KR20210073540A - 양성 종양의 예방 또는 치료약 - Google Patents

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하루오 스기야마
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인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드
다이니뽄 스미토모 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

본 개시는, 양성 종양의 예방 또는 치료약을 제공한다. WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 이것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약이 제공된다. 특정한 실시 형태에서는, 본 개시는 WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 이것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약이 제공된다. 바람직한 실시 형태에서는, 본 개시의 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료약은 킬러형 및/또는 헬퍼형의 WT1 펩티드를 포함한다. 더욱 바람직한 실시 형태에서는, 상기 WT1 펩티드는 WT1126 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드이다. 다른 국면에 있어서, WT1 펩티드에 특이적인 CTLs, 및 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법, 그리고 WT1 펩티드를 제시하는 수지상 세포의 유도 방법이 제공된다.

Description

양성 종양의 예방 또는 치료약
본 개시는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 의약, 방법 등에 관한 것이다. 한 구체적인 예로는, 본 개시는 가족성 선종증의 예방 또는 치료약에 관한 것이다.
양성 종양은 병리학적으로 악성 소견을 갖지 않는 종양이다. 양성 종양은 악성 종양과는 다른 것이라고 이해되고 있고, 전이나 침윤 경향을 나타내지 않는다고 되어 있다. 양성 종양의 대부분은 무증상인데, 종양 직경이 큰 것인 경우에는 다른 조직을 압박하는 것 등에 의해 증상을 나타내거나, 악성화되는 경우가 있어, 치료나 예방이 필요로 되는 경우가 있다. 그 때문에, 치료제나 예방제는 그리 알려져 있지 않다.
가족성 대장 선종증은 암 억제 유전자 APC 헤테로 결손을 갖는 유전성 질환이다. 20세경부터 대장에 있어서 APC 헤테로 결손을 갖는 선 세포에 APC 유전자의 호모 결손이 발생하여, 대장의 도처에 선종이 발증하고, 그리고 그 선종으로부터 대장암이 발증한다. 치료로서, 초기에는 내시경에 의한 선종의 절제를 행하지만, 그 후, 선종이 밀집하여 절제를 할 수 없게 됨과 동시에 선종으로부터 암이 발증하기 때문에, 많은 경우 대장 전적출이 행하여지고 있다. 침투율은 100％로, 보인자 전원이 20세 전후에 발증하는 극히 비참한 질환이다. 일본에는 6,000명 정도의 환자가 있다.
아스피린이 가족성 대장 선종증에서의 선종·선암의 발증 예방 및/또는 진전 억제에 효과가 있음이 알려져 있지만, 효과는 약하고, 또한 아스피린의 부작용인 소화관 출혈의 위험이 수반된다.
윌름스 종양 유전자 WT1은 소아 신장 종양인 윌름스 종양의 종양 형성에 관여하는 유전자로서 단리되었다(비특허문헌 1 참조). 이 유전자는 세포 증식 및 세포 분화의 조절 기구, 그리고 아포토시스 및 조직 발달과 관련하는 징크·핑거 전사 인자를 코드하는 유전자이다.
Gessler, M. 등, Nature, 제343권, 774-778 페이지, 1990년
본 발명자들은 예의 연구한 결과, WT1 펩티드 백신이 가족성 대장 선종증 등의 양성 종양에서의 선종의 발증의 억제 및/또는 지연이나, 선종으로부터의 증상의 발증의 억제 및/또는 지연에 유효함을 알아내고, 전적 수술한 근본적인 치료 방법이 없어, 난치성으로 되는 가족성 대장 선종증 등의 양성 종양의 치료 및 예방에 유용함을 알아냈다. 본 발명자들은, 가족성 대장 선종증 등의 양성 종양의 환자의 선종이 WT1 암 항원을 발현하고 있음을 알아냈기 때문에, WT1 암 백신이 가족성 대장 선종증 등의 양성 종양에서의 선종의 발증의 억제 및/또는 지연이나, 선종으로부터의 증상의 발증의 억제 및/또는 지연에 유효한 것이 아닐까라고 발상하여, 본 발명에 이르렀다.
본 개시는, 양성 종양의 선종의 세포가 WT1 단백질을 발현한다는 놀라운 발견에 기초하는 것이다. 본 기술분야에 있어서, 악성 종양의 암 세포에서는 WT1 단백질이 고발현되고 있는 것은 공지이며, 악성 종양에 있어서의 WT1 펩티드 백신의 유용성은 용이하게 예상될 수 있는 것이었다. 본 개시는, 양성 종양인 가족성 대장 선종증의 선종의 세포가 WT1 단백질을 발현하는 것을 처음으로 밝히고, 양성 종양 일반에 있어서 치료제 또는 예방제를 제공하는 것에 생각이 미친 것이다. 추가로, WT1 펩티드 백신의 유효성은 WT1 단백질의 발현 양식(발현량 등)에 좌우되기 때문에, 가령 선종에 있어서 WT1 단백질이 발현되는 것을 알아낸 경우일지라도, WT1 펩티드 백신의 유효성을 합리적으로 예측할 수는 없었다. 그 점에서 본 개시는, WT1 펩티드 백신이 양성 종양에 대해서도 유효함을 처음으로 실증한 것이며, 선행 기술로부터 예측할 수 없는 효과를 알아낸 것이다.
따라서, 본 개시는 이하를 제공한다.
(항목 X1)
WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약.
(항목 X2)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 킬러형 및/또는 헬퍼형을 포함하는, 항목 X1에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X3)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 WT1126 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드를 포함하는, 항목 X1 또는 항목 X2에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X4)
WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 항목 X1 내지 항목 X3 중 어느 한 항에 기재된 양성 종양의 예방 또는 치료약.
(항목 X5)
상기 핵산 분자는 RNA 및/또는 DNA를 포함하는, 항목 X1 내지 항목 X4 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X6)
아쥬반트를 더 포함하는, 항목 X1 내지 항목 X5 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X7)
상기 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트인, 항목 X1 내지 항목 X6 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X8)
상기 양성 종양은 WT1을 발현하는, 항목 X1 내지 항목 X7 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X9)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 항목 X1 내지 항목 X8 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X10)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증인, 항목 X1 내지 항목 X9 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X11)
1주일에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는, 항목 X1 내지 항목 X10 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 X12)
양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구를, 상기 항목 X 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 상기 항목 X 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 말초혈 단핵구에 도입하고, 해당 말초 단핵구로부터 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법.
(항목 X13)
양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포를, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 상기 항목 X 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 미숙 수지상 세포에 도입하고, WT1 제시 수지상 세포를 유도하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포의 유도 방법.
(항목 X13A)
항목 X1 내지 항목 X11 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 X12 또는 13에 기재된 방법.
(항목 X14)
WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한 조성물.
(항목 X15)
WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포를 유도하기 위한 조성물.
(항목 X15A)
항목 X1 내지 항목 X13 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 X14 또는 항목 X15에 기재된 조성물.
(항목 X16)
WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 조성물.
(항목 X17)
WT1 제시 수지상 세포를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 조성물.
(항목 X17A)
항목 X1 내지 항목 X13 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 X16 또는 항목 X17에 기재된 조성물.
본 개시는 또한, 이하를 제공한다.
(항목 1)
WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약.
(항목 2)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 킬러형 및/또는 헬퍼형을 포함하는, 항목 1에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 3)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 WT1126 킬러 펩티드, WT1235 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드, 또는 어느 아미노산 서열에 있어서, 1개 내지 몇개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 포함하는, 항목 1 또는 2에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 4)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는,
RMFPNAPYL(서열 번호 2),
RYFPNAPYL(서열 번호 46),
YMFPNAPYL(서열 번호 14),
CYTWNQMNL(서열 번호 45),
CMTWNQMNL(서열 번호 3),
C-CYTWNQMNL(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.), 및
C-CMTWNQMNL(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로부터 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 1 내지 3 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 5)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (2):
Figure pct00001
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 1 내지 4 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 6)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (3):
Figure pct00002
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 1 내지 5 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 7)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가, 추가로
이하의 아미노산 서열:
WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50), 및
WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)
로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 하나 이상 포함하는 조성물인, 항목 1 내지 6 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 8)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (2):
Figure pct00003
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 9)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (3):
Figure pct00004
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 1 내지 8 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 10)
WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약.
(항목 11)
상기 핵산 분자는 RNA 및/또는 DNA를 포함하는, 항목 A1 내지 A10 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 12)
아쥬반트를 더 포함하는, 항목 1 내지 11 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 13)
상기 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트인, 항목 1 내지 12 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 14)
상기 양성 종양은 WT1을 발현하는, 항목 1 내지 13 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 15)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 항목 1 내지 14 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 16)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증인, 항목 1 내지 15 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 17)
1주일에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는, 항목 1 내지 16 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 18)
양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구를, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 말초혈 단핵구에 도입하고, 해당 말초혈 단핵구로부터 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하는 공정을 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법.
(항목 19)
양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포를, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 미숙 수지상 세포에 도입하고, WT1 제시 수지상 세포를 유도하는 공정을 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포의 유도 방법.
(항목 19A)
항목 1 내지 17 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 18 또는 19에 기재된 방법.
(항목 20)
WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한 조성물.
(항목 21)
WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포를 유도하기 위한 조성물.
(항목 21A)
항목 1 내지 19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 20 또는 21에 기재된 조성물.
(항목 22)
WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 조성물.
(항목 23)
WT1 제시 수지상 세포를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 조성물.
(항목 23A)
항목 1 내지 19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 22 또는 23에 기재된 조성물.
(항목 A1)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, 유효량의 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A2)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 킬러형 및/또는 헬퍼형을 포함하는, 항목 A1에 기재된 방법.
(항목 A3)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 WT1126 킬러 펩티드, WT1235 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드, 또는 어느 아미노산 서열에 있어서, 1개 내지 몇개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 포함하는, 항목 A1 또는 A2에 기재된 방법.
(항목 A4)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
RMFPNAPYL(서열 번호 2),
RYFPNAPYL(서열 번호 46),
YMFPNAPYL(서열 번호 14),
CYTWNQMNL(서열 번호 45),
CMTWNQMNL(서열 번호 3),
C-CYTWNQMNL(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.), 및
C-CMTWNQMNL(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로부터 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 A1 내지 A3 중 어느 한 항에 기재된 예방 또는 치료약.
(항목 A5)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (2):
Figure pct00005
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 A1 내지 A4 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A6)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (3):
Figure pct00006
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 A1 내지 A5 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A7)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가, 추가로
이하의 아미노산 서열:
WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50), 및
WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)
로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 하나 이상 포함하는 조성물인, 항목 A1 내지 A6 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A8)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (2):
Figure pct00007
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 A1 내지 A7 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A9)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (3):
Figure pct00008
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 A1 내지 A8 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A10)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, 유효량의 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A11)
상기 핵산 분자는 RNA 및/또는 DNA를 포함하는, 항목 A1 내지 A10 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A12)
상기 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자가 아쥬반트와 병용되는, 항목 A1 내지 A11 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A13)
상기 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트인, 항목 A1 내지 A12 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A14)
상기 양성 종양은 WT1을 발현하는, 항목 A1 내지 A13 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A15)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 항목 A1 내지 A14 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A16)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증인, 항목 A1 내지 A15 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A17)
상기 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자가 1주일에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는, 항목 A1 내지 A16 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(항목 A18)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구를, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 말초혈 단핵구에 도입하고, 그에 의해 해당 말초혈 단핵구로부터 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하는 공정, 및 생성된 해당 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 해당 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A19)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포를, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 미숙 수지상 세포에 도입하고, 그에 의해 WT1 제시 수지상 세포를 유도하는 공정, 및 생성된 해당 수지상 세포를 해당 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A19A)
항목 A1 내지 A17 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 A18 또는 A19에 기재된 방법.
(항목 A20)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자에 의해 유도된 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A21)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자에 의해 유도된 WT1 제시 수지상 세포의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A21A)
항목 A1 내지 A19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 A20 또는 A21에 기재된 조성물.
(항목 A22)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, 유효량의 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A23)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, 유효량의 WT1 제시 수지상 세포를 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
(항목 A23A)
항목 A1 내지 A19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 A22 또는 A23에 기재된 조성물.
(항목 B1)
양성 종양을 예방 또는 치료하기 위한, WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B2)
킬러형 및/또는 헬퍼형을 포함하는, 항목 B1에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B3)
WT1126 킬러 펩티드, WT1235 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드, 또는 어느 아미노산 서열에 있어서, 1개 내지 몇개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 포함하는, 항목 B1 또는 B2에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B4)
RMFPNAPYL(서열 번호 2),
RYFPNAPYL(서열 번호 46),
YMFPNAPYL(서열 번호 14),
CYTWNQMNL(서열 번호 45),
CMTWNQMNL(서열 번호 3),
C-CYTWNQMNL(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.), 및
C-CMTWNQMNL(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로부터 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 B1 내지 B3 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B5)
식 (2):
Figure pct00009
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 B1 내지 B4 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B6)
식 (3):
Figure pct00010
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 B1 내지 B5 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B7)
추가로, 이하의 아미노산 서열:
WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50), 및
WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)
로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 하나 이상 포함하는 조성물인, 항목 B1 내지 B6 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B8)
식 (2):
Figure pct00011
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 B1 내지 B7 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B9)
식 (3):
Figure pct00012
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 B1 내지 B8 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
(항목 B10)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하기 위한, WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자.
(항목 B11)
RNA 및/또는 DNA를 포함하는, 항목 B1 내지 B10 중 어느 한 항에 기재된 핵산 분자.
(항목 B12)
아쥬반트와 병용되는, 항목 B1 내지 B11 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B13)
상기 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트인, 항목 B1 내지 B12 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B14)
상기 양성 종양은 WT1을 발현하는, 항목 B1 내지 B13 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B15)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 항목 B1 내지 B14 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B16)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증인, 항목 B1 내지 B15 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B17)
1주일에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는, 항목 B1 내지 B16 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B18)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 핵산 분자이며, 해당 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체가 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구와 함께 배양되거나, 혹은 해당 핵산 분자가 해당 말초혈 단핵구에 도입되고, 그에 의해 해당 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포가 유도되는, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B19)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포를 유도하기 위한, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 또는 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 핵산 분자이며, 해당 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포와 함께 배양되거나, 혹은 해당 핵산 분자가 해당 미숙 수지상 세포에 도입되고, 그에 의해 해당 WT1 제시 수지상 세포가 유도되는, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 B19A)
항목 B1 내지 B17 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 B18 또는 B19에 기재된 방법.
(항목 B20)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자.
(항목 B21)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포를 유도하기 위한, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자.
(항목 B21A)
항목 B1 내지 B19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 B20 또는 B21에 기재된 조성물.
(항목 B22)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하기 위한, WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포.
(항목 B23)
피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하기 위한, WT1 제시 수지상 세포.
(항목 B23A)
항목 B1 내지 B19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 B22 또는 B23에 기재된 조성물.
(항목 C1)
양성 종양의 예방 또는 치료약의 제조에 있어서의, WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 사용.
(항목 C2)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 킬러형 및/또는 헬퍼형을 포함하는, 항목 C1에 기재된 사용.
(항목 C3)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 WT1126 킬러 펩티드, WT1235 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드, 또는 어느 아미노산 서열에 있어서, 1개 내지 몇개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 포함하는, 항목 C1 또는 C2에 기재된 사용.
(항목 C4)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
RMFPNAPYL(서열 번호 2),
RYFPNAPYL(서열 번호 46),
YMFPNAPYL(서열 번호 14),
CYTWNQMNL(서열 번호 45),
CMTWNQMNL(서열 번호 3),
C-CYTWNQMNL(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.), 및
C-CMTWNQMNL(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로부터 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 C1 내지 C3 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C5)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (2):
Figure pct00013
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 C1 내지 C4 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C6)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (3):
Figure pct00014
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인,
항목 C1 내지 C5 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C7)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가, 추가로
이하의 아미노산 서열:
WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50), 및
WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)
로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 하나 이상 포함하는 조성물인, 항목 C1 내지 C6 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C8)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (2):
Figure pct00015
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 C1 내지 C7 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C9)
상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
식 (3):
Figure pct00016
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인,
항목 C1 내지 C8 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C10)
양성 종양의 예방 또는 치료약의 제조에 있어서의, WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자의 사용.
(항목 C11)
상기 핵산 분자는 RNA 및/또는 DNA를 포함하는, 항목 C1 내지 C10 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C12)
상기 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자가 아쥬반트와 병용되는, 항목 C1 내지 C11 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C13)
상기 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트인, 항목 C1 내지 C12 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C14)
상기 양성 종양은 WT1을 발현하는, 항목 C1 내지 C13 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C15)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 항목 C1 내지 C14 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C16)
상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증인, 항목 C1 내지 C15 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C17)
상기 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자가 1주일에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는, 항목 C1 내지 C16 중 어느 한 항에 기재된 사용.
(항목 C18)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 제조에 있어서의, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 핵산 분자의 사용이며, 해당 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체가 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구와 함께 배양되거나, 혹은 해당 핵산 분자가 해당 말초혈 단핵구에 도입되고, 그에 의해 해당 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포가 유도되는, 사용.
(항목 C19)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포의 제조에 있어서의, 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 또는 상기 항목 중 어느 한 항에 기재된 핵산 분자이며, 해당 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포와 함께 배양되거나, 혹은 해당 핵산 분자가 해당 미숙 수지상 세포에 도입되고, 그에 의해 해당 WT1 제시 수지상 세포가 유도되는, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 핵산 분자.
(항목 C19A)
항목 C1 내지 C17 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 C18 또는 C19에 기재된 방법.
(항목 C20)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 제조에 있어서의, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자의 사용.
(항목 C21)
양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포의 제조에 있어서의, WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자의 사용.
(항목 C21A)
항목 C1 내지 C19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 C20 또는 C21에 기재된 조성물.
(항목 C22)
양성 종양의 예방 또는 치료약의 제조에 있어서의, WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 사용.
(항목 C23)
양성 종양의 예방 또는 치료약의 제조에 있어서의, WT1 제시 수지상 세포의 사용.
(항목 C23A)
항목 C1 내지 C19 중 어느 하나 또는 복수에 기재된 1개 또는 복수의 특징을 더 포함하는, 항목 C22 또는 C23에 기재된 조성물.
본 개시에 있어서, 상기 1개 또는 복수의 특징은 명시된 조합에 더하여, 추가로 조합하여 제공될 수 있는 것이 의도된다. 본 개시의 또다른 실시 형태 및 이점은, 필요에 따라 이하의 상세한 설명을 읽어서 이해하면 당업자에게 인식된다.
본 발명에 따르면, 양성 종양의 예방, 지연 및 치료가 달성된다. 예시적인 실시 형태에서는, 본 발명에 의해 가족성 대장 선종증의 예방, 지연 및 치료가 달성된다. 다른 국면에서는, 본 발명에 의해 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 선종으로부터 발생한 증상의 예방, 지연 및 치료가 달성된다.
또한, 본 개시의 WT1 펩티드 암 백신은 투여 부위의 피부의 발적·종창 이외에는 위독한 부작용이 없어, 매우 안전성이 높다. 따라서 WT1 펩티드 암 백신은, 안전하게 그리고 용이하게 대부분의 양성 종양 환자 및 가족성 대장 선종증 환자에게 투여할 수 있고, 환자의 QOL의 관점에서도, 내시경적 절제나 수술의 회피에 의한 의료비 경감의 경제적 효과의 관점에서도, 종래 기술보다 우수하다고 할 수 있다.
도 1은, 인간 가족성 대장 선종증 환자의 선종에 있어서, WT1 단백질이 발현된 것을 나타내는 현미경 사진이다. 좌측의 사진은 선종 조직의 사진을 나타내고, 우측의 사진은 정상 선관의 사진을 나타낸다. 양쪽의 사진에 있어서, 연한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 진하게 원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다.
도 2는, APCMin/+ 마우스에 있어서의 WT1 단백질의 발현을 나타내는 현미경 사진이다. 위에서부터 순차적으로, 5배, 10배, 20배의 배율에서의 현미경 사진을 나타낸다. 각각의 사진의 좌측 하방에 스케일 바를 나타내고, 위에서부터 순차적으로, 500㎛, 250㎛, 100㎛의 길이를 나타낸다. 각각의 조직의 우측 하단의 사진은, 조직의 전체상에 있어서 확대된 영역을 나타낸다. 어느 사진에 있어서든, 진한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다.
도 3은, APCMin/+ 마우스에 있어서의 WT1 단백질의 발현을 나타내는 현미경 사진이다. 확대 배율은 40배이며, 사진의 좌측 하방에 100㎛의 길이를 나타내는 스케일 바를 나타낸다. 진한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다.
도 4는, APCMin/+ 마우스에, WT1 펩티드 백신을 투여한 실험의 투여 스킴을 나타낸다. 위의 횡축은 APCMin/+ 마우스의 주령, 백신의 투여 시기 및 안락사시켜 해석에 제공한 시기를 나타낸다. 위의 횡축에 있어서, 하부의 숫자는 마우스의 주령을 나타내고, 상부의 짧은 화살표는 백신을 투여한 시기를 나타내고, 상부의 긴 화살표는 안락사시켜 해석에 제공한 시기를 나타낸다. 횡축 아래에, WT1 백신과 대조 백신의 조성을 나타낸다.
도 5는, WT1 펩티드 백신의 투여에 의한 선종의 발증의 억제를 나타내는 그래프이다. 그래프의 종축은 소장당의 선종수를 나타내고, 좌측의 산포도는 WT1 펩티드 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타내고, 우측의 산포도는 대조 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타낸다. 각각의 산포도에 있어서의 가로선은 평균값을 나타내고, 그래프의 상부에 유의차 검정의 결과를 나타낸다.
도 6은, WT1 펩티드 백신의 투여에 의해 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포가 증가한 것을 나타내는 그래프이다. 그래프의 종축은 CD3+CD8+ 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 나타내고, 좌측의 산포도는 WT1 펩티드 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타내고, 우측의 산포도는 대조 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타낸다. 각각의 산포도에 있어서의 가로선은 평균값을 나타내고, 그래프의 상부에 유의차 검정의 결과를 나타낸다.
도 7은, WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군 사이의 회귀 분석을 나타내는 그래프이다. 그래프의 종축은 CD3+CD8+ 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 나타내고, 횡축은 소장당의 선종수를 나타낸다. 각 점은, WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군 사이의 선종수와 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 그래프 상에 플롯한 것이다. 그래프 중의 직선은 회귀 직선을 나타내고, 우측에 위에서부터 순차적으로 상관 계수(R), 회귀 직선의 함수의 식, 결정 계수(R2)를 나타낸다.
도 8은, APCMin/+ 마우스에, WT1 펩티드 백신을 투여하는 실험의 투여 스킴을 나타낸다. 위의 횡축은 APCMin/+ 마우스의 주령, 백신의 투여 시기 및 안락사시켜 해석에 제공한 시기를 나타낸다. 위의 횡축에 있어서, 하부의 숫자는 마우스의 주령을 나타내고, 상부의 짧은 화살표는 백신을 투여하는 시기를 나타내고, 상부의 긴 화살표는 안락사시켜 해석에 제공하는 시기를 나타낸다. 횡축 아래에, WT1 백신과 대조 백신의 조성을 나타낸다.
도 9는, 인간 비유전성의 대장 선종증 환자의 선종에 있어서 WT1 단백질이 발현된 것을 나타내는 현미경 사진이다. 좌측으로부터 1번째의 사진은 정상 선관의 사진을 나타내고, 우측 3장의 사진은 각각 3명의 비유전성의 대장 선종증 환자로부터 얻어진 선종 조직의 사진을 나타낸다. 모든 사진에 있어서, 연한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 진하게 원형 또는 타원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다. 각 사진 아래에 WT1 단백질의 발현 레벨을 나타내고, (-)는 발현 레벨이 낮은 것을, (+)는 발현 레벨이 높은 것을 나타낸다.
도 10은, APCMin/+ 마우스에, 본 명세서에 있어서 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 펩티드를 포함하는 혼합물을 투여한 실험의 투여 스킴을 나타낸다. 횡축은 APCMin/+ 마우스의 주령, 백신의 투여 시기 및 안락사시켜 해석에 제공한 시기를 나타낸다. 횡축에 있어서, 하부의 숫자는 마우스의 주령을 나타내고, 상부의 화살표는 백신을 투여한 시기, 및 안락사시켜 해석에 제공한 시기를 나타낸다.
도 11은, 본 명세서에 있어서 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 펩티드를 포함하는 혼합물의 투여에 의한 선종의 발증의 억제를 나타내는 그래프이다. 그래프의 종축은 소장당의 선종수를 나타내고, 좌측의 산포도는 WT1 펩티드 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타내고, 우측의 산포도는 대조 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타낸다. 각각의 산포도에 있어서의 가로선은 평균값을 나타내고, 그래프의 상부에 유의차 검정의 결과를 나타낸다.
도 12는, 본 명세서에 있어서 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 펩티드를 포함하는 혼합물의 투여에 의해 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포가 증가한 것을 나타내는 그래프이다. 그래프의 종축은 CD3+CD8+ 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 나타내고, 좌측의 산포도는 본 명세서에 있어서 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 펩티드를 포함하는 혼합물을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타내고, 우측의 산포도는 대조 백신을 투여한 APCMin/+ 마우스의 결과를 나타낸다. 각각의 산포도에 있어서의 가로선은 평균값을 나타내고, 그래프의 상부에 유의차 검정의 결과를 나타낸다.
도 13은, 본 명세서에 있어서 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 펩티드를 포함하는 혼합물 투여군과 대조 백신 투여군 사이의 회귀 분석을 나타내는 그래프이다. 그래프의 종축은 CD3+CD8+ 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 나타내고, 횡축은 소장당의 선종수를 나타낸다. 각 점은, 본 명세서에 있어서 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 펩티드를 포함하는 혼합물 투여군과 대조 백신 투여군 사이의 선종수와 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 그래프 상에 플롯한 것이다. 그래프 중의 직선은 회귀 직선을 나타내고, 우측에 위에서부터 순차적으로 상관 계수(R), 회귀 직선의 함수의 식, 결정 계수(R2)를 나타낸다.
이하, 본 발명을 최선의 형태를 나타내면서 설명한다. 본 명세서의 전체에 걸쳐 단수형의 표현은 특별히 언급하지 않는 한, 그의 복수형의 개념도 포함하는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 단수형의 관사(예를 들어, 영어의 경우에는 「a」, 「an」, 「the」 등)는 특별히 언급하지 않는 한, 그의 복수형의 개념도 포함하는 것이 이해되어야 한다. 또한, 본 명세서에 있어서 사용되는 용어는 특별히 언급하지 않는 한, 당해 분야에서 통상 사용되는 의미로 사용되는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서 중에서 사용되는 모든 전문 용어 및 과학 기술 용어는, 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 모순되는 경우, 본 명세서(정의를 포함하여)가 우선한다.
이하에 본 명세서에 있어서 특별히 사용되는 용어의 정의 및/또는 기본적 기술 내용을 적절히 설명한다.
(용어의 정의)
본 명세서에 있어서 「WT1(Wilms Tumor Gene 1)」, 「WT1 단백질」 또는 「WT1 펩티드」란, 윌름스 종양(WT1) 유전자 산물 또는 그의 유사체의 적어도 일부(전부여도 된다)를 포함하는 폴리펩티드를 말한다. 「WT1 단백질」로서는, 구체적으로는 대표적으로 449개의 아미노산을 포함하는 인간 WT1 단백질(서열 번호 1), 또는 이 아미노산 서열에 있어서, 1개 혹은 몇개(바람직하게는, 약 2 내지 6개)의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 바람직하게 들 수 있다. 삽입되는 아미노산 또는 치환되는 아미노산은 유전자에 의해 코드되는 20종류의 아미노산 이외의 비천연 아미노산이어도 된다. 「WT1 펩티드」란, WT1 단백질을 구성하는 아미노산 서열의 일부를 포함하는 펩티드를 말한다. 본 명세서에 있어서 「WT1」 또는 「WT1 펩티드」라고 하는 경우, 특별히 언급하지 않는 한, 변이형의 WT1을 포함하는 것으로 한다. 또한, 본 명세서에 있어서 WT1 또는 WT1 펩티드로 언급하는 경우, 특별히 언급하지 않는 한 인간의 WT1을 말한다.
본 개시에 사용되는 WT1 펩티드의 길이는 특별히 한정되지 않지만, 약 7개 내지 약 30개의 아미노산을 포함하는 것이 바람직하다. 바람직한 WT1 펩티드는 HLA 분자에 결합하여 제시되는 항원 펩티드의 서열의 규칙성(모티프)을 갖고, HLA 분자와의 결합능을 갖는 것이다. HLA 분자와의 결합능은 당해 기술분야에 있어서 기지의 방법에 의해 조사할 수 있다. 이러한 방법으로서, 예를 들어 Rankpep, BIMAS, SYFPEITHI 등의 컴퓨터 베이스의 방법, HLA 분자에 대한 결합능을 갖는 기지의 WT1 펩티드와의 경합적 결합 시험 등이 있다. 본 개시에서 사용될 수 있는 WT 펩티드로서는 본 명세서 중 (WT1 펩티드)의 항에 설명되고, WO2016/093326에 있어서도 설명되어 있으며, 이들은 참고로서 원용된다.
본 개시에 사용되는 바람직한 WT1 펩티드는 킬러 T 세포 및/또는 헬퍼 T 세포를 활성화하는 것이다. 킬러 T 세포 및/또는 헬퍼 T 세포의 활성화는 단독의 펩티드가 담당해도 되고, 복수의 펩티드가 담당하고 있어도(분업하고 있음) 된다. 또한, 본 개시의 의약 조성물에 사용하는 WT1 펩티드는 1종류여도 되고, 복수 종류여도 된다. 또한, 본 개시의 의약 또는 의약 조성물에 사용하는 WT1 펩티드는 킬러 WT1 펩티드여도 되고, 혹은 헬퍼 WT1 펩티드여도 되고, 이들을 혼합하여 사용해도 된다. 본 개시의 WT1 펩티드는 단독의 펩티드여도 되고, 복수의 펩티드의 콘쥬게이트, 혼합물 또는 조합이어도 된다. 보다 바람직한 WT1 펩티드로서는, 킬러 WT1 펩티드와 헬퍼 WT1 펩티드의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어 그러한 조합의 예로서는, WO2014/157692에 기재되는 화합물 또는 조성물 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「양성 종양」이란, 병리학적으로 악성 소견을 갖지 않는 종양이며, 악성 종양과는 다른 것이라고 이해된다. 전이나 침윤 경향을 나타내지 않는다고 되어 있다. 양성 종양의 진단은 반드시 임상적인 예후가 양호한 것을 의미하지는 않는다. 예를 들어 뇌간부에 발생한 저이형도 수막종은 양성 종양이지만 치료 곤란이며, 또한 뇌간을 압박하여 예후 불량하므로 임상 악성이기 때문에, 치료나 예방이 필요하게 되는 경우도 많다. 양성 종양으로서는, 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종이나, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
본 명세서에 있어서 「가족성 대장 선종증」, 「가족성 대장 폴리포시스」, 「가족성 선종성 폴리포시스」 또는 「FAP」라는 용어는 호환적으로 사용되며, 암 억제 유전자 APC(adenoma polyposis coli)의 변이를 특징으로 하고, 장관에 다수의 선종이 형성되는 유전성 질환을 말하며, 양성 종양으로 분류된다. 본 명세서에 있어서, 가족성 대장 선종증에는 가드너 증후군 등의, 장관 이외의 조직에 있어서의 종양이 병발한 질환도 포함된다. 대표적인 가족성 대장 선종증의 모델 동물로서는, APCMin/+ 마우스(Jackson 연구소, Bar Harbor, Maine, USA)를 들 수 있지만, 이것에 한정되지 않는다.
본 명세서에 있어서 「킬러형」, 「킬러 펩티드」 등의 용어는 세포 상해성 T 세포(CTL, 킬러 T 세포)를 활성화시키는 능력을 갖는 펩티드를 의미한다. 킬러 T 세포의 활성화란, 킬러 T 세포가 갖는 세포 상해 활성이 증대하는 것, 및/또는 킬러 T 세포의 수가 증대하는 것을 말한다. 「킬러(형)」인지의 여부는 대표적으로 이하의 시험에 의해 판정한다. 즉, 플로 사이토메트리 등의 방법에 의해, CD8이 T 세포의 표면에 발현함으로써 판정할 수 있다. 대체적으로, 51Cr 방출 어세이 및 락트산 탈수소 효소(LDH) 어세이 등에 의해 표적 세포 상해 활성을 측정함으로써도 판정할 수 있다. 바람직한 실시 형태에서는, 본 개시의 WT1 펩티드는 이 킬러형의 활성을 갖는다.
MHC는 인간이면 인간 백혈구형 항원(HLA)이라고 불린다. MHC 클래스 I 분자에 상당하는 HLA는 HLA-A, B, Cw, F 및 G 등의 서브타입으로 분류된다. 「MHC 클래스 I 구속성」으로서, 바람직하게는 HLA-A 구속성, HLA-B 구속성 또는 HLA-Cw 구속성을 들 수 있다.
HLA의 각 서브타입에 대해서, 다형(대립 유전자)이 알려져 있다. HLA-A의 다형으로서는, HLA-A1, HLA-A0201, HLA-A24 등의 27종 이상을 들 수 있고, HLA-B의 다형으로서는, HLA-B7, HLA-B40, HLA-B4403 등의 59종 이상을 들 수 있고, HLA-Cw의 다형으로서는, HLA-Cw0301, HLA-Cw0401, HLA-Cw0602 등의 10종 이상을 들 수 있다. 이들 다형 중, 바람직하게는 HLA-A0201이나 HLA-A24를 들 수 있다.
본 개시에 있어서의 「WT1 펩티드」란, 서열 번호 1에 기재된 인간의 WT1의 아미노산 서열에 있어서 연속하는 7 내지 30 잔기의 아미노산을 포함하는 부분 펩티드이다.
본 개시에 있어서의 「MHC 클래스 I 구속성」이란, 주요 조직 적합 항원(Major Histocompatibility Complex, MHC)의 클래스 I인 MHC 클래스 I 분자와 결합하여 CTL을 유도하는 특성을 의미한다. 「MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드」는, 시험관 내(in vitro) 및/또는 생체 내(in vivo)로 MHC 클래스 I 항원에 결합하고, 복합체로서 제시되는 펩티드이며, 또한 해당 복합체가 전구체 T 세포에 인식된 결과 CTL을 유도하는 펩티드를 의미하는 것으로부터, WT1 헬퍼 펩티드와 동의이다. 「WT1 클래스 I 구속성 WT1 펩티드」의 아미노산 잔기는 7 내지 30이며, 바람직하게는 7 내지 15이며, 보다 바람직하게는 8 내지 12이며, 더욱 바람직하게는 8 내지 11이며, 가장 바람직하게는 8 또는 9이다.
「MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드」로서는, 예를 들어 서열 번호 1에 나타내는 인간 WT1의 아미노산 서열에 있어서, 2 위치, 3 위치, 4 위치, 6 위치, 7 위치, 10 위치, 17 위치, 18 위치, 20 위치, 23 위치, 24 위치, 26 위치, 29 위치, 30 위치, 32 위치, 33 위치, 37 위치, 38 위치, 39 위치, 40 위치, 47 위치, 63 위치, 64 위치, 65 위치, 70 위치, 73 위치, 80 위치, 81 위치, 82 위치, 83 위치, 84 위치, 85 위치, 86 위치, 88 위치, 92 위치, 93 위치, 96 위치, 98 위치, 99 위치, 100 위치, 101 위치, 104 위치, 107 위치, 110 위치, 118 위치, 119 위치, 120 위치, 123 위치, 125 위치, 126 위치, 128 위치, 130 위치, 136 위치, 137 위치, 138 위치, 139 위치, 141 위치, 143 위치, 144 위치, 146 위치, 152 위치, 161 위치, 163 위치, 165 위치, 168 위치, 169 위치, 174 위치, 177 위치, 179 위치, 180 위치, 185 위치, 187 위치, 191 위치, 192 위치, 194 위치, 202 위치, 204 위치, 206 위치, 207 위치, 208 위치, 209 위치, 210 위치, 211 위치, 213 위치, 217 위치, 218 위치, 219 위치, 221 위치, 222 위치, 223 위치, 225 위치, 227 위치, 228 위치, 230 위치, 232 위치, 233 위치, 235 위치, 239 위치, 240 위치, 242 위치, 243 위치, 244 위치, 250 위치, 251 위치, 252 위치, 260 위치, 261 위치, 263 위치, 269 위치, 270 위치, 272 위치, 273 위치, 276 위치, 278 위치, 279 위치, 280 위치, 285 위치, 286 위치, 287 위치, 289 위치, 292 위치, 293 위치, 294 위치, 295 위치, 298 위치, 299 위치, 301 위치, 302 위치, 303 위치, 306 위치, 309 위치, 312 위치, 313 위치, 315 위치, 316 위치, 317 위치, 318 위치, 319 위치, 324 위치, 325 위치, 326 위치, 327 위치, 329 위치, 332 위치, 334 위치, 337 위치, 340 위치, 343 위치, 345 위치, 347 위치, 349 위치, 351 위치, 354 위치, 356 위치, 358 위치, 362 위치, 363 위치, 364 위치, 366 위치, 368 위치, 371 위치, 372 위치, 373 위치, 375 위치, 379 위치, 383 위치, 384 위치, 386 위치, 387 위치, 389 위치, 390 위치, 391 위치, 394 위치, 396 위치, 401 위치, 406 위치, 408 위치, 409 위치, 410 위치, 412 위치, 415 위치, 416 위치, 417 위치, 418 위치, 419 위치, 420 위치, 423 위치, 424 위치, 425 위치, 426 위치, 427 위치, 428 위치, 429 위치, 432 위치, 433 위치, 434 위치, 436 위치, 437 위치, 439 위치, 440 위치 혹은 441 위치로부터 개시되는 9 아미노산 잔기의 펩티드, 또는 그의 개변체를 포함하는 펩티드를 들 수 있다(국제 공개 제2014/157692호를 참조). 국제 공개 제2014/157692호는, 그 전체가 본 명세서에 있어서 참고로서 원용된다.
「MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드」로서, 바람직하게는 이하의 아미노산 서열:
RMFPNAPYL(서열 번호 2),
CMTWNQMNL(서열 번호 3),
ALLPAVPSL(서열 번호 52),
SLGEQQYSV(서열 번호 53) 및
RVPGVAPTL(서열 번호 54)
중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 서열 번호 2, 3, 52, 53 및 54 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 들 수 있다. 더욱 바람직하게는, 서열 번호 2, 3, 52, 53 및 54 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 들 수 있다.
본 개시에 있어서의 「WT1 펩티드 또는 그의 유사체」가 킬러 펩티드인 경우에는, 아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 의미한다.
본 개시에 있어서의 「아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드」는, 「개변 킬러 펩티드」라고도 불린다. 당해 개변 킬러 펩티드는, 아미노산 서열에 있어서 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, MHC 클래스 I에 결합하고, CTL을 유도하는 펩티드를 의미한다. 치환되는 아미노산의 치환 위치로서는, 9 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 경우, 1 위치(N 말단), 2 위치, 3 위치 및 9 위치를 들 수 있다. 부가(삽입도 포함된다)되는 아미노산의 수는 통상 1 내지 몇개이며, 바람직하게는 1 내지 3개, 보다 바람직하게는 1 또는 2개, 더욱 바람직하게는 1개이다. 바람직한 부가 위치로서는, C 말단을 들 수 있다. 결실되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1이다. 개변에 있어서 부가되는 아미노산 또는 치환되는 아미노산은, 유전자에 의해 코드되는 20종류의 아미노산 이외의 비천연 아미노산이어도 된다.
개변 킬러 펩티드로서는 예를 들어, 다음과 같은 펩티드를 들 수 있다.
RMFPNAPYL(서열 번호 2)의 개변 킬러 펩티드임
RYFPNAPYL(서열 번호 46)(국제 공개 제2003/106682호 참조);
FMFPNAPYL(서열 번호 13),
RLFPNAPYL(서열 번호 18),
RMMPNAPYL(서열 번호 25),
RMFPNAPYV(서열 번호 28) 혹은
YMFPNAPYL(서열 번호 14)(국제 공개 제2009/072610호 참조);
CMTWNQMNL(서열 번호 3)의 개변 킬러 펩티드임
CYTWNQMNL(서열 번호 45)(국제 공개 제2002/79253호 참조);
Xaa-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu(서열 번호 55)(본 서열 중 Xaa는 Ser 또는 Ala를 나타낸다) 혹은
Xaa-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu(서열 번호 56)(본 서열 중 Xaa는 Ser, Ala, Abu, Arg, Lys, Orn, Cit, Lue, Phe 또는 Asn을 나타낸다)(국제 공개 제2004/026897호 참조);
ALLPAVPSL(서열 번호 52)의 개변 킬러 펩티드임
AYLPAVPSL(서열 번호 57)(국제 공개 제2003/106682호 참조);
SLGEQQYSV(서열 번호 53)의 개변 킬러 펩티드임
FLGEQQYSV(서열 번호 58),
SMGEQQYSV(서열 번호 59) 혹은
SLMEQQYSV(서열 번호 60)(국제 공개 제2009/072610호 참조); 또는
RVPGVAPTL(서열 번호 54)의 개변 킬러 펩티드임
RYPGVAPTL(서열 번호 61)(국제 공개 2003/106682호 참조).
서열 번호: 1에 기재된 인간의 WT1의 아미노산 서열에 있어서 연속하는 8 내지 35 잔기의 아미노산을 포함하는 부분 펩티드가 아닌 아미노산 서열로서는, 예를 들어 다음과 같은 아미노산 서열을 들 수 있다(국제 공개 2007/063903호 참조).
C-CYTWNQMNL(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.) 또는
C-CMTWNQMNL(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.).
본 개시의 개변 킬러 펩티드에는, 예를 들어 다음과 같은 2량체에 다량체 펩티드도 포함된다(국제 공개 제2014/157692호 참조).
식 (2):
Figure pct00017
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로 표시되는 화합물,
식 (3):
Figure pct00018
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물, 혹은
식 (4)
Figure pct00019
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로 표시되는 화합물.
본 명세서에 있어서 「헬퍼형」, 「헬퍼 펩티드」 등의 용어는, 헬퍼 T 세포를 활성화시키는 능력을 갖는 펩티드를 의미한다. 헬퍼 T 세포의 활성화란, 헬퍼 T 세포가 갖는 B 세포의 항체 산생이나 킬러 T 세포의 활성화 등을 보조하는 기능이 증대하는 것, 및/또는 헬퍼 T 세포의 수가 증대하는 것을 말한다. 「헬퍼(형)」인지의 여부는 대표적으로 이하의 시험에 의해 판정한다. 즉, 플로 사이토메트리 등의 방법에 의해, CD4가 T 세포의 표면에 발현함으로써 판정할 수 있다. 대체적으로, 목적 세포를 항원으로 자극하고, 항원 특이적으로 IFN-α 및 IFN-γ 등의 사이토카인이 산생된 것을 면역 염색법에 의해 해석함으로써도 판정할 수 있다.
본 개시에 있어서의 「MHC 클래스 II 구속성」이란, MHC 클래스 II 분자와 결합하여 헬퍼 T 세포를 유도하는 특성을 의미한다.
MHC 클래스 II 분자에 상당하는 HLA는 HLA-DR, DQ 및 DP 등의 서브타입으로 분류된다. 「MHC 클래스 II 구속성」으로서, 바람직하게는 HLA-DR 구속성, HLA-DQ 구속성 또는 HLA-DP 구속성을 들 수 있다.
따라서, 본 개시에 있어서의 「MHC 클래스 II 구속성 WT1 펩티드」 는, 시험관 내 및/또는 생체 내로 MHC 클래스 II 항원에 결합하고, 헬퍼 T 세포를 유도하는 펩티드를 의미한다. 「MHC 클래스 II 구속성 WT1 펩티드」의 아미노산 잔기수는 7 내지 30이며, 바람직하게는 14 내지 30이다.
본 개시에 있어서의 「WT1 펩티드 또는 그의 유사체」가 헬퍼 펩티드인 경우에는, 아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하며 헬퍼 T 세포 유도 활성을 갖는 펩티드를 의미한다.
본 개시에 있어서의 「아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 갖는 개변 아미노산 서열을 포함하며 헬퍼 T 세포 유도 활성을 갖는 펩티드」는, 「개변 헬퍼 펩티드」라고도 불린다. 당해 개변 헬퍼 펩티드는, 아미노산 서열에 있어서 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, MHC 클래스 II에 결합하고, 헬퍼 T 세포를 유도하는 펩티드를 의미한다. 부가(삽입도 포함된다)되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1 내지 3이다. 결실되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1 내지 5이다. 개변에 있어서 부가되는 아미노산 또는 치환되는 아미노산은, 유전자에 의해 코드되는 20종류의 아미노산 이외의 비천연의 아미노산이어도 된다.
개변 헬퍼 펩티드로서는 예를 들어, 다음과 같은 펩티드를 들 수 있다.
SGQARMFPNAPYLPSCLES(서열 번호 69)의 개변 헬퍼 펩티드임
SGQAYMFPNAPYLPSCLES(서열 번호 70)(국제 공개 제2004/063217호 참조)
SGQARMFPNAPYLPSC(서열 번호 71) 혹은
SGQAYMFPNAPYLPSC(서열 번호 72); 또는
PGCNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호 49),
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호 62),
CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호 64),
CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호 65) 혹은
CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호 66); 또는
WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50) 혹은
WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51).
본 개시의 「WT1 펩티드 또는 그의 유사체」는, 킬러 펩티드 및 헬퍼 펩티드의 조성물로 함으로써 킬러형 및 헬퍼형의 양쪽의 활성도 갖는다. 킬러형 및 헬퍼형의 양쪽의 활성의 것으로서는 예를 들어, 다음과 같은 것을 들 수 있다.
식 (2):
Figure pct00020
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로 표시되는 화합물,
식 (3):
Figure pct00021
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물, 및
식 (4)
Figure pct00022
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로 표시되는 화합물로 이루어지는 군에서 선택되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
이하의 아미노산 서열:
CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호 63),
CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호 64),
CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호 65),
WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50) 및
WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)
로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는
그의 약학상 허용되는 염을 하나 이상 포함하는 조성물;
식 (2):
Figure pct00023
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물; 및
식 (3):
Figure pct00024
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물.
본 명세서에 있어서 「아쥬반트」란, 주제(예를 들어, 본 개시에 있어서의 WT1 펩티드)에 대한 보조제를 의미한다. 본 개시에 있어서, 아쥬반트는 치료약 또는 예방약에 있어서 WT1 펩티드가 야기하는 면역 응답을 증강 또는 개량하는 물질을 말한다. 본 개시에 있어서 아쥬반트로서는, 예를 들어 수산화나트륨, 수산화알루미늄, 인산칼슘, 인산알루미늄, 명반, 페페수(Pepesu) 또는 카르복시비닐 폴리머 등의 침강성 아쥬반트여도 되고, 또는 유동 파라핀, 라놀린, 프로인트, Montanide ISA763AVG, Montanide ISA51, 불완전 프로인트 아쥬반트 또는 완전 프로인트 아쥬반트 등의 유성 아쥬반트여도 된다.
본 명세서에 있어서 「선종」이란, 폴립 중, 암화의 위험성이 높은 것을 말한다. 「폴립」이란, 소장, 대장 또는 직장 등의 장관 조직의 내벽에 생긴, 버섯상이나 사마귀상의 융기성 병변의 총칭을 말한다. 선종은 종양성 폴립이며, 대장암 등의 암으로 변화할 위험성이 높다.
선종 중에서도 대장에 있어서 발증한 선종은 「대장 선종」이라고 총칭된다. 대장 선종으로서는, 유전성의 대장 선종(예를 들어, 가족성 대장 선종증 등), 및 비유전성의 대장 선종증이 존재한다. 「비유전성의 대장 선종증」이란, APC 유전자에 있어서의 변이를 특징으로 하지 않고, 생활 습관, 식생활, 음주, 흡연, 스트레스 등을 요인으로 하여 장관에 다수의 선종이 형성되는 질환을 말하며, 양성 종양으로 분류된다.
본 명세서에 있어서 사용하는 경우, 「치료」한다란, 이미 발증하고 있는 본 개시의 표적으로 하는 질환, 장애 또는 증상의 진행을 멈추고, 바람직하게는 치유시키는 것을 말한다. 치료 효과의 판정에 대해서는, 「고형암의 치료 효과 판정을 위한 신가이드 라인」(RECIST) <http://www.jcog.jp/doctor/tool/C_150_0010.pdf로부터 입수 가능> 또는 그의 최신판에 의해 행할 수 있다. WHO 또는 RECIST 기준에 의한 재량 효과의 정의는 이하와 같이 되어 있다.
Figure pct00025
본 명세서에 있어서 「치료약(제)」이란, 광의로는, 목적으로 하는 상태(예를 들어, 가족성 대장 선종증 등의 질환 등)를 치료할 수 있는 모든 약제를 말한다. 본 개시의 일 실시 형태에 있어서 「치료약」은, 유효 성분과, 약리학적으로 허용되는 1개 혹은 그 이상의 담체를 포함하는 의약 조성물이어도 된다. 의약 조성물은 예를 들어 유효 성분과 상기 담체를 혼합하고, 제제학의 기술분야에 있어서 알려진 임의의 방법에 의해 제조할 수 있다. 또한 치료약은 치료를 위하여 사용되는 것이면 사용 형태는 한정되지 않고, 유효 성분 단독이어도 되고, 유효 성분과 임의의 성분의 혼합물이어도 된다. 또한 상기 담체의 형상은 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 고체 또는 액체(예를 들어, 완충액)여도 된다.
본 명세서에 있어서 사용하는 경우, 「예방」한다란, 본 개시의 표적으로 하는 질환, 장애 또는 증상이 발생하기 전에, 어떠한 수단에 의해 그 질환, 장애 또는 증상을 발생시키지 않거나 또는 적어도 지연시키는 것, 혹은 질환, 장애 또는 증상의 원인 자체가 발생했다고 해도 그것이 원인인 장애가 발생하지 않는 상태로 하는 것을 말한다.
본 명세서에 있어서 「예방약(제)」이란, 광의로는, 목적으로 하는 상태(예를 들어, 가족성 대장 선종증 등의 질환 등)를 예방할 수 있는 모든 약제를 말한다.
본 명세서에 있어서 사용하는 경우, 「개선」한다란, 이미 발증하고 있는 본 개시의 표적으로 하는 질환, 장애 또는 증상의 진행을 완전하게든 또는 부분적으로든 상관없이 정지시키는 것, 또는 경감하는 것을 말한다.
본 명세서에 있어서 「피검체(자)」란, 본 개시의 예방 또는 치료 등의 대상이 되는 대상(예를 들어, 인간 등의 생물 또는 생물로부터 취출한 세포, 혈액, 혈청 등)을 말한다.
본 명세서에 있어서 「말초혈 단핵구」 또는 「PBMC」란, 말초혈로부터 분리된 단구나 림프구를 포함하는 단핵구 또는 단핵 세포를 말한다. 말초혈 단핵구는 T 세포, B 세포, NK 세포, 단구 및 수지상 세포 등의 다양한 혈구 세포를 포함한다. 말초혈 단핵구를 자극함으로써, 세포 상해성 T 세포나 헬퍼 T 세포 등으로 분화시킬 수 있다.
본 명세서에 있어서, 예를 들어 WT1에 대하여 특이적인 세포 상해성 T 세포 및 헬퍼 T 세포는, 각각 「WT1 특이적 세포 상해성 T 세포」 및 「WT1 특이적 헬퍼 T 세포」라고 한다. 본 개시에 기재되어 있는 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 사용함으로써 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도할 수 있다.
본 명세서에 있어서 「미숙 수지상 세포」란, 펩티드, 세포 등을 감작시킴으로써, 그 펩티드 또는 세포 등에 대한 항원을 제시할 수 있는 수지상 세포를 말한다. 미숙 수지상 세포를 자극함으로써, 특정 펩티드를 제시하는 수지상 세포 등으로 분화시킬 수 있다.
본 명세서에 있어서, 예를 들어 WT1을 제시하는 수지상 세포는 각각 「WT1 제시 수지상 세포」라고 한다. 본 명세서에 기재되어 있는 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 사용함으로써 WT1 제시 수지상 세포를 유도할 수 있다.
항원 제시 세포 또는 킬러 T 세포 또는 헬퍼 T 세포의 유도 또는 활성화 방법은 당업자에게 공지이다. 생체 내에서는, WT1 펩티드를 대상에게 투여함으로써, 이들 세포를 유도 또는 활성화할 수 있다. 시험관 내에 있어서는, 예를 들어 대상 유래의 림프구를 포함하는 시료와, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 반응시킴으로써 킬러 T 세포를 얻어도 된다. 또한 예를 들어, 대상 유래의 말초혈 단핵구를 WT1 펩티드의 존재 하에서 배양하고, 해당 말초혈 단핵구로부터 WT1 특이적 CTL을 유도해도 된다. 또한 예를 들어, 대상 유래의 미숙 항원 제시 세포를 WT1 펩티드의 존재 하에서 배양함으로써, HLA 분자를 통하여 WT1 펩티드를 제시하는 항원 제시 세포를 유도해도 된다. 미숙 항원 제시 세포는 성숙하여 항원 제시 세포가 될 수 있는 세포를 말하며, 미숙 수지상 세포 등이 예시된다. 또한 예를 들어 WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여, 헬퍼 T 세포를 활성화해도 된다. 본 개시의 의약 또는 조성물에 사용하는 항원 제시 세포 또는 킬러 T 세포 또는 헬퍼 T 세포는, 어느 WT1 펩티드 또는 그의 유도체, 혹은 핵산 분자를 사용하여 유도 또는 활성화된 것이어도 된다. 이와 같이 하여 유도 또는 활성화된 항원 제시 세포 또는 킬러 T 세포 또는 헬퍼 T 세포를 대상에게, 바람직하게는 이들 세포를 얻은 대상에게 투여하여, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방을 행할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 (WT1 펩티드 등의) 「유연체(類緣體)」, 「유도체」, 「유사체」 또는 「변이체」는, 바람직하게는 한정을 의도하는 것은 아니지만, 대상이 되는 단백질(예를 들어, WT1 펩티드)에 실질적으로 상동인 영역을 포함하는 분자를 포함하고, 이러한 분자는 여러가지 실시 형태에 있어서, 동일 사이즈의 아미노산 서열에 걸쳐, 또는 당해 분야에서 공지된 컴퓨터 상동성 프로그램에 의해 얼라인먼트를 행하여 얼라인되는 서열과 비교했을 때, 적어도 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％, 90％, 95％ 또는 99％ 동일하거나, 혹은 이러한 분자를 코드하는 핵산은 (고도로) 엄격한 조건, 중정도로 엄격한 조건, 또는 엄격하지 않은 조건 하에서, 구성 요소 단백질을 코드하는 서열로 하이브리다이즈 가능하다. 이것은, 각각 아미노산 치환, 결실 및 부가에 의해 단백질을 개변한 산물이며, 그의 유도체가 또한 원래의 단백질의 생물학적 기능을 반드시 동일한 정도는 아니어도 되지만 나타내는 단백질을 의미한다. 예를 들어, 본 명세서에 있어서 기재되거나 혹은 당해 분야에서 공지된 적절하게 이용 가능한 시험관 내 어세이에 의해, 이러한 단백질의 생물학적 기능을 조사하는 것도 가능하다. 본 명세서에서 사용되는 「기능적으로 활성인」 또는 「기능적 활성을 갖는다」는, 본 명세서에 있어서 본 개시의 폴리펩티드, 즉 프래그먼트 또는 유도체가 관련하는 양태에 따라서, 생물학적 활성 등의 단백질의 구조적 기능, 제어 기능, 또는 생화학적 기능을 갖는 것을 가리킨다.
본 개시에 있어서 WT1 펩티드의 프래그먼트란, WT1 펩티드의 임의의 영역을 포함하는 폴리펩티드이며, 본 개시의 목적(예를 들어, 펩티드 백신)으로서 기능하는 한, 반드시 천연의 WT1 펩티드의 생물학적 기능 모두를 갖고 있지는 않아도 된다.
본 명세서에 있어서 「단백질」, 「폴리펩티드」, 「올리고펩티드」 및 「펩티드」는 본 명세서에 있어서 동일한 의미로 사용되고, 임의의 길이의 아미노산 폴리머를 말한다. 이 폴리머는 직쇄여도 되고 분지되어 있어도 되며, 환상이어도 된다. 아미노산은 천연의 것이어도 되고 비천연의 것이어도 되며, 개변된 아미노산이어도 된다. 이 용어는 또한, 복수의 폴리펩티드쇄의 복합체로 어셈블된 것을 포함할 수 있다. 이 용어는 또한, 천연 또는 인공적으로 개변된 아미노산 폴리머도 포함한다. 그러한 개변으로서는, 예를 들어 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화 또는 임의의 다른 조작 혹은 개변(예를 들어, 표지 성분과의 결합체화)이 포함된다. 이 정의에는 또한, 예를 들어 아미노산의 1 또는 2 이상의 유사체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 비천연 아미노산 등을 포함한다), 펩티드 유사 화합물(예를 들어, 펩토이드) 및 당해 분야에 있어서 공지된 다른 개변이 포함된다. 본 명세서에 있어서 「아미노산」은, 아미노기와 카르복실기를 갖는 유기 화합물의 총칭이다. 본 개시의 실시 형태에 관계되는 단백질 또는 효소가 「특정한 아미노산 서열」을 포함할 때, 그 아미노산 서열 중 어느 아미노산이 화학 수식을 받고 있어도 된다. 또한, 그 아미노산 서열 중 어느 아미노산이 염, 또는 용매화물을 형성하고 있어도 된다. 또한, 그 아미노산 서열 중 어느 아미노산이 L형 또는 D형이어도 된다. 그들과 같은 경우에도, 본 개시의 실시 형태에 관계되는 단백질은 상기 「특정한 아미노산 서열」을 포함한다고 할 수 있다. 단백질에 포함되는 아미노산이 생체 내에서 받는 화학 수식으로서는, 예를 들어 N 말단 수식(예를 들어, 아세틸화, 미리스토일화 등), C 말단 수식(예를 들어, 아미드화, 글리코실포스파티딜이노시톨 부가 등), 또는 측쇄 수식(예를 들어, 인산화, 당쇄 부가 등) 등이 알려져 있다. 아미노산은 본 개시의 목적을 충족하는 한, 천연의 것이어도 되고 비천연의 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 「폴리뉴클레오티드」, 「올리고뉴클레오티드」 및 「핵산」은 본 명세서에 있어서 동일한 의미로 사용되고, 임의의 길이의 뉴클레오티드의 폴리머를 말한다. 이 용어는 또한, 「올리고뉴클레오티드 유도체」 또는 「폴리뉴클레오티드 유도체」를 포함한다. 「올리고뉴클레오티드 유도체」 또는 「폴리뉴클레오티드 유도체」란, 뉴클레오티드의 유도체를 포함하거나, 또는 뉴클레오티드 간의 결합이 통상과는 다른 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드를 말하며, 호환적으로 사용된다. 그러한 올리고뉴클레오티드로서 구체적으로는, 예를 들어 2'-O-메틸-리보뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드 중의 인산디에스테르 결합이 포스포로티오에이트 결합으로 변환된 올리고뉴클레오티드 유도체, 올리고뉴클레오티드 중의 인산디에스테르 결합이 N3'-P5' 포스포로아미데이트 결합으로 변환된 올리고뉴클레오티드 유도체, 올리고뉴클레오티드 중의 리보오스와 인산디에스테르 결합이 펩티드 핵산 결합으로 변환된 올리고뉴클레오티드 유도체, 올리고뉴클레오티드 중의 우라실이 C-5 프로피닐우라실로 치환된 올리고뉴클레오티드 유도체, 올리고뉴클레오티드 중의 우라실이 C-5 티아졸우라실로 치환된 올리고뉴클레오티드 유도체, 올리고뉴클레오티드 중의 시토신이 C-5 프로피닐시토신으로 치환된 올리고뉴클레오티드 유도체, 올리고뉴클레오티드 중의 시토신이 페녹사진 수식 시토신(phenoxazine-modified cytosine)으로 치환된 올리고뉴클레오티드 유도체, DNA 중의 리보오스가 2'-O-프로필리보오스로 치환된 올리고뉴클레오티드 유도체 및 올리고뉴클레오티드 중의 리보오스가 2'-메톡시에톡시리보오스로 치환된 올리고뉴클레오티드 유도체 등이 예시된다. 이외에 달리 언급이 없는 한, 특정한 핵산 서열은 또한 명시적으로 나타난 서열과 마찬가지로, 그의 보존적으로 개변된 개변체(예를 들어, 축중 코돈 치환체) 및 상보 서열을 포함하는 것이 기도된다. 구체적으로는, 축중 코돈 치환체는 하나 또는 그 이상의 선택된(또는, 모든) 코돈의 3번째의 위치가 혼합 염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 제작함으로써 달성될 수 있다(Batzer et al., Nucleic Acid Res.19: 5081(1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608(1985); Rossolini et al., Mol.Cell.Probes 8: 91-98(1994)). 본 명세서에 있어서 「핵산」은 또한, 유전자, cDNA, mRNA, 올리고뉴클레오티드, 및 폴리뉴클레오티드와 호환 가능하게 사용된다. 본 명세서에 있어서 「뉴클레오티드」는 천연의 것이어도 되고 비천연의 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 「유전자」란, 유전 형질을 규정하는 인자를 말하며, 「유전자」는 「폴리뉴클레오티드」, 「올리고뉴클레오티드」 및 「핵산」을 가리키는 경우가 있다.
본 명세서에 있어서 유전자의 「상동성」이란, 2 이상의 유전자 서열의 서로에 대한 동일성의 정도를 말하며, 일반적으로 「상동성」을 갖는다란, 동일성 또는 유사성의 정도가 높은 것을 말한다. 따라서, 어떤 2개의 유전자의 상동성이 높을수록, 그들 서열의 동일성 또는 유사성은 높다. 2종류의 유전자가 상동성을 갖는지의 여부는 서열의 직접 비교, 또는 핵산의 경우 엄격한 조건 하에서의 하이브리다이제이션법에 의해 조사될 수 있다. 2개의 유전자 서열을 직접 비교하는 경우, 그 유전자 서열간에서 DNA 서열이 대표적으로는 적어도 50％ 동일한 경우, 바람직하게는 적어도 70％ 동일한 경우, 보다 바람직하게는 적어도 80％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％ 또는 99％ 동일한 경우, 그들 유전자는 상동성을 갖는다. 따라서 본 명세서에 있어서 「상동체」 또는 「상동 유전자 산물」은, 본 명세서에 추가로 기재하는 복합체의 단백질 구성 요소와 동일한 생물학적 기능을 발휘하는, 다른 종, 바람직하게는 포유 동물, 보다 바람직하게는 인간에게 있어서의 단백질을 의미한다. 이와 같은 상동체는 또한 「오르토로그 유전자 산물」이라고도 칭해지는 경우도 있다. 본 개시의 목적에 합치하는 한, 이러한 상동체, 상동 유전자 산물, 오르토로그 유전자 산물 등도 사용할 수 있음이 이해된다.
아미노산은 그의 일반적으로 공지된 3문자 기호이거나, 또는 IUPAC-IUB 생화학적 명명 위원회(Biochemical Nomenclature Co㎜ission)에 의해 권장되는 1문자 기호 중 어느 것에 의해, 본 명세서 중에서 언급될 수 있다. 뉴클레오티드도 마찬가지로, 일반적으로 인지된 1문자 코드에 의해 언급될 수 있다. 본 명세서에서는 아미노산 서열 및 염기 서열의 유사성, 동일성 및 상동성의 비교는, 서열 분석용 툴인 BLAST를 사용하여 디폴트 파라미터를 사용하여 산출된다. 동일성의 검색은 예를 들어 NCBI의 BLAST2.7.1(2017.10.19 발행)을 사용하여 행할 수 있다. 본 명세서에 있어서의 「동일성」의 값은 통상적으로는 상기 BLAST를 사용하여, 디폴트의 조건에서 얼라인했을 때의 값을 말한다. 단, 파라미터의 변경에 의해 더 높은 값이 나올 경우에는, 가장 높은 값을 동일성의 값으로 한다. 복수의 영역에서 동일성이 평가되는 경우에는 그 중 가장 높은 값을 동일성의 값으로 한다. 「유사성」은 동일성에 더하여, 유사한 아미노산에 대해서도 계산에 넣은 수치이다.
본 개시의 일 실시 형태에 있어서 「몇개」는, 예를 들어 10, 8, 6, 5, 4, 3, 또는 2개여도 되고, 그들 중 어느 값 이하여도 된다. 1 또는 몇개의 아미노산 잔기의 결실, 부가, 삽입, 또는 다른 아미노산에 의한 치환을 받은 폴리펩티드가 그의 생물학적 활성을 유지하는 것은 알려져 있다(Mark et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1984 Sep; 81(18): 5662-5666., Zoller et al., Nucleic Acids Res. 1982 Oct 25; 10(20): 6487-6500., Wang et al., Science. 1984 Jun 29; 224(4656): 1431-1433.). 결실 등이 이루어진 단백질은, 예를 들어 부위 특이적 변이 도입법, 랜덤 변이 도입법, 또는 단백질 파지 라이브러리를 사용한 바이오패닝 등에 의해 제작할 수 있다. 부위 특이적 변이 도입법으로서는, 예를 들어 KOD-Plus-Mutagenesis Kit(TOYOBO CO., LTD.)를 사용할 수 있다. 결실 등을 도입한 변이형 단백질로부터, 야생형과 마찬가지의 활성이 있는 단백질을 선택하는 것은, FACS 해석이나 ELISA 등의 각종 캐릭터리제이션을 행함으로써 가능하다.
본 개시의 일 실시 형태에 있어서 동일성 등의 수치인 「70％ 이상」은, 예를 들어 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 99％ 이상, 또는 100％여도 되고, 그들 기점이 되는 수치 중 어느 2개의 값의 범위 내여도 된다. 상기 「동일성」은, 2개 혹은 복수간의 아미노산 서열에 있어서 상동인 아미노산수의 비율을 상술한 바와 같은 공지된 방법에 따라서 산정힌다. 구체적으로 설명하면 비율을 산정하기 전에는, 비교하는 아미노산 서열군의 아미노산 서열을 정렬시키고, 동일 아미노산의 비율을 최대로 하기 위하여 필요한 경우에는 아미노산 서열의 일부에 간극을 도입한다. 정렬을 위한 방법, 비율의 산정 방법, 비교 방법, 및 그들에 관련하는 컴퓨터 프로그램은 당해 분야에서 종래부터 잘 알려져 있다(예를 들어, 상술한 BLAST 등). 본 명세서에 있어서 「동일성」 및 「유사성」은 특별히 언급하지 않는 한, NCBI의 BLAST에 의해 측정된 값으로 나타낼 수 있다. BLAST에서 아미노산 서열을 비교할 때의 알고리즘에는, Blastp을 디폴트 설정으로 사용할 수 있다. 측정 결과는 Positives 또는 Identities로서 수치화된다.
본 명세서에 있어서 「엄격(한) 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드」란, 당해 분야에서 관용되는 주지의 조건을 말한다. 본 개시의 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된 폴리뉴클레오티드를 프로브로 하여, 콜로니·하이브리다이제이션법, 플라크·하이브리다이제이션법 혹은 서던 블롯 하이브리다이제이션법 등을 사용함으로써, 그러한 폴리뉴클레오티드를 얻을 수 있다. 구체적으로는, 콜로니 혹은 플라크 유래의 DNA를 고정화한 필터를 사용하여, 0.7 내지 1.0M의 NaCl 존재 하, 65℃에서 하이브리다이제이션을 행한 후, 0.1 내지 2배 농도의 SSC(saline-sodiumcitrate; 염수-시트르산나트륨) 용액(1배 농도의 SSC 용액의 조성은 150mM 염화나트륨, 15mM 시트르산나트륨임)을 사용하여, 65℃ 조건 하에서 필터를 세정함으로써 동정할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 「엄격한 조건」은, 예를 들어 이하의 조건을 채용할 수 있다. (1) 세정을 위하여 저이온 강도 및 고온도를 사용한다(예를 들어 50℃에서, 0.015M의 염화나트륨/0.0015M의 시트르산나트륨/0.1％의 도데실황산나트륨), (2) 하이브리다이제이션 중에 포름아미드 등의 변성제를 사용한다(예를 들어 42℃에서, 50％(v/v) 포름아미드와 0.1％ 소혈청 알부민/0.1％ 피콜/0.1％의 폴리비닐피롤리돈/50mM의 pH6.5의 인산나트륨 버퍼, 및 750mM의 염화나트륨, 75mM 시트르산나트륨), 또는 (3) 20％ 포름아미드, 5×SSC, 50mM 인산나트륨(pH7.6), 5×덴하르트액, 10％ 황산덱스트란, 및 20mg/ml의 변성 전단 연어 정자 DNA를 포함하는 용액 중에서, 37℃에서 밤새 인큐베이션하고, 다음으로 약 37 내지 50℃에서 1×SSC로 필터를 세정한다. 또한, 포름아미드 농도는 50％ 또는 그 이상이어도 된다. 세정 시간은 5, 15, 30, 60, 혹은 120분, 또는 그들 이상이어도 된다. 하이브리다이제이션 반응의 엄격함에 영향을 미치는 요소로서는 온도, 염 농도 등 복수의 요소가 생각되고, 상세는 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)]을 참조할 수 있다. 「고도로 엄격한 조건」의 예는, 0.0015M 염화나트륨, 0.0015M 시트르산나트륨, 65 내지 68℃, 또는 0.015M 염화나트륨, 0.0015M 시트르산나트륨, 및 50％ 포름아미드, 42℃이다. 하이브리다이제이션은 문헌[Molecular Cloning 2nd ed., Current Protocols in Molecular Biology, Supplement 1-38, DNA Cloning 1: Core Techniques, A Practical Approach, Second Edition, Oxford University Press(1995)] 등의 실험서에 기재되어 있는 방법에 준하여 행할 수 있다. 여기서, 엄격한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 서열로부터는, 바람직하게는 A 서열만 또는 T 서열만을 포함하는 서열이 제외된다. 중정도의 엄격한 조건은, 예를 들어 DNA의 길이에 기초하여 당업자에 의해 용이하게 결정할 수 있고, 문헌[Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제3번, Vol.1, 7.42-7.45 Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001]에 나타나고, 그리고 니트로셀룰로오스 필터에 관하여, 5×SSC, 0.5％ SDS, 1.0mM EDTA(pH8.0)의 전세정 용액, 약 40 내지 50℃에서의 약 50％ 포름아미드, 2×SSC 내지 6×SSC(또는 약 42℃에서의 약 50％ 포름아미드 중의, 스타크 용액(Stark's solution) 등의 다른 마찬가지의 하이브리다이제이션 용액)의 하이브리다이제이션 조건, 및 약 60℃, 0.5×SSC, 0.1％ SDS의 세정 조건의 사용이 포함된다. 따라서 본 개시에 있어서 사용되는 폴리펩티드에는, 본 개시에서 특별히 기재된 폴리펩티드를 코드하는 핵산 분자에 대하여, 고도 또는 중정도로 엄격한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산 분자에 의해 코드되는 폴리펩티드도 포함된다.
본 개시의 WT1 펩티드는, 바람직하게는 「정제된」 또는 「단리된」 것일 수 있다. 본 명세서에 있어서 「정제된」 물질 또는 생물학적 인자(예를 들어, 핵산 또는 단백질 등)란, 그 물질 또는 생물학적 인자에 천연으로 수반되는 인자의 적어도 일부가 제거된 것을 말한다. 따라서, 통상, 정제된 생물학적 인자에 있어서의 그 생물학적 인자의 순도는, 그 생물학적 인자가 통상 존재하는 상태보다 높다(즉 농축되어 있다). 본 명세서 중에서 사용되는 용어 「정제된」은, 바람직하게는 적어도 75중량％, 보다 바람직하게는 적어도 85중량％, 보다 더욱 바람직하게는 적어도 95중량％, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 98중량％의 동형의 생물학적 인자가 존재하는 것을 의미한다. 본 개시에서 사용되는 물질 또는 생물학적 인자는 바람직하게는 「정제된」 물질이다. 본 명세서에서 사용되는 「단리된」 물질 또는 생물학적 인자(예를 들어, 핵산 또는 단백질 등)란, 그 물질 또는 생물학적 인자에 천연으로 수반되는 인자가 실질적으로 제거된 것을 말한다. 본 명세서 중에서 사용되는 용어 「단리된」은 그 목적에 따라 변동되기 때문에, 반드시 순도로 표시될 필요는 없지만, 필요한 경우 바람직하게는 적어도 75중량％, 보다 바람직하게는 적어도 85중량％, 보다 더욱 바람직하게는 적어도 95중량％, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 98중량％의 동형의 생물학적 인자가 존재하는 것을 의미한다. 본 개시에서 사용되는 물질은 바람직하게는 「단리된」 물질 또는 생물학적 인자이다.
본 명세서에 있어서 「프래그먼트」란, 전체 길이의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드(길이가 n)에 대하여 1 내지 n-1까지의 서열 길이를 갖는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 말한다. 프래그먼트의 길이는 그 목적에 따라 적절히 변경할 수 있고, 예를 들어 그 길이의 하한으로서는 폴리펩티드의 경우, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 및 그 이상의 아미노산을 들 수 있고, 여기에 구체적으로 열거하고 있지 않은 정수로 표현되는 길이(예를 들어, 11 등)도 또한, 하한으로서 적절할 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드의 경우, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100 및 그 이상의 뉴클레오티드를 들 수 있고, 여기에 구체적으로 열거하고 있지 않은 정수로 표현되는 길이(예를 들어, 11 등)도 또한, 하한으로서 적절할 수 있다. 본 명세서에 있어서 이러한 프래그먼트는, 예를 들어 전체 길이의 것이 암 백신으로서 기능하는 경우, 그 프래그먼트 자체도 또한 암 백신으로서의 기능을 갖는 한, 본 개시의 범위 내에 들어가는 것이 이해된다.
본 명세서에 있어서 「생물학적 기능」이란, 어떤 유전자 또는 그에 관한 핵산 분자 혹은 폴리펩티드에 대하여 언급할 때, 그 유전자, 핵산 분자 또는 폴리펩티드가 생체 내 또는 생체 외에 있어서 가질 수 있는 특정한 기능을 말하며, 이것에는 예를 들어 킬러 T 세포 또는 헬퍼 T 세포의 활성화 등을 들 수 있지만, 그들에 한정되지 않는다. 본 명세서에 있어서 생물학적 기능은, 대응하는 「생물학적 활성」에 의해 발휘될 수 있다. 본 명세서에 있어서 「생물학적 활성」이란, 어떤 인자(예를 들어, 폴리뉴클레오티드, 단백질 등)가 가질 수 있는 활성을 말하며, 여러가지 기능(예를 들어, 킬러 T 세포 또는 헬퍼 T 세포의 활성화)을 발휘하는 활성이 포함된다. 「생물학적 활성」은 생체 내에서 발휘되는 활성이어도 되고, 분비 등에 의해 생체 외에서 발휘되는 활성이어도 된다. 예를 들어, 어떤 인자가 효소일 경우, 그의 생물학적 활성은 그 효소 활성을 포함한다. 그러한 생물학적 활성은, 당해 분야에 있어서 주지의 기술에 의해 측정할 수 있다. 따라서 「활성」은, 결합(직접적 또는 간접적 중 어느 것)을 나타내거나 또는 명확히 하거나; 응답에 영향을 미치는(즉, 얼마간의 폭로 또는 자극에 응답하는 측정 가능한 영향을 갖는) 여러가지 측정 가능한 지표를 말하며, 예를 들어 본 개시의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드에 직접 결합하는 화합물의 친화성, 또는 예를 들어 몇 가지의 자극 후 또는 사상 후의 상류 또는 하류의 단백질의 양 혹은 다른 유사한 기능의 척도도 포함될 수 있다.
본 명세서에 있어서 유전자, 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드 등의 「발현」이란, 그 유전자 등이 생체 내에서 일정한 작용을 받아 다른 형태가 되는 것을 말한다. 바람직하게는 유전자, 폴리뉴클레오티드 등이 전사 및 번역되어서, 폴리펩티드의 형태가 되는 것을 말하는데, 전사되어서 mRNA가 제작되는 것도 또한 발현의 일 양태이다. 따라서, 본 명세서에 있어서 「발현 산물」이란, 이러한 폴리펩티드 혹은 단백질, 또는 mRNA를 포함한다. 보다 바람직하게는, 그러한 폴리펩티드의 형태는 번역 후 프로세싱을 받은 것일 수 있다. 예를 들어, WT1의 발현 레벨은 임의의 방법에 의해 결정할 수 있다. 구체적으로는, WT1의 mRNA의 양, WT1 단백질의 양, 그리고 WT1 단백질의 생물학적인 활성을 평가함으로써, WT1의 발현 레벨을 알 수 있다. WT1의 mRNA나 단백질의 양은, 본 명세서의 다른 개소에 상세하게 설명한 방법 혹은 다른 당해 분야에 있어서 공지된 방법에 의해 결정할 수 있다.
본 명세서에 있어서 「기능적 등가물」이란, 대상이 되는 것의 실체에 대하여, 목적으로 되는 기능이 동일하지만 구조가 다른 임의의 것을 말한다. 따라서, 본 개시의 「WT1 펩티드」의 기능적 등가물은 서열 번호 1과 동일 서열을 갖는 것은 아니지만, 그의 변이체 또는 개변체(예를 들어, 아미노산 서열 개변체 등)이며, WT1 펩티드가 갖는 생물학적 작용을 갖는 것, 그리고 작용하는 시점에 있어서, 그 WT1 펩티드가 갖는 생물학적 작용을 갖는 변이체 혹은 개변체로 변화될 수 있는 것(예를 들어, 그 변이체 혹은 개변체를 코드하는 핵산, 및 그 핵산을 포함하는 벡터, 세포 등을 포함한다)이 포함되는 것이 이해된다. 본 개시에 있어서 WT1 펩티드의 기능적 등가물은, 특별히 언급하고 있지 않더라도 WT1 펩티드와 마찬가지로 사용될 수 있음이 이해된다. 기능적 등가물은 데이터베이스 등을 검색함으로써 알아낼 수 있다. 본 명세서에 있어서 「검색」이란, 전자적으로 또는 생물학적 혹은 다른 방법에 의해, 어떤 핵산 염기 서열을 이용하여 특정한 기능 및/또는 성질을 갖는 다른 핵산 염기 서열을 알아내는 것을 말한다. 전자적인 검색으로서는, BLAST(Altschul et al., J.Mol.Biol.215: 403-410(1990)), FASTA(Pearson & Lipman, Proc.Natl.Acad.Sci., USA 85: 2444-2448(1988)), 스미스 및 워터만(Smith and Waterman)법(Smith and Waterman, J.Mol.Biol.147: 195-197(1981)), 및 니들만 및 분쉬(Needleman and Wunsch)법(Needleman and Wunsch, J.Mol.Biol.48: 443-453(1970)) 등을 들 수 있지만 그들에 한정되지 않는다. 생물학적인 검색으로서는, 엄격한 하이브리다이제이션, 게놈 DNA를 나일론 멤브레인 등에 첩부한 매크로어레이 또는 유리판에 첩부한 마이크로어레이(마이크로어레이 어세이), PCR 및 계 내(in situ) 하이브리다이제이션 등을 들 수 있지만 그들에 한정되지 않는다. 본 명세서에 있어서, 본 개시에 있어서 사용되는 유전자에는 이러한 전자적 검색, 생물학적 검색에 의해 동정된 대응 유전자도 포함되어야 하는 것이 의도된다.
본 개시의 기능적 등가물로서는, 아미노산 서열에 있어서, 1개 혹은 복수개의 아미노산 삽입, 치환 혹은 결실, 또는 그의 한쪽 혹은 양쪽 말단에 부가된 것을 사용할 수 있다. 본 명세서에 있어서, 「아미노산 서열에 있어서, 1개 혹은 복수개의 아미노산 삽입, 치환 혹은 결실, 또는 그의 한쪽 혹은 양쪽 말단에 부가」란, 부위 특이적 돌연변이 유발법 등의 주지의 기술적 방법에 의해, 혹은 천연의 변이에 의해, 천연으로 발생할 수 있을 정도의 복수개의 수의 아미노산의 치환 등에 의해 개변이 이루어져 있는 것을 의미한다. 개변 아미노산 서열은, 예를 들어 1 내지 4개, 바람직하게는 1 내지 3개, 특히 바람직하게는 1 내지 2개, 혹은 1개의 아미노산의 삽입, 치환, 및/또는 결실, 또는 그의 한쪽 혹은 양쪽의 말단에 부가가 이루어진 것일 수 있다. 개변 아미노산 서열은 바람직하게는 그의 아미노산 서열이, 서열 번호 1 내지 5 중 어느 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개(바람직하게는 1개 혹은 몇개 또는 1, 2, 3, 혹은 4개)의 보존적 치환을 갖는 아미노산 서열이어도 된다. 여기서 「보존적 치환」이란, 단백질의 기능을 실질적으로 개변하지 않도록, 1개 또는 복수개의 아미노산 잔기를 다른 화학적으로 유사한 아미노산 잔기로 치환하는 것을 의미한다. 예를 들어, 어떤 소수성 잔기를 다른 소수성 잔기에 의해 치환하는 경우, 어떤 극성 잔기를 동일한 전하를 갖는 다른 극성 잔기에 의해 치환하는 경우 등을 들 수 있다. 이러한 치환을 행할 수 있는 기능적으로 유사한 아미노산은, 아미노산마다 당해 분야에 있어서 공지이다. 구체예를 들면, 비극성(소수성) 아미노산으로서는, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 프롤린, 트립토판, 페닐알라닌, 메티오닌 등을 들 수 있다. 극성(중성) 아미노산으로서는, 글리신, 세린, 트레오닌, 티로신, 글루타민, 아스파라긴, 시스테인 등을 들 수 있다. 양전하를 갖는 (염기성) 아미노산으로서는, 아르기닌, 히스티딘, 리신 등을 들 수 있다. 또한, 음전하를 갖는 (산성) 아미노산으로서는, 아스파르트산, 글루탐산 등을 들 수 있다.
(WT1 펩티드)
본 개시에 있어서 WT1 펩티드로서는, 세포 상해성 T 세포 또는 헬퍼 T 세포의 활성화를 유도하는 WT1 단백질 유래의 펩티드를 들 수 있다. WT1 단백질로서는, 세포 상해성 T 세포의 활성화를 유도하는 WT1 킬러 펩티드와, 헬퍼 T 세포의 활성화를 유도하는 WT1 헬퍼 펩티드를 들 수 있다. WT1 킬러 펩티드로서는, WT1 단백질 유래의 8 내지 12개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 들 수 있고, 바람직하게는 8 내지 9개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 들 수 있다. 또한, 특히 바람직하게는 WT1126 펩티드: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu(서열 번호 2), 또는 WT1235 펩티드: Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(서열 번호 3), 또는 식 (3)
Figure pct00026
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
에 나타나는, WT1126 펩티드와 WT1235 펩티드의 콘쥬게이트이다. WT1 헬퍼 펩티드로서는, WT1 단백질 유래의 14 내지 20개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 들 수 있고, 바람직하게는 16 내지 18개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 들 수 있다. 또한, 특히 바람직하게는 WT135 펩티드(Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly Ser Leu; 서열 번호 4), 또는 WT1332 펩티드: Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His)(서열 번호 5)이다. WT1 펩티드에 있어서 1개 혹은 몇개의 아미노산이 결실, 치환 혹은 부가된 개변 펩티드도, 본 개시에 있어서의 WT1 펩티드로서 사용할 수 있다. 이러한 개변 펩티드로서는, WT1126 펩티드의 개변 펩티드, WT1235 펩티드의 개변 펩티드, WT135 펩티드의 개변 펩티드, 및 WT1332 펩티드의 개변 펩티드를 들 수 있다.
WT1126 펩티드의 개변 펩티드로서는, N 말단으로부터 4 내지 8번째의 아미노산 잔기가 WT1126 펩티드의 N 말단으로부터 4 내지 8번째의 아미노산 잔기(PNAPY)와 동일한 펩티드가 적합하다. 이러한 WT1126 펩티드의 개변 펩티드로서는, 이하의 서열 번호 6 내지 44 중 어느 것에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 펩티드가 바람직하다.
WT1126P1G 펩티드(GMFPNAPYL; 서열 번호 6)
WT1126P1A 펩티드(AMFPNAPYL; 서열 번호 7)
WT1126P1V 펩티드(VMFPNAPYL; 서열 번호 8)
WT1126P1L 펩티드(LMFPNAPYL; 서열 번호 9)
WT1126P1I 펩티드(IMFPNAPYL; 서열 번호 10)
WT1126P1M 펩티드(MMFPNAPYL; 서열 번호 11)
WT1126P1W 펩티드(WMFPNAPYL; 서열 번호 12)
WT1126P1F 펩티드(FMFPNAPYL; 서열 번호 13)
WT1126P1Y 펩티드(YMFPNAPYL; 서열 번호 14)
WT1126P2V 펩티드(RVFPNAPYL; 서열 번호 15)
WT1126P2Q 펩티드(RQFPNAPYL; 서열 번호 16)
WT1126P2A 펩티드(RAFPNAPYL; 서열 번호 17)
WT1126P2L 펩티드(RLFPNAPYL; 서열 번호 18)
WT1126P2I 펩티드(RIFPNAPYL; 서열 번호 19)
WT1126P3I 펩티드(RMIPNAPYL; 서열 번호 20)
WT1126P3L 펩티드(RMLPNAPYL; 서열 번호 21)
WT1126P3G 펩티드(RMGPNAPYL; 서열 번호 22)
WT1126P3A 펩티드(RMAPNAPYL; 서열 번호 23)
WT1126P3V 펩티드(RMVPNAPYL; 서열 번호 24)
WT1126P3M 펩티드(RMMPNAPYL; 서열 번호 25)
WT1126P3P 펩티드(RMPPNAPYL; 서열 번호 26)
WT1126P3W 펩티드(RMWPNAPYL; 서열 번호 27)
WT1126P9V 펩티드(RMFPNAPYV; 서열 번호 28)
WT1126P9A 펩티드(RMFPNAPYA; 서열 번호 29)
WT1126P9I 펩티드(RMFPNAPYI; 서열 번호 30)
WT1126P9M 펩티드(RMFPNAPYM; 서열 번호 31)
WT1126P1D 펩티드(DMFPNAPYL; 서열 번호 32)
WT1126P1E 펩티드(EMFPNAPYL; 서열 번호 33)
WT1126P1H 펩티드(HMFPNAPYL; 서열 번호 34)
WT1126P1K 펩티드(KMFPNAPYL; 서열 번호 35)
WT1126P1N 펩티드(NMFPNAPYL; 서열 번호 36)
WT1126P1P 펩티드(PMFPNAPYL; 서열 번호 37)
WT1126P1Q 펩티드(QMFPNAPYL; 서열 번호 38)
WT1126P1S 펩티드(SMFPNAPYL; 서열 번호 39)
WT1126P1T 펩티드(TMFPNAPYL; 서열 번호 40)
WT1126P2I&P9I 펩티드(RIFPNAPYI; 서열 번호 41)
WT1126P2I&P9V 펩티드(RIFPNAPYV; 서열 번호 42)
WT1126P2L&P9I 펩티드(RLFPNAPYI; 서열 번호 43)
WT1126P2L&P9V 펩티드(RLFPNAPYV; 서열 번호 44)
WT1235 펩티드의 개변 펩티드로서는, WT1235: Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(서열 번호 3), 또는 WT1235m: Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(서열 번호 45)를 포함하는 혹은 이루어지는 펩티드, 서열 번호 3 또는 45의 아미노산 서열을 포함하는 혹은 이루어지는 펩티드의 2량체, 서열 번호 3 또는 45의 아미노산 서열을 포함하는 혹은 이루어지는 펩티드의 시스틴체, 및 상기 아미노산 서열에 있어서 1개 내지 몇개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가되어 있는 아미노산 서열을 포함하는 혹은 이루어지는 펩티드 등이 예시되지만, 이들에 한정되지 않는다. WT1235 펩티드의 개변 펩티드 중에서도, WT1235m 펩티드는 HLA-A*24:02(일본인 최다인 HLA형) 구속성 WT1 펩티드이며, 야생형의 WT1235 펩티드보다 치료 유효성이 높고, 물에 대한 가용성이 우수하다는 점에서 특히 바람직하다.
이들 개변 펩티드로서는, 예를 들어 다음과 같은 것을 들 수 있다.
Cys-Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.), 또는 Cys-Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)는 N 말단 시스테인 잔기의 티올기를 수식함으로써, 특히 물리화학적 성질 및 안정성이 우수하다(국제 공개 제2007/063903호 참조).
넓게 HLA 서브타입을 커버하는 관점에서, 본 실시 형태에 있어서의 WT1 펩티드의 개변 펩티드로서는, 각각 다른 HLA의 서브타입에 대응하는 복수의 펩티드를 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들어, HLA 서브타입 A2 타입에 대응하는 상기 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염, 및 HLA 서브타입 A24 타입에 대응하는 상기 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염의 양쪽을 포함하는 것이 바람직하다. 그러한 경우에는, 예를 들어 의약 조성물은 식 (1):
Figure pct00027
[식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열: RMFPNAPYL(서열 번호 2), ALLPAVPSL(서열 번호 52), SLGEQQYSV(서열 번호 53), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), YMFPNAPYL(서열 번호 14) 및 VLDFAPPGA(서열 번호 68) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르며 이하의 아미노산 서열: CMTWNQMNL(서열 번호 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호 45) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물은 시스테인 잔기가 디술피드 결합을 형성하고 있는 것 등에 의해, 용액 중에서의 산화제 등에 대한 안정성이 우수하여, 의약품 원료로서 일정한 품질을 갖는다.
또한, 본 실시 형태에 있어서의 WT1 펩티드의 개변 펩티드가 상기 식 (1)로 표시되는 화합물(WT1 킬러 펩티드의 결합체)을 포함하는 경우, 체 내에서 ERAP1에 의한 N 말단의 시스테인 잔기간의 디술피드 결합의 환원적 개열에 의해 결합체가 분해되어, 다른 HLA 서브타입에 대응하는 2종류의 에피토프가 생성된다. 식 (1)로 표시되는 결합체과 같이, 다른 HLA 서브타입에 대응하는 복수 종류의 에피토프가 체 내에 있어서 생성되는 결합체는, 대상에 따라 다른 HLA 서브타입에 넓게 대응 가능하고, 큰 집단(Population)을 하나의 결합체에 의해 커버할 수 있기 때문에, 대상에 있어서 효율적으로 CTL을 유도할 수 있다(국제 공개 2014/157692호 참조, 또한 국제 공개 2014/157692호는 본 명세서에 있어서 그 전체가 참고로서 원용된다.).
본 실시 형태에 있어서의 「종양 항원 펩티드 A」란, 7 내지 30 잔기의 아미노산을 포함하는 MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드이다. 식 (1)에 있어서 종양 항원 펩티드 A는, N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합한다.
또한, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물은, 식 (2):
Figure pct00028
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물이어도 되고, 식 (3):
Figure pct00029
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
으로 표시되는 화합물이어도 되고, 식 (4):
Figure pct00030
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물이어도 된다.
WT135 펩티드의 개변 펩티드로서는, 서열 번호 4에 나타나는 아미노산 서열에 있어서, 1개 혹은 몇개의 아미노산이 치환, 또는 결실 혹은 부가된 아미노산 서열이면 특별히 한정되지 않는다.
WT1332 펩티드의 개변 펩티드로서는, 서열 번호 5에 나타나는 아미노산 서열에 있어서, 1개 혹은 몇개의 아미노산이 치환, 또는 결실 혹은 부가된 아미노산 서열이면 특별히 한정되지 않는다. 바람직한 실시 형태에서는, WT1332 펩티드의 개변 펩티드로서는, 서열 번호 5에 나타나는 WT1332 펩티드의 제3 위치, 제6 위치, 제8 위치 및/또는 제11 위치의 아미노산 잔기가,
제3 위치: 페닐알라닌, 트립토판, 발린, 이소류신, 류신, 메티오닌,
제6 위치: 발린, 이소류신, 메티오닌, 아스파르트산, 글루탐산,
제8 위치: 아스파라긴, 세린, 트레오닌, 글루타민, 리신, 아스파르트산,
제11 위치: 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민
중에서 선택되는 어느 아미노산 잔기로 치환된 아미노산 서열을 포함하는 펩티드가 적합하다.
그 중에서도, WT1126 펩티드의 개변 펩티드로서는, WT1126P1F 펩티드(서열 번호 13), WT1126P2L 펩티드(서열 번호 18), WT1126P3M 펩티드(서열 번호 25) 또는 WT1126P9V 펩티드(서열 번호 28)가 바람직하고, WT1126P2L 펩티드, WT1126P3M 펩티드 또는 WT1126P9V 펩티드가 보다 바람직하고, WT1126P9V 펩티드가 더욱 바람직하다.
본 개시의 예방 또는 치료약에 있어서의 WT1 펩티드로서는, WT1126 펩티드, WT1126P1F 펩티드, WT1126P2L 펩티드, WT1126P3M 펩티드 또는 WT1126P9V 펩티드가 바람직하다. 보다 바람직하게는, WT1126 펩티드, WT1126P2L 펩티드, WT1126P3M 펩티드 또는 WT1126P9V 펩티드이며, 더욱 바람직하게는 WT1126 펩티드, 또는 WT1126P9V 펩티드이며, 특히 바람직하게는 WT1126 펩티드이다.
또한, WT1 펩티드로서, WT1 펩티드의 유도체도 사용할 수 있다. 예를 들어, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드의 유도체로서는, 상기 9, 16 또는 18개의 연속하는 아미노산을 포함하는 아미노산 서열의 N 말단 및/또는 C 말단에, 여러가지 물질을 결합시킨 것 등을 들 수 있다. 예를 들어 아미노산, 펩티드, 그들의 유사체 등을 결합시켜도 된다. 이론에 구속되는 것이 아니지만, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드, 또는 그들의 개변 펩티드에 이러한 물질이 결합하고 있는 경우, 이들 물질이 예를 들어 생체 내 효소 등에 의해, 혹은 세포 내 프로세싱 등의 과정에 의해 처리되어, 최종적으로 상기 9, 16 또는 18개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 발생하고, 세포 표면에 제시됨으로써 WT1 특이적 CTL 반응을 인출할 수 있다.
본 실시 형태에 있어서의 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 WT1 헬퍼 펩티드를 더 포함하고 있어도 된다. 본 실시 형태에 있어서의 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가 CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호 63), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호 64), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호 65), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 66) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 더 포함하는 경우에는, 상기 군에서 선택되는 다른 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 및/또는 그 이외의 다른 WT1 헬퍼 펩티드를 더 포함하고 있어도 된다.
WT1 펩티드는, 당해 기술분야에 있어서 통상 사용되는 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976; 펩티드 합성, 마루젠(주), 1975; 펩티드 합성의 기초와 실험, 마루젠(주)1985; 의약품의 개발 속 제14권·펩티드 합성, 히로카와 쇼텐, 1991] 등에 기재되어 있는 펩티드 합성 방법에 의해 합성할 수 있다.
WT1 펩티드 및 개변 펩티드의 스크리닝 방법으로서는, 예를 들어 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)을 갖는 몇사람의 환자의 PBMCs(말초혈 단핵구)를 사용하여, 1회의 펩티드만의 자극으로 IFNγ 어세이를 행하고, 반응이 좋은 펩티드를 선택하는 방법이 간편하기 때문에 바람직하다.
본 개시에 있어서는, 상기의 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 코드하는 DNA 또는 RNA 등의 폴리뉴클레오티드도, 예방 또는 치료약의 유효 성분으로서 사용할 수 있다. 즉, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 적절한 벡터, 바람직하게는 발현 벡터에 삽입한 후, 인간을 포함하는 동물에게 투여함으로써, 생체 내에서 암 면역을 발생시킬 수 있다. 폴리뉴클레오티드로서는 DNA, RNA 등을 들 수 있고, DNA 또는 RNA가 바람직하다. 폴리뉴클레오티드의 염기 서열은, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 환자에 대하여 면역원성을 갖는 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드의 아미노산 서열에 기초하여 결정할 수 있다. 해당 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어 공지의 DNA 또는 RNA 합성법, PCR법 등에 의해 제조할 수 있다. 이러한 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 코드하는 DNA를 함유하는 예방 또는 치료약도, 본 개시의 하나이다. WT1 단백질 또는 WT1 펩티드로서는 WT1 펩티드가 바람직하고, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 혹은 WT1332 펩티드, 혹은 그의 개변 펩티드, 또는 그의 조합이 보다 바람직하고, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드 혹은 WT135 펩티드, 혹은 그의 개변체 펩티드, 또는 그의 조합이 더욱 바람직하고, 식 (3)에 표시되는 화합물(WT1126 펩티드와 WT1235 펩티드의 콘쥬게이트)과 WT135 펩티드의 조합이 가장 바람직하다. 상기 DNA가 삽입되는 발현 벡터로서는, 특별히 한정되지 않는다. 또한, RNA는 벡터에 삽입하지 않고, 그대로 조성물의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.
본 개시의 예방 또는 치료약은 아쥬반트를 함유할 수 있다. 아쥬반트로서는, 항원이 되는 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 투여하는 경우, 이들과 함께, 또는 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드와는 별도로 투여하고, 그 항원에 대한 면역 응답을 비특이적으로 높이는 물질이면 한정되지 않는다. 아쥬반트로서는, 예를 들어 침강성 아쥬반트 또는 유성 아쥬반트를 들 수 있다. 침강성 아쥬반트로서는, 예를 들어 수산화나트륨, 수산화알루미늄, 인산칼슘, 인산알루미늄, 명반, 페페수 또는 카르복시비닐 폴리머 등을 들 수 있다. 유성 아쥬반트는 기름이 항원 수용액을 둘러싸서 미셀을 만들 수 있는 것이 바람직하고, 예를 들어 구체적으로는, 유동 파라핀, 라놀린, 프로인트, Montanide ISA763AVG, Montanide ISA51, 불완전 프로인트 아쥬반트 또는 완전 프로인트 아쥬반트 등을 들 수 있다. 아쥬반트는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수도 있다. 바람직하게는, 유성 아쥬반트이다. 본 개시의 예방 또는 치료약에 있어서의 아쥬반트의 배합량은 항원에 대한 면역 응답을 비특이적으로 높이는 양이면 특별히 한정되지 않고, 아쥬반트의 종류 등에 따라 적절히 선택하면 된다.
본 개시의 예방 또는 치료약은 경구 투여, 또는 비경구 투여, 예를 들어 복강내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여 혹은 비강내 투여 등에 의해 투여할 수 있다. 또한, 비경구 투여로서는, 예방 또는 치료약을 피부에 도포하거나, 첩부제에 예방 또는 치료약을 함유시켜서 피부에 첩부하거나 함으로써, 유효 성분인 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 경피 흡수시키는 투여 방법도 들 수 있다. 또한, 본 개시의 예방 또는 치료약은 흡인 등에 의해 투여할 수도 있다. 바람직하게는, 비경구 투여에 의해 투여한다. 보다 바람직하게는, 피내 투여 또는 피하 투여에 의해 투여한다. 피내 투여, 피하 투여하는 몸의 부위는, 예를 들어 상완 등이 바람직하다.
본 개시의 예방 또는 치료약은 투여 경로에 따라 여러가지 제제 형태, 예를 들어 고형 제제, 액상 제제 등을 취할 수 있다. 예를 들어, 경구 투여를 위한 내복용 고형제 혹은 내복용 액제, 또는 비경구 투여를 위한 주사제 등으로 할 수 있다.
경구 투여를 위한 내복용 고형제로서는, 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 과립제 등을 들 수 있다.
내복용 고형제에 있어서는, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드는 그대로이거나, 첨가제와 혼합 또는 조립(예를 들어, 교반 조립법, 유동층 조립법, 건식 조립법, 전동 교반 유동층 조립법 등)되어, 통상의 방법에 따라서 제조된다. 예를 들어 캡슐제이면 캡슐 충전 등에 의해, 정제이면 타정제 등에 의해 제조할 수 있다. 첨가제는 1종 또는 2종 이상을 적절히 배합해도 된다. 첨가제로서는, 예를 들어 락토오스, 만니톨, 글루코오스, 미결정 셀룰로오스, 옥수수 전분 등의 부형제; 히드록시프로필셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 메타규산알루민산마그네슘 등의 결합제; 옥수수 전분 등의 분산제; 섬유소 글리콜산칼슘 등의 붕괴제; 스테아르산마그네슘 등의 활택제; 글루탐산, 아스파르트산 등의 용해 보조제; 안정제; 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올 등의 합성 고분자류 등의 수용성 고분자; 백당, 분당, 자당, 과당, 포도당, 유당, 환원 맥아당 물엿, 분말 환원 맥아당 물엿, 포도당 과당 액당, 과당 포도당 액당, 벌꿀, 소르비톨, 말티톨, 만니톨, 크실리톨, 에리트리톨, 아스파탐, 사카린, 사카린나트륨 등의 감미제 등을 들 수 있다.
과립제 또는 정제는 필요에 따라 코팅제 등으로 피복되어 있어도 되고, 또한 해당 코팅은 2 이상의 층이어도 된다. 코팅제로서는, 예를 들어 백당, 젤라틴, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스프탈레이트 등을 들 수 있다. 캡슐제로서 제조하는 경우에는, 상기 부형제를 적절히 선택하고, 프란루카스트 수화물과 균등하게 혼화, 또는 입상, 혹은 입상으로 한 것에 적당한 코팅제로 제피를 실시한 것을 캡슐에 충전하거나, 적당한 캡슐 기제(젤라틴 등)에 글리세린 또는 소르비톨 등을 가하여 소성을 증가시킨 캡슐 기제로 피포 성형해도 된다. 이들 캡슐 기제에는 필요에 따라, 착색제 또는 보존제(이산화황; 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 등의 파라벤류) 등을 첨가할 수 있다. 캡슐제에는, 하드 캡슐 또는 소프트 캡슐이 포함된다.
경구 투여를 위한 내복용 액제로서는, 수제, 현탁제·유제, 시럽제, 드라이 시럽제 등의 용시 용해형 제제, 엘릭시르제 등을 들 수 있다. 이러한 내복용 액제에 있어서는, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드는 내복용 액제에서 일반적으로 사용되는 희석제에 용해, 현탁 또는 유화된다. 희석제로서는, 예를 들어 정제수, 에탄올 또는 그들의 혼합액 등을 들 수 있다. 또한 이 액제는 습윤제, 현탁화제, 유화제, 감미제, 풍미제, 방향제, 보존제 또는 완충제 등을 함유하고 있어도 된다. 또한, 드라이 시럽제는 예를 들어 프란루카스트 수화물과, 예를 들어 백당, 분당, 자당, 과당, 포도당 또는 유당 등을 혼합하거나 하여 제조할 수 있다. 또한, 드라이 시럽제는 통상의 방법에 따라서 과립으로 해도 된다.
비경구 투여를 위한 제형으로서는, 주사제, 연고제, 겔제, 크림제, 첩부제, 분무제, 스프레이제 등을 들 수 있는데, 주사제가 바람직하다. 예를 들어, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드와 관용의 담체가 함께 주사제로 되는 것이 바람직하다.
비경구 투여를 위한 주사제로서는, 수성 주사제 또는 유성 주사제 중 어느 것이어도 된다. 수성 주사제로 하는 경우, 공지된 방법에 따라서 예를 들어 수성 용매(주사용수, 정제수 등)에 의약상 허용되는 첨가제를 적절히 첨가한 용액에, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 혼합한 후, 필터 등으로 여과하여 멸균하고, 이어서 무균적인 용기에 충전함으로써 조제할 수 있다. 의약상 허용되는 첨가제로서는, 예를 들어 상술한 아쥬반트; 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세린, 만니톨, 소르비톨, 붕산, 붕사, 포도당, 프로필렌글리콜 등의 등장화제; 인산 완충액, 아세트산 완충액, 붕산 완충액, 탄산 완충액, 시트르산 완충액, 트리스 완충액, 글루탐산 완충액, 입실론아미노카프로산 완충액 등의 완충제; 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필, 파라옥시벤조산부틸, 클로로부탄올, 벤질알코올, 염화벤잘코늄, 데히드로아세트산나트륨, 에데트산나트륨, 붕산, 붕사 등의 보존제; 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리에틸렌글리콜 등의 증점제; 아황산수소나트륨, 티오황산나트륨, 에데트산나트륨, 시트르산나트륨, 아스코르브산, 디부틸히드록시톨루엔 등의 안정화제; 염산, 수산화나트륨, 인산, 아세트산 등의 pH 조정제 등을 들 수 있다. 또한 주사제에는, 적당한 용해 보조제, 예를 들어 에탄올 등의 알코올; 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등의 폴리알코올; 폴리소르베이트 80, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 50, 리솔레시틴, 플루로닉 폴리올 등의 비이온 계면 활성제 등을 더 배합해도 된다. 또한, 예를 들어 소혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌 등의 단백질; 아미노덱스트란 등의 폴리사카리드 등을 함유해도 된다. 유성 주사제로 하는 경우, 유성 용매로서는 예를 들어 참깨유 또는 대두유 등이 사용되고, 용해 보조제로서 벤조산벤질 또는 벤질알코올 등을 배합해도 된다. 조제된 주사액은 통상 적당한 앰플 또는 바이알 등에 충전된다. 주사제 등의 액상 제제는 동결 보존 또는 동결 건조 등에 의해 수분을 제거하여 보존할 수도 있다. 동결 건조 제제는 용시에 주사용 증류수 등을 첨가하고, 재용해하여 사용된다.
또한, 본 개시의 예방 또는 치료약의 다른 형태로서, 리포솜 중에 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 혼합하고, 또한 필요에 따라, 다당 및/또는 암 백신 조성물 중에 배합되는 다른 성분을 함유시킬 수도 있다.
본 개시의 예방 또는 치료약의 투여량은 사용하는 WT1 단백질 혹은 WT1 펩티드, 또는 DNA나, 환자의 연령, 체중, 대상 질환 등에 따라서도 다르지만, 예를 들어 WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드 등의 WT1 펩티드를 포함하는 백신 조성물의 경우, WT1 펩티드량으로서 1일에 체중당 약 0.1μg 내지 1mg/kg이 바람직하다. 또한, WT1 펩티드의 투여량은 통상 0.0001mg 내지 1000mg, 바람직하게는 0.01mg 내지 1000mg, 보다 바람직하게는 0.1mg 내지 10mg이며, 이 양을 수일 내지 수개월에 1회 투여하는 것이 바람직하다.
또한, 본 개시의 예방 또는 치료약의 투여 방법으로서, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 환자의 말초혈로부터 PBMCs를 모으고, 그 중에서 수지상 세포를 취출하고, 본 개시의 예방 또는 치료약에 유효 성분으로서 포함되는 펩티드, 예를 들어 WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 혹은 WT1332 펩티드, 또는 DNA 혹은 RNA 등의 폴리뉴클레오티드를 펄스하여 환자에게 피하 투여 등으로 환자에게 되돌리는 방법도 들 수 있다. 수지상 세포에 WT1 펩티드 등을 펄스할 때의 조건으로서는, 본 개시의 효과를 발휘하는 한 특별히 한정되지 않고 통상의 조건을 채용할 수 있다.
WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 코드하는 핵산 분자를 예방 또는 치료약에 사용하는 경우에는, 해당 핵산 분자가 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 환자의 수지상 세포에 도입되도록 예방 또는 치료약을 투여하는 것이 바람직하다. 핵산 분자를 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 환자의 수지상 세포에 도입하는 방법으로서는, 예를 들어 상술한 바와 같이 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 환자로부터 수지상 세포를 채취하고, 해당 수지상 세포에, 전기 펄스에 의해 핵산 분자를 도입하는 방법을 들 수 있다. 수지상 세포에 도입된 핵산 분자로부터 발현하는 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드는 해당 수지상 세포 표면에 제시되기 때문에, 핵산 분자가 펄스된 수지상 세포를 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 환자의 체내로 되돌리는 것에 의해, 생체 내에서 빠르게 암 면역을 발생시킬 수 있다. 이러한, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 코드하는 핵산 분자를 피검체의 수지상 세포에 도입하는 암의 치료 또는 예방 방법은, 본 개시의 바람직한 실시 형태의 하나이다. 상기 실시 형태에 있어서, 핵산 분자로서는 DNA 및 RNA 중 어느 것이어도 되고, 바람직하게는 RNA이다.
본 개시의 다른 양태는 피검체 유래의 말초혈 단핵구를 WT1 단백질 혹은 WT1 펩티드의 존재 하에서 배양하거나, 또는 그들을 코드하는 핵산 분자를 해당 말초혈 단핵구에 도입함으로써, 해당 말초 단핵구로부터 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하는, WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법에 관한 것이다. 말초혈 단핵구가 유래되는 피검체는 특별히 한정되지 않는다. WT1 단백질 또는 WT1 펩티드로서는, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 혹은 WT1332 펩티드, 또는 그의 개변 펩티드를 들 수 있고, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드가 적합하다. 예를 들어, 피검체 유래의 말초혈 단핵구를 WT1126 펩티드 또는 WT1235 펩티드의 존재 하에서 배양함으로써, 말초혈 단핵구 중의 CTLs 전구 세포로부터 WT1 특이적 CTLs가 유도된다. 피검체 유래의 말초혈 단핵구를 WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드의 존재 하에서 배양한 경우에는, 말초혈 단핵구 중의 헬퍼 T 세포 전구 세포로부터 WT1 특이적 헬퍼 T 세포가 유도된다. 피검체 유래의 말초혈 단핵구의 배양 조건은 특별히 한정되지 않고 통상의 조건에서 배양할 수 있다. 이렇게 얻어진 CTLs 및 헬퍼 T 세포는, 각각 WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 및 WT1332 펩티드를 인식한다. 따라서, 본 개시에 의해 유도되는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 사용하면, WT1 고발현 종양 세포를 특이적으로 상해할 수 있고, 대상인 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)을 치료 및/또는 예방할 수 있다. WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 피검체에 투여하는 방법으로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 상술한 예방 또는 치료약과 마찬가지로 하여 투여할 수 있다.
본 개시의 다른 양태는 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 필수 구성 성분으로서 포함하는, WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한 키트에 관한 것이다. 바람직하게는 해당 키트는, 상기 피검체 유래의 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법에 사용된다. 이러한 키트는 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드 이외에, 예를 들어 말초혈 단핵구의 취득 수단, 아쥬반트, 반응 용기 등을 포함하고 있어도 된다. 이러한 키트를 사용하면, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드 등의 암 항원을 인식하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 효율적으로 유도할 수 있다.
본 개시의 또다른 실시 형태에서는, 피검체 유래의 미숙 수지상 세포를 WT1 단백질 혹은 WT1 펩티드의 존재 하에서 배양하거나, 또는 그들을 코드하는 핵산 분자를 해당 미숙 수지상 세포에 도입함으로써, 해당 미숙 수지상 세포로부터 해당 WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 제시하는 수지상 세포를 유도하는, WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 제시하는 수지상 세포의 유도 방법에 관한 것이다. WT1 단백질 또는 WT1 펩티드로서는, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 혹은 WT1332 펩티드 또는 그의 개변 펩티드를 들 수 있고, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드가 적합하다. WT1 단백질 또는 WT1 펩티드를 코드하는 핵산 분자로서는, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 혹은 WT1332 펩티드 또는 그의 개변 펩티드를 코드하는 것을 들 수 있고, WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드를 코드하는 것이 적합하다. 핵산 분자로서는 DNA 및 RNA 중 어느 것을 사용해도 되고, RNA가 적합하다. 미숙 수지상 세포가 유래되는 피검체는 특별히 한정되지 않는다. 미숙 수지상 세포는 예를 들어 말초혈 단핵구 등에 포함되어 있기 때문에, 이러한 세포를 WT1126 펩티드, WT1235 펩티드, WT135 펩티드 또는 WT1332 펩티드의 존재 하에서 배양해도 된다. 이렇게 얻어지는 수지상 세포를 피검체에 투여하면, 상기 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포가 효율적으로 유도되고, 그것에 의해 피검체의 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)을 치료 및/또는 예방할 수 있다. 수지상 세포를 피검체에 투여하는 방법으로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 상술한 예방 또는 치료약과 마찬가지로 하여 투여할 수 있다.
(바람직한 실시 형태)
이하에 본 개시의 바람직한 실시 형태를 설명한다. 이하에 제공되는 실시 형태는 본 개시의 보다 좋은 이해를 위하여 제공되는 것이며, 본 개시의 범위는 이하의 기재에 한정되어서는 안되는 것이 이해된다. 따라서, 당업자는 본 명세서 중의 기재를 참작하여, 본 개시의 범위 내에서 적절히 개변을 행할 수 있음은 명확하다. 또한, 본 개시의 이하의 실시 형태는 단독으로도 사용되거나 혹은 그들을 조합하여 사용할 수 있음이 이해된다.
또한, 이하에서 설명하는 실시 형태는 모두 포괄적 또는 구체적인 예를 나타내는 것이다. 이하의 실시 형태에서 나타나는 수치, 형상, 재료, 구성 요소, 스텝, 스텝의 순서 등은 일례이며, 청구범위를 한정하는 주지가 아니다. 또한, 이하의 실시 형태에 있어서의 구성 요소 중, 최상위 개념을 나타내는 독립 청구항에 기재되어 있지 않은 구성 요소에 대해서는, 임의의 구성 요소로서 설명된다.
(예방 또는 치료약)
하나의 국면에 있어서, 본 개시는 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 포함하는 양성 종양의 예방 또는 치료약을 제공한다. WT1은 악성 종양의 암 세포에 있어서 고발현되고 있는 것이 나타나 있었지만, 양성 종양에 있어서의 발현은 미지였다. 본 개시는, 양성 종양의 세포에 있어서 WT1 단백질이 발현된다라는 놀라운 발견에 기초하는 것이며, 양성 종양의 새로운 치료법을 제공하는 것이다.
하나의 실시 형태에서는, 본 개시의 양성 종양은 WT1을 발현한다. 이론에 구속되는 것은 아니지만, 본 개시의 WT1 펩티드는 암 항원으로서 작용하고, CTLs의 세포 상해 활성 및/또는 헬퍼 T 세포의 활성을 증강시킴으로써 양성 종양의 세포에 대한 세포 상해 활성을 발휘하기 때문에, 본 개시의 WT1 펩티드 백신은 WT1을 발현하는 양성 종양에 대하여 치료 유효성을 갖는다. 또한, WT1 단백질의 발현은 특정한 양성 종양에 한정되는 것은 아니며, 유전성·비유전성의 다양한 양성 종양에 있어서 보이는 것이다. 따라서, 유전성뿐만 아니라 후천적인 양성 종양이어도 WT1 단백질이 발현되는 경우가 있고, 그러한 타입의 양성 종양에 대해서는, 본 개시의 기술을 사용하여 치료 또는 예방할 수 있음이 이해된다. 하나의 실시 형태에서는, 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 및 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택된다.
하나의 실시 형태에 있어서, 본 개시는 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 포함하는, 가족성 대장 선종증의 예방 또는 치료약을 제공한다. WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 혈관신생병의 치료에 유효하다는 것이 나타나 있지만, 난치성이며 지금까지 절제밖에 사실상 치료법이 없었던 가족성 대장 선종증의 치료 또는 예방에 효과가 있다고는 예상할 수 없었다. 본 개시는, 절제밖에 사실상 치료법이 없었던 가족성 대장 선종증에 새로운 치료법을 제공하는 것이며, 절제를 필요로 하지 않는 치료 또는 예방이며, 삶의 질(Quality of Life(QOL))의 개선에 이바지하는 것으로서 유용하다.
하나의 실시 형태에서는, 본 개시의 WT1 펩티드는 1종류여도 되고, 복수 종류여도 된다. 또한, 본 개시의 의약 또는 조성물에 사용하는 WT1 펩티드는 킬러 WT1 펩티드여도 되고, 혹은 헬퍼 WT1 펩티드여도 되고, 이들을 혼합하여 사용해도 된다. 보다 바람직하게는, 킬러형 WT1 펩티드 및 헬퍼형의 WT1 펩티드의 양쪽을 포함하는 것이 바람직하다. 본 개시에서는 WT1 펩티드의 2량체를 사용해도 된다. WT1 펩티드의 2량체는, 시스테인 잔기를 갖는 2개의 WT1 펩티드간에 디술피드 결합을 형성시킴으로써 얻어도 된다. 본 개시의 의약 조성물에 사용하는 WT1 펩티드는 1종류여도 되고, 혹은 복수 종류여도 된다.
WT1 펩티드가 대상에 있어서 치료 또는 예방 효과를 발휘할지의 여부는, WT1 펩티드가 대상의 HLA형에 대응할 것인지 여부에 따른다. 현재, 많은 WT1 펩티드에 대해서 어느 HLA형에 적합한지가 알려져 있으므로, 본 개시에 사용하는 WT1 펩티드를 대상의 HLA형에 따라서 선택할 수 있다. 또한, 본 개시의 의약 조성물에 복수 종류의 WT1 펩티드를 사용하여, 폭넓은 대상에 대응하도록 해도 된다.
하나의 바람직한 실시 형태에서는, 본 개시에 있어서 사용되는 WT1 펩티드는 WT1126 킬러 펩티드, WT1235 킬러 펩티드, WT135 헬퍼 펩티드 및/또는 WT1332 헬퍼 펩티드이다. 바람직하게는, 이 WT1 펩티드는 WT1126 펩티드 및 WT1235 펩티드로부터 선택되는 킬러 펩티드와, WT135 및 WT1332 펩티드로부터 선택되는 헬퍼 펩티드의 양쪽을 포함한다. 이론에 속박되는 것을 요망하지 않지만, 본 개시에 있어서, WT1 펩티드는 킬러 펩티드 및 헬퍼 펩티드를 포함하면, 단독으로 사용하는 효과를 넘는 효과가 있음을 알았다.
다른 국면에서는, 본 개시의 WT1 펩티드는 식 (3)으로 표시되는 화합물 및 WT135 헬퍼 펩티드의 양쪽을 포함한다. 상기 식 (3)으로 표시되는 화합물과 WT135 헬퍼 펩티드의 조합은 출원인이 아는 한, 양성 종양에 대하여 예방 및/또는 치료 유효성을 발휘하는 것이 알려져 있지 않았다.
다른 국면에서는, 본 개시는 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약을 제공한다.
어떤 실시 형태에서는, 본 개시는 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 가족성 대장 선종증의 예방 또는 치료약을 제공한다. 이 경우, 본 개시의 의약 조성물 중의 유효 성분은 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드라고 할 수 있지만, 이것에 한정되지 않는다. 폴리뉴클레오티드의 염기 서열은 WT1 펩티드의 아미노산 서열에 기초하여 결정할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 화학 합성법 등의 공지된 DNA 또는 RNA 합성 방법, PCR법 등에 의해 제조할 수 있다.
하나의 실시 형태에서는, 본 개시의 예방 또는 치료약은 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 DNA를 포함한다.
다른 실시 형태에서는, 본 개시의 예방 또는 치료약은 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 RNA를 포함한다.
다른 실시 형태에서는, 본 개시의 예방 또는 치료약은 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 RNA 및 DNA를 포함한다.
하나의 실시 형태에서는, 본 개시의 예방 또는 치료약은 상기에 더하여 아쥬반트를 포함한다.
하나의 바람직한 실시 형태에서는, 본 개시에 있어서 사용되는 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트를 포함한다.
하나의 실시 형태에서는, 본 개시의 예방 또는 치료약은 1주일에 1회 투여된다.
본 개시의 의약 또는 조성물을, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽에 사용되는 의약과 병용해도 된다.
본 개시의 의약 또는 조성물의 투여 경로는 특별히 한정되지 않지만, 바람직한 투여 경로의 예로서 피내 투여, 피하 투여, 경피 투여, 경점막 투여(예를 들어, 점안, 점비, 설하 등)를 들 수 있다.
본 개시의 의약 또는 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 주사용 액제, 점안용 액제, 점비용 액제, 로션제, 크림제, 패치제, 설하정, 트로키 등의 제형이어도 된다. 이들 제형은 당업자에게 잘 알려져진 방법에 의해 제조할 수 있고, 투여할 수 있다.
본 개시의 의약 또는 조성물을 사용하는 경우의 WT1 펩티드의 투여량은, WT1 펩티드의 종류, 투여 경로, 제형, 질환의 종류, 질환의 정도, 대상의 건강 상태 등을 고려하여 적절히 변경할 수 있다. 일반적으로는, WT1 펩티드의 투여량은 성인 1일당 0.1μg/kg 내지 1mg/kg이다. WT1 펩티드의 종류, 투여 경로, 제형에 대해서도 마찬가지로 적절히 변경할 수 있다. 본 개시의 의약 또는 조성물은 의약상 허용되는 담체나 부형제 외에, 예를 들어 수산화알루미늄과 같은 적당한 아쥬반트를 포함하고 있어도 된다. 혹은 본 개시의 의약 또는 조성물은 리포솜 중에 봉입된 WT1 펩티드를 포함하는 것이어도 된다.
본 실시 형태에 있어서, 예를 들어 식 (2) 또는 식 (3)에 표시되는 화합물인 WT1 펩티드의 투여량은, 도입기에 있어서는 성인 1일당 3.5mg을 2주일 간격으로 계 1 내지 5회 피내에 투여하고, 유지기에 있어서는 성인 1일당 3.5mg을 1개월 또는 2개월 간격으로 계 3 내지 6회 피내에 투여할 수 있다.
투여량은 성인 1일당 1.0mg 이상, 2.5mg 이상, 5.0mg 이상, 10mg 이상, 15mg 이상, 20mg 이상 혹은 25mg 이상, 또는 100mg 이하, 50mg 이하, 40mg 이하, 30mg 이하, 25mg 이하, 20mg 이하, 15mg 이하, 10mg 이하, 5.0mg 이하 혹은 2.5mg 이하의 범위로 투여할 수 있다. 구체적인 투여량은, 예를 들어 성인 1일당 0.5mg, 1.0mg, 1.5mg, 2.0mg, 2.5mg, 3.0mg, 3.5mg, 4.0mg, 4.5mg, 5.0mg, 5.5mg, 6.0mg, 6.5mg, 7.0mg, 7.5mg, 8.0mg, 8.5mg, 9.0mg, 9.5mg 또는 10mg 등이어도 된다.
투여 간격은 1주일 내지 1년의 사이에서 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어 1일 이상, 1주일 이상, 2주일 이상, 3주일 이상, 1개월 이상, 2개월 이상, 3개월 이상, 4개월 이상, 5개월 이상 혹은 6개월 이상, 또는 1년 이하, 9개월 이하, 6개월 이하, 5개월 이하, 4개월 이하, 3개월 이하, 2개월 이하, 1개월 이하, 3주일 이하, 2주일 이하 혹은 1주일 이하의 간격으로 투여할 수 있다. 구체적으로 투여 간격으로서는, 예를 들어 1일, 3일, 5일, 1주일, 2주일, 3주일, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 9개월 또는 1년 등이어도 된다.
투여 횟수는 계 1 내지 100회의 사이에서 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어 1회 이상, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 5회 이상, 6회 이상, 7회 이상, 8회 이상, 9회 이상 혹은 10회 이상, 또는 100회 이하, 50회 이하, 40회 이하, 30회 이하, 20회 이하, 15회 이하, 10회 이하, 9회 이하, 8회 이하, 7회 이하, 6회 이하, 5회 이하, 4회 이하, 3회 이하 혹은 2회 이하의 횟수로 투여할 수 있다. 구체적인 투여 횟수로서는, 예를 들어 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 11회 또는 12회 등이어도 된다.
다른 국면에 있어서, 본 개시는 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 위한, WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 제공한다.
또다른 국면에 있어서, 본 개시는 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 위한, 혹은 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 위한 의약 조성물의 제조를 위한 WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자의 사용에 관한 것이다. 본 개시는 또한, WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자의 유효량을 그것을 필요로 하는 피검체에 투여하는 공정을 포함하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 위한 방법을 제공한다. 또다른 양태에 있어서, 본 개시는 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 위한 의약의 제조를 위한 WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자의 사용에 관한 것이다. 또다른 국면에 있어서, 본 개시는 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 필요로 하는 대상에 WT1 펩티드 또는 그의 유사체, 혹은 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 투여하는 것을 특징으로 하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 치료 및 예방 중 어느 것 또는 양쪽을 위한 방법에 관한 것이기도 하다. 이들 국면에 있어서도, 본 명세서에 기재되는 상기를 포함하는 모든 설명이 적합하다.
(면역 세포의 유도 방법)
다른 국면에 있어서, 본 개시는 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구를, 본 명세서에 기재된 어느 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 또는 그들을 코드하는 핵산 분자를 상기 말초혈 단핵구에 도입함으로써, 상기 말초 단핵구로부터 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법을 제공한다. (예방 또는 치료약)에 기재되는 임의의 설명은, 이 유도 방법에 있어서도 적합한 것이 당업자에게 이해된다.
다른 국면에 있어서, 본 개시는 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포를, 본 명세서에 기재된 어느 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 또는 그들을 코드하는 핵산 분자를 상기 미숙 수지상 세포에 도입함으로써 WT1 제시 수지상 세포를 유도하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포의 유도 방법을 제공한다. (예방 또는 치료약)에 기재되는 임의의 설명은, 이 유도 방법에 있어서도 적합한 것이 당업자에게 이해된다.
다른 국면에 있어서, 본 개시는 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한 조성물을 제공한다. (예방 또는 치료약)에 기재되는 임의의 설명은, 이 조성물에 있어서도 적합한 것이 당업자에게 이해된다.
또다른 국면에 있어서, 본 개시는 WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포를 유도하기 위한 조성물을 제공한다. (예방 또는 치료약)에 기재되는 임의의 설명은, 이 조성물에 있어서도 적합한 것이 당업자에게 이해된다.
또다른 국면에 있어서, 본 개시는 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 포함하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료를 위한 조성물을 제공한다. (예방 또는 치료약)에 기재되는 임의의 설명은, 이 조성물에 있어서도 적합한 것이 당업자에게 이해된다.
또다른 국면에 있어서, 본 개시는 WT1 제시 수지상 세포를 포함하는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방 또는 치료를 위한 조성물을 제공한다. (예방 또는 치료약)에 기재되는 임의의 설명은, 이 조성물에 있어서도 적합한 것이 당업자에게 이해된다.
(제조 방법)
본 개시의 펩티드 또는 유도체, 혹은 핵산 분자는 당 기술분야에 있어서 통상 사용되는 제조법에 의해 제조할 수 있다. 이들 제조법은 면역학적 방법, 분자생물학적 방법, 생화학적 방법, 미생물학적 방법에 습숙된 사람의 지식에 기초하여 적절히 개량할 수 있다. 구체적으로는, 본 개시의 펩티드 또는 유도체, 혹은 핵산 분자는 천연의 WT1 단백질의 아미노산 서열(예를 들어, 서열 번호 1) 또는 핵산 서열에 기초하는 설계를 행해도 되고, 미생물 발현계 등에 의해 제조해도 된다. 제조법에 있어서의 출발 원료 및 중간체는 시판품으로서 구입 가능하거나, 또는 공지 문헌에 기재된 방법 혹은 공지 화합물로부터 공지된 방법에 준하여 입수 가능하다. 또한, 이들 출발 원료 및 중간체는 제조 공정에 지장을 초래하지 않는 한, 그들의 유사체를 사용해도 된다.
(일반 기술)
본 명세서에 있어서 사용되는 면역학적 방법, 분자생물학적 방법, 생화학적 방법, 미생물학적 방법은 당해 분야에 있어서 주지이며 관용되는 것이며, 문헌[Sambrook J. et al.(1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor 및 그의 3rd Ed.(2001); Ausubel, F.M.(1987). Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience; Ausubel, F.M.(1989). Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience; Innis, M.A.(1990). PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press; Ausubel, F.M.(1992). Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates; Ausubel, F.M.(1995). Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates; Innis, M.A. et al.(1995). PCR Strategies, Academic Press; Ausubel, F.M.(1999). Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, and annual updates; Sninsky, J.J. et al.(1999). PCR Applications: Protocols for Functional Genomics, Academic Press, 별책 실험 의학 「유전자 도입 & 발현 해석 실험법」 요도샤, 1997] 등에 기재되어 있고, 이들은 본 명세서에 있어서 관련하는 부분(전부일 수 있다)이 참고로서 원용된다.
(주기)
본 명세서에 있어서 「또는」은, 문장 중에 열거되어 있는 사항의 「적어도 1개 이상」을 채용할 수 있을 때에 사용된다. 「혹은」도 마찬가지이다. 본 명세서에 있어서 「2개의 값의 범위 내」라고 명기한 경우, 그 범위에는 2개의 값 자체도 포함한다.
본 명세서에 있어서 인용된 과학 문헌, 특허, 특허 출원 등의 참고 문헌 은, 그 전체가 각각 구체적으로 기재된 것과 동일한 정도로 본 명세서에 있어서 참고로서 원용된다.
이상, 본 개시를, 이해의 용이를 위하여 바람직한 실시 형태를 나타내서 설명해 왔다. 이하에, 실시예에 기초하여 본 개시를 설명하지만, 상술한 설명 및 이하의 실시예는 예시의 목적으로만 제공되고, 본 개시를 한정하는 목적으로 제공한 것은 아니다. 따라서, 본 개시의 범위는, 본 명세서에 구체적으로 기재된 실시 형태로든 실시예로든 한정되지 않고, 특허 청구 범위에 의해서만 한정된다.
실시예
이하에 실시예를 기재한다. 이하의 실시예에서 사용하는 생물의 취급은, 필요한 경우, 오사카 대학이나 감독 관청에 있어서 규정되는 기준을 준수하였다. 시약류는 구체적으로는 실시예 중에 기재한 제품을 사용했지만, 다른 메이커(Sigma-Aldrich, 후지필름 와코준야쿠, 나카라이테스크, R&D Systems, USCN Life Science INC, Thermo Fisher Scientific, 간또 가가꾸, 후나코시, 도쿄 카세이, Merck 등)의 동등품으로도 대용 가능하다.
(마우스)
이하의 실시예에 있어서, 마우스는 ApcMin/+(C57BL/6J) 마우스(Jackson 연구소, Bar Harbor, Maine, USA)를 사용하였다. 마우스는 오사카 대학 동물 실험 규정을 준수하고, 오사카 대학 의학부 부속 동물 실험 시설의 특정 미생물 프리(SPF) 봉입 시설에서 사육하였다.
(시약)
이하의 실시예에 있어서, MHC 클래스 I(H-2Db)-결합 펩티드인 WT1126-134(RMFPNAPYL, 9a.a), 및 MHC 클래스 II(H-2I-Ab)-결합 펩티드인 WT135-52(WAPVLDFAPPGASAYGSL, 18a.a.)는 SIGMA Genosys(이시카리, 일본)로부터 구입하였다. 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물에 사용하는 각 원료는, 다이닛폰 스미토모 세이야꾸 가부시키가이샤(오사카, 일본)로부터 공여되었다. 펩티드는 사용까지 -20℃에서 보존하였다. 펩티드는 인산 완충 생리 식염수(PBS; 137mM NaCl, 2.7mM KCl, 8.1mM Na2HPO4, 1.47mM KH2PO4)에 용해하고, -20℃에서 보존하였다. 프로인트의 불완전 아쥬반트(IFA), Montanide ISA 51은 Seppic S.A.(오르세, 프랑스)로부터 구입하였다.
(실시예 1: 가족성 대장 선종증의 선종에 있어서의 WT1 단백질의 발현)
본 실시예에서는, 인간 가족성 대장 선종증 환자의 선종에 있어서 WT1 단백질이 발현된 것을 나타낸다.
(실험 방법)
가족성 대장 선종증의 인간 환자의 소장 및 대장을 포르말린에 의해 고정 후, 파라핀으로 포매하고, 파라핀 블록을 3㎛의 두께로 얇게 썰었다. 내인성 퍼옥시다아제 반응을 경감시키기 위해서, 파라핀 절편을 3％ H2O2 용액으로 처리 후, 크실렌으로 탈파라핀하고, 에탄올로 단계적으로 재수화한 후, 10mM의 트리스EDTA 완충액(10mM 트리스, 1mM EDTA(pH9.0)) 중에서, 오일 배스에 있어서 70℃에서 25분간, 110℃에서 25분간 가열하고, 3시간 실온에서 식혀서 항원 부활화하였다. 처리한 절편을, PBST(PBS+0.05％ Tween20(등록 상표))로 100배 희석한 항WT1 6FH2 마우스 단일 클론 항체(Dako Cytomation, Inc., Carpinteria, CA)에 의해, 4℃에서 밤새 반응시켰다. 그 후, Dako REAL Envision HRP RABBIT/MOUSE(Dako Cytomation)를 37℃에서 30분간 반응시켰다. Dako REAL Envision Detection System Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse(Dako Cytomation)를 사용하여, 사용 설명서에 따라서 WT1 단백질을 가시화시켰다. 그 후 절편을 헤마톡실린 염색하였다.
(결과)
실시예 1의 결과를 표 1 및 도 1에 도시한다. 표 1은 각 환자 유래의 표본에 있어서의, 선종, 정상 선관 및 섬유아세포에 있어서의 WT1 단백질의 발현량을 나타낸다. 표 1에 있어서, 선종에 있어서의 WT1 단백질의 발현량이 정상 선관에 있어서의 발현량보다 현저하게 증대하고 있는 것이 나타난다. 도 1에 있어서, 연한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 진하게 원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다. 선종에 있어서는 WT1 단백질의 발현이 보였지만, 정상 선관에 있어서는 WT1 단백질의 발현이 보이지 않았다.
Figure pct00031
(실시예 2: APCMin/+ 마우스에 있어서의 WT1 단백질의 발현)
본 실시예에서는, 가족성 대장 선종증의 모델 마우스인 APCMin/+ 마우스의 소장 선종에 있어서 WT1 단백질이 발현한 것을 나타낸다.
(실험 방법)
20주령의 ApcMin/+(C57BL/6J) 마우스의 소장 및 대장을 포르말린에 의해 고정 후, 파라핀으로 포매하고, 파라핀 블록을 3㎛의 두께로 얇게 썰었다. 파라핀 절편을 크실렌으로 탈파라핀하고, 에탄올로 단계적으로 재수화한 후, 10mM의 시트르산 완충액(10mM 시트르산나트륨, 0.05％ Tween20(pH6.0) 중에서, 15분간 마이크로파를 조사하여 항원 부활화하였다. 처리한 절편을, 염소 혈청 함유 PBS로 100배 희석한 항WT1 6FH2 마우스 단일 클론 항체(Dako Cytomation, Inc., Carpinteria, CA)에 의해, 4℃에서 밤새 반응시켰다. 그리고, 염소 혈청 함유 PBS로 100배 희석한 비오틴화 항마우스 IgG 항체(Vector Labs., Burlingame, CA)를 37℃에서 30분간 반응시켰다. 내인성 퍼옥시다아제 반응을 경감시키기 위해서, 3％ H2O2 용액으로 처리 후, Vectastain ABC kit(Vector Labs.)를 사용하여, 사용 설명서에 따라서 WT1 단백질을 가시화시켰다. 그 후 절편을 헤마톡실린 염색하였다.
(결과)
실시예 2의 결과를 도 2 및 3에 도시하였다. 도 2는, 위에서부터 순차적으로 5배, 10배, 20배의 배율에서의 현미경 사진을 나타내고, 도 3은, 40배의 배율에서의 현미경 사진을 나타낸다. 도 2 및 3에 있어서 진한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다. 가족성 대장 선종증의 모델 마우스인 ApcMin/+ 마우스의 소장 선종에 있어서, WT1 단백질의 발현이 보였다.
(실시예 3: 가족성 대장 선종증 모델 마우스에 대한 WT1 펩티드 백신의 투여)
본 실시예에서는, APCMin/+ 마우스에 WT1 펩티드 백신을 투여한 실험의 투여 스킴을 나타낸다.
(실험 방법)
WT1 펩티드 백신의 투여 스킴을 도 4에 도시한다. 100μg의 WT1126-134 킬러 펩티드와 45μg의 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물, 또는 PBS를, 각각 IFA Montanide ISA51 아쥬반트로 에멀션화하고, 각각 WT1 펩티드 백신 또는 대조 백신으로 하였다. 4 내지 5주령의 ApcMin/+의 마우스의 옆구리에, WT1 펩티드 백신 또는 대조 백신을 피내 투여하였다. 면역은 생후 5주째부터 개시하고, 1주일에 1회의 빈도로 8회 행하였다. 최종 면역의 10일 후에 면역한 마우스를 안락사시켜, 한층 더한 해석을 행하였다. 또한, WT1 펩티드 백신의 투여는 이하의 표 3에 있어서 나타나는 바와 같이, 장기 상해를 초래하지 않는 것이었다.
Figure pct00032
(실시예 4: WT1 펩티드 백신의 투여에 의한 선종의 예방 및 치료)
본 실시예에서는, APCMin/+ 마우스에 WT1 펩티드 백신을 투여함으로써, 선종의 발증이 예방되고 선종을 치료한 것을 나타낸다.
(실험 방법)
실시예 3에 기재된 투여 스킴에 의해 얻어진 마우스를 사용하였다. 최종 면역의 10일 후에 안락사시킨 마우스로부터 전장을 채취하였다. 소장은 8 내지 10분획으로 나누고, 대장은 맹장과 상행 결장으로 나누었다. 각 분획은 세로 방향으로 절개하고, PBS로 세정 후, 여과지 사이에 끼우고, 4％ 파라포름알데히드/인산 완충액에 있어서, 4℃에서 24시간 이상 고정하였다. 고정한 장 조직은 1％ 메틸렌블루액으로 염색 후, 실체 현미경 하에서 관찰하고, 선종(폴립)수를 셌다. WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군간의 선종(폴립)수의 차는 스튜던트 t 검정(Student's t test)에 의해 통계 해석하였다.
(결과)
실시예 4의 결과를 도 5에 도시한다. 그래프의 횡축은 좌측에 WT1 백신을 투여한 군을, 우측에 대조 백신을 투여한 군을 나타내고, 종축은 소장당의 선종수를 나타낸다. WT1 펩티드 백신 투여군에서는 소장당의 선종수의 평균값이 약 29개였던 데 반해, 대조 백신 투여군에서는 약 34개이며, WT1 펩티드 백신의 투여에 의해, 선종의 발증이 유의미하게 억제되고, 또한 선종이 치료된 것이 나타났다.
(실시예 5: WT1 펩티드 백신의 투여에 의한 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 증가)
본 실시예에서는, APCMin/+ 마우스에 WT1 펩티드 백신을 투여함으로써, WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포가 증가한 것을 나타낸다.
(실험 방법)
실시예 3에 기재된 투여 스킴에 의해 얻어진 마우스를 사용하였다. 최종 면역의 10일 후에 안락사시킨 마우스로부터 비세포를 채취하였다. 적혈구를 용해 후, 세포를 H-2Db WT1 테트라머(MBL, 아이치, 일본)로 염색하고, 추가로 항마우스 CD3 항체(17A2, BioLegend, 샌 디에고, CA) 및 항마우스 CD8 항체(KT15, MBL, 아이치, 일본)로 염색하였다. 염색한 세포는 FACSCanto로 해석하고, CD3+CD8+T 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 측정하였다. WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군간의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도의 차는 스튜던트 t 검정에 의해 통계 해석하였다.
(결과)
실시예 5의 결과를 도 6에 도시하였다. 그래프의 횡축은 좌측에 WT1 펩티드 백신을 투여한 군을, 우측에 대조 백신을 투여한 군을 나타내고, 종축은 CD3+CD8+ 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머 빈도를 나타낸다. WT1 백신 투여군에서는, CD3+CD8+T 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도의 평균값이 약 0.6％였던 데 반해, 대조 백신 투여군에서는 약 0.2％이며, WT1 백신의 투여에 의해, WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포가 증가한 것이 나타났다.
(실시예 6: 통계 해석)
본 실시예에서는, 실시예 4에 있어서의 선종수와, 실시예 5에 있어서의 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포에 상관이 보인 것을 나타낸다.
(실험 방법)
실시예 4로부터 얻어진 소장당의 선종수와, 실시예 5로부터 얻어진 CD3+CD8+T 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를, Microsoft Excel(등록 상표)에 의해 산포도로 플롯하였다. 또한 이들 결과에 대해서, Excel의 피어슨 상관 계수에 의해 상관 관계를 통계 해석하였다.
(결과)
실시예 6의 결과로부터, WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군간의 선종(폴립)수 및 WT1 테트라머 빈도의 차는, 약하더라도 상관 관계를 나타내는 것이 보였다.
(실시예 7: 단제에서의 실시예)
본 실시예에서는, APCMin/+ 마우스에 킬러형 및 헬퍼형의 양쪽의 WT1 펩티드 백신을 투여하는 경우와, 킬러형 또는 헬퍼형의 WT1 펩티드 백신의 단제만을 투여하는 경우의, 선종의 발증 예방 및 치료 효과에 있어서의 비교를 나타낸다.
(실험 방법)
WT1 펩티드 백신의 투여 스킴을 도 8에 도시하였다. 100μg의 WT1126-134 킬러 펩티드와 45μg의 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물, 100μg의 WT1126-134 킬러 펩티드 단독, 45μg의 WT135-52 헬퍼 펩티드 단독 또는 PBS를, 각각 IFA Montanide ISA51 아쥬반트로 에멀션화한다. 5주령의 ApcMin/+의 마우스의 옆구리에, 킬러 펩티드와 헬퍼 펩티드의 혼합물, 킬러 펩티드 단독, 헬퍼 펩티드 단독, 또는 PBS만의 대조 백신을 피내 투여한다. 면역은 생후 5주째부터 개시하고, 1주일에 1회의 빈도로 8회 행한다. 최종 면역의 10일 후에 면역하는 마우스를 안락사시켜, 한층 더한 해석을 행한다.
(실시예 8: 다른 양성 종양에서의 WT1의 발현)
본 실시예에서는, 비유전성의 대장 선종에 있어서도 WT1이 발현하는 것을 나타낸다.
(실험 방법)
비유전성의 대장 선종을 발증한 인간 환자(3명)로부터 선종 조직을 적출하고, 실시예 1과 마찬가지의 방법에 의해 WT1 단백질 및 핵을 염색하였다.
(결과)
실시예 8의 결과를 도 9에 도시하였다. 도 9에 있어서, 좌측으로부터 1번째는 정상 선관의 현미경 화상을 나타내고, 우측의 3매의 화상은 비유전성의 대장 선종의 선종 조직의 현미경 화상을 나타낸다. 도 9에 있어서, 연한 염색은 WT1 단백질을 나타내고, 진하게 원형 또는 타원형으로 염색된 영역은 핵을 나타낸다. 선종에 있어서는 WT1 단백질의 발현이 보였지만, 정상 선관에 있어서는 WT1 단백질의 발현이 보이지 않았다.
(실시예 9: 가족성 대장 선종증 모델 마우스에 대한 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물의 투여)
본 실시예에서는 APCMin/+ 마우스에, WT1 펩티드 백신인 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물을 투여한 실험의 투여 스킴을 나타낸다.
(실험 방법)
WT1 펩티드 백신의 투여 스킴을 도 10에 도시한다. WT1 펩티드 백신을 PBS로 용해하고, WT1 펩티드 백신을 포함하는 용해액 및 PBS 단독을 IFA Montanide ISA51 아쥬반트로 에멀션화하고, 각각 WT1 펩티드 백신 또는 대조 백신으로 하였다. 4 내지 5주령의 ApcMin/+의 마우스의 옆구리에, WT1 펩티드 백신 또는 대조 백신을 피내 투여하였다. 면역은 생후 4 내지 5주째부터 개시하고, 1주일에 1회의 빈도로 6회 행하였다. 최종 면역의 7일 후에 면역한 마우스를 안락사시켜, 한층 더한 해석을 행하였다.
(실시예 10: 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물의 투여에 의한 선종의 예방 및 치료)
본 실시예에서는, APCMin/+ 마우스에 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물을 투여함으로써, 선종의 발증이 예방되고, 선종을 치료한 것을 나타낸다. 또한, 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물의 투여는 이하의 표 4에 있어서 나타나는 바와 같이, 장기 상해를 초래하지 않는 것이었다.
Figure pct00033
(실험 방법)
실시예 9에 기재된 투여 스킴에 의해 얻어진 마우스를 사용하였다. 최종 면역의 7일 후에 안락사시킨 마우스로부터 각 장기를 적출하고, 그의 중량을 측정하였다. 소장은 8 내지 10분획으로 나누었다. 각 분획은 세로 방향으로 절개하고, PBS로 세정 후, 여과지 사이에 끼우고, 4％ 파라포름알데히드/인산 완충액에 있어서, 4℃에서 24시간 이상 고정하였다. 고정한 장 조직은 1％ 메틸렌블루액으로 염색 후, 실체 현미경 하에서 관찰하고, 선종(폴립)수를 셌다. WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군간의 선종(폴립)수의 차는 스튜던트 t 검정에 의해 통계 해석하였다.
(결과)
실시예 10의 결과를 도 11에 도시한다. 그래프의 횡축은 좌측에 WT1 펩티드 백신을 투여한 군을, 우측에 대조 백신을 투여한 군을 나타내고, 종축은 소장당의 선종수를 나타낸다. WT1 펩티드 백신 투여군에서는 소장당의 선종수의 평균값이 약 37.2개였던 데 반해, 대조 백신 투여군에서는 약 43.7개였다. 따라서, WT1 펩티드 백신의 투여에 의해, 선종의 발증이 억제되고, 또한 선종이 치료되는 경향이 보였다.
(실시예 11: 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물의 투여에 의한 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 증가)
본 실시예에서는, APCMin/+ 마우스에 식 (3)의 화합물 및 WT135-52 헬퍼 펩티드의 혼합물을 투여함으로써, WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포가 증가한 것을 나타낸다.
(실험 방법)
실시예 9에 기재된 투여 스킴에 의해 얻어진 마우스를 사용하였다. 최종 면역의 7일 후에 안락사시킨 마우스로부터 비세포를 채취하였다. 적혈구를 용해 후, 세포를 H-2Db WT1 테트라머(MBL, 아이치, 일본)로 염색하고, 추가로 항마우스 CD3 항체(17A2, BioLegend, 샌 디에고, CA), 항마우스 CD8 항체(KT15, MBL, 아이치, 일본) 및 7-AAD Viability Staining Solution(Bioscience, 샌 디에고, CA)으로 염색하였다. 염색한 세포는 FACSCanto로 해석하고, 7-AAD+의 사세포 분획을 제거하고, CD3+CD8+T 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를 측정하였다. WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군간의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도의 차는 스튜던트 t 검정에 의해 통계 해석하였다.
(결과)
실시예 11의 결과를 도 12에 도시하였다. 그래프의 횡축은 좌측에 WT1 펩티드 백신을 투여한 군을, 우측에 대조 백신을 투여한 군을 나타내고, 종축은 CD3+CD8+ 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머 빈도를 나타낸다. WT1 펩티드 백신 투여군에서는, CD3+CD8+T 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도의 평균값이 약 0.13％였던 데 반해, 대조 백신 투여군에서는 약 0.04％이며, WT1 펩티드 백신의 투여에 의해, WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포가 증가한 것이 나타났다.
(실시예 12: 통계 해석)
본 실시예에서는, 실시예 10에 있어서의 선종수와, 실시예 11에 있어서의 WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포에 상관이 보인 것을 나타낸다.
(실험 방법)
실시예 10으로부터 얻어진 소장당의 선종수와, 실시예 11로부터 얻어진 CD3+CD8+T 세포 중의 H-2Db WT1 테트라머+CD3+CD8+T 세포의 빈도를, Microsoft Excel(등록 상표)에 의해 산포도로 플롯하였다. 또한 이들 결과에 대해서, Excel의 피어슨 상관 계수에 의해 상관 관계를 통계 해석하였다.
(결과)
실시예 12의 결과로부터, WT1 펩티드 백신 투여군과 대조 백신 투여군간의 선종(폴립)수 및 WT1 테트라머 빈도의 차는, 높은 상관 관계를 나타내고, WT1 특이적 면역이 종양의 억제에 강하게 작용하고 있는 것이 실증되었다.
(주기)
이상과 같이, 본 개시의 바람직한 실시 형태를 사용하여 본 개시를 예시해 왔지만, 본 개시는 특허 청구 범위에 의해서만 그 범위가 해석되어야 하는 것이 이해된다. 본 명세서에 있어서 인용한 특허, 특허 출원 및 다른 문헌은, 그 내용 자체가 구체적으로 본 명세서에 기재되어 있는 것과 마찬가지로, 그 내용이 본 명세서에 대한 참고로서 원용되어야 하는 것이 이해된다. 본원은 일본 특허청에 2018년 10월 5일에 제출된 일본 특허 출원 제2018-190461에 대하여 우선권 주장을 수반하는 것이며, 그 내용은 모두 본 명세서에 대한 참고로서 원용되어야 하는 것이 이해된다.
본 개시는, 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 예방, 지연 및 치료, 그리고 양성 종양(예를 들어, 가족성 대장 선종증)의 선종으로부터 발생한 증상의 예방, 지연 및 치료에 유용하다. 본 개시의 WT1 펩티드 백신은 내시경적 절제 등의 수술을 회피하고, 위독한 부작용이 없고, 매우 안전성이 높은 점에서 유용성을 갖는다.
<서열 표 자유텍스트>
서열 번호 1 인간 WT1 단백질의 전체 길이 아미노산 서열
서열 번호 2 인간 WT1126 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 3 인간 WT1235 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 4 인간 WT135 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 5 인간 WT1332 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 6 인간 WT1126P1G 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 7 인간 WT1126P1A 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 8 인간 WT1126P1V 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 9 인간 WT1126P1L 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 10 인간 WT1126P1I 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 11 인간 WT1126P1M 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 12 인간 WT1126P1W 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 13 인간 WT1126P1F 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 14 인간 WT1126P1Y 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 15 인간 WT1126P2V 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 16 인간 WT1126P2Q 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 17 인간 WT1126P2A 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 18 인간 WT1126P2L 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 19 인간 WT1126P2I 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 20 인간 WT1126P3I 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 21 인간 WT1126P3L 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 22 인간 WT1126P3G 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 23 인간 WT1126P3A 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 24 인간 WT1126P3V 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 25 인간 WT1126P3M 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 26 인간 WT1126P3P 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 27 인간 WT1126P3W 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 28 인간 WT1126P9V 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 29 인간 WT1126P9A 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 30 인간 WT1126P9I 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 31 인간 WT1126P9M 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 32 인간 WT1126P1D 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 33 인간 WT1126P1E 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 34 인간 WT1126P1H 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 35 인간 WT1126P1K 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 36 인간 WT1126P1N 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 37 인간 WT1126P1P 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 38 인간 WT1126P1Q 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 39 인간 WT1126P1S 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 40 인간 WT1126P1T 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 41 인간 WT1126P2I&P9I 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 42 인간 WT1126P2I&P9V 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 43 인간 WT1126P2L&P9I 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 44 인간 WT1126P2L&P9V 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 45 인간 WT1235m 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 46 인간 WT1126 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 47 인간 WT1235 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 48 인간 WT1235 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 49 인간 WT1122 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 50 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 51 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 52 인간 WT110 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 53 인간 WT1187 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 54 인간 WT1126 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 55 인간 WT1235 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 56 인간 WT1235 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 57 인간 WT1235 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 58 인간 WT110 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 59 인간 WT1187 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 60 인간 WT1187 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 61 인간 WT1126 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 62 인간 WT1122 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 63 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 64 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 65 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 66 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 67 인간 WT135 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 68 인간 WT137 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 69 인간 WT1122 펩티드의 아미노산 서열
서열 번호 70 인간 WT1122 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 71 인간 WT1122 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
서열 번호 72 인간 WT1122 펩티드의 개변체의 아미노산 서열
SEQUENCE LISTING <110> International Institute of Cancer Immunology, Inc. <120> PROPHYLACTIC OR THERAPEUTIC AGENT FOR BENIGN TUMOR <130> SDP022PCT <150> JP 2018-190461 <151> 2018-10-05 <160> 72 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro 1 5 10 15 Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala Ala 20 25 30 Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 35 40 45 Gly Ser Leu Gly Gly Pro Ala Pro Pro Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro 50 55 60 Pro Pro Pro Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp Gly Gly 65 70 75 80 Ala Glu Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val His Phe 85 90 95 Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly Pro Phe 100 105 110 Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe 115 120 125 Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ile 130 135 140 Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Thr Phe Asp Gly Thr 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<212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 21 Arg Met Leu Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 22 Arg Met Gly Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 23 Arg Met Ala Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 24 Arg Met Val Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 25 Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 26 Arg Met Pro Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 27 Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 28 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 29 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 30 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 31 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 32 Asp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 33 Glu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 34 His Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 35 Lys Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 36 Asn Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 37 Pro Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 38 Gln Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 39 Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 40 Thr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 41 Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 42 Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 43 Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 44 Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 45 Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 46 Arg Tyr Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> DISULFID <222> (1)..(2) <400> 47 Cys Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 10 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> DISULFID <222> (1)..(2) <400> 48 Cys Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 10 <210> 49 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 49 Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His 1 5 10 15 Ser Arg Lys <210> 50 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 50 Cys Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 1 5 10 15 Gly Ser Leu <210> 51 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 51 Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Leu Cys <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 52 Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro Ser Leu 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 53 Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 54 Arg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is Ser or Ala <400> 55 Xaa Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ser, Ala, Abu, Arg, Lys, Orn, Cit, Leu, Phe and Asn <400> 56 Xaa Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 57 Ala Tyr Leu Pro Ala Val Pro Ser Leu 1 5 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 58 Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 59 Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 60 Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 61 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 61 Arg Tyr Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu 1 5 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 62 Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His 1 5 10 15 Ser Arg Lys His 20 <210> 63 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 63 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys <210> 64 <211> 18 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 64 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys His <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 65 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys His Thr Gly 20 <210> 66 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 66 Cys Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 1 5 10 15 Gly Ser Leu <210> 67 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 67 Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Leu Cys <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 68 Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala 1 5 <210> 69 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 69 Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 Leu Glu Ser <210> 70 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 70 Ser Gly Gln Ala Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 Leu Glu Ser <210> 71 <211> 16 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 71 Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 <210> 72 <211> 16 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 72 Ser Gly Gln Ala Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15

Claims (26)

  1. WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약.
  2. 제1항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 킬러형 및/또는 헬퍼형을 포함하는, 예방 또는 치료약.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는 WT1126 킬러 펩티드, WT1235 킬러 펩티드 및/또는 WT135 헬퍼 펩티드, 또는 어느 아미노산 서열에 있어서, 1개 내지 몇개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하며 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드를 포함하는, 예방 또는 치료약.
  4. 제3항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체는,
    RMFPNAPYL(서열 번호 2),
    RYFPNAPYL(서열 번호 46),
    YMFPNAPYL(서열 번호 14),
    CYTWNQMNL(서열 번호 45),
    CMTWNQMNL(서열 번호 3),
    C-CYTWNQMNL(서열 번호 47)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.), 및
    C-CMTWNQMNL(서열 번호 48)(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)로부터 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 예방 또는 치료약.
  5. 제3항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
    식 (2):
    Figure pct00034

    (식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
    로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 예방 또는 치료약.
  6. 제3항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
    식 (3):
    Figure pct00035

    (식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
    으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 예방 또는 치료약.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가, 추가로
    이하의 아미노산 서열:
    WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4),
    CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 50), 및
    WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호 51)
    로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 하나 이상 포함하는 조성물인, 예방 또는 치료약.
  8. 제7항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
    식 (2):
    Figure pct00036

    (식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
    로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
    아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인, 예방 또는 치료약.
  9. 제7항에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 그의 유사체가,
    식 (3):
    Figure pct00037

    (식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
    으로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학상 허용되는 염과,
    아미노산 서열: WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호 4)을 포함하는 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 조성물인, 예방 또는 치료약.
  10. WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료약.
  11. 제10항에 있어서, 상기 핵산 분자는 RNA 및/또는 DNA를 포함하는, 예방 또는 치료약.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 아쥬반트를 더 포함하는, 예방 또는 치료약.
  13. 제12항에 있어서, 상기 아쥬반트가 Montanide(등록 상표) ISA51 아쥬반트인, 예방 또는 치료약.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양성 종양은 WT1을 발현하는, 예방 또는 치료약.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증, 비유전성의 대장 선종, 췌관내 유두 점액성 종양, 뇌의 수막종, 신경초종, 각 장기의 상피성의 선종, 유두종, 비상피성의 근종, 지방종, 연골종, 혈관종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 예방 또는 치료약.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양성 종양은 가족성 대장 선종증인, 예방 또는 치료약.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 1주일에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는, 예방 또는 치료약.
  18. 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 말초혈 단핵구를, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 제10항 또는 제11항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 말초혈 단핵구에 도입하고, 해당 말초혈 단핵구로부터 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포(CTLs) 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하는 공정을 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 유도 방법.
  19. 양성 종양의 처치를 필요로 하는 피검체 유래의 미숙 수지상 세포를, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 존재 하에서 배양하거나, 혹은 제10항 또는 제11항에 기재된 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 코드하는 핵산 분자를 해당 미숙 수지상 세포에 도입하고, WT1 제시 수지상 세포를 유도하는 공정을 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포의 유도 방법.
  20. WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 유도하기 위한 조성물.
  21. WT1 펩티드 혹은 그의 유사체, 또는 그것을 코드하는 핵산 분자를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위하여 사용하는 WT1 제시 수지상 세포를 유도하기 위한 조성물.
  22. WT1 특이적 CTLs 및/또는 WT1 특이적 헬퍼 T 세포를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 조성물.
  23. WT1 제시 수지상 세포를 포함하는, 양성 종양의 예방 또는 치료를 위한 조성물.
  24. 피검체에 있어서의 양성 종양을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 해당 피검체에, 유효량의 WT1 펩티드 또는 그의 유사체를 투여하는 공정을 포함하는, 방법.
  25. 양성 종양을 예방 또는 치료하기 위한, WT1 펩티드 또는 그의 유사체.
  26. 양성 종양의 예방 또는 치료약의 제조에 있어서의, WT1 펩티드 또는 그의 유사체의 사용.
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