KR20210050188A - 광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물 - Google Patents

광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20210050188A
KR20210050188A KR1020190134517A KR20190134517A KR20210050188A KR 20210050188 A KR20210050188 A KR 20210050188A KR 1020190134517 A KR1020190134517 A KR 1020190134517A KR 20190134517 A KR20190134517 A KR 20190134517A KR 20210050188 A KR20210050188 A KR 20210050188A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
hydrolyzate
seq
peptide
hypertension
flounder
Prior art date
Application number
KR1020190134517A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102253996B1 (ko
Inventor
전유진
오재영
Original Assignee
제주대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제주대학교 산학협력단 filed Critical 제주대학교 산학협력단
Priority to KR1020190134517A priority Critical patent/KR102253996B1/ko
Publication of KR20210050188A publication Critical patent/KR20210050188A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102253996B1 publication Critical patent/KR102253996B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/326—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having effect on cardiovascular health
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/54—Proteins
    • A23V2250/542—Animal Protein
    • A23V2250/543—Fish protein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2300/00—Processes
    • A23V2300/28—Hydrolysis, degree of hydrolysis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드가 안지오텐신 I 전환 효소 (Angiotensin I converting Enzyme, ACE) 저해 활성을 가지므로, 상기 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드들을 이용하여, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 식품 조성물에 사용할 수 있다.

Description

광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물{Anti-hypertensive composition comprising peptides derived from hydrolysates of Paralichthys olivaceus}
본 발명은 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드를 포함하는 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.
고혈압은 전 세계적으로 성인의 15~20%가 겪고 있는 만성 순환기계 질환 중 발생빈도가 가장 높은 질환으로 비교적 증상이 없는 편이지만, 높은 혈압으로 인해 정상적인 기능을 유지하던 기관들이 서서히 그 기능을 상실하여 뇌졸중, 심부전, 관상동맥질환 등 치명적인 합병증을 유발할 수 있기 때문에 보다 적극적이고 꾸준한 환자 관리와 치료가 요구되는 질환이다. 세계건강보건기구 (WHO)에서는 최고 혈압이 160 mmHg 이상이고 최저 혈압이 95 mmHg 이상인 경우를 고혈압으로 규정하고 있으며, 고혈압 질환의 종류로는 크게 원인이 불분명한 본태성 고혈압과 원인 질병에 의한 속발성 고혈압으로 구분되는데 이 중 90% 이상이 본태성 고혈압에 속하는 것으로 알려져 있으며, 전 세계적으로 약 6억명 이상의 사람들이 고혈압을 앓고 있으며, 이 고혈압 때문에 매년 3백만 명이 사망하고 있어 전 세계적인 과제로 떠오르고 있다.
생체 중에 존재하고 있는 불활성화 안지오텐신 I (Angiotensin I)은 안지오텐신 I 전환 효소 (Angiotensin I converting Enzyme, ACE)에 의하여 C-말단 His-Leu가 떨어져 나감으로써 혈관벽 수축 작용을 가지는 안지오텐신 II (Angiotensin II)로 전환되어 혈관을 수축하고, 신장에서 알도스테론의 분비를 증가시켜 체액량을 증가시킴으로써 혈압을 상승시키는 작용을 한다. 따라서 ACE의 활성을 억제시킴으로써 혈압상승의 원인이 되는 안지오텐신 II 생성 저하를 통해 혈압을 억제할 수 있다.
고혈압을 개선하기 위한 목적으로 에넬라프릴(enelapril)이나 라미프릴(Ramipril) 등의 ACE 저해제가 개발되어 상용되고 있으나 이러한 약제의 사용으로 인한 부작용으로 미각이상, 백혈구 감소, 혈관부종, 간기능 이상 등이 발견되었다.
따라서 천연물질로부터 항고혈압 효과를 가지는 연구에 대한 요구가 계속되었으며, 대두 단백질 가수분해물, 키토산, 밀크 카제인 등에서 분리된 ACE 저해제는 식품의약품안전처에 개별인정 기능성 식품으로 인정받았다.
생리활성 펩티드(Bioactive peptide)들은 다양한 단백질 가수분해효소를 통해 만들어질 수 있고, 천연물 유래의 펩티드들은 음식이 장내에서 소화되는 동안 신진대사 과정에서 잠재적인 생리적 조절자로 기능할 수 있다. 또한 구조, 조성, 아미노산 서열에 따라 항산화, 항균, 항고혈압 효능 등을 기대할 수 있다.
종래 화학 합성 방법 등을 통하여 제조되었던 고혈압 제제들이 부작용 등의 문제가 발생됨에 따라, 최근 세계 각국에서는 천연 물질로부터 항고혈압 효과를 갖는 물질을 얻기 위한 노력이 지속되고 있다. 또한, 각국에서는 의약품은 물론이고, 효소와 건강보조제와 같은 식품 소재 등 다양한 용도에 활용될 수 있는 새로운 물질을 탐색하기 위하여 자연 상태의 생물, 특히 대량 배양 및 번식이 용이한 생물에 대한 연구도 활발하게 진행하고 있다.
한편, 해양생물은 육상생물에 없는 특유의 대사과정과 독특한 환경으로 인하여 다양한 신규 생리활성물질의 탐색 기능성을 가지고 있다. 또한, 육상생물은 이미 많은 연구가 진행되었으나 해양생물은 아직 충분하게 연구되지 않아서 새로운 유용성을 가진 천연물질 개발에 대한 기대치가 높은 분야이기도 하다.
국내등록특허 제10-1150425호
본 발명의 목적은 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 개선 또는 예방용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 광어에 가수분해 효소를 첨가하여 1차 가수분해를 진행하는 1차 가수분해물 제조 단계; 상기 제조된 1차 가수분해물에 가수분해 효소를 첨가하여 2차 가수분해를 진행하는 2차 가수분해물 제조 단계; 및
상기 2차 가수분해물을 가열하여 효소 불활성화를 진행하고 여과하여 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는 광어의 가수분해물을 제조하는 단계를 포함하는, 고혈압 치료, 예방 또는 개선용 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명자는 가수분해 효소인 프로타멕스(protamex)를 이용한 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 1차 가수분해물을 제조한 후, 상기 1차 가수분해물에 펩신(pepsin)을 첨가하여 2차 가수분해물을 제조하였으며, 상기 2차 가수분해물에서 분리된 특정 아미노산 서열을 가지는 펩티드가 안지오텐신 I 전환 효소 (Angiotensin I converting Enzyme, ACE) 저해 활성이 있는 것을 확인하였다.
따라서, 상기 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드들을 이용하여, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 식품 조성물에 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 펩티드는 광어(Paralichthys olivaceus)의 가수분해물에서 분리될 수 있으며, 구체적으로 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리될 수 있다.
상기 용어 "광어 육"은 광어에서 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈를 제거하고 남은 부분을 의미한다.
상기 가수분해물은 펩신(pepsin), 트립신(trysin), 뉴트라제(neutrase), 프로타멕스(protamex), 알칼레이즈(alcalase), 코지자임(kojizyme), 플라보자임(flavourzyme) 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 효소의 가수분해물 일 수 있다. 상기 가수분해물은 가수분해를 2번 이상 진행, 보다 구체적으로 가수분해를 2번 진행하여 얻은 2차 가수분해물 일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는 광어의 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈를 제거하고 남은 광어 육을 마쇄 및 수세한 후, 가수분해 효소를 첨가하여 1차 가수분해를 진행하여 1차 가수분해물을 제조하였으며, 상기 제조된 1차 가수분해물에 가수분해 효소를 첨가하여 2차 가수분해를 진행하여 2차 가수분해물을 제조하였으며, 상기 2차 가수분해물을 가열하여 효소 불활성화를 진행하고 여과하여 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는 광어의 가수분해물을 제조하였다. 구체적으로, 상기 1차 가수분해물의 제조를 위하여, 가수분해 효소로 프로타멕스(protamex)를 사용하였으며, 상기 2차 가수분해물의 제조를 위하여, 펩신(pepsin)을 사용하였다.
상기 2차 가수분해를 진행하여 얻은 광어의 가수분해물에서 8종의 펩티드를 분리하였으며, Q-TOF mass spectrometer (Micromass, Altrincham, UK) electrospray ionization (ESI)을 사용하여 펩티드의 서열 및 분자량을 분석한 결과, Leucine-Aspartic acid-Aspartic acid (Leu-Asp-Asp, LDD)(서열번호 1), Aspartic acid-Leucine-Glutamine-Arginine (Asp-Leu-Gln-Arg, DLQR)(서열번호 2), Leucine-Glutamic acid (Leu-Glu, LE)(서열번호 3), Leucine-Valine-Histidine (Leu-Val-His, LVH)(서열번호 4), Leucine-Glutamic acid-Arginine (Leu-Glu-Arg, LER)(서열번호 5), Isoleucine-Glutamic acid (Ile-Glu, IE)(서열번호 6), Isoleucine-Glutamic acid-Arginine (Ile-Glu-Arg, IER)(서열번호 7) 또는 Isoleucine-Aspartic acid-Aspartic acid (Ile-Asp-Asp, IDD)(서열번호 8)의 아미노산 서열을 가지는 것을 확인하였으며, 각각 분자량은 361.15Da, 531.28Da, 260.14Da, 367.23Da, 416.24Da, 260.14Da, 416.24Da, 또는 361.15 Da을 가지는 것을 확인하였다.
또한, 상기 펩티드들을 이용하여, ACE(Angiotensin I converting enzyme) 저해 효과를 평가한 결과, Aspartic acid-Leucine-Glutamine-Arginine (Asp-Leu-Gln-Arg, DLQR)(서열번호 2), Leucine-Valine-Histidine (Leu-Val-His, LVH)(서열번호 4), Leucine-Glutamic acid-Arginine (Leu-Glu-Arg, LER)(서열번호 5), Isoleucine-Glutamic acid-Arginine (Ile-Glu-Arg, IER)(서열번호 7)의 펩티드가 ACE 저해 효능이 높아 항고혈압 활성이 우수한 것을 확인하였다.
따라서, 상기 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물은 Aspartic acid-Leucine-Glutamine-Arginine (Asp-Leu-Gln-Arg, DLQR)(서열번호 2), Leucine-Valine-Histidine (Leu-Val-His, LVH)(서열번호 4), Leucine-Glutamic acid-Arginine (Leu-Glu-Arg, LER)(서열번호 5), 및 Isoleucine-Glutamic acid-Arginine (Ile-Glu-Arg, IER)(서열번호 7)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하거나, Leucine-Aspartic acid-Aspartic acid (Leu-Asp-Asp, LDD)(서열번호 1), Aspartic acid-Leucine-Glutamine-Arginine (Asp-Leu-Gln-Arg, DLQR)(서열번호 2), Leucine-Glutamic acid (Leu-Glu, LE)(서열번호 3), Leucine-Valine-Histidine (Leu-Val-His, LVH)(서열번호 4), Leucine-Glutamic acid-Arginine (Leu-Glu-Arg, LER)(서열번호 5), Isoleucine-Glutamic acid (Ile-Glu, IE)(서열번호 6), Isoleucine-Glutamic acid-Arginine (Ile-Glu-Arg, IER)(서열번호 7) 및 Isoleucine-Aspartic acid-Aspartic acid (Ile-Asp-Asp, IDD)(서열번호 8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함한다.
상기 ACE(Angiotensin I converting enzyme)는 데카펩티드(decapeptide)인 안지오텐신I으로부터 다이펩티드(dipeptide, His-Leu)를 절단함으로써 혈관 수축 작용을 갖는 안지오텐신Ⅱ로 전환시키는 역할을 하는 효소이다. 안지오텐신Ⅱ의 증가는 강한 혈압 상승 작용과 항이뇨 호르몬인 알도스테론(aldosterone)의 분비를 촉진하고 물과 나트륨의 배설을 억제하여 순환 혈액량을 증가시킴으로써 고혈압을 일으키게 한다. 또한 ACE는 혈관 이완 작용을 하는 브레디키닌(bradykinin)을 분해하여 불활성화시킴으로써 결과적으로 혈압 상승을 유발하는 역할을 한다.
본 발명에서 상기 "광어"의 학명은 Paralichthys olivaceus이며, 넙치라고 불리며, 몸길이는 60cm 가량이며, 모양은 위아래로 넓적한 긴 타원형이다. 입이 크고 이빨이 잘 발달되어 있으며, 눈은 몸의 왼쪽에 있다. 눈이 있는 쪽은 진한 황갈색 바탕에 흑색 및 백색 반점이 흩어져 있으나, 눈이 없는 쪽은 백색이다. 수심 10-200m 연안의 모래나 펄 지역에 서식하며, 2-6월에 산란한다. 우리나라 전 연안에 출현하며, 쿠릴 열도, 일본, 남중국해에 분포한다. 넙적한 체형 때문에 흔히 '광어'라고 부르며, 눈이 왼쪽에 있기 때문에 일반적으로 눈이 오른쪽에 있는 가자미류와 쉽게 구별된다.
본 발명의 용어 "고혈압(hypertension)"과 관련하여, 세계건강보건기구 (WHO)에서는 최고 혈압이 160 mmHg 이상이고 최저 혈압이 95 mmHg 이상인 경우를 고혈압으로 규정하고 있으며, 고혈압 질환의 종류로는 크게 원인이 불분명한 본태성 고혈압과 원인 질병에 의한 속발성 고혈압으로 구분되는데 이 중 90% 이상이 본태성 고혈압에 속하는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란, 본 발명에 따른 조성물을 개체에 투여하여 고혈압의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란, 본 발명의 상기 조성물을 고혈압 발병 의심 개체에 투여하여 고혈압에 의한 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
또한 본 발명의 일실시예에서는 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈를 제거하고 남은 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드들이 안지오텐신 I 전환 효소 (Angiotensin I converting Enzyme, ACE) 저해 활성을 가지는 것을 확인하여, 상기 펩티드들을 이용하여, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물에 사용할 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 상기 펩티드들을 포함하는 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 이때, 상기 조성물에 포함되는 펩티드는 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 99 중량%로, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 50 중량%를 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 고혈압 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 인간, 조류 및 어류 등 어느 것이나 사용할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의하여 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 약학 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 개선 또는 예방용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 고혈압 개선 또는 예방용 식품 조성물은 Aspartic acid-Leucine-Glutamine-Arginine (Asp-Leu-Gln-Arg, DLQR)(서열번호 2), Leucine-Valine-Histidine (Leu-Val-His, LVH)(서열번호 4), Leucine-Glutamic acid-Arginine (Leu-Glu-Arg, LER)(서열번호 5), 및 Isoleucine-Glutamic acid-Arginine (Ile-Glu-Arg, IER)(서열번호 7)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하거나, Leucine-Aspartic acid-Aspartic acid (Leu-Asp-Asp, LDD)(서열번호 1), Aspartic acid-Leucine-Glutamine-Arginine (Asp-Leu-Gln-Arg, DLQR)(서열번호 2), Leucine-Glutamic acid (Leu-Glu, LE)(서열번호 3), Leucine-Valine-Histidine (Leu-Val-His, LVH)(서열번호 4), Leucine-Glutamic acid-Arginine (Leu-Glu-Arg, LER)(서열번호 5), Isoleucine-Glutamic acid (Ile-Glu, IE)(서열번호 6), Isoleucine-Glutamic acid-Arginine (Ile-Glu-Arg, IER)(서열번호 7) 및 Isoleucine-Aspartic acid-Aspartic acid (Ile-Asp-Asp, IDD)(서열번호 8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함한다.
본 발명에서, 상기 펩티드와 고혈압, 광어, 예방에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 발명에서의 용어, "개선"은 상기 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 이용하여 예방 또는 치료되는 고혈압과 같은 질환의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 말한다.
구체적으로, 본 발명의 상기 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 고혈압의 예방 또는 개선을 목적으로 식품 조성물에 첨가할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 상기 펩티드들을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.
상기 식품 조성물에는 상기 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있는 바, 본 발명에서 상기 식품 조성물은 건강기능식품일 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 상기 펩티드는 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 연육, 연제품, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 광어에 가수분해 효소를 첨가하여 1차 가수분해를 진행하는 1차 가수분해물 제조 단계; 상기 제조된 1차 가수분해물에 가수분해 효소를 첨가하여 2차 가수분해를 진행하는 2차 가수분해물 제조 단계; 및
상기 2차 가수분해물을 가열하여 효소 불활성화를 진행하고 여과하여 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는 광어의 가수분해물을 제조하는 단계를 포함하는, 고혈압 치료, 예방 또는 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법은 가수분해 효소를 첨가하기 전에, 광어를 마쇄 및 수세하는 단계를 더 포함할 수 있다. 구체적으로, 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈를 제거하고 남은 광어 육을 마쇄 및 수세한다.
본 발명의 일실시예에서는 광어의 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈를 제거하고 남은 광어 육을 마쇄 및 수세한 후, 가수분해 효소를 첨가하여 1차 가수분해를 진행하여 1차 가수분해물을 제조하였으며, 상기 제조된 1차 가수분해물에 가수분해 효소를 첨가하여 2차 가수분해를 진행하여 2차 가수분해물을 제조하였으며, 상기 2차 가수분해물을 가열하여 효소 불활성화를 진행하고 여과하여 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드를 포함하는 광어의 가수분해물을 제조하였다. 구체적으로, 상기 1차 가수분해물의 제조를 위하여, 가수분해 효소로 프로타멕스(protamex)를 사용하였으며, 상기 2차 가수분해물의 제조를 위하여, 펩신(pepsin)을 사용하였다.
상기 제조된 광어의 가수분해물에 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드가 포함되어 있는 것을 확인하였으며, 또한 상기 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드가 ACE 저해 활성을 가지는 것을 확인하였는 바, 상기 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 광어의 가수분해물을 이용하여 고혈압 치료, 예방 또는 개선용 조성물의 제조가 가능하다.
본 발명에서, 상기 광어의 가수분해물, 가수분해 효소, 고혈압은 전술한 바와 같으며, 상기 조성물은 전술한 약학조성물, 식품 조성물의 형태를 포함한다.
본 발명의 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드가 안지오텐신 I 전환 효소 (Angiotensin I converting Enzyme, ACE) 저해 활성을 가지므로, 상기 광어(Paralichthys olivaceus) 육의 가수분해물에서 분리된 펩티드들을 이용하여, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 식품 조성물에 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 광어 육의 가수분해 공정을 나타낸다.
도 2는 광어 가수분해물의 Hydrogen peroxide 소거능 측정 결과를 나타낸다.
도 3은 광어 가수분해물의 ACE 저해 활성 측정 결과를 나타낸다.
도 4는 1차 가수분해물의 LC/MS 분석 결과이다.
도 5는 2차 가수분해물의 LC/MS 분석 결과이다.
도 6은 광어 가수분해물의 분자량 분포도를 나타낸다.
도 7은 LDD 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 8은 DLQR 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 9는 LE 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 10은 LVH 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 11은 LER 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 12는 IE 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 13은 IER 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
도 14는 IDD 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
<A. 실험방법>
1. 광어육의 가수분해물의 제조
1-1. 광어육의 1차 가수분해물의 제조
본 발명에 사용된 재료는 제주도 수산시장에서 구입한 광어(넙치)(Paralichthys olivaceus)를 사용하였으며, 광어의 머리, 껍질, 내장, 혈액, 뼈를 제거하고 민서기를 이용하여 마쇄한 후, 정제수에 3회 반복 수세하여 혈액 등의 협잡물을 제거 하였다. 이 후 -50℃ 냉동창고에서 보관하며 실험에 사용하였다.
광어의 1차 가수분해물을 제조하기 위하여 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈가 제거된 냉동 광어 육을 저온(5℃)에서 24시간 동안 해동시켰고, 10배수의 증류수를 첨가하였다. 이 후 Protamex 효소를 광어육 대비 1% 첨가하였고, pH는 6.0으로 조정하였으며, 40℃에서 24시간동안 교반하였다. 가수분해 종료 후 95℃에서 10분 동안 가열하여 효소 불활성화를 진행하였고, 원심분리(4000rpm, 20분)와 여과를 통하여 1차 가수분해물을 얻었다. 상기 1차 가수분해물은 농축 후 동결건조하여 냉동보관하며 실험에 사용하였다.
1-2. 광어육의 2차 가수분해물의 제조
광어의 2차 가수분해물을 제조하기 위하여 머리, 껍질, 내장, 혈액, 및 뼈가 제거된 냉동 광어 육을 저온(5℃)에서 24시간동안 해동시켰고, 10배수의 증류수를 첨가하였다. 이 후 Protamex 효소를 광어육 대비 1% 첨가하였고, pH는 6.0으로 조정하였으며, 40℃에서 24시간동안 교반시켰다. 이 후, pH를 약 2.5로 조정하였고, pepsin 효소를 광어육 대비 1% 첨가한 후 36℃에서 24시간 동안 교반하였다. 가수분해 종료 후 95℃에서 10분 동안 가열하여 효소 불활성화를 진행하였고, 원심분리(4000rpm, 20분)와 여과를 통하여 2차 가수분해물을 얻었다. 상기 2차 가수분해물은 농축 후 동결건조하여 냉동보관하며 실험에 사용하였다. 본 발명에 따른 가수분해 공정을 정리하면 도 1과 같다.
2. 항산화 활성 측정
Hydrogen peroxide radical 소거활성을 측정하기 위하여, 0.1M phosphate buffer(pH 5.0) 100μL와 시료를 96 well plate에서 혼합시킨 후 20μL의 hydrogen peroxide(100mM)를 첨가하고 37℃에서 5분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후 1.25mM ABTS와 peroxidase(1unit/mL)를 각각 30μL 첨가하여 최종적으로 37℃에서 10 분간 반응시켜 ELISA reader를 사용해 405 nm에서 흡광도 값을 측정하였다.
3. 항고혈압 활성 측정(ACE 저해능 측정)
항고혈압 활성을 측정하기 위하여, ACE 저해 활성을 측정하였다. ACE kit-WST (Dojindo inc., Japan)을 이용하였으며, 기질인 3-hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly에 ACE가 작용하여 생성된 3-hyroxybutylic acid를 측정하는 colorimetric method를 통해 확인하였다. 96 well plate에 substrate buffer와 시료를 각각 분주한 후, enzyme solution을 첨가하여 반응시켰다. 이때, Blank1과 Blank2에는 시료대신 용매를 넣었고, 37℃에서 1 시간 동안 반응시킨 후, indicator solution을 각 well에 첨가하였다. 상기 반응 후에 생성된 3-hyroxybutylic acid의 양을 450 nm에서 흡광도를 측정하여 시료의 ACE　저해율을 계산하였다.
4. 분자량 분포도 측정
시료 20mg을 DW 1mL에 녹인 후, 100㎕를 취한 후, 메탄올 500㎕를 첨가하고 교반하였다. 상기 교반한 시료는 얼음에서 5분간 반응시키고, 13,000rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 새로운 마이크로튜브에 옮긴 후, 진공건조하였다. 건조된 시료는 100㎕의 DW에 녹여 0.2㎛ 실린지 필터로 여과하여 시료로 사용하였다.
분석에 사용된 분석 LC는 UltiMate 3000 system (Dionex, US)를 사용하였고, ZORBAX 300SB-C18 (1.0 X 150mm, 3.5 ㎛, Agilent) 컬럼을 사용하였다. 이동상은 0.2% formic acid 첨가 증류수와 0.2% formic acid 첨가 아세토니트릴을 사용하였다. 이동상은 분당 100㎕의 속도로 흘려주었다. MS는 MicroQ-TOF III mass spectrometer (Bruker Daltonics, 255748 Germany)를 사용하였고, ESI+ 모드를 사용하였다. Scan range는 m/z 200-2000로 설정하였다.
5. 광어 가수분해물 유래 기능성 펩티드 분리 정제
광어 육 2차 가수분해물 유래 기능성 펩티드 분리 및 정제를 위하여 가수분해물을 200mg/mL의 농도가 되도록 증류수에 녹여 고농도의 시료를 제조한 후, 시료 양의 3배수의 에탄올을 첨가한 뒤 5℃에 냉장보관하여 침전시켰다. 이 후 10000rpm에서 20분간 원심분리하여 침전물을 회수하였고, 건조하여 분석시료로 사용하였다. 이 후 분석조건은 분자량 분포도 측정 방법과 동일하게 하였다.
<B. 실험결과>
실험예 1: 광어 육 가수분해물의 항산화 활성
과산화수소(H2O2)에 대한 소거능을 측정하여 가수분해물의 항산화 효과를 비교하였다. 0.5~4mg/mL 농도의 시료를 측정하였고, 0.5~1mg까지는 2차 가수분해물이 소폭 우수한 항산화 효과를 나타냈다. IC50값으로 환산하여 비교하였을 때, 2차 가수분해물이 1.34mg/mL으로 더 낮은 농도에서 hydrogen peroxide 50%를 소거시켜, 1차 가수분해물에 비해 2차 가수분해물의 항산화 효과가 우수하였다.
실험예 2: 광어 육 가수분해물의 항고혈압 활성 측정
광어 육 가수분해물의 항고혈압 활성을 확인하기 위하여 ACE 저해 활성을 측정하였고, 0.33~1.33㎍/㎖의 농도에서 측정을 하였다. 모든 농도에서 1차 가수분해물보다 2차 가수분해물이 우수한 ACE 저해 활성을 나타내었고, IC50값으로 환산하였을 때, 1차 가수분해물은 559.96㎍/㎖, 2차 가수분해물은 432.41㎍/㎖으로 2차 가수분해물이 ACE 저해 효과가 더 우수한 것을 확인하였다.
실험예 3: 광어 육 가수분해물의 분자량 분포도 분석
LC/MS 분석으로 1차 가수분해물과 2차 가수분해물을 분석하였고, 분석시료의 피크에 따라 1차 가수분해물은 총 7개 부분으로 나누어 분석하였고(도 4), 2차 가수분해물은 총 10개의 부분으로 분석하였다(도 5). 분석 결과 검출된 펩티드들의 분자량과 정보들은 표 1과 2에 나타내었다.
상기 두 가지 가수분해물을 펩티드 분자량 크기별로 도 6에 나타내었으며, 300~599 Da 크기의 분자량에서는 1차 가수분해물에서 약 27%가 분포되어 있었고, 2차 가수분해물에서는 약 47%가 분포하였다. 600~899 Da 범위에서는 1차 가수분해물의 경우 약 37%로 2차 가수분해물 약 33%에 비해 높았다. 900~1199 Da 범위에서는 1차 가수분해물이 약 22%로 2차 가수분해물 약 18%에 비해 높았다. 1차 가수분해물에서는 1200 Da 이상의 분자량에서 펩티드가 검출이 되었지만 2차 가수분해물에서는 펩티드가 검출이 되지 않았다. 또한, 300 Da 미만의 분자량에서 2차 가수분해물에서만 펩티드가 검출되었다.
따라서 2차 가수분해물의 경우, 599 Da 이하의 분자량을 가지는 펩티드가 많이 분포되어 있는 것을 확인 할 수 있었고, 1200 Da 이상의 분자량에서는 펩티드가 검출되지 않는 것으로 보아, 2차 가수분해에 의해 얻어진 가수분해물이 1차 가수분해에 의해 얻어진 1차 가수분해물보다 저분자화된 것을 알 수 있었다.
광어 1차 가수분해물 내 펩티드의 분자량 리스트
No. m/z Charge Intensity Calc. mass(M+H) No. m/z Charge Intensity Calc. mass(M+H)
1 316.21 1+ 63419 316.21 33 412.17 2+ 10870 823.34
2 323.15 1+ 11684 323.15 34 415.23 2+ 10019 829.46
3 342.17 1+ 12312 342.17 35 423.73 2+ 44783 846.46
4 390.18 1+ 23080 390.18 36 848.34 1+ 36711 848.34
5 430.24 1+ 32712 430.24 37 424.70 2+ 41338 848.40
6 461.22 1+ 10522 461.22 38 440.21 2+ 19910 879.42
7 461.22 1+ 15550 461.22 39 441.20 2+ 20804 881.40
8 475.24 1+ 29304 475.24 40 442.24 2+ 15909 883.48
9 475.24 1+ 38331 475.24 41 455.71 2+ 12252 910.42
10 504.22 1+ 11556 504.22 42 460.22 2+ 23523 919.40
11 505.21 1+ 14487 505.21 43 465.73 2+ 10219 930.46
12 507.22 1+ 10634 507.22 44 469.19 2+ 62636 937.38
13 519.22 1+ 23764 519.22 45 971.49 1+ 11895 971.49
14 526.28 1+ 30209 526.28 46 488.25 2+ 45624 975.50
15 555.19 1+ 13430 555.19 47 501.75 2+ 14799 1002.50
16 585.32 1+ 12003 585.32 48 518.75 2+ 15900 1036.50
17 590.26 1+ 16520 590.26 49 521.27 2+ 12720 1041.54
18 600.32 1+ 29673 600.32 50 535.24 2+ 10607 1069.48
19 604.28 1+ 27942 604.28 51 554.72 2+ 17477 1108.44
20 637.30 1+ 15297 637.30 52 575.25 2+ 26144 1149.50
21 639.36 1+ 15824 639.36 53 587.78 2+ 11916 1174.56
22 648.27 1+ 16412 648.27 54 590.75 2+ 59373 1180.50
23 653.24 1+ 44938 653.24 55 611.27 2+ 19512 1221.54
24 655.23 1+ 15410 655.23 56 642.78 2+ 30577 1284.56
25 328.12 2+ 16556 655.24 57 428.86 3+ 14609 1284.58
26 658.30 1+ 20992 658.30 58 670.80 2+ 10639 1340.60
27 355.16 2+ 21981 709.32 59 690.30 2+ 10200 1379.60
28 357.18 2+ 17663 713.36 60 583.63 3+ 10211 1748.89
29 763.29 1+ 19516 763.29 61 437.98 4+ 11618 1748.92
30 766.32 1+ 18983 766.32 62 686.31 3+ 15024 2056.93
31 806.33 1+ 13443 806.33 63 756.02 3+ 12227 2266.06
32 810.31 1+ 16117 810.31
광어 2차 가수분해물 내 펩티드의 분자량 리스트
No. m/z Charge Intensity Calc. mass(M+H) No. m/z Charge Intensity Calc. mass(M+H)
1 261.14 1 149608 261.14 34 637.31 1 29062 637.31
2 261.15 1 16052 261.15 35 328.13 2 12916 655.26
3 316.21 1 61129 316.21 36 658.3 1 34551 658.3
4 323.15 1 11048 323.15 37 680.23 1 12078 680.23
5 362.15 1 56931 362.15 38 697.34 1 12494 697.34
6 362.16 1 91531 362.16 39 357.18 2 20597 713.36
7 368.23 1 256056 368.23 40 719.31 1 11772 719.31
8 374.23 1 10820 374.23 41 730.41 1 15659 730.41
9 390.19 1 16872 390.19 42 368.22 2 10842 735.44
10 417.24 1 113532 417.24 43 763.3 1 11202 763.3
11 417.25 1 125180 417.25 44 415.24 2 15430 829.48
12 430.24 1 51567 430.24 45 423.73 2 25625 846.46
13 461.23 1 18228 461.23 46 424.7 2 25006 848.4
14 461.23 1 32013 461.23 47 429.25 2 13808 857.5
15 475.24 1 53844 475.24 48 871.44 1 15621 871.44
16 475.24 1 82414 475.24 49 442.24 2 11727 883.48
17 489.25 1 19308 489.25 50 451.76 2 19078 902.52
18 490.28 1 19178 490.28 51 463.74 2 20782 926.48
19 505.22 1 10149 505.22 52 468.74 2 20284 936.48
20 507.22 1 10401 507.22 53 468.75 2 33532 936.5
21 519.23 1 17949 519.23 54 940.57 1 27760 940.57
22 523.24 1 11036 523.24 55 489.77 2 12232 978.54
23 523.24 1 10651 523.24 56 521.28 2 12758 1041.56
24 526.28 1 21503 526.28 57 528.31 2 65767 1055.62
25 527.29 1 10901 527.29 58 553.8 2 17420 1106.6
26 529.26 1 10405 529.26 59 586.81 2 38517 1172.62
27 531.28 1 188,181 531.28 60 590.76 2 31422 1180.52
28 550.26 1 11474 550.26
29 574.31 1 14550 574.31
30 577.26 1 15902 577.26
31 600.32 1 17871 600.32
32 604.28 1 38180 604.28
33 622.34 1 13925 622.34
실험예 4: 광어 육 2차 가수분해물 유래 기능성 펩티드 규명
광어 육 2차 가수분해물 내 펩티드를 분석한 결과 총 8가지의 펩티드를 규명하였으며, 펩티드들은 표 3에 나타내었다.
서열번호 이름 서열 Calc. mass (M+H) 분자량 (Da)
1 LDD Leucine - Aspartic acid - Aspartic acid 362.15 361.37
2 DLQR Aspartic acid - Leucine - Glutamine-Arginine 531.28 530.89
3 LE Leucine - Glutamic acid 261.14 260.31
4 LVH Leucine - Valine - Histidine 368.23 367.48
5 LER Leucine - Glutamic acid - Arginine 417.24 416.51
6 IE Isoleucine - Glutamic acid 261.15 260.31
7 IER Isoleucine - Glutamic acid - Arginine 417.25 416.51
8 IDD Isoleucine - Aspartic acid - Aspartic acid 362.16 361.37
그리고, 상기 펩티드들의 분자량 및 아미노산 서열을 Q-TOF mass spectrometer (Micromass, Altrincham, UK) electrospray ionization (ESI)을 사용하여 분석하고 그 결과를 도 7 내지 도 14에 나타내었다. 도 7은 LDD 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 8은 DLQR 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 9는 LE 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 10은 LVH 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 11은 LER 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 12는 IE 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 13은 IER 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다. 도 14는 IDD 펩티드의 MS 크로마토그램을 나타낸다.
실험예 5: 광어 2차 가수분해물 유래 기능성 펩티드의 ACE 저해 활성 측정
상기 2차 가수분해물에서 분리된 각각의 펩티드의 ACE 저해 활성을 측정한 결과를 표 4에 나타내었다. 그 결과, LDD, LE와 IE는 IC50 값이 66.67보다 높게 나타내서 유의적인 ACE 저해 활성을 나타내지 않았다. 그러나, DLQR, LVH, LER 그리고 IER 펩티드가 각각 22.64, 39.78, 63.60 그리고 20.13의 ACE 저해 IC50값을 나타내었다. 따라서, 상기 DLQR, LVH, LER 그리고 IER을 이용하여 고혈압 치료 또는 예방용 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.
LDD DLQR LE LVH LER IE IER IDD
IC50 value
(μg/mL)		 > 66.67 22.64
± 0.62		 > 66.67 39.78
± 0.16		 63.60
± 4.56		 > 66.67 20.13
± 1.61		 > 66.67
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
<110> Jeju National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Anti-hypertensive composition comprising peptides derived from hydrolysates of Paralichthys olivaceus <130> DP20190076 <160> 8 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 1 Leu Asp Asp 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 2 Asp Leu Gln Arg 1 <210> 3 <211> 2 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 3 Leu Glu 1 <210> 4 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 4 Leu Val His 1 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 5 Leu Glu Arg 1 <210> 6 <211> 2 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 6 Ile Glu 1 <210> 7 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 7 Ile Glu Arg 1 <210> 8 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 8 Ile Asp Asp 1

Claims (10)

  1. 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 펩티드는 광어의 가수분해물에서 분리된 것인, 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 가수분해물은 펩신(pepsin), 트립신(trysin), 뉴트라제(neutrase), 프로타멕스(protamex), 알칼레이즈(alcalase), 코지자임(kojizyme), 플라보자임(flavourzyme) 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 효소의 가수분해물 것인, 약학 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 가수분해물은 가수분해를 2번 진행하여 얻은 것인, 약학 조성물.
  5. 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 고혈압 개선 또는 예방용 식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 펩티드는 광어의 가수분해물에서 분리된 것인, 식품 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 가수분해물은 항산화 활성을 나타내는 것인, 식품 조성물.
  8. 제6항에 있어서, 상기 가수분해물은 펩신(pepsin), 트립신(trysin), 뉴트라제(neutrase), 프로타멕스(protamex), 알칼레이즈(alcalase), 코지자임(kojizyme), 플라보자임(flavourzyme) 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 효소의 가수분해물 것인, 식품 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 상기 가수분해물은 가수분해를 2번 진행하여 얻은 것인, 식품 조성물.
  10. 광어에 가수분해 효소를 첨가하여 1차 가수분해를 진행하는 1차 가수분해물 제조 단계;
    상기 제조된 1차 가수분해물에 가수분해 효소를 첨가하여 2차 가수분해를 진행하는 2차 가수분해물 제조 단계; 및
    상기 2차 가수분해물을 가열하여 효소 불활성화를 진행하고 여과하여 서열번호 1 내지 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는 광어의 가수분해물을 제조하는 단계를 포함하는, 고혈압 치료, 예방 또는 개선용 조성물의 제조방법.
KR1020190134517A 2019-10-28 2019-10-28 광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물 KR102253996B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190134517A KR102253996B1 (ko) 2019-10-28 2019-10-28 광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190134517A KR102253996B1 (ko) 2019-10-28 2019-10-28 광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210050188A true KR20210050188A (ko) 2021-05-07
KR102253996B1 KR102253996B1 (ko) 2021-05-20

Family

ID=75916972

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190134517A KR102253996B1 (ko) 2019-10-28 2019-10-28 광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102253996B1 (ko)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101150425B1 (ko) 2011-09-26 2012-06-01 제주대학교 산학협력단 미더덕 유래의 혈압조절용 조성물
KR101991880B1 (ko) * 2017-06-21 2019-06-24 제주대학교 산학협력단 고혈압 치료 또는 예방용 조성물
KR102003934B1 (ko) * 2018-02-27 2019-07-26 제주대학교 산학협력단 넙치 유래의 펩타이드를 포함하는 항고혈압용 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101150425B1 (ko) 2011-09-26 2012-06-01 제주대학교 산학협력단 미더덕 유래의 혈압조절용 조성물
KR101991880B1 (ko) * 2017-06-21 2019-06-24 제주대학교 산학협력단 고혈압 치료 또는 예방용 조성물
KR102003934B1 (ko) * 2018-02-27 2019-07-26 제주대학교 산학협력단 넙치 유래의 펩타이드를 포함하는 항고혈압용 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Process Biochemistry 51 (2016) 535-541 *
고주영. Small molecular preparation of flounder fish(Paralichthys olivaceus) muscle and its biological activities. 제주대학교 석사학위논문 (2011) *

Also Published As

Publication number Publication date
KR102253996B1 (ko) 2021-05-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101533308B1 (ko) 안지오텐신-i 전환 효소 저해능을 나타내는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US9399051B2 (en) Dipeptidyl peptidase-4 inhibitor
KR101449804B1 (ko) 홍어 껍질 유래 젤라틴 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 조성물
JP4808218B2 (ja) 抗糖尿病作用を有する蛋白加水分解物
KR20230110470A (ko) 식용곤충 가수분해물 또는 상기 식용곤충 가수분해물의분획물을 유효성분으로 포함하는 고혈압의 개선 또는 예방용 식품조성물
KR102253996B1 (ko) 광어 가수분해물 유래의 펩티드를 포함하는 항고혈압용 조성물
KR101847452B1 (ko) 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 항고혈압용 조성물
KR100653582B1 (ko) 신규 펩티드 ｙ-2
KR102003934B1 (ko) 넙치 유래의 펩타이드를 포함하는 항고혈압용 조성물
KR102252955B1 (ko) 돈태반 유래 펩타이드를 포함하는 돈태반 가수분해물 및 간 보호용 조성물
KR102283751B1 (ko) 돈태반 효소 가수분해물과 산 분해물의 혼합물을 포함하는 간 보호용 조성물
KR101991880B1 (ko) 고혈압 치료 또는 예방용 조성물
KR20220168677A (ko) 수벌번데기 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 근육질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물, 및 이의 제조방법
KR20210122125A (ko) 갈색거저리 유충 단백질 또는 이의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 근감소증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR101491902B1 (ko) 콜라게나제의 활성 저해 효과를 갖는 신규 펩타이드 및 그의 용도
KR101497506B1 (ko) 안지오텐신 전환효소 저해용 약학 조성물 및 건강기능식품
KR20210012915A (ko) 효소처리 로얄젤리 분말을 포함하는 염증성 골관절질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101961921B1 (ko) 넙치 유래의 항고혈압 펩타이드 및 이를 포함하는 항고혈압용 조성물
JP2005006533A (ja) 機能性食品、その製造方法及び医薬
KR102362988B1 (ko) 유청단백 가수분해물 및 인삼열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 근기능 개선 또는 근육질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
JP2001026753A (ja) 高血圧症予防又は治療用組成物
KR101921214B1 (ko) 항고혈압 효과를 가지는 광어 연육 및 이의 제조방법
KR20230075184A (ko) 흰점박이 꽃무지 유충 가수분해물 유래의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항고혈압 식품 조성물
US20220151987A1 (en) Muscle building agent
JP2012056879A (ja) アンジオテンシン変換酵素阻害剤およびその用途

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant