KR20210018735A

KR20210018735A - 어성초 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물

Info

Publication number: KR20210018735A
Application number: KR1020190097747A
Authority: KR
Inventors: 양지혜; 이은영
Original assignee: 주식회사 피에프네이처; 주식회사 아샤그룹
Priority date: 2019-08-09
Filing date: 2019-08-09
Publication date: 2021-02-18
Also published as: KR102326886B1

Abstract

본 발명은 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물은 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주의 생장을 효과적으로 저해시켜 우수한 항여드름 효과를 나타내고, 염증매개 물질인 산화질소의 생성을 효과적으로 억제하며, iNOS 유전자 및 COX-2 유전자 발현을 억제하여 염증 반응의 억제에 효과적으로 작용한다.
따라서, 본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물은 약학적 조성물, 화장료 조성물 등의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

어성초 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물{Compositions for Anti-Acne and Anti-Inflammatory Effect Comprising Complex Extract of Houttuynia cordata}

본 발명은 어성초 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물에 관한 것으로 더욱 구체적으로 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물에 관한 것이다.

대표적인 피부 염증 질환의 하나인 여드름은 호르몬의 작용, 과도한 피지 분비, 세균의 감염 등에 의한 모피지선, 모낭 및 주변 조직의 염증성 질환을 말한다.

여드름의 원인은 여러 가지가 있으나, 피지 분비의 증가, 피지선을 자극하는 호르몬(예를 들어, 안드로젠)과 모피지선에서 번식하면서 피지를 분해하여 유리 지방산을 형성하는 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes)에 의한 염증 진전, 모낭 내 이상 각화, 유전적 소질 등의 주요 인자가 복합적으로 작용하여 발생하는 것으로 알려져 있다. 또한, 호기성 피부 상재균은 염증의 일차적 원인은 아니지만, 염증 발생 부위를 더욱 확장시켜 여드름이 악화되는데 영향을 주는 것으로 밝혀져 있다.

여드름의 치료는 국소 제제 도포 요법 및 경구 약물 복용 요법과 최근 시행되고 있는 레이저 시술, 박피술 등 수술 요법이 있다. 국소 도포 요법은 여드름의 원인균으로 알려진 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대한 항균 작용 목적으로 아젤라익산(azelaic acid), 살리실산 등의 항균제를 사용하거나 면포 용해 작용을 위해 벤조일퍼옥사이드(benzoyl peroxide) 등을 외용 연고 타입으로 사용하는 방법이나, 이는 제형화에 어려움이 있고, 관련법규제 등으로 제품화에 어려운 점이 있었다. 또한, 경구약물 복용요법은 피지선의 기능 억제와 모낭벽 파괴의 억제 목적으로 레티노이드, 부신피질 호르몬 등을 이용하는 방법인데, 이들 경구제제의 과량 복용시 피부 발적, 피부 과민반응, 피부 건조증 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있었다.

또한, 염증 반응은 세포 또는 조직의 손상이나 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질 등의 외부감염원에 감염되었을 때 국소 혈관과 체액 중 각종 염증매개인자 및 면역세포가 관련되어, 효소 활성화, 염증 매개물질 분비, 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등 일련의 복합적인 생리적 반응과 홍반, 부종, 발열, 통증 등 외적 증상을 나타낸다. 평상시의 염증 반응은 외부감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체 기능회복작용을 하지만, 항원이 제거되지 않거나 내부물질이 원인이 되어 염증 반응이 과도하거나 지속해서 일어나면 오히려 점막 손상을 촉진하고, 그 결과 일부에서는 암 발생 등의 질환을 이끈다.

염증의 발생 원인으로서는 다양한 생화학적인 현상이 관여하고 있는 것으로 알려져 있는데, 특히 일산화질소(Nitric Oxide; NO)를 발생시키는 효소인 산화질소 합성 효소(Nitric Oxide Synthase; NOS)와 프로스타글란딘의 생합성과 관련된 효소들이 염증 반응을 매개하는 데 있어서 가장 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 따라서 L-아르기닌으로부터 일산화질소를 생성시키는 효소인 산화질소 합성효소(NOS)나, 아라키돈산으로부터 프로스타글란딘 등을 합성하는데 관련된 효소인 사이클로옥시게나아제(COX-2)의 활성 저해를 통해 염증을 차단하는 것이 염증 치료제 개발에 목표가 되고 있다.

그러나, 아직까지 식물추출물에서 분리된 단일성분들의 조합에 대한 항여드름 및 항염증의 시너지 활성 연구는 충분히 이루어지지 않고 있으며, 이로 인해 단일성분들의 조합을 활용한 항여드름 및 항염제와 관련된 연구 성과는 미미한 상태이다.

이러한 배경 아래에서, 본 발명자들은 우수한 항여드름 및 항염증 활성을 갖는 식물추출물들의 조합을 찾기 위해 예의 노력한 결과, 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물추출물의 조합이 다양한 여드름 원인균들을 효과적으로 억제하고, 우수한 항염증 활성을 나타내어 항여드름제 및 항염제로 유용하게 활용될 수 있음을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 여드름 원인균의 생장을 효과적으로 저해하고, 우수한 항염증 효과를 나타내는 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 하는 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항여드름 및 항염증 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 여드름 피부의 피부상태 개선에 효능이 있는 물질을 찾고자 항균활성을 갖는 여러 천연물질들 중에서 여드름 원인균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내는 동시에, 여드름 증상을 확대하는 염증반응을 억제하는데 유효한 식물추출물의 조합을 찾아내기 위해 예의 연구노력한 결과, 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물을 조합하는 경우, 여드름 원인균에 대한 항균 효과와 항염증 효과가 획기적으로 증가함을 발견하였고, 또한 피부에 적용시에도 안전성에 문제가 없음을 확인하였다.

본 발명의 용어 “어성초(Houttuynia cordata)”는 삼백초과의 약모밀의 개화기의 지상부를 의미하고, “청호(Artemisiae Annuae Herba)”는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 개똥쑥(Artemisia annua Linne) 또는 개사철쑥(Artemisia apiacea Hance)의 지상부를 의미하며, 용어 “황금(Scutellaria baicalensis)”은 꿀풀과의 여러해살이풀인 속썩은풀(Scutellaria baicalensis Georgi)의 뿌리를 의미하고, 용어 “단삼(Salvia miltiorrhiza)”은 꿀풀과에 속하는 다년생 초본식물로 학명 살비아 밀티오리자(Salvia miltiorrhiza BUNGE)로 분류된 식물의 뿌리를 건조한 약재를 의미하며, 용어 “로즈마리(Rosmarinus officinalis)”는 쌍떡잎식물 통화식물목 꿀풀과의 상록관목을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "여드름"은 피부의 모피지선, 모낭 및 주변 조직에서 발생하는 여드름 원인균 또는 피부상재균 등에 의해 감염되는 염증성 질환을 의미하며, 용어 "여드름 피부" 여드름 원인균 또는 피부상재균 등에 의해 여드름이 발생한 피부 또는 여드름 발생의 우려가 있는 피부를 의미한다. 또한, 용어 “항여드름”은 여드름 원인균 또는 피부상재균 등에 의해 감염되는 질환에서 여드름 원인균 또는 피부상재균을 사멸시키고, 감염에 의해 발생하는 염증 반응을 완화시는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 식물의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.

본 발명의 상기 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물은, 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물에서도 추출이 가능하며, 잎, 줄기, 뿌리, 꽃, 열매 등의 부위에서 추출한 추출물을 포함한다.

본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물에서, 상기 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물은 10:10-2.5:4-1.25:0.5-2:0.5-2의 중량비를 갖는 것이 바람직하며, 10:7:3:1:1의 중량비를 갖는 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 실시예에서 상기 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물을 다양한 비율로 혼합하여 여드름 원인균에 대한 항균 조성물을 제조하였으며, 제조된 조성물의 항균력을 확인하기 위해 한천확산법(disc diffusion test) 및 미생물 생장 최소억제 농도 평가를 수행하였다. 그 결과, 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물의 조합이 전반적으로 여드름 원인균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내는 것을 확인하였으며, 특히 대조군으로 사용한 메틸파라벤이나 시판되는 항균제와 비교하였을 때, 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물이 10:10-2.5:4-1.25:0.5-2:0.5-2의 중량비로 혼합되었을 때 우수한 시너지 효과가 있음을 확인하였고, 10:7:3:1:1의 중량비로 혼합되었을 때 가장 우수한 시너지 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물은 여드름 원인균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내는데, 구체적으로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주에 대한 항균 활성을 나타낸다.

또한, 본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물은 산화질소(nitric oxide)의 생성을 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물에서, 상기 조성물은 iNOS 유전자 및 COX-2 유전자 발현을 억제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항여드름 및 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 화장료 조성물은 여드름 원인균에 대한 강력한 생장 억제 활성을 나타내고, 염증 반응을 저해하는 우수한 효과가 있으므로 항여드름 및 항염증 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로 상기 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들이 포함되며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센셜 오일, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸타, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸타 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품의 구체예로서는 여성청결제, 손세정제, 세안크림, 세안폼, 클렌징크림, 클렌징밀크, 클렌징로션, 마사지크림, 콜드크림, 모이스처크림, 유액, 화장수, 팩, 에프터세이빙크림, 썬텐방지크림, 썬텐용 오일, 비누, 보디샴푸, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 양모료, 육모료, 헤어크림, 헤어리퀴드, 세트로션, 헤어스프레이, 헤어브리지, 컬러린스, 컬러스프레이, 퍼머넌트웨이브액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도, 핸드크림, 및 립스틱 등을 들 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항여드름 및 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물은 여드름 원인균에 대한 강력한 생장 억제 활성을 나타내고, 염증 반응을 저해하는 우수한 효과가 있으므로 항여드름 및 항염증 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

한편, 본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증용 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제조될 수 있다. 구체적으로 산을 첨가함으로써 염을 형성할 수 있고, 예를 들어 무기산(예: 염산, 히드로브롬산, 인산, 질산, 황산 등), 유기 카르복실산(예: 아세트산, 트리플루오로아세트산과 같은 할로 아세트산, 프로피온산, 말레산, 숙신산, 말산, 시트르산, 타르타르산, 살리실산), 및 산성 당(글루쿠론산, 갈락투론산, 글루콘산, 아스코르브산), 산성 폴리사카리드(예: 히알우론산, 콘드로이틴 술페이트, 아르기닌산), 콘드로이틴 술페이트와 같은 술폰산 당 에스테르를 포함하는 유기 술폰산(예: 메탄, 술폰산, p-톨루엔 술폰산) 등을 첨가하여 염을 형성할 수 있다.

본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증용 약학적 조성물은 천연 식물 추출물에서 분리되는 물질로 임상투여시 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증용 약학적 조성물은 실제로 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 리우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증용 약학적 조성물은 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 카보하이드레이트, 아스코르브 산(ascorbic acid) 또는 글루타치온과 같은 항산화제(antioxidants), 킬레이트화제(chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.

본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증용 약학적 조성물의 유효용량은 0.01 내지 10㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.1 내지 1㎎/㎏ 이며, 하루 1회 내지 3회 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물에서 또는 그 배양액은 총 유효량은 볼루스(bolus) 형태 혹은 상대적으로 짧은 기간 동안 주입(infusion) 등에 의해 단일 투여량(single does)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple does)이 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기 농도는 약의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 나이 및 건강상태 등 다양한 요인들을 고려하여 환자의 유효 투여량이 결정되는 것이므로 이러한 점을 고려할 때, 이 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 유제놀 및 갈릭산 조합의 약학적 조성물로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명은 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항여드름 및 항염증 조성물을 제공한다.

(b) 본 발명의 항여드름 및 항염증 조성물은 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주의 생장을 효과적으로 저해시켜 우수한 항여드름 효과를 나타낸다.

(c) 또한, 본 발명의 조성물은 염증매개 물질인 산화질소의 생성을 효과적으로 억제하고, iNOS 유전자 및 COX-2 유전자 발현을 억제하여 염증 반응의 억제에 효과적으로 작용한다.

도 1은 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물의 처리 후 세포 생존율의 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물의 처리 후 산화질소의 생성 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리 추출물의 처리 후 iNOS 및 COX-2 유전자 발현 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 식물 추출물의 제조

건조된 어성초 100g을 분쇄한 후 3L의 70% 에탄올을 용매로 사용하여 12시간 가온 환류추출한 후, 냉침 시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 감압농축 및 감압 건조로 농축하여 어성초 건조 분말을 제조하였다.

상기와 동일한 방법으로 각각 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 건조 분말을 제조하였다.

실시예 2. 식물 추출물 첨가에 따른 세포 생존 시험

실시예 1에서 제조한 5종 식물 추출물이 인간 피부섬유아세포(NHDF, normal human dermal fibroblasts)의 생장에 미치는 효과를 아래와 같은 방법으로 확인하였다.

먼저, 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 한국세포주은행(KTCC, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 구체적으로, 10% FBS(Fetal bovine serum)를 함유한 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)에 10% FBS, 100㎍/㎖ 페니실린 및 100㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 배지에 상기 세포를 접종하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

구체적으로, 상기 RAW 264.7 세포를 1×10⁶ cells/mL의 농도(in DMEM)로 96 웰 플레이트에 접종하고 24시간 배양 후, 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물추출물을 농도별(10, 50 및 100 ㎍/㎕)로 처리하여 희석한 시료와 내독소로 알려진 LPS(1μg/ml)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다.

그 결과, 대식세포주인 RAW 264.7 세포에 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 식물추출물을 처리한 경우, 이들 식물 추출물이 대식세포주인 RAW 264.7 세포의 세포 생존율에 크게 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었으며, 이를 통해 본 발명의 5종 식물체의 복합추출물이 인체에 독성을 나타내지 않음을 확인할 수 있었다(도 1 참조).

실시예 3. 단일 및 복합 식물 추출물의 여드름 원인균에 대한 항균 테스트

본 발명의 식물 추출물이 여드름 원인균에 대한 직접적인 항균 활성이 있는지를 확인하기 위하여 여드름 원인균으로 알려진 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주를 대상으로 여드름 유발 원인균에 대한 생장 억제 효능을 검증하였다.

[표 1]

검증을 위해 액체배지 희석법에 따라 상기 5종 균주에 대한 최소 성장억제농도(Minimun Inhibitory Concentration, MIC)를 구하여 검증하였다.

먼저, 프로피오니박테리움 아크네스 균주는 RCM 배지에, 스타필로코커스 에피더미디스 균주와 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주는 NB 배지를 이용하여 배양하였고, 상기 [표 1]의 배양 조건으로 배양한 후 시험에 사용하였다.

각각의 접종 균은 2×10⁶ CFU/well 농도로 5종 식물추출물의 시료와 함께 18시간 동안 배양하였다. 배양 후, 육안 및 현미경으로 균의 성장을 관찰하였고, 흡수파장 600nm에서 흡광도를 측정하여 순수 배양액의 흡광도 값과 같은 결과를 얻은 것을 최소억제농도로 결정하였다. 비교 검증을 위해 종래 여드름 원인균에 대해 항균효과가 알려진 메틸파라벤(비교예 1)을 사용하였다.

[표 2]

그 결과, 상기 [표 2]에 나타난 바와 같이, 본 발명의 5종 식물 추출물은 단일 추출물인 경우, [비교예 1]의 메틸파라벤을 처리한 대조군과 비교하여 여드름 원인균들에 대한 항균 효과가 유사한 수준인 것으로 나타났다.

이에 따라, 상기 5종 식물 추출물의 조합에 따른 항균효과를 최적화하기 위하여 체커보드 어세이 실험을 수행하였다.

실시예 4. 5종 복합 식물 추출물의 최적 배합 비율 선정을 위한 항균 테스트

4-1. 어성초 및 청호 추출물의 시너지 효과 검증

어성초 추출물과 청호 추출물 사이의 상호 영향을 확인하기 위하여 2종 복합 추출물의 P. acnes KACC 11946 균주에 대한 미생물 생장 최소억제농도(MIC)를 평가하였다.

항균 시너지를 확인하기 위한 실험 방법은 표준화되어 있지 않아, 항균물질을 조합하여 항균 시너지를 확인하는 방법인 체커보드 어세이(checkerboard assay)를 응용하여 사용하였다. 항균력 측정실험은 6행×6열로 설정하였고, 96웰-플레이트에 혼합효과를 측정할 어성초 추출물과 청호 추출물을 각각 MIC 농도에서 연속 2배 희석하여 어성초 추출물은 수평축으로 청호 추출물은 수직축으로 각 웰에 연속적으로 희석하였다. 이후 37℃에서 16~24시간 동안 배양한 후, 어성초 추출물과 청호 추출물의 상호적으로 억제한 가장 낮은 농도로서 정의하였으며, 두 화합물 사이의 상호작용은 하기 FIC(fractional inhibitory concentration) 지수로 나타내었다.

FIC index(FICI)는 하기 [수학식 1] 및 [수학식 2]에 따라 계산되었다.

[수학식 1]

[수학식 2]

이때, FICI 지수가 0.5보다 작거나 같으면 상승 효과(synergistic effect), 0.5와 1 사이이면 부가 효과(additive effect), 1과 4 사이이면 무관함(indifferent), 4 이상이면 상쇄 효과(antagonistic effect)가 있는 것으로 판단하였고, 측정 결과를 하기 [표 3]에 나타내었다.

[표 3] P. acnes KACC 11946

그 결과, 어성초 추출물과 청호 추출물은 이들이 4:4 내지 1의 비율로 혼합된 추출물이 여드름 원인균에 대한 상승된 억제 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었고, 어성초 추출물과 청호 추출물이 10:7의 비율로 혼합된 복합 추출물이 가장 우수한 시너지 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

4-2. 어성초, 청호 및 황금 추출물의 시너지 효과 검증

실시예 4-1의 어성초와 청호 추출물에 대한 항균활성 검정 결과를 반영하여, 어성초 및 청호의 10:7 혼합 추출물과, 황금 추출물의 혼합 비율에 따른 미생물 생장 최소억제농도(MIC)를 평가하고, 측정 결과를 하기 [표 4]에 나타내었다.

[표 4] P. acnes KACC 11946

그 결과, 어성초 및 청호의 복합 추출물과 황금 추출물은 이들이 2 내지 8 : 1의 비율로 혼합된 추출물이 여드름 원인균에 대한 상승된 억제 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었고, 어성초, 청호 및 황금 추출물이 10:7:3의 비율로 혼합된 복합 추출물이 가장 우수한 시너지 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

4-3. 단삼 및 로즈마리 추출물의 시너지 효과 검증

단삼 추출물과 로즈마리 추출물 사이의 상호 영향을 확인하기 위하여 2종 복합 추출물의 미생물 생장 최소억제농도(MIC)를 평가하고, 측정 결과를 하기 [표 5]에 나타내었다.

[표 5] P. acnes KACC 11946

그 결과, 단삼 추출물과 로즈마리 추출물은 이들이 1:1의 비율로 혼합된 추출물이 여드름 원인균에 대한 상승된 억제 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.

4-4. 최종 5종 복합 추출물의 항균 활성 검정

상기 실시예 4-1 및 4-2의 실험을 통해 어성초, 청호, 및 황금 추출물은 10:10-2.5:4-1.25의 비율로 혼합되는 경우 여드름 원인균에 대한 상승된 억제 효과가 있고, 상기 실시예 4-3의 실험을 통해 단삼 추출물과 로즈마리 추출물은 이들이 1:1의 비율로 혼합된 경우 여드름 원인균에 대한 상승된 억제 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

상기 결과를 바탕으로 어성초, 청호, 및 황금의 3종 추출물과 단삼과 로즈마리의 2종 추출물을 배합한 결과, 이들이 10:0.5-2의 비율로 혼합되는 경우 상승효과가 있음을 확인하였고, 이를 통해 어성초, 청호, 및 황금, 단삼, 및 로즈마리의 5종 복합추출물은 10:10-2.5:4-1.25:0.5-2:0.5-2의 비율로 혼합되는 경우 상승효과가 있고, 10:7:3:1:1로 혼합되는 경우 여드름 원인균 억제에 최적의 효과가 있는 것으로 나타났다.

어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 5종 복합추출물의 시너지 효과를 검증하기 위해 10:7:3:1:1로 혼합된 5종 복합추출물의 항균 활성을 검증하였다.

실험은 5종의 식물 추출물과 캐리어 오일(포도씨 오일)에 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주를 1×10⁶ CFU/ml의 초기 균수로 준비하여 미생물 저감 효능 시험을 실시하였다. 준비된 5종의 균주를 5종 복합 추출물에 접종하여 균주별 최적 조건에서 배양하였으며, 0, 1, 24시간마다 시료를 채취하여 멸균된 saline을 이용해 10배수로 희석하여 한천배지에 도말하였다. 도말한 플레이트들은 최적 조건에서 배양한 후, 전형적인 집락을 확인 및 계수하여 감소율을 확인하였다. 비교실험을 위해 음성대조군과 비교예 2[0.1%(w/v) Salicylic acid] 및 비교예 3[1%(v/v) Tea Tree oil]을 대조군으로 사용하였다.

상기 실험을 최적 비율로 혼합된 5종 복합추출물의 여드름 원인균에 대한 생장 저해 효능을 확인할 수 있었고, 그 결과를 [표 6]에 나타내었다.

[표 6]

[표 6]을 참조하면, 무처리 음성대조군에 비해 본 발명의 5종 식물추출물을 처리한 시험군에서는 여드름 원인균 모두에 대해 99.9% 이상의 높은 억제율을 보여 단일 추출물에 비해 현저하게 상승된 여드름 원인균 억제 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

또한, 복합추출물 간에 객관적인 비교 검증을 위해 액체배지 희석법에 따라 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주에 대한 최소 성장억제농도(Minimun Inhibitory Concentration, MIC)를 구하여 하기 [표 7]에 나타내었다.

그 결과, 각각의 단일 추출물이나, 이들의 2종 또는 3종 추출물에 비해, 5종 추출물의 항균 효과가 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다.

[표 7]

상기와 같은 실험을 통해, 본 발명의 5종 식물 복합추출물은 여드름 원인균의 생장을 억제하는 우수한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었고, 이러한 여드름 원인균에 대한 억제 효과는 시중에서 사용되는 화합물질인 메틸파라벤과 비교하여도 매우 우수한 억제 효과임을 확인할 수 있었다.

실시예 5. 5종 복합 추출물의 항염증 효과 테스트

본 발명의 5종 식물 복합 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위해, 염증 유발에 관여하는 대표적인 세포 독성물질인 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생성 억제율을 측정하였다.

구체적으로, 상기 RAW 264.7 세포를 1×10⁶ cells/mL의 농도(in DMEM)로 96 웰 플레이트에 접종하고 24시간 배양 후, 비율을 달리하여 혼합한 본 발명의 5종 복합추출물을 10, 50, 및 100㎍/㎖ 농도로 희석한 시료와 내독소로 알려진 LPS(1μg/ml)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후, 세포 배양 상등액 100㎕와 Griess reagent[1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtylethylenediamine in 2.5%(v/v) phosphoric acid] 100㎕를 혼합하여 96 웰 플레이트에서 10분 동안 반응시키고, ELISA 리더를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 산화질소의 양을 측정하였다. 생성된 아질산염(nitrite)의 농도는 아질산나트륨(sodium nitrite)을 DMEM 배지에 용해한 표준 곡선을 이용하여 계산하였다. LPS를 처리한 대조군과 LPS를 처리하지 않은 대조군에서 생성된 아질산염의 생성량 차이를 기준으로 각 시료의 일산화질소 생성 저해 활성을 확인하였다(표 8, 도 2 참조).

[표 8]

그 결과, 본 발명의 5종 식물 복합 추출물은 LPS처리 대조군에 비해 모든 조합 비율에서 산화질소 생성을 억제하여 항증에 우수한 시너지 효과를 보이는 것으로 관찰되었다. 특히, 여드름 원인균에 억제 효과가 좋았던 10:10-2.5:4-1.25:0.5-2:0.5-2의 비율의 혼합비율에서도 전반적인 항염증의 시너지 효과가 인정되었으며, 10:7:3:1:1로 혼합되는 경우에 가장 항염증 효과가 우수한 것으로 나타났다.

실시예 6. iNOS 및 COX-2 유전자 발현 분석

실시예 5에서 산화질소 생성 억제 효과가 가장 좋은 것으로 나타난5종 복합추출물(10:7:3:1:1 중량비)을 대상으로 염증 유발 인자인 iNOS 및 COX-2 유전자에 대한 유전자 발현 조절 효과를 검증하였다.

먼저, 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 한국세포주은행(KTCC, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였고, 10% FBS(Fetal bovine serum)를 함유한 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)에 10% FBS, 100㎍/㎖ 페니실린 및 100㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 배지에 상기 세포를 접종하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

구체적으로, 상기 RAW 264.7 세포를 1×10⁶ cells/mL의 농도(in DMEM)로 6 웰 플레이트에 접종하고 24시간 배양 후, 상기 5종 복합추출물을 50, 및 100㎍/㎖ 농도로 희석한 시료와 내독소로 알려진 LPS(1μg/ml)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다.

실험은 RT-PCR 방법을 이용하여 iNOS 및 COX-2 유전자의 mRNA 발현량을 확인하였다. 사용한 프라이머는 다음과 같다:

- iNOS : 정방향 5′-AAT GGC AAC ATC AGG TCG GCC ATC ACT-3′, 역방향 5′-GCT GTG TGT CAC AGA AGT CTC GAA CTC-3′

- COX-2 : 정방향 5‘ -AAG ACT TGC CAG GCT GAA CT-3’, 역방향 5’-CTT CTG CAG TCC AGG TTC AA-3’

- GAPDH: 정방향 5'-TGA AGG TCG GTG TGA ACG GAT TTT GGC-3', 역방향 5'-TGG TTC ACA CCC ATC ACA AAC ATG G-3'.

상기와 같은 프라이머를 이용하여 RT-PCR 수행하고, 실험 결과를 도 3에 정리하였다.

그 결과, 본 발명의 5종 복합추출물 처리군에서는 LPS만 처리한 음성대조군과 비교하여 각각 52%(50㎍/㎖), 및 60%(100㎍/㎖) 감소된 iNOS 유전자의 발현 억제 효과가 관찰되었고, 52%(50㎍/㎖), 및 55%(100㎍/㎖) 감소된 COX-2 유전자의 발현 억제 효과가 관찰되었다(도 3 참조).

또한, 단독 추출물 중에서 가장 효과가 좋은 것으로 관찰된 어성초 단독 추출물과 비교하여도, 본 발명의 5종 복합추출물 처리군에서는 iNOS 유전자의 mRNA 발현량이 각각 49%(50μg/mL) 및 20%(100μg/mL) 감소하였고, COX-2 유전자의 mRNA 발현량도 각각 38%(50μg/mL) 및 35%(100μg/mL) 감소한 것으로 관찰되었다(도 3 참조).

상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리의 복합추출물은 세포 독성이 없고, NO 생성을 직접적으로 억제하며, iNOS와 COX-2 유전자의 발현을 억제하여 염증성 질환의 치료 및 예방에 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 특히, 어성초, 청호, 황금, 단삼, 및 로즈마리가 10:7:3:1:1의 비율로 혼합된 복합추출물에서 여드름 원인균에 대한 억제 효과와 마찬가지로 염증 억제에도 가장 높은 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항에 있어서,
상기 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물은 10:10-2.5:4-1.25:0.5-2:0.5-2의 중량비를 갖는 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항에 있어서,
상기 어성초(Houttuynia cordata) 추출물, 청호(Artemisiae Annuae Herba) 추출물, 황금(Scutellaria baicalensis) 추출물, 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물, 및 로즈마리(Rosmarinus officinalis) 추출물은 10:7:3:1:1의 중량비를 갖는 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주에 대한 항균 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 산화질소(nitric oxide)의 생성을 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 iNOS 유전자 및 COX-2 유전자 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인 것을 특징으로 하는 항여드름 및 항염증 조성물.