KR20200064899A - 백향과 추출물의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명의 백향과 추출물의 분획물은 멜라닌 합성을 저해하고, 티로시나제 활성을 저해하므로 미백 용도로 사용할 수 있고, 다른 한편으로 라디칼 활성을 소거하므로 피부 기능의 개선 용도로 사용할 수 있다.

Description

백향과 추출물의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic Composition Containing Fraction of Extract Derived from Passiflora edulis for Skin-Whitening}

본 발명은 백향과 추출물의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

여성들에게 가장 관심이 큰 화장품 분야 중 하나는 피부 미백 분야이다. '피부 미백'이란 자외선, 스트레스, 호르몬 분비 이상 및 임신 등과 같은 환경 변화에 의해 피부 내에 색소의 생성이 과하게 일어나 발생하는 피부색의 변화를 정돈하여 주는 것이다. 이와 관련하여 가장 중요한 요소는 피부 색소인 멜라닌이다.

멜라닌은 표피 내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트(melanocyte)에서 합성되고, 주변의 각질세포로 전이되어 피부색을 결정한다. 티로시나제는 멜라닌 생합성을 촉매하는 것으로 알려져 있다. 티로시나제는 기질인 L-티로신을 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)로 수산화시키고, L-DOPA를 도파퀴논으로 산화시키며, 이후 도파퀴논은 효소의 촉매 작용 없이 세포 내의 pH 조건에 따라 멜라닌으로 전환된다. 멜라닌은 생물체에서 발견된 색소로는 특이하게 안정된 색소로서 멜라닌의 화학적인 특성에 대해 밝혀지지 않은 점들이 많고 연구의 진보도 부진한 편이다.

피부의 과색소침착(hyperpigmentation)은 피부의 염증 반응 이후의 체내 호르몬 이상, 유전질환 및 자외선 조사 등 여러 요인에 의해 발생될 수 있는데, 주된 요인은 멜라닌 색소 합성 이상 및 분포 이상에 의한 것이다. 멜라닌의 주요한 기능은 산소 라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것으로 멜라닌이 많다는 것은 물리적, 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호하기 위한 효과적인 대응체계를 가지고 있음을 의미한다.

하지만, 과도한 멜라닌의 침착은 피부 등의 병리적 문제의 원인이 되기도 하며, 기미, 주근깨, 점, 검버섯과 같은 미용적인 측면의 문제로 인식되고 있다. 따라서 멜라닌 형성을 억제할 수 있는 미백제에 대한 관심이 증가되고 많은 연구가 진행되고 있다. 종래부터 이러한 피부에 색소가 침착되는 것을 예방하는 것을 목적으로 다양한 미백 화장료가 제안되고 있다. 예를 들면 비타민 C 및 그 유도체(특허문헌 1), 글루타티온 등의 환원제, 과산화수소, 태반 추출물, 코지산 등의 멜라닌 생성 억제 물질을 이용한 것이 알려져 있다.

그러나 비타민 C는 산화되기 쉽고, 비타민 C를 배합한 화장료가 변색, 변취되어 버리는 단점이 있다. 글루타티온 등의 환원제는 불쾌한 냄새가 있을 뿐만 아니라, 경피 흡수성에도 문제가 있고, 과산화수소는 안전성이나 안정성 점에서 문제가 있다. 또한 태반 추출물과 같은 동물 조직 추출계의 것은 그 효과가 충분하지 않고 또한 그 안정성이나 색상, 악취 등의 점에서도 문제가 있다. 또한 코지산도 소량으로는 피부의 흑화를 방지하는 효과가 작은 등의 문제가 있으므로, 미백 화장료의 유효성분으로서는 모두 충분한 것이라고는 말하기 어렵다.

따라서, 상술한 멜라닌 생성 억제 물질들은 이들만을 이용하였을 때, 효과가 불충분하므로, 단독으로 사용하여도 미백 효과가 우수한 소재의 개발이 필요한 실정이다.

한국 등록특허 제1639615호

본 발명의 목적은 우수한 미백 효과, 및 항산화 활성을 나타내는 피부 미백용 물질을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위해서, 본 발명은 백향과 추출물의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 노화 억제용 화장료 조성물, 피부 탄력 유지용 화장료 조성물, 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 백향과 추출물의 분획물은 멜라닌 합성을 저해하고, 티로시나제 활성을 저해하므로 미백 효과가 있고, 다른 한편으로 라디칼 활성을 소거하므로 산화에 의한 피부 기능의 저하를 개선할 수 있다.

도 1은 본 발명의 분획물의 제조 공정을 나타내는 개략도이다.
도 2a는 백향과 과육의 열수 추출물로부터 유래한 에틸아세테이트 분획물의 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이고, 도 2b는 백향과의 각 부위별 열수 추출물의 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이며, 도 2c는 백향과 종자 열수 추출물에 대한 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 및 물 분획물, 즉 제조예 <4-1>의 분획물의 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이고, 도 2d 내지 도 2f는 각각 제조예 <4-2> 내지 제조예 <4-4>의 분획물의 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3a는 백향과 과육의 열수 추출물로부터 유래한 에틸아세테이트 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내는 그래프이고, 도 3b는 백향과의 각 부위별 열수 추출물의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내는 그래프이며, 도 3c는 백향과 종자 열수 추출물에 대한 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 및 물 분획물, 즉 제조예 <4-1>의 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내는 그래프이고, 도 3d 내지 도 3f는 각각 제조예 <4-2> 내지 <4-4>의 분획물에 대한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4a는 백향과 과육의 열수 추출물로부터 유래한 에틸아세테이트 분획물의 라디칼 소거 활성을 나타내는 그래프이고, 도 4b는 백향과의 각 부위별 열수 추출물의 라디칼 소거 활성을 나타내는 그래프이며, 도 4c는 백향과 종자 열수 추출물에 대한 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 및 물 분획물, 즉 제조예 <4-1>의 분획물의 라디칼 소거 활성을 나타내는 그래프이고, 도 4d 내지 도 4f는 각각 제조예 <4-2> 내지 <4-4>의 분획물에 대한 라디칼 소거 활성을 나타내는 그래프이다.
도 5는 백향과 종자의 열수 추출물 및 유기용매 분획물의 제조 공정을 나타내는 개략도이다.
도 6은 백향과 종자 분쇄물의 열수 추출물 및 백향과 종자 미분쇄물의 열수 추출물 내에 포함되어 있는 피세아탄올(piceatannol) 및 스키르푸신(scirpusin) B 화합물에 대한 HPLC 데이터를 나타낸다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

1. 백향과 추출물의 분획물 제조

백향과는 시계초(Passiflora edulis)라고도 불리며, 아열대와 열대지역에서 재배되고 있는 다년생 상록덩굴 식물로 시계꽃과(Passifloraceae) 시계꽃속(Passiflora)에 속하고 전 세계적으로 500여 종이 분포한다. 주요 품종으로는 '루비 스타(Rubi star)', '레드 퍼플(Red purple)', '뉴 블랙(New black)', '피치(Peach)', '랙 뷰티(Lack beauty)' 등이 대표적이다. 식용 부위는 과일로 공 모양이며 무게는 40-70 g 정도이고 풍미와 향기가 좋아 생식하거나 음료수, 가공품, 향수 등을 만들 때 사용된다.

본 발명의 추출물의 제조에 있어서는 백향과 유래의 임의의 부위가 제한없이 사용될 수 있다. 한 구현예에서, 상기 추출물은 백향과의 종자, 과육, 과피, 잎, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 얻어질 수 있다. 한 구현예에서, 백향과는 미숙과, 완숙과를 제한없이 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 백향과는 종자, 과육, 과피, 또는 이들의 임의의 조합을 사용할 수 있고, 바람직하게는 종자, 과육, 또는 이들의 조합을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 백향과 추출물을 유기용매로 분획하여 분획물을 제조하는 단계;를 포함하는 백향과 추출물의 분획물의 제조 방법을 제공한다.

한 구현예에서, 상기 백향과 추출물은 종자, 과육, 또는 이들의 조합을 이용해 제조될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직한 구현예에서, 상기 종자는 분쇄하여 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서 일컫는 "추출물"은 원료로부터 임의의 방법으로 추출된 물질을 의미하며, 이렇게 추출된 추출액, 이로부터 얻을 수 있는 농축액, 상기 농축액의 건조물 및 분말을 제한 없이 모두 포함하는 의미로 사용된다.

상기 추출물은 원료 또는 이의 건조물로부터 추출하여 얻을 수 있으며, 상기 추출물의 원료는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.

상기 추출물을 원료로부터 추출하여 수득할 때, 추출 방법으로는 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 종래 알려진 통상적인 추출 방법을 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 용매 추출법이나 환류 추출법을 이용함으로써 제조할 수 있다. 상기 추출 과정은 수회 반복할 수 있으며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거칠 수 있다. 구체적으로, 수득한 추출물을 감압 농축하여 농축액을 얻고, 상기 농축액을 동결건조시킨 후 분쇄기를 이용하여 고농도의 추출 분말을 제조할 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 추출물은 추출물을 추가적으로 분획하여 얻은 분획물도 제한없이 포함하는 의미로 사용된다.

상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 추출 용매로 하여 추출될 수 있고, 물을 추출 용매로 사용하는 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 추출 용매를 이용한 추출 후에 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 이용해 추가로 분획할 수도 있다. 상기 유기용매는 알코올, 바람직하게는 C₁-C₄의 저급 알코올, 헥산(n-헥산), 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 벤젠 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있다. 물 및 유기용매의 혼합물을 추출 용매로 사용하는 경우, 물 및 유기용매의 혼합물은 바람직하게는 물과 C₁-C₄의 저급 알코올의 혼합물일 수 있고, 더욱 바람직하게는 물과 에탄올의 혼합물일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 있어서, 물은 증류수, 예컨대 1차 증류수, 2차 증류수, 또는 3차 증류수를 사용하는 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

추출은 50℃ 내지 110℃에서 수행될 수 있고, 바람직하게는 60℃ 내지 100℃에서 수행될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 70℃ 내지 90℃에서 수행될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 시간은 1시간 내지 36시간일 수 있고, 바람직하게는 5시간 내지 24시간일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 10시간 내지 18시간일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 온도와 추출 시간이 상기 범위를 만족하지 않으면 백향과 추출물 및/또는 이의 분획물의 멜라닌 합성 저해 효과가 미약하거나 나타나지 않는 경우도 있으므로 바람직하지 않다.

본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 유기용매로 분획하여 분획물을 제조하는 단계는, 백향과 추출물, 예컨대 백향과 과육 추출물, 바람직하게는 백향과 과육의 수추출물을 제1 유기용매로 1차 분획하여 유기용매층만 분리하여 1차 분획물을 수득하는 단계; 및 1차 분획시 유기용매층을 분리하고 남은 물층인 제1 물 분획물을 제2 유기용매로 2차 분획하여 유기용매층만 분리하여 제2 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 포함할 수 있다. 상기 각 단계에서 사용된 유기용매가 동일할 경우에는 분획물의 멜라닌 합성 저해 효과, 및 항산화 활성이 감소될 수 있으므로 각 단계에서 사용된 유기용매는 상이한 것이 보다 바람직하다. 또한, 2차 분획을 진행하지 않고, 1차 분획만 진행할 경우 원하는 정도의 미백 효과 및/또는 항산화 효과를 얻지 못할 수도 있다.

1차 분획 단계에서 사용된 제1 유기용매는 C₅ ~ C₁₀ 알칸일 수 있고, 바람직하게는 n-헥산일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 2차 분획 단계에서 사용된 제2 유기용매는 에틸아세테이트일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 1차 분획 단계에서 n-헥산 이외의 유기용매를 사용하거나, 2차 분획 단계에서 에틸아세테이트 이외의 유기용매를 사용하면, 2차 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과와 항산화 활성이 낮아질 수 있다.

1차 분획물 제조시 사용된 제1 유기용매의 첨가량은 백향과 추출물, 예컨대 백향과 과육 추출물 200㎖ 대비 유기용매는 100㎖ 내지 400㎖로 사용될 수 있고, 바람직하게는 150㎖ 내지 300㎖로 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 180㎖ 내지 250㎖로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 제1 유기용매의 첨가량을 하한값 미만으로 처리할 경우에는 유효성분이 충분히 분획되지 않을 수 있고, 제1 유기용매의 첨가량을 상한값을 초과하여 처리할 경우에는 1차 분획물에서 제1 유기용매를 증발시키는데 다량의 시간과 비용이 소모되며, 환경 오염 등이 초래될 수 있다는 문제점이 있다.

2차 분획물 제조시 사용된 제2 유기용매의 첨가량은 제1 물 분획물 200㎖ 대비 유기용매는 100㎖ 내지 400㎖로 사용될 수 있고, 바람직하게는 150㎖ 내지 300㎖로 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 180㎖ 내지 250㎖로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 제2 유기용매의 첨가량을 하한값 미만으로 처리할 경우에는 유효성분이 충분히 분획되지 않을 수 있고, 제2 유기용매의 첨가량을 상한값을 초과하여 처리할 경우에는 2차 분획물에서 제2 유기용매를 증발시키는데 다량의 시간과 비용이 소모되며, 환경 오염 등이 초래될 수 있다는 문제점이 있다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 백향과 추출물의 분획물은 백향과 추출물, 예컨대 백향과 종자 추출물, 바람직하게는 백향과 종자, 특히 분쇄된 백향과 종자의 수추출물을 제3 유기용매로 분획해 유기용매층만 분리하여 제3 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 백향과 추출물의 분획물은 상기 제3 유기용매 분획물을 제4 유기용매를 이용하여 컬럼, 예컨대 실리카 겔 컬럼에 적용하여 제4 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 백향과 추출물의 분획물은 상기 제4 유기용매 분획물을 제5 유기용매를 이용하여 컬럼, 예컨대 C18 컬럼에 적용하여 제5 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 백향과 추출물의 분획물은 상기 제5 유기용매 분획물을 박막크로마토그래피를 이용해 극성에 따라 추가로 분획하는 단계;를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 각 단계에서 사용된 유기용매가 동일할 경우에는 분획물의 멜라닌 합성 저해 효과, 및 항산화 활성이 감소될 수 있으므로 각 단계에서 사용된 유기용매는 상이한 것이 바람직하다.

본 발명의 한 구현예에서, 상기 제3 유기용매는 C₅ ~ C₁₀ 알칸, 예컨대 n-헥산, 메틸렌클로라이드(MC), 에틸아세테이트(EA), 부탄올(BuOH)가 사용될 수 있고, 이들 중 에틸아세테이트를 사용하는 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 컬럼, 예컨대 실리카 겔 컬럼에 적용하기 위한 상기 제4 유기용매는 임의의 유기용매 또는 유기용매의 혼합물이 제한없이 사용될 수 있지만, n-헥산, 또는 n-헥산과 에틸아세테이트의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 n-헥산과 에틸아세테이트의 혼합물에 포함되는 n-헥산:에틸아세테이트는 100:0, 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50, 40:60, 30:70, 20:80, 10:90, 또는 0:100과 같은 임의의 혼합비로 사용될 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, n-헥산:에틸아세테이트는 100:0 내지 80:20의 혼합비로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 혼합비는 부피비 또는 중량비일 수 있으며, 부피비인 것이 바람직하다.

또한, 컬럼, 예컨대 C18 컬럼에 적용하기 위한 상기 제5 유기용매는 임의의 유기용매, 유기용매의 혼합물, 또는 물과 유기용매의 혼합물이 제한없이 사용될 수 있지만, 물과 C₁-C₄의 저급 알코올의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하고, 물과 메탄올의 혼합물을 사용하는 것이 보다 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 제3 유기용매 분획물 제조시 사용된 제3 유기용매의 첨가량은 백향과 추출물, 예컨대 백향과 종자, 특히 분쇄된 백향과 종자의 열수추출물 200㎖ 대비 100㎖ 내지 400㎖로 사용될 수 있고, 바람직하게는 150㎖ 내지 300㎖로 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 180㎖ 내지 250㎖로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 제4 유기용매 분획물 제조시 사용된 제4 유기용매의 첨가량은 제3 유기용매 분획물 200㎖ 대비 100㎖ 내지 400㎖로 사용될 수 있고, 바람직하게는 150㎖ 내지 300㎖로 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 180㎖ 내지 250㎖로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 제5 유기용매 분획물 제조시 사용된 제5 유기용매의 첨가량은 제4 유기용매 분획물 200㎖ 대비 100㎖ 내지 400㎖로 사용될 수 있고, 바람직하게는 150㎖ 내지 300㎖로 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 180㎖ 내지 250㎖로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 제3 내지 제5 유기용매의 첨가량을 하한값 미만으로 처리할 경우에는 유효성분이 충분히 분획되지 않을 수 있고, 상한값을 초과하여 처리할 경우에는 환경 오염 등이 초래될 수 있다는 문제점이 있다.

본 발명에 있어서, 상기 백향과 추출물의 분획물은 실온에서 제조될 수 있다. 실온은 온도 조절을 위해 별도의 장치를 가하지 않은 상태로 약 10℃ 내지 약 35℃의 온도를 나타낸다. 실온보다 저온에서는 유기용매, 예컨대, n-헥산, 에틸아세테이트, 등에 대한 용해도가 높은 용질이어도 백향과 추출물, 예컨대 백향과 종자 또는 과육 추출물로부터 1차 분획물로 용질이 충분히 용해되지 않고, 이에 따라 2차 분획, 3차 분획 등을 수행하여도, 백향과 추출물의 2차 분획물, 3차 분획물 등이 원하는 정도로 미백 효과 또는 항산화 효과가 나타나지 않는다. 실온보다 고온일 경우에는 분획에 사용되는 유기용매들이 분해되어 독성 가스를 생성할 수 있고 얻어진 분획물의 물성이 변하며, 미백 효과가 나타나지 않는 문제점이 있다.

본 발명에 있어서, 상기 분획물 제조시 유기용매 처리 후 정치 시간은 12시간 내지 36시간일 수 있고, 바람직하게는 15시간 내지 30시간일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 20시간 내지 25시간일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 정치 시간이 하한값 미만일 경우에는 분획물의 미백 효과 또는 항산화 효과가 감소할 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 구현예에서, 백향과 과육의 열수 추출물에 1차로 n-헥산을 가하여 n-헥산층만을 분리하여 1차 분획물을 제조하고, 1차 분획시 1차 분획물을 분리하고 남은 물층인 제1 물 분획물에 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트층만을 분리하여 제2 유기용매 분획물을 제조하였다. 상기 제2 유기용매 분획물은 멜라닌 합성을 저해하고, 티로시나제 활성을 억제하여 미백 효과를 나타내고, 라디칼 소거 활성을 나타내므로 항산화 활성이 있는 것으로 나타났다(도 2 내지 도 4 참조).

본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 백향과 종자의 열수 추출물에 1차로 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트층만을 분리하여 제3 유기용매 분획물을 제조하고, 상기 제3 유기용매 분획물을 실리카 겔 컬럼에 적용한 후 n-헥산:에틸아세테이트의 혼합물, 바람직하게는 100:0 내지 80:20 부피비의 혼합물로 용출하여 제4 융기용매 분획물을 제조하고, 상기 제4 유기용매 분획물을 C18 컬럼에 흡착시킨 후, 메탄올 및 물로 용출하여 제5 유기용매 분획물을 제조하고, 상기 제5 유기용매 분획물을 박막크로마토그래피를 이용하여 극성에 따라 추가로 분획한 분획물을 제조하였다. 상기 유기용매 분획물들은 멜라닌 합성을 저해하고, 티로시나제 활성을 억제하여 미백 효과를 나타내고, 라디칼 소거 활성을 나타내므로 항산화 활성이 있는 것으로 나타났다.

본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 백향과의 종자는 분쇄하여 사용할 때 추출물 내의 유효성분의 함유량이 증가되어 보다 뛰어난 미백 및 항산화 활성을 보일 수 있는 것으로 나타났다(도 6 참조). 한 구현예에서, 상기 유효성분은 피세아탄올 또는 스키르푸신 B일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 백향과 추출물의 분획물은 미백 개선 효과 또는 항산화 효과를 높이기 위해서 추가로 통상의 정제 공정을 수행할 수 있으며, 추가 정제 공정을 통해서 얻어진 정제물도 본 발명에 포함된다. 본 발명에 따른 백향과 추출물의 분획물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 통과시켜 얻은 정제물, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획물도 본 발명의 분획물에 포함된다. 여러 성분이 혼합되어 있는 분획물을 농도구배 컬럼 크로마토그래피 등을 통하여 활성 성분의 성질에 따라 분리하여서 보다 미백 개선 효과가 높은 특정 활성 분획물을 제조할 수 있다.

상기 컬럼 크로마토그래피는 실리카 겔, C18, 세파덱스, LH-20, ODS 겔, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(Toyopearl) 및 XAD 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 충진제를 이용하여 활성 분획물을 분리 및 정제할 수 있다. 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 크로마토그래피를 사용함에 있어 용출 용매, 용출 속도 및 용출 시간은 본 기술 분야에서 일반적으로 사용하는 용매, 속도 또는 시간을 적용할 수 있다

2. 백향과 추출물의 분획물을 포함하는 피부 기능 개선용 화장료 조성물

백향과 추출물의 분획물의 제조 방법은 상기 "1. 백향과 추출물의 분획물 제조"에서 언급한 것과 동일하므로 그 기재를 생략한다.

본 발명은 백향과 추출물의 분획물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 미백용 화장료 조성물은 멜라닌 생성을 근본적으로 억제함으로써 뛰어난 미백 효과를 제공하고, 피부 색소 침착 및 피부톤 다운 현상을 개선할 수 있다. 상기 피부 미백은 멜라닌의 합성을 저해하여 멜라닌 색소의 피부 침착을 억제하거나 방지하는 모든 작용을 나타내며, 상기 색소의 피부 침착은 멜라닌의 합성 증가로 인해 피부의 색깔이 어두워지는 모든 작용 또는 그 상태를 나타낸다.

또한 본 발명은 백향과 추출물의 분획물을 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 활성 산소종의 작용에 의해 악화된 피부 상태를 개선하기 위한 용도로 이용될 수 있다. 보다 구체적으로, 피부의 산화에 의한 손상, 예를 들면 반점(갈색반), 주근깨, 피부 균열, 자외선 손상(햇볕에 탐), 피부 표면의 주름 생성, 탄력의 감소와 같은 증상들을 예방 또는 개선할 수 있으므로, 피부 노화 억제용, 피부 탄력 유지용, 피부 주름 개선용, 피부 미백용으로 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 백향과 추출물의 분획물은 항산화 활성이 있으므로, 화장품 자체의 산화를 방지함으로써 화장품의 품질을 유지하는데도 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 백향과 추출물의 분획물은 화장료 조성물에 0.01 내지 30중량%로 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.01 내지 20중량%로 포함될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 10중량%로 포함될 수 있고, 보다 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5중량%로 포함될 수 있다. 그 함량이 0.01중량% 미만일 경우에는 백향과 추출물의 분획물에 의한 효과가 미미할 수 있으며, 30중량%를 초과할 경우에는 투입 농도 대비 백향과 추출물의 분획물에 의한 효과가 상대적으로 낮을 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는, 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로션제, 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다.

화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올, 유동 파라핀 등이 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 백향과 추출물의 분획물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 보습 효과 및 피부 장벽 개선 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용 방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 제조예 및 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 제조예, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예 및 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 백향과 과육의 열수 추출물의 제조

백향과로부터 과육을 분리하였다. 과육 100g 중량 대비 10배수의 증류수를 첨가하여 80℃에서 12시간 동안 추출하여 백향과 과육의 열수 추출물 980㎖을 수득하였다.

제조예 2. 백향과 과육의 열수 추출물의 유기용매 분획물의 제조

제조예 1의 백향과 과육의 열수 추출물 200㎖ 대비 유기용매를 200㎖씩 가하여 분획물을 얻었다. 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트, 부탄올을 사용하였고, 위 순서대로 분획에 사용하였다. 유기용매 처리 후, 실온에서 24시간 동안 정치하였다. 유기용매층과, 물층이 분리되면, 유기용매층만을 회수하여 시료로 사용하였고, 잔사인 물층에는 다른 유기용매를 추가하여 2차 ~ 3차 분획을 하였다. 도 1에 분획 방법을 나타낸다. 수득한 유기용매층은 감압농축하고 건조하여, n-헥산 분획물 0.115g, 에틸아세테이트 분획물 0.046g, 부탄올 분획물 0.178g을 수득하였다.

또한, 에틸아세테이트로 분획한 후, 에틸아세테이트층을 분리하고 남은 물층(도 1의 제2 물 분획에 해당함)을 부탄올로 분획하였으며, 부탄올층을 분리하고 남은 물층인 제3 물 분획물을 감압농축하고 건조하여 2.252g을 수득하였다.

제조예 3. 백향과의 열수 추출물의 제조

백향과의 종자, 과육(종자 포함), 과피, 및 잎을 이용한 열수 추출물을 제조하였다. 이를 위하여, 상기 각 부위 100g 중량 대비 10배수의 증류수를 첨가하여 60℃에서 6시간 동안 추출하여 백향과 종자, 과육(종자포함), 과피, 및 잎의 열수 추출물을 수득하였다.

제조예 4. 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물의 제조

<4-1> 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물의 제조 (1)

제조예 3의 백향과 종자의 열수 추출물 200㎖ 대비 유기용매를 200㎖씩 가하여 분획물을 얻었다. 유기용매는 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 및 부탄올을 사용하였고, 위 순서대로 분획에 사용하였다. 유기용매 처리 후, 각 용매 단계마다 실온에서 4시간 이상 정치하였다. 유기용매층과 물층이 분리되면, 유기용매층만을 회수하여 각각의 유기용매 분획물 시료로 사용하였다.

<4-2> 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물의 제조 (2)

제조예 <4-1>의 에틸아세테이트 분획물을 감압 농축 및 동결건조한 후, 메틸렌클로라이드에 용해시켰다. 상기 용해물을 실리카 겔 컬럼에 적용한 후, n-헥산:에틸아세테이트를 각각 100:0 내지 0:100의 부피비로 10%씩 변화시키면서 상기 컬럼에 흘려주어 각각의 분획물을 분리하였다.

<4-3> 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물의 제조 (3)

상기 실시예 <4-2>에서 제조한 첫 번째 및 두 번째 분획물을 혼합하여 C18 컬럼에 흡착시킨 후, 메탄올과 증류수로 용출하여 4개의 분획물을 분리하였다.

<4-4> 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물의 제조 (4)

상기 실시예 <4-3>에서 제조한 3번째 분획물을 박막 크로마토그래피를 이용하여 극성에 따라 5개의 분획으로 분리하였다.

상기 제조예 3 및 제조예 4의 백향과 종자의 열수 추출물 및 유기용매 분획물의 제조 공정을 도 5에 개략적으로 나타내었다.

실험예 1. 미백 효과 측정

<1-1> 백향과 추출물 및 분획물의 미백 효과 측정 (1)

쥐 멜라닌형성세포(murine melanocyte)를 6웰 플레이트에 각 1ㅧ10⁴ 세포/웰로 접종하였다. 접종 24시간 후 100 ㎍/㎖, 200 ㎍/㎖로 계열희석한 시료와 양성대조군(arbutin)을 세포에 처리하였다. 음성대조군에는 멜라닌 생성을 유도하는 a-MSH를 처리하였다. 처리 72시간 후 세포를 회수하고 NaOH로 용해하여 세포 내 멜라닌을 검출하였다. 무처리군(배양액만 처리), 음성대조군(a-MSH만 처리), 양성대조군(a-MSH와 알부틴을 농도별 처리), 시료처리군(a-MSH와 각 시료를 농도별 처리)의 흡광도(OD₄₀₅)를 측정하고 음성대조군의 멜라닌 생성 저해율을 0으로, 무처리군의 멜라닌 생성 저해율을 100으로 하여 각 군의 멜라닌 생성 저해율을 측정하였다. 이때, 시료로는 상기 제조예 1 및 제조예 2에서 수득한 백향과 추출물 및 분획물들을 사용하였다.

그 결과, 도 2a에서 알 수 있듯이, 제조예 2의 에틸아세테이트 분획물은 농도 의존적으로 멜라닌 합성 저해 효과를 나타내었고, 동일한 농도로 처리한 양성대조군 대비 현저한 멜라닌 합성 저해 효과를 나타내었다. 반면에, 제조예 2의 에틸아세테이트 분획물과 동일한 농도로 처리한 제조예 1의 백향과 과육의 열수 추출물, 제조예 2의 n-헥산 분획물, 제조예 2의 부탄올 분획물, 제조예 2의 제3 물 분획물은 멜라닌 형성을 저해하지 못하였다.

<1-2> 백향과 추출물 및 분획물의 미백 효과 측정 (2)

상기 제조예 3 및 제조예 4의 각 단계에서 수득한 백향과 추출물 및 분획물들을 시료로 사용한 것을 제외하고는 상기 실험예 <1-1>과 동일한 방식으로 백향과 추출물 및 분획물의 미백 효과를 측정하였다.

그 결과, 제조예 3의 백향과의 각 부위별 열수 추출물의 경우, 300ppm의 처리 농도에서 종자, 과육(종자포함), 과피, 및 잎 추출물은 각각 85.82%, 51.56%, 30.85%, 및 45.74%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내고, 100ppm의 처리 농도에서는 각각 24.61%, 5.61%, 20.21%, 및 -2.84%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내어, 백향과의 다양한 부위 중에서 백향과 종자의 열수 추출물의 미백 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 2b).

또한, 상기 백향과 종자 열수 추출물에 대한 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 및 물 분획물, 즉 제조예 <4-1>의 분획물에 대해 미백 효과를 측정한 결과, 상기 분획물들은 100ppm의 처리 농도에서 각각 -9.43%, -5.32%, 68.72%, -4.82%, 및 0.42%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내고, 50ppm의 처리 농도에서 각각 -4.43%, 0.75%, 56.39%, 1.72%, 및 0.01%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내어, 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물들 중에서 에틸아세테이트 분획물의 미백 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 2c).

또한, 상기 백향과 종자의 열수 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 대하여 실리카 겔 컬럼에 n-헥산 및 에틸아세테이트의 농도별 혼합물을 용출시켜 제조한 각 분획물, 즉 제조예 <4-2>의 분획물의 미백 효과를 측정한 결과, n-헥산:아세테이트가 100:0 또는 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 및 0:100의 부피비로 용출한 경우의 분획물들은 10ppm의 처리 농도에서 각각 80.14%, 28.16%, 5.99%, -3.61%, 및 1.91%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내었고, 5ppm 및 2.5ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내어, n-헥산:아세테이트를 100:0 내지 80:20의 부피비로 혼합하여 용출한 경우의 분획물의 미백 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 2d).

또한, 상기 n-헥산:아세테이트를 100:0 내지 80:20의 부피비로 용출한 분획물에 대하여 C18 컬럼에 메탄올과 증류수의 혼합물 용출한 4개의 분획물, 즉 제조예 <4-3>의 분획물의 미백 효과를 측정한 결과, 첫 번째 내지 네 번째 분획물들은 20ppm의 처리 농도에서 각각 -2.68%, 1.15%, 49.04%, 및 20.31%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내었고, 10ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내어, 세 번째 분획물의 미백 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 2e).

또한, 상기 세 번째 분획물에 대하여 박막 크로마토그래피를 이용하여 극성에 따라 분리한 5개의 분획물, 즉 제조예 <4-4>의 분획물의 미백 효과를 측정한 결과, 첫 번째 내지 다섯 번째 분획물들은 20ppm의 처리 농도에서 각각 116.22%, 40.57%, 3.81%, 0.01%, 및 4.29%의 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내었고, 10ppm 및 5ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 멜라닌 형성 억제 효과를 나타내어, 첫 번째 및 두 번째 분획물의 미백 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 2f).

실험예 2. 티로시나제 활성 저해 효과 측정

<2-1> 백향과 추출물 및 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과 측정 (1)

시험관에 인산염완충액, 계열희석한 시료와 양성대조군(arbutin), Mushroom tyrosinase, L-DOPA를 넣고 37℃에서 15분 동안 반응시킨 후 흡광도(OD₄₉₀)를 측정하였다. 무처리군(시료와 L-DOPA를 인산염완충액으로 대체)의 흡광도를 100으로 하고, 인산염 음성대조군(시료를 인산염 완충액으로 대체)의 흡광도를 0으로 하여 각 군의 티로시나제 활성 저해율을 측정하였다. 이때, 시료로는 상기 제조예 1 및 제조예 2의 각 단계에서 수득한 백향과 추출물 및 분획물들을 사용하였다.

티로시나제 활성 저해 효과를 확인한 결과, 제조예 2의 에틸아세테이트 분획물에서 농도 의존적인 저해 효과를 나타냈으며 동일한 농도로 처리한 양성대조군과 비교하여 우월한 효과를 나타내었다(도 3a). 반면에, 제조예 1의 백향과 과육의 열수 추출물, 및 제조예 2에서 에틸아세테이트 외의 다른 용매를 사용하여 수득한 분획물에서는 티로시나제 활성 저해효과를 나타내지 않았다.

<2-2> 백향과 추출물 및 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과 측정 (2)

상기 제조예 3 및 제조예 4의 각 단계에서 수득한 백향과 추출물 및 분획물들을 시료로 사용한 것을 제외하고는 상기 실험예 <2-1>과 동일한 방식으로 백향과 추출물 및 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과를 측정하였다.

그 결과, 제조예 3의 백향과의 각 부위별 열수 추출물의 경우, 500ppm의 처리 농도에서 종자, 과육(종자포함), 과피, 및 잎 추출물은 각각 86.30%, 45.11%, 22.21%, 및 35.55%의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내었고, 250ppm 및 125ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내어, 백향과의 다양한 부위 중에서 백향과 종자의 열수 추출물의 티로시나제 활성 저해 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 3b).

또한, 상기 백향과 종자 열수 추출물에 대한 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 및 물 분획물, 즉 제조예 <4-1>의 분획물에 대해 티로시나제 활성 저해 효과를 측정한 결과, 상기 분획물들은 300ppm의 처리 농도에서 각각 4.05%, 1.17%, 77.42%, 3.93%, 및 4.08%의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내었고, 150ppm 및 75ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내어, 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물들 중에서 에틸아세테이트 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 3c).

또한, 제조예 <4-2>의 분획물에 대해 동일한 방식으로 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정한 결과, n-헥산:아세테이트가 100:0 또는 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 및 0:100의 부피비로 용출한 경우의 분획물들은 30ppm의 처리 농도에서 각각 95.25%, 68.54%, -1.55%, 2.52%, 및 2.54%의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내었고, 15ppm 및 7.5ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내어, n-헥산:아세테이트를 100:0 내지 80:20의 부피비로 혼합하여 용출한 경우의 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 3d).

또한, 제조예 <4-3>의 분획물에 대해 동일한 방식으로 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정한 결과, 첫 번째 내지 네 번째 분획물들은 50ppm의 처리 농도에서 각각 6.11%, 1.32%, 62.55%, 및 12.12%의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내었고, 25ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내어, 세 번째 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 3e).또한, 제조예 <4-4>의 분획물에 대해 동일한 방식으로 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정한 결과, 첫 번째 내지 다섯 번째 분획물들은 50ppm의 처리 농도에서 각각 105.1%, 35.1%, 0.11%, 5.11%, 및 3.28%의 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내었고, 25ppm 및 12.5ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내어, 첫 번째 및 두 번째 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과가 가장 뛰어남을 확인하였다(도 3f).

실험예 1 및 실험예 2의 정리:

위 결과로부터 백향과 과육의 열수 추출물 자체에는 멜라닌 합성 저해 효과 및 티로시나제 활성 저해 효과가 없고, 백향과 과육의 열수 추출물에서 유래한 분획물이더라도 분획시 사용하는 용매에 따라서 멜라닌 합성을 차단하는 효과와 티로시나제 활성 저해 효과가 상이하였고, 멜라닌 합성 억제 효과를 높이기 위해서는 1차 분획시 n-헥산을 사용하고, 2차 분획시 에틸아세테이트를 용매로 사용해야 하는 것을 알 수 있었다.

또한, 백향과 종자의 열수 추출물은 다른 부위에 비해 멜라닌 합성 저해 효과 및 티로시나제 활성 저해 효과가 뛰어났으며, 백향과 종자의 열수 추출물을 다양한 유기 용매 및 컬럼을 이용하여 제조한 분획물의 경우, 백향과 종자 열수 추출물의 에틸아세테이트 분획물, 상기 에틸아세테이트 분획물을 n-헥산:에틸아세테이트의 100:0 내지 80:20 부피비의 혼합물로 용출한 분획물, 상기 n-헥산:에틸아세테이트 혼합물로 용출한 분획물을 소정의 분자량으로 분획한 분획물, 및 상기 분획물을 소정의 극성으로 분획한 분획물의 미백 효과가 특히 뛰어남을 알 수 있었다.

실험예 3. 항산화 효과 측정

<3-1> 백향과 추출물 및 분획물의 항산화 효과 측정 (1)

시험관에 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)와 계열희석한 시료 및 양성대조군(ascorbic acid)을 넣고 10분간 반응시킨 후 흡광도(OD₄₉₀)를 측정하였다. 시료와 양성대조군의 처리 농도 단위는 ㎍/㎖이다. 무처리군(시료를 에탄올로 대체)의 흡광도를 100으로 하여 각 군의 DPPH 라디칼 소거율을 측정하였다. 이때, 시료로는 상기 제조예 1 및 제조예 2의 각 단계에서 수득한 백향과 추출물 및 분획물들을 사용하였다.

추출물 또는 각 분획물별 DPPH 프리 라디칼 소거 활성을 확인한 결과, 제조예 2의 에틸아세테이트 분획물 처리시 농도 의존적으로 소거 활성을 나타내었다(도 4a). 반면에, 제조예 1의 백향과 과육의 열수 추출물, 및 제조예 2에서 에틸아세테이트 외의 다른 용매를 사용하여 수득한 분획물에서는 프리 라디칼 소거 활성 효과가 낮아 유의적인 차이를 나타내지 않았다.

위 결과로부터 백향과 과육의 열수 추출물은 프리 라디칼 소거 활성이 없고, 백향과 과육의 열수 추출물에서 유래한 분획물이더라도 분획시 사용하는 용매에 따라서 라디칼 소거 활성이 상이하였고, 항산화 효과를 높이기 위해서는 1차 분획시 n-헥산을 사용하고, 2차 분획시 에틸아세테이트를 용매로 사용해야 하는 것을 알 수 있었다.

<3-2> 백향과 추출물 및 분획물의 항산화 효과 측정 (2)

상기 제조예 3 및 제조예 4의 각 단계에서 수득한 백향과 추출물 및 분획물들을 시료로 사용한 것을 제외하고는 상기 실험예 <3-1>과 동일한 방식으로 백향과 추출물 및 분획물의 DPPH 라디칼 소거율을 측정하였다.

그 결과, 제조예 3의 백향과의 각 부위별 열수 추출물의 경우, 500ppm의 처리 농도에서 종자, 과육(종자포함), 과피, 및 잎 추출물은 각각 67.5%, 22.21%, 15.13%, 및 40.4%의 DPPH 라디칼 소거율을 나타내었고, 250ppm 및 125ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 DPPH 라디칼 소거율을 나타내어, 백향과의 다양한 부위 중에서 백향과 종자의 열수 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다(도 4b).

또한, 상기 백향과 종자 열수 추출물에 대한 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 및 물 분획물, 즉 제조예 <4-1>의 분획물에 대해 DPPH 라디칼 소거율을 측정한 결과, 상기 분획물들은 300ppm의 처리 농도에서 각각 0.02%, 2.11%, 87.51%, 1.33%, 및 2.04%의 DPPH 라디칼 소거율을 나타내었고, 150ppm 및 75ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 DPPH 라디칼 소거율을 나타내어, 백향과 종자의 열수 추출물의 유기용매 분획물들 중에서 에틸아세테이트 분획물의 DPPH 라디칼 소거 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다(도 4c).

또한, 제조예 <4-2>의 분획물에 대해 동일한 방식으로 DPPH 라디칼 소거율을 측정한 결과, n-헥산:아세테이트가 100:0 또는 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 및 0:100의 부피비로 용출한 경우의 분획물들은 30ppm의 처리 농도에서 각각 52.25%, 30.30%, 1.07%, 1.44%, 및 3.37%%의 DPPH 라디칼 소거율을 나타내었고, 15ppm 및 7.5ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 DPPH 라디칼 소거율을 나타내어, n-헥산:아세테이트를 100:0 내지 80:20의 부피비로 혼합하여 용출한 경우의 분획물의 항산화 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다(도 4d).

또한, 제조예 <4-3>의 분획물에 대해 동일한 방식으로 DPPH 라디칼 소거율을 측정한 결과, 첫 번째 내지 네 번째 분획물들은 50ppm의 처리 농도에서 각각 1.58%, 2.48%, 41.14%, 및 5.22%의 DPPH 라디칼 소거율을 나타내었고, 25ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 DPPH 라디칼 소거율을 나타내어, 세 번째 분획물의 항산화 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다(도 4e).

또한, 제조예 <4-4>의 분획물에 대해 동일한 방식으로 DPPH 라디칼 소거율을 측정한 결과, 첫 번째 내지 다섯 번째 분획물들은 50ppm의 처리 농도에서 각각 88.1%, 30.1%, 2.15%, 3.11%, 및 1.25%의 DPPH 라디칼 소거율을 나타내었고, 15ppm 및 7.5ppm의 처리 농도에서도 농도 의존적으로 이와 유사한 DPPH 라디칼 소거율을 나타내어, 첫 번째 및 두 번째 분획물의 항산화 활성이 가장 뛰어남을 확인하였다(도 4f).

실험예 4. 백향과 추출물 및 분획물 내에 존재하는 피세아탄올 및 스키르푸신 B 함량 확인

상기 제조예 <4-4>에서 제조한 5개의 분획물과, 백향과 종자의 분쇄물 및 미분쇄물의 열수 추출물에 대하여 종래 미백 활성에 효과가 있는 것으로 알려진 피세아탄올 및 스키르푸신 B의 함량을 분석하였다. HPLC 분획 조건은 하기와 같다.

사용 기기: 1525 Binary HPLC Pump (Waters, USA)

검출기: 2998 PDA (Waters, USA)

컬럼: 4.6 ㎜ ID X 25 ㎝, 5 ㎛ (Discovery?? C18, SPELCO, USA)

주입 부피: 10 ㎕

이동상 조건: 용매 A - 0.1% Phospheric acid in distilled Water

용매 B - 아세토니트릴

시간	유속(㎖/분)	A(%)	B(%)
0	1.2	85	15
5	1.2	85	15
25	1.2	60	40
30	1.2	30	70
35	1.2	30	70
36	1.2	85	15
45	1.2	85	15

그 결과, 하기 표 2와 같이 제조예 <4-4>의 분획물의 경우, 첫 번째 및 두 번째 분획물 내에 상기 화합물들이 실질적으로 모두 포함되어 있음을 확인하였다.

화합물	1번 분획물	2번 분획물	3, 4, 5번 분획물
피세아탄올	40 mg/g	140 mg/g	-
스키르푸신 B	20 mg/g	420 mg/g	-

또한, 동일한 농도에서 백향과 종자를 분쇄한 추출물이 분쇄하지 않은 추출물과 비교하여 다양한 화합물들에 대한 피크를 보이고, 또한 추출물 내의 피세아탄올 및 스키르푸신 B의 함량도 보다 뛰어남을 확인하였다(도 6).

제조예 3. 화장품 제형의 제조

3-1. 에센스의 제조

백향과 추출물의 분획물을 이용하여 하기 표 3에 기재된 함량(중량부)에 따라 에센스를 제조하였다.

조성	함량(중량부)
트리에탄올아민	0.25
카르복시비닐폴리머	0.22
글리세린	4
부틸렌글리콜	2
제조예 2 또는 제조예 4의 백향과 추출물의 분획물	1.5
밀납	0.5
세토스테아릴알코올	1
글리세릴모노스테아레이트	1
스쿠알렌	4
정제수	적량

3-2. 유연화장수의 제조

백향과 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연화장수는 하기 표 4와 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
PEG-40 수소화 캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
제조예 2 또는 제조예 4의 백향과 추출물의 분획물	0.5
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

3-3. 영양 크림의 제조

백향과 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 영양크림은 하기 표 5의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
1,3-부틸렌글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알렌	3.8
제조예 2 또는 제조예 4의 백향과 추출물의 분획물	1.5
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
착향제	적량
정제수	잔량

3-4. 로션의 제조

백향과 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유한 로션을 하기 표 6의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
세토스테아릴알코올	1.6
스테아린산	1.4
친유형모노스테아린산글리세린	1.8
PEG-100 스테아레이트	2.6
세스퀴올레인산소르비탈	0.6
스쿠알렌	4.8
마카다이아오일	2
호호바오일	2
초산토코페롤	0.4
메틸폴리실록산	0.2
초산토코페롤	0.4
1,3-부틸렌글리콜	4
산탄검	0.1
글리세린	4
d-판데놀	0.15
제조예 2 또는 제조예 4의 백향과 추출물의 분획물	1.0
알란토인	0.1
카르보머(2% aq. Sol)	4
트리에탄올아민	0.15
에탄올	3
정제수	적량

Claims (20)

1. 백향과 추출물의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 청구항 1에 있어서,
   상기 백향과 추출물은 백향과 과육 추출물, 백향과 종자 추출물, 또는 이들의 조합인 화장료 조성물.
3. 청구항 1에 있어서,
   상기 백향과 추출물 제조시 사용된 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 및 이들의 혼합 용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화장료 조성물.
4. 청구항 1에 있어서,
   상기 백향과 추출물 제조시 사용된 용매는 물인 화장료 조성물.
5. 청구항 1에 있어서,
   상기 백향과 추출물의 분획물은 백향과 과육의 수추출물을 제1 유기용매로 1차 분획하여 유기용매층만 분리하여 1차 분획물을 수득하는 단계; 및 1차 분획시 유기용매층을 분리하고 남은 물층인 제1 물 분획물을 제2 유기용매로 2차 분획하여 유기용매층만 분리하여 제2 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조되며, 각 단계에서 사용된 유기용매는 상이한 화장료 조성물.
6. 청구항 5에 있어서,
   상기 제1 유기용매는 n-헥산인 화장료 조성물.
7. 청구항 5에 있어서,
   상기 제2 유기용매는 에틸아세테이트인 화장료 조성물.
8. 청구항 1에 있어서,
   상기 백향과 추출물의 분획물은 백향과 종자의 수추출물을 제3 유기용매로 분획해 유기용매층만 분리하여 제3 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조되는 화장료 조성물.
9. 청구항 8에 있어서,
   상기 제3 유기용매는 에틸아세테이트인 화장료 조성물.
10. 청구항 8에 있어서,
    상기 백향과 추출물의 분획물은 상기 제3 유기용매 분획물을 제4 유기용매를 이용하여 실리카 겔 컬럼에 적용하여 제4 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조되는 화장료 조성물.
11. 청구항 10에 있어서,
    상기 제4 유기용매는 n-헥산, 또는 n-헥산과 에틸아세테이트의 혼합물인 화장료 조성물.
12. 청구항 11에 있어서,
    상기 제4 유기용매는 n-헥산:에틸아세테이트가 100:0 내지 80:20의 부피비로 혼합된 혼합물인 화장료 조성물.
13. 청구항 10에 있어서,
    상기 백향과 추출물의 분획물은 상기 제4 유기용매 분획물을 제5 유기용매를 이용하여 C18 컬럼에 적용하여 제5 유기용매 분획물을 수득하는 단계;를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조되는 화장료 조성물.
14. 청구항 13에 있어서,
    상기 제5 유기용매는 물과 메탄올의 혼합물인 화장료 조성물.
15. 청구항 13에 있어서,
    상기 백향과 추출물의 분획물은 상기 제5 유기용매 분획물을 박막크로마토그래피를 이용해 극성에 따라 추가로 분획하는 단계;를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조되는 화장료 조성물.
16. 청구항 8 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 백향과 종자는 분쇄된 백향과 종자인 화장료 조성물.
17. 청구항 1에 있어서,
    상기 백향과 추출물의 분획물은 실온에서 제조되는 화장료 조성물.
18. 청구항 1에 있어서,
    상기 피부 미백은 멜라닌 합성에 의한 색소 침착을 억제하는 것인 화장료 조성물.
19. 청구항 1에 있어서,
    상기 피부 미백은 산화에 의한 피부 손상의 개선에 따른 것인 화장료 조성물.
20. 백향과 추출물의 분획물을 포함하는 항산화용 화장료 조성물.

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