KR20200031713A

KR20200031713A - 미생물상 복원 요법(mrt), 조성물 및 제조방법

Info

Publication number: KR20200031713A
Application number: KR1020207007721A
Authority: KR
Inventors: 리 에이. 존스; 코트니 알. 존스; 에드윈 제이. 흘라브카; 라이언 디. 고든
Original assignee: 리바이오틱스, 인코퍼레이티드
Priority date: 2013-06-05
Filing date: 2014-06-04
Publication date: 2020-03-24
Also published as: KR102291174B1; US9433651B2; US10624932B2; US10610547B2; US20150216917A1; US10391129B2; WO2014197562A1; US20140363400A1; AU2022204369A1; US20170274022A1; HRP20181302T1; LT3003330T; CA2914636A1; US20160354414A1; AU2020202691A1; DK3003330T3; PT3003330T; ES2673581T3; KR20180003630A; US20140363399A1

Abstract

미생물상 복원 요법 조성물, 미생물상 복원 요법 조성물의 제조, 가공 및/또는 전달 방법이 개시된다. 미생물상 복원 요법 조성물의 제조를 위한 예시적 방법은 인간 배설물 샘플을 수집하는 단계 및 상기 인간 배설물 샘플에 희석제를 첨가하여 희석된 샘플을 형성하는 단계를 포함할 수 있다. 희석제는 동결보호제를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 희석된 샘플을 혼합 장치와 혼합하는 단계 및 희석된 샘플을 여과시키는 단계를 포함할 수 있다. 여과시키는 단계는 여과액을 형성할 수 있다. 상기 방법은 또한 여과액을 샘플백에 옮기는 단계 및 샘플백을 밀봉시키는 단계를 포함할 수 있다.

Description

미생물상 복원 요법(MRT), 조성물 및 제조방법{MICROBIOTA RESTORATION THERAPY (MRT), COMPOSITIONS AND METHODS OF MANUFACTURE}

관련 출원과의 상호참조

본 출원은 2013년 6월 5일자로 출원된 미국 가출원 특허 제61/831,409호에 대해 미국 특허법(35 U.S.C. §119) 하에서 우선권을 주장하며, 이 기초출원의 전문은 본 명세서에 참고로 포함된다.

기술분야

본 개시내용은 소화관의 질환 및/또는 병태를 치료하는 조성물 및 방법에 관한 것이다.

소화기관의 질환 및/또는 병태를 치료하기 위해 매우 다양한 조성물 및 방법이 개발되었다. 공지된 조성물 및 방법 중에서, 각각은 특정 이점 및 단점을 가진다. 소화기관의 질환 및/또는 병태를 치료하기 위한 대안의 조성물 및 방법을 제공하기 위한 진행 중인 필요가 있다.

미생물상 복원 요법 조성물(microbiota restoration therapy composition), 및 미생물상 복원 요법 조성물을 제조, 가공 및/또는 전달하기 위한 방법이 개시된다. 미생물상 복원 요법 조성물의 예시적 제조방법은 인간 배설물 샘플을 수집하는 단계 및 인간 배설물 샘플에 희석제를 첨가하여 희석된 샘플을 형성하는 단계를 포함할 수 있다. 희석제는 동결보호제를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 희석된 샘플을 혼합 장치와 혼합하는 단계 및 희석된 샘플을 여과시키는 단계를 포함할 수 있다. 여과시키는 단계는 여과액을 형성할 수 있다. 상기 방법은 또한 여과액을 샘플백에 옮기는 단계 및 샘플백을 밀봉시키는 단계를 포함할 수 있다.

미생물상 복원 요법 조성물을 제조, 가공 및/또는 전달하기 위한 예시적 방법은 사전 선별한 공여자로부터 배설물 샘플을 수집하는 단계, 배설물 샘플을 여과백에 옮기는 단계, 및 여과백에 희석제를 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 희석제는 동결보호제를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 여과백을 밀봉하는 단계, 밀봉한 여과백을 믹서에 옮기는 단계, 및 여과백으로부터의 여과액을 샘플백에 옮기는 단계를 포함할 수 있다. 여과백으로부터의 여과액을 샘플백에 옮기는 단계는 샘플백 내에 미생물상 복원 요법 조성물을 한정할 수 있다. 상기 방법은 또한 샘플백을 밀봉시키는 단계, 샘플백을 냉각시키는 단계, 및 냉각된 샘플을 제어된 온도 저장 장치에 옮기는 단계를 포함할 수 있다. 냉각된 샘플백을 제어된 온도 저장 장치에 옮기는 단계는 미생물상 복원 요법 조성물을 냉동시키는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 냉동된 미생물상 복원 요법 조성물을 해동시키는 단계, 절연된 포장 시스템 내에 샘플백을 포장하는 단계, 및 포장된 샘플백을 처리 시설에 수송하는 단계를 포함할 수 있다.

의학적 처리를 위한 예시적 방법은 사전 선별한 공여자로부터 배설물 샘플을 수집하는 단계, 배설물 샘플을 여과백에 옮기는 단계, 및 여과백에 희석제를 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 희석제는 동결보호제를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 여과백을 밀봉하는 단계, 밀봉한 여과백을 믹서에 옮기는 단계, 및 여과백으로부터의 여과액을 샘플백에 옮기는 단계를 포함할 수 있다. 여과액을 여과백으로부터 샘플백에 전달하는 단계는 샘플백 내에 미생물상 복원 요법 조성물을 한정할 수 있다. 상기 방법은 또한 샘플백을 밀봉시키는 단계, 샘플백을 냉각시키는 단계, 및 냉각된 샘플을 제어된 온도 저장 장치에 옮기는 단계를 포함할 수 있다. 냉각된 샘플백을 제어된 온도 저장 장치에 옮기는 단계는 미생물상 복원 요법 조성물을 냉동시키는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 냉동된 미생물상 복원 요법 조성물을 해동시키는 단계, 절연된 포장 시스템 내에 샘플백을 포장하는 단계, 포장된 샘플백을 처리 시설에 수송하는 단계, 및 환자에게 미생물상 복원 요법 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있다.

일부 실시형태의 상기 개요는 각각의 개시된 실시형태 또는 본 개시내용의 모든 실행을 기재하는 것으로 의도되지 않는다. 다음의 도면 및 상세한 설명은 이들 실시형태를 더 구체적으로 예시한다.

본 발명의 한 관점은 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 인간 공여자의 대변 샘플; 및 동결보호제;를 포함하고, 상기 동결보호제는 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유한다.

상기 조성물은, 질병 관리 센터(Center for Disease Control: CDC) 배양 플레이트에서 배양되어, 환자에게 투여되기 전에 10^-6의 연속 희석에서 집락 형성 단위(colony forming unit: CFU)가 약 30 CFU 내지 약 300 CFU의 계수로 존재하는 것이 확인된다.

상기 조성물은, 박테리오데스 바일 에스쿨린 한천(Bacteriodes Bile Esculin Agar: BBE) 배양 플레이트에서 배양되어, 환자에게 투여되기 전 10^-5의 연속 희석에서 집락 형성 단위(colony forming unit: CFU)가 약 30 CFU 내지 약 300 CFU의 계수로 존재하는 것이 확인된다.

상기 조성물은, 적어도 2가지의 목 및 서로 상이한 적어도 7가지의 과로부터 유래되는 박테리아를 포함하고, 과 수준에서 계산되는 섀넌 다양성 지수(Shannon Diversity Index)가 0.4 내지 2.5이며, 상기 박테리아의 40% 내지 60%가 박테로이달레스(Bacteroidales)목, 상기 박테리아의 30% 내지 40%가 클로스트리디알레스(Clostridiales)목, 상기 박테리아의 36% 내지 48%가 박테로이데세애(Bacteroidaceae)과로부터 유래된다.

상기 대변 샘플은 45g 내지 75g의 대변을 포함한다.

상기 조성물은 서로 상이한 적어도 7개의 과로부터 유래되는 박테리아를 포함한다.

상기 조성물은 과 수준에서 계산되는 섀넌 다양성 지수(Shannon Diversity Index)가 0.4 내지 2.5이다.

상기 조성물은 관장 투여용 액체이다.

상기 조성물은 경구 투여용 고체이다.

상기 조성물은 동결건조된 것이다.

본 발명의 다른 관점은 소화 장애를 치료하기 위한 조성물이며, 상기 조성물은, 여과되고, 희석된, 인간 배설물 샘플을 포함하고, 상기 인간 배설물 샘플은, 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 용액에 희석된 것인, 조성물에 관한 것이다.

상기 인간 배설물 샘플은 45g 내지 75g의 대변을 포함하는 것이다.

상기 조성물은 서로 상이한 적어도 7가지의 과로부터 유래되는 박테리아를 포함한다.

상기 조성물은 관장 투여용 액체이다.

상기 조성물은 경구 투여용 고체이다.

상기 조성물은 동결건조된 것이다.

본 발명의 또 다른 관점은 인간 공여자로부터 대변 샘플을 수집하고; 상기 대변 샘플에 희석제를 가하되, 상기 희석제는 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하며; 상기 대변 샘플과 상기 희석제를 혼합하여 혼합된 조성물을 형성하고; 상기 혼합된 조성물을 여과한 후 여과액을 수집하고; 상기 여과액을 사전 냉각한 후 상기 여과액을 냉동시키는; 과정에 의해 형성된 제약을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

상기 제약은 관장 투여용 액체 제약이다.

상기 제약은 경구 투여용 동결건조된 제약이다.

본 발명의 또 다른 관점은 배설물 샘플로부터 유래된 미생물의 집단; 및

동결보호제;를 포함하고, 상기 동결보호제는 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 것인 조성물이다.

본 발명의 또 다른 관점은 배설물 샘플로부터 유래된 미생물의 집단; 동결보호제; 및 상기 동결보호제는 폴리에틸렌 글리콜을 30-90 g/L의 농도로 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 용액을 포함하는 것인 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 관점은 조성물을 제조하는 방법으로, 상기 방법은, 동결보호제를 배설물 샘플에 가하여 혼합물을 형성하고; 그리고 상기 혼합물을 여과하는; 단계를 포함하며, 상기 동결보호제는 폴리에틸렌 글리콜을 30-90 g/L의 농도로 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 용액을 포함하는 것인 방법에 관한 것이다.

상기 혼합물을 여과하는 단계는 상기 혼합물을 잔류물과 투과물로 여과하는 단계를 포함한다.

상기 투과물은 상기 조성물을 형성한다.

상기 혼합물을 동결 건조하는 단계를 더 포함한다.

본 발명은 병원성 및/또는 비유효 유기체를 건강하고, 효과적인 박테리아 군집으로 대체함으로써 위장관의 미생물상 복원 요법을 이용하는 조성물, 제조방법 및 치료방법을 제공한다.

본 개시내용은 수반하는 도면과 관련하여 다음의 상세한 설명을 고려하여 더 완전하게 이해될 수 있다, 여기서:
도 1은 공여자 배설물 샘플을 수집 및 검사하기 위한 공정을 개략적으로 도시하는 흐름도를 도시한 도면;
도 2는 배설물 공여자를 선별하기 위한 공정을 개략적으로 도시하는 흐름도를 도시한 도면;
도 3a 및 도 3b는 미생물상 복원 요법 조성물을 제조하는 예시적 방법을 도시하는 흐름도를 도시한 도면;
도 4는 미생물상 복원 요법 조성물을 주문하고 수송하는 예시적 공정을 도시하는 흐름도를 도시한 도면;
도 5는 미생물상 복원 요법 조성물을 주문하고 수송하는 다른 예시적 공정을 도시하는 흐름도를 도시한 도면;
도 6은 예시적 포장 시스템의 개략도를 도시한 도면;
도 7은 예시적 샘플백을 도시한 도면; 및
도 8은 예시적 관 조립체를 도시한 도면.
개시내용은 다양한 변형 및 대안의 형태를 잘 받아들일 수 있지만, 이의 세부사항은 도면에서 예시의 방법에 의해 나타내었고, 상세하기 기재될 것이다. 그러나, 기재된 특정 실시형태로 본 발명을 제한하려는 의도가 아님을 이해하여야 한다. 대조적으로, 본 개시내용의 정신과 범주 내에 속하는 모든 변형, 동등물 및 대안을 아우르는 의도이다.

다음의 정의된 용어에 대해, 본 명세서의 청구범위 또는 다른 곳에서 상이한 정의가 주어지지 않는 한, 이들 정의가 적용될 것이다.

모든 수치값은 본 명세서에서 명확하게 표시되든 아니든 용어 "약"에 의해 변형되는 것으로 추정된다. 용어 "약"을 일반적으로 당업자가 인용된 값에 대한 동등물(예를 들어, 동일한 기능 또는 결과를 가짐)을 고려하는 숫자 범위를 지칭한다. 다수의 예에서, 용어 "약"은 가장 가까운 중요한 수치로 반올림되는 숫자를 포함할 수 있다.

종점에 의한 수치적 범위의 인용은 해당 범위 내의 모든 숫자를 포함한다(예를 들어, 1 내지 5는 1, 1.5, 2, 2.75, 3, 3.80, 4 및 5를 포함한다).

본 명세서 및 첨부하는 청구범위에서 사용하는 바와 같은 단수 형태는 내용이 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수의 대상을 포함한다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같은 용어 "또는"은 일반적으로 내용이 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 그의 의미에 "및/또는"을 포함하는 것으로 사용된다.

"실시형태", "일부 실시형태", "다른 실시형태" 등에 대한 본 명세서의 언급은 기재된 실시형태가 하나 이상의 특정 특징, 구조 및/또는 특징을 포함할 수 있다는 것이 주목된다. 그러나, 이러한 설명은 모든 실시형태가 특정 특징, 구조 및/또는 특징을 포함한다는 것을 필수적으로 의미하지는 않는다. 추가적으로, 특정 특징, 구조 및/또는 특징이 일 실시형태와 관련하여 기재될 때, 이러한 특징, 구조 및/또는 특징은 또한 달리 대조적으로 명확하게 언급되지 않는 한, 명확하게 기재되든 아니든, 다른 실시형태와 관련하여 사용될 수 있다는 것이 이해되어야 한다.

다음의 상세한 설명은 도면에 관련하여 읽어야 하는데, 이때 상이한 도면에서 동일한 구성요소는 동일하게 넘버링된다. 도면은 필수적으로 일정한 비율은 아니며, 예시적 실시형태를 도시하고 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

본 명세서에 사용되는 "포유류"는 인간 및 비인간 영장류, 예컨대 침팬지, 및 기타 유인원 및 원숭이종; 농장 동물, 예컨대 소, 양, 돼지, 염소 및 말; 애완동물, 예컨대 개 및 고양이; 마우스, 래트 및 기닉픽 등과 같은 설치류를 포함하는 실험실 동물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 포유류강의 임의의 구성원을 지칭한다. 상기 용어는 특정 연령 또는 성별을 의미하지는 않는다. 따라서, 성인 및 신생아 대상체뿐만 아니라 태아는 남성이든 여성이든 본 용어 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "동결보존"은 그들의 생존력을 유지하기 위해 저온에서 생물학적 세포, 조직 또는 기관을 냉동 및 저장하는 공정을 지칭한다. 비제한적 예로서, 동결보존은 해동 시 세포의 고비율의 생존성을 허용하는 빙점 미만의 온도(예를 들어, -20℃ 또는 더 저온, -80℃ 또는 더 저온 등)에서 세포를 냉각 및 저장하는 기법일 수 있다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "동결보호제"는 생물학적 세포 또는 조직을 냉동 효과로부터 보호하기 위해 사용되는 물질을 지칭한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "미생물상"은 인간 미생물군집, 인간 미생물상, 또는 인간 장 미생물상을 지칭할 수 있다. 인간 미생물군집(또는 인간 미생물상)은 표면 상에 그리고 피부의 깊은 층에, 타액 및 경구 점막에, 결막에, 인간의 위장관에 체류하는 미생물유기체의 응집물로서 이해될 수 있다. 인간 미생물군집은 박테리아, 진균, 바이러스 및 고세균을 포함한다. 이들 유기체의 적어도 일부는 인간 숙주에 유용한 작업을 수행한다. 정상 환경 하에서, 이들 미생물유기체는 인간 숙주에 대한 질환을 야기하지는 않지만, 대신 건강을 유지하는데 참여한다. 따라서, 유기체의 이 집단은 "정상군"으로서 빈번하게 지칭된다.

인간 위장관에서 살아있는 미생물유기체의 집단은 통상적으로 "미생물상", "세균총", 및/또는 "장 미생물상"으로서 지칭된다. 인간 장의 미생물상은 소화, 비타민 합성 및 인간 신체에 의해 생산되지 않는 효소의 생성을 돕는 매우 다양한 미생물유기체를 포함한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 어구 "미생물상 복원 요법"은 환자 또는 공여자로부터의 살아있는 세균총을 함유하는 인간 배설물 물질, 희석제 및 동결보호제를 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는 조성물을 지칭한다. 추가적인 조성물은 냉동 건조된 동등물 및 재구성된 배설물 또는 "합성" 배성물 조성물을 포함한다. 인간 배설물 물질은 미생물상 복원 요법에서 그의 사용 전에 병원성 미생물유기체의 존재에 대해 선별된다. 인간 배설물 물질은 클로스트리듐 디피실(C. difficile)을 포함하는 클로스트리듐(Clostridium) 종, 노로바이러스, 아데노바이러스, 장 병원균, 지아르디아(Giardia) 종에 대한 항원, 크립토스포리듐(Cryptosporidia) 종 및 항산균을 포함하는 다른 병원균, 반코마이신 내성 장구균(VRE)을 포함하지만 이것으로 제한되지 않는 장구균, 메티실린-내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA)뿐만 아니라 임의의 알 또는 기생체, 또는 아이소스포라(Isospora), 클리스로스포라(Clyslospora) 및 크립토스포라(Cryptospora)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 포자-형성 기생충의 존재에 대해 선별된다.

1000가지가 넘는 상이한 박테리아 종이 건강한 위장(GI) 관 내에 체류한다. 클로스트리디아(Clostridia)는 혐기성의, 포자-형성 박테리아이다. 클로스트리디아의 특정 종은 인간에 해로울 수 있는 독소를 생성하는 병원균이다. 클로스트리듐 디피실("C diff")은 GI 관 내에서 과밀화된다면, 특히, 특정 경우에, 사망을 유발할 수 있는, 복부팽창, 변비, 설사, 염증, 복통을 포함하는, 다수의 증상을 야기할 수 있는 독소를 방출할 수 있는 클로스트리듐의 한 가지 종이다.

스트레스를 받을 때, 클로스트리듐 디피실은 다수의 활성 박테리아가 견딜 수 없는 극도의 조건을 견딜 수 있는 포자를 생성한다. 일반적으로, 클로스트리디아는 건강한 GI 관에서 잘 경쟁하지 않는다. 그러나, 항생제는 정상 장내미생물상을 파괴하여 클로스트리듐 디피실의 과성장을 야기할 수 있다. 특정 예에서, 클로스트리듐 디피실 포자는 다양한 항생체에 대해 내성이 있을 수 있다. 따라서, 정상 장내미생물상이 클리어런스됨에 따라, 클로스트리듐 디피실 포자가 남아서 거대 집단의 클로스트리듐 디피실을 야기할 수 있다.

질병공제예방중심(CDC)에 따르면, 대략 337,000 경우의 클로스트리듐 디피실 감염(CDI)이 약 14,000건의 사망을 초래하는 것으로 미국에서 매년 보고된다. 현재의 치료 표준은 전형적으로 메트로니다졸 및/또는 반코마이신에 의한 항생제 치료이다. 초기 항균제 치료 후에, 환자의 대략 25%는 증상의 재발을 경험한다. 이 재발 환자 집단에서, 대략 45 내지 65%는 지속적 재발 CDI가 발생되었다. 지속적 재발 CDI는 고이환율 및 사망률과 관련된다. 예를 들어, 클로스트리듐 디피실 과밀 발생률의 추정은 매년 미국에서 1백 5십만 내지 2백 7십만의 경우로 변하며, 점점 증가하고 있다. 하나의 추정에서, 클로스트리듐 디피실에 의한 병원 입원은 2001년에서부터 2005년까지 2배가 되었는데, 5%로부터 25%의 연평균 성장률로 추정된다. 현재의 추정값은 클로스트리듐 디피실 과밀에 의해 영향받은 환자가 3일로부터 36일로 입원이 증가되었고, 병에 걸린 환자의 거의 20%가 180일 내에 재입원하며, 각각은 영향받지 않은 환자보다 장기간 치료 시설에 보내질 가능성이 더 높다는 것을 나타낸다. 클로스트리듐 디피실의 재정적 영향은 연간 10억 달러 내지 30억 달러로 추정된다. 게다가, 1일당 300명으로 추정되는 환자 사망은 클로스트리듐 디피실 과밀, 1 내지 7.7%의 사망률 및 점점 더 증가하는 사망률에 기인한다.

클로스트리듐 디피실의 전통적 치료는 전형적으로 도포 항생제를 포함한다. 메트로니다졸("후라질(Flagyl)(등록상표)")은 낮은 가격 및 고효능에 기인하는 선택의 항생제이다. 그러나, 재발 사례(총 사례의 20%까지, 예를 들어 메트로니다졸에 대해 내성), 임신한 환자 또는 10세보다 어린 환자에 대해, 반코마이신("반코신(Vancocin)(등록상표)")이 전형적으로 사용된다. 그러나 전형적으로 메트로니다졸보다 부작용이 거의 없음에도 불구하고, 반코마이신은 훨씬 더 고비용이며, 존재하는 클로스트리듐 디피실의 추가 항생제에 대한 내성을 야기할 수 있다.

첫 번째 발생에서, 클로스트리듐 디피실에 대한 항생제 치료는 대략 90% 이상의 비율로 2 내지 4일 내에 설사를 치료하는데 몹시 효과적일 수 있다. 그러나, 클로스트리듐 디피실은 20% 추정 비율(예를 들어, 15% 내지 30%)에서 첫 번째 발생 후에(예를 들어, 항생제 중단 후 며칠 내지 12주) 전형적으로 재발된다. 그러나, 첫 번째 발생 후 각각의 재발에 대해, 비율은 두 번째 재발 후 40% 추정 비율로 크게 그리고 60% 추정 비율보다 크게 또는 그 이후에 더 크게 증가된다. 환자의 대략 5%는 6회 이상 재발되는 것으로 추정된다.

클로스트리듐 디피실에 대한 치료는 전형적으로 각각의 발생 후에 변한다. 예를 들어, 첫 번째 경증 내지 중등증의 재발에 대해, 메트로니다졸이 경구로 투여될 수 있다(예를 들어, 500㎎의 용량에서, 10 내지 14일 동안 1일 3회("TID")). 두 번째 재발에 대해, 반코마이신은 점점 줄어들거나 또는 펄스화된 용량으로(예를 들어, 14일 동안 1일 4회("QID") 125㎎의 용량으로; 7일 동안 1일 2회("BID") 125㎎의 용량으로; 7일 동안 1일 1회("QD") 125㎎의 용량으로; 8일 동안 2일에 1회 125㎎의 용량으로(4회 용량); 15일 동안 3일에 1회 125㎎의 용량으로(5회 용량) 등) 경구로 투여될 수 있다. 세 번째 재발에 대해, 반코마이신은 더 큰 용량에서(예를 들어, 14일 동안 1일 4회("QID") 125㎎의 용량에서) 적용될 수 있고, 재발 감염에 대한 임의의 다른 선택사항, 예컨대 정맥내 면역글로불린(예를 들어, 효과에 따라서 총 2 또는 3회 용량 동안, 3주마다 1회 400㎎/㎏ 체중 용량의 용량으로), 또는 반코마이신 용량 후 리파마이신(예를 들어, 14일 동안 1일 2회("BID") 400㎎의 용량에서 리파마이신) 등과 조합된다.

미생물상 복원 요법(MRT)과 관련된 치료인 대변 이식(fecal transplantation: FT)은 재발 CDI를 갖는 일부 환자에 대한 최후의 수단으로서 실행되었다. 항균제 치료 후에, FT는 환자의 위장 미생물상 내에서 건강한 미생물 혼합을 재확립하기 위해 사용된다. 480건 이상은 FT 물질에 기인하는 임의의 유해효과 없이 재발 CDI를 치료함에 있어서 ~90% 누적 성공률을 보고하였다. 현재 시설의 실행은 환자에게 이식을 위해 치료 시설 내에서 가족 구성원 또는 자원자로부터 배설물 샘플을 얻는 것이다. 이 치료 기법에 의한 명백한 문제는 FT 물질이 표준화되지 않는다는 점이다. 공여 시 건강한 것으로 고려된 공여자가 일반적으로 선택되지만, 이는 이식될 미생물의 품질과 생존력 둘 다를 보장하기에 충분하지 않다. 공여자에게 알려지지 않은 배설물 물질에 영향을 미치는 질환 상태가 존재할 수 있다. 원배설물 물질의 품질에 추가적으로, 수용 또는 치료 시설에서 가공 및 처리를 위한 표준화된 절차의 결여는 환자에게 주어진 FT 물질의 품질과 생존력 둘 다에 의한 문제를 야기할 수 있다. 추가로, 각각의 시설은 바람직하지 않은 원 배설물 물질을 처리하여야 한다.

전달 시 환자에 대한 MRT 제품의 품질 및 생존력을 보장하는 표준화된, 사전가공된 MRT 제품에 대한 필요가 있다. 추가로 각각의 시설에서 원 배설물 물질의 처리를 제거하기 위한 용이하게 처리되고 전달가능한 상태로 가공한 후에, 적합한 처리 시설에 수송할 수 있는 MRT 제품을 갖는 것이 바람직할 수 있다. 이들 개선에 의해, MRT는 소수의 시설에서 최후 수단의 처리보다는 CDI에 대한 바람직하고/생존가능한 1차 처리가 될 수 있다.

이 문헌은 특히 복수의 공여자로부터 복수의 공여자 배설물 샘플을 수용하는 단계 및 각각의 공여자 배설물 샘플의 적어도 하나의 특징을 이용하여 각각의 공여자 배설물 샘플을 저장하고 지표화하는 단계를 논의한다. 예에서, 공여자 배설물 샘플은 건강하거나 또는 환자의 소화기관 내에서 병원성 또는 바람직하지 않은 유기체를 바람직한 장 미생물상으로 대체하기 위한 배설물 박테리아요법에서의 후속적 용도를 위해 선별되고 처리될 수 있다.

본 개시내용은 유효량의 배설물 미생물상 및 유효량의 동결보호제의 혼합물을 포함하는 미생물상 복원 요법 조성물을 제공한다. 예시적 동결보호제는 폴리에틸렌 글라이콜을 포함할 수 있다. 추가적으로, 본 개시내용의 미생물상 복원 요법 조성물에서, 폴리에틸렌 글라이콜은 약 5 내지 60g/㎖, 또는 약 5 내지 30g/㎖, 또는 약 30g/㎖ 미만의 농도로 존재한다. 조성물은 추가로 희석제로서 식염수를 포함할 수 있다. 개시내용의 조성물은 평균 분자량이 약 600 내지 약 20000의 범위에 있는 폴리에틸렌 글라이콜을 포함할 수 있다. 예를 들어, 평균 분자량이 3150인 PEG-3150이 이용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 미생물상 복원 요법 조성물은 하나 이상의 인간 대변 샘플로부터 유래된 배설물 미생물상을 포함한다.

다른 동결보호제, 예컨대 덱스트로스, 베타인, 글라이신, 수크로스, 폴리비닐 알코올, 플루로닉(Pluronic) F-127, 만니톨, 트윈 80, 에틸렌 글라이콜, 1,3-프로판다이올, 하이드록시프로필 셀룰로스, 글라이세롤, PEG/글라이세롤 혼합물, 우유(예를 들어, 탈지유), 및 프로필렌 글라이콜이 사용될 수 있다.

다른 실시형태에서, 본 개시내용의 조성물의 미생물상의 생존력은 박테리오데스 바일 에스쿨린 한천(Bacteriodes Bile Esculin Agar: BBE) 플레이트(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니(Becton, Dickinson and Company)로부터 입수가능, 카탈로그 번호221836, BBL(상표명) 박테리오데스 바일 에스쿨린 한천 BBE 플레이트), 또는 질병 관리 센터(Center for Disease Control: CDC) 플레이트(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니로부터 입수가능, 카탈로그 번호 221733, BBLTM CDC 혐기성생물 5% 양 혈액 한천 플레이트), 또는 둘 다에 대해 미생물상(및/또는 여과액 및/또는 박테리아요법 조성물)을 배양시킴으로써 확인될 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 조성물의 미생물상의 생존력은 10^-5의 연속 희석에서 약 30 CFU 내지 약 300 CFU의 집락 형성 단위(colony forming unit: CFU) 계수의 존재에 의해, 또는 10^-6의 연속 희석에서 약 30 CFU 내지 약 300 CFU의 CFU 계수의 존재에 의해 BBE 및/또는 CDC 플레이트 상에서 확인될 수 있다. 추가로 미생물상의 농도가 약 10⁷개 미생물/㎖의 규모인 미생물상 복원 요법 조성물이 제공된다. 추가적으로, 미생물상 복원 요법 조성물을 생성하기 위한 방법은 간격을 두고 수집된 인간 대변 샘플을 이용하여 공여자 선별 전과 선별 후 둘 다에 수행하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

미생물의 생존력을 확인하는 것에 추가적으로, 플레이팅 시험은 또한 존재하는 살아있는 미생물의 다양성을 확인할 수 있다. 존재하는 미생물의 혼합물 또는 미생물의 다양성은 인간 대변 샘플 및 해당 샘플로부터 만들어진 MRT 제품 품질의 추가적인 측정이다. CDC 플레이트 및 BBE 플레이트는 단독으로 또는 조합하여 본 명세서에 기재된 바와 같은 다양성을 통한 품질의 측정을 제공한다.

본 개시내용은 또한 미생물상 복원 요법 조성물로 가공될 인간 대변 샘플의 품질을 보장하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 인간 대변 공여자를 동정하는 단계; 건강 이력의 질문, 1일 식이요법 질문 및 적어도 1회의 혈액검사를 포함하는 공여자의 사전 공여 선별을 수행하는 단계; 공여자로부터 인간 대변 샘플을 수집하는 단계; 공여자로부터의 대변 샘플을 가공하여 하나 이상의 미생물상 복원 요법 조성물을 형성하는 단계; 건강 이력의 질문 및 적어도 1회의 혈액검사를 포함하는, 약 15 내지 120일, 또는 약 30 내지 100일, 또는 약 45 내지 90일의 간격으로 공여자의 공여후 선별을 수행하는 단계; 공여전 선별과 공여 후 선별 사이의 간격 동안 수집한 공여자 대변 샘플로부터 가공한 하나 이상의 미생물상 복원 요법 조성물의 격리를 유지하는 단계; 선별전 결과와 선별후 결과로부터 미생물상 복원 요법 조성물의 품질을 확인하는 단계; 및 미생물상 복원 요법이 필요한 인간에서 사용하기 위해 미생물상 복원 요법 조성물을 방출시키는 단계를 포함한다. 선별 전/선별 후 단계는 건강한 샘플을 수집할 가능성을 개선시킬 수 있다. 간격은 증상을 나타내거나 또는 선별 후 인간 대변 또는 혈청 시험에서 양성으로 동정되는 인간 대변 수집 시간에 존재하는 질환 상태 또는 다른 인자에 대해 적절한 시간을 허용하도록 선택된다. 추가로, 조성물은 선별 전과 선별 후 단계가 둘 다를 통해 공여자 건강상태의 유효성이 확인될 때까지 격리될 수 있다.

개시내용의 방법은 감염성 질환의 존재에 대해 인간 대변 샘플 상에서 적어도 1회 시험을 수행하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로, 본 개시내용의 방법은 클로스트리듐 디피실; 노로바이러스; 아데노바이러스; 장 병원균; 지아르디아 항원; 크립토스포리듐(Cryptosporidium) 항원; 항산성 염색(클리스로스포라, 아이소스포라); 알 및 기생충; 반코마이신-내성 장구균(VRE); 메티실린-내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA) 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 구성성분에 대해 인간 대변 샘플을 시험하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 개시내용의 방법은 공여자의 혈액을 시험하는 단계를 포함할 수 있되, 혈액검사는 HIV; A형 간염; B형 간염; C형 간염; RPR 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 구성성분에 대한 적어도 하나의 시험을 포함한다.

인간 대변 샘플로부터 미생물상 복원 요법 조성물을 생성하고, 조성물의 생존력을 보장하는 대표적인 방법은 목적으로 하는 양의 인간 대변 샘플을 수집하는 단계, 식염수를 첨가하는 단계, 동결보호제(예를 들어, 폴리에틸렌 글라이콜)을 첨가하는 단계, 및 조성물을 혼합하는 단계를 포함할 수 있다. 이어서, 얻어진 혼합물은 여과될 수 있고, 미생물을 함유하는 여과액이 수집된다. 여과액의 일부는 시험을 위해 수집될 수 있고, 여과액의 나머지는 상기 기재한 바와 같이 선별 전 및 선별 후 결과와 결합된 시험 샘플의 배양에 기반하여 시험이 냉동 여과액의 품질을 검증할 때까지 격리되어 냉동될 수 있다.

본 개시내용은 병원성 및/또는 비유효 유기체를 건강하고, 효과적인 박테리아 군집으로 대체함으로써 위장관의 미생물상 복원 요법을 이용하는 조성물, 제조방법 및 치료방법에 관한 것이다. 치료될 수 있는 예시적 병태 및 질환 상태는 클로스트리듐 디피실 감염, 과민성 장증후군(IBS), 크론병, 궤양성 대장염(UC), 스타필로코커스 또는 클로스트리듐 디피실 감염으로부터 초래되는 전격성 감염, 염증성 장질환(IBD), 궤양, 당뇨병, 결장암, 변비, 비만, 및 기타 병태 및 장 박테리아 군집의 불균형과 관련된 질환 상태를 포함한다.

일부 예에서, 클로스트리듐 디피실 감염(CDI)의 치료를 위해 미생물상 복원 요법(MRT)을 이용하는 조성물, 제조방법 및 치료방법이 제공된다. CDI는 흔한 병원내 감염이며, 특히 노인 환자에서 중증의 이환율 및 사망률과 빈번하게 관련된다.

각각의 개체는, 예를 들어, 소화를 돕고, 결장에 영양을 제공하며, 비타민을 생성하고, 면역계를 자극하며, 외인성 박테리아에 대한 방어를 돕고, 에너지 대사를 조절하며, 단쇄 지방산(SCFA), 구체적으로는 최종 생성물로서 SCFA, 주로 아세트산염, 프로피온산염 및 뷰티르산염을 생성하는 발효를 위한 기질인, 저항성 전분 및 식이섬유를 포함하는 식이 탄수화물의 생성을 포함하는, 유용한 공생 기능의 숙주를 제공하는 소화관 내에 체류하는, 500 내지 5000가지 이상으로 추정되는 종의 박테리아, 진균, 바이러스, 고세균 및 다른 미생물유기체, 100조 개까지의 개개 유기체를 포함하는 맞춤화된 장 미생물상을 가진다. 그러나, 장 미생물상을 부적절하게 균형을 맞추거나 또는 기능화시키는 것은 특정 질환 또는 고통, 예컨대 특히 기막성대장염, 클로스트리듐 디피실 대장염, 항생제-관련 설사(AAD), 궤양성 대장염(UC), 낭염, 과민성 장증후군 (IBS), 비만에서 어떤 역할을 할 수 있다.

따라서, 본 발명자는 특히 환자의 소화기관 내 병원성 유기체를 건강한 박테리아 군집, 또는 장 미생물상과 관련된 고통을 지니는 구체적 개체에 유익한 것으로 의도되는 박테리아 군집으로 대체함으로써 클로스트리듐 디피실 대장염을 포함하는 장 미생물상과 관련된 고통을 치료하기 위한 박테리아요법을 제공하는 시스템 및 방법을 인식하였다. 예로서, 본 명세서에 기재된 시스템 및 방법은 환자에게 박테리아요법을 제공하기 위해 현재의 능력 및 일상적인 현재의 클리닉 및 병원에 의해 메싱(meshing)할 수 있는 편리하고 위생적인 메커니즘을 제공할 수 있다. 특정 예에서, 유사한 치료는 IBS, 크론병, 궤양성 대장염(UC), 염증성 장질환(IBD), 궤양 또는 다른 위장, 대사 또는 소화관 관련 질환과 같은 다른 질환을 지니는 환자에게 효과적일 수 있다. 다른 예에서, 박테리아요법은 장 내의 비유효 군집을 더 효과적인 미생물상으로 대체하여 체중감소에 도움을 주기 위해 사용될 수 있다. 다른 예에서, 박테리아요법은 심혈관 및 말초혈관 질환에 도움을 주기 위해 사용될 수 있다.

예에서, 클로스트리듐 디피실 또는 소화관의 하나 이상의 다른 질환 또는 고통을 치료하기 위한 박테리아요법은 건강한 또는 목적으로 하는 포유류 박테리아 군집의 재정주(re-population) 및 항생제의 조합을 이용하여 제공될 수 있다. 특정 예에서, 박테리아 군집의 재정주는 배설물 박테리아요법, 또는 배설물 이식을 포함할 수 있다.

배설물 박테리아요법의 공정은 건강한 공여자, 또는 하나 이상의 목적으로 하는 특징을 갖는 공여자의 배설물 샘플을 환자의 위장관 내로 도입해서 건강한 또는 바람직한 장 미생물상을 재정주시키는 단계를 포함할 수 있다. 특정 예에서, 배설물 샘플의 도입 전에, 환자의 장내미생물상은 일단 환자에게 도입되면 건강한 또는 바람직한 장 미생물상이 위장관을 용이하게 정주할 수 있도록 항생제를 이용하여 파괴될 수 있다.

인간 배설물 물질은 선택적으로 미생물상 복원 요법에서 그것의 사용 전에 여과된다.

본 개시내용의 일부 실시형태에서, 조성물은 사전선별된 공여자로부터 표준화된 배설물 미생물 제제이다. 공여자는 혈청과 인간 대변 둘 다에서 흔한 감염성 질환에 대해 선별된다. 이는 실험실 검사뿐만 아니라 공여자의 의학적 이력의 검토를 포함한다. 일단 공여자가 자격을 얻으면, 그/그녀는 선택된 간격으로 완전한 재선별을 겪을 필요가 있을 것이다. 이는 대략 3개월마다의 하나의 예시적 간격으로 각각 1 내지 3개월의 기간을 포함할 수 있다. 품질 또는 정상 배설물 물질을 수집하기 위한 시스템의 일부 방법에서, 완전한 재선별 사이에, 공여자는 그들의 건강 상태가 변한다면 즉시 동일한 수집자와 접촉하도록 지시될 것이다. 추가로 이 건강 정보는 설문지 또는 다른 수단을 통해 완전한 선별 사이에 매공여시간에 수집될 수 있다. 그/그녀가 그들의 선별검사를 계속해서 통과하고 건강상태를 충족시키는 한 공여자는 계속해서 자격이 있는 공여자가 될 수 있다.

수집된 인간 대변은 본 명세서에 개시된 바와 같이 처리될 수 있고, 이어서 냉동 및 격리될 수 있다. 수집 전과 수집 후 의학적 선별(예를 들어, 건강 상태에 따른 인간 대변 및 혈액검사)이 완료될 때, 생성물은 격리로부터 해제될 수 있다. 이는 선별 사이에 수집된 샘플의 품질을 보장한다. 생성물은 해동되고 온도 제어 용기 내에서 시설에 수송되거나 또는 대안적으로 시설에서 냉동 및 해동되도록 수송될 수 있다.

본 조성물은 재발 CDI를 갖는 환자에 특히 적합하다. 재발 CDI는 원발성 에피소드 후에 최소 적어도 하나의 재발 에피소드를 갖는 환자로서 정의되며, 그들의 CDI를 치료하기 위해 적어도 2회 과정의 경구 항생제가 완료될 것이다. 조성물은 또한 CDI의 원발성 에피소드의 치료에 적합하다.

본 MRT에서의 치료의 일 방법에서, 환자는 요법의 마지막에 적어도 7일의 반코마이신 다음에 24 내지 48시간의 세척 기간을 포함하는, 경구 항생제의 10 내지 14일 과정을 완료할 수 있다. 이어서 MRT 조성물은 관장을 통해 도입될 수 있다. 치료는 첫 번째 관장의 투여 후 60일에 CDI 증상이 해결된다면 성공적인 것으로 고려될 수 있다. 일부 환자에서, 증상이 60일의 기간 내에 되돌아온다면, MRT 조성물을 이용하는 두 번째 관장이 투여될 수 있고, 성공적인 치료는 두 번째 관장 후 60일 이내에 증상의 비재발일 수 있다.

인간 배설물 물질은 공여자 간의 자연적 변수에 의하며, 심지어 동일 공여자에서 매일 변한다. 추가로, 인간 배설물 물질의 개개 샘플은 임의의 시간에 존재하는 1000종보다 많은 상이한 미생물을 가져서 샘플 내 전체 배설물 미생물군집을 시험하고 설명하는 것을 실현할 수 없게 하며, 심지어 CDI와 같은 주어진 질환에 대한 미생물의 개개 종의 효과를 결정하는 것을 훨씬 덜 실현가능하게 한다. 그러나, 본 개시내용에 의해, 배설물 물질의 표준화된 또는 정상 샘플은 안전성 및 생존력을 보장하는 MRT 조성물 또는 MRT 제품으로 동정되고 가공될 수 있다는 것이 발견되었다. 가변적 원재료에 의해, 본 조성물은 공여자 선별 방법, 배설물 시험 방법, 배설물 가공 방법, 가공된 물질 처리, 저장 및 보존 방법, 및 인간 배설물로부터의 일관되고, 재생가능하며, 품질-제어된 조성물이 GI관 내에서 미생물 불균형에 의해 영향받는 다양한 병태 및 질환 상태를 치료하기 위한 치료적 생성물로서 전달되는 시험방법을 이용하여 제조된다.

본 조성물은 정상 인간 대변 샘플로서 특성규명된 것에 의해 시작할 수 있다. 정상 인간 대변 샘플을 정하기 위해, 환자는 설문지 또는 다른 특징을 입증 또는 확인하기 위한 혈액 및/또는 인간 대변 시험과 결합된 다른 건강 이력 수단을 통해 선별될 수 있다. 추가로, 인간 대변 샘플이 정상이고 가공 및 처리가 생성 조성물 내 미생물의 생존력을 유지하는 방법으로 완료된 것을 확인하기 위해 시험한 얻어진 생성물을 이용하는 제어된 방식으로 인간 대변 샘플은 처리 및 가공될 수 있다. 생존력에 추가적으로, 존재하는 살아있는 미생물의 다양성, 건강한 또는 정상 대변의 다른 측정을 확인하기 위한 선택 시험이 수행될 수 있다. 이런 방법으로, 공여자 대 공여자 변이 및 공여자 내의 매일의 변이가 이해될 수 있고, 정상 인간 대변 샘플에 대한 기준으로 이용될 수 있다. 추가로, 설계 및 실행된 바와 같은 가공 및 처리 기법의 유효성이 확인될 수 있다. 정상 인간 대변을 수집하는 것과 유효한 가공 및 처리 기법을 이용하는 것의 조합은 표준화된 조성물 또는 생성물을 야기한다. 일단 표준화된 조성물이 만들어지면, 이는 성공적인 치료를 보장하기 위해 생성물의 생존력을 유지하는 방법으로 생성으로부터 투여까지 저장 및 처리되어야 한다. 환자에 대해 투여를 통한 생성 시간으로부터 표준화된 생성물의 생존력을 유지하는 유효한 과정은 성공적인 치료에 중요하다. 샘플의 가공, 즉, 본 개시내용의 의약을 생산하기 위한 이러한 추출물의 캡슐화 동안, 생산된 의약은 이후의 가공, 처리 및 사용에 대해 적절하게 추적, 저장되고 쌓이는 것을 보장하기 위해 샘플을 추적하는 것이 일반적으로 바람직할 수 있다는 것이 인식될 것이다. 이러한 추적을 용이하게 하기 위해, 적합한 태그를 사용하여 샘플, 추출물 및 의약을 동정하고, 이들이 서로 그리고 치료될 환자와 관련되게 하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 공여자 샘플의 RFID 태그 또는 DNA 분석의 사용에 의해 달성될 수 있다. 당업자는 개시내용의 의약을 추적하는데 적합한 다른 태그, 예를 들어 바코드가 친숙할 것이다.

인간 대변 샘플이 정상인지 또는 정상으로 고려되는 범위 내인지의 여부를 결정하기 위해 인간 대변 샘플을 특성규명함에 있어서, 건강한 이력 데이터, 혈청 및/또는 혈액 분석 및 인간 대변 분석이 이용될 수 있다. 추가적으로, 인간 대변 샘플 내의 생존력 및 다양성을 확인하기 위한 살아있는 선택적 미생물 및 미생물군의 존재를 결정하기 위해 선택 배지 상에서 배양될 수 있는 생성물을 생성하기 위해 일정한 상황의 가공 파라미터가 이용될 수 있다. 가공 파라미터는 또한 특정 미생물 및/또는 미생물 군의 부재를 결정하기 위해 선택 배지 상에서 배양될 수 있는 생성물을 생성하기 위해 이용될 수 있다. 가공 프로토콜의 이 부분은 MRT 제품에서 사용을 위한 대변 샘플의 안정성을 확인하기 위해 사용될 수 있다.

표준화되고 실행 가능한 MRT 제품에 대한 인간 대변 샘플의 처리 및 가공은 일관되고 증명된 수집 및 처리 기법, 여과 공정, 제어된 균질화 및 선택 액체 및 이들 액체 양의 첨가를 포함할 수 있다. 추가로, 이 제어되고 증명된 처리 및 가공에 의해 표준화된 조성물 또는 제품인 생성 조성물은 살아있는 선택 미생물 및 미생물군의 존재를 결정하기 위해 선택 배지 상에서 배양되어 제품 내 생존력 및 미생물 다양성을 확인할 수 있다.

환자에 대한 투여시간을 통해 표준화된 제품을 생산하는 시간으로부터, 표준화된 제품은 성공적인 치료를 위해 살아있는 채로 유지되어야 한다. 이는 생존력을 유지하기 위해 냉동 저장 기법 및 동결보호제를 이용하는 것을 포함할 수 있다. 특히, 본 출원인은 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)이 MRT 제품에 대해 효과적인 동결보호제로서 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. 저장시간, 해동기법, 수송 기법 및 해동된 생성물의 처리는 또한 생존력에 영향을 미치고 본 명세서에 정의된 인자이다. 본 명세서에 정의된 기법은 대변 공여가 표준화된 생성물의 생성을 통해 그리고 환자에 대한 투여를 통해 수용되는 시간으로부터 사용될 수 있다. 본 명세서에 제공된 기법은 또한 MRT 제품 내 미생물상의 생존력이 유지되고 확인되게 한다. 선택 배지 상에서 배양시킴으로써 선택 미생물의 존재, 생존력 및 다양성 및 미생물군을 확인하기 위한 프로토콜이 제공된다. 추가로, 본 명세서에 제공된 기법은 환자에 대한 투여 직전에 그리고 그 사이의 매시점에 수집으로부터 가공, 생산, 저장, 해동까지의 공정 동안 임의의 시점에 선택 미생물 및 미생물군의 존재, 생존력 및 다양성을 확인하기 위해 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 동결보호제 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)은 가공 시에 인간 대변 샘플 및 등장 식염수와 혼합될 수 있다. PEG는 약 0.1g/㎖, 내지 약 70g/㎖, 또는 약 2g/㎖ 내지 약 68g/㎖, 또는 약 4g/㎖ 내지 약 65g/㎖, 또는 약 5g/㎖ 내지 약 60g/㎖의 농도로 첨가될 수 있다. 사용된 PEG는 평균 분자량이 약 600 내지 약 20000일 수 있다. 일부 실시형태에서, PEG는 평균 분자량이 약 2000 내지 약 4000, 예를 들어 PEG 3350의 제형으로 제공된 바와 같이 약 3350이다.

정상 인간 대변 샘플을 정하는 배양물의 성장은 다음의 기법을 포함하여 원 인간 대변이 지속적으로 배양될 수 없다는 것을 인식할 수 있다. 가공된 샘플 생성물은 50 그램(g) 인간 대변 샘플을 이용하여 만들어지고, 멸균 혼합/필터백 내에서 약 2 내지 약 4 ㎖의 PEG/식염수 혼합물 대 1g의 인간 대변의 비로 일정한 조건 하에 혼합되어 박테리아 현탁액을 생성한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 현탁액은 배양 전 표준 기법에 따라 여과된다. 박테리아 현탁액의 플레이팅 및 인큐베이션은 본 명세서에서 이하에 기재하는 바와 같은 성장 배지 상에서 행해지며, 산업 표준 혐기성 배양 방법에 따라 행해졌다. 얻어진 집락 형성 단위(CFU)를 계수화하고, 이들 프로토콜을 이용하여 일관된 결과를 달성하였다.

2개의 배양 배지를 사용하여 박테리아 현탁액을 배양한다. 첫 번째는 통상적으로 "CDC 혐기성생물 5% 양 혈액 한천 플레이트로서 언급되는 질병 관리 센터(CDC) 플레이트이다. 이 플레이트는 일반적인 혐기성 미생물 플레이트인데, 까다롭고 느리게 성장하는 절대적 혐기성 박테리아를 단리 및 배양시킨다. 두 번째는 박테리오데스 바일 에스쿨린 한천(BBE) 플레이트인데, 박테리오데스에 대한 특이적 지표종 배지이다. 배지 유형 둘 다는 통상적으로, 예를 들어 벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니 및 피셔 사이언티픽(Fisher Scientific)과 같은 실험실 공급업자를 통한 구입용으로 상업적으로 입수가능하다.

선택 배지 상에서 배양시킴으로써, 출원인은 인간 대변 내에 존재하는 미생물의 다양성, 생성된 생성물 및 투여 중인 생성물의 측정을 제공한다. 상기 개시된 기법은 임의의 단계에서 인간 대변 샘플 내 미생물의 다양성 측정을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 특히, CDC 플레이트는 MRT 물질 내에 존재할 수 있는 미생물의 5 내지 7종의 상이한 패밀리를 성장시키도록 설계된다. 하나의 비제한적 예에서, 박테리아 현탁액과 함께 배양한 CDC 플레이트는 MRT 요법을 위해 가공 및/또는 사용될 박테리아 현탁액에 대해 플레이트 상에서 성장하는 미생물의 적어도 3종의 동정가능한 속을 가져야 한다. 추가로, BBE 플레이트의 사용은 MRT 제품에서 미생물 다양성의 추가적인 측정을 제공할 수 있다. BBE 플레이트는 미생물의 박테리오데스속 내의 다양한 종을 성장시킨다. BBE 플레이트 상의 충분한 CFU는 MRT 제품 내에 존재하는 속 내의 다양성을 나타낸다. 특정 실시형태에서, CDC 플레이트 또는 BBE 플레이트는 단독으로 다양성의 측정으로서 사용될 수 있다. 다른 실시형태에서, CDC 플레이트와 BBE 플레이트는 둘 다 미생물 속 수준에서뿐만 아니라 특정 미생물 속 내의 종 수준에서 다양성의 향상된 측정을 제공하기 위해 함께 사용될 수 있다.

도 1은 예시적 MRT 생산 공정의 일부를 도시하는 흐름도이다. 더 구체적으로는, 도 1은 공여자 배설물 샘플을 수집하고 검사하기 위한 공정을 개략적으로 도시한다. 수집/검사 공정에서 제1 단계로서, 잠재적 대변 공여자가 선별된다. 선별/사전선별은 본 명세서에서 더욱 상세하게 기재된다. 일단 공여자가 선별을 통과하면, 단계 2는 본 명세서에 정의된 바와 같은 인간 대변 수집 키트를 이용하여 집에서든 수집 시설에서든 공여자의 대변을 수집하는 것을 포함할 수 있다. 키트는 뚜껑이 있는 깨끗한 인간 대변 수집 용기, 큰 폐쇄가능한/밀봉가능한 백, 공여물 형태 및 인간 대변 수집 지침 시트를 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 수집으로부터 가공까지의 시간을 추적하기 위해 공여자 신원 및 수송 방법과 함께 수집 시간 및 일자가 기록될 수 있다. 비제한적 예로서, 수집 용기는 샘플이 노출되는 최소 및 최대 온도의 지표를 포함할 수 있다. 다른 비제한적 예로서, 약 4℃ 미만의 온도 및 약 실온(약 22 내지 29℃) 초과의 온도에서 색이 변하는 하나 이상의 온도 감지 스티커가 용기에 고정될 수 있다.

단계 3은 샘플을 가공 시설에 수송하는 단계를 수반할 수 있다. 샘플이 가공 시설에서 수집된다면, 샘플 수송이 필요하지 않다는 것이 인식될 수 있다. 일부 예에서, 샘플 관리의 연속성을 더 명확하게 확립하기 위해 가공 시설에서 샘플을 수집하는 것이 바람직할 수 있다. 임의의 개체에 대한 첫 번째 대변 공여물의 수용에 의해, 각각의 공여자에 대한 프로파일이 확립될 것이다. 후속 대변 샘플에 공여한 공여자의 신원을 매칭하고 확인하기 위해 이용되는 인간 대변 검사가 실시될 수 있다. 사전 수집된 샘플에 기반하여, 공여자에 대한 인간 대변 프로파일이 생성되고, 반복된 공여를 거쳐서 유지 또는 향상될 수 있다. 임의의 새로운 샘플은 그것이 동일한 공여자임을 확인하기 위해 이 프로파일과 비교될 것이다. 인간 대변 내 박테리오데스 종의 대표에 기반한 공여자 신원을 확인하기 위해 분화가 이루어질 수 있다. 비제한적 예에서, 프로파일을 생성하기 위해 사용되는 대변 샘플의 기본 세트는 가공 시설에서 수집되어 프로파일 샘플에서 공여자 신원을 보장한다. 다른 비제한적 예에서, 프로파일을 생성하기 위해 사용되는 대변 샘플의 기본 세트는 상황 또는 위치에 적절한 공여자 신원 보장 프로토콜을 이용하여 가공 시설 이외의 위치에서 수집될 수 있다.

상기 방법의 단계 4는 공여물 "격리"를 라벨링하는 단계 및 가공 전 24시간 이하 동안 실온에서 또는 실온 미만에서 격리로 공여물을 보유하는 단계를 포함할 수 있다. 공여는 온도 지시기가 활성화되거나 또는 공여와 수용 사이의 시간이 24시간을 초과하지 않는 상황에서 거부될 수 있다. 추가로, 적절하다면, 인간 대변 검사 결과는 공여자 프로파일을 매칭하여야 한다. 인간 대변 검사가 공여자 프로파일과 매칭되지 않는다면, 해당 일자 동안 수집된 공여물은 폐기될 것이고, 공여자는 자격이 박탈될 것이다.

개시내용의 일 방법에서, 인간 대변 샘플은 수집의 약 24시간 이내에 가공된다. 다른 적용 방법에서, 수집 시간은 가공 시설에서 대변 샘플의 도착시간에 기록된다. 단계 6은 대변 공여를 검사하는 단계를 포함할 수 있다. 시각검사는 가공 시설에서 대변 샘플의 도착 시 완료될 수 있다. 결국 인간 대변 샘플은 흐물흐물하고, 형태가 없으며, 충분한 중량을 갖지 않거나(예를 들어, 약 50g 미만) 또는 불량한 샘플 품질을 표시하는 증거 또는 공여자 건강에 관한 문제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다른 이유로, 샘플은 거부되고, "검사 - 거부됨"으로 라벨링될 수 있고, 공여물은 폐기된다. 추가로, 인간 대변 수집 형태에 대한 질문에 대한 답변은 훈련받은 개인에 의해 검토될 수 있다. 수집 형태에서 특정 답변은 앰플 거부를 필요로 할 수 있다. 샘플이 허용된다면, 이는 "검사 - 허용됨"으로 라벨이 붙을 수 있고 제조 공정으로 이동될 수 있다.

공여자 선별, 인간 대변 샘플의 획득 및 대변 샘플의 MRT 제품으로의 가공의 다른 예시적 방법은 도 2에 도시된 흐름도에 도시된다. 단계 1은 잠재적 공여자를 모으는 단계를 포함할 수 있다. 단계 2는 초기 공여자 건강 이력 설문지(IDHHQ)를 완료한 잠재적 공여자를 갖는 단계를 포함할 수 있다. 설문지는 잠재적 혈액 공여자의 선별을 위해 적십자에서 사용되는 것과 유사할 수 있다(원한다면, 잠재적으로 추가적인 선별 질문이 있음). "실패" 결과는 잠재적 공여자가 거부되게 하거나 공여자 풀(pool)로부터 제거되게 한다. 예를 들어, 공여자는 잠재적 공여자가 적십자 선별에 실패하게 하는 것과 유사한 조건 하에서 "실패" 결과를 수용할 것이다. "통과" 결과는 공여자가 추가 시험을 받게 한다. 단계 4는, 공여자가 실패한다면 공여자가 풀로부터 제거되는 추가 시험 및 검토를 수반할 수 있다. 공여자는 본 명세서에 열거된 바와 같은 통상적인 감염성 질환 및 기타 병태에 대해 정기적으로 선별된다. 훈련받은 개인에 의한 공여자의 의학적 이력의 검토 및 반복 선별 시험은, 예컨대 대략 15 내지 90일마다 이지만, 이것으로 제한되지 않는 정기적 간격으로 수행될 것이다. 선별은 이하의 표 1에 열거하는 구성성분을 포함할 수 있다.

이들은 단지 예이다. 다른 시험이 또한 이용될 수 있다.

단계 5는 공여자를 통과한 공여자 풀 내로 등록시키는 단계를 수반할 수 있고, 단계 6은 공여자에게 대변 수집 키트를 공급하는 단계를 수반할 수 있다. 단계 7은 등록된 공여자로부터 대변 샘플의 주기적 수집 스케줄을 시작하는 단계를 수반할 수 있고, 단계 8은 수집된 대변 샘플로부터 약물 제품을 제조하는 단계를 수반할 수 있다. 단계 9는 약물 제품을 격리시키는 단계를 수반할 수 있고, 단계 10은 45일에 공여자 대변 샘플을 재선별하는 단계를 수반할 수 있다. 샘플이 선별에 실패한다면, 과거 45일에 걸쳐 해당 공여자로부터 생산된 모든 약물 제품은 폐기된다. 샘플이 선별을 통과한다면, 약물 제품은 격리가 해제된다(단계 11).

다른 예시적 방법에서, 인간 대변 샘플은 칭량되고, 45 내지 75g의 샘플이 멸균 필터백 내로 옮겨진다. 식염수와 동결보호제(예를 들어, 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 3350)의 혼합물은 희석제로서 사용되며, 따라서 인간 대변 샘플에 첨가될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "식염수/PEG 혼합물" 및 "희석제"는 상호호환 가능하다. 희석제의 PEG 농도는 대략 약 30 내지 90g/리터일 수 있다. 희석제의 PEG 농도는 또한 대략 약 25 내지 75g/리터일 수 있다. 일 예에서, 식염수/PEG 혼합물 대 대변 샘플의 비는 2:1, 또는 2㎖ 식염수/PEG 혼합물 대 1그램 인간 대변이다. 비제한적 예로서, 대략 100㎖의 식염수/PEG 혼합물이 50g의 인간 대변에 대해 사용될 수 있다. 식염수/PEG가 희석제(및/또는 동결보호제)로서 사용에 적합할 수 있지만, 이는 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 다른 동결보호제가 또한 이용될 수 있다. 예를 들어, 덱스트로스, 베타인, 글라이신, 수크로스, 폴리비닐 알코올, 플루로닉(Pluronic) F-127, 만니톨, 트윈 80, 에틸렌 글라이콜, 1,3-프로판다이올, 하이드록시프로필 셀룰로스, 글라이세롤, PEG/글라이세롤 혼합물, 프로필렌 글라이콜 또는 이들의 조합물은 동결보호제로서 사용될 수 있다. 이들 물질은 단독으로 또는 식염수와 같은 용매와 조합하여 사용될 수 있다.

일단 희석제가 인간 대변 샘플을 백에 첨가되면, 백은 밀봉된다. 패들 믹서를 이용하여, 대변 샘플은 희석제와 혼합된다. 혼합된 대변 샘플과 희석제의 생성물은 박테리아 제제로서 지칭된다.

박테리아 제제는 표준 기법에 따라 여과될 수 있고, 여과액은 혼합백으로부터 제거되고 멸균 파우치 또는 백에 옮겨질 수 있다. 일부 실시형태에서, 박테리아 제제는 여과되지 않는다.

다른 실시형태에서, 박테리아 제제(여과 또는 비여과)를 함유하는 각각의 백은 1용량의 MRT 제품의 등가물이며, 1용량의 MRT로서 처리된다. 다른 실시형태에서, 백은 적절한 프로토콜에 따라 저장될 수 있고, 더 이후의 날짜에 더 소량으로 분취될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 해당 백은 적절한 프로토콜에 따라 저장될 수 있고, 1회 이상의 용량을 만들도록 조합된다. 추가적으로, 박테리아 제제의 하나 이상의 백은 품질관리(QC)를 위해 보유될 수 있다.

하나의 비제한적 예에서, 백은 제품번호가 라벨링되고, 냉동될 수 있다. 일단 이것이 일어나면, 백은 MRT 제품의 용량을 고려할 수 있다. 제품번호는 공여자 ID 및 제조일자(가공일자)에 대한 언급을 포함할 수 있다. MRT 제품은 약 -20℃ 내지 약 -80℃ 또는 더 저온에서 냉동될 수 있다. 이어서, MRT 제품은 이하에 기재하는 바와 같이 QC 검사 및 추가적인 검사로부터의 결과 평가까지 격리될 수 있다.

다른 비제한적 예에서, 백은 제품번호가 라벨링되고, 냉동될 수 있다. 제품번호는 공여자 ID 및 제조일자(가공일자)에 대한 언급을 포함할 수 있다. 이들 라벨링된 백은 약 -20℃ 내지 약 -80℃ 또는 더 저온(예를 들어, 약 -192℃만큼의 저온이 원한다면 액체 질소 하에 냉동에 의해 수행될 수 있음)에서 냉동될 수 있다. 이어서, 백의 내용물은 이하에 기재하는 바와 같이 QC 및 추가적인 검사로부터의 결과 평가까지 격리될 수 있다.

제조된 MRT 제품 품질(가공에 따른 미생물의 생존력을 포함)의 하나의 예시적 검사에서, 단일의 자격을 갖춘 공여자로부터 하루하루 수집한 배설물 공여 또는 대변 샘플이 가공될 수 있다. 일부 실시형태에서, 공여자 간의 또는 개개 공여자의 샘플 간의 샘플의 풀링은 행해지지 않을 것이다. 다른 실시형태에서, 개개 공여자로부터의 샘플 제제는 풀링되거나 또는 조합된다. 다른 실시형태에서, 한명 초과의 공여자로부터의 샘플 제제가 조합된다.

가공된 인간 대변 또는 MRT 제품의 샘플은 표준 산업 절차에 따라 희석되고, 플레이팅되고, 계수화될 수 있다. 혐기성 CFU는 CDC 플레이트 상에서 계수화될 수 있고, 박테리오데스 CFU는 BBE 플레이트 상에서 계수화될 수 있다. 플레이트 계수는 특정 공여자 및 다른 확립된 적절한 표준에 대한 사전 공여불로부터의 시험 결과를 포함할 수 있지만, 이것으로 제한되지 않는 품질관리 표준에 대해 확인될 것이다. 계수가 허용가능한 범위 내라면, MRT 제품은 허용가능한 것으로 고려될 것이다. 계수가 허용가능한 범위 내에 있지 않다면, 동일한 인간 대변 샘플로부터 제조된 MRT 제품의 모든 백은 냉동고로부터 제거되고, 파괴될 것이다. 최종의 허용가능한 계수 범위는 CDC 플레이트 상의 10^-6의 연속 희석 수준에서 약 30 내지 약 300 CFU 그리고 샘플 제제 또는 MRT 제품의 냉동 전에 BBE 플레이트 상의 10^-5의 연속 희석 수준에서 약 30 내지 약 300 CFU일 수 있다.

격리 해제로부터 소비자에 대한 수송까지 약물 물질(MRT 조성물)을 가공하는 예시적 방법은 도 3a 및 도 3b에 나타낸다. 단계 1은 약물 물질을 격리로부터 해제시키는 단계를 포함할 수 있고, 단계 2는 수집 용기를 레벨 II 생물안전작업대로 이동시키는 단계를 포함할 수 있다. 단계 3은 교정한 등급 상에서 생물안전작업대 내 백 홀더 상의 필터백을 포장한 다음, 단계 4에서 약 50g ± 10g의 약물 물질을 필터백 내로 칭량하는 단계를 포함할 수 있다. 단계 5는 필터백 내 약물 물질에 3㎖/g의 사전혼합된 PEG/식염수 용액을 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 사전혼합된 PEG/식염수 용액은 0.9% 염화나트륨 관류(irrigation) USP에서 30g/ℓ의 농도로 PEG 분말을 재구성함으로써 단계 A에서 제조될 수 있다. 단계 6은 장입된 필터백을 밀폐백 내로 밀봉시키는 단계 및 밀폐백을 밀봉시키는 단계를 포함할 수 있다. 단계 7은 밀봉된 백 조립체를 생물안전작업대로부터 제거하는 단계 및 백을 패들믹서 내로 넣는 단계를 포함할 수 있다. 단계 8에서, 백은 2분 동안 230 rpm에서 패들 믹스 내에서 혼합되고, 이어서 백이 패들 믹서로부터 제거되고 단계 9에서 백은 생물안전작업대에 복귀될 수 있다. 단계 10에서, 150㎖의 여과된 현탁액은 에틸렌 비닐 아세테이트(EVA) 관장 백 내로 피펫팅된 다음 단계 11에서 관장백은 밀봉될 수 있다. 여과된 현탁액으로부터의 샘플은 제품 품질검사를 위해 따로 떼어 둘 수 있다. 단계 B1에서, CDC 및 BBE 플레이트가 바람직할 수 있다. 단계 B2는 남아있는 여과된 현탁액으로부터 단계 희석물을 생성하는 단계를 포함할 수 있다. 이 단계를 배취(batch) 당 1회 수행된다. 단계 B3에서, CDC 및 BBE 플레이트는 단계 희석에 의해 접종되고, 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션시킨다. 단계 B4에서, 플레이트 당 집락 형성 단위(CFU)가 계수화된다.

예시적인 방법은 도 3b에서 계속된다. 단계 13에서, EVA 관장백 내에 밀봉된 약물 제품은 0℃에서 60분 동안 사전 냉각될 수 있다. 단계 14에서, EVA 백은 단계 B 및 공여자 검사로부터의 결과를 받을 때까지 -80℃ 냉동고에 넣어둘 수 있다. 약물 제품이 시험에 실패한다면, 약물 제품의 모든 영향받은 용량이 폐기된다. 약물 제품이 시험을 통과한다면, 단계 15에서 EVA 백은 격리로부터 -80℃ 냉동고의 장기간 저장 영역으로 이동될 수 있다. 약물 제품은 -80℃ 냉동고에 저장되지만, 소비자로부터의 주문은 받을 수 있다. 단계 16에서, EVA 백은 냉동고로부터 제거되고 0℃로 60분 동안 해동될 수 있다. 단계 17에서, EVA 백은 누출에 대해 검사될 수 있다. 백이 검사에 실패하면, 제품은 폐기되고, 백이 검사를 통과하면, EVA 백은 단계 18에서 포장되고 소비자에게 수송된다.

도 4는 흐름도에서 전달 방법의 일 예를 요약한다. MRT 제품의 소비자 또는 장소 주문은 방출될 제품을 -80℃에서 장기간 저장으로부터 풀리는 것을 촉발한다. 장소는 의사의 사무실, 클리닉, 병원 또는 MRT 제품이 사용될 다른 위치일 수 있다. 제품은 해동되고 라벨링된다. 라벨링 공정의 품질관리(QC)가 수행되며, 라벨링 공정의 실패는 제품이 재라벨링되어 다시 품질검사를 통과하게 한다. QC 통과는 포장 단계로 제품을 이동시키는데, 여기서 제품은 수송 박스에 포장된 다음 장소로 수송된다.

도 5는 흐름도에서 전달 방법의 다른 예를 요약한다. 제품을 주문하고 수취한 후 검사한다. 제품의 검사 통과 실패는 제품이 폐기되게 하며, 가공 센터에 보고가 보내지고, 제품의 재주문이 들어가게 한다. 제품이 검사를 통과하면, 가공 센터에 보고가 보내지고, 제품은 치료를 위해 환자에 대해 취해지거나 또는 치료를 위해 환자에 대해 취해지기 전 고정 위치에서 저장된다. 두 경우 중 하나에, 제품이 환자에게 제공된 후에 1차 포장이 폐기된다.

예시적 포장 시스템(10)을 도 6에 나타낸다. 포장 시스템(10)은 샘플백(12)을 포함할 수 있다. 샘플백(12)은 본 명세서에 기재된 바와 같은 MRT 조성물, 보호용 내부 박스(14), 관 조립체(16), 관 조립체(16)에 대한 포장(18)(예를 들어, TYVEK(등록상표)), 저장 박스(20)(샘플백(12), 보호용 내부 박스(14), 포장(18) 내의 관 조립체(16), 및 설명서를 보관할 것임)을 포함하기 위해 사용될 수 있다. 저장 박스(20)는 얼음팩과 함께 절연 수송 박스(22)(예를 들어, 스티로폼을 포함할 수 있음) 내에 놓일 수 있고, 수송 박스(22)는 치료 시설에 수송될 수 있다. 수송 박스(22)는 폐쇄되고 포장 시스템(10)과 외부 대기 사이에 공기 교환을 제한하기 위해 H-패턴으로 테이핑될 수 있다.

이어서, 포장 시스템(10)에 대해 장기간에 걸쳐 온도 범위를 변화시켰다. 시험 조건은 해동욕으로부터(예를 들어, 0 ± 0.5℃에서) 샘플백(12)의 제거, "차가운" 환경에 (예를 들어, -20±3℃에서 4시간±30분 동안) 포장 시스템(10)을 위치시키는 것, 제1 시간 기간 동안 실온에서 (22 ± 3℃에서 8시간±30분 동안) 포장 시스템(10)을 보유하는 것, "뜨거운" 환경에 (50±3℃에서 4시간±30분) 포장 시스템(10)을 위치시키는 것, 제2 기간 동안 실온에서 (22±3℃에서 8시간±30분 동안) 포장 시스템(10)을 보유하는 것, "따뜻한" 환경에 (35±3℃에서 4시간±30분 동안) 포장 시스템(10)을 위치시키는 것, 및 제3 기간 동안 실온에서 (22±3℃에서 8시간±30분) 포장 시스템(10)을 보유하는 것을 포함하였다. 이들 조건 하에서, 샘플백(12)의 온도는 전체 기간(대략 36시간) 동안 20℃ 미만으로 유지하였다. 이들 시험 결과에 따르면, 포장 시스템(10)은 본 명세서에 개시된 MRT 조성물의 전달을 위해 기대된 기후 극단(extreme)으로부터의 샘플백(12)의 적합한 보호를 제공한다.

도 7은 샘플백(12)을 도시한다. 백(12)은 아세트산 에틸 비닐로부터 형성될 수 있다. 다른 물질이 상정된다. 예를 들어, 백(12)은 폴리에틸렌 테레프탈레이트 폴리에스터 막, 기체에 대해 실질적으로 불침투성인 물질, 다른 중합체 등을 포함할 수 있다. 백(12)은 정맥내 백과 비슷할 수 있으며, 선택적으로 백(12)은 백(12)이 스탠드 상에 걸리도록(예를 들어, 내시경 위에 위치되고/걸리도록) 부착물을 포함할 수 있다.

백(12)은 약 25 내지 250㎖(예를 들어, 50㎖) 범위의 수용력을 가질 수 있다. 백(12)은 MRT 조성물을 백(12) 내로 수송하기 위한 충전 포트(24)를 가질 수 있다. 충전 포트(24)는 MRT 조성물의 수송을 용이하게 하기 위한 루어(luer) 또는 다른 유형의 어댑터를 포함할 수 있다. MRT 조성물로 백(12)을 충전시킨 후에, 충전 포트(24)는 밀봉되어 백(12) 내의 MRT 조성물을 효과적으로 밀봉시킬 수 있다. 백(12)은 또한 스파이크 포트(26)를 포함할 수 있다. 스파이크 포트(26)는 사용 시 백(12)으로부터 MRT 조성물을 추출하기 위해 이용될 수 있다.

도 8은 관 조립체(16)를 도시한다. 관 조립체(16)는 백(12) 상의 스파이크 포트(26)를 연결하도록 설계된 스파이크 부재(28)를 포함할 수 있다. 관 조립체(16)는 또한 단계 어댑터(32)를 지니는 관체(tube body)(30)를 포함할 수 있다. 단계 어댑터(32)는 관(16)이 전달관(34)과 결합되게 할 수 있다.

관 조립체(16)는 다수의 추가 특징을 포함할 수 있다. 예를 들어, 클램프(36)는 전달관(34)에 결합될 수 있다. 추가로, 시각적 마커(38)는 또한 전달관(34)을 따라 배치될 수 있다. 스파이크 커버(40)는 스파이크 부재(28)를 따라 배치될 수 있다.

본 명세서에 개시된 MRT 조성물은 다양한 온도 조건에서 장기간에 걸쳐 안정하게 남아있도록 설계된다. 예를 들어, 대략 20 내지 25℃의 온도에서 저장될 때, MRT 조성물은 24시간 이상 동안, 또는 48시간 이상 동안, 96시간 이상 동안 또는 192시간 이상 동안 (예를 들어, 미생물의 살아있는 집단에 의해) 안정하게 유지될 수 있다. 대략 4℃의 온도에서 저장될 때, MRT 조성물은 24시간 이상 동안, 또는 48시간 이상 동안, 96시간 이상 동안 또는 192시간 이상 동안, 또는 240시간 이상 동안 (예를 들어, 미생물의 살아있는 집단에 의해) 안정하게 남아있을 수 있다. 다시 말해서, MRT 조성물의 "해동된 저장수명"은 대략 24시간 이상, 약 48시간 이상, 약 96시간 이상, 약 192시간 이상, 또는 약 240시간 이상일 수 있다.

대략 -20℃의 온도에서 저장될 때, MRT 조성물은 약 60 내지 90일 이상 동안, 약 4 내지 6개월 이상 동안, 또는 약 6 내지 9개월 이상 동안 안정하게 (예를 들어, 미생물의 살아있는 집단에 의해) 남을 수 있다. 대략 -80℃의 온도에서 저장될 때, MRT 조성물은 약 60 내지 90일 이상 동안, 약 4 내지 6개월 이상 동안, 또는 약 6 내지 9개월 이상 동안 또는 약 12개월 이상 동안 안정하게 (예를 들어, 미생물의 살아있는 집단에 의해) 남을 수 있다. 다시 말해서, MRT 조성물의 "냉동된 저장수명"은 대략 60 내지 90일 이상 동안, 약 4 내지 6개월 이상 동안, 또는 약 6 내지 9개월 이상 동안 또는 약 12개월 이상일 수 있다.

본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 문, 적어도 2가지의 문, 적어도 3가지의 문, 적어도 4가지의 문, 적어도 5가지의 문, 적어도 6가지의 문, 적어도 7가지의 문, 적어도 8가지의 문, 적어도 9가지의 문 또는 적어도 10가지의 문의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 강, 적어도 2가지의 강, 적어도 3가지의 강, 적어도 4가지의 강, 적어도 5가지의 강, 적어도 6가지의 강 또는 적어도 7가지의 강의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 목, 적어도 2가지의 목, 적어도 3가지의 목, 적어도 4가지의 목, 적어도 5가지의 목, 적어도 6가지의 목 또는 적어도 7가지의 목의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 과, 적어도 2가지의 과, 적어도 3가지의 과, 적어도 4가지의 과, 적어도 5가지의 과, 적어도 6가지의 과, 적어도 7과의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 5, 적어도 10, 적어도 20 또는 적어도 30가지 상이한 속의 박테리아의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 10, 적어도 50, 적어도 100, 적어도 200, 적어도 300, 또는 적어도 400가지 상이한 종의 박테리아를 포함할 수 있다.

예를 들어, MRT 조성물은 박테리오달레스 및 클로스트리디알레스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 1가지 이상의 목 또는 2가지 이상의 목으로부터의 살아있는 박테리아를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 20 내지 95%, 또는 약 30 내지 85%, 또는 약 40 내지 60%는 박테리오달레스 목으로부터 유래될 수 있다. 이들의 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 10 내지 85%, 또는 약 20 내지 60%, 또는 약 30 내지 40%는 클로스트리디알레스 목으로부터 유래될 수 있다.

추가로 또는 대안적으로, MRT 조성물은 5가지 이상의 과, 또는 6 내지 12가지 과 또는 약 7 내지 10가지의 과로부터의 박테리아를 포함할 수 있다. 이는 박테로이데세애(Bacteroidaceae), 부르크홀데리알데스(Burkholderiales), 클로스트리디아세애(Clostridiaceae), 클로스트리디알레스(Clostridiales), 유박테리아세애(Eubacteriaceae), 퍼미쿠테스(Firmicutes), 래크노스피래세애(Lachnospiraceae), 포르피로모나스세애(Porphyromonadaceae), 프레보텔라세애(Prevotellaceae), 리케넬라세애(Rikenellaceae), 루미노코카세애(Ruminococcaceae) 및 스트렙토코카세애(Streptococcaceae) 과로부터의 박테리아를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 20 내지 84%, 또는 약 30 내지 50%, 또는 약 36 내지 48%는 박테로이데세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 0.5 내지 2% 또는 약 1%는 부르크홀데리알데스 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 1 내지 10%, 또는 약 1 내지 8%, 또는 약 2 내지 7%는 클로스트리디아세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 1 내지 22%, 또는 약 3 내지 22%, 또는 약 1 내지 10%, 또는 약 1 내지 8%, 또는 약 4 내지 7%는 클로스트리디알데스 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 1 내지 10%, 또는 약 1 내지 9%, 또는 약 4 내지 8%는 유박테리아세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 0.5 내지 2% 또는 약 1%는 퍼미쿠테스 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 0.5 내지 23%, 또는 약 1 내지 10%, 또는 약 4 내지 9%는 래크노스피래세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 0.5 내지 8%, 또는 약 1 내지 5%, 또는 약 1 내지 3%는 포르피로모나스세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 0.5 내지 2% 또는 약 1%는 프레보텔라세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 1 내지 30%, 또는 약 1 내지 52%, 또는 약 4 내지 23%는 리케넬라세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 5 내지 30%, 또는 약 8 내지 25%, 또는 약 10 내지 18%는 루미노코카세애 과로부터 유래될 수 있다. 이들 중 일부에서 그리고 다른 실시형태에서, MRT 조성물 내 살아있는 박테리아의 약 0.5-2% 또는 약 1%는 스트렙토코카세애 과로부터 유래될 수 있다.

본 개시내용의 MRT 조성물은 섀넌 다양성 지수(Shannon Diversity Index)가 약 0.4 내지 2.5, 또는 약 1.0 내지 2.0, 또는 약 1.08 내지 1.89, 또는 약 1.25 내지 1.75일 수 있다. 이 수들은 "과" 수준으로 계산된다. 다른 수준(예를 들어, 문, 종 등)에서 투약 계산은 상이한 수를 초래할 것이다(예를 들어, 1 내지 8 등). 따라서, 섀넌 다양성 지수는 문, 종 또는 다른 수준으로 계산될 때 대략 1 내지 8일 수 있다.

본 개시내용의 MRT 조성물은 대상체(예를 들어, 인간, 포유류, 동물 등)의 위장관, 바람직하게는 결장에 그것을 침착시키는데 적합한 방법에 의해 투여될 수 있다. 예시적 투여경로는 대장내시경, 좌약, 관장, 상부 내시경, 상부 밀기법 장내시경에 의한 직장 투여를 포함한다. 추가적으로, 비위관, 비장관 또는 비공장관에 의해 코 또는 입을 통한 기관삽관이 이용될 수 있다. 알약, 정제, 현탁액, 겔, 겔탑, 반고체, 정제, 사셰, 로젠지 또는 캡슐 또는 마이크로캡슐 또는 정제, 사셰, 로젠지 또는 캡슐 또는 마이크로캡슐 또는 장용 제형과 같은 고체 또는 액체, 현탁액, 겔, 겔탑, 반고체, 정제, 사셰, 로젠지 또는 캡슐, 또는 장용 제형으로서 최종 전달을 위한 재제형화에 의한 경구 투여가 마찬가지로 이용될 수 있다. 조성물은 처리 또는 비처리된 배설물 군집, 전체(또는 실질적으로 전체의) 미생물상일 수 있거나, 또는 부분적으로, 실질적으로 또는 완전하게 단리 또는 정제된 배설물 군집은 동결건조, 냉동건조 또는 냉동되거나, 분말로 가공된다.

본 개시내용의 방법에서 치료적 용도를 위해, 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 형태로 편리하게 투여될 수 있다. 적합한 담체는 당업계에 잘 공지되어 있고, 조성물의 목적으로 하는 형태 및 투여방식에 따라 다르다. 예를 들어, 그들은 희석제 또는 부형제, 예컨대 충전제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 표면활성제, 활택제, 윤활제 등을 포함할 수 있다. 전형적으로, 담체는 고체(분말을 포함), 액체 또는 이들의 조합일 수 있다. 각각의 담체는 바람직하게는 조성물 내에서 대상체에게 손상을 주지 않는 다른 성분과 양립가능하게 되는 의미에서 "허용가능한"이다. 담체는 생물학적으로 허용가능하고 비활성일 수 있다(예를 들어, 적절한 부위에 전달될 때까지 조성물이 생물학적 물질의 생존력을 유지하게 한다).

경구 조성물은 비활성 희석제 또는 식용 담체를 포함할 수 있다. 경구 치료 투여 목적을 위해, 활성 화합물은 부형제와 함께 혼입될 수 있고, 정제, 트로키 또는 캡슐, 예를 들어 젤라틴 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 경구 조성물은 또한 본 개시내용의 조성물을 식품과 조합함으로써 제조될 수 있다. 일 실시형태에서, 투여를 위해 사용되는 식품은 아이스크림과 같이 냉각된다. 약제학적으로 양립가능한 결합제 및/또는 애주번트 물질이 조성물의 부분으로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키 등은 임의의 다음의 성분 또는 유사한 특성의 화합물을 함유할 수 있다: 결합제, 예컨대 미정질셀룰로스, 트래거캔스 검 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스, 붕해제, 예컨대 알긴산, 프리모겔 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘 또는 스테로트마그네슘; 활택제, 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린; 또는 향미제, 예컨대 페퍼민트, 살리실산메틸, 오렌지향 또는 다른 적합한 향. 이들은 단지 예시적 목적을 위한 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

활성 화합물은 또한 좌약의 형태로(예를 들어, 코코아 버터 및 다른 글라이세라이드와 같은 전통적인 좌약 베이스에 의해) 또는 직정 전달을 위한 보류 관장의 형태로 제조될 수 있다. 활성 화합물은 이식물을 포함하는 제어 방출 제형과 같이 신체로부터의 빠른 제거에 대해 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 생분해성의, 생체양립가능한 중합체, 예컨대 에틸렌아세트산비닐, 폴리산 무수물, 폴리글라이콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스터 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형은 표준 기법을 이용하여 제조될 수 있다. 물질은 또한, 예를 들어, 알자 코포레이션(Alza Corporation) 및 노바 파마슈티칼스, 인코포레이티드(Nova Pharmaceuticals, Inc.))로부터 상업적으로 얻을 수 있다. 리포솜 현탁액이 또한 약제학적으로 허용가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.

조성물은 캡슐화될 수 있다. 예를 들어, 조성물이 경구로 투여될 때, 제형은 조성물이 결장 앞 위장관 내의 일반적인 조건, 예를 들어, 고산도, 및 위 및/또는 장 내에 존재하는 분해 효소에 노출되지 않도록 제형화된다. 치료적 용도를 위한 조성물의 캡슐화는 당업계에서 일상적이다. 캡슐화는 경질 캡슐을 포함할 수 있는데, 이는 건조, 분말화된 성분 연질 캡슐에 대해 사용될 수 있다. 캡슐은 겔화제, 예컨대 동물성 단백질(예를 들어, 젤라틴), 식물 다당류 또는 카라기난과 같은 유도체 및 전분 및 셀룰로스의 개질된 형태의 수용액으로부터 제조될 수 있다. 다른 성분은 겔화제 용액, 예컨대 가소제(예를 들어, 글라이세린 및 또는 솔비톨), 착색제, 보존제, 붕해제, 윤활제 및 표면 처리에 첨가될 수 있다.

직장 투여에 적합한 제형은 겔, 크림, 로션, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀전, 용해성 고체 물질, 관수 등을 포함한다. 제형은 바람직하게는 좌약 베이스, 예를 들어 코코아 버터를 형성하는 하나 이상의 고체 담체에서 활성 성분을 포함하는 단위 용량 좌약으로서 제공된다. 이러한 제형의 적합한 담체는 페트롤리움 젤리, 라놀린, 폴리에틸렌글라이콜, 알코올 및 이들의 조합물을 포함한다. 대안적으로, 본 개시내용의 빠른 재군집화 배치제를 이용하는 결장 세척은 결장 또는 직장 투여를 위해 제형화될 수 있다.

경구 투여에 적합한 제형은 별개의 단위, 예컨대 정제, 캡슐, 카셰(cachet), 시럽, 엘릭시르, 츄잉검, "막대 사탕" 제형, 마이크로에멀전, 용액, 현탁액, 로젠지 또는 겔 코팅된 앰플(각각은 사전 결정된 양의 활성 화합물을 함유함)로서; 분말 또는 과립으로서; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 또는 유중수 에멀전으로서 제공될 수 있다.

설하 또는 협측 투여와 같은 경점막 방법에 적합한 제형은 활성 화합물을 포함하는 로젠지 패치, 정제 등 및 전형적으로 가향 베이스, 예컨대 당 및 아카시아 또는 트래거캔스 및 비활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글라이세린 또는 수크로서 아카시아 내에 활성 화합물을 포함하는 향정을 포함한다.

개시내용의 제형은 임의의 적합한 방법에 의해, 전형적으로 사전결정된 세균총을 액체 또는 미세하게 분할된 고체 담체 또는 둘 다와 필요한 비율로 혼합한 다음, 필요하다면 얻어진 혼합물을 목적으로 하는 형상으로 형상화하여 균일하게 그리고 친밀하게 제조될 수 있다. 추가로, 사전 결정된 세균총은 저장 수명을 연장시키기 위해 처리될 것이고, 바람직하게는 사전 결정된 세균총의 저장 수명은 냉동 건조를 통해 연장될 것이다.

더 나아가, 정제는 활성 성분 및 하나 이상의 선택적 성분, 예컨대 결합제, 윤활제, 비활성 희석제 또는 표면 활성 분산제를 포함하는 친숙한 혼합물을 압축시키거나, 또는 본 개시내용의 분말화된 활성 성분의 친숙한 혼합물을 성형함으로써 제조될 수 있다. 상기에 구체적으로 언급한 성분에 추가적으로, 본 개시내용의 제형은 문제가 되는 제형 유형에 관한 당업자에게 공지된 다른 작용제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 경구 투여에 적합한 제형은 향미제를 포함할 수 있고, 비강내 투여에 적합한 제형은 향수를 포함할 수 있다.

개시내용의 치료적 조성물은 개개 치료제로서 또는 치료제의 조합으로 약제학적 약물과 함께 사용을 위해 이용가능한 임의의 전통적인 방법에 의해 투여될 수 있다. 투여되는 투약량은 물론 공지된 인자, 예컨대 특정 작용제의 약역학적 특징 및 그의 투여 방식 및 경로; 수용인의 연령, 건강상태 및 체중; 증상의 특성 및 정도; 동시 치료의 종류; 치료 빈도; 목적으로 하는 효과에 따라서 변할 것이다. 활성 성분의 1일 투약량은 약 0.001 내지 1000 밀리그램(㎎)/킬로그램(㎏) 체중일 것으로 예상된다.

제형(투여에 적합한 조성물)은 약 1㎎ 내지 약 500㎎의 활성성분/단위를 함유한다. 이들 약제학적 조성물에서, 활성 성분은 보통 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.5 내지 95중량%의 양으로 존재할 것이다.

연고, 페이스트, 발포제, 흡장, 크림 및 겔은 또한 부형제, 예컨대 전분, 트래거캔스, 셀룰로스 유도체, 실리콘, 벤토나이트, 규산 및 탈크 또는 이들의 혼합물을 함유할 수 있다. 분말 및 스프레이는 또한 부형제, 예컨대 락토스, 탈크, 규산, 수산화알루미늄 및 규산칼슘 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다.

직장 투여에 적합한 제형은 다양한 베이스, 예컨대 유화 베이스 또는 수용성 베이스와 혼합함으로써 좌약으로서 제공될 수 있다.

질 투여에 적합한 제형은 활성 성분에 추가적으로, 당업계에 적절한 것으로 공지된 담체를 함유하여 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포제 또는 스프레이 제형으로서 제공될 수 있다. 적합한 약제학적 담체는 이 분야의 표준 참고 교재인 문헌[Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company]에 기재되어 있다.

본 개시내용과 관련하여 대상체, 특히 동물, 특별하게는 인간에 투여되는 용량은 합리적인 시간에 걸쳐 동물에서 치료적 반응에 영향을 미치기에 충분하여야 한다. 당업자는 투약량이 동물의 병태, 동물의 체중뿐만 아니라 치료 중인 병태를 포함하는 다양한 인자에 의존할 것이라는 것을 인식할 것이다. 적합한 용량은 목적으로 하는 반응에 영향을 미치는 것으로 알려진 대상체에서의 치료적 조성물의 농도를 초래하는 것이다.

용량 크기는 또한 투여 경로, 시간 및 빈도뿐만 아니라 치료 조성물의 투여에 수반될 수 있는 임의의 부작용의 존재, 특성 및 정도, 및 목적으로 하는 생리적 효과에 의해 결정될 것이다.

조합물의 화합물은 (1) 공동 제형에서 화합물의 조합에 의해 동시에 또는 (2) 교번으로, 즉, 화합물을 별개의 약제학적 제형으로 연속해서, 순차적으로, 병행해서 또는 동시에 투여될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 교번 요법에서, 제2 및 선택적으로 제3의 활성 성분을 투여하는 것의 지연은 활성 성분의 조합물의 상승적 치료 효과의 이점을 상실하는 것이 아니어야 한다. 투여 (1) 또는 (2)의 방법에 의한 특정 실시형태에 따르면, 이상적으로는 조합물은 가장 효능있는 결과를 달성하기 위해 투여되어야 한다. 투여 (1) 또는 (2)의 방법에 의한 특정 실시형태에서, 이상적으로는 조합물은 각각의 활성 성분의 최대 혈장 농도를 달성하기 위해 투여되어야 한다.

당업자는 치료에서 사용하는데 필요한 개시내용의 조합물이 치료 중인 병태의 특성 및 환자의 연령 및 병태를 포함하는 다양한 인자에 따라 변할 수 있고, 궁극적으로는 담당 의사 또는 건강관리 실행자의 판단에 의할 것이라는 것이 인식될 것이다. 고려될 인자는 투여 경로 및 제형의 특성, 동물의 체중, 연령 및 일반적 병태 및 치료될 질환의 특성 및 중증도를 포함한다.

샘플 약물 조성물은 저장 박스 내로 포장된 다음, 주문 시 소비자에게 수송을 위해 절연 골판지 상자 내로 포장될 수 있다. 샘플 약물 조성물은 -80℃ 장기간 저장 냉동고로부터 0℃로 해동시킨 후에 수송된다. 액체 현탁액이 수송 동안의 온도에서 변성되는 것으로부터 적절하게 보호되는 것을 보장하기 위해, 포장 시스템에 24시간의 기간에 걸쳐 온도를 변화시킬 수 있다. 이 시험 공정에 대한 설계는 단일 소포 전달을 위한 포장 시스템의 기후적 스트레스에 대한 표준 실행(Standard Practice for Climatic Stressing of Packaging Systems for Single Parcel Delivery)인 ASTM 국제 F2825-10으로부터 적합화되었다. 시험 목표는 제품이 허용가능한 역치 미만의 온도(32℉ 또는 0℃)를 경험하지 않거나 또는 허용가능한 역치(84℉ 또는 29℃)를 초과하지 않는 것을 보장하는 것이다.

제품은 다양한 상이한 의학적 병태를 갖는 환자에게 투여될 수 있고, 이들 병태에 바람직하게 영향을 미칠 수 있다. 바람직하게 영향받을 수 있는 일부 의학적 병태는 심혈관 및/또는 말초혈관 질환, 알레르기, 비만, 저혈당증, 변비, 복강 증후군(예를 들어, 셀리악병), 위장암(예를 들어, 위장암은 위암, 식도암, 결장암 담낭암, 간암, 췌장암, 결장직장암, 항문암 및 위장 기질 종양 중 적어도 하나임), 근육간대경련근육긴장이상, 천장골염, 척추관절증, 척추관절염, 근위성 근긴장 근육병증; 자가면역질환 신장염 증후군, 자폐증, 여행자 설사, 소장 박테리아 과성장, 만성 췌장염, 췌장 부전증, 만성 피로 증후군, 양성 근통성 뇌척수염, 만성 피로 면역기능장애 증후군, 파킨슨병(PD), 근위축성 측삭경화증(ALS), 다발성경화증(MS), 퇴행 신경질환, 대발작 또는 소발작, 근긴장성 이영양증, 만성 전염성 단핵증, 근육통성 뇌척수염, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 급성 또는 만성 알레르기 반응 비만, 식욕 부진, 과민성 장증후군(IBS 또는 대장 경련) 크론병, 과민성 대장 질환(IBD), 대장염, 궤양성 대장염 또는 크론 대장염, 만성 전염성 단핵증, 근육통성 뇌척수염, 급성 또는 만성 두드러기, 낭창, 류마티스 관절염(RA) 또는 소아 특발성 관절염(JIA), 당뇨병 전증 증후군, 섬유근육통(FM), I형 또는 II형 당뇨병, 급성 또는 만성 불면증 및 주의력 결핍/과잉행동장애(ADHD)를 포함한다.

인간의 경우에, 본 개시내용은 비정상 장 미생물상의 존재와 관련된 만성 장애의 치료방법을 포함한다. 이러한 장애는 다음 범주의 해당 병태를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 과민성 장증후군 또는 대장 경련을 포함하는 위장 장애, 변비 우세형 FBD, 통증 우세형 FBD, 상복부 FBD를 포함하는 기능성 장질환(FBD), 비궤양성 소화불량(NUD), 위식도역류병, 크론병을 포함하는 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 불확정 대장염, 교원성 대장염, 미세형 대장염, 만성 클로스트리듐 디피실 감염, 가막성 대장염, 점액성 대장염, 항생제 관련 대장염, 특발성 또는 단순 변비, 게실성 질환, AIDS 장질환, 소장 박테리아 과성장, 만성 소화 장애증, 다발성 대장 폴립증, 대장용종, 만성 특발성 유사 폐색 증후군; 박테리아, 바이러스, 진균 및 원생동물을 포함하는 특이적 병원균에 의한 만성 장 감염; 바이러스 위장염, 노워크 바이러스 위장염, 로타바이러스 위장염, AIDS 관련 위장염을 포함하는 바이러스성 위장 장애; 간 장애, 예컨대 원발성 답즙성 경변증, 원발 경화성 담관염, 지방간 또는 원인불명의 경변증; 류마티스 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 비-류마티스 관절염, 비류마티스 인자 양성 관절염, 강직성 척추염, 라임병, 및 라이터 증후군; 면역 매개 장애, 예컨대 사구체신염, 용혈성 요독증후군, 소아 진성당뇨병, 혼합 한랭글로불린혈증, 다발동맥염, 가족성 지중해열, 유전분증, 피부경화증, 전신 홍반성 낭창, 및 베체트 증후군; 전신성 낭창, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 쇼그렌 증후군, 용혈성 요독성 증후군 또는 피부경화증을 포함하는 자가면역 장애: 신경 증후군, 예컨대 만성 피로 증후군, 편두통, 다발성경화증, 근위축성 측삭경화증, 중증 근무력증, 길랑-바레 증후군, 파킨슨병, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증 및 기타 퇴행성 장애; 만성 우울증, 조현병, 정신병적 장애, 조울증을 포함하는 정신과 질환; 아스퍼거 증후군, 레트 증후군, 주의력 결핍 과잉행동장애(ADHD) 및 주의력 결핍 장애(ADD)를 포함하는, 퇴행성 장애; 퇴행성 장애, 자폐증; 영아 급사 증후군(SIDS), 식욕 부진증; 피부과적 병태, 예컨대 만성 두드러기, 여드름, 포진성 피부염 및 혈관염 장애; 및 심혈관 및/또는 혈관 장애 및 질환.

실시예

본 개시내용은 일부 실시형태를 예시하는 역할을 하지만 임의의 방법으로 본 발명을 제한하지 않는 다음의 실시예를 참고하여 더 명확하게 될 수 있다.

실시예 1: 샘플 특성규명 방법의 확인

정상 인간 대변 샘플의 특정규명을 위한 방법을 확인하기 위한 시험을 완료하였다. 상기 기재한 시험 측정에서 변화 성분을 확인하기 위해 측정 시스템 분석(MSA)을 수행하였다. 이를 위해서, 상이한 연령, 성별 및 체중의 5명의 건강한 인간 공여자를 채용하였다. 각각의 공여자로부터 대변 샘플을 수집하고 나서, 사전 결정한 표준 프로토콜에 따라 처리하였다. 얻어진 박테리아 현탁액을 플레이팅하고 나서, 상기 기재한 2개의 상이한 플레이트(CDC 및 BBE 플레이트) 상에서 성장시켰다.

시험한 변수는: 5 상이한 공여자, 3 액체 대 인간 대변비, 2 플레이트 유형, 4 플레이트 당 희석 수준, 6 희석 수준 당 플레이트, 이중 계수(인간 플레이트 계수기에 기인하는 오차를 계산하기 위해 사용), 2회 계수화한 총 550 플레이트, 및 20 실행(플레이트의 세트)을 포함하였다.

미니탭(Minitab) 15 통계학적 소프트웨어를 이용하여 내포 게이지 R&R(Gage R&R)(반복성 및 재현성)에 의해 시험 측정을 분석하였고, 오차 밴드를 평가하였다. 시험 과정이 구체화된 오차 밴드 내에서 반복가능하고 재현가능하게 되는지를 결정하였다. 모든 미생물이 배양되고 계수화될 수는 없다는 것은 인식하였지만, 이 방법은 박테리아 현탁액 내 미생물의 대표적인 서브세트가 정상의 건강한 인간 대변 샘플의 지표로서 사용될 수 있다는 것을 입증한다.

실시예 2: 관장백 및 포트 내구성

-80℃에서 냉동시켰을 때 포트의 내구성을 평가하기 위해 샘플백(12)과 유사한 3개의 에틸렌 아세트산비닐(EVA) 백을 시험하였다. 장래의 제품 생산 및 처리를 자극하기 위한 제조 절차마다 온도 및 시간을 사용하였다. 냉동전, 해동전 및 해동후 누출에 대해 백을 시험하였다. 백을 100 ㎖의 식염수 용액으로 채우고, 포트를 밀봉시켰다. 백의 에지를 따라 밀봉이 누출되는지의 여부를 결정하기 위해, 백을 뒤집어서 포트가 완전히 밀봉되었는지의 여부를 결정하였다. 백을 1시간 동안 0℃ 냉각욕에 두고, 이어서, 배향을 달리하여 1개월 동안 -80℃에 두었다. 백 샘플 A를 편평하게 두었고, 백 샘플 B를 긴 측에 두고 나서, 백 샘플 C를 짧은 측에 두었다. 1개월 후에, 백을 -80℃ 냉동고로부터 제거하고 나서, 파열, 크랙 및 누출에 대해 검사하였다. 추가적으로, 36인치 높이로부터 모서리, 면 및 포트 상에 냉동 EVA 백을 낙하시킴으로써 낙하시험을 수행하였다. 낙하시험은 저장으로부터 장래의 제품을 제거할 때 잠재적 처리 오류를 자극하기 위해 제품의 모서리, 포트 및 편평한 표면 상에 샘플을 낙하시키는 것을 포함하였다. 이어서, 상기 기준에 의한 각각의 낙하 후에 백을 재검사하였다. 백 주위 밀봉의 초기 검사를 제외하고 각각의 낙하 시험을 샘플 당 3회 반복하였다. 모든 샘플 백은 모든 시험을 통과하였다(누출은 검출되지 않았음).

이어서 백에 해동 과정을 실시하였다. 각각의 샘플을 1시간 동안 0℃에서 글라이세롤/물 욕에 침지시켰다. 이어서, 샘플을 제거하고, 건조시키고 나서, 낙하시험을 반복하였다. 또한, 모든 샘플 백은 모든 시험을 통과하였다(누출이 검출되지 않음).

실시예 3: 임상연구

본 명세서에 개시된 바와 같은 MRT 조성물을 2상 임상 연구에서 31명의 대상체에게 투여하였다. 심각한 유해 사건은 보고되지 않았으며, 제품 또는 그의 투여와 관련된 유해 사건은 없었다. 대상체 중에서, 27명의 대상체는 MRT 조성물의 1 또는 2 용량을 받은 후에 그들의 rCDAD (재발 클로스트리듐 디피실 관련 설사) 증상의 성공적인 해결을 경험하였고, 투여 후 56일 동안 rCDAD 증상의 재발이 없음을 확정하였다. 이들 27명의 대상체 중에서, 16명은 MRT 조성물 1용량을 받은 후에 rCDAD의 완전한 해결을 경험하였고, 나머지 11명의 대상체는 처음 투여 후 재발되었지만, 그 다음에 MRT 조성물의 제2 투여 후에 56일 효능 종점에 성공적으로 도달되었다. 이들 대상체 중에, 4명의 대상체는 치료 실패로 고려되었다: 3명의 대상체는 그들의 제2 용량의 MRT 조성물을 받은 후에 rCDAD의 재발을 경험하였고, 1명의 대상체는 제1 용량 후에 재발하였으며, 제2 투여를 받지 않았다.

MRT 조성물의 용량을 입수가능한 제조된 임상 배취로부터 무작위로 선택하였다. 투여한 용량은 4명의 공여자로부터 만들어진 제품을 반영한다. 제품 속성(투약량, 살아있는 미생물, 저장수명, 해동된 저장수명 등) 중 어떤 것도 임상 결과과 상관관계를 나타내지 않으며, 또는 용량이 성공적인 결과를 초래하는지 여부를 예측하기 위해 사용할 수 있다. 임상 결과 정보를 이 ID의 마지막에 제공한다.

2상 임상 연구에서 투여한 MRT 조성물에 대한 정보:

45 용량의 MRT 조성물을 해동시키고, 수송하고 나서 인간 환자에게 투약하였다. 투약물 수명(AD)(임상 환자에 대한 투여일에 대한 투약물의 제조일자)을 표시한다. MRT 조성물의 몇몇 속성과 관련된 통계를 이하에 제공한다:

AD 평균 시간 = 43.2시간

AD 표준 편차 = 14.9시간

AD 최소 시간 = 22.1시간

AD 최대 시간 = 73.8시간

임상 결과(재발 클로스트리듐 디피실 관련 설사의 해결)와 이들 제품 속성에 대한 어떠한 상관관계 또는 손상도 나타나지 않았다.

실시예 4: 동결보호제의 선택

동결보호제, 특히 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)의 용도는 냉동 및 재해동 후 MRT 조성물의 생존력(CDC 및 BBE 플레이트에 대한 CFU에 의해 결정한 바와 같음)을 유지하는 것을 발견하였다. 이는 해동으로부터의 시간, 제어된 온도 포장 내 수송 및 개방으로부터 환자를 치료할 때까지의 허용시간을 포함한다. 상기 품질검사에 의하면, 냉동되기 전 MRT 제품에 대한 최종의 허용가능한 계수 범위는 CDC 플레이트에 대해 희석 수준 10^-6에서 약 30 내지 약 300 CFU, BBE 플레이트에 대해 희석 수준 10^-5에서 약 30 내지 약 300 CFU일 수 있다. 생존력이 유지되는 것을 보장하는 한 방법은 제품을 받고 48시간 내에 제품을 사용하는 의사 또는 임상의를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 최종 사용자 또는 소비자의 필요이다. 추가적으로, 최종 사용자는 사용까지 약 2 내지 약 29℃에서 제품을 저장할 필요가 있을 것이다.

동결보호제의 첨가는 두 관점으로 분석하였다. 첫째로, MRT 제품에 대한 동결보호제 첨가의 초기 효과를 평가하기 위해 몇몇 동결보호제를 선별하였다. 이 시험을 사용하여 특정 동결보호제과 혼합하였을 때, MRT 제품의 사망률 또는 생존력을 결정하였다. 분석한 두번째 관점은 MRT 제품을 냉동시킨 다음, 환자에게 전달을 위해 재해동시켰을 때, MRT 제품에 대한 특정 동결보호제의 실제 냉동 보호 능력이었다. 이 배양 결과는 제품을 냉동/해동시킨 후 실행가능한 방법을 나타내었다.

균질화된 그리고 여과된 인간 대변 혼합물(또는 MRT 제품)에 다양한 상이한 잠재적 MRT 동결보호제를 첨가하는 것의 효과를 연구하는 시험을 완료하였다. 동결보호제의 초기 첨가에 대한 박테리아 반응을 정량화하기 위한 시험만을 의도하였으며, 동결보호제가 후속 냉동 해동 주기를 통해 박테리아를 보호하는데 성공적이었는지 여부를 시험하는 것은 포함하지 않았다. 이들 시험에서, 단일 인간 대변 공여물은 다양한 시험에서 쪼개었고, "대조군" 샘플은 기준을 위해 사용한 단지 정상의 등장 식염수(즉, 첨가한 동결보호제가 없음)였다. CDC 플레이트와 BBE 플레이트를 둘 다 사용하였다. 모든 시험을 위해, 두 상이한 희석 수준의 결과를 합한 CFU 계수의 칭량한 평균을 사용하였다. 사용한 동결보호제는 분자량이 600 내지 20000의 범위에 있는 10% 탈지유, 5% 글라이세롤, 10% 글라이세롤, 10 % DMSO 및 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)을 포함하였다.

CDC 플레이트에 대해: 10% 탈지유, 10% 글라이세롤 및 PEG를 모두 합리적으로 제대로 수행하였고, CFU 계수는 식염수 대조군의 대략 25% 내에 있었다. 흥미롭게도, 고농도의 글라이세롤은 용량 의존적 관계에서 상당한 미생물 사망률을 초래하였다.

BBE 플레이트에 대해: PEG 제형만이 상당한 미생물 사망률을 나타내지 않았다. 흥미롭게도, 10% 글라이세롤 제형은 거의 90% 사망률(10% 생존률)을 수득하였고, 더 고농도의 글라이세롤은 100% 사망률을 수득하였다(현재 희석 수준을 이용하여 알 수 있는 바와 같음).

10% 글라이세롤의 BBE 플레이트로부터의 결과가 주어지면, 글라이세롤을 첨가하는 것으로부터 90% 사망률(BBE 플레이트 상에서)이 제거될 수 있는지의 여부를 알기 위해 추가적인 조사를 수행하였다. 글라이세롤 농도를 5%로 감소시키는 것 또는 (대사 활성을 늦추기 위해) 글라이세롤의 첨가 전에 미생물 혼합물을 냉각시키는 것이 기대한 높은 사망률을 감소시킬 수 있었다는 가설을 세웠다. 5% 글라이세롤 용액은 사망률이 10%보다 더 적으며, 냉각은 또한 용량 의존적 관계로 사망률을 감소시켰다. 그러나, 이들 효과는 기준 결과를 극복할 만큼 충분히 강하지 않았고, 글라이세롤 대 대조군에서의 모든 시험에 대해 적어도 60%의 사망률을 알 수 있었다.

MRT 제품에서 미생물의 생존력을 유지하는 것은 인간 대변 수집 시간으로부터 환자에게 MRT 제품 용량을 제공하는 시간까지 중요하다. 따라서, 첨가한 동결보호제를 처음에 첨가하였을 때 미생물에 대해 상당한 독성 효과를 갖지 않는다는 것은 중요하다. 시험한 동결보호제 중에서, PEG 제형만이 제대로 수행되었다. 탈지유는 BBE 결과에 대해 특히 제대로 수행되지 않았다. 우유에 대한 추가적인 문제점은 알레르기 반응 기회를 증가시키는 것에 대한 잠재력 및 우유의 가변적 특성규명 프로파일을 포함한다. 마찬가지로, DMSO는 BBE 플레이트 상에서 제대로 수행되지 않았다. 추가로, DMSO가 의학적 용도에서 국소적으로 사용되지만, 인간 위장계에서의 공지된 용도는 현재 없다. 10% 글라이세롤은 CDC 플레이트 상에서 제대로 수행하였지만, BBE 플레이트 상에서 80 내지 90% 사망률(10 내지 20% 생존)을 나타내었다.

실시예 5: 추가적인 동결보호제

인간 장 미생물상을 인간 대변으로부터 구체적 농도에서 다수의 상이한 잠재적 동결보호제를 함유하는 수성 식염수 내로 추출하였다. 이들 용액을 pH에 대해 시험하였고, CDC 및 BBE 한천 플레이트 상에서 배양시켜 살아있는 미생물 부하를 측정하고, 이어서, 1 내지 7일 동안 -80℃에서 냉동시킨 다음 해동시켰다. 이어서, 해동된 용액으로부터의 샘플을 pH에 대해 시험하였고, CDC 및 BBE 한천 플레이트 상에서 배양시켜 살아있는 미생물 부하를 측정하였다. "++"의 선별 결과를 지니는 동결보호제는 PEG3350(및 글라이세롤)에 비해 상당히 더 큰 생존력 결과를 나타내었고, "+"를 지니는 것은 적어도 글라이세롤만큼 양호한 것으로 고려되는 결과를 가지며, "0"를 지니는 것은 혼합된 결과를 갖고, 이는 적합한 동결보존이 될 수도 있고 되지 않을 수도 있으며, "-"를 지니는 것은 글라이세롤보다 더 불량하게 수행되었고, 인간 장 미생물상 용액에 대한 효과적인 동결보호제로서 고려되어서는 안 된다. CDC 및 BBE 한천 플레이트를 이용하는 살아있는 미생물의 pH 측정 및 열거에 기반한 결과는 다음의 덱스트로스, 베타인, 글라이신, 수크로스, 폴리비닐 알코올, 및 DMSO 중의 플루로닉 F-127이 "++"로서 스코어링된 결과를 가졌다는 것을 시사하였다. 만니톨, 트윈 80, 에틸렌 글라이콜, 1,3-프로판다이올, 하이드록시프로필 셀룰로스, 글라이세롤, PEG/글라이세롤 혼합물 및 프로필렌 글라이콜은 "+"로서 스코어링된 결과를 가졌다. 프로필렌 글라이콜(3%w/v) 및 생선 오일은 "0"으로서 스코어링된 결과를 가졌다. 수산화마그네슘, 유레아 및 잔탄검은 "-+"의 스코어를 가졌다. "-+"의 스코어링은 pH가 허용가능하지 않다는 것을 발견하였지만, 플레이팅 결과는 허용가능한 것을 발견하였다.

실시예 6: 예시적 생산 공정

예시적 전체 생산 공정을 자극하기 위한 시험을 완료하되, (희석, 균질화 및 여과한) 인간 대변의 가공 샘플을 장기간 저장을 위해 냉각, 냉동시키고, 해동시키고 나서, 소비자 작업장에 수송하고, 보유 관장 전에 체온으로 가온시켰다. 생산 공정은 인간 대변의 수집을 위한 명목상의 공정; 2:1 내지 4:1 비로 동결보호 용액(또는 희석물 또는 식염수/PEG 혼합물) 내로 직접적인 인간 대변의 희석; 명목상의 균질화 및 여과 공정; 순환 유체욕에서 포장된 제품의 냉각; 장기간 냉동 저장; 순환 유체욕 내 포장된 제품의 가온; 수송을 위해 "냉각팩"과 함께 그리고 절연 물질에서 제품의 포장; 밤새 소비자에게 수송; 환자에게 즉시 주입을 위한 제품의 침상 가온을 자극하였다. 연구의 부분으로서, 전체 미생물 생존력 또는 생존에 대한 그들의 효과(CFU의 인큐베이션 및 계수화를 위한 CDC 및 BBE 플레이트 상의 연속희석에 의해 측정한 바와 같음)를 연구하기 위해 3가지 파라미터를 변화시켰다. 이들 파라미터는 동결보호제의 사용, 냉각욕의 온도 및 해동욕의 온도를 포함하였다.

동결보호제 시험에 대해, 연구는 동결보호제(정상 식염수)이 없고; 10% 글라이세롤 및 PEG 3350를 지니는 샘플을 59g/리터로 포함하였다. 냉각욕의 사용을 시험하기 위해, 연구는 냉동고(-80℃) 내로 직접 샘플(따라서, 냉각욕으로 처리하지 않음), 0℃ 냉각욕 내로 직접 보낸 샘플 및 -11℃ 냉각욕 내로 직접 보낸 샘플을 포함하였다. 가온을 0℃에서, +10℃ 및 +20℃에서 시험하였다. 각각의 시험 순열을 동일한 동결보호제를 사용한 대조군 샘플에 대해 정규화하였지만, 즉시 플레이팅하였고, 임의의 해동 공정을 실시하지 않았다.

동결보호제는 사용한다면 정상 식염수와 혼합하였고, 균질화 공정 동안 첨가하였다(희석제 및 식염수/PEG 혼합물의 정의 참조). 따라서, 동결보호제의 첨가에 기인하는 임의의 미생물 사망률(예를 들어, 글라이세롤에 의해, 특히 BBE 플레이트에서 알 수 있는 것과 같음)을 대조군 샘플의 CFU와 비교에 의해서만 관찰하였다.

냉동 및 해동 파라미터는 전체 미생물 생존에 대해 효과가 거의 없음을 발견하였다. 이는 일반적으로 CDC 플레이트에 대해 명확한데, 여기서 데이터는 일반적으로 잘 거동되며, 모든 냉동-해동 파라미터에 대해 결과는 단지 희석의 단일 로그 수준 내에서 제대로 변한다. BBE 플레이트에 대해, 원 데이터는 인접한 희석 수준(즉, 로그 수준)에 비해 10x 규칙을 위반한 분명한 이상점 및 사례의 몇몇 예에 의해 훨씬 제대로 거동하지 못하였다. 그러나, 냉동-해동 파라미터에 기인하는 차이는 여전히 명확하지 않았다.

사용한 상이한 동결보호제에 기인하는 효과를 명확하게 관찰하였다. 이 분석을 위해, 상이한 냉동-해동 파라미터로부터의 결과의 단순한 산술 평균을 사용하여 동결보호제 성능을 비교하였다. CDC 플레이트에 대해, "저온보호 없음"은 냉동-해동을 통해 18% 생존(82% 사망률)을 가졌지만, 글라이세롤 및 PEG의 첨가는 대략 30%로 이 사망률을 감소시켰다(각각 67% 및 75% 생존률). 글라이세롤로 처리한 샘플에 대해, 상기 결과는 글라이세롤의 초기 첨가로부터의 사망률을 무시한다. 동결보호제의 초기 첨가가 냉동/해동 효과에 첨가될 때, 이 효과의 규모는 대략 80% 사망률이었다. 이를 동결보호제로서 PEG를 이용하는 샘플에 대한 약 32% 사망률과 비교하였다.

BBE 플레이트 상에서, 글라이세롤을 첨가하는 것의 효과는 80% 내지 90%로 사망률이 매우 높았다. 대위법에서, PEG 플레이트는 동결보호제로부터 낮은 초기 독성을 나타내거나 또는 초기 독성을 나타내지 않았고, 냉동-해동 주기 내내 강한 보존적 효과를 나타내었다. PEG를 이용하는 전체 누적 생존률은 대조군에 대해 75%이다(25% 사망률). 초기 사망률과 냉동-해동 손실의 조합이 1-로그 상실(10% 생존)의 규모가 된다는 것에 기반하여 10% 글라이세롤이 BBE 플레이트 상에서 불량하게 수행된다는 결론을 내렸다. PEG-3350은 CDC와 BBE 플레이트 둘 다에서 잘 수행된다. PEG는 미생물에 대해 낮은 초기 독성을 가지며(인간 대변에 대한 동결보호제의 첨가로부터의 손실은 거의 없거나 없음), 이는 "동결보호제 없음"에 대해 상당한 보호를 제공한다. MRT의 각각의 용량은 최소 10⁷ 미생물/㎖의 현탁액을 가질 것이며, 최소 100 ㎖의 현탁액이 용량 당 전달된다는 것이 예상된다.

실시예 7: 배설물 이식 키트

예로서, 배설물 이식을 돕기 위해 부품의 키트를 생성할 수 있다. 예로서, 공여물 키트를 임상의에게 수송할 수 있다. 공여물 키트는 혈액에 대한 장비 및 환자로부터의 배설물 샘플 또는 특정 예에서 건강한 공여자를 포함할 수 있다. 다수의 환자의 장 미생물상이 혐기성이기 때문에, 많은 유기체가 공기에 대한 노출에 의해 사멸될 수 있다. 예로서, 공여물 키트는 샘플을 해하는 일 없이(예를 들어, 급속 냉동, 드라이아이스 등) 혈액 및 배설물 샘플을 수송하기 위한 물질을 포함할 수 있다.

일단 시설(예를 들어, 하나의 위치, 국소 위치, 다수 위치 등)에 수송되면, 샘플을 시험할 수 있고, 클로스트리듐 디피실 또는 하나 이상의 다른 질환 또는 병태의 존재 또는 부재를 확인할 수 있다. 다른 예에서, 건강한 배설물 샘플을 시험하고, 치료로서 사용을 위해 제조할 수 있다.

예로서, 일단 질환 또는 병태를 확인하기 위해 환자의 샘플을 시험하거나, 또는 건강상태 또는 다른 양립성(예를 들어, 하나 이상의 목적으로 하는 병태의 존재 등)을 확인하기 위해 공여자의 샘플을 시험하면, 치료를 (예를 들어, 건강한 공여자 배설물 샘플, 하나 이상의 건강하게 저장된 배설물 샘플의 적어도 일부, 배설물 은행으로부터의 물질 등을 이용) 준비하고, 환자에게 전달 및 치료를 위해 임상의에게 다시 수송될 수 있다. 특정 예에서, 치료는 수송 동안 보존된다(예를 들어, 냉동 등). 키트는 비위(NG)관, (예를 들어, 보유관장에 의한 사용을 위한) 바이알, 위-내성 캡슐(예를 들어, 바깥쪽 멸균을 갖는 장관에 도달하는 산-생물내성) 등 멸균 용기 내에서 가공된 배설물 샘플 또는 치료를 포함할 수 있다. 예로서, 일단 받으면, 임상의는 환자에게 삽입할 준비가 될 때까지 보종하기 위한 방식으로 내용물을 저장할 수 있다.

실시예 8: 장기간의 저장 수명 제형

공여자 대변의 건강한 인간 미생물 내용물 생존성의 장기간 저장을 연구하였다. 동결보호제과 함께 그리고 동결보호제 없이 대변 샘플을 가공하였고, 다양한 제어된 온도에서 냉동/해동시켰다. 이어서, 샘플을 -80℃ 및 -20℃에서 저장 360일(12개월) 후에 제거하고 나서, 제어된 온도에서 해동시키고, 두 유형의 한천 플레이트(각각 질병 관리 센터 5% 혈액 한천(CDC) 및 박테리오데스 바일 에스쿨린 한천(BBB)) 상에서 플레이팅하였다. 전체 집락 형성 단위/밀리리터(CFU/㎖)를 보고하고 분석하였다. 연구로부터, 동결보호제 없이 보존한 샘플을 우선 분석한 후에 상이한 동결보호제의 농도를 달리하면서 샘플을 보존하였다.

"동결보호제가 없는" 샘플로부터 성장시킨 CDC 플레이트 계수는 냉동 온도 및 저장시간이 회수가능한 CFU 수에 대해 상당한 영향을 가진다는 것을 입증하였다. 이들 데이터는 이전의 시점에 보고한 데이터와 일치한다. 이 모델에서, R² 값은 데이터에서 대략 59%의 분산(조정된 결정계수(Adi. R²))이 모델에 의해 설명되고, 대략 80%로부터의 하락이 저장 180일(6개월) 후 모델에 의해 입증되었다는 것을 나타낸다.

-20℃에서 저장했을 때, 대부분의 샘플은 제품 규격에 대해 허용가능한 것으로 고려되는 하한 미만으로 떨어진 CFU/㎖ 계수를 생성하였다(10⁸ CFU/㎖). 대조적으로, -80℃에서 저장한 샘플은 제품 규격에 대해 목적으로 하는 하한 초과로 남아있는 계수를 입증하였다. 이것으로부터, 동결보호제의 사용 없이 제조하고 -80℃에서 저장한 샘플의 장기간 저장이 -20℃에서 저장한 샘플에 비해 더 큰 생존력을 초래하는 것을 발견한 것으로 결론을 내렸다.

동결보호제과 함께 저장한 샘플로부터 수집한 데이터에 대해, 저장 시간 및 냉동고 온도는 CFU/㎖로 CDC 계수 반응에 대한 가장 중요한 인자였다. 데이터에서 알 수 있는 대부분의 변이는 저장 시간, 냉동고 온도 및 0.59로 얻어진 R²값에 의해 알 수 있는 바와 같은 이들 사이의 상호작용에 의해 설명된다.

샘플을 동결보호제과 합하고, 회복 가능한 CFU/㎖로 더 상당한 감소를 입증하기 위해 -20℃에서 지속적으로 저장하였다. -20℃에서 저장한 샘플에 대해 60 내지 90일(2 및 3 개월) 사이의 10⁸ 제품 규격 한계 미만으로 샘플 실행이 하락하기 시작한다. 회복가능한 CFU/㎖의 양으로 감소 속도는 저장 60일(2개월)을 지나서 느려진다. 그러나, -80℃ 저장 온도에서, 회복가능한 CFU/㎖ 계수는 저장 270일(9개월) 내내 상대적으로 안정하게 남아있다. 추가적으로, 대부분의 계수는 10⁸ CFU/㎖의 최소 제품 규격 한계 초과로 남아있었다.

더 낮은 냉동고 온도에서 그리고 더 적은 시간 동안 샘플을 저장하는 것은 시간이 제조시점으로부터 추가로 진행됨에 따라 계수에 대해 긍정적 효과를 가지며, CFU/㎖의 믿을 수 있는 회복은 제품의 살아있는 미생물 집단이 격리되는 것이 더 어렵게 된다는 것을 나타낸다. 그러나, 데이터는 저장 시간의 효과가 동결보호제로서 PEG 3550의 첨가뿐만 아니라 저온에서(이 경우에, -80℃) 물질의 저장에 의해 꺾일 수 있다는 것을 시사한다.

실시예 9: 장기간 저장 수명 제형

인간 대변을 본 명세서에 개시한 바와 같이 가공하였고; 가공한 현탁액의 초기 샘플을 한천 플레이트의 접종을 위한 연속 희석물을 생성하기 위해 사용하였다. 일단 샘플이 현탁액으로부터 제거되면, 남아있는 현탁액(대략 150㎖)를 두(2) 별개의 멸균 EVA 저장백에 옮겼다. 각각의 백을 -80℃에서 1주 동안 냉동시켰다.

1주 후에, 백을 냉동고로부터 제거하고 나서 MRT 조성물 배취 프로토콜마다 해동시켰다. 백을 샘플링하여 냉동직후 회복가능한 CFU/㎖ 계수 및 다양성을 측정하였고; 각각의 샘플을 연속 희석시키고, CDC 및 BBE 플레이트 상에서 플레이팅하였다. 이어서, 백을 2개의 상이한 온도, 4℃ 및 25℃에서 저장하였고, 총 192시간 동안 24시간 마다 샘플링하였다.

각각의 시점에 샘플을 16s rRNA 방법을 이용함으로써 생물다양성에 대해 계약 실험실에 의해 시험하였다. 각각의 샘플에 대해, RNA를 박테리아 세포로부터 추출하고, RNA 복제를 개시하는데 필요한 일련의 염기쌍으로부터 만들어진 태그 프라이머를 이용하여 복제하였다("증폭시켰다"). RNA를 증폭시킨 후에, 서열의 노이즈를 제거하고(정확하게 또는 정확하지 않게 짝지어진 뉴클레오타이드의 통계적 확률을 결정하는 과정) 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information: NCBI) 서열 라이브러리를 이용하여 각각의 유기체를 동정하기 위해 사용한다. 각각의 샘플에서 발견한 유기체의 동정을 샘플에서 대부분의 연속되는 통계적으로 가능한 염기쌍을 함유하는 서열 길이에 의해 결정한다. 이어서, 최종 수(적용가능하다면 문으로부터 종까지 동정된 유기체의 직접적 계수 및 백분율)를 각각의 샘플에서 시간을 거쳐서 생물다양성의 변화를 결정하는데 사용하기 위한 리바이오틱스(Rebiotix)에 보고한다.

일단 냉동고로부터 제거되고 해동되면(t=0 시간 시점) 제품은 CDC와 BBE 플레이트 둘 다에 대해 회복가능한 CFU/㎖의 초기 하락을 겪는데, 이는 리바이오틱스에 의해 수행되는 이전의 연구로부터의 관찰과 일치된다(P-006, P-007, P-009, P-012).

25℃에서 보유한 해동시킨 제품은 192시간에 걸쳐 4℃에서 저장한 물질보다 더 높은 전체적으로 회복가능한 CFU/㎖ 계수를 유지하였다.

전체 계수에도 불구하고 모든 CDC 플레이트에 대해 계수화한 회복가능한 CFU/㎖는 리바이오틱스 측정 시스템(P-001)에 기반한 실험 내내 두 온도 모두에서 "안정하게" 고려되었다. 저장 온도 둘 다에서 FU/㎖ 결과는 초기 계수로부터 192시간으로 해동까지 1 로그 내에 머물러 있었다.

BBE 플레이트에 대해 계수화한 회복가능한 CFU/㎖는 저장 192시간의 과정에 걸쳐 본래의 사전 냉동 샘플에 비해 25℃에서 저장하였을 때 회복가능한 CFU/㎖의 증가를 입증하였다. 그러나, 4℃에서, 회복가능한 CFU/㎖는 192시간 보유 시간 내내 변화없는(1로그 미만의 변화) 계수를 유지하였다.

온도 둘 다에서 해동시킨 제품은 CFU/㎖ 계수의 획득 또는 손실에도 불구하고 192시간 보유 시간 내내 리바이오틱스 제품 방출 규격을 충족시킨다:

CDC 냉동후 미생물 부하 규격: 10⁷ 내지 10¹⁴ CFU/㎖

BBE 냉동후 미생물 부하 규격: 10⁵ 내지 10¹⁴ CFU/㎖

이 연구로부터 현재 수집한 결과는 CDC 플레이트에 대한 회복가능한 표현형 다양성이 제품이 25℃에서 해동 후 저장될 때 냉동전의 본래의 샘플 다양성과 매칭된다는 것을 나타낸다. 추가로, 샘플은 둘 다 3 이상의 독특한 집락 표현형의 시간에 따른 다양성에 대한 리바이오틱스 제품 방출 규격을 충족시켰다.

샘플의 유전자 생물다양성 특성규명(16s rRNA)을 총 박테리아 유형(가능하다면 종에 대해)뿐만 아니라 시간에 따라 샘플 내에 존재하는 이들 유형의 박테리아의 농도 백분율을 시험하는 계약 실험실에 의해 수행한다.

두 상이한 온도에서 192시간까지의 보유 기간 동안 제품 거동의 예비 이해는 CDC 및 BBE 플레이트를 접종하기 위해 사용할 때마다 CFU/㎖의 리바이오틱스 제품 방출 표준을 계속해서 충족시킨다. 이들 발견점을 확인하기 위해 더 많은 작업이 필요하다. 각각의 시점의 16s rRNA 데이터는 현재 분석 하에 있다.

실시예 10: 16s rRNA 데이터

본 개시내용은 배설물 미생물을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "배설물 미생물"은 정상의 건강한 성인 인간의 장, 창자 또는 결장, 바람직하게는 결장에 존재하는 미생물유기체를 지칭한다. 이러한 조성물은 본 명세서에 개시된 바와 같은 배설물 물질을 가공함으로써 제조될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "배설물 물질"은 인간 대변을 지칭한다. 가공되지 않은 배설물 물질은 살아있지 않은 물질 및 생물학적 물질을 함유한다. "살아있지 않은 물질"은 사멸된 박테리아, 보관된 숙주 세포, 단백질, 탄수화물, 지방, 무기염, 점액, 담즙, 소화되지 않은 섬유질 및 기타 음식물, 및 음식물로부터 생긴 다른 화합물 및 대사 노폐물 및 음식물질의 부분적 또는 완전한 소화물을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. "생물학적 물질"은 배설물 내 살아있는 물질을 지칭하며, 원핵세포, 예컨대 박테리아 및 고세균(예를 들어, 살아있는 원핵세포, 및 살아있는 원핵세포로 포자를 형성할 수 있는 포자), 진핵세포, 예컨대 원생동물 및 진균 및 바이러스를 포함하는 미생물을 포함한다. "생물학적 물질"은 또한 정상의 건강한 인간의 결장 내에 존재하는 살아있는 물질(예를 들어, 미생물, 진핵 세포 및 바이러스)을 지칭할 수 있다. 본 개시내용의 조성물에 존재할 수 있는 원핵세포의 예는 악티노박테리아(Actinobacteria) 강, 예컨대 악티노박테리대(Actinobacteridae) 또는 코리오박테리대(Coriobacteridae) 아강, 예컨대 비피도박테리알데스(Bifidobacteriales) 또는 코리오박테리알데스(Coriobacteriales) 목, 및/또는 예컨대 비피도박테리아세애(Bifidobacteriaceae) 또는 코리오박테리아세애(Coriobacteriaceae) 과의 구성원; 박테리오데트(Bacteroidetes) 문, 예컨대 박테로이디아(Bacteroidia) 강, 예컨대 박테로이달레스(Bacteroidales) 강, 및/또는 예컨대 박테로이데세애 또는 리케넬라세애 과의 구성원; 퍼미쿠테스 문의 구성원, 예컨대 바실리(Bacilli) 강, 클로스트리디아, 또는 에리시펠로트리치(Erysipelotrichi), 예컨대 바실라레스(Bacillales) 또는 락토바실라레스(Lactobacillales) 또는 클로스트리달레스(Clostridales) 또는 에리시펠로트리칼레스(Erysipelotrichales) 목, 및/또는 예컨대 파에니바실라세애(Paenibacillaceae) 또는 에로카세애(Aeroccaceae) 또는 락토바실라세애(Lactobacillaceae) 또는 스트렙토코카세애 또는 카타박테리아세애(Catabacteriaceae) 또는 펩토코카세애(Peptococcaceae) 또는 펩토스트렙토코카세애(Peptostreptococcaceae) 또는 루미노코카세애 또는 클로스트리디아세애 또는 유박테리아세애 또는 래크노스피래세애 또는 에리시펠로트리카세애(Erysipelotrichaceae) 과; 프로테오박테리아(Proteobacteria) 문, 예컨대 알파프로테오박테리아(Alphaproteobacteria) 또는 베타프로테오박테리아(Betaproteobacteria) 또는 감마프로테오박테리아(Gammaproteobacteria) 강의 구성원, 예컨대 리조비알레스(Rhizobiales) 또는 부르크홀데리알데스 또는 아즈테로모나달레스(AJteromonadales) 또는 엔테로박테리알데스(Enterobacteriales) 목 및/또는 예컨대 로도비아세애(Rhodobiaceae) 또는 크홀데리아세애(Burkholderiaceae) 또는 셰와넬라세애(Shewanellaceae) 또는 엔테로박테리아세애(Enterobacteriales) 과; members of the 문 테네리쿠테스(Tenericutes) 문, 예컨대 몰리쿠테스(Mollicutes) 강, 예컨대 엔토모플라스마탈레스(Entomoplasmatales) 목, 및/또는 예컨대 스피로플라스마타세애(Spiroplasmataceae) 과; 및/또는 베루코미크로비애(Verrucomicrobiae) 강, 예컨대 베루코미크로비알레스(Verrucomicrobiales) 과, 및/또는 예컨대 베루코미크로비아세애(Verrucomicrobiaceae) 과의 구성원인 세포를 포함한다. 이들은 단지 예이다.

본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 문, 적어도 2가지의 문, 적어도 3가지의 문, 적어도 4가지의 문, 적어도 5가지의 문, 적어도 6가지의 문, 적어도 7가지의 문, 적어도 8가지의 문, 적어도 9가지의 문, 또는 적어도 10가지의 문의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 강, 적어도 2가지의 강, 적어도 3가지의 강, 적어도 4가지의 강, 적어도 5가지의 강, 적어도 6가지의 강 또는 적어도 7가지의 강의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 목, 적어도 2가지의 목, 적어도 3가지의 목, 적어도 4가지의 목, 적어도 5가지의 목, 적어도 6가지의 목 또는 적어도 7가지의 목의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 적어도 1가지의 과, 적어도 2가지의 과, 적어도 3가지의 과, 적어도 4가지의 과, 적어도 5가지의 과, 적어도 6가지의 과, 적어도 7가지 과의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 박테리아의 적어도 5, 적어도 10, 적어도 20 또는 적어도 30가지의 상이한 속의 구성원인 박테리아를 포함할 수 있다. 적어도 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MRT 조성물은 박테리아의 적어도 10, 적어도 50, 적어도 100, 적어도 200, 적어도 300 또는 적어도 400가지의 상이한 종을 포함할 수 있다.

제조된 MRT 조성물의 샘플(본 명세서에 개시된 바와 같이 제조됨)을 일루미나(Illumina) MiSeq 플랫폼을 이용하여 16sRNA 증폭 및 시퀀싱에 대해 텍사스주 러벅에 소재한 리서치 앤드 테스팅 래버러토리(Research and Testing Laboratory)에 제공하였다. 이 분석의 목적은 잠정적 효능 방출 분석을 입증하는 것; 및 공여자 내 및 공여자간 박테리아 다양성 및 지속성을 평가하는 것에 대해 유용한 데이터를 얻는 것이다.

모든 제품 배취의 16s rRNA 분석은 본 명세서에 개시된 공정이 바람직한 박테리아 다양성 프로파일을 초래한다는 것을 입증하였다. 데이터는 또한 제조 공정이 정상 배설물과 일치되는 박테리아 다양성의 수준을 보존하였고, 우세한 문인 박테리오이데트(Bacteroidetes) 및 퍼미쿠테스의 유지를 포함하는 재발 클로스트리듐 디피실의 치료에 대해 생존가능한 것으로 고려된다는 것을 나타내었다.

추가로, 시간에 따라 개개 공여자의 대변으로부터 만들어진 제품은 매우 유사한 다양성 프로파일을 유지하였다. 표 2는 제조 및 시험한 모든 배취에 대한 목(Order)에 의한 박테리아%에 대해 평균 및 표준편차를 강조한 데이터의 요약을 제공한다. 이들 "목" 범주는 제품 배취에서 가장 흔히 동정되는 박테리아 군집을 나타낸다.

실시예 11: 16s rRNA 데이터 - 개개 공여자

제품 제조의 일관성을 추가로 도시하기 위해, 시간에 따라 동일한 공여자로부터 제조한 제품의 다수 배취를 분석하였다. 다음의 표는 임상 시험 제조 기간에 걸쳐 단일 공여자로부터의 제품의 다수 배취가 유사한 다양성 프로파일을 나타내었다는 것을 나타낸다. 각각의 공여자에 대한 미생물상을 다양성의 경향이 질 좋은 유전자 수준에서 계속된다는 것을 보장하기 위해 박테리아 과에 의해 분석하였다. 섀넌 다양성 지수(또한 H'로 표시함)는 미생물군집 내에 존재하는 유기체의 존재비 및 균등도를 보고하는 산업적으로 허용되는 방법이며, 이 실시예 내내 사용하였다. 이는 샘플링 깊이의 변화를 가장 완전하게 포함하는 것으로 나타났고, 따라서 복합 미생물 군락을 기재하는데 적절하다.

공여자 1의 박테리아 다양성을 표 3에 요약한다.

공여자 1로부터의 다양한 샘플에 대한 섀넌 다양성 지수를 표 4에 요약한다.

공여자 2의 박테리아 다양성을 표 5에서 요약한다.

공여자 2로부터의 다양한 샘플에 대한 섀넌 다양성 지수를 표 6에 요약한다.

공여자 3의 박테리아 다양성을 표 7에 요약한다.

공여자 3으로부터의 다양한 샘플에 대한 섀넌 다양성 지수를 표 8에 요약한다.

공여자 4의 박테리아 다양성을 표 10에 요약한다.

공여자 4로부터의 다양한 샘플에 대한 섀넌 다양성 지수를 표 11에 요약한다.

공여자 5의 박테리아 다양성을 표 12에 요약한다.

공여자 5로부터의 다양한 샘플에 대한 섀넌 다양성 지수를 표 13에 요약한다.

공여자 6의 박테리아 다양성을 표 14에 요약한다.

공여자 6으로부터의 다양한 샘플에 대한 섀넌 다양성 지수를 표 15에 요약한다.

하나의 배취만이 공여자 6으로부터 제조되었다는 사실에 기인하여, 평균(H') 또는 (H')의 표준 편차를 이때에 계산할 수 없었다.

본 명세서에 개시된 바와 같은 MRT 조성물의 16s rRNA 분자 특징은 상당한 박테리아 다양성이 제조 공정을 통해 보존된다는 것을 나타낸다. 공여자 간에 다양한 박테리아의 상대적 양의 변동이 있지만, 구체적 박테리아 목의 평균 백분율의 표준 편차에 의해 측정되는 바와 같은 변화는 상당히 작다. 시간에 따라 수집한 개개 공여자로부터 제조한 제품의 다양성 프로파일은 과 수준에서 높은 정도의 유사성을 입증하였다(공여자 1 내지 5에 대해 표를 참조). 대조적으로, 환자의 질환과 통상적으로 관련된 미생물에 대한 16s 데이터는 건강한 공여자로부터 만들어진 MRT 조성물이 현저히 없었다. 이 분석에서 평가한 제품 배취를 2상 임상 연구에서 사용하였는데, 이는 허용가능한 경증 내지 중등증의 유해 효과에 의한 87% 치료율을 입증하였다. 이 데이터는 본 명세서에 개시된 바와 같은 MRT 조성물의 박테리아 다양성 수준이 치료적 이점을 제공하였다는 것을 입증하기 때문에 중요하다.

실험 12: 공여자 성별에 의한 성공/실패

본 명세서에 개시한 MRT 조성물을 이용하는 치료의 성공을 공여자의 성별을 고려하여 표로 만들었다. MRT 조성물의 단일 투약 후 치료 성공은 배설물 공여자가 남성(그의 배설물 샘플을 MRT 조성물을 제조하는데 이용함)일 때 더 크다는 것을 관찰하였다. 용량 2 반응은 공여자 간에 더 유사하고 이들 용량은 항생제 미경험 환자(항생제 전처리가 없고 활성 질병을 지님)에게 전달되었기 때문에, 여성 공여자로부터의 군집은 항생제에 대해 민감한 것일 수 있다.

미국 특허 출원 제61/337,283호는 본 명세서에 참고로 포함된다.

미국 특허 출원 제61/351,184호는 본 명세서에 참고로 포함된다.

미국 특허 출원 공개 제2013/0045274호로서 공개된 미국 특허 출원 제13/576,573호는 본 명세서에 참고로 포함된다.

미국 특허 출원 공개 제2014/0086877호로서 공개된 미국 특허 출원 제14/093,913호는 본 명세서에 참고로 포함된다.

본 개시내용은 다양한 측면에서, 단지 예시적이라는 것을 이해하여야 한다. 특히 본 개시내용의 범주를 넘어서는 일 없이 형상, 크기 및 단계의 배열에 관해 변화가 상세하게 이루어질 수 있다. 이는 적절한 정도로 다른 실시형태에서 사용되는 하나의 예시적 실시형태의 임의의 특징의 사용을 포함할 수 있다. 본 발명의 범주는, 물론 첨부하는 청구범위가 표현하는 언어로 정의한다.

Claims

인간 공여자의 대변 샘플; 및 동결보호제;를 포함하고,
상기 동결보호제는 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은, 질병 관리 센터(Center for Disease Control: CDC) 배양 플레이트에서 배양되어, 환자에게 투여되기 전에 10^-6의 연속 희석에서 집락 형성 단위(colony forming unit: CFU)가 약 30 CFU 내지 약 300 CFU의 계수로 존재하는 것이 확인되는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은, 박테리오데스 바일 에스쿨린 한천(Bacteriodes Bile Esculin Agar: BBE) 배양 플레이트에서 배양되어, 환자에게 투여되기 전 10^-5의 연속 희석에서 집락 형성 단위(colony forming unit: CFU)가 약 30 CFU 내지 약 300 CFU의 계수로 존재하는 것이 확인되는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은, 적어도 2가지의 목 및 서로 상이한 적어도 7가지의 과로부터 유래되는 박테리아를 포함하고,
과 수준에서 계산되는 섀넌 다양성 지수(Shannon Diversity Index)가 0.4 내지 2.5이며,
상기 박테리아의 40% 내지 60%가 박테로이달레스(Bacteroidales)목,
상기 박테리아의 30% 내지 40%가 클로스트리디알레스(Clostridiales)목,
상기 박테리아의 36% 내지 48%가 박테로이데세애(Bacteroidaceae)과로부터 유래되는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 대변 샘플은 45g 내지 75g의 대변을 포함하는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 서로 상이한 적어도 7개의 과로부터 유래되는 박테리아를 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 과 수준에서 계산되는 섀넌 다양성 지수(Shannon Diversity Index)가 0.4 내지 2.5인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 관장 투여용 액체인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 경구 투여용 고체인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 동결건조된 것인 조성물.
소화 장애를 치료하기 위한 조성물이며, 상기 조성물은,
여과되고, 희석된, 인간 배설물 샘플을 포함하고,
상기 인간 배설물 샘플은, 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 용액에 희석된 것인, 조성물.
제11항에 있어서, 상기 인간 배설물 샘플은 45g 내지 75g의 대변을 포함하는 것인 조성물.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 서로 상이한 적어도 7가지의 과로부터 유래되는 박테리아를 포함하는 조성물.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 과 수준에서 계산되는 섀넌 다양성 지수(Shannon Diversity Index)가 0.4 내지 2.5인 조성물.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 관장 투여용 액체인 조성물.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 경구 투여용 고체인 조성물.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 동결건조된 것인 조성물.
인간 공여자로부터 대변 샘플을 수집하고;
상기 대변 샘플에 희석제를 가하되, 상기 희석제는 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하며;
상기 대변 샘플과 상기 희석제를 혼합하여 혼합된 조성물을 형성하고;
상기 혼합된 조성물을 여과한 후 여과액을 수집하고;
상기 여과액을 사전 냉각한 후 상기 여과액을 냉동시키는;
과정에 의해 형성된 제약을 포함하는 조성물.
제18항에 있어서, 상기 제약은 관장 투여용 액체 제약인 조성물.
제18항에 있어서, 상기 제약은 경구 투여용 동결건조된 제약인 조성물.
배설물 샘플로부터 유래된 미생물의 집단; 및
동결보호제;를 포함하고,
상기 동결보호제는 식염수 중 30-90 g/L의 농도로 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 것인 조성물.
배설물 샘플로부터 유래된 미생물의 집단;
동결보호제; 및
상기 동결보호제는 폴리에틸렌 글리콜을 30-90 g/L의 농도로 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 용액을 포함하는 것인 조성물.
조성물을 제조하는 방법으로, 상기 방법은,
동결보호제를 배설물 샘플에 가하여 혼합물을 형성하고; 그리고
상기 혼합물을 여과하는;
단계를 포함하며, 상기 동결보호제는 폴리에틸렌 글리콜을 30-90 g/L의 농도로 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 용액을 포함하는 것인 방법.
제23항에 있어서, 상기 혼합물을 여과하는 단계는 상기 혼합물을 잔류물과 투과물로 여과하는 단계를 포함하는 방법.
제24항에 있어서, 상기 투과물은 상기 조성물을 형성하는 것인 방법.
제23항에 있어서, 상기 혼합물을 동결 건조하는 단계를 더 포함하는 방법.