KR20200024793A - 알파-ENaC의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제 및 사용 방법 - Google Patents
알파-ENaC의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제 및 사용 방법 Download PDFInfo
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Abstract
알파-ENaC (SCNN1A) 유전자의 억제를 위한 RNAi 작용제, RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 방법이 기술된다. 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제 및 RNAi 작용제 접합체는 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제한다. 임의적으로 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께, 하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물이 또한 기술된다. 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 생체 내에서 상피 세포, 예컨대 폐 상피 세포에 전달하는 것은 알파-ENaC 유전자 발현의 억제 및 ENaC 활성의 감소를 제공하고, 이는 인간 대상체를 포함하는 대상체에게 치료 이익을 제공할 수 있다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 6월 1일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/679,549, 2018년 2월 17일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/631,683, 및 2017년 7월 6일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/529,132를 우선권 주장하고, 이들 각각의 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 제출되고 이에 의해 전문이 참조로 포함된 서열 목록을 함유한다. ASCII 사본의 명칭은 30656_SequenceListing이고, 이의 크기는 74 kb이다.
발명의 분야
본 개시내용은 알파-ENaC 유전자 발현의 억제를 위한 RNA 간섭 (RNAi) 작용제, 예를 들어, 이중 가닥 RNAi 작용제, 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
배경
척추동물 아밀로라이드-감수성 상피 나트륨 채널 ("ENaC" 또는 "아밀로라이드-감수성 나트륨 채널")은 2개의 막-스패닝 도메인, 세포내 N- 및 C-말단, 및 퓨린 프로테아제의 기질인 대형 세포외 루프를 특징으로 하는, 디제네린 / ENaC 채널 수퍼패밀리의 구성원이다. 이 채널은 3개의 별개의 유전자인 SCNN1A (알파), SCNN1B (베타), 및 SCNN1G (감마)에 의해 코딩되는 3개의 동종 서브유닛 (알파 (α), 베타 (β), 및 감마 (γ))으로 구성된 이종삼량체성 복합체이다. 3개 모두의 서브유닛이 완전한 채널 활성에 요구된다. SCNN1D가 코딩하는 제4 서브유닛 (델타 (δ))이 고환 및 난소에서 발현되고, 이러한 조직에서 알파 (α) 서브유닛을 기능적으로 대체할 수 있다.
ENaC는, 특히 폐, 신장 원위 곡세관, 위장 (GI) 관, 생식기 관, 및 눈의 안구 표면 상피에서, 상피 세포의 첨단 막 상에서 발현된다. 이러한 상피에서, ENaC 채널은 세포외 나트륨 이온의 유입을 매개하고, 그 후 나트륨 이온은 기저측면 나트륨/칼륨 ATPase에 의해 세포로부터 능동적으로 수송되어, 삼투 구배를 확립하고 상피 내강의 물이 간질 내로 흡수되게 한다. 신장에서, ENaC는 전해질 균형 및 혈압을 매개하고, 전신성 소형 분자 이뇨제 예컨대 아밀로라이드의 표적이다. 폐에서, 기도 상피 ENaC는 폐 수화 및 점액섬모 소거에서 핵심적인 역할을 한다.
SCNN1A, SCNN1B, 또는 SCNN1G의 기능 상실 돌연변이가 있는 제1형 거짓저알도스테론증 (PHA) 환자는 과도한 기도 표면 액체를 생산하고, 점액섬모 소거율이 상당히 더 높다. 반대로, 모든 유전자형의 낭성 섬유증 (CF) 환자에서 기도 상피 ENaC 활성이 상당히 상승된다. ENaC 활성 강화는, 낭성 섬유증 막횡단 전도도 조절제 (CFTR) 클로라이드 채널 활성 감소와 함께, CF 폐 질환 환자에서 기도 탈수 및 점액섬모 정체의 기저를 이루는 주요 발병 메커니즘이다.
흡입된 소형 분자 ENaC 억제제가 CF 치료의 초기 전망을 나타냈지만, 이의 임상 개발은 폐에서의 짧은 작용 기간 및 신장 ENaC의 억제와 연관된 표적 상에서의 독성 (고칼륨혈증)에 의해 제한되었다. (예를 들어, 문헌 [O'Riordan et al., 27 J. Aerosol Med. & Pulmonary Drug Dev., 200-208 (2014)] 참조).
예를 들어, 미국 특허 번호 7,718,632에 개시된 것들과 같이, 알파-ENaC 유전자 (즉, SCNN1A)의 발현을 억제할 수 있는 특정 RNAi 작용제가 이전에 확인되었다. 그러나, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 서열 및 변형은 이전에 관련 분야에서 개시 또는 공지된 것과 상이하다. 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 알파-ENaC 유전자의 발현이 고도로 강력하고 효율적인 억제를 제공한다.
개요
알파-ENaC 유전자 (즉, SCNN1A)의 발현을 선택적 및 효율적으로 억제할 수 있는 신규한 RNA 간섭 (RNAi) 작용제 (RNAi 작용제, RNAi 유발제, 또는 유발제로 명명됨), 예를 들어 이중 가닥 RNAi 작용제가 요구된다. 추가로, ENaC 활성 강화와 연관된 질환의 치료를 위한 신규한 알파-ENaC-특이적 RNAi 작용제의 조성물이 요구된다.
일반적으로, 본 개시내용은 알파-ENaC 유전자-특이적 RNAi 작용제, 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제 및 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물을 사용하여 시험관 내에서 및/또는 생체 내에서 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법을 특색으로 한다. 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 알파-ENaC 유전자의 발현을 선택적 및 효율적으로 감소시킬 수 있고, 이에 의해 대상체에서 ENaC 수준을 감소시키거나, 대상체에서 ENaC 활성을 감소시키거나, 또는 대상체, 예를 들어, 인간 또는 동물 대상체에서 ENaC 수준 및 ENaC 활성 양쪽 모두를 감소시킬 수 있다.
기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 다양한 호흡기 질환 예컨대 낭성 섬유증, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 천식, 기도 감염, 원발성 섬모 운동이상증, 및 폐 암종 낭성 섬유증을 포함하지만 이에 제한되지 않는, ENaC 활성 수준 강화 또는 상승과 연관된 증상 및 질환의 치료적 처치 (방지적 또는 예방적 처치를 포함함)를 위한 방법에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 낭성 섬유증 (CF)을 앓고 있는 대상체에서, ENaC 활성 증가가 기도 내의 점액 건조 및 폐가 독소 및 감염체를 소거하는 능력의 감소에 기여하는 것으로 공지되어 있다. 추가로, 기능이 불량한 ENaC 유전자가 유전된 CF 대상체가 경도의 폐 질환을 나타냈다는 것이 또한 공지되어 있고, 이는 ENaC 수준의 억제가 특정 환자 집단에 이로울 수 있다는 추가적인 증거를 제공한다. 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는, 예를 들어, 눈 질환 및 장애 예컨대 건성안 증후군의 치료를 포함하여, 눈 표면 상피, 예컨대 결막 상피에서의 ENaC 활성 수준 강화 또는 상승과 연관된 증상 및 질환의 치료적 처치 (방지적 또는 예방적 처치를 포함함)에 사용될 수도 있다. 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 알파-ENaC 발현을 선택적으로 감소시킬 수 있고, 이는 ENaC 활성의 감소에 이를 수 있다. 본원에 개시된 방법은 관련 분야에 공지된 임의의 적절한 수단, 예컨대 에어로졸 흡입 또는 건조 분말 흡입, 비강내 투여, 기관내 투여, 또는 입인두 흡인 투여에 의해 하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체, 예를 들어, 인간 또는 동물 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제를 특색으로 한다. RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제할 수 있는 RNAi 작용제를 포함하거나 또는 이로 이루어지는 조성물이 또한 본원에서 기술되고, 조성물은 적어도 하나의 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 알파-ENaC 유전자의 발현을 선택적 및 효율적으로 감소시킬 수 있는 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제 중 하나 이상을 포함하는 조성물을 특색으로 한다. 하나 이상의 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물은 ENaC 활성 강화 또는 상승 (본원에서 ENaC 채널 활성 수준 강화 또는 ENaC 채널 활성 수준 상승으로도 지칭됨)과 연관된 증상 및 질환의 치료 (예방적 처치 또는 억제를 포함함)를 위해 대상체, 예컨대 인간 또는 동물 대상체에게 투여될 수 있다.
본원에 개시된 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다. 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 서로 부분적으로, 실질적으로, 또는 완전히 상보적일 수 있다. 본원에 기술된 RNAi 작용제 센스 및 안티센스 가닥의 길이는 각각 뉴클레오티드 16 내지 30개일 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 뉴클레오티드 17 내지 26개 길이이다. 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 길이 또는 상이한 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 뉴클레오티드 21 내지 26개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 뉴클레오티드 21 내지 24개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 양쪽 모두 뉴클레오티드 21개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및/또는 안티센스 가닥은 독립적으로 뉴클레오티드 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 길이이다. 본원에 기술된 RNAi 작용제는, 알파-ENaC를 발현하는 세포에 전달 시, 생체 내에서 또는 시험관 내에서 하나 이상의 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제한다.
본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 알파-ENaC mRNA 내의 동일한 개수의 뉴클레오티드의 코어 신장물 서열 (본원에서 "코어 신장물" 또는 "코어 서열로도 지칭됨)에 대한 동일성이 적어도 85% 인 적어도 16개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 센스 가닥 코어 신장물은 뉴클레오티드 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개 길이이다. 일부 실시양태에서, 이러한 센스 가닥 코어 신장물은 뉴클레오티드 17개 길이이다. 일부 실시양태에서, 이러한 센스 가닥 코어 신장물은 뉴클레오티드 19개 길이이다.
본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 알파-ENaC mRNA 내의 동일한 개수의 뉴클레오티드의 코어 신장물 및 상응하는 센스 가닥에 대한 상보성이 적어도 85%인 적어도 16개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 안티센스 가닥 코어 신장물은 뉴클레오티드 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개 길이이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 1에 개시된 서열 중 임의의 것의 서열을 갖는 알파-ENaC 유전자의 일부분을 표적화한다.
알파-ENaC RNAi 작용제에서 사용될 수 있는 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 예가 표 3 및 4에서 제공된다. 알파-ENaC RNAi 작용제 듀플렉스의 예가 표 5에서 제공된다. 본원에 개시된 특정 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 이룰 수 있거나 또는 이에 포함될 수 있는 19-뉴클레오티드 코어 신장물 서열의 예가 표 2에서 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 생체 내에서 대상체, 예컨대 포유동물 내의 상피 세포에 알파-ENaC RNAi 작용제를 전달하는 방법을 특색으로 한다. 이같은 방법에서 사용하기 위한 조성물 또한 본원에서 기술된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체에게 생체 내에서 폐 상피 세포로 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제를 생체 내에서 인간 대상체의 폐 상피 세포에 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제가 관련 분야에 공지되어 있는 임의의 올리고뉴클레오티드 전달 기술을 사용하여 표적 세포 또는 조직으로 전달될 수 있다. 핵산 전달 방법은 리포솜 내의 캡슐화에 의한 것, 이온영동에 의한 것, 또는 기타 비히클, 예컨대 히드로겔, 시클로덱스트린, 생분해성 나노캡슐 및 생체부착성 미세구체, 단백질성 벡터, 또는 다이나믹 폴리컨쥬게이트(Dynamic Polyconjugate)™ (DPC) 내로의 혼입에 의한 것을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다 (예를 들어 WO 2000/053722, WO 2008/022309, WO 2011/104169, 및 WO 2012/083185를 참조하고, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다).
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 RNAi 작용제를 표적화 기에 공유결합으로 연결시키는 것에 의해 세포 또는 조직으로 전달된다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 세포 수용체 리간드, 예컨대 인테그린 표적화 리간드를 포함할 수 있다. 인테그린은 세포-세포외 기질 (ECM) 부착을 용이하게 하는 막횡단 수용체 패밀리이다. 특히, 인테그린 알파-v-베타-6 (αvβ6)은 ECM 단백질 및 TGF-베타 잠복성-연관 펩티드 (LAP)에 대한 수용체인 것으로 공지된 상피-특이적 인테그린이고, 다양한 세포 및 조직에서 발현된다. 인테그린 αvβ6은 손상된 폐 상피에서 고도로 상향조절되는 것으로 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 인테그린 αvβ6에 대한 친화력이 있는 인테그린 표적화 리간드에 연결된다. 본원에서 지칭된 바와 같이, "αvβ6 인테그린 표적화 리간드"는 자신이 부착된 RNAi 작용제를 원하는 세포 및/또는 조직 (즉, 인테그린 αvβ6을 발현하는 세포)으로 표적화 및 전달하는 것을 용이하게 하는 리간드로서 사용될 수 있는, 인테그린 αvβ6에 대한 친화력이 있는 화합물이다. 일부 실시양태에서, 다중 αvβ6 인테그린 표적화 리간드 또는 αvβ6 인테그린 표적화 리간드 클러스터가 알파-ENaC RNAi 작용제에 연결된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제-αvβ6 인테그린 표적화 리간드 접합체가 수용체-매개 세포내이입을 통해 또는 다른 수단에 의해 폐 상피 세포에 의해 선택적으로 내재화된다.
αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제를 전달하는데 유용한 표적화 기의 예가, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2018/085415 및 미국 특허 가출원 번호 62/580,398 및 62/646,739에 개시되어 있고, 이들 각각의 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다.
표적화 기는 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 3' 또는 5' 단부에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 센스 가닥의 3' 또는 5' 단부에 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 센스 가닥의 5' 단부에 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 RNAi 작용제의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 상의 뉴클레오티드에 내부에서 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 링커를 통해 RNAi 작용제에 연결된다.
표적화 기는, 링커와 함께 또는 링커 없이, 표 2, 3, 및 4에 개시된 센스 및/또는 안티센스 가닥 중 임의의 것의 5' 또는 3' 단부에 부착될 수 있다. 링커는, 표적화 기와 함께 또는 표적화 기 없이, 표 2, 3, 및 4에 개시된 센스 및/또는 안티센스 가닥 중 임의의 것의 5' 또는 3' 단부에 부착될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 표 5에 개시된 듀플렉스 구조를 갖는 하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물을 특색으로 한다.
일부 실시양태에서, 상이한 서열을 갖는 적어도 2개의 알파-ENaC RNAi 작용제의 조합물 또는 칵테일을 포함하는 조성물이 본원에 기술된다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제는 각각 별개로, 그리고 독립적으로 표적화 기에 연결된다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제는 인테그린 표적화 리간드를 포함하거나 또는 이로 이루어지는 표적화 기에 각각 연결된다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함하거나 또는 이로 이루어지는 표적화 기에 각각 연결된다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제할 수 있는 양의 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 알파-ENaC RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는, 대상체에서 알파-ENaC 유전자 발현을 억제하는 방법을 특색으로 한다. 이같은 방법에서 사용하기 위한 조성물이 본원에서 또한 기술된다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 ENaC 활성 상승 또는 강화에 의해 유발되는 질환 또는 증상의 치료를 필요로 하는 대상체에게 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 것의 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제를 투여하는 것을 포함하는, ENaC 활성 상승 또는 강화에 의해 유발되는 질환 또는 증상을 치료 (예방적 또는 방지적 치료를 포함함)하는 방법을 특색으로 한다. 이같은 방법에서 사용하기 위한 조성물이 본원에서 또한 기술된다.
일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하나 이상의 추가적인 (즉, 제2, 제3 등) 치료제와 임의적으로 조합된다. 제2 치료제는 또 다른 알파-ENaC RNAi 작용제 (예를 들어, 알파-ENaC 유전자 내의 상이한 서열을 표적화하는 알파-ENaC RNAi 작용제)일 수 있다. 추가적인 치료제는 소형 분자 약물, 항체, 항체 단편, 및/또는 앱타머일 수도 있다. 알파-ENaC RNAi 작용제는, 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께 또는 이러한 치료제 없이, 하나 이상의 부형제와 조합되어 제약 조성물을 형성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제를 생체 내에서 상피 세포로 전달하기 위한 조성물이 기술된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표적화 리간드 또는 약동학 (PK) 조정제에 접합되지 않고 전달된다 ("네이키드(naked)" 또는 "네이키드 RNAi 작용제"로 지칭됨). 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표적화 기, 연결 기, PK 조정제, 및/또는 또 다른 비-뉴클레오티드 기에 접합된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표적화 기에 연결되고, 여기서 표적화 기는 인테그린 표적화 리간드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 인테그린 표적화 리간드는 αvβ6 인테그린 표적화 리간드이다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 하나 이상의 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 하나 이상의 연결 기 또는 다른 비-뉴클레오티드 기 또는 화합물, 예컨대 약동학 조정제에 연결된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티, 또는 12개 이상의 탄소 원자가 있는 소수성 기, 예컨대 콜레스테롤 또는 팔미토일 기에 접합된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 콜레스테롤 또는 콜레스테릴 유도체, 알킬 기, 알케닐 기, 알키닐 기, 아릴 기, 아르알킬 기, 아르알케닐 기 또는 아르알키닐 기 (각각 선형, 분지형, 고리형, 및/또는 치환 또는 비치환일 수 있음)로부터 선택된 하나 이상의 약동학 조정제에 연결된다. 일부 실시양태에서, 이러한 모이어티의 부착 위치는 센스 가닥의 5' 또는 3' 단부일 수 있고/있거나, 센스 가닥의 임의의 소정의 뉴클레오티드의 리보스 고리의 2' 위치일 수 있고/있거나, 센스 가닥의 임의의 위치의 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 백본에 부착될 수 있다.
일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제 중 하나 이상이 제약상 허용되는 담체 또는 희석제 내에서 포유동물에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.
알파-ENaC RNAi 작용제을 사용하는 것은 ENaC 활성 강화 또는 상승과 연관된 질환 또는 장애의 치료적 처치 (예방적 처치를 포함함)를 위한 방법을 제공한다. 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 알파-ENaC의 발현을 억제할 수 있다 (예를 들어, 억제한다). 알파-ENaC RNAi 작용제는 낭성 섬유증, 만성 기관지염, 비-낭성 섬유증 기관지확장증, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 천식, 기도 감염, 원발성 섬모 운동이상증, 및 폐 암종 낭성 섬유증을 포함하는 다양한 호흡기 질환을 치료하는데 또한 사용될 수 있다. 추가로 알파-ENaC RNAi 작용제는, 예를 들어, 다양한 눈 질환 및 장애, 예컨대 건성안을 치료하는데 사용될 수 있다. 이같은 치료 방법은 알파-ENaC RNAi 작용제를 ENaC 활성 수준이 상승 또는 강화된 인간 또는 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 알파-ENaC RNAi 작용제를 폐 상피 세포에 전달하기 위한 조성물이 본원에서 기술된다. 추가로, 알파-ENaC RNAi 작용제를 생체 내에서 신장 상피 세포 및/또는 GI 또는 생식관 내의 상피 세포 및/또는 및 눈 내의 안구 표면 상피 세포를 포함하는 세포에 전달하기 위한 조성물이 본원에서 일반적으로 기술된다.
하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물은 국소 또는 전신 치료를 원하는지 여부에 따라 다양한 방식으로 투여될 수 있다. 투여는, 예를 들어, 정맥내, 동맥내, 피하, 복막내, 피부하 (예를 들어, 이식된 장치를 통함), 및 실질내 투여를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 제약 조성물은 흡입 (예컨대 건조 분말 또는 에어로졸 흡입), 비강내 투여, 기관내 투여, 또는 입인두 흡인 투여에 의해 투여된다.
기술된 알파-ENaC RNAi 작용제 및/또는 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물은 ENaC 활성 수준 상승 또는 강화에 의해 유발되는 질환 또는 병태의 치료적 처치를 위한 방법에서 사용될 수 있다. 이같은 방법은 본원에 기술된 바와 같은 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체, 예를 들어, 인간 또는 동물 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 것을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를 치료 유효량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 적어도 부분적으로 알파-ENaC 발현에 의해 매개되는 병리 상태 (예컨대 병태 또는 질환)를 치료 (예방적 치료를 포함함)하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 것을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를 세포에 투여하는 것을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 표 2 또는 표 4의 서열 중 임의의 것을 포함하는 센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를 치료 유효량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 적어도 부분적으로 알파-ENaC 발현에 의해 매개되는 병리 상태를 치료 (예방적 치료를 포함함)하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 표 2 또는 표 4의 서열 중 임의의 것을 포함하는 센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를 세포에 투여하는 것을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 표 4의 서열 중 임의의 것을 포함하는 센스 가닥, 및 표 3의 서열 중 임의의 것의 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를 치료 유효량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 적어도 부분적으로 알파-ENaC 발현에 의해 매개되는 병리 상태를 치료 (예방적 치료를 포함함)하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 표 4의 서열 중 임의의 것을 포함하는 센스 가닥, 및 표 3의 서열 중 임의의 것의 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를 세포에 투여하는 것을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 표 4의 서열 중 임의의 것의 핵염기 서열로 이루어지는 센스 가닥 및 표 3의 서열 중 임의의 것의 핵염기 서열로 이루어지는 안티센스 가닥을 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시된다. 다른 실시양태에서, 표 4의 변형 서열 중 임의의 것의 변형 서열로 이루어지는 센스 가닥 및 표 3의 변형 서열 중 임의의 것의 변형 서열로 이루어지는 안티센스 가닥을 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 표 5에 기재된 듀플렉스 중 하나의 듀플렉스 구조를 갖는 하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 알파-ENaC 유전자 (서열식별번호(SEQ ID NO): 1) 상의 특정 위치를 표적화하도록 디자인된다. 본원에서 규정된 바와 같이, 안티센스 가닥 서열은 유전자 상의 소정의 위치에서 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인되고, 이때 안티센스 가닥의 5' 말단 핵염기는 유전자와 염기 쌍을 형성할 때 유전자 상의 소정의 위치로부터 (3' 단부를 향해) 뉴클레오티드 19개 하류인 위치와 정렬될 것이다. 예를 들어, 본원의 표 1 및 2에 도시된 바와 같이, 위치 972에서 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥 서열은 유전자와 염기 쌍을 형성할 때 안티센스 가닥의 5' 말단 핵염기가 알파-ENaC 유전자의 위치 990과 정렬되는 것을 필요로 한다.
본원에서 제공된 바와 같이, 적어도 16개의 연속적인 뉴클레오티드의 코어 신장물 서열에 걸쳐 안티센스 가닥 및 유전자의 적어도 85%의 상보성 (예를 들어, 적어도 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 의 상보성)이 있는 한, 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥 (5' → 3')의 위치 1의 핵염기가 유전자에 대해 상보적인 것을 필요로 하지 않는다. 예를 들어, 알파-ENaC 유전자의 위치 972를 표적화하도록 디자인된 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 경우, 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥의 5' 말단 핵염기는 유전자의 위치 990과 정렬되어야 한다; 그러나, 적어도 16개의 연속적인 뉴클레오티드의 코어 신장물 서열에 걸쳐 안티센스 가닥 및 유전자의 적어도 85%의 상보성 (예를 들어, 적어도 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100%의 상보성)이 있는 한, 안티센스 가닥의 5' 말단 핵염기는 알파-ENaC 유전자의 위치 990에 대해 상보적일 수는 있지만, 상보적일 필요는 없다. 특히, 본원에 개시된 다양한 실시예에 의해 제시되는 바와 같이, 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥이 유전자에 결합하는 특정 부위 (예를 들어, 알파-ENaC RNAi 작용제가 위치 972, 위치 1291, 위치 1000, 또는 일부 다른 위치에서 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인되는지 여부)는 알파-ENaC RNAi 작용제에 의해 달성되는 억제의 수준에 매우 중요한 인자이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGG (서열식별번호: 3)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGG (서열식별번호: 3) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGG (서열식별번호: 3)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 서열식별번호: 3은 안티센스 가닥의 위치 1-21 (5' → 3')에 위치한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 2) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타냄)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 안티센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다. 관련 분야의 통상의 기술자가 명확하게 이해할 바와 같이, 본원에 개시된 변형 뉴클레오티드 서열에서 나타난 바와 같이 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 것은 올리고뉴클레오티드에 전형적으로 존재하는 포스포디에스테르 연결을 교체한다 (예를 들어, 모든 뉴클레오시드간 연결을 나타내는 도 12a 내지 도 12g를 참조한다).
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 2) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타냄)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 안티센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') CCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 5)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') CCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 5) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') CCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 5)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 서열식별번호: 5는 안티센스 가닥의 위치 1-21 (5' → 3')에 위치한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 4) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타냄)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 안티센스 가닥은 센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 4) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타냄)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 안티센스 가닥은 센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 역전 무염기 잔기가 서열식별번호: 4의 센스 가닥의 5' 단부, 센스 가닥의 3' 단부, 또는 센스 가닥의 5' 및 3' 단부 양쪽 모두에 부가된다. 일부 실시양태에서, 표적화 리간드, 예컨대 αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 서열식별번호: 4의 센스 가닥의 5' 단부, 센스 가닥의 3' 단부, 또는 센스 가닥의 5' 및 3' 단부 양쪽 모두에 공유결합으로 연결될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGG (서열식별번호: 3)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') CCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 5)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGG (서열식별번호: 3) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') CCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 5) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 2)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 4)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 2)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 4)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기 및 5' 말단 단부에 공유결합으로 연결된 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGC (서열식별번호: 7)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGC (서열식별번호: 7) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGC (서열식별번호: 7)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 서열식별번호: 7은 안티센스 가닥의 위치 1-21 (5' → 3')에 위치한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsc (서열식별번호: 6) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타냄)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 안티센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') GCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 9)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') GCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 9) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') GCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 9)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 서열식별번호: 9는 안티센스 가닥의 위치 1-21 (5' → 3')에 위치한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') gscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 8) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타냄)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 안티센스 가닥은 센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 역전 무염기 잔기가 서열식별번호: 8의 센스 가닥의 5' 단부, 센스 가닥의 3' 단부, 또는 센스 가닥의 5' 및 3' 단부 양쪽 모두에 부가된다. 일부 실시양태에서, 표적화 리간드, 예컨대 αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 서열식별번호: 8의 센스 가닥의 5' 단부, 센스 가닥의 3' 단부, 또는 센스 가닥의 5' 및 3' 단부 양쪽 모두에 공유결합으로 연결될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGC (서열식별번호: 7)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') GCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 9)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACAGC (서열식별번호: 7) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') GCUGUGCAACCAGAACAAAUA (서열식별번호: 9) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsc (서열식별번호: 6)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') gscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 8)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내며; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsc (서열식별번호: 6)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') gscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 8)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기 및 5' 말단 단부에 공유결합으로 연결된 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cPrpusAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 10) (여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내며, cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘 (표 6 참조)를 나타냄)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 안티센스 가닥에 대해 적어도 실질적으로 상보적이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cPrpusAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 10)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 4)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내며, cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘 (표 6 참조)을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cPrpusAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 10)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥, 및 변형 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') cscugugcaAfCfCfagaacaaaua (서열식별번호: 4)로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기 및 5' 말단 단부에 공유결합으로 연결된 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고:
여기서 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 대해 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함하고, 안티센스 가닥 및 센스 가닥 양쪽 모두 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고:
여기서 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 대해 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함하고, 안티센스 가닥 및 센스 가닥 양쪽 모두 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이며, 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기를 포함하고, αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고:
여기서 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 대해 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함하고, 안티센스 가닥 및 센스 가닥 양쪽 모두 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이고, 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기를 포함하고, αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 연결되며, 각각의 안티센스 가닥 서열은 안티센스 가닥의 위치 1-21에 위치한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 쌍 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고:
여기서 안티센스 가닥 및 센스 가닥 양쪽 모두 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 쌍 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고:
여기서 안티센스 가닥 및 센스 가닥 양쪽 모두 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이고, 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기를 포함하고, αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고:
(여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내며, cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘 (표 6 참조)를 나타냄); 여기서 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 대해 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함하고, 센스 가닥 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고:
여기서 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥에 대해 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함하고, 센스 가닥 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이고, 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기를 포함하고, αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 쌍 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함한다:
(여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고, cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘 (표 6 참조)을 나타냄).
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 뉴클레오티드 서열 쌍 (5' → 3') 중 하나로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나 또는 이를 포함하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고:
(여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고, cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘 (표 6 참조)을 나타냄); 여기서 센스 가닥은 3' 말단 단부의 역전 무염기 잔기를 포함하고, αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACA (서열식별번호: 21)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACA (서열식별번호: 21) (여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드임)와 1개 이하의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') UAUUUGUUCUGGUUGCACA (서열식별번호: 21)와 0 또는 1개의 핵염기만큼 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 서열식별번호: 21은 안티센스 가닥의 위치 1-19 (5' → 3')에 위치한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "폴리뉴클레오티드"는 각각 독립적으로 변형되거나 또는 변형되지 않을 수 있는 연결된 뉴클레오시드들의 중합체를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "RNAi 작용제" ("RNAi 유발제"로도 지칭됨)는 서열 특이적 방식으로 표적 mRNA의 메신저 RNA (mRNA) 전사체를 분해하거나 또는 이의 번역을 억제할 수 있는 (예를 들어, 적합한 조건 하에 이를 분해하거나 또는 이의 번역을 억제하는) RNA 또는 RNA-유사 (예를 들어, 화학적으로 변형된 RNA) 올리고뉴클레오티드 분자를 함유하는 조성물을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, RNAi 작용제는 RNA 간섭 메커니즘 (즉, 포유동물 세포의 RNA 간섭 경로 기구 (RNA-유도 침묵화 복합체 또는 RISC)와의 상호작용을 통해 RNA 간섭을 유도함)을 통해, 또는 임의의 대안적인 메커니즘(들) 또는 경로(들)에 의해 작동할 수 있다. RNAi 작용제가, 이러한 용어가 본원에서 사용된 바와 같이, 주로 RNA 간섭 메커니즘을 통해 작동하지는 것으로 여겨지지만, 개시된 RNAi 작용제는 임의의 특정 경로 또는 메커니즘에 의해 구속되거나 또는 이에 제한되지 않는다. 본원에 개시된 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥으로 구성되고, 짧은 간섭 RNA (siRNA), 이중 가닥 RNA (dsRNA), 마이크로 RNA (miRNA), 짧은 헤어핀 RNA (shRNA), 및 다이서 기질을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 기술된 RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표적화되는 mRNA (즉, 알파-ENaC mRNA)에 대해 적어도 부분적으로 상보적이다. RNAi 작용제는 하나 이상의 변형 뉴클레오티드 및/또는 하나 이상의 비-포스포디에스테르 연결을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 소정의 유전자의 발현을 언급할 때의 용어 "침묵시킨다", "감소시킨다", "억제한다", "하향-조절한다" 또는 "녹다운시킨다"는 유전자가 전사되는 세포, 세포 군, 조직, 기관, 또는 대상체 내의 유전자로부터 전사된 RNA의 수준 또는 mRNA로부터 번역된 폴리펩티드, 단백질 또는 단백질 서브유닛의 수준에 의해 측정된 바와 같은 유전자 발현이 세포, 세포 군, 조직, 기관 또는 대상체가 본원에 기술된 RNAi 작용제로 처치될 때 이렇게 처치되지 않은 제2 세포, 세포 군, 조직, 기관 또는 대상체에 비교하여 감소된다는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "서열" 및 "뉴클레오티드 서열"은 표준 명명법을 사용하여 일련의 문자로 기술된, 일련의 또는 연속된 핵염기 또는 뉴클레오티드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "염기", "뉴클레오티드 염기", 또는 "핵염기"는 뉴클레오티드의 성분인 헤테로고리형 피리미딘 또는 퓨린 화합물이고, 1차 퓨린 염기인 아데닌 및 구아닌, 및 1차 피리미딘 염기인 시토신, 티민 및 우라실을 포함한다. 핵염기는, 비제한적으로, 만능 염기, 소수성 염기, 혼잡 염기, 크기-확장 염기, 및 플루오린화 염기를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008]을 참조한다). 이같은 변형 핵염기 (변형 핵염기를 포함하는 포스포르아미디트 화합물을 포함함)의 합성은 관련 분야에 공지되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 그리고 달리 지시되지 않는 한, 용어 "상보적"은, 제1 핵염기 또는 뉴클레오티드 서열 (예를 들어, RNAi 작용제 센스 가닥 또는 표적화된 mRNA)을 제2 핵염기 또는 뉴클레오티드 서열 (예를 들어, RNAi 작용제 안티센스 가닥 또는 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드)과 관련하여 기술하도록 사용되었을 때, 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드가 특정 표준 조건 하에 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드와 혼성화하고 (포유동물의 생리학적 조건 (또는 시험과 내에서의 유사한 조건) 하에 염기 쌍 수소 결합을 형성하고), 듀플렉스 또는 이중 나선 구조를 형성하는 능력을 의미한다. 적어도 상기 혼성화 요건이 충족되는 한, 상보적 서열은 왓슨-크릭 염기 쌍 또는 비-왓슨-크릭 염기 쌍을 포함하고, 천연 또는 변형 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 서열 동일성 또는 상보성은 변형에 독립적이다. 예를 들어, 본원에서 정의된 바와 같은 a 및 Af는 U (또는 T)에 상보적이고, 동일성 또는 상보성을 결정하기 위한 목적으로 A와 동일하다.
본원에서 사용된 바와 같이, "완벽하게 상보적" 또는 "완전히 상보적"은 핵염기 또는 뉴클레오티드 서열 분자의 혼성화된 쌍에서, 제1 올리고뉴클레오티드의 연속 서열 내의 모든 (100％의) 염기가 제2 올리고뉴클레오티드의 연속 서열 내의 동일한 개수의 염기와 혼성화할 것임을 의미한다. 연속 서열은 제1 또는 제2 뉴클레오티드 서열 모두 또는 이의 일부분을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "부분적으로 상보적"은 핵염기 또는 뉴클레오티드 서열 분자의 혼성화된 쌍에서, 제1 올리고뉴클레오티드의 연속 서열 내의 염기 모두가 아니라 이의 적어도 70%가 제2 올리고뉴클레오티드의 연속 서열 내의 동일한 개수의 염기와 혼성화할 것임을 의미한다. 연속 서열은 제1 또는 제2 뉴클레오티드 서열 모두 또는 이의 일부분을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "실질적으로 상보적"은 핵염기 또는 뉴클레오티드 서열 분자의 혼성화된 쌍에서, 제1 올리고뉴클레오티드의 연속 서열 내의 염기 모두가 아니라 이의 적어도 85%가 제2 올리고뉴클레오티드의 연속 서열 내의 동일한 개수의 염기와 혼성화할 것임을 의미한다. 연속 서열은 제1 또는 제2 뉴클레오티드 서열 모두 또는 이의 일부분을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "상보적", "완전히 상보적", "부분적으로 상보적", 및 "실질적으로 상보적"은 RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이 또는 RNAi 작용제의 안티센스 가닥과 알파-ENaC mRNA의 서열 사이의 핵염기 또는 뉴클레오티드 매칭에 관련하여 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 핵산 서열에 적용된 바와 같은 용어 "실질적으로 동일한" 또는 "실질적 동일성"은 뉴클레오티드 서열 (또는 뉴클레오티드 서열의 일부분)이 기준 서열에 비교하여 적어도 약 85% 서열 동일성 또는 이를 초과하는 값, 예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는다는 것을 의미한다. 서열 동일성의 백분율은 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교 창에 걸쳐 비교함으로써 결정된다. 백분율은 동일한 유형의 핵산 염기가 양쪽 서열에서 발생하는 위치의 개수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 개수를 비교 창 내의 위치의 총 개수로 나누고, 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산된다. 본원에 개시된 발명은 본원에 개시된 것들과 실질적으로 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료" 등은 대상체에서 질환의 하나 이상의 증상으로부터의 완화 또는 이의 수, 중증도 및/또는 빈도의 경감을 제공하도록 취해지는 방법 또는 단계를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "치료하다" 및 "치료"는 대상체에서의 질환의 하나 이상의 증상의 수, 중증도 및/또는 빈도의 방지적 처치, 관리, 예방적 처치, 및/또는 억제 또는 감소를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "세포 내로의 도입"이라는 문구는, RNAi 작용제를 지칭할 때, RNAi 작용제를 세포 내로 기능적으로 전달하는 것을 의미한다. "기능적 전달"은 RNAi 작용제가 예상되는 생물학적 활성, 예를 들어, 유전자 발현의 서열-특이적 억제를 가질 수 있게 하는 방식으로 RNAi 작용제를 세포에 전달하는 것을 의미한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같은 기호 "
"의 사용은 본원에 기술된 발명의 범주에 따른 임의의 기 또는 기들이 이에 연결될 수 있다는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이성질체"는 분자식이 동일하지만 이들의 원자의 성질 또는 결합 순서 면에서 또는 공간 내에서의 이들의 분자의 배열 면에서 상이한 화합물들을 지칭한다. 공간 내에서의 이들의 원자의 배열 면에서 상이한 이성질체는 "입체 이성질체"로 명명된다. 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체는 "부분입체 이성질체"로 명명되고, 중첩가능하지 않은 거울상인 입체 이성질체는 "거울상 이성질체", 또는 때때로 광학 이성질체로 명명된다. 4개의 동일하지 않은 치환기에 결합된 탄소 원자는 "키랄 중심"으로 명명된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 특정 형상을 갖는 것으로 구조 면에서 구체적으로 확인되지 않는 한, 비대칭 중심이 존재하고 따라서 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 기타 입체 이성질체 형상을 일으키는 각각의 구조에 대해, 본원에 개시된 각각의 구조는 이들의 광학적으로 순수한 형태 및 라세미 형태를 포함하여 모든 이러한 가능한 이성질체를 나타내도록 의도된다. 예를 들어, 본원에 개시된 구조는 부분입체 이성질체, 뿐만 아니라 단일한 입체 이성질체의 혼합물을 포함하도록 의도된다.
본원의 청구범위에서 사용된 바와 같이, "~로 이루어지는"이라는 문구는 청구범위에서 명시되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. 본원의 청구범위에서 사용될 때, "본질적으로 ~로 이루어지는"이라는 문구는 청구범위의 범주를 명시된 물질 또는 단계 및 청구된 발명의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들로 제한한다.
관련 기술 분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 화합물 및 조성물이, 화합물 또는 조성물이 놓이는 환경에 따라, 양성자화 또는 탈양성자화 상태의 특정 원자 (예를 들어, N, O, 또는 S 원자)를 가질 수 있다는 것을 쉽게 이해 및 인지할 것이다. 따라서, 본원에서 사용된 바와 같이, 본원에 개시된 구조는 특정한 관능기, 예를 들어, OH, SH, 또는 NH가 양성자화 또는 탈양성자화될 수 있는 것으로 생각한다. 본원의 개시내용은, 관련 기술 분야의 통상의 기술자가 쉽게 이해할 바와 같이, 개시된 화합물 및 조성물을 환경 (예컨대 pH)을 기초로 하는 이들의 양성자화 상태와 관계 없이 포함하도록 의도된다
본원에서 사용된 바와 같이, 2개의 화합물 또는 분자 사이의 연결을 언급할 때의 용어 "연결된" 또는 "접합된"은 2개의 화합물 또는 분자가 공유 결합에 의해 연결된다는 것을 의미한다. 언급되지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "연결된" 및 "접합된"은 임의의 개재 원자 또는 원자 군의 존재 또는 부재 하의 제1 화합물과 제2 화합물 사이의 연결을 지칭할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "~을 포함하는"은 본원에서 "~을 포함하지만 이에 제한되지 않는"이라는 문구를 의미하도록 사용되고, 이와 상호교환가능하게 사용된다. 용어 "또는"은, 문맥적으로 명확하게 달리 지시되지 않는 한, 본원에서 용어 "및/또는"을 의미하도록 사용되고, 이와 상호교환가능하게 사용된다.
달리 규정되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 관련 기술 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것들과 유사하거나 등가인 방법 및 물질이 본 발명의 실행 또는 테스트에서 사용될 수 있지만, 적절한 방법 및 물질이 하기에 기술된다. 본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 전문이 참조로 포함된다. 충돌되는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선한다. 추가적으로, 물질, 방법 및 예는 예시적일 뿐이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 목표, 특색, 측면 및 장점이 하기의 상세한 설명, 첨부 도면 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
도면의 간단한 설명
도 1. 비히클 대조군에 비교된 다양한 알파-ENaC RNAi 작용제 투여 후의 마우스 전체 폐 알파-ENaC 발현의 상대적 발현을 나타내는 막대 그래프.
도 2. 비히클 대조군에 비교된 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04858 투여 후의 마우스 전체 폐 알파-ENaC 발현의 상대적 발현을 나타내는 막대 그래프.
도 3. 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04025-접합체 (즉, 펩티드-기반 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 AD04025)의 래트 전체 폐 알파-ENaC 발현의 상대적 발현을 나타내는 그래프.
도 4. 본원에서 Tri-SM2로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 5. 본원에서 Tri-SM1로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 6. 본원에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 7. 본원에서 Tri-SM9로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 8. 본원에서 Tri-SM6으로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 9. 본원에서 Tri-SM8로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 10. 본원에서 Tri-SM10으로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 11. 본원에서 Tri-SM11로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 12a. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기와 함께 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
하기의 약어가 도 12a 내지 12g에서 사용된다: a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드이고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드이고; p는 포스포디에스테르 연결이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; invAb는 역전 무염기 잔기이고; cPrp는 5' 말단 시클로프로필 포스포네이트 기 (표 6 참조)이고; NH2-C6은 C6 아미노 기 (표 6 참조)이고; TriAlk14는 본원에 도시된 구조를 갖는 트리-알킨 링커 (표 6 참조)이다.
도 12b. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 트리-알킨 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조). 본원에 기술된 바와 같이, AD05453 및 AD05924는 동일한 변형 뉴클레오티드 서열을 갖고, 본원에 개시된 알파 ENaC-RNAi 작용제 접합체를 합성하는 것에 대한 대안적 접근법을 나타낸다.
도 12c. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05625의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12d. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05347의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12e. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05831의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12f. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05833의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12g. 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453 및 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924 양쪽 모두의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조) (여기서, X는 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 나타낸다 (임의의 링커를 포함함)).
도 12h. 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 접합된, 본원에 기술된 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드-RNAi 작용제 접합체의 예의 개략도. 여기에 나타난 바와 같이, 각각의 αvβ6은 αvβ6 인테그린 표적화 화합물을 나타낸다.
도 13a 내지 13d. 나트륨 염으로 제시된, NH2-C6 말단 아미노 기를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 화학 구조 표현.
도 14a 내지 14d. 나트륨 염으로 제시된, 트리-알킨 관능화 링커 기 (TriAlk14)를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924의 화학 구조 표현.
도 15a 내지 15e. 나트륨 염으로서의, Tri-SM6.1에 접합되어 제시된 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 화학 구조 표현. 본원에서 논의된 바와 같이, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924에 대한 변형 센스 가닥 뉴클레오티드 서열 (즉, 표 4의 AM07807-SS)에 기재된 바와 같이 포스포르아미디트 합성을 통해 부가될 수 있는 트리-알킨 관능화 링커 기 (TriAlk14)를 사용하여 동일한 화학 구조가 합성될 수 있다.
도 16a 내지 16d. 유리 산으로서 제시된, NH2-C6 말단 관능화 아미노 기를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 화학 구조 표현.
도 1. 비히클 대조군에 비교된 다양한 알파-ENaC RNAi 작용제 투여 후의 마우스 전체 폐 알파-ENaC 발현의 상대적 발현을 나타내는 막대 그래프.
도 2. 비히클 대조군에 비교된 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04858 투여 후의 마우스 전체 폐 알파-ENaC 발현의 상대적 발현을 나타내는 막대 그래프.
도 3. 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04025-접합체 (즉, 펩티드-기반 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 AD04025)의 래트 전체 폐 알파-ENaC 발현의 상대적 발현을 나타내는 그래프.
도 4. 본원에서 Tri-SM2로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 5. 본원에서 Tri-SM1로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 6. 본원에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 7. 본원에서 Tri-SM9로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 8. 본원에서 Tri-SM6으로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 9. 본원에서 Tri-SM8로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 10. 본원에서 Tri-SM10으로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 11. 본원에서 Tri-SM11로 지칭되는 세갈래 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드의 화학 구조 표현.
도 12a. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기와 함께 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
하기의 약어가 도 12a 내지 12g에서 사용된다: a, c, g, 및 u는 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드이고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드이고; p는 포스포디에스테르 연결이고; s는 포스포로티오에이트 연결이고; invAb는 역전 무염기 잔기이고; cPrp는 5' 말단 시클로프로필 포스포네이트 기 (표 6 참조)이고; NH2-C6은 C6 아미노 기 (표 6 참조)이고; TriAlk14는 본원에 도시된 구조를 갖는 트리-알킨 링커 (표 6 참조)이다.
도 12b. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 트리-알킨 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조). 본원에 기술된 바와 같이, AD05453 및 AD05924는 동일한 변형 뉴클레오티드 서열을 갖고, 본원에 개시된 알파 ENaC-RNAi 작용제 접합체를 합성하는 것에 대한 대안적 접근법을 나타낸다.
도 12c. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05625의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12d. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05347의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12e. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05831의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12f. 표적화 리간드로의 연결을 용이하게 하기 위한 센스 가닥의 5' 말단 단부 상의 아미노 기로 관능화되어 제시된, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05833의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조).
도 12g. 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453 및 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924 양쪽 모두의 변형 센스 및 안티센스 가닥의 개략도 (표 3-5 참조) (여기서, X는 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 나타낸다 (임의의 링커를 포함함)).
도 12h. 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 접합된, 본원에 기술된 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드-RNAi 작용제 접합체의 예의 개략도. 여기에 나타난 바와 같이, 각각의 αvβ6은 αvβ6 인테그린 표적화 화합물을 나타낸다.
도 13a 내지 13d. 나트륨 염으로 제시된, NH2-C6 말단 아미노 기를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 화학 구조 표현.
도 14a 내지 14d. 나트륨 염으로 제시된, 트리-알킨 관능화 링커 기 (TriAlk14)를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924의 화학 구조 표현.
도 15a 내지 15e. 나트륨 염으로서의, Tri-SM6.1에 접합되어 제시된 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 화학 구조 표현. 본원에서 논의된 바와 같이, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05924에 대한 변형 센스 가닥 뉴클레오티드 서열 (즉, 표 4의 AM07807-SS)에 기재된 바와 같이 포스포르아미디트 합성을 통해 부가될 수 있는 트리-알킨 관능화 링커 기 (TriAlk14)를 사용하여 동일한 화학 구조가 합성될 수 있다.
도 16a 내지 16d. 유리 산으로서 제시된, NH2-C6 말단 관능화 아미노 기를 포함하는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453의 화학 구조 표현.
상세한 설명
RNAi 작용제
알파-ENaC (즉, SCNN1A) 유전자의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제 (본원에서 알파-ENaC RNAi 작용제 또는 알파-ENaC RNAi 유발제로 지칭됨)가 본원에서 기술된다. 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다. 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 각각 뉴클레오티드 16개 내지 30개 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 뉴클레오티드 17개 내지 26개 길이일 수 있다. 센스 및 안티센스 가닥은 길이가 동일할 수 있거나, 또는 길이가 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 독립적으로 뉴클레오티드 17개 내지 26개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 독립적으로 뉴클레오티드 17-21개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 양쪽 모두 각각 뉴클레오티드 21-26개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 뉴클레오티드 21-24개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 약 19개 길이인 한편, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 약 21개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 약 21개 길이인 한편, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 약 23개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 양쪽 모두 각각 뉴클레오티드 21개 길이이다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제 센스 및 안티센스 가닥은 각각 독립적으로 뉴클레오티드 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26개 길이이다. 일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 뉴클레오티드 약 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개의 듀플렉스 길이를 갖는다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이의 완벽한, 실질적 또는 부분적 상보성의 영역은 뉴클레오티드 16-26개 (예를 들어, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26개) 길이이고, 안티센스 가닥의 5' 단부에서 또는 그 부근에서 발생한다 (예를 들어, 이러한 영역은 안티센스 가닥의 5' 단부로부터 완벽하게, 실질적으로 또는 부분적으로 상보적이지 않은 뉴클레오티드 0, 1, 2, 3, 또는 4개만큼 분리될 수 있다).
센스 가닥 및 안티센스 가닥 각각은 뉴클레오티드 16 내지 23개 길이의 코어 신장물 (본원에서 "코어 서열" 또는 "코어 신장물 서열"로도 지칭됨)을 함유한다. 안티센스 가닥 코어 신장물은 알파-ENaC 표적 내에 존재하는 뉴클레오티드 서열 (때때로, 예를 들어, 표적 서열로 지칭됨)에 100% (완벽하게) 상보적이거나 또는 적어도 85% (실질적으로) 상보적이다. 센스 가닥 코어 신장물은 안티센스 가닥 내의 코어 신장물에 100% (완벽하게) 상보적이거나 또는 적어도 85% (실질적으로) 상보적이고, 따라서 전형적으로 센스 가닥 코어 신장물은 알파-ENaC mRNA 표적 내에 존재하는 뉴클레오티드 서열 (표적 서열)과 완벽하게 동일하거나 또는 적어도 85% 동일하다. 센스 가닥 코어 신장물은 상응하는 안티센스 코어 신장물과 길이가 동일할 수 있거나, 또는 길이가 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 코어 신장물은 뉴클레오티드 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 코어 신장물은 뉴클레오티드 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개 길이이다.
알파-ENaC RNAi 작용제를 형성하는데 사용된 뉴클레오티드 서열의 예가 표 2, 3, 및 4에서 제공된다. 표 2, 3, 및 4의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 뉴클레오티드 서열을 포함하는 RNAi 작용제 듀플렉스의 예가 표 5에서 제시된다.
알파-ENaC RNAi 작용제 센스 및 안티센스 가닥은 어닐링되어 듀플렉스를 형성한다. 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 서로 부분적으로, 실질적으로, 또는 완전히 상보적일 수 있다. 상보적 듀플렉스 영역 내에서, 센스 가닥 코어 신장물 서열은 안티센스 코어 신장물 서열에 대해 적어도 85% 상보적 또는 100% 상보적이다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 코어 신장물 서열은 안티센스 가닥 코어 신장물 서열의 상응하는 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개 뉴클레오티드 서열에 적어도 85% 또는 100% 상보적인 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 적어도 20개, 적어도 21개, 적어도 22개, 또는 적어도 23개 뉴클레오티드의 서열을 함유한다 (즉, 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 코어 신장물 서열은 적어도 85%의 염기가 쌍을 이루거나 또는 100%의 염기가 쌍을 이룬 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 적어도 20개, 적어도 21개, 적어도 22개, 또는 적어도 23개 뉴클레오티드의 영역을 갖는다).
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것과 뉴클레오티드 0, 1, 2, 또는 3개만큼 상이하다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 2 또는 표 4의 센스 가닥 서열 중 임의의 것과 뉴클레오티드 0, 1, 2, 또는 3개만큼 상이하다.
센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥은 임의적으로 및 독립적으로 코어 신장물 서열의 3' 단부, 5' 단부, 또는 3' 및 5' 단부 양쪽 모두에 추가적인 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 뉴클레오티드 (연장물)를 함유할 수 있다. 존재하는 경우의 안티센스 가닥의 추가적인 뉴클레오티드는 알파-ENaC mRNA 내의 상응하는 서열에 상보적일 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 존재하는 경우의 센스 가닥의 추가적인 뉴클레오티드는 알파-ENaC mRNA 내의 상응하는 서열과 동일할 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 존재하는 경우의 안티센스 가닥의 추가적인 뉴클레오티드는 존재하는 경우의 상응하는 센스 가닥의 추가적인 뉴클레오티드에 상보적일 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 연장물은 센스 가닥 코어 신장물 서열 및/또는 안티센스 가닥 코어 신장물 서열의 5' 및/또는 3' 단부의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 뉴클레오티드를 포함한다. 센스 가닥 상의 연장물 뉴클레오티드는 상응하는 안티센스 가닥 내의 코어 신장물 서열 뉴클레오티드 또는 연장물 뉴클레오티드인 뉴클레오티드에 상보적일 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 반대로, 안티센스 가닥 상의 연장물 뉴클레오티드는 상응하는 센스 가닥 내의 코어 신장물 서열 뉴클레오티드 또는 연장물 뉴클레오티드인 뉴클레오티드에 상보적일 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두 3' 및 5' 연장물을 함유한다. 일부 실시양태에서, 하나의 가닥의 3' 연장물 뉴클레오티드 중 하나 이상이 다른 가닥의 하나 이상의 5' 연장물과 염기 쌍을 이룬다. 다른 실시양태에서, 하나의 가닥의 3' 연장물 뉴클레오티드 중 하나 이상이 다른 가닥의 하나 이상의 5' 연장물과 염기 쌍을 이루지 않는다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 3' 연장물이 있는 안티센스 가닥 및 5' 연장물이 있는 센스 가닥을 갖는다. 일부 실시양태에서, 연장물 뉴클레오티드(들)는 쌍을 이루지 않고, 오버행을 형성한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "오버행"은 본원에 개시된 RNAi 작용제의 혼성화 또는 듀플렉스화 부분의 일부분을 형성하지 않는, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 말단 단부에 위치하는 하나 이상의 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드의 신장물을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 길이의 3' 연장물이 있는 안티센스 가닥을 포함한다. 다른 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 1, 2, 또는 3개 길이의 3' 연장물이 있는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 연장물 뉴클레오티드 중 하나 이상은 우라실 또는 티미딘 뉴클레오티드 또는 상응하는 알파-ENaC mRNA 서열에 상보적인 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 단부는 추가적인 무염기 잔기 (Ab)를 포함할 수 있다. "무염기 잔기" 또는 "무염기 부위"는 당 모이어티의 1' 위치에서 핵염기가 결여된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드이다. (예를 들어, 미국 특허 번호 5,998,203 참조). 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥의 3' 단부에 Ab 또는 AbAb가 부가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 무염기 잔기(들)는 역전 무염기 잔기 (invAb)로서 부가될 수 있다 (표 6 참조). (예를 들어, 문헌 [F. Czauderna, Nucleic Acids Res., 2003, 31(11), 2705-16] 참조).
일부 실시양태에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥은 "말단 캡"을 포함할 수 있고, 이는, 본원에서 사용된 바와 같이, 본원에 개시된 RNAi 작용제의 가닥의 하나 이상의 말단에서 혼입될 수 있고, 일부 경우에, RNAi 작용제에 특정한 이로운 성질, 예를 들어, 엑소뉴클레아제 분해에 대한 보호를 제공할 수 있는 비-뉴클레오티드 화합물 또는 기타 모이어티이다. 말단 캡은 일반적으로 관련 분야에 공지되어 있고, 역전 무염기 잔기, 뿐만 아니라 탄소 사슬 예컨대 말단 C3, C6, 또는 C12 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 말단 캡은 센스 가닥의 5' 말단 단부, 3' 말단 단부, 또는 5' 및 3' 말단 단부 양쪽 모두에 존재한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 1, 2, 3, 4, 또는 5개 길이의 3' 연장물이 있는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 연장물 뉴클레오티드 중 하나 이상은 아데노신, 우라실, 또는 티미딘 뉴클레오티드, AT 디뉴클레오티드, 또는 알파-ENaC mRNA 서열 내의 뉴클레오티드에 상응하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 3' 센스 가닥 연장물은 하기 서열 중 하나를 포함하거나 또는 이로 이루어지지만, 이에 제한되지는 않는다: T, UT, TT, UU, UUT, TTT, 또는 TTTT (각각 5' → 3'으로 열거됨).
일부 실시양태에서, 센스 가닥의 3' 단부는 추가적인 무염기 잔기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, UUAb, UAb, 또는 Ab가 센스 가닥의 3' 단부에 부가된다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 역전 무염기 잔기 (invAb)가 센스 가닥의 3' 단부에 부가된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 역전 무염기 잔기 또는 역전 무염기 부위가 표적화 리간드와 RNAi 작용제의 센스 가닥의 핵염기 서열 사이에 삽입된다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 말단 단부 또는 말단 단부들에서 또는 이의 근처에서 하나 이상의 역전 무염기 잔기 또는 역전 무염기 부위를 포함하는 것은 RNAi 작용제의 강화된 활성 또는 다른 바람직한 성질을 허용한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 뉴클레오티드 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 길이의 5' 연장물이 있는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 연장물 뉴클레오티드 중 하나 이상은 우라실 또는 아데노신 뉴클레오티드 또는 알파-ENaC mRNA 서열 내의 뉴클레오티드에 상응하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 센스 가닥 5' 연장물은 하기 서열 중 하나이지만, 이에 제한되지는 않는다: CA, AUAGGC, AUAGG, AUAG, AUA, A, AA, AC, GCA, GGCA, GGC, UAUCA, UAUC, UCA, UAU, U, UU (각각 5' → 3'으로 열거됨). 센스 가닥은 3' 연장물 및/또는 5' 연장물이 있을 수 있다.
일부 실시양태에서, 센스 가닥의 5' 단부는 하나 이상의 추가적인 무염기 잔기 (예를 들어, (Ab) 또는 (AbAb))를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 역전 무염기 잔기 (invAb)가 센스 가닥의 5' 단부에 부가된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 역전 무염기 잔기가 표적화 리간드와 RNAi 작용제의 센스 가닥의 핵염기 서열 사이에 삽입될 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 말단 단부 또는 말단 단부들에서 또는 이의 근처에서 하나 이상의 역전 무염기 잔기를 포함하는 것은 RNAi 작용제의 강화된 활성 또는 다른 바람직한 성질을 허용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 무염기 (데옥시리보스) 잔기는 리비톨 (무염기 리보스) 잔기로 교체될 수 있다.
일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 코어 신장물 서열의 3' 단부, 또는 안티센스 가닥 서열의 3' 단부는 역전 무염기 잔기 (invAb (표 6 참조))를 포함할 수 있다.
알파-ENaC RNAi 작용제를 형성하는데 사용된 서열의 예가 표 2, 3, 및 4에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 3의 서열 중 임의의 것의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17, 2-15, 2-17, 1-18, 2-18, 1-19, 2-19, 1-20, 2-20, 1-21, 2-21, 1-22, 2-22, 1-23, 2-23, 1-24, 또는 2-24의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 3의 변형 서열 중 어느 하나의 변형 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 표 2 또는 4의 서열 중 임의의 것의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 표 2 또는 4의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-18, 1-19, 1-20, 1-21, 1-22, 1-23, 1-24, 2-19, 2-20, 2-21, 2-22, 2-23, 2-24, 3-20, 3-21, 3-22, 3-23, 3-24, 4-21, 4-22, 4-23, 4-24, 5-22, 5-23, 또는 5-24의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 표 4의 변형 서열 중 어느 하나의 변형 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 개수의 뉴클레오티드를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 상이한 개수의 뉴클레오티드를 함유한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 5' 단부 및 안티센스 가닥 3' 단부는 평활 단부를 형성한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 3' 단부 및 안티센스 가닥 5' 단부는 평활 단부를 형성한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 양쪽 단부가 평활 단부를 형성한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 어느쪽 단부도 평활 단부가 아니다. 본원에서 사용된 바와 같이, "평활 단부"는 2개의 어닐링된 가닥의 말단 뉴클레오티드가 상보적인 (상보적 염기 쌍을 형성하는) 이중 가닥 RNAi 작용제의 단부를 지칭한다.
일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 5' 단부 및 안티센스 가닥 3' 단부는 풀린 단부를 형성한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥 3' 단부 및 안티센스 가닥 5' 단부는 풀린 단부를 형성한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 양쪽 단부는 풀린 단부를 형성한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 어느쪽 단부도 풀린 단부가 아니다. 본원에서 사용된 바와 같이, 풀린 단부는 2개의 어닐링된 가닥의 말단 뉴클레오티드가 쌍을 형성하지만 (즉, 오버행을 형성하지 않지만) 상보적이지는 않은 (즉, 비-상보적 쌍을 형성하는) 이중 가닥 RNAi 작용제의 단부를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 이중 가닥 RNAi 작용제의 하나의 가닥의 단부의 하나 이상의 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드가 오버행을 형성한다. 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드가 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상에 있어, 3' 또는 5' 오버행을 생성시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 평활 단부 및 풀린 단부, 평활 단부 및 5' 오버행 단부, 평활 단부 및 3' 오버행 단부, 풀린 단부 및 5' 오버행 단부, 풀린 단부 및 3' 오버행 단부, 2개의 5' 오버행 단부, 2개의 3' 오버행 단부, 5' 오버행 단부 및 3' 오버행 단부, 2개의 풀린 단부, 또는 2개 평활 단부를 함유한다. 전형적으로, 존재하는 경우, 오버행은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두의 3' 말단 단부에 위치한다.
변형 뉴클레오티드는, 다양한 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 구축물에서 사용될 때, 세포 내에서 화합물의 활성을 보존하면서 동시에 이러한 화합물의 혈청 안정성을 증가시킬 수 있고, 또한 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 구축물의 투여 시 인간에서 인터페론 활성을 활성화시킬 가능성을 최소화할 수 있다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 염, 혼합 염, 또는 유리 산으로서 제조되거나 또는 제공된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 나트륨 염으로서 제조된다. 관련 분야에 널리 공지되어 있는 이같은 형태들은 본원에 개시된 발명의 범주 내이다.
변형 뉴클레오티드
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 하나 이상의 변형 뉴클레오티드를 함유한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "변형 뉴클레오티드"는 리보뉴클레오티드 (2'-히드록실 뉴클레오티드) 이외의 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드의 적어도 50% (예를 들어, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%)가 변형 뉴클레오티드이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 변형 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 뉴클레오티드 모방체, 무염기 뉴클레오티드 (본원에서 Ab로 표시됨), 2'-변형 뉴클레오티드, 3' → 3' 연결 (역전) 뉴클레오티드 (본원에서 invdN, invN, invn으로 표시됨), 변형 핵염기-포함 뉴클레오티드, 가교 뉴클레오티드, 펩티드 핵산 (PNA), 2',3'-세코 뉴클레오티드 모방체 (비-잠금 핵염기 유사체, 본원에서 NUNA 또는 NUNA로 표시됨), 잠금 뉴클레오티드 (본원에서 NLNA 또는 NLNA로 표시됨), 3'-O-메톡시 (2' 뉴클레오시드간 연결) 뉴클레오티드 (본원에서 3'-OMen으로 표시됨), 2'-F-아라비노 뉴클레오티드 (본원에서 NfANA 또는 NfANA로 표시됨), 5'-Me, 2'-플루오로 뉴클레오티드 (본원에서 5Me-Nf로 표시됨), 모르폴리노 뉴클레오티드, 비닐 포스포네이트 데옥시리보뉴클레오티드 (본원에서 vpdN으로 표시됨), 비닐 포스포네이트를 함유하는 뉴클레오티드, 및 시클로프로필 포스포네이트를 함유하는 뉴클레오티드 (cPrpN)를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 2'-변형 뉴클레오티드 (즉, 5원 당 고리의 2' 위치에 히들록실 기 이외의 기가 있는 뉴클레오티드)는 2'O-메틸 뉴클레오티드 (본원에서 뉴클레오티드 서열 내에서 소문자 'n'으로 표시됨), 2'-데옥시-2'-플루오로 뉴클레오티드 (본원에서 2'-플루오로 뉴클레오티드로도 지칭되고, 본원에서 Nf로 표시됨), 2'-데옥시 뉴클레오티드 (본원에서 dN으로 표시됨), 2'-메톡시에틸 (2'-O-2-메톡실에틸) 뉴클레오티드 (본원에서 2'-MOE로도 지칭되고, 본원에서 NM으로 표시됨), 2'-아미노 뉴클레오티드, 및 2'-알킬 뉴클레오티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 소정의 화합물 내의 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없다. 역으로, 단일한 알파-ENaC RNAi 작용제에서 또는 심지어 이의 단일한 뉴클레오티드에서 하나를 초과하는 변형이 혼입될 수 있다. 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 관련 기술 분야에 공지된 방법에 의해 합성되고/되거나 변형될 수 있다. 하나의 뉴클레오티드에서의 변형은 또 다른 뉴클레오티드에서의 변형에 독립적이다.
변형 핵염기는 합성 및 천연 핵염기, 예컨대 5-치환 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환 퓨린, (예를 들어, 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실, 또는 5-프로피닐시토신), 5-메틸시토신 (5-me-C), 5-히드록시메틸 시토신, 이노신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-알킬 (예를 들어, 6-메틸, 6-에틸, 6-이소프로필, 또는 6-n-부틸) 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-알킬 (예를 들어, 2-메틸, 2-에틸, 2-이소프로필, 또는 2-n-부틸) 및 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민, 2-티오시토신, 5-할로우라실, 시토신, 5-프로피닐 우라실, 5-프로피닐 시토신, 6-아조 우라실, 6-아조 시토신, 6-아조 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-술프히드릴, 8-티오알킬, 8-히드록실 및 기타 8-치환 아데닌 및 구아닌, 5-할로 (예를 들어, 5-브로모), 5-트리플루오로메틸, 및 기타 5-치환 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌, 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌, 및 3-데아자아데닌을 포함한다.
일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형 뉴클레오티드를 나타내는 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두 내의 4개 이하 (즉, 0, 1, 2, 3, 또는 4개)의 뉴클레오티드가 리보뉴클레오티드 (즉, 미변형)인 RNAi 작용제이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 존재하는 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형 뉴클레오티드인 센스 가닥은 센스 가닥 내의 2개 이하 (즉, 0, 1, 또는 2개)의 뉴클레오티드가 미변형 리보뉴클레오티드인 센스 가닥이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 존재하는 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형 뉴클레오티드인 안티센스 가닥은 센스 가닥 내의 2개 이하 (즉, 0, 1, 또는 2개)의 뉴클레오티드가 미변형 리보뉴클레오티드인 안티센스 가닥이다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 하나 이상의 뉴클레오티드는 미변형 리보뉴클레오티드이다.
변형 뉴클레오시드간 연결
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 하나 이상의 뉴클레오티드는 비-표준 연결 또는 백본 (즉, 변형 뉴클레오시드간 연결 또는 변형 백본)에 의해 연결된다. 변형 뉴클레오시드간 연결 또는 백본은 포스포로티오에이트 기 (본원에서 소문자 "s"로 표시됨), 키랄 포스포로티오에이트, 티오포스페이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬-포스포트리에스테르, 알킬 포스포네이트 (예를 들어, 메틸 포스포네이트 또는 3'-알킬렌 포스포네이트), 키랄 포스포네이트, 포스피네이트, 포스포르아미데이트 (예를 들어, 3'-아미노 포스포르아미데이트, 아미노알킬포스포르아미데이트, 또는 티오노포스포르아미데이트), 티오노알킬-포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 모르폴리노 연결, 정상적인 3'-5' 연결이 있는 보라노포스페이트, 보라노포스페이트의 2'-5' 연결 유사체, 또는 뉴클레오시드 단위의 인접한 쌍들이 3'-5' → 5'-3' 또는 2'-5' → 5'-2' 연결된 역전 극성의 보라노포스페이트를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형 뉴클레오시드간 연결 또는 백본은 인 원자가 결여된다. 인 원자가 결여된 변형 뉴클레오시드간 연결은 단쇄 알킬 또는 시클로알킬 당간 연결, 혼합된 헤테로원자 및 알킬 또는 시클로알킬 당간 연결, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로원자 또는 헤테로고리 당간 연결을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형 뉴클레오시드간 백본은 실록산 백본, 술피드 백본, 술폭시드 백본, 술폰 백본, 포름아세틸 및 티오포름아세틸 백본, 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 백본, 알켄-함유 백본, 술파메이트 백본, 메틸렌이미노 및 메틸렌히드라지노 백본, 술포네이트 및 술폰아미드 백본, 아미드 백본, 및 혼합된 N, O, S, 및 CH2 성분이 있는 기타 백본을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥이 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포스포로티오에이트 연결을 함유할 수 있거나, 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥이 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포스포로티오에이트 연결을 함유할 수 있거나, 또는 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두가 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 포스포로티오에이트 연결을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥이 1, 2, 3, 또는 4개의 포스포로티오에이트 연결을 함유할 수 있거나, 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥이 1, 2, 3, 또는 4개의 포스포로티오에이트 연결을 함유할 수 있거나, 또는 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두가 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 포스포로티오에이트 연결을 함유할 수 있다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 함유한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 3' 단부로부터 위치 1-3의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 1개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이 센스 가닥의 5' 단부에 있고, 또 다른 포스포로티오에이트 연결이 센스 가닥의 3' 단부에 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 센스 가닥의 5' 단부로부터 위치 1-3, 2-4, 3-5, 4-6, 4-5, 또는 6-8의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 함유한다. 일부 실시양태에서, 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결은 안티센스 가닥의 5' 단부로부터 위치 1-3의 뉴클레오티드 사이 및 5' 단부로부터 위치 19-21, 20-22, 21-23, 22-24, 23-25, 또는 24-26의 뉴클레오티드 사이에 있다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 센스 가닥 내의 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 및 안티센스 가닥 내의 3개 또는 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 함유한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 하나 이상의 변형 뉴클레오티드 및 하나 이상의 변형 뉴클레오시드간 연결을 함유한다. 일부 실시양태에서, 2'-변형 뉴클레오시드가 변형 뉴클레오시드간 연결과 조합된다.
알파-ENaC RNAi 작용제
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 1에 제시된 알파-ENaC 서열의 위치에서 또는 이러한 위치 부근에서 알파-ENaC 유전자를 표적화한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 1에 개시된 표적 알파-ENaC 19량체 서열에 완전히, 실질적으로 또는 적어도 부분적으로 상보적인 코어 신장물 서열을 포함한다.
<표 1>
알파-ENaC 19량체 mRNA 표적 서열 (호모 사피엔스(homo sapiens) 나트륨 채널 상피 1 알파 서브유닛 (SCNN1A), 전사체 변이체 1, 진뱅크(GenBank) NM_001038.5 (서열식별번호: 1)로부터 취해짐)
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥 (5' → 3')의 위치 19가 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 위치 1과 염기 쌍을 형성할 수 있는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC 작용제는 안티센스 가닥 (5' → 3')의 위치 1이 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 위치 19와 염기 쌍을 형성할 수 있는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC 작용제는 안티센스 가닥 (5' → 3')의 위치 2가 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 위치 18과 염기 쌍을 형성할 수 있는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC 작용제는 안티센스 가닥 (5' → 3')의 위치 2 내지 18이 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 위치 18 내지 2에 위치하는 각자의 상보적인 염기 각각과 염기 쌍을 형성할 수 있는 안티센스 가닥을 포함한다.
본원에 개시된 RNAi 작용제에 대해, 안티센스 가닥 (5' 단부에서 → 3' 단부)의 위치 1의 뉴클레오티드는 알파-ENaC 유전자에 완벽하게 상보적일 수 있거나, 또는 알파-ENaC 유전자에 비-상보적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 (5' 단부에서 → 3' 단부)의 위치 1의 뉴클레오티드는 U, A, 또는 dT이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 (5' 단부에서 → 3' 단부)의 위치 1의 뉴클레오티드는 센스 가닥과 A:U 또는 U:A 염기 쌍을 형성한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 2-18 또는 2-19의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 센스 가닥은 표 2 또는 표 4의 센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17, 1-18, 또는 2-18의 서열을 포함한다
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 (i) 표 2 또는 표 3의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 2-18 또는 2-19의 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 (ii) 표 2 또는 표 4의 센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17 또는 1-18의 서열을 포함하는 센스 가닥으로 구성된다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 하기 표 2에 제시된 코어 19량체 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
<표 2>
알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥 및 센스 가닥 코어 신장물 염기 서열 (N = 임의의 핵염기)
표 2의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지는 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 또는 미변형 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 표 2 의 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것을 포함하거나 또는 이로 이루어지는 센스 및 안티센스 가닥 서열이 있는 알파-ENaC RNAi 작용제는 모두 또는 실질적으로 모두 변형 뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 2의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것과 뉴클레오티드 0, 1, 2, 또는 3개만큼 상이하다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 2의 센스 가닥 서열 중 임의의 것과 뉴클레오티드 0, 1, 2, 또는 3개만큼 상이하다.
본원에서 사용된 바와 같이, 표 2에 개시된 서열에서 열거된 각각의 N은 임의의 모든 핵염기 (변형 및 미변형 뉴클레오티드 양쪽 상에서 발견되는 것들을 포함함)로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표 2에 개시된 서열에서 열거된 N 뉴클레오티드는 다른 가닥 상의 상응하는 위치의 N 뉴클레오티드에 상보적인 핵염기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 표 2에 개시된 서열에서 열거된 N 뉴클레오티드는 다른 가닥 상의 상응하는 위치의 N 뉴클레오티드에 상보적이지 않은 핵염기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 표 2에 개시된 서열에서 열거된 N 뉴클레오티드는 다른 가닥 상의 상응하는 위치의 N 뉴클레오티드와 동일한 핵염기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 표 2에 개시된 서열에서 열거된 N 뉴클레오티드는 다른 가닥 상의 상응하는 위치의 N 뉴클레오티드와 상이한 핵염기를 갖는다.
특정한 변형 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 및 안티센스 가닥이 표 3 및 표 4에서 제공된다. 변형 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥, 뿐만 아니라 이의 미변형 기저 핵염기 서열이 표 3에서 제공된다. 변형 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥, 뿐만 아니라 이의 미변형 기저 핵염기 서열이 표 4에서 제공된다. 알파-ENaC RNAi 작용제의 형성에서, 표 3 및 4, 뿐만 아니라 상기 표 2에서 열거된 각각의 기저 염기 서열 내의 각각의 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드일 수 있다.
본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥을 센스 가닥과 어닐링시킴으로써 형성된다. 표 2 또는 표 4에 열거된 서열을 함유하는 센스 가닥은 표 2 또는 표 3에 열거된 서열을 함유하는 임의의 안티센스 가닥에 혼성화될 수 있고, 단 2개의 서열은 연속적인 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개 뉴클레오티드 서열에 걸쳐 적어도 85% 상보적인 영역을 갖는다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 2, 표 3 또는 표 4의 서열 중 임의의 것의 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 핵염기 서열을 갖는 듀플렉스를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
변형 뉴클레오티드를 함유하는 안티센스 가닥의 예가 표 3에서 제공된다. 변형 뉴클레오티드를 함유하는 센스 가닥의 예가 표 4에서 제공된다.
표 3 및 4에서 사용된 바와 같이, 하기의 표기법이 변형 뉴클레오티드, 표적화 기, 및 연결 기를 지시하도록 사용된다:
A = 아데노신-3'-포스페이트;
C = 시티딘-3'-포스페이트;
G = 구아노신-3'-포스페이트;
U = 우리딘-3'-포스페이트
I = 이노신 3'-포스페이트
a = 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트
as = 2'-O-메틸아데노신-3'-포스포로티오에이트
c = 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트
cs = 2'-O-메틸시티딘-3'-포스포로티오에이트
g = 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트
gs = 2'-O-메틸구아노신-3'-포스포로티오에이트
i = 2'-O-메틸이노신-3'-포스페이트
is = 2'-O-메틸이노신-3'-포스포로티오에이트
t = 2'-O-메틸-5-메틸우리딘-3'-포스페이트
ts = 2'-O-메틸-5-메틸우리딘-3'-포스포로티오에이트
u = 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트
us = 2'-O-메틸우리딘-3'-포스포로티오에이트
Nf = 임의의 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드
Af = 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트
Afs = 2'-플루오로아데노신-3'-포스포로티오에이트
Cf = 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트
Cfs = 2'-플루오로시티딘-3'-포스포로티오에이트
Gf = 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트
Gfs = 2'-플루오로구아노신-3'-포스포로티오에이트
Tf = 2'-플루오로-5'-메틸우리딘-3'-포스페이트
Tfs = 2'-플루오로-5'-메틸우리딘-3'-포스포로티오에이트
Uf = 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트
Ufs = 2'-플루오로우리딘-3'-포스포로티오에이트
dN = 임의의 2'-데옥시리보뉴클레오티드
dT = 2'-데옥시티미딘-3'-포스페이트
NUNA = 2',3'-세코 뉴클레오티드 모방체 (비-잠금 핵염기 유사체)-3'-포스페이트
NUNAs = 2',3'-세코 뉴클레오티드 모방체 (비-잠금 핵염기 유사체)-3'-포스포로티오에이트
AUNA = 2',3'-세코-아데노신-3'-포스페이트
AUNAs = 2',3'-세코-아데노신-3'-포스포로티오에이트
CUNA = 2',3'-세코-시티딘-3'-포스페이트
CUNAs = 2',3'-세코-시티딘-3'-포스포로티오에이트
GUNA = 2',3'-세코-구아노신-3'-포스페이트
GUNAs = 2',3'-세코-구아노신-3'-포스포로티오에이트
UUNA = 2',3'-세코-우리딘-3'-포스페이트
UUNAs = 2',3'-세코-우리딘-3'-포스포로티오에이트
a_2N = 표 7 참조
a_2Ns = 표 7 참조
pu_2N = 표 7 참조
pu_2Ns = 표 7 참조
D2us = 표 7 참조
Npu = 표 7 참조
Nus = 표 7 참조
NLNA = 잠금 뉴클레오티드
NfANA = 2'-F-아라비노 뉴클레오티드
NM = 2'-O-(2-메톡시에틸) 뉴클레오티드
AM = 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신-3'-포스페이트
AMs = 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신-3'-포스포로티오에이트
TM = 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘-3'-포스페이트
TMs = 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘-3'-포스포로티오에이트
R = 리비톨
(invdN) = 임의의 역전 데옥시리보뉴클레오티드 (3'-3' 연결 뉴클레오티드)
(invAb) = 역전 (3'-3' 연결) 무염기 데옥시리보뉴클레오티드-5'-포스페이트, 표 7 참조
(invAb)s = 역전 (3'-3' 연결) 무염기 데옥시리보뉴클레오티드-5'-포스포로티오에이트, 표 7 참조
(invn) = 임의의 역전 2'-OMe 뉴클레오티드 (3'-3' 연결 뉴클레오티드)
s = 포스포로티오에이트 연결
vpdN = 비닐 포스포네이트 데옥시리보뉴클레오티드
(5Me-Nf) = 5'-Me, 2'-플루오로 뉴클레오티드
cPrp = 시클로프로필 포스포네이트, 표 7 참조
epTcPr = 표 7 참조
epTM = 표 7 참조
spus = 표 7 참조
(Chol-TEG) = 표 7 참조
(TEG-비오틴) = 표 7 참조
(PEG-C3-SS) = 표 7 참조
(Alk-SS-C6) = 표 7 참조
(C6-SS-Alk) = 표 7 참조
(C6-SS-C6) = 표 7 참조
(6-SS-6) = 표 7 참조
(C6-SS-Alk-Me) = 표 7 참조
(NH2-C6) = 표 7 참조
(TriAlk#) = 표 7 참조
(TriAlk#)s = 표 7 참조
관련 분야의 통상의 기술자가 쉽게 이해할 바와 같이, 서열에 의해 (예를 들어, 포스포로티오에이트 연결 "s"에 의해) 달리 지시되지 않는 한, 올리고뉴클레오티드 내에 존재할 때, 뉴클레오티드 단량체들은 서로 5'-3'-포스포디에스테르 결합에 의해 연결된다. 추가로, 관련 분야의 통상의 기술자는 소정의 올리고뉴클레오티드 서열의 3' 단부의 말단 뉴클레오티드가 전형적으로 소정의 단량체의 각자의 3' 위치에 생체 외에서 포스페이트 모이어티 대신 히드록실 (-OH) 기를 가질 것임을 쉽게 이해할 것이다. 또한, 통상의 기술자가 쉽게 이해하고 인식할 바와 같이, 본원에 도시된 포스포로티오에이트 화학 구조는 전형적으로 황 원자 상에 음이온을 나타내는 한편, 본원에 개시된 발명은 모든 포스포로티오에이트 호변체 및/또는 부분입체 이성질체 (예를 들어, 황 원자가 이중-결합을 갖고, 음이온이 산소 원자 상에 있는 경우)를 포함한다. 본원에서 명백하게 다르게 지시되지 않는 한, 관련 분야의 통상의 기술자의 이같은 이해가 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제 및 알파-ENaC RNAi 작용제의 조성물을 기술할 때 사용된다.
본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제와 함께 사용된 표적화 기 및 연결 기의 특정 예가 하기 표 6에서 제공된 화학 구조 내에 포함된다. 각각의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥은 서열의 5' 및/또는 3' 단부에 접합된, 임의의 본원에 열거된 표적화 기 또는 연결 기, 뿐만 아니라 다른 표적화 또는 연결 기를 가질 수 있다.
<표 3>
알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥 서열
<표 4>
알파-ENaC 작용제 센스 가닥 서열
본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 안티센스 가닥을 센스 가닥과 어닐링시킴으로써 형성된다. 표 2 또는 표 4에 열거된 서열을 함유하는 센스 가닥이 표 2 또는 표 3에 열거된 서열을 함유하는 임의의 안티센스 가닥에 혼성화될 수 있고, 단 2개의 서열은 연속적인 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개 뉴클레오티드 서열에 걸쳐 적어도 85% 상보적인 영역을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것과 뉴클레오티드 0, 1, 2, 또는 3개만큼 상이하다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 센스 가닥 서열 중 임의의 것과 뉴클레오티드 0, 1, 2, 또는 3개만큼 상이하다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 3의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17, 2-17, 1-18, 2-18, 1-19, 2-19, 1-20, 2-20, 1-21, 2-21, 1-22, 2-22, 1-23, 2-23, 1-24, 또는 2-24의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 3의 변형 서열 중 어느 하나의 변형 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 표 2 또는 4의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 표 2 또는 4의 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17, 2-17, 3-17, 4-17, 1-18, 2-18, 3-18, 4-18, 1-19, 2-19, 3-19, 4-19, 1-20, 2-20, 3-20, 4-20, 1-21, 2-21, 3-21, 4-21, 1-22, 2-22, 3-22, 4-22, 1-23, 2-23, 3-23, 4-23, 1-24, 2-24, 3-24, 또는 4-24의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥은 표 3의 변형 서열 중 어느 하나의 변형 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
본원에 개시된 RNAi 작용제에 대해, 안티센스 가닥 (5' 단부에서 → 3' 단부)의 위치 1의 뉴클레오티드는 알파-ENaC 유전자에 완벽하게 상보적일 수 있거나, 또는 알파-ENaC 유전자에 비-상보적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 (5' 단부에서 → 3' 단부)의 위치 1의 뉴클레오티드는 U, A, 또는 dT (또는 U, A 또는 dT의 변형 버전)이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 가닥 (5' 단부에서 → 3' 단부)의 위치 1의 뉴클레오티드는 센스 가닥과 A:U 또는 U:A 염기 쌍을 형성한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 2-18 또는 2-19의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 센스 가닥은 표 2 또는 표 4의 센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17 또는 1-18의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 (i) 표 2 또는 표 3의 안티센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 2-18 또는 2-19의 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 (ii) 표 2 또는 표 4의 센스 가닥 서열 중 임의의 것의 뉴클레오티드 (5' 단부에서 → 3' 단부) 1-17 또는 1-18의 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
표 2 또는 표 4에 열거된 서열을 함유하는 센스 가닥은 표 2 또는 표 3에 열거된 서열을 함유하는 임의의 안티센스 가닥에 혼성화될 수 있고, 단 2개의 서열은 연속적인 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개 뉴클레오티드 서열에 걸쳐 적어도 85% 상보적인 영역을 갖는다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 4의 변형 서열 중 임의의 것의 변형 서열로 이루어지는 센스 가닥, 및 표 3의 변형 서열 중 임의의 것의 변형 서열로 이루어지는 안티센스 가닥을 갖는다. 특정한 대표적인 서열 쌍이 표 5에서 제시된 듀플렉스 ID 번호에 의해 예시된다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 본원에서 제시된 듀플렉스 ID 번호 중 어느 하나에 의해 표현되는 듀플렉스를 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 본질적으로 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 본원에서 제시된 듀플렉스 ID 번호 중 임의의 것으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 본원에서 제시된 듀플렉스 ID 번호 중 임의의 것의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 본원에서 제시된 듀플렉스 ID 번호 중 임의의 것의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 뉴클레오티드 서열, 및 표적화 기, 연결 기, 및/또는 다른 비-뉴클레오티드 기를 포함하고, 여기서 표적화 기, 연결 기, 및/또는 다른 비-뉴클레오티드 기는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 공유결합으로 연결된다 (즉, 접합된다). 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 본원에서 제시된 듀플렉스 ID 번호 중 임의의 것의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 본원에서 제시된 듀플렉스 ID 번호 중 임의의 것의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 변형 뉴클레오티드 서열, 및 표적화 기, 연결 기 및/또는 다른 비-뉴클레오티드 기를 포함하고, 여기서 표적화 기, 연결 기 및/또는 다른 비-뉴클레오티드 기는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 공유결합으로 연결된다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 2 또는 표 5의 안티센스 가닥/센스 가닥 듀플렉스 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 표적화 기를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 2 또는 표 5의 안티센스 가닥/센스 가닥 듀플렉스 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 하나 이상의 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 2 또는 표 5의 안티센스 가닥/센스 가닥 듀플렉스 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 인테그린 표적화 리간드인 표적화 기를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 2 또는 표 5의 안티센스 가닥/센스 가닥 듀플렉스 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 하나 이상의 αvβ6 인테그린 표적화 리간드 또는 αvβ6 인테그린 표적화 리간드 클러스터 (예를 들어, 세갈래 αvβ6 인테그린 표적화 리간드)를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 5의 안티센스 가닥/센스 가닥 듀플렉스 중 임의의 것의 변형 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 5의 안티센스 가닥/센스 가닥 듀플렉스 중 임의의 것의 변형 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 인테그린 표적화 리간드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표 5의 듀플렉스 중 임의의 것을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이로 이루어진다.
<표 5>
상응하는 센스 및 안티센스 가닥 ID 번호를 갖는 알파-ENaC RNAi 작용제 듀플렉스
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 염, 혼합 염, 또는 유리 산으로서 제조되거나 또는 제공된다. 본원에 기술된 RNAi 작용제는, 알파-ENaC 유전자를 발현하는 세포에 전달되는 경우에, 생체 내에서 및/또는 시험과 내에서 하나 이상의 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하거나 또는 녹다운시킨다.
표적화 기, 연결 기, 약동학 (PK) 조정제, 및 전달 비히클
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 표적화 기, 연결 기, 약동학 (PK) 조정제, 전달 중합체, 또는 전달 비히클을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 비-뉴클레오티드 기를 함유하거나 또는 이에 접합된다. 비-뉴클레오티드 기는 RNAi 작용제의 표적화, 전달 또는 부착을 강화할 수 있다. 표적화 기 및 연결 기의 예가 표 6에서 제공된다. 비-뉴클레오티드 기는 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 3' 및/또는 5' 단부에 공유결합으로 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 센스 가닥의 3' 및/또는 5' 단부에 연결된 비-뉴클레오티드 기를 함유한다. 일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 알파-ENaC RNAi 작용제 센스 가닥의 5' 단부에 연결된다. 비-뉴클레오티드 기는 직접적으로 또는 간접적으로 RNAi 작용제에 링커/연결 기를 통해 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 불안정하거나, 절단가능하거나 또는 가역성인 결합 또는 링커를 통해 RNAi 작용제에 연결된다.
일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 자신이 부착된 RNAi 작용제 또는 접합체의 약동학 또는 생체분포 성질을 강화하여 RNAi 작용제 또는 접합체의 세포- 또는 조직-특이적 분포 및 세포-특이적 흡수를 개선한다. 일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 RNAi 작용제의 세포내이입을 강화한다.
표적화 기 또는 표적화 모이어티는 자신이 부착된 접합체 또는 RNAi 작용제의 약동학 또는 생체분포 성질을 강화하여 접합체 또는 RNAi 작용제의 세포-특이적 (일부 경우에, 기관 특이적을 포함함) 분포 및 세포-특이적 (또는 기관 특이적) 흡수를 개선한다. 표적화 기는 자신이 지시되는 표적에 대해 1가, 2가, 3가, 4가일 수 있거나, 또는 더 높은 결합가를 가질 수 있다. 대표적인 표적화 기는, 비제한적으로, 세포 표면 분자에 대한 친화력이 있는 화합물, 세포 수용체 리간드, 합텐, 항체, 모노클로날 항체, 항체 단편, 및 세포 표면 분자에 대한 친화력이 있는 항체 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 링커, 예컨대 PEG 링커, 또는 일부 경우에 링커로서의 역할을 할 수 있는 1개, 2개 또는 3개의 무염기 및/또는 리비톨 (무염기 리보스) 잔기를 사용하여 RNAi 작용제에 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 인테그린 표적화 리간드를 포함한다.
5'-말단 및/또는 3'-말단에 반응성 기, 예컨대 아미노 기 (본원에서 아민으로도 지칭됨)가 있는 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 합성될 수 있다. 이어서 관련 기술 분야에 전형적인 방법을 사용하여 표적화 모이어티를 부착시키는데 반응성 기를 사용할 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 5'-말단에 NH2-C6 기가 있는 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제가 합성된다. 이어서, 예를 들어, αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 기와 접합체를 형성하도록 말단 아미노 기가 반응될 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 5'-말단에 하나 이상의 알킨 기가 있는 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제가 합성된다. 이어서, 예를 들어, αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 기와 접합체를 형성하도록 말단 알킨 기(들)가 반응될 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적화 기는 인테그린 표적화 리간드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 인테그린 표적화 리간드는 αvβ6 인테그린 표적화 리간드이다. αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 사용하는 것은 세포 각각의 표면에 αvβ6가 있는 세포에 대한 세포-특이적 표적화를 용이하게 하고, 인테그린 표적화 리간드의 결합은 자신이 연결된 치료제, 예컨대 RNAi 작용제가 세포 예컨대 폐 상피 세포 및 신장 상피 세포를 포함하는 상피 세포 내로 진입하는 것을 용이하게 할 수 있다. 인테그린 표적화 리간드는 단량체성 또는 1가 (예를 들어, 단일한 인테그린 표적화 모이어티가 있음), 또는 다량체성 또는 다가 (예를 들어, 다중 인테그린 표적화 모이어티가 있음)일 수 있다. 표적화 기는 관련 분야에 공지된 방법을 사용하여 RNAi 올리고뉴클레오티드의 3' 및/또는 5' 단부에 부착될 수 있다. 표적화 기, 예컨대 αvβ6 인테그린 표적화 리간드의 제조가, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2018/085415 및 미국 특허 가출원 번호 62/580,398 및 62/646,739에 기술되어 있고, 각각의 내용은 전문이 본원에 포함된다.
본 개시내용의 실시양태는 생체 내에서 알파-ENaC RNAi 작용제를 폐 상피 세포에 전달하기 위한 제약 조성물을 포함한다. 이같은 제약 조성물은, 예를 들어, 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 표적화 기에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인테그린 표적화 리간드는 αvβ6 인테그린 리간드로 구성된다.
일부 실시양태에서, RNAi 작용제에 연결 기가 접합된다. 연결 기는 작용제가 표적화 기, 약동학 조정제, 전달 중합체 또는 전달 비히클에 공유결합으로 연결되는 것을 용이하게 한다. 연결 기는 RNAi 작용제 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 3' 및/또는 5' 단부에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 연결 기는 RNAi 작용제 센스 가닥에 연결된다. 일부 실시양태에서, 연결 기는 RNAi 작용제 센스 가닥의 5' 또는 3' 단부에 접합된다. 일부 실시양태에서, 연결 기는 RNAi 작용제 센스 가닥의 5' 단부에 접합된다. 연결 기의 예는 Alk-SMPT-C6, Alk-SS-C6, DBCO-TEG, Me-Alk-SS-C6, 및 C6-SS-Alk-Me, 반응성 기 예컨대 1급 아민 및 알킨, 알킬 기, 무염기 잔기/뉴클레오티드, 아미노산, 트리-알킨 관능화 기, 리비톨, 및/또는 PEG 기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
링커 또는 연결 기는 하나의 화학 기 (예컨대 RNAi 작용제) 또는 관심 분절을 또 다른 화학 기 (예컨대 표적화 기, 약동학 조정제, 또는 전달 중합체) 또는 관심 분절에 하나 이상의 공유 결합을 통해 연결하는 2개의 원자 사이의 접속이다. 불안정 연결은 불안정 결합을 함유한다. 연결은 2개의 결합된 원자 사이의 거리를 증가시키는 스페이서를 임의적으로 포함할 수 있다. 스페이서는 연결에 연성 및/또는 길이를 추가로 부가할 수 있다. 스페이서는 알킬 기, 알케닐 기, 알키닐 기, 아릴 기, 아르알킬 기, 아르알케닐 기, 및 아르알키닐 기를 포함하지만, 이에 제한되지는 않고, 이들 각각은 하나 이상의 헤테로원자, 헤테로고리, 아미노산, 뉴클레오티드, 및 당류를 함유할 수 있다. 스페이서 기는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 상기 목록은 설명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는다.
일부 실시양태에서, 추가적인 링커를 사용하지 않으면서 표적화 기가 알파-ENaC RNAi 작용제에 연결된다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제에 연결되는 것을 용이하게 하도록 링커가 쉽게 존재하는 표적화 기가 디자인된다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물 내에 포함되는 경우, 2개 이상의 RNAi 작용제는 동일한 링커를 사용하여 이들 각각의 표적화 기에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물 내에 포함되는 경우, 2개 이상의 RNAi 작용제는 상이한 링커를 사용하여 이들 각각의 표적화 기에 연결될 수 있다.
표 2, 3 및 4에 열거된 알파-ENaC RNAi 작용제 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것이, 변형되었든 또는 변형되지 않았든, 3' 및/또는 5' 표적화 기(들), 연결 기(들), 및/또는 약동학 조정제(들)를 함유할 수 있다. 3' 또는 5' 표적화 기, 연결 기 또는 약동학 조정제를 함유하는, 표 3 및 4에 열거되거나 또는 본원에서 다른 방식으로 기술된 열거된 알파-ENaC RNAi 작용제 서열 중 임의의 것이 대안적으로 3' 또는 5' 표적화 기, 연결 기, 또는 약동학 조정제를 함유하지 않을 수 있거나, 또는 표 6에 도시된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는 상이한 3' 또는 5' 표적화 기, 연결 기, 또는 약동학 조정제를 함유할 수 있다. 표 5에 열거된 알파-ENaC RNAi 작용제 듀플렉스 중 임의의 것이, 변형되었든 또는 변형되지 않았든, 표 6에 도시된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는 표적화 기 또는 연결 기를 추가로 포함할 수 있고, 표적화 기 또는 연결 기는 알파-ENaC RNAi 작용제 듀플렉스의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 3' 또는 5' 말단에 부착될 수 있다.
특정 표적화 기 및 연결 기의 예가 표 6에서 제공된다.
<표 6>
다양한 변형 뉴클레오티드, 표적화 기 및 연결 기를 나타내는 구조
대안적으로, 관련 기술 분야에 공지되어 있는 다른 연결 기를 사용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 전달 비히클이 RNAi 작용제를 세포 또는 조직에 전달하는데 사용될 수 있다. 전달 비히클은 RNAi 작용제를 세포 또는 조직에 전달하는 것을 개선하는 화합물이다. 전달 비히클은 중합체, 예컨대 양친매성 중합체, 막 활성 중합체, 펩티드, 멜리틴 펩티드, 멜리틴-유사 펩티드 (MLP), 지질, 가역적으로 변형된 중합체 또는 펩티드, 또는 가역적으로 변형된 막 활성 폴리아민을 포함하거나 또는 이로 이루어질 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 지질, 나노입자, 중합체, 리포솜, 미셀, DPC 또는 관련 기술 분야에서 이용가능한 기타 전달 시스템과 조합될 수 있다. RNAi 작용제는 또한 표적화 기, 지질 (콜레스테롤 및 콜레스테릴 유도체를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 나노입자, 중합체, 리포솜, 미셀, DPC (예를 들어, 각각 본원에 참조로 포함된 WO 2000/053722, WO 2008/022309, WO 2011/104169, 및 WO 2012/083185, WO 2013/032829, WO 2013/158141 참조), 또는 관련 기술 분야에서 이용가능한 기타 전달 시스템에 화학적으로 접합될 수도 있다.
제약 조성물 및 제형
본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 제약 조성물 또는 제형 (본원에서 "의약"으로도 지칭됨)으로서 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 적어도 하나의 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함한다. 이러한 제약 조성물은 표적 세포, 세포 군, 조직 또는 생물에서의 알파-ENaC mRNA의 발현의 억제에서 특히 유용하다. 제약 조성물은 표적 mRNA의 수준의 감소 또는 표적 유전자의 발현의 억제가 이로울 질환, 장애 또는 병태가 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 제약 조성물은 표적 mRNA의 수준의 감소 또는 표적 유전자의 발현의 억제가 이로울 질환 또는 장애가 발달될 위험이 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 방법은 본원에 기술된 바와 같은 표적화 리간드에 연결된 알파-ENaC RNAi 작용제를 치료될 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제 (비히클, 담체, 희석제, 및/또는 전달 중합체를 포함함)가 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물에 첨가되고, 이에 의해 인간을 포함하는 대상체로의 생체내 전달에 적절한 제약 제형 또는 의약이 형성된다.
알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물, 및 치료 유효량의 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체에게 투여하고, 이에 의해 대상체에서 알파-ENaC mRNA의 발현을 억제하는 것에 의한 것을 포함하는 본원에 개시된 방법은 세포, 세포 군, 세포 군, 조직, 기관, 또는 대상체 내의 표적 mRNA의 수준을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 대상체는 적어도 부분적으로 ENaC 발현에 의해 매개되는 질환 또는 장애에 걸린 것으로 기존에 확인 또는 진단되었다. 일부 실시양태에서, 대상체는 하나 이상의 세포 또는 조직에서 ENaC 활성이 강화된 것으로 기존에 확인 또는 진단되었다. 일부 실시양태에서, 대상체는 하나 이상의 호흡기 질환 예컨대 낭성 섬유증, 만성 기관지염, 비-낭성 섬유증 기관지확장증, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 천식, 기도 감염, 원발성 섬모 운동이상증, 및 폐 암종 낭성 섬유증에 걸린 것으로 기존에 진단되었다. 일부 실시양태에서, 대상체는 하나 이상의 눈 질환 예컨대 건성안에 걸린 것으로 기존에 진단되었다. 일부 실시양태에서, 대상체는 ENaC 활성 강화와 연관되거나 또는 이에 의해 야기되는 하나 이상의 호흡기 질환과 연관된 증상을 앓고 있었다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 기술된 제약 조성물은 ENaC 발현의 억제가 이로울 대상체에서의 임상적 표현을 치료 또는 관리하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 유효량의 하나 이상의 제약 조성물이 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 임의의 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 투여는 대상체에서 질환 증상의 수, 중증도 및/또는 빈도를 감소시키는데 사용될 수 있다.
알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 기술된 제약 조성물은 알파-ENaC mRNA의 발현의 감소 또는 억제가 이로울 질환 또는 장애가 있는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 하나 이상의 제약 조성물을 치료 유효량으로 대상체에게 투여하고, 이에 의해 증상이 치료된다. 다른 실시양태에서, 예방적 유효량의 하나 이상의 알파-ENaC RNAi 작용제를 대상체에게 투여하고, 이에 의해 적어도 하나의 증상이 예방 또는 억제된다.
투여 경로는 알파-ENaC RNAi 작용제가 신체와 접촉되는 경로이다. 일반적으로, 포유동물의 치료를 위해 약물, 올리고뉴클레오티드 및 핵산을 투여하는 방법이 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 본원에 기술된 조성물의 투여에 적용될 수 있다. 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 특정 경로에 적합하게 맞춰진 제제에서 임의의 적절한 경로를 통해 투여될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제약 조성물은 흡입, 비강내 투여, 기관내 투여, 또는 입인두 흡인 투여를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 주사에 의해, 예를 들어, 정맥내로, 근육내로, 피내로, 피하로, 관절 내로, 또는 복막내로, 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 제약 조성물은 관련 기술 분야에 공지되어 있는 올리고뉴클레오티드 전달 기술을 사용하여 세포, 세포 군, 조직, 또는 대상체에 전달될 수 있다. 일반적으로, (시험관 내에서 또는 생체 내에서) 핵산 분자를 전달하기 위해 관련 기술 분야에 인지되어 있는 임의의 적절한 방법이 본원에 기술된 조성물과 함께 사용하기 위해 개조될 수 있다. 예를 들어, 국소 투여 (예를 들어, 직접 주사, 이식, 또는 국부 투여), 전신 투여, 또는 피하, 정맥내, 복막내, 또는 비경구 경로 (두개내 (예를 들어, 뇌실내, 실질내 및 경막내), 근육내, 경피, 기도 (에어로졸), 비강, 구강, 직장 또는 국부 (협측 및 설하 포함) 투여를 포함함)에 의해 전달될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 흡입, 비강내 투여, 입인두 흡인 투여, 또는 기관내 투여를 통해 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 폐 상피에서 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 것이 바람직하고, 이를 위해 흡입 (예를 들어, 흡입기 장치, 예컨대 계량 흡입기, 또는 네뷸라이저 예컨대 제트 또는 진동 메쉬 네뷸라이저, 또는 연무 흡입기에 의함)을 통한 투여가 특히 적절하고 유리하다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 본원에 기술된 제약 조성물은 대상체에게 투여하기 위해 제형된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 제약 조성물 또는 의약은 약리학적 유효량의 적어도 하나의 기술된 치료 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 제약상 허용되는 부형제 (부형제)는 약물 전달 시스템에 의도적으로 포함되는, 활성 제약 성분 (API, 치료용 제품, 예를 들어, 알파-ENaC RNAi 작용제) 이외의 물질이다. 부형제는 의도된 투여량에서 치료 효과를 발휘하지 않거나 또는 발휘하도록 의도되지 않는다. 부형제는 a) 제조 동안 약물 전달 시스템의 가공을 돕고/돕거나, b) API의 안정성, 생체이용률 또는 환자 허용성을 보호, 지지 또는 강화하고/하거나, c) 제품 식별을 보조하고/하거나, d) 보관 또는 사용 동안 API의 전반적인 안전성, 유효성 또는 전달의 임의의 다른 속성을 강화하는 작용을 할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제는 불활성 물질일 수 있거나 또는 불활성 물질이 아닐 수 있다.
부형제는 흡수 강화제, 항부착제, 소포제, 항산화제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 색소, 전달 강화제, 전달 중합체, 세제, 덱스트란, 덱스트로스, 희석제, 붕해제, 유화제, 증량제, 충전제, 풍미제, 활제, 보습제, 윤활제, 오일, 중합체, 방부제, 식염수, 염, 용매, 당, 계면활성제, 현탁제, 지속 방출 매트릭스, 감미제, 증점제, 장성 작용제, 비히클, 발수제, 및 습윤화제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
주사 용도에 적절한 제약 조성물은 수성 용액 (수용성인 경우) 또는 분산액, 및 멸균성의 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균성 분말을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 적절한 담체는 생리식염수, 정균수, 크레모포어(Cremophor)® ELTM (바스프(BASF), 뉴저지주 파시패니) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 포함한다. 이는 제조 및 보관 조건 하에 안정적이어야 하고, 미생물 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이의 적절한 혼합물을 예를 들어 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 예를 들어, 코팅 예컨대 레시틴의 사용, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해, 적합한 유동성이 유지될 수 있다. 다수의 경우에, 등장성 작용제, 예를 들어, 당, 폴리알콜 예컨대 만니톨, 소르비톨 및 염화나트륨을 조성물 내에 포함하는 것이 바람직할 것이다. 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 모노스테아르산알루미늄 및 젤라틴을 포함하는 것에 의해, 주사가능한 조성물의 장기 흡수가 초래될 수 있다.
필요한 양의 활성 화합물을 필요한 양으로 상기 열거된 성분 중 하나 또는 이의 조합물과 함께 적합한 용매 내에 혼입시킨 후 필터 멸균함으로써 멸균성의 주사가능한 용액이 제조될 수 있다. 일반적으로, 활성 화합물을 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균성 비히클 내로 혼입시킴으로써 분산액이 제조된다. 멸균성의 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균성 분말의 경우, 제조 방법은 활성 성분 + 임의의 추가적인 원하는 성분의 분말이 이의 사전에 멸균-여과된 용액으로부터 산출되는 진공 건조 및 동결 건조를 포함한다.
관절내 투여에 적절한 제형은 미세결정질 형태, 예를 들어, 수성 미세결정질 현탁액의 형태일 수 있는 약물의 멸균성 수성 제제의 형태일 수 있다. 리포솜 제형 또는 생분해성 중합체 시스템이 관절내 및 안구 투여 양쪽 모두를 위한 약물을 제시하는데 또한 사용될 수 있다.
원하는 양의 활성 화합물을 적합한 용매에 혼입시킨 후, 멸균 여과함으로써 흡입 투여에 적절한 제형이 제조될 수 있다. 일반적으로, 흡입 투여용 제형은 생리학적 pH에서 멸균 용액이고, 점도가 낮다 (< 5 cP). 장성 균형을 맞추도록 제형에 염이 첨가될 수 있다. 일부 경우에, 활성 화합물 용해도를 증가시키고 에어로졸 특성을 개선하도록 계면활성제 또는 공용매가 첨가될 수 있다. 일부 경우에, 분무된 액적의 크기 및 분포를 확실히 하기 위해 점도를 제어하도록 부형제가 첨가될 수 있다.
활성 화합물은 신체로부터의 급속한 제거로부터 화합물을 보호할 담체, 예컨대 이식물 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 함께 제조될 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 다가무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 관련 기술 분야의 기술자에게 명백할 것이다. 리포솜 현탁액 또한 제약상 허용되는 담체로서 사용될 수 있다. 이들은, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,522,811에 기술된 바와 같이, 관련 기술 분야의 기술자에게 공지되어 있는 방법에 따라 제조될 수 있다.
알파-ENaC RNAi 작용제는 투여 용이성 및 투여량 균일성을 위해 투여량 단위 형태의 조성물에서 제형될 수 있다. 투여량 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 단위 투여량으로서 적절한 물리적으로 분리된 단위를 지칭한다; 각각의 단위는 필요한 제약 담체와 함께 원하는 치료 효과를 일으키도록 계산된 미리 정해진 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 개시내용의 투여량 단위 형태에 대한 상세사항은 활성 화합물의 독특한 특성 및 달성될 치료 효과, 및 이러한 활성 화합물을 개인의 치료를 위해 배합하는 분야에 고유한 제한사항에 의해 결정되고, 이에 직접적으로 의존적이다.
제약 조성물은 제약 조성물에서 통상적으로 발견되는 다른 추가적인 성분을 함유할 수 있다. 이러한 추가적인 성분은 항소양제, 수렴제, 국소 마취제, 또는 항염증제 (예를 들어, 항히스타민, 디펜히드라민 등)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에서 규정된 RNAi 작용제를 발현하거나 또는 포함하는 세포, 조직, 또는 단리된 기관이 "제약 조성물"로서 사용될 수 있는 것으로 또한 구상된다. 본원에서 사용된 바와 같이, "약리학적 유효량", "치료 유효량", 또는 간단히 "유효량"은 약리학적, 치료 또는 예방 결과를 일으키는 RNAi 작용제의 양을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 본원에 개시된 RNAi 작용제를 투여하는 것에 더하여 제2 치료제 또는 치료를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 또 다른 알파-ENaC RNAi 작용제 (예를 들어, 알파-ENaC 표적 내의 상이한 서열을 표적화하는 알파-ENaC RNAi 작용제)이다. 다른 실시양태에서, 제2 치료제는 소형 분자 약물, 항체, 항체 단편, 및/또는 앱타머일 수 있다.
일반적으로, 본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제의 유효량은 약 0.0001 내지 약 20 mg/체중 kg/일, 예를 들어, 약 0.001 내지 약 3 mg/체중 kg/일의 범위일 것이다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 유효량은 용량 당 약 0.001 내지 약 0.500 mg/체중 kg의 범위일 것이다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 유효량은 용량 당 약 0.001 내지 약 0.100 mg/체중 kg의 범위일 것이다. 일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 유효량은 용량 당 약 0.001 내지 약 0.050 mg/체중 kg의 범위일 것이다. 투여되는 양은 환자의 또한 전반적인 건강 상태, 전달되는 화합물의 상대적 생물학적 효능, 약물의 제형, 제형 내의 부형제의 존재 및 유형, 및 투여 경로와 같은 변수에 의존적일 수 있다. 또한, 원하는 혈액 수준 또는 조직 수준을 신속하게 달성하기 위해 상기의 상위 수준 너머로 증가될 수 있거나, 또는, 초기 투여량이 최적값보다 더 작을 수 있다는 것을 이해하여야 한다.
질환 치료를 위해, 또는 질환 치료를 위한 의약 또는 조성물의 형성을 위해, 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 본원에 기술된 제약 조성물은 부형제와 또는 제2 또는 다른 RNAi 작용제, 소형 분자 약물, 항체, 항체 단편, 펩티드 및/또는 앱타머를 포함하지만 이에 제한되지 않는 제2 치료제 또는 치료와 조합될 수 있다.
기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는, 제약상 허용되는 부형제 또는 아주반트에 첨가되는 경우, 키트, 용기, 팩 또는 분배기 내로 포장될 수 있다. 본원에 기술된 제약 조성물은 건조 분말 또는 에어로졸 흡입기, 기타 계량 흡입기, 네뷸라이저, 미리 충전된 주사기 또는 바이알에 포장될 수 있다.
치료 방법 및 발현 억제
본원에 개시된 알파-ENaC RNAi 작용제는 RNAi 작용제의 투여가 이로울 질환 또는 장애가 있는 대상체 (예를 들어, 인간 또는 기타 포유동물)를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNAi 작용제는 알파-ENaC mRNA 발현의 감소 및/또는 억제가 이로울 대상체 (예를 들어, 인간)를 치료하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 RNAi 작용제는, 예를 들어, 낭성 섬유증, 만성 기관지염, 비-낭성 섬유증 기관지확장증, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 천식, 기도 감염, 원발성 섬모 운동이상증, 및/또는 폐 암종 낭성 섬유증 및/또는 건성안을 포함하지만 이에 제한되지 않는, ENaC 채널 활성의 감소가 이로울 대상체에 대한 질환 또는 장애가 있는 대상체 (예를 들어, 인간)를 치료하는데 사용될 수 있다. 대상체의 치료는 치료적 및/또는 예방적 처치를 포함할 수 있다. 치료 유효량의 임의의 하나 이상의 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 대상체에게 투여된다. 대상체는 인간, 환자, 또는 인간 환자일 수 있다. 대상체는 성인, 청소년, 아동 또는 유아일 수 있다. 본원에 기술된 제약 조성물이 인간 또는 동물에게 투여될 수 있다.
ENaC 활성 증가는 기도 표면 액체 탈수를 촉진하고 점액섬모 소거를 손상시키는 것으로 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제는 대상체에서 적어도 부분적으로 ENaC 활성 수준에 의해 매개되는 적어도 하나의 증상을 치료하는데 사용된다. 치료 유효량의 임의의 하나 이상의 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 예방적 유효량의 임의의 하나 이상의 기술된 RNAi 작용제가 대상체에게 투여되고, 이에 의해 적어도 하나의 증상을 방지 또는 억제함으로써 대상체를 치료한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 적어도 부분적으로 알파-ENaC 유전자 발현에 의해 매개되는 질환, 장애, 병태 또는 병리 상태의 치료를 필요로 하는 환자에게 임의의 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 적어도 부분적으로 알파-ENaC 유전자 발현에 의해 매개되는 질환, 장애, 병태 또는 병리 상태를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 알파-ENaC RNAi 작용제는 대상체에서 적어도 부분적으로 ENaC 발현에 의해 매개되는 임상적 표현 또는 병리 상태를 치료 또는 관리하는데 사용된다. 치료 유효량의 하나 이상의 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제 또는 알파-ENaC RNAi 작용제-함유 조성물이 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 조성물을 치료될 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되는 대상체의 특정 상피 세포에서의 알파-ENaC 유전자의 유전자 발현 수준 및/또는 mRNA 수준이 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 알파-ENaC RNAi 작용제가 제공되지 않은 대상체에 비교하여 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 초과만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되는 대상체의 특정 상피 세포에서의 ENaC 수준 또는 ENaC 채널 활성 수준이 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 알파-ENaC RNAi 작용제가 제공되지 않은 대상체에 비교하여 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 초과만큼 감소된다. 대상체에서의 유전자 발현 수준, 단백질 수준, 및/또는 mRNA 수준이 대상체의 세포, 세포 군, 및/또는 조직에서 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여된 대상체의 특정 상피 세포에서의 알파-ENaC mRNA 수준이 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 알파-ENaC RNAi 작용제가 제공되지 않은 대상체에 비교하여 적어도 약 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 98%만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여된 대상체의 특정 상피 세포에서의 ENaC 이종삼량체 단백질 복합체의 수준이 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 알파-ENaC RNAi 작용제가 제공되지 않은 대상체에 비교하여 적어도 약 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 98%만큼 감소된다. 대상체에서의 ENaC 수준이 대상체의 세포, 세포 군, 조직, 혈액, 및/또는 기타 체액에서 감소될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여된 대상체의 폐 상피 세포에서의 알파-ENaC mRNA 및/또는 ENaC 이종삼량체 단백질 복합체의 수준이 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 알파-ENaC RNAi 작용제가 제공되지 않은 대상체에 비교하여 적어도 약 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 98%만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여된 대상체의 폐 상피 세포의 부분집합, 예컨대 기도 상피 세포에서의 알파-ENaC mRNA 및/또는 ENaC 이종삼량체 단백질 복합체의 수준 및/또는 ENaC 채널 활성 수준이 알파-ENaC RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 알파-ENaC RNAi 작용제가 제공되지 않은 대상체에 비교하여 적어도 약 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 98%만큼 감소된다.
유전자 발현, mRNA, 및 단백질 수준의 감소를 관련 기술 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 평가할 수 있다. 알파-ENaC mRNA 수준, ENaC 채널 활성 수준, 및/또는 ENaC 이종삼량체 단백질 복합체 수준의 감소 또는 저하는 본원에서 총괄적으로 알파-ENaC의 감소 또는 저하 또는 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하거나 감소시키는 것으로 지칭된다. 본원에 기재된 실시예는 알파-ENaC 유전자 발현의 억제를 평가하기 위한 공지된 방법을 설명한다.
세포, 조직, 기관 및 비-인간 생물
적어도 하나의 본원에 기술된 알파-ENaC RNAi 작용제를 포함하는 세포, 조직, 기관, 및 비-인간 생물이 구상된다. 이러한 세포, 조직, 기관 또는 비-인간 생물은 RNAi 작용제를 세포, 조직, 기관, 또는 비-인간 생물에 전달함으로써 만들어진다.
이제 상기에서 제공된 실시양태 및 항목이 하기의 비제한적 실시예와 함께 예시된다.
실시예
실시예 1. 알파-ENaC RNAi 작용제의 합성
표 5에 제시된 알파-ENaC RNAi 작용제 듀플렉스를 하기에 따라 합성하였다:
A. 합성. 알파-ENaC RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥을 올리고뉴클레오티드 합성에서 사용되는 고체 상 상에서 포스포르아미디트 기술에 따라 합성하였다. 규모에 따라, 머메이드(MerMade)96E® (바이오오토메이션(Bioautomation)), 머메이드12® (바이오오토메이션), 또는 OP 파일럿(OP Pilot) 100 (GE 헬스케어(GE Healthcare))를 사용하였다. 제어 세공 유리 (CPG, 500 Å 또는 600Å, 프라임 신쎄시스(Prime Synthesis) (미국 펜실베니아주 애스톤)로부터 수득됨)로 제조된 고체 지지체 상에서 합성을 수행하였다. 모든 RNA 및 2'-변형 RNA 포스포르아미디트는 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific) (미국 위스콘신주 밀워키)에서 구입하였다. 구체적으로, 사용된 2'-O-메틸 포스포르아미디트는 하기를 포함하였다: (5'-O-디메톡시트리틸-N6-(벤조일)-2'-O-메틸-아데노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미디트, 5'-O-디메톡시-트리틸-N4-(아세틸)-2'-O-메틸-시티딘-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필-아미노) 포스포르아미디트, (5'-O-디메톡시트리틸-N2-(이소부티릴)-2'-O-메틸-구아노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미디트, 및 5'-O-디메톡시트리틸-2'-O-메틸-우리딘-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미디트. 2'-데옥시-2'-플루오로-포스포르아미디트는 2'-O-메틸 RNA 아미디트와 동일한 보호기를 보유하였다. 5'-디메톡시트리틸-2'-O-메틸-이노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미디트는 글렌 리서치(Glen Research) (버지니아주)에서 구입하였다. 역전 무염기 (3'-O-디메톡시트리틸-2'-데옥시리보스-5'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미디트는 켐진스(ChemGenes) (미국 매사추세츠주 윌밍턴)에서 구입하였다. 하기의 UNA 포스포르아미디트를 사용하였다: 5'-(4,4'-디메톡시트리틸)-N6-(벤조일)-2',3'-세코-아데노신, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소프로필)]-포스포르아미디트, 5'-(4,4'-디메톡시트리틸)-N-아세틸-2',3'-세코-시토신, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소-프로필)]-포스포르아미디트, 5'-(4,4'-디메톡시트리틸)-N-이소부티릴-2',3'-세코-구아노신, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소프로필)]-포스포르아미디트, 및 5'-(4,4'-디메톡시-트리틸)-2',3'-세코-우리딘, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소-프로필)]-포스포르아미디트. TFA 아미노연결 포스포르아미디트 또한 시판되었다 (써모피셔(ThermoFisher)).
트리-알킨-함유 포스포르아미디트를 무수 디클로로메탄 또는 무수 아세토니트릴 (50 mM)에 용해시킨 한편, 모든 다른 아미디트를 무수 아세토니트릴 (50 mM)에 용해시키고, 분자 체 (3Å)를 첨가하였다. 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT, 아세토니트릴 내의 250 mM) 또는 5-에틸티오-1H-테트라졸 (ETT, 아세토니트릴 내의 250 mM)을 활성화제 용액으로서 사용하였다. 커플링 시간은 10분 (RNA), 90초 (2' O-Me), 및 60초 (2' F)였다. 포스포로티오에이트 연결을 도입하기 위해, 무수 아세토니트릴 내의 3-페닐 1,2,4-디티아졸린-5-온 (POS, 폴리오르그 인크(PolyOrg, Inc.) (미국 매사추세츠주 레민스터)로부터 수득함)의 100 mM 용액을 사용하였다.
대안적으로, 트리-알킨 모이어티를 합성 후에 도입하였다 (하기 섹션 E 참조). 이러한 경로의 경우, 센스 가닥이 1급 아민을 함유하는 5' 및/또는 3' 말단 뉴클레오티드로 관능화되었다. TFA 아미노연결 포스포르아미디트를 무수 아세토니트릴 (50 mM)에 용해시키고, 분자 체 (3Å)를 첨가하였다. 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT, 아세토니트릴 내의 250 mM) 또는 5-에틸티오-1H-테트라졸 (ETT, 아세토니트릴 내의 250 mM)을 활성화제 용액으로서 사용하였다. 커플링 시간은 10분 (RNA), 90초 (2' O-Me), 및 60초 (2'F)였다. 포스포로티오에이트 연결을 도입하기 위해, 무수 아세토니트릴 내의 3-페닐 1,2,4-디티아졸린-5-온 (POS, 폴리오르그 인크. (미국 매사추세츠주 레민스터)로부터 수득함)의 100 mM 용액을 사용하였다.
B. 지지체에 결합된 올리고머의 절단 및 탈보호. 고체 상 합성의 종료 후, 건조된 고체 지지체를 40 중량%의 수 중 메틸아민 및 28% 내지 31% 수산화암모늄 용액 (알드리치(Aldrich)의 1:1 부피 용액으로 1.5시간 동안 30℃에서 처리하였다. 용액을 증발시키고, 고체 잔류물을 물에서 재구성시켰다 (하기 참조).
C. 정제. 미정제 올리고머를 TSK겔 수퍼Q-5PW 13 ㎛ 칼럼 및 시마주(Shimadzu) LC-8 시스템을 사용하여 음이온성 교환 HPLC에 의해 정제하였다. 완충제 A는 20 mM 트리스, 5 mM EDTA, pH 9.0이었고, 20% 아세토니트릴를 함유하였으며, 완충제 B는 1.5 M 염화나트륨이 첨가된 완충제 A와 동일하였다. 260 nm에서의 UV 트레이스를 기록하였다. 적합한 분획을 풀링한 후, 100 mM 중탄산암모늄, pH 6.7 및 20% 아세토니트릴 또는 여과수의 러닝 완충제와 함께 세파덱스 G-25 파인(Sephadex G-25 fine)이 패킹된 GE 헬스케어 XK 16/40 칼럼을 사용하여 크기 배제 HPLC 상에서 러닝시켰다. 대안적으로, 풀링된 분획을 탈염시키고, 접선 유동 여과를 통해 적합한 완충제 또는 용매 시스템 내로 교환시켰다.
D. 어닐링. 1× PBS (포스페이트 완충 염수, 1×, 코닝(Corning), 셀그로(Cellgro)) 내의 등몰량의 RNA 용액 (센스 및 안티센스)을 조합함으로써 상보적 가닥들을 혼합하여 RNAi 작용제를 형성시켰다. 일부 RNAi 작용제를 동결건조시키고, -15 내지 -25℃에서 보관하였다. 1× PBS에서 UV-Vis 분광계 상에서 용액 흡광도를 측정함으로써 듀플렉스 농도를 결정하였다. 그 후, 260 nm에서의 용액 흡광도에 변환 인자 및 희석 인자를 곱하여 듀플렉스 농도를 결정하였다. 달리 언급되지 않는 한, 사용된 변환 인자는 0.037 mg/(mLㆍcm)이었다.
E. 트리-알킨 링커의 접합. 어닐링 전 또는 후에, 5' 또는 3' 아민 관능화 센스 가닥이 트리-알킨 링커에 접합된다. 본원에 개시된 구축물을 형성하는데 사용될 수 있는 예시적인 트리-알킨 링커 구조는 하기와 같다:
F. 표적화 리간드의 접합. 어닐링 전 또는 후에, 5' 또는 3' 세갈래 알킨 관능화 센스 가닥이 표적화 리간드에 접합된다. 하기 예는 표적화 리간드를 어닐링된 듀플렉스에 접합시키는 것을 기술한다: 0.5 M 트리스(3-히드록시프로필트리아졸릴메틸)아민 (THPTA), 0.5 M의 황산구리(II) 오수화물 (Cu(II)SO4·5H2O) 및 아스코르브산나트륨의 2 M 용액의 모액을 탈이온수에서 제조하였다. 표적화 리간드의 DMSO 내의 75 mg/mL 용액을 제조하였다. 트리-알킨 관능화 듀플렉스 (3 mg, 75 ㎕, 탈이온수 내의 40 mg/mL, ~15,000 g/mol)를 함유하는 1.5 mL 원심분리 튜브에, 25 ㎕의 1 M 헤페스 pH 8.5 완충제를 첨가한다. 와동 후, 35 ㎕의 DMSO를 첨가하고, 용액을 와동시켰다. 표적화 리간드를 반응에 첨가하고 (6 당량/듀플렉스, 2 당량/알킨, ~15 ㎕), 용액을 와동시켰다. pH 종이를 사용하여, pH를 점검하고, pH가 ~8임을 확인하였다. 별개의 1.5 mL 원심분리 튜브에서, 50 ㎕의 0.5 M THPTA를 10 uL의 0.5 M Cu(II)SO4·5H2O와 혼합하고, 와동시키고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 5분 후, THPTA/Cu 용액 (7.2 ㎕, 6 당량 5:1 THPTA:Cu)을 반응 바이알에 첨가하고, 와동시켰다. 그후 즉각적으로, 2 M 아스코르베이트 (5 ㎕, 50 당량/듀플렉스, 16.7/알킨)를 반응 바이알에 첨가하고, 와동시켰다. 반응이 완료되었으면 (전형적으로 0.5-1 시간 내에 완료됨), 비-변성 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 반응을 즉각적으로 정제하였다.
실시예 2. 마우스에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
생체 내에서 알파-ENaC RNAi 작용제의 활성을 평가하기 위해, 연구 제1일 및 제2일에 기관내 (IT) 투여에 적절한 미세분무기 장치 (펜 센추리(Penn Century), 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 염수 비히클, 또는 등장성 염수 내에 제형화된, 5 mg/kg의 접합 리간드가 없는 하기 알파-ENaC RNAi 작용제 (즉, "네이키드 RNAi 작용제") 중 하나 50 마이크로리터를 수컷 ICR 마우스에 투여하였다: AD04019, AD04020, AD04021, AD04022, AD04023, AD04024, AD04025, 또는 AD04026. (예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 당 4 또는 5마리의 마우스에 투약하였다. 마우스를 연구 제9일에 희생시키고 (sac), 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
도 1은 확인된 알파-ENaC RNAi 작용제 조성물 (AD04019, AD04020, AD04021, AD04022, AD04023, AD04024, AD04025, 및 AD04026)의 상대적 발현을 나타내고, 각각의 RNAi 작용제는 비히클 대조군에 비교하여 폐 알파-ENaC 발현에서의 유의한 감소를 나타낸다.
실시예 3. 마우스에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 기관내 (IT) 투여에 적절한 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 염수 비히클, 또는 등장성 염수 내에 제형화된, 3 mg/kg의 알파-ENaC RNAi 작용제 (즉, AD04025 또는 AD04858 (예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6 참조)) 50 마이크로리터를 수컷 ICR 마우스에 투여하였다. 군 당 4 또는 5마리의 마우스에 투약하였다. 마우스를 연구 제9일에 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
도 2는 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04858의 상대적 발현을 나타내고, 양쪽 RNAi 작용제는 대조군에 비교하여 폐 알파-ENaC 발현에서의 유의한 감소를 나타낸다.
실시예 4. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드 접합의 존재 또는 부재 하의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 기관내 (IT) 투여에 적절한 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 등장성 염수 내에 제형화된 0.5 mg/kg, 1.5 mg/kg, 또는 5 mg/kg의 알파-ENaC RNAi 작용제 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리(Sprague Dawley) 래트에 투여하였다. 군 당 다섯 (5) 마리의 래트에 투약하였다. 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
도 3은 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04025-접합체의 상대적 발현을 나타낸다. AD04025-접합체는 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부에 부가된 아미노 기에 αvβ6 인테그린에 대한 친화력이 있는 펩티드-기반 인테그린 표적화 리간드를 마스크 폴리-L-리신 (PLL) 스캐폴드를 통해 합성 후에 연결시킴으로써 합성되었다. (예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다). 네이키드 RNAi 작용제 및 RNAi 작용제-접합체 양쪽 모두 기준선 측정치에 비교하여 폐 알파-ENaC 발현에서의 실질적인 감소를 나타냈지만, AD04025-접합체가 측정된 3가지 투여량 수준 (0.5 mg/kg, 1.5 mg/kg, 및 5 mg/kg) 각각에 걸쳐 수치적으로 개선된 수준의 녹다운을 나타냈고, 특히 1.5 mg/kg 용량에서 현저한 개선이 있었다 (리간드 존재 하의 78% 녹다운 대 리간드 부재 하의 47% 녹다운).
실시예 5. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 7에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 7>
실시예 5에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2 내지 7에서 Tri-SM2로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 4에 표현된 구조를 갖고, 이는 센스 가닥의 5' 말단 단부 상에서 말단 아민을 통해 (즉, 말단 NH2-C6 기와 공유 결합을 형성함으로써) RNAi 작용제에 접합되었다.
군 당 다섯 (5) 마리의 래트에 투약하였다 (n=5). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 8>
실시예 5에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 8에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다. 예를 들어, 안티센스 가닥의 5' 말단 단부에 위치하는 시클로프로필-포스포네이트 기를 포함하는 AD05347은 대조군에 비교하여 mRNA의 평균 감소가 약 59% (0.411)였다. 추가로, 각각의 다른 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 rENaC mRNA의 적어도 약 27%의 감소를 나타냈다.
실시예 6. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일에, 표 9에 상술된 하기 투약 군에 따라 기관내 (IT) 투여에 적절한 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 염수 비히클 또는 하기 알파-ENaC RNAi 작용제 중 하나 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투여하였다.
<표 9>
실시예 6에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2, 5 및 6에서 Tri-SM1으로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 5에 표현된 구조를 갖고, 이는 센스 가닥의 5' 말단 단부 상에서 말단 아민을 통해 (즉, 말단 NH2-C6 기와 공유 결합을 형성함으로써) RNAi 작용제에 접합되었다. 군 3 및 4의 경우, 군 3 및 4의 세갈래 소형 분자 리간드는 도 5에 제시된 글루타르산 링커를 하기와 같이 표현된 시스테인-PEG2 연결을 포함한 링커로 교체하였다:
각각의 군 1, 2, 3, 4, 5, 및 7에서는 다섯 (5) 마리의 래트에 투약하였고 (n=5), 군 6에서는 네 (4) 마리의 래트에 투약하였다. 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 10>
실시예 6에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 10에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다. 추가적으로, 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드를 사용하는 것이 20 kDa PEG PK 변형제를 추가로 포함한 펩티드-기반 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드에 비교했을 때 mRNA 발현의 필적하는 감소를 나타낸다.
실시예 7. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 11에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 11>
실시예 7에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
각각의 군 2-6 및 8-10에서 Tri-SM2로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 4에 표현된 구조를 갖고, 이는 센스 가닥의 5' 말단 단부 상에서 말단 아민을 통해 (즉, 말단 NH2-C6 기와 공유 결합을 형성함으로써) RNAi 작용제에 접합되었다. 군 7의 리간드는 시스테인 연결 기를 포함하였다 (예를 들어, 실시예 6을 참조한다).
군 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 및 9에서는 네 (4) 마리의 래트에 투약하였고 (n=4), 군 8 및 10에서는 세 (3) 마리의 래트에 투약하였다 (n=3). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 12>
실시예 7에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 12에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다. 예를 들어, AD05347은 대조군에 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 약 54% 감소 (0.457)를 나타냈다.
실시예 8. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 13에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 13>
실시예 8에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2 및 군 4에서 Tri-SM2로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 4에 표현된 구조를 갖고, 군 3 및 8에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖고, 군 5에서 Tri-SM9로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 7에 표현된 구조를 갖고, 군 6에서 Tri-SM6으로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 8에 표현된 구조를 갖고, 군 7에서 Tri-SM8로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 9에 표현된 구조를 갖고, 군 9에서 Tri-SM10으로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 10에 표현된 구조를 갖고, 군 10에서 Tri-SM11로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 11에 표현된 구조를 갖는다. 각각의 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드 각각은 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제의 5' 말단 단부 상에서 아미노 기를 통한 접합에 의해 부가되었다.
각각의 군에서 네 (4) 마리의 래트에 투약하였다 (n=4). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 14>
실시예 8에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 14에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다. 예를 들어, AD05347-Tri-SM6.1 (군 3)은 대조군에 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 약 64% 감소 (0.358)를 나타냈고, AD05453-Tri-SM6.1 (군 8)은 대조군에 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 약 55% 감소 (0.454)를 나타냈다. 추가로, 군 8 및 9는 안티센스 가닥 상에서 5' 말단 시클로프로필-포스포네이트 변형을 사용하지 않으면서 평균 rENaC mRNA 발현에서 약 55% 감소 (0.454)를 달성하였고, 5' 안티센스 시클로프로필-포스포네이트 변형의 존재 하에 평균 rENaC mRNA 발현에서 약 53% 감소 (0.469)가 있은 군 2에 필적하는 억제 효과를 나타냈다. 또한, 군 4, 6, 8, 9, 및 10에서 관찰된 바와 같이, 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 인테그린 αvβ6에 대한 친화력이 있는 것으로 공지된 세갈래 펩티드-기반 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드 (화학 구조 정보에 대해 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2018/085415의 도 11 참조)를 이용한 군 11에 필적하거나 또는 일부 경우에는 군 11보다 수치적으로 우수하였다 (예를 들어, Tri-SM6.1 및 Tri-SM10을 포함한 군 8 및 9).
실시예 9. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 15에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 15>
실시예 9에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 3 및 5-8에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군에서 네 (4) 마리의 래트에 투약하였다 (n=4). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 16>
실시예 9에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 16에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다. 추가로, 네이키드로 투여되었을 때, AD05453은 약 29% 억제 (0.713)만 나타낸 한편, Tri-SM6.1 인테그린 표적화 리간드에 접합되었을 때는 평균 rENaC mRNA 발현에서 44% 감소 (0.562)를 나타냈다.
실시예 10. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 17에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 17>
실시예 10에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2-10에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군에서 네 (4) 마리의 래트에 투약하였다 (n=4). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 18>
실시예 10에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 18에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다.
실시예 11. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 19에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 19>
실시예 11에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2-7에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군에서 다섯 (5) 마리의 래트에 투약하였다 (n=5). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 20>
실시예 11에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 20에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다.
실시예 12. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 입인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 표 21에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 21>
실시예 12에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2-13에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군에서 네 (4) 마리의 래트에 투약하였다 (n=4). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 22>
실시예 12에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 22에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다.
실시예 13. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 입인두 흡인 투여의 용량 범위 연구.
연구 제1일에, 표 23에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 23>
실시예 13에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2-8에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군 1, 2, 3, 4, 7, 및 8에서 여섯 (6) 마리의 래트에 투약하였다 (n=5). 군 5 및 6에서는 네 마리의 래트에 투약하였다 (n=4). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 24>
실시예 13에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
상기 표 24에 나타난 바와 같이, 각각의 투여된 투여량 수준에서 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453이 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다.
실시예 14. 마우스에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 염수 비히클, 또는 등장성 염수 내에 제형화된, 5 mg/kg의 접합 리간드가 없는 하기 알파-ENaC RNAi 작용제 (즉, "네이키드 RNAi 작용제") 중 하나 50 마이크로리터를 수컷 ICR 마우스에 투여하였다: AD04025, AD04526, AD04527, AD04528, AD04529, AD04530, AD04531, AD04536, 또는 AD04537. 군 당 4마리의 마우스에 투약하였다 (n=4). 마우스를 연구 제9일에 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 25>
실시예 14에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 mENaC mRNA 발현
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
상기 표 25에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다.
실시예 15. 마우스에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 염수 비히클, 또는 등장성 염수 내에 제형화된, 5 mg/kg의 접합 리간드가 없는 하기 알파-ENaC RNAi 작용제 (즉, "네이키드 RNAi 작용제") 중 하나 50 마이크로리터를 수컷 ICR 마우스에 투여하였다: AD04025, AD04538, AD04539, AD04532, AD04533, AD04534, AD04535, 또는 AD04540. (예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 당 네 (4) 마리의 마우스에 투약하였다 (n=4). 마우스를 연구 제9일에 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 26>
실시예 15에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 mENaC mRNA 발현
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
상기 표 26에 나타난 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제의 기저 서열이 달성된 ENaC 유전자 억제의 수준에 영향을 미친다. 예를 들어, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025는 알파-ENaC 유전자의 위치 972를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥 서열을 포함한다 (즉, 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 1-19는 위치 972-990에서 알파-ENaC 유전자 (서열식별번호: 1)에 적어도 부분적으로 상보적이도록 디자인된다). AD04525는 이러한 실시예에서 테스트된 RNAi 작용제 중 가장 높은 수준의 억제를 달성하였고, 대조군에 비교하여 유전자 발현의 약 55% 녹다운 (0.448)을 나타냈다. 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04538 (유전자 위치 973을 표적화함), AD04539 (유전자 위치 999를 표적화함), AD04532 (유전자 위치 1000을 표적화함), AD04533 (유전자 위치 973을 또한 표적화함), AD04534 (유전자 위치 999를 또한 표적화함), AD04535 (유전자 위치 1291을 표적화함), 및 AD04540 (유전자 위치 763을 표적화함)을 포함하여, 나머지 알파-ENaC RNAi 작용제는 유전자 상의 상이한 위치를 표적화하도록 디자인되었다. 상기 나타난 바와 같이, 상이한 위치의 유전자를 표적화하도록 디자인된 알파-ENaC RNAi 작용제는 상이한 억제 활성을 가질 수 있다 (예를 들어, AD04025 (위치 972)의 알파-ENaC mRNA 녹다운 수준을 AD04538 (위치 973) 및 AD04533 (위치 973)과 비교한다). 추가로, 동일한 위치의 알파-ENaC RNAi 작용제 (예를 들어, AD04539 및 AD04534)를 비교할 때, 양쪽 서열의 기저 핵염기가 동일한 위치 (예를 들어, 유전자 위치 999)의 유전자를 억제하도록 디자인되었음에도 불구하고, 기저 염기 서열의 근소한 변형 및/또는 상이한 변형 뉴클레오티드의 포함이 적어도 수치적으로 상이한 억제 활성에 이를 수 있다.
실시예 16. 래트에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 염수 비히클, 또는 등장성 염수 내에 제형화된, 약 3 mg/kg의 접합 리간드가 없는 하기 알파-ENaC RNAi 작용제 (즉, "네이키드 RNAi 작용제") 중 하나 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투여하였다: AD04835, AD04022, AD05116, AD05117, AD05118, 또는 AD05119. (예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 당 다섯 (5) 마리의 래트에 투약하였다 (n=5). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 27>
실시예 16에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
상기 표 27은 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제의 기저 서열이 달성된 ENaC 유전자 억제의 수준에 영향을 미친다는 것을 나타내는 추가적인 데이터를 제공한다. 예를 들어, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD04025 및 AD04835는 알파-ENaC 유전자의 위치 972를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥 서열을 각각 포함한다 (즉, 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 1-19는 위치 972-990에서 알파-ENaC 유전자 (서열식별번호: 1)에 적어도 부분적으로 상보적이도록 디자인된다). 이러한 실시예에서 테스트된 알파-ENaC RNAi 작용제 중에서, 이러한 2개의 RNAi 작용제가 70%를 초과하는 가장 큰 수준의 녹다운을 나타냈다. 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05116 (유전자 위치 944를 표적화함), AD05117 (유전자 위치 945), AD05118 (유전자 위치 1289를 표적화함), 및 AD05119 (유전자 위치 1579를 표적화함)를 포함하는 나머지 알파-ENaC RNAi 작용제는 유전자 상의 상이한 위치를 표적화하도록 디자인되었다.
실시예 17. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 입인두 흡인 투여의 다중 용량, 용량 범위 연구.
연구 제1일, 연구 제2일 및 연구 제3일에, 표 28에 상술된 하기 투약 군에 따라, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였다:
<표 28>
실시예 17에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다). 본원에서 언급된 바와 같이, 이러한 실시예에서의 동일한 RNAi 작용제-세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드 접합체 구조 (즉, Tri-SM6.1-AD05453)는, AD05453에서 나타난 바와 같이 말단 아미노 기에 합성 후에 부가하는 것 대신에, AD05924에서 나타난 바와 같이 트리-알킨 관능화 연결 기 (TriAlk14)를 사용함으로써 대안적으로 합성될 수 있다. (실시예 1을 또한 참조한다).
군 2-7에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군 1, 2, 3, 4, 5, 및 6에서는 일곱 (7) 마리의 래트에 투약하였고 (n=7), 군 7에서는 여섯 (6) 마리의 래트에 투약하였다 (n=6). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 29>
실시예 17에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 29에 나타난 바와 같이, 각각의 투여된 투여량 수준에서 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05453이 대조군에 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타냈다. 추가로, 동일한 알파-ENaC RNAi 작용제를 사용했을 때 다중 OP 용량 투여가 단일 용량에 비교하여 rENaC mRNA 발현의 추가 녹다운의 징후를 나타냈다 (예를 들어, 실시예 17의 군 7과 실시예 13의 군 5를 비교한다).
실시예 18. 마우스 및 인간 COPD 가래 안정성 평가에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
공지된 종래 기술 듀플렉스 대 본원에 개시된 RNAi 작용제의 활성 및 안정성을 평가 및 비교하기 위해, 노바티스(Novartis) 등의 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2008/152131 (표 1C의 ND-9201 참조)에 개시된 바와 같은 하기 변형 구조를 갖는 듀플렉스를 합성하였다:
안티센스 가닥 서열 (5' → 3'): GAUUUGUUCUGGUUGcAcAdTsdT (서열식별번호: 291)
센스 가닥 서열 (5' → 3'): uGuGcAAccAGAAcAAAucdTsdT (서열식별번호: 292)
(이하 ND-9201로 지칭됨). WO 2008/152131에 따르면, ND-9201은 알파-ENaC 유전자 발현의 비교적 강력한 시험관내 억제를 나타냈다.
먼저, 생체 내에서 알파-ENaC 억제 활성을 평가하기 위해 연구를 수행하였다. 연구 제1일 및 제2일에, 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 등장성 글루코스 (D5W) 비히클 또는 D5W 내에 제형화된 약 10 mg/kg의 ND-9201를 수컷 ICR 마우스에 투여하였다. 제9일에 마우스를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다. 비교를 위해, 연구 제1일 및 제2일에, 미세분무기 장치 (펜 센추리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 대조군으로서 사용하기 위한 D5W 비히클 또는 D5W 내에 제형화된 약 5 mg/kg의 본원에 개시된 RNAi 작용제 AD04025를 수컷 ICR 마우스에 투여하였다. (예를 들어, AD04025의 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다). 제9일에 마우스를 유사하게 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다.
ND-9201의 경우, 제1일 및 제2일의 10 mg/kg 투약에서, 생체 내에서 mENaC mRNA 발현의 약 25% 억제가 마우스에서 달성되었다.
AD04025의 경우, 제1일 및 제2일의 오직 5 mg/kg의 투약에서, 생체 내에서 mENaC mRNA 발현의 약 65% 억제가 마우스에서 달성되었고, 따라서 공지된 종래 기술의 듀플렉스 ND-9201에 비해 억제 활성의 실질적인 개선을 나타낸다.
추가적으로, COPD로 진단된 환자로부터 취한 인간 가래에서 ND-9201 및 AD04858로 안정성 연구를 수행하였다 (예를 들어, AD04858의 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다). 50 ㎕의 가래 및 350 ㎕의 용해 완충제를 함유하는 용액을 와동시키고, 12.5 ㎕의 ND-9201 또는 AD04858을 첨가하고, 매시간 간단하게 와동시켰다. 샘플 상에서 LCMS를 수행하여, 각각의 분자의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두의 잔여 전장 생성물을 경시적으로 결정하였다. 6시간 후, 센스 가닥 및 안티센스 가닥 양쪽 모두에 대해 약 20 내지 30% 더 큰 전장 생성물이 존재한 바와 같이, AD04858이 개선된 안정성을 나타냈다.
실시예 19. 래트에서의 상피 세포 표적화 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제의 입인두 흡인 투여의 생체내 연구.
연구 제1일 및 연구 제2일에, 입인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 파이펫을 사용하여 200 마이크로리터를 수컷 스프라그 돌리 래트에 투약하였고, 이는 표 30에 상술된 하기 투약 군을 포함하였다:
<표 30>
실시예 19에서의 래트의 투약 군
(예를 들어, 이러한 실시예에서 사용된 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다).
군 2-7에서 Tri-SM6.1로 지칭되는 세갈래 소형 분자 αvβ6 상피 세포 표적화 리간드는 도 6에 표현된 구조를 갖는다.
각각의 군에서 네 (4) 마리의 래트에 투약하였다 (n=7). 연구 제9일에 래트를 희생시키고, 수집 및 균질화 후에 양쪽 폐로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
<표 31>
실시예 19에서의 희생 (제9일) 시의 평균 상대적 rENaC mRNA 발현
상기 표 31에서, 알파-ENaC RNAi 작용제 AD05625 및 AD05453은 위치 972 (서열식별번호: 1 참조)에서 시작하는 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥을 각각 포함하였고, AD05829는 위치 944에서 시작하는 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥을 포함하였고, AD05831은 위치 973에서 시작하는 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥을 포함하였고, AD01289는 위치 1289에서 시작하는 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 디자인된 안티센스 가닥을 포함하였다. 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제가 유전자 발현의 억제를 나타냈고, RNAi 작용제 AD05453이 알파-ENaC의 비교적 강력한 억제를 나타냈다.
실시예 20. 마우스에서의 알파-ENaC RNAi 작용제의 생체내 국소 안구 투여.
안구 표면 상피에서 알파 ENaC mRNA의 발현을 억제하는 알파-ENaC RNAi 작용제의 능력을 평가하기 위해, CB57Bl/6 마우스 (n=3/군)의 양쪽 눈에 염수 비히클 또는 400 마이크로그램의 AD04858 (2 마이크로리터 부피)의 국소 안구 점적을 5일 동안 하루에 2회 제공하였다. (예를 들어, AD04858의 화학적으로 변형된 듀플렉스에 대한 화학 구조 정보에 대해 표 3 내지 6을 참조한다). 연구 제5일에, 마우스를 희생시키고, 결막 상피의 샘플을 수집하고, 조직 균질화물로부터 전체 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다.
5일 동안 AD04858을 매일 2회 국소 투약한 후에, 처리된 마우스로부터의 결막 샘플이 비히클로 처리된 대조군으로부터의 샘플보다 유의하게 더 적은 (약 24%) 알파 ENaC mRNA를 나타냈다.
기타 실시양태
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 기술되었지만, 상기 설명은 첨부된 청구범위의 범주에 의해 규정되는 본 발명의 범주를 예시하지만 제한하지 않는 것으로 의도된다는 것을 이해하여야 한다. 다른 측면, 장점 및 변형이 하기 청구범위의 범주 내에 속한다.
SEQUENCE LISTING
<110> ARROWHEAD PHARMACEUTICALS, INC.
<120> RNAi Agents for Inhibiting Expression of Alpha-ENaC and Methods of Use
<130> 30656-WO1
<150> 62/529,132
<151> 2017-07-06
<150> 62/631,683
<151> 2018-02-17
<150> 62/679,549
<151> 2018-06-01
<160> 296
<210> 1
<211> 3345
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Sodium channel epithelial 1 alpha subunit (SCNN1A), transcript
variant 1, GenBank NM_001038.5
<400> 1
cttgcctgtc tgcgtctaaa gcccctgccc agagtccgcc ttctcaggtc cagtactccc 60
agttcacctg ccctcgggag ccctccttcc ttcggaaaac tcccggctct gactcctcct 120
cagcccctcc ccccgccctg ctcaccttta attgagatgc taatgagatt cctgtcgctt 180
ccatccctgg ccggccagcg ggcgggctcc ccagccaggc cgctgcacct gtcaggggaa 240
caagctggag gagcaggacc ctagacctct gcagcccata ccaggtctca tggaggggaa 300
caagctggag gagcaggact ctagccctcc acagtccact ccagggctca tgaaggggaa 360
caagcgtgag gagcaggggc tgggccccga acctgcggcg ccccagcagc ccacggcgga 420
ggaggaggcc ctgatcgagt tccaccgctc ctaccgagag ctcttcgagt tcttctgcaa 480
caacaccacc atccacggcg ccatccgcct ggtgtgctcc cagcacaacc gcatgaagac 540
ggccttctgg gcagtgctgt ggctctgcac ctttggcatg atgtactggc aattcggcct 600
gcttttcgga gagtacttca gctaccccgt cagcctcaac atcaacctca actcggacaa 660
gctcgtcttc cccgcagtga ccatctgcac cctcaatccc tacaggtacc cggaaattaa 720
agaggagctg gaggagctgg accgcatcac agagcagacg ctctttgacc tgtacaaata 780
cagctccttc accactctcg tggccggctc ccgcagccgt cgcgacctgc gggggactct 840
gccgcacccc ttgcagcgcc tgagggtccc gcccccgcct cacggggccc gtcgagcccg 900
tagcgtggcc tccagcttgc gggacaacaa cccccaggtg gactggaagg actggaagat 960
cggcttccag ctgtgcaacc agaacaaatc ggactgcttc taccagacat actcatcagg 1020
ggtggatgcg gtgagggagt ggtaccgctt ccactacatc aacatcctgt cgaggctgcc 1080
agagactctg ccatccctgg aggaggacac gctgggcaac ttcatcttcg cctgccgctt 1140
caaccaggtc tcctgcaacc aggcgaatta ctctcacttc caccacccga tgtatggaaa 1200
ctgctatact ttcaatgaca agaacaactc caacctctgg atgtcttcca tgcctggaat 1260
caacaacggt ctgtccctga tgctgcgcgc agagcagaat gacttcattc ccctgctgtc 1320
cacagtgact ggggcccggg taatggtgca cgggcaggat gaacctgcct ttatggatga 1380
tggtggcttt aacttgcggc ctggcgtgga gacctccatc agcatgagga aggaaaccct 1440
ggacagactt gggggcgatt atggcgactg caccaagaat ggcagtgatg ttcctgttga 1500
gaacctttac ccttcaaagt acacacagca ggtgtgtatt cactcctgct tccaggagag 1560
catgatcaag gagtgtggct gtgcctacat cttctatccg cggccccaga acgtggagta 1620
ctgtgactac agaaagcaca gttcctgggg gtactgctac tataagctcc aggttgactt 1680
ctcctcagac cacctgggct gtttcaccaa gtgccggaag ccatgcagcg tgaccagcta 1740
ccagctctct gctggttact cacgatggcc ctcggtgaca tcccaggaat gggtcttcca 1800
gatgctatcg cgacagaaca attacaccgt caacaacaag agaaatggag tggccaaagt 1860
caacatcttc ttcaaggagc tgaactacaa aaccaattct gagtctccct ctgtcacgat 1920
ggtcaccctc ctgtccaacc tgggcagcca gtggagcctg tggttcggct cctcggtgtt 1980
gtctgtggtg gagatggctg agctcgtctt tgacctgctg gtcatcatgt tcctcatgct 2040
gctccgaagg ttccgaagcc gatactggtc tccaggccga gggggcaggg gtgctcagga 2100
ggtagcctcc accctggcat cctcccctcc ttcccacttc tgcccccacc ccatgtctct 2160
gtccttgtcc cagccaggcc ctgctccctc tccagccttg acagcccctc cccctgccta 2220
tgccaccctg ggcccccgcc catctccagg gggctctgca ggggccagtt cctccacctg 2280
tcctctgggg gggccctgag agggaaggag aggtttctca caccaaggca gatgctcctc 2340
tggtgggagg gtgctggccc tggcaagatt gaaggatgtg cagggcttcc tctcagagcc 2400
gcccaaactg ccgttgatgt gtggagggga agcaagatgg gtaagggctc aggaagttgc 2460
tccaagaaca gtagctgatg aagctgccca gaagtgcctt ggctccagcc ctgtacccct 2520
tggtactgcc tctgaacact ctggtttccc cacccaactg cggctaagtc tctttttccc 2580
ttggatcagc caagcgaaac ttggagcttt gacaaggaac tttcctaaga aaccgctgat 2640
aaccaggaca aaacacaacc aagggtacac gcaggcatgc acgggtttcc tgcccagcga 2700
cggcttaagc cagcccccga ctggcctggc cacactgctc tccagtagca cagatgtctg 2760
ctcctcctct tgaacttggg tgggaaaccc cacccaaaag ccccctttgt tacttaggca 2820
attccccttc cctgactccc gagggctagg gctagagcag acccgggtaa gtaaaggcag 2880
acccagggct cctctagcct catacccgtg ccctcacaga gccatgcccc ggcacctctg 2940
ccctgtgtct ttcatacctc tacatgtctg cttgagatat ttcctcagcc tgaaagtttc 3000
cccaaccatc tgccagagaa ctcctatgca tcccttagaa ccctgctcag acaccattac 3060
ttttgtgaac gcttctgcca catcttgtct tccccaaaat tgatcactcc gccttctcct 3120
gggctcccgt agcacactat aacatctgct ggagtgttgc tgttgcacca tactttcttg 3180
tacatttgtg tctcccttcc caactagact gtaagtgcct tgcggtcagg gactgaatct 3240
tgcccgttta tgtatgctcc atgtctagcc catcatcctg cttggagcaa gtaggcagga 3300
gctcaataaa tgtttgttgc atgaaggaaa aaaaaaaaaa aaaaa 3345
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 2
uauuuguucu gguugcacag g 21
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 3
uauuuguucu gguugcacag g 21
<210> 4
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 4
ccugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 5
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 5
ccugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 6
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi Agent antisense strand modified sequence
<400> 6
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 7
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 7
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 8
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 8
gcugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 9
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 9
gcugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 10
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi Agent antisense strand modified sequence
<400> 10
uauuuguucu gguugcacag g 21
<210> 11
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 11
ugugcaacca gaacaaauc 19
<210> 12
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 12
gugcaaccag aacaaaucg 19
<210> 13
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 13
gcagagcaga augacuuca 19
<210> 14
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 14
agagcagaau gacuucauu 19
<210> 15
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 15
cuaccagaca uacucauca 19
<210> 16
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 16
ucuaccagac auacucauc 19
<210> 17
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 17
cuuugaccug uacaaauac 19
<210> 18
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 18
uggaaggacu ggaagaucg 19
<210> 19
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 19
ggaaggacug gaagaucgg 19
<210> 20
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Alpha-ENaC gene transcript (mRNA) target sequence
<400> 20
cugugccuac aucuucuau 19
<210> 21
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 21
uauuuguucu gguugcaca 19
<210> 22
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 22
aauuuguucu gguugcaca 19
<210> 23
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 23
gauuuguucu gguugcaca 19
<210> 24
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 24
nauuuguucu gguugcaca 19
<210> 25
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 25
nauuuguucu gguugcacn 19
<210> 26
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 26
aaugaaguca uucugcucu 19
<210> 27
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 27
uaugaaguca uucugcucu 19
<210> 28
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 28
naugaaguca uucugcucu 19
<210> 29
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 29
naugaaguca uucugcucn 19
<210> 30
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 30
ugaugaguau gucugguag 19
<210> 31
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 31
ngaugaguau gucugguag 19
<210> 32
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 32
ngaugaguau gucugguan 19
<210> 33
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 33
gaugaguaug ucugguaga 19
<210> 34
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 34
uaugaguaug ucugguaga 19
<210> 35
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 35
naugaguaug ucugguaga 19
<210> 36
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 36
naugaguaug ucugguagn 19
<210> 37
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 37
cgauuuguuc ugguugcac 19
<210> 38
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 38
ugauuuguuc ugguugcac 19
<210> 39
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 39
ngauuuguuc ugguugcac 19
<210> 40
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 40
ngauuuguuc ugguugcan 19
<210> 41
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 41
guauuuguac aggucaaag 19
<210> 42
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 42
uuauuuguac aggucaaag 19
<210> 43
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 43
nuauuuguac aggucaaag 19
<210> 44
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 44
nuauuuguac aggucaaan 19
<210> 45
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 45
cgaucuucca guccuucca 19
<210> 46
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 46
ugaucuucca guccuucca 19
<210> 47
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 47
ngaucuucca guccuucca 19
<210> 48
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 48
ngaucuucca guccuuccn 19
<210> 49
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 49
ccgaucuucc aguccuucc 19
<210> 50
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 50
ucgaucuucc aguccuucc 19
<210> 51
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 51
ncgaucuucc aguccuucc 19
<210> 52
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 52
ncgaucuucc aguccuucn 19
<210> 53
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 53
ugaagucauu cugcucugc 19
<210> 54
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 54
ngaagucauu cugcucugc 19
<210> 55
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 55
ngaagucauu cugcucugn 19
<210> 56
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 56
auagaagaug uaggcacag 19
<210> 57
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<400> 57
uuagaagaug uaggcacag 19
<210> 58
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1
<223> n = any nucleotide
<400> 58
nuagaagaug uaggcacag 19
<210> 59
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 59
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<210> 60
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 60
ugugcaacca gaacaaaua 19
<210> 61
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 61
ugugcaacca gaacaaauu 19
<210> 62
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 62
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
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<400> 63
ugugcaacca gaacaaaun 19
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 64
ngugcaacca gaacaaaun 19
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 65
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<210> 66
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 66
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
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<400> 67
agagcagaau gacuucaun 19
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 68
ngagcagaau gacuucaun 19
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 69
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<210> 70
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = any nucleotide
<400> 70
cuaccagaca uacucaucn 19
<210> 71
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
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<400> 71
nuaccagaca uacucaucn 19
<210> 72
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 72
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<210> 73
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 73
ucuaccagac auacucaua 19
<210> 74
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = any nucleotide
<400> 74
ucuaccagac auacucaun 19
<210> 75
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 75
ncuaccagac auacucaun 19
<210> 76
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 76
gugcaaccag aacaaaucg 19
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 77
gugcaaccag aacaaauca 19
<210> 78
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
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<400> 78
gugcaaccag aacaaaucn 19
<210> 79
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 79
nugcaaccag aacaaaucn 19
<210> 80
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 80
cuuugaccug uacaaauac 19
<210> 81
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 81
cuuugaccug uacaaauaa 19
<210> 82
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 82
cuuugaccug uacaaauan 19
<210> 83
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 83
nuuugaccug uacaaauan 19
<210> 84
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 84
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<210> 85
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 85
uggaaggacu ggaagauca 19
<210> 86
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
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<400> 86
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 87
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 88
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 89
ggaaggacug gaagaucga 19
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<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = any nucleotide
<400> 90
ggaaggacug gaagaucgn 19
<210> 91
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 91
ngaaggacug gaagaucgn 19
<210> 92
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 92
gcagagcaga augacuuca 19
<210> 93
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = any nucleotide
<400> 93
gcagagcaga augacuucn 19
<210> 94
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 94
ncagagcaga augacuucn 19
<210> 95
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 95
cugugccuac aucuucuau 19
<210> 96
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<400> 96
cugugccuac aucuucuaa 19
<210> 97
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = any nucleotide
<400> 97
cugugccuac aucuucuan 19
<210> 98
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand core 19-mer base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 1, 19
<223> n = any nucleotide
<400> 98
nugugccuac aucuucuan 19
<210> 99
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 99
uauuuguucu gguugcacag cug 23
<210> 100
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 100
uauuuguucu gguugcacag cug 23
<210> 101
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 101
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 102
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 102
uauuuguucu gguugcacau u 21
<210> 103
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 103
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 104
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 104
aauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 105
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 105
uaugaaguca uucugcucug c 21
<210> 106
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 106
ugaugaguau gucugguaga a 21
<210> 107
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 107
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<210> 108
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 108
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<210> 109
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 109
uuauuuguac aggucaaaga g 21
<210> 110
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 110
uaugaaguca uucugcucug c 21
<210> 111
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 111
ugaugaguau gucugguaga a 21
<210> 112
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 112
ugauuuguuc ugguugcaca g 21
<210> 113
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 113
uaugaguaug ucugguagaa g 21
<210> 114
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 114
uuauuuguac aggucaaaga g 21
<210> 115
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 115
uaugaaguca uucugcucuu u 21
<210> 116
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 116
ugaugaguau gucugguagu u 21
<210> 117
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 117
ugauuuguuc ugguugcacu u 21
<210> 118
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 118
uaugaguaug ucugguagau u 21
<210> 119
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 119
uuauuuguac aggucaaagu u 21
<210> 120
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 120
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 121
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 121
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 122
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 122
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 123
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 123
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 124
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 124
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 125
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 125
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 126
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 126
ugaucuucca guccuuccag u 21
<210> 127
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 127
ucgaucuucc aguccuucca g 21
<210> 128
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 128
ugaagucauu cugcucugcg c 21
<210> 129
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 129
auagaagaug uaggcacagc c 21
<210> 130
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 130
uaucgugaca gagggagacu c 21
<210> 131
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 131
uugaccaucg ugacagaggg a 21
<210> 132
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 132
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 133
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 133
uauuuguucu gguugcacag cu 22
<210> 134
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 134
uauuuguucu gguugcacag cuu 23
<210> 135
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 135
uauuuguucu gguugcacag g 21
<210> 136
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 136
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<210> 137
<211> 21
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 137
uauuuguucu gguugcacag g 21
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<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
<400> 138
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<212> RNA
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent antisense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 188
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<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<221> modified_base
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<400> 202
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 18
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<400> 203
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 204
ccugugcaac cagaacaanu a 21
<210> 205
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 17
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 205
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 206
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<220>
<221> modified_base
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acugugcaac cagaacanau a 21
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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<210> 220
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 220
cugugcaacc agaacaaauc a 21
<210> 221
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
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gcagagcaga augacuucuu u 21
<210> 222
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 222
gcagagcaga augacuucuu u 21
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<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 223
ccugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 224
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 224
uauuuguucu gguugcacag cug 23
<210> 225
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 225
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 226
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 226
uauuuguucu gguugcacau u 21
<210> 227
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 227
aauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 228
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 228
uaugaaguca uucugcucug c 21
<210> 229
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 229
ugaugaguau gucugguaga a 21
<210> 230
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 230
ugauuuguuc ugguugcaca g 21
<210> 231
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 231
uaugaguaug ucugguagaa g 21
<210> 232
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 232
uuauuuguac aggucaaaga g 21
<210> 233
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 233
uaugaaguca uucugcucuu u 21
<210> 234
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 234
ugaugaguau gucugguagu u 21
<210> 235
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 235
ugauuuguuc ugguugcacu u 21
<210> 236
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 236
uaugaguaug ucugguagau u 21
<210> 237
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 237
uuauuuguac aggucaaagu u 21
<210> 238
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 238
ugaucuucca guccuuccag u 21
<210> 239
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 239
ucgaucuucc aguccuucca g 21
<210> 240
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 240
ugaagucauu cugcucugcg c 21
<210> 241
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 241
auagaagaug uaggcacagc c 21
<210> 242
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 242
uaucgugaca gagggagacu c 21
<210> 243
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 243
uugaccaucg ugacagaggg a 21
<210> 244
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 244
uauuuguucu gguugcacag cu 22
<210> 245
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 245
uauuuguucu gguugcacag cuu 23
<210> 246
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 246
uauuuguucu gguugcacag g 21
<210> 247
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 247
uauuuguucu gguugcacag u 21
<210> 248
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 248
uauuuguucu gguugcacgg g 21
<210> 249
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 249
uauuuguucu gguugcacgg u 21
<210> 250
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 250
uauuuguucu gguugcaccg u 21
<210> 251
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 251
uauuuguucu gguugcacag a 21
<210> 252
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 13
<223> n = inosine (hypoxanthine)
<400> 252
nauuuguucu gguugcacag g 21
<210> 253
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 253
tauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 254
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 254
agaagucauu cugcucugcu u 21
<210> 255
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 255
gcugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 256
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 256
gcugugcaac cagaacaaau u 21
<210> 257
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 257
gcagagcaga augacuucau a 21
<210> 258
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 258
uucuaccaga cauacucauc a 21
<210> 259
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 259
cugugcaacc agaacaaauc a 21
<210> 260
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 260
cuucuaccag acauacucau a 21
<210> 261
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 261
cucuuugacc uguacaaaua a 21
<210> 262
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 262
agagcagaau gacuucauau u 21
<210> 263
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 263
cuaccagaca uacucaucau u 21
<210> 264
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 264
gugcaaccag aacaaaucau u 21
<210> 265
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 265
ucuaccagac auacucauau u 21
<210> 266
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 266
cuuugaccug uacaaauaau u 21
<210> 267
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 267
acuggaagga cuggaagauc a 21
<210> 268
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 268
cuggaaggac uggaagaucg a 21
<210> 269
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 269
gcgcagagca gaaugacuuc a 21
<210> 270
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 270
ggcugugccu acaucuucua u 21
<210> 271
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 271
gagucucccu cugucacgau a 21
<210> 272
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 272
ucccucuguc acgaugguca a 21
<210> 273
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 273
ccugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 274
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 13
<223> n = 2'-O-methylinosine-3'-phosphate
<400> 274
ccugugcaac canaacaaau a 21
<210> 275
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 18
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 275
ccugugcaac cagaacanau a 21
<210> 276
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 276
acugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 277
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 277
ccugugcaac uagaacaaau a 21
<210> 278
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 278
cccgugcaac cagaacaaau a 21
<210> 279
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 279
accgugcaac cagaacaaau a 21
<210> 280
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 280
acggugcaac cagaacaaau a 21
<210> 281
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 281
acugugcaac cagaacaanu a 21
<210> 282
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 18
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 282
acugugcaac cagaacanau a 21
<210> 283
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 17
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 283
acugugcaac cagaacnaau a 21
<210> 284
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 284
ucugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 285
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 18
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 285
ccugugcaac cagaacanaua 21
<210> 286
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 19
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 286
ccugugcaac cagaacaanu a 21
<210> 287
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<220>
<221> modified_base
<222> 17
<223> n = 2'-O-methyl-2-aminoadenosine-3'-phosphate
<400> 287
ccugugcaac cagaacnaau a 21
<210> 288
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 288
ccugugcaac cagaacaaau c 21
<210> 289
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand underlying base sequence
<400> 289
gcagagcaga augacuucuu u 21
<210> 290
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> tetrapeptide linker
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Citrulline
<400> 290
Phe Xaa Phe Pro
1
<210> 291
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> ND-9201 modified antisense strand sequence
<400> 291
gauuuguucu gguugcacat t 21
<210> 292
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> ND-9201 modified antisense strand sequence
<400> 292
ugugcaacca gaacaaauct t 21
<210> 293
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 293
cugugcaacc agaacaaauc a 21
<210> 294
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 294
gcagagcaga augacuucuu u 21
<210> 295
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent sense strand modified sequence
<400> 295
aaugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 296
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> RNAi agent antisense strand underlying base sequence
<400> 296
aaugugcaac cagaacaaau a 21
Claims (52)
- 표 2 또는 표 3에서 제공된 서열 중 어느 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 17개의 연속적인 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 가닥; 및
안티센스 가닥에 대해 적어도 부분적으로 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥
을 포함하는, 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제. - 제1항에 있어서, 안티센스 가닥이 표 2 또는 표 3에서 제공된 서열 중 어느 하나의 뉴클레오티드 2-18을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 센스 가닥이 표 2 또는 표 4에서 제공된 서열 중 어느 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 적어도 17개의 연속적인 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥이 안티센스 가닥에 대해 17개의 연속적인 뉴클레오티드에 걸쳐 적어도 85% 상보적인 영역을 갖는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 알파-ENaC RNAi 작용제의 적어도 1개의 뉴클레오티드가 변형 뉴클레오티드이거나 또는 변형 뉴클레오시드간 연결을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형 뉴클레오티드인 RNAi 작용제.
- 제4항 또는 제5항에 있어서, 변형 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 2'-데옥시 뉴클레오티드, 2',3'-세코 뉴클레오티드 모방체, 잠금 뉴클레오티드, 2'-F-아라비노 뉴클레오티드, 2'-메톡시에틸 뉴클레오티드, 무염기 뉴클레오티드, 리비톨, 역전 뉴클레오티드, 역전 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 역전 2'-데옥시 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형 뉴클레오티드, 2'-알킬-변형 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 비닐 포스포네이트 데옥시리보뉴클레오티드, 및 3'-O-메틸 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 RNAi 작용제.
- 제5항에 있어서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 2'-O-메틸 뉴클레오티드 또는 2'-플루오로 뉴클레오티드로 변형된 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 가닥이 표 3에서 제공된 변형 서열 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 표 4에서 제공된 변형 서열 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항에 있어서, 안티센스 가닥이 표 3에 제공된 변형 서열 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥이 표 4에 제공된 변형 서열 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 리간드에 연결된 RNAi 작용제.
- 제11항에 있어서, 표적화 리간드가 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제12항에 있어서, 인테그린 표적화 리간드가 αvβ6 인테그린 표적화 리간드인 RNAi 작용제.
- 제13항에 있어서, αvβ6 인테그린 표적화 리간드가 도 4-11의 구조 중 어느 하나에 의해 표현되는 구조를 갖는 것인 RNAi 작용제.
- 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 리간드가 센스 가닥에 접합된 것인 RNAi 작용제.
- 제15항에 있어서, 표적화 리간드가 센스 가닥의 5' 말단 단부에 접합된 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 뉴클레오티드 18개 내지 30개 길이이고, 안티센스 가닥이 뉴클레오티드 18개 내지 30개 길이인 RNAi 작용제.
- 제17항에 있어서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 뉴클레오티드 18개 내지 27개 길이인 RNAi 작용제.
- 제18항에 있어서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 뉴클레오티드 18개 내지 24개 길이인 RNAi 작용제.
- 제19항에 있어서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 뉴클레오티드 21개 길이인 RNAi 작용제.
- 제20항에 있어서, 2개의 평활 단부를 갖는 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 1개 또는 2개의 말단 캡을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 센스 가닥이 1개 또는 2개의 역전 무염기 잔기를 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항에 있어서, 표 5의 듀플렉스 중 어느 하나의 구조를 갖는 듀플렉스를 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥으로 구성되는 RNAi 작용제.
- 제1항에 있어서, RNAi 작용제가 센스 가닥 및 안티센스 가닥으로 구성되고, 여기서 안티센스 가닥은 하기 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고:
;
여기서, a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고, cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘을 나타내고; 센스 가닥 상의 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드인 RNAi 작용제. - 제25항에 있어서, 센스 가닥이 3' 말단 단부에 무염기 잔기를 추가로 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항에 있어서, RNAi 작용제가 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 여기서 안티센스 가닥 및 센스 가닥은 서열식별번호: 2 및 4; 서열식별번호: 3 및 5; 서열식별번호: 6 및 8; 서열식별번호: 7 및 9; 및 서열식별번호: 10 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열 쌍을 포함하는 것인 RNAi 작용제.
- 제1항에 있어서, AD05453, AD05625, AD05347, AD05831, AD05833, AD04835, 및 AD05924로 이루어진 군으로부터 선택된 듀플렉스 구조를 갖는 RNAi 작용제.
- 제1항에 있어서, RNAi 작용제가 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 여기서 안티센스 가닥 및 센스 가닥은 하기의 뉴클레오티드 서열 (5' → 3') 쌍 중 하나와 0 또는 1개의 뉴클레오티드만큼 상이한 뉴클레오티드 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이를 포함하는 것인 RNAi 작용제:
.
- 제29항에 있어서, 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형 뉴클레오티드인 RNAi 작용제.
- 제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥이 표적화 리간드에 연결된 것인 RNAi 작용제.
- 제31항에 있어서, 표적화 리간드가 상피 세포 상에서 발현되는 세포 수용체에 대한 친화력을 갖는 것인 RNAi 작용제.
- 제31항 또는 제32항에 있어서, 표적화 리간드가 αvβ6 인테그린 표적화 리간드인 RNAi 작용제.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 RNAi 작용제를 포함하며, 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물.
- 제34항에 있어서, 알파-ENaC의 발현을 억제하기 위한 제2 RNAi 작용제를 추가로 포함하는 조성물.
- 제34항 또는 제35항에 있어서, 하나 이상의 추가적인 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
- 제36항에 있어서, 흡입에 의한 투여용으로 제형화된 조성물.
- 제37항에 있어서, 계량 흡입기, 제트 네뷸라이저, 진동 메쉬 네뷸라이저, 또는 연무 흡입기에 의해 전달되는 조성물.
- 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 RNAi 작용제 또는 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항의 조성물을 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 세포에서 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제하는 방법.
- 제39항에 있어서, 세포가 대상체 내에 있는 것인 방법.
- 제40항에 있어서, 대상체가 인간 대상체인 방법.
- 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 알파-ENaC 유전자 발현이 적어도 약 30%만큼 억제되는 것인 방법.
- 강화 또는 상승된 ENaC 활성 수준과 연관된 하나 이상의 증상 또는 질환의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 강화 또는 상승된 ENaC 활성 수준과 연관된 하나 이상의 증상 또는 질환을 치료하는 방법.
- 제43항에 있어서, 질환이 호흡기 질환인 방법.
- 제44항에 있어서, 호흡기 질환이 낭성 섬유증, 만성 기관지염, 비-낭성 섬유증 기관지확장증, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 천식, 기도 감염, 원발성 섬모 운동이상증, 또는 폐 암종 낭성 섬유증인 방법.
- 제43항에 있어서, 질환이 눈 질환, 예컨대 건성안 증후군인 방법.
- 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, RNAi 작용제가 약 0.001 mg/체중 kg 내지 약 0.500 mg/체중 kg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
- 제39항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, RNAi 작용제가 2회 이상의 용량으로 투여되는 것인 방법.
- 적어도 부분적으로 ENaC 활성 및/또는 알파-ENaC 유전자 발현에 의해 매개되는 질환, 장애 또는 증상의 치료를 위한 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 RNAi 작용제의 용도.
- 적어도 부분적으로 ENaC 활성 및/또는 알파-ENaC 유전자 발현에 의해 매개되는 질환, 장애 또는 증상의 치료를 위한 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
- 적어도 부분적으로 ENaC 활성 및/또는 알파-ENaC 유전자 발현에 의해 매개되는 질환, 장애 또는 증상의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
- 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 질환이 낭성 섬유증인 용도.
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| US5395619A (en) | 1993-03-03 | 1995-03-07 | Liposome Technology, Inc. | Lipid-polymer conjugates and liposomes |
| US5540935A (en) | 1993-12-06 | 1996-07-30 | Nof Corporation | Reactive vesicle and functional substance-fixed vesicle |
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| US5820873A (en) | 1994-09-30 | 1998-10-13 | The University Of British Columbia | Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof |
| US5756122A (en) | 1995-06-07 | 1998-05-26 | Georgetown University | Liposomally encapsulated nucleic acids having high entrapment efficiencies, method of manufacturer and use thereof for transfection of targeted cells |
| DE69629702T2 (de) | 1995-08-01 | 2004-06-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc., Carlsbad | Liposomale oligonukleotidzusammensetzungen |
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| EP0975798A1 (en) | 1997-03-11 | 2000-02-02 | Yale University | Method to diagnose and treat pathological conditions resulting from deficient ion transport such as pseudohypoaldosteronism type-1 |
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| JP4709545B2 (ja) | 2002-07-26 | 2011-06-22 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 修飾された低分子干渉ｒｎａ分子および使用方法 |
| JP2004121218A (ja) | 2002-08-06 | 2004-04-22 | Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk | 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法 |
| EP2314691A3 (en) | 2002-11-14 | 2012-01-18 | Dharmacon, Inc. | Fuctional and hyperfunctional siRNA |
| EP1573045A4 (en) | 2002-11-27 | 2007-02-21 | Artesian Therapeutics Inc | DETECTION OF GENES RELATED TO HEART FAILURE AND THERAPEUTIC ASSAY |
| DE10305213A1 (de) | 2003-02-07 | 2004-08-26 | Florian Prof. Dr.med. Lang | Verwendung eines neuen Polymorphismus im hsgk1-Gen zur Diagnose der Hypertonie und Verwendung der sgk-Genfamilie zur Diagnose und Therapie des Long-Q/T-Syndroms |
| AU2004227915A1 (en) | 2003-03-31 | 2004-10-21 | John F. Engelhardt | Pharmico-gene theraphy of epithelial sodium channel associated disoders |
| US7723509B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-05-25 | Alnylam Pharmaceuticals | IRNA agents with biocleavable tethers |
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| US20050256071A1 (en) | 2003-07-15 | 2005-11-17 | California Institute Of Technology | Inhibitor nucleic acids |
| EP1752536A4 (en) | 2004-05-11 | 2008-04-16 | Alphagen Co Ltd | POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME |
| US7923206B2 (en) | 2004-11-22 | 2011-04-12 | Dharmacon, Inc. | Method of determining a cellular response to a biological agent |
| AU2005316384B2 (en) | 2004-12-14 | 2012-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi modulation of MLL-AF4 and uses thereof |
| US8101741B2 (en) | 2005-11-02 | 2012-01-24 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
| SG166778A1 (en) | 2006-10-11 | 2010-12-29 | Max Planck Gesellschaft | Influenza targets |
| AR066984A1 (es) * | 2007-06-15 | 2009-09-23 | Novartis Ag | Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia) |
| US20110288154A1 (en) * | 2008-11-26 | 2011-11-24 | Merck & Co., Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition of Epithelial Sodium Channel (ENaC) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
| US20130023578A1 (en) * | 2009-12-31 | 2013-01-24 | Samyang Biopharmaceuticals Corporation | siRNA for inhibition of c-Met expression and anticancer composition containing the same |
| MX2012009178A (es) | 2010-02-24 | 2012-11-30 | Arrowhead Res Corp | Composiciones para liberacion dirigida de arnsi. |
| US8501930B2 (en) | 2010-12-17 | 2013-08-06 | Arrowhead Madison Inc. | Peptide-based in vivo siRNA delivery system |
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| CN105392886B (zh) * | 2013-07-02 | 2019-10-22 | 印度医学研究理事会 | 用于抑制切昆贡亚病毒的RNAi剂 |
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