KR20190140969A - Btla 효능제 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

루푸스를 치료하는 것을 포함하여 자가면역 질환과 연관된 병태를 치료하기 위한 제제로서 유용한, BTLA에 결합하는 항체 및 이를 이용하는 방법이 제공된다.

Description

BTLA 효능제 항체 및 이의 용도
본 발명은 의약 분야에 속한다. 보다 특히, 본 발명은 B 및 T 림프구 감쇠자 (BTLA)에 대해 지시되는 항체 및 이의 제약 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 자가면역 질환, 예컨대 루푸스의 치료에 유용할 것으로 예상된다.
루푸스는 피부, 구강, 근육 & 관절, 심장, 말초 혈액, 폐, 신장, 생식 및 CNS 징후를 포함하는 이질적인 특색을 갖는 자가면역 질환이다. 루푸스 환자는 심각하고 생명을 위협하는 심혈관, 신장 및 신경정신 질환에 대한 위험이 있다. 의료 표준은 많은 불리한 및/또는 위험한 부작용을 갖는 다수의 스테로이드를 포함한다. 질환을 관리하고 스테로이드 사용의 감소 또는 제거를 허용하는 요법이 필요하다.
B 및 T 림프구 감쇠자 (BTLA; CD272)는 Ig 슈퍼패밀리 구성원이고 면역 세포 활성화를 음성적으로 조절하는 체크포인트 수용체 패밀리의 일부이다. BTLA는 주로 B 세포, T 세포 및 수지상 세포 상에서 발현된다. BTLA에 대한 천연 리간드는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원인 헤르페스 바이러스 도입 매개자 (HVEM; TNFRSF14)이다.
인간 HVEM-Fc는 유동 세포측정에 의해 검출된 바와 같이 112 nM의 KD로 293T 세포에서 발현되는 인간 BTLA에 결합하는 것으로 보고되었다 (Cheung et al., PNAS, Sept. 13, 2005, 102:37;13218-13223). BTLA에 대한 HVEM의 결합은 BTLA의 세포질 도메인 상의 2개의 보존된 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 도메인의 티로신-인산화를 초래한다. 이 인산화는, 2개의 Src 상동성 2 도메인을 통해, 탈인산화시키고 양성 세포 수용체 신호전달 (예컨대, T 세포 수용체 또는 B 세포 수용체 신호 전달 케스케이드)을 하향-조절함으로써 BTLA에 억제 활성을 부여하는 단백질 티로신 포스파타제의 모집을 이끌어 면역 세포 활성화의 억제를 초래한다. 루푸스-유사 질환을 자발적으로 발병시키기 쉬운 마우스 모델 (MRL-lpr 마우스)에서, BTLA-결핍 마우스는 BTLA-발현 마우스와 비교하여 침샘, 폐, 췌장, 신장 및 관절에서 더 심각한 림프구 침윤을 갖는다. 따라서, BTLA 효능제 항체는 자가면역 질환, 예컨대 루푸스를 갖는 환자에 대해 이점을 제공할 수 있다.
BTLA에 대한 효능제 항체는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예컨대, 미국 특허 번호 8,563,694 ('694 특허)는 BTLA에 대한 HVEM 결합을 차단하거나 (Mab21H6 및 Mab19A7) 차단하지 않는 (Mab8D5 및 Mab8A3) BTLA 효능제 항체를 개시한다. '694 특허는 BTLA-HVEM 결합을 허용하면서 림프구 반응에서 BTLA의 억제 역할을 이용하는 치료제 개발에 대한 지속적인 필요성을 기재한다. 그러나, 자가면역 질환의 치료를 위해 BTLA에 대한 HVEM의 결합을 모방하는 BTLA 효능제 항체가 부족하다. 항체가 HVEM의 결합 부위와 상당히 중첩되는 에피토프를 갖고 항체와 HVEM 사이에 구조적 유사성이 있는 경우, 항체는 BTLA에 대한 HVEM 결합을 "모방한다". 또한, 인간 BTLA에 결합하고 자가면역 질환의 생체내 전임상 모델, 예컨대 뮤린 및 시노몰구스 원숭이 모델에서의 연구에 유용한 BTLA 효능제 항체가 부족하다. 따라서, 대안적인 BTLA 효능제 항체가 여전히 필요하다.
본 발명의 항체는 대안적 BTLA 효능제 항체를 제공하고자 한다. 이러한 BTLA 효능제 항체는 자가면역 질환, 예컨대 루푸스의 치료에 유용할 수 있다. 이러한 BTLA 효능제 항체는 다수 종으로부터의 BTLA, 예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이 및/또는 뮤린 BTLA에 결합할 수 있다. 또한, 이러한 BTLA 효능제 항체는 Mab8D5와 동일한 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체와 비교하여 증가된 시험관내 활성을 입증한다. 본 발명의 항체는 이들 바람직한 특성 중 적어도 하나를 갖는다.
하나의 이러한 BTLA 효능제 항체는 인간, 시노몰구스 원숭이 및 뮤린 BTLA에 결합할 수 있다. 놀랍게도, 본 항체는 BTLA에 대한 HVEM 결합을 모방하기 때문에 이러한 바람직한 교차-반응성을 갖는다. 본 항체는 또한 BTLA에 결합하는 HVEM과 비교하여 BTLA에 대해 더 높은 결합 친화도를 갖는다. 이는 일시적 수준의 HVEM을 갖는 질환 상태를 갖는 환자에 대해 이점을 제공할 수 있으며, 여기서 환자가 HVEM의 감소를 갖는 시간 동안 BTLA-모방 효능제 항체를 탑재하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명은 BTLA-매개된 신호전달을 활성화 및/또는 증진시키는 BTLA에 결합하는 항체 (BTLA 효능제 항체)를 제공한다. 본 발명은 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체를 제공하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호 (SEQ ID NO): 22이고, LCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 25이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 28이고, HCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 13이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 16이고, HCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 19이다. 일 실시양태에서, 항체는 LCVR 및 HCVR을 포함하고, 여기서 LCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 4이고, HCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 3이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하고, 여기서 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 2이고, HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 2개의 LC 및 2개의 HC를 포함하고, 여기서 각각의 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 2이고, 각각의 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1이다.
본 발명은 또한 LCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 23이고, LCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 26이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 29이고, HCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 14이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 17이고, HCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 20인 BTLA 효능제 항체를 제공한다. 일 실시양태에서, LCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 8이고, HCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 7이다. 또 다른 실시양태에서, LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6이고, HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 2개의 LC 및 2개의 HC를 포함하고, 여기서 각각의 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6이고, 각각의 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5이다.
본 발명은 또한 LCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 24이고, LCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 27이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 30이고, HCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 15이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 18이고, HCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 21인 BTLA 효능제 항체를 제공한다. 일 실시양태에서, LCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 12이고, HCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 11이다. 또 다른 실시양태에서, LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10이고, HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 2개의 LC 및 2개의 HC를 포함하고, 여기서 각각의 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10이고, 각각의 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9이다.
본 발명은 또한 인간 BTLA의 Fc-태그부착된 세포외 도메인 (ECD) 도메인으로 토끼를 면역화시키는 단계 및 인간 및 마우스 BTLA-Fc 태그부착된 단백질로 부스팅하는 단계를 포함하는 단계에 의해 생성되는, BTLA에 결합하는 항체를 제공한다. 인간 BTLA ECD의 아미노산 서열은 서열식별번호: 31의 아미노산 31-150이다.
본 발명은 BTLA에 대한 HVEM 결합을 모방하는 BTLA 효능제 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 인간, 시노몰구스 원숭이 및 뮤린 BTLA에 결합할 수 있는 BTLA 효능제 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상의 치료에 사용될 수 있으며, 이러한 치료는 이를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 특정 실시양태에서, 류마티스 질환은 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 피부과 질환은 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 신경 질환은 다발성 경화증이다.
본 발명은 또한 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상을 갖는 이의 치료가 필요한 환자에게 유효량의 본 발명의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 류마티스 질환은 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 피부과 질환은 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 신경 질환은 다발성 경화증이다.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 항체 또는 이의 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체 또는 이의 제약 조성물을 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 류마티스 질환은 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 피부과 질환은 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 신경 질환은 다발성 경화증이다.
본 발명은 또한 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항체 또는 이의 제약 조성물의 용도를 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 류마티스 질환은 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 피부과 질환은 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나이다. 다른 특정 실시양태에서, 신경 질환은 다발성 경화증이다.
본 발명은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 35이고, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 36이다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 37이고, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 38이다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 39이고, 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 40이다.
또한, 본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다. 본 발명은 또한 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다. 본 발명은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다. 일 실시양태에서, 포유동물 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 또는 햄스터 배아 신장 (HEK) 세포주이다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및/또는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 발현할 수 있다. 바람직하게는, 포유동물 세포는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 일 실시양태에서, 포유동물 세포주는 CHO 또는 HEK 세포주이다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및/또는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 발현할 수 있다. 바람직하게는, 포유동물 세포는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 일 실시양태에서, 포유동물 세포주는 CHO 또는 HEK 세포주이다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및/또는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 발현할 수 있다. 바람직하게는, 포유동물 세포는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 일 실시양태에서, 포유동물 세포주는 CHO 또는 HEK 세포주이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 LC 및/또는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HC를 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하여, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체를 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 바로 위에서 기재된 바와 같은 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LC 및/또는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 HC를 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하여, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체를 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 바로 위에서 기재된 바와 같은 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명은 또한 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC 및/또는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC를 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하여, 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체를 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 바로 위에서 기재된 바와 같은 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명은 a) 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하고, 여기서 2개의 HC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 1이고 2개의 LC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 2인 항체를 제조하는 방법을 포함한다. 본 발명은 바로 위에서 기재된 바와 같은 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명은 또한 a) 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하고, 여기서 2개의 HC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 5이고 2개의 LC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 6인 항체를 제조하는 방법을 포함한다. 본 발명은 바로 위에서 기재된 바와 같은 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명은 또한 a) 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하고, 여기서 2개의 HC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 9이고 2개의 LC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 10인 항체를 제조하는 방법을 포함한다. 본 발명은 바로 위에서 기재된 바와 같은 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명은 서열식별번호: 31의 하기 잔기를 갖는 구조적 및 기능적 에피토프에서 인간 BTLA와 접촉하는 항체를 제공한다: 위치 42에서 Arg 및 위치 127에서 His. 본 발명은 또한 서열식별번호: 31에 의해 제공되는 아미노산 서열의 위치 42에서 Arg를 포함하는 구조적 및 기능적 에피토프에서 인간 BTLA와 접촉하는 항체를 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 31의 하기 잔기를 갖는 새로운 구조적 에피토프에서 인간 BTLA와 접촉하는 항체를 제공한다: 위치 35에서 Asp, 위치 37에서 Gln, 위치 42에서 Arg, 위치 74에서 Leu, 위치 76에서 Gly, 위치 79에서 Cys, 위치 114에서 Arg, 위치 119에서 Phe, 위치 120에서 Gln, 위치 122에서 Asn, 위치 128에서 Ser. 바람직한 실시양태에서, 항체 22B3의 HCDR3은 HVEM과 구조적으로 유사하기 때문에, 항체 22B3은 BTLA에 대해 HVEM 결합을 모방한다고 한다. 바람직하게는, PyMOLTM과 같은 프로그램에서 BTLA:항체 결정 구조가 BTLA:HVEM 결정 구조와 함께 정렬되는 경우, 항체 CDR 루프는 아미노산 잔기 69 내지 72 (서열식별번호: 41의 아미노산 ELTG)를 포함하는 HVEM 루프와 유사한 입체구조를 채택한다.
본 발명은 서열식별번호: 31의 위치 52에서 Asp를 갖는 기능적 에피토프에서 인간 BTLA와 접촉하는 항체를 제공한다. 항체는 서열식별번호: 31의 하기 잔기를 갖는 새로운 구조적 에피토프와 접촉한다: 위치 46에서 His, 위치 55에서 Glu, 위치 103에서 Glu, 위치 104에서 Pro, 위치 106에서 Leu, 위치 107에서 Pro, 위치 134에서 Thr, 위치 139에서 Ala.
본 발명은 서열식별번호: 31의 위치 68에서 His 및 위치 81에서 Lys를 갖는 기능적 에피토프에서 인간 BTLA와 접촉하는 항체를 제공한다. 일 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 31의 하기 잔기를 갖는 새로운 구조적 에피토프와 접촉한다: 위치 62에서 Tyr, 위치 64에서 Ala, 위치 68에서 His, 위치 85에서 Arg, 위치 91에서 Glu, 위치 98에서 Phe, 위치 118에서 Asn.
본 발명은 서열식별번호: 31의 하기 잔기를 갖는 새로운 구조적 에피토프에서 인간 BTLA와 접촉하는 항체를 제공한다: 위치 35에서 Asp, 위치 37에서 Gln, 위치 42에서 Arg, 위치 74에서 Leu, 위치 76에서 Gly, 위치 79에서 Cys, 위치 114에서 Arg, 위치 119에서 Phe, 위치 120에서 Gln, 위치 122에서 Asn, 및 위치 124에서 Ile, 위치 128에서 Ser.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항체"는 디술파이드 결합에 의해 서로연결된 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하는 면역글로불린 분자이다. 각각의 LC 및 HC의 아미노 말단 부분은 주로 이에 함유된 CDR을 통해 항원 인식을 담당하는 약 100-120개 아미노산의 가변 영역을 포함한다. CDR은 프레임워크 영역 ("FR")이라 불리는 보다 보존된 영역을 두고 배치된다. 각각의 LCVR 및 HCVR은 하기 순서로 아미노-말단부터 카복시-말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. LC의 3개의 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 지칭되고, HC의 3개의 CDR은 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"으로 지칭된다. CDR은 항원과 특이적 상호작용을 형성하는 대부분의 잔기를 함유한다. 즉, CDR은 항원 잔기와 (4.5 Å 이내에서) 접촉하는 대부분의 잔기를 함유한다. 따라서, 특정 항원에 결합하는 항체의 기능적 능력은 6개의 CDR 내의 아미노산 잔기에 의해 크게 영향을 받는다. 본 발명의 항체의 LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 도메인에 대한 아미노산의 할당은 널리-공지된 카바트 넘버링 규칙 (Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)) 및 초티아 (Chothia C, Lesk AM. Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J. Mol. Biol. 1987;196:901-17. Chothia C, Lesk AM, Tramontano A, Levitt M, Smith-Gill SJ, Air G, Sheriff S, Padlan EA, Davies D, Tulip WR, et al. Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature. 1989;342:877-83)에 기반한다. HCDR1의 출발 아미노산 잔기는 초티아에 의해 정의되며, HCDR1에 대한 종결 아미노산 잔기는 카바트에 의해 정의된다. HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3에 대한 출발 및 종결 아미노산 잔기는 카바트에 의해 정의된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "에피트프"는 구조적 에피토프 (항체의 가변 영역과 접촉하는 항원의 부위) 및/또는 기능적 에피토프 (항체의 가변 영역과 접촉할 수 있거나 접촉할 수 없고 항체 결합에 필수적인 항원의 부위)를 지칭할 수 있다. 구조적 에피토프는 X-선 결정학에 의해 결정되며, 여기서 결합된 Fab 상의 또 다른의 잔기에 대해 4.5Å 내의 인간 BTLA 상의 임의의 잔기는 접촉 부위인 것으로 여겨진다.
본 발명의 항체는 공지된 방법을 이용하여 제조 및 정제될 수 있다. 예컨대, HC (예컨대, 서열식별번호: 1에 의해 제공되는 아미노산 서열) 및 LC (예컨대, 서열식별번호: 2에 의해 제공되는 아미노산 서열)를 코딩하는 cDNA 서열은 GS (글루타민 신테타제) 발현 벡터로 클로닝되고 조작될 수 있다. 이어서, 조작된 면역글로불린 발현 벡터는 CHO 세포로 안정하게 형질감염될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인식할 것인 바와 같이, 항체의 포유동물 발현은 전형적으로 Fc 영역의 고도로 보존된 N-당화 부위에서 당화를 초래할 것이다. BTLA에 특이적으로 결합하는 항체의 발현에 대한 안정한 클론이 확인될 수 있다. 양성 클론은 생물반응기에서의 항체 생성을 위해 혈청을 함유하지 않는 배양 배지에서 증대될 수 있다. 항체가 분비된 배지는 통상의 기술로 정제될 수 있다. 예컨대, 배지는 편리하게는 적합한 완충액, 예컨대 인산염 완충된 식염수로 평형화된 단백질 A 또는 G 세파로스 FF 컬럼에 적용될 수 있다. 컬럼은 비특이적 결합 성분을 제거하기 위해 세척된다. 결합된 항체는, 예컨대 pH 구배에 의해 용출되고, 항체 분획은, 예컨대 SDS-PAGE에 의해 검출된 후, 풀링된다. 항체는 일반적인 기술을 이용하여 농축 및/또는 멸균 여과될 수 있다. 가용성 응집체 및 다량체는 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함하는 일반적인 기술에 의해 효과적으로 제거될 수 있다. 생성물은, 예컨대 -70 ℃에서 즉시 동결될 수 있거나, 동결건조될 수 있다.
본 발명의 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 혼입될 수 있다.
유효량의 본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 질환 또는 장애의 위험이 있는 또는 이를 나타내는 환자에게 비경구 경로 (예컨대, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내 또는 경피)에 의해 투여될 수 있다. "유효량"은 목적하는 치료 결과를 달성하기 위해 (용량에서 및 투여 시간 및 투여 수단에 대해) 필요한 양을 지칭한다. 항체의 유효량은 개체의 질환 상태, 나이, 성별 및 체중 및 개체에서 목적하는 반응을 유도하는 항체의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 치료적으로 유리한 효과가 본 발명의 항체의 임의의 독성 또는 유해 효과를 능가하는 양이다.
본 발명의 항체는 환자의 치료에 사용될 수 있다. 보다 특히, 본 발명의 항체는 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상을 치료할 것으로 예상된다. 류마티스 질환은 인간의 관절, 근육 및/또는 기관에 영향을 끼칠 수 있는 염증으로 특징지어진다. 하나의 이러한 류마티스 질환은 전신 홍반 루푸스 (SLE)이다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 바와 같이, "치료" 및/또는 "치료하는" 및/또는 "치료하다"는 본원에 기재된 장애의 진행의 둔화, 차단, 정지, 조절, 중단 또는 역전일 수 있으나 반드시 모든 장애 증상의 완전한 제거를 나타내는 것은 아닌 모든 과정을 지칭하도록 의도된다. 치료는 BTLA 활성 증가로부터 이익을 얻을 수 있는 인간에서의 질환 또는 병태의 치료를 위한 본 발명의 항체의 투여를 포함하며, (a) 질환의 추가 진행을 억제하는 것; 및 (b) 질환을 완화시키는 것, 즉 질환 또는 장애의 퇴행을 야기시키거나 증상 또는 이의 합병증을 경감시키는 것을 포함한다.
항체 조작
본 발명의 항체는 인간 BTLA의 Fc-태그부착된 세포외 도메인 (ECD) 도메인으로 토끼를 면역화시키고 마우스 BTLA-Fc 태그부착된 단백질 (25F7) 또는 대안적으로 인간 및 마우스 BTLA-Fc 태그부착된 단백질 (22B3 및 23C8)로 부스팅함으로써 생성되었다. 스크리닝은 교차 반응성을 확인하기 위해 히스티딘-태그부착된 인간, 마우스 및 시노몰구스 원숭이 BTLA로 수행되었다. 인간 BTLA의 아미노산 서열은 서열식별번호: 31에 의해 제공되고, Balbc 마우스 BTLA의 아미노산 서열은 서열식별번호: 32에 의해 제공되고, C57BL6의 아미노산 서열은 서열식별번호: 33에 의해 제공되고, 시노몰구스 원숭이 BTLA의 아미노산 서열은 서열식별번호: 34에 의해 제공된다. 이어서, 항체는 인간화되고 친화도 성숙되었다.
실시예
조작된 BTLA 효능제 항체의 발현 및 정제
본 발명의 BTLA 효능제 항체는 본질적으로 하기와 같이 발현되고 정제될 수 있다. 적합한 숙주 세포, 예컨대 HEK 293 또는 CHO가 적합한 미리결정된 HC:LC 벡터 비율 (예컨대, 1:3 또는 1:2)을 사용하는 항체 분비를 위한 발현 시스템 또는 HC 및 LC 둘 다를 코딩하는 단일 벡터 시스템으로 일시적으로 또는 안정하게 형질감염될 수 있다. 항체가 분비되는 정화된 배지는 많은 일반적으로 이용되는 기술 중 임의의 것을 이용하여 정제될 수 있다. 예컨대, 배지는 편리하게는 Fab 단편에 대해 적합한 완충액, 예컨대 인산염 완충된 식염수 (pH 7.4)로 평형화된 맙실렉트 (MabSelect) 컬럼 (GE 헬스케어 (GE Healthcare)) 또는 카파실렉트 (KappaSelect) 컬럼 (GE 헬스케어)에 적용될 수 있다. 컬럼은 비특이적 결합 성분을 제거하기 위해 세척될 수 있다. 결합된 항체는, 예컨대 pH 구배 (예컨대, 20 mM 트리스 완충액, pH 7.0 내지 10 mM 쇼듐 시트레이트 완충액, pH 3.0, 또는 인산염 완충된 식염수 pH 7.4 내지 100 mM 글리신 완충액, pH 3.0)로 용출될 수 있다. 항체 분획은, 예컨대 SDS-PAGE에 의해 검출된 후 풀링될 수 있다. 추가의 정제는 의도된 사용에 따라 임의적이다. 항체는 일반적 기술을 이용하여 농축 및/또는 멸균 여과될 수 있다. 가용성 응집체 및 다량체는 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환, 멀티모달 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함하는 일반적 기술에 의해 효과적으로 제거될 수 있다. 이들 크로마토그래피 단계 후 항체의 순도는 약 95% 내지 약 99%이다. 생성물은 냉장되거나, -70 ℃에서 즉시 냉동되거나 동결건조될 수 있다. 본 발명의 예시된 항체에 대한 아미노산 서열식별번호가 하기에 나타나 있다.
<표 1>
Figure pct00001
결합 친화도 및 동역학
BTLA에 대한 본 발명의 BTLA 효능제 항체 (22B3, 23C8 및 25F7)의 결합 친화도 및 동역학을 비아코어 (Biacore)® 3000 (GE 헬스케어)을 사용하여 표면 플라스몬 공명에 의해 측정한다. 결합 친화도를 비아코어® CM5 칩 상의 아민 커플링을 통해 약 120 RU BTLA 단백질 (인간, 래트, 뮤린 (Balbc 또는 C57BL6) 또는 시노몰구스 원숭이 BTLA)을 고정시키고, BTLA 효능제 항체를 500 nM로부터 시작하여 2배 연속 희석으로 15.6 nM까지 유동시킴으로써 측정한다. 실험을 HBS-EP 완충액 (GE 헬스케어 BR100669; 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4) 중에서 25 ℃에서 수행한다. 각각의 사이클에 대해, 250 μL 항체 샘플을 유동 셀 1 및 2를 통해 50 μL/min으로 유동시킨 후, 10분 동안 해리시킨다. 칩 표면을 10 μL/mL 유속으로 pH 1.5에서 5 μL의 글리신 완충액 주입으로 재생시킨다. 데이터를 kon, koff를 유도하고 KD를 계산하기 위해 1:1 랭뮤어 (Langmiur) 결합 모델로 피팅한다. 본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, 하기 파라미터 (표 2에 나타냄)가 관찰되었다. 하기 나타낸 데이터는 22B3에 대해 인간, 시노, 래트 및 뮤린에 대한 3개의 실험의 평균이다.
<표 2>
Figure pct00002
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 BTLA 효능제 항체는 BTLA에 결합한다. 구체적으로, 항체 22B3은 인간, 뮤린 및 시노몰구스 원숭이 BTLA에 결합할 수 있다.
일차 세포에 대한 결합
상이한 종으로부터의 일차 세포에 결합하는 본 발명의 BTLA 항체 (22B3, 23C8 및 25F7)의 능력을 FACS에 의해 측정한다. 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 제조사의 프로토콜에 따라 피콜 (Ficoll) (GE #17-1440-02) 및 셉메이트 (SepMate) 튜브 (STEMCELL #15450)를 사용하여 공여자 혈액 샘플 (샌디에고 혈액 은행 (San Diego Blood Bank), #LRS-WBC))로부터 단리한다. 시노 PBMC (월드와이드 프라이메이츠 (WorldWide Primates) #CA-10)를 액체 질소로부터 해동시키고 FACS 완충액 (상기와 동일)으로 1회 세척한다.
수컷 C57BL6 마우스 (JAX) 또는 암컷 스프라그 다우리 (Sprague Dawley) 래트 (할란 (Harlan))로부터 비장을 수거하고, 풀링하며, 세포 스트레이너 및 주사기 플런저를 사용하여 10% 열 불활성화된 FBS 및 2 mM EDTA를 갖는 완전 RPMI 1640 배지로 세정된 50 mL 원추형 튜브 상에서 단일 세포 현탁액으로 해리시킨다. 세포를 펠렛화시키고, 배지를 제거하며, 적혈구를 완전 RPMI로의 퀀칭 전 약 2분 동안 2 ml ACK 용해 (Lysing) 완충액 (집코 (gibco) #A10492-01)에 펠렛을 재현탁시킴으로써 용해시킨다. 용해된 세포를 펠렛화시키고, FACS 완충액 (3% FBS, 20 mM HEPES 및 2 mM EDTA를 함유하는 DPBS 1X) 중에 1회 세척할 수 있다.
단리된 일차 세포를 카운트리스 (Countess) 세포 계수기를 사용하여 정량화하고, FACS 완충액 중에 ml당 2 x106개 세포로 재현탁시킨다. 유동 세포측정 실험을 세포 단리와 동일한 날에 96 웰 플레이트 (그레이너 (Greiner) #650101)로 50 μl (~0.1 x106개) 세포를 플레이팅함으로써 수행한다. 비-특이적 항체 결합을 세척 없이 4 ℃에서 15분 동안 1 μl Fc 블럭 (예컨대, BD #553142로부터의 것)을 첨가함으로써 방지한다.
BTLA 항체 결합을 FACS 완충액 중에 연속 희석시킴으로써 다양한 농도에서 시험한다. 예컨대, 상이한 농도에서 시작하는 정제된 항체 및 대조군을 먼저 30 μg/mL로 희석하고, 출발 물질의 일련의 1:3 희석을 총 10개의 적정물 (+ 비처리된 대조군)에 대해 수행한다. 항체 적정물을 세포와 함께 20분 동안 4 ℃에서 인큐베이션하고, 염색 전에 FACS 완충액으로 세척한다. 세포를 특정 세포 유형 (예컨대, CD19 B 세포, CD4 T 세포 또는 CD8 T 세포)을 식별하기 위해 형광색소-컨주게이션된 항체를 사용하거나 그러한 서브세트에 대한 항체 결합의 존재 또는 부재를 식별하기 위해 이차 항체를 사용하여 염색한다. 염색은 20분 동안 4 ℃에서 수행하며, 유동 세포측정기 상에서 분석하기 전에 FACS 완충액으로 3회 세척한다. 결과를 표준 FACS 분석 소프트웨어 (예컨대, FACSDiva))를 사용하여 분석하고, 각각의 적정에 대해 이차 항체의 평균 형광 강도로 기록한다. 결합을 나타내는 양성 결과를 배경보다 높은 평균 형광 강도로 측정한다.
본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, 항체 22B3은 인간, 시노몰구스 원숭이, 래트 및 마우스 BTLA-발현 세포에 결합하고 항체 23C8은 인간 및 시노몰구스 원숭이 BTLA-발현 세포에 결합하고, 항체 25F7은 인간, 시노몰구스 원숭이 및 마우스 BTLA-발현 세포에 결합한다.
BTLA 효능제 항체-유도된 인산화
인간 B 세포주에서 티로신 인산화를 유도하는 본 발명의 BTLA 효능제 항체 (22B3 및 25F7)의 능력을 결정하기 위해, BTLA 항체를 1시간 동안 37 ℃에서 10 μg/mL로 24-웰 배양 플레이트에 결합시킨다. 플레이트를 PBS로 세척하여 임의의 비결합된 항체를 제거시킨다. 인간 BTLA-발현 B 세포주, 예컨대 Ramos.2G6.4C10 인간 B 림프구 세포주 (ATCC)를 10x10^6개 세포/mL로 웰에 첨가하고 37 ℃에서 30분 동안 인큐베이션할 수 있다. 세포를 꺼내고, 완전 용해 완충액 (MSD) 중에서 용해시키고, -80 ℃에서 적어도 30분 동안 냉동시킨다.
인산화된-BTLA를 메소 섹터 (Meso Sector) S 600에 의해 검출한다. 스트렙트아비딘 검출 플레이트를 차단 용액 (MSD) 중에서 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하여 제조한다. 바이오티닐화된-BTLA 포획 항체 (5A5)를 플레이트 상에 1시간 동안 실온에서 코팅한 후, 3회 이상 트리스-세척 단계를 수행한다. 세포 용해물을 2시간 동안 실온에서 인큐베이션한다. 총 BTLA를 SULFO-TAG 항-BTLA 항체 (ANC6E9)로 검출하고, 인산화된 BTLA를 SULFO-TAG 항-포스포티로신 항체 (PY20; MSD)로 측정한 후 3회 이상 트리스-세척 단계를 수행한다. 이어서, 2x 리드 (Read) 완충액 T (MSD)를 메소 섹터 S 600을 사용하여 분석하기 직전에 웰에 첨가한다.
본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, 항체 22B3은 음성 대조군과 비교하여 BTLA의 티로신 인산화가 배경보다 높게 2.41배 증가하였으며, 항체 25F7은 음성 대조군과 비교하여 BTLA의 티로신 인산화가 배경보다 높게 1.47배 증가하였다. 이들 데이터는 BTLA 효능제 항체 22B3 및 25F7이 인간 B 세포주에서 BTLA 인산화를 유도할 수 있음을 입증한다.
인간 일차 B 세포 증식의 억제
본 발명의 BTLA 효능제 항체의 시험관내 효능을 인간 일차 B 세포 증식을 억제하는 능력에 의해 평가한다. 인간 일차 B 세포를 인간 B 세포 단리 키트 (이지셉 (EasySep))를 사용하여 건강한 인간 말초 혈액 단핵 세포로부터 단리하고, 적합한 인간 일차 세포 배지에 재현탁시킨다. 항-IgM을 이소형 대조군 또는 BTLA 항체의 적정물과 함께 플레이트에 코팅하고, 1시간 동안 37 ℃에서 인큐베이션한 후, PBS 세척을 수행한다. 단리된 인간 B 세포를 각각의 웰에 첨가하고, 72시간 동안 37 ℃에서 5% CO2와 함께 인큐베이션한 후, 마지막 18시간 동안 [3H]-티미딘 펄싱을 수행한다. 인큐베이션 후 플레이트를 꺼내고, 드라이 아이스 상에 30분 동안 배치한 후, 수거가 준비될 때까지 -20 ℃에서 저장한다. 세포를 해동시킴으로써 용해시키고, 하베스터9600 (Harvester9600) (톰텍 (Tomtec))으로 수거한다. 증식을 마이크로베타 (MicroBeta)2 2450 마이크로플레이트 카운터 (Microplate Counter) (펄킨 엘머 (Perkin Elmer))로 [3H]-티미딘 삽입을 측정함으로써 평가한다.
카운트를 사용하여 이 검정에서 상대적 증식 반응을 평가하고, 억제 퍼센트를 수학식 [억제 퍼센트=[(AVG최대시그널-시그널샘플)/AVG최대시그널 x 100]을 이용하여 계산하고, 이를 그래프 소프트웨어 (그래프패드 프리즘 (GraphPad Prism))을 사용하여 IC50 값을 결정하는데 사용할 수 있다.
본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, BTLA 효능제 항체 22B3은 0.32 +/- 0.1 nM의 계산된 IC50으로 시험관내에서 일차 B 세포 증식을 억제할 수 있었으며, 항체 23C8은 0.14 nM의 계산된 IC50으로 시험관내에서 일차 B 세포 증식을 억제할 수 있었으며, 항체 25F7은 0.17 nM의 계산된 IC50으로 시험관내에서 일차 B 세포 증식을 억제할 수 있었다. 유사한 실험에서, 항체 22B3은 0.32 nM의 계산된 IC50으로 일차 B 세포 증식을 억제할 수 있었으며, Mab8D5와 동일한 HCVR 및 LCVR (각각 '694 특허의 서열식별번호: 11 및 18)을 갖는 항체는 6.38 nM의 계산된 IC50으로 일차 B 세포 증식을 억제하였다. 이들 데이터는 BTLA 효능제 항체 22B3, 23C8 및 25F7이 시험관내에서 B 세포 증식을 억제할 수 있고, 항체 22B3이 Mab8D5와 비교하여 더 큰 시험관내 활성을 갖는다는 것을 입증한다.
GvHD의 인간화된 NSG 마우스 모델
인간 PBMC-유래된 이식편대 숙주 질환 (GvHD)의 예방을 생체내에서 측정한다.
간단히, 약 8-10주령의 암컷 NSG 마우스 (JAX 랩스 (Labs), 스톡 # 05557)를 정상화하고 기준선 체중 측정치에 기반하여 처리 그룹으로 나눈다 (처리 그룹당 n=8 마우스). 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 제조사의 프로토콜에 따라 피콜 (GE # 17-1440-02) 및 셉메이트 튜브 (STEMCELL # 15450)를 사용하여 혈액 공여자 프로그램 (샌디에고 혈액 은행, # LRS-WBC)으로부터 단리하였다. PBMC를 PBS ml당 약 150 x106개 세포로 재현탁시킨다. 처리 그룹을 투여 전에 블라인드 처리한다.
1일에, PBS 중에 현탁된 PBMC (상기 기재된 바와 같음) 100μl (15 x106개 세포) (또는 비-이식된 대조군에 대해 100μl PBS)를 각각의 마우스의 꼬리로 정맥내 (IV) 주사한다. 마우스에 본 발명의 항체 (22B3 또는 23C8) 또는 대조군을 PBS 비히클 중의 다양한 농도로 피하 (SQ) 주사에 의해 매주 (QW) 투여한다. 3개의 독립적인 연구를 본질적으로 본원에 기재된 바와 같이 수행한다. 각각의 연구에 대한 투여 농도는 [연구 1 (항체 22B3): 0.1, 1.0, 5.0, 10.0 및 20.0 mg/kg; 연구 2 (항체 22B3 또는 23C8): 0.001, 0.01, 10.0 및 100 mpk; 및 연구 3: 0.001, 0.005, 0.01, 0.1, 0.5 및 1.0 mpk]이다.
연구를 종료하고, 이소형 대조군 동물이 기준선 체중의 20%를 상실하기 전 (연구 1 및 2) 또는 28일 (연구 3)에 마우스를 안락사시킨다. 체중을 기록하고 (연구 1 및 연구 2), 혈청을 시토카인 분석을 위해 수집하고 (연구 1; 분석은 MSD ELISA에 의해 수행되고, 분석된 시토카인은 TNFα, IL-10,IL-6, IL-4, IL12p70, IL-13, IL-2 및 IL-8임), 비장을 표현형결정/약역학 분석을 위해 수거한다 (CD 8 T 세포 집단의 감소로 측정됨; 연구 1 및 연구 3).
본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, 하기 데이터가 수득되었다.
연구 1에서 항체 22B3-처리된 동물은 (0.1, 1.0, 5.0, 10.0 또는 20.0 mg/kg 항체의 용량에서) 하기를 입증하였다: (i) 비-이식된 대조군 동물의 체중과 비교하여 연구 종료 시 유사한 체중; (ii) 이소형 대조군 동물과 비교하여 시토카인 TNFα, IL-10, IL-6, IL-4 및 IL-12p70의 감소; 및 (iii) 이소형 대조군 동물과 비교하여 CD8 T 세포 집단의 감소 (표현형결정/약역학 분석).
연구 2로부터의 데이터는, 0.01 mg/kg 항체 22B3, 또는 1.0, 5.0 또는 10.0 mg/kg 항체 23C8로 처리된 마우스가 비-이식된 대조군 동물의 체중과 비교하여 연구 종료 시 유사한 체중을 가졌음을 입증한다. 연구 2는 10.0 mg/kg에서 체중에 대한 22B3의 활성을 입증하지 못했으며, 이는 이 모델의 자연적 공여자 변동성을 반영할 수 있다. 연구 3에서, 항체 22B3은 하기 항체 용량에서 생체내 약역학 활성을 입증하였다: 0.01, 0.1, 0.5 및 1.0 mg/kg. 종합하면, 이들 데이터는 항체 22B3 및 항체 23C8이 생체내에서 GvHD를 예방하는데 효과적임을 입증한다.
mIFNα-유도된 루푸스 신장염
인터페론-알파 (IFNα)-유도된 루푸스 신장염 모델은, IFNα가 뉴질랜드 블랙 및 뉴질랜드 화이트 (NZB/W) 마우스와 교차하여 질환의 개시를 동기화하고 진행을 가속화하는데 사용된, 전신 홍반 루푸스 (SLE)의 마우스 모델이다. NZB/W 마우스 모델은 자발적 루푸스 신장염의 고전적 모델이다. 이들 마우스에서 질환 진행은 아데노바이러스 벡터를 사용하는 IFNα의 외인성 투여로 가속화될 수 있다. 이 루푸스 신장염 모델은 본 발명의 BTLA 효능제 항체의 활성을 입증하는데 사용된다.
연구 시작 1일 전에, 11주령의 암컷 NZB/W 마우스를 체중에 기준하여 무작위로 분류한다. 마우스를 하기 처리 그룹으로 분배한다: (1) LacZ 아데노-연관된 바이러스 (AAV) + 10 mg/kg 인간 IgG4 PAA 이소형 대조군 (PAA는 S228P, F234A 및 L235A 돌연변이임), (2) IFNα AAV + 10 mg/kg 인간 IgG4 PAA 이소형 대조군, (3) IFNα AAV + 3 mg/kg 22B3 항체, (4) IFNα AAV + 10 mg/kg 22B3 항체, 또는 (5) IFNα AAV + 50 mg/kg 시클로포스파미드. 연구 개시일 (0일)에, 마우스에게 PBS 중의 LacZ 유전자 (비-질환) 또는 마우스 IFNα (질환)를 발현하는 AAV의 1011 게놈 카피 (GC)를 1회 정맥내 투여한다. 그룹 1-4에서, 마우스를 0일에 시작하여 매주 1회 PBS 중의 이소형 대조군 또는 22B3 항체로 피하로 처리한다. 그룹 5에서, 마우스를 10일마다 PBS 중의 시클로포스파미드로 복강내로 처리한다. 소변 샘플을 처리 개시 후 연구 종료 6주까지 2주마다 마우스로부터 수집한다. 카미야 바이오메디칼 (Kamiya Biomedical)TM 마우스 마이크로알부민 ELISA를 이용하여 소변 알부민 수준을 정량화한다. 소변 크레아틴을 효소적 크레아티닌 검정 (로쉬 다이아그노스틱스 (Roche Diagnostics))을 이용하여 측정한다. 신장 기능의 바이오마커인 알부민뇨를 소변 중에서 검출된 크레아티닌 mg당 300 μg을 초과하는 알부민으로 정의한다.
본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, 4주까지 이소형 처리된 질환 그룹 (IFNα AAV + hIgG4 PAA)에서 알부민뇨의 발생은 100%에 도달하고 연구를 마칠 때까지 상승되게 유지되었으나, LacZ AAV 처리된 (비-질환) 마우스는 어떠한 알부민뇨 발생도 나타내지 않았다. 급성 신독성일 수 있는 시클로포스파미드는 병에 걸린 마우스에서 알부민뇨를 일시적으로 증가시켰지만, 시클로포스파미드 그룹에서 알부민뇨의 발생은 연구 종료 시 0으로 감소되었다. 3 mg/kg 및 10 mg/kg의 항체 22B3은 알부민뇨의 발생을 28일에 각각 50% 및 20% 및 42일에 각각 60% 및 70%로 감소시킬 수 있었다. 이들 결과는 항체 22B3이 모델에서 신장 기능을 보호할 수 있음을 나타내었다.
연구 동안 생존 퍼센트의 카플란-마이어 (Kaplan-Meier) 플롯 (데이터는 나타내지 않음)은 이소형 처리된 질환 그룹에서의 신부전이 28일에 시작하여 죽음을 초래하였다는 것을 나타내었다. 연구 종료 시, 이소형 처리된 질환 그룹에서의 생존율은 60%였다. 비-질환 및 시클로포스파미드 처리된 군은 100% 생존율을 가졌다. 10 mg/kg의 항체 22B3으로 처리된 마우스도 연구 종료 시 100% 생존율을 나타낸 반면, 3 mg/kg으로 처리된 마우스는 80% 생존율을 나타내었다. 이들 결과는 항체 22B3이 이 모델에서 질환 관련된 죽음을 예방할 수 있음을 나타내었다.
건선의 이미퀴모드-유도된 모델
TLR7/8 효능제 이미퀴모드 (IMQ)의 적용에 의해 유도된 건선-유사 피부염의 중증도를 제한하는 본 발명의 항체의 능력을 시험한다. 7주령의 암컷 B6.SJL-Ptprc a Pepc b/BoyJ 마우스 (JAX 스톡 번호: 002014) 또는 HVEM-/- 마우스 (문헌 (Wang et al., J. Clin. Invest., 115:3, 711-717, March 2005)에 기재됨)에 0일에 각각 3 mg/kg 또는 1 mg/kg의 항체 22B3 또는 항체 25F7을 복강내 주사하고, 마우스의 등을 면도한다. hIgG4 이소형 대조군이 주사된 동물을 대조군으로 사용한다. 1-3일에, 마우스를 흡입되는 이소플루란 (베트원 (VetOne))으로 마취시킨 후, 5% IMQ 크림 (50mg, Fougera)을 면도된 피부의 한정된 부위에 적용한다. 4일에, 처리된 피부 부위를 절제하고, 질환 중증도 및 염증-관련된 유전자 발현에 대해 분석한다.
본질적으로 상기 기재된 바와 같은 절차에 따라, 조직학적 분석은 hIgG4 이소형 대조군 또는 1mg/kg 항체 22B3으로 처리된 그룹에서 이상각화증 및 과다각화증을 갖는 표피층의 비후화를 입증하였다. 3mg/kg의 항체 22B3 또는 3mg/kg의 항체 25F7로 처리된 마우스는 조직학적으로 정상으로 보이는 일부 부위와 함께 표피 두께의 상당한 감소를 나타내었다. 피부에서의 유전자 발현을 iTaq 유니버설 SYBR 그린 슈퍼믹스 (iTaq Universal SYBR Green Supermix) (바이오-라드 (Bio-Rad))를 사용하여 qPCR에 의해 분석하였다. 3mg/kg 항체 22B3으로 처리된 마우스는 유형 I IFN (IFNα, IFNβ) 및 IFNγ 뿐만 아니라 IFN-반응 유전자 (Isg15, Mx1, Mx2, Oas2)의 발현에 있어 상당한 감소를 나타내었다. IMQ-유도된 피부염을 확립하는데 수반되는 시토카인의 분석도 3mg/kg의 항체 22B3 처리 그룹에서 IL-22 및 IL-23 발현의 상당한 감소를 입증하였다. 이들 데이터는 BTLA 효능제 항체 22B3 및 25F7이 건선-유사 피부염의 마우스 모델에서 표피 두께를 감소시킬 수 있음을 입증한다.
에피토프 결정
본 발명의 BTLA 효능제 항체의 기능적 에피토프를 ELISA에 의해 결정하고, 구조적 에피토프를 X-선 결정학으로 결정한다.
방법
ELISA: 기능적 에피토프
BTLA의 하기 표면 돌연변이 세트를 (인간) Fc에 융합된 인간 BTLA 단백질에 개별적으로 도입하였다: D35R, Q37R, Y39E, R42D, Q43A, E45R, S47H, L49R, D52R, E55R, E57R, D84R, N65R, H68A, V80R, K81E, E83R, S88H, K90H, E91H, I95R, E103H, L106R, N108R, R114V, S121Y, N122R, E125H, H127E, T130R, Y132R 및 T134H.
22B3 및 23C8의 결합을 ELISA를 이용하여 결정하였으며, 여기서 에피토프 맵핑될 항체는 고정된 항-토끼 항체에 의해 포획되었으며, 세척 후, 각각의 BTLA 돌연변이체는 4 포인트 4배 희석 시리즈로 포획된 항체와 함께 인큐베이션되었으며, 효소 결합된 항-인간 Fc 시약으로 검출되었다. 생성된 시그널을 항체들간에 및 대조군 항체에 대해 비교하였다. 기능적 에피토프는 일반적으로 1개 또는 2개의 돌연변이체에 대한 신호의 급격한 감소에 의해 그 자체를 나타내었다. 25F7 항체의 경우, 인간화된 22B3이 고정되고, BTLA 돌연변이체가 포획되고, 토끼 25F7에 의해 결합되는 샌드위치 ELISA를 수행하였다. 이는 훨씬 강한 시그널을 제공하였으며, 22B3 에피토프를 제거한 후 25F7 에피토프를 확인할 수 있었다.
X-선 결정학: 구조적 에피토프
다양한 항체의 BTLA 상의 상호작용 인터페이스 및 따라서 물리적 에피토프를 결정하기 위해, 인간 BTLA를 본 발명의 항체의 Fab 부분과 공동-결정화하고, 결정 구조를 측정하였다. 생성된 결정 구조로부터, 임의의 항체 원자의 4.5 Å 내의 BTLA 잔기를 (피몰 (Pymol) 시각화 소프트웨어를 사용하여) 에피토프의 부분으로서 카운트하였다. 4.5 옹스트롬은 원자 중심에서 원자 중심까지 측정된다. 항체의 임의의 원자에 대해 4.5 옹스트롬 가까이 있는 적어도 하나의 원자를 갖는 임의의 잔기는 에피토프의 부분이다.
2개의 22B3 구조가 인간 BTLA와 복합체로 결정되었다. 제1 구조는 히스티딘 태그부착되고 정제된 모 토끼 22B3 항체 Fab를 Fc 융합물로서 발현된 후 절단되고 정제된 인간 BTLA의 S47H 돌연변이체 (안정화 돌연변이)와 함께 사용하였다. 이들 2개의 단백질을 약 등몰 비율로 혼합하고, 결정화에 대해 상업적으로 이용가능한 스크린에서 스크리닝하였다. 결정을 수득하고, 회절 데이터를 어드벤스트 포톤 소스 (Advanced Photon Source)에 수집하였다. 이 데이터를 분자 교체에 의해 감소시키고 해결하고, 리파이닝하여 22B3과 BTLA 사이의 복합체의 고해상 구조를 산출하였다. 제2 복합체는 인간화된 22B3 (Fab 부분)의 친화도 성숙된 버전 (HC 돌연변이 I56Q/T57H/G98A 및 LC S95H를 가짐)과 인간 BTLA 사이의 것이었다. 이들을 공동-발현시키고, 복합체로서 정제하고, 유사하게 스크리닝하였다. 생성된 구조 및 에피토프는 제1 구조와 유사하였다.
복합체에서 23C8의 구조를 제1 22B3 복합체와 유사한 방식으로, 즉 His 태그부착된 토끼 모 Fab를 정제하고, 단량체성 S47H 인간 BTLA와 혼합하고, 결정화함으로써 수득하였다.
인간 BTLA와의 복합체에서 25F7의 구조는 제2 22B3 복합체에 따라, 즉 공동-발현, 공동-정제 및 결정화에 의해 수득하였다. 인간 BTLA에 대해 개선된 결합을 갖는 인간화된 25F7의 이중 돌연변이체를 사용하였다 (에피토프 결정에 사용된 인간화된 25F7은 HC S30W/LC E27R에서 돌연변이를 가짐).
결과
22B3 항체: BTLA 표면 돌연변이체 중에서, R42D 및 H127E는 토끼 22B3 항체 (22B3과 동일한 CDR을 포함하나 토끼 프레임워크를 가짐)에 대한 결합에 대해 상당한 부정적 영향을 가졌다. 기능적 에피토프는 인간 BTLA (서열식별번호: 31)의 위치 42에서 Arg 및 위치 127에서 His를 포함한다. 인간 BTLA와 토끼 22B3 Fab 사이의 결정 구조 복합체에서 22B3의 4.5 옹스트롬 내에 있고 구조적 에피토프인 BTLA 잔기는 서열식별번호: 31의 하기 잔기이다: 위치 35에서의 Asp, 위치 37에서의 Gln 내지 위치 42에서의 Arg, 위치 74에서의 Leu, 위치 76에서의 Gly 내지 위치 79에서의 Cys, 위치 114에서의 Arg, 위치 119에서의 Phe, 위치 120에서의 Gln 및 위치 122에서의 Asn 내지 위치 128에서의 Ser. 인간 BTLA와 인간 22B3 변이체 (HC I56Q/T57H/G98A LC S95H) Fab 사이의 결정 구조 복합체에서 22B3의 4.5 옹스트롬 내에 있는 BTLA 잔기는 서열식별번호: 31의 위치 35에서의 Asp, 위치 37에서의 Gln 내지 위치 42에서의 Arg, 위치 74에서의 Leu, 위치 76에서의 Gly 내지 위치 79에서의 Cys, 위치 114에서의 Arg, 위치 119에서의 Phe, 위치 120에서의 Gln, 위치 122에서의 Asn 및 위치 124에서의 Ile 내지 위치 128에서의 Ser이다.
유사한 연구에서, HVEM 결합 BTLA에 대한 구조적 에피토프는 BTLA의 하기 아미노산이었다: 위치 37에서의 Gln 내지 위치 42에서의 Arg, 위치 74에서의 Leu, 위치 76에서의 Gly, 위치 77에서의 Thr, 위치 112에서의 Ser, 위치 114에서의 Arg, 위치 118에서의 Asn, 위치 121에서의 Ser 내지 위치 128에서의 Ser 및 위치 130에서의 Thr. 항체 22B3와 HVEM 사이의 구조적 유사성을 항체:BTLA 결정 구조를 HVEM:BTLA 결정 구조에 중첩시켜 BTLA 분자를 정렬시킴으로써 평가하였다. 아미노산 잔기 69-72 및 상응하는 항체 영역을 함유하는 HVEM 영역에서 골격 평균 제곱근 편차는 1.4 옹스트롬인 것으로 결정되었다.
23C8 항체: D52R은 ELISA에서 인간 BTLA에 대한 토끼 23C8 (23C8와 동일한 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1 및 LCDR2를 포함하고, QCTYGGVVGSTSDDNP의 LCDR3을 갖고, 토끼 프레임워크를 가짐)의 결합을 차단한다. 기능적 에피토프는 인간 BTLA (서열식별번호: 31)의 위치 52에서 Asp를 포함한다. 인간 BTLA (S47H)와 토끼 23C8 Fab 사이의 결정 구조 복합체에서 23C8의 4.5 옹스트롬 내에 있고 구조적 에피토프인 BTLA 잔기는 서열식별번호: 31의 위치 46에서의 His 내지 위치 55에서의 Glu, 위치 103에서의 Glu, 위치 104에서의 Pro, 위치 106에서의 Leu, 위치 107에서의 Pro, 위치 134에서의 Thr 내지 위치 139에서의 Ala이다. 항체 23C8은 HVEM 결합을 모방하지 않는다.
25F7 항체: BTLA 표면 돌연변이체 세트 중에서, H68A 및 K61E는 토끼 25F7 항체 (25F7과 동일한 CDR을 포함하나 토끼 프레임워크를 가짐)에 대한 결합에 상당한 부정적 영향을 가졌다. 기능적 에피토프는 인간 BTLA (서열식별번호: 31)의 위치 68에서 His 및 위치 81에서 Lys를 포함한다. 인간 BTLA와 인간화된 25F7 Fab 변이체 (HC S30W, LC E27R) 사이의 결정 구조 복합체에서 25F7의 4.5 옹스트롬 내에 있고 구조적 에피토프인 BTLA 잔기는 서열식별번호: 31의 위치 62에서의 Tyr, 위치 64에서의 Ala 내지 위치 68에서의 His, 위치 85에서의 Arg 내지 위치 91에서의 Glu, 위치 98에서의 Phe 및 위치 118에서의 Asn이다. 항체 25F7은 HVEM 결합을 모방하지 않는다.
서열
항체 22B3의 HC (서열식별번호: 1)
Figure pct00003
항체 22B3의 LC (서열식별번호: 2)
Figure pct00004
항체 22B3의 HCVR (서열식별번호: 3)
Figure pct00005
항체 22B3의 LCVR (서열식별번호: 4)
Figure pct00006
항체 23C8의 HC (서열식별번호: 5)
Figure pct00007
항체 23C8의 LC (서열식별번호: 6)
Figure pct00008
항체 23C8의 HCVR (서열식별번호: 7)
Figure pct00009
항체 23C8의 LCVR (서열식별번호: 8)
Figure pct00010
항체 25F7의 HC (서열식별번호: 9)
Figure pct00011
항체 25F7의 LC (서열식별번호: 10)
Figure pct00012
항체 25F7의 HCVR (서열식별번호: 11)
Figure pct00013
항체 25F7의 LCVR (서열식별번호: 12)
Figure pct00014
항체 22B3의 HCDR1 (서열식별번호: 13)
Figure pct00015
항체 23C8의 HCDR1 (서열식별번호: 14)
Figure pct00016
항체 25F7의 HCDR1 (서열식별번호: 15)
Figure pct00017
항체 22B3의 HCDR2 (서열식별번호: 16)
Figure pct00018
항체 23C8의 HCDR2 (서열식별번호: 17)
Figure pct00019
항체 25F7의 HCDR2 (서열식별번호: 18)
Figure pct00020
항체 22B3의 HCDR3 (서열식별번호: 19)
Figure pct00021
항체 23C8의 HCDR3 (서열식별번호: 20)
Figure pct00022
항체 25F7의 HCDR3 (서열식별번호: 21)
Figure pct00023
항체 22B3의 LCDR1 (서열식별번호: 22)
Figure pct00024
항체 23C8의 LCDR1 (서열식별번호: 23)
Figure pct00025
항체 25F7의 LCDR1 (서열식별번호: 24)
Figure pct00026
항체 22B3의 LCDR2 (서열식별번호: 25)
Figure pct00027
항체 23C8의 LCDR2 (서열식별번호: 26)
Figure pct00028
항체 25F7의 LCDR2 (서열식별번호: 27)
Figure pct00029
항체 22B3의 LCDR3 (서열식별번호: 28)
Figure pct00030
항체 23C8의 LCDR3 (서열식별번호: 29)
Figure pct00031
항체 25F7의 LCDR3 (서열식별번호: 30)
Figure pct00032
인간 BTLA (서열식별번호: 31)
Figure pct00033
마우스 Balbc BTLA (서열식별번호: 32)
Figure pct00034
마우스 C57BL6 BTLA (서열식별번호: 33)
Figure pct00035
시노몰구스 원숭이 BTLA (서열식별번호: 34)
Figure pct00036
서열식별번호: 1의 항체 22B3의 중쇄를 발현하기 위한 예시된 DNA (서열식별번호: 35)
Figure pct00037
서열식별번호: 2의 항체 22B3의 경쇄를 발현하기 위한 예시적 DNA (서열식별번호: 36)
Figure pct00038
서열식별번호: 5의 항체 23C8의 중쇄를 발현하기 위한 예시적 DNA (서열식별번호: 37)
Figure pct00039
서열식별번호: 6의 항체 23C8의 경쇄를 발현하기 위한 예시적 DNA (서열식별번호: 38)
Figure pct00040
서열식별번호: 9의 항체 25F7의 중쇄를 발현하기 위한 예시적 DNA (서열식별번호: 39)
Figure pct00041
서열식별번호: 10의 항체 25F7의 경쇄를 발현하기 위한 예시적 DNA (서열식별번호: 40)
Figure pct00042
인간 HVEM (서열식별번호: 41)
Figure pct00043
SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> BTLA Agonist Antibodies and Uses Thereof <130> X21261 <140> 62/508510 <141> 2017-05-19 <160> 41 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Tyr Tyr Asp Asp Tyr Val Tyr Val Tyr Ala Leu Asp Ile 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 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His Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val 65 70 75 80 Lys Leu Glu Asp Arg Gln Thr Ser Trp Lys Glu Glu Lys Asn Ile Ser 85 90 95 Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Asn Asp Asn Gly Ser 100 105 110 Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Gln Ser Asn Leu Ile Glu Ser His Ser 115 120 125 Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser 130 135 140 Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Arg Leu Leu Pro 145 150 155 160 Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys 165 170 175 Cys Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Ala 180 185 190 Gly Arg Glu Ile Asn Leu Val Asp Ala His Leu Lys Ser Glu Gln Thr 195 200 205 Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly 210 215 220 Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Asp Leu Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser 225 230 235 240 Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Val 245 250 255 Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Val Ile Gly Pro Asn Ser Arg Leu Ala 260 265 270 Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg 275 280 285 Ser <210> 32 <211> 306 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32 Met Lys Thr Val Pro Ala Met Leu Gly Thr Pro Arg Leu Phe Arg Glu 1 5 10 15 Phe Phe Ile Leu His Leu Gly Leu Trp Ser Ile Leu Cys Glu Lys Ala 20 25 30 Thr Lys Arg Asn Asp Glu Glu Cys Glu Val Gln Leu Asn Ile Lys Arg 35 40 45 Asn Ser Lys His Ser Ala Trp Thr Gly Glu Leu Phe Lys Ile Glu Cys 50 55 60 Pro Val Lys Tyr Cys Val His Arg Pro Asn Val Thr Trp Cys Lys His 65 70 75 80 Asn Gly Thr Ile Trp Val Pro Leu Glu Val Gly Pro Gln Leu Tyr Thr 85 90 95 Ser Trp Glu Glu Asn Arg Ser Val Pro Val Phe Val Leu His Phe Lys 100 105 110 Pro Ile His Leu Ser Asp Asn Gly Ser Tyr Ser Cys Ser Thr Asn Phe 115 120 125 Asn Ser Gln Val Ile Asn Ser His Ser Val Thr Ile His Val Arg Glu 130 135 140 Arg Thr Gln Asn Ser Ser Glu His Pro Leu Ile Thr Val Ser Asp Ile 145 150 155 160 Pro Asp Ala Thr Asn Ala Ser Gly Pro Ser Thr Met Glu Glu Arg Pro 165 170 175 Gly Arg Thr Trp Leu Leu Tyr Thr Leu Leu Pro Leu Gly Ala Leu Leu 180 185 190 Leu Leu Leu Ala Cys Val Cys Leu Leu Cys Phe Leu Lys Arg Ile Gln 195 200 205 Gly Lys Glu Lys Lys Pro Ser Asp Leu Ala Gly Arg Asp Thr Asn Leu 210 215 220 Val Asp Ile Pro Ala Ser Ser Arg Thr Asn His Gln Ala Leu Pro Ser 225 230 235 240 Gly Thr Gly Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Trp Ser Ser Met Gln Asp Glu 245 250 255 Ser Glu Leu Thr Ile Ser Leu Gln Ser Glu Arg Asn Asn Gln Gly Ile 260 265 270 Val Tyr Ala Ser Leu Asn His Cys Val Ile Gly Arg Asn Pro Arg Gln 275 280 285 Glu Asn Asn Met Gln Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val 290 295 300 Arg Ser 305 <210> 33 <211> 306 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 33 Met Lys Thr Val Pro Ala Met Leu Gly Thr Pro Arg Leu Phe Arg Glu 1 5 10 15 Phe Phe Ile Leu His Leu Gly Leu Trp Ser Ile Leu Cys Glu Lys Ala 20 25 30 Thr Lys Arg Asn Asp Glu Glu Cys Pro Val Gln Leu Thr Ile Thr Arg 35 40 45 Asn Ser Lys Gln Ser Ala Arg Thr Gly Glu Leu Phe Lys Ile Gln Cys 50 55 60 Pro Val Lys Tyr Cys Val His Arg Pro Asn Val Thr Trp Cys Lys His 65 70 75 80 Asn Gly Thr Ile Cys Val Pro Leu Glu Val Ser Pro Gln Leu Tyr Thr 85 90 95 Ser Trp Glu Glu Asn Gln Ser Val Pro Val Phe Val Leu His Phe Lys 100 105 110 Pro Ile His Leu Ser Asp Asn Gly Ser Tyr Ser Cys Ser Thr Asn Phe 115 120 125 Asn Ser Gln Val Ile Asn Ser His Ser Val Thr Ile His Val Thr Glu 130 135 140 Arg Thr Gln Asn Ser Ser Glu His Pro Leu Ile Thr Val Ser Asp Ile 145 150 155 160 Pro Asp Ala Thr Asn Ala Ser Gly Pro Ser Thr Met Glu Glu Arg Pro 165 170 175 Gly Arg Thr Trp Leu Leu Tyr Thr Leu Leu Pro Leu Gly Ala Leu Leu 180 185 190 Leu Leu Leu Ala Cys Val Cys Leu Leu Cys Phe Leu Lys Arg Ile Gln 195 200 205 Gly Lys Glu Lys Lys Pro Ser Asp Leu Ala Gly Arg Asp Thr Asn Leu 210 215 220 Val Asp Ile Pro Ala Ser Ser Arg Thr Asn His Gln Ala Leu Pro Ser 225 230 235 240 Gly Thr Gly Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Trp Ser Ser Met Gln Asp Glu 245 250 255 Ser Glu Leu Thr Ile Ser Leu Gln Ser Glu Arg Asn Asn Gln Gly Ile 260 265 270 Val Tyr Ala Ser Leu Asn His Cys Val Ile Gly Arg Asn Pro Arg Gln 275 280 285 Glu Asn Asn Met Gln Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val 290 295 300 Arg Ser 305 <210> 34 <211> 289 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 34 Met Lys Thr Leu Pro Ala Met Leu Gly Ser Gly Arg Leu Phe Trp Val 1 5 10 15 Val Phe Leu Ile Pro Tyr Leu Asp Ile Trp Asn Ile His Gly Lys Glu 20 25 30 Ser Cys Asp Val Gln Leu Tyr Ile Lys Arg Gln Ser Tyr His Ser Ile 35 40 45 Phe Ala Gly Asp Pro Phe Lys Leu Glu Cys Pro Val Lys Tyr Cys Ala 50 55 60 His Arg Pro Gln Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val 65 70 75 80 Lys Leu Glu Gly Arg His Thr Ser Trp Lys Gln Glu Lys Asn Leu Ser 85 90 95 Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Ser Asp Asn Gly Ser 100 105 110 Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Leu Ser Ala Ile Ile Glu Ser His Ser 115 120 125 Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser 130 135 140 Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Ser Leu Leu Pro 145 150 155 160 Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys 165 170 175 Phe Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Thr 180 185 190 Gly Arg Glu Ile Thr Leu Val Asp Val Pro Phe Lys Ser Glu Gln Thr 195 200 205 Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly 210 215 220 Ile Tyr Asp Asn Glu Pro Asp Phe Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser 225 230 235 240 Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Ile 245 250 255 Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Ile Ile Gly Leu Asn Ser Arg Gln Ala 260 265 270 Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg 275 280 285 Ser <210> 35 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 35 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggatt ctccctcagt agctatggag tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagcc attagttatg atggtattac atactacgcg 180 agctgggcga aaagcagagt caccatgacc agggacacgt ccacgagcac agtctacatg 240 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggggactac 300 tacgatgatt atgtttatgt ttatgcttta gacatctggg gccagggcac cctggtcacc 360 gtctcctcag cttctaccaa gggcccatcg gtcttcccgc tagcgccctg ctccaggagc 420 acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600 acgaagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660 gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca ccctgcccag cacctgaggc cgccggggga 720 ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840 tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggaaagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca 1320 cagaagagcc tctccctgtc tctgggt 1347 <210> 36 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgcc aggccagtca gagcattagt actgcattag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgct gcatccactc tggcatctgg catcccagac 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240 gaagattttg cagtgtatta ctgtcaacag ggttatagta gtagtaatct tgataatgtt 300 ttcggcggag ggaccaaggt ggagatcaaa cggaccgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600 catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg c 651 <210> 37 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 37 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cgacatcagt aagtacaaca tccaatgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggcttc attaattatg gtggtagcgc atactacgcg 180 agccgggcga aaggcagatt caccatctca agagatgatt caaagaactc actgtatctg 240 caaatgaaca gcctgaaaac cgaggacacg gccgtgtatt actgtgctag aggactaagt 300 aatagcgacc tctggggcca gggcaccctg gtcaccgtct cctcagcttc taccaagggc 360 ccatcggtct tcccgctagc gccctgctcc aggagcacct ccgagagcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta 600 gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagagttg agtccaaata tggtccccca 660 tgcccaccct gcccagcacc tgaggccgcc gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 720 aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 780 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 840 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 900 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 960 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag 1020 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1080 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga aagcaatggg 1140 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1200 ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc 1260 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctctg 1320 ggt 1323 <210> 38 <211> 663 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc aggccagtca gagcattagt agttggttat cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctacagg gcatccactc tggcatctgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatattg caacatatta ctgtcaatcc acttatggtg gtgttgttgg cagtactagt 300 gatgataatc ctttcggcgg agggaccaag gtggagatca aacggaccgt ggctgcacca 360 tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg 420 tgcctgctga ataacttcta tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc 480 ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac 540 agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc 600 tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag 660 tgc 663 <210> 39 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 39 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggatt ctccctcagt acctatgcaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaatc attagtgatg atggtaccac atactacgcg 180 acctgggcga aaggcagagt caccatgacc agggacacgt ccacgagcac agtctacatg 240 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatgctggt 300 gctggtggtg tccaagacta cttaaccttg tggggccagg gcaccctggt caccgtctcc 360 tcagcttcta ccaagggccc atcggtcttc ccgctagcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660 tccaaatatg gtcccccatg cccaccctgc ccagcacctg aggccgccgg gggaccatca 720 gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg 900 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020 aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaaa gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag 1260 gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag 1320 agcctctccc tgtctctggg t 1341 <210> 40 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgcc aggccagtga gaatatttac aactttttgg cctggtacca gcagaaacca 120 ggacagcctc ctaagctgct catttactct gcatccactc tggcatctgg ggtccctgac 180 cgattcagtg gcagcgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcaggct 240 gaagatgtgg cagtttatta ctgtcaacag ggttctagta atagtaatat tgataatcct 300 ttcggcggag ggaccaaggt ggagatcaaa cggaccgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600 catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg c 651 <210> 41 <211> 283 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Met Glu Pro Pro Gly Asp Trp Gly Pro Pro Pro Trp Arg Ser Thr Pro 1 5 10 15 Lys Thr Asp Val Leu Arg Leu Val Leu Tyr Leu Thr Phe Leu Gly Ala 20 25 30 Pro Cys Tyr Ala Pro Ala Leu Pro Ser Cys Lys Glu Asp Glu Tyr Pro 35 40 45 Val Gly Ser Glu Cys Cys Pro Lys Cys Ser Pro Gly Tyr Arg Val Lys 50 55 60 Glu Ala Cys Gly Glu Leu Thr Gly Thr Val Cys Glu Pro Cys Pro Pro 65 70 75 80 Gly Thr Tyr Ile Ala His Leu Asn Gly Leu Ser Lys Cys Leu Gln Cys 85 90 95 Gln Met Cys Asp Pro Ala Met Gly Leu Arg Ala Ser Arg Asn Cys Ser 100 105 110 Arg Thr Glu Asn Ala Val Cys Gly Cys Ser Pro Gly His Phe Cys Ile 115 120 125 Val Gln Asp Gly Asp His Cys Ala Ala Cys Arg Ala Tyr Ala Thr Ser 130 135 140 Ser Pro Gly Gln Arg Val Gln Lys Gly Gly Thr Glu Ser Gln Asp Thr 145 150 155 160 Leu Cys Gln Asn Cys Pro Pro Gly Thr Phe Ser Pro Asn Gly Thr Leu 165 170 175 Glu Glu Cys Gln His Gln Thr Lys Cys Ser Trp Leu Val Thr Lys Ala 180 185 190 Gly Ala Gly Thr Ser Ser Ser His Trp Val Trp Trp Phe Leu Ser Gly 195 200 205 Ser Leu Val Ile Val Ile Val Cys Ser Thr Val Gly Leu Ile Ile Cys 210 215 220 Val Lys Arg Arg Lys Pro Arg Gly Asp Val Val Lys Val Ile Val Ser 225 230 235 240 Val Gln Arg Lys Arg Gln Glu Ala Glu Gly Glu Ala Thr Val Ile Glu 245 250 255 Ala Leu Gln Ala Pro Pro Asp Val Thr Thr Val Ala Val Glu Glu Thr 260 265 270 Ile Pro Ser Phe Thr Gly Arg Ser Pro Asn His 275 280

Claims (87)

  1. 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, BTLA에 결합하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 (HC) 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하는 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하고, 여기서 각각의 HC는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖고, 각각의 경쇄 (LC)는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  6. 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 류마티스, 신경 및/또는 피부과 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 방법.
  9. 제6항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 방법.
  10. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 항체.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상의 치료에 사용하기 위한 항체.
  12. 제11항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 항체.
  13. 제11항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 항체.
  14. 제11항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 항체.
  15. 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  16. 제15항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 항체의 용도.
  17. 제15항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 항체의 용도.
  18. 제15항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 항체의 용도.
  19. 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염으로부터 선택되는 병태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  20. 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 아토피 피부염 및 건선으로부터 선택되는 병태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  21. 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 다발성 경화증을 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  22. 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 의해 제공되는 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
  23. 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 의해 제공되는 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
  24. 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자.
  25. 제24항에 있어서, 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 35이고, 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 36인 DNA 분자.
  26. 제22항의 DNA 분자 및 제23항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포이며, 여기서 세포는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고, 여기서 각각의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1에 의해 제공되고 각각의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 2에 의해 제공되는 것인 포유동물 세포.
  27. 제24항 또는 제25항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포이며, 여기서 세포는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고, 여기서 각각의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1에 의해 제공되고 각각의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 2에 의해 제공되는 것인 포유동물 세포.
  28. a) 제26항 또는 제27항의 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 2개의 HC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 1이고, 2개의 LC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 2인 항체를 제조하는 방법.
  29. 제28항의 방법에 의해 수득가능한 항체.
  30. 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, BTLA에 결합하는 항체.
  31. 제30항에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는 항체.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 (HC) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하는 항체.
  33. 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하고, 여기서 각각의 HC는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖고, 각각의 경쇄 (LC)는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
  34. 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  35. 유효량의 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 류마티스, 신경 및/또는 피부과 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법.
  36. 제35항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 방법.
  37. 제35항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 방법.
  38. 제35항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 방법.
  39. 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 항체.
  40. 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상의 치료에 사용하기 위한 항체.
  41. 제40항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 항체.
  42. 제40항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 항체.
  43. 제40항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 항체.
  44. 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  45. 제44항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 항체의 용도.
  46. 제44항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 항체의 용도.
  47. 제44항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 항체의 용도.
  48. 유효량의 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염으로부터 선택되는 병태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  49. 유효량의 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 아토피 피부염 및 건선으로부터 선택되는 병태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  50. 유효량의 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 다발성 경화증을 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  51. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 의해 제공되는 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
  52. 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 의해 제공되는 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
  53. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자.
  54. 제53항에 있어서, 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 37이고, 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 38인 DNA 분자.
  55. 제51항의 DNA 분자 및 제52항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포이며, 여기서 세포는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고, 여기서 각각의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5에 의해 제공되고 각각의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6에 의해 제공되는 것인 포유동물 세포.
  56. 제53항 또는 제54항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포이며, 여기서 세포는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고, 여기서 각각의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5에 의해 제공되고 각각의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6에 의해 제공되는 것인 포유동물 세포.
  57. a) 제55항 또는 제56항의 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 2개의 HC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 5이고, 2개의 LC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 6인 항체를 제조하는 방법.
  58. 제57항의 방법에 의해 수득가능한 항체.
  59. 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, BTLA에 결합하는 항체.
  60. 제59항에 있어서, 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는 항체.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 (HC) 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하는 항체.
  62. 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하고, 여기서 각각의 HC는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖고, 각각의 경쇄 (LC)는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  64. 유효량의 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 류마티스, 신경 및/또는 피부과 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법.
  65. 제64항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 방법.
  66. 제64항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 방법.
  67. 제64항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 방법.
  68. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 항체.
  69. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상의 치료에 사용하기 위한 항체.
  70. 제69항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 항체.
  71. 제69항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 항체.
  72. 제69항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 항체.
  73. 류마티스, 신경 및 피부과 질환 중 하나 이상을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  74. 제73항에 있어서, 류마티스 질환이 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염 중 적어도 하나인 항체의 용도.
  75. 제73항에 있어서, 피부과 질환이 아토피 피부염 및 건선 중 적어도 하나인 항체의 용도.
  76. 제73항에 있어서, 신경 질환이 다발성 경화증인 항체의 용도.
  77. 유효량의 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 루푸스 신장염, 전신 홍반 루푸스 및 류마티스 관절염으로부터 선택되는 병태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  78. 유효량의 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 아토피 피부염 및 건선으로부터 선택되는 병태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  79. 유효량의 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 다발성 경화증을 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물.
  80. 서열식별번호: 9의 아미노산 서열에 의해 제공되는 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
  81. 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 의해 제공되는 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
  82. 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자.
  83. 제82항에 있어서, 항체 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 39이고, 항체 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 40인 DNA 분자.
  84. 제80항의 DNA 분자 및 제81항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포이며, 여기서 세포는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고, 여기서 각각의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9에 의해 제공되고 각각의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10에 의해 제공되는 것인 포유동물 세포.
  85. 제82항 또는 제83항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포이며, 여기서 세포는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체를 발현할 수 있고, 여기서 각각의 중쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9에 의해 제공되고 각각의 경쇄의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10에 의해 제공되는 것인 포유동물 세포.
  86. a) 제84항 또는 제85항의 포유동물 세포를 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 2개의 HC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 9이고, 2개의 LC 각각의 아미노산 서열이 서열식별번호: 10인 항체를 제조하는 방법.
  87. 제86항의 방법에 의해 수득가능한 항체.
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