KR20190122878A - Pml의 위험을 판단하는 방법 - Google Patents

Pml의 위험을 판단하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 진행성다병소성백질뇌증 (PML)이 발병하는 환자의 위험을 판단하는 방법에 관계한다.

Description

PML의 위험을 판단하는 방법{METHOD OF ASSESSING RISK OF PML}
관련된 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2011년 5월 31일자 제출된 U.S. 특허가출원 번호 61/491,810, 2011년 7월 15일자 제출된 U.S. 특허가출원 번호 61/508,584, 2011년 10월 21일자 제출된 U.S. 특허가출원 번호 61/550,257, 그리고 2012년 4월 20일자 제출된 U.S. 특허가출원 번호 61/636,588에 우선권을 주장한다. 이들 선행 출원은 본원에 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
발명의 분야
본 발명은 진행성다병소성백질뇌증 (progressive multifocal leukoencephalopathy, PML)이 발병하는 환자의 위험을 판단하는 방법에 관계한다.
발명의 배경
항-VLA-4 (Very Late Antigen 4) 항체 치료적 나탈리주맙은 다발성 경화증 (MS) 및 중등도-내지-중증도 크론병의 재발성 형태를 치료하는데 처방된다. 나탈리주맙 치료는 하지만, JC 바이러스 (JCV)에 의해 유발되는 기회적 뇌 감염인 진행성다병소성백질뇌증 (PML)의 증가된 위험과 연관된다. PML은 주로, 면역약화된 개체에서 및 나탈리주맙을 비롯한 일정한 면역조절성 요법을 받는 환자에서 발생한다. PML은 숙주와 바이러스 인자 사이에 복잡한 상호작용의 결과이고, 중추신경계에서 희돌기교세포를 감염시킬 수 있는 신경영양성 형태로, 잠복 원형 JCV의 재활성화 성숙을 유발하는 것으로 가정된다.
발명의 요약
본 발명은 특히, 생물학적 유체, 예를 들면, 혈청 또는 혈장에서 JCV 항체의 존재를 검출하기 위한 최적화되고 분석적으로 검증된 민감한 검정법, 그리고 환자를 평가하고 및/또는 치료하는 방법을 비롯한 다양한 다른 방법에 관계한다.
따라서 한 양상에서, 본 발명은 시료 내에서 항-JCV 항체의 수준을 평가하는 방법으로 특징된다. 상기 방법은 하기 단계 중에서 하나 또는 그 이상 또는 모두를 포함한다:
(a) 일차 분량의 시료 및 HPVLP (고도 정제된 바이러스-유사 입자, 예를 들면, 고도 정제된 VP1 입자)가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질을 포함하는 일차 반응 혼합물을 형성하고;
(b) 예로써, 상기 기질에 결합된 항-JCV 항체에 결합된 표지된 검출 시약, 예를 들면, 효소 표지된 항-IgG 항체를 검출함으로써, HPVLP가 배치되는 상기 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질에 결합된 항-JCV 항체의 수준을 검출하고; 따라서 시료 내에서 항-JCV 항체의 수준을 평가하고 (본원에서 논의된 바와 같이, 상기 방법은 항-JCV 항체의 수준을 지시하는 값을 분류하거나, 또는 이를 시료에 배정하는 것을 포함할 수 있고, 상기 값은 때때로, 본원에서 지수 값으로 지칭된다. 이러한 값은 시료 또는 환자를 평가하고, 그리고 구체예에서, 상기 방법의 추가 단계, 예를 들면, 하기 단계 (c)를 진행할 지의 여부를 결정하는데 이용될 수 있다); 그리고
(c) 이차 분량의 시료 및 용해-상 HPVLP을 내포하는 이차 반응 혼합물을 형성하고, 그리고 예로써, HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질과 결합할 수 있는 항-JCV 항체를 검출함으로써 상기 이차 반응 혼합물 내에 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준을 검출하고 (본원에서 논의된 바와 같이, 상기 방법은 용해-상 HPVLP와 함께 배양이 이차 반응 혼합물 내에서 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준을 감소시키는 정도를 지시하는 값을 분류하거나, 또는 이를 시료에 배정하는 것을 포함할 수 있고, 상기 값은 때때로, 본원에서 저해, 저해 % 등으로 지칭된다. 이러한 값은 시료 또는 환자를 평가하는데 이용될 수 있다), 따라서 시료 내에서 항-JCV 항체의 수준을 평가한다.
한 구체예에서, 상기 방법은 하기를 더욱 포함한다:
(d) 시료 내에 항-JCV 항체가 HPVLP 또는 기타 항원에 의해 결합되지 않는 조건 하에 삼차 분량을 내포하는 삼차 반응 혼합물을 형성하고, 그리고 예로써, HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질과 결합할 수 있는 항-JCV 항체를 검출함으로써 삼차 반응 혼합물 내에서 항-JCV 항체의 수준을 검출한다. 이러한 저해 또는 저해 %는 용해-상 HPVLP과 함께 배양 (단계 (c))이 단계 (d)에서 결과와 비교하여, 결합되지 않은 항-JCV 항체의 양을 감소시키는 정도의 함수로서 계산될 수 있다.
한 구체예에서, 상기 방법은 단계 (a)와 (b), 그리고 선택적으로, 결과를 다른 실체, 예를 들면, 의료인에게 제공하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 방법은 단계 (a), (b)와 (c), 그리고 선택적으로, 결과를 다른 실체, 예를 들면, 의료인에게 제공하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 방법은 단계 (a), (b), (c)와 (d), 그리고 선택적으로, 결과를 다른 실체, 예를 들면, 의료인에게 제공하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 방법은 단계 (c), 그리고 선택적으로, 결과를 다른 실체, 예를 들면, 의료인에게 제공하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 방법은 단계 (c)와 (d), 그리고 선택적으로, 결과를 다른 실체, 예를 들면, 의료인에게 제공하는 것을 포함한다.
본원에서 설명된 방법은 향상된 성과를 가능하게 하는 시약의 최적화된 수준과 양을 이용한다. 따라서 한 구체예에서, 일차 반응 혼합물의 경우에, 20 ngs 내지 60 ngs, 30 ngs 내지 50 ngs, 20 ngs 내지 40 ngs, 35 ngs 내지 45 ngs의 HPVLP가 상기 기질 상에 배치된다. 한 구체예에서, 약 20 ngs, 30 ngs, 40 ngs, 50 ngs 또는 60 ngs의 HPVLP가 상기 기질 상에 배치된다. 전형적으로, 다중-기질 장치, 예를 들면, 다중-웰 평판, 예를 들면, 폴리스티렌 다중-웰 평판은 복수의 기질 각각에서 본원에서 명기된 HPVLP의 양을 가질 것이다. 전형적인 기질은 다중-웰 평판 상에서 웰의 내부이다.
본원에서 설명된 방법은 향상된 성과를 가능하게 하는 최적화된 비율의 시약과 시료를 이용한다. 한 구체예에서, 일차 반응에서 기질 상에 배치된 HPVLP의 ngs에 대한 시료 (이것은 희석되지 않은 시료, 또는 희석액에서 시료의 양을 지칭하고, 따라서 1 μl :100 μl 희석액의 100 μl는 1 μl의 시료일 것이다), 예를 들면, 혈청 또는 혈장의 μl의 비율은 1: 100 내지 1:20; 1:80 내지 1:30; 1:60 내지 1:20; 1:20 내지 1: 60; 1:30 내지 1:50이다. 한 구체예에서, 기질 상에 배치된 HPVLP의 ngs에 대한 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장의 μl의 비율은 약: 1:30, 1:40, 또는 1:50이다. 한 구체예에서, 기질 상에 배치된 HPVLP의 ngs에 대한 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장의 μl의 비율은 약 (0.08 내지 1.2): 30, (0.08 내지 1.2): 40, 또는 (0.08 내지 1.2): 50이다.
한 구체예에서, 일차 반응을 위한 시료, 예를 들면, 혈청은 예로써, HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질과의 접촉에 앞서, 완충액에서 예로써, 약 100-배 희석된다. 한 구체예에서, 검출은 효소 표지된 항체, 예를 들면, 효소 표지된 IgG, 예를 들면, HRP (양고추냉이 과산화효소) 표지된 IgG로 수행된다. 다른 구체예에서, 검출 시약, 예를 들면, HRP 표지된 IgG는 적어도 0.01 μg/mL, 0.02 μg/mL, 0.03 μg/mL, 0.04 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.06 μg/mL, 또는 0.08 μg/ml의 농도로 첨가된다. 한 구체예에서, 검출 시약은 기질에 결합된 항체에 비하여 10x 내지 100x 과잉으로 제공된다. 한 구체예에서, 검출 시약은 기질에 결합된 항체와 비교하여, 10x, 20x, 50x, 75x 또는 100x 과잉에 동등하거나 또는 그 이상을 제공하는 양으로 제공된다.
한 구체예에서, (c)에서 용해-상 HPVLP는 이차 반응 혼합물 또는 시료 내에서 항-JCV 항체에 비하여 2x 내지 100x 과잉 입자로 존재한다. 한 구체예에서, 이차 반응 혼합물 또는 시료 내에서 항-JCV 항체에 비하여 입자의 과잉은 2x, 4x, 5x, 10x, 15x, 20x, 40x, 50x, 70x, 80x, 100x 또는 110x에 동등하거나 이보다 크다.
한 구체예에서, 이차 반응 혼합물의 경우에, 20 ngs 내지 60 ngs, 30 ngs 내지 50 ngs, 20 ngs 내지 40 ngs, 35 ngs 내지 45 ngs의 HPVLP가 상기 기질 상에 배치된다. 한 구체예에서, 약 20 ngs, 30 ngs, 40 ngs, 50 ngs 또는 60 ngs의 HPVLP가 상기 기질 상에 배치된다. 전형적으로, 다중-기질 장치, 예를 들면, 다중-웰 평판, 예를 들면, 폴리스티렌 다중-웰 평판은 복수의 기질 각각에서 본원에서 명시된 HPVLP의 양을 가질 것이다. 전형적인 기질은 다중-웰 평판 상에서 웰의 내부이다.
한 구체예에서, 이차 반응 혼합물의 경우에, 시료는 용해-상 HPVLP와 접촉되고, 그 다음 결합되지 않은 항-JVC 항체는 기질 상에 배치되는 HPVLP에 결합하도록 허용된다. 한 구체예에서, 이차 반응 혼합물의 경우에, 시료는 용해-상 HPVLP 및 기질 상에 배치되는 HPVLP와 동시 접촉한다.
한 구체예에서, 기질 상에 배치된 HPVLP의 ngs에 대한 시료 (이것은 희석되지 않은 시료, 또는 희석액에서 시료의 양을 지칭하고, 따라서 1 μl :100 μl 희석액의 100 μl는 1 μl의 시료일 것이다), 예를 들면, 혈청 또는 혈장의 μl의 비율은 1: 100 내지 1:20; 1:80 내지 1:30; 1:60 내지 1:20; 1:20 내지 1: 60; 1:30 내지 1:50이다. 한 구체예에서, 기질 상에 배치된 HPVLP의 ngs에 대한 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장의 μl의 비율은 약: 1:30, 1:40, 또는 1:50이다. 한 구체예에서, 기질 상에 배치된 HPVLP의 ngs에 대한 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장의 μl의 비율은 약 (0.08 내지 1.2): 30, (0.08 내지 1.2): 40, 또는 (0.08 내지 1.2): 50이다.
한 구체예에서, 시료, 예를 들면, 혈청은 예로써, HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질과의 접촉에 앞서, 완충액에서 예로써, 약 100-배 희석된다. 한 구체예에서, 검출은 효소 표지된 항체, 예를 들면, 효소 표지된 IgG, 예를 들면, HRP 표지된 IgG로 수행된다. 다른 구체예에서, 검출 시약, 예를 들면, HRP 표지된 IgG는 적어도 0.01 μg/mL, 0.02 μg/mL, 0.03 μg/mL, 0.04 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.06 μg/mL, 또는 0.08 μg/ml의 농도로 첨가된다. 한 구체예에서, 검출 시약은 기질에 결합된 항체에 비하여 10x 내지 100x 과잉으로 제공된다. 한 구체예에서, 검출 시약은 기질에 결합된 항체와 비교하여, 10x, 20x, 50x, 75x 또는 100x 과잉에 동등하거나 또는 그 이상을 제공하는 양으로 제공된다.
한 구체예에서, 단계 (b)에서 항-JCV 항체의 검출된 수준에 응하여, 단계 (c) 및/또는 (d)가 수행된다.
한 구체예에서, 단계 (b)에서 항-JCV 항체의 검출된 수준에 응하여, 예로써 지수 수준 (nOD)은 >0.2 및 <0.4이고, 그 다음 단계 (c)와 (d)가 수행된다.
한 구체예에서, 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장은 상기 이차 반응 혼합물을 형성하기에 앞서, 예로써 완충액에서 약 50, 100, 또는 150 배에 동등하거나 이보다 큰 양으로 희석된다. 다른 구체예에서, 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장은 상기 삼차 반응 혼합물을 형성하기에 앞서, 예로써 완충액에서 약 50-배, 100-배, 또는 150-배에 동등하거나 이보다 큰 양으로 희석된다. 다른 구체예에서, 이차와 삼차 반응 혼합물 중에서 한쪽 또는 양쪽의 검출은 효소 표지된 항체, 예를 들면, 효소 표지된 IgG, 예를 들면, HRP 표지된 IgG로 달성된다.
이차와 삼차 반응 혼합물 중에서 한쪽 또는 양쪽의 검출은 적어도 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 또는 0.08 μg/ml의 농도로 첨가된 HRP 표지된 IgG로 달성될 수 있다. 한 구체예에서, 검출 시약은 기질에 결합된 항체와 비교하여, 10x 내지 100x (가령, 10x, 20x, 50x, 75x 또는 100x) 과잉으로 제공된다.
한 구체예에서, 시료 내에서 항-JCV 항체의 수준을 평가하는 것은 예로써, 약 1의 지수 (가령, 1의 흡광도, 여기서 양성 대조는 1.3의 흡광도를 갖고, 그리고 음성 대조는 0.1의 흡광도를 갖는다) 및 15x 내지 20x에 동등하거나 이보다 큰 (가령, 16x, 17x, 18x, 또는 19x에 동등하거나 이보다 큰) 신호-대-잡음 비율을 갖는 표준, 예를 들면, 컷오프 구경 측정기를 단계 b에서 평가하는 것을 더욱 포함한다. 다른 구체예는 예로써, 약 1.3의 스코어를 갖는 표준, 예를 들면, 양성 대조를 단계 b에서 평가하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 방법은 예로써, 약 0.1의 스코어를 갖는 표준, 예를 들면, 음성 대조를 단계 b에서 평가하는 것을 더욱 포함한다.
한 구체예에서, 상기 방법은 상기 용해 상 HPVLP 입자에 결합이 상기 일차 분량 내에 HPVLP 입자가 배치되는 기질에 결합과 비교하여, HPVLP 입자가 배치되는 기질에 결합을 저해하거나 감소시키는 양을 결정하는 것을 포함한다. 2-단계 검정의 일차 단계 (상기 단계 (a)와 (b))의 결과는 전형적으로, 정규화된 OD (nOD, 또는 "지수") 값으로서 표시된다. 2-단계 검정의 이차 단계 (상기 단계 (c) 및 선택적으로 (d))의 결과는 전형적으로, "저해 퍼센트"로서 표시된다. 한 구체예에서, nOD는 OD450이다. 한 구체예에서, 상기 저해는 미리 결정된 값, 예를 들면, 45 %보다 작거나 이에 동등하고, 그리고 상기 시료는 음성으로 분류된다.
한 구체예에서, 상기 저해는 미리 결정된 값, 예를 들면, 45 %보다 크고, 그리고 상기 시료는 양성으로 분류된다.
한 구체예에서, 컷-오프 구경 측정기 (CO)는 약 1.0의 반응성 지수 (nOD)를 갖도록 조정되고, 그리고 양성 대조 (PC)는 약 1.3의 반응성 지수를 갖도록 조정된다. CO와 PC 용액은 JCV 항체에 대한 양성 혈청을 JCV 항체에 대해 음성인 혈청과 혼합함으로써 만들어진다. 예로써, 항-JCV 항체-음성 혈청의 병 (bottle)일 수 있는 음성 대조 (NC)의 경우에, 지수 (nOD) 목표는 약 0.1이다.
한 구체예에서, JCV 항원은 본 발명에서 특징되는 검정에서 이용에 앞서, 크로마토그래피에 의해 정제되는 VLP 입자, 예를 들면, HPVLP이다.
일정한 구체예에서, 시료는 혈청 시료, 소변 시료, 혈장 시료, 혈액 시료 또는 뇌척수액 (CSF) 시료이다. 한 구체예에서, 시료는 시료의 일차 분량 및 HPVLP가 배치되는 기질을 포함하는 일차 반응 혼합물을 형성하기에 앞서, 1:101 희석된 혈청 시료이다.
다른 구체예에서, 이차 검출 시약 (가령, 항-인간 IgG)은 검출가능한 작용제, 예를 들면, 과산화효소, 예를 들면, HRP에 접합된다. 한 구체예에서, 이차 검출 시약은 항-인간 IgG일 수 있고, 여기서 항-인간 IgG는 HRP에 접합된다. 다른 구체예에서, IgG-HRP를 내포하는 검출 시약 용액은 0.04 μg/mL에서 이용된다. 가령, IgG-HRP의 0.8 mg/mL 저장 용액은 HPVLP에 결합된 항-JCV 항체의 수준을 검출하기 위한 검정에서 이용에 앞서, 1:15,000, 1:20,000, 1:30000 또는 그 이상 희석된다. 다른 구체예에서, 이차 검출 시약의 농도는 새로운 로트가 신호를 이전 로트에 조화시키기 위해 조정되고, 그리고 접합체와 함께 배양은 단지 30분이다. 한 구체예에서, 완충액에서 TMB (테트라메틸벤지딘)와 과산화수소는 항-JCV 항체에 결합된 HRP IgG 혼합물을 내포하는 반응 혼합물과 함께, 20분 ± 2분 동안 배양된다.
한 구체예에서, 전배양되지 않은 시료와 비교하여 이차 검정 시료에서 검출된 수준의 감소는 시료가 항-JCV 항체에 대해 양성이라는 것을 지시하고, 그리고 명시된 백분율 미만에서 검출된 수준의 변화는 시료 내에 JCV-특이적 항체가 존재하지 않는다는 것을 지시한다.
한 구체예에서, 시료는 일차 분량의 시료 및 HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질을 포함하는 일차 반응 혼합물의 형성, 그리고 HPVLP가 배치되는 상기 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질에 결합된 항-JCV 항체의 수준 검출인 검정의 일차 단계 후, 지수 값 (즉, nOD 값) >0.2 및 <0.4 ("불확정 구역")을 갖는 것으로 결정된다.
시료의 이차 분량은 이후, 이차 혼합물을 HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질과 접촉시킴으로써 결합되지 않은 항-JCV 항체를 이차 혼합물 내에서 검출하기에 앞서, 이차 분량과 용해-상 HPVLP 사이에 이차 혼합물의 형성을 포함하는 검정의 이차 단계에서 조사될 수 있다.
다른 구체예에서, 시료가 검정의 일차 단계 후 지수 값 <0.2를 갖는 것으로 결정되면, 상기 시료는 항-JCV 항체 음성인 것으로 결정된다. 한 구체예에서, 항-JCV 항체 음성인 것으로 결정된 시료는 검정의 이차 단계를 이용하여 평가되지 않는다.
다른 구체예에서, 시료가 검정의 일차 단계 후 지수 값 > 0.4를 갖는 것으로 결정되면, 상기 시료는 항-JCV 항체 양성인 것으로 결정된다. 한 구체예에서, 항-JCV 항체 양성인 것으로 결정된 시료는 검정의 이차 단계를 이용하여 평가되지 않는다.
한 구체예에서, 본 발명은 개체로부터 생물학적 시료 (가령, 혈장, 혈청, 혈액, 소변, 또는 뇌척수액 (CSF))을 획득하고; 그리고 기준이 3%보다 크지 않은 가음성률 및 다른 폴리오마 바이러스, 예를 들면, BK 바이러스 (BKV)에 최소 교차 반응성을 나타내게 선택되도록, 검출된 수준을 기준과 상관시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 대조 시료 또는 일단의 시료로부터 도출된 기준은 개체로부터 시료와 함께 가공 처리된다. 일부 구체예에서, 기준은 검정의 가음성률이 1%보다 크지 않도록 선택된다. 검정은 HPVLP가 고형 기질, 예를 들면, 마이크로역가 평판 또는 슬라이드 상에 배치되도록 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, HPVLP는 VP1 바이러스 단백질로 본질적으로 구성된다. HPVLP는 다른 바이러스 단백질, 예를 들면, VP2, 또는 VP3 중에서 적어도 하나를 더욱 포함할 수 있다. HPVLP에서 바이러스 단백질(들)은 재조합 방식 (가령, MAD1 VP1)으로 유래되거나 또는 자연 발생 바이러스 단백질 (가령, 자연 발생 공급원으로부터 유래됨)일 수 있다. 상기 방법은 예로써, 현재 면역조절성 약물로 치료를 받고 있는 개체, 면역조절성 약물로 치료를 시작하는 것을 고려하고 있는 개체, 또는 진행성다병소성백질뇌증 (PML)을 앓는 것으로 의심되는 개체로부터 획득된 생물학적 시료를 이용하여 수행될 수 있다.
다른 양상에서, 본 발명은 HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질을 내포하는 키트로 특징된다. 기질은 다중웰 평판, 예를 들면, 96 웰 평판을 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 키트는 하기 중에서 하나 또는 그 이상 또는 모두를 포함한다: 기질, 예를 들면, HPVLP와 같은 JCV 항원 기질로 코팅된 웰을 갖는 평판; 냉동 건조되거나 용해 상태에서 JCV 항원, 예를 들면, HPVLP; JCV 컷-오프 구경 측정기, 항-JCV 항체 양성 대조 및 JCV 음성 대조, 이들은 혈청, 예를 들면, 인간 혈청의 시료이다. 한 구체예에서, 키트는 항원에 결합된 항-JCV 항체를 내포하는 복합체를 검출하기 위한 하나 또는 그 이상의 시약을 포함하거나 더욱 포함하고, 그리고 이들 시약에는 예로써, JCV 접합체, 카제인 시료, 검출가능한 시약, 예를 들면, TMB (테트라메틸벤지딘), 세척 완충액, 그리고 중단 시약이 포함된다.
다른 양상에서, 본 발명은 HPVLP가 배치되는 기질, 예를 들면, 높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질로 특징된다.
다른 양상에서, 본 발명은 HPVLP, 그리고 시료, 예를 들면, 생물학적 시료에서 항-JCV 항체 수준을 확인하기 위한 검정을 수행하기 위한 적어도 하나의 시약을 포함하는 키트로 특징된다.
다른 양상에서, 본 발명은 VP1 펜타머 (캡소미어)보다 크기가 큰 VP1-내포 입자로 본질적으로 구성되는, 예를 들면, 약 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 또는 72 펜타머를 내포하거나 또는 약 360 VP1 분자를 내포하는 HPVLP 입자를 포함하는 용액에 관계한다.
본 발명의 다른 양상은 HPVLP의 용액을 제조하는 방법인데, 상기 방법은 VP1-내포 입자를 VP1 펜타머 또는 그 이하의 크기인 용액으로부터 제거하는 것을 포함한다.
본원에서 개시된 방법은 적어도 부분적으로, 항-JCV 항체 역가 및 기타 특징, 예를 들면, 친화성/친화력이 진행성다병소성백질뇌증 (PML)이 발병하는 환자의 위험의 인디케이터일 수 있다는 발견에 기초된다.
따라서 다른 양상에서, 본 발명은 PML이 발병하는 환자의 위험을 평가하는 방법으로 특징되고, 상기 방법은 환자의 시료에서 JC 바이러스 (JCV) 항체 역가 (가령, 본원에서 설명된 바와 같이 결정되고 정규화된 흡광도 (nOD) 또는 지수로서 표시됨) 또는 친화성/친화력 (가령, 본원에서 설명된 바와 같이 결정되고 검정의 확증 단계에서 저해 퍼센트로서 표시됨)에 관한 지식을 획득하고, 그리고 선택적으로, 획득된 값 또는 값들을 본원에서 개시된 기준과 비교하여 위험을 평가하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트는 환자로부터 생물학적 시료, 예를 들면, 혈액 (혈청 또는 혈장), 또는 CSF 시료에서 결정된다. 역가 및/또는 저해 퍼센트, 또는 양쪽 값의 함수가 미리 결정된 수준 미만인 것으로 결정되면, 환자는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 역가 및/또는 저해 퍼센트, 또는 양쪽 값의 함수가 미리 결정된 수준 또는 미리 결정된 수준 초과인 것으로 결정되면 환자는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다.
상기 방법은 환자의 시료에서 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 결정하는 것이 환자의 신체로부터 생물학적 시료를 떼어내거나 또는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 요구하거나, 또는 환자가 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되면, 요법, 예를 들면, 면역억제제 요법이 환자에 투여되는 것을 더욱 제공할 수 있다.
한 구체예에서, 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트는 환자로부터 하나 이상의 생물학적 시료, 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 혈액 (혈청 또는 혈장), 또는 CSF 시료에서 결정된다.
한 구체예에서, 개체는 다발성 경화증을 앓는다, 예를 들면, 항-VLA-4 항체, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료를 이전에 받았던 다발성 경화증 환자이다.
한 구체예에서, 환자는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 항-VLA-4 항체, 예를 들면, 나탈리주맙, 또는 이의 단편 (가령, 이의 항원-결합 단편)이 더욱 투여된다.
한 구체예에서, 환자는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 대안 요법을 받아야 하는 사람으로서 확인된다, 예를 들면, 환자는 항-VLA-4 항체 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 받는 것을 중단하고, 그리고, 예로써 대안 요법, 예를 들면, 대안적으로 승인된 다발성 경화증 (MS) 요법, 예를 들면, Avonex®를 받아야 한다. 다른 구체예에서, 환자는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 항체 요법, 예를 들면, 나탈리주맙이 투여된다.
한 구체예에서, 환자는 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트에 기초하여 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 PML이 발병하는 위험을 결정하기 위한 추가의 검사를 받아야 하는 사람으로서 확인된다.
한 구체예에서, 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70% 또는 60%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면, PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정된다. 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 >0.5 및 <1.5인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, PML의 중간 위험을 갖는 것으로 결정된다. 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면, PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정된다. 항-JCV 항체의 저해 퍼센트는 예로써, (i) 시료 내에 항-JCV 항체의 HPVLP에 대한 결합에 적합한 조건 하에, 개체로부터 생물학적 시료를 용액 내에서 HPVLP와 접촉시키고; (ii) HPVLP에 결합된 JCV 항체를 용액으로부터 분리하여 이차 시료를 산출하고; (iii) 이차 시료를 (i)에서와 동일한 조건 하에 HPVLP와 접촉시키고; 그리고 (iv) HPVLP에 대한 항-JCV 항체 결합의 수준을 이차 시료 내에서 검출함으로써 측정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-JCV 항체 역가는 예로써, (i) 시료 내에 항-JCV 항체의 HPVLP에 대한 결합에 적합한 조건 하에, 생물학적 시료를 HPVLP와 접촉시키고; (ii) HPVLP에 대한 시료 내에 항-JCV 항체 결합의 수준을 검출하고; 그리고 (iii) 검출된 수준을 기준 세트와 상관시킴으로써 측정될 수 있다. 기준 세트는 미리 결정된 양, 예를 들면, 3%보다 크지 않은 가음성률을 지시하도록 선택될 수 있다. 다른 구체예에서, 항-JCV 항체 역가는 상업적 플랫폼, 예를 들면, VIDAS® 검정 (bioM
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rieux), 또는 다른 대안적 플랫폼, 예를 들면, 용해-상 방법 또는 측면 유동 방법에 의해 측정된다.
한 구체예에서, 검정은 생물학적 시료가 JCV 항체를 내포하지 않는다는 것을 지시하고, 그리고 상기 검정은 하기를 더욱 포함한다: (iv) 단계 (i)에 앞서, 개체로부터 생물학적 시료의 일부를 용액 내에서 HPVLP와 접촉시키고, 그리고 여기서 단계 (i)의 HPVLP는 고형 기질에 부착되고, 따라서 이차 시료를 제공하고; (v) 이차 시료를 (i)에서와 동일한 조건 하에 HPVLP와 접촉시키고; (vi) HPVLP에 대한 항-JCV 항체 결합의 수준을 이차 시료 내에서 검출하고; 그리고 (vii) 이차 시료 내에서 항-JCV 항체의 검출된 수준을 HPVLP가 없는 용액과 함께 배양될 때 생물학적 시료 내에서 결합의 수준과 비교한다. 용액-배양된 시료와 비교하여 HPVLP와 함께 전-배양된 시료 내에서 검출된 수준에서 감소는 상기 시료가 항-JCV 항체에 대해 양성이라는 것을 지시하고, 그리고 검출된 수준에서 변화 없음은 시료 내에 항-JCV 항체가 존재하지 않는다는 것을 지시한다. 용액-배양된 시료와 비교하여, HPVLP와 함께 전-배양된 시료 내에 검출된 수준에서 감소는 시료가 항-JCV 항체에 대해 양성이라는 것을 지시하고, 그리고 검출된 수준에서 변화 없음은 항-JCV 항체가 시료 내에 배경 수준 초과하여 존재하지 않는다는 것을 지시한다.
한 구체예에서, 검정은 생물학적 시료가 JCV 항체를 내포한다는 것을 지시하고, 그리고 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다.
또 다른 구체예에서, 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면, PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정된다. 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 3인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면, PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정된다.
한 구체예에서, 단지 지수 값 (nOD) 또는 단지 저해 퍼센트가 PML의 위험을 결정하는데 이용된다. 가령, 한 구체예에서, 환자는 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정되고, 환자는 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 <1.5인 것으로 결정되면, 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정되고, 또는 환자는 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 1.5인 것으로 결정되면, 훨씬 높은 위험을 갖는 것으로 결정된다.
한 구체예에서, 검정은 생물학적 시료가 배경 수준 초과의 JCV 항체를 내포하지 않는다는 것을 지시하고, 그리고 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다.
다른 양상에서, 본 발명은 검정 절차를 평가하거나 또는 검사하기 위한 방법으로 특징된다. 항-JCV 항체 검정은 미리 결정된 간격에서, 예를 들면, 6개월 마다 또는 1년 마다 효과가 재평가될 수 있다. 한 예시적인 효율 검정에서, 시료, 예를 들면, 30, 40 또는 50개 혈청 시료 및 30, 40, 또는 50개 혈장 시료의 수집은 예로써, 현재의 최적화된 방법 및 기존의 산출 방법에 의한 평가를 위해 제공된다. 결과 간에 일치가 판단되고, 그리고 일치가 예로써, 90% 또는 95% 이상인 것으로 밝혀지면, 검정의 성과는 받아들여지는 것으로 결정될 수 있다. 한 구체예에서, 공지된 항-JCV 항체 상태를 갖는 시료, 예를 들면, 90, 100, 150개 또는 그 이상의 시료를 내포하는 패널이 시간의 흐름에서 검정 성과의 일관성을 판단하는데 이용된다. 결과 간에 일치가 판단되고, 그리고 일치가 예로써, 90% 또는 95% 이상인 것으로 밝혀지면, 검정의 성과는 받아들여지는 것으로 결정될 수 있다. 시료의 패널은 시료 은행을 창출하는데 충분한 부피로 가용한 환자 혈청이다
한 양상에서, 실체, 예를 들면, 의료인은 본원에서 설명된 항-JCV 항체 검정으로부터 발생하는 정보를 획득하고, 그리고 이러한 정보에 응하여, 본원에서 설명된 치료를 환자, 예를 들면, MS 환자에 투여한다.
다른 양상에서, 본원에서 설명된 JCV 검정이 환자에서 수행되고, 그리고 그 다음, 환자는 치료된다, 예를 들면, MS 환자는 검정의 결과에 기초하여 치료된다.
환자에서 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트는 규칙적인 간격에서, 예를 들면, 3개월 마다, 6개월 마다, 또는 12개월 마다 또는 더욱 긴 간격 또는 그 이상에서 빈번하게 재평가될 수 있다. 항체 역가 또는 저해 퍼센트에서 관찰된 증가는 PML이 발병하는 환자의 위험에서 증가를 지시할 수 있다. 가령, 항체 역가 (nOD 또는 지수)에서 2배 또는 3배의 증가는 PML의 증가된 위험을 지시할 수 있다. 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 받는 환자는 항-VLA-4 요법으로 치료를 중단하고, 그리고 선택적으로, 대안적 작용제, 예를 들면, 항-VLA-4 요법 이외의, 또는 나탈리주맙 이외의 면역억제제로 치료를 시작할 수 있다. 역가에서 증가는 낮은 기준선 역가를 갖는 환자에서보다 높은 기준선 역가 (가령, 역가의 범위 내에 더욱 좁은 범위에서)를 갖는 환자에서 상이하게 나타날 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 항체, 예를 들면, 나탈리주맙을 받는 환자는 항-JCV 항체 역가 및/또는 저해 퍼센트에 대해, 예로써 5, 6. 7. 8. 9. 10, 11, 12, 15, 20, 30, 40개월 마다 모니터링될 수 있다.
한 구체예에서, 환자는 혈장사혈을 받은 후 1 또는 2 또는 3주 이내에 JCV 항체의 존재에 대해, 또는 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트에 대해 재-평가되지 않는다. 다른 구체예에서, 환자는 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 치료를 받은 후 1 또는 2 또는 3주 이내에 JCV 항체의 존재에 대해, 또는 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트에 대해 재-평가되지 않는다.
항-JCV 항체 역가의 적도는 nOD 또는 지수 값에 관해서일 수 있다.
본원에서 설명된 바와 같은 환자의 평가는 항-VLA-4 요법의 투여에 앞서, 또는 환자가 항-VLA-4 요법을 시작한 이후 수행될 수 있다.
한 구체예에서, 환자는 예로써, 본원에서 설명된 검정에 의해 PML의 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법이 투여된다. 다른 구체예에서, 환자는 PML의 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 항-VLA-4 항체, 예를 들면, 나탈리주맙이 투여된다. 또 다른 구체예에서, 환자는 PML의 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법 이외의 요법, 예를 들면, 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드가 투여된다.
한 구체예에서, 환자는 PML에 대한 증가된 위험을 갖는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법을 받는 것을 중단한다.
환자는 항-JCV 항체 역가에서 감소 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트에서 감소에 대해, 규칙적인 간격에서, 예를 들면, 3개월 마다, 6개월 마다, 1년 마다, 또는 그 이상 또는 그 이하에서 빈번하게 모니터링될 수 있다. 항-JCV 항체 역가에서 감소 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트에서 감소는 환자가 PML이 발병하는 낮아진 위험을 갖는다는 것을 지시할 수 있다.
한 구체예에서, 항-JCV 항체 역가 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트는 미리 결정된 수준 미만으로 감소되는 것으로 결정되고, 심지어 상승된 이후에도, 환자는 항-VLA-4 요법이 투여되거나, 또는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다. 환자가 항-VLA-4를 이전에 받았던 적이 있으면, 환자의 항-VLA-4 요법은 재개될 수 있다. 항-VLA-4 요법을 재개한 후, 환자는 항체 역가에서 감소 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트에서 감소에 대해 6개월 마다 또는 1년 마다 평가될 수 있다.
한 구체예에서, 환자가 PML의 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된 후, 예를 들면, 환자가 >0.5, 예를 들면, >1.0 또는 >1.5의 nOD에 의한 측정에서 항-JCV 항체 역가를 갖는 것으로 결정된 후, 환자는 JCV 상태에 대해 다시 검사되지 않는다. 가령, 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료를 중단할 수 있고, 그리고 항-JCV 항체 상태에 대해 다시 검사되지 않는다.
한 구체예에서, 예로써 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 결정하기 위한, 본원에서 설명된 바와 같은 환자를 평가하는 방법은 위험 예측 변수의 다른 적도를 판단하는 것을 더욱 포함할 수 있다. 가령, 환자를 평가하는 방법은 하기를 더욱 포함할 수 있다: (a) 환자가 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료 (가령, 24개월 이상)을 받았는지를 결정하고; 또는 (b) 환자가 명시된 비-항-VLA-4 면역억제제 요법 (가령, 지난 2, 3, 5년 동안 또는 심지어 환자의 일생 동안)을 받았는지를 결정한다. 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖지만 명시된 사전 면역억제제 이용이 없고 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 받은 적이 없는 환자에 대한 PML의 상대적 위험은 미리 결정된 수준 미만의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 또는 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작고, 이것은 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 및 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작다.
한 구체예에서, 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 이전에 받았고, 그리고 다른 구체예에서, 환자는 평가, 예를 들면, 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트의 평가에 기초하여 항-VLA-4 요법이 투여된다. 가령, 평가의 결과로서, 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류될 수 있다. 한 구체예에서, 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류된 환자는 요법이 더욱 투여된다.
일부 구체예에서, 계층화 모델에 포함되는 인자는 환자의 연령 또는 성별이다.
본원에서 설명된 방법은 하나 또는 그 이상의 인자를 환자의 평가에 통합할 수 있다. 따라서 다른 양상에서, 본 발명은 환자를 예로써, 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보로서 평가하는 방법으로 특징된다. 상기 방법은 예로써, 본원에서 설명된 방법에 의해, 예로써 환자로부터 생물학적 시료 내에서 JC 바이러스 (JCV) 항체 역가 및 저해 퍼센트를 획득하거나 결정하는 것을 포함한다. 항체 역가 또는 저해 퍼센트가 미리 결정된 수준 미만인 것으로 결정되면, 환자는 일차 범주의 요법, 예를 들면, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료에 적합한 것으로 분류될 수 있다. 항체 역가 또는 저해 퍼센트가 미리 결정된 수준 또는 미리 결정된 수준 초과인 것으로 결정되면, 환자는 이차 범주의 요법, 예를 들면, 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드에 적합한 것으로 분류된다. 환자의 시료 내에서 항-JCV 항체 역가 및 저해 퍼센트를 획득하는 것은 환자의 신체로부터 생물학적 시료를 떼어내거나 또는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 포함할 수 있다. 평가 방법은 또한, 예로써 일차 범주 (가령, 나탈리주맙) 또는 이차 범주 (가령, 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드)로부터 요법을 환자에 투여하는 것을 포함할 수 있다.
또 다른 구체예에서, 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면, PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정된다. 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 1.5인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면, PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정된다. 환자는 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 1.5인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, PML의 중간 위험을 갖는 것으로 결정된다.
앞서 논의된 바와 같이, 환자를 평가하는 방법은 하나 이상의 요인 또는 인자를 통합할 수 있다. 따라서 환자를 평가하는 방법은 하기를 더욱 포함할 수 있다:
(aa) 환자가 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료 (가령, 24개월 이상)을 받았는지를 결정하고, 그리고 구체예에서, 사전 항-VLA-4 요법 노출 분류를 제공하고; 또는
(bb) 환자가 명시된 비-항-VLA-4 면역억제제 요법 (가령, 지난 2, 3, 5년 동안 또는 심지어 환자의 일생 동안)을 받았는지를 결정하고, 그리고 구체예에서, 사전 면역억제성 노출 분류를 제공한다.
전형적으로, 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖지만 명시된 사전 면역억제제 이용이 없고 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 받은 적이 없는 환자는 미리 결정된 수준 미만의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 또는 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 PML이 발병하는 더욱 작은 위험을 갖는 것으로 분류되고, 이것은 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 및 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작다.
한 구체예에서, 환자는 항-VLA-4 요법을 이전에 받았다. 다른 구체예에서, 상기 방법은 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 환자에 투여하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법이 더욱 투여된다.
항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 동안 받았고, 면역억제제 요법 (항-VLA-4 요법 이외에)을 이전에 받았던 적이 없고, 그리고 JCV에 노출에 대해 음성 (가령, JCV 항체에 대해 음성)으로 검사되는 환자는 전형적으로, PML이 발병하는 가장 작은 위험을 갖는다. 역으로, 항-VLA-4 요법을 24개월 이상 동안 받았고, 면역억제제 요법 (항-VLA-4 요법 이외에)을 이전에 받았고, 그리고 JCV에 노출에 대해 양성 (가령, JCV 항체에 대해 양성)으로 검사되는 환자는 전형적으로, PML이 발병하는 가장 높은 위험을 갖는다.
PML에 대한 환자의 위험 수준은 확인된 위험 인자 중에서 1개, 또는 2개 또는 3개 모두를 평가함으로써 판단될 수 있다.
가령, 항-JCV 항체 역가에 대해 음성으로 검사된 환자, 예를 들면, 다발성 경화증 (MS)을 앓는 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 환자는 약 0.2/1000 환자 이하, 예를 들면, ≤0.11/1000의 위험을 가질 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 (가령, 23개월, 22개월, 20개월, 15개월, 12개월, 6개월, 1개월 또는 그 이하) 동안 받았고, 그리고 면역억제제 요법을 이전에 받았던 적이 없는 환자, 예를 들면, MS를 앓는 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 가령, 환자는 약 0.54/1000 환자의 PML 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 이상, 예를 들면, 약 25 내지 48개월 또는 그 이상 (가령, 26, 28, 30, 36, 40, 또는 48개월 또는 그 이상) 동안 받았고, 그리고 면역억제제 요법을 이전에 받지 않았던 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되거나, 또는 PML에 대한 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 분류될 수 있다. PML의 더욱 높은 위험에 처해 있는 환자는 ≥ 약 3.7/1000 환자, 예를 들면, 약 1.37/1000 환자의 위험을 가질 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 (가령, 24개월, 22개월, 20개월, 15개월, 12개월, 6개월, 1개월 또는 그 이하) 동안 받았고, 그리고 항-JCV 항체, 또는 JCV 핵산에 대해 음성인 것으로 결정되는 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되거나, 또는 PML에 대한 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 분류될 수 있다. 가령, 환자는 ≤0.2/1000 환자의 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 면역억제제 (항-VLA-4 요법 이외에)로 사전 치료를 받지 않았고, 그리고 JCV에 대해 음성인 것으로 결정되는 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험, 예를 들면, ≤0.2/1000 환자에 처해 있는 것으로 결정된다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 이상 (가령, 25개월, 26개월, 28개월, 30개월, 35개월, 38개월, 40개월, 48개월 또는 그 이상) 동안 받았고, 그리고 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제 요법을 이전에 받았던 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 환자는 약 0.37/1000 또는 그 이상, 예를 들면, 약 4.3/1000 환자의 위험을 가질 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다. 가령, 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는, PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 환자는 PML의 더욱 낮은 위험에 처해 있는 환자보다 PML의 발병에 대한 더욱 빈번한 모니터링을 받을 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 (가령, 24개월, 22개월, 20개월, 15개월, 12개월, 6개월, 1개월 또는 그 이하) 동안 받았고, 그리고 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제 요법을 이전에 받았던 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 가령, 환자는 0.66/1000 환자의 PML 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다. 가령, 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는, PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 환자는 PML의 더욱 낮은 위험에 처해 있는 환자보다 PML의 발병에 대한 더욱 빈번한 모니터링을 받을 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 이상 (가령, 25 내지 48개월, 예를 들면, 26, 30, 36, 42 또는 48개월 또는 그 이상) 동안 받았고, 그리고 JCV에 대해 양성인 것으로 결정되는 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 이상 (가령, 25 내지 48개월, 예를 들면, 26, 30, 36, 42 또는 48개월 또는 그 이상) 동안 받았고, 그리고 면역억제제 (항-VLA-4 요법 이외에)로 사전 치료를 받지 않았고, 그리고 JCV에 대해 양성인 것으로 결정되는 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. 가령, 환자는 4/1000 환자의 PML 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되고, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법 이외에 면역억제제로 사전 치료를 받았고, 그리고 항-JCV 항체, 또는 JCV 핵산에 대해 양성인 것으로 결정되는 환자, 예를 들면, MS 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제로 사전 치료를 받았고, 그리고 항-JCV 항체, 또는 JCV 핵산에 대해 양성인 것으로 결정되고, 그리고 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 이상 (가령, 25 내지 48개월, 예를 들면, 26, 30, 36, 42 또는 48개월 또는 그 이상) 동안 받았던 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. 가령, 환자는 9.8/1000 환자의 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 (가령, 24개월, 22개월, 20개월, 15개월, 12개월, 6개월, 1개월 또는 그 이하) 동안 받았고, 그리고 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제로 사전 치료를 받았고, 그리고 JCV에 대해 양성인 것으로 결정되는 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 가령, 환자는 4.5/1000 환자의 PML 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 (가령, 24개월, 22개월, 20개월, 15개월, 12개월, 6개월, 1개월 또는 그 이하) 동안 받았고, 그리고 면역억제제 (항-VLA-4 요법 이외에)로 사전 치료를 받지 않았고, 그리고 JCV에 대해 양성인 것으로 결정되는 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. 가령, 환자는 0.35/1000 환자의 PML 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 환자는 따라서, 항-VLA-4 요법으로 추가의 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정되거나, 또는 더욱 빈번한 모니터링을 동반하는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보인 것으로 결정될 수 있다.
PML이 발병하는 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정된 환자는 ≤ 약 0.54/1000 환자, 예를 들면, ≤ 0.25/1000, ≤ 0.2/1000, 0.19/1000, ≤ 0.15/1000, ≤ 0.11/1000, ≤ 0.1/1000, 예를 들면, 0.3/1000, 0.25/1000, 0.2/1000, 0.19/1000, 0.15/1000, 0.11/1000, 또는 0.1/1000 또는 그 이하의 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정된 환자는 약 0.54/1000 또는 그 이상, 예를 들면, 약 0.55/1000, 약 0.60/1000, 약 0.66/1000, 약 1.2/1000, 약 1.37/1000, 약 2.0/1000, 약 2.5/1000, 약 3.0/1000, 약 4.3/1000, 약 5.0/1000, 약 7.8/1000, 약 8.0/1000, 또는 그 이상의 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다. 가령, PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정된 환자는 0.3/1000, 0.35/1000, 0.5/1000, 0.66/1000, 1.2/1000, 1.37/1000, 2.0/1000, 2.5/1000, 3.0/1000, 4.3/1000, 5.0/1000, 7.8/1000, 8.0/1000 또는 그 이상의 위험을 갖는 것으로 결정될 수 있다.
한 구체예에서, 항-VLA-4 요법으로 사전 치료를 24개월 이상 동안 받았고, 그리고 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제로 사전 요법을 받지 않았고, 그리고 JCV 음성인 것으로 결정되는 환자는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있고, 그리고 이런 이유로, 적절한 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 추가의 치료를 받는 후보인 것으로 결정된다. 하지만, 항-VLA-4 요법을 24개월 이상 동안 받았기 때문에, 위험 판단은 유해한 증상, 예를 들면, PML의 발병을 지시할지도 모르는 증상의 발생에 대해 환자를 더욱 빈번하게 모니터링하라는 권고를 포함할 수 있다.
PML의 발병에 대한 환자의 증강된 모니터링은 JCV의 존재를 확인하기 위한 증가된 빈도의 검사, 예를 들면, 항-JCV 항체 검정 또는 핵산-기초된 검정에 의한 증가된 검사를 포함할 수 있다. 증강된 모니터링은 또한, PML에 기인한 뇌 병소를 확인하기 위한 MRI 스캔을 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 미리 선택된 규준 이하에서 항-JCV 항체를 갖는 환자는 검출되지 않는 수준의 항-JCV 항체를 갖는다.
한 구체예에서, 환자는 항-VLA-4 요법을 이전에 받았고, 그리고 다른 구체예에서, 환자 항-VLA-4 요법을 이전에 받지 않았다.
또 다른 구체예에서, 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되고, 그리고 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙이 환자에 투여된다.
한 구체예에서, 결정하는 것, 예를 들면, 환자가 JCV에 대해 음성인 지를 결정하는 것은 환자로부터 생물학적 시료를 제공하고 (가령, 획득하거나 받고), 그리고 JCV 항체를 시료 내에서 검출하기 위한 면역검정, 예를 들면, ELISA 검정을 수행하는 것을 필요로 한다. 다른 구체예에서, 결정, 예를 들면, 환자가 JCV에 대해 음성인 지를 결정하는 것은 환자로부터 생물학적 시료를 제공하고, 그리고 JCV 핵산을 시료 내에서 검출하기 위한 검정, 예를 들면, PCR-기초된 검정을 수행하는 것을 필요로 한다.
환자가 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되면, 환자는 항-VLA-4 요법이 더욱 투여될 수 있다. 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류된 환자는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험, 예를 들면, 약 0.2/1000 환자 이하, 예를 들면, 0.3/1000 환자, 또는 0.2/1000 환자 또는 0.19/1000 환자 또는 0.11/1000 환자의 위험을 갖는 것으로 결정된다. 가령, PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 환자는 ≤0.2/1000의 위험을 가질 수 있다.
항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되지 않거나, 또는 PML의 발병에 대한 증강된 모니터링을 필요로 하는 항-VLA-4 요법에 대한 후보인 것으로 결정된 환자는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험, 예를 들면, 약 0.3.7/1000 환자보다 크거나 이에 동등한 위험을 갖는 것으로 결정된다. 가령, PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정된 환자는 0.37/1000, 0.35/1000, 0.66/1000, 1.2/1000, 1.37/1000, 2.5/1000, 4.3/1000, 또는 7.8/1000 환자의 위험을 가질 수 있다.
한 구체예에서, 사전 면역억제성 노출 분류는 만약 선택되면, 하기 중에서 한 가지이다:
미리 선택된 기간 이내에, 예를 들면, 1, 3, 또는 5년 이내에, 또는 환자의 일생 동안, 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 받았음에 상응하는 양성 사전 면역억제성 노출 분류; 그리고
미리 선택된 기간 동안, 예를 들면, 1, 3, 또는 5년 이내에, 또는 환자의 일생 동안 비-항-VLA-4 면역억제제 요법이 없음에 상응하는 음성 사전 면역억제성 노출 분류.
한 구체예에서, 사전 VLA-4 요법 노출 분류는 만약 선택되면, 하기 중에서 한 가지이다:
미리 선택된 기간 이상, 예를 들면, 1, 2, 3, 또는 5년 또는 그 이상 동안, 항-VLA-4 요법을 받았음에 상응하는 양성 사전 VLA-4 요법 노출 분류; 그리고
미리 선택된 기간 이하, 예를 들면, 6개월, 1, 2, 3, 또는 5년 이하 동안 항-VLA-4 요법을 받았음에 상응하는 음성 사전 VLA-4 요법 노출 분류.
한 구체예에서, 상기 방법은 치료 적합성 분류를 제공하는 것을 포함하고, 이것은 예로써, 하기 중에서 선택될 수 있다:
항-VLA-4 치료에 대한 환자의 적합성과 상관되는 양성 치료 적합성 분류 (양성 치료 적합성 분류는 다양한 경고 또는 모니터링, 예를 들면, PML의 발병에 대한 증가된 모니터링에 대한 요구를 동반하는 양성 치료 적합성 분류로 더욱 세분될 수 있다); 그리고
항-VLA-4 치료에 대한 환자의 비적합성, 또는 다양한 경고 또는 예로써, PML의 발병에 대한 증가된 모니터링에 대한 요구를 동반하는 항-VLA-4 치료에 대한 환자의 적합성과 상관되는 음성 치료 적합성 분류.
양성 치료 적합성 분류는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험과 상관하고, 그리고 음성 치료 적합성 분류는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험과 상관한다. PML이 발병하는 더욱 낮은 위험은 0.2/1000 환자 이하의 위험에 전형적으로 상응하고, 그리고 PML이 발병하는 더욱 높은 위험은 ≥0.37/1000의 위험에 상응한다.
환자가 낮은 노출 분류, 그리고 음성 JCV 상태 분류에 배정되면, 환자는 양성 치료 적합성 분류, 예를 들면, PML의 발병에 대한 모니터링을 권하거나 요구하는 변형된 양성 치료 적합성 분류에 배정된다.
환자가 음성 사전 면역억제성 노출 분류, 그리고 음성 항-JCV 항체 상태 분류에 배정되면, 환자는 양성 치료 적합성 분류, 예를 들면, PML의 발병에 대한 모니터링을 권하거나 요구하는 변형된 양성 치료 적합성 분류에 배정될 수 있다.
환자가 낮은 노출 분류, 음성 사전 면역억제성 노출 분류, 그리고 음성 JCV 항체 분류에 배정되면, 환자는 양성 치료 적합성 분류에 배정된다.
한 구체예에서, 환자는 양성 치료 적합성 분류에 배정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙이 더욱 투여된다.
한 양상에서, 환자를 평가하는, 예를 들면, PML이 발병하는 환자의 위험을 평가하는 방법 역시 제시된다. 상기 방법은 하기를 포함한다:
(aaa) 예로써, 본원에서 개시된 방법에 의해 결정된 바와 같이, 예로써 항-JCV 항체의 수준이 미리 선택된 규준 이하 또는 이상인 지를 결정함으로써, 환자가 JCV에 대해 음성 또는 양성인 지를 결정하고;
(bbb) 환자가 항-VLA-4 요법을 미리 선택된 기간 이상 (가령, 24개월 이상), 또는 미리 선택된 기간 이하, 예를 들면, 24개월 또는 그 이하 동안 받았는 지, 또는 항-VLA-4 요법을 미리 선택된 기간, 예를 들면, 지난 2, 3, 5년, 또는 심지어 환자의 일생 동안 받지 않았는 지를 결정하고;
(ccc) 환자가 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 미리 선택된 기간 동안 받은 적이 없거나, 또는 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 미리 선택된 기간 (명시된 기간) (가령, 지난 1, 2, 3, 4, 5, 또는 10년, 또는 심지어 환자의 일생) 동안 받았는 지를 결정하고; 그리고 이러한 결정에 응하여, 환자를 평가한다.
한 구체예에서, 환자가 JCV에 대해 음성이라는 결정에 응하여, 상기 환자가 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있음을 결정한다.
한 구체예에서, 환자가 JCV에 대해 양성이라는 결정에 응하여, 상기 환자가 PML의 더욱 높은 위험을 갖는다고 결정한다.
한 구체예에서, 결정, 예를 들면, 환자가 JCV에 대해 음성인지를 결정하는 것은 환자의 신체로부터 시료를 떼어내거나 또는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 포함하거나 요구하고, 또는 상기 방법은 요법을 환자에 투여하는 것을 더욱 필요로 한다. 상기 요법은 예로써, 더욱 낮은 위험 환자의 경우에, 항-VLA-4 요법 (가령, 항-VLA-4 항체)일 수 있고, 또는 예로써, 더욱 낮은 위험 환자의 경우에, 대안 (비-항-VLA-4) 요법, 예를 들면, 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드일 수 있다.
한 양상에서, 사용설명서를 준수하는 방법이 제시된다. 사용설명서는 예로써, 정부 요구된 포장 삽입물, 예를 들면, FDA (식품의약국) 또는 EMA (유럽의약청) 요구된 포장 위에 나타나 있을 수 있고, 그리고 항-VLA-4 요법의 이용에 관한 보도를 제공한다. 사용설명서를 준수하는 방법은 선택적으로, 사용설명서를 수취하고; 본원에서 설명된 평가 방법의 결과를 획득하고, 그리고 획득된 결과에 응하여, 요법에 대한 권고를 환자에게 제공하고, 그리고 선택적으로, 요법을 환자에 더욱 투여하는 것을 포함한다. 사용설명서는 본원에서 설명된 바와 같은 평가 방법이 요법을 안전하게 투여하는데 필수적이라고 명시할 수 있다. 요법은 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙일 수 있다.
환자를 평가하는 방법이 제시되고, 여기서 상기 방법은 의료인에게 환자 시료의 수집 또는 수송을 위한 키트를 제공하고; 환자 시료를 의료인으로부터 수취하고; 본원에서 청구된 바와 같은 방법을 수행하는 것을 필요로 한다.
환자를 치료하는 방법 역시 제시된다. 상기 방법은 본원에서 설명된 환자 또는 시료 평가 방법의 결과를 획득하고, 그리고 획득된 결과에 응하여, 요법을 환자에 투여하는 것을 필요로 한다. 요법은 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙일 수 있다. 가령, 단계 (a)와 (b), 단계 (a), (b)와 (c), 단계 (a), (b), (c)와 (d), 단계 (c), 또는 단계 (c)와 (d)의 결과에 응하여, 요법, 예를 들면, 본원에서 설명된 요법을 환자에 투여한다.
예로써, 항-VLA-4 요법의 비용에 대한 변제를 인가하는 전산화 방법 역시 제시된다. 변제를 받는 당사자는 제삼자 지불인, 예를 들면, 보험 회사 또는 정부 기관일 수 있다. 상기 방법은 (a) 본원에서 설명된 환자 평가 방법의 결과를 획득하고, 그리고 결과를 컴퓨터 판독가능 매체 상에 기록하고; (b) 환자에 항-VLA-4 요법의 투여의 증거를 획득하고, 그리고 증거를 컴퓨터 판독가능 매체 상에 기록하고; 그리고 (c) 결과가 항-VLA-4 요법의 투여와 일치하면, 당사자에게 변제를 인가하거나 변제하는 것을 포함할 수 있다.
한 양상에서, 환자를 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료를 받는 후보로서 선별하거나 분류하는 방법이 제시된다. 가령, 상기 방법은 환자가 항-VLA-4 요법을 24개월 또는 그 이하, 예를 들면, 1 내지 24개월, 2 내지 20개월, 5 내지 15개월, 또는 10 내지 12개월 동안 이전에 받았는 지, 또는 환자가 면역억제제로 치료를 이전에 받지 않았는 지를 결정하고, 그리고 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 판단하는 것을 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 판단은 환자로부터 시료를 분석하는 것을 수반한다. 시료는 예로써, 혈액, 혈장, 혈청, 소변, 또는 뇌척수액의 시료일 수 있다. 이러한 판단이 환자가 JCV에 대해 양성, 예를 들면, 항-JCV 항체 또는 JCV 핵산에 대해 양성임을 지시하면, 환자는 항-VLA-4 요법으로 치료에 대한 후보로서 선별되거나 분류되지 않는다. 이러한 판단이 환자가 JCV에 대해 음성, 예를 들면, 항-JCV 항체 또는 JCV 핵산에 대해 음성임을 지시하면, 환자는 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보로서 선별되거나 분류된다.
항-JCV 항체의 존재에 대한 검정은 면역검정, 예를 들면, ELISA 검정일 수 있다. JCV 핵산에 대한 검정은 예로써, PCR 검정 또는 차세대 염기서열분석(Next Generation Sequencing, NGS) 방법일 수 있다.
PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정된 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙이 더욱 투여될 수 있다. PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 대안, 예를 들면, 인터페론, 글라티라머 아세테이트, 코르티코스테로이드 또는 TNF 효현제가 더욱 투여될 수 있다. 한 구체예에서, PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된 환자는 항-VLA-4 요법이 더욱 투여될 수 있고, 그리고 PML에 대한 증가된 빈도의 검사를 받도록 요구될 수 있고, 그리고 환자가 초기에 JCV 음성인 것으로 결정되는 경우에, 또한 JCV에 대한 증가된 빈도의 검사를 받도록 요구될 수 있다.
한 양상에서, PML에 대한 환자의 위험을 결정하는 방법이 제시된다. 상기 방법은 (a) 환자가 항-VLA-4 요법 (가령, 나탈리주맙)을 24개월 또는 그 이하 동안 이전에 받았는 지, 또는 환자가 면역억제제로 치료를 이전에 받지 않았는 지를 결정하고; 그리고 (b) 환자의 항-JCV 항체 상태를 판단하는 것을 포함하고, 여기서 판단 단계는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 포함한다. 이러한 판단이 환자가 JCV 음성임을 지시하면, 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. 이러한 판단이 환자가 JCV 양성임을 지시하면, 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다.
다른 양상에서, 환자를 치료하는 방법이 제시된다. 상기 치료 방법은 예로써, 항-VLA-4 요법에 대한 환자의 사전 노출을 결정하고, 그리고 환자가 면역억제제로 치료를 이전에 받았는 지를 결정하는 것을 포함한다. 선택적으로, JCV에 대한 환자의 상태 역시 결정될 수 있다.
환자가 항-VLA-4 요법을 24개월 또는 그 이하 동안 받았고, 그리고 면역억제제로 치료를 이전에 받지 않았던 것으로 결정되면, 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법이 투여된다.
환자가 나탈리주맙을 24개월 이상 (가령, 25개월 또는 그 이상) 동안 받았고, 그리고 면역억제제로 치료를 이전에 받지 않았던 것으로 결정되면, 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 대안, 예를 들면, 인터페론, 코르티코스테로이드, 스타틴 또는 TNF 길항제가 투여된다.
항-VLA-4 요법 또는 면역억제제에 대한 환자의 사전 노출을 결정하는 것은 환자 또는 돌보는 사람, 예를 들면, 의사, 간호사, 부모 또는 기타 돌보는 사람에게 물어보는 것을 포함할 수 있다. 일부 사례에서, 환자의 사전 노출을 결정하는 것은 데이터베이스, 예를 들면, 의료 기록의 데이터베이스에서 정보에 접근하는 것을 포함할 수 있다.
또한, PML에 대한 환자의 위험을 결정하는 방법이 제시된다. 상기 방법은 항-VLA-4 요법에 대한 환자의 사전 노출을 결정하고, 그리고 환자가 면역억제제로 치료를 이전에 받았는 지를 결정하는 것을 포함한다. 선택적으로, 환자의 항-JCV 항체 상태 역시 결정될 수 있다. 환자가 항-VLA-4 요법을 24개월 또는 그 이하 동안 받았고, 그리고 면역억제제로 치료를 이전에 받지 않았던 것으로 결정되면, 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. 환자가 항-VLA-4 요법을 24개월 이상 동안 받았고, 그리고 면역억제제로 치료를 이전에 받지 않았던 것으로 결정되면, 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다. PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정된 환자는 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙이 더욱 투여될 수 있다. 역으로, PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정된 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 대안, 예를 들면, 인터페론, 코르티코스테로이드, 스타틴 또는 TNF 길항제가 더욱 투여될 수 있다.
한 구체예에서, 환자의 JCV 상태 역시 결정되고, 그리고 환자가 JCV 음성인 것으로 결정되면, 환자는 환자가 JCV 양성인 것으로 결정될 때보다 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정된다.
달리 정의되지 않으면, 본원에서 이용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 비록 본원에서 설명된 것들과 유사하거나 동등한 방법과 재료가 본 발명의 실시 또는 검사에서 이용될 수 있긴 하지만, 적절한 방법과 재료가 하기에 기술된다. 본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 그리고 기타 기준은 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 충돌의 경우에, 정의를 비롯한 본 명세서가 지배할 것이다. 이에 더하여, 이들 재료, 방법, 그리고 실례는 단지 예시이고 한정하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 하나 또는 그 이상의 구체예의 상세는 첨부된 도면 및 하기 설명에서 진술된다. 본 발명의 다른 특징, 목적, 그리고 이점은 상기 설명과 도면으로부터, 그리고 청구항으로부터 명백할 것이다.
도면의 간단한 설명
도 1A와 1B는 누적 치료 지속 기간 (도 1A) 및 12-개월 치료 간격 지속 기간 (도 1B)에 의한 나탈리주맙-연관된 PML 발생률을 묘사하는 그래프이다.
도 2은 사전 면역억제제 이용 및 나탈리주맙 치료 지속 기간에 의해 계층화된 PML의 근사 발생률을 묘사하는 계통도이다.
도 3은 항-JCV 항체 혈청 상태, 사전 면역억제제 이용, 그리고 나탈리주맙 치료 지속 기간에 의해 계층화된 PML의 근사 발생률을 묘사하는 계통도이다.
도 4A와 4B는 사전 면역억제제 이용 (예 또는 아니오) 및 나탈리주맙 치료 지속 기간 (1-24개월 (도 4A) 또는 25-48개월 (도 4B))에 의해 계층화된, 항-JCV 항체 양성 환자에서 PML 발생률 추산치의 민감도 분석결과를 묘사하는 그래프이다. 기준 = 기준 사례 시나리오.
도 5A와 5B는 각각, 환자 1의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 6A와 6B는 각각, 환자 2의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 7A와 7B는 각각, 환자 3의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 8A와 8B는 각각, 환자 4의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 9A와 9B는 각각, 환자 5의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 9C와 9D는 각각, 환자 6의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 10A와 10B는 각각, 환자 7의 nOD와 역가를 묘사하는 그래프이다.
도 11은 MS 환자의 군에 대해 수집된 지수 (x 축)와 저해 퍼센트 (y 축) 데이터를 묘사하는 산포도이다.
도 12는 MS 환자의 군에 대해 수집된 지수 (x 축)와 저해 퍼센트 (y 축) 데이터를 묘사하는 산포도이다.
도 13은 MS 환자의 군에 대해 결정된 지수 값을 묘사하는 산포도이다.
상세한 설명
본 발명은 적어도 부분적으로, 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 판단하는 것을 포함하는 PML에 대한 환자의 위험을 판단하는 새롭고 향상된 방법의 발견에 기초된다. 본 발명은 적어도 부분적으로, 항-JCV 항체 역가와 항체 저해 퍼센트가 진행성다병소성백질뇌증 (PML)이 발병하는 환자의 위험의 인디케이터일 수 있다는 발견에 기초된다.
출원인들은 또한, 항-JCV 항체 역가 수준을 생물학적 시료 내에서 결정하기 위한 최적화된 검정, 그리고 저해 퍼센트 값을 결정하고, 그리고 이러한 정보를 이용하여 PML이 발병하는 환자의 위험을 결정함으로써 항체를 정성적으로 검정하기 위한 방법을 개발하였다. 상기 검정은 하기를 포함한다: (a) 일차 분량의 시료 및 HPVLP가 배치되는 기질을 포함하는 일차 반응 혼합물을 형성하고, 여기서 VLP 입자는 0.04μg의 양, 그리고 0.4 μg/mL의 농도로 존재하고; b) 예로써, 상기 기질에 결합된 항-JCV 항체에 결합된 표지된 이차 검출 시약, 예를 들면, 효소 표지된 항-IgG 항체를 검출함으로써, 기질 상에 배치된 HPVLP에 결합된 항-JCV 항체의 수준을 검출하고; (c) 예로써, 용해-상 HPVLP가 0.4 μg/mL의 농도로 제공된 이차 분량의 시료, 그리고 예로써, 1:100 또는 1:101 희석도에서 제공된 이차 분량의 시료를 포함하는 이차 반응 혼합물을 형성하고; (d) HPVLP를 내포하지 않는 음성 대조 용액, 그리고 음성 대조 용액에서 예로써, 1:100 또는 1:101, 또는 1:110 희석된 삼차 분량의 시료를 포함하는 삼차 반응 혼합물을 형성하고; (e) 예로써, HPVLP가 존재하는 경우에, HPVLP가 배치되는 기질에 결합할 수 있는 JCV를 검출함으로써, 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준을 이차와 삼차 반응 혼합물 내에서 검출하고; (f) 일차 분량의 시료 내에서 기질 상에 배치되는 HPVLP에 대한 항-JCV 항체 결합의 수준에 상응하는 일차 값, 그리고 이차 반응 혼합물 내에서 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준, 예를 들면, 상기 이차 반응 혼합물로부터 기질 상에 배치되는 HPVLP에 결합하는 항-JCV 항체의 수준에 상응하는 이차 값을 제공하고; 그리고 (g) 선택적으로, 일차와 이차 항체 수준을 비교한다.
출원인들은 또한, 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면, PML이 발병하는 더욱 낮은 위험을 갖는다는 것을 발견하였다. 환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 3인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면, PML의 더욱 높은 위험을 갖는다.
환자는 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트에서 변화에 대해 규칙적인 간격에서, 예를 들면, 6개월 마다 또는 12개월 마다 모니터링될 수 있다. 이러한 후자 검정의 결과가 환자가 0.5 이하 nOD의 항-JCV 항체 역가, 그리고 <70%의 저해 퍼센트를 여전히 갖는다는 것을 지시하면, 환자는 여전히, PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 후자 검정이 환자의 항체 역가가 최초 검정으로부터 2 내지 3배 증가된다는 것을 지시하면, 환자는 PML이 발병하는 증가된 또는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 수 있다. 출원인들은 PML로 진단된 환자가 진단에 앞서 6개월 동안 항체 역가와 nOD의 2 내지 3배 증가를 나타내는 경향이 있다는 것을 관찰하였다.
환자는 (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 3인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는 (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면, PML의 더욱 높은 위험을 갖는다.
이들 규준을 충족하는 환자는 선택적으로, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 항-VLA-4 항체, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료를 받는 후보가 아닌 것으로 결정될 수 있고, 또는 환자는 PML이 발병하는 다른 위험 인자에 대해 더욱 판단될 수 있다. 이들 위험 인자에는 환자가 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 이전에 받았는 지의 여부, 그리고 환자가 상기 요법을 얼마나 오랫동안 받았는 지; 그리고 환자가 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제 요법을 이전에 받았는 지의 여부와 얼마나 오랫동안 받았는 지가 포함된다. 환자의 PML 위험은 이들 인자 각각의 조합이다.
항체 역가는 "nOD" 또는 "지수"에 의해 측정될 수 있다. "nOD"는 항-JCV 항체 검출을 위한 검사, 예를 들면, ELISA 검사에서 정규화된 흡광도 값이다. "지수" 값은 면역검정, 예를 들면, ELISA 검정에서 양성 대조의 흡광도에 의해 나눗셈된 시료에 대한 흡광도 값이다.
출원들은 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙을 24개월 또는 그 이하 동안 받았고, 그리고 면역억제제 요법을 이전에 받지 않았던 환자가 이들 2가지 규준을 충족하지 못하는 환자보다 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있다는 것을 이전에 발견하였다. 게다가, 가장 낮은 위험을 갖는 환자는 이들 2가지 규준을 충족하고, 그리고 또한, JCV 음성인 환자, 예를 들면, 항-JCV 항체 또는 JCV 핵산, 예를 들면, JCV DNA에 대해 양성으로 검사되지 않는 환자이다. 이들 3가지 위험 인자 ((i) 환자가 항-VLA-4 요법을 이전에 받았던 시간의 양; (ii) 환자가 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제로 치료를 이전에 받았는 지의 여부; 그리고 (iii) JCV 상태) 각각이 환자의 PML 위험에 독립적으로 기여한다는 것은 이전에 알려지지 않았다. 본원에서 설명된 발명은 일반적으로, VLA-4 저해제로 치료된 환자에 대해 이용될 수 있다. 명백하게 상이한 PML 위험에서 환자의 하위개체군을 확인하는 능력은 이전의 방법보다 위험 (즉, 전체 PML 위험)의 더욱 효과적인 특성화를 가능하게 하고, 그리고 건강관리 전문가와 환자가 더욱 정보에 근거한 혜택-위험 치료 결정을 하는데 조력할 것이다. 이들 위험 판단 규준은 2011년 5월 31일자 제출된 공동-소유된 U.S. 가출원 61/491,810, 그리고 2011년 7월 15일자 제출된 공동-소유된 U.S. 가출원 61/508584에서 기술된다. 이들 가출원 각각의 내용은 본원에 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 항-JCV 항체 역가 (가령, nOD 또는 지수 수준에 의해 측정됨) 및 저해 퍼센트에 관한 본원에서 설명된 위험 규준은 선행 공동-소유된 가출원에서 설명된 위험 인자와 공동으로 고려될 수 있다.
PML 위험을 결정하기 위한 방법은 환자에 대한 JCV 분류 (가령, 예로써 nOD 또는 지수 수준 및 저해 퍼센트에 의해 측정된 항-JCV 항체 역가), 환자에 대한 사전 항-VLA-4 요법 이력, 그리고 환자에 대한 사전 면역억제제 요법 이력 (항-VLA-4 요법 이외에) 중에서 1개, 2개 또는 3개 모두를 획득하는 것을 필요로 할 수 있다. 이들 부류에 응하여, 환자는 치료 적합성 분류에 배정될 수 있다. PML이 발병하는 낮은 위험을 갖는 것으로 결정되는 환자는 양성 치료 분류에 배정될 수 있고, 그리고 PML이 발병하는 더욱 높은 상대적 위험을 갖는 것으로 결정되는 환자는 음성 치료 분류에 배정될 수 있다. 양성 치료 분류를 받는 환자는 추가 치료 또는 항-VLA-4 요법으로 치료의 개시에 대한 권고를 받을 수 있다. 음성 치료 분류를 받는 환자는 항-VLA-4로 치료를 종결하라는 권고, 비-항-VLA-4 요법으로 치료를 개시하라는 권고, PML의 징후와 증상에 대한 증가된 감시와 함께 항-VLA-4 요법을 지속하거나 개시하라는 권고를 받을 수 있다.
항-VLA-4 요법으로 추가의 치료에 대한 권고는 환자가 추가의 또는 증강된 모니터링, 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 인자가 환자가 PML의 증가된 위험에 처해 있음을 지시하면, 예로써 24개월 이상, 예를 들면, 25개월 또는 그 이상 동안 항-VLA-4 요법으로 사전 치료, 또는 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제로 사전 치료를 환자가 받아야 한다는 추가의 지시 또는 필요조건을 동반할 수 있다.
환자는 환자에 의한 자가-보고를 통해, 또는 부모, 의사, 의료 보조자, 간호사 또는 기타 의료인에 의해 제공된 정보 (구두 또는 서면)를 통해, 항-VLA-4 요법 또는 항-VLA-4 요법 이외의 면역억제제 요법을 이전에 받았던 것으로 결정될 수 있다. 정보는 또한, 데이터베이스, 예를 들면, 의료 데이터베이스 또는 임상 시험 데이터베이스를 통해 획득될 수 있다.
PML의 증가된 위험을 지시하는, 항-VLA-4 요법 이외의 사전 면역억제제 요법은 항종양제, 면역억제제 또는 면역조절제, 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 베타-인터페론 또는 글라티라머 아세테이트로 사전 치료를 포함할 수 있다. 예시적인 면역억제제에는 예로써, 미톡산트론, 메토트렉사트, 아자티오프린, 시클로포스파미드, 그리고 미코페놀레이트, 항-CD20 요법 (가령, 리툭시맙), 항-CD11a 요법 (가령, 에팔리주맙), 또는 미코페놀레이트 모페틸이 포함된다. 하기에서 설명된 바와 같은 다른 면역억제제 요법으로 사전 치료 역시 추가의 항-VLA-4 요법의 투여 이후에, 환자의 PML 위험을 증가시킬 것으로 예상된다. 일반적으로, 사전 면역억제제 이용의 결정은 VLA-4 저해제 (가령, 항-VLA-4 항체)가 아닌 면역억제제의 임의의 사전 이용, 또는 PML 위험의 평가에 앞서, 명시된 기간, 예를 들면, 이전 1, 2, 3, 5, 또는 10년 이내에 사전 이용일 수 있는 명시된 이용이다.
JCV 상태를 결정하는 것은 환자가 JCV에 노출되었는 지를 결정하는 것을 지칭하고, 이런 이유로, 노출을 결정하는 직접적인 방법 (가령, JCV 단백질 또는 JCV DNA를 검출) 및 간접적인 방법 (가령, JCV에 대한 항체를 환자 시료 내에서 검출)을 포함한다. JCV 상태를 결정하기 위한 검정은 JCV 핵산 (가령, DNA 또는 RNA), 또는 JCV 혈청 유병률, 또는 항-JCV 항체를 생물학적 시료 내에서, 예를 들면, 혈장, 혈청, 혈액 또는 소변 시료 내에서, 또는 말초혈 단핵구 세포 (PBMCs)의 시료 내에서, 또는 뇌척수액 내에서 검출하기 위한 검정을 포함할 수 있다. JCV 핵산은 당분야에 공지된 방법을 이용하여, 예를 들면, 증폭 방법, 예를 들면, 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해, 또는 차세대 염기서열분석(NGS) 방법에 의해 검출될 수 있다. JCV 혈청 유병률은 당분야에 공지된 방법, 예를 들면, 혈구응집 저해 (HI) 검정을 이용하여 검정될 수 있다. JCV 항체는 면역검정, 예를 들면, ELISA 검정에 의해 검출될 수 있다. 한 구체예에서, JCV 항체는 International Application Number PCT/US2011/20832에서 기술된 방법에 의해 검출될 수 있는데, 이것은 항-JCV 항체 결합의 수준을 생물학적 시료 내에서 검출하기 위한 항-JCV 항체의 결합에 적합한 조건 하에 HPVLP를 이용한다. JCV 상태를 결정하는 방법은 또한, 항-JCV 항체 역가 및 저해 퍼센트를 결정하는 방법을 포함한다. 항-JCV 항체 역가 및 저해 퍼센트의 검출은 전형적으로, International Application Number PCT/US2011/20832에서 설명된 바와 같은 2-단계 항체 검출 검정을 포함한다.
JCV의 존재가 환자로부터 생물학적 시료, 예를 들면, JCV 항체, 단백질, 펩티드, 또는 핵산 내에서 확인되면, 환자는 "JCV 양성"인 것으로 결정된다. 양성 JCV 분류는 생물학적 시료 내에서 JCV 항체, 예를 들면, 미리 선택된 규준에 동등하거나 이보다 큰 JCV 항체의 존재에 상응한다. 미리 선택된 규준은 전형적으로 정성적 값, 예를 들면, 특정 검정, 예를 들면, 면역검정에 따른 항체의 "검출가능한" 양이다.
PML 위험을 결정하기 위한 본원에서 설명된 방법은 면역조절제, 예를 들면, 항-VLA-4 요법 (가령, 나탈리주맙), 항-CD20 요법 (가령, 리툭시맙), 항-CD11a 요법 (가령, 에팔리주맙), 또는 미코페놀레이트 모페틸로 치료를 고려하고 있는 개체; 현재 면역조절제로 치료를 받고 있는 개체; 또는 면역조절제로 치료를 중단한 개체를 비롯한 임의의 인간 개체에 유용할 수 있다. 상기 방법은 PML에 민감할 수 있는 다른 개체, 예를 들면, 림프증식성 질환, 예를 들면, 다발성 골수종 또는 림프종을 앓는 개체; 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)로 감염된 개체, 또는 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS), 혈액암, 또는 자가면역 질환, 예를 들면, 전신성 홍반성 낭창 (SLE), 염증성 장 질환, 예를 들면, 크론병 (CD) 또는 궤양성 대장염, 다발성 경화증 (MS) 또는 관절염, 예를 들면, 류머티스성 관절염 (RA)을 앓는 개체에 유용할 수도 있다. 위험-판단 방법은 또한, 면역억제성 또는 면역조절성 요법을 받고 있는 개체, 예를 들면, 이식 환자에 유용할 수 있다. 예시적인 면역억제성 또는 면역조절성 요법에는 나탈리주맙, 리툭시맙, 에팔리주맙, 그리고 미코페놀레이트 모페틸이 포함된다. 상기 방법은 Piccinni et al. "Stronger association of drug-induced progressive multifocal leukoencephalopathy (PML) with biological immunomodulating agents" Eur. J. Clin. Pharmacol. 66:199-206, 2010에서 개시된 바와 같이, 질환을 앓거나, 또는 약물로 치료되는 개체에서 위험을 판단하는데 유용할 수 있고, 이의 내용은 본원에서 참고문헌으로 편입된다.
정의
본원에서 이용된 바와 같이, "HPVLP"는 VP1 단백질로 주로 구성되는 고도 정제된 VLP ("바이러스-유사 입자")이다. 본 발명에서 특징되는 "HPVLP"는 주요 캡시드 단백질 "VP1"로 주로 구성되는데, 이것은 폴리오마바이러스, JC 바이러스 (JCV)로부터 자연 발생 VP1 또는 재조합 VP1일 수 있다. HPVLP는 예로써, 적어도 하나의 펜타머성 아단위, 하나 이상의 펜타머성 아단위, 최대 72개 펜타머성 아단위 또는 그 이상의 VP1로 구성될 수 있다. 본 발명의 HPVLP는 자연 발생, 본래 JC 바이러스에 대한 항체에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, HPVLP는 JC 바이러스의 소수 캡시드 단백질인 이차, 그리고 선택적으로 삼차 폴리펩티드, 예를 들면, 적어도 하나의 VP2 또는 VP3 폴리펩티드를 포함한다. VP2 또는 VP3은 재조합 또는 자연 발생 또는 자연-유래된 폴리펩티드일 수 있다.
이런 "고도 정제된" 입자는 하나 이상의 VP1 펜타머, 예를 들면, 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 72개 VP1 펜타머, 또는 100개 이하의 VP1 펜타머를 내포한다. 이런 고도 정제된 입자는 예로써, 이중 여과를 수반하는 방법에 의해 획득될 수 있다. 가령, 한 구체예에서, VLP의 고도 정제된 제조물은 예로써, 당 쿠션 (sucrose cushion)을 통한 원심분리에 의해, 입자를 적어도 2회 정제함으로써 획득될 수 있다. 다른 구체예에서, HPVLP는 크로마토그래피 방법을 이용하여 제조된다. 일반적으로, HPVLP 제조물은 정의된 대조 시료를 이용한 ELISA 검정에서, 이의 활성에 의해 확인될 수 있다. 일부 사례에서, 이런 대조 시료는 음성 대조 및/또는 낮은 수준의 JCV 항체를 내포하는 대조 시료이다.
본원에서 이용된 바와 같이, "높은 신호-대-잡음 HPVLP 기질"은 HPVLP가 배치되는 기질이다. 이것은 시료 내에서 예로써, 유리 (즉, 항원 또는 다른 표적에 결합되지 않은) HPVLP의 수준을 평가하는데 이용될 수 있다. 기질 상에서 HPVLP의 농도는 존재하는 항-JCV 항체의 양을 측정할 때, 10 내지 30, 15 내지 30, 15 내지 25, 18 내지 22의 신호-대-잡음 비율이 제공되도록 하는 것이다. 구체예에서, 신호-대-잡음 비율은 적어도 10, 15, 18 또는 20이다. 구체예에서, 신호-대-잡음 비율은 약 10, 15, 18 또는 20이다. 신호-대-잡음 비율은 1.0의 흡광도를 제공하는 시료, 예를 들면, 교정 대조로 결정될 수 있다. 한 구체예에서, HPVLP는 96 웰 평판의 웰 내에서 0.5 ml, 0.8 ml, 1.0 ml, 1.2 ml, 또는 1.5 ml의 0.4 μg/ml의 HPVLP를 냉동 건조시킴으로부터 발생하는 농도로 상기 기질 상에 제공된다. 한 구체예에서, HPVLP는 96 웰 평판의 웰 내에서 1.0 ml의 0.4μg/ml의 HPVLP를 냉동 건조시킴으로부터 발생하는 농도로 상기 기질 상에 제공되고, 이것은 본원에서 이용된 바와 같이, 웰당 30 ng 내지 50 ng (가령, 40 ng) HPVLP에 동등하다. 한 구체예에서, HPVLP는 96 웰 평판의 웰 내에서 0.05 ml 내지 0.35 mL 또는 0.1 ml 내지 0.2 ml의 0.4 μg/ml의 HPVLP를 냉동 건조시킴으로부터 발생하는 농도로 상기 기질 상에 제공된다. 기질 상에 배치된 HPVLP의 양, 또는 침착이 달성되는 조건은 원하는 신호-대-잡음 비율이 획득되기만 하면, 변할 수 있다.
신호-대-잡음 비율은 검정에서 신호 강도의 동적 범위를 결정하기 위해, 음성 대조의 흡광도 값을 구경 측정기 대조에 비교함으로써 계산된다.
한 구체예에서, 시료는 약 100배 희석되고, 그리고 음성 스코어에 대한 컷오프는 45 %보다 작거나 이에 동등한 감소이고, 그리고 양성 스코어에 대한 컷오프는 45 % 이상이다. 구체예에서, 희석은 100배가 아니지만 200 배 이하이다. 가령, 희석은 50- 내지 150-배, 75- 내지 125-배, 85- 내지 115-배이다. 구체예에서, 희석은 150-배, 125-배, 100-배, 또는 75-배 이하이다. 구체예에서, 희석이 100-배 아닌 (가령, 200-배, 400-배, 500-배, 800-배, 최대 >1,000,000-배) 경우에, 컷오프 또는 기타 매개변수는 시료가 희석이 100-배이고, 그리고 음성에 대한 컷오프가 45% 이하이고, 그리고 양성에 대한 컷오프가 45%보다 크거나 이에 동등한 경우에서와 동일한 스코어 (양성 또는 음성)를 얻도록 조정된다.
항-JCV 항체 검출 검정. 검정은 생물학적 시료를 HPVLP로 코팅된 기질에 첨가함으로써 수행되고, 그리고 당분야에 공지된 방법을 이용하여 검출된다. 일반적으로, 고형 기부 플랫폼, 예를 들면, 마이크로역가 평판 (가령, 96 웰 평판)이 이용된다; 하지만, 당분야에 공지된 다른 형식이 이용될 수도 있다. 일부 구체예에서, 생물학적 시료는 검정에서 이용에 앞서 희석된다.
일정한 구체예에서, 검정 형식은 효소-연결된 면역검정 (ELISA)이다. 간단히 말하면, 이러한 방법은 전형적으로, 기질을 포획 항원, 예를 들면, HPVLP로 코팅하고, 포획 시약에 지향된 결합 항체를 내포하는 시료를 배양하고, 세척하여 비-특이적으로 결합된 종류를 제거하고, 그리고 결합된 면역 복합체를 예로써, 발색성 또는 화학발광 검정에 의해 검출하는 것을 포함한다. 발색성 기질은 착색된 최종 산물을 생산하고, 이것은 시각적으로 또는 분광 광도계의 이용에 의해 검출되고 측정될 수 있다. 화학발광 기질은 광을 생산하고, 이것은 광도계를 이용하여 측정될 수 있다.
평판을 HPVLP로 코팅하는 것은 일반적으로, 적절한 농도 (가령, 0.4 μg/ml)에서 HPVLP의 용액과 함께, 하룻밤동안 또는 명시된 숫자의 시간 동안 고형 기질 (가령, 마이크로역가 평판의 웰)을 배양하는 것을 포함한다. HPVLP는 VP1을 유일한 JCV 바이러스 성분으로서 포함할 수 있고, 또는 HPVLP는 입자당 적어도 하나의 VP2 또는 VP3 또는 입자당 적어도 하나의 VP2와 VP3 각각을 내포하는 이종성 입자일 수 있다. HPVLP로 코팅한 후, 평판의 웰은 세척된다. 기질은 그 다음, 조사되는 시료에 관하여 항원적으로 중성인 비특이적 단백질로 "코팅된다". 적절한 코팅 물질은 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 소 혈청 알부민 (BSA), 카제인, 당 또는 분유의 용액이 포함된다. 그 다음, 평판은 건조되고, 그리고 검정의 다음 단계로 진행하기에 앞서, 더욱 오랜 기간, 예를 들면, 1일, 1개월 또는 1년 동안 보관될 수 있다.
시료 또는 기준은 복합체 형성 (HPVLP/JCV 항체)을 허용하고, 따라서 결합된 복합체를 형성하는데 효과적인 조건 하에, 제조된 기질 상에서 배양된다. 결합된 복합체의 검출은 인간 항체에 결합할 수 있는 표지된 항체를 이용하여 수행된다. 일반적으로, 표지된 항체는 인간 IgG 또는 인간 IgG와 IgM을 검출할 수 있다. 일부 사례에서, 검정은 이차 또는 삼차 검출 방법을 이용하여 수행될 수 있다.
기준 시료는 개체의 소변 내에 JCV DNA의 존재 (소변양성)에 기초하여, JC 바이러스로 감염되는 것으로 알려진 개체로부터 단리된 동일한 생물학적 물질 (가령, 혈장, 혈청, 소변, 또는 CSF)의 시료일 수 있다. 기준 시료는 검정의 가음성률이 1%-3%보다 크지 않도록 검정 컷-포인트를 확립하는데 이용된다.
"복합체 형성을 허용하는데 효과적인 조건 하에"는 일반적으로, 시약이 배경을 감소시키고 명시된 범위 내에 있는 결과의 판독을 제공하기 위해 희석되는 조건을 의미한다. 희석액에는 무제한적 실례에서, BSA, 인산염 완충된 식염수 (PBS), 또는 PBS 내포 Tween을 포함하는 용액이 포함될 수 있다.
"적합한" 조건은 또한, 효과적인 결합을 허용할 만큼 충분한 온도에서 및/또는 기간 동안의 조건을 포함한다. 배양은 전형적으로, 대략 25℃ 내지 27℃의 온도에서 약 1 내지 2시간 또는 1 내지 4시간, 또는 약 4℃에서 하룻밤일 수 있다. 하지만, 당업자는 다른 조건이 적합할 수도 있음을 이해할 것이다.
일반적으로, 1회 또는 그 이상의 세척이 검정의 배양 사이에 수행된다. 적절한 세척 용액은 희석 완충액 (가령, PBS 또는 PBS/Tween) 또는 붕산염 완충액을 포함한다.
일반적으로, HPVLP에 결합된 항체의 검출은 당분야에 널리 공지된 방법을 이용하여 수행된다. 일반적으로, 이런 방법은 라벨 또는 마커, 예를 들면, 방사성, 형광, 생물학적 또는 효소적 태그의 검출에 기초된다. 이런 라벨의 이용과 관련된 U.S. 특허에는 예로써, U.S. 특허 번호 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 및 4,366,241이 포함된다. 일반적으로, 항-JCV 항체 결합의 검출은 표지된 이차 항체를 이용하여 검출된다. 일반적으로, 이차 항체는 인간 IgG를 검출하는데 특이적이다. 정량은 예로써, 가시 스펙트럼 분광 광도계를 이용하여, 산출된 색의 정도를 측정함으로써 달성된다.
한 구체예에서, 검정은 예로써, 생물학적 시료가 환자로부터 획득되는 시설에서 일하는 의료인, 예를 들면, 의사, 간호사 또는 전문가에 의해 진료소에서 수행된다. 다른 구체예에서, 환자로부터 획득된 생물학적 시료는 검정이 수행되는 다른 시설, 예를 들면, 제삼자 시설로 수송된다. 이러한 후자의 경우에, 검정의 결과는 예로써, 메일에 의해 또는 전자적으로 제출될 수 있는 형태를 통해 (가령, 팩시밀리 또는 이-메일을 통해) 또는 온-라인 데이터베이스를 통해, 의료인에게 되돌려 보고될 수 있다. 한 구체예에서, 검정 (스크리닝 검정 및 선택적으로, 확증 검정 포함)의 결과는 데이터베이스에서 보관될 수 있고, 그리고 예로써, 월드와이드 웹을 통해 의료인에 의해 접근될 수 있다.
이차 검사. 일부 사례에서, 예로써 시료 내에 항-JCV 항체의 수준이 지정된 "불분명 구역" 또는 "불확정 구역" 내에 속할 때, 예를 들면, 항-JCV 항체의 존재 또는 부재에 대한 확실성이 제한되는 것으로 결정되는 경우에 (가령, nOD 값이 >0.2 및 <0.4인 것으로 결정될 때), 시료의 이차 검사 (일명, 본원에서 "확증 검정")가 이용된다. 이차 검사를 위하여, 2개 분량의 생물학적 시료가 이용된다. 일차는 시료를 용해 상태에서 검정 완충액의 존재에서 일정한 기간 동안 (가령, 4℃에서 30분, 1시간, 또는 그 이상, 예를 들면, 하룻밤 동안) 전배양함으로써, 검정에서 이용에 앞서 제조된다. 이차 분량은 시료를 용해 상태에서 HPVLP의 존재에서 일정한 기간 (가령, 30분, 또는 1시간 또는 그 이상) 동안 전배양함으로써, 검정에서 이용에 앞서 제조된다. 이들 두 분량은 그 다음, 본원에서 설명된 바와 같은 HPVLP 검정에 이용되고, 그리고 항-JCV 항체 양성 또는 항체 음성에 시료의 배정이 이루어진다. HPVLP와 함께 배양된 분량에 대한 검정 결과가 <45 저해 %의 값 (즉, "컷-포인트")을 지시하면, 시료는 JCV-특이적 항체의 존재에 대해 음성인 것으로 해석된다. 검정 결과가 ≥45 저해 %의 값을 지시하면, 시료는 JCV-특이적 항체를 갖고, 따라서 항체 양성인 것으로 해석된다.
이차 검사를 이용하는 본 발명에서 특징되는 검정은 또한, 본원에서 "2-단계 검사" 또는 "2-단계 검정"으로 지칭된다. 2 단계 검정의 초기 버전은 공동-소유된 International Application No. PCT/US2011/020832에서 설명되고, 이것은 본원에 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
기질과 용액 기초된 방법. 임의의 적절한 고형 기질이 HPVLP 검정 형식에 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 기질은 마이크로역가 평판 (가령, 96-웰 평판), 슬라이드, 비드, 또는 칼럼이다. 기질은 발색성 또는 화학발광 검출 방법, 또는 용액 기초된 방법, 예를 들면, 근위 결찰 (proximal ligation)에 적합할 수 있다.
컷-포인트. 본 발명은 가음성과 가양성 비율을 감소시키기 위해 "컷-포인트"를 이용하는 분석 방법을 제시한다. 컷-포인트는 예로써, 중복 검사 시료 및 다중 복제물 (가령, 대조 시료의 적어도 2개, 적어도 4개, 또는 적어도 8개 복제물) 사이에서 평균화된, HPVLP 검정 (가령, JCV 항체를 생물학적 시료 내에서 검출하기 위한)으로부터 데이터에 기초하여 확립된다. 컷-포인트는 또한, 비-PML과 PML 시료의 대규모 패널을 이용하여 통계학적으로 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 검정의 한 버전에서, 최초 HPVLP 스크리닝 검정, 예를 들면, ELISA 검정으로부터 결과는 검사 시료가 JCV-특이적 항체를 갖거나 갖지 않는 것으로 분류되도록 유발하거나, 또는 시료가 이들 두 분류 중에서 어디에도 속하지 않으면, 시료는 보충 확증 검정에 종속될 것이다. 가령, 본 발명에서 특징되는 HPVLP ELISA 검정에서 확립된 수준 이하의 결과 (가령, nOD450 < 0.2)를 산출하는 시료는 JCV-특이적 항체를 결여하는 것으로 분류될 것이고, 그리고 ELISA에서 확립된 수준 이상의 결과 (가령, nOD450 > 0.4)를 산출하는 시료는 JCV에 대해 양성-특이적 항체로서 분류될 것이다. 이들 분류 중에서 어디에도 명백하게 속하지 않는 시료 (가령, 0.2 < OD450 < 0.4)는 확증 검정에서 조사될 수 있다.
한 구체예에서, 확증 검정은 전-배양 단계를 필요로 하고, 여기서 검사 시료는 하기에 더욱 상세하게 기술된 바와 같이, HPVLP ELISA에서 분석에 앞서 JCV-특이적 항체를 미리 흡착하기 위해 완충액 (또는 기타 적절한 용액) 대조 또는 HPVLP (완충액 또는 다른 적절한 용액에서)와 함께 전-배양된다. HPVLP와의 전배양 후, 일차 검정에서 반응이 완충액 대조와 비교하여 45% 이하 감소하면, 시료는 JCV-특이적 항체의 존재에 대해 음성인 것으로 해석된다. 결과가 HPVLP와 함께 전-배양 후, 일차 검정에서 완충액 대조와 비교하여 반응에서 ≥45% 감소를 보이면, 시료는 JCV 특이적 항체를 내포하는 것으로 해석된다. 일부 구체예에서, 단지 확증 검정만 수행된다.
VP1. JCV 항체에 대한 검정에서 HPVLP의 이용은 검정의 정확성을 향상시킬 수 있고, 그리고 분석과 진단 목적에 적합한 검정에서 유용하다. HPVLP를 생산하는데 이용을 위한 VP1은 당분야에 공지된 방법을 이용하여 산출될 수 있고, 그리고 자연 발생 VP1 또는 재조합 방식으로 생산된 VP1, 예를 들면, JC 바이러스로부터 VP1일 수 있다. 일반적으로, 이용되는 VP1은 JCV의 MAD1 계통으로부터 VP1이다. 일부 구체예에서, 검정에 이용되는 VP1은 하나 이상의 JCV 계통, 예를 들면, 계통 1A, 1B, 2A, 2B, 3, 4, 그리고 7 중에서 한 가지 또는 그 이상으로부터 VP1를 포함한다. VP1, 예를 들면, 재조합 방식으로 합성된 VP1의 제조 후, 본원에서 설명된 검정에서 이용을 위한 VP1은 그 다음, 밀도-구배/초원심분리 방법, 또는 일련의 화학적 침전 단계, 농도/정용여과 및 이온-교환 크로마토그래피를 비롯한 표준 생화학적 방법을 통해 더욱 정제된다. 정제 방법은 전형적으로, 단위체 VP1 폴리펩티드, 또는 펜타머 VP1을 비롯한 더욱 작은 단백질을 제거하는 단계를 포함한다. 이들 더욱 작은 입자의 제거는 예로써, 1 단계 또는 2 단계 (가령, VP1 단위체를 제거하기 위한 일차 여과 단계, 그리고 그 다음, 펜타머 VP1 입자를 제거하기 위한 이차 여과 단계)에서 수행될 수 있다. 이런 생화학적 정제 방법은 당업자에게 알려져 있다. 실시예 1과 7은 JCV VP1-VLP 정제의 2가지 상이한 방법을 제공한다.
본 발명의 한 양상에 따른 HPVLP 제조물 (HPVLPs)은 유의미한 양의 VP1 단위체를 내포하지 않는다 (가령, 단위체를 제거하기 위해 정제되었다). 본 발명의 다른 양상에 따른 HPVLP 제조물은 VP1 펜타머, 또는 더욱 작은 (단위체 포함) 크기의 입체배열에서 유의미한 양의 VP1 분자를 내포하지 않는다. HPVLP는 재조합 VP1 또는 자연 발생 VP1로부터 제조될 수 있다 (가령, 바이러스 또는 바이러스 캡시드로부터 단리될 수 있다). 일부 구체예에서, 추가의 JCV 성분, 예를 들면, JC 바이러스, 예를 들면, VP2 또는 VP3으로부터 소수 피막 단백질 중에서 한쪽 또는 양쪽이 HPVLP 입자에 포함되거나 또는 기질과 결합된다.
일부 사례에서, 재조합 방식으로 발현된 VP1은 자연 발생 바이러스 캡시드와 유사한 펜타머 또는 HPVLP로 조립할 수 없다, 예를 들면, 재조합 방식으로 발현된 VP1은 튜브 또는 기타 비-구형 기하학적 구조로 조립할 수 있다. 따라서 본 발명은 기하학적 구조에서 실질적으로 구형인 HPVLP를 생산하는 방법에 관계한다. 본 발명은 HPVLP 제조물을 포함하고, 여기서 제조물 내에 HPVLP 중에서 적어도 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 50%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%가 자연 발생 JCV 캡시드와 유사하다 (가령, 정20면체이거나 또는 실질적으로 구형 입체배열을 갖는다). 일부 구체예에서, HPVLP 제조물에 내포된 HPVLP 중에서 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%는 자연 발생 JCV 캡시드와 유사하다. 이런 방법은 이런 제조물을 산출하는 조건 하에 바이러스 단백질을 발현하고 및/또는 발현된 바이러스 단백질을 본원에서 설명된 바와 같이 단리하고 정제하여 이런 제조물을 생산하는 것을 포함할 수 있다.
HPVLP를 제조하는 방법. HPVLP는 예로써, 배큘로바이러스를 VP1 유전자, 예를 들면, JC 바이러스로부터 VP1 유전자를 발현하는 벡터로 형질전환시킴으로써 만들어질 수 있다. 배큘로바이러스는 세포 배양액, 예를 들면, 곤충 세포 배양액 (가령, SF9 세포) 또는 포유류 세포 배양액을 감염시키는데 이용되고, 그리고 이들 세포는 VP1 단백질을 발현한다. HPVLP는 이들 세포를 용해시키고, 그리고 이들 입자를 일련의 원심분리와 한외여과 단계를 통해 정제함으로써 단리된다. 일반적으로, 정제는 당 쿠션 침강, 등밀도 초원심분리와 광범위한 한외여과 또는 당업자에게 알려진 기타 방법과 같은 방법을 이용하여 수행된다. 일정한 구체예에서, 정제는 입자를 당 쿠션을 통해 2회 원심분리하는 것을 포함할 것이다. 대안적 정제 방법에서, 세포는 용해되고, 그리고 입자는 일련의 침전과 농도/정용여과 단계 및 최종 이온-교환 단계에 의해 단리된다. 또 다른 대안적 방법에서, 이들 HPVLP는 크로마토그래피 방법에 의해, 그리고 원심분리 단계 없이 정제된다.
정제는 당분야에 공지된 임의의 적절한 기술, 예를 들면, 분석적 초원심분리, 전자 검경, PAGE 분석, 질량 분석, 단백질 농도, 또는 대조 혈청을 이용한 ELISA에서 활성을 이용하여 판단될 수 있다. 불충분하게 정제된 VLP는 높은 배경을 유발하고 부당하게 높은 항-JCV 항체 수준 또는 계산된 노출율을 산출한다.
일부 구체예에서, 이들 HPVLP는 VP1을 유일한 JC 바이러스 단백질로서 내포한다.
일부 구체예에서, 이들 HPVLP는 이종성 입자이고, 그리고 따라서, VP1 단백질, 그리고 JC 바이러스의 소수 피막 단백질, 예를 들면, VP2 또는 VP3 중에서 적어도 하나를 포함한다. 다른 구체예에서, HPVLP는 VP1, VP2와 VP3 단백질을 포함한다. VP1과 VP2를 포함하는 HPVLP는 당분야에 공지된 방법을 이용하여, 예를 들면, 배큘로바이러스를 예로써, 동일한 또는 상이한 프로모터의 제어 하에, VP1과 VP2 유전자를 포함하는 핵산으로 형질전환시킴으로써 생산될 수 있다. 세포 배양액은 상기 배큘로바이러스로 감염되고, 그리고 이들 세포는 VP1과 VP2를 발현하고, 그리고 양쪽 유형의 단백질을 포함하는 HPVLP가 형성된다. 한 구체예에서, VP1과 VP2 유전자는 상이한 DNA 분자 상에 있고, 이들 DNA 분자는 상이한 배큘로바이러스 내로 형질전환되고, 그리고 이들 배큘로바이러스는 동일한 배양액에서 세포를 형질감염시키는데 이용된다. 이들 세포는 VP1과 VP2 단백질을 발현하고, 그리고 양쪽 유형의 단백질을 포함하는 HPVLP가 형성된다. 일부 사례에서, 이종성 HPVLP는 예로써, 5개 VP1 폴리펩티드마다 1개 또는 2개 VP2 폴리펩티드를 내포할 것이다. 일반적으로, HPVLP는 자연 발생 JC 바이러스에서 그러한 것처럼, VP2 폴리펩티드보다 VP1 폴리펩티드를 더 많이 내포할 것이다.
VP1와 VP3 둘 모두 또는 VP1과 VP2 분자 둘 모두를 포함하는 HPVLP는 예로써, 배큘로바이러스를 동일한 또는 상이한 프로모터의 제어 하에, VP1과 VP3 유전자 또는 VP1과 VP2 유전자를 각각 포함하는 핵산으로 형질전환시킴으로써 생산될 수 있다. 세포 배양액은 상기 배큘로바이러스로 감염되고, 그리고 이들 세포는 VP1과 VP3 또는 VP1과 VP2를 발현하고, 그리고 양쪽 유형의 단백질을 포함하는 HPVLP가 형성된다. 일부 구체예에서, VP1과 VP3 또는 VP1과 VP2 유전자는 상이한 DNA 분자 상에 있고, 이들 DNA 분자는 상이한 배큘로바이러스 내로 형질전환되고, 그리고 이들 배큘로바이러스는 동일한 배양액에서 세포를 형질감염시키는데 이용된다. 이들 세포는 VP1과 VP3 단백질 또는 VP1과 VP2 유전자를 각각 발현하고, 그리고 양쪽 유형의 단백질을 포함하는 HPVLP가 형성된다. HPVLP 입자는 당분야에 공지된 방법, 예를 들면, JCV 캡시드를 단리하는데 이용되는 것들을 이용하여 이런 제조물로부터 단리될 수 있다.
전형적으로, 이종성 HPVLP 내에 있는 VP1 펜타머는 VP3 유전자 또는 VP2 유전자가 구조체를 만드는데 이용되는 지의 여부에 따라, 예로써 5개 VP1 폴리펩티드 및 1개 VP3 폴리펩티드 및/또는 1개 VP2 폴리펩티드를 포함할 것이다. 전형적으로, HPVLP 내에 VP3 또는 VP2 폴리펩티드보다 VP1 폴리펩티드가 더 많이 존재할 것이다. 일부 구체예에서, VP2 또는 VP3은 JC 바이러스가 아닌 폴리오마 바이러스, 예를 들면, BK 바이러스 폴리펩티드로부터 유래된다.
VP1과 VP2와 VP3 분자 중에서 3개 모두를 포함하는 HPVLP는 배큘로바이러스를 예로써, 동일한 또는 상이한 프로모터의 제어 하에, VP1, VP2와 VP3 유전자를 포함하는 핵산 (가령, 원형 DNA, 예를 들면, < 5.5 kb)으로 형질전환시킴으로써 생산될 수 있다. 세포 배양액, 예를 들면, 포유류 세포 배양액은 상기 배큘로바이러스로 감염되고, 그리고 이들 세포는 VP1, VP2와 VP3 단백질을 발현한다. 결과적으로, 3가지 유형의 단백질을 모두 포함하는 HPVLP가 형성된다. 한 구체예에서, VP1, 그리고 VP2와 VP3 중에서 어느 한쪽 또는 양쪽 유전자는 상이한 DNA 분자 상에 있고, 이들 DNA 분자는 동일한 또는 상이한 배큘로바이러스 내로 형질전환되고, 그리고 이들 배큘로바이러스는 동일한 또는 별개의 배양액에서 세포를 감염시키는데 이용된다. 이들 세포는 VP1, VP2와 VP3 단백질을 발현하고, 그리고 양쪽 유형의 단백질을 포함하는 HPVLP가 형성된다. 이종성 HPVLP는 비록 비율이 제조물 내에서 변할 수 있긴 하지만, 예로써 5개 VP1 폴리펩티드 및 각각 1개의 VP2와 VP3 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 전형적으로, HPVLP 내에 VP2와 VP3 폴리펩티드보다 VP1 폴리펩티드가 더 많이 존재할 것이다.
일부 구체예에서, HPVLP는 VP1 펜타머보다 크기가 더 클 것이다. 크기가 더 크다는 것은 HPVLP 입자에 내포된 단백질의 질량이 단지 VP1만을 내포하는 펜타머보다 크다는 것을 의미한다.
다른 구체예에서, HPVLP의 용액을 제조하는 방법은 VP1 펜타머의 크기이거나 또는 이보다 작은 입자 (가령, VP1 단위체 또는 작은 VP1 내포 입자)를 용액으로부터 제거하는 것을 포함할 수 있다. 원심분리 및 크기-배제 크로마토그래피와 같은 방법이 이러한 정제 단계를 수행하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 당분야에 공지된 다른 방법, 예를 들면, 이온 교환 크로마토그래피가 VP1 펜타머보다 큰 HPVLP의 제조에 이용될 수 있다. 일반적으로, 검정에 이용하기 적합한 HPVLP 제조물은 비-HLVLP 입자와 비교하여 (가령, VP1 단위체 및 5개 이하의 VP1 분자를 내포하는 집합체와 비교하여 펜타머의 퍼센트에 의해), 적어도 20% HPVLPs, 적어도 25% HPVLPs, 적어도 40% HPVLPs, 적어도 60% HPVLPs, 적어도 65% HPVLPs, 적어도 70% HPVLPs, 적어도 80% HPVLPs, 적어도 85% HPVLPs, 적어도 90% HPVLPs, 적어도 95% HPVLPs, 또는 적어도 99% HPVPLs를 내포할 것이다.
시료 및/또는 개체를 평가하는 방법. 본원에서 이용된 바와 같이, 개체 또는 개체로부터 생물학적 시료를 평가하거나 분석하는 방법은 시료의 분석을 수행하는 것, 시료의 분석을 요구하는 것, 시료의 분석으로부터 결과를 요구하는 것, 또는 시료의 분석으로부터 결과를 수취하는 것 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함한다. (본원에서 전반적으로, 결정 (또는 결정하는 것), 분석 또는 평가 (또는 평가하는 것)은 기초가 되는 방법을 수행하는 것, 또는 기초가 되는 방법을 수행한 다른 사람으로부터 데이터를 수취하는 것 중에서 한쪽 또는 양쪽을 포함할 수 있다)
분석 또는 평가는 재료, 예를 들면, 생물학적 재료 또는 검정 성분의 변환을 요구한다. 가령, 생물학적 시료는 항-JCV 항체의 존재, 항-JCV 항체 역가 및 JCV 항체의 저해 퍼센트에 대해 평가될 수 있다. 평가는 환자가 예로써, MS에 대한 치료를 받기 이전에, 또는 받은 이후에, 또는 받는 것과 동시에 수행될 수 있다. 평가는 적어도 부분적으로, 개체로부터 시료, 예를 들면, 혈액, 혈장, 혈청, 소변 또는 CSF 시료의 분석에 기초된다. 항-JCV 항체의 존재는 특정한 결합 작용제, 예를 들면, JCV 단백질, 예를 들면, VP1와의 접촉에 의해 결정될 수 있다. 결합 작용제는 JCV 단백질, 예를 들면, 입자의 형태에서 VP1, 예를 들면, HPVLP일 수 있다.
한 구체예에서, 항-JCV 항체의 존재를 검출하는 검정은 예로써, 본원에서 설명된 바와 같은 2-단계 검정이다. 이러한 검정은 항-JCV 항체를 결합시키는데 적합한 조건 하에 HPVLP를 이용한다. 검정은 항-JCV 항체의 임의의 아이소타입 (IgG, IgM, IgA, 그리고 IgE 포함)을 검출할 수 있다. 상기 검정은 또한, 고도로 민감하고 예로써, 2.0 μg/mL 또는 그 이하, 예를 들면, 1.5 μg/mL 또는 그 이하, 1.25 μg/mL 또는 그 이하, 1.0 μg/mL 또는 그 이하, 0.5 μg/mL 또는 그 이하, 50 ng/mL 또는 그 이하, 10 ng/mL 또는 그 이하, 5 ng/mL 또는 그 이하, 1.7 ng/mL 또는 그 이하, 또는 1 ng/mL 또는 그 이하의 농도에서 항-JCV 항체를 검출할 수 있다.
한 구체예에서, 시료는 시료 내에 존재하는 JCV 핵산의 수준에 대해 분석된다. 가령, 핵산은 시료로부터 단리되고, 그리고 PCR 증폭 또는 차세대 (Nex-Gen) 염기서열분석 기술에 이용될 수 있다. 한 구체예에서, 생물학적 시료의 가공되지 않은 용해물은 증폭 방법, 예를 들면, PCR에 종속되고, 그리고 증폭된 산물은 JCV DNA 또는 RNA가 시료 내에 존재하는 지의 여부 및 시료 내에 얼마나 존재하는 지를 확인하기 위해, 전기영동, 제한 단편 맵핑, 혼성화 또는 염기서열분석 중에서 한 가지 또는 그 이상에 의해 분석된다.
생물학적 시료는 환자로부터 제거되고 분석될 수 있다.
일부 구체예에서, 환자 시료, 예를 들면, 혈청 또는 혈장 또는 전체 혈액 시료 또는 CSF는 JCV, 예를 들면, JCV 항체 또는 JCV 핵산에 대한 검사에 앞서 보관될 수 있다. 환자 시료, 예를 들면, JCV 항체 또는 JCV 핵산을 내포하는 환자 시료는 1-21일, 예를 들면, 1-14일 또는 1-7일 또는 그 이상 (가령, 1일, 2일, 3일, 5일, 7일, 10일, 14일, 21일 또는 그 이상); 1 내지 6주, 예를 들면, 1 내지 3주 또는 1 내지 2주 또는 그 이상 (가령, 1주까지, 2주까지, 3주까지, 6주까지, 또는 그 이상); 또는 1 내지 6개월, 예를 들면, 1 내지 3개월 또는 1 내지 2개월 또는 그 이상 (가령, 1개월까지, 2개월까지, 3개월까지, 6개월까지 또는 그 이상) 동안 보관될 수 있다. 시료는 예로써, 냉동 (가령, -80℃ 내지 -20℃)에서, 2-8℃에서, 실온 (18℃-25℃)에서 또는 더욱 따뜻한 온도, 예를 들면, 37℃에서 보관될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "획득한다" 또는 "획득하는"은 물리적 실체 또는 값, 예를 들면, 환자의 상태, 예를 들면, 항-VLA-4 요법 또는 다른 면역억제제에 사전 노출, 또는 JCV 상태를 "직접적으로 획득"하거나 또는 "간접적으로 획득"함으로써 물리적 실체 또는 값, 예를 들면, 수치 값의 소유를 달성하는 것을 지칭한다. "직접적으로 획득"은 물리적 실체 또는 값을 달성하기 위한 과정을 수행하는 (가령, 합성적 또는 분석적 방법을 수행하는) 것을 의미한다. "간접적으로 획득하는"은 다른 당사자 또는 공급원 (가령, 물리적 실체 또는 값을 직접적으로 획득한 제삼자 실험실)으로부터 물리적 실체 또는 값을 수취하는 것을 지칭한다. 물리적 실체를 직접적으로 획득하는 것은 물리적 물질, 예를 들면, 출발 물질에서 물리적 변화를 수반하는 과정을 수행하는 것을 포함한다. 예시적인 변화에는 2개 또는 그 이상의 출발 물질로부터 물리적 실체를 만드는 것, 물질을 전단하거나 단편화시키는 것, 물질을 분리하거나 정제하는 것, 2개 또는 그 이상의 독립된 실체를 혼합물로 합치는 것, 공유 또는 비-공유 결합을 파괴하거나 형성하는 것을 포함하는 화학 반응을 수행하는 것이 포함된다. 값을 직접적으로 획득하는 것은 시료 또는 다른 물질에서 물리적 변화를 수반하는 과정을 수행하고, 예를 들면, 물질, 예를 들면, 시료, 분석물, 또는 시약에서 물리적 변화를 수반하는 분석적 과정 (본원에서, 때때로 "물리적 분석"으로 지칭됨)을 수행하고, 분석적 방법, 예를 들면, 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함하는 방법을 수행하는 것을 포함한다: 물질, 예를 들면, 분석물, 또는 이의 단편 또는 다른 유도체를 다른 물질로부터 분리하거나 정제하고; 분석물, 또는 이의 단편 또는 다른 유도체를 다른 물질, 예를 들면, 완충액, 용매, 또는 반응물과 합치고; 또는 예로써, 분석물의 일차와 이차 원자 사이에 공유 또는 비-공유 결합을 파괴하거나 형성함으로써 분석물, 또는 이의 단편 또는 다른 유도체의 구조를 변화시키고; 또는 예로써, 시약의 일차와 이차 원자 사이에 공유 또는 비-공유 결합을 파괴하거나 형성함으로써 시약, 또는 이의 단편 또는 다른 유도체의 구조를 변화시킨다.
환자의 상태 (가령, JCV 상태), 또는 활동 수준을 결정하는 것, 그리고 이러한 상태가 기준 규준과 미리 선택된 상관관계를 갖는 지를 결정하는 것 중에서 적어도 한쪽 또는 양쪽은 시료를 분석하는 것, 시료의 분석을 요구하는 것, 시료의 분석으로부터 결과를 요구하는 것, 또는 시료의 분석으로부터 결과를 수취하는 것 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함한다. (전반적으로, 분석은 기초가 되는 방법 (가령, 면역검정)을 수행하는 것, 또는 기초가 되는 방법을 수행한 다른 사람으로부터 데이터를 수취하는 것 중에서 한쪽 또는 양쪽을 포함할 수 있다.)
항-VLA-4 요법. 항-VLA-4 요법은 VLA-4 활성을 차단하는 분자, 예를 들면, 소형 분자 화합물 또는 단백질 생물학적 약제 (가령, 항체 또는 이의 단편, 예를 들면, 이의 항원결합 단편)이다. 항-VLA-4 요법인 분자는 VLA-4 길항제이다. VLA-4 길항제에는 VLA-4 인테그린이 리간드 및/또는 수용체에 결합하는 것을 저해하는 임의의 화합물이 포함된다. 항-VLA-4 요법은 항체 (가령, 나탈리주맙 (TYSABRI®)) 또는 이의 단편, 또는 리간드의 가용성 형태일 수 있다. α4 인테그린에 대한 리간드 단백질의 가용성 형태에는 가용성 VCAM-I 또는 피브로넥틴 펩티드, VCAM-I 융합 단백질, 또는 이중기능성 VCAM-I/Ig 융합 단백질이 포함된다. 가령, VLA-4 리간드 또는 이의 단편의 가용성 형태는 투여되면 VLA-4에 결합하고, 그리고 일부 경우에, 세포 상에서 VLA-4 결합 부위에 대해 경쟁하고, 따라서 길항제, 예를 들면, 항-VLA-4 항체의 투여와 유사한 효과를 유발한다. 가령, VLA-4 리간드에 결합하지만 인테그린-의존성 신호전달을 유도하지 않는 가용성 VLA-4 인테그린 돌연변이체가 전술한 방법에서 이용하기 적합하다. 이런 돌연변이체는 야생형 인테그린 단백질의 경쟁적 저해제로서 기능할 수 있고 "길항제"로 간주된다. 다른 적절한 길항제는 "소형 분자"이다.
"소형 분자"는 예로써, VLA-4에 결합하고 VLA-4 리간드 (가령, VCAM-I 또는 피브로넥틴)와의 상호작용을 차단함으로써, 또는 VLA-4 리간드에 결합하고 상기 리간드가 VLA-4와 상호작용하는 것을 예방함으로써, VLA4/리간드 상호작용을 교란하는 펩티드의 작용을 모방하는 작용제이다. 한 가지 예시적인 소형 분자는 VLA-4 리간드 (가령, 피브로넥틴 또는 VCAM-I)의 결합 도메인을 모방하고 VLA-4의 리간드-결합 도메인에 결합하는 올리고당류이다. (Devlin et al., Science 249: 400-406 (1990); Scott and Smith, Science 249:386-390 (1990); 그리고 U.S. Pat. No. 4,833,092 (Geysen)를 참조하고, 이들 모두 본원에서 참고문헌으로 편입된다)
"소형 분자"는 화학적 화합물, 예를 들면, 유기 화합물, 또는 소형 펩티드, 또는 더욱 큰 펩티드-내포 유기 화합물 또는 비-펩티드성 유기 화합물일 수 있다. "소형 분자"는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 비록 소형 분자의 분자량이 일반적으로 2000 달톤 이하이지만, 이러한 숫자는 분자량에서 절대 상한선으로서 의도되지 않는다.
복합 요법 또는 항-VLA-4 요법에 대한 대안. 일부 구체예에서, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙이 이차 작용제와 함께 투여되거나, 또는 대안 요법이 예로써, 환자가 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정될 때, 항-VLA-4 요법 대신에 투여될 수 있다.
항-VLA-4 요법과 공동으로 다발성 경화증을 치료하기 위한 이차 작용제, 또는 항-VLA-4 요법 대신에 이용을 위한 대안적 작용제의 무제한적 실례에는 하기가 포함된다: 푸마르산 염, 예를 들면, 디메틸 푸마르산염; 스핑고신 1-인산염 (S1P)-길항제, 예를 들면, S1B-차단 항체 스핑고맙 (Sphingomab); 인터페론, 예를 들면, 인간 인터페론 베타-1a (가령, AVONEX® 또는 Rebif®)) 및 인터페론 β-1b (BETASERON® 위치 17에서 치환된 인간 인터페론 β; Berlex/Chiron); 글라티라머 아세테이트 (일명, Copolymer 1, Cop-1; COPAXONE® Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); 항체 또는 이의 단편 (가령, 이의 항원-결합 단편), 예를 들면, 항-CD20 항체, 예를 들면, Rituxan® (리툭시맙), 또는 리툭시맙과 경쟁하거나 또는 리툭시맙과 함께 중복 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 단편; 미톡산트론 (NOVANTRONE®, Lederle); 화학치료성 작용제, 예를 들면, 클라드리빈 (LEUSTATIN®), 아자티오프린 (IMURAN®), 시클로포스파미드 (CYTOXAN®), 시클로스포린-A, 메토트렉사트, 4-아미노피리딘, 그리고 티자니딘; 코르티코스테로이드, 예를 들면, 메틸프레드니솔론 (MEDRONE®, Pfizer), 또는 프레드니손; CTLA4 Ig; 알렘투주맙 (MabCAMPATH®) 또는 다클리주맙 (CD25에 결합하는 항체); 스타틴; 그리고 TNF 길항제.
글라티라머 아세테이트는 아미노산 (글루타민산, 리신, 알라닌과 티로신 (따라서, GLATiramer))의 무작위 사슬로부터 형성되는 단백질이다. 글라티라머 아세테이트는 N-카르복시아미노산 무수물을 이용하여 대략 5 분율 알라닌 대 3 분율 리신, 1.5 분율 글루타민산 및 1 분율 티로신의 비율에서 이들 아미노산으로부터 용해 상태에서 합성될 수 있다.
추가의 이차 작용제, 또는 항-VLA-4 요법 대신에 이용되는 작용제에는 기타 인간 사이토킨 또는 성장 인자의 항체 또는 길항제, 예를 들면, TNF, LT, IL1, IL2, IL6, IL7, IL8, IL12 IL15, IL16, IL18, EMAP11, GMCSF, FGF, 그리고 PDGF가 포함된다. 또 다른 예시적인 이차 작용제에는 세포 표면 분자, 예를 들면, CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 또는 이들의 리간드에 대한 항체가 포함된다. 가령, 다클리주맙은 다발성 경화증을 개선할 수 있는 항-CD25 항체이다.
또 다른 예시적인 항체에는 본원에서 설명된 작용제의 활성을 제공하는 항체, 예를 들면, 인터페론 수용체, 예를 들면, 인터페론 베타 수용체와 맞물리는 항체가 포함된다. 전형적으로, 이차 작용제가 항체를 포함하는 실시에서, 이것은 VLA-4 이외의 또는 α4 인테그린 이외의 표적 단백질, 또는 나탈리주맙에 의해 인식되는 것 이외에 VLA-4 상에서 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
또 다른 추가의 예시적인 이차 작용제에는 하기가 포함된다: FK506, 라파마이신, 미코페놀레이트 모페틸, 레플로미드, 비-스테로이드성 소염성 약물 (NSAIDs), 예를 들면, 포스포디에스테라아제 저해제, 아데노신 효현제, 항혈전제, 보체 저해제, 아드레날린성 작용제, 본원에서 설명된 바와 같은 친염증성 사이토킨에 의한 신호전달을 간섭하는 작용제, IL-1β 전환 효소 저해제 (가령, Vx740), 항-P7s, PSGL, TACE 저해제, T-세포 신호전달 저해제, 예를 들면, 키나아제 저해제, 금속단백분해효소 저해제, 술파살라진, 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린, 안지오텐신 전환 효소 저해제, 본원에서 설명된 바와 같은 가용성 사이토킨 수용체와 이들의 유도체, 소염성 사이토킨 (가령, IL-4, IL-10, IL-13과 TGF).
일부 구체예에서, 이차 작용제는 MS의 하나 또는 그 이상의 증상 또는 부작용을 치료하는데 이용될 수 있다. 이런 작용제에는 예로써, 아만타딘, 바클로펜, 파파베린, 메클리진, 히드록시진, 술파메톡사졸, 시프로플록사신, 도쿠세이트, 페몰린, 단트롤렌, 데스모프레신, 덱사메타손, 톨테로딘, 페니토인, 옥시부티닌, 비사코딜, 벤라팍신, 아미트립틸린, 메테나민, 클로나제팜, 이소니아지드, 바르데나필, 니트로푸란토인, 사일륨 친수성 무실로이드, 알프로스타딜, 가바펜틴, 토르트립틸린, 파록세틴, 프로판텔린 브롬화물, 모다피닐, 플루옥세틴, 페나조피리딘, 메틸프레드니솔론, 카르바마제핀, 이미프라민, 디아제팜, 실데나필, 부프로피온, 그리고 세르트랄린이 포함된다. 소형 분자인 많은 이차 작용제는 150 내지 5000 달톤의 분자량을 갖는다.
TNF 길항제의 실례에는 TNF (가령, 인간 TNF α)에 대한 키메라, 인간화, 인간 또는 시험관내 산출된 항체 (또는 이들의 항원-결합 단편), 예를 들면, D2E7, (인간 TNFα 항체, U.S. Patent No. 6,258,562; BASF), CDP571/CDP-870/BAY-10-3356 (인간화된 항-TNFα 항체; Celltech/Pharmacia), cA2 (키메라 항-TNFα 항체; REMICADE™, Centocor); 항-TNF 항체 단편 (가령, CPD870); TNF 수용체, 예를 들면, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 이들의 유도체의 가용성 단편, 예를 들면, 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL™; Immunex; 예로써, Arthritis & Rheumatism 37:S295, 1994; J. Invest. Med. 44:235A, 1996을 참조한다), p55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질 (LENERCEPT™)); 효소 길항제, 예를 들면, TNFα 전환 효소 (TACE) 저해제 (가령, 알파-술포닐 히드록삼산 유도체, WO 01/55112, 그리고 N-히드록시포름아미드 TACE 저해제 GW 3333, -005, 또는 -022); 그리고 TNF-bp/s-TNFR (가용성 TNF 결합 단백질; 예로써, Arthritis & Rheumatism 39:S284, 1996; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology 268:37-42, 1995를 참조한다)이 포함된다.
한 실시에서, 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제는 공동-제제로서 제공되고, 그리고 이러한 공동-제제는 개체에 투여된다. 게다가, 예로써 공동-제제를 투여하기 이전 또는 투여한 이후 적어도 24시간 시점에, 1회 분량의 항-VLA-4 요법 제제 및 그 다음, 이차 작용제를 내포하는 1회 분량의 제제를 별개로 투여하는 것이 가능하다. 다른 실시에서, 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제는 별개의 제제로서 제공되고, 그리고 투여 단계는 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제를 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 이들 순차적 투여는 동일한 일자 (가령, 서로 1시간 이내에, 또는 적어도 3, 6, 또는 12시간 간격을 두고) 또는 상이한 일자에 제공될 수 있다.
항-VLA-4 요법 및 이차 작용제는 각각, 별개의 시점에서 복수의 분량으로서 투여될 수 있다. 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제는 전형적으로, 투약 계획에 따라 각각 투여된다. 한쪽 또는 양쪽에 대한 투약 계획은 규칙적인 주기성을 가질 수 있다. 항-VLA-4 요법에 대한 투약 계획은 이차 작용제에 대한 투약 계획과 상이한 주기성을 가질 수 있다, 예를 들면, 한쪽은 다른 쪽보다 더욱 빈번하게 투여될 수 있다. 한 실시에서, 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제 중에서 하나는 주1회 투여되고, 다른 하나는 월1회 투여된다. 다른 실시에서, 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제 중에서 하나는 연속적으로, 예를 들면, 30분 이상, 하지만 1, 2, 4, 또는 12시간 이하의 기간에 걸쳐 투여되고, 그리고 다른 하나는 볼러스로서 투여된다. 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제는 임의의 적절한 방법에 의해, 예를 들면, 피하, 근육내, 또는 정맥내 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 항-VLA-4 요법 및 이차 작용제는 각각, 단일요법을 위해 각각이 처방되는 동일한 분량으로 투여된다. 다른 구체예에서, 항-VLA-4 요법은 단독으로 투여되면 효능에 필요한 양에 동등하거나 이보다 적은 용량에서 투여된다. 유사하게, 이차 작용제는 단독으로 투여되면 효능에 필요한 양에 동등하거나 이보다 적은 용량에서 투여될 수 있다.
키트. 항-JCV 항체 검정을 수행하기 위한 시약은 키트의 형태에서 제공될 수 있다. 환자 시료를 제외하고, 검정을 위해 필요한 일부 또는 모든 재료가 키트에 담겨 제공될 수 있다. 키트는 예로써, 기질, 예를 들면, JCV 항원 기질, 예를 들면, HPVLP로 코팅된 웰을 갖는 평판을 포함할 수 있다. 평판은 예로써, 6-웰 평판, 12-웰 평판, 24-웰 평판, 48-웰 평판, 96-웰 평판 또는 384 웰 평판일 수 있다. 키트 내에 제공된 평판은 예로써, 0.4 μg/mL에서 JCV VLP 항원으로 미리 코팅될 수 있다. 한 구체예에서, 키트는 고-처리량 시스템과 함께 이용을 위한 재료와 시약, 예를 들면, bioMerieux 시스템과 함께 이용을 위한 SPR (Solid Phase Receptacle) 팁을 포함한다.
키트는 또한, 예로써 검정의 확증 단계에서 이용을 위한 냉동 건조된 또는 용해 상태에서 JCV 항원, 예를 들면, HPVLP를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 키트는 JCV 컷-오프 구경 측정기, 항-JCV 항체 양성 대조 및 JCV 음성 대조를 포함하고, 이들은 혈청, 예를 들면, 인간 혈청의 시료이다. JCV 항원 및 혈청을 내포하는 용액은 보존제, 예를 들면, 아지드화나트륨, 예를 들면, 0.05%, 0.1%, 1.5%, 그리고 2% 아지드화나트륨을 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명에서 특징되는 키트는 항원, 예를 들면, HPVLP에 결합된 항-JCV 항체를 내포하는 복합체를 검출하기 위한 하나 또는 그 이상의 시약을 포함할 수 있다. 복합체를 검출하기 위한 시약에는 예로써, JCV 접합체, 카제인 시료, 검출가능한 시약, 예를 들면, TMB (테트라메틸벤지딘), 세척 완충액, 그리고 중단 시약이 포함된다.
JCV 기질은 예로써, 항-인간 항체, 예를 들면, 효소-접합된 항-인간 항체일 수 있다. 한 구체예에서, JCV 접합체는 친화성-정제되고 과산화효소-접합된 당나귀 항-인간 항체이다. 다른 구체예에서, 카제인 용액은 완충액 (가령, 인산염 완충된 식염수 (PBS)) 내에 카제인, 계면활성제 및 비-아지드 보존제를 내포한다. 다른 구체예에서, TMB 기질 용액은 완충액 내에 TMB와 과산화수소를 내포한다. 다른 구체예에서, 키트는 세척 완충액을 포함하고, 그리고 이러한 세척 완충액은 예로써, 비-아지드 보존제와 함께, PBS 내에 계면활성제를 내포할 수 있다. 중단 시약은 예로써, 산, 예를 들면, 황산 (가령, 1 M 황산)일 수 있다.
키트에서 제공되는 용액은 이용에 앞서 희석이 필요할 정도로 농축된 수준으로 제공될 수 있다. 예로써, 2-단계 검정의 확증 단계에서 생물학적 시료 내에 항-JCV 항체에 결합하는, 용해 상태에서 이용을 위한 HPVLP는 예로써, 10 μg/mL, 5 μg/mL, 1 μg/mL, 0.8 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.2 μg/mL에서 이용을 위해, 2 mg/mL, 1.5 mg/mL, 1 mg/mL, 0.5 mg/mL의 농도로 제공될 수 있다. 세척 완충액은 예로써, 10x 농도로 제공될 수 있다. JCV 기질 (가령, 친화성-정제되고 과산화효소-접합된 당나귀 항-인간 항체)는 항-JCV 항체 검출 검정에서 이용에 앞서, 예로써 1:40,000, 1:30,000, 1:20,000 또는 1:20,000에 의한 희석을 위해, 예로써 1 mg/mL, 0.8 mg/mL 또는 0.6 mg/mL로 제공될 수 있다.
반응 혼합물을 밀봉하기 위한 재료, 예를 들면, 밀봉 테이프 역시 키트 내에 포함될 수 있다.
결과의 보고. 위험-판단 분석의 결과는 예로써, 치료 센터, 또는 의료인, 또는 보험 제공업체에 보고될 수 있다. 한 구체예에서, 위험-판단의 결과는 데이터베이스에 저장된다.
한 구체예에서, 정보 자료는 위험 판단을 수행하고 해석하기 위해 제공된다. 정보 자료는 판단의 결과를 어디에, 예를 들면, 치료 센터 또는 의료인 또는 데이터베이스 제공자에게 보고할 지에 관한 보도를 제공할 수 있다. 정보 자료는 키트 또는 패킷에 담겨 제공될 수 있고, 그리고 판단의 결과를 보고하기 위한 형태뿐만 아니라 판단의 각 갈래 (항-VLA-4 요법으로 사전 치료, 면역억제제로 사전 치료, 그리고 JCV 상태에 관한 정보), 그리고 이런 형태를 어디에 발송해야 하는 지에 관한 주소와 연락처 정보 또는 기타 관련된 정보; 또는 온라인 데이터베이스 또는 온라인 애플리케이션 (가령, "앱 (app)")에서 결과를 보고하기 위한 URL (Uniform Resource Locator) 주소를 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 정보 자료는 위험 판단의 결과에 따른 환자의 PML 위험에 따라, 환자가 항-VLA-4 요법으로 치료를 받아야 하는 지에 관한 보도를 포함할 수 있다.
키트 또는 패킷은 또한, 사용설명서, 그리고 의료인에 환자 시료의 수집 또는 수송, 또는 시료를 의료인으로부터 수취하기 위한, 또는 본원에서 설명된 평가 방법을 수행하기 위한 품목을 포함한다. 가령, 교육용 정보 이외에, 본 발명에서 특징되는 키트 또는 패킷은 생물학적 시료를 수집하고, 보관하고, 수송하기 위한 하나 또는 그 이상의 면종 또는 스크래퍼, 또는 그릇 (가령, 컵, 검사 튜브, 앰플, 또는 백)를 포함할 수 있다. 키트 또는 패킷은 또한, 면역검정을 수행하기 위한 공급품, 또는 JCV 항체 또는 핵산의 검출을 위한 염기서열분석 검정을 각각 내포할 수 있다.
키트는 검정, 예를 들면, JCV-검출 검정에 요구되는 시약을 위한 하나 또는 그 이상의 용기를 포함할 수 있다. 시약은 검정에서 이용하기 적합한 농도에서 또는 검정에서 이용을 위한 희석에 대한 설명서와 함께 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 키트는 검정 성분을 위한 별개의 용기, 분할기 또는 구획, 그리고 정보 자료를 내포한다. 가령, 검정 성분은 병 또는 바이알에 내포될 수 있고, 그리고 정보 자료는 플라스틱 슬리브 또는 패킷에 내포될 수 있다. 다른 구체예에서, 키트의 별개의 요소는 분할되지 않은 단일 용기에 내포된다. 가령, 검정 시약은 정보 자료가 라벨의 형태로 부착된 병 또는 바이알에 내포된다. 일부 구체예에서, 키트는 복수 (가령, 한 무리)의 개별 용기를 포함하고, 이들 각각은 검정 성분의 하나 또는 그 이상의 단위 형태 (가령, 1회 검정에서 이용을 위한)를 내포한다. 가령, 키트는 복수의 앰플, 포일 패킷, 또는 블리스터 팩을 포함하고, 이들 각각은 스크리닝 또는 확증 검정에서 이용을 위한 검정 시약의 단일 단위를 내포한다. 키트의 용기는 기밀 및/또는 방수일 수 있다. 용기는 이용을 위해 표지될 수 있다.
키트 또는 패킷의 정보 자료는 형태에서 제한되지 않는다. 많은 사례에서, 정보 자료, 예를 들면, 사용설명서는 인쇄물, 예를 들면, 인쇄된 텍스트, 도면, 및/또는 사진, 예를 들면, 라벨 또는 인쇄된 시트로 제공된다. 하지만, 정보 자료는 또한, 기타 형식, 예를 들면, 컴퓨터 판독가능 자료, 비디오 녹화, 또는 오디오 녹음으로 제공될 수 있다. 다른 구체예에서, 키트의 정보 자료는 연락처 정보, 예를 들면, 물리적 주소, 이메일 주소, 웹사이트, 또는 전화번호이고, 여기서 키트 또는 패킷의 사용자는 위험 판단 분석을 위해 요구되는 정보를 어떻게 찾는 지, 예를 들면, 개체에 투여된 사전 치료를 어디서 그리고 어떻게 확인하는 지, 그리고 환자의 JCV 상태를 결정하기 위한 검정을 어떻게 수행하는 지에 관한 실질적인 정보를 얻을 수 있다. 정보 자료는 또한, 형식의 임의의 조합으로 제공될 수 있다.
일부 구체예에서, 생물학적 시료는 이러한 시료를 검정에서 평가하고 판독을 제공하는 검정 제공자, 예를 들면, 서비스 제공자 (가령, 제삼자 시설) 또는 의료인에게 제공된다. 가령, 한 구체예에서, 검정 제공자는 개체로부터 생물학적 시료, 예를 들면, 혈장, 혈액 또는 혈청 시료를 수취하고, 그리고 본원에서 설명된 검정을 이용하여 시료를 평가하고, 그리고 상기 시료가 JCV 항체 또는 핵산을 내포하는 지를 결정한다. 일부 구체예에서, 검정 제공자, 예를 들면, 서비스 제공자 또는 의료인은 예로써, 의료인 또는 데이터베이스 서비스 제공자와 접촉함으로써, 환자가 받았던 사전 항-VLA-4 요법의 양 또는 환자가 면역조절제로 치료를 이전에 받았는 지의 여부를 더욱 결정할 수 있다. 검정 제공자는 개체가 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료를 받는 후보가 아닌 지, 또는 개체가 면역조절제로 치료를 받는 후보인 지, 또는 개체가 음성 JCV 상태를 갖는 것으로 결정되는 (가령, JCV 핵산 또는 항-JCV 항체에 대해 음성으로 검사되는) 개체와 비교하여 증강된 모니터링을 받아야 하는 후보일 수 있는 지를 더욱 결정할 수 있다. 가령, 항-VLA-4 요법으로 사전 치료를 24개월 또는 그 이하 동안 받았고, 그리고 면역억제제로 사전 요법을 받지 않았지만, JCV 양성인 것으로 결정되는 후보는 유해한 증상, 예를 들면, PML의 발병을 지시할지도 모르는 증상의 발생에 대해 환자를 더욱 빈번하게 모니터링하라는 권고가 동반되긴 하지만, 추가의 항-VLA-4 요법을 받는 후보로서 선별될 수 있다.
한 구체예에서, 검정 제공자는 본원에서 설명된 바와 같이 PML 위험에 대한 판단을 수행하고, 그리고 개체가 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 나탈리주맙으로 치료를 받는 후보임을 결정한다. 한 구체예에서, 검정 제공자는 의료인에게 상기 개체가 항-VLA-4 요법으로 치료에 대한 후보임을 통지하고, 그리고 상기 후보는 항-VLA-4 요법이 투여된다. 가령, 검정 제공자는 환자가 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있음을 결정하고, 그리고 차후에 의료인에게 더욱 낮은 위험의 결정 및 상기 개체가 항-VLA-4 요법으로 치료에 대한 후보임을 통지할 수 있다.
다른 실례에서, 검정 제공자는 환자가 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있음을 결정하고, 그리고 차후에 의료인에게 더욱 높은 위험의 결정을 통지하고, 그리고 환자가 항-VLA-4 요법으로 치료에 대한 후보이지만, PML 및 선택적으로, JCV 상태에 대한 증가된 검사를 받아야 한다고 권고한다. 한 구체예에서, 검정 제공자는 의료인에게 환자가 PML의 더욱 높은 위험에 처해 있고, 따라서 항-VLA-4 요법에 대한 대안 요법을 받아야 한다는 것을 통지하거나, 또는 환자가 PML 및 선택적으로, JCV 상태에 대한 증가된 검사를 동반하는 항-VLA-4 요법을 받는 후보라는 것을 통지한다.
검정 제공자는 위험 판단의 결과, 그리고 선택적으로, 진단, 예후, 또는 적절한 요법 옵션 중에서 하나 또는 그 이상에 관한 결론을 예로써 의료인, 또는 환자, 또는 보험 회사에, 임의의 적절한 형식으로, 예를 들면, 메일에 의해 또는 전자적으로, 또는 온라인 데이터베이스를 통해 제공할 수 있다. 검정 제공자에 의해 수집되고 제공된 정보는 데이터베이스에서 저장될 수 있다.
한 구체예에서, 의료인 또는 보험 제공자 또는 기타 실체는 예로써, 환자 또는 이차 의료인에게, 환자가 본원에서 설명된 바와 같이 PML에 대한 위험 판단을 받아야 한다고 권고한다.
PML 위험 계층화 도구는 PML이 발병하는 위험을 증가시키는 것으로 알려진 VLA4 저해제 또는 기타 치료제를 복용하고 있거나 복용을 고려하고 있는 환자에 대한 개인적인 혜택-위험 치료 결정을 내릴 때 한 가지 성분으로서 유용하다. 환자의 PML 위험의 정량은 예로써, 혜택-위험 분석에서 이용될 수 있다.
표제, 예를 들면, (a), (b), (i) 등은 단지, 명세서와 청구항을 쉽게 이해하도록 하기 위해 제공된다. 명세서 또는 청구항에서 표제의 이용은 이들 단계 또는 요소가 알파벳 또는 번호 순서, 또는 그들이 나타나 있는 순서 그대로 수행되어야 함을 요구하지 않는다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 더욱 예증되고, 이들은 추가적인 한정으로서 해석되지 않아야 한다.
실시예
실시예 1. MS 환자에서 PML 위험은 독특한, 2-단계 VP1 VLP-기초된 ELISA에 의해 결정된 2개의 확립된 위험 인자 및 항-JCV 항체 상태를 이용하여 최초로 정량되었다.
방법
환자, 시료와 데이터 수집
PML의 드문 발생으로 인하여, 나탈리주맙-치료된 PML 환자에 대한 데이터가 Biogen Idec global 나탈리주맙 안전성 데이터베이스로부터 시판후 데이터 및 2011년 3월 4일까지의 임상적 시험을 비롯한 여러 출처로부터 수집되었다. 사전 면역억제제 이용 데이터가 나탈리주맙에 노출된 모든 환자에 대해 가용한 것은 아니었다; 이런 이유로, TYSABRI® Global Observational Program in Safety (TYGRIS; NCT00477113, NCT00483847)에서 사전 면역억제제 이용이 있는 환자와 없는 환자의 비율이 전체 나탈리주맙-치료된 개체군에 대한 추산치로서 이용되었다. TYGRIS는 나탈리주맙-치료된 MS 환자에서 장기 안전성 데이터를 임상적 실무 설정에서 얻기 위해 설계된 관찰상 코호트 연구이다. 전체 MS 개체군에서 항-JCV 항체 유병률의 판단은 진행 중인 또는 완결된 나탈리주맙 임상적 연구 (AFFIRM (Polman et al., N. Engl. J. Med. 354:899-910, 2006; STRATIFY-1 (NCT01070823), TYGRIS-US, 그리고 Sweden에서 독립적 MS 레지스트리 (인터넷 상에서 msreg.net/cms/sv/home에서 이용가용, 2011년 2월 3일 접근됨))를 비롯한 4가지 출처의 환자로부터 수집된 단일 기준선 혈장 또는 혈청 시료에 기초되었다. 임상적 계획은 임상적 시험 및 시판후 사례 둘 모두를 비롯하여, PML 진단에 앞서 획득된 혈청과 혈장 시료의 광범위한 수집을 위해 진전되었다.
PML에 대한 위험 인자로서 나탈리주맙 치료 지속 기간의 확인
나탈리주맙 시장 재도입 이후로 PML 발생률의 추산치는 2011년 2월 28일까지 나탈리주맙 시판후 노출, 그리고 2011년 5월까지 확증된 PML 사례의 숫자에 기초하여 계산되었다. 각 기간 (누적 지속 기간 또는 12-개월 치료 간격) 동안 PML 발생률은 이러한 시간의 양 동안 나탈리주맙에 노출되었던 환자의 숫자에 의해 나눗셈된, 상기 기간 동안 PML이 발병한 환자의 숫자를 이용하여 계산되었다.
PML에 대한 위험 인자로서 사전 면역억제제 이용의 확인
시판후 설정 및 임상적 시험에서 PML이 발병한 나탈리주맙-치료된 MS 환자의 면역억제제 치료 전력은 2010년 11월 2일까지의 Biogen Idec global 나탈리주맙 안전성 데이터베이스로부터 획득되고, 그리고 TYGRIS로부터 획득된 데이터와 비교되었다. 사전 면역억제제 이용 전력에 대한 이러한 컷-오프 일자는 표지화에서 위험 인자로서 이것의 포함 (EU에서 2010년 12월) (Package Insert. TYSABRI® (나탈리주맙). Biogen Idec. Weston, MA July 2010; Summary of Product Characteristics. TYSABRI® (나탈리주맙). Biogen Idec. Weston, MA, December 13, 2010)이 혼란 인자일 것으로 예상되기 때문에, 선택되었다 (모든 다른 데이터의 경우에 2011년 3월 4일과 대비하여).
PML에 대한 위험 인자로서 항-JCV 항체 상태의 확인
전체 MS 개체군에서 항-JCV 항체의 전체 유병률은 앞서 기술된 바와 같은 독특한 2-단계 VP1 VLP-기초된 ELISA를 이용하여 결정되었다 (Gorelik et al., Ann. Neurology, 2010). 전-PML 혈청 또는 혈장 시료가 진단에 앞서 가용한 PML을 앓는 MS 환자에서 항-JCV 항체의 유병률 역시 이러한 검정을 이용하여 결정되고 전체 MS 개체군에서 전체 유병률에 비교되었다.
항-JCV 항체 혈청상태에 의한 PML 발생률의 추산
항-JCV 항체 양성과 음성 환자에서 PML의 발생률은 PML의 전세계 발생률, 그리고 25-48개월 주입 후 (이 시점 후, PML 발생률에서 증가가 이러한 분석에서 가장 현저하였다) 발생률, 전체 MS 개체군에서 항-JCV 항체 유병률, 그리고 진단에 앞서, 항-JCV 항체 양성으로 검사된, 전-PML 시료가 이용가능한 PML을 앓는 MS 환자의 숫자를 이용하여 추산되었다. 항-JCV 항체 양성 환자와 항-JCV 항체 음성 환자에서 PML의 추산된 발생률을 비교하기 위해 단측 피셔의 정확 검증 (one-sided Fisher's exact test)이 이용되었다. 항-JCV 항체 음성 환자에서 PML 발생률의 보수적 추산치를 제공하기 위해, 이러한 추산치에 대한 가상 항-JCV 항체 음성 PML 사례의 영향을 판단하기 위한 민감도 분석이 수행되었다. 추가적으로, 항-JCV 항체 양성 PML 사례의 숫자를 변경함으로써 이러한 추산치의 통계학적 확실성을 판단하기 위한 민감도 분석이 수행되었다.
PML 위험의 정량: 사전 면역억제제 이용, 나탈리주맙 치료 지속 기간, 그리고 항-JCV 항체 양성 상태
나탈리주맙 연관된 PML과 항-JCV 항체 혈청상태에 대한 일정한 위험 인자가 있는 환자와 없는 환자에서 PML 발생률을 추산하기 위한 위험 인자 알고리즘이 개발되었다. 이들 알고리즘은 PML 위험을 사전 면역억제제 이용 (예 또는 아니오), 나탈리주맙 치료 지속 기간 (1-24개월 및 25-48개월), 그리고 항-JCV 항체 상태에 의해 추산하였다. 이들 위험 알고리즘은 나탈리주맙 치료 지속 기간 (1-24 또는 25-48개월)에 의한 PML 발생률 데이터, 그리고 TYGRIS로부터 나탈리주맙-치료된 환자 및 PML을 앓는 환자에서 사전 면역억제제 이용의 추산치에 기초되었다. 이에 더하여, 전체 MS 개체군에서 항-JCV 항체의 추산된 전체 유병률은 나탈리주맙-연관된 PML의 모든 확증된 사례가 진단에 앞서 항-JCV 항체 양성이라는 추정 하에, 3-인자 위험 알고리즘에 대하여 혈청상태와 연관된 PML의 발생률을 귀속시키는데 이용되었다. 관찰된 최대값과 최저값에 기초된 이러한 3 인자 알고리즘을 개발하는데 이용된 추산치를 변경하는 효과를 정량하기 위한 민감도 분석이 수행되었다.
결과
PML에 대한 위험 인자로서 나탈리주맙 치료 지속 기간의 확인
전세계 기초에서, 102건의 확증된 PML 사례가 2011년 3월 4일까지 확인되었다. 전체적으로, PML 위험은 치료 지속 기간이 증가함에 따라 증가하였고 (도 1A), 위험에서 최대 증가는 2년의 요법 후 발생하였고, 3년째에 1000명 환자당 1.68 사례로 정점에 도달하였다 (도 1B). 4년을 초과하는 데이터는 제한되었다.
PML에 대한 위험 인자로서 사전 면역억제제 이용의 확인
사전 면역억제제 이용은 나탈리주맙을 받는 전체 환자 개체군을 대표하는 TYGRIS에 등록된 환자와 비교하여, PML이 발병한 나탈리주맙 치료된 환자에서 더욱 흔하였다. 나탈리주맙-치료된 PML 환자 중에서 45 퍼센트는 TYGRIS로부터 나탈리주맙-치료된 환자에서 20.3% (US에서 13.9% 및 EU에서 23.6%)와 비교하여, 나탈리주맙으로 치료를 개시하기에 앞서 한 가지 또는 그 이상의 면역억제제 요법을 받았다. 나탈리주맙-치료된 PML 개체군과 TYGRIS 둘 모두에서 가장 흔히 이용된 사전 면역억제제에는 미톡산트론, 메토트렉사트, 시클로포스파미드, 아자티오프린, 그리고 미코페놀레이트가 포함되었고, 면역억제제의 유형, 이용의 지속 기간, 또는 면역억제제의 중단과 나탈리주맙의 개시 사이에 휴약기에서 특정한 패턴이 관찰되지 않았다 (표 1).
Figure pat00002
PML 위험의 정량: 나탈리주맙 치료 지속 기간 및 사전 면역억제제 이용
환자가 나탈리주맙 치료 지속 기간 (1-24 또는 25-48개월) 및 사전 면역억제제 이용 (예 또는 아니오)에 의해 계층화될 때, 환자의 4가지 상이한 하위집단이 PML의 발생률에 대하여 확인되었다 (도 2). 이들 하위집단 중에서 3개는 1000명당 1명보다 작거나 대략 이에 동등한 추산된 PML 발생률을 가졌다. PML 위험은 나탈리주맙으로 1-24개월 동안 치료되고, 그리고 사전 면역억제제 요법을 받지 않았던 환자에서 1000명당 0.19명 (95% CI: 0.10-0.33)으로 가장 낮았다. PML에 대한 이들 위험 인자 둘 모두를 갖는 환자를 포함하는 네 번째 하위집단은 1000명당 4.3명 (95% CI: 2.9-6.2)의 추산된 PML 발생률로 최대 위험을 가졌다.
PML에 대한 위험 인자로서 항-JCV 항체 상태의 확인
AFFIRM, TYGRIS-US, STRATIFY-1, 그리고 Swedish MS Registry로부터 5,896명의 환자는 항-JCV 항체 검사에 이용가능한 기준선 시료를 가졌다. 나탈리주맙 치료 지속 기간 및 사전 면역억제제 이용 전력을 비롯한 인구 통계는 이용가능한 경우에, 이들 데이터 출처 간에 유사하였다 (표 2). 본 연구에서 판단된 전체 MS 개체군에서 전체 항-JCV 항체 유병률은 55% (95% CI: 54-56%)이었다.
Figure pat00003
TYGRIS-US 데이터세트에서, 1480명 환자 중에서 1451명은 연령, 성별 및 사전 면역억제제 정보가 가용하였다. STRATIFY-1 데이터세트에서, 1096명 환자 중에서 988명은 사전 면역억제제 정보가 가용하였다. Swedish MS 데이터세트에서, 2497명 환자 중에서 2464명은 연령 정보가 가용하였고, 그리고 2497명 환자 중에서 2494명은 성별 정보가 가용하였다. 사전 면역억제제 이용은 Swedish MS 환자에서 가용하지 않았다 (NA).
하나 또는 그 이상의 전-PML 시료가 PML 진단에 앞서 6.5-187개월에, 25명의 나탈리주맙-치료된 MS 환자로부터 획득되었다. 표 1 보충에서 제시된 바와 같이, 이들 25명의 환자는 전세계적으로 102건의 확증된 PML 사례와 유사한 임상적 특징을 나타냈는데, 이것은 명백한 선택 편향 (selection bias)이 없음을 지시하였다. 복수의 전-PML 시료가 가용한 모든 환자는 나탈리주맙 치료의 개시에 앞서 수집된 시료를 비롯하여, 모든 시점에서 항-JCV 항체 양성으로 검사되었다. PML 진단에 앞서 MS 나탈리주맙-치료된 PML 환자에서 100% (25명중 25명) 항-JCV 항체 양성 유병률은 전체 MS 개체군에서 관찰된 예측된 55% 유병률과 유의미하게 상이하였는데 (p<0.0001), 이것은 추가의 PML 위험 계층화 도구로서 역할하는 항-JCV 항체 상태의 능력을 증명하였다.
Figure pat00004
MS 발병 데이터는 항-JCV 항체 양성 군에서 5명 환자 및 모든 PML 군에서 38명 환자에 대해 알려지지 않았다. 사전 면역억제제 이용 상태는 항-JCV 항체 양성 군에서 1명 환자 및 전체 PML 군에서 9명 환자에 대해 알려지지 않았다.
항-JCV 항체 혈청상태에 의한 PML 발생률의 추산
항-JCV 항체 양성인 환자에서 PML의 발생률은 전체 나탈리주맙-치료된 개체군의 PML의 발생률보다 거의 2-배인 것으로 추산되었다 (표 4). PML의 전체 발생률을 항-JCV 항체 상태에 의해 추산하기 위해, 하기 방법이 이용되었다: 전-PML 시료가 가용한 25명의 나탈리주맙-치료된 MS 환자에 기초하여, PML을 앓는 25명의 MS 환자는 PML의 전체 비율, 1000명 환자당 1.23명에 기준하여, 나탈리주맙 치료를 받은 대략 20276명의 환자로부터 나온 것으로 추산되었다 (도 1). 이들 20276명의 환자 중에서 55%는 항-JCV 항체 양성 (즉, 11152명의 환자)이고, 그리고 45%는 항-JCV 항체 음성 (즉, 9124명의 환자)이라는 추정 하에, 항-JCV 항체 양성 환자에서 PML의 발생률은 치료된 1000명 환자당 2.24 사례 (=1000x25/11152), 95% CI: 1.45-3.31인 것으로 추산되었는데, 이것은 기존 문헌 (Tyler, Ann. Neurol. 68:271-274, 2010)에서 추산된 비율과 유사하였다. 역으로, 항-JCV 항체 음성 환자에서 PML의 추산된 발생률은 1000명 환자당 0 사례 (95% CI: 0-0.40)이었는데, 이것은 항-JCV 항체 양성 환자에서 추산된 발생률과 유의미하게 상이하였다, p<0.0001.
Figure pat00005
이러한 추산치에 대한 나탈리주맙 치료 지속 기간의 효과는 25-48개월의 나탈리주맙 (요법의 이러한 지속 기간 후, 발생률에서 증가가 가장 현저하였다) 이후에 PML 발생률을 이용한 분석에서 판단되었다. 25-48개월의 요법 후 PML의 위험은 항-JCV 항체 양성 환자에서 1000명당 3.97명 (95% CI: 2.36-6.27), 그리고 항-JCV 항체 음성 환자에서 1,000명당 0명 (95% CI: 0-0.99)이었다 (표 3).
이러한 작성의 시점에서, 항-JCV 항체 음성 환자에서 PML의 발생률은 완전하게 확증될 수는 없었는데, 그 이유는 어떤 PML 사례도 진단에 앞서 항-JCV 항체 음성으로 검사되지 않았기 때문이다. 이런 이유로, 항-JCV 항체 음성 환자에서 PML의 발생률을 추산하기 위하여, PML의 가상 사례가 항-JCV 항체 음성 환자에서 발생하였고, 따라서 보수적 추산치의 결정이 가능하며, 이에 대한 비율이 아마도 낮아질 거라는 추정 하에, 민감도 분석이 수행되었다. 이러한 분석은 항-JCV 항체 양성 환자에서보다 항-JCV 항체 음성 환자에서 적어도 20-배 낮은 PML의 추산된 발생률을 증명하였다, p<0.0001 (표 3).
항-JCV 항체 양성으로 검사된, 전-PML 시료가 가용한 항-JCV 항체 양성 PML 환자의 숫자를 증가시키는 효과의 민감도 분석은 항-JCV 항체 양성 환자에서 PML의 증가된 위험과 관련된 통계학적 확실성이 25개의 가용한 전-PML 시료를 초과하여 향상되지는 않는다는 것을 증명하였다 (표 5).
Figure pat00006
PML 위험의 정량: 나탈리주맙 치료 지속 기간, 사전 면역억제제 이용, 그리고 항-JCV 항체 상태
나탈리주맙 치료 지속 기간, 사전 면역억제제 이용, 그리고 항-JCV 항체 상태에 기초하여, 나탈리주맙-치료된 MS 환자에 대한 통합된 정량적 PML 위험 알고리즘이 개발되었다 (도 3). JCV 노출이 PML에 대한 필요조건이기 때문에, 항-JCV 항체 음성인 환자는 민감도 분석에서 결정된 보수적 추산치에 기초된 1000명당 ≤ 0.11명 (95% CI: 0-0.59)의 추산된 위험으로, PML 위험 계층화 알고리즘에서 최저 위험 하위집단을 나타냈다. 역으로, 최대 위험 군은 항-JCV 항체 양성이고, 사전 면역억제제 이용이 있고, 그리고 나탈리주맙으로 치료를 25-28개월 동안 받았던 환자로 구성된다. 이러한 알고리즘은 PML의 102건의 확증된 사례 모두 PML 진단에 앞서 항-JCV 항체 양성인 것으로 추정하였다. 더욱 높은 위험 하위집단 (3개 위험 인자를 모두 갖는 환자)의 경우에, 추산된 PML 위험은 1000명당 대략 7.8명 (95% CI: 5.2-11.3)이었다. 항-JCV 항체 양성이고 사전 면역억제제 이용이 없는 환자의 경우에, PML 위험은 유사한 시점에서 전체 나탈리주맙-치료된 개체군에서 위험과 일치하였다 (도 1A와 1B). 이러한 알고리즘을 개발하는데 이용된 추산치를 변경하는 효과의 민감도 분석은 기준 사례 시나리오에서 관찰된 본래 추산치와 전반적으로 일치하는 최소값과 최대값을 산출하였다 (도 4A와 4B 참조). 항-JCV 항체 음성 환자에서 위험은 PML의 가상 사례가 항-JCV 항체 음성 환자에서 발생했다고 추정함으로써 결정되었다.
이러한 분석은 전체 MS 개체군에서 항-JCV 항체 유병률을 48% (TYGRIS-US에서 관찰됨)에서 59% (독립적인 Swedish Registry에서 관찰됨)로, 나탈리주맙-치료된 MS 개체군에서 사전 면역억제제 이용을 14에서 24%로 (각각, TYGRIS에서 US와 EU 추산치에 기초됨), 그리고 나탈리주맙 25-48개월 노출 추산치를 35에서 45%로 (40%의 현재 추산치 및 전년도에 대략 10% 증가에 기초됨) 변경하였다. 플롯은 각 시나리오에 대한 포인트 추산치 및 95% 신뢰 간격 (기준 사례, 최소, 그리고 최대)을 나타낸다. 일반적으로, 기준 사례 시나리오는 최소와 최대 추산치와 상대적으로 일치하였다.
JCV 감염이 PML 발병에 요구되기 때문에, PML의 가장 낮은 위험은 다른 위험 인자와 상관없이, 항-JCV 항체 양성 환자에서보다 적어도 20-배 낮은 1000명 나탈리주맙-치료된 환자당 ≤ 0.11 사례 (95% CI 0-0.59)로, 항-JCV 항체 음성인 환자에서 있는 것으로 결정되었다, p<0.0001. 비록 현재까지 항-JCV 항체 음성 환자에서 PML의 사례가 없긴 하지만, PML이 발병하는 진정한 위험은 제로일 수 없는데, 그 이유는 항-JCV 항체 검정이 2.5-3.2% 사이의 추산된 분석적 가음성률을 갖기 때문이다1,19 역으로, PML 위험은 3개 위험 인자 (25-48개월 동안 나탈리주맙 치료, 사전 면역억제제 이용, 그리고 항-JCV 항체 양성 상태) 모두를 갖는 환자에서 가장 높았고, 추산된 발생률이 1000명 환자당 7.8 사례 (95% CI: 5.2-11.3)이었다.
실시예 2. 항-JCV 항체 ELISA는 상기 방법의 견고성을 증명하기 위해 임상적 실험실에서 검증되었다.
인간 혈청 또는 혈장에서 항-JCV 항체를 검출하는 신규한 2-단계 효소-연결된 면역흡착성 검정 (ELISA)이 최근에 보고되었다 (PCT/US2011/020832를 참조한다). 이러한 검정의 핵심 속성에는 직접적인 결합과 용해 상태 경쟁 성분 둘 모두; JC 바이러스-유사 입자 (VLP)의 충분히 특성화된 제조물의 이용; 적절한 품질 관리 (QC) 시료의 포함; 다수의 종단면 수집된 임상적 시료를 이용한 검정 컷 포인트의 통계학적 결정; 검정 신호의 정규화; 그리고 항-JCV 항체의 여러 아이소타입 (IgG, IgM, IgA, 그리고 IgE 포함)의 검출이 포함된다.
항-JCV 항체 ELISA는 상기 방법의 견고성을 증명하기 위해, 3곳의 임상적 실험실에서 검증되었다. 분석적 검증은 검정 간과 검정 내 정밀도, 분석적 특이성과 민감성, 매트릭스 간섭, 견고성, 그리고 시약 안전성의 평가에 의해 수행되었다.
혈청과 혈장 시료 내에서 항-JCV 항체의 안전성은 합쳐진 인간 혈청으로부터 제조된 검정 QC 시료뿐만 아니라 개별 공여자로부터 혈청과 혈장 시료를 이용함으로써 증명되었다. 항-JCV 항체는 실온 (18-25℃) 및 2-8℃ 둘 모두에서 보관될 때, 6회 냉동/해동 주기 내내, 그리고 14일 동안 혈청 또는 혈장 내에서 안정한 것으로 밝혀졌다. 추가적으로, 가공 처리에 앞서, 2-8℃에서, 실온 (18-25℃)에서, 또는 37℃에서 각각 7일, 7일, 그리고 3일 동안 보관된 전체 혈액 내에서 항-JCV 항체의 안정성 역시 혈청과 혈장 수집 튜브 둘 모두를 이용하여 관찰되었다. JC VLP의 안정성은 2-8℃에서 4회 냉동/해동 주기 내내, 그리고 18개월 동안 관찰되었다.
이러한 분석적 검증은 상기 검정이 민감하고, 특이적이고, 그리고 정확하다는 것을 증명하였다. 검정 민감도는 인간화된 항-JCV 단일클론 항체 대조를 이용하여 1.7 ng/mL로 추산되었고, 그리고 항-JCV 항체 양성 혈청으로부터 정제된 다중클론 항체를 이용하여 1.25 μg/mL로 추산되었다. JCV 감염을 검출하는 민감도는 97.5%인 것으로 추산되었다. JCV 특이적 항체를 관련된 폴리오마바이러스인 BK 바이러스에 지향된 항체와 식별하는 검정의 특이성 역시 증명되었다. 평균 검정 간과 검정 내 정밀도는 대략, 스크리닝 단계의 경우 6.4%와 12.2%, 그리고 확증 단계의 경우 2.6%와 5.3%이었다. 혈장과 혈청에 대해 획득된 결과는 고도로 일치하고, 그리고 검정 견고성은 100개 맹검 시료의 패널을 검사하는 3개 실험실에 의해 산출된 고도로 일치하는 결과에 의해 증명되었다.
실시예 3. 정밀화된 2-단계 JCV 검정 (Gen2 검정)은 본래 검정 (Gen1검정)보다 더욱 정확한 결과를 제공한다.
2-단계 항-JCV 항체 검정은 최적화 라운드 이후에 변형되었다. 이러한 새로운 검정은 적어도 다음의 방식에서 일차 검정과 상이하다:
ㆍ HPVLP는 Gen1 검정에서 이용된 1 μg/mL와는 대조적으로, 일차 단계에서 평판 상에, 그리고 확증 검정에서 용해 상태에서 0.4 μg/mL의 기질 농도로 이용된다;
ㆍ 환자 혈청은 Gen1 검정에서 1:200과는 대조적으로, 검정의 일차 단계에서 평판 상에 HPVLP에, 또는 확증 검정에서 용해 상태에서 HPVLP에 적용하기에 앞서 1:101 희석된다;
ㆍ HRP에 접합된 이차 시약 (항-인간 IgG)은 전형적으로 1:20,000 희석되고 (하지만, 새로운 로트가 신호를 이전 로트에 조화시키기 위해 재조정되어야 할지도 모른다), 그리고 접합체와 함께 배양 시간은 단지 30분이다. Gen1 검정에서, 동일한 시약은 1:80,000 희석되고, 그리고 배양 시간이 60분이었다;
ㆍ 결합 반응은 HRP 기질 TMB를 20분 ± 2분 동안 배양함으로써 검정되는 반면, Gen1에서, TMB 배양은 20분 ± 5분 동안이었다;
ㆍ 확증 검정에서, 10 μl의 시료가 1 mL의 확증 완충액 (1:101 희석)에 첨가되고, 그리고 반응은 10 내지 20분 동안 진행된다. Gen1 검정에서, 2x 농도의 시료 (1:100 희석) 및 HPVLP (2 μg/mL)가 동등한 비율에서 혼합되고, 이후 60분 동안 배양되었다.
ㆍ 컷-오프 구경 측정기 (CO)는 약 nOD 1.0의 반응성 지수를 갖도록 조정되고, 그리고 양성 대조 (PC)는 약 nOD 1.3의 반응성 지수를 갖도록 조정된다. CO와 PC는 항-JCV 항체 양성 혈청 및 항-JCV 항체 음성 혈청을 혼합함으로써 만들어진다. 전형적으로 병 음성 혈청인 음성 대조 (NC)의 경우에, 반응성 지수 목표는 약 0.1이다;. 정성적으로, 이들 대조는 인간 혈청의 상이한 풀로부터 나오지만, 검정 표적 농도로부터, 이들은 Gen 1 대조 수준과 유사하다.
JCV Gen2 임상적 동의 연구 결과는 하기 표 6에 요약된다. 모든 Gen1 검사는 Focus Diagnostics 기준 실험실 (Cypress, CA)에서 수행되고, 그리고 Gen2 검정을 위한 검사 장소에는 Denver (n: 전체= 275; TYSABRI® 검사 = 149; 무경험 = 126); New York (n: 전체= 275; TYSABRI® 검사 = 136; 무경험 = 139); 그리고 Focus Diagnostics (n= 전체 262; TYSABRI® 검사 = 95; 무경험 = 167)가 포함되었다. 동의 퍼센트는 96% 신뢰 간격의 하한과 상한 대역 (95% Cl: LB 내지 UB)에서, (Gen2/Gen1)로서 표시된다.
Figure pat00007
실시예 4. 항-JCV 항체 상태는 PML에 대한 환자의 위험을 분류하는데 이용될 수 있다.
출원인들은 항-JCV 항체 양성 환자가 항-JCV 항체 역가 (nOD 또는 지수) 및 항-JCV 항체 친화력/친화성 (저해 %)에 기초하여, PML이 발병하는 위험에 대해 더욱 계층화될 수 있다는 가설을 세웠다. 이러한 가설은 미리 결정된 수준 ("임상적 컷-포인트") 미만의 항-JCV 항체 역가와 저해 %를 갖는 환자가 전체 항-JCV 항체 양성 개체군과 비교하여, PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있다는 관찰 결과로부터 도출되었다. 항체 역가와 저해 퍼센트의 상태에 의해 제안된 PML의 상대적 위험을 결정하기 위하여, 항-JCV 항체 역가와 저해 퍼센트는 TYSABRI® (나탈리주맙)의 개시에 앞서 또는 환자가 이미 TYSABRI®를 복용하고 있을 때 달성될 수 있다.
다른 위험 인자와 공동으로 항체 역가와 저해 퍼센트의 상태에 의해 제안된 PML의 상대적 위험을 결정하기 위하여, 2개의 상이한 항-JCV 항체 검정 ("세대 I"과 "세대 II")으로부터 기존의 데이터가 수집되고 분석되었다. 기존의 데이터는 "nOD" 또는 "지수"로서 표시된 항-JCV 항체 역가 정보를 포함하였다.
세대 I 검정에서, 22% (77/356)의 항-JCV 항체 양성 환자가 nOD > 1.0 (C-1801)을 가졌고, 그리고 34% (13/38)의 항-JCV 항체 양성 PML 환자가 nOD >1.0 (C-1801)을 가졌다. 따라서 ~1.5배 많은 PML 환자가 비-PML 환자와 비교하여 nOD > 1.0을 가진다. 이것은 nOD>1.0과 연관된 2-3-배 위험 비율로 해석된다.
6%의 TYSABRI® 비-PML 환자는 또한, >2년에 걸쳐 수집된 종단면 시료에 대한 항-JCV 항체 역가 (nOD)에서 >2배 변화 (C-1801)를 갖는 것으로 관찰되었다. 하지만, 종단면 시료가 정보제공 시점 (PML 진단 전 >1년, 그리고 PML 진단의 6개월 이내에, 그리고 PML 진단 시점)에서 수집된 대부분의 PML 환자는 항-JCV 항체 역가 (nOD)에서 >2배 증가를 보였다. 이것은 시간의 흐름에서 JCV 역가에서 유의미한 변화를 나타내지 않는 환자가 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있다는 것을 암시한다.
예시적인 nOD와 항체 역가는 도 5A-10B에서 제공된다. 환자 데이터는 표 7에 요약된다.
통계학적 분석의 그래프는 도 11에 도시된다.
통계학적 분석은 저해 퍼센트의 경우에, ~17%의 항체양성 시료가 0.502 이하이고, 그리고 ~0%의 PML 시료가 0.502 이하라는 것을 지시하였다. ~30%의 항체-양성 시료가 70% 이하 저해이고, 그리고 ~0%의 PML 시료 (지수 <3.0)가 70% 이하 저해이다.
Figure pat00008
실시예 5. 분석적으로 검증된 항-JCV-항체 검정은 MS 환자를 PML의 더욱 높은 또는 더욱 낮은 위험에 대해 계층화하기 위한 임상적 실무에 도입되었다.
하기 연구의 목적은 나탈리주맙으로 치료의 개시 전후에 항-JCV-항체 역가 변화를 판단하는 것이었다.
항-JCV 항체 검정 (Gorelik et al., Ann. Neurol. 2010)은 5명의 PML 양성 환자를 비롯한, 나탈리주맙으로 치료된 Swedish MS 환자의 시료에 적용되었다. 항-JCV 항체 검정의 정규화된 OD (nOD) 값은 나탈리주맙으로 치료 전과 치료 동안 조사되었다. 양성 시료는 역가 수준을 결정하기 위해 1:3 희석 단계에서 희석되었다. 동일한 환자의 비율은 또한, 핵 인간 사이토메갈로바이러스 (CMV) 항원에 대한 항체 (Schmitz et al., J. Clin. Microbiol. 1977), 그리고 재조합 수두대상포진 (VZV) 당단백질 E 항원에 대한 항체 (Thomsson, J. Virol. Methods 2011)에 대해 조사되었다.
Figure pat00009
나탈리주맙 치료의 개시 후, 항-JCV 항체 수준은 상대적으로 안정적으로 유지되었는데, 항-JCV 양성 환자에서 nOD 수준의 가벼운 감소가 관찰되었다. 항-JCV 항체 수준 (nOD)에서 명백한 감소는 환자가 나탈리주맙 치료 (n=471)를 받는 동안 관찰되지만, 이전의 인터페론 베타 요법 (n=210) 동안에는 관찰되지 않았다. 이것은 혈청학적 상태 및 혈청양성반응 비율 (seropositivity rate) (이전: 56%; 이후 55%)에 유의미하게 영향을 주지 않으면서, 항-JCV 항체 수준에 대한 나탈리주맙 요법의 잠재적 효과를 지시한다.
나탈리주맙 치료의 개시 후, 항-VZV (OD) (n=715)는 약간 감소하지만, 항-CMV (n=502) 항체 수준은 그렇지 않았다.
PML이 발병한 5명 환자의 경우에, 혈청 내에서 항-JCV 항체 (nOD)의 수준에서 관찰된 변화가 하기 표 9에 요약된다. 혈청 내에서 항-JCV 항체 (nOD)의 수준은 기준선 값과 비교하여, PML 진단의 시점에서 증가하였다.
Figure pat00010
본 연구로부터, 나탈리주맙으로 치료는 JCV 혈청양성반응 비율에 영향을 주지 않으면서, 항-JCV 항체 수준 (nOD)에서 가벼운 감소를 유발할 수 있는 것으로 결론되었다. 흥미롭게도, 항-JCV 양성 기준 개체군 중에서 단지 5%만 nOD 값에서 0.151 초과의 변화 (95%-백분위수) (ΔnOD)를 나타내는 반면, 이것은 기준선 값과 비교하여 진단의 시점에서 5건의 Swedish PML 사례 모두에서 관찰되었다. 따라서 PML 위험 계층화의 배경에서, PML 진단에 앞서, 나탈리주맙 요법 동안 항-JCV 항체 수준에서 증가의 연구가 보증된다.
실시예 6. 항-JCV 항체 양성 환자 사이에 높은 위험 군과 낮은 위험 군을 묘사하기 위한 분석적 컷-오프와 별개의 임상적 컷-오프의 이용.
Stratify I 연구로부터 결과는 항-JCV 항체 양성 환자 사이에 높은 위험 군과 낮은 위험 군을 묘사하기 위한 분석적 컷-오프와 별개의 임상적 컷-오프를 결정하는데 이용되었다. 따라서 환자의 PML 위험은 초기에, 기준선 항-JCV 항체 역가 수준에 기초될 것이다. 세대 II 항-JCV 항체 검정이 본 연구에서 이용되었다.
TYSABRI® 비-PML 환자 (Stratify I, n= 1044) 및 PML 환자 (PML 진단에 앞서 > 6개월, n= 38)가 평가되었다 (도 12). 세대 II 검정에서, 17%의 항-JCV 항체 양성 환자는 PML 진단에 앞서 >6개월에 수집된, PML 환자로부터 시료에 대해 관찰된 가장 낮은 역가 (지수) 미만의 역가 (지수)를 가졌는데, 이것은 이들 환자가 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험 (항-JCV 항체 음성 환자와 유사)을 가질지도 모른다는 것을 암시하였다. 부가적으로, 시료가 PML 진단에 앞서 >6개월에 수집된 단지 13% PML 환자만 지수 <1.5를 갖는 것과 비교하여, 50%의 항-JCV 항체 양성 환자가 지수 1.5 미만의 역가 (지수)를 가졌다. 또한, 면역억제성 작용제를 이전에 받았던 것으로 알려지지 않은 PML 환자 중에서 단지 4.4%만 지수 <1.5를 갖는 시료를 가졌는데, 이것은 이들 환자가 높은 항-JCV 항체 역가 (nOD 또는 지수)를 갖는 환자와 비교하여, PML이 발병하는 더욱 낮은 위험을 가질지도 모른다는 것을 암시하였다.
nOD < 0.5 (109/1044 (전체 시료 중에서 10.4%) 또는 109/549 (항-JCV 항체 양성 환자 중에서 20%))를 갖는 환자는 가장 낮은 PML 위험 군 (잠재적으로, 항-JCV 항체 음성 환자만큼 낮음)에 있는 것으로 결정되었는데, 그 이유는 어떤 PML 환자도 지수<0.5를 갖지 않았기 때문이다. 지수 >0.5 및 <1.5를 갖는 환자는 더욱 낮은 위험 구역에 있는 것으로 결정되었는데, 그 이유는 각각, 비-PML 항-JCV 항체 양성 환자 중에서 50% 및 PML 환자 중에서 단지 13%만 이러한 구역 내에 시료를 가졌기 때문이다. 부가적으로, 사전 면역억제성 요법을 받았던 것으로 알려지지 않은 PML 환자 중에서 단지 4%만 지수 <1.5를 갖는 시료를 가졌다 (도 13). 지수 >1.5를 갖는 환자 (항-JCV 항체 양성 개체군의 271/549 (50%))는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되었다. 환자 중에서 47 퍼센트는 항-JCV 항체 음성이었다.
PML 진단 후, 환자는 순환 나탈리주맙을 제거하고 면역 기능을 복원하기 위한 면역-흡착 (IA) 또는 혈장 교환 (PLEX)에 종속된다. 항-JCV 항체 수준은 이들 환자에서 시술전 수준으로 빠르게 회복된다.
실시예 7. 본원에서 설명된 정밀화된 2-단계 항-JCV 검정에서 항-JCV 항체에 대해 이미 양성으로 검사된, TYSABRI® 치료를 받고 있는 다발성 경화증 (MS) 환자에 계층화된 위험을 배정하기 위한 제안된 통계학적 방법.
STRATIFY-II (American Academy of Neurology (AAN) Meeting, April 21-28, 2012, abstract S041.002) 연구를 위하여, PML 위험을 항-JCV 혈청양성반응에 배정하기 위한 2가지 대안적 전략 (전략 1과 2로 명명됨)이 평가될 것이다. 이들 2가지 방법 중에서 더욱 보수적인 전략-1은 첨부된 보고서에서 제공된 비모수적 이변수 허용 영역 (nonparametric bivariate tolerance region) 중에서 한 가지의 정밀화일 것이다. 통계학적 방법이 하기에 개략적으로 진술되는 전략-2은 전략-1과 비교하여, 더욱 높은 비율의 장래 항-JCV 혈청양성반응을 PML이 발병하는 낮은 위험에 배정할 것이다.
전략-2는 PML 환자 시료에 대한 저해% 대 지수를 측정하는 적합 방정식 주변에 더욱 낮은 연립 허용 영역 (simultaneous tolerance region)을 고안한다. 전략-1은 STRATA (Ann. Neurol., 68:295-303, 2010)와 STRATIFY-I (Ann. Neurol., 70:742-750, 2011) 환자 (PML이 발병하는 매우 낮은 위험을 갖는 것으로 추정되는 거의 모두)에서 2-단계 항-JCV 검정으로부터 저해%/지수 치수에 기초된 낮은 위험 영역을 구축하는 반면, 전략-2는 PML 진단의 일자에 앞서, MS 환자로부터 수집된 치수에 기초된 높은 위험 영역을 구축한다. 비록 PML 시료의 제한된 수집이 PML로 감염된 Tysabri 치료된 MS 환자의 전체 모집단을 대표할 수는 없지만, 전략-2는 이들 시료에서 저해% 대 지수 상관관계가 진단에 앞서, PML 모집단을 대표하는 것으로 추정한다. 이러한 추정은 STRATIFY-1+STRATA의 것에 평행하는 저해% 대 지수 상관관계를 보여주는 항-JCV PML 데이터에 의해 통계학적으로 뒷받침된다. 이러한 평행성 (parallelism)은 PML 저해% 대 지수 상관관계를 모델링하기 위해 전략-2에 의해 활용된다.
저해%와 지수 사이에 상관관계는 먼저, STRATIFY-1/STRATA/PML 시료의 통합된 세트에 대해 통계학적으로 모델링될 것이다. 저해% 대 지수의 이러한 적합 방정식은 PML 시료와 STRATIFY-1/STRATA 시료를 식별할 것이다. 그 다음, 더욱 낮은 95% 또는 99% 연립 허용 영역이 PML 시료에 대해 구속된 적합 방정식 주변에 구축될 것이다. 이러한 허용 영역 내에 속하는 저해%/지수 치수를 갖는 장래 항-JCV 혈청양성반응은 PML이 발병하는 더욱 높은 위험이 배정될 것이다; 이러한 허용 영역은 진단에 앞서, PML 환자로부터 시료의 적어도 95% (또는 99%)가 더욱 높은 위험에 배정되도록 보증할 것이다. 주의할 점은 지수 치수 > 2.5를 갖는 장래 시료는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 자동적으로 배정될 것이라는 점이다.
통계학적 상세 . 하기의 혼합 모델 (또는 이의 일부 정밀화)은 Gen-2 항-JCV STRATIFY-1 + STRATA + PML 시료 저해%/지수 치수의 통합된 세트에 SAS 혼합 절차를 이용한 일차 적합 (first fit)일 것이다.
Yij=β 0 + δxW + β 1xX + + β 11xX +xX + + π i + ε ij (1)
여기서
Y (또는 로그-비율) = -로그e{1 - 저해%/100};
X + = 지수< χ 0이면 지수
= χ 0≤ 지수 ≤ 2.5이면 χ 0;
W = 시료가 STRATIFY-1 또는 STRAT 환자로부터 수집되면 0
= 시료가 진단에 앞서 PML 환자로부터 수집되면 1;
π i = 환자 i에 대한 랜덤 효과;
ε ij = i번째 환자의 j번째 시점에 대한 랜덤 검정 치수 + 종단면 오차;
ε ij 는 정규적으로 추정되고 평균 0과 표준편차 σ 2에서 독립적으로 분포되고; π i 는 정규적으로 추정되고 평균 0과 표준편차 σ 2 p에서 독립적으로 분포되고; ε ij 와 π i 는 독립적인 것으로 추정된다. 따라서 방정식 (1)에서 혼합 모델의 경우에, X +와 W는 고정 효과인 반면, π i 와 ε ij 는 랜덤 효과이다. χ 0의 예비 추산치는 1.77이었지만, 정밀화될 것이다. 적합 방정식 주변에 더욱 낮은 95 또는 99% 연립 허용 영역이 구축될 것이다 (참고 1-5). 지수 수준의 함수로서 허용 영역의 더욱 낮은 경계는 이후, 저해%로 역 변환될 것이다. 저해%/지수 치수가 허용 영역 내에 속하거나 또는 지수 치수 > 2.5를 갖는 장래 시료는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 판정될 것이다.
하기 표 10에서는 상이한 nOD에 기초하여 더욱 낮은 위험으로서 분류되는 항-JCV 항체 양성의 추산된 백분율을 제공한다.
Figure pat00011
다른 구체예는 청구항에 있다.

Claims (85)

  1. 시료 내에서 항-JCV 항체의 수준을 평가하는 방법에 있어서, 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 일차 분량의 시료 및 HPVLP가 배치되는 기질을 포함하는 일차 반응 혼합물을 형성하고; 그리고
    (b) 상기 기질에 결합된 항-JCV 항체에 결합된 표지된 검출 시약을 검출함으로써 HPVLP가 배치되는 상기 기질에 결합된 항-JCV 항체의 수준을 검출하고;
    여기서 하기 중에서 한쪽 또는 양쪽이 충족된다: (i) 20 ngs 내지 60 ngs의 HPVP가 상기 기질 상에 배치되고, 그리고 (ii) 시료 대 기질의 비율이 1:50 내지 1:30이고,
    따라서 시료 내에서 항-JCV 항체의 수준을 평가한다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 시료, 예를 들면, 혈청은 상기 기질과의 접촉에 앞서, 예로써 완충액에서, 예로써 약 100배 희석되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 검출은 효소 표지된 항체, 예를 들면, 효소 표지된 IgG, 예를 들면, HRP 표지된 IgG로 달성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 청구항 3에 있어서, 검출 시약, 예를 들면, HRP 표지된 IgG는 적어도 0.01 μg/mL, 0.02 μg/mL, 0.03 μg/mL, 0.04 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.06 μg/mL, 또는 0.08 μg/ml의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 청구항 1에 있어서, 하기를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (c) 이차 분량의 시료 및 용해-상 HPVLP를 내포하는 이차 반응 혼합물을 형성하고, 그리고 예로써, HPVLP가 배치되는 기질과 결합할 수 있는 항-JCV 항체를 검출함으로써 상기 이차 반응 혼합물 내에서 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준을 검출하고; 그리고
    선택적으로 (d) 시료 내에 항-JCV 항체가 HPVLP 또는 기타 항원에 의해 결합되지 않는 조건 하에 삼차 분량을 내포하는 삼차 반응 혼합물을 형성하고, 그리고 예로써, HPVLP가 배치되는 기질과 결합할 수 있는 항-JCV 항체를 검출함으로써 삼차 반응 혼합물 내에서 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준을 검출하여 간섭을 위한 값을 제공한다.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 이차 반응 혼합물 내에서 검출된 수준을 상기 삼차 반응 혼합물 내에서 검출된 수준과 비교하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 비교는 이차 반응 혼합물 내에서 HPVLP의 존재가 상기 삼차 반응 혼합물 내에서 결합되지 않은 항체의 수준과 비교하여, 상기 이차 반응 혼합물 내에서 결합되지 않은 항-JCV 항체의 수준을 저해하는 수준을 결정하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 저해는 45% 이하이고, 그리고 선택적으로, 상기 시료는 음성으로서 분류되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 청구항 7에 있어서, 상기 저해는 45%보다 크거나 이에 동등하고, 그리고 상기 시료는 양성으로서 분류되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 청구항 5에 있어서, 상기 방법은 청구항 1의 단계 b에서 검출된 항-JCV 항체의 수준에 응하여 수행되고, 예를 들면, nOD 값은 <0.2 및 <0.4이고, 그리고 단계 c와 d로 진행하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 청구항 5에 있어서, 상기 시료, 예를 들면, 혈청은 상기 이차 반응 혼합물을 형성하기에 앞서, 예로써 완충액에서, 예로써 약 100배 희석되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 청구항 5에 있어서, 상기 시료, 예를 들면, 혈청은 상기 삼차 반응 혼합물을 형성하기에 앞서, 예로써 완충액에서, 예로써 약 100배 희석되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 청구항 5에 있어서, 상기 이차와 삼차 반응 혼합물 중에서 한쪽 또는 양쪽에 대한 검출은 효소 표지된 항체, 예를 들면, 효소 표지된 IgG, 예를 들면, HRP 표지된 IgG로 달성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 청구항 3에 있어서, 상기 이차와 삼차 반응 혼합물 중에서 한쪽 또는 양쪽에 대한 검출은 적어도 0.01 μg/mL, 0.02 μg/mL, 0.03 μg/mL, 0.04 μg/mL, 0.05 μg/mL, 0.06 μg/mL, 또는 0.08 μg/ml의 농도로 첨가된 HRP 표지된 IgG로 달성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 청구항 1에 있어서, 예로써 약 1의 스코어를 갖는 표준, 예를 들면, 컷오프 구경 측정기를 단계 b에서 평가하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 청구항 1에 있어서, 예로써 약 1.3의 스코어를 갖는 표준, 예를 들면, 양성 대조를 단계 b에서 평가하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 청구항 1에 있어서, 예로써 약 0.1의 스코어를 갖는 표준, 예를 들면, 음성 대조를 단계 b에서 평가하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 청구항 1의 기질을 포함하는 키트.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 기질은 다중웰 평판, 예를 들면, 96 웰 평판 상에 제공되는 것을 특징으로 하는 키트.
  20. 청구항 18에 있어서, 하기 중에서 하나 또는 그 이상 또는 모두를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 키트: 용해 상태에서 HPVLP; JCV 컷-오프 구경 측정기, 항-JCV 항체 양성 대조 및 JCV 음성 대조, 이들은 인간 혈청의 시료이다; 그리고 JCV 항원에 결합된 항-JCV 항체를 내포하는 복합체를 검출하기 위한 시약.
  21. 청구항 20에 있어서, 검출 시약은 TMB (테트라메틸벤지딘), 세척 완충액, 그리고 중단 시약 중에서 하나 또는 그 이상인 것을 특징으로 하는 키트.
  22. 진행성다병소성백질뇌증 (PML)이 발병하는 환자의 위험을 평가하는 방법에 있어서, 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    항-JCV 항체 확증 검정에서 환자로부터 생물학적 시료 내에서 nOD, 지수 또는 기타 단위로서 표시된 JC 바이러스 (JCV) 항체 역가, 또는 저해 퍼센트로서 표시된 친화성 또는 친화력과 같은 기타 특징을 결정하고, 여기서
    역가 및/또는 저해 퍼센트, 또는 양쪽 값의 함수가 미리 결정된 수준 초과 또는 미만인 것으로 결정되면, 환자는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 여기서
    역가 및/또는 저해 퍼센트, 또는 양쪽 값의 함수가 미리 결정된 수준 초과 또는 미만인 것으로 결정되면, 환자는 PML이 발병하는 중간 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 여기서
    역가 및/또는 저해 퍼센트, 또는 양쪽 값의 함수가 미리 결정된 수준 또는 미리 결정된 수준 초과인 것으로 결정되면, 환자는 PML이 발병하는 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 게다가,
    (i) 환자의 시료에서 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 결정하는 것이 환자의 신체로부터 생물학적 시료를 떼어내거나 또는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 포함하면, 또는
    (ii) 환자가 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되면, 요법을 환자에 투여한다.
  23. 청구항 22에 있어서, 환자는 PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법이 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 청구항 22에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는
    (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면,
    환자는 PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 청구항 22에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 >0.5 및 <1.5인 것으로 결정되고, 그리고
    (ii) 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면,
    환자는 PML의 중간 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 청구항 22에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 3인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는
    (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면,
    환자는 PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 청구항 26에 있어서, 항-JCV 항체의 저해 퍼센트는
    (i) 시료 내에 항-JCV 항체의 HPVLP에 대한 결합에 적합한 조건 하에, 개체로부터 생물학적 시료를 용액 내에서 고도 정제된 VP1 입자 (HPVLPs)와 접촉시키고;
    (ii) HPVLP에 결합된 JCV 항체를 용액으로부터 분리하여 이차 시료를 산출하고;
    (iii) 이차 시료를 (i)에서와 동일한 조건 하에 HPVLP와 접촉시키고; 그리고
    (iv) HPVLP에 대한 항-JCV 항체 결합의 수준을 이차 시료 내에서 검출함으로써 측정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 청구항 22에 있어서, 항-JCV 항체 역가는 하기를 포함하는 검정에 의해 측정되는 것을 특징으로 하는 방법:
    (i) 시료 내에 항-JCV 항체의 HPVLP에 대한 결합에 적합한 조건 하에, 생물학적 시료를 HPVLP와 접촉시키고;
    (ii) HPVLP에 대한 시료 내에 항-JCV 항체 결합의 수준을 검출하고; 그리고
    (iii) 검출된 수준을 기준 세트와 상관시키고, 여기서 기준 세트는 3%보다 크지 않은 가음성률을 지시하도록 선택된다.
  29. 청구항 22에 있어서, 항-JCV 항체 역가는 VIDAS® 검정 (bioM
    Figure pat00012
    rieux)을 이용함으로써 측정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 청구항 28에 있어서, 검정은 생물학적 시료가 JCV 항체를 내포하지 않는다는 것을 지시하고, 그리고 게다가, 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (iv) 단계 (i)에 앞서, 개체로부터 생물학적 시료의 일부를 용액 내에서 HPVLP와 접촉시키고, 그리고 여기서 단계 (i)의 HPVLP는 고형 기질에 부착되고, 따라서 이차 시료를 제공하고;
    (v) 이차 시료를 (i)에서와 동일한 조건 하에 HPVLP와 접촉시키고;
    (vi) HPVLP에 대한 항-JCV 항체 결합의 수준을 이차 시료 내에서 검출하고; 그리고
    (vii) 이차 시료 내에서 항-JCV 항체의 검출된 수준을 HPVLP가 없는 용액과 함께 배양될 때 생물학적 시료 내에서 결합의 수준과 비교하고, 여기서 용액-배양된 시료와 비교하여 HPVLP와 함께 전-배양된 시료 내에서 검출된 수준에서 감소는 상기 시료가 항-JCV 항체에 대해 양성이라는 것을 지시하고, 그리고 검출된 수준에서 변화 없음은 시료 내에 항-JCV 항체가 존재하지 않는다는 것을 지시한다.
  31. 청구항 28에 있어서, 검정은 생물학적 시료가 JCV 항체를 내포한다는 것을 지시하고, 그리고 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 청구항 30에 있어서, 검정은 생물학적 시료가 JCV 항체를 내포한다는 것을 지시하고, 그리고 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 청구항 30에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는
    (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면,
    환자는 PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 청구항 30에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 3인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는
    (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면,
    환자는 PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 청구항 30에 있어서, 검정은 생물학적 시료가 JCV 항체를 내포하지 않는다는 것을 지시하고, 그리고 환자는 PML에 대한 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 청구항 22에 있어서, 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트는 6개월 또는 12개월 간격에서 재검사되는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 청구항 36에 있어서, 항체 역가 또는 저해 퍼센트에서 증가는 PML이 발병하는 환자의 위험에서 증가를 지시하는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 청구항 36에 있어서, 항-JCV 항체 역가에서 2배 또는 그 이상 증가는 PML이 발병하는 증가된 위험을 지시하는 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 청구항 22에 있어서, 평가는 항-VLA-4 요법의 투여에 앞서 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 청구항 22에 있어서, 평가는 환자가 항-VLA-4 요법을 시작한 후 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 청구항 22에 있어서, 환자는 PML의 더욱 낮은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법이 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 청구항 22에 있어서, 환자는 PML의 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법이 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 청구항 22에 있어서, 항-VLA-4 요법은 나탈리주맙인 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 청구항 37에 있어서, 환자는 PML에 대한 증가된 위험을 갖는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 게다가, 항-VLA-4 요법을 받는 것을 중단하는 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 청구항 22에 있어서, 환자는 PML에 대한 더욱 높은 위험에 처해 있는 것으로 결정되고, 그리고 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 대안, 예를 들면, 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드가 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 청구항 44에 있어서, 환자는 규칙적인 간격에서, 항-JCV 항체 역가에서 감소 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트에서 감소에 대해 모니터링되고, 여기서 항-JCV 항체 역가에서 감소 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트에서 감소는 상기 환자가 PML이 발병하는 낮아진 위험을 갖는다는 것을 지시하는 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 청구항 44에 있어서, JCV 역가 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트는 미리 결정된 수준 미만으로 감소되는 것으로 결정되고, 그리고 환자의 항-VLA-4 요법은 재개되는 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 청구항 46에 있어서, 환자는 6개월 마다 또는 1년 마다 항체 역가에서 감소 또는 JCV 항체의 저해 퍼센트에서 감소에 대해 평가되는 것을 특징으로 하는 방법.
  49. 청구항 22에 있어서, 하기를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 환자가 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료 (가령, 24개월 이상)을 받았는지를 결정하고; 또는
    (b) 환자가 명시된 비-항-VLA-4 면역억제제 요법 (가령, 지난 2, 3, 5년 동안 또는 심지어 환자의 일생 동안)을 받았는지를 결정하고; 그리고
    여기서 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖지만 명시된 사전 면역억제제 이용이 없고 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 받은 적이 없는 환자에 대한 PML의 상대적 위험은 미리 결정된 수준 미만의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 또는 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작고, 이것은 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 및 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작다.
  50. 청구항 49에 있어서, 환자는 항-VLA-4 요법을 이전에 받았던 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 청구항 49에 있어서, 항-VLA-4 요법을 환자에 투여하는 것을 더욱 포함하는
    것을 특징으로 하는 방법.
  52. 청구항 51에 있어서, 항-VLA-4 요법은 나탈리주맙 요법인 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 청구항 49에 있어서, 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되고, 그리고 여기서 환자는 항-VLA-4 요법이 더욱 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 환자를 예로써, 항-VLA-4 요법으로 치료를 받는 후보로서 평가하는 방법에 있어서, 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    환자로부터 생물학적 시료 내에서 JC 바이러스 (JCV) 항체 역가 및 저해 퍼센트를 획득하고, 여기서
    항체 역가 또는 저해 퍼센트가 미리 결정된 수준 미만인 것으로 결정되면, 환자는 일차 범주의 요법으로 치료에 적합한 것으로 분류되고, 그리고 여기서
    항체 역가 또는 저해 퍼센트가 미리 결정된 수준 또는 미리 결정된 수준 초과인 것으로 결정되면, 환자는 이차 범주의 요법에 적합한 것으로 분류되고, 그리고 게다가,
    (i) 환자의 시료에서 항-JCV 항체 역가 및 저해 퍼센트를 획득하는 것이 환자의 신체로부터 생물학적 시료를 떼어내거나 또는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 포함하면, 또는
    (ii) 상기 방법이 일차 범주 또는 이차 범주로부터 요법을 환자에 투여하는 것을 더욱 포함하면,
    환자를 평가한다.
  55. 청구항 54에 있어서, 일차 범주의 요법은 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 항-VLA-4 항체 요법, 예를 들면, 나탈리주맙인 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 청구항 54에 있어서, 이차 범주의 요법은 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 청구항 54에 있어서, 환자는 일차 범주의 요법으로 치료에 적합한 것으로 분류되고, 그리고 환자는 나탈리주맙이 더욱 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 청구항 54에 있어서, 환자는 이차 범주의 요법으로 치료에 적합한 것으로 분류되고, 그리고 환자는 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드가 더욱 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 청구항 54에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 < 0.5인 것으로 결정되면, 또는
    (ii) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 0.5 및 < 3.0인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트가 70%보다 작거나 이에 동등한 것으로 결정되면,
    환자는 PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 청구항 54에 있어서,
    (i) 지수 값 또는 nOD에 의해 지시되는 항-JCV 항체 역가가 > 3인 것으로 결정되고, 그리고 저해 퍼센트 값이 > 70%인 것으로 결정되면, 또는
    (ii) 환자가 이전 검사로부터 지수, nOD 또는 역가의 2-배 증가를 보이면,
    환자는 PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 청구항 33에 있어서, 하기를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 환자가 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료 (가령, 24개월 이상)을 받았는지를 결정하고; 또는
    (b) 환자가 명시된 비-항-VLA-4 면역억제제 요법 (가령, 지난 2, 3, 5년 동안 또는 심지어 환자의 일생 동안)을 받았는지를 결정하고; 그리고
    여기서 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖지만 명시된 사전 면역억제제 이용이 없고 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 받은 적이 없는 환자는 미리 결정된 수준 미만의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 또는 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 PML이 발병하는 더욱 작은 위험을 갖는 것으로 분류되고, 이것은 미리 결정된 수준 초과의 항-JCV 항체 역가 또는 저해 퍼센트를 갖고 명시된 사전 면역억제제 이용 및 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작다.
  62. 청구항 61에 있어서, 환자는 항-VLA-4 요법을 이전에 받았던 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 청구항 61에 있어서, 항-VLA-4 요법을 환자에 투여하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 청구항 63에 있어서, 항-VLA-4 요법은 나탈리주맙 요법인 것을 특징으로 하는 방법.
  65. 청구항 61에 있어서, 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되고, 그리고 여기서 환자는 항-VLA-4 요법이 더욱 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  66. 진행성다병소성백질뇌증 (PML)이 발병하는 환자의 위험을 평가하는 방법에 있어서, 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 환자가 JC 바이러스 (JCV)에 노출에 대해 음성 또는 양성인 지를 결정하고;
    (b) 환자가 항-VLA-4 요법으로 연장된 치료 (가령, 24개월 이상)를 받았는지를 결정하고; 또는
    (c) 환자가 명시된 비-항-VLA-4 면역억제제 요법 (가령, 지난 2, 3, 5년 동안 또는 심지어 환자의 일생 동안)을 받았는지를 결정하고; 그리고
    환자가 JCV에 노출에 대해 음성이라는 결정에 응하여, 상기 환자가 PML이 발병하는 상대적으로 낮은 위험에 처해 있다고 결정하고, 또는 환자가 JCV에 대해 양성이라는 결정에 응하여, 상기 환자가 PML이 발병하는 상대적으로 더욱 높은 위험을 갖는다고 결정하고;
    여기서 JCV에 노출되었지만 명시된 사전 면역억제제 이용이 없고 항-VLA-4로 연장된 치료를 받은 적이 없는 환자에 대한 PML의 상대적 위험은 JCV에 노출되고 명시된 사전 면역억제제 이용 또는 항-VLA-4로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작고, 이것은 JCV에 노출되고 명시된 사전 면역억제제 이용 및 항-VLA-4로 연장된 치료를 갖는 환자의 상대적 위험보다 작다.
  67. 청구항 66에 있어서, 게다가 (i) 환자가 JCV에 대해 음성인지를 결정하는 것은 환자의 신체로부터 시료를 떼어내거나 또는 환자로부터 시료를 분석하는 것을 포함하고, 또는 (ii) 상기 방법은 요법을 환자에 투여하는, 예를 들면, 항-VLA-4 요법, 예를 들면, 항-VLA-4 항체, 또는 대안적 치료, 예를 들면, 인터페론, 글라티라머 아세테이트 또는 코르티코스테로이드를 환자에 투여하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 청구항 66에 있어서, 환자는 항-VLA-4 요법을 이전에 받았던 것을 특징으로 하는 방법.
  69. 청구항 66에 있어서, 항-VLA-4 요법을 환자에 투여하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  70. 청구항 69에 있어서, 항-VLA-4 요법은 나탈리주맙 요법인 것을 특징으로 하는 방법.
  71. 청구항 66에 있어서, 환자가 JCV에 대해 음성인 지를 결정하는 것은 환자로부터 생물학적 시료를 제공하고, 그리고 JCV 항체를 시료 내에서 검출하기 위한 면역검정을 수행하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  72. 청구항 71에 있어서, 면역검정은 ELISA 검정인 것을 특징으로 하는 방법.
  73. 청구항 71에 있어서, 면역검정은 IgG 아이소타입, IgM 아이소타입, IgA 아이소타입, 또는 IgE 아이소타입인 JCV 항체를 검출하는 것을 특징으로 하는 방법.
  74. 청구항 71에 있어서, 시료는 면역검정의 수행에 앞서, 2-8℃에서 1 내지 14일 동안 보관되는 것을 특징으로 하는 방법.
  75. 청구항 66에 있어서, 환자가 JCV에 대해 음성인 지를 결정하는 것은 환자로부터 생물학적 시료를 제공하고, 그리고 JCV 핵산을 시료 내에서 검출하기 위한 검정을 수행하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  76. 청구항 66에 있어서, 환자는 항-VLA-4 요법에 대한 후보로서 분류되고, 그리고 여기서 환자는 항-VLA-4 요법이 더욱 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  77. 청구항 66에 있어서, PML이 발병하는 더욱 낮은 위험에서 환자는 약 0.3/1000 이하, 예를 들면, ≤0.11/1000의 위험을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
  78. 청구항 66에 있어서, PML이 발병하는 더욱 높은 위험에서 환자는 PML이 발병하는, 약 ≥ 0.3/1000, 예를 들면, 0.35/1000, 1.2/1000, 2.5/1000 또는 7.8/1000의 위험을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
  79. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV에 대해 양성이고, 환자는 항-VLA-4 요법을 미리 선택된 기간 이하 동안 받았고, 그리고 환자는 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 미리 선택된 기간 동안 받은 적이 없고, 그리고 이러한 결정에 응하여, 환자는 약 0.35/1000의 PML이 발병하는 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  80. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV에 대해 양성이고, 환자는 항-VLA-4 요법을 미리 선택된 기간 이하 동안 받았고, 그리고 환자는 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 미리 선택된 기간 동안 받았고, 그리고 이러한 결정에 응하여, 환자는 약 1.2/1000의 PML이 발병하는 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  81. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV에 대해 양성이고, 환자는 항-VLA-4 요법을 미리 선택된 기간 이상 동안 받았고, 그리고 환자는 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 미리 선택된 기간 동안 받았고, 그리고 이러한 결정에 응하여, 환자는 약 7.8/1000의 PML이 발병하는 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  82. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV에 대해 양성이고, 환자는 항-VLA-4 요법을 미리 선택된 기간 이상 동안 받았고, 그리고 환자는 비-항-VLA-4 면역억제제 요법을 미리 선택된 기간 동안 받은 적이 없고, 그리고 이러한 결정에 응하여, 환자는 약 2.5/1000의 PML이 발병하는 위험을 갖는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  83. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV 항체 양성이고, 그리고 >0.5 및 <1.5의 지수 값 또는 nOD에 의해 지시된 JCV 항체 역가, 그리고 >70%의 저해 퍼센트 값을 갖는 것으로 결정되고, 그리고 여기서 환자는 PML의 중간 위험을 갖는 것으로 더욱 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  84. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV 항체 양성이고, 그리고 >1.5의 지수 값 또는 nOD에 의해 지시된 JCV 항체 역가, 그리고 >70%의 저해 퍼센트 값을 갖는 것으로 결정되고, 그리고 여기서 환자는 PML의 더욱 높은 위험을 갖는 것으로 더욱 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  85. 청구항 66에 있어서, 환자는 JCV 항체 양성이고, 그리고 <3의 지수 값에 의해 지시된 JCV 항체 역가, 그리고 70%보다 작거나 이에 동등한 저해 퍼센트 값을 갖는 것으로 결정되고, 그리고 여기서 환자는 PML의 더욱 낮은 위험을 갖는 것으로 더욱 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
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