JP2009500040A - ニューロンの神経炎症的破壊をモニタリングする方法およびホスホリパーゼａ２に関連する炎症性成分を有する疾患を処置する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、急性期炎症性酵素の上昇から生じる中枢および末梢神経系のニューロン／軸索破壊をモニタリングするために有用な方法に関する。この方法は多発性硬化症およびアルツハイマー病を含む神経学的疾患の進行、ならびにスポーツ傷害、激しい身体的活動または身体的酷使から生じる神経炎症性傷害のモニタリングに応用性を有する。さらに本発明は、ホスホリパーゼＡ２に関連する炎症性成分で多発性硬化症または他の疾患を処置する方法に関する。

Description

発明の背景
多発性硬化症（ＭＳ）の齧歯類の実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）モデルを用いた最近の研究では、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）酵素がこの疾患を特徴付ける行動的欠損および炎症の発生の両方に関与することが示唆されている（非特許文献１；非特許文献２）。全身性ｓＰＬＡ２酵素は特に、高分子ｓＰＬＡ２基質デコイの注入によりこれらの実験の１つで阻害された。この結果は重要な行動的改善および炎症の減少であった。

多発性硬化症（ＭＳ）は中枢神経系の脱髄を特徴とする消耗性の炎症性神経的疾病である。この疾患は主に若年成人に影響を及ぼし、女性の方が発症が高い。疾患の症状には疲労、しびれ感、振せん、刺痛、知覚不全、視覚障害、めまい感、認知障害、泌尿器不全、運動低下および鬱を含む。４つのタイプでこの疾患の臨床的パターンを分類する：再発−寛解、二次進行、一時進行および進行再発（非特許文献３）。

ＭＳの正確な病因は未知であるが、疾患の脱髄的特徴は自己免疫応答の結果であり、恐らく環境的傷害、例えばウイルス感染により誘発されることが強く疑われている。具体的にはＭＳはＴ細胞が媒介する自己免疫炎症反応により引き起こされると仮定される。自己免疫の基礎は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）に対して特異的な抗体がＭＳ患者の血清および脳脊髄液で見いだされ、そしてこれらの抗体はＭＢＰおよび他のミエリンプロテオリピドに反応性のＴ細胞と一緒に、疾患の活性を上昇させるという事実により強力に支持されている。さらに細胞のレベルでは、Ｔ細胞増殖、ならびにＢ細胞およびマクロファージの活性化および血管脳関門の分解を伴うサイトカインの分泌のような他の細胞の出来事が、ミエリンおよび希突起膠細胞の破壊を引き起こす可能性があると憶測されている（非特許文献４）。進行性ＭＳ（一時および二次）は、脱髄を生じる神経変性的プロセスに基づいているかもしれない。

多発性硬化症の病態生理学には、炎症性応答の幾つかの要素を含む抗原特異的メカニズムおよび先天性の免疫系の両方が関与する。現在、炎症は神経組織の破壊が存在するすべての障害に貢献する因子として認識されているので、ＭＳはこれに関しては驚くことではない。ホスホリパーゼＡ２による膜のリン脂質の加水分解の上昇は、神経系を含むすべての臓器系において組織傷害に対する周知の初期応答である。これらの酵素活性は、プロスタグランジン、ロイコトリエン、脂肪酸および活性酸素種を含む炎症性メディエーターのレベルを調節する。これらすべてのメディエーターは、その原因に拘わらず神経変性の初期段階で生産される。しかしＰＬＡ２活性およびこれら下流のＰＬＡ２産物の役割は、相対的にほとんど注目さなかった。

現段階では、ＭＳに関する治療はない。現行の治療は、出来る限り疾患の症状を緩和し、そしてその進行を止めることを目的としている。タイプに依存して、薬剤処置は通常、インターフェロン（インターフェロンベータ１−ａ、ベータ１−ｂおよびアルファ２）、酢酸グラチラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ ａｃｅｔａｔｅ）、またはコルチコステロイド、例えばメチルプレドニゾロンおよびプレドニゾンのような疾患を修飾する作用物質の使用を必要とする。またメトトレキセート、アザチオプリン、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、シクロホスファミドおよびシクロスポリンのような化学療法剤が使用されてきた。上記処置のすべては副作用に罹り易く、疲労および鬱に及ぼす効果はほとんどないか、またはなく、ならびに再発率および疾患の悪化を防止する能力に及ぼす効果も限られている。またインターフェロンを用いた処置は中和抗体の生産を誘導する恐れがあり、これは最終的にはこの治療の効果を下げる。

ＭＳに関する現在そして計画されている疾患修飾治療（ｄｉｓｅａｓｅ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｙ）（使用または試験で）では、後天的免疫応答の観点を抑える。２種類の最先端処置、酢酸グラチラマーおよびインターフェロンベータの活性は完全に解明されていないが、これらは少なくとも一部はＴ細胞の増殖およびアポトーシスの調節により作用する。ナタリズマブ（ＴＳＡＹＢＲＩ、バイオジェン（Ｂｉｏｇｅｎ））、アルファ−４−インテグリンに結合するヒト化ＩｇＧ４抗体は、Ｔ細胞を含む免疫反応性細胞の経血管移動（ｔｒａｎｓｖａｓｃｕｌａｒ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）を妨害する。現在試験中であるより新しい経口化合物（例えばＦＴＹ７２０、ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＢＧ−１２、バイオジェン；Ｌａｑｕｉｎｉｍｏｄ、テバ（Ｔｅｖａ）、Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ、ワイス（Ｗｙｅｔｈ））も、免疫細胞の増殖および／またはトラフィッキングを阻害するように設計されている。これら一般的な取り組みの欠点は、ますます明らかになってきている。いずれの薬剤も効力が限定されているか、または効力の上昇で正常な免疫監視が抑制される。例えばインターフェロンベータの費用対効果は、生活の質を調整した生存年（Ｑｕａｌｉｔｙ Ａｄｊｕｓｔｅｄ Ｌｉｆｅ Ｙｅａｒｓ）（ＱＡＬＹはＥＤＳＳスコアおよび寿命の両方を考慮する）という意味で測定された場合に低い。一方、ナタリズマブは再発の限定に大変効果的と思われるが、稀ではあるが日和見ＪＣウイルス感染から生じるしばしば致命的疾患である進行性の多巣白質脳症の症例により、臨床試験中に取り下げられた。ＣＨＥＣ−９は抗−炎症性で、しかもニューロン生存促進ペプチドである。第１の場合、これは炎症の初期段階中に変化のカスケードを開始する酵素を阻害するので、この経路で作用する他の薬剤も同じく阻害し（例えばＣＯＸインヒビター）、後天免疫応答の重要な機能に及ぼす効果は最小となり得る。他方、ＭＳの初期炎症成分の排除が、ＢＢＢ分解、免疫細胞の滲出、ミエリンおよび軸索の変性のようなカスケードで引き続き起こる事を制限し、これにより活性な疾患を抑制することが可能である。我々のデータは、ＰＬＡ２阻害が神経系の急性の損傷後のこれらの出来事を制限することを示す。我々の結果および他の結果が示唆するように、これはＥＡＥにもあてはまる可能性がある。ＣＨＥＣ−９は非競合的インヒビターであるので、我々はそれが酵素および基質レベルが高い時に「必要に応じて」作用することを提案する。さらにＣＨＥＣ−９の直接的な細胞生存促進特性は、特に細胞変性（ニューロンおよび希突起膠細胞の両方）の主要な重要性が強調される疾患の新規モデルに照らして、ＭＳにおけるこの潜在的効力をさらに示すことができる。

ＭＳの齧歯類の実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルの最近の実験では、ＰＬＡ２酵素が、この疾患を特徴付ける行動的欠損および炎症の両方の発生に関与していることを示唆する。Ｐｉｎｔｏ，ｅｔ ａｌ．の基質様分子の全身的注入が恐らく分泌型（ｓ）ＰＬＡ２を標的とするという報告は、炎症および臨床的ＥＡＥ疾患の減少に効果的である。しかしＰＬＡ２活性に関してＭＳ患者の状態は未知であり、したがってこれらの酵素が実際にＭＳ処置に価値ある標的であるかどうかは明確ではない。

前述の開発にもかかわらず、炎症およびニューロン変性を見いだし、そしてモニタリングする非侵襲的方法を提供する方法が必要である。さらにＭＳの進行および症状を克服するための新規処置に関する強い必要性が存在する。本発明はこれらの必要性に対処する。

参考文献

Ｐｉｎｔｏ Ｆ，Ｂｒｅｎｎｅｒ Ｔ，Ｄａｎ Ｐ，Ｋｒｉｍｓｋｙ Ｍ，Ｙｅｄｇｅｒ Ｓ．，Ｇｌｉａ ４４：２７５−２８２，２００３ Ｋａｌｙｖａｓ Ａ，Ｄａｖｉｄ Ｓ．，Ｎｅｕｒｏｎ ４１：３２３−３３５，２００４ Ｓ．Ｌ．Ｈａｕｓｅｒ ａｎｄ Ｄ．Ｅ．Ｇｏｏｄｋｉｎ，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４．ｓｕｐ．ｔｈ．Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｖｏｌ．２，Ｍｃ Ｇｒａｗ−Ｈｉｌｌ，１９９８，ｐｐ．２４０９−２４１９ Ｒ．Ａ．Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｖ．Ｖｉｃｔｏｒ ａｎｄ Ａ．Ｈ．Ｒｏｐｐｅｒ ｅｄｓ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｍｃ Ｇｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９７，ｐｐ．９０３−９２１

発明の要約
本発明の一観点では、本発明は哺乳動物の炎症を検出する方法を含み、この方法は、体液からサンプルを得、体液中に、少なくとも１つの炎症性酵素の活性の上昇を検出し、そして少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出することを含んでなる。一観点では、神経系特異的タンパク質が抗体に基づくアッセイを使用して検出される。

一観点では、本発明はニューロンの変性を検出する方法を含み、この方法は、体液からサンプルを得、炎症性酵素の活性の上昇を検出し、そして少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出することを含んでなる。

本発明の一観点では、軸索の変性を検出する方法は、体液からサンプルを得、炎症性酵素の活性の上昇を検出し、そして少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出することを含んでなる。一観点では、炎症性酵素がホスホリパーゼＡ２酵素である。別の観点では、体液は尿を含んでなる。

一観点では、本発明は哺乳動物の炎症を検出するためのキットを含み、このキットは、少なくとも１つの炎症性酵素の活性を検出するための第１成分、サンプル中の少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出するための第２成分、アプリケーター、およびそれらの使用のための使用説明書を含んでなる。一観点では、第１成分が、少なくとも２つの別個の試薬を含んでなり、さらに各試薬が別個の炎症性酵素を検出する。別の観点では、第１成分がホスホリパーゼＡ２活性を検出する試薬を含んでなる。さらに別の観点では、第１成分がホスホリパーゼＡ２タンパク質を検出する試薬を含んでなる。本発明のさらに別の観点では、第２成分が少なくとも２つの別個の試薬を含んでなり、さらに各試薬が別個の神経系特異的タンパク質またはその断片を検出する。

一観点では、本発明は哺乳動物のニューロンの変性を検出するためのキットを含み、このキットは少なくとも１つの炎症性酵素の活性を検出するための第１成分、サンプル中の少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出するための第２成分、アプリケーター、およびそれらの使用のための使用説明書を含んでなる。

本発明の一観点では、哺乳動物の軸索の変性を検出するためのキットが少なくとも１つの炎症性酵素の活性を検出するための第１成分、サンプル中の少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出するための第２成分、アプリケーター、およびそれらの使用のための使用説明書を含む。

また本発明はＭＳを有する哺乳動物を処置する方法を含み、この方法は治療に有効な量のポリペプチドを哺乳動物に投与することを含んでなり、ここでポリペプチドがＰＬＡ２の活性を阻害する。一観点では、ポリペプチドはＣＨＥＣ−９である。別の観点では、ポリペプチドが非経口、経口、筋肉内および全身的からなる群から選択される少なくとも１つの経路により投与される。

また本発明は哺乳動物のＭＳの進行をモニタリングする方法も含み、この方法は該哺乳動物から得た第１の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第１測定値を取り、哺乳動物から得た第２の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第２測定値を取り、ここで該第２サンプルは該第１サンプルよりも後の時期に得られ、そして該第１および第２の測定値を比較することを含んでなり、ここで第１測定値よりも大きな第２測定値は、ＭＳが哺乳動物中で進行している表示である。

また本発明は、炎症状態に罹患している哺乳動物を処置する方法を含み、この方法は治療に有効な量のポリペプチドを該哺乳動物に投与することを含んでなり、ポリペプチドはＰＬＡ２の活性を阻害する。一観点では、ポリペプチドがＣＨＥＣ−９である。別の観点では、ポリペプチドが、非経口、経口、筋肉内および全身的からなる群から選択される少なくとも１つの経路により投与される。

また本発明は哺乳動物の炎症状態の進行をモニタリングする方法を含み、この方法は哺乳動物から得た第１の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第１測定値を取り、哺乳動物から得た第２の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第２測定値を取り、ここで第２サンプルは第１サンプルよりも後の時期に得られ、そして第１および第２測定値を比較することを含んでなり、ここで第１測定値よりも大きな第２測定値は、炎症状態が哺乳動物中で進行している表示である。

発明の詳細な記述
本発明は、分泌されたホスホリパーゼＡ２酵素活性を介して炎症を同定し、検出し、かつ／またはモニタリングすることを含む。また本発明は限定するわけではないが尿もしくは体液を使用したウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡまたはマルチプレックスアッセイを初めとする技術を使用して、神経系特異的タンパク質のレベルをモニタリングすることを介して、ニューロンの変性を同定し、検出し、かつ／またはモニタリングすることを含む。本発明は種々の障害に応用可能である（例えば情動的または肉体的ストレス、すべての神経変性障害、懸賞付き対戦による損傷）。この方法は一部、活性なｓＰＬＡ２酵素および神経系特異的タンパク質の断片が排出され、そして神経変性疾患の動物モデルの場合は（ＭＳおよびＡＬＳのような）、それらは症状の前の時点で分泌されるという知見に基づく。

さらに本発明は、ＭＳおよび他の炎症に付随する疾患もしくは障害を処置する方法を含む。特に本発明は、ＭＳおよびＰＬＡ２活性に関連する他の炎症に付随する疾患もしくは障害を処置する方法を含む。これはポリペプチド、ＣＨＥＣ−９がＰＬＡ２の活性を阻害できることが本明細書で示されたからである。

定義
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法上の対象となる１もしくは１より多くのものを指す（すなわち少なくとも１つ）ために使用される。例として「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」は、１もしくは１より多くの要素を意味する。

本明細書で使用する用語である「アプリケーター」という用語は、限定するわけではないがＣＨＥＣ−９または本発明の他のインヒビターを哺乳動物に投与するための皮下シリンジ、ピペット等を含む任意のデバイスを意味する。

本明細書で使用する「使用説明書」とは、本発明の組成物の明示された使用のためにその有用性を伝えるために使用することができる公報、記録、表または他の任意の表現媒体を含む。本発明のキットの使用説明書は、例えば組成物を含む容器に付けてよく、または組成物を含む容器と一緒に輸送してもよい。あるいは使用説明書は使用説明書および組成物が受容者に協同して使用されることを意図して、容器とは別個に輸送してもよい。

「ポリペプチド」は、アミノ酸残基、関連する天然に存在する構造的バリアント、およびペプチド結合を介して連結された合成の天然には存在しないその類似体、関連する天然に存在する構造的バリアント、およびその合成の天然には存在しないその類似体からなるポリマーを指す。合成ポリペプチドは、例えば自動化ポリペプチド合成器を使用して合成することができる。

用語「タンパク質」は典型的には大きなポリペプチドを指す。

用語「ペプチド」は、典型的には短いポリペプチドを指す。

化合物の「治療に有効な量」は、化合物が投与される個体に有益な効果を提供するために十分な化合物の量である。非限定的な例として、ＭＳを処置する目的でＣＨＥＣ−９の治療に有効な量は、患者の１もしくは複数の症状を緩和するために十分なＣＨＥＣ−９の量であり、症状は患者のＭＳに関連している。

本明細書で使用する「緩和する」という用語は、症状、状況または状態が少なくなること、減少すること、または先細りになることを指す。１つの観点では、疾患の症状は、症状が患者における発生もしくは影響の重篤度が低下する場合に緩和する。別の観点では、疾患の症状は、症状が患者から完全に根絶され、または排除された場合に緩和する。

本明細書で使用する用語「処置」または「処置する」とは、哺乳動物の疾患または障害の１もしくは複数の症状を緩和することを指す。

本明細書で使用する「ニューロンの変性」という用語は、正常な健康状態のニューロンからニューロンの活性、生育能または機能における任意の減少を指す。１つの観点では、ニューロンの変性は正常な健康状態のニューロンからニューロンの活性、生育能または機能におけるわずかな減少を指す。別の観点では、ニューロンの変性はニューロンが任意の能力において機能できず、そしてさらにニューロンの死のようなニューロンの完全な無能力を指す。用語「軸索の変性」は同様に軸索の活性、生育能または機能を指す。

本明細書で使用する用語である、タンパク質、化合物または活性の「上昇を検出する」とは、タンパク質、化合物または活性のレベルの測定値を指し、ここで測定値は健康な非疾患状態の個体で同一の測定から得られた値より高い値を反映する。非限定的例として、ＭＳ患者の尿中のＰＬＡ２活性において測定可能な上昇は、ＰＬＡ２活性における「上昇を検出する」ための１つの方法であり、ここでこの上昇はＭＳではない個体の尿中のＰＬＡ２活性のレベルと比較される。当業者は、ＭＳに罹患している患者の尿中のＰＬＡ２活性の「上昇を検出する」ために、ＭＳを有する個体の尿中のＰＬＡ２活性のレベルは、例えば別の健康な患者におけるＰＬＡ２活性のレベルに対して標準化できると理解するだろう。

本明細書で使用する用語「少なくなくとも一断片」とは、少なくとも２つの連続するアミノ酸残基を含んでなるポリペプチドを指し、ここで連続するアミノ酸残基は、より大きなペプチドまたはタンパク質の配列に対応する。非限定的な例として、ジペプチドＳｅｒ−Ａｒｇは全ポリペプチド中に配列Ｓｅｒ−Ａｒｇを含有する、より大きなポリペプチドの一断片である。同様にジペプチドＳｅｒ−Ａｒｇは、配列Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙからなる、より大きなポリペプチドの一断片である。すなわちたとえ１個のアミノ酸残基が欠けているポリペプチドでも、より大きな完全なポリペプチドの「少なくとも一断片」である。

近年、ＭＳで起こる軸索損傷および細胞死、ならびにＭＳ研究において神経変性の抗原特異的メカニズムから先天免疫系の役割への「焦点の移行」に関心が一新された（Ｂｊａｒｔｍａｒ ａｎｄ Ｔｒａｐｐ，２００１，Ｈｅｎｄｒｉｋｓ，ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｐｒａｔ ａｎｄ Ａｎｔｅｌ，２００５により総説されている）。この移行の理由は、組織傷害（軸索の損失）が疾患の発症で起こり、そして長期ＭＳ患者でしばしば見いだされる進行性の障害を導く神経炎症性カスケードを引き起こすという認識である。ホスホリパーゼＡ２が向けられる炎症は長い間、神経系を含むすべての臓器系で組織傷害に対する初期応答として認識されてきた（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，ｅｔ ａｌ．２０００；Ｂａｚａｎ，ｅｔ ａｌ．２００２）。これら酵素の活性は、プロスタグランジン、ロイコトリエン、脂肪酸、および活性酸素種（ＲＯＳ）を含む炎症性メディエーターのレベルを調節する。すべてのこれらのメディエーターは、病因にかかわらず神経変性の初期段階で生産される。しかしＰＬＡ２活性、および神経組織の破壊、特にＭＳにおけるこれら多くの下流のメディエーターの役割は、神経伝達物質に関連する分子または前炎症性サイトカインに比べて比較的注目されることが少なく、その両方ともがＰＬＡ２活性により調節され得る。Ｌｉｐｔｏｎ（１９９９）により注目されているように、神経変性に対する活性に向けられるＰＬＡ２の貢献を理解することは、有用なインヒビターを欠くことにより限定されている。事実、工業的に開発されたほとんどの低分子（非ペプチド）インヒビター（一般に分泌型すなわちｓＰＬＡ２を標的とする）は、任意の臓器系で生体内のパラダイムに成功裏に適用されず、神経系は取り残された（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００１により総説されている、以下も参照されたい）。ＰＬＡ２／トランスグルタミナーゼインヒビターであるペプチドが最近同定されたが、これらはこれまで結膜炎のモデルで局所剤として適用されただけである（Ｍｉｅｈｌｅ ｅｔ ａｌ．２００３；Ｓｏｈｎ ｅｔ ａｌ．，２００３）。さらに最近の齧歯類ＥＡＥおよびＣＮＳ外傷に対して適用されたＣＨＥＣ−９を用いた実験（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．２００４）まで、内因性ｓＰＬＡ２活性を生体内の神経変性の出来事に直接結び付けた報告はなかった。これら最近の研究は、ｓＰＬＡ２の貢献が事実、重要であることを示唆している。ＣＨＥＣ−９はＥＡＥの効果的な処置にもなるので、本発明はＭＳモデル、そしてさらにこのペプチドの臨床的能力を利用するようなＭＳ患者の血液において、この酵素を標的にするための方法を提供する。

Ａ２と名付けられたホスホリパーゼ（ＰＬＡ２）は、配列の相同性、細胞での場所および関連する生物学的活性に従いグループＩ−ＸＩＩに分類されてきた関連酵素の大きなファミリーを形成する（Ｆｕｅｎｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．，２００２；Ｔａｋｅｔｏ ａｎｄ Ｓｏｎｏｓｈｉｔａ，２００２；Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｉ，２００３により総説されている）。ＰＬＡ２酵素は３−ｎ−ホスホグリセリドの２−アシル結合の加水分解の原因である。（これらの酵素はそれらの２−アシル特異性を表すためにＡ２と名付けられた。）２５以上のアイソフォームがすでに同定され、そして分泌型、細胞質ゾル型またはカルシウム非依存型として３つの一般的範疇に構成されている。グループＩ、ＩＩ、ＶおよびＸのＰＬＡ２は分子量が１３〜２０ｋＤａの緊密に関連している酵素であり、そして集合的に分泌型ホスホリパーゼ（ｓＰＬＡ２）として知られている。これらはさらに数個のジスルフィド結合により特徴付けられ、そして触媒活性にはミリモル量のＣａ^２＋を必要とする。ｓＰＬＡ２酵素はすべて、触媒的ヒスチジンが関与する共通のメカニズムを有する。

ＰＬＡ２酵素はアラキドン酸（ＡＡ）代謝における第１段階の原因であり、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）およびリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）酵素によるプロスタノイドおよびロイコトリエンへのプロセッシングにＡＡを生産する（エイコサノイド、図１）。これら経路の下流に参加するものの１つ、ＣＯＸ酵素の操作は、これらの酵素が多くの急性および慢性神経変性障害の炎症性成分に重要な貢献をすることができるので、修復神経科学の中心となった（Ｌｕｋｉｗ ａｎｄ Ｂａｚａｎ ２０００；Ｂａｚａｎ，ｅｔ ａｌ，２００２により総説されている）。ＰＬＡ２活性（すなわち上流活性）、特にｓＰＬＡ２の貢献は、これらの酵素が神経系以外の周知な炎症状態と長く関連してきたにもかかわらず、ほとんど注目されなかった（Ｔｒｉｇｉａｎｎｉ，ｅｔ ａｌ．，２００３によりまとめられている）。細胞外ｓＰＬＡ２のレベルの上昇は、急性膵炎、敗血症ショック、重度の火傷および自己免疫疾患のような全身的炎症疾患に罹患している患者の血漿中で検出された。ｓＰＬＡ２は慢性関節リウマチの患者の滑液、気管支喘息患者の気管支肺胞洗浄物、およびアレルギー性鼻炎患者の鼻分泌液のような炎症性流体中に蓄積する。幾つかのグループはｓＰＬＡ２が、気管支喘息の患者の気道およびアレルギー性鼻炎患者の鼻粘膜のようなアレルギー反応の部位に放出されることを示した。

本明細書のいたるところで証明されるように、ｓＰＬＡ２酵素活性はＭＳに見いだされる炎症および神経変性に重要な貢献をする。実際に、炎症性の応答においてＰＬＡ２の関与に関連する多くの細胞外および細胞内化学経路が今では広く認識されているが、これらの経路は複雑であり、そして多くの詳細（ならびに全体を有機的にまとめあげる原理）は未知である。それにもかかわらず、炎症性の刺激はほとんどすべてのタイプの細胞のＰＬＡ２−ＡＡ経路で顕著かつ迅速な応答を生じ、そして：１）分泌型（ｓ）と細胞質ゾル型（ｃ）との間のＰＬＡ_２の相互作用；および２）ＰＬＡ２酵素とサイトカインと他の炎症性メディエーターとの間のクロストークが正しい場所で関与する増幅メカニズムがあることは確実である。第１の場合、ｓＰＬＡ２およびｃＰＬＡ２は多くの細胞型でＡＡの生産および放出において協同作業を行うことが今では明らかである（Ｍｏｕｎｉｅｒ，ｅｔ ａｌ ２００４；Ｈａｎ，ｅｔ ａｌ ２００３；Ｆｏｎｔｅｈ，２０００；Ｂａｌｂｏａ ｅｔ ａｌ，２００３；Ｍｕｒａｋａｍｉ，ｅｔ ａｌ ２００２；Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，１９９８）。ＡＡ放出におけるｓＰＬＡ２の関与は細胞から酵素の分泌中に起こり、そして細胞が酸化的ストレスにかけられる場合に増幅される（炎症反応中に）ことが示される。このプロセスはまたオートクリンループにより駆動されることができる。例えばｓＰＬＡ２ＩＩａ（恐らく最も豊富な循環しているＰＬＡ２アイソフォーム）の生産は、ＰＰＲＥ−１がＩＩａ酵素の発現を駆動するので、ペルオキシソーム増殖剤−活性化受容体α（ＰＰＡＲα）、数種のＡＡ産物（エイコサノイド）の受容体およびその応答要素ＰＰＲＥ−１により調節され得る。前炎症性サイトカインとＰＬＡ２−ＡＡ経路の成分との間のクロストークについては多くの機会が存在する。急性期のサイトカインメディエーターとｓＰＬＡ２との間の関係が数年間認識されていた（Ｃｒｏｗｌ，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｖａｌｅｔｉｎ ａｎｄ Ｌａｍｂｅａｕ，２０００；Ｇｒａｎａｔａ，ｅｔ ａｌ．，２００５）。ＩＬ−６およびｓＰＬＡ２は例えば同時調節（ｃｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ）となるようである。一方では、ＩＬ−６は肝臓からのｓＰＬＡ２生産を制御することができ、すなわち急性期応答中に全身性のｓＰＬＡ２レベルを調節する。同時に、非触媒的ｓＰＬＡ２酵素（少なくともアイソタイプＩＢ、ＸおよびＩＩＡ）は、「Ｍ」型ｓＰＬＡ２受容体を介してＩＬ−６およびＴＮＦα生産を駆動することができる。ＮＦカッパＢのＴＮＦα活性化も、この活性化が特異的ｓＰＬＡ２酵素インヒビターの存在下で強く減少させられるので（ケラチノサイトで）、ｓＰＬＡ２酵素活性に依存していることが示される（Ｔｈｏｍｍｅｓｅｎ，１９９８）。このようにｓＰＬＡ２酵素自身により支配される幾つかのサイトカイン媒介型の炎症性メカニズムの例がある。さらにまた下流では、アラキドン酸生成物（プロスタグランジンＥ２のような）もこのカスケードに貢献し、ここでもＮＦカッパＢの活性化後の炎症性サイトカインおよびメディエーター（例えばＴＮＦα、ｉＮＯＳ）のアップレギュレーションによる（Ｐｏｌｉｇｏｎｅ ａｎｄ Ｂａｌｄｗｉｎ，２００１）。ＴＮＦαが誘導する活性酸素種の生産も、ＡＡ経路のロイコトリエン分枝の下流成分に依存することができる（Ｗｏｏ，ｅｔ ａｌ，２０００）。

また逆方向、すなわちサイトカインからｐＬＡ２産物または関連酵素への幾つかのクロストークの例も存在する。例えば平滑筋細胞では、ＮＦカッパＢとＰＰＡＲγが一緒に関与する経路で、ＳＰＬＡ２（ＩＩａ）転写がＩＬ１βにより調節される（Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒ ａｔ ａｌ．，１９９９）。神経芽腫では、ＩＬ−１βがＣＯＸ−２およびＰＧＥ（２）を、ＮＦカッパＢ媒介型メカニズムを介して再度アップレギュレートする（Ｈｏｏ
ｚｅｍａｎｎｓ，ｅｔ ａｌ，２００３）。細胞内のＰＬＡ２の増幅およびサイトカインのクロストークプロセスは、拡散可能なｓＰＬＡ２酵素により誘発されるプロセスで互いに依存することができる。例えばラットの糸球体間質細胞では、種々のｓＰＬＡ２がＴＮＦα−誘導型のｓＰＬＡ２−ＩＩａ発現をｍＲＮＡおよびタンパク質レベルで強化することが示されている（Ｂｅｃｋ，ｅｔ ａｌ．２００３）。

本明細書の開示から、ｓＰＬＡ２酵素活性が数種のエコサノイドおよび関連するサイトカインを全体的な炎症応答の一部として調節することは明らかである。ＭＳにおけるサイトカインレベルおよび活性は徹底的に研究され、そしてこのクラスのメディエーターの疾患に対する貢献は複雑であり、しかも問題が多い（Ｍａｒｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，２００２による総説）。一方エコサノイド（もっぱらＰＥＧ２およびＬＴＢ４）は、ＭＳ患者のＣＳＦ中で上昇することが一貫して見いだされる（Ｍａｒｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，２００２；Ｇｒｅｃｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９９；Ｄｏｒｅ−Ｄｕｆｆｙ，ｅｔ ａｌ．１９９１；Ｎｅｕ，ｅｔ ａｌ．，１９９２；Ｂｏｌｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８４）。シクロオキシゲナーゼが誘導するメディエーターも、動物モデルで測定された。例えばＴＢＸＡ２およびＰＧＥ２は両方とも、モルモットのアレルギー性脳炎において疾患の活発な誘導期および再発中に脊髄で上昇する（Ｂｏｌｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８６）。これらのレベルは脊髄損傷の数に相関する。しかしＥＡＥおよびＭＳの病因におけるＣＯＸ酵素の役割は依然として不明である。実際に、ＣＯＸインヒビターでのＥＡＥの改善の報告があるが（アスピリンおよびインドメタシン、Ｍｏｏｎ，ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｒｅｄｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９９４；１９９５）、それらは炎症カスケードにおける酵素の直接的参加よりむしろ、グルタミン酸興奮毒性へのＣＯＸの影響に関連し得るので、結果を解釈することが難しい（Ｒｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，２００４も参照にされたい）。アスピリンが効果的であったのは、ＭＳにおいて体験した疲労に関係するＭＳ患者でのＣＯＸインヒビターの全身的調査だけであると思われる（Ｗｉｎｇｅｒｃｈｕｋ，ｅｔ ａｌ．２００５）。前炎症性ロイコトリエンは、神経系の中および外では炎症性メディエーターとしてほとんど見落とされてきた（Ｐｅｔｅｒｓ−Ｇｏｌｄｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２００５）。多くのリポキシゲナーゼインヒビターが市販されており、そしてそれらインヒビターの中にはＥＡＥを遮断するものもある（Ｒｅｄｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９９５）。しかしこの調査の方針は追跡されず、リポキシゲナーゼインヒビターが現在でも治療薬開発の候補であるのかどうかは明らかではない。特異的ＬＴＢ４インヒビター（ファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）により開発されたＣＰ−１０５、６９６）はＥＡＥおよびＥＡＥ中に好酸球の脊髄への移動を改善するが（Ｇｌａｄｕｅ，ｅｔ ａｌ．，１９９６）、この元の報告にはこれら２つの化合物を用いたさらなる研究が見られなかったからである。

ＭＳにおける先天免疫応答の役割の重要性が増して、この疾患における単球および単球誘導物（マクロファージ／ミクログリア）の関与に再び興味が戻った（Ｒａｉｖｉｃｈ ａｎｄ Ｂａｎａｔｉ，２００４ Ｈｅｎｄｒｉｋｓ，ｅｔ ａｌ．，２００５により総説されている；またＨｅｐｐｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．２００５も参照されたい）。これら細胞の重要性は、ＭＳに及ぼすエコサノイドおよびｓＰＬＡ２活性の貢献にも関連し得る。予想どおり、ＡＡ代謝経路は活性化単球（マクロファージおよびミクログリア）により刺激される。ＡＡ代謝のＣＯＸ分枝では、単球は主にＰＧＥ２およびＴＢＸＡ２を生産し、そしてまたリポキシゲナーゼ誘導物も生産する（Ｔｉｌｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。これらＡＡ経路の活性化が神経細胞に毒性であるという事実は、３つの酵素−ＰＬＡ２（ｓＰＬＡ２を含む）、リポキシゲナーゼおよびＣＯＸのインヒビターがそれぞれインビトロでミクログリアの神経細胞致死活性を下げるので、ミクログリア細胞を用いて納得の行くように証明された（Ｋｌｅｇｅｒｉｓ ａｎｄ ＭｃＧｅｅｒ，２０００；２００３）。さらにＣＨＥＣ−９およびＹ−Ｐ３０と呼ばれるＣＨＥＣ−９を含有する３０ｍｅｒ、およびＤＳＥＰと呼ばれるこれら両者の元のタンパク質（以下を参照）は、すべてミクログリアおよび活性化マクロファージの分化および／または致死活性をインビボおよびインビトロで阻害することが見いだされ、これにはマウスの神経細胞を用いたキセノカルチャー中の活性化ヒトＨＬ−６０細胞も含まれる（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．，２００２）。少なくともＣＨＥＣ−９に関しては、この阻害はｓＰＬＡ２阻害、そして続いて活性化細胞における下流のエコサノイドの生産の阻害に直接的に関連することができる。したがってｓＰＬＡ２活性の阻害がＥＡＥの、そして恐らくＭＳの効果的処置であるという１つの理由は、先天免疫系のこれら疾患への貢献の阻害、特に単球およびその誘導物におけるエコサノイド生産の阻害に関連する可能性がある。

少なくとも２０年間、炎症の脂肪酸、リン脂質および他の脂質メディエーターが、脳傷害の後にホスホリパーゼＡ２活性の結果として放出されることが知られてきた（例えばＲｅｈｎｃｒｏｎａ，ｅｔ ａｌ．１９８２；Ｙｏｓｈｉｄａ，ｅｔ ａｌ，１９８６；Ａｂｅ，ｅｔ ａｌ，１９８７；Ｓａｌｕｊａ，ａｔ ａｌ，１９９７）。これらの脂質産物はサイトカインおよび他のメディエーターと共同作用する（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）活性と一緒に神経系における細胞死に有意な貢献をするものと予想され、それはＣＮＳに対する急性損傷後に観察されるものであるか、または多くの進行性の神経変性疾患で見いだされるもののいずれかである（Ｌｕｋｉｗ ａｎｄ Ｂａｚａｎ ２０００；Ｂａｚａｎ ｅｔ ａｌ，２００２による総説）。さらにリン脂質の分解は、一般に膜およびミエリン機能、ならびにフリーラジカル形成および遊離脂肪酸の増加によるシグナリングの欠失に主要な変化を生じる。すべてのこのような変化は、ニューロンを含むほとんどの細胞型を傷害している恐れがある（Ｌｉｐｔｏｎ，１９９９）。

本発明では、ｓＰＬＡ２活性のＣＨＥＣ−９阻害がインビトロおよび皮質損傷後の皮質ニューロンの生存の増加と相関する。分泌したホスホリパーゼの中で、グループＩｂ、ＩＩａおよびＩＩＩはすべてインビトロでのニューロン死を誘導または強化することが示され、これは時折、アラキドン酸のＮＭＤＡおよび／またはカルシウムチャンネルに及ぼす効果を介する（Ｙａｇａｍｉ，ｅｔ ａｌ，２００３；２００２ａ；２００２ｂ；ＤｅＣｏｓｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，２００２；Ｋｏｌｋｏ，ｅｔ ａｌ．，２００２）。実際、これら３つのすべてのクラスのＰＬＡ２酵素（分泌型、カルシウム−依存型および細胞質ゾル型）に向けられたＰＬＡ２インヒビターは、ラットの大脳皮質に局所的に適用された時、グルタミン酸およびアスパラギン酸の放出を減少する（Ｐｈｉｌｌｉｓ ａｎｄ Ｏ’Ｒｅｇａｎ，１９９６）。アルツハイマー病のような神経変性障害では、アミロイドベータペプチドもｓＰＬＡ２を活性化するので、アミロイドニューロパシーにおけるＰＬＡ２の直接的関与が示唆された（Ｌｅｈｔｏｎｅｎ，ｅｔ ａｌ，１９９６）。特にストレス条件下でｓＰＬＡ２により調節され得る細胞質ゾル型ＰＬＡ２（ｃＰＬＡ２）は（上記参照）、ニューロン死が関与する急性および慢性障害の両方に関与すると思われる。さらにｃＰＬＡ２ノックアウトマウスはＭＣＡ閉塞後に、より小さいサイズの梗塞を有し（Ｓａｐｉｒｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｂｏｖｅｎｔｒｅ，２０００）、そしてパーキンソン病のモデルではドパミン消耗に抵抗性である（ＭＰＴＰ神経毒性、Ｋｉｌｖｅｎｙｉ ｅｔ ａｌ，１９９８）。

コルチコステロイドは、内因性ＰＬＡ２インヒビターであるリポコルチンを刺激することにより一部作用する（Ａｎｎｅｘｉｎ １、Ｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，１９７９）。Ａｎｎｅｘｉｎ １の標的はｃＰＬＡ２らしい（Ｈａｎｎｏｎ，ｅｔ ａｌ．２００３；Ｖｉｓｈｗａｎａｔｈ．Ｅｔ ａｌ．１９９３；Ｎｅｗｍａｎ，ｅｔ ａｌ，１９９７）。ｓＰＬＡ２およびｃＰＬＡ２の両方は最近、齧歯類ＥＡＥに結び付けられた。しかし実験ではこの疾患における細胞質ゾル型ＰＬＡ２の関与が示唆されたが（Ｋａｌｙｖａｓ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ，２００４）、原理的には恐らく正しいが、幾つかの注意を払って解釈しなければならない。ＡＡＣＯＦ３（この実験のＥＡＥマウスでは、ｃＰＬＡ２を阻害するために使用されたアラキドン酸のトリフルオメチルケトン類似体）の１つの副作用は、副腎細胞から全スペクトルの副腎皮質ステロイドの基準放出における数倍の上昇である（Ａｎｄｒｅｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。この応答はＥＡＥに対するマウスの抵抗性を説明することができる（Ｓｔｅｆｆｅｒｌ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。外因性ステロイド処置は、ＭＳにおける活発な疾患を防止しないが、再発を経験した患者において短期回復の加速に効果的であると思われる（Ｂｒｕｓａｆｅｒｒｉ ａｎｄ Ｃａｎｄｅｌｉｓｅ，２０００）。

循環しているｓＰＬＡ２は、神経系以外の炎症性障害に可能な治療標的として数年間認識されてきたが、最新の総説では（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００１）、ｓＰＬＡ２の低分子インヒビター（非ペプチド、活性部位の構造に基づき設計された）の開発を目的とするほとんどの努力が、商業的興味から見放されていたようであった。この興味損失の理由の１つは（Ｓｐｒｉｎｇｅｒにより示唆されるような）、インビボアッセイにおけるこれら化合物の効力の欠損である。イーライリリー（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）から２つのＳＰＬＡ２グループＩＩＡインヒビターが残ったが、それらは関節炎および敗血症の患者を含む初期の臨床試験でそれほど見込みがなかった（Ｂｒａｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，２００５；Ａｂｒａｈａｍ，ｅｔ ａｌ．，２００３）。これらまたは他の工業的に開発されたｓＰＬＡ２インヒビターがＭＳモデルで、または任意の神経系障害のモデルで試験されたことを示唆する報告はない。

ＤＳＥＰ（拡散性生存回避ポリペプチド：Ｄｉｆｆｕｓｉｂｌｅ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ｅｖａｓｉｏｎ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）（配列番号２）は元々、過酸化水素で神経細胞株を処理することにより同定された。Ｙ−Ｐ３０と呼ばれるＤＳＥＰの３０アミノ酸の生存促進Ｎ−末端断片がこれら細胞の培養基からクロマトグラフィーおよび電気泳動分離技術により精製された（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ，１９９８）。このペプチドは、インビトロで神経細胞株を、および大脳皮質の損傷後に皮質ニューロンの生存を促進する（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ，１９９８；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ，２０００）。ＤＳＥＰをコードする新規ｃＤＮＡおよびそのゲノムの位置が同定された（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ，２０００）。染色体１２領域ｑに位置するヒトＤＳＥＰ遺伝子は、５個のエキソンおよび４個のイントロンを有し、そして１２ｋＤの分泌型ポリペプチドをコードする。Ｙ−Ｐ３０は分泌される分子のＮ−末端を含んでなる。ペプチド精製の前、ならびに引き続くアッセイおよび精製工程の細胞の苛酷な処理は、ＣＮＳ移植の「神経栄養的」特性、および胚性細胞および細胞株の両方によりコンディショニングした培地（ＣＭ）の生存促進活性の実験中になされた考察にすべて基づいた（例えばＥａｇｌｅｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．１９９０，１９９２；Ｈａｕｎ ａｎｄ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，１９９３）。これらの実験から、インビボでの「栄養」活性は、ＣＭが酸化的ストレスにかけられた細胞に由来する時、最もはっきり理解できるということが明白であることが多く、そしてこの考察は最終的にペプチド濃度が高い培地の生産を導いた。このペプチドまたは大変良く似た分子は、マウスの腺癌細胞（Ｔｏｄｏｒｏｖ，ｅｔ ａｌ，１９９６）、グループＡβ溶血性連鎖球菌（Ｙｏｓｈｉｚａｗａ，ｅｔ ａｌ，１９９２）、およびヒト汗（Ｓｃｈｉｔｔｅｋ，ｅｔ ａｌ ２００１）からも部分精製された。最も最近では、ＤＳＥＰおよびＤＳＥＰ由来ペプチドの生存促進特性が２つの別個の研究室で独立に確認された（Ｐｏｒｔｅｒ，ｅｔ ａｌ，２００３；Ｌａｎｄｇｒａｆ，ｅｔ ａｌ，２００４）。

様々なインビトロおよびインビボモデルを使用して、細胞生存促進活性および縮小した免疫細胞活性がこのペプチドを用いて証明された（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ，１９９８，２０００，２００２，２００４）。ＤＳＥＰおよびＤＳＥＰペプチドは、様々な種類のストレスにインビトロでかけられたすべての神経芽腫細胞、海馬細胞株、および主要な皮質ニューロンの生存を促進する。皮質損傷後のＤＳＥＰペプチドの適用は、通常は変性する皮質ニューロンを保護し、そして細胞性炎症応答を阻害する。このペプチドは全身性投与を含め、インビトロでの混乱（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）後、またはインビ
ボでの損傷後に適用することができるので、通常ではない。ニューロン細胞でのＤＳＥＰの過剰発現は、Ｙ−Ｐ３０／ＣＨＥＣ−９処置後に見いだされるものに類似する表現型をもたらし、すなわち単球攻撃を含め種々のストレッサーに耐性である（キセノカルチャーでのインビトロ、および異種移植片でのインビボ）。さらにヒトＮ−末端ペプチドに対して免疫感作されたラットは、悪化した皮質損傷ならびにそれらの血清中に増加した致死活性を有するので、ＤＳＥＰは、ストレス、免疫およびその他に対する正常な防御メカニズムの一部であり得る。この致死活性は免疫感作したラット血清中のｓＰＬＡ２活性の上昇と一致するが、これは証明されなければならない。最後にＹ−Ｐ３０は、大脳皮質の虚血／無酸素症のモデルで試験され、ここでＹ−Ｐ３０は皮質領域２でＭＡＰ２免疫陽性樹状突起を救済し、これは以前に領域２／３境界で損傷の直接的吸引後に報告された効果に類似する効果である（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．１９９８）。

これまでに見いだされたＤＳＥＰまたはＤＳＥＰペプチドの最も顕著な特性は、ノナペプチドＣＨＥＣ−９を用いた場合である。ＣＨＥＣ−９は、ペプチド中の９個のアミノ酸ループのジスルフィド安定化を可能にするＹ−Ｐ３０の２３位でｌｙｓのｃｙｓへの思わぬ置換により見いだされた（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．２００４）。ＣＨＥＣ−９はインビボで有力な生存分子であり；大脳皮質損傷後にＣＨＥＣ−９の単回の皮下注射（０．４ｍｇ／ｋｇ）で創傷のまわりの細胞構築（これは本質的に保存される）、ならびに損傷部位のミクログリアおよびマクロファージを含む炎症性細胞の浸潤および分化（これは抑制される）の両方に劇的な効果をもたらす。またＣＨＥＣ−９は、これらの細胞のカルチャーに０．１ｎＭの濃度で加えた時、精製された大脳皮質ニューロンの生存を増加し、そして活性化ミクログリアの形態学的分化を抑制する。

ＣＨＥＣ−９はインビトロで分泌されるＰＬＡ２グループＩＩＩ（ハチ毒由来）の活性およびラット血清のｓＰＬＡ２活性を阻害する。ＣＨＥＣ−９の特異的ｓＰＬＡ２標的は未知であるが、ラット血清はｓＰＬＡ２ＩＩ型が優勢である（Ｍｉｃｈｅｌｉｃｈ，１９９７）。重要なことは、ＣＨＥＣ−９のｓＰＬＡ２阻害効果が、損傷後にペプチドの生存および免疫調節効果を証明するために使用された同じ皮下注射を使用したペプチドの全身性送達後に、ラットから回収した血清で証明できる点である。酢酸ミリスチン酸ホルボールが刺激した血小板の凝集（これは分泌型および細胞質ゾル型ホスホリパーゼＡ２の両方により調節され得る：Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．２００４を参照にされたい）もＣＨＥＣ−９により抑制される。この抑制は、単離された血小板の直接的処置（１００ｐＭのＣＨＥＣ−９）後にインビトロで、または神経保護的濃度でペプチドの皮下送達後にペプチドを注射したラットから単離した血小板で見いだされる。最も最近では、我々はミエリン塩基性タンパク質での免疫感作後に、ＣＨＥＣ−９がＤＡラットのＥＡＥ発症を防ぐことを見いだした。

ホスホリパーゼ（Ａ２）が向かう炎症は、本発明の前まではほんどの場合でニューロン変性に貢献したようだが、この考えを示すインビボ試験はほとんど無かった。またＰＬＡ２が関連する炎症は、本明細書のいたるところで記載するように、ＭＳでも役割を果たす。分泌型ホスホリパーゼＡ２のインヒビター、すなわちヒト神経保護ペプチドＤＳＥＰ、ペプチドＣＨＥＡＳＡＡＱＣ（ＣＨＥＣ−９）のノナペプチド断片は、本発明者により見いだされ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．２００２）、そしてラットの大脳皮質損傷の効果的処置のために全身的に適用された（図１８）。ＣＨＥＣ−９は２００３年１１月１７日に出願された米国特許出願第１０／７１４，６９９号明細書に、「脳傷害、神経変性障害および炎症性障害を処置するための低分子量の生存促進／免疫調節ペプチド」という表題で詳細に記載されており、これは引用により編入する。

ＣＨＥＣ−９およびリリーのｓＰＬＡ２ＩＩインヒビター（ＬＹ３１１７２７）の両方は、付加的効果無しに６０〜７０％までヒト血漿ｓＰＬＡ２活性を下げる。両インヒビタ
ーは、同じｓＰＬＡ２酵素プールを標的にするのかもしれない（図１９を参照にされたい）。

ＣＨＥＣ−９はヒトにおいて全身性ｓＰＬＡ２活性を下げる。またｓＰＬＡ２活性は急性および慢性の両方の神経変性障害に貢献することも見いだされた。これはノナペプチドｓＰＬＡ２インヒビターであるＣＨＥＣ−９が全身性ｓＰＬＡ２活性および神経炎症を抑制し、そして重要なことには急性のＣＮＳ損傷モデルに適用した時にニューロンを救済することが今、示されたからである（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．２００４）。ＣＨＥＣ−９は、これも本発明者により見いだされた内因性ヒトタンパク質（ＤＳＥＰ）の低分子量ミメティックであり、そして製薬への開発に適している。本発明ではこのペプチドが、全身性ｓＰＬＡ２活性が最大になったと予想された時点で、免疫感作後の処置を始めた時に、ＥＡＥの防止にも効果的であったことが見いだされた。またＣＨＥＣ−９は疾患に伴う体重の減少、ならびに末梢免疫感作部位の回りの浮腫も防止または抑制する。すなわち今、ＣＨＥＣ−９が神経変性障害の処置に大きな可能性をもたらす抗炎症性および神経保護的ペプチドであるという証拠に動かされずにはいれらない。

本発明の観点では、単純な非侵襲的試験が、炎症の早期兆候を同定し、神経変性的炎症をモニタリングし、症状が現れる前に神経変性疾患の方向を変え、高い危険性にある個体を同定し、そして神経系を傷害するか、または傷害する可能性がある活性または状況（ストレス）を同定するために見いだされた。

本発明は一部、複雑な生物学的流体様の尿を酵素活性について成功裏に分析することができ、そして得られた活性のレベルに意味があるという知見に基づく。神経系を破壊するものを含む多くの炎症反応（ｅｖｅｎｔｓ）／疾患に関連するｓＰＬＡ２については、本明細書で様々なレベルの活性が尿中に検出でき、そしてそのような反応／疾患と相関させることができたことが証明される。場合によっては、活性の上昇は動物モデルで示されるように初期の症状が現れる前の段階に見いだされる。

また本発明は一部、検出可能なレベルのｓＰＬＡ２活性および神経系特異的タンパク質活性を有する例えば尿、汗、唾液および他の流体のような体液中に、ｓＰＬＡ２酵素および／または神経系特異的タンパク質活性を検出し、そして定量することにより神経変性的炎症を検出することに基づく。

別の観点では、本発明は体液中の炎症およびニューロン／軸索変性／破壊を検出するためのキットを提供し、このキットは体液を含んでなるサンプルおよび炎症酵素の活性を検出するための抗体、およびサンプル中に少なくとも１つの神経系特異的タンパク質を含んでなる。本発明に従い、キットはさらにサンプル中の炎症およびニューロン／軸索変性／破壊の表示物を含んでなることができる。表示物は、サンプル中の炎症酵素および少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の存在を表すための任意の適切な媒体であることができる。

本発明は、限定するわけではないが以下の：脳障害、脊髄障害、外傷、脳卒中、末梢ニューロパシーを含む急性および慢性の神経変性、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、多発性硬化症のような神経変性疾患、進行性の神経変性（例えば脳性麻痺）および非特異的無酸素症（すなわち溺死、窒息等による無酸素症）に伴う精神遅滞症候群に関連するニューロンおよび軸索の炎症性破壊を見いだし、かつ／またはモニタリングするために応用可能である。また激しい運動、スポーツ損傷、懸賞がかかった試合に伴う炎症、加齢に伴う炎症、および任意の継続している身体の酷使に伴う炎症にも適用可能である。

これは本発明が、単純な非侵襲性の尿アッセイを使用してＭＳ患者の全身性ＰＬＡ２レベルを特徴付けることができるということも証明するからである。同じアッセイがこのモデルで疾患の出現に関連してＰＬＡ２のレベルをモニタリングするために、ＥＡＥを生じる免疫感作後のラットにも適用される。また本発明はラットが、以前にニューロンの生存を上昇させ、そして大脳皮質の急性損傷後に炎症を抑制するために使用されたｓＰＬＡ２活性のペプチドインヒビターのＣＨＥＣ−９で処置された場合、ＣＨＥＣ−９がＥＡＥの症状も緩和することを証明する。ＥＡＥはヒトＭＳに関する効果的モデルであることが示されたので、故に本発明はＭＳの処置に直接的な応用性を有する。すなわちＣＨＥＣ−９は、患者のＭＳ疾患の部位でＰＬＡ２の活性を阻害するＣＨＥＣ−９の能力に基づき、ＭＳの症状を緩和するために使用することができる。

別の観点では、本発明は「標準的な」個人の毎日の、または日常的なモニタリングに関する。そのような患者では、ｓＰＬＡ２の増加および神経系タンパク質の損失の検出が、限定するわけではないがＣＨＥＣ−９（本明細書のいたるところで詳細に記載するように）のような抗炎症治療の必要性を示すことができる。そのような処置は、限定するわけではないがアルツハイマー病の防止、認知症の防止または処置、および寿命の全体的増加を含め、患者に有益な効果を提供することができる。本発明のこの観点の１つの利点は、試験および／または処置が必要に応じて投与されるので、抗炎症化合物使用のいかなるマイナスの、または副作用も限定される。

尿または他の体液中に現れる神経系特異的タンパク質の様々な系特異的タンパク質または断片の出現を測定でき、そして限定するわけではないがアルツハイマー病、ＭＳ、ＡＬＳ、脳卒中および外傷含む神経系の変性障害、ならびに限定するわけではないが激しい運動をしすぎること、長期の高熱、情動的ストレス（今では炎症成分を有することが知られている）、および重度の火傷を含め、中枢もしくは末梢神経組織を実際に損傷する神経および非神経の両方の他の炎症性障害に見いだされる炎症の増加と相関させることができる。

これらの障害は、１）上昇した尿中のｓＰＬＡ２活性、および２）神経系特異的タンパク質（およびタンパク質の断片）の可能な出現を伴い、このタンパク質には限定するわけではないがニューロフィラメントタンパク質（高、中および低ＭＷアイソフォーム）、ベータチューブリンアイソタイプＩＩＩ（神経系特異的）、希突起膠細胞特異的タンパク質（ＣＮＳミエリンおよび希突起膠細胞の成分）、グリア線維酸性タンパク質（ＣＮＳ星状細胞の構造タンパク質）、ミエリン塩基性タンパク質（ＣＮＳおよびＰＮＳミエリンの成分）、ＮｅｕＮ（ニューロン核に特異的な成分）、ならびに現在利用可能な、または将来開発されるであろう他の神経系特異的マーカーを含む。

本発明の態様では、これらすべてのタンパク質用の特異的なモノおよびポリクローナル抗体プローブが市販されているので、１もしくは複数のこれらタンパク質が標準的な定量的ウエスタンブロッティングアッセイを使用してアッセイされる。さらにありとあらゆるこれらのプローブを、例えばＢＩＯＲＡＤマルチプレックスアッセイシステム（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ）（バイオラッド社（ＢｉｏＲａｄ Ｉｎｃ．）、ヘラクレス、カリフォルニア州）のような多数を測定する装置で使用することができ、ここで抗体は、尿または血清のような少容量の体液中で数種のタンパク質を同時測定するために、特異的に暗号化されたビーズに結合される。

一態様では、本発明は炎症酵素の濃度における上昇（例えば分泌型ホスホリパーゼＡ２）に関する尿サンプルのアッセイを含む手順を使用することにより、ニューロン／軸索破壊を生じる炎症をモニタリングすることを提供する。すなわち治療を早く始めることができるように、炎症性の神経系破壊を早期段階で検出することができる。

一態様では、本発明は例えば尿または他の体液中を例えばウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡまたはマルチプレックスアッセイのような抗体に基づくアッセイを使用して、炎症酵素（分泌型ホスホリパーゼＡ２酵素活性）の濃度の上昇、およびニューロン／軸索変性／破壊（神経系特異的タンパク質のレベルをモニタリングする）により炎症をモニタリングする方法を含む。この方法は、種々の障害（例えばストレスから、すべての神経変性疾患、懸賞付きの試合にまで）に適用することができる。この方法は活性なｓＰＬＡ２酵素および神経系特異的タンパク質の断片が排出され、そして神経変性疾患の動物モデルの場合（ＭＳおよびＡＬＳのような）、そしてそれらは症状時またはその前に分泌されて早期の調査／検出が可能になるという知見に基づく。

現在のプラクティスは、ＣＮＳ炎症の状態下での神経破壊を示すために、肉眼で見える外的な行動的兆候（例えば虚弱、知覚欠損、認知困難）に依っている。ｓＰＬＡ２のような炎症性酵素は血中で測定されるが、１）これは侵襲的手順であるが、尿分析は非侵襲的である、そして２）ニューロンの破壊を示すために血中のニューロン特異的タンパク質（およびそれらの断片）をモニタリングすることも難しい。この困難は、血中の高濃度の妨害タンパク質、および尿中の大変低濃度の妨害タンパク質によるものである。本発明は炎症性酵素（分泌型ホスホリパーゼＡ２）の増加の内容において、この破壊の大変早い兆候を検出できるようにし、これは尿中で直接的に測定され得る。

本発明では、ニューロン特異的タンパク質（またはこれらタンパク質の断片）のレベルを測定するための定量的なウエスタンブロッティング法が、同じサンプルの急性期炎症性酵素ｓＰＬＡ２用の酵素アッセイと組み合わせられる。これらの手順は、炎症によるニューロン／軸索破壊をモニタリングするための単純な非侵襲的方法を開発するために、尿に適用される。そのように組み合わせた技術は尿に、あるいは他の容易に入手可能な体液（例えば唾液）にこれまで適用されたことはなかった。この組み合わせた技法は、幾つかの異なるモデルで試験された、中でも；１）激しい運動後の成人男性の尿サンプル：炎症性酵素活性およびニューロン特異的タンパク質の両方が３０分後に尿中に検出可能であり、運動から６時間後まで減少し、そして２４時間で低い）；２）脊髄損傷後のラットの尿サンプル（挫傷後６時間、２４時間および４日にモニタリングした尿は、２４時間でピークの尿中ｓＰＬＡ２活性およびニューロンタンパク質を示す）；および３）筋萎縮性側索硬化症のマウスモデル（Ｇ９３／ＳＯＤ１トランスジェニックマウス）に由来する尿サンプルは、同じサンプル中で上昇している尿のｓＰＬＡ２活性およびニューロンタンパク質を示し、これはこの手法が進行性の神経変性疾患（例えばアルツハイマー病、多発性硬化症（ＭＳ）等）のモニタリングに有用であることを示唆している）。

また一態様では、本発明は本発明の２つの重要な特徴を証明するために、神経変性障害がある動物モデルおよびヒトの両方に由来する尿サンプルを使用する：１）尿中のｓＰＬＡ２活性および尿中のニューロン特異的タンパク質の断片の定量的増加は、神経学的症状の発症に相関するか、またはそれに先行し、そして２）本発明の方法により提供されるその情報を使用して、いつそのような患者を抗炎症薬で処置し始めるかを決定することができる。

実験的な自己免疫脳炎（ＥＡＥ、多発性硬化症モデル）からの最近のデータは、この取り組みが本明細書で証明するように働くことができるという支持を与える。ラットを脳炎誘発性化合物で免疫感作した後（ラットにＥＡＥを与えるために）、尿中のｓＰＬＡ２活性をモニタリングし、そしてＥＡＥ症状が現れる前にピークになった。数匹のラットはこの時点でｓＰＬＡ２インヒビターのＣＨＥＣ−９で処置され、そしてこのインヒビターが疾患の症状の出現を防止した。

図１７は、激しい運動後にモニタリングした様々な時点で尿中のｓＰＬＡ２活性およびニューロフィラメントタンパク質を具体的に説明する（以前に炎症性の出来事となることが示された）。両対象は２４時間で回復する。神経変性疾患または幾つかの活動（例えば激しい運動、懸賞付きの試合）では、症状が現れる前からでも始まる可能性がある持続的なｓＰＬＡ２炎症があり得る。本発明の観点では、本明細書に説明する方法に従う試験が、処置を始めるための基礎を形成し、高い危険性のある個体を同定し、あるいは炎症が関連する状況の傷害反応を予想する。ＭＳモデル（ＥＡＥ）を使用して行った実験（図１２および７）は、個体にＭＳ様疾患を生じる免疫感作工程後のｓＰＬＡ２活性のタイムコースを示し、これでは症状が現れる前にｓＰＬＡ２活性がピークに達し、ここが処置を始める時である。症状がある期間（そして恐らくそれ以前）を通して尿中のｓＰＬＡ２活性に持続的上昇があるＡＬＳモデル（Ｇ９３ａ ＳＯＤ１トランスジェニック）を使用して行った実験（図１４）は、これらの応用の可能性に支持を示す。本発明の方法をそのような個体に適用することにより、ｓＰＬＡ２インヒビターのＣＨＥＣ−９でＥＡＥラットが本質的に治った。

多発性硬化症（ＭＳ）患者および年齢／性別が合った健康な対照からの尿サンプルを図１５に示すように分析した。この実験は尿中の活性が、我々のアッセイ系（チオ−グリセロホスホコリン基質／Ｃａ２＋開始型）を使用した典型的なミハエル−メンテンの酵素動力学を示し、そして重要なことはその反応が最大速度および測定可能な親和性定数を有することを証明する。この実験は尿が正に酵素のように挙動するので、炎症をモニタリングするために本発明で使用する方法を検証する。

本発明の方法は、中でも筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、脊髄損傷および脳傷害の患者および動物モデルに応用することができる。当業者には理解されるように、本開示から手掛ければ、本発明は個体の他の炎症に関連する状態の特性決定にも応用することができる。個体で、尿の測定値を神経系障害の重篤度を測定するために使用する標準的な動作スケールと相関させることができる。動物については、標準化された行動試験法を使用することができる。

本発明の別の態様では、炎症に関連する神経変性の全身的処置に効果的な分泌型ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２）の大変安定なペプチドインヒビターが見いだされた。このＣＨＥＣ−９と呼ばれるペプチドは、ＣＮＳに対する障害に続く炎症カスケードの観点を阻害し、そして結果として、通常は変性するニューロンを救済する。多発性硬化症は、再発するＣＮＳ炎症、軸索および細胞の変性、および引き続き現れる神経学的欠損を特徴とする。繰り返す再発の後、患者はしばしば慢性的に無能となる。ＣＨＥＣ−９の顕著な特性、およびＭＳモデルにおけるｓＰＬＡ２活性の役割に関する最近の報告に基づき、本明細書で説明する本発明は、ＣＨＥＣ−９が多発性硬化症の治療として使用できることを証明する。また本発明は製薬としてＣＨＥＣ−９ペプチドの開発の可能性を証明するために、エクスビボでの患者の成分を含め、ＣＨＥＣ−９の臨床前試験も示す。

したがって１つの態様では、本発明はＭＳを有する患者のＭＳを処置する方法を提供する。１つの観点では、この方法はＭＳを有する患者にＣＨＥＣ−９ペプチドを投与することを含む。ペプチドの投与法は、本明細書に説明する開示から着手する場合、当業者に理解される。そのような方法は本明細書のいたるところで詳細に記載されている。

本発明の一観点では、ＣＨＥＣ−９を種々の障害の抗炎症性もしくは細胞生存剤として使用することができる。これはＣＨＥＣ−９が本明細書に示すように非競合的ｓＰＬＡ２インヒビターであるからである。酵素阻害療法における非競合的ｓＰＬＡ２インヒビターの利点は、競合的インヒビターとは異なり、非競合的インヒビターが非修飾基質の蓄積により非効果的とはされない点である。そのような条件を全身的およびＣＮＳの両方で、ｓ
ＰＬＡ２およびそれらの基質の増加がカスケードしている幾つかの神経炎症の場合に適用する。

また本明細書に説明する開示に基づき、ＣＨＥＣ−９様ペプチドも本明細書に説明する本発明の方法に従い有用となり得ると理解される。これは本発明がペプチド、すなわちとりわけ炎症状態を検出し、そしてそのような状態を処置するために有用なＣＨＥＣ−９の構造および特性を教示するからである。

また本発明は哺乳動物の変異体ＣＨＥＣ−９分子を含んでなる単離されたポリペプチドを含む。好ましくはこの哺乳動物の変異体ＣＨＥＣ−９分子を含んでなる単離されたポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドと少なくとも約７７％の相同性であり、またはその幾つかの断片である。好ましくは単離されたポリペプチドは、配列番号１と約８８％の相同性であり、より好ましくは約９９％の相同性であり、またはその幾つかの断片である。

また本発明は、本明細書に開示する変異体ＣＨＥＣ−９分子を含んでなるタンパク質またはペプチドの類似体を提供する。類似体は保存的なアミノ酸配列の差異により、または配列に影響しない修飾により、またはその両方により自然に存在するタンパク質もしくはペプチドとは異なることができる。例えばタンパク質もしくはペプチドの１次配列を改変するが、通常はその機能を改変しない保存的アミノ酸の変化を作成することができる。保存的アミノ酸置換は典型的には以下のグループ内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；フェニルアラニン、チロシン。

修飾（これは通常、１次配列を改変しない）には、インビボまたはインビトロで、ポリペプチドの化学的誘導化、例えばアセチル化もしくはカルボキシル化を含む。またグリコシル化の修飾も含まれ、例えばその合成および処理中、あるいはさらなる処理段階で、ポリペプチドのグリコシル化パターンを修飾することにより作成されるもの；例えばポリペプチドをグリコシル化に影響を及ぼす酵素、例えば哺乳動物のグリコシル化または脱グリコシル化酵素に暴露することにより作成されるものを含む。またリン酸化アミノ酸残基、例えばホスホチロシン、ホスホセリンまたはホスホトレオニンを有する配列も包含する。

またポリペプチドのタンパク質溶解性の分解に対する耐性を改善し、または溶解特性を至適化し、またはそれらを治療薬としてさらに適するようにするために、通常の分子生物学的技術を使用して修飾したポリペプチドも含む。そのようなポリペプチドの類似体には、自然に存在するＬ−アミノ酸以外の残基、例えばＤ−アミノ酸または自然には存在しない合成アミノ酸を含有するものを含む。本発明のペプチドは本明細書に列挙する任意の具体例の方法の生成物に限定されない。

また本発明は、本発明のペプチドの「誘導体」および「バリアント」（またはそれをコードするＤＮＡ）も包含すると解釈されるべきであり、その誘導体およびバリアントは、生じたペプチド（またはＤＮＡ）が本明細書で言及する配列とは同一ではないが、本明細書に開示するペプチドと同じ生物学的特性を有するように、そのペプチドが本発明の変異体ＣＨＥＣ−９ペプチドの生物学的／生化学的特性を有するように、１もしくは複数のアミノ酸が改変されている（またはそれをコードするヌクレオチド配列を指す場合は、１もしくは複数の塩基対が改変されている）変異体ＣＨＥＣ−９ペプチドである。

本発明のさらに別の観点では、ＣＨＥＣ−９バリアントはＣＨＥＣ−９に存在するものに加えて１もしくは複数のアミノ酸を有する。本発明の別の観点では、ＣＨＥＣ−９バリアントはＣＨＥＣ−９に存在するアミノ酸よりも１もしくは複数少ないアミノ酸を有する
。非限定的例として、ＣＨＥＣ−９バリアントは、より大きいＤＳＥＰタンパク質に見いだされる１０個の連続する残基を有してよく、そこからＣＨＥＣ−９が誘導化される。

変異体ＣＨＥＣ−９タンパク質の生物学的特性は、ＰＬＡ２活性を阻害するペプチドの能力を含むことに限定されないと解釈すべきである。ＭＳに対する炎症成分が存在するので、変異体ＣＨＥＣ−９タンパク質の生物学的特性は、１もしくは複数のＭＳの症状を緩和または排除するペプチドの能力を含むことにも限定されないと解釈すべきである。

また本発明は、本発明の方法を実施するために適切なタンパク質またはペプチド、ミメトープおよび／またはペプチドミメティックの製薬学的組成物の使用を包含し、この組成物は適切なタンパク質またはペプチド、ミメトープ（ｍｉｍｅｔｏｐｅ）および／またはペプチドミメティック、および製薬学的に許容され得る担体を含んでなる。

本明細書で使用する用語「製薬学的に許容され得る担体」とは、適切なタンパク質またはペプチド、ミメトープおよび／またはペプチドミメティックを合わせることができ、そして組み合わせた後、適切なタンパク質またはペプチド、ミメトープおよび／またはペプチドミメティックを哺乳動物に投与するために使用することができる化学組成物を意味する。

本発明の実施に有用な製薬学的組成物は、１ｎｇ／ｋｇ／日から１００ｍｇ／ｋｇ／日の間の用量を送達するために投与することができる。１つの態様では、本発明は哺乳動物中で１μＭから１０μＭの間の本発明の化合物濃度を生じる用量の投与を構想する。

本発明の方法に有用な製薬学的組成物は、経口固体製剤、目薬、座薬、エーロゾル、局所もしくは他の類似製剤で全身的に投することができる。それらはＣＮＳに直接的に、または末梢神経系に直接注射を介して、もしくは生物的に工作されたポリマーを介して髄腔内に、脳室に、実質内に投与することができる。適切なタンパク質またはペプチド、ミメトープおよび／またはペプチドミメティックに加えて、そのような製薬学的組成物は、製薬学的に許容され得る担体、および薬剤投与を増強し、そして促進することが知られている他の成分を含んでよい。ナノ粒子、リポソーム、再封入赤血球（ｒｅｓｅａｌｅｄ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）、および免疫学に基づく系のような他の可能な製剤も、本発明の方法に従い適切なヒペリシン誘導体を投与するために使用することができる。

本発明の１つの態様では、経口ＣＨＥＣ−９投与は哺乳動物における急性の分泌型ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２）炎症応答を防ぐ。ラットへのグラム−陰性細菌の内毒素（リポ多糖：ＬＰＳ）の皮下注射は、酵素的に活性なｓＰＬＡ２の血漿濃度に一過性の２００〜３００％の上昇を含む急性の炎症応答を生じる。この上昇は単相または二相性であり、そしてＬＰＳ注射後、最初の１時間内に始まる。ＣＨＥＣ−９がＬＰＳ処置から３０分後に摂取されれば、（０時で）、この応答は防止される。同様の結果がＣＨＥＣ−９の皮下注射、そして固定化ストレスから生じる一過性のｓＰＬＡ２上昇後に得られた。ＬＰＳ応答中、後期、すなわち活性な酵素レベルの初期上昇後に注射または摂取されたＣＨＥＣ−９は、血漿中の酵素の自然な低下を加速し、ＣＨＥＣ−９が内因性の阻害分子と相乗的であることを示唆する。

本明細書に記載する任意の方法を使用して同定される化合物は、これから記載する本明細書に開示する疾患の処置のために配合され、そして哺乳動物に投与されることができる。

本発明は有効成分として本明細書に開示する疾患の処置に有用な化合物を含んでなる製薬学的組成物の調製および使用を包含する。そのような製薬学的組成物は、個体に投与す
るために適する形態で有効成分のみからなることができ、あるいは製薬学的組成物は、有効成分および１もしくは複数の製薬学的に許容され得る担体、１もしくは複数の追加成分、またはこれらの幾つかの組み合わせを含んでなることができる。有効成分は、当該技術分野で周知な生理学的に許容され得るカチオンまたはアニオンとの組み合わせのような、製薬学的組成物中に生理学的に許容され得るエステルまたは塩の形態で存在することができる。

本明細書で使用する用語「製薬学的に許容され得る担体」とは、有効成分と組み合わせることができ、そして組み合わせた後、有効成分を個体に投与するために使用することができる化学組成物を意味する。

本明細書で使用する用語「生理学的に許容され得る」エステルまたは塩とは、製薬学的組成物の他の成分と適合性があり、組成物が投与される個体に有害ではない有効成分のエステルまたは塩形を意味する。

本明細書に記載する製薬学的組成物の製剤は、既知の方法または製薬分野において今後開発される任意の方法により調製され得る。一般にそのような調製法には、有効成分を担体または１もしくは複数の補助成分と一緒にし、次いで必要に応じて、もしくは望ましい場合に、生成物を所望する単一のもしくは複数の用量単位に成形または包装する工程を含む。

本明細書に提供される製薬学的組成物の説明は、主にヒトへの倫理に合った投与に適する製薬学的組成物を対象としているが、当業者にはそのような組成物が一般にすべての種類の哺乳動物への投与にも適すると理解するだろう。組成物を種々の動物への投与に適するようにするために、ヒトへの投与に適する製薬学的組成物の修飾は十分に理解されており、そして獣医薬理学者である当業者は、そのような修飾を、もし行うならば単に通常の実験で設計し、そして行うことができる。本発明の製薬学的組成物の投与が企図される個体には、限定するわけではないが、ヒトおよび他の霊長類、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよびイヌのような商業的に意味のある哺乳動物を含む哺乳類、齧歯類（ラットおよびマウスを含む）、ニワトリ、カモ、ガチョウおよび七面鳥のような商業的に意味のある鳥を含む鳥類を含む。

本発明の方法に有用な製薬学的組成物は、経口、直腸、膣、非経口、局所、肺、鼻内、バッカル、目、髄腔内、脳室内、実質内に、または他の投与経路に適する製剤に調製し、包装し、または販売することができる。他の企図する製剤には、放出される（ｐｒｏｊｅｃｔｅｄ）ナノ粒子、リポソーム調製物、有効成分を含有する再封入赤血球、および免疫学に基づく製剤がある。

本発明の製薬学的組成物は、単回の単位用量として、または複数の単回の単位用量として調製し、包装し、またはバルク（ｉｎ ｂｕｌｋ）で販売することができる。本明細書で使用するように。「単位用量」という用語は、予め定めた量の有効成分を含んでなる製薬学的組成物の個別の量である。有効成分の量は一般に、個体に投与される有効成分の投薬用量に等しいか、または例えばそのような投薬用量の１／２または１／３のようなそのような投薬用量の便利な分画である。

本発明の製薬学的組成物中の有効成分、製薬学的に許容され得る担体、および任意の追加の成分の相対的量は、処置する個体の同一性、サイズおよび状態に依存して、そしてさらに組成物が投与される経路に依存して変動する。例として組成物は０．１％から１００（重量／重量）％の間の有効成分を含んでなることができる。

有効成分に加えて、本発明の製薬学的組成物はさらに１もしくは複数の追加の製薬学的に活性な作用物質を含んでなることができる。特に企図される追加の作用物質には、制吐薬およびシアニドおよびシアネートスカベンジャーのようなスカベンジャーを含む。

本発明の製薬学的組成物の制御型または徐放性製剤は、通例の技法を使用して作成することができる。

本明細書で使用する製薬学的組成物の「非経口投与」には、個体の組織の身体的裂け目（ｐｈｙｓｉｃａｌ ｂｒｅａｃｈｉｎｇ）を特徴とする任意の投与経路を含み、そして製薬学的組成物を組織にその裂け目を介して投与することを含む。すなわち非経口的投与には、限定するわけではないが組成物の注射による、外科的切開を介する組成物の適用による、組織を貫通する非外科的創傷を介する組成物の適用によるなどによる製薬学的組成物の投与を含む。特に非経口的投与には、限定するわけではないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内注射、および腎臓の透析輸液技術を含むことを企図している。

非経口投与に適する製薬学的組成物の製剤は、滅菌水または滅菌した等張性塩水のような製薬学的に許容され得る担体と合わせた有効成分を含んでなる。そのような製剤は、ボーラス投与または連続投与に適する形態に調製し、包装し、または販売することができる。注入可能な製剤は、アンプル中に、または保存剤を含有する多用量容器中に単位剤形で調製し、包装し、または販売することができる。非経口投与用の製剤には限定するわけではないが、懸濁液、溶液、油もしくは水性賦形剤中の乳液、ペーストおよび移植可能な徐放姓または生分解性製剤を含む。そのような製剤はさらに１もしくは複数の追加の成分を含んでなることができ、それらには限定するわけではないが、沈殿防止剤、安定化剤または分散剤がある。非経口投与用の製剤の一態様では、有効成分は再構成した組成物の非経口投与前に、適切な賦形剤（例えば滅菌された発熱物質を含まない水）で再構成するために、乾燥（すなわち粉末または粒子）形で提供される。

製薬学的組成物は、滅菌された注入可能な水性もしくは油姓懸濁液または溶液の状態に調製し、包装し、または販売することができる。この懸濁液または溶液は、既知の技術に従い配合されることができ、そして有効成分に加えて本明細書に記載するような分散剤、湿潤剤または沈殿防止剤のような追加成分を含んでなることができる。そのような滅菌された注入可能な製剤は、例えば水もしくは１，３−ブタンジオールのような非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒を使用して調製することができる。他の許容され得る希釈剤および溶媒には、限定するわけではないがリンゲル溶液、等張姓の塩化ナトリウム溶液、および合成モノ−もしくはジ−グリセリドのような固定油がある。有用である他の非経口的に投与可能な製剤には、有効成分をミクロ結晶形に、リポソーム調製物に含んでなるか、あるいは生分解性ポリマー系の成分として含んでなるものがある。徐放性または移植用の組成物は、乳液、イオン交換樹脂、あまり溶解性ではないポリマー、あまり溶解性ではない塩のような製薬学的に許容され得るポリマー性もしくは疎水性物質を含んでなることができる。

本発明の製薬学的組成物は、口腔前庭を介して肺投与に適する製剤に調製し、包装し、または販売することができる。そのような製剤は有効成分を含んでなり、そして約０．５〜約７ナノメートル、そして好ましくは約１〜約６ナノメートルの範囲の直径を有する乾燥粒子を含んでなることができる。そのような組成物は、推進薬の流れが粉末を分散させるために向けられる乾燥粉末リザーバーを含んでなるデバイスを使用して、あるいは密閉容器中の低沸点推進薬に溶解もしくは懸濁された有効成分を含んでなるデバイスのような、自己推進溶媒（ｓｅｌｆ−ｐｒｏｐｅｌｌｉｎｇ ｓｏｌｖｅｎｔ）／粉末分散容器を使用して投与するために都合が良い乾燥粉末の状態である。好ましくはそのような粉末は、少なくとも９８重量％の粒子が０．５ナノメートルよりも大きい直径を有し、そし
て数による少なくとも９５％の粒子が７ナノメートル未満の直径を有する粒子を含んでなる。より好ましくは少なくとも９５重量％の粒子が１ナノメートルよりも大きい直径を有し、そして数による少なくとも９０％の粒子が６ナノメートル未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、好ましくは糖のような固体の微細な粉末希釈剤を含み、そして都合良く単位剤形で提供される。

低沸点推進薬は一般に、大気圧で６５゜Ｆ以下の沸点を有する液体推進薬を含む。一般に推進薬は組成物の５０〜９９．９（重量／重量）％を構成し、そして有効成分は組成物の０．１〜２０（重量／重量）％を構成することができる。推進薬はさらに、液体の非イオン性または固体のアニオン性表面活性剤または固体の希釈剤（好ましくは、有効成分を含んでなる粒子と同じ次元の粒子サイズを有する）のような追加の成分を含んでなることができる。

肺へ送達するために配合された本発明の製薬学的組成物は、溶液、懸濁液または遅延放出（ｓｌｏｗ−ｒｅｌｅａｓｅ）ポリマーの液滴の状態で有効成分を提供することもできる。そのような製剤は、有効成分を含んでなり、そして任意に滅菌された水性もしくは希釈されたアルコール性溶液または懸濁液として調製し、包装し、または販売することができ、そして任意のネブライザーまたは噴霧化デバイスを使用して都合良く投与することができる。そのような製剤はさらに１もしくは複数の追加の成分を含んでなることができ、そのような成分には限定するわけではないが、サッカリンナトリウムのような風味料、揮発性油、緩衝剤、表面活性剤またはメチルヒドロキシベンゾエートのような保存剤がある。この投与経路により提供される液滴は、好ましくは約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均直径を有する。

肺への送達に有用であるような本明細書に記載する製剤は、本発明の製薬学的組成物の鼻内送達にも有用である。

鼻内送達に適する別の製剤は、有効成分を含んでなり、そして約０．２〜５００マイクロメートルの平均粒子を有する粗い粉末である。そのような製剤は鼻を嗅ぐ様式で、すなわち鼻孔の付近に保持された粉末の容器から鼻腔を通して迅速に吸入することにより投与される。

別の製剤は、遅延放出ポリマー中に包含された有効成分である。そのようなポリマーは製薬分野では周知であり、そして例えば米国特許（第４，７２８，５１２号；同第４，７２８，５１３号；同第５，０８４，２８７号；同第５，２８５，１８６号明細書）に詳細に記載されている。

鼻への投与に適する製剤は、例えばおよそ少なくて０．１（重量／重量）％および多くても１００（重量／重量）％の有効成分を含んでなることができ、そしてさらに本明細書に記載の１もしくは複数の追加の成分を含んでなることができる。

本発明の製薬学的組成物は、目への投与に適する製剤に調製し、包装し、または販売することができる。そのような製剤は例えば点眼薬の状態でよく、例えば水性もしくは油性の液体担体中に有効成分の０．１〜１．０（重量／重量）％の溶液または懸濁液を含む。そのような液滴はさらに緩衝剤、塩、本明細書に記載する１もしくは複数の他の追加の成分を含んでよい。有用な他の目に投与可能な製剤には、微結晶状またはリポソーム調製物中に有効成分を含んでなるものを含む。

本発明の製薬学的組成物は、直接ＣＮＳに投与するために適する製剤に調製し、包装し、または販売することができる。そのような製剤は例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバーにより、鞘内もしくは脳室内投与により、直接的な実質内注射により、遅延放出ポリマーにより、あるいは製薬および神経学分野で周知のような他の方法で投与される液体状であることができる。

本明細書で使用する「追加の成分」には限定するわけではないが、１もしくは複数の以下の：補形剤；表面活性剤；分散剤；不活性な希釈剤；造粒および崩壊剤；結合剤；滑剤；甘味料；風味料；着色剤；保存剤；ゼラチンのような生理学的に分解可能な組成物；水性の賦形剤および溶媒；油性の賦形剤および溶媒；沈殿防止剤；分散または湿潤剤；乳化剤、粘滑剤；緩衝剤；塩；増粘剤；充填剤；乳化剤；酸化防止剤；抗生物質；抗カビ・菌剤；安定化剤；および製薬学的に許容され得るポリマー性または疎水性物質を含む。本発明の製薬学的組成物に含まれ得る他の「追加の成分」は当該技術分野で知られており、そして例えばＧｅｎａｒｏ，ｅｄ．，１９８５，レミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、マック出版社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．）、イーストン、ペンシルベニア州に記載され、これは引用により本明細書に編入する。

典型的には、哺乳動物、好ましくはヒトに投与することができる本発明の化合物の投薬用量は、動物の体重１キログラムあたり１μｇ〜約１００ｇの量の範囲である。投与される正確な投薬用量は、限定するわけではないが処置する動物の種類および疾患状態の種類、動物の年齢、および投与経路を含む多くの因子に依存して変動する。好ましくは化合物の投薬用量は、動物の体重１キログラムあたり１ｍｇ〜約１０ｇで変動する。より好ましくは投薬用量は、動物の体重１キログラムあたり約１０ｍｇ〜約１ｇで変動する。

化合物は哺乳動物に１日に数回の頻度で投与することができ、あるいはそれは１日１回、１週間に１回、２週間に１回、１カ月に１回のようなより少ない頻度、あるいは数カ月に１回または１年に１回以下のようなさらに一層少ない頻度で投与することができる。投与頻度は当業者には直ちに明らかであり、そして限定するわけではないが処置する疾患の種類、重篤度、動物の種類および年齢等のような多くの因子に依存する。

今、本発明を以下の実施例を参照にして説明する。これらの実施例は具体的説明の目的にのみ提供し、そして本発明はこれらの実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈すべきである。

とりわけ本発明は、１）ＣＨＥＣ−９の注入による全身性のｓＰＬＡ２活性の阻害が、齧歯類のＭＳモデルにおいて神経学的症状の進行を抑制し、そして細胞免疫応答を抑制し；２）活発な疾患中に、ｓＰＬＡ２活性は多発性硬化症が再発し／寛解している患者の血液および尿中で上昇することを証明する。ＣＨＥＣ−９はこの上昇した活性を阻害する。

この目的に、ＣＨＥＣ−９および対照の処置計画を、１）ミエリン塩基性タンパク質（中程度のＥＡＥ）、または２）脊髄ホモジネート（重篤なＥＡＥ）で免疫感作したＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉラットに適用する。ラットは血液および尿のｓＰＬＡ２活性およびＥＡＥ症状の発症について毎日モニタリングされる。臨床的疾患の最大レベルが記録され、そしてミエリン／軸索変性、脈管周囲浸潤物、およびマクロファージ／ミクログリア、顆粒球（好中球）、およびＴ細胞を含む免疫細胞と相関させる。

さらに重篤なＥＡＥのラットにおける炎症応答の進行が、ＣＨＥＣ−９および対照処置を用いてモニタリングされる。この分析には変性している軸索の出現、種々の炎症細胞の数およびタイムコース、ならびにｓＰＬＡ２、トロンボキサンＡ２、ロイコトリエンＢ４
およびプロスタグランジンＥ２およびサイトカインの一団の血液および組織レベル／活性を、マルチプレックスアッセイシステムで定量することを含む。測定されるアラキドン酸代謝産物（ＴＢＸＡ２、ＬＴＢ４、ＰＧＥ２）および多くのサイトカインは、炎症の状態で同時に調節される（ｃｏ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ）ことが知られている。したがってこれらの実験は、ＣＨＥＣ−９が、このペプチドを臨床的に開発するためのさらなるはずみとして、アラキドン酸代謝産物により支配される下流の前炎症物質の出現およびレベルに及ぼす効果を証明する。

別の態様では、ｓＰＬＡ２活性は多発性硬化症が再発し／寛解している患者の血漿および尿サンプル中で測定され、そして健康な対照からのサンプルと比較される。患者群には活発および静止の両方の疾患状態の個体を含むことができ、そしてベースラインで処置実験にはいないＭＳ患者、ならびに定めた処置パラダイムにあるＭＳ患者を含む。ＥＤＳＳおよびＭＳＦＣ無能スコアは、ｓＰＬＡ２レベルと比較するために測定する。各血液サンプルの画分はＣＨＥＣ−９とインキュベーションされて、ペプチドがＭＳにおけるｓＰＬＡ２活性を阻害するかどうかを決定する（これは健康な有志の全血の処置後に行うように）。下流のＡＡ代謝産物および多数のサイトカインは、事前のＣＨＥＣ−９処理有り、または無しで血漿サンプルを測定する。

前臨床および臨床的開発。 上に説明したこの実験の目的は、ｓＰＬＡ２が神経炎症障害の価値ある治療用標的であり、そしてＣＨＥＣ−９が新規治療であるという大量に増える証拠を加えることにより、新規ペプチドの工業的開発を支持する証拠を作ることである。多発性硬化症は理論的および現実的理由の両方から興味深い疾患の１つである。第１に、「急性期」または早期の応答物および先天免疫は、多発性硬化症の処置において現在、理論的に大変興味深い。分泌型ＰＬＡ２はＭＳの治療標的としてほとんど見過ごされているが、後天免疫よりはむしろ急性の炎症応答と関連している。さらにＭＳの動物モデルは、例えばＡＬＳまたはアルツハイマーモデルに比べて比較的短期間現れる十分に明確にされた臨床的および組織学的プロファイルを有する。したがって個々の実験の全体的期間が短いので、より効果的な前臨床処置のパラダイムが開発されると思われる。また臨床的な可能性は、ＣＨＥＣ−９の治療的開発にも利点を表す。本明細書で説明されるこの実験的実施例は、大きな患者集団により支持される。ｓＰＬＡ２酵素の自然な歴史を仮定すると、活発な（および恐らく静止の）疾患状態には上昇したｓＰＬＡ２活性が伴うことになる。

ＣＨＥＣ−９は、エクスビボで全血の処置後に、ヒト血漿サンプル中のｓＰＬＡ２活性を阻害する。 これらの実験はＣＨＥＣ−９がヒト血液中のｓＰＬＡ２活性を阻害するかどうかを決定するために行った。４名の健康な有志からの全血（２Ｍ、２Ｆ、３６〜５７ｙｏ）を、静脈穿刺によりクエン酸リン酸デキストロース（ＣＰＤ）抗凝固剤中に集め、そしてＣＨＥＣ−９または賦形剤（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ＝７．４）のいずれかと等しい容量の処理に分割した。処理は４゜で２時間、穏やかに揺り動かした。血漿サンプルは遠心により調製し、そしてｓＰＬＡ２に特異的なグリセロホスホコリン基質（ケイマン ケミカル：Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）と反応させた。ＣＨＥＣ−９で処理したすべてのサンプルは、ｓＰＬＡ２活性の阻害を示した（５０〜８０％）。血漿中の最終ペプチド濃度は２００〜４００ｎＭであった。

ヒト血漿サンプル中のｓＰＬＡ２活性のＣＨＥＣ−９阻害は、リリーのデザイナーｓＰＬＡ２ＩＩａインヒビターＬＹ３１１２７の阻害に匹敵する。 ＣＨＥＣ−９はＬＹ３１２２７と一緒に比較された。この低分子インヒビターはｓＰＬＡ２ＩＩａ活性部位構造を基にして設計され、そして現在、非神経系の抗炎症療法に考えられている。両インヒビターは、グループＩＩアイソフォームが優勢なヒト全血に適用した（図３）。ＣＨＥＣ−９およびＬＹ３１２２７は類似の結果を与えた。インヒビターの効果は、対照サンプルでの阻害をゼロと想定することにより算出された（図３に関する説明を参照されたい）。ＬＹ３１２２７およびＣＨＥＣ−９の効果は非付加的であり、それらが血清中で類似の酵素プールを標的とするか、または２つのインヒビターおよび／またはそれらの標的の間に複雑な相互作用があるかのいずれかを示唆する。

全身性ＣＨＥＣ−９は、塩水を潅流した正常なラットの全皮質細胞膜中のｓＰＬＡ２酵素活性を阻害する。 これらの実験は全身性のＣＨＥＣ−９が、手術をしていないラットのＣＮＳ組織でｓＰＬＡ２活性に影響するかどうかを決定するために着手し、これはペプチドの影響が血液脳関門により遮断されなかったことを示唆している。この結果は、塩水を潅流したラットの膜全体を試験した時、ＣＨＥＣ−９注射は本明細書で使用した条件下でｓＰＬＡ２活性の有意な阻害を生じたことを示唆した。０．４ｍｇ／ｋｇのＣＨＥＣ−９を注射した正常ラットの大脳皮質ホモジネートに由来する組織調製物を、損傷実験に使用したペプチドの投薬用量で試験した。これらの抽出物は以前の実験（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．，２０００）のように調製し、そして細胞質ゾル、事前に塩洗浄をした、またはしなかったＣＨＡＰＳ可溶化膜、および膜全体、すなわち塩洗浄後に非可溶化していないものを含んだ。さらにプロテアーゼインヒビターをこれらの調製物の様々な段階で加え、または省略した。最も一致したｓＰＬＡ２活性およびＣＨＥＣ−９阻害は、例えばプロテアーゼインヒビターを含むＣＨＡＰＳ可溶化膜に比べて、これら最終サンプル中にプロテアーゼインヒビターを含まずに塩で洗浄した膜全体に見いだされた。故にこの手順がすべての最近の実験に使用されてきた。Ｐｅｔｅ，ｅｔ ａｌ．，（１９９６）は、プロテアーゼインヒビターＰＭＳＦもＰＬＡ２活性を阻害すると報告している。

精製した細胞集団のＣＨＥＣ−９処理。 精製した大脳皮質ニューロンおよび精製したミクログリアを、それぞれＣＨＥＣ−９で処理した。ミクログリアは、ロータリーシェーカーで星状細胞支持細胞層からインビトロで１０日後に精製した。インビトロのミクログリアは悪評が立つくらい生態学的に不安定であることがよく知られており、通常は大きな平らな細胞に広がるか、または紡錘状となり、そして細長い突起（ｐｒｏｃｅｓｓ）を形成する。処置無しで、それらは培養中、分割し続ける。種々の作用物質で活性化した後、細胞は丸いアメーバー様のミクログリアに「デラミファイ（ｄｅｒａｍｉｆｙ）」するので、この挙動はインビボで活性化後のそれらの形態学的応答に類似している（Ｂｏｈａｔｓｃｈｅｋ，２００１；Ｌｏｍｂａｒｄｉ，ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｋｌｏｓｓ，ｅｔ ａｌ．，２００１）。加えて、これらの形態学的変化は、種々の前炎症性サイトカインおよび炎症性メディエーターのアップレギュレーションと相関する。細菌のリポ多糖は時折、インターフェロンと組合わさり、活性化およびミクログリアに使用された。図５に示す実験では、ＬＰＳ（２５ｎｇ／ｍｌ）を培養に加え、続いて（２０分後）、ＣＨＥＣ−９を０．１ｎＭの最終濃度で加えた。さらに４８時間後、ペプチドで処理した、および賦形剤で処理したカルチャー中の両方でミクログリアの数が同様であることが分かったが、対照カルチャー中でほぼ２倍多い細胞が丸いアメーバー様の形態を有し（図５）、ＣＨＥＣ−９がインビトロでミクログリアの活性化を妨害することを示唆している。

ＣＨＥＣ−９は、インビトロで生存皮質ニューロンの発育を促進した。 ニューロンは１日齢のラットに由来し、そしてインビトロにて低密度（１Ｘ１０^４細胞／ｃｍ^２）で４日間、成長させた。プレーティングから２４時間後、培地を交換し、そしてＣＨＥＣ−９を幾つかの培養の新たな培地で０．１ｎＭの濃度で含めた。培養を終了した時、８０〜９５％の生存細胞が、ニューロン特異的チューブリンに対するＴＵＪ１抗体で染色された。混入している細胞の大部分はＧＦＡＰ＋星状細胞であった。このプレーティング密度で、そして星状細胞支持細胞層の不存在で、４日後の両グループのカルチャー中に広がったニューロン死が存在した。しかしＣＨＥＣ−９処置は、高度に有意なＴＵＪ１陽性ニューロン細胞の出現をもたらした。図６は４つの別個の実験の１つから代表的データを表し、各々が幾つかのカルチャーを含み、そして各々が生存しているニューロンの数に数倍の増加を示した。

実験的な自己免疫脳炎のＣＨＥＣ−９処置。実験は、完全フロインドアジュバントで乳化したモルモットのミエリン塩基性タンパク質で左右対称に足の平に免疫感作した１０匹のＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉラットを使用して行った。他の研究者により記載されたように（Ｍｉｌｉｃｅｖｉｃ，ｅｔ ａｌ．，２００３）、ＤＡラットでこの手順は中程度であるが、一貫したＥＡＥ応答を１０〜１５日後に誘導し、これは尾および四肢の不全麻痺／完全麻痺を特徴とする。実験は免疫感作後１８日間続き、この期間、ラットの体重を測定し、そして臨床的疾患を毎日採点した。尿中のｓＰＬＡ２活性の免疫感作後（ＰＩ）の変化を、適切なＣＨＥＣ−９処置計画に対する有力な指針としてモニタリングした（図７）。ＣＨＥＣ−９または賦形剤による処置は、尿のａＰＬＡ２活性に有意なピークがあった場合は、ＰＩ５日に開始した。次いでラットは１０日間、２００μｌ中の６０μｇのペプチド（１日目）および３０μｇ（翌日）で皮下送達により処置した（それぞれ〜０．４および０．２ｍｇ／ｋｇ）。ブラインドの処置および観察には、動物およびシリンジの両方を暗号化した。ＰＩ４〜８日でのｓＰＬＡ２応答、次の４日間にわたる平均活性の下降が続いた。この活性の低下はＣＨＥＣ−９処置ラットについては有意であったが、賦形剤処置ラットには有意ではなかった（図７）。
また尿サンプルは、ニューロフィラメントをアッセイするためにＳＤＳｐａｇｅおよびイムノブロッティング用にも調製した。これらの実験は、半定量的なウエスタン分析により、ニューロン／軸索損失の非侵襲的な測定を提供するための試みを表す。これまでこの分析は、通常１６０ｋＤのニューロフィラメントＭに限定されてきた。尿中に出現するこのタンパク質の特異的断片はモデルに依存して可変性であり、一貫した増加がニューロン／軸索死が予想される条件下で１もしくは複数のこれら断片で見いだされた。

ＭＢＰ／ＣＦＡ注射により引き起こされる足の浮腫を測定した。これらのブラインド測定は、５日間の処置後にＰＩ１０日で作成した。ペプチドで処置したラットは、足のむくみが減ったか、または無かった。足の厚さは免疫感作後に連続して測定しなかったので、ＣＨＥＣ−９による浮腫の抑制および逆転の相対的貢献はこの時点では明確ではない。それにもかかわらず、これらの実験はＣＨＥＣ−９が本実験および他の応用および兆候に、その効果が貢献し得る末梢の抗炎症／免疫抑制特性を有することを示唆している。

図９および１０は、パイロット実験における毎日の体重測定およびＥＡＥ臨床スコアの結果を表す。これらのデータは、実験的にブラインド様式で集めた。両測定の結果は、１匹のラットが尾の脱力（ｔａｉｌ ｗｅａｋｎｅｓｓ）を後期に発症したことを除いて、ＣＨＥＣ−９処置がすべてにおいて疾患の発症を防止した。ＣＨＥＣ−９処置後の体重増加率は、ペプチド処置ラットで加速された。

１つの脊髄を各群から脊髄円錐の領域を介して切り出し、そしてＮｉｓｓｌ−ミエリンで染色した。ペプチド処理ラット（＃４１１）は欠損を示さず、そして賦形剤処置ラット（＃４１０）は２．５のスコアであった（尾がバッタリと落ち、１つは完全麻痺し、そして麻痺した四肢）。これら２匹のラット間の尾の脊髄の組織学には、注目すべき明白な差異があった−尾の数ミリメートル−ラット４１０でほとんどの脊髄は重度に萎縮した。この区分は、徹底的な細胞の縮小および／または小細胞の滲出、密集した変性しているミエリンの大きな領域も存在することが明らかになった（図１１）。ラット４１１は変性しているミエリンの小領域を有するが、皮質または細胞のいずれにも明白な萎縮はほとんど無かった。これらの結果は２匹のラットの臨床的スコアと一致する。

脊髄振とう症および神経変性のＡＬＳモデルを使用した実験は、これら障害の炎症成分に対するｓＰＬＡ２酵素活性の貢献を定め、そしてさらにＣＨＥＣ−９の効力を試験するために行った。上昇した尿および／または血清ｓＰＬＡ２活性が、予想されるニューロン死の期間中に検出された。これらの実験で、ニューロフィラメントＭのタンパク質溶解断片の尿中レベルは、ニューロン／軸索破壊の有効なモニターとして検出された。しかし興味深いことに、これら３つの各モデルはニューロン／軸索損失が予想された時に、ＮＦ（Ｍ）断片の蓄積の比較的特徴的なパターンを有する。

脊髄振とう症モデルに関して、ＣＨＥＣ−９は最近、術後２０分に単回の注射（０．４ｍｇ／ｋｇ）で適用され、これは大脳皮質損傷の実験で使用した処置手順と同じである（
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２００４）。１２日間生存したラットの脊索背側で固定した索の直径を測定した。ＣＨＥＣ−９処置後のこの領域に有意な組織のスパーリング（ｓｐａｒｉｎｇ）がある。症候性のＧ９３Ａ／ＳＯＤ１トランスジェニックマウスも、上昇したｓＰＬＡ２活性を示す。このモデルはおよそ８０日齢で始まる運動ニューロンの損失および運動欠損の予想可能なパターンを特徴とする。この日齢ならびに後期の症候性段階（〜１３０日）で、尿中のｓＰＬＡ２活性が有意に上昇する。これらの実験では、異なる日齢および性別のマウスに由来するサンプルを分析用にプールするが、後者のグループ分けはこのコロニーにおいて疾患の時期に性的な差異があるからである。すべてのグループはｓＰＬＡ２活性に関して類似の結果を与えた。マウスの尿中のＮＦ（Ｍ）に関するイムノブロットは、症候性マウスにおけるこのタンパク質の上昇したレベルを示したが、異なるＮＦ断片がこの特定モデルでは優勢であることを示唆している（図１４）。

尿および血液採集。 均一の照明サイクルおよび温度条件下に収容したラットを、代謝ケージに収容し、午前９時に水を自由に与え始め、そして最初の排尿後に取り出した（通常は２時間以内）。典型的な容量は０．８〜２ｍｌである。サンプルをスピンカップ中に滅菌濾過し（０．２２μＭ）、そして凍結した。血液（０．６〜１．２）ｍｌは、局所麻酔をかけた後、小さい尾の切り込みにより加熱ランプ下で集める。また血清は、全組織および組織学的実験のための潅流前に、心穿刺により移動した血液から調製した。血清は２回の遠心により凝固させた後に調製し、続いて滅菌濾過した。同じ手順をＣＰＤ抗凝固剤中に集めた血漿についても使用する。

組織学／免疫細胞化学。 動物はＮｅｍｂｕｔａｌ（１００ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．、アボットラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で麻酔をかけ、そして２００ｍｌの生理食塩水、続いて５００ｍｌの氷冷４％パラホルムアルデヒド（０．１Ｍのリン酸バッファー中（ｐＨ７．４））で噴門を介して潅流する（ｔｒａｎｓｃａｒｄｉａｌｌｙ）。脊髄を切開し、そして０．１Ｍ リン酸バッファー（ＰＢ）中に４℃で２時間、浸し、続いて３０％シュクロース中で３〜５日間、凍結防止する。腰骨拡大の始まりから終糸までの脊髄領域を摘出し、そしてクリオスタットを使用して２０μｍで矢状方向に切断される２つのブロックに二分する（１つは吻側、１つは尾側）。次いで１０〜１４組の連続切片を、各ブロック中の脊髄を通して得（サンプリングは１００μｍ毎）、これは以下に提案する分析に十分である。切片はゼラチンで覆ったスライドに乗せ、そして我々の研究室の標準プロトコールを使用して組織学的または免疫細胞化学的染色用に処理する。

以下の分析は、連続切片の各組について行う：１）通例のＮｉｓｓｌ−ミエリン染色を使用して、ＥＡＥ損傷に関与する尾の脊髄の全面積を定量する ２）関与する面積の脈管周囲浸潤の数を定量する通例のヘモトキシリンおよびエオシン染色。３）アミロイド前駆体タンパク質（ヤギのポリクローナル）および正常のニューロフィラメント（ＮＦＭまたはＮＦＬに対するマウスモノクローナル）用の二重免疫蛍光染色。４）ＣＤ４＋Ｔ細胞および単球に関する二重免疫蛍光染色（ＣＤ４抗体はＡＬＥＸＡ−６４７結合体に向けられ、そしてＥＤ−１（マクロファージ／ミクログリア）はＦＩＴＣ結合体に向けられる）。抗−ＣＤ−４ｍＡｂが単球と弱く反応するので、これら２つのプローブは一緒に使用される。５）ラット顆粒球（マウスモノクローナル）および希突起膠細胞特異的タンパク質（ウサギポリクローナル）用の二重免疫蛍光染色。

切片の興味深いパラメーターは、結合したＳｅｎｓｙｓモデル１４０１ＣＣＤカメラ／ＬＣＤフィルターシステム（バイオビジョン テクノロジー：Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に補足した後、ＩＰＬＡＢＳソフトウェア（スカナリティックス社：Ｓｃａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、ライカ（Ｌｅｉｃａ）のＤＭＲＢＥ落射蛍光顕微鏡で定量する。すべての定量は、ブラインド暗号化スライドで行う。利用可能なソフトウェアは、ミエリン変性および浸潤物の尾側吻側（ｃａｕｄｏｒｏｓｔｒａｌ）および中外側の広がりを追跡することから、正常な軸索、ジストロフィー軸索（ＡＰＰについて陽性）および特異的免疫細胞の密度と広がりを定量するまで、提案された分析についてすべての必要なマクロス（ｍａｃｒｏｓ）を提供する。定量は、補足した画像上に現れるオーバーレイグリッドにより達成することができる。切片中の興味深いパラメーターは、結合したＳｅｎｓｙｓモデル１４０１ＣＣＤカメラ／ＬＣＤフィルターシステム（バイオビジョン テクノロジー）に補足した後、ＩＰＬＡＢＳソフトウェア（スカナリティックス社）を使用して、ライカのＤＭＲＢＥ落射蛍光顕微鏡で定量する。すべての定量は、ブラインド暗号化スライドで行う。利用可能なソフトウェアは、ミエリン変性および浸潤物の尾側吻側および中外側の広がりを追跡することから、正常な軸索、ジストロフィー軸索（ＡＰＰについて陽性）および特異的免疫細胞の密度と広がりを定量するまで、提案された分析についてすべての必要なマクロスを提供する。軸索の定量は、補足した画像上に現れるオーバーレイグリッドにより達成することができる。細胞体のカウントが均一ではない直径の集団から作成される場合、我々は多くのこれまでの実験のように解剖法（ｄｉｓｓｅｃｔｏｒ ｍｅｔｈｏｄ）を使用するか、または適切な補正を適用する。細胞質ゾルおよび膜画分は、以前の実験のように（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．，２００２）ＰＢＳを潅流したラットにおいて超遠心により調製する。これは組織および血清について完全に自動化されており、そしてラットＥＡＥおよびヒトＭＳ中の数種の興味深いサイトカインの同時測定用のキットが利用できる。

ＰＬＡ２酵素は、３−ｎ−ホスホグリセリドの２−アシル結合を加水分解する。使用したアッセイには、基質として１，２−ビス（ヘプタノイルチオ）グリセロホスホコリン（ｓＰＬＡ２に特異的、ケイマンケミカル）の使用を含む。この化合物では、硫黄がこの結合を形成し、そして開裂で遊離のスルフヒドリルが存在し、これがＤＴＮＢを使用して検出される。いったんＤＴＮＢ中で平衡化した血清または尿は、このアッセイでは反応性ではなく（基質およびＣａ^２＋の不存在下で）、ＣＨＥＣ−９は基質の不存在または存在下で非反応性であり、そして基質は血漿または精製した酵素の不存在下で安定である。さらに、天然の基質の代わりにそのような人工的基質の使用は、真の酵素阻す害として界面の組織化の破壊が現れる可能性があるので（酵素は生物の膜上の脂質界面で作用する）、インヒビター実験に好適である（Ｍｉｈｅｌｉｃｈ，１９９７）。またこれらの基質は、アラキドン酸の数種の可能な起源から、ＡＡ生成が関与するアッセイについても好適である（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，ｅｔ ａｌ．，２０００）。アッセイは、単純な塩溶液（５０ｍＭ ｔｒｉｓ ｐＨ７．５中、０．１Ｍ ＮａＣｌ）および２ｍＭ Ｃａ^２＋を使用して修飾され（ケイマンにより薦められた手順から）、後者の試薬は基質を加えた直後にマルチチャンネルピペットで反応を開始するために使用される。１０〜１５μｌの血漿サンプルまたは２５μｌの尿サンプルは、神経系炎症の状況で高い活性の有意な変化を明らかに示す。撹拌および完全にプログラム可能な動力学的読み取りを備えた、温度が制御されるＥＬＸ−８０８マイクロプレートリーダーを使用するＤｅｌｔａ Ｓｏｆｔソフトウェアにより分析される。データは、４１５ｎｍで１３，６００／モル／ｃｍ−１のＤＴＮＢに関する吸光係数を使用して、モル／分／容量（重量）に転換することができる。次いで動力学的パラメーターは、グラフパッド（Ｇｒａｐｈｐａｄ）からの非線型回帰ソフトウェアを使用して決定することができる（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．，２００４）。しかし単純な定常状態の速度計算は、実験下で生物学的流体の活性の一貫した、そして信頼性のある予測を提供する過剰な基質の存在下で使用される。血清サンプルの活性は、一貫して高いタンパク質含量により、血清の容量あたり表す。尿に関しては、一定容量の生の速度データ（ＯＤ／分）の予備的考察を特に使用することができ、ここでは相対的尺度が必要である（例えばタイムコース、ＣＨＥＣ−９阻害）。とにかく尿中のｓＰＬＡ２活性データは、常に常に全タンパク質含量につき表される。動物実験における活性曲線のパターンは、これまで少なくとも、恐らく我々が適用した均一な尿採集手順で、いずれの方法でも類似した。ペプチド調製：ＣＨＥＣ−９、スクランブルされ、そして置換されたペプチドは、ペンシルベニア大学、病理学部、タンパク質化学施設で作成される。これらはＨＰＬＣで精製され、そして分子量は質量分析法により確認される。我々はペプチドサンプルを受け取った時に、２回、再溶解し、そして乾燥させてさらに生産に使用したいかなる溶媒も除去した。ペプチドはＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．，２００４に記載されたように架橋化され、そしてそれらの構造が質量分析により確認される。

ｓＰＬＡ２活性は、多発性硬化症が再発／寛解している患者からの血漿および尿サンプルでも測定し、そして健康な対照からのサンプルと比較する。患者集団は、活発または静止疾患状態の両方の個体からなり、そしてベースラインで処置実験を行っていないＭＳ患者、ならびに定めた処置パラダイムの患者を含む。ＥＤＳＳおよびＭＳＦＣ不能スコアはｓＰＬＡ２レベルを比較するために測定する。各血液サンプルの画分をＣＨＥＣ−９とインキュベーションして、ペプチドがＭＳのｓＰＬＡ２活性を阻害するかどうかを測定する（健康な有志の全血の処置後に行うように）。下流のＡＡ代謝産物および多数のサイトカインは、事前のＣＨＥＣ−９処置有り、および無しの血漿サンプルで測定する。

ＭＳ患者におけるＰＬＡ２活性および治療におけるＣＨＥＣ−９の潜在的役割の実験。多
発性硬化症が再発／寛解している診断の４４名の患者がこの実験に尿サンプルを提供した（表２）。

健康な対照は、広告により集められた。ドレキセル大学（Ｄｒｅｘｅｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）およびフィラデルフィアのグラジュエート病院（Ｇｒａｄｕａｔｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）の研究所の検討委員会は、この実験を認可し、そしてすべての個体から十分な説明による同意を得た。１２名の患者は、サンプル採取の時に活発な疾患を提示し、これは発熱または感染が無い状態で機能的な神経学的状態のスコアに関して１もしくは複数の点の変化と定めた。表Ｉに記録した治療は、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（商標）、バイオジェン、３０μｇ／週 Ｉ．Ｍ．）、または酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（商標）、テバ ファルマシューティカル インダストリーズ（Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）２０ｍｇ／日，Ｓ．Ｃ．）であった。末梢感染または炎症傷害を有する個体、またはサンプル採集前２４時間以内に抗炎症剤を使用した個体は、実験から除外した。

ＥＡＥ生産および分析。 動物実験はドレキセル大学から認可されたＩＡＣＵＣプロトコールの援助の下に行った。関与したすべての個人は、実験のすべての手順に関して知らされていなかった。軽度から中度のＥＡＥが２０名のメスＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉラット（１３０〜１５０ｇ）で、完全フロインドアジュバントで乳化した塩水中の１００μｇのモルモットミエリン塩基性タンパク質の左右対称の足の平への免疫感作により誘導された。ラットの体重を測定し、そして臨床的疾患に関する１〜４の採点を使用して毎日、ＥＡＥの症状についてスコアを付けた（１−尾がたれる、２後脚の不全麻痺、３後脚の完全麻痺、４瀕死）。２．５のスコアは１つの後脚の完全麻痺について与え、これはこの実験系で遭遇した最も重篤な疾患であった。実験は免疫感作後１８日間続け、その後、ラットに０．１Ｍ リン酸バッファー中の４％パラホルムアルデヒドを潅流し、そして組織学用にそれらの脊髄を取り出した。

尿の採集およびＣＨＥＣ−９処理。 尿はすべてのラットから代謝ケージ内で免疫感作の１〜２日前から集め始め、そして１８日間１日おきに集めた。ＣＨＥＣ−９処置は、尿のＰＬＡ２活性が上がる間、免疫感作から５日後に開始した。処置は１日目に透明なＤＭＥＭ賦形剤中の６０μｇＣＨＥＣ−９の皮下注射からなり、続いて毎日、３０μｇの用量で９日間注射した。ＣＨＥＣ−９、ＣＨＥＡＳＡＡＱＣはセルテック（Ｃｅｌｔｅｋ）（ナッシュビル、テネシー州）により作成され、そして精製され、そして前述のように架橋化した。

ＰＬＡ２酵素活性。 濾過した（０．２μｍ）尿の２５μｌのサンプルは、ｃＰＬＡ２およびＰＡＦ−ＡＨ（ケイマンケミカル）、アナーバー、ミシガン州）を除いて、１，２−ビス（ヘプタノイルチオ）グリセロホスホコリン（ＰＬＡ２の基質）と反応させた。反応バッファーは、１ｍＭ ＤＴＮＢ（エルマン試薬）および２ｍＭ ＣａＣｌ_２を含有する５０ｍＭ ｔｒｉｓ、０．１Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ＝７．４）からなった。速度および動力
学パラメーターは、ＥＬＸ８０８リーダー（バイオテック（Ｂｉｏｔｅｋ）、バーリントン、バーモント州）にサポートされたＤｅｌｔａｓｏｆｔ（プリンストン、ニュージャージー州）およびＧｒａｐｈｐａｄ（サンディエゴ、カリフォルニア州）からの非線型回帰ソフトウェアにより測定し、そしてサンプル中の全タンパク質に対して表した。選択した尿サンプルを１ｋＤの膜で２０ｍＭ ｔｒｉｓに対して透析し、そして前の実験のようにウエスタンブロッティング用に調製した。ブロッティング前のＳＤＳ ＰＡＧＥは還元条件下であった。ブロットは、ヒトｓＰＬＡ２ＩＩａ（ケイマンケミカル）に対するポリクローナル抗体と反応させた。すべてのデータ比較は、両側マン ホイットニー検定またはノンパラメトリック（スペルマン）線型相関によった。

他のアッセイは周辺温度（２２〜２５℃）で、Ｖｉｃｔｏｒ３蛍光リーダー（パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）、ナトゥレイ、ニュージャージー州）を使用して行った。基質は１−パルミトイル−２−ピレンデカノイルホスファチジルコリン（“１０−ピレン”、ケイマンケミカル、アナーバー、ミシガン州）であり、ｃＰＬＡ２およびＰＡＦを除いてすべてカルシウム依存性ＰＬＡ２の基質であった。基質（クロロホルム中で供給）は窒素流下で乾燥させ、エタノールに迅速に溶解し、そして使用するまで−２０°に保存した。基質溶液は、５０ｍＭ ｔｒｉｓ（ｐＨ＝７．４）、０．１Ｍ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．２５％の脂肪酸を含まないアルブミン（シグマ）、および示した濃度のＣＨＥＣ−９ペプチドからなる反応バッファー中に調製した。ＣＨＥＣ−９（ＣＨＥＡＳＡＡＱＣ）はセルテック（Ｃｅｌｔｅｋ）（ナッシュビル、テネシー州）により合成され、精製され、そして前述のように架橋化し（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ
２００４）、そしてアリコートをトリスバッファーまたはＤＭＥＭ賦形剤中で−８０゜にて保存した。１０−ピレン基質は水溶液中でリン脂質小胞を形成し、そして加水分解で１０−ピレニルデカン酸を放出する。この生成物はアルブミンの存在下で蛍光性であり、そして３５０ｎｍの励起、４０５ｎＭの発光で測定した。血漿サンプルは反応混合物中、２０％の最終濃度であり、そしてすべての酵素反応は、基質溶液をｓＰＬＡ２含有サンプルに加えることにより開始した。ＣＨＥＣ−９の特性を含む動力学的パラメーターは、酵素反応の初速度（Ｖ_０）（開始１分以内）を測定することにより決定した。活性なｓＰＬＡ２酵素濃度がペプチドで処置したラットからの血漿サンプルで測定される実験には、我々は単一の基質濃度を使用し、そして３０分間、酵素反応の定常状態の速度を測定した。この速度は、この期間中の生成物の形成が時間に関して一次であれば、血漿中の活性な酵素濃度に比例する。ほとんどの実験で、相対的蛍光単位（ＲＦＵ）は、ピレニルデカン酸標準曲線（モレキュラープローブス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、ユージーン、オレゴン州）を使用して生成物濃度に変換した。血漿に関しては、血漿のバックグラウンド蛍光を差し引かないが、これは速度測定に影響しなかった。個々の反応は二連または三連で行い、そして動力学曲線はペプチド有り、または無しで同時に反応させた５〜６個の基質濃度を使用して生成した。同じ結果で実験を５回以上繰り返した後にのみ、代表的なラインウィーバー−バークプロットおよび非線型回帰分析を結果で提示し、すなわちインヒビター処理後のＫｍおよびＶｍａｘの変化の方向は同じであり、そしてＫｉは１００ｎＭより低かった。ＫｍおよびＶｍａｘは、Ｇｒａｐｈｐａｄ（サンディエゴ、カリフォルニア州）の非線型回帰ソフトウェア（プリズム：Ｐｒｉｓｍ）で決定された。

ＭＳおよびＥＡＥ実験の結果。 濾過した尿は、飽和の基質濃度での速度の測定値がサンプル中に存在する活性な酵素の濃度に比例することを示す典型的なミハエル−メンテン反応の動力学に従う（図２２Ａ）。平均ｓＰＬＡ２活性は、活性および安定なＭＳの両患者の尿で有意に上昇する（図２２Ｂ）。平均活性は、再発しない患者に比べて再発している患者で高かったが、その差異は統計的に有意には達しなかった（ｐ＝０．１０７）。興味深いことに、処置を受けていない安定した患者の平均活性と、ベータインターフェロンで処置した患者の平均活性には差異が無かった（平均３９３±１３０％の対照ｎ＝１５ 対
４０９±９８％ｓ．ｅ．ｍ．、ｎ＝１４、ｐ＝０．５８５）。しかしこれらの患者は測定における高い変動により示唆されるように、ＰＬＡ２レベルに関しては不均一である。
重要なことは、ＰＬＡ２活性がいかなる群の全尿タンパク質とも相関しないので、これまでに認識されていない幾らかの腎臓機能における不全により、患者が単により多くのＰＬＡ２を漏出するのではないらしい（タンパク質−ＰＬＡ２相関に関するｐ値、活性＝０．５７２；安定＝０．３５０；対照＝０．８８５）。我々はまた、透析および濃縮したサンプル（２００μｇの全タンパク質）が１４ｋＤのグループＩＩａ ＰＬＡ２種と免疫反応性であることも分かり、これは全ＰＬＡ２分子（少なくともこのアイソフォーム）が排出されることを示唆している（図２２Ａ、挿入図）。

ＣＨＥＣ−９および賦形剤で処置したラットの両方に、免疫感作後（ＰＩ）の初期の体重減少があった。免疫感作後５日（処置の開始）から進行し、ペプチドで処置した動物は賦形剤で処置したラットよりも有意に高い率で体重が増加した（０．５１７ｇ／日 対 ０．３９２ｇ／日、ｐ＝０．００２、毎日の平均のペアード検定）。平均の尿ＰＬＡ２活性は、両群のラットで最初のＰＩ８日で増加した（図２３Ａ）。ＣＨＥＣ−９処置は行動的欠損の丁度発症前に、８から１０日の間で活性の有意な低下が生じた（図２３Ｂ）。しかし３／１０のペプチド処置ラットが疾患の症状を示し、そしてこれらの１匹は後期に尾の不全麻痺を発症した（免疫感作後１７日）。これを、ＰＩの１０から１３日の間に現れた一般にさらに重篤な症状を示す賦形剤で処置した群の８／１０と比較する。尾側−最脊髄側を通るＮｉｓｓｌ／ミエリンおよびヘマトキシリンおよびエオシン染色は、臨床的スコアと合致する病理を明らかにした。最も重篤な欠損を示すラットで稠密に詰まった小細胞の大きい領域が現れ（臨床的スコア２．０以上）、これは恐らく末梢免疫細胞の脈管周囲滲出の結果であろう。

ＰＬＡ２酵素活性は活発または安定したＭＳ個体の尿中で増加し、これらの患者が全身的に活性な酵素の上昇したレベルを有することを示唆する。尿中のＰＬＡ２酵素が典型的な双曲線関数に従い基質と反応することには幾分驚いたが、この結果は測定が活性酵素のレベルを反映しているという信頼を増す。さらに同じ上昇がＥＡＥを生じる免疫感作の後にラットで見いだされた。ＭＳのモデルとしてＥＡＥの妥当性には問題があったが、神経系が関与する自己免疫病理の進行において、ＰＬＡ２活性の役割を定めることを助けるための本内容においては有用である。ＰＬＡ２インヒビターであるＣＨＥＣ−９によるＥＡＥの弱化は、他者による類似の結果と一緒に、ＭＳおよび関連する障害におけるこれらの酵素の重要な役割についても立証している。興味深いことに、ＣＨＥＣ−９の効果は処置の開始から２、３日後のＰＬＡ２活性のピーク時に検出されただけであった。最近の実験は、ＣＨＥＣ−９が精製されたｓＰＬＡ２グループＩおよびヒトまたはラットの血漿を用いてエクスビボで試験された時、いくつかの非競合的インヒビターの特性を現すことを示唆している（すなわちこれは酵素−基質複合体に結合することができる）。したがってこのペプチドは、過度な炎症または酸化的ストレスの期間中に予想されるように、高い酵素−基質利用性で効果的となることができ、これは遅れたＰＬＡ２応答を説明することができる。

ＥＡＥにおけるＣＨＥＣ−９の治療効果は、ＰＬＡ２が向かう炎症の減少と、またはＰＬＡ２が強化する細胞傷害性の低下と関連するかもしれない。またＰＬＡ２酵素の特異的な免疫調節機能が影響される可能性もある。分泌型ＰＬＡ２は、特に酸化的ストレスの期間中に、Ｔリンパ球活性および種々の細胞型の前炎症性サイトカインのレベルを調節する（直接的に、または細胞質ゾルのＰＬＡ２を介するいずれかで）。

本明細書に説明する結果は、ＥＡＥモデルにおけるＰＬＡ２調節化プロセスのさらなる実験が、神経系に影響を及ぼす自己免疫障害の治療に新たな洞察を提供する可能性を示唆している。さらにＭＳ患者におけるＰＬＡ２活性のモニタリングは、例えばＭＳの再発に対する疑いに関連して、これらの新規治療の応用に関する適切な処方を定めるために役立つことができる。

また本明細書に説明する開示は、神経系以外の炎症と長く関連したｓＰＬＡ２酵素の上昇したレベルが、多発性硬化症および実験的自己免疫脳脊髄炎を特徴づけることも示す。ＥＡＥモデルは有効なＭＳ治療を同定するためのその妥当性という意味では最近まで問題を呈してきたが、このモデルは神経系の自己免疫攻撃において、炎症性酵素、特にＰＬＡ２の役割を定めることを助けるには明らかに有用である。活性酵素濃度の単純な尿アッセイを使用して、ＥＡＥを生じるように免疫感作されたラットは免疫感作後に全身性のｓＰＬＡ２が上昇したことが示された。ＭＳ患者から集めたサンプルに同じアッセイを適用すると、無作為または「スポット」サンプリングでさえ上昇した酵素レベルが示された。齧歯類モデルでの平行した結果に一部基づき、ｓＰＬＡ２の炎症活性は処置にかかわらず活発もしくは安定なＭＳ患者の大部分で進行中であると結論づける。最高レベルの酵素は、活発な疾患、すなわち再発している患者に見いだされた。興味深いことに、無症状性ＥＡＥラットが上昇した酵素活性を有したが、測定した活性のピーク後にのみ症状を有するようになり、上昇した酵素活性および行動的欠損は相関することが示唆される。最後に最も重要なことは、ＥＡＥの症状がｓＰＬＡ２インヒビターであるＣＨＥＣ−９により弱められた点であった。この知見は、ＰＬＡ２酵素がＭＳおよび関連する自己免疫障害の病因に直接的役割を果たすという考えを支持している。

ｓＰＬＡ２のＣＨＥＣ−９阻害の動力学は、ペプチドが非競合的インヒビターの幾つかの特性を現すことを示唆し、これは処置と酵素活性の減少を検出する能力との間の遅れを説明することができる。非競合的インヒビターは十分なレベルの酵素および基質に依存するので、それらのレベルはｓＰＬＡ２活性がペプチド処置の開始から数日後に最大となるまで適切ではなかったのかもしれない（少なくとも本ＣＨＥＣ−９の投薬用量および処置計画に関して）。さらにｓＰＬＡ２が細胞質ゾルのＰＬＡ２（ｃＰＬＡ２）の活性に最も顕著な効果を発揮できるのは、これらの炎症および酸化的ストレス条件下である。ＥＡＥにおけるｃＰＬＡ２の具体的関与も示された。ＣＨＥＣ−９の治療的効果の率直な説明は、ペプチドの阻害がｓＰＬＡ２媒介型の炎症およびＰＬＡ２代謝の炎症性産物を、直接的に、またはｃＰＬＡ２とのクロストークを介するいずれかで下げるということである。ＰＬＡ２経路の特異的な下流産物と関連して、この提案を試験するための実験が現在進行中である。これらはニューロンの生存能力および先天および後天免疫応答の両方の調節に関与し得るこれら酵素の他の特性である。例えばｓＰＬＡ２酵素は、最も多い神経変性の症例に関与していることが示唆されているメカニズムである興奮毒性を増強する。さらにこのインヒビターにより影響を受け得るＰＬＡ２酵素の特異的免疫調節機能が存在する。分泌型ＰＬＡ２は、特に酸化的ストレスの間中に、Ｔリンパ球活性および種々の細胞型の前炎症性サイトカインのレベルを調節する（直接的に、または細胞質ＰＬＡ２を介するいずれかで）。このように、ｓＰＬＡ２酵素は種々の神経変性障害、特に強い炎症成分を含む障害の重要な治療標的となり得る。

本明細書に引用したありとあらゆる特許、特許出願および公報の開示は、参考により全部、本明細書に編入する。

本発明を具体的態様に関連して開示してきたが、本発明の他の態様および変更も本発明の真の精神および範囲から逸脱せずに当業者により考案されることは明白である。添付する特許請求の範囲は、そのようなすべての態様および等価の変更体を含むと解釈されるものとする。

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Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ＢＳ，ＭｃＨｏｗａｔ Ｊ，Ｓｃｈｎｅｌｌｍａｎｎ ＲＧ．（２０００）細胞損傷および死におけるホスホリパーゼＡ_２Ｓ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２Ｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｄｅａｔｈ）．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ＆ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒａｐ ２９４：７９３−７９９．
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｔ．Ｊ．Ｓｏｕａｙａｈ，Ｎ．，Ｊａｍｅｓｏｎ，Ｂ．，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｊ．ａｎｄ Ｙａｏ，Ｌ．２００４．新規ホスホリパーゼＡ２インヒビターを用いたラットの大脳皮質損傷の全身的処置（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ａ ｎｅｗ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ，２１：１６８３−１６９１．
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＴＪ，Ｊｉｎｇ Ｈ，Ａｋｅｒｂｌｏｍ Ｉ，Ｍｏｒｇａｎ Ｒ，Ｆｉｓｈｅｒ ＴＳ，Ｎｅｖｅｕ Ｍ．（２００２）新規生存／脱出ペプチド（ＤＳＥＰ）に関するヒトｃＤＮＡの同定：神経細胞による過剰発現のインビトロおよびインビボの実験（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃＤＮＡ ｆｏｒ ｎｅｗ ｓｕｒｖｉｖａｌ／ｅｖａｓｉｏｎ ｐｅｐｔｉｄｅ （ＤＳＥＰ）：Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｏｆ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｎｅｕｒａｌ ｃｅｌｌｓ）．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１７７：３２−３９．
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｔ．Ｊ．，Ｊｉｎｇ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｙ，Ｈｏｄｇｅ
Ｌ．（２０００）ラットの全身的処置の効果を含む生存ペプチドＹ−Ｐ３０のカルレチクリン結合および他の生物活性（Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ Ｙ−Ｐ３０ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｔｓ）．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１６３：４５７−４６８．
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ＴＪ，Ｈｏｄｇｅ ｌ，Ｓｐｅｉｃｈｅｒ Ｄ，Ｒｅｉｍ Ｄ，Ｔｙｌｅｒ−Ｐｏｌｚ Ｃ，Ｌｅｖｉｔｔ Ｐ，Ｅａｇｌｅｓｏｎ，Ｋ，Ｋｅｎｎｅｄｙ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｙ （１９９８）酸化的にストレスを受けた神経系起源の細胞株によりコンディショニングされた培地中での生存促進ペプチドの同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｕｒｖｉｖａｌ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ
ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｂｙ ｏｘｉｄａｔｉｖｅｌｙ ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｏｒｉｇｉｎ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １８：７０４７−７０６０．
ＤｅＣｏｓｔｅｒ ＭＡ，Ｌａｍｂｅａｕ Ｇ，Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ Ｍ，Ｂａｚａｎ ＮＧ．（２００２）分泌型ホスホリパーゼＡ２は、グルタミン酸が誘導するカルシウム増加および初代神経培養の細胞死を強化する（Ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ ｇｌｕｔａｍａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ
ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎｃｒｅａｓｅ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ．６７：６３４−６４５．
Ｄｏｒｅ−Ｄｕｆｆｙ Ｐ，Ｓｈｉｈ−Ｙｉｅｈ Ｈ，Ｄｏｎｏｖａｎ Ｃ．（１９９１）大脳皮質液のエイコサノイドレベル：中枢神経系に移動する抗原提示細胞による内因性ＰＧＤ２およびＬＴＣ４合成（Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄ ｌｅｖｅｌｓ：ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ＰＧＤ２ ａｎｄ ＬＴＣ４ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｍｉｇｒａｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）．Ｎｅｕｒｏｌ ４１：３２２−３３４．
Ｅａｇｌｅｓｏｎ ＫＬ，Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＴＪ，Ｈａｕｎ Ｆ （１９９２）皮質で誘導されるニューロン生存因子による成体ラットの外側膝状核中で急速に、およびゆっくりと変性する両方のニューロンの救済（Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｂｏｔｈ ｒａｐｉｄｌｙ ａｎｄ ｓｌｏｗｌｙ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｏｒｓａｌ ｌａｔｅｒａｌ ｇｅｎｉｃｕｌａｔｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ ｂｙ ａ ｃｏｒｔｉｃａｌｌｙ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆａｃｔｏｒ）．Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １１６：１５６−１６２．
Ｅａｇｌｅｓｏｎ ＫＬ，Ｈａｕｎ Ｆ，Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＴＪ （１９９０）外側膝状核ニューロンの異なる集団は、皮質で誘導されるニューロン生存因子に濃度特異的な要件を有する（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｏｒｓａｌ ｌａｔｅｒａｌ ｇｅｎｉｃｕｌａｔｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ｎｅｕｒｏｎｓ ｈａｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ａ ｃｏｒｔｉｃａｌｌｙ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆａｃｔｏｒ）．Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １１０：２８４−２９０．
Ｆａｒｏｏｑｕｉ ＡＡ，Ｌｉｔｓｋｙ ＭＬ，Ｆａｒｏｏｑｕｉ Ｔ，Ｈｏｒｒｏｃｋｓ ＬＡ．（１９９９）細胞内ホスホリパーゼＡ２活性のインヒビター：神経学的障害に関するそれらの神経化学的効果および治療的重要性（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｃｔｉｖｉｔｙ：ｔｈｅｉｒ ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ．４９：１３９−１５３．
Ｆａｓａｎｉ Ｆ，Ｂｏｃｑｕｅｔ Ａ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｐ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ Ａ，Ｅｙｅｒ Ｊ．（２００４）細胞体で凝集するニューロフィラメントの量は、それらのトリプシン様プロテアーゼに対するそれらの感度の上昇により制御される（Ｔｈｅ
ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ ａｇｇｒｅｇａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｂｏｄｙ ｉｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ｔｈｅｉｒ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ）．Ｓｃｉｅｎｃｅ １１７：８６１−８６９．
Ｆｉｓｃｈｅｒ ＨＧ，Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ Ｇ．（２００１）中枢神経系炎症における脳樹状細胞およびマクロファージ／ミクログリア（Ｂｒａｉｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ／ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｉｎ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６：２７１７−２７２６．
Ｆｌｏｗｅｒ ＲＪ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ ＧＪ．（１９７９）抗炎症性ステロイドは、プロスタグランジン生成を防止するホスホリパーゼＡ２インヒビターの生合成を誘導する（Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｔｅｒｏｉｄｓ ｉｎｄｕｃｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｈｉｃｈ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）．Ｎａｔｕｒｅ ２７８：４５６−４５９．
Ｆｏｎｔｅｈ ＡＮ，Ａｔｓｕｍｉ Ｇ，ＬａＰｏｒｔｅ Ｔ，Ｃｈｉｌｔｏｎ ＦＨ．（２０００）マウスの骨髄誘導マスト細胞における細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ_２の分泌型ホスホリパーゼＡ_２受容体媒介型の活性化（Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６５：２７７２−２７８２．
Ｆｕｅｎｔｅｓ Ｌ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ Ｍ，Ｎｉｅｔｏ ＭＬ，Ｃｒｅｓｐｏ，ＭＳ．（２００２）グループＩＩＡ分泌型ホスホリパーゼＡ_２の生物学的効果（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＩＩＡ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２）．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５３１：７−１１．
Ｇｌａｄｕｅ ＲＰ，Ｃａｒｒｏｌｌ ＬＡ，Ｍｉｌｉｃ ＡＪ，Ｓｃａｍｐｏｌｉ ＤＮ，Ｓｔｕｋｅｎｂｒｏｋ ＨＡ，Ｐｅｔｔｉｐｈｅｒ ＥＲ，Ｓａｌｔｅｒ
ＥＤ，Ｃｏｎｔｉｌｌｏ Ｌ，Ｓｈｏｗｅｌｌ ＨＪ．（１９９６）ロイコトリエンＢ４−受容体相互作用の阻害は、実験的アレルギー性脳脊髄炎のマウスモデルにおける好酸球浸潤および疾患の病理を抑制する（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｂ４−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８３：１８９３−１８９８．
Ｇｏｒｄｏｎ Ｔ，Ｈｅｇｅｄｕｓ Ｊ，Ｔａｍ ＳＬ．（２００４）加齢および運動ニューロン疾患における適応性および不適応性運動軸索発生（Ａｄａｐｔｉｖｅ
ａｎｄ ｍａｌａｄａｐｔｉｖｅ ｍｏｔｏｒ ａｘｏｎａｌ ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ）．Ｎｅｕｒｏｌ Ｒｅｓ．２６：１７４−１８５．
Ｇｒａｎａｔａ Ｆ，Ｐｅｔｒａｒｏｌｉ Ａ，Ｂｏｉｌａｒｄ Ｅ，Ｂｅｚｚｉｎｅ Ｓ．Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ Ｊ，ＤｅｌＶｅｃｃｈｉｏ Ｌ，Ｇｅｌｂ ＭＨ，Ｌａｍｂｅａｕ Ｇ，Ｍａｒｏｎｅ Ｇ，Ｔｒｉｇｇｉａｎｉ Ｍ．（２００５）Ｍ−型受容体を発現しているヒト肺のマクロファージにおける分泌型ホスホリパーゼＡ２によるサイトカイン生産の活性化（Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎ ｈ
ｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｍ−ｔｙｐｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：４６４−４７４．
Ｇｒｅｃｏ Ａ，Ｍｉｎｇｈｅｔｔｉ Ｌ，Ｐｕｏｐｏｌｏ Ｍ，Ｃａｎｎｏｎｉ Ｓ，Ｒｏｍａｎｏ Ｓ，Ｐｏｚｚｉｌｌｉ Ｃ，Ｌｅｖｉ Ｇ．（２００４）脳脊髄炎イソプラスタンは、再発−寛解する多発性硬化症における炎症活性に関係しない（Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｉｓｏｐｒｏｓｔａｎｅｓ ａｒｅ ｎｏｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｒｅｌａｐｓｉｎｇ−ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ ２２４：２３−２７．
Ｈａｎ ＷＫ，Ｓａｐｉｒｓｔｅｉｎ Ａ，Ｈｕｎｇ ＣＣ，Ａｌｅｓｓａｎｄｒｉｎｉ Ａ，Ｂｏｎｖｅｎｔｒｅ ＪＶ．（２００３）マウス糸球体間質細胞での過酸化水素が誘導するアラキドン酸放出における細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２アルファ（ｃＰＬＡ２アルファ）間のクロストーク：ｓＰＬＡ２はアラキドン酸放出の原因であるｃＰＬＡ２アルファ活性を調節する（Ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｌｐｈａ （ｃＰＬＡ２ａｌｐｈａ）ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ （ｓＰＬＡ２）ｉｎ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ：ｓＰＬＡ２ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｃＰＬＡ２ ａｌｐｈａ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｈａｔ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｌｅａｓｅ）．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７８：２４１５３−２４１６３．
Ｈａｎｎｏｎ Ｒ，Ｃｒｏｘｔａｌｌ ＪＤ，Ｇｅｔｔｉｎｇ ＳＪ，Ｒｏｖｉｅｚｚｏ Ｆ，Ｙｏｎａ Ｓ，Ｐａｕｌ−Ｃｌａｒｋ ＭＪ，Ｇａｖｉｎｓ ＦＮ，Ｐｅｒｒｅｔｔｉ Ｍ，Ｍｏｒｒｉｓ ＪＦ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ ＪＣ，Ｆｌｏｗｅｒ
ＲＪ．（２００３）アネキシン１−／−マウスにおける異常な炎症およびグルココルチコイドに対する耐性（Ａｂｅｒｒａｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ｉｎ ａｎｎｅｘｉｎ １−／− ｍｏｕｓｅ）．ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：２５３−２５５．
Ｈａｕｎ Ｆ，Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＴＪ （１９９３）内側前頭皮質における軸索切断化ニューロンの神経栄養救済後の前頭皮質−中間視覚行動の回復（Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖｉｓｕａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ａｘｏｔｏｍｉｚｅｄ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ｍｅｄｉａｌ ｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １３（２）：６１４−６２２．
Ｈｅｎｄｒｉｋｓ ＪＪ，Ｔｅｕｎｉｓｓｅｎ ＣＥ，ｄｅ Ｖｒｉｅｓ ＨＥ，Ｄｉｊｋｓｔｒａ ＣＤ．（２００５）マクロファージおよび神経変性（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ４８：１８５−１９５．
Ｈｅｐｐｎｅｒ ＦＬ，Ｇｒｅｔｅｒ Ｍ，Ｍａｒｉｎｏ Ｄ，Ｆａｌｓｉｇ
Ｊ，Ｒａｉｖｉｃｈ Ｇ，Ｈｏｖｅｌｍｅｙｅｒ Ｎ，Ｗａｉｓｍａｎ Ａ，Ｒｕｌｉｃｋｅ Ｔ，Ｐｒｉｎｚ Ｍ，Ｐｒｉｌｌｅｒ Ｊ，Ｂｅｃｈｅｒ Ｂ，Ａｇｕｚｚｉ Ａ．（２００５）ミクログリアの完全麻痺により抑制される実験的自己免疫脳脊髄炎（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ
ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ｐａｒａｌｙｓｉｓ）．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１：１４６−１５２．
Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ Ｍ，Ｂｕｒｉｌｌｏ ＳＬ，Ｃｒｅｓｐｏ ＭＳ，Ｎｉｅｔｏ ＭＬ．（１９９８）ヒト星状細胞株１３２１Ｎ１において、分泌型ホスホリパーゼＡ２はマイトジェン−活性化プロテインキナーゼおよび細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２のカスケードを活性化する（Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２
ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｈｅ ｃａｓｃａｄｅ ｏｆ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａ
ｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ ｃｅｌｌ
ｌｉｎｅ １３２１Ｎ１）．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７３：６０６−６１２．
Ｈｏｏｚｅｍａｎｓ ＪＪ，Ｖｅｅｒｈｕｉｓ Ｒ，Ｊａｎｓｅｎ Ｉ，Ｒｏｚｅｍｕｌｌｅｒ ＡＪ，Ｅｉｋｅｌｅｎｂｏｏｍ Ｐ．（２００１）インターロイキン−１ベータは、ヒト神経芽細胞によるシクロオキシゲナーゼ２発現およびプロスタグランジンＥ２分泌を誘導した：アルツハイマー病に関する意義（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ｂｅｔａ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ
ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）．Ｅｘｐ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ ３６：５５９−５７０．
Ｋａｌｙｖａｓ Ａ，Ｄａｖｉｄ Ｓ．（２００４）細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２は多発性硬化症様の疾患の病因に重要な役割を果たす（Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｐｌａｙｓ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ−ｌｉｋｅ ｄｉｓｅａｓｅ）．Ｎｅｕｒｏｎ ４１：３２３−３３５．
Ｋａｍｉｙａ Ｓ，Ｓｈｉｒａｈａｓｅ Ｈ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｓ，Ｋａｎｄａ Ｍ，Ｍａｔｓｕｉ Ｈ，Ｙｏｓｈｉｍｉ Ａ，Ｋａｓａｉ Ｍ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｋ，Ｋｕｒａｈａｓｈｉ Ｋ．（２００１）フリーラジカルの捕捉および抗過酸化活性を用いた新規シリーズのトロンボキサンＡ２シンセターゼインヒビター（Ａ ｎｏｖｅｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ａ２ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｎｄ ａｎｔｉ−ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）．Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ ４９：５６３−５７１．
Ｋｉｌｖｅｎｙｉ Ｐ，Ｂｅａｌ ＭＦ，Ｆｅｒｒａｎｔｅ ＲＪ，Ａｎｄｒｅａｓｓｅｎ ＯＡ，Ｗｅｒｍｅｒ Ｍ，Ｃｈｉｎ ＭＲ，Ｂｏｎｖｅｎｔｒｅ ＪＶ．（１９９８）グループＩＶ細胞質ホスホリパーゼＡ２が欠損しているマウスは、ＭＰＴＰ神経毒性に耐性である（Ｍｉｃｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ＩＶ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ＭＰＴＰ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ７１：２６３４−２６３７．
Ｋｌｅｇｅｒｉｓ Ａ，ＭｃＧｅｅｒ ＰＬ．（２００３）ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽細胞に向かうヒト単球性ＴＨＰ−１細胞およびミクログリアの毒性は、５−リポキシゲナーゼのインヒビターおよびその活性化タンパク質ＦＬＡＰにより減少する（Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ＴＨＰ−１ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｔｏｗａｒｄ ＳＨ−ＳＹ５Ｙ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ５−ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＦＬＡＰ）．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ７３：３６９−３７８．
Ｋｌｅｇｅｒｉｓ Ａ，ＭｃＧｅｅｒ ＰＬ．（２０００）ニューロン細胞に対する単核食細胞毒性に関与する種々の細胞内シグナル伝達メカニズムの相互作用（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｐｈａｇｏｃｙｔｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｏｗａｒｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ）．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ６７：１２７−１３３．
Ｋｌｏｓｓ ＣＵ，Ｂｏｈａｔｓｃｈｅｋ Ｍ，Ｋｒｅｕｔｚｂｅｒｇ ＧＷ，Ｒａｉｖｉｃｈ Ｇ．（２００１）マウス脳および細胞培養中の分枝化ミクログリアの形態学およびインテグリン免疫反応性に及ぼすリポ多糖の効果（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ
ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｒａｍｉｆｉｅｄ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ）．Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １６８：３２−４６．
Ｋｏｌｋｏ Ｍ，ｄｅ Ｔｕｒｃｏ ＥＢ，Ｄｉｅｍｅｒ ＮＨ，Ｂａｚａｎ
ＮＧ．（２００２）分泌ホスホリパーゼＡ２媒介型のニューロン細胞死には、グルタミン酸のイオノトロピック受容体が関与する（Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｉｏｎｏｔｒｏｐｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）．Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ １３：１９６３−１９６６．
Ｋｕｇｉｙａｍａ Ｋ，Ｏｔａ Ｙ，Ｓｕｇｉｙａｍａ Ｓ，Ｋａｗａｎｏ Ｈ，Ｄｏｉ Ｈ，Ｓｏｅｊｉｍａ Ｈ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｓ，Ｏｇａｗａ Ｈ，Ｔａｋａｚｏｅ Ｋ，Ｙａｓｕｅ Ｈ．（２０００）不安定狭心症患者における分泌型ＩＩ型ホスホリパーゼＡ２の血漿レベルの予後値（Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｔｙｐｅ ＩＩ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｕｎｓｔａｂｌｅ ａｎｇｉｎａ ｐｅｃｔｏｒｉｓ）．Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．８６（７）：７１８−２２．
Ｋｕｒｔｚｋｅ ＪＦ （１９８３）多発性硬化症における神経学的欠陥の採点：拡大した不能状態の尺度（ＥＤＳＳ）（Ｒａｔｉｎｇ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ａｎ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ｓｔａｔｕｓ ｓｃａｌｅ （ＥＤＳＳ））．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ； ３３：１４４４−１４５２．
Ｌａｎｄｇｒａｆ Ｐ，Ｓｉｅｇ Ｆ，Ｗａｈｌ Ｐ，Ｍｅｙｅｒｓ Ｇ，Ｋｒｅｕｔｚ ＭＲ，Ｈ−Ｃ Ｐａｐｅ．（２００４）母親の血液が有する因子は、発生中の胸腺の生存を促進する（Ａ ｍａｔｅｒｎａｌ ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎｅ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｔｈａｌａｍｕｓ），ＦＡＳＥＢ Ｊ．（ｉｎ ｐｒｅｓｓ）．
Ｌｅｈｔｏｎｅｎ ＪＹ，Ｈｏｌｏｐｉｎｅｎ ＪＭ，Ｋｉｎｎｕｎｅｎ ＰＫ．（１９９６）インビトロでアミロイド ベータ−ペプチドによるホスホリパーゼＡ２の活性化（Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｂｙ ａｍｙｌｏｉｄ ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ）．Ｂｉｏｃｈｅｍ ３５：９４０７−９４１４．
Ｌｉｎ ＭＫ，Ｆａｒｅｗｅｌｌ Ｖ，Ｖａｄａｓ Ｐ，Ｂｏｏｋｍａｎ ＡＡ，Ｋｅｙｓｔｏｎｅ ＥＣ，Ｐｒｕｚａｎｓｋｉ Ｗ．（１９９８） 慢性関節リウマチにおける疾患活性の表示としての分泌型ホスホリパーゼＡ２（Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｓ ａｎ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ２２：１６１−７３．
Ｌｉｐｔｏｎ Ｐ．脳のニューロンにおける虚血性細胞死（Ｉｓｃｈｅｍｉｃ
ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ）．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．７９：１４３１−１５６８，１９９９．
Ｌｉｕ Ｐ−Ｙ，Ｌｉ Ｙ−Ｈ，Ｔｓａｉ Ｗ−Ｃ，Ｃｈａｏ Ｔ−Ｈ，Ｔｓａｉ Ｌ−Ｍ，Ｗｕ Ｈ−Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｊ−Ｈ．（２００３）皮膚を介する冠状介入を受けている冠状動脈疾患の患者における分泌型ＩＩ型ホスホリパーゼＡ２の血漿レベルの予後値および変化（Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｔｙｐｅ ＩＩ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ
Ｊｏｕｒｎａｌ ２４：１８２４−１８３２．
Ｌｏｍｂａｒｄｉ ＶＲ，Ｇａｒｃｉａ Ｍ，Ｃａｃａｂｅｌｏｓ Ｒ．（１
９９８）アルツハイマー関連ＡｐｏＥ遺伝子型に由来する血清中に含まれる因子（１もしくは複数）により誘導されるミクログリアの活性化（Ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆａｃｔｏｒ（ｓ）ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｓｅｒａ ｆｒｏｍ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ ＡｐｏＥ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ ５４：５３９−５５３．
Ｌｕｋｉｗ ＷＪ，Ｂａｚａｎ ＮＧ．（２０００）アルツハイマー病における神経炎症性シグナル伝達のアップレギュレーション（Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ
ｄｉｓｅａｓｅ）．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ Ｒｅｓ．２５：１１７３−１１８４．
Ｍａｒｔｉｎｏ Ｇ，Ａｄｏｒｉｎｉ Ｌ，Ｒｉｅｃｋｍａｎｎ Ｐ，Ｈｉｌｌｅｒｔ Ｊ，Ｋａｌｌｍａｎｎ Ｂ，Ｃｏｍｉ Ｇ，ｅｔ ａｌ．（２００２）．多発性硬化症における炎症：良好、悪い、そして複合（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ｔｈｅ ｇｏｏｄ，ｔｈｅ ｂａｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ）．Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ １：４９９−５０９．
Ｍｉｅｌｅ Ｌ．（２００３）炎症に対する新たな武器：ホスホリパーゼＡ２およびトランスグルタミナーゼの二重インヒビター（Ｎｅｗ ｗｅａｐｏｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ｄｕａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１１：１９−２１．
Ｍｉｈｅｌｉｃｈ ＥＤ，Ｃａｒｌｓｏｎ ＤＧ，Ｆｏｘ Ｎ，Ｓｏｎｇ Ｍ，Ｓｃｈｅｖｉｔｚ ＲＷ，Ｓｎｙｄｅｒ ＤＷ．（１９９７）ホスホリパーゼＡ（２）インヒビターの構造に基づく設計および治療的可能性（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ（２）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）．Ｐｒｏｇ Ｓｕｒｇｅｒｙ ２４：１４０−１４５．
Ｍｉｌｌｃｅｖｉｃ Ｉ，Ｐｅｋｏｖｉｃ Ｓ，Ｓｕｂａｓｉｃ Ｓ，Ｍｏｓｔａｒｉｃａ−Ｓｔｏｊｋｏｖｉｃ Ｍ，Ｓｔｏｓｉｃ−Ｇｒｕｊｉｃｉｃ Ｓ，Ｍｅｄｉｃ−Ｍｉｊａｃｅｖｉｃ Ｌ，Ｐｅｊａｎｏｖｉｃ Ｖ，Ｒａｋｉｃ Ｌ，Ｓｔｏｊｉｌｊｋｏｖｉｃ Ｍ．（２００３）リバビリンは、ダークアグーチラットにおける実験的自己免疫脳脊髄炎の臨床的兆候および病理学的変化を減少する（Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ ｄａｒｋ ａｇｏｕｔｉ ｒａｔｓ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ ７２：２６８−２７８．
Ｍｉｌｌｉｇａｎ ＣＥ，Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＴＪ，Ｌｅｖｉｔｔ Ｐ．（１９９１）示差的免疫化学マーカーは、発生しているラットの脳における脳マクロファージおよびミクログリアの正常な分布を明らかとする（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒｓ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｒａｔ ｂｒａｉｎ）．Ｊ Ｃｏｍｐ Ｎｅｕｒｏｌ ３１４：１２５−１３５．
Ｍｏｏｎ Ｃ，Ａｈｎ Ｍ，Ｗｉｅ ＭＢ，Ｋｉｍ ＨＭ，Ｋｏｈ ＣＳ，Ｈｏｎｇ ＳＣ，Ｋｉｍ ＭＤ，Ｔａｎｕｍａ Ｎ，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ Ｙ，Ｓｈｉｎ Ｔ．（２００５）シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの二重インヒビターであるフェニドンは、その標的酵素を抑制することにより実験的自己免疫脳脊髄炎におけるラットの完全麻痺を改善する（Ｐｈｅｎｉｄｏｎｅ，ａ ｄｕａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅｓ ａｎｄ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅｓ，ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｒａｔ ｐａｒａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｂｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔ ｅｎｚｙｍｅｓ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１０３５：２０６−２１０．
Ｍｏｏｎ Ｃ，Ａｈｎ Ｍ，Ｊｅｅ Ｙ，Ｈｅｏ Ｓ，Ｋｉｍ Ｓ，Ｋｉｍ Ｈ，Ｓｉｍ ＫＢ，Ｋｏｈ ＣＳ，Ｓｈｉｎ ＹＧ，Ｓｈｉｎ Ｔ．（２００４）ルイスラットにおける実験的自己脳脊髄炎のサリチル酸ナトリウムが誘導する改善は、誘導性の一酸化窒素シンターゼおよびシクロオキシゲナーゼの抑制と関連する（Ｓｏｄｉｕｍ−ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｌｅｗｉｓ ｒａｔｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ
ａｎｄ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅｓ）．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ３５６：１２３−１２６．
Ｍｏｕｎｉｅｒ ＣＭ，Ｇｈｏｍａｓｈｃｈｉ Ｆ，Ｌｉｎｄｓａｙ ＭＲ，Ｊａｍｅｓ Ｓ，Ｓｉｎｇｅｒ ＡＧ，Ｐａｒｔｏｎ ＲＧ，Ｇｅｌｂ ＭＨ．（２００４） ヒトグループＩＩＡおよびＸ分泌型ホスホリパーゼＡ（２）でトランスフェクトされた哺乳動物細胞からのアラキドン酸放出は、主に分泌プロセス中に、そして細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ（２）−アルファの関与で起こる（Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇｒｏｕｐｓ ＩＩＡ ａｎｄ Ｘ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ（２）ｏｃｃｕｒｓ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ（２）−ａｌｐｈａ）．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１１； ２７９（２４）：２５０２４−３８．
Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｍ，Ｍａｓｕｄａ Ｓ，Ｓｈｉｍｂａｒａ Ｓ，Ｂｅｚｚｉｎｅ Ｓ，Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ Ｍ，Ｌａｍｂｅａｕ Ｇ，Ｇｅｌｂ ＭＨ，Ｍａｔｓｕｋｕｒａ Ｓ，Ｋｏｋｕｂｕ Ｆ，Ａｄａｃｈｉ Ｍ，Ｋｕｄｏ Ｉ．（２００３）新たなクラスの分泌型ホスホリパーゼＡ_２Ｓの細胞性アラキドン酸放出機能（グループ ＩＩＩ および ＸＩＩ）（Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｒａｃｈｉｄｏｎａｔｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｃｌａｓｓｅｓ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２Ｓ （Ｇｒｏｕｐｓ ＩＩＩ ａｎｄ ＸＩＩ））．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：１０６５７−１０６６７．
Ｎｅｕ Ｉ，Ｍａｌｌｉｎｇｅｒ Ｊ，Ｗｉｌｄｆｅｕｅｒ Ａ，Ｍｅｈｌｂｅｒ Ｌ．（１９９２）多発性硬化症患者における脳脊髄液中のロイコトリエン（Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ）．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｌ
Ｓｃａｎｄ ８６：５８６−５８７．
Ｎｅｗｍａｎ ＳＰ，Ｃｒｏｘｔａｌｌ ＪＤ，Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ Ｑ，Ｆｌｏｗｅｒ ＲＪ．（１９９７）Ａ５４９細胞中のＩＬ−１ベータによるリポコルチン１、ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２の調和的調節（Ｔｈｅ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｃｏｒｔｉｎ １，ＣＯＸ ２ ａｎｄ ｃＰＬＡ２ ｂｙ
ＩＬ−１ ｂｅｔａ ｉｎ Ａ５４９ ｃｅｌｌｓ）．Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ４０７：２４９−２５３．
Ｐｅｔｅ ＭＪ，Ｗｕ ＤＷ，Ｅｘｔｏｎ ＪＨ．（１９９６）ウシ脳の細胞下画分は、ｓｎ−１およびｓｎ−２位の順次脱アシル化によりホスファチジルコリンを分解する（Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｂｒａｉｎ ｄｅｇｒａｄｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｂｙ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｄｅａｃｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｎ−１ ａｎｄ ｓｎ−２ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １２９９：３２５−３３２．
Ｐｅｔｅｒｓ−Ｇｏｌｄｅｎ Ｍ，Ｃａｎｅｔｔｉ Ｃ，Ｍａｎｃｕｓｏ Ｐ，Ｃｏｆｆｅｙ ＭＪ．（２００５）ロイコトリエン：先天免疫応答で正当に評価されないメディエーター（Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ：ｕｎｄｅｒａｐｐｒｅｃｉａｔｅｄ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７４：５８９−５９４．
Ｐｅｔｒｏｖｉｃ Ｎ，Ｇｒｏｖｅ Ｃ，Ｌａｎｇｔｏｎ ＰＥ，Ｍｉｓｓｏ
ＮＬ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＰＪ．（２００１） 高密度リポタンパク質に関連するヒト血清ホスホリパーゼＡ２に関する単純なアッセイ（Ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ａ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｔｈａｔ ｉｓ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）．Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ ４２：１７０６−１３．
Ｐｈｉｌｌｉｓ ＪＷ，Ｏ’Ｒｅｇａｎ ＭＨ．（１９９６）虚血性のラット大脳皮質におけるグルタミン酸およびアスパラギン酸放出のメカニズム（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ａｎｄ ａｓｐａｒｔａｔｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｒａｔ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ ７３０：１５０−１６４．
Ｐｉｎｔｏ Ｆ，Ｂｒｅｎｎｅｒ Ｔ，Ｄａｎ Ｐ，Ｋｒｉｍｓｋｙ Ｍ，Ｙｅｄｇａｒ Ｓ．（２００３）細胞外ホスホリパーゼＡ_２インヒビターは中枢神経系の炎症を抑制する（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ
ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）．Ｇｌｉａ ４４：２７５−２８２．
Ｐｏｌｉｇｏｎｅ Ｂ，Ｂａｌｄｗｉｎ ＡＳ．（２００１）ＣＯＸ−２によるＮＦ−カッパＢの正または負の調節：異なるプロスタグランジンの役割（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ ｂｙ ＣＯＸ−２：ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ）．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：３８６５８−３８６５４．
Ｐｏｒｔｅｒ Ｄ，Ｗｅｒｅｍｏｗｉｃｚ Ｓ，Ｃｈｉｎ Ｋ，Ｓｅｔｈ Ｐ，Ｋｅｓｈａｖｉａｈ Ａ，Ｌａｈｔｉ−Ｄｏｍｅｎｉｃｉ Ｊ，Ｂａｅ ＹＫ，Ｍｏｎｉｔｔｏ ＣＬ，Ｍｅｒｌｏｓ−Ｓｕａｒｅｚ Ａ，Ｃｈａｎ Ｊ，Ｈｕｌｅｔｔｅ ＣＭ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ Ａ，Ｍｏｒｔｏｎ ＣＣ，Ｍａｒｋｓ （２００３）神経生存因子は乳癌における発癌遺伝子の候補である（Ａ ｎｅｕｒａｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆａｃｔｏｒ ｉｓ ａ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １００（１９）：１０９３１−６．
Ｐｒａｔ Ａ，Ａｎｔｅｌ Ｊ．（２００５）多発性硬化症の病因（Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｍｕｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ
Ｎｅｕｒｏｌ １８：２５５−２３０．
Ｒａｉｖｉｃｈ Ｇ，Ｂａｎａｔｉ Ｒ．（２００４）脳のミクログリアおよび血液由来マクロファージ：多発性硬化症および自己免疫脱髄疾患の動物モデルにおける分子プロファイルおよび機能的役割（Ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ４６：２６１−２８１．
Ｒａｏ ＭＶ，Ｎｉｘｏｎ ＲＡ （２００３）筋萎縮性側索硬化症のマウスモデルにおける欠損的ニューロフィラメント輸送：総説（Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ）．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ Ｒｅｓ．２８：１０４１−７．
Ｒｅｄｅｒ ＡＴ，Ｔｈａｐａｒ Ｍ，Ｓａｐｕｇａｙ ＡＭ，Ｊｅｎｓｅｎ
ＭＡ．（１９９４）プロスタグランジンおよびアラキドン酸代謝のインヒビターは、実験的アレルギー性脳脊髄炎を抑制する（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎａｔｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ ５４：１１７−１２７．
Ｒｅｄｅｒ ＡＴ，Ｔｈａｐａｒ Ｍ，Ｓａｐｕｇａｙ ＡＭ，Ｊｅｎｓｅｎ
ＭＡ．（１９９５）エイコサノウドは実験的アレルギー性脳脊髄炎を修飾する（Ｅｉｃｏｓｅｎｏｉｄｓ ｍｏｄｉｆｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）．Ａｍ Ｊ Ｔｈｅｒ ２：７１１−７２０．
Ｒｅｈｎｃｒｏｎａ Ｓ，Ｗｅｓｔｅｒｂｅｒｇ Ｅ，Ａｋｅｓｓｏｎ Ｂ，Ｓｉｅｓｊｏ ＢＫ．（１９８２）完全または重篤な不完全虚血中および後の脳皮質脂肪酸およびリン脂質（Ｂｒａｉｎ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｎｄ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ｉｓｃｈｅｍｉａ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ３８：８４−９３．
Ｒｏｔｈｗｅｌｌ ＮＪ，Ｌｕｈｅｓｈｉ ＧＮ．（２０００）脳中のインターロイキン１：生物学、病理学および治療的標的（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ：ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ）．Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２３：６１８−６２５．
Ｓａｌｕｊａ Ｉ，Ｓｏｎｇ Ｄ，Ｏ’Ｒｅｇａｎ ＭＨ，Ｐｈｉｌｉｓ ＪＷ．（１９９７）（ラット大脳皮質における虚血−再潅流中の遊離脂肪酸放出におけるホスホリパーゼＡ２の役割（Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｄｕｒｉｎｇ ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ）．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２３３：９７−１００．
Ｓａｐｉｒｓｔｅｉｎ Ａ，Ｂｏｎｖｅｎｔｒｅ ＪＶ．（２０００）遺伝子ノックアウトにより定められるような細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ_２の特異的な生理学的役割（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２ ａｓ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔｓ）．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １４８８：１３９−１４８．
Ｓｃｈｉｔｔｅｋ Ｂ，Ｈｉｐｆｅｌ Ｒ，Ｓａｕｅｒ Ｂ，Ｂａｕｅｒ Ｊ，Ｋａｌｂａｃｈｅｒ Ｈ，Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ Ｓ，Ｓｃｈｉｒｌｅ Ｍ，Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ Ｋ，Ｂｌｉｎ Ｎ，Ｍｅｉｅｒ Ｆ，Ｒａｓｎｅｒ Ｇ，Ｇａｒｂｅ Ｃ．（２００１）デルメシジン：汗腺により分泌される新規なヒト抗生物質ペプチド（Ｄｅｒｍｃｉｄｉｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ ｓｗｅａｔ ｇｌａｎｄｓ）．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：１１３３−１１３７．
Ｓｏｈｎ Ｊ，Ｋｉｍ Ｔ−Ｉ，Ｙｏｏｎ Ｙ−Ｈ，Ｋｉｍ Ｊ−Ｙ，Ｋｉｍ
Ｓ−Ｙ．（２００３）新規なトランスグルタミナーゼインヒビターは、アレルギー性結膜炎を逆転する（Ｎｏｖｅｌ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｏｎ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１１：１２１−１２８．
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＤＭ．（２００１）開発におけるヒト１４ｋＤａのＩＩ型Ｓ−ＰＬＡ_２のインヒビターに関する最新情報（Ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ １４ ｋＤａ Ｔｙｐｅ ＩＩ Ｓ−ＰＬＡ２ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ Ｄｅｓｉｇｎ ７：１８１−１９８．
Ｓｔｅｆｆｅｒｌ Ａ，Ｓｔｏｒｃｈ ＭＫ，Ｌｉｎｉｎｇｔｏｎ Ｃ，Ｓｔａｄｅｌｍａｎｎ Ｃ，Ｌａｓｓｍａｎｎ Ｈ，Ｐｏｈｌ Ｔ，Ｈｏｌｓｂｏｅｒ Ｆ，Ｔｉｌｄｅｒｓ ＦＪ，Ｒｅｕｌ ＪＭ．（２００１）．慢性の再発している実験的アレルギー性脳脊髄炎の疾患の進行は、減少した炎症が推進するコルチコステロンの生産に関連する（Ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｌａｐｓｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ）．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４２：３６１６−３６２４．
Ｓｔｏｓｉｃ−Ｇｒｕｊｉｃｉｃ Ｓ，Ｒａｍｉｃ Ｚ，Ｂｕｍｂａｓｉｒｅｖｉｃ Ｖ，Ｈａｒｈａｊｉ Ｌ，Ｍｏｓｔａｒｉｃａ−Ｓｔｏｊｋｏｖｉｃ Ｍ．（２００４）ダークアグーチラットにおけるアジュバントなしでの実験的自己免疫脳脊髄炎の誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ ｄａｒｋ ａｇｏｕｔｉ ｒａｔｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｄｊｕｖａｎｔ）．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３６：４９−５５．
Ｓｔｙｓ ＰＫ，Ｊｉａｎｇ Ｑ．（２００２）無酸素血症および虚血症ラットの中枢軸索における カルピン依存性ニューロフィラメント分解（Ｃａｌｐａｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ ｂｒｅａｋｄｏｗｎ ｉｎ ａｎｏｘｉｃ ａｎｄ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｒａｔ ｃｅｎｔｒａｌ ａｘｏｎｓ）．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ３２８：１５０−１５４．
Ｔａｋｅｔｏ ＭＭ，Ｓｏｎｏｓｈｉｔａ Ｍ．（２００２）ホスホリパーゼＡ２およびアポトーシス（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ_２ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）．Ｂｉｏｃｈｉｍ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８５：７２−７６．
Ｔｈｏｍｍｅｓｅｎ Ｌ，Ｓｊｕｒｓｅｎ Ｗ，Ｇａｓｖｉｋ Ｋ，Ｈａｎｓｓｅｎ Ｗ，Ｂｒｅｋｋｅ ＯＬ，Ｓｋａｔｔｅｂｏｌ Ｌ，Ｈｏｌｍｅｉｄｅ ＡＫ，Ｅｓｐｅｖｉｋ Ｔ，Ｊｏｈａｎｓｅｎ Ｂ，Ｌａｅｇｒｅｉｄ Ａ．（１９９８）細胞質ゾルまたは分泌型ホスホリパーゼＡ２の選択的インヒビターは、転写因子核因子−カッパＢのＴＮＦ誘導型活性化およびＩＣＡＭ−１の発現を遮断する。（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｏｒ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｂｌｏｃｋ ＴＮＦ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａ Ｂ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＣＡＭ−１）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：３４２１−３４３０．
Ｔｉｌｌｅｙ ＳＬ，Ｃｏｆｆｍａｎ ＴＭ，Ｋｏｌｌｅｒ ＢＨ．（２００１）．混合メッセージ：プロスタグランジンおよびトロンボキサンによる炎症および免疫応答のモジュレーション（Ｍｉｘｅｄ ｍｅｓｓａｇｅｓ：ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅｓ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０８：１５−２３．
Ｔｏｄｏｒｏｖ Ｐ，Ｃａｒｉｕｋ Ｐ，ＭｃＤｅｖｉｔｔ Ｔ，Ｃｏｌｅｓ
Ｂ，Ｆｅａｒｏｎ Ｋ，Ｔｉｓｄａｌｅ Ｍ．（１９９６）癌の悪液質因子の特性決定（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃａｎｃｅｒ ｃａｃｈｅｃｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ）．Ｎａｔｕｒｅ ３７９：７３９−４２．
Ｔｒｉｇｇｉａｎｉ Ｍ，Ｇｒａｎａｔａ Ｆ，Ｂａｌｅｓｔｒｉｅｒｉ Ｂ，Ｐｅｔｒａｒｏｌｉ Ａ，Ｓｃａｌｉａ Ｇ，Ｄｅｌ Ｖｅｃｃｈｉｏ Ｌ，Ｍａｒｏｎｅ Ｇ．（２００３）分泌型ホスホリパーゼＡ_２は、ヒト好酸球における選択的機能を活性化する（Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅｓ Ａ_２ ａｃｔｉｖａｔｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：３２７９−３２８８．
Ｖａｌｅｎｔｉｎ Ｅ，Ｌａｍｂｅａｕ Ｇ．（２０００）分泌型ホスホリパーゼＡ（２）およびそれらの受容体および結合タンパク質の分子多様性の増加（Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅｓ Ａ（２）ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １４８８：５９−７０．
Ｖｉｓｈｗａｎａｔｈ ＢＳ，Ｆｒｅｙ ＦＪ，Ｂｒａｄｂｕｒｙ ＭＪ，Ｄａｌｌｍａｎ ＭＦ，Ｆｒｅｙ ＢＭ．（１９９３）グルココルチコイド欠損はラットにおいてホスホリパーゼＡ２活性を上げる（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎ ｒａｔｓ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ９２：１９７４−１９８０．
Ｙａｇａｍｉ Ｔ，Ｕｅｄａ Ｋ，Ａｓａｋｕｒａ Ｋ，Ｓａｋａｅｄａ Ｔ，Ｈａｔａ Ｓ，Ｋｕｒｏｄａ Ｔ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｇ，Ｉｔｏｈ Ｎ，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｙ，Ｈｏｒｉ Ｙ．（２００３）ブタ膵臓グループＩＢ分泌型ホスホリパーゼＡ２は、Ｌ−型の電圧感受性Ｃａ２＋チャンネルを介してＣａ２＋の流入を強化する（Ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｇｒｏｕｐ ＩＢ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｌ−ｔｙｐｅ ｖｏｌｔａｇｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ）．Ｂｒ Ｒｅｓ ９６０：７１−８０．
Ｙａｇａｍｉ Ｔ，Ｕｅｄａ Ｋ，Ａｓａｋｕｒａ Ｋ，Ｈａｔａ Ｓ，Ｋｕｒｏｄａ Ｔ，Ｓａｋａｅｄａ Ｔ，Ｔａｋａｓｕ Ｎ，Ｔａｎａｋａ Ｋ，Ｇｅｍｂａ
Ｔ，Ｈｏｒｉ Ｙ．（２００２ａ）ヒトのグループＩＩＡ分泌型ホスホリパーゼＡ２は、アポトーシスによりニューロン細胞を誘導する（Ｈｕｍａｎ ｇｒｏｕｐ ＩＩＡ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｉｎｄｕｃｅｓ ｎｅｕｒｏｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｂｙ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）．Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ６１：１１４−１２６．
Ｙａｇａｍｉ Ｔ，Ｕｅｄａ Ｋ，Ａｓａｋｕｒａ Ｋ，Ｈａｔａ Ｓ，Ｋｕｒｏｄａ Ｔ，Ｓａｋａｅｄａ Ｔ，Ｋｉｓｈｉｎｏ Ｊ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｇ，Ｉｔｏｈ Ｎ，Ｈｏｒｉ Ｙ．（２００２ｂ）グループＩＢ分泌型ホスホリパーゼＡ（２）は、その結合部位の関与が可能な培養した皮質ニューロンにおける細胞死を誘導する（Ｇｒｏｕｐ ＩＢ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ（２）ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｔｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．９４９：１９７−２０１．
Ｙｏｓｈｉｄａ Ｓ，Ｉｋｅｄａ Ｍ，Ｂｕｓｔｏ Ｒ，Ｓａｎｔｉｓｏ Ｍ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ Ｅ，Ｇｉｎｓｂｅｒｇ ＭＤ．（１９８６）可逆性虚血における大脳ホスホイノシチジン、トリアシルグリセロールおよびエネルギー代謝：遊離脂肪酸の起源および運命（Ｃｅｒｅｂｒａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ，ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ａｎｄ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｉｓｃｈｅｍｉａ：ｏｒｉｇｉｎ ａｎｄ ｆａｔｅ ｏｆ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ）．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ４７：７４４−７５７．
Ｙｏｓｈｉｚａｗａ Ｎ，Ｏｓｈｉｍａ Ｓ，Ｓａｇｅｌ Ｉ，Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｊ，Ｔｒｅｓｅｒ Ｇ （１９９２）急性の連鎖球菌糸後の球体腎炎の病原における連鎖球菌抗原の役割（Ｒｏｌｅ ｏｆ ａ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｐｏｓｔｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ａ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：３１１０−６３１１６．
Ｙｏｕｎｇ Ｗ，脊髄挫傷モデル（Ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｃｏｎｔｕｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌｓ）．Ｐｒｏｇ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２００２；１３７：２３１−５５．

前述の要約ならびに本発明の好適な態様の詳細な説明は、添付する図面と一緒に読んだ時、より良く理解されるだろう。本発明を具体的に説明する目的で、現在好適な態様を図面で示す。しかし本発明は示す厳密な配列および手段に限定されない。図面では：
炎症性メディエーターの生産に関与するＰＬＡ２−経路の図表である。炎症および酸化的ストレスは膜のリン脂質からアラキドン酸（ＡＡ）の、および幾つかのクラスのＡＡ誘導化炎症性メディエーターの上昇した生産をもたらす（下の図）。これらの条件下で、ｓＰＬＡ２はＡＡ生産に直接的および関節的に（ｃＰＬＡ２を介して）、したがってこれらメディエーターを生産するＡＡ経路のリポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）およびシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）分枝の両方に貢献する。またＳＰＬＡ２は、ｓＰＬＡ２“Ｍ”受容体を含む幾つかの細胞性の経路を介して前炎症性サイトカインの上昇したレベルにも貢献する。ＣＨＥＣ−９（配列番号１）は、（例えば）下流のシクロオキシゲナーゼに誘導されるメディエーターに限定されるＣＯＸインヒビターに比べて、多くのこれら経路を「上流」で阻害することができる。代表的なＡＡ誘導体および関連するサイトカインのレベルは、ＭＳに関するＣＨＥＣ−９治療の提案されたモデルで血清および脊髄で測定される。 健康な５７歳の男性の全血から調製した８％血漿サンプルのｓＰＬＡ２活性を具体的に説明する。全血は４００ｎＭのＣＨＥＣ−９（最終濃度）と４°で２時間インキュベーションし、次いでサンプルをｓＰＬＡ２特異的基質を加水分解するために使用して、４１５ｎｍの吸収で検出される生成物を得た。反応はＣＨＥＣ−９処理で阻害された。３つの酵素反応を示し、そしてデータは健康な４名のすべての有志からの代表である。これらの曲線は反応の速度（吸収／時間またはミリＯＤ／分）、および幾つかの他の反応パラメーターと一緒に、動力学的リーダーを援助するソフトウェアにより計算される。アッセイの基質、バッファーおよび他の詳細は、本明細書のいたるところに記載されている。 どのように全ヒト血液が健康な４２歳の女性有志から集められ、そして賦形剤（対照）、ＣＨＥＣ−９（０．４μＭ）、続いて賦形剤（ＣＨＥＣ−９）、ＬＹ３１１２７（５．０μＭ）続いて賦形剤（ＬＹ３１１２７）またはＣＨＥＣ−９続いてＬＹ３１１２７（ＬＹ３１１２７＋ＣＨＥＣ−９）と４゜で２回の９０分間のインキュベーションされたかを具体的に説明する。阻害は対照速度［（１−Ｖ_ｉｎｈ／Ｖ_ｃｏｎ）ｘ１００］と比較することにより計算した。データは条件あたり４つの酵素反応に関する平均値を表す。これらの濃度でＣＨＥＣ−９およびＬＹ３１１２７は、これらの実験条件下で付加的でないインヒビターと等しく効果的であるようである。 ＣＨＥＣ−９または賦形剤が皮下から１２匹のラット（０．４ｍｇ／ｋｇ）に送達されたことを具体的に説明する。大脳皮質膜画分はプロテアーゼインヒビターを含まないバッファー中１Ｍ ＮａＣｌで使用前に洗浄したことを除いて、前の実験のように調製した（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ｅｔ ａｌ．２０００）。各ラットから７．０ｍｍ^３のサンプルをＤＴＮＢ（比色試薬）および５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ＝７．４）、０．１％ｔｒｉｔｏｎＸ−１００中で３７゜にて２０分間平衡化し、そして２ｍＭ Ｃａ^２＋の存在下でラボラトリーメソッドに記載された手順にしたがい反応させた。平均速度は各ラットについて３サンプルを測定した。阻害パーセントは図３のように算出し、賦形剤およびＣＨＥＣ−９を注射したラット（各条件についてｎ＝６ラット）を比較した。Ｐ値を示す。 図５Ａ〜５ｃから構成され、ＣＨＥＣ−９がインビトロでＬＰＳ刺激型のミクログリア「脱分枝化」を阻害することを具体的に説明する。精製されたミクログリア（ＥＤ−１染色により９５％＋）は、２５ｎＭのＬＰＳで処理し、そして２０分後、ＣＨＥＣ−９を１０ｐＭの最終濃度で加えた。培養は４８時間後に止めた。ペプチド処置はアメーバー状細胞の割合いに有意な減少を生じる（例を矢印により印を付ける）。賦形剤−６４±３．０％（ｎ＝８）対ＣＨＥＣ−９−３７±３．８％（ｎ＝８）ｐ＝３Ｘ１０^−４、一方、２つの条件におけるミクログリアの総数は類似する（賦形剤に対して＝１００±６％、ＣＨＥＣ−９＝９９．４±６％）。細胞は腫瘍壊死因子アルファに対する抗体で染色した棒＝１００μｍ。中央パネルは類似の実験からの蛍光画像であり、ほとんどのＴＮＦα＋細胞（緑）もＤＥ−１で染色することを示す（赤）。重複面積＝黄色。 図６Ａ〜６Ｂから構成され、ＣＨＥＣ−９が精製した皮質ニューロンの生存を上昇することを具体的に説明する。顕微鏡写真は１日齢ラットに由来するインビトロで４日後の新皮質ニューロンである。皮質ニューロンはＮ２培地中で低密度（１Ｘ１０^４細胞／ｃｍ^２）にてポリ−Ｌ−リシン上で２４時間、分化させた。２日目に、培地を交換し、そして細胞をＣＨＥＣ−９またはＤＭＥＭ賦形剤で処理した。ほぼ完全に星状細胞が存在しない状態での低密度の播種は、培地交換と一緒に実質的な量の酸化的ストレスおよび培養における細胞死を生じる。ＣＨＥＣ−９処置は生存するニューロン数を７倍以上上昇させる（ＣＨＥＣ−９−７７２±１８６％ 対 賦形剤−１００±３２％）。細胞はニューロンのチューブリンに対するＴＵＪ１抗体で染色される（アイソタイプＩＩＩ）。棒＝１００μｍ。 ＤＡラットの左右対称の足の平にモルモットのミエリン塩基性タンパク質（ＣＦＡ中の全１００μｇ）を免疫感作した後、尿のｓＰＬＡ２活性における変化のタイムコースを具体的に説明する。各ラットからのシグナルボイドは、代謝ケージ中で１日および２日、そして２日以降は１日おきに午前９時から午後２時の間に集めた。活性における有意な上昇は、ＰＩから４〜６日後に見られるが、続いて下降する。ＣＨＥＣ−９での処置は、ＰＩ５〜１５日に毎日、午後２〜５時の間であった。ＣＨＥＣ−９および対照−処置ラットにおけるｓＰＬＡ２曲線のパターンは、処置前および後で幾分類似している。しかし処置から２日後の平均活性は、ＣＨＥＣ−９により有意に弱められたが（ＰＩ４および６日 対 ＰＩ８および１０日、ｐ＝０．００７、^＊＊）、賦形剤処置後はなかった（同じ期間に関してｐ＝０．５２８）。この期間内のグループ間の比較は、個々の賦形剤処置ラットに関する値の変動性から明からに有意ではなかった。右：ウエスタンブロットは、免疫感作前および免疫感作後に集めたプールした尿サンプルから調製した。尿サンプルは２０時間、４゜で２回の１０００倍過剰２０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣＬの交換に対して透析され、２００μｇのタンパク質が、１６０ｋＤのニューロフィラメントタンパク質に対するモノクローナル抗体を使用したＳＤＳゲル（還元型）のイムノブロッティングに乗せられた。ブロットをはがし、そして添加対照としてアルブミンと反応させた。ＮＦ Ａｂは他のＮＦタンパク質と、または筋肉中の中間フィラメントとは交差反応せず、そしてサンプルは２次抗体とは反応性ではなかった。ブロットは、賦形剤処理ラットにおいて最も顕著な３０ｋＤ ＮＦ（Ｍ）断片の免疫感作後の増加を示唆した。類似の断片は他の神経病理学的状態で見いだされ、そして内因性のトリプシン様酵素に依存的となることが示唆された（Ｆａｓａｎｉ，ｅｔ ａｌ．，２００４）。我々はＮＦ断片（または異なるサイズ）の尿中レベルも他の神経変性モデルで過大となることを見いだすので、賦形剤処理ラットにおける過剰は、増加した軸索破壊（中枢または末梢のいずれか）の結果であり得る。正常な動物におけるこのそれらの外観は、正常な末梢軸索の代謝回転を表すことができる（Ｇｏｒｄｏｎ，ｅｔ ａｌ．による総説、２００４）。しかしこれら断片の起源は現在知られていない。 左右対称の足の平にミエリン塩基性タンパク質／ＣＦＡを免疫感作した後のＣＨＥＣ−９および賦形剤処置マウスにおける足の浮腫を具体的に説明する。足の厚さは免疫感作から１０日後に測定した。ＣＨＥＣ−９処置は５日早く始めた。測定はちょうど吻（ｒｏｓｔｒａｌ）から踵（ｈｅｅｌ）の足底（ｐｌａｎｔｅｒ）から最上面（ｓｕｐｅｒｉｏｒ）で測定した。２つのグループ間の差異は有意であり、いずれのラット（ｎ＝５、各条件）または足（ｎ＝１０）も観察の単位として指し示す（それぞれｐ＝０．００８、０．００２）。 モルモットのミエリン塩基性タンパク質（ＣＦＡ中）で免疫感作したＤＡラットの体重を示す。ラットは免疫感作前、普通に体重が増え、その後、予想された急激な（ｐｒｅｃｉｐｉｔｏｕｓ）低下があった。ＣＨＥＣ−９／賦形剤処置は免疫感作から５日後に始まった。ＣＨＥＣ−９処置ラットは、賦形剤処置ラットに比べて有意に高い速度で体重が増加し、この期間中に後者はＥＡＥの症状を発症した。 モルモットのミエリン塩基性タンパク質／ＣＦＡで免疫感作したＤＡラットのＥＡＥ症状の発症を示す。ラットはＣＨＥＣ−９または賦形剤で、ＰＩ５日から初めて１０日間処置した。それらは毎日、０〜４のＥＡＥスケールについて、実験の範疇を知らない２名の別個の調査者によりスコアを付けられた（方法を参照にされたい）。すべての賦形剤処置ラットは症状を発症し、３匹は後脚が含まれた。ＣＨＥＣ−９処置ラットのうちの１匹は、ＰＩ１７日に弱い尾（ｗｅａｋ ｔａｉｌ）を発症した。 図１１Ａおよび１１Ｂから構成され、ＣＨＥＣ−９（ラット＃４１１）または賦形剤（ラット＃４１０）で処置し、そして免疫感作から１８日後に屠殺した２匹のＥＡＥラットの脊髄中の脊髄円錐（ＣＭ）の領域を示す顕微鏡写真を表す。２つの側矢状平面切片は、ほぼ均等な中央−側面を表す。徹底的な脊髄および細胞の萎縮（および／または細胞の浸潤）がラット４１０に、ならびに大きな面積のミエリン変性があった（尺度棒が等しいことに留意されたい）。臨床的ＥＡＥスコアは、これら２匹のラットに関して示され、そして組織学と一致する。Ｎｉｓｓｌ−ミエリン染色（シアニンＲに続いてクレシルバイオレット）。 図１２Ａおよび１２Ｂから構成され、脊髄挫傷後のｓＰＬＡ２活性を示す。この損傷は、他に処置されなかった５匹のラットを対象として、２５ｍｍの重さを落とすように設定したＭＡＳＣＩＳ衝撃デバイスで作成した（Ｙｏｕｎｇ，２００２を参照にされたい）。尿サンプルは示した時間に集めた（０＝手術前）。酵素活性は全タンパク質に対して表す。ウエスタンブロットは図７に記載のように調製した。サンプル＝２００μｇ（ブロットは添加対照としてアルブミンＡｂを用いた反応についてはがした）。最大のｓＰＬＡ２活性および最大の排出されたＮＦが６（１匹のラット）および２４（４匹のラット）時間のいずれかで見いだされ、そして２匹が相関した：短い生存時間は調査されなかった。 図１３Ａおよび１３Ｊから構成され、脊髄挫傷のＣＨＥＣ−９処置を示す。脊髄の挫傷は、２５ｍｍの重さを落とすように設定したＭＡＳＣＩＳ衝撃デバイスを用いた。ペプチドは、損傷から２０分後に０．４ｍｇ／ｋｇ ｓｕｂｃｕ．で送達し、そしてラットは１２日後に屠殺した。挫傷の中心での全索直径（ｗｈｏｌｅ ｃｏｒｄ ｄｉａｍｅｔｅｒ）の測定は、ＣＨＥＣ−９処置後の有意な広がりを明らかにした。ＣＨＥＣ−９処置ラットの５匹が、すべての５匹の賦形剤処置ラットの反対上に示される。すべてのラットはブラインド測定および統計的分析に使用された。脊髄の組織学的処理は進行中である。 図１４Ａおよび１４Ｂから構成され、Ｇ９３Ａ／ＳＯＤ１変異体マウスの尿および血清中の上昇したｓＰＬＡ２活性を具体的に説明する。５０μｌの尿を集め、そして１２匹の症状があるＧ９３／ＳＯＤ１変異体マウスおよび１２匹の同腹子対照のサンプル。８０〜８５および１２９〜１３４日の２つの症状の段階で集め、そしてマウスの性別に従いプールした。両性別からの全血を後年（ｌａｔｅｒ ａｇｅ）で集め、そして血清サンプルを遠心により調製した。尿は、２回交換した１０００倍過剰の２０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣＬに対して透析し、総タンパク質を測定し、そして分泌型ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２）活性を各プールからの３〜４サンプルで測定した。結果は高度に有意であった（多くの比較のために補正した、任意の比較に関してｔｇおよび対照マウスから得た値の間に重複はなかった）。またウエスタンブロットは後期のサンプルから１２．５μｇの全タンパク質をＳＤＳゲルに乗せた後、他のＮＦタンパク質と最小の交差反応性を有する媒体のニューロフィラメントタンパク質に対するポリクローナルウサギ抗体で免疫染色した。主要な７５ｋＤが尿中に現れ、これはＮＦ（Ｍ）のカルパイン依存的タンパク質溶解断片を表す可能性がある（Ｓｔｙｓ ａｎｄ Ｊｉａｎｇ，２００２）。ゲル上の添加対照（示さず）および他の反応性バンドは、測定し、そして添加した全タンパク質濃度が均等であることを示す。尿のニューロフィラメントの起源は未知であるが、対照マウスのＰＮＳにおける軸索の代謝回転に由来する可能性がある（図７を参照）。症状がある変異体マウスの過剰は、変性した脊髄ニューロンおよび軸索に由来するさらなるタンパク質を表すことができる（ＣＮＳおよびＰＮＳの両方）。ＡＮＳ患者の疾患したニューロンにおけるニューロフィラメントの蓄積は、周知である（Ｒａｏ ａｎｄ Ｎｉｘｏｎ，２００３により総説されている）。ＳＰＬＡ２活性およびＮＦレベルは、全尿タンパク質とは無関係である（腎臓機能の１つの予測）。さらなる対照、例えばクレアチンキナーゼ測定、ＰＮＳおよびＣＮＳ特異的マーカーの適用は、進行中である。 尿のｓＰＬＡ２活性を表すグラフであり、ここで尿サンプルは多発性硬化症の患者および年齢／性別が合った健康な対照（対照−１）から午前半ばに集められた。尿は滅菌濾過され、そして３連の２５μｌサンプルを種々の濃度のチオグリセロホスホコリン基質とＣａ２＋の存在下で反応させた。この基質はｓＰＬＡ２活性に特異的である。反応はこれらの条件下で典型的なミハエル−メンテンの酵素動力学を示した。患者は静止期（再発しない）であり、最後の再発は２００４年の１０月に起こった。患者はいかなる免疫調節療法にも関与せず、そして患者および対照の有志は精力的な身体活動を拘束されず、すなわち最後の２４時間にＮＳＡＩＤが取られた。 炎症性カスケード（すなわち症状がある組織傷害）に対するベースライン（すなわ炎症なし）から様々な段階で、全身性ｓＰＬＡ２活性と分泌されたニューロフィラメントとの間の関係を具体的に説明する。 図１７Ａ〜１７Ｃから構成され、激しい運動後にモニタリングした種々の時間で、尿中のｓＰＬＡ２活性およびニューロフィラメントタンパク質を示すゲルのグラフおよび絵である。 図１８Ａ〜１８Ｃから構成され、ペプチドＣＨＥＡＳＡＡＱＣ（ＣＨＥＣ−９）（０．４ｍｇ／ｋｇ）の単回皮下注射が大脳皮質損傷後に、炎症およびニューロンの死を抑制することを証明する対照処理（上の絵）およびＣＨＥＣ−９処置（下の絵）を表す写真およびグラフを示す（ｓ．（４ｄ生存、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２００４から）。 図１９Ａおよび１９Ｂから構成され、ＣＨＥＣ−９およびリリーのｓＰＬＡ２ＩＩインヒビター（ＬＹ３１１７２７）が付加的効果無しでヒト血漿ｓＰＬＡ２活性を６０〜７０％まで減少することを証明するグラフである。両インヒビターは同じＳＰＬＡ２酵素プールを標的とし得る。 図２０Ａおよび２０Ｂから構成され、ＡＬＳモデルを対象とした進行性疾患において、ｓＰＬＡ２活性を証明するゲルのグラフおよびおよび絵である。進行中の増加は、症状があるＧ９３／ＳＯＤ１トランスジェニックマウスの血清または尿に見いだされる。グラフは尿のｓＰＬＡ２活性を示す。同じ尿サンプルは、ニューロン／軸索破壊に影響し得るＮＦ（Ｍ）の断片に大きな増加がある。 図２１Ａおよび２１Ｂから構成され、脊髄挫傷における急性ｓＰＬＡ２活性をモニタリングするゲルのグラフおよび絵を表す。グラフはラットにおける脊髄挫傷後の４点でｓＰＬＡ２活性を表し、尿サンプル中のＮＦ断片の増加に対応する。尿は低濃度の妨害タンパク質により、ニューロン特異的タンパク質をモニタリングするために血清よりも安定である。 図２２Ａおよび２２Ｂから構成され、ＭＳ患者および対照における尿中ＰＬＡ２酵素活性を表す一連のグラフである。図２２Ａは異なる基質濃度［Ｓ］でＰＬＡ２酵素反応の速度を具体的に説明し、年齢／性別が合った対照と比較して３７歳の安定なＭＳ患者からの２５μｌの尿サンプルについて示されている。典型的な双曲線が、患者および対照の両方からの尿サンプルについて得られ、すなわち反応速度は高い［Ｓ］でピークに達し、そして平らになる。故に速度は出発する基質濃度で尿中の活性酵素の濃度に比例する（ミハエル−メンテンの式、Ｖｍａｘ＝Ｋ_２［Ｅ］）。各濃度について３連の反応の平均およびｓ．ｅ．ｍ．を示す。挿入：活発なＭＳの３４歳の患者の２００μｇの全尿タンパク質のウエスタンブロット。１４ｋＤのｓＰＬＡ２免疫反応性バンドが、未知の同定されていない６８ｋＤの免疫反応性バンドと一緒に現れた（矢印）。図２２Ｂは本明細書のいたるところに記載するように、対照と比較して活発または安定な疾患のＭＳ患者における酵素のレベルを具体的に説明する。すべての測定は６００μＭの基質を使用して作成され、そして平均対照値に対して標準化された。安定および活発なＭＳ患者において、対照に比べてそれぞれ有意な４および６倍のＰＬＡ２活性の増加があった（対照との比較に関してｐ＝０．０４９^＊；０．００１９^＊＊）。 図２３Ａおよび２３Ｂから構成され、ｓＰＬＡ２インヒビターで処置した実験的な自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）におけるＰＬＡ２活性および臨床的疾患を表す一連のグラフである。図２３Ａは、免疫感作前の値に対して標準化されたＰＬＡ２酵素活性が、ＣＨＥＣ−９および賦形剤処置ラットの両方で８日まで安定に増加したことを表す。活性の有意な減少は、ペプチドと賦形剤の値を直接比較することにより（それぞれｐ＝０．０４９、０．０２６）、あるいは８日と１２日との間の谷の比較に対するピークのいずれかにより、ペプチドで処置した群における免疫感作後１０日および１２日に観察され、ここでペプチド処置でのｓＰＬＡ２レベルの減少は有意であったが（ｐ＝１０^−３）、賦形剤処置ラットでは有意ではなかった（ｐ＝．４９１）。図２３Ｂは１０日から先の臨床的スコアの平均も、ペプチド処置ラットで有意に低かったことを表す（ｐ＜１０^−４）。 ＣＨＥＣ−９の全身的送達後、ラットの血漿サンプル中のストレスが誘導するｓＰＬＡ２酵素の弱化を表すグラフである。活性酵素の平均レベルにおける一過性の上昇は、固定化ストレスにかけられたラットにおける賦形剤注射から６０分後に見いだされた。皮下ＣＨＥＣ−９（０．４ｍｇ／ｋｇ）は、この上昇を３０および６０分で阻害する。各データ点は各２種類の処置群における４匹の各ラットからの２〜３の測定値の平均±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。この値は個々のラットに関する注射前のサンプルのパーセントとして表す。（^＊）は３０および６０分で有意な差異を表す（マンホイットニー検定によりｐ＜０．０５）。

Claims (21)

1. ａ．体液からサンプルを得る工程
   ｂ．該体液中に、少なくとも１つの炎症性酵素の活性の上昇を検出する工程；および
   ｃ．少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出する工程、
   を含んでなる哺乳動物の炎症の検出方法。
2. 神経系特異的タンパク質が抗体をベースとするアッセイを使用して検出される請求項１に記載の方法。
3. ａ．体液からサンプルを得る工程；
   ｂ．該体液中に、炎症性酵素の活性の上昇を検出する工程；および
   ｃ．少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出する工程、
   を含んでなるニューロンの変性の検出方法。
4. ａ．体液からサンプルを得る工程；
   ｂ．該体液中に、炎症性酵素の活性の上昇を検出する工程；および
   ｃ．少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出する工程、
   を含んでなる軸索の変性の検出方法。
5. 炎症性酵素がホスホリパーゼＡ２酵素である請求項１に記載の方法。
6. 体液が尿を含んでなる請求項１に記載の方法。
7. ａ．少なくとも１つの炎症性酵素の活性を検出するための第１成分；
   ｂ．サンプル中の少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出
   するための第２成分；
   ｃ．アプリケーター；および
   ｄ．それらの使用のための使用説明書、
   を含んでなる哺乳動物の炎症を検出するためのキット。
8. 第１成分が、少なくとも２つの別個の試薬を含んでなり、さらに各試薬が別個の炎症性酵素を検出する、請求項７に記載のキット。
9. 第１成分が、ホスホリパーゼＡ２活性を検出する試薬を含んでなる請求項７に記載のキット。
10. 第１成分が、ホスホリパーゼＡ２タンパク質を検出する試薬を含んでなる請求項７に記載のキット。
11. 第２成分が少なくとも２つの別個の試薬を含んでなり、さらに各試薬が別個の神経系特異的タンパク質またはその断片を検出する、請求項７に記載のキット。
12. ａ．少なくとも１つの炎症性酵素の活性を検出するための第１成分；
    ｂ．サンプル中の少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出
    するための第２成分；
    ｃ．アプリケーター；および
    ｄ．それらの使用のための使用説明書、
    を含んでなる哺乳動物のニューロンの変性を検出するためのキット。
13. ａ．少なくとも１つの炎症性酵素の活性を検出するための第１成分；
    ｂ．サンプル中の少なくとも１つの神経系特異的タンパク質の少なくとも一断片を検出するための第２成分；
    ｃ．アプリケーター；および
    ｄ．それらの使用のための使用説明書、
    を含んでなる哺乳動物の軸索の変性を検出するためのキット。
14. 治療に有効な量のポリペプチドを哺乳動物に投与することを含んでなる、ＭＳを有する哺乳動物の処置方法であって、該ポリペプチドがＰＬＡ２の活性を阻害する上記方法。
15. ポリペプチドがＣＨＥＣ−９である請求項１４に記載の方法。
16. ポリペプチドが、非経口、経口、筋肉内および全身的からなる群から選択される少なくとも１つの経路により投与される、請求項１４に記載の方法。
17. 哺乳動物のＭＳの進行のモニタリング方法であって：
    ａ．該哺乳動物から得た第１の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第１測定値を取る工程；
    ｂ．該哺乳動物から得た第２の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第２測定値を取る工程であ
    って、ここで該第２サンプルが該第１サンプルよりも後の時期に得られる、工程；お
    よび
    ｃ．該第１および第２の測定値を比較する工程、
    を含んでなり、該第１測定値よりも大きな第２測定値が、該哺乳動物中でＭＳが進行していることの指標である上記方法。
18. 炎症状態に罹患している哺乳動物の処置方法であって、治療に有効な量のポリペプチドを該哺乳動物に投与することを含んでなり、該ポリペプチドがＰＬＡ２の活性を阻害する、上記方法。
19. ポリペプチドがＣＨＥＣ−９である請求項１８に記載の方法。
20. ポリペプチドが、非経口、経口、筋肉内および全身的からなる群から選択される少なくとも１つの経路により投与される、請求項１８に記載の方法。
21. 哺乳動物の炎症状態の進行のモニタリング方法であって：
    ａ．該哺乳動物から得た第１の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第１測定値を取る工程；
    ｂ．該哺乳動物から得た第２の尿サンプル中にＰＬＡ２活性の第２測定値を取る工程であ
    って、ここで該第２サンプルは該第１サンプルよりも後の時期に得られる、工程；お
    よび
    ｃ．該第１および第２の測定値を比較する工程、
    含んでなり、該第１測定値よりも大きな第２測定値は、該哺乳動物中で炎症状態が進行している表示である上記方法。

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