JP6663396B2 - Ｐｍｌの危険性を査定する方法 - Google Patents

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年５月３１日に出願された米国仮出願第６１／４９１，８１０号、２０１１年７月１５日に出願された米国仮出願第６１／５０８，５８４号、２０１１年１０月２１日に出願された米国仮出願第６１／５５０，２５７号、および２０１２年４月２０日に出願された米国仮出願第６１／６３６，５８８号の利益を主張する。先行出願は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
発明の分野
本発明は、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を発症する患者の危険性を査定する方法に関する。
抗ＶＬＡ−４（最晩期抗原４）抗体治療薬であるナタリズマブは、多発性硬化症（ＭＳ）および中程度から重度のクローン病の再発型を治療するために適応される。ナタリズマブ治療はしかしながら、ＪＣウイルス（ＪＣＶ）によって引き起こされる脳の日和見感染症である、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の増加した危険性を伴う。ＰＭＬは、主に、免疫不全の個人において、およびナタリズマブを含む、ある特定の免疫調節療法を受容している患者において生じる。ＰＭＬは、中枢神経系におけるオリゴデンドロサイトを感染させ得る、潜在性原型ＪＣＶの神経栄養型への再活性化および突然変異をもたらす、宿主因子とウイルス因子との間の複合の相互作用の結果であると仮定される。
本発明は、とりわけ、生体液、例えば、血清または血漿中のＪＣＶ抗体の存在を検出するための、最適化され分析的に検証された高感度アッセイ、ならびに患者を評価するおよび／または治療する方法を含む、種々の他の方法に関する。
したがって、一態様では、本発明は、試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価する方法を特長とする、本方法は、次のステップのうちの１つ以上または全てを含む：
（ａ）試料の第１のアリコートおよびＨＰＶＬＰ（高度精製ウイルス様粒子、例えば、高度精製ＶＰ１粒子）が上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質を含む、第１の反応混合物を形成するステップ、
（ｂ）ＨＰＶＬＰが上に配置される該基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質に結合した抗ＪＣＶ抗体のレベルを、該基質に結合した抗ＪＣＶ抗体に結合した、例えば、標識された検出試薬、例えば、酵素で標識された抗ＩｇＧ抗体を検出することによって、検出し、それによって試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価するステップ（本明細書に考察されるように、本方法は、試料に、抗ＪＣＶ抗体のレベルを示す値を分類すること、または割り当てることを含むことができ、その値は、本明細書で時に指標値と称される。その値を使用して、試料または患者を評価することができ、実施形態において、本方法の更なるステップ、例えば、下のステップ（ｃ）に進むかどうかを決定することができる）、ならびに
（ｃ）試料の第２のアリコートおよび溶液相ＨＰＶＬＰを含有する、第２の反応混合物を形成し、該第２の反応混合物中の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベルを、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質と結合できる抗ＪＣＶ抗体を検出すること等によって、検出し（本明細書に考察されるように、本方法は、試料に、可溶相ＨＰＶＬＰでのインキュベーションが第２の反応混合物の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベルを低減する度合いを示す値を分類すること、または割り当てることを含むことができ、その値は、本明細書で時に阻害、阻害％等と称される。この値を使用して、試料または患者を評価することができる）、
それによって試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価するステップ。
ある実施形態では、本方法は、次のことを更に含む：
（ｄ）試料中の抗ＪＣＶ抗体がＨＰＶＬＰまたは他の抗原によって結合していない条件下で、第３のアリコートを含有する第３の反応混合物を形成し、第３の反応混合物中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質と結合できる抗ＪＣＶ抗体を検出すること等によって、検出すること。阻害または阻害％は、可溶相ＨＰＶＬＰでのインキュベーション（ステップ（ｃ））が、ステップ（ｄ）における結果と比較して、結合していない抗ＪＣＶ抗体の量を低減する度合いの関数として算出することができる。
ある実施形態では、本方法は、ステップ（ａ）および（ｂ）と、任意に結果を、別の実体、例えば、医療提供者に提供することとを含む。
ある実施形態では、本方法は、ステップ（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）と、任意に結果を、別の実体、例えば、医療提供者に提供することとを含む。
ある実施形態では、本方法は、ステップ（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）と、任意に結果を、別の実体、例えば、医療提供者に提供することとを含む。
ある実施形態では、本方法は、ステップ（ｃ）と、任意に結果を、別の実体、例えば、医療提供者に提供することとを含む。
ある実施形態では、本方法は、ステップ（ｃ）および（ｄ）と、任意に結果を、別の実体、例えば、医療提供者に提供することとを含む。
本明細書に記載される方法は、試薬の最適化されたレベルおよび量を使用して、改善された性能を可能にする。故に、ある実施形態では、第１の反応混合物について、２０ｎｇｓ〜６０ｎｇｓ、３０ｎｇｓ〜５０ｎｇｓ、２０ｎｇｓ〜４０ｎｇｓ、３５ｎｇｓ〜４５ｎｇｓのＨＰＶＬＰが、該基質上に配置される。ある実施形態では、約２０ｎｇｓ、３０ｎｇｓ、４０ｎｇｓ、５０ｎｇｓ、または６０ｎｇｓのＨＰＶＬＰが、該基質上に配置される。典型的に、マルチ基質デバイス、例えば、マルチウェルプレート、例えば、ポリスチレンマルチウェルプレートは、複数の基質の各々の上に本明細書に指定されるＨＰＶＬＰの量を有するであろう。典型的な基質は、マルチウェルプレート上のウェルの内部である。
本明細書に記載される方法は、試薬および試料の最適化された比率を使用して、改善された性能を可能にする。ある実施形態では、第１の反応物中のμＬの試料（これは、希釈されていない試料、または希釈物中の試料の量を指し、したがって１００μＬの１μＬ：１００μＬ希釈は、１μＬの試料であろう）、例えば、血清または血漿と、基質上に配置されるｎｇｓのＨＰＶＬＰとの比率は、１：１００〜１：２０、１：８０〜１：３０、１：６０〜１：２０、１：２０〜１：６０、１：３０〜１：５０である。ある実施形態では、μＬの試料、例えば、血清または血漿と、基質上に配置されるｎｇｓのＨＰＶＬＰとの比率は、約：１：３０、１：４０、または１：５０である。ある実施形態では、μＬの試料、例えば、血清または血漿と、基質上に配置されるｎｇｓのＨＰＶＬＰとの比率は、約（０．０８〜１．２）：３０、（０．０８〜１．２）：４０、または（０．０８〜１．２）：５０である。
一実施形態では、第１の反応物のための試料、例えば、血清は、約１００倍等、緩衝液中で、例えば、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質との接触前に、希釈される。一実施形態では、検出は、酵素で標識された抗体、例えば、ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）で標識されたＩｇＧ等の、酵素で標識されたＩｇＧ、を用いる。別の実施形態では、検出試薬、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧは、少なくとも０．０１μｇ／ｍＬ、０．０２μｇ／ｍＬ、０．０３μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬ、０．０５μｇ／ｍＬ、０．０６μｇ／ｍＬ、または０．０８μｇ／ｍＬの濃度で添加される。一実施形態では、検出試薬は、基質に結合した抗体に対して１０倍〜１００倍過剰で提供される。ある実施形態では、検出試薬は、基質に結合した抗体と比較して１０倍、２０倍、５０倍、７５倍、または１００倍以上）過剰をもたらす量で提供される。
ある実施形態では、（ｃ）における溶液相ＨＰＶＬＰは、第２の反応混合物または試料中の抗ＪＣＶ抗体に対して２倍〜１００倍過剰粒子で存在する。ある実施形態では、第２の反応混合物または試料中の抗ＪＣＶ抗体に対して過剰の粒子は、２倍以上、４倍以上、５倍以上、１０倍以上、１５倍以上、２０倍以上、４０倍以上、５０倍以上、７０倍以上、８０倍以上、１００倍以上、または１１０倍以上である。
ある実施形態では、第２の反応混合物について、２０ｎｇｓ〜６０ｎｇｓ、３０ｎｇｓ〜５０ｎｇｓ、２０ｎｇｓ〜４０ｎｇｓ、３５ｎｇｓ〜４５ｎｇｓのＨＰＶＬＰが、該基質上に配置される。ある実施形態では、約２０ｎｇｓ、３０ｎｇｓ、４０ｎｇｓ、５０ｎｇｓ、または６０ｎｇｓのＨＰＶＬＰが、該基質上に配置される。典型的に、マルチ基質デバイス、例えば、マルチウェルプレート、例えば、ポリスチレンマルチウェルプレートは、複数の基質の各々の上に本明細書に指定されるＨＰＶＬＰの量を有するであろう。典型的な基質は、マルチウェルプレート上のウェルの内部である。
ある実施形態では、第２の反応混合物について、試料は、可溶相ＨＰＶＬＰと接触させられ、次いで結合していない抗ＪＶＣ抗体は、基質上に配置されるＨＰＶＬＰに結合することを可能にされる。ある実施形態では、第２の反応混合物について、試料は、基質上に配置される可溶相ＨＰＶＬＰおよびＨＰＶＬＰと同時に接触している。
ある実施形態では、μＬ試料（これは、希釈されていない試料、または希釈物中の試料の量を指し、したがって１００μＬの１μＬ：１００μＬ希釈は、１μＬの試料であろう）、例えば、血清または血漿と、基質上に配置されるｎｇｓのＨＰＶＬＰとの比率は、１：１００〜１：２０、１：８０〜１：３０、１：６０〜１：２０、１：２０〜１：６０、１：３０〜１：５０である。ある実施形態では、μＬの試料、例えば、血清または血漿と、基質上に配置されるｎｇｓのＨＰＶＬＰとの比率は、約：１：３０、１：４０、または１：５０である。ある実施形態では、μＬの試料、例えば、血清または血漿と、基質上に配置されるｎｇｓのＨＰＶＬＰとの比率は、約：（０．０８〜１．２）：３０、（０．０８〜１．２）：４０、または（０．０８〜１．２）：５０である。
一実施形態では、試料、例えば、血清は、約１００倍等、例えば、緩衝液中で、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質との接触前に、希釈される。一実施形態では、検出は、酵素で標識された抗体、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧ等の、酵素で標識されたＩｇＧを用いる。別の実施形態では、検出試薬、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧは、少なくとも０．０１μｇ／ｍＬ、０．０２μｇ／ｍＬ、０．０３μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬ、０．０５μｇ／ｍＬ、０．０６μｇ／ｍＬ、または０．０８μｇ／ｍＬの濃度で添加される。一実施形態では、検出試薬は、基質に結合した抗体に対して１０倍〜１００倍過剰で提供される。ある実施形態では、検出試薬は、基質に結合した抗体と比較して１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上、７５倍以上、または１００倍以上）過剰をもたらす量で提供される。
一実施形態では、ステップ（ｂ）において検出される抗ＪＣＶ抗体のレベルに応答して、ステップ（ｃ）および／または（ｄ）が行われる。
一実施形態では、ステップ（ｂ）において検出される抗ＪＣＶ抗体のレベル、例えば、指標レベル（ｎＯＤ）が０．２超であり、かつ０．４未満であることに応答して、次いでステップ（ｃ）および（ｄ）が行われる。
一実施形態では、試料、例えば、血清または血漿は、約５０倍以上、約１００倍以上、または約１５０倍以上の量等、例えば、緩衝液中で、該第２の反応混合物を形成する前に希釈される。別の実施形態では、試料、例えば、血清または血漿は、約５０倍以上、約１００倍以上、または約１５０倍以上の量等、例えば、緩衝液中で、該第３の反応混合物を形成する前に希釈される。別の実施形態では、第２および第３の反応混合物のうちの一方または両方の検出は、酵素で標識された抗体、例えば、酵素で標識されたＩｇＧ、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧを用いる。
第２および第３の反応混合物のうちの一方または両方の検出は、少なくとも０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、または０．０８μｇ／ｍＬの濃度で添加される、ＨＲＰで標識されたＩｇＧを用いることができる。一実施形態では、検出試薬は、基質に結合した抗体と比較して１０倍〜１００倍（例えば、１０倍、２０倍、５０倍、７５倍、または１００倍）過剰で提供される。
一実施形態では、試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価することは、ステップｂにおいて、例えば、約１の指標（例えば、陽性対照が１．３の光学密度を有し、陰性対照が０．１の光学密度を有する場合の、１の光学密度）および１５倍〜２０倍以上（例えば、１６倍以上、１７倍以上、１８倍以上、または１９倍以上）のシグナル対ノイズ比を有する、カットオフ検量用試料等の、標準物質を評価することを更に含む。別の実施形態は、ステップｂにおいて、例えば、約１．３のスコアを有する標準物質、例えば、陽性対照を評価することを含む。他の実施形態では、本方法は、ステップｂにおいて、例えば、約０．１のスコアを有する陰性対照等の、標準物質を評価することを更に含む。
ある実施形態では、本方法は、該可溶相ＨＰＶＬＰ粒子への結合が、該第１のアリコートにおけるＨＰＶＬＰ粒子配置基質への結合と比較して、ＨＰＶＬＰ粒子配置基質への結合を阻害または低減する量を決定することを含む。２ステップアッセイの第１のステップ（上のステップ（ａ）および（ｂ））の結果は典型的に、正規化ＯＤ（ｎＯＤ、または「指標」）値として表される。ツーステップアッセイの第２のステップ（上のステップ（ｃ）および任意に（ｄ））の結果は典型的に、「阻害パーセント」として表される。ある実施形態では、ｎＯＤは、ＯＤ４５０である。ある実施形態では、該阻害は、既定値、例えば、４５％以下であり、該試料は、陰性として分類される。
ある実施形態では、該阻害は、既定値、例えば、４５％超であり、該試料は、陽性として分類される。
一実施形態では、カットオフ検量用試料（ＣＯ）は、約１．０の反応性指標（ｎＯＤ）を有するように調整され、陽性対照（ＰＣ）は、約１．３の反応性指標を有するように調整される。ＣＯおよびＰＣ溶液は、ＪＣＶ抗体に対して陽性の血清を、ＪＣＶ抗体に対して陰性である血清と混合することによって作製される。例えば、抗ＪＣＶ抗体陰性血清の瓶であり得る、陰性対照（ＮＣ）について、指標（ｎＯＤ）標的は、約０．１である。
一実施形態ではＪＣＶ抗原は、本発明で特長とされるアッセイに使用する前にクロマトグラフィーにより精製される、ＨＰＶＬＰ等のＶＬＰ粒子である。
ある特定の実施形態では、試料は、血清試料、尿試料、血漿試料、血液試料、または脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である。一実施形態では試料は、試料の第１のアリコートおよびＨＰＶＬＰが上に配置される基質を含む、第１の反応混合物を形成する前に１：１０１希釈される、血清試料である。
別の実施形態では、二次検出試薬（例えば、抗ヒトＩｇＧ）は、ＨＲＰ等のペルオキシダーゼ等の、検出可能な薬剤に複合体化させられる。一実施形態では、二次検出試薬は、抗ヒトＩｇＧであり得、その抗ヒトＩｇＧは、ＨＲＰに複合体化させられる。別の実施形態では、ＩｇＧ−ＨＲＰを含有する検出試薬溶液は、０．０４μｇ／ｍＬで使用される。例えば、ＩｇＧ−ＨＲＰの０．８ｍｇ／ｍＬ保存液は、ＨＰＶＬＰに結合した抗ＪＣＶ抗体のレベルを検出するためのアッセイに使用する前に、１：１５，０００、１：２０，０００、１：３００００以上希釈される。別の実施形態では、二次検出試薬の濃度は、シグナルを以前のロットに合致させるために、新たなロットに対して調整され、複合体とのインキュベーション時間は、わずか３０分である。一実施形態では、緩衝液中のＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）および過酸化水素は、抗ＪＣＶ抗体に結合したＨＲＰ ＩｇＧ混合物を含有する反応混合物と共に、２０分間（±２分間）インキュベートされる。
ある実施形態では、プレインキュベートされなかった試料と比較した、二次アッセイ試料中における検出されたレベルの減少は、試料が、抗ＪＣＶ抗体に対して陽性であることを示し、指定される百分率を下回る検出されたレベルにおける変化は、ＪＣＶ特異的抗体が試料中に何ら存在しないことを示す。
一実施形態では、試料の第１のアリコートおよびＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質を含む、第１の反応混合物の形成、ならびにＨＰＶＬＰが上に配置される該基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質に結合した抗ＪＣＶ抗体のレベルを検出することである、アッセイの第１のステップ後に、試料は、指標値（すなわち、ｎＯＤ値）０．２超かつ０．４未満（「不確定ゾーン」）を有することが決定される。試料の第２のアリコートを次いで、第２のアリコートと溶液相ＨＰＶＬＰとの間の第２の混合物の形成の後に、第２の混合物を、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質と接触させることによって、第２の混合物中の結合していない抗ＪＣＶ抗体を検出することを含む、アッセイの第２のステップにおいて試験することができる。
別の実施形態では、試料が、アッセイの第１のステップ後に、指標値０．２未満を有することが決定される場合、試料は、抗ＪＣＶ抗体陰性であることが決定される。一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体陰性であることが決定される試料は、アッセイの第２のステップを使用しては評価されない。
別の実施形態では、試料が、アッセイの第１のステップ後に、指標値０．４超を有することが決定される場合、試料は、抗ＪＣＶ抗体陽性であることが決定される。一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体陽性であることが決定される試料は、アッセイの第２のステップを使用しては評価されない。
一実施形態では、本発明は、対象からの生体試料（例えば、血漿、血清、血液、尿、または脳脊髄液（ＣＳＦ））を得ることと、参照物質が、３％以下の偽陰性率および他のポリオーマウイルス、例えば、ＢＫウイルス（ＢＫＶ）への極小の交差反応性を示すように選択されるように、検出されたレベルを参照物質と相関させることとを含む。幾つかの実施形態では、対照試料または対照試料の一組に由来する参照物質は、対象からの試料でプロセスされる。幾つかの実施形態では、参照物質は、アッセイの偽陰性率が１％以下であるように選択される。アッセイは、ＨＰＶＬＰがマイクロタイタープレートまたはスライド等の固体基質上に配置されるように行うことができる。幾つかの実施形態では、ＨＰＶＬＰは、ＶＰ１ウイルスタンパク質から本質的になる。ＨＰＶＬＰは、他のウイルスタンパク質、例えば、ＶＰ２またはＶＰ３のうちの少なくとも１つを更に含み得る。ＨＰＶＬＰ中のウイルスタンパク質（複数可）は、組換え由来（例えば、ＭＡＤ１ ＶＰ１）であり得るか、または天然に生じるウイルスタンパク質（例えば、天然に生じる源に由来する）であり得る。本方法は、例えば、現在、免疫調節薬で治療されている対象、免疫調節薬での治療を開始することを検討している対象、または進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を有することが疑われる対象から得られる生体試料を使用して行うことができる。
別の態様では、本発明は、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質を含有するキットを特長とする。基質には、９６ウェルプレート等のマルチウォール（ｍｕｌｔｉｗａｌｌ）プレートが含まれ得る。一実施形態では、キットは、次のうちの１つ以上または全てを含む：ウェルがＪＣＶ抗原基質、例えば、ＨＰＶＬＰでコーティングされた、プレート等の基質；凍結乾燥させられたまたは溶液中のＪＣＶ抗原、例えば、ＨＰＶＬＰ；ヒト血清等の血清の試料である、ＪＣＶカットオフ検量用試料、抗ＪＣＶ抗体陽性対照、およびＪＣＶ陰性対照。一実施形態では、キットは、抗原に結合した抗ＪＣＶ抗体を含有する複合体を検出するための１つ以上の試薬を含むか、または１つ以上の試薬を更に含み、試薬は、例えば、ＪＣＶ複合体、カゼイン試料、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）等の検出可能な試薬、洗浄緩衝液、および停止試薬を含む。
別の態様では、本発明は、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質、例えば、高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質を特長とする。
別の態様では、本発明は、ＨＰＶＬＰ、および生体試料等の試料中の抗ＪＣＶ抗体レベルを特定するアッセイを行うための、少なくとも１つの試薬を含むキットを特長とする。
他の態様では、本発明は、ＶＰ１五量体（カプソメア）よりもサイズが大きい、例えば、約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、または７２の五量体を含有する、または約３６０のＶＰ１分子を含有する、ＶＰ１含有粒子から本質的になる、ＨＰＶＬＰ粒子を含む溶液に関する。
本発明の別の態様は、ＨＰＶＬＰの溶液を調製する方法であり、本方法は、ＶＰ１五量体以下のサイズであるＶＰ１含有粒子を溶液から除去することを含む。
本明細書に開示される方法は、少なくとも一部には、抗ＪＣＶ抗体価および親和性／結合活性等の他の特性が、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を発症する患者の危険性を示し得るという発見に基づく。
したがって、別の態様では、本発明は、ＰＭＬを発症する患者の危険性を評価する方法を特長とし、患者の試料中のＪＣウイルス（ＪＣＶ）抗体価（例えば、本明細書に記載されるように決定され、正規化光学密度（ｎＯＤ）または指標として表される）または親和性／結合活性（例えば、本明細書に記載されるように決定され、アッセイの確認ステップにおいて阻害パーセントで表される）の知識を獲得することと、任意に、獲得された値（単数または複数）を本明細書に開示される参照物質と比較して、それによって危険性を評価することとを含む。
一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントは、血液（血清または血漿）、またはＣＳＦ試料等の、患者からの生体試料中において決定される。力価もしくは／および阻害パーセント、または両方の値の関数が、既定のレベルを下回ることが決定される場合、患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定され、力価および／もしくは阻害パーセント、または両方の値の関数が、既定のレベルであるかまたはそれを上回ることが決定される場合、患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより高いことが決定される。
本方法は更に、患者の試料中の抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを決定することが、生体試料を患者の身体から除去することまたは患者からの試料を分析することを必要とすること、あるいは患者が、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定される場合、免疫抑制療法等の療法が患者に施与されることを定めることができる。
一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントは、血液（血清または血漿）、またはＣＳＦ試料のうちの１つ以上等の、患者からの１つを超える生体試料中において決定される。
一実施形態では、対象は、多発性硬化症を有し、例えば、抗ＶＬＡ−４抗体、例えば、ナタリズマブでの治療法を既に受容している多発性硬化症患者である。
一実施形態では、患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定され、患者は更に、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４抗体、またはその断片（その抗原結合断片等）等の、抗ＶＬＡ−４療法を施与される。
一実施形態では、患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより高いことが決定され、患者は、代替療法を受容すべき者として特定され、例えば、患者は、抗ＶＬＡ−４抗体療法、例えば、ナタリズマブを受容することを停止し、例えば、代替療法、例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）等の代替的な認可された多発性硬化症（ＭＳ）療法を受容すべきである。別の実施形態では、患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより高いことが決定され、患者は、抗ＶＬＡ−４抗体療法、例えば、ナタリズマブを施与される。
一実施形態では、患者は、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントに基づいて、ＰＭＬを発症する危険性がより高いことが決定され、患者は、ＰＭＬを発症する危険性を決定するための更なる試験を受けるべき者として特定される。
一実施形態では、患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、阻害パーセントが、７０％または６０％以下であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定される。患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ１．５未満であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％未満であることが決定される場合、ＰＭＬの中程度の危険性を有することが決定される。患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される。抗ＪＣＶ抗体の阻害パーセントは、例えば、（ｉ）対象からの生体試料を、溶液中のＨＰＶＬＰと、ＨＰＶＬＰへの試料中における抗ＪＣＶ抗体の結合に好適な条件下で接触させることと、（ｉｉ）ＨＰＶＬＰに結合したＪＣＶ抗体を溶液から分離して、二次試料を作り出すことと、（ｉｉｉ）二次試料を、ＨＰＶＬＰと、（ｉ）と同じ条件下で接触させることと、（ｉｖ）二次試料中におけるＨＰＶＬＰへの抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出することとによって、測定することができる。
一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体価は、例えば、（ｉ）生体試料を、ＨＰＶＬＰと、ＨＰＶＬＰへの試料中における抗ＪＣＶ抗体の結合に好適な条件下で接触させることと、（ｉｉ）ＨＰＶＬＰへの試料中における抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出することと、（ｉｉｉ）検出されたレベルを参照集合と相関させることとによって、測定される。参照集合は、３％等の既定量を超えないの偽陰性率を示すように選択することができる。別の実施形態では、抗ＪＣＶ抗体価は、ＶＩＤＡＳ（登録商標）アッセイ（ｂｉｏＭeｒｉｅｕｘ）等の商用のプラットフォーム、または溶液相法もしくは側方流動法等の別の代替的なプラットフォームによって測定される。
一実施形態では、アッセイは、生体試料がＪＣＶ抗体を含有しないことを示し、アッセイは次いで、（ｉｖ）対象からの生体試料の一部分を、溶液中のＨＰＶＬＰと、ステップ（ｉ）の前に接触させることと（ステップ（ｉ）のＨＰＶＬＰは、二次試料を提供するために、固体基質に結合される）、（ｖ）二次試料を、ＨＰＶＬＰと、（ｉ）と同じ条件下で接触させることと、（ｖｉ）二次試料中におけるＨＰＶＬＰへの抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出することと、（ｖｉｉ）二次試料中における抗ＪＣＶ抗体の検出されたレベルを、ＨＰＶＬＰを含まない溶液でインキュベートされたときの生体試料中における結合のレベルと比較することとを更に含む。溶液でインキュベートされた試料と比較した、ＨＰＶＬＰでプレインキュベートされた試料中における検出されたレベルの減少は、試料が、抗ＪＣＶ抗体に対して陽性であることを示し、検出されたレベルにおける変化のなさは、抗ＪＣＶ抗体が試料中のバックグラウンドレベルを上回っては存在しないことを示す。
一実施形態では、アッセイは、生体試料がＪＣＶ抗体を含有することを示し、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される。
なおも別の実施形態では、患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、阻害パーセントが、７０％以下であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定される。患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、３超であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される。
一実施形態では、指標値（ｎＯＤ）のみまたは阻害パーセントのみを使用して、ＰＭＬの危険性を決定する。例えば、一実施形態では、患者は、指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定され、患者は、指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ１．５未満であることが決定される場合、より高い危険性を有することが決定され、あるいは患者は、指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、１．５超であることが決定される場合、更により高い危険性を有することが決定される。
一実施形態では、アッセイは、生体試料が、バックグラウンドレベルを上回るＪＣＶ抗体を含有しないことを示し、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される。
別の態様では、本発明は、アッセイ手順を評価または試験するための方法を特長とする。抗ＪＣＶ抗体アッセイは、６ヶ月毎または毎年等の既定間隔で、有効性について再評価することができる。１つの例となる技能アッセイにおいて、試料の集団、例えば、３０、４０、または５０の血清試料、および３０、４０、または５０の血漿試料は、現在最適化された方法および先行する前世代方法による評価等のために提供される。結果の間の一致が査定され、一致が、例えば、９０％または９５％を超えることが見出される場合、アッセイの性能は、許容されることが決定され得る。一実施形態では、既知の抗ＪＣＶ抗体状態を有する、例えば、９０、１００、１５０以上の試料を含有する、試料のパネルを利用して、経時的なアッセイ性能の一貫性を査定する。結果の間の一致が査定され、一致が、例えば、９０％または９５％を超えることが見出される場合、アッセイの性能は、許容されることが決定され得る。試料のパネルは、試料バンクを作り出すのに十分な量で入手可能な、患者血清である。
一態様では、実体、例えば、医療提供者は、本明細書に記載される抗ＪＣＶ抗体アッセイからもたらされる情報を獲得し、その情報に応答して、本明細書に記載される治療を、患者、例えば、ＭＳ患者に施与する。
別の態様では、本明細書に記載されるＪＣＶアッセイが患者に対して行われ、次いで患者がアッセイの結果に基づいて治療され、例えば、ＭＳ患者が治療される。
患者における抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントは、３ヶ月毎、６ヶ月毎、もしくは１２ヶ月毎等の一定間隔で、またはそれよりも長い間隔で、またはより頻繁に、再評価することができる。抗体価または阻害パーセントにおいて観察される増加は、ＰＭＬを発症する患者の危険性における増加を示すことができる。例えば、抗体価（ｎＯＤまたは指標）における２倍、または３倍の増加は、ＰＭＬの増加した危険性を示すことができる。ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を受容する患者は、抗ＶＬＡ−４療法での治療法を停止する場合があり、任意に、代替的な薬剤、例えば、抗ＶＬＡ−４療法以外、またはナタリズマブ以外の免疫抑制薬での治療法を開始する場合がある。力価における増加は、高いベースライン力価を有する患者において、低いベースライン力価を有する患者とは異なって（例えば、力価の範囲におけるより狭い範囲で）現れる場合がある。
一実施形態では、抗ＶＬＡ−４抗体、例えば、ナタリズマブを受容する患者は、例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、３０、４０ヶ月毎に、抗ＪＣＶ抗体価および／または阻害パーセントについて、モニタリングすることができる。
一実施形態では、患者は、血漿分離交換法を受容した後の１または２または３週間以内に、ＪＣＶ抗体の存在について、または抗ＪＣＶ抗体価もしくは阻害パーセントについて再評価されない。別の実施形態では、患者は、免疫グロブリン静注（ＩＶＩＧ）治療を受容した後の１または２または３週間以内に、ＪＣＶ抗体の存在について、または抗ＪＣＶ抗体価もしくは阻害パーセントについて再評価されない。
抗ＪＣＶ抗体価の測定は、ｎＯＤまたは指標値によるものであり得る。
本明細書に記載される患者の評価は、抗ＶＬＡ−４療法の施与前に、または患者が抗ＶＬＡ−４療法を開始した後に、行うことができる。
一実施形態では、患者は、本明細書に記載されるアッセイ等によって、ＰＭＬの危険性がより低いことが決定され、患者は、抗ＶＬＡ−４療法を施与される。別の実施形態では、患者は、ＰＭＬの危険性がより高いことが決定され、患者は、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４抗体を施与される。なおも別の実施形態では、患者は、ＰＭＬの危険性がより高いことが決定され、患者は、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイド等の、抗ＶＬＡ−４療法以外の治療法を施与される。
一実施形態では、患者は、ＰＭＬに対する増加した危険性を有することが決定され、患者はしたがって、抗ＶＬＡ−４療法を受容することを停止する。
患者は、一定間隔で、例えば、３ヶ月毎、６ヶ月毎、毎年、またはより多いもしくは少ない頻度で、抗ＪＣＶ抗体価における減少またはＪＣＶ抗体の阻害パーセントにおける減少についてモニタリングすることができる。抗ＪＣＶ抗体価における減少またはＪＣＶ抗体の阻害パーセントにおける減少は、患者がＰＭＬを発症する低下した危険性を有することを示すことができる。
一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体価またはＪＣＶ抗体の阻害パーセントは、亢進された後であっても、既定のレベルを下回るまで減少したことが決定され、次いで患者は、抗ＶＬＡ−４療法での治療を施与されるか、または抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定される。患者が以前に抗ＶＬＡ−４を受容した場合、患者の抗ＶＬＡ−４療法は、復帰させられ得る。抗ＶＬＡ−４療法を復帰させた後、患者は、６ヶ月毎または毎年、ＪＣＶ抗体の抗体価における減少または阻害パーセントにおける減少について評価される。
一実施形態では、患者が、ＰＭＬの危険性がより高いことが決定されると、例えば、患者が、０．５超、例えば、１．０超または１．５未満のｎＯＤによって測定される、抗ＪＣＶ抗体価を有することが決定されると、患者は、再びＪＣＶ状態について試験されない。例えば、患者は、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での治療法を停止する可能性があり、抗ＪＣＶ抗体状態について再び試験されない。
一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを決定するため等の、本明細書に記載される患者を評価する方法は、危険性予測因子の他の測定を査定することを更に含むことができる。例えば、患者を評価する方法は、（ａ）患者が、抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を（例えば、２４ヶ月よりも長く）受容したことがあるかどうかを決定すること、あるいは（ｂ）患者が、指定される非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を（例えば、ここ２、３、５年間でまたは患者の生涯でこれまでに、ミトキサントロンまたは他の治療法を）受容したことがあるかどうかを決定することを更に含むことができる。既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有するが、指定される先の免疫抑制薬の使用がなく、かつ抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有したことがない患者についての、ＰＭＬの相対的危険性は、既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用および抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の相対的未満の危険性である、既定のレベルを下回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用または抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の相対的未満の危険性である。
一実施形態では、患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブを受容し、別の実施形態では、患者は、評価、例えば、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントの評価に基づいて、抗ＶＬＡ−４療法を施与される。例えば、評価の結果として、患者は、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類され得る。一実施形態では、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類される患者は更に、その治療法を施与される。
幾つかの実施形態では、階層化モデルに含まれるべき因子は、患者の年齢または性別である。
本明細書に記載される方法は、１つ以上の要因を患者の評価に組み込むことができる。したがって、別の態様では、本発明は、患者を、例えば、抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補として評価する方法を特長とする。
本方法は、例えば、本明細書に記載される方法によって、例えば、患者からの生体試料中のＪＣウイルス（ＪＣＶ）抗体価および阻害パーセントを獲得することまたは決定することを含む。抗体価または阻害パーセントが、既定のレベルを下回ることが決定される場合、患者は、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブ等の、第１の療法カテゴリーでの治療に好適であるとして分類され得る。抗体価または阻害パーセントが、既定のレベルであるかまたはそれを上回ることが決定される場合、患者は、第２の療法カテゴリー、例えば、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイドに好適であるとして分類される。患者の試料中の抗ＪＣＶ抗体価および阻害パーセントを獲得することは、生体試料を患者の身体から取り出すこと、または患者からの試料を分析することを含んでもよい。評価方法はまた、第１のカテゴリー（例えば、ナタリズマブ）または第２のカテゴリー（例えば、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイド）等からの療法を、患者に施与することを含んでもよい。
なおも別の実施形態では、患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、阻害パーセントが、７０％以下であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定される。患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、１．５超であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される。患者は、指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ１．５未満であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％超であることが決定される場合、ＰＭＬの中程度の危険性を有することが決定される。
上に論じられたように、患者を評価する方法は、１つを超える考慮事項または要因を組み込むことができる。故に、患者を評価する方法は、
（ａａ）患者が、抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を（例えば、２４ヶ月よりも長く）受容したことがあるかどうかを決定し、実施形態において、先の抗ＶＬＡ−４療法曝露分類を提供すること、または
（ｂｂ）患者が、指定される非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を（例えば、ここ２、３、５年間でまたは患者の生涯でこれまでに）受容したことがあるかどうかを決定し、実施形態において、先の免疫抑制薬曝露分類を提供することを更に含むことができる。
典型的に、既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有するが、指定される先の免疫抑制薬の使用がなく、かつ抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有したことがない患者は、既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用および抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の相対的未満の危険性である、既定のレベルを下回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用または抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の相対的危険性よりも、ＰＭＬを発症するより少ない危険性を有するとして分類される。
一実施形態では、患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがある。別の実施形態では、本方法は、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブを、患者に施与することを含む。
一実施形態では、患者は、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類され、患者は更に、抗ＶＬＡ−４療法を施与される。
ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下にわたって受容したことがあり、以前に免疫抑制療法（抗ＶＬＡ−４療法以外）を受容したことがなく、かつＪＣＶへの曝露に対して陰性（例えば、ＪＣＶ抗体に対して陰性）の試験結果である患者は典型的に、ＰＭＬを発症することに対して最も低い危険性を有する。逆に、抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月よりも長く受容し、以前に免疫抑制療法（抗ＶＬＡ−４療法以外）を受容したことがあり、かつＪＣＶへの曝露に対して陽性（例えば、ＪＣＶ抗体に対して陽性）の試験結果である患者は典型的に、ＰＭＬを発症することに対して最も高い危険性を有する。
ＰＭＬに対する患者の危険性レベルは、特定される危険因子のうちの１つまたはいずれか２つまたは３つ全てを評価することによって査定することができる。例えば、抗ＪＣＶ抗体価に対して陰性の試験結果である患者、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）を有する患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定され得る。ＰＭＬに対する危険性がより低い患者は、約０．２／１０００患者未満、例えば、０．１１／１０００以下の危険性を有する可能性がある。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下（例えば、２３ヶ月、２２ヶ月、２０ヶ月、１５ヶ月、１２ヶ月、６ヶ月、１ヶ月以下）受容したことがあり、かつ以前に免疫抑制療法を受容したことがない患者、例えば、ＭＳを有する患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定され得る。例えば、患者は、約０．５４／１０００患者というＰＭＬの危険性を有することが決定され得る。患者は、したがって、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を約２５〜４８ヶ月以上（例えば、２６、２８、３０、３６、４０、または４８ヶ月以上）等、２４ヶ月よりも長く受容したことがあり、かつ以前に免疫抑制療法を受容したことがない患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得るか、またはＰＭＬに対するより高い危険性を有するとして分類され得る。ＰＭＬの危険性がより高い患者は、約３．７／１０００患者以上、例えば、約１．３７／１０００患者の危険性を有する可能性がある。患者は、したがって、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下にわたって（例えば、２４ヶ月、２２ヶ月、２０ヶ月、１５ヶ月、１２ヶ月、６ヶ月、１ヶ月以下にわたって）受容したことがあり、かつ抗ＪＣＶ抗体、またはＪＣＶ核酸に対して陰性であることが決定される患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定され得るか、またはＰＭＬに対するより低い危険性を有するとして分類され得る。例えば、患者は、０．２／１０００患者以下の危険性があることが決定され得る。患者は、したがって、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、免疫抑制薬（抗ＶＬＡ−４療法以外）での先の治療を受容したことがなく、かつＪＣＶに対して陰性であることが決定される患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低い、例えば、０．２／１０００患者以下であることが決定される。患者は、したがって、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、患者ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月よりも長く（例えば、２５ヶ月、２６ヶ月、２８ヶ月、３０ヶ月、３５ヶ月、３８ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、またはより長く）受容したことがあり、かつ以前に抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制療法を受容したことがある患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得る。ＰＭＬに対する危険性がより高い患者は、約０．３７／１０００以上、例えば、約４．３／１０００患者の危険性を有する可能性がある。患者はしがたって、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。例えば、抗ＶＬＡ−４療法での治療法を受容する、ＰＭＬに対する危険性がより高い患者は、ＰＭＬの発症について、ＰＭＬの危険性がより低い患者よりも頻繁なモニタリングを受容する可能性がある。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下にわたって（例えば、２４ヶ月、２２ヶ月、２０ヶ月、１５ヶ月、１２ヶ月、６ヶ月、１ヶ月以下にわたって）受容したことがあり、かつ以前に抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制療法を受容したことがある患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得る。例えば、患者は、０．６６／１０００患者というＰＭＬの危険性を有することが決定され得る。患者はしがたって、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。例えば、抗ＶＬＡ−４療法での治療法を受容する、ＰＭＬに対する危険性がより高い患者は、ＰＭＬの発症について、ＰＭＬの危険性がより低い患者よりも頻繁なモニタリングを受容する可能性がある。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月よりも長く（例えば、２６、３０、３６、４２、もしくは４８ヶ月等の２５〜４８ヶ月、またはより長く）受容したことがあり、かつＪＣＶに対して陽性であることが決定される患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される。患者はしがたって、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月よりも長く（例えば、２６、３０、３６、４２、もしくは４８ヶ月等の２５〜４８ヶ月、またはより長く）受容したことがあり、免疫抑制薬（抗ＶＬＡ−４療法以外）での先の治療を受容したことがなく、かつＪＣＶに対して陽性であることが決定され、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される患者。例えば、患者は、４／１０００患者というＰＭＬの危険性を有することが決定され得る。患者はしがたって、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制薬での先の治療を受容したことがあり、かつ抗ＪＣＶ抗体またはＪＣＶ核酸に対して陽性であることが決定される患者、例えば、ＭＳ患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得る。患者はしがたって、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制薬での先の治療を受容したことがあり、抗ＪＣＶ抗体またはＪＣＶ核酸に対して陽性であることが決定され、かつナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月よりも長く（例えば、２６、３０、３６、４２、もしくは４８ヶ月等の２５〜４８ヶ月、またはより長く）受容したことがある患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得る。例えば、患者は、９．８／１０００患者の危険性を有することが決定され得る。患者はしがたって、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下にわたって（例えば、２４ヶ月、２２ヶ月、２０ヶ月、１５ヶ月、１２ヶ月、６ヶ月、１ヶ月以下にわたって）受容したことがあり、抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制薬での先の治療を受容したことがあり、かつＪＣＶに対して陽性であることが決定される患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得る。例えば、患者は、４．５／１０００患者というＰＭＬの危険性を有することが決定され得る。患者はしがたって、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。
ある実施形態では、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下にわたって（例えば、２４ヶ月、２２ヶ月、２０ヶ月、１５ヶ月、１２ヶ月、６ヶ月、１ヶ月以下にわたって）受容したことがあり、免疫抑制薬（抗ＶＬＡ−４療法以外）での先の治療を受容したことがなく、かつＪＣＶに対して陽性であることが決定される患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され得る。例えば、患者は、０．３５／１０００患者というＰＭＬの危険性を有することが決定され得る。患者はしがたって、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する候補でないことが決定され得るか、またはより頻繁なモニタリングを伴う抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることが決定され得る。
ＰＭＬを発症するより低い危険性を有することが決定される患者は、約０．５４／１０００患者以下、例えば、０．２５／１０００以下、０．２／１０００以下、０．１９／１０００、０．１５／１０００以下、０．１１／１０００以下、０．１／１０００以下、例えば、０．３／１０００、０．２５／１０００、０．２／１０００、０．１９／１０００、０．１５／１０００、０．１１／１０００、もしくは０．１／１０００の、またはより低い危険性を有することが決定され得る。ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される患者は、約０．５４／１０００以上、例えば、約０．５５／１０００、約０．６０／１０００、約０．６６／１０００、約１．２／１０００、約１．３７／１０００、約２．０／１０００、約２．５／１０００、約３．０／１０００、約４．３／１０００、約５．０／１０００、約７．８／１０００、約８．０／１０００の、またはより高い危険性を有することが決定され得る。例えば、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される患者は、０．３／１０００、０．３５／１０００、０．５／１０００、０．６６／１０００、１．２／１０００、１．３７／１０００、２．０／１０００、２．５／１０００、３．０／１０００、４．３／１０００、５．０／１０００、７．８／１０００、８．０／１０００の、またはより高い危険性を有することが決定され得る。
一実施形態では、抗ＶＬＡ−４療法での先の治療を２４ヶ月よりも長く受容したことがあり、抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制薬での先の治療法を受容したことがなく、かつＪＣＶ陰性であることが決定される患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定され、したがってナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療を受容する好適な候補である。しかしながら、抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月よりも長く受容したことがあることに起因して、危険性査定は、ＰＭＬの発症を示し得る症状等の有害症状の発症について、患者をより頻繁にモニタリングすることの推奨を含む可能性がある。
ＰＭＬの発症についての患者の強化されたモニタリングは、ＪＣＶの存在を特定するための増加した頻度の試験実施、例えば、抗ＪＣＶ抗体アッセイまたは核酸ベースのアッセイによる増加した試験実施を含む可能性がある。強化されたモニタリングはまた、ＰＭＬに起因する脳の病変を特定するためのＭＲＩ走査も含む可能性がある。
一実施形態では、あらかじめ選択されている基準未満の抗ＪＣＶ抗体を有する患者は、抗ＪＣＶ抗体の検出不可能なレベルを有する。
一実施形態では、患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがあり、別の実施形態では、患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがない。
なおも別の実施形態では、患者は、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類され、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブが、患者に施与される。
一実施形態では、決定を下すこと、例えば、患者がＪＣＶに対して陰性であるかどうかを決定することは、患者からの生体試料を提供すること（例えば、それを得るまたは受容すること）、および試料中のＪＣＶ抗体を検出するためのＥＬＩＳＡアッセイ等の免疫測定法を行うことを必要とする。別の実施形態では、決定、例えば、患者がＪＣＶに対して陰性であるかどうかを決定することは、患者からの生体試料を提供すること、および試料中のＪＣＶ核酸を検出するためのＰＣＲベースのアッセイ等のアッセイを行うことを必要とする。
患者が、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類される場合、患者は更に、抗ＶＬＡ−４療法を施与され得る。抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類される患者は、ＰＭＬを発症することに対してより低い危険性、例えば、約０．２／１０００患者未満、例えば、０．３／１０００患者、または０．２／１０００患者、または０．１９／１０００患者、または０．１１／１０００患者の危険性を有することが決定される。例えば、ＰＭＬのより低い危険性を有する患者は、０．２／１０００以下の危険性を有する可能性がある。
抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類されないか、またはＰＭＬの発症についての強化されたモニタリングによる抗ＶＬＡ−４療法に対する候補であることが決定される患者は、ＰＭＬを発症することに対してより高い危険性、例えば、約０．３．７／１０００患者以上の危険性を有することが決定される。例えば、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される患者は、０．３７／１０００、０．３５／１０００、０．６６／１０００、１．２／１０００、１．３７／１０００、２．５／１０００、４．３／１０００、または７．８／１０００患者の危険性を有する可能性がある。
ある実施形態では、先の免疫抑制薬曝露分類は、選択される場合、次のうちの１つである：
非抗ＶＬＡ−４免疫抑制薬での療法を、あらかじめ選択されている時間枠内で、例えば、１、３、もしくは５年以内、または患者の一生涯で受容したことがあることに対応する、陽性の先の免疫抑制薬曝露分類、および
非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている時間枠にわたって、例えば、１、３、もしくは５年以内、または患者の一生涯で受けていないことに対応する、陰性の先の免疫抑制薬曝露分類。
ある実施形態では、先のＶＬＡ−４療法曝露分類は、選択される場合、次のうちの１つである：
抗ＶＬＡ−４療法を、あらかじめ選択されている一定期間を超えて、例えば、１、２、３、または５年以上受容したことがあることに対応する、陽性の先のＶＬＡ−４療法曝露分類、および
抗ＶＬＡ−４療法を、あらかじめ選択されている一定期間未満、例えば、６ヶ月、１、２、３、または５年未満にわたって受容したことがあることに対応する、陰性の先のＶＬＡ−４療法曝露分類。
ある実施形態では、本方法は、例えば、次のうちの１つから選択され得る、治療適合性分類を提供することを含む：
抗ＶＬＡ−４治療に対する患者の適合性と相関する、正の治療適合性分類（正の治療適合性分類は、ＰＭＬの発症についての増加したモニタリング等の、モニタリングに対する種々の警告または必要性を伴う、正の治療適合性分類へと更に細分することができる）、および
抗ＶＬＡ−４治療に対する患者の不適合性、またはＰＭＬの発症について等の増加したモニタリングに対する種々の警告または必要性を伴う抗ＶＬＡ−４治療に対する患者の適合性と相関する、負の治療適合性分類。
正の治療適合性分類は、ＰＭＬを発症するより低い危険性と相関し、負の治療適合性分類は、ＰＭＬを発症するより高い危険性と相関する。ＰＭＬを発症するより低い危険性は典型的に、０．２／１０００患者未満の危険性に対応し、ＰＭＬを発症するより高い危険性は、０．３７／１０００以上の危険性に対応する。
患者が、低い曝露分類、および陰性のＪＣＶ状態分類を割り当てられる場合、患者は、正の治療適合性分類、例えば、ＰＭＬの発症についてのモニタリングを忠告または必要とする、修正された正の治療適合性分類を割り当てられる。
患者が、陰性の先の免疫抑制薬曝露分類、および陰性の抗ＪＣＶ抗体状態分類を割り当てられる場合、患者は、正の治療適合性分類、例えば、ＰＭＬの発症についてのモニタリングを忠告または必要とする、修正された正の治療適合性分類を割り当てられ得る。
患者が、低い曝露分類、陰性の先の免疫抑制薬曝露分類、および陰性のＪＣＶ抗体分類を割り当てられる場合、患者は、正の治療適合性分類を割り当てられる。
一実施形態では、患者は、正の治療適合性分類を割り当てられ、患者は更に、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブを施与される。
一態様では、患者を評価する、例えば、ＰＭＬを発症する患者の危険性を評価する方法もまた、提供される。本方法は、
（ａａａ）抗ＪＣＶ抗体のレベルが、例えば、本明細書に開示される方法によって決定される、あらかじめ選択されている基準未満であるかそれともあらかじめ選択されている基準超であるかを決定すること等によって、患者がＪＣＶに対して陰性であるかそれとも陽性であるかを決定することと、
（ｂｂｂ）患者が抗ＶＬＡ−４療法を、あらかじめ選択されている一定期間を超えて（例えば、２４ヶ月よりも長く）、もしくはあらかじめ選択されている一定期間未満、例えば、２４ヶ月以下にわたって受容したことがあるかどうか、または抗ＶＬＡ−４療法を、あらかじめ選択されている期間中、例えば、ここ２、３、５年間、もしくは患者の生涯でこれまでに受容したことがないかどうかを決定することと、
（ｃｃｃ）患者が非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている一定期間にわたって受けなかったかどうか、または非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている一定期間（指定される時間）にわたって（例えば、ここ１、２、３、４、５、もしくは１０年間、または患者の生涯でこれまでに）受容したことがあるかどうかを決定し、その決定に応答して、患者を評価することとを含む。
ある実施形態では、患者がＪＣＶに対して陰性であるという決定に応答して、患者がＰＭＬを発症する危険性がより低いことを決定すること。
ある実施形態では、患者がＪＣＶに対して陽性であるという決定に応答して、患者がＰＭＬのより高い危険性を有することを決定すること。
ある実施形態では、決定、例えば、患者がＪＣＶに対して陰性であることを決定することは、試料を患者の身体から取り出すこと、または患者からの試料を分析することを含むか、またはそれらを必要とし、あるいは本方法は、治療法を患者に施与することを更に必要とする。治療法は、例えば、危険性のより低い患者の場合、抗ＶＬＡ−４療法（例えば、抗ＶＬＡ−４抗体）、または例えば、危険性のより低い患者の場合、代替（非抗ＶＬＡ−４）療法、例えば、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイドであり得る。
一態様では、指示を順守する方法が提供される。指示は、例えば、政府により要求されるパッケージ挿入物、例えば、ＦＤＡ（食品医薬品局）またはＥＭＡ（欧州医薬品庁）により義務付けられるパッケージ上に現れ、抗ＶＬＡ−４療法の使用についてのガイダンスを提供してもよい。指示を順守する方法は、任意に指示書を受容することと、本明細書に記載される評価法の結果を獲得し、獲得された結果に応答して、患者への療法に対する推奨を提供することと、任意に、更に、治療法を患者に施与することとを含む。指示書は、治療法を安全に施与するために必須である、本明細書に記載される評価法を指定することができる。治療法は、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブであってもよい。
患者を評価する方法が提供され、本方法は、医療提供者への患者試料の収集または輸送のためのキットを提供することと、医療提供者から患者試料を受容することと、本明細書に特許請求される方法を行うこととを必要とする。
患者を治療する方法もまた、提供される。本方法は、本明細書に記載される患者または試料評価法の結果を獲得し、獲得された結果に応答して、治療法を患者に施与することを必要とする。治療法は、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法であり得る。例として、例えば、ステップ（ａ）および（ｂ）、ステップ（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）、ステップ（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）、ステップ（ｃ）、またはステップ（ｃ）および（ｄ）の結果に応答して、治療法、例えば、本明細書に記載される治療法を、患者に施与すること。
抗ＶＬＡ−４療法の費用等に対する還付を許可する、コンピュータ処理による方法もまた、提供される。還付対象の当事者は、保険会社または政府機関等の、第三者支払人であってもよい。本方法は、（ａ）本明細書に記載される患者評価法の結果を獲得し、結果をコンピュータ可読媒体上に記録することと、（ｂ）患者への抗ＶＬＡ−４療法の施与の証拠を獲得し、証拠をコンピュータ可読媒体上に記録することと、（ｃ）結果が抗ＶＬＡ−４療法の施与と一貫する場合、当事者への還付を許可すること、または当事者に還付することとを含むことができる。
一態様では、患者を、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブでの治療を受容する候補として、選択または分類するための方法が提供される。例えば、本方法は、患者が以前に抗ＶＬＡ−４療法を、２４ヶ月以下にわたって、例えば、１〜２４ヶ月、２〜２０ヶ月、５〜１５ヶ月、もしくは１０〜１２ヶ月にわたって受容したことがあること、または患者が以前に免疫抑制薬での治療を受容したことがないことを決定し、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを査定することを含むことができる。一実施形態では、査定することは、患者からの試料を分析することを伴う。試料は、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液の試料であることができる。査定が、患者がＪＣＶに対して陽性、例えば、抗ＪＣＶ抗体またはＪＣＶ核酸に対して陽性であることを示す場合、患者は、抗ＶＬＡ−４療法での治療に対する候補として選択または分類されない。査定が、患者がＪＣＶに対して陰性、例えば、抗ＪＣＶ抗体またはＪＣＶ核酸に対して陰性であることを示す場合、患者は、抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補として選択しているかまたはそのように分類される。
抗ＪＣＶ抗体の存在についてのアッセイは、ＥＬＩＳＡアッセイ等の免疫測定法であり得る。ＪＣＶ核酸についてのアッセイは、例えば、ＰＣＲアッセイまたは次世代シークエンシング（ＮＧＳ）法であり得る。
ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される患者は更に、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を施与され得る。ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される患者は更に、インターフェロン、酢酸グラチラマー、コルチコステロイド、またはＴＮＦアゴニスト等の、抗ＶＬＡ−４療法の代替手段を施与され得る。一実施形態では、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される患者は更に、抗ＶＬＡ−４療法を施与され得、ＰＭＬについての増加した頻度の試験実施を受容することを必要とされ得、その患者が最初にＪＣＶ陰性であることが決定される場合、ＪＣＶについての増加した頻度の試験実施を受容することもまた必要とされ得る。
一態様では、ＰＭＬに対する患者の危険性を決定する方法が提供される。本方法は、（ａ）患者が以前に抗ＶＬＡ−４療法（例えば、ナタリズマブ）を２４ヶ月以下にわたって受容したことがあること、または患者が以前に免疫抑制薬での治療を受容したことがないことを決定することと、（ｂ）患者の抗ＪＣＶ抗体状態を査定することと（査定するステップは、患者からの試料を分析することを含む）を含む。査定が、患者がＪＣＶ陰性であることを示す場合、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される。査定が、患者がＪＣＶ陽性であることを示す場合、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される。
別の態様では、患者を治療する方法が提供される。治療方法は、例えば、患者の抗ＶＬＡ−４療法への先の曝露量を決定すること、および患者が以前に免疫抑制薬での治療を受容したかどうかを決定することを含む。任意に、ＪＣＶに対する患者の状態もまた、決定することができる。
患者が抗ＶＬＡ−４療法を、２４ヶ月以下にわたって受容したことがあること、および以前に免疫抑制薬での治療を受容したことがないことが決定される場合、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定され、患者は、抗ＶＬＡ−４療法を施与される。患者がナタリズマブを、２４ヶ月よりも長く（例えば、２５ヶ月またはより長く）受容したことがあること、および以前に免疫抑制薬での治療を受容したことがないことが決定される場合、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され、患者は、抗ＶＬＡ−４療法の代替手段、例えば、インターフェロン、コルチコステロイド、スタチン、またはＴＮＦアンタゴニストを施与される。
患者の抗ＶＬＡ−４療法または免疫抑制薬への先の曝露量を決定することは、患者またはケアをする者、例えば、医師、看護師、親、または他のケアをする者に尋ねることを含む可能性がある。場合によっては、患者の先の曝露量を決定することは、データベース、例えば、医療記録のデータベース内の情報にアクセスすることを含むことができる。
また、ＰＭＬに対する患者の危険性を決定する方法も提供される。本方法は、患者の抗ＶＬＡ−４療法への以前の曝露量を決定すること、および患者が以前に免疫抑制薬での治療を受容したかどうかを決定することを含む。任意に、患者の抗ＪＣＶ抗体状態がまた、決定されてもよい。患者が抗ＶＬＡ−４療法を、２４ヶ月以下にわたって受容したことがあること、および以前に免疫抑制薬での治療を受容したことがないことが決定される場合、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される。患者が抗ＶＬＡ−４療法を、２４ヶ月よりも長く受容したことがあること、および以前に免疫抑制薬での治療を受容したことがないことが決定される場合、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される。ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される患者は更に、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブを施与されてもよい。逆に、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される患者は更に、抗ＶＬＡ−４療法の代替手段、例えば、インターフェロン、コルチコステロイド、スタチン、またはＴＮＦアンタゴニストを施与されてもよい。
一実施形態では、患者のＪＣＶ状態がまた決定され、患者がＪＣＶ陰性であることが決定される場合、患者がＪＣＶ陽性であることが決定された場合よりも、患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される。
別途既定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の専門家によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および物質と同様または同等の方法および物質は、本発明の実施または試験で使用することができるが、好適な方法および物質が下に記載される。本明細書に言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。対立する場合には、定義を含む、本明細書が支配力を有するものとする。加えて、物質、方法、および例は、例証的なものにすぎず、限定するようには意図されない。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価する方法であって、
（ａ）試料の第１のアリコートおよびＨＰＶＬＰが上に配置される基質を含む、第１の反応混合物を形成することと、
（ｂ）ＨＰＶＬＰが上に配置される前記基質に結合した抗ＪＣＶ抗体のレベルを、前記基質に結合した抗ＪＣＶ抗体に結合している、標識された検出試薬を検出することによって、検出することと、を含み、
（ｉ）２０ｎｇｓ〜６０ｎｇｓのＨＰＶＰが前記基質上に配置されること、および（ｉｉ）試料対基質の比率が１：５０〜１：３０であることのうちの一方または両方が満たされ、
それによって試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価する、方法。
（項目２）
前記試料、例えば、血清が、例えば、緩衝液中で、例えば、約１００倍、前記基質との接触前に希釈される、項目１に記載の方法。
（項目３）
検出は、酵素で標識された抗体、例えば、酵素で標識されたＩｇＧ、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧを用いる、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記検出試薬、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧは、少なくとも０．０１μｇ／ｍＬ、０．０２μｇ／ｍＬ、０．０３μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬ、０．０５μｇ／ｍＬ、０．０６μｇ／ｍＬ、または０．０８μｇ／ｍＬの濃度で添加される、項目３に記載の方法。
（項目５）
（ｃ）試料の第２のアリコートおよび溶液相ＨＰＶＬＰを含有する、第２の反応混合物を形成し、前記第２の反応混合物中の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベルを、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質と結合できる抗ＪＣＶ抗体を検出すること等によって、検出することと、
任意に（ｄ）前記試料中の抗ＪＣＶ抗体がＨＰＶＬＰまたは他の抗原によって結合しない条件下で、第３のアリコートを含有する第３の反応混合物を形成し、前記第３の反応混合物中の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベルを、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質と結合できる抗ＪＣＶ抗体を検出すること等によって、検出することと、を更に含み、
干渉についての値を提供する、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記第２の反応混合物中の前記検出されたレベルを、前記第３の反応混合物中の前記検出されたレベルと比較することを含む、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記比較することは、前記第２の反応混合物中のＨＰＶＬＰの存在が、前記第３の反応混合物中の結合していない抗体のレベルと比較して、前記第２の反応混合物中の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベルを阻害するレベルを決定することを含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記阻害は、４５％未満であり、任意に、前記試料は、陰性として分類される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記阻害は、４５％以上であり、前記試料は、陽性として分類される、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記方法は、項目１のステップｂにおいて検出される抗ＪＣＶ抗体のレベル、例えば、ｎＯＤ値が０．２未満かつ０．４未満であることに応答して行われ、ステップｃおよびｄに進む、項目５に記載の方法。
（項目１１）
前記試料、例えば、血清が、例えば、緩衝液中で、例えば、約１００倍、前記第２の反応混合物を形成する前に希釈される、項目５に記載の方法。
（項目１２）
前記試料、例えば、血清が、例えば、緩衝液中で、例えば、約１００倍、前記第３の反応混合物を形成する前に希釈される、項目５に記載の方法。
（項目１３）
前記第２および第３の反応混合物のうちの一方または両方についての検出は、酵素で標識された抗体、例えば、酵素で標識されたＩｇＧ、例えば、ＨＲＰで標識されたＩｇＧを用いる、項目５に記載の方法。
（項目１４）
前記第２および第３の反応混合物のうちの一方または両方についての検出は、少なくとも０．０１μｇ／ｍＬ、０．０２μｇ／ｍＬ、０．０３μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬ、０．０５μｇ／ｍＬ、０．０６μｇ／ｍＬ、または０．０８μｇ／ｍＬの濃度で添加される、ＨＲＰで標識されたＩｇＧを用いる、項目３に記載の方法。
（項目１５）
ステップｂにおいて、例えば、約１のスコアを有する標準物質、例えば、カットオフ検量用試料を評価することを更に含む、項目１に記載の方法。
（項目１６）
ステップｂにおいて、例えば、約１．３のスコアを有する標準物質、例えば、陽性対照を評価することを更に含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
ステップｂにおいて、例えば、約０．１のスコアを有する標準物質、例えば、陰性対照を評価することを更に含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
項目１に記載の基質を含む、キット。
（項目１９）
前記基質は、マルチウォール（ｍｕｌｔｉｗａｌｌ）プレート、例えば、９６ウェルプレート上に提供される、項目１８に記載のキット。
（項目２０）
溶液中のＨＰＶＬＰ；ヒト血清の試料である、ＪＣＶカットオフ検量用試料、抗ＪＣＶ抗体陽性対照、およびＪＣＶ陰性対照；ならびにＪＣＶ抗原に結合した抗ＪＣＶ抗体を含有する複合体を検出するための試薬のうちの１つ以上または全てを更に含む、項目１８に記載のキット。
（項目２１）
前記検出試薬は、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）、洗浄緩衝液、および停止試薬のうちの１つ以上である、項目２０に記載のキット。
（項目２２）
進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を発症する患者の危険性を評価する方法であって、前記方法は、
前記患者からの生体試料中の抗ＪＣＶ抗体確認アッセイにおいて、ｎＯＤ、指標、もしくは他の単位として表されるＪＣウイルス（ＪＣＶ）抗体価、または阻害パーセントとして表される親和性もしくは結合活性等の他の特性を決定することを含み、
前記力価もしくは／および阻害パーセント、または両方の値の関数が、既定のレベルを上回るかまたは下回ることが決定される場合、前記患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定され、
前記力価もしくは／および阻害パーセント、または両方の値の関数が、既定のレベルを上回るかまたは下回ることが決定される場合、前記患者は、ＰＭＬを発症する危険性が中程度であることが決定され、
前記力価もしくは／および阻害パーセント、または両方の値の関数が、既定のレベルであるかまたはそれを上回ることが決定される場合、前記患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより高いことが決定され、更に、
（ｉ）前記患者の試料中の前記抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを決定することが、生体試料を前記患者の身体から取り出すこと、または前記患者からの試料を分析することを含むか、あるいは
（ｉｉ）前記患者が、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定される場合、治療法を前記患者に施与すること、のいずれかを条件とする、方法。
（項目２３）
前記患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことが決定され、前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法を施与される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは
（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、前記阻害パーセントが、７０％以下であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定される、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ１．５未満であることが決定され、かつ
（ｉｉ）前記阻害パーセント値が、７０％超であることが決定される場合、ＰＭＬの中程度の危険性を有することが決定される、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、３超であることが決定され、前記阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは
（ｉｉ）前記患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される、項目２２に記載の方法。
（項目２７）
抗ＪＣＶ抗体の阻害パーセントは、
（ｉ）前記対象からの生体試料を、溶液中の高度に精製されたＶＰ１粒子（ＨＰＶＬＰ）と、ＨＰＶＬＰへの前記試料中における抗ＪＣＶ抗体の結合に好適な条件下で接触させることと、
（ｉｉ）ＨＰＶＬＰに結合した前記ＪＣＶ抗体を前記溶液から分離して、二次試料を作り出すことと、
（ｉｉｉ）前記二次試料を、ＨＰＶＬＰと、（ｉ）と同じ条件下で接触させることと、
（ｉｖ）前記二次試料中におけるＨＰＶＬＰへの抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出することと、によって測定される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記抗ＪＣＶ抗体価は、
（ｉ）前記生体試料を、ＨＰＶＬＰと、ＨＰＶＬＰへの前記試料中における抗ＪＣＶ抗体の結合に好適な条件下で接触させることと、
（ｉｉ）ＨＰＶＬＰへの前記試料中における抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出することと、
（ｉｉｉ）前記検出されたレベルを参照集合と相関させることと、を含むアッセイによって測定され、前記参照集合は、３％を超えない偽陰性率を示すように選択される、項目２２に記載の方法。
（項目２９）
前記抗ＪＣＶ抗体価は、ＶＩＤＡＳ（登録商標）アッセイ（ｂｉｏＭeｒｉｅｕｘ）を使用することによって測定される、項目２２に記載の方法。
（項目３０）
前記アッセイは、前記生体試料がＪＣＶ抗体を含有しないことを示し、
（ｉｖ）前記対象からの前記生体試料の一部分を、溶液中のＨＰＶＬＰと、ステップ（ｉ）の前に接触させることであって、ステップ（ｉ）の前記ＨＰＶＬＰは、固体基質に結合され、それによって二次試料を提供する、接触させることと、
（ｖ）前記二次試料を、ＨＰＶＬＰと、（ｉ）と同じ条件下で接触させることと、
（ｖｉ）前記二次試料中におけるＨＰＶＬＰへの抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出することと、
（ｖｉｉ）前記二次試料中における抗ＪＣＶ抗体の前記検出されたレベルを、ＨＰＶＬＰを含まない前記溶液でインキュベートされたときの前記生体試料中における結合のレベルと比較することと、を更に含み、前記溶液でインキュベートされた試料と比較した、ＨＰＶＬＰでプレインキュベートされた前記試料中の前記検出されたレベルにおける減少は、前記試料が、抗ＪＣＶ抗体に対して陽性であることを示し、前記検出されたレベルにおける変化のなさは、抗ＪＣＶ抗体が前記試料中に何ら存在しないことを示す、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
前記アッセイは、前記生体試料がＪＣＶ抗体を含有することを示し、前記患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される、項目２８に記載の方法。
（項目３２）
前記アッセイは、前記生体試料がＪＣＶ抗体を含有することを示し、前記患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定される、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは
（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、前記阻害パーセントが、７０％以下であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定される、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、３超であることが決定され、前記阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは
（ｉｉ）前記患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
前記アッセイは、前記生体試料がＪＣＶ抗体を含有しないことを示し、前記患者は、ＰＭＬに対する危険性がより低いことが決定される、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
前記抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントは、６ヶ月または１２ヶ月間隔で再試験される、項目２２に記載の方法。
（項目３７）
抗体価または阻害パーセントにおける増加は、ＰＭＬを発症する前記患者の危険性における増加を示す、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
抗ＪＣＶ抗体価における２倍以上の増加は、ＰＭＬを発症する増加した危険性を示す、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記評価は、抗ＶＬＡ−４療法の施与前に生じる、項目２２に記載の方法。
（項目４０）
前記評価は、前記患者が抗ＶＬＡ−４療法を開始した後に生じる、項目２２に記載の方法。
（項目４１）
前記患者は、ＰＭＬの危険性がより低いことが決定され、前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法を施与される、項目２２に記載の方法。
（項目４２）
前記患者は、ＰＭＬの危険性がより高いことが決定され、前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法を施与される、項目２２に記載の方法。
（項目４３）
前記抗ＶＬＡ−４療法は、ナタリズマブである、項目２２に記載の方法。
（項目４４）
前記患者は、ＰＭＬに対する増加した危険性を有することが決定され、前記患者は更に、前記抗ＶＬＡ−４療法を受容することを停止する、項目３７に記載の方法。
（項目４５）
前記患者は、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定され、前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法の代替手段、例えば、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイドを施与される、項目２２に記載の方法。
（項目４６）
前記患者は、一定間隔で、抗ＪＣＶ抗体価における減少またはＪＣＶ抗体の阻害パーセントにおける減少についてモニタリングされ、抗ＪＣＶ抗体価における減少またはＪＣＶ抗体の阻害パーセントにおける減少は、前記患者がＰＭＬを発症する低下した危険性を有することを示す、項目４４に記載の方法。
（項目４７）
前記ＪＣＶ力価またはＪＣＶ抗体の阻害パーセントは、既定のレベルを下回るまで減少したことが決定され、前記患者の抗ＶＬＡ−４療法は、復帰させられる、項目４４に記載の方法。
（項目４８）
前記患者は、６ヶ月毎または毎年、ＪＣＶ抗体の抗体価における減少または阻害パーセントにおける減少について評価される、項目４６に記載の方法。
（項目４９）

（ａ）前記患者が、抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を（例えば、２４ヶ月よりも長く）受容したことがあるかどうかを決定すること、または
（ｂ）前記患者が、指定される非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を（例えば、ここ２、３、５年間でまたは前記患者の生涯でこれまでに）受容したことがあるかどうかを決定すること、を更に含み、
既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有するが、指定される先の免疫抑制薬の使用がなく、かつ抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有したことがない患者についてのＰＭＬの前記相対的危険性は、既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用および抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の前記相対的未満の危険性である、既定のレベルを下回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用または抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の前記相対的未満の危険性である、項目２２に記載の方法。
（項目５０）
前記患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがある、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
抗ＶＬＡ−４療法を前記患者に施与することを更に含む、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
前記抗ＶＬＡ−４療法は、ナタリズマブ療法である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類され、前記患者は更に、前記抗ＶＬＡ−４療法を施与される、項目４９に記載の方法。
（項目５４）
患者を、例えば、抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補として、評価する方法であって、前記方法は、
前記患者からの生体試料中のＪＣウイルス（ＪＣＶ）抗体価および阻害パーセントを獲得することを含み、
前記抗体価または阻害パーセントが、既定のレベルを下回ることが決定される場合、前記患者は、第１の療法カテゴリーでの治療に好適であるとして分類され、
前記抗体価または阻害パーセントが、既定のレベルであるかまたはそれを上回ることが決定される場合、前記患者は、第２の療法カテゴリーに好適であるとして分類され、
更に、
（ｉ）前記患者の試料中の前記抗ＪＣＶ抗体価および阻害パーセントを獲得することが、生体試料を前記患者の身体から取り出すこと、または前記患者からの試料を分析することを含むか、あるいは
（ｉｉ）前記方法が、前記第１のカテゴリーまたは前記第２のカテゴリーからの治療法を前記患者に施与することを更に含むこと、のいずれかを条件とし、
それによって前記患者を評価する、方法。
（項目５５）
前記第１の療法カテゴリーは、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、抗ＶＬＡ−４抗体療法、例えば、ナタリズマブである、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記第２の療法カテゴリーは、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイドである、項目５４に記載の方法。
（項目５７）
前記患者は、第１の療法カテゴリーでの治療に好適であるとして分類され、前記患者は更に、ナタリズマブを施与される、項目５４に記載の方法。
（項目５８）
前記患者は、第２の療法カテゴリーでの治療に好適であるとして分類され、前記患者は更に、インターフェロン、酢酸グラチラマー、またはコルチコステロイドを施与される、項目５４に記載の方法。
（項目５９）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは
（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、前記阻害パーセントが、７０％以下であることが決定される場合、ＰＭＬのより低い危険性を有することが決定される、項目５４に記載の方法。
（項目６０）
前記患者は、
（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される前記抗ＪＣＶ抗体価が、３超であることが決定され、前記阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは
（ｉｉ）前記患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有することが決定される、項目５４に記載の方法。
（項目６１）
（ａ）前記患者が、抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を（例えば、２４ヶ月よりも長く）受容したことがあるかどうかを決定すること、または
（ｂ）前記患者が、指定される非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を（例えば、ここ２、３、５年間でまたは前記患者の生涯でこれまでに）受容したことがあるかどうかを決定すること、を更に含み、
既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有するが、指定される先の免疫抑制薬の使用がなく、かつ抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有したことがない患者は、既定のレベルを上回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用および抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の前記相対的未満の危険性である、既定のレベルを下回る抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを有し、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用または抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を有する患者の前記相対的危険性よりも、ＰＭＬを発症するより少ない危険性を有するとして分類される、項目３３に記載の方法。
（項目６２）
前記患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがある、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
抗ＶＬＡ−４療法を前記患者に施与することを更に含む、項目６１に記載の方法。
（項目６４）
前記抗ＶＬＡ−４療法は、ナタリズマブ療法である、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類され、前記患者は更に、前記抗ＶＬＡ−４療法を施与される、項目６１に記載の方法。
（項目６６）
進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を発症する患者の危険性を評価する方法であって、前記方法は、
（ａ）前記患者がＪＣウイルス（ＪＣＶ）への曝露に対して陰性であるかそれとも陽性であるかを決定すること、
（ｂ）前記患者が、抗ＶＬＡ−４療法での長期治療を（例えば、２４ヶ月よりも長く）受容したことがあるかどうかを決定すること、または
（ｃ）前記患者が、指定される非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を（例えば、ここ２、３、５年間でまたは前記患者の生涯でこれまでに）受容したことがあるかどうかを決定することと、
前記患者がＪＣＶへの曝露に対して陰性であるという決定に応答して、患者がＰＭＬを発症する危険性が比較的低いこと、または前記患者がＪＣＶに対して陽性であるという決定に応答して、前記患者がＰＭＬを発症する比較的より高い危険性を有することを決定することと、を含み
ＪＣＶに曝露されたことがあるが、指定される先の免疫抑制薬の使用がなく、かつ抗ＶＬＡ−４での長期治療を有したことがない患者についてのＰＭＬの前記相対的危険性は、ＪＣＶに曝露されたことがあり、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用および抗ＶＬＡ−４での長期治療を有する患者の前記相対的未満の危険性である、ＪＣＶに曝露されたことがあり、かつ指定される先の免疫抑制薬の使用または抗ＶＬＡ−４での長期治療を有する患者の前記相対的未満の危険性である、方法。
（項目６７）
更に、（ｉ）前記患者がＪＣＶに対して陰性であることを決定することが、試料を前記患者の身体から取り出すこと、または前記患者からの試料を分析することを含むか、あるいは（ｉｉ）前記方法が、治療法を前記患者に施与すること、例えば、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、抗ＶＬＡ−４抗体、または代替治療、例えば、インターフェロン、酢酸グラチラマー、もしくはコルチコステロイドを、前記患者に施与することを更に含むこと、のいずれかを条件とする、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記患者は、以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがある、項目６６に記載の方法。
（項目６９）
抗ＶＬＡ−４療法を前記患者に施与することを更に含む、項目６６に記載の方法。
（項目７０）
前記抗ＶＬＡ−４療法は、ナタリズマブ療法である、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記患者がＪＣＶに対して陰性であるかどうかを決定することは、前記患者からの生体試料を提供することと、免疫測定法を行って、前記試料中のＪＣＶ抗体を検出することと、を含む、項目６６に記載の方法。
（項目７２）
前記免疫測定法は、ＥＬＩＳＡアッセイである、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記免疫測定法は、ＩｇＧアイソタイプ、ＩｇＭアイソタイプ、ＩｇＡアイソタイプ、またはＩｇＥアイソタイプであるＪＣＶ抗体を検出する、項目７１に記載の方法。
（項目７４）
前記試料は、前記免疫測定法の実施前に１〜１４日間、２〜８℃で保管される、項目７１に記載の方法。
（項目７５）
前記患者がＪＣＶに対して陰性であるかどうかを決定することは、前記患者からの生体試料を提供することと、アッセイを行って、前記試料中のＪＣＶ核酸を検出することと、を含む、項目６６に記載の方法。
（項目７６）
前記患者は、抗ＶＬＡ−４療法に対する候補として分類され、前記患者は更に、前記抗ＶＬＡ−４療法を施与される、項目６６に記載の方法。
（項目７７）
ＰＭＬを発症する危険性がより低い患者は、約０．３／１０００未満の危険性、例えば、０．１１／１０００以下を有する、項目６６に記載の方法。
（項目７８）
ＰＭＬを発症することに対する危険性がより高い患者は、ＰＭＬを発症することに対して約０．３／１０００以上の危険性、例えば、０．３５／１０００、１．２／１０００、２．５／１０００、または７．８／１０００を有する、項目６６に記載の方法。
（項目７９）
前記患者は、ＪＣＶに対して陽性であり、前記患者は、あらかじめ選択されている一定期間未満にわたって抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがあり、前記患者は、非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている一定期間にわたって受けたことがなく、その決定に応答して、前記患者は、約０．３５／１０００というＰＭＬを発症する危険性を有することが決定される、項目６６に記載の方法。
（項目８０）
前記患者は、ＪＣＶに対して陽性であり、前記患者は、あらかじめ選択されている一定期間未満にわたって抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがあり、前記患者は、非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている一定期間にわたって受容したことがあり、その決定に応答して、前記患者は、約１．２／１０００というＰＭＬを発症する危険性を有することが決定される、項目６６に記載の方法。
（項目８１）
前記患者は、ＪＣＶに対して陽性であり、前記患者は、あらかじめ選択されている一定期間を超えて抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがあり、前記患者は、非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている一定期間にわたって受容したことがあり、その決定に応答して、前記患者は、約７．８／１０００というＰＭＬを発症する危険性を有することが決定される、項目６６に記載の方法。
（項目８２）
前記患者は、ＪＣＶに対して陽性であり、前記患者は、あらかじめ選択されている一定期間を超えて抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがあり、前記患者は、非抗ＶＬＡ−４免疫抑制療法を、あらかじめ選択されている一定期間にわたって受けたことがなく、その決定に応答して、前記患者は、約２．５／１０００というＰＭＬを発症する危険性を有することが決定される、項目６６に記載の方法。
（項目８３）
前記患者は、ＪＣＶ抗体陽性であること、ならびに指標値またはｎＯＤによって示される０．５か超つ１．５未満のＪＣＶ抗体価、および７０％超の阻害パーセント値を有することが決定され、前記患者は、ＰＭＬの中程度の危険性を有することが更に決定される、項目６６に記載の方法。
（項目８４）
前記患者は、ＪＣＶ抗体陽性であること、ならびに指標値またはｎＯＤによって示される１．５超のＪＣＶ抗体価、および７０％超の阻害パーセント値を有することが決定され、前記患者は、ＰＭＬのより高い危険性を有することが更に決定される、項目６６に記載の方法。
（項目８５）
前記患者は、ＪＣＶ抗体陽性であること、ならびに指標値によって示される３未満の抗体価、および７０％以下の阻害パーセント値を有することが決定され、前記患者は、ＰＭＬのより低い危険性を有することが更に決定される、項目６６に記載の方法。
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面および下の説明において述べられる。本発明の他の特長、対象物、および利点は、説明および図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
累積治療継続期間による（図１Ａ）、および１２ヶ月の治療間隔継続期間による（図１Ｂ）、ナタリズマブ関連ＰＭＬ発生を図示するグラフ。 先の免疫抑制薬の使用およびナタリズマブ治療継続期間によって階層化された、ＰＭＬのおよその発生を図示する略図。 抗ＪＣＶ抗体血清状態、先の免疫抑制薬の使用、およびナタリズマブ治療継続期間によって階層化された、ＰＭＬのおよその発生を図示する略図。 先の免疫抑制薬の使用（ありまたはなし）、およびナタリズマブ治療継続期間（１〜２４ヶ月（図４Ａ）または２５〜４８ヶ月（図４Ｂ））によって階層化された、抗ＪＣＶ抗体陽性患者におけるＰＭＬ発生の感受性分析推定を図示するグラフ。基線＝基線症例シナリオ。 患者１の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 患者２の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 患者３の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 患者４の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 患者５の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 患者６の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 患者７の、それぞれ、ｎＯＤおよび力価を図示するグラフ。 ＭＳ患者の群について収集された指標（ｘ軸）および阻害パーセント（ｙ軸）データを図示する散布図。 ＭＳ患者の群について収集された指標（ｘ軸）および阻害パーセント（ｙ軸）データを図示する散布図。 ＭＳ患者の群について決定された指標値を図示する散布図。
本発明は、少なくとも一部には、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントを査定することを含む、ＰＭＬに対する患者の危険性を査定する新たなおよび改善された方法の発見に基づく。本発明は、少なくとも一部には、抗ＪＣＶ抗体価および抗体阻害パーセントが、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を発症する患者の危険性を示し得るという発見に基づく。
出願人はまた、生体試料中の抗ＪＣＶ抗体価レベルを決定するための最適化されたアッセイ、および阻害パーセント値を決定することによって抗体を定性的にアッセイし、この情報を使用して、ＰＭＬを発症することに対する患者の危険性を決定するための方法を開発した。アッセイは、（ａ）試料の第１のアリコートおよびＨＰＶＬＰが上に配置される（ＶＬＰ粒子が０．０４μｇの量、および０．４μｇ／ｍＬの濃度で存在する）基質を含む、第１の反応混合物を形成することと、ｂ）基質上に配置されるＨＰＶＬＰに結合した抗ＪＣＶ抗体のレベルを、該基質に結合した抗ＪＣＶ抗体に結合している、標識された二次検出試薬、例えば、酵素で標識された抗ＩｇＧ抗体を検出すること等によって、検出することと、（ｃ）例えば、０．４μｇ／ｍＬの濃度で提供される溶液相ＨＰＶＬＰを有する、試料の第２のアリコート、および例えば、１：１００または１：１０１希釈で提供される試料の第２のアリコートを含む、第２の反応混合物を形成することと、（ｄ）ＨＰＶＬＰを含有しない陰性対照溶液、および陰性対照溶液中で例えば、１：１００もしくは１：１０１、または１：１１０希釈された試料の第３のアリコートを含む、第３の反応混合物を形成することと、（ｅ）第２および第３の反応混合物中の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベルを、ＨＰＶＬＰが上に配置される（該ＨＰＶＬＰが存在する）基質に結合できるＪＣＶを検出すること等によって、検出することと、（ｆ）試料の第１のアリコート中での基質上に配置されるＨＰＶＬＰへの抗ＪＣＶ抗体結合のレベルに対応する、第１の値、および第２の反応混合物の結合していない抗ＪＣＶ抗体のレベル、例えば、該第２の反応混合物からの基質上に配置されるＨＰＶＬＰに結合する抗ＪＣＶ抗体レベルに対応する、第２の値を提供することと、（ｇ）任意に、第１および第２の抗体レベルを比較することとを含む。
出願人はまた、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５未満であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、０．５超かつ３．０未満であることが決定され、阻害パーセントが、７０％以下であることが決定される場合、患者が、ＰＭＬを発症するより低い危険性を有することも発見した。患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、３超であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有する。
患者を、６ヶ月毎または１２ヶ月毎等の一定間隔で、抗ＪＣＶ抗体価または阻害パーセントにおける変化についてモニタリングすることができる。この後のアッセイの結果が、患者が依然として、０．５未満のｎＯＤの抗ＪＣＶ抗体価および７０％未満の阻害パーセントを有することを示す場合、患者は、依然としてＰＭＬを発症する危険性がより低いと決定され得る。後のアッセイが、患者の抗体価が最初のアッセイから２〜３倍増加したことを示す場合、患者は、ＰＭＬを発症することに対する危険性が増加したまたは危険性がより高いことが決定され得る。出願人は、ＰＭＬであると診断される患者が、診断前の６ヶ月で、抗体価およびｎＯＤにおける２〜３倍の増加を実証する傾向があることを観察した。
患者は、（ｉ）指標値またはｎＯＤによって示される抗ＪＣＶ抗体価が、３超であることが決定され、阻害パーセント値が、７０％超であることが決定されるか、あるいは（ｉｉ）患者が、指標、ｎＯＤ、または力価において、前回の試験から２倍の増加を示した場合、ＰＭＬのより高い危険性を有する。
これらの基準を満たす患者は、任意に、抗ＶＬＡ−４抗体、例えば、ナタリズマブ等の、抗ＶＬＡ−４療法での治療法を受容する候補でないと決定され得るか、または患者は、ＰＭＬを発症する他の危険因子について更に査定され得る。これらの危険因子には、患者が以前にナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがあるか否か、および患者がどれほど長くその治療法を受容したことがあるか、ならびに患者が以前に抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制療法を受容したことがあるかどうか、および患者が以前にどれほど長くその治療法を受容したことがあるかが含まれる。患者のＰＭＬの危険性は、これらの因子の各々の組み合わせである。
抗体価は、「ｎＯＤ」または「指標」によって測定することができる。「ｎＯＤ」は、ＥＬＩＳＡ試験等の試験における、抗ＪＣＶ抗体検出についての正規化光学密度値である。「指標」値は、ＥＬＩＳＡアッセイ等の免疫測定法において、試料についての光学密度値を、陽性対照の光学密度で除したものである。
出願人は以前に、ナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法を２４ヶ月以下にわたって受容し、かつ免疫抑制療法以前にを受容したことがない患者が、これらの２つの基準を満たさない患者よりも、ＰＭＬを発症することに対して危険性がより低いことを発見した。更に、最も低い危険性を有する患者は、これらの２つの基準を満たし、かつＪＣＶ陰性でもある患者、例えば、抗ＪＣＶ抗体またはＪＣＶ核酸、例えば、ＪＣＶ ＤＮＡに対して陽性の試験結果とならない患者である。これらの３つの危険因子（（ｉ）患者が以前に抗ＶＬＡ−４療法を受容したことがある時間の量、（ｉｉ）患者が以前に抗ＶＬＡ−４療法での治療以外の免疫抑制薬を受容したことがあるか否か、および（ｉｉｉ）ＪＣＶ状態）の各々が独立して、患者のＰＭＬの危険性に寄与することは、以前に未知であった。本明細書に記載される本発明は、一般に、ＶＬＡ−４阻害剤で治療される患者に対して使用することができる。明らかに異なるＰＭＬ危険性のある患者の亜集団を特定する能力は、以前の方法（すなわち、全体的なＰＭＬ危険性）よりも危険性のよりよい特徴づけを可能にし、より情報に基づいた便益−危険性治療決定を下すことにおいて、医療専門家および患者を補助するはずである。これらの危険性査定基準は、譲受人共通の、２０１１年５月３１日に出願された米国仮出願第６１／４９１，８１０号、および２０１１年７月１５日に出願された同第６１／５０８５８４号に記載される。これらの仮出願の各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。抗ＪＣＶ抗体価（例えば、ｎＯＤまたは指標レベルによって測定される）および阻害パーセントに向けられる、本明細書に記載される危険性基準は、先の譲受人共通の仮出願に記載される危険因子と組み合わせて考慮することができる。
ＰＭＬ危険性を決定するための方法は、患者についてのＪＣＶ分類（例えば、ｎＯＤまたは指標レベル等によって測定される抗ＪＣＶ抗体価、および阻害パーセント）、患者についての先の抗ＶＬＡ−４療法歴、および患者についての先の免疫抑制療法歴（抗ＶＬＡ−４療法以外）のうちの１つ、２つ、または３つ全てを獲得することを必要とし得る。これらの分類に応答して、患者は、治療適合性分類を割り当てられ得る。ＰＭＬを発症する低い危険性を有することが決定される患者は、正の治療分類を割り当てられ得、ＰＭＬを発症するより高い相対的危険性を有することが決定される患者は、負の治療分類を割り当てられ得る。正の治療分類を受ける患者は、更なる治療に対する、または抗ＶＬＡ−４療法での治療を開始することに対する推奨を受容し得る。負の治療分類を受ける患者は、抗ＶＬＡ−４での治療を終結する推奨、非抗ＶＬＡ−４療法での治療を開始する推奨、ＰＭＬの徴候および症状についての増加した監視により抗ＶＬＡ４での療法を継続または開始することに対する推奨を受容してもよい。
例えば、抗ＶＬＡ−４療法での、２４ヶ月よりも長い、例えば、２５ヶ月もしくはより長い、先の治療、または抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制薬での先の治療等、１つ以上の要因が、患者にＰＭＬの増加した危険性があり得ることを示す場合等には、抗ＶＬＡ−４療法での更なる治療に対する推奨は、患者が更なるまたは強化されたモニタリングを受けることの更なる指示または必要性を伴ってもよい。
患者は、患者による自己報告を通じて、または親、医師、医師助手、看護師、もしくは他の医療提供者によって提供される情報（口頭または書面）を通じて、以前に抗ＶＬＡ−４療法または抗ＶＬＡ−４療法以外の免疫抑制療法を受容したことがあることが決定され得る。情報はまた、医療データベースまたは臨床治験データベース等のデータベースを通じて得ることもできる。
ＰＭＬの増加した危険性を示すであろう、抗ＶＬＡ−４療法以外の先の免疫抑制療法には、１つ以上のベータ−インターフェロンまたは酢酸グラチラマー等の、抗腫瘍薬、免疫抑制薬、または免疫調節物質での先の治療が含まれ得る。例となる免疫抑制薬には、例えば、ミトキサントロン、メトトレキサート、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびミコフェノール酸塩、抗ＣＤ２０療法（例えば、リツキシマブ）、抗ＣＤ１１ａ療法（例えば、エファリズマブ）、またはミコフェノール酸モフェチルが含まれる。下に記載される他の免疫抑制療法での先の治療もまた、抗ＶＬＡ−４療法の更なる施与後の患者のＰＭＬの危険性を増加させることが予測されるであろう。一般に、先の免疫抑制薬の使用の決定は、ＶＬＡ−４阻害剤（例えば、抗ＶＬＡ−４抗体）でない免疫抑制薬の任意の先の使用、または指定される一定期間以内、例えば、ＰＭＬ危険性の評価前の過去１、２、３、５、もしくは１０年以内での先の使用であり得る、指定される使用である。
ＪＣＶ状態を決定することは、患者ＪＣＶに曝露されたことがあるかどうかを決定することを指し、したがって、曝露を決定する直接的方法（例えば、ＪＣＶタンパク質またはＪＣＶ ＤＮＡを検出すること）および間接的方法（例えば、患者試料中のＪＣＶに対する抗体を検出すること）を含む。ＪＣＶ状態を決定するためのアッセイは、血漿、血清、血液、もしくは尿試料中、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、もしくは脳脊髄液の試料中等の、生体試料中のＪＣＶ核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）、ＪＣＶ血清有病率、または抗ＪＣＶ抗体を検出するためのアッセイを含み得る。ＪＣＶ核酸は、当該技術分野で既知の方法を使用して、例えば、増幅法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、または次世代シークエンシング（ＮＧＳ）方法によって、検出することができる。ＪＣＶ血清有病率は、血液凝集阻害（ＨＩ）アッセイ等の当該技術分野で既知の方法を使用してアッセイすることができる。ＪＣＶ抗体は、ＥＬＩＳＡアッセイ等の免疫測定法によって検出することができる。一実施形態では、ＪＣＶ抗体は、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／２０８３２号に記載される方法によって検出することができ、それは、生体試料中の抗ＪＣＶ抗体結合のレベルを検出するための、抗ＪＣＶ抗体の結合に好適な条件下でＨＰＶＬＰを利用する。ＪＣＶ状態を決定する方法はまた、抗ＪＣＶ抗体価および阻害パーセントを決定する方法も含む。抗ＪＣＶ抗体価および阻害パーセントの検出は典型的に、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／２０８３２号に記載されるツーステップ抗体検出アッセイを含む。
患者からの生体試料中でＪＣＶの存在、例えば、ＪＣＶ抗体、タンパク質、ペプチド、または核酸が特定される場合、患者は、「ＪＣＶ陽性」であることが決定される。陽性のＪＣＶ分類は、生体試料中のＪＣＶ抗体の存在、例えば、あらかじめ選択されている基準以上であるＪＣＶ抗体に対応する。あらかじめ選択されている基準は典型的に、特定のアッセイ、例えば、免疫測定法に従った、定性的値、例えば、抗体の「検出可能な」量である。
ＰＭＬ危険性を決定するための本明細書に記載される方法は、免疫調節物質、例えば抗ＶＬＡ−４療法（例えば、ナタリズマブ）、抗ＣＤ２０療法（例えば、リツキシマブ）、抗ＣＤ１１ａ療法（例えば、エファリズマブ）、もしくはミコフェノール酸モフェチルでの治療を検討する対象、現在免疫調節物質で治療されている対象において、または免疫調節物質での治療を中止した対象を含む、任意のヒト対象に有用であり得る。本方法は、多発性骨髄腫もしくはリンパ腫等のリンパ増殖性障害を有する個人；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した個人、または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、血液系腫瘍、または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）等の自己免疫疾患、クローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、または関節炎、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）を有する個人等の、ＰＭＬの影響を受けやすい場合があるその他の者に有用であり得る。危険性査定方法はまた、移植患者等の、免疫抑制薬または免疫調節療法を受容する対象に有用であり得る。例となる免疫抑制薬または免疫調節療法には、ナタリズマブ、リツキシマブ、エファリズマブ、およびミコフェノール酸モフェチルが含まれる。本方法は、Ｐｉｃｃｉｎｎｉ ｅｔ ａｌ．“Ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ
ｌｅｕｋｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ （ＰＭＬ）ｗｉｔｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６６：１９９−２０６，２０１０に開示される、障害を有するか、または薬物で治療されている対象における危険性を査定するために有用であり得、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
定義
本明細書に使用されるとき、「ＨＰＶＬＰ」は、大部分がＶＰ１タンパク質からなる、高度に精製されたＶＬＰ（「ウイルス様粒子」）である。本発明で特長とされる「ＨＰＶＬＰ」は、主に、主カプシドタンパク質「ＶＰ１」からなり、それはポリオーマウイルスであるＪＣウイルス（ＪＣＶ）からの、天然に生じるＶＰ１または組換えＶＰ１であり得る。ＨＰＶＬＰは、例えば、ＶＰ１の少なくとも１つの五量体サブユニット、１つを超える五量体サブユニット、最大７２の五量体サブユニット、またはそれを超える五量体サブユニットからなることができる。本発明のＨＰＶＬＰは、天然に生じる、無傷のＪＣウイルスに対抗して、抗体に結合することができる。幾つかの実施形態では、ＨＰＶＬＰは、ＪＣウイルスのマイナーカプシドタンパク質である、第２および任意に第３のポリペプチド、例えば、少なくとも１つのＶＰ２またはＶＰ３ポリペプチドを含む。ＶＰ２またはＶＰ３は、組換えまたは天然に生じるもしくは天然由来のポリペプチドであり得る。
かかる「高度に精製された」粒子は、１つを超えるＶＰ１五量体、例えば、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、７２のＶＰ１五量体、または１００未満のＶＰ１五量体を含有する。かかる高度に精製された粒子は、例えば、二重濾過を伴う方法によって得ることができる。例えば、一実施形態では、高度に精製されたＶＬＰの調製は、粒子を少なくとも２回、遠心分離によって、例えば、ショ糖クッションを通じて精製することによって得られる。他の実施形態では、ＨＰＶＬＰは、クロマト法を使用して調製される。一般に、ＨＰＶＬＰ調製物は、既定の対照試料を使用するＥＬＩＳＡアッセイにおけるその活性によって特定することができる。場合によっては、かかる対照試料は、低レベルのＪＣＶ抗体を含有する陰性対照および／または対照試料である。
本明細書に使用されるとき、「高シグナル対ノイズのＨＰＶＬＰ基質」は、ＨＰＶＬＰが上に配置される基質である。それを使用して、試料中の遊離（つまり、抗原または他の標的に結合していない、例えば、ＨＰＶＬＰのレベルを評価することができる。基質上のＨＰＶＬＰの濃度は、存在する抗ＪＣＶ抗体の量を測定するとき、それが１０〜３０、１５〜３０、１５〜２５、１８〜２２のシグナル対ノイズ比を提供するようなものである。実施形態ではシグナル対ノイズ比は、少なくとも１０、１５、１８、または２０である。実施形態では、シグナル対ノイズ比は、約１０、１５、１８、または２０である。シグナル対ノイズ比は、１．０の光学密度を与える試料、例えば、検量対照により決定され得る。ある実施形態では、ＨＰＶＬＰは、該基質上に、９６ウェルプレートのウェル中、０．４μｇ／ｍＬのＨＰＶＬＰの０．５ｍＬ、０．８ｍＬ、１．０ｍＬ、１．２ｍＬ、または１．５ｍＬを凍結乾燥させることからもたらされる濃度で提供される。ある実施形態では、ＨＰＶＬＰは、該基質上に、９６ウェルプレートのウェル中、０．４μｇ／ｍＬのＨＰＶＬＰの１．０ｍＬを凍結乾燥させることからもたらされる濃度で提供され、それはウェル当たり３０ｎｇ〜５０ｎｇ（例えば、４０ｎｇ）のＨＰＶＬＰに相当する。ある実施形態では、ＨＰＶＬＰは、該基質上に、９６ウェルプレートのウェル中、０．４μｇ／ｍＬのＨＰＶＬＰの０．０５ｍＬ〜０．３５ｍＬまたは０．１ｍＬ〜０．２ｍＬを凍結乾燥させることからもたらされる濃度で提供される。基質上に配置されるＨＰＶＬＰの量、または配置が達成される条件は、所望のシグナル対ノイズ比が得られる限り、変化させることができる。
シグナル対ノイズ比は、アッセイにおいてシグナル強度のダイナミックレンジを決定するために、陰性対照の光学密度値を検量用試料対照と比較することによって計算される。
ある実施形態では、試料は、約１００倍希釈され、陰性スコアに対するカットオフは、４５％以下である低減であり、陽性スコアに対するカットオフは、４５％超である。実施形態では希釈は、１００倍以外であるが、２００倍未満である。例えば、希釈は、５０倍〜１５０倍、７５倍〜１２５倍、８５倍〜１１５倍である。実施形態では、希釈は、１５０倍、１２５倍、１００倍、または７５倍未満である。実施形態では、希釈が１００倍以外（例えば、２００倍、４００倍、５００倍、８００倍、最大１，０００，０００倍超である場合、カットオフ、または他のパラメータは、希釈が１００倍であった場合、および陰性に対するカットオフが４５％未満であり、陽性に対するカットオフが４５％以上である場合に試料が受容するであろうスコアと同じスコア（陽性または陰性）を、試料が得るように調整される。
抗ＪＣＶ抗体検出アッセイ。アッセイは、生体試料を、ＨＰＶＬＰでコーティングされた基質に添加することによって行われ、当該技術分野で既知の方法を使用して検出される。一般に、マイクロタイタープレート（例えば、９６ウェルプレート）等の固体ベースプラットフォームが使用されるが、当該技術分野で既知の他の形式を使用することもできる。幾つかの実施形態では、生体試料は、アッセイに使用する前に希釈される。
ある特定の実施形態では、アッセイ形式は、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）である。広くは、本方法は典型的に、基質を、ＨＰＶＬＰ等の捕捉抗原でコーティングし、試薬を捕捉するように導かれる結合抗体を含有する試料をインキュベートし、洗浄して非特異的に結合した種を除去し、結合された免疫複合体を、例えば、発色または化学発光アッセイによって検出すること含む。発色基質は、着色された最終産物を産生し、それは視覚的に、または分光光度計の使用により検出および測定することができる。化学発光基質は、光を生成し、それを輝度計を使用して測定することができる。
プレートをＨＰＶＬＰでコーティングすることは一般に、固体基質（マイクロタイタープレートのウェル等）を、好適な濃度（例えば、０．４μｇ／ｍＬ）のＨＰＶＬＰの溶液で、一晩または指定される時間数のいずれかにわたってインキュベートすることを含む。ＨＰＶＬＰは、唯一のＪＣＶウイルス構成成分としてＶＰ１を含むことができるか、あるいはＨＰＶＬＰは、粒子当たりＶＰ２またはＶＰ３のうちの少なくとも１つ、または粒子当たりＶＰ２およびＶＰ３の各々少なくとも１つを含有する、異種性粒子であり得る。ＨＰＶＬＰでのコーティング後、プレートのウェルは、洗浄される。基質は次いで、試験対象の試料に関して抗原的に中性である、非特異的タンパク質で「コーティングされ」る。好適なコーティング材は、当該技術分野で既知であり、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、糖類、または粉乳の溶液を含む。プレートは次いで、乾燥させられ、アッセイの次のステップに進む前に、１日、１ヶ月間、または１年間等のより長い一定期間にわたって保管されてもよい。
試料または参照物は、調製された基質上で、複合体形成（ＨＰＶＬＰ／ＪＣＶ抗体）を可能にするのに有効な条件下でインキュベートされ、このようにして結合された複合体を形成する。結合された複合体の検出は、ヒト抗体に結合することができる、標識された抗体を使用して行われる。一般に、標識された抗体は、ヒトＩｇＧまたはヒトＩｇＧおよびＩｇＭを検出することができる。場合によっては、アッセイは、二次または三次検出法を使用して行うことができる。
参照試料は、個人の尿中のＪＣＶ ＤＮＡの存在に基づいてＪＣウイルスに感染したことが知られる（尿陽性（ｕｒｏ陽性））個人から単離される、同じ生物学的物質（例えば、血漿、血清、尿、またはＣＳＦ）の試料であり得る。参照試料を使用して、アッセイの偽陰性率が１％〜３％を超えないにアッセイカットポイントが確立される。
「複合体形成を可能にするのに有効な条件下」は、一般に、試薬が、バックグラウンドを低減し、指定される範囲内にある結果の読み出しを提供するように希釈された条件を意味する。希釈液は、非限定的例において、ＢＳＡを含む溶液、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、またはＴｗｅｅｎを含有するＰＢＳが含むことができる。
「好適な」条件はまた、有効な結合を可能にするのに十分な温度であるかつ／または一定期間にわたる条件を含む。インキュベーションは典型的に、約１〜２時間または１〜４時間、およそ２５℃〜２７℃の温度であるか、または一晩、約４℃であってもよい。しかしながら、当業者であれば、他の条件が好適な場合があることを理解するであろう。
一般に、アッセイのインキュベーションの間に１回以上の洗浄が行われる。適切な洗浄溶液には、希釈液緩衝液（例えば、ＰＢＳまたはＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）またはホウ酸塩緩衝液が含まれる。
一般に、ＨＰＶＬＰに結合した抗体の検出は、当該技術分野で周知の方法を使用して行われる。一般に、かかる方法は、放射性タグ、蛍光タグ、生物学的タグ、または酵素タグ等の、標識またはマーカーの検出に基づく。かかる標識の使用に関する米国特許には、例えば、米国特許第３，８１７，８３７号、第３，８５０，７５２号、第３，９３９，３５０号、第３，９９６，３４５号、第４，２７７，４３７号、第４，２７５，１４９号、および第４，３６６，２４１号が含まれる。一般に、抗ＪＣＶ抗体結合の検出は、標識されている二次抗体を使用して検出される。一般に、二次抗体は、ヒトＩｇＧを検出することに対して特異的である。定量化は、例えば、可視スペクトル分光光度計を使用して、生成される色素の度合いを測定することによって達成される。
一実施形態では、アッセイは、診療所において、生体試料が患者から得られる施設に勤務する医療提供者等、例えば、医師、看護師、または技師によって行われる。別の実施形態では、患者から得られる生体試料は、アッセイが行われる別の施設、例えば、第三者施設に輸送される。後者の場合において、アッセイの結果は、医療提供者に、郵送によってもしくは電子的に（例えば、ファクシミリまたは電子メールを通じて）、またはオンラインデータベースを通じて提出され得る、記入用紙等を通じて折り返し報告され得る。一実施形態では、アッセイの結果（スクリーニングアッセイ、および任意に、確認アッセイを含む）は、データベース内に保管され得、医療提供者によって、ワールドワイドウェブを通じて等でアクセスされ得る。
二次試験。場合によっては、例えば、試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルが指定される「曖昧区間」または「不確定区間」に該当するとき、例えば、抗ＪＣＶ抗体の存在または不在に関して確実性が限定されることが決定される場合（ｎＯＤ値が０．２超かつ０．４未満であることが決定されるとき等）、試料の二次試験（本明細書で「確認アッセイ」とも称される）が用いられる。二次試験のために、生体試料の２つのアリコートが使用される。第１のアリコートは、アッセイに使用する前に、試料を、溶液中のアッセイ緩衝液の存在下で、一定期間（例えば、３０分間、１時間、または一晩等のより長くにわたって４℃で）プレキュベートすることによって調製される。第２のアリコートは、アッセイに使用する前に、試料を、溶液中のＨＰＶＬＰの存在下で、一定期間（例えば、３０分間、または１時間もしくはより長くにわたって）プレキュベートすることによって調製される。２つのアリコートは次いで、本明細書に記載されるＨＰＶＬＰアッセイにおいて使用され、抗ＪＣＶ抗体陽性または抗体陰性への試料の割り当てが行われる。ＨＰＶＬＰでインキュベートされたアリコートについてのアッセイ結果が、４５阻害％（すなわち、「カットポイント」）未満の値を示す場合、試料は、ＪＣＶ特異的抗体の存在に対して陰性と解釈される。アッセイ結果が４５％阻害以上の値を示す場合、試料は、ＪＣＶ特異的抗体を有し、したがって抗体陽性として解釈される。
二次試験を利用する本発明で特長とされるアッセイはまた、本明細書で「ツーステップ試験」または「ツーステップアッセイ」と称される。２つのステップアッセイの旧バージョンは、譲受人共通の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２０８３２号に記載され、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
基質および溶液ベースの方法。任意の好適な固体基質をＨＰＶＬＰアッセイ形式のために使用することができる。幾つかの実施形態では、基質は、マイクロタイタープレート（例えば、９６ウェルプレート）スライド、ビーズ、またはカラムである。基質は、発色もしくは化学発光検出法、または近位ライゲーション（ｐｒｏｘｉｍａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ）等の溶液ベースの方法に好適であり得る。
カットポイント。本発明は、偽陰性および偽陽性率を低減するために「カットポイント」を用いる、分析法を提供する。カットポイントは、ＨＰＶＬＰアッセイ（例えば、生体試料中のＪＣＶ抗体を検出するための）からのデータに基づいて確立され、例えば、二重試験試料と多重反復試料（例えば、対照試料の少なくとも２つ、少なくとも４つ、または少なくとも８つの反復試料）との間で平均化される。カットポイントはまた、非ＰＭＬおよびＰＭＬ試料の大きいパネルを使用して、統計的に決定することもできる。
本発明によるアッセイの１つのバージョンでは、最初のＨＰＶＬＰスクリーニングアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイからの結果は、試験試料がＪＣＶ特異的抗体を有するまたは有さないものとして分類されるようにし、さもなければ、試料がこれらの２つの分類のうちの１つに該当しない場合、試料は、補足的確認アッセイに供されることになる。例えば、本発明で特長とされるＨＰＶＬＰ ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、確立されたレベル未満（例えば、ｎＯＤ４５０＜０．２）の結果をもたらす試料は、ＪＣＶ特異的抗体を欠いているとして分類されることになり、ＥＬＩＳＡにおいて、確立されたレベルを超える（例えば、ｎＯＤ４５０＞０．４）結果を提供する試料は、ＪＣＶ特異的抗体に対して陽性として分類されることになる。これらの分類のうちの１つに明確に該当しない（例えば、０．２＜ＯＤ４５０＜０．４）試料は、確認アッセイにおいて試験することができる。
一実施形態では、確認アッセイは、プレインキュベーションステップを必要とし、ここで試験試料は、下に更に詳述されるように、ＨＰＶＬＰ ＥＬＩＳＡにおける分析前に、緩衝液（または他の好適な溶液）対照でまたはＨＰＶＬＰ（緩衝液または他の好適な溶液中）でプレインキュベートして、ＪＣＶ特異的抗体を吸着処理する。ＨＰＶＬＰでのプレインキュベーション後、一次アッセイにおける反応が、緩衝液対照と比較して４５％未満減少する場合、試料は、ＪＣＶ特異的抗体の存在に対して陰性と解釈される。結果が、ＨＰＶＬＰでのプレインキュベーション後、一次アッセイにける緩衝液対照と比較して反応の４５％以上の低減を示す場合、試料は、ＪＣＶ特異的抗体を含有すると解釈される。幾つかの実施形態では、確認アッセイのみが行われる。
ＶＰ１。ＪＣＶ抗体についてのアッセイにおけるＨＰＶＬＰの使用は、アッセイの正確性を改善し得、分析および診断目的に好適なアッセイにおいて有用である。ＨＰＶＬＰを産生する際に使用するためのＶＰ１は、当該技術分野で既知の方法を使用して生成することができ、天然に生じるＶＰ１または組換えにより産生されるＶＰ１のいずれか、例えば、ＪＣウイルスからのＶＰ１であり得る。一般に、使用されるＶＰ１は、ＪＣＶのＭＡＤ１株からのＶＰ１である。幾つかの実施形態では、アッセイに使用されるＶＰ１は、１つを超えるＪＣＶ株からの、例えば、株１Ａ、１Ｂ、２Ａ、２Ｂ、３、４、および７のうちの１つ以上からのＶＰ１を含む。ＶＰ１、例えば、組換えにより合成されるＶＰ１の調製後、本明細書に記載されるアッセイにおいて使用するためのＶＰ１は次いで、密度勾配／超遠心分離法を含む、標準の生化学的方法、または一連の化学沈殿ステップである濃縮／透析およびイオン交換クロマトグラフィーを通じて、更に精製される。精製方法は典型的に、単量体ＶＰ１ポリペプチド、または五量体ＶＰ１を含む、より小さいタンパク質を除去するステップを含む。これらのより小さい粒子の除去は、例えば、１ステップまたは２ステップ（例えば、ＶＰ１単量体を除去するための第１の濾過ステップ、次いで五量体ＶＰ１粒子を除去するための第２の濾過ステップ）で行うことができる。かかる生化学的精製方法は、当業者に既知である。実施例１および７は、ＪＣＶ ＶＰ１−ＶＬＰ精製の２つの異なる方法を提供する。
本発明の一態様によるＨＰＶＬＰ調製物（ＨＰＶＬＰ）は、有意な量のＶＰ１単量体を含有しない（例えば、単量体を除去するために精製されている）。本発明の別の態様によるＨＰＶＬＰ調製物は、ＶＰ１五量体、またはより小さいサイズ（単量体を含む）の構成で、有意な量のＶＰ１分子を含有しない。ＨＰＶＬＰは、組換えＶＰ１または天然に生じるＶＰ１（例えば、ウイルスまたはウイルスカプシドから単離される）から調製することができる。幾つかの実施形態では、ＪＣウイルスからの主要ではないコートタンパク質、例えば、ＶＰ２またはＶＰ３のうちの一方または両方等の、更なるＪＣＶ構成成分が、ＨＰＶＬＰ粒子に含まれるか、または基質に関連付けられる。
場合によっては、組換えにより発現されるＶＰ１は、天然に生じるウイルスカプシドに似ている五量体またはＨＰＶＬＰへと組み立てられない場合があり、例えば、組換えにより発現されるＶＰ１は、管または他の非球形の形状へと組み立てられる場合がある。したがって、本発明は、形状が実質的に球形であるＨＰＶＬＰを産生する方法に関する。本発明は、調製物中のＨＰＶＬＰの少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９９％が、天然に生じるＪＣＶカプシドに似ている（例えば、正２０面体または実質的に球形の構成である）、ＨＰＶＬＰ調製物を含む。幾つかの実施形態では、ＨＰＶＬＰ調製物は、調製物中のＨＰＶＬＰの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％が天然に生じるＪＣＶカプシドに似ていることを含有する。かかる方法は、かかる調製をもたらす条件下でウイルスタンパク質を発現させること、ならびに／またはかかる調製物を産生するために、本明細書に記載される発現されたウイルスタンパク質を単離および精製することを含むことができる。
ＨＰＶＬＰを作製する方法。ＨＰＶＬＰは、例えば、バキュロウイルスを、ＪＣウイルスからのＶＰ１遺伝子等のＶＰ１遺伝子を発現するベクターで形質転換することによって、作製することができる。バキュロウイルスを使用して、昆虫細胞培養物（例えば、ＳＦ９細胞）または哺乳類細胞培養物等の細胞培養物を感染させ、その細胞がＶＰ１タンパク質を発現する。ＨＰＶＬＰは、細胞を溶解させ、一連の遠心分離および限外濾過ステップ通じて粒子を精製することによって単離される。一般に、精製は、ショ糖クッション沈降、等密度超遠心分離、および広範な限外濾過等の方法、または当業者に既知の他の方法を使用して行われる。ある特定の実施形態では、精製は、粒子を２回、ショ糖クッションを通じて遠心分離することを含むであろう。代替的な精製方法では、細胞が溶解され、粒子は、最終イオン交換ステップと共に、一連の沈殿および濃縮／透析ステップによって単離される。なおも別の代替的な方法では、ＨＰＶＬＰは、遠心分離ステップを用いずに、クロマト法によって精製される。
純度は、当該技術分野で既知の任意の好適な技法、例えば、分析超遠心分離、電子顕微鏡法、ＰＡＧＥ分析、質量分析、タンパク質濃度、または対照血清を用いるＥＬＩＳＡにおける活性を使用して、査定することができる。不十分に精製されたＶＬＰは、偽性に高い抗ＪＣＶ抗体レベルまたは曝露率の算出を生み出す、高バックグラウンドをもたらす。
幾つかの実施形態では、ＨＰＶＬＰは、唯一のＪＣウイルスタンパク質としてＶＰ１を含有する。
幾つかの実施形態では、ＨＰＶＬＰは、不均質粒子であり、したがって、ＶＰ１タンパク質、およびＪＣウイルスのマイナーコートタンパク質、例えば、ＶＰ２またはＶＰ３のうちの少なくとも１つを含む。別の実施形態では、ＨＰＶＬＰは、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３タンパク質を含む。ＶＰ１およびＶＰ２を含むＨＰＶＬＰは、当該技術分野で既知の方法を使用して、例えば、バキュロウイルスを、同じまたは異なるプロモータの制御下等で、ＶＰ１およびＶＰ２遺伝子を含む核酸で形質転換することによって、産生することができる。細胞培養物を、バキュロウイルスに感染させ、それらの細胞は、ＶＰ１およびＶＰ２を発現し、両方のタイプのタンパク質を含むＨＰＶＬＰが形成される。一実施形態では、ＶＰ１およびＶＰ２遺伝子は、異なるＤＮＡ分子上にあり、それらのＤＮＡ分子は、異なるバキュロウイルスへと形質転換され、それらのバキュロウイルスを使用して、同じ培養物中で細胞をトランスフェクトする。細胞は、ＶＰ１およびＶＰ２タンパク質を発現し、両方のタイプのタンパク質を含むＨＰＶＬＰが形成される。場合によっては、不均質ＨＰＶＬＰは、例えば、５つのＶＰ１ポリペプチド毎に１つまたは２つのＶＰ２ポリペプチドを含むであろう。一般に、ＨＰＶＬＰは、天然に生じるＪＣウイルスの場合と同様に、ＶＰ２ポリペプチドよりもＶＰ１ポリペプチドを多く含有するであろう。
ＶＰ１およびＶＰ３の両方またはＶＰ１およびＶＰ２分子の両方を含むＨＰＶＬＰは、例えば、バキュロウイルスを、同じまたは異なるプロモータの制御下で、それぞれＶＰ１およびＶＰ３遺伝子またはＶＰ１およびＶＰ２遺伝子を含む核酸で形質転換することによって、産生することができる。細胞培養物を、バキュロウイルスに感染させ、それらの細胞は、ＶＰ１およびＶＰ３またはＶＰ１およびＶＰ２を発現し、両方のタイプのタンパク質を含むＨＰＶＬＰが形成される。幾つかの実施形態では、ＶＰ１およびＶＰ３またはＶＰ１およびＶＰ２遺伝子遺伝子は、異なるＤＮＡ分子上にあり、それらのＤＮＡ分子は、異なるバキュロウイルスへと形質転換され、それらのバキュロウイルスを使用して、同じ培養物中で細胞をトランスフェクトする。細胞は、それぞれ、ＶＰ１およびＶＰ３タンパク質またはＶＰ１およびＶＰ２遺伝子を発現し、両方のタイプのタンパク質を含むＨＰＶＬＰが形成される。ＨＰＶＬＰ粒子は、ＪＣＶカプシドを単離するために使用される方法等の、当該技術分野で既知の方法を使用して、かかる調製物から単離することができる。
典型的に、不均質ＨＰＶＬＰ中にあるＶＰ１五量体は、例えば、５つのＶＰ１ポリペプチド、ならびに構築物を作製するためにＶＰ３遺伝子それともＶＰ２遺伝子のどちらかが使用されたかに応じて、１つのＶＰ３ポリペプチドおよび／または１つのＶＰ２ポリペプチドを含むであろう。典型的に、ＨＰＶＬＰ中にはＶＰ３またはＶＰ２ポリペプチドよりもＶＰ１ポリペプチドが多く存在するであろう。幾つかの実施形態では、ＶＰ２またはＶＰ３は、ＪＣウイルスでないポリオーマウイルスからのもの、例えば、ＢＫウイルスポリペプチドである。
ＶＰ１およびＶＰ２およびＶＰ３分子の３つ全てを含むＨＰＶＬＰは、バキュロウイルスを、同じまたは異なるプロモータの制御下等で、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３遺伝子を含む核酸（例えば、環状ＤＮＡ、例えば、５．５ｋｂ未満）で形質転換することによって、産生することができる。哺乳類細胞培養物等の細胞培養物を、バキュロウイルスに感染させ、それらの細胞は、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３タンパク質を発現する。３つ全てのタイプのタンパク質を含むＨＰＶＬＰが結果として形成される。一実施形態では、ＶＰ１、ならびにＶＰ２およびＶＰ３遺伝子のいずれかまたは両方は、異なるＤＮＡ分子上にあり、それらのＤＮＡ分子は、同じまたは異なるバキュロウイルスへと形質転換され、それらのバキュロウイルスを使用して、同じまたは別個の培養物中で細胞をトランスフェクトする。細胞は、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３タンパク質を発現し、両方のタイプのタンパク質を含むＨＰＶＬＰが形成される。不均質ＨＰＶＬＰは、例えば、５つのＶＰ１ポリペプチド、ならびにＶＰ２およびＶＰ３ポリペプチドの各々１つを含むことができるが、その比率は調製物内で変動してもよい。典型的に、ＨＰＶＬＰ中にはＶＰ２およびＶＰ３ポリペプチドよりもＶＰ１ポリペプチドが多く存在するであろう。
幾つかの実施形態では、ＨＰＶＬＰは、ＶＰ１五量体よりもサイズが大きい。サイズが大きいとは、ＨＰＶＬＰ粒子に含有されるタンパク質の質量が、ＶＰ１を唯一含有する五量体よりも大きいことを意味する。
他の実施形態では、ＨＰＶＬＰの溶液を調製する方法は、溶液から、ＶＰ１五量体またはより小さいサイズである粒子（例えば、ＶＰ１単量体または小さいＶＰ１含有粒子）を除去することを含む可能性がある。遠心分離およびサイズ排除クロマトグラフィー等の方法を使用して、この精製ステップを行うことができる。幾つかの実施形態では、当該技術分野で既知の他の方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィーを、ＶＰ１五量体よりも大きいＨＰＶＬＰの調製において使用することができる。一般に、アッセイにおいて使用するのに好適なＨＰＶＬＰ調製物は、非ＨＬＶＬＰ粒子と比較して少なくとも２０％ＨＰＶＬＰ、少なくとも２５％ＨＰＶＬＰ、少なくとも４０％ＨＰＶＬＰ、少なくとも６０％ＨＰＶＬＰ、少なくとも６５％ＨＰＶＬＰ、少なくとも７０％ＨＰＶＬＰ、少なくとも８０％ＨＰＶＬＰ、少なくとも８５％ＨＰＶＬＰ、少なくとも９０％ＨＰＶＬＰ、少なくとも９５％ＨＰＶＬＰ、または少なくとも９９％ＨＰＶＰＬを含有するであろう（例えば、ＶＰ１単量体および５つよりも少ないＶＰ１分子を含有する凝集体と比較した五量体のパーセント分だけ）。
試料および／または対象を評価する方法。本明細書に使用されるとき、対象または対象からの生体試料を評価または分析する方法は、試料の分析を行うこと、試料の分析を請求すること、試料の分析からの結果を請求すること、または試料の分析からの結果を受け取ることのうちの１つ以上を含む。（本明細書で一般に、決定（または決定すること）、分析、または評価（または評価すること）は、基礎的な方法を行うこと、または基礎的な方法を行った別の者からデータを受容することのうちの一方または両方を含むことができる。）
分析または評価は、物質、例えば、生物学的物質またはアッセイ構成成分のある種の変換を必要とする。例えば、生体試料を、抗ＪＣＶ抗体の存在、抗ＪＣＶ抗体価、およびＪＣＶ抗体の阻害パーセントについて評価することができる。評価は、患者がＭＳ等に対する治療を受容している前もしくは後、またはそれと同時に行うことができる。評価は、少なくとも一部には、対象からの試料、例えば、血液、血漿、血清、尿、またはＣＳＦ試料の分析に基づく。抗ＪＣＶ抗体の存在は、特異的な結合剤、例えば、ＶＰ１等のＪＣＶタンパク質との接触によって決定され得る。結合剤は、ＪＣＶタンパク質、例えば、粒子の形態のＶＰ１、例えば、ＨＰＶＬＰであり得る。
一実施形態では、抗ＪＣＶ抗体の存在を検出するためのアッセイは、本明細書に記載されるような、ツーステップアッセイである。アッセイは、抗ＪＣＶ抗体に結合するのに好適な条件下でＨＰＶＬＰを利用する。アッセイは、抗ＪＣＶ抗体の任意のアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む）を検出することができる。アッセイはまた、高感度であり、例えば、２．０μｇ／ｍＬ以下、例えば、１．５μｇ／ｍＬ以下、１．２５μｇ／ｍＬ以下、１．０μｇ／ｍＬ以下、０．５μｇ／ｍＬ以下、５０ｎｇ／ｍＬ以下、１０ｎｇ／ｍＬ以下、５ｎｇ／ｍＬ以下、１．７ｎｇ／ｍＬ以下、または１ｎｇ／ｍＬ以下の濃度の抗ＪＣＶ抗体を検出することができる。
一実施形態では、試料は、試料中に存在するＪＣＶ核酸のレベルについて分析される。例えば、核酸は、試料から単離し、ＰＣＲ増幅または次世代（Ｎｅｘ−Ｇｅｎ）シークエンシング技法に使用することができる。一実施形態では、生体試料の粗溶解物は、ＰＣＲ等の増幅法の対象となり、増幅された産物は、ＪＣＶ ＤＮＡまたはＲＮＡが試料中に存在するかどうか、およびどれほどが試料中に存在するかを特定するために、電気泳動、制限断片マッピング、ハイブリダイゼーション、または配列決定のうちの１つ以上によって分析される。
生体試料は、患者から取り出し、分析することができる。
幾つかの実施形態では、患者試料、例えば、血清または血漿または全血試料またはＣＳＦ、は、ＪＣＶについての、例えば、ＪＣＶ抗体についてのまたはＪＣＶ核酸についての試験実施前に、保管することができる。患者試料、例えば、ＪＣＶ抗体またはＪＣＶ核酸を含有する患者試料は、１〜２１日間、例えば、１〜１４日間もしくは１〜７日間、またはより長く（例えば、１日、２日間、３日間、５日間、７日間、１０日間、１４日間、２１日間、またはより長く）にわたって；１〜６週間、例えば、１〜３週間もしくは１〜２週間、またはより長く（例えば、最大１週間、最大２週間、最大３週間、最大６週間、またはより長く）にわたって；あるいは１〜６ヶ月、例えば、１〜３ヶ月もしくは１〜２ヶ月、またはより長く（例えば、最大１ヶ月、最大２ヶ月、最大３ヶ月、最大６ヶ月、またはより長く）にわたって保管することができる。試料は、例えば、凍結（例えば、−８０℃〜−２０℃で）されるか、２〜８℃で、周囲温度（１８℃〜２５℃）、またはより温暖で、例えば、３７℃で、保管することができる。
本明細書に使用されるとき、「獲得する」または「獲得すること」という用語は、物理的実体または値、例えば、抗ＶＬＡ−４療法もしくは他の免疫抑制薬への先の曝露等の患者の状態、またはＪＣＶ状態を「直接的に獲得すること」または「間接的に獲得すること」によって、物理的実体または値、例えば、数値の所有を得ることを指す。「直接的に獲得すること」は、物理的実体または値を得るためにプロセスを行うこと（例えば、合成または分析法を行うこと）を意味する。「間接的に獲得すること」は、物理的実体または値を、別の当事者または源（例えば、物理的実体または値を直接的に獲得した第三者研究室）から受けることを指す。物理的実体を直接的に獲得することは、物理的物質、例えば、出発物質における物理的変化を含むプロセスを行うことを含む。例となる変化には、２つ以上の出発物質から物理的実体を作製すること、物質をせん断または断片化すること、物質を分離または精製すること、２つ以上の別個の実体を混合物中に組み合わせること、共有結合または非共有結合を切断または形成することを含む化学反応を行うことが含まれる。値を直接的に獲得することは、試料または別の材料における物理的変化を含むプロセスを行うこと、例えば、物質、例えば、試料、分析物、または試薬における物理的変化を含む分析プロセスを行うことと（本明細書で時に「物理的分析」と称される）、分析法、例えば、次のうちの１つ以上を含む方法を行うこととを含む：物質、例えば、分析物、またはその断片もしくは他の誘導体を、別の材料から分離または精製すること；分析物、またはその断片もしくは他の誘導体を、別の材料、例えば、緩衝液、溶媒、または反応物質と組み合わせること；あるいは分析物、またはその断片もしくは他の誘導体の構造を、例えば、分析物の第１の原子と第２の原子との間の共有結合または非共有結合を切断または形成することによって、変化させること；あるいは試薬、またはその断片もしくは他の誘導体の構造を、例えば、試薬の第１の原子と第２の原子との間の共有結合または非共有結合を切断または形成することによって、変化させること。
患者の状態（例えば、ＪＣＶ状態）、または活性レベルを決定すること、およびその状態が参照基準とのあらかじめ選択されている関係を有するかどうかを決定することのうちの少なくとも一方または両方は、試料を分析すること、試料の分析を請求すること、試料の分析からの結果を請求すること、または試料の分析からの結果を受けることのうちの１つ以上を含む。（一般に、分析は、基礎的な方法を行うこと（例えば、免疫測定法）、または基礎的な方法を行った別の者からデータを受けることのうちの一方または両方を含むことができる）。
抗ＶＬＡ−４療法。抗ＶＬＡ−４療法は、ＶＬＡ−４活性を遮断する分子、例えば、小分子化合物またはタンパク質生物製剤（例えば、抗体、またはその抗原結合断片等のその断片）である。抗ＶＬＡ−４療法である分子は、ＶＬＡ−４アンタゴニストである。ＶＬＡ−４アンタゴニストは、ＶＬＡ−４インテグリンがリガンドおよび／または受容体に結合することを阻害する、任意の化合物を含む。抗ＶＬＡ−４療法は、抗体（例えば、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）））またはその断片、またはリガンドの可溶型であり得る。α４インテグリンに対するリガンドタンパク質の可溶型は、可溶性ＶＣＡＭ−Ｉもしくはフィブロネクチンペプチド、ＶＣＡＭ−Ｉ融合タンパク質、または二機能性ＶＣＡＭ−Ｉ／Ｉｇ融合タンパク質を含む。例えば、ＶＬＡ−４リガンドの可溶型またはその断片は、ＶＬＡ−４に結合するように施与されてもよく、幾つかの事例では、細胞上のＶＬＡ−４結合部位に対して競合し、それによって抗ＶＬＡ−４抗体等のアンタゴニストの施与と同様の効果をもたらす。例えば、ＶＬＡ−４リガンドに結合するが、インテグリン依存性シグナル伝達を引き出さない、可溶性ＶＬＡ−４インテグリン突然変異体は、記載される方法において使用するのに好適である。かかる突然変異体は、野生型インテグリンタンパク質の競合阻害剤として作用することができ、「アンタゴニスト」と見なされる。他の好適なアンタゴニストは、「小分子」である。
「小分子」は、例えば、ＶＬＡ−４に結合し、ＶＬＡ−４リガンド（例えば、ＶＣＡＭ−Ｉまたはフィブロネクチン）との相互作用を遮断することによって、またはＶＬＡ−４リガンドに結合し、リガンドがＶＬＡ−４と相互作用することを防止することによって、ＶＬＡ−４／リガンド相互作用を妨害するペプチドの作用を模倣する薬剤である。１つの例となる小分子は、ＶＬＡ−４リガンド（例えば、フィブロネクチンまたはＶＣＡＭ−Ｉ）のの結合ドメインを模倣し、ＶＬＡ−４のリガンド結合ドメインに結合する、オリゴ糖類である。（全て参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｅｖｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４００−４０６ （１９９０）、Ｓｃｏｔｔ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０ （１９９０）、および米国特許第４，８３３，０９２号（Ｇｅｙｓｅｎ）を参照されたい。）
「小分子」は、化学化合物、例えば、有機化合物、もしくは小ペプチド、またはより大きいペプチド含有有機化合物もしくは非ペプチド性有機化合物である。「小分子」は、抗体または抗体断片を包含することは意図されない。小分子の分子量は、一般に２０００ダルトン未満であるが、この数字は、分子量に対する絶対的上限としては意図されない。
併用療法または抗ＶＬＡ−４療法の代替手段。幾つかの実施形態では、患者が、ＰＭＬに対する危険性がより高いことが決定されるとき等には、抗ＶＬＡ−４療法、例えば、ナタリズマブが、第２の薬剤と共に施与されるか、または代替療法が、抗ＶＬＡ−４療法の代わりに施与される。
抗ＶＬＡ−４療法と組み合わせた、多発性硬化症を治療するための第２の薬剤、または抗ＶＬＡ−４療法の代わりに使用するための代替的な薬剤の非限定的例としては、フマル酸ジメチル等のフマル酸塩；Ｓ１Ｂ遮断抗体スフィンゴマブ等のスフィンゴシン１−リン酸（Ｓ１Ｐ）−アンタゴニスト；ヒトインターフェロンベータ−１ａ（例えば、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）またはＲｅｂｉｆ（登録商標）））およびインターフェロンβ−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）１７位で置換されたヒトインターフェロンβ；Ｂｅｒｌｅｘ／Ｃｈｉｒｏｎ）等のインターフェロン；酢酸グラチラマー（コポリマー１、Ｃｏｐ−１とも称される；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；抗ＣＤ２０抗体、例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）等の抗体もしくはその断片（その抗原結合断片等）、またはリツキシマブにより重複エピトープと競合もしくはそれを結合する抗体もしくはその断片；ミトキサントロン（ｍｉｘｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標）、Ｌｅｄｅｒｌｅ）；クラドリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）（ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（登録商標））、アザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ（登録商標））、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、シクロスポリン−Ａ、メトトレキサート、４−アミノピリジン、およびチザニジン（ｔｉｚａｎｉｄｉｎｅ）等の化学療法剤；メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＮＥ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）またはプレドニゾン等のコルチコステロイド；ＣＴＬＡ４ Ｉｇ；アレムツズマブ（ＭａｂＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））またはダクリズマブ（ＣＤ２５に結合する抗体）；スタチン；およびＴＮＦアンタゴニストが挙げられる。
酢酸グラチラマーは、アミノ酸（グルタミン酸、リジン、アラニン、およびチロシン（したがって、ＧＬＡＴｉｒａｍｅｒ））のランダム鎖から形成されるタンパク質である。酢酸グラチラマーは、これらのアミノ酸からの溶液中で、およそ５部のアラニン対３部のリジン、１．５部のグルタミン酸および１部のチロシンの比率で、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物を使用して合成することができる。
更なる第２の薬剤、または抗ＶＬＡ−４療法の代わりに使用するための薬剤には、他のヒトサイトカインまたは成長因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦの抗体またはアンタゴニストが含まれる。依然として他の例示的な第２の薬剤には、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０等の細胞表面分子またはそれらのリガンドに対する抗体が含まれる。例えば、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｂｍａｂ）は、多発性硬化症を寛解させ得る抗ＣＤ２５抗体である。
依然として他の例示的な抗体には、インターフェロン受容体、例えば、インターフェロンベータ受容体に係合する抗体等の、本明細書に記載される薬剤の活性を提供する抗体が含まれる。典型的に、第２の薬剤が抗体を含む実現例において、それは、ＶＬＡ−４以外もしくはα４インテグリン以外の標的タンパク質、または少なくともナタリズマブによって認識されるもの以外のＶＬＡ−４上のエピトープに結合する。
依然として他の更なる例示的な第２の薬剤には、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、本明細書に記載される炎症誘発性サイトカインによってシグナル伝達を干渉する薬剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤等のＴ−細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテアーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、明細書に記載される可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体、抗炎症サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＴＧＦ）が含まれる。
幾つかの実施形態では、第２の薬剤をまた使用して、ＭＳの１つ以上の症状または副作用を治療してもよい。かかる薬剤には、例えば、アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドキュセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレッシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファキシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソナイアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、臭化プロパンテリン、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリンが含まれる。小分子である多くの第２の薬剤は、１５０〜５０００ダルトンの分子量を有する。
ＴＮＦアンタゴニストの例としては、Ｄ２Ｅ７（ヒトＴＮＦα抗体、米国特許第６，２５８，５６２号；ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα 抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）等の、ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦα）に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または体外で生成された抗体（またはその抗原結合断片）；抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の可溶性断片、例えば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ ３７：Ｓ２９５，１９９４、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．４４：２３５Ａ，１９９６を参照されたい）、ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（商標））；酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦα転換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えば、アルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＷＯ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ３３３３、−００５、または−０２２）；ならびに、ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ ３９：Ｓ２８４，１９９６、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．− Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２６８：３７−４２，１９９５を参照されたい）が挙げられる。
一つの実現例では、抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤は、共製剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）として提供され、その共製剤が対象に施与される。例えば、共製剤の施与の少なくとも２４時間前または後に、抗ＶＬＡ−４療法製剤の１回用量、次いで第２の薬剤を含有する製剤の１回用量を別個に施与することも更に可能である。別の実現例では、抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤は、別個の製剤として提供され、施与するステップは、抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤を順次施与することを含む。順次の施与は、同じ日（例えば、互いの１時間以内、または少なくとも３、６、もしくは１２時間空けて）または異なる日に提供することができる。
抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤の各々は、複数回の用量として別個の時間に施与することができる。抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤は典型的に各々、レジメンに従って施与される。一方または両方についてのレジメンは、一定周期性を有してもよい。抗ＶＬＡ−４療法についてのレジメンは、第２の薬剤についてのレジメンから異なる周期性を有することができ、例えば、一方を他方よりも頻繁に施与することができる。一つの実現例では、抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤のうちの一方は、週１回施与され、他方は、月１回施与される。別の実現例では、抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤のうちの一方は、継続的に、例えば、３０分を超えるが、１、２、４、または１２時間未満の期間にわたって施与され、他方は、ボーラスとして施与される。抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤は、任意の適切な方法によって、例えば、皮下に、筋肉内に、または静脈内に、施与することができる。
幾つかの実施形態では、抗ＶＬＡ−４療法および第２の薬剤の各々は、各々が単剤療法として処方されるため、同じ用量で施与される。他の実施形態では、抗ＶＬＡ−４療法は、単独で施与される場合に有効性のために必要とされる量、あるいはそれより低い量である投薬量で、施与される。同様に、第２の薬剤は、単独で施与される場合に有効性のために必要とされる量あるいはそれより低い量である投薬量で、施与することができる。
キット．抗ＪＣＶ抗体アッセイを行うための試薬は、キットの形態で提供することができる。患者試料を除いて、アッセイのために必要とされる幾つかまたは全ての物質は、キット中で提供することができる。キットは、例えば、ＪＣＶ抗原基質、例えば、ＨＰＶＬＰでコーティングされたウェルを有するプレート等の、基質を含むことができる。プレートは、例えば６ウェルプレート、１２ウェルプレート、２４ウェルプレート、４８ウェルプレート、９６ウェルプレート、または３８４ウェルプレートであり得る。キット中で提供されるプレートは、０．４μｇ／ｍＬ等のＪＣＶ ＶＬＰ抗原でプレコーティングされ得る。一実施形態では、キットは、Ｍｅｒｉｅｕｘ系と共に使用するためのＳＰＲ（固相レセプタクル）チップ等の、高処理系と共に使用するための物質および試薬を含む。
キットはまた、アッセイの確認ステップと共に使用するため等のＪＣＶ抗原、例えば、凍結乾燥させられたまたは溶液中のＨＰＶＬＰも含む可能性がある。一実施形態では、キットは、ヒト血清等の血清の試料である、ＪＣＶカットオフ検量用試料、抗ＪＣＶ抗体陽性対照、およびＪＣＶ陰性対照を含む。ＪＣＶ抗原および血清を含有する溶液は、アジ化ナトリウム、例えば、０．０５％、０．１％、１．５％、および２％アジ化ナトリウム等の、防腐剤を含むことができる。一実施形態では、本発明で特長とされるキットは、ＨＰＶＬＰ等の抗原に結合した抗ＪＣＶ抗体を含有する複合体を検出するための１つ以上の試薬を含むことができる。試薬を検出するための複合体は、例えば、ＪＣＶ複合体、カゼイン試料、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）等の検出可能な試薬、洗浄緩衝液、および停止試薬を含む。
ＪＣＶ基質は、例えば、酵素標識された抗ヒト抗体等の抗ヒト抗体であり得る。一実施形態では、ＪＣＶ複合体は、親和性精製され、ペルオキシダーゼ標識された、ロバ抗ヒト抗体である。別の実施形態では、カゼイン溶液は、緩衝液中、カゼイン、界面活性剤、および非アジド防腐剤（例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ））を含有する。別の実施形態では、ＴＭＢ基質溶液は、緩衝液中、ＴＭＢおよび過酸化水素を含む。別の実施形態では、キットは、洗浄緩衝液を含み、洗浄緩衝液は、例えば、非アジド防腐剤を有するＰＢＳ中、界面活性剤を含有することができる。停止試薬は、例えば、硫酸（例えば、１Ｍ硫酸）等の、酸であり得る。
キット中に提供される溶液は、使用前に希釈が必要とされるような濃縮レベルで提供することができる。ツーステップアッセイの確認ステップにおける等、生体試料中の抗ＪＣＶ抗体に結合する溶液中で使用するためのＨＰＶＬＰは、例えば、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、０．８μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、０．２μｇ／ｍＬで使用するために、２ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供することができる。洗浄緩衝液は、例えば、１０倍濃縮で提供することができる。ＪＣＶ基質（親和性精製され、ペルオキシダーゼ標識されたロバ抗ヒト抗体等）は、抗ＪＣＶ抗体検出アッセイに使用する前に、例えば、１：４０，０００、１：３０，０００、１：２０，０００、または１：２０，０００希釈のために、例えば、１ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、または０．６ｍｇ／ｍＬで提供することができる。
密封テープ等の、反応混合物を密封するための物質もまた、キット中に含めることができる。
結果の報告。の結果危険性−査定分析は、治療院、または医療提供者、または保険提供業者等に報告することができる。一実施形態では、危険性査定の結果は、データベース内に保管される。
一実施形態では、情報資料が、危険性査定を行い、それを解釈するために提供される。情報資料は、査定の結果を、治療院または医療提供者またはデータベース提供者等のどこに報告すべきかについての手引きを提供することができる。情報資料は、キットまたはパケット中に提供することができ、査定の各分岐（抗ＶＬＡ−４治療法での先の治療、免疫抑制薬での先の治療、およびＪＣＶ状態に関する情報）、ならびにかかる記入用紙もしくは他の関連情報をどこに送付すべきかに関する住所および連絡先情報を含む、査定の結果を報告するための記入用紙；または結果をオンラインデータベウースもしくはオンラインアプリケーション（例えば、「ａｐｐ」）で報告するためのＵＲＬ（ユニフォーム・リソース・ロケータ）アドレスを含む可能性がある。別の実施形態では、情報資料は、危険性査定の結果に従った患者のＰＭＬの危険性に応じて、患者が抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容すべきかどうかに関する手引きを含む可能性がある。
キットまたはパケットはまた、医療提供者への患者試料の収集もしくは輸送のための、または医療提供者から試料を受け取るための、または本明細書に記載される評価法を行うための、指示書および項目を含んでもよい。例えば、指示情報の他に、本発明で特長とされるキットまたはパケットは、生体試料を収集する、ならびに保管および輸送するための、スワブまたはスクレーパー、または入れ物（例えば、カップ、試験管、アンプル、またはバッグ）のうちの１つ以上を含むことができる。キットまたはパケットはまた、それぞれ、ＪＣＶ抗体または核酸の検出のために、免疫測定法または配列決定アッセイを行うための補給品を含有してもよい。
キットは、アッセイ、例えば、ＪＣＶ検出アッセイのために必要とされる試薬のための１つ以上の容器を含むことができる。試薬は、アッセイにおいて使用するのに好適な濃度で、またはアッセイにおいて使用するための希釈についての指示書と共に、提供することができる。幾つかの実施形態では、キットは、各アッセイ構成成分のための、別個の容器、仕切り、または区画、および情報資料を含む。例えば、アッセイ構成成分は、瓶またはバイアル中に含有され得、情報資料が、プラスチックスリーブまたはパケット中に含められ得る。他の実施形態では、キットの別個の要素が、単一の分割されていない容器内に含有される。例えば、アッセイ試薬が、ラベルのの形態で情報資料が添付された、瓶またはバイアル中に含有される。幾つかの実施形態では、キットは、複数（例えば、パック）の個々の容器を含み、各々が、アッセイ構成成分の（例えば、１つのアッセイ共に使用するための）１つ以上の単位形態を含有する。例えば、キットは、複数のアンプル、ホイルパケット、またはブリスターパックを含み、各々が、スクリーニングまたは確認アッセイにおいて使用するためのアッセイ試薬の単一の単位を含有する。キットの容器は、気密および／または防水とすることができる。容器は、使用のためにラベル付けすることができる。
キットまたはパケットの情報資料は、その形態において限定されない。多くの場合、情報資料、例えば、指示書は、印刷物、例えば、印刷文字、図面、および／または写真、例えば、ラベルまたは印刷シートとして提供される。しかしながら、情報資料はまた、コンピュータ可読資料、ビデオ記録、またはオーディオ記録等の他の形式で提供することもできる。別の実施形態では、キットの情報資料は、連絡先情報、例えば、物理的住所、電子メールアドレス、ウェブサイト、または電話番号であり、ここでキットまたはパケットのユーザは、危険性査定分析に必要とされる情報をどのように見出すか、例えば、対象に施与された先の治療をどこでどのように特定するか、および患者のＪＣＶ状態を決定するためのアッセイをどのように行うかについての、実質的な情報を得ることができる。情報資料もまた、任意の組み合わせの形式で提供することができる。
幾つかの実施形態では、生体試料は、アッセイにおける試料を評価し、読み出しを提供するアッセイ提供者、例えば、サービス提供者（第三者施設等）または医療提供者に提供される。例えば、一実施形態では、アッセイ提供者は、血漿、血液、または血清試料等の対象からの生体試料を受容し、本明細書に記載されるアッセイを使用して試料を評価し、試料がＪＣＶ抗体または核酸含有することを決定する。幾つかの実施形態では、アッセイ提供者、例えば、サービス提供者または医療提供者は更に、例えば、医療提供者またはデータベースサービス提供者に連絡することによって、患者が受容したことがある先の抗ＶＬＡ−４療法の量、または患者が以前に免疫調節物質での治療を受容したことがあるかどうかを決定することができる。アッセイ提供者は更に、対象がナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補でないこと、または対象が免疫調節物質での治療を受容する候補であること、または対象が、陰性のＪＣＶ状態を有することが決定される（例えば、ＪＣＶ核酸または抗ＪＣＶ抗体に対して陰性の試験結果である）対象と比較して、強化されたモニタリングを有するべき候補であり得ることを決定することができる。例えば、抗ＶＬＡ−４療法での先の治療を２４ヶ月以下にわたって受容したことがあり、免疫抑制薬での先の治療法を受容したことがなく、ＪＣＶ陽性であることが決定される候補は、更なる抗ＶＬＡ−４療法を受容する候補として選択され得るが、ＰＭＬの発症を示し得る症状等の有害症状の発症について、患者をより頻繁にモニタリングすることの推奨を伴う。
一実施形態では、アッセイ提供者は、本明細書に記載されるＰＭＬ危険性についての査定を行い、対象がナタリズマブ等の抗ＶＬＡ−４療法での治療を受容する候補であることを決定する。一実施形態では、アッセイ提供者は、医療提供者に、対象が抗ＶＬＡ−４療法での治療に対する候補であることを通知し、その候補は、抗ＶＬＡ−４療法を施与される。例えば、アッセイ提供者は、患者がＰＭＬに対する危険性がより低いことを決定し、その後、医療提供者に、より低い危険性の決定、および対象が抗ＶＬＡ−４療法での治療に対する候補であることを通知してもよい。
別の例では、アッセイ提供者は、患者がＰＭＬに対する危険性がより高いことを決定し、その後、医療提供者に、より高い危険性の決定を通知し、患者が抗ＶＬＡ−４療法での治療に対する候補であるが、患者がＰＭＬおよび任意にＪＣＶ状態についての増加した試験実施を受けるべきであることを推奨する。一実施形態では、アッセイ提供者は、医療提供者に、患者がＰＭＬのより高い危険性があり、したがって患者が抗ＶＬＡ−４療法の代替手段を受容すべきであること、または患者がＰＭＬおよび任意にＪＣＶ状態についての増加した試験実施による抗ＶＬＡ−４療法を受容する候補であることを通知する。
アッセイ提供者は、危険性査定の結果、および任意に、診断、予後、または適切な治療法選択肢のうちの１つ以上に関する結論を、例えば、医療提供者、または患者、または保険会社に、任意の好適な形式で、郵便物によってもしくは電子的に、またはオンラインデータベースを通じて等で提供することができる。アッセイ提供者によって収集され、提供される情報は、データベース内に保管することができる。
一実施形態では、医療提供者または保険提供業者または別の事業体は、例えば、患者または第２の医療提供者に、患者が本明細書に記載されるＰＭＬについての危険性査定を受けることを推奨する。
ＰＭＬ危険性階層化ツールは、ＶＬＡ４阻害剤またはＰＭＬを発症する危険性を増加させることが知られる他の治療薬を摂取するまたは摂取することを検討する患者のための、個々の便益−危険性治療決定を下す際の１つの構成要素として有用である。患者のＰＭＬ危険性の定量化を、例えば、便益−危険性分析において使用することができる。
見出し、例えば、（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、本明細書および特許請求の範囲を読むことを容易にするために提示されるにすぎない。本明細書および特許請求の範囲における見出しの使用は、ステップまたは要素がアルファベット順もしくは番号順で、またはそれらが提示される順序で行われることを必要としない。
本発明は、次の実施例によって更に例証されるが、それは更に限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例１．ＭＳ患者におけるＰＭＬ危険性を、２つの確立された危険因子、および独自のツーステップＶＰ１ ＶＬＰベースのＥＬＩＳＡによって決定される抗ＪＣＶ抗体状態を使用して、初めて定量化した。
方法
患者、試料、およびデータ収集
ＰＭＬの低頻度の出現に起因して、ナタリズマブ治療ＰＭＬ患者に関するデータを、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃのグローバルナタリズマブ安全性データベースからの市販後データおよび２０１１年３月４日現在の臨床治験を含む、複数の源から収集した。先の免疫抑制薬の使用データは、ナタリズマブに曝露された全ての患者については入手可能でなかったため、ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）Ｇｌｏｂａｌ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ ｉｎ Ｓａｆｅｔｙ（ＴＹＧＲＩＳ；ＮＣＴ００４７７１１３、ＮＣＴ００４８３８４７）における、先の免疫抑制薬の使用のあるまたはない患者の割合を、全体的なナタリズマブ治療集団に対する推定として使用した。ＴＹＧＲＩＳは、臨床実施設定でのナタリズマブ治療ＭＳ患者における長期的安全性データを得るように設計された、観察的コホート研究である。一般のＭＳ集団における抗ＪＣＶ抗体罹患率の査定は、進行中または完了したナタリズマブ臨床研究（ＡＦＦＩＲＭ （Ｐｏｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５４：８９９−９１０，２００６、ＳＴＲＡＴＩＦＹ−１ （ＮＣＴ０１０７０８２３）、ＴＹＧＲＩＳ−米国、およびスウェーデンにおける独立したＭＳレジストリ（インターネット上で、ｍｓｒｅｇ．ｎｅｔ／ｃｍｓ／ｓｖ／ｈｏｍｅ（２０１１年２月３日にアクセス）にて入手可能））を含む、４つの源からの患者から収集された単一ベースライン血漿または血清試料に基づいていた。臨床治験および市販後の両方の症例を含む、ＰＭＬ診断前に得られた血清および血漿試料の大規模な収集について、臨床計画を開発した。
ＰＭＬに対する危険因子としてのナタリズマブ治療継続期間の特定
ナタリズマブの市場再導入以来のＰＭＬ発生率の推定値を、２０１１年２月２８日までのナタリズマブ市販後曝露、および２０１１年３月現在で確認されるＰＭＬ症例の数に基づいて算出した。各時間枠（累積継続期間または１２ヶ月の治療間隔）にわたるＰＭＬ発生率を、その時間枠中にＰＭＬを発症した患者の数を使用して、これまでにナタリズマブにその時間の量にわたって曝露された患者の数で割って算出した。
ＰＭＬに対する危険因子としての先の免疫抑制薬の使用の特定
市販後設定および臨床治験における、ＰＭＬを発症したナタリズマブ治療ＭＳ患者の免疫抑制治療歴を、２０１０年１１月２日現在のＢｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃのグローバルナタリズマブ安全性データベースから得、ＴＹＧＲＩＳから得たデータと比較した。先の免疫抑制薬の使用歴についてのこのカットオフ日付を選択したのは（全ての他のデータについての２０１１年３月４日に対して）、これを危険因子としてラベリング（欧州、２０１０年１２月）（パッケージ挿入物、ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ．Ｗｅｓｔｏｎ，ＭＡ、２０１０年７月、製品概要、ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ．Ｗｅｓｔｏｎ，ＭＡ、２０１０年１２月１３日）に組み込むことが交絡因子となろうことが予想されたためである。
ＰＭＬに対する危険因子としての抗ＪＣＶ抗体状態の特定
一般のＭＳ集団における抗ＪＣＶ抗体の全体的な罹患率を、独自のツーステップＶＰ１
ＶＬＰベースのＥＬＩＳＡを使用して、以前に記載されたように（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０１０）決定した。診断前にＰＭＬ前の血清または血漿試料が入手可能であった場合の、ＰＭＬを有するＭＳ患者における抗ＪＣＶ抗体の罹患率もまた、このアッセイを使用して決定し、一般のＭＳ集団における全体的な罹患率と比較した。
抗ＪＣＶ抗体血清状態によるＰＭＬ発生率の推定
抗ＪＣＶ抗体陽性および陰性患者におけるＰＭＬの発生率を、ＰＭＬの全体的な世界的発生率、および２５〜４８回の注入後（この分析においてＰＭＬ発生率における増加が最も顕著であった後の時点）の発生率、一般のＭＳ集団における抗ＪＣＶ抗体罹患率、および診断前に抗ＪＣＶ抗体陽性の試験結果であったＰＭＬ前の試料が入手可能であった、ＰＭＬを有するＭＳ患者の数を使用して推定した。Ｆｉｓｈｅｒの正確確率検定の片側検定を使用して、抗ＪＣＶ抗体陽性患者および抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬの推定発生率を比較した。抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬ発生率の保守的な推定を提供するために、感受性分析を行って、この推定に対する仮想的抗ＪＣＶ抗体陰性ＰＭＬ症例の影響を査定した。更に、感受性分析を行って、抗ＪＣＶ抗体陽性ＰＭＬ症例の数を変動させることによってこの推定の統計的確実性を査定した。
ＰＭＬ危険性の定量化：先の免疫抑制薬の使用、ナタリズマブ治療継続期間、および抗ＪＣＶ抗体陽性状態
危険因子アルゴリズムを開発して、ナタリズマブ随伴ＰＭＬおよび抗ＪＣＶ抗体血清状態に対するある特定の危険因子のあるまたはない患者におけるＰＭＬ発生率を推定した。これらのアルゴリズムは、先の免疫抑制薬の使用（ありまたはなし）、ナタリズマブ治療継続期間（１〜２４ヶ月および２５〜４８ヶ月）、および抗ＪＣＶ抗体状態によるＰＭＬ危険性を推定した。これらの危険性アルゴリズムは、ナタリズマブ治療継続期間（１〜２４または２５〜４８ヶ月）、ならびにＴＹＧＲＩＳからのナタリズマブ治療患者における、およびＰＭＬを有する患者における先の免疫抑制薬の使用の推定による、ＰＭＬ発生率データに基づいていた。加えて、一般のＭＳ集団における抗ＪＣＶ抗体の推定される全体的な罹患率を使用して、ナタリズマブ随伴ＰＭＬの全ての確認された症例が診断前に抗ＪＣＶ抗体陽性であったと想定して、血清状態に関連付けられるＰＭＬの発生率を３因子危険性アルゴリズムに帰属させた。感受性分析を行って、観察された最も高い値および最も低い値に基づいて、この３因子アルゴリズムを開発するために使用された推定値を変動させる効果を定量化した。
結果
ＰＭＬに対する危険因子としてのナタリズマブ治療継続期間の特定
世界的な規模で、２０１１年３月４日現在のＰＭＬの１０２件の確認された症例を特定した。全体的に、ＰＭＬ危険性は、治療継続期間が増加すると共に増加し（図１Ａ）、２年間の療法後に危険性における最大の増加が生じ、３年目で患者１０００人当たり１．６８症例のピークに達した（図１Ｂ）。４年目を超えるデータは限定された。
ＰＭＬに対する危険因子としての先の免疫抑制薬の使用の特定
先の免疫抑制薬の使用は、ナタリズマブを受容する全体的な患者集団を代表したＴＹＧＲＩＳに登録した患者と比較して、ＰＭＬを発症したナタリズマブ治療患者においてよりよく見られた。ＴＹＧＲＩＳからのナタリズマブ治療患者における２０．３％（米国において１３．９％、および欧州において２３．６％）と比較して、ナタリズマブ治療ＰＭＬ患者の４５パーセントが、ナタリズマブでの治療を開始する前に１つ以上の免疫抑制療法を受容したことがあった。ナタリズマブ治療ＰＭＬ集団およびＴＹＧＲＩＳの両方において使用された、最も一般的な先の免疫抑制薬には、ミトキサントロン、メトトレキサート、シクロホスファミド、アザチオプリン、およびミコフェノール酸塩が含まれ、免疫抑制薬のタイプ、使用継続期間、または免疫抑制薬の中止とナタリズマブの開始との間の休薬期間において特定のパターンは何ら観察されなかった（表１）。
ＰＭＬ危険性の定量化：ナタリズマブ治療継続期間および先の免疫抑制薬の使用
患者を、ナタリズマブ治療継続期間（１〜２４または２５〜４８ヶ月）および先の免疫抑制薬の使用（ありまたはなし）によって階層化したとき、ＰＭＬの発生率に関して、患者の４つの明確に異なる下位群が特定された（図２）。これらの下位群のうちの３つは、１０００分の１未満またはそれにおよそ等しい推定ＰＭＬ発生率を有した。ＰＭＬ危険性は、ナタリズマブで１〜２４ヶ月にわたって治療され、かつ先の免疫抑制療法を受容したことがなかった患者において、１０００分の０．１９（９５％信頼区間：０．１０〜０．３３）で最も低かった。ＰＭＬに対するこれらの危険因子の両方を有した患者を含む、第４の下位群は、１０００分の４．３の推定ＰＭＬ発生率（９５％信頼区間：２．９〜６．２）で最も高い危険性を有した。
ＰＭＬに対する危険因子としての抗ＪＣＶ抗体状態の特定
ＡＦＦＩＲＭ、ＴＹＧＲＩＳ−ＵＳ、ＳＴＲＡＴＩＦＹ−１、およびスウェーデンＭＳ
レジストリからの５，８９６人の患者が、抗ＪＣＶ抗体試験実施のためのベースライン試料を入手可能であった。ナタリズマブ治療継続期間および先の免疫抑制薬の使用歴を含む人口統計は、入手可能であった場合、これらのデータ源の間で同様であった（表２）。本研究において査定された、一般のＭＳ集団における全体的な抗ＪＣＶ抗体罹患率は、５５％（９５％信頼区間：５４〜５６％）であった。
ＴＹＧＲＩＳ−米国データセットにおいて、１４８０人の患者のうちの１４５１人が、年齢、性別、および先の免疫抑制薬情報を得ることができた。ＳＴＲＡＴＩＦＹ−１データセットにおいて、１０９６人の患者のうちの９８８人が、先の免疫抑制薬情報を得ることができた。スウェーデンＭＳデータセットにおいて、２４９７人の患者のうちの２４６４人が、年齢情報を得ることができ、２４９７人の患者のうちの２４９４人が、性別情報を得ることができた。先の免疫抑制薬の使用は、スウェーデンＭＳ患者において得ることができなかった（該当なし）。
１つ以上のＰＭＬ前の試料を、２５人のナタリズマブ治療ＭＳ患者から、ＰＭＬ診断の６．５〜１８７ヶ月前に得た。補足表１に示されるように、これらの２５人の患者は、世界中の１０２件の確認されたＰＭＬ症例と同様であった臨床特性を有したが、それは明白な選択バイアスはないことを示している。複数のＰＭＬ前の試料が得ることができた全ての患者は、ナタリズマブ治療の開始前に収集された試料を含む、全ての時点で、抗ＪＣＶ抗体陽性の試験結果であった。ＰＭＬ診断前のＭＳナタリズマブ治療ＰＭＬ患者における１００％（２５人中２５人）の抗ＪＣＶ抗体陽性罹患率は、一般のＭＳ集団において観察された、予想された５５％の罹患率から有意に異なっていたが（ｐ＜０．０００１）、それは更なるＰＭＬ危険性階層化ツールとしての役目を果たす抗ＪＣＶ抗体状態の能力を実証している。
ＭＳ発症日は、抗ＪＣＶ抗体陽性群における５人の患者、および全ＰＭＬ群における３８人の患者について未知であった。先の免疫抑制薬の使用状態は、抗ＪＣＶ抗体陽性群における１人の患者、および全体的なＰＭＬ群における９人の患者について未知であった。
抗ＪＣＶ抗体血清状態によるＰＭＬ発生率の推定
抗ＪＣＶ抗体陽性であった患者におけるＰＭＬの発生率を、全体的なナタリズマブ治療集団のほぼ２倍と推定した（表４）。抗ＪＣＶ抗体状態による全体的なＰＭＬの発生率を推定するために、次の方法を使用した：ＰＭＬ前の試料が入手可能であった２５人のナタリズマブ治療を有するＭＳ患者に基づいて、ＰＭＬを有する２５人のＭＳ患者が、ＰＭＬの全体的率である１０００分の１．２３人の患者に基づいて、ナタリズマブ治療を受容しているおよそ２０２７６人の患者に由来していたことを推定した（図１）。これらの２０２７６人の患者の５５％が抗ＪＣＶ抗体陽性であり（すなわち、１１１５２人の患者）、４５％が抗ＪＣＶ抗体陰性であった（すなわち、９１２４人の患者）ことを想定して、抗ＪＣＶ抗体陽性患者におけるＰＭＬの発生率を、文献において推定された率と同様の（Ｔｙｌｅｒ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．６８：２７１−２７４，２０１０）、治療された患者１０００人当たり２．２４症例と推定した（＝１０００×２５／１１１５２）、９５％信頼区間：１．４５〜３．３１。逆に、抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬの推定発生率は、患者１０００人当たり０症例であり（９５％信頼区間：０〜０．４０）、抗ＪＣＶ抗体陽性患者における推定発生率から有意に異なった。ｐ＜０．０００１。
この推定に対するナタリズマブ治療継続期間の効果を、分析において、ナタリズマブの２５〜４８ヶ月後（その療法継続期間後、発生率の増加が最も顕著であった療法継続期間）のＰＭＬ発生率を使用して査定した。抗ＪＣＶ抗体陽性患者において、２５〜４８ヶ月の療法後のＰＭＬの危険性は、１０００あたり３．９７であり（９５％信頼区間：２．３６〜６．２７）、抗ＪＣＶ抗体陰性患者においては、１，０００あたり０であった（９５％信頼区間：０〜０．９９）、表３。
この文書の時点で、抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬの発生率は、何のＰＭＬ症例も診断前に抗ＪＣＶ抗体陰性の試験結果でなかったため、完全に確認することができなかった。したがって、抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬの発生率を推定するために、ＰＭＬの仮想的症例が抗ＪＣＶ抗体陰性患者において生じたことを想定し、故に、その比率がより低い可能性が高い保守的な推定の決定を可能にして、感受性分析を行った。この分析は、抗ＪＣＶ抗体陽性患者におけるよりも少なくとも２０倍低い、抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬの推定発生率を実証した、ｐ＜０．０００１（表３）。
抗ＪＣＶ抗体陽性の試験結果であった、ＰＭＬ前の試料が入手可能であった抗ＪＣＶ抗体陽性ＰＭＬ患者の数を増加させる効果の感受性分析は、抗ＪＣＶ抗体陽性患者におけるＰＭＬの増加した危険性に関する統計的確実性が、２５の入手可能なＰＭＬ前の試料を上回っては改善されなかったことを実証した（表５）。
ＰＭＬ危険性の定量化：ナタリズマブ治療継続期間、先の免疫抑制薬の使用、および抗ＪＣＶ抗体状態
ナタリズマブ治療継続期間、先の免疫抑制薬の使用、および抗ＪＣＶ抗体状態に基づいて、組み合わされた定量的ＰＭＬ危険性アルゴリズムを、ナタリズマブ治療ＭＳ患者について開発した（図３）。ＪＣＶ曝露がＰＭＬの要件であるため、抗ＪＣＶ抗体陰性である患者がＰＭＬ危険性階層化アルゴリズムにおいて最も低い危険性の下位群を代表し、推定危険性は、感受性分析において決定される保守的な推定に基づいて、１０００につき０．１１以下であった（９５％信頼区間：０〜０．５９）。逆に、最も高い危険性群は、抗ＪＣＶ抗体陽性であり、先の免疫抑制薬の使用があり、かつナタリズマブで２５〜２８ヶ月にわたって治療されたことがある患者からなる。このアルゴリズムは、ＰＭＬの全ての１０２件の確認された症例が、ＰＭＬ診断前に抗ＪＣＶ抗体陽性であったことを想定した。より高い危険性の下位群について（３つ全ての危険因子を有した患者）、推定ＰＭＬ危険性は、およそ１０００につき７．８であった（９５％信頼区間：５．２〜１１．３）。抗ＪＣＶ抗体陽性であり、先の免疫抑制薬の使用がなかった患者について、ＰＭＬ危険性は、同様の時点での全体的なナタリズマブ治療集団における危険性と一致した（図１Ａおよび１Ｂ）。このアルゴリズムを開発するために使用された推定値を変動させる効果の感受性分析は、一般に基線症例シナリオにおいて見られる元の推定と一貫していた、最小および最大値をもたらした（図４Ａおよび４Ｂを参照されたい）。抗ＪＣＶ抗体陰性患者における危険性を、ＰＭＬの仮想的症例が抗ＪＣＶ抗体陰性患者において生じたことを想定することによって決定した。
この分析は、一般のＭＳ集団における抗ＪＣＶ抗体罹患率を、４８％〜（ＴＹＧＲＩＳ−米国において見られる）５９％（独立したスウェーデンレジストリにおいて見られる）、ナタリズマブ治療ＭＳ集団における先の免疫抑制薬の使用を、１４〜２４％（それぞれ、ＴＹＧＲＩＳにおける米国および欧州推定値に基づく）、およびナタリズマブ２５〜４８ヶ月曝露推定値を３５〜４５％（４０％の現在の推定値およそ過去１年間における１０％の増加に基づく）に変動させた。プロットは、各々シナリオ（基線症例、最小、および最大）についての点推定および９５％信頼区間を表す。一般に、基線症例シナリオは、最小および最大推定値と比較的一貫していた。
ＰＭＬ発症にはＪＣＶ感染が必要とされるため、最も低いＰＭＬの危険性は、他の危険因子に関わらず、抗ＪＣＶ抗体陽性患者におけるよりも少なくとも２０倍低い、ナタリズマブ治療患者１０００人当たり０．１１症例以下の抗ＪＣＶ抗体陰性であった（９５％信頼区間 ０〜０．５９）患者におけることを決定した。ｐ＜０．０００１。現在までに抗ＪＣＶ抗体陰性患者におけるＰＭＬの症例は何ら存在しないが、抗ＪＣＶ抗体アッセイが２．５〜３．２％の推定分析偽陰性率を有するため、ＰＭＬを発症する真の危険性は、ゼロではあり得ない．１、１９。逆に、ＰＭＬ危険性は、３つ全ての危険因子（２５〜４８ヶ月にわたるナタリズマブ治療、先の免疫抑制薬の使用、および抗ＪＣＶ抗体陽性状態）を有した患者において最も高く、その推定発生率は、患者１０００人当たり７．８症例であった（９５％信頼区間：５．２〜１１．３）。
実施例２．本方法の堅牢性を実証するために、抗ＪＣＶ抗体ＥＬＩＳＡを臨床研究所で検証した。
ヒト血清または血漿における抗ＪＣＶ抗体を検出する、新規の２ステップ酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）が、最近記載された（第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２０８３２号を参照されたい）。アッセイの主要な特質には、直接結合および溶液中の競合構成成分の両方；特徴がはっきりしているＪＣウイルス様粒子（ＶＬＰ）の調整物の使用；適切な品質管理（ＱＣ）試料の組み込み；多数の縦断的に収集された臨床試料を使用したアッセイカットポイントの統計的決定；アッセイのシグナルの正規化；ならびに抗ＪＣＶ抗体の複数のアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む）の検出が含まれる。
本方法の堅牢性を実証するために、抗ＪＣＶ抗体ＥＬＩＳＡを３つの臨床研究所で検証した。分析検証を、アッセイ内およびアッセイ間精度、分析特異性および感受性、マトリックス干渉、堅牢性、ならびに試薬能力の評価によって行った。
血清および血漿試料中の抗ＪＣＶ抗体の安定性を、プールされたヒト血清から調製されたアッセイＱＣ試料ならびに個々のドナーからの血清および血漿試料を使用して実証した。抗ＪＣＶ抗体を、血清または血漿中で、６回の凍結／融解サイクルを通じて、かつ周囲（１８〜２５℃）温度および２〜８℃の両方で保管されたとき１４日間にわたって、安定であることが示された。更に、処理する前に、２〜８℃で、周囲温度（１８〜２５℃）で、または３７℃で、それぞれ、７日間、７日間、および３日間保管された全血中の抗ＪＣＶ抗体の安定性もまた、血清および血漿収集管の両方を使用して示された。ＪＣ ＶＬＰの安定性は、４回の凍結／融解サイクルを通じて、かつ２〜８℃で１８ヶ月にわたって示された。
分析検証は、アッセイが、感受性があり、特異的、かつ精密であることを実証した。アッセイ感受性を、ヒト化抗ＪＣＶモノクローナル抗体対照を使用して１．７ｎｇ／ｍＬであると推定し、抗ＪＣＶ抗体陽性血清からの精製されたポリクローナル抗体を使用して１．２５μｇ／ｍＬであると推定した。ＪＣＶ感染を検出するための感受性は、９７．５％であると推定した。ＪＣＶ特異的抗体を、関連するポリオーマウイルスであるＢＫウイルスに向けられる抗体から識別するアッセイの特異性もまた、実証された。平均アッセイ内およびアッセイ間精度は、スクリーニングステップについておよそ６．４％および１２．２％、ならびに確認ステップについて２．６％および５．３％であった。血漿および血清について得られた結果は、高度に調和しており、１００の盲検化試料のパネルを試験した３つの研究所によってもたらされた高度に一致した結果によって、アッセイ堅牢性が実証された。
実施例３．改良されたツーステップＪＣＶアッセイ（第２世代アッセイ）は、元のアッセイ（第１世代アッセイ）よりも正確な結果を提供する。
ツーステップ抗ＪＣＶ抗体アッセイを、最適化ラウンドに従って修正した。新たなアッセイは、第１のアッセイとは、少なくとも次のように異なる：
・第１世代アッセイにおいて使用した１μｇ／ｍＬとは異なり、ＨＰＶＬＰを、第１のステップにおいてプレート上で、および確認アッセイにおいて溶液中で、０．４μｇ／ｍＬの基質濃度で使用する。
・第１世代アッセイにおける１：２００とは異なり、患者血清を、アッセイの第１のステップにおいてプレート上のＨＰＶＬＰに、または確認アッセイにおいて溶液中のＨＰＶＬＰに適用する前に、１：１０１希釈する。
・ＨＲＰに複合体化される二次試薬（抗ヒトＩｇＧ）を、典型的に１：２０，０００希釈し（しかし、シグナルを以前のロットに合致させるために新たなロットに対して再調整する必要があり得る）、複合体とのインキュベーション時間は、わずか３０分である。第１世代アッセイにおいては、同じ試薬を１：８０，０００希釈し、インキュベーション時間は６０分間であった。
・結合反応を、ＨＲＰ基質ＴＭＢを２０分間±２分間インキュベートすることによってアッセイするが、第１世代においては、ＴＭＢインキュベーションは、２０分間±５分間であった。
・確認アッセイにおいて、１０μＬの試料を１ｍＬの確認緩衝液に添加し（１：１０１希釈）、反応は１０〜２０分間進行する。第１世代アッセイにおいては、２倍濃度の試料（１：１００希釈）およびＨＰＶＬＰ（２μｇ／ｍＬ）を等割合で混合し、次いで６０分間インキュベートした。
・カットオフ検量用試料（ＣＯ）を、約１．０のｎＯＤ反応性指標を有するように調整し、陽性対照（ＰＣ）を、約１．３のｎＯＤ反応性指標を有するように調整する。ＣＯおよびＰＣを、抗ＪＣＶ抗体陽性血清および抗ＪＣＶ抗体陰性血清を混合することによって作製する。典型的に瓶内陰性血清である、陰性対照（ＮＣ）について、反応性指標標的は、約０．１である。定性的に、対照は、ヒト血清の異なるプールに由来するが、アッセイ標的濃度に由来し、それらは、第１世代対照レベルと同様である。
ＪＣＶ第２世代臨床一致研究結果が、下の表６に要約される。全ての第１世代試験をＦｏｃｕｓ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ参照研究所（Ｃｙｐｒｅｓｓ、ＣＡ）にて行い、第２世代アッセイのための試験会場には、Ｄｅｎｖｅｒ（数：全体＝２７５；ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）に基づく＝１４９；ナイーブ＝１２６）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（数：全体＝２７５；ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）に基づく＝１３６；ナイーブ＝１３９）、およびＦｏｃｕｓ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（数＝全体２６２；ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）に基づく＝９５；ナイーブ＝１６７）が含まれた。一致パーセントは、（第２世代／第１世代）、９６％信頼区間の下限値および上限値（９５％Ｃｌ：ＬＢ対ＵＢ）として表される。
実施例４．抗ＪＣＶ抗体状態を使用して、ＰＭＬに対する患者の危険性を分類することができる。
我々は、抗ＪＣＶ抗体陽性患者を、抗ＪＣＶ抗体価（ｎＯＤまたは指標）および抗ＪＣＶ抗体結合活性／親和性（阻害％）に基づいて、ＰＭＬを発症する危険性に対して更に階層化することができるという仮説を立てた。この仮説は、既定レベル（「臨床カットポイント」）を下回る抗ＪＣＶ抗体価および阻害％を有する患者が、全体的な抗ＪＣＶ抗体陽性集団と比較して、ＰＭＬを発症することに対して危険性がより低いという観察に由来した。抗体価および阻害パーセントの状態によって示唆されるＰＭＬの相対的危険性を決定するために、抗ＪＣＶ抗体価および阻害パーセントは、ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）（ナタリズマブ）の開始前に、または患者が既にＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）中であるときに、行うことができた。
他の危険因子と組み合わせた抗体価および阻害パーセントの状態によって示唆されるＰＭＬの相対的危険性を決定するために、２つの異なる抗ＪＣＶ抗体アッセイ（「第Ｉ世代」および「第ＩＩ世代」）からの既存のデータを収集し、分析した。既存のデータには、「ｎＯＤ」または「指標」として表される抗ＪＣＶ抗体価情報が含まれた。
第Ｉ世代アッセイにおいて、抗ＪＣＶ抗体陽性患者の２２％（７７／３５６）がｎＯＤ１．０（Ｃ−１８０１）超を有し、抗ＪＣＶ抗体陽性ＰＭＬ患者の３４％（１３／３８）がｎＯＤ１．０（Ｃ−１８０１）超を有した。故に、非ＰＭＬ患者と比較して、約１．５倍多いＰＭＬ患者が、ｎＯＤ１．０超を有した。これは、ｎＯＤ１．０超に関連付けられる２〜３倍の危険比率に相当する。
ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）非ＰＭＬ患者の６％のもまた、２年間超にわたって収集された縦断的試料について、抗ＪＣＶ抗体価（ｎＯＤ）における２倍超の変化を有することが観察された（Ｃ−１８０１）。しかしながら、情報伝達的時点（ＰＭＬ診断前の１年間超、ＰＭＬ診断の６ヶ月以内、およびＰＭＬ診断時）で収集された縦断的試料を有するＰＭＬ患者の大部分は、抗ＪＣＶ抗体価（ｎＯＤ）における２倍超の増加を示した。これは、経時的なＪＣＶ力価における有意な変化を示さない患者は、ＰＭＬを発症する危険性がより低いことを示唆する。
例示的なｎＯＤおよび抗体価が、図５Ａ〜１０Ｂに提供される。患者データは、表７に要約される。
統計的分析のグラフは、図１１に示される。
統計的分析は、阻害パーセントについて、抗体陽性試料の約１７％が０．５０２未満であり、ＰＭＬ試料の約０％が０．５０２未満であることを示した。抗体陽性試料の約３０％が７０％阻害未満であり、ＰＭＬ試料（指標３．０未満を有する）の約０％が７０％阻害未満である。
実施例５．分析的に検証された抗ＪＣＶ抗体アッセイを臨床実施に導入して、ＭＳ患者をＰＭＬのより高い危険性またはより低い危険性について階層化した。
下の研究の目的は、ナタリズマブでの治療の開始の前および後の抗ＪＣＶ抗体価変化を査定することであった。
抗ＪＣＶ抗体アッセイ（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０１０）を、５人のＰＭＬ陽性患者を含む、ナタリズマブで治療されるスウェーデンＭＳ患者の試料に適用した。抗ＪＣＶ抗体アッセイの正規化ＯＤ（ｎＯＤ）値を、ナタリズマブでの治療前および後に試験した。陽性試料を、希釈ステップにおいて１：３希釈して、力価レベルを決定した。同じ割合の患者をまた、核ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）抗原（Ｓｃｈｍｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９７７）に対する抗体、および組換え水痘帯状疱疹（ＶＺＶ）糖タンパク質Ｅ抗原（Ｔｈｏｍｓｓｏｎ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０１１）に対する抗体について試験した。
ナタリズマブ治療の開始後、抗ＪＣＶ抗体レベルは、比較的安定に留まり、ｎＯＤレベルの緩やかな下落が、抗ＪＣＶ陽性患者において観察された。抗ＪＣＶ抗体レベル（ｎＯＤ）における明らかな下落は、患者がナタリズマブ治療を受けたときに観察されたが（ｎ＝４７１）、先行するインターフェロンベータ療法中には観察されなかった（ｎ＝２１０）。これは、血清学的状態および血清陽性率に有意に影響を及ぼすことのない（前：５６％、後５５％）、抗ＪＣＶ抗体レベルに対するナタリズマブ療法の可能性のある効果を示す。
ナタリズマブ治療の開始後、抗ＶＺＶ（ＯＤ）（ｎ＝７１５）は、若干下落したが、抗ＣＭＶ（ｎ＝５０２）抗体レベルは下落しなかった。
ＰＭＬを発症した５人の患者について、血清中の抗ＪＣＶ抗体（ｎＯＤ）のレベルにおける観察された変化が、下の表９に要約される。血清中の抗ＪＣＶ抗体（ｎＯＤ）のレベルは、ベースライン値と比較して、ＰＭＬ診断時に増加した。
本研究から、我々は、ナタリズマブでの療法が、ＪＣＶ血清陽性率に影響を及ぼすことなく、抗ＪＣＶ抗体レベル（ｎＯＤ）における緩やかな減少をもたらし得ると結論付けた。注目すべきは、ベースライン値と比較して、抗ＪＣＶ陽性参照集団のわずか５％が、０．１５１（９５％百分位数）を上回るｎＯＤ値（ΔｎＯＤ）における変化を示したことであるが、これは、ＰＭＬの５つのスウェーデン症例全てにおいて診断時に観察された。故に、ＰＭＬ危険性階層化の文脈における、ＰＭＬ診断前の、ナタリズマブ療法中の抗ＪＣＶ抗体レベルにおける増加の調査が、正当化される。
実施例６．抗ＪＣＶ抗体陽性患者の間の高危険性および低危険性群を描出するための、分析カットオフとは明確に異なる臨床カットオフの使用。
階層化第Ｉ研究からの結果を使用して、抗ＪＣＶ抗体陽性患者の間の高危険性および低危険性群を描出するための、分析カットオフとは異なる臨床カットオフを決定した。故に、患者のＰＭＬの危険性は、最初にベースライン抗ＪＣＶ抗体価レベルに基づくであろう。第ＩＩ世代抗ＪＣＶ抗体アッセイを、本研究において使用した。
ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）非ＰＭＬ患者（階層化第Ｉ、ｎ＝１０４４）およびＰＭＬ患者（ＰＭＬ診断の６ヶ月超以前（ｎ＝３８）を評価した（図１２）。第ＩＩ世代アッセイにおいて、抗ＪＣＶ抗体陽性患者の１７％は、ＰＭＬ診断の６ヶ月超以前に収集されたＰＭＬ患者からの試料について観察された最も低い力価（指標）を下回る力価（指標）を有したが、それはこれらの患者が、ＰＭＬを発症することに対してより低い危険性を有し得る（抗ＪＣＶ抗体陰性患者と同様に）ことを示唆する。更に、ＰＭＬ診断の６ヶ月超以前に試料が収集されたわずか１３％のＰＭＬ患者が指標１．５未満を有したことと比較して、抗ＪＣＶ抗体陽性患者の５０％が、指標１．５を下回る力価（指標）を有した。また、以前に免疫抑制薬剤を受容したことが知られていないＰＭＬ患者のわずか４．４％が、指標１．５未満の試料を有したが、それはそれらの患者が、高い抗ＪＣＶ抗体価（ｎＯＤまたは指標）を有する患者５と比較して、ＰＭＬを発症することに対してより低い危険性を有し得たことを示唆する。
どのＰＭＬ患者も指標０．５未満を有する者はなかったので、０．５未満のｎＯＤを有する患者（１０９／１０４４（総計試料の１０．４％）または１０９／５４９（抗ＪＣＶ抗体陽性患者の２０％））は、最も低いＰＭＬ危険性群（可能性として抗ＪＣＶ抗体陰性患者と同程度に低い）にあると決定した。指標が０．５超であるが、１．５未満を有する患者は、非ＰＭＬ抗ＪＣＶ抗体陽性患者の５０％およびＰＭＬ患者のわずか１３％が、それぞれ、この区間内の試料を有したため、より低い危険性区間にあると決定した。更に、先の免疫抑制療法を受容したことが知られなかったＰＭＬ患者のわずか４％が、指標１．５超の試料を有した（図１３）。抗ＪＣＶ抗体陽性集団の指標１．５超を有する患者（２７１／５４９（５０％））を、ＰＭＬに対する危険性がより高いと決定した。４７パーセントの患者は、抗ＪＣＶ抗体陰性であった。
ＰＭＬ診断後、患者を免疫吸着（ＩＡ）または血漿交換（ＰＬＥＸ）に供して、循環しているナタリズマブを除去し、免疫機能を回復させる。抗ＪＣＶ抗体レベルを、これらの患者において処置前レベルまで迅速に回復させる。
実施例７．本明細書に記載される改良されたツーステップ抗ＪＣＶアッセイにおける、階層化された危険性を、抗ＪＣＶ抗体に対して既に陽性の試験結果であったＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）治療を受ける多発性硬化症（ＭＳ）患者に割り当てるために提案される統計的手法。
ＰＭＬ危険性を抗ＪＣＶ血清陽性に割り当てるための２つの代替的な戦略（戦略１および２として表される）である、ＳＴＲＡＴＩＦＹ−ＩＩ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（ＡＡＮ）Ｍｅｅｔｉｎｇ、２０１２年４月２１〜２８日、要約Ｓ０４１．００２）研究を評価する。２つの方法のうちより保守的な戦略１は、添付の報告書に提供されるノンパラメトリックな二変量許容域のうちの１つを改良する。統計的手法が下に概説される戦略２は、戦略１と比較してより高い割合の将来的抗ＪＣＶ血清陽性を、ＰＭＬを発症する低い危険性に割り当てるはずである。
戦略２は、ＰＭＬ患者試料についての阻害％対指標を測定する、適合方程式の周囲のより低い同時許容域を考案する。戦略１は、ＳＴＲＡＴＡ（Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，６８：２９５−３０３，２０１０）およびＳＴＲＡＴＩＦＹ−Ｉ （Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，７０：７４２−７５０，２０１１）患者（彼らのほぼ全ては、ＰＭＬを発症する非常に低い危険性を有することが想定される）におけるツーステップ抗ＪＣＶアッセイからの阻害％／指標測定値に基づいて低危険域を構築するが、戦略２は、それらのＰＭＬ診断の日付前のＭＳ患者から収集された測定値に基づいて高危険域を構築する。我々の限定されたＰＭＬ試料の集団は、ＰＭＬに感染したタイサブリ治療ＭＳ患者のユニバース全体を代表しない可能性があるが、戦略２は、これらの試料における阻害％対指標関係が、診断前のＰＭＬ全体を代表することを想定する。この想定は、阻害％対指標関係を、ＳＴＲＡＴＩＦＹ−１＋ＳＴＲＡＴＡのそれと並列して示す、抗ＪＣＶ ＰＭＬデータによって統計的に支持された。ＰＭＬ阻害％対指標関係をモデル化するために戦略２によって活用されるのは、この並列性である。
阻害％と指標との間の関係を、ＳＴＲＡＴＩＦＹ−１／ＳＴＲＡＴＡ／ＰＭＬ試料の組み合わされた一組について、最初に統計的にモデル化する。阻害％対指標に対する当てはめ方程式は、ＰＭＬとＳＴＲＡＴＩＦＹ−１／ＳＴＲＡＴＡ試料との間を識別するであろう。より低い同時９５％または９９％許容域を次いで、ＰＭＬ試料について制約された当てはめ方程式の周囲に構築する。阻害％／指標測定値がこの許容域内に入る将来の抗ＪＣＶ血清陽性症例には、ＰＭＬを発症するより高い危険性が割り当てられるであろうが、この許容域は、それらの診断前のＰＭＬ患者からの試料の少なくとも９５％（または９９％）がより高い危険性に割り当てられることを保証するはずである。指標測定値２．５超を有する将来的試料は、ＰＭＬを発症するより高い危険性に自動的に割り当てられることに留意されたい。
統計的詳細。次の混合モデル（または何らかの改良）を、ＳＡＳ ＭＩＸＥＤ手順を使用して、第２世代抗ＪＣＶ ＳＴＲＡＴＩＦＹ−１＋ＳＴＲＡＴＡ＋ＰＭＬ試料阻害％／指標測定値の組み合わされた一組に最初に当てはめる。
εｉｊの値は、平均ゼロおよび分散σ２で正規で、独立して分布されると想定され、πｉの値は、平均ゼロおよび分散
で正規で、独立して分布されると想定され、εｉｊの値およびπｉの値は、独立していると想定される。故に、方程式（１）における混合モデルについて、Ｘ＋およびＷは、固定効果である一方で、πｉおよびεｉｊは、変量効果である。ｘ０の予備推定値は、１．７７であったが、それは改良されるであろう。適合方程式周囲のより低い９５または９９％同時許容域を構築する（参照１〜５）。指標レベルの関数としての許容域の下限を次いで、阻害％へと逆変換する。阻害％／指標測定値が許容域に該当するか、または指標測定値２．５超を有するかのいずれかである将来的試料は、ＰＭＬを発症する危険性がより高いと判断する。
下の表１０は、異なるｎＯＤに基づいてより低い危険性として分類されるであろう、抗ＪＣＶ抗体陽性の推定百分率を提供する。
＊患者ドナー内の多数かつ不均等な数の測定値に起因する、ＰＭＬ前の集団の偏った推定値。
＊＊ＰＭＬ前の患者１人当たり１時点を無作為に選択した、１０００のシミュレーションの平均に基づく推定当てはめる。
他の実施形態は、特許請求の範囲内にある。

Claims (1)

  1. 試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価する方法であって、
    （ａ）試料の第１のアリコートと第１の基質とを含む、第１の反応混合物を形成することであって、ＨＰＶＬＰが前記第１の基質上に配置されていることと、
    （ｂ）前記基質上に配置されたＨＰＶＬＰに結合した抗ＪＣＶ抗体のレベルを、前記第１の基質上に配置されたＨＰＶＬＰに結合した抗ＪＣＶ抗体に結合している、標識された検出試薬を検出することによって、検出することと、を含み、
    （ｉ）２０ｎｇｓ〜６０ｎｇｓのＨＰＶＬＰが前記第１の基質上に配置されること、および（ｉｉ）試料対前記第１の基質上に配置されたｎｇｓのＨＰＶＬＰの比率が１：５０〜１：３０であることのうちの一方または両方が満たされ、
    それによって試料中の抗ＪＣＶ抗体のレベルを評価する、方法。
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