KR20190083265A - 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.

Description

발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 조성물{COMPOSITION FOR ENHANCING SKIN ELASTICITY OR IMPROVING SKIN WRINKLE COMPRISING FERMENTATED EXTRACT OF INULA BRITANNICA FLOWER}

본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.

현대인들은 보다 복잡한 사회와의 관계 속에서 식생활의 변화, 부족한 운동량, 과중한 정신적 스트레스 등으로 인하여 인체 과산화물(peroxides) 등과 같은 노폐물이 인체 내 누적되게 되고 축적된 과산화물은 피부의 노화를 촉진하고 더 나아가 인체의 염증 유발하거나 면역력 감소를 가져오며 암을 유발하기도 한다.

즉, 과산화물은 인체 내에 존재하는 지질 중 특히 불포화 지방산에서 쉽게 발생하며 여러 가지 요인에 의하여 촉진되어진다. 그 요인으로는 식품인 경우 산소, 가열, 자외선, 기계적 충격, 금속이온의 존재 등으로 자동적으로 유래되기도 하나 인체 내에서는 리포옥시게네이즈(lipooxygenase)와 같은 지질산화효소에 의하여 생성되기도 한다. 이 물질들은 매우 불안정하고 반응성이 강하여 세포 내 DNA를 공격하여 손상시키며, 지질이 주성분인 세포막에 공격하여 연쇄적인 지방산화를 일으켜 피부 조직의 노화를 촉진한다. 따라서 주름개선에 대한 연구는 피부 노화와 관련하여 진행되기도 한다.

따라서 최근에 항산화에 대한 연구가 최근 활발히 진행되고 있으며 특히 천연물 소재로서의 폴리페놀류(polyphenols)는 자유 라디칼을 페놀 고리(phenol ring)분자 자체에 흡수시킴으로써 공명화(resonance) 구조로서 안정화됨과 동시에 자유 라디칼 형성에 의한 여러 가지 연쇄적인 산화를 억제하는 것으로 알려져 있다. 폴리페놀류는 식물체 종류에 따라 매우 다양하게 존재하며 그 대표적인 예로서 플라보노이드(flavonoid)를 들 수 있다. 플라보노이드는 C₆-C₃-C₆를 주요 골격으로 하며 자연에서는 하나 이상의 당과 결합된 배당체(glycoside)로서 존재하고 있다. 플라보노이드는 식물의 열매나 꽃 부위에 주로 존재하며 특히 열매나 꽃의 색을 결정 지워주기도 한다. 플라보노이드는 구조에 따른 분류를 보면 기능기의 위치에 따라 플라바놀(flavanol), 플라바논(flavanones), 플라본(flavone), 아이소플라본(isoflavone), 플라보놀(flavonols), 안소시아니딘(fnthocyanidin)의 소그룹으로 나누어진다. 생리 기능성으로는 강력한 항산화력 이외에 항균 작용과 치매 예방, 항염 및 항암 작용이 있는 것으로 연구되어 있으며 이러한 기능성은 플라보노이드의 소그룹에 따라 다소 차이가 있는 것으로 알려져 있다.

그 예로서 녹차 및 송이버섯 추출물의 항염, 항산화용 화장료 조성물이 출원된 바 있고, 김 등은 섬쑥부쟁이 분획물의 항산화 및 항염증 활성을 연구한 바 있다. 특히, 여러 가지 항산화제 중 폴리페놀류 특히 플라보노이드의 산화력이 가장 강한 것으로 알려져 있으며 부가적인 생리 기능성으로 인하여 최근 많은 연구가 진행되고 있다.

콜라겐은 근육에 존재하는 고분자 단백질로 특히 피하 근육에서 연령이 클수록 그 함량이 적어진다. 특히 콜라게나아제(collagenase)는 콜라겐을 분해함으로써 피부 탄력을 저하시키고 피부 주름을 유발함으로써 피부 노화와 함께 중요한 인자로 작용하고 있다. 현재 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선의 하나로 천연물 소재를 사용하여 현재 피부 및 근육의 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과를 갖는 물질들이 활발히 연구되고 있다.

그러나 천연물에서의 생리활성 물질이 실제 유효 농도에 못 미치어 산업적으로 추출, 농축, 또는 발효를 통한 생물 전환 등 여러 가지 가공법이 필요하다. 즉, 천연물에 존재하는 유효성분은 대부분 배당체(glycosides)로 존재하거나 다른 성분과 결합되어 있다. 따라서 그 추출수율을 높이기 위하여 미생물에 의한 효소적 추출이나 극성에 따른 여러 가지 용매를 사용하고 있다. 그러나 실제적으로 식품 제조에서의 용매의 사용에 있어서 에탄올(ethanol)만 허가되어 용매선정에 제한이 있다. 그러나 발효법인 경우, 미생물이 생산하는 효소를 이용하여 효율적으로 배당체로부터 유효성분 만을 분리 추출할 수 있고 더 나아가 생물 전환까지 진행하면 보다 높은 생리기능성을 기대할 수 있다. 예로서 아스퍼질러스(Aspergillus) 곰팡이를 이용한 발효를 통하여 기능성을 더욱 부각시킨 특허가 출원된 바 있다.

본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물 등을 제공하고자 한다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물을 제공한다.

상기 발효는 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum) 균주 KCCM 11613P에 의한 것일 수 있다.

상기 선복화 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 탄소수 1-4의 저급 케톤, 탄소수 1-4의 저급 에스테르, 클로로포름 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것일 수 있다.

상기 발효된 선복화 추출물에서 유산균 생균의 수는 7.0 Log cfu/mL 이상일 수 있다.

상기 발효된 선복화 추출물에서 pH는 4.5 이하일 수 있다.

상기 발효된 선복화 추출물은 비발효된 선복화 추출물에 비해, ⅰ) DPPH 라디칼 소거능; ⅱ) ABTS 라디칼 소거능; ⅲ) 수퍼옥사이드 음이온 소거능; 또는 ⅳ) 철 3가 이온 또는 구리 2가 이온에 대한 환원력이 향상된 것일 수 있다.

상기 발효된 선복화 추출물의 농도는 10 ㎍/㎖ 내지 10 mg/㎖일 수 있다.

본 발명의 일 구현예로, 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 다른 구현예로, 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 조성물은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는데, 상기 발효된 선복화 추출물은 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과를 가지는바, 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선에 유용하게 이용될 수 있다.

뿐만 아니라, 상기 발효된 선복화 추출물은 비발효된 선복화 추출물에 비해, ⅰ) DPPH 라디칼 소거능; ⅱ) ABTS 라디칼 소거능; ⅲ) 수퍼옥사이드 음이온 소거능; 또는 ⅳ) 철 3가 이온 또는 구리 2가 이온에 대한 환원력의 향상과 같은 항산화 효과가 향상된 것을 특징으로 한다.

도 1은 발효된 선복화 추출물(□: 실시예) 및 비발효된 선복화 추출물(■: 비교예)의 DPPH 라디칼 소거능을 비교한 그래프이다.
도 2는 발효된 선복화 추출물(□: 실시예) 및 비발효된 선복화 추출물(■: 비교예)의 ABTS 라디칼 소거능을 비교한 그래프이다.
도 3은 발효된 선복화 추출물(□: 실시예) 및 비발효된 선복화 추출물(■: 비교예)의 수퍼옥사이드 음이온 소거능을 비교한 그래프이다.
도 4는 발효된 선복화 추출물(□: 실시예) 및 비발효된 선복화 추출물(■: 비교예)의 철 3가 이온에 대한 환원력을 비교한 그래프이다.
도 5는 발효된 선복화 추출물(□: 실시예) 및 비발효된 선복화 추출물(■: 비교예)의 구리 2가 이온에 대한 환원력을 비교한 그래프이다.
도 6은 비발효된 선복화 추출물(□: 비교예)의 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과와, 발효된 선복화 추출물(■: 실시예)의 농도별 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과를 비교한 그래프이다.

본 발명자들은 약용 식물로 이용되는 선복화를 유산균을 이용하여 발효시켜, 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과를 가지는 유효 성분의 농도를 증가시킴으로써, 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선 능력을 향상시킬 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 “피부 탄력” 및 “피부 주름”이라 함은 피부 노화의 지표로 잘 알려진 증상으로서, 피부 노화를 방지하기 위한 목적으로 피부 탄력을 증진시키거나 피부 주름을 개선시키기 위해서는 콜라게나아제(collagenase) 활성을 저해시킬 필요가 있다.

본 발명에 따른 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물에서 사용되는 선복화(학술명 Inula britannica)는 국화과의 금불초의 꽃을 말린 약재로 한국, 중국, 일본 등 동아시아에서 자생하는 야생화이다. 선복화는 예부터 소화 장애, 기관지염 등의 치료에 사용되었으며, 탕제나 환제로 조제하여 복용한다. 특히, 선복화에는 퀘르세틴(quercetin), 캠페롤(kaempferol), 루테올린(luteolin) 등의 플라보노이드가 다량 함유되어 있으며, 정유(essential oil)에는 항산화 작용뿐만 아니라 다양한 종류의 세스키테르펜 락톤(sesquiterpene lactone)이 함유되어 있어 각종 암세포의 아포토시스(apoptosis)를 유도하고 이를 통해 암세포를 사멸시킬 수 있다. 따라서 이러한 피토케미컬은 인체 내에 흡수되어 다양한 기능성을 나타내므로 건강 증진을 위한 기능성을 제공한다.

통상 천연물에서의 플라보노이드는 대부분 배당체로 존재하며 배당체 형태의 플라보노이드는 아글리콘 형태보다 그 효율이 낮아 실제 기능성을 위한 유효 농도에 도달하기 위해서는 추출, 농축, 또는 발효 등을 통한 여러 가지 가공법이 필요하다.

이에, 본 발명에 따른 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 것으로, 즉, 선복화를 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 탄소수 1-4의 저급 케톤, 탄소수 1-4의 저급 에스테르, 클로로포름 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출한 다음, 상기 추출된 선복화에 유산균을 접종한 후, 발효시킨 선복화 추출물 발효액을 포함한다.

상기 선복화 추출물은 건조시킨 선복화가 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 탄소수 1-4의 저급 케톤, 탄소수 1-4의 저급 에스테르, 클로로포름 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것일 수 있고, 건조시킨 선복화가 식품의약품안전처에서 고시한 용매를 참고하여, 건조시킨 선복화 100 g을 기준으로, 500 mL 내지 2000 mL의 물 또는 에탄올로 추출된 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

이때, 상기 추출은 고온에서 수행될 수 있고, 50 ℃ 내지 70 ℃의 온도에서 12 시간 내지 48 시간 동안 추출된 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 발효된 선복화 추출물은 상기 선복화 추출물 발효액을 말하는 것으로, 이와 같은 발효를 이용하는 경우, 유산균이 생산하는 효소를 이용하여 효율적으로 배당체로부터 유효성분만을 분리 추출할 수 있고, 더 나아가 생물 전환까지 진행하면 보다 높은 생리기능성을 기대할 수 있다. 즉, 상기 선복화의 유효물질은 자연에서 그 농도가 적은 문제가 있어 산업적으로 응용이 어려우나, 인체에 무해한 유산균을 이용한 발효액에서의 유효 물질을 증진시킴으로써 그 기능성이 증가되고 특히 향상된 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과로 인하여 산업적인 응용가능성을 제공할 수 있다.

상기 발효는 유산균에 의한 것일 수 있고, 바람직하게는 김치에서 분리한 유산균에 의한 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum) KCCM 11613P에 의한 것일 수 있다.

상기 락토바실러스 플랜타룸은 대표적인 프로바이오틱스(probiotics)로서 그람 양성균, 간균 형태의 논-스포어 포밍 박테리아(non-spore forming bacteria)이다. 특히 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum) KCCM 11613P는 김치에서 분리한 균주이며 내산성 및 내담즙성이 높아 생존률이 각각 99%와 97.9%에 이르러 과채류에서 발견되는 타 락토바실러스 플랜타룸 보다 높은 수치를 보이고 또한 항 알러지 효과가 있는 균주이기도 하다.

구체적으로, 상기 유산균은 상기 선복화 추출물 100 부피부에 대하여, 0.1 부피부 내지 10 부피부로 접종되는 것이 최적의 발효 조건 및 이에 따른 항균력 증진 측면에서 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

이때, 상기 발효는 20℃ 내지 40℃에서 20 시간 내지 100 시간 동안 수행되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 발효된 선복화 추출물에서 유산균 생균의 수는 7.0 Log cfu/mL 이상일 수 있다. 또한, 상기 발효된 선복화 추출물에서 pH는 4.5 이하, 바람직하게는 pH는 4.0 이하일 수 있다. 이러한 pH의 변화는 유산균이 성장하면서 생산하는 유기산 등에 기인한 것으로 볼 수 있다.

상기 발효된 선복화 추출물은 비발효된 선복화 추출물에 비해, ⅰ) DPPH 라디칼 소거능; ⅱ) ABTS 라디칼 소거능; ⅲ) 수퍼옥사이드 음이온 소거능; 또는 ⅳ) 철 3가 이온 또는 구리 2가 이온에 대한 환원력이 향상된 것을 특징으로 하는바, 결과적으로, 항산화 효과가 향상된 것을 특징으로 할 수 있다.

상기 발효된 선복화 추출물의 농도는 10 ㎍/㎖ 내지 10 mg/㎖인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이때, 발효된 선복화 추출물의 농도가 상기 범위 미만인 경우, 콜라게나아제(collagenase) 활성을 저해시키는 효과가 미미하여 효과적인 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선 효과를 제대로 발휘하기 어려운 문제점이 있고, 발효된 선복화 추출물의 농도가 상기 범위를 초과하는 경우에는, 세포독성을 포함한 독성의 우려사항이 있을 수 있다.

상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.

상기 담체 또는, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리게이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제는 상기 발효된 선복화 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제조할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용하는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등을 사용할 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등을 사용할 수 있다.

상기 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.

또한, 본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 건강기능식품은 발효된 선복화 추출물을 포함하는데, 상기 발효된 선복화 추출물에 대해서는 전술한바 있으므로, 중복 설명을 생략하기로 한다.

상기 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 발효된 선복화 추출물을 건강기능식품의 첨가물로 사용하는 경우 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 예방, 건강 또는 치료 등의 각 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물의 제형은 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태뿐만 아니라 일반 식품 또는 음료의 형태 어느 것이나 가능하다.

상기 식품의 종류에는 특별히 제한은 없고, 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다.

일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 발효된 선복화 추출물은 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 또한 본 발명은 천연물질을 이용하는 점에서 안전성 면에서 문제가 없으므로 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 상기 음료 100 mL당 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g일 수 있다.

상기 외에 상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제를 함유할 수 있다. 그 밖에 상기 건강기능식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 제한되지 않으나 본 발명의 건강기능식품 100 중량부 대비 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물은 발효된 선복화 추출물을 포함하는데, 상기 발효된 선복화 추출물에 대해서는 전술한바 있으므로, 중복 설명을 생략하기로 한다.

상기 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 및, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산 dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴 또는 케라틴이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등)이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 갈조 엑기스, 홍조 엑기스 또는 녹조 엑기스이 바람직하고, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨 또는 아르긴산칼륨이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다. 상기 다른 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알코올, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제 또는 정제수가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 또는 식물 유지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴 또는 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스 또는 와셀린 등의 탄화 수소계 유지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유 또는 아미노 변성 실리콘유가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린 또는 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자 또는 지용성 고분자가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n=2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n=2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n=2 이상), 락트산 또는 락트산염이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤 또는 콜레스테롤에스테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산 또는 덱스트린 이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르 또는 고분자 실리콘이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산 또는 라놀린지방산콜레스테릴에스테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제 또는 양성 계면활성제가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지

방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEPOP (폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드 또는 수소첨가대두인지질이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염 또는 퍼플루오로알킬인산에스테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드 또는 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형 또는 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 또는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠스티렌 공중합체, 사불화에틸렌가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert -부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p -(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진 또는 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301호, 모노니트로과이어콜나트륨 또는 운데시렌산이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필 또는 엘리소르빈산이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨 또는 인산일수소나트륨이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 0.01 ~ 5% 중량 백분율로 배합되는 것이 바람직하고, 0.01 ~ 3% 중량 백분율로 배합되는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물은 용액, 유화물 또는 점성형 혼합물의 형상을 취할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액 또는 모발화장료로 제조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클린저의 제형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연이 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트가 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따른 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 조성물은 발효된 선복화 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는데, 상기 발효된 선복화 추출물은 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과를 가지는바, 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선에 유용하게 이용될 수 있다.

뿐만 아니라, 상기 발효된 선복화 추출물은 비발효된 선복화 추출물에 비해, ⅰ) DPPH 라디칼 소거능; ⅱ) ABTS 라디칼 소거능; ⅲ) 수퍼옥사이드 음이온 소거능; 또는 ⅳ) 철 3가 이온 또는 구리 2가 이온에 대한 환원력의 향상과 같은 항산화 효과가 향상된 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 >

실시예

(1) 선복화 열수 추출물의 제조

인큐베이터(Jeio-Tech Co., Seoul, Korea)을 이용하여 60에서 상대 습도 4-5%를 유지하며 10 시간 동안 선복화 시료를 건조시켰다. 건조된 선복화는 고속 믹서기를 이용하여 10 mm 이하의 크기가 되도록 분쇄하였다. 분쇄된 선복화 50 g을 물 500 mL로 혼합하여 60에서 24 시간 동안 추출하였다. 선복화 열수 추출물은 사용할 때까지 동결 건조하여 -20에서 보관하였다.

(2) 발효된 선복화 열수 추출물의 제조

선복화 열수 추출물의 발효는 김치에서 분리한 유용 유산균인 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum KCCM 11613P)를 이용하였고 액체 발효를 실시하였다. 1 L 용량의 삼각플라스크에 선복화 열수 추출물 500 mL와 미생물의 성장에 필요한 성장원을 보충하기 위해 1%(w/v) peptone을 첨가하고 0.1 N NaOH를 이용하여 pH를 6.5까지 적정한 뒤 121 1.5 기압에서 15분 간 멸균하여 발효를 위한 배지를 제조하였다. 완성된 배지에 12 시간 간격으로 3회 배양시킨 Lactobacillus plantarum KCCM 11613P를 약 5 Log CFU/mL 접종하여 72시간 동안 30, 50 rpm의 속도로 진탕 배양시키면서 발효하였다. 발효 후 0.45 ?m 막 여과기(membrane filter)를 이용하여 남아있는 균체를 제거하고 동결 건조하여 -20에 보관하였다. 이를 70% 에탄올로 용해시키고 다시 0.45 ?m 막 여과기(membrane filter)를 이용하여 불용성 물질을 제거한 다음, 후술하는 실험에 사용하였다.

이때, Lactobacillus plantarum KCCM 11613P는 2014년 11월 27일자로 한국미생물보존센터에 기탁하여 수탁번호 KCCM 11613P를 부여받았다.

비교예

선복화 열수 추출물의 발효를 생략한 것을 제외하고는, 실시예와 동일한 방법으로 비발효된 선복화 열수 추출물을 제조하였다.

실험예 1: pH, 유산균 생균수 및 수율 측정

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 pH, 유산균 생균수 및 수율을 각각 측정하였다.

구체적으로, pH는 pH측정기(Model 720, WTW Co., Germany)를 이용하여 측정하였고, 유산균 생균수는 MRS 고체 배지에 발효액을 도말하여 표준 평판배양법을 이용하여 직접 측정하였으며, 수율은 건조 상태를 기준으로 중량 변화를 측정하였다. 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

	실시예	비교예
pH	3.98±0.01	4.73±0.02
유산균 생균수 (Log CFU/mL)	7.4±0.1	-
수율 (%)	12.4±1.1	15.2±0.1

표 1에 나타난 바와 같이, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물의 pH는 약 3.98로 감소하는 것으로 확인되는 반면, 유산균 생균수는 약 7.4 Log CFU/mL로 증가한 것으로 확인된다. 또한, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물에 비해, 수율이 낮은 것으로 확인된다. 이는 발효 과정에서 미생물이 성장하는 동안 배당체 형태의 플라보노이드(flavonoids)를 사용하고 이를 당이 분리된 글라이콘(aglycon) 형태로 전환시키면서, 감소된 당의 무게 만큼 최종 발효된 선복화 열수 추출물의 무게가 감소한 관계로, 수율이 낮아진 것으로 볼 수 있다.

실험예 2: 항산화 효과 확인

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 항산화 효과를 확인하고자, DPPH 라디칼 소거능 측정, ABTS 라디칼 소거능 측정, 수퍼옥사이드 음이온 소거능 측정, 철 3가 이온에 대한 환원력 측정 및 구리 2가 이온에 대한 환원력 측정 실험을 수행하였다.

(1) DPPH 라디칼 소거능 측정

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) 라디칼 소거능은 DPPH 라디칼 스캐빈징 어세이를 이용하여 측정하였다.

구체적으로, 에탄올에 용해시킨 100μM DPPH 용액 1mL와 증류수에 용해시킨 시료(실시예의 발효된 선복화 열수 추출물 또는 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물) 100 μL를 15 분 간 암실에서 반응한 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료는 62.5, 125, 250 및 500 μg/mL의 농도로 실험하였고, DPPH 라디칼 소거능(%)은 하기와 같이 계산하였으며, 그 결과는 도 1에 나타내었다:

DPPH 라디칼 소거능(%) = (1 A _sample/A_control)× 100

상기 식에서 A _control은 대조군의 흡광도이고, A _sample은 시료의 흡광도이다.

도 1에 나타난 바와 같이, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물은 500 μg/mL의 농도에서 DPPH 라디칼 소거능이 51.67%에 불과한 것으로 확인되는 반면, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 동일 농도에서 DPPH 라디칼 소거능이 92.65%인 것으로 확인되는바, 발효로 인하여 DPPH 라디칼 소거능이 약 79% 증가하였음을 알 수 있다.

(2) ABTS 라디칼 소거능 측정

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 ABTS 라디칼 소거능은 2, 2′-azino-bis-3-ethyl benzthiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) 라디칼 스캐빈징 어세이를 이용하여 측정하였다.

구체적으로, 2 mM ABTS와 2.45 mM의 potassium persulphate를 증류수에서 12 시간 동안 반응시켜 ABTS 라디칼을 생성하였다. 이후, 생성된 ABTS 라디칼을 희석하여 734 nm에서 흡광도가 0.700이 되도록 하여 실험에 사용하였다. ABTS 라디칼 용액 1 mL와 시료 50 μL를 암실에서 30분 간 반응시킨 후, 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료는 62.5, 125, 250 및 500 μg/mL의 농도로 실험하였고, ABTS 라디칼 소거능은 trolox를 이용하여 표준 곡선을 작성하여 TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity)로 계산하였으며, 그 결과는 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물은 500 μg/mL의 농도에서 477.17 μM/mL TEAC의 라디칼 소거능을 보인 것으로 확인되는 반면, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 동일 농도에서 694.25 μM/mL TEAC의 라디칼 소거능을 보인 것으로 확인되는바, 발효로 인하여 ABTS 라디칼 소거능이 약 45% 증가하였음을 알 수 있다.

(3) 수퍼옥사이드 음이온( Superoxide anion) 소거능 측정

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 수퍼옥사이드 음이온 소거능은 nitroblue tetrazolium (NBT), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) 및 phenazine methosulphate (PMS)의 NBT-NADH-PMS 복합체 형성을 통해 산화제로 작용하여 NBT의 활성 억제를 측정하는 수퍼옥사이드 음이온 스캐빈징 어세이를 이용하여 측정하였다.

구체적으로, 78 μM NBT, 468 μM NADH, 시료를 각각 1 mL씩 첨가 후, 60 μM PMS 0.4 mL를 첨가하여 5 분간 반응시켰다. 이 후 560 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료는 62.5, 125, 250 및 500 μg/mL의 농도로 실험하였고, 수퍼옥사이드 음이온 소거능(%)은 하기와 같이 계산하였으며, 그 결과는 도 3에 나타내었다:

수퍼옥사이드 음이온 소거능(%) = (A _control A _sample)/A_control× 100

상기 식에서 A _control은 대조군의 흡광도이고, A _sample은 시료의 흡광도이다.

도 3에 나타난 바와 같이, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물은 500 μg/mL의 농도에서 수퍼옥사이드 음이온 소거능이 84.37%에 불과한 것으로 확인되는 반면, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 동일 농도에서 수퍼옥사이드 음이온 소거능이 86.38%인 것으로 확인되는바, 발효로 인하여 수퍼옥사이드 음이온 소거능이 유의적인 차이(p<0.05)를 보이며 증가하였음을 알 수 있다.

(4) 철 3가 이온에 대한 환원력 측정

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 철 3가 이온에 대한 환원력을 측정하였다.

구체적으로, 시료 및 1% potassium ferricyanide를 0.2M sodium phosphate buffer(pH 6.6)에 용해시켜 각각 200 μL씩 50℃에서 20 분 간 반응시켰다. 이 후, 200 μL의 10% trichloroacetic acid를 첨가하여 반응액을 산성화시킨 후 500 μL 0.1% 염화철(Ⅲ) 수용액을 첨가하여 20 분 간 반응시켜 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료가 철 3가 이온을 철 2가 이온으로 환원시키는 경우, 철 2가 이온은 칼륨 이온과 반응하여 푸른색을 나타낸다. 시료는 62.5, 125, 250 및 500 μg/mL의 농도로 실험하였고, 그 결과는 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타난 바와 같이, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물이 비해, 높은 흡광도를 기록하는바, 철 3가 이온에 대한 환원력이 향상된 것으로 확인된다. 특히, 시료의 농도가 125 및 500 μg/mL인 경우, 유의적인 차이(p<0.05)를 보임을 알 수 있다.

(5) 구리 2가 이온에 대한 환원력 측정

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물과, 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물의 구리 2가 이온에 대한 환원력을 측정하였다.

구체적으로, 1 M ammonium acetate buffer (pH 7.4) 1200 μL에 7.5 mM neocuporine 에탄올 용액, 염화구리(Ⅱ) 수용액, 시료를 200 μL씩 첨가하여 30분 간 반응시켰다. 이 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료는 62.5, 125, 250 및 500 μg/mL의 농도로 실험하였고, 그 결과는 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물이 비해, 높은 흡광도를 기록하는바, 구리 3가 이온에 대한 환원력이 향상된 것으로 확인된다. 인체 내에서 타이로시나이제와 같이 산화 반응을 촉진하는 효소들은 구리 2가 이온과 같은 금속 2가 이온에 의해 활성이 촉진된다. 따라서, 발효로 인하여 향상된 구리 2가 이온에 대한 환원력은 인체 내의 산화 반응 효소 활성을 억제할 수 있으므로, 항산화 효과를 향상시킬 수 있을 것으로 판단된다.

실험예 3: 콜라게나아제(collagenase)의 저해 효과 확인

실시예의 발효된 선복화 열수 추출물의 피부 탄력 증진 및 피부 주름 개선 효과를 검증하기 위하여, Clostridium 균에서 유래된 콜라게나아제(collagenase)를 사용하여 이에 대한 저해 효과를 확인하였다.

구체적으로, 기질로서 N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala(FLAGPA)를 사용하였고, 100 μL 1.1 U/mL의 콜라게나아제(collagenase), 300 μL 시료 및 600 μL tricine buffer(0.05 M, pH 7.5)를 혼합하여 37℃에서 20분 간 효소 활성을 유도하였다. 이 후, 200 μL 1 mM FLAGPA를 첨가하여 효소반응을 10 분 간 진행한 후 350 nm에서 흡광도를 확인하였고, 잔여 FLAGPA양을 통하여 콜라게나아제(collagenase) 저해 효과를 확인하였으며, 그 결과는 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타난 바와 같이, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 동일 농도에서 비교예의 비발효된 선복화 열수 추출물이 비해, 콜라게나아제(collagenase) 저해 효과가 높은 것으로 확인된다. 또한, 실시예의 발효된 선복화 열수 추출물은 농도가 증가함에 따라 콜라게나아제(collagenase) 저해 효과가 높아지는 것으로 확인된다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

한국미생물보존센터(국외) KCCM11613P 20141127

Claims (9)

1. 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 발효는 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum) 균주 KCCM 11613P에 의한 것인
   피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 선복화 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 탄소수 1-4의 저급 케톤, 탄소수 1-4의 저급 에스테르, 클로로포름 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것인
   피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 발효된 선복화 추출물에서 유산균 생균의 수는 7.0 Log cfu/mL 이상인
   피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 발효된 선복화 추출물에서 pH는 4.5 이하인
   피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 발효된 선복화 추출물은 비발효된 선복화 추출물에 비해,
   ⅰ) DPPH 라디칼 소거능;
   ⅱ) ABTS 라디칼 소거능;
   ⅲ) 수퍼옥사이드 음이온 소거능; 또는
   ⅳ) 철 3가 이온 또는 구리 2가 이온에 대한 환원력이 향상된 것을 특징으로 하는
   피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 발효된 선복화 추출물의 농도는 10 ㎍/㎖ 내지 10 mg/㎖인
   피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 약학 조성물.
   
8. 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 건강기능식품.
   
9. 발효된 선복화 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
   

Images