KR102565127B1

KR102565127B1 - 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는기능성 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102565127B1
Application number: KR1020230083010A
Authority: KR
Inventors: 조현정
Original assignee: 조현정
Priority date: 2023-06-27
Filing date: 2023-06-27
Publication date: 2023-08-10

Abstract

본 발명은 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 본 발명에서 분리 및 정제된 뱀독 펩타이를 이용하여 여러 기능성 테스트를 진행한 결과 첫 번째로 세포독성을 나타내지 않고, 두 번째로 항염증 효능으로 염증반응 물질인 NO의 생성량 감소 및 염증성 사이토가인을 억제시키며, 세 번째로 주름개선 효능으로 콜라겐 생성량을 증가시키고, 네 번째로 면역증진 효능으로 NK 세포활성을 증가시키며, 다섯 번째로 피부미백 효능으로 DOPA 산화활성 억제시키고, 멜라닌 생성을 직접적으로 저해시키며, 또한 마지막 일곱 번째로 항산화 효능으로 DPPH 자유라디칼 소거 활성을 증가시킨다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는 화장료 조성물 또는 의약외품 조성물로 이용될 수 있다.

Description

뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물{Functional cosmetic composition comprising novel peptides isolated from snake venom as an active ingredient}

본 발명은 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

독은 태고적부터 종이 살아 남기 위해 수 천년간 진화시켜온 지구의 유전적 산물이다. 그 중에서 뱀독은 피부면역력 강화와 주름개선에 뛰어나고, 난치질환으로 알려진 버거시병, 중증 아토피에도 효과가 뛰어난 것으로 잘 알려져 있다. 독을 피부 미용에 이용한 대표적인 예로는 보톨리눔이라는 치명적인 신경 독소를 이용한 보톡스와 봉독, 거미독 화장품이 있다. 또한, 독을 이용한 연구로서 전갈, 지네 등의 독소 중 특정성분을 마취제로 사용하는 연구가 진행되었으며, 뱀독 성분을 동맥경화증 예방을 위한 약학조성물로 활용하기 위한 연구개발도 활발하게 진행되고 있으며, 독 개구리에서 추출한 물질인 '에피바티딘'은 모르핀보다 200배 강한 진통제로 활용되고 있다.

한편, 뱀독은 효소, 비효소성 폴리펩타이드 독소, 비독성 단백 등 100여 가지 이상의 단백질, 금속 이온, 탄수화물, 핵산, 아민, 지질과 소량의 유리 아미 노산으로 구성된 약리학적으로 활성화된 혼합체로 가장 복잡한 자연독소다. 건조 무게의 90% 이상이 단백질과 폴리펩타이드가 차지한다. 이와같은 뱀독은 생체에서 물리, 화학적 반응을 통해서 생리적으로 어떤 해로운 변조(變調)를 일으키는 물질로, 이로운 효능을 나타내면 약이 되고 그 반대이면 독이 된다.

뱀독의 펩타이드(Snake Venom Peptide)는 지난 수년 동안 민간요법 및 의약품의 원료로서 우수한 효능과 안전성을 바탕으로 점차 사용이 증가하고 있는 기능성 소재이다. 뱀독의 주요 구성 성분은 뉴로톡신(neurotoxin), 카디오톡신(cardiotoxin), 포스포라이페이스(phospholipase), 신경 생장 인자(nerve growth factor) 등의 다양한 종류의 펩타이드 성분들이 함유되어 있는 것으로 보고되고 있으며, 최근에는 이들 뱀독 펩타이드가 피부 알러지 개선, 주름개선, 피부 염증개선 및 피부 면역기능 활성화 등의 효과가 과학적으로 입증되어 국제 화장품 원료사전(ICID)에 등재되었으며, 다양한 형태의 제품개발 연구가 진행중이다.

본 발명에서는 뱀독에서 분리하여 정제한 펩타이드를 이용하여 여러 기능성 테스트를 진행한 결과 본 발명의 펩타이드는 ①세포독성을 나타내지 않고, ②염증반응 물질인 NO의 생성량을 감소 및 염증성 사이토가인을 억제하므로 항염증 효과를 확인하였으며, ③콜라겐 생성량을 증가시키므로 주름개선 효과를 확인하였고, ④NK 세포활성을 증가시키므로 면역증진 효과를 확인하였으며, ⑤DOPA 산화활성을 억제시키므로 멜라닌 생성을 간접적으로 저해시키며, 또는 멜라닌 생성을 직접적으로 저해시키므로 미백 효과를 확인하였고, ⑦DPPH 자유라디칼 소거 활성이 있으므로 항산화 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.

10-2022-0060315

상기 문제점을 해결하기 본 발명의 일 과제는 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 문제점을 해결하기 본 발명의 일 과제는 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 의약외품 조성물을 제공하는 데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물에서, 상기 펩타이드는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 각각의 펩타이드가 혼합된 것을 특징으로 하고, 상기 기능성은 항염증, 주름개선, 면역증진, 피부미백 및 항산화 효과인 것을 특징으로 하는, 기능성 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 "펩타이드"는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 각각의 펩타이드가 동일한 농도로 혼합된 것일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 "펩타이드"는 세포독성이 없는 것이다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 "펩타이드"는 뱀독으로부터 분리하여 정제한 것으로 HPLC 분석결과 순도 95 내지 99%인 것일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한 상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 의약외품 조성물에서, 상기 펩타이드는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 각각의 펩타이드가 혼합된 것을 특징으로 하고, 상기 기능성은 항염증, 주름개선, 면역증진, 피부미백 및 항산화 효과인 것을 특징으로 하는, 기능성 의약외품 조성물을 제공한다.

본 발명에서 분리 및 정제한 뱀독 펩타이를 이용하여 여러 기능성 테스트를 진행한 결과 본 발명의 펩타이드는 ①세포독성을 나타내지 않고, ②염증반응 물질인 NO의 생성량 감소 및 염증성 사이토가인을 억제(항염증), ③콜라겐 생성량을 증가(주름개선), ④NK 세포활성 증가(면역증진), ⑤DOPA 산화활성 억제(멜라닌 생성 저해를 통한 피부미백), 또는 멜라닌 생성을 직접적으로 저해(피부미백) 및 ⑦DPPH 자유라디칼 소거 활성(항산화) 효과를 가진다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 3가지 펩타이드의 LCMS-MS/MS 결과를 나타낸 도이다(1a: 서열번호 1의 펩타이드; 1b: 서열번호 2의 펩타이드; 및 1c: 서열번호 3의 펩타이드).
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 세포독성 평가(MTT assay)를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 세포독성 평가(EZ-CYTOX assay)를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 항염증 효과(NO 생성 억제)를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 항염증 효과(염증성 사이토카인 분비 억제)를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 주름개선 효과(콜라겐 생성)를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 면역활성 효과(NK 세포 활성 증진)를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 피부미백 효과(DOPA 산화활성 억제)를 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 피부미백 효과(멜라닌 생성 저해)를 나타낸 도이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 항산화 효과(DPPH 자유라디칼 소거 활성 증가)를 나타낸 도이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 주름개선 효과(콜라겐 생성)를 나타낸 도이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현 예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(Terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.

본 발명은 뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 "기능성"은 항염증 효능, 주름개선 효능, 면역증진 효능, 피부미백 효능 및 항산화 효능을 의미한다.

본 발명의 "기능성 조성물"은 화장료 조성물, 의약외품 조성물, 식품/건강기능식품 조성물, 사료/사료첨가제 조성물 또는 약학 조성물로 이용될 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 기능성 화장료 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드를 포함하는 조성물은 항염증 효능, 주름개선 효능, 면역증진 효능, 피부미백 효능 및 항산화 효능을 나타내기 위한 제품으로 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨, 에센스 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 팩, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 추출물로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 추출물로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및무기안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다. 유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산 부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산 에틸,리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산 트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산 이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴, 카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜 틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인 산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르 계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산 및 메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산 및 메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜 (중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈 및 에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈 및 헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들수 있다. 에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산 콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린 지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POE 및 POP (폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌) 공중합체, POE 및 POP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산업, 알킬아미드 인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산 디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아 미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다. 양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드 술포 베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트 수지, 디비닐벤젠 및 스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠 및 스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐,살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시 계피산 이소프로필, 디이소프로필 및 디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합이 가능하다.

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 밀크 로션, 아스트린젠트, 로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 헤어로션, 헤어토닉, 헤어에센스, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화 아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 기능성 의약외품 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 의약외품 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 펩타이드 이외에 의약외품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 연마제, 습윤제, 결합제, 기포제, 감미제, 방부제, 약효성분, 향미제, 색소, 용제, 증백제, 가용화제 또는 pH 조정제를 포함할 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 기능성 식품/건강기능식품 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 식품/건강기능식품 조성물은 유효성분인 펩타이드를 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨,소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 하기에서 서술될 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한 상기 식품/건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 기능성 사료/사료첨가제 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 사료/사료첨가제 조성물은 여러가지 기능성을 가지는 바, 동물체의 건강상태를 양호하게 하고, 가축의 증체량과 육질을 개선시키며, 산유량 및 면역력을 증가시키는 효과를 기대할 수 있다. 본 발명의 사료 조성물은 발효사료, 배합사료, 펠렛 형태 및 사일레지 등의 형태로 제조될 수 있다. 상기 발효사료는 본 발명의 펩타이드 이외의 여러 가지 미생물군 또는 효소들을 첨가함으로서 유기물을 발효시켜 제조할 수 있으며, 배합사료는 여러 종류의 일반사료와 본 발명의 펩타이드를 혼합하여 제조할 수 있다. 펠렛 형태의 사료는 상기 배합사료 등을 펠렛기에서 열과 압력을 가하여 제조할 수 있으며, 사일레지는 청예 사료를 본 발명에 따른 미생물로 발효시킴으로써 제조할 수 있다. 습식발효사료는 음식물 쓰레기 등과 같은 유기물을 수집 및 운반하여 살균과정과 수분조절을 위한 부형제를 일정비율로 혼합한 후, 발효에 적당한 온도에서 24시간 이상 발효하여, 수분함량이 약 70%으로 포함되도록 조절하여 제조할 수 있다. 발효건조사료는 습식 발효 사료를 건조과정을 추가로 거쳐 수분함량이 30% 내지 40% 정도 함유되도록 조절하여 제조할 수 있다.

본 발명의 사료/사료첨가제 조성물은 종래 사료에 첨가되는 성분을 더 포함할 수 있다. 이러한 사료에 첨가되는 성분의 일예로서 곡류분말, 고기분말, 및 두류 등을 포함할 수 있다. 상기에서 곡류분말은 쌀가루, 밀가루, 보리가루, 및 옥수수가루 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다. 상기에서 고기분말은 닭고기, 소고기, 돼지고기, 및 타조고기 중에서 선택된 어느 하나 이상을 분말화한 고기분말을 사용할 수 있다. 상기에서 두류는 대두, 강낭콩, 완두콩, 및 검정콩 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.

본 발명의 사료/사료첨가제 조성물은 상기에서 언급한 종래 사료에 첨가되는 성분인 곡류분말, 고기분말, 및 두류 이외에도 사료의 영양성을 증대시키기 위해 영양제, 및 무기물 중에서 선택된 어느 하나 이상을 첨가할 수 있으며, 사료 품질의 저하를 막기 위해 항곰팡이제, 항산화제, 항응고제, 유화제, 및 결착제 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 기능성 약학 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에는 유효성분인 펩타이드 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있으나, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 더 포함하여 그 기능성을 증가시킬 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 유효성분의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 1,000 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 1,000 ㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.

상기 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.

또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.

이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면을 참고하여 보다 상세하게 설명하도록 한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐, 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아닐 것이다.

<준비예 1> 시약 및 재료

본 발명의 펩타이드는 쇠살모사(Agkistrodon caliginosa)에서 분리 및 정제한 것이다. 구체적으로는 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 분리 및 정제하였다. 이때 펩타이드 각 서열번호에 따른 아미노산 서열과 이의 분자량은 하기 표 1과 같다. 이후 실험에서는 하기의 각각의 펩타이드를 동량(1:1:1의 비율)으로 혼합하여 사용하였으나, 이는 기능성의 효능에 따라 변경이 가능하다.

	아미노산 서열	분자량(Da)
서열번호 1	VPNEDAQTR	515.2519
서열번호 2	KVPNEDEQKR	621.8255
서열번호 3	DLCECDR	484.1840

실험에 사용된 마우스 대식세포주 RAW 264.7 세포는 ATCC(Rockville, MD, USA)로부터 분양 받아서 사용하였다. 세포배양을 위한 RPMI 1640 배지, Fetal bovine serum(FBS), Penicillin-streptomycin, Trypsin-EDTA는 Gibco BRL(Grand Island, NY, USA)에서 구입하였으며, EZ-CYTOX 키트는 DoGen Bio(구로, 서울, 한국)에서 구입하여 사용하였고, iNOS 항체는 Santa Cruz(San Diego, CA, USA)에서 구입하였으며, LPS(Lipopolysaccharide), MTT(Methylthiazol-2-yl-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), NaN0₂, Griess reagent 및 기타 시약은 Sigma(ST Louis, MO, USA) 시약을 구입하여 사용하였다.

<실험예 1> 펩타이드의 세포독성 평가(MTT assay)

본 발명의 펩타이드의 세포독성 유무를 평가하기 위하여 다음과 같이 실험을 진행하였다. 3 x 10⁴ RAW 264.7 세포를 96-웰-플레이트에 분주하고 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 배양한 세포에 본 발명의 혼합 펩타이드를 다양한 농도로 처리하여 24시간 동안 배양한 후, PBS(Phosphate buffered saline)에 녹인 5㎎/㎖의 MTT 용액 50㎕를 각 웰에 넣고 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 4시간 동안 배양하였다. 배양 후 배양액을 버리고 DMSO 100㎕씩 넣어 formazin을 용해한 후, 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 2에서 나타낸 것과 같이 0.1 내지 100㎍/㎖의 농도 구간에서 세포생존률이 모두 98% 이상으로 나타나므로 독성이 없는 것으로 확인되었다.

<실험예 2> 펩타이드의 세포독성 평가(EZ-CYTOX assay)

본 발명의 펩타이드의 세포독성 유무를 평가하기 위하여 다음과 같이 실험을 진행하였다. EZ-CYTOX assay는 MTT 보다 쉽고 간편한 방법으로 세포독성을 평가할 수 있는 키트이다. 5 x 10³ RAW 264.7 세포를 96-웰-플레이트에 분주하고, LPS를 1㎍/㎖ 또는 다양한 농도의 뱀독 펩타이드를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 배양액에 10㎕씩 동일한 양의 EZ-CYTOX 세포독성 평가 키트의 시양을 각각의 웰에 넣고 3시간 동안 반응시켰다. 그후 450nm에서 흡광도를 측정하고, 평균 흡광도[세포생존율(%) = 테스트흡광도/컨트롤흡광도 x 100]으로 세포생존율을 계산하였다.

그 결과 도 3에서 나타낸 것과 같이 12.5 내지 200㎍/㎖의 농도 구간에서 모두 독성이 없는 것으로 확인되었다.

<실험예 3> 펩타이드의 항염증 효과 평가(NO 생성 억제능)

염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 NO 생성에 대해 뱀독 펩타이드의 억제능을 확인하기 위해 실험을 진행하였다. NO의 농도는 배양액 내의 nitrite 농도를 Griess Reagent System을 이용하여 측정하였다. 1 x 10⁵ RAW 264.7 세포를 96-웰-플레이트에 분주하고, LPS를 1㎍/㎖ 처리함과 동시에 다양한 농도의 뱀독 펩타이드를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배양액 100㎕와 같은 양의 Griess Reagent(1% sufanilamide, 0.1% N-[1-naphtyl]-ethylenediamine dihydrochloride, 5% phosphoric acid)를 넣어주고 10분간 상온에서 반응시킨 후 ELISA reader로 540nm에서 흡광도를 측정하였다. NaNO₂의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액 내의 NO농도를 결정하였다.

그 결과 도 4에서 나타낸 것과 같이 LPS 1㎍/㎖와 뱀독 펩타이드 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50 및 100㎍/㎖ 농도로 처리한 구간에서 모두 농도 의존적으로 NO의 생성을 억제하여 항염증 효과를 발휘할 수 있음을 확인하였다.

추가적으로 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 각각을 위와 동일한 실험방식으로 하여 50㎍/㎖를 각각 처리한 후 NO의 생성 억제능을 확인해 보았고, 그 결과 NO 생성 농도(마이크로몰농도)는 각각 약 8.2, 7.5 및 8.1로 약간의 NO 생성 억제능을 보였으나 혼합하여 사용하는 경우 대비 현저히 낮은 수치에 해당하였다.

<실험예 4> 펩타이드의 항염증 효과 평가(염증성 사이토카인 분비 억제능)

본 발명의 펩타이드를 이용하여 항염증 효과를 평가하기 위하여 5 x 10⁵ RAW 264.7 세포를 12-웰-플레이트에 분주하고 24시간 배양한 다음, LPS를 1㎍/㎖ 처리함과 동시에 다양한 농도의 뱀독 펩타이드를 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 그 후 상층액을 모은 후, TNF-a, IL-6 및 IL-1b ELISA 키트를 이용하여 각각의 분비량을 측정하였다.

그 결과 도 5에서 나타낸 것과 같이 RAW 264.7 세포주에 LPS를 단독으로 처리하였을 때, 염증성 사이토카인의 생성량은 대조군에 비하여 유의적으로 증가함을 확인하였으며, 본 발명의 뱀독 펩타이드를 농도별로 처리하였을 때 염증성 사이토카인 각각의 생성량이 LPS 처리군에 비하여 농도의존적으로 유의하게 감소함을 확인하였다.

또한 추가로 상기 실험예 3과 같이 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 각각을 위와 동일한 실험방식으로 하여 50㎍/㎖를 각각 처리한 후 염증성 사이토카인의 생성량 억제능을 확인해 보았고, 각 펩타이드는 LPS처리로 증가된 염증성 사이토카인의 생성량을 약간 감소시키는 것으로 확인되었으나 혼합하여 사용하는 경우 대비 현저히 낮은 수치에 해당하였다.

<실험예 5> 펩타이드의 주름개선 효과 평가(콜라겐 생성 증가능)

본 발명의 펩타이드를 이용하여 주름개선 효과를 평가하기 위하여 다음과 같이 실험을 진행하였다. Procollagen Type Ⅰ C-Peptide(PIP) EIA 키트를 사용하여 측정하였다. Anti-PIP monoclonal antibody plate, Peroxidase 표식된 anti-PIP monoclonal antibody, 표준품, 검체 희석액 및 기질액(3,3',5,5'-tetramethyl benzidine)을 사용하여 다음과 같이 측정하였다. 96-웰-플레이트에 HDFn(Human Dermal Fibroblast, neonatal) 세포를 2 x 10⁴세포/웰이 되도록 동일하게 분주하고 24시간 동안 사전 배양하였다. 그 후 기존의 배지를 제거하고, FBS free 배지 및 본 발명의 펩타이드를 농도별로 처리한 후 다시 24시간 동안 배양하고 상층액을 분리하였다. 합성된 콜라겐의 양은 PIP 키트를 이용하여 측정하였다.

그 결과 도 6에서 나타낸 것과 같이 뱀독 펩타이드 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50 및 100㎍/㎖ 농도로 처리하였을 때, 0.1㎍/㎖의 저농도부터 유의적으로 콜라겐 생성을 증가시켰으며, 시험한 최고 농도인 100㎍/㎖의 농도에서는 205.1%로 현저하게 콜라겐 생성을 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.

또한 추가로 상기 실험예 3과 같이 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 각각을 위와 동일한 실험방식으로 하여 50㎍/㎖를 각각 처리한 후 콜라겐 생성량을 확인해 보았고, 각 펩타이드는 순서대로 115.2, 121.4 및 114.5%의 콜라겐 생성량을 보여, 이는 각각의 펩타이드를 혼합하여 사용하는 경우 대비 현저히 낮은 수치에 해당하였다.

<실험예 6> 펩타이드의 면역활성 효과 평가(NK 세포 활성 증가능)

본 발명의 펩타이드를 이용하여 면역활성 효과를 평가하기 위하여 다음과 같이 실험을 진행하였다. 비장 세포로부터 분리한 NK 세포 활성도는 short-term lactate dehydrogenase(LDH) release assay를 통해 측정하였다. YAC-1 세포(NK-sensitive 세포주)는 NK 세포에 의해 공격되는 세포로 YAC-1 세포가 NK 세포에 의해 공격을 받아 배지에 유리되는 LDH는 NK 세포 활성을 측정하는 지표가 된다. NK 세포와 YAC-1 세포를 96-웰-플레이트에 1, 10, 50 및 100㎍/㎖ 농도의 뱀독 펩타이드와 함께 분주하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 4시간 동안 배양하였다. 이때 NK 세포와 YAC-1 세포를 10:1[100㎕ NK 세포(5 x 10⁶)와 100㎕ YAC-1 세포(5 x 10⁵)]의 비율로 하였다. 배양액을 1800rpm에서 5분간 원심분리한 다음 상층액을 취하여 LDH release cytotoxicity detection 키트를 이용하여 490nm에서 흡광도를 측정하였다. YAC-1 세포의 용해로 인하여 분비되는 LDH의 최대 농도를 100%로 간주하였으며, YAC-1 세포 단독으로 분비되는 LDH의 농도를 기저치로 간주하였다.

그 결과 도 7에서 나타낸 것과 같이 본 발명의 펩타이드는 직접적으로 NK 세포 활성도를 증가시키는 효과가 있음을 확인하였다.

또한 추가로 상기 실험예 3과 같이 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 각각을 위와 동일한 실험방식으로 하여 50㎍/㎖를 각각 처리한 후 NK 세포 활성도를 확인해 보았고, 각 펩타이드는 순서대로 22.1, 23.5 및 31.2%의 낮은 NK 세포 활성도를 보였으며, 이는 각각의 펩타이드를 혼합하여 사용하는 경우 대비 현저히 낮은 수치에 해당하였다.

<실험예 7> 시험기관(한국화학융합시험연구원)을 통한 기타 효과검증

본 발명의 펩타이드의 피부미백 효과, 항산화 효과 및 주름개선 효과를 검증하기 위하여 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 시험 성적서를 받았다(도 8 내지 11).

도 8은 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 피부미백 효과(DOPA 산화활성 억제)를 나타낸 것으로, 본 발명의 펩타이드는 DOPA 산화활성을 억제시키므로 피부미백 효과를 가지는 것을 확인할 수 있었다.

도 9는 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 피부미백 효과(멜라닌 생성 저해)를 나타낸 것으로, 본 발명의 펩타이드는 멜라닌 생성을 저해시키므로 피부미백 효과를 가지는 것을 확인할 수 있었다.

도 10은 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 항산화 효과(DPPH 자유라디칼 소거 활성 증가)를 나타낸 것으로, 본 발명의 펩타이드는 DPPH 자유라디칼 활성을 증가시키므로 항산화 효과를 가지는 것을 확인할 수 있었다.

도 11은 한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 받은 시험 성적서로 본 발명의 뱀독에서 분리 및 정제한 펩타이드의 주름개선 효과(콜라겐 생성)를 나타낸 것으로, 본 발명의 펩타이드는 콜라겐 생성을 증가시키므로 주름개선 효과를 가지는 것을 확인할 수 있었다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물에서,
상기 펩타이드는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 각각의 펩타이드가 혼합된 것을 특징으로 하고,
상기 기능성은 항염증, 주름개선, 면역증진, 피부미백 및 항산화 효과인 것을 특징으로 하는,
기능성 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 펩타이드는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 각각의 펩타이드가 동일한 농도로 혼합된 것을 특징으로 하는,
기능성 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 펩타이드는 세포독성이 없는 것을 특징으로 하는,
기능성 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 펩타이드는 뱀독으로부터 분리하여 정제한 것으로 HPLC 분석결과 순도 95 내지 99%인 것을 특징으로 하는,
기능성 화장료 조성물.
뱀독에서 분리한 신규 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 기능성 의약외품 조성물에서,
상기 펩타이드는 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 각각의 펩타이드가 혼합된 것을 특징으로 하고,
상기 기능성은 항염증, 주름개선, 면역증진, 피부미백 및 항산화 효과인 것을 특징으로 하는,
기능성 의약외품 조성물.