KR20190062502A

KR20190062502A - 급성 신장 손상을 치료하는 방법

Info

Publication number: KR20190062502A
Application number: KR1020197012516A
Authority: KR
Inventors: 바라트 라구; 마이클 파타네; 에피 토조; 스콧 트르자스카
Original assignee: 미토브리지, 인크.
Priority date: 2016-10-05
Filing date: 2017-10-05
Publication date: 2019-06-05
Also published as: AU2017340760A1; EP3522880B1; RU2019111421A3; HRP20210294T1; UA124019C2; CN109789117B; RS61573B1; JP7065839B2; TW201815391A; RU2019111421A; WO2018067857A1; SI3522880T1; SG11201901925RA; PL3522880T3; AU2017340760B2; DK3522880T3; PH12019500725A1; MY192385A; MD3522880T2; RU2753607C2

Abstract

본 발명은 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

급성 신장 손상을 치료하는 방법

관련 출원에 대한 상호-참조

본 출원은 2016 년 10 월 5 일에 제출된, 미국 가출원 번호 제62/404,390호를 우선권 주장한다. 전술한 출원의 교시 전체가 본원에 참조로 포함된다.

본 발명의 분야

발명의 배경

이전에 급성 신부전(ARF)으로 알려졌던 급성 신장 손상(AKI)은 며칠 이내에 발생하는 신장 기능의 급격한 악화로 특징되는 임상 증후군이다. AKI의 주된 특징은 질소 노폐물 (요소, 크레아티닌)의 축적을 야기하는 사구체 여과율(GFR)의 급격한 감소이다. 일반적인 세계 인구에서, 백만 명 중에 170-200 사례의 심각한 AKI가 매년 발생한다. 현재까지, 확립된 AKI에 대한 특정한 치료법이 없다. 몇몇 약물은 다른 동물 모델에서 낮은 혈청 크레아티닌 수치, 감소한 조직적 손상, 빨라진 신기능의 회복으로 나타나는 독성 및 허혈성 실험적 AKI를 예방적으로 완화한다고 밝혀졌다. 이들은 항-산화제, 칼슘채널차단제, 이뇨제, 혈관활성 물질, 성장 인자, 항-염증제 등을 포함한다. 그러나, 이 약물들은 임상 시험에서 연구되었고 이익이 나타나지 않았고, 임상적 AKI에서 그들의 사용이 허가되지 않았다. 한번 발병한 AKI를 치료하는 것은 심지어 더욱 어렵다.

본원에서 개시된 화합물들은 퍼옥시솜 증식자-활성화된 수용체 델타(PPARδ)의 예시적 조절자이다. PPARδ는 미토콘드리아 생합성을 조절할 수 있는 핵 수용체이다. PPARδ의 활성을 조절하는 것은 질병의 치료에 유용하다고 보여져왔다.

발명의 요약

하기 구조식으로 나타내어지는 화합물, (R)-3-메틸-6-(2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-1-일)메틸)페녹시)헥사노에이트가:

(이후 본원에서 “화합물 A”)

급성 신장 질병의 랫트 모델에서 신장 손상을 감소시켰음이 이제 밝혀졌다 (실시예 2 참조). 특별히, 화합물 A는 실험실 랫트의 신장에 유발된 허혈성 재관류 손상 4 시간 후에 정맥내로 투여되었을 때, 혈장 크레아티닌 수치를 유의하게 감소시켰고, 신장 기능을 개선하고, 초기 신장 손상 바이오마커 NGAL을 감소시킨다.

하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 B:

(이후 본원에서 “화합물 B”)

또한 급성 신장 질병의 랫트 모델에서 신장 손상을 감소시켰다는 것이 밝혀졌다 (실시예 3 참조). 특별히, 화합물 B를 실험실 랫트의 신장에 유발된 허혈성 재관류 손상 4 시간 후에 경구로 투여하였을 때 유의하게 혈장 크레아티닌 수치를 감소시켰고 신장 기능을 개선하였다.

이런 발견에 기반하여, 급성 신장 손상 치료 방법이 본원에 개시된다.

본 발명의 하나의 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법이다. 그 방법은 화합물 A 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 환자에게 정맥내로 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법이다. 그 방법은 화합물 B 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 하나의 실시양태에서, 화합물 B는 경구로 투여된다; 또 다른 실시양태에서, 화합물 B는 정맥내로 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법이다. 그 방법은 화합물 C:

(이후 본원에서 “화합물 C”)

또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 하나의 실시양태에서, 화합물 C는 경구로 투여된다; 또 다른 실시양태에서, 정맥내로 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 정맥내로 치료하는 용도를 위한, 화합물 A 또는 제약적으로 허용되는 그의 염이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 용도를 위한, 화합물 B 또는 제약적으로 허용되는 그의 염이다. 하나의 실시양태에서, 화합물 B는 경구 투여를 위한 것이다; 또 다른 실시양태에서, 화합물 B는 정맥내 투여를 위한 것이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 용도를 위한, 화합물 C 또는 제약적으로 허용되는 그의 염이다. 하나의 실시양태에서, 화합물 C는 경구 투여를 위한 것이다; 또 다른 실시양태에서, 화합물 C는 정맥내 투여를 위한 것이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 정맥내로 치료하기 위한 약제의 생산을 위한 화합물 A 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 용도이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하기 위한 약제의 생산을 위한, 화합물 B, 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 용도이다. 하나의 실시양태에서, 화합물 B는 경구 투여를 위한 것이다; 또 다른 실시양태에서, 화합물 B는 정맥내 투여를 위한 것이다.

여전히 본 발명의 또 다른 실시양태는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하기 위한 약제의 생산을 위한 화합물 C, 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 용도이다. 하나의 실시양태에서, 화합물 C는 경구 투여를 위한 것이다; 또 다른 실시양태에서, 화합물 B는 정맥내 투여를 위한 것이다.

도면의 간단한 설명

도 1 a, b 및 c는 급성 신장 손상의 랫트 모델에서 정맥내로 투여한 화합물 A의 치료적 효과를 보여주는 막대 그래프다. 막대 그래프 1a는 신장 손상 24시간 후 랫트의 혈장 크레아티닌 수치를 mg/dL로 보여준다. 좌측에서부터 우측의 막대는 부형제를 정맥내로 투여한 신장 손상이 없는 랫트 및 부형제; 화합물 A 0.3 mpk; 화합물 A 1 mpk; 화합물 A 3.0 mpk를 정맥내로 투여한 신장 손상이 있는 랫트의 혈장 크레아티닌 수치를 나타낸다. 유사하게 막대 그래프 1b는, 신장 손상 24시간 후 신장 기능 또는 GFR(사구체 여과율)의 평가치, 크레아티닌 청소율 수치를 보여주고 막대 그래프 1c는 신장 손상 48시간 후 NGAL(호중구 젤라티나아제-연관 리포칼린)의 소변 수치를 보여준다. NGAL은 임상에서 자주 사용되는 초기 신장 손상 바이오마커이다.

도 2 a 및 b는 급성 신장 손상의 랫트 모델에서 화합물 B의 치료적 효과를 보여주는 막대 그래프다. 막대 그래프 2a는 신장 손상 24시간 후 랫트의 혈장 크레아티닌 수치를 mg/dL로 보여준다. 좌측에서부터 우측의 막대는 30 mpk 부형제를 투여한 거짓 수술(sham surgery)한 랫트; 30 mpk 부형제를 투여한 급성 신장 손상을 가진 랫트; 및 화합물 B를 30 mpk 투여한 급성 신장 손상을 가진 랫트의 혈장 크레아티닌 수치를 나타낸다. 유사하게 막대 그래프 2b는 신장 기능 또는 GFR(사구체 여과율)의 평가치, 크레아티닌 청소율 수치를 보여준다.

상세한 설명

본원에 제공된 것은 인간 환자에서 급성 신장 손상 치료를 위한 방법이다. 그러한 방법은 유효량의 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염을 인간 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 하나의 실시양태에서, 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염은 인간 환자에서 급성 신장 손상이 발생한 후에 투여된다. 화합물 A는 바람직하게는 정맥내로 투여된다.

본원에서 사용된 용어, 이전에 “급성 신부전” 또는 “ARF”를 말하는, “급성 신장 손상” 또는 “AKI”는, 신독성 항생제 및 항암제의 사용, 사구체신염, 신혈류량 감소같은 많은 요인에 의해 야기된 급격한 신 기능의 감소로 특징되는 급성 임상적 증후군을 말한다.

급성 신장 손상은 신장 기능의 갑작스런 감소로 정의되고, 혈청 크레아티닌 수치, 사구체 여과율, 또는 소변량 중 하나 이상의 변화를 보이는 환자에 기반하여 진단될 수 있다. 예를 들어, 급성 신장 손상은 기준치(baseline)의 적어도 1.5배의 혈청 크레아티닌 수치로 특징될 수 있고, 여기서 기준치는 7 일 전 이내의 환자의 혈청 크레아티닌 수치를 말한다. 예를 들어, 급성 신장 손상을 가지는 환자는 기준치의 1.5 내지 1.9배, 기준치의 2.0 내지 2.9배, 또는 기준치의 3.0배 이상의 혈청 크레아티닌 수치를 가질 수 있다. 또는, 급성 신장 손상 적어도 0.3 mg/dL 또는 적어도 0.4 mg/dL의 혈청 크레아티닌의 증가로 특징될 수 있다.

다르게는, 급성 신장 손상은 90 mL/min/1.73 m²미만의 사구체 여과율로 특징될 수 있다. 예를 들어, 급성 신장 손상을 가지는 환자는 60-89 mL/min/1.73 m², 30-59 mL/min/1.73 m², 15-29 mL/min/1.73 m², 또는 15 mL/min/1.73 m² 미만의 사구체 여과율을 가질 수 있다.

다르게는, 급성 신장 손상은 6 시간 동안 0.5 mL/Kg 미만의 소변량, 12 시간 동안 0.5 mL/Kg 미만, 12 시간 동안 0.3 mL/Kg 미만의 소변량, 또는 12 시간 이상 무뇨증을 가지는 환자로 특징될 수 있다.

급성 신장 손상은 특이성 신장 질환 (예를 들면, 급성 간질 신장염, 급성 사구체 및 혈관염성 신질환); 비-특이성 상태 (예를 들면, 허혈증, 독성 손상); 뿐만 아니라 신장외 병리 (예를 들면, 전신성 고질소혈증 및 급성 신후성 폐쇄성 신질환)와 발생할 수 있다. 하나 초과의 상기 상태가 동일한 환자에서 동시에 존재할 수 있고, 보다 중요하게, 역학적 증거는 경도의, 가역적인 AKI조차도 사망 위험 증가를 포함하는, 중요한 임상 결과를 가진다는 개념을 뒷받침한다. 게다가, 병인이 대부분 신장 내에 있거나 대부분 신장 외부 스트레스로부터 유래하는지 관련없이 AKI의 징후 및 임상결과가 꽤 비슷할 (심지어 구별할 수 없을) 수 있기 때문에, AKI의 증후군은 신장에 대한 직접적인 상해 뿐만 아니라 기능의 급성 부전도 포함한다.

일부 실시양태에서, 신부전, 신장염 증후군, 동맥경화성 질병, 패혈증, 저혈압, 저산소증, 미오글로빈뇨-혈뇨증 또는 간 질환을 겪으면서 AKI 치료를 받는 중인 환자는 당뇨를 갖는다. 다른 실시양태에서, 환자는 고령, 임부, 수술 환자이거나, 신독성 약제에 노출된 적 있다.

특정 실시양태에서, AKI 치료받는 환자는 수술 환자이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 화합물은 수술 후에 수술 환자에게 투여된다.

또 다른 실시양태에서, AKI 치료받는 환자는 신독성 약제에 노출된 적 있다. 신독성 약제는 AKI를 유발할 수 있는 약물 또는 화학 물질이다. 급성 신장 손상을 야기할 수 있는 약물 또는 화학 물질은 시스플라틴; 겐타마이신; 세팔로리딘; 시클로스포린; 암포테리신; 사염화 탄소; 트리클로로에틸렌; 및 디클로로아세틸렌을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

상기 세 문단에서 언급된 임의의 상태의 AKI를 가진 환자도 개시된 방법에 따라, 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염으로 치료될 수 있다.

화합물 A, 화합물 B, 및 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염은 개시된 방법으로 사용될 수 있다. 용어 “제약적으로-허용되는 염”은 타당한 의학적 판단의 범주 안에, 과도한 독성, 자극 및 알러지 반응이 없어, 인간 및 하등 동물의 조직과 접촉하여 사용하기 적합하고, 합리적인 이익/위험 비에 알맞는 제약적 염을 말한다. 제약적으로-허용되는 염은 그 기술분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[S. M. Berge et al. J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19]에서 약학적으로 허용되는 염을 기술한다. 염은 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 인산, 질산, 황산, 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 및 메글루민산인, 산의 첨가로; 및 예를 들어, 암모늄염, 알칼리 금속염 (나트륨 및 칼륨염같은), 알칼리토 금속염 (마그네슘 및 칼슘염같은) 및 유기 염기염 (메글루민 및 L-리신염같은)인, 염기의 첨가로 형성된다.

제약 조성물 및 그의 투여

화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염은 AKI에 이롭다고 알려진 다른 약제와 조합하여 사용될 수 있다.

환자에게 “유효량”을 제공하기 위해 투여된 화합물의 정확한 양은 투여 방법, 질병 및/또는 상태의 유형 및 중증도 및 일반적 건강, 나이, 성별, 체중 및 약물에 대한 내성같은 환자의 개성에 좌우될 것이다. 통상의 기술자는 이것 및 다른 요인을 고려한 적합한 용량을 결정할 수 있을 것이다. 용어 “유효량”은 환자에게 투여되었을 때 임상 결과를 포함하는 이롭거나 바람직한 결과를 일으키는, 예를 들어, 대조군과 대비하여 환자에서 치료되는 상태의 증상을 억제, 저해 또는 감소하는 양을 의미한다. 예를 들어, 유효량은 하루에 0.1 mg 내지 약 50 g일 수 있다.

본원에서 사용된 용어 “투여하다”, “투여하는”, “투여”, 등은 생물학적 작용의 바람직한 부위로 조성물의 운반이 가능하도록 사용될 수 있는 방법을 말한다. 이런 방법은 관절내 (관절부에), 정맥내, 근육내, 종양내, 진피내, 복강내, 피하, 경구로, 국소로, 척추 강내로, 흡입으로, 경피로, 직장으로 투여 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 처치되는 상태가 급성 신장 손상인 경우, 경구 및 정맥내 투여가 보통 사용된다. 본원에서 기술된 요법 및 방법에 적용될 수 있는 투여 기술은 예를 들어, 문헌[Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; and Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa]에서 발견된다.

개시된 방법에서 사용된 제약 조성물은 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염, 및 전형적으로 부형제, 본 개시의 것 외의 공지된 치료제, 및 그의 조합과 같은 적어도 1종의 부가적 물질을 포함한다.

개시된 방법에서 사용된 제약 조성물은 의도된 투여 경로에 적합하게 제제화된다. 실시양태에서, 조성물은 인간에게 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 비강내 또는 국소 투여에 적합한 제약 조성물로서 일상적인 절차에 따라 제제화된다.

정맥내 제형에 의한 치료제의 투여는 제약 산업에 잘 알려져 있다. 정맥내 제형은 증류수, 생리식염수, 링거 젖산(lactated Ringer's), 또는 링거 용액(Ringer's solution)같은 다른 염 용액같은, 제약적으로 허용되는 용매 또는 용액에 용해된 제약적 활성 성분 (예를 들어, 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염)을 포함한다. 제형은 활성 성분(들)의 전반적인 안정성을 촉진해야 하고, 또한, 제형의 생산은 비용-효율적이어야 한다. 모든 이런 요인이 정맥주사 제형의 전반적인 성공 및 유용성을 궁극적으로 결정한다.

경구 제형은 전형적으로 압축 제형, 예를 들어, 정제 또는 환제의 형태로 제조된다. 정제는, 예를 들어 약 5-10 %의 활성 성분 (예를 들어, 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C, 또는 화합물 A, 화합물 B, 또는 화합물 C의 제약적으로 허용되는 염), 약 80 %의 충전제, 붕해제, 윤활제, 활택제, 및 결합제; 및 위 또는 소장에서 정제의 용이한 붕해(disintegration), 분해(disaggregation) 및 용해가 가능하게 하는 10 %의 화합물을 함유할 수 있다. 환제는 맛을 숨기기 위해 당, 바니쉬(varnish), 또는 왁스로 코팅될 수 있다.

실시예

실시예 1

( R )-3-메틸-6-(2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1 H -이미다졸-1-일)메틸)페녹시)헥사노에이트 (화합물 A)의 합성

반응식:

에틸 (R)-6-브로모-3-메틸헥사노에이트의 합성:

1 L 둥근 바닥 플라스크에서, 디클로로메탄 (650 mL) 중 에틸 (R)-6-히드록시-3-메틸헥사노에이트 (65.0 g, 373.56 mmol)의 용액을 실온(RT)에서 PBr₃ (101.0 g, 373.56 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 RT에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후에 (TLC로 관찰함), 반응 혼합물을 물로 희석하고 (500 mL) 디에틸 에테르 (3 x 500 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 분리하고 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시켰다. 감압하에 용매를 제거하여 표제 화합물을 얻었다 (57.12 g).

단계-1: N-(프로프-2-인-1-일)-6-(트리플루오로메틸)니코틴아미드의 합성:

100 mL 둥근 바닥 플라스크에서, 디메틸포름아미드 (DMF: 50 mL) 중 6-(트리플루오로메틸)니코틴산 (3 g, 15.70 mmol) 및 프로프-2-인-1-아민 (1.05 g, 18.84 mmol)의 교반 용액을 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(7.2 g, 18.84 mmol) 및 트리에틸아민 (3.1 mL, 23.55 mmol)로 RT에서 질소 대기하에 처리하였다. 반응 결과 혼합물을 RT에서 3 시간 교반하였다. 반응 완료 후 (TLC로 관찰함), 반응 혼합물을 냉수로 희석하고 고체 침전물을 여과하고, 물로 세척하고 감압하에 건조하여 표제 화합물을 얻었다 (2.6 g, 72.6 %).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 9.08 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.32 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.62 (brs, 1H), 4.30-4.28 (m, 2H), 2.33 (t, J = 2.4 Hz, 1H).

LCMS (ESI+, m/z): 229.2 (M+H)⁺.

단계-2: 5-(1-(2-메톡시벤질)-5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-2-(트리플루오로메틸) 피리딘의 합성:

50 mL 재밀봉가능한 튜브에서, 톨루엔 (10 mL) 중 N-(프로프-2-인-1-일)-6-(트리플루오로메틸)니코틴아미드 (1.0 g, 4.38 mmol) 및 2-메톡시페니벤질 아민 (1.2 g, 8.77 mmol)의 용액에 아연 트리플루오로메탄술포네이트 (0.16 g, 0.43 mmol)를 RT에서 질소 대기하에 처리하였다. 반응 혼합물을 120 ℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응 완료 후에 (TLC로 관찰함), 반응 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 추출물은 포화된 NaHCO₃, 염수로 세척하고 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시켰다. 용액을 감압하에 농축시켜 획득한 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (용리, 헥산 중 25 % EtOAc) 표제 화합물을 수득하였다 (0.8 g, 52.6 %).

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.79 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.94-6.87 (m, 2H), 6.56 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 3.87 (s, 3H). LCMS (ESI+, m/z): 348.3 (M+H)⁺.

단계-3: 2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-1-일) 메틸)페놀의 합성:

100 mL 둥근 바닥 플라스크에서, 디클로로메탄 (300 mL) 중 5-(1-(2-메톡시벤질)-5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-2-(트리플루오로메틸)피리딘 (0.8 g, 2.31 mmol)의 용액을 0 ℃에서 BBr₃ (0.8 mL, 2.31 mmol)으로 적가 처리하였다. 반응 혼합물은 RT에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 (TLC로 관찰함), 반응 혼합물을 NaHCO₃ 수용액으로 염기성화시키고 (pH ~9) 에틸 아세테이트(EtOAc)로 추출하였다. 유기 추출물을 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜 표제 화합물을 제공하였다 (0.5 g, 65.1 %).

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 9.92 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.87 (d, J = 7.8 Hz 1H), 6.73 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 2.15 (s, 3H).

LCMS (ESI+, m/z): 334.3 (M+H)⁺.

단계-4: 에틸 (R)-3-메틸-6-(2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-1-일)메틸)페녹시)헥사노에이트의 합성:

50 mL 둥근 바닥 플라스크에서, DMF (10 mL) 중 2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-1-일)메틸)페놀 (0.5 g, 1.50 mmol)의 교반 용액을 K₂CO₃ (0.41 g, 3.00 mmol) 및 에틸 (R)-6-브로모-3-메틸헥사노에이트 (0.710 g, 3.00 mmol)으로 RT에서 질소 대기하에 처리하였다. 반응 결과 혼합물을 60 ℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응 완료 후 (TLC로 관찰함), 반응 혼합물을 얼음 냉수로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (75 mL X 3)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 획득한 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (구배 용리, 헥산 중 15-30 % EtOAc) 표제 화합물을 제공하였다 (0.45 g, 61.3 %).

수득률: 0.45 g (61.3 %).

LCMS (ESI+, m/z): 491.0 (M+H)⁺.

단계-5: (R)-3-메틸-6-(2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-1-일)메틸)페녹시)헥사노에이트 (화합물 A)의 합성:

250 mL 둥근 바닥 플라스크에서, 테트라히드로푸란 (THF: 5 mL), 에탄올 (2.5 mL) 및 물 (2.5 mL) 중 에틸 (R)-3-메틸-6-(2-((5-메틸-2-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-1-일)메틸)페녹시)헥사노에이트 (0.45 g, 0.92 mmol)의 교반 용액에 수산화 리튬 일수화물 (16.0 g, 74.33 mmol)을 RT에서 처리하였다. 반응 혼합물은 RT에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 (TLC로 관찰함), 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 획득한 잔류물을 EtOAc로 세척하고, 냉수로 희석하고 1 N 염산으로 산성화시켰다 (pH ~5). 고체를 여과하고 감압하에 건조시켜 표제 화합물을 얻었다 (0.166 g, 39.2 %).

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ11.96 (brs, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.84 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 3.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.19-2.14 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.03-1.94 (m, 1H), 1.85-1.80 (m, 1H), 1.68-1.66 (m, 2H), 1.38-1.36 (m, 1H), 1.28-1.18 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

¹⁹F NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ -66.46

LCMS (ESI+, m/z): 462.3 (M+H)⁺.

HPLC: 95.11 % (210 nm).

화합물 A의 메글루민염의 제조

화합물 A의 메글루민염을 만들기 위해 2 가지 별도의 방법을 사용하였다.

방법 1

화합물 A (102.7 mg)를 메글루민 (43.7 mg) 및 2 mL의 2-프로판올과 4 mL 유리 바이알에서 혼합하였다. 바이알을 뚜껑으로 밀봉하고 내용물을 25 ℃에서 20 분간 초음파처리하고 이어서 50 ℃에서 60 분간 교반하였다. 이어서 바이알을 새로운 교반 플레이트로 옮기고 25 ℃에서 바이알의 슬러리를 교반하였다.

방법 2

화합물 A (102.2 mg)를 메글루민 (43.2 mg) 및 2 mL의 아세토니트릴과 4 mL 유리 바이알에서 혼합하였다. 바이알을 뚜껑으로 밀봉하고 내용물을 25 ℃에서 20 분간 초음파처리하고 이어서 50 ℃에서 60 분간 교반하였다. 이어서 바이알을 새로운 교반 플레이트로 옮기고 25 ℃에서 바이알의 슬러리를 교반하였다.

방법 1 및 방법 2 모두, 25 ℃에서 교반하고 2 일 후, 두 샘플을 원심분리하고, 상층액을 버리고, 고체를 공기 중에서 건조시켰다.

화합물 A의 메글루민염의 수화물의 제조

500 mL 둥근 바닥 플라스크에서, THF (100 mL) 및 물 (100 mL) 중 화합물 A (20 g, 43.33 mmol)의 교반 용액에 메글루민 (8.45 g, 43.33 mmol)을 0 ℃에서 처리하였다. 반응 결과 혼합물을 RT에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고 획득한 고체를 감압하에 건조시켜 (3 시간) 흰색 고체인 표제 화합물을 제공하였다 (28.5 g, 98.95 %).

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.75 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz 1H), 7.26 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.99 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.09-3.99 (m, 3H), 3.97-3.77 (m, 2H), 3.74-3.61 (m, 3H), 3.29-3.06 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.18-2.14 (m, 1H), 1.99 - 1.94 (m, 2H), 1.83 - 1.75 (m, 2H), 1.51 - 1.38 (m, 1H), 1.32-1.22 (m, 1H), 0.86 (d, J = 6.0 Hz, 3H).

¹⁹F NMR (400 MHz, CD₃OD): δ-69.39

원소 분석: C₃₁H₄₃F₃N₄O_8.H₂O에 대한 계산치: C, 55.18; H, 6.72; N, 8.30. 실측치: C, 54.95; H, 6.89; N, 8.07

수분 함량 (칼 피셔): 2.33 %

실시예 2

화합물 A는 급성 신장 손상의 동물 모델에서 정맥내로 투여하였을 때 허혈성 재관류 손상을 감소시킨다

동물, 수술 및 투여: 자유롭게 표준 사료 및 음수에 접근하도록 한 약 280-300 g의 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 수컷 랫트를 실험에 사용하였다. 랫트 (n = 8 /군)를 이소플루란으로 마취하고 온도 조절된 가열 수술 플랫폼에 배쪽으로 놓았다. 피부 절개는 옆구리 절개를 통해 두 신장이 모두 노출 되도록, 등쪽 표면에 하였다. 혈관 클립을 양쪽 신혈관(renal pedicles)에 적용하고 45 분간 폐색을 유지하였다. 45 분 후, 클립을 제거하고, 신장의 성공적인 재관류를 관찰하고, 이어서 수술 부위를 봉합하였다. 폐색 클램프가 적용되지 않은 것을 제외하고, 거짓 수술군 (n=4 마리 랫트)은 유사한 수술 과정을 받았다. 화합물 A는 5 % 덱스트로오스 중 화합물 A의 메글루민염 (1.5 몰당량의 화합물 A) 수화물의 매일 신선하고 깨끗한 용액으로 제형화하였다. 화합물 A는 동물이 수술 및 거짓 수술로부터 깨어나고 4 시간 후에 꼬리 정맥을 통해 3 mg/kg, 1 mg/kg 또는 0.3 mg/kg을 IV 투여하였고 IRI 대조군 동물은 부형제를 유사하게 투여하였다.

채혈: 재관류로부터 24 시간 후, 혈액은 경도의 이소플루란 마취하에 모든 군으로부터 후안와정맥채혈법(retro-orbital bleeding)에 의하여 K2 EDTA 튜브에 수집하였다. 혈장은 4 ℃에서 10 분간 3000 rpm에서 원심분리하여 분리하였다.

채뇨: 모든 시험 동물군을 수술 회복 후 즉시 대사케이지(metabolic cages)에 놓았고 24 또는 48 시간 동안 소변을 수집하였다. 소변량을 조심스럽게 측정하고 이어서 침전물을 제거하기 위해 4 ℃에서 10 분간 3000 rpm으로 원심분리하였다. 혈장 및 소변의 크레아티닌은 완전 자동화된 임상 생화학 분석기[지멘스 디멘션(Siemens Dimension)® 엑스팬드(Xpand)® 플러스 통합된 화학 시스템]로 분석하였다. 소변의 NGAL은 바이오포르토 엘라이자 키트(BioPorto ELISA kit)를 사용하여 분석하였다. 크레아티닌 청소율은 하기에 따라 계산하였다:

데이터 분석 및 통계 분석:

그래프패드 프리즘 소프트웨어(GraphPad Prism software), 버전 6.05를 그래핑과 통계 검정에 사용하였다. 크레아티닌은 디아고스티노-피어슨 옴니버스 정규성 검정 및 샤피로-윌크 정규성 검정을 통해 모든 군에서 정규 분포를 검정하였다. 통계적 유의성 (p<0.05)은 통상의 일원배치분산분석(ordinary One-way ANOVA) 후 IRI-처리군을 대조군으로 사용하여 던넷의 다중 비교(Dunnett's multiple comparison)로 결정하였다. IR-부형제 대비 **p<0.01, ***p<0.001 및 ****p<0.0001.

결과: 데이터는 도 1에 나타낸다. 허혈증 4 시간 후에 IV 투여한, 화합물 A는 신장 손상을 감소시킨다. 화합물 A를 0.3 mg/kg, 1 mg/kg 또는 3 mg/kg으로 투여하였을 때 유의하게 혈장 크레아티닌을 감소시키고, 신장 기능을 향상시키고, 초기 신장 손상 바이오마커 NGAL을 감소시킨다.

실시예 3

화합물 B는 급성 신장 손상의 동물 모델에 경구로 투여하였을 때 허혈성 재관류 손상을 감소시킨다

동물, 수술 및 투여: 자유롭게 표준 사료 및 음수에 접근하도록 한, 약 280-300 g의 수컷 스프라그-도울리 랫트를 본 실험들에 사용한다. 랫트 (n=8/군)를 이소플루란으로 마취하고 온도 조절된 가열 수술 플랫폼에 배쪽으로 놓았다. 피부 절개는 옆구리 절개를 통해 두 신장이 모두 노출 되도록, 등쪽 표면에 하였다. 혈관 클립을 양쪽 신혈관에 적용하고 45 분간 폐색을 유지하였다. 45 분 후, 클립을 제거하고, 신장의 성공적인 재관류를 관찰하고, 이어서 수술 부위를 봉합하였다. 폐색 클램프가 적용되지 않은 것을 제외하고, 거짓 수술군 (n=4 마리 랫트)은 유사한 수술 과정을 받았다. 화합물 B는 정제수 중 0.25 % 카르복시메틸-셀룰로스 나트륨, 0.25 % 트윈(Tween)-80에 매일 신선한 현탁액으로 제형화하였다. 화합물 B를 동물이 수술 및 거짓 수술로부터 깨어나고 4 시간 후에 경구로 30 mg/kg 투여하였고 IRI 대조군 동물은 부형제를 유사하게 투여하였다.

채혈: 재관류로부터 24 시간 후, 혈액은 경도의 이소플루란 마취하에 모든 군으로부터 후안와정맥채혈법에 의하여 K2 EDTA 튜브에 수집하였다. 혈장은 4 ℃에서 10 분간 3000 rpm에서 원심분리하여 분리하였다.

채뇨: 모든 시험 동물군을 수술 회복 후 즉시 대사케이지에 놓았고 24 시간동안 소변을 수집하였다. 소변량을 조심스럽게 측정하고 이어서 침전물을 제거하기 위해 4 ℃에서 10 분간 3000 rpm으로 원심분리하였다.

혈장 및 소변의 크레아티닌은 완전 자동화된 임상 생화학 분석기 (지멘스 디멘션® 엑스팬드® 플러스 통합된 화학 시스템)로 분석하였다. 크레아티닌 청소율은 하기에 따라 계산하였다:

데이터 분석 및 통계 분석:

그래프패드 프리즘 소프트웨어, 버전 6.05를 그래핑과 통계 검정을 위해 사용하였다. 데이터는 디아고스티노-피어슨 옴니버스 정규성 검정 및 샤피로-윌크 정규성 검정을 통해 모든 군에서 정규 분포를 검정하였다. 정규 분포된 데이터는 비대응표본, 양쪽 꼬리 t-검정(unpaired, two-tailed t test)을 받았다. 비-정규 분포 데이터는 맨-휘트니 검정(Mann-Whitney test (비-모수))을 받았다. 통계적 유의성은 화합물 처리군 대비 IRI-부형제의 p<0.05에 의하여 결정한다. IR-부형제 대비 **p<0.01 및 ***p<0.001.

결과: 허혈증 4 시간 후 투여된 화합물 B는, 신장 손상을 감소시킨다. 화합물 B (도 2)를 경구로 투여하였을 때 혈장 크레아티닌을 감소시키고 신장 기능을 개선하였다. 막대 그래프 a는 경구로 투여하였을 때 혈장 크레아티닌을 감소시킨 신장 손상 24 시간 후의 랫트에서 혈장 크레아티닌 수치를 mg/dL로 보여준다. 좌측에서부터 우측의 막대 그래프는 부형제를 투여한 거짓 수술한 랫트의 혈장 크레아티닌 수치; 부형제를 투여한 급성 신장 손상을 가진 랫트; 30 mpk의 화합물 B를 투여한 급성 신장 손상을 가진 랫트 (도 2a)를 나타낸다. 유사하게 막대 그래프 b는 신장 기능 또는 GFR(사구체 여과율)의 평가치, 크레아티닌 청소율 수치를 보여준다 (도 2b).

Claims

하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 환자에게 정맥내로 투여하는 것을 포함하는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물의 메글루민염의 유효량을 환자에게 정맥내로 투여하는 것을 포함하는 방법.
하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법.
하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 방법.
제3항 또는 제4항에 있어서, 화합물을 정맥내로 투여하는 것인 방법.
제3항 또는 제4항에 있어서, 화합물을 경구로 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 급성 간질 신장염에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 사구체 신질환에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 급성 혈관염성 신질환에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 허혈증에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 독성 손상에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 전신성 고질소혈증에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 급성 신후성 파괴성 신질환에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 신부전, 신장염 증후군, 동맥경화성 질병, 패혈증, 저혈압, 저산소증, 미오글로빈뇨-혈뇨증, 또는 간 질환을 겪으면서 당뇨병에 의한 급성 신장 손상을 치료받는 중인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 급성 신장 손상을 치료를 받고 있거나 고령, 임부, 수술 환자이거나, 신독성 약제에 노출된 적이 있는 방법.
제15항에 있어서, 환자는 수술 환자인 방법.
제15항에 있어서, 환자는 신독성 약제에 노출된 적이 있고 신독성 약제는 급성 신장 손상을 야기할 수 있는 약물 또는 화학 물질인 방법.
제17항에 있어서, 약물 또는 화학 물질은 시스플라틴; 겐타마이신; 세팔로리딘; 시클로스포린; 암포테리신; 사염화 탄소; 트리클로로에틸렌; 및 디클로로아세틸렌으로 이루어진 군 중에 선택되는 하나 이상의 화합물인 방법.
급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 정맥내로 치료하는 용도를 위한 하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염.
급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 용도를 위한 하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염.
급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하는 용도를 위한 하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염.
급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 정맥내로 치료하기 위한 약제의 생산을 위한 하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 용도.
급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하기 위한 하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 용도.
급성 신장 손상을 가진 인간 환자를 치료하기 위한 하기 구조식으로 나타내어지는 화합물 또는 제약적으로 허용되는 그의 염의 용도.