KR20180112284A - 다마스크 장미꽃 및 블루베리의 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

다마스크 장미꽃 및 블루베리의 추출물을 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명의 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 따르면, 콜라겐의 생합성을 증진 및 MMP-1 활성의 저해를 통해 피부주름이 개선되고, 체내의 자유 라디칼이 소거되어 항산화 효과를 가질 수 있을 뿐만 아니라, 피부의 각질층의 제거가 촉진되어 미백 효과가 달성될 수 있다.

Description

다마스크 장미꽃 및 블루베리의 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing Damask rose flower and blueberry extracts}
본 발명은 다마스크 장미꽃 및 블루베리의 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 외부로부터 유래한 유해한 자극으로부터 인체를 보호하고, 인체의 가장 바깥쪽에 위치한 기관이다. 사람의 피부는 장벽(Barrier)으로서 체내의 수분 또는 유용한 성분이 체외로 유출되는 것을 방지하고, 아울러 체온의 조절, 노폐물의 배출 또는 호흡에도 관여하는 등 다양한 생리적 역할을 수행한다.
멜라닌(Melanin)은 흑갈색 알갱이의 색소로서 피부, 털 및 눈 등에 존재한다. 멜라닌을 만드는 세포를 멜라닌 세포라 하며, 멜라닌은 멜라닌 세포 속의 멜라노솜이라는 작은 자루 모양의 세포 소기관에서 만들어진다. 멜라닌 세포는 멜라노솜이 들어 있는 돌기를 뻗어서 케라틴 세포 등 주변의 다른 세포에 멜라닌을 전달한다. 멜라닌 세포의 종류에 따라 멜라노솜을 그대로 유지하고 있는 경우도 있다. 멜라닌의 양에 따라 피부색이 결정되는데, 멜라닌의 양이 많을수록 검은 피부색을 띤다. 인종마다 피부색이 다른 것은 멜라닌 세포의 수가 다르기 때문이 아니라, 멜라닌 세포의 크기와 만들어지는 멜라닌의 양이 다르기 때문이다. 멜라닌은 일정량 이상의 자외선을 흡수하여 유해한 자외선이 인체 내로 침투하는 것을 차단하여 인체를 보호하는 역할을 한다. 햇빛에 의해 피부가 갈색으로 변하는 것은, 피부 아래층에 존재하는 멜라닌 세포가 자외선에 의해 자극을 받아 신체를 보호하기 위해 멜라닌을 만들고, 만든 멜라닌을 피부 위쪽으로 올려 보내어 자외선이 피부 깊숙이 침투하는 것을 방지하기 때문이다. 그런데 노화된 각질이 정상적으로 탈락되지 않으면, 피부가 활성을 잃으며, 기미 또는 주근깨 등의 색소 침착이 일어나게 된다. 따라서, 이러한 색소 침착 현상을 막기 위해서는 멜라닌의 생성을 저해하거나 노화된 각질층을 제거해야 할 필요가 있다. 즉, 충분한 미백 효과를 얻기 위해서는 멜라닌 생성의 억제와 아울러 피부 턴오버의 촉진이 요구된다.
체외로부터 흡입되거나, 체내에서 발생하는 활성산소는 생체의 노화, 암 발생 등의 원인으로 알려져 있고, 프리 라디칼에 의한 산화를 억제하는 항산화 물질에 대한 개발 및 연구도 많이 이루어지고 있다. 항산화 물질은 동·식물계에 널리 분포되어 있으며, 특히 페놀성 화합물, 플라보노이드, 토코페롤, 비타민 C 또는 셀레늄 등은 과일이나 채소에 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 천연적으로 존재하는 항산화 물질은 피부에 적용시 충분한 효과를 기대할 수 없는 실정이어서, 항산화력이 뛰어나고 가격이 저렴한 합성 항산화제가 많이 사용되고 있으나, 부작용 등 안전성에 대한 우려로 그 사용이 제한된다.
따라서, 인공적으로 합성된 물질과 비교하여, 안전하면서도 피부를 개선할 수 있는 원료의 개발이 절실히 요구되는 실정이다.
본 발명은 안전하면서도 피부를 개선할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상술한 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 다음과 같은 수단을 포함할 수 있다.
본 발명은 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 발효된 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 효모 또는 유산균을 이용하여 발효된 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 Galactomyces, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces ellipsoids, Bifidobacterium longum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus confusus, Lactobacillus fermentum, Leuconostoc citreum, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc sp, 및 Pediococcus acidilactici로 이루어진 군으로부터 선택되는 효모 또는 유산균을 이용하여 발효된 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로, 약 0.01 중량% 내지 약 90.00 중량%의 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물 또는 이의 발효물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로, 약 1.00 중량% 내지 약 90.00 중량%의 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물 또는 이의 발효물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로, 약 1.00 중량% 내지 약 10.00 중량%의 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물 또는 이의 발효물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로, 약 10.00 중량%의 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물 또는 이의 발효물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물 또는 이의 발효물을 함유하는 피부 주름 개선용, 항산화용 또는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물 또는 이의 발효물을 함유하고, 스킨류, 로션류, 에센스류, 크림류, 팩류, 파운데이션류 및 메이크업베이스류로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 따르면, 콜라겐의 생합성을 증진 및 MMP-1 활성의 저해를 통해 피부주름이 개선되고, 체내의 자유 라디칼이 소거되어 항산화 효과를 가질 수 있을 뿐만 아니라, 피부의 각질층의 제거가 촉진되어 미백 효과가 달성될 수 있다.
이하에서는, 본 발명을 하기 실시예 등을 통해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 등은 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 등에 의해서만 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에서 "포함하다", "가지다" 또는 "함유하다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 구성요소 또는 이들의 조합이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징, 숫자, 단계, 구성요소 또는 이들의 조합의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에서 "%"는 특별히 정해진 바가 없다면 중량%를 의미하며, 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로 한다.
본 발명에서 이용되는 다마스크 장미의 학명은 Rosa × damascena이며, 영어로는 Damask rose, Damascus rose 또는 Rose of Castile로도 불린다. 상기 학명을 가지는 품종을 개량한 다마스크 장미의 꽃도 본 발명에 이용될 수 있다. 다마스크 장미는 향기가 매우 좋아 다마스크 장미 오일은 향료의 원료로서 사용된다. 다마스크 장미에는 항산화 활성을 가지는 폴리페놀과 비타민 등의 물질이 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 이용되는 블루베리(Blueberry)는 일반적으로 블루베리로 분류될 수 있는 것을 모두 포함할 수 있다. 바람직하게는 산앵두나무속(Vaccinium)에 속하는 블루베리가 이용될 수 있다. 블루베리는 관목성 식물이며, 야생종은 열대 산악지대인 온대와 아한대에 널리 분포되어 있다. 블루베리의 원산지는 북아메리카이며, 북아메리카의 3대 블루베리에는 하이부시 블루베리, 래빗아이 블루베리 및 로우부시 블루베리 등 3 종류가 있다. 블루베리에는 안토시아닌, 클로로겐산, 프로안토시아니딘, 플라보노 배당체, 카테킨 등의 다양한 폴리페놀이 함유되어 있다. 이 폴리페놀은 항산화 작용을 하며, 생활습관병을 예방하는 성분으로 알려져 있다. 또한, 블루베리는 노화와 파킨슨병의 예방에 유효하다고 알려져 있으며, 아울러 알츠하이머병의 예방에도 효과가 높다고 알려져 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 주요성분으로서 다마스크 장미꽃과 블루베리 추출물을 포함한다. 다마스크 장미꽃과 블루베리는 각각 별도로 추출될 수도 있고, 동시에 추출될 수도 있다. 다마스크 장미꽃 추출물과 블루베리 추출물의 혼합물의 함량은 약 1 중량% 내지 약 90.00 중량%이다. 다마스크 장미꽃 추출물의 함량과 블루베리 추출물의 함량은 각각 약 0.01 중량% 내지 약 90.00 중량%이지만, 다마스크 장미꽃 추출물의 함량과 블루베리 추출물의 함량의 비는 제한되지 않는다. 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물의 함량이 0.01 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 미미하며, 90.00 중량%를 초과하는 경우에는 피부자극을 유발하거나 불안정하기 때문에 화장료 조성물로서의 효과를 기대하기 어렵다. 바람직하게는, 다마스크 장미꽃 추출물과 블루베리 추출물의 혼합물의 함량은 약 1 중량% 내지 약 10 중량%이다. 가장 바람직하게는, 다마스크 장미꽃 추출물과 블루베리 추출물의 혼합물의 함량은 약 10 중량%이다.
본 발명의 다른 양태로서, 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물은 발효되어 이용될 수 있다. 발효란 미생물이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해하는 과정을 의미한다. 본 발명에 이용될 수 있는 미생물 균주는 Galactomyces, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces ellipsoids, Bifidobacterium longum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus confusus, Lactobacillus fermentum, Leuconostoc citreum, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc sp, 및 Pediococcus acidilactici 로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 즉, 발효를 할 수 있는 박테리아, 특히 유산균 및 효모를 모두 포함할 수 있고, 바람직하게는, 본 발명에 이용될 수 있는 미생물 균주는 Saccharomyces cerevisiae 또는 Lactobacillus paracasei 이다. 상기 추출물을 발효시킨 경우에는 발효시키지 않은 경우에 비하여, 피부 주름 개선 효과, 항산화 효과 및/또는 미백 효과가 더욱 개선될 수 있다.
본 발명에 다른 양태로서, 다마스크 장미꽃 및 블루베리 추출물은 각각 별도로 추출되어 혼합될 수 있고, 동시에 추출될 수도 있다.
본 발명의 다른 양태로서, 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물을 혼합하여 발효시킬 수도 있고, 각각 발효시킨 후 혼합하여 이용할 수 있다.
본 발명에 화장료 조성물은 통상적으로 이용되는 첨가제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 항산화제, 방부제, 가용화제, 안료, 비타민 및/또는 향료 등을 선택적으로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, '피부 주름 개선 효과'는 섬유아세포(Fibroblast) 내에서 생성되는 콜라겐의 양을 측정하고, 콜라겐을 분해하는 효소 중에서 콜라겐 타입 1을 분해하는 MMP-1(Matrix metalloproteinase 1)을 측정하기 위한 MMP-1 어세이를 실시하여 MMP-1의 활성 저해도를 비교하는 것을 포함하여 지표로 삼는다.
본 발명에 있어서, '항산화 효과'는 자유 라디칼(Free radical)에 의한 세포 산화를 억제하는 것을 의미하며, 자유 라디칼의 제거로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.
본 발명에 있어서, '미백 효과'는 멜라노사이트 생성의 억제하거나, 배출된 멜라닌의 흑화 과정을 막거나 티로시나제(Tyrosinase)의 활성을 억제하여 멜라닌의 합성을 억제하거나 생성된 멜라닌의 환원을 촉진시켜 연한 색의 멜라닌으로 환원시키는 것을 포함한다.
실시예
실시예 1: 다마스크 장미 꽃 및 블루베리의 추출물의 제조
환류 냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 다마스크 장미꽃과 블루베리 열매 100 g에 증류수 1 ℓ를 넣고, 80 ℃의 수욕조 상에서 3 시간씩, 3회 반복 추출하여 추출물을 얻었고, 추출물을 여과지로 여과하였다. 얻어진 추출물은 하기의 발효 원료 및 실험에서의 시료로 사용되었다.
실시예 2: 다마스크 장미 꽃 및 블루베리의 추출물의 효모발효
Saccharomyces cerevisiae 균을 YM 고체 배지에서 25 ℃ 내지 50 ℃의 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 하나의 콜로니를 취하여 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 25 ℃ 내지 50 ℃의 온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켰다. 이렇게 배양된 것을 종균으로 사용하였다.
실시예 1에서 얻어진 추출물을 각각 1 중량% 또는 10 중량% 함유된 액체 배지에 미리 배양시킨 Saccharomyces cerevisiae 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25 ℃ 내지 50 ℃의 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100 ℃에서 40분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 사용하였다.
실시예 3: 다마스크 장미 꽃 및 블루베리의 추출물의 유산균발효
Lactobacillus paracasei 균을 MRS 고체 배지에서 25 ℃ 내지 50 ℃의 온도 에서 24시간 활성화시킨 후, 하나의 콜로니를 취하여 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 25 ℃ 내지 50 ℃의 온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켰다. 이렇게 배양된 것을 종균으로 사용하였다.
실시예 1에서 얻어진 추출물을 각각 1 중량% 또는 10 중량% 함유된 액체 배지에 미리 배양된 Lactobacillus paracasei 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25 ℃ 내지 50 ℃의 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100 ℃에서 40분간 열을 가하여 균의 기능을 상실시켰다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 사용하였다
실시예 4: 피부 주름 개선 효과
- 콜라겐 생합성 평가
콜라겐 생합성 평가를 위한 검증으로 시료에 대한 섬유아세포 내에서 생성되는 콜라겐 양을 측정하기 위해 프로콜라겐 어세이(Procollagen assay)를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 섬유아세포를 젠타마이신 (50ug/mL)과 10% 소태아혈청(FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM Welgene, Korea)에 37℃, 5 % CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 2x105 농도의 섬유아세포를 6 웰 플레이트에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 인산 완충 식염수(PBS:Phosphate buffered saline)로 세척한 후, UV 312 nm 파장에서 12.5 mJ로 조사하였다. 그 후, DMEM배지에 시료를 농도 별로 처리하여 48~72시간 동안 추가 배양하였다. 추가 배양이 끝난 후 배지를 수거하였고, 수거한 배지에서 새로 생성된 콜라겐의 양을 측정하기 위하여 Procollagen Type-I C-Peptide(PIP) EIA kit(Takara Bio Inc. MK101)를 이용하였다. Antibody-POD conjugate solution 100 ul를 각 웰에 첨가하고, 샘플이나 스탠다드를 20 ul씩 넣은 뒤 잘 섞어서 37℃에서 3시간 방치하였다. 반응이 끝난 내용물을 제거한 뒤 PBS 400 ul로 4번 세척하였다. 제거 후 기질용액 100 ul를 첨가하여 실온에서 15분간 반응시킨 뒤 stop solution 100 ul 첨가하여 부드럽게 섞어주었다, microplate reader(BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정한 후 표준 농도곡선을 작성하여 콜라겐 양을 산정하였다. 대조군으로서, UV 처리를 하지 않은 군(UV(-)), UV만 처리한 군(UV(+)), UV처리 후 아스코르브산 200 uM을 처리한 군(UV(+)+ Ascorbic acid 200 uM)을 준비하였고, 시료의 결과와 비교하였다(표 1).
시료 농도(%) 콜라겐 합성 (% of UV(-))
UV(-) UV(+) UV(+)+Ascorbic acid 20 uM 실시예 1 실시예 2 실시예 3
1 100 51 64 43 73 77
10 56 87 85
표 1에 나타난 바와 같이, 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물의 콜라겐 생합성율이 UV(+)군에 비하여 개선되었음을 확인할 수 있다. 특히, 실시예 2 및 3의 시료와 같이 추출물을 발효시킨 경우에는 실시예 1는 물론 콜라겐 형성의 기본물질인 아스코르브산을 처리한 군에 비해서도 더 높은 콜라겐 생합성율을 보였다. 이로써 자외선에 의해 발생한 주름이 실시예 1 내지 3, 특히 실시예 2 및 3의 시료에 의해 개선되는 효과가 확인되었다.
- MMP -1 저해 평가
피부 주름 개선 효과를 검증하기 위한 또 한가지 방법으로 콜라겐을 분해하는 효소 중에서 콜라겐 타입 I을 분해하는 MMP-1(Matrix metalloproteinase I, collagenase)을 측정하기 위해 MMP-1 어세이를 실시하였다. 시료에 대한 섬유아세포 내에서 생성되는 콜라겐 양을 측정하기 위해 프로콜라겐 어세이(Procollagen assay)를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 섬유아세포를 젠타마이신 (50ug/mL)과 10% 소태아혈청(FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM Welgene, Korea)에 37℃, 5 % CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 2x105 농도의 섬유아세포를 6 웰 플레이트에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 인산 완충 식염수(PBS:Phosphate buffered saline)로 세척한 후, UV 312 nm 파장에서 12.5 mJ로 조사하였다. 그 후, DMEM배지에 시료를 농도 별로 처리하여 48~72시간 동안 추가 배양하였다. 추가 배양이 끝난 후 배지를 수거하였고, 수거한 배지에서 흡광도를 측정하기 위하여 MMP-1 측정 키트(RPN 2610, Amersham Bioscience, UK)를 이용하였다. Anti-MMP1 antibody로 코팅된 96 웰 플레이트에 버퍼를 웰 하나에 첨가하여 블랭크로 삼고, 배지 중에 유리된 샘플과 표준액 100 ul를 각각의 웰에 넣었다, 실온에서 교반없이 2시간 동안 반응시킨 후 워싱 버퍼로 웰을 가득 채워서 3회 반복해서 세척한 후 물기를 완전히 제거하였다. 그 후 100 ul 퍼옥사이드 컨쥬게이트를 첨가하고, 실온에서 교반없이 2시간 동안 반응시켰다. 다시 워싱 버퍼로 웰을 가득 채워서 30분간 교반하면서 반응시켰다. 100 ul 1M H2SO4로 반응을 중지시킨 후 microplate reader(BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하여 비교 하였다. 대조군으로서, UV를 처리한 군(UV(+)), UV처리 후 아스코르브산 200 uM을 처리한 군(UV(+)+ Ascorbic acid 200 uM)을 준비하였고, 시료의 결과와 비교하였다(표 2).
시료 농도(%) MMP-1 (% of UV(+))
UV(+) UV(+)+Ascorbic acid 200 uM 실시예 1 실시예 2 실시예 3
1 100
 68
 88 61 65
10 77 51 52
표 2에 나타난 바와 같이, 다마스크 장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물의 MMP-1 활성 저해율이 UV(+)군에 비하여 개선되었음을 확인할 수 있다. 특히, 실시예 2 및 3의 시료와 같이 추출물을 발효시킨 경우에는 실시예 1은 물론 콜라겐 형성의 기본물질인 아스코르브산을 처리한 군에 비해서도 더 높은 MMP-1 저해율을 보였다. 이는 콜라겐 생합성율에 관한 표 1과 일치하는 양상을 가졌다. 이로써 자외선에 의해 발생한 주름이 실시예 1 내지 3, 특히 실시예 2 및 3의 시료에 의해 개선되는 효과가 확인되었다.
실시예 5: 항산화 활성
다마스크 장미꽃 추출물과 블루베리 추출물의 혼합물의 항산화 활성을 측정하기 위하여, DPPH (2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 라디칼 소거능을 이용하였다. 0.4 mM DPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 용액을 에틸 알콜에 녹여 여과한 후 즉시 사용하였다. 제조된 DPPH 용액과 시료 용액을 1:1로 혼합하여 격렬하게 섞은 후, 상온 암소에 10분간 방치하였다. Microplate reader (BioTek, USA)를 이용하여 515 nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 수학식 1을 통해 DPPH 라디칼 제거율(%)을 산출하였다(표 3). 이때 라디칼을 제거하는 양성 대조군(positive control)으로 0.1 mg/ml의 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.
수학식 1
DPPH 라디칼 제거율(scavenging, %) = {(A - B) / A} x 100
(상기 식에서, A는 공시험액에서 얻은 흡광도이고, B는 검액에서 얻은 흡광도임)
시료농도(%)
 라디칼 제거율(%)
Ascorbic acid 0.1 mg/ml 실시예 1 실시예 2 실시예 3
1 87.4
 25.1 30.2 28.7
10 61.7 62.1 63.2
표 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1 내지 3의 시료 모두 라디칼 제거능을 가지고 있음을 확인할 수 있었으며, 특히, 시료의 농도가 10%인 경우에는 아스코르브산에 준하는 유의미한 라디칼 제거율을 보였다. 이로써, 실시예 1 내지 3의 시료에 의한 항산화 활성이 확인되었다.
실시예 6: 미백 효과
미백 효과를 알아보기 위하여, 멜라닌을 합성하는 세포주로 B16-F10 (murine melanocyte)을 사용하여, 멜라닌 생성을 저해하는 실험을 수행하였다. 실시예 1 및 3에 따른 시료를 0.1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 및 1 mg/ml의 농도별로 준비하였고, 12시간 동안 배양한 후에 CCK-8 어세이 용액을 50 ul 넣은 후 37 ℃ CO2 인큐베이터에서 3시간 반응 후 450 nm 파장에서 OD값을 확인하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다. 대조군으로서는 아무것도 첨가하지 않은 것과, 멜라닌세포자극호르몬(HSH)을 첨가한 군 및 알부틴을 첨가한 군을 사용하였다.
0.10 % 0.50 % 1.00 %
대조군 100
MSH 1 uM 287.5
알부틴 0.01 % 178.7
실시예1 357.5 335.3 287.2
실시예2 330.5 273.1 192.5
실시예3 257.9 227.1 215.6
추가로 24시간 경과 후에, CCK-8 어세이 용액을 50 ul 넣은 후 37 ℃ CO2 인큐베이터에서 3시간 반응 후 450 nm 파장에서 OD값을 확인하였으며, 그 결과를 표 5에 내었다.
0.10 % 0.50 % 1.00 %
실시예 1 99.8 93.8 89.8
실시예 2 101.7 103.6 102.0
실시예 3 100.6 103.8 102.1
표 4와 표 5의 데이터를 비교하면, 실시예 1 내지 3의 시료에 의해 B16-F10 세포주의 수가 현저히 감소된 것을 확인할 수 있다. 이로써, 실시예 1 내지 3의 시료에 의한 멜라닌 합성 저해 효과가 확인되었다.
실시예 7: 피부 자극성 시험
피부 자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알러지 증상이 없는 20-30대 여성 20명을 대상으로 본 발명의 피부 안전성을 확인하기 위하여 인체 피부 첩포시험을 하였다. 우선 시험 부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤에 건조시켰다. 준비된 시험물질을 15㎍씩 핀챔버 (Finn chamber, 100 x 10, EPITEST, 핀란드) 내에 적하시킨 후 시험대상자의 전박 (forearm) 안쪽 부위에 밀폐 첩포하였다. 24시간 동안 첩포하고 첩포를 제거한 후 펜으로 시험부위를 표시하였다. 표시 후 각각 1시간 및 24시간 후에 육안으로 시험 부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다. 피부반응은 국제접촉피부염연구회 (ICDRG, International Contact Dermaitis Research Group)의 평가 기준 및 점수에 따라 판정하고, 수학식 2에 따라 평균피부반응도 (mean response rate)를 구하였다. 그 결과는 표 6에 나타내었다.
- 피부반응의 평가 기준 및 점수
Figure pat00001
- 수학식 2
평균피부반응도 = (점수Ⅹ 반응수 Ⅹ 100 Ⅹ1/2) / [3(최대점수) Ⅹ 총피검자수 (n)]
시험물질 1시간 후 24시간 후 반응도
± + ++ ± + ++
무도포 - - - - - - 0
15% 글리세린 - - - - - 0
실시예 1 - - - - - - 0
실시예 2 - - - - - - 0
실시예 3 - - - - - - 0
실시예 8: 화장수(스킨로션)의 제조
하기 표 7에 기재된 바와 같은 성분과 함량을 함유하는 화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
원료 중량%
실시예 2의 시료 10.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카복시비닐폴리머 0.1
피이지-60 하이드로제네이티드캐스터오일 0.2
폴리솔베이트80 0.4
에탄올 10
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔분
실시예 9: 크림의 제조
하기 표 8에 기재된 바와 같은 성분과 함량을 함유하는 크림은 수상과 유상을 각각 75℃에서 가열 후 5분간 유화시키고, 냉각·탈포하여 제조하였다.
원료명 중량%
실시예 2의 시료 10.0
밀납 10.0
폴리솔베이트60 1.5
피이지-60 하이드로제네이티드캐스터오일 2.0
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
유동파라핀 10.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔분

Claims (10)

  1. 다마스커스장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 혼합물을 함유하는 화장료 조성물.
  2. 제1 항에 있어서, 상기 혼합물은 발효된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제2 항에 있어서, 상기 혼합물은 효모 또는 유산균을 이용하여 발효된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제2 항에 있어서, 상기 혼합물은 Galactomyces, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces ellipsoids, Bifidobacterium longum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus confusus, Lactobacillus fermentum, Leuconostoc citreum, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc sp, 및 Pediococcus acidilactici로 이루어진 군으로부터 선택되는 효모 또는 유산균을 이용하여 발효된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 다마스커스장미꽃 추출물 및 블루베리 추출물의 함량은, 각각, 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로, 0.01 중량% 내지 90.00 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 혼합물의 함량은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로 1.00 중량% 내지 90.00 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 혼합물의 함량은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로 1.00 중량% 내지 10.00 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 혼합물의 함량은 화장료 조성물 전체 100 중량%를 기준으로 10.00 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  9. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선용, 항산화용 또는 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  10. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨류, 로션류, 에센스류, 크림류, 팩류, 파운데이션류 및 메이크업베이스류로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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