KR20180093072A - 용액상 gap 펩타이드 합성을 위한 시스템 및 방법 - Google Patents
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Abstract
새로운 벤질 유형의 GAP 보호기의 개발을 포함하는 Fmoc/tBu 용액상 펩타이드 합성을 위한 시스템과 방법, 및 이와 관련된 용도가 개시된다. 이러한 새로운 GAP 보호기는 중합체 지지체 대신에 사용되어, 크로마토그래피, 재결정화 또는 중합체 지지체 없이 C에서 N으로의 Fmoc 펩타이드 합성을 용이하게 한다. GAP 기는 첨가되어 고수율로 제거될 수 있다.
Description
본 출원은 저작권 보호를 받는 내용을 포함한다. 저작권자는 본 내용이 미국 특허 상표청의 파일 또는 기록으로 볼 수 있기에 누구든 해당 특허 명세서를 무단 복사하는 것에 대해 이의를 제기하지는 않지만, 그 이외의 경우에서는 모든 저작권이 보호된다.
관련 출원의 인용
본 출원은 발명의 명칭이 "용액상 GAP 펩타이드 합성을 위한 시스템 및 방법"인 미국 특허출원 번호 제62/270,432호에 대한 우선권을 주장한다. 상기 특허 출원은 모든 목적을 위하여 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 일반적으로 펩타이드 합성 분야에 관한 것이다. 특히, 본 시스템은 크로마토그래피, 재결정화, 또는 중합체 지지체 없이 용액상 펩타이드 합성을 제공하여, 높은 전체 수율과 순도를 가능하게 한다. 본원에 개시된 시스템과 방법은 광범위하게 다양한 시나리오를 뒷받침하며 다양한 제품과 서비스를 포함한다.
연방 자금 지원을 받는 연구에 대한 언급
해당없음
최근의 연구 노력은 특히 컬럼 크로마토그래피와 재결정화를 수행하지 않는 것에 중점을 둔 정제 화학 분야에서 큰 진전을 이루었다. 이 연구는 출발 물질 또는 새롭게 생성된 생성물에 적절하게 작용화시킨 기를 의도적으로 도입함으로써 크로마토그래피 및/또는 재결정화와 같은 전통적인 정제 방법을 피하는, 유기 합성을 위한 화학으로서 기를 이용한 정제 (Group-Assisted Purification, GAP) 화학/기법으로 확립되었다. 이러한 연구는 합성 유기 화학의 전 분야를 망라할 수 있는 가능성이 있다.
보호기가 광범위하게 사용되는 한 분야는 펩타이드 합성인데, 이는 고체상 및 용액상 접근법 모두에서 그러하다. 1960년대에 메리필드(Merrifield)에 의해 개발된 고체상 펩타이드 합성 (SPPS)은 연구 및 제조를 위한 다수의 과학 교과목에서 사용되는 표준 프로토콜이 되었다 (도 1A 참고). 중합체 지지체의 장점은 각각의 커플링/탈보호 단계 이후에 성장하는 펩타이드의 손쉬운 정제를 가능하게 하는 그의 역량에 있으며, 이로써 컬럼 크로마토그래피의 사용을 피할 수 있다. SPPS의 주요 단점은 스케일 업(scale-up)이 어렵다는 점에 있다: 다수의 중합체 지지체들은 고가이며, 처리할 물질 중 대부분의 질량을 차지하고 있다. 보호기는 다수의 작용기들이 존재하는 거의 모든 착체 합성에서 발견된다. 유효 보호기들은 광범위하게 다양한 조건에 강할 필요가 있으며, 첨가되어 고수율로 제거되어야 한다. GAP 화학용으로 이상적인 예로는 반영구적 보호기가 GAP에 필요한 용해도 특성을 도입한 것일 것이다. 그러나, 대부분의 통상적인 보호기들은 비극성이어서, 대부분의 기질에 요구되는 GAP 용해도를 이끌어 내지 못한다. 적절한 용해도 제어를 만들어 내는 보호기가 개발될 수 있다면, GAP 화학은 그 보호기의 사용을 필요로 하는 모든 합성으로 확장될 가능성이 높다.
여러 접근 방법들이 이용되어 왔다. 공개된 특허 출원 WO 2014093723 A2호는, GAP에 적합한 카이랄 보조물로 이민을 보호한 후, 비대칭성 붕소 첨가 반응에서 이들 카이랄성 N-포스포닐 이민을 친전자체로 사용하는 것에 대하여 교시하고 있다. 정제는 GAP 공정을 통해 수행되었다. 이 작업은 신규한 펩타이드 표적물에 도입될 가능성이 있는 신규한 아미노산 유도체를 합성하는데 잠재적으로 사용될 수 있는 카이랄성 α-붕산 아민에 대한 손쉬운 접근을 제공한다는 점에 있어서 가치가 있다.
미국 특허 제8,383,770 B2호는 SPPS에서의 Fmoc 및 Boc N-말단 보호기의 사용에 대하여 교시하고 있다. 이 기법은 산업계에 잘 알려져 있어 광범위하게 이용된다. Boc 및 Fmoc 기는 펩타이드 화학의 모든 분야에서 수십년간 사용되어 왔으며, 바람직한 Fmoc 기는 거의 전부가 고체상으로 한정된다. 용액 중에서 경제성이 높은 Fmoc 보호 체계의 예로는 문헌 중에 몇 가지 예시가 있을 뿐 거의 존재하지 않는다.
미국 특허 제5,516,891 A호는 Fmoc 기반의 SolPPS의 몇 가지 예들 중 하나를 제공하고 있다. 또 한편, Fmoc 펩타이드 합성은, 탈보호 동안에 부산물로서 형성되는 N-플루오레닐메틸피페리딘 (NFMP)이 중합체 지지체 없이는 제거하기가 어렵기 때문에, 거의 전부가 SPPS로 한정된다. Fmoc 탈보호를 위한 표준 프로토콜은 초과량의 피페리딘을 함유하는 DMF 또는 DCM 용액 중에서 Fmoc-펩타이드를 교반하여, 공정 중에 Fmoc 기를 탈보호시키고 NFMP를 형성하는 것이다. 상기 '891 특허는 피페리딘 대신에 4-아미노메틸피페리딘 (4AMP)을 사용하는 탈보호에 의한 해당 불순물의 제거에 대하여 교시하고 있다. 여기서는 NFMP 대신에 NFMP-CH2NH2를 형성하는데, 이는 추가의 아미노기 존재로 인하여, 물로 추출될 수 있다. 이 방법의 문제점은 고비용의 4AMP를 사용하는 데에 있다. 시그마 알드리치(Sigma Aldrich)사에 의하면, 4AMP는 그램당 $3.80인 반면, 피페리딘은 그램당 고작 $0.12이다. 이것이 상기 방법이 고비용이 들어가는 이유이며, 산업게에서도 그 동안 용인되지 않았던 이유이다.
따라서, 당업계에서는 고체상 펩타이드 합성의 정제의 편익을 유지하면서 상기한 제약들을 극복할 수 있는 경제성이 높은 GAP 펩타이드 합성 시스템의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명은 중합체 지지체의 대량 폐기물 없이 용액상에서 일어나는 반응을 이용하는 펩타이드 합성을 위한 시스템 및 방법을 제공하여, 당업계의 문제점을 해결하지만 전통적인 용액상 펩타이드 합성 (SolPPS) 뿐만 아니라 SPPS 양자 모두에 대한 대안책으로서 SPPS의 모든 정제 편익을 유지하여, 상기 양 방법의 장점을 모두 제공한다. GAP 화학의 장점들을 이용함으로써, 경제성이 높아 펩타이드의 상업적 제조에 유용한 Fmoc-SolPPS 전략이 제공된다.
따라서, 본 발명의 목적은 C-말단 보호를 위한 새로운 GAP 벤질 유형의 보호기의 개발을 통해 GAP 펩타이드 합성 (GAP-PS)을 가능하게 하는 것이다 (도 1B 참고). C-말단 보호와 관련하여, GAP-PS는 가벼운 탈보호 프로토콜로 인해 SPPS에 가장 많이 사용되는 방법인 Fmoc/tBu 전략을 이용하여 달성될 수 있다. 이 전략은 탈보호 동안에 부산물로서 형성되는 N-플루오레닐메틸피페리딘 (NFMP)이 중합체 지지체 없이는 제거하기가 어렵기 때문에, 거의 전부가 SPPS로 한정된다. 따라서, 본 발명의 목적은 펩타이드 합성의 일반적인 방법에 대한 예로서 용액상 Fmoc/tBu 전략의 이용을 통해 고수율 및 고순도로 1 그램 이상의 표적 펩타이드, 예컨대 티모펜틴을 제공하는 것이다. 이러한 새로운 보호기를 이용한 다양한 아미노산들의 보호도 일관된 정량 수율로 달성될 수 있었다.
한 양태에서, 펩타이드 합성을 위한 방법이 제공된다. 본 방법은 용액상 펩타이드 합성 (SolPPS)을 이용하는 Fmoc/tBu 전략을 사용하여 고순도 (99%)의 고수율 (50% 이상)을 가능하게 한다. 본 발명은 SolPPS과 함께 기를 이용한 정제 (GAP)를 사용하여, 재결정화 또는 크로마토그래피 대신에 침전을 통해 펩타이드가 정제될 수 있게 한다. 또한, 개시된 방법은 고체상 펩타이드 합성 (SPPS)을 피함으로써, 실제로 형성되는 생성물의 양을 증가시킨다.
본 발명의 또 다른 목적은 C-말단에 화학적으로 연결된 신규한 C-말단 보호기 (본원에서 "BnDppOH", "BnDppYH", "BzDppOH"로 지칭됨)를 제공하는 것이다. 또한, 이러한 GAP 기의 사용도 차이가 있다: 기존의 GAP 기가 아미노 보호기로 기능했던 반면, 본 발명은 카복실산을 위한 보호기를 개시하고 있다. 카복실산을 보호함으로써, 펩타이드 합성이 N에서 C로의 방향보다는 산업계에서 바람직한 C에서 N으로의 방향으로 가능하게 되는데, 이는 기존의 GAP-PS 방법과 결정적인 차이점으로서, 펩타이드 사슬을 성장시킬 일시적인 보호기로서 Fmoc의 사용을 추가적으로 가능하게 한다. Fmoc 탈보호 동안, 고체 지지체 없이는 제거하기 어려운 NFMP가 형성된다. 본 발명은 GAP-펩타이드를 선택적으로 침전시킴으로써 용액 중에 NFMP를 남겨두는 제거 방법을 제공한다.
본 발명의 상술한 목적 및 기타 목적들, 특징 및 장점들은 첨부하는 도면에 도시된 바와 같은 실시양태들에 대한 하기의 설명으로부터 명백히 알 수 있을 것이며, 도면에서 참조 문자는 다양한 시각을 통해서 본 동일한 부분을 지칭한다. 도면들은 반드시 일정한 비율로 할 필요는 없고, 그 대신에 본 발명의 원리를 설명하는 곳에 대해서는 강조할 수 있다.
도 1a는 선행 기술의 고체상 펩타이드 합성 (SPPS) 방법을 도시한다.
도 1b는 C-말단 보호를 위한 벤질 유형의 보호기의 사용을 포함하는 본 발명의 방법을 도시한다.
도 2는 도 1b에 사용된 보호기의 개발 과정을 도시한다.
도 3은 도 2의 보호기의 차별성 및 GAP 역량을 시험하는 개략도를 도시한다.
도 4a-4b는 각각 다양한 아미노산들에 대해 도 2의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다.
도 5는 본 발명의 펩타이드 합성의 대표적인 비제한적인 예시의 목적을 위해 도 2의 보호기를 사용하는 티모펜틴의 합성에 대한 개략도를 도시한다.
도 6은 본 발명의 실시양태에 사용될 수 있는 다른 보호기를 도시한다.
도 7은 본 발명의 실시양태에 이용된 도 6의 보호기의 생산, 합성 및 제조를 위한 대안적인 방법을 도시한다.
도 8은 본 발명의 실시양태에 이용된 도 6의 보호기의 생산, 합성 및 제조를 위한 또 다른 대안적인 방법을 도시한다.
도 9a는 다양한 아미노산들에 대해 "BnDppYH"의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다.
도 9b는 도 9a에 나타낸 방법을 위한 계획에 이용된 보호기 "BnDppYH"를 도시한다.
도 10a는 다양한 아미노산들에 대해 "BnDppZH"의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다.
도 10b는 도 10a에 나타낸 방법을 위한 계획에 이용된 보호기 "BzDppOH"를 도시한다.
도 1a는 선행 기술의 고체상 펩타이드 합성 (SPPS) 방법을 도시한다.
도 1b는 C-말단 보호를 위한 벤질 유형의 보호기의 사용을 포함하는 본 발명의 방법을 도시한다.
도 2는 도 1b에 사용된 보호기의 개발 과정을 도시한다.
도 3은 도 2의 보호기의 차별성 및 GAP 역량을 시험하는 개략도를 도시한다.
도 4a-4b는 각각 다양한 아미노산들에 대해 도 2의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다.
도 5는 본 발명의 펩타이드 합성의 대표적인 비제한적인 예시의 목적을 위해 도 2의 보호기를 사용하는 티모펜틴의 합성에 대한 개략도를 도시한다.
도 6은 본 발명의 실시양태에 사용될 수 있는 다른 보호기를 도시한다.
도 7은 본 발명의 실시양태에 이용된 도 6의 보호기의 생산, 합성 및 제조를 위한 대안적인 방법을 도시한다.
도 8은 본 발명의 실시양태에 이용된 도 6의 보호기의 생산, 합성 및 제조를 위한 또 다른 대안적인 방법을 도시한다.
도 9a는 다양한 아미노산들에 대해 "BnDppYH"의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다.
도 9b는 도 9a에 나타낸 방법을 위한 계획에 이용된 보호기 "BnDppYH"를 도시한다.
도 10a는 다양한 아미노산들에 대해 "BnDppZH"의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다.
도 10b는 도 10a에 나타낸 방법을 위한 계획에 이용된 보호기 "BzDppOH"를 도시한다.
본 발명의 다양한 실시양태를 만들어 사용하는 것에 대해서 아래에 상세히 설명하지만, 본 발명이 광범위하게 다양한 구체적인 상황, 물품 또는 서비스에 구현될 수 있는 여러가지로 응용가능한 독창적인 개념을 제공하고 있다는 점에 대해서는 이해해야 할 것이다. 본원에 거론된 구체적인 실시양태들은 본 발명을 만들어 사용하는 구체적인 방법들을 예시하는 것일 뿐이지 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물 및 특허 출원들은 본 발명이 속한 업계에서 숙련자들의 기술 수준을 나타낸다. 모든 간행물 및 특허 출원들은 상기 각각의 간행물 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고로 포함되는 나타낸 바와 동일한 정도로 본원에 참고로 포함된다.
이제, 본 발명의 일부를 형성하며 예시로서 구체적인 실시양태를 보여주는 첨부하는 도면을 참고하면서 본 발명을 아래에서 보다 상세히 기술할 것이다. 그러나, 본 발명의 대상은 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있기 때문에, 본원에 포함되거나 청구된 본 발명의 대상은 여기에 기술된 임의의 실시양태로 한정되는 것으로 해석되어서는 안되며; 예시적 실시양태들은 단지 설명을 위해 제공되는 것이다. 마찬가지로, 본원에 청구되거나 포함된 청구 대상 범위도 적정하게 넓은 범위로 한다. 무엇보다도, 예를 들어, 본 발명의 대상은 방법, 조성물 또는 시스템으로 구현될 수 있다. 따라서, 실시양태는, 예를 들어 방법, 조성물, 화합물, 물질 또는 이들의 임의의 조합의 형태를 취한다. 따라서, 하기의 상세한 설명은 본 발명을 한정하려는 것은 아니다.
본 명세서와 청구범위 전반에 걸쳐, 용어들은 명시적으로 언급한 의미 이외에 그러한 용어들이 사용된 문맥 중에서 시사되거나 암시된 뉘앙스를 갖는 의미를 나타낼 수도 있다. 마찬가지로, 본원에서 사용된 "한 실시양태에서"라는 어구도 반드시 동일한 실시양태를 지칭할 필요는 없으며, 본원에서 사용된 "또 다른 실시양태에서"라는 어구도 반드시 서로 다른 실시양태를 지칭할 필요는 없다. 예를 들어, 청구된 본 발명의 대상은 전체적으로나 부분적으로 실시양태들의 조합을 포함시키고자 한다.
일반적으로, 용어는 적어도 부분적으로 문맥상 용법으로부터 이해될 수 있다. 예를 들어, 본원에 사용된 "및", "또는" 또는 "및/또는"이라는 용어들은, 적어도 부분적으로는 이러한 용어들이 사용되는 문맥에 따라 달라질 수 있는 다양한 의미들을 포함할 수 있다. 통상적으로, A, B 또는 C와 같이 목록과 결부되어 사용되는 경우에 있어서 "또는"이라는 말은 본원에서 한정적인 의미로 사용된 A, B 또는 C 뿐만 아니라, 본원에서 포괄적인 의미로 사용된 A, B 및 C도 의미하는 것을 의도한 것이다. 또한, 본원에 사용된 "하나 이상"이라는 용어는, 적어도 부분적으로 문맥에 따라서는, 단수형 의미로 임의의 특징, 구조 또는 특성을 기술하는데 사용될 수 있거나, 또는 복수형 의미로 특징, 구조 또는 특성의 조합을 기술하는데 사용될 수도 있다. 이와 유사하게, 단수형 관사 ("a," "an" 또는 "the")와 같은 용어들도, 적어도 부분적으로 문맥에 따라서는, 단수형 용법을 의미하거나 또는 복수형 용법을 의미하는 것으로 이해될 수 있다. 또한, "~을 근거(기반)로 한 (based on)" 이라는 말은 반드시 한정적인 일군의 요인들을 의미하려는 것이 아니고, 그 보다는 오히려 이 역시 적어도 부분적으로 문맥에 따라서 반드시 명확히 기술된 것이 아닌 추가의 요인들의 존재에 대해서도 용인할 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
따라서, 본 발명의 실시양태는 새로운 C-말단 보호기를 위한 시스템 및 방법을 제공한다. 새로운 보호기를 설계하는데 있어서, 보호기의 GAP-작용화 세그먼트가 명백히 광범위하게 다양한 조건들에 안정해야될 필요가 있을 것이다. 이것이 GAP 화학을 위해 필요한 용해도 특성을 제공해야 한다는 점도 고려하였다. 또한, 이것은 현재 보호 전략의 반응성과 함께 효율적이면서 차별성 있게 작동해야만 한다. 이에 따라, GAP 기를 도입하는 한편 목적하는 반응성을 유지하기 위하여 개질된 벤질 보호기가 사용되었다. 선택된 GAP 기는, GAP 화학을 이용하여 포스핀 옥사이드기로 기존에 성공한 것으로 알려진 이유에서 디페닐포스핀 옥사이드이다. 또한, 벤질기의 파라 위치에 대한 이러한 기의 부착은, 광범위하게 다양한 조건들에 안정한 것으로 문헌 상에 널리 알려진 트리페닐포스핀 옥사이드 부분을 생성한다. 이러한 안정성은 기질이 노출될 수 있는 다수의 탈보호 조건들에 의한 간섭을 피하는데 필수적이며, 이로써 진정한 차별성을 확립하게 된다.
초기의 노력은 카이랄 아민의 합성을 위한 카이랄성의 N-포스포닐 및 N-포스피닐 이민 화학의 개발에 초점을 두었으며, 꽤 성과가 좋았다. 용해도를 제어함으로써, 카이랄 아민 생성물은 미정제 혼합물로부터 선택적으로 침전됨으로써 크로마토그래피 및 재결정화를 피할 수 있다. 추가의 노력들은 이러한 기법을 다른 기질과 작용기들로 확장시켰다. 이를 행하기 위해, 카이랄 보조물로부터 GAP 특성을 취하여, 이를 변형시키지 않고 본 발명의 GAP 보호기를 위한 토대를 제공한다.
본 발명의 예시적 실시양태에서, 이러한 새로운 보호기의 합성은 시판되는 디페닐(p-톨릴)포스핀 1로부터 출발한다 (도 2). 과망간산칼륨을 이용한 1의 산화는 벤조산 2 뿐만 아니라 포스핀 산화를 통해 GAP 기도 제공한다. 이러한 GAP 기는 디페닐포스핀 옥사이드 (Dpp)이다. 에스테르화 이후 수소화붕소 환원은 GAP에 적합한 벤질 알콜 4, 즉 "BndppOH" (다르게는 "HOBndpp")을 고수율로 제공한다. 다음으로, 이러한 새로운 보호기의 차별성 및 GAP 역량에 대하여 시험한다. Boc-Phe-OH의 보호는 카르보디이미드 커플링 시약으로서 EDCI를 이용하여 용이하면서도 정량적이었다 (도 3). 생성물 5a는 에틸 아세테이트/석유 에테르 용매 혼합물로부터 백색 고체로서 선택적으로 침전됨으로써 GAP 화학의 요건을 충족할 수 있다. Boc 기의 탈보호도 정량적이었으며, Bndpp 기의 어떠한 손실도 초래하지 않았다. 상기 Bndpp 기는 촉매 수소화를 이용하여 쉽게 제거될 수 있으며, 탈보호된 아미노산을 세척하여 제거한 후에 재사용을 위해 "HBndpp" 7a로서 회수되어 재활용될 수도 있다. 7a를 과망간산염으로 산화시키면 2를 수득하는데, 이는 상기 언급한 HOBndpp 4로 변환될 수 있다 (도 2).
도 4a-4b는 다양한 아미노산들에 대해 도 2의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다. 아미노산 보호를 위한 전체 기질 범위를, 여러 가지 측쇄 보호기를 이용하는 다양한 Boc 및 Fmoc 아미노산의 보호에 대한 일관된 정량적 수율과 함께 하기에 표 1에 나타낸다. 트립토판, 아르기닌, 발린 및 시스테인의 정량적 보호는 주목할 만하다.
한 실시양태에서, 카복실산을 위한 새로운 벤질 유형의 GAP 보호기의 개발과 함께, GAP 화학/기법을 통한 Fmoc/tBu 액체상 펩타이드 합성을 위한 방법이 제공된다. 이러한 새로운 GAP 보호기는 중합체 지지체 대신에 사용되어, 크로마토그래피 또는 재결정화 없이 C에서 N으로의 Fmoc 펩타이드 합성을 용이하게 한다. GAP 보호기는, 존재하는 다른 보호기에 대한 차별적 관계를 유지하면서 첨가되어 고수율로 제거될 수 있다. GAP 펩타이드 합성을 위한 이러한 새로운 보호기에 대한 첫 시험으로서, 1 그램 이상의 펜타펩타이드 약물 티모펜틴 (면역자극제)을 높은 전체 수율 (83%) 및 고순도 (99%)로 합성하였다.
본 발명의 한 실시양태에서, 기를 이용한 정제 (GAP) 펩타이드 합성을 위해 하기의 화합물들을 포함하는 보호기가 제공된다:
(1A)
;
(1B)
;
(1C)
;
(1D)
; 및
(1E)
.
상기 식 중에서, R은 H, Me 또는 OMe이고; Y는 O, S 또는 NH이며; X는 O, S 또는 NH이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 Fmoc-tBu 기반의 용액상 펩타이드 합성 (SolPPS)을 포함하는, C-말단 보호를 위한 보호기를 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 하기 보호기
(1A)
를 포함하며, 이는 하기에 의해 제조된다:
여기서, 상기 보호기는 (p-톨릴)디페닐포스핀과 과망간산칼륨 (KMn04)을 환류시키는 단계, 카복실산 생성물을 분리하는 단계, 상기 카복실산 생성물을 산성 에탄올 (EtOH, H+) 중에서 환류시키는 단계 및 수소화붕소나트륨 (NaBH4)을 첨가하는 단계에 의해 제조된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기의 보호기
(1B)
를 제조하는 방법을 제공하며, 이는 하기에 의해 제조된다:
여기서, 상기 보호기는 2브롬화물과 부틸리튬 (nBuLi), 디페닐클로로포스핀 (Ph2PCl), 이산화탄소 (C02) 및 과산화수소 (H+, H202)를 단일 반응 중에서 반응시켜 카복실산 생성물을 제조하는 단계, 상기 카복실산 생성물을 분리시키는 단계, 상기 카복실산 생성물을 산성 에탄올 (EtOH, H+) 중에서 환류시키는 단계, 수소화붕소나트륨 (NaBH4)을 첨가하여 알콜 생성물을 형성하는 단계 및 상기 알콜 생성물을 중습성(mesic) 무수물 Ms20 또는 YH2로 처리하는 단계에 의해 제조되며, 이 경우 R은 H, Me 또는 OMe이고; Y는 S 또는 NH이다.
또 다른 실시양태에서, 하기 보호기
(1C)
는 하기에 의해 제조된다:
여기서, 에틸 에스테르 유도체를 디페닐클로로포스핀 (Ph2PCl)과 반응시킨 후, 산화를 위해 과산화수소 (H202)와 반응시킨다. 상기 생성된 포스핀 옥사이드를 수소화붕소나트륨 (NaBH4)으로 처리하여 알콜을 제조하고, 이를 중습성 무수물 (Ms20)과 YH2로 처리하여 (1C)를 제조하는데; 이 경우, R은 H, Me 또는 OMe이고; X는 O, S 또는 NH이며; Y는 O, S 또는 NH이다.
또 다른 실시양태에서, 하기 보호기
(1D)
는 하기에 의해 제조된다:
여기서, 2브롬화물을 부틸리튬 (nBuLi), 디페닐클로로포스핀 (Ph2PCl), 이산화탄소 (C02) 및 과산화수소 (H+, H202)과 원포트(one-pot) 형식으로 반응시켜 카복실산 생성물 (1D)을 제조하는데; 이 경우, R은 H, Me 또는 OMe이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 하기 보호기
(1E)
는 하기에 의해 제조된다:
여기서, 에틸 에스테르 유도체를 디페닐클로로포스핀 (Ph2PCl)과 반응시킨 후, 산화를 위해 과산화수소 (H202)와 반응시킨다. 상기 생성된 포스핀 옥사이드를 수산화리튬 (LiOH)과 물 (H20)로 처리하여, 카복실산 생성물 (1E)을 제조하는데; 이 경우, R은 H, Me 또는 OMe이고; X는 O, S 또는 NH이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 보호기 1A, 1B, 1C, 1D 또는 1E를 아미노산에 부착시키는 방법이 제공되는데, 이 경우, 상기 방법은 청구항 제1항의 보호기를 하기의 아미노산 화합물과 반응시키는 단계를 포함한다:
이러한 방법은 하기의 단계를 포함한다:
여기서, BnDppOH는 보호기 (1A, 1B, 1C, 1D 또는 1E)이고; Pg는 이에 제한되지는 않지만: Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 또는 tBu를 포함할 수 있으며; Z는 일반 변수이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 방법은 하기 보호기를 포함한다:
(1A)
상기 방법은 하기의 단계를 더 포함할 수 있다:
여기서, BnDppYH는 보호기 (1A, 1B, 1C, 1D 또는 1E)이고; Pg는 이에 제한되지는 않지만, Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 또는 tBu를 포함할 수 있으며; Z는 일반 변수이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 방법은 하기 보호기를 포함한다:
(1B)
및 (1C)
이 경우, R은 H, Me 또는 OMe이고; X는 O, S 또는 NH이다.
또 다른 실시양태에서, 본 방법은 하기의 단계를 포함한다:
여기서, BnDppYH는 보호기 (1A, 1B, 1C, 1D 또는 1E)이고; Pg는 이에 제한되지는 않지만, Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 또는 tBu를 포함할 수 있으며; Z는 일반 변수이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 방법은 하기의 단계를 포함한다:
여기서, BzDppOH는 보호기 (1A, 1B, 1C, 1D 또는 1E)이고; Pg는 이에 제한되지는 않지만, Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 또는 tBu를 포함할 수 있으며; Z는 일반 변수이다.
또 다른 실시양태에서, 본 방법은 하기 보호기를 포함한다:
(1D)
; 또는 (1E)
여기서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되고; X는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 기를 이용한 정제 (GAP) 펩타이드 합성을 수행하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 본원에 기술된 임의의 방법을 사용하여 보호기 1A, 1B, 1C, 1D 또는 1E를 아미노산에 부착시키는 단계 및 이후 본원에 기술된 방법을 이용하여 상기 결과 생성물에 대한 Fmoc-tBu 기반의 용액상 펩타이드 합성 (SolPPS) 커플링 반응을 수행하는 단계를 포함한다. GAP-PS의 이러한 방법은 에틸 아세테이트 중에서, 또는 다르게는 디클로로메탄 중에서 일어나는 반응을 더 포함할 수 있다.
본원에서 논의된 원리들은 여러가지 서로 다른 형태들로 구현될 수 있다. 이제, 완전성을 기하기 위해, 본 발명의 바람직한 실시양태를 기술할 것이며, 적어도 도면들은 참조해야 한다.
실시예 1
새로운 보호기의 첫 적용을 위해, Fmoc/tBu SolPPS 전략을 취급하는 역량에 대해 시험한다. 해당 표적 펩타이드의 비제한적인 예로는 면역조절성 폴리펩타이드인 티모포이에틴 중에서 약학적으로 흥미로운, 생물학적으로 활성인 펜타펩타이드 서브유닛인 티모펜틴이다. 길이가 짧은 펩타이드에 있어서는, 티모펜틴은 다양한 작용기 (1개의 방향족기, 2개의 염기기 (1개는 구아니딘), 2개의 산성기 및 1개의 β-분지형 기)를 갖는 아미노산을 함유한다. 이는 티모펜틴을 GAP 보호기의 예시적 사용 및 수개의 측쇄 보호기의 제거를 용인하는 그 능력에 있어서 이상적인 후보물질이 되도록 해준다. 티모펜틴의 합성을 도 5에 도시한다. 화합물 5k를 먼저 DCM 중의 30% 피페리딘으로 10분간 처리하여 Fmoc 기를 제거한 후, 염화암모늄 세척으로 초과량의 피페리딘을 제거한다. (건조 후) DCM 층을 다음 Fmoc 아미노산 (언급한 바와 같은 측쇄 보호용)으로, TBTU 커플링 시약 및 DIPEA와 함께 직접 로딩한다. 20분 동안 커플링 후, 상기 반응 혼합물을 염화암모늄 및 0.5 M의 수산화나트륨으로 (각각) 세척하고, 건조시킨 후, 흡인 배출(evacuate)시킨다. 커플링 후 상기 미정제 생성물은 (커플링으로부터) 수개의 불순물들, 특히 NFMP 및 테트라메틸 우레아를 함유하고 있다. GAP 정제 절차는 단순히 상기 혼합물을 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해시킨 후, 석유 에테르를 사용하여 GAP-펩타이드의 선택적 침전에 의하여 이러한 불순물들을 쉽게 제거할 수 있다. 테트라- 및 펜타펩타이드 단편에 있어서는, 용해도에 도움을 주기 위하여 침전 전에 소량의 DCM을 에틸 아세테이트에 첨가한다. 마지막 커플링 단계 및 9k의 합성 후, 마지막 Fmoc 기는 이전과 같은 방법을 사용하지만 후처리 이후에 제거하고, 상기 DCM 층을 농축시킨 후 상기 펩타이드를 측쇄 탈보호를 위해 TFA/DCM/H20 (6/3/1) 용액 중에 용해시킨다. 펜타펩타이드 10k (이제 유일한 보호기로서 Bndpp를 사용함)를 디에틸 에테르를 사용하여 침전시킨다. 다음으로, 이 펩타이드를 수소화시켜 GAP 기를 제거한다. 생성물은 10% 아세트산 (aq)을 이용하여 클로로포름으로부터 추출을 통해서 분리한다. 생성물은 10% 아세트산 (aq)을 이용하여 클로로포름으로부터 추출을 통해서 분리한다. 예상외로, 상기 생성물 펩타이드의 HPLC 분석을 통해, 상기 화합물이 어떠한 컬럼 크로마토그래피, 재결정화 또는 중합체 지지체 없이도 거의 99% 순수한 것으로 밝혀졌다. 상기 GAP 기는 단순히 추출 후에 클로로포름 층을 흡인 배출시킴으로써 회수될 수 있다. 이 원재료를 도 2의 합성 방법을 거치게 하면 BndppOH를 재생시킬 수 있다.
일반적 방법: 모든 용매들은 ACS 등급으로 추가의 정제없이 사용하였다. HRMS 분석을 Orbitrap 질량 분석기를 사용하여 수행하였다. HPLC 분석은 UV 검출기가 구비된 퍼킨 엘머(Perkin Elmer)사의 플렉사(Flexar) 등용매용리(isocratic) 펌프를 사용하여 수행하였다. Fmoc 및 Boc 보호된 아미노산을 바켐바이오(BachemBio)에서 구매하여 커플링을 위해 직접 사용하였다.
벤조산 2의 합성: 10.0 g의 1을 500 mL의 둥근 바닥 플라스크에 넣은 후, 130 mL의 0.43 M NaOH(aq) 용액을 넣고, 다음으로 22.2 g의 KMnO4를 넣었다. 상기 반응 혼합물을 환류에서 12시간 동안 교반한 후, 상기 반응 혼합물을 가열하면서 셀라이트를 통해 여과시켰다. 생성된 용액을 디에틸 에테르로 2회 세척한 후, 50%의 H2S04를 첨가하여 생성물을 침전시켰다. 여과 후, 벤조산 2를 백색 고체 (수율 10.8 g, 93%)로서 수거하고; 이 생성물을 직접 다음 반응을 거치도록 하였다.
에스테르 3의 합성: 10.8 g의 2를 300 mL의 에탄올 및 3 mL의 염화티오닐과 함께 500 mL의 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 상기 반응 혼합물을 환류시키고 12시간 동안 교반하였다. 완료 후, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 휘발성 물질들을 흡인 배출시켜, 백색 고체 (수율 11.8 g, 99%)로서 에스테르 3을 수득하고; 이 생성물을 직접 다음 반응을 거치도록 하였다.
BndppOH 4의 합성: 11.8 g의 에스테르 3을 300 mL의 에탄올과 함께 500 mL의 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, 3.82 g의 NaBH4를 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 하고 12시간 동안 교반하였다. 용매를 흡인 배출시킨 후, DCM 중의 미정제 생성물을 용매화하고 2M HCl(aq)로 3회 세척하였다. 다음으로, 유기층을 MgS04로 건조, 여과 및 흡인 배출시켜 백색 고체 (수율 9.96 g, 96%)로서 BndppOH 4를 수득하였는데; 이 화합물은 다른 방법을 통해 사전에 합성된 바 있고, NMR 데이터가 문헌30 상에서 발견된 것과 일치한다: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.62 - 7.57 (m, 4H), 7.54 - 7.47 (m, 4H), 7.45 - 7.40 (m, 4H), 7.38 - 7.36 (m, 2H), 4.70 (s, 2H).
Bndpp 보호를 위한 일반적 절차: 100 mg의 BndppOH, 2.0 당량의 PG-AA-OH 및 10 mL의 DCM을 0℃, 20 mL의 스크류 뚜껑(screw-cap)이 있는 바이알 중에서 교반하였다. 124 mg (2.0 당량)의 EDCI(HCl)를 첨가하여 상기 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 어느 시점에 4 mg (10 mol%)의 DMAP를 첨가하고 상기 반응 혼합물을 실온으로 하여 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(aq)로 2회 세척한 후, 포화 Na2C03(aq)로 2회 세척하였다. 혼합된 유기층을 MgS04로 건조시키고, 여과 및 흡인 배출시켜 보호된 미정제 아미노산을 수득하였다. GAP 정제는, 상기 미정제 혼합물을 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해시킨 후, 석유 에테르를 사용한 침전 및 생성된 백색 침전물의 여과에 의하여 수행하였다. 이와 동일한 절차를 5k를 제외한 모든 기질에 대해 사용하였는데, 이 경우에 반응은 600 mg의 BndppOH 및 이전과 같은 양의 다른 시약들을 사용하여, 보다 큰 스케일 상에서 수행하였다.
화합물 범례
화합물 5a. 백색 고체; 수율 180 mg, 99%; mp 62 - 63℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.69 - 7.63 (m, 6H), 7.58 - 7.52 (m, 2H), 7.49 - 7.45 (m, 4H), 7.35 - 7.32 (m, 2H), 7.24 - 7.18 (m, 3H), 7.07 - 7.05 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 5.20 - 5.12 (m, 2H), 4.96 - 4.95 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.68 - 4.58 (m, 1H), 3.09 - 3.07 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 171.9, 155.2, 139.3, 135.9, 133.0, 132.6, 132.5, 132.2, 132.1, 132.0, 129.4, 128.8, 128.6, 128.2, 128.1, 127.2, 80.2, 66.3, 54.6, 38.5, 28.4; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.28; HRMS (ESI): [C33H34NO5P + H]+에 대한 m/z 계산치: 556.2253, 실측치: 556.2235.
화합물 5b. 백색 고체; 수율 189 mg, 99%; mp 76 - 77℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.69 - 7.64 (m, 6H), 7.58 - 7.54 (m, 2H), 7.49 - 7.44 (m, 6H), 6.65 (bs, 1H), 5.52 - 5.50 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.27 - 5.19 (m, 2H), 4.54 (bs, 1H), 4.38 - 4.32 (m, 2H), 3.09 - 2.91 (m, 2H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.43 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 170.9, 170.4, 139.3, 133.5, 132.8, 132.6, 132.5, 132.4, 132.2, 132.1, 131.8, 128.7, 128.2, 80.7, 66.7, 54.2, 42.2, 34.5, 28.4, 23.3, 22.5, 14.2; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.46; HRMS (ESI): [C30H35N206PS + H]+에 대한 m/z 계산치: 583.2032, 실측치: 583.2012.
화합물 5c. 백색 고체; 수율 246 mg, 99%; mp 86 - 87℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.76 - 7.74 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.69 - 7.63 (m, 6H), 7.60 - 7.52(m, 4H), 7.47 - 7.42 (m, 6H), 7.40 - 7.36 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.31 - 7.27 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 5.48 - 5.46 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.65 - 4.57 (bs, 1H), 4.43 - 4.34 (m, 3H), 4.22 - 4.19 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.10 - 3.02 (m, 2H), 1.88 - 1.84 (m, 1H), 1.72 - 1.68 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.38 - 1.24 (m, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 172.4, 156.2, 143.9, 141.4, 139.5, 132.9, 132.6, 132.2, 131.8, 128.7, 128.0, 127.8, 127.2, 125.2, 120.1, 79.3, 67.2, 66.4, 54.0, 47.3, 40.0, 32.1, 29.8, 28.5, 22.5; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.37; HRMS (ESI): [C45H47N207P + H]+에 대한 m/z 계산치: 759.3199, 실측치: 759.3183.
화합물 5d. 백색 고체; 수율 227 mg, 99%; mp 85 - 86℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.76 - 7.74 (d, J = 7.5Hz, 2H), 7.66 - 7.52 (m, 10H), 7.46 - 7.36 (m, 8H), 7.29 - 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 5.86 - 5.84 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.29 - 5.20 (dd, J = 12.8 Hz, 12.4 Hz, 2H), 4.69 - 4.66 (m, 1H), 4.44 - 4.31 (m, 2H), 4.24 - 4.21 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.01 - 2.95 (dd, J = 4.3 Hz, 17.0 Hz, 1H), 2.81 - 2.76 (dd, J = 4.2 Hz, 17.0 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 170.9, 170.2, 156.1, 143.9, 143.8, 141.4, 139.5, 132.7, 132.6, 132.5, 132.2, 132.1, 131.7, 128.7, 128.6, 128.0, 127.9, 127.2, 125.2, 120.1, 82.1, 67.4, 66.7, 50.7, 47.2, 37.8, 28.1; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.75; HRMS (ESI): [C42H40NO7P + H]+에 대한 m/z 계산치: 702.2621, 실측치: 702.2602.
화합물 5e. 백색 고체; 수율 257 mg, 97%; mp 98 - 99℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.10 - 8.08 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.76 - 7.74 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.68 - 7.61 (m, 6H), 7.56 - 7.36 (m, 14H), 7.31 - 7.25 (m, 3H), 7.21 - 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.48 - 5.46 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.21 - 5.06 (dd, J = 12.9, 47.8 Hz, 2H), 4.84 - 4.79 (m, 1H), 4.41 - 4.34 (m, 2H), 4.22 - 4.18 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.28 - 3.27 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 1.63 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 171.6, 155.8, 149.6, 143.9, 143.8, 141.4, 139.1, 135.5, 132.9, 132.6, 132.5, 132.2, 132.1, 131.8, 130.4, 128.7, 128.6, 127.8, 127.2, 125.2, 124.8, 124.3, 122.8, 120.1, 118.9, 115.5, 114.8, 84.0, 67.4, 66.6, 54.3, 47.2, 28.2; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.32; HRMS (ESI): [C50H45N2O7P + H]+에 대한 m/z 계산치: 817.3043, 실측치: 817.3031.
화합물 5f. 백색 고체; 수율 304 mg, 99%; mp 117 - 118℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.75 - 7.73 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.69 - 7.63 (m, 4H), 7.60 - 7.55 (m, 4H), 7.53 - 7.46 (m, 8H), 7.39 - 7.35 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.29 - 7.27 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.61 (bs, 2H), 5.88 (bs, 1H), 5.50 - 5.35 (dd, J1 = 9.7 Hz, J2 = 52.8 Hz, 2H), 5.03 - 5.00 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.34 (m, 3H), 4.20 - 4.16 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.25 - 3.15 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.78 - 2.67 (m, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.68 - 1.57 (m, 2H), 1.42 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 172.0, 158.6, 156.6, 156.2, 143.8, 141.3, 140.0, 138.3, 133.3, 132.5, 132.4, 132.2, 132.0, 131.9, 131.8, 130.8, 128.9, 128.8, 127.8, 127.2, 125.2, 124.6, 121.1, 120.0, 119.8, 117.4, 86.4, 68.0, 67.2, 66.2, 53.5, 47.1, 43.3, 40.5, 29.6, 28.6, 25.2, 19.4, 18.1, 12.6; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 31.03; HRMS (ESI): [C53H55N408PS + H]+에 대한 m/z 계산치: 939.3556, 실측치: 939.3538.
화합물 5g. 백색 고체; 수율 204 mg, 99%; mp 81 - 82℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ =7.77 - 7.75 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.70 - 7.53 (m, 10H), 7.48 - 7.44 (m, 6H), 7.41 - 7.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.32 - 7.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 5.36 - 5.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.44 - 4.32 (m, 3H), 4.24 - 4.21 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 1H), 0.97 - 0.95 (d, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 172.0, 156.3, 143.9, 143.8, 141.4, 139.4, 132.6, 132.5, 132.2, 132.1, 128.7, 128.6, 128.1, 128.0, 127.8, 127.1, 125.1, 120.1, 67.1, 66.2, 59.1, 47.2, 31.3, 19.1, 17.6; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.45; HRMS (ESI): [C39H36N05P + H]+에 대한 m/z 계산치: 630.2409, 실측치: 630.2392.
화합물 5h. 백색 고체; 수율 287 mg, 99%; mp 121 - 122℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.76 - 7.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.65 - 7.51 (m, 12H), 7.46 - 7.40 (m, 4H), 7.38 - 7.31 (m, 4H), 7.24 - 7.20 (m, 9H), 7.15 - 7.13 (m, 6H), 6.75 (s, 1H), 6.13 - 6.11 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.21 - 5.11 (q, J = 12.8 Hz, 2H), 4.69 - 4.65 (m, 1H), 4.43 - 4.38 (m, 1H), 4.30 - 4.26 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.20 - 4.16 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.18 - 3.13 (dd, J1 = 4.2 Hz, J2 = 15.8 Hz, 1H), 2.87 - 2.82 (dd, J1 = 4.2 Hz, J2 = 15.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 171.0, 169.4, 156.4, 144.3, 144.0, 143.8, 141.4, 139.6, 132.6, 132.5, 132.2, 132.0, 128.7, 128.6, 128.2, 127.9, 127.6, 127.5, 127.4, 127.2, 125.3, 120.1, 71.1, 67.4, 66.6, 51.2, 47.2, 38.8; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.38; HRMS (ESI): [C57H47N206P + H]+에 대한 m/z 계산치: 887.3250, 실측치: 887.3230.
화합물 5i. 백색 고체; 수율 195 mg, 99%; mp 78 - 79℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.76 - 7.75 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.70 - 7.63 (m, 6H), 7.59 - 7.53 (m, 4H), 7.48 - 7.37 (m, 8H), 7.31 - 7.28 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.37 - 5.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.49 - 4.38 (m, 3H), 4.23 - 4.19 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.46 - 1.44 (d, J = 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 172.9, 155.8, 144.0, 143.8, 141.4, 139.5, 132.9, 132.6, 132.5, 132.2, 132.1, 131.9, 128.7, 128.6, 127.9 127.8, 127.2, 125.2, 120.1, 67.2, 66.4, 53.6, 49.8, 47.3, 31.7, 22.8, 18.7, 14.3; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.28; HRMS (ESI): [C37H32N05P + H]+에 대한 m/z 계산치: 602.2096, 실측치: 602.2080.
화합물 5j. 백색 고체; 수율 189 mg, 99%; mp 79 - 80℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.76 - 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.70 - 7.63 (m, 6H), 7.60 - 7.53 (m, 4H), 7.48 - 7.42 (m, 6H), 7.41 - 7.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.31 - 7.27 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 5.42 -5.37 (m, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.41 - 4.39 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 4.24 - 4.21 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.06 - 4.05 (d, J = 5.6 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 169.9, 156.4, 143.9, 141.4, 139.3, 132.9, 132.6, 132.2, 132.1, 131.8, 128.7, 128.6, 128.1, 128.0, 127.9, 127.2, 125.2, 120.1, 67.4, 66.4, 47.2, 42.9; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.33; HRMS (ESI): [C36H30NO5P + H]+에 대한 m/z 계산치: 588.1940, 실측치: 588.1925.
화합물 5k. 백색 고체; 수율 , 99%; mp 99 - 100℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.77 - 7.75 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.69 - 7.64 (m, 6H), 7.56 - 7.53 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 7.48 - 7.44 (m, 4H), 7.41 - 7.36 (m, 4H), 7.31 - 7.27 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.95 -6.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.87 - 6.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.28 - 5.26 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.22 - 5.13 (q, J = 8.5 Hz, 2H), 4.70 - 4.68 (m, 1H), 4.44 - 4.32 (m, 2H), 4.21 - 4.18 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.09 - 3.06 (m, 2H), 1.30 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 171.5, 155.7, 154.7, 143.9, 143.8, 141.4, 139.2, 132.9, 132.6, 132.5, 132.2, 132.1, 129.9, 128.8, 128.6, 128.2, 128.0, 127.9, 127.2, 125.2, 124.3, 120.1, 78.6, 67.1, 66.5, 55.0, 47.3, 37.8, 28.9; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.29; HRMS (ESI): [C47H44N06P + H]+에 대한 m/z 계산치: 750.2984, 실측치: 750.2966.
화합물 6a의 합성: Boc-Phe-OBndpp 5a (80 mg)를 5 mL의 60% TFA/DCM 중에 용해시키고 실온에서 교반하였다. 1시간 후, 상기 용매 혼합물을 흡인 배출시키고, 미정제 생성물을 DCM 중에 용해시켰다. 1M HCl(aq)로 2회 세척한 후, 유기층을 MgS04로 건조시키고, 여과 및 농축시켜 미정제 6a HCl 염을 수득하였다. GAP 정제는, 상기 미정제 혼합물을 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해시킨 후, 석유 에테르를 사용한 침전에 의하여 수행하였다. 상기 정제된 생성물을 여과를 통해 백색 고체로서 분리하였다; 수율 71 mg, 99%; mp 68 - 71℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.57 - 7.40 (m, 12 H), 7.10 - 7.04 (m, 7H), 4.99 - 4.96 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 4.41 (bs, 1H), 3.43 (bs, 1H), 3.25 (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ = 169.1, 138.6, 134.3, 132.5, 132.3, 132.2, 132.1, 132.0, 131.5, 129.6, 128.8, 128.7, 128.6, 128.3, 128.2, 127.5, 67.0, 54.6, 36.6; 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 29.79; HRMS (ESI): [C28H26N03P + H]+에 대한 m/z 계산치: 456.1729, 실측치: 456.1725.
HBndpp 7a의 합성: Boc-Phe-OBndpp 5a (100 mg)를 메탄올 및 10% Pd/C (20 mg)의 5 mL 혼합물 중에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 H2 환경 (풍선 모양의 플라스크) 하에 두고 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 상기 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 메탄올을 흡인 배출시켰다. 상기 미정제 고체를 DCM 중에 용해시키고 포화 Na2C03(aq) 용액으로 2회 세척하였다. 유기층을 MgS04로 건조시키고, 여과 및 흡인 배출시켜 백색 고체(수율 51 mg, 97%)로서 HBndpp 7a를 수득하였는데; 이 화합물은 다른 방법을 통해 사전에 합성된 바 있고, NMR 데이터가 문헌30 상에서 발견된 것과 일치한다: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.68 - 7.63 (m, 4H), 7.57 - 7.52 (m, 4H), 7.48 - 7.44 (m, 4H), 7.29 - 7.26 (m, 2H), 2.41 (s, 3H).
Fmoc 탈보호 및 커플링을 위한 일반적 절차: Fmoc-(AA)n-OBnDpp를 30% 피페리딘/DCM (그램당 100 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(aq)로 3회 세척하고, MgS04로 건조시킨 후 여과하였다. 생성된 DCM 용액에 1.2 당량의 TBTU, 1.2 당량의 Fmoc-AA-OH 및 2.4 당량의 DIPEA를 첨가하였고; 커플링 반응을 20분 동안 교반하였다. 다음으로, 상기 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(aq)로 2회 세척한 후, 0.5 M의 NaOH로 2회 세척하였다. 혼합된 유기층을 MgS04로 건조시키고, 여과 및 흡인 배출시켜 미정제 펩타이드를 수득하였다. GAP 정제는 미정제 혼합물 (Fmoc-(AA)n+1-OBndpp, NFMP 및 테트라메틸우레아 함유)을 최소량의 에틸 아세테이트 (길이가 긴 펩타이드는 일부 DCM 사용) 중에 용해시킨 후, 석유 에테르를 이용한 상기 생성물의 침전에 의해 수행하였다. 생성물 펩타이드를 진공 여과를 통해 정량적 수율의 백색 고체로서 제거하였다.
화합물 9k, Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Asp(tBu)-Val-Tyr(tBu)-OBndpp. 백색 고체; 수율 3.08 g, 97% (6k로부터 3단계 이상); mp 124 - 125℃; 용리액으로서 IPA 중의 0.1% 에탄올아민을 이용하는 분석용 NP-HPLC에 대한 체류 시간: 8.85분, 92.0% 순도; HRMS (ESI): [C90H114N9O17PS + H]+에 대한 m/z 계산치: 1657.7903, 실측치: 1657.7871.
측쇄 보호기의 탈보호: Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Asp(tBu)-Val-Tyr(tBu)-OBnDpp 9k를 100 mL의 30% 피페리딘/DCM 중에 용해시킨 후 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(aq)로 2회 세척하고, MgS04로 건조시킨 후, 여과 및 흡인 배출시켰다. 다음으로, 상기 미정제 혼합물을 TFA/DCM/H20 (6/3/1) 중에 용해시킨 후, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 흡인 배출하여 포화시킨 후, 상기 생성물 펩타이드를 디에틸 에테르로 침전시켰다. 여과 후 펩타이드 10k를 백색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
BnDpp의 탈보호: 수소화 용기 중의 100 mg의 건조 Pd/C에 150 mL의 메탄올 중의 H-RKDVY-OBnDpp 10k를 첨가하였다. 상기 용기를 70 PSI의 H2 환경 하에 두고 실온에서 24시간 동안 진탕시켰다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 흡인 배출시켜 건조한 상태로 하였다. 상기 미정제 혼합물을 10% 아세트산 (aq) 및 클로로포름의 혼합물 중에 용해시킨 후, 수성층을 클로로포름으로 2회 세척하였다. 상기 수성층의 흡인 배출로 티모펜틴을 백색 고체로서 수득하였다; 수율 1.09 g, 87%; 용리액으로서 0.06% TFA/H20 중의 50% MeCN를 이용하는 분석용 RP-HPLC에 대한 체류 시간: 1.24분, 98.9% 순도; HRMS (ESI): [C30H49N9O9 + H]+에 대한 m/z 계산치: 680.3731, 실측치: 680.3730. 기쁘게도, 상기 생성물 펩타이드의 HPLC 분석을 통해, 상기 화합물이 어떠한 컬럼 크로마토그래피, 재결정화 또는 중합체 지지체 없이도 거의 99% 순수한 것으로 밝혀졌다. 상기 GAP 기는 단순히 추출 후에 클로로포름 층을 흡인 배출시킴으로써 회수될 수 있다. 이 원재료를 도 2의 합성 방법을 거치게 하면 BndppOH를 재생시킬 수 있다.
추가의 GAP 기 및 부착 방법
도 6은 본 발명의 실시양태에 사용될 수 있는 대표적인 보호기를 도시한다. 도 7-8은 BndppOH를 개발하는데 사용될 수 있는 대안적 방법 (도 2에 나타낸 방법에 대한 대안) 및 도 6에 기재된 바와 같이, 다른 대표적인 보호기를 개발하는데 사용될 수 있는 대안적인 방법을 도시한다.
도 4a-4b는 각각 다양한 아미노산들에 대해 도 2의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다. 보호기를 부착시키기 위한 다른 방법들은 도 9a-9b 및 10a-10b에 나타나 있다. 도 9a는 다양한 아미노산들에 대해 "BnDppYH"의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다. 도 9b는 도 9a에 나타낸 방법에 대한 개략도에 이용된 보호기 "BnDppYH"를 도시한다. 도 10a는 다양한 아미노산들에 대해 "BzDppOH"의 보호기를 부착시키는 방법에 대한 개략도를 도시한다. 도 10b는 도 10a에 나타낸 방법에 대한 개략도에 이용된 보호기 "BzDppOH"를 도시한다.
이러한 추가의 보호기들은 본 발명의 실시양태와 일치하는 "BnDppOH"와 동일한 방식으로 펩타이드 합성에 사용될 수 있다. 이러한 추가의 보호기들을 위한 펩타이드 커플링 반응은 에틸 아세테이트 중에서 뿐만 아니라 디클로로메탄 중에서도 수행될 수 있다.
당업계의 숙련자라면 본 발명의 방법과 시스템이 여러가지 방식으로 수행될 수 있고, 이러한 이유로 상술한 예시적인 실시양태와 예들에 한정되지는 않는다. 다시 말해서, 하드웨어와 소프트웨어 또는 펌웨어의 다양한 조합으로 단일 또는 다수의 성분들에 의해 수행되는 기능적 구성요소 및 개별 기능들은, 클라이언트 수준 또는 서버 수준 또는 양자 모두의 수준으로 다양한 소프트웨어 애플리케이션들 간에 배포될 수 있다. 이와 관련하여, 본원에 기술된 서로 다른 실시양태들의 임의 다수의 특징들은 단일 또는 다수의 실시양태로 조합될 수 있고, 본원에 기술된 모든 특징들보다 적거나 또는 그보다 많은 특징을 갖는 대안적인 실시양태도 가능하다.
또한, 기능성도 현재 공지되어 있거나 알려진 방식으로 다수의 성분들 간에 전체적으로 또는 부분적으로 배포될 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 기능, 특징 및 선호도를 달성하는데 있어서 무수히 많은 조합들이 가능하다. 또한, 본 발명의 범위도 기술된 특징을 수행하기 위해 통상적으로 공지된 방식 뿐만 아니라, 현재 및 이후에도 당업계의 숙련자에 의해 이해될 수 있는 본원에 기술된 공정, 조성물 또는 화합물에 가해질 수 있는 변화 및 변형을 포함한다.
나아가, 본 명세서에서 도해, 개략도 또는 순서도(예컨대 도면)로 제공되어 기술된 본 방법의 실시양태들은 본 발명의 기법의 보다 완전한 이해를 위하여 제공된다. 개시된 방법들은 본원에 제시된 작업과 논리적 순서에만 한정되지는 않는다. 다양한 작업들의 순서가 변경되는 대안적인 실시양태들, 및 더 큰 작업의 일부로서 기술된 하위 작업들이 독립적으로 수행되는 대안적인 실시양태들도 고려된다.
다양한 실시양태들을 본 발명의 목적을 위하여 기술하였지만, 이러한 실시양태들이 본 발명의 교시를 그 실시양태들에 한정하는 것으로 생각해서는 안된다. 본 명세서에 기술된 시스템과 공정의 범위 내에서 유지되는 결과를 수득하기 위해서, 상기 기술한 구성요소 및 작업에 다양한 변화 및 변형을 가할 수 있다.
관련 참조문헌
Claims (18)
- 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 기를 이용한 정제 (Group Assisted Purification, GAP) 펩타이드 합성을 위한 보호기
(1A);
(1B);
(1C);
(1D); 및
(1E).
상기 식 중에서,
R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Y는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택되며;
X는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다. - Fmoc-tBu 기반의 용액상 펩타이드 합성 (SolPPS)을 포함하는, C-말단 보호를 위한 보호기를 제조하는 방법.
- 제2항에 있어서, 하기 보호기
(1A)
가 하기의 과정
에 의해 제조되는 것인, 방법. - 제2항에 있어서, 하기 보호기
(1B)
가 하기의 과정
에 의해 제조되는 것인, 방법.
상기 식 중에서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Y는 S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제2항에 있어서, 하기 보호기
(1C)
는 하기의 과정
에 의해 제조되는 것인, 방법.
상기 식 중에서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되며;
X는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Y는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제2항에 있어서, 하기 보호기
(1D)
가 하기의 과정
에 의해 제조되는 것인, 방법.
상기 식 중에서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제2항에 있어서, 하기 보호기
(1E)
가 하기의 과정
에 의해 제조되는 것인, 방법.
상기 식 중에서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제1항의 보호기를 하기의 아미노산 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는, 제1항의 보호기를 아미노산에 부착시키는 방법:
- 제8항에 있어서, 상기 방법이 하기의 단계를 포함하는 것인, 방법:
상기 식 중에서, BnDppOH는 제1항의 보호기이고;
Pg는 Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 및 tBu로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Z는 일반 변수이다. - 제9항에 있어서, 상기 보호기가 하기의 화합물인 것인, 방법:
(1A) - 제8항에 있어서, 상기 방법이 하기의 단계를 포함하는 것인, 방법:
상기 식 중에서, BnDppYH는 제1항의 보호기이고;
Pg는 Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 및 tBu로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Z는 일반 변수이다. - 제11항에 있어서, 상기 보호기가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법:
(1B)및 (1C)
상기 식 중에서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제8항에 있어서, 상기 방법이 하기의 단계를 포함하는 것인, 방법:
상기 식 중에서, BnDppYH는 제1항의 보호기이고;
Pg는 Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 및 tBu로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Z는 일반 변수이다. - 제8항에 있어서, 상기 방법이 하기의 단계를 포함하는 것인, 방법:
상기 식 중에서, BzDppOH는 제1항의 보호기이고;
Pg는 Cbz, Fmoc, Boc, Bn, Fm 및 tBu로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Z는 일반 변수이다. - 제14항에 있어서, 상기 보호기가 하기를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 방법:
(1D); 및 (1E)
상기 식 중에서, R은 H, Me 및 OMe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X는 O, S 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 기를 이용한 정제 (GAP) 펩타이드 합성을 수행하는 방법으로서, 상기 방법이 제1항의 보호기를 아미노산에 부착시킨 후, 그 결과로 생성된 상기 부착된 보호기를 갖는 아미노산에 대해 Fmoc-tBu 기반의 용액상 펩타이드 합성 (SolPPS) 커플링 반응을 행하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
- 제16항에 있어서, 상기 반응이 에틸 아세테이트 중에서 일어나는 것인, 방법.
- 제16항에 있어서, 상기 반응이 디클로로메탄 중에서 일어나는 것인, 방법.
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011152603A1 (ko) * | 2010-06-01 | 2011-12-08 | 고려대학교 산학협력단 | 고효율 염료감응 태양전지용 파장전환물질 및 그의 제조방법 |
| WO2013117440A1 (en) * | 2012-02-09 | 2013-08-15 | Paul Scherrer Institut | Synthesis of water-soluble phosphine oxides by pd/c-catalyzed p-c coupling in water |
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|---|---|---|---|---|
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| WO2008080845A1 (en) | 2006-12-29 | 2008-07-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for the synthesis of cyclic peptides |
| AU2010273220B2 (en) | 2009-07-13 | 2015-10-15 | President And Fellows Of Harvard College | Bifunctional stapled polypeptides and uses thereof |
| JP5640722B2 (ja) * | 2010-02-05 | 2014-12-17 | Jsr株式会社 | 新規化合物及びそれを含有する感放射線性組成物 |
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| WO2013117440A1 (en) * | 2012-02-09 | 2013-08-15 | Paul Scherrer Institut | Synthesis of water-soluble phosphine oxides by pd/c-catalyzed p-c coupling in water |
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| Org.Biomol.Chem.,12:2895-2902(2014.2.26.)* * |
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