RU1781226C

RU1781226C - Способ получени пироглутамилсодержащих субстратов

Info

Publication number: RU1781226C
Application number: SU904812402A
Authority: RU
Inventors: Ириса Таливалдовна Равиня; Дайна Роландовна Зицане; Юрис Брунович Слиеде; Инесе Ансовна Рийкуре; Зента Фрицевна Тетере
Original assignee: Рижский политехнический институт им.А.Я.Пельше
Priority date: 1990-02-05
Filing date: 1990-02-05
Publication date: 1992-12-15
Also published as: LV5007A3

Abstract

Использование: в медицинской и биологической химии. Сущность: способ получе- ни пироглутамилсодержащих ферментных субстратов общей формулы: L-GLp-MR-C CH-C-N02 СН СН-СН где R-H, -Phe, -Phe-Ala, -Ala-Ala-Leu. Реагент 1: хлорангидрид L-пироглутаминовой кислоты , полученный непосредственно перед введением в реакцию обработкой L-пироглутаминовой кислоты п тихлористым фосфором при температуре -5-10&deg;С в абсолютном хлорированном углеводороде: . Реагент 2: RNH-C-CH-C-N(2 сн сн-сн Процесс ведут в присутствии основани с последующей выдержкой в течение 16 ч. Предпочтительно при получении соединений I, где , в качестве основани используют избыточное количество n-нитроанилина. Выход 70-95%. 1 з.п. ф-лы, 2 табл. со С

Description

Изобретение относитс к усовершенствованному способу получени пироглута- милсодержащих субстратов, которые наход т применение в медицинской биологической химии.

Известно несколько способов синтеза n-нитроанилидов пироглутамилсодержа- щих субстратов. Их получают конденсацией пироглутамилпептида с п-нитроанилидом аминокислоты.

Известен способ получени пироглута- милпептидов методом активированных эфи- ровсиспользованием

пентафторфенилового или М-оксисукцини- мидного эфиров. Конденсаци пироглутамилпептида с п-нитроанилидом аминокислоты проведена с N.N -дициклогексилкарбодиимидом , иногда в присутствии одного эквивалента М-оксисукциними- да.

Известны ферментативные способы получени n-нитроанилидов пироглутамил- содержащих субстратов путем конденсации фрагментов с использованием химотрипси- на и термолизина.

Эти способы не позвол ют получать продукты с достаточно высоким выходом, они не удобны дл использовани в промышленности при крупномасштабных производствах и требуют дорогосто щих реактивов.

Известны способы получени пироглу- тамилсодержащих ферментных субстратов путем конденсации Вос-замещенной L-пиvi со

ю ю

0

роглутаминовой кислоты с п-нитроанили- дом в присутствии конденсирующего агента (ДЦК) при 0°С с последующей выдержкой при комнатной температуре.

Недостаток известного способа состоит в том, что в нем используют защищенную по аминогруппе пироглутаминовую кислоту, дициклогексилкарбодиимид (сильный аллерген ), кроме того при осуществлении известногоспособатребуетс дополнительна стади - отщепление защитной группы. Выход целевого продукта невысок и составл ет-ч.17%.

Недостатком известных способов вл етс использование в синтезе М-защищен- ных производных пироглутаминовой кислоты.

Цель описываемого способа - повышение выхода пироглутамилсодержащих ферментных субстратов и упрощение процесса

Поставленна цель достигаетс описываемым способом, в котором хлоран- гидрид 1-пироглутаминовой кислоты полученный непосредственно перед введением в реакцию обработкой 1-пироглутаминовой кислоты п тихлористым фосфором при температуре -5 - 10°С в абсолютном хлорированном углеводороде, ввод т во взаимодействие с азотсодержащим ароматическим нитросоединением

формулы A-NH- J -N02 , где , L-Phe,

L-Phe-L-Ala, L-Alaa-L-Ala-L-Leu и процесс ведут в присутствии основани с последующей выдержкой в течение 16 часов, предпочтительно при в качестве основани использовать избыточное количество п-нитроанилида.

Способ осуществл ют следующим образом .

Индивидуальность полученных соединений установлена методом ТХС на пластинках Silufol в системах, этанол-н-бутанол-вода 1:4:1 (А); пиридин- н-бутанол-вода-уксусна кислота 20:30:12:6(5); н-бутанол-уксусна кислота- вода 200-35:70 (В).

К суспензии 18,1 г (87 ммоль) пентахло- рида фосфора в 150 мл абсолютного хлорированного углеводорода (метиленхлорид, хлороформ) порци ми добавл ют 10,2 г (79 ммоль) L-пироглутаминовой кислоты, под- дё ржйва т е мпературу реакционной смеси -5-10°С При данной температуре переме- шибйют еще 1 ч. Растворителе обсасывают. Прибавл ют 79 ммоль n-нитроанилида аминокислоты или пептида, или п-нитроанили- на и 79 ммоль основани х (триэтиламин пиридин, N-метилморфолин) в абсолютном

непол рном растворителе (тетрагидрофу- ран, диоксан). Прибавление ведет при температуре -5-10°С, затем перемешивают 2 ч при той же температуре, и оставл ют на

16-20 ч при температуре 18-20°С. Раствори- тельупаривают в вакууме водоструйного насоса (температура бани 40°С), остаток обрабатывают 1 н. раствором сол ной кислоты , отфильтровывают и на фильтре промывают водой. При перекристаллизации из спирта получают соответственный пироглу- тамилсубстрат.

Выходы и свойства полученных соединений даны в табл.1.

При использовании п-нитроанилина

дл синтеза п-нитроанилина L-пироглутаминовой кислоты прибавление основани не требуетс

По сравнению с известными способами

получени пироглутамилсодержащих ферментных субстратов преимущество предложенного способа характеризуетс тем, что по одной общей унифицированной схеме можно синтезировать любой представитель

класса пироглутамилсодержащих ферментных субстратов. Это позвол ет провести синтез выше названных соединений в одинаковых технологических услови х.

Кроме того, предложенный способ позвол ет исключить работу с сильным аллергеном МЫ-дициклогексилкарбодиимидом, который используетс в известных способах дл конденсации пироглутамилпептида с п- питроанилидом аминокислоты,

Дл осуществлени предложенного способа не требуетс дефицитные и дорогосто щие сЬерментные препараты (химотрип- син, термолизин), которые используютс в известных способах дл синтеза препаративных количеств некоторых пироглутамил- пептидов.

Claims

Формула изобретени 1 Способ получени пироглутамилсодержащих субстратов общей формулы

L-CCp-NRNO- ,

где R-H, L-Phe-, -L-Phe-Ala, -L-Ala-Ala-Leu, путем взаимодействи производного Lпироглутаминовой кислоты с соответствующим азотсодержащим ароматическим , нигросоединением в абсолютном непол р- ; ном органическом растворителе при пониженной температуре с последующей

выдержкой при комнатной температуре, о т- личающийс тем, что, с целью упрощени процесса и повышени выхода, в качестве производного L-пироглутаминовой кислоты используют хлорангидрид L-пиро- глутаминовой кислоты, полученный непосредственно перед введением в реакцию обработкой L-пироглутаминовой кислоты п - тихлористым фосфором при температуре (-БН-Ю С в абсолютном хлорированном углеводороде , в качестве азотсодержащего ароматического нитросоединени - соединение общей формулы

А-МН- 3 М02

где А-Н. L-Phe, -L-Phe-Ala. -L Ala-Ala-Leu,

и процесс ведут в присутствии основани с последующей выдержкой в течение 16ч.
2. Способ по п. 1,отличающийс тем, что при А-Н в качестве основани используют избыточное количество п-нитро- анилина.

Таблица

Таблица 2