KR20180064603A - 유전자감식 신속분석을 위한 20개의 Autosomal-STR 유전자 마커 및 성염색체 유전자마커를 이용한 PCR 다중증폭 시스템 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인간의 유전자감식을 위한 Autosomal-STR을 신속하게 분석할 수 있는 20개 유전자 마커를 포함한 STR 다중증폭시스템에 관한 것으로, 본 발명을 통해 기존 100% 수입에 의존하던 유전자감식 멀티플렉스 키트 (multiplex kit)의 수입 대체 및 검사 비용 절감 효과를 기대할 수 있다. 또한, 국내 국산화로 인해, 한국인의 특성에 맞는 유전자 감식 가이드라인 확립할 수 있다.
Description
본 발명은 인간의 유전자감식을 위한 Autosomal-STR을 신속하게 분석할 수 있는 20개 유전자 마커를 포함한 STR 다중증폭시스템에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 한국인 집단에 대한 상염색체에서 19개의 STR 유전좌위들과 성별구분이 가능한 성염색체 유전좌위를 포함한 20개의 유전자마커를 한 번에 동시에 증폭 가능하도록 개발함으로써 신속한 유전자감식이 가능한 다중증폭시스템에 관한 것이다.
개인의 DNA는 부모로부터 물려받은 개인마다 고유한 양상의 유전자를 가지고 있으며, 이러한 DNA 분석을 통하여 지문처럼 개인을 식별할 수 있다. 이를 통해 각종 범죄 사건에서 범인색출의 중요 단서를 제공, 신원확인 및 혈연확인 등에 이용된다.
초기에는 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphisms)법을 이용하여 인체 염색체상에 존재하는 미니새털라이트(minisatellites)의 다형성을 분석함으로써 법의학에 적용시켰으나, 방사성 동위원소를 사용하고, 시간이 오래 걸리는 단점과 DNA의 양이 많이 필요한 제한점을 가지고 있었다.
현재는 DNA 타이핑에 PCR을 이용한 DNA 절편의 증폭이 가능해지면서, 염색체상의 비정보성 유전부위에 존재하는 특정 'tandem repeat region'을 증폭시켜 유전적 길이 다형성을 보다 편리하고 명확하게 분석할 수 있게 되었다.
STR(short tandem repeat)은 일반적으로 2-6 bp가 반복적으로 배열되어 있고, 인체 유전체 내에 널리 분포하고 있는 것으로 알려져 있으며, 'tandem repeat sequence (반복염기서열)'은 유전자 감식의 마커로써 사용되고 있다.
법과학 분야에서 개인 식별에 사용하고 있는 DNA 핑커프린트(fingerprint) 또는 DNA 프로파일은 게놈에 존재하는 반복되는 염기서열 (tandem repeat sequence)의 특징이 개인별로 차이가 있다는 과학적 원리를 이용하여 개인식별을 하는 유전자 감식방법이다. DNA 프로파일은 주로 STR 마커를 사용하여 개인식별에 활용하는데 STR 마커는 사람마다 다른 반복배열을 나타내어 신원확인 가능한 것이다.
인체 유전자의 다형성에 대한 연구는 집단유전학, 신원확인, 친자감별 및 혈연확인 등 법의학적으로 많이 사용되고 있다. STR 분석기술은 높은 개인 식별력을 지니고 있으며, 현재 전세계적으로 많은 STR 마커들이 유전자 감식분야 분야에서 표준화된 실험 방법으로 사용되고 있다.
세계적으로 국가 간의 DNA 정보 교환을 위해 모든 국가가 공통적인 STR 마커를 포함하여 사용할 것이 권유되었다. 개인의 신원확인을 위한 STR 마커 분석의 국제적인 규격으로 미국은 FBI에서 표준으로 정한 CODIS (Combined DNA Index System)의 13개 STR 유전자마커 (D16S539, D13S317, D7S820, D5S818, CSF1PO, TPOX, TH01, vWA, FGA, D21S11, D18S51, D3S1358, D8S1179)를 포함하고 있는 상용화 키트를 사용하고 있다.
현재 세계적으로 널리 사용되고 있는 STR 유전자 마커 시스템은 외국회사에서 제조, 판매하고 있는 상용화된 키트로써, 'applied biosystems'와 'Promega'가 주요회사이다. 이들 회사에서 세계시장을 독점하다시피 생산 판매하고 있기 때문에, 생산원가에 비해 매우 비싼 실정이다.
STR 유전자형 분석방법은 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)으로 얻은 증폭 산물을 모세관 전기영동법 (capillary electrophoresis, CE)으로 분리하여, 길이의 차이에 따른 STR의 반복 수를 조사한다. 이때, 멀티플렉스(multiplex) PCR을 이용하여, 여러 STR 유전좌 마커들이 한 튜브 내에서 한 번의 PCR 반응으로 동시에 증폭 가능하도록 한다. 모세관 전기영동법은 증폭산물의 길이를 정확하게 확인할 수 있으며, 형광표지자가 부착된 프라이머를 이용하여 증폭 산물을 자동화된 장비에서 쉽고 빠르게 검출할 수 있다.
법의학적 유전자분석 기법으로 사용되고 있는 DNA 프로파일 분석은 13개 유전좌의 STR 마커와 X-Y 염색체 분석을 위해 'Amelogenin' 유전자를 모두 포함하는 'AmpFLSTR Identifiler (Applied Biosystem)', 'PowerPlex 16 system (Promega)' 키트 등을 사용한다. 최근에는 STR 마커를 20개 이상 확장하는 것을 권고하고 있으며, 'GlobalFiler System (Applied Biosystem)', 'PowerPlex Fusion System (Promega)' 확장 키트들이 상용화되어 출시되었다.
본 발명에서는 'Applied Biosystem의 AmpFLSTR Identifiler'와 'Promega의 PowerPlex 16 System'의 두 제품의 STR 마커를 포함하는 20개의 마커 (즉 19개의 STR 마커와 사람의 성별을 식별할 수 있는 성염색체 유전좌위를 1개 포함)로 구성된 다중증폭 시스템을 국산화하고자 하였다. 외국제품 의존도를 대체할 수 있는 자체개발 키트를 개발하는 것은 큰 의미를 갖는데, 국내의 DNA 신원확인정보 시스템에서 DNA 데이터베이스를 국내에서 개발된 국제규격에 맞는 키트를 사용할 경우, 시료의 단가가 낮아지기 때문에 훨씬 경제적인 시스템을 만들 수 있기 때문이다.
본 발명은 서열번호 1 내지 40의 핵산서열을 갖는 프라이머를 모두 포함하는 프라이머 세트를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 40의 핵산서열을 갖는 프라이머를 모두 포함하는 DNA 분석용 키트를 제공한다. 이때, 상기 키트는, 바람직하게 반응 완충액, DNA 중합 효소, dNTP를 더 포함하는 것이 좋다.
또한, 본 발명은 D8S1179, D21S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358, TH01, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, vWA, TPOX, D18S51, D5S818, FGA, Amelogenin, Penta D, D8S1477, Penta E, D6S1043 좌위를 포함하는 유전좌위 세트에서 각각의 유전좌위에 대응되는 프라이머들을 포함하는 복합 증폭 시스템을 사용하여 DNA 시료를 동시에 증폭하는 단계 (a); 상기 단계에서 증폭된 DNA 시료로부터 대립 유전자들을 동시에 분리 검출함으로써 증폭된 대립 유전자들을 평가하고, 이를 통해 상기 증폭된 DNA 시료 내의 각각의 대립유전자형을 결정하는 단계 (b);를 포함하는 개인 식별 마커로써 인간의 염색체 상에 존재하는 STR 좌위를 검출하여 인간의 유전자감식을 분석하는 방법을 제공한다.
본 발명의 인간 유전자감식 분석 방법에 있어서, 상기 프라이머들은, 바람직하게 서열번호 1 내지 40의 핵산서열을 갖는 프라이머 모두인 것이 좋다.
본 발명의 인간 유전자감식 분석 방법에 있어서, 상기 프라이머들은, 바람직하게 각각 형광물질로 표지되어 있는 것이 좋다. 이때, 상기 프라이머들은, 바람직하게 각각 다른 형광물질로 표지되어 있는 것이 좋다.
본 발명의 인간 유전자감식 분석 방법에 있어서, 상기 DNA 시료는, 일 예로, 혈액, 정액, 질 세포, 모발, 타액, 소변, 구강세포, 태반세포 또는 태아세포를 포함하는 양수 및 이의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 어느 하나로부터 유래한 것일 수 있다.
본 발명의 인간 유전자감식 분석 방법에 있어서, 상기 DNA 시료의 증폭은, 바람직하게 PCR (polymerase chain reaction)을 통해 수행하는 것이 좋다.
본 발명의 인간 유전자감식 분석 방법에 있어서, 상기 유전자감식 분석은, 일 예로 법의학적 타이핑 또는 신원확인 또는 친자구별을 목적으로 하는 것일 수 있다.
본 발명을 통해 기존 100% 수입에 의존하던 유전자감식 멀티플렉스 키트 (multiplex kit)의 수입 대체 및 검사 비용 절감 효과를 기대할 수 있다. 또한, 국내 국산화로 인해, 한국인의 특성에 맞는 유전자 감식 가이드라인 확립할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 DG20plexSTR 다중증폭시스템의 20개 각 마커들의 PCR산물 크기 및 형광표지물질을 나타낸 배치도이다.
도 2는 본 발명에 따른 DG20plexSTR 다중증폭시스템의 PCR 수행조건 및 반응액 조성을 나타낸다.
도 3은 본 발명에 따른 DG20plexSTR 다중증폭시스템을 이용한 20개 마커들의 전기영동도 (eletropherogram)를 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 DG20plexSTR 다중증폭시스템의 PCR 수행조건 및 반응액 조성을 나타낸다.
도 3은 본 발명에 따른 DG20plexSTR 다중증폭시스템을 이용한 20개 마커들의 전기영동도 (eletropherogram)를 나타낸다.
본 발명은 인간의 유전자감식을 위한 Autosomal-STR을 신속하게 분석할 수 있는 20개 유전자마커를 이용한 DG20plexSTR 다중증폭시스템을 개발하고자 하였다.
본 발명에서는 세계시장을 독점하고 있는 외국회사의 기술에 의존하는 유전자감식 시약을 대체하거나 보완할 수 있는 한국인 집단에서 변별력과 정확도를 높이고자 노력하였다. 또한, 기존 상용화된 키트와 호환성을 최대한 유지할 수 있도록 20개의 유전자마커를 설계·배치하였다.
| Marer | DG20plexSTR 다중증폭시스템 |
| D8S1179 | AmpFLSTR Identifiler (Applied Biosystem) 16개 유전좌위 마커 |
| D21S11 | |
| D7S820 | |
| CSF1PO | |
| D3S1358 | |
| TH01 | |
| D13S317 | |
| D16S539 | |
| D2S1338 | |
| D19S433 | |
| vWA | |
| TPOX | |
| D18S51 | |
| D5S818 | |
| FGA | |
| Amelogenin | |
| Penta D | 4개 유전좌위 마커 추가 |
| D8S1477 | |
| Penta E | |
| D6S1043 |
본 발명에서는 한국인 집단에 대한 상염색체에서 19개의 STR 유전좌위들과 성염색체 좌위 1개를 한 번에 동시에 증폭 가능하도록 DG20plexSTR 다중증폭시스템을 국산화 개발함으로써 비용 절감된 신속한 유전자감식을 제공하고자 한다.
현재 우리나라의 국가기관 및 민간기관에서는 DNA 감식을 위해 미국의 13개 CODI S STR을 포함하는 사용 DNA 감식키트(applied biosystems사, Promega사)를 사용하고 있다.
본 발명에서는 13개 CODIS STR 마커와 시료의 성별 분석이 가능한 아멜로제닌(amelogenin) 유전자를 포함하여 20개의 유전자마커를 계획하였고, 각 유전자의 염기서열 정보를 수집하기 위하여 GeneBank 및 STRBase의 내용을 참고하였다. 또한, 본 발명에서는 세계시장을 독점하고 있는 외국회사의 기술에 의존하는 유전자감식 시약을 대체하거나 보완할 수 있는 한국인 집단에서 변별력과 정확도를 높이고자 하였으며, 기존 상용화된 키트와 호환성을 최대한 유지할 수 있도록 20개의 유전좌위를 배치하였다.
이상과 같은 과정을 통해, 본 발명에서는 한국인 집단에 대한 상염색체에서 19개의 STR 유전좌위들과 성염색체 유전좌위 amelogenin 1개를 포함한 20개 유전자마커를 한번에 동시에 증폭 가능하도록 DG20plexSTR 다중증폭시스템을 개발하였다. 즉, 20개 유전좌위 마커에 대하여 다음과 같이 DG20plexSTR 다중증폭시스템을 개발한 것이다.
20개의 마커에 대한 염기서열정보는 STRBase를 참고로 하여 GeneBank에서 염기서열 정보를 얻었으며, 프라이머 설계는 Primer 3 프로그램을 이용하여 20개의 유전좌위가 같은 조건에서 동시에 증폭할 수 있도록 프라이머의 Tm값을 조절하였다. 제작한 프라이머들의 PCR 증폭효율을 최대화하였으며, 비특이적인 반응 및 20개 유전자마커들간의 간섭을 최대한 최소화하였다.
DG20plexSTR 다중증폭시스템에서는 4개의 형광 dye를 사용하여 각 STR 마커에 형광색소를 부착하였으며, 증폭산물의 크기가 동일한 형광색소를 사용한 하나의 형광 dye lane 내에서는 겹치지 않도록 하였다. 또한, 20개 유전좌위 마커 중에서 PCR 효율이 저하되는 현상을 해결하고자 DGplex 버퍼, 즉 반응시약 제조 개발하였으며, PCR 조건을 변화시키거나 프라이머의 양을 조절하여 문제점을 개선하였다. 또한, 전체 유전좌위간의 피크 높이 밸런스 (peak height balance)를 맞추기 위해서 각 마커에 대한 최적의 프라이머 농도를 결정하였다. 20개 모든 유전자마커의 증폭산물 크기는 475bp 이하가 되도록 프라이머 설계를 하였다 (표 2).
| dye color | no. | Marker | PCR 사이즈 (bp) |
| Blue |
1 | D8S1179 | 116 |
| 2 | D21S11 | 187 | |
| 3 | D7S820 | 293 | |
| 4 | CSF1PO | 345 | |
| 5 | Penta D | 429 | |
| Green |
6 | D3S1358 | 102 |
| 7 | TH01 | 170 | |
| 8 | D13S317 | 223 | |
| 9 | D16S539 | 288 | |
| 10 | D2S1338 | 335 | |
| Yellow |
11 | D8S1477 | 379 |
| 12 | D19S433 | 117 | |
| 13 | vWA | 194 | |
| 14 | TPOX | 244 | |
| 15 | D18S51 | 330 | |
| Red |
16 | Penta E | 379 |
| 17 | Amelogenin | 81 | |
| 18 | D5S818 | 135 | |
| 19 | FGA | 224 | |
| 20 | D6S1043 | 356 |
이상의 과정을 통해 개발한 본 발명의 DG20plexSTR 멀티플렉스 프라이머는 하기 표 3과 같았다. 하기 프라이머 명에서, 'F'는 정방향, 'R'은 역방향 프라이머를 의미한다.
| dye | Marker | Primer 명 | 5'-3' sequence | Conc. | 서열번호 |
| FAM |
D8S1179 | Dgplex-D8S1179-F | ctgcccacacggcctggcaact | 0.5 | 1 |
| Dgplex-D8S1179-R | ccacagtgaaaataatctacaggatagg | 0.5 | 2 | ||
| D21S11 | Dgplex-D21S11-F | gtctccataaatatgtgagtcaattccc | 0.8 | 3 | |
| Dgplex-D21S11-R | agtctgtctctggagaacattgactaata | 0.8 | 4 | ||
| D7S820 | Dgplex-D7S820-F | gctactgcatccagctaatttttg | 0.35 | 5 | |
| Dgplex-D7S820-R | aggataaatgtggaatcgttat | 0.35 | 6 | ||
| CSF1PO | Dgplex-CSF1PO-F | aagtgagaaagaataactgca | 0.15 | 7 | |
| Dgplex-CSF1PO-R | atgctgtccaagtgtgcacca | 0.15 | 8 | ||
| Penta D | Dgplex-Penta D-F | gcctggaaggtcgaagctg | 0.5 | 9 | |
| Dgplex-Penta D-R | aaggacttgtgtccagattaaag | 0.5 | 10 | ||
| VIC |
D3S1358 | Dgplex-D3S1358-F | aatctgggtgacagagcaaga | 0.2 | 11 |
| Dgplex-D3S1358-R | ccctctgttgatttcatgagtataag | 0.2 | 12 | ||
| TH01 | Dgplex-TH01-F | gctctggggtgattcccattgg | 0.13 | 13 | |
| Dgplex-TH01-R | gccaggctggataatcgggagct | 0.13 | 14 | ||
| D13S317 | Dgplex-D13S317-F | atgtggaggagagttcatttc | 0.15 | 15 | |
| Dgplex-D13S317-R | ggagatttgaccaacaattcaag | 0.15 | 16 | ||
| D16S539 | Dgplex-D16S539-F | ttgtaaaaagtgtacaagtgcc | 0.25 | 17 | |
| Dgplex-D16S539-R | cacacacaaacgctaaatggtata | 0.25 | 18 | ||
| D2S1338 | Dgplex-D2S1338-F | tgaaaatggcaattcctactg | 0.15 | 19 | |
| Dgplex-D2S1338-R | agaagccagcaaatgtatcaa | 0.15 | 20 | ||
| D8S1477 | Dgplex-D8S1477-F | atagcaagcattcatagcatag | 0.35 | 21 | |
| Dgplex-D8S1477-R | ctgggtctctttgttataca | 0.35 | 22 | ||
| NED |
D19S433 | Dgplex-D19S433-F | taagattctgttgaaggaaaga | 0.25 | 23 |
| Dgplex-D19S433-R | tcgggtaatgggtgcaccaaa | 0.25 | 24 | ||
| vWA | Dgplex-vWA -F | cttggctgagatgtgaaagcc | 0.18 | 25 | |
| Dgplex-vWA -R | gtcctatctctatctaacctatgtatc | 0.18 | 26 | ||
| TPOX | Dgplex-TPOX-F | agatcgtaagcccaggagga | 0.11 | 27 | |
| Dgplex-TPOX-R | tgtgttcagaagacctgggat | 0.11 | 28 | ||
| D18S51 | Dgplex-D18S51-F | ggttaaggctgcagtgagccatgttc | 0.35 | 29 | |
| Dgplex-D18S51-R | gttgctggtagtcgggtttgttat | 0.35 | 30 | ||
| Penta E | Dgplex-Penta E-F | accaataacaagaaaattgtggaca | 1.5 | 31 | |
| Dgplex-Penta E-R | gagttttctcaattaataacccaaataagagaa | 1.5 | 32 | ||
| PET |
Amelogenin | Dgplex-Amelogenin -F | tgctcacccctttgaagtggt | 0.35 | 33 |
| Dgplex-Amelogenin -R | ttctttattccctgaaaatat | 0.35 | 34 | ||
| D5S818 | Dgplex-D5S818-F | tgtgacaagggtgattttcctc | 0.18 | 35 | |
| Dgplex-D5S818-R | tacagataaagatacaaatgttgtaa | 0.18 | 36 | ||
| FGA | Dgplex-FGA-F | ccaaaagtcaaatgccccat | 0.25 | 37 | |
| Dgplex-FGA-R | caaatcactcagcagctacttca | 0.25 | 38 | ||
| D6S1043 | Dgplex-D6S1043-F | tcccacttctaaaacacctcta | 0.45 | 39 | |
| Dgplex-D6S1043-R | caagtcaaagccttcaaaacatg | 0.45 | 40 |
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[
실시예
1: 본 발명의
STR
유전자형 결과 분석]
1. DNA 추출
'QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN, USA)'를 이용하여 DNA를 추출하였다.
(1) 1.5 mL 튜브에 시료(혈액, 구강상피세포, 모발 등)를 넣는다.
(2) 각 튜브에 300 μL의 버퍼 ATL, 20 μL의 'QIAGEN Proteinase K'를 넣고 혼합 후 56 ℃ 에서 2 시간 이상 반응시킨다.
(3) 300 μL의 버퍼 AL를 넣은 후 10 초간 볼텍스(vortex) 하여 잘 혼합되도록 한다.
(4) 70 ℃에서 10 분 동안 반응시킨다.
(5) 14 000 r/min에서 3 분 동안 원심 분리한다.
(6) 상층액을 조심스럽게 'QIAamp Micro column'으로 옮긴다.
(7) 컬럼의 뚜껑을 닫고 2 mL 콜렉션 튜브 (collection tube)에 장착한 다음 8 000 r/min에서 1 분 동안 원심분리한다.
(8) 콜렉션 튜브 (collection tube)로 빠져나온 용액을 버린 다음 500 μL의 Buffer AW1을 첨가한 후, 8 000 r/min에서 1 분 동안 원심분리 한다.
(9) 용액을 버린 후 500 μL의 버퍼 AW2를 첨가하여 8 000 r/min에서 1 분 동안 원심분리한다.
(10) 용액을 버린 후 14 000 r/min에서 3 분 동안 원심 분리하여 멤브레인을 완전히 건조시킨다.
(11) 'QIAamp Micro column'을 새로운 튜브에 장착하고 30 μL의 멸균된 증류수를 멤브레인 가운데에 첨가한다.
(12) 상온에서 5 분 정도 방치한 다음, 14,000 r/min에서 3 분 동안 원심 분리하여 DNA를 회수한다.
2. DNA 정량
추출된 DNA의 상태를 확인을 위해서 아가로스 겔에서 확인한다.
(1) 1.5 % 아가로스 겔 (agarose gel)을 준비한다.
(2) 2 X 로딩 버퍼 (loading buffer), 2 μL에 DNA, 2 μL를 혼합하여 준비한 후 아가로스 겔에 로딩한다.
(3) 100 V에서 15분 동안 전기영동한다.
(4) UV 트랜스일루미네이터(transilluminator)인 Gel Doc EZ system (BioRad, USA)으로 DNA 밴드를 확인한다.
(5) 추출된 DNA는 아가로스 겔을 이용하여 전기영동을 수행한 후, 'NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, USA)'을 사용하여 그 양과 순도를 측정하였다.
3.
PCR
(Polymerase Chain Reaction)
게놈 DNA (0.1 ~ 10 ng), Taq DNA 폴리머라아제 (3 Unit), 2.5 X DGplex 버퍼와 본 발명 DG20plexSTR 프라이머 믹스 (표 3)가 포함된 혼합물을 만들어 'GeneAmp PCR system 9700' 또는 'Veriti 96 well Thermal Cycler (Applied Biosystems, USA)'을 이용하여 다음과 같은 조건으로 증폭하였다.
PCR 반응은 95 ℃에서 11분간 디네쳐레이션(denaturation)시킨 후, 94 ℃에서 1분간 다시 디네쳐레이션(denaturation), 59 ℃에서 1분간 어니얼링(annealing) 그리고 72℃에서 1분간 익스텐션(extension) 시키는 과정으로 총 30회 증폭하였으며, 마지막 주기 60 ℃에서 60분간 반응하여 PCR을 수행하였다 (도 2).
4.
STR
유전자형 분석
(1) 자동염기분석기 분석장비에 런(run) 하기 위해 다음과 같이 주입 샘플 (injection sample)을 준비한다 (표 4).
| DG20plexSTR 다중증폭시스템 | For 1 sample (μL) |
| GeneScan™ 500 LIZⓡ Size Standard | 0.5 |
| Hi-Di™ Formamide | 15.5 |
| Dispensing volume | 15.0 |
| Diluted PCR Product | 1.0 |
(2) 준비된 샘플들은 95 ℃에서 3 분 동안 히팅(heating) 하여 얼음에 쿨링(cooling) 한 후, 자동염기서열 분석장비를 통해 분석된다.
(3) STR 유전자형 결과분석은 GeneMapperTM ID Software (Applied Biosystem)를 사용하여 분석한다 (도 3).
<110> Dowgene
<120> Multiplex PCR system with twenty Autosomal-STR gene markers and
sex choromosome gene marker for rapid detection of human
identification
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Dgplex-D8S1179-F
<400> 1
ctgcccacac ggcctggcaa ct 22
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ggttaaggct gcagtgagcc atgttc 26
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<223> Dgplex-D18S51-R
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gttgctggta gtcgggtttg ttat 24
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accaataaca agaaaattgt ggaca 25
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ttctttattc cctgaaaata t 21
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caaatcactc agcagctact tca 23
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<220>
<223> Dgplex-D6S1043-R
<400> 40
caagtcaaag ccttcaaaac atg 23
Claims (10)
- 서열번호 1 내지 40의 핵산서열을 갖는 프라이머를 모두 포함하는 프라이머 세트.
- 서열번호 1 내지 40의 핵산서열을 갖는 프라이머를 모두 포함하는 DNA 분석용 키트.
- 제2항에 있어서,
상기 키트는,
반응 완충액, DNA 중합 효소, dNTP를 더 포함하는 DNA 분석용 키트.
- D8S1179, D21S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358, TH01, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, vWA, TPOX, D18S51, D5S818, FGA, Amelogenin, Penta D, D8S1477, Penta E, D6S1043 좌위를 포함하는 유전좌위 세트에서 각각의 유전좌위에 대응되는 프라이머들을 포함하는 복합 증폭 시스템을 사용하여 DNA 시료를 동시에 증폭하는 단계 (a);
상기 단계에서 증폭된 DNA 시료로부터 대립 유전자들을 동시에 분리 검출함으로써 증폭된 대립 유전자들을 평가하고, 이를 통해 상기 증폭된 DNA 시료 내의 각각의 대립유전자형을 결정하는 단계 (b);를 포함하는 개인 식별 마커로써 인간의 염색체 상에 존재하는 STR 좌위를 검출하여 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
- 제4항에 있어서,
상기 프라이머들은,
서열번호 1 내지 40의 핵산서열을 갖는 프라이머 모두인 것을 특징으로 하는 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
- 제4항에 있어서,
상기 프라이머들은,
각각 형광물질로 표지되어 있는 것을 특징으로 하는 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
- 제6항에 있어서,
상기 프라이머들은,
각각 다른 형광물질로 표지되어 있는 것을 특징으로 하는 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
- 제4항에 있어서,
상기 DNA 시료는,
혈액, 정액, 질 세포, 모발, 타액, 소변, 구강세포, 태반세포 또는 태아세포를 포함하는 양수 및 이의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 어느 하나로부터 유래한 것을 특징으로 하는 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
- 제4항에 있어서,
상기 DNA 시료의 증폭은,
PCR (polymerase chain reaction)을 통해 수행하는 것을 특징으로 하는 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
- 제4항에 있어서,
상기 유전자감식 분석은,
법의학적 타이핑 또는 신원확인 또는 친자구별을 목적으로 하는 것을 특징으로 하는 인간의 유전자감식을 분석하는 방법.
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Legal Events
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| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| GRNT | Written decision to grant |