KR20180040706A - 면역억제 시토카인에 대해 증가된 면역 또는 저항성을 갖는 면역 세포 및 그의 용도 - Google Patents

면역억제 시토카인에 대해 증가된 면역 또는 저항성을 갖는 면역 세포 및 그의 용도 Download PDF

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개리 디. 글릭
루이지 프란치
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Abstract

면역억제 시토카인에 대해 증가된 면역 또는 저항성을 갖는 면역 세포 및 그의 용도가 본원에 제공된다.

Description

면역억제 시토카인에 대해 증가된 면역 또는 저항성을 갖는 면역 세포 및 그의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2015년 9월 1일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/212,747에 대한 우선권을 주장하며; 그의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 발명은 면역학 방법 및 입양 세포 요법에 관한 것이다.
면역계의 T 세포는 1개 이상의 수용체 (예를 들어, CD3 이량체와 복합체화된 T 세포 수용체)를 통해 특이적 분자를 인식하고 그와 상호작용하며, 이들 분자의 인식 또는 그와의 상호작용 시, 이는 T 세포를 활성화시켜 다양한 면역 활성을 수행하는 것으로 공지되어 있다. 선천성 면역 세포는, 선천성 면역 세포에서 하류 신호전달 경로(들)를 활성화하고 선천성 면역 세포의 1종 이상의 면역 활성의 활성화를 발생시키는 1종 이상의 작용제 (예를 들어, 알레르겐, 손상 시 생산되는 화학물질 (예를 들어, 오피오이드 및 알콜), 폴리믹신, 가교 IgE, 가교 보체 단백질, T 세포 또는 다른 면역 세포에 의해 생산되는 시토카인 (예를 들어, 인터페론-γ), DAMP, 또는 PAMP)에 의해 활성화되는 것으로 공지된 면역계의 세포이다.
T 세포 및 선천성 면역 세포 둘 다는 포유동물의 면역 방어에서 역할을 한다. 예를 들어, 선천성 면역 세포의 면역 활성은 포유동물에게 다양한 상이한 감염성 질환에 대한 보호를 제공한다. T 세포의 면역 활성은 포유동물을, 예를 들어, 상이한 암 및 상이한 감염성 질환에 대해 보호한다.
입양 세포 요법은 포유동물로부터 1종 이상의 상이한 유형의 면역 세포를 수거하고, 수거한 면역 세포를 생체외 배양 및/또는 조작하고, 배양 및/또는 조작한 면역 세포를 포유동물에게 다시 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이다. 수거한 면역 세포를 생체외 조작하는 것은 재조합 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명은, 적어도 부분적으로, T 세포를 NLRP3 활성화제와 접촉시키는 것이 T 세포가 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖게 하고 또한 T-세포의 항종양 활성을 증가시킨다는 발견을 기초로 한다. 이러한 발견의 관점에서, T 세포 또는 선천성 면역 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 유도하는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 증가를 발생시키는 것을 포함하는, T 세포의 항종양 활성을 증가시키는 방법이 제공된다. 또한, 이들 방법에 의해 생산된 T 세포 또는 선천성 면역 세포, 이들 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 함유하는 제약 조성물, 또는 이들 제약 조성물을 포함하는 키트가 제공된다. 또한, (i) 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서, 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계, 및 T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계 또는 (ii) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 포유동물에게 투여하는 단계를 (부분적으로) 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 활성을 증가시키는 방법, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법, 및 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법이 제공된다. 또한, 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계, T 세포 내로 재조합 핵산을 도입하여 재조합 T 세포를 생성하는 단계, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, 항종양 활성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계, 및 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 (예를 들어, 적어도 2개월 또는 적어도 1개월) 동안 포유동물에서 재조합 T 세포 집단을 유지시키는 방법이 제공된다. 또한, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제를 확인하는 방법이 제공된다.
한 측면에서, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) T 세포 또는 선천성 면역 세포를 제공하는 단계, 및 (b) T 세포 또는 선천성 면역 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 배양 배지는 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 추가로 포함한다. T 세포 또는 선천성 면역 세포를 활성화하는 대표하는 작용제는, 비제한적으로, 단리된 종양 항원, 종양 용해물, 괴사성 종양 세포, 종양 아폽토시스체, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함한다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포 또는 단핵구이다.
일부 실시양태에서, 단계 (b)에서 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 배양하는 것은 T 세포 또는 선천성 면역 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 단계 (b)에서 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 배양하는 것은 T 세포 또는 선천성 면역 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시킨다.
일부 실시양태에서, 방법은 선천성 면역 세포를 제공하는 단계 및 선천성 면역 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 T 세포를 제공하는 단계 및 T 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ T 세포 또는 CD8+ 세포이다. 대표적인 T 세포는, 비제한적으로, 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포이다. 일부 실시양태에서, CAR-T 세포는 항원-결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포질 신호전달 도메인을 포함하는 CAR 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 대표적인 항원-결합 도메인은, 비제한적으로, 항체, 항체의 항원-결합 단편, Fab 단편, 및 scFv를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 또는 인간화 항체이거나, 또는 항체의 항원-결합 단편 또는 Fab는 인간 또는 인간화 항체의 단편이다. 일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은 CD3ζ 세포질 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은 하기 단백질: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 CD3ζ, CD8, 또는 CD28로부터의 막횡단 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR 단백질은 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 포유동물로부터 수거된다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포는 포유동물로부터 수거된다.
일부 실시양태에서, 포유동물은 암 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 대표적인 암은, 비제한적으로, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암을 포함한다.
대표적인 감염성 질환은, 비제한적으로, 아시네토박터(Acinetobacter) 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰(Arcanobacterium haemolyticum) 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스(Bacillus cereus) 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스(Bacteroides) 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스(Baylisascaris) 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis) 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아(Burkholderia) 감염, 부룰리(Buruli) 궤양, 칼리시바이러스(Calicivirus) 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에(Chlamydophila pneumoniae) 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile) 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스(Desmodesmus) 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스(Enterococcus) 감염, 엔테로바이러스(Enterovirus) 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움(Fusobacterium) 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae) 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스(Heartland virus) 질환, 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori) 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르(Epstein-Barr) 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에(Kingella kingae) 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라(Prevotella) 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum) 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis) 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법은 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법은 포유동물로부터 선천성 면역 세포를 수거하는 단계를 추가로 포함한다. 대표적인 면역억제 시토카인은, 비제한적으로, IL-10, TGF-β, IL-1Ra, IL-18Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, PGE2, SCF, G-CSF, CSF-1R, M-CSF, GM-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IFN-λ, bFGF, CCL2, CXCL1, CXCL8, CXCL12, CX3CL1, CXCR4, 및 VEGF를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 면역억제 시토카인은 TGF-β이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 IL-1α 또는 IL-1β이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자이다. 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 대표적인 분자는, 예를 들어, 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는
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이며, 여기서 R1은 H이고, R2는 H이거나; R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나; R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는 R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3이다. 대표적인 NLRP3 활성화제는, 비제한적으로, 이미다조퀴놀린; 이미다조나프티리딘; 피라졸로피리딘; 아릴-치환된 이미다조퀴놀린; 1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물; 옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 이미다조나프티리딘; 이미다조퀴놀린아민; 1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 융합된 시클로알킬이미다조피리딘; 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 나프토[ij]퀴놀리진; 치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체; 치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및 테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트를 포함한다.
또한, 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 T 세포가 제공된다. 추가로 이러한 T 세포를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 또한, 이러한 제약 조성물을 포함하는 키트가 제공된다.
추가로 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 선천성 면역 세포가 제공된다. 또한, 이러한 선천성 면역 세포를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 추가로 이러한 제약 조성물을 포함하는 키트가 제공된다.
또 다른 측면에서, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) T 세포를 제공하는 단계; 및 (b) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 일반적으로 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시킨다.
일부 실시양태에서, 이러한 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 배양 배지는 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 추가로 포함한다. T 세포를 활성화하는 대표적인 작용제는, 비제한적으로, 단리된 종양 항원, 종양 용해물, 괴사성 종양 세포, 종양 아폽토시스체, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지는 하기 중 1종 이상을 포함한다: (i) 글루코스 보충의 부재 하의 갈락토스; (ii) 대조군 세포에서의 비율을 초과하는 보충대사의 유도 및/또는 증가를 막지 않는 임의의 양으로 첨가된 갈락토스 및 글루코스를 함유하는 배양 배지; 및/또는 (iii) 3-브로모피루베이트, 2-데옥시글루코스, 5가 비소 (H3AsO4), 로니다민, 이마티닙, 옥시티아민, 피루베이트, 홀수-쇄 지방산, 5-탄소 케톤체, 및 트리헵타노인 중 1종 이상.
일부 실시양태에서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건은 T 세포에서 하기 중 1종 이상을 발생시키는 조건이다: 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, 산화성 인산화율 대비 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, T 세포에 의한 글루타민 흡수율의 증가, 기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율의 증가, 피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율의 증가, 아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸무레이트를 생산하는 비율의 증가, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율의 증가, 및 프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율의 증가.
일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 T 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 T 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시킨다. 대표적인 NLRP3 활성화제는, 비제한적으로, 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β를 포함한다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자이다. 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 대표적인 NLRP3 활성화제는 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는
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이며, 여기서 R1은 H이고, R2는 H이거나; R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나; R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는 R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3이다.
대표적인 NLRP3 활성화제는, 비제한적으로, 이미다조퀴놀린; 이미다조나프티리딘; 피라졸로피리딘; 아릴-치환된 이미다조퀴놀린; 1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물; 옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 이미다조나프티리딘, 이미다조퀴놀린아민; 1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 융합된 시클로알킬이미다조피리딘; 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 나프토[ij]퀴놀리진; 치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체; 치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및 테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트를 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ T 세포 또는 CD8+ 세포이다. 대표적인 T 세포는, 비제한적으로, 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포이다. 일부 실시양태에서, CAR-T 세포는 항원-결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포질 신호전달 도메인을 포함하는 CAR 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 대표적인 항원-결합 도메인은, 비제한적으로, 항체, 항체의 항원-결합 단편, Fab 단편, 및 scFv를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 또는 인간화 항체이거나, 또는 항체의 항원-결합 단편 또는 Fab는 인간 또는 인간화 항체의 단편이다. 대표적인 세포질 신호전달 도메인은 CD3ζ 세포질 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은 하기 단백질: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 CD3ζ, CD8, 또는 CD28로부터의 막횡단 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR 단백질은 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 포유동물로부터 수거된다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 암 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 대표적인 암은, 비제한적으로, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암을 포함한다.
대표적인 감염성 질환은, 비제한적으로, 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법은 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계를 추가로 포함한다.
또한, 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 T 세포가 제공된다. 추가로 이러한 T 세포를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 또한, 이러한 제약 조성물을 포함하는 키트가 제공된다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 면역을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 일반적으로 포유동물에서 항종양 면역의 증가를 발생시킨다.
또 다른 측면에서, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 일반적으로 포유동물에서 암의 완화 시간의 증가를 발생시킨다.
또 다른 측면에서, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 또는 항감염성 질환 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 또는 항감염성 질환 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암 및 고형 종양을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 측면에서, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포 집단을 유지시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계; (c) T 세포 내로 재조합 핵산을 도입하여 재조합 T 세포를 생성하는 단계; (d) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 재조합 T 세포를 배양하여 재조합 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (e) 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여하여, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포 집단이 지속되게 하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 배양 배지는 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 배양 배지는 재조합 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 포함한다. T 세포를 활성화하는 대표적인 작용제는, 비제한적으로, 단리된 종양 항원, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함한다. 재조합 T 세포를 활성화하는 대표적인 작용제는, 비제한적으로, 단리된 종양 항원, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지는 하기 중 1종 이상을 포함한다: (i) 글루코스 보충의 부재 하의 갈락토스; (ii) 대조군 세포에서의 비율을 초과하는 보충대사의 증가를 막지 않는 임의의 양으로 첨가된 갈락토스 및 글루코스를 함유하는 배양 배지; 및/또는 (iii) 3-브로모피루베이트, 2-데옥시글루코스, 5가 비소 (H3AsO4), 로니다민, 이마티닙, 옥시티아민, 피루베이트, 홀수-쇄 지방산, 5-탄소 케톤체, 및 트리헵타노인 중 1종 이상.
일부 실시양태에서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건은 T 세포에서 하기 중 1종 이상을 발생시키는 조건이다: 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, 산화성 인산화율 대비 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, T 세포에 의한 글루타민 흡수율의 증가, 기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율의 증가, 피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율의 증가, 아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸무레이트를 생산하는 비율의 증가, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율의 증가, 및 프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율의 증가.
일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 T 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 재조합 T 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 T 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 재조합 T 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는
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이며, 여기서 R1은 H이고, R2는 H이거나; R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나; R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는 R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3이다.
대표적인 NLRP3 활성화제는, 비제한적으로, 이미다조퀴놀린; 이미다조나프티리딘; 피라졸로피리딘; 아릴-치환된 이미다조퀴놀린; 1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물; 옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 이미다조나프티리딘, 이미다조퀴놀린아민, 1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 융합된 시클로알킬이미다조피리딘; 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 나프토[ij]퀴놀리진; 치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체; 치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및 테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트를 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ T 세포 또는 CD8+ 세포이다. 대표적인 T 세포는, 비제한적으로, 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포이다. 일부 실시양태에서, 재조합 T 세포는 CAR-T 세포이다. 일부 실시양태에서, CAR-T 세포는 항원-결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포질 신호전달 도메인을 포함하는 CAR 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 대표적인 항원-결합 도메인은, 비제한적으로, 항체, 항체의 항원-결합 단편, Fab 단편, 및 scFv를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 또는 인간화 항체이거나, 또는 항체의 항원-결합 단편 또는 Fab는 인간 또는 인간화 항체의 단편이다. 일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은 CD3ζ 세포질 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은 하기 단백질: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 CD3ζ, CD8 또는 CD28로부터의 막횡단 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR 단백질은 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 대표적인 암은, 비제한적으로, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암을 포함한다.
일부 실시양태에서, 포유동물은 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 대표적인 감염성 질환은, 비제한적으로, 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증을 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 정맥내로, 동맥내 또는 종양내 투여에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 재조합 T 세포는 정맥내, 동맥내 또는 종양내 투여에 의해 투여된다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 면역을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
한 측면에서, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암 및 고형 종양을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 대표적인 암은, 비제한적으로, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암을 포함한다.
일부 실시양태에서, 포유동물은 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 대표적인 감염성 질환은, 비제한적으로, 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증을 포함한다.
대표적인 NLRP3 활성화제는, 비제한적으로, 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β를 포함한다. 대표적인 NLRP3 활성화제는, 예를 들어, 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자를 포함한다. 대표적인 NLRP3 활성화제는, 예를 들어, 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 대표적인 NLRP3 활성화제는
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이며, 여기서 R1은 H이고, R2는 H이거나; R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나; R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는 R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3이다.
대표적인 NLRP3 활성화제는, 비제한적으로, 이미다조퀴놀린; 이미다조나프티리딘; 피라졸로피리딘; 아릴-치환된 이미다조퀴놀린; 1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물; 옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민; 이미다조나프티리딘, 이미다조퀴놀린아민; 1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 융합된 시클로알킬이미다조피리딘; 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민; 2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 나프토[ij]퀴놀리진; 치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체; 치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산; 치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및 테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트를 포함한다.
일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제는 정맥내로, 동맥내 또는 종양내 투여에 의해 투여된다.
한 측면에서, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제를 확인하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 전형적으로 (a) NLRP3 단백질을 발현하는 포유동물 세포를 제공하는 단계; (b) 포유동물 세포를 작용제와 접촉시키는 단계; (c) 단계 (b)에서 세포 내 NLRP3 활성의 수준을 검출하는 단계; 및 (d) NLRP3 활성의 대조군 수준과 비교하여 세포 내 NLRP3 활성의 증가된 수준을 증가시키는 작용제를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제로서 확인하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, NLRP3 활성의 대조군 수준은 작용제의 부재 하의 세포 내 NLRP3 활성 수준이다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성은 NLRP3 하류 신호전달 활성이다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 (e) T 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인 및 후보 작용제와 접촉시키는 단계; 및 (f) T 세포에 대한 적어도 1종의 면역억제 시토카인의 면역억제 활성을 차단하는 후보 작용제의 능력을 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
본원에 사용된 명사 앞의 단수 용어는 하나 이상의 특정한 명사를 나타낸다. 예를 들어, 어구 "T 세포"는 "하나 이상의 T 세포"를 나타낸다.
용어 "T 세포"는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 그의 세포 표면 상에 T-세포 수용체 (TCR) 단백질을 발현하는 한 유형의 면역 세포를 의미한다. 예를 들어, α 및 β 쇄를 포함하는 TCR, γ 및 δ 쇄를 포함하는 TCR을 포함한, 다양한 상이한 TCR이 관련 기술분야에 공지되어 있다. T 세포의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. T 세포의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
용어 "재조합 T 세포"는 외인성으로-도입된 서열 (예를 들어, 포유동물 T 세포에 정상적으로 존재하지 않거나 또는 포유동물 T 세포에서 그의 천연 상태로 발견되지 않는 서열)을 포함하는 핵산을 포함하는 포유동물 T 세포를 의미한다.
용어 "선천성 면역 세포"는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 그의 세포 표면 상에 항체 또는 TCR을 발현하는 것에 의해 병원성 물질 (예를 들어, 암 세포, 박테리아, 바이러스, 및 효모)을 인식하지는 않지만, 대신 병원체와 연관된 패턴-연관 분자 패턴 (PAMP) 및/또는 손상되거나 형질전환된 세포와 연관된 위험-연관 분자 패턴 (DAMP)에 결합하는 병원체 및/또는 수용체에 결합된 다른 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체 (예를 들어, 그의 세포 표면 상의 수용체) 또는 단백질을 발현하는 세포를 의미한다. 선천성 면역 세포의 비제한적 예는 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 킬러 세포를 포함한다. 선천성 면역 세포의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
용어 "포유동물 세포"는 임의의 포유동물 (예를 들어, 인간, 햄스터, 마우스, 녹색 원숭이, 래트, 돼지, 소, 또는 토끼)로부터의 또는 그로부터 유래된 임의의 세포를 의미한다. 예를 들어, 포유동물 세포는 불멸화 세포일 수 있다. 일부 실시양태에서, 포유동물 세포는 분화 세포이다. 포유동물 세포의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 포유동물 세포의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
용어 "배양" 또는 "세포 배양"은 물리적 조건의 제어된 세트 하에서의 포유동물 세포의 유지 또는 증식을 의미한다.
용어 "액체 배양 배지"는 세포 (예를 들어, 포유동물 세포)가 시험관내에서 성장 또는 증식되도록 충분한 영양을 함유하는 유체를 의미한다. 예를 들어, 액체 배양 배지는 아미노산 (예를 들어, 20종의 아미노산), 퓨린 (예를 들어, 하이포크산틴), 피리미딘 (예를 들어, 티미딘), 콜린, 이노시톨, 티아민, 폴산, 비오틴, 칼슘, 니아신아미드, 피리독신, 리보플라빈, 티미딘, 시아노코발라민, 피루베이트, 리포산, 마그네슘, 글루코스, 나트륨, 칼륨, 철, 구리, 아연, 및 중탄산나트륨 중 1종 이상을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 액체 배양 배지는 포유동물로부터의 혈청을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 액체 배양 배지는 포유동물로부터의 혈청 또는 또 다른 추출물을 함유하지 않는다 (한정된 액체 배양 배지). 일부 실시양태에서, 액체 배양 배지는 미량 금속, 포유동물 성장 호르몬 및/또는 포유동물 성장 인자를 함유할 수 있다. 액체 배양 배지의 또 다른 예는 최소 배지 (예를 들어, 오직 무기 염, 탄소 공급원, 및 물만을 함유하는 배지)이다. 액체 배양 배지의 또 다른 예는 본원에 기재되어 있다. 액체 배양 배지의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 상업적으로 입수가능하다. 액체 배양 배지는 포유동물 세포를 임의의 밀도로 함유할 수 있다. 예를 들어, 본원에서 사용된 바와 같이, 생물반응기로부터 제거된 액체 배양 배지의 부피에는 포유동물 세포가 실질적으로 존재하지 않을 수 있다.
용어 "동물-유래 성분 무함유 액체 배양 배지"는 포유동물로부터 유래된 임의의 성분 (예를 들어, 단백질 또는 혈청)을 함유하지 않는 액체 배양 배지를 의미한다.
용어 "혈청-무함유 액체 배양 배지"는 포유동물 혈청을 함유하지 않는 액체 배양 배지를 의미한다.
용어 "혈청-함유 액체 배양 배지"는 포유동물 혈청을 함유하는 액체 배양 배지를 의미한다.
용어 "화학적으로-한정된 액체 배양 배지"는 관련 기술분야의 용어이고, 모든 화학적 성분이 공지된 액체 배양 배지를 의미한다. 예를 들어, 화학적으로-한정된 액체 배양 배지는 태아 소 혈청, 소 혈청 알부민, 또는 인간 혈청 알부민을 함유하지 않으며, 이는 이들 제제가 전형적으로 알부민 및 지질의 복합 혼합물을 함유하기 때문이다.
용어 "단백질-무함유 액체 배양 배지"는 임의의 단백질 (예를 들어, 임의의 검출가능한 단백질)을 함유하지 않는 액체 배양 배지를 의미한다.
용어 "면역억제 시토카인"은 림프구 (예를 들어, Treg 및 선천성 면역 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 골수 억제 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, 암-연관 섬유모세포, 내피 세포, 암 세포, 및 상피 세포 (예를 들어, 고형 종양과 인접한 상피 세포) 중 1종 이상의 적어도 하나의 면역 기능의 억제를 야기하는 시토카인 또는 림포카인을 의미한다. 림프구, 골수 억제 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, 암-연관 섬유모세포, 내피 세포, 암 세포, 및 상피 세포 (예를 들어, 고형 종양과 인접한 상피 세포)에 대한 면역 기능의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 림프구, 골수 억제 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, 암-연관 섬유모세포, 내피 세포, 암 세포, 및 상피 세포 (예를 들어, 고형 종양과 인접한 상피 세포)에 대한 면역 기능의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
예를 들어, 적어도 하나의 면역 기능의 억제는 LAG3, CTLA4, PDL1, PDL2, PD1, CD80, CD244, TIM3, BTLA4, CD160, B7-H3, B7-H4, BTNL2, VISTA, CD48, HVEM, 갈렉틴, FAS, 및 FASL 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 또는 19종)의 증가된 발현 및/또는 기능, 및/또는 CD40L, CD40, TL1A, TNFSF25, GITRL, GITR, 41BBL, 4-1BB, OX40L, OX40, CD27, CD70, HHLA2, TMIGD2, ICOS, ICOSL, SIGLEC 패밀리, CD28, 및 LIGHT 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 또는 19종)의 감소된 발현 및/또는 기능을 포함할 수 있다.
예를 들어, 적어도 하나의 면역 기능의 억제는 IDO, TDO, ARG1, ARG2, iNOS, 및 PDES 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 6종)의 증가된 발현 및/또는 기능, 및/또는 P2X7R의 감소된 발현 및/또는 기능, 및/또는 P2Y11, A2A 수용체, CD39, CD73, COX2, EP2 수용체, EP4 수용체, TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, RIG-I, MDA-5, CGAS, 및 STING 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15종)의 증가된 발현을 포함할 수 있다.
예를 들어, 적어도 하나의 면역 기능의 억제는 ALK5, BRAFV600E, RON, CFS1, PI3Kδ, 및 PI3Kγ 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 6종)의 증가된 발현 및/또는 기능을 포함할 수 있다.
예를 들어, 적어도 하나의 면역 기능의 억제는 IL-10, TGF-β, CSF-1R, GM-CSF, CXCR1, CXCR2, CXCR4, CXCR5, CCR2, CCR5, IL-10, TGF-β, IL-1Ra, IL-18Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, PGE2, SCF, G-CSF, CSF-1R, M-CSF, GM-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IFN-λ, bFGF, CCL2, CXCL1, CXCL8, CXCL12, CX3CL1, CXCR4, 및 VEGF 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20종)의 증가된 생산 및/또는 기능, 및/또는 TNF, IL-1α, IL-1β, IL-7, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, GM-CSF, IFNα, IFNβ, IFNγ, 및 IFNλ 중 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14종)의 감소된 생산 및/또는 기능을 포함할 수 있다.
면역억제 시토카인의 비제한적 예는 IL-10, TGF-β, IL-1Ra, IL-18Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, PGE2, SCF, G-CSF, CSF-1R, M-CSF, GM-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IFN-λ, bFGF, CCL2, CXCL1, CXCL8, CXCL12, CX3CL1, CXCR4, 및 VEGF를 포함한다. 면역억제 시토카인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
어구 "적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 저항성"은 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 의해 유도된 T 세포 또는 선천성 면역 세포에서의 적어도 하나의 면역 기능 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 기능 중 적어도 하나)의 억제 수준에서의 검출가능한 감소를 의미한다. 예를 들어, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 저항성은 작용제 (예를 들어, 후보 작용제 또는 NLRP3 활성화제)의 부재 하에 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 의해 유도된 적어도 하나의 면역 기능의 억제의 수준과 비교하여, 작용제의 존재 하에 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 의해 유도된 T 세포 또는 선천성 면역 세포에서의 적어도 하나의 면역 기능 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 기능 중 적어도 하나)의 억제 수준에서의 감소일 수 있다.
어구 "T 세포의 항종양 활성"은 포유동물의 암 세포의 사멸에 기여하는 T 세포의 활성을 의미한다. 포유동물의 암 세포의 사멸에 기여하는 T 세포 활성의 비제한적 예는 T 세포로의 분화, T 세포의 분열 및 증식, 혈액으로부터 조직 내로의 T 세포의 혈관외유출, T 세포가 고형 종양에 침윤하는 능력, T 세포의 활성화, T 세포가 종양 세포를 사멸시키는 능력, T 세포가 면역계의 다른 세포를 동원하여 종양 세포를 사멸시키는 능력, T 세포가 종양 세포를 사멸시키는 인자를 활성화하는 능력을 포함한다.
어구 "T 세포의 항감염성 질환 활성"은 미생물 또는 미생물을 포함하는 포유동물 세포의 사멸에 기여하는 T 세포의 활성을 의미한다. 미생물 또는 포유동물 내의 미생물을 포함하는 포유동물 세포의 사멸에 기여하는 T 세포 활성의 비제한적 예는 T 세포로의 분화, T 세포의 분열 및 증식, 혈액으로부터 조직 내로의 T 세포의 혈관외유출, T 세포의 활성화, T 세포가 면역계의 다른 세포를 동원하여 미생물 또는 미생물을 포함하는 포유동물 세포를 사멸시키는 능력, 및 T 세포가 미생물 또는 미생물을 포함하는 포유동물 세포를 사멸시키는 인자를 활성화하는 능력을 포함한다.
용어 "항종양 시토카인"은 포유동물의 암 세포의 사멸에 기여하는 포유동물 시토카인을 의미한다. 항종양 시토카인의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 항종양 시토카인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
용어 "항종양 림포카인"은 포유동물의 암 세포의 사멸에 기여하는 포유동물 림포카인을 의미한다. 항종양 림포카인의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. 항종양 림포카인의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
어구 "T 세포를 활성화하다"는 관련 기술분야에 공지된 용어이고, T 세포의 표면 상의 1개 이상의 수용체 (예를 들어, 임의로 CD3 이량체와 회합된 TCR)의, 항원-제시 세포의 표면 상의 1개 이상의 동족 수용체에 의한 결합을 의미한다. 용어 T 세포를 활성화하다는 T 세포의 표면 상의 1개 이상의 인테그린의, 그의 각각의 리간드 (예를 들어, 세포간 부착 분자 (ICAM), 혈관 세포 부착 분자 (VCAM) 또는 피브로넥틴)에 의한 결합, 또는 그의 리간드에의 결합에 의한 T 세포 상의 공동-자극 수용체 (예를 들어, CD28, ICSO, CD40)의 활성화를 포함할 수 있다. 예를 들어 CD28은 CD80 또는 CD86에 의해 활성화되고, ICOS는 ICOS-L에 의해 활성화되고, ICOS는 ICOS-L에 의해 활성화된다. T 세포의 활성화는, 예를 들어, 단리된 종양 항원, 종양 용해물, 괴사성 종양 세포, 종양 아폽토시스체, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 사용하여 수행될 수 있다. T 세포의 활성화는 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 시약을 부분적으로 사용하여 수행될 수 있다. T 세포를 활성화하는 방법의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다. T 세포를 활성화하는 추가의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
어구 "선천성 면역 세포를 활성화하다"는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 선천성 면역 세포에서 하류 신호전달 경로(들)를 활성화하고 선천성 면역 세포의 1종 이상의 면역 활성의 활성화를 발생시키는 1종 이상의 작용제 (예를 들어, 알레르겐, 손상 시 생산되는 화학물질 (예를 들어, 오피오이드 및 알콜), 폴리믹신, 가교 IgE, 가교 보체 단백질, T 세포 또는 다른 면역 세포에 의해 생산되는 시토카인 (예를 들어, 인터페론-γ), DAMP, 또는 PAMP)와 선천성 면역 세포를 접촉시키는 것을 의미한다. 일부 예에서, 1종 이상의 작용제가 선천성 면역 세포의 표면 상의 1개 이상의 수용체 (예를 들어, FcεR1, 패턴 인식 수용체 (예를 들어, 톨-유사 수용체))에 결합하여, 선천성 면역 세포에서 하류 신호전달 경로(들)를 활성화한다. DAMP의 비제한적 예는 핵 또는 시토졸 단백질 (예를 들어, HMGB1 단백질 또는 S100 단백질), DNA 또는 RNA, 퓨린 대사물 (예를 들어, ATP, 아데노신 또는 요산), 및 글리칸 또는 당접합체 (예를 들어, 히알루로난 단편)를 포함한다. PAMP의 비제한적 예는 박테리아 리포폴리사카라이드, 플라젤린, 리포테이코산, 펩티도글리칸, 이중-가닥 RNA, 및 비메틸화 CpG 모티프를 포함한다.
어구 "항원-결합 도메인"은 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 항원-결합 분자이다. 항원-결합 도메인의 비제한적 예는 모노클로날 항체 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgE, 및 IgD) (예를 들어, 완전 인간 또는 키메라 (예를 들어, 인간화) 항체), 항체의 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab, Fab', 또는 F(ab')2 단편) (예를 들어, 완전 인간 또는 키메라 (예를 들어, 인간화) 항체의 단편), 디아바디, 선형 항체, 항체 단편으로 형성된 다중특이적 항체, 및 선형 항체를 포함한다.
특정한 항원에 "특이적으로 결합"하는 항원-결합 도메인은, 그러한 항원에는 결합하지만, 샘플 내 다른 분자는 더 낮은 정도로 인식하여 결합한다 (예를 들어, 인식 및 결합하지 않는다). 일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인은 포스페이트 완충 염수 중 1x 10-7 M 이하 (예를 들어, 1 x 10-8 M 이하, 5 x 10-9 M 이하, 2 x 10-9 M 이하, 또는 1 x 10-9 M 이하)의 친화도 (KD)로 항원에 선택적으로 결합한다.
어구 "막횡단 도메인"은 포유동물 세포의 형질 막을 횡단하는 분자이다. 본원에 사용된 막횡단 도메인은, 예를 들어, 한 말단에서 (1) 링커 및 항원-결합 도메인, 또는 (2) 항원 결합 도메인에 연결될 수 있고, 막횡단 도메인의 다른 말단은, 예를 들어, 세포질 신호전달 도메인 (예를 들어, 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 공동-자극 활성을 제공하는데 충분한 CD3ζ의 세포질 서열, 및 임의로, 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 공동-자극 활성을 제공하는 공동-자극 단백질 중 1종 이상의 세포질 서열 (예를 들어, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열)을 포함하는 세포질 신호전달 도메인)에 연결될 수 있다. 막횡단 도메인의 비제한적 예 및 측면은 본원에 기재되어 있다. 막횡단 도메인의 추가의 예 및 측면은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
어구 "세포질 신호전달 도메인"은 CAR의 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 T 세포를 자극하는 1차 세포질 신호전달 서열 (예를 들어, 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 T 세포를 자극하는데 충분한 CD3ζ 서열의 서열), 및 임의로, T 세포의 공동-자극을 제공하는 공동-자극 단백질 중 1종 이상의 세포질 서열 (예를 들어, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열)을 포함하는 분자이다.
어구 "링커 서열"은 막횡단 도메인과 항원-결합 도메인 사이 및/또는 막횡단 도메인과 세포질 신호전달 도메인 사이에 위치할 수 있는 분자이다. 링커의 비제한적 예 및 측면은 본원에 기재되어 있다. 링커의 추가의 예 및 측면은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
어구 "NLRP3 활성화제"는 포유동물 세포에서 NLRP3 단백질을 코딩하는 mRNA의 수준을 증가시키는 능력, 포유동물 세포에서 NLRP3 단백질의 수준을 증가시키는 능력, 및 포유동물 세포에서 NLRP3의 하류 신호전달을 촉진하는 능력 중 1종 이상을 갖는 작용제를 의미한다.
어구 "보충대사"는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 생합성을 위해 배출된 시트르산 사이클 중간체를 보충하는 대사 활성을 의미한다.
보충대사를 사용하는 포유동물 세포는 당분해 산화성 인산화로부터의 검출가능한 락테이트 생산, 글루타민 흡수, 기질로서 글루타민을 사용하여 세포에 의해 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율, 옥살로아세테이트를 형성하기 위한 피루베이트 카르복실화, 푸무레이트를 생산하는 아데닐로숙시네이트 신테타제 활성, 옥살로아세테이트를 생산하는 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 활성, 및 숙시닐-CoA를 생산하는 프로피오닐-CoA 카르복실라제 활성 중 1종 이상을 입증할 수 있거나, 또는 이를 갖는다.
어구 "생존 시간"은 의료 전문가에 의한 포유동물에서의 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)의 확인 또는 진단과, (암에 의해 유발된) 포유동물의 사망 시간 사이의 시간의 길이를 의미한다. 암을 갖는 포유동물에서 생존 시간을 증가시키는 방법이 본원에 기재되어 있다.
어구 "종양의 크기를 감소시키는 것"은 시간의 경과에 따른 고형 종양의 크기에서의 감소를 의미한다. 고형 종양의 크기를 결정하는 예시적인 방법은 본원에 기재되어 있다. 고형 종양의 크기를 결정하는 추가의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 암을 갖는 포유동물에서 종양의 크기를 감소시키는 방법은 본원에 기재되어 있다.
어구 "암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 것"은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 미래의 시간의 경과에 따라 포유동물에서 암의 중증도를 검출가능하게 감소시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 암을 갖는 포유동물의 개선된 예후는 증가된 생존 시간을 가질 증가된 가능성, 전이 발생의 감소된 가능성, 추가의 전이 발생의 감소된 가능성, 시간의 경과에 따라 크기의 감소를 갖는 적어도 하나의 고형 종양을 가질 증가된 가능성, 및 포유동물에서 증가된 암 완화 시간을 가질 증가된 가능성 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 예시적인 방법은 본원에 기재되어 있다.
용어 "전이"는 관련 기술분야에 공지된 용어이고, 포유동물에서 원발성 종양과 떨어진 부위에서의 추가의 종양 (예를 들어, 고형 종양)의 형성을 의미하며, 여기서 추가의 종양은 원발성 종양과 동일하거나 유사한 암 세포를 포함한다.
어구 "전이의 발생 위험"은 원발성 종양을 갖는 포유동물에서 소정의 세트의 기간의 경과에 따라 포유동물 내의 원발성 종양과 떨어진 부위에서 추가의 종양 (예를 들어, 고형 종양)이 발생할 위험을 의미하며, 여기서 추가의 종양은 원발성 종양과 동일하거나 유사한 암 세포를 포함한다. 암을 갖는 포유동물에서 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법은 본원에 기재되어 있다.
어구 "추가의 전이의 발생 위험"은 원발성 종양 및 포유동물 내의 원발성 종양과 떨어진 부위에서 1개 이상의 추가의 종양 (여기서 1개 이상의 추가의 종양은 원발성 종양과 동일하거나 유사한 암 세포를 포함함)을 갖는 포유동물에서 원발성 종양과 떨어져 1개 이상의 추가의 종양이 발생할 위험을 의미하며, 여기서 추가의 종양은 원발성 종양과 동일하거나 유사한 암 세포를 포함한다. 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법은 본원에 기재되어 있다.
어구 "암을 치료하는 것"은 포유동물에서 암의 중증도 중 하나 이상을 감소시키거나, 또는 포유동물에서 암의 1종 이상의 증상의 수 및/또는 빈도를 감소시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 암의 중증도의 감소는 (예를 들어, 치료 전 하나 이상의 종양의 크기와 비교하여) 포유동물에서 하나 이상의 고형 종양의 크기의 감소를 포함할 수 있다. 포유동물에서 암의 중증도의 감소는 (예를 들어, 치료 전 하나 이상의 종양의 성장 속도와 비교하여) 시간의 경과에 따른 포유동물에서의 하나 이상의 종양의 성장 속도의 감소를 포함할 수 있다. 암의 중증도의 감소는 또한 (예를 들어, 유사한 암을 가졌지만 상이한 치료를 받은 포유동물에서의 완화의 평균 길이와 비교하여) 포유동물에서의 증가된 암 완화 시간에 의해 나타내어질 수 있다. 암의 중증도의 감소는 또한, 예를 들어, (예를 들어, 유사한 암을 갖는 포유동물 집단과 비교하여) 암을 갖는 포유동물에서 전이의 발생 속도 또는 추가의 전이의 발생 속도의 감소를 의미할 수 있다. 암의 중증도의 감소는, 예를 들어, (예를 들어, 유사한 암을 갖는 포유동물 집단과 비교하여) 암을 갖는 포유동물의 생존 시간의 증가일 수 있다. 암의 중증도의 감소는, 예를 들어, 암을 갖는 포유동물의 개선된 예후를 발생시킬 수 있다. 포유동물에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재되어 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에서 사용하기 위한 방법 및 물질은 본원에 기재되어 있고; 다른, 관련 기술분야에 공지된 적합한 방법 및 물질이 또한 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 예는 단지 예시적이며 제한적인 것으로 의도되지 않는다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 서열, 데이터베이스 엔트리, 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다. 상충되는 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 우선할 것이다.
본 발명의 다른 특색 및 이점은 하기 상세한 설명 및 도면으로부터, 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
도 1은 IL-1β가 확립된 암에 대해 CD8+ 항종양 활성을 촉진한다는 것을 보여주는 데이터를 제공한다. 종양을 유발하기 위해, OVA 항원을 발현하는 1 x 106개의 EG.7 종양 세포를 블랙/6 마우스의 측복부에 피하로 주사하였다. 이러한 조건에서, 7일 후 EG.7 세포는 촉지성 종양을 형성하였다. 항종양 T 세포를 생성하기 위해, OVA 항원을 인식하는 트랜스제닉 TCR을 갖는 OT-1 마우스로부터의 비장세포를 TGF-β의 존재 하에, 또는 TGF-β 및 IL-1β의 존재 하에 OVA 항원 (1 μg/mL)으로 활성화시켰다. 5일 후 CD8+ 세포를 정제하였다. CD8+ 항종양 활성을 결정하기 위해, 상이한 실험군 (대조군, TGF-β, TGF-β + IL-1β)의 5 x 106개의 CD8+ 세포를 재현탁시키고, 확립된 EG.7 종양을 갖는 마우스 내에 200 μL PBS (포스페이트 완충 염수) 중 복강내로 투여하였다. 비히클이 단독으로 주사된 대조군 마우스를 사용하여 치료의 부재 하에서의 종양 성장을 추정하였다. 연구 말미까지 1주 3회 종양 부피를 기록하였다.
T 세포 또는 선천성 면역 세포를 적어도 1종의 면역억제에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하는, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 보충대사를 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 유도 및/또는 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서, 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 증가를 발생시키는 것을 포함하는, T 세포의 항종양 활성을 증가시키는 방법이 제공된다. 또한, 이들 방법에 의해 생산된 T 세포 또는 선천성 면역 세포, 이들 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 함유하는 제약 조성물, 또는 이들 제약 조성물을 포함하는 키트가 제공된다.
또한, (i) 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서, 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계, 및 T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계 또는 (ii) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 포유동물에게 투여하는 단계를 (부분적으로) 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 활성을 증가시키는 방법, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법, 및 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법이 제공된다. 또한, 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계, T 세포 내로 재조합 핵산을 도입하여 재조합 T 세포를 생성하는 단계, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, 항종양 활성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계, 및 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포 집단을 유지시키는 방법이 제공된다. 또한, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제를 확인하는 방법이 제공된다.
각각의 이들 방법, 세포, 제약 조성물, 및 키트의 비제한적 측면이 하기에 기재되어 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 하기 기재된 다양한 측면은, 예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 측면과 임의로 조합되어 사용될 수 있다.
T-세포
T 세포는 그의 세포 표면 상에 TCR 단백질을 발현하는 한 유형의 면역 세포이다. 예를 들어, α 및 β 쇄를 포함하는 TCR, 또는 γ 및 δ 쇄를 포함하는 TCR을 포함한, 다양한 상이한 TCR이 관련 기술분야에 공지되어 있다. T 세포의 비제한적 예는 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, 세포독성 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포를 포함한다. T 세포는 또한 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포일 수 있다. CAR-T 세포의 예시적인 측면은 하기에 기재되어 있다. T 세포의 상이한 유형의 추가의 설명은 예를 들어 문헌 [Kuby Immunology (Kindt, Kuby Immunology), Janeway's Immunobiology or Cellular and Molecular Immunology, Abbas]에 제공되어 있다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, T 세포는 포유동물 (예를 들어, 암을 갖는 포유동물 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물)로부터 수득된다. T 세포는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 고형 종양, 복수, 흉막 삼출, 및 비장 조직을 포함한 수많은 공급원으로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 관련 분야에서 입수가능한 임의의 수의 T 세포주가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 피콜(Ficoll)™ 분리를 사용하여 포유동물로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 분리반출술에 의해 수득된다. 분리반출술 생성물은 전형적으로, 예를 들어, T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포를 포함한 림프구, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 함유한다. 일부 예에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고 세포를 후속 취급 단계 또는 T-세포 단리 단계를 위해 적절한 완충제 또는 배양 배지에 둘 수 있다. 예를 들어, 세포를 포스페이트 완충 염수 (PBS) 또는 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 등장성 용액으로 세척할 수 있다. 일부 실시양태에서, 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘이 결여되어 있을 수 있거나, 또는 많은 (전부는 아니더라도) 2가 양이온이 결여되어 있을 수 있다. 칼슘의 부재 하에 수행된 T 세포의 활성화는 확대된 활성화로 이어질 수 있다. 세척 단계는, 예를 들어, 제조업체의 지침에 따라 반자동화 "관통형" 원심분리 (예를 들어, 코브 2991 셀 프로세서, 백스터 시토메이트(Baxter CytoMate), 또는 해모네틱스 셀 세이버 5)와 같은, 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 세척 후, 세포는 다양한 생체적합성 완충제, 예컨대, 예를 들어, Ca2 +-무함유, Mg2 +-무함유 PBS, 플라스마라이트 A, 또는 완충제를 포함하거나 포함하지 않는 다른 염수 용액 중에 재현탁될 수 있다. 일부 예에서, 분리반출술 생성물의 바람직하지 않은 성분은 제거될 수 있고, 세포는 적절한 배양 배지 중에 직접 재현탁될 수 있다.
일부 예에서, T 세포는 적혈구를 용해시키고, 예를 들어 퍼콜(PERCOLL)™ 구배를 통한 원심분리에 의해 또는 역류 원심 분리에 의해 단핵구를 고갈시킴으로써 말초 혈액 림프구로부터 단리된다 (예를 들어, 포유동물로부터 수득된다). T 세포의 특정 하위집단, 예컨대 CD3+, CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및 CD45RO+ T 세포는 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포는 항-CD3/항-CD28 (3 x 28)-접합된 비드, 예컨대 디나비즈(DYNABEADS)® M-450 CD3/CD28 T와 목적하는 T 세포의 양성 선택을 위한 충분한 시간 기간 동안 인큐베이션함으로써 단리된다. 예를 들어, 시간 기간은 예를 들어 약 30분, 약 30분 내지 36시간, 또는 36시간 이상일 수 있다. 예를 들어, 시간 기간은 예를 들어 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6시간일 수 있다. 일부 예에서, 시간 기간은 약 10 내지 약 24시간, 또는 약 24시간이다. 백혈병을 갖는, 백혈병을 갖는 것으로 확인된, 또는 백혈병을 갖는 것으로 진단된 포유동물로부터 T 세포를 단리하기 위해, 보다 긴 인큐베이션 시간, 예를 들어, 24시간 또는 24시간 초과를 사용하는 것은 세포 수율을 증가시킬 수 있다. 다른 세포 유형과 비교 하여 T 세포가 거의 없는 임의의 샘플에서, 예를 들어, 예컨대 고형 종양으로부터 또는 면역손상된 포유동물로부터 종양 침윤 림프구 (TIL)를 단리하는데 있어서, T 세포를 단리하기 위해 보다 긴 인큐베이션 시간이 사용될 수 있다. 보다 긴 인큐베이션 시간은, 예를 들어, CD8+ T 세포의 포획 효율을 증가시킬 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 시간을 단축시키거나 연장시키는 것은 T 세포가 CD3/CD28 비드에 결합하게 하고/거나, 비드 대 T 세포의 비를 증가시키거나 감소시키는 것은 배양물 접종 시 또는 단리 동안의 다른 시점에 T 세포의 특정 하위집단을 우선적으로 선택하는데 사용될 수 있거나 또는 이를 우선적으로 선택한다. 일부 예에서, 비드 또는 다른 표면 상의 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체의 비를 증가시키거나 감소시키는 것은 배양물 접종 시 또는 단리 동안 다른 시점에 T 세포의 특정 하위집단을 우선적으로 선택하는데 사용될 수 있다. 관련 기술분야에서 인지될 수 있는 바와 같이, T 세포 또는 특정 유형의 T 세포를 단리하는데 다중 라운드의 선택이 또한 사용될 수 있다. 일부 예에서, 선택 절차를 수행하고, 활성화 및 확장 과정에 비선택된 세포를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 비선택된 세포는 예를 들어 추가의 라운드의 선택에 적용될 수 있다.
음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는, 예를 들어 음성 선택된 세포에 고유한 표면 마커로 지시되는 항체의 조합에 의해 달성될 수 있다. 음성 선택에 의해 T 세포 집단을 풍부화하는 하나의 예시적인 방법은 음성 선택된 하나 이상의 세포 상에 존재하는 하나 이상의 세포 표면 마커로 지시되는 하나 이상의 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는, 음성 자기 면역부착 또는 유동 세포측정법을 통한 세포 분류 및/또는 선택을 포함한다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로, 예를 들어, CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 전형적으로 CD4+, CD25+, CD62L1+, GITR+, 및 FoxP3+를 발현하는 조절 T 세포를 풍부화하거나 또는 양성 선택하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 예에서, T 조절 세포는 항-C25 접합된 비드 또는 또 다른 유사한 선택 방법에 의해 고갈된다.
양성 또는 음성 선택에 의한 T 세포의 목적 집단의 단리를 위해, 세포의 농도 및 표면 {예를 들어, 입자, 예컨대 비드)은 달라질 수 있다. 일부 예에서, 세포 및 비드의 최대 접촉을 보장하기 위해 비드 및 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는 {즉, 세포의 농도를 증가시키는) 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 약 2 x 109개 세포/mL, 약 1 x 109개 세포/mL, 약 150 x 106개 세포/mL, 약 125 x 106개 세포/mL, 약 100 x 106개 세포/mL, 약 95 x 106개 세포/mL, 약 90 x 106개 세포/mL, 약 85 x 106개 세포/mL, 약 80 x 106개 세포/mL, 약 75 x 106개 세포/mL, 약 70 x 106개 세포/mL, 약 65 x 106개 세포/mL, 약 60 x 106개 세포/mL, 약 55 x 106개 세포/mL, 약 50 x 106개 세포/mL, 약 45 x 106개 세포/mL, 약 40 x 106개 세포/mL, 약 35 x 106개 세포/mL, 약 30 x 106개 세포/mL, 약 25 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 15 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 또는 약 5 x 106개 세포/mL의 농도가 사용된다. 높은 농도를 사용하는 것은, 예를 들어, 증가된 세포 수율, 세포 활성화, 및 세포 확장을 발생시킬 수 있다. 또한, 높은 세포 농도의 사용은, 예를 들어, 관심 표적 항원을 약하게 발현할 수 있는 세포, 예컨대 CD28-음성 T 세포의, 또는 많은 종양 세포가 존재하는 샘플 (예를 들어, 백혈병성 혈액, 고형 조직 등)로부터의 보다 효율적인 포획을 가능하게 한다. 이러한 세포 집단은 치료 가치를 가질 수 있고, 수득하는 것이 바람직할 것이다. 예를 들어, 높은 농도의 세포를 사용하는 것은 정상적으로는 보다 약한 CD28 발현을 갖는 CD8+ T 세포의 보다 효율적인 선택을 가능하게 한다.
일부 예에서, 보다 낮은 농도의 세포를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. T 세포 및 표면 (예를 들어, 입자, 예컨대 비드)의 혼합물을 희석함으로써, 입자와 세포 사이의 상호작용이 최소화된다. T 세포 및 표면 (예를 들어, 입자, 예컨대 비드)의 혼합물을 희석하는 것은 입자에 결합될 많은 양의 목적 항원을 발현하는 T 세포를 선택한다. 예를 들어, CD4+ T 세포는 보다 높은 수준의 CD28을 발현하고, 희석 농도에서 CD8+ T 세포보다 더 효율적으로 포획된다. 일부 예에서, 사용되는 세포의 농도는 5 x 106개/mL 또는 약 1 x 105개/mL 내지 1 x 106개/mL, 및 그 사이의 임의의 정수 값일 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포는 예를 들어 2-10℃ 또는 실온에서 상이한 속도로 상이한 시간 길이 동안 예를 들어 회전장치 상에서 인큐베이션될 수 있다. 일부 예는 세척 단계 후 및 활성화 전 세포를 동결시키는 것을 추가로 포함한다. 어떠한 이론에 얽매이지는 않지만, 동결 및 후속 해동 단계는, 예를 들어, 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도까지 단핵구를 제거함으로써 보다 균일한 생성물을 제공할 수 있다. 혈장 및 혈소판을 제거하는 세척 단계 후에, 세포는 예를 들어 동결 용액 중에 현탁될 수 있다. 다양한 상이한 동결 용액 및 파라미터는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 사용될 수 있는 예시적인 동결 용액은 (1) 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민을 포함하는 PBS; (2) 10% 덱스트란 40, 5% 덱스트로스, 20% 인간 혈청 알부민, 및 7.5% DMSO를 포함하는 배양 배지; 또는 (3) 31.25% 플라스마라이트-A, 31.25% 덱스트로스 5%, 0.45% NaCl, 10% 덱스트란 40, 5% 덱스트로스, 20% 인간 혈청 알부민, 및 7.5% DMSO를 포함하는 배양 배지; 또는 (4) 예를 들어, 헤스판(Hespan) 및 플라스마라이트 A를 포함하는 다른 적합한 세포 동결 배지이다. 일부 예에서, 세포는 이어서 분당 약 1°의 속도로 -80℃로 동결되고, 액체 질소 저장 탱크의 증기 상에 저장된다. 사용될 수 있는 제어 동결의 추가의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 일부 예에서, 세포는 즉시 (비제어 방식으로) -20℃에서 또는 액체 질소 중 동결될 수 있다.
일부 예에서, 동결보존된 세포는 본원에 기재된 바와 같이 해동 및 세척되고, 본원에 기재된 임의의 방법을 사용한 활성화 전 실온에서 약 1시간 동안 휴지되도록 한다.
일부 실시양태에서, 포유동물 (예를 들어, 암을 갖는 포유동물 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물)로부터의 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물의 수집은 본원에 제공된 임의의 제약 조성물 또는 세포의 투여 전의 시점에 수행될 수 있다. 이와 같이, 생체외 취급 및 조작될 세포의 공급원은 포유동물로부터 필요한 임의의 시점에 수집될 수 있고, 목적하는 세포, 예컨대 T 세포는 포유동물에게 다시 투여되기 전에, 후속 생체외 취급 및 조작을 위해 단리 및 동결될 수 있다.
일부 예에서, 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물은 일반적으로 건강한 포유동물 (예를 들어, 암 또는 감염성 질환의 1종 이상의 증상을 제시하지 않는 포유동물)로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물은 질환 발생 위험 (예를 들어, 암 또는 감염성 질환 발생 위험)이 있지만 아직 질환 (예를 들어, 암 또는 감염성 질환)이 발생하지 않은 일반적으로 건강한 포유동물로부터 수득되고, 관심 세포는 후속 사용 (예를 들어, 후속 배양, 활성화, 및/또는 생체외 조작)을 위해 단리 및 동결된다. 일부 예에서, T 세포는 확장, 동결되고, 후속 시점에 사용될 수 있다. 일부 예에서, 샘플은 본원에 기재된 바와 같은 특정한 질환의 진단 (예를 들어, 암의 진단 또는 감염성 질환의 진단) 직후, 그러나 특정한 질환에 대한 임의의 치료의 투여 전에 포유동물로부터 수집된다. 일부 실시양태에서, 세포는, 1종 이상의 작용제 예컨대 나탈리주맙, 에팔리주맙, 항바이러스제, 화학요법, 방사선, 면역억제제 (예를 들어, 시클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 미코페놀레이트, 및 FK506), 재조합 항체, 및 다른 면역 절제제 (예를 들어, 캄파트, 항-CD3 항체, 시톡산, 플루다라빈, 시클로스포린, FK506, 라파마이신, 미코페놀산, 스테로이드, FR901228 및 방사선조사)에 의한 치료를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 수의 관련 치료 양식 전에, 포유동물로부터의 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물로부터 단리된다. 면역 절제제는 칼슘-의존성 포스파타제 칼시뉴린 (예를 들어, 시클로스포린 및 FK506)을 억제하거나 또는 성장 인자-유도 신호전달에 중요한 p70S6 키나제 (예를 들어, 라파마이신)를 억제한다 (Liu et al., Cell 66:807-815, 1991); Henderson et al., Immunology 73:316-321, 1991; Bterer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993). 일부 예에서, 세포는 포유동물로부터 수득되어, 골수 또는 줄기 세포 이식, 화학요법제, 예컨대, 플루다라빈, 외부-빔 방사선 요법 (XRT), 시클로포스파미드 또는 항체, 예컨대 OT3 또는 캄파트를 사용한 T 세포 절제 요법과 함께 (예를 들어, 그 전, 그와 동시, 또는 그 후) 후속 사용을 위해 동결된다. 일부 예에서, 세포는 이전에 단리되어 B-세포 절제 요법, 예컨대 CD20과 반응하는 작용제, 예를 들어, 리툭산 후의 치료를 위해 후속 사용을 위해 동결될 수 있다.
일부 예에서, T 세포는 치료의 투여 후 포유동물로부터 직접 수득된다. 이와 관련하여, 특정 암 치료, 예를 들어 면역계를 손상시키는 약물의 투여 후, 치료 직후, 환자가 치료로부터 정상적으로 회복되는 기간 동안, 수득된 T 세포의 품질은 생체외에서 확장되는 그의 능력이 최적화되거나 또는 개선될 수 있는 것으로 관찰되었다. 마찬가지로, 본원에 기재된 방법을 사용한 생체외 조작 후, 이들 세포는 증진된 생착 및 생체내 증식에 바람직한 상태로 존재할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태는 이러한 회복 단계 동안 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 포함한 혈액 세포를 수집하는 것을 포함한다. 추가로, 일부 예에서, 특히 본원에 제공된 임의의 제약 조성물 또는 세포의 투여 후 규정된 시간 윈도우 동안 특정한 세포 유형의 재증식, 재순환, 재생, 및/또는 증식이 유리한 조건을 포유동물에서 생성하기 위해, 가동화 (예를 들어, GM-CSF의 투여에 의한 가동화) 및 조건화 요법이 사용될 수 있다.
CAR-T 세포
T 세포를 키메라 항원 수용체 (CAR)에 의해 유전자 변형하는 것은 종양-특이적 T 세포를 생성하기 위해 가장 통상적으로 사용되는 접근법이다 (Sadelain et al., Cancer Discov. 3:388-398, 2013). 예를 들어, T 세포를 제공하고, 키메라 항원 수용체를 코딩하는 재조합 핵산을 T 세포 내로 도입하여 CAR T 세포를 생성한다. 재조합 핵산을 T 세포 내로 도입하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 핵산을 T 세포 내로 도입하는 비제한적 예는 인산칼슘 형질감염, 고분지형 유기 화합물을 사용하는 형질감염, 양이온성 중합체를 사용하는 형질감염, 리포솜 (예를 들어, 양이온성 리포솜)을 사용하는 형질감염, 전기천공, 세포 스퀴징, 초음파천공, 광학 형질감염, 원형질체 융합, 임페일펙션, 유체역학적 전달, 유전자 총, 마그네토펙션, 입자-기반 형질감염, 바이러스 형질감염, 및 뉴클레오펙션을 포함한다.
키메라 항원 수용체는 항원-결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 T 세포를 자극하는데 충분한 CD3ζ 서열의 세포질 서열 및 임의로, 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 T 세포의 공동-자극을 제공하는 1종 이상 (예를 들어, 2, 3, 또는 4종)의 공동-자극 단백질의 세포질 서열 (예를 들어, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열)을 포함하는 세포질 신호전달 도메인을 포함한다. CAR의 비제한적 측면 및 특색은 하기에 기재되어 있다. 예시적인 항원-결합 도메인, 링커, 막횡단 도메인, 및 세포질 신호전달 도메인을 포함하는 CAR 및 CAR T 세포의 추가의 측면은, 예를 들어, 문헌 [Kakarla et al., Cancer J. 20:151-155, 2014; Srivastava et al., Trends Immunol. 36:494-502, 2015; Nishio et al., Oncoimmunology 4(2):e988098, 2015; Ghorashian et al., Br. J. Haematol. 169:463-478, 2015; Levine, Cancer Gene Ther. 22:79-84, 2015; Jensen et al., Curr. Opin. Immunol. 33:9-15, 2015; Singh et al., Cancer Gene Ther. 22:95-100, 2015; Li et al., Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi 22:1753-1756, 2014; Gill et al., Immunol. Rev. 263:68-89, 2015; Magee et al., Discov. Med. 18:265-271, 2014; Gargett et al., Front. Pharmacol. 5:235, 2014; Yuan et al., Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi 22:1137-1141, 2014; Pedgram et al., Cancer J. 20:127-133, 2014; Eshhar et al., Cancer J. 20:123-126, 2014; Ramos et al., Cancer J. 20:112-118, 2014; Maus et al., Blood 123:2625-2635, 2014; Jena et al., Curr. Hematol. Malig. Rep. 9:50-56, 2014; Maher et al., Curr. Gene Ther. 14:35-43, 2014; Riches et al., Discov. Med. 16:295-302, 2013; Cheadle et al., Immunol. Rev. 257:83-90, 2014; Davila et al., Int. J. Hematol. 99:361-371, 2014; Xu et al., Cancer Lett. 343:172-178, 2014; Kochenderfer et al., Nat. Rev. Clin. Oncol. 10:267-276, 2013; Hosing et al., Curr. Hematol. Malig. Rep. 8:60-70, 2013; Hombach et al., Curr. Mol. Med. 13:1079-1088, 2013; Xu et al., Leuk. Lymphoma 54:255-260, 2013; Gilham et al., Trends Mol. Med. 18:377-384, 2012; Lipowska-Bhalla et al., Cancer Immunol. Immunother. 61:953-962, 2012; Chmielewski et al., Cancer Immunol. Immunother. 61:1269-1277, 2013; Jena et al., Blood 116:1035-1044, 2010]; 미국 특허 출원 공개 번호 2015/0232880, 2015/0225480; 2015/0224143; 2015/0224142; 2015/0196599; 2015/0152181; 2015/0140023; 2015/0118202; 2015/0110760; 2015/0099299; 2015/0093822; 2015/0093401; 2015/0051266; 2015/0050729; 2015/0024482; 2015/0023937; 2015/0017141; 2015/0017136; 2015/0017120; 2014/0370045; 2014/0370017; 2014/0369977; 2014/0349402; 2014/0328812; 2014/0322275; 2014/0322216; 2014/0322212; 2014/0322183; 2014/0314795; 2014/0308259; 2014/0301993; 2014/0296492; 2014/0294784; 2014/0286973; 2014/0274909; 2014/0274801; 2014/0271635; 2014/0271582; 2014/0271581; 2014/0271579; 2014/0255363; 2014/0242701; 2014/0242049; 2014/0227272; 2014/0219975; 2014/0170114; 2014/0134720; 2014/0134142; 2014/0120622; 2014/0120136; 2014/0106449; 2014/0106449; 2014/0099340; 2014/0086828; 2014/0065629; 2014/0050708; 2014/0024809; 2013/0344039; 2013/0323214; 2013/0315884; 2013/0309258; 2013/0288368; 2013/0287752; 2013/0287748; 2013/0280221; 2013/0280220; 2013/0266551; 2013/0216528; 2013/0202622; 2013/0071414; 2012/0321667; 2012/0302466; 2012/0301448; 2012/0301447; 2012/0060230; 2011/0213288; 2011/0158957; 2011/0104128; 2011/0038836; 및 2007/0036773에 기재되어 있다. 예시적인 항원-결합 도메인, 링커, 막횡단 도메인, 및 세포질 신호전달 도메인을 포함하는 CAR 및 CAR T 세포의 추가의 측면은 WO 12/079000; 2015/0141347; 2015/0031624; 2015/0030597; 2014/0378389; 2014/0219978; 2014/0206620; 2014/0037628; 2013/0274203; 2013/0225668; 2013/0116167; 2012/0230962; 2012/0213783; 2012/0093842; 2012/0071420; 2012/0015888; 2011/0268754; 2010/0297093; 2010/0158881; 2010/0034834; 2010/0015113; 2009/0304657; 2004/0043401; 2014/0322253; 2015/0118208; 2015/0038684; 2014/0024601; 2012/0148552; 2011/0223129; 2009/0257994; 2008/0160607; 2008/0003683; 2013/0121960; 2011/0052554; 및 2010/0178276에 기재되어 있다.
항원 결합 도메인
키메라 항원 수용체 내에 포함된 항원 결합 도메인은 항원 (예를 들어, 암 세포의 항원 또는 기생충 또는 기생충 감염된 세포의 항원)에 특이적으로 결합할 수 있다. 항원 결합 도메인의 비제한적 예는 모노클로날 항체 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgE, 및 IgD) (예를 들어, 완전 인간 또는 키메라 (예를 들어, 인간화) 항체); 항체의 항원 결합 단편 (예를 들어, Fab, Fab', 또는 F(ab')2 단편) (예를 들어, 완전 인간 또는 키메라 (예를 들어, 인간화) 항체의 단편); 디아바디; 트리아바디; 테트라바디; 미니바디; scFv; scFv-Fc; scFab; 비스-scFv; hc-IgG; 단일 도메인 항체 (예를 들어, V-NAR 도메인 또는 VhH 도메인); IgNAR 및 다중특이적 (예를 들어, 이중특이적 항체) 항체를 포함한다. 이들 항원-결합 도메인을 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
항원 결합 도메인은 표적 항원, 예컨대 이뮤노글로불린 분자 (예를 들어, 경쇄 또는 중쇄 이뮤노글로불린 분자) 및 이뮤노글로불린 분자의 면역학적-활성 (항원-결합) 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 적어도 1개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)의 CDR (예를 들어, 이뮤노글로불린 경쇄 가변 도메인으로부터의 임의의 3개의 CDR 또는 이뮤노글로불린 중쇄 가변 도메인으로부터의 임의의 3개의 CDR)을 포함할 수 있다.
항원 결합 도메인은 또한 단일-쇄 항체일 수 있다 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음). 항원 결합 도메인은 전체 항체 분자 (예를 들어, 인간, 인간화, 또는 키메라 항체) 또는 다량체 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)일 수 있다.
항원-결합 도메인은 또한 항체 단편 및 다중특이적 (예를 들어, 이중특이적) 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 항체 및 그의 항원-결합 단편의 예는 단일-쇄 Fv (scFv), Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), Fv, 및 VL 또는 VH 도메인을 함유하는 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에 사용된 용어 "단일 쇄 Fv" 또는 "scFv"는 항체의 적어도 1개의 VH 도메인에 연결된 항체의 적어도 1개의 VL 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 제공된 추가의 항원 결합 도메인은 폴리클로날, 모노클로날, 다중특이체 (다량체, 예를 들어, 이중특이체), 인간 항체, 키메라 항체 (예를 들어, 인간-마우스 키메라), 단일-쇄 항체, 세포내-생성 항체 (즉, 인트라바디), 및 그의 항원-결합 단편이다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2) 또는 하위부류일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 IgG1 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 예에서, 항원 결합 도메인은 IgG4 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 항원 결합 도메인은 중쇄 및 경쇄를 갖는 이뮤노글로불린일 수 있다.
단리된 항원은 모노클로날 항체 제조를 위한 표준 기술을 사용하여 항체를 생성하는데 면역원으로서 사용될 수 있다. 폴리클로날 항체는 항원의 다중 주사 (예를 들어, 피하 또는 복강내 주사)에 의해 동물에서 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 적어도 1종의 아주반트와 함께 주사된다. 일부 실시양태에서, 항원은 면역화될 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들어, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에, 이관능성 작용제 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기을 통해 접합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통함), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl2, 또는 R1N=C=NR을 사용하여 접합될 수 있으며, 여기서 R 및 R1은 상이한 알킬 기이다. 동물은 항원에 의해 1회 초과 (예를 들어, 2회, 3회, 또는 4회) 주사될 수 있다.
항원은 전형적으로 적합한 포유동물 (예를 들어, 적어도 하나의 인간 이뮤노글로불린 유전자좌를 발현하는 인간 또는 트랜스제닉 동물)을 면역화함으로써 항체를 제조하는데 사용된다. 포유동물을 면역화하는데 사용되는 제제는 추가로 아주반트, 예컨대 프로인트 완전 또는 불완전 아주반트 또는 유사한 면역자극제를 포함할 수 있다.
폴리클로날 항체는 적합한 포유동물을 항원으로 면역화함으로써 상기 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 면역화된 포유동물에서 항체 역가는 표준 기술에 의해, 예컨대 항원을 사용하는 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 시간의 경과에 따라 모니터링될 수 있다. 면역화 후 적절한 시간에, 예를 들어 특정 항체 역가가 최고일 때, 항체-생산 세포를 포유동물로부터 수득하여, 표준 기술, 예컨대 문헌 [Kohler et al., Nature 256:495-497, 1975]에 최초로 기재된 하이브리도마 기술, 인간 B 세포 하이브리도마 기술 (Kozbor et al., Immunol. Today 4:72, 1983), EBV-하이브리도마 기술 (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96, 1985) 또는 트리오마 기술에 의해 모노클로날 항체를 제조하는데 사용할 수 있다. 하이브리도마를 생산하는 기술은 널리 공지되어 있다 (일반적으로, 문헌 [Current Protocols in Immunology, 1994, Coligan et al. (Eds.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY] 참조). 예를 들어, 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마 세포는, 예를 들어 표준 ELISA 검정을 사용하여, 관심 항원에 결합하는 항체에 대해 하이브리도마 배양물 상청액을 스크리닝함으로써 검출된다.
모노클로날 항체-분비 하이브리도마를 제조하는 것에 대한 대안으로서, 재조합 조합 이뮤노글로불린 라이브러리 (예를 들어, 항체 파지 디스플레이 라이브러리)를 관심 항원으로 스크리닝함으로써 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체를 확인하고 단리할 수 있다. 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 스크리닝하기 위한 키트는 상업적으로 입수가능하다 (예를 들어, 파마시아(Pharmacia) 재조합 파지 항체 시스템, 카탈로그 번호 27-9400-01; 및 스트라타진(Stratagene) SurfZAP* 파지 디스플레이 키트, 카탈로그 번호 240612). 추가적으로, 항체 디스플레이 라이브러리를 생성하고 스크리닝하는데 사용하기에 특히 적용가능한 방법 및 시약의 예는, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,223,409; WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/2079; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; WO 90/02809; 문헌 [Fuchs et al., Bio/Technology 9:1370-1372, 1991; Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85, 1992; Huse et al., Science 246:1275-1281, 1989; 및 Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734, 1993]에서 확인할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체로부터의 서열 (예를 들어, 인간 이뮤노글로불린 불변 도메인 또는 인간 이뮤노글로불린 가변 도메인 프레임워크 영역)을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화 항체는 비-인간 (예를 들어, 마우스) 이뮤노글로불린으로부터 유도된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 비-인간 항체 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 또는 염소 항체)에 존재하는 적어도 1개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유하도록 조작된 인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체 또는 그의 단편은 실질적으로 동일한 항원에 특이적으로 결합하는 비-인간 항체 또는 인간 항체의 경쇄의 모든 3개의 CDR을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체 또는 그의 단편은 동일한 항원에 특이적으로 결합하는 비-인간 모노클로날 항체 또는 인간 항체의 중쇄의 모든 3개의 CDR을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 이뮤노글로불린의 프레임워크 영역 잔기는 상응하는 비-인간 (예를 들어, 마우스) 항체 잔기에 의해 대체된다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 인간 항체 또는 비-인간 (예를 들어, 마우스) 항체에서 발견되지 않는 잔기를 함유할 수 있다. 비-인간 (예를 들어, 마우스) 모노클로날 항체로부터 인간화 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 키메라 (예를 들어, 인간화) 항체를 제조하는 추가의 비제한적 예는 본원에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 비-인간 항체 (예를 들어, 마우스 항체)의 경쇄 가변 도메인 또는 비-인간 항체 (예를 들어, 마우스 항체)의 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 CDR을 함유하는 경쇄 이뮤노글로불린 및 인간 이뮤노글로불린 경쇄의 불변 도메인 (예를 들어, 인간 κ 쇄 불변 도메인)을 함유하는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-인간 (예를 들어, 마우스 항체)의 중쇄 가변 도메인 또는 비-인간 (예를 들어, 마우스 항체)의 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 CDR을 함유하는 중쇄 이뮤노글로불린 및 인간 이뮤노글로불린 중쇄의 불변 도메인 (예를 들어, 인간 IgG 중쇄 불변 도메인)을 함유하는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체는 인간 이뮤노글로불린의 불변의 일부 (Fc 도메인)를 함유한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 다중특이체 (예를 들어, 다량체)일 수 있다. 예를 들어, 항체는 항체 이량체, 삼량체, 또는 단량체 이뮤노글로불린 분자의 보다 고차의 다량체 형태를 취할 수 있다. 전체 이뮤노글로불린 분자의 또는 F(ab')2 단편의 이량체는 4가인 반면에, Fab 단편 또는 scFv 분자의 이량체는 2가이다. 항체 다량체 내의 개별 단량체는 동일하거나 상이할 수 있고, 즉, 이는 이형 또는 동형 항체 다량체일 수 있다. 예를 들어, 다량체 내의 개별 항체는 동일하거나 상이한 결합 특이성을 가질 수 있다.
항체의 다량체화는 항체의 천연 응집을 통해 또는 관련 기술분야에 공지된 화학적 또는 재조합적 연결 기술을 통해 달성될 수 있다. 예를 들어, 정제된 항체 제제 (예를 들어, 정제된 IgG1 분자)의 일부 백분율은 항체 동종이량체를 함유하는 단백질 응집체 및 다른 보다 고차의 항체 다량체를 자발적으로 형성한다. 대안적으로, 항체 동종이량체는 관련 기술분야에 공지된 화학적 연결 기술을 통해 형성될 수 있다. 예를 들어, SMCC (숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트) 및 SATA (N-숙신이미딜 S-아세틸티오-아세테이트) (예를 들어, 일리노이주 록포드 소재의 피어스 바이오테크놀로지, 인크.(Pierce Biotechnology, Inc.)로부터 입수가능함)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 이종이관능성 가교제가 항체 다량체를 형성하는데 사용될 수 있다. 항체 동종이량체의 형성을 위한 예시적인 프로토콜은 문헌 [Ghetie et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94: 7509-7514, 1997)]에 기재되어 있다. 항체 동종이량체를 형성하는 또 다른 방법은 문헌 [Zhao et al. (J. Immunol. 25:396-404, 2002)]에 기재된 오토필릭 T15 펩티드의 사용을 통한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다. 이중특이적 항체는 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면을 조작함으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 도메인의 적어도 일부를 함유할 수 있다. 이러한 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 1개 이상의 작은 아미노산 측쇄는 보다 큰 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 것 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 큰 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 크기의 보상 "공동"이 제2 항체 분자의 계면에 생성된다. 이는 다른 원치않는 최종-생성물, 예컨대 동종이량체보다 이종이량체의 수율을 증가시키는 메카니즘을 제공한다 (예를 들어, WO 96/27011 참조).
이중특이적 항체는 가교된 또는 "이종접합체" 항체를 포함한다. 적합한 가교제가 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 다양한 가교 기술과 함께 미국 특허 번호 4,676,980에 개시되어 있다.
항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 방법은 또한 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 화학적 연결을 사용하여 이중특이적 항체를 제조할 수 있다. 문헌 [Shalaby et al. (J. Exp. Med.175:217-225, 1992)]에는 완전-인간화 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산이 기재되어 있다. 재조합 세포 배양물로부터 직접 이중특이적 항체 단편을 제조 및 단리하는 추가의 기술이 또한 기재되어 있다. 예를 들어, 류신 지퍼를 사용하여 이중특이적 항체가 생산된 바 있다 (Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553, 1992). 이러한 방법은 또한 항체 동종이량체의 생산에 사용될 수 있다.
문헌 [Hollinger et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448, 1993)]에 기재된 디아바디 기술은 이중특이적 항체 단편을 제조하는 추가의 방법이다. 단편은 동일한 쇄 상의 2개의 도메인이 쌍을 형성하게 하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 함유한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍 형성하도록 강제되어, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체의 사용에 의해 이중특이적 항체 단편을 제조하는 또 다른 방법이 문헌 [Gruber et al. (J. Immunol. 153:5368, 1994)]에 기재되어 있다. 대안적으로, 이중특이적 항체는, 예를 들어, 문헌 [Zapata et al. (Protein Eng. 8:1057-1062, 1995)]에 기재된 방법을 사용하여 생산된 "선형" 또는 "단일-쇄 항체"일 수 있다. 일부 실시양태에서 항체는 2개 초과의 항원-결합 부위를 갖는다. 예를 들어, 삼중특이적 항체가 문헌 [Tutt et al. (J. Immunol. 147:60, 1991)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
대안적으로, 항체는 재조합 DNA 기술을 통해 다량체화될 수 있다. IgM 및 IgA는 성숙한 J 쇄 폴리펩티드와의 상호작용을 통해 항체 다량체를 자연 형성한다. 비-IgA 또는 비-IgM 분자, 예컨대 IgG 분자는 IgA 또는 IgM의 J 쇄 상호작용 도메인을 함유하도록 조작될 수 있고, 그로 인해 비-IgA 또는 비-IgM 분자에게 보다 고차의 다량체를 형성하는 능력이 부여된다 (예를 들어, 문헌 [Chintalacharuvu et al., Clin. Immunol. 101:21-31, 2001, 및 Frigerio et al., Plant Physiol. 123:1483-1494, 2000] 참조). IgA 이량체는 점막으로-쌓인 기관의 내강 내로 자연 분비된다. 이러한 분비는 J 쇄와 상피 세포 상의 중합체 IgA 수용체 (pIgR)의 상호작용을 통해 매개된다. 항체의 (또는 J 쇄 상호작용 도메인을 함유하도록 조작된 항체의) IgA 형태의 분비가 바람직하지 않은 경우에, pIgR과 잘 상호작용하지 않는 돌연변이체 J 쇄와 회합된 항체 분자를 발현시킴으로써 이를 매우 감소시킬 수 있다 (Johansen et al., J. Immunol., 167:5185-192, 2001). scFv 이량체는 또한 관련 기술분야에 공지된 재조합 기술을 통해 형성될 수 있다. scFv 이량체의 구축의 예는 문헌 [Goel et al. (Cancer Res. 60:6964-71, 2000)]에 주어져 있다.
항원 결합 도메인은 특정한 항원에 포스페이트 완충 염수 중 1x 10-7 M 이하 (예를 들어, 1 x 10-8 M 이하, 5 x 10-9 M 이하, 2 x 10-9 M 이하, 또는 1 x 10-9 M 이하)의 친화도 (KD)로 결합할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, CAR 내에 포함시킬 항원 결합 도메인의 선택은 표적 암 세포의 표면을 규정하는 리간드의 유형 및 수, 표적 병원체, 또는 병원체에 감염된 표적 세포에 좌우된다. 예를 들어, 항원 결합 도메인은 암 세포 상의 세포 표면 마커로서 작용하는 리간드, 병원체, 또는 병원체에 감염된 세포를 인식하도록 선택될 수 있다. 따라서 CAR 내의 항원 결합 도메인에 대한 리간드로서 작용할 수 있는 세포 표면 마커의 예는 바이러스, 박테리아, 및 기생충 감염, 및 암 세포와 연관된 것을 포함한다.
항원 결합 도메인은 종양 항원 또는 병원체 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 종양 항원은 면역 반응, 특히 T 세포-매개 면역 반응을 도출하는 암 세포에 의해 생산된 단백질 또는 분자 (예를 들어, 폴리사카라이드 및/또는 지질)이다. 병원체 항원은 병원체에 의해 생산된 단백질 또는 다른 분자 (예를 들어, 폴리사카라이드 및/또는 지질)이다.
항원 결합 모이어티의 선택은 치료할 암 또는 병원체의 특정한 유형에 좌우될 것이다. 종양 항원은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 신경교종-연관 항원, 암배아성 항원 (CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파태아단백질 (AFP), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CA IX, 인간 텔로머라제 리버스 트랜스크립타제, RU1, RU2 (AS), 장 카르복실 에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원 (PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, Her2/neu, 서바이빈, 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1 (PCTA-1), MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, CD22, 인슐린 성장 인자 (IGF)-1, IGF-2, IGF-1 수용체, 및 메소텔린을 포함한다.
일부 예에서, 종양 항원은 악성 종양과 연관된 1개 이상의 항원 암 에피토프를 포함한다. 악성 종양은 표적 항원으로서 역할을 할 수 있는 수많은 단백질을 발현한다. 이들 분자는 흑색종에서의 조직-특이적 항원, 예컨대 MART-1, 티로시나제 및 GP 100, 및 전립선암에서의 전립선 산 포스파타제 (PAP) 및 전립선-특이적 항원 (PSA)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다른 표적 항원은 형질전환-관련 분자의 군, 예컨대 종양유전자 HER-2/Neu ErbB-2에 속한다. 표적 항원의 또 다른 군은 종양태아성 항원, 예컨대 암배아성 항원 (CEA)이다. B-세포 림프종에서, 종양-특이적 이디오타입 이뮤노글로불린은 개별 종양에 대해 고유한, 종양-특이적 이뮤노글로불린 항원을 구성한다. B-세포 분화 항원, 예컨대 CD19, CD20 및 CD37은 B-세포 림프종에서의 표적 항원에 대한 다른 후보이다. 이들 항원 (CEA, HER-2, CD19, CD20, 이디오타입) 중 일부는 제한된 성공을 갖는 모노클로날 항체에 의한 수동 면역요법을 위한 표적으로서 사용되어 왔다.
항원 결합 도메인에 의해 인식되는 종양 항원은 또한 종양-특이적 항원 (TSA) 또는 종양-연관 항원 (TAA)일 수 있다. TSA는 종양 세포에 고유하고, 신체 내의 다른 세포 상에서 발생하지 않는다. TAA는 종양 세포에 대해 고유하지 않고, 대신 항원에 대해 면역 관용의 상태를 유도하는데 실패한 조건 하에 정상 세포 상에서 또한 발현된다. 종양 상에서의 TAA 항원의 발현은 면역계가 항원에 반응할 수 있는 조건 하에 일어날 수 있다. TAA는 면역계가 미성숙하고 반응할 수 없는 때인 태아 발생 동안 정상 세포 상에서 발현되는 항원일 수 있거나, 또는 정상적으로는 정상 세포 상에서 극도로 낮은 수준으로 존재하지만 종양 세포 상에서는 훨씬 더 높은 수준으로 발현되는 항원일 수 있다.
TSA 또는 TAA의 비제한적 예는 하기: 분화 항원, 예컨대 MART-l/멜란A (MART-1), g100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2; 종양-특이적 다계열 항원, 예컨대 MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE- 1, GAGE-2, 및 pi5; 과다발현된 배아 항원, 예컨대 CEA; 과다발현된 종양유전자 및 돌연변이된 종양-억제 유전자 예컨대 p53, Ras, 및 HER-2/neu; 염색체 전위로 인해 생성된 고유 종양 항원, 예컨대 BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, 1GH-IGK, 및 MYL-RAR을 포함한다. 다른 대형, 항원은, 예를 들어, TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE- 6, RAGE, NY-ESO, pl 85erbB2, pl 80erbB-3, c-met, nm-23H l, PSA, TAG-72, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 베타-카테닌, CDK4, Mum-1, p15, p16, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 알파-태아단백질, 베타-HCG, BCA225, BTAA, CA125, CA15-3/CA 27.29/BCAA, CA195, CA242, CA-50, CAM43, CD68/ I , CO-029, FGF-5, G250, Ga733VEpCAM, HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90/Mac-2 결합 단백질 A 시클로필린 C-연관 단백질, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, hTERT, 강글리오시드 GD3, Hu, Yo, 및 GAP를 포함한다.
일부 예에서, 항원 결합 도메인은 CD19, CD20, CD22, RORl, 메소텔린, CD33/IL3Ra, c-Met, PSMA, 당지질 F77, EGFRvIII, GD-2, MY-ESO-1 TCR, MAGE A3 TCR 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 항원에 특이적으로 결합한다. 표적화할 목적 항원에 따라, CAR은 목적 항원에 특이적으로 결합하는 적절한 항원 결합 도메인을 포함하도록 조작될 수 있다. 예를 들어, CD19가 표적화할 목적 항원인 경우에, CD19에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체의 항원-결합 단편을 CAR에서 항원 결합 도메인으로서 사용할 수 있다. 일부 예에서, CAR의 항원 결합 모이어티 부분은 CD19를 표적화한다. 예를 들어, CAR의 항원 결합 도메인은 항-CD19 scFV이다.
일부 예에서, 항원 결합 도메인은 인간 유두종 바이러스 (HPV) 항원, 및 엡스타인-바르 바이러스 항원, 폴리오마 바이러스 항원, 카포시 육종-연관 헤르페스바이러스 (KSHV) HHV-8, B형 간염 (HBV) 및 C (HCV) 바이러스 항원, 포진 바이러스 항원, HIV 항원, 인플루엔자 (오르토믹소비리다에(Orthomyxoviridae)) 항원, 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori) 항원, 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 항원을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 바이러스 또는 박테리아 기원의 것이다. 예는 HPV E6/E7 항원, EBV 바이러스 핵 항원 1, 폴리오마 바이러스 대형 T 항원, HBV 코어 항원, HCV 비구조적 (NS) 5A, HIV gp120 항원, HIV gp41, 에스. 아우레우스 표면 항원 B, 인플루엔자 헤마글루티닌, 및 인플루엔자 뉴라미니다제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 항원-결합 도메인 및 항원의 추가의 예는 본원에 인용된 참고문헌에 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Van der Bruggen et al., Cancer Immunity 2013 (www.cancerimmunity.org/peptide/), 및 Vigneron, BioMed Res. Int. Vol. 2015 Article ID 948501, 17 pp, 2015)] 참조).
일부 예에서, 종양 항원의 존재는 용해된 종양 세포, 괴사성 종양 세포, 종양 단백질, 종양 아폽토시스체를 포함한 종양 물질이 항원의 추가의 특징화 없이 자가 T 세포 집단의 활성화를 도출하는 능력에 의해 규정된다.
링커
본원에 기재된 CAR은 (1) 항원 결합 도메인과 막횡단 도메인 사이, 및/또는 (2) 막횡단 도메인과 세포질 신호전달 도메인 사이에 링커를 임의로 포함할 수 있다. 링커는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 링커일 수 있다. 예를 들어, 링커가 올리고뉴클레오티드인 경우에, 링커는 약 1개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 약 70개 뉴클레오티드, 약 60개 뉴클레오티드, 약 50개 뉴클레오티드, 약 40개 뉴클레오티드, 약 30개 뉴클레오티드, 약 20개 뉴클레오티드, 또는 약 10개 뉴클레오티드; 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 약 70개 뉴클레오티드, 약 60개 뉴클레오티드, 약 50개 뉴클레오티드, 약 40개 뉴클레오티드, 약 30개 뉴클레오티드, 또는 약 20개 뉴클레오티드; 약 20개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 약 70개 뉴클레오티드, 약 60개 뉴클레오티드, 약 50개 뉴클레오티드, 약 40개 뉴클레오티드, 또는 약 30개 뉴클레오티드; 약 30개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 약 70개 뉴클레오티드, 약 60개 뉴클레오티드, 약 50개 뉴클레오티드, 또는 약 40개 뉴클레오티드; 약 40개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 약 70개 뉴클레오티드, 약 60개 뉴클레오티드, 또는 약 50개 뉴클레오티드; 약 50개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 약 70개 뉴클레오티드, 또는 약 60개 뉴클레오티드; 약 60개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 약 80개 뉴클레오티드, 또는 약 70개 뉴클레오티드; 약 70개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 약 90개 뉴클레오티드, 또는 약 80개 뉴클레오티드; 약 80개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 약 100개 뉴클레오티드, 또는 약 90개 뉴클레오티드; 약 90개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 약 120개 뉴클레오티드, 또는 약 100개 뉴클레오티드; 약 100개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 약 140개 뉴클레오티드, 또는 약 120개 뉴클레오티드; 약 120개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 약 160개 뉴클레오티드, 또는 약 140개 뉴클레오티드; 약 140개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 약 180개 뉴클레오티드, 또는 약 160개 뉴클레오티드; 약 160개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 약 200개 뉴클레오티드, 또는 약 180개 뉴클레오티드; 약 180개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 약 250개 뉴클레오티드, 또는 약 200개 뉴클레오티드; 약 200개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 약 300개 뉴클레오티드, 또는 약 250개 뉴클레오티드; 약 250개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 약 350개 뉴클레오티드, 또는 약 300개 뉴클레오티드; 약 300개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 약 400개 뉴클레오티드, 또는 약 350개 뉴클레오티드; 약 350개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 450개 뉴클레오티드, 또는 약 400개 뉴클레오티드; 약 400개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드 또는 약 450개 뉴클레오티드; 또는 약 450개 뉴클레오티드 내지 약 500개 뉴클레오티드일 수 있다.
예를 들어, 링커가 폴리펩티드인 경우에, 링커는 약 1개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 약 14개 아미노산, 약 12개 아미노산, 약 10개 아미노산, 약 8개 아미노산, 약 6개 아미노산, 약 4개 아미노산, 또는 약 2개 아미노산; 약 2개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 약 14개 아미노산, 약 12개 아미노산, 약 10개 아미노산, 약 8개 아미노산, 약 6개 아미노산, 또는 약 4개 아미노산; 약 4개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 약 14개 아미노산, 약 12개 아미노산, 약 10개 아미노산, 약 8개 아미노산, 또는 약 6개 아미노산; 약 6개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 약 14개 아미노산, 약 12개 아미노산, 약 10개 아미노산, 또는 약 8개 아미노산; 약 8개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 약 14개 아미노산, 약 12개 아미노산, 또는 약 10개 아미노산; 약 10개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 약 14개 아미노산, 또는 약 12개 아미노산; 약 12개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 약 16개 아미노산, 또는 약 14개 아미노산; 약 14개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 18개 아미노산, 또는 약 16개 아미노산; 약 16개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산, 또는 약 18개 아미노산; 약 18개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 25개 아미노산, 또는 약 20개 아미노산; 약 20개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 약 30개 아미노산, 또는 약 25개 아미노산; 약 25개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 35개 아미노산, 또는 약 30개 아미노산; 약 30개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산, 또는 약 35개 아미노산; 약 35개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 50개 아미노산, 또는 약 40개 아미노산; 약 40개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 60개 아미노산, 또는 약 50개 아미노산; 약 50개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 70개 아미노산, 또는 약 60개 아미노산; 약 60개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 약 80개 아미노산, 또는 약 70개 아미노산; 약 70개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 약 90개 아미노산, 또는 약 80개 아미노산; 약 80개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산, 또는 약 90개 아미노산; 약 90개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산, 또는 약 100개 아미노산; 약 100개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 약 200개 아미노산, 또는 약 150개 아미노산; 약 150개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 약 250개 아미노산, 또는 약 200개 아미노산; 약 200개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 약 300개 아미노산, 또는 약 250개 아미노산; 약 250개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 약 350개 아미노산, 또는 약 300개 아미노산; 약 300개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 약 400개 아미노산, 또는 약 350개 아미노산; 약 350개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 450개 아미노산, 또는 약 400개 아미노산; 약 350개 아미노산 내지 약 500개 아미노산 또는 약 450개 아미노산; 약 450개 아미노산 내지 약 500개 아미노산일 수 있다.
일부 예에서, 폴리펩티드 링커는 글리신-세린 이중체를 포함한다. 일부 예에서, 폴리펩티드 링커는 2차 알파 나선 구조를 갖는다. 일부 예에서, 폴리펩티드 링커는 2차 베타 시트 구조를 갖는다. 링커의 추가의 예는 본원에 인용된 참고문헌에 기재되어 있다.
막횡단 도메인
본원에 기재된 CAR은 또한 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 예에서, 막횡단 도메인은 세포질 도메인 내의 서열과 자연 회합된다. 일부 예에서, 막횡단 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 도메인이 다른 막횡단 도메인 (예를 들어, 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인)에 결합하는 것을 회피하도록 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 아미노산 치환에 의해 변형될 수 있다.
막횡단 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우에, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막횡단 단백질로부터 유래될 수 있다. 본 발명에 특히 유용한 막횡단 도메인의 비제한적 예는 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CDS, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, 또는 CD 154로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, 적어도 그의 막횡단 서열 또는 막횡단 서열의 일부를 포함할 수 있다).
일부 예에서, 막횡단 도메인은 합성일 수 있고, 이 경우에 이는 소수성 잔기 예컨대 류신 및 발린을 우세하게 포함할 것이다. 일부 예에서, 합성 막횡단 도메인은 합성 막횡단 도메인의 각각의 말단에 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체를 포함할 것이다. 일부 예에서, CAR의 막횡단 도메인은 CD8 힌지 도메인을 포함한다.
막횡단 도메인의 추가의 구체적 예는 본원에 인용된 참고문헌에 기재되어 있다.
세포질 도메인
본원에 기재된 CAR은, 예를 들어, 항원-결합 도메인이 항원에 결합한 경우에 T 세포를 자극하는데 충분한 CD3ζ 서열의 세포질 서열, 및 임의로, T 세포의 공동-자극을 제공하는 공동-자극 단백질 중 1종 이상의 세포질 서열 (예를 들어, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40L, CD40, PD-1, PD-L1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, CD160, LIGHT, BTLA, TIM3, CD244, CD80, LAG3, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열)을 포함하는 1차 세포질 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. CAR T 세포의 자극은 CAR T 세포의 1종 이상의 항종양 또는 항감염성 질환 활성의 활성화를 발생시킬 수 있다. 예를 들어, CAR T 세포의 자극은 시토카인의 분비를 포함한 CAR T 세포의 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성의 증가를 발생시킬 수 있다. 일부 예에서, 공동-자극 단백질의 전체 세포내 신호전달 도메인은 세포질 신호전달 도메인에 포함된다. 일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은, 세포내 신호전달 도메인의 말단절단된 일부가 CAR T 세포에서 이펙터 기능 신호를 전달하는 한, 공동-자극 단백질의 세포내 신호전달 도메인의 말단절단된 일부를 포함한다. 세포질 신호전달 도메인에 포함될 수 있는 세포내 신호전달 도메인의 비제한적 예는 항원 수용체 맞물림 후 함께 신호 전달을 개시하는 작용을 하는 T 세포 수용체 (TCR) 및 보조-수용체의 세포질 서열, 뿐만 아니라 적어도 1개 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 치환을 포함하고 동일한 기능적 능력을 갖는 이들 서열의 임의의 변이체를 포함한다.
일부 예에서, 세포질 신호전달 도메인은 2개의 개별 부류의 세포질 신호전달 서열: TCR을 통해 항원-의존성 1차 활성화를 개시하는 신호전달 서열 (1차 세포질 신호전달 서열) (예를 들어, CD3ζ 세포질 신호전달 서열) 및 항원-비의존성 방식으로 작용하여 2차 또는 공동-자극 신호를 제공하는 공동-자극 단백질 중 1종 이상의 세포질 서열 (2차 세포질 신호전달 서열)을 포함할 수 있다.
1차 세포질 신호전달 서열은 자극 방식 또는 억제 방식으로 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호전달 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호전달 모티프를 함유할 수 있다.
세포질 신호전달 도메인에 포함될 수 있는 ITAM 함유 1차 세포질 신호전달 서열의 예는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CDS, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터 유래된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR의 1차 세포질 신호전달 서열은 CD3ζ로부터 유래된 세포질 신호전달 서열을 포함한다.
일부 예에서, CAR의 세포질 도메인은 CD3ζ 신호전달 도메인을 그 자체로 또는 CAR과 관련하여 유용한 임의의 다른 바람직한 세포질 신호전달 서열(들)과 조합하여 포함하도록 설계될 수 있다. 예를 들어, CAR의 세포질 도메인은 CD3ζ 쇄 부분 및 공동자극 세포질 신호전달 서열을 포함할 수 있다. 공동자극 세포질 신호전달 서열은 공동자극 단백질의 세포질 신호전달 서열을 포함하는 CAR의 부분을 지칭한다. 공동자극 단백질은 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응에 필요한, 항원 수용체 또는 그의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 이러한 공동자극 단백질의 비제한적 예는 CD27, CD28, 4-IBB (CD 137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다.
CAR의 세포질 신호전달 도메인 내의 세포질 신호전달 서열은 서로 무작위로 또는 명시된 순서로 연결될 수 있다. 임의로, 링커 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 링커)는 연결을 형성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포질 신호전달 도메인은 CD3ζ의 세포질 신호전달 서열 및 공동자극 단백질 CD28의 세포질 신호전달 서열을 포함하도록 설계된다. 일부 예에서, 세포질 신호전달 도메인은 CD3ζ의 세포질 신호전달 서열 및 공동자극 단백질 4-IBB의 세포질 신호전달 서열을 포함하도록 설계된다. 일부 예에서, 세포질 신호전달 도메인은 CD3ζ의 세포질 신호전달 서열 및 공동자극 단백질 CD28 및 4-1BB의 세포질 신호전달 서열을 포함하도록 설계된다.
일부 예에서, CAR의 세포질 신호전달 도메인은 4-IBB의 세포질 신호전달 서열 및 CD3ζ의 세포질 신호전달 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 4-1BB의 세포질 신호전달 서열은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 핵산 서열에 의해 코딩되고, CD3ζ의 세포질 신호전달 서열은 서열식별번호: 2의 핵산에 의해 코딩된다.
일부 예에서, CAR의 세포질 신호전달 도메인은 4-IBB의 세포질 신호전달 도메인 및 CD3ζ의 세포질 신호전달 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 4-IBB의 세포질 신호전달 도메인은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, CD3ζ의 세포질 신호전달 도메인은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함한다.
T 세포를 활성화하는 작용제
본원에 기재된 방법 중 일부는 T 세포를 활성화하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서 T 세포가 유전자 변형된 T 세포 (예를 들어, CAR T 세포)인 경우에, T 세포의 활성화는 재조합 핵산을 T 세포 내로 도입하기 전 또는 후에 이루어질 수 있다. T 세포를 활성화 및 배양하는 방법은 예를 들어 미국 특허 번호 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; 및 미국 특허 출원 공개 번호 20060121005에 기재되어 있다.
일반적으로, T 세포는 T 세포 내의 CD3 TCR 복합체 연관 신호를 자극하는 작용제 및 T 세포의 표면 상의 공동-자극 단백질을 자극하는 리간드가 부착된 표면과 세포를 접촉시킴으로써 활성화된다. 일부 예에서, T 세포는 T 세포를 표면 상에 고정된 항-CD3 항체, 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 항-CD2 항체와 접촉시킴으로써, 또는 T 세포를 칼슘 이오노포어와 조합된 단백질 키나제 C 활성화제 (예를 들어, 브리오스타틴)와 접촉시킴으로써 활성화될 수 있다. T 세포 표면 상의 공동-자극 단백질에 결합하는 리간드는 T 세포 표면 상의 공동-자극 단백질을 활성화하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, T 세포 집단은 T 세포를 활성화하는데 적절한 조건 하에 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 접촉될 수 있다. 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체는 CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포의 증식을 자극하는데 사용될 수 있다. 항-CD28 항체의 비제한적 예는 9.3, B-T3, XR-CD28 (프랑스 브장송 소재의 디아클론(Diaclone))을 포함한다. T 세포를 활성화하는 추가의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):1319-1328, 1999; 및 Garland et al., J. Immunol. Meth. 227(1 -2):53-63, 1999).
일부 예에서, T 세포 내 1차 세포질 신호전달 서열 및 공동자극 세포질 신호전달 서열 신호의 활성화는 상이한 프로토콜에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어, 각각의 신호를 활성화하는 작용제는 용액 중에 존재할 수 있거나 또는 표면에 커플링될 수 있다. 표면에 커플링된 경우에, 작용제는 동일한 표면에 커플링되거나 (즉, "시스" 형성) 또는 개별 표면에 커플링될 수 있다 (즉, "트랜스" 형성). 일부 예에서, 하나의 작용제는 표면에 커플링될 수 있고, 다른 작용제는 용액 중에 존재할 수 있다. 일부 예에서, 공동-자극 세포질 신호전달 서열의 활성화를 제공하는 작용제는 세포 표면에 결합되고, 1차 세포질 신호전달 서열의 활성화를 제공하는 작용제는 용액 중에 존재하거나 표면에 커플링된다. 특정 실시양태에서, 둘 다의 작용제는 용액 중에 존재할 수 있다. 일부 예에서, 작용제는 가용성 형태로 존재한 후, 표면, 예컨대 Fc 수용체 또는 항체 또는 작용제에 결합할 다른 결합체를 발현하는 세포에 가교될 수 있다. 예를 들어, 본 방법에서 T 세포를 활성화하는데 사용될 수 있는 인공 항원 제시 세포 (aAPC)에 대한 미국 특허 출원 공개 번호 2004/0101519 및 2006/0034810을 참조한다.
일부 예에서, 2종의 작용제는 동일한 비드 상, 즉 "시스" 또는 개별 비드 상, 즉 "트랜스"로 비드 상에 고정된다. 예로서, 1차 세포질 신호전달 서열을 활성화하는 작용제는 항-CD3 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고, 공동-자극 세포질 신호전달 서열을 활성화하는 작용제는 항-CD28 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고; 둘 다의 작용제는 동일한 비드에 동등한 분자 양으로 공동-고정된다. 일부 예에서, 1:1 비의 각 항체가 T 세포 활성화를 위해 비드에 결합된다. 다른 예에서, 1:1 비를 사용하여 관찰된 T 세포 확장과 비교하여 확장의 증가가 관찰되도록 항-CD3:항-CD28 항체의 비가 비드에 결합된다. 일부 예에서, 비드에 결합된 항-CD3:항-CD28 항체의 비는 100:1 내지 1:100, 및 그 사이의 모든 정수 값 범위이다. 일부 예에서, 항-CD3 항체보다 많은 항-CD28 항체가 입자에 결합된다 (1 미만의 항-CD3:항-CD28 항체의 비). 일부 예에서, 비드에 결합된 항-CD28 항체 대 항-CD3 항체 비는 2:1 초과이다. 일부 예에서, 항체는 1:100 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다. 일부 예에서, 항체는 1:75 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다. 일부 예에서, 항체는 1:50 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 1:30 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다. 일부 예에서, 항체는 1:10 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다. 일부 실시양태에서, 항체는 1:3 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다. 일부 예에서, 항체는 3:1 항-CD3:항-CD28의 비로 비드에 결합된다.
입자 수 대 T 세포 수의 비는, 예를 들어, 약 1:500 내지 약 500:1, 및 그 사이의 임의의 정수 값일 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 인지할 수 있는 바와 같이, 입자 대 세포의 비는 표적 세포의 크기 대비 입자 크기에 의존할 수 있다. 예를 들어, 작은 크기의 비드는 단지 소수의 세포에 결합할 수 있는 반면에, 보다 큰 비드는 많은 세포에 결합할 수 있다. 일부 예에서, T 세포 대 입자의 비는 약 1:100 내지 약 100:1, 및 그 사이의 임의의 정수 값일 수 있다. 일부 예에서 T 세포 대 입자의 비는 약 1:9 내지 약 9:1, 및 그 사이의 임의의 정수 값일 수 있다. T 세포 활성화를 발생시키는 항-CD3- 및 항-CD28-커플링된 입자 수 대 T 세포 수의 비는 약 1:100, 약 1:50, 약 1:40, 약 1:30, 약 1:20, 약 1:10, 약 1:9, 약 1:8, 약 1:7, 약 1:6, 약 1:5, 약 1:4, 약 1:3, 약 1:2, 약 1:1, 약 2:1, 약 3:1, 약 4:1, 약 5:1, 약 6:1, 약 7:1, 약 8:1, 약 9:1, 약 10:1, 또는 약 15:1일 수 있다. 일부 예에서, 1:1 이하의 입자 수 대 T 세포 수의 비가 사용된다. 일부 예에서, 약 1:5의 입자 수 대 T 세포 수의 비가 사용된다. 일부 예에서, 입자 수 대 T 세포 수의 비는 활성화 일에 의존하여 달라질 수 있다. 예를 들어, 약 1:1 내지 약 10:1의 입자 수 대 T 세포 수의 비가 활성화 제1일에 사용되고, 그 후 최대 10일 동안 매일 또는 격일로 약 1:1 내지 약 1:10의 최종 입자 대 T 세포 비 (각각의 첨가일에서의 세포 카운트에 기초함)로 추가의 입자가 T 세포에 첨가된다. 일부 예에서, 입자 대 T 세포의 비는 활성화 제1일에 약 1:1이고, 활성화 제3일 및 제5일에 약 1:5로 조정된다. 일부 예에서, 입자는 활성화 제1일에 약 1:1, 및 제3일 및 제5일에 약 1:5의 최종 비를 기준으로 매일 또는 격일로 첨가된다. 일부 예에서, 입자 대 세포의 비는 활성화 제1일에 약 2: 1이고, 활성화 제3일 및 제5일에 1:10으로 조정된다. 일부 실시양태에서, 입자는 활성화 제1일에 약 1:1, 및 제3일 및 제5일에 1:10의 최종 비를 기준으로 매일 또는 격일로 첨가된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 다양한 다른 비가 T 세포를 활성화하는 이들 방법에 사용하는데 적합할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 특히, 비는 입자 크기 및 세포 크기 및 유형에 의존하여 달라질 것이다.
일부 예에서, T 세포는 작용제-코팅된 비드와 조합되고, 비드 및 세포는 후속적으로 분리된 후, 세포가 배양된다. 대안적으로, 배양 전에, 작용제-코팅된 비드 및 세포는 분리되지 않고 함께 배양된다. 일부 예에서, 비드 및 세포는 먼저 자기력과 같은 힘의 적용에 의해 농축되어, T 세포 표면 상의 단백질이 비드 상의 항체에 라이게이션하는 것이 증가되고, 이에 의해 T 세포 활성화가 유도된다.
예로서, 세포 표면 단백질은 항-CD3 및 항-CD28 항체가 부착된 상자성 비드 (3 x 28 비드)가 T 세포에 접촉되도록 함으로써 라이게이션될 수 있다. 일부 예에서, T 세포 (예를 들어, 104 내지 109개 T 세포) 및 비드 (예를 들어, 디나비즈® M-450 CD3/CD28 T 상자성 비드)는, 예를 들어, 약 1:1의 비로 완충제, 바람직하게는 PBS (2가 양이온, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 부재) 중에서 조합된다. 다시, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 임의의 T 세포 농도가 사용될 수 있다는 것을 용이하게 인지할 수 있다. 예를 들어, 표적 T 세포는 샘플 중에 매우 드물 수 있고, 샘플의 단지 약 0.01 %만을 구성할 수 있거나, 또는 표적 T 세포는 전체 샘플 (약 100%)을 구성할 수 있다. 따라서, 임의의 T 세포 수 또는 농도가 활성화 단계에서 사용될 수 있다. 일부 예에서, T 세포와 입자의 최대 접촉을 보장하기 위해 입자 및 T 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는 (예를 들어, T 세포의 농도를 증가시키는) 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 약 2 x 109개 세포/mL의 T 세포 농도가 사용될 수 있다. 다른 예에서, 100 x 106개 세포/mL 초과의 T 세포 농도가 사용될 수 있다. 다른 예에서, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 15 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 25 x 106개 세포/mL, 30 x 106개 세포/mL, 35 x 106개 세포/mL, 40 x 106개 세포/mL, 45 x 106개 세포/mL, 또는 50 x 106개 세포/ml의 T 세포 농도가 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 약 75 x 106개 세포/mL, 80 x 106개 세포/mL, 85 x 106개 세포/mL, 90 x 106개 세포/mL, 95 x 106개 세포/mL, 또는 100 x 106개 세포/mL의 T 세포 농도가 사용될 수 있다. 일부 예에서, 125 x 106개 세포/mL 또는 150 x 106개 세포/mL의 T 세포 농도가 사용될 수 있다. 높은 T 세포 농도를 사용하는 것은 증가된 세포 수율, 증가된 T 세포 활성화, 및 증가된 T 세포 증식을 발생시킬 수 있다. 또한, 높은 T 세포 농도의 사용은 관심 표적 항원의 발현이 보다 낮은 T 세포, 예컨대 CD28-음성 T 세포의 보다 효율적인 포획을 가능하게 한다. 이러한 T 세포 집단은 치료 가치를 가질 수 있고, 특정 측면에서 수득하는 것이 바람직할 것이다. 예를 들어, 높은 농도의 T 세포를 사용하는 것은, 정상적으로는 CD28 발현이 보다 낮은 CD8+ T 세포의 보다 효율적인 선택을 가능하게 한다.
일부 예에서, T 세포 및 입자의 혼합물은 약 수시간 (약 3시간) 내지 약 14일, 또는 그 사이의 임의의 매시간 정수 값 동안 배양될 수 있다. 일부 예에서, 혼합물은 21일 동안 배양될 수 있다. 일부 실시양태에서, 비드 및 T 세포는 약 8일 동안 함께 배양된다. 다른 예에서, 비드 및 T 세포는 약 2 내지 약 3일 동안 함께 배양된다. 여러 사이클의 활성화가 사용될 수 있으며, 이에 T 세포 및 입자는 약 60일 이상 동안 배양될 수 있다. T 세포 및 입자 혼합물은 본원에 기재된 임의의 배양 방법 및 배양 배지를 사용하여 배양될 수 있다.
상이한 활성화 횟수에 노출된 T 세포는 상이한 특징을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 전형적인 혈액 또는 분리반출술을 거친 말초 혈액 단핵 세포 생성물은 세포독성 또는 억제 T 세포 집단 (Tc, CD8+)보다 큰 헬퍼 T 세포 집단 (TH, CD4+)을 갖는다. CD3 및 CD28 수용체를 자극하는 것에 의한 T 세포의 생체외 확장은 T 세포 집단을 생산하고, 이는 배양 약 8-9일 전에는 TH 세포를 우세하게 포함하는 반면에, 약 8-9일 후 T 세포 집단은 점점 더 큰 Tc 세포 집단을 포함한다. 따라서, TH 세포가 바람직한 경우에, 세포는 단지 최대 8 내지 9일 동안 활성화되어야 하고, 세포독성 T 세포가 바람직한 경우에, T 세포는 9 또는 10일을 초과하여 활성화되어야 한다.
T 세포의 활성화는 또한 단리된 종양 항원, 종양 용해물, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원 또는 종양 백신을 포함하거나 추가로 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 것에 의해 수행될 수 있다.
선천성 면역 세포
선천성 면역 세포는 그의 세포 표면 상에 항체 또는 TCR을 발현하는 것에 의해 병원성 물질 (예를 들어, 암 세포, 박테리아, 바이러스, 및 효모)을 인식하지 않는 포유동물 세포이다. 선천성 면역 세포는 병원체와 연관된 PAMP 및/또는 손상되거나 형질전환된 세포와 연관된 DAMP에 결합하는 병원체 및/또는 수용체에 결합된 다른 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체 (예를 들어, 그의 세포 표면 상의 수용체) 또는 단백질을 발현한다. DAMP의 비제한적 예는 핵 또는 시토졸 단백질 (예를 들어, HMGB1 단백질 또는 S100 단백질), DNA 또는 RNA, 퓨린 대사물 (예를 들어, ATP, 아데노신 또는 요산), 및 글리칸 또는 당접합체 (예를 들어, 히알루로난 단편)를 포함한다. PAMP의 비제한적 예는 박테리아 리포폴리사카라이드, 플라젤린, 리포테이코산, 펩티도글리칸, 이중-가닥 RNA, 및 비메틸화 CpG 모티프를 포함한다. PAMP 및 DAMP의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
선천성 면역 세포의 비제한적 예는 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 킬러 세포를 포함한다. 선천성 면역 세포의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
포유동물로부터의 말초 혈액 또는 조직으로부터 선천성 면역 세포를 정제하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 비만 세포의 정제 방법은 문헌 [Kulka et al., Curr. Protoc. Immunol., Chapter Unit 7.25, 2010; Radinger et al., Current Protoc. Immunol. Chapter Unit 7.37, 2010; Saito et al., Nature Protocols 1:2178-2183, 2006; Davies et al., Methods in Molecular Biology 290:105-116, 2005; Rezapour et al., J. Animal Vet. Sci. 8:11-15, 2009; Roth et al., J. Immunol. Methods 45:153-164, 1981; Thomas et al., J. Immunol. 150:1821-1834, 1993; McLellan et al., J. Immunological Methods 184:81-89, 1995; Akuthota et al., Curr. Protoc. Immunol. Chapter Unit 7.31, 2001; Fairhurst et al., FASEB J. 22:1075, 2008; Munoz et al., Nature Protocols 1:2613-2620, 2007; Falcone et al., Methods Molecular Biology 1192:35-47, 2014; Cooper et al., Current Protocols Immunology, Unit 7.34, 2004; 및 Pak-Wittel et al., Current Protocols Immunology, Unit 3.22, 2014]에 기재되어 있다.
T-세포 또는 선천성 면역 세포의 배양
T 세포 또는 선천성 면역 세포를 배양하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. T 세포 및 선천성 면역 세포를 배양하는데 사용될 수 있는 비제한적인 배양 배지, 온도, O2 수준, 및 CO2 수준은 하기에 제공된다. T 세포 및 선천성 면역 세포를 배양하는데 사용될 수 있는 배양 배지, 온도, CO2 수준, 및 습도 수준의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
T 세포 및 선천성 면역 세포를 배양하는데 사용될 수 있는 배양 배지의 비제한적 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 최소 필수 배지 또는 RPM1 배지 1640, 또는 엑스-비보 15(X-vivo 15), (론자(Lonza))). T 세포 및 선천성 면역 세포를 배양하는데 사용되는 배양 배지는, 예를 들어, 혈청 (예를 들어, 태아 소 또는 인간 혈청), 인터류킨-2 (IL-2), 인슐린, IFN-γ, IL-4, IL-7, GM-CSF, IL- 10, IL- 12, IL-15, TGF, 및 TNF, 또는 통상의 기술자에게 공지된 세포의 성장을 위한 임의의 다른 첨가제 중 1종 이상을 포함한, 예를 들어, 증식 및 생존에 필요한 인자를 포함할 수 있다. T 세포 및 선천성 면역 세포를 배양하는데 사용되는 배양 배지는, 예를 들어, 계면활성제, 플라스마네이트 및 환원제, 예컨대 N-아세틸-시스테인 및 2-메르캅토에탄올을 포함할 수 있다. 배양 배지의 추가의 예는, 예를 들어, RPMI 1640 배지, AIM-V®, DMEM 배지, MEM 배지, MEM 알파 배지, F12 배지, 엑스-비보™ 15 배지, 엑스-비보™ 20 배지, 및 옵티마이저(OpTimizer)™ CTS™ T-세포 확장 조직 배양 배지를 포함한다. 본원에 기재된 임의의 예시적인 배지는 아미노산, 피루브산나트륨, 비타민, 혈청 또는 혈장, 1종 이상의 호르몬, 및 1종 이상의 시토카인(들) 중 1종 이상을, 예를 들어, T 세포 또는 선천성 면역 세포의 성장 및 확장에 충분한 양으로 포함할 수 있다. 배양 배지는 1종 이상의 항생제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 항생제) 및/또는 1종 이상의 항진균제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 항진균제)를 추가로 포함할 수 있다. 포유동물에의 투여 전에, T 세포 또는 선천성 면역 세포는 성장을 지지하는데 필요한 조건, 예를 들어 적절한 온도 (예를 들어, 임의의 예시적인 온도) 및 분위기 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 CO2 수준 및/또는 습도 수준) 하에 유지된다.
일부 예에서, 배양은 제어된 가습 분위기에서 (예를 들어, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 습도, 또는 100%의 습도에서) 수행된다.
일부 예에서, 배양 단계는 약 31℃ 내지 약 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 숙련된 진료의는 온도가 배양 단계 동안 특정 시점(들)에, 예를 들어, 매시간 또는 매일 기준으로 변화될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 온도는 배양 단계의 시작 후 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일에 변화 또는 변경 (예를 들어, 증가 또는 감소)될 수 있다. 예를 들어, 온도는 상향 변경될 수 있다 (예를 들어, 최대 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 최대 또는 약 20℃의 변화). 예를 들어, 온도는 하향 변경될 수 있다 (예를 들어, 최대 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 최대 또는 약 20℃의 변화).
일부 예에서, 기재된 배양 단계는 세포를 포함하는 액체 배양 배지를 최대 또는 약 15% CO2 (예를 들어, 최대 또는 약 14% CO2, 12% CO2, 10% CO2, 8% CO2, 6% CO2, 5% CO2, 4% CO2, 3% CO2, 2% CO2, 또는 최대 또는 약 1% CO2)를 함유하는 분위기에 노출시키는 것을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 방법에서 배양 단계는 약 1시간 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 약 6일, 약 5일, 약 4일, 약 3일, 약 2일, 약 1일, 또는 약 12시간; 약 12시간 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 약 6일, 약 5일, 약 4일, 약 3일, 약 2일, 또는 약 1일; 약 1일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 약 6일, 약 5일, 약 4일, 약 3일, 또는 약 2일; 약 2일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 약 6일, 약 5일, 약 4일, 또는 약 3일; 약 3일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 약 6일, 약 5일, 또는 약 4일; 약 4일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 약 6일, 또는 약 5일; 약 5일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 약 7일, 또는 약 6일; 약 6일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 약 8일, 또는 약 7일; 약 7일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 약 9일, 또는 약 8일; 약 8일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 약 10일, 또는 약 9일; 약 9일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 약 11일, 또는 약 10일; 약 10일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 약 12일, 또는 약 11일; 약 11일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 약 13일, 또는 약 12일; 약 12일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 약 2주, 또는 약 13일; 약 13일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 약 3주, 또는 약 2주; 약 14일 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 약 4주, 또는 약 3주; 약 3주 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 약 5주, 또는 약 4주; 약 4주 내지 약 2개월, 약 7주, 약 6주, 또는 약 5주; 약 5주 내지 약 2개월, 약 7주, 또는 약 6주; 약 6주 내지 약 2개월 또는 약 7주; 또는 약 7주 내지 약 2개월 동안 수행될 수 있다.
T 세포를 배양하는 예시적인 방법은 문헌 [Jackson et al., J. Immunol. Methods 291:51-62, 2004]; 미국 특허 번호 5,443,983; 미국 특허 번호 7,816,134; 미국 특허 출원 공개 번호 2008/0261307; WO 02/014481; 문헌 [Barrett et al., Cytotherapy pp. 1-12, 2014; Keever-Taylor et al., Biol. Blood Marrow Transplantation 11:44, 2004; Monica Raulf-Heimsoth, Method Mol. Med. 138:17-30, 2008; Janas et al., Perfusion's Role in Maintenance of High-Density T-Cell Cultures," BioProcess International website, dated January 13, 2015; Fabricius et al., Immunobiology 156:364-371, 1980; 및 Watkins et al., J. Vis. Exp. (64):e3952, 2012]에 기재되어 있다.
선천성 면역 세포를 배양하는 예시적인 방법은 문헌 [Saito et al., Nat. Protoc. 1(4):2178-2183, 2006; Levi-Schaffer et al., Pharmacological Res. 24:307-317, 1991; Davies et al., Methods in Mol. Biology 290:105-116, 2005; Weischenfeldt et al., Cold Spring Harbor Protocols Vol 12, 2008; Zemans et al., J. Immunol. Methods 340:102-115, 2009; Celluzzi et al., J. Hematother. Stem Cell Res. 12:575-585, 2003; Morseet al., Human Cell Culture 4:171-191, 2002; Magee et al., Natural Killer Cells, Basic Science and Clinical Application, Chapter 9- Isolation, Culture and Propagation of Natural Killer Cells, Academic Press, pp. 125-135, 2010]; 및 미국 특허 출원 공개 번호 2008/0299660에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, T 세포를 활성화하는 것은 T 세포를 배양하는 것을 포함할 수 있고 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 배지, 배양 조건, 또는 총 배양 시간을 사용함), 이는 T 세포를 활성화하는 작용제 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포를 활성화하는 임의의 작용제)를 포함하는 배양 배지의 사용을 포함할 수 있다.
NLRP3 및 NLRP3 하류 신호전달
NLR 패밀리, 피린 도메인 함유 3 (NLRP3)은 포유동물 세포에서 인플라마솜 복합체의 일부를 형성하는 단백질이다. 인간 NLPR3 단백질의 아미노산 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 5일 수 있다. 인간 NLRP3 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 6이다. 소 NLRP3 단백질의 아미노산 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 7일 수 있다. 소 NLRP3 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 8이다. 마우스 NLRP3 단백질의 아미노산 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 9일 수 있다. 마우스 NLRP3 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 10이다. 래트 NLRP3 단백질의 아미노산 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 11일 수 있다. 래트 NLRP3 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 12이다.
NLRP3 단백질의 수준 또는 NLRP3 단백질을 코딩하는 cDNA의 수준은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 예를 들어, NLRP3 단백질 (예를 들어, 인간 NLRP3 단백질)에 특이적으로 결합하는 항체는 세포 (예를 들어, T 세포 또는 선천성 면역 세포)에서 NLRP3 단백질의 수준을 결정하는데 사용될 수 있다. 인간 NLRP3 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 비제한적 예는 이엠디 밀리포어(EMD Millipore), 아디포겐(AdipoGen)® 라이프 사이언시스(Life Sciences), 시그마 알드리치(Sigma Aldrich), 알앤디 시스템즈(R&D Systems), 오리진(OriGene) 및 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific)으로부터 상업적으로 입수가능하다.
NLRP3 단백질을 코딩하는 cDNA의 수준을 결정하는 방법은, 예를 들어, 정량적 역전사 폴리머라제 연쇄 반응 (qRT-PCR), 노던 블롯, 리보뉴클레아제 보호 검정, DNA 마이크로어레이, 차등 디스플레이, 택맨 RT-PCR, 및 유전자 발현의 연속 분석 (SAGE)을 포함한다. qRT-PCR의 경우에, 표적 cDNA 서열에 기초하여 (예를 들어, NLRP3 단백질을 코딩하는 cDNA 서열에 기초하여) 적합한 프라이머를 설계하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
예를 들어, NLRP3의 하류 신호전달은 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포 또는 선천성 면역 세포)에서의 NLRP3 인플라마솜 복합체 (예를 들어, NLRP3 단백질, 카스파제 동원 도메인 (ASC) 단백질을 함유하는 아폽토시스-연관 티끌-유사 단백질, 및 카스파제-1의 복합체)의 형성의 증가, 카스파제-1의 활성의 증가, 및 IL-1β 및/또는 IL-18의 전구체 형태의 프로세싱의 증가 중 1종 이상일 수 있다. NLRP3 인플라마솜 복합체의 형성을 검출하는 예시적인 방법은 문헌 [Jhang et al., J. Agric. Food Chem. 63:7343-7352, 2015; Zhao et al., Exp. Neurol. 273:23-35, 2015; 및 Xiong et al., Kidney Blood Press Res. 40:344-354, 2015]에 기재되어 있다. NLRP3 인플라마솜 복합체의 형성을 검출하는 예시적인 방법은 형광 현미경검사 및 면역침전 또는 공동-면역침전 방법을 포함한다. 카스파제-1의 활성의 증가를 검출하기 위한 키트는 압캠(abcam)®, 진텍스(GeneTex), 엔조 라이프 사이언시스(Enzo Life Sciences), 엠디 시스템즈(MD Systems), 써모 피셔 사이언티픽, 압노바(Abnova), 및 레이 바이오테크(Ray Biotech)에 의해 상업적으로 판매된다. IL-1β의 전구체 형태의 프로세싱은 이뮤노블롯팅, IL-1β 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, IL-1β 단백질의 전구체 형태 및 성숙 형태에 특이적으로 결합하는 항체, 및/또는 IL-1β 단백질의 전구체 형태에만 결합하는 항체)를 사용하여 검출될 수 있다. IL-1β 단백질에 결합하는 항체의 비제한적 예는 산타 크루즈 바이오테크(Santa Cruz Biotech), 압캠, 노부스 바이오(Novus Bio), 에이비디 세로텍(AbD Serotec), 및 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology)로부터 상업적으로 입수가능한 것을 포함한다. IL-18 단백질의 전구체 형태의 프로세싱은 이뮤노블롯팅, IL-18에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, IL-18 단백질의 전구체 형태 및 성숙 형태에 특이적으로 결합하는 항체, 및/또는 IL-18 단백질의 전구체 형태에만 결합하는 항체)를 사용하여 검출될 수 있다. IL-18 단백질에 결합하는 항체의 비제한적 예는 산타 크루즈 바이오테크, 압캠, 에이비디 세로텍, 압바이오텍(Abbiotec), 이엠디 밀리포어, 알앤디 시스템즈, 및 써모 피셔 사이언티픽으로부터 상업적으로 입수가능한 것을 포함한다.
NLRP3 활성화제
본원에 기재된 임의의 방법 또는 조성물의 일부 예에서, NLRP3 활성화제는 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포 또는 선천성 면역 세포)에서 NLRP3 단백질의 수준을 증가시키고/거나 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포 또는 선천성 면역 세포)에서 NLRP3 단백질을 코딩하는 mRNA의 수준을 증가시키는 작용제일 수 있다. 다른 예에서, NLRP3 활성화제는 NLRP3의 하류 신호전달을 증가시킨다. 예를 들어, NLRP3의 하류 신호전달은 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포 또는 선천성 면역 세포)에서의 NLRP3 인플라마솜 복합체 (예를 들어, NLRP3 단백질, 카스파제 동원 도메인 (ASC) 단백질을 함유하는 아폽토시스-연관 티끌-유사 단백질, 및 카스파제-1의 복합체)의 형성의 증가, 카스파제-1의 활성의 증가, 및 IL-1β 및/또는 IL-18의 전구체 형태의 프로세싱의 증가 중 1종 이상일 수 있다.
일부 예에서, NLRP3 활성화제는 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β이다. 인간 인터류킨-1β는, 예를 들어, 프로스펙(ProSpec) (뉴저지주 이스트 브런즈윅), 써모 피셔 사이언티픽 인크. (일리노이주 록포드), 및 이뮤노툴즈(ImmunoTools) (독일 프리에소이테)를 포함한 수많은 판매업체로부터 상업적으로 입수가능하다. 인간 인터류킨-1α는, 예를 들어, 알앤디 시스템즈, 라이프 테크놀로지스, 및 시그마 알드리치를 포함한 수많은 판매업체로부터 상업적으로 입수가능하다.
예를 들어, 인간 IL-1α 단백질의 서열은 서열식별번호: 13일 수 있다. 인간 IL-1α 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 14이다. 마우스 IL-1α 단백질의 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 15일 수 있다. 마우스 IL-1α 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 16이다. 래트 IL-1α 단백질의 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 17일 수 있다. 래트 IL-1α 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 18이다.
예를 들어, 인간 IL-1β 단백질의 서열은 서열식별번호: 19일 수 있다. 인간 IL-1β 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 20이다. 마우스 IL-1β 단백질의 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 21일 수 있다. 마우스 IL-1β 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 22이다. 래트 IL-1β 단백질의 서열은, 예를 들어, 서열식별번호: 23일 수 있다. 래트 IL-1β 단백질을 코딩하는 예시적인 cDNA 서열은 서열식별번호: 24이다.
일부 예에서, NLRP3은 10 kDa 미만, 9 kDA 미만, 8 kDA 미만, 7 kDa 미만, 6 kDa 미만, 5 kDa 미만, 4 kDa 미만, 3 kDa 미만, 2 kDa 미만, 또는 1 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자이다. 일부 예에서, NLRP3 활성화제는 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
일부 예에서, NLRP3 활성화제는
이며, 여기서 (a) R1은 H이고, R2는 H이거나; (b) R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나; (c) R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는 (d) R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3이다. 이들 NLRP3 활성화제를 합성하는 방법은, 예를 들어, 문헌 [Shi et al., ACS Med. Chem. Lett. 3:501-504, 2012]에 기재되어 있다.
일부 예에서, NLRP3 활성화제는 하기 군으로부터 선택된다:
이미다조퀴놀린 (예를 들어, 미국 특허 번호 8,658,666에 기재된 이미다조퀴놀린 참조);
이미다조나프티리딘 (예를 들어, 미국 특허 번호 8,658,666 및 7,335,773에 기재된 이미다조나프티리딘 참조);
피라졸로피리딘 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,678,918 및 7,554,697에 기재된 피라졸로피리딘 참조);
아릴-치환된 이미다조퀴놀린 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,598,382 및 7,091,214에 기재된 아릴-치환된 이미다조퀴놀린 참조);
1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,579,359에 기재된 1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물 참조);
옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,148,232; 6,809,203; 6,703,402; 6,677,334; 6,627,640; 6,627,638; 6,440,992; 6,323,200; 및 6,110,929에 기재된 옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민 참조);
티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,148,232; 6,809,203; 6,703,402; 6,677,334; 6,627,640; 6,627,638; 6,440,992; 6,323,200; 및 6,110,929에 기재된 티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민 참조);
셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,148,232; 6,809,203; 6,703,402; 6,677,334; 6,627,640; 6,627,638; 6,440,992; 6,323,200; 및 6,110,929에 기재된 셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민 참조);
이미다조나프티리딘 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,038,051; 6,949,646; 6,894,165; 6,797,716; 6,797,716; 6,518,280; 6,514,985; 및 6,194,425에 기재된 이미다조나프티리딘 참조);
이미다조퀴놀린아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,026,482; 6,897,314; 6,624,305; 6,613,902; 6,534,654; 6,437,131; 6,150,523; 5,998,619; 및 5,741,908에 기재된 이미다조퀴놀린아민 참조);
1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,790,961; 6,686,472; 6,608,201; 6,465,654; 6,348,462; 5,977,366; 5,741,909; 5,525,612; 및 5,389,640에 기재된 1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민 참조);
융합된 시클로알킬이미다조피리딘 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,886,006; 5,468,516; 5,627,281; 5,444,065; 및 5,352,784에 기재된 융합된 시클로알킬이미다조피리딘 참조);
1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,756,747에 기재된 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민 참조);
1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,714,608 및 5,346,905에 기재된 1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민 참조);
이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,367,076; 5,175,296; 및 4,689,338에 기재된 이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민 참조);
2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,266,575에 기재된 2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민 참조);
올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,037,986 및 4,929,624에 기재된 올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민 참조);
1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,698,348에 기재된 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린 참조);
피리도퀴녹살린-6-카르복실산 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,449,270에 기재된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산 참조);
6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,567,269 및 4,472,406에 기재된 6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H 벤조 [ij] 퀴놀리진-2-카르복실산 참조);
치환된 나프토[ij]퀴놀리진 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,456,606에 기재된 치환된 나프타[ij]퀴놀리진 참조);
치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,348,521의 치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산 참조);
7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,051,247에 기재된 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체 참조);
치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,014,877; 4,001,243; 및 3,985,882에 기재된 치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 참조);
7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 (예를 들어, 미국 특허 번호 3,985,753 및 3,976,651에 기재된 7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 참조);
치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진 (예를 들어, 미국 특허 번호 3,984,548에 기재된 치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진 참조); 및
테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트 (예를 들어, 미국 특허 번호 3,969,463에 기재된 테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트 참조).
NLRP3 활성화제의 추가의 예는 미국 특허 번호 8,658,666; 7,879,849; 7,678,918; 7,598,382; 7,579,359; 7,544,697; 7,335,773; 7,148,232; 7,091,214; 7,038,051; 7,026,482; 6,949,646; 6,897,314; 6,894,165; 6,809,203; 6,797,716; 6,790,961; 6,703,402; 6,686,472; 6,677,334; 6,627,640; 6,627,638; 6,624,305; 6,613,902; 6,608,201; 6,534,654; 6,518,280; 6,514,985; 6,465,654; 6,437,131; 6,348,462; 6,323,200; 6,194,425; 6,150,523; 6,110,929; 5,998,619; 5,977,366; 5,907,083; 5,886,006; 5,756,747; 5,741,909; 5,741,908; 5,714,608; 5,468,516; 5,627,281; 5,605,899; 5,525,612; 5,444,065; 5,389,640; 5,367,076; 5,352,784; 5,346,905; 5,266,575; 5,175,296; 5,037,986; 4,929,624; 4,698,348; 4,689,338; 4,603,199; 4,567,269; 4,449,270; 4,472,406; 4,456,606; 4,443,447; 4,348,521; 4,051,247; 4,014,877; 4,001,243; 3,985,882; 3,985,753; 3,984,548; 3,976,651; 및 3,969,463에 기재되어 있다. NLRP3 활성화제의 추가의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)는 포유동물에 투여될 수 있다. 숙련된 건강 전문가 (예를 들어, 의사 및 의사 보조자)는 하나 이상의 공지된 인자 (예를 들어, 포유동물의 건강, 포유동물의 연령, 포유동물의 체중, 및 포유동물의 성별 중 하나 이상)에 기초하여 포유동물에게 투여하기 위한 NLRP3 활성화제의 용량을 결정할 수 있다.
예를 들어, NLRP3 활성화제의 단일 용량은 약 1 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 약 60 mg, 약 50 mg, 약 40 mg, 약 30 mg, 약 20 mg, 약 10 mg, 또는 약 5 mg; 약 5 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 약 60 mg, 약 50 mg, 약 40 mg, 약 30 mg, 약 20 mg, 또는 약 10 mg; 약 10 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 약 60 mg, 약 50 mg, 약 40 mg, 약 30 mg, 또는 약 20 mg; 약 20 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 약 60 mg, 약 50 mg, 약 40 mg, 또는 약 30 mg; 약 30 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 약 60 mg, 약 50 mg, 또는 약 40 mg; 약 40 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 약 60 mg, 또는 약 50 mg; 약 50 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 약 70 mg, 또는 약 60 mg; 약 60 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 약 80 mg, 또는 약 70 mg; 약 70 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 약 90 mg, 또는 약 80 mg; 약 80 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 약 100 mg, 또는 약 90 mg; 약 90 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 약 120 mg, 또는 약 100 mg; 약 100 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 약 140 mg, 또는 약 120 mg; 약 120 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 약 160 mg, 또는 약 140 mg; 약 140 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 약 180 mg, 또는 약 160 mg; 약 160 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 약 200 mg, 또는 약 180 mg; 약 180 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 약 250 mg, 또는 약 200 mg; 약 200 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 약 300 mg, 또는 약 250 mg; 약 250 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 약 350 mg, 또는 약 300 mg; 약 300 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 약 400 mg, 또는 약 350 mg; 약 350 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 약 450 mg, 또는 약 400 mg; 약 400 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 약 500 mg, 또는 약 450 mg; 약 450 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 약 550 mg, 또는 약 500 mg; 약 500 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 약 600 mg, 또는 약 550 mg; 약 550 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 약 650 mg, 또는 약 600 mg; 약 600 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 약 700 mg, 또는 약 650 mg; 약 650 mg 내지 약 800 mg, 약 750 mg, 또는 약 700 mg; 약 700 mg 내지 약 800 mg 또는 약 750 mg; 또는 약 750 mg 내지 약 800 mg의 NLRP3 활성화제를 포함할 수 있다.
보충대사 및 보충대사를 유도 및/또는 증가시키기 위한 조건
보충대사는 생합성을 위해 배출된 시트르산 사이클 중간체를 보충하는 대사 활성이다. 대조군 세포와 비교하여, 보충대사가 유도 및/또는 증가된 포유동물 세포는 (예를 들어, 충분한 O2, 에너지 공급원, 및 필수 비타민이 제공된 대조군 세포와 비교하여) 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, 산화성 인산화율 대비 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, 글루타민 흡수율의 증가, 기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율의 증가, 피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율의 증가, 아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸무레이트를 생산하는 비율의 증가, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율의 증가, 및 프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율의 증가 중 1종 이상을 가질 수 있다.
당분해로부터의 락테이트 생산율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 당분해 검정 (압캠); 락테이트 검정 키트 (시그마-알드리치); 및 당분해 세포-기반 검정 키트 (케이멘 케미칼(Caymen Chemical)) 참조). 산화성 인산화율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 미토톡스(MitoTox)™ 완전 옥스포스 활성 검정 키트 (압캠); 미토톡스™ 완전 옥스포스 활성 검정 패널 (미토사이언시스(MitoSciences)) 참조). 글루타민 흡수율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Carr et al., Cell. Immunol. Immune Recog. 185:1037-1044, 2010; 및 McDermott et al., J. Cell. Sci. 104;51-58, 1993] 참조). 피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Berndt et al., Anal. Biochem. 86:154=158, 1978; 및 Kerr et al., Mitochondrial Disorders 837:93-119, 2011] 참조). 아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸마레이트를 생산하는 비율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Van Der Weyden et al., J. Biol. Chem. 249:7282-7289, 1974; Boitz et al., J. Biol. Chem. 288:8977-8990, 2013] 참조). 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 활성 검정 키트 (시그마-알드리치); 아스파르테이트 트랜스아미나제 검정 키트 (압노바); 알라닌 트랜스아미나제 악템라 활성 검정 키트 (케이만 케미칼(Cayman Chemical))). 프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gravel et al., Biochem. Med. 20:1-6, 1978; 및 Sansaricq et al., Pediatric Res. 18:299A, 1984] 참조).
보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지는, 예를 들어, 글루코스가 첨가되지 않은 갈락토스, 3-브로모피루베이트, 2-데옥시글루코스, 5가 비소 (H3AsO4), 로니다민, 이마티닙, 옥시티아민, 피루베이트, 홀수-쇄 지방산, 5-탄소 케톤체 및 트리헵타노인 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 추가의 배양 배지는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건은, 예를 들어, T 세포 또는 선천성 면역 세포에서 대조군 세포와 비교하여 (예를 들어, 대조군 세포, 예를 들어, 어떠한 검출가능한 보충대사도 갖지 않는 유사한 세포 또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시킬 조건 하에 배양되지 않은 유사한 세포와 비교하여) 하기: 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, 산화성 인산화율 대비 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소, 세포에 의한 글루타민 흡수율의 증가, 기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율의 증가, 피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율의 증가, 아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸무레이트를 생산하는 비율의 증가, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율의 증가, 및 프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율의 증가 중 1종 이상을 발생시키는 조건일 수 있다.
암
본원에 기재된 임의의 방법에서, 포유동물은 암을 가질 수 있다. 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로서 확인된 바 있거나, 또는 암을 갖는 것으로 진단된 바 있다. 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태는 암을 갖는 포유동물, 암을 갖는 것으로 확인된 포유동물, 또는 암을 갖는 것으로 진단된 포유동물로부터 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 수득하는 것을 포함한다.
암의 비제한적 예는 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암을 포함한다.
포유동물이 암을 갖는 것으로 진단하거나 또는 포유동물이 암을 갖는 것으로 확인하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 의료 전문가 (예를 들어, 의사, 의사 보조자, 또는 기술자)는 포유동물에서 암의 1종 이상의 증상을 관찰함으로써 포유동물에서 암을 진단할 수 있다. 암의 증상의 비제한적 예는 피로, 피부 아래에 느껴지는 덩어리 또는 비후 영역, 체중 변화, 황달, 피부의 흑화 또는 발적, 치유되지 않는 통증, 기존 모반의 변화, 장 또는 방광 습관에서의 변화, 지속성 기침 또는 호흡 곤란, 삼킴 곤란, 애성, 지속성 소화불량 또는 식후 불편감, 지속성, 설명되지 않는 근육 또는 관절통, 지속성, 설명되지 않는 열 또는 야간 발한, 및 설명되지 않는 출혈 또는 타박상을 포함한다. 포유동물이 암을 갖는 것으로 진단하거나 또는 포유동물이 암을 갖는 것으로 확인하는 방법은 1종 이상의 진단 시험을 수행하는 것 (예를 들어, 생검 또는 혈액 샘플에 대해 1종 이상의 진단 시험을 수행하는 것)을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암에 대해 이전에 투여된 치료에 비반응성인 암을 갖는 포유동물, 암을 갖는 것으로 진단된 포유동물, 또는 암을 갖는 것으로 확인된 포유동물일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, T 세포 또는 선천성 면역 세포는 암에 대해 이전에 투여된 치료에 비반응성인 암을 갖는 포유동물, 암을 갖는 것으로 진단된 포유동물, 또는 암을 갖는 것으로 확인된 포유동물로부터 수득된다. 포유동물이 암을 갖는 것으로 진단하거나 또는 포유동물이 암을 갖는 것으로 확인하기 위한 진단 시험은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
감염성 질환
본원에 기재된 임의의 방법에서, 포유동물은 감염성 질환을 가질 수 있다. 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, 포유동물은 감염성 질환을 갖는 것으로서 확인된 바 있거나, 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단된 바 있다. 예를 들어, 감염성 질환은 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 미코박테리움에 의해 유발될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태는 감염성 질환을 갖는 포유동물, 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 포유동물, 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단된 포유동물로부터 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 수득하는 것을 포함한다.
감염성 질환의 비제한적 예는 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증을 포함한다.
포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 진단하거나 또는 포유동물이 암을 갖는 것으로 확인하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 의료 전문가 (예를 들어, 의사, 의사 보조자, 또는 기술자)는 포유동물에서 감염성 질환의 1종 이상의 증상을 관찰함으로써 포유동물에서 감염성 질환을 진단할 수 있다. 감염성 질환의 증상의 비제한적 예는 열, 설사, 피로, 및 근육통을 포함한다. 포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 진단하거나 또는 포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 확인하는 방법은 1종 이상의 진단 시험을 수행하는 것 (예를 들어, 생검 또는 혈액 샘플에 대해 1종 이상의 진단 시험을 수행하는 것)을 추가로 포함할 수 있다. 포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 진단하거나 또는 포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 확인하기 위한 진단 시험은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 면역 세포의 저항성을 증가시키는 방법
또한, (a) T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포) 또는 선천성 면역 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 선천성 면역 세포)를 제공하는 단계, 및 (b) T 세포 또는 선천성 면역 세포를 (예를 들어, NLRP3 활성화제와 접촉되지 않은 T 세포 또는 선천성 면역 세포와 비교하여) 적어도 1종의 면역억제 시토카인 (예를 들어, 본원에 기재된 면역억제 시토카인 중 어느 1종 이상)에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서 (예를 들어, 임의의 배양 배지에서 또는 본원에 기재된 임의의 배양 방법을 사용하여) 배양하는 단계를 포함하는, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. 면역억제 시토카인의 비제한적 예는 IL-10, TGF-β, IL-1Ra, IL-18Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, PGE2, SCF, G-CSF, CSF-1R, M-CSF, GM-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IFN-λ, bFGF, CCL2, CXCL1, CXCL8, CXCL12, CX3CL1, CXCR4, 및 VEGF를 포함한다.
포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포) 또는 선천성 면역 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 선천성 면역 세포)를 수득하기 위한 예시적인 방법은 본원에 기재되어 있다. 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포) 또는 선천성 면역 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 선천성 면역 세포)를 수득하는 추가의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. T 세포 또는 선천성 면역 세포를 배양하는 것은 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 조건, 및 배양 시간을 사용하여 수행될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다.
이들 방법의 일부 예는 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 포유동물에게 다시 (예를 들어, T 세포 또는 선천성 면역 세포가 포유동물로부터 수득되었을 때) 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖거나, 암을 갖는 것으로 확인되거나, 또는 암을 갖는 것으로 진단된 바 있다. T 세포 또는 선천성 면역 세포는 동맥내 주사, 정맥내 주사, 또는 종양내 주사를 사용하여 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. 본원에 기재된 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 임의의 총 수, 또는 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 임의의 투여 파라미터가 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포 또는 선천성 면역 세포는 포유동물에게 다중 용량으로 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 투여 빈도를 사용하여) 투여될 수 있다. T 세포 또는 선천성 면역 세포는 투여 전 본원에 기재된 임의의 예시적인 조성물 내에 제제화될 수 있다.
T 세포의 항종양 활성을 개선시키는 방법
또한, (a) T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 제공하는 단계; 및 (b) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 항종양 활성)을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 또는 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계를 포함하는, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 및/또는 배양 시간 길이가 이들 방법에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다.
T 세포의 항종양 활성의 비제한적 예는 미성숙 세포의 T 세포로의 증가된 분화, T 세포의 증가된 분열 및 증식, 혈액으로부터 조직으로의 T 세포의 증가된 혈관외유출, T 세포가 고형 종양으로 침윤하는 증가된 능력, T 세포의 증가된 활성화, T 세포가 종양 세포를 사멸시키는 증가된 능력, T 세포가 종양 세포를 사멸시키는 다른 면역계의 세포를 동원하는 증가된 능력, 및 T 세포가 종양 세포를 사멸시키는 인자를 활성화하는 증가된 능력을 포함한다. T 세포의 항종양 활성을 시험관내 검출하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미성숙 세포의 T 세포로의 분화는 세포가 T 세포로 분화된 것을 나타내는 세포 내 단백질 (예를 들어, TCR 및 CD3)의 발현 수준을 검출함으로써 검출될 수 있다. T 세포의 혈관외유출 수준을 검출하기 위한 예시적인 검정은, 예를 들어, 트랜스웰 배양 시스템을 사용하는 것을 포함한다. T 세포의 고형 종양 내로의 침윤 수준을 검출하기 위한 예시적인 검정은 문헌 [Ye et al., J. Clin. Immunol. 26:447-456, 2006]에 기재되어 있다. 항종양 면역 활성을 감소시키거나 항종양 면역 활성을 촉진하는 T 세포에 의해 생산된 시토카인 및/또는 림포카인의 수준을 검출하기 위한 예시적인 검정은, 예를 들어, 항종양 면역 활성을 감소시키거나 항종양 면역 활성을 촉진하는 T 세포에 의해 생산된 시토카인 또는 림포카인에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 항체를, 예를 들어, 면역검정 (예를 들어, ELISA)에서 사용하는 것을 포함할 수 있다. 이들 항체는 수많은 판매업체로부터 상업적으로 입수가능하다. T 세포 활성화 수준을 검출하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. T-세포 활성화는 T 세포의 표면 상의 1개 이상의 수용체 (예를 들어, 임의로 CD3 이량체와 회합된 TCR)의, 항원-제시 세포의 표면 상의 1개 이상의 동족 수용체에 의한 결합을 의미한다. 용어 T 세포를 활성화하다는 T 세포의 표면 상의 1개 이상의 인테그린의, 그의 각각의 리간드 (예를 들어, 세포간 부착 분자 (ICAM), 혈관 세포 부착 분자 (VCAM) 또는 피브로넥틴)에 의한 결합, 또는 그의 리간드에의 결합에 의한 T 세포 상의 공동-자극 수용체 (예를 들어, CD28, ICSO, CD40)의 활성화를 포함할 수 있다. 예를 들어 CD28은 CD80 또는 CD86에 의해 활성화되고, ICOS는 ICOS-L에 의해 활성화되고, ICOS는 ICOS-L에 의해 활성화된다. T 세포의 활성화를 검출하는 예시적인 방법은 T 세포 증식, T 세포 표면 상의 활성화 마커의 상향조절, T 세포의 이펙터 세포로의 분화, 세포독성의 유도 또는 시토카인 분비, 및 아폽토시스의 유도를 측정하는 것을 포함한다. T 세포 증식을 검출하기 위한 검정은 상업적으로 입수가능하다. T 세포 표면 상의 활성화 마커, T 세포의 이펙터 세포로의 분화 마커, 세포독성의 유도 마커, 활성화된 T 세포에 의해 분비된 시토카인, 및 아폽토시스의 마커를 검출하기 위한 이러한 방법의 예는, 예를 들어, T 세포 표면 상의 활성화 마커, T 세포의 이펙터 세포로의 분화 마커, 활성화된 T 세포에 의해 분비된 시토카인, 또는 아폽토시스의 마커에 결합하는 1종 이상의 항체를 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 항체는 다양한 상이한 판매업체로부터 상업적으로 입수가능하다.
이들 방법의 일부 예는 T 세포를 포유동물에게 다시 (예를 들어, T 세포가 포유동물로부터 수득되었을 때) 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖거나, 암을 갖는 것으로 확인되거나, 또는 암을 갖는 것으로 진단된 바 있다. T 세포는 동맥내 주사, 정맥내 주사, 또는 종양내 주사를 사용하여 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. 본원에 기재된 T 세포의 임의의 총 수, 또는 T 세포의 임의의 투여 파라미터가 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 포유동물에게 다중 용량으로 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 투여 빈도를 사용하여) 투여될 수 있다. T 세포는 투여 전 본원에 기재된 임의의 예시적인 조성물 내에 제제화될 수 있다.
T-세포 및 선천성 면역 세포
또한, 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포) 및 선천성 면역 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 선천성 면역 세포)가 본원에 제공된다. 예를 들어, 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)가 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 선천성 면역 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 선천성 면역 세포)가 제공된다. 또한, 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생산된 개선된 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 개선된 항종양 활성의 임의의 예시적인 유형)을 갖는 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)가 제공된다.
제약 조성물
또한, 상기 섹션에 기재된 임의의 T 세포 및/또는 선천성 면역 세포를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 제약 조성물은 약 1 x 105개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 8 x 106개 세포/mL, 약 6 x 106개 세포/mL 약 4 x 106개 세포/mL, 약 2 x 106개 세포/mL, 약 1 x 106개 세포/mL, 약 0.5 x 106개 세포/mL, 또는 약 0.25 x 106개 세포/mL; 약 0.25 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 8 x 106개 세포/mL, 약 6 x 106개 세포/mL, 약 4 x 106개 세포/mL, 약 2 x 106개 세포/mL, 약 1 x 106개 세포/mL, 또는 약 0.5 x 106개 세포/mL; 약 0.5 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 8 x 106개 세포/mL, 약 6 x 106개 세포/mL, 약 4 x 106개 세포/mL, 약 2 x 106개 세포/mL, 또는 약 1 x 106개 세포/mL; 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 8 x 106개 세포/mL, 약 6 x 106개 세포/mL, 약 4 x 106개 세포/mL, 또는 약 2 x 106개 세포/mL; 약 2 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 8 x 106개 세포/mL, 약 6 x 106개 세포/mL, 또는 약 4 x 106개 세포/mL; 약 4 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 약 8 x 106개 세포/mL, 또는 약 6 x 106개 세포/mL; 약 6 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL, 또는 약 8 x 106개 세포/mL; 약 8 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 약 12 x 106개 세포/mL, 또는 약 10 x 106개 세포/mL; 약 10 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 약 14 x 106개 세포/mL, 또는 약 12 x 106개 세포/mL; 약 12 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 약 16 x 106개 세포/mL, 또는 약 14 x 106개 세포/mL; 약 14 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 약 18 x 106개 세포/mL, 또는 약 16 x 106개 세포/mL; 약 16 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 약 20 x 106개 세포/mL, 또는 약 18 x 106개 세포/mL; 약 18 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 약 22 x 106개 세포/mL, 또는 약 20 x 106개 세포/mL; 약 20 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 약 24 x 106개 세포/mL, 또는 약 22 x 106개 세포/mL; 약 22 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 약 26 x 106개 세포/mL, 또는 약 24 x 106개 세포/mL; 약 24 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 28 x 106개 세포/mL, 또는 약 26 x 106개 세포/mL; 약 26 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL 또는 약 28 x 106개 세포/mL; 또는 약 28 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL의 총 세포 밀도를 가질 수 있다.
제약 조성물의 각각의 용량은 약 0.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 약 4 x 106개 세포/kg, 약 3.5 x 106개 세포/kg, 약 3 x 106개 세포/kg, 약 2.5 x 106개 세포/kg, 약 2 x 106개 세포/kg, 약 1.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 1 x 106개 세포/kg; 약 1 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 약 4 x 106개 세포/kg, 약 3.5 x 106개 세포/kg, 약 3 x 106개 세포/kg, 약 2.5 x 106개 세포/kg, 약 2 x 106개 세포/kg, 또는 약 1.5 x 106개 세포/kg; 1.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 약 4 x 106개 세포/kg, 약 3.5 x 106개 세포/kg, 약 3 x 106개 세포/kg, 약 2.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 2 x 106개 세포/kg; 약 2 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 약 4 x 106개 세포/kg, 약 3.5 x 106개 세포/kg, 약 3 x 106개 세포/kg, 또는 약 2.5 x 106개 세포/kg; 2.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 약 4 x 106개 세포/kg, 약 3.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 3 x 106개 세포/kg; 약 3 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 약 4 x 106개 세포/kg, 또는 약 3.5 x 106개 세포/kg; 3.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 약 4.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 4 x 106개 세포/kg; 약 4 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 약 5 x 106개 세포/kg, 또는 약 4.5 x 106개 세포/kg; 4.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 약 5.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 5 x 106개 세포/kg; 약 5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 약 6 x 106개 세포/kg, 또는 약 5.5 x 106개 세포/kg; 약 5.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 약 6.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 6 x 106개 세포/kg; 약 6 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 약 7 x 106개 세포/kg, 또는 약 6.5 x 106개 세포/kg; 약 6.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 약 7.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 7 x 106개 세포/kg; 약 7 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 약 8 x 106개 세포/kg, 또는 약 7.5 x 106개 세포/kg; 약 7.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 약 8.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 8 x 106개 세포/kg; 약 8 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 약 9 x 106개 세포/kg, 또는 약 8.5 x 106개 세포/kg; 약 8.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 약 9.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 9 x 106개 세포/kg; 약 9 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 약 10 x 106개 세포/kg, 또는 약 9.5 x 106개 세포/kg; 약 9.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 약 10.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 10 x 106개 세포/kg; 약 10 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 약 11 x 106개 세포/kg, 또는 약 10.5 x 106개 세포/kg; 약 10.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 약 11.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 11 x 106개 세포/kg; 약 11 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 약 12 x 106개 세포/kg, 또는 약 11.5 x 106개 세포/kg; 약 11.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 약 12.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 12 x 106개 세포/kg; 약 12 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 약 13.0 x 106개 세포/kg, 또는 약 12.5 x 106개 세포/kg; 약 12.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 약 13.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 13.0 x 106개 세포/kg; 약 13 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 약 14.0 x 106개 세포/kg, 또는 약 13.5 x 106개 세포/kg; 약 13.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg, 약 14.5 x 106개 세포/kg, 또는 약 14.0 x 106개 세포/kg; 약 14 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg 또는 약 14.5 x 106개 세포/kg; 또는 약 14.5 x 106개 세포/kg 내지 약 15 x 106개 세포/kg일 수 있다.
제약 조성물의 각각의 용량은 약 5 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 약 140 x 106개 세포, 약 120 x 106개 세포, 약 100 x 106개 세포, 약 80 x 106개 세포, 약 60 x 106개 세포, 약 40 x 106개 세포, 또는 약 20 x 106개 세포; 약 20 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 20 x 106개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 약 140 x 106개 세포, 약 120 x 106개 세포, 약 100 x 106개 세포, 약 80 x 106개 세포, 약 60 x 106개 세포, 또는 약 40 x 106개 세포; 약 40 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 약 140 x 106개 세포, 약 120 x 106개 세포, 약 100 x 106개 세포, 약 80 x 106개 세포, 또는 약 60 x 106개 세포; 약 60 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 약 140 x 106개 세포, 약 120 x 106개 세포, 약 100 x 106개 세포, 또는 약 80 x 106개 세포; 약 80 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 약 140 x 106개 세포, 약 120 x 106개 세포, 또는 약 100 x 106개 세포; 약 100 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 약 140 x 106개 세포, 또는 약 120 x 106개 세포; 약 120 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 약 160 x 106개 세포, 또는 약 140 x 106개 세포; 약 140 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 180 x 106개 세포, 또는 약 160 x 106개 세포; 약 160 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 또는 약 180 x 106개 세포; 약 180 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 또는 약 200 x 106개 세포; 약 200 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 또는 약 250 x 106개 세포; 약 250 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 또는 약 300 x 106개 세포; 약 300 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 또는 약 350 x 106개 세포; 약 350 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 또는 약 400 x 106개 세포; 약 400 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 약 600 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 또는 약 450 x 106개 세포; 약 500 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 약 700 x 106개 세포, 또는 약 600 x 106개 세포; 약 600 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 약 800 x 106개 세포, 또는 약 700 x 106개 세포; 약 700 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 약 900 x 106개 세포, 또는 약 800 x 106개 세포; 약 800 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 약 1 x 109개 세포, 또는 약 900 x 106개 세포; 약 900 x 106개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 약 1.1 x 109개 세포, 또는 약 1 x 109개 세포; 약 1 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 약 1.2 x 109개 세포, 또는 약 1.1 x 109개 세포; 약 1.1 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 약 1.3 x 109개 세포, 또는 약 1.2 x 109개 세포; 약 1.2 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 약 1.4 x 109개 세포, 또는 약 1.3 x 109개 세포; 약 1.3 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 약 1.5 x 109개 세포, 또는 약 1.4 x 109개 세포; 약 1.4 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 약 1.6 x 109개 세포, 또는 약 1.5 x 109개 세포; 약 1.5 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 약 1.7 x 109개 세포, 또는 약 1.6 x 109개 세포; 약 1.6 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 약 1.8 x 109개 세포, 또는 약 1.7 x 109개 세포; 약 1.7 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 약 1.9 x 109개 세포, 또는 약 1.8 x 109개 세포; 약 1.8 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포, 약 2 x 109개 세포, 또는 약 1.9 x 109개 세포; 약 1.9 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포 또는 약 2 x 109개 세포; 또는 약 2.0 x 109개 세포 내지 약 2.25 x 109개 세포를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 제약 조성물의 단일 용량은 약 2.5 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 약 40 mL, 약 30 mL, 약 25 mL, 약 20 mL, 약 15 mL, 약 10 mL, 또는 약 5 mL; 약 5.0 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 약 40 mL, 약 30 mL, 약 25 mL, 약 20 mL, 약 15 mL, 또는 약 10 mL; 약 10 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 약 40 mL, 약 30 mL, 약 25 mL, 약 20 mL, 또는 약 15 mL; 약 15 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 약 40 mL, 약 30 mL, 약 25 mL, 또는 약 20 mL; 약 20 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 약 40 mL, 약 30 mL, 또는 약 25 mL; 약 25 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 약 40 mL, 또는 약 30 mL; 약 30 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 약 50 mL, 또는 약 40 mL; 약 40 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 약 60 mL, 또는 약 50 mL; 약 50 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 약 70 mL, 또는 약 60 mL; 약 60 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 약 80 mL, 또는 약 70 mL; 약 70 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 약 90 mL, 또는 약 80 mL; 약 80 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 약 100 mL, 또는 약 90 mL; 약 90 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 약 110 mL, 또는 약 100 mL; 약 100 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 약 120 mL, 또는 약 110 mL; 약 110 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 약 130 mL, 또는 약 120 mL; 약 120 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 약 140 mL, 또는 약 130 mL; 약 130 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 약 150 mL, 또는 약 140 mL; 약 140 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 약 160 mL, 또는 약 150 mL; 약 150 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 약 170 mL, 또는 약 160 mL; 약 160 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 약 180 mL, 또는 약 170 mL; 약 170 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 약 190 mL, 또는 약 180 mL; 약 180 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 약 200 mL, 또는 약 190 mL; 약 190 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 약 250 mL, 또는 약 200 mL; 약 200 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 약 300 mL, 또는 약 250 mL; 약 250 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 약 350 mL, 또는 약 300 mL; 약 300 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 약 400 mL, 또는 약 350 mL; 약 350 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 약 450 mL, 또는 약 400 mL; 약 400 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 약 500 mL, 또는 약 450 mL; 약 450 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 약 550 mL, 또는 약 500 mL; 약 500 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 약 600 mL, 또는 약 550 mL; 약 550 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 약 650 mL, 또는 약 600 mL; 약 600 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 약 700 mL, 또는 약 650 mL; 약 650 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 약 750 mL, 또는 약 700 mL; 약 700 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 약 800 mL, 또는 약 750 mL; 약 750 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 약 850 mL, 또는 약 800 mL; 약 800 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 약 900 mL, 또는 약 850 mL; 약 850 mL 내지 약 1 L, 약 950 mL, 또는 약 900 mL; 약 900 mL 내지 약 1 L 또는 약 950 mL; 또는 약 950 mL 내지 약 1 L의 부피를 가질 수 있다.
본원에 기재된 제약 조성물의 일부 실시양태는 추가로 멸균 등장성 유체 (예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 임의의 등장성 용액, 예를 들어, 멸균 염수, 멸균 포스페이트 완충 용액, 멸균 링거 락테이트, 멸균 5% 알부민 용액, 멸균 D5W 용액, 멸균 D5W / 1/4 NS 용액, 멸균 ½ NS 용액, 멸균 25% 알부민 용액, 멸균 5% NaHCO3, 멸균 8.4% NaHCO3 용액, 멸균 3% NaCl 용액 및 멸균 5% NaCl 용액)를 포함한다. 제약 조성물의 일부 예는 추가로, 포유동물 혈청 알부민 (예를 들어, 인간, 마우스, 토끼, 원숭이, 침팬지, 또는 유인원 혈청 알부민)을 약 1 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 15 mg/mL, 약 10 mg/mL, 또는 약 5 mg/mL; 약 5 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 15 mg/mL, 또는 약 10 mg/mL; 약 10 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 20 mg/mL, 또는 약 15 mg/mL; 약 15 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 25 mg/mL, 또는 약 20 mg/mL; 약 20 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 30 mg/mL, 또는 약 25 mg/mL; 약 25 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 30 mg/mL; 약 30 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 40 mg/mL, 또는 약 35 mg/mL; 약 35 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 45 mg/mL, 또는 약 40 mg/mL; 약 40 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 50 mg/mL, 또는 약 45 mg/mL; 약 45 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 55 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL; 약 50 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 60 mg/mL, 또는 약 55 mg/mL; 약 55 mg/mL 내지 약 70 mg/mL, 약 65 mg/mL, 또는 약 60 mg/mL; 약 60 mg/mL 내지 약 70 mg/mL 또는 약 65 mg/mL; 또는 약 65 ng/mL 내지 약 70 mg/mL의 최종 농도로 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인지할 수 있는 바와 같이, 혈청 알부민은 제약 작용제가 투여될 포유동물에 기초하여 선택될 것이다 (예를 들어, 인간은 인간 혈청 알부민을 포함하는 제약 조성물이 투여될 것임).
제약 조성물의 일부 실시양태는 하기: (i) 1종 이상의 항진균제 (예를 들어, 비포나졸, 부토코나졸, 클로트리마졸, 에코나졸, 케토코나졸, 룰리코나졸, 미코나졸, 오모코나졸, 옥시코나졸, 세르타코나졸, 술코나졸, 티오코나졸, 알바코나졸, 에피나코나졸, 에폭시코나졸, 플루코나졸, 이사부코나졸, 이트라코나졸, 포사코나졸, 프로피코나졸, 라부코나졸, 테르코나졸, 보리코나졸, 아바펀진, 아모롤핀, 부테나핀, 나프티핀, 테르비나핀, 아니둘라펀진, 카스포펀진, 미카펀진, 벤조산, 시클로피록스, 플루시토신, 5-플루오로시토신, 그리세오풀빈, 할로프로진, 톨나페이트, 운데실렌산, 및 페루 발삼의 군으로부터 선택됨) 및 (ii) 1종 이상의 항생제 (예를 들어, 아미카신, 겐타미신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸미신, 토브라마이신, 파로모마이신, 스트렙토마이신, 스펙티노마이신, 겔다나마이신, 헤르비마이신, 리팍시민, 로라카르베프, 에르타페넴, 도리페넴, 이미페넴, 실라스타틴, 메로페넴, 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔로신, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 세프타롤린 포사밀, 세프토비프롤, 테이코플라닌, 반코마이신, 텔라반신, 달바반신, 오리타반신, 클린다마이신, 린코마이신, 답토마이신, 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 록시트로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신, 스피라마이신, 아즈트레오남, 푸라졸리돈, 니트로푸란토인, 리네졸리드, 포시졸리드, 라데졸리드, 토레졸리드, 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 G, 페니실린 V, 피페라실린, 페니실린 G, 테모실린, 티카르실린, 아목시실린, 클라불라네이트, 암피실린, 술박탐, 피페라실린, 타조박탐, 티카르실린, 클라불라네이트, 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B, 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 게미플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕스산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파르플록사신, 테마플록사신, 마페니드, 술프아세트아미드, 술파디아진, 은 술파디아진, 술파디메톡신, 술파메톡사졸, 술파닐이미드, 술파살라진, 술프이속사졸, 트리메토프림-술파메톡사졸, 술폰아미드크리소이딘, 데메클로시클린, 미노시클린, 옥시테트라시클린, 테트라시클린, 클로파지민, 답손, 카프레오마이신, 시클로세린, 에탐부톨, 에티온아미드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리팜피신, 리파부틴, 리파펜틴, 스트렙토마이신, 아르스페나민, 클로람페니콜, 포스포마이신, 푸시드산, 메트로니다졸, 뮤피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴, 달포프리스틴, 티암페니콜, 티게시클린, 티니다졸, 트리메토프림, 및 테익소박틴의 군으로부터 선택됨) 중 하나 또는 둘 다를 약 1.0 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 약 35 μg/mL, 약 30 μg/mL, 약 25 μg/mL, 약 20 μg/mL, 약 15 μg/mL, 약 10 μg/mL, 또는 약 5.0 μg/mL; 약 5.0 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 약 35 μg/mL, 약 30 μg/mL, 약 25 μg/mL, 약 20 μg/mL, 약 15 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL; 약 10 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 약 35 μg/mL, 약 30 μg/mL, 약 25 μg/mL, 약 20 μg/mL, 또는 약 15 μg/mL; 약 15 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 약 35 μg/mL, 약 30 μg/mL, 약 25 μg/mL, 또는 약 20 μg/mL; 약 20 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 약 35 μg/mL, 약 30 μg/mL, 또는 약 25 μg/mL; 약 25 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 약 35 μg/mL, 또는 약 30 μg/mL; 약 30 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 약 40 μg/mL, 또는 약 35 μg/mL; 약 35 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 약 45 μg/mL, 또는 약 40 μg/mL; 약 40 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 약 50 μg/mL, 또는 약 45 μg/mL; 약 45 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 약 55 μg/mL, 또는 약 50 μg/mL, 약 50 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 약 60 μg/mL, 또는 약 55 μg/mL; 약 55 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 약 65 μg/mL, 또는 약 60 μg/mL; 약 60 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 약 70 μg/mL, 또는 약 65 μg/mL; 약 65 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 약 75 μg/mL, 또는 약 70 μg/mL; 약 70 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 약 80 μg/mL, 또는 약 75 μg/mL; 약 75 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 약 85 μg/mL, 또는 약 80 μg/mL; 약 80 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 약 90 μg/mL, 또는 약 85 μg/mL; 약 85 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 약 95 μg/mL, 또는 약 90 μg/mL; 약 90 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 약 100 μg/mL, 또는 약 95 μg/mL; 약 95 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 약 105 μg/mL, 또는 약 100 μg/mL; 약 100 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 약 110 μg/mL, 또는 약 105 μg/mL; 약 105 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 약 115 μg/mL, 또는 약 110 μg/mL; 약 110 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 약 120 μg/mL, 또는 약 115 μg/mL; 약 115 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 약 125 μg/mL, 또는 약 120 μg/mL; 약 120 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 약 130 μg/mL, 또는 약 125 μg/mL; 약 125 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 약 135 μg/mL, 또는 약 130 μg/mL; 약 130 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 약 140 μg/mL, 또는 약 135 μg/mL; 약 135 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 약 145 μg/mL, 또는 약 140 μg/mL; 약 140 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 약 150 μg/mL, 또는 약 145 μg/mL; 약 145 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 약 155 μg/mL, 또는 약 150 μg/mL; 약 150 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 약 160 μg/mL, 또는 약 155 μg/mL; 약 155 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 약 165 μg/mL, 또는 약 160 μg/mL; 약 160 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 약 170 μg/mL, 또는 약 165 μg/mL; 약 165 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 약 175 μg/mL, 또는 약 170 μg/mL; 약 170 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 약 180 μg/mL, 또는 약 175 μg/mL; 약 175 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 약 185 μg/mL, 또는 약 180 μg/mL; 약 180 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 약 190 μg/mL, 또는 약 185 μg/mL; 약 185 μg/mL 내지 약 200 μg/mL, 약 195 μg/mL, 또는 약 190 μg/mL; 또는 약 195 μg/mL 내지 약 200 μg/L의 각각의 항진균제 및/또는 각각의 항생제의 최종 농도로 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 정맥내로, 동맥내 또는 종양내 투여를 위해 제제화된다.
키트
또한, 본원에 기재된 임의의 제약 조성물의 하나 이상의 용량을 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 사전-충전된 멸균 및 생체적합성 백 내에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포 또는 선천성 면역 세포)에 대해 유의한 양의 전단 응력을 유발하지 않을 게이지를 갖는 바늘이 달린, 바늘을 통해 유동되는 사전-충전된 멸균 시린지 내에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 멸균 및 생체적합성 바이알 내에 제공된다.
키트는 또한 본원에 기재된 임의의 방법을 수행하는 것에 대한 지침서를 제공할 수 있다.
암을 갖는 포유동물에서 항종양 면역을 증가시키는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 기술을 사용하여 수행됨); (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 또는 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 1종 이상의 항종양 활성의 개선)을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하여, 포유동물에서 항종양 면역의 증가를 발생시키는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 면역을 증가시키는 방법이 제공된다. 본원에 기재된 포유동물로부터 T 세포를 배양 또는 수거 (단리)하는 임의의 방법이 이들 방법에 사용될 수 있다. 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 것은, 예를 들어, 포유동물로부터 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물을 수득하는 것을 포함할 수 있다. 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다. T 세포는 정맥내 투여, 동맥내 투여 또는 종양내 주사를 통해 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 항종양 면역을 증가시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 NLRP3 활성화제에 대해 본원에 기재된 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된다. 이들 방법의 일부 실시양태는 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 방법을 사용하여) 포유동물을 암을 갖는 것으로 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 증가된 항종양 면역은, 예를 들어, 포유동물에서의 미성숙 세포의 T 세포로의 증가된 분화, 포유동물에서의 T 세포의 증가된 분열 및 증식, 포유동물에서의 혈액으로부터 조직으로의 T 세포의 증가된 혈관외유출, 포유동물에서의 T 세포가 고형 종양으로 침윤하는 증가된 능력, 포유동물에서의 T 세포의 증가된 활성화, 포유동물에서의 Treg 세포가 이펙터 T 세포의 유도 및/또는 증식을 감소시키는 능력의 감소, 포유동물에서의 항종양 면역 활성을 촉진하는 T 세포에 의한 시토카인 및/또는 림포카인 (예를 들어, GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, 및 IL-21)의 증가된 생산, 및 포유동물에서의 항종양 활성을 감소시키는 T 세포에 의한 시토카인 및/또는 림포카인 (예를 들어, IL-10 및 TGF-β)의 생산의 감소 중 1종 이상일 수 있다. 포유동물에서 T 세포의 항종양 활성을 검출하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미성숙 세포의 T 세포로의 분화는 포유동물에서 시간의 경과에 따라 (예를 들어, FACS 분석에 의해, 예를 들어, 포유동물로부터의 혈액 샘플에서 세포를 분석함으로써) 미성숙 세포 및 T 세포의 비를 검출하는 것에 의해 검출될 수 있다. 포유동물에서의 T 세포의 혈관외유출의 수준을 검출하기 위한 예시적인 검정은, 예를 들어, 포유동물로부터의 조직 샘플에서 T 세포의 수준을 검출하는 것 또는 혈류로부터 조직으로의 순환 및 혈관외유출을 가능하게 하는 T 세포의 표면 상의 단백질의 발현을 검출하는 것을 포함한다. T 세포의 고형 종양 내로의 침윤 수준을 검출하기 위한 예시적인 검정은 문헌 [Ye et al., J. Clin. Immunol. 26:447-456, 2006]에 기재되어 있다. 포유동물에서의 T 세포의 고형 종양 내로의 침윤 수준은 치료 전 포유동물로부터의 종양 생검 샘플 및 치료 후 포유동물로부터의 종양 생검 샘플을 검사함으로써 결정될 수 있다. 이러한 방법은 종양 생검 샘플에서 T 세포의 존재를 결정하는 현미경검사 기술을 포함할 수 있다. 항종양 면역 활성을 감소시키거나 항종양 면역 활성을 촉진하는 T 세포에 의해 생산된 시토카인 및/또는 림포카인의 수준을 검출하기 위한 예시적인 검정은, 예를 들어, 항종양 면역 활성을 감소시키거나 항종양 면역 활성을 촉진하는 T 세포에 의해 생산된 시토카인 또는 림포카인에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 항체를, 예를 들어, 샘플로서 포유동물로부터의 혈액 또는 혈청 샘플을 사용하여 수행되는 면역검정 (예를 들어, ELISA)에서 사용하는 것을 포함할 수 있다. 이들 항체는 수많은 판매업체로부터 상업적으로 입수가능하다. T 세포 활성화 수준을 검출하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. T-세포 활성화는 T 세포의 표면 상의 1개 이상의 수용체 (예를 들어, 임의로 CD3 이량체와 회합된 TCR)의, 항원-제시 세포의 표면 상의 1개 이상의 동족 수용체에 의한 결합을 의미한다. 용어 T 세포를 활성화하다는 T 세포의 표면 상의 1개 이상의 인테그린의, 그의 각각의 리간드 (예를 들어, 세포간 부착 분자 (ICAM), 혈관 세포 부착 분자 (VCAM) 또는 피브로넥틴)에 의한 결합, 또는 그의 리간드에의 결합에 의한 T 세포 상의 공동-자극 수용체 (예를 들어, CD28, ICSO, CD40)의 활성화를 포함할 수 있다. 예를 들어 CD28은 CD80 또는 CD86에 의해 활성화되고, ICOS는 ICOS-L에 의해 활성화되고, ICOS는 ICOS-L에 의해 활성화된다. T 세포의 활성화를 검출하는 예시적인 방법은 T 세포 증식, T 세포 표면 상의 활성화 마커의 상향조절, T 세포의 이펙터 세포로의 분화, 세포독성의 유도 또는 시토카인 분비, 및 아폽토시스의 유도를 측정하는 것을 포함한다. 포유동물로부터의 T 세포를 포함하는 샘플에서 T 세포 증식을 검출하기 위한 검정은 상업적으로 입수가능하다. T 세포 표면 상의 활성화 마커, T 세포의 이펙터 세포로의 분화 마커, 세포독성의 유도 마커, 활성화된 T 세포에 의해 분비된 시토카인, 및 아폽토시스의 마커를 검출하기 위한 이러한 방법의 예는, 예를 들어, T 세포 표면 상의 활성화 마커, T 세포의 이펙터 세포로의 분화 마커, 활성화된 T 세포에 의해 분비된 시토카인, 또는 아폽토시스의 마커에 결합하는 1종 이상의 항체를 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 항체는 다양한 상이한 판매업체로부터 상업적으로 입수가능하다.
일부 예에서, 포유동물에서의 항종양 활성의 증가는 하나 이상의 고형 종양의 크기의 감소, 포유동물에서의 암의 중증도 또는 증상의 수의 감소, 포유동물에서의 암의 완화 시간의 증가, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간의 증가, 및 전이 발생 또는 추가의 전이 발생의 위험의 감소를 통해 간접적으로 관찰될 수 있다.
포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법
(a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물, 예를 들어, 인간)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 1종 이상의 항종양 활성)을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하여 포유동물에서 암의 완화 시간의 증가를 발생시키는 단계를 포함하는, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 배양 방법을 사용하여 배양될 수 있다. 본원에 기재된 T 세포의 임의의 용량이 이들 방법에서 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는, 예를 들어, 동맥내 투여, 정맥내 투여, 또는 종양내 주사에 의해 투여될 수 있다. T 세포는 1주 1회, 1주 2회, 1주 3회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월 1회, 1개월 2회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회, 또는 12개월마다 1회 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물, 예를 들어, 인간)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 (예를 들어, 본원에 기재된 NLRP3 활성화제의 임의의 투여량으로) 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법이 제공된다. 본원에 기재된 NLRP3 활성화제의 임의의 용량이 이들 방법에서 포유동물에게 투여될 수 있다. 일부 예에서, NLRP3 활성화제는 경구 투여, 복강내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여 또는 정맥내 투여에 의해 투여된다. NLRP3 활성화제는 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 1일 4회, 1주 1회, 1주 2회, 1주 3회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월 1회, 1개월 2회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회, 또는 12개월마다 1회 투여될 수 있다. 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된 바 있다. 일부 실시양태는 포유동물에서 암을 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 완화 시간의 증가는 대조군 포유동물 (예를 들어, 동일하거나 유사한 유형의 암을 갖는 포유동물 또는 포유동물 집단)과 비교된다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 아직 완화 상태가 아니다. 일부 예에서, 포유동물은 이미 완화 상태이다. 일부 예에서, 완화 상태의 증가는 통계적으로 유의한 증가이다. 일부 예에서, 완화 시간의 증가는 약 1일 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 약 1개월, 또는 약 2주; 약 2주 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 또는 약 1개월; 약 1개월 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 또는 약 2개월; 약 2개월 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 또는 약 4개월; 약 4개월 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 또는 약 6개월; 약 6개월 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 또는 약 8개월; 약 8개월 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 또는 약 10개월; 약 10개월 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 또는 약 1년; 약 1년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 또는 약 1.5년; 약 1.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년; 약 2년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 또는 약 2.5년; 약 2.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 또는 약 3년; 약 3년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 또는 약 3.5년; 약 3.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 또는 약 4년; 약 4년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 또는 약 4.5년; 약 4.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 또는 약 5년; 약 5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 또는 약 5.5년; 약 5.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 또는 약 6년; 약 6년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 또는 약 6.5년; 약 6.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 또는 약 7년; 약 7년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 또는 약 7.5년; 약 7.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 또는 약 8년; 약 8년 내지 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 또는 약 8.5년; 약 8.5년 내지 약 10년, 약 9.5년, 또는 약 9년; 약 9년 내지 약 10년 또는 약 9.5년; 또는 약 9.5년 내지 약 10년이다 (예를 들어, 대조군 포유동물, 예를 들어, 동일하거나 유사한 유형의 암을 갖는 포유동물 또는 포유동물 집단과 비교).
포유동물이 완화 상태인지 여부를 결정하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 포유동물의 신체의 PET 스캔, MRI, CT 스캔, 초음파 및 X선이 수득될 수 있고, 이러한 데이터는 포유동물이 완화 상태인지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 예에서, 포유동물이 여전히 완화 상태인지 여부를 결정하기 위해, 포유동물로부터의 샘플 (예를 들어, 혈액 샘플 또는 생검)에 대해 진단 시험이 수행될 수 있다.
암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암) 또는 감염성 질환 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 감염성 질환)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 또는 항감염성 질환 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 항종양 활성 또는 항감염성 질환 활성)을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 또는 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 또는 항감염성 질환 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법이 제공된다. 본원에 기재된 포유동물로부터 T 세포를 배양 또는 수거 (단리)하는 임의의 방법이 이들 방법에 사용될 수 있다. 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 것은, 예를 들어, 포유동물로부터 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물을 수득하는 것을 포함할 수 있다. 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다. T 세포는 정맥내 투여, 동맥내 투여 또는 종양내 주사를 통해 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암) 또는 감염성 질환 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 감염성 질환)을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 NLRP3 활성화제에 대해 본원에 기재된 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단된다. 이들 방법의 일부 실시양태는 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 방법을 사용하여) 포유동물을 암 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 암의 치료는 포유동물에서 암의 중증도의 감소, 및/또는 포유동물에서 암의 1종 이상의 증상의 수 및/또는 빈도의 감소 중 1종 이상을 발생시킨다. 예를 들어, 암의 중증도의 감소는 (예를 들어, 치료 전 하나 이상의 종양의 크기와 비교하여) 포유동물에서 하나 이상의 고형 종양의 크기의 감소를 포함할 수 있다. 포유동물에서 암의 중증도의 감소는 (예를 들어, 치료 전 하나 이상의 고형 종양의 성장 속도와 비교하여) 시간의 경과에 따른 포유동물에서의 하나 이상의 고형 종양의 성장 속도의 감소를 포함할 수 있다. 암의 중증도의 감소는 또한 (예를 들어, 유사한 암을 가졌지만 상이한 치료를 받은 포유동물에서의 완화의 평균 길이와 비교하여) 포유동물에서의 증가된 암 완화 시간에 의해 나타내어질 수 있다. 암의 중증도의 감소는 또한, 예를 들어, (예를 들어, 유사한 암을 갖는 포유동물 집단과 비교하여) 암을 갖는 포유동물에서 전이의 발생 속도 또는 추가의 전이의 발생 속도의 감소를 의미할 수 있다. 암의 중증도의 감소는, 예를 들어, (예를 들어, 유사한 암을 갖는 포유동물 집단과 비교하여) 암을 갖는 포유동물의 생존 시간의 증가일 수 있다. 암의 중증도의 감소는, 예를 들어, 암을 갖는 포유동물의 개선된 예후를 발생시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 감염성 질환의 치료는 포유동물에서 감염성 질환의 중증도의 감소, 및/또는 포유동물에서 감염성 질환의 1종 이상의 증상 (예를 들어, 본원에 기재된 감염성 질환의 임의의 증상)의 수 및/또는 빈도의 감소 중 1종 이상을 발생시킨다. 예를 들어, 감염성 질환의 중증도의 감소는 (예를 들어, 치료 전 포유동물 또는 치료 전 포유동물로부터 수득된 포유동물로부터의 샘플 내 병원체의 역가와 비교하여) 포유동물 또는 포유동물로부터의 샘플 내 병원체의 역가의 감소를 포함할 수 있다. 포유동물에서 감염성 질환의 중증도의 감소는 (예를 들어, 치료 전 병원체의 번식 속도와 비교하여) 시간의 경과에 따른 포유동물에서의 병원체의 번식 속도의 감소를 포함할 수 있다.
암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법
(a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물, 예를 들어, 인간)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 1종 이상의 항종양 활성)을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계 (그에 의해 암을 갖는 포유동물의 생존 시간의 증가를 발생시키는 단계)를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 배양 방법을 사용하여 배양될 수 있다. 본원에 기재된 T 세포의 임의의 용량이 이들 방법에서 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는, 예를 들어, 동맥내 투여, 정맥내 투여, 또는 종양내 주사에 의해 투여될 수 있다. T 세포는 1주 1회, 1주 2회, 1주 3회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월 1회, 1개월 2회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회, 또는 12개월마다 1회 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물, 예를 들어, 인간)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 (예를 들어, 본원에 기재된 NLRP3 활성화제의 임의의 투여량으로) 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법이 제공된다. 본원에 기재된 NLRP3 활성화제의 임의의 용량이 이들 방법에서 포유동물에게 투여될 수 있다. 일부 예에서, NLRP3 활성화제는 경구 투여, 복강내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여 또는 정맥내 투여에 의해 투여된다. NLRP3 활성화제는 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 1일 4회, 1주 1회, 1주 2회, 1주 3회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월 1회, 1개월 2회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회, 또는 12개월마다 1회 투여될 수 있다. 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된 바 있다. 일부 실시양태는 포유동물에서 암을 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 완화 시간의 증가는 대조군 포유동물 (예를 들어, 동일하거나 유사한 유형의 암을 갖는 포유동물 또는 포유동물 집단)과 비교된다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 초기 병기의 암 (예를 들어, 1기 또는 2기)을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 후기 병기의 암 (예를 들어, 3기 또는 4기)을 가질 수 있다. 일부 예에서, 완화 시간의 증가는 통계적으로 유의한 증가이다. 일부 예에서, 생존 시간의 증가는 약 1일 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 약 1개월, 또는 약 2주; 약 2주 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 또는 약 1개월; 약 1개월 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 또는 약 2개월; 약 2개월 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 또는 약 4개월; 약 4개월 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 또는 약 6개월; 약 6개월 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 또는 약 8개월; 약 8개월 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 또는 약 10개월; 약 10개월 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 또는 약 1년; 약 1년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 또는 약 1.5년; 약 1.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 또는 약 2년; 약 2년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 또는 약 2.5년; 약 2.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 또는 약 3년; 약 3년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 또는 약 3.5년; 약 3.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 또는 약 4년; 약 4년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 또는 약 4.5년; 약 4.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 또는 약 5년; 약 5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 또는 약 5.5년; 약 5.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 또는 약 6년; 약 6년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 또는 약 6.5년; 약 6.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 또는 약 7년, 약 7년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 또는 약 7.5년; 약 7.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 또는 약 8년; 약 8년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 또는 약 8.5년; 약 8.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 약 9.5년, 또는 약 9년; 약 9년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 약 10년, 또는 약 9.5년; 약 9.5년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 약 12년, 또는 약 10년; 약 10년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 약 14년, 또는 약 12년; 약 12년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 약 16년, 또는 약 14년; 약 14년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 약 18년, 또는 약 16년; 약 16년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 약 20년, 또는 약 18년; 약 18년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 약 22년, 또는 약 20년; 약 20년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 약 24년, 또는 약 22년; 약 22년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 약 26년, 또는 약 24년; 약 24년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 약 28년, 또는 약 26년; 약 26년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 약 30년, 또는 약 28년; 약 28년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 약 32년, 또는 약 30년; 약 30년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 약 34년, 또는 약 32년; 약 32년 내지 약 40년, 약 38년, 약 36년, 또는 약 34년; 약 34년 내지 약 40년, 약 38년, 또는 약 36년; 약 36년 내지 약 40년 또는 약 38년; 또는 약 38년 내지 약 40년이다 (예를 들어, 대조군 포유동물, 예를 들어, 동일하거나 유사한 유형의 암을 갖는 포유동물 또는 포유동물 집단과 비교).
암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암) 및 고형 종양을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여) T 세포를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 및 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법이 제공된다. 본원에 기재된 포유동물로부터 T 세포를 배양 또는 수거 (단리)하는 임의의 방법이 이들 방법에 사용될 수 있다. 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 것은, 예를 들어, 포유동물로부터 혈액 샘플 또는 분리반출술 생성물을 수득하는 것을 포함할 수 있다. 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다. T 세포는 정맥내 투여, 동맥내 투여 또는 종양내 주사를 통해 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암) 및 고형 종양을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 NLRP3 활성화제에 대해 본원에 기재된 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된다. 이들 방법의 일부 실시양태는 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 방법을 사용하여) 포유동물을 암을 갖는 것으로 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
이들 방법의 일부 예는 포유동물에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 고형 종양의 크기의 감소를 발생시킨다. 일부 예에서 1개 이상의 고형 종양 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 고형 종양)의 크기의 감소는 약 1% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 약 14%, 약 12%, 약 10%, 약 8%, 약 6%, 약 4%, 또는 약 2%; 약 2% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 약 14%, 약 12%, 약 10%, 약 8%, 약 6%, 또는 약 4%; 약 4% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 약 14%, 약 12%, 약 10%, 약 8%, 또는 약 6%; 약 6% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 약 14%, 약 12%, 약 10%, 또는 약 8%; 약 8% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 약 14%, 약 12%, 또는 약 10%; 약 10% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 약 14%, 또는 약 12%; 약 12% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 약 24%, 약 22%, 약 20%, 약 18%, 약 16%, 또는 약 14%; 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약 22% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 약 26%, 또는 약 24%; 약 24% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 약 28%, 또는 약 26%; 약 26% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 약 30%, 또는 약 28%; 약 28% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 약 66%, 약 64%, 약 62%, 약 60%, 약 58%, 약 56%, 약 54%, 약 52%, 약 50%, 약 48%, 약 46%, 약 44%, 약 42%, 약 40%, 약 38%, 약 36%, 약 34%, 약 32%, 또는 약 30%; 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약 64% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 약 68%, 또는 약 66%; 약 66% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 약 70%, 또는 약 68%; 약 68% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 약 72%, 또는 약 70%; 약 70% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 약 74%, 또는 약 72%; 약 72% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 약 76%, 또는 약 74%; 약 74% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 약 78%, 또는 약 76%; 약 76% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 약 80%, 또는 약 78%; 약 78% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 약 82%, 또는 약 80%; 약 80% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 약 84%, 또는 약 82%; 약 82% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 약 86%, 또는 약 84%; 약 84% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 약 88%, 또는 약 86%; 약 86% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 약 90%, 또는 약 88%; 약 88% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 약 94%, 또는 약 90%; 약 90% 내지 약 100%, 약 98%, 약 96%, 또는 약 94%; 약 92% 내지 약 100%, 약 98%, 또는 약 96%; 약 94% 내지 약 100% 또는 약 98%; 약 96% 내지 약 100% 또는 약 98%; 또는 약 98% 내지 약 100%이다. 포유동물에서 고형 종양의 크기를 검출하는 방법은, 예를 들어, PET 스캔, MRI, CT 스캔, 초음파, 및 X선을 포함한다.
일부 예에서, 1개 이상의 고형 종양의 크기의 감소 및/또는 치료 시간은 약 1주 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 또는 약 1개월; 약 1개월 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 또는 약 2개월; 약 2개월 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 또는 약 4개월; 약 4개월 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 약 8개월, 또는 약 6개월; 약 6개월 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 약 10개월, 또는 약 8개월; 약 8개월 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 약 1년, 또는 약 10개월; 약 10개월 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 1.5년, 또는 약 1년; 약 1년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 또는 약 1.5년; 약 1.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 또는 약 2년; 약 2년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 또는 약 2.5년; 약 2.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 또는 약 3년; 약 3년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 또는 약 3.5년; 약 3.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 또는 약 4년; 약 4년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 또는 약 4.5년; 약 4.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 또는 약 5년; 약 5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 또는 약 5.5년; 약 5.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 약 6.5년, 또는 약 6년; 약 6년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 약 7년, 또는 약 6.5년; 약 6.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 약 7.5년, 또는 약 7년; 약 7년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 약 8년, 또는 약 7.5년; 약 7.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 약 8.5년, 또는 약 8년; 약 8년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 약 9년, 또는 약 8.5년; 약 8.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 약 9.5년, 또는 약 9년; 약 9년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 약 10년, 또는 약 9.5년; 약 9.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 약 10.5년, 또는 약 10년; 약 10년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 약 11년, 또는 약 10.5년; 약 10.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 약 11.5년, 또는 약 11년; 약 11년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 약 12년, 또는 약 11.5년; 약 11.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 약 12.5년, 또는 약 12년; 약 12년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 약 13년, 또는 약 12.5년; 약 12.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 약 13.5년, 또는 약 13년; 약 13년 내지 약 15년, 약 14.5년, 약 14년, 또는 약 13.5년; 약 13.5년 내지 약 15년, 약 14.5년, 또는 약 14년; 약 14년 내지 약 15년 또는 약 14.5년; 또는 약 14.5년 내지 약 15년의 기간에 걸쳐 일어난다.
암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 항종양 활성)을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 또는 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법이 본원에 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다. T 세포는 정맥내 투여, 동맥내 투여 또는 종양내 주사를 통해 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 NLRP3 활성화제에 대해 본원에 기재된 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된다. 이들 방법의 일부 실시양태는 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 방법을 사용하여) 포유동물을 암을 갖는 것으로 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
임의의 이들 방법에서, 포유동물의 예후는 치료 전 포유동물의 예후와 비교하여, 또는 동일하거나 유사한 암을 갖고 치료를 받지 않거나 상이한 치료를 받은 포유동물 또는 포유동물 집단과 비교하여 개선된다. 임의의 이들 방법의 일부 예에서, 암을 갖는 포유동물의 개선된 예후는 포유동물에서 (예를 들어, 동일하거나 유사한 암을 갖고 치료를 받지 않거나 상이한 치료를 받은 포유동물 또는 포유동물 집단과 비교하여) 증가된 생존 시간을 가질 증가된 가능성, 전이 발생의 감소된 가능성, 1개 이상의 추가의 전이 발생의 감소된 가능성, 시간의 경과에 따라 크기가 감소된 적어도 1종의 고형 종양을 가질 증가된 가능성, 및 증가된 암 완화 시간을 가질 증가된 가능성 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 및/또는 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 항종양 활성)의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다. T 세포는 정맥내 투여, 동맥내 투여 또는 종양내 주사를 통해 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 NLRP3 활성화제에 대해 본원에 기재된 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된다. 이들 방법의 일부 실시양태는 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 방법을 사용하여) 포유동물을 암을 갖는 것으로 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험의 감소는 치료 전 포유동물에서의 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험과 비교될 수 있거나, 또는 치료를 받지 않았거나 상이한 치료를 받은 유사하거나 동일한 암을 갖는 포유동물 또는 포유동물 집단과 비교될 수 있다. 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험의 감소는, 치료 전 포유동물에서의 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험과 비교하여 또는 치료를 받지 않았거나 상이한 치료를 받은 유사하거나 동일한 암을 갖는 포유동물 또는 포유동물 집단과 비교하여, 약 1% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 또는 약 5%; 약 5% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10%; 약 10% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 또는 약 15%; 약 15% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 또는 약 20%; 약 20% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 또는 약 25%; 약 25% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 또는 약 30%; 약 30% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 또는 약 35%; 약 35% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 또는 약 40%; 약 40% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 또는 약 45%; 약 45% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 또는 약 50%; 약 50% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 또는 약 55%; 약 55% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 또는 약 60%; 약 60% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 또는 약 65%; 약 65% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 또는 약 70%; 약 70% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 또는 약 75%; 약 75% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 약 85%, 또는 약 80%; 약 80% 내지 약 99%, 약 95%, 약 90%, 또는 약 85%; 약 85% 내지 약 99%, 약 95%, 또는 약 90%; 약 90% 내지 약 99% 또는 약 90%; 또는 약 95% 내지 약 99%일 수 있다.
일부 예에서, 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험은 약 2주, 1개월, 1.5개월, 2개월, 2.5개월, 3개월, 3.5개월, 4개월, 4.5개월, 5개월, 5.5개월, 6개월, 6.5개월, 7개월, 7.5개월, 8개월, 8.5개월, 9개월, 9.5개월, 10개월, 10.5개월, 11개월, 11.5개월, 12개월, 1.5년, 2년, 2.5년, 3년, 3.5년, 4년, 4.5년, 5년, 5.5년, 6년, 6.5년, 7년, 7.5년, 8년, 8.5년, 9년, 9.5년, 또는 10년 초과이다.
항종양 림포카인 및/또는 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건) 하에 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 배양 방법, 배양 배지, 배양 조건, 및/또는 배양 시간을 사용하여) T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 항종양 활성)의 개선을 발생시키는 단계; 및 (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10종)의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지, 및/또는 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 조건이 이들 방법에 사용될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 다시 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다. T 세포는 정맥내 투여, 동맥내 투여 또는 종양내 주사를 통해 포유동물에게 투여될 수 있다. T 세포는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물)을 확인하는 단계; 및 (b) 치료 유효량의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 확인된 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10종)의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법이 제공된다. 임의의 NLRP3 활성화제가 이들 방법에 사용될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 용량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 NLRP3 활성화제에 대해 본원에 기재된 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. NLRP3 활성화제는 본원에 기재된 임의의 투여 빈도로 포유동물에게 투여될 수 있다.
임의의 이들 방법의 일부 예에서, 포유동물은 암을 갖는 것으로 진단된다. 이들 방법의 일부 실시양태는 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 방법을 사용하여) 포유동물을 암을 갖는 것으로 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인은 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, 및 IL-21의 군으로부터 선택된다. 포유동물로부터의 샘플 내 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준은 항종양 시토카인 및/또는 림포카인에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 항체 (예를 들어, 항종양 시토카인 및/또는 림포카인에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 상업적으로 입수가능한 항체)를 사용하여 검출될 수 있다. 일부 예에서, 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준의 증가는 치료 전 포유동물에서의 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준과 비교된다. 일부 예에서, 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준의 증가는, 동일하거나 유사한 암을 가졌지만 치료를 받지 않았거나 상이한 치료를 받은 포유동물 또는 포유동물 집단에서의 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준과 비교된다.
일부 예에서, 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준의 증가는, 치료 전 포유동물에서의 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준과 비교하여 또는 동일하거나 유사한 암을 가졌지만 치료를 받지 않았거나 상이한 치료를 받은 포유동물 또는 포유동물 집단에서의 적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준과 비교하여, 약 1% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 약 50%, 약 40%, 약 30%, 약 20%, 약 10%, 또는 약 5%; 약 5% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 약 50%, 약 40%, 약 30%, 약 20%, 또는 약 10%; 약 10% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 약 50%, 약 40%, 약 30%, 또는 약 20%; 약 20% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 약 50%, 약 40%, 또는 약 30%; 약 30% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 약 50%, 또는 약 40%; 약 40% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 또는 약 50%; 약 50% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 약 70%, 또는 약 60%; 약 60% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 약 80%, 또는 약 70%; 약 70% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 약 90%, 또는 약 80%; 약 80% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 약 100%, 또는 약 90%; 약 90% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 약 120%, 또는 약 100%; 약 100% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 약 140%, 또는 약 120%; 약 120% 내지 약 200%, 약 180%, 약 160%, 또는 약 140%; 약 140% 내지 약 200%, 약 180%, 또는 약 160%; 약 160% 내지 약 200% 또는 약 180%; 또는 약 180% 내지 약 200%일 수 있다.
적어도 1종의 항종양 시토카인 및/또는 림포카인의 수준의 증가는 약 1일 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 약 1개월, 약 2주, 또는 약 1주; 약 1주 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 약 1개월, 또는 약 2주; 약 2주 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 약 2개월, 또는 약 1개월; 약 1개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 약 4개월, 또는 약 2개월; 약 2개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월, 또는 약 4개월; 약 4개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 약 8개월, 약 6개월; 약 6개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 약 10개월, 또는 약 8개월; 약 8개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 약 12개월, 또는 약 10개월; 약 10개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 약 14개월, 또는 약 12개월; 약 12개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 약 16개월, 또는 약 14개월; 약 14개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 약 18개월, 또는 약 16개월; 약 16개월 내지 약 2년, 약 22개월, 약 20개월, 또는 약 18개월; 약 18개월 내지 약 2년, 약 22개월, 또는 약 20개월; 약 20개월 내지 약 2년 또는 약 22개월; 또는 약 22개월 내지 약 24개월의 치료 후에 결정될 수 있다.
포유동물에게 재조합 T 세포를 투여한 후 포유동물에서 재조합 T 세포 집단을 유지시키는 방법
또한, (a) 암 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암)을 갖는 포유동물 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 포유동물, 예를 들어, 인간)을 확인하는 단계; (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 수거하는 단계; (c) T 세포 내로 재조합 핵산을 도입하여 재조합 T 세포 (예를 들어, 이종 TCR을 포함하는 T 세포 또는 CAR T 세포)를 생성하는 단계; (d) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분 (예를 들어, 본원에 기재된 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 임의의 배양 배지임)하고/거나, T 세포의 항종양 활성 (예를 들어, 본원에 기재된 T 세포의 임의의 항종양 활성 중 1종 이상)을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 NLRP3 활성화제)를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 재조합 T 세포를 배양하여 재조합 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및 (e) 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여하여, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포 집단이 지속되게 하는 단계를 포함하는, 포유동물에게 재조합 T 세포를 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포 집단을 유지시키는 방법이 제공된다. 재조합 T 세포는 본원에 기재된 임의의 배양 방법을 사용하여 배양될 수 있다. 본원에 기재된 재조합 T 세포의 임의의 용량이 이들 방법에서 포유동물에게 투여될 수 있다. 재조합 T 세포는, 예를 들어, 동맥내 투여, 정맥내 투여, 또는 종양내 주사에 의해 투여될 수 있다. 재조합 T 세포는 1주 1회, 1주 2회, 1주 3회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월 1회, 1개월 2회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회, 또는 12개월마다 1회 투여될 수 있다. 재조합 T 세포는 본원에 기재된 임의의 제제로 투여될 수 있다.
포유동물은 암을 갖는 것으로 진단될 수 있다. 일부 실시양태는 포유동물을 암을 갖는 것으로 진단하는 활성 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 이미 치료를 투여받았을 수 있고, 치료는 효과적이지 않았다.
일부 예에서, 방법은 재조합 T 세포 집단이 포유동물에서, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 1년, 적어도 13개월, 적어도 14개월, 적어도 15개월, 적어도 16개월, 적어도 17개월, 적어도 18개월, 적어도 19개월, 적어도 20개월, 적어도 21개월, 적어도 22개월, 적어도 23개월, 적어도 2년, 적어도 25개월, 적어도 26개월, 적어도 27개월, 적어도 28개월, 적어도 29개월, 적어도 30개월, 적어도 31개월, 적어도 32개월, 적어도 33개월, 적어도 34개월, 적어도 35개월, 적어도 3년, 적어도 37개월, 적어도 38개월, 적어도 39개월, 적어도 40개월, 적어도 41개월, 적어도 42개월, 적어도 43개월, 적어도 44개월, 적어도 45개월, 적어도 46개월, 적어도 47개월, 적어도 4년, 적어도 49개월, 적어도 50개월, 적어도 51개월, 적어도 52개월, 적어도 53개월, 적어도 54개월, 적어도 55개월, 적어도 56개월, 적어도 57개월, 적어도 58개월, 적어도 59개월, 적어도 5년, 적어도 61개월, 적어도 62개월, 적어도 63개월, 적어도 64개월, 적어도 65개월, 적어도 66개월, 적어도 67개월, 적어도 68개월, 적어도 69개월, 적어도 70개월, 적어도 71개월, 또는 적어도 6년 동안 유지되게 한다.
일부 예에서, 방법은 재조합 T 세포 집단이 포유동물에서 약 1개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 약 8개월, 약 7개월, 약 6개월, 약 5개월, 약 4개월, 약 3개월, 또는 약 2개월; 약 2개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 약 8개월, 약 7개월, 약 6개월, 약 5개월, 약 4개월, 또는 약 3개월; 약 3개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 약 8개월, 약 7개월, 약 6개월, 약 5개월, 또는 약 4개월; 약 4개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 약 8개월, 약 7개월, 약 6개월, 또는 약 5개월; 약 5개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 약 8개월, 약 7개월, 또는 약 6개월; 약 6개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 약 8개월, 또는 약 7개월; 약 7개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 약 9개월, 또는 약 8개월; 약 8개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 약 10개월, 또는 약 9개월; 약 9개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 약 11개월, 또는 약 10개월; 약 10개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 약 12개월, 또는 약 11개월; 약 11개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 약 13개월, 또는 약 12개월; 약 12개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 약 14개월, 또는 약 13개월; 약 13개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 약 15개월, 또는 약 14개월; 약 14개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 약 16개월, 또는 약 15개월; 약 15개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 약 17개월, 또는 약 16개월; 약 16개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 약 18개월, 또는 약 17개월; 약 17개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 약 19개월, 또는 약 18개월; 약 18개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 약 20개월, 또는 약 19개월; 약 19개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 약 21개월, 또는 약 20개월; 약 20개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 약 22개월, 또는 약 21개월; 약 21개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 약 23개월, 또는 약 22개월; 약 22개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 약 2년, 또는 약 23개월; 약 23개월 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 약 2.5년, 또는 약 2년; 약 2년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 약 3년, 또는 약 2.5년; 약 2.5년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 약 3.5년, 또는 약 3년; 약 3년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 약 4년, 또는 약 3.5년; 약 3.5년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 약 4.5년, 또는 약 4년; 약 4년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 약 5년, 또는 약 4.5년; 약 4.5년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 약 5.5년, 또는 약 5년; 약 5년 내지 약 7년, 약 6.5년, 약 6년, 또는 약 5.5년; 약 5.5년 내지 약 7년, 약 6.5년, 또는 약 6년; 약 6년 내지 약 7년 또는 약 6.5년; 또는 약 6.5년 내지 약 7년 동안 유지되게 한다.
적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제를 확인하는 방법
또한, (a) NLRP3 단백질을 발현하는 포유동물 세포 (예를 들어, 상피 세포, 내피 세포, HEK 세포, CHO 세포, 또는 본원에 기재된 임의의 선천성 면역 세포, 또는 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 제공하는 단계; (b) 포유동물 세포를 작용제 (예를 들어, 5 kDa 미만의 질량을 갖는 분자, 단백질, 지질, 핵산, 사카라이드, 또는 그의 임의의 조합)와 접촉시키는 단계; (c) 단계 (b)에서 세포 내 NLRP3 활성의 수준을 검출하는 단계; 및 (d) NLRP3 활성의 대조군 수준 또는 NLRP3 (예를 들어, NLRP3 단백질 또는 NLRP3 단백질을 코딩하는 핵산)의 대조군 수준과 비교하여 세포 내 NLRP3 활성 또는 NLRP3의 수준을 증가시키는 작용제를 적어도 1종의 면역억제 시토카인 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역억제 시토카인)에 대한 T 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)의 저항성을 증가시키는 후보 작용제로서 확인하는 단계를 포함하는, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제를 확인하는 방법 (예를 들어, 시험관내 방법)이 제공된다. NLRP3 활성의 대조군 수준은 작용제의 부재 하의 세포 (또는 유사한 세포) 내 NLRP3 활성 수준이다. NLRP3의 대조군 수준은 작용제의 부재 하의 세포 (또는 유사한 세포) 내 NLRP3 단백질 또는 NLRP3 단백질을 코딩하는 핵산 수준이다. NLRP3의 활성을 검출하는 예시적인 방법, NLRP3 단백질 수준을 검출하는 예시적인 방법, 및 NLRP3 단백질을 코딩하는 핵산 수준을 검출하는 예시적인 방법은 본원에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, NLRP3 활성은 NLRP3 하류 신호전달 활성이다 (예를 들어, 본원에 기재된 상이한 NLRP3 하류 신호전달 사건).
일부 실시양태는 (e) 포유동물 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 T 세포)를 적어도 1종의 면역억제 시토카인 (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역억제 시토카인) 및 후보 작용제와 접촉시키는 단계; 및 (f) T 세포에 대한 적어도 1종의 면역억제 시토카인의 면역억제 활성을 차단하는 후보 작용제의 능력을 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
실시예
실시예 1. NLRP3 활성화제는 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 저항성을 증가시킨다
목적
예시적인 NLRP3 활성화제, IL-1β가 예시적인 면역억제 시토카인, TGF-β에 대한 T 세포 저항성을 증가시킬 수 있는지 여부를 관찰하기 위해 실험을 수행하였다.
모델
OVA-알부민 (OA) 발현 흉선종 세포주, EG7을 사용하여 마우스에서 측복부 종양을 생성하였다. 트랜스제닉 OT-1 마우스로부터의 비장세포 (그의 CD8+ T-세포는 OA 내의 면역우성 펩티드를 인식함)를 상이한 시토카인에 의해 시험관내 활성화시키고, 대형 종양을 보유하는 마우스 내로 입양 전달하였다. 이는, 시험관내 분화 세포의 항암 활성을 평가하기 위해 널리 확립된 모델이다.
물질 및 방법
세포 단리 및 배양
EG7은 OVA cDNA 구축물로 형질감염된 모 뮤린 흉선종 세포주 (EL4)의 유도체이다. EG7 세포를 100 mg/ml G418, 10% 태아 소 혈청, 2 mM 글루타민, 100 U/ml 페니실린, 100 μg/ml 스트렙토마이신, 100mM 피루브산나트륨, 및 2.5% β-메르캅토에탄올이 보충된 RPMI 배지 (깁코(Gibco))로 이루어진 배지에서 배양하고 유지시켰다.
시험관내 T 세포 자극 및 단리
OT-1 마우스를 마취시키고, 비장을 수거하여, 10% FBS를 함유하는 PBS를 사용하여 70-um 필터를 통해 걸러내었다. 적혈구를 용해 완충제 (비디 파밍겐(BD Pharmingen))를 사용하여 실온에서 15분 동안 제거하였다. 세척 후, 세포를 카운팅하고, 조직 배양물 중 1x 106개 세포/mL의 최종 농도로 넣었다. OT-1 비장세포를 제0일에 SIINFEKL 펩티드 (1 μg/mL) (바켐(Bachem), 펜실베니아주 킹 오브 프러시아)를 함유하는 배지로 활성화시켰다. 세포를 TGF-β (10 ng/mL) (알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스) 또는 TGF-β (10 ng/mL) 및 IL-1β (10 ng/mL)로 처리하거나, 또는 처리하지 않았다. 5일 후, 밀테니로부터의 CD8 단리 키트를 사용하여 자기 비드에 의한 음성 선택에 의해 CD8+ 세포를 단리하고, PBS 중에 재현탁시키고, 이를 입양 전달 및 T 세포 연구에 사용하였다.
마우스 계통 및 수용
9주령의 C57BL/6J 암컷 마우스를 더 잭슨 래보러토리(the Jackson Laboratory)로부터 구입하여, 이를 환기되는 케이지 내의 특정 병원체-무함유 설비에서 주간 12시간 명 주기로 68℉ 내지 74℉ 범위의 온도에서 수용하였다. 음식물 및 물을 자유롭게 제공하였다. 동물을 실험 시작 전 7일 동안 국부 미생물총에 순응시켰다.
동물 종양 모델
100 μL PBS 중에 현탁된 1x 106개 세포의 피하 측복부 주사에 의해 종양을 확립하였다. 종양을 1주 3회 측정하고, 공식 3.14 x [최대 직경 x (수직 직경)2]/6을 사용하여 부피를 추정하였다. 종양이 촉지가능한 때인 7일 후에 치료를 투여하고, 종양 성장에 대해 마우스를 추적하였다. 추정 종양 부피가 2500 mm3를 초과하거나 마우스에서 곤란 징후가 보이면 마우스를 희생시켰다.
입양 T 세포 전달
TGF-β의 존재 하 또는 TGF-β 및 IL-1β의 존재 하에 시험관내 활성화된 비장세포로부터 단리된 CD8+ 세포를 PBS 중에 현탁시켰다. 각각의 군 (시토카인 부재, TGF-β, TGF-β 및 IL-1β)에 대해, 200 μL PBS (비히클) 단독 중 5 x 106개의 세포를 복강내 주사를 통해 입양 전달하였다. 마우스 대조군에게 비히클을 단독으로 주사하여 치료의 부재 하에서의 종양 성장을 추정하였다.
치료 효과의 계산
시간의 경과에 따라 조합 치료 군의 평균 종양 부피를 플롯팅하고, 비히클로 치료한 대조군과 비교하였다. 각각의 실험에는 군당 10마리의 마우스가 포함되었다. 통계적 비교를 위해, 이원 Anova 및 본페로니 보정을 그래프프리즘 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
결론
이들 데이터는 NLRP3 활성화제가 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는데 사용될 수 있고, 이는 T 세포의 항종양 활성의 증가를 발생시킬 수 있다는 것을 보여준다.
다른 실시양태
본 발명이 그의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 상기 기재는 첨부된 청구범위의 범주에 의해 규정되는 본 발명의 범주를 예시하기 위해 의도되는 것이며 이를 제한하지 않는다는 것을 이해해야 한다. 다른 측면, 이점 및 변형은 하기 청구범위의 범주 내이다.
SEQUENCE LISTING <110> IFM THERAPEUTICS, INC <120> IMMUNE CELLS HAVING INCREASED IMMUNITY OR RESISTANCE TO AN IMMUNOSUPPRESSIVE CYTOKINE AND USE OF THE SAME <130> 42453-0003WO1 <150> 62/212,747 <151> 2015-09-01 <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 126 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 1 aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60 actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120 gaactg 126 <210> 2 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 2 agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc 60 tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120 cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180 gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240 cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300 tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336 <210> 3 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 3 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 4 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 4 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 5 <211> 1016 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu 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agactgcttc ctgaggcctc cctcctcatc accacaagac 1140 ccgtggccct ggagaaactt cagcacttgc tgggccaggc tcgtcatgtg gagatcctgg 1200 gtttctcaga ggccaggagg aaggaatatt tcttaaagta tttctcagat gagcagcaag 1260 caagggaagc cttcagactg attcaggaga atgagatcct cttcaccatg tgctttattc 1320 ctctggtctg ctggattgtg tgcactgggc tgaaacagca gatggatagt ggtaagagtc 1380 ttgctcggac atccaagacc accactgcag tgtatatctt cttcctctcc agtttgttgc 1440 aatctcaggg agggagccag gagaaccaca actctgctac cctctggggt ctctgctcac 1500 tggctgcaga tggaatctgg aaccagaaaa tcctatttca ggagtgtgat ctcagaaatc 1560 atggcctgca gaaggcagat gtgtctgctt tcttgaggat gaacctgttc caaaaggaag 1620 tggactgcga gaaattctac agcttcatcc acatgacttt ccaggagttc tttgctgcca 1680 tgtactacct gctggaagaa gataatcatg gggagatgag gaacacgcct caggcttgtt 1740 caaagcttcc caaccgagat gtgaaggtcc ttctcgaaaa ctacggcaaa ttcgaaaagg 1800 gatatctgat ttttgttgtc cgtttcctct ttggccttat aaaccaggag agaacctcct 1860 acttagagaa aaaactgagt tgtaagatct ctcagaaaat caggctggag ctgctgaaat 1920 ggattgaagc aaaagccaat gccaagacac tacagattga gcccagccag ctggaattgt 1980 tctattgttt gtatgagatg caggaggagg actttgtgca aagggccatg agccatttcc 2040 ccaaaattga gatcaagctg tccaccagaa tggaccatgt ggtttcttct ttttgtattg 2100 agaactgtcg ccatgtggaa tccctttcct tgaggttgct ccataactca cccaaggagg 2160 aggaagaaga ggaggaagtt agacactctc atatggaccg ttctgttctc tctgattttg 2220 aggtggcata ttctcaggga ttggtgaact atctgacctc cagcatttgc aggggcatct 2280 tctcagtcct gagcaataac tggaatctca ctgaattgaa cctcagtggc aataccctgg 2340 gagacccagg catgaacgtg ttatgtgaaa cactccaaca acctggctgt aacattcgta 2400 gattgtggtt gggacagtgc tgcctttccc atcagtgctg cttcaacatc tcctcagtct 2460 tgagcaacaa ccagaagctg gtggagttgg acctgagcca caatgccctg ggagacttcg 2520 ggatcagact tctgtgtgtg ggactgaggc atctattctg caatctgaag aagctctggt 2580 tggtcagttg ctgtctcaca tcggcaagct gtgaggacct tgcatctgtc ctgagcacca 2640 accattccct gaccagactc tacttggggg aaaatgctct gggagactca ggagttggga 2700 ttttgtgtga aaaagtaaag aatccacact gtaacttgca aaaactgggg ttggtgaatt 2760 ctggccttac atcaggttgt 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Gly Thr Lys Gly Gly Gln Asp Ile Thr 130 135 140 Asp Phe Thr Met Gln Phe Val Ser Ser 145 150 <210> 20 <211> 1498 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 accaaacctc ttcgaggcac aaggcacaac aggctgctct gggattctct tcagccaatc 60 ttcattgctc aagtgtctga agcagccatg gcagaagtac ctgagctcgc cagtgaaatg 120 atggcttatt acagtggcaa tgaggatgac ttgttctttg aagctgatgg ccctaaacag 180 atgaagtgct ccttccagga cctggacctc tgccctctgg atggcggcat ccagctacga 240 atctccgacc accactacag caagggcttc aggcaggccg cgtcagttgt tgtggccatg 300 gacaagctga ggaagatgct ggttccctgc ccacagacct tccaggagaa tgacctgagc 360 accttctttc ccttcatctt tgaagaagaa cctatcttct tcgacacatg ggataacgag 420 gcttatgtgc acgatgcacc tgtacgatca ctgaactgca cgctccggga ctcacagcaa 480 aaaagcttgg tgatgtctgg tccatatgaa ctgaaagctc tccacctcca gggacaggat 540 atggagcaac aagtggtgtt ctccatgtcc tttgtacaag gagaagaaag taatgacaaa 600 atacctgtgg ccttgggcct caaggaaaag aatctgtacc tgtcctgcgt gttgaaagat 660 gataagccca ctctacagct ggagagtgta gatcccaaaa attacccaaa gaagaagatg 720 gaaaagcgat 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ctgatgggca accacttacc tatttattta tgtatttatt gattggttga tctatttaag 1140 ttgattcaag gggacattag gcagcactct ctagaacaga acctagctgt caacgtgtgg 1200 gggatgaatt ggtcatagcc cgcactgagg tctttcattg aagctgagaa taaataggtt 1260 cctataatat ggatgagact ttttatgaat gaagcaccag cacattgctt tgatgagtat 1320 gaaataaatt tcattaaaac aaacaaac 1348 <210> 23 <211> 152 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 23 Val Pro Ile Arg Gln Leu His Cys Arg Leu Arg Asp Glu Gln Gln Lys 1 5 10 15 Cys Leu Val Leu Ser Asp Pro Cys Glu Leu Lys Ala Leu His Leu Asn 20 25 30 Gly Gln Asn Ile Ser Gln Gln Val Val Phe Ser Met Ser Phe Val Gln 35 40 45 Gly Glu Thr Ser Asn Asp Lys Ile Pro Val Ala Leu Gly Leu Lys Gly 50 55 60 Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Met Lys Asp Gly Thr Pro Thr Leu 65 70 75 80 Gln Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Gln Tyr Pro Lys Lys Lys Met Glu 85 90 95 Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys Ile Glu Val Lys Thr Lys Val Glu Phe 100 105 110 Glu Ser Ala Gln Phe Pro Asn Trp Tyr Ile Ser Thr Ser Gln Ala Glu 115 120 125 His Arg Pro Val Phe Leu Gly Asn Ser Asn Gly Arg Asp Ile Val Asp 130 135 140 Phe Thr Met Glu Pro Val Ser Ser 145 150 <210> 24 <211> 1339 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 24 ggctcatctg ggatcctctc cagtcaggct tccttgtgca agtgtctgaa gcagctatgg 60 caactgtccc tgaactcaac tgtgaaatag cagctttcga cagtgaggag aatgacctgt 120 tctttgaggc tgacagaccc caaaagatta aggattgctt ccaagccctt gacttgggct 180 gtccagatga gagcatccag cttcaaatct cacagcagca tctcgacaag agcttcagga 240 aggcagtgtc actcattgtg gctgtggaga agctgtggca gctacctatg tcttgcccgt 300 ggagcttcca ggatgaggac ccaagcacct tcttttcctt catctttgaa gaagagcccg 360 tcctctgtga ctcgtgggat gatgacgacc tgctagtgtg tgatgttccc attagacagc 420 tgcactgcag gcttcgagat gaacaacaaa aatgcctcgt gctgtctgac ccatgtgagc 480 tgaaagctct ccacctcaat ggacagaaca taagccaaca agtggtattc tccatgagct 540 ttgtacaagg agagacaagc aacgacaaaa tccctgtggc cttgggcctc aaggggaaga 600 atctatacct gtcctgtgtg atgaaagacg gcacacccac cctgcagctg gagagtgtgg 660 atcccaaaca atacccaaag aagaagatgg aaaagcggtt tgtcttcaac aagatagaag 720 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Claims (147)

  1. (a) T 세포 또는 선천성 면역 세포를 제공하는 단계, 및
    (b) T 세포 또는 선천성 면역 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계
    를 포함하는, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포 또는 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 배양 배지가 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 추가로 포함하는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, T 세포 또는 선천성 면역 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제가 단리된 종양 항원, 종양 용해물, 괴사성 종양 세포, 종양 아폽토시스체, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함하는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)에서 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 배양하는 것은 T 세포 또는 선천성 면역 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)에서 T 세포 또는 선천성 면역 세포를 배양하는 것은 T 세포 또는 선천성 면역 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 선천성 면역 세포가 수지상 세포, 대식세포 또는 단핵구인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 선천성 면역 세포를 제공하는 단계 및 선천성 면역 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 선천성 면역 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포를 제공하는 단계 및 T 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  9. 제1항 내지 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 CD4+ T 세포 또는 CD8+ 세포인 방법.
  10. 제1항 내지 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제5항 및 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포인 방법.
  12. 제11항에 있어서, CAR-T 세포가
    항원-결합 도메인,
    막횡단 도메인, 및
    세포질 신호전달 도메인
    을 포함하는 CAR 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체, 항체의 항원-결합 단편, Fab 단편, 및 scFv인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 항체가 인간 또는 인간화 항체이거나, 또는 항체의 항원-결합 단편 또는 Fab가 인간 또는 인간화 항체의 단편인 방법.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 세포질 신호전달 도메인이 CD3ζ 세포질 서열을 포함하는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 세포질 신호전달 도메인이 하기 단백질: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 막횡단 도메인이 CD3ζ, CD8 또는 CD28로부터의 막횡단 서열을 포함하는 것인 방법.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CAR 단백질이 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 포유동물로부터 수거된 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 선천성 면역 세포가 포유동물로부터 수거된 것인 방법.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 포유동물이 암 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 포유동물이 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  23. 제19항 또는 제20항에 있어서, 포유동물이 아시네토박터(Acinetobacter) 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰(Arcanobacterium haemolyticum) 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스(Bacillus cereus) 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스(Bacteroides) 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스(Baylisascaris) 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis) 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아(Burkholderia) 감염, 부룰리(Buruli) 궤양, 칼리시바이러스(Calicivirus) 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에(Chlamydophila pneumoniae) 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile) 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스(Desmodesmus) 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스(Enterococcus) 감염, 엔테로바이러스(Enterovirus) 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움(Fusobacterium) 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae) 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드(Heartland) 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori) 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르(Epstein-Barr) 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에(Kingella kingae) 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라(Prevotella) 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum) 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis) 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증의 군으로부터 선택된 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  24. 제19항 및 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  25. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물로부터 선천성 면역 세포를 수거하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 면역억제 시토카인이 IL-10, TGF-β, IL-1Ra, IL-18Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36, IL-37, PGE2, SCF, G-CSF, CSF-1R, M-CSF, GM-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IFN-λ, bFGF, CCL2, CXCL1, CXCL8, CXCL12, CX3CL1, CXCR4, 및 VEGF로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 적어도 1종의 면역억제 시토카인이 TGF-β인 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 IL-1α 또는 IL-1β인 방법.
  29. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자인 방법.
  30. 제29항에 있어서, NLRP3 활성화제가 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
  31. 제29항에 있어서, NLRP3 활성화제가
    Figure pct00006

    이며, 여기서
    (a) R1은 H이고, R2는 H이거나;
    (b) R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나;
    (c) R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는
    (d) R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3인
    방법.
  32. 제29항에 있어서, NLRP3 활성화제가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법:
    이미다조퀴놀린;
    이미다조나프티리딘;
    피라졸로피리딘;
    아릴-치환된 이미다조퀴놀린;
    1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물;
    옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    이미다조나프티리딘;
    이미다조퀴놀린아민;
    1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    융합된 시클로알킬이미다조피리딘;
    1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 나프토[ij]퀴놀리진;
    치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체;
    치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및
    테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트.
  33. 제1항 내지 제5항, 제8항 내지 제19항, 제21항 내지 제24항 및 제26항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 T 세포.
  34. 제33항의 T 세포를 포함하는 제약 조성물.
  35. 제34항의 제약 조성물을 포함하는 키트.
  36. 제1항 내지 제7항, 제20항 내지 제23항 및 제26항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 증가된 저항성을 갖는 선천성 면역 세포.
  37. 제36항의 선천성 면역 세포를 포함하는 제약 조성물.
  38. 제37항의 제약 조성물을 포함하는 키트.
  39. (a) T 세포를 제공하는 단계; 및
    (b) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계
    를 포함하는, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  41. 제39항에 있어서, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  42. 제39항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  43. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  44. 제39항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  45. 제39항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 배양 배지가 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 추가로 포함하는 것인 방법.
  46. 제45항에 있어서, T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제가 단리된 종양 항원, 종양 용해물, 괴사성 종양 세포, 종양 아폽토시스체, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함하는 것인 방법.
  47. 제39항, 제40항, 제42항, 제43항, 제45항 및 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지가 하기 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법:
    (i) 글루코스 보충의 부재 하의 갈락토스;
    (ii) 대조군 세포에서의 비율을 초과하는 보충대사의 유도 및/또는 증가를 막지 않는 임의의 양으로 첨가된 갈락토스 및 글루코스를 함유하는 배양 배지; 및/또는
    (iii) 3-브로모피루베이트, 2-데옥시글루코스, 5가 비소 (H3AsO4), 로니다민, 이마티닙, 옥시티아민, 피루베이트, 홀수-쇄 지방산, 5-탄소 케톤체, 및 트리헵타노인 중 1종 이상.
  48. 제39항 및 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건이 T 세포에서 하기 중 1종 이상을 발생시키는 조건인 방법:
    당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소,
    산화성 인산화율 대비 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소,
    T 세포에 의한 글루타민 흡수율의 증가,
    기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율의 증가,
    피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율의 증가,
    아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸무레이트를 생산하는 비율의 증가,
    아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율의 증가, 및
    프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율의 증가.
  49. 제39항, 제41항, 제42항, 제43항, 제45항 및 제46항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 T 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  50. 제39항, 제41항, 제42항, 제43항, 제45항 및 제46항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 T 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  51. 제39항, 제41항, 제42항, 제43항, 제45항, 제46항, 제49항 및 제50항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β인 방법.
  52. 제39항, 제41항, 제42항, 제43항, 제45항, 제46항, 제49항 및 제50항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자인 방법.
  53. 제52항에 있어서, NLRP3 활성화제가 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
  54. 제52항에 있어서, NLRP3 활성화제가
    Figure pct00007

    이며, 여기서
    (a) R1은 H이고, R2는 H이거나;
    (b) R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나;
    (c) R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는
    (d) R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3인
    방법.
  55. 제52항에 있어서, NLRP3 활성화제가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법:
    이미다조퀴놀린;
    이미다조나프티리딘;
    피라졸로피리딘;
    아릴-치환된 이미다조퀴놀린;
    1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물;
    옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    이미다조나프티리딘,
    이미다조퀴놀린아민;
    1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    융합된 시클로알킬이미다조피리딘;
    1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 나프토[ij]퀴놀리진;
    치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체;
    치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및
    테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트.
  56. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 CD4+ T 세포 또는 CD8+ 세포인 방법.
  57. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포인 방법.
  59. 제58항에 있어서, CAR-T 세포가
    항원-결합 도메인,
    막횡단 도메인, 및
    세포질 신호전달 도메인
    을 포함하는 CAR 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 것인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체, 항체의 항원-결합 단편, Fab 단편, 및 scFv인 방법.
  61. 제60항에 있어서, 항체가 인간 또는 인간화 항체이거나, 또는 항체의 항원-결합 단편 또는 Fab가 인간 또는 인간화 항체의 단편인 방법.
  62. 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 세포질 신호전달 도메인이 CD3ζ 세포질 서열을 포함하는 것인 방법.
  63. 제62항에 있어서, 세포질 신호전달 도메인이 하기 단백질: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  64. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 막횡단 도메인이 CD3ζ, CD8 또는 CD28로부터의 막횡단 서열을 포함하는 것인 방법.
  65. 제59항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, CAR 단백질이 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  66. 제39항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 포유동물로부터 수거된 것인 방법.
  67. 제66항에 있어서, 포유동물이 암 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  68. 제67항에 있어서, 포유동물이 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  69. 제67항에 있어서, 포유동물이 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증의 군으로부터 선택된 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  70. 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  71. 제39항 내지 제70항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대해 개선된 저항성을 갖는 T 세포.
  72. 제71항의 T 세포를 포함하는 제약 조성물.
  73. 제34항의 제약 조성물을 포함하는 키트.
  74. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하여, 포유동물에서 항종양 면역의 증가를 발생시키는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 면역을 증가시키는 방법.
  75. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하여, 포유동물에서 암의 완화 시간의 증가를 발생시키는 단계
    를 포함하는, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법.
  76. (a) 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 또는 항감염성 질환 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 또는 항감염성 질환 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법.
  77. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법.
  78. (a) 암 및 고형 종양을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법.
  79. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법.
  80. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법.
  81. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    T 세포를 배양하여 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (d) T 세포를 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법.
  82. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계;
    (b) 확인된 포유동물로부터 T 세포를 수거하는 단계;
    (c) T 세포 내로 재조합 핵산을 도입하여 재조합 T 세포를 생성하는 단계;
    (d) 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고/거나, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서; 및/또는
    보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에
    재조합 T 세포를 배양하여 재조합 T 세포의 항종양 활성의 개선을 발생시키는 단계; 및
    (e) 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여하여, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포의 집단이 지속되게 하는 단계
    를 포함하는, 재조합 T 세포를 포유동물에게 투여한 후 적어도 1개월 동안 포유동물에서 재조합 T 세포의 집단을 유지시키는 방법.
  83. 제74항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  84. 제82항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  85. 제74항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  86. 제82항에 있어서, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  87. 제74항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  88. 제82항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분하고, T 세포의 항종양 활성을 개선시키는데 충분한 양의 NLRP3 활성화제를 포함하는 배양 배지에서 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  89. 제83항, 제85항 및 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  90. 제84항, 제86항 및 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  91. 제74항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  92. 제82항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건 하에 재조합 T 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
  93. 제74항 내지 제81항, 제83항, 제85항, 제87항, 제89항 및 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 배양 배지가 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 추가로 포함하는 것인 방법.
  94. 제82항, 제84항, 제86항, 제88항, 제90항 및 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 배양 배지가 재조합 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제를 포함하는 것인 방법.
  95. 제93항에 있어서, T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제가 단리된 종양 항원, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함하는 것인 방법.
  96. 제94항에 있어서, 재조합 T 세포를 활성화하는 1종 이상의 작용제가 단리된 종양 항원, 병원성 유기체 또는 바이러스로부터의 단리된 항원, 또는 종양 백신을 포함하는 것인 방법.
  97. 제74항 내지 제84항, 제87항 내지 제90항 및 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 배양 배지가 하기 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법:
    (i) 글루코스 보충의 부재 하의 갈락토스;
    (ii) 대조군 세포에서의 비율을 초과하는 보충대사의 증가를 막지 않는 임의의 양으로 첨가된 갈락토스 및 글루코스를 함유하는 배양 배지; 및/또는
    (iii) 3-브로모피루베이트, 2-데옥시글루코스, 5가 비소 (H3AsO4), 로니다민, 이마티닙, 옥시티아민, 피루베이트, 홀수-쇄 지방산, 5-탄소 케톤체, 및 트리헵타노인 중 1종 이상.
  98. 제74항 내지 제82항 및 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 보충대사를 유도 및/또는 증가시키는데 충분한 조건이 T 세포에서 하기 중 1종 이상을 발생시키는 조건인 방법:
    당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소,
    산화성 인산화율 대비 당분해로부터의 락테이트 생산율의 감소,
    T 세포에 의한 글루타민 흡수율의 증가,
    기질로서 글루타민을 사용하여 합성된 지질 및/또는 아미노산의 분율의 증가,
    피루베이트가 피루베이트 카르복실라제에 의해 옥살로아세테이트로 전환되는 비율의 증가,
    아데닐로숙시네이트 신테타제가 푸무레이트를 생산하는 비율의 증가,
    아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 옥살로아세테이트를 생산하는 비율의 증가, 및
    프로피오닐-CoA 카르복실라제가 숙시닐-CoA를 생산하는 비율의 증가.
  99. 제72항 내지 제81항, 제85항, 제87항, 제89항, 제93항 및 제95항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 T 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  100. 제82항, 제86항, 제88항, 제90항, 제94항 및 제96항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 재조합 T 세포에서 NLRP3 단백질의 수준의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  101. 제72항 내지 제81항, 제85항, 제87항, 제89항, 제93항 및 제95항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 T 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  102. 제82항, 제86항, 제88항, 제90항, 제94항 및 제96항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 재조합 T 세포에서 NLRP3 하류 신호전달의 증가를 발생시키는 것인 방법.
  103. 제72항 내지 제82항, 제85항 내지 제90항 및 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β인 방법.
  104. 제72항 내지 제82항, 제85항 내지 제90항 및 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자인 방법.
  105. 제104항에 있어서, NLRP3 활성화제가 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
  106. 제104항에 있어서, NLRP3 활성화제가
    Figure pct00008

    이며, 여기서
    (a) R1은 H이고, R2는 H이거나;
    (b) R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나;
    (c) R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는
    (d) R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3인
    방법.
  107. 제104항에 있어서, NLRP3 활성화제가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법:
    이미다조퀴놀린;
    이미다조나프티리딘;
    피라졸로피리딘;
    아릴-치환된 이미다조퀴놀린;
    1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물;
    옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    이미다조나프티리딘,
    이미다조퀴놀린아민,
    1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    융합된 시클로알킬이미다조피리딘;
    1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 나프토[ij]퀴놀리진;
    치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체;
    치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및
    테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트.
  108. 제74항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 CD4+ T 세포 또는 CD8+ 세포인 방법.
  109. 제74항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 림프성 전구 세포, 미성숙 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 나이브 T 세포, 만능 TH 세포 전구체, Treg 세포, 기억 T 세포, TH17 세포, TH22 세포, TH9 세포, TH2 세포, TH1 세포, TH3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 및 종양-침윤 T 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  110. 제74항 내지 제81항, 제83항, 제85항, 제87항, 제89항, 제91항, 제93항, 제95항, 제97항 내지 제99항, 제101항 및 제103항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포인 방법.
  111. 제82항, 제84항, 제86항, 제88항, 제90항, 제92항, 제94항, 제96항 내지 제98항, 제100항 및 제102항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 T 세포가 CAR-T 세포인 방법.
  112. 제110항 또는 제111항에 있어서, CAR-T 세포가
    항원-결합 도메인,
    막횡단 도메인, 및
    세포질 신호전달 도메인
    을 포함하는 CAR 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 것인 방법.
  113. 제112항에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체, 항체의 항원-결합 단편, Fab 단편, 및 scFv인 방법.
  114. 제113항에 있어서, 항체가 인간 또는 인간화 항체이거나, 또는 항체의 항원-결합 단편 또는 Fab가 인간 또는 인간화 항체의 단편인 방법.
  115. 제112항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 세포질 신호전달 도메인이 CD3ζ 세포질 서열을 포함하는 것인 방법.
  116. 제115항에 있어서, 세포질 신호전달 도메인이 하기 단백질: CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 중 1종 이상의 세포질 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  117. 제112항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 막횡단 도메인이 CD3ζ, CD8 또는 CD28로부터의 막횡단 서열을 포함하는 것인 방법.
  118. 제112항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, CAR 단백질이 항원-결합 도메인과 막횡단 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는 것인 방법.
  119. 제74항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물이 암을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  120. 제76항, 제83항, 제85항, 제87항, 제89항, 제91항, 제93항, 제95항, 제97항 내지 제99항, 제101항, 제103항 내지 제110항 및 제112항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  121. 제119항에 있어서, 포유동물이 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  122. 제120항에 있어서, 포유동물이 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증의 군으로부터 선택된 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  123. 제74항 내지 제81항, 제83항, 제85항, 제87항, 제89항, 제91항, 제93항, 제95항, 제97항 내지 제99항, 제101항, 제103항 내지 제109항, 제110항 및 제112항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 정맥내로, 동맥내 또는 종양내 투여에 의해 투여되는 것인 방법.
  124. 제82항, 제84항, 제86항, 제88항, 제90항, 제92항, 제94항, 제96항 내지 제98항, 제100항, 제102항 내지 제109항 및 제111항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 T 세포가 정맥내, 동맥내 또는 종양내 투여에 의해 투여되는 것인 방법.
  125. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 항종양 면역을 증가시키는 방법.
  126. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 포유동물에서 암의 완화 시간을 증가시키는 방법.
  127. (a) 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암 또는 감염성 질환을 갖는 포유동물을 치료하는 방법.
  128. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 생존 시간을 증가시키는 방법.
  129. (a) 암 및 고형 종양을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 고형 종양의 크기를 감소시키는 방법.
  130. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물의 예후를 개선시키는 방법.
  131. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 전이 또는 추가의 전이의 발생 위험을 감소시키는 방법.
  132. (a) 암을 갖는 포유동물을 확인하는 단계; 및
    (b) 확인된 포유동물에게 치료 유효량의 NLRP3 활성화제를 투여하는 단계
    를 포함하는, 암을 갖는 포유동물에서 적어도 1종의 항종양 림포카인 및/또는 적어도 1종의 항종양 시토카인의 수준을 증가시키는 방법.
  133. 제127항에 있어서, 포유동물이 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  134. 제127항에 있어서, 포유동물이 암을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  135. 제125항, 제126항, 제129항 내지 제132항 및 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물이 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 카포시 육종, 림프종, 항문암, 충수암, 기형양/횡문근양 종양, 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 기관지 종양, 카르시노이드 종양, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 담관암, 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉 육종, 안암, 난관암, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 기질 종양, 배세포 종양, 모발상 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간암, 하인두암, 췌장암, 신장암, 후두암, 만성 골수 백혈병, 구순암 및 구강암, 폐암, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암, 입암, 골육종, 난소암, 음경암, 인두암, 전립선암, 직장암, 타액선암, 피부암, 소장암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 및 외음부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  136. 제133항에 있어서, 포유동물이 아시네토박터 감염, 방선균증, 아프리카 수면병, 후천성 면역결핍 증후군, 아메바증, 아나플라스마증, 탄저병, 아르카노박테리움 하에몰리티쿰 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염, 박테리아성 폐렴, 박테리아성 질증, 박테로이데스 감염, 발란티디움증, 바일리사스카리스 감염, BK 바이러스 감염, 흑색 사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 블라스토미세스증, 볼리비아 출혈열, 보툴리눔독소증, 브라질 출혈열, 브루셀라증, 가래톳 흑사병, 부르크홀데리아 감염, 부룰리 궤양, 칼리시바이러스 감염, 캄필로박터증, 칸디다증, 고양이 찰과상, 연조직염, 샤가스병, 연성하감, 수두, 치쿤군야, 클라미디아, 클라미도필라 뉴모니아에 감염, 콜레라, 색소모세포진균증, 간흡충증, 클로스트리디움 디피실레 감염, 콕시디오이데스진균증, 콜로라도 진드기열, 감기, 크로이츠펠트-야콥병, 크림-콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리디움증, 피부 유충 이행증, 원포자충증, 낭미충증, 시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 데스모데스무스 감염, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증, 에를리히아증, 요충증, 엔테로코쿠스 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염, 돌발성 발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움성 근괴사균에 의한 식중독, 자유-생활 아메바 감염, 푸소박테리움 감염, 가스 괴저, 지오트리쿰증, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커 증후군, 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종, A군 연쇄구균 감염, B군 연쇄구균 감염, 헤모필루스 인플루엔자에 감염, 수족구병, 한타바이러스 폐 증후군, 하트랜드 바이러스 질환, 헬리코박터 필로리 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 에윙기이 에를리히아증, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구성 에를리히아증, 인간 유두종바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증, 엡스테인-바르 바이러스 감염성 단핵구증, 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨가에 감염, 쿠루병, 라사 열, 레지오넬라병, 폰티악열, 리슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 림프 사상충증, 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 중동 호흡 증후군, 유비저, 수막염, 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 원두, 볼거리, 발진열, 미코플라스마 폐렴, 균종, 구더기증, 신생아 결막염, 변종 크로이츠펠트-야콥병, 노카르디아증, 회선사상충증, 파라콕시디오이데스진균증, 폐흡충증, 파스퇴렐라증, 머리이감염증, 몸이감염증, 사면발이감염증, 골반 염증성 질환, 백일해, 흑사병, 폐렴, 회색질척수염, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바 수막뇌염, 진행성 다초점성 백질뇌병증, 앵무새병, Q 열, 광견병, 재귀열, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케치아 감염, 리케치아폭스, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, 중증 급성 호흡기 증후군, 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 시겔라증, 대상포진, 천연두, 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 아급성 경화성 범뇌염, 매독, 조충증, 파상풍, 모창 백선, 두부 백선, 체부 백선, 고부 백선, 수부 백선, 흑색 백선, 족부 백선, 조갑 백선, 전풍, 톡소카라증, 트라코마, 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 우레아플라스마 우레아리티쿰 감염, 밸리 열, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색 사모증, 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 감염, 예르시니아증, 황열, 및 접합균증으로 이루어진 군으로부터 선택된 감염성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  137. 제125항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 인터류킨-1α 또는 인터류킨-1β인 방법.
  138. 제125항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 분자인 방법.
  139. 제138항에 있어서, NLRP3 활성화제가 이미퀴모드 또는 레시퀴모드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
  140. 제138항에 있어서, NLRP3 활성화제가
    Figure pct00009

    이며, 여기서
    (a) R1은 H이고, R2는 H이거나;
    (b) R1은 부틸 기이고, R2는 H이거나;
    (c) R1은 H이고, R2는 -CO2CH3이거나; 또는
    (d) R1은 부틸 기이고, R2는 -CO2CH3인
    방법.
  141. 제138항에 있어서, NLRP3 활성화제가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법:
    이미다조퀴놀린;
    이미다조나프티리딘;
    피라졸로피리딘;
    아릴-치환된 이미다조퀴놀린;
    1-알콕시 1H-이미다조 고리계를 갖는 화합물;
    옥사졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    티아졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    셀레나졸로[4,5-c]-퀴놀린-4-아민;
    이미다조나프티리딘,
    이미다조퀴놀린아민;
    1-치환된, 2-치환된 1H-이미다조[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    융합된 시클로알킬이미다조피리딘;
    1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    1-치환된 1H-이미다조-[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    이미다조-[4,5-C]퀴놀린-4-아민;
    2-에틸 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    올레핀 1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    6,7-디히드로-8-(이미다졸-1-일)-5-메틸-1-옥소-1H,5H-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 나프토[ij]퀴놀리진;
    치환된 피리도퀴녹살린-6-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산 유도체;
    치환된 벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    7-히드록시-벤조[ij]퀴놀리진-2-카르복실산;
    치환된 피리도[1,2,3,-데]-1,4-벤족사진; 및
    테트라히드로퀴놀린의 N-메틸렌 말로네이트.
  142. 제125항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, NLRP3 활성화제가 정맥내로, 동맥내 또는 종양내 투여에 의해 투여되는 것인 방법.
  143. (a) NLRP3 단백질을 발현하는 포유동물 세포를 제공하는 단계;
    (b) 포유동물 세포를 작용제와 접촉시키는 단계;
    (c) 단계 (b)에서 세포 내 NLRP3 활성의 수준을 검출하는 단계; 및
    (d) NLRP3 활성의 대조군 수준과 비교하여 세포 내 NLRP3 활성의 증가된 수준을 증가시키는 작용제를 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제로서 확인하는 단계
    를 포함하는, 적어도 1종의 면역억제 시토카인에 대한 T 세포의 저항성을 증가시키는 후보 작용제를 확인하는 방법.
  144. 제143항에 있어서, NLRP3 활성의 대조군 수준이 작용제의 부재 하의 세포 내 NLRP3 활성 수준인 방법.
  145. 제143항 또는 제144항에 있어서, NLRP3 활성이 NLRP3 하류 신호전달 활성인 방법.
  146. 제143항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 세포가 T 세포인 방법.
  147. 제143항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서,
    (e) T 세포를 적어도 1종의 면역억제 시토카인 및 후보 작용제와 접촉시키는 단계; 및
    (f) T 세포에 대한 적어도 1종의 면역억제 시토카인의 면역억제 활성을 차단하는 후보 작용제의 능력을 결정하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
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