KR20180030414A - 골 이형성증 치료를 위한 c―형 나트륨이뇨 펩타이드 변이체의 용도 - Google Patents

골 이형성증 치료를 위한 c―형 나트륨이뇨 펩타이드 변이체의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20180030414A
KR20180030414A KR1020187005634A KR20187005634A KR20180030414A KR 20180030414 A KR20180030414 A KR 20180030414A KR 1020187005634 A KR1020187005634 A KR 1020187005634A KR 20187005634 A KR20187005634 A KR 20187005634A KR 20180030414 A KR20180030414 A KR 20180030414A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cnp
cnp variant
composition
variant peptide
dysplasia
Prior art date
Application number
KR1020187005634A
Other languages
English (en)
Inventor
쉐리 불렌스
스튜어트 번팅
티안웨이 츄
어거스터스 오. 오크하마페
크리스토퍼 피. 프라이스
다니엘 제이. 웬트
클래런스 얍
Original Assignee
바이오마린 파머수티컬 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이오마린 파머수티컬 인크. filed Critical 바이오마린 파머수티컬 인크.
Publication of KR20180030414A publication Critical patent/KR20180030414A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/2242—Atrial natriuretic factor complex: Atriopeptins, atrial natriuretic protein [ANP]; Cardionatrin, Cardiodilatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease

Abstract

본 발명은 골 이형성증, 골 이형성증의 하나 이상의 증상들, 예컨대 장골 성장 또는 성장 속도, 및 골 이형성증 및/또는 CNP-관련 증상 또는 구성요소를 갖는 다른 질환을 치료하기 위한, C―형 나트륨이뇨 펩타이드(CNP)의 변이체, 및 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 신규 약학 조성물 및 제형의 용도를 제공한다.

Description

골 이형성증 치료를 위한 C―형 나트륨이뇨 펩타이드 변이체의 용도
본 발명은 일반적으로 골 이형성증을 치료하기 위한 C―형 나트륨이뇨 펩타이드(CNP)의 변이체의 용도 및 CNP 변이체 펩타이드의 제형에 관한 것이다.
나트륨이뇨 펩타이드 군은 구조적으로 관련된 3개의 펩타이드로 이루어져있다: 심방 나트륨이뇨 펩타이드(ANP)(ANP 전구체 단백질에 대한 Genbank 수탁 번호 NP_006163, NPPA), 뇌 나트륨이뇨 펩타이드(BNP)(BNP 전구체 단백질에 대한 GenBank 수탁 번호 NP_002512, NPPB) 및 C―형 나트륨이뇨 펩타이드(CNP)(Biochem. Biophys. Res. Commun., 168: 863-870 (1990)(CNP 전구체 단백질에 대한 GenBank 수탁 번호 NP_077720, NPPC)(J. Hypertens., 10: 907-912 (1992)). 상기 소형의 단일사슬 펩타이드(ANP, BNP, CNP)는 17개-아미노산 루프 구조를 갖고(Levin et al., N. Engl. J. Med., 339: 863-870 (1998)), 여러가지 생물학적 과정에서 중요한 역할을 한다. ANP와 BNP는 구아날릴 시클라제A(GC-A)로도 불리는 나트륨이뇨 펩타이드 수용체 A(NPR-A)에 결합하고, 이를 활성화시켜 더욱 높은 세포내 고리형 구아노신 모노포스페이트(cGMP) 수준을 얻었다. 이와 같이, CNP는 NPR-B(GC-B)와 상호작용하여, cGMP의 생성을 활성화시킨다(J. Hypertens., 10: 1111-1114(1992)). 수용체의 세번째 유형인 NPR-C는 각 나트륨이뇨 펩타이드를 고 친화도로 결합시키고, 주로 세포외 구획으로부터 펩타이드를 포획하고, 펩타이드를 리소좀에 침착시켜 분해되도록 기능한다(Science, 238: 675-678(1987)). ANP와 BNP는 주로 심장의 근육 세포 내에서 생성되며, 심혈관 항상성에 중요한 역할을 한다고 여겨진다(Science, 252: 120-123(1991)). CNP는 중추 신경계, 생식 관, 뼈 및 혈관의 내피를 포함하여 더 광범위하게 발현된다(Hypertension, 49: 419-426(2007)).
인간에서, CNP는 나트륨이뇨 펩타이드 전구체 C(NPPC) 유전자로부터 단일 사슬 126-아미노산 프리-프로(pre-pro) 폴리펩타이드로서 초기에 생산된다(Biochem. Biophys. Res. Commun., 168: 863-870(1990)). 신호 펩타이드를 제거하면 프로-CNP가 생성되고, 엔도프로테아제 퓨린(furin)에 의해 추가로 분열되면 활성 53-아미노산 펩타이드(CNP-53)가 생성되고, 분비되고 다시 분열되어 성숙한 22-아미노산 펩타이드(CNP-22)가 생성된다(Wu, J. Biol. Chem. 278: 25847-852(2003)). CNP-53과 CNP-22는 그들의 분포가 상이하며, 주로 CNP-53이 조직에서 주로 발견되는 반면, CNP-22는 주로 혈장과 뇌척수액에서 발견된다(J. Alfonzo, Recept. Signal. Transduct. Res., 26: 269-297(2006)). 연골에서 우세한 CNP 형태는 알려져 있지 않다. CNP-53과 CNP-22는 NPR-B에 유사하게 결합한다. 또한, 이들은 모두 용량-의존적 및 유사한 방식으로 cGMP 생산을 유도한다(VT Yeung, Peptides, 17: 101-106(1996)).
천연 CNP 유전자 및 폴리펩타이드는 이미 기술되어 있다. 미국특허 제5,352,770호는 인간 CNP와 서열이 동일한 돼지 뇌에서 분리되고 정제된 CNP-22 및 심혈관 징후의 치료에 있어서 그의 용도를 개시한다. 미국특허 제6,034,231호는 인간 유전자 및 proCNP의 폴리펩타이드(126개 아미노산) 및 인간 CNP-53 유전자 및 폴리펩타이드를 개시한다.
세포외 공간으로부터 CNP의 제거는 CNP를 급속히 분해하는 막-결합 중성 엔도펩티다아제(NEP)의 작용을 통해 일어나며(Biochem. J., 291(Pt 1): 83-88(1993)), NPR-C를 통해, CNP에 결합하고, 리소좀에 CNP를 침착시키고, 거기에서 CNP가 분해된다. CNP는 정상 인간에서 2.6분의 생체내 반감기를 갖는 것으로 밝혀졌다(J. Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35(1994)). 많은 조직에서 CNP의 낮은 혈장 농도(J. Bone Moner. Res., 19(Suppl.1)S20(2004))와 NPR-B와의 공동 발현은 CNP가 주로 자가 자가분비/측분비 메커니즘을 통해 기능한다는 것을 시사한다.
상기한 바와 같이, CNP는 구아닐릴 시클라제 B(GC-B)로도 불리우는 나트륨이뇨 펩타이드 수용체 B(NPR-B)에 결합하고, 이를 활성화시켜 더 높은 세포내 사이클릭 구아노신 모노포스페이트(cGMP) 수준을 유도한다. cGMP 생성에 의해 매개되는 하류 신호전달(signaling)은 연골내 골화(endochondral ossification)를 포함하는 다양한 생물학적 과정에 영향을 미친다. 따라서, 이 경로의 구성 요소 중 하나의 상승된 또는 저하된 수준은 비정상적인 뼈 또는 연골 성장을 초래할 수 있다. 예를 들어, 마우스 모델에서 CNP 또는 NPR-B의 녹아웃은 더 짧은 장골 및 척추를 갖는 왜소한 표현형을 갖는 동물이 생성된다. 적절한 CNP 신호전달을 차단하는 인간 NPR-B의 돌연변이가 확인되었으며, 왜소증이 야기된다(Olney, et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 91(4): 1229-1232 (2006); Bartels, et al., Am. J. Hum. Genet. 75: 27-34 (2004)). 대조적으로, 상승된 수준의 CNP를 생산하도록 조작된 마우스는 길어진 장골과 척추를 나타낸다.
연골형성부전증은 연골 형성의 이상을 일으키는 섬유아세포 성장 인자 수용체 3(FGFR-3) 유전자의 상 염색체 우성 변이의 결과이다. FGFR-3은 일반적으로 연골세포의 성장 및 뼈의 성장에 부정적인 조절 효과를 갖는다. 연골형성부전증에서는 FGFR-3의 돌연변이 형태가 구성적으로 활성화되어, 심하게 뼈가 짧아진다. 연골세포의 증식과 분화가 모두 방해되어 성장판 연골이 현저하게 짧아지는 것으로 나타난다(P. Krejci et al., J. Cell Sci. 118: 5089-5100(2005)). 연골내 골화는 길이방향 장골 성장을 조절하는 과정이다. 성장판에는 휴지부, 증식부, 비대부 및 석회화부의 네 구역이 있다. 성장판에서 NPR-B는 증식세포에 의해 발현되는 반면, NPR-C는 비대세포에 의해 발현된다(Yamashite et al., J. Biochem. 127: 177-179(2000)). 정상적인 연골내골 성장에서 연골세포는 컬럼에서 조직화되고, 성장판의 증식 영역에서 증식한다. 이 컬럼들은 연골형성부전증 환자에서는 분열되어 있다. 또한, 비대 구역은 세포가 커지고 결국 세포사멸(apoptose)(용해)되어 골세포 침습과 광물화(mineralization)로 이어진다. 비대 연골세포와 전체 구역 크기는 연골형성부전증 환자에서 정상적인 환자보다 훨씬 작다. CNP는 연골세포와 뼈 성장의 양성 조절자인 NPR-B의 작용제이다. CNP/NPR-B의 하류 신호전달은 미토겐-활성화 단백질 키나아제(MAP K)의 수준에서 FGFR-3 경로를 억제한다. MAP K에서의 억제는 성장판의 증식부 및 비대부 구역에서 연골세포의 증식 및 분화를 촉진하여, 뼈를 성장시킨다.
인간에서 FGFR-3의 변이를 활성화시키는 것은 유전적 왜소증의 주요 원인이다. 활성화된 FGFR-3을 갖는 마우스는 골 이형성증의 가장 흔한 형태인 연골형성부전증의 모델이 되고, CNP의 과다 발현은 왜소증에서 이 동물들을 구제한다. 따라서, CNP 및 CNP의 기능성 변이체는 다양한 골 이형성증의 치료를 위한 잠재적인 치료제이다.
CNP의 치료적 사용은 현재 짧은 혈장 반감기에 의해 제한되며, 이는 인간에서 생체내에서 2.6분인 것으로 나타났다(J Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35(1994)). 인간 혈장에서 전형적으로 발견되는 내인성 수준(약 5pM) 이상으로 CNP 농도를 증가시키기 위해, 전신 투여된 CNP를 사용하는 모든 인간 및 동물 연구에서 지속적인 주입이 필요하다. 인간 혈장에서 CNP의 반감기가 감소하는 두 가지 메커니즘은 중성 엔도펩티다아제(NEP)에 의한 분해 및 나트륨이뇨 펩타이드 수용체 C(NPR-C)에 의한 제거이다(Growth Horm. & IGF Res., 16: S6-S14 (2006)). 보다 긴 생체내 혈청 반감기를 갖고, 야생형 CNP의 활성과 유사한 또는 개선된 활성을 나타내는 CNP 변이체는 지속가능한 치료 전략에 중요하다.
CNP의 다양한 유사체 및 유도체의 생물학적 활성이 평가되었다. 예를 들어, CNP-22의 키메라 및 바소나트린 펩타이드(VNP)로 지칭되는 ANP의 5-아미노산 C-말단을 개시하는 미국특허 제7,276,481호, PCT 공보 WO 94/20534를 참조한다. 미국특허 제8,198,242호 및 제8,598,121호는 연골형성부전증과 같은 골 이형성증을 치료하기 위한 CNP 변이체의 용도를 개시하고있다. 미국특허 제7,642,243호 및 제8,658,373호에는 관절염을 치료하기 위한 CNP-22 또는 CNP-53의 변이체의 용도가 기술되어 있다.
본 발명은 CNP 변이체 펩타이드가 본원에 기술된 바와 같이 특정 투여량 이상으로 및/또는 특정 약물 투여 요법하에 투여되는 경우, 골 이형성증으로부터 고통받는 개체내 골 이형성증을 치료하거나, 하나 이상의 골 이형성증-관련 증상(들)을 치료하거나, 또는 골 이형성증의 하나 이상의 결과(들) 또는 생리학적 증상(들)을 개선하기 위한 CNP 변이체 펩타이드의 용도에 관한 것이다. CNP 변이체 펩타이드의 투여가 연골형성부전증 개체에서 성장 속도를 개선시킬 수 있다는 사실이 본원에 개시되어 있다. 다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 CNP-38 또는 Pro-Gly-CNP-37이다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물을 그것을 필요로 하는 개체에게 적어도 7.5μg/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는 골 이형성증을 치료하는 방법으로서, 상기 투여가 골 이형성증을 치료하거나, 또는 골 이형성증의 적어도 하나의 증상 또는 생리학적 결과를 개선시키는, 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 치료는 증가된 절대 성장, 개선 또는 증가된 성장 속도, 증가된 QCT 골 무기질 밀도(BMD), 성장판 형태 개선, 장골의 성장 증가, 척추의 형태 개선, 팔꿈치 관절의 운동 범위의 개선 또는 증가, 수면 무호흡증의 감소로 구성된 그룹으로부터 선택된 골 이형성증의 하나 이상의 증상 개선이다.
일 구현예에서, 골 이형성증은 연골형성부전증(achondroplasia), 연골형성저하증(hypochondroplasia), 단신(short stature), 왜소증(dwarfism), 골 연골 이형성증(osteochondrodysplasias), 치사성 이형성증(thanatophoric dysplasia), 골형성 부전증(osteogenesis imperfecta), 연골무발생증(achondrogenesis), 점상 연골형성부전증(chondrodysplasia punctata), 동형접합성 연골형성부전증(homozygous achondroplasia), 점상 연골형성부전증(chondrodysplasia punctata), 굴지 형성이상(camptomelic dysplasia), 선천성 치사성 저인산증(congenital lethal hypophosphatasia), 태아 선천성 불완전 골형성증(perinatal lethal type of osteogenesis imperfecta), 단늑골 다지증 증후군(short-rib polydactyly syndromes), 연골형성저하증(hypochondroplasia), 점상연골 이형성증(rhizomelic type of chondrodysplasia punctata), 쟌센형 골간단 연골이형성증(Jansen-type metaphyseal dysplasia), 선천척추골단이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita), 아텔로스테오제네시스(atelosteogenesis), 이영양성 형성이상(diastrophic dysplasia), 선천성 단발성 대퇴골(congenital short femur), 랑거형 전완부 이형성증(Langer-type mesomelic dysplasia), 니버겔트형 전완부 이형성증(Nievergelt-type mesomelic dysplasia), 로비노 증후군(Robinow syndrome), 라인하르트 증후군(Reinhardt syndrome), 선단이골증(acrodysostosis), 말단 이골증(peripheral dysostosis), 니스트 이형성증(Kniest dysplasia), 섬유연골형성(fibrochondrogenesis), 로버트 증후군(Roberts syndrome), 전완하퇴말단 형성이상(acromesomelic dysplasia), 소지증(micromelia), 모르키오 증후군(Morquio syndrome), 니스트 증후군(Kniest syndrome), 유기영양 이형성증(metatrophic dysplasia) 및 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia)으로 구성된 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, 골 이형성증은 연골형성부전증이다.
CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물을 그것을 필요로하는 개체에 7.5μg/kg 이상의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 장골 성장을 증가시키는 방법으로서, 상기 투여가 장골 성장을 증가시키는 방법이 또한 제공된다. 바람직한 구현예에서, 개체는 연골형성부전증을 갖는다.
본 발명은 또한 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물을 그것을 필요로하는 개체에게 7.5μg/kg 이상의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 성장의 속도(즉, 성장 속도)를 증진 또는 증가시키는 방법으로서, 상기 투여가 개체에서 성장 속도를 증진시키거나 증가시키는 방법을 고려한다. 바람직한 구현예에서, 개체는 연골형성부전증을 갖는다. 다양한 구현예에서, 성장 속도의 증진 또는 증가는 개체의 기준선으로부터 25%-50% 변화 범위에서 연간 성장 속도의 증가이다. 일 구현예에서, 성장 속도의 증진 또는 증가는 개체의 기준선으로부터 적어도 약 25%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40% 변화의 연간 성장 속도 증가이다.
성장 속도의 개선은 키(standing height), 앉은 키, 체중, 머리 둘레, 상완(upper arm) 길이, 로어암(lower arm) 길이, 상지(upper leg) 길이, 하지(lower leg) 길이, 손 길이 및/또는 발 길이를 측정함으로써 평가될 수 있는 것으로 고려된다.
본원에 기술된 다양한 방법 및 조성물에서, CNP 변이체 펩타이드는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00001
Figure pct00002
다양한 바람직한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 CNP-38 또는 Pro-Gly-CNP-37이다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, 투여되는 CNP 변이체 펩타이드의 양은 약 7.5 ㎍/kg 내지 약 100 ㎍/kg, 바람직하게는 약 7.5 ㎍/kg 내지 약 80 ㎍/kg, 보다 바람직하게는 약 7.5 ㎍/kg 내지 약 60 ㎍/kg이다. 다양한 구현예에서, 투여되는 CNP 변이체 펩타이드의 양은 적어도 약 7.5 ㎍/kg, 적어도 약 15 ㎍/kg, 적어도 약 30 ㎍/kg 또는 적어도 약 60 ㎍/kg이다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 함유하는 조성물 또는 제형은 피하 또는 비경구로, 바람직하게는 피하로 투여된다. 또한, CNP 변이체 펩타이드는 다른 경로로 투여되는 것으로 고려된다. 예시적인 투여 경로는 피하, 관절내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피내, 경막내, 복강내, 근육내, 피내, 경막내, 국소, 경피 또는 경점막 투여를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형은 단일 치료 또는 다수의 투여량으로 개체에게 투여된다. 다수의 투여량은 치료과정동안 1일 1회 또는 다수의 투여량으로 투여될 수 있다. 다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형이 단일 투여량 또는 다수의 투여량으로, 매일, 격일마다, 3일마다, 주당 2회, 주당 3회, 매주, 격주, 3주마다, 매월, 6주마다, 2개월마다, 3개월마다 또는 담당 의사가 적절하다고 판단한 기타 간격으로 투여되는 것으로 고려된다. 특히 바람직한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형은 개체에게 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월 또는 그 이상의 기간동안 1일 1회 투여된다.
본원에 기술된 방법의 특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여는 예방 또는 치료적 치료 기간 후에 회복 기간을 허용하도록 조정된다. 예를 들어, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형은 관절내, 피하, 정맥내 또는 다른 방식으로 일정 기간동안 매일 또는 일주일에 여러 번 투여한 후 무치료 기간후, 이어서 이 사이클이 반복될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료(예를 들어,CNP 변이체 펩타이드를 매일 또는 1주일에 여러 번 투여)의 초기 기간은 3일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주간이다. 관련 구현예에서, 무치료 기간은 3일, 1주, 2주, 3주 또는 4주간 지속된다. 특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드의 투여 요법은 3일간 매일, 이후 3일간 중단; 또는 1주일간 매일 또는 1주일에 여러 번, 이후 3일 또는 1주일 중단; 또는 2주간 매일 또는 1주일에 여러 번, 이후 1주 또는 2주 중단; 또는 3주간 매일 또는 1주일에 여러 번, 이후 1, 2 또는 3주 중단; 또는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주간 매일 또는 1주일에 여러 번, 이후 1, 2, 3 또는 4주 중단이다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여가 등급 2 이상으로 평가된 개체에서 부작용을 일으키지 않거나 초래하지 않는 것이 바람직하다. 본원에 기술된 방법의 다른 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여는 상기 개체내 혈액 헤모글로빈 농도, 혈액 혈소판 수, 혈액 전해질 농도, 혈액 요소 질소 농도, 혈액 크레아티닌 농도, 혈액 알칼리성 포스파타아제 농도, 혈액 알라닌 아미노트랜스퍼라제 농도 및/또는 혈액 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 농도의 임상적으로 유의한 변화를 야기하지 않는다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, 바람직한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여는 기준선(즉, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여 전)과 비교하여, 약 -0.25 내지 약 0.25, 약 -0.20 내지 약 0.20, 약 -0.15 내지 약 0.15, 약 -0.10 내지 약 0.10, 또는 약 -0.05 내지 약 0.05의 (i) 상체 길이 대 하체 길이 비율, (ii) 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 또는 (ⅲ) 상지 길이 대 하지 길이 비율을 변화시킨다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물 또는 제형, 또는 본원에 기술된 방법에서 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물 또는 제형의 용도를 제공한다. 일 구현예에서, 조성물 또는 제형은 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 조성물은 약 4 내지 약 6의 pH를 갖는 시트르산/시트레이트 완충액 또는 아세트산/아세테이트 완충액을 포함하는 액체의 또는 동결건조된 제형으로부터 제조된다. 다양한 구현예에서, pH는 약 5.5이다.
또한, 제2 제제의 투여를 추가로 포함하는, 본원에 기술된 치료 방법이 고려된다.
다양한 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물 또는 제형에 사용되는 CNP 변이체 펩타이드는 소수성 산에 부착될 수 있고, 하나 이상의 소수성 산에 부착될 수 있다. 소수성 산의 비제한적인 예는 직쇄형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C5-C12 카르복실산(예를 들어, 펜탄산, 헵탄산 등) 및 천연 지방산을 포함한다. 소수성 산은 하나 이상의 아미노산 잔기의 N-말단, C-말단 및/또는 측쇄에 부착될 수 있다. 일 구현예에서, 소수성 산은 N-말단에 접합된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법 및 조성물에 사용되는 CNP 변이체 펩타이드는 CNP 변이체 펩타이드 및 절단가능한 펩타이드 또는 단백질, 또는 펩타이드 태그를 포함하는 키메라 또는 융합 단백질이다. 예시적인 절단가능한 단백질 또는 펩타이드는 히스티딘(예를 들어, 헥사-His) 태그; TAF12: 인간 전사 인자 TAF12; KSI: 케토스테로이드 이성질화 효소; MBP: 말토스-결합 단백질; β-Gal: β-갈락토시다아제; GST: 글루타티온-S-트랜스퍼라제; Trx: 티오레독신; CBD: 키틴 결합 도메인; BMPM: BMP-2 돌연변이, SUMO, CAT, TrpE, 포도상구균 단백질 A, 연쇄상구균 단백질, 전분-결합 단백질, 엔도글루카나제 A의 셀룰로스-결합 도메인, 엑소글루카나제 Cex의 셀룰로스-결합 도메인, 바이오틴-결합 도메인, recA, Flag, c-Myc, 폴리(His), 폴리(Arg), 폴리(Asp), 폴리(Gln), 폴리(Phe), 폴리(Cys), 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질, 시안 형광 단백질, 바이오틴, 아비딘, 스트렙타비딘, 항체 에피토프 및 이들의 단편을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
본원에 기술된 다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 단량체 또는 이량체일 수 있다. 관련 구현예에서, 이량체 CNP 변이체 펩타이드의 단량체는 링커를 통해 또는 링커없이, N-말단 내지 N-말단에, 링커를 통해 또는 링커없이, N-말단 내지 C-말단에, 또는 링커를 통해 또는 링커없이, C-말단 내지 C-말단에 부착될 수 있다.
본원에 개시된 임의의 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 야생형 CNP-22와 실질적으로 동일하거나 더 우수한 생물학적 활성을 가질 수 있다. 예를 들어, CNP 변이체 펩타이드는, 예를 들어, cGMP의 생성을 촉진시키기 위해 NPR-B(GC-B)와의 상호작용과 관련하여, 야생형 CNP-22의 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상을 보유할 수 있거나, CNP-22보다 더 큰 활성을 가질 수 있다. 선택적으로, 또는 부가적으로, CNP 변이체 펩타이드는 연골세포의 증식, 연골세포의 분화, 미토겐 활성화 단백질(MAP) 키나아제/MEK(Raf-1) 키나아제 신호전달 경로의 억제, 연골내 골화의 촉진을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 연골내 골 성장과 연골세포 활성을 조절하는 것과 관련하여, 야생형 CNP-22의 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 보유할 수 있거나, CNP-22보다 더 큰 활성을 가질 수 있다. 본원에 기술된 임의의 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 야생형 CNP-22의 아미노산 6-22 또는 1-22과 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 동일하거나 상동인 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 연골 표적화를 촉진하고, 신장 정화치(renal clearance)를 감소시키며, 및/또는 NEP 분해에 대한 내성을 증가시키기 위해 예를 들어, N-말단 및/또는 C-말단에서 접합부(들) 또는 연장부(들)을 선택적으로 가질 수 있다. 상기 접합부(들) 또는 연장부(들)은 예를 들어 폴리Asp, 폴리Glu, 연골-표적화 펩타이드, 시알로단백질, PEG, 탄수화물, 소수성 산, NPPC 또는 비-CNP (폴리)펩타이드, 또는 이들의 조합물로부터 형성되거나 유도된 분자 또는 서열을 포함할 수 있다.
CNP 변이체 펩타이드는 예를 들어, 헵탄산, 펜탄산 또는 지방산과 같은 소수성 중합체 또는 비-중합체 잔기에 접합될 수 있다는 것이 또한 고려된다. 소수성 모이어티는 리신, 세린, 시스테인 또는 트레오닌을 포함하지만 이에 한정되지 않는 아미노산 잔기의 측쇄에 접합되거나, 또는 CNP 변이체의 N-말단 및/또는 C-말단에 부착될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 방법에 유용한 CNP 변이체 펩타이드는 약 8 내지 약 10.5, 또는 약 8.5 내지 약 10의 범위의 pI를 갖는다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 CNP 변이체 펩타이드, 임의로 또다른 생물학적 활성제, 및 임의로 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물의 용도를 제공한다. 다양한 구현예에서, 상기 조성물은 비경구 주사에 적합한 멸균 약학 조성물이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 실질적으로 순수한, 예를 들면, 적어도 약 90% 또는 95%의 순도를 갖는 CNP 변이체 펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 다른 인간 단백질, 돼지 단백질 또는 CNP-53 또는 그의 단편(원하는 CNP 변이체 펩타이드외)과 같은 오염물을 약 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 0.5% 미만 함유한다. 다양한 구현예에서, 멸균 조성물은 본원에 개시된 골 이형성증 또는 골 이형성증의 하나 이상의 증상 또는 생리학적 결과를 치료 또는 예방하기 위해 개체에게 투여된다.
본 발명에서 유용한 CNP 변이체 펩타이드는 CNP 활성을 유리하게 보유하고, 증가된 혈청 반감기를 나타낸다. CNP 활성의 보유는 예를 들어, 원하는 생체내 생물학적 효과의 보유로서, 또는 동일한 농도(예를 들어, 1 μM의 CNP 펩타이드 또는 ED80보다 큰)에서 CNP-22의 cGMP 촉진 활성의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 적어도 약 100% 보유로서 보여질 수 있다. 일부 구현예에 있어서, CNP 변이체 펩타이드는 CNP-22에 비해 혈청 반감기의 적어도 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배 또는 40배 증가를 나타낸다.
관련된 구현예에서, 본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드는 증가된 NEP 내성을 가지며, 야생형 CNP-22와 비교하여 증가된 반감기를 나타낸다. 일 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드의 반감기는 야생형 CNP-22와 비교하여, 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 약 100% 증가된다.
골 이형성증 및 골 이형성증과 관련된 본원에 기술된 증상 또는 다른 생리학적 징후의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 본원에 기술된 상기 CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 용도도 고려된다. 주사기, 예를 들어, 일회용 또는 미리-채워진 주사기, 멸균 밀폐 용기, 예를 들어, 상기 CNP 변이체 펩타이드, 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형 중 임의의 것을, 임의로 사용하기에 적합한 지침서와 함께 포함하는 바이알, 병, 용기 및/또는 키트 또는 패키지가 또한 본원에서 고려된다.
또한, (a) 본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드 및 (b) 완충제, 등장성 제제, 안정화제 및 흡착방지제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 제형이 고려된다. 특히 바람직한 구현예에서, 제형에 사용되는 완충제는 시트르산 일수화물, 시트르산 나트륨 이수화물 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 또다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 제형에 사용되는 등장성 제제는 트레할로스 이수화물, D-만니톨 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 제형에 사용되는 안정화제는 L-메티오닌이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 제형에 사용되는 흡착방지제는 폴리소르베이트 80이다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 제형은 동결건조되거나, 액체 형태, 또는 이전에 동결건조된 형태로부터 재구성된 액체 형태이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제형은 방부제가 없고, 선택적으로 타입 1 비처리 붕규산 유리 바이알 내에 들어잇을 수 있다. 선택적으로, 본 발명의 제형은 약 5.0 내지 약 6.0, 바람직하게는 약 5.5의 범위의 pH를 갖는다.
다른 구현예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 2.0 mg/ml, 5.0 mg/ml, 10.0 mg/ml 또는 그 이상의 농도로 CNP 변이체 펩타이드를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 본 발명의 제형은 약 10.0 mg/ml의 농도로 CNP 변이체 펩타이드를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 상기 제형의 CNP 변이체 펩타이드는 CNP-38 또는 Pro-Gly-CNP-37이다.
다른 구현예에서, 본 발명의 제형은 본원에 기술된 바와 같은 CNP 변이체 펩타이드, 시트르산 일수화물, 시트르산 나트륨 이수화물, 트레할로스 이수화물, D-만니톨, L-메티오닌 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 바람직한 특정 구현예에서, 상기 CNP 변이체 펩타이드는 약 2.0 mg/ml 내지 약 10.0 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 시트르산 일수화물은 약 0.15 mg/ml 내지 약 0.40 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 시트르산 나트륨 이수화물은 약 0.5 mg/ml 내지 약 1.5 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 트레할로스 이수화물은 약 30 mg/ml 내지 약 70 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 D-만니톨은 약 10 mg/ml 내지 약 20.0 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 L-메티오닌은 약 0.5 mg/ml 내지 약 1.5 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.1 mg/ml의 농도로 존재한다. 특히 바람직한 구현예에서, 상기 CNP 변이체는 약 10.0 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 시트르산 일수화물은 약 0.28 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 시트르산 나트륨 이수화물은 약 1.08 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 트레할로스 이수화물은 약 58.01 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 D-만니톨은 약 15.0 mg/ml의 농도로 존재하며, 상기 L-메티오닌은 약 0.73 mg/ml의 농도로 존재하며, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.05 mg/ml의 농도로 존재한다.
본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드-함유 제형은 유용하고, 본원에 기술된 다양한 방법에 사용될 수 있다.
본원에 기술된 각각의 특징 또는 구현예, 또는 조합은 본 발명의 양태들 중 임의의 양태에 대한 비제한적이고 예시적인 예이며, 그 자체로 본원에 기술된, 임의의 다른 특징 또는 구현예, 또는 조합과 조합될 수 있다는 것을 의미한다고 이해된다. 예를 들어, "일 구현예", "일부 구현예", "추가 구현예", "예시적인 특정 구현예" 및/또는 "다른 구현예"와 같은 언어로 특징이 설명되는 경우, 이들 유형의 구현예 각각은 모든 가능한 조합을 나열할 필요없이 본 명세서에 기술된 임의의 다른 특징 또는 특징들의 조합과 조합되도록 의도된 특징의 비제한적인 예이다. 이러한 특징 또는 특징들의 조합은 본 발명의 임의의 양태에 적용된다. 범위 내에 속하는 값의 예가 개시되는 경우, 상기 예들 중 하나는 범위의 가능한 종점으로 간주되며, 상기 종점 사이의 임의의 및 모든 수치값이 고려되며, 상한 및 하한 종점의 임의의 및 모든 조합이 구상된다.
본 발명은 골 이형성증, 골 이형성증의 하나 이상의 증상 또는 생리학적 결과 및 골 이형성증 및/또는 CNP-관련 증상 또는 성분을 갖는 다른 장애를 치료하기 위한 CNP 변이체 펩타이드의 사용 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물 및 제형 및, 골 이형성증 또는 골 이형성증의 증상 또는 생리학적 결과를 치료하고, 이를 필요로하는 개체에서의 장골 성장을 증가시키고, 이를 필요로 하는 개체, 예를 들어 골 이형성증을 앓고 있는 개체에서 성장 속도를 개선 또는 증가시키기 위한 상기 조성물 또는 제형의 용도에 관한 것이다.
A. 정의
달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 청구범위를 비롯한 본원에서 사용된 하기 용어는 하기 주어진 정의를 갖는다.
명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 개체의 단수와 복수는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수형 및 단수형 개체를 포함한다.
"약" 또는 "대략"이라는 용어는 당업자에 의해 결정된 특정 값에 대한 수용가능한 오차를 의미하며, 이는 값이 어떻게 측정되거나 결정되는지에 부분적으로 의존한다. 특정 구현예에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 1, 2, 3 또는 4 표준 편차내에 있음을 의미한다. 특정 구현예에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범의의 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.05%내에 있음을 의미한다. "약" 또는 "대략"이라는 용어가 일련의 둘 이상의 수치에서 첫번째 수치 앞에 있을 때마다, "약" 또는 "대략"이라는 용어는 해당 수치들 각각에 적용된다고 이해된다.
표준 화학 용어의 정의는 Carey and Sundberg, Advanced Organic Chemistry, 3rd Edition, Vols. A and B (Plenum Press, New York 1992)를 포함하는, 참고문헌에서 찾아볼 수 있다. 본 발명의 실시는 당 기술내에서 달리 지시되지 않는 한, 합성 유기 화학, 질량 분광법, 예비 및 분석 크로마토 그래피, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 특정 통상적 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., 4th Edition, 2004); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)를 참조한다.
본원에 인용된 상기 또는 하기의 모든 공보, 특허 및 특허출원은, 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
다음의 아미노산 약어가 본문 전반에 걸쳐 사용된다:
알라닌: Ala (A) 아르기닌: Arg (R)
아스파라긴: Asn (N) 아스파르트산: Asp (D)
시스테인: Cys (C) 글루타민: Gln (Q)
글루탐산: Glu (E) 글리신: Gly (G)
히스티딘: His (H) 이소류신: Ile (I)
류신: Leu (L) 리신: Lys (K)
메티오닌: Met (M) 페닐알라닌: Phe (F)
프롤린: Pro (P) 세린: Ser (S)
트레오닌: Thr (T) 트립토판: Trp (W)
티로신: Tyr (Y) 발린: Val (V)
본원에서 폴리펩타이드 또는 펩타이드 서열의 왼쪽 끝은 아미노-말단이고; 폴리펩타이드 서열의 오른쪽 끝은 카르복실-말단인 폴리펩타이드 및 펩타이드 서열을 나타내기 위해 관례적인 기호가 사용된다.
일 구현예에서, 상기 방법에서 유용한 본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드는 CNP 변이체 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 사용하여 재조합 수단을 통해 생성된다. 상기 폴리뉴클레오티드에 의해 발현된 CNP 변이체 펩타이드는 CNP 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건하에 배양 배지에서 숙주 세포를 성장시키는 단계, 및 발현 산물을 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성될 수 있다. 실제 발현 산물은 번역 후 가공에 따라, 코딩된 단백질 산물과 약간 다를 수 있다. 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드를 생산하는 방법은 본원에 참고로 포함된 미국특허 제8,198,242호에 적어도 개시되어 있다.
2개 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩타이드 서열의 문맥에서 용어 "동일한" 및 % "동일성"은 하기 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여, 또는 육안 검사를 통해 측정되는 바와 같이, 최대 대응을 위해 비교 및 정렬될 때, 동일하거나, 동일한 특정 백분율의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 갖는 2개 이상의 서열 또는 부분서열을 지칭한다.
2개의 핵산 또는 폴리펩타이드의 문맥에서 "실질적으로 동종인" 또는 "실질적으로 동일한"이란 구절은 일반적으로 하기 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여, 또는 육안 검사를 통해 측정되는 바와 같이, 최대 대응을 위해 비교 및 정렬될 때, 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98% 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 동일성을 갖는 2개 이상의 서열 또는 부분서열을 지칭한다. 특정 구현예에서, 서열의 길이가 적어도 약 25, 50, 100 또는 150개의 잔기인 서열의 영역에 걸쳐 실질적인 상동성 또는 동일성이 존재한다. 또다른 구현예에서, 서열은 비교 바이오폴리머 중 하나 또는 둘다의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 상동성이거나 동일하다.
서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 시험 서열이 비교되는 기준 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용할 때, 시험 및 기준 서열이 컴퓨터에 입력되고, 필요하다면 부분서열 좌표가 지정되며, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 기준 서열에 대한 시험 서열(들)에 대한 퍼센트 서열 동일성을 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어 Smith & Waterman, Adv. Appl. Math., 2: 482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘에 의해, Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol., 48: 443 (1970)의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444 (1988)의 유사도 방법에 대한 연구에 의해, 상기 알고리즘들(GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI)의 전산화 구현에 의해 또는 육안 검사에 의해 진행될 수 있다. 유용한 알고리즘의 한 예가 PILEUP이며, 이는 Feng & Doolittle, J. Mol. Evol., 35: 351-360 (1987)의 점진적 정렬 방법의 단순화를 사용하며, Higgins & Sharp, CABIOS, 5: 151-153 (1989)에 기술된 방법과 유사하다. 서열의 다수의 정렬을 생성하는데 유용한 다른 알고리즘은 Clustal W(Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22: 4673-4680 (1994))이다. 퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사도를 측정하기에 적합한 알고리즘의 예는 BLAST 알고리즘(Altschul et al., J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990); Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 10915 (1989); Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5787 (1993))이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 사용가능하다.
"야생형"(wt)은 한 종에서 폴리뉴클레오티드, 폴리펩타이드 또는 단백질의 서열을 포함하는 천연 형태를 지칭하는 용어이다. 야생형 형태는 유전적 돌연변이(genetic mutation)(들)로 인해 발생하는 폴리뉴클레오티드, 폴리펩타이드 또는 단백질의 돌연변이체 형태와 구별된다.
일 구현예에서, 제2 펩타이드의 "유사체" 또는 "변이체" 또는 "유도체"인 제1 펩타이드는 제2 펩타이드와 적어도 약 50%, 60% 또는 70%의 서열 상동성을 갖지만 100% 미만의 서열 상동성을 갖는 펩타이드이다. 이러한 유사체, 변이체 또는 유도체는 자연 발생 아미노산 잔기뿐만 아니라 호모아르기닌, 오르니틴, 페니실라민 및 노르발린을 제한없이 포함하는 비-자연 발생 아미노산 잔기로 구성될 수 있다.
나트륨이뇨 펩타이드 전구체 C(NPPC) 폴리펩타이드는 단일 사슬 126-아미노산 프리-프로 폴리펩타이드이며, 절단시 최종적으로 야생형 CNP-22(wtCNP-22)를 생성한다. NPPC에서 신호 펩타이드를 제거하면 프로(pro)-CNP가 생성되고, 엔도프로테아제 퓨린에 의해 추가 절단되면 활성 53-아미노산 펩타이드(CNP-53)가 생성되고, 다시 분비 및 분열되어 성숙한 22-아미노산 펩타이드(CNP, 또는 CNP-22)가 생성된다. 일 구현예에서, "CNP 변이체 펩타이드"는 동일한 개수의 아미노산 잔기에 대하여, 야생형 NPPC와 적어도 약 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 상동성이다. CNP 변이체 펩타이드는 NPPC 폴리펩타이드의 약 1 내지 약 53개, 또는 1 내지 38개, 또는 1 내지 37개, 또는 1 내지 35개, 또는 1 내지 31개, 또는 1 내지 27개, 또는 1 내지 22개, 또는 10 내지 35개, 또는 약 15 내지 약 37개 잔기를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, CNP 변이체는 NPPC 폴리펩타이드 유래의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 또는 53개의 아미노산의 서열을 포함할 수 있다.
용어 "효과적인 양"은 개체의 건강 상태, 병리 또는 질병에 대해 또는 진단 목적으로 원하는 결과를 생성하기에 충분한 투여량을 의미한다. 원하는 결과는 투여량으로 인한 수혜자의 주관적 또는 객관적인 개선을 포함할 수 있다. "치료적으로 효과적인 양"은 건강에 의도된 유익한 효과를 발생시키는데 효과적인 제제의 양을 지칭한다. 임의의 개별 경우에서 적절한 "효과적인" 양은 통상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 임의의 특정 환자에 대한 특정 투여 수준 및 투여 빈도는 다양할 수 있고, 사용된 특정 화합물의 활성; 그 화합물의 생체 이용률, 대사 안정성, 배설 속도 및 작용 길이; 화합물의 투여 방식 및 시간; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이 요법; 및 특정 상태의 중증도를 비롯한 다양한 인자에 좌우될 것이라는 것을 이해할 것이다.
"치료"는 예방적 치료 또는 치료적 치료 또는 진단적 치료를 지칭한다. 특정 구현예에서, "치료"는 치료, 예방 또는 진단 목적을 위해 화합물 또는 조성물을 개체에게 투여하는 것을 지칭한다.
"예방적" 치료는 병리 발생 위험을 줄이기 위해 질병의 징후를 보이지 않거나 질병의 초기 징후만을 나타내는 개체에게 투여되는 치료이다. 본 발명의 화합물 또는 조성물은 병리가 발생될 가능성을 감소시키거나, 발생한다면 병리의 중증도를 최소화하기 위한 예방적 치료로서 제공될 수 있다.
"치료적" 치료는 징후 또는 증상을 감소시키거나 제거하기 위해 병리의 징후 또는 증상을 나타내는 개체에게 투여되는 치료이다. 징후 또는 증상은 생화학적, 세포성, 조직학적, 기능적 또는 물리적, 주관적 또는 객관적일 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 치료적 치료로서, 또는 진단을 위해 제공될 수 있다.
"약학 조성물" 또는 "제형"은 인간 및 포유동물을 비롯한 해당 동물의 약학적 용도에 적합한 조성물을 지칭한다. 약학 조성물은 치료적으로 효과적인 양의 CNP 변이체 펩타이드, 임의로 다른 생물학적 활성제 및 임의로 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함한다. 일 구현예에서, 약학 조성물은 활성 성분(들) 및 담체를 구성하는 불활성 성분(들)을 포함하는 조성물뿐만 아니라, 임의의 2개 이상의 성분의 조합, 복합체화 또는 응집으로부터, 또는 하나 이상의 성분의 해리로부터, 또는 하나 이상의 성분의 다른 유형의 반응 또는 상호 작용으로부터 직접 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포함한다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 화합물을 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제와 혼합하여 제조된 임의의 조성물을 포함한다.
"약학적으로 허용가능한 담체"는 인산 완충 식염수 용액, 덱스트로스의 5% 수용액 및 에멀젼(예를 들어, 오일/물 또는 물/오일 에멀젼)과 같은 임의의 표준 약학 담체, 완충제 등을 지칭한다. 부형제의 비제한적인 예는 보조제, 결합제, 충전제, 희석제, 붕해제, 유화제, 습윤제, 윤활제, 활택제, 감미제, 풍미제 및 착색제를 포함한다. 적합한 약학 담체, 부형제 및 희석제는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed. (Mack Publishing Co., Easton, 1995)에 기술되어 있다. 바람직한 약학 담체는 활성 제제의 의도된 투여 방식에 좌우된다. 전형적인 투여 방식은 장내(예를 들어, 경구) 또는 비경구(예를 들어, 피하, 근육내, 정맥내 또는 복강내 주사; 또는 국소, 경피 또는 경점막 투여)를 포함한다.
"약학적으로 허용가능한 염"은 금속염(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등) 및 암모니아 또는 유기 아민의 염을 포함하지만 이에 한정되지 않는, 약학적 용도를 위한 화합물로 제형화될 수 있는 염이다.
"약학적으로 허용가능한" 또는 "약리학적으로 허용가능한"은 생물학적으로 또는 다른 방식으로 바람직하지 않은 물질이 아닌 것을 의미하며, 즉, 상기 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않거나, 또는 바람직하지 않은 방식으로 그것이 함유된 조성물의 성분과, 또는 개체의 신체위 또는 신체내에 존재하는 임의의 성분들과 상호작용하지 않으면서 개체에 투여될 수 있다.
"생리적 조건"은 동물(예를 들어, 인간)의 신체내 조건을 지칭한다. 생리적 조건은 체온 및 생리적 이온 강도, pH 및 효소의 수성 환경을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 생리적 조건은 또한 대다수의 개체에 존재하는 "정상적인" 조건과 다른, 예를 들어 정상인의 체온인 약 37℃와 다르거나 정상인의 혈액 pH인 약 7.4와 다른, 특정 개체의 신체내 조건을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "개체"라는 용어는 포유동물 및 비-포유동물을 포함한다. 포유동물의 예는 포유동물 종류의 임의의 구성원: 인간, 비-인간 영장류, 예컨대 침팬지 및 다른 유인원들 및 원숭이 종; 소, 말, 양, 염소, 돼지와 같은 사육동물(farm animal); 토끼, 개, 및 고양이와 같은 가축; 래트, 마우스 및 기니아 피그와 같은 설치류를 비롯한 실험용 동물 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 비-포유동물의 예는 조류, 어류 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 이 용어는 특정 연령이나 성별을 나타내지 않는다.
용어 "폴리에틸렌 글리콜", "PEG", "폴리에틸렌 옥사이드" 및 "PEO"는 달리 표시되지 않는 한 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 아미노기를 통해 숫자 n과 관련된 "PEOn" 중합체에 접합된 CNP 변이체는 일반적으로 구조식: CH3-[-O-CH2CH2-]n-C(=O)-NHR을 가지며, 상기 n은 에틸렌 옥사이드 단위의 수를 나타내고, R은 펩타이드의 나머지를 나타낸다. "PEOn" 중합체는 카르보닐 탄소와 반복 에틸렌 옥사이드 단위 사이에, 알킬렌기, (CH2)m(여기에서, m은 1 내지 5의 정수임)을 임의로 가질 수 있다. 상기 "PEOn"(예를 들어, PEO12 또는 PEO24) 중합체는 단분산되며, 즉 특정 분자량의 단일 이산 중합체이다. 유사하게, 숫자 nK와 관련된 "PEGnK" 중합체에 아미노기를 통해 접합된 CNP 변이체는 일반적으로 구조식: CH3-[-O-CH2CH2-]p-C(=O)-NHR을 가지며, 여기에서 p는 1보다 큰 정수이다. "PEGnK" 중합체는 또한 카르보닐 탄소와 반복 에틸렌 옥사이드 단위 사이에 알킬렌기, (CH2)m(여기에서, m은 1 내지 5의 정수임)을 선택적으로 가질 수 있다. 그러나, 상기 "PEGnK"(예를 들어, PEG1K, PEG2K, PEG5K 또는 PEG20K) 중합체는 다분산되며, 즉 분자량 분포를 갖는 중합체의 혼합물을 함유하며, 여기서 숫자 nK는 중합체 수-평균 분자량(Mn)(킬로 달톤)을 지칭한다. 예를 들어, CNP 변이체에 접합된 "PEG2K"는 약 2 kDa의 중합체 수-평균 분자량을 갖는 다분산된 PEG 중합체를 나타낸다.
중합체(예를 들어, PEG)의 질량 범위가 주어질 때(예를 들어, kDa 단위로), 상기 범위는 달리 명시되지 않는 한, 다분산된 혼합물내 다중 중합체의 분자량 범위가 아닌, 중합체 수-평균 분자량의 범위를 지칭한다.
B. CNP 변이체 펩타이드
치료제로서의 CNP-22의 용도는 혈장내 짧은 반감기에 의해 제한된다(J. Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35 (1994)). 인간 혈장에서, CNP-22의 농도는 전형적으로 5 피코몰 미만이다. CNP-22는 인간내 NEP와 NPR-C에 의해 순환으로부터 분해되고, 제거된다(Growth Hormone & IGF Res., 16: S6-S14). 전신 투여된 CNP-22를 사용한 모든 인간 및 동물 연구에서, 개체내 CNP-22 농도를 증가시키기 위해 연속 주입이 사용되었다. 더 긴 반감기 및 적어도 유사한 수준의 작용가(functionality)를 갖는 CNP 펩타이드는 CNP-기반 치료 전략에 유익할 것이다. 개선된 특성을 갖는 CNP 변이체 펩타이드는 국제출원 WO2009/067639 및 WO 2010/135541 및 미국특허 제8,198,242호, 제8,598,121호 및 제8,377,884호에 개시되어 있으며, 이들은 모두 본원에 참고로 포함된다.
특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 CNP-37 또는 CNP-38의 유도체이다. CNP-37 변이체 펩타이드는 CNP-37의 37개 위치 중 어느 하나 이상에서 천연 또는 비천연 아미노산(들) 또는 펩티도 유사체(들)(예를 들어, 펩타이드 결합 동배체(들))에 의한 아미노산 부가(들), 결실(들) 및/또는 치환(들)을 함유할 수 있다. CNP-22의 넘버링에 기초하여 CNP-37에서 제조될 수 있는 치환의 비제한적인 예는 K4R, G5S, G5R, G8S, K10R, G15S, S16Q, M17N, G19R 및 이들의 조합들을 포함한다.
일 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 퓨린 프로테아제에 대한 생체내 내성을 개선시키기 위해 디자인된, 퓨린 절단 부위에서 돌연변이(들)/치환(들)을 갖고, 및/또는 혈장 안정성을 향상시키고, 피로글루타민 형성을 방지하도록 디자인된, N-말단에 글리신 또는 프롤린-글리신을 함유하는 변형된 CNP-37 또는 CNP-38 펩타이드이다. 예시적인 CNP-37 변이체는 하기를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다:
Figure pct00003
Figure pct00004
C. CNP 변이체 펩타이드의 합성 및 정제
일부 구현예에서, 본원에서 유용한 CNP 변이체 펩타이드는 특정 구현예에서 당 분야에 공지된 특정 기술을 사용하여 재조합 발현에 의해 생성된다. 예를 들어, Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II, D. N. Glover, Ed. (1985); 및 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)를 참조한다.
특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 융합 폴리펩타이드를 발현시키는 조건하에, 절단가능한 펩타이드 또는 단백질을 코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드에 결합된 CNP 변이체 펩타이드를 코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포를 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 재조합 방법에 의해 생성되며, 상기 융합 폴리펩타이드는 절단가능한 펩타이드 또는 단백질에 직접 결합되거나, 링커를 통해 간접적으로 결합된 CNP 변이체 펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 절단가능한 펩타이드 또는 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 연결된 CNP 변이체 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질전환된다. 특정 구현예에서, 융합 폴리펩타이드는 가용성 단백질 또는 봉입체로서 발현된다. 발현된 융합 폴리펩타이드는 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 분리될 수 있고, 상기 분리된 융합 폴리펩타이드는 절단제와 접촉되어 CNP 변이체 펩타이드를 방출할 수 있다.
CNP 변이체 펩타이드를 생산하는 방법은 본원에 참고로 포함된 미국특허 제8,198,242호, 제8,377,884호 및 제8,598,121호에 기술되어 있다.
CNP 변이체 펩타이드 생산에 사용되는 숙주 세포는 박테리아, 효모, 곤충, 비-포유동물 척추동물 또는 포유동물 세포일 수 있다. 박테리아 세포는 대장균(E. coli) 세포주 및 균주를 제한없이 포함한다. 대장균(E. coli) 세포주 및 균주의 비제한적인 예로는 BL21, BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS, BL21(DE3)pGro7, ArcticExpress(DE3), C41[C41(DE3)로도 불림], C43[C43(DE3)로도 불림], Origami B(DE3), Origami B(DE3)pLysS, KRX, 및 Tuner(DE3)가 포함된다. 일 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드 및 CNP 융합 단백질은 BL21(DE3) 세포를 사용하여 생산된다. 포유동물 세포는 햄스터, 원숭이, 침팬지, 개, 고양이, 소, 돼지, 마우스, 래트, 토끼, 양 및 인간 세포를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 상기 숙주 세포는 불멸화된 세포(세포주) 또는 불멸화되지않은(1차 또는 2차) 세포일 수 있으며, 섬유아세포, 각질 형성 세포, 상피 세포(예를 들어, 유선 상피 세포, 장 상피 세포), 난소 세포(예를 들어, 중국 햄스터 난소 또는 CHO 세포), 내피 세포, 신경교세포, 신경 세포, 혈액의 유형성분(예를 들어, 림프구, 골수 세포), 연골세포 및 기타 뼈-유래 세포 및 상기 체세포 유형의 전구체와 같은 다양한 종류의 세포일 수 있으며, 이에 한정되지 않는다. CNP 변이체 DNA 또는 RNA를 함유하는 숙주 세포는 세포의 성장, DNA 또는 RNA의 발현 및 CNP 변이체 펩타이드를 발현하는 세포의 확인/선택에 적합한 조건하에 배양된다.
특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 CNP 변이체 펩타이드 및 절단가능한 담체 단백질 또는 절단가능한 태그(예를 들어, 펩타이드 태그)를 포함하는 융합 단백질로서 재조합적으로 발현되며, 상기 융합 단백질은 절단가능한 담체 단백질 또는 태그에 직접 결합되거나, 또는 링커를 통해 간접적으로 결합된 CNP 변이체 펩타이드를 포함한다. 담체 단백질 또는 태그의 사용은 예를 들어 융합 단백질의 검출, 분리 및/또는 정제를 용이하게 한다. 절단가능한 담체 단백질 및 태그는 히스티딘(예를 들어, 헥사-His) 태그; 인간 전사인자 TAF12(TAF12), TAF12 단편, TAF12 히스톤 폴드 도메인, TAF12의 돌연변이체 및 그의 단편, TAF12(C/A), TAF12(D/E), TAF12(4D/4E), TAF12(6D/6E), TAF12(10D/10E), TAF12(C/A & D/E), TAF12(C/A & 4D/4E), TAF12(C/A & 6D/6E), TAF12(C/A & 10D/10E); 케토스테로이드 이성질화효소(KSI); 말토스-결합 단백질(MBP); β-갈락토시다제(β-Gal); 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST); 티오레독신(Trx); 키틴 결합 도메인(CBD); BMP-2, BMP-2 돌연변이체, BMP-2(C/A); SUMO; 및 그의 돌연변이체 및 단편을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
다른 구현예에서, 본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드는 펩타이드 합성기를 사용하여 합성되고, 당 분야에 공지된 방법, 예를 들어 Atherton and Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach, IRL Press (Oxford, England (1989))의 방법에 따라 정제된다.
D. CNP 변이체 펩타이드, CNP 변이체 펩타이드의 약학 조성물의 사용 방법 및 투여 경로
CNP 변이체 사용 방법
뼈-관련 장애/골 이형성증
섬유아세포 성장 인자(FGF)는 골 형성에 중요한 역할을 하며, FGF 수용체 유전자(FGFR 1, 2 및 3)의 돌연변이는 다양한 유전된 골격 기형을 유발한다(Curr. Biol., 5: 500-507(1995)). 특히, FGFR-3의 활성화 돌연변이는 인간의 유전 왜소증의 가장 흔한 형태인 연골 형성 부전증(Nature, 371: 252-254 (1994); Cell, 78: 335-342 (1994)), 경증 장애 연골형성저하증(Ann. N.Y. Acad. Sci., 785: 182-187 (1996)), 및 보다 중증의 및 신생아 치명적 치사성 이형성증(TD) I 및 II 형(Hum. Mol. Genet., 5: 509-512 (1996); Nat. Genet., 9: 321-328 (1995))을 포함하는 장골의 장애를 일으킨다. FGF-2를 과발현하는, 및 결과적으로 FGFR-3을 활성화시키는 마우스 모델은 짧아진 장골과 대두증을 나타낸다(Mol. Biol. Cell, 6: 1861-73 (1995)). 이 모델과 일치하여, FGFR-3이 결핍된 마우스는 더 넓은 성장판으로 현저한 골격 과성장을 나타낸다(Nature Genet., 12: 390-397(1996)).
연골세포의 기질 생성, 증식 및 분화를 촉진하고 장골 성장을 증가시킴으로써, 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드는 골 이형성증과 같은 뼈-관련 장애를 앓고 있는 포유동물, 예컨대 인간을 치료하는데 유용하다. CNP-반응성 뼈-관련 장애 및 골 이형성증의 비제한적 예로는 연골형성부전증(achondroplasia), 연골형성저하증(hypochondroplasia), 단신(short stature), 왜소증(dwarfism), 골 연골 이형성증(osteochondrodysplasias), 치사성 이형성증(thanatophoric dysplasia), 골형성 부전증(osteogenesis imperfecta), 연골무발생증(achondrogenesis), 점상 연골형성부전증(chondrodysplasia punctata), 동형접합성 연골형성부전증(homozygous achondroplasia), 점상 연골형성부전증(chondrodysplasia punctata),굴지 형성이상(camptomelic dysplasia), 선천성 치사성 저인산증(congenital lethal hypophosphatasia), 태아 선천성 불완전 골형성증(perinatal lethal type of osteogenesis imperfecta), 단늑골 다지증 증후군(short-rib polydactyly syndromes), 연골형성저하증(hypochondroplasia), 점상연골 이형성증(rhizomelic type of chondrodysplasia punctata), 쟌센형 골간단 연골이형성증(Jansen-type metaphyseal dysplasia), 선천척추골단이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita), 아텔로스테오제네시스(atelosteogenesis), 이영양성 형성이상(diastrophic dysplasia), 선천성 단발성 대퇴골(congenital short femur), 랑거형 전완부 이형성증(Langer-type mesomelic dysplasia), 니버겔트형 전완부 이형성증(Nievergelt-type mesomelic dysplasia), 로비노 증후군(Robinow syndrome), 라인하르트 증후군(Reinhardt syndrome), 선단이골증(acrodysostosis), 말단 이골증(peripheral dysostosis), 니스트 이형성증(Kniest dysplasia), 섬유연골형성(fibrochondrogenesis), 로버트 증후군(Roberts syndrome), 전완하퇴말단 형성이상(acromesomelic dysplasia), 소지증(micromelia), 모르키오 증후군(Morquio syndrome), 니스트 증후군(Kniest syndrome), 유기영양 이형성증(metatrophic dysplasia) 및 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia)이 포함된다. 또한, CNP 변이체는 특발성 저신장증 및 다른 골격 이형성증의 치료를 위한 성장 호르몬의 보조제 또는 대체제로서 유용하다.
또한, CNP 변이체 펩타이드는 다른 뼈-관련 상태 및 질병, 예컨대 구루병(ricket), 저인산혈성 구루병(hypophosphatemic ricket)[X-결합성 저인산혈성 구루병(비타민 D-내성 구루병이라고 함) 및 상염색체 우성 저인산혈성 구루병을 포함함], 및 골연화증(osteomalacia)[종양-유발 골연화증(암성 골연화증 또는 암성 저인산혈성 골연화증이라고 함)을 포함함]을 치료하는데 유용하다.
특정 구현예에서, 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물 및 제형은 골 이형성증의 하나 이상의 증상(들) 또는 생리학적 결과를 개선시키는데 유용하며, 상기 개선은 절대 성장 증가, 성장속도 증가, 정성적인 전산화 단층촬영(QCT) 뼈의 무기질 밀도 증가, 성장판 형태의 개선, 장골의 성장 증가, 척추 형태의 개선, 팔꿈치 관절 운동 범위의 개선 및/또는 수면 무호흡증의 감소일 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "개선된", "개선", "증가하다", "감소하다" 및 그의 문법적 균등어는 모두 질병 상태의 증상 또는 생리학적 결과와 관련하여 사용될 때, 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형)로 치료한 후의 질병의 증상 또는 생리학적 결과에 대한 상태를 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형)로 치료하기 전의 질병의 동일한 증상 또는 생리학적 결과와 비교하여(즉, "기준선"과 비교하여) 지칭하는 모든 관련 용어들이라는 것을 유의한다. 상기 기술한 바와 같이, "기준선" 상태는 치료 전의 개체 상태의 측정(치료 후 동일한 개체 상태와 나중에 비교될 수 있음)을 통해, 또는 동일하거나 유사한 특성(예를 들어, 연령, 성별 및/또는 질병 상태 또는 진행)을 공유하는 동일한 고통을 겪고있는 개체 집단의 상태의 측정을 통해 결정될 수 있다.
성장 속도 증가 또는 향상
본 발명의 조성물 및 제형은 또한 골 이형성증을 앓고 있는 개체에서 성장 속도를 향상시키거나 증가시키기 위한 목적으로 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 개체는 연골형성부전증을 앓고있다.
개체에서의 성장 속도의 측정은 당 분야에 널리 공지된 표준 기술을 사용하여 시간이 지남에 따라 이루어질 수 있다. 특정 구현예에서, 키, 앉은 키, 체중, 머리 둘레, 상완 길이, 로어암(팔뚝) 길이, 상지 길이, 하지 길이(무릎에서 발까지), 손의 길이(손목에서 손가락 끝까지) 및/또는 발 길이와 같은 변수들의 측정은 임의의 특성 변수(즉, 성장 속도)에 의해 측정된 특정 성장 속도를 결정하기 위해 특정 기간에 걸쳐 수행될 수 있다. 특정 기간에 걸친 성장 속도의 측정은 "연율화(annualized)"될 수 있으며, 특정 기간에 걸친 계산된 성장률은 1년에 걸친 예상 성장률로 변환된다. 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드로 치료하기 전에 개체의 성장 속도(즉, "기준선" 성장 속도)의 측정은 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드로 치료하는 동안 또는 치료한 후에 성장 속도의 측정치와 비교되어, 개체내 성장 속도 변화에 대한 치료의 효과가 측정될 수 있다. "기준선" 성장 속도는 또한 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드로 치료받는 개인과 동일한 일반적인 연령, 성별 및 질병 상태를 갖는 개체의 집단으로부터 결정될 수 있다.
본 발명의 CNP 변이체 펩타이드(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형)로 이를 필요로하는 개체를 치료함으로써 유도되거나 유발된 상기 기술된 변수 중 하나 이상(예를 들어, 키 등)의 평가에 의해 측정된 성장 속도의 개선은 정량적으로 측정될 수 있다. 이와 관련하여, 특정 구현예에서, 본 발명의 CNP 변이체(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형)로 치료된 개체에서 임의의 특정 변수의 성장 속도의 연간 증가 또는 향상은 기준선보다 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50%, 또는 그 이상이다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 방법은 기준선보다 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 이상의 키에 의해 측정된 성장 속도의 연간 증가를 초래한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법은 기준선보다 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 이상의 앉은 키, 체중, 머리 둘레, 상완 길이, 로어 암(팔뚝) 길이, 상지 길이, 하지 길이(무릎에서 발까지), 손 길이(손목에서 손가락 끝까지) 또는 발 길이에 의해 측정된 성장 속도의 연간 증가를 초래한다. 본원에 기술된 바와 같이, 기준선 비교기(comparator)는 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드로 동일한 개체를 치료하기 전에 특정 변수에 의해 측정된 연율화된 성장 속도일 수 있거나, 또는 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드로 치료받는 개인과 동일한 일반적인 연령, 성별 및 질병 상태의 개체의 집단으로부터 측정된 성장 속도일 수 있다.
CNP 변이체 펩타이드의 투여가 다른 신체 분절에 대한 특정 분절의 비례의 변화를 초래하는지 여부를 결정하기 위해 CNP 변이체 펩타이드로 치료하기 전후에 개체로부터 다른 신체 분절에 대한 특정 신체 분절의 비례에 관한 인체계측 데이터를 또한 얻을 수 있다. 예를 들어, CNP 변이체 펩타이드에 의한 치료가 신체 비례에 악영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해, CNP 변이체 펩타이드 치료 전(즉, 기준선)과 CNP 변이체 펩타이드 치료 후 둘 다에 상체 길이(허리부터 머리 꼭대기까지)와 하체 길이(허리부터 발까지)의 비율을 계산할 수 있다. 신체 비례에 대한 CNP 변이체 펩타이드 치료의 효과를 결정하기 위해, 팔뚝 길이에 대한 상완, 또는 하지(무릎에서 발까지)에 대한 상지의 비율이 계산되고 비교될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 개체에게 CNP 변이체 펩타이드를 투여하는 것은 기준선과 비교하여 임의의 특정 비율로 측정된 바와 같이 신체 비례의 유의한 변화를 초래하지 않는다. 이와 관련하여, 특정 구현예에서, 본 발명의 CNP 변이체 펩타이드, 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형으로 치료하면 0.5, 0.25, 0.20, 0.15, 0.10 또는 0.05 이하, 바람직하게는 0.05 이하의 임의의 상기 기술된 비율의 변화를 초래한다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여가 치료된 개체에서 2등급 이상, 또는 3등급 이상의 연구 약물에 관련된 부작용을 초래하지 않는 것이 바람직하다. 이와 관련하여, 화합물로 개체를 치료하는 것과 관련된 생리학적 반응을 측정하고 등급을 매기는 기술, 및 등급이 부여된 부작용의 목록은 http://evs.nci.nih.gov/ftp1/CTCAE/CTCAE_ 4.03_2010-06-14_QuickReference_8.5x11.pdf에서 찾을 수 있으며, 이는 본원에 참고로 통합된다.
게다가, 본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이체 펩타이드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형의 투여가 하나 이상의 하기의 생리적 변수들; 혈액 헤모글로빈 농도, 혈액 혈소판 수, 혈액 전해질 농도, 혈액 요소 질소 농도, 혈액 크레아티닌 농도, 혈액 알칼리성 포스파타아제 농도, 혈액 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 농도 또는 혈액 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 농도에 있어서 (기준선과 비교하여 증가 또는 감소하는) 임상적으로 유의한 변화를 초래하지 않는 것이 바람직하다. "임상적으로 유의한 변화"는 개체의 전반적인 건강 상태에서 검출가능/관찰가능한, 부정적인 생리학적 변화를 초래하는 것으로 관찰된 상기 변수 중 임의의 하나 이상의 변화를 의미한다.
CNP 변이체 펩타이드의 약학 조성물 및 제형
추가의 구현예에서, 본원은 CNP 변이체 펩타이드, 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 및/또는 희석제를 포함하는 약학 조성물 및 제형의 용도를 고려한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 하나 이상의 다른 생물학적 활성제(예를 들어, 프로테아제, 수용체 티로신 키나아제 및/또는 제거(clearance) 수용체 NPR-C의 억제제)를 추가로 포함한다.
부형제, 담체 및 희석제의 비제한적인 예는 비히클, 액체, 완충제, 등장제, 첨가제, 안정화제, 방부제, 가용화제, 계면활성제, 유화제, 습윤제, 보조제 등을 포함한다. 상기 조성물은 액체(예를 들어, 물, 에탄올); 다양한 완충제 함량), pH 및 이온 강도의 희석제(예를 들어, Tris-HCl, 인산염, 아세테이트 완충제, 구연산 완충제; 세제 및 가용화제(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80); 항산화제(예를 들어, 메티오닌, 아스코르브산, 메타중아황산나트륨); 방부제(예를 들어, 티메로솔, 벤질 알콜, m-크레졸); 및 벌크제(bulking) 물질(예를 들어, 락토스, 만니톨, 수크로스)을 함유할 수 있다. 약학 조성물의 제형에서 부형제, 희석제 및 담체의 용도는 당 분야에 공지되어 있으며; 예를 들어 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, pages 1435-1712, Mack PublishingCo. (Easton, Pennsylvania (1990))를 참조하며, 이는 본원에 참고로 전문통합된다.
예를 들어, 담체는 희석제, 비히클 및 보조제뿐만 아니라 임플란트 담체, 및 활성 성분(들)과 반응하지 않는 비활성 무독성 고체 또는 액체 충전제 및 캡슐화 물질을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 담체의 비제한적 예는 인산염 완충 식염수, 생리 식염수, 물 및 에멀젼(예를 들어, 오일/물 에멀젼)을 포함한다. 담체는 예를 들어, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 식물성 오일 및 이들의 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 액체 제형이다. 특정 구현예에서, 상기 제형은 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml, 또는 약 0.5 mg/ml 내지 약 20 mg/ml, 또는 약 1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml, 또는 약 0.1 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 또는 약 0.5 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 또는 약 1 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 또는 약 2 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 또는 약 2 mg/ml 또는 약 10 mg/ml 범위의 농도의 CNP 변이체 펩타이드를 포함한다. 다른 구현예에서, 제형은 동결건조 제형일 수 있거나 또는 동결건조 제형으로부터 이전에 재구성된 액체 제형일 수 있다.
추가의 구현예에서, 상기 조성물은 완충 용액 또는 완충제를 포함하여, CNP- 함유 용액 또는 현탁액의 pH를 원하는 범위 내로 유지시킨다. 완충 용액의 비제한적인 예는 인산염 완충 식염수, 트리스(Tris) 완충 식염수 및 행크(Hank) 완충 식염수를 포함한다. 완충제는 아세트산 나트륨, 인산 나트륨, 시트르산 일수화물 및 시트르산 나트륨 이수화물을 제한없이 포함한다. 완충제의 혼합물도 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 완충제는 아세트산/아세테이트 또는 시트르산/시트레이트이다. 조성물에 적합한 완충제의 양은 사용된 특정 완충액 및 용액 또는 현탁액의 원하는 pH에 부분적으로 의존한다. 예를 들어, 아세테이트는 pH 6에서보다 pH 5에서 더 효율적인 pH 완충제이므로, pH 6에서보다 pH 5에서 용액내에서 더 적게 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 완충제의 농도는 약 10 mM±5 mM이다. 특정 구현예에서, 조성물의 pH는 약 pH 3 내지 약 pH 7.5, 또는 약 pH 3.5 내지 약 pH 7, 또는 약 pH 3.5 내지 약 pH 6.5, 또는 약 pH 4 내지 약 pH 6, 또는 약 pH 4 내지 약 pH 5이며, 또는 약 pH 5.0±1.0, 또는 약 pH 5.5±1.0이다.
다른 구현예에서, 상기 조성물은 용액 또는 현탁액을 등장성으로 하여 주사에 보다 적합하게하는 등장성 제제를 함유한다. 등장성 제제의 비제한적인 예는 NaCl, 트레할로스, 만니톨, 덱스트로스, 글루코스, 글리세린, 소르비톨, 크실리톨 및 에탄올을 포함한다. 특정 구현예에서, 등장성 제제는 트레할로스 또는 만니톨이고, 이들은 개별적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 트레할로스 또는 만니톨은 약 160±20 mM, 또는 약 140 mM±20 mM, 또는 약 120±20 mM, 또는 약 100 mM±20 mM, 또는 약 80 mM±20 mM, 또는 약 60 mM±20 mM의 농도로 존재한다.
다양한 구현예에서, 상기 조성물은 방부제를 포함할 수 있다. 방부제는 m-크레졸 및 벤질 알콜을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 특정 구현예에서, 상기 방부제는 약 0.4%±0.2%, 또는 약 1%±0.5%, 또는 약 1.5%±0.5%, 또는 약 2.0%±0.5%의 농도로 존재한다. 본 발명의 특정 구현예에서, 조성물 또는 제형은 방부제를 함유하지 않는다.
다양한 구현예에서, 상기 조성물은 (예를 들어, 유리 또는 플라스틱에 대한 CNP 변이체의 흡착을 경감시키기 위해) 흡착방지제를 함유한다. 흡착방지제는 제한없이, 벤질 알콜, 폴리소르베이트 20, 및 폴르소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 흡착 방지제는 약 0.001% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.1% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1.5%, 또는 약 0.5% 내지 약 2%, 또는 약 1% 내지 약 2%의 농도로 존재한다.
다양한 구현예에서, 상기 조성물은 안정화제를 포함한다. 안정화제의 비제한적인 예는 글리세린, 글리세롤, 티오글리세롤, 메티오닌 및 아스코르브산 및 그의 염을 포함한다. 일부 구현예에서, 안정화제가 티오글리세롤 또는 아스코르브산 또는 그의 염인 경우, 안정화제는 약 0.1% 내지 약 1%의 농도로 존재한다.
다양한 구현예에서, 상기 조성물은 항산화제를 함유한다. 예시적인 항산화제는 아스코르브산을 제한없이 포함한다. 특정 구현예에서, 항산화제 대 CNP 변이체 펩타이드의 몰비는 약 0.1:1 내지 약 15:1, 또는 약 1:1 내지 약 15:1, 또는 약 0.5:1 내지 약 10:1, 또는 약 1:1 내지 약 10:1, 또는 약 3:1 내지 약 10:1이다.
제한없이, 무기산 염(예를 들어, 염산염, 브롬화수소산염, 인산염, 황산염), 유기산 염(예를 들어, 아세테이트, 프로피오네이트, 말로네이트, 벤조에이트, 메실레이트, 토실레이트) 및 아민 염(예를 들어, 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디시클로헥실아민, 디에탄올아민)을 포함하는, 약학적으로 허용가능한 염이 조성물에 사용될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염의 철저한 논의는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Company, (Easton, Pennsylvania (1990))에서 찾아볼 수 있다.
비경구 투여용 제형은 예를 들어, 액체 용액 또는 현탁액으로서, 주사 전에 액체 매질에서의 가용화 또는 현탁에 적합한 고체 형태로서 또는 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 예를 들어, 멸균 주사 용액 및 현탁액은 적합한 희석제, 담체, 용매(예를 들어, 완충된 수용액, 링거액, 등장성 염화나트륨 용액), 분산제, 습윤제, 유화제, 현탁제 등을 사용하여, 당 분야에 공지된 기술들에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 고정유, 지방 에스테르, 폴리올 및/또는 다른 비활성 성분들이 사용될 수 있다. 추가의 예에서, 비경구 투여를 위한 제형은, 항산화제, 완충액, 정균제, 및 제형을 의도된 수혜자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다.
예시적인 CNP 펩타이드-함유 제형은 미국특허 제8,198,242호 및 제8,598,121호에 기술되어 있다. 약 4 내지 약 6 범위의 pH를 갖는 CNP 제형의 용도가 고려된다.
다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 골 이형성증이 발병한 개체에게 투여하기 위해 약학적 담체로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드의 액체 제형은 성분들의 임의의 조합에 따라 제형화되며, 그의 양 또는 농도는 하기에 기술된다:
Figure pct00005
CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물은 또한 동결건조된 제형일 수 있다. 특정 구현예에서, 동결건조된 제형은 완충제 및 벌크제, 및 선택적으로 항산화제를 포함한다. 예시적인 완충제는 아세테이트 완충제 및 시트레이트 완충제를 제한없이 포함한다. 예시적인 벌크제는 만니톨, 수크로스, 덱스트란, 락토스, 트레할로스 및 포비돈(PVP K24)을 제한없이 포함한다. 특정 구현예에서, 만니톨 및/또는 트레할로스는 약 3% 내지 약 10%, 또는 약 4% 내지 약 8%, 또는 약 4% 내지 약 6%의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, 수크로스는 약 6% 내지 약 20%, 또는 약 6% 내지 약 15%, 또는 약 8% 내지 약 12%의 양으로 존재한다.
다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드의 동결건조된 제형은 하기 기술된 성분들의 임의의 조합 및 이들의 양 또는 농도에 따라 제형화된 제형으로부터 제조된다:
Figure pct00006
다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 제형은 약 3 내지 7, 또는 약 3 내지 6, 또는 약 3.5 내지 6.5, 또는 약 4 내지 6, 또는 약 4 내지 5, 또는 약 4.5 내지 5.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, pH 4 내지 5.5에 대해, 적합한 완충제는 아세트산/아세테이트(예를 들어, 아세트산 나트륨)이고, pH 5.5 내지 6에 대해 적합한 완충제는 시트르산/시트레이트이다. 시트르산/시트레이트(예를 들어, 시트르산 나트륨)는 또한 pH 3 내지 6 또는 pH 4 내지 6의 범위에서 적합한 완충제이다. 특정 구현예에서, 완충제는 약 2 내지 50 mM, 또는 약 2 내지 40 mM, 또는 약 2 내지 30 mM, 또는 약 5 내지 30 mM, 또는 약 2 내지 20 mM, 또는 약 5 내지 20 mM, 또는 약 5 내지 15 mM의 제형내 농도를 갖는다.
또한, CNP 변이체 펩타이드의 탈 아미드화를 최소화 또는 회피하기 위해, 동결건조에 의해 제형으로부터 물을 제거할 수 있다. 일부 구현예에서, 동결건조된 제형은 하기 성분들의 임의의 조합을 함유한다: 완충제: 아세트산 나트륨 및 아세트산, 또는 시트르산 나트륨 및 시트르산; 등장성/벌크제: 만니톨(예를 들어, 3 내지 10%, 2 내지 8% 또는 4 내지 6%); 수크로스(예를 들어, 6 내지 20%, 5 내지 15% 또는 8 내지 12%); 항산화제: 약 0.1:1 내지 약 1:1, 또는 약 0.5:1 내지 약 5:1, 또는 약 1:1 내지 약 15:1, 또는 약 1:1 내지 약 10:1, 또는 약 3:1 내지 약 10:1의 각 항산화제 대 CNP 변이체 펩타이드의 몰 비를 갖는 메티오닌 및/또는 아스코르브산.
탈 아미드화는 또한 약 5℃, 0℃, -10℃, -20℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -80℃, -90℃ 또는 -100℃와 같은 저온에서 CNP 조성물(예를 들어, 액체 제형 또는 동결건조 제형)을 저장함으로써 최소화 또는 회피될 수 있다.
CNP 변이체 펩타이드에서 산화가능한 잔기(예를 들어, 메티오닌)의 산화를 최소화 또는 회피하기 위해, 상기 변이체는 하나 이상의 산화방지제로 제형화될 수 있다. 예시적인 항산화제는 메티오닌, 아스코르브산 및 티오글리세롤을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 메티오닌 잔기의 산화는 또한 질소 또는 아르곤으로 액체 매질(액체 제형인 경우)로부터 산소를 퍼징함으로써 및/또는 질소 또는 아르곤으로 용기 또는 포장으로부터 산소를 퍼징함으로써 최소화 또는 방지될 수 있다.
일부 구현예에서, 흡착(예를 들어, 플라스틱 또는 유리에 대한 CNP 변이체 펩타이드의 흡착)을 최소화 또는 방지하기 위해, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 또는 벤질 알콜 또는 이들의 조합물이 CNP 제형에 첨가된다. 특정 구현예에서, 흡착방지제(들) 각각은 약 0.001% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.1% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1%, 약 0.5% 내지 약 1.5%, 또는 약 0.5% 내지 약 2%, 또는 약 1% 내지 약 2%의 농도로 존재한다. 제형 내 흡착방지제(들)의 예시적인 범위(들)은 제한없이, 약 0.001% 내지 약 0.5%의 폴리소르베이트 20, 약 0.001% 내지 약 0.5%의 폴리소르베이트 80 및/또는 약 0.5% 내지 약 1.5%의 벤질 알콜을 포함한다.
본 발명은 또한 액체(예를 들어, 멸균 주사용) 제형 또는 고체(예를 들어, 동결건조된) 제형을 포함하는 병, 바이알, 앰풀, 튜브, 카트리지 및/또는 주사기를 포함하는 키트를 제공한다. 상기 키트는 또한 고체(예를 들어, 동결건조된) 제형을 (예를 들어, 주사에 의해) 투여하기 위한 용액 또는 현탁액으로 재구성하기 위한 약학적으로 허용가능한 비히클 또는 담체(예를 들어, 용매, 용액 및/또는 완충액)를 포함할 수 있으며, 이러한 재구성은 동결건조된 제형을 주입용 주사기 또는 농축액을 보다 낮은 농도로 희석시키기 위한 주사기에서 재구성하는 것을 제한 없이 포함한다. 또한, 즉석 주사 용액 및 현탁액은 예를 들어 CNP-함유 조성물을 포함하는 멸균 분말, 과립 또는 정제로부터 제조될 수 있다. 이 키트에는 에어로졸 또는 주사 조제(injection dispensing) 장치, 펜 주입기, 자동 주입기, 바늘없는 주사기, 주사기 및/또는 바늘과 같은 분배 장치가 포함될 수도 있다.
투여량 및 투여 빈도
본원에서 사용된 바와 같이, 활성제(예를 들어, CNP 변이체 펩타이드)의 "치료적으로 효과적인 양"이란 용어는 환자에게 치료적 이익을 제공하는 양을 지칭한다. 그 양은 개인마다 다를 수 있으며, 환자의 전반적인 신체 상태를 포함하여 여러 가지 요인에 따라 달라질 수 있다. CNP 변이체 펩타이드의 치료적으로 효과적인 양은 공개적으로 이용가능한 재료 및 절차를 사용하여, 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 예를 들어, 치료에 사용되는 CNP 변이체 펩타이드의 양은 연령에 대한 신장, 머리 둘레 및 분기별 성장을 나열하는, 연골형성부전증이 있는 0~17세 아동(여아 214명, 남아 189명)의 성장 차트를 기반으로 허용가능한 성장률을 제공해야 한다(Horton WA et al., Standard growth curvesfor achondroplasia, J. Pediatr., 93: 435-8 (1978)). CDC 차트는 연령에 대한 체중 및 연령에 대한 BMI 또는 신장에 대한 체중을 평가하는데 사용할 수 있다. 사실상 더 만성인 과정을 갖는 이차 결과도 측정될 수 있다.
특정 개인에 대한 투여 빈도는 치료되는 장애 및 치료에 대한 개인의 상태 및 반응을 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드를 함유하는 약학 조성물은 개체에게 하루에 약 1회, 2일에 1회, 3일에 1회, 또는 1주일에 1회, 1주일에 2회, 1주일에 3회, 2주일에 한번 또는 매월 투여된다. 일 구현예에서, 뼈-관련 장애(예를 들어, 연골형성부전증을 포함하는, 골 이형성증)의 치료를 위해, 성인기까지 및/또는 성인기 내내 CNP 변이체 펩타이드의 1일 또는 1주 투여량을 환자에게 투여한다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드는 약 5 또는 10 nmol/kg 내지 약 300 nmol/kg, 또는 약 20 nmol/kg 내지 약 200 nmol/kg 범위의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1250, 1500, 1750 또는 2000 nmol/kg의 투여량 또는 담당 의사가 적절하다고 간주하는 기타 투여량으로 투여된다. 다른 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 약 5, 7.5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000 ㎍/kg 또는 약 1, 1.25, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10 mg/kg의 투여량 또는 담당 의사가 적절하다고 간주하는 기타 투여량으로 투여된다. 다양한 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 약 7.5 내지 100 ㎍/㎏, 또는 약 15 내지 75 ㎍/㎏, 또는 약 15 내지 30 ㎍/㎏, 또는 약 2.5 ㎍/㎏, 7.5 ㎍/㎏, 15.0 ㎍/㎏, 30.0 ㎍/㎏ 또는 60.0 ㎍/㎏의 투여량으로 투여된다. 본원에 기술된 CNP 변이체 펩타이드의 투여량은 제한 없이 매일, 주 2회 또는 3회, 매주, 2주마다, 3주마다, 매월 등을 포함하는, 본원에 기술된 투약 빈도/투여 빈도에 따라 투여될 수 있다. CNP 변이체 펩타이드의 투여는 어떤 경우, 1개월, 3개월, 6개월 이상에 걸쳐 연장된 기간 동안 발생할 수 있다.
특정 개체에 대한 CNP 변이체 펩타이드의 투약/투여 빈도는 치료되는 장애 및 치료 개체의 상태 및 반응을 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. CNP 변이체 펩타이드는 1회 투여량 또는 투여마다 다중 투여량으로 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 단일 용량 또는 다중 용량으로, 매일, 격일로, 3일마다, 1주일에 2회, 1주일에 3회, 매주, 격주로, 3주마다, 매월, 6주마다, 2개월마다, 3개월마다, 또는 담당 의사가 적절하다고 판단한 경우에 투여된다.
일부 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 성장 기간(예를 들면, 연골 형성),이어서 회복 기간(예를 들어, 골 형성)을 허용하도록 투여된다. 예를 들어, CNP 변이체 펩타이드는 일정 시간동안 정맥내, 피하, 관절내 또는 다른 방식으로, 매일 또는 일주일에 여러 번 투여된 후, 무치료 기간 후, 사이클을 반복한다. 일부 구현예에서, 초기 치료기간(예를 들어, CNP 변이체 펩타이드를 매일 또는 1주일에 여러 번 투여)은 3일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주간이다. 관련된 구현예에서, 무치료 기간은 3일, 1주, 2주, 3주 또는 4주간 지속된다. 특정 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드의 투여 요법은 3일간 매일 이후이어서 3일 중단; 또는 1주일간 매일 또는 1주일에 여러 번 이후 3일 또는 1주 중단; 또는 2주일간 매일 또는 1주일에 여러 번, 이후 1주 또는 2주 중단; 또는 3주일간 매일 또는 1주일에 여러 번 이후, 1, 2 또는 3주 중단; 또는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주간 매일 또는 1주일에 여러 번 이후, 1, 2, 3 또는 4주 중단이다.
투여 방식
CNP 변이체 펩타이드 또는 이들을 포함하는 약학 조성물 또는 제형은 다양한 방식으로, 예컨대 피하, 관절내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피내 또는 경막내 주사에 의해 개체에 투여될 수 있다. 일 구현예에서, CNP 변이체 펩타이드는 단일 피하, 관절내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피내 또는 경막내 주사에 의해 1일 1회, 2일 1회, 3일 1회 또는 1주일에 1회 투여된다.
CNP 변이체 펩타이드는 또한 질병 부위 또는 그 근처에서 직접 주사에 의해 투여될 수 있다. 또한, CNP 변이체 펩타이드는 표적 작용 부위(예를 들어, 비정상적 또는 퇴행성 관절 또는 연골 영역)에서의 저장소의 이식에 의해 투여될 수 있다. 대안적으로, CNP 변이체 펩타이드는 혀 밑에서(예를 들어, 설하 정제) 또는 폐 흡입(예를 들어, 흡입기 또는 에어로졸 스프레이), 비강 내로 전달(예를 들어, 비내 스프레이), 눈으로 전달(예를 들어, 점안제) 또는 경피 전달(예를 들어, 피부에 붙이는 패치)에 의해 투여될 수 있다. CNP 변이체 펩타이드는 또한 마이크로스피어, 마이크로캡슐, 리포솜(대전되지않거나 또는 대전된(예를 들어, 양이온성)), 중합체 미립자(예를 들어, 폴리아미드, 폴리락티드, 폴리글리콜라이드, 폴리(락티드-글리콜라이드)), 마이크로에멀젼, 등의 형태로 경구투여될 수 있다.
또다른 투여방법은 예정된 기간에 걸쳐 CNP 변이체 펩타이드 또는 약학 조성물의 조절된, 연속적 및/또는 서방 전달을 허용하는 삼투압 펌프(예를 들어, Alzet 펌프) 또는 미니-펌프(예를 들어, Alzet 미니-삼투압 펌프)에 의한 방법이다. 삼투압 펌프 또는 미니-펌프는 피하 또는 목표 부위 부근(예를 들어 사지의 장골, 골단(epiphyses) 등)에 이식될 수 있다.
CNP 변이체 펩타이드 또는 이의 조성물이 다른 방식으로 투여될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. CNP 변이체 펩타이드 또는 이의 조성물의 가장 효과적인 투여 방식의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다.
본 발명의 추가의 양태 및 세부 사항은 하기 실시예로부터 명백해질 것이며, 이는 제한하기 위한 것보다는 예시적인 것으로 의도된다.
E. 실시예
실시예 1 - 연골형성부전 환자에 대한 6개월 인간 임상 시험 데이터
연골형성부전증 환자의 경우, 연골형성부전증과 같은 골 이형성증 및 장골 성장 및/또는 성장 속도에 대한 CNP 변이체 펩타이드의 효과를 측정하기 위해(전처리와 비교하여 환자의 치료후 키 성장 속도에 따라 측정된 바와 같이), 임상 양상에 의해 문서화되고 유전자 검사로 확인된 바와 같이, 문서화된 ACH를 갖는 5~14세 연령(5세와 14세 포함)의 연골형성부전증(ACH) 아동에서 투여량 확대 연구가 수행되었다.
본원에 기술된 바와 같은 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 제형을 투여하기 전에, (다양한 변수에 대한) 연속 성장 측정치 및 (적어도 환자 키에서) 성장 속도 비율 측정치를 치료받지 않은 연구 환자로부터 3개월 간격으로 수집하여, 위에서 설명한대로 성장 속도 및 신체 비례 비율에 대한 기준선 수준을 설정한다. 성장 속도 및 신체 비례 비율에 대한 기준선 수준을 얻으면, CNP 변이체 펩타이드(구체적으로, Pro-Gly-CNP-37, SEQ ID NO: 5)를 포함하는 제형을 하기 1일 1회 투여 요법들 중 하나로 매일 피하 투여하였다: 코호트 1(n=8): Pro-Gly-CNP-37 펩타이드 2.5 μg/kg의 매일 투여량, 코호트 2(n=8), Pro-Gly-CNP-37 펩타이드 7.5 ㎍/kg의 매일 투여량; 코호트 3(n=10), Pro-Gly-CNP-37 펩타이드 15.0μg/kg의 매일 투여량. 6개월간 매일 피하 투여를 실시하였다.
보다 구체적으로, Pro-Gly-CNP-37 펩타이드는 0.28 mg/ml 시트르산 일수화물, 1.08 mg/ml 시트르산 나트륨 이수화물, 58.01 mg/ml 트레할로스 이수화물, 15 mg/ml D-만니톨, 0.73 mg/ml L-메티오닌 및 0.05 mg/ml 폴리소르베이트 80, pH 5.5와 조합하여, 2.0mg/ml 또는 10mg/ml CNP 펩타이드를 포함하는 멸균, 무방부제 조성물로 제형화하였다. 상기 액체 조성물은 기술된 성분을 포함하는 원래의 동결건조된 제형으로부터 재구성되었으며, 멸균된 일회용 타입 I 미처리 보로실리케이트 투명 유리 바이알에 공급하였다. 이 재구성된 액체 제형은 본원에 기술된 모든 인간 임상 시험 연구에 사용하였다.
CNP 변이체 펩타이드의 투여 과정 중에, 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 상지 길이 대 하지 길이 비율, 및 상체 길이 대 하체 길이 비율의 계산을 포함하여, 체중, 골 길이 및 골 성장의 측정값을 비롯한 다양한 평가가 이루어졌다. 또한 성장 속도 측정값은 환자의 키를 측정하여 계산되었으며, 데이터는 이전에 얻어진 기준선 성장 속도 비율과 비교되었다. CNP 변이체 펩타이드를 처음 투여한 후 약 15, 22, 29, 43, 85, 127 및 183일에 평가하였다.
탐색 이미징 평가 데이터에는 척추, 장골 및 사지의 측정 및 형태뿐만 아니라 성장판, 뼈 나이 및 골 무기질 밀도의 측정이 포함되었다. 분석법은 기준선 힙(hip) 평가를 위한 골반의 전방-후방(AP) x-레이; 뼈 나이를 평가하기 위한 왼쪽손과 손목의 후방-전방(PA) 방사선 사진(Greulich, 1971, Stanford University Press); (Tanner, 1975, Academic Press.), 성장판, 손 길이, 피질골 두께; 성장판, 경골 길이, 피질골 두께, 및 보잉(bowing)을 평가하기 위한 AP 하지 방사선사진, 횡격 척추경간 거리를 평가하기 위한 요추골의 AP 방사선사진을 포함한다. 요추골 전만각, 척추의 형태 및 척추 협착과 관련된 다른 잠재적인 변화를 평가하기 위한 요추골의 측부 방사선사진, 골 무기질 밀도, 성장판 형태 및 골 길이를 평가하기 위한 팔뚝과 경골의 QCT 스캔이 수행된다. 이 스캔은 미리 결정된 낮은 방사선량 프로토콜을 사용한, 표준 CT 스캐너, 보정 팬텀(calibration phantom) 및 지정된 소프트웨어를 사용하여 얻을 수 있으며, 이 프로토콜을 사용하면 머리와 몸통으로의 직접적인 방사를 피할 수 있다.
수면 연구: 소아기에 치료받지 않은 수면 무호흡증은 행동 및 학습과 같은 아동 발달의 특정 측면에 대한 부정적 영향을 포함하여, 빈약한 기능 및 건강 결과와 반복적으로 관련되어왔다. 소아의 수면 무호흡증과 관련된 것으로 보고된 인지 결핍은 학습, 기억 및 시각-공간 기술; 언어, 언어 구사력, 학교 성적 및 수행 기능을 포함한다. 또한, 소아 수면-장애 호흡은 성장 이상; 수축기 혈압, 이완기 혈압, 자율 신경 조절, 뇌 산소 공급 및 뇌 혈류를 포함한 심장 건강의 변화와 관련되어 있으며, 이는 소아기 폐쇄성 수면 무호흡 증후군이 장기간 심혈관 건강; 및 염증의 전신 마커를 위태롭게 할 수 있음을 시사한다(Marcus, 2012, Pediatrics). 수면-검사 장치는 야간 모니터링동안 혈액 산소 포화도, 맥박 및 공기 흐름을 측정하여 수면-장애 호흡의 존재 여부와 심각성을 평가하는데 사용된다. 수면 무호흡의 평가에는 시간당 무호흡 및 저호흡의 수(무호흡/저호흡 지수, AHI)를 측정하는 것이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.
팔꿈치 관절 운동 범위의 굴곡-신전(flexion-extension) 측정은 고니오미터로 측정된다.
바이오마커는 기준선으로부터의 변화에 의해 평가되며, 연골 교체율(CTX-II), 연골세포 및 골아세포 활성(골-특이성 알칼리성 포스파타제), 골 형성(P1NP), 골 교체율(오스테오칼신); 및 CNP 생물작용(cGMP, NT-proCNP 및 ANP) 마커 뿐만 아니라 추가 바이오마커에 대한 평가를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 콜라겐 및 골 교체율의 혈액 및 소변 생화학적 마커 및 CNP 활성의 마커에 대한 샘플을 지정된 시점에 수집한다.
결과: 코호트 1(2.5 ㎍/kg/일), 코호트 2(7.5 ㎍/kg/일), 및 코호트 3(15 ㎍/kg/일)에서 총 26명의 환자에 대해 치료하는 동안 키의 변화를 측정하고, 치료전 측정된 기준선 성장 속도 비율과 비교함으로써, CNP 변이체 펩타이드 Pro-Gly-CNP-37에 의한 치료 결과로서 성장 속도 변화를 측정하였다. 6개월 연구에서의 키 성장 속도의 평균 변화는 표 1에 요약되어 있다. 표 1에서 입증된 바와 같이, 6개월간 2.5 μg/kg/일의 Pro-Gly-CNP-37로 치료된 연골형성부전증 환자에서 성장 속도의 유의한 증가는 관찰되지 않았다(코호트 1). 그러나, 코호트 1의 환자와 달리 6개월간 7.5 μg/kg/일의 Pro-Gly-CNP-37로 치료한 연골형성부전증 환자들(코호트 2)은 (이전에 계산된 기준선 키 성장 속도 비율과 비교하여) 키 성장 속도에 있어서 통계적으로 유의한 증가(p 값=0.04)를 보여주었다. 보다 구체적으로, 코호트 2의 환자들은 1.3cm/년의 키 성장 속도에 있어서의 평균 증가를 나타냈으며, 이는 기준선보다 45% 높은 연간 성장 속도 증가를 나타냈다. 마지막으로 6개월간 15 ㎍/kg/일의 Pro-Gly-CNP-37로 치료한 연골형성부전증 환자들(코호트 3)도 (이전에 계산된 기준선 키 성장 속도 비율과 비교하여) 키 성장 속도에 있어서 통계적으로 유의한 증가(p 값=0.01)를 보여주었다. 보다 구체적으로, 코호트 3의 환자들은 2.0cm/년의 키 성장 속도에 있어서의 평균 증가를 나타냈으며, 이는 기준선보다 50% 높은 연간 성장 속도 증가를 나타냈다. 이 데이터는 CNP 변이체 펩타이드 7.5 ㎍/kg 이상으로 연골형성부전증 환자들을 6개월 이상동안 매일 피하 치료하는 것이 골 성장, 성장 속도 및 일반적으로 연골형성부전증의 증상 치료에 유익한 효과가 있음을 입증한다.
[표 1]
Figure pct00007
신체 비례. CNP 변이체 펩타이드에 의한 치료 전(기준선) 및 치료과정동안 모든 코호트에서 모든 환자에 대한 신체 비례 비율(상체 길이 대 하체 길이, 상완 길이 대 팔뚝 길이, 및 상지 길이 대 하지[무릎에서 발까지] 길이)를 계산하였다.
코호트 1의 경우, 평균기준선 상체 길이 대 하체 길이 비율, 평균기준선 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 및 평균기준선 상지 길이 대 하지 길이 비율은 각각 2.09, 1.13 및 0.67이었다. 2.5 μg/kg의 CNP 변이체 펩타이드로 6개월간 매일 피하 치료한 후, 동일한 신체 비례 비율은 각각 2.07, 1.11 및 0.67로 측정되었으며, 이는 각각 -0.02, -0.02 및 0.0의 동일한 신체 비례 비율의 평균 변화를 나타냈다.
코호트 2의 경우, 평균기준선 상체 길이 대 하체 길이 비율, 평균기준선 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 및 평균기준선 상지 길이 대 하지 길이 비율은 각각 2.03, 1.14 및 0.66이었다. 7.5 ㎍/kg의 CNP 변이체 펩타이드로 6개월간 매일 피하 치료한 후, 동일한 신체 비례 비율은 각각 2.03, 1.14 및 0.66으로 측정되었으며, 이는 각각 0.0, 0.0 및 0.0의 동일한 신체 비례 비율의 평균 변화를 나타냈다.
코호트 3의 경우, 평균기준선 상체 길이 대 하체 길이 비율, 평균기준선 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 및 평균기준선 상지 길이 대 하지 길이 비율은 각각 1.91, 1.13 및 0.69이었다. 15 ㎍/kg의 CNP 변이체 펩타이드로 6개월간 매일 피하 치료한 후, 동일한 신체 비례 비율은 각각 1.89, 1.08 및 0.69로 측정되었으며, 이는 각각 -0.02, -0.05 및 0.0의 동일한 신체 비례 비율의 평균 변화를 나타냈다.
이 데이터는 CNP 변이체 펩타이드에 의한 연골형성부전증 환자의 치료가 CNP 변이체 펩타이드에 의한 6개월간의 치료 후 기준선에 비해, 모든 측정된 신체 비례 비율 변화가 -0.05 내지 0.05에 속함에 따라, 전반적인 신체 비례에 유의한 악영향을 미치지 않는다는 것을 입증한다.
부작용. 상기 기술된 코호트들의 각각에서 모든 환자는 특히 CNP 변이체 펩타이드로 치료함으로써 야기되는 부작용의 존재에 대해 정기적으로 평가되었다(http://evs.nci.nih.gov/ftp1/CTCAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_8.5 x11.pdf에 의해 정의됨). 세 연구 코호트 중 어떤 환자도 연구 약물과 관련이 있다고 판정된 2등급 이상의 부작용을 나타내지 않았으며, CNP 변이체 펩타이드에 의한 연골형성부전증 환자의 치료가 심각한 생리적 부작용을 일으키지 않음을 입증했다.
또한, 각 연구 코호트의 모든 환자들은 혈액 헤모글로빈 농도, 혈액 혈소판 수, 혈액 전해질 농도, 혈액 요소 질소 농도, 혈액 크레아티닌 농도, 혈액 알칼리성 포스파타아제 농도, 혈액 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 농도 및 혈액 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 농도에 대해 정기적으로 모니터링되었다. 세 연구 코호트 각각에서 얻은 데이터는 상기 안전성 지표 중 어느 하나의 임상적으로 유의한 변화가 관찰되지 않았음을 보여주었으며, 연골형성부전증 및 관련 증상에 대한 CNP 변이체 펩타이드 치료의 기본 안전성을 다시 확인했다.
실시예 2 - 연골형성부전증에 대한 12개월 인간 임상 시험 데이터(코호트 3)
최초의 6개월간의 임상 시험 치료 및 평가 기간 후, 상기 실시예 1에 기술된 코호트 3의 연골형성부전증 환자 10명에게 추가로 6개월 동안(총 12개월) 매일 피하 투여된 15μg/ml의 Pro-Gly-CNP-37 임상 요법을 계속하였다. 추가 6개월간의 치료 기간 동안, 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 상지 길이 대 하지 길이 비율, 및 상체 길이 대 하체 길이 비율의 계산을 비롯하여, 체중, 골 길이 및 골 성장의 측정값을 포함한 다양한 평가가 이루어졌다. 성장 속도 측정은 환자의 키를 측정하여 계산될 수도 있으며, 데이터는 이전에 얻어진 기준선 성장 속도 비율과 비교하였다.
결과: 코호트 3(15 ㎍/kg/일)에서 총 10명의 환자를 치료하는 동안 키의 변화를 측정하고, 치료전 측정된 기준선 성장 속도 비율과 비교함으로써, CNP 변이체 펩타이드 Pro-Gly-CNP-37에 의한 12개월의 치료 결과로서 성장 속도 변화를 측정하였다. 12개월의 연구로부터 얻은 데이터는, 12개월간 15 ㎍/kg/일의 Pro-Gly-CNP-37로 치료한 연골형성부전증 환자들(코호트 3)이 (이전에 계산된 기준선 키 성장 속도 비율과 비교하여) 키 성장 속도에 있어서 통계적으로 유의한 증가(p 값=0.017)를 보여주었음을 입증하였다. 보다 구체적으로, 코호트 3의 환자들은 1.9cm/년의 키 성장 속도에 있어서의 평균 증가를 나타냈으며, 이는 기준선보다 47% 높은 연율화된 성장 속도 증가를 나타냈다. 이 데이터는 CNP 변이체 펩타이드 15 ㎍/kg 이상으로 연골형성부전증 환자들을 12개월 이상 동안 매일 피하 치료하는 것이 골 성장, 성장 속도 및 일반적으로 연골형성부전증의 증상 치료에 유익한 효과가 있음을 입증한다.
신체 비례. CNP 변이체 펩타이드에 의한 치료 전(기준선) 및 치료과정동안 코호트 3의 환자 10명에 대한 신체 비례 비율(상체 길이 대 하체 길이, 상완 길이 대 팔뚝 길이, 및 상지 길이 대 하지[무릎에서 발까지] 길이)를 계산하였다.
코호트 3의 경우, 평균기준선 상체 길이 대 하체 길이 비율, 평균기준선 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율, 및 평균기준선 상지 길이 대 하지 길이 비율은 각각 1.91, 1.13 및 0.69이었다. 15 ㎍/kg의 CNP 변이체 펩타이드로 6개월간 매일 피하 치료한 후, 동일한 신체 비례 비율은 각각 1.88, 1.16 및 0.69로 측정되었으며, 이는 각각 -0.03, 0.03 및 0.0의 동일한 신체 비례 비율의 평균 변화를 나타냈다.
이 데이터는 CNP 변이체 펩타이드에 의한 연골형성부전증 환자의 치료가 CNP 변이체 펩타이드에 의한 12개월간의 치료 후 기준선에 비해, 모든 측정된 신체 비례 비율 변화가 -0.05 내지 0.05에 속함에 따라, 전반적인 신체 비례에 유의한 악영향을 미치지 않는다는 것을 입증한다.
부작용. 코호트 3의 모든 환자는 치료 과정 동안 특히 CNP 변이체 펩타이드로 치료함으로써 야기되는 부작용의 존재에 대해 정기적으로 평가되었다(http://evs.nci.nih.gov/ftp1/CTCAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_8.5 x11.pdf에 의해 정의됨). 코호트 3의 어떤 환자도 연구 약물과 관련이 있다고 판정된 2등급 이상의 부작용을 나타내지 않았으며, CNP 변이체 펩타이드에 의한 연골형성부전증 환자의 치료가 심각한 생리적 부작용을 일으키지 않음을 입증했다.
또한, 코호트 3의 모든 환자들은 혈액 헤모글로빈 농도, 혈액 혈소판 수, 혈액 전해질 농도, 혈액 요소 질소 농도, 혈액 크레아티닌 농도, 혈액 알칼리성 포스파타아제 농도, 혈액 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 농도 및 혈액 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 농도에 대해 정기적으로 모니터링되었다. 상기 연구로부터 얻은 데이터는 상기 안전성 지표 중 어느 하나의 임상적으로 유의한 변화가 관찰되지 않았음을 보여주었으며, 연골형성부전증 및 관련 증상에 대한 CNP 변이체 펩타이드 치료의 기본 안전성을 다시 확인했다.
위에서 설명한 인간 임상 데이터에 근거하여, 인간 연골형성부전증 환자에게 30 μg/kg/일 및 60 ㎍/kg/일의 Pro-Gly-CNP-37의 매일 피하 투여된 투여량은 또한 위에서 설명한 바와 같이 효능 및 안전성에 대해 시험될 것이다. 본원에 개시된 데이터에 기초하여, 상기 투여 요법들이 인간 환자에서 연골형성부전증의 치료에 효과적이고 안전할 것으로 충분히 예상된다.
본 명세서에 설명된 구현예들 및 예시적인 실시예들에 개시된 바와 같이, 본 발명에 대한 다수의 변형 및 변경들이 일어날 수 있음을 당업자라면 예상할 것이다. 결과적으로 첨부된 청구범위에 개시된 것과 같은 제한사항만이 본 발명에 주어질 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> BIOMARIN PHARMACEUTICAL INC. <120> USE OF C-TYPE NATRIURETIC PEPTIDE VARIANTS TO TREAT SKELETAL DYSPLASIA <130> 30610/49788 <150> US-62/199,081 <151> 2015-07-30 <150> US-62/320,704 <151> 2016-04-11 <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys Gly 1 5 10 15 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 2 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 3 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Pro Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 4 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Asn Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 5 <211> 39 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Pro Gly Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys 1 5 10 15 Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 20 25 30 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 6 <211> 39 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Gly Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys 1 5 10 15 Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 20 25 30 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 7 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gly Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Met Ser Gly Leu Gly Cys 35

Claims (61)

  1. (a) 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는 CNP 변이체 펩타이드:
    Figure pct00008

    Figure pct00009

    (b) 완충제, 등장성 제제, 안정화제 및 흡착방지제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 성분
    을 포함하는 제형.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 완충제는 시트르산 일수화물 또는 시트르산 나트륨 이수화물인, 제형.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 등장성 제제는 트레할로스 이수화물 또는 D-만니톨인, 제형.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 안정화제는 L-메티오닌인, 제형.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 흡착방지제는 폴리소르베이트 80인, 제형.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    동결건조되는, 제형.
  7. 제1항에 있어서,
    액체 형태로 존재하는, 제형.
  8. 제7항에 있어서,
    동결건조된 제형으로부터 재구성되는, 제형.
  9. 제1항에 있어서,
    적어도 약 2.0 mg/ml의 상기 CNP 펩타이드 변이체를 포함하는, 제형.
  10. 제1항에 있어서,
    적어도 약 10.0 mg/ml의 상기 CNP 펩타이드 변이체를 포함하는, 제형.
  11. 제1항에 있어서,
    10.0 mg/ml의 상기 CNP 펩타이드 변이체를 포함하는, 제형.
  12. 제1항에 있어서,
    시트르산 일수화물, 시트르산 나트륨 이수화물, 트레할로스 이수화물, D-만니톨, L-메티오닌 및 폴리소르베이트 80을 포함하는, 제형.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 상기 시트르산 일수화물은 약 0.15 mg/ml 내지 약 0.40 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 시트르산 나트륨 이수화물은 약 0.5 mg/ml 내지 약 1.5 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 트레할로스 이수화물은 약 30 mg/ml 내지 약 70 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 D-만니톨은 약 10 mg/ml 내지 약 20.0 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 L-메티오닌은 약 0.5 mg/ml 내지 약 1.5 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.1 mg/ml의 농도로 존재하는, 제형.
  14. 제12항에 있어서,
    상기 시트르산 일수화물은 약 0.28 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 시트르산 나트륨 이수화물은 약 1.08 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 트레할로스 이수화물은 약 58.01 mg/ml의 농도로 존재하고, 상기 D-만니톨은 약 15.0 mg/ml의 농도로 존재하며, 상기 L-메티오닌은 약 0.73 mg/ml의 농도로 존재하며, 상기 폴리소르베이트 80은 약 0.05 mg/ml의 농도로 존재하는, 제형.
  15. 제1항에 있어서,
    방부제가 없는, 제형.
  16. 제1항에 있어서,
    붕규산 유리 바이알 내에 들어 있는, 제형.
  17. 제1항에 있어서,
    약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 갖는, 제형.
  18. 제1항에 있어서,
    약 5.5의 pH를 갖는, 제형.
  19. CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물을 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 적어도 7.5 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 개체내 골 이형성증의 치료 방법으로서, 상기 CNP 변이체 펩타이드는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되며:
    Figure pct00010

    Figure pct00011

    상기 투여 단계는 상기 골 이형성증을 치료하는, 방법.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 치료는 증가된 절대 성장, 증가된 성장 속도, 증가된 QCT 골 무기질 밀도(BMD), 성장판 형태 개선, 장골의 성장 증가, 척추의 형태 개선, 팔꿈치 관절의 운동 범위의 개선, 수면 무호흡증의 감소로 구성된 그룹으로부터 선택된 골 이형성증의 하나 이상의 증상을 개선시키는, 방법.
  21. 제19항에 있어서,
    상기 골 이형성증은 연골형성부전증(achondroplasia), 연골형성저하증(hypochondroplasia), 단신(short stature), 왜소증(dwarfism), 골 연골 이형성증(osteochondrodysplasias), 치사성 이형성증(thanatophoric dysplasia), 골형성 부전증(osteogenesis imperfecta), 연골무발생증(achondrogenesis), 점상 연골형성부전증(chondrodysplasia punctata), 동형접합성 연골형성부전증(homozygous achondroplasia), 점상 연골형성부전증(chondrodysplasia punctata), 굴지 형성이상(camptomelic dysplasia), 선천성 치사성 저인산증(congenital lethal hypophosphatasia), 태아 선천성 불완전 골형성증(perinatal lethal type of osteogenesis imperfecta), 단늑골 다지증 증후군(short-rib polydactyly syndromes), 연골형성저하증(hypochondroplasia), 점상연골 이형성증(rhizomelic type of chondrodysplasia punctata), 쟌센형 골간단 연골이형성증(Jansen-type metaphyseal dysplasia), 선천척추골단이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita), 아텔로스테오제네시스(atelosteogenesis), 이영양성 형성이상(diastrophic dysplasia), 선천성 단발성 대퇴골(congenital short femur), 랑거형 전완부 이형성증(Langer-type mesomelic dysplasia), 니버겔트형 전완부 이형성증(Nievergelt-type mesomelic dysplasia), 로비노 증후군(Robinow syndrome), 라인하르트 증후군(Reinhardt syndrome), 선단이골증(acrodysostosis), 말단 이골증(peripheral dysostosis), 니스트 이형성증(Kniest dysplasia), 섬유연골형성(fibrochondrogenesis), 로버트 증후군(Roberts syndrome), 전완하퇴말단 형성이상(acromesomelic dysplasia), 소지증(micromelia), 모르키오 증후군(Morquio syndrome), 니스트 증후군(Kniest syndrome), 유기영양 이형성증(metatrophic dysplasia) 및 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  22. 제19항에 있어서,
    상기 골 이형성증은 연골형성부전증인, 방법.
  23. 제19항에 있어서,
    상기 조성물은 매일 1회 투여되는, 방법.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 조성물은 적어도 6개월의 기간동안 매일 1회 투여되는, 방법.
  25. 제19항에 있어서,
    상기 조성물은 피하로 투여되는, 방법.
  26. 제19항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 15 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  27. 제19항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 30 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  28. 제19항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 60 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  29. 제19항에 있어서,
    상기 조성물은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 제형을 포함하는, 방법.
  30. 제19항에 있어서,
    상기 조성물은 제14항의 제형을 포함하는, 방법.
  31. CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물을 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 적어도 7.5 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 개체내 장골 성장을 증가시키는 방법으로서, 상기 CNP 변이체 펩타이드는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되며:
    Figure pct00012

    Figure pct00013

    상기 투여 단계는 상기 개체내 장골 성장을 증가시키는, 방법.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 개체는 연골형성부전증을 갖는, 방법.
  33. 제31항에 있어서,
    상기 조성물은 매일 1회 투여되는, 방법.
  34. 제33항에 있어서,
    상기 조성물은 적어도 6개월의 기간동안 매일 1회 투여되는, 방법.
  35. 제31항에 있어서,
    상기 조성물은 피하로 투여되는, 방법.
  36. 제31항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 15 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  37. 제31항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 30 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  38. 제31항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 60 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  39. 제31항에 있어서,
    상기 조성물은 제1항의 제형을 포함하는, 방법.
  40. 제31항에 있어서,
    상기 조성물은 제14항의 제형을 포함하는, 방법.
  41. CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 조성물을 개체에게 적어도 7.5 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 개체내 성장 속도를 증가시키는 방법으로서, 상기 CNP 변이체 펩타이드는 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되며:
    Figure pct00014

    Figure pct00015

    상기 투여 단계는 상기 개체내 성장 속도를 증가시키는, 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 개체는 연골형성부전증을 갖는, 방법.
  43. 제41항에 있어서,
    상기 성장 속도 증가는 상기 개체내 기준선보다 적어도 25% 높은 키에 의해 측정되는 바와 같이 연율화된 성장 속도 증가인, 방법.
  44. 제41항에 있어서,
    상기 성장 속도 증가는 상기 개체내 기준선보다 적어도 40% 높은 키에 의해 측정되는 바와 같이 연율화된 성장 속도 증가인, 방법.
  45. 제41항에 있어서,
    상기 성장 속도 증가는 키, 앉은 키, 체중, 머리 둘레, 상완(upper arm) 길이, 로어암(lower arm) 길이, 상지(upper leg) 길이, 하지(lower leg) 길이, 손 길이 또는 발 길이를 측정함으로써 평가되는, 방법.
  46. 제41항에 있어서,
    상기 조성물은 매일 1회 투여되는, 방법.
  47. 제46항에 있어서,
    상기 조성물은 적어도 6개월의 기간 동안 매일 1회 투여되는, 방법.
  48. 제46항에 있어서,
    상기 조성물은 적어도 12개월의 기간 동안 매일 1회 투여되는, 방법.
  49. 제41항에 있어서,
    상기 조성물은 피하로 투여되는, 방법.
  50. 제41항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 15 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  51. 제41항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 30 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  52. 제41항에 있어서,
    상기 CNP 변이체 펩타이드를 포함하는 상기 조성물을 상기 개체에게 상기 CNP 변이체 펩타이드의 1일당 적어도 약 60 ㎍/kg의 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  53. 제41항에 있어서,
    상기 조성물은 제1항의 제형을 포함하는, 방법.
  54. 제41항에 있어서,
    상기 조성물은 제14항의 제형을 포함하는, 방법.
  55. 제41항에 있어서,
    2등급 이상의 부작용을 야기하지 않는, 방법.
  56. 제41항에 있어서,
    상기 개체내 혈액 헤모글로빈 농도, 혈액 혈소판 수, 혈액 전해질 농도, 혈액 요소 질소 농도, 혈액 크레아티닌 농도, 혈액 알칼리성 포스파타아제 농도, 혈액 알라닌 아미노트랜스퍼라제 농도 또는 혈액 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 농도의 임상적으로 유의한 변화를 야기하지 않는, 방법.
  57. 제41항에 있어서,
    -0.05 내지 0.05의 상체 길이 대 하체 길이 비율 변화를 일으키는, 방법.
  58. 제41항에 있어서,
    -0.05 내지 0.05의 상완 길이 대 팔뚝 길이 비율 변화를 일으키는, 방법.
  59. 제41항에 있어서,
    -0.05 내지 0.05의 상지 길이 대 하지 길이 비율 변화를 일으키는, 방법.
  60. 제41항에 있어서,
    상기 조성물은 비경구로 투여되는, 방법.
  61. 제41항에 있어서, 상기 조성물은 매일, 1주일에 3회, 1주일에 2회, 1주일에 1회, 또는 2주일에 1회 투여되는, 방법.
KR1020187005634A 2015-07-30 2016-08-01 골 이형성증 치료를 위한 c―형 나트륨이뇨 펩타이드 변이체의 용도 KR20180030414A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562199081P 2015-07-30 2015-07-30
US62/199,081 2015-07-30
US201662320704P 2016-04-11 2016-04-11
US62/320,704 2016-04-11
PCT/US2016/044968 WO2017020034A1 (en) 2015-07-30 2016-08-01 Use of c-type natriuretic peptide variants to treat skeletal dysplasia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20180030414A true KR20180030414A (ko) 2018-03-22

Family

ID=56682280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187005634A KR20180030414A (ko) 2015-07-30 2016-08-01 골 이형성증 치료를 위한 c―형 나트륨이뇨 펩타이드 변이체의 용도

Country Status (19)

Country Link
US (5) US9907834B2 (ko)
EP (1) EP3328416B1 (ko)
JP (3) JP6882256B2 (ko)
KR (1) KR20180030414A (ko)
CN (2) CN108472336B (ko)
AU (2) AU2016298425B2 (ko)
BR (1) BR112018001761A2 (ko)
CA (1) CA2994280C (ko)
CL (1) CL2018000215A1 (ko)
CO (1) CO2018002328A2 (ko)
DK (1) DK3328416T3 (ko)
FI (1) FI3328416T3 (ko)
HK (1) HK1255864A1 (ko)
IL (2) IL257125B (ko)
MX (2) MX2018001314A (ko)
PT (1) PT3328416T (ko)
RU (1) RU2728567C2 (ko)
TW (2) TWI773649B (ko)
WO (1) WO2017020034A1 (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9907834B2 (en) 2015-07-30 2018-03-06 Biomarin Pharmaceutical Inc. Use of C-type natriuretic peptide variants to treat skeletal dysplasia
EP3574913A4 (en) * 2017-01-24 2020-07-22 Daiichi Sankyo Company, Limited SMALL SIZE THERAPEUTIC AGENT
KR102649069B1 (ko) 2018-05-31 2024-03-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물
KR102058961B1 (ko) 2018-07-28 2019-12-24 주식회사 엑소코바이오 엑소좀의 동결건조 방법
KR102163806B1 (ko) 2018-07-30 2020-10-07 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물
JP7197310B2 (ja) * 2018-08-31 2022-12-27 株式会社小松製作所 積込機械の制御装置および制御方法
WO2021030411A1 (en) * 2019-08-12 2021-02-18 Biomarin Pharmaceutical Inc. Hydrophobic peptide salts for extended release compositions
CN110514619B (zh) * 2019-08-29 2021-01-29 山东科技大学 基于有偏估计的近红外定量分析模型构建方法
KR20220063220A (ko) * 2019-09-16 2022-05-17 바이오마린 파머수티컬 인크. Cnp 변이체 및 이의 접합체
TW202313663A (zh) 2021-07-09 2023-04-01 美商拜奧馬林製藥公司 Ｃ型利鈉肽變異體治療兒童骨骼發育不良
TW202334188A (zh) 2021-12-07 2023-09-01 美商拜奧馬林製藥公司 Ｃｎｐ療法

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0478797B1 (en) 1990-04-20 1995-04-12 Hisayuki Matsuo Novel physiologically active peptide originating in hog
JP3026354B2 (ja) 1990-09-27 2000-03-27 壽之 松尾 ヒトｃｎｐ遺伝子及び前駆体蛋白
JP2809533B2 (ja) * 1991-01-31 1998-10-08 壽之 松尾 Ｃｎｐ類似体ペプチド
AU6360394A (en) 1993-03-03 1994-09-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Vasonatrin peptide and analogs thereof
IL142118A0 (en) * 2001-03-20 2002-03-10 Prochon Biotech Ltd Method and composition for treatment of skeletal dysplasias
US7015195B2 (en) * 2002-01-10 2006-03-21 Osteotrophin, Llc Treatment of bone disorders with skeletal anabolic drugs
ES2465141T3 (es) 2004-03-31 2014-06-05 Kazuwa Nakao Remedio o medicamento preventivo para la artritis
TW200806317A (en) * 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
AR069409A1 (es) 2007-11-21 2010-01-20 Biomarin Pharm Inc Variantes de peptidos natriureticos de tipo c
WO2009086166A1 (en) * 2007-12-19 2009-07-09 Ekr Therapeutics, Inc. Room temperature stable, lyophilized natriuretic peptide formulations
HUE032582T2 (en) * 2009-05-20 2017-09-28 Biomarin Pharm Inc Variants of C-type natriuretic peptide
US20110152188A1 (en) * 2009-12-23 2011-06-23 Hanns-Christian Mahler Pharmaceutical compositions of igf/i proteins
US9266939B2 (en) * 2010-12-27 2016-02-23 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising natriuretic peptides and methods of use thereof
WO2013058833A1 (en) * 2011-10-19 2013-04-25 Enobia Canada Limited Partnership Compositions comprising alkaline phosphatase and/or natriuretic peptide and methods of use thereof
US9907834B2 (en) 2015-07-30 2018-03-06 Biomarin Pharmaceutical Inc. Use of C-type natriuretic peptide variants to treat skeletal dysplasia

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016298425B2 (en) 2022-11-10
HK1255864A1 (zh) 2019-08-30
TWI820795B (zh) 2023-11-01
CO2018002328A2 (es) 2018-05-10
RU2018106890A (ru) 2019-08-28
EP3328416B1 (en) 2024-03-13
CA2994280C (en) 2024-01-23
AU2023200669A1 (en) 2023-04-27
JP2021107458A (ja) 2021-07-29
US11590204B2 (en) 2023-02-28
US11911446B2 (en) 2024-02-27
US20230293637A1 (en) 2023-09-21
JP2018522022A (ja) 2018-08-09
RU2728567C2 (ru) 2020-07-30
RU2020123892A3 (ko) 2021-12-03
RU2018106890A3 (ko) 2019-12-27
US9907834B2 (en) 2018-03-06
MX2023002973A (es) 2023-04-05
FI3328416T3 (fi) 2024-03-26
US20180207239A1 (en) 2018-07-26
IL278488B2 (en) 2023-02-01
US10646550B2 (en) 2020-05-12
CN108472336A (zh) 2018-08-31
JP7336482B2 (ja) 2023-08-31
AU2016298425A1 (en) 2018-02-08
US20200246433A1 (en) 2020-08-06
CL2018000215A1 (es) 2018-06-22
CN108472336B (zh) 2022-05-31
US20170028023A1 (en) 2017-02-02
CA2994280A1 (en) 2017-02-02
TW201717995A (zh) 2017-06-01
BR112018001761A2 (pt) 2018-09-18
WO2017020034A8 (en) 2018-03-15
US20200246434A1 (en) 2020-08-06
EP3328416A1 (en) 2018-06-06
DK3328416T3 (da) 2024-04-08
TW202322847A (zh) 2023-06-16
JP6882256B2 (ja) 2021-06-02
IL278488B (en) 2022-10-01
TWI773649B (zh) 2022-08-11
RU2020123892A (ru) 2020-09-18
PT3328416T (pt) 2024-04-10
CN114796460A (zh) 2022-07-29
IL257125A (en) 2018-03-29
WO2017020034A1 (en) 2017-02-02
MX2018001314A (es) 2018-05-28
IL278488A (ko) 2020-12-31
IL257125B (en) 2020-11-30
JP2023144124A (ja) 2023-10-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11911446B2 (en) Use of C-type natriuretic peptide variants to treat skeletal dysplasia
JP5718909B2 (ja) Ｃ型ナトリウム利尿ペプチドの変異体
TW200927758A (en) Variants of C-type natriuretic peptide
US9745358B2 (en) Peptides and compositions for treatment of joint damage
US20230140311A1 (en) C-Type Natriuretic Peptide Variants to Treat Skeletal Dysplasia in Children
KR20160091888A (ko) 요법에 사용하기 위한 인슐린-유사 성장 인자 모방체
RU2794515C2 (ru) Применение вариантов натрийуретического пептида c-типа для лечения скелетной дисплазии
US20240156914A1 (en) Use of C-Type Natriuretic Peptide Variants to Treat Skeletal Dysplasia
CN117881416A (zh) 用于治疗儿童的骨骼发育不良的c型利钠肽变体

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal