KR20160091888A - 요법에 사용하기 위한 인슐린-유사 성장 인자 모방체 - Google Patents

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KR20160091888A
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노파르티스 아게
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Abstract

본 발명은 인간 요법에서의 IGF-1 모방체의 용도에 관한 것이다. 특히, 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료를 위한 E-펩티드를 포함하는, IGF-1 전구체 단백질, 특히 인간 IGF-1 전구체 단백질의 용도가 본원에서 개시된다.

Description

요법에 사용하기 위한 인슐린-유사 성장 인자 모방체 {INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR MIMETICS FOR USE IN THERAPY}
본 발명은 인슐린-유사 성장 인자 1 (IGF-1) 변형의 분야에 관한 것이다. 특히, 이는 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)의 요법에 사용하기 위한 변형된 IGF-1 폴리펩티드에 관한 것이다.
척수 연수 근육 위축증 (SBMA)은 진행성 근육 약화 및 위축을 특징으로 하는 후발성 X-연관성 신경변성 질환이며, 이에 대한 효과적인 질환-조절 요법은 현재 없다. 이 질환은 100,000명 당 1 내지 2명의 추정 유병률로 성인 남성에서 우세하게 발생한다. SBMA는 안드로겐 수용체 (AR) 유전자의 제1 엑손 내에서 폴리글루타민 트랙을 코딩하는 트리뉴클레오티드 CAG 반복체의 확대에 의해 유발된다 (Fischbeck KH (2012) Developing treatment for spinal and bulbar muscular atrophy. Prog Neurobiol; 99:257-61). AR은 핵 호르몬 수용체 슈퍼패밀리에 속하며, 안드로겐 결합시 핵으로 전위되고, 여기서 DNA에 결합하여 표적 유전자를 활성화 및 억제시킨다. SBMA에서, AR에서의 폴리글루타민 트랙의 확대는 돌연변이 단백질에서의 독성 기능 획득을 부여하며, 이는 운동 뉴런 및 다른 이환 조직의 핵에서 그의 축적을 초래한다. 일부 번역후 변형은 아마도 돌연변이 AR 클리어런스를 향상시킴으로써 폴리글루타민-확대된 AR의 독성을 조절한다 (Palazzolo I, Burnett BG, Young JE, et al (2007) Akt blocks ligand binding and protects against expanded polyglutamine androgen receptor toxicity. Hum Mol Gent; 16:1593-603).
SBMA의 주요 증상은 척수 및 뇌간 하위 운동 뉴런의 변성에 기인하는 반면, 감각 징후, 안드로겐 불감성의 조짐 (여성유방증 및 감소된 생식력), 및 원발성 근병증 이상도 일어난다 (Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012) Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56.). 이러한 맥락에서, 근육은 SBMA의 발병에 관련될 가능성이 매우 높다. SBMA 환자로부터의 근육 생검은 근병증 뿐만 아니라 신경학적 변화를 나타내며, SBMA의 녹-인 마우스 모델에서 근육 병리현상은 운동 뉴런 병리현상에 선행하고, 야생형 AR의 근육 특이적 과다발현은 SBMA-유사 표현형을 초래한다 (Banno H, Katsuno M, Suzuki K, et al (2012) Pathogenesis and molecular targeted therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Cell Tissue Res; 349:313-320.).
골격근에서 IGF-1의 근육-특이적 이소형을 과다발현하는 SBMA 트랜스제닉 마우스는 증가된 Akt 활성화 (Palazzolo I, Stack C, Kong L, et al (2009) Overexpression of IGF-1 in muscle attenuates disease in a mouse model of spinal and bulbar muscular atrophy. Neuron; 63:16-28.), 및 AR 단백질의 증가된 인산화 및 감소된 응집을 나타내었다. Akt 활성화는 행동적 및 조직병리학적 이상을 효과적으로 구제하고, 수명을 연장하며, SBMA 마우스의 근육 및 척수 병리현상 둘 다를 감소시키는 것으로 나타났다 (Rinaldi C, Bott LC, Chen KL, et al (2012) Insulinlike growth factor (IGF)-1 administration ameliorates disease manifestations in a mouse model of spinal and bulbar muscular atrophy. Mol Med; 18:1261-8.).
현재, SBMA에 대한 효과적인 치료법은 없다. 안드로겐-감소제의 임상 시험은 임상적으로 유의미한 이점을 제공하지는 못하였지만, SBMA에서의 돌연변이 AR의 독성은 리간드 의존적이라는 증거가 있다 (Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7., Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012) Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56.).
인슐린-유사 성장 인자 (IGF)는 세포가 그의 생리적 환경과 연통하는 데 사용하는 복합 시스템의 일부이다. 이 복합 시스템 (종종 인슐린-유사 성장 인자 축으로 지칭됨)은 2개의 세포-표면 수용체 (IGF-1R 및 IGF-2R), 2개의 리간드 (IGF-1 및 IGF-2), 6개의 고-친화도 IGF-결합 단백질의 패밀리 (IGFBP 1 내지 6), 및 관련된 IGFBP 분해 효소 (프로테아제)로 이루어진다. 이 시스템은 정상 생리상태의 조절 뿐만 아니라 다수의 병리학적 상태에도 중요하다 (Glass, Nat Cell Biol 5:87-90, 2003).
인슐린-유사 성장 인자-1 (IGF-1)은 골격근에 대한 강력한 동화 인자이며; 그의 비대성 및 항-위축성 특성에 의해 이는 내인성 IGF-1의 감소와 관련된 근육 소모 상태에 대적하는 생물학적으로 및 임상적으로 실행가능한 후보가 된다 (Clemmons DR (2007) Modifying IGF1 activity: an approach to treat endocrine disorders, atherosclerosis and cancer. Nat Rev Drug Discov; 6:821-37). 그의 성숙한 형태에서, 소마토메딘으로도 지칭되는 인간 IGF-1은 배양물에서 폭넓은 범위의 세포의 성장을 자극하는 것으로 나타난 70개 아미노산의 작은 단백질이다. IGF-1 단백질은 처음에 3개의 공지된 스플라이스 변이체 mRNA에 의해 코딩된다. 각각의 mRNA의 오픈 리딩 프레임은 70개 아미노산 IGF-1 (서열 1) 및 C-말단에 특정 E-펩티드를 특정 IGF-1 mRNA에 따라 함유하는 전구체 단백질을 코딩한다. 이들 E-펩티드는 Ea (rsvraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm; 서열 2), Eb (rsvraqrhtdmpktqkyqppstnkntksqrrkgwpkthpggeqkegteaslqirgkkkeqrreigsrnaecrgkkgk; 서열 3) 및 Ec (rsvraqrhtdmpktqkyqppstnkntksqrrkgstfeerk; 서열 4) 펩티드로 용어화되었으며, 35 내지 87개 아미노산 길이의 범위이고, N-말단에 공통 서열 영역 및 C-말단에 가변 서열 영역을 포함한다. 예를 들어, IGF-1-Ea에 대한 야생형 오픈 리딩 프레임은 리더 서열을 포함하는 135개 아미노산의 폴리펩티드 및 리더 서열을 갖지 않는 105개 아미노산의 폴리펩티드 (gpetlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksarsvraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm; 서열 5)를 코딩한다. 생리학적 발현에서, E-펩티드는 내인성 프로테아제에 의해 전구체가 절단되어 성숙한 70개 아미노산 IGF-1을 생성한다. 그러나, 천연 IGF-1 단백질은 그의 효능을 제한할 수 있는 특정 특성을 갖는다. 첫째로, IGF-1은 IGF-1이 혈청 중에 인큐베이션될 경우 급속한 단백질분해를 허용하는 2염기 모티프를 함유하는 그의 수용체-결합 부위에서의 절단에 의해 불활성화될 수 있다. 둘째로, IGF-1은 이 호르몬이 그의 수용체 (IGF1R)에 대해 갖는 것보다 더 높은 IGF-1에 대한 친화도를 갖는 특정 IGF-1 결합 단백질, 특히 IGF 결합 단백질 5 (IGFBP5)에 의해 억제될 수 있다 (Clemmons DR (2012) Metabolic actions of insulin-like growth factor-1 in normal physiology and diabetes. Endocrinol Metab Clin North Am; 41:425-43). 마지막으로, IGF-1의 성숙한 형태는 신장 여과에 의해 순환으로부터 급속하게 청소되는 작은 단백질 (7,600 Da)이다. 이들 요인이 천연 IGF-1의 짧은 반감기 및 근육 소모 상태에서 임상 효능의 결여의 원인이 되는 것으로 생각된다.
IGF-1과 관련된 약동학적 및 약역학적 쟁점을 다루기 위해, 천연 단백질의 변형된 형태가 개발되었다. 이 인간 IGF-1 (hIGF-1) 모방체의 서열은, 단백질분해성 분해를 감소시키고, 억제성 IGFBP5에의 결합을 감소시킴으로써, 및 N 말단에서 선형 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 쇄를 첨가함으로써, 그의 효능을 증가시키도록 변형되었다 (WO 2007/146689).
발명의 요약
진행성 근육 약화 및 위축을 특징으로 하는 신경변성 질환 SBMA를 앓고 있는 환자에서의 중재는 매우 혁신적일 것이며, 충족되지 않는 높은 의학적 필요를 충족시킬 것이다. 사실, 이 환자 집단은 현재 치료 옵션이 없다. 따라서, 돌연변이 AR의 독성에 의해 유발되며 진행성 근육 약화 및 위축을 특징으로 하는 신경변성 질환을 다루기 위한 신규한 제약 조성물 및 방법을 개발해야 할 필요성이 있다. 이 목적은 본 개시내용 내에 제공된 방법 및 조성물에 의해 달성될 수 있다.
본 발명은 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 SBMA를 앓고 있는 환자에서의 SBMA와 관련된 증상을 예방, 개선 또는 반전시킴으로써 요법에 사용하기 위한 IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 한 실시양태에서, IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 SBMA를 앓고 있는 환자의 뇌간 및 척수에서의 운동 뉴런의 변성을 감소시키거나 예방한다.
본 발명의 또다른 실시양태에서, IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 SBMA를 앓고 있는 환자에서의 근육 약화 및/또는 위축의 예방 또는 반전을 위해 사용된다.
본 발명의 한 실시양태에서, IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 골격근에서의 돌연변이 안드로겐 수용체 (AR) 응집을 감소시킨다.
또다른 실시양태에서, IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 골격근에서의 돌연변이 안드로겐 수용체 (AR) 응집을 감소시키고, 따라서 돌연변이 AR 독성을 감소시킨다. 따라서, 본 발명의 한 실시양태에서, IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 골격근에서의 돌연변이 안드로겐 수용체 (AR) 독성의 감소를 위해 사용된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 억제성 IGF1 결합 단백질에의 결합을 회피하도록 변경되고, 예를 들어 PEG화되거나 WO 2007/146689에 기재된 바와 같이 특정 위치에서 돌연변이됨으로써 향상된 혈청 반감기를 갖는 IGF-1 모방체이다.
본 개시내용의 특정 실시양태에서, 선행하는 실시양태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 그 자체로서 또는 제약 조성물의 일부로서 IGF-1 모방체는 E-펩티드를 포함하는 인간 IGF-1 전구체 단백질, 특히 프로테아제에 의한 IGF-1로부터의 E-펩티드의 절단이 - 비변형된 IGF-1 단백질에 비해 - 감소되거나 회피되도록 변형되고/거나, - 비변형된 IGF-1 단백질에 비해 - 억제성 IGF-1 결합 단백질에 대한 보다 낮은 친화도, 특히 IGF-1 결합 단백질 5 (IGFBP5)에 대한 보다 낮은 친화도를 갖는 전구체 단백질을 포함하는 폴리펩티드이다.
본 발명의 구체적인 실시양태에서, E-펩티드는 Ea, Eb 또는 Ec 펩티드이지만, 특히 Ea 펩티드이다.
IGF-1 전구체 단백질의 N-말단에서, 아미노산 G1, P2 또는 E3 중 1개, 2개 또는 모두는 결실되거나 돌연변이될 수 있다. 또한, R36 및 R37은 각각 R36A 및 R37A로 돌연변이될 수 있다.
또다른 관련된 실시양태에서, IGF-1 전구체 단백질은 하기 돌연변이를 포함하는 Ea 펩티드를 포함한다: 아미노산 잔기 G1, P2, E3, R71 및 S72는 결실되고, 위치 37에서의 R은 A로 돌연변이되고, 따라서 하기 변형을 함유한다: ΔG1, ΔP2, ΔE3; R37A; ΔR71, ΔS72.
추가의 실시양태에서, IGF-1 Ea-전구체 단백질 G1, P2, E3, R37, R71 및 S72의 아미노산은 결실된다 (IGF-1 Ea-펩티드-ΔG1, ΔP2, ΔE3, ΔR37, ΔR71 및 ΔS72).
또다른 특정 실시양태에서, IGF-1 전구체 단백질의 위치 37에서의 아르기닌은 알라닌 (R37A)으로 돌연변이된다.
특정 바람직한 실시양태에서, IGF-1 Ea-전구체 단백질은 하기 돌연변이를 포함한다: 아미노산 잔기 E3, R71 및 S72는 결실되고, 위치 37에서의 아미노산 R은 알라닌으로 돌연변이되고, 따라서 하기 변형을 포함한다: ΔE3; R37A; ΔR71, ΔS72, 여기서, 아미노산의 넘버링은 서열 5에 상응한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 선행하는 실시양태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 특히 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 그 자체로서 또는 제약 조성물의 일부로서 IGF-1 모방체는 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 다른 실시양태에서, 선행하는 실시양태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 그 자체로서 또는 제약 조성물의 일부로서 IGF-1 모방체는 PEG화된다. 특히, IGF-1 모방체는 특히 전구체 단백질의 측쇄에, 특히 N-말단에 공유 부착된 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 쇄로 이루어진 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 선행하는 실시양태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 특히 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 PEG화된 IGF-1 모방체, 또는 PEG화된 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이며, 여기서, 상기 PEG화된 IGF-1 모방체는 Ea 펩티드를 포함하고, 여기서 아미노산 잔기 E3, R71 및 S72가 결실되고, 위치 37에서의 아미노산 R이 A로 돌연변이되고, 따라서 하기 변형을 함유한다: ΔE3; R37A; ΔR71, ΔS72.
또다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 선행하는 실시양태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 특히 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 PEG화된 IGF-1 모방체, 또는 PEG화된 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이며, 여기서, 상기 PEG화된 IGF-1 모방체는 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
본 발명은 또한 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 IGF-1 모방체를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.
특히, 본 발명은 선행하는 실시양태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 특히 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다. 구체적인 실시양태에서, 이 핵산 분자는 서열 7에 나타낸 바와 같은 뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
특정 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물은 IGF-1 모방체를 예방 또는 치료 유효량으로 및 추가로 제약학상 허용되는 담체를 포함한다.
특히, 요법에서 상기 언급된 용도 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체는 0.1 mg/kg 내지 3 mg/kg 체중의 용량으로, 특히 약 0.1 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg 체중의 용량으로, 특히 단일 정맥내 주입의 형태로 투여된다.
본 발명의 또다른 측면은 본원에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료 방법에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체, 또는 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 SBMA를 앓고 있는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, SBMA를 앓고 있는 환자에서의 SBMA와 관련된 증상의 예방, 개선 또는 반전을 위한 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 IGF-1 모방체는 IGF-1 전구체 단백질, 특히 인간 IGF-1 전구체 단백질이다. 특히, 본 발명에 따른 방법은 프로테아제에 의한 IGF-1로부터의 E-펩티드의 절단이 감소되도록 변형된 IGF-1 전구체 단백질의 투여를 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 상기 환자에게 치료 유효량으로 투여되는 IGF-1 전구체 단백질은 Ea, Eb 또는 Ec 펩티드, 특히 Ea 펩티드를 포함한다. 개시된 방법의 특정 다른 실시양태에서, 상기 환자에게 치료 유효량으로 투여되는 IGF-1 Ea-전구체 단백질의 변형은 아미노산 잔기 E3, R71, S72의 결실 및 위치 37에서의 아르기닌의 돌연변이 또는 결실, 특히 돌연변이 R37A를 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 본 발명은 IGF-1 전구체 단백질의 치료 유효량, 또는 IGF-1 전구체 단백질을 치료 유효량으로 포함하는 제약 조성물을 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 IGF-1 전구체 단백질은 Ea 펩티드 및 하기 변형: ΔE3; R37A; ΔR71; ΔS72, 특히 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 전구체 단백질을 포함하는 것인, 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료를 위한, 또는 SBMA와 관련된 증상의 예방, 개선 또는 반전을 위한 방법에 관한 것이다.
특히, 상기 기재된 방법에 사용되는 IGF-1 Ea-전구체 단백질은 PEG화되며, ΔE3; R37A; ΔR71; ΔS72 변형을 포함한다. 특히, 상기 PEG화된 IGF-1 Ea 전구체 단백질은 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
특히, 상기 기재된 방법에 사용되는 IGF-1 Ea 전구체 단백질은 ΔE3; R37A; ΔR71; ΔS72 변형 (예를 들어 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 전구체 단백질) 및 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티, 특히 전구체 단백질의 아미노산 측쇄에 공유 부착된 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함한다.
본 개시내용의 특정 실시양태에서, 상기 기재된 IGF-1 모방체에 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티는 20 내지 100 kDa (킬로 달톤)의 전체 분자량을 갖는 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티이다. 결과적으로, 본 개시내용의 한 실시양태에서, 상기 기재된 IGF-1 모방체에 부착된 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티는 약 30 kDa의 전체 분자량을 갖는다.
또다른 측면에서, 본 발명에 따른 및 본원에 기재된 바와 같은 방법은 SBMA를 앓고 있는 환자의 뇌간 및 척수에서의 운동 뉴런의 변성의 감소 또는 예방을 더 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명에 따른 및 본원에 기재된 바와 같은 방법은 SBMA를 앓고 있는 환자에서의 근육 약화 및/또는 위축의 예방 또는 반전 및/또는 골격근에서의 돌연변이 안드로겐 수용체 (AR) 응집을 감소시켜 돌연변이 AR 독성을 감소시키는 것을 더 포함한다.
본 발명은 또한 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)의 치료에 사용하기 위한, 또는 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 SBMA와 관련된 증상의 예방, 개선 또는 반전을 위한 의약의 제조를 위한 본원에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체의 용도에 관한 것이다.
본 개시내용의 실시양태는 하기 측면에서 기재된다:
1. E-펩티드를 포함하는 IGF-1 전구체 단백질을 포함하는 폴리펩티드인, 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 IGF-1 모방체.
2. 측면 1에 따라 사용하기 위한, SBMA를 앓고 있는 환자에서의 SBMA와 관련된 증상의 예방, 개선 또는 반전을 위한 IGF-1 모방체.
3. 측면 1 또는 측면 2에 따라 사용하기 위한, SBMA를 앓고 있는 환자의 뇌간 및 척수에서의 운동 뉴런의 변성의 감소 또는 예방을 위한 IGF-1 모방체.
4. 측면 1 내지 3 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, SBMA를 앓고 있는 환자에서의 골격근 약화 및/또는 위축증의 예방 또는 반전을 위한 IGF-1 모방체.
5. 측면 1 내지 4 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 골격근에서의 돌연변이 안드로겐 수용체 (AR) 응집을 감소시켜 돌연변이 AR 독성을 감소시키기 위한 IGF-1 모방체.
6. 측면 1 내지 5 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질이 인간 IGF-1 전구체 단백질인 IGF-1 모방체.
7. 측면 1 내지 6 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질이 프로테아제에 의한 IGF-1로부터의 E-펩티드의 절단이 감소되도록 변형된 것인 IGF-1 모방체.
8. 측면 1 내지 7 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질이 Ea, Eb 또는 Ec 펩티드를 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
9. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질이 Ea 펩티드를 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
10. 측면 1 내지 9 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질의 아미노산 잔기 E3, R71 또는 S72가 결실된 것인 IGF-1 Ea 전구체 모방체.
11. 측면 1 내지 10 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질의 위치 37에서의 아르기닌이 알라닌 (R37A)으로 돌연변이된 것인 IGF-1 모방체.
12. 측면 1 내지 11 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질이 하기 변형: ΔE3; R37A; ΔR71, ΔS72를 포함하는 것인 IGF-1 Ea 전구체 모방체.
13. 측면 1 내지 12 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질이 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
14. 측면 1 내지 13 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 전구체 단백질의 측쇄에 공유 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 더 포함하는 IGF-1 모방체.
15. 측면 14에 따라 사용하기 위한, PEG화된 전구체 단백질이 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
16. 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 측면 6 내지 15 중 어느 하나에 기재된 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물.
17. 측면 16에 있어서, 측면 1 내지 5 중 어느 하나에 기재된 바와 같이 사용하기 위한 조성물.
18. 측면 16 또는 측면 17에 따라 사용하기 위한, 제약학상 허용되는 담체를 더 포함하는 조성물.
19. 측면 16 내지 18 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 측면 6 내지 15 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체를 예방 또는 치료 유효량으로 포함하는 조성물.
20. 측면 16 내지 19 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, IGF-1 모방체가 0.001 내지 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것인 조성물.
21. 측면 20에 따라 사용하기 위한, IGF-1 모방체가 약 0.01, 약 0.03, 약 0.1, 약 0.3, 약 0.5, 약 1 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것인 조성물.
22. 측면 16 내지 21 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, IGF-1 모방체가 단일 정맥내 주입으로서 투여되는 것인 조성물.
23. 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에게 측면 6 내지 15 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 측면 1 내지 5 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료 방법.
24. 측면 1 내지 5 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조를 위한 측면 6 내지 15 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체의 용도.
정의
본 개시내용이 보다 용이하게 이해될 수 있도록 하기 위해, 특정 용어가 먼저 정의된다. 본 출원의 범위 내에서 사용된 기술 용어 및 표현은 본원에서 달리 지시되지 않는다면 일반적으로 관련 기술분야에서 그들에게 통상적으로 적용되는 의미로 주어진다. 추가의 정의는 상세한 설명 전반에 걸쳐 설명된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 내용이 명백하게 달리 나타내지 않는다면 복수 지칭대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "화합물"에 대한 지칭은 1종 이상의 화합물을 포함한다.
용어 "포함하는"은 "포괄하는"을 의미하며, 예를 들어 X를 "포함하는" 조성물은 X로 독점적으로 이루어질 수 있거나, 추가의 어떤 것, 예를 들어 X + Y를 포함할 수 있다.
수치값 x와 관련하여 용어 "약"은 예를 들어 x +10％를 의미한다.
본 발명의 내용에서 사용될 경우 용어 "전구체"는 신호 펩티드를 갖지 않지만 각각 Ea, Eb 또는 Ec 펩티드를 포함하는 성숙한 인간 IGF-1 단백질의 전구체를 지칭할 것이다. 용어 "전구체"는 또한 성숙한 70개 아미노산 단백질을 포함하는 인간 IGF-1 전구체 단백질, 또는 IGF1 수용체에 결합하는 데 충분한 동일한 또는 유사한 크기의 IGF-1 모방체 - 및 종종 성숙한 영역으로부터 절단되지만 항상 그렇지는 않은 COOH 말단 E-펩티드를 지칭한다.
본 발명의 목적상 "환자" 또는 "대상체"는 호환적으로 사용되며, 인간을 지칭하는 것을 의미한다. 따라서, 방법은 적용가능한 인간 요법이다.
단백질 설명의 내용에서 기호 "Δ" 또는 문자 "d" 또는 "D" (예를 들어 "hIGF-1-Ea- Δ1-3, R37A, Δ 71-72)는 아미노산 결실을 지칭한다. 달리 특정되지 않는다면, 특정 아미노산 위치의 넘버링은 서열 5에 상응한다. 단일 문자 아미노산 코드는 문자 코드에 통상적으로 사용되는 하기를 지칭한다:
단일-문자 아미노산 코드
G - 글리신 (Gly); P - 프롤린 (Pro); A - 알라닌 (Ala); V - 발린 (Val); L - 류신 (Leu); I - 이소류신 (Ile); M - 메티오닌 (Met); C - 시스테인 (Cys); F - 페닐알라닌 (Phe); Y - 티로신 (Tyr); W - 트립토판 (Trp); H - 히스티딘 (His); K - 리신 (Lys); R - 아르기닌 (Arg); Q - 글루타민 (Gln); N - 아스파라긴 (Asn); E - 글루탐산 (Glu); D - 아스파르트산 (Asp); S - 세린 (Ser); T - 트레오닌 (Thr)
용어 "치료", "치료하는 것" 등은 일반적으로 바람직한 약물학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미하기 위해 본원에 사용된다. 효과는 질환 또는 그의 증상을 완전하게 또는 부분적으로 예방하는 것의 면에서 예방적일 수 있고/거나, 질환 및/또는 질환으로 인한 부작용을 부분적으로 또는 완전하게 치료하는 것의 면에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치료"는 대상체에서의 질환의 임의의 치료를 커버하며, (a) 질환에 걸릴 성향이 있을 수 있는 대상체에서 질환이 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 그의 발달을 정지시키는 것; 또는 (c) 질환을 완화시키는 것, 즉 질환의 퇴보를 유발하는 것을 포함한다. 본 발명의 내용 (치료)에서 사용된 용어 "예방하는 것", "개선시키는 것" 또는 "반전시키는 것"은 SBMA 환자에서 관찰된 질환 상태/병인의 예방, 개선 또는 반전을 지칭한다 (예를 들어 문헌 [Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012) Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56.] 참조). 결과적으로, 그 중에서도 "예방하는 것", "개선시키는 것" 또는 "반전시키는 것"은 대상체에서의 질환 증상의 감소, 즉 근육 질량 및 강도의 증가를 지칭한다. 이러한 증가의 특정 정도 또는 수준은 적어도 15％, 25％, 35％, 50％, 65％, 75％, 80％, 85％, 90％, 95％, 98％ 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 예방, 개선 또는 반전의 정도는 또한 환자에서의 질환 상태/병인의 특질이 본 발명의 조성물을 받지 않은 환자가 갖는 것보다 통계학적으로 유의하게 덜 현저하도록 부분적일 수 있다. 부분적 치료 결과는 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지일 수 있다.
"치료 유효량"은 주어진 상태 및 투여 처방에 대한 치료 효과를 제공하는 양을 지칭한다. 특히, "치료 유효량"은 질환의 증상을 예방, 개선 또는 경감시키거나, 치료되는 환자의 생존을 연장시키는 데 유효한 양을 의미한다. 치료 유효량의 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자의 기술 내에 있다. 본 발명에 따른 화합물의 치료 유효량 또는 투여량은 넓은 한계 내에서 다양할 수 있으며, 관련 기술분야에 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 투여량은 넓은 한계 내에서 다양할 수 있으며, 물론 각각의 특정 경우에 개별 요건으로 조정되어야 할 것이다.
어구 "인슐린 유사 성장 인자 1 단백질"은 인슐린 유사 성장 인자 1 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 지칭하며, 인간 인슐린 유사 성장 인자 1 (hIGF-1) 단백질 및 그의 변이체가 특히 바람직하다. IGF-1 단백질 변이체 또는 IGF-1 모방체는 IGF-1 야생형 서열과 적어도 하나의 아미노산이 상이한 단백질이며, 여기서 용어 "야생형 서열"은 적어도 하나의 천연 발생 유기체에서 이용가능한 폴리펩티드 또는 유전자 서열, 또는 변화되거나, 돌연변이되거나, 또는 다르게는 인간에 의해 조작되지 않은 폴리펩티드 또는 유전자 서열을 지칭한다. 용어 IGF-1 변이체 및 IGF-1 모방체는 문서 전반에 걸쳐 호환적으로 사용된다. IGF-1 변이체는 또한 펩티드 리더 서열을 포함하는 IGF-1 전구체 단백질 또는 프로-IGF-1 단백질이다. IGF-1 변이체는 또한 IGF-1 단백질을 포함하는 융합 단백질, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 모이어티 또는 인간 IgG fc 도메인에 융합된 IGF-1 단백질을 포함하는 단백질일 수 있다. IGF-1 변이체에 대한 예는 그 중에서도 특허 출원 WO2007146689 (안정화된 IGF-1 전구체 단백질)에 개시되어 있다. 상기 기재된 바와 같은 IGF-1 변이체는 이러한 단백질이 야생형 IGF-1의 기능적 등가물로서 간주될 수 있다는 의미에서 그의 생물학적 활성을 보유한다.
IGF-1 단백질에 관해 기능적 등가물은 천연 또는 인공 돌연변이를 포함하는 IGF-1 단백질로서 이해되어야 한다. 돌연변이는 IGF-1 단백질의 생물학적 활성을 감소시키지 않는 하나 이상의 핵산의 삽입, 결실 또는 치환일 수 있다. 기능적 등가물은 IGF-1 야생형 단백질, 예를 들어 인간 IGF-1 단백질 서열 1과 적어도 80％, 바람직하게는 85％, 보다 바람직하게는 90％, 가장 바람직하게는 95％ 초과의 동일성, 매우 특히 바람직하게는 적어도 98％ 동일성 - 그러나 100％ 미만의 동일성을 갖는다. 융합 단백질의 경우, ％ 동일성은 이러한 융합 단백질의 IGF-1 부분에 기초해서만 정의될 것이다.
본 개시내용의 다양한 측면은 하기 하위섹션에서 보다 상세하게 기재된다.
현재 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)에 대한 효과적인 치료법은 없다. 안드로겐-감소제는 임상적으로 유의미한 이점을 생성하는 데 실패하였다 (Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7., Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012). Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56).
본 발명의 범위 내에서, 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환을 효과적으로 치료하기 위한 수단 및 방법이 제공된다.
본 발명은 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한, 활성 IGF-1을 그의 E-펩티드로부터 방출하는 것을 담당하는 전형적인 프로테아제 절단을 방지하거나, 감소시키거나, 회피하도록 변형된 E-펩티드를 실질적으로 함유하는 IGF-1 전구체 폴리펩티드에 관한 것이다.
어떠한 특정 가설에 얽매이지는 않지만, 돌연변이 AR 독성의 IGF-1/Akt-매개된 억제는 생체내에서 SBMA를 치료하는 효과적인 전략인 것으로 믿어진다. 본 발명에 따른 IGF-1 전구체 폴리펩티드 모방체는 골격근, 말초 신경 또는 다른 관련 세포에서 돌연변이 AR 독성을 특이적으로 감소시키고, 따라서 SBMA를 갖는 환자에서 근육 변성을 직접적으로 약화시키며, 기능을 개선시키는 잠재성을 갖는다.
IGF-1 치료는 단지 1) IGF-1 결함의 치료를 위해; 또는 2) 당뇨병에서의 인슐린 요법을 대체하는 그의 인슐린-유사 특성을 이용하기 위해; 또는 3) 성장 호르몬의 제2 전령으로서의 그의 역할로 인한 일반적인 동화작용제로서만 시험되었다. 종래 기술에 기재된 전임상/임상 연구는 개선된 근육 기능과 관련된 주로 근육 조직에서 IGF-1 치료로 유익한 변화를 나타내었다. SBMA의 병리현상은 주로 연수 및 척수 운동 뉴런과 관련된다. 종래 기술에서는 (i) IGF-1 모방체로의 치료가 척수 운동 뉴런에 영향을 미치는 질환에 대해 효과를 가질 수 있다는 것, 또는 (ii) IGF-1 모방체가 돌연변이 AR 독성의 Akt-매개된 억제를 유도하는 데 사용될 수 있다는 것이 입증되지 않았다.
천연 IGF-1은 우수한 약물-유사 특성을 갖지 않는다. 이는 매우 급속하게 청소되며, 그의 효능을 방지하는 억제성 IGF1 결합 단백질에 의해 결합된다. 결과적으로, 천연 IGF-1은 저혈당증을 초래하는 인슐린 수용체의 교차-자극의 위험이 있는 높은 Cmax를 유발하는 용량으로 주어질 필요가 있다. 놀랍게도, 개시된 IGF-1 모방체, 특히 아미노산 잔기 E3, R71 또는 S72 중 하나 이상이 결실되고, 전구체 단백질의 위치 37에서의 아르기닌이 알라닌 (R37A)으로 돌연변이된 IGF-1 Ea-전구체 단백질은 골격근, 말초 신경 또는 다른 관련 세포에서의 돌연변이 AR 독성을 특이적으로 감소시키고, 따라서 상기 언급된 문제를 유발하지 않으면서 SBMA를 갖는 환자에서 근육 변성을 직접적으로 약화시키며, 기능을 개선시키는 잠재성을 갖는다. 이러한 전구체 단백질은 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또다른 구체적인 실시양태에서, 상기 언급된 IGF-1 Ea 전구체 단백질은 전구체 단백질의 측쇄에 공유 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 더 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티는 상기 기재된 IGF-1 Ea 전구체 단백질, 예를 들어 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산을 포함하는 단백질의 N-말단에 공유 부착된다.
본 개시내용의 또다른 바람직한 실시양태에서, SBMA를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 IGF-1 Ea 전구체 단백질 모방체, 또는 상기 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 및 상기 단백질의 N-말단에 공유 부착된 약 30 kDa의 전체 분자량을 갖는 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함한다.
본 개시내용의 추가의 바람직한 실시양태에서, SBMA를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 IGF-1 Ea 전구체 단백질 모방체, 또는 상기 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물은 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산으로 이루어지며, 상기 단백질의 N-말단에 공유 부착된 약 30 kDa의 전체 분자량을 갖는 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함한다.
본 개시내용의 또다른 바람직한 실시양태는 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에게 IGF-1 전구체 단백질 모방체의 치료 유효량, 또는 상기 IGF-1 전구체 단백질 모방체를 치료 유효량으로 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 상기 IGF-1 전구체 단백질이 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 및 상기 단백질의 N-말단에 공유 부착된 약 30 kDa의 전체 분자량을 갖는 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함하는 것인, 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료 방법에 관한 것이다.
본 개시내용의 또다른 바람직한 실시양태는 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에게 IGF-1 전구체 단백질 모방체의 치료 유효량, 또는 상기 IGF-1 전구체 단백질 모방체를 치료 유효량으로 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 상기 IGF-1 전구체 단백질이 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산으로 이루어지고, 상기 단백질의 N-말단에 공유 부착된 약 30 kDa의 전체 분자량을 갖는 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함하는 것인, 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료 방법에 관한 것이다.
활성 IGF 전구체 폴리펩티드에 대한 스크리닝
본 발명의 임의의 폴리펩티드의 유용성은 안정성 시험, AKT 인산화 검정, IGF-1 수용체 특이성 측정, 비대증의 마우스 모델에서의 생체내 시험, 근육 위축증 모델에서의 생체내 시험을 포함하는 WO 2007/146689에 개시된 검정 (예를 들어 제8 내지 14면 참조)을 사용함으로써 평가될 수 있으며, 이 문헌의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
중요한 돌연변이: WO 2007/146689에는 실질적으로 그의 E-펩티드를 함유하는 IGF 전구체 폴리펩티드는 혈청의 존재 하에서 생물활성을 유지하며 안정한 것으로 나타났다. E-펩티드가 2염기성 프로테아제 부위를 표적화하는 내인성 프로테아제에 의해 절단되지 않음을 보장하기 위해, 일반적으로 전구체에서의 E-펩티드의 2개의 N-말단 2염기성 아미노산 중 하나는 결실되거나, 돌연변이되거나, 다르게는 마스킹된다. hIGF-1의 경우, 이들 2개의 아미노산은 R71 및 S72이다.
성숙한 IGF의 N-말단에서의 돌연변이: 본 발명의 특정 실시양태에서, IGF 전구체 폴리펩티드는 첫번째 몇 개의 N-말단 아미노산의 결실 또는 돌연변이를 갖는다. IGF-1의 경우, 임의의 첫번째 3개의 N-말단 아미노산은 단독으로 또는 조합으로 결실되거나, 돌연변이될 수 있다.
선택적 돌연변이 부위에 대한 및 내인성 프로테아제에 의한 E-펩티드의 절단의 방지를 가능하게 하는 변형에 대한 보다 상세한 내용은 WO 2007/146689 (예를 들어 제14 및 15면 참조)에 제공되며, 이 문헌의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
IGF-1의 반감기를 증가시키는 전략은 종래 기술에 기재되었다. 고려된 전략은 (i) 세린 프로테아제에 의한 인간 혈청에서의 IGF-1의 절단을 방지하거나, IGF-1의 이용률 또는 혈청 반감기에 대한 IGF-1 결합 단백질의 부정적 영향을 경감시키는 것을 목적으로 하는 특이적 돌연변이를 포함하는 IGF-1 변이체의 생성 (WO200040613, WO05033134, WO2006074390, WO2007/146689);
(ii) 성숙한 IGF-1 단백질이 인간 이뮤노글로불린 Fc 영역에 융합된 IGF-1 융합 단백질의 생성 (WO2005033134, WO200040613);
(iii) 프로테아제에 의한 IGF-1로부터의 E-펩티드의 절단이 전구체 단백질의 변형에 의해 감소된 IGF-1 전구체 단백질의 사용 (WO2007146689);
(iv) 상기 기재된 전략의 조합 ((i)/(ii) WO05033134, (i)/(ii) WO200040613, (i)/(iii) WO2007146689)이다.
따라서, 본원에 기재된 hIGF-1-Ea 전구체 폴리펩티드 변이체 외에, 하기 추가의 단백질 변이체가 생성될 수 있으며, 본 발명에 따라 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에서 사용될 수 있다:
a) IGF-1 변이체가 야생형 IGF-I 아미노산 서열의 위치 27, 37, 65, 68에서의 3개 이하의 아미노산에서 돌연변이된 것을 특징으로 하는 WO2006066891에 기재된 상기 IGF-1 변이체.
b) 상기 융합 단백질이 위치 리신 27, 65 및/또는 68에서 아미노산 치환을 포함하는 WO 2008025528에 기재된 IGF-1 변이체.
c) WO200040613에 기재된 IGF-1 변이체, 특히 (a) 아미노산 잔기 1 내지 3, 37, 및 65 내지 70의 결실을 갖는 서열 1의 인간 IGF1 변이체 폴리펩티드; 및 (b) 인간 IgG fc 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드.
상기 기재된 hIGF-1-Ea 전구체 폴리펩티드 변이체 외에, 하기 추가의 단백질 변이체가 생성될 수 있으며, 본 발명에 따라 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에서 사용될 수 있다:
(1) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 8).
(2) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 9).
(3) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 10).
(4) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 11).
(5) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 12).
(6) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqaapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 13).
(7) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 14).
(8) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 15).
(9) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 16).
(10) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavraqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 17).
(11) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 18).
(12) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 19).
(13) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌 (A)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 20).
(14) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌 (A)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 21).
(15) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌 (A)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 22).
(16) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 23).
(17) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 24).
(18) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 25).
(19) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 26).
(20) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 27).
(21) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqaapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 28).
(22) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 29).
(23) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqaapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaksavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 30).
(24) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 31).
(25) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 32).
(26) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 33).
(27) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 34).
(28) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpaqvraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 35).
(29) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqaapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavraqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 36).
(30) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 37).
(31) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 38).
(32) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqrapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 39).
(33) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 40).
(34) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 41).
(35) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 글루탐산 (E)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssreapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 42).
(36) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌 (A)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 43).
(37) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌 (A)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 44).
(38) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌 (A)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssraapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 45).
(39) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 46).
(40) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 47).
(41) E3이 결실되고, 아미노산 R37이 프롤린 (P)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssrpapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 48).
(42) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqrhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 49).
(43) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 50).
(44) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74 및 R77이 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqaapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyrm (서열 51).
(45) E3이 결실되고, 아미노산 R36 및 R37이 둘 다 글루타민 (Q)으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqqapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 52).
(46) E3이 결실되고, 아미노산 R36이 글루타민 (Q)으로 치환되고, R37이 알라닌으로 치환되고, 아미노산 K68, S69, A70, R71 및 S72가 결실되고, 아미노산 R74, R77 및 R104가 글루타민 (Q)으로 돌연변이된다.
gptlcgaelvdalqfvcgdrgfyfnkptgygsssqaapqtgivdeccfrscdlrrlemycaplkpavqaqqhtdmpktqkevhlknasrgsagnknyqm (서열 53).
또다른 실시양태에서, 본 개시내용은 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에서의 상기 기재된 단백질 (예를 들어 서열 6 및 8 내지 53에 나타낸 바와 같음)의 용도에 관한 것이며, 여기서, 상기 분자는 위치 3에서 돌연변이되는 대신, 아미노산 1 내지 3의 결실을 포함한다.
더욱이, 또다른 실시양태에서, 본 개시내용은 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에서의 상기 기재된 단백질 (예를 들어 서열 6 및 8 내지 53에 나타낸 바와 같음)의 용도에 관한 것이며, 여기서, 아미노산 G42는 결실되거나, 아미노산 세린으로 치환된다.
글리코실화의 사용: 본 발명의 폴리펩티드의 생체내 반감기는 N-연결된 글리코실화가 가능한 포유동물 또는 다른 진핵 세포에서 발현되는 경우 IGF 또는 전구체의 E-펩티드 부분 중 하나 내로 N-연결된 글리코실화 부위를 첨가함으로써 개선될 수 있다. 시험관내에서 인간 IGF-1 Ea는 N92 및 N100에서, Ea의 이들 부분이 N-X-S/T의 컨센서스 N-연결된 글리코실화 서열에 피팅될 때, 글리코실화되는 것으로 나타났으며, 여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있고, 트리플렛의 세번째 아미노산은 S 또는 T 중 하나이다. 또한, 컨센서스의 인접한 아미노산 컨텍스트는 아스파라긴이 얼마나 강하게 글리코실화되는 지에 영향을 줄 것으로 공지되어 있다. 따라서, 글리코실화 부위를 Eb 또는 Ec 내로 도입하는 하나의 전략은 컨센서스 서열 주위의 Ea 아미노산을 Eb 또는 Ec의 대략 동일한 부분 내로 삽입하는 것이다. 이 전략의 특정 실행은 WO 2007/146689에 개시된 실시예에 예시되어 있다. 어떤 경우에도, 통상의 기술자에게 공지된 주변의 컨텍스트 아미노산을 비롯한 임의의 다른 컨센서스 N-연결된 글리코실화 부위는 본 발명의 전구체 폴리펩티드 내로 삽입될 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드의 O-연결된 글리코실화는 폴리펩티드의 생성에 사용되는 특정 숙주를 선택함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, IGF-1 발현을 위한 특정 효모 균주의 사용은 세린 또는 트레오닌 상의 올리고당류의 첨가를 초래한다. 예를 들어, 미국 특허 제5,273,966호를 참조한다.
폴리(에틸렌 글리콜)의 첨가:
IGF-1과 관련된 약동학적 및 약역학적 쟁점을 다루기 위해, 천연 단백질의 변형된 형태가 개발되었다. 이 인간 IGF-1 (hIGF-1) 모방체의 서열은 단백질분해성 분해를 감소시키고, 억제성 IGFBP5에의 결합을 감소시킴으로써, 및 N 말단에서의 선형 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 쇄를 첨가함으로써, 그의 효능을 증가시키도록 변형되었다 (WO 2007/146689).
신경근육 장애의 치료를 위한 IGF-1 변이체의 PEG화된 형태의 제조는 또한 WO2008025528, WO2009121759 A2 및 WO2006066891에 기재되었다. 통상적으로, PEG는 단백질의 아미노 기에 부착된다. 그러나, 이 아미노 PEG화 접근의 주요한 한계는 단백질이 전형적으로 리신 잔기의 상당한 양을 함유하며, 따라서 폴리(에틸렌 글리콜) 기가 비-특이적 방식으로 단백질에 부착된다는 것이다. 생물학적 활성에 요구되는 아미노 잔기 (예를 들어 단백질의 활성 부위의 또는 근처의 잔기)의 PEG화는 단백질의 낮은 비 활성 또는 불활성화를 초래할 수 있다. 상기 기재된 단점의 일부를 회피하기 위해, WO2006066891에는 IGF-1 변이체가 야생형 IGF-1 아미노산 서열의 위치 27, 37, 65 및/또는 68에서 돌연변이된 것을 특징으로 하는, 상기 IGF-1 변이체 및 1개 또는 2개의 폴리(에틸렌 글리콜) 기(들)로 이루어진 컨쥬게이트의 사용이 기재되어 있다. 그러나, 랜덤 PEG화를 최소화하기 위해 단백질 내로 도입된 각각의 돌연변이는 동시에 면역원성의 위험을 증가시킨다. WO 2008025528에는 재조합 인간 IGF-1 융합 단백질의 제조가 개시되어 있으며, 여기서, 융합 단백질은 위치 리신 27, 65 및/또는 68에서 아미노산 치환을 포함한다. WO2008025528에 기재된 방법은 N-말단 PEG화를 갖지 않는 재조합 인간 IGF-I 뮤테인의 제조를 가능하게 한다. WO2006066891 및 WO2008025528에서 사용된 PEG화 시약은 랜덤하게 PEG화된 단백질을 초래하는 메톡시폴리에틸렌글리콜의 N-히드록시숙신이미딜 에스테르 (PEG-NHS)였다. N-말단 PEG화 및 위치 이성질체의 생성을 회피하기 위해, 1개를 제외한 모든 리신은 극성 아미노산으로 대체되었고, 프로펩티드는 N-말단에 부착되었다. 제1 단계에서, IGF-1 뮤테인은 PEG화되고, 그 후 프로펩티드는 단일 리신 잔기에서만 PEG화된 IGF-1 뮤테인을 남기면서 IgA 프로테아제로 IGF-1로부터 절단되었다. 메톡시폴리-에틸렌글리콜 프로피온알데히드 (PEG-CHO) 시약을 사용한 환원성 알킬화는 일반적으로 부위 특이적 PEG화 방법으로 인식된다 (Roberts et al, Chemistry for peptide and protein PEGylation. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54 459-476). N-말단 PEG화는 암젠 (Amgene) 관련된 특허 패밀리 (US 7090835 B2, US 6956027 B2, EP 0 822199B1)에 기재되었다. 환원성 알킬화의 반응은 산성 조건 하에서, 5.0의 pH에서 수행되었다 (EP 0822199 B1).
E-펩티드의 다합체 : 특정 약물학적 내용에서, 약물이 혈액-뇌 장벽의 하나의 측면 또는 다른 것 상에 잔류하는 것을 보장하기 위해 펩티드 또는 단백질 약물의 크기를 증가시키는 것이 유익하다. 성숙한 IGF 분자는 상대적으로 짧은 펩티드이기 때문에, E-펩티드가 부착되어 잔류하는 경우에도, 본 발명의 폴리펩티드의 크기를 증가시키는 것이 유익할 수 있다. 이렇게 하는 하나의 수단은 WO 2007/146689에 기재된 특정 실시예에 예시된 바와 같이, IGF 전구체 폴리펩티드의 C-말단에서 E-펩티드의 다합체를 제공하는 것이다.
제약 조성물
한 측면에서, 본 발명은 제약학상 허용되는 담체와 함께 제제화된 상기 기재된 IGF-1 전구체 폴리펩티드의 1종 또는 조합을 함유하는 조성물, 예를 들어 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 제약 조성물은 또한 조합 요법으로, 즉 다른 작용제와 조합으로 투여될 수 있다. 조합 요법에 사용될 수 있는 치료제의 예는 하기에 보다 상세하게 기재된다.
용어 "제약학상 허용되는"은 동물에서, 보다 특히 인간에서 사용하기 위해 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인된 또는 미국 약전 또는 다른 일반적으로 승인되는 약전에 열거된 것을 의미한다. 용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 아주반트, 부형제 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 제약 담체는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예컨대 땅콩유, 대두유, 광물유, 참깨유 등을 포함하는, 멸균 액체, 예컨대 물 또는 오일일 수 있다. 적합한 제약 부형제로는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 들 수 있다. 바람직할 경우 조성물은 또한 소량의 습윤화제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀전, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 서방형 제제 등의 형태를 취할 수 있다. 조성물은 전통적인 결합제 및 담체, 예컨대 트리글리세리드와 함께 좌제로서 제제화될 수 있다. 경구 제제는 표준 담체, 예컨대 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 적합한 제약 담체의 예는 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin]에 기재되어 있다.
바람직한 실시양태에서, 조성물은 인간에게 정맥내 투여를 위해 적응된 제약 조성물로서 통상적인 절차에 따라 제제화된다. 필요할 경우, 조성물은 또한 주입 부위에서의 통증을 완화하기 위해 가용화제 및 국부 마취제, 예컨대 리도카인을 포함할 수 있다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우, 이는 멸균 제약 등급 수 또는 염수를 함유하는 주입 병에 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수의 앰풀이 제공될 수 있다.
제약학상 허용되는 담체는 생리학상 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척수 또는 표피 투여 (예를 들어 주사 또는 주입에 의한)에 적합해야 한다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉 항체, 면역접합체 또는 이중특이적 분자는 화합물을 산의 작용 및 화합물을 불활성화시킬 수 있는 다른 자연 상태로부터 보호하기 위해 물질로 코팅될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 또한 제약학상 허용되는 항산화제를 포함할 수 있다. 제약학상 허용되는 항산화제의 예로는 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 나트륨 비술페이트, 나트륨 메타비술파이트, 아황산나트륨 등; 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 들 수 있다.
본 발명의 제약 조성물에 채용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예로는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물유, 예컨대 올리브유, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 들 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤화제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물의 존재의 방지는 상기 멸균 절차에 의해, 및 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등의 포함에 의해 보장될 수 있다. 또한, 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물 내로 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 제약 형태의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 포함에 의해 야기될 수 있다.
제약학상 허용되는 담체는 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 임시 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 제약 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 활성 화합물과 비혼화성인 한에 있어서를 제외하고는 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가, 본 발명의 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 보충적 활성 화합물은 또한 조성물 내로 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에서 멸균성이고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀전, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정돈된 구조로서 제제화될 수 있다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨이 조성물 내에 포함될 수 있다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 야기될 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은 활성 화합물을 요구되는 양으로 적절한 용매에 상기 열거된 제제의 1종 또는 조합과 함께 혼입시킨 후, 필요할 경우, 멸균 미세여과함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터의 요구되는 다른 작용제를 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은 활성제 플러스 그의 미리 멸균-여과된 용액으로부터의 임의의 추가의 바람직한 제제의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결-건조 (동결건조)이다.
단일 투여 형태를 생성하는 담체 물질과 조합될 수 있는 활성제의 양은 치료되는 대상체, 및 특정 투여 방식에 따라 다양할 것이다. 단일 투여 형태를 생성하는 담체 물질과 조합될 수 있는 활성제의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 100％ 중에서, 이 양은 활성제 약 0.01％ 내지 약 99％, 약 0.1％ 내지 약 70％, 또는 제약학상 허용되는 담체와 조합으로 활성제 약 1％ 내지 약 30％의 범위일 것이다.
투여량 처방은 최적의 바람직한 반응 (예를 들어 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 몇몇 분할된 용량이 시간의 경과에 따라 투여될 수 있거나, 용량은 치료 상황의 긴급성에 의해 지시된 바와 같이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 투여 단위 형태는 치료되는 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합화된 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 요구되는 제약 담체와 공동으로 바람직한 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 설명은 활성 화합물의 고유한 특징 및 달성되는 특정 치료 효과, 및 개체에서의 민감성의 치료를 위한 이러한 활성 화합물을 배합하는 관련 기술분야의 고유한 한계에 의해 서술되며, 이에 직접적으로 의존한다.
본 개시내용의 IGF-1 전구체 폴리펩티드의 투여 또는 상기 IGF-1 전구체 폴리펩티드를 포함하는 조성물의 내용에서 폴리펩티드의 치료 유효량은 숙주 체중의 약 0.001 내지 10 mg/kg, 또는 0.01 내지 3 mg/kg, 및 보다 통상적으로 0.01 내지 0.3 mg/kg의 범위이다. 예를 들어, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.02 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.03 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.04 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.05 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.06 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.1 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.3 mg/kg 체중일 수 있고, 약 0.5 mg/kg 체중 또는 약 1 mg/kg 체중일 수 있다. 통상의 기술자는 투여 경로 (예를 들어 정맥내로 또는 피하로)에 따라 다양할 것인 적합한 유효 용량을 확인하는 것을 알고 있다. 예시적인 치료 처방은 1일 당 1회, 1주마다 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회 또는 1개월에 1회 투여를 포함한다. 이러한 투여는 정맥내로 또는 피하로 수행될 수 있다. 본 발명의 IGF-1 전구체 폴리펩티드에 대한 투여량 처방은 정맥내 투여에 의한 0.01 mg/kg 체중 또는 0.02 mg/kg 체중 또는 0.03 mg/kg 체중 또는 0.05 mg/kg 체중 또는 0.1 mg/kg 체중 또는 0.3 mg/kg 체중 또는 1 mg/kg 체중을 포함한다. 본 발명의 IGF-1 전구체 폴리펩티드에 대한 투여량 처방은 피하 투여에 의한 0.01 mg/kg 체중 또는 0.02 mg/kg 체중 또는 0.03 mg/kg 체중 또는 0.05 mg/kg 체중 또는 0.1 mg/kg 체중 또는 0.3 mg/kg 체중 또는 1 mg/kg 체중을 포함한다. 예를 들어, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.01 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.02 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.03 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.04 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.05 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.06 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 정맥내로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.1 mg/kg이다.
본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.01 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.02 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.03 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.04 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.05 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.06 mg/kg이다. 본 개시내용의 또다른 실시양태에서, 피하로 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 투여량은 0.1 mg/kg이다.
대안적으로, 조성물은 서방형 제제일 수 있으며, 이 경우 보다 덜 빈번한 투여가 요구된다. 투여량 및 빈도는 환자에서의 항체의 반감기에 따라 다양하다. 투여량 및 투여의 빈도는 치료가 예방적인지 치료적인지에 따라 다양할 수 있다. 예방적 적용에서, 상대적으로 낮은 투여량이 상대적으로 드문 간격으로 긴 시간에 걸쳐 투여된다. 일부 환자는 그의 삶의 나머지 동안 치료를 계속 받는다. 치료적 적용에서, 질환의 진행이 감소되거나 종결될 때까지 또는 환자가 질환의 증상의 부분적인 또는 완전한 개선을 나타낼 때까지 상대적으로 짧은 간격으로 상대적으로 높은 투여량이 때때로 요구된다. 그 후, 환자는 예방적 처방이 투여될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물에서 활성제의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성이 없이, 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대한 바람직한 치료 반응을 달성하는 데 유효한 활성제의 양을 얻도록 다양화될 수 있다. 선택되는 투여량 수준은 채용되는 본 발명의 특정 조성물, 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 채용되는 특정 화합물의 배설 속도, 치료의 기간, 채용되는 특정 조성물과 조합으로 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적 건강 및 이전의 의학적 병력을 포함하는 다양한 약동학적 인자, 및 의학 기술분야에 널리 공지된 유사 인자에 의존할 것이다.
본 발명의 조성물에 포함되는 IGF-1 변이체의 치료 유효 용량의 투여는 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지, 즉 근육 질량 및 강도의 증가를 초래할 수 있다.
환자는 폴리펩티드 활성 성분의 유효량, 즉 당해 질환 또는 장애의 검출, 치료, 개선 또는 예방에 충분한 양을 받을 것이다. 치료 효과는 또한 신체 증상의 감소를 포함할 수 있다. 임의의 특정 대상체에 대한 치료 단백질의 최적의 유효량 및 농도는 환자의 연령, 크기, 건강 및/또는 성별, 상태의 성질 및 정도, 특정 치료 단백질의 활성, 신체에 의한 그의 클리어런스 속도, 및 또한 치료 단백질과 조합으로 투여되는 임의의 가능한 추가의 치료제(들)를 포함하는 다양한 인자에 의존할 것이다. 주어진 상황에 대해 전달되는 유효량은 통상적인 실험에 의해 결정될 수 있으며, 임상의의 판단 내에 있다. 투여량은 단일 용량 스케줄 또는 다중 용량 스케줄에 의할 수 있다.
본 발명의 조성물은 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법 중 하나 이상을 사용하여 하나 이상의 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 통상의 기술자에 의해 이해될 것인 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 다양할 것이다. 본 발명의 치료 단백질에 대한 투여 경로는 정맥내, 근육내, 피부내, 복강내, 피하, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 것을 들 수 있다. 본원에 사용된 어구 "비경구 투여"는 통상적으로 주사에 의한 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피부내, 복강내, 경기관내, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 줄기내 주사 및 주입을 들 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 포함 조성물은 정맥내로 투여된다. 또다른 실시양태에서, 항체는 피하로 투여된다.
대안적으로, 본 발명의 IGF-1 변이체 포함 조성물은 비경구 경로, 예컨대 국소, 표피 또는 점막 투여 경로에 의해, 예를 들어 비강내로, 경구로, 질내로, 직장내로, 설하로 또는 국소로 투여될 수 있다.
활성 화합물은 화합물을 급속 방출에 대해 보호할 것인 담체, 예컨대 이식물, 경피 패치 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제제로 제조될 수 있다. 생체분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제제의 제조 방법의 다수는 특허되어 있거나, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 [Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조한다.
치료 조성물은 관련 기술분야에 공지된 의료 기기로 투여될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 본 발명의 치료 조성물은 무바늘 피하 주사 장치, 예컨대 미국 특허 제5,399,163호; 제5,383,851호; 제5,312,335호; 제5,064,413호; 제4,941,880호; 제4,790,824호 또는 제4,596,556호에 나타난 장치로 투여될 수 있다. 본 발명에 유용한 널리 공지된 이식물 및 모듈의 예로는 의약을 제어된 속도로 분배하기 위한 이식가능한 미세-주입 펌프를 나타내는 미국 특허 제4,487,603호; 의약을 피부를 통해 투여하기 위한 치료 장치를 나타내는 미국 특허 제4,486,194호; 의약을 정확한 주입 속도로 전달하기 위한 의약 주입 펌프를 나타내는 미국 특허 제4,447,233호; 연속적 약물 전달을 위한 다양한 유동 이식가능한 주입 장치를 나타내는 미국 특허 제4,447,224호; 다중-챔버 구획을 갖는 삼투적 약물 전달 시스템을 나타내는 미국 특허 제4,439,196호; 및 삼투적 약물 전달 시스템을 나타내는 미국 특허 제4,475,196호를 들 수 있다. 많은 다른 이러한 이식물, 전달 시스템 및 모듈은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있으며, 마이크로CHIPSTM (미국 메사추세츠주 베드포드)에 의해 제조된 것을 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 인간 IGF-1 변이체 포함 조성물은 생체내에서 적절한 분포를 보장하도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 혈액-뇌 장벽 (BBB)은 많은 매우 친수성 화합물을 배제한다. 본 발명의 치료 화합물이 BBB를 가로지르는 것을 보장하기 위해 (바람직할 경우); 이는 예를 들어 리포솜으로 제제화될 수 있다. 리포솜의 제조 방법에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 제4,522,811호; 제5,374,548호; 및 제5,399,331호를 참조한다. 리포솜은 특정 세포 또는 기관 내로 선택적으로 수송되는 하나 이상의 모이어티를 포함하며, 따라서 표적화된 약물 전달을 향상시킬 수 있다 (예를 들어 문헌 [V.V. Ranade, 1989 J. Clin Pharmacol. 29:685] 참조). 예시적인 표적화 모이어티로는 엽산 또는 비오틴 (예를 들어 미국 특허 제5,416,016호 참조); 만노시드 (Umezawa et al., 1988 Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038); 항체 (P.G. Bloeman et al., 1995 FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al., 1995 Antimicrob. Agents Chernother. 39:180); 계면활성제 단백질 A 수용체 (Briscoe et al., 1995 Am. J. Physiol.1233:134); p120 (Schreier et al., 1994 J. Biol. Chem. 269:9090)을 들 수 있으며; 또한 문헌 [K. Keinanen; M.L. Laukkanen, 1994 FEBSLett. 346:123]; [J.J. Killion; I.J. Fidler, 1994 Imrnunomethods 4:273]을 참조한다.
다양한 전달 시스템, 예를 들어 리포솜, 미세입자, 마이크로캡슐, 단백질을 발현할 수 있는 재조합 세포 내의 캡슐화, 수용체-매개된 세포내이입 (예를 들어, 문헌 [Wu and Wu, J Biol Chem 262:4429-4432, 1987] 참조), 레트로바이러스, 아데노-관련된 바이러스, 아데노바이러스, 폭스바이러스 (예를 들어, 조류폭스바이러스, 특히 가금폭스바이러스) 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 구축 등은 공지되어 있으며, 본 발명의 폴리펩티드를 투여하는 데 사용될 수 있다. 도입 방법은 장관 또는 비경구일 수 있으며, 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 폐, 비내, 안구내, 경막외 및 경구 경로를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리펩티드는 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 라이닝 (예를 들어, 구강 점막, 직장 및 창자 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신적 또는 국소적일 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물을 중추 신경계 내로 뇌실내 및 척수강내 주사를 포함하는 임의의 적합한 경로에 의해 도입하는 것이 바람직할 수 있으며; 뇌실내 주사는 예를 들어 저장기, 예컨대 옴마야 (Ommaya) 저장기에 부착된 뇌실내 카테터에 의해 용이화될 수 있다. 폐 투여는 또한 예를 들어 흡입기 또는 네뷸라이저의 사용, 및 에어로졸화제로의 제제화에 의해 채용될 수 있다.
구체적인 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물을 치료가 필요한 영역에 국소적으로 투여하는 것이 바람직할 수 있으며; 이는 예를 들어 제한의 방식에 의하지 않고 수술 동안 국소 주입, 국소 적용에 의해, 예를 들어 주사에 의해, 카테터에 의해, 또는 이식물에 의해 달성될 수 있으며, 이식물은 막, 예컨대 실라스틱 막, 섬유, 또는 시판 피부 대용물을 포함하는 다공성, 비-다공성 또는 젤라틴성 물질이다.
또다른 실시양태에서, 활성제는 베지클, 특히 리포솜으로 전달될 수 있다 (문헌 [Langer, Science 249:1527-1533, 1990] 참조). 또다른 실시양태에서, 활성제는 제어 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 한 실시양태에서, 펌프가 사용될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 중합체 물질이 사용될 수 있다 (문헌 [Howard et al., J Neurosurg 71:105, 1989] 참조). 본 발명의 활성제가 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산인 또다른 실시양태에서, 핵산은 그의 코딩된 단백질의 발현을 촉진시키기 위해, 이를 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 구축하고, 예를 들어 레트로바이러스 벡터의 사용에 의해 (예를 들어, 미국 특허 제4,980,286호 참조), 또는 직접 주사에 의해, 또는 미세입자 포격의 사용에 의해 (예를 들어, 유전자 총; 바이오리스틱 (Biolistic), 듀폰 (Dupont)), 또는 지질 또는 세포-표면 수용체 또는 형질감염제로의 코팅, 또는 핵에 유입되는 것으로 공지된 호메오박스-유사 펩티드에 연결하여 이를 투여함으로써 (예를 들어, 문헌 [Joliot et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868, 1991] 참조) 등에 의해, 이것이 세포내가 되도록 이를 투여함으로써 생체내로 투여될 수 있다. 대안적으로, 핵산은 세포내로 도입되고, 상동 재조합에 의해 발현을 위한 숙주 세포 DNA 내로 혼입될 수 있다.
세포 형질감염 및 유전자 요법: 본 발명은 시험관내에서 및 생체내에서 세포의 형질감염을 위한 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 용도를 포함한다. 이들 핵산은 표적 세포 및 유기체의 형질감염을 위한 임의의 다수의 널리-공지된 벡터 내로 삽입될 수 있다. 핵산은 생체외에서 및 생체내에서 세포 내로 벡터 및 표적 세포의 상호작용을 통해 형질감염된다. 조성물은 치료 반응을 유발하는 데 충분한 양으로 대상체에게 (예를 들어, 근육 내로의 주사에 의해) 투여된다.
또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산으로 세포를 형질감염시키는 것을 포함하며, 핵산이 표적화 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 작동적으로 연결된 유도성 프로모터를 포함하는 것인, 인간 또는 다른 동물에서의 표적 부위, 즉 표적 세포 또는 조직의 치료 방법을 제공한다. 인간 질환의 치료 또는 예방에서의 유전자 요법 절차에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Van Brunt Biotechnology 6:1149-1154, 1998]을 참조한다.
환자 군
SBMA로 진단되고, 유전 시험에 의해 확인된 진단을 갖는 환자는 본 발명으로 치료에 적격일 것이다.
조합 요법
이 치료는 근육 소모 과정의 1차적 원인을 목표로 하는 어떠한 치료와도 조합될 수 있다. 이러한 조합은 코르티코스테로이드, 면역 억제제, 항-시토카인제, 항암 약물; 성장 인자, 예컨대 에리트로포이에틴, G-CSF, GM-CSF, 또는 기타; 당뇨병의 치료에 사용되는 약물 (인슐린 및 경구 혈당강하제 포함), 항-결핵 약물 및 항생제를 포함할 수 있다. 조합은 소분자 및 생체분자 제제 둘 다를 포함할 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 단독 활성제로서 또는 예를 들어 다른 약물, 예를 들어 ActRIIB 항체, ActRIIA 항체, 가용성 ActRIIB 유인 모방체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRIIB에 결합하지만 이를 활성화시키지 않는 미오스타틴 유인 단백질, 베타 2 효능제, 그렐린 (Ghrelin) 효능제, SARM, GH 효능제/모방체 또는 폴리스타틴에 대한 아주반트로서 또는 이와 조합으로 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약물은 WO2010125003에 개시된 바와 같은 ActRIIB 항체와 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 더 설명되지만, 이에 제한되지는 않는다.
도면의 간단한 설명:
도 1: 연구 개관 - 파트 A.
도 2: 연구 개관 - 파트 B.
서열
Figure pct00001
Figure pct00002
본 개시내용의 하나 이상의 실시양태의 상세사항은 상기 첨부하는 설명에서 설명된다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 등가의 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 이하에 기재된다. 본 개시내용의 다른 특징, 목적 및 이점은 상세한 설명으로부터 및 청구범위로부터 명백할 것이다. 달리 정의되지 않는다면, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 하기 실시예는 본 개시내용의 바람직한 실시양태를 보다 충분히 예시하기 위해 제시된다. 이들 실시예는 어떤 식으로도 첨부된 청구범위에 의해 한정되는 바와 같은 개시된 요지의 범위를 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다.
실시예
A. 일반적 설명
활성 화합물: 하기 연구에 대한 기본 가설은 돌연변이 AR 독성의 IGF-1/Akt-매개된 억제가 생체내에서 SBMA를 치료하는 효과적인 전략일 수 있다는 것이다. hIGF1-Ea-mut 3은 돌연변이 AR 독성을 특이적으로 감소시켜 SBMA를 갖는 환자에서의 근육 변성을 직접적으로 약화시키고 기능을 개선시킬 것임을 가설로 세운다.
hIGF1-Ea-mut 3은, 단백질분해성 분해를 감소시키고, 억제성 IGFBP5에의 결합을 감소시킴으로써, 및 선형 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 쇄를 첨가함으로써, 그의 효능이 증가되도록 그의 서열이 변형된 인간 IGF-1 (hIGF-1) 모방체이다.
1. 연구 목적/목표 및 조사 계획
본 연구의 목적은 IGF-1의 수준이 감소된 SBMA를 갖는 환자에서의 IGF-1 모방체 hIGF1-Ea-mut 3의 안전성, 내약성 및 예비 효능을 평가하는 것이다. 연구는 2-부분, 이중-맹검, 위약-대조 연구로서 설계된다.
본 연구의 파트 A의 목적은 SBMA를 갖는 환자에서의 hIGF1-Ea-mut 3의 선택된 용량의 안전성 및 내약성을 확인하고, 표적 조직에 대한 그의 약역학적 효과를 예비적으로 조사하는 것이다.
파트 A에서 SBMA를 갖는 환자에서의 hIGF1-Ea-mut 3의 안전성 및 내약성의 성공적인 입증 후, 매주 투여되는 hIGF1-Ea-mut 3의 단일 용량 (파트 A에서 측정됨)의 치료 효능이 파트 B에서 조사될 것이다.
조사 계획
이는 대략 38명의 SBMA를 갖는 환자에서의 이중-맹검 랜덤화된 위약-대조 비-확증적 연구이다.
연구는 2개의 부분, 파트 A 및 파트 B로 수행된다. 파트 A는 파트 B가 시작될 수 있기 전에 완료되어야 한다. 연구의 파트 A에서 투여된 환자는 적어도 60일의 "세척" 기간 후 파트 B에 참여할 수 있다. 환자는 파트 B에 동의하는 것이 요구될 것이며, 스크리닝 및 기준선 방문 평가는 그들을 연구의 제2 부분에 대해 적격화하기 위해 반복될 것이다.
3가지 계획된 중간 분석이 있다. 중간 분석 동안, 안전성, 약동학적 및 약역학적 데이터가 검토될 것이다. 이 검토는 유해 사례, 안전성 검사, 약동학적 데이터, IGF-1 유사 활성, IGF-1 항체 및 IGFBP를 포함할 것이다. 중간 분석은 내부 노파르티스 (Novartis) 팀에 의해 수행될 것이다. 또한, 각각의 중간 분석 동안, 독립적인 데이터 모니터링 위원회 (DMC)는 모든 안전성 관련된 데이터의 개별 검토를 수행할 것이다. 중간 분석은 시험의 과정 전반에 걸쳐 스케줄화된다.
1. 첫번째 2명의 오픈 라벨 환자가 시험을 완료한 후, 파트 A의 랜덤화된 부분으로의 진행은 제1 중간 분석 후 진행될 것이다.
2. 파트 A의 완료 시, 안전성 및 약역학적 데이터 검토 외에, PK 분석으로 파트 B에서 이용되는 요법의 용량 및 간격을 확인할 것이다. 내약성이 우수한 것으로 판단되고 파트 A에서 확인된 PD 효과를 갖는 최대 용량이 파트 B에서 이용될 것이다.
3. 중간 분석은 12명의 환자가 연구의 파트 B를 완료한 후 수행될 것이다.
2. 연구 설계
2.1 파트 A
연구의 이 파트는 스크리닝 기간, 기준선 기간, 5가지 용량으로의 치료 기간, 추적관찰 방문 및 연구 완료 평가로 이루어질 것이다. 파트 A에 대한 연구 설계의 개관은 도 1에 제시된다.
파트 A 전반에 걸친 안전성 평가는 신체 검사, ECG, 활력 징후, 표준 임상 실험실 평가 (혈액학, 혈액 화학, 소변검사, 응고 패널), 포도당 모니터링, 유해 사례 및 심각한 유해 사례 모니터링, 안면 사진, 안저 검사, 시력 및 면역원성을 포함한다. 약역학적 평가는 IGF-1, 총 IGF-1 유사 활성, 세포 바이오마커, IGF 결합 단백질, 가용성 단백질 마커 및 근육 생검을 포함한다.
2.1.1 스크리닝
환자는 조사자가 연구에 대한 적합성을 평가하는 스크리닝 방문을 위해 조사자 센터에 참석할 것이 요구된다. 스크리닝에서 적격성 기준을 충족하는 환자는 기준선 평가를 위해 참석할 것이 요청될 것이다.
2.1.2 기준선
성공적인 스크리닝 방문의 완료 후, 환자는 기준선 평가를 위해 클리닉으로 복귀할 것이 요청될 것이다. 요구된 기준선 평가를 통과한 환자는 치료 기간으로 진행하는 데 적격이 될 것이다.
시험에 포함되기 위해 요구되는 모든 기준선 결과는 환자가 랜덤화되고 치료 기간으로 진행하기 전에 이용가능하며, 조사자에 의해 검토되어야 한다.
2.1.3 치료
기준선 평가의 성공적인 완료 후, 첫번째 2명의 환자는 오픈-라벨 활성 약물 (hIGF1-Ea-mut 3)을 받을 것이다. 용량 수준은 하기 표에 나타낸 바와 같이 증가될 것이다. 이들 2명의 환자가 치료 및 추적관찰을 완료한 후, 제1 중간 분석이 있을 것이다. 중간 분석으로부터의 만족할 만한 검토 후, 파트 A에서 나머지 6명의 환자는 hIGF1-Ea-mut 3 또는 위약 중 하나의 5가지 용량을 2:1의 비율로 받도록 랜덤화될 것이다. 이 기간 전반에 걸친 약동학적 평가는 SBMA 환자에서의 hIGF1-Ea-mut 3의 생체이용률의 평가를 가능하게 할 것이다.
파트 A에 대한 투약 스케줄은 하기 표에 나타나 있다:
<표 a> 파트 A에서의 투약
Figure pct00003
투약 방문 시, 환자는 각각의 투약 대략 2시간 전에 연구 장소에 입장할 것이며, 투약후 24시간에 평가를 완료할 때까지 정주한 채 잔류할 것이다. 투약 전 및 후에, 안전성, 약동학적 및 약역학적 평가가 수행될 것이다. 환자는 48시간 동안 연구 장소로 복귀하고, 매주 투약후 평가될 것이다.
2.1.4 연구의 종료 ( EOS )
환자는 약동학을 위한 그들의 hIGF1-Ea-mut 3 또는 위약의 마지막 투여 후 외래환자 방문, 및 연구 종료 평가를 위해 클리닉으로 복귀할 것이다.
2.2. 파트 B
중간 분석은 파트 A의 종료 시에 수행될 것이다. 파트 B에서의 투약은 파트 A에서의 PK, PD 및 안전성 평가에 의해 결정될 것이다. 30명의 환자는 피하로 투여된 파트 A에서 내약성이 우수한 것으로 결정된 hIGF1-Ea-mut 3 (0.1 mg/kg 이하) 또는 위약의 용량 [2:1 비율]을 받도록 랜덤하게 할당될 것이다. 첫번째 12명의 랜덤화된 환자가 파트 B를 완료한 후, PK, PD 및 안전성 데이터를 검토하기 위해 중간 분석이 수행될 것이다. 연구의 이 파트는 스크리닝 기간, 단일 기준선 기간, 12회의 치료 방문 및 연구 완료 평가로 이루어질 것이다.
파트 B에 대한 연구 설계의 개관은 도 2에 제시된다.
파트 B 전반에 걸친 안전성 평가는 신체 검사, ECG, 활력 징후, 표준 임상 실험실 평가 (혈액학, 혈액 화학, 소변검사, 응고 패널), 포도당 모니터링, 유해 사례 및 심각한 유해 사례 모니터링, 안면 사진, 안저 검사, 시력 및 면역원성을 포함한다. 약역학적 평가는 IGF-1, 총 IGF-1 유사 활성, 세포 바이오마커, IGF 결합 단백질 및 가용성 단백질 마커를 포함한다. 효능 측정은 MRI에 의한 TMV, AMAT, DXA에 의한 LBM 및 근육 강도 및 기능의 측정을 포함한다.
2.2.1 스크리닝
환자는 조사자가 연구에 대한 적합성을 평가하는 스크리닝 방문을 위해 조사자 센터에 참석할 것이 요구된다. 스크리닝에서 적격성 기준을 충족하는 환자는 기준선 평가를 위해 참석할 것이 요청될 것이다.
2.2.2 기준선
성공적인 스크리닝 방문의 완료 후, 환자는 기준선 평가를 위해 클리닉으로 복귀할 것이 요청될 것이다. 요구된 기준선 평가를 통과한 환자는 치료 기간으로 진행하는 데 적격이 될 것이다. 주목된 바와 같이, 파트 A를 완료한 환자는 파트 B에 적격일 것이지만, 파트 B를 위해 모든 관련된 방문 평가를 완료할 것이 요구될 것이다.
시험에 포함되기 위해 요구되는 모든 기준선 결과는 치료 기간으로 진행하기 전에 이용가능하며, 조사자에 의해 검토되어야 한다.
2.2.3 치료
기준선 평가의 성공적인 완료 후, 환자는 hIGF1-Ea-mut 3 또는 위약 중 하나의 12가지 용량을 2:1의 비율로 받도록 랜덤화될 것이다.
파트 B에 대한 투약 스케줄은 하기 표에 제시된다.
<표 b> 파트 B에서의 투약
Figure pct00004
* 투약 빈도는 파트 A로부터의 중간 분석의 약동학, 약역학 및 안전성 결과에 따라 조정될 수 있다.
투약 방문 시, 환자는 각각의 투약 대략 2시간 전에 연구 장소에 입장할 것이며, 4시간 평가의 완료 후 해제될 것이다. 모든 방문은 외래환자 방문이다.
2.2.4 연구의 종료 ( EOS )
환자는 연구 완료 평가를 받을 것이며, 연구 약물의 최종 용량 1주 후 연구로부터 해제될 것이다.
3. 연구 설계에 대한 근거
파트 A에서, hIGF1-Ea-mut 3 또는 위약의 5가지 용량 (0.01 정맥내, 0.01 피하, 0.03 피하, 0.06 피하 및 0.1 피하 mg/kg)은 2주마다 투여될 것이며, 환자는 마지막 용량 후 3주 동안 추적관찰될 것이다. 추가의 안전 조치로서, 첫번째 2명의 환자는 오픈-라벨 hIGF1-Ea-mut 3을 받을 것이며, 연구 완료까지 추적관찰될 것이다. 안전성 평가는 신체적/신경학적 검사, ECG, 활력 징후, 표준 임상 실험실 평가 (혈액학, 혈액 화학, 소변검사, 응고 패널), 포도당 모니터링, 유해 사례 및 심각한 유해 사례 모니터링, IGF-1, 총 IGF-1 유사 활성, 안면 사진, 안저 검사, 시력 및 면역원성을 포함한다. SBMA 환자에서 약동학을 기재하고 hIGF1-Ea-mut 3의 생체이용률을 평가하기 위해 제1 용량은 정맥내로 투여되고, 후속 용량은 피하로 투여될 것이다. 상승 피하 용량은 정맥내 경로에 비해 감소된 최고점 대 최저점 비를 허용하고, 따라서 보다 높은 Cmax와 관련된 잠재적 위험을 최소화할 것이다. 넓적다리 근육 부피 (TMV) 및 근육 생검 (파트 A에서만)은 기준선에서 및 PD 측정을 위해 치료후에 수행될 것이다. 전자 (TMV)의 경우, 표적 조직에 대한 효과의 관찰은 파트 B의 잠재적 성공을 위한 추가의 지지를 제공할 것이다. 생검에서 얻어진 근육 조직에서의 PD 측정은 시험된 용량에서 hIGF1-Ea-mut 3이 근육에서 측정가능한 효과를 갖는지 여부에 관한 추가의 데이터를 제공할 것이다.
평행-아암 설계는 비치료된 환자와의 직접 비교로 만성 질환에서 요법의 지속기간을 최대화하는 것이 바람직하기 때문에 선택되었다. 2:1 활성제:위약 비율은 통계학적 유의성을 유지하면서 적격 환자의 모집을 향상시키기 위해 선택되었다. 시험의 지속기간 (12주)은 요법의 13주 동안 전임상 독성학의 생체이용률에 기초하며, 주목된 바와 같이, 지속된 치료는 치료 반응의 검출 가능성을 최적화하는 데 필요할 것이다.
파트 B는 SBMA를 갖는 환자에서 12주 동안 매주 투여된 파트 A에서의 내약성이 우수한 것으로 결정된 용량 처방 (0.1 mg/kg 이하)에서 hIGF1-Ea-mut 3의 예비 효능을 측정하도록 설계된다. 안전성 외에, 1차 효능 측정 (TMV)은 근육 질량/부피에 대한 hIGF1-Ea-mut 3의 작용의 메커니즘에 주어진 치료 효과의 관찰 가능성에 기초하여 선택되었다. 근육 강도 및 기능의 2차 탐색적 측정은 근육 부피의 변화가 SBMA 환자에서 기능적으로 관련되는 지를 결정할 것이다.
4. 용량/처방에 대한 근거, 치료의 지속기간
0.01 정맥내, 0.01 피하, 0.03 정맥내, 0.03 피하, 0.06 피하 및 0.1 피하 mg/kg의 용량 처방은 파트 B에서 적절한 용량 처방을 선택하기 위해 소수의 환자에서 신속하게 PK 및 PD 정보가 얻어지도록 선택되었다.
파트 A에서, 총 IGF-1-유사 활성은 상한선 노출 값이 초과되지 않는 것을 보장하기 위해 첫번째 2명의 오픈-라벨 환자 후에 검토될 것이다. 유사하게, 파트 A의 완료 후, 이들 데이터는 파트 B로 이동하기 전에 검토되고 수용가능한 지가 평가될 것이다. 파트 B에서, 총 IGF-1-유사 활성은 적어도 12명의 환자가 연구를 완료한 후 중간 분석에서 검토될 것이다. 이들 추가의 예방책은 감소된 IGF-1 수준/활성의 포함 요건을 고려하여 SBMA 환자에서 적당한 안전성을 제공해야 하며, 따라서 과잉-생리학적 IGF-1 수준과 관련된 부정적인 결과가 회피된다. 등록된 환자는 IGF-1의 낮은 기준선 혈청 수준 - 170 ng/mL 미만을 가져야 하며, 이는 40 내지 60세의 건강한 대조군 남성의 평균 아래로 1 초과의 표준 편차 (SD)이다 (Colao A, Di Somma C, Cascella T, et al (2008) Relationships between serum IGF-1 levels, blood pressure and glucose tolerance; an observational exploratory study in 404 subjects. Eur J Endocrinol; 159:389-97).
파트 A에 대한 용량 및 투약 간격은 hIGF1-Ea-mut 3의 관찰된 반감기에 기초하여 선택되었다. 투약 간격은 파트 A의 결과에 기초하여 변형될 수 있으며, 이는 SBMA를 갖는 환자를 정맥내 및 피하 둘 다로 투여하는 첫번째 기회를 제공할 것이다.
5. 비교자의 선택에 대한 근거
SBMA에 대한 공지된 요법이 없기 때문에, 그리고 근육 강도 및 기능의 평가는 잠재적으로 편향을 초래하는 환자 및 관찰자 참여 및 동기에 의해 영향을 받는 신체 수행력 (예컨대 시한의 업-앤드-고 (up-and-go), 시한의 걷기, 정량적 근육 시험)을 측정하는 시험의 사용을 요구하기 때문에, 위약 대조군이 제안된다. 비교자로서 위약의 사용을 대체하는 SBMA에 대한 효과적인 이용가능한 치료법은 현재 없다.
6. 중간 분석/설계 적응의 목적 및 시기
중간 분석 동안, 안전성, 약동학적 및 약역학적 데이터가 검토될 것이다. 이 검토는 유해 사례, 안전성 시험, 약동학적 데이터, IGF-1 유사 활성, IGF-1 항체 및 IGFBP를 포함할 것이다. 연구 중지 기준은 분석을 위한 가이드로서 사용될 것이다. 중간 분석은 비맹검 검토 위원회 (해석 의학 전문가, 통계학자, 임상 시험 리더, 바이오마커 전문가 및 PK 전문가로 이루어진 임상 시험 팀의 하위 팀)에 의해 수행될 것이다.
또한, 각각의 중간 분석 동안, 독립적인 데이터 모니터링 위원회 (DMC)는 모든 안전성 관련된 데이터의 개별 검토를 수행할 것이다.
추가의 중간 분석은 일반적으로 또는 임의의 안전성 문제의 경우 현행 임상 연구, 임상 개발 프로젝트에 관하여 행하는 결정을 지지하기 위해 수행될 수 있다.
6.1 중간 분석 1: 오픈 라벨 단계 ( 파트 A의 초기 2명의 환자)
안전성 측정으로서, 첫번째 2명의 환자가 투약 및 3주 추적관찰 기간을 완료한 후, 중간 분석이 수행될 것이다. 파트 A의 랜덤화된 부분으로의 진행은 일단 안전성/내약성이 확인되고, PK 프로파일이 만족스러우면 진행될 것이다.
6.2 중간 분석 2: 파트 A에서 파트 B로의 전이
파트 A의 완료시, 안전성, 약동학적 및 약역학적 데이터는 파트 B에서 이용되는 요법의 용량 및 간격을 확인하기 위해 검토될 것이다. 파트 A에서 내약성이 우수한 것으로 판단된 최대 용량은 파트 B에서 이용될 것이다.
6.3 중간 분석 3: 파트 B
적절한 용량 및 간격이 파트 B에 대해 선택되었는지를 보장하기 위해, 중간 분석은 적어도 12명의 환자가 파트 B를 완료한 후 수행될 것이다.
효능 데이터의 예비 검토는 또한 이 중간 분석 동안 수행될 수 있으며, 검토는 해석 의학 전문가, 통계학자, 임상 시험 리더 및 PK 전문가에 의해 비맹검 방식으로 수행되고, 예비 효능 평가로서 평가될 것이다. 중간 분석의 목적은 현행 임상 연구 뿐만 아니라 일반적으로 임상 개발 프로젝트에 관하여 행해진 초기 결정을 지지하기 위한 것이다.
7. 집단
연구 집단은 남성 SBMA 환자로 구성될 것이다. 총 대략 38명의 환자가 연구에 참여하기 위해 등록되고, 랜덤화될 것이다.
대상체 선택은 하기 특정화된 바와 같이 스크리닝 및 기준선 방문에서 모든 포함/배제 기준을 통해 점검함으로써 확립되어야 한다. 임의의 참가 기준에서 벗어나면 대상체를 연구 등록에서 배제한다.
8. 포함 기준:
이 연구에 포함되기에 적격인 대상체는 하기 기준들 모두를 충족해야 한다:
1. 서면 사전 동의서는 임의의 평가가 수행되기 이전에 받아야 한다.
2. SBMA의 확인된 유전적 진단 및 증상적 근육 약화를 갖는 18세 이상의 남성.
3. 스크리닝에서 혈청 IGF-1 ≤ 170 ng/mL.
4. 스크리닝 및 기준선에서 보조 장치의 도움이 있거나 없이 2분 시한의 걷기를 완료할 수 있음.
5. 조사자와 의사소통을 잘 하고, 연구의 요건을 이해하고 준수할 수 있음.
9. 배제 기준
하기 기준들 중 어느 하나를 충족하는 환자는 본 연구에 포함되기에 적격이 아니다.
1. 등록 시에, 또는 등록의 5 반감기 내에, 또는 예상된 PD 효과가 기준선으로 복귀할 때까지에, 다른 조사 약물의 사용 (그 중 더 긴 기간, 또는 현지 규제의 요구에 따라 더 긴 기간).
2. 연구 약물에 대한 또는 유사한 화학적 부류의 약물에 대한 과민증의 병력.
3. 의학적으로 치료된 당뇨병, 또는 저혈당증의 기지의 병력.
4. 벨 마비, 상승된 두개내압, 유두부종, 가성뇌종양 또는 망막병증의 병력.
5. 스크리닝 또는 기준선에서 연수 등급화 스케일 (Bulbar Rating Scale) 상의 항목 A 또는 B 상의 1 또는 2의 스코어에 의해 문서화된 바와 같은 심각한 안면 약화.
6. 전신 코르티코스테로이드 (> 10 mg/일 프레드니손 또는 등가물), 안드로겐 또는 안드로겐-감소제, 또는 전신 베타 효능제 또는 베타 차단제, 또는 관련 허브 또는 기능식품 제품을 비롯한 이전 3개월 내의 근육 대사에 영향을 주는 것으로 공지된 약물의 사용.
7. 절제된 비-흑색종 피부 암 이외의 암의 병력.
8. 임상적으로 유의한 심-혈관 질환 [비제어된 고혈압, 허혈성 심장 질환 (예를 들어, 심근 경색, 협심증, 비정상적 관상동맥 조영술 또는 심장 스트레스 시험/영상화), 심실위 또는 심실 부정맥, 심부전 또는 LV 기능장애를 포함함], 또는 임상적으로 유의한 뇌-혈관 질환 (졸중 또는 일과성 허혈 발작)의 기지의 병력.
9. 현장 조사자에 의해 임상적으로 관련된 것으로 판단되고 연구 참여에 허용가능하지 않은 위험을 나타내는 스크리닝 또는 기준선 방문에서의 비정상적 ECG.
10. 연구 참여의 경우 환자를 위태롭게 할 수 있는 임의의 수술 또는 의학적 상태. 조사자는 환자의 의학적 병력 및/또는 하기 중 어느 하나의 임상적 또는 실험실 증거를 고려하여 이 결정을 내려야 한다:
· 염증성 장 질환, 궤양, 위장관 또는 직장 출혈;
· 비정상적 간 기능 시험, 예컨대 SGOT (AST), SGPT (ALT), γ-GT, 알칼리성 포스파타제 (ALP), 또는 정상 혈청 크레아틴 키나제 (CK)의 존재 하에서 혈청 빌리루빈에 의해 지시된 바와 같은 간 질환 또는 간 손상.
조사자는 하기 기준에 의해 가이드되어야 한다:
· 임의의 단일 파라미터는 정상의 3 x 상한치 (ULN)을 초과하지 않아야 한다. 3 x ULN까지 상승된 및 이를 포함하는 단일 파라미터는 가능한 한 빨리, 그리고 모든 경우, 적어도 등록/랜덤화 전에 실험실 오차를 배제하기 위해 한번 더 재-점검되어야 한다. 비정상적 간 기능 시험의 경우, 정상의 5 X 상한치 이하의 ALT 및 AST는 혈청 CK > 1000 IU/L의 존재 하에서는 허용가능하다.
· 혈청 CK가 1000 IU/L을 초과하는 경우, 5 x ULN 이하의 ALT 및 AST 상승은 다른 간 시험이 정상적인 한 허용가능하다.
· 총 빌리루빈 농도가 1.5 x ULN 초과로 상승될 경우, 총 빌리루빈은 직접 및 간접 반응 빌리루빈으로 분화되어야 한다. 어떠한 경우에나, 혈청 빌리루빈은 1.6 mg/dL (27 μmol/L)의 값을 초과하지 않아야 한다.
11. 스크리닝에서의 양성 HIV (ELISA 및 웨스턴 블롯) 시험 결과를 비롯한 면역결핍 질환의 병력.
12. 스크리닝에서의 양성 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 또는 C형 간염 시험 결과.
13. 기지의 폐소공포증, MRI 평가를 방해하는 박동조율기 및/또는 강자성 물질이 신체 내에 있는 환자.
14. 기지의 출혈 장애를 갖거나, 항-응고제로 치료 중인 환자.
15. 투약 전 12개월 내에 약물 또는 알콜 남용의 병력, 또는 스크리닝 동안 수행된 실험실 검정에 의해 나타난 바와 같은 이러한 남용의 증거.
연구 집단이 모든 적격 대상체를 대표하도록 보장하기 위해, 조사자는 추가의 배제를 적용할 수 없다.
10. 치료
10.1 프로토콜 요청된 치료
기준선에서 평가된 대상체의 체중이 약물 용량의 계산에 사용될 것이다.
hIGF1-Ea-mut 3 10 mg은 바이알 내의 동결건조물로서 제공될 것이다. 이는 주사용수로 재구성되고, 피하 또는 정맥내 중 하나를 통해 투여되어야 한다. 위약은 또한 정맥내 주입으로 제공될 것이며, 최소 1시간에 걸쳐 일어날 것이다. 주입 후에 1시간 염수 세정이 이어질 것이다.
10.2 치료 아암
10.2.1 파트 A
첫번째 2명의 환자는 하기 표에서 시퀀스 1에 나타낸 바와 같이 오픈-라벨 hIGF1-Ea-mut 3을 받을 것이다. 다음 6명의 환자는 2:1의 비율로 2가지 치료 순서 중 하나로 랜덤화될 것이다.
<표 a> 치료 시퀀스
Figure pct00005
연구 치료는 하기와 같이 정의된다:
· A: 0.01 mg/kg hIGF1-Ea-mut 3 정맥내의 단일 용량
· B: 0.01 mg/kg hIGF1-Ea-mut 3 피하의 단일 용량
· C: 0.03 mg/kg hIGF1-Ea-mut 3 피하의 단일 용량
· D: 0.06 mg/kg hIGF1-Ea-mut 3 피하의 단일 용량
· E: 0.10 mg/kg hIGF1-Ea-mut 3 피하의 단일 용량
· F: hIGF1-Ea-mut 3 정맥내에 대한 위약의 단일 용량
· G: hIGF1-Ea-mut 3 피하에 대한 위약의 단일 용량
10.2.2 파트 B
환자는 2:1의 비율로 랜덤화되고, 0.10 mg/kg hIGF1-Ea-mut 3 피하 또는 hIGF1-Ea-mut 3 피하에 대한 위약 중 하나의 매주 용량을 받도록 할당될 것이다. 용량 및 간격은 파트 A 중간 분석 동안 검토된 데이터에 기초하여 조정될 수 있다.
11. 활력 평가
11.1 효능 및 약역학적 평가
11.1.1 MRI에 의한 넓적다리 근육 부피 ( TMV )
넓적다리 근육 부피는 본 연구의 1차적 결과이며, MRI에 의해 평가될 것이다. 근육 주위 및 침투 지방 조직이 근육 소모에서 골격근의 대사 및 기능 이상에 관련될 수 있기 때문에, 사용된 MRI 펄스 시퀀스는 또한 넓적다리 근육 영역에서의 지질 정량화 (즉, 피하 지방-SC 및 근육간 지방 조직-IMAT)를 가능하게 할 것이다.
데이터 수집 및 가공
대상체는 모든 부위에서 유사한 스캐너 (1.5T) 및 Q-바디 코일을 사용하여 영상화될 것이다. 스캐닝 동안 최소의 환자 움직임 (예를 들어 다리 아래로 접힌 패드/시트를 놓음으로써) 및 모든 후속 스캔에 사용된 동일한 위치를 보장하기 위해 주의가 기울여질 것이다.
급속한 측량 스캔 후, 넓적다리 영상은 전체 넓적다리 (무릎에서 엉덩이까지)를 덮도록 2D 멀티슬라이스 펄스 시퀀스를 사용하여 획득될 것이다. 총 시퀀스 시간은 환자 불편을 최소화하기에 충분히 빠를 것이다. 양성자-밀도 급속-스핀 에코 (FSE) MRI 펄스 시퀀스는 이것이 영상 품질의 손실 없이 상대적으로 짧은 시간에 상부 다리 전반에 걸쳐 영상 획득을 허용하며, 근육과 주위의 지방 조직 사이에 우수한 콘트라스트를 생성하기 때문에 바람직한 접근법으로 간주되었다.
11.1.2 연수 등급화 스케일
연수 등급화 스케일 (BRS)은 비정상에서 정상까지 1 내지 4 스케일로 각각 등급화된 8개의 도메인을 포함한다 (Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7). 도메인은 하기 근육 군/기능으로 이루어진다: 눈둘레, 입둘레, 턱 개구, 턱 폐쇄, 혀 돌출, 혀 편위, 연구개 상승 및 후 인두부 벽 수축. 각각의 도메인은 조사자에 의한 침대측 검사/관찰에 의한 강도/기능의 관점에서 평가된다.
데이터 수집 및 가공
각각의 도메인은 조사자에 의해 1 내지 4 스케일로 등급화될 것이며; 각각의 도메인에서의 각각의 점수를 더해 BRS 점수 (8 내지 32)를 얻을 것이다. BRS는 지시서와 함께 별도의 매뉴얼로 제공될 것이다. BRS 점수의 결과는 CRF에서 캡처될 것이다.
기술 통계학, 예컨대 평균, 표준 편차 (SD) 및 표준 오차 (SE)를 계산하여 BRS 결과를 특성화할 것이다.
효능 파라미터
hIGF1-Ea-mut 3-치료된 환자에서 기준선으로부터의 변화가 위약과 비교하여 평가될 것이다.
11.1.3 성인 근병증 평가 도구 ( AMAT )
성인 근병증 평가 도구 (AMAT) (Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7)는 신체적 기능 및 근지구력을 등급화하며, 보다 높은 점수는 보다 우수한 수행력을 나타내고; 이는 7개의 시한의 기능 과제 및 6개의 지구력 과제를 포함한다 (0=가장 나쁨, 45=가장 양호함). 이는 특히 SBMA에 걸린 근육 (축근 및 사지근위근) 및 기능 (어깨/엉덩이 요대, 축 약화)을 평가한다. 근위근 및 축근 군에 대한 시한의 또는 반복된 측정이 채용된다. AMAT는 SBMA를 갖는 환자의 관리에 숙련된 의사 또는 평가자에 의해 수행되어야 한다.
데이터 수집 및 가공
AMAT는 13개의 기능/지구력 과제로 이루어진다: 지속된 머리 상승, 반듯이 눕고 엎드림, 변형된 푸쉬-업, 반복된 변형된 푸쉬-업, 윗몸 일으키기, 반듯이 눕고 앉음, 팔 올리기, 지속된 팔 올리기, 앉고 서기, 지속된 엉덩이 구부리기, 지속된 무릎 연장, 반복된 뒤꿈치 올리기 및 올라서기. 각각의 과제는 조사자에 의해 점수화된다 (스케일 0 [보다 나쁨/가장 약함] 내지 3 또는 4 [가장 강함]). 평가 도구는 지시서와 함께 별도의 매뉴얼로 제공될 것이다. AMAT의 결과는 CRF에서 캡처될 것이다.
11.1.4 이중-에너지 X-선 흡수측정법 ( DXA ) 스캔에 의한 총 제지방 체질량 (LBM)
DXA는 연구 동안 대부분 골격근 질량을 반영하는 총 제지방 체질량 (LBM)의 변화에 대해 모니터링하는 데 사용될 것이다. DXA 기기는 지방 및 지방-무함유 질량이 추정되는 골 무기질 질량 및 연성 조직을 측정하기 위해 2가지 에너지를 생성하거나 이로 분할되는 x-선 원을 사용한다. 검사는 빠르고 (1 내지 2분), 정확하고 (0.5 내지 1％), 비-침습성이다. DXA 스캐너는 5％ 정도의 작은 근육 질량의 변화를 검출하는 데 요구되는 정밀도를 갖는다.
DXA 스캔으로부터의 방사선 노출은 최소이다. 미국 방사선 방호 측정 위원회 (NCRP)는 일반의 저빈도 노출에 대한 연간 유효 선량 한계가 5,000 μSv이며, 10 μSv의 연간 유효 선량이 무시할 수 있는 개별 용량으로 간주된다고 권고하였다. 성인에 대한 이중-에너지 x-선 흡수측정법 전신 스캔의 유효 선량은 2.1 μSv이다.
연구는 신체 조성을 측정하기 위한 DXA 스캔의 사용에서 품질 보증이 중요한 쟁점임을 나타내었다. DXA 기기 제조자 및 모델은 일정하게 유지되어야 하며, 그의 교정은 연구 전반에 걸쳐 모니터링되어야 한다. 표준화된 스캔 획득 프로토콜 및 적절하고 변화하지 않는 스캔 획득 및 분석 소프트웨어의 사용은 일정한 결과를 달성하는 데 필수적이다. 유사하게, 스캔 해석에서의 가변성 때문에, 숙련된 스태프에 의한 중앙집중된 스캔 분석을 이용하는 것이 중요하다.
11.1.5 정량적 근육 시험 ( QMT )
정량적 근육 시험 (QMT; 또한 최대 자발 등척성 수축 검사 (MVICT)로 지칭됨)은 QMA 시스템 (컴퓨터 소스 (Computer Source), 미국 조지아주 아틀란타) 또는 바이오덱스 (Biodex) 시스템 (바이오덱스 메디칼 시스템즈 (Biodex Medical Systems))을 사용하여 수행될 것이다. 이들 시스템은 환자의 팔 또는 다리를 0.5 내지 1,000 뉴턴의 하중으로 힘 변환기에 연결된 무탄성 스트랩에 부착하는 조절가능한 커프를 사용한다.
11.1.6 시한의 업-앤-고 (TUG) 시험
시험은 앉은 위치로부터 일어나고, 3 미터 걷고, 180° 돌고, 의자로 걸어오고, 다시 돌고, 앉는 사람의 능력을 평가한다. 보행 보조기는 필요할 경우 시험을 수행하기 위해 사용될 수 있다. 줄자, 스톱워치 및 표준 높이 의자가 요구된다. (Rutkove SB, Parker RA, Nardin RA, et al (2002) A pilot randomized trial of oxandrolone in inclusion body myositis. Neurology; 58:1081-7.)
11.1.7 2분 또는 6분 시한의 걷기
시험의 파트 A에 적격화하기 위해, 환자는 스크리닝 및 기준선에서 2분 시한의 걷기를 수행할 것이 요구될 것이다. 6분 걷기 시험은 시험 포함을 위해 2분으로 변형된다.
파트 B에 대한 시험에 적격화하기 위해, 환자는 스크리닝 및 기준선에서 2분 시한의 걷기를 수행할 것이 요구될 것이지만, 이것이 가능한 경우는 전체 6분 걷기 시험을 수행하도록 요청될 것이다.
6분 걷기 시험은 환자가 6분에 걸을 수 있는 거리를 평가한다 (Rutkove SB, Parker RA, Nardin RA, et al (2002) A pilot randomized trial of oxandrolone in inclusion body myositis. Neurology; 58:1081-7). 이는 걸음걸이의 기능적 능력을 평가하는 폭넓게 이용되는 임상 시험이다. 6분 동안 이동한 거리, 즉 6-분 걷기 거리는 신경근육, 폐 및 심혈관 계를 비롯한 걷기에 관련된 모든 계의 전반적 통합 반응을 평가하는 파라미터이다. 이 시험의 타당성은 척수 연수 근육 위축증을 비롯한 다양한 신경근육 장애에서 입증되었다.
환자가 파트 B에서의 시험에 적격화한 후, 이들이 6분 동안 걸을 수 없는 경우에는, 2분 걷기 시험 (2MWT)이 대신 수행될 것이다.
약어의 목록
AE 유해 사례
AESI 특별한 관심의 유해 사례
ALT 알라닌 아미노트랜스퍼라제
ALP 알칼리성 포스파타제
AMAT 성인 근병증 평가 도구
ANCOVA 공분산 분석
aPTT 활성화 부분적 트롬보플라스틴 시간
AR 안드로겐 수용체
AST 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제
BMI 체질량 지수
BRS 연수 등급화 스케일
CFR 미국 연방 규정집
CK 크레아티닌 키나제
CN 두개 신경
CRF 사례 보고 형태
CRO 계약 연구 기관
CV 변동 계수
DMC 데이터 모니터 위원회
DXA 이중-에너지 X-선 흡수측정법
EC 윤리 위원회
ECG 심전도
ELISA 효소-연결 면역흡착 검정
EOS 연구의 종료
FDA 미국 식품 의약품국
GCP 우수한 임상 시험
γ-GT 감마-글루타밀 트랜스퍼라제
HAQ 건강 평가 설문지
HAQ-DI 건강 평가 설문지 장애 지수
hIGF-1 인간 IGF-1
hIGF1-Ea-mut 3 상기 단백질의 N-말단에 공유 부착된 약 30 kDa의 전체 분자량을 갖는 선형 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함하는 서열 6에 나타낸 바와 같은 인간 IGF-1 전구체 폴리펩티드.
HIV 인간 면역결핍 바이러스
ICH 인간 사용을 위한 의약의 등록을 위한 기술적 요건의 조화에 관한 국제 회의
IEC 독립 윤리 위원회
IGF-1 인슐린-유사 성장 인자-1
IGFBP IGF 결합 단백질
IGFBP3 IGF 결합 단백질 3
IGFBP5 IGF 결합 단백질 5
i.v. 정맥내
IR 인슐린 저항성
IRB 기관 감사 위원회
LBM 제지방 체질량
LLOQ 정량 하한치
MRI 자기 공명 영상화
MTD 최대 허용 용량
PD 약역학
PEG 폴리에틸렌 글리콜
PG 약리유전학
PK 약동학
QMT 정량적 근육 시험
REB 연구 윤리 위원회
SAE 심각한 유해 사례
SBMA 척수 연수 근육 위축증
s.c. 피하
SGOT 혈청 글루탐산 옥살로아세트산 트랜스아미나제
SGPT 혈청 글루탐산 피루브산 트랜스아미나제
SD 표준 편차
TBL 총 빌리루빈
TMV 넓적다리 근육 부피
TUG 시한의 업 앤 고
ULN 정상 상한치
ULOQ 정량 상한치
SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR MIMETICS FOR USE IN THERAPY <130> PAT055915 <140> US 61/885811 <141> 2013-10-02 <160> 53 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 70 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 2 <211> 35 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 3 <211> 77 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys 20 25 30 Gly Trp Pro Lys Thr 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35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys 50 55 60 Pro Ala Val Gln Ala Gln Gln His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Gln Met <210> 43 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated human IGF-1 precursor protein <400> 43 Gly Pro Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val 1 5 10 15 Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser 20 25 30 Ser Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys 50 55 60 Pro Ala Val Gln Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Arg Met <210> 44 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated human IGF-1 precursor protein <400> 44 Gly Pro Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val 1 5 10 15 Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser 20 25 30 Ser Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys 50 55 60 Pro Ala Val Gln Ala Gln Gln His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Arg Met <210> 45 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated human IGF-1 precursor protein <400> 45 Gly Pro Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val 1 5 10 15 Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser 20 25 30 Ser Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys 50 55 60 Pro Ala Val Gln Ala Gln Gln His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Gln Met <210> 46 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys 50 55 60 Pro Ala Val Gln Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Arg Met <210> 50 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated human IGF-1 precursor protein <400> 50 Gly Pro Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val 1 5 10 15 Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser 20 25 30 Ser Ser Gln Gln Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys 50 55 60 Pro Ala Val Gln Ala Gln Gln His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Arg Met <210> 51 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated human IGF-1 precursor protein <400> 51 Gly Pro Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val 1 5 10 15 Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe 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Claims (24)

  1. E-펩티드를 포함하는 IGF-1 전구체 단백질을 포함하는 폴리펩티드인, 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 IGF-1 모방체.
  2. 제1항에 있어서, SBMA를 앓고 있는 환자에서의 SBMA와 관련된 증상의 예방, 개선 또는 반전을 위한 IGF-1 모방체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, SBMA를 앓고 있는 환자에서의 운동 뉴런의 변성의 감소 또는 예방을 위한 IGF-1 모방체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SBMA를 앓고 있는 환자에서의 골격근 약화 및/또는 위축의 예방 또는 반전을 위한 IGF-1 모방체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 골격근에서의 돌연변이 안드로겐 수용체 (AR) 응집을 감소시켜 돌연변이 AR 독성을 감소시키기 위한 IGF-1 모방체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질이 인간 IGF-1 전구체 단백질인 IGF-1 모방체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질이, 프로테아제에 의한 IGF-1로부터의 E-펩티드의 절단이 감소되도록 변형된 것인 IGF-1 모방체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질이 Ea, Eb 또는 Ec 펩티드를 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질이 Ea 펩티드를 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질의 아미노산 잔기 E3, R71 또는 S72 중 하나 이상이 결실되고, 여기서 아미노산의 넘버링은 서열 5에 상응하는 것인 IGF-1 Ea 펩티드 전구체 모방체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질의 위치 37에서의 아르기닌이 알라닌 (R37A)으로 돌연변이된 것인 IGF-1 모방체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질이 하기 변형: ΔE3; R37A; ΔR71, ΔS72를 포함하고, 여기서 아미노산의 넘버링은 서열 5에 상응하는 것인 IGF-1 Ea 펩티드 전구체 모방체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질이 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 전구체 단백질의 측쇄에 공유 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 모이어티를 더 포함하는 IGF-1 모방체.
  15. 제14항에 있어서, PEG화된 전구체 단백질이 서열 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 IGF-1 모방체.
  16. 척수 연수 근육 위축증 (SBMA)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 요법에 사용하기 위한 제6항 내지 제15항 중 어느 한 항에 기재된 IGF-1 모방체를 포함하는 제약 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 사용하기 위한 조성물.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 제약학상 허용되는 담체를 더 포함하는 조성물.
  19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 제6항 내지 제15항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체를 예방 또는 치료 유효량으로 포함하는 조성물.
  20. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, IGF-1 모방체가 0.001 내지 1 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것인 조성물.
  21. 제20항에 있어서, IGF-1 모방체가 약 0.01, 약 0.03, 약 0.06, 약 0.1, 약 0.3, 약 0.5, 약 1 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것인 조성물.
  22. 제16항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, IGF-1 모방체가 단일 정맥내 또는 피하 주입으로서 투여되는 것인 조성물.
  23. 척수 연수 근육 위축증을 앓고 있는 환자에게 제6항 내지 제15항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 상기 질환을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료 방법.
  24. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 척수 연수 근육 위축증 (SBMA 또는 케네디병)을 앓고 있는 환자에서의 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조를 위한 제6항 내지 제15항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 IGF-1 모방체의 용도.
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