KR20170137366A - 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 (a) 육종용을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계; (b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계; 및 (e) 상기 (d) 단계에서의 추출물을 여과한 후 농축하는 단계를 포함하는 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법 및 상기 방법에 따라 제조된 육종용 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 추출방법은, 종래 공지된 육종용 추출방법과 비교하여 페닐에타노이드 배당체의 함량이 현저하게 향상된 육종용 추출물을 제공한다. 따라서, 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물은 탈모 또는 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물 개발에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 추출방법은, 종래 공지된 육종용 추출방법과 비교하여 페닐에타노이드 배당체의 함량이 현저하게 향상된 육종용 추출물을 제공한다. 따라서, 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물은 탈모 또는 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물 개발에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 (a) 육종용을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계; (b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계; 및 (e) 상기 (d) 단계에서의 추출물을 여과한 후 농축하는 단계를 포함하는 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법 및 상기 방법에 따라 제조된 육종용 추출물의 용도에 관한 것이다.
육종용은 전통적으로 중국 등에서 폭넓게 사용되어 왔으며, 육종용은 염증세포로부터 NO 유리에 필요한 주요 cytokine인 TNF-α와 IL-4 생성을 낮추는 것으로 보고되었으며, 동물실험에서도 강력한 항염증 효과를 보여 주었다. 육종용 또한 혈중 콜레스테롤을 강하시킴으로써 혈행개선 효과를 발휘하는 것으로 알려져 탈모예방 및 성장에 긍정적인 효능을 나타낼 것으로 기대되는 천연물이다.
육종용은 신장, 콩팥을 보호해 주고 피를 맑게 하는 데 도움이 되며 윤장통변 등의 효능을 가지고 있으며, 페닐에타노이드 배당체 중에서 에키나코사이드가 주요 효과 성분으로 알려져 있다. <중국약전>에 육종용은 열당과 식물 육종용 Cistanche deserticola Y.C. Ma와 같은 과 식물 관화육종용 Cistanche tubulosa (Schenk) Wight와 염생육종용 Cistanche salsa G. Beck가 약용으로 사용된다. 육종용과 염생 육종용은 주로 내몽고, 신장지역에 분포해 있다. 관화육종용은(Cistanche tubulosa)주로 신장천산 남쪽 타클라마칸 사막 지역에서 생산된다. 육종용의 전통적인 가공방법은 화서를 제거하고 자른 후 그늘이나 바람에 말린다. 육종용 육질 줄기 부피는 비교적 크며, 수분 함량도 비교적 높아(75~88%) 건조 과정은 보통 2~4개월이 걸리며, 비교적 쉽게 곰팡이가 생긴다. 육종용 식물에는 페닐에타노이드류 가수분해효소가 함유되어 있으며, 건조과정 중 페닐에타노이드 배당체 성분들이 가수분해되어 함량은 크게 내려가고 육종용 치료효과를 낮추는 것으로 알려져 있다.
그 동안 육종용의 유효성분 중 페닐에타노이드 배당체의 수율증가를 위한 방법으로 발효 또는 증숙방법을 많이 사용하였으나, 증숙하는 과정에서 발생하는 균열, 내공, 내백 등의 균질화 및 불량요인을 비롯한 에너지 소비가 높아 효율성이 떨어지는 단점이 있었다.
이에 본 발명자들은 종래의 스팀을 이용한 증숙 방법에 원적외선과 증기를 병용하는 증숙방법과 최적의 온도에서 일정한 시간 동안 침지시키는 단계를 포함하는 공정을 통해, 증숙과정에서 발생하는 문제점을 해결하고, 유효성분 함량 및 수율이 향상된 육종용 추출물을 획득할 수 있다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 (a) 육종용을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계; (b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계; 및 (e) 상기 (d) 단계에서의 추출물을 여과한 후 농축하는 단계를 포함하는 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 (a) 육종용을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계; (b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계; 및 (e) 상기 (d) 단계에서의 추출물을 여과한 후 농축하는 단계를 포함하는 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
이하 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명은 (a) 육종용을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계; (b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계; 및 (e) 상기 (d) 단계에서의 추출물을 여과한 후 농축하는 단계를 포함하는 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법을 제공한다.
페닐에타노이드 배당체는 육종용의 주요 활성성분 중 하나로서, 육종용의 품질을 평가하는 하나의 지표로 사용된다. 육종용에 포함된 페닐에타노이드 배당체로는 에키나코사이드, 악테오사이드, 이소악테오사이드, 시스타노사이드, 시스탄튜불로사이드 A, 2'-아세틸악테오사이드 또는 튜불로사이드 A 등이 알려져 있다. 본 발명의 상기 페닐에타노이드 배당체는 그 종류를 한정하지 않으며, 상기한 페닐에타노이드 배당체를 모두 포함하는 개념으로 이해될 수 있다.
본 발명의 상기 추출방법에 의할 경우, 육종용의 총 활성성분 중량 대비 페닐에타노이드 배당체의 함량을 70 중량% 이상으로 높일 수 있으며, 이러한 추출방법은 본 발명을 통해 최초로 공개하는 바이다.
이하 상기 추출방법의 각 단계를 보다 상세히 설명한다.
(a) 육종용을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계;
본 발명에서 상기 육종용은 학명이 cistanche tubulosa인 천연물로 국내에서는 관화육종용으로 알려져 있다. 본 발명의 추출방법에 사용되는 육종용은 그 형태를 불문하고 사용될 수 있으나, 절편한 형태를 사용하는 것이 추출 수율 측면에서 바람직할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명자들은 약리활성을 나타내는 페닐에타노이드 배당체 함량이 높은 육종용 추출물의 제조방법을 연구하던 중, 육종용을 증숙하고 추출하는 과정을 거치기 전에 열수에 침지하는 과정을 거치게 되면 페닐에타노이드 배당체 함량이 향상된다는 것을 확인하였다. 특히, 상기 침지단계에서 사용하는 열수의 온도 및 침지 시간에 따라서 페닐에타노이드 배당체의 추출율이 달라진다는 것을 발견하였다.
상기 (a) 단계의 침지과정은 육종용을 열수에 담그어 놓는 과정이다. 바람직하게는, 상기 열수의 온도는 85 내지 95℃일 수 있으며, 보다 바람직하게는 87 내지 93℃일 수 있으며, 가장 바람직하게는 90℃일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 육종용을 열수에 침지하는 시간은 0.5 내지 3분일 수 있으며, 바람직하게는 0.5 내지 2분, 보다 바람직하게는 0.5 내지 1.5분, 가장 바람직하게는 1분일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 다양한 온도의 열수 및 침지시간에 따른 에키나코사이드의 함량 변화를 관찰한 결과, 90℃의 열수에서 1분간 침지과정을 거친 추출물에서 페닐에타노이드 배당체인 에키나코사이드의 함량이 가장 높은 것을 확인할 수 있었다.
침지에 사용하는 열수의 온도가 85℃ 미만일 경우에는 페닐에타노이드 배당체가 추출될 수 있을 정도로 육종용이 전처리 되지 못하며, 95℃를 초과할 경우에는 페닐에타노이드 성분의 변성이 발생하여 목적하는 약리활성 성분을 수득하지 못하는 문제가 발생할 수 있다. 또한, 침지시간이 0.5분 미만인 경우에는 그 시간이 너무 짧아 침지효과를 달성할 수 없으며, 침지시간이 3분을 초과하는 경우에는 열수로 유효활성성분이 유출되어 소실되는 문제점이 발생할 수 있다.
(b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계;
상기 (b) 단계는 (a) 단계에서 열수에 침지한 후 건조한 육종용을 수증기를 열원으로 하여 1차 증숙하는 공정이다. 상기 1차 증숙공정에서의 바람직한 증숙 온도는 90 내지 100℃이며, 증숙시간은 3 내지 5시간이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 (b) 단계 이후에 1차 증숙된 육종용을 열수로 세척하고 예열하여 0.5 내지 2분간 뜸을 들이는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 (b) 단계에서 증숙을 마친 후 육종용을 건조할 때에 건조방법은 특별히 제한되지 않으며, 육종용 총 중량 대비 수분양이 55% 이하가 되도록 건조하는 것이 바람직하다.
(c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계;
상기 (c) 단계는 (b) 단계의 증숙을 거친 후 건조된 육종용을 다시한번 증숙하는 2차 증숙 단계로, 바람직하게는 90 내지 100℃의 수증기로 3 내지 5시간 동안 증숙과정을 진행하면서 원적외선을 조사해 주는 것을 특징으로 한다.
상기 원적외선은 1.5 내지 400㎛의 파장을 갖는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 (c) 단계의 2차 증숙과정을 거친 후의 육종용 추출물은 페닐에타노이드 배당체의 총 함량이 약 70%로써, 상기 (c) 단계를 거치지 않은 육종용 추출방법과 비교하였을 때 약 20% 이상 상승하였으며, 이 중 에키나코사이드의 함량은 10% 이상 향상된 것을 확인할 수 있었다. 즉, 1차 증숙과정만을 거친 후 육종용 추출물을 획득하는 것보다, 원적외선을 조사하면서 2차 증숙과정을 거치면 유효성분인 페닐에타노이드 배당체의 함량이 현저히 증가한다는 것을 확인하였다.
상기 (c) 단계에서 육종용을 건조할 때에 건조방법은 특별히 제한되지 않으며, 육종용 총 중량 대비 수분양이 15% 이하가 되도록 건조하는 것이 바람직하다.
(d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계;
상기 (d) 단계는 추출 용매를 이용하여 (c) 단계까지 완료된 육종용에서 활성성분을 추출하는 단계이다. 상기 추출단계에서 육종용을 추출하는 방법은 당업계에서 천연물의 활성성분을 추출하기 위해 사용되는 방법이 제한 없이 이용될 수 있으며, 추출에 사용되는 용매성분으로는 C1 내지 C5의 저급 알코올 또는 열수를 이용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올 일 수 있다.
상기 (d) 단계에서 육종용 추출물을 획득한 후 이를 여과, 농축하여 페닐에타노이드 배당체 함량이 현저히 향상된 육종용 추출물을 얻을 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 추출방법은 상기 (e) 단계 이후에 얻어진 추출물을 정제하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 정제단계에서는 담체로 실리카 또는 종이를, 전개용매로는 헥산:클로로포름:에탄올의 혼합용액을 이용하여 크로마토그래피(종이, TLC, 컬럼 등)를 실시하여 정제할 수 있다. 여기서, 담체에 함유된 물과 전개용매간의 추출물내 물질들의 분배가 일어나고, 분배율의 차이에 따라 물질이 분리된다.
상기 크로마토그래피는 담체로서 실리카를 이용한 박층 크로마토그래피(TLC) 또는 컬럼 크로마토그래피일 수 있다. 상기 TLC는 유리판 또는 플라스틱과 같은 지지체에 실리카겔을 얇게 입히고, 그 위에 추출물을 점적한 후 전개용매로 전개하여 정제하는 방식이다. 상기 컬럼 크로마토그래피는 컬럼내에 실리카를 충진하고, 그 위에 추출물을 로딩한 후 전개용매로 전개하여 정제하는 방식이다. 추출물의 대량 제조시에는 컬럼 크로마토그래피를 이용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 정제과정까지 마친 최종적인 육종용 추출물은 추출된 총 유효성분의 중량 대비 페닐에타노이드 배당체의 함량이 85% 이었고, 이 중 에키나코사이드의 함량이 40% 이상인 것으로 확인되었다.
이상과 같이, 본 발명에 따라 수득된 육종용 추출물은 페닐에타노이드 배당체의 함량이 총 유효활성성분 중량 대비 65 내지 85%로서, 종래 공지된 방법에 따라 수득된 육종용 추출물과 비교해 현저히 높아 약리 활성 또한 매우 우수할 것으로 판단해 볼 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 추출방법에 따라 추출된 육종용 추출물은 탈모 동물모델에서 우수한 발모 촉진효과를 나타내었으며, 우수한 in vivo 혈전 생성 억제효과를 나타냄을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 육종용 추출물을 단독으로 함유하거나 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 약학적 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물은 경피 투여될 수 있다. 상기에서 경피 투여'란 본 발명의 약학적 조성물을 세포 또는 피부에 투여하여 본 발명 조성물에 함유된 활성성분이 피부 내로 전달되도록 하는 것을 말하다. 예컨대, 본 발명의 약학적 조성물을 주사형 제형으로 제조하여 이를 30 게이지의 가는 주사 바늘로 피부를 가볍게 단자(prick)하는 방법, 또는 피부에 직접적으로 도포하는 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1 ㎏ 당 약 0.01ug 내지 1,000 mg, 가장 바람직하게는 0.1 ug 내지 100(200) mg일 수 있다. 그러나 상기 본 발명의 약학적 조성물의 투여 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 본 발명의 약학적 조성물을 탈모 예방 또는 치료제로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명은 또한 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 상기 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형들은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 식품 조성물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 탈모에 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
또한 기능성 식품으로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품 (예를 들어 과일 통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예를 들어 햄, 소시지콘비이프 등), 빵류 및 면류(예를 들어 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예를 들어 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예를 들어 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 식품 조성물을 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 식품 조성물의 바람직한 함유량으로는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 최종적으로 제조된 식품 총 중량 중 0.01 내지 50 중량% 이다. 본 발명의 식품 조성물을 식품첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 혈전 질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 혈전 질환은 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸증 및 뇌경색으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 추출방법은, 종래 공지된 육종용 추출방법과 비교하여 페닐에타노이드 배당체의 함량이 현저하게 향상된 육종용 추출물을 제공한다. 따라서, 본 발명의 추출방법에 따라 추출된 육종용 추출물은 탈모 또는 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물 개발에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 실시예 1에 따른 육종용 추출물의 제조방법 흐름을 간략하게 나타낸 공정도이다.
도 2는 실시예 2에 따른 육종용 추출물의 제조방법 흐름을 간략하게 나타낸 공정도이다.
도 3은 실시예 3에 따른 육종용 추출물의 제조방법 흐름을 간략하게 나타낸 공정도이다.
도 4A는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 탈모 동물모델에 투여하였을 때 나타나는 발모율 향상도를 나타낸 그래프이다.
도 4B는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 탈모 동물모델에 투여하였을 때 나타나는 발모 효과를 육안으로 관찰한 사진이다.
도 4C는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 탈모 동물모델에 투여하였을 때 털 길이의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 20~60세의 성인을 대상으로 16주 동안 하루 2번(400mg/일) 물과 함께 경구 섭취하도록 하였을 때, 모발 밀도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 6A는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물의 혈소판 응집억제효과를 나타낸 그래프이다.
도 6B는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물의 혈전 형성 억제효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 2에 따른 육종용 추출물의 제조방법 흐름을 간략하게 나타낸 공정도이다.
도 3은 실시예 3에 따른 육종용 추출물의 제조방법 흐름을 간략하게 나타낸 공정도이다.
도 4A는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 탈모 동물모델에 투여하였을 때 나타나는 발모율 향상도를 나타낸 그래프이다.
도 4B는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 탈모 동물모델에 투여하였을 때 나타나는 발모 효과를 육안으로 관찰한 사진이다.
도 4C는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 탈모 동물모델에 투여하였을 때 털 길이의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 20~60세의 성인을 대상으로 16주 동안 하루 2번(400mg/일) 물과 함께 경구 섭취하도록 하였을 때, 모발 밀도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 6A는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물의 혈소판 응집억제효과를 나타낸 그래프이다.
도 6B는 본 발명의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물의 혈전 형성 억제효과를 나타낸 그래프이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
육종용 추출물의 제조(1)
육종용 원물을 깨끗한 물로 세척하고, 두께는 0.5~1.0cm의 두께로 절편한 다음, 70~100℃의 뜨거운 물에 5~10분간 침지한 다음, 자연건조 하여 수분을 제거하였다. 수분을 제거한 후, 수증기를 열원으로 하여 3~5시간 동안 열수에 의한 세척 및 예열 2단계(증숙, 뜸)의 단계를 거쳐 육종용 총 중량 대비 수분양이 55% 이하가 되도록 자연건조 하였다. 건조된 육종용을 고체와 액체비율 대비 1:15의 비율로 하여 80% 에탄올로 추출한 다음 분석 시료로 사용하였다(도 1).
에키나코사이드 함량분석을 위해 sigma Co.에서 에키나코사이드(표준품)을 구입하여 최종용량(Stock Solution) 145.6mg/kg에서 일정량을 취해 희석하여 검량선을 작성하였다. 분석조건은 하기 표 1과 같았다.
한편, 육종용 추출물에 포함된 총 페닐에타노이드 배당체 함량을 평가하기 위해서 UV 분석법을 이용하였다. 보다 구체적으로, 에키나코사이드 10mg을 정밀하게 측정하여 50ml 갈색 메스플라스크에 담고 50%메틸알코올 용액을 넣고 눈금까지 희석하여 대조품 시료로 사용 하였다. 표준곡선은 대조품 용액 0.2ml, 0.4ml, 0.6ml, 0.8ml, 1.0ml로 정밀하게 측정해서 각각 10ml 메스플라스크에 넣고 50%메틸알코올을 눈금까지 희석하고, UV-VIS spectrophotometor, 330nm 파장에서 흡광도를 측정하고, 흡광도는 세로 좌표 농도는 가로좌표로 표준곡선을 그렸다.
30mg 육종용 추출물 분말을 정밀하게 측정하여 50ml 메스 플라스크에 50% 메틸알코올로 적당히 넣어 희석하고 실온에서 50%메탄올을 눈금까지 넣고 섞어주었다. 1.0ml 용액을 정밀하게 측정하여 25ml 메스플라스크에 50% 메틸알코올을 눈금까지 희석하고, 흡광도를 측정하고 표준곡선에서 분석시료 중 총 페닐에타노이드 배당체의 양을 하기 식에 따라 계산하였다.
총 페닐에타노이드 배당체의 양 %(mg/g)= C×1250/W
C는 농도(㎍/ml), W는 표본량(mg)
이에 대한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
상기 표에 나타낸 바와 같이, 증숙된 육종용 추출물의 에키나코사이드의 함량을 측정한 결과, 온도와 담금시간에 따라 100℃/0.5min 처리한 육종용은 에키나코사이드 1.72%의 함량을, 80℃/3min 처리한 육종용은 2.01%, 70℃/5min 처리한 육종용은 4.03%, 85℃/10min 처리한 육종용은 3.83%, 95℃/8min 처리한 육종용은 5.12%, 90℃/1min 처리한 육종용은 10.97%의 함량을 나타내어, 증숙하기 전 관화육종용의 침지온도와 시간은 90℃에서 1분 정도 침지시키는 것이 육종용의 유효성분을 증가시키는데 가장 적합한 것으로 판단되었다.
또한, 에키나코사이드 함량이 가장 높았던 90℃에서 1분간 침지한 후 추출한 육종용 추출물의 총 페닐에타노이드 배당체의 함량을 측정한 결과, 50%로 나타났다.
<실시예 2>
페닐에타노이드 배당체 함량이 증가한 육종용 추출물의 제조
육종용 원물을 깨끗한 물로 세척하고, 두께는 0.5~1.0cm의 두께로 절편한 다음, 70~100℃의 뜨거운 물에 5~10분간 침지한 다음, 자연건조 하여 수분을 제거하였다. 수분을 제거한 후, 수증기를 열원으로 하여 3~5시간 동안 열수에 의한 세척 및 예열 2단계(증숙, 뜸)의 단계를 거쳐 육종용 총 중량 대비 수분양이 55% 이하가 되도록 자연건조 하였다. 이 후 추가적으로, 상기 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙하는 과정 거치고, 건조단계를 거쳐 총 수분양이 15% 이하가 되게 하였다. 건조된 육종용을 고체와 액체비율 대비 1:15의 비율로 하여 80% 에탄올로 추출한 다음 분석 시료로 사용하였다(도 2).
상기 방법에 따라 추출된 육종용 추출물에 포함된 에키나코사이드의 함량 및 총 페닐에타노이드 배당체의 함량은 상기 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 방법에 따라 평가하였다.
이에 대한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 원적외선과 병행하여 2차 증숙과정을 추가로 거쳐 제조된 육종용 추출물의 에키나코사이드 함량을 측정한 결과, 온도와 담금시간에 따라 100℃/0.5min 처리한 육종용은 3.44%의 함량을, 80℃/3min 처리한 육종용은 4.02%, 70℃/5min 처리한 육종용은 8.06%, 85℃/10min 처리한 육종용은 7.65%, 95℃/8min 처리한 육종용은 10.23%, 90℃/1min 처리한 육종용은 20.93%의 함량을 나타내었다.
또한, 90℃에서 1분간 침지한 육종용 추출물에서의 총 페닐에타노이드 배당체의 함량은 70%로 나타나, 1차 증숙과정을 거친 육종용 추출물과 비교해 20%나 함량이 증가한 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 3>
칼럼 크로마토그래프법으로 정제한 육종용 추출물의 유효성분 분석
육종용 원물을 깨끗한 물로 세척하고, 두께는 0.5~1.0cm의 두께로 절편한 다음, 70~100℃의 뜨거운 물에 5~10분간 침지한 다음, 자연건조 하여 수분을 제거하였다. 수분을 제거한 후, 수증기를 열원으로 하여 3~5시간 동안 열수에 의한 세척 및 예열 2단계(증숙, 뜸)의 단계를 거쳐 육종용 총 중량 대비 수분양이 55% 이하가 되도록 자연건조 하였다. 이 후 추가적으로, 상기 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙 과정 거치고, 건조단계를 거쳐 총 수분양이 15% 이하가 되게 하였다. 건조된 육종용을 고체와 액체비율 대비 1:15의 비율로 하여 80% 에탄올로 추출하였다.
상기 육종용 추출물을 다공성 입자를 가진 흡착 column chromatography로 흡착시킨 후, 물로 흡착-탈착조작을 반복하고, 20%와 40%의 에탄올로 용출시킨 후, 용출액을 모아, 농축하고, 건조하여 조제물을 얻었다. 에키나코사이드의 함량 및 총 페닐에타노이드 배당체의 함량은 상기 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 방법에 따라 평가하였다(도 3).
이에 대한 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 기존함량 대비 온도, 시간에 따른 유효성분 함량변화는 온도와 담금시간에 따라 100℃/0.5min 처리한 육종용은 에키나코사이드 6.88%의 함량을, 80℃/3min 처리한 육종용은 8.04%, 70℃/5min 처리한 육종용은 16.12%, 85℃/10min 처리한 육종용은 15.30%, 95℃/8min 처리한 육종용은 20.46%, 90℃/1min 처리한 육종용은 40%이상의 함량을 나타내어, 증숙단계를 거쳐 에키나코사이드의 함량 증대를 위해 흡착 칼럼 크로마토그래피에 흡착시켜 용출시켰을 때, 기존함량 대비 27.4% 이상 함량을 증가시키는 것으로 나타났으며, 총 페닐에타노이드 배당체 함량 또한 85%로 증가하는 것으로 확인 되었다.
<비교예 1>
종래 추출방법에 따라 수득된 육종용 추출물의 페닐에타노이드 배당체 함량
관화육종용 10kg을 8배의 물에 1시간 정도 침지시킨 후, 1차로 2시간 끓여 추출한 후, 여과하여 1차 혼합추출액을 얻었다. 2차로 끓여 추출한 혼합물의 잔사를 잔사 4배량의 40%에탄올과 혼합하고 4시간 끓여 추출한 후, 추출된 혼합물을 여과하여, 2차 혼합추출액을 얻었다. 2차 추출 혼합물의 잔사에 대해 상기와 동일한 방법으로 2회 반복하여, 3차, 4차 혼합추출액을 얻었으며, 1,2,3,4차 혼합추출액을 합하여 진공농축하는 것으로 최종 추출물을 얻었다. 최종추출물을 물로 용해하여 마이크로입자가 충진된 흡착수지컬럼에 로딩하였다. 이동상 용매는 0, 20%에탄올로 용출한 후, 용출액을 농축, 건조하는 방법으로 페닐에타노이드 배당체를 포함한 조제물을 얻었다.
상기 방법에 따라 제조된 육종용 추출물의 페닐에타노이드 배당체 함량을 상기 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 방법으로 평가한 결과, 50~60%의 총 페닐에타노이드 배당체 함량을 나타내어 본 발명의 추출방법보다 현저히 적은 것으로 확인되었다.
<실시예 4>
육종용 추출물의 발모촉진효과
<4-1> in vivo 발모 촉진효과
8주령의 수컷 C3H마우스를 이용하여 등 부분을 전동 이발기 및 면도기로 털을 깎은 후. 2일이 경과한 다음, 상기 실시예 1 내지 3의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물(1마리당 0.2mL)을 1일 1회, 주5일, 28일간 경구투여 하였다. 경구 투여 후, 14일째에 등 부분의 피부를 카메라로 촬영하여, NIH image로 털 깎은 부분 및 발모부의 면적을 측정하였다. 발모촉진효과는 하기의 식에 의해 산출된 발모율(%)를 지표로하여 평가하였다. 또 경구투여 후, 28일째(시험최종일)에 등 부분의 털을 채취하여 털 길이를 측정하였다.
*발모촉진효과
[발모율(%)]=[발모부의 면적]/[털 깎은 부분의 면적]
이에 대한 결과를 도 4에 나타내었다(실시예 1의 육종용 추출물: 육종용 추출물 a, 실시예 2의 육종용 추출물: 육종용 추출물 b, 실시예 3의 육종용 추출물: 육종용 추출물 c).
도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 내지 3의 육종용 추출물을 투여한 동물에서, Control 군과 비교하여 발모율의 증가를 보였으며, 특히, 증숙과정을 거쳐 정제된 추출물은 촬영화상에 있어서도 유의적인 효과를 나타내었다.
시험최종일(경구투여 후 28일째)의 털 길이를 측정한 결과, 실시예 1 내지 3의 육종용 추출물을 투여한 동물에서 Control군과 비교해 유의한 촉진작용이 있음을 확인하였다.
이상의 결과를 종합해 볼 때,육종용 추출물은 페닐에타노이드 배당체의 함량 증가에 따라 발모촉진 효과가 높은 것이 확인되었을 뿐만 아니라, 성장기를 조기에 유도하는 작용이 나타나 모발촉진 및 모발건강에 효과가 있을 것으로 판단해 볼 수 있었다.
<4-2> 발모 촉진 효과 임상평가
정형화된 탈모에 적절한 경도성 진단을 받은 육체적, 정신적으로 건강한 20~60세의 성인을 대상으로 16주 동안 하루 2번씩 상기 실시예 1 내지 3의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물 분말(400mg/일)을 물과 함께 경구 섭취하도록 하였다.
정형화된 탈모에 영향을 받는 부위인 환자들의 머리 부위를 정수리 근처 1cm 직경의 원형 형상으로 <2mm 길이로 면도했다. 원형부위의 중심에 실험적 타겟 부위는 1mm 검정점으로 표시하였다. 환자 모발의 밀도, 직경은 육종용 추출물을 투여한 후 16주가 경과한 후에 1cm2 영역 내의 모발의 수를 카운트하여 측정하였다.
이에 대한 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 테스트 그룹의 모발 밀도의 평균은 복용 전 대조군 152.18, 복용 후 평균 157.32, 실시예 1의 육종용 추출물(육종용 추출물 a) 복용 전 159.56, 복용 후 평균 167.72, 실시예 2의 육종용 추출물(육종용 추출물 b) 복용 전 161.38, 복용 후 평균 176.84, 실시예 3의 육종용 추출물(육종용 추출물 c) 복용 전 159.54, 복용 후 평균 186.87으로 임상시험물질 복용 후 모든 육종용 추출물에서 대조군과 비교하여 통계학적으로 모발 밀도의 증가하는 것을 확인하였다(*p<0.05, **p<0.01). 한편, 모발 밀도의 증가 경향은 페닐에타노이드 배당체의 함량이 증가할수록 더 우수한 경향을 나타내었다.
<실시예 5>
육종용 추출물의 혈전생성 억제효과
랫드에 상기 실시예 1 내지 3에 따른 육종용 추출물을 7일간 경구투여하고(200mg/kg), 최종 투여 후, 1시간 후에 혈액을 대동맥에서 채취하였다. 그 후, 혈소판의 응집을 일으키는 adenosine disodium diphosphate (ADP) 용액을 더하여 SPA-4 다기능 혈소판 응집계를 이용하여 응집율을 측정하였다. 혈소판 응집억제작용을 측정한 결과, 관화육종용 추출물은 Control과 비교하여 혈소판의 응집억제작용이 유의하게 인정되었다(도 6A)
.
랫드에 상기 실시예 1 내지 3에 따른 육종용 추출물을 7일간 경구투여하고 최종 투여일에 동맥의 바이패스를 단리하여 혈전중량을 측정하였다. 혈전중량을 측정한 결과, 육종용 추출물을 투여한 동물군은 Control과 비교하여 정맥바이패스의 혈전형성저해가 유의하게 인정되었다(도 6B).
이상의 결과를 종합해 볼 때, 관화육종용 추출물은 유효성분인 페닐에타노이드 배당체 함량의 증가에 따라 탈모예방 및 혈행개선 효과가 높은 것이 확인되었으며, 성장기를 조기에 유도하는 작용이 나타나, 탈모예방 및 혈행개선에 효과가 있을 뿐만 아니라, 혈소판 응집억제 및 혈행을 개선시켜 뇌경색 및 심근경색에 대한 예방작용 또한 기대할 수 있을 것으로 사료된다.
본 발명의 추출방법은, 종래 공지된 육종용 추출방법과 비교하여 페닐에타노이드 배당체의 함량이 현저하게 향상된 육종용 추출물을 제공한다. 따라서, 본 발명의 추출방법에 따라 추출된 육종용 추출물은 탈모 또는 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물 개발에 유용하게 사용될 수 있어 산업상 이용가능성이 매우 우수하다.
Claims (10)
- (a) 육종용(cistanche tubulosa)을 85 내지 95℃의 열수에 0.5 내지 3분간 침지한 후 건조하는 단계;
(b) 상기 건조된 육종용을 1차 증숙한 후 건조하는 단계;
(c) 상기 (b) 단계에서 건조된 육종용에 원적외선을 조사하면서 2차 증숙한 후 건조하는 단계;
(d) 상기 (c) 단계에서 건조된 육종용을 C1 내지 C5의 알코올 또는 열수로 추출하는 단계; 및
(e) 상기 (d) 단계에서의 추출물을 여과한 후 농축하는 단계를 포함하는 페닐에타노이드 배당체 함량이 증가된 육종용 추출물의 제조방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (e) 단계 이후에 상기 농축물을 정제하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 증숙은 건조된 육종용을 90 내지 100℃의 수증기로 3 내지 5시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (c) 단계에서 원적외선은 1.5 내지 400㎛의 파장을 갖고, 상기 증숙은 건조된 육종용을 90 내지 100℃의 수증기로 3 내지 5시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 육종용 추출물은 추출된 총 유효성분의 중량 대비 페닐에타노이드 배당체의 함량이 65 내지 85중량%인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 식품 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제8항에 있어서, 상기 혈전 질환은 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸증 및 뇌경색으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법에 따라 추출된 육종용 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 개선용 식품 조성물.
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN108310065A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-07-24 | 内蒙古曼德拉沙产业开发有限公司 | 一种肉苁蓉鲜品加工干燥工艺 |
| CN112618599A (zh) * | 2019-09-24 | 2021-04-09 | 宁夏农林科学院农业生物技术研究中心（宁夏农业生物技术重点实验室） | 一种肉苁蓉鲜干片的加工方法及其产品 |
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2016
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