KR20170102981A - 헤테로아릴렌-가교된 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 및 제조 및 사용 방법 - Google Patents

헤테로아릴렌-가교된 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 및 제조 및 사용 방법 Download PDF

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이바르 엠. 맥도널드
나이두 에스. 초우다리
월터 루이스 존슨
용 장
로버트 엠. 보르질레리
산지브 강와르
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브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
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Abstract

하기에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체.
Figure pct00261

여기서 X는 헤테로방향족 모이어티를 포함하고, 추가로 본원에 정의된 바와 같고; R1은
Figure pct00262

이고; 화학식 I, Ia, 및 Ib에서의 다른 가변기는 본 출원에 정의된 바와 같다. 이러한 이량체는 특히 항체-약물 접합체 (ADC)에 사용 시에 항암제로서 유용하다.

Description

헤테로아릴렌-가교된 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 및 제조 및 사용 방법
본 발명은 2개의 이량체 단위 사이에 헤테로방향족 기를 갖는 벤조디아제핀 이량체, 그로부터 유도된 이량체-링커 화합물, 그의 접합체, 및 그의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.
일부 자연 발생 세포독소, 예컨대 토메이마이신 및 안트라마이신은 벤조디아제핀 고리계를 함유한다. 디아제핀 고리에 융합된 피롤리딘 고리의 추가의 존재를 반영하여, 이들 화합물은 종종 피롤로벤조디아제핀, 또는 PBD로 지칭된다.
Figure pct00001
PBD는 항생제 및 항종양 활성을 보유하며, 후자의 형질은 항암 약물로서 이들에서의 관심으로 이어진다. 기계론적으로, PBD는 서열 선택적 방식으로 DNA의 작은 홈에 결합하고, DNA를 알킬화시킨다. 상이한 치환기의 구조-활성 관계 (SAR)가 연구된 바 있다 (Antonow et al. 2010; Thurston et al. 1999).
추가의 연구는 PBD 이량체가 항암제로서의 특수한 유망성을 나타냄을 제시한 바 있다. 전형적인 PBD 이량체의 코어 구조는 화학식 (A-1)에 의해 나타내어질 수 있으며, 여기서 X는 2개의 이량체 반쪽을 연결시키는 가교 기이다.
Figure pct00002
단량체 PBD와 같이, 이량체는 DNA 작은 홈 결합제-알킬화제이다. 이관능성이므로, 이량체에 의한 알킬화는 가교된 DNA를 생성시켜 DNA 복구를 더 어렵게 한다. (DNA 알킬화는 이민 기를 통해 발생한다. 이민 기 중 1개가 환원된 PDB는 여전히 DNA를 알킬화시킬 수 있지만, 이를 가교시킬 수는 없다. 이들은 비록 일반적으로 더 적게 생물학적 활성이더라도 여전히 생물학적 활성이지만, 그의 상이한 약동학적 프로파일은 일부 적용에 바람직할 수 있다.) 자연 발생 단량체 내지 합성 단량체로부터 합성 이량체로의, 항종양제로서의 PBD의 발생에 관한 종설에 대해, 문헌 [Hartley 2011]을 참조한다.
PBD 이량체의 SAR은 A/A' 및 C/C' 고리 상의 치환기, C/C' 고리 내의 불포화, 가교 기 X의 구조 및 길이, 및 고리 B/B' 내의 이민 이중 결합의 산화 또는 환원, 및 이러한 특색의 조합을 통해 연구된 바 있다. 문헌 [Bose et al. 1992, Gregson et al. 1999, Gregson et al. 2001a and 2001b, Gregson et al. 2004, Gregson et al. 2009, Hartley et al. 2012, Howard et al. 2007, Howard et al. 2009a. Howard et al. 2010, Howard et al. 2013a and 2013b, Liu et al. 2007, Thurston et al. 1996, Thurston et al. 2006, 및 Thurston et al. 2008]을 참조한다. 대부분의 PBD 이량체는 상기 제시된 바와 같은 8/8' 가교를 통해 연결되지만, 7/7' 가교가 또한 개시된 바 있다 (Howard et al. 2009b).
강하게 관심받고 있는 항암제의 유형은 항체-약물 접합체 (ADC, 면역접합체로도 지칭됨)이다. ADC에서, 치료제 (약물, 페이로드, 또는 워헤드로도 지칭됨)는 그 항원이 암 세포에 의해 발현되는 것 (종양 연관 항원)인 항체에 공유 연결된다. 항체는 항원에 결합함으로써, ADC를 암 부위에 전달한다. 그곳에서, 공유 연결의 절단 또는 항체의 분해는 치료제의 방출로 이어진다. 반대로, ADC는 혈액계를 순환하며, 치료제는 항체에 대한 그의 공유 연결 때문에 불활성으로 유지된다. 따라서, ADC에 사용되는 치료제는 그의 국한된 방출 때문에 통상의 화학요법제보다 훨씬 더 강력 (즉, 세포독성)할 수 있다. ADC에 관한 종설에 대해, 문헌 [Schrama et al. 2006]을 참조한다.
PBD 이량체는 ADC에서 약물로서 제안된 바 있다. 항체에 연결시키는 링커의 부착은 가교 기 X인 C/C' 고리에 위치하는 관능기를 통해, 또는 B/B' 고리 내의 이민 기를 가로지르는 부가에 의해 이루어질 수 있다. 문헌 [Beau-Larvor et al. 2014, Bouchard et al. 2013, Commercon et al. 2013a and 2013b, Flygare et al. 2013, Gauzy et al. 2012, Howard 2104a-2014e, Howard et al. 2011, Howard et al. 2013c and 2013d, Howard et al. 2014a-2014h, Jeffrey et al. 2013, Jeffrey et al. 2014a and 2014b, 및 Zhao et al. 2014]을 참조한다.
벤조디아제핀 이량체의 또 다른 유형은 또한 ADC에 사용하기 위한 약물로서 제안된 바 있다. 구조적으로, 이러한 유형은 PBD 이량체가 화학식 (A-2) 및 (A-3)에 제시된 바와 같이 각각의 C/C' 고리에 융합된 페닐 고리를 추가로 갖는 것으로 볼 수 있다. 문헌 [Chari et al. 2013, Li et al. 2013, Fishkin et al. 2014, Li et al. 2014]을 참조한다.
Figure pct00003
다른 고리계를 갖는 벤조디아제핀 화합물, 예컨대 테트라히드로이소퀴놀리노[2,1-c][1,4]벤조디아제핀이 또한 개시된 바 있다. 문헌 [Kothakonda et al. 2004].
제1 저자 또는 발명자 및 연도에 의해 본원에 인용된 문헌에 대한 전체 인용은 본 명세서의 말미에 열거되어 있다.
본 발명은 벤조디아제핀 단위 중 적어도 1개가 벤조디아제핀 고리계에 융합된 테트라히드로이소퀴놀린 (THIQ) 고리계를 갖는 것이고, 2개의 이량체 단위를 연결시키는 가교 내에 헤테로아릴렌 모이어티를 추가로 갖는 신규 벤조디아제핀 이량체를 제공한다. 임의로, 벤조디아제핀 고리계 내의 이민 결합은 환원될 수 있다.
Figure pct00004
이량체의 둘 다의 단위 (반쪽)가 THIQ 고리계를 가질 수 있거나 ("THIQ-THIQ 이량체" 또는 "THIQ 동종이량체"), 또는 1개의 단위가 THIQ 고리계를 가지며, 다른 단위가 상이한 벤조디아제핀 고리계, 예컨대 PBD 고리계를 가질 수 있다 (일반적으로, "THIQ 이종이량체", 또는 이러한 특정한 예에서 "THIQ-PBD 이량체"). THIQ-THIQ 이량체에서, 2개의 단위는 동일할 수 있거나 ("대칭 THIQ-THIQ 이량체") 또는 상이할 수 있다 ("비대칭 THIQ-THIQ 이량체").
따라서, 본 발명은 화학식 I에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00005
여기서
X는
Figure pct00006
로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R1은 화학식 Ia 또는 화학식 Ib에 따르고;
Figure pct00007
각각의 G 및 G'는 C 또는 N이며, 단 2개 이하의 G 또는 2개 이하의 G'가 N이고;
각각의 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C5 알킬이고;
각각의 R3 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, C1-C3 알킬, O(C1-C3 알킬), 시아노, (CH2)0- 5NH2, 또는 NO2이고;
디아제핀 고리계 내의 각각의 이중선
Figure pct00008
는 독립적으로 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
각각의 R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00009
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
각각의 R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00010
가 단일 결합인 경우에는 H, OH, SO3Na, 또는 SO3K이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
각각의 R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 H, C1-C5 알킬, C≡C(CH2)1 -5X2, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0-5X2, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2-5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴,
Figure pct00011
이거나;
또는 R7, R8, R9, 또는 R10이, N인 G 또는 G'에 부착되어 있는 경우에, 이러한 R7, R8, R9, 또는 R10은 부재하고;
화학식 Ib의 고리 C 내의 점선은 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합의 임의적인 존재를 나타내고;
R11은 H, =O, =CH2, =CH(C1-C5 알킬), CH=CH(CH2)1- 5X2, C≡C(CH2)1 -5X2, C1-C5 알킬, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2로 치환된 4- 내지 7-원 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클로알킬, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0-5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴이고;
R11'는 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합이 존재하는 경우에는 부재하고, 다른 경우에는 H이고;
각각의 X2는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, O(C1-C3 알킬), O(C1-C3 알킬렌), CO2H, N3, CN, NO2, CO2(C1-C3 알킬), NH2, NH(C1-C5 알킬), N(C1-C5 알킬)2, SH, CHO, N(CH2CH2)2N(C1-C3 알킬), NHNH2, 또는 C(=O)NHNH2이고;
각각의 Y는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이고;
Y' 및 Y"는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이며, 단 Y' 및 Y" 중 적어도 1개가 존재한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 표적 세포 상의 화학 물질에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 표적화 모이어티에 공유 결합된 화학식 I의 이량체를 포함하는 접합체를 제공하며, 이러한 표적 세포는 바람직하게는 암 세포이다. 바람직하게는, 표적화 모이어티는 항체 - 보다 바람직하게는 모노클로날 항체; 보다 더 바람직하게는 인간 모노클로날 항체 -이고, 화학 물질은 종양 연관 항원이다. 종양 연관 항원은 암 세포의 표면 상에서 나타나는 것, 또는 암 세포에 의해 주위의 세포외 공간으로 분비되는 것일 수 있다. 바람직하게는, 종양 연관 항원은 정상 세포와 비교하여 암 세포에 의해 과다-발현되는 것, 또는 암 세포에 의해 발현되지만 정상 세포에 의해서는 발현되지 않는 것이다.
또 다른 실시양태에서, 표적화 모이어티에 대한 접합에 적합한, 반응성 관능기를 갖는 링커 모이어티에 공유 결합된 화학식 I에 따른 이량체가 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 암을 앓고 있는 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 이량체 또는 그와 표적화 모이어티의 접합체를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 암을 앓고 있는 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 이량체 또는 그와 표적화 모이어티의 접합체의 용도가 제공된다. 본 발명의 이량체 또는 그와 표적화 모이어티의 접합체는 또한 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 암 세포의 증식을 억제하는데 사용될 수 있다. 특히, 암은 폐암 또는 위암일 수 있다.
도 1, 2, 3, 4, 5, 19a, 19b, 및 21은 본 발명의 이량체의 제조에 유용한 다양한 중간체의 합성을 위한 반응식을 제시한다.
도 6, 8, 9, 11, 14, 16, 18, 및 22는 본 발명의 다양한 이량체의 합성을 위한 반응식을 제시한다.
도 7a, 7b, 10, 12a, 12b, 13, 15, 17, 및 20은 본 발명의 다양한 이량체-링커의 합성을 위한 반응식을 제시한다.
정의
"항체"는 전체 항체 및 그의 임의의 항원 결합 단편 (즉 "항원-결합 부분") 또는 단일 쇄 변이체를 의미한다. 전체 항체는 디술피드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (VH), 및 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (VL 또는 Vk), 및 1개의 단일 도메인, CL을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. VH 및 VL 영역은 더 보존된 프레임워크 영역 (FR) 사이에 배치된 상보성 결정 영역 (CDR)으로 칭하는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR를 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (Clq)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 항체가 항원 X에 5 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 1 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 6 x 10-9 M 이하, 보다 바람직하게는 3 x 10-9 M 이하, 보다 더 바람직하게는 2 x 10-9 M 이하의 KD로 결합하는 경우에, 항원 X에 "특이적으로 결합하다"로 언급된다. 항체는 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 바람직하게는 인간 항체일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 글리코실화 유형 또는 정도에 영향을 미치거나, 항체 반감기를 연장시키거나, 이펙터 세포 또는 보체계와의 상호작용을 증진 또는 감소시키거나, 또는 일부 다른 특성을 조정하기 위해 조작될 수 있다. 조작은 1개 이상의 아미노산의 대체, 부가, 또는 결실에 의해, 또는 도메인의 또 다른 이뮤노글로불린 유형으로부터의 도메인으로의 대체에 의해, 또는 상기의 조합에 의해 달성될 수 있다.
항체의 "항원 결합 단편" 및 "항원 결합 부분" (또는 간단하게 "항체 부분" 또는 "항체 단편")은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는, 항체의 1개 이상의 단편을 의미한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편, 예컨대 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) 본질적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab인 Fab' 단편 (예를 들어, 문헌 [Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed., Saunders Elsevier 2007] 참조); (iv) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (v) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); (vii) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR); 및 (viii) 단일 가변 도메인 및 2개의 불변 도메인을 함유하는 중쇄 가변 영역인 나노바디에 의해 수행될 수 있는 것으로 제시된 바 있다. 바람직한 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, Fab', Fv, 및 Fd 단편이다. 게다가, Fv 단편의 2개의 도메인, VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여, 이들을 VL 및 VH 영역이 쌍형성하여 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄 (단일쇄 Fv, 또는 scFv로 공지됨)로서 제조되도록 할 수 있는 합성 링커에 의해 연결될 수 있으며; 예를 들어, 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883]을 참조한다. 이러한 단일 쇄 항체는 용어 항체의 "항원-결합 부분" 내에 또한 포괄된다.
"단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체를 실질적으로 함유하지 않는 항체를 의미한다 (예를 들어, 항원 X에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 항원 X 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 실질적으로 함유하지 않음). 그러나, 항원 X에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종으로부터의 항원 X 분자와 같은 다른 항원에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 단리된 항체는 인간 항원 X에 특이적으로 결합하고, 다른 (비-인간) 항원 X 항원과는 교차-반응하지 않는다. 더욱이, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다.
"모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 특정한 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타내는, 단일 분자 조성의 항체 분자의 제제를 의미한다.
"인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다 (및 존재하는 경우에 불변 영역)가 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 것인 가변 영역을 갖는 항체를 의미한다. 인간 항체는 천연 또는 합성 변형을 포함한 후기 변형을 포함할 수 있다. 인간 항체는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그라프트된 것인 항체는 포함하지 않는다.
"인간 모노클로날 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내며, 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다가 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 것인 가변 영역을 갖는 항체를 의미한다. 한 실시양태에서, 인간 모노클로날 항체는 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는, 트랜스제닉 비인간 동물, 예를 들어 트랜스제닉 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
"지방족"은 명시된 수의 탄소 원자를 갖거나 (예를 들어, "C3 지방족", "C1-5 지방족", "C1-C5 지방족" 또는 "C1 내지 C5 지방족"에서와 같으며, 후자 3개의 어구는 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 지방족 모이어티에 대한 동의어임) 또는 탄소 원자의 수가 명확하게 명시되지 않은 경우에는 1 내지 4개의 탄소 원자 (불포화 지방족 모이어티의 경우에는 2 내지 4개의 탄소)를 갖는 직쇄 또는 분지쇄, 포화 또는 불포화, 비-방향족 탄화수소 모이어티를 의미한다. 유사한 이해가 C2-4 알켄, C4-C7 시클로지방족 등에서와 같은 다른 유형에서의 탄소의 수에 적용된다. 유사한 맥락에서, "(CH2)1-3"과 같은 용어는 이러한 용어가 CH2, CH2CH2, 및 CH2CH2CH2를 나타내도록, 아래첨자가 1, 2, 또는 3인 것에 대한 약칭으로서 이해되어야 한다.
"알킬"은 포화 지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 탄소 원자의 수의 지정에 대한 동일한 규정이 적용가능하다. 예시로서, C1-C4 알킬 모이어티는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, t-부틸, 1-부틸, 2-부틸 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "알킬렌"은 알킬 기의 2가 대응물, 예컨대 CH2CH2, CH2CH2CH2, 및 CH2CH2CH2CH2를 의미한다.
"알케닐"은 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 탄소 원자의 수의 지정에 대한 동일한 규정이 적용가능하다. 예시로서, C2-C4 알케닐 모이어티는 에테닐 (비닐), 2-프로페닐 (알릴 또는 프로프-2-에닐), 시스-1-프로페닐, 트랜스-1-프로페닐, E- (또는 Z-) 2-부테닐, 3-부테닐, 1,3-부타디에닐 (부트-1,3-디에닐) 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"알키닐"은 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 탄소 원자의 수의 지정에 대한 동일한 규정이 적용가능하다. 예시로서, C2-C4 알키닐 기는 에티닐 (아세틸레닐), 프로파르길 (프로프-2-이닐), 1-프로피닐, 부트-2-이닐 등을 포함한다.
"시클로지방족"은 1 내지 3개의 고리를 가지며, 각각의 고리가 3 내지 8개 (바람직하게는 3 내지 6개)의 탄소 원자를 갖는 것인 포화 또는 불포화, 비-방향족 탄화수소 모이어티를 의미한다. "시클로알킬"은 각각의 고리가 포화된 것인 시클로지방족 모이어티를 의미한다. "시클로알케닐"은 적어도 1개의 고리가 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 것인 시클로지방족 모이어티를 의미한다. "시클로알키닐"은 적어도 1개의 고리가 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 것인 시클로지방족 모이어티를 의미한다. 예시로서, 시클로지방족 모이어티는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 및 아다만틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 시클로지방족 모이어티는 시클로알킬 모이어티, 특히 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 및 시클로헥실이다. "시클로알킬렌"은 시클로알킬 기의 2가 대응물을 의미한다.
"헤테로시클로지방족"은 그의 적어도 1개의 고리 내에서, 최대 3개 (바람직하게는 1 내지 2개)의 탄소가 N, O, 또는 S로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자로 대체된 것인 시클로지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 N 및 S는 임의로 산화될 수 있고, N은 임의로 4급화될 수 있다. 유사하게, "헤테로시클로알킬", "헤테로시클로알케닐", 및 "헤테로시클로알키닐"은 각각 적어도 1개의 고리가 이렇게 하여 변형된 것인 시클로알킬, 시클로알케닐, 또는 시클로알키닐 모이어티를 의미한다. 예시적인 헤테로시클로지방족 모이어티는 아지리디닐, 아제티디닐, 1,3-디옥사닐, 옥세타닐, 테트라히드로푸릴, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 테트라히드로티오피라닐 술폰, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 티오모르폴리닐 술폭시드, 티오모르폴리닐 술폰, 1,3-디옥솔라닐, 테트라히드로-1,1-디옥소티에닐, 1,4-디옥사닐, 티에타닐 등을 포함한다. "헤테로시클로알킬렌"은 헤테로시클로알킬 기의 2가 대응물을 의미한다.
"알콕시", "아릴옥시", "알킬티오", 및 "아릴티오"는 각각 -O(알킬), -O(아릴), -S(알킬), 및 -S(아릴)을 의미한다. 예는 각각 메톡시, 페녹시, 메틸티오, 및 페닐티오이다.
"할로겐" 또는 "할로"는 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 의미한다.
"아릴"은 각각의 고리가 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1개의 고리가 방향족인 모노시클릭, 비시클릭, 또는 트리시클릭 고리계를 갖는 탄화수소 모이어티를 의미한다. 고리계 내의 고리는 서로 융합될 수 있거나 (비페닐에서와 같음) 또는 서로 결합될 수 있으며 (나프틸에서와 같음), 비-방향족 고리에 융합 또는 결합될 수 있다 (인다닐 또는 시클로헥실페닐에서와 같음). 추가 예시로서, 아릴 모이어티는 페닐, 나프틸, 테트라히드로나프틸, 인다닐, 비페닐, 페난트릴, 안트라세닐, 및 아세나프틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "아릴렌"은 아릴 기의 2가 대응물, 예를 들어 1,2-페닐렌, 1,3-페닐렌, 또는 1,4-페닐렌을 의미한다.
"헤테로아릴"은 각각의 고리가 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1개의 고리가 N, O, 또는 S로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 방향족 고리인 모노시클릭, 비시클릭, 또는 트리시클릭 고리계를 갖는 모이어티를 의미하며, 여기서 N 및 S는 임의로 산화될 수 있고, N은 임의로 4급화될 수 있다. 이러한 적어도 1개의 헤테로원자 함유 방향족 고리는 다른 유형의 고리에 융합될 수 있거나 (페닐피리딜 또는 2-시클로펜틸피리딜에서와 같음) 또는 다른 유형의 고리에 직접 결합될 수 있다 (벤조푸라닐 또는 테트라히드로이소퀴놀릴에서와 같음). 추가 예시로서, 헤테로아릴 모이어티는 피롤릴, 푸라닐, 티오페닐 (티에닐), 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, N-옥소피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 퀴노잘리닐, 나프티리디닐, 벤조푸라닐, 인돌릴, 벤조티오페닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 페노티아졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조트리아졸릴, 디벤조푸라닐, 카르바졸릴, 디벤조티오페닐, 아크리디닐 등을 포함한다. "헤테로아릴렌"은 헤테로아릴 기의 2가 대응물을 의미한다.
"비치환 또는 치환된 C1-C5 알킬" 또는 "임의로 치환된 헤테로아릴"에서와 같은 "비치환 또는 치환된" 또는 "임의로 치환된" 어구의 사용에 의해서와 같이 모이어티가 치환될 수 있는 것으로 제시된 경우에, 이러한 모이어티는 1개 이상의 독립적으로 선택된 치환기, 바람직하게는 수에 있어서 1 내지 5개, 보다 바람직하게는 수에 있어서 1 또는 2개를 가질 수 있다. 치환기 및 치환 패턴은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해, 치환기가 부착되는 모이어티를 고려하여, 화학적으로 안정하고 관련 기술분야에 공지된 기술 뿐만 아니라 본원에 제시된 방법에 의해 합성될 수 있는 화합물을 제공하도록 선택될 수 있다. 모이어티가 "비치환 또는 치환된" 또는 "임의로 치환된" 것으로 확인되는 경우에, 바람직한 실시양태에서 이러한 모이어티는 비치환된다.
"아릴알킬", "(헤테로시클로지방족)알킬", "아릴알케닐", "아릴알키닐", "비아릴알킬" 등은, 예를 들어 벤질, 페네틸, N-이미다조일에틸, N-모르폴리노에틸 등에서와 같이, 경우에 따라 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 모이어티에서 개방 (비충족) 원자가를 갖는, 경우에 따라 아릴, 헤테로시클로지방족, 비아릴 등의 모이어티로 치환된 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 모이어티를 의미한다. 반대로, "알킬아릴", "알케닐시클로알킬" 등은, 경우에 따라 예를 들어 메틸페닐 (톨릴) 또는 알릴시클로헥실에서와 같이, 경우에 따라 알킬, 알케닐 등의 모이어티로 치환된 아릴, 시클로알킬 등의 모이어티를 의미한다. "히드록시알킬", "할로알킬", "알킬아릴", "시아노아릴" 등은, 경우에 따라 확인된 치환기 (경우에 따라 히드록실, 할로 등) 중 1개 이상으로 치환된 알킬, 아릴 등의 모이어티를 의미한다.
예를 들어, 허용되는 치환기는 알킬 (특히 메틸 또는 에틸), 알케닐 (특히 알릴), 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 시클로지방족, 헤테로시클로지방족, 할로 (특히 플루오로), 할로알킬 (특히 트리플루오로메틸), 히드록실, 히드록시알킬 (특히 히드록시에틸), 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -O(할로알킬) (특히 -OCF3), -O(시클로알킬), -O(헤테로시클로알킬), -O(아릴), 알킬티오, 아릴티오, =O, =NH, =N(알킬), =NOH, =NO(알킬), -C(=O)(알킬), -C(=O)H, -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NH(히드록시알킬), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -OSO2(알킬), -SH, -S(알킬), -S(아릴), -S(시클로알킬), -S(=O)알킬, -SO2(알킬), -SO2NH2, -SO2NH(알킬), -SO2N(알킬)2 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
치환될 모이어티가 지방족 모이어티인 경우에, 바람직한 치환기는 아릴, 헤테로아릴, 시클로지방족, 헤테로시클로지방족, 할로, 히드록실, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -O(할로알킬), -O(시클로알킬), -O(헤테로시클로알킬), -O(아릴), 알킬티오, 아릴티오, =O, =NH, =N(알킬), =NOH, =NO(알킬), -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NH(히드록시알킬), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -OSO2(알킬), -SH, -S(알킬), -S(아릴), -S(=O)알킬, -S(시클로알킬), -SO2(알킬), -SO2NH2, -SO2NH(알킬), 및 -SO2N(알킬)2이다. 보다 바람직한 치환기는 할로, 히드록실, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(아릴), =O, =NOH, =NO(알킬), -OC(=O)(알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, 및 -NHC(=NH)NH2이다. 페닐, 시아노, 할로, 히드록실, 니트로, C1-C4알콕시, O(C2-C4 알킬렌)OH, 및 O(C2-C4 알킬렌)할로가 특히 바람직하다.
치환될 모이어티가 시클로지방족, 헤테로시클로지방족, 아릴, 또는 헤테로아릴 모이어티인 경우에, 바람직한 치환기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로, 할로알킬, 히드록실, 히드록시알킬, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -O(할로알킬), -O(아릴), -O(시클로알킬), -O(헤테로시클로알킬), 알킬티오, 아릴티오, -C(=O)(알킬), -C(=O)H, -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NH(히드록시알킬), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -OSO2(알킬), -SH, -S(알킬), -S(아릴), -S(시클로알킬), -S(=O)알킬, -SO2(알킬), -SO2NH2, -SO2NH(알킬), 및 -SO2N(알킬)2이다. 보다 바람직한 치환기는 알킬, 알케닐, 할로, 할로알킬, 히드록실, 히드록시알킬, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -C(=O)(알킬), -C(=O)H, -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, 및 -NHC(=NH)NH2이다. C1-C4 알킬, 시아노, 니트로, 할로, 및 C1-C4알콕시가 특히 바람직하다.
"C1-C5 알킬" 또는 "5 내지 10%"에서와 같이 범위가 언급된 경우에, 이러한 범위는 첫 번째 경우에서는 C1 및 C5 및 두 번째 경우에서는 5% 및 10%에서와 같은 범위의 종점을 포함한다.
특정한 입체이성질체가 구체적으로 (예를 들어, 구조 화학식에서의 관련 입체중심에서 굵은선 또는 파선 결합에 의해, 구조 화학식에서 E 또는 Z 배위를 갖는 것으로서의 이중 결합의 도시에 의해, 또는 입체화학-지정 명명법 사용에 의해) 나타내지 않는 한, 모든 입체이성질체는 순수한 화합물 뿐만 아니라 그의 혼합물로서, 본 발명의 범주 내에 포함된다. 달리 나타내지 않는 한, 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 기하 이성질체, 및 그의 조합 및 혼합물은 모두 본 발명에 의해 포괄된다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 화합물이 구조 화학식에 도시된 것들과 등가인 호변이성질체 형태 (예를 들어, 케토 및 엔올 형태), 공명 형태, 및 쯔비터이온 형태를 가질 수 있고, 구조 화학식이 이러한 호변이성질체, 공명, 또는 쯔비터이온 형태를 포괄함을 인지할 것이다.
"제약상 허용되는 에스테르"는 생체내에서 (예를 들어 인간 신체에서) 가수분해되어 모 화합물 또는 그의 염을 생산하거나, 또는 그 자체로 모 화합물의 것과 유사한 활성을 갖는 에스테르를 의미한다. 적합한 에스테르는 C1-C5 알킬, C2-C5 알케닐 또는 C2-C5 알키닐 에스테르, 특히 메틸, 에틸 또는 n-프로필을 포함한다.
"제약상 허용되는 염"은 제약 제제에 적합한 화합물의 염을 의미한다. 화합물이 1개 이상의 염기성 기를 갖는 경우에, 염은 산 부가염, 예컨대 술페이트, 히드로브로마이드, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 파모에이트 (엠보네이트), 히드로아이오다이드, 니트레이트, 히드로클로라이드, 락테이트, 메틸술페이트, 푸마레이트, 벤조에이트, 숙시네이트, 메실레이트, 락토비오네이트, 수베레이트, 토실레이트 등일 수 있다. 화합물이 1개 이상의 산성 기를 갖는 경우에, 염은 칼슘 염, 칼륨 염, 마그네슘 염, 메글루민 염, 암모늄 염, 아연 염, 피페라진 염, 트로메타민 염, 리튬 염, 콜린 염, 디에틸아민 염, 4-페닐시클로헥실아민 염, 벤자틴 염, 나트륨 염, 테트라메틸암모늄 염 등과 같은 염일 수 있다. 다형성 결정질 형태 및 용매화물은 본 발명의 범주 내에 또한 포괄된다.
본 명세서의 화학식에서, 결합에 대한 파상선 (
Figure pct00012
) 또는 결합의 말단에서의 별표 (*)는 공유 부착 부위를 나타낸다. 예를 들어, R은
Figure pct00013
이다라는 언급은 화학식
Figure pct00014
에서
Figure pct00015
를 지칭한다.
본 명세서의 화학식에서, 방향족 고리를 그의 2개의 탄소 사이에서 가로지르는 결합은 해당 결합에 부착된 기가 방향족 고리의 임의의 이용가능한 위치에 위치할 수 있음을 의미한다. 예시로서, 화학식
Figure pct00016
는
Figure pct00017
를 나타낸다.
이량체
화학식 I에 따른 벤조디아제핀 이량체의 바람직한 실시양태는 화학식 I'에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 화학식 I'에서의 가변기의 의미는 화학식 I에 정의된 바와 같다.
Figure pct00018
즉, 화학식 I'는 X가
Figure pct00019
인 점에서 화학식 I과 상이하다.
화학식 I 및 그의 아속, 및 이량체-링커 화합물 및 접합체에 대한 관련 화학식에서, 보다 특히 바람직한 것이 특정한 화학식의 문맥에 제시되지 않는 한, 하기 바람직한 것이 적용된다:
(a) 화학식이 이중선
Figure pct00020
를 갖는 2개의 벤조디아제핀 고리계를 포함하는 경우에는, 1개 이하의 이중선
Figure pct00021
가 단일 결합을 나타낸다. 오히려 바람직하게는 이들 둘 다는 이중 결합이거나, 또는 대안적으로 1개는 단일 결합이고, 나머지는 이중 결합이다.
(b) 각각의 R2는 화학식에 존재하는 경우에 Me이고, 보다 바람직하게는 각각의 R2는 Me이고, 각각의 R3, R4, R7, R8, 및 R10은 화학식에 존재하는 경우에 H이다.
(c) 각각의 Y는 화학식에 존재하는 경우에 CH2이다.
(d) 각각의 R9는 화학식에 존재하는 경우에 독립적으로 H, OH, OMe, NH2, NMe2, O(CH2CH2O)1-8Me, OCH2CH2OH, 또는
Figure pct00022
(특히 파라- 이성질체)이다.
(e) 화학식에 존재하는 경우에, 각각의 G'는 C이고, Y' 및 Y" 둘 다는 CH2이거나, 또는 1개의 G'는 N이고, Y'는 CH2이고, Y"는 부재한다.
(f) 화학식에 존재하는 경우에, R11은 H, =CH2, CH=CHMe, =CHMe, C≡CCH2NH2,
Figure pct00023
(특히 파라- 이성질체), 또는
Figure pct00024
이다.
(h) 가교 기
Figure pct00025
는
Figure pct00026
이고, 보다 바람직하게는
Figure pct00027
이다.
(i) 가교 기
Figure pct00028
내의 모이어티 (CH2)0- 5X2는 바람직하게는 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이다.
본 발명의 이량체는 THIQ-THIQ 이량체일 수 있으며; 즉, 화학식 I에서, R1은 화학식 Ia에 따른다. 이러한 이량체는 화학식 IIa에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00029
여기서
X, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 이중선
Figure pct00030
, 및 X2는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IIa에 따른 바람직한 THIQ-THIQ 이량체는 화학식 IIa'에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 화학식 IIa'에서의 가변기는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
Figure pct00031
즉, 화학식 IIa'는 X가
Figure pct00032
인 점에서 화학식 IIa와 상이하다.
화학식 IIa에 따른 또 다른 바람직한 실시양태에서, THIQ-THIQ 이량체는 화학식 IIa"에 의해 나타내어진다.
Figure pct00033
여기서
R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00034
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00035
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00036
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00037
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
각각의 R9는 독립적으로 H, OH, OMe, NH2, NMe2, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, 또는
Figure pct00038
(특히 파라- 이성질체)이고;
X3은 H, OH, OMe, Me, CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이다.
THIQ-THIQ 이량체의 구체적 예는 하기를 포함한다.
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 이량체는 THIQ-PBD 이량체이며; 즉, 화학식 I에서, R1은 화학식 Ib에 따른다. 이러한 이량체는 화학식 IIb에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00042
여기서
X, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R11', 이중선
Figure pct00043
, 고리 C 내의 점선, 및 X2는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IIb에 따른 바람직한 THIQ-PBD 이량체는 화학식 IIb'에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 화학식 IIb'에서의 가변기는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
Figure pct00044
즉, 화학식 IIb'는 X가
Figure pct00045
인 점에서 화학식 IIb와 상이하다.
화학식 IIb에 따른 또 다른 바람직한 THIQ-PBD 이량체는 화학식 IIb"에 의해 나타내어진다.
Figure pct00046
여기서
R9는 H, OH, OMe, NH2, NMe2, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, 또는
Figure pct00047
(특히 파라- 이성질체)이고;
R11은 H, =CH2, CH=CHMe, =CHMe, C≡CCH2NH2,
Figure pct00048
(특히 파라- 이성질체), 또는
Figure pct00049
이고;
R11'는 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합이 존재하는 경우에는 부재하고, 다른 경우에는 H이고;
X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
디아제핀 고리계 내의 이중선
Figure pct00050
중 적어도 1개는 이중 결합이고;
R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00051
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00052
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00053
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00054
가 이중 결합인 경우에는 부재한다.
바람직하게는, 화학식 IIb, IIb', 및 IIb"에서,
Figure pct00055
는
Figure pct00056
이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 이량체는 THIQ 고리계를 갖는 벤조디아제핀 단위 및 아자인돌린 (AZI) 고리계를 갖는 벤조디아제핀 단위를 포함한다 ("THIQ-AZI 이량체"). 이러한 이량체는 화학식 IIc에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00057
여기서
X, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 이중선
Figure pct00058
, 및 X2는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같고;
1개의 G'는 N이고, 나머지는 C이고;
디아제핀 고리계 내의 이중선
Figure pct00059
중 적어도 1개는 이중 결합이고;
R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00060
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00061
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00062
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00063
가 이중 결합인 경우에는 부재한다.
화학식 IIc에 따른 바람직한 THIQ-AZI 이량체는 화학식 IIc'에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 가변기는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
Figure pct00064
즉, 화학식 IIc'는 X가
Figure pct00065
인 점에서 화학식 IIc와 상이하다.
접합체
일반사항
본 발명의 이량체는 그 자체로 치료제로서 사용될 수 있지만, 바람직하게는 암 세포 상의 화학 물질에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 표적화 모이어티와의 접합체로서 사용된다. 바람직하게는, 표적화 모이어티는 항체 또는 그의 항원 결합 부분이고, 화학 물질은 종양 연관 항원이다.
따라서, 본 발명의 또 다른 실시양태는 화학식 II에 의해 나타내어진, 본 발명의 이량체 및 리간드를 포함하는 접합체이다.
Figure pct00066
여기서 Z는 리간드이고, D는 본 발명의 이량체이고, -(XD)aC(XZ)b-는 이들이 Z 및 D를 연결시키기 때문에 집합적으로 "링커 모이어티" 또는 "링커"로 지칭된다. 링커 내에서, C는 이량체 D의 의도된 생물학적 작용 부위에서 또는 그 근처에서 절단되도록 설계된 절단가능한 기이고; XD 및 XZ는 이들이 각각 D와 C 및 C와 Z를 이격시키기 때문에 스페이서 모이어티 (또는 "스페이서")로 지칭되고; 아래첨자 a, b, 및 c는 독립적으로 0 또는 1이다 (즉, XD, XZ, 및 C의 존재는 임의적임). 아래첨자 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 (바람직하게는 1, 2, 3, 또는 4)이다. D, XD, C, XZ, 및 Z는 하기에 더 완전히 기재되어 있다.
리간드 Z - 예를 들어 항체 -는 표적화 기능을 수행한다. 항원 또는 수용체가 위치하는 표적 조직 또는 세포에 결합함으로써, 리간드 Z는 그곳에서 접합체를 유도한다. 리간드 Z가 항체인 경우에, 접합체는 때때로 항체-약물 접합체 (ADC) 또는 면역접합체로 지칭된다. 바람직하게는, 표적 조직 또는 세포는 암 조직 또는 세포이고, 항원 또는 수용체는 종양-연관 항원, 즉 암성 세포에 의해 특유하게 발현되거나 또는 비-암성 세포와 비교하여 암 세포에 의해 과다발현되는 항원이다. 표적 조직 또는 세포에서의 기 C의 절단은 이량체 D를 방출하여 그의 세포독성 효과를 국부로 표출한다. 일부 경우에, 접합체는 세포내이입에 의해 표적 세포에 내재화되고, 절단은 표적 세포 내에서 일어난다. 이러한 방식으로, 이량체 D의 정밀한 전달이 의도된 작용 부위에서 달성되어, 필요한 투여량이 감소된다. 또한, 이량체 D는 그의 접합된 상태에서 통상적으로 생물학적으로 불활성 (또는 유의하게 덜 활성)이고, 그에 의해 비-표적 조직 또는 세포에 대한 목적하지 않는 독성이 감소된다. 항암 약물은 일반적으로 세포에 대해 종종 고도로 독성이기 때문에, 이는 중요한 고려사항이다.
아래첨자 m에 의해 반영된 바와 같이, 리간드 Z의 각각의 분자는 리간드 Z가 갖는 접합에 이용가능한 부위의 수 및 사용되는 실험 조건에 따라, 1개 초과의 이량체 D와 접합할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 리간드 Z의 각각의 개별 분자가 정수개의 이량체 D에 접합되며, 접합체의 제조가 통계적 평균을 반영하여 비-정수 비의 이량체 D 대 리간드 Z에 대해 분석될 수 있음을 인지할 것이다. 이러한 비는 치환 비 (SR)로, 또는 동의어로 약물-항체 비 (DAR)로 지칭된다.
리간드 Z
바람직하게는, 리간드 Z는 항체이다. 편의성 및 간결성을 위해 및 제한 없이, 리간드 Z의 접합에 대한 본원의 상세한 후속 논의는 그것이 항체라는 문맥으로 기록되어 있지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 필요한 변경을 가하여 다른 유형의 리간드 Z가 접합될 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 리간드로서의 폴산과의 접합체는 그의 표면 상에 폴레이트 수용체를 갖는 세포를 표적화할 수 있다 (Leamon et al., Cancer Res. 2008, 68 (23), 9839). 동일한 이유로, 하기 상세한 논의는 주로 1:1 비의 항체 Z 대 유사체 D (m = 1)의 관점에서 기록되어 있다.
바람직하게는, 리간드 Z는 암 세포의 선택적 표적화를 가능하게 하는, 종양 연관 항원에 대한 항체이다. 이러한 항원의 예는 메소텔린, 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), CD19, CD22, CD30, CD70, B7H3, B7H4 (O8E로도 공지됨), 단백질 티로신 키나제 7 (PTK7), 글리피칸-3, RG1, 푸코실-GM1, CTLA-4, 및 CD44를 포함한다. 항체는 동물 항체 (예를 들어, 뮤린), 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 바람직하게는 인간 항체일 수 있다. 항체는 바람직하게는 모노클로날, 특히 모노클로날 인간 항체이다. 상기 언급된 항원 중 일부에 대한 인간 모노클로날 항체의 제조는 문헌 [Korman et al., US 8,609,816 B2 (2013; B7H4, 08E로도 공지됨; 특히 항체 2A7, 1G11, 및 2F9); Rao-Naik et al., 8,097,703 B2 (2012; CD19; 특히 항체 5G7, 13F1, 46E8, 21D4, 21D4a, 47G4, 27F3, 및 3C10); King et al., US 8,481,683 B2 (2013; CD22; 특히 항체 12C5, 19A3, 16F7, 및 23C6); Keler et al., US 7,387,776 B2 (2008; CD30; 특히 항체 5F11, 2H9, 및 17G1); Terrett et al., US 8,124,738 B2 (2012; CD70; 특히 항체 2H5, 10B4, 8B5, 18E7, 및 69A7); Korman et al., US 6,984,720 B1 (2006; CTLA-4; 특히 항체 10D1, 4B6, 및 1E2); Vistica et al., US 8,383,118 B2 (2013, 푸코실-GM1, 특히 항체 5B1, 5B1a, 7D4, 7E4, 13B8, 및 18D5) Korman et al., US 8,008,449 B2 (2011; PD-1; 특히 항체 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 4A11, 7D3, 및 5F4); Huang et al., US 2009/0297438 A1 (2009; PSMA. 특히 항체 1C3, 2A10, 2F5, 2C6); Cardarelli et al., US 7,875,278 B2 (2011; PSMA; 특히 항체 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5, 및 1C3); Terrett et al., US 8,222,375 B2 (2012; PTK7; 특히 항체 3G8, 4D5, 12C6, 12C6a, 및 7C8); Terrett et al., US 8,680,247 B2 (2014; 글리피칸-3; 특히 항체 4A6, 11E7, 및 16D10); Harkins et al., US 7,335,748 B2(2008; RG1; 특히 항체 A, B, C, 및 D); Terrett et al., US 8,268,970 B2 (2012; 메소텔린; 특히 항체 3C10, 6A4, 및 7B1); Xu et al., US 2010/0092484 A1 (2010; CD44; 특히 항체 14G9.B8.B4, 2D1.A3.D12, 및 1A9.A6.B9); Deshpande et al., US 8,258,266 B2 (2012; IP10; 특히 항체 1D4, 1E1, 2G1, 3C4, 6A5, 6A8, 7C10, 8F6, 10A12, 10A12S, 및 13C4); Kuhne et al., Us 8,450,464 B2 (2013; CXCR4; 특히 항체 F7, F9, D1, 및 E2); 및 Korman et al., US 7,943,743 B2 (2011; PD-L1; 특히 항체 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7, 및 13G4)]에 개시되어 있으며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 각각의 상기 언급된 항체는 본 발명의 이량체와의 ADC에 사용될 수 있다.
리간드 Z는 또한 항체의 항원 결합 단편인 단편 또는 항체 모방체, 예컨대 아피바디, 도메인 항체 (dAb), 나노바디, 유니바디, DARPin, 안티칼린, 베르사바디, 듀오칼린, 리포칼린, 또는 아비머일 수 있다.
리간드 Z의 여러 상이한 반응성 기 중 임의의 1개는 리신 잔기 내의 ε-아미노 기, 펜던트 탄수화물 모이어티, 카르복실산 기, 디술피드 기, 및 티올 기를 포함한 접합 부위일 수 있다. 각각의 유형의 반응성 기는 일부 이점 및 일부 단점을 갖는 트레이드-오프를 나타낸다. 접합에 적합한 항체 반응성 기에 대한 종설에 대해, 예를 들어 문헌 [Garnett, Adv. Drug Delivery Rev. 53 (2001), 171-216 및 Dubowchik and Walker, Pharmacology & Therapeutics 83 (1999), 67-123]을 참조하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
한 실시양태에서, 리간드 Z는 리신 ε-아미노 기를 통해 접합된다. 대부분의 항체는 다중 리신 ε-아미노 기를 가지며, 이는 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 아미드, 우레아, 티오우레아, 또는 카르바메이트 결합을 통해 접합될 수 있다. 그러나, 어떠한 및 얼마나 많은 ε-아미노 기가 반응하는지를 제어하는 것은 어려우며, 이는 접합체 제조에서 잠재적인 배치별 변동성으로 이어진다. 또한, 접합은 항체의 천연 입체형태를 유지하는데 중요한 양성자화된 ε-아미노 기의 중화를 일으킬 수 있거나, 또는 리간드 또는 항원 결합 부위 근처 또는 그 부위의 리신에서 일어날 수 있으며, 어떠한 것도 바람직한 경우는 아니다.
또 다른 실시양태에서, 많은 항체가 글리코실화되는 것과 같이, 리간드 Z는 탄수화물 측쇄를 통해 접합될 수 있다. 탄수화물 측쇄는 퍼아이오데이트를 사용하여 산화되어 알데히드 기를 생성할 수 있고, 이는 또한 아민과 반응하여 세미카르바존, 옥심 또는 히드라존에서와 같이 이민 기를 형성할 수 있다. 원하는 경우에, 이민 기는 NaCNBH3을 사용한 환원에 의해 더 안정한 아민 기로 전환될 수 있다. 탄수화물 측쇄를 통한 접합에 관한 추가의 개시내용에 대해, 예를 들어 문헌 [Rodwell et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83, 2632-2636 (1986)]을 참조하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 리신 ε-아미노 기와 같이, 접합 부위(들)의 위치의 재현성 및 화학량론에 대한 우려가 존재한다.
또 다른 실시양태에서, 리간드 Z는 카르복실산 기, 예컨대 글루탐산 또는 아스파르트산의 측쇄 카르복실을 통해 접합될 수 있다. 한 실시양태에서, 말단 카르복실산 기는 관능화되어 카르보히드라지드를 생성하고, 이는 이어서 알데히드-보유 접합 모이어티와 반응한다. 문헌 [Fisch et al., Bioconjugate Chemistry 1992, 3, 147-153]을 참조한다.
또 다른 실시양태에서, 항체 Z는 항체 Z 상의 시스테인 잔기 및 접합체의 다른 부분 상의 황을 가교하는 디술피드 기를 통해 접합될 수 있다. 일부 항체는 유리 티올 (술프히드릴) 기가 결여되어 있지만, 예를 들어 힌지 영역 내에 디술피드 기를 갖는다. 이러한 경우에, 유리 티올 기는 천연 디술피드 기의 환원에 의해 생성될 수 있다. 이렇게 하여 생성된 티올 기는 이어서 접합에 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Packard et al., Biochemistry 1986, 25, 3548-3552; King et al., Cancer Res. 54, 6176-6185 (1994); 및 Doronina et al., Nature Biotechnol. 21(7), 778-784 (2003)]을 참조하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 다시, 접합 부위 위치 및 화학량론, 및 항체 천연 입체형태의 가능한 파괴에 대한 우려가 존재한다.
천연 디술피드 결합을 파괴하지 않으면서 유리 티올 기를 항체에 도입하기 위한 다수의 방법이 공지되어 있으며, 이러한 방법은 본 발명의 리간드 Z를 사용하여 실시될 수 있다. 사용되는 방법에 따라, 미리 결정된 위치에 예측가능한 수의 유리 술프히드릴을 도입하는 것이 가능할 수 있다. 한 접근법에서는, 시스테인이 또 다른 아미노산 대신에 치환된 돌연변이된 항체를 제조한다. 예를 들어, 문헌 [Eigenbrot et al., US 7,521,541 B2 (2009); Chilkoti et al., Bioconjugate Chem. 1994, 5, 504-507; Urnovitz et al., US 4,698,420 (1987); Stimmel et al., J. Biol. Chem., 275 (39), 30445-30450 (2000); Bam et al., US 7,311,902 B2 (2007); Kuan et al., J. Biol. Chem., 269 (10), 7610-7618 (1994); Poon et al., J. Biol. Chem., 270 (15), 8571-8577 (1995)]을 참조한다. 또 다른 접근법에서는, 여분의 시스테인을 C-말단에 부가한다. 예를 들어, 문헌 [Cumber et al., J. Immunol., 149, 120-126 (1992); King et al., Cancer Res., 54, 6176-6185 (1994); Li et al., Bioconjugate Chem., 13, 985-995 (2002); Yang et al., Protein Engineering, 16, 761-770 (2003); 및 Olafson et al., Protein Engineering Design & Selection, 17, 21-27 (2004)]을 참조한다. 유리 시스테인을 도입하기 위한 바람직한 방법은 문헌 [Liu et al., 8,865,875 B2 (2014)]에 교시된 것이며, 여기서는 시스테인 보유 아미노산 서열을 항체 중쇄의 C-말단에 부가한다. 이러한 방법은 공지된 수의 시스테인 잔기 (중쇄당 1개)를 항원 결합 부위로부터 멀리있는 공지된 위치에 도입한다. 본 단락에 인용된 문헌의 개시내용은 모두 본원에 참조로 포함된다.
또 다른 실시양태에서, 리신 ε-아미노 기를 시약 예컨대 2-이미노티올란, 2-이미노티아시클로헥산, 또는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 (SPDP)를 사용하여 변형시켜, ε-아미노 기를 티올 또는 디술피드 기로 전환시킬 수 있으며 - 이를테면 시스테인 대용물을 생성시킬 수 있다. 그러나, 이러한 방법은 적절한 ε-아미노 기와 연관된 동일한 접합 위치 및 화학량론 제한을 겪는다.
링커 성분
상기 나타낸 바와 같이, 본 발명의 접합체의 링커 부분은 최대 3종의 요소: 절단가능한 기 C 및 임의적인 스페이서 XZ 및 XD를 포함한다.
절단가능한 기 C는 생리학적 조건 하에 절단가능한 기이며, 바람직하게는 접합체가 혈장 내에서 일반적으로 순환되는 동안에는 비교적 안정하지만, 일단 접합체가 그의 의도된 작용 부위, 즉 표적 세포 근처에, 표적 세포에 또는 표적 세포 내에 도달하면 용이하게 절단되도록 선택된다. 바람직하게는, 접합체는 표적 세포의 표면 상에 나타난 항원에 대한 항체 Z의 결합 시에 표적 세포에 의해 내재화된다. 후속적으로, 기 C의 절단이 표적 세포의 소포체 (초기 엔도솜, 후기 엔도솜, 또는 특히 리소솜)에서 발생한다.
한 실시양태에서, 기 C는 pH 감수성 기이다. 혈장 내의 pH는 중성을 약간 초과하며, 리소솜 내부의 pH는 약 5인 산성이다. 따라서, 절단이 산 촉매되는 것인 기 C는 혈장 내 속도보다 리소솜 내부에서 여러 자릿수 더 빠른 속도로 절단될 것이다. 적합한 산-감수성 기의 예는 문헌 [Shen et al., US 4,631,190 (1986); Shen et al., US 5,144,011 (1992); Shen et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 102, 1048-1054 (1981) 및 Yang et al., Proc. Natl Acad. Sci (USA), 85, 1189-1193 (1988)]에 기재된 바와 같은 시스-아코니틸 아미드 및 히드라존을 포함하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
또 다른 실시양태에서, 기 C는 디술피드이다. 디술피드는 티올-디술피드 교환 메카니즘에 의해, 주위 티올 농도에 의존성인 속도로 절단될 수 있다. 글루타티온 및 다른 티올의 세포내 농도는 그의 혈청 농도보다 더 높기 때문에, 디술피드의 절단 속도는 세포내에서 더 높을 것이다. 추가로, 티올-디술피드 교환의 속도는 디술피드의 입체 및 전자 특징의 조정 (예를 들어, 알킬-아릴 디술피드 대 알킬-알킬 디술피드; 아릴 고리 상에서의 치환 등)에 의해 조정될 수 있으며, 이는 증진된 혈청 안정성 또는 특정한 절단 속도를 갖는 디술피드 연결의 설계를 가능하게 한다. 접합체 내의 디술피드 절단가능한 기에 관한 추가의 개시내용에 대해, 예를 들어 문헌 [Thorpe et al., Cancer Res. 48, 6396-6403 (1988); Santi et al., US 7,541,530 B2 (2009); Ng et al., US 6,989,452 B2 (2006); Ng et al., WO 2002/096910 A1; Boyd et al., US 7,691,962 B2; 및 Sufi et al., US 2010/0145036 A1]을 참조하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 절단가능한 기는, 혈청 내의 프로테아제에 의한 것과 대조적으로, 표적 세포 내부의 프로테아제에 의해 선택적으로 절단되는 펩티드이다. 전형적으로, 절단가능한 펩티드 기는 1 내지 20개의 아미노산, 바람직하게는 1 내지 6개의 아미노산, 보다 바람직하게는 1 내지 3개의 아미노산을 포함한다. 아미노산(들)은 천연 및/또는 비-천연 α-아미노산일 수 있다. 천연 아미노산은 유전자 코드에 의해 코딩되는 것들, 뿐만 아니라 그로부터 유래된 아미노산, 예를 들어 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, 시트룰린, 및 O-포스포세린이다. 이러한 문맥에서, 용어 "아미노산"은 아미노산 유사체 및 모방체를 또한 포함한다. 유사체는 R 기가 천연 아미노산 중에서 발견되는 것이 아닌 것을 제외하고는, 천연 아미노산의 동일한 일반적 H2N(R)CHCO2H 구조를 갖는 화합물이다. 유사체의 예는 호모세린, 노르류신, 메티오닌-술폭시드, 및 메티오닌 메틸 술포늄을 포함한다. 아미노산 모방체는 α-아미노산의 일반적 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만, 그와 유사한 방식으로 기능하는 화합물이다. 아미노산은 유전자 코딩되는 아미노산의 "L" 입체화학, 뿐만 아니라 거울상이성질체 "D" 입체화학의 것일 수 있다.
바람직하게는, 기 C는 프로테아제에 대한 절단 인식 서열인 아미노산 서열을 함유한다. 많은 절단 인식 서열이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Matayoshi et al. Science 247: 954 (1990); Dunn et al. Meth. Enzymol. 241: 254 (1994); Seidah et al. Meth. Enzymol. 244: 175 (1994); Thornberry, Meth. Enzymol. 244: 615 (1994); Weber et al. Meth. Enzymol. 244: 595 (1994); Smith et al. Meth. Enzymol. 244: 412 (1994); 및 Bouvier et al. Meth. Enzymol. 248: 614 (1995)]을 참조하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
세포에 의해 내재화되도록 의도된 것이 아닌 접합체의 경우, 기 C는 표적 조직의 부근에서 세포외 매트릭스에 존재하는 프로테아제, 예를 들어 근처의 사멸 중인 세포에 의해 방출되는 프로테아제 또는 종양-연관 프로테아제에 의해 절단되도록 선택될 수 있다. 예시적인 세포외 종양-연관 프로테아제는 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMP), 티메트 올리고펩티다제 (TOP) 및 CD10이다.
세포에 의해 내재화되도록 설계된 접합체의 경우, 기 C는 바람직하게는 엔도솜 또는 리소솜 프로테아제, 특히 후자에 의한 절단을 위해 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 프로테아제의 비제한적 예는 카텝신 B, C, D, H, L 및 S, 특히 카텝신 B를 포함한다. 카텝신 B는 서열 -AA2-AA1- (여기서 AA1은 염기성 또는 강한 수소 결합 아미노산 (예컨대 리신, 아르기닌, 또는 시트룰린)이고, AA2는 소수성 아미노산 (예컨대 페닐알라닌, 발린, 알라닌, 류신, 또는 이소류신)임), 예를 들어 Val-Cit (여기서 Cit는 시트룰린을 나타냄) 또는 Val-Lys에서의 펩티드를 우선적으로 절단한다. (여기서, 아미노산 서열은 문맥이 달리 명백하게 나타내지 않는 한, H2N-AA2-AA1-CO2H에서와 같이 N에서 C 방향으로 기록되어 있음.) 일부 경우에 절단 속도가 더 느릴 수는 있지만, Lys-Val-Ala, Asp-Val-Ala, Val-Ala, Lys-Val-Cit, 및 Asp-Val-Cit가 또한 카텝신 B에 대한 기질 펩티드 모티프이다. 카텝신-절단가능한 기에 관한 추가의 정보에 대해, 문헌 [Dubowchik et al., Biorg. Med. Chem. Lett. 8, 3341-3346 (1998); Dubowchik et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 8 3347-3352 (1998); 및 Dubowchik et al., Bioconjugate Chem. 13, 855-869 (2002)]을 참조하며; 그의 개시내용은 참조로 포함된다. 펩티딜 링커를 절단하기 위해 이용될 수 있는 또 다른 효소는 Ala-Ala-Asn에서 우선적으로 절단하는 리소솜 시스테인 프로테아제인 레구마인이다.
한 실시양태에서, 기 C는 2개-아미노산 서열 -AA2-AA1- (여기서 AA1은 리신, 아르기닌, 또는 시트룰린이고, AA2는 페닐알라닌, 발린, 알라닌, 류신, 또는 이소류신임)을 포함하는 펩티드이다. 또 다른 실시양태에서, C는 Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Cit-Cit, Val-Lys, Ala-Ala-Asn, Lys, Cit, Ser, 및 Glu로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3개의 아미노산의 서열로 이루어진다.
단일 아미노산으로 이루어진 절단가능한 기 C의 제조 및 설계는 문헌 [Chen et al., US 8,664,407 B2 (2014)]에 개시되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
기 C는 또한 광절단가능한 것, 예를 들어 광에 노출 시에 절단되는 니트로벤질 에테르일 수 있다.
기 C는 항체 Z 또는 유사체 D에 직접 결합될 수 있으며; 즉, 스페이서 XZ 및 XD는 경우에 따라 부재할 수 있다. 예를 들어, 기 C가 디술피드인 경우에, 2개의 황 중 1개는 항체 Z 상의 시스테인 잔기 또는 그의 대용물일 수 있다. 또는, 기 C는 항체의 탄수화물 측쇄 상의 알데히드에 결합된 히드라존일 수 있다. 또는, 기 C는 항체 Z의 리신 ε-아미노 기로 형성된 펩티드 결합일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 이량체 D는 이량체 D 내의 카르복실 또는 아민 기에 대한 펩티딜 결합을 통해 기 C에 직접 결합된다.
존재하는 경우에, 스페이서 XZ는 기 C와 항체 Z 사이의 공간적 분리를 제공하여, 전자가 후자에 의한 항원 결합을 입체적으로 방해하거나 또는 후자가 전자의 절단을 입체적으로 방해하지 않도록 한다. 추가로, 스페이서 XZ는 상승된 용해도 또는 감소된 응집 특성을 접합체에 부여하는데 사용될 수 있다. 스페이서 XZ는 1개 이상의 모듈 절편을 포함할 수 있으며, 이는 임의의 수의 조합으로 조립될 수 있다. 스페이서 XZ에 대한 적절한 절편의 예는
Figure pct00067
및 그의 조합이며,
여기서 아래첨자 g는 0 또는 1이고, 아래첨자 h는 1 내지 24, 바람직하게는 2 내지 4이다. 이들 절편은 하기 예시된 바와 같이 조합될 수 있다.
Figure pct00068
스페이서 XD는 존재하는 경우에 기 C와 이량체 D 사이의 공간적 분리를 제공하여, 후자가 전자의 절단을 입체적으로 또는 전자적으로 방해하지 않도록 한다. 스페이서 XD는 또한 추가의 분자 질량 및 화학적 관능기를 접합체에 도입하도록 기능할 수 있다. 일반적으로, 추가의 질량 및 관능기는 접합체의 혈청 반감기 및 다른 특성에 영향을 미칠 것이다. 따라서, 스페이서 기의 신중한 선택을 통해, 접합체의 혈청 반감기는 조정될 수 있다. 스페이서 XD는 또한 스페이서 XZ의 문맥에 상기 기재된 바와 같이 모듈 절편으로부터 조립될 수 있다.
스페이서 XZ 및/또는 XD는 존재하는 경우에 바람직하게는 각각 Z와 C 또는 D와 C 사이에 4 내지 25개의 원자, 보다 바람직하게는 4 내지 20개의 원자의 선형 분리를 제공한다.
링커는 항체 및 약물을 공유 연결시키는 것 이외에도 다른 기능을 수행할 수 있다. 예를 들어, 링커는 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG) 기를 함유할 수 있으며, 이는 접합 화학 수행 동안 또는 최종 ADC 생성물에서 용해도를 증진시킨다. PEG 기가 존재하는 경우에, 이는 스페이서 XZ 또는 XD 중 어느 하나 또는 둘 다에 혼입될 수 있다. PEG 기 내의 반복 단위의 수는 2 내지 20개, 바람직하게는 4 내지 10개일 수 있다.
스페이서 XZ 또는 XD 중 어느 하나 또는 둘 다는 자기-희생 모이어티를 포함할 수 있다. 자기-희생 모이어티는 (1) 기 C 및 항체 Z 또는 이량체 D에 결합되고, (2) 기 C로부터의 절단이 경우에 따라 항체 Z 또는 이량체 D로부터의 자기-희생 모이어티 결합분리 그 자체를 생성하는 반응 순서를 개시하도록 하는 구조를 갖는 모이어티이다. 다시 말해서, 항체 Z 또는 이량체 D로부터의 원위 부위에서의 반응 (기 C로부터의 절단)은 XZ-Z 또는 XD-D 결합이 또한 파열되도록 한다. 자기-희생 모이어티의 존재는 스페이서 XD의 경우에 바람직하며, 이는 접합체의 절단 후, 스페이서 XD 또는 그의 일부가 계속 이량체 D에 부착되도록 유지되어야 하는 경우에, 후자의 생물학적 활성이 손상될 수 있기 때문이다. 자기-희생 모이어티의 사용은 절단가능한 기 C가 폴리펩티드인 경우에 특히 바람직하며, 이러한 경우에 자기-희생 모이어티는 전형적으로 그에 인접하게 위치한다.
파트너 분자 D 상의 히드록실 또는 아미노 기에 결합된 예시적인 자기-희생 모이어티 (i)-(vii)은 하기 제시되어 있다.
Figure pct00069
자기-희생 모이어티는 점선 a 와 b (또는 점선 b와 c) 사이의 구조이며, 여기서 인접한 구조적 특색부는 문맥을 제공하도록 제시되어 있다. 자기-희생 모이어티 (i) 및 (v)는 이량체 D-NH2에 결합되며 (즉, 이량체 D는 아미노 기를 통해 접합됨), 자기-희생 모이어티 (ii), (iii), 및 (iv)는 이량체 D-OH에 결합된다 (즉, 이량체 D는 히드록실 또는 카르복실 기를 통해 접합됨). 점선 b에서의 (예를 들어, 펩티다제에 의한) 아미드 결합의 절단은 아미드 질소를 아민 질소로서 방출하여, 점선 a에서의 결합의 절단 및 경우에 따라 D-OH 또는 D-NH2의 결과적 방출을 생성하는 반응 순서를 개시한다. 대안적으로, 자기-희생 반응을 촉발하는 절단은 구조 (vi)의 경우에서와 같이, 다양한 유형의 효소에 의해, 예를 들어 β-글루쿠로니다제에 의해 이루어질 수 있다. 일부 경우에, 자기-희생 기는 구조 (vii)에 의해 제시된 바와 같이 탠덤으로 사용될 수 있다. 이러한 경우에, 점선 c에서의 절단은 1,6-제거 반응에 의한 점선 b와 c 사이의 모이어티의 자기-희생, 이어서 고리화-제거 반응에 의한 점선 a와 b 사이의 모이어티의 자기-희생을 촉발한다. 자기-희생 모이어티에 관한 추가의 개시내용에 대해, 문헌 [Carl et al., J. Med. Chem., 24 (3), 479-480 (1981); Carl et al., WO 81/01145 (1981); Dubowchik et al., Pharmacology & Therapeutics, 83, 67-123 (1999); Firestone et al., US 6,214,345 B1 (2001); Toki et al., J. Org. Chem. 67, 1866-1872 (2002); Doronina et al., Nature Biotechnology 21 (7), 778-784 (2003) (erratum, p. 941); Boyd et al., US 7,691,962 B2; Boyd et al., US 2008/0279868 A1; Sufi et al., WO 2008/083312 A2; Feng, US 7,375,078 B2; Jeffrey et al., US 8039,273; 및 Senter et al., US 2003/0096743 A1]을 참조하며; 그의 개시내용은 참조로 포함된다. 바람직한 자기-희생 기는 구조 (i)에 제시된 바와 같은 p-아미노벤질 옥시카르보닐 (PABC) 기이다.
또 다른 실시양태에서, 항체 표적화 모이어티 및 이량체 D는 비-절단가능한 링커에 의해 연결되며, 즉 요소 C는 부재한다. 항체의 분해는 결국 링커를 이량체 D의 생물학적 활성을 방해하지 않는 작은 첨부된 모이어티로 감소시킨다.
접합 기술
본 발명의 접합체는 바람직하게는 먼저 본 발명의 유사체 (하기 화학식에서 D에 의해 나타내어짐) 및 링커 (XD)a(C)c(XZ)b (여기서 XD, C, XZ, a, b, 및 c는 화학식 II에 대해 정의된 바와 같음)를 포함하는 화합물을 제조하여 화학식 III에 의해 나타내어진 유사체-링커 조성물을 형성함으로써 제조된다.
Figure pct00070
여기서 R31은 항체 Z 상의 상보적 관능기와 반응하여 접합체를 형성하기에 적합한 관능기이다. 적합한 기 R31의 예는 아미노, 아지드, 티올, 시클로옥틴,
Figure pct00071
를 포함하고,
여기서 R32는 Cl, Br, F, 메실레이트, 또는 토실레이트이고, R33은 Cl, Br, I, F, OH, -O-N-숙신이미딜, -O-(4-니트로페닐), -O-펜타플루오로페닐, 또는 -O-테트라플루오로페닐이다. 적합한 모이어티 D-(XD)aC(XZ)b-R31의 제조에 일반적으로 사용가능한 화학은 문헌 [Ng et al., US 7,087,600 B2 (2006); Ng et al., US 6,989,452 B2 (2006); Ng et al., US 7,129,261 B2 (2006); Ng et al., WO 02/096910 A1; Boyd et al., US 7,691,962 B2; Chen et al., US 7,517,903 B2 (2009); Gangwar et al., US 7,714,016 B2 (2010); Boyd et al., US 2008/0279868 A1; Gangwar et al., US 7,847,105 B2 (2010); Gangwar et al., US 7,968,586 B2 (2011); Sufi et al., US 2010/0145036 A1; 및 Chen et al., US 2010/0113476 A1]에 개시되어 있으며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직하게는 반응성 관능기 -R31은 -NH2, -OH, -CO2H, -SH, 말레이미도, 시클로옥틴, 아지도 (-N3), 히드록실아미노 (-ONH2) 또는 N-히드록시숙신이미도이다. 특히 바람직한 관능기 -R31은 하기이다.
Figure pct00072
-OH 기는 항체 상의, 예를 들어 아스파르트산 또는 글루탐산 측쇄 상의 카르복시 기와 함께 에스테르화될 수 있다.
-CO2H 기는 -OH 기와 함께 에스테르화되거나 또는 항체 상의 (예를 들어 리신 측쇄 상의) 아미노 기와 함께 아미드화될 수 있다.
N-히드록시숙신이미드 기는 기능적으로 활성화된 카르복실 기이고, (예를 들어, 리신으로부터의) 아미노 기와의 반응에 의해 편리하게 아미드화될 수 있다.
말레이미드 기는 마이클 부가 반응에서, (예를 들어, 시스테인으로부터의, 또는 술프히드릴 관능기를 도입하기 위한 항체의 화학적 변형으로부터의) 항체 상의 -SH 기와 접합될 수 있다. 또는, 2개의 기의 위치는, 말레이미드 기가 부착되도록 변형된 항체 및 -SH 기를 갖는 약물-링커 화합물을 사용하여 역전될 수 있다.
-SH 기를 항체에 도입하는 다양한 기술이 존재할 수 있다. 바람직한 것에서, 항체 내의 리신 잔기의 측쇄에서의 ε-아미노 기를 2-이미노티올란과 반응시켜 유리 티올 (-SH) 기를 도입한다. 티올 기를 말레이미드 또는 다른 친핵체 수용자 기와 반응시켜 접합을 실시할 수 있다.
Figure pct00073
전형적으로, 항체당 2 내지 3개의 티올의 티올화 수준이 달성된다. 대표적인 절차에 대해, 문헌 [Cong et al. 2014]을 참조하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 이량체에 대한 접합을 위한 항체는 이미노티올란과의 반응에 의해 변형된 1개 이상의 리신 잔기 (바람직하게는 2 또는 3개)를 갖는다.
-SH 기는 또한 상기 기재된 것의 "거울상"인 마이클 부가 반응에서 항체가 말레이미드 기를 그에 도입하도록 변형되는 접합에 사용될 수 있다. 항체는 N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)-시클로헥산카르복실레이트 (SMCC) 또는 그의 술폰화 변이체 술포-SMCC를 사용하여 말레이미드 기를 갖도록 변형될 수 있으며, 이들 둘 다의 시약은 시그마-알드리치로부터 입수가능하다.
대안적 접합 기술은 아지드 기를 시클로옥틴의 스트레인드 알킨 결합을 가로질러 부가하여 1,2,3-트리아졸 고리를 형성하는 구리-무함유 "클릭 화학"을 사용한다. 예를 들어, 문헌 [Agard et al., J. Amer. Chem. Soc. 2004, 126, 15046; Best, Biochemistry 2009, 48, 6571]을 참조하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 아지드는 항체 상에 위치하고, 시클로옥틴은 약물 모이어티 상에 위치할 수 있거나, 또는 그 반대의 경우일 수 있다. 바람직한 시클로옥틴 기는 디벤조시클로옥틴 (DIBO)이다. DIBO 기를 갖는 다양한 시약은 오레곤주 유진 소재의 인비트로젠/몰레큘라 프로브스로부터 입수가능하다. 하기 반응은 DIBO 기가 항체 (Ab)에 부착된 경우에 대한 클릭 화학 접합을 예시한다.
Figure pct00074
또 다른 접합 기술은 비-천연 아미노산을 항체에 도입하는 것을 수반하며, 여기서 비-천연 아미노산은 약물 모이어티 내의 반응성 관능기와의 접합을 위한 관능기를 제공한다. 예를 들어, 비-천연 아미노산인 p-아세틸페닐알라닌은 문헌 [Tian et al., WO 2008/030612 A2 (2008)]에 교시된 바와 같이 항체 또는 다른 폴리펩티드에 혼입될 수 있다. p-아세틸페닐알라닌 내의 케톤 기는 링커-약물 모이어티 상의 히드록실아미노 기와의 옥심의 형성을 통한 접합 부위일 수 있다. 대안적으로, 비-천연 아미노산인 p-아지도페닐알라닌은 항체에 혼입되어 상기 논의된 바와 같은 클릭 화학을 통한 접합을 위한 아지드 관능기를 제공할 수 있다. 비-천연 아미노산은 또한 문헌 [Goerke et al., US 2010/0093024 A1 (2010) 및 Goerke et al., Biotechnol. Bioeng. 2009, 102 (2), 400-416]에 교시된 바와 같은 무세포 방법을 사용하여, 항체 또는 다른 폴리펩티드에 혼입될 수 있다. 상기 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 이량체와의 접합체를 제조하는데 사용되는 항체는 바람직하게는 p-아세틸페닐알라닌 또는 p-아지도페닐알라닌, 보다 바람직하게는 p-아세틸페닐알라닌인 비-천연 아미노산에 의해 대체된 1개 이상의 아미노산을 갖는다.
또 다른 접합 기술은 문헌 [Jeger et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995 ("예거")]에 따라, 효소 트랜스글루타미나제 (바람직하게는 박테리아 트랜스글루타미나제 또는 BTG)를 사용한다. BTG는 글루타민의 측쇄 카르복스아미드 (아민 수용자)와, 예를 들어 리신의 ε-아미노 기 또는 5-아미노-n-펜틸 기일 수 있는 알킬렌아미노 기 (아민 공여자) 사이의 아미드 결합을 형성한다. 전형적 접합 반응에서, 하기 제시된 바와 같이, 글루타민 잔기는 항체 상에 위치하며, 알킬렌아미노 기는 링커-약물 모이어티 상에 위치한다.
Figure pct00075
폴리펩티드 쇄 상의 글루타민 잔기의 위치설정은 BTG 매개 아미드교환에 대한 그의 감수성에 대해 큰 효과를 갖는다. 항체 상의 어떠한 글루타민 잔기도 통상적으로 BTG 기질이 아니다. 그러나, 예거는 항체가 탈글리코실화되는 경우 - 글리코실화 부위는 아스파라긴 297 (N297)임 -에, 근처의 글루타민 295 (Q295)가 비차단되어 BTG-반응성으로 됨을 개시하고 있다. 항체는 PNGase F (펩티드-N-글리코시다제 F)로의 처리에 의해 효소적으로 탈글리코실화될 수 있다. 대안적으로, 항체는 N297A 돌연변이를 불변 영역에 도입하여 N297 글리코실화 부위를 제거함으로써 글리코시드 무함유로 합성될 수 있다. 예거는 항체에서의 N297Q 치환이 글리코실화를 제거할 뿐만 아니라, 또한 아민 수용자인 제2 글루타민 잔기 (위치 297)를 도입함을 개시하고 있다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 이량체에 접합되는 항체는 탈글리코실화된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 N297Q 치환을 갖는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 합성후 변형에 의한 또는 N297A 돌연변이를 도입하는 것에 의한 탈글리코실화가 항체당 2개의 BTG-반응성 글루타민 잔기 (위치 295에서, 중쇄당 1개)를 생성하며, N297Q 치환을 갖는 항체가 4개의 BTG-반응성 글루타민 잔기 (위치 295 및 297에서, 중쇄당 2개)를 가질 것임을 인지할 것이다. (항체에서의 아미노산 위치의 넘버링은 문헌 [Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest, 5th ed., Pub. number 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991; 이하 "카바트"]에 제시된 바와 같은 EU 인덱스에 따름).
접합은 또한 문헌 [Levary et al., PLoS One 2011, 6(4), e18342; Proft, Biotechnol. Lett. 2010, 32, 1-10; Ploegh et al., WO 2010/087994 A2 (2010); 및 Mao et al., WO 2005/051976 A2 (2005)]에 교시된 바와 같이 효소 소르타제 A를 사용하여 실시될 수 있다. 소르타제 A 인식 모티프 (전형적으로 LPXTG, 여기서 X는 임의의 천연 아미노산임)는 리간드 Z 상에 위치할 수 있고, 친핵성 수용자 모티프 (전형적으로 GGG)는 화학식 III에서의 기 R31일 수 있거나, 또는 그 반대의 경우일 수 있다.
항체는 또한 문헌 [Zhu et al., mAbs 2014, 6, 1]에 교시된 바와 같이 옥심 형성에 의해 접합 부위로서 기능하는 케토 기가 도입되도록 그의 글리코실 기를 변형함으로써 접합에 적합화될 수 있다. 또 다른 당조작 변형에서, 항체의 글리코실 기는 "클릭 화학"에 의해 접합을 위한 아지드 기가 도입되도록 변형될 수 있다. 문헌 [Huang et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 12308 및 Wang, US 8,900,826 B2 (2014) 및 US 7,807,405 B2 (2010)]을 참조한다.
또 다른 접합 기술은 일반적으로 디술피드 가교로서 지칭될 수 있다: 항체에서의 디술피드 결합을 절단하여 한 쌍의 티올 (-SH) 기를 생성한다. 이어서, 항체를 2개의 티올-반응성 부위를 함유하는 약물-링커 화합물로 처리한다. 티올 기와 2개의 부위의 반응은 재-가교를 실시하며, 이는 일정 방식으로 원래의 디술피드 가교를 재생성하며, 따라서 항체 3차 구조를 보존하고, 약물-링커 모이어티를 부착시킨다. 예를 들어, 문헌 [Burt et al., WO 2013/190292 A2 (2013) 및 Jackson et al., US 2013/0224228 A1 (2013)]을 참조한다.
이량체-링커 화합물
일반적으로, 본 발명의 이량체의 ADC는 이량체 상의 관능기에 부착된 링커를 포함하며, 이러한 링커는 항체에 부착된다. 이용가능한 접합 기술의 다양성을 반영하여, 본 발명의 이량체는 항체에 대한 접합에 적합한 많은 상이한 이량체-링커 화합물로 정교화될 수 있다.
일반적으로, 하기 도면에 예시된 바와 같이 본 발명의 이량체에 대한 링커의 3종의 상이한 부착 방식이 존재한다 (여기서 고리 내의 가변기 및 임의적인 치환기는 단순성을 위해 나타내지 않음).
Figure pct00076
유형 (a) 이량체-링커 화합물에서, 링커의 부착을 위한 관능기는 2개의 이량체 반쪽 사이의 가교 X에 위치한다. 유형 (b) 이량체-링커 화합물에서, 링커는 이민 이중 결합을 가로지르는 부가 생성물로서 부착된다. 유형 (c) 및 (c') 이량체-링커 화합물에서, 링커의 부착을 위한 관능기는 THIQ, AZI, 또는 PBD 이량체 단위의 "외부" 고리에 위치한다.
한 실시양태에서, 유형 (a) 이량체-링커 화합물은 화학식 IIIa에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00077
여기서
T는 자기-희생 기이고;
t는 0 또는 1이고;
AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
u는 0 또는 1이고;
p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 (바람직하게는 2, 3, 4, 또는 8)이고;
r은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
s는 0 또는 1이고;
R31은
Figure pct00078
이고;
X4는 S-S, O 또는 NH이고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, G, Y, 및 이중선
Figure pct00079
는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IIIa에 따른 바람직한 유형 (a) 이량체-링커 화합물은 화학식 IIIa'에 의해 나타내어진다.
Figure pct00080
여기서
X4, T, t, AAa, AAb, p, q, r, s, 및 R31은 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
각각의 R9는 독립적으로 H, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1-4H, (CH2CH2O)1-4(C1-C3 알킬), OH, Cl, F, 또는 Br이고;
R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00081
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00082
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00083
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00084
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
바람직하게는, 화학식 IIIa 및 IIIa'에서, R9는 H이고, X4는 NH이다.
한 실시양태에서, 유형 (b) 이량체-링커 화합물은 화학식 IIIb에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00085
여기서
T, t, AAa, AAb, u, p, q, s, r, 및 R31은 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
X, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, X2, Y, 및 G는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IIIb에 따른 바람직한 유형 (b) 이량체-링커는 화학식 IIIb'에 의해 나타내어진다.
Figure pct00086
즉, 화학식 IIIb'는 아래첨자 u가 1이고, X가
Figure pct00087
인 점에서 화학식 IIIb와 상이하다.
화학식 IIIb에 따른 또 다른 바람직한 유형 (b) 이량체-링커는 화학식 IIIb"에 의해 나타내어진다.
Figure pct00088
여기서
T, t, AAa, AAb, p, q, r, s, 및 R31은 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
각각의 R9는 독립적으로 H, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1-4H, (CH2CH2O)1-4(C1-C3 알킬), OH, Cl, F, 또는 Br이고;
X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00089
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00090
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00091
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00092
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
바람직하게는, 화학식 IIIb"에서, R9는 H이고, X3은 H이다.
바람직하게는, 화학식 IIIb"에서, 모이어티
Figure pct00093
는
Figure pct00094
이다.
유형 (b) 이량체-링커 화합물의 예는 하기를 포함한다.
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
한 실시양태에서, 유형 (c) 이량체-링커 화합물은 화학식 IIIc에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00099
여기서
T, t, AAa, AAb, u, p, q, s, r, 및 R31은 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, Y, X2 및 이중선
Figure pct00100
는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IIIc에 따른 바람직한 유형 (c) 이량체-링커 화합물은 화학식 IIIc'에 의해 나타내어진다.
Figure pct00101
즉, 화학식 IIIc'는 아래첨자 u가 1이고, X가
Figure pct00102
인 점에서 화학식 IIIc와 상이하다.
화학식 IIIc에 따른 또 다른 바람직한 유형 (c) 이량체-링커 화합물은 화학식 IIIc"에 의해 나타내어진다.
Figure pct00103
여기서
X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
디아제핀 고리계 내의 이중선
Figure pct00104
중 적어도 1개는 이중 결합이고;
R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00105
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00106
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00107
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00108
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R9는 H, O(CH2CH2O)1-4H, (CH2CH2O)1-4(C1-C3 알킬), OH, Cl, F, 또는 Br이다.
바람직하게는, 화학식 IIIc"에서, R9는 H이고, X3은 H이다.
바람직하게는, 화학식 IIIc"에서, 모이어티
Figure pct00109
는
Figure pct00110
이다.
유형 (c) 이량체-링커 화합물의 예는 하기를 포함한다.
Figure pct00111
Figure pct00112
유형 (c') 이량체-링커는 바람직하게는 화학식 IIIc"'에 따른다.
Figure pct00113
여기서
X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
T, t, AAa, AAb, u, p, q, s, r, 및 R31은 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
각각의 R50은 독립적으로 H, O(C1-C3 알킬), O(C2-C3 알킬렌), O(C2-C3 알키닐), F, Cl, Br, 또는 CN이다.
화학식 IIIa, IIIb, IIIc 및 IIIc"'에서, 아래첨자 t 및 u가 둘 다 0인 경우에, 링커는 상기 논의된 바와 같은 비-절단가능한 유형의 것이다.
화학식 IIIa, IIIa', IIIa", IIIb, IIIb', IIIb", IIIc, IIIc', IIIc" 및 IIIc"'에서의 R31은 상기 기재된 바와 같은 항체 상의 상보적 관능기와 반응하여 접합을 실시할 수 있는 반응성 관능기이다.
바람직한 실시양태에서, 화학식 IIIa, IIIa', IIIb, IIIb', IIIb", IIIc, IIIc", IIIc' 또는 IIIc"'에서, 기 R31은
Figure pct00114
이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 화학식 IIIa, IIIa', IIIa", IIIb, IIIb', IIIb", IIIc, IIIc' 또는 IIIc"'에서, 기 R31은
Figure pct00115
이다.
화학식 IIIa, IIIa', IIIa", IIIb, IIIb', IIIb", IIIc, IIIc', IIIc" 및 IIIc"'에서, -AAa-[AAb]p-는 그 길이가 p의 값에 의해 결정되는 폴리펩티드 (p가 1인 경우에는 디펩티드, p가 3인 경우에는 테트라펩티드 등)를 나타낸다. AAa는 폴리펩티드의 카르복시 말단에 있고, 그의 카르복실 기는 이량체의 아민 질소 (또는 존재하는 경우에 자기-희생 기 T)와 함께 펩티드 (아미드) 결합을 형성한다. 반대로, 마지막 AAb는 폴리펩티드의 아미노 말단에 있고, 그의 α-아미노 기는 s가 각각 1인지 또는 0인지에 따라 하기와 함께 펩티드 결합을 형성한다.
Figure pct00116
바람직한 폴리펩티드 -AAa-[AAb]p-는 H2N-Val-Cit-CO2H에서와 같이 통상적인 N에서 C 방향으로 기록하여, Val-Cit, Val-Lys, Lys-Val-Ala, Asp-Val-Ala, Val-Ala, Lys-Val-Cit, Ala-Val-Cit, Val-Gly, Val-Gln, 및 Asp-Val-Cit이다. 보다 바람직하게는, 폴리펩티드는 Val-Cit, Val-Lys, 또는 Val-Ala이다. 바람직하게는, 폴리펩티드 -AAa-[AAb]p-는 표적 (암) 세포에서 발견되는 효소, 예를 들어 카텝신, 특히 카텝신 B에 의해 절단가능하다.
0 또는 1인 아래첨자 t에 의해 나타낸 바와 같이, 자기-희생 기 T는 화학식 IIIa, IIIa', IIIa", IIIb, IIIb', IIIb", IIIc, IIIc' 및 IIIc"의 이량체-링커 화합물에 임의로 존재한다. 존재하는 경우에, 자기-희생 기 T는 바람직하게는 그 구조가 하기에 제시되어 있는 p-아미노벤질 옥시카르보닐 (PABC) 기이며, 여기서 별표 (*)는 PABC의 말단이 이량체의 아민 질소와 결합된 것을 나타내고, 파상선 (
Figure pct00117
)은 폴리펩티드 -AAa-[AAb]p-에 결합된 말단을 나타낸다.
Figure pct00118
접합체의 제조
이러한 일반적 절차는 리신 ε-아미노 기와 2-이미노티올란의 반응, 이어서 상기 기재된 바와 같은 말레이미드-함유 약물-링커 모이어티와의 반응에 의해 유리 티올 기를 항체에 도입하는 것을 기반으로 한다. 처음에, 항체를 50 mM NaCl 및 2 mM 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산 (DTPA)을 함유하는 0.1 M 포스페이트 완충제 (pH 8.0)로 완충제 교환하고, 5-10 mg/mL로 농축시킨다. 티올화는 항체에 대한 2-이미노티올란의 첨가를 통해 달성된다. 첨가될 2-이미노티올란의 양은 예비 실험에 의해 결정될 수 있고, 항체마다 달라진다. 예비 실험에서, 증가하는 양의 2-이미노티올란의 적정액을 항체에 첨가하고, RT (실온, 약 25℃)에서 1시간 동안 항체와 함께 인큐베이션한 후, 항체를 세파덱스(SEPHADEX)™ G-25 칼럼을 사용하여 50 mM HEPES, 5 mM 글리신, 2 mM DTPA, pH 5.5로 탈염시키고, 도입된 티올 기의 수를 디티오디피리딘 (DTDP)과의 반응에 의해 신속하게 결정한다. 티올 기와 DTDP의 반응은 티오피리딘의 유리를 생성하며, 이를 324 nm에서 분광학적으로 모니터링할 수 있다. 단백질 농도 0.5-1.0 mg/mL의 샘플을 전형적으로 사용한다. 280 nm에서의 흡광도를 사용하여 샘플 중 단백질의 농도를 정확하게 결정할 수 있고, 이어서 각각의 샘플의 분취물 (0.9 mL)을 RT에서 10분 동안 0.1 mL DTDP (에탄올 중 5 mM 원액)와 함께 인큐베이션한다. 완충제 단독 플러스 DTDP의 블랭크 샘플을 또한 나란히 인큐베이션한다. 10분 후, 324 nm에서의 흡광도를 측정하고, 티올 기의 수를 19,800 M-1의 티오피리딘에 대한 흡광 계수를 사용하여 정량화한다.
전형적으로 항체당 약 2 내지 3개의 티올 기의 티올화 수준이 바람직하다. 예를 들어, 일부 항체 하에, 이는 15배 몰 과량의 2-이미노티올란을 첨가하고, 이어서 RT에서 1시간 동안 인큐베이션함으로써 달성된다. 이어서, 항체를 목적 몰비의 2-이미노티올란과 함께 인큐베이션한 다음, 접합 완충제 (50 mM HEPES, 5 mM 글리신, 2 mM DTPA, pH 5.5)로 탈염시킨다. 티올화된 물질을 얼음 상에서 유지하면서, 도입된 티올의 수를 상기 기재된 바와 같이 정량화한다.
도입된 티올의 수의 확인 후, 약물 (이량체)-링커 모이어티를 티올당 2.5배 몰 과량으로 첨가한다. 접합 반응이 최종 농도 25% 프로필렌 글리콜 및 5% 트레할로스를 함유하는 접합 완충제 중에서 진행되도록 한다. 흔히, 약물-링커 원액을 100% DMSO 중에 용해시킨다. 원액을 티올화된 항체에 직접 첨가한다.
접합 반응 혼합물을 완만하게 교반하면서 RT에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 10배 몰 과량의 N-에틸 말레이미드 (DMSO 중 100 mM 원액)를 접합 혼합물에 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반하여 임의의 미반응 티올을 차단한다.
이어서, 샘플을 0.2 μ 필터를 통해 여과한다. 물질을 TFF 비바플로우 50 사토리우스 30 MWCO PES 막을 통해 10 mg/mL 글리신, 20 mg/mL 소르비톨, 15% 아세토니트릴 pH 5.0 (5X TFF 완충제 교환 부피)로 완충제 교환하여 임의의 미반응 약물을 제거한다. 최종 제제화를 TFF에 의해 20 mg/mL 소르비톨, 10 mg/mL 글리신, pH 5.0로 수행한다.
하기 절차는 이량체-링커 화합물의 트랜스글루타미나제 매개 접합에 사용될 수 있으며, 여기서 링커는 아민 공여자로서 작용할 수 있는 아민 기를 갖는다. 항체는 트랜스글루타미나제-반응성 글루타민을 갖는 것, 예를 들어 N297A 또는 N297Q 치환을 갖는 것일 수 있다. 접합을 5:1의 항체:효소의 몰비를 갖는 재조합 박테리아 트랜스글루타미나제에 의해 수행한다. 접합을 50 mM 트리스 완충제, pH 8.0 중에서 표준 프로토콜을 사용하여 수행하고, 37℃에서 밤새 인큐베이션한다. 생성된 접합체를 50 mM 트리스, pH 8.0으로 예비 평형화된 단백질 A 칼럼 상에서 정제한다. 접합체를 0.1 M 시트르산나트륨 완충제, pH 3.5로 용리시킨다. 용리된 분획을 1M 트리스 pH 9.0으로 중화시킨다. 접합된 것을 20 mg/mL 소르비톨, 10 mg/mL 글리신, pH 5.0 중에 제제화할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 기재된 조건 및 방법론이 예시적이고 비-제한적이며, 접합을 위한 다른 접근법이 관련 기술분야에 공지되어 있고 본 발명에 사용가능함을 이해할 것이다.
접합체
한 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 유형 (a) 이량체-링커 화합물로부터 유도되고, 화학식 IVa에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00119
여기서
Ab는 항체이고;
R40은
Figure pct00120
이고;
여기서 Ab에 결합되어 있는 R40의 개방 원자가는 별표 (*)에 의해 나타내고, (CH2)r에 결합되어 있는 R40의 개방 원자가는 파상선 (
Figure pct00121
)에 의해 나타내고;
m은 1, 2, 3, 또는 4이고;
T, t, AAa, AAb, u, p, q, s, r, 및 X4는 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, Y, G, 및 이중선
Figure pct00122
는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IVa에 따른 바람직한 접합체는 화학식 IVa'에 의해 나타내어진다.
Figure pct00123
여기서
Ab, R40, T, t, AAa, AAb, p, q, s, r, 및 X4는 화학식 IIIa에 대해 정의된 바와 같고;
R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00124
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00125
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00126
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00127
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R9는 H, OH, OMe, NH2, NMe2, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, F, Cl, Br, 또는
Figure pct00128
(특히 파라- 이성질체)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 유형 (b) 이량체-링커 화합물로부터 유도되고, 화학식 IVb에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00129
여기서
Ab, R40, m, T, t, AAa, AAb, u, p, q, s, 및 r은 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, Y, G, 및 X는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IVb에 따른 바람직한 접합체는 화학식 IVb'에 의해 나타내어진다.
Figure pct00130
여기서
T, t, AAa, AAb, m, p, q, s, r, R40, 및 Ab는 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, Y, G, 및 X2는 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같다.
즉, 접합체 (IVb')는 아래첨자 u가 1이고, X가
Figure pct00131
인 점에서 접합체 (IVb)와 상이하다.
또 다른 화학식 IVb에 따른 바람직한 접합체는 화학식 IVb"에 의해 나타내어진 구조를 갖는다.
Figure pct00132
여기서
T, t, AAa, AAb, m, p, q, s, r, R40, 및 Ab는 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
X3은 H, OH, OMe, Me 또는 CH2OH이고;
R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00133
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00134
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00135
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00136
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R9는 H, OH, OMe, NH2, NMe2, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, F, Br, Cl, 또는
Figure pct00137
(특히 파라- 이성질체)이다.
바람직하게는, 화학식 IVb'에서, R9는 H이고, X3은 H이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 유형 (c) 이량체-링커 화합물로부터 유도되고, 화학식 IVc에 의해 나타내어질 수 있다.
Figure pct00138
여기서
Ab, R40, m, T, t, AAa, AAb, u, p, q, s, 및 r은 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, Y, X, 및 이중선
Figure pct00139
는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
화학식 IVc에 따른 바람직한 접합체는 화학식 IVc'에 의해 나타내어진다.
Figure pct00140
여기서
Ab, R40, m, T, t, AAa, AAb, p, q, s, 및 r은 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, Y, X2, 및 이중선
Figure pct00141
는 화학식 I에 대해 상기 발명의 내용 섹션에 정의된 바와 같다.
즉, 접합체 (IVc')는 아래첨자 u가 1이고, X가
Figure pct00142
인 점에서 접합체 (IVc)와 상이하다.
화학식 IVc에 따른 또 다른 바람직한 접합체는 화학식 IVc"에 의해 나타내어진 구조를 갖는다.
Figure pct00143
여기서
Ab, R40, m, T, t, AAa, AAb, p, q, s, 및 r은 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
디아제핀 고리계 내의 이중선
Figure pct00144
중 적어도 1개는 이중 결합이고;
R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
Figure pct00145
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00146
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
Figure pct00147
가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
Figure pct00148
가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
R9는 H, OH, OMe, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1- 8Me, F, Cl, 또는 Br이다.
바람직하게는, 화학식 IVc"에서, R9는 H이고, X3은 H이다.
유형 (c') 이량체-링커를 기재로 하는 바람직한 접합체는 화학식 IVc"'에 따른다.
Figure pct00149
여기서
Ab, R40, m, T, t, AAa, AAb, p, q, s, u, 및 r은 화학식 IVa에 대해 정의된 바와 같고;
X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
각각의 R50은 독립적으로 H, O(C1-C3 알킬), O(C2-C3 알킬렌), O(C2-C3 알키닐), F, Cl, Br, 또는 CN이다.
폴리펩티드 -AAa-[AAb]p- 및 자기-희생 기 T에 대한 화학식 IIIa, IIIa', IIIb, IIIb', IIIb", IIIc, IIIc', IIIc" 및 IIIc"'의 이량체 링커에 대해 상기 언급된 바람직한 것은 또한 화학식 IVa, IVa', IVb, IVb', IVc, IVc' 및 IVc"'의 접합체에 적용가능하다.
화학식 IVa, IVb, IVc 및 IVc"'에서, 아래첨자 t 및 u가 둘 다 0인 경우에, 링커는 비-절단가능한 유형의 것이고, 약물을 방출하기 위해 항체 Ab의 분해에 의존한다. 폴리에틸렌 글리콜 성분은 그의 존재가, 예를 들어 접합 동안 약물-링커 화합물의 용해도를 증가시킴으로써 유익하고, 약물의 생물학적 활성을 방해하지 않는 경우에, 임의로 존재할 수 있다 (즉, s는 1임).
제약 조성물
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 제제화된 본 발명의 화합물 또는 그의 접합체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 이는 1종 이상의 추가의 제약 활성 성분, 예컨대 항체 또는 또 다른 약물을 임의로 함유할 수 있다. 제약 조성물은 또 다른 치료제, 특히 또 다른 항암제와의 조합 요법으로 투여될 수 있다.
제약 조성물은 1종 이상의 부형제를 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 담체, 표면 활성제, 증점제 또는 유화제, 고체 결합제, 분산 또는 현탁 보조제, 가용화제, 착색제, 향미제, 코팅, 붕해제, 윤활제, 감미제, 보존제, 등장화제, 및 그의 조합을 포함한다. 적합한 부형제의 선택 및 사용은 문헌 [Gennaro, ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 2003)]에 교시되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
바람직하게는, 제약 조성물은 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의한) 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척수 또는 표피 투여에 적합하다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물은 이를 불활성화시킬 수 있는 산 및 다른 천연 조건의 작용으로부터 이를 보호하기 위한 물질로 코팅될 수 있다. 어구 "비경구 투여"는 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하며, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 대안적으로, 제약 조성물은 비-비경구 경로, 예컨대 국소, 표피 또는 점막 투여 경로를 통해, 예를 들어 비강내로, 경구로, 질로, 직장으로, 설하로 또는 국소로 투여될 수 있다.
제약 조성물은 멸균 수용액 또는 분산액 형태일 수 있다. 이들은 또한 마이크로에멀젼, 리포솜, 또는 높은 약물 농도를 달성하기에 적합한 다른 정렬된 구조로 제제화될 수 있다. 조성물은 또한 투여 전에 물 중 재구성을 위해, 동결건조물 형태로 제공될 수 있다.
단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 대상체 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이며, 일반적으로 치료 효과를 생성하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 100 퍼센트 중, 이러한 양은 제약상 허용되는 담체와 조합하여 약 0.01 퍼센트 내지 약 99 퍼센트의 활성 성분, 바람직하게는 약 0.1 퍼센트 내지 약 70 퍼센트, 가장 바람직하게는 약 1 퍼센트 내지 약 30 퍼센트의 활성 성분 범위일 것이다.
투여 요법은 치료 반응을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 시간 경과에 따라 투여될 수 있거나, 또는 용량이 상황의 위급성에 의해 지시된 바와 같이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 비경구 조성물을 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. "투여 단위 형태"는 치료될 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합화된 물리적 이산 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 목적하는 치료 반응을 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을, 필요한 제약 담체와 함께 함유한다.
투여량은 숙주 체중의 약 0.0001 내지 100 mg/kg, 보다 통상적으로 0.01 내지 5 mg/kg 범위이다. 예를 들어 투여량은 0.3 mg/kg 체중, 1 mg/kg 체중, 3 mg/kg 체중, 5 mg/kg 체중 또는 10 mg/kg 체중 또는 1-10 mg/kg, 또는 대안적으로 0.1 내지 5 mg/kg 범위 내일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 1주에 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 1개월에 1회, 3개월마다 1회, 또는 3 내지 6개월마다 1회 투여이다. 바람직한 투여 요법은 하기 투여 스케줄: (i) 6회 투여에 대해 4주마다, 이어서 3개월마다; (ii) 3주마다; (iii) 3 mg/kg 체중으로 1회, 이어서 3주마다 1 mg/kg 체중 중 1종을 사용하여, 1 mg/kg 체중 또는 3 mg/kg 체중을 정맥내 투여하는 것을 포함한다. 일부 방법에서, 투여량은 약 1-1000 μg/mL, 및 일부 방법에서는 약 25-300 μg/mL의 혈장 항체 농도가 달성되도록 조정된다.
"치료 유효량"의 본 발명의 화합물은 바람직하게는 질환 증상의 중증도에서의 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 및 지속기간에서의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 생성한다. 예를 들어, 종양-보유 대상체의 치료를 위해, "치료 유효량"은 바람직하게는 종양 성장을 비치료 대상체에 비해 적어도 약 20%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 80% 억제한다. 치료 유효량의 치료 화합물은 전형적으로 인간이지만 또 다른 포유동물일 수 있는 대상체에서 종양 크기를 감소시키거나 또는 증상을 달리 호전시킬 수 있다.
제약 조성물은 임플란트, 경피 패치, 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함한 제어 또는 지속 방출 제제일 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조한다.
치료 조성물은 의료 디바이스 예컨대 (1) 무바늘 피하 주사 디바이스 (예를 들어, US 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824; 및 4,596,556); (2) 마이크로-주입 펌프 (US 4,487,603); (3) 경피 디바이스 (US 4,486,194); (4) 주입 장치 (US 4,447,233 및 4,447,224); 및 (5) 삼투 디바이스 (US 4,439,196 및 4,475,196)를 통해 투여될 수 있으며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 생체내에서 적절한 분포가 보장되도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 치료 화합물이 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 것을 보장하기 위해, 이들은 리포솜 중에 제제화될 수 있으며, 이는 특이적 세포 또는 기관에 대한 선택적 수송을 증진하기 위한 표적화 모이어티를 추가적으로 포함할 수 있다. 예를 들어, US 4,522,811; 5,374,548; 5,416,016; 및 5,399,331; 문헌 [V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685; Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038; Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180; Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134; Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090; Keinanen and Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; 및 Killion and Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 참조한다.
용도
본 발명의 화합물 또는 그의 접합체는 질환 예컨대 비제한적으로 두부, 경부, 비강, 부비동, 비인두, 구강, 구인두, 후두, 하인두, 타액선, 및 부신경절종의 종양을 포함한 두경부암; 간 및 담도계의 암, 특히 간세포성 암종; 장암, 특히 결장직장암; 난소암; 소세포 및 비소세포 폐암 (SCLC 및 NSCLC); 유방암 육종, 예컨대 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 배아성 횡문근육종, 평활근육종, 신경섬유육종, 골육종, 활막 육종, 지방육종, 및 폐포 연부 육종; 백혈병 예컨대 급성 전골수구성 백혈병 (APL), 급성 골수 백혈병 (AML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 및 만성 골수 백혈병 (CML); 중추 신경계의 신생물, 특히 뇌암; 다발성 골수종 (MM), 림프종 예컨대 호지킨 림프종, 림프형질세포양 림프종, 여포성 림프종, 점막-연관 림프성 조직 림프종, 외투 세포 림프종, B-계통 대세포 림프종, 버킷 림프종, 및 T-세포 역형성 대세포 림프종을 포함한 과다증식성 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 임상적으로, 본원에 기재된 방법의 실시 및 조성물의 사용은 암성 성장의 크기 또는 수에서의 감소 및/또는 연관 증상에서의 감소 (적용가능한 경우)를 생성할 것이다. 병리학적으로, 본원에 기재된 방법의 실시 및 조성물의 사용은 병리학적 관련 반응, 예컨대 암 세포 증식의 억제, 암 또는 종양의 크기에서의 감소, 추가 전이의 예방, 및 종양 혈관신생의 억제를 생성할 것이다. 이러한 질환을 치료하는 방법은 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 조합물을 투여하는 것을 포함한다. 방법은 필요에 따라 반복될 수 있다. 특히, 암은 신암, 폐암, 위암, 또는 난소암일 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 그의 접합체는 항체, 알킬화제, 혈관신생 억제제, 항대사물, DNA 절단제, DNA 가교제, DNA 삽입제, DNA 작은 홈 결합제, 에네디인, 열 쇼크 단백질 90 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제, 면역조정제, 미세관 안정화제, 뉴클레오시드 (퓨린 또는 피리미딘) 유사체, 핵 유출 억제제, 프로테아솜 억제제, 토포이소머라제 (I 또는 II) 억제제, 티로신 키나제 억제제, 및 세린/트레오닌 키나제 억제제를 포함한 다른 치료제와 조합되어 투여될 수 있다. 구체적 치료제는 아달리무맙, 안사미토신 P3, 아우리스타틴, 벤다무스틴, 베바시주맙, 비칼루타미드, 블레오마이신, 보르테조밉, 부술판, 칼리스타틴 A, 캄프토테신, 카페시타빈, 카르보플라틴, 카르무스틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 클라드리빈, 시타라빈, 크립토피신, 다카르바진, 다사티닙, 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 두오카르마이신, 디네마이신 A, 에포틸론, 에토포시드, 플록수리딘, 플루다라빈, 5-플루오로우라실, 게피티닙, 겜시타빈, 이필리무맙, 히드록시우레아, 이마티닙, 인플릭시맙, 인터페론, 인터류킨, β-라파콘, 레날리도미드, 이리노테칸, 메이탄신, 메클로레타민, 멜팔란, 6-메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미토마이신 C, 닐로티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 프로카르바진, 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA), 6-티오구아니딘, 티오테파, 테니포시드, 토포테칸, 트라스투주맙, 트리코스타틴 A, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 및 빈데신을 포함한다.
실시예
본 발명의 실시는 하기 실시예를 참조하여 더욱 이해될 수 있으며, 이는 제한이 아니라 예시로서 제공된다. 하기 일반적 절차는 예시적이며, 여기서 관련 기술분야의 통상의 기술자는 대안적이지만 등가인 방법이 사용될 수 있음을 이해한다.
일부 1H NMR 스펙트럼은 브루커 600, 500, 또는 400 MHz 기기 상에서 실행하였으며, 화학적 이동은 테트라메틸실란 (δ = 0.0)을 참조하여 ppm (δ) 단위로 보고하였다. 일반적으로, 증발은 감압 하에 수행하였다.
이들 2종의 LC/MS 분석 방법은 예시적이다:
A 칼럼: 워터스 BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 물, 0.05% TFA (트리플루오로아세트산) 포함; 이동상 B: 아세토니트릴, 0.05%TFA 포함; [1.5분 내에 2-98%와, 3분 실행 시간]; 온도: 40℃; 유량: 0.8 mL/분 및 220 또는 254nm에서의 UV 검출기 설정.
B 칼럼: 페노메넥스루나, 2.0 x 30 mm, 3-μm 입자; 이동상 A: 10% 아세토니트릴/90% 물, 0.1%TFA 포함; 이동상 B: 90% 아세토니트릴/10% 물, 0.1%TFA 포함; [2분 내에 0-100%와, 4분 실행 시간]; 온도: 40℃; 유량: 1.0 mL/분 및 220 또는 254nm에서의 UV 검출기 설정.
실시예 1 - 중간체 화합물 6
본 실시예 및 도 1은 본 발명의 이량체의 제조에 사용되는 중간체 화합물 6의 합성에 관한 것이다.
4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일 클로라이드 1을 상응하는 메틸 에스테르로부터 하기와 같이 제조하였다: 테트라히드로푸란 (THF, 350 mL) 중 메틸 4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조에이트 (하베 켐, 15 g, 47.3 mmol)의 용액에 수성 NaOH의 용액 (56.7 mL, 142 mmol, 2.5M)을 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온 (RT)으로 냉각시킨 다음, 진공 하에 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 층을 수성 HCl (6 N)을 사용하여 pH 2로 산성화시켰다. 생성된 황색 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조산을 수득하였다 (14.32 g, 100% 수율).
LCMS (M+H) = 304.08.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ 7.60 (s, 1H), 7.53 - 7.45 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 3H), 7.29 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 3.98 (s, 3H).
THF (150 mL) 중 상기 니트로벤조산 (3.5 g, 11.54 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (1.212 mL, 13.85 mmol)에 이어서 N,N-디메틸포름아미드 (DMF, 50 uL)를 적가하였다. 생성된 용액을 RT에서 2시간 동안 교반한 후, 이것을 진공 하에 농축시켜 산 클로라이드 1을 황색 고체로서 수득하였다.
산 클로라이드 1을 THF (35 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 THF (80 mL) 중 (S)-벤질 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실레이트 p-톨루엔술폰산 염 2 (액셀라, 5.58 g, 12.70 mmol) 및 트리에틸아민 (4.83 mL, 34.6 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 4시간 교반한 후, 물로 켄칭하고, 농축시켜 THF를 제거하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3에 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g 칼럼, 15분 내에 0%에서 100% EtOAc/디클로로메탄 (DCM)의 구배)를 사용하여 정제하여 에스테르 3을 수득하였다 (6.25 g, 98% 수율).
LCMS (M+H) = 553.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.95 - 7.72 (m, 1H), 7.57 - 7.35 (m, 5H), 7.34 - 7.0 (m, 8H), 7.14 - 6.98 (m, 1H), 6.94 - 6.69 (m, 1H), 5.39 - 5.19 (m, 2H), 5.19 - 5.08 (m, 1H), 4.99 (q, J=12.4 Hz, 1H), 4.75 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4.65 - 4.40 (m, 2H), 4.28 (d, J=15.6 Hz, 1H), 3.86 (br. s., 3H), 3.71 (s, 1H), 3.50 - 3.18 (m, 1H).
MeOH (50 mL) 중 에스테르 3 (6.25 g, 11.31 mmol), 아연 (4.44 g, 67.9 mmol), 및 NH4Cl (7.26 g, 136 mmol)의 현탁액을 50℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각시키고, MeOH로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc, DCM 및 MeOH로 연속적으로 세척하면서 셀라이트(CELITE)™의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (120 g 칼럼, 15분 내에 0%에서 100% EtOAc/DCM의 구배)를 사용하여 정제하여 디온 4를 수득하였다 (4.5 g, 96% 수율).
LCMS (M+H) = 415.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.49 - 7.40 (m, 4H), 7.32 (br. s., 6H),, 6.45 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 5.13 (d, J=15.4 Hz, 1H), 4.47 (d, J=15.2 Hz, 1H), 4.21 (t, J=6.7 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.52 (dd, J=15.4, 7.0 Hz, 1H), 3.02 (dd, J=15.4, 6.4 Hz, 1H).
DMF (54.3 ml) 중 디온 4 (4.5 g, 10.86 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시킨 후, NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 0.54 g, 13.57 mmol)를 배치식으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반한 후, (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (SEM-Cl, 2.31 ml, 13.03 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 RT로 가온하고, 물을 사용하여 1시간 동안 교반한 후, 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g 칼럼, 15분 내에 0%에서 50% EtOAc/DCM의 구배)를 사용하여 정제하여 SEM-디온 5를 수득하였다 (4.60 g, 78% 수율).
LCMS (M+H) = 545.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.59 - 7.41 (m, 2H), 7.40 - 7.21 (m, 9H), 5.43 (d, J=9.9 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 5.14 (d, J=15.2 Hz, 1H), 4.50 (d, J=9.7 Hz, 1H), 4.41 (d, J=15.2 Hz, 1H), 4.33 - 4.16 (m, 1H), 4.13 (d, J=7.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.82 - 3.46 (m, 3H), 3.06 - 2.84 (m, 1H), 1.26 (t, J=7.2 Hz, 1H), 0.97 (ddd, J=9.9, 6.8, 2.6 Hz, 2H), 0.10 - 0.01 (m, 9H).
EtOH (10 mL) 중 SEM-디온 5 (4.68 g, 8.59 mmol) 및 Pd/C (10%, 0.457 g)의 현탁액을 RT에서 H2의 풍선 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트™ 패드를 통해 여과하고, EtOH로 세척하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (120 g 칼럼, 15분 내에 0%에서 100% EtOAc/DCM의 구배)를 사용하여 정제하여 화합물 6을 수득하였다 (3.23 g, 83% 수율).
LCMS (M+H) = 455.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.21 (m, 5H), 5.97 (s, 1H), 5.46 (d, J=9.7 Hz, 1H), 5.18 (d, J=15.4 Hz, 1H), 4.72 (d, J=9.7 Hz, 1H), 4.58 - 4.24 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.83 - 3.44 (m, 3H), 3.14 - 2.88 (m, 1H), 0.99 (t, J=8.0 Hz, 2H), 0.14 (s, 9H).
실시예 2 - 중간체 화합물 13
본 실시예 및 도 2는 본 발명의 이량체의 제조에 유용한 추가의 중간체 화합물의 합성에 관한 것이다.
산 클로라이드 1을 THF (30 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 THF (20 mL) 중 카르복실레이트 7 (문헌 [Borzilleri et al., WO 2014/047024 A1 (2014)], 1.6 g, 6.39 mmol) 및 NEt3 (2.67 mL, 19.2 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 용액을 RT로 천천히 가온하고, 30분 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 농축시켜 THF를 제거하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3에 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g 칼럼, 15분 내에 0%에서 100% EtOAc/헥산의 구배)를 사용하여 정제하여 에틸 에스테르 8을 수득하였다 (2.66 g, 78% 수율).
LCMS (M+H) = 536.4.
MeOH (10 mL) 중 에틸 에스테르 8 (1.75 g, 3.55 mmol), 아연 (1.394 g, 21.32 mmol), 및 NH4Cl (2.281 g, 42.6 mmol)의 현탁액을 50℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 방대한 양의 DCM 중 20% MeOH로 세척하면서 셀라이트™의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시켜 아미노-디온 9를 백색 고체로서 수득하였다 (1.25 g, 2.90 mmol, 82% 수율).
LCMS (M+H) = 430.3.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.26 (br. s., 1H), 7.53 - 7.31 (m, 6H), 7.24 (s, 1H), 6.92 (d, J=7.9 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.50 - 6.41 (m, 2H), 5.07 (d, J=4.6 Hz, 2H), 5.00 - 4.88 (m, 2H), 4.84 (d, J=15.0 Hz, 1H), 4.09 (d, J=15.0 Hz, 1H), 4.01 (t, J=6.9 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.12 (dd, J=15.3, 7.6 Hz, 1H), 2.78 (dd, J=15.2, 6.2 Hz, 1H).
DCM (10 mL) 중 아미노-디온 9 (1.6 g, 3.73 mmol) 및 트리틸 클로라이드 (1.246 g, 4.47 mmol)의 용액에 NEt3 (0.779 mL, 5.59 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 3시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g 칼럼, 0-50% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하여 트리틸-디온 10을 백색 고체로서 수득하였다 (2.2 g, 3.27 mmol, 88% 수율).
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 8.01 (s, 1H), 7.50 - 7.12 (m, 22H), 6.77 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.47 - 6.34 (m, 2H), 6.16 (dd, J=8.1, 2.4 Hz, 1H), 5.02 (br. s., 1H), 4.91 (d, J=15.2 Hz, 1H), 4.18 - 4.09 (m, 2H), 4.05 (t, J=6.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.28 (dd, J=15.4, 7.7 Hz, 1H), 2.75 (dd, J=15.4, 6.4 Hz, 1H).
0℃에서 DMF (15 mL) 중 트리틸-디온 10 (2.2 g, 3.27 mmol)의 용액에 NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 0.236 g, 3.93 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 후, SEM-Cl (0.697 ml, 3.93 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 이것을 염수로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물 혼합물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g 칼럼, 0-50% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하여 SEM-디온 11을 수득하였다 (2.1 g, 2.62 mmol, 80% 수율).
LCMS (M-트리틸) = 560.4.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.48 - 7.42 (m, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 9H), 7.31 - 7.18 (m, 11H), 6.77 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.38 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.19 (dd, J=8.3, 2.3 Hz, 1H), 5.45 (d, J=9.7 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 5.08 - 4.92 (m, 2H), 4.49 (d, J=9.7 Hz, 1H), 4.13 - 4.08 (m, 1H), 4.02 (d, J=15.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.71 (td, J=9.6, 7.0 Hz, 1H), 3.61 (td, J=9.6, 7.2 Hz, 1H), 3.36 (dd, J=15.5, 8.3 Hz, 1H), 2.72 (dd, J=15.5, 6.5 Hz, 1H), 1.05 - 0.92 (m, 2H), 0.06 (s, 9H).
EtOAc (20 mL) 중 SEM-디온 11 (950mg, 1.18 mmol) 및 Pd/C (10%, 200 mg)의 현탁액을 H2의 풍선 하에 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트™의 패드를 통해 여과하고, EtOAc에 이어서 MeOH로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g 칼럼, 0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하여 화합물 12를 수득하였다 (510 mg, 1.08 mmol, 90% 수율).
LCMS (M+H) = 470.2.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.33 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.09 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 2H), 6.02 (s, 1H), 5.47 (d, J=9.7 Hz, 1H), 5.11 (d, J=15.2 Hz, 1H), 4.71 (d, J=9.7 Hz, 1H), 4.29 (d, J=15.2 Hz, 1H), 4.22 (dd, J=7.7, 6.5 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.79 - 3.60 (m, 4H), 3.47 (dd, J=15.4, 7.7 Hz, 1H), 2.90 (dd, J=15.5, 6.4 Hz, 1H), 1.09 - 0.94 (m, 2H), 0.05 (s, 9H).
0℃에서 THF (3 mL) 중 화합물 12 (500 mg, 1.065 mmol)의 용액에 NEt3 (0.742 mL, 5.32 mmol)을 첨가하였다. 알릴 클로로포르메이트 12a (513 mg, 4.26 mmol)를 적가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, MeOH (5mL) 및 수성 LiOH (2 mL, 2N)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 실리카 겔 크로마토그래피 (24 g 칼럼, 0-10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 화합물 13을 백색 고체로서 수득하였다 (440 mg, 0.795 mmol, 74.6% 수율).
LCMS (M+H) = 554.2.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.38 - 7.30 (m, 3H), 7.27 - 7.21 (m, 2H), 6.96 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.02 - 5.89 (m, 1H), 5.44 (d, J=9.8 Hz, 1H), 5.35 (dq, J=17.2, 1.5 Hz, 1H), 5.26 (dq, J=10.4, 1.3 Hz, 1H), 5.10 (d, J=15.4 Hz, 1H), 4.70 (d, J=9.8 Hz, 1H), 4.66 (d, J=5.1 Hz, 2H), 4.40 (d, J=15.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.79 - 3.58 (m, 2H), 3.51 (dd, J=15.6, 7.3 Hz, 1H), 2.96 (dd, J=15.5, 6.4 Hz, 1H), 1.07 - 0.95 (m, 2H), 0.03 (s, 9H).
실시예 3 - 추가의 중간체
본 실시예 및 도 3 및 4는 본 발명의 이량체의 합성에 유용한 추가의 중간체의 제조에 관한 것이다.
플라스크에 0℃에서 DCM (100 mL) 중 5-메톡시-2-니트로-4-((트리이소프로필실릴)옥시)벤조산 14 (CAS 등록 번호 1430738-03-6, 9.0 g, 24.36 mmol) 및 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 10.19 g, 26.8 mmol)를 채웠다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, N,N-디이소프로필에틸 아민 (DIEA 또는 DIPEA, 4.68 mL, 26.8 mmol) 및 이소퀴놀린 15 (CAS 등록 번호 215928-81-7, 7.43 g, 26.8 mmol)로 처리하였다. 반응물을 0℃에서 3시간 동안 유지한 다음, RT에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 및 DCM에 부었다. 유기 상을 수집하고, 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 추가로 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 헥산 중 10%-30% EtOAc로 용리시키면서 정제하였다. 생성물을 수집하고, 농축시켜 아미드 16을 담황갈색 오일로서 수득하였다 (10.15g, 66% 수율).
LCMS M+H=629.65.
MeOH (200 mL) 중 아미드 16 (10.1 g, 16.06 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시키고, NH4Cl (4.29 g, 80 mmol) 및 아연 분진 (5.25 g, 80 mmol)을 첨가하였다. 생성된 녹색 현탁액을 0℃에서 45분 동안 교반한 다음, RT로 밤새 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 셀라이트™ 패드를 통해 (MeOH로 세척하면서) 여과하고, 여과물을 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 DCM에 녹이고, 실리카 겔 패드 상에 로딩하였다. 이를 50% EtOAc 및 헥산으로 플러싱하여 아닐린 17을 수득하였다 (8.02g, 83% 수율).
LCMS M+H=599.35.
아닐린 17 (2500 mg, 4.17 mmol)을 DCM (50 mL) 중에 용해시키고, 피리딘 (0.878 mL, 10.85 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, 알릴 클로로포르메이트 12a (0.579 mL, 5.43 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 1시간 동안 유지한 다음, RT로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 및 DCM에 부었다. 혼합물을 DCM으로 추출하고, 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 헥산 중 10%-50% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 카르바메이트 18을 수득하였다 (2.5g, 88% 수율).
LCMS M+H=683.40.
카르바메이트 18 (1.372g, 2.009 mmol)을 MeOH (20 mL) 중에 용해시켰다. MeOH 중 10% 농도의 HCl (2 mL, 6.58 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 숙성시키고, 물 중 NaHCO3 (0.591 g, 7.03 mmol)으로 켄칭하였다. 혼합물을 물로 희석하고, DCM으로 4x 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 10-50% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하여 알콜 19를 수득하였다 (963mg, 84% 수율).
LCMS M+H=569.25.
옥살릴 클로라이드 (2.0M, 1.450 mL, 2.90 mmol)를 DCM (30 mL) 중에 용해시킨 다음, 혼합물을 드라이 아이스/아세톤 조에서 -78℃로 냉각시켰다. 여기에 DMSO (0.515 mL, 7.25 mmol, 첨가 동안의 동결을 방지하기 위해 ~2mL DCM 중에 용해됨)를 첨가하고, 온도를 -78℃에서 유지하였다. 20분 후, DCM (10 mL) 중에 용해된 알콜 19 (1.65 g, 2.90 mmol)를 반응물에 첨가하였다. 이를 추가로 30분 동안 교반되도록 하고, 이어서 NEt3 (2.022 mL, 14.50 mmol)을 첨가하였다. 10분 후, 반응물을 RT로 가온되도록 하였다. 이를 포화 NH4Cl로 켄칭하고, DCM (2x)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 헥산 중 30%-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하였다. 생성물을 수집하고, 농축시켜 아미날 20을 백색 고체로서 수득하였다 (1.51g, 92% 수율).
LCMS M+H = 567.30.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.39 - 7.24 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.75 (dd, J=11.2, 5.6 Hz, 1H), 5.31 (dd, J=9.5, 4.0 Hz, 1H), 5.22 - 5.07 (m, 2H), 4.84 (d, J=15.8 Hz, 1H), 4.64 - 4.49 (m, 2H), 4.44 (d, J=5.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.77 - 3.61 (m, 1H), 3.28 - 3.01 (m, 3H), 1.34 - 1.18 (m, 3H), 1.09 (dd, J=7.4, 2.6 Hz, 18H).
아미날 20 (776 mg, 1.369 mmol)을 DCM (12 mL) 중에 용해시키고, 2,6-루티딘 (0.638 mL, 5.48 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 빙조에서 냉각시키고, tert-부틸디메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (TBSOTf, 0.943 mL, 4.11 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 숙성시키고, DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 2x 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 10-30% EtOAc/ 헥산으로 용리시키면서 정제하여 실릴 에테르 21을 수득하였다 (907.6 mg, 1.333 mmol, 97% 수율). 1H NMR은 정제된 물질이 ~0.25 당량 2,6-루티딘 (~4 중량%)으로 오염되었음을 나타내었지만, 이를 어떠한 추가 정제도 없이 사용하였다.
LCMS M+H = 681.25.
실릴 에테르 21 (907 mg, 1.332 mmol)을 DMF (5 ml) 및 물 (0.1 ml) 중에 용해시켰다. 아세트산리튬 (88 mg, 1.332 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 숙성시켰다. 대부분의 DMF를 질소의 스트림 하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 0.1M 시트르산으로 2x 세척한 다음, 염수로 1회 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 30-70% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하여 1H NMR에 의하면 약간의 EtOAc (대략 1.3 당량; 수율은 EtOAc를 해명하도록 조정됨)를 함유하는 페놀 22를 수득하였다 (707.4 mg, 1.107 mmol, 83% 수율).
LCMS M+H = 525.10.
이제 도 4로 전환하면, 화합물 17 (2.1g, 3.51 mmol)을 DCM (30 mL) 중에 용해시키고, 피리딘 (0.3 mL, 3.71 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 4-니트로페닐 카르보노클로리데이트 23 (0.707 g, 3.51 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 7분 동안 숙성시켰다. DMF (3 mL) 중 화합물 24 (CAS 등록 번호 1343407-91-9, 1.323 g, 3.51 mmol) 및 DIEA (0.750 mL, 4.29 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 회전 증발기 상에 배치하여 DCM을 제거하였다. 20분 후, DMF를 질소의 스트림 하에 증발시킨 다음, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 헥산 중 10-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 화합물 25를 수득하였다 (1.579 g, 1.575 mmol, 44.9% 수율).
LCMS M+H=1002.50.
MeOH (14.4 ml) 중 화합물 25 (1.579g, 1.575 mmol)의 용액을 MeOH 중 10% 농도의 HCl (1.6 ml, 5.27 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 30분 동안 숙성시키고, 포화 NaHCO3으로 켄칭하고, 클로로포름 (3x)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제를 위해 동일한 반응의 또 다른 배치 (0.816 g의 화합물 25로 출발함)와 합하였다. 합한 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 20-100% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하여 카르바메이트 26을 수득하였다 (1.7412 g, 1.961 mmol, 82% 수율).
LCMS M+H=888.30.
10 mL DCM 중 옥살릴 클로라이드의 용액 (2.0M, 1.00 mL, 2.000 mmol)을 -78℃로 냉각시켰다. 5mL DCM 중 DMSO (0.348 mL, 4.90 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 10분 동안 숙성시켰다. 5mL DCM 중 카르바메이트 26 (1741.2 mg, 1.961 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 15분 동안 다시 숙성시켰다. NEt3 (1.366 mL, 9.80 mmol)을 적가하고; 혼합물을 동일한 온도에서 5분 동안 숙성시킨 다음, 냉각 조를 제거하고, 혼합물을 RT로 가온되도록 하였다. 혼합물을 NH4Cl 용액으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 50-80% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하여 화합물 27을 수득하였다 (1376.7 mg, 1.554 mmol, 79% 수율).
LCMS M+H=886.30.
화합물 27 (1045 mg, 1.179 mmol)을 DCM (10 ml) 중에 용해시키고, 2,6-루티딘 (0.549 ml, 4.72 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 빙조에서 냉각시키고, tert-부틸디메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (0.813 ml, 3.54 mmol)를 첨가하였다. 1시간 후, 혼합물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 20-100% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하였다. 약간 혼합된 분획을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 50% EtOAc/헥산 (등용매)으로 용리시키면서 다시 정제하였다. 순수한 분획을 합하여 화합물 28을 수득하였다 (676.9 mg, 0.677 mmol, 57.4% 수율).
LCMS M+H=1000.30.
DMF (5 mL) 및 물 (0.1 mL) 중 화합물 28 (676 mg, 0.676 mmol)의 용액을 LiOAc (44.6 mg, 0.676 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 밤새 숙성시키고, 용매를 질소의 스트림 하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc와 0.1M 시트르산 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 0.1M 시트르산으로 2회 세척하고, 염수로 1회 세척한 다음, Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (바이오타지)에 의해 50-100% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하여 화합물 29를 수득하였다 (543.6 mg, 0.644 mmol, 95% 수율).
LCMS M+H=844.35.
실시예 4 - PABC 기를 갖는 링커
본 실시예 및 도 5는 PABC 자기-희생 기를 갖는 링커에 관한 것이다.
DMF (2 ml) 및 THF (8 mL) 중 화합물 30 (문헌 [Firestone et al. US 6,124,345 B1 (2001), Example 57]; 0.75 g, 1.246 mmol)의 용액에 디에틸아민 (2.81 ml, 26.9 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 RT에서 1.5시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 조 생성물을 DCM으로 연화처리하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 31을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (M+H) = 380.2.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.06 (s, 1H), 8.15 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.56 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.26 (d, J=8.3 Hz, 2H), 6.00 (t, J=5.4 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.13 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.56 - 4.33 (m, 3H), 3.07 - 2.93 (m, 3H), 2.00 - 1.55 (m, 5H), 1.49 - 1.32 (m, 2H), 0.90 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.80 (d, J=6.8 Hz, 3H).
DMSO (1 mL), 중 DMSO (2 mL) 중 화합물 31 (79 mg, 0.209 mmol)의 용액에 MAL-dPEG®8-NHS 에스테르 32 (퀀타바이오, 120 mg, 0.174 mmol)의 용액에 이어서 2,6-루티딘 (37.3 mg, 0.348 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 RT에서 3시간 동안 교반하였다. DMF (2 mL) 중 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (63.5 mg, 0.209 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 2,6-루티딘 (37.3 mg, 0.348 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 RT에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, DIPEA (0.061 mL, 0.348 mmol)를 첨가하고, 반응물을 RT에서 3시간 동안 교반하였다. 조 생성물 혼합물을 DMF로 희석하고, 여과하고, 역상 HPLC (칼럼: 페노메넥스 루나 C18 20x100mm; 이동상 A: 10:90 아세토니트릴:물, 0.1% TFA 포함; 이동상 B: 90:10 아세토니트릴:물, 0.1% TFA 포함; 구배: 15분에 걸쳐 0-70% B; 유량: 20 mL/분; 검출: 220 nm에서의 UV)를 사용하여 정제하여 화합물 33을 수득하였다 (40 mg, 0.036 mmol, 20.54% 수율).
LCMS (M+H) = 1119.5.
실시예 5 - 이량체 IIa-01 및 IIa-05
본 실시예 및 도 6은 이량체 IIa-01의 합성에 관한 것이다.
아세톤 (0.4 ml) 중 페놀 22 (60 mg, 0.114 mmol), 2,6-비스(브로모메틸)피리딘 34 (15 mg, 0.057 mmol, 시그마 알드리치로부터 입수가능함) 및 Cs2CO3 (37 mg, 0.114 mmol)의 현탁액을 40℃로 1시간 동안 가온하였다. 혼합물을 0.1 M 시트르산으로 켄칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 30-80% EtOAc의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 35를 수득하였다 (36.2 mg, 55% 수율).
LCMS M+H=1153.40.
이량체 35 (36 mg, 0.031 mmol)를 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 1.9 ml, 0.078 mmol) 중에 용해시키고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (Pd(PPh3)4, 2.2 mg, 1.9 μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였으며, 그 시점에 이것을 DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 증발시키고, 이를 이어서 정제용 HPLC (선파이어 C18 정제용 OBD 칼럼 19x100mm; 용매 A = 95% 물, 5% 아세토니트릴 + 0.1% TFA; 용매 B = 5% 물 (95% 아세토니트릴 + 0.1% TFA; 10분에 걸쳐 0-100%의 구배; 이하 "HPLC 절차 A"로 지칭됨)에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-01을 백색 분말로서 수득하였다 (13.4 mg, 56% 수율).
LCMS M+H=720.10. HRMS 실측치: M+H=720.2808, 계산치: 720.2817.
가교 모이어티로서 대신에 2,4-비스(브로모메틸)피리딘을 사용하여, 이량체 IIa-05를 유사하게 제조하였다.
DMF (1.0 ml) 중 페놀 22 (170 mg, 0.414 mmol), 2,4-비스(브로모메틸)피리딘 (50 mg, 0.189 mmol) 및 Cs2CO3 (170 mg, 0.522 mmol)의 현탁액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 20 mL로 켄칭하고, 여과하였다. 침전물을 디에틸 에테르로 세척하고, 공기 건조시켰다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM의 5-50% 아세톤으로부터의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 35와 유사한 Alloc-TBS 화합물을 수득하였다 (134 mg, 70% 수율).
LCMS M+H=1153.40.
Alloc-TBS 화합물 (36 mg, 0.031 mmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 1.9 ml, 0.078 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (2.2 mg, 1.9 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 증발시키고, 이를 이어서 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 수성 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-05를 백색 분말로서 수득하였다 (16.0 mg, 65% 수율).
LCMS M+H=720.10.
실시예 6 - 이량체-링커 IIIb-01 및 IIIb-02
본 실시예 및 조합된 도 7a 및 7b는 이량체-링커 IIIb-01 및 IIIb-02의 제조에 관한 것이다.
DMF (3.0 ml) 중 페놀 22 (480 mg, 0.823 mmol), 2,6-비스(브로모메틸)피리딘 34 (654 mg, 2.47 mmol, 시그마 알드리치로부터 입수가능함) 및 Cs2CO3 (500 mg, 1.54 mmol)의 현탁액을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0.1 M 시트르산으로 켄칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 30-80% EtOAc의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 36을 수득하였다 (465 mg, 80% 수율).
LCMS M+H=708.05.
실릴 에테르 27 (431 mg, 0.486 mmol)을 DMF (2.0 mL) 및 물 (0.04 mL) 중에 용해시키고, LiOAc (32 mg, 0.486 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 40℃로 2.5시간 동안 가온하고, RT에서 추가로 1시간 동안 교반되도록 하였다. 용매를 N2의 스트림 하에 3일에 걸쳐 제거하였다. 잔류물을 0.1 M 시트르산으로 처리하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키면서 정제하여 페놀 37을 수득하였다 (297 mg, 84% 수율).
LCMS M+H=730.40.
페놀 37 (178 mg, 0.244 mmol), 화합물 36 (190 mg, 0.268 mmol) 및 Cs2CO3 (79 mg, 0.244 mmol)을 DMF (0.7 mL) 중에 현탁시키고, 40℃로 3.5시간 동안 가온하였다. 혼합물을 물에 첨가하고, 여과하여 화합물 38을 백색 고체로서 수집하였다 (320 mg, 97% 수율).
LCMS M+H=1357.30.
화합물 38 (320 mg, 0.236 mmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 14 ml, 0.589 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (15 mg, 13 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 이것을 DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 증발시키고, 이를 이어서 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 10개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 아민 39를 백색 분말로서 수득하였다 (145 mg, 58% 수율).
LCMS M+Na=1078.90.
아민 39 (145 mg, 0.137 mmol)를 DMF 중 DIPEA의 용액 (0.05 M, 3.3 ml, 0.165 mmol) 중에 용해시키고, 말레이미드 40 (85 mg, 0.274 mmol, 시그마 알드리치로부터 입수가능함)을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 이것을 DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 8개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체-링커 IIIb-01을 백색 분말로서 수득하였다 (68 mg, 38% 수율).
LCMS M+H=1251.10.
이량체-링커 IIIb-01 (20.0 mg, 0.016 mmol)을 THF (1 ml) 및 AcOH (0.1 ml) 중에 용해시키고, MeOH (1 ml) 중 NaCNBH3 (2.0 mg, 0.032 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 이것을 아세토니트릴로 희석한 다음, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체-링커 IIIb-02를 백색 분말로서 수득하였다 (16 mg, 76% 수율).
LCMS (M+2H)/2=627.10.
실시예 7 - 이량체 IIa-02
본 실시예 및 도 8은 이량체 IIa-02의 제조에 관한 것이다.
아미날 20 (500 mg, 0.244 mmol)을 DCM (10 ml) 및 피롤리딘 (0.18 ml, 2.21 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (51 mg, 44 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 45분 동안 교반하고, DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 증발시켜 이민 41을 수득하였으며 (410 mg, 100% 수율), 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS M+H=465.20.
이민 41 (410 mg, 0.882 mmol)을 THF (8 ml) 및 아세트산 (0.8 ml) 중에 용해시키고, NaCNBH3 (111 mg, 1.77 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, NaHCO3으로 켄칭하고, EtOAc로 3x 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 증발시켜 아민 42를 수득하였으며 (315 mg, 77% 수율), 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS M+H=467.30.
아민 42 (315 mg, 0.675 mmol)를 DCM (7 ml) 중에 용해시키고, 피리딘 (0.15 ml, 1.86 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 -78℃로 냉각시켰다. 알릴 클로로포르메이트 12a (0.10 ml, 1.39 mmol)를 적가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였으며, 그 시점에 이것을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, DCM으로 3x 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 증발시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20-50% EtOAc의 구배로 용리시키면서 정제하여 alloc-보호된 아민 43을 수득하였다 (372 mg, 100% 수율).
LCMS M+H=551.50.
아민 43 (372 mg, 0.675 mmol)을 반응물을 가온하는 대신에 RT에서 밤새 유지한 것을 제외하고는 페놀 37의 제조에 사용된 것와 동일한 방식으로 처리하였다. 이와 같이 하여 페놀 44를 수득하였다 (249 mg, 93% 수율).
LCMS M+H=395.05.
페놀 44 (30 mg, 0.076 mmol), 화합물 36 (30 mg, 0.042 mmol) 및 Cs2CO3 (30 mg, 0.092 mmol)을 DMF (0.25 mL) 중에 현탁시키고, 40℃로 1시간 동안 가온하였다. 혼합물을 0.1 M 시트르산으로 처리하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 30-100% EtOAc의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 45를 수득하였다 (32 mg, 74% 수율).
LCMS M+H=1022.10.
화합물 45 (32 mg, 0.031 mmol)를 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 2.0 ml, 0.08 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (1.8 mg, 1.6 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 교반한 후, 이것을 증발시키고, DMF로 희석한 다음, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 3개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-02를 백색 분말로서 수득하였다 (12 mg, 53% 수율).
LCMS M+H=722.30.
실시예 8 - 이량체 IIa-03
본 실시예 및 도 9는 이량체 IIa-03의 합성에 관한 것이다.
플라스크에 DMF (20 mL) 중 화합물 6 (1.830 g, 4.03 mmol)을 첨가하였다. 여기에 2,6-비스(브로모메틸)피리딘 34 (3.2 g, 12.08 mmol)에 이어서 K2CO3 (1.669 g, 12.08 mmol)을 첨가하였다. RT에서 밤새 교반하면서 반응이 진행되도록 한 다음, 물에 부음으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 포화 NaCl로 세척하였다. 유기 상을 잔류물로 농축시키고, 콤비플래쉬(COMBIFLASH)™ 칼럼 상에서 헥산 구배 중 10%-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 화합물 46을 백색 고체로서 수득하였다 (2.3 g, 89% 수율).
플라스크 내에서 DMF (5 mL) 중 화합물 46 (1.0 g, 1.566 mmol) 및 화합물 13 (1.084 g, 1.957 mmol)을 합하였다. 여기에 K2CO3 (0.649 g, 4.70 mmol)을 첨가하였다. 4시간 후, 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 콤비플래쉬™ 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 47을 백색 고체로서 수득하였다 (856 mg, 49.2% 수율).
플라스크에 DCM (10 mL) 중 화합물 47 (850 mg, 0.765 mmol)을 첨가하였다. 여기에 Pd(PPh3)4 (88 mg, 0.076 mmol) 및 피롤리딘 (0.158 mL, 1.912 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 및 DCM에 부었다. 유기 상을 수집하고, 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 콤비플래쉬™ 칼럼 상에서 DCM 중 0%-30 MeOH로 용리시키면서 정제하여 화합물 48을 백색 고체로서 수득하였다 (500 mg, 63.6% 수율).
THF (1 mL) 중 화합물 48 (26 mg, 0.025 mmol)의 용액에 -76℃에서 슈퍼 히드라이드(SUPER HYDRIDE)™ (0.127 mL, 0.127 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉수 (1 mL)로 켄칭하고, DCM (3x10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, DCM/EtOH/물 (1:2:1, 4 mL) 및 실리카 겔 (1 g)로 3일 동안 처리하였다. 이 혼합물을 소결 깔때기를 통해 여과하고, 실리카 겔을 DCM-MeOH (8:2, 100 mL)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에 농축시키고, 12 g 실리카 겔 칼럼 상에서 0-10% MeOH/DCM 용리액을 사용하여 정제하여 이량체 IIa-03을 백색 고체로서 수득하였다 (16 mg, 0.021 mmol, 82% 수율).
MS (m+1) = 735.2.
실시예 9 - 이량체-링커 IIIc-01, IIIc-03, 및 IIIc-04
본 실시예 및 도 10은 이량체-링커 IIIc-01, IIIc-03, 및 IIIc-04의 합성에 관한 것이다.
0℃에서 DMF (11 mL) 중 화합물 48 (1.15 g, 1.119 mmol), 산 49 (0.667 g; 1.343 mmol; 문헌 [Firestone et al., US 6,214,345 B1 (2001)]), 및 HATU (0.511 g, 1.343 mmol)의 용액에 2,6-루티딘 (0.261 mL, 2.239 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 물에 이어서 염수로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, THF (20 mL)에 녹였다. 피페리딘 (2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 32분에 걸쳐 이스코 콤비플래쉬™ (40 g 칼럼, 0-40% MeOH/DCM) 상에서 정제하여 화합물 50을 백색 고체로서 수득하였다 (0.997 g, 69.4% 수율).
MS (m+1) = 1284.6.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.01 (s, 2H), 8.27 (m, 2H), 7.96 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.55 (m, 4H), 7.42 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 2H), 7.20-7.31 (m, 12H), 5.98 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 5.89 (brs, 1H), 5.43 (brs, 2H), 5.35 (brs, 1H), 5.25 (m, 8H), 5.10 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.95 (d, J = 15.6 Hz, 2H), 4.75 (brs, 1H), 4.50 (brs, 2H), 4.32 (m, 6H), 4.09 (q, J = 5.2 Hz, 4H), 3.83 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.40 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 3.17 (d, J = 5.2 Hz, 8H), 3.00 (m, 10H), 2.68 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 2.33 (t, J = 1.6 Hz, 2H), 1.97 (m, 3H), 1.63 (m, 10H), 1.42 (m, 6H), 0.91 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.75 (m, 4H), 0.08 (s, 18H).
-76℃에서 THF (10 mL) 중 화합물 50 (322 mg, 0.251 mmol)의 용액에 슈퍼 히드라이드™ (1.254 mL, 1.254 mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉수 (1 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM/EtOH/물 (1:2:1 = 8 mL) 및 실리카 겔 (1 g)로 2일 동안 처리하였다. 이 혼합물을 소결 깔때기를 통해 여과하고, 실리카 겔을 DCM-MeOH (8:2, 100 mL)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에 농축시키고, 24g 실리카 겔 칼럼 상에서 15분에 걸쳐 0-50% MeOH/DCM 용리액을 사용하여 정제하여 화합물 51을 백색 고체로서 수득하였다 (248 mg, 90% 수율).
MS (m+1) = 991.4.
DMSO (6 mL) 중 화합물 51 (88 mg, 0.089 mmol) 및 화합물 40 (54.7 mg, 0.178 mmol)의 용액에 DIPEA (0.031 mL, 0.178 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 R-HPLC에 의해 엑스브리지 정제용 OBD C18, 5 μm 칼럼 (30 x 150 mm) 및 30분에 걸쳐 5-60% 아세토니트릴/물 (0.05% 포름산) 용리 구배를 사용하여 정제하였다. 16.9분에서 수집된 분획을 염기성 수지 (PL-HCO3 MP -수지 1.8 mmol/g; 애질런트 파트 # PL3540-#603)를 통해 여과하고, 아세토니트릴 (5 mL)로 세척하고, 동결건조시켜 이량체-링커 IIIc-01을 백색 고체로서 수득하였다 (39.1 mg, 0.031 mmol, 35.0% 수율).
MS (m+1) = 1184.3
이량체-링커 IIIc-03 및 IIIc-04를 하기 적절한 Fmoc-보호된 N-히드록시숙신이미드를 사용하여 각각 화합물 51 및 이량체 IIa-03으로부터 유사하게 제조하고, 이어서 피페리딘을 사용하여 Fmoc 기를 제거하였다.
Figure pct00150
이량체-링커 IIIc-03은 아미노 기로 종결된 링커를 가지며, 따라서 트랜스글루타미나제 매개 접합에서의 아민 공여자 성분일 수 있다.
MS (m+1) = 1414.5.
이량체-링커 IIIc-04는 또한 아미노 기로 종결된 링커를 가지며, 따라서 트랜스글루타미나제 매개 접합에서의 아민 공여자 성분일 수 있다. 펩티드 기가 결여되면, 이량체-링커 IIIc-04는 비-절단가능한 유형의 것이며, 이량체 약물을 방출하기 위해 이것이 부착되어 있는 항체의 분해에 의존한다.
MS (m+1) = 982.53.
실시예 10 - 이량체 IIa-04
본 실시예 및 도 11은 이량체 IIa-04의 합성에 관한 것이다.
2,6-비스(브로모메틸)피리딘 34 (4.31 g, 16.25 mmol), 화합물 13 (1.8 g, 3.25 mmol) 및 DMF (20 mL)를 플라스크 내에서 합하였다. 여기에 K2CO3 (0.899 g, 6.50 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 2시간 동안 교반하고, 물 (200 mL) 및 EtOAc (200 mL)에 부었다. 유기 층을 물 (100 mL) 및 염수 (50 ml)로 세척하고, 잔류물로 농축시켰다. 잔류물을 콤비플래쉬™ 80 g 칼럼 상에서 30분에 걸쳐 헥산 중 0-100% EtOAc의 구배 용리로 용리시키면서 정제하여 화합물 52를 백색 고체로서 수득하였다 (1.409 g, 1.910 mmol, 58.8% 수율).
MS (m+1) = 737.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80 (m, 1H), 7.54 (m, 1H), 7.45 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.37 (s, 2H), 7.28 (m, 4H), 6.62 (s, 1H), 5.98 (m, 1H), 5.42 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.37 (m, 1H), 5.28 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 6 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.42 (d, J =15.6 Hz, 1H), 4.27 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.65 (m, 2H), 3.51 (dd, J=15.6, 7.2 Hz, 1H), 2.97 (dd, J=15.6, 6.4 Hz, 1H), 0.97 (m, 2H), 0.04 (s, 9H).
THF (20 mL) 중 화합물 6 (2 g, 4.40 mmol)의 용액에 -76℃에서 슈퍼 히드라이드™ (22.00 mL, 22.00 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 그 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉수 (100 mL)로 켄칭하고, DCM (3x100 mL)으로 추출하였다. 생성된 잔류물을 DCM/EtOH/물 (1:2:1 = 40 mL) 및 실리카 겔 (10 g)로 3일 동안 처리하였다. 이 혼합물을 소결 깔때기를 통해 여과하고, 실리카 겔을 DCM-MeOH (8:2, 100 mL)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에 농축시키고, 40 g 실리카 겔 칼럼 상에서 15분에 걸쳐 MeOH/DCM을 사용하여 정제하였다. 10분에서의 10% MeOH/DCM 분획은 화합물 53을 황색 고체로서 제공하였다 (1.35 g, 4.03 mmol, 92% 수율).
MS (m+1) = 309.0.
DMSO (10 mL) 중 화합물 52 (1.265 g, 1.715 mmol) 및 화합물 53 (0.582 g, 1.886 mmol)의 용액에 K2CO3 (0.474 g, 3.43 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하고, 물 및 EtOAc (1:1, 300 mL)에 부었다. 유기 층을 농축시키고, 40 g 실리카 겔 칼럼 상에서 15분에 걸쳐 MeOH/DCM 용리를 사용하여 정제하여 화합물 54를 황색 고체로서 수득하였다 (1.78 g, 1.568 mmol, 91% 수율).
MS (m+1) = 965.3.
DCM (30 mL) 중 화합물 54 (1.78 g, 1.844 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (0.107 g, 0.092 mmol)의 용액에 피롤리딘 (0.305 mL, 3.69 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반하였다. 농축시키고, 40 g 실리카 겔 칼럼 상에서 15분에 걸쳐 MeOH/DCM 용리를 사용하여 정제하여 화합물 55를 백색 고체로서 수득하였다 (1.54 g, 1.748 mmol, 95% 수율).
MS (m+1) = 881.2
THF (2 mL) 중 화합물 55 (100 mg, 0.113 mmol)에 0℃에서 한 방울의 아세트산에 이어서 MeOH (0.2 mL) 중 NaCNBH3 (14.27 mg, 0.227 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 20분 동안 교반하고, EtOAc (50 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고, 이스코 콤비플래쉬™ 24g 칼럼 상에서 15분에 걸쳐 MeOH/DCM을 사용하여 정제하여 화합물 56을 백색 고체로서 수득하였다 (37 mg, 0.042 mmol, 36.9% 수율).
MS (m+1) = 883.4.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.73 (t, J =8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 3H), 7.35 (s, 1H), 7.28 (m, 4H), 7.20 (m, 1H), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.61(m, 2H), 6.13 (s, 1H), 5.44 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.28 (m, 4H), 5.09 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.81 (q, J =15.6 Hz, 2H), 4.63 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.18 (dd, J= 8.0, 6.8 Hz, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.71 (m, 3H), 3.41 (m, 2H), 3.21 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 3.09 (dd, J = 15.2, 5.6 Hz, 1H), 2.83 (m, 2H), 0.98 (m, 2H), 0.03 (s, 9H).
THF (2 mL) 중 화합물 56 (37 mg, 0.042 mmol)의 용액에 -76℃에서 슈퍼 히드라이드™ (0.209 mL, 0.209 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 냉수 (1 mL)로 켄칭하고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, DCM/EtOH/물 (1:2:1, 4 mL) 및 실리카 겔 (1 g)로 3일 동안 처리하였다. 이 혼합물을 소결 깔때기를 통해 여과하고, 실리카 겔을 DCM-MeOH (8:2, 50 mL)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에 농축시키고, 12 g 실리카 겔 칼럼 상에서 15분에 걸쳐 0-10% MeOH/DCM 용리를 사용하여 정제하여 이량체 IIa-04를 백색 고체로서 수득하였다 (25.3 mg, 78% 수율).
MS (m+1) = 737.2.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.43 (m, 3H), 7.28 (m, 3H), 7.23 (m, 1H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.32 (m, 3H), 4.80 (m, 2H), 4.40 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.50 (s, 1H), 3.14 (m, 2H), 2.97 (m, 3H), 2.75 (dd, J = 15.2, 5.6 Hz, 2H).
실시예 11 - 이량체 링커 IIIc-02
본 실시예 및 도 12a 및 12b는 이량체-링커 IIIc-02의 합성에 관한 것이다.
2,6-루티딘 (0.323 mL, 2.77 mmol)을 0℃에서 DMF (20 mL) 중 화합물 55 (1.22 g, 1.385 mmol), 화합물 49 (0.825 g, 1.662 mmol), 및 HATU (0.632 g, 1.662 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 LCMS는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응 혼합물을 EtOAc (300 mL) 및 물 (100 mL)이 들은 분리 깔때기에 부었다. 염수 (50 mL)를 첨가하여 2개의 층으로 분리하였다. 유기 층을 농축시키고, 이스코 콤비플래쉬™ 120 g 칼럼, 25분에 걸쳐 0-30% MeOH/DCM 용리 상에서 정제하여 화합물 56을 백색 고체로서 수득하였다 (1.13 g, 0.831 mmol, 60.0% 수율).
MS (m+1) = 1359.4.
아세트산 (0.095 mL, 1.662 mmol)을 THF (30 mL) 중 화합물 56 (1.13 g, 0.831 mmol)의 용액에 첨가하고, 이어서 0℃에서 MeOH (3 mL) 중 NaCNBH3 (0.104 g, 1.662 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하고, EtOAc (200 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고, 이스코 콤비플래쉬™ 80g 칼럼, 25분에 걸쳐 0-20% MeOH/DCM 용리액 상에서 정제하여 화합물 57을 백색 고체로서 수득하였다 (1 g, 0.734 mmol, 88% 수율).
MS (m+Na) = 1384.2
피페리딘 (2 mL, 20.20 mmol)을 THF (20 mL) 중 화합물 57 (1 g, 0.734 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 이스코 콤비플래쉬™ 40g 칼럼, 25분에 걸쳐 0-50% MeOH/DCM 용리액 상에서 정제하여 화합물 58을 백색 고체로서 수득하였다 (0.7 g, 0.614 mmol, 84% 수율).
MS (m+1) = 1139.4.
-76℃에서 THF (10 mL) 중 화합물 58 (0.5 g, 0.439 mmol)의 용액에 슈퍼 히드라이드™ (4.39 mL, 4.39 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 반응물을 냉수 (1 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM/EtOH/물 (1:2:1, 8 mL) 및 실리카 겔 (2 g)로 2일 동안 처리하였다. 이 혼합물을 소결 깔때기를 통해 여과하고, 실리카 겔을 DCM-MeOH (8:2, 200 mL)로 세척하였다. 여과물을 고진공 하에 농축시키고, 이스코 80 g 실리카 겔 (금) 칼럼 상에서 40분에 걸쳐 MeOH/DCM을 사용하여 정제하여 화합물 59를 백색 고체로서 수득하였다 (0.4 g, 0.403 mmol, 92% 수율).
MS (m+1) = 993.4
DMSO (2 mL) 중 화합물 59 (24 mg, 0.024 mmol) 및 화합물 84 (14.90 mg, 0.048 mmol)의 용액에 DIPEA (8.44 μL, 0.048 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 R-HPLC에 의해 엑스브리지 정제용 OBD C18, 5 μm 칼럼 (30x250 mm) 및 30분에 걸쳐 5-60% 아세토니트릴/물 (0.05% 포름산)을 사용하여 정제하였다. 20.3분에서 수집된 분획을 염기성 수지 (PL-HCO3 MP -수지 1.8 mmol/g; 애질런트 파트 # PL3540-#603)를 통해 여과하고, 아세토니트릴 (5 mL)로 세척하였다. 동결건조시켜 이량체-링커 IIIc-02를 백색 고체로서 수득하였다 (7.6 mg, 6.21 μmol, 25.7% 수율).
MS (m+1) = 1186.5.
실시예 12 - 이량체-링커 IIIb-03 및 IIIb-03'
본 실시예 및 도 13은 이량체-링커 IIIb-03의 합성에 관한 것이다.
THF (2 mL) 중 피리딘-2,4-디일디메탄올 (80 mg, 0.572 mmol)에 페놀 22 (100 mg, 0.191 mmol), 중합체-결합된 트리페닐포스핀 (200 mg, 0.629 mmol) 및 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (DIAD, 0.122 mL, 0.629 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 12시간 동안 교반하고, 혼합물을 여과하였다. 용매를 제거하고, 이 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 20-100% 아세톤의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 61 (70 mg, 56.9% 수율) LCMS M+H=646.45 및 62 (50 mg, 40.6% 수율) LCMS M+H=646.40을 수득하였다.
DCM (2mL) 중 화합물 61 (67 mg, 0.104 mmol) 및 TEA (0.036 mL, 0.259 mmol)에 0℃에서 메탄술포닐 클로라이드 (MsCl, 0.019 mL, 0.239 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고, 차가운 수성 HCl (0.05 N), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 화합물 63을 오렌지색 오일로서 수득하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피 상에서 헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 정제된 화합물 63을 수득하였다 (40 mg, 30% 수율).
LCMS M+H=724.10.
DMF (.1 mL) 중 화합물 63 (40 mg, 0.055 mmol)에 Cs2CO3 (40 mg, 0.123 mmol) 및 화합물 37 (40.3 mg, 0.055 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 4시간 동안 교반하고, 이 물질을 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 화합물 64를 백색 분말로서 수득하였다 (16.0 mg, 65% 수율).
LCMS M+H=1357.65.
화합물 64 (15 mg, 0.011 mmol)를 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 0.658 mL, 0.028 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (0.766 mg, 0.663 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 2.5시간 동안 교반하고, 반응 용매를 N2 하에 제거하였다. 나머지 물질을 1.5 mL DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 아민 65를 백색 분말로서 수득하였다 (11.5 mg, 98% 수율).
LCMS M+Na=1080.
아민 65 (11.5 mg, 10.88 μmol)를 DMF 중 DIPEA의 용액 (0.261 ml, 0.013 mmol) 중에 용해시키고, 화합물 40 (6.71 mg, 0.022 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 교반하고, DMF로 희석하고, 상기 단락에 기재된 바와 같이 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체-링커 IIIb-03을 백색 분말로서 수득하였다 (3 mg, 2.231 μmol, 20.51% 수율).
LCMS M+H=1250.60.
이량체-링커 IIIb-03'를 화합물 62로부터 유사하게 제조할 수 있다.
실시예 13 - 이량체 IIa-06
본 실시예 및 도 14는 이량체 IIa-06의 제조에 관한 것이다.
THF (2 mL) 중 피리딘-3,5-디일디메탄올 66 (26.5 mg, 0.191 mmol)에 페놀 22 (100 mg, 0.191 mmol), 중합체-결합된 트리페닐포스핀 (200 mg, 0.629 mmol) 및 DIAD (0.122 mL, 0.629 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 12시간 동안 교반하고, 혼합물을 여과하였다. 용매를 제거하고, 이 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 20-100% 아세톤의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 67 (55 mg, 15.02% 수율) LCMS M+Na=1174.65 및 화합물 68 (38 mg, 31% 수율) LCMS M+H=646.30을 수득하였다.
이량체 67 (15 mg, 0.013 mmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.775 mL, 0.033 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (1 mg, 0.865 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-06을 백색 분말로서 수득하였다 (2 mg, 20.28% 수율).
LCMS M+H=721.30.
실시예 14 - 이량체-링커 IIIb-04
본 실시예 및 도 15는 이량체-링커 IIIb-04의 합성에 관한 것이다.
DMF (1.0 mL) 중 페놀 22 (200 mg, 0.381 mmol), 3,5-비스(클로로메틸)피리딘 히드로클로라이드 (250 mg, 1.176 mmol) 및 Cs2CO3 (800 mg, 2.455 mmol)의 현탁액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 질소 하에 제거하였다. 잔류물을 셀라이트™ 상에 건식 로딩하고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 2-10% MeOH의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 69를 수득하였다 (120 mg, 47% 수율).
LCMS M+Na = 687.05.
DMF (1.0 mL) 중 화합물 37 (150 mg, 0.206 mmol)에 Cs2CO3 (100 mg, 0.307 mmol) 및 이량체 69 (150 mg, 0.206 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 12시간 동안 교반하고, 이 물질을 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 화합물 70을 백색 분말로서 수득하였다 (42 mg, 15.65% 수율).
LCMS M+H=1357.65.
화합물 70 (40 mg, 0.029 mmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 1.8 mL, 0.074 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (2.0 mg, 1.768 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 2.5시간 동안 교반하고, 반응 용매를 N2 하에 제거하였다. 물질을 1.5 ml DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 아민 71을 백색 분말로서 수득하였다 (15 mg, 43% 수율).
LCMS M+Na=1080.
아민 71 (15 mg, 10.88 μmol)을 DMF 중 DIPEA의 용액 (0.615 mL, 0.031 mmol) 중에 용해시키고, 화합물 40 (25 mg, 0.024 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 교반하고, DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체-링커 IIIb-04를 백색 분말로서 수득하였다 (10 mg, 30% 수율).
LCMS M+H=1250.60.
실시예 15 - 이량체 IIa-08
본 실시예 및 도 16은 이량체 IIa-08의 제조에 관한 것이다.
DMF (0.888 ml) 중 디메틸 4-(히드록시메틸)피리딘-2,6-디카르복실레이트 72 (200 mg, 0.888 mmol)에 이미다졸 (100 mg, 1.469 mmol) 및 t-부틸디메틸실릴 클로라이드 (TBS-Cl, 4 ml, 1.149 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 질소 하에 제거하고, 이 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 73을 수득하였다 (290mg, 91% 수율).
LCMS M+H = 340.50.
에탄올 (2mL) 중 화합물 73 (14 g, 0.412 mmol)에 LiBH4 (0.054 g, 2.475 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 아세트산 (0.189 mL, 3.30 mmol)으로 켄칭하고, 10분 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 이 물질을 셀라이트™ 상에 건식 로딩하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 2-10% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 74를 수득하였다 (120 mg, 98% 수율).
LCMS M+H = 284.50.
DCM (2 mL) 중 화합물 74 (100 mg, 0.353 mmol), TEA (0.123 mL, 0.882 mmol)의 현탁액에 0℃에서 MsCl (0.063 mL, 0.811 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하고, 차가운 수성 HCl (0.05 N), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 메실레이트 75를 오렌지색 오일로서 수득하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 메실레이트 75를 수득하였다 (155 mg, 98% 수율).
LCMS M+H = 440.30.
DMF (.3 mL) 중 메실레이트 75 (25 mg, 0.057 mmol)에 Cs2CO3 (85 mg, 0.261 mmol) 및 페놀 22 (90 mg, 0.171 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 30-100% 아세톤의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 76을 수득하였다 (70 mg, 93% 수율).
LCMS M+H = 1296.65.
THF (.3 mL) 중 이량체 76 (40 mg, 0.031 mmol)에 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (TBAF, 0.037 mL, 0.037 mmol)를 첨가하였다. 반응은 30분 내에 완결되었으며, 포화 (NH4)2SO4로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하고, DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 77을 백색 분말로서 수득하였다 (14 mg, 47% 수율).
LCMS M+H=954.35.
이량체 77 (14 mg, 0.012 mmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 0.705 ml, 0.030 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (1.0 mg, 0.9 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-08을 백색 분말로서 수득하였다 (5.0 mg, 54% 수율).
LCMS M+H=750.30.
실시예 16 - 이량체-링커 IIIb-05
본 실시예 및 도 17은 이량체-링커 IIIb-05의 제조에 관한 것이다.
DMF (.2 mL) 중 화합물 75 (113 mg, 0.257 mmol)에 페놀 22 (45 mg, 0.086 mmol) 및 Cs2CO3 (60 mg, 0.184 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 30-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 78을 수득하였다 (40 mg, 30.6% 수율).
LCMS M+H = 868.60.
DMF (.2 mL) 중 이량체 78 (39 mg, 0.045 mmol)에 Cs2CO3 (40 mg, 0.123 mmol) 및 화합물 37 (40 mg, 0.055 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 4시간 동안 교반하고, 이 물질을 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 화합물 79를 백색 분말로서 수득하였다 (60.0 mg, 89% 수율).
LCMS M+H=1501.85.
THF (.4 mL) 중 이량체 79 (60 mg, 0.040 mmol)에 TBAF (0.04 mL, 0.040 mmol)를 첨가하였다. 반응은 30분 내에 완결되었으며, 포화 NH4Cl로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하고, DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 80을 백색 분말로서 수득하였다 (13 mg, 20% 수율).
LCMS M+H= 1273.55.
화합물 80 (13 mg, 10.21 μmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 0.608 mL, 0.026 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (0.708 mg, 0.613 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 N2 하에 제거하였다. 물질을 1.5 ml DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 아민 81을 백색 분말로서 수득하였다 (11 mg, 90% 수율).
LCMS M+H=1087.50.
아민 81 (11 mg, 10.12 μmol)을 DMF 중 DIPEA의 용액 (0.243 mL, 0.012 mmol) 중에 용해시키고, 화합물 40 (6.24 mg, 0.020 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 교반하고, DMF로 희석하고, HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체-링커 IIIb-04를 백색 분말로서 수득하였다 (6 mg, 42% 수율).
LCMS M+H=1281.60.
실시예 17 - 이량체 IIa-07 및 IIa-09
본 실시예 및 도 18은 이량체 IIa-07 및 IIa-09의 제조에 관한 것이다.
DCM (3 mL) 중 (3-메톡시피리딘-2,6-디일)디메탄올 82 (90 mg, 0.532 mmol), NEt3 (0.185 mL, 1.330 mmol)의 현탁액에 0℃에서 MsCl (0.095 mL, 1.224 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하고, 차가운 수성 HCl (0.05 N), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 메실레이트를 오렌지색 오일로서 수득하였다. 물질을 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 83을 수득하였다 (87 mg, 45% 수율).
LCMS M+Na = 347.75.
DMF (0.3 ml) 중 페놀 22 (97 mg, 0.184 mmol), 화합물 83 (20 mg, 0.061 mmol) 및 Cs2CO3 (60 mg, 0.184 mmol)의 현탁액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 질소 하에 제거하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 2-10% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 84를 수득하였다 (67 mg, 77% 수율).
LCMS M+H=1183.02.
이량체 84 (20 mg, 0.017 mmol)를 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 1.0 ml, 0.042 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (1.0 mg, 1.0 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-09를 백색 분말로서 수득하였다 (3.0 mg, 22% 수율).
LCMS M+H=750.30.
DCM (3 mL) 중 퀴놀린-2,4-디일디메탄올 85 (100 mg, 0.529 mmol), NEt3 (0.185 mL, 1.330 mmol)의 현탁액에 0℃에서 MsCl (0.095 mL, 1.224 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하고, 차가운 수성 HCl (0.05 N), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 메실레이트를 오렌지색 오일로서 수득하였다. 물질을 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 화합물 86을 수득하였다 (80 mg, 44% 수율).
LCMS M+Na = 345.80.
DMF (0.3 ml) 중 페놀 22 (182 mg, 0.347 mmol), 화합물 86 (40 mg, 0.116 mmol) 및 Cs2CO3 (113 mg, 0.347 mmol)의 현탁액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 질소 하에 제거하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 30-100% 아세톤의 구배로 용리시키면서 정제하여 이량체 87을 수득하였다 (95 mg, 68% 수율).
LCMS M+H=1202.60.
이량체 87 (20 mg, 0.017 mmol)을 DCM 중 피롤리딘의 용액 (0.042 M, 0.4 ml, 0.017 mmol) 중에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (1.0 mg, 1.0 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, DCM과 포화 NH4Cl 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 수성 분획을 DCM으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 HPLC 절차 A에 의해 정제하였다. 샘플을 2개의 동등한 주입으로 나누었다. 생성물 피크를 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체 IIa-07을 백색 분말로서 수득하였다 (8.0 mg, 59% 수율).
LCMS M+H=770.30.
실시예 18 - 추가의 중간체
본 발명의 이량체의 합성에 유용한 디브로마이드 91a-d를 도 19a의 반응식에 따라 합성하였다. 출발 물질 88a 및 88b를 문헌 [Synth. Commun. 1999, 3719]에 기재된 바와 같이 제조하였다. 출발 물질 88c를 아크파마로부터 입수하였다. 출발 물질 89d를 WO 2012/153253에 기재된 바와 같이 제조하였다.
중간체 88a의 하기 제조 절차가 대표적이다.
메틸 에테르 88a (0.45 g, 2.0 mmol)를 에탄올 (20 mL) 중에 현탁시키고, 수소화붕소리튬을 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 5시간 동안 교반한 다음, 아세트산을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 증발시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM 중 0-20% 메탄올의 구배를 사용하여 정제하여 디올 89a를 수득하였다 (210 mg, 62% 수율).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 6.87 (s, 2H), 5.33 (br t, J=5.5 Hz, 2H), 4.47 (br d, J=4.9 Hz, 4H), 3.84 (s, 3H).
디올 89a (0.21 g, 1.24 mmol) 및 트리에틸아민 (0.52 mL, 3.72 mmol)을 DCM (6.2 mL) 중에 현탁시키고, 빙수조에서 냉각시켰다. 이 혼합물에 MsCl (0.22 mL, 2.85 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 동일한 온도에서 2시간 동안 진행되도록 한 다음, 물의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 상을 0.1N HCl에 이어서 염수로 세척한 다음, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과한 후, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 메실레이트 90a를 수득하였으며 (0.4 g, 100% 수율을 가정하였음), 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS M+H=325.85.
메실레이트 90a (0.44 g, 1.35 mmol)를 DMF (2.7 mL) 중에 용해시키고, 브로민화나트륨 (696 mg, 6.76 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 이것을 물로 희석하고, 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 디브로마이드 91a를 수득하였다 (0.155g, 39% 수율).
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 6.92 (s, 2H), 4.51 (s, 4H), 3.91 (s, 3H).
LCMS M+H=293.70.
디브로마이드 91b-d를 유사하게 합성하였다:
91b: LCMS M+H=319.70.
91c: 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.42 (s, 2H), 4.51 (s, 4H).
91d: 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.95 (s, 2H), 4.61 (s, 4H), 4.06 - 3.94 (m, 3H).
실시예 19 - 이량체 IIa-10, IIa-11, IIa-12, IIa-13, 및 IIa-14.
화합물 20을 도 19b에 제시된 바와 같이 LiOAc로의 처리에 의해 화합물 92로 전환시켰다. 화합물 92를 유사하게 실시예 5의 절차 및 도 6의 반응식에 따라 디브로마이드 91a-d와 커플링시켜 보호된 이량체를 수득하고, 이를 이어서 Pd(PPh3)4로 탈보호시켜 이량체 IIa-10 내지 IIa-14를 수득하였다.
(IIa-10): LCMS M+H=750.05.
(IIa-11): LCMS M+H=736 (이량체 IIa-12로 이어지는 탈보호 단계에서 알릴 기의 상실에 의해 수득됨).
(IIa-12): LCMS M+H=776.05.
(IIa-13): LCMS M+H=754.00.
(IIa-14): LCMS M+H=778.05.
하기 요약된 바와 같이 가교 모이어티의 성질에 있어서 이량체 (IIa-10) 내지 (IIa-14)는 상이하다.
Figure pct00151
실시예 20 - 이량체-링커 IIIb-06 및 IIIb-07
이량체-링커 IIIb-06 및 IIIb-07을 유사하게 실시예 14의 절차 및 도 15의 반응식에 따라 화합물 22 및 각각 디브로마이드 91a 및 91b로부터 제조하였다.
(IIIb-06): LCMS M+Na=1302.05.
(IIIb-07): LCMS M+H=1267.
Figure pct00152
실시예 21 - 이량체-링커 IIIb-08, IIIb-08a, IIIb-08b, 및 IIIb-08c
본 실시예는 링커 내에 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG) 모이어티를 갖는 이량체-링커의 제조에 관한 것이다. PEG 모이어티의 존재는 수성 매질 중 접합 동안 이량체-링커의 용해도를 개선시킬 수 있다.
Figure pct00153
말레이미드 화합물 32 및 32a-b (이들 모두는 퀀타 바이오디자인으로부터 입수가능함)를 아민 39 (실시예 6 및 도 7b)에 커플링시켜 각각 이량체-링커 IIIb-08, IIIb-08a, IIIb-08b, 및 IIIb-08c를 제조하였다:
IIIb-08: LCMS (M+2H)/2=816.55.
IIIb-08a: LCMS (M+2H)/2=772.50.
IIIb-08b: LCMS (M+2H)/2=728.40.
IIIb-08c: LCMS M+Na=1390.05.
Figure pct00154
실시예 22 - 이량체 IIa-15
본 실시예는 디아제핀 고리 내의 둘 다의 이민 기가 환원된 이량체 IIa-15의 제조에 관한 것이다.
유사하게 실시예 5의 절차 및 도 5의 반응식에 따라, 디브로마이드 34를 화합물 44에 커플링시켜 비스-alloc 화합물을 수득하였다. 후자를 Pd(PPh3)4로 탈보호시켜 이량체 IIa-15를 수득하였다.
LCMS M+H=724.45.
Figure pct00155
실시예 23 - 이량체-링커 IIIb-09
본 실시예 및 도 20은 링커가 반응성 관능기로서 아미노 기를 갖는 것인 이량체-링커 IIIb-09의 제조에 관한 것이다. 아미노 기는 상기 논의된 바와 같은 트랜스글루타미나제-매개 접합에서 아민 공여자로서 작용함으로써 접합에 참여할 수 있다.
일반적으로 실시예 6 및 14의 절차 및 각각 연관된 도 7a-7b 및 15의 반응식에 따라, Alloc 화합물 44, 디브로마이드 34, 및 화합물 37을 사용하여 화합물 93을 제조하였다.
화합물 94 (0.079 g, 0.086 mmol, 퀀타 바이오디자인)를 유사하게 실시예 6 및 도 7b의 절차에 따라 화합물 93 (0.091 g, 0.095 mmol)과 커플링시켜 화합물 95를 수득하였다 (40 mg, 27% 수율).
LCMS (M+2H)/2=853.45.
화합물 95 (40 mg, 0.023 mmol)를 DMF (1.0 mL) 중에 용해시키고, 디에틸아민 (0.1 mL, 0.957 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 숙성시키고, DMF로 희석하고, 바이오타지 C18 칼럼, 용매 A = 95% 물, 5% 아세토니트릴 +0.05% 포름산; 용매 B = 5% 물, 95% 아세토니트릴 + 0.05% 포름산; 20-100%의 구배에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, PL-HCO3- MP SPE 500 mg/6 mL 카트리지에 아세토니트릴로 용리시키면서 통과시켜 유리 염기로서의 생성물의 용액을 수득하였다. 벌크의 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물을 동결건조에 의해 제거하여 이량체-링커 IIIb-09를 백색 분말로서 수득하였다 (18.5 mg, 51% 수율).
LCMS (M+2H)/2=742.35.
실시예 24 - 추가의 중간체
본 실시예 및 도 21은 방향족 고리 상에 추가의 질소를 갖는 THIQ-THIQ 이량체의 합성에 적합한 중간체의 합성에 관한 것이다
수소화나트륨 (60%, 2.72g, 56.8 mmol)을 DMF (50 mL) 중에 용해시키고, 빙조에서 냉각시켰다. 디에틸 아세트아미도말로네이트 97 (6.17 g, 28.4 mmol)을 대략 3분에 걸쳐 조금씩 첨가하고, 버블링이 진정될 때까지 추가로 10분 동안 반응시켰다. 피리딘 96 (5 g, 28.4 mmol, WO 2002/036555에 따라 제조됨)을 대략 1분의 과정에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 2종의 위치이성질체 98a/b가 형성되었으며 (7.2 g, 79% 수율), 이를 혼합물로서 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
LCMS M+H=321.10 (동일한 질량을 갖는 2개의 피크).
화합물 98a/b의 혼합물 (7.2 g, 22.48 mmol)을 6N HCl (50 ml, 1646 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 환류하였다. RT로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 형성된 갈색 고체를 디옥산과 함께 농축시키고, 메탄올로 연화처리하였다. 화합물 99a/b의 혼합물의 2종의 수확물을 수집하였으며, 제1 수확물은 황갈색 고체 2.4 g이고, 제2 수확물은 암갈색 고체 1.0g이었다. 이들을 추가 정제 없이 사용하였다.
MeOH (20 mL) 및 티오닐 클로라이드 (1.578 mL, 21.62 mmol)를 실온에서 화합물 99a/b의 혼합물 (1810 mg, 7.21 mmol)에 연속적으로 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 20시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 완전히 농축시키고, 형성된 고체를 디옥산과 함께 재농축시켜 과량의 티오닐 클로라이드를 제거하여 갈색 고체를 수득하였다. 혼합물을 MeOH로 연화처리하여 고체를 수득하였으며, 이를 Na2CO3과 DCM 사이에 분배하고, 2x 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 증발시켜 화합물 100a/b의 혼합물을 수득하였다 (1.2g, 6.24 mmol, 87% 수율).
화합물 100a/b의 혼합물 (1.2 g, 6.24 mmol)을 MeOH (50 mL) 중에 용해시키고, LiBH4 (0.136 g, 6.24 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 2시간 동안 환류하고, 에탄올 및 톨루엔과 함께 증발 및 공비시켜 화합물 101a/b의 혼합물을 수득하였다 (1 g, 98% 수율).
화합물 101a/b의 혼합물 (1.0 g, 6.09 mmol)을 DMF (1 mL) 및 아세토니트릴 (5.8 mL) 중에 용해시키고, TBS-Cl (3.15 mL, 2.9M, 9.13 mmol) 및 이미다졸 (0.62 g, 9.13 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 20분 동안 정치되도록 하고, 대부분의 용매를 증발시켰다. 잔류물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 3x 추출하였다. 합한 유기 상을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하여 고체를 제거하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 24 g 실리카 겔 칼럼 상에서 0-10% MeOH/DCM를 사용하여 플래시 크로마토그래피하였다. 이들 조건 하에 2종의 성분이 대부분 분해되었지만, 추가의 변환을 위해 화합물 102a/b의 혼합물로 다시 합하였다 (967 mg, 57% 수율).
화합물 102a/b의 혼합물 (917 mg, 3.29 mmol)을 필요한 변경을 가하여 실시예 3의 절차에 따라 사용하여 화합물 106a/b의 혼합물을 수득하였다.
103a/b: (1.39 g, 67% 수율). LCMS M+H=630.20 (동일한 질량을 갖는 2개의 피크).
104a/b: (0.52 g, 62% 수율). LCMS M+H=600.20 (동일한 질량을 갖는 2개의 피크).
105a/b: (0.50 g, 84% 수율). LCMS M+H=684.75 (동일한 질량을 갖는 2개의 피크).
106a: (158 mg, 38% 수율). LCMS M+H=570.25 (실리카 겔 크로마토그래피, 50-100% EtOAc/헥산 구배에 의해 106b과의 분리 후).
106b: (179 mg, 43% 수율). LCMS M+H=570.30 (분리 후).
실시예 25 - 이량체 IIa-16
본 실시예 및 도 22는 외부 벤젠 고리 중 1개가 질소를 갖는, 즉 화학식 I에서 1개의 G 또는 G'가 N인 이량체 IIa-16의 제조에 관한 것이다.
화합물 106b를 필요한 변경을 가하여 실시예 3의 절차에 따라 거울상이성질체 108a 및 108b의 혼합물로 전환시켰으며, 이를 키랄팩(CHIRALPAK)® IE 칼럼 상에서 키랄 SEC 크로마토그래피에 의해 CO2 중 20% MeOH로 용리시키면서 분리하였다. 108a: LCMS M+H=411.95; 25 mg, 23% 수율). 108b: LCMS M+H=411.95; 22 mg, 20% 수율.
거울상이성질체 108b를 유사하게 실시예 6의 절차에 따라 화합물 36과 커플링시켜 비스-Alloc 화합물 109를 수득하였으며, 이를 이어서 Pd(PPh3)4로 처리하여 이량체 IIa-16을 수득하였다 (4.3 mg, 45% 수율).
LCMS M+H=721.30.
유사하게, 거울상이성질체 108a를 이량체 단위 중 1개에서 비천연 입체화학을 갖는 이량체 110으로 전환시켰다.
Figure pct00156
또한 유사하게, 화합물 106a를 거울상이성질체 111a (LCMS M+H=411.95; 18.6 mg, 18% 수율) 및 111b (LCMS M+H=411.95; 19 mg, 18% 수율)로 전환시켰다. 이들 거울상이성질체를 필요한 변경을 가하여 상기 절차에 따라 사용하여 이량체를 제조할 수 있다.
Figure pct00157
실시예 26 - 이량체의 생물학적 활성
본 발명의 이량체의 세포독성 활성을 다양한 암 세포주, 예컨대 H226 폐암, DMS 79 폐암, H187 폐암, N87 위암, 786-O 신암, 및/또는 OVCAR3 난소암 세포주에 대해 시험할 수 있다. 세포 증식을 억제하는 것에 대한 이량체의 능력을 또한 ATP 발광 검정 또는 MTS 세포 증식 검정에 의해 측정할 수 있다. 일반적으로, 이들 2종의 방법은 비슷한 결과를 생성한다.
하기는 ATP 발광 검정에 대한 일반적 절차이다: 세포를 각각 ATP 셀타이터글로(CellTiterGlo)™ 검정을 위해 3시간 동안 96-웰 플레이트에 1 x 103개 세포/웰로 시딩하였다. 화합물의 연속 희석물 (1:3)을 웰에 첨가하였다. 플레이트를 72시간 동안 인큐베이션되도록 하였다. 프로메가로부터의 셀타이터글로™ 세포 생존율 키트를 제조업체의 지침에 따라 시험 화합물로 처리된 세포의 ATP 함량을 측정하는데 사용하였다. ATP 함량의 감소는 세포 생존율의 감소의 척도이다. EC50 값 - 작용제가 세포 생존율을 최대 효과의 50%만큼 감소시키는 농도 -은 프리즘(PRISM)™ 소프트웨어, 버전 5.0 (그래프패드 소프트웨어, 미국 캘리포니아주 라 졸라)을 사용하여 계산할 수 있다.
MTS 세포 증식 검정을 하기와 같이 수행하였다: 프로메가 (위스콘신주 매디슨)로부터의 셀타이터 96 수성 비-방사성 세포 증식 키트를 사용하여 세포 증식 검정에서 생존 세포의 수를 결정하였다. 종양 세포를 웰당 40 μL에서의 멸균 384-웰 흑색 투명 바닥 매트릭스 플레이트에 특정 시딩 밀도로 플레이팅하고, 검정 전에 5% CO2 중에서 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날에, 한 세트의 세포 플레이트 (10개의 플레이트)를 사용하여 제0 시점 세포 밀도를 결정하고, 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라졸륨은 10개의 플레이트에 4 μL/웰로 첨가하고, 이어서 5% CO2 중에서 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 이 테트라졸륨 시약은 간 세포에 의해 생체환원되어 수용액 중에 가용성인 포르마잔 생성물을 형성한다. 490 nm에서의 흡광도를 엔비전 판독기 (퍼킨 엘머, 매사추세츠주 보스톤) 상에서 측정하였다. 동일한 날에, 화합물을 남아있는 세포 플레이트 (T72 플레이트)에 첨가하고, 5% CO2 중에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 72시간 후, 4 μL MTS 시약을 이어서 이들 세포 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 추가로 5% CO2 중에서 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션하고, A490에서의 흡광도 값을 엔비전 판독기 상에서 측정하였다.
결과는 표 I에 제시되어 있다.
Figure pct00158
실시예 27 - 접합체의 생물학적 활성
이량체-링커 화합물을 상기 기재된 일반적 절차에 따라 항-푸코실 GM1 항체에 접합하였다. 시험을 N87 위암, DMS 79 및/또는 H187 소세포 폐암 세포주에 대해 수행하였으며, 그의 세포 표면 상에서 처음의 것은 메소텔린을 발현하고, 후자 2종은 푸코실 GM1을 발현한다. 활성을 3H 티미딘 검정을 사용하여 측정하였다 (Cong et al. 2014). 결과는 표 II에 제시되어 있다.
Figure pct00159
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 접합체에서, 항체는 항-푸코실 GM1 또는 항-메소텔린 항체이다.
상기 본 발명의 상세한 설명은 본 발명의 특정한 부분 또는 측면과 주로 또는 배타적으로 관련된 구절을 포함한다. 이는 명료성 및 편의성을 위한 것이고, 특정한 특색은 단지 개시된 구절보다 많은 것과 관련될 수 있으며, 본원의 개시내용은 상이한 구절에서 발견되는 정보의 모든 적절한 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 유사하게, 본원의 다양한 도면 및 설명은 본 발명의 구체적 실시양태에 관한 것이지만, 구체적 특색이 특정한 도면 또는 실시양태의 문맥에 개시된 경우에, 이러한 특색은 또한 적절한 정도로, 또 다른 도면 또는 실시양태의 문맥에, 또 다른 특징과 조합하여, 또는 일반적으로 본 발명에 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
추가로, 본 발명은 특히 특정의 바람직한 실시양태의 관점에서 기재되어 있지만, 본 발명은 이러한 바람직한 실시양태에 제한되지는 않는다. 오히려, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위에 의해 정의된다.
참고문헌
본 명세서에 이전에 제1 저자 (또는 발명자) 및 날짜에 의해 요약된 방식으로 인용된 하기 참고문헌에 대한 전체 인용은 하기 제공되어 있다. 각각의 이들 참고문헌은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
Figure pct00160
Figure pct00161

Claims (29)

  1. 화학식 I에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00162

    여기서
    X는
    Figure pct00163

    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R1은 화학식 Ia 또는 화학식 Ib에 따르고;
    Figure pct00164

    각각의 G 및 G'는 C 또는 N이며, 단 2개 이하의 G 또는 2개 이하의 G'가 N이고;
    각각의 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C5 알킬이고;
    각각의 R3 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, C1-C3 알킬, O(C1-C3 알킬), 시아노, (CH2)0- 5NH2, 또는 NO2이고;
    디아제핀 고리계 내의 각각의 이중선
    Figure pct00165
    는 독립적으로 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
    각각의 R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00166
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00167
    가 단일 결합인 경우에는 H, OH, SO3Na, 또는 SO3K이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 H, C1-C5 알킬, C≡C(CH2)1 -5X2, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0-5X2, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2-5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴,
    Figure pct00168

    이거나;
    또는 R7, R8, R9, 또는 R10이, N인 G 또는 G'에 부착되어 있는 경우에, 이러한 R7, R8, R9, 또는 R10은 부재하고;
    화학식 Ib의 고리 C 내의 점선은 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합의 임의적인 존재를 나타내고;
    R11은 H, =O, =CH2, =CH(C1-C5 알킬), CH=CH(CH2)1- 5X2, C≡C(CH2)1 -5X2, C1-C5 알킬, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2로 치환된 4- 내지 7-원 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클로알킬, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0-5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    R11'는 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합이 존재하는 경우에는 부재하고, 다른 경우에는 H이고;
    각각의 X2는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, O(C1-C3 알킬), O(C1-C3 알킬렌), CO2H, N3, CN, NO2, CO2(C1-C3 알킬), NH2, NH(C1-C5 알킬), N(C1-C5 알킬)2, SH, CHO, N(CH2CH2)2N(C1-C3 알킬), NHNH2, 또는 C(=O)NHNH2이고;
    각각의 Y는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이고;
    Y' 및 Y"는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이며, 단 Y' 및 Y" 중 적어도 1개가 존재한다.
  2. 제1항에 있어서, X는
    Figure pct00169
    인 벤조디아제핀 이량체.
  3. 제1항에 있어서, 화학식 IIa에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체.
    Figure pct00170
  4. 제3항에 있어서, X는
    Figure pct00171
    인 벤조디아제핀 이량체.
  5. 제3항에 있어서, 화학식 IIa"에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체.
    Figure pct00172

    여기서
    R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00173
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00174
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00175
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00176
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R9는 독립적으로 H, OH, OMe, NH2, NMe2, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, 또는
    Figure pct00177
    이고;
    X3은 H, OH, OMe, Me, CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이다.
  6. 제5항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조디아제핀 이량체.
    Figure pct00178

    Figure pct00179

    Figure pct00180
  7. 제1항에 있어서, 화학식 IIb에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체.
    Figure pct00181
  8. 제7항에 있어서, X는
    Figure pct00182
    인 벤조디아제핀 이량체.
  9. 제7항에 있어서, 화학식 IIb"에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체.
    Figure pct00183

    여기서
    R9는 H, OH, OMe, NH2, NMe2, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, 또는
    Figure pct00184
    이고;
    R11은 H, =CH2, CH=CHMe, =CHMe, C≡CCH2NH2,
    Figure pct00185
    이고;
    R11'는 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합이 존재하는 경우에는 부재하고, 다른 경우에는 H이고;
    X3은 H, OH, OMe, Me, CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이고;
    디아제핀 고리계 내의 이중선
    Figure pct00186
    중 적어도 1개는 이중 결합이고;
    R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00187
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00188
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00189
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00190
    가 이중 결합인 경우에는 부재한다.
  10. 제1항에 있어서, 하기의 벤조디아제핀 이량체.
    Figure pct00191

    여기서
    1개의 G'는 N이고, 나머지는 C이고;
    디아제핀 고리계 내의 이중선
    Figure pct00192
    중 적어도 1개는 이중 결합이고;
    R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00193
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00194
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00195
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00196
    가 이중 결합인 경우에는 부재한다.
  11. 제10항에 있어서, X는
    Figure pct00197
    인 벤조디아제핀 이량체.
  12. 화학식 IIIa, IIIb, IIIc 또는 IIIc"'에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
    Figure pct00198

    Figure pct00199

    여기서
    T는 자기-희생 기이고;
    t는 0 또는 1이고;
    AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    u는 0 또는 1이고;
    p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
    q는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 (바람직하게는 2, 3, 4, 또는 8)이고;
    r은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
    s는 0 또는 1이고;
    R31은
    Figure pct00200

    이고;
    X4는 S-S, O 또는 NH이고;
    R1은 화학식 Ia 또는 화학식 Ib에 따르고;
    Figure pct00201

    X는
    Figure pct00202

    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 G 및 G'는 C 또는 N이며, 단 2개 이하의 G 또는 2개 이하의 G'가 N이고;
    각각의 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C5 알킬이고;
    각각의 R3 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, C1-C3 알킬, O(C1-C3 알킬), 시아노, (CH2)0- 5NH2, 또는 NO2이고;
    디아제핀 고리계 내의 각각의 이중선
    Figure pct00203
    는 독립적으로 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
    각각의 R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00204
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00205
    가 단일 결합인 경우에는 H, OH, SO3Na, 또는 SO3K이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 H, C1-C5 알킬, C≡C(CH2)1 -5X2, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0-5X2, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2-5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴,
    Figure pct00206

    이거나;
    또는 R7, R8, R9, 또는 R10이, N인 G 또는 G'에 부착되어 있는 경우에, 이러한 R7, R8, R9, 또는 R10은 부재하고;
    화학식 Ib의 고리 C 내의 점선은 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합의 임의적인 존재를 나타내고;
    R11은 H, =O, =CH2, =CH(C1-C5 알킬), CH=CH(CH2)1- 5X2, C≡C(CH2)1 -5X2, C1-C5 알킬, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2로 치환된 4- 내지 7-원 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클로알킬, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0-5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    R11'는 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합이 존재하는 경우에는 부재하고, 다른 경우에는 H이고;
    각각의 X2는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, O(C1-C3 알킬), O(C1-C3 알킬렌), CO2H, N3, CN, NO2, CO2(C1-C3 알킬), NH2, NH(C1-C5 알킬), N(C1-C5 알킬)2, SH, CHO, N(CH2CH2)2N(C1-C3 알킬), NHNH2, 또는 C(=O)NHNH2이고;
    X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
    각각의 R50은 독립적으로 H, O(C1-C3 알킬), O(C2-C3 알킬렌), O(C2-C3 알키닐), F, Cl, Br, 또는 CN이고;
    각각의 Y는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이고;
    Y' 및 Y"는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이며, 단 Y' 및 Y" 중 적어도 1개가 존재한다.
  13. 제12항에 있어서, 화학식 IIIa'에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
    Figure pct00207

    여기서
    각각의 R9는 독립적으로 H, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1-4H, (CH2CH2O)1-4(C1-C3 알킬), OH, Cl, F, 또는 Br이고;
    R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00208
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00209
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00210
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00211
    가 이중 결합인 경우에는 부재한다.
  14. 제12항에 있어서, 화학식 IIIb에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 u는 1이고, X는
    Figure pct00212
    인 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
  15. 제12항에 있어서, 화학식 IIIb"에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
    Figure pct00213

    여기서
    각각의 R9는 독립적으로 H, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1-4H, (CH2CH2O)1-4(C1-C3 알킬), OH, Cl, F, 또는 Br이고;
    X3은 H, OH, OMe, Me, CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이고;
    R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00214
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00215
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00216
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00217
    가 이중 결합인 경우에는 부재한다.
  16. 제15항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조디아제핀 이량체-링커.
    Figure pct00218

    Figure pct00219

    Figure pct00220

    Figure pct00221
  17. 제12항에 있어서, 화학식 IIIc에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 u는 1이고, X는
    Figure pct00222
    인 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
  18. 제17항에 있어서, 화학식 IIIc"에 의해 나타내어진 구조를 갖는 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
    Figure pct00223

    여기서
    X3은 H, OH, OMe, Me, CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이고;
    디아제핀 고리계 내의 이중선
    Figure pct00224
    중 적어도 1개는 이중 결합이고;
    R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00225
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00226
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00227
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00228
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R9는 H, O(CH2CH2O)1-4H, (CH2CH2O)1-4(C1-C3 알킬), OH, Cl, F, 또는 Br이다.
  19. 제17항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조디아제핀 이량체-링커 화합물.
    Figure pct00229

    Figure pct00230
  20. 화학식 IVa, IVb, IVc 또는 IVc"'에 의해 나타내어진 구조를 갖는, 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
    Figure pct00231

    Figure pct00232

    여기서
    Ab는 항체이고;
    R40은
    Figure pct00233

    이고;
    여기서 Ab에 결합되어 있는 R40의 개방 원자가는 별표 (*)에 의해 나타내고, (CH2)r에 결합되어 있는 R40의 개방 원자가는 파상선 (
    Figure pct00234
    )에 의해 나타내고;
    m은 1, 2, 3, 또는 4이고;
    T는 자기-희생 기이고;
    t는 0 또는 1이고;
    AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    u는 0 또는 1이고;
    p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
    q는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 (바람직하게는 2, 3, 4, 또는 8)이고;
    r은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
    s는 0 또는 1이고;
    X3은 H, OH, OMe, Me, 또는 CH2OH이고;
    X4는 S-S, O 또는 NH이고;
    R1은 화학식 Ia 또는 화학식 Ib에 따르고;
    Figure pct00235

    X는
    Figure pct00236

    로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 G 및 G'는 C 또는 N이며, 단 2개 이하의 G 또는 2개 이하의 G'가 N이고;
    각각의 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C5 알킬이고;
    각각의 R3 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, C1-C3 알킬, O(C1-C3 알킬), 시아노, (CH2)0- 5NH2, 또는 NO2이고;
    디아제핀 고리계 내의 각각의 이중선
    Figure pct00237
    는 독립적으로 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
    각각의 R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00238
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00239
    가 단일 결합인 경우에는 H, OH, SO3Na, 또는 SO3K이고, 이중선이 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    각각의 R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 H, C1-C5 알킬, C≡C(CH2)1 -5X2, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0-5X2, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2-5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴,
    Figure pct00240

    이거나;
    또는 R7, R8, R9, 또는 R10이, N인 G 또는 G'에 부착되어 있는 경우에, 이러한 R7, R8, R9, 또는 R10은 부재하고;
    화학식 Ib의 고리 C 내의 점선은 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합의 임의적인 존재를 나타내고;
    R11은 H, =O, =CH2, =CH(C1-C5 알킬), CH=CH(CH2)1- 5X2, C≡C(CH2)1 -5X2, C1-C5 알킬, OH, O(C1-C5 알킬), 시아노, NO2, F, Cl, Br, O(CH2CH2O)1-8(C1-3 알킬), (CH2)0- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2로 치환된 4- 내지 7-원 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클로알킬, O(CH2)2- 5X2, 비치환되거나 또는 (CH2)0-5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 3- 내지 7-원 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬, 비치환되거나 또는 (CH2)0- 5X2 또는 O(CH2)2- 5X2로 치환된 5- 내지 6-원 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    R11'는 C1-C2, C2-C3, 또는 C2-R11 이중 결합이 존재하는 경우에는 부재하고, 다른 경우에는 H이고;
    각각의 R50은 독립적으로 H, O(C1-C3 알킬), O(C2-C3 알킬렌), O(C2-C3 알키닐), F, Cl, Br, 또는 CN이고;
    각각의 X2는 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, O(C1-C3 알킬), O(C1-C3 알킬렌), CO2H, N3, CN, NO2, CO2(C1-C3 알킬), NH2, NH(C1-C5 알킬), N(C1-C5 알킬)2, SH, CHO, N(CH2CH2)2N(C1-C3 알킬), NHNH2, 또는 C(=O)NHNH2이고;
    각각의 Y는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이고;
    Y' 및 Y"는 독립적으로 CH2, C=O, 또는 CHR12이고; 여기서 각각의 R12는 독립적으로 F, Cl, Br, 또는 C1-C3 알킬이며, 단 Y' 및 Y" 중 적어도 1개가 존재한다.
  21. 제20항에 있어서, 화학식 IVa'에 의해 나타내어진 구조를 갖는, 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
    Figure pct00241

    여기서
    R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00242
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00243
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00244
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00245
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R9는 H, OH, OMe, NH2, NMe2, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, F, Cl, Br 또는
    Figure pct00246
    이다.
  22. 제20항에 있어서, 화학식 IVb에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 아래첨자 u는 1이고, X는
    Figure pct00247
    인 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
  23. 제22항에 있어서, 화학식 IVb"에 의해 나타내어진 구조를 갖는, 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
    Figure pct00248

    여기서
    X3은 H, OH, OMe, Me CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이고;
    R5는 이것이 결합되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00249
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00250
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 결합되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00251
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00252
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R9는 H, OH, OMe, NH2, NMe2, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1- 8Me, OCH2CH2OH, F, Br, Cl, 또는
    Figure pct00253
    이다.
  24. 제20항에 있어서, 화학식 IVc에 의해 나타내어진 구조를 가지며, 여기서 아래첨자 u는 1이고, X는
    Figure pct00254
    인 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
  25. 제24항에 있어서, 화학식 IVc"에 의해 나타내어진 구조를 갖는, 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
    Figure pct00255

    여기서
    X3은 H, OH, OMe, Me, CH2OH, O(알릴), Cl, 또는 CO2Me이고;
    디아제핀 고리계 내의 이중선
    Figure pct00256
    중 적어도 1개는 이중 결합이고;
    R5는 이것이 부착되어 있는 N에 대한 이중선
    Figure pct00257
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00258
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R6은 이것이 부착되어 있는 C에 대한 이중선
    Figure pct00259
    가 단일 결합인 경우에는 H이고, 이중선
    Figure pct00260
    가 이중 결합인 경우에는 부재하고;
    R9는 H, OH, OMe, C1-C3 알킬, O(CH2CH2O)1- 8Me, F, Cl, 또는 Br이다.
  26. 제20항에 있어서, 항체가 항-푸코실 GM1 또는 항-메소텔린 항체인 벤조디아제핀 이량체 및 항체의 접합체.
  27. 제20항에 따른 접합체 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 제제.
  28. 암을 앓고 있는 대상체에게 치료 유효량의 제20항에 따른 접합체를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 암이 폐암 또는 위암인 방법.
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