KR20170098880A - 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어 조성물 및 관련 방법 - Google Patents

지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어 조성물 및 관련 방법 Download PDF

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시몬 피. 로빈슨
로버트 더블유. 시글러
데이비드 씨. 온탱크
느훙 투에트 느구엔
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랜티우스 메디컬 이메징, 인크.
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Abstract

본 발명은, 특히, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 생성에 사용되는 개선된 지질 배합물, 및 그의 사용 방법을 제공한다.

Description

지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어 조성물 및 관련 방법{LIPID-ENCAPSULATED GAS MICROSPHERE COMPOSITIONS AND RELATED METHODS}
관련 출원
본 출원은, 35 U.S.C. § 119(e) 하에 2014년 12월 31일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/098,453의 이익을 주장하며, 상기 가출원은 전체가 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은, 부분적으로, 초음파 조영제의 제조를 위한 신규한 개선된 배합물 뿐만 아니라 초음파 조영제 그 자체의 제조물을 제공한다. 이러한 배합물은, 초음파 조영제의 제조에 사용되는 선행 기술 배합물에 비해, 연장된 기간 동안 실온에서 보다 안정적인 것을 포함하여, 이들의 조성, 이들의 제조 방법 및 이들의 사용 방법에 있어 보다 덜 복잡하고, 또한 놀랍게도 보다 강건하다. 놀랍게도, 이러한 배합물은, 복잡한 조작 없이, 초음파 조영제의 제조에 사용될 수 있다.
본원에서는, 이들 신규한 배합물, 이들 신규한 배합물을 포함하는 키트, 이들 배합물을 사용하여 초음파 조영제를 제조하는 방법을 포함한 이들 배합물의 사용 방법, 및 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어 그 자체의 조성물 또는 제조물이 제공된다. 이들 신규한 배합물은 본원에서 보다 상세히 기재되는 비-수성 혼합물을 포함한다.
하나의 양태에서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 비-수성 혼합물 및 완충제로 이루어진 또는 본질적으로 이들로 이루어진 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 비-수성 혼합물 및 완충제로 이루어진 또는 본질적으로 이들로 이루어진 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 비-수성 혼합물 및 완충제로 이루어진 또는 본질적으로 이들로 이루어진 조성물이 제공된다.
완충제는, 비-제한적으로, 아세테이트 완충제(예를 들어, 아세트산나트륨 및 아세트산의 조합), 또는 벤조에이트 완충제(예를 들어, 나트륨 벤조에이트 및 벤조산의 조합), 또는 살리실레이트 완충제(예를 들어, 나트륨 살리실레이트 및 살리실산의 조합)일 수 있다.
상기 조성물은, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 생성하기 위해, 멸균 용기 내에, 선택적으로 퍼플루오로카본 기체와 함께, 그리고 추가로 선택적으로 퍼플루오로카본 기체의 존재 하에, 그리고 선택적으로 수성 희석제의 존재 하에 이러한 조성물을 활성화시키기 위한 지시를 포함한 사용을 위한 지시와 함께 제공될 수 있다. 활성화될 조성물은 제2 상으로서 수성 희석제를 포함할 수 있고, 따라서 활성화 전에 비-균질 상태일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 비-수성 혼합물, 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 중량 대 중량 대 중량(w/w/w) 비율은 약 1:50:50 내지 약 1:1000:1000, 또는 약 1:100:100 내지 약 1:600:700의 범위이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 1:120:120 내지 약 1:400:400, 또는 약 1:120:120 내지 약 1:300:300, 또는 약 1:120:120 내지 약 1:250:250이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 1:100:150 내지 약 1:150:200이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 1:250:300 내지 약 1:300:350이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 1:500:600 내지 약 1:600:700이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 1:138:168 또는 약 1:276:336 또는 약 1:552:673이다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 0.75 mg:103.5 mg:126.2 mg이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 0.375 mg:103.5 mg:126.2 mg이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 약 0.1875 mg:103.5 mg:126.2 mg이다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 비-수성 혼합물, 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 w/w 비율은 약 1:10 내지 약 1:2000, 또는 약 1:10 내지 약 1:1500, 또는 약 1:10 내지 약 1:1000, 또는 약 1:20 내지 약 1:2000, 또는 약 1:50 내지 약 1:1000, 또는 약 1:50 내지 약 1:600, 또는 약 1:100 내지 약 1:600의 범위이다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 w/w 비율은 약 1:100 내지 약 1:200, 또는 약 1:100 내지 약 1:150이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 w/w 비율은 약 1:200 내지 약 1:350, 또는 약 1:250 내지 약 1:300이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 w/w 비율은 약 1:500 내지 약 1:600, 또는 약 1:525 내지 약 1:575이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 w/w 비율은 약 1:138 또는 약 1:276 또는 약 1:552이다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 w/w 비율은 약 0.75 mg:103.5 mg 또는 약 0.375 mg:103.5 mg 또는 약 0.1875 mg:103.5 mg이다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 비-수성 혼합물, 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 w/w 비율은 약 1:10 내지 약 1:2000, 또는 약 1:15 내지 약 1:1500, 또는 약 1:50 내지 약 1:1000, 또는 약 1:50 내지 약 1:7000, 또는 약 1:100 내지 약 1:700의 범위이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 w/w 비율은 약 1:100 내지 약 1:200 또는 약 1:125 내지 약 1:175이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 w/w 비율은 약 1:250 내지 약 1:400, 또는 약 1:300 내지 약 1:350이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 w/w 비율은 약 1:550 내지 약 1:700 또는 약 1:650 내지 약 1:700이다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 w/w 비율은 약 1:168 또는 약 1:336 또는 약 1:673이다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 w/w 비율은 약 0.75 mg:126.2 mg, 또는 약 0.375 mg:126.2 mg, 또는 약 0.1875 mg:126.2 mg이다.
다른 양태에서, 본원에서는, 임의의 상기 조성물을 포함하는 용기가 제공된다.
일부 구현예에서, 용기는 단일 챔버 용기이다.
일부 구현예에서, 용기는 제1 및 제2 챔버를 포함하고, 여기서 비-수성 혼합물은 제1 챔버 내에 있고, 퍼플루오로카본 기체는 제2 챔버 내에 있다.
다른 양태에서, 본원에서는, 제1 챔버 내의 임의의 상기 조성물 및 제2 챔버 내의 수성 희석제를 포함하는 용기가 제공된다.
다른 양태에서, 본원에서는, 임의의 상기 조성물 및 수성 희석제를 포함하며, 여기서 비-수성 혼합물은 제1 챔버 내에 제공되고, 퍼플루오로카본 기체는 제2 챔버 내에 제공되고, 수성 희석제는 제3 챔버 내에 제공되는 것인 용기가 제공된다.
일부 구현예에서, 수성 희석제는 수성 식염수 용액이다. 일부 구현예에서, 수성 희석제는 수성 완충 용액이다. 일부 구현예에서, 수성 희석제는 수성 완충 식염수 용액이다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 혼합물, 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 조성물이 제공된다. 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 혼합물은 블렌딩된 고체 형태(예를 들어, 지질의 비교적 균질한 혼합물)일 수 있거나, 또는 이는 고체 형태의 각각의 지질의 조합(예를 들어, 지질의 균질 혼합물일 수 있거나 이것이 아닐 수 있음)일 수 있다. 또 다른 양태에서, 본원에서는, 상기 고체 형태 조성물을 포함하는 용기가 제공된다. 일부 구현예에서, 용기는 단일 챔버를 갖는 용기이다. 일부 구현예에서, 용기는 2 개의 챔버를 갖는 용기이고, 여기서 제1 챔버는 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하고, 제2 챔버는 퍼플루오로카본 기체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 2 개의 챔버를 갖는 용기이고, 여기서 제1 챔버는 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하고, 제2 챔버는 (a) 프로필렌 글리콜, (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤, 또는 (c) 글리세롤을 포함한다. 지질(합계) 대 프로필렌 글리콜 및/또는 대 글리세롤의 w/w/w 비율은 상기에 언급된 바와 같을 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 3 개의 챔버를 갖는 용기이고, 여기서 제1 챔버는 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하고, 제2 챔버는 퍼플루오로카본 기체를 포함하고, 제3 챔버는 (a) 프로필렌 글리콜, (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤, 또는 (c) 글리세롤을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 수성 희석제를 포함하는 추가의 챔버를 갖는 용기이다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 용액 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜을 포함하는 비-수성 용액 중의, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 글리세롤을 포함하는 비-수성 용액 중의, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구현예에서, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 1.0 마이크론 내지 약 2.0 마이크론 범위의 평균 직경을 갖는다. 일부 구현예에서, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 1.2 마이크론 내지 약 2.0 마이크론 범위의 평균 직경을 갖는다. 일부 구현예에서, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 1.4 마이크론 내지 1.8 마이크론의 평균 직경을 갖는다.
일부 구현예에서, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 108/mL 초과의 농도로 조성물 중에 존재한다.
다양한 구현예가 상기 조성물에 동등하게 적용되고, 이제 이를 언급할 것이다.
일부 구현예에서, 비-수성 혼합물은 5 중량% 미만의 물(즉, 지질 및 프로필렌 글리콜 및/또는 글리세롤의 합계 중량에 대한 물의 중량)을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-수성 혼합물은 1 중량% 내지 4 중량%의 물을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-수성 혼합물은 1 중량% 미만의 물을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 무-염(salt-free) 조성물이고, 이는 이것이 조성물 중에 지질에 대한 반대-이온은 포함할 수 있지만 기타 다른 이온은 갖지 않음을 의미한다. 지질 반대-이온은 통상적으로 나트륨과 같은 양이온이다. 따라서, 일부 구현예에서 조성물은 음이온을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 조성물은 염화나트륨을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 조성물은 클로라이드 이온을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 조성물은 완충제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 비-포스페이트 완충제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 아세테이트 완충제, 또는 벤조에이트 완충제, 또는 살리실레이트 완충제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계)는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.9 mg 내지 약 8 mg 지질, 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.9 mg 내지 약 7.5 mg 지질, 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 2 mg 내지 약 7.5 mg 지질, 또는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 2 mg 내지 약 4 mg 지질의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계)는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.94 mg 내지 약 7.5 mg 지질, 또는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 1.875 mg 내지 약 7.5 mg 지질(비-수성 혼합물 1 mL 당 약 1.875 mg 내지 약 3.75 mg 지질, 및 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg 지질 포함)의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, DPPA. DPPC 및 PEG5000-DPPE는 약 10:82:8(몰%)의 비율로 존재한다.
일부 구현예에서, 단독의 또는 퍼플루오로카본 기체와 조합된 비-수성 혼합물은, 실온에서 약 3 개월 동안 저장시 5% 미만의 불순물을 포함한다. 일부 구현예에서, 단독의 또는 퍼플루오로카본 기체와 조합된 비-수성 혼합물은, 데피니티(DEFINITY)®에 비해, 둘 다 실온에서 저장시(즉, 조성물 및 데피니티®를 실온에서 저장시) 보다 적은 불순물을 포함한다.
일부 구현예에서, 퍼플루오로카본 기체는 퍼플루오로프로판 기체이다.
일부 구현예에서, PEG5000-DPPE는 MPEG5000-DPPE이다.
일부 구현예에서, 조성물은 바이알 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 약 3.8 mL 이하의 실제 부피를 갖는 바이알 내에 제공된다.
일부 구현예에서, 조성물은 V자형 바닥을 갖는 바이알 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 평바닥을 갖는 바이알 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 둥근 바닥을 갖는 바이알 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 바이알은 유리 바이알이다. 일부 구현예에서, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중에서 조합된 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 비-수성 혼합물, 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 조성물은, 약 3.75 mg/ml의 지질 농도로 2 mL 니프로(Nipro)(휘톤(Wheaton)) 바이알 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중에서 조합된 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 비-수성 혼합물, 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 조성물은, 약 3.75 mg/ml의 지질 농도로 2 mL 스코트(Schott) 바이알 내에 제공된다.
일부 구현예에서, 조성물은 단일 챔버 용기 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 다챔버 용기 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 제1 챔버 내에 제공되고, 수성 희석제는 제2 챔버 내에 제공된다. 수성 희석제는 식염수 용액일 수 있거나, 또는 이는 무-식염수(saline-free) 희석제일 수 있다. 수성 희석제는 완충 용액일 수 있거나, 또는 이는 무-완충제 희석제일 수 있다. 수성 희석제는 완충 식염수 용액일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 용기 내에 임의의 상기 조성물을 포함하는 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 용기는 단일 챔버 용기이다.
일부 구현예에서, 키트는 제2 용기를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 용기는 수성 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 용기는 예비-충전된 시린지이다.
일부 구현예에서, 용기는 다챔버 용기이다. 일부 구현예에서, 제1 용기는 고체 형태의 지질(즉, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE)을 포함하고, 제2 용기는 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함한다. 제3 용기는 수성 희석제를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 용기는 프로필렌 글리콜 중의 지질을 포함하고, 제2 용기는 글리세롤 또는 수성 희석제를 포함한다. 대안적으로, 제2 용기는 글리세롤을 포함하고, 제3 용기는 수성 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 용기는 글리세롤 중의 지질을 포함하고, 제2 용기는 프로필렌 글리콜 또는 수성 희석제를 포함한다. 대안적으로, 제2 용기는 프로필렌 글리콜을 포함하고, 제3 용기는 수성 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 용기는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 지질을 포함하고, 제2 용기는 수성 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 활성화 장치, 예컨대 비알믹스(VIALMIX)® 장치(이에 제한되지는 않음)를 추가로 포함한다.
또한, 본 발명에 따라, 특정 비-수성 혼합물(즉, 특정 이들 개질된 지질 배합물)을 사용하여, 본원에서 "활성화"로서 언급되는 방법을 통해, 비-수성 혼합물로서 또는 조합된 용액의 균질도에 관계 없이 수성 희석제의 단순 첨가 후에, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 생성할 수 있음이 발견되었다. 이는, 특정 시판 조영제가, 과량의 수용액 중의 지질을 포함하는, 예비-배합된 단일-상 혼합물을 활성화시킴으로써 제조되기 때문에 놀라운 것이다. 본 발명 이전에는, 적합한 크기 및 수의 지질-캡슐화된 마이크로스피어가 수용액 중의 지질의 예비-배합 없이 또는 수용액의 부재 하에 생성될 수 있음이 공지되어 있지 않았다.
따라서, 또 다른 양태에서, 본원에서는, 퍼플루오로카본 기체의 존재 하에, 그리고 수성 희석제의 존재 또는 부재 하에, 임의의 상기 비-수성 혼합물을 활성화시켜, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 것을 포함하는, 초음파 조영제의 형성 방법이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 임의의 상기 비-수성 혼합물을 퍼플루오로카본 기체의 존재 하에 수성 희석제와 조합하는 단계, 및 조합물을 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계를 포함하는, 초음파 조영제의 형성 방법이 제공된다. 수성 희석제는 교반 또는 기타 다른 개질(예를 들어, 가열 등)을 사용하거나 사용하지 않고 비-수성 혼합물에 첨가될 수 있고, 이러한 조합된 혼합물은, 이것이 단일-상 혼합물(즉, 지질 및 수성 상이 실질적으로 뒤섞이고/뒤섞이거나 혼합물이 비교적 균질한 것으로 나타남)인지 이중-상 혼합물(즉, 지질 및 수성 상이 실질적으로 뒤섞이지 않고/않거나 혼합물이 비교적 균질한 것으로 나타나지 않음)인지의 여부에 관계없이, 퍼플루오로카본 기체의 존재 하에, 활성화될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 특정 상기 비-수성 혼합물과 프로필렌 글리콜 단독을 또는 프로필렌 글리콜 및 수성 희석제(동시에 또는 연속하여)를 조합하는 단계, 및 조합물을 퍼플루오로카본 기체의 존재 하에 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계를 포함하는, 초음파 조영제의 형성 방법이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 특정 상기 비-수성 혼합물과 글리세롤 단독을 또는 글리세롤 및 수성 희석제(동시에 또는 연속하여)를 조합하는 단계, 및 조합물을 퍼플루오로카본 기체의 존재 하에 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계를 포함하는, 초음파 조영제의 형성 방법이 제공된다.
비-수성 혼합물은 실온에 있을 수 있고/있거나 사용 전에 실온에서 저장된 것일 수 있다. 실온에서의 저장은 수 일, 내지 수 개월, 내지 수 년의 범위일 수 있다.
일부 구현예에서, 활성화는 20 초 내지 45 초 동안 일어난다. 일부 구현예에서, 활성화는 60 초 내지 120 초 동안 일어난다.
일부 구현예에서, 방법은 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 추가의 수성 희석제 중에 희석하는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 조영 초음파 영상화를 필요로 하는 대상체에게 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 바이알 내에 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 시린지 내에 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 단일 챔버 용기 내에 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 다챔버 용기 내에 있다.
또 다른 양태에서, 본원에서는, 본원에 기재된 조성물 중 임의의 하나에서의 불순물의 수준을 검출 및/또는 측정하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 특히, 조성물의 온전성을 평가하는 데 유용하고, 이를 사용하여 조성물이 사용에 적합한지 또는 폐기되어야 하는지를 결정할 수 있다. 방법은, 본원에 기재된 조성물의 새로 제조된 배치 상에서 수행될 수 있거나, 또는 이들은 제조 후 일정 기간 동안 저장 또는 수송 중에 있었던 배치 상에서 수행될 수 있다.
방법은 샘플의 성분을 검출하고 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은, 성분들을, 선택적으로 검출 및 식별 전에, 물리화학적 특성, 예컨대 전하 및 친유성(이에 제한되지는 않음)에 기초하여 분리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서는, 분리를 검출 전에 수행하고, 샘플을 분리 전에 식염수로 희석한다. 일부 구현예에서는, 샘플을, 균질 용액이 얻어질 때까지 혼합한다. 물리화학적 특성에 기초한 분리 기법은 당업계에 공지되어 있고, 이는 HPLC, 예컨대 역상 HPLC를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이어서, 불순물을 검출하고, 선택적으로 대전 에어로졸 검출(CAD)(이에 제한되지는 않음)과 같은 기법을 사용하여 측정한다. 또 다른 구현예에서는, 분리 후에 증발 광 산란 검출(ELSD)을 사용할 수 있다. 이러한 검출의 예를 하기에서 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 이들 및 다른 양태 및 구현예를 본원에서 보다 상세히 설명한다.
도 1. 지질 블렌드/프로필렌 글리콜(LB/PG) 배합물 대 데피니티®의 안정성.
도 2. 지질 블렌드/프로필렌 글리콜/글리세롤(LB/PG/G) 배합물 대 데피니티®의 안정성.
도 3. 지질 블렌드/프로필렌 글리콜/글리세롤/완충제(LB/PG/G/완충제) 배합물 대 데피니티®의 안정성.
본 발명에 따라, 초음파 영상화제로서 사용되는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 생성을 위한 지질 배합물이, 유의한 열화 없이, 실온(연장된 기간 동안의 실온 포함)에서 유지될 수 있음이 발견되었다. 이전에는, 상기 목적으로 사용되는 지질 배합물은 열화를 피하기 위해 4℃에서 저장되어야 한다고 여겨졌다. 본 발명에 따라, 실온에서 수 개월 동안의 이들 개질된 지질 배합물의 저장이, 실온에서 동일한 기간 동안 저장시 현재 시판되는 초음파 조영제 중에 존재하는 것 미만의 수준인 5% 미만의 불순물을 초래함이 발견되었다.
중요하게, 이들 개질된 지질 배합물(지질-함유 비-수성 혼합물로서 언급됨)의 실온에서의 저장(실온에서의 장기간 저장 포함)은, 현재 시판되는 초음파 조영제와 유사한 크기 및 양의 마이크로스피어를 형성하는 능력에 의해 입증되는 바와 같이, 초음파 조영제로서 사용하기 위한 마이크로스피어를 형성하는 이들의 능력에 부정적 영향을 주지 않는다. 따라서, 이들 개질된 지질 배합물은, 적어도 이러한 향상된 안정성의 관점에서, 특정 시판 지질 배합물에 비해 보다 강건하다.
본원에 기재된 신규한 지질 배합물은, 이들이 냉장을 필요로 하지 않기 때문에, 적어도 부분적으로 특정 기존 배합물에 비해 사용이 보다 용이하다. 반면, 특정 현재 시판되는 지질 배합물은 이들의 저장 기간 전반에 걸쳐 냉장되어야 하지만, 이후에는 실온에서 환자에게 투여된다. 이는, 이러한 배합물이, 사용될 수 있기 전에, 먼저 약 4℃로부터 대략 실온까지 가온되어야 함을 의미한다. 반면, 본원에서 제공되는 개질된 지질 배합물은, 실온으로 가온되기까지 필요한 기간 동안의 대기 없이, 본질적으로 "바로 상용가능한(off the shelf)" 것으로 사용될 수 있다. 이는, 이들 개질된 배합물이 사용하기 보다 용이하게 되도록 하고, 또한 예를 들어 비상 상황에서의, 이들의 즉시 사용을 용이하게 한다.
추가로, 개질된 지질 배합물의 고유한 보다 강건한 성질로 인해, 사용 전에(예를 들어, 수송 및 저장 동안을 포함) 이들의 온전성이 손상될 가능성이 적다. 현재 실용에서, 특정 시판 배합물이 실온에서 임의의 상당한 기간 동안 저장된 경우, 이러한 배합물은 문제가 되는 품질을 가질 수 있고, 따라서 폐기되어야 할 수 있다. 신규한 배합물을 사용하면, 최종 사용자는 배합물의 이력 또는 처리에 대하여 고려할 필요가 없다. 따라서, 증가된 사용 용이성 외에도, 또한 온전성 고려로 인해 폐기되는 개질된 지질 배합물은 보다 적을 것이다.
이들 개질된 지질 배합물은 초음파 조영제로서 또는 이들의 중간체로서 사용되도록 의도된다. 이에 따라, 본원에 기재된 바와 같이, 기체와 함께 제공시, 이들은 수성 희석제의 사용 하에 또는 사용 없이 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하도록 활성화될 수 있다. 또한, 수성 희석제가 사용되는 경우, 이러한 배합물은, 비-수성 혼합물 및 수성 희석제의 예비-배합 또는 예비-혼합의 임의의 필요성 없이, 수성 희석제의 단순 첨가 후에 활성화될 수 있다. 일례로, 수성 희석제의 첨가는 불균질 또는 2-상 혼합물을 초래할 수 있고, 이러한 2-상 혼합물이 활성화될 수 있다. 특정 시판 초음파 조영제는, 수성 매트릭스 중에서 배합된 지질의 예비-배합된, 비교적 균질한 단일-상 혼합물로서 제공되고, 이러한 필수적으로 수성-배합된 형태로 활성화된다. 반면, 본원에서 제공되는 개질된 지질 배합물은 이들의 비-수성 형태로 활성화될 수 있거나, 또는 지질(들) 및 수성 희석제의 예비-배합이나 혼합물의 균질화 필요 없이 수성 희석제의 단순 첨가 후에 활성화될 수 있다. 이는 결국, 지질 배합물 부피가 활성화시(수송 및 저장시) 훨씬 더 작을 수 있고, 필요한 경우 이는 사용 직전에 희석될 수 있음을 의미한다. 이는 또한, 수성 희석제의 첨가 없이 활성화될 수 있고, 이어서 배합물이 사용되지 않은 경우, 이후 사용을 위해 배합물을 단순 저장할 수 있기 때문에, 배합물 온전성이 손상될 가능성이 적음을 의미한다. 대신에 비-수성 혼합물이 활성화를 위해 수용액과 조합되어야 하는 경우, 이러한 상황에서는 이러한 유형의 융통성이 손상될 것이고, 배합물이 폐기되어야 할 것이며, 이는 또한 불필요한 폐기물로 이어진다.
따라서, 본 발명은, 부분적으로, 그 자체로 초음파 조영제로서 적합한, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 제조에 사용되는 지질이, 비-수성 혼합물 중에서 배합시, 유의한 열화 없이 연장된 기간 동안 실온에서 저장될 수 있다는 예상외의 놀라운 발견에 기초한 것이다. 비-수성 혼합물은 프로필렌 글리콜, 또는 글리세롤, 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤의 혼합물을 포함할 수 있다. 중요하게, 본원에서 제공되는 지질 배합물은, 특히 마이크로스피어 농도 및 크기(이들 둘 다 마이크로스피어의 음향 특성에 영향을 줌)와 관련하여, 현재 시판되는 초음파 조영제인 데피니티®에 의해 생성되는 것들과 동등한 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 생성한다. 이러한 지질 배합물은 데피니티®에 비해 보다 강건하고 실온에서의 저장(장기간 저장 포함)에 민감하지 않다.
데피니티®는, 좌심실을 불투명화하고 좌심실 심내막 경계의 묘사를 개선시키기 위한 차선의 심장초음파상으로 대상체에서의 사용에 대해 FDA에 의해 승인된 초음파 조영제이다. 데피니티®는 수용액 중의 10:82:8 몰% 비율로 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하는 단일 상 용액, 및 퍼플루오로프로판 기체를 포함하는 헤드스페이스를 포함하는 바이알 내에 제공된다. 대상체로의 투여 전에, 데피니티®는 기계적 진탕에 의해 활성화된다(이후 "활성화된 데피니티®"로서 언급됨). 활성화는 1.1 내지 3.3 마이크론의 평균 직경을 갖는 충분한 수의 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 형성을 초래한다. 그러나, 데피니티®는 사용 직전까지 냉장되어야 한다. 이는 특히 적절한 냉장이 결여된 셋팅에서, 특히 저장 기간 동안 그의 활용성을 제한한다.
특히, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 제조에 사용하기 위한 조성물 및 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어 그 자체의 조성물 및 용도가 본원에서 제공된다. 본 발명은 추가로, 이러한 마이크로스피어의 제조 방법을 제공한다.
저장 배합물
이들 신규한 배합물은 하나 이상의 지질 및 프로필렌 글리콜(PG), 또는 글리세롤(G), 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤(PG/G)의 비-수성 혼합물을 포함한다. 본 발명에 따라, 이들 배합물은, 유의한 열화 없이, 기존 초음파 조영제 배합물을 사용하여 이전에 가능하였던 것에 비해 보다 장기간 동안 보다 고온에서 저장될 수 있음이 발견되었다. 따라서, 이들 조성물은, 배합물을 사용 전에 취급하는 방법에 대한 특별한 고려 없이 폭넓은 범위의 셋팅에서 사용될 수 있다.
이들 신규한 배합물의 향상된 안정성이 실시예에서 입증되며, 여기서는 프로필렌 글리콜 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 지질 배합물이, 실온에서 유지되는 데피니티® 배합물에서 나타나는 것에 비해, 보다 적은 열화로 3 개월 이상 동안 유지될 수 있는 것으로 나타난다. 실시예는, 이들 배합물이 유의한 열화 없이 약 3 개월 내지 6 개월 동안 저장될 수 있음을 입증한다.
프로필렌 글리콜, 또는 글리세롤, 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 지질의 비-수성 혼합물은 5 중량% 이하의 물(즉, 지질(합계) 및 프로필렌 글리콜 및/또는 글리세롤 중량에 대한 물의 중량)을 갖는 혼합물을 의미한다. 일부 경우에, 비-수성 혼합물은 5% 미만의 물(w/w), 1% 내지 4% 물(w/w), 1% 내지 3% 물(w/w), 2% 내지 3% 물(w/w), 또는 1% 내지 2% 물(w/w)을 포함한다. 일부 경우에, 비-수성 혼합물은 1% 미만의 물(w/w)을 포함한다. 물 함량은 제조 종료시(그리고 장기간 저장 전에) 측정될 수 있거나, 또는 이는 저장(장기간 저장 포함) 후 및 사용 직전에 측정될 수 있다.
비-수성 혼합물은 또한, 무-염 혼합물일 수 있고, 이는 지질 반대-이온 이외의 임의의 염을 함유하지 않음을 의미한다. 보다 구체적으로, 일례로, 지질, 예컨대 DPPA 및 DPPE는 통상적으로 나트륨 염으로서 제공된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 무-염 비-수성 혼합물은 이러한 반대-이온(예를 들어, DPPA 및/또는 DPPE가 사용되는 경우 나트륨)을 포함할 수 있으나, 이들은 기타 다른 이온은 함유하지 않는다. 일부 경우에, 비-수성 혼합물은 염화나트륨 또는 클로라이드를 갖지 않는다.
비-수성 혼합물은 완충제를 포함할 수 있다. 완충제는 아세테이트 완충제, 벤조에이트 완충제, 또는 살리실레이트 완충제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에는 비-포스페이트 완충제가 본원에서 제공되는 비-수성 혼합물 중에서의 이들의 용해 프로파일로 인해 바람직하다. 일부 경우에는, 포스페이트 완충제가 사용될 수 있다(예를 들어, 수성 희석제의 첨가 후에 또는 그와 동시에).
일부 구현예에서, 비-수성 혼합물은, (a) 하나 이상의 지질, (b) 프로필렌 글리콜, 또는 글리세롤, 또는 프로필렌 글리콜/글리세롤, 및 (c) 비-포스페이트 완충제를 포함하거나, 이들로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이들로 이루어진다. 이러한 비-수성 혼합물은 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체와 함께 제공될 수 있거나, 또는 이들은 단독으로(즉, 기체의 부재 하에) 제공될 수 있다. 이러한 비-수성 혼합물은 단일 사용량으로 및/또는 단일 사용 용기 내에, 기체와 함께 또는 기체 없이 제공될 수 있다. 이러한 용기는 통상적으로 멸균 용기이다.
비-포스페이트 완충제는, 아세테이트 완충제, 벤조에이트 완충제, 살리실레이트 완충제, 디에탄올아민 완충제, 트리에탄올아민 완충제, 보레이트 완충제, 카르보네이트 완충제, 글루타메이트 완충제, 숙시네이트 완충제, 말레이트 완충제, 타르트레이트 완충제, 글루타레이트 완충제, 아코나이트 완충제, 시트릭 완충제, 아세틱 완충제 , 락테이트 완충제, 글리세레이트 완충제, 글루코네이트 완충제, 및 트리스 완충제일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 경우에, 완충제는 포스페이트 완충제이다. 각각의 완충제 유형에 대하여 완충제 농도를 결정하고 최적화하는 것은 당업자의 기술 내에 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이 실온은, 15℃ 내지 30℃(18℃ 내지 25℃ 및 20℃ 내지 25℃ 포함)의 온도, 및 이들 사이의 모든 온도를 의미한다. 실온은 이러한 온도에 있도록 제어될 수 있지만(예를 들어, 항온으로 유지될 수 있지만), 이에 제한되지는 않는다.
지질
이들 신규한 배합물은 하나의, 그리고 통상적으로는 하나 초과의 지질을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "지질" 또는 "총 지질" 또는 "조합된 지질"은 지질의 혼합물을 의미한다.
지질은 이들의 개개의 고체 상태(예를 들어, 분말화된) 형태로 제공될 수 있다. 대안적으로, 지질은 지질 블렌드로서 제공될 수 있다. 지질 블렌드의 제조 방법은, 미국 특허 8,084,056 및 PCT 출원 공개 WO 99/36104에 기재된 것들을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 지질 블렌드는, 지질을 이들의 개개의 분말화된 형태로 단순 혼합함으로써 다른 방식으로 달성가능한 것에 비해 보다 균질한 지질 혼합물을 초래하도록 블렌딩된 둘 이상의 지질을 나타내도록 의도된다. 지질 블렌드는 일반적으로 분말 형태이다. 지질 블렌드는 수성 현탁-동결건조 방법 또는 유기 용매를 사용한 유기 용매 용해-침전 방법을 통해 제조될 수 있다. 수성 현탁-동결건조 방법에서는, 요망되는 지질을 고온에서 물 중에 현탁시키고, 이어서 동결건조에 의해 농축시킨다.
유기 용매 용해 방법은, 하기 단계를 포함한다:
(a) 요망되는 지질(예를 들어, DPPA, DPPC, 및 MPEG5000 DPPE)과 제1 비-수성 용매 시스템을 접촉시키는 단계. 이 시스템은 통상적으로 용매의 조합, 예를 들어 CHCl3/MeOH, CH2Cl2/MeOH, 및 톨루엔/MeOH이다. 바람직하게, 제1 비-수성 용매는 톨루엔 및 메탄올의 혼합물이다. 지질 용액을 완전한 용해가 달성되기에 충분한 온도까지 가온시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 온도는 바람직하게 약 25℃ 내지 75℃, 보다 바람직하게는 약 35℃ 내지 65℃이다. 용해 후, 용해되지 않은 외부 물질을 고온-여과 또는 실온으로의 냉각 및 이어서 여과에 의해 제거할 수 있다. 공지된 여과 방법을 사용할 수 있다(예를 들어, 중력 여과, 진공 여과, 또는 압력 여과).
(b) 이어서, 용액을 농후 겔/반고체로 농축시키는 단계. 농축은 바람직하게 진공 증류에 의해 수행된다. 기타 다른 용액 농축 방법, 예컨대 회전 증발이 또한 사용될 수 있다. 이 단계의 온도는 바람직하게 약 20℃ 내지 60℃, 보다 바람직하게는 30℃ 내지 50℃이다.
(c) 이어서, 농후 겔/반고체를 제2 비-수성 용매 중에 분산시키는 단계. 혼합물을, 바람직하게는 상온 근처(예를 들어, 15℃ 내지 30℃)에서 슬러리화 한다. 유용한 제2 비-수성 용매는, 여과된 용액으로부터 지질을 침전시키는 것들이다. 제2 비-수성 용매는 바람직하게 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)이다. 기타 다른 에테르 및 알콜이 사용될 수 있다.
(d) 이어서, 제2 비-수성 용매의 첨가에 따라 생성된 고체를 수집하는 단계. 바람직하게는 수집된 고체를 또 다른 부분의 제2 비-수성 용매(예를 들어, MTBE)로 세척한다. 수집은, 바람직하게 상온에서, 진공 여과 또는 원심분리에 의해 수행될 수 있다. 수집 후, 고체를 약 20℃ 내지 60℃의 온도에서 진공에서 건조시키는 것이 바람직하다.
지질 블렌드의 생성 방법과 관련하여 미국 특허 8,084,056 및 PCT 출원 공개 WO 99/36104의 내용이 본원에 참조로 포함된다.
미국 특허 8,084,056 및 PCT 출원 공개 WO 99/36104에 요약된 바와 같은 많은 이유로(유기 용해 방법을 사용시 얻어지는 균일하게 분포된 지질 고체 포함), 유기 용매 용해-침전 방법이 수성 현탁/동결건조 방법에 비해 바람직하다.
대안적으로, 지질은, 프로필렌 글리콜, 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜/글리세롤 중으로 함께 또는 개별적으로 직접 용해되어 비-수성 혼합물을 형성하는 개개의 분말로서 제공될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 지질 용액은 지질의 혼합물을 포함하는 용액이다. 유사하게, 지질 배합물은 하나 이상의 지질을 포함하는 배합물이다. 지질은 양이온성, 음이온성 또는 중성 지질일 수 있다. 지질은 천연, 합성 또는 반-합성 기원의 것일 수 있고, 이는 예를 들어 지방 산, 플루오르화된 지질, 중성 지방, 포스파티드, 오일, 플루오르화된 오일, 당지질, 표면 활성제(계면활성제 및 플루오로계면활성제), 지방족 알콜, 왁스, 테르펜 및 스테로이드를 포함한다.
지질 중 적어도 하나는 인지질일 수 있고, 따라서 지질 블렌드는 인지질 블렌드로서 언급될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 인지질은, 극성(친수성) 인 헤드 기와 함께 유성(소수성) 탄화수소 사슬(들)을 함유하는 지방 물질이다. 인지질은 양친매성이다. 이들은 수성 매질 중에서 자발적으로 경계 및 닫힌 소포를 형성한다.
바람직하게는 모든 지질이 인지질, 바람직하게는 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜콜린(DPPC); 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티드산(DPPA); 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민(DPPE)이다. DPPA 및 DPPE는 일나트륨 염 형태로서 제공될 수 있다.
일부 경우에, 주변 환경(생체내 환경 포함)과의 마이크로스피어의 반응성을 감소시키고, 이로써 그의 반감기를 연장시키기 위해 지질 성분이 개질될 수 있다. 이러한 목적상 중합체, 예컨대 키틴, 히알루론산, 폴리비닐피롤리돈 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 갖는 지질이 또한 사용될 수 있다. PEG에 컨쥬게이션된 지질은 본원에서 페길화된(PEGylated) 지질로서 언급된다. 바람직하게, 페길화된 지질은 DPPE-PEG 또는 DSPE-PEG이다.
중합체, 예컨대 PEG에 대한 지질의 컨쥬게이션은, 다양한 결합 또는 연결, 예컨대 아미드, 카르바메이트, 아민, 에스테르, 에테르, 티오에테르, 티오아미드, 및 디술피드(티오에스테르) 연결(이에 제한되지는 않음)에 의해 달성될 수 있다.
PEG 상의 말단 기는, 히드록시-PEG(HO-PEG)(또는 그의 반응성 유도체), 카르복시-PEG(COOH-PEG), 메톡시-PEG(MPEG), 또는 예를 들어 이소-프로폭시PEG 또는 t-부톡시PEG, 아미노 PEG(NH2PEG) 또는 티올(SH-PEG)에서와 같은 또 다른 저급 알킬 기일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
PEG의 분자량은 약 500 내지 약 10000(약 1000 내지 약 7500, 및 약 1000 내지 약 5000 포함)으로 달라질 수 있다. 일부 중요한 구현예에서, PEG의 분자량은 약 5000이다. 따라서, DPPE-PEG5000 또는 DSPE-PEG5000은, 약 5000의 분자량을 갖는 PEG 중합체가 부착된 DPPE 또는 DSPE를 지칭한다.
지질 용액 중 지질의 총량에 대한 페길화된 지질의 백분율(몰 기준)은, 약 2% 내지 약 20%이다. 다양한 구현예에서, 지질의 총량에 대한 페길화된 지질의 백분율은 5 몰 퍼센트 내지 약 15 몰 퍼센트이다.
바람직하게, 지질은, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜콜린(DPPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티드, 일나트륨 염(DPPA), 및 N-(폴리에틸렌 글리콜 5000 카르바모일)-1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민, 일나트륨 염(PEG5000-DPPE)이다. 폴리에틸렌 글리콜 5000 카르바모일은 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 5000 카르바모일일 수 있다. 일부 중요한 구현예에서, 지질은 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 중 하나, 둘 또는 셋 모두일 수 있다. PEG5000-DPPE는 MPEG5000-DPPE 또는 HO-PEG5000-DPPE일 수 있다.
폭넓게 다양한 지질, 예컨대 운거(Unger)외 다수의 미국 특허 5,469,854에 기재된 것들이 본 방법에서 사용될 수 있다. 적합한 지질은, 예를 들어 지방산, 라이소지질(lysolipid), 플루오르화된 지질, 포스포콜린, 예컨대 혈소판 활성화 인자(PAF)와 연관된 것들(아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids), 미국 알라바마주 알라바스터)(1-알킬-2-아세토일-sn-글리세로 3-포스포콜린, 및 1-알킬-2-히드록시-sn-글리세로 3-포스포콜린 포함); 포화 및 불포화 지질 둘 다를 갖는 포스파티딜콜린(디올레오일포스파티딜콜린 포함); 디미리스토일-포스파티딜콜린; 디펜타데카노일포스파티딜콜린; 디라우로일포스파티딜콜린; 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜콜린(DPPC); 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC); 및 디아라키도닐포스파티딜콜린(DAPC); 포스파티딜에탄올아민, 예컨대 디올레오일-포스파티딜에탄올아민, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민(DPPE) 및 디스테아로일-포스파티딜에탄올아민(DSPE); 포스파티딜세린; 포스파티딜글리세롤(디스테아로일포스파티딜글리세롤(DSPG) 포함); 포스파티딜이노시톨; 스핑고지질, 예컨대 스핑고미엘린; 당지질, 예컨대 강글리오시드 GM1 및 GM2; 글루코지질; 술파티드; 글리코스핑고지질; 포스파티드산, 예컨대 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티드산(DPPA) 및 디스테아로일포스파티드산(DSPA); 팔미트산; 스테아르산; 아라키돈산; 및 올레산을 포함한다.
기타 다른 적합한 지질은, 포스파티딜콜린, 예컨대 디올레오일포스파티딜콜린, 디미리스토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 및 디스테아로일포스파티딜콜린; 포스파티딜에탄올아민, 예컨대 디팔미토일포스파티딜에탄올아민(DPPE), 디올레오일포스파티딜에탄올아민 및 N-숙시닐-디올레오일포스파티딜에탄올아민; 포스파티딜세린; 포스파티딜-글리세롤; 스핑고지질; 당지질, 예컨대 강글리오시드 GM1; 글루코지질; 술파티드; 글리코스핑고지질; 포스파티드산, 예컨대 디팔미토일포스파티드산(DPPA); 팔미틱 지방산; 스테아릭 지방산; 아라키도닉 지방산; 라우릭 지방산; 미리스틱 지방산; 라우롤레익 지방산; 피세테릭 지방산; 미리스톨레익 지방산; 팔미톨레익 지방산; 페트로셀리닉 지방산; 올레익 지방산; 이소라우릭 지방산; 이소미리스틱 지방산; 이소팔미틱 지방산; 이소스테아릭 지방산; 콜레스테롤 및 콜레스테롤 유도체, 예컨대 콜레스테롤 헤미숙시네이트, 콜레스테롤 술페이트, 및 콜레스테릴-(4'-트리메틸암모니오)-부타노에이트; 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 지방산 알콜; 폴리옥시에틸렌 지방산 알콜 에테르; 폴리옥시에틸화된 소르비탄 지방산 에스테르; 글리세롤 폴리에틸렌 글리콜 옥시스테아레이트; 글리세롤 폴리에틸렌 글리콜 리시놀레에이트; 에톡실화된 대두 스테롤; 에톡실화된 피마자유; 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 지방산 중합체; 폴리옥시에틸렌 지방산 스테아레이트; 12-(((7'-디에틸아미노쿠마린-3-일)-카르보닐)-메틸아미노)-옥타데칸산; N-[12-(((7'-디에틸아미노-쿠마린-3-일)-카르보닐)-메틸-아미노)옥타데카노일]-2-아미노-팔미트산; 1,2-디올레오일-sn-글리세롤; 1,2-디팔미토일-sn-3-숙시닐글리세롤; 1,3-디팔미토일-2-숙시닐-글리세롤; 및 1-헥사데실-2-팔미토일-글리세로포스포에탄올아민 및 팔미토일호모시스테인; 라우릴트리메틸암모늄 브로마이드(라우릴-=도데실-); 세틸트리메틸암모늄 브로마이드(세틸-=헥사데실-); 미리스틸트리메틸암모늄 브로마이드(미리스틸-=테트라데실-); 알킬디메틸벤질암모늄 클로라이드(예컨대, 여기서 알킬은 C.sub.12, C.sub.14 또는 C.sub.16 알킬임); 벤질디메틸도데실암모늄 브로마이드; 벤질디메틸도데실암모늄 클로라이드, 벤질디메틸헥사데실암모늄 브로마이드; 벤질디메틸헥사데실암모늄 클로라이드; 벤질디메틸테트라데실암모늄 브로마이드; 벤질디메틸테트라데실암모늄 클로라이드; 세틸디메틸에틸암모늄 브로마이드; 세틸디메틸에틸암모늄 클로라이드; 세틸피리디늄 브로마이드; 세틸피리디늄 클로라이드; N-[1-2,3-디올레오일옥시)-프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTMA); 1,2-디올레오일옥시-3-(트리메틸암모니오)프로판(DOTAP); 및 1,2-디올레오일-e-(4'-트리메틸암모니오)-부타노일-sn-글리세롤(DOTB)을 포함한다.
DPPA, DPPC 및 DPPE가 사용되는 일부 구현예에서, 이들의 몰 백분율은 약 77 몰% 내지 90 몰% DPPC, 약 5 몰% 내지 15 몰% DPPA, 및 약 5 몰% 내지 15 몰% DPPE(DPPE-PEG5000 포함)이다. 각각의 지질의 바람직한 비율은 실시예 섹션에 기재된 것들, 예컨대 6.0 대 53.5 대 40.5(DPPA : DPPC : MPEG5000-DPPE)의 중량% 비율 또는 10 대 82 대 8(10 : 82 : 8)(DPPA : DPPC : MPEG5000-DPPE)의 몰% 비율을 포함한다.
장기간, 실온 저장을 위해 의도된 비-수성 혼합물 중의 지질 농도는 구현예에 따라 달라질 수 있다. 일부 경우에, 지질 농도는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.1 mg 내지 약 20 mg(비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.9 mg 내지 약 10 mg 및 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.9 mg 내지 약 7.5 mg 포함)의 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 농도는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.94 mg 내지 약 7.5 mg 지질(비-수성 혼합물 1 mL 당 약 1.875 mg 내지 약 7.5 mg 지질, 또는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg 지질 포함)의 범위일 수 있다. 일부 경우에, 지질 농도는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.94 mg 내지 약 1.875 mg, 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 1.875 mg 내지 약 3.75 mg, 또는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg의 총 지질이다.
일례로, 지질 농도는 프로필렌 글리콜/글리세롤(합계) 1 mL 당 약 0.1 mg 내지 약 10 mg 지질(프로필렌 글리콜/글리세롤(합계) 1 mL 당 약 1 mg 내지 약 5 mg 지질 포함)의 범위일 수 있다. 일부 경우에, 지질 농도는 프로필렌 글리콜/글리세롤(합계) l mL 당 약 0.94 mg 내지 약 3.75 mg 지질이다.
또 다른 예로서, 지질 농도는 프로필렌 글리콜 1 mL 당 약 0.1 mg 내지 약 20 mg 지질(프로필렌 글리콜 1 mL 당 약 1 mg 내지 약 10 mg 지질, 또는 프로필렌 글리콜 1 mL 당 약 2 mg 내지 약 7.5 mg 지질, 또는 프로필렌 글리콜 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg 지질 포함)의 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 농도는 프로필렌 글리콜 1 mL 당 약 1.875 mg 내지 약 7.5 mg 지질(프로필렌 글리콜 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg 지질 포함)이다.
또한 또 다른 예로서, 지질 농도는 글리세롤 1 mL 당 약 0.1 mg 내지 약 20 mg 지질(글리세롤 1 mL 당 약 1 mg 내지 약 10 mg 지질, 또는 글리세롤 1 mL 당 약 2 mg 내지 약 7.5 mg 지질, 또는 글리세롤 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg 지질 포함)의 범위일 수 있다. 일부 경우에, 지질 농도는 글리세롤 1 mL 당 약 1.875 mg 내지 약 7.5 mg 지질(글리세롤 1 mL 당 약 3.75 mg 내지 약 7.5 mg 지질 포함)이다.
시판 초음파 조영제 지질 배합물에 비해, 보다 낮은 양의 지질을 사용하여도 초음파 조영제로서 여전히 유용한 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 조성물을 생성하는 능력은, 이것이 단일 바이알로부터 대상체에게 투여될 수 있는 지질(및 기타 다른 구성성분)의 최대량을 감소시키고, 이로써 대상체의 돌발적인 과잉투여 위험을 감소시키기 때문에 유리하다.
프로필렌 글리콜은 20℃에서 1.035 g/ml의 밀도를 가지며 실온에서 액체이다. 글리세롤은 20℃에서 1.26 g/ml의 밀도를 가지며 실온에서 액체이다.
장기간, 실온 저장이 가능한 비-수성 혼합물의 총 부피는 의도된 최종 용도에 따라 달라질 수 있다. 일례로, 부피는 약 0.05 mL 내지 약 10 mL, 또는 약 0.1 mL 내지 약 10 mL, 또는 약 0.1 mL 내지 약 5 mL, 또는 약 0.25 mL 내지 약 5 mL, 또는 약 0.5 mL 내지 약 1 mL, 또는 약 0.1 mL 내지 약 1.0 mL의 범위일 수 있다.
이들 비-수성 혼합물은 통상적으로, 예를 들어, 하기에 기재되는 바와 같이, 활성화 전에, 및/또는 대상체에게 투여 전에 수용액으로 희석될 것임을 이해하여야 한다. 총 희석은 약 1 배 내지 약 100 배(약 5 배 내지 약 30 배, 예컨대 약 5 배, 약 10 배, 약 20 배, 및 약 50 배 포함)일 수 있다.
일부 구현예에서, 지질, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 지질 배합물은 활성화 전에 약 5배 희석될 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 및 프로필렌 글리콜을 포함하는 지질 배합물은 활성화 전에 약 10 배 희석될 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 및 글리세롤을 포함하는 지질 배합물은 활성화 전에 약 10 배 희석될 수 있다. 그 후, 희석된 조성물을 약 1 배 내지 약 50 배(약 10 배 내지 약 50 배, 예컨대 약 10 배 포함)로 추가로 희석할 수 있다.
따라서, 상기 언급된 지질, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 농도는 희석에 따라 변할 것이다. 예를 들어, 희석이 약 10 배인 경우, 최종 배합물의 지질 농도는 상기에 언급된 것들에 대해 약 10 배 감소된다. 유사한 감소가 프로필렌 글리콜 및/또는 글리세롤 농도에서 나타날 것이다.
기체
비-수성 혼합물은 기체와 함께 제공될 수 있다. 예를 들어, 비-수성 혼합물은 기체와 접촉되어 제공될 수 있거나, 또는 이들은 기체와 동일한 용기 또는 하우징 내에, 그러나 기체와 접촉되지 않고 제공될 수 있다(즉, 비-수성 혼합물 및 기체가 서로 물리적으로 분리될 수 있음).
이들 비-수성 혼합물이 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체와 접촉되어 실온에서 장기간 안정적으로 저장될 수 있다는 것은 지금까지 공지되거나 예상되지 않았다. 또한, 이들 비-수성 혼합물이 활성화되어 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성할 수 있다는 것도 지금까지 공지되거나 예상되지 않았다. 추가로, 본 발명에 따라, 특정 이들 비-수성 혼합물을 사용하여 임상적으로 유용하도록 충분한 수 및 충분한 크기(예를 들어, 직경으로서 나타냄)의 마이크로스피어를 형성할 수 있음이 발견되었다.
기체는 바람직하게 비-수성 혼합물과 같이 본원에서 제공되는 지질 배합물 중에서 실질적으로 불용성이다. 기체는 비-가용성 플루오르화된 기체, 예컨대 육플루오르화황 또는 퍼플루오로카본 기체일 수 있다. 퍼플루오로카본 기체의 예는, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로헥산을 포함한다. 본 발명의 마이크로스피어에 사용될 수 있는 기체의 예는 미국 특허 5,656,211에 기재되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함된다. 중요한 구현예에서, 기체는 퍼플루오로프로판이다.
기체의 예는, 헥사플루오로아세톤, 이소프로필아세틸렌, 알렌, 테트라플루오로알렌, 삼플루오르화붕소, 1,2-부타디엔, 1,3-부타디엔, 1,2,3-트리클로로부타디엔, 2-플루오로-1,3-부타디엔, 2-메틸-1,3 부타디엔, 헥사플루오로-1,3-부타디엔, 부타디인, 1-플루오로부탄, 2-메틸부탄, 데카플루오로부탄(퍼플루오로부탄), 데카플루오로이소부탄(퍼플루오로이소부탄), 1-부텐, 2-부텐, 2-메틸-1-부텐, 3-메틸-1-부텐, 퍼플루오로-1-부텐, 퍼플루오로-1-부텐, 퍼플루오로-2-부텐, 4-페닐-3-부텐-2-온, 2-메틸-1-부텐-3-인, 부틸니트레이트, 1-부틴, 2-부틴, 2-클로로-1,1,1,4,4,4-헥사플루오로-부틴, 3-메틸-1-부틴, 퍼플루오로-2-부틴, 2-브로모-부티르알데히드, 카르보닐 술피드, 크로토노니트릴, 시클로부탄, 메틸시클로부탄, 옥타플루오로시클로부탄(퍼플루오로시클로부탄), 퍼플루오로이소부탄, 3-클로로시클로펜텐, 시클로프로판, 1,2-디메틸시클로프로판, 1,1-디메틸시클로프로판, 에틸 시클로프로판, 메틸시클로프로판, 디아세틸렌, 3-에틸-3-메틸디아지리딘, 1,1,1-트리플루오로디아조에탄, 디메틸아민, 헥사플루오로디메틸아민, 디메틸에틸아민, 비스-(디메틸 포스핀)아민, 2,3-디메틸-2-노르보르난, 퍼플루오로-디메틸아민, 디메틸옥소늄 클로라이드, 1,3-디옥솔란-2-온, 1,1,1,1,2-테트라플루오로에탄, 1,1,1-트리플루오로에탄, 1,1,2,2-테트라플루오로에탄, 1,1,2-트리클로로-1,2,2-트리플루오로에탄, 1,1-디클로로에탄, 1,1-디클로로-1,2,2,2-테트라플루오로에탄, 1,2-디플루오로에탄, 1-클로로-1,1,2,2,2-펜타플루오로에탄, 2-클로로-1,1-디플루오로에탄, 1-클로로-1,1,2,2-테트라플루오로-에탄, 2-클로로-1,1-디플루오로에탄, 클로로에탄, 클로로펜타플루오로에탄, 디클로로트리플루오로에탄, 플루오로에탄, 니트로펜타플루오로에탄, 니트로소펜타플루오로-에탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로에틸아민, 에틸 비닐 에테르, 1,1-디클로로에틸렌, 1,1-디클로로-1,2-디플루오로-에틸렌, 1,2-디플루오로에틸렌, 메탄, 메탄-술포닐-클로라이드트리플루오로, 메탄-술포닐-플루오라이드-트리플루오로, 메탄-(펜타플루오로티오)트리플루오로, 메탄-브로모-디플루오로-니트로소, 메탄-브로모-플루오로, 메탄-브로모-클로로-플루오로, 메탄-브로모-트리플루오로, 메탄-클로로-디플루오로-니트로, 메탄-클로로-디니트로, 메탄-클로로-플루오로, 메탄-클로로-트리플루오로, 메탄-클로로-디플루오로, 메탄-디브로모-디플루오로, 메탄-디클로로-디플루오로, 메탄-디클로로-플루오로, 메탄-디플루오로, 메탄-디플루오로-요오도, 메탄-디실라노, 메탄-플루오로, 메탄-요오도메탄-요오도-트리플루오로, 메탄-니트로-트리플루오로, 메탄-니트로소-트리오플루오로, 메탄-테트라플루오로, 메탄-트리클로로-플루오로, 메탄-트리플루오로, 메탄술페닐클로라이드-트리플루오로, 2-메틸 부탄, 메틸 에테르, 메틸 이소프로필 에테르, 메틸 락테이트, 메틸 니트라이트, 메틸 술피드, 메틸 비닐 에테르, 네오펜탄, 질소(N.sub.2), 아산화질소, 1,2,3-노나데칸 트리카르복실산-2-히드록시크리메틸에스테르, 1-노넨-3-인, 산소(O.sub.2), 산소 17(.sup.17 O.sub.2), 1,4-펜타디엔, n-펜탄, 도데카플루오로펜탄(퍼플루오로펜탄), 테트라데카플루오로헥산(퍼플루오로헥산), 퍼플루오로이소펜탄, 퍼플루오로네오펜탄, 2-펜탄온-4-아미노-4-메틸, 1-펜텐, 2-펜텐{시스}, 2-펜텐{트랜스}, 1-펜텐-3-브로모, 1-펜텐-퍼플루오로, 프탈산-테트라클로로, 피페리딘-2,3,6-트리메틸, 프로판, 프로판-1,1,1,2,2,3-헥사플루오로, 프로판-1,2-에폭시, 프로판-2,2 디플루오로, 프로판-2-아미노, 프로판-2-클로로, 프로판-헵타플루오로-1-니트로, 프로판-헵타플루오로-1-니트로소, 퍼플루오로프로판, 프로펜, 프로필-1,1,1,2,3,3-헥사플루오로-2,3 디클로로, 프로필렌-1-클로로, 프로필렌-클로로-{트랜스}, 프로필렌-2-클로로, 프로필렌-3-플루오로, 프로필렌-퍼플루오로, 프로핀, 프로핀-3,3,3-트리플루오로, 스티렌-3-플루오로, 육플루오르화황, 황 (디)-데카플루오로(S.sub.2 F.sub.10), 톨루엔-2,4-디아미노, 트리플루오로아세토니트릴, 트리플루오로메틸 퍼옥시드, 트리플루오로메틸 술피드, 육플루오르화텅스텐, 비닐 아세틸렌, 비닐 에테르, 네온, 헬륨, 크립톤, 크세논(특히 루비듐 풍부 과분극 크세논 기체), 이산화탄소, 헬륨, 및 공기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
플루오르화된 기체(즉, 하나 이상의 플루오린 분자를 함유하는 기체, 예컨대 육플루오르화황), 플루오로카본 기체(즉, 플루오르화된 탄소 또는 기체인 플루오르화된 기체), 및 퍼플루오로카본 기체(즉, 완전 플루오르화된 플루오로카본 기체, 예컨대 퍼플루오로프로판 및 퍼플루오로부탄)가 바람직하다.
퍼플루오로카본 기체와 같은 기체는 통상적으로, 생성 동안 공기의 혼입으로 인해 실온에서 그의 통상적 농도 미만으로 존재한다. 비-수성 혼합물 및 기체 헤드스페이스를 포함하는 바이알 내에 존재하는 경우 퍼플루오로프로판의 농도는, 약 1 기압에서, 약 6.52 mg/mL로 예상된다. 당업계에 공지된 바와 같은, 기타 다른 기체의 농도는, 생성 동안 공기의 혼입으로 인해 유사하게 희석될 것이다.
본 발명은, 본원에서 제공되는 비-수성 혼합물이, 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체와 접촉되는지 또는 그와 물리적으로 분리되는지의 여부에 관계없이, 약 4℃ 내지 약 40℃, 약 4℃ 내지 약 30℃, 약 4℃ 내지 약 25℃, 약 10℃ 내지 약 40℃, 약 15℃ 내지 약 40℃, 또는 약 15℃ 내지 약 30℃ 범위의 온도에서 저장될 수 있음을 고려한다.
본 발명은 추가로, 본원에서 제공되는 비-수성 혼합물이, 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체와 접촉되는지 또는 그와 물리적으로 분리되는지의 여부에 관계없이, 약 1 개월 내지 약 6 개월, 약 1 개월 내지 약 1 년, 또는 약 1 개월 내지 약 2 년 동안 저장될 수 있음을 고려한다. 따라서, 본원에서 제공되는 비-수성 혼합물은, 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체와 접촉되는지 또는 그와 물리적으로 분리되는지의 여부에 관계없이, 비-제한적 예로서, 약 15℃ 내지 약 30℃의 온도 범위에서 약 1 개월 내지 약 2 년 동안 저장될 수 있다.
용기 및 챔버 구성
비-수성 혼합물은 용기(또는 하우징) 내에 제공될 수 있다. 용기는 단일 챔버 또는 다챔버 용기, 예컨대 이중 챔버 용기(이에 제한되지는 않음)일 수 있다.
일부 구현예에서, 용기는 바이알이다. 바이알은 유리 또는 플라스틱을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 재료로 제조될 수 있다. 유리는 제약 등급 유리일 수 있다. 용기는 스토퍼, 예컨대 고무 스토퍼로 시일링될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 0.5 mL 내지 10 mL 용기이다. 용기는 1 mL 내지 5 mL 용기, 또는 1 mL 또는 2 mL 용기일 수 있다. 이러한 부피는 통상적으로 용기 내로 배치된 액체의 부피를 지칭한다(액체 충전 부피로서 언급됨). 이는, 액체 충전 부피를 초과할, 용기의 전체 내부 부피와 대조적인 것이다. 액체 충전 및 내부 부피의 예는 하기와 같다: 2.9 mL 내부 부피를 갖는 스코트 2 mL(액체 충전 부피) 바이알; 4.5 mL 내부 부피를 갖는 스코트 3 mL(액체 충전 부피) 바이알; 1.2 mL 내부 부피를 갖는 휘톤 1 mL(액체 충전 부피) V자형 바이알이다.
본 개시내용과 관련하여 이해되는 바와 같이, 용기의 내부 부피는 비-수성 혼합물 및 기체로 점유될 수 있다. 적합한 용기의 일례는, 약 3.75 mL의 실제 내부 부피를 갖는 휘톤 2 mL 유리 바이알(예를 들어, 니프로로부터 상업적으로 입수가능함, Cat. No. 2702, B33BA, 2 cc, 13 mm, 타입 I, 플린트 배관 바이알)이다. 적합한 스토퍼의 일례는 웨스트(West) 그레이 부틸 리오, 실리콘화된 스토퍼(Cat. No. V50, 4416/50, 13 mm)이다. 적합한 시일의 일례는, 웨스트 플립-오프 알루미늄 시일(Cat. No. 3766, 화이트, 13 mm)이다. 용기는 바람직하게 멸균 용기이고/용기이거나 PCT 출원 공개 WO99/36104에 기재된 바와 같이 지질 용액 및/또는 기체의 도입 후에 멸균된다.
일부 구현예에서, 용기는 평바닥 용기, 예컨대 평바닥 바이알이다. 적합한 바이알은 평바닥 보로실리케이트 바이알(휘톤 바이알 포함)이다. 일부 구현예에서, 용기는 비-평바닥 용기 또는 바이알이다. 일부 구현예에서, 용기는 V자형 바닥 용기, 예컨대 V자형 바닥 바이알이다. 일부 구현예에서, 용기는 둥근 바닥 용기, 예컨대 둥근 바닥 바이알이다. 일부 구현예에서, 용기는 그의 바닥 표면적(또는 바닥 표면 직경)이 그의 상단(개구) 표면적(또는 직경)보다 더 작은 또는 이들 사이의 임의의 직경(예를 들어, 본체 직경)보다 더 작은 수렴형 벽을 갖는다. 명확성을 위해, V자형 바닥 용기 또는 바이알은 수렴형 벽을 갖고, 그의 바닥 표면적은 임의의 그의 상단 또는 본체 표면적보다 현저히 더 작다.
일부 구현예에서, 용기는 시린지이다. 비-수성 혼합물은, 선택적으로 기체와 물리적으로 접촉되어, 예비-충전된 시린지 내에 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 용기는 단일 챔버 용기, 예컨대 바이알이다. 이러한 단일 챔버에서, 비-수성 혼합물 및 기체(존재하는 경우)는 서로 물리적으로 접촉될 수 있다.
일부 구현예에서, 용기는 2 개 이상의 챔버를 포함한다. 2 개의 챔버의 내용물은, 예를 들어 저장 동안, 서로 물리적으로 분리된다. 그러나, 사용시에는, 2 개의 챔버의 내용물이 조합되고 상호혼합된다. 따라서, 용기는, 제1 및 제2 챔버의 내용물을 물리적으로 분리하지만 궁극적으로 이들 내용물을 조합하기 위해 "제거"될 수 있는 배리어를 추가로 포함한다. 본 개시내용은, 압력, 기계적 피어싱 또는 펀칭, 용해 등을 포함한 이러한 배리어를 제거하는 임의의 가능한 수단을 고려한다.
이중 챔버 장치, 예컨대 이중 챔버 시린지 또는 이중 챔버 튜브는 당업계에 공지되어 있고, 상업적으로 입수가능하다. 비-제한적 예는, 베터(Vetter) 이중 챔버 시린지 및 네오팩(NeoPak) 이중 챔버 튜브를 포함한다.
일부 구현예에서는, 하나 이상의 지질, 프로필렌 글리콜, 또는 글리세롤, 또는 프로필렌 글리콜/글리세롤, 및 비-포스페이트 완충제로 이루어진 또는 본질적으로 이들로 이루어진 비-수성 혼합물이 용기, 예컨대 단일 챔버 용기 내에 제공된다. 이러한 혼합물은 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체와 함께 또는 이것 없이 제공될 수 있다. 기체와 함께 제공되는 경우, 기체는 비-수성 혼합물과 동일한 챔버 내에, 또는 하기에 제공되는 바와 같이, 다챔버 용기의 별도의 챔버 내에 있을 수 있다.
용기는 2 개의 챔버를 가질 수 있고, 여기서 제1 챔버는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤 중의 지질(들), 예컨대 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하는 비-수성 혼합물을 포함하고, 제2 챔버는 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체를 포함한다. 비-수성 혼합물은 완충제, 예컨대 비-포스페이트 완충제를 포함할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 용기는 2 개의 챔버를 가질 수 있고, 여기서 제1 챔버는
(i) (a) 지질(들), 예컨대 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및
(b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤
을 포함하는 비-수성 혼합물, 및
(ii) 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체
를 포함하고, 제2 챔버는 수성 희석제를 포함한다.
비-수성 혼합물은 완충제, 예컨대 비-포스페이트 완충제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 수용액은 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제를 포함할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 용기는 2 개의 챔버를 가질 수 있고, 여기서 제1 챔버는
(i) (a) 지질(들), 예컨대 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및
(b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤
을 포함하는 비-수성 혼합물을 포함하고, 제2 챔버는
(i) 수성 희석제, 및
(ii) 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체
를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 용기는 적어도 3 개의 챔버를 가질 수 있고, 여기서 제1 챔버는 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하는 비-수성 혼합물을 포함하고, 제2 챔버는 퍼플루오로카본 기체와 같은 기체를 포함하고, 제3 챔버는 수용액을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 용기는, 지질 및 프로필렌 글리콜을 포함하는 비-수성 혼합물을 포함하는 제1 챔버 및 글리세롤을 포함하는 제2 챔버를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 용기는, 지질 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 혼합물을 포함하는 제1 챔버 및 프로필렌 글리콜을 포함하는 제2 챔버를 포함할 수 있다.
수성 희석제는 염, 예컨대 염화나트륨(이에 제한되지는 않음)을 포함할 수 있고, 따라서 식염수 용액으로서 간주될 수 있다. 수성 희석제는 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제를 포함할 수 있고, 따라서 완충 수성 희석제로서 간주될 수 있다. 수성 희석제는 완충 식염수 용액일 수 있다. 비-수성 혼합물은 완충제, 예컨대 비-포스페이트 완충제를 포함할 수 있고, 그의 예가 본원에서 제공된다. 비-수성 혼합물 및 수성 희석제가 둘 다 완충제를 포함할 수 있다. 통상적인 구현예에서는, 비-수성 혼합물 또는 수성 희석제가 완충제를 포함하지만, 둘 다는 아니다. 완충제 농도는, 당업자의 기술 내에서 이해되는 바와 같이, 사용되는 완충제의 유형에 따라 달라질 것이다. 비-수성 지질 배합물 중의 완충제 농도는 약 1 mM 내지 약 100 mM의 범위일 수 있다. 일부 경우에, 완충제 농도는 약 1 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 10 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 5 mM(약 5 mM 포함)일 수 있다.
통상적으로 정맥내로 대상체(인간 대상체 포함)에게 투여될 최종 배합물은, 4 내지 8 범위 또는 4.5 내지 7.5 범위의 pH를 가질 수 있다. 일부 경우에, pH는 약 6 내지 약 7.5의 범위, 또는 6.2 내지 약 6.8의 범위일 수 있다. 또한 다른 경우에, pH는 약 6.5(예를 들어, 6.5 +/- 0.5 또는 +/-0.3)일 수 있다. 일부 경우에, pH는 5 내지 6.5의 범위 또는 5.2 내지 6.3의 범위 또는 5.5 내지 6.1의 범위 또는 5.6 내지 6의 범위 또는 5.65 내지 5.95의 범위일 수 있다. 또 다른 경우에, pH는 약 5.7 내지 약 5.9의 범위(예를 들어, 범위의 한쪽 또는 양쪽 끝값 +/- 0.1 또는 +/- 0.2 또는 +/- 0.3)일 수 있다. 또 다른 경우에, pH는 약 5.8(예를 들어, 5.8 +/- 0.15 또는 5.8 +/- 0.1)일 수 있다.
일부 구현예에서, 수성 희석제는 글리세롤, 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제, 염(들) 및 물을 포함한다. 이러한 수성 희석제는 글리세롤을 갖지 않는 비-수성 혼합물과 함께 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 8:1의 중량비의 식염수(염(들) 및 물의 합계) 및 글리세롤을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 수성 희석제는 프로필렌 글리콜, 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제, 염(들) 및 물을 포함한다. 이러한 수성 희석제는 프로필렌 글리콜을 갖지 않는 비-수성 혼합물과 함께 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 수성 희석제는 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제, 염(들) 및 물을 포함한다. 이러한 수성 희석제는, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 둘 다를 포함하는 비-수성 혼합물과 함께 사용될 수 있다.
본원에서는, 지질 및 프로필렌 글리콜의 비-수성 혼합물, 및 기체를 용기 내로 배치하는 것을 포함하는 방법, 지질 및 글리세롤의 비-수성 혼합물, 및 기체를 용기 내로 배치하는 것을 포함하는 방법, 및 지질 및 프로필렌 글리콜 및 글리세롤의 비-수성 혼합물, 및 기체를 용기 내로 배치하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 임의의 이들 방법에서는, 기체를 헤드스페이스 기체의 교환을 통해 용기 내로 배치할 수 있다. 이러한 목적상 적합한 기체 교환기는 당업계에 공지되어 있다. 기체 교환 장치의 일례는 동결건조 챔버이다. 이어서, 이러한 용기를 약 10℃ 내지 약 50℃, 또는 약 15℃ 내지 약 40℃, 또는 약 20℃ 내지 약 30℃에서 2 년 이하 동안, 또는 1 개월 내지 12 개월 동안, 또는 1 일 내지 30 일 동안 저장할 수 있다. 또 다른 양태에서는, 상기 온도에서, 선택적으로 상기 기간 동안 저장에 대한 지시를 갖는, 또는 대안적으로 4℃에서 또는 냉장 하에 저장에 대한 지시를 갖지 않는 용기가 제공될 수 있다.
본원에서는, 프로필렌 글리콜 중의 지질의 비-수성 용액 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 제1 조성물과 수성 희석제를 포함하는 제2 조성물을 조합하는 것을 포함하는 방법, 글리세롤 중의 지질의 비-수성 용액 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 제1 조성물과 수성 희석제를 포함하는 제2 조성물을 조합하는 것을 포함하는 방법, 및 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 지질의 비-수성 용액 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 제1 조성물과 수성 희석제를 포함하는 제2 조성물을 조합하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
제1 및 제2 조성물은 각각 용기의 제1 및 제2 챔버 내에 제공될 수 있고, 조합은 제1 챔버와 제2 챔버 사이의 시일을 파괴하는 것을 포함할 수 있다. 제1 조성물이 바이알 내에 제공될 수 있고, 제2 조성물이 시린지 내에 제공될 수 있으며, 시린지의 내용물을 바이알의 내용물에 첨가한다. 대안적으로, 제2 조성물이 바이알 내에 제공될 수 있고, 제1 조성물이 시린지 내에 제공될 수 있으며, 시린지의 내용물을 바이알의 내용물에 첨가한다.
상기 구현예에 대한 임의의 조합 또는 변형이 고려되고 이것이 본 개시내용에 포함되며, 상기 예는 명시적으로 지시되지 않는 한 제한적인 것으로 고려되어선 안됨을 이해하여야 한다.
임의의 상기 용기 구현예는, 추가의 하우징과 함께 또는 이것 없이, 4℃ 초과의 온도에서의(또는 냉장 없이) 저장에 대한 지시와 함께 또는 저장 온도에 대해 언급하지 않는 지시와 함께 제공될 수 있다. 본원에서 제공되는 배합물은 4℃에서 저장될 수 있으나 이들이 이 온도에서 저장되어야 할 필요는 없음을 이해하여야 한다. 지시는 장기간 저장, 예컨대 수 일, 수 개월 또는 심지어 수 년 동안의 저장을 추가로 언급할 수 있고, 장기간 저장이 실온 또는 대략 실온(예를 들어, 18℃ 내지 25℃)에서 일어남을 추가로 언급할 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 용기, 예컨대 바이알 내에 있고, 이러한 용기는 라벨링된다. 용기는 그의 외부 표면 중 하나 이상에 부착된 라벨을 가질 수 있다. 이러한 라벨은 종이 라벨 또는 눈에 대해 가시적이고 추가의 보조 또는 장치 없이 최종 사용자가 읽고 이해할 수 있는 기타 다른 이러한 라벨일 수 있다. 대안적으로, 라벨은 기계- 또는 장치-판독가능한 것일 수 있다. 기계- 또는 장치-판독가능한 라벨의 예는, 자기 스트라이프, 칩, 바코드(선형, 매트릭스 및 2D 바코드 포함), 무선 주파수 식별(RFID) 태그 등을 포함한다. 선형 바코드와 같은 바코드는, 통합 코드 관리 기관(Uniform Code Council) 표준 또는 보건 산업 사업 커뮤니케이션 협의회(Health Industry Business Communications Council) 표준에 따르는 또는 이를 충족하는 것들일 수 있다. 이러한 라벨은 결국, 예를 들어 장치, 예컨대 자기 스트라이프 리더, 칩 리더, 바코드 스캐너 또는 리더, RFID 태그 리더 등으로부터 판독될 수 있다. 인증을 위해 및/또는 "추적(track and trace)" 목적으로 사용되는 사실상 임의의 라벨링 기술이 본원에서 제공되는 용기와 함께 사용될 수 있다.
라벨은 용기의 최종 사용자 또는 중간 취급자에게, 그 안에 함유된 조성물의 공급원 및/또는 생성업체(예를 들어, 조성물을 제조하고/제조하거나 조성물의 성분을 생성한 회사 또는 자회사의 명칭 포함), 조성물 제조 일자, 조성물이 제조된 물리적 위치, 용기 수송 일자, 예를 들어 용기를 먼 위치에 저장하였는지의 여부 및 이러한 저장 조건 및 길이를 포함한 용기의 처리, 용기 배달 일자, 배달 수단, FDA에 의해 규정된 국가 약물 코드(NDC), 용기 내용물, 용량 및 투여 방식을 포함한 사용 방법 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 정보를 제공할 수 있다.
라벨은, 예를 들어 용기 및 그 안에 함유된 조성물의 인증을 포함한 하나 이상의 목적을 제공할 수 있다. 인증은 용기가 공인 단체에서 유래되고 제조되었음을 식별하거나 표시하는 능력을 의미하며, 이는 최종 사용자 또는 기타 다른 단체가 또 다른 비-공인 단체로부터 유래된 용기 및 조성물을 식별할 수 있게 한다. 라벨은 또한 용기의 추적에 사용될 수 있다. 이러한 특징은, 생성 후 대상체로의 투여 시점까지 용기 및 그 안에 함유된 조성물의 추종에 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 그 기간 동안 용기의 이동이 데이터베이스에 저장될 수 있고, 선택적으로 이러한 데이터베이스는 조성물의 온전성을 보장하도록 최종 사용자에게 접근가능할 수 있다.
라벨은 조합된 라벨일 수 있고, 이는 이것이 2 개의 상이한 모드를 사용하여 판독되는 정보를 함유할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 라벨은 눈에 대해 가시적인 명백하고 이해가능한 정보(예를 들어, 이는 생성업체의 명칭을 단어로 언급할 수 있음) 및 기계-판독가능한 기타 다른 정보, 예컨대 RFID 내장된 또는 바코드 내장된 정보를 함유할 수 있다.
라벨은 또한 이중 사용 라벨일 수 있고, 이는 이것이 2 개 이상의 목적을 제공할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 라벨은 조성물을 식별하는 정보 및 제조업체 및/또는 제조 일자를 식별하는 추가의 정보를 함유할 수 있다. 이러한 정보는 동일한 포맷으로 또는 상이한 포맷을 사용하여 이송될 수 있다(예를 들어, 하나는 RFID 라벨 내에 제공될 수 있고, 다른 것은 바코드 라벨 내에 제공될 수 있음).
라벨은, 인간에게 가시적이고 이해가능한 내용, 예컨대 제조업체의 명칭을 제공할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 라벨은 인간 눈에 대해 용이하게 가시적이면서 참조되어야 하는 검색 표 또는 기타 다른 형태의 데이터베이스의 부재 하에 의미있는 정보를 제공하지 않는 정보를 함유할 수 있다. 이러한 정보는 예를 들어 문자-숫자 코드로서 제공될 수 있다.
활성화
임의의 상기 조성물을 사용하여, 결국 초음파 조영제로서 사용될 수 있는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는, 주로 기체이고 지질 쉘에 의해 캡슐화된 내부 부피를 갖는 구이다. 지질 쉘은 단층 또는 이중층(유니라멜라 또는 멀티라멜라 이중층 포함)으로서 배열될 수 있다. 이들 마이크로스피어는 초음파 조영제로서 유용하다.
마이크로스피어는 활성화 방법을 통해 비-수성 혼합물로부터 생성된다. 본원에서 보다 상세히 기재되는 바와 같이, 활성화는, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어 생성을 위한 지질 용액(예컨대, 비-수성 용액)의 격렬한 진탕을 지칭한다. 활성화는 통상적으로 용액 1 mL 당 적어도 1 × 107 마이크로스피어, 용액 1 mL 당 5 × 107 마이크로스피어, 또는 용액 1 mL 당 적어도 7.5 × 107 마이크로스피어, 또는 용액 1 mL 당 적어도 1 × 108 마이크로스피어, 또는 용액 1 mL 당 약 1 × 109 마이크로스피어를 생성한다.
본 개시내용은, 본원에서 제공되는 특정 비-수성 혼합물을 사용하여 기체의 존재 하에 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성할 수 있음을 고려한다. 이들 비-수성 혼합물이 활성화될 수 있다는 것은 예상외의 것이었다.
활성화는, 한정된 기간 동안의 진탕을 포함하는 격렬한 교반에 의해 수행될 수 있다. 상기에 기재된 바와 같이, 활성화는 수성 희석제의 존재 또는 부재 하에 일어날 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 활성화는, 기체가 헤드스페이스로부터 지질 용액 내로 도입되도록 지질 용액을 교반하는 운동으로서 정의된다. 지질 용액을 교반하고 기체의 도입을 초래하는 임의의 유형의 운동이 진탕에 사용될 수 있다. 교반은 일정 기간 후에 기포의 형성을 가능하게 하도록 충분한 힘을 가져야 한다. 바람직하게, 교반은 짧은 기간, 예컨대 30 분 내에, 바람직하게는 20 분 내에, 보다 바람직하게는 10 분 내에 기포를 형성하도록 충분한 힘을 갖는다. 일부 구현예에서, 활성화는 5 분 미만, 4 분 미만, 3 분 미만, 2 분 미만, 약 75 초, 1 분 미만, 또는 약 45 초 내에 일어날 수 있다. 교반은 마이크로유화에 의한, 마이크로유동화, 예를 들어 스월링(예컨대, 와류발생에 의한), 사이드-투-사이드(side-to-side), 또는 상하 운동에 의한 것일 수 있다. 상이한 유형의 운동이 조합될 수 있다. 교반은, 지질 용액을 보유하는 용기의 진탕에 의해, 또는 용기 자체의 진탕 없이 용기 내의 지질 용액의 진탕에 의해 일어날 수 있다. 또한, 진탕은 수동으로 또는 기계에 의해 일어날 수 있다. 사용될 수 있는 기계적 진탕기는, 예를 들어, 진탕기 테이블, 예컨대 브이더블유알 사이언티픽(VWR Scientific)(미국 캘리포니아주 세리토스) 진탕기 테이블, 마이크로유동화기, 윅-엘-버그(Wig-L-Bug)™(크레센트 덴탈 매뉴팩쳐링, 인코포레이티드(Crescent Dental Manufacturing, Inc.)(미국 일리노이주 리온스)), 및 기계적 도료 혼합기, 비알믹스®, 또는 실시예 12에 기재된 임의의 장치를 포함한다. 격렬한 교반은 분 당 적어도 약 60 회의 진탕 운동으로서 정의된다. 이것이 일부 경우에 바람직하다. 분 당 적어도 1000 회전의 와류발생이 격렬한 진탕의 일례이고, 이것이 일부 경우에 보다 바람직하다. 분 당 1800 회전의 와류발생이 일부 경우에 훨씬 더 바람직하다.
비알믹스®는 미국 특허 6,039,557에 기재되어 있다. 용기, 예컨대 바이알은 상기에 언급된 시간 범위(예를 들어, 45 초 포함) 동안 비알믹스®를 사용하여 충분히 교반될 수 있다. 비알믹스®를 사용한 활성화는 1 분 미만 또는 그 이상 동안(30 초, 45 초, 60 초, 75 초, 90 초, 105 초, 120 초 또는 그 이상 동안 포함) 일어날 수 있다.
활성화 방법의 추가의 예가 실시예 12에 제공된다.
지질 및 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 혼합물을 기타 다른 용액의 첨가 없이 기체의 존재 하에 활성화시킬 수 있다. 대안적으로, 이 혼합물을 먼저 수성 희석제와 조합하고, 이어서 기체의 존재 하에 활성화시킬 수 있다.
지질 및 프로필렌 글리콜을 포함하는 비-수성 혼합물을 먼저 글리세롤, 및 선택적으로 수성 희석제와 조합하고, 이어서 기체의 존재 하에 활성화시킬 수 있다.
지질 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 혼합물을 먼저 프로필렌 글리콜, 및 선택적으로 수성 희석제와 조합하고, 이어서 기체의 존재 하에 활성화시킬 수 있다.
다른 경우에는, (지질 블렌드이든 아니든) 고체 형태의 지질을 프로필렌 글리콜 단독 또는 글리세롤 단독 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜, 글리세롤 및 수성 희석제(이는 결국 염(들) 및 완충제를 포함할 수 있음) 중에 용해시킬 수 있다. 이들 혼합물 중 임의의 하나를 활성화시킬 수 있고, 일부 경우에는 이를 사용 전에 수성 희석제로 추가로 희석할 수 있다.
따라서, 본원에서는, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 혼합물 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 조성물, 프로필렌 글리콜을 포함하는 비-수성 혼합물 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 조성물, 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 혼합물 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 조성물이 제공된다.
본 개시내용은 또한, 수성 희석제, 예컨대 수성 완충 식염수 용액(이에 제한되지는 않음)의 존재 하에 마이크로스피어의 형성을 고려한다. 수성 희석제는 염(들), 완충제(들), 프로필렌 글리콜, 글리세롤 및 물을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 포함하는 활성화된 조성물은 식염수, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜을 8:1:1의 중량% 비율로 포함할 수 있다.
일단 형성되면, 마이크로스피어를 수성 희석제 중에서 희석하고, 이어서 대상체에게 투여할 수 있다. 수성 식염수 용액은 통상적으로 제약학적으로 허용가능할 것이고, 보존제를 갖지 않을 수 있다(본원에서 무-보존제로서 언급됨). 수성 희석제는 식염수 용액(즉, 이는 염, 예컨대 염화나트륨(이에 제한되지는 않음)을 함유할 수 있음)일 수 있고/있거나, 이는 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제(이에 제한되지는 않음)를 함유할 수 있다. 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 5 배 내지 약 50 배, 또는 약 35 배 내지 약 45 배 희석될 수 있다. 희석된 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 초음파 조영 영상화를 필요로 하는 대상체에게 볼러스 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다.
마이크로스피어는 마이크론 범위의 평균 직경을 갖는다. 일부 구현예에서, 마이크로스피어는 약 1.0 마이크론 내지 약 2.0 마이크론, 또는 약 1.2 마이크론 내지 약 1.8 마이크론 범위의 평균 직경을 갖는다. 일부 구현예에서, 마이크로스피어는 약 1.6 마이크론의 평균 직경을 갖는다.
일부 구현예에서, 대부분의 마이크로스피어는 약 1.0 마이크론 내지 약 3.0 마이크론, 또는 약 1.0 마이크론 내지 약 2.0 마이크론, 또는 약 1.2 마이크론 내지 약 2.0 마이크론 범위, 바람직하게는 약 1.2 마이크론 내지 약 1.8 마이크론 범위의 직경을 가질 수 있다. 대부분의 마이크로스피어는, 조성물 중의 측정된 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90%를 의미한다. 일부 구현예에서, 조성물 중의 검출된 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어의 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 임의의 상기 범위의 직경을 갖는다.
평균 직경은 조성물 중의 모든 검출된 마이크로스피어의 평균 직경을 나타낸다. 마이크로스피어 직경은 통상적으로 당업계에서 공지되고 이용가능한 기기(말베른(Malvern) FPIA-3000 시스멕스(Sysmex) 입도 측정기를 포함하나 이에 제한되지는 않음)를 사용하여 측정된다. 당업계에서 이해될 바와 같이, 이러한 기기는 통상적으로 하한 및 상한 둘 다에 대하여 컷오프 크기를 갖는다. 이는, 이들 컷오프 미만 또는 초과의 마이크로스피어는 각각 카운팅되지 않고(그리고 마이크로스피어 농도 계산에 포함되지 않음), 이들의 직경이 측정되지 않음(그리고 마이크로스피어의 평균 직경 결정에 있어 고려되지 않음)을 의미한다. 실시예에서 사용된 기기는 1.0 마이크론 하한 컷오프 및 40.0 마이크론 상한 컷오프를 갖는다. 1.0 마이크론의 하한 컷오프 및 40.0 마이크론의 상한 컷오프를 사용하여 카운팅되고 검출된 대부분의 마이크로스피어는 1.0 마이크론 내지 20.0 마이크론 범위의 직경을 갖는다. 본 개시내용은 용어 마이크로스피어 크기 및 마이크로스피어 직경을 상호교환가능하게 사용함을 이해하여야 한다. 따라서, 달리 특정되지 않는 한, 마이크로스피어 크기는 마이크로스피어 직경을 지칭한다.
본원에서 제공되는 조성물(활성화된 조성물을 포함)은 기타 다른 구성성분, 예컨대 안정화 물질 또는 안정화제, 점도 개질제, 등장화제, 코팅제, 및 현탁제를 추가로 포함할 수 있다. 작용제의 각각의 부류의 예는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 미국 특허 5,656,211, PCT 출원 공개 WO99/36104, 및 US 출원 공개 US 2013/0022550에 제공되어 있다.
본원에서 제공되는 조성물(활성화된 조성물을 포함)은 아세테이트 완충제, 벤조에이트 완충제, 살리실레이트 완충제, 및/또는 포스페이트 완충제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 완충제를 포함할 수 있다.
조성물의 pH는 약 6.2 내지 약 6.8일 수 있다. 일부 경우에, pH는 5 내지 6.5의 범위 또는 5.2 내지 6.3의 범위 또는 5.5 내지 6.1의 범위 또는 5.6 내지 6의 범위 또는 5.65 또는 5.95의 범위일 수 있다. 또 다른 경우에, pH는 약 5.7 내지 약 5.9(예를 들어, 범위의 한쪽 또는 양쪽 끝값 +/- 0.1 또는 +/- 0.2 또는 +/- 0.3)의 범위일 수 있다. 또 다른 경우에, pH는 약 5.8(예를 들어, 5.8 +/- 0.15 또는 5.8 +/- 0.1)일 수 있다. 이러한 범위는, 예를 들어 물 중에 희석된 아세테이트 완충 배합물을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 최종 조성물(수성 희석제로의 비-수성 용액의 희석 후) 1 mL는 0.75 mg 지질(0.045 mg DPPA, 0.401 mg DPPC, 및 0.304 mg DPPE-PEG5000으로 이루어짐), 103.5 mg 프로필렌 글리콜, 126.2 mg 글리세롤, 2.34 mg 인산나트륨 일염기성 일수화물, 2.16 mg 인산나트륨 이염기성 칠수화물, 및 4.87 mg 염화나트륨(물 중)을 포함한다.
일부 구현예에서, 최종 조성물 1 mL는 약 0.43 mg 지질(0.0225 mg DPPA, 0.2 mg DPPC, 및 0.152 mg DPPE-PEG5000으로 이루어짐), 103.5 mg 프로필렌 글리콜, 126.2 mg 글리세롤, 2.34 mg 인산나트륨 일염기성 일수화물, 2.16 mg 인산나트륨 이염기성 칠수화물, 및 4.87 mg 염화나트륨(물 중)을 포함한다.
일부 구현예에서, 최종 조성물(식염수로의 비-수성 용액의 희석 후) 1 mL는 약 0.75 mg 지질(0.045 mg DPPA, 0.401 mg DPPC, 및 0.304 mg DPPE-PEG5000으로 이루어짐), 103.5 mg 프로필렌 글리콜, 126.2 mg 글리세롤, 0.074 mg 아세트산나트륨, 0.006 mg 아세트산, 및 7.20 mg 염화나트륨(물 중)을 포함한다.
불순물 및 안정성
본 발명은 또한, 비-수성 용액과 같은 지질 용액 중의 불순물 함량을 평가하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은, 임의의 수의 분석 방법, 예컨대 선택적으로 하나 이상의 분리 기법, 예컨대 HPLC와 커플링된 대전 에어로졸 검출(CAD)(이에 제한되지는 않음)을 사용하여 지질 용액을 불순물의 존재에 대하여 분석하는 것을 포함한다. 지질 용액은 지질 및 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 용액일 수 있다. 지질 용액은 완충제, 예컨대 비-포스페이트 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 지질 용액은 염(들) 및/또는 물을 추가로 포함할 수 있다. 임계치 수준 초과의 불순물의 존재는, 지질 용액이 적절하게 저장되지 않았음을, 그의 안정성이 손상되었음을, 그리고 그에 따라 지질 용액을 폐기하고 대상체에게 투여하지 않아야 함을 나타낼 수 있다. 이러한 방법은 품질 관리 목적에 사용될 수 있다.
실시예 2는 비-수성 용액 중의 불순물 함량을 측정하는 방법을 제공한다. 불순물 함량은 입력(또는 이론적 또는 공칭) 지질량에 대한 % 불순물로서 제공되고, 이는 불순물이 지질 손실이 없다는 가정 하에 존재하는 지질의 총량에 대한 백분율로서 나타내어짐을 의미한다.
개질된 지질 배합물은, 실온에서 일정 기간 동안, 예를 들어, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 6 개월, 또는 그 이상(약 1 년, 또는 약 2 년 포함) 동안 저장시 10% 미만, 5% 미만, 또는 2% 미만의 불순물을 포함할 수 있다.
현저히, 개질된 지질 배합물은, 데피니티®에 비해, 두 배합물 모두 실온에서 저장시(즉, 조성물 및 데피니티®를 실온에서 저장시) 보다 적은 불순물을 포함할 수 있다. 이러한 불순물 수준의 감소는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 또는 약 5%, 또는 그 이상의 차이일 수 있다.
용도 및 적용
본 발명은, 마이크로스피어 사용 방법 및 마이크로스피어 조성물을 제공한다. 마이크로스피어는 초음파 조영제로서 의도되고, 이들은 인간 또는 비-인간 대상체에서 생체내에서 또는 시험관내에서 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 진단 또는 치료 목적으로 또는 조합된 진단 및 치료 목적으로 사용될 수 있다.
인간 대상체에서의 초음파 조영제로서의 사용시, 조성물은 충분한 수의 마이크로스피어를 형성하기 위해 본원에 기재된 바와 같이 활성화되고, 선택적으로 보다 큰 부피로 희석되고, 하나 이상의 볼러스 주사 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여는 통상적으로 정맥내 주사이다. 이어서, 그 직후에 영상화가 수행된다. 영상화 적용은 심장에 대한 것일 수 있거나, 또는 이는 초음파 영상화에 민감한 신체의 또 다른 영역을 포함할 수 있다. 영상화는, 심장, 혈관, 심혈관, 및 간을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 신체 기관 또는 영역의 영상화일 수 있다.
본 발명의 대상체는 인간 및 동물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 경우에는 인간이 바람직하다.
지질 조성물은 유효량으로 투여된다. 유효량은 의도된 생체내 반응 및/또는 적용을 용이하게 하거나 일으키는 양일 것이다. 영상화 적용, 예컨대 초음파 적용과 관련하여, 유효량은 대상체 또는 대상체의 영역의 영상화를 가능하게 하는 지질 마이크로스피어의 양일 수 있다.
실시예
실시예 1. 샘플 제조
상업적인, FDA 승인된 초음파 조영제인 데피니티®(란테우스 메디칼 이미징(Lantheus Medical Imaging))를 비교용으로 사용하였다. 각각의 바이알은 하기 물질을 함유한다: 103.5 mg/mL 프로필렌 글리콜, 126.2 mg/mL 글리세롤, 및 2.34 mg/mL 인산나트륨 일염기성 일수화물, 2.16 mg/mL 인산나트륨 이염기성 칠수화물, 및 4.87 mg/mL 염화나트륨(주사용수 중)의 매트릭스 중의, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜콜린(DPPC; 0.401 mg/mL), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티드산(DPPA; 0.045 mg/mL), 및 N-(메톡시폴리에틸렌 글리콜 5000 카르바모일)-1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민(MPEG5000 DPPE; 0.304 mg/mL). pH는 6.2 내지 6.8이다. 지질 용액의 공칭 충전 부피는 3.80 mL의 대략적 부피를 갖는 2 cc 휘톤 유리 바이알 내에서 대략 1.76 mL이고, 따라서 대략 2.04 mL의 헤드스페이스가 퍼플루오로프로판 기체(PFP, 6.52 mg/mL)를 함유한다.
신규한 배합물을 하기와 같이 제조하였다:
DPPC, DPPA, MPEG500 DPPE를 함유하는 지질 블렌드(LB)를 미국 특허 8084056에 기재된 바와 같이 제조하였고, 상기 특허의 내용은 본원에 참조로 포함되며, 이를 본 방법에 사용할 수 있다. 55℃에서 프로필렌 글리콜(PG), 또는 1:1 v/v 프로필렌 글리콜/글리세롤(PG/G), 또는 글리세롤 비히클 중의 LB 분말을 혼합함으로써 LB의 배합물을 제조하였다. 일부 연구에서, 90/10, 75/25, 50/50, 25/79 및 10/90의 염 대 산 비율로 제조된 0.005 M 아세테이트, 벤조에이트, 또는 살리실레이트 완충제를 비히클 중에 용해시켰다. 일부 경우에, 포스페이트 완충제는 수성 또는 식염수 용액 중에 포함되었다.
실시예 2. 지질 안정성
프로필렌 글리콜 중의 실시예 1로부터의 신규한 배합물 지질 블렌드 샘플을 2 cc 휘톤 유리 바이알 내에 배치하고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하였다. 바이알을 25℃에서의 환경 챔버 내에 저장하여 실온 저장을 나타내고, 건조 오븐 내에서 130℃까지 가열하여 종착 멸균을 나타내었다. 적절한 시점에, 샘플 바이알을 저장으로부터 제거하고, 크림핑 제거하고, 식염수를 바이알에 첨가하고 혼합하여 균질 용액을 보장하였다. 샘플을 HPLC 바이알로 전달하고, 불순물에 대해 역상 HPLC 분리 및 코로나(Corona) 대전 에어로졸 검출(CAD; HPLC With Charged Aerosol Detection for the Measurement of Different Lipid Classes, I.N. Acworth, P.H. Gamache, R. McCarthy and D. Asa, ESA Biosciences Inc., Chelmsford, MA, USA; J. Waraska and I.N. Acworth, American Biotechnology Laboratory, January 2008)로 분석하였다.
25℃에서 3 개월 저장된 데피니티® 바이알에 대한 결과가 비교용으로 제공된다. 분석에서는, C18 컬럼, 및 물, 메탄올, 아세트산암모늄 및 트리에틸아민을 함유하는 이동 상을 사용하는 증발 광 산란 검출(ELSD)과 함께 구배 역상 HPLC를 사용하였다. 표 1 및 2는, 25℃ 및 130℃에서의 바이알 내의 총 지질 함량에 대한 백분율로서의 총 불순물을 제공한다.
25℃에서 저장된 프로필렌 글리콜( PG ) 중의 지질 블렌드 (LB) 배합물에 대한 불순물 데이터.
7.50 mg 지질 블렌드 /mL PG* 데피니티 ®
(0.75 mg 지질 블렌드 /mL)
25℃에서의 일 수 96 일
(대략 3 개월)
3 개월
% 총 불순물 2.1 11.86
*LB 함유 PG 177 mg(0.72 wt% LB; 1:138의 LB:PG 비율).
130℃에서 30 분 동안 처리된 프로필렌 글리콜( PG ) 중의 지질 블렌드 (LB) 배 합물 및 데피니티 ® 에 대한 불순물 데이터
7.50 mg 지질 블렌드 /mL PG* 3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG** 데피니티 ®
(0.75 mg 지질 블렌드 /mL)
% 총 불순물 0.334 0.818 4.230
*LB 함유 PG 89 mg(0.72 wt% LB; 1:138의 LB:PG 비율).
**LB 함유 PG 177 mg(0.36 wt% LB; 1:276의 LB:PG 비율).
도 1은, 2℃ 내지 8℃ 및 25℃에서의 데피니티®에 대한, 그리고 25℃에서의 7.5 mg LB/mL PG에 대한 시간의 함수로서의 총 불순물 수준을 나타낸다. 2℃ 내지 8℃에서 저장된 데피니티®에서의 총 불순물 수준은 25℃에서 저장된 7.5 mg LB/mL PG 배합물의 수준과 유사하였다. 그러나, 데피니티®를 25℃에서 저장한 경우, 총 불순물의 수준이 극적으로 증가하였다.
이들 데이터는, 보다 고온에서 7.5 mg LB/mL PG 배합물이 데피니티® 배합물에 비해 훨씬 더 강건함을 입증한다. 이러한 관찰은 예상외의 것이었다.
실시예 3. 지질 블렌드/프로필렌 글리콜/글리세롤(LB/PG/G) 배합물의 안정성
1:1(v:v) 프로필렌 글리콜/글리세롤 중의 실시예 1로부터의 신규한 배합물 지질 블렌드 샘플을 2 cc 휘톤 유리 바이알 내로 충전시키고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하였다. 바이알을 25℃에서의 환경 챔버 내에 저장하여 실온 저장을 나타내고, 건조 오븐 내에서 130℃까지 가열하여 종착 멸균을 나타내었다. 25℃에서 저장된 바이알을 준비하고, 실시예 2에 기재된 바와 같이 분석하였다. 130℃에서 가열된 바이알을 실시예 2에 기재된 바와 같이 준비하였으나, 이는 실시예 2에서 데피니티®에 대해 기재된 바와 같이 HPLC 시스템을 사용하여 분석하였다. 표 3 및 4는, 25℃ 및 130℃에서의 바이알 내의 총 지질 함량에 대한 백분율로서의 총 불순물을 제공한다. 실시예 2에 기재된 바와 같이 분석된 데피니티®에 대한 결과가 비교용으로 제공된다.
25℃에서 저장된 3.75 mg 지질 블렌드 (LB)/mL PG /G 배합물에 대한 불순물 데이터
3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG /G* 데피니티 ®
(0.75 mg 지질 블렌드 /mL)
25℃에서의 일 수 87 일
(대략 3 개월)
3 개월
% 총 불순물 1.747 11.86
*LB 함유 PG/G 391 mg(0.33 wt% LB:44.9 wt% PG:54.8 wt% G; 1:138:168의 LB:PG:G 비율).
130℃에서 30 분 동안 처리된 PG /G 중의 지질 블렌드 (LB) 배합물 및 데피니티 ® 에 대한 불순물 데이터
3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG /G* 데피니티 ®
(0.75 mg 지질 블렌드 /mL)
% 총 불순물 2.558 4.150
*LB 함유 PG/G 391 mg(0.33 wt% LB:44.9 wt% PG:54.8 wt% G; 1:138:168의 LB:PG:G 비율).
도 2는, 2℃ 내지 8℃ 및 25℃에서 저장된 데피니티®에 대한, 그리고 25℃에서 저장된 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물에 대한 시간의 함수로서의 총 불순물 수준을 나타낸다. 데피니티®에서의 총 불순물 수준은 25℃에서 저장된 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물의 수준과 유사하였다. 그러나, 데피니티®를 25℃에서 저장한 경우, 총 불순물의 수준이 극적으로 증가하였다.
이들 데이터는, 보다 고온에서 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물이 데피니티® 배합물에 비해 훨씬 더 강건함을 입증한다. 이러한 관찰은 예상외의 것이었다.
실시예 4. 완충 지질 블렌드/프로필렌 글리콜/글리세롤 배합물의 안정성
0.005 M 아세테이트(75/25 아세트산나트륨/아세트산), 벤조에이트(75/25 나트륨 벤조에이트/벤조산) 또는 살리실레이트(90/10 나트륨 살리실레이트/살리실산) 완충제를 함유하는 1:1(v:v) 프로필렌 글리콜/글리세롤 중의, 실시예 1로부터의 신규한 배합물 지질 블렌드 샘플을 2 cc 휘톤 유리 바이알 내로 충전시키고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하였다. 바이알을 25℃에서 저장하고, 실시예 2에 기재된 바와 같이 준비하고 분석하였다. 실시예 2에 기재된 바와 같이 분석된 데피니티®에 대한 결과가 비교용으로 제공된다. 표 5는 25℃에서의 바이알 내의 총 지질 함량에 대한 백분율로서의 총 불순물을 제공한다.
도 3은, 시간의 함수로서의 총 불순물 수준을 나타낸다. 그러나, 데피니티®를 25℃에서 저장한 경우, 총 불순물의 수준이 극적으로 증가하였다. 이들 데이터는, 보다 고온에서 3.75 mg 완충 LB/mL PG/G 배합물이 데피니티® 배합물에 비해 훨씬 더 강건함을 입증한다. 이러한 관찰은 예상외의 것이었다.
25℃에서 저장된 3.75 mg 지질 블렌드 /mL 완충 PG /G 배합물에 대한 불순물 데이터
3.75 mg 지질 블렌드/mL 완충* PG /G 배합물
75/25 아세테이트 75/25 벤조에이트 90/10 살 리실레이트 데피니티 ®
(0.75 mg 지질 블렌드/mL)
25℃에서의 일 수 50 50 50 2 개월
총 불순물 0.562 0.658 1.475 8.94
*LB 함유 PG/G 391 mg 중의 5 mM 완충제(0.33 wt% LB;44.9 wt% PG; 54.8 wt% G; 1:138:168의 LB:PG:G 비율). 비율은 아세트산나트륨 대 아세트산, 나트륨 벤조에이트 대 벤조산, 나트륨 살리실레이트 대 살리실산을 나타냄.
실시예 5. 지질 블렌드 글리세롤 배합물의 안정성
글리세롤 중의 실시예 1로부터의 신규한 배합물 지질 블렌드 샘플을 2 cc HPLC 유리 바이알 내로 충전시키고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 바이알을 셉텀을 함유하는 스크류 캡으로 시일링하였다. 바이알을 25℃에서 저장하고, 실시예 2에 기재된 바와 같이 준비하고 분석하였다.
실시예 2에 기재된 바와 같이 분석된 데피니티®에 대한 결과가 비교용으로 제공된다. 표 6은 이 실험에 대한 총 불순물 결과를 제공한다. 이들 데이터는, 보다 고온에서 7.5 mg 완충 LB/mL G 배합물이 데피니티® 배합물에 비해 훨씬 더 강건함을 입증한다. 이러한 관찰은 예상외의 것이었다.
25℃에서 저장된 7.50 mg 지질 블렌드 /mL 글리세롤(G) 배합물 *에 대한 불순물 데이터.
7.5 mg 지질 블렌드 /mL G 데피니티 ® (Lot 4519M)
(0.75 mg 지질 블렌드 /mL)
25℃에서의 일 수 149 일
(대략 5 개월)		 6 개월
% 총 불순물 2.478 23.17
*LB 함유 G 215 mg, 0.59 wt% LB(1:168의 LB:G 비율).
실시예 6. 지질 블렌드 분말의 안정성
LB 분말을 25℃에서 PTFE 라이닝 캡을 갖는 황갈색 병 내에 저장하였다. 샘플을 메탄올(50%), 프로필렌 글리콜(10%), 글리세린(10%) 아세트산암모늄(30%, 5 mM) 용액 중에서 제조하였다. 용액을 HPLC 바이알로 전달하고, C18 컬럼, 및 물, 메탄올, 아세트산암모늄 및 트리에틸아민을 함유하는 이동 상을 사용하는 증발 광 산란 검출(ELSD)과 함께 구배 역상 HPLC를 사용하여 분석하였다.
표 7은, 25℃에서 저장된 데피니티®와 비교한 지질 블렌드 분말에 대한 안정성 데이터를 제공한다.
이들 데이터는, 보다 고온에서 지질 블렌드 분말이 데피니티® 배합물에 비해 훨씬 더 강건함을 입증한다.
지질 블렌드 분말에 대한 불순물 데이터
LB 분말 데피니티 ®
(0.75 mg 지질 블렌드 /mL)
25℃ 25℃
25℃에서의 일 수 87 일
(대략 3 개월)		 3 개월
% 총 불순물 1.747 11.86
실시예 7. 데피니티 ® 의 활성화
상업적으로 입수가능한, FDA 승인된 초음파 조영제인 데피니티®(란테우스 메디칼 이미징, 인코포레이티드)를, 비알믹스®를 사용한 PFP/지질 용액의 기계적 진탕에 의해 활성 형태("활성화된 것")로 만든다(미국 특허 6,039,557에 기재됨, 상기 특허의 내용은 본원에 참조로 포함되며, 이를 본 방법에 사용할 수 있음). 이로부터, 지질 마이크로스피어 내로 기체가 혼입되고, 이는 활성 생성물을 나타낸다(데피니티® 규정 정보 참조). 데피니티®의 최적 비알믹스® 활성화는 지속적으로 기체 충전된 마이크로스피어를 생성하고, 이를 1 마이크론 내지 40 마이크론의 하한 및 상한 컷오프를 갖는 적절한 시쓰(sheath) 용액으로 희석시(표 8 참조) 입도 측정기(말베른 FPIA-3000 시스멕스)를 사용하여 수 및 크기 분포에 대해 분석할 수 있다.
말베른 FPIA -3000 시스멕스를 사용하여 분석된 데피니티 ® 버블 수 및 크기.
데피니티®
샘플		 마이크로스피어 평균
직경(마이크론)a 		1 mL 당 마이크로스피어
(× 109)b
샘플 1 1.7 2.67
샘플 2 1.6 3.20
샘플 3 1.7 3.20
샘플 4 1.7 1.75
샘플 5 1.6 2.77
샘플 6 1.6 2.97
평균 1.7 2.76
a 1 마이크론 내지 40 마이크론 범위의 마이크로스피어에 대한 평균 마이크로스피어 직경.
b 1 마이크론 내지 40 마이크론 범위의 마이크로스피어에 대한 평균 마이크로스피어 농도.
필립스 소노스(Philips Sonos) 5500 임상 초음파 영상화 시스템을 사용하여 선택된 샘플에 대해 음향 감쇠를 측정하였다. 샘플을 10 mL 시린지 내에서 1:7.7(1.3 mL 플러스 8.7 mL 식염수)로 희석하였다. 이 시린지로부터의 200 마이크로리터 샘플을 실온에서 0.9% 식염수 200 mL를 함유하는 비커 내로 피펫팅하였다. 2 cm 교반 막대로 용액을 균일하게 유지하고, 초음파 시스템의 s3 변환기를 비커의 상단에 배치하였다(바로 용액 내, 그리고 교반 막대의 상부 가장자리 위의 8.9 cm). 이어서, 5 초의 120 Hz 이미지를 디지털로 획득하고, 디스크로 라이팅하였다. US 시스템을 IBS 모드로 사용하였고, TGC는 모든 깊이에 대해 최소 값에서 고정시키고, LGC는 손상되었다. 기계적 지수(MI)는 최대 18 dB 미만으로 셋팅된 전력에서 0.2였다. 수용 이득을 90으로 고정시키고, 압축을 0으로 하였다. 시험된 각각의 샘플에 대해 US 데이터 획득은 샘플 주입 전(블랭크) 및 후에 획득되었다. 측정은, 비커 내로의 샘플의 도입 후 20 초, 60 초 및 120 초에 얻었다.
필립스 큐랩(Philips QLab)을 사용하여 이미지 분석을 수행하였고, 이는 US 시스템에 의해 생성된 파일을 판독하고, IBS 모드에 대해 dB로 값을 계산하였다. 관심 영역을 교반 막대 상에 취출하고, dB 값을 전체 5 초(대략 360 개 비디오 프레임) 획득에 걸쳐 평균내었다. 블랭크 ROI 값에서 샘플 ROI 값을 뺌으로써(둘 다 dB 단위) 감쇠 측정치를 얻었다. 이를 US 변환기와 교반 막대의 상부 가장자리 사이의 거리의 2 배로 나누어 감쇠를 dB/cm로 얻었다. 비커로의 도입 후 시간에 대하여 얻어진 샘플의 선형 회귀를 적용함으로써 최종 값을 얻었다. 사용된 값은 회귀선의 y-축과의 절편으로부터 유래되었다.
데피니티 ® 음향 감쇠 측정 a
바이알 1 바이알 2 바이알 3 평균 SD
데피니티 ® 2.06 1.97 2.30 2.11 0.17
a 데피니티®의 음향 감쇠를 필립스 소노스 5500을 사용하여 측정.
실시예 8. 비-수성 배합물의 활성화
실시예 1에 기재된 지질 블렌드의 신규한 배합물을 2 cc 휘톤 유리 바이알 내로 칭량 투입하고, 필요한 경우 희석제를 첨가하고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하였다. 필요한 경우 스토퍼를 통해 희석제를 주입하고, 바이알을 최적 생성물 활성화를 생성하는 지속기간 동안 비알믹스®를 사용하여 기계적으로 진탕시켰다. 마이크로스피어 수 및 분포를 결정하고, 일부 활성화된 배합물을 실시예 7에 기재된 방법에 의해 초음파 감쇠에 대해 검사하였다.
활성화 직전에 배합물 희석제a가 첨가된 7.5 mg 지질 블렌드/mL PG 배합물에 대한 마이크로스피어 특징.
샘플
마이크로스피어 평균
직경 (마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어
(× 10 9 )
LB/ PG 배합물(희석제 첨가 후 캡) b 1.82 1.76
LB/ PG 배합물 ( 캡핑 후 스토퍼를 통해 희석제 주입) c 1.82 1.92
a 배합물 희석제는, 배합물 희석에 따라 데피니티® 바이알 조성물에 매칭되도록 글리세롤, 포스페이트 완충제 및 식염수를 함유.
b 177 mg 프로필렌 글리콜 배합물(0.72 wt% LB; 1:138의 LB:PG 비율), 1.59 mL 희석제a 첨가, 헤드스페이스를 PFP로 대체, 2 mL 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 바이알을 비알믹스®로 45 초 동안 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
c 2 mL 바이알 내의 177 mg 프로필렌 글리콜 배합물(0.72 wt% LB; 1:138의 LB:PG 비율), 헤드스페이스를 PFP로 대체, 바이알을 캡핑 및 크림핑. 희석제a 1.59 mL를 일회용 시린지를 사용하여 바이알 내로 스토퍼를 통해 주입, 바이알을 비알믹스®로 45 초 동안 즉시 활성화, 이어서 실시예 7에 기재된 바와 같이 시험.
활성화 직전에 식염수가 첨가된 7.5 mg 지질 블렌드 /mL PG 배합물에 대한 마이크로스피어 특징 및 음향 감쇠.
샘플 마이크로스피어 평균 직경(마이크론) 1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 ) 평균(SD) 음향 감쇠 b (dB/cm)
LB/ PG 배합물 (식염수 첨가 후 캡) a 1.84 1.88 2.13 (0.34)
a 177 mg 프로필렌 글리콜 배합물(0.72 wt% LB; 1:138의 LB:PG 비율), 1.59 mL 0.9% 식염수 첨가, 헤드스페이스를 PFP로 대체, 2 mL 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 바이알을 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
b 음향 감쇠를 실시예 7에 기재된 바와 같이 결정.
7.5 mg 지질 블렌드 /mL PG /G 배합물에 대한 마이크로스피어 특징 및 음향 감쇠.
샘플 마이크로스피어 평균 직경(마이크론) 1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 ) 평균 음향(SD) 감쇠 c (dB/cm)
LB/ PG /G 배합물 ,
식염수 첨가 후 활성화 a 		1.68 2.65 x 109 결정 안 됨
LB/ PG /G 배합물 ,
활성화 후 식염수로 희석 b 		1.82 2.23 x 109 2.12 (0.27)
a 391 mg 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 배합물(0.33% LB;44.9% PG :54.8% G; 1:138:168의 LB:PG:G 비율), 1.38 mL 0.9% 식염수 첨가, 헤드스페이스를 PFP로 대체, 2 mL 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 바이알을 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
b 391 mg 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 배합물(0.33% LB;44.9% PG :54.8% G; 1:138:168의 LB:PG:G 비율), 헤드스페이스를 PFP로 대체, 그리고 바이알 캡핑 및 크림핑(상기 각주 a에 기재된 바와 같음). 식염수 1.38 mL를 일회용 시린지를 사용하여 바이알 내로 주입, 바이알을 즉시 활성화, 그리고 이어서 실시예 7에 기재된 바와 같이 시험.
c 음향 감쇠를 실시예 7에 기재된 바와 같이 결정.
활성화 후에 식염수 희석제가 첨가된 7.5 mg 지질 블렌드 /mL 완충(5 mM ) PG/G 배합물에 대한 마이크로스피어 특징.
아세트산나트륨 대 아세트산 비율(5 mM 총 아세테이트) 마이크로스피어 평균
직경 (마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어
(× 10 9 )
90:10 1.72 3.37 x 109
80:20 1.70 4.69 x 109
70:30 1.74 3.83 x 109
50:50 1.71 3.67 x 109
10:90 1.82 3.01 x 109
a 391 mg 완충 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 배합물(0.33% LB;44.9% PG :54.8% G; 1:138:168의 LB:PG:G 비율), 2 mL 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 바이알을 활성화, 1.38 mL 0.9% 식염수 첨가, 바이알을 혼합하고, 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
이들 연구는, a) PG b) PG/G c) 완충 PG/G 중에 배합된 지질 블렌드가, 희석제를 단순 첨가하고 비알믹스® 상에서 진탕시킴으로써 활성화되어, 활성화된 데피니티®(실시예 7에 나타냄)와 동등한 특징 및 음향 감쇠를 갖는 마이크로스피어를 형성할 수 있음을 입증한다. 이는, 수성 희석제로의 예비-배합이 필요하지 않고, 단순 첨가로 충분함을 입증한다. 또한, 희석제를 바이알 스토퍼를 통해 주입함으로써 지질 배합물에 첨가할 수 있다. 추가로, PG/G 중의 지질 블렌드는, 희석제 첨가 전에 진탕시킴으로써 활성화되어, 활성화된 데피니티®(실시예 7에 나타냄)와 동등한 특징 및 음향 감쇠를 갖는 마이크로스피어를 형성할 수 있음을 입증한다. 이들 발견은 놀라운 것이다.
실시예 9. 개개의 지질 또는 지질 블렌드의 활성화
프로필렌 글리콜 중의 개개의 인지질(DPPA, DPPC 및 MPEG5000 DPPE)을 0.045:0.401:0.304(w:w:w) 비율(지질 블렌드에 대한 비율과 동일함)로 혼합함으로써 배합물(개개의 지질 배합물)을 제조하였다. 생성된 7.5 mg/mL의 개개의 지질 프로필렌 글리콜 배합물을 희석제(데피니티® 바이알 조성물에 매칭되도록 글리세롤, 포스페이트 완충제 및 식염수 함유)에 첨가하고, 혼합하여, 0.75 mg/mL의 최종 총 지질 농도를 형성하였다. 1.7 mL 분취량을 2 cc 휘톤 유리 바이알에 첨가하고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하였다. 바이알을 비알믹스®로 활성화시키고, 시스멕스 FPIA 3000을 사용하여 마이크로스피어 수 및 평균 마이크로스피어 크기에 대해 분석하였다.
7.5 mg 개개의 지질/mL PG 배합물에 대한 마이크로스피어 특징
마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
개개의 지질 배합물 1.7 2.46
본 연구는, 지질 블렌드 제조 없이 PG 중의 개개의 지질을 혼합함으로써 배합물을 생성할 수 있으며, 이는 희석제와의 혼합이, 활성화된 데피니티®(실시예 7과 비교)와 동등한 특징을 갖는 마이크로스피어를 생성할 수 있도록 활성화될 수 있는 용액을 형성할 수 있게 함을 입증한다.
또 다른 실험에서는, 지질 블렌드를 2 cc 휘톤 유리 바이알 내로 칭량 투입하고, 매트릭스(PG/G/식염수)를 바이알에 첨가하고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하고, 이어서 25℃에서 비알믹스®로 활성화시키고, 시스멕스 FPIA 3000을 사용하여 마이크로스피어 수 및 평균 마이크로스피어 크기에 대해 분석하였다. 결과를 표 15에 나타내었다.
PFP 헤드스페이스를 갖는 바이알 내의 지질 블렌드 분말(1.275 mg)에 대한 마이크로스피어 특징
마이크로스피어 평균 직경(마이크론) 1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
지질 블렌드 배합물 1.63 4.10
본 연구는, 지질 블렌드 분말을 바이알 내로 칭량 투입하고, 희석제를 첨가고, 헤드스페이스를 PFP로 대체하고, 바이알을 활성화시켜, 활성화된 데피니티®(실시예 7과 비교)와 동등한 특징을 갖는 마이크로스피어를 생성할 수 있음을 입증한다. 이는, 지질이 활성화를 가능하게 하기 위해 예비-배합될 필요가 없음을 입증한다.
실시예 10. 상이한 지질 농도의 활성화
실시예 1에 기재된 바와 같은 지질 블렌드를 사용하여, 프로필렌 글리콜(PG) 또는 1:1 v/v 프로필렌 글리콜/글리세롤(PG/G) 중의 상이한 양의 LB 분말을 혼합함으로써 총 지질 블렌드 농도를 변화시켜 배합물을 제조하였다. 각각의 지질 배합물을 2 cc 휘톤 유리 바이알 내로 칭량 투입하고, 필요한 경우 희석제를 첨가하고, 헤드스페이스를 PFP 기체로 대체하고, 웨스트, 그레이 부틸 리오 스토퍼를 삽입하고, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑하였다. 바이알을 비알믹스®를 사용하여 기계적으로 진탕시켜 생성물을 활성화시키고, 필요한 경우, 니들이 장착된 시린지를 사용하여 스토퍼를 통해 희석제를 첨가하였다. 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 분포를 결정하였다.
상이한 지질 mg/mL PG 배합물 a 에서의 마이크로스피어 특징
배합물 중 지질
블렌드 농도 		희석 시간 희석 후 지질 블렌드 농도 1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 ) 직경
( μm )
데피니티 ® 0.75 mg 지질 블렌드/mL d n/a n/a 3.05 1.66
7.5 mg 지질 블렌드 /mL PG 활성화 전b 0.75 mg/mL 4.55 1.63
7.5 mg 지질 블렌드 /mL PG 활성화 전c 0.75 mg/mL 4.65 1.72
0.375 mg으로
희석된 데피니티 ® 지질 블렌드 / mL d 		활성화 전 0.375 mg/mL 1.38 1.66
3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG 활성화 전b 0.375 mg/mL 2.24 1.7
3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG 활성화 전c 0.375 mg/mL 2.69 1.72
0.1875 mg으로
희석된 데피니티 ® 지질 블렌드/mL d 		활성화 전 0.1875 mg/mL 0.54 1.75
1.875 mg 지질 블 렌드/mL PG 활성화 전b 0.1875 mg/mL 0.892 1.72
1.875 mg 지질 블 렌드/mL PG 활성화 전c 0.1875 mg/mL 1.25 1.74
a 1.875 mg, 3.75 mg 또는 7.5 mg 지질 블렌드/mL를 함유하는 177 mg의 프로필렌 글리콜(각각 1:552; 1:276; 및 1:138의 LB:PG 비율)을 칭량 투입함으로써 바이알(2 cc 휘톤 바이알)을 준비.
b 바이알을 활성화 전에 8:1(v:v) 식염수 및 글리세롤로 1.7 mL의 최종 부피로 희석. 이어서, 공기 헤드스페이스를 PFP로 교환, 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
c 바이알을 활성화 직전에 식염수로 1.7 mL의 최종 부피로 희석. 이어서, 공기 헤드스페이스를 PFP로 교환, 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
d 데피니티®를 배합물 매트릭스 1 내지 4 또는 1 내지 2로 희석함으로써 바이알(2 cc 휘톤 바이알)을 준비(비-희석 데피니티® 또한 시험), 헤드스페이스 기체를 PFP로 교환, 바이알에 스토퍼 삽입 및 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
상이한 지질 mg/mL PG /G 배합물 a 에서의 마이크로스피어 특징
배합물 중 지질
블렌드 농도 		희석 시간 희석 후 지질 블렌드 농도, 1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 ) 직경
( μm )
데피니티 ® 0.75 mg 지질 블렌드/ mL d n/a n/a 3.05 1.66
3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG /G 활성화 전b 0.75 mg/mL 4.71 1.66
3.75 mg 지질 블렌드 /mL PG /G 활성화 후c 0.75 mg/mL 3.12 1.60
0.375 mg으로
희석된 데피니티 ® 지질 블렌드 / mL d 		활성화 전 0.375 mg/mL 1.38 1.66
1.875 mg 지질 블렌드 /mL PG /G 활성화 전b 0.375 mg/mL 2.45 1.74
1.875 mg 지질 블렌드 /mL PG /G 활성화 후c 0.375 mg/mL 1.73 1.66
0.1875 mg으로
희석된 데피니티 ® 지질 블렌드 per mL d 		활성화 전 0.1875 mg/mL 0.54 1.75
0.9375 mg 지질 블 렌드/mL PG/G 활성화 전b 0.1875 mg/mL 1.00 1.72
0.9375 mg 지질 블 렌드/mL PG/G 활성화 후c 0.1875 mg/mL 0.41 1.89
a 0.9375 mg, 1.875 mg 또는 3.75 mg 지질 블렌드/mL를 함유하는 1:1(v/v) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 391 mg(각각 1:552:672; 1:276:336; 및 1:138:168의 LB:PG:G 비율)을 칭량 투입함으로써 바이알(2 cc 휘톤 바이알)을 준비.
b 바이알을 활성화 직전에 식염수로 1.7 mL의 최종 부피로 희석. 이어서, 공기 헤드스페이스를 PFP로 교환, 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 바이알을 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
c 공기 헤드스페이스를 PFP로 교환, 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화. 식염수를 1.7 mL의 최종 부피로 첨가, 그리고 바이알을 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
d 데피니티®를 배합물 매트릭스 1 내지 4 또는 1 내지 2로 희석함으로써 바이알(2 cc 휘톤 바이알)을 준비(비-희석 데피니티® 또한 시험), 헤드스페이스 기체를 PFP로 교환, 바이알에 스토퍼 삽입 및 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
이들 연구는, 상이한 지질 농도를 갖는 지질 블렌드 배합물이, 활성화시, 비례적 수의 마이크로스피어(주어진 부피, 1 mL 당)를 생성함을 입증한다. 마이크로스피어 크기는 활성화된 데피니티®와 동등하였고, 마이크로스피어 수는 활성화된 데피니티® 또는 등가의 희석 형태와 유사하거나 그보다 더 높았다. PG 또는 PG/G 중의 다양한 상이한 지질 블렌드 농도에서 활성화된 데피니티®와 동등한 특징을 갖는 마이크로스피어를 형성할 수 있는 능력은 예상되지 못하였다. 희석제 첨가 전에 PG/G 중의 지질 블렌드의 활성화에 의해 이를 달성하는 능력은 훨씬 더 놀라운 것이었다.
실시예 11. 용기
신규한 지질 배합물 또는 데피니티®를 바이알, 시린지, 및 유연 플라스틱 튜브를 포함한 다양한 용기 내로 충전시키고, 이어서 이를 활성화시켰다. 모든 연구에서, 적절한 양의 지질 배합물을 용기 내에 배치하고, 헤드스페이스를 PFP로 대체하고, 용기를 시일링하고, 배합물을 활성화시켰다.
2 mL 스코트 바이알 내의 활성화된 PG 또는 PG /G 중의 지질 블렌드 배합물 a 에 대한 마이크로스피어 특징
충전 중량 희석 시간 식염수 희석 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
55 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.50 1.52 6.23
89 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.80 1.52 4.83
134 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 1.20 1.61 5.29
177 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 1.59 1.63 5.00
122 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 0.43 1.57 5.43
196 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 0.69 1.55 5.31
295 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 1.04 1.61 4.48
392 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 1.38 1.60 4.96
196 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 0.69 1.88 1.77
295 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 1.04 1.69 2.68
392 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 1.38 1.56 4.06
a 적절한 양의 7.5 mg LB/mL PG 또는 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물을 2 mL 스코트 바이알 내로 칭량 투입, 적절한 양의 식염수를 "활성화 전" 샘플에 대해 첨가, 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 적절한 양의 식염수를 "활성화 후 샘플"에 대해 첨가, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험. 바이알을 비알믹스®를 사용하여 활성화.
1 mL 휘톤 V자형 바이알 내의 활성화된 PG 또는 PG /G 중의 지질 블렌드 배합물 a 에 대한 마이크로스피어 특징
충전 중량 희석 시간 식염수 희석 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
55 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.50 1.64 6.33
88 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.80 1.73 4.04
177 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 1.59 1.63 5.00
122 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 0.43 1.57 5.28
392 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 1.38 1.60 4.96
122 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 0.43 1.78 1.06
392 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 1.38 1.68 3.07
a 적절한 양의 7.5 mg LB/mL PG 또는 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물을 1 mL 휘톤 V-바이알 내로 칭량 투입, 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 적절한 양의 식염수를 "활성화 전" 샘플에 대해 첨가, 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 시일링, 알루미늄 시일로 크림핑, 활성화, 적절한 양의 식염수를 "활성화 후 샘플"에 대해 첨가, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험. 바이알을 비알믹스®를 사용하여 활성화.
시린지 내의 활성화된 데피니티 ®a 에 대한 마이크로스피어 농도
시린지 크기 데피니티 ® 의 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경(마이크론) 1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
3 mL 1.5 1.63 2.45
5 mL 1.6 1.78 0.961
5 mL 1.9 1.92 1.00
5 mL 2.25 1.76 2.25
　 5 mL 2.7 1.78 0.513
a 3 mL 및 5 mL 노름-젝트(NORM-JECT)® 시린지(헨케-사스, 울프 게엠베하(Henke-Sass, Wolf GmbH)(독일 투틀링겐)) 내로 데피니티® 충전(1.5 mL 내지 2.7 mL), 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 시린지를 윅-엘-버그™로 활성화, 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
3 mL 노름- 젝트 ® 시린지 내의 활성화된 PG 또는 PG /G 중의 지질 블렌드 배합물에 대한 마이크로스피어 특징
충전 중량 희석 시간 식염수 희석 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
101 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.90 1.79 4.02
177 mg 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 1.59 1.66 4.15
222 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.78 1.72 3.63
222 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 0.78 1.57 4.83
a 적절한 양의 7.5 mg LB/mL PG 또는 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물을 3 mL 노름-젝트® 시린지(헨케-사스, 울프 게엠베하(독일 투틀링겐)) 내로 칭량 투입, 적절한 양의 식염수를 "활성화 전" 샘플에 대해 첨가, 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 그리고 시린지 활성화, 적절한 양의 식염수를 "활성화 후" 샘플에 대해 첨가, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 제조물 시험. 시린지를 비알믹스®를 사용하여 활성화.
치과용 아말감 캡슐 형성된 2 구획을 갖도록 개조된 시린지 내의 활성화된 PG 중의 지질 블렌드 배합물 a 로에 대한 마이크로스피어 특징
충전 중량 b 희석 시간 식염수 희석 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
177 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 1.59 1.66 4.15
391 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 1.38 1.64 4.14
391 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 1.38 1.59 3.92
a 5 mL 노름-젝트® 시린지(헨케-사스, 울프 게엠베하(독일 투틀링겐))를 3 mL로 절단. 치과용 아말감 캡슐(현지 치과의로부터 입수)을 개방, 분말을 함유하는 바닥 제거, 그리고 상단 구획의 내용물과 함께 상단 구획으로부터 플런저를 제거. 상단 구획을 절단 시린지의 배럴 내로 핏팅.
b 적절한 양의 7.5 mg LB/mL PG 또는 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물을 대략 2.5 mL로 절단된 5 mL 노름-젝트® 시린지(헨케-사스, 울프 게엠베하(독일 투틀링겐)) 내로 칭량 투입, 치과용 아말감 플런저를 캡슐 내로 삽입, 적절한 양의 식염수를 "활성화 전" 샘플에 대해 첨가, 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 시린지를 루어 락 캡으로 시일링, 활성화, 적절한 양의 식염수를 "활성화 후" 샘플에 대해 첨가, 그리고 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험. 바이알을 비알믹스®를 사용하여 활성화.
2 구획을 갖도록 개조된 시린지 내의 활성화된 PG 또는 PG /G 중의 지질 블렌드 배합물 a 에 대한 마이크로스피어 특징
충전 중량 b 희석 시간 식염수 희석 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
60 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 0.54 1.83 4.74
133 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 0.47 1.72 4.42
133 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 후 0.47 1.89 1.40
a 3 mL 노름-젝트® 시린지(헨케-사스, 울프 게엠베하(독일 투틀링겐))를 상업적 2 구획 시린지에서 통상적인 바이패스 채널로서 대략 3 mm × 10 mm × 1 mm 벌지(bulge)를 갖도록 개조. 겸자의 하나의 집게를 가열하고 이를 2 mL 부피 표시 주위에서 시린지 배럴의 내부로 압착시킴으로써 채널 제조. 시린지 플런저의 말단을 대략 1 cm의 길이로 절단하고 바이패스 플러그로서 사용. 제2 시린지 플런저를 또한 절단.
b 적절한 양의 7.5 mg LB/mL PG 또는 3.75 mg LB/mL PG/G 배합물을 바이패스 채널 하부에서 개조된 3 mL 노름-젝트® 시린지의 본체 내로 칭량 투입, 바이패스 플러그를 바이패스 채널 바로 위 지점으로 삽입, 적절한 양의 식염수를 바이패스 플러그 삽입 후 형성된 상단 챔버에 첨가, 절단 시린지 플런저를 삽입하여 상부 챔버의 충전을 완성. 저부 챔버의 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 시린지를 루어 락 캡으로 시일링. 시린지를 비알믹스®를 사용하여 활성화, 시린지 플런저를 밀어내어 바이패스 플러그를 바이패스 채널로 이동시켜, 식염수를 "활성화 후" 샘플에 대해 활성화된 생성물을 함유하는 저부 챔버로 도입. "활성화 전" 샘플에 대해서는, 시린지 플런저를 밀어내어 바이패스 플러그를 바이패스 채널로 이동시켜, 식염수를 저부 챔버로 도입, 시린지를 비알믹스®를 사용하여 활성화. 샘플을 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
2 구획 플라스틱 튜브 내의 활성화된 PG 또는 PG /G 중의 지질 블렌드 배합물에 대한 마이크로스피어 특징
충전 중량 a 희석 시간 식염수 희석 부피(mL) 마이크로스피어 평균 직경
(마이크론) 		1 mL 당 마이크로스피어 (× 10 9 )
177 mg의 7.5 mg
LB/mL PG 		활성화 전 1.59 1.64 3.11
392 mg의 3.75 mg
LB/mL PG /G 		활성화 전 1.38 1.80 2.62
392 mg의 3.75 mg LB/mL PG/G 활성화 후 1.38 1.63 3.72
a 적절한 양의 7.5 mg LB/mL PG 또는 3.75 mg LB/mL PG 7 G 배합물을 2 구획 튜브(네오팩 플렉스메드 튜브(NEOPAC Fleximed Tube), 13.5 × 80 mm, 호프만 네오팩 아게(Hoffmann Neopac AG)(스위스, 오베르디에스바흐))의 저부 챔버 내로 칭량 투입, 적절한 양의 식염수를 상단 챔버에 첨가, 저부 챔버 내의 공기 헤드스페이스를 PFP로 대체, 튜브를 루어 락 캡으로 시일링. 튜브를 비알믹스®를 사용하여 활성화, "활성화 후" 샘플에 대해 상부 구획 식염수를 하부 구획으로 전달하고 혼합. "활성화 전" 샘플에 대해서는, 식염수를 비알믹스®를 사용한 튜브 활성화 전에 저부 구획으로 전달. 샘플을 실시예 7에 기재된 바와 같이 마이크로스피어 수 및 평균 크기에 대해 시험.
이들 연구는, 기계적 진탕기를 사용한 지질 블렌드 PG 및 PG/G 배합물의 진탕 방법이 바이알, 시린지 및 플라스틱 튜브를 포함한 다양한 용기 내에서 달성될 수 있고, 이것이 활성화된 데피니티®와 동등한 특징을 갖는 마이크로스피어를 생성할 수 있음을 입증한다. 놀랍게도, 기계적 진탕은 용기 치수 및 용기가 제조된 재료에 있어서의 차이를 극복하고, 동등한 크기 및 수를 갖는 마이크로스피어가 형성될 수 있게 한다. 희석제의 첨가 전 및 첨가 후 둘 다에서의 시린지 내의 PG 및 PG/G 중의 LB 배합물의 활성화는 흥미로운 발견이다. 추가로, 배합물로부터 희석제를 분리할 수 있고, 이어서 두 성분이 기계적 진탕에 의한 활성화 전 또는 후에 함께 합쳐질 수 있다는 것은, 용이한 생성물 생성과 함께 실온 안정성 배합물을 달성할 수 있는 제조물을 제공하는 새로운 기회를 드러내는 것이다.
실시예 12. 활성화 방법
비알믹스®의 사용 이외의 여러 방법으로 데피니티®를 활성화시키는 능력을 입증하기 위해 연구를 수행하였다. 이들 방법을 표 25에서 결과 기록과 함께 하기에 기재한다.
A. 데피니티®(1.5 mL)를 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 50 회 내지 400 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
B. 데피니티®(3.0 mL)를 10 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 200 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
C. 지질 배합물(1.5 mL의 0.045 mg/mL DPPA, 0.75 mg/mL DPPC, 0 mg/mL MPEG5000DPPE, 4.87 mg NaCl/mL, 103.5 mg/mL 프로필렌 글리콜, 126.2 mg/mL 글리세롤, 2.34 mg/mL NaH2PO4H2O, 2.16 mg/mL NaHPO47H20)을 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 100 회 하강시킴으로써 배합물 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 이 지질 배합물의 활성화를 나타낸다.
D. 개질된 지질 배합물(1.5 mL의 0.045 mg/mL DPPA, 0.75 mg/mL DPPC, 0 mg/mL MPEG5000DPPE, 4.87 mg/mL NaCl, 103.5 mg/mL 프로필렌 글리콜, 126.2 mg/mL 글리세롤, 2.34 mg/mL NaH2PO4H2O, 2.16 mg/mL NaHPO47H20)을 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 지질 배합물 충전된 시린지와 스탑코크 사이에 7 개의 고성능 X-그리드 정적 혼합기(StaMixCo, GXP-9, 4-PA66, 블랙)가 제공된 플라스틱 튜브를 배치하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 50 회 하강시킴으로써 배합물 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 이 지질 배합물의 활성화를 나타낸다.
E. 개질된 지질 배합물(1.5 mL의 0.045 mg/mL DPPA, 0.75 mg/mL DPPC, 0 mg/mL MPEG5000DPPE, 4.87 mg/mL NaCl, 103.5 mg/mL 프로필렌 글리콜, 126.2 mg/mL 글리세롤, 2.34 mg/mL NaH2PO4H2O, 2.16 mg/mL NaHPO47H20)을 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 직렬로 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 100 회 하강시킴으로써 배합물 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 이 지질 배합물의 활성화를 나타낸다.
F. 개질된 지질 배합물(1.5 mL의 0.045 mg/mL DPPA, 0.75 mg/mL DPPC, 0 mg/mL MPEG5000DPPE, 4.87 mg/mL NaCl, 103.5 mg/mL 프로필렌 글리콜, 126.2 mg/mL 글리세롤, 2.34 mg/mL NaH2PO4H2O, 2.16 mg/mL NaHPO47H20)을 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 지질 배합물 충전된 시린지와 스탑코크 사이에 8 개의 고성능 X-그리드 정적 혼합기(StaMixCo, GXF-10-2-ME, 오렌지)가 제공된 플라스틱 튜브를 배치하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 100 회 하강시킴으로써 배합물 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 이 지질 배합물의 활성화를 나타낸다.
G. 개질된 지질 배합물(1.5 mL의 0.045 mg/mL DPPA, 0.401 mg/mL DPPC, 0.304 mg/mL MPEG5000DPPE, 4.87 mg/mL NaCl, 155.25 mg/mL 프로필렌 글리콜, 31.55 mg/mL 글리세롤, 2.34 mg/mL NaH2PO4H2O, 2.16 mg/mL NaHPO47H20)을 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 100 회 하강시킴으로써 배합물 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 이 지질 배합물의 활성화를 나타낸다.
H. 데피니티®(1.5 mL) 플러스 3.5 mL의 식염수를 5 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 100 회 하강시킴으로써 데피니티®, 식염수 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
I. 데피니티®(1.5 mL)를 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 데피니티® 충전된 시린지와 스탑코크 사이에 플라스틱 나선 혼합기(StaMixCo, 2.5" x 3/16", 15 개의 나선이 2.5 인치 내에서 턴(turn)을 가짐)를 갖는 플라스틱 튜브를 배치하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 50 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
J. 데피니티®(3.0 mL)를 10 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 3 웨이 스탑코크에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 스탑코크 상의 또 다른 포트에 연결하였다. 데피니티® 충전된 시린지와 스탑코크 사이에 플라스틱 나선 혼합기(StaMixCo, 2.5" x 3/16", 15 개의 나선이 2.5 인치 내에서 턴을 가짐)를 갖는 플라스틱 튜브를 배치하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 50 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
K. 데피니티®(1.5 mL)를 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 플라스틱 나선 혼합기(StaMixCo, 2.5" x 3/16", 15 개의 나선이 2.5 인치 내에서 턴을 가짐)를 갖는 플라스틱 튜브에 직접 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 플라스틱 튜브 상의 또 다른 말단에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 25 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
L. 데피니티®(1.5 mL)를 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 20 u QMA 필터(워터스(Waters))에 직접 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 필터의 다른 말단에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 50 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
M. 데피니티®(1.5 mL)를 3 mL 플라스틱 시린지 내로 취출하고, 20 u QMA 필터(워터스) 및 플라스틱 나선 혼합기(StaMixCo, 2.5" x 3/16", 15 개의 나선이 2.5 인치 내에서 턴을 가짐)를 갖는 플라스틱 튜브에 직접 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 혼합기의 다른 말단에 연결하였다. 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 50 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
N. 데피니티®(0.6 mL)를 1 mL 유리 시린지 내로 취출하고, 5 u 필터를 함유하는 1.5 인치 금속 홀더에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 유리 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 금속 홀더의 다른 말단에 연결하였다. 이 압출 장치는 상업적으로 입수가능하다(리포소패스트-베이직, 아베스틴, 인코포레이티드(LiposoFast-Basic, Avestin, Inc.)). 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 25 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
O. 데피니티®(0.6 mL)를 1 mL 유리 시린지 내로 취출하고, 5 u 필터를 함유하는 1.5 인치 금속 홀더에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 유리 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 금속 홀더의 다른 말단에 연결하였다. 이 압출 장치는 상업적으로 입수가능하다(리포소패스트-베이직, 아베스틴, 인코포레이티드). 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 100 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
P. 데피니티®(0.6 mL)를 1 mL 유리 시린지 내로 취출하고, 0.4 마이크론 또는 1.0 마이크론 필터를 함유하는 1.5 인치 금속 홀더에 연결하였다. 동일한 크기의 별도의 유리 시린지를 PFP 기체로 충전시키고, 금속 홀더의 다른 말단에 연결하였다. 이 압출 장치는 상업적으로 입수가능하다(리포소패스트-베이직, 아베스틴, 인코포레이티드). 각각의 시린지 앞뒤 상에서 플런저를 교대로 25 회 하강시킴으로써 데피니티® 및 PFP 기체를 혼합하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
Q. 데피니티®(1.5 mL)의 바이알을 5 분 동안 최고 셋팅으로 와류발생시켰다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
R. 데피니티®(1.5 mL)의 바이알을 2 분 동안 음파파쇄하였다. 그러나, 용액은 유백색이었고, 마이크로버블 카운트 또는 버블 직경 측정에 대하여 시험하지 않았다.
S. 데피니티®(1.5 mL)의 바이알을 5 분 동안 고속 블레이드 균질화기로 처리하였다. 그러나, 용액은 유백색이었고, 마이크로버블 카운트 또는 버블 직경 측정에 대하여 시험하지 않았다.
T. 데피니티®(1.5 mL)의 바이알을 0.75" × 2.25" × 23" 목재 스틱의 말단 상에 고정하고, 15" 떨어진 2 개의 목재 포스트 사이에서 100 타격/27 초의 속도로 300 회 내지 1500 회 이동시키고, 마이크로버블 카운트 또는 버블 직경 측정에 대하여 시험하였다. 마이크로버블 카운트 및 버블 직경 측정은 데피니티®의 활성화를 나타낸다.
시스멕스 마이크로버블 분석기를 사용한 마이크로버블 카운트 및 직경의 결과
실시예 시린지 배럴 앞뒤
하강 #
( 실시예 "T"는 #
타격임) 		# 마이크로버블
(× 10 9 )/ml 		마이크로버블 직경
( 마이크론)
A
50 0.80, 1.49 1.8 - 2.0
75 1.19 1.7
100 0.57, 1.25, 1.40 1.8, 1.9
200 1.28 1.7
400 1.02 1.6
B 200 0.55 1.7
C 100 1.28 1.7
D 50 0.50 1.9
E 100 0.99 1.7
F 100 0.69 2.0
G 100 1.08 2.0
H 100 0.08 2.3
I 50 0.23 1.9
J 50 0.16 1.9
K 25 0.14 2.0
L 50 0.07 2.1
M 50 0.11 2.1
N 25 0.10 1.7
O 100 0.57 1.3
P 0.4 u 및 1.0 u 필터
25		 0.01 및 0.12 3.6 and 1.9
Q 와류 5 분 0.13 2.1
R 음파파쇄 2 분 시각적 밝은 유백색에 기초하여 시험 안 됨 시각적 밝은 유백색에 기초하여 시험 안 됨
S 폴리트론(Polytron) 5 분 시각적 밝은 유백색에 기초하여 시험 안 됨 시각적 밝은 유백색에 기초하여 시험 안 됨
T 100 타격/27 초의 속도로 300 회 내지 1500 회
300× 0.056 1.86
500× 0.096 1.93
1000× 0.205 1.90
1500× 0.194 1.74
이들 연구는, 데피니티® 또는 그의 개질된 형태의 활성화가 다양한 활성화 장치를 사용하여 달성될 수 있음을 입증한다.
특허 및 특허 출원을 포함한 본원에서 언급된 참조문헌은 전체가 참조로 포함된다.

Claims (99)

  1. 프로필렌 글리콜 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하는 비-수성 혼합물, 및
    퍼플루오로카본 기체
    를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 비율은 약 1:100 내지 약 1:600의 범위인 조성물.
  3. 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하는 비-수성 혼합물, 및
    퍼플루오로카본 기체
    를 포함하는 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 비율은 약 1:100:100 내지 약 1:600:700의 범위인 조성물.
  5. 글리세롤 중의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하는 비-수성 혼합물, 및
    퍼플루오로카본 기체
    를 포함하는 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 비율은 약 1:100 내지 약 1:700인 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-수성 혼합물은 5% 미만 w/w(중량/중량)의 물을 포함하는 것인 조성물.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-수성 혼합물은 1% 내지 4% w/w의 물을 포함하는 것인 조성물.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-수성 혼합물은 1% w/w 미만의 물을 포함하는 것인 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 지질 반대-이온인 이온을 포함하는 것인 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 염화나트륨을 갖지 않는 것인 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 클로라이드 이온을 갖지 않는 것인 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 완충제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 비-포스페이트 완충제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계)는 비-수성 혼합물 1 mL 당 약 0.9 mg 내지 약 7.5 mg의 농도로 존재하는 것인 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, DPPA. DPPC 및 PEG5000-DPPE는 약 10:82:8(몰%)의 비율로 존재하는 것인 조성물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 실온에서 약 3 개월 동안 저장시, 5% 미만의 불순물을 포함하는 것인 조성물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 둘 다 실온에서 저장시, 데피니티®에 비해 보다 적은 불순물을 포함하는 것인 조성물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 퍼플루오로카본 기체는 퍼플루오로프로판 기체인 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, PEG5000-DPPE는 MPEG5000-DPPE인 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE는 10 대 82 대 8(10:82:8)의 몰% 비율로 존재하는 것인 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 바이알 내에 제공되는 것인 조성물.
  23. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 3.8 mL 이하의 실제 부피를 갖는 바이알 내에 제공되는 것인 조성물.
  24. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 V자형 바닥을 갖는 바이알 내에 제공되는 것인 조성물.
  25. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 평바닥을 갖는 바이알 내에 제공되는 것인 조성물.
  26. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 둥근 바닥을 갖는 바이알 내에 제공되는 것인 조성물.
  27. 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이알은 유리 바이알인 조성물.
  28. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 단일 챔버 용기 내에 제공되는 것인 조성물.
  29. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 다챔버 용기 내에 제공되는 것인 조성물.
  30. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 용기.
  31. 제30항에 있어서, 상기 용기는 단일 챔버 용기인 용기.
  32. 제30항에 있어서, 상기 용기는 제1 및 제2 챔버를 포함하고, 여기서 비-수성 혼합물은 제1 챔버 내에 있고, 퍼플루오로카본 기체는 제2 챔버 내에 있는 것인 용기.
  33. 제1 챔버 내에 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 조성물, 및 제2 챔버 내에 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 용기.
  34. 제1 챔버 내에 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 조성물, 및 제2 챔버 내에 수성 희석제를 포함하는 용기.
  35. 제33항에 있어서, 상기 수성 희석제는 수성 식염수 용액인 용기.
  36. 제33항에 있어서, 상기 수성 희석제는 수성 완충 식염수 용액인 용기.
  37. 제3항, 제4항 및 제7항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 2 mL 휘톤 바이알 내의 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 상기 비-수성 혼합물은 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 1 mL 당 약 3.75 mg 지질의 지질 농도를 갖는 것인 조성물.
  39. 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE의 혼합물, 및
    퍼플루오로카본 기체
    를 포함하는 조성물.
  40. 제39항의 조성물을 포함하는 용기.
  41. 제40항에 있어서, 단일 챔버를 갖는 용기.
  42. 제40항에 있어서, 제1 챔버를 갖고, 상기 조성물은 용기의 제1 챔버 내에 존재하는 것인 용기.
  43. 제40항에 있어서, 2 개의 챔버를 갖고, 여기서 제1 챔버는 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하고, 제2 챔버는 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 것인 용기.
  44. 제40항에 있어서, 2 개의 챔버를 갖고, 여기서 제1 챔버는 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하고, 제2 챔버는 (a) 프로필렌 글리콜, (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤, 또는 (c) 글리세롤을 포함하는 것인 용기.
  45. 제40항에 있어서, 3 개의 챔버를 갖고, 여기서 제1 챔버는 고체 형태의 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE를 포함하고, 제2 챔버는 퍼플루오로카본 기체를 포함하고, 제3 챔버는 (a) 프로필렌 글리콜, (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤, 또는 (c) 글리세롤을 포함하는 것인 용기.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 프로필렌 글리콜의 비율은 약 1:100 내지 약 1:600의 범위인 용기.
  47. 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 대 프로필렌 글리콜 대 글리세롤의 비율은 약 1:100:100 내지 약 1:600:700의 범위인 용기.
  48. 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계) 대 글리세롤의 비율은 약 1:100 내지 약 1:700인 용기.
  49. 제42항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 희석제를 포함하는 추가의 챔버를 갖는 용기.
  50. 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 비-수성 용액 중의, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE 및 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어
    를 포함하는 조성물.
  51. 제50항에 있어서, 상기 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 1.0 마이크론 내지 약 2.0 마이크론 범위의 평균 직경을 갖는 것인 조성물.
  52. 제50항에 있어서, 상기 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 1.2 마이크론 내지 약 2.0 마이크론 범위의 평균 직경을 갖는 것인 조성물.
  53. 제50항에 있어서, 상기 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 약 1.4 내지 1.8 마이크론의 평균 직경을 갖는 것인 조성물.
  54. 제50항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 108/mL 초과의 농도로 조성물 중에 존재하는 것인 조성물.
  55. 제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 5% 미만 w/w의 물을 포함하는 것인 조성물.
  56. 제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 1% 내지 4% w/w의 물을 포함하는 것인 조성물.
  57. 제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 1% w/w 미만의 물을 포함하는 것인 조성물.
  58. 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 지질 반대-이온인 이온을 포함하는 것인 조성물.
  59. 제50항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 염화나트륨을 갖지 않는 것인 조성물.
  60. 제50항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 클로라이드 이온을 갖지 않는 것인 조성물.
  61. 제50항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 완충제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  62. 제50항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 아세테이트 완충제, 벤조에이트 완충제, 또는 살리실레이트 완충제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  63. 제50항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE(합계)는 비-수성 용액 1 mL 당 약 0.9 mg 내지 약 4 mg 지질의 농도로 존재하는 것인 조성물.
  64. 제50항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, DPPA, DPPC 및 PEG5000-DPPE는 약 10%:82%:8%(몰%)의 비율로 존재하는 것인 조성물.
  65. 제50항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 퍼플루오로카본 기체를 포함하는 것인 조성물.
  66. 제50항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어는 퍼플루오로프로판 기체를 포함하는 것인 조성물.
  67. 제50항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, PEG5000-DPPE가 MPEG5000-DPPE인 조성물.
  68. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 바이알 내의 조성물.
  69. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 약 3.8 mL 이하의 실제 부피를 갖는 바이알 내의 조성물.
  70. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, V자형 바닥을 갖는 바이알 내의 조성물.
  71. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 평바닥을 갖는 바이알 내의 조성물.
  72. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 둥근 바닥을 갖는 바이알 내의 조성물.
  73. 제68항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이알은 유리 바이알인 조성물.
  74. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 챔버 용기 내의 조성물.
  75. 제50항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 다챔버 용기 내의 조성물.
  76. 용기 내의 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 조성물
    을 포함하는 키트.
  77. 제76항에 있어서, 상기 용기는 단일 챔버 용기 또는 다챔버 용기인 키트.
  78. 제76항 또는 제77항에 있어서, 제2 용기를 추가로 포함하는 키트.
  79. 제78항에 있어서, 제2 용기는 수성 희석제를 포함하는 것인 키트.
  80. 제78항 또는 제79항에 있어서, 상기 제2 용기는 예비-충전된 시린지인 키트.
  81. 제78항 또는 제79항에 있어서, 상기 제2 용기는 프로필렌 글리콜을 포함하는 것인 키트.
  82. 제78항 또는 제79항에 있어서, 상기 제2 용기는 글리세롤을 포함하는 것인 키트.
  83. 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 희석제를 포함하는 제3 용기를 추가로 포함하는 키트.
  84. 제77항에 있어서, 상기 다챔버 용기는 제1항의 조성물을 포함하는 제1 챔버, 및 글리세롤 및/또는 수성 희석제를 포함하는 제2 챔버를 포함하는 것인 키트.
  85. 제77항에 있어서, 상기 다챔버 용기는 제3항의 조성물을 포함하는 제1 챔버, 및 수성 희석제를 포함하는 제2 챔버를 포함하는 것인 키트.
  86. 제77항에 있어서, 상기 다챔버 용기는 제5항의 조성물을 포함하는 제1 챔버, 및 프로필렌 글리콜 및/또는 수성 희석제를 포함하는 제2 챔버를 포함하는 것인 키트.
  87. 제76항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 비알믹스(VIALMIX)® 장치를 추가로 포함하는 키트.
  88. 제1항의 조성물에 글리세롤 및/또는 수성 희석제를 첨가하는 단계, 및
    이어서 조성물을 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계
    를 포함하는 초음파 조영제의 형성 방법.
  89. 제3항의 조성물을 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계
    를 포함하는 초음파 조영제의 형성 방법.
  90. 제3항의 조성물에 수성 희석제를 첨가하는 단계, 및
    이어서 조성물을 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계
    를 포함하는 초음파 조영제의 형성 방법.
  91. 제5항의 조성물에 프로필렌 글리콜 및/또는 수성 희석제를 첨가하는 단계, 및
    이어서 조성물을 활성화시켜 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 형성하는 단계
    를 포함하는 초음파 조영제의 형성 방법.
  92. 제88항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물을 20 초 내지 45 초 동안 활성화시키는 것인 방법.
  93. 제88항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물을 60 초 내지 120 초 동안 활성화시키는 것인 방법.
  94. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 추가의 수성 희석제 중에서 희석하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  95. 제88항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 조영 초음파 영상화를 필요로 하는 대상체에게 지질-캡슐화된 기체 마이크로스피어를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  96. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 바이알 내에 있는 것인 방법.
  97. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 시린지 내에 있는 것인 방법.
  98. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 단일 챔버 용기 내에 있는 것인 방법.
  99. 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 다챔버 용기 내에 있는 것인 방법.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2928401T3 (es) 2014-12-31 2022-11-17 Lantheus Medical Imaging Inc Composiciones de microesferas de gas encapsuladas en lípidos y métodos relacionados
EP3452108A4 (en) * 2016-05-04 2019-12-25 Lantheus Medical Imaging, Inc. METHODS AND DEVICES FOR PREPARING ULTRASONIC CONTRAST AGENTS
US9789210B1 (en) 2016-07-06 2017-10-17 Lantheus Medical Imaging, Inc. Methods for making ultrasound contrast agents

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030044354A1 (en) * 2001-08-16 2003-03-06 Carpenter Alan P. Gas microsphere liposome composites for ultrasound imaging and ultrasound stimulated drug release
US20080009561A1 (en) * 2004-09-03 2008-01-10 Imarx Therapeutics, Inc. Apparatus And Method To Prepare A Microsphere-Forming Composition

Family Cites Families (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3873564A (en) 1971-03-03 1975-03-25 Synvar Ass 2-Imidazolinyl-3-oxide-1-oxypropionic acid
CH588887A5 (ko) 1974-07-19 1977-06-15 Battelle Memorial Institute
CH621479A5 (ko) 1977-08-05 1981-02-13 Battelle Memorial Institute
CH624011A5 (ko) 1977-08-05 1981-07-15 Battelle Memorial Institute
US4276885A (en) 1979-05-04 1981-07-07 Rasor Associates, Inc Ultrasonic image enhancement
ATE17311T1 (de) 1980-11-17 1986-01-15 Schering Ag Praeparat zur erzeugung von mikroblaeschen.
DE3141641A1 (de) 1981-10-16 1983-04-28 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen Ultraschall-kontrastmittel und dessen herstellung
US4718433A (en) 1983-01-27 1988-01-12 Feinstein Steven B Contrast agents for ultrasonic imaging
SE463651B (sv) 1983-12-21 1991-01-07 Nycomed As Diagnostikum och kontrastmedel
EP0158441B2 (en) 1984-03-08 2001-04-04 Phares Pharmaceutical Research N.V. Liposome-forming composition
ES2054658T3 (es) 1986-01-24 1994-08-16 Childrens Hosp Medical Center Metodo para la preparacion de una emulsion fisiologicamente aceptable.
JPS6360943A (ja) 1986-09-01 1988-03-17 Green Cross Corp:The 超音波診断造影剤
FR2608942B1 (fr) 1986-12-31 1991-01-11 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une substance, sous forme de nanocapsules
FR2634375B3 (fr) 1988-06-30 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles de lipide amphiphiles sous forme de liposomes submicroniques
US5219538A (en) 1987-03-13 1993-06-15 Micro-Pak, Inc. Gas and oxygen carrying lipid vesicles
JPS63277618A (ja) 1987-03-31 1988-11-15 Noebia:Kk リポソ−ムの製造方法
CH672733A5 (ko) 1987-05-22 1989-12-29 Bracco Ind Chimica Spa
IE61591B1 (en) 1987-12-29 1994-11-16 Molecular Biosystems Inc Concentrated stabilized microbubble-type ultrasonic imaging agent and method of production
DE3803972A1 (de) 1988-02-05 1989-08-10 Schering Ag Ultraschallkontrastmittel
DE3812816A1 (de) 1988-04-16 1989-11-02 Lawaczeck Ruediger Dipl Phys P Verfahren zur solubilisierung von liposomen und/oder biologischer membranen sowie deren verwendung
US5171755A (en) 1988-04-29 1992-12-15 Hemagen/Pfc Emulsions of highly fluorinated organic compounds
US5045304A (en) 1988-08-31 1991-09-03 Wayne State University Contras agent having an imaging agent coupled to viable granulocytes for use in magnetic resonance imaging of abscess and a method of preparing and using same
GB8824593D0 (en) 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Liposomes
US5114703A (en) 1989-05-30 1992-05-19 Alliance Pharmaceutical Corp. Percutaneous lymphography using particulate fluorocarbon emulsions
FR2649335B1 (fr) 1989-07-05 1991-09-20 Texinfine Sa Procede et dispositif de production directe de liposomes
US5843473A (en) 1989-10-20 1998-12-01 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Method of treatment of infected tissues
US6551576B1 (en) 1989-12-22 2003-04-22 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US5305757A (en) 1989-12-22 1994-04-26 Unger Evan C Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents
US5149319A (en) 1990-09-11 1992-09-22 Unger Evan C Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids
US6088613A (en) 1989-12-22 2000-07-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of magnetic resonance focused surgical and therapeutic ultrasound
US5580575A (en) 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
US5656211A (en) 1989-12-22 1997-08-12 Imarx Pharmaceutical Corp. Apparatus and method for making gas-filled vesicles of optimal size
US5334381A (en) 1989-12-22 1994-08-02 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5088499A (en) 1989-12-22 1992-02-18 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5705187A (en) 1989-12-22 1998-01-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Compositions of lipids and stabilizing materials
US5922304A (en) 1989-12-22 1999-07-13 Imarx Pharmaceutical Corp. Gaseous precursor filled microspheres as magnetic resonance imaging contrast agents
US5352435A (en) 1989-12-22 1994-10-04 Unger Evan C Ionophore containing liposomes for ultrasound imaging
US5773024A (en) 1989-12-22 1998-06-30 Imarx Pharmaceutical Corp. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US5230882A (en) 1989-12-22 1993-07-27 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5123414A (en) 1989-12-22 1992-06-23 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5733572A (en) 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
US6146657A (en) 1989-12-22 2000-11-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas-filled lipid spheres for use in diagnostic and therapeutic applications
US5776429A (en) 1989-12-22 1998-07-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas-filled microspheres using a lyophilized lipids
US5209720A (en) 1989-12-22 1993-05-11 Unger Evan C Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids using gas filled liposomes
US6001335A (en) 1989-12-22 1999-12-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Contrasting agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5542935A (en) 1989-12-22 1996-08-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic delivery systems related applications
US5228446A (en) 1989-12-22 1993-07-20 Unger Evan C Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents
US5469854A (en) 1989-12-22 1995-11-28 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of preparing gas-filled liposomes
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5445813A (en) 1992-11-02 1995-08-29 Bracco International B.V. Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography
US5578292A (en) 1991-11-20 1996-11-26 Bracco International B.V. Long-lasting aqueous dispersions or suspensions of pressure-resistant gas-filled microvesicles and methods for the preparation thereof
IN172208B (ko) 1990-04-02 1993-05-01 Sint Sa
ES2138122T3 (es) 1990-04-10 2000-01-01 Imarx Pharmaceutical Corp Polimeros como medios de contraste para resonancia magnetica.
US5368840A (en) 1990-04-10 1994-11-29 Imarx Pharmaceutical Corp. Natural polymers as contrast media for magnetic resonance imaging
US5358702A (en) 1990-04-10 1994-10-25 Unger Evan C Methoxylated gel particle contrast media for improved diagnostic imaging
AU636481B2 (en) 1990-05-18 1993-04-29 Bracco International B.V. Polymeric gas or air filled microballoons usable as suspensions in liquid carriers for ultrasonic echography
IS1685B (is) 1990-12-11 1998-02-24 Bracco International B.V. Aðferð við að búa til fitukúlur (liposomes) sem eru gæddar auknum hæfileika til að draga í sig og halda í sér aðskotaefnum
GB9106673D0 (en) 1991-03-28 1991-05-15 Hafslund Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
US5874062A (en) 1991-04-05 1999-02-23 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of computed tomography using perfluorocarbon gaseous filled microspheres as contrast agents
US5205290A (en) 1991-04-05 1993-04-27 Unger Evan C Low density microspheres and their use as contrast agents for computed tomography
JP3299745B2 (ja) 1991-06-18 2002-07-08 イマアーレクス・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン 新規なリポソーム薬配達システム
MX9205298A (es) 1991-09-17 1993-05-01 Steven Carl Quay Medios gaseosos de contraste de ultrasonido y metodo para seleccionar gases para usarse como medios de contraste de ultrasonido
ATE191346T1 (de) 1991-09-17 2000-04-15 Sonus Pharma Inc Gasförmige ultraschallkontrastmittel
US5409688A (en) 1991-09-17 1995-04-25 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Gaseous ultrasound contrast media
AU2789192A (en) 1991-10-04 1993-05-03 Mallinckrodt Medical, Inc. Gaseous ultrasound contrast agents
GB9200387D0 (en) 1992-01-09 1992-02-26 Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
IL104084A (en) 1992-01-24 1996-09-12 Bracco Int Bv Sustainable aqueous suspensions of pressure-resistant and gas-filled blisters, their preparation, and contrast agents containing them
US5558855A (en) 1993-01-25 1996-09-24 Sonus Pharmaceuticals Phase shift colloids as ultrasound contrast agents
CZ191695A3 (en) 1993-01-25 1996-05-15 Sonus Pharma Inc Biologically compatible contrast agent, process of its preparation and representation method by ultrasound
GB9305351D0 (en) 1993-03-16 1993-05-05 Nycomed Imaging As Improvements in or relating to contrast agents
GB9305349D0 (en) 1993-03-16 1993-05-05 Nycomed Imaging As Improvements in or relating to contrast agents
DE4313402A1 (de) 1993-04-23 1994-10-27 Hexal Pharma Gmbh Transdermale Wirkstoffzubereitung
US5853755A (en) 1993-07-28 1998-12-29 Pharmaderm Laboratories Ltd. Biphasic multilamellar lipid vesicles
DK0711179T3 (da) 1993-07-30 2005-02-14 Imcor Pharmaceutical Co Stabiliserede sammensætninger med mikrobobler til ultralyd
GB9318288D0 (en) 1993-09-03 1993-10-20 Nycomed Imaging As Improvements in or relating to contrast agents
HUT74509A (en) 1993-09-09 1997-01-28 Schering Ag Active principles and gas containing microparticles, their use for realising active principles in ultrasonically controlled manner, and process for preparing them
EP0678017B1 (en) 1993-11-05 1998-04-01 Amgen Inc. Liposome preparation and material encapsulation method
US7083572B2 (en) * 1993-11-30 2006-08-01 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Therapeutic delivery systems
JPH10508284A (ja) 1993-12-15 1998-08-18 ブラッコ リサーチ ソシエテ アノニム 超音波造影媒体、この媒体を含む造影剤及び方法
NO940711D0 (no) 1994-03-01 1994-03-01 Nycomed Imaging As Preparation of gas-filled microcapsules and contrasts agents for diagnostic imaging
CA2184834A1 (en) 1994-03-11 1995-09-14 Yoshiyuki Mori Liposome preparation
CA2185810A1 (en) 1994-03-28 1995-10-05 Jo Klaveness Liposomes
US5736121A (en) 1994-05-23 1998-04-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized homogenous suspensions as computed tomography contrast agents
US6066331A (en) 1994-07-08 2000-05-23 Barenholz; Yechezkel Method for preparation of vesicles loaded with biological structures, biopolymers and/or oligomers
US5562893A (en) 1994-08-02 1996-10-08 Molecular Biosystems, Inc. Gas-filled microspheres with fluorine-containing shells
JPH08151335A (ja) 1994-09-27 1996-06-11 Otsuka Pharmaceut Co Ltd 超音波造影剤およびその製造方法
US5540909A (en) 1994-09-28 1996-07-30 Alliance Pharmaceutical Corp. Harmonic ultrasound imaging with microbubbles
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US5997898A (en) 1995-06-06 1999-12-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized compositions of fluorinated amphiphiles for methods of therapeutic delivery
US5558092A (en) 1995-06-06 1996-09-24 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods and apparatus for performing diagnostic and therapeutic ultrasound simultaneously
US6033645A (en) 1996-06-19 2000-03-07 Unger; Evan C. Methods for diagnostic imaging by regulating the administration rate of a contrast agent
US5804162A (en) 1995-06-07 1998-09-08 Alliance Pharmaceutical Corp. Gas emulsions stabilized with fluorinated ethers having low Ostwald coefficients
EP1444991A1 (en) 1995-06-07 2004-08-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Novel targeted compositions for diagnostic and therapeutic use
US6139819A (en) 1995-06-07 2000-10-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Targeted contrast agents for diagnostic and therapeutic use
US6231834B1 (en) 1995-06-07 2001-05-15 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for ultrasound imaging involving the use of a contrast agent and multiple images and processing of same
US6521211B1 (en) 1995-06-07 2003-02-18 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Methods of imaging and treatment with targeted compositions
US5897851A (en) 1995-06-07 1999-04-27 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Nucleation and activation of a liquid-in-liquid emulsion for use in ultrasound imaging
US6120794A (en) 1995-09-26 2000-09-19 University Of Pittsburgh Emulsion and micellar formulations for the delivery of biologically active substances to cells
EP0935415B1 (en) 1996-05-01 2006-11-22 Imarx Pharmaceutical Corp. In vitro methods for delivering nucleic acids into a cell
US6214375B1 (en) * 1996-07-16 2001-04-10 Generex Pharmaceuticals, Inc. Phospholipid formulations
US5837221A (en) 1996-07-29 1998-11-17 Acusphere, Inc. Polymer-lipid microencapsulated gases for use as imaging agents
US6414139B1 (en) 1996-09-03 2002-07-02 Imarx Therapeutics, Inc. Silicon amphiphilic compounds and the use thereof
US5846517A (en) 1996-09-11 1998-12-08 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for diagnostic imaging using a renal contrast agent and a vasodilator
ES2289188T3 (es) 1996-09-11 2008-02-01 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Procedimiento para la obtencion de imagenes para el diagnostico usando un agente de contraste y un vasodilatador.
ATE381353T1 (de) 1996-10-21 2008-01-15 Ge Healthcare As Verbesserungen in oder an kontrastmitteln
WO1998018498A2 (en) 1996-10-28 1998-05-07 Marsden, John, Christopher Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents
WO1998018501A2 (en) 1996-10-28 1998-05-07 Marsden, John, Christopher Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents
BR9713978A (pt) 1996-10-28 2000-05-02 Nycomed Imaging As Agente diagnóstico alvejável e/ou terapeuticamente ativo, processo para preparação e uso do mesmo, formulação combinada, e, processos para gerar imagens intensificadas de um corpo animal humano ou não-humano e para investigação in vitro de alvejamento por um agente
WO1998018495A2 (en) 1996-10-28 1998-05-07 Marsden, John, Christopher Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents
US6537246B1 (en) 1997-06-18 2003-03-25 Imarx Therapeutics, Inc. Oxygen delivery agents and uses for the same
US6143276A (en) 1997-03-21 2000-11-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering bioactive agents to regions of elevated temperatures
US6090800A (en) 1997-05-06 2000-07-18 Imarx Pharmaceutical Corp. Lipid soluble steroid prodrugs
US6416740B1 (en) 1997-05-13 2002-07-09 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Acoustically active drug delivery systems
GB9717588D0 (en) 1997-08-19 1997-10-22 Nycomed Imaging As Improvements in or relating to contrast agents
GB9717542D0 (en) 1997-08-19 1997-10-22 Nycomed Imaging As Process
US6548047B1 (en) 1997-09-15 2003-04-15 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Thermal preactivation of gaseous precursor filled compositions
US6123923A (en) 1997-12-18 2000-09-26 Imarx Pharmaceutical Corp. Optoacoustic contrast agents and methods for their use
US20010003580A1 (en) * 1998-01-14 2001-06-14 Poh K. Hui Preparation of a lipid blend and a phospholipid suspension containing the lipid blend
JP4772958B2 (ja) 1998-02-09 2011-09-14 ブラッコ・リサーチ・ソシエテ・アノニム 生物学的に活性な媒質の標的に向けた送達
US6572840B1 (en) * 1999-07-28 2003-06-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Stable microbubbles comprised of a perfluoropropane encapsulated lipid moiety for use as an ultrasound contrast agent
JP2004522960A (ja) 2001-02-02 2004-07-29 ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・ファーマ・カンパニー バイアルのヘッドスペース中のフッ素化材料をオンラインモニターするための装置及び方法
US20040062748A1 (en) 2002-09-30 2004-04-01 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US9750821B2 (en) * 2003-12-22 2017-09-05 Bracco Suisse S.A. Gas-filled microvesicle assembly for contrast imaging
CN102600485B (zh) 2004-06-04 2014-10-22 阿库斯菲尔公司 超声对比剂剂量配方
CN101229382A (zh) * 2008-02-04 2008-07-30 许川山 一种适用于多种成像模式的新型造影剂
US8459462B2 (en) 2008-10-10 2013-06-11 Quest Diagnostics Investments Incorporated System and method for sorting specimen
JP2012213475A (ja) 2011-03-31 2012-11-08 Panasonic Corp 超音波造影剤注入装置
US9101895B2 (en) 2011-04-15 2015-08-11 General Electric Company System for mixing and dispersing microbubble pharmaceuticals
US10279053B2 (en) 2011-07-19 2019-05-07 Nuvox Pharma Llc Microbubble compositions, method of making same, and method using same
KR102076069B1 (ko) * 2011-08-24 2020-02-11 캘리포니아 인스티튜트 오브 테크놀로지 타기팅 미세버블
JP2015002752A (ja) 2011-12-09 2015-01-08 パナソニック株式会社 薬剤容器
US10577554B2 (en) 2013-03-15 2020-03-03 Children's Medical Center Corporation Gas-filled stabilized particles and methods of use
TWI552761B (zh) 2013-05-03 2016-10-11 博信生物科技股份有限公司 一種脂質微／奈米氣泡、及其最佳化之製備方法及製備裝置
TWI504413B (zh) 2013-07-24 2015-10-21 Univ Nat Chiao Tung 奈米級複合高分子顯影劑及藥物載體
WO2015192093A1 (en) 2014-06-12 2015-12-17 Unger Evan C Phospholipid composition and microbubbles and emulsions formed using same
AU2014410198B2 (en) 2014-10-30 2021-08-19 Lantheus Medical Imaging, Inc. Lipid encapsulated gas microsphere compositions and related methods
ES2928401T3 (es) 2014-12-31 2022-11-17 Lantheus Medical Imaging Inc Composiciones de microesferas de gas encapsuladas en lípidos y métodos relacionados
EP3452108A4 (en) 2016-05-04 2019-12-25 Lantheus Medical Imaging, Inc. METHODS AND DEVICES FOR PREPARING ULTRASONIC CONTRAST AGENTS
US9789210B1 (en) 2016-07-06 2017-10-17 Lantheus Medical Imaging, Inc. Methods for making ultrasound contrast agents

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030044354A1 (en) * 2001-08-16 2003-03-06 Carpenter Alan P. Gas microsphere liposome composites for ultrasound imaging and ultrasound stimulated drug release
US20080009561A1 (en) * 2004-09-03 2008-01-10 Imarx Therapeutics, Inc. Apparatus And Method To Prepare A Microsphere-Forming Composition

Also Published As

Publication number Publication date
EP4154915A1 (en) 2023-03-29
BR112017013787A2 (pt) 2018-03-13
US11395856B2 (en) 2022-07-26
MX2022010827A (es) 2022-09-29
KR20240005184A (ko) 2024-01-11
MX2017008721A (es) 2017-11-17
JP2020172507A (ja) 2020-10-22
EP3240579A2 (en) 2017-11-08
WO2016109400A2 (en) 2016-07-07
ZA201704426B (en) 2022-01-26
ES2928401T3 (es) 2022-11-17
IL252705B (en) 2022-11-01
EP3240579A4 (en) 2018-08-22
US10583207B2 (en) 2020-03-10
US20220395590A1 (en) 2022-12-15
IL252705B2 (en) 2023-03-01
TWI745282B (zh) 2021-11-11
CA2972423A1 (en) 2016-07-07
MX2020002793A (es) 2020-07-22
KR102618877B1 (ko) 2023-12-28
HK1244677A1 (zh) 2018-08-17
JP2023089124A (ja) 2023-06-27
US20170258946A1 (en) 2017-09-14
US20200384132A1 (en) 2020-12-10
US20160331851A1 (en) 2016-11-17
US10022460B2 (en) 2018-07-17
IL296875A (en) 2022-12-01
EA201791437A1 (ru) 2017-12-29
IL252705A0 (en) 2017-08-31
JP2018503629A (ja) 2018-02-08
AU2022201065A1 (en) 2022-03-10
TW201632173A (zh) 2016-09-16
CN113289034A (zh) 2021-08-24
CN107206111B (zh) 2021-04-27
EP3240579B1 (en) 2022-07-27
JP6728186B2 (ja) 2020-07-22
AU2015374286B2 (en) 2021-11-18
CN107206111A (zh) 2017-09-26
TW202228793A (zh) 2022-08-01
AU2015374286A1 (en) 2017-07-13
WO2016109400A3 (en) 2016-10-06
TWI821755B (zh) 2023-11-11
NZ733010A (en) 2023-01-27
HK1246207A1 (zh) 2018-09-07

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