JP3299745B2 - 新規なリポソーム薬配達システム - Google Patents

新規なリポソーム薬配達システム

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 関連出願 本出願は、1989年12月22日付で提出した米国特許出願
第455,707号の一部継続出願に続く、1990年８月20日付
で提出した同時継続中の米国特許第569,828号の一部継
続出願であり、各先行出願の開示事項は引用によりそれ
らのすべてが本明細書の内容となる。
発明の分野 本発明は、薬配達（ドラッグデリバリー）の分野にそ
して、更に詳細には、真空乾燥ガス注入方法を使用して
製造された、ガス充填リポソームに、そしてその内部に
液体が実質的にない、ガス充填リポソームに関し、ここ
で前記リポソームはまたその中に薬をカプセルに包んで
有する。本発明は更に、このような薬を含むガス充填リ
ポソームを製造するための方法及び装置に、そして薬配
達システムとしてこのようなリポソームを用いるための
方法に関する。
発明の背景 何百年もの間、人間は、種々の病気及び疾患の処置に
おいて有用な広範囲の薬を開発するために努力してき
た。しかしながら、この努力における後にある顕著な遅
れは、体の選ばれた場所にこのような薬を配達するため
の効果的な手段の開発であった。この10年間の間に幾つ
かの業績がこの領域において為された（例えばR.Bake
r、生物学的に活性な薬剤の制御された放出（Controlle
d Release of Biologically Active Agents）、Jo
hn Wiley ＆ Sons（ニューヨーク 1987）を参照せ
よ）けれども、新しくそして／またはより良い薬配達シ
ステムが必要とされている。
薬の毒性が問題である時には、標的化された配達手段
が特に重要である。特定の薬配達方法は、毒性副作用を
最小にし、要求される投薬量を低くし、そして患者に関
しては薬のコストを減らすのに役立つ可能性がある。本
発明は、薬配達の領域におけるこれらの及び／またはそ
の他の重要なニーズを扱うことに向けられる。
発明の要約 本発明は、新規なリポソーム薬配達システムを提供す
る。
詳細には、１つの実施態様においては、本発明は、真
空乾燥ガス注入方法によって製造されそしてその中に薬
をカプセルに包んで有する、ガス充填リポソームを有し
て成る、薬配達システムを提供し、そしてこのようなリ
ポソームは、本明細書中では時々、薬を含み真空乾燥さ
れたガス注入リポソームと呼ばれる。
もう一つの実施態様においては、本発明は、その内部
に液体が実質的になくそしてその中に薬をカプセルに包
んで有する、ガス充填リポソームを含んで成る、薬配達
システムに向けられる。
別の実施態様においては、本発明は、（ｉ）薬をカプ
セルに包んでいるリポソームを陰圧下に置くこと、（i
i）前記リポソームから実質的にすべての液体を除去す
るのに十分な時間の間、前記リポソームを該陰圧下でイ
ンキュベートすること、及び（iii）周囲圧力に到達す
るまで前記リポソーム中にガスを注入することを含有し
て成る、本発明のリポソームを製造するための方法を提
供する。
なお別の実施態様においては、本発明は、（ｉ）その
中に薬をカプセルに包んで有するリポソームを含む容
器、（ii）この中に入れられたリポソームから液体を引
き出すために容器に陰圧をかけるための手段、（iii）
陰圧をかける手段を容器に接続する導管（この導管は前
記液体の流れを方向付ける）、及び（iv）容器中のリポ
ソーム中にガスを導入するための手段を含有して成る、
真空乾燥ガス注入方法に使用する本発明のリポソームを
製造するための装置を提供する。
最後に、本発明は、患者の部位への薬の制御された配
達のための方法であって、（ｉ）真空乾燥ガス注入方法
によって製造されそしてその中に薬をカプセルに包んで
有する、ガス充填リポソーム、及び／またはその内部に
液体が実質的になくそしてその中に薬をカプセルに包ん
で有する、ガス充填リポソームを患者に投与すること、
（ii）前記部位中の前記リポソームの存在を測定するた
めに超音波を使用して前記リポソームを監視すること、
及び（iii）超音波を使用して前記リポソームを破壊し
て、前記薬を前記部位中で放出することを有して成る方
法を意図する。
驚くべきことに、真空乾燥ガス注入方法によって製造
された、薬を含むガス充填リポソーム、及び真空乾燥ガ
ス注入方法に従って製造することができるその内部に液
体が実質的にない、薬を含むガス充填リポソームは、多
数の予期せぬしかし高度に有益な特徴を有する。本発明
のリポソームは、超音波に対する強い反響性（echogeni
city）を示し、これはそれらを生体内で効果的に監視す
ることを可能にする。本発明のリポソームはまた、リポ
ソームのピーク共鳴周波数での超音波の付与に際する破
裂に対して感受性がある。このような特徴は、本発明の
リポソームを本発明の新規でかつ予期せぬ応用において
用いることを可能にする。更に、本発明のリポソーム
は、圧力に対して驚くほど高度に安定であり、及び／ま
たは乾燥して若くしては液体媒体中に懸濁して貯蔵され
る時のどちらでも長い貯蔵寿命を有する。また、ガスに
よって満たされそして、カップ状の形に不可逆的につぶ
れるよりはむしろそれらの元の円の形を再び取る、真空
乾燥ガス注入方法の間のリポソームの能力は予期せぬこ
とである。
本発明のこれらのそしてその他の特徴及びその利点
を、以下の図面及び説明においてより詳細に述べる。
図面の簡単な説明 図１は、真空乾燥ガス注入方法によって製造された、
薬を含む真空乾燥されたガス充填リポソーム、及びその
内部に液体が実質的にない、薬を含むガス充填リポソー
ムを製造するための本発明による装置を示す。図２は、
真空乾燥ガス注入方法によって製造されたその内部に液
体が実質的にない、その中にカプセルに包んだ薬を何ら
有しない、ガス充填リポソームのdB反射率のグラフ図で
ある。このデータは、Acoustic Imaging（商標）モデ
ル5200走査機（Acoustic Imaging、フェニックス、ア
リゾナ）を使用して7.5メガヘルツの変換器によって走
査することによって得られ、そして反射率を測定するた
めのシステムテストソフトウェアを使用することによっ
て発生された。このシステムは、各々の実験に先立って
既知の音響のインピーダンスによって標準化した。
発明の詳細な説明 本発明は、真空乾燥ガス注入方法によって製造されそ
してその中に薬をカプセルに包んだ（即ち、薬を含
む）、ガス充填リポソームを含有して成る超音波造影剤
に向けられ、このようなリポソームは本明細書中では時
々薬を含む真空乾燥されたガス注入されたリポソームと
呼ばれる。本発明は、更に、その内部に液体が実質的に
ない、薬を含むガス充填リポソームを含有して成る造影
剤に向けられる。
本発明の、真空乾燥ガス注入方法によって製造され
た、ガス充填リポソームと、その内部に液体が実質的に
ない、ガス充填リポソームとの両方を製造するために用
いられる真空乾燥ガス注入方法は、以下の方法を意図す
る。第一に、この方法に従って、薬を含むリポソームを
陰圧（即ち、減圧または真空状態）下に置く。次に、リ
ポソームを、リポソームから実質的にすべての液体を除
去し、それによって実質的に乾燥されたリポソームを生
成させるのに十分な時間、その陰圧下で温置する。実質
的にすべての液体の除去とは、そして実質的に乾燥され
たリポソームとは、これらの文言が本明細書中で使用さ
れる時には、リポソームは液体が少なくとも約90％な
い、好ましくは液体が少なくとも約95％ない、最も好ま
しくは液体がほぼ100％ないことを意味する。液体は除
去されるけれども、より高い分子量を有する薬は、リポ
ソーム中にカプセルに包まれて後に留まる。最後に、周
囲圧力に到達するまでリポソームにガスを付与すること
によってリポソームに選ばれたガスを注入し、かくして
本発明の主題の薬を含む真空乾燥されたガス注入された
リポソーム、及びその内部に液体が実質的にない、本発
明の薬を含むガス充填リポソームを生成させる。本明細
書中で使用される時には、その内部に液体が実質的にな
いとは、液体が少なくとも約90％ない、好ましくは液体
が少なくとも約95％ない、最も好ましくは液体がほぼ10
0％ないことを意味する。
予想外にも、真空乾燥ガス注入方法に従って製造され
た薬を含むリポソーム、及びその内部に液体が実質的に
ない、薬を含むガス充填リポソームは、多数の驚くべき
しかし高度に有益な特徴を有する。本発明のリポソーム
は、超音波に対する強い反響性を示し、ピーク共鳴周波
数超音波（並びに十分な強度及び期間のその他の共鳴周
波数）の付与に際して破裂するであろうし、そして圧力
に対して高度に安定であり、及び／または乾燥して若く
しては液体媒体中に懸濁されてのどちらかで貯蔵される
時に一般的に長い貯蔵寿命を有する。
リポソームの反響性及び超音波を使用してピーク共鳴
周波数でリポソームを破裂させることができることは、
所望の部位中のリポソームの存在を測定するための患者
への投与の後でのリポソームの監視、及び部位中に薬を
放出するための超音波を使用してのリポソームの破裂を
可能にすることによって患者の部位への薬の制御された
配達を可能にする。好ましくは、本発明のリポソーム
は、2dBより大きい、好ましくは約4dB〜約20dBの反射率
を有する。これらの範囲内で、本発明のリポソームに関
する最高の反射率は、より大きなリポソームによって、
リポソームのより高い濃度によって、及び／またはより
高い超音波周波数を用いる時に示される。好ましくは、
本発明のリポソームは、約0.5mHz〜約10mHzのピーク共
鳴周波数を有する。勿論、本発明のガス充填リポソーム
のピーク共鳴周波数は、リポソームの径そして、ある程
度、弾性に依存して変わり、そしてより大きなそしてよ
り弾性的なリポソームは、より小さなそしてより弾性的
なリポソームよりも低い共鳴周波数を有する。
本発明のリポソームの安定性もまた、大きな実際的な
重要さのものである。本発明のリポソームは、既知の手
順例えば加圧化またはその他の技術によって製造され
た、その他のガス充填リポソームよりも、貯蔵の間大き
な安定性を有する傾向がある。例えば、生成の72時間後
では、従来のやり方で製造されたガスを含むリポソーム
は、しばしば本質的にガスがなく、ガスがリポソームか
ら拡散してしまったか及び／またはリポソームが破裂及
び／または融解してしまって、結果として反射率の付随
の損失がもたらされる。これと比較して、本発明のガス
充填リポソームは、一般的に約３週間より長い貯蔵寿命
安定性、好ましくは約４週間より長い貯蔵寿命安定性、
更に好ましくは約５週間より長い貯蔵寿命安定性、なお
更に好ましくは約３カ月より長い貯蔵寿命安定性、そし
てしばしばもっとずっと長い、例えば６カ月、12カ月、
または２年をさえ越える貯蔵寿命安定性を有する。
また、ガスで満たされそして、先行技術から予期され
るようにカップの形の構造につぶれるよりもむしろそれ
らの元の円の形を取り戻す、真空乾燥ガス注入方法の間
のリポソームの能力は予想外である。例えば、Crowe
ら、Archives of Biochemistry and Biophysics、2
42巻、240〜247頁（1985）、Croweら、Archives of B
iochemistry and Biophysics、220巻、477〜484頁（1
983）、Fukudaら、J.Am.Chem.Soc.、108巻、2321〜2327
頁（1986）及びReganら、J.Am.Chem.Soc.、102巻、6638
〜6640頁（1980）を参照せよ。
本発明の真空乾燥ガス注入方法にかけられる薬を含む
リポソームは、当業者には明らかであろう種々の慣用の
リポソーム準備技術の任意の１つを使用して製造するこ
とができる。これの技術は、凍結融解、並びに超音波処
理、キレート透析、均質化、溶媒注入（infusion）、マ
イクロ乳化、自発生成、溶媒蒸発、フレンチプレス細胞
技法、制御された洗浄剤透析及びその他のような技術を
含み、そしてそれらの各々は、薬が生成されるリポソー
ム中にカプセル化されるように所望の薬を含む溶液中で
種々の方式でリポソームを製造することを含む。その代
わりに、当業者が認めるであろうように、特定のpHでプ
ロトン化する（protinate）または脱プロトン化する（d
eprotinate）薬に特に適用できるpH傾斜技術を使用して
リポソーム中に薬を装填しても良い。例えば、その開示
が引用によって本明細書中に組み込まれる、Maddenら、
Chemistry and Physics of Lipids、53巻、37〜46
頁を参照せよ。所望の場合には、薬を含むリポソームの
サイズは、真空乾燥及びガス注入に先立って、生成する
リポソームの生物分布及びクリアランスを調節するため
に、種々の手順例えば押出、濾過、超音波処理、液体の
非混和性シース中に導入された液体のコアの層流を用い
る均質化、及び類似の方法によって調節することができ
る。しかしながら、規定されたサイズの細孔を通しての
圧力下での押出は、リポソームのサイズを調節する好ま
しい手段である。上述の技術、並びにその他のものは、
例えば、米国特許第4,728,578号、英国特許出願特許219
3095号、米国特許第4,728,575号、米国特許第4,737,323
号、国際出願PCT/US85/01161、Mayerら、Biochimica e
t Biophysica Acta、858巻、161〜168頁（1986）、Ho
peら、Biochimica et Biophysica Acta、812巻、55
〜65頁（1985）、米国特許第4,533,254号、Mayhewら、M
ethods in Enzymology、149巻、64〜77頁（1987）、M
ayhewら、Biochimica et Biophysica Acta、755巻、
169〜74頁（1984）、Chengら、Investigative Radiolo
gy、22巻、47〜55頁（1987）、PCT/US89/05040、米国特
許第4,162,282号、米国特許第4,310,505号、米国特許第
4,921,706号並びにLiposome Technology、Gregoriadi
s,G、編集、Ｉ巻、29〜37、51〜67及び79〜108頁（CRC
出版社、Boca Raton,FL,1984）中で議論されている。
上述の特許、刊行物及び特許出願の各々の開示は、それ
らの全体が引用によって本明細書中に組み込まれる。多
数の種々の技術の任意のものを用いることができるけれ
ども、好ましくは、薬を含むリポソームはマイクロ乳化
技術によって製造される。種々の慣用の手順によって製
造されたリポソームは、次に、本発明の薬を含むリポソ
ームを製造するために、本発明の真空乾燥ガス注入方法
において用いることができる。
本発明の真空乾燥ガス注入方法において用いられるべ
きリポソームを製造する際に利用することができる物質
は、リポソーム合成のために適切であるとして当業者に
知られている任意の物質またはそれらの組み合わせを含
む。使用される脂質は、天然または合成のどちらの起源
のものでも良い。このような物質は、脂質例えば脂肪
酸、リソ脂質、ジパルミトイルホスファチジルコリン、
ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、スフィンゴ
ミエリン、コレステロール、コレステロールヘミスクシ
ネート、トコフェロールヘミスクシネート、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、
リソ脂質、スフィンゴミエリン、グリコスフィンゴ脂
質、グルコ脂質、グリコ脂質、スルファチド、エーテル
及びエステル結合された脂肪酸を有する脂質、重合され
た脂質、リン酸ジアセチル、ステアリルアミン、ジステ
アロイルホスファチジルコリン、ホスファチジルセリ
ン、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、長さが６〜
８の炭素の短鎖脂肪酸を含むリン脂質、非対称アシル連
鎖を含む（例えば、６の炭素の一つのアシル連鎖及び12
の炭素のもう一つのアシル連鎖を含む）合成リン脂質、
６−（５−コレステン−３β−イロキシ）−１−チオ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセ
リド、６−（５−コレステン−３β−イロキシ）ヘキシ
ル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシド、６−（５−コレステン−３β−イロ
キシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシル−１−チ
オ−α−Ｄ−マンノピラノシド、ジベヘノイルホスファ
チジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、
ジラウロイルホスファチジルコリン、並びにジオレオイ
ルホスファチジルコリン、並びに／またはこれらの組み
合わせを含むが、それらに限定されない。本発明の精神
を保持する当業者に明らかなその他の有用な脂質または
それらの組み合わせもまた、本発明によって包含され
る。例えば、米国特許第4,310,505号中に述べられたよ
うに、脂質を有する炭水化物を生体内標的化（targetin
g）のために用いて良い。本発明における使用のために
特に興味あるものは、真空乾燥ガス注入が行われる温度
でゲル状態（液状結晶性状態と比較して）にある脂質で
ある。種々の脂質の相転移温度は、当業者には容易に明
らかであろうし、そして、例えば、その開示が全体とし
て引用によって本明細書に組み込まれる、Liposome Te
chnology、Gregoriadis,G、編集、Ｉ巻、１〜18頁（CRC
出版社、Boca Raton,FL 1984）中に述べられている。
加えて、任意のリポソーム膜中への少なくとも小量の負
に荷電された脂質の組み入れは、必要ではないけれど
も、高度に安定なリポソームを供給することのために有
益である。少なくとも小量とは、全脂質の約１モル％を
意味する。適切な負に荷電された脂質は、当業者には容
易に明らかであろうし、そして、例えばホスファチジル
セリン及び脂肪酸を含む。真空乾燥ガス注入方法の後の
共鳴周波数超音波の適用に際して破裂する究極の能力、
反響性及び安定性の合わせられた理由のために最も好ま
しいのは、ジパルミトイルホスファチジルコリンから製
造されたリポソームである。
種々の薬の任意のものをリポソーム中にカプセル化し
て良い。本明細書中で使用される時には、薬とは、患者
に対して有益な及び／または治療の効果を有する任意の
薬剤を意味する。適切な薬は、抗腫瘍薬例えば白金化合
物（例えばスピロプラチン、シスプラチン及びカルボプ
ラチン）、メトトレキサート、アドリアマイシン、マイ
トマイシン、アンサミトシン、ブレモイシン、サイトシ
ン、アラビノシン、アラビノシル、アネニン、メルカプ
トポリリシン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロラ
ムブシル、メルファザン（例えばPAM、Ｌ−PAMまたはフ
ェニルアラニンマスタード）、メルカプトプリン、マイ
トテイン、塩酸プロカルバジンダシノマイシン（アクチ
ノマイシンＤ）、塩酸ダウノルビシン、マイトマイシ
ン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、アミノグルテ
チミド、エストラムスタインホスフェートナトリウム、
フルタミド、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、
クエン酸タモキシフェン、テトララクトン、トリロスタ
ン、アムサクリン（ｍ−AMSA）、アスパラギナーゼ（Ｌ
−アスパラギナーゼ）、エルウィニアアスパギナーゼ、
エトポシド（VP−16）、インターフェロンα−2a、イン
ターフェロンα−2b、テニポシド（VM−26）、硫酸ビン
ブラスチン（VLB）、硫酸ビンクリスチン、ブレオマイ
シン、硫酸ブレオマイシン、メトトレキサート、アドリ
アマイシン、シトシン、アラビノシン及びアラビノシ
ル；生物学的応答調製剤例えばムラミルジペプチド、ム
ラミルトリペプチド、微生物の細胞壁成分、リンホカイ
ン（例えばバクテリアの内毒素例えばリポ多糖類、マク
ロファージ活性化因子）、バクテリアの亜単位（例えば
マイコバクテリア、コリネバクテリア）、合成ジペプチ
ドであるＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−
イソグルタミン；遺伝子の物質例えば天然または合成起
源のどちらかの核酸、RNA及びDNA（組み換えのRNA及びD
NAを含む）；抗真菌薬例えばケトコナゾール、ナイスタ
チン、グリセオフルビン、フルシトソン（５−fc）、ミ
コナゾール、アムホテリシン−β、リシン及びβ−ラク
タム抗生物質（例えばスルファゼシン）；ホルモン例え
ば成長ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、エストラ
ジオール、ベクロメタソンジプロピオネート、酢酸ベタ
メタゾン及びリン酸ナトリウムベタメタゾン、リン酸二
ナトリウムベタメタゾン（vetamethasone）、リン酸ナ
トリウムベタメタゾン、酢酸コルチゾン、デキサメサゾ
ン、酢酸デキサメサゾン、リン酸ナトリウムデキサメサ
ゾン、フルインソリド、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロ
コルチゾン、ヒドロコルチゾンシピオネート、リン酸ナ
トリウムヒドロコルチゾン、コハク酸ナトリウムヒドロ
コルチゾン、メチルプレドニソロン、酢酸メチルプレド
ニソロン、コハク酸ナトリウムメチルプレドニソロン、
酢酸パラメサゾン、プレドニソロン、酢酸プレドニソロ
ン、リン酸ナトリウムプレドニソロン、プレドニソロン
テブテート、プレドニソン、トリアムシノロン、トリア
ムシノロンアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、トリ
アムシノロンヘキサセトニド及び酢酸フルドロコルチゾ
ン；ビタミン例えばシアノコバラミン及びα−トコフェ
ロール；ペプチド例えばマンガンスーパーオキシドジム
ターゼ；酵素例えばアルカリ性フォスファターゼ；抗ア
レルギー薬例えばアメレクサノックス；抗凝血薬例えば
フェンプロクーモン及びヘパリン；循環薬例えばプロプ
ラノロール；代謝相乗薬例えばグルタチオン；結核治療
薬例えばｐ−アミノサリチル酸、イソニアジド硫酸カプ
レオマイシンサイクロセリン、エタンブトール塩酸塩エ
チオナミド、ピラジナミド、リファンピン及び硫酸スト
レプトマイシン；抗ウイルス物質例えばアシクロビル、
アマンタジンアジドチミジン（AZTまたはジドブジ
ン）、リバビリン及びビダラビン一水和物（アデニンア
ラビノシド、ara−Ａ）；抗狭心症薬例えばジルチアゼ
ム、ニフェジピン、ベラパミル、四硝酸エリスリチル、
二硝酸イソソルビド、ニトログリセリン（三硝酸グリセ
リル）及び四硝酸ペンタエリトリトール；抗凝血薬例え
ばフェンプロクーモン、ヘパリン；抗生物質例えばダプ
ソーン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、セファ
クロール、セファドロキシル、セファレキシン、セフラ
ジン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマ
イシン、アモキシシリン、アンピシリン、バカンピシリ
ン、カルベニシリン、クロキサシリン、シクラシリン、
ピクロキサシリン、ヘタシリン、メチシリン、ナフシリ
ン、オキサシリン、ベニシリンＧ、ペニシリンＶ、チカ
ルシリンフィファンピン及びテトラサイクリン；抗炎症
薬例えばジフニサル、イブプロフェン、インドメタシ
ン、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセ
ン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキ
シカム、クリンダック、トルメチン、アスピリン及びサ
リチル酸塩；抗原虫剤例えばクロロキン、ヒドロキシク
ロロキン、メトロニダゾール、キニン及びアンチモン酸
メグレミン；抗リウマチ薬例えばペニシラミン；麻酔薬
例えばアヘン安息香酸チンキ；アヘン剤例えばゴデイ
ン、ヘロイン、メサドン、モルヒネ及びアヘン；強心配
糖体例えばデスラノシド、ジギトキシン、ジゴキシン、
ジギタリン及びジギタリス；神経筋遮断薬例えばアトラ
クリウムベシレート、三ヨウ化エチルガラミン、臭化ヘ
キサフルオレニウム、ヨウ化メトクリン、臭化パンクロ
ニウム、塩化サクシニルコリン（塩化スキサメトニウ
ム）、塩化ツボクラリン及び臭化ベクロニウム；鎮静薬
（睡眠薬）例えばアモバルビタール、アモバルビタール
ナトリウム、アプロバルビタール、ブタバルビタールナ
トリウム、抱水クロラール、エチクロルビノール、エチ
ナメート、塩酸フルラゼパム、グルテチミド、塩酸メト
トリメプラジン、メチプリロン、塩酸ミダゾラム、パラ
アルデヒド、ペントバルビタール、ペントバルビタール
ナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバル
ビタールナトリウム、タルブタル、テマゼパム及びトリ
アゾラム；局所麻酔薬例えば塩酸ブピバカイン、塩酸ク
ロロプロカイン、塩酸エチドカイン、塩酸リドカイン、
塩酸メピバカイン、塩酸プロカイン及び塩酸テトラカイ
ン；全身麻酔薬例えばドロペリドール、エトミデート、
ドロペリドールとのクエン酸フェンタニール、塩酸ケタ
ミン、メトヘキシタルナトリウム及びチオペンタルナト
リウム；並びに放射性粒子またはイオン例えばストロン
チウム、ヨウ化レニウム及びイットリウムを含むが、こ
れらに限定されない。
同様に、プロドラッグは、リポソーム中にカプセル化
することができ、そして本明細書中で使用される時には
薬という術語の範囲内に含まれる。プロドラッグは、当
該技術において良く知られていて、そして酸素の存在下
でまたはそうでなくて、高温、空洞現象及び／または圧
力に曝される時に、またはリポソームから放出される時
に、活性な薬を形成するであろう不活性な薬前駆体を含
む。このようなプロドラッグは、空洞現象、加熱、圧
力、及び／またはリポソームからの放出をもたらす。プ
ロドラッグを含むリポソームへの超音波の付与に際し
て、本発明の方法において活性化することができる。適
切なプロドラッグは、当業者には明らかであろうし、そ
して例えば、その開示が全体として引用によって本明細
書中に組み込まれるSinkulaら、J.Pharm.Sci.、64巻、1
81〜210頁（1975）中に述べられている。例えば、プロ
ドラッグは活性な薬の不活性な形から成って良く、そこ
では、プロドラッグを不活性にする及び／または薬に溶
解度若しくは何らかのその他の特性を授ける、化学基が
プロドラッグの上に存在する。この形においては、プロ
ドラッグは一般的に不活性であるが、一度化学基が、
熱、空洞現象、圧力によって及び／または取り巻く環境
若しくはその他中の酵素によって、プロドラッグから開
裂されてしまうと、活性な薬が生成される。このような
プロドラッグは、当該技術において十分に述べられてい
て、そして短鎖、中鎖または長鎖の脂肪族カーボネート
へのエステル、有機リン酸塩のヘミエステル、ピロリン
酸塩、硫酸塩、アミド、アミノ酸、アゾ結合、カルバメ
ート、ホスファミド、グルコシズロネート、Ｎ−アセチ
ルグルコサミニド及びβ−グリコシドのような結合によ
って化学基に結合された広範囲の薬から成る。親分子及
び可逆的改質または結合を含む薬の例は以下の通りであ
る：ケタールを含むコンバラトキシン、アルキルエステ
ルを含むヒダントイン、グリシンまたはアラニンエステ
ルを含むクロルフェネシン、カフェイン錯体を含むアセ
トアミノフェン、THAM塩を含むアセチルサリチル酸、ア
セトアミドフェニルエステルを含むアセチルサリチル
酸、硫酸エステルを含むナロキソン、メチルエステルを
含む15−メチルプロスタグランジンF2、ポリエチレング
リコールを含むプロカイン、アルキルエステルを含むエ
リスロマイシン、アルキルエステルまたはリン酸エステ
ルを含むクリンダマイシン、ベタイン塩を含むテトラサ
イクリン、環置換されたアシロキシベンジルエステルを
含む７−アシルアミノセファロスポリン、フェニルプロ
ピオン酸デカン酸エステルを含むナンドロロン、エノー
ルエーテルアセタールを含むエストラジオール、酢酸エ
ステルを含むメチルプレドニソロン、ｎ−アセチルグル
コサミニドガルコシズロネート（トリメチルシリル）エ
ーテルを含むテストステロン、21−リン酸エステルを含
むコルチゾルまたはプレドニソロンまたはデキサメサゾ
ン。特定の組織の場所への輸送そして増進された治療効
果のために影響を与える可逆的改質または結合を含む親
分子の例は、ハロアルキルニトロス尿素を含むイソシア
ネート、プロピオン酸エステルを含むテストステロン、
ジアルキルエステルを含むメトトレキサート（３−5'−
ジクロロメトトレキサート）、5'−アクリレートを含む
シトシンアラビノシド、ナイトロジェンマスタード（2,
2'−ジクロロ−Ｎ−メチルジエチルアミン）、アミノメ
チルテトラサイクリンを含むナイトロジェンマスター
ド、コレステロールまたはエストラジオールまたはデヒ
ドロエピアンドロステロンエステルを含むナイトロジェ
ンマスタード及びアゾベンゼンを含むナイトロジェンマ
スタードを含む。当業者なら認めるであろうように、与
えられた薬を改質するための特定の化学基は、リポソー
ムの膜または内部空間のどちらかの中への薬の分配に影
響するように選ぶことができる。化学基を薬に結合する
ために選ばれる結合は、代謝、例えば、エステル結合の
場合にはガス充填リポソームからの放出の後での血清エ
ステラーゼの存在下での加水分解の所望の速度を有する
ように選ぶことができる。加えて、特定の化学基は、本
発明のガスで満たされた薬を含むリポソーム中で用いら
れる薬の生物分布に影響を与えるように選ぶことがで
き、例えば卵巣の腺癌のための環状ホスホルアミドを含
むN,N−ビス（２−クロロエチル）−ジアミドリン酸で
良い。加えて、ガス充填リポソーム内で用いられるプロ
ドラッグは、活性の期間の改質剤として利用して作用効
果を供給する、長期化するまたは長くする可逆的誘導体
を含むように設計することができる。例えば、ニコチン
酸はデキストラン及びカルボキシメチルデキストランエ
ステルによって、ストレプトマイシンはアルギン酸塩に
よって、ジヒドロストレプトマイシンはパモエート塩に
よって、サイタラビン（ara−Ｃ）は5'−アダマントエ
ートエステルによって、アラ−アデノシン（ara−Ａ）
は５−パルミチン酸及び5'−安息香酸エステルによっ
て、アムホ−テリシン−βはメチルエステルによって、
テストステロンは17−β−アルキルエステルによって、
エストラジオールはギ酸エステルによって、プロスタグ
ランジンは２−（４−イミダゾリル）エチルアミン塩に
よって、ドーパミンはアミノ酸アミドによって、クロラ
ムフェニコールはモノ−及びビス（トリメチルシリル）
エーテルによって、そしてシクログアニルはパモエート
塩によって改質することができる。この形で、長く作用
する薬のデポー製剤またはレザバーを、ガス充填プロド
ラッグを含むリポソームから生体内で放出することがで
きる。加えて、一般的に熱的に不安定である化合物を利
用して毒性のフリーラジカル化合物を作り出すことがで
きる。高温で分解するアゾ結合、ペルオキシド及びジス
ルフィド結合を有する化合物が好ましい。この形のプロ
ドラッグによって、アゾ、ペルオキシドまたはジスルフ
ィド結合含有化合物は、高いエネルギーの音とガス充填
リポソームとの相互作用によって引き起こされる空洞現
象及び／または増加した加熱によって活性化されて、そ
れらの中に包まれたこれらのプロドラッグからフリーラ
ジカルのカスケードを作り出す。広範囲の薬または化学
品、例えばアゾ化合物［このような化合物の一般的構造
はＲ−Ｎ＝Ｎ−Ｒ（式中、Ｒは炭化水素連鎖である）で
あり、２つの窒素原子の間の二重結合は反応して生体内
でフリーラジカル生成物を作り出す可能性がある］がこ
れらのプロドラッグを構成することができる。フリーラ
ジカル生成物を作り出すために使用することができる例
示の薬または化合物は、アゾ含有化合物例えばアゾベン
ゼン、2,2'−アゾビスイソブチロニトリル、アゾジカル
ボンアミド、アゾリトミン、アゾマイシン、アゾセミ
ド、アゾスルファミド、アゾキシベンゼン、アズトレオ
ナム、ズダンIII、スルファクリソイジン、スルファミ
ドクンリソイジン及びスルファサラジン、ジスルフィド
結合を含む化合物例えばスルベンチン、チアミンジスル
フィド、チオルチン、チラム、ペルオキシドを含む化合
物例えば過酸化水素及びベンゾイルペルオキシド、2,2'
−アゾビス（２−アミドプロパン）ジヒドロクロリド及
び2,2'−アゾビス（2,4−ジメチルバレロニトリル）を
含む。酸素ガスによって満たされた、ガス充填リポソー
ムは、空洞現象によって多数のフリーラジカルを作り出
すはずである。また、遷移シリーズ、殊にマンガン、鉄
及び銅からの金属イオンは、酸素からの反応性酸素中間
体の生成の速度を増すことができる。金属イオンをリポ
ソーム内部にカプセル化することによって、生体内での
フリーラジカルの生成を増加させることができる。これ
らの金属イオンは、遊離塩として、例えばEDTA、DTPA、
DOTA若しくはデスフェリオキサミンとの錯体として、ま
たは金属イオンの酸化物としてリポソーム中に組み入れ
ることができる。加えて、金属イオンの誘導化された錯
体は、脂質の頭の基に結合されて良いか、またはイオン
の親油性錯体は脂質の二重層中に組み入れられて良い。
熱的刺激例えば空洞現象に曝す時に、これらの金属イオ
ンは反応性酸素中間体の生成の速度を増加させるであろ
う。更に、放射線増感剤例えばメトロニダゾール及びミ
ソニダゾールをガス充填リポソーム中に組み入れて、熱
的刺激に際してフリーラジカルを作り出して良い。
プロドラッグの使用の例として、アシル化された化学
基を、血清中の酵素的作用によって生体内で容易に開裂
するであろうエステル結合によって薬に結合して良い。
このアシル化されたプロドラッグを、本発明のガス充填
リポソーム中に組み入れる。リポソームはまた、リポソ
ームの内側と外側の両方で薬の対称的または非対称的分
布が存在するように設計しても良い。ガス充填リポソー
ムが超音波からの音のパルスによってはじかれる時に、
リポソームによってカプセル化されたプロドラッグは、
血清に曝されるであろう。するとエステル結合が血清中
のエステラーゼによって開裂され、それによって薬を発
生する。
同様に、超音波はガス充填リポソームをはじくためば
かりではなく、また化学的開裂及びプロドラッグからの
活性の放出の速度を増すことができる熱的効果を引き起
こすためにも利用することができる。
当業者なら認めるであろうように、薬の特別な化学的
構造は、所望の溶解度を達成し、その結果薬をリポソー
ムの内部水性空間内にかまたは脂質膜中にかのどちらか
にカプセル化することができるように選択または改質し
て良い。膜に結合された薬は１以上のアシル連鎖を有し
て良く、その結果、泡がはじかれるまたは加熱されるま
たは空洞現象による時に、アシル化された薬は膜を離れ
得るか及び／または薬はアシル連鎖化学基から開裂され
得る。同様に、その他の薬も、構造が芳香族またはステ
ロールである疎水基によって調製されて膜中に組み入れ
られて良い。
薬を含むリポソームを製造するために、そして一般的
なガイダンスのために、例えば、ジパルミトイルホスフ
ァチジルコリンリポソームは、ジパルミトイルホスファ
チジルコリン脂質を、カプセル化されるべき薬を含む、
リン酸塩で緩衝された食塩水または水の中に懸濁させる
こと、及びジパルミトイルホスファチジルコリン脂質が
ゲル状態から液状結晶性状態へ転移して、薬を含むリポ
ソームを形成するために必要とされる45℃の温度より少
し高い温度である約50℃に脂質を加熱することによって
製造することができる。約２ミクロンのむしろ不均一な
サイズ分布の多重層小胞を製造するためには、リポソー
ムを、次に、リポソーム溶液を約50℃の温度で保持しな
がら手によってゆっくりと混合して良い。次に、温度を
室温に下げ、そしてリポソームをそのままに留める。規
定されたサイズのポリカーボネートフィルターを通して
のジパルミトイルホスファチジルコリンリポソームの押
出は、所望の場合には、もっと均一なサイズ分布のリポ
ソームを作るために用いることができる。この技術のた
めの有用な装置は、押出が脂質に関するゲル状態−液状
結晶性転移温度より上で好都合に達成できるように熱バ
レルを備えた押出装置（Extruder Device（商標）、Li
pex Biomembranes、バンクーバー、カナダ）である。
水性媒体中に難溶性である親油性薬に関しては、この
ような薬は、リポソームを形成するのに先立ってそれ自
体脂質と混合して良い。例えば、アムホテリシンは乾燥
された脂質（例えば、クロロホルム中のそして脂質と混
合された8:2のモル比の卵ホスファチジルコリン及びコ
レステロール）によって懸濁させて良い。次に、クロロ
ホルムを蒸発させ（その他の適切な有機溶媒例えばエタ
ノールまたはエーテルもまた使用することができること
に着目せよ）、そして親油性薬の混合物を含む乾燥され
た脂質を、次に、水性媒体、例えば、無菌の水または生
理食塩水中に再懸濁させる。この方法は、種々の親油性
薬例えばコルチコステロイドに関してリポソーム膜中に
親油性薬を組み入れるために使用することができる。次
に、生成するリポソームを乾燥し、上で述べたような真
空ガス注入方法にかける。
その代わりに、そして再び一般的なガイダンスのため
に、慣用の凍結融解手順を、オリゴ膜（oligolamella
r）または一枚膜のどちらかのジパルミトイルホスファ
チジルコリンリポソームを製造するために使用して良
い。凍結融解手順の後で、次に、上で述べたような押出
手順をリポソームに関して実施して良い。
このようにして製造された薬を含むリポソームは、次
に、本発明の薬を含む真空乾燥されたガス注入リポソー
ム、及びその内部に液体が実質的にない薬を含むガス充
填リポソームを製造するために、本発明の真空乾燥ガス
注入方法にかけることができる。本発明の方法に従っ
て、薬を含むリポソームを、リポソームに陰圧（即ち、
減圧または真空条件）をかけるために適切な容器中に入
れる。次に、リポソームから実質的にすべての液体を除
去し、それによって実質的に乾燥されたリポソームを生
成させるのに十分な時間陰圧をかける。当業者が、一度
本発明の開示を与えられると、認識するであろうよう
に、種々の陰圧を用いることができ、そして重要なパラ
メーターは実質的にすべての液体がリポソームから除去
されてしまったことである。一般的に、約24〜約72時間
かけられる、少なくとも約700mmHgそして好ましくは約7
00mmHg〜約760mmHg（ゲージ圧力）の範囲の陰圧が、リ
ポソームから実質的にすべての液体を除去するのに十分
である。その他の適切な圧力及び時間の期間は、本明細
書中の開示に鑑みて、当業者には明らかであろう。
最後に、周囲圧力に到達するまで選ばれたガスをリポ
ソームにかけてリポソームにガスを注入し、それによっ
て本発明の薬を含む真空乾燥されたガス注入されたリポ
ソームを、そしてその内部に液体が実質的にない、薬を
含むガス充填リポソームを生成させる。好ましくは、ガ
ス注入は、ゆっくりと、即ち、少なくとも約４時間の時
間の期間にわたって、最も好ましくは約４〜約８時間の
時間の期間にわたって行われる。種々の生物適合性ガス
を用いることができる。このようなガスは、空気、窒
素、二酸化炭素、酸素、アルゴン、キセノン、ネオン、
ヘリウム、またはこれらの任意のそしてすべての組み合
わせを含む。その他の適切なガスは当業者には明らかで
あろう。選ばれるガスはリポソームの提案された応用に
よってのみ限定される。
リポソームの製造のための上で述べた方法は、本明細
書中で以後真空乾燥ガス注入方法と呼ばれる。
所望の場合には、リポソームに陰圧をかけるのに先立
ってリポソームを冷却して良く、そしてこのような冷却
は好ましい。好ましくは、リポソームに陰圧をかけるの
に先立って、リポソームを、０℃未満に、更に好ましく
は約−10℃〜約−20℃に、そして最も好ましくは−10℃
に冷却する。所望の陰圧に達すると、次にリポソーム温
度を、実質的にすべての液体がリポソームから除去され
てしまうまで、好ましくは０℃より高く、更に好ましく
は約10℃〜約20℃に、そして最も好ましくは10℃に上
げ、そして陰圧を打ち切り、その時点で次に温度を室温
に復帰せしめる。
リポソームを０℃未満の温度に冷却する場合には、真
空乾燥ガス注入方法を、凍結保護剤（cryoprotectant
s）の存在下で初めから製造されたリポソームか、また
は本発明の真空乾燥ガス注入方法を実施するのに先立っ
て凍結保護剤を添加されたリポソームのどちらかに関し
て実施することが好ましい。このような凍結保護剤は、
必ずしも添加されはしないが、低温でリポソーム膜の実
体を維持するのを助け、そしてまた膜の究極の安定性を
加える。好ましい凍結保護剤は、トレハローズ、グリセ
ロール、ポリエチレングリコール（殊に分子量400のポ
リエチレングリコール）、ラフィノーゼ、スクロース及
びソルビトールであり、そしてトレハローズが特に好ま
しい。
本発明のリポソームは圧力の変化に対して高度に安定
であることもまた驚くべきことに発見された。この特徴
のために、真空乾燥及びガス注入の後の規定された細孔
サイズのフィルターを通してのリポソームの押出を、比
較的均一なそして規定された細孔サイズのリポソームを
作り出すために、所望の場合には、実施することができ
る。
使用に先立つ貯蔵のために、本発明の薬を含むリポソ
ームを、水性溶液例えば食塩水溶液（例えば、リン酸塩
で緩衝された食塩水溶液）、または単に水の中に懸濁さ
せ、そして好ましくは約２℃〜約10℃の温度で、好まし
くは約４℃で貯蔵して良い。好ましくは、水は無菌であ
る。最も好ましくは、リポソームを高張食塩水溶液（例
えば、約0.3〜約0.5％のNaCl）中に貯蔵するが、所望の
場合には、食塩水溶液は等張性で良い。水溶液はまた、
所望の場合には、pH6.8〜pH7.4のpH範囲を与えるように
緩衝されていて良い。適切な緩衝剤は、酢酸塩、クエン
酸塩、リン酸塩及び重炭酸塩を含むが、これらに限定さ
れない。デキストロースもまた懸濁媒体中に含めて良
い。好ましくは、水性溶液は、その中にリポソームを懸
濁させるのに先立って脱ガス（即ち、真空圧力下で脱ガ
ス）される。細菌発育阻止剤もまた、貯蔵に際しての細
菌による劣化を防止するためにリポソームと共に含まれ
て良い。適切な細菌発育阻止剤は、ベンザルコニウムク
ロリド、ベンゼトニウムクロリド、安息香酸、ベンジル
アルコール、ブチルパラベン、セチルピリジニウムクロ
リド、クロロブタノール、クロロクレゾール、メチルパ
ラベン、フェノール、安息香酸カリウム、カリウムソル
ベート（sorbate）、安息香酸ナトリウム及びソルビン
酸を含むがこれらに限定されない。更に、１以上の酸化
防止剤も、脂質の酸化を防止するためにガス充填リポソ
ームと共に含まれて良い。適切な酸化防止剤は、トコフ
ェロール、アスコルビン酸及びパルミチン酸アスコルビ
ルを含む。種々の上述のやり方で製造されたリポソーム
は、少なくとも数週または数カ月の間貯蔵することがで
きる。その代わりに、本発明のリポソームは、所望の場
合には、それらの乾燥された、懸濁されない形で貯蔵し
ても良く、そしてこのようなリポソームもまた数週また
は数カ月より長い貯蔵寿命を有する。詳細には、いずれ
のやり方で貯蔵されても、本発明のリポソームは、一般
的に約３週間より長い貯蔵寿命安定性、好ましくは約４
週間より長い貯蔵寿命安定性、更に好ましくは約５週間
より長い貯蔵寿命安定性、なお更に好ましくは約３カ月
より長い貯蔵寿命安定性、そしてしばしばもっとずっと
長い、例えば６カ月、12カ月または２年をさえ越える貯
蔵寿命安定性を有する。
本発明のもう一つの面として、本発明の薬を含む真空
乾燥されたガス注入されたリポソーム、及びその内部に
液体が実質的にない、薬を含むガス充填リポソームを製
造するために有用な装置もまた提供される。詳細には、
リポソームを真空乾燥しそして乾燥されたリポソーム中
にガスを注入するための好ましい装置を図１中に示す。
この装置は薬を含むリポソーム19を入れるための容器８
を含む。所望の場合には、装置は容器８を取り巻くドラ
イアイス17を含むアイスバス５を含んで良い。アイスバ
ス５及びドライアイス17はリポソームを０℃未満に冷却
せしめる。真空ポンプ１が、容器に維持された（sustai
ned）陰圧をかけるために導管15を経由して容器８に接
続されている。好ましい実施態様においては、ポンプ１
は少なくとも約700mmHgの陰圧、そして好ましくは約700
mmHg〜約760mmHg（ゲージ圧力）の範囲の陰圧をかける
ことができる。マノメーター６が、容器８にかけられた
陰圧の監視を可能にするために導管15に接続されてい
る。
リポソームから除去された液体がポンプ１に入るのを
防止するために、一連のトラップを導管15に接続してリ
ポソームから引き出された液体（及び液体蒸気、本明細
書中ではすべてを集合的に液体と呼ぶ）を収集するのを
助ける。好ましい実施態様においては、２つのトラップ
を利用する。第一のトラップは、好ましくは、ドライア
イス17を含むアイスバス４中に配置されたフラスコから
成る。第二のトラップは、好ましくは、その回りにチュ
ーブ16が螺旋状に配置されているカラム３から成る。カ
ラム３は、そのトップ端で導管15にそしてその底端でチ
ューブ16の一端に接続されている。チューブ16の他端は
導管15に接続されている。図１中に示すように、ドライ
アイス17を含むアイスバス２がカラム３及びチューブ16
を取り囲む。所望の場合には、ドライアイス17を、液体
窒素、液体空気またはその他の低温貯蔵用の物質で置き
換えることができる。アイスバス２及び４は、トラップ
中への収集のために、リポソームから引き出された液体
を収集しそして液体蒸気を凝縮するのを助ける。本発明
の好ましい実施態様においては、アイストラップ２及び
４は、各々少なくとも約−70℃の温度で維持される。
ストップコック14が、選ばれたガスがガスボトル18か
ら容器８中にそしてリポソーム19中に導入せしめられる
ように容器８の上流で導管15中に配置されている。
本発明の装置は薬を含むリポソーム19を容器８中に入
れることによって利用される。好ましい実施態様におい
ては、ドライアイス17を含むアイスバス５が、リポソー
ムの温度を０℃未満に、更に好ましくは約−10℃〜約−
20℃に、そして最も好ましくは−10℃に低下させるため
に使用される。ストップコック14及び９を閉じておい
て、真空ポンプ１を機動する。次に、ストップコック1
0、11、12及び13を注意深く開いて、真空ポンプ１によ
って容器８中に真空を作り出す。少なくとも約700mmHg
のそして好ましくは約700mmHg〜約760mmHg（ゲージ圧
力）の陰圧が達成させるまでマノメーター６によって圧
力を測定する。本発明の好ましい実施態様においては、
ドライアイス17を含むアイスバス４によって冷却された
容器７、並びにドライアイス17を含むアイスバス２によ
って冷却されたカラム３及びコイル16が、一緒にまたは
別々にリポソームから引き出された液体蒸気を凝縮しそ
して液体をトラップして、その結果このような液体及び
液体蒸気が真空ポンプ１に入るのを防止する。本発明の
好ましい実施態様においては、アイストラップ２及び４
の温度は、各々、少なくとも約−70℃の温度で維持され
る。所望の陰圧は一般的に少なくとも24時間維持され、
その結果液体及び液体蒸気は容器８中のリポソーム19か
ら除去されそして容器３及び７中で凍結される。システ
ム内の圧力を、マノメーター６を使用して監視しそして
一般的に約24〜約72時間維持するが、この時間には実質
的にすべての脂質がリポソームから除去されてしまって
いる。この時点で、ストップコック10をゆっくりと閉じ
そして真空ポンプ１を停止する。次に、ストップコック
14を徐々に開き、そしてガスをガスボトル18からストッ
プコック14を通して導管15を経由してゆっくりとシステ
ム中に導入し、容器８中の薬を含むリポソーム19中にガ
スを注入する。好ましくは、このガス注入は、システム
が周囲圧力に到達するまで、少なくとも約４時間の時間
の期間にわたって、最も好ましくは約４〜約８時間の時
間の期間にわたってゆっくりと行われる。
本発明の薬を含む真空乾燥されたガス注入されたリポ
ソーム、及びその内部に液体が実質的にない、薬を含む
ガス充填リポソームは、薬配達ビヒクルとして優れた特
徴を有する。詳細には、本発明は、患者の部位への薬の
制御された配達に用いることができ、患者は本発明の薬
を含むリポソームを投与され、これらのリポソームは部
位中のリポソームの存在を測定するために超音波を使用
して監視され、そして次に部位中に薬を放出するために
リポソームは超音波を使用して破裂させられる。患者は
いずれのタイプの哺乳類でも良いが、最も好ましくはヒ
トである。患者の部位とは、患者全体、または患者の特
別な領域若しくは部分を意味する。例えば、本発明の方
法を使用することによって、薬配達は、患者の心臓、及
び患者の脈管構造（即ち、静脈または動脈系）中に行う
ことができる。本発明はまた、患者の左心、即ち薬配達
によってはこれまで容易には到達されなかった部位に薬
を配達するのに特に有用である。本発明の方法を使用し
て、薬はまた、患者の肝臓、脾臓及び腎臓の部位、並び
にその他の部位に容易に配達することができる。
本発明の薬を含むリポソームの破裂は、リポソームが
治療が望まれる患者の部位に投与されたまたは別途到達
した後で、その部位にある周波数の超音波を付与するこ
とによって驚くほど容易に実施される。詳細には、薬を
含むガス充填リポソームのピーク共鳴周波数に対応する
周波数で超音波を付与する時に、リポソームは破裂しそ
してそれらの内容物を放出することが予想外にも見い出
された。ピーク共鳴周波数は、生体内または生体外のど
ちらでも、しかし好ましくは生体内で、慣用の手段を使
用して、リポソームを超音波に曝し、反射された共鳴周
波数信号を受信し、そして受信した信号のスペクトルを
解析してピークを決定することによって測定することが
できる。このようにして決定されたピークは、ピーク共
鳴周波数（または、時々呼ばれるように、第二倍音（ha
rmonic））に対応する。ガス充填リポソームはまた、非
ピーク共鳴周波数超音波に曝される時にも破裂するであ
ろうけれども、リポソームを破裂せしめるためには強度
（ワット数）及び期間（時間）がより高くなければなら
ない。このより高いエネルギーは結果として大幅に増加
した加熱をもたらし、これは望ましくない可能性があ
る。エネルギーの周波数をピーク共鳴周波数とマッチす
るように調節することによって、破裂及び薬放出の効率
が改善され、認め得る組織の加熱は一般的に起きず（約
２℃より大きい温度の増加はないのが普通である）、そ
して必要とされる全体としてのエネルギーはより少な
い。かくして、ピーク共鳴周波数での超音波の付与は、
必要ではないけれども最も好ましい。
診断用超音波イメージング装置の種々のタイプの任意
のものを本発明の実施において用いることができ、そし
て装置の特別なタイプまたはモデルは本発明の方法にと
って重要ではない。また、超音波高体温剤を投与するた
めに設計された装置も適切であり、そしてこのような装
置は、それらの各々の開示がそれらの全体として引用に
よって本明細書中に組み込まれる米国特許第4,620,546
号、第4,658,828号及び第4,586,512号中に述べられてい
る。好ましくは、この装置は共鳴周波数（RF）スペクト
ル分析計を用いる。超音波は、一般的に比較的低い強度
及び期間で、好ましくはピーク共鳴周波数で開始され、
そして次にリポソーム破裂が起きるまで強度、時間及び
／または共鳴周波数が増加される。
一度本発明の開示を与えられれば、種々の原理の応用
は当業者には容易に明らかであろうけれども、一般的な
ガイダンスのために、約1.5〜約2.0ミクロン径のガス充
填リポソームに関しては、共鳴周波数は一般的に約7.5
メガヘルツの領域であろう。焦点のゾーンをターゲット
組織（例えば、腫瘍）の中心に調節することによって、
ガス充填リポソームは、それらがターゲット組織内に集
積するにつれてリアルタイム超音波下で可視化すること
ができる。例として7.5メガヘルツの曲がったアレイ変
換器を使用して、変換器に送られる電力を最大に調節し
そして焦点のゾーンをターゲット組織内に調節すると、
空間ピーク時間平均（SPTA）電力は、水の中で最大約5.
31mW/cm2であろう。この電力はガス充填リポソームから
の薬の幾らかの放出を引き起こすであろうが、もっとず
っと大きな放出はもっと高い電力を使用することによっ
て達成することができる。変換器をドップラーモードに
切り換えることによって、同じ変換器から1cm2あたり2.
5ワットまでのもっと高い電力出力が利用可能である。
機械をドップラーモードで運転することによって、電力
をターゲット組織内の選ばれた焦点のゾーンに配達する
ことができ、そしてガス充填リポソームにそれらの薬を
放出させることができる。ガス充填リポソームの共鳴周
波数とマッチするように変換器を選ぶことは、薬放出の
この方法を更にもっと効率的にするであろう。比較的大
きい径のガス充填リポソーム、例えば、サイズが３ミク
ロンより大きいものに関しては、薬放出を達成する際に
比較的低い周波数変換器が一層効果的であろう。例え
ば、3.5メガヘルツの比較的低い周波数変換器（20mmの
曲がったアレイモデル）を、ガス充填リポソームの共鳴
周波数に対応して選んで良い。この変換器を使用する
と、1cm2あたり101.6ミリワットを焦点のスポットに配
達することができ、そしてドップラーモードに切り換え
ることは、電力出力（SPTA）を1cm2あたり1.02ワットに
増すであろう。ガス充填リポソーム内の薬／プロドラッ
グを放出及び／または活性化するために空洞現象の現象
を使用するためには、空洞現象はもっと低い周波数でも
っと効果的に起きるので、もっと低い周波数エネルギー
を使用することができる。比較的高い電圧（300ボルト
ほど高い）によって駆動される0.757メガヘルツの変換
器を使用すると、ガス充填リポソームの溶液の空洞現象
は、約5.2大気圧の敷居値で起きるであろう。
本発明のリポソームは種々のサイズのもので良いが、
好ましくは、それらが約30ナノメートル〜約10ミクロン
の平均外径を有するサイズ範囲のものであり、そして好
ましい平均外径は約２ミクロンである。当業者には知ら
れているように、リポソームのサイズは生物分布に影響
を与え、そしてそれ故種々の目的のために異なるサイズ
のリポソームを選んで良い。例えば、脈管内の使用のた
めには、リポソームのサイズは、平均外径で、一般的に
約５ミクロンより大きくはなく、そして約30ナノメート
ルより小さくはない。器官例えば肝臓に薬配達を供給し
そして通常の組織からの腫瘍の弁別を可能にするために
は、平均外径が約30ナノメートル〜約100ナノメートル
のもっと小さなリポソームが有用である。比較的小さな
リポソームに関しては、共鳴周波数超音波は、比較的大
きなリポソームに関するよりも一般的に高いであろう。
本発明のガスで満たされた薬を含むリポソームは、超
音波高体温剤を投与するために設計された種々のタイプ
の超音波イメージング装置の任意のものによって使用す
ることができる。このような装置は良く知られていて、
そしてそれらの各々の開示が全体として引用によって本
明細書中に組み込まれる米国特許第4,620,546号、第4,6
58,828号及び第4,586,512号中に述べられていて、そし
て通常は物理的治療及びスポーツ医学において用いられ
る。ピーク共鳴周波数を決定するために、商業的に入手
できるソフトウェアを使用して超音波データから共鳴周
波数データに直接にアクセスすることが、このデータを
（例えばフーリエ変換によって）二次元または三次元の
像に再度フォーマットに従って並べ換えることによりも
むしろ好ましい。また、変換器のプローブは外部でも良
くまたは、所望の場合には、植え付けられて良い。
当業者が認めるであろうように、本発明の薬配達シス
テムの投与は、種々のやり方で、例えば脈管内に、リン
パ管内に、非経口的に、皮下に、筋肉内に、腹膜内に、
間質的に、高圧的に（hyperbarically）、経口的にまた
は腫瘍内に種々の投薬形を使用して実施して良い。１つ
の好ましい投与のルートは脈管内へである。脈管内の使
用のためには、本発明の薬配達システムは、一般的に静
脈内に注射されるが、同様に動脈内に注射しても良い。
投与される有用な投薬量及び投与の方式は、年齢、体
重、及び処置される哺乳動物、及び意図された特別な治
療の応用に依存して変わるであろう。典型的には、投薬
量を比較的低いレベルで始めそして所望の治療効果が達
成されるまで増す。一般的には、本発明の薬配達システ
ムは、水または食塩水溶液（例えば、リン酸塩で緩衝さ
れた食塩水）中のような水性懸濁液の形で投与される。
好ましくは、水は無菌である。また好ましくは食塩水溶
液は高張性食塩水溶液（例えば、約0.3〜約0.5％のNaC
l）であるが、所望の場合には、食塩水溶液は等張性で
良い。また所望の場合には、溶液を緩衝してpH6.8〜pH
7.4の範囲のpHを与えても良い。加えて、デキストロー
スを好ましくは媒体中に含めて良い。好ましくは、水性
溶液を、その中にリポソームを懸濁させるのに先立って
脱ガス（即ち、真空圧力下で脱ガス）する。
本発明のリポソームは、物理的及び機能的特徴の両方
における多数の面において先行技術のリポソームとは異
なると信じられる。例えば、本発明のリポソームは、そ
の内部に液体が実質的にない。定義によって、先行技術
におけるリポソームは、水性媒体の存在によって特徴付
けられてきた。例えば、Dorland's Illustrated Medi
cal Dictionary、946頁、第27版（W.B.Saunders社、フ
ィラデルフィア 1988）を参照せよ。更にまた、本発明
のリポソームは、驚くべきことに、超音波に対する強い
反響性を示し、リポソームのピーク共鳴周波数での超音
波の付与に際して破裂し易く、そして薬配達システムと
してのリポソームの使用にとって大きな利益の特徴であ
る長い貯蔵寿命を有する。
本明細書中で詳細に述べられた応用を越える、本発明
のリポソームのための種々のその他の応用が存在する。
このような付加的な用途は、例えば、超音波のための過
温相乗作用剤のようなそして超音波イメージングのため
の造影剤のような応用を含む。このような付加的な用途
及びその他の関連する主題は、“ガス充填リポソームを
使用して生物の組織及び体液に局在化された治療の熱を
供給するための方法”及び“ガス充填リポソーム及び超
音波造影剤としてのそれらの使用”という標題の本発明
と同時に出願された出願人の特許出願中に述べられそし
て特許請求されている。なおこれらの特許出願の各々の
開示は、その全体が引用によって本明細書中に組み込ま
れる。
本発明の以下の実施例において更に説明する。実施例
１〜10は、薬を含む真空乾燥されたガス注入リポソーム
の製造、テスト及び使用を述べている予言的な実施例で
あり、ガス充填リポソームはその内部に液体が実質的に
ない。以下の実施例は、添付された請求の範囲の範囲を
限定すると考えられてはならない。
実施例 実施例１ ジパルミトイルホスファチジルコリン（１グラム）
を、薬アドリアマイシンを含む10mlのリン酸塩で緩衝さ
れた食塩水中に懸濁させ、この懸濁液を約50℃に加熱
し、そして次に約30分間丸底フラスコ中で手によって渦
を巻かせる。熱源を除去し、そして懸濁液を室温に冷却
せしめながら更に２時間渦を巻かせて、薬を含むリポソ
ームを生成させる。
このようにして製造されるリポソームを、図１中に示
したものと類似の装置中の容器に入れ、約−10℃に冷却
し、そして次に高い負の真空圧力をかける。次に、リポ
ソームの温度を約10℃に上げる。高い負の真空圧力を約
48時間維持する。約48時間後に、約４時間の期間にわた
って室の中に窒素を徐々に注入し、この時間の後で圧力
を周囲圧力に戻す。生成する薬を含む真空乾燥されたガ
ス注入されたリポソーム（ガス充填リポソームはその内
部に何ら液体が実質的にない）を、次に、10ccのリン酸
塩で緩衝された食塩水中に懸濁させ、そして次に約４℃
で約３カ月貯蔵する。
実施例２ 実施例１のリポソームを超音波検査的にテストするた
めに、これらのリポソームの250mgのサンプルを、300cc
の脱ガスされた（即ち、真空圧力下で脱ガスされた）リ
ン酸塩で緩衝された食塩水中に懸濁させる。次に、これ
らのリポソームを、Acoustic Imaging モデル 5200
走査線（Acoustic Imaging、フェニックス、AZ）を
使用しそしてdB反射率を測定するためのシステムソフト
ウェアを用いる7.5mHzの変換器によって種々の時間間隔
で走査する。このシステムはリポソームをテストするの
に先立って既知の音響インピーダンスのファントムによ
って標準化する。リポソームの良好なdB反射率が示され
る。
実施例３ ジパルミトイルホスファチジルコリン（１グラム）及
び凍結予防保護剤トレハローズ（１グラム）を、薬アム
ホテリシン−Ｂを含む10mlのリン酸塩で緩衝された食塩
水中に懸濁させ、この懸濁液を約50℃に加熱し、そして
次に約30分間丸底フラスコ中で手によって渦を巻かせ
る。熱源を除去し、そして懸濁液を室温に冷却せしめな
がら更に約２時間渦を巻かせて、リポソームを生成させ
る。次に、このようにして製造されるリポソームを、実
施例１中で示した手順に実質的に従って真空乾燥しそし
てガス注入して、薬を含む真空乾燥されたガス注入され
たリポソームを生成させるが、ガス充填リポソームはそ
の内部に何ら液体が実質的にない。次にこれらのリポソ
ームを10ccのリン酸塩で緩衝された食塩水中に懸濁さ
せ、そして次に約４℃で数週間貯蔵する。
実施例４ 実施例３のリポソームを超音波検査的にテストするた
めに、実施例２の手順に実質的に従う。リポソームの良
好なdB反射率が示される。
実施例５ ジパルミトイルホスファチジルコリン（１グラム）
を、薬シトシンアラビノシンを含む10mlのリン酸塩で緩
衝された食塩水中に懸濁させ、この懸濁液を約50℃に加
熱し、そして次に約30分間丸底フラスコ中で手によって
渦を巻かせる。次に、この懸濁液を、約50℃で温度を維
持しながら、押出に先立って慣用のの凍結融解処理をし
てそしてしないでの両方で、熱バレルによって覆われた
押出装置（Extruder DeviceTM、Lipex Biomembrane
s、バンクーバー、カナダ）による５サイクルの押出を
施す。熱源を除去し、そして懸濁液を室温に冷却せしめ
ながら更に約２時間渦を巻かせて、リポソームを生成さ
せる。
次に、このようにして製造されたリポソームを、実施
例１中で示した手順に実質的に従って真空乾燥しそして
ガス注入して、薬を含む真空乾燥されたガス注入リポソ
ームを生成させるが、ガス充填リポソームはその内部に
何ら液体が実質的にない。次にこれらのリポソームを10
ccのリン酸塩で緩衝された食塩水中に懸濁させ、そして
次に約４℃で数週間貯蔵する。
実施例６ 実施例５のリポソームを超音波検査的にテストするた
めに、実施例２の手順に実質的に従う。リポソームの良
好なdB反射率が示される。
実施例７ 本発明の薬を含むリポソームの安定性をテストするた
めに、実施例１のリポソーム懸濁液を、約600psiの圧力
で５回、押出装置（Extruder DeviceTM、Lipex Biome
mbranes、バンクーバー、カナダ）中の２ミクロンのポ
リカーボネートフィルターを通過させる。押出処理の後
で、実施例２中で述べたようにして、リポソームを超音
波検査的に検討する。驚くべきことに、高い圧力下での
押出の後でさえ、本発明のリポソームはそれらの反響性
を実質的に保留する。
実施例８ 実施例１のリポソームを、３〜7.5mHzで変わる変換器
周波数を使用する超音波によって走査する。結果は、超
音波の周波数が高ければ高いほど、反響性はそれだけ急
速に衰え、これは比較的高い共鳴周波数及びより高い周
波数に伴うより高いエネルギーを反映することを示す。
実施例９ 癌を有する患者に、静脈内の薬を含む真空乾燥された
ガス注入リポソームを与えるが、ガス充填リポソームは
その内部に液体が実質的にない。リポソーム中に含まれ
る薬はアドリアマイシンである。静脈内注射を行うと、
腫瘍を超音波検査的にそして自動化されたソフトウェア
プログラムによって走査し、そしてリポソームの共鳴周
波数を決定する。次に、超音波エネルギーをリポソーム
のピーク共鳴周波数で腫瘍中に焦点を合わせる。超音波
エネルギーの量は認め得る組織加熱を引き起こすには不
十分（即ち、２℃より大きい温度の変化はない）である
が、このエネルギーはリポソームをはじかせそして腫瘍
の場所でアドリアマイシンを放出せしめるのに十分であ
る。このようにすることによって、超音波と共にリポソ
ームを使用して局所の薬配達が達成される。
実施例10 ひどい局在化された真菌感染を有する患者に関して、
薬を含む真空乾燥されたガス注入リポソーム（ガス充填
リポソームはその内部に液体が実質的にない）を静脈内
に注射し、そして実施例９中で述べた様式と実質的に類
似の様式で超音波を使用して局所の薬配達を達成する。
リポソームが含む薬アムホテリシン−Ｂは、感染の場所
に効果的に配達される。
本発明の主な態様は次のとおりである。
1.真空乾燥ガス注入方法によって製造されそしてその中
に薬をカプセルに包んで有する、ガス充填リポソームを
含んで成る、薬配達システム。
2.該リポソームが、脂肪酸、リソ脂質、ジパルミトイル
ホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジン酸、スフィンゴミエリン、コレステロール、コ
レステロールヘミスクシネート、トコフェロールヘミス
クシネート、ホスファチジルエタノールアミン、ホスフ
ァチジルイノシトール、リソ脂質、スフィンゴミエリ
ン、グリコスフィンゴ脂質、グルコ脂質、グリコ脂質、
スルファチド、エーテル及びエステル結合された脂肪酸
を有する脂質、並びに重合された脂質から成る群から選
ばれた脂質材料を含んで成る、前記１記載の薬配達シス
テム。
3.該リポソームがジパルミトイルホスファチジルコリン
を含んで成る、前記２記載の薬配達システム。
4.該リポソームが、空気、窒素、二酸化炭素、酸素、ア
ルゴン、キセノン、ヘリウム及びネオンから成る群から
選ばれたガスによって満たされている、前記１記載の薬
配達システム。
5.該リポソームが窒素ガスによって満たされている、前
記４記載の薬配達システム。
6.該リポソームが水性媒体中に懸濁されて貯蔵される、
前記１記載の薬配達システム。
7.該リポソームが乾燥して貯蔵される、前記１記載の薬
配達システム。
8.該リポソームが約３週間より長い安定性を有する、前
記１記載の薬配達システム。
9.該リポソームが約2dBより大きい反射率を有する、前
記１記載の薬配達システム。
10.該リポソームが約2dB〜約20dBの反射率を有する、前
記９記載の薬配達システム。
11.その内部に液体が実質的になくそしてその中に薬を
カプセルに包んで有する、ガス充填リポソームを含んで
成る、超音波イメージングのための薬配達システム。
12.該リポソームが、脂肪酸、リソ脂質、ジパルミトイ
ルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホス
ファチジン酸、スフィンゴミエリン、コレステロール、
コレステロールヘミスクシネート、トコフェロールヘミ
スクシネート、ホスファチジルエタノールアミン、ホス
ファチジルイノシトール、リソ脂質、スフィンゴミエリ
ン、グリコスフィンゴ脂質、グルコ脂質、グリコ脂質、
スルファチド、エーテル及びエステル結合された脂肪酸
を有する脂質、並びに重合された脂質から成る群から選
ばれた脂質材料を含んで成る、前記11記載の薬配達シス
テム。
13.該リポソームがジパルミトイルホスファチジルコリ
ンを含んで成る、前記12記載の薬配達システム。
14.該リポソームが、空気、窒素、二酸化炭素、酸素、
アルゴン、キセノン、ヘリウム及びネオンから成る群か
ら選ばれたガスによって満たされている、前記11記載の
薬配達システム。
15.該リポソームが窒素ガスによって満たされている、
前記14記載の薬配達システム。
16.該リポソームが水性媒体中に懸濁されて貯蔵され
る、前記11記載の薬配達システム。
17.該リポソームが乾燥して貯蔵される、前記11記載の
薬配達システム。
18.該リポソームが約３週間より長い貯蔵寿命安定性を
有する、前記11記載の薬配達システム。
19.該リポソームが約2dBより大きい反射率を有する、前
記11記載の薬配達システム。
20.該リポソームが約2dB〜約20dBの反射率を有する、前
記19記載の薬配達システム。
21.（ｉ）その中に薬をカプセルに包んで有するリポソ
ームを陰圧下に置く工程、 （ii）該リポソームから実質的にすべての液体を除去す
るのに十分な時間の間、該リポソームを該陰圧下で温置
する工程、及び （iii）周囲圧力に到達するまで該リポソーム中にガス
を注入する工程を含有して成る、薬配達システムを製造
するための方法。
22.工程（ｉ）に先立ってそしてその間、該リポソーム
を約−10℃〜約−20℃の温度に冷却せしめること、工程
（ii）の間、該リポソームを約10℃〜約20℃の温度でイ
ンキュベートせしめること、及び工程（iii）の間、該
リポソームを周囲温度でインキュベートせしめることを
更に含有して成る、前記21記載の方法。
23.該陰圧が約700mmHg〜約760mmHgでありそして約24〜
約72時間かけられる、前記21記載の方法。
24.該ガスを約４〜約８時間の期間にわたって該リポソ
ーム中に注入する、前記21記載の方法。
25.該ガスが、空気、窒素、二酸化炭素、酸素、アルゴ
ン、キセノン、ネオン及びヘリウムから成る群から選ば
れる、前記21記載の方法。
26.該ガスが窒素である、前記25記載の方法。
27.工程（iii）の後で、該リポソームを選ばれた細孔サ
イズの少なくとも一種のフィルターを通して押出すこと
を更に含有して成る、前記21記載の方法。
28.（ｉ）その中に薬をカプセルに包んで有するリポソ
ームを約−10℃〜約−20℃の温度に冷却せしめる工程、 （ii）該リポソームを約700mmHg〜約760mmHgの陰圧下に
置く工程、 （iii）該リポソームを約10℃〜約20℃の温度でインキ
ュベートせしめながら、該リポソームを該陰圧下で約24
〜約72時間温置して該リポソームから実質的にすべての
液体を除去する工程、及び （iv）該リポソームを周囲温度でインキュベートせしめ
ながら、周囲圧力に到達するまで約４〜約８時間の期間
にわたって該リポソーム中にガスを注入する工程 を含有して成る、超音波イメージングのための薬配達シ
ステムを製造するための方法。
29.該ガスが、空気、窒素、二酸化炭素、酸素、アルゴ
ン、キセノン、ネオン及びヘリウムから成る群から選ば
れる、前記28記載の方法。
30.該ガスが窒素である、前記29記載の方法。
31.工程（iv）の後で、該リポソームを選ばれた細孔サ
イズの少なくとも一種のフィルターを通して押出すこと
を更に含有して成る、前記28記載の方法。
32.（ｉ）その中に薬をカプセルに包んで有するリポソ
ームを入れるための容器、 （ii）この容器中に入れられたリポソームから液体を引
き出すために容器に陰圧をかけるための手段、 （iii）陰圧をかける手段を容器に接続する導管（この
導管は液体の流れを方向付ける）、及び （iv）容器中に入れられたリポソーム中にガスを導入す
るための手段を含有して成る、薬配達システムを製造す
るための装置。
33.陰圧をかける手段が真空ポンプである、前記32記載
の装置。
34.容器中に入れられたリポソームを冷却するための手
段を更に含有して成る、前記32記載の装置。
35.前記冷却手段が容器中に入れられたリポソームを約
−10℃〜約−20℃に冷却するための手段を有する、前記
34記載の装置。
36.前記冷却手段がアイスバスを含有して成る、前記35
記載の装置。
37.前記導管中を流れる液体を収集するための手段を更
に含有して成る、前記32記載の装置。
38.前記収集手段がトラップである、前記37記載の装
置。
39.トラップを冷却するための手段を更に含有して成
る、前記38記載の装置。
40.トラップがそれを通して流体流れを方向付けるのに
適した第一及び第二部材を含有して成り、これらの部材
がお互いとそして導管と流れ連絡していて、第二部材が
第一部材の回りに螺旋状に配置されていて、そしてトラ
ップが、第一及び第二部材の少なくとも一部を取り囲む
アイスバスを含有して成る冷却手段を含有して成る、前
記38記載の装置。
41.（ｉ）その中に薬をカプセルに包んで有するリポソ
ームを入れるための容器、 （ii）この容器中に入れられたリポソームを冷却するた
めの手段、 （iii）この容器中に入れられたリポソームから液体を
引き出すために容器に陰圧をかけるための手段、 （iv）陰圧をかける手段を容器に接続する導管（この導
管は液体の流れを方向付ける）、 （ｖ）導管中を流れる液体を収集するための手段、及び （vi）容器中に入れられたリポソーム中にガスを導入す
るための手段を含有して成る、薬配達システムを製造す
るための装置。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 9/127 A61K 31/704 A61K 47/24 B01J 13/02 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ)

Claims (16)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】真空乾燥ガス注入方法によって製造されそ
    してその中に薬物をカプセルに包んで有する、ガス充填
    リポソームを含んで成る、薬物配達組成物。
  2. 【請求項２】該リポソームが、脂肪酸、リソ脂質、ジパ
    ルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリ
    ン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、コレステ
    ロール、コレステロールヘミスクシネート、トコフェロ
    ールヘミスクシネート、ホスファチジルエタノールアミ
    ン、ホスファチジルイノシトール、リソ脂質、スフィン
    ゴミエリン、グリコスフィンゴ脂質、グルコ脂質、グリ
    コ脂質、スルファチド、エーテル及びエステル結合され
    た脂肪酸を有する脂質、並びに重合された脂質から成る
    群から選ばれた脂質材料を含んで成る、請求の範囲１記
    載の薬物配達組成物。
  3. 【請求項３】該リポソームがジパルミトイルホスファチ
    ジルコリンを含んで成る、請求の範囲２記載の薬物配達
    組成物。
  4. 【請求項４】その内部に液体が実質的になくそしてその
    中に薬物をカプセルに包んで有する、ガス充填リポソー
    ムを含んで成る、超音波イメージングのための薬物配達
    組成物。
  5. 【請求項５】該リポソームが、脂肪酸、リソ脂質、ジパ
    ルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリ
    ン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、コレステ
    ロール、コレステロールヘミスクシネート、トコフェロ
    ールヘミスクシネート、ホスファチジルエタノールアミ
    ン、ホスファチジルイノシトール、リソ脂質、スフィン
    ゴミエリン、グリコスフィンゴ脂質、グルコ脂質、グリ
    コ脂質、スルファチド、エーテル及びエステル結合され
    た脂肪酸を有する脂質、並びに重合された脂質から成る
    群から選ばれた脂質材料を含んで成る、請求の範囲４記
    載の薬物配達組成物。
  6. 【請求項６】該リポソームがジパルミトイルホスファチ
    ジルコリンを含んで成る、請求の範囲５記載の薬物配達
    組成物。
  7. 【請求項７】（ｉ）その中に薬物をカプセルに包んで有
    するリポソームを陰圧下に置く工程、 （ii）該リポソームから実質的にすべての液体を除去す
    るのに十分な時間の間、該リポソームを該陰圧下で温置
    する工程、及び （iii）周囲圧力に到達するまで該リポソーム中にガス
    を注入する工程を含有して成る、薬物配達組成物を製造
    するための方法。
  8. 【請求項８】工程（ｉ）に先立ってそしてその間、該リ
    ポソームを約−10℃〜約−20℃の温度に冷却せしめるこ
    と、工程（ii）の間、該リポソームを約10℃〜約20℃の
    温度でインキュベートせしめること、及び工程（iii）
    の間、該リポソームを周囲温度でインキュベートせしめ
    ることを更に含有して成る、請求の範囲７記載の方法。
  9. 【請求項９】該陰圧が約700mmHg〜約760mmHgでありそし
    て約24〜約72時間かけられる、請求の範囲７記載の方
    法。
  10. 【請求項１０】工程（iii）の後で、該リポソームを選
    ばれた細孔サイズの少なくとも一種のフィルターを通し
    て押出すことを更に含有して成る、請求の範囲７記載の
    方法。
  11. 【請求項１１】（ｉ）その中に薬物をカプセルに包んで
    有するリポソームを約−10℃〜約−20℃の温度に冷却せ
    しめる工程、 （ii）該リポソームを約700mmHg〜約760mmHgの陰圧下に
    置く工程、 （iii）該リポソームを約10℃〜約20℃の温度でインキ
    ュベートせしめながら、該リポソームを該陰圧下で約24
    〜約72時間温置して該リポソームから実質的にすべての
    液体を除去する工程、及び （iv）該リポソームを周囲温度でインキュベートせしめ
    ながら、周囲圧力に到達するまで約４〜約８時間の期間
    にわたって該リポソーム中にガスを注入する工程 を含有して成る、超音波イメージングのための薬物配達
    組成物を製造するための方法。
  12. 【請求項１２】工程（iv）の後で、該リポソームを選ば
    れた細孔サイズの少なくとも一種のフィルターを通して
    押出すことを更に含有して成る、請求の範囲11記載の方
    法。
  13. 【請求項１３】（ｉ）その中に薬物をカプセルに包んで
    有するリポソームを入れるための容器、 （ii）この容器中に入れられたリポソームから液体を引
    き出すために容器に陰圧をかけるための手段、 （iii）陰圧をかける手段を容器に接続する導管（この
    導管は液体の流れを方向付ける）、及び （iv）容器中に入れられたリポソーム中にガスを導入す
    るための手段を含有して成る、薬物配達組成物を製造す
    るための装置。
  14. 【請求項１４】陰圧をかける手段が真空ポンプである、
    請求の範囲13記載の装置。
  15. 【請求項１５】容器中に入れられたリポソームを冷却す
    るための手段を更に含有して成る、請求の範囲13記載の
    装置。
  16. 【請求項１６】（ｉ）その中に薬物をカプセルに包んで
    有するリポソームを入れるための容器、 （ii）この容器中に入れられたリポソームを冷却するた
    めの手段、 （iii）この容器中に入れられたリポソームから液体を
    引き出すために容器に陰圧をかけるための手段、 （iv）陰圧をかける手段を容器に接続する導管（この導
    管は液体の流れを方向付ける）、 （ｖ）導管中を流れる液体を収集するための手段、及び （vi）容器中に入れられたリポソーム中にガスを導入す
    るための手段を含有して成る、薬物配達組成物を製造す
    るための装置。
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