KR20170020842A - 포스포릴 콜린 유도체를 포함하는 분리 재료 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고체 지지체 상에 부동화되어 일반식 (II)의 분리 재료를 제공하기에 적절한 일반식 (I)의 포스포릴 콜린 유도체를 제공하며, 이는 단백질, 특히 C-반응성 단백질 및 항-포스포릴 콜린 항체에 대하여 높은 친화성 및 높은 특이성 둘 다로 결합한다. 상기 분리 재료는 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 C-반응성 단백질 및 항-포스포릴 콜린 항체의 체외 제거에 특히 유용하다. 일반식 (II)의 분리 재료를 포함하는 컬럼과 마찬가지로 컬럼을 포함하는 장치가 또한 제공된다. 변수 X가: SH, -NHR3, -C=CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고; 다른 변수가 특허청구범위에서 정의된 바와 같은 식(I); 변수 "A"가 고체 지지체를 나타내는 식(II). "A"와 마찬가지로 다른 변수는 특허청구범위에서 정의된다.

Description

포스포릴 콜린 유도체를 포함하는 분리 재료{SEPARATION MATERIAL COMPRISING PHOSPHORYL CHOLINE DERIVATIVES}
본 발명은 고체 지지체 상에 부동화되어 일반식 (II)의 분리 재료를 제공하기에 적절한 일반식 (I)의 포스포릴 콜린 유도체를 제공하며, 이는 단백질, 특히 C-반응성 단백질 및 항-포스포릴 콜린 항체에 대하여 높은 친화성 및 높은 특이성 둘 다로 결합한다. 상기 분리 재료는 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 C-반응성 단백질 및 항-포스포릴 콜린 항체의 체외 제거에 특히 유용하다. 일반식 (II)의 분리 재료를 포함하는 컬럼과 마찬가지로 컬럼을 포함하는 장치가 또한 제공된다.
C-반응성 단백질(CRP: C-reactive protein)은 염증 동안 사이토카인 방출에 반응하여 간에 의해 생성되는 급성기 반응물질이다. 이는 오랫동안 임상 실습에서 전신적 염증(systemic inflammation), 특히 박테리아 감염을 추적하는 데 사용되어 왔다. 더 최근에는, 명백한 염증 질환의 부재 중에서 CRP의 기저 수준(basal level)이 장래 심근 또는 심혈관계 사고(event)를 예측하는 데 정보를 줄 수 있다는 역학적 증거가 밝혀졌다(Ridker et al. Circulation, 2001 103, 1813). CRP가 관상동맥 사고의 예측에서 가치가 있다고 여겨지는 잠재적인 염증 표지자(inflammatory marker)라는 것(Danesh et al. N. Engl . J. Med . 2004 350, 1387) 및 CRP가 심근경색증 이후 수 주 동안 관측된 파괴적 과정의 원인 인자라는 것(Slagman　 et al., Blood Purif. 2011, 31, 9)이 또한 흥미로운 사실이다.
여러 연구들에서 CRP에 대한 포스포릴 콜린의 결합 친화성이 밝혀졌다. 따라서, 고체 지지체 상에 부동화된 PC 유도체가 서로 다른 생물학적 원천으로부터 PC 결합 단백질을 단리하는 데 광범위하게 사용되고 있다. 그러나, 상기 언급된 고체 지지체 상에 부동화된 PC 유도체의 가장 중요한 임상적 응용은 생물학적 유체로부터의 C-반응성 단백질 및 항-포스포릴 콜린 항체의 체외 제거이다.
WO 90/12632는 생물학적 유체로부터 CRP 및 항-포스포릴 콜린 항체를 제거하여 그의 세포상 면역 반응을 개선하는 방법 및 포스포릴 콜린-기질 흡수 장치를 통한 환자의 혈장의 체외 관류를 수행하는 것에 의하여 암을 앓는 환자의 순환계로부터 CRP 및 항-포스포릴 콜린 항체를 제거하여 암에 대한 환자의 세포상 면역 반응을 개선하는 방법을 기술하고 있다.
WO 2007/076844는 환자의 생물학적 유체로부터 CRP를 제거하기 위한 PC 유도체를 포함하는 흡수 기질 재료를 포함하는 컬럼의 도움으로 심혈관 질환 또는 자가면역 질환 등과 같은 면역 기능장애의 위험이 있는 환자의 혈장의 체외 관류를 수행하는 것에 의하여 누적 CRP의 위험을 치료하여 심근경색증, 뇌졸증, 당뇨병, 류머티즘 및 신부전 등과 같은 자가면역 질환, 심혈관 질환을 예방 및/또는 치료하도록 하는 방법을 기술하고 있다.
소혈청 알부민의 PC 유도체(PC-BSA)의 합성, 그의 Toyopearl® HW 65 상에의 부동화 및 CRP 친화성 정제를 위한 그의 용도가 또한 기술되었다(Stults et al. Anal. Biochem . 1987, 161, 567). 이 연구에서, 고체 지지체 상에의 PC 유도체의 부동화가 포스포디에스테르 결합(phosphodiester linkage)의 형성을 통하여 달성되었다. 다른 PC 유도체들이 고체 지지체 상에 유사한 방법으로 부동화되었다(Spande T.F. J. Org . Chem . 1980, 45, 3081; Martin, L. M. Tetrahedron Lett. 1996 37, 7921).
WO 2013/176084 A1은 또한 혈소판 등과 같은 생물학적 물질의 부착을 억제하기 위하여 의료 기구를 코팅하기 위한 일반식 (1)의 실릴알킬 포스포르아미데이트 화합물을 기술하고 있다.
Figure pct00001
WO 2012/160187 A1는 염증, 자가면역 및/또는 알러지 장애(allergic disorder)의 치료에 사용하기 위한 암모늄-함유 포스폰산 유도체를 제공한다. 기술된 화합물은 포스포이노시타이드 3-키나아제 (PI3K)/Akt 키나아제 경로(phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt kinase pathway)의 억제를 통하여 그들의 약리 활성을 발휘하는 것으로 상정된다.
우리의 지식으로, 현재까지 고체 지지체 상에의 PC의 부동화는 단지 포스포디에스테르 결합의 형성을 통하여서만이 달성되었다. 포스포디에스테르 결합 형성을 통한 PC 유도체의 부동화는 일부 이점을 가지나, 또한 심각한 단점을 갖는다. 이러한 접근법의 주요 단점은 포스포디에스테르 결합의 형성이 PC 분자의 전체 전하 (순전하)를 변화시키고, 그에 의하여 그렇게 변성된 PC의 바인딩 포켓(binding pocket)에서의 배향을 변화시킨다는 것이다. 게다가, 포스포디에스테르 결합은 생물학적 유체 중에 존재하는 비-특이적 포스포디에스테라아제에 의하여 쉽게 개열(cleaved)되어 그러한 방법으로 치환된 기질의 불안정성 문제를 야기할 수 있다.
앞서 언급된 단점을 제거하기 위하여, 본 발명의 목적은 고체 지지체 상에 부동화되어 CRP 및 항-포스포릴 콜린 항체의 체외 제거에 의한 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 높은 친화성 및 높은 특이성 CRP 둘 다로 결합하는 분리 재료를 제공할 수 있는 화합물을 제공하는 것이다.
이러한 목적은 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 CRP 및 항-포스포릴 콜린 항체의 체외 제거에서 사용하기 위한 독립 청구항 제1항에 따른 일반식 (I)의 화합물, 독립 청구항 제5항에 따른 분리 재료에 의하여 해결된다.
본 발명의 목적은 독립 청구항들의 교시에 의하여 해결된다. 본 발명의 추가의 유리한 특징, 관점 및 상세들이 본원의 종속 청구항들, 상세한 설명, 도면 및 실시예들로부터 명백하다.
따라서, 본 발명은 일반식 (I)의 화합물
Figure pct00002
여기에서
b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00003
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
X는 -SH, -NHR3, -C≡CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고;
R3은 -H, -CH3, -C2H5 및 -C3H7로부터 선택되고;
-L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
여기에서
-La-는 -(CH2)m-, -(CH2-CH2-O)m-CH2-,
Figure pct00004
로부터 선택되고;
-Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
-Ld-는 -(CH2)n-, -(CH2-CH2-O)n-CH2-,
Figure pct00005
로부터 선택되고;
-Le-는 -(CH2)p1-, -(CH2)p1-O-(CH2)p2-,
Figure pct00006
로부터 선택되고;
m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택됨;
및 상기 언급된 화합물의 거울상 이성질체, 거울상 이성질체들의 혼합물, 호변 이성질체, 수화물, 용매화물, 라세미체, 양성자화 및 탈양성자화 형태에 관한 것이다.
단편 -L-의 좌측단이 X에 연결되고 단편 -L-의 우측단이
Figure pct00007
에 연결된다는 것은 당해 기술분야에서 숙련된 자에게는 명백하다. 단편 -La-, -Lb-, -Lc-, -Ld- 및 -Le-에도 동일하게 적용된다.
따라서, 예를 들어, 만일 -L-가 -(CH2)m-인 -La-, -O-C(O)-NH-인 -Lb- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-인 -Le-를 수반하는 -La-Lb-Le-를 나타내는 경우, 일반식 (I)의 화합물은 다음과 같다:
Figure pct00008
.
여기에서 사용되는 바와 같은 표현 호변 이성질체는 호변 이성화(tautomerization)로 불리우는 화학 반응에 의하여 호환가능한 유기 화합물을 나타낸다. 호변 이성화는 염기, 산 또는 다른 적절한 화합물로 촉매화된다.
본 발명의 바람직한 화합물은 일반식 (I)의 화합물이다:
Figure pct00009
여기에서 b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3 및 -C2H5로부터 선택되거나 R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00010
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
X는 -SH, -NHR3, -C≡CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고;
R3는 -H, -CH3, -C2H5 및 -C3H7로부터 선택되고;
-L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
여기에서
-La-는 -(CH2)m- 또는 -(CH2-CH2-O)m-CH2-를 나타내고;
-Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
-Ld-는 -(CH2)n- 또는 -(CH2-CH2-O)n-CH2-를 나타내고;
-Le-는 -(CH2)p1- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 바람직한 구체예는 일반식 (I)의 화합물에 관한 것이고, 여기에서 X는 -SH, -NHR3 및 -CHO로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 -SH 및 -NHR3로부터 선택된다.
본 발명의 다른 바람직한 구체예는 일반식 (I)의 화합물에 관한 것이고, 여기에서 X는 -C≡CH, -CH=CH2 또는 -N3를 나타낸다.
본 발명의 바람직한 화합물은 하기 일반식 (III), (IV), (V) 및 (VI)의 화합물이다:
Figure pct00011
여기에서
-La-는 -(CH2)m- 또는 -(CH2-CH2-O)m-CH2-를 나타내고;
-Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
-Ld-는 -(CH2)n- 또는 -(CH2-CH2-O)n-CH2-를 나타내고;
-Le-는 -(CH2)p1- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고,
m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고;
b, X, R1 및 R2는 상기 정의된 의미를 갖는다.
일반식 (I), (III), (IV), (V) 및 (VI)의 화합물이 특히 바람직한 화합물이며, 여기에서
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3 및 -C2H5로부터 선택되고;
X는 -SH 및 -NHR3로부터 선택되고;
R3는 -H, -CH3, -C2H5 및 -C3H7로부터 선택되고;
-La-는 -(CH2)m-를 나타낸다.
심지어 보다 바람직한 구체예는 일반식 (I)의 화합물에 관한 것이다:
Figure pct00012
여기에서 b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11, -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00013
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
X는 -SH, -NHR3, -C≡CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고;
R3는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7로부터 선택되고;
-L-은 -(CH2)m-, -(CH2)m-O-C(O)-NH--(CH2)p1-, -(CH2)m-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-NH-C(O)-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2- 및 -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택된다.
바람직하게는 일반식 (I)의 화합물은
1 2-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디에틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-(2-aminoethoxy)ethyl-diethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00014
2 2-[4-[2-(2-아미노에톡시)에틸]몰포리-4-니움-4-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[4-[2-(2-aminoethoxy)ethyl]morpholin-4-ium-4-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00015
3 2-[1-[2-(2-아미노에톡시)에틸]피페리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[1-[2-(2-aminoethoxy)ethyl]piperidin-1-ium-1-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00016
4 2-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-(2-aminoethoxy)ethyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00017
5 2-[3-아미노프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[3-aminopropyl(dimethyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00018
6 2-[디메틸(4-술파닐부틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[dimethyl(4-sulfanylbutyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00019
7 2-[4-아지도부틸(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[4-azidobutyl(dimethyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00020
8 2-[디메틸(펜-4-티닐)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[dimethyl(pent-4-ynyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00021
9 2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로필-디에틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[3-(6-aminohexanoylamino)propyl-diethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00022
10 2-[1-[2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에톡시]에틸]피페리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[1-[2-[2-(6-aminohexanoylamino)ethoxy]ethyl]piperidin-1-ium-1-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00023
11 2-[4-[2-[2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로파노일아미노]에톡시]에틸] 몰포리-4-니움-4-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[4-[2-[2-[3-(6-aminohexanoylamino)propanoylamino]ethoxy]ethyl] morpholin-4-ium-4-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00024
12 2-[1-[2-[2-[6-(6-아미노헥사노일아미노)헥사노일아미노]에톡시]에틸] 피롤리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[1-[2-[2-[6-(6-aminohexanoylamino)hexanoylamino]ethoxy]ethyl] pyrrolidin-1-ium-1-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00025
13 2-[2-알릴옥시에틸(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-allyloxyethyl(dimethyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00026
14 2-[2-알릴옥시에틸(디에틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-allyloxyethyl(diethyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00027
15 2-[4-(2-알릴옥시에틸)몰포리-4-니움-4-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[4-(2-allyloxyethyl)morpholin-4-ium-4-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00028
16 2-[1-(2-알릴옥시에틸)피페리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[1-(2-allyloxyethyl)piperidin-1-ium-1-yl]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00029
17 2-[2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-[2-(6-aminohexanoylamino)ethoxy]ethyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00030
18 2-[2-[2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로파노일아미노]에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-[2-[3-(6-aminohexanoylamino)propanoylamino]ethoxy]ethyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00031
19 2-[3-아지도프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[3-azidopropyl(dimethyl)ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00032
20 2-[디메틸-[2-[2-(프로-2-피녹시카르보닐아미노)에톡시]에틸]암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[dimethyl-[2-[2-(prop-2-ynoxycarbonylamino)ethoxy]ethyl]ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00033
21 2-[2-[2-(알릴옥시카르보닐아미노)에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-[2-(allyloxycarbonylamino)ethoxy]ethyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00034
22 2-[2-[2-[6-(알릴옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-[2-[6-(allyloxycarbonylamino)hexanoylamino]ethoxy]ethyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00035
23 2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[2-(6-aminohexanoylamino)ethyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00036
24 2-[디메틸-[3-[6-(프로-2-핀옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]프로필] 암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[dimethyl-[3-[6-(prop-2-ynoxycarbonylamino)hexanoylamino]propyl] ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00037
25 2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로필-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트(2-[3-(6-aminohexanoylamino)propyl-dimethyl-ammonio]ethyl hydrogen phosphate)
Figure pct00038
로부터 선택된다.
본 발명의 독창적인 화합물은 이것이 고체 지지체 상에 부동화되어 증가된 안정성, 증가된 친화성 및 선행기술로 기술된 분리 재료에 비하여 CRP에 대하여 증가된 선택성을 제공하는 분리 재료를 제공할 수 있도록 설계되었다. 이는 포스포릴 콜린의 트리-알킬 암모늄기의 알킬 치환기의 하나를 성분 -L-X로 치환하는 것에 의하여 달성되었다. 성분 -L-X는 포스포릴 콜린 분자의 전체 전하를 변화함이 없이 그리고 구조물(construct) 내에의 불안정한 포스포디에스테르 결합의 존재를 회피하는 것에 의하여 일반식 (I)의 화합물의 고체 지지체 상에의 부동화를 가능하게 한다.
따라서, 본 발명은 추가로 일반식 (II)의 분리 재료:
Figure pct00039
여기에서
b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00040
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -CH2-NH-, -NH-CH2-, -CH2-CH2-S-, -S-CH2-CH2-,
Figure pct00041
로부터 선택되고;
R4는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7 및 -C(O)-CH3로부터 선택되고;
-L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
여기에서
-La-는 -(CH2)m-, -(CH2-CH2-O)m-CH2-,
Figure pct00042
로부터 선택되고;
-Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
-Ld-는 -(CH2)n-, -(CH2-CH2-O)n-CH2-,
Figure pct00043
로부터 선택되고;
-Le-는 -(CH2)p1-, -(CH2)p1-O-(CH2)p2-,
Figure pct00044
로부터 선택되고;
-L*-는 -L*a-, -L*a-L*e- 및 -L*a-L*b-L*e-로부터 선택되고,
여기에서
-L*a-는 -(CH2)o-, -(CH2-CH2-O)o-C2H4-, -(CH2-CH2-O)o-CH2- 및 -CH2-CH(OH)-CH2-로부터 선택되고;
-L*e-는 -(CH2)q-, -C2H4-(O-CH2-CH2)q- 및 -CH2-(O-CH2-CH2)q-로부터 선택되고;
-L*b-는 -O-(CH2)r-O-, -S-(CH2)r-S-, -SO2-, -S-, -O-, -NH-C(O), -C(O)-NH- 및 -S-S-로부터 선택되고;
m, n, p1, p2, o, r, q는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고;
A는 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 폴리아크릴레이트, 폴리(메틸 메타크릴레이트) (PMMA), 폴리(글리시딜 메타크릴레이트) (PGMA), 폴리(하이드록시 메타크릴레이트), 폴리스티렌 (PS), 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), 폴리아크릴아미드, 폴리아크롤레인, 아크릴로니트릴 부타디엔 스티렌 (ABS), 폴리아크릴로니트릴 (PAN), 폴리우레탄 (PU), 유페르지트®(eupergit®), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 하이퍼플루오로카본, 아가로스, 알긴산염, 카라기난, 키틴, 녹말, 셀룰로오스, 니트로셀룰로오스, 세파로스®(sepharose®), 유리, 실리카, 규조토(kieselguhr), 지르코니아, 알루미나, 산화철 및 상기 고체 지지체의 혼합물 및/또는 유도체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 고체 지지체임; 및 이러한 분리 재료의 양성자화되고 탈양성자화된 형태를 제공한다.
단편 -L*-의 좌측단이 A에 연결되고, 단편 -L*-의 우측단이 단편 Y의 좌측단에 연결되고, 단편 Y의 우측단이 단편 -L-의 좌측단에 연결되고, 그의 우측단이
Figure pct00045
에 연결된다는 것은 당해 기술분야에서 숙련된 자에게는 명백하다.
단편 -La-, -Lb-, -Lc-, -Ld-, -Le-, -L*a-, -L*b- 및 -L*e-에도 동일하게 적용된다.
따라서, 예를 들어, 만일 -L*-가 -CH2-CH(OH)-CH2-인 -L*a-, -O-인 -L*b-, -(CH2)q-인 -L*e-를 수반하는 -L*a-L*b-L*e-를 나타내는 경우, Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-를 나타내고, -L-은 -(CH2)m-인 -La-, -O-C(O)-NH-인 -Lb- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-인 -Le-를 수반하는 -La-Lb-Le-를 나타내고, 따라서 일반식 (II)의 분리 재료는 다음과 같다:
Figure pct00046
.
여기에서 사용되는 바와 같이 고체 지지체 A는 일반식 (I), (III), (IV), (V) 및 (VI)의 독창적인 화합물의 공유 부동화가 성분 -L*-FG로 관능화되는 것을 고려하여 비활성 고체 지지체를 나타내고, 여기에서 FG는 관능기 X와 반응하기에 적절한 반응성 관능기(reactive functional group)이다. FG기의 예에는 에폭시화물, -CHO, -C≡CH, -CH=CH2, -N3, -CH(OH)-CH2-N3, -NH2, -SH, 트레실(tresyl)이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다. 고체 지지체의 관능화는 당해 기술분야에서 숙련된 자에게 잘 알려진 방법을 통하여 달성된다 (Chin. J. Chem . 2012, 30, 2473; Polym. Int . 2013, 62, 991). 게다가, 관능화된 고체 지지체는 이미 상용적으로 획득가능하다: Toyopearl® AF-epoxy, Toyopearl® AF-amino, Toyopearl® AF-tresyl, TSKgel® tresyl, epoxy-activated Sepharose® 6B (GE Healthcare Life Sciences), CNBr-activated Sepharose® 4 fast flow (GE Healthcare Life Sciences), ECH Sepharose® 4B (GE Healthcare Life Sciences), NHS-activated Sepharose® 4 fast flow (GE Healthcare Life Sciences), terminal vinylsulfone activated Sepharose® 4 fast flow (Affiland), aldehyde Separopore® (Agarose) 4B, ECH Separopore® (Agarose) 4B (Separopore).
고체 지지체는 가교-결합 또는 다른 처리에 적용되어 물리적 또는 화학적 안정성을 증가시킬 수 있고, 섬유, 시트, 막대, 비드 및 막을 포함하나 이들로 제한되지 않는 여러 형태로 형성될 수 있다.
바람직하게는, 고체 지지체 A는 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로부터 선택된다.
PS, PES 및 PAES 기반 고체 지지체는 그들 표면에 성분 -L*-FG을 제공하도록 변성될 수 있고, 여기에서 FG는 관능기 X와 반응하기에 적절한 반응성 관능기이다 (Chin. J. Chem . 2012, 30, 2473; Polym . Int . 2013, 62, 991). 이러한 변성은 방오 특성(antifouling property), 생체적합성 및 다른 특정한 기능의 증가의 결과를 가져온다.
본 발명의 바람직한 분리 재료는 일반식 (II)의 분리 재료 및 그의 양성자화되고 탈양성자화된 형태이다:
Figure pct00047
여기에서
b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00048
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -CH2-NH-, -NH-CH2-, -CH2-CH2-S-, -S-CH2-CH2-,
Figure pct00049
로부터 선택되고;
R4는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7, -C(O)-CH3로부터 선택되고;
-L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
여기에서
-La-는 -(CH2)m- 또는 -(CH2-CH2-O)m-CH2-를 나타내고;
-Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
-Ld-는 -(CH2)n- 및 -(CH2-CH2-O)n-CH2-로부터 선택되고,
-Le-는 -(CH2)p1- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
-L*-는 -L*a-, -L*a-L*e- 및 -L*a-L*b-L*e-로부터 선택되고,
여기에서
-L*a-는 -(CH2)o-, -(CH2-CH2-O)o-C2H4-, -(CH2-CH2-O)o-CH2- 및 -CH2-CH(OH)-CH2-로부터 선택되고;
-L*e-는 -(CH2)q-, -C2H4-(O-CH2-CH2)q- 및 -CH2-(O-CH2-CH2)q-로부터 선택되고;
-L*b-는 -O-(CH2)r-O-, -S-(CH2)r-S-, -SO2-, -S-, -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH- 및 -S-S-로부터 선택되고;
m, n, p1, p2, o, r, q는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고;
A는 상기 정의된 의미를 갖고, 보다 바람직하게는 A는 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로부터 선택된다.
본 발명에 따른 바람직한 구체예는 일반식 (II)의 분리 재료에 관한 것이며, 여기에서 Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -CH2-NH-, -NH-CH2-, -CH2-CH2-S-, -S-CH2-CH2-,
Figure pct00050
로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 -CH(OH)-CH2-N(R4)- 및 -CH(OH)-CH2-S-로부터 선택된다.
Y가
Figure pct00051
를 나타내는 일반식 (II)의 분리 재료가 또한 바람직하다.
본 발명의 바람직한 화합물은 하기 일반식 (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 화합물이며
Figure pct00052
여기에서
-La-는 -(CH2)m- 및 -(CH2-CH2-O)m-CH2-로부터 선택되고;
-Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
-Ld-는 -(CH2)n- 및 -(CH2-CH2-O)n-CH2-로부터 선택되고;
-Le-는 -(CH2)p1- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
m, n, p1, p2, o, r, q는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고; b, A, L*, Y, R1 및 R2는 상기 정의된 의미를 갖는다.
특히 바람직한 분리 재료는 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 분리 재료이며, 여기에서
-L*-는 -L*a-, -L*a-L*e- 및 -L*a-L*b-L*e-로부터 선택되고;
-L*a-는 -(CH2)o- 및 -CH2-CH(OH)-CH2-로부터 선택되고;
-L*e-는 -(CH2)q-를 나타내고;
-L*b-는 -O-(CH2)r-O-, -S-(CH2)r-S-, -S- 및 -O-로부터 선택되고;
o, q 및 r은 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택된다.
일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)에서, L*는 바람직하게는 -L*a-L**b-L*e-를 나타내고 A는 바람직하게는 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로부터 선택된다.
본 발명의 다른 바람직한 구체예는 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 분리 재료에 관한 것이고, 여기에서
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3 및 -C2H5로부터 선택되고;
Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -CH(OH)-CH2-O-, -CH2-NH-, -S-CH2-CH2- 및 -CH2-CH2-S-로부터 선택되고;
R4는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7 및 -C(O)-CH3로부터 선택되고;
-La-는 -(CH2)m-를 나타낸다.
심지어 보다 바람직한 구체예는 일반식 (II)의 분리 재료 및 상기 분리 재료의 양성자화되고 탈양성자화된 형태에 관한 것이고
Figure pct00053
여기에서
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나 R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00054
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -CH2-NH-, -NH-CH2-, -S-CH2-CH2- 및 -CH2-CH2-S-,
Figure pct00055
로부터 선택되고,
R4는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7 및 -C(O)-CH3로부터 선택되고;
-L-은 -(CH2)m-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-NH-C(O)-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2- 및 -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고 b, A 및 L*는 상기 정의된 의미를 갖고, 보다 바람직하게는 A는 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로부터 선택된다.
다른 바람직한 구체예는 일반식 (II)의 분리 재료에 관한 것이고
Figure pct00056
여기에서 b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나 R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00057
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -S-CH2-CH2- 및 -CH2-CH2-S-로부터 선택되고;
R4는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7 및 -C(O)-CH3로부터 선택되고;
-L-은 -(CH2)m-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-NH-C(O)-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2- 및 -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고; m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고;
-L*-는 -(CH2)o-, -(CH2-CH2-O)o-C2H4-, -(CH2-CH2-O)o-CH2-C(O)-NH-(CH2)q-, -(CH2)o-SO2-(CH2)q-, -CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-, -CH2-CH(OH)-CH2-O-(CH2)r-O-CH2- 및 -(CH2-CH2-O)o-C2H4-O-CH2-로부터 선택되고;
o, r 및 q는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고; A는 상기 정의된 의미를 갖고 보다 바람직하게는 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로부터 선택된다.
다른 바람직한 구체예는 일반식 (II)의 분리 재료
Figure pct00058
및 그의 양성자화되고 탈양성자화된 형태에 관한 것이고
여기에서 b는 2 및 3으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
Figure pct00059
로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
Y는
Figure pct00060
로부터 선택되고;
-L-은 -(CH2)m-, -(CH2)m-O-C(O)-NH--(CH2)p1-, -(CH2)m-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-NH-C(O)-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2- 및 -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고; m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고;
-L*-는 -(CH2)o-, -(CH2-CH2-O)o-C2H4-, -(CH2-CH2-O)o-CH2-C(O)-NH-(CH2)q-, -(CH2)o-SO2-(CH2)q-, -CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-, -CH2-CH(OH)-CH2-O-(CH2)r-O-CH2- 및 -(CH2-CH2-O)o-C2H4-O-CH2-로부터 선택되고;
o, r 및 q는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고; A는 상기 정의된 의미를 갖고 보다 바람직하게는 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로부터 선택된다.
표시:
놀랍게도 상기-언급된 일반식 (I), (III), (IV), (V) 및 (VI)의 화합물과 마찬가지로 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 분리 재료는 높은 친화성 및 높은 선택성으로 CRP 및 항-포스포릴 콜린 항체와 결합한다. 따라서, 본 발명의 화합물 및 분리 재료는 생물학적 유체로부터의 CRP 및 항-포스포릴 콜린 항체의 분리에 유용하다.
본 발명의 하나의 구체예는
a) 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 또는 (X)의 분리 재료를 제공하고;
b) 환자의 생물학적 유체를 분리 재료와 접촉시키는
의 단계를 포함하는 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 CRP의 체외 제거 방법에 관한 것이다.
이러한 목적을 위하여, 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 분리 재료는 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 CRP의 체외 제거에 유용한 컬럼 내로 적하된다.
여기에서 사용되는 바와 같은 용어 생물학적 유체는 혈액, 혈장, 복막액 및 림프액을 포함한다.
컬럼의 크기는 절대적인 것이 아니고, 이들은 환자로부터 제거되는 생물학적 유체의 유속에 적응되도록 선택되어야 하며, 이는 환자의 체중과 고도로 연관된다. 본 발명의 분리 재료를 포함하는 컬럼은, 예를 들어, 에틸렌옥사이드 등과 같은 소독 가스(sterilant gas)로 멸균화되어야만 하고, 즉시로 사용되거나 추후 사용을 위하여 밀봉되고 저장된다. 사용 이전에, 컬럼은 통상의 염수로 세척되고 후속하여 임의의 다른 적절한 제조 성분(preparatory ingredient)을 포함하는 통상의 염수로 세척되어야 한다. 컬럼은 통상의 카트릿지 디자인(cartridge design), 유동상(fluidized bed), 확장상(expandable bed) 또는 단일암체(monolith)일 수 있다. 이러한 컬럼의 제조는 숙련된 자에게는 잘 알려져 있다. 예를 들어, 통상의 카트릿지 디자인의 컬럼의 제조는 특허출원 EP 0237659 A1에서 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
컬럼의 재생 또한 가능하다. 재생의 목적을 위하여는, 예를 들어, 0.9% 염용액을 사용하여 컬럼을 관류(flushing)할 수 있다. 그 후 글리신/HCl 완충제 (pH 2.8)을 사용하여 pH 값을 낮추어 CRP와 분리 재료 간의 연결을 파괴하고, 후속하여 7.4의 pH의 PBS (인산염 완충 염수)로의 세척 및 0.9% 염용액으로의 최종 세척 단계가 수행된다.
선택적으로, 본 발명의 분리 재료를 포함하는 컬럼은 환자의 생물학적 유체로부터의 다른 대상 물질의 제거에 적절한 추가의 분리 재료를 포함한다. 다른 물질은 바람직하게는 단백질이다. 다른 물질의 예들은 인터류킨-6, 인터류킨-1, TNF-α, 혈청 아밀로이드 P-성분 (SAP: serum amyloid P-component), PTX3, 피브리노겐, 항체 (IgG, IgE 등과 같은), 항-포스포리피드 항체 및 C1q, C3a 또는 C5a 등과 같은 보체계(complement system)이다.
본 발명의 컬럼은 장치 내에 내포되어 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 CRP의 체외 제거에 적절한 장치를 제공할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 장치는
a) 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 분리 재료를 포함하는 컬럼; 및
b) 분리 재료를 포함하는 생체 외 컬럼을 환자의 생물학적 유체와 접촉시키고, 그에 의하여 상기 생물학적 유체 중의 CRP 수준을 낮추고 생물학적 유체를 환자에 되돌리기 위한 장치;
를 포함한다.
일반식 (I)의 화합물의 높은 친화성 및 선택성으로 인하여, 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 및 (X)의 분리 재료, 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 또는 (X)의 분리 재료를 포함하는 컬럼 및 일반식 (II), (VII), (VIII), (IX) 또는 (X)의 분리 재료를 포함하는 컬럼을 포함하는 장치는 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 환자의 생물학적 유체로부터의 CRP의 체외 제거에서 특히 유용하다.
바람직하게는, 생물학적 유체는 혈액, 혈장, 복막액 및 림프액으로부터 선택된다.
여기에서 사용되는 바와 같은 용어 "심혈관 질환"은 경색(infarction), 뇌졸증(stroke), 당뇨병(diabetes), 말기 신장병(end-stage renal disease), 신부전(renal insufficiency), 고혈압으로 인한 신부전(renal insufficiency due to hypertension), 내피 병소(endothelial lesions), 내피 파손(endothelial destruction), 동맥경화증(arteriosclerosis), 혈전증(thrombosis), 죽상동맥경화증(atherosclerosis), 협착증(stenosis), 재협착증(restenosis), 아테롬성 동맥경화성 또는 혈전성 질환(atherosclerotic or thrombotic diseases), 혈류 부전(blood flow insufficiency), 허혈성 사고(ischemic events), 폐색전증(pulmonary embolism), 안정 및 불안정 협심증(stable and unstable angina pectoris), 관상동맥 질환(coronary arterial diseases), 심근경색(myocardial infarction)과 마찬가지로 아테롬성 동맥경화성 또는 혈전성 질환의 병리학적 결과(pathologic result)를 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다.
여기에서 사용되는 바와 같은 용어 "면역 기능장애"는 면역 질환(immune diseases), 자가면역 질환(autoimmune diseases), 이식에서의 거부 반응, 동종-이식거부(allo-transplant rejection), 이종-이식거부(xeno-transplant rejection), 이식물-대-숙주 거부(graft-versus-host rejection), 숙주-대-이식물 거부(host-versus-graft rejection), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 류마티스(rheumatism), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 강직성 척추염(ankylosing spondilitis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 중증 근무력증(myasthenia gravis), 심상성 건선(psoiasis vulgaris), 그레이브즈병(Graves' disease), 굿페스쳐 증후군(Goodpasture syndrome), 특발저혈소판자색반병(ITP: idiopathic thrombocytopenia purpura), 재생불량성 빈혈(aplastic anemia), 염증성 장질환(IBD: inflammatory bowel disease), 크론씨병(Crohn's disease ; 또한 크론 증후군(Crohn syndrome)으로도 알려짐), 궤양성 대장염(colitis ulcerosa), 확장성 심근병증(DCM: dilatative cardiomyopathy), 자가면역 갑상선염(autoimmune thyroiditis), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 호르몬 대체요법(HRT: hormone replacement therapy), 퇴행성 관절염(osteoarthritis) 및 통풍(gout)을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다.
화학적 합성
A. 일반식 (I)의 화합물의 합성
A.1 도식 1에 따라 L1이 -La-, -La-O-Le-, -La-Le-, -Le-, -Ld-O-Le- 또는 -Ld-Le-을 나타내는 일반식 NHR3-L1-OH (1)의 상용적으로 획득가능한 아미노알코올로부터 출발하여 X가 -NHR3를 나타내고, R3이 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7로부터 선택되고 -L-이 -La-, -La-O-Le-, -La-Le- (즉 일반식 6의 화합물)을 나타내거나, X가 -C≡CH 또는 -CH=CH2을 나타내고 -L-이 -La-O-C(O)-NH-Le- 또는 -La-O-C(O)-NH-Ld-O-Le-을 나타내는 (즉 일반식 5의 화합물, 여기에서 PG1은 알릴옥시 카르보닐 또는 포로파길옥시 카르보닐을 나타내고 R3은 -H를 나타냄) 일반식 I의 독창적인 화합물이 조립될 수 있다.
Figure pct00061
도식 1: 일반식 5 및 6의 화합물의 합성; a. 아미노기 보호; b . 하이드록실기의 유리기 LG로의 전환; c. 4차화; d. 포스포릴화; e. 탈보호.
합성은 아미노알코올 1의 말단 아미노기의 보호기 PG로의 보호 및 후속하여 말단 하이드록실기의 유리기 LG로의 전환을 포함하여 중간체 3을 제공한다. 적절한 아미노 보호기 PG1는 당해 기술분야에서 숙련된 자에게는 잘 알려져 있고 카르바메이트, 프탈로일기 및 치환된 프탈로일기를 포함한다. 카르바메이트의 예에는 벤질옥시카르보닐 (Cbz 또는 Z), 4-니트로-벤질옥시카르보닐, 4-클로로-벤질옥시카르보닐, 4-메톡시-벤질옥시카르보닐, 4-메틸-벤질옥시카르보닐, 4-아지도-벤질옥시카르보닐, 9-플루오레닐메톡시 카르보닐 (Fmoc), 알릴옥시 카르보닐 (Aloc), 프로파길옥시 카르보닐, 3차-부틸옥시 카르보닐 (Boc)들이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다. 프탈로일 및 치환된 프탈로일 보호기가 특히 1차 아민 (R3가 H를 나타냄)의 보호에 유용하다. 치환된 프탈로일기의 예에는 4-니트로-프탈로일, 3-니트로-프탈로일 및 테트라클로로프탈로일들이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 보호기 PG1는 알릴옥시 카르보닐, 프로파길옥시 카르보닐, 벤질옥시카르보닐 및 프탈로일로부터 선택된다. 단계 b에서 설치되는 유리기 LG는 클로라이드, 브로마이드, 이오다이드(iodide), 토실레이트, 벤질설포네이트, p-니트로-벤젠설포네이트, 메실레이트를 포함하는 기 또는 트리플레이트기로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 유리기 LG는 술폰산의 에스테르 (즉, 술포네이트)이고, 보다 바람직하게는 LG는 메실레이트기이다. 기 LG에 대한 알코올 관능성의 전환은 예를 들어 알코올 2를 트리에틸아민의 존재 중에서 용매로 0℃의 디클로로메탄을 사용하여 MsCl 또는 TsCl로 처리하는 것에 의하여 수행될 수 있다. 중간체 3은 추가로 디메틸에탄올아민, 디메틸프로판올아민, N,N-디에틸에탄올아민, N-(2-하이드록시에틸)몰포린 또는 N-(2-하이드록시에틸)피페리딘 등과 같은 일반식 NHR1R2-(CH2)b-OH의 아미노알코올과 반응하여 4차화 반응을 통하여 아미노알코올 4를 제공한다. 후속하여 아세토니트릴 중에서 0℃에서 알코올 4를 POCl3 및 트리에틸아민으로 처리하여 분자 상에 포스페이트기를 도입한다. 말단 아미노기의 탈보호로 말단 아미노기를 통하여 고체 지지체 상에 부동화될 준비가 된 본 발명에 따른 일반식 6의 표적 화합물을 수득한다. 만일 보호기 PG1이 알릴옥시 카르보닐 또는 프로파길옥시 카르보닐이고 R3가 -H를 나타내는 경우, 일반식 5의 화합물이 말단 알켄 (티올-엔 화학(thiol-ene chemistry), 클릭 화학(click chemistry), 전위(methathesis)) 또는 알킨기 (클릭 화학)를 통하여 고체 지지체 상에 직접적으로 부동화될 수 있기 때문에 탈보호는 선택적이다.
일반식 NHR3-L1-OH (1)의 다양한 상용적으로 획득가능한 아미노알코올이 도식 1에서 기술된 합성 경로를 위한 출발물질로서 기능할 수 있다. 이러한 상용적으로 획득가능한 아미노알코올에는 2-아미노에탄올, 3-아미노프로판-1-올, 4-아미노부탄-1-올, 5-아미노펜탄-1-올, 6-아미노헥산-1-올, 2-(2-아미노에톡시)에탄올, 2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에탄올, 2-(3-아미노프로폭시)에탄올. 3-(3-아미노프로폭시)프로판-1-올, 4-(3-아미노프로폭시)부탄-1-올, 2- (메틸아미노)에탄올, 3-(메틸아미노)프로판-1-올, 4-(메틸아미노)부탄-1-올, 5-(메틸아미노)헥산-1-올, 6-(메틸아미노)헥산-1-올, 7-(메틸아미노)헵탄-1-올, 2-[2-(메틸아미노)에톡시]에탄올, 2-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에톡시]에탄올, 2-[3-(메틸아미노)프로폭시]에탄올, 3-[3-(메틸아미노)프로폭시]에탄올, 3-[3-(메틸아미노)프로폭시]프로판-1-올, 4-[3-(메틸아미노)프로폭시]부탄-1-올들이 포함되나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
당해 기술분야에서 숙련된 자로서는 도식 1에서 기술된 합성 절차 중의 단계 b, c 및 d를 적용하고 필요한 경우 PG2가 설피드릴(sulfhydryl) 보호기 (예를 들어 벤질)이고 PG3가 알데히드 보호기 (예를 들어 디티안(dithiane) 또는 아세탈) 유사체 6a, 6b, 6c, 6d 및 6e인 일반식 PG2S-L1-OH, HC≡C-L1-OH, CH2=CH-L1-OH, N3-L1-OH 또는 PG3=C-L1-OH의 알코올에 적절한 탈보호 단계가 적용될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다.
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
이 경우에 있어서 프로파길 알코올(propargylic alcohol), 3-아지도프로판-1-올, 2-아지도에탄올, 4-아지도부탄-1-올, 2-(2-아지도에톡시)에탄올, 2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에탄올, 2-[2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에톡시]에탄올, 2-(2-아지도에톡실설포닐)에탄올, 부-3-틴-1-올(but-3-yn-1-ol), 펜-4-틴-1-올(pent-4-yn-1-ol), 2-프로-2-핀옥시에탄올(2-prop-2-ynoxyethanol), 2-(2-프로2-핀옥시에톡시)에탄올(2-(2-prop-2-ynoxyethoxy)ethanol), 2-[2-(2-프로-2-핀옥시에톡시)에톡시]에탄올(2-[2-(2-prop-2-ynoxyethoxy)ethoxy]ethanol)이 출발물질로서 사용될 수 있다.
A.2 도식 2에 따라 -L2-가 -La- 또는 -Ld-를 나타내는 일반식 NHR3-L2-CO2H의 아미노산 9, L1이 -Le-를 나타내는 일반식 NH2-L1-OH (1)의 아미노알코올 10 또는 L3이 -Le-을 나타내는 일반식 NH2-L3-NR1R2의 디아민 11로부터 출발하여 X가 -NHR3를 나타내고 R3가 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7로부터 선택되고 -L-이 -La-C(O)-NH-Le-를 나타내거나 (즉 일반식 7 및 19의 화합물) X가 -C=CH 또는 -CH≡CH2를 나타내고 -L-이 -La-O-C(O)-NH-Ld-C(O)-NH-Le-를 나타내는 (즉 일반식 8 및 18의 화합물, 여기에서 PG1는 알릴옥시카르보닐 또는 프로파길옥시카르보닐을 나타내고 R3는 -H를 나타냄) 일반식 I의 독창적인 화합물이 조립될 수 있다.
합성은 PG1이 문단 A.1에서 정의된 의미를 갖는 보호기 PG1로의 아미노산 9 상의 아미노기의 보호부터 시작되어 카르복실산 12를 제공한다. 카르복실산 12와 아미노알코올 10의 커플링이 1차 알코올 13을 완성하고 그에 의하여 하이드록실기가 추가로 유리기 LG로 전환되어 중간체 14를 제공하고, 여기에서 유리기 LG는 문단 A.1에서 정의된다. 일반식 NHR1R2-(CH2)b-OH (예를 들어 디메틸에탄올아민, 디메틸프로판올아민, N,N-디에틸에탄올아민, N-(2-하이드록시에틸)몰포린 또는 N-(2-하이드록시에틸)피페리딘)의 아미노알코올 10으로의 중간체 14의 처리는 4차화 반응과 후속하여 보호기 PG1의 개열을 포함하여 표적 화합물 7을 제공하는 탈보호에 적용되는 알코올 15의 형성의 결과를 가져온다. 앞서와 마찬가지로, 알릴옥시카르보닐 또는 프로파길옥시카르보닐인 PG1을 수반하는 전구체 8이 직접적으로 고체 지지체 상에 부동화될 수 있다.
Figure pct00067
도식 2: 일반식 7, 8, 18 및 19의 화합물의 합성: a. 아미노기 보호; b. 10, 커플링; c. 하이드록실기의 유리기 LG로의 전환; d. 4차화; e. 포스포릴화; f. 탈보호; g. 11, 커플링; h. 4차화.
달리, 카르복실 알코올(carboxylic alcohol) 12는 디아민 11과 커플링되어 아미드 16을 제공하고 이는 후속하여 2-하이드록시에틸 또는 3-하이드록시프로필 유도체로의 처리에 의하여 4차화 반응에 적용된다. 적절한 2-하이드록시에틸 및 3-하이드록시프로필 유도체에는 2-브로모- 및 2-이오도-에탄올(2-iodo-ethanol) 및 3-브로모- 및 3-이오도 프로판올이 포함된다. 4차화 반응은 바람직하게는 아세토니트릴 중에서 실온에서 수행된다. 마지막으로, 포스포릴화 반응, 후속하는 탈보호 반응이 알코올 18에 적용되어 표적 화합물 19을 제공한다.
일반식 NHR3-L2-CO2H의 아미노산 9에는 7-아미노헵탄산(7-aminoheptanoic acid), 6-아미노헥산산(6-aminohexanoic acid), 5-아미노펜탄산, 4-아미노부탄산, 3-아미노프로판산, 2-아미노아세트산, 2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]아세트산, 2-[2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시]아세트산, 2-(2-아미노에톡시)아세트산, 2-(3-아미노프로폭시)아세트산, 3-(3-아미노프로폭시)프로판산, 4-(3-아미노프로폭시)부탄산, 2-(메틸아미노)아세트산, 3-(메틸아미노)프로판산, 4-(메틸아미노)부탄산, 5-(메틸아미노)펜탄산, 6-(메틸아미노)헥산산, 7-(메틸아미노)헵탄산, 2-[2-(메틸아미노)에톡시]아세트산, 2-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에톡시]아세트산, 2-[3-(메틸아미노)프로폭시]아세트산, 3-[3-(메틸아미노)프로폭시]프로판산, 4-[3-(메틸아미노)프로폭시]부탄산, 2-[2-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에톡시]에톡시]아세트산이 포함되나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
도식 2로 표시되는 합성 도식에서 사용되기에 적절한 일반식 NHR1R2-(CH2)b-OH의 아미노알코올 10에는 2-아미노에탄올, 3-아미노프로판-1-올, 4-아미노부탄-1-올, 5-아미노펜탄-1-올, 6-아미노헥산-1-올, 2-(2-아미노에톡시)에탄올, 2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에탄올, 2-(3-아미노프로폭시)에탄올, 3-(3-아미노프로폭시)프로판-1-올, 4-(3-아미노프로폭시)부탄-1-올이 포함되나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
상용적으로 획득가능한 일반식 H2N-Le-NR1R2의 디아민 11의 예들에는 에틸렌디아민; 1,3 디아미노프로판; N-메틸에틸렌디아민; 1,4-디아미노부탄; 3-(메틸아미노)-프로필아민; N,N'-디메틸에틸렌디아민; N-에틸렌디아민; 3-(디메틸아미노)-1-프로필아민; N-이소프로필-에틸렌디아민; N-프로필에틸렌디아민; 헥사메틸렌디아민; 1,2- 디아미노시클로헥신; 1,4-디아미노시클로헥산; 및 N-헥실에틸렌디아민이 포함되나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
당해 기술분야에서 숙련된 자로서는 도식 2에서 기술된 합성 절차 중의 단계 b 내지 e를 적용하고 필요한 경우 PG2가 설피드릴 보호기 (예를 들어 벤질)이고 PG3가 알데히드 보호기 (예를 들어 디티안 또는 아세탈) 유사체 7a, 7b, 7c, 7d 및 7e인 일반식 PG2S-L2-CO2H, HC≡C-L2-CO2H, CH2=CH-L2-CO2H, N3-L2-CO2H 또는 PG3=C-L2-CO2H의 카르복실산에 적절한 탈보호 단계가 적용될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다.
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
유사체 7a 내지 7e를 수득하기 위한 출발물질로서 사용되기에 적절한 카르복실산의 예들에는 6-티오헥산산(6-thiohexanoic acid), 6-아지도헥산산, 5-티오펜탄산, 5-아지도펜탄산, 4-티오부탄산, 4-아지도부탄산, 3-티오프로판산, 3-아지도프로판산, 티오아세트산, 3-부틴산(3-butynoic acid), 4-펜틴산(4-pentynoic acid)들이 포함되나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
A.3 달리, X가 -NHR3를 나타내고, R3이 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7로부터 선택되고 -L-이 -La-를 나타내는 일반식 I의 화합물을 수득하는 데 일반식 R3HN-L4-NR1R2 (20)의 디아민이 성공적으로 사용될 수 있다 (도식 3을 참조하시오). 디아민 20은 상용적으로 획득가능하거나 (예를 들어 N,N-디메틸-1,3-프로판디아민) 예를 들어 대응하는 할로겐 유도체(halogeno derivatives)로부터 출발하여 할로겐 유도체의 아지도 유도체로의 전환 및 아지도 유도체의 대응하는 1차 아민으로의 환원을 포함하는 2 단계 합성을 통하여 용이하게 수득될 수 있다.
일반식 R3HN-L4-NR1R2의 일반식의 디아민 20으로부터 출발하여, 문단 A.1에서 정의되는 의미를 갖는 보호기 PG1으로의 2차 아민 중의 1차의 보호, 적절한 2-하이드록시에틸 또는 3-하이드록시프로필 유도체로의 처리에 의한 3차 아민의 4차화에 후속하여 포스포릴화 및 1차 또는 2차 아민의 탈보호를 포함하는 4 단계에서 일반식 24의 화합물이 수득될 수 있다.
Figure pct00073
도식 3: 일반식 24의 화합물의 합성: a. 아미노기 보호; b. 4차화; c. 포스포릴화; d. 탈보호.
B. 일반식 (II)의 분리 재료의 제조
일반식 (II)의 분리 재료는 성분 -L*-FG로 관능화되고 여기에서 FG는 관능기 X와 반응하기에 적절한 관능기인 고체 지지체와 일반식 (I)의 화합물의 커플링에 의해 제조될 수 있다. FG기의 예에는 -CHO, -C≡CH, -N3, -CH=CH2, -NH2, -SH, 에폭시화물, 트레실이 포함된다. 도식 4는 일반식 (II)의 분리 재료를 수득하는 데 채용될 수 있는 서로 다른 커플링 방법론을 요약하고 있다. 바람직하게는, X가 -SH, -OH 및 -NHR3로부터 선택되는 일반식 (I)의 화합물이 에폭시화물 개환(epoxide ring opening)을 통하여 고체 지지체 A에 커플링된다 (도식 5 a, b를 참조하시오).
본 발명의 하나의 구체예에 있어서, X = -C≡CH, -N3 또는 -CH=CH2인 일반식 (I)의 화합물과 고체 지지체의 커플링은 트리아졸 성분의 형성으로 일어난다 (도식 5 c, d, e를 참조하시오). 또한 알킨 아지드 위스겐 고리화 첨가반응(alkyne azide Huisgen cycloaddition)으로도 알려진 아지드와 알킨으로부터의 트리아졸의 형성은 1,3-고리화 첨가로 실행된다. 위스겐 1,3-이극 고리화 첨가반응의 중요한 변형은 구리(I) 촉매화 변형이며, 여기에서 유기 아지드 및 말단 알킨이 일체화되어 유일한 생성물로서 1,2,3-트리아졸의 1,4-구조이성질체(1,4-regioisomers)를 제공한다. 이 반응은 구리(I)-촉매화 아지드-알킨 고리화 첨가반응(CuAAC: copper(I)-catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition)으로 명명된다. 반응은 브롬화구리 또는 요오드화구리 등과 같은 통상의 구리(I)의 공급원을 사용하여 수행될 수 있다. 그러나, 반응은 원위치 Cu(I)를 생성하는 구리(II) (예를 들어, 황산구리(copper(II) sulfate))와 환원제 (예를 들어 아스코르빈산 나트륨)의 혼합물을 사용하여 훨씬 잘 작동한다. Cu(l)이 수성 용매 중에서 불안정하기 때문에, 반응 결과를 개선하기 위하여 안정화 리간드가 유효하며, 특히 트리스-(벤질트리아졸릴메틸)아민(TBTA: tris-(benzyltriazolylmethyl)amine)가 사용된다. 반응은 다양한 용매 그리고 알코올, DMSO, DMF, t-BuOH, 디옥산, 아세톤 및 이들의 혼합물을 포함하여 다양한 (부분적으로) 혼화성 유기 용매와 물의 혼합물 중에서 진행될 수 있다. 게다가, 반응은 루테늄에 의해 촉매화될 수 있다. 루테늄-촉매화 1,3-이극 아지드-알킨 고리화 부가 반응(RuAAC: ruthenium-catalyzed 1,3-dipolar azide-alkyne cycloaddition) 은 1,5-트리아졸을 제공한다. 따라서, 아지드-알킨 고리화 부가 반응을 사용하여 Y가
Figure pct00074
로부터 선택되는 일반식 (II)의 분리 재료가 용이하게 수득될 수 있다.
동일한 방법으로, 아지드 및 알켄으로부터 출발하여 Y가
Figure pct00075
로부터 선택되는 일반식 (II)의 분리 재료가 수득될 수 있다.
X가 -NH2 또는 -CH(O)인 일반식 (I)의 화합물 및 관능기 FG가 각각 -CH(O) 및 -NH2를 나타내는 성분 -L*-FG를 수반하는 A 관능화된 고체 지지체로부터 출발하여 Y가 -CH2-NH- 및 -NH-CH2-로부터 선택되는 일반식 (II)의 분리 재료가 예를 들어 환원제로서 NaBH4를 사용하는 환원성 아민화(reductive amination)에 의하여 제조될 수 있다 (도식 4 f, g를 참조하시오).
X = -CH=CH2인 일반식 (I)의 화합물이 치환(metathesis) 또는 위티그 반응(Wittig reaction)을 통하여 고체 지지체에 부동화되어 Y가
Figure pct00076
로부터 선택되는 일반식 (II)의 분리 재료를 제공할 수 있다.
X = -CH=CH2 또는 -SH인 일반식 (I)의 화합물이 티올-엔 화학을 통하여 고체 지지체에 부동화되어 Y가 -S-CH2-CH2- 또는 -CH2-CH2-S-를 나타내는 일반식 (II)의 분리 재료를 제공할 수 있다.
도식 5. 일반식 (I)의 화합물의 고체 지지체에의 커플링 방법론.
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083
하기 실시예들은 본 발명의 바람직한 구체예를 입증하도록 포함되었다. 하기 실시예들에서 기술된 기술이 본 발명자에 의하여 본 발명의 실시에서 잘 기능하는 것으로 발견된 기술을 나타내고 따라서 그의 실시를 위한 바람직한 방식을 구성하는 것으로 고려될 수 있다는 것이 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 이해되어야 한다. 그러나, 본 상세한 설명의 관점에서, 기술되는 특정한 구체예들에서 많은 변경들이 이루어질 수 있고 본 발명의 정신이나 관점으로부터 벗어남이 없이 여전히 같거나 유사한 결과를 얻을 수 있다는 것이 당해 기술분야에서 숙련된 자에게는 이해되어야 한다.
본 발명의 여러 태양들의 추가의 변경 및 대안의 구체예가 이 상세한 설명의 시각에서 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 명백하게 될 것이다. 따라서, 본 상세한 설명은 단지 설명으로 이해되어야 하고 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명을 실행하는 일반적인 방법을 교시하기 위한 목적이다. 여기에서 표시되고 기술된 본 발명의 형태는 구체예의 실시예로 고려되어야 한다는 것은 이해되어야 한다. 모두 본 발명의 이러한 개시의 이점을 가진 채 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한 바와 같이 요소 및 재료는 여기에서 설명되고 개시된 것들로 치환될 수 있고, 부품 및 공정은 가역일 수 있고, 본 발명의 특정한 특징은 독립적으로 활용될 수 있다. 하기 특허청구범위에서 기술된 바와 같은 본 발명의 정신 및 관점으로부터 벗어남이 없이 여기에서 기술된 요소들에서 변경이 이루어질 수 있다.
실시예
실시예 1: 벤질 N-[3-(디메틸아미노)프로필]카르바메이트(benzyl N-[3-(dimethylamino)propyl]carbamate) (1 * )의 합성.
Figure pct00084
아르곤 대기 하에서 그리고 0℃에서 클로로포름 (300　㎖) 중의 N-(벤질옥시카르보닐옥시)숙신이미드 (68.8　g, 0.276　mol)의 교반되는 용액에 클로로포름 (150　㎖) 중에 용해된 N',N'-디메틸프로판-1,3-디아민 (24.52　g, 0.24　mol)을 적가하는 한편으로 반응 혼합물 온도를 0 ℃로 유지하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반시키고, 계속해서 클로로포름 (400　㎖)으로 희석시키고 포화 수성 탄산수소나트륨 (3　x 200　㎖) 및 포화 염화나트륨 (2　x　200　㎖)으로 세척하였다. 유기상을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 중에서 농축시켜 소정의 생성물 1 * 로서 56　g (98.7%)의 점성 오일을 수득하였으며, 이는 다음 반응을 위하여 그대로 사용되었다. MS m/z 236.31 (M+H)+ (실험치 236.15).
실시예 2: 3-(벤질옥시카르보닐아미노)프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄브로마이드(3-(benzyloxycarbonylamino)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethyl-ammonium bromide) (2 * )의 합성.
Figure pct00085
아세토니트릴 중의 벤질 N-[3-(디메틸아미노)프로필]카르바메이트 (1 * , 56　g, 0.237　mol, 실시예　1) 대략 1 M 용액에 2-브로모에탄올 (32.58　g, 0.261　mol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 모든 벤질 N-[3-(디메틸아미노)프로필]카르바메이트가 소모될 때까지 배양시켰다 (LC/MS 및 TLC로 모니터링 함). 그 결과의 3-(벤질옥시카르보닐아미노)프로필-(2-하이드록시에틸)디메틸-암모늄브로마이드의 용액에 5배 용적의 메틸 3차-부틸에테르를 첨가하였다. 진흙 같은 혼합물 용액(muddy mixture solution)을 상분리가 관찰될 때까지 교반시켰다. 따라내기(decantation)에 의하여 상부 유기상을 3-(벤질옥시카르보닐아미노)프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄브로마이드로부터 분리하고 침전을 다시 3회 반복시켰다. 마지막으로, 흔적량의 용매(trace solvent)를 진공 중에서 펌핑 아웃(pumping out)시켜 점성 오일로서 표적 화합물을 수득하였다 (76.7　g, 브롬화물 염으로서 89.6%). 표적 생성물 2 * 는 LC/MS 및 TLC에 의해 균질함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 포스포릴화 단계에서 사용되었다. MS m/z 281.33 M+ (실험치 281.19).
실시예 3: 6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노산(6-(benzyloxycarbonylamino)hexanoic acid (3 * ).
Figure pct00086
디클로로메탄 (500　㎖) 중의 미세하게 분말화된 6-아미노카프로산 (32.79　g, 0.25　mol)의 교반된 현탁액에 트리에틸아민 (63.24　g, 0.625　mol)을 첨가하였다. 계속해서, 격렬하게 교반시키면서 트리메틸클로로실란 (54.32　g, 0.5　mol)을 적가하고 그 결과의 혼합물을 2 시간 동안 환류시켰다. 계속해서 반응 혼합물을 빙욕(ice bath) 중에서 냉각시키고 벤질클로로포르메이트 (95%, 53.31　g, 0.313　mol)를 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 얼음 중에서 60 분 동안 그리고 실온에서 4 시간 동안 교반시켰다. 용매의 제거 이후, 잔사를 1000　㎖의 4% (v/w) 탄산수소나트륨 용액과 500　㎖의 메틸 3차-부틸에테르 사이에서 분배시켰다. 수성층을 분리해내고, 2N 염산으로 pH 2.0까지 산성화시키고 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 결합된 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 표적 카르복실산 3 * 에 대응하는 투명한 오일로 농축시켰으며 이는 LC/MS 및 TLC에 의해 균질함이 확인되었고 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 265.33 (M+1)+ (실험치 265.13).
실시예 4: 벤질 N-[6-[3-(디메틸아미노)프로필아미노]-6-옥소-헥실]카르바메이트(benzyl N-[6-[3-(dimethylamino)propylamino]-6-oxo-hexyl]carbamate) (4 * )의 합성.
Figure pct00087
건조 디클로로메탄 (500　㎖) 중의 6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노산 (3 * , 66.3　g, 0.25　mol, 실시예　3)의 용액에 촉매량의 디메틸포름아미드 (1.25　㎖)를 첨가하고 반응 혼합물을 빙/염조(ice/salt bath) 중에서 0 ℃까지 냉각시켰다. 디클로로메탄 (150　㎖) 중의 염화옥살릴 (38.08　g, 0.3　mol)의 용액을 반응 혼합물의 온도를 0 ℃로 유지하면서 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 실온에서 교반시켰다. 휘발성분을 진공 하에서 증발시키고 잔사를 건조 디클로로메탄 (500　㎖) 중에 용해시켰다. 그 결과의 용액을 빙/염조 중에서 0 ℃까지 냉각시키고 N,N-디메틸-1,3-프로판디아민 (25.55　g, 0.25　mol)과 트리에틸아민 (55.65　g, 0.55　mol )의 혼합물을 교반시키면서 그리고 2 시간 동안 냉각시키면서 적가하였다. 반응 혼합물을 6 시간 동안 교반시키고 반응의 진행을 TLC 및 LC-MS로 모니터링 하였다. 침전물을 여과하고, 소량의 디클로로메탄으로 세척하였다. 계속해서, 디클로로메탄 용액을 순차적으로 포화 탄산수소나트륨, 포화 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축시켜 투명한 황색 오일로서 벤질 N-[6-[3-(디메틸아미노)프로필아미노]-6-옥소-헥실]카르바메이트 (4 * , 76.4　g, 87.4%)를 수득하였다. 조 물질(crude material)은 LC/MS 및 TLC에 의해 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 249.13 (M+1)+ (실험치 349.24).
실시예 5: 3-[6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄브로마이드(3-[6-(benzyloxycarbonylamino)hexanoylamino]propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethyl-ammonium bromide) (5 * )의 합성.
Figure pct00088
아세토니트릴 중의 벤질 N-[6-[3-(디메틸아미노)프로필아미노]-6-옥소-헥실]카르바메이트 (4 * , 56　g, 0.16　mol, 실시예　4) 대략 1 M 용액에 2-브로모에탄올 (22.03　g, 0.176　mol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 모든 벤질 N-[6-[3-(디메틸아미노)프로필아미노]-6-옥소-헥실]카르바메이트가 소모될 때까지 교반시켰다 (LC/MS 및 TLC로 모니터링 함). 그 결과의 3-[6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄브로마이드의 용액에 5배 용적의 메틸 3차-부틸에테르를 첨가하였다. 진흙 같은 혼합물 용액을 상분리가 관측될 때까지 교반시켰다. 따라내기에 의하여 상부 유기상을 3-[6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄브로마이드로부터 분리시키고 침전을 다시 3회 반복시켰다. 마지막으로, 흔적량의 용매를 진공 중에서 펌핑 아웃시켜 점성 오일로서 표적 화합물을 수득하였다 (5 * , 66.3　g, 브롬화물 염으로서 87.2%). 생성물은 LC/MS 및 TLC에 의해 균질함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 포스포릴화 단계에서 사용되었다. MS m/z 394.1 M+ (실험치 394.27).
실시예 6: 벤질 N-[2-(2-하이드록시에톡시)에틸]카르바메이트(benzyl N-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl]carbamate) (6 * )의 합성.
Figure pct00089
2-(2-아미노에톡시)에탄올 (25.23　g, 0.240　mol)을 MeOH 중의 10% 트리에틸아민 530　㎖ (48　㎖, 0.345　mol의 트리에틸아민, 480　㎖의 메탄올) 중에 용해시키고 0 ℃까지 냉각시켰다. 벤질 클로로포르메이트 (공업용(technical grade), 95%, 34.4　㎖, 0.229　mol)를 한 번에 모두 첨가하고, 반응을 실온까지 따뜻하게 되도록 하였다. 12 시간 이후, 용매를 증발에 의해 제거하고, 생성물을 실리카 컬럼 크로마토그래피 (에틸아세테이트/헥산)로 정제하여 무색 오일을 수득하였다 (6 * , 52　g, 0.163　mol, 벤질클로로포르메이트를 기준으로 95%). 조 물질은 LC/MS 및 TLC에 의해 분석학적으로 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 239.17 (M+1)+ (실험치 239.12).
Example 7: (벤질 N-[6-[2-(2-하이드록시에톡시)에틸아미노]-6-옥소-헥실]카르바메이트(benzyl N-[6-[2-(2- hydroxyethoxy ) ethylamino ]-6- oxo - hexyl ] carbamate ) (7 * )의 합성.
Figure pct00090
디클로로메탄 (290　㎖) 중의 트리메틸포스파이트 (12.5　g, 0.101　mol)의 용액을 빙/염조 중에서 냉각시켰다. 계속해서, 분말화된 요오드 (25.6　g, 0.101　mol)를 분량적으로(portionwise) 첨가하는 한편으로 반응 혼합물 온도를 0℃로 유지시켰다. 고체 요오드가 완전히 용해된 후, 6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노산 (3 * , 25.5　g, 0.096　mol, 실시예　3) 및 트리에틸아민 (23.3　g, 0.23　mol)을 순서대로 첨가하고, 그 결과의 용액을 20 분 동안 냉각조(cooling bath) 내에서 0℃에서 교반시켰다. 디클로로메탄 (50　㎖) 중에 용해된 2-(2-아미노에톡시)에탄올 (10.6　g, 0.101　mol)을 첨가하고 반응 혼합물을 0℃에서 30 분 동안 교반시켰다. 냉각조를 제거한 후, 반응 혼합물을 밤새도록 실온에서 교반시켰다. 반응의 진행을 TLC 및 LC/MS로 모니터링 하였다. 계속해서, 반응 혼합물을 순차적으로 10% (v/w) 황산수소나트륨, 포화 염화나트륨, 포화 탄산수소나트륨으로 세척하고 무수 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 증발에 의하여 용매를 제거하고, 무색 오일 (34.7　g, 0.091　mol, 6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노산을 기준으로 95.1%)을 수득하도록 생성물을 실리카 컬럼 크로마토그래피 (에틸아세테이트/헥산)로 정제하였다. 조 물질 7 * 은 LC/MS 및 TLC에 의해 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 352.42 (M+H)+ (실험값 352.20).
실시예 8: 2-[2-[6-(벤질옥시카르보닐아미노) 헥사노일아미노]에톡시] 에틸 메탄설포네이트(2-[2-[6-(benzyloxycarbonylamino) hexanoylamino]ethoxy] ethyl methanesulfonate) (8 * )의 합성.
Figure pct00091
아르곤 하에서 메틸렌클로라이드 (115　㎖) 중의 벤질 N-[6-[2-(2-하이드록시에톡시)에틸아미노]-6-옥소-헥실]카르바메이트 (7 * , 17.25　g, 0.049　mol, example　7)의 용액을 빙-염조 내에서 -5 ℃까지 냉각시켰다. 트리에틸아민 (8.2　㎖, 0.059　mol)을 첨가하고 그 결과의 용액을 -5℃에서 10 분 동안 교반시켰다. 메탄설포닐클로라이드 (4.5　㎖, 0.059 mol)를 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0 ℃ 내지 -5 ℃로 유지시켰다. 적가가 완료된 이후, 반응을 실온까지 가온시켰다. 4 시간 후, 반응 혼합물을 물, 포화 염화나트륨 그리고 다시 물로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 중에서 농축시켰다. 조 물질 8 * 은 LC/MS 및 TLC에 의해 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 430.52 (M+H)+ (실험값 430.18).
실시예 9: 2-[2-[6-(벤질옥시카르보닐아미노) 헥사노일아미노]에톡시] 에틸-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄 메탄설폰산 염(2-[2-[6-(benzyloxycarbonylamino) hexanoylamino]ethoxy] ethyl-(2-hydroxyethyl)-dimethyl-ammonium methanesulfonic acid salt) (9 * )의 합성.
Figure pct00092
아세토니트릴 중의 2-[2-[6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노] 에톡시]에틸 메탄설포네이트 (8 * , 18.6　g, 0.043　mol, 실시예　8) 1 M 용액에 2-(디메틸아미노)에탄올 (4.24　g, 0.048　mol)을 20 내지 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가가 완료된 이후, 모든 알킬메실레이트가 소모될 때까지 그 결과의 용액을 연속적인 교반과 함께 환류시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 12 시간 후, 반응 혼합물을 냉각시키고 아세토니트릴을 진공 중에서 증발시켰다. 그 결과의 혼합물을 200　㎖의 뜨거운 메틸 3차-부틸에테르 중에 용해시켰다. 용액을 실온까지 천천히 냉각시키고 계속해서 결정화가 완료될 때까지 12 시간 0 내지 5 ℃에서 정치시켰다. 표적 알코올 9 * 에 대응하는 대략 19.7 g (메탄설폰산 염으로서 87.7%)의 백색 고체가 회수되었다. 조 물질은 LC/MS 및 TLC에 의해 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 424.55 M+ (실험값 424.28).
실시예 10: 6-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)헥사노산(6-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)hexanoic acid) (10 * )의 합성.
Figure pct00093
6-아미노카프로산 (65.6　g, 0.5　mol), 프탈산 무수물 (74.1　g, 0.5　mol) 및 아세트산 (115　㎖)의 교반된 혼합물을 가열시켜 9 시간 동안 환류시켰다. 냉각에 의하여 결정화된 생성물을 여과에 의해 단리해내고, 물로 수 차례 세척하고, 진공 중에서 100 ℃에서 건조시켜 124.2　g (95.1%)의 6-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)헥사노산 10 * 을 수득하고 이는 LC/MS 및 TLC에 의하여 균질함이 확인되었고 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 261.24 (M+H)+ (실험값 261.10).
실시예 11: 2-[2-(2-하이드록시에톡시)에틸]이소인돌린-1,3-디온(2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl]isoindoline-1,3-dione) (11 * )의 합성.
Figure pct00094
기계적 교반기, 질소 인입-인출구 및 환류 응축기(reflux condenser)로 상부가 폐쇄된 딘-스타크 트랩(Dean-Stark trap)이 장착된 1 ℓ 3구 둥근바닥 플라스크에 톨루엔 (540　㎖) 중의 프탈산 무수물 (88.87　g, 0.6　mol) 및 2-(2-아미노에톡시)에탄올 (63.08　g, 0.6　mol)의 용액을 충진시켰다. 1 당량의 물이 딘-스타크 트랩 중에 수집될 때까지 (대략 24 시간) 반응 혼합물을 환류시켰다. 24 시간 후 톨루엔을 진공 하에서 제거하고 잔사를 에틸아세테이트 (550　㎖) 중에 용해시키고 10% (v/w) 황산수소나트륨, 포화 염화나트륨, 포화 탄산수소나트륨으로 순차적으로 세척하고 무수 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 진공 하에서 용매를 제거하고 메틸 3차-부틸에테르로 결정화시켰다. 표적 알코올 11 * 에 대응하는 대략 130 g (92.1%)의 백색 고체가 회수되었다. 조 물질은 LC/MS 및 TLC에 의하여 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 235.27 (M+H)+ (실험값 235.08).
실시예 12: 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸 메탄설포네이트(2-[2-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)ethoxy]ethyl methanesulfonate) (12 * )의 합성.
이 실시예는 N-보호 2-(2-아미노에톡시)에탄올의 메탄설포네이트 에스테르의 제조를 위한 방법을 설명한다.
Figure pct00095
메틸렌클로라이드 (300　㎖) 중의 2-[2-(2-하이드록시에톡시)에틸]이소인돌린-1,3-디온 (11 * , 47.05　g, 0.2　mol, example　11)의 용액을 아르곤 하에서 빙-염조 내에서 -5 ℃까지 냉각시켰다. 트리에틸아민 (33.4　㎖, 0.24　mol)을 첨가하고 그 결과의 용액을 -5 ℃에서 10 분 동안 교반시켰다. 메탄설포닐클로라이드 (18.6　㎖, 0.24 mol)를 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0 ℃ 내지 -5 ℃로 유지시켰다. 첨가가 완료된 이후, 반응을 실온까지 가온시켰다. 4 시간 후, 반응 혼합물을 물, 포화 염화나트륨 그리고 다시 물로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 중에서 농축시켰다. 조 물질은 LC/MS 및 TLC에 의하여 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 313.17 (M+H)+ (실험값 313.06).
실시예 13: 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄 메탄설폰산 염(2-[2-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)ethoxy]ethyl-(2-hydroxyethyl)-dimethyl-ammonium methanesulfonic acid salt) (13 * )의 합성.
Figure pct00096
아세토니트릴 중의 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸 메탄설포네이트 (12 * , 32.53　g, 0.104　mol, 실시예　12)의 대략 1 M 용액에 2-(디메틸아미노)에탄올 (10.18　g, 0.114　mol)을 20 내지 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가가 완료된 이후, 모든 알킬메실레이트가 소모될 때까지 그 결과의 용액을 연속적인 교반과 함께 환류시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 12 시간 후, 반응 혼합물을 냉각시키고 아세토니트릴을 진공 중에서 증발시켰다. 그 결과의 혼합물을 150 ㎖의 뜨거운 아세토니트릴 중에 용해시키고 후속하여 그 결과의 용액에 200 ㎖의 뜨거운 메틸 3차-부틸에테르를 첨가하였다. 용액이 실온까지 천천히 냉각시키고 계속해서 결정화가 완료될 때까지 0 내지 5 ℃에서 밤새도록 정치시켰다. 대략 50.7　g (메탄설폰산 염으로서 92.6%)의 백색 고체가 회수되었다. 표적 화합물 13 * 에 대응하는 조 물질은 LC/MS 및 TLC에 의하여 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 307.07 M+ (실험값 307.17).
실시예 14: 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸-(3-하이드록시프로필)-디메틸-암모늄 메탄설폰산 염(2-[2-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)ethoxy]ethyl-(3-hydroxypropyl)-dimethyl-ammonium methanesulfonic acid salt) (14 * )의 합성.
Figure pct00097
아세토니트릴 중의 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸 메탄설포네이트 (12 * , 30.41　g, 0.097　mol, 실시예　12)의 대략 1 M 용액에 3-(디메틸아미노)프로판-1-올 (11.01　g, 0.107　mol)을 첨가하였다. 3-(디메틸아미노)프로판-1-올의 첨가는 대략 20 내지 30 분 정도 소요되었다. 모두 첨가되면, 모든 알킬메실레이트가 소모될 때까지 그 결과의 용액을 연속적인 교반과 함께 환류시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 12 시간 후, 반응 혼합물을 냉각시키고 아세토니트릴을 진공 중에서 증발시켰다. 그 결과의 혼합물을 120 ㎖의 뜨거운 아세토니트릴 중에 용해시키고 후속하여 그 결과의 용액에 200 ㎖의 뜨거운 메틸 3차-부틸에테르를 첨가하였다. 용액을 실온까지 천천히 냉각시키고 계속해서 결정화가 완료될 때까지 0 내지 5 ℃에서 밤새도록 정치시켰다. 대략 46.1　g (88.1%)의 백색 고체가 회수되었다. 표적 화합물 14 * 에 대응하는 조 물질은 LC/MS 및 TLC에 의하여 순수함이 확인되었고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. MS m/z 321.11 M+ (실험값 321.18).
실시예 15: 세파로스 6B의 에폭시-활성화.
Figure pct00098
세파로스 6B (GE Healthcare Life Sciences)를 유리필터-깔대기(glass filter-funnel) 상에서 3　x 1000　㎖ 분량(portion)의 물로 세척하고 흡기-건조시켰다. 계속해서 100 g의 흡기-건조된 세파로스 6B를 100　㎖의 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (CAS No. 2425-79-8) 및 밀리리터 당 2 ㎎의 소듐보로하이드라이드를 포함하는 100 ㎖의 0.6　M 수산화나트륨 용액과 혼합시켰다. 현탁액을 회전에 의하여 8 시간 동안 실온에서 혼합시키고 유리필터-깔대기 상에서 겔을 10　x　400　㎖ 분획의 뜨거운 (40　내지　60 ℃) 물로 세척하는 것에 의하여 반응을 정지시켰다. 겔의 옥시란 함량은 흡기-건조된 겔의 67　μmol/g 이었다.
실시예 16: 에폭시-기의 수를 결정하기 위한 분석.
Figure pct00099
에폭시-활성화 세파로스 6B를 머캡토아세트산과 반응시키고 Scoble, JA and Scopes, RK Journal of Chromatography A, 1996, 752, 67에서 기술된 방법에 따른 적정에 의하여 도입된 산성기의 수를 결정하였다.
실시예 17: 아지드- 관능화 세파로스 6B의 합성
Figure pct00100
10 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화 세파로스 6B (실시예 15)를 물 중의 소듐아지드 1 M 용액 50 ㎖에 첨가하였다. 혼합물을 실험실 회전 혼합기 (laboratory rotating mixer) 상에서 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 물로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 18: 아지도 -기의 수를 결정하기 위한 분석.
Figure pct00101
DTT (Handlon, AL and Oppenheimer, NJ, Pharmaceutical Research 1988, 5, 297.)와의 반응에 의하여 아지도 세파로스 6B의 아지도기를 아미노기로 정량적으로 환원시키고 그 결과의 아미노기를 공개된 절차 (Antoni, G et al. Analytical Biochemistry 1983, 129, 60)에 따라 TNBS로 정량하였다. 이 방법은 매트릭스와 과량의 2,4,6-트리니트로벤젠설폰산 (TNBS)의 반응 및 후속하는 글리신과의 반응에 의한 미반응된 TNBS의 정량적 결정에 기초하고 있다.
실시예 19: 분광학적 방법에 의한 유리 1차 아미노기의 결정.
실온 및 pH 9.5에서의 L-글루탐산과 o-프탈알데히드 및 N-아세틸-L-시스테인의 반응 후 생성된 표준 곡선을 사용하여 1차 아미노기의 양을 직접적으로 정량하였다 (Medina Hernandez, MJ et al. Microchemical Journal 1990, 42, 288). N-아세틸-L-시스테인 유도체는 고도로 안정하고 2-머캡토에탄올과는 달리 반응의 시간의 엄격한 제어를 요구하지 않는다. 335 ㎚에서의 UV 흡광도와 아미노-기의 농도 간의 관계는 선형적인 것으로 밝혀졌다.
실시예 20: 분광학적 방법에 의한 유리 2차 아미노기의 결정.
이러한 화합물들의 군과 소듐니트로푸르시드(sodium nitroprusside) 및 아세트알데히드의 반응을 사용하여 2차 아미노기의 양을 직접적으로 정량적으로 추정되었다 (Lin, CML and Wagner, C Analytical Biochemistry 1974, 60, 278).
실시예 21: 에폭시-활성화된 세파로스 6B 상에의 2-[3- 아미노프로필(디메틸) 암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트의 부동화 (분리 재료 1).
Figure pct00102
포스포릴화.
0℃ 내지 -10℃로 유지된, 건조 아세토니트릴 중의 옥시염화인(phosphorus oxychloride) (3.7　g)의 0.2 M 용액에 트리에틸아민 (2.68　g)을 첨가하였다. 트리에틸아민의 첨가 이후, 3-(벤질옥시카르보닐아미노)프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄 브로마이드 (2 * , 5.81　g, 실시예　2)의 대략 0.2 M 용액을 30 분의 시간 범위에 걸쳐 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0℃ 내지 -5℃로 유지시켰다. 첨가의 완료 이후 현탁액을 추가 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 트리에틸아민 염산염 침전을 여과해내고 그 결과의 용액에 교반 하에서 물 (1.8　㎖)을 첨가하는 한편으로 온도를 0 내지 5℃로 유지시켰다. 물-용매 혼합물을 진공 중에서 제거하여 포스포릴화된 생성물을 수득하였고, 이는 후속의 탈보호 및 부동화를 위하여 충분히 순수하였다.
보호기 개열.
물 (50　㎖) 중의 상기 포스포릴화된 생성물의 교반된 용액에 활성탄(activated charcoal) 상의 10% 팔라듐 (10　mol%)을 25℃에서 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 24 시간 동안 25℃에서 H2 (1　atm) 하에서 교반시키고 계속해서 여과하였다. 촉매를 물 (2　x 10　㎖)로 세척하고 투명한 용액을 감압 하에서 농축시켜 여과 후 높은 순도로 2-[3-아미노프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트를 수득하였다.
부동화.
20 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화된 세파로스 6B (실시예　15)를 2-[3-아미노프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트 (40　㎖)의 용액에 첨가하였다. 그 결과의 현탁액의 pH를 1 M 수산화나트륨 용액으로 11.0으로 조정하였다. 혼합물을 실험실 회전 혼합기 상에서 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 가압멸균처리수(autoclaved water)로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 22: 에폭시-활성화 세파로스 6B 상에의 2-[3-(6- 아미노헥사노일아미 노)프로필-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트의 부동화 (분리 재료 2).
Figure pct00103
포스포릴화.
0℃ 내지 -10℃로 유지된, 건조 아세토니트릴 중의 옥시염화인 (3.7　g)의 대략 0.2 M 용액에 트리에틸아민 (2.68　g)을 첨가하였다. 트리에틸아민의 첨가 이후, 3-[6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]프로필-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄브로마이드 (5 * , 7.63　g, 실시예　5)의 대략 0.2 M 용액을 30 분의 시간 범위에 걸쳐 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0℃ 내지 -5℃로 유지시켰다. 첨가의 완료 이후 현탁액을 추가 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 트리에틸아민 염산염 침전을 여과해내고 그 결과의 용액에 교반 하에서 물 (1.8　㎖)을 첨가하는 한편으로 온도를 0 내지 5℃로 유지시켰다. 물-용매 혼합물을 진공 중에서 제거하여 포스포릴화된 생성물을 수득하였고, 이는 후속의 탈보호 및 부동화를 위하여 충분히 순수하였다.
보호기 개열.
물 (50　㎖) 중의 상기 포스포릴화된 생성물의 교반된 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐 (10　mol%)을 25℃에서 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 24 시간 동안 25℃에서 H2 (1　atm) 하에서 교반시키고 계속해서 여과하였다. 촉매를 물 (2　x 10　㎖)로 세척하고 투명한 용액을 감압 하에서 농축시켜 여과 후 높은 순도로 2-[3-아미노프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트를 수득하였다.
부동화.
20 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화된 세파로스 6B (실시예　15)를 2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로필-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트 (40　㎖)의 용액에 첨가하였다. 그 결과의 현탁액의 pH를 1 M 수산화나트륨 용액으로 11.0으로 조정하였다. 혼합물을 실험실 회전 혼합기 상에서 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 가압멸균처리수로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 23: 에폭시-활성화 세파로스 6B 상에의 2-[2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트의 부동화 (분리 재료 3).
Figure pct00104
포스포릴화.
0℃ 내지 -10℃로 유지된, 건조 아세토니트릴 중의 옥시염화인 (3.7　g)의 대략 0.2 M 용액에 트리에틸아민 (2.68　g)을 첨가하였다. 트리에틸아민의 첨가 이후, 2-[2-[6-(벤질옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]에톡시]에틸-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄 메탄설폰산 염 (9 * , 8.36　g, 실시예　9)의 대략 0.2 M 용액을 30 분의 시간 범위에 걸쳐 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0℃ 내지 -5℃로 유지시켰다. 첨가의 완료 이후 현탁액을 추가 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 트리에틸아민 염산염 침전을 여과해내고 그 결과의 용액에 교반 하에서 물 (1.8　㎖)을 첨가하는 한편으로 온도를 0 내지 5℃로 유지시켰다. 물-용매 혼합물을 진공 중에서 제거하여 포스포릴화된 생성물을 수득하였고, 이는 후속의 탈보호 및 부동화를 위하여 충분히 순수하였다.
보호기 개열.
물 (50　㎖) 중의 상기 포스포릴화된 생성물의 교반된 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐 (10　mol%)을 25℃에서 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 24 시간 동안 25℃에서 H2 (1　atm) 하에서 교반시키고 계속해서 여과하였다. 촉매를 물 (2　x 10　㎖)로 세척하고 투명한 용액을 감압 하에서 농축시켜 여과 후 높은 순도로 2-[3-아미노프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트를 수득하였다.
부동화.
20 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화된 세파로스 6B (실시예　15)를 2-[2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트 (40　㎖)의 용액에 첨가하였다. 그 결과의 현탁액의 pH를 1 M 수산화나트륨 용액으로 11.0으로 조정하였다. 혼합물을 실험실 회전 혼합기 상에서 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 가압멸균처리수로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 24: 에폭시-활성화된 세파로스 6B 상에의 2-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트의 부동화 (분리 재료 4).
Figure pct00105
포스포릴화.
0℃ 내지 -10℃로 유지된, 건조 아세토니트릴 중의 옥시염화인 (3.7　g)의 대략 0.2 M 용액에 트리에틸아민 (2.68　g)을 첨가하였다. 트리에틸아민의 첨가 이후, 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸-(2-하이드록시에틸)-디메틸-암모늄 메탄설폰산 염 (6.47　g, 실시예　13)의 대략 0.2 M 용액을 30 분의 시간 범위에 걸쳐 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0℃ 내지 -5℃로 유지시켰다. 첨가의 완료 이후 현탁액을 추가 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 트리에틸아민 염산염 침전을 여과해내고 그 결과의 용액에 교반 하에서 물 (1.8　㎖)을 첨가하는 한편으로 온도를 0 내지 5℃로 유지시켰다. 물-용매 혼합물을 진공 중에서 제거하여 포스포릴화된 생성물을 수득하였고, 이는 후속의 탈보호 및 부동화를 위하여 충분히 순수하였다.
보호기 개열.
용액의 pH가 11.5에 도달될 때까지 물 (50　㎖) 중의 상기 포스포릴화된 생성물의 교반된 용액에 1 M 수산화나트륨을 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 1 시간 동안 25℃에서 교반시키고 계속해서 용액의 pH가 2에 도달될 때까지 6 M 염산을 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 12 시간 동안 25℃에서 교반시키고 계속해서 반응 혼합물의 pH를 7로 조정하였다.
부동화.
20 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화된 세파로스 6B (실시예　15)를 2-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트 (40　㎖)의 용액에 첨가하였다. 그 결과의 현탁액의 pH를 1 M 수산화나트륨 용액으로 11.0으로 조정하였다. 혼합물을 실험실 회전 혼합기 상에서 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 가압멸균처리수로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 25: 에폭시-활성화된 세파로스 6B 상에의 3-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디메틸-암모니오]프로필 하이드로겐 포스페이트의 부동화 (분리 재료 5).
Figure pct00106
포스포릴화.
0℃ 내지 -10℃로 유지된, 건조 아세토니트릴 중의 옥시염화인 (3.7　g)의 대략 0.2 M 용액에 트리에틸아민 (2.68　g)을 첨가하였다. 트리에틸아민의 첨가 이후, 2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에톡시]에틸-(3-하이드록시프로필)-디메틸-암모늄 메탄설폰산 염 (14 * , 6.7　g, 실시예　14)의 대략 0.2 M 용액을 30 분의 시간 범위에 걸쳐 적가하는 한편으로 반응 혼합물의 온도를 0℃ 내지 -5℃로 유지시켰다. 첨가의 완료 이후 현탁액을 추가 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 반응의 진행을 LC/MS 및 TLC로 모니터링 하였다. 트리에틸아민 염산염 침전을 여과해내고 그 결과의 용액에 교반 하에서 물 (1.8　㎖)을 첨가하는 한편으로 온도를 0 내지 5℃로 유지시켰다. 물-용매 혼합물을 진공 중에서 제거하여 포스포릴화된 생성물을 수득하였고, 이는 후속의 탈보호 및 부동화를 위하여 충분히 순수하였다.
보호기 개열.
용액의 pH가 11.5에 도달될 때까지 물 (50　㎖) 중의 상기 포스포릴화된 생성물의 교반된 용액에 1 M 수산화나트륨을 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 1 시간 동안 25℃에서 교반시키고 계속해서 용액의 pH가 2에 도달될 때까지 6 M 염산을 첨가하였다. 그 결과의 혼합물을 12 시간 동안 25℃에서 교반시키고 계속해서 반응 혼합물의 pH를 7로 조정하였다.
부동화.
20 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화된 세파로스 6B (실시예　15)를 3-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디메틸-암모니오]프로필 하이드로겐 포스페이트 (40　㎖)의 용액에 첨가하였다. 그 결과의 현탁액의 pH를 1 M 수산화나트륨 용액으로 11.0으로 조정하였다. 혼합물을 실험실 회전 혼합기 상에서 24 시간 동안 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 가압멸균처리수로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 26: 비교예
에폭시-활성화된 세파로스 6B 상에의 (4-아미노페닐) 2-(트리메틸암모니오)에틸 포스페이트의 부동화 (분리 재료 6).
Figure pct00107
부동화.
20 g의 흡기-건조된 에폭시-활성화된 세파로스 6B를 (4-아미노페닐) 2-(트리메틸암모니오)에틸 포스페이트의 용액 (40　㎖의 물 중의 4.41　g) 내로 첨가하였다. 그 결과의 현탁액의 pH를 1 M 수산화나트륨 용액으로 11.5로 조정하였다. 그 혼합물을 실험실 회전 혼합기 상에서 24 시간 실온에서 배양시켰다. 겔을 4　x　100　㎖의 가압멸균처리수로 세척하고 후속하여 사용할 때까지 20% (v/v) 에탄올 중에 보관하였다.
실시예 27: 결합 친화성의 결정
결합 및 세척 완충제: 100　mM Tris, pH 8,0, 200　mM 염화나트륨, 2　mM 염화칼슘.
용리 완충제: 100　mM Tris, pH 8,0, 200　mM 염화나트륨, 2　mM EDTA.
모든 크로마토그래피 작업은 실온에서 수행하였다.
0.5 g의 각 분리 재료를 소 컬럼(small column) 내에 충진시키고 12 수지 베드 용적(resin bed volumes) (6　㎖)의 결합 완충제로 평형화시켰다. 40　내지　50　㎖의 인간 혈청 또는 혈장 (CRP > 0.1　mg/㎖)을 1.2　㎖/분의 속도로 각 컬럼 상으로 공급하였다. OD280 판독이 제로 기저선(zero baseline)에 접근할 때까지 미결합 물질을 60 수지 베드 용적의 결합 완충제 (30　㎖)로 세척해내었다. 친화성 수지 결합 단백질이 용리 완충제로 1,2　㎖/분의 속도로 용리되고 3.6　㎖ 분획이 수집되었다. SDS-PAGE에 의해 분석될 때까지 수집된 분획을 4℃에 저장하였다. 인간 C-반응성 단백질 (CRP)의 정량적 결정이 ELISA에 의해 수행되었다.
결과들을 표 1에 요약하였다.
Figure pct00108

Claims (12)

  1. 일반식 (I)의 화합물
    Figure pct00109

    여기에서
    b는 2 및 3으로부터 선택되고;
    R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
    Figure pct00110

    로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
    여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
    X는 -SH, -NHR3, -C≡CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고;
    R3은 -H, -CH3, -C2H5 및 -C3H7로부터 선택되고;
    -L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
    여기에서
    -La-는 -(CH2)m-, -(CH2-CH2-O)m-CH2-,
    Figure pct00111

    로부터 선택되고;
    -Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
    -Ld-는 -(CH2)n-, -(CH2-CH2-O)n-CH2-,
    Figure pct00112

    로부터 선택되고;
    -Le-는 -(CH2)p1-, -(CH2)p1-O-(CH2)p2-,
    Figure pct00113

    로부터 선택되고;
    m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택됨;
    및 상기 언급된 화합물의 거울상 이성질체, 거울상 이성질체들의 혼합물, 호변 이성질체, 수화물, 용매화물, 라세미체, 양성자화 및 탈양성자화 형태.
  2. 제 1 항에 있어서, 여기에서 b는 2 및 3으로부터 선택되고;
    R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3 및 -C2H5로부터 선택되거나 R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
    Figure pct00114

    로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
    여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
    X는 -SH, -NHR3, -C≡CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고;
    R3는 -H, -CH3, -C2H5 및 -C3H7로부터 선택되고;
    -L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
    여기에서
    -La-는 -(CH2)m- 및 -(CH2-CH2-O)m-CH2-를 나타내고;
    -Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
    -Ld-는 -(CH2)n- 및 -(CH2-CH2-O)n-CH2-를 나타내고;
    -Le-는 -(CH2)p1- 및 -(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
    m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되는 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서, 여기에서 b는 2 및 3으로부터 선택되고;
    R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11, -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
    Figure pct00115

    로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
    여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
    X는 -SH, -NHR3, -C≡CH, -CH=CH2, -N3 및 -CHO로부터 선택되고;
    R3는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7로부터 선택되고;
    -L-은 -(CH2)m-, -(CH2)m-O-C(O)-NH--(CH2)p1-, -(CH2)m-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)p1-, -(CH2)m-NH-C(O)-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-O-(CH2)p1-, -(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2- 및 -(CH2)m-O-C(O)-NH-(CH2)n-C(O)-NH-(CH2)p1-O-(CH2)p2-로부터 선택되고;
    m, n, p1 및 p2는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되는 화합물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    2-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디에틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[4-[2-(2-아미노에톡시)에틸]몰포리-4-니움-4-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[1-[2-(2-아미노에톡시)에틸]피페리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-(2-아미노에톡시)에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[3-아미노프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[디메틸(4-술파닐부틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[4-아지도부틸(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[디메틸(펜-4-티닐)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로필-디에틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[1-[2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에톡시]에틸]피페리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[4-[2-[2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로파노일아미노]에톡시]에틸] 몰포리-4-니움-4-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[1-[2-[2-[6-(6-아미노헥사노일아미노)헥사노일아미노]에톡시]에틸] 피롤리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-알릴옥시에틸(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-알릴옥시에틸(디에틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[4-(2-알릴옥시에틸)몰포리-4-니움-4-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[1-(2-알릴옥시에틸)피페리디-1-니움-1-일]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-[2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로파노일아미노]에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[3-아지도프로필(디메틸)암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[디메틸-[2-[2-(프로-2-핀옥시카르보닐아미노)에톡시]에틸]암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-[2-(알릴옥시카르보닐아미노)에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-[2-[6-(알릴옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]에톡시]에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[2-(6-아미노헥사노일아미노)에틸-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[디메틸-[3-[6-(프로-2-핀옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노]프로필] 암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트;
    2-[3-(6-아미노헥사노일아미노)프로필-디메틸-암모니오]에틸 하이드로겐 포스페이트
    로부터 선택되는 화합물.
  5. 일반식 (II)의 분리 재료:
    Figure pct00116

    여기에서
    b는 2 및 3으로부터 선택되고;
    R1 및 R2는 서로 독립적으로 -CH3, -C2H5, -C3H7, -C4H9, -C5H11 및 -C6H13로부터 선택되거나, R1 및 R2는 이들이 그에 연결되는 질소 원자와 함께
    Figure pct00117

    로부터 선택되는 헤테로고리를 형성할 수 있고,
    여기에서 하나 이상의 수소 원자(들)가 불소 원자(들)로 치환될 수 있고;
    Y는 -CH(OH)-CH2-N(R4)-, -CH(OH)-CH2-S-, -CH2-NH-, -NH-CH2-, -CH2-CH2-S-, -S-CH2-CH2-,
    Figure pct00118

    로부터 선택되고;
    R4는 -H, -CH3, -C2H5, -C3H7 및 -C(O)-CH3로부터 선택되고;
    -L-은 -La-, -La-Le-, -La-Lb-Le- 및 -La-Lb-Ld-Lc-Le-로부터 선택되고,
    여기에서
    -La-는 -(CH2)m-, -(CH2-CH2-O)m-CH2-,
    Figure pct00119

    로부터 선택되고;
    -Lb- 및 -Lc-는 서로 독립적으로 -O-, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 및 -SO2-로부터 선택되고;
    -Ld-는 -(CH2)n-, -(CH2-CH2-O)n-CH2-,
    Figure pct00120

    로부터 선택되고;
    -Le-는 -(CH2)p1-, -(CH2)p1-O-(CH2)p2-,
    Figure pct00121

    로부터 선택되고;
    -L*-는 -L*a-, -L*a-L*e- 및 -L*a-L*b-L*e-로부터 선택되고,
    여기에서
    -L*a-는 -(CH2)o-, -(CH2-CH2-O)o-C2H4-, -(CH2-CH2-O)o-CH2- 및 -CH2-CH(OH)-CH2-로부터 선택되고;
    -L*e-는 -(CH2)q-, -C2H4-(O-CH2-CH2)q- 및 -CH2-(O-CH2-CH2)q-로부터 선택되고;
    -L*b-는 -O-(CH2)r-O-, -S-(CH2)r-S-, -SO2-, -S-, -O-, -NH-C(O), -C(O)-NH- 및 -S-S-로부터 선택되고;
    m, n, p1, p2, o, r, q는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되고;
    A는 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 폴리아크릴레이트, 폴리(메틸 메타크릴레이트) (PMMA), 폴리(글리시딜 메타크릴레이트) (PGMA), 폴리(하이드록시 메타크릴레이트), 폴리스티렌 (PS), 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), 폴리아크릴아미드, 폴리아크롤레인, 아크릴로니트릴 부타디엔 스티렌 (ABS), 폴리아크릴로니트릴 (PAN), 폴리우레탄 (PU), 유페르지트®, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 하이퍼플루오로카본, 아가로스, 알긴산염, 카라기난, 키틴, 녹말, 셀룰로오스, 니트로셀룰로오스, 세파로스®, 유리, 실리카, 규조토(kieselguhr), 지르코니아, 알루미나, 산화철 및 상기 고체 지지체의 혼합물 및/또는 유도체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 고체 지지체임;
    및 이러한 분리 재료의 양성자화되고 탈양성자화된 형태.
  6. 제 5 항에 있어서, 여기에서 고체 지지체 A가 폴리설폰 (PS), 폴리에테르설폰 (PES), 폴리아릴에테르설폰 (PAES), 이들의 혼합물 및/또는 유도체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 분리 재료.
  7. 제 5 항 또는 제 6 항에 따른 분리 재료를 포함하는 컬럼.
  8. 제 7 항에 따른 컬럼을 포함하는 장치.
  9. 면역 기능장애 및 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료를 위하여 생물학적 유체로부터 CRP의 체외 제거를 위하여 사용되는 제 1 항 내지 제 4 항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 제 5 항 및 제 6 항 중의 어느 한 항에 따른 분리 재료.
  10. 제 9 항에 있어서, 여기에서 생물학적 유체가 혈액, 혈장, 복막액 및 림프액으로부터 선택되는 화합물 또는 분리 재료.
  11. 제 9 항에 있어서, 여기에서 심혈관 질환이 경색, 뇌졸증, 당뇨병, 말기 신장병, 신부전, 고혈압으로 인한 신부전, 내피 병소, 내피 파손, 동맥경화증, 혈전증, 죽상동맥경화증, 협착증, 재협착증, 아테롬성 동맥경화성 또는 혈전성 질환, 혈류 부전, 허혈성 사고, 폐색전증, 안정 및 불안정 협심증, 관상동맥 질환, 심근경색과 마찬가지로 아테롬성 동맥경화성 또는 혈전성 질환의 병리학적 결과를 포함하는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 분리 재료.
  12. 제 9 항에 있어서, 여기에서 면역 기능장애가 면역 질환, 자가면역 질환, 이식에서의 거부 반응, 동종-이식거부, 이종-이식거부, 이식물-대-숙주 거부, 숙주-대-이식물 거부, 진성 당뇨병, 류마티스, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상성 건선, 그레이브즈병, 굿페스쳐 증후군, 특발저혈소판자색반병(ITP), 재생불량성 빈혈, 염증성 장질환(IBD), 크론씨병(또한 크론 증후군으로도 알려짐), 궤양성 대장염, 확장성 심근병증(DCM), 자가면역 갑상선염, 하시모토 갑상선염, 호르몬 대체요법(HRT), 퇴행성 관절염 및 통풍을 포함하는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 분리 재료.
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