KR20160137950A - 당살초 추출물의 미용 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 ATP의 합성을 증가시키고, 시토크롬 C 옥시다아제의 활성을 자극하며, 리보오스-5-인산 합성을 유도하고, 및 따라서 피부와 관련된 대사 및 에너지 과정을 조절하기 위한 당살초 추출물의 미용 용도 및 상기 추출물을 포함하는 화장품 조성물에 관한 것이다.

Description

당살초 추출물의 미용 용도 {COSMETIC USE OF AN EXTRACT OF GYMNEMA SYLVESTRE}
본 발명은 미용 피부 치료 분야에 관한 것이다.
피부는 사람의 신체에서 특별한 기관이다. 이것은 신체의 전체 표면을 덮고 있음에 따라 얇고 매우 광범위하며; 성인에게서, 대략 1.6㎡의 총 표면적을 갖는다. 이의 기능은, 이물질의 물리적 진입의 관점에서, 외부환경으로부터 심부 조직 (deep tissue)을 보호하고, 및 면역, 온도 조절, 체액 유출, 등의 기능을 갖는다. 궁극적으로, 피부에 연속적으로 적용되는 기계적 응력은 피부가 큰 적응력 (flexibility)과 연관된 강하고 결합력 있는 구조를 요구한다는 것을 의미한다. 피부의 의해 지속되는 환경적인 공격 때문에, 이의 구성 세포 (constituent cells)의 대사를 자극하여 이의 재생 및 회복을 유지하는 것은 중요하다.
피부 세포에서 대사 및 에너지 과정의 조절에 대한 이의 연구의 범주 내에서, 본 출원인은 피부 세포의 대사에 대한 당살초 추출물 (Gymnema sylvestre extract)의 이로운 효과를 밝혀냈고; 좀 더 구체적으로, 이러한 추출물이 미토콘드리아를 자극할 수 있고, 세포의 에너지 수준을 증가시킬 수 있으며, 따라서 피부 노화의 징후, 및 또한 추위, 바람, UV 방사, 방사선, 또는 독소 또는 오염원에 노출과 같은, 외부 공격에 의해 유발된 손상을 예방 또는 방지하는 것이 가능하다는 것을 입증하였다.
이들 연구는 특히 - 배양 조직 (culture)에서 사람 각질세포 (human keratinocytes) 내의 ATP 합성에 대한 당살초 추출물의 효과를 입증하였다.
세포에서 에너지는 식사로부터 필수적으로 얻어진 기초 분자(탄수화물, 단백질, 지방)로부터 생산된다. 미토콘드리아에서 이들 화합물의 산화는 고-에너지 화합물인, 아데노신 트리포스페이트 (ATP)의 형태로 에너지의 방출을 일으킨다.
세포가 에너지가 필요한 경우, ATP의 말단 포스페이트기 (phosphate group)는 가수분해되어 결합으로부터 에너지 및 아데노신 디포스페이트 (ADP)를 방출한다. 세포의 요구조건에 따르면, ATP는 연속적으로 가수분해되고, 그 다음 재생된다. 그러나, 피부 세포에 의해 지속되는 노화 및 다양한 산화 스트레스로, 미토콘드리아 완전한 상태 및 기능은 손상되고: ATP 네오합성 (neosynthesis)은 감소된다.
따라서, ATP 네오합성을 자극하여 피부 세포의 대사를 북돋우고, 세포내 ATP 함량을 증가시킬 수 있는 작용제 (agents)를 확인하는 것은 중요할 것이다.
이하 실험적인 부분에서 나타난 결과는 당살초 추출물이 ATP 합성에서 상당한 증가를 유도한다는 것을 입증한다.
- 산화 스트레스에 적용되거나 또는 적용되지 않은 배양 조직 내의 사람 각질세포에서, 호흡 사슬 (respiratory chain)의 시토크롬 C 옥시다아제 (cytochrome C oxidase), 복합체 IV의 활성:
시토크롬 C 옥시다아제는 다양한 피부 및 머리 세포 타입에서 발견되고; 이것은 미토콘드리아 호흡 사슬 또는 산화환원 사슬 (redox chain)에서 에너지 대사에 포함되는 것으로 알려져 있고, 이것은 세포의 에너지 수준, 대사 및 항상성 (homeostasis)을 조절한다. 이 효소는 적색 광 (red light)에 의해 활성화된 광수용체 (photoacceptor)이고: 광자 (photons)가 산화환원 사슬에 의해 흡수된 경우, 이들은, 광활성화된 세포의 전기화학적 전위의 변화 및 Ca2 + 및 cAMP에 의해 매개된 세포내 신호의 변환을 통하여, 세포에서 일련의 사건 (DNA 및 RNA 합성, 증식성 세포 활성) 및 ATP의 형태로 에너지 생산을 유도하여 호흡계로 이의 에너지를 전달한다.
상기 효소는, 하기 반응식 1에 따라, 세포에 대해 유해한 중간 자유 라디칼 (intermediate free radicals)을 형성하지 않고 물 분자로 산소 분자의 전환을 위해 산소 분자에 전자의 전달을 촉진할 수 있다:
[반응식 1]
Figure pct00001
사이토 C (CytoC) 옥시다아제에 의해 산소로부터 ATP 및 물 분자의 생산을 유도하는 반응의 다이어그램 (Diagram)
이의 기질 중 하나인, 시토크롬 C는 호흡 사슬의 필수 성분이다. 시토크롬 C는 미토콘드리아 기능 및 세포 생존에서 필수적 역할을 수행한다. 시토크롬 C의 주요 역할은 철 원자의 원자가의 변화에 의하여, 전자의 전달을 보장하는 것이다. 용해성인 시토크롬 C은, 따라서, 복합체 Ⅲ에서 복합체 Ⅳ (시토크롬 옥시다아제)로 전자를 운반한다. 시토크롬 옥시다아제의 기질인, 전자는 그 다음 효소에 의해 산소에 전달된다.
다수의 데이터는, 지질 과산화 반응 (lipid peroxidation reactions)의 유도에 의한, 자유 라디칼이, 노화 조직의 미토콘드리아에서, 시토크롬 옥시다아제와 같은 몇몇 수송체의 활성의 하락 및 막 유동성 (membrane fluidity)에서 상당한 비율의 감소에 책임이 있다는 주장을 현 시점에서 가능하게 한다; 따라서, 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 증가시킬 수 있는 화합물의 확인은 유용할 것이다.
당살초 추출물이 사람 각질세포의 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 자극하고; 부가적으로, 당살초 추출물의 효과는 과산화수소로 미리 처리된 사람 각질 세포에 대해 시험되었고, 이는 시토크롬 C 옥시다아제 활성에서 상당한 감소를 유도하는 효과가 있다는 것이 입증되었고; 그 다음 당살초 추출물이 시토크롬 C 옥시다아제를 상당하게 복구시킨다는 것이 입증되었다.
결론적으로, 당살초 추출물은 배양 조직에서 사람 각질 세포 내의 대사 및 에너지 과정의 조절에 상당한 효과를 갖는다.
- 리보오스-5-인산 분석에 의해 배양 조직에서 사람 섬유아세포 (fibroblast)내의 펜토오스 경로 (pentose pathway):
본 출원인의 시험은 또한 당살초 추출물이 리보오스-5-인산 합성에서 상당한 증가를 유도하여 배양 조직에서 섬유아세포 및 사람 각질 세포 내의 대사 및 에너지 과정의 조절에 대한 효과를 갖는 것으로 입증하였다.
ATP 생산에 포함된 당분해 (glycolysis)와 병행하여, 펜토오스 포스페이트 경로는 NAPDH, 세포 호흡을 특별히 촉진하는 전자 도너 (Krebs 사이클, 호흡 사슬), 및 리보오스-5-인산 (DNA, RNA, 생합성)을 생산하는 대사 경로이다.
이의 특성들에 기인하여, 당살초 추출물은 따라서 피부 세포의 에너지 대사를 증가시키기 위한 유용한 작용제인 것으로 나타난다.
당살초는 중앙 및 남인도 및 스리랑카의 열대 숲의 야생식물이고; 상기 식물은 다양한 난치병 치료, 특히 당뇨병 치료하기 위한 의료용 제제로 전통적으로 사용된다.
특히 이 화합물의 천연 색상에 기인하거나 또는 이의 머리카락 성장 억제 특성 때문에, 피부에 적용되도록 의도된 조성물에서 당살초의 추출물의 사용은 알려져 있다 (WO 2005/067953).
그러나, 본 출원인의 지식으로, 지금까지, 당살초 추출물이 상기에서 명시된 특성을 가질 수 있고, 피부 세포에 에너지를 공급하는 대사 경로의 활성제로서 유용하다는 것이 제안된바는 없다.
본 발명은 따라서 당살초 추출물의 미용 용도, 또는 피부 세포의 에너지-생산 대사 경로 (energy-producing metabolic pathways)를 활성화하기 위해; ATP 합성을 증가시키기 위해; 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 자극하기 위해; 리보오스-5-인산 합성을 유도하기 위해; 및 피부에 대사 및 에너지 과정을 조절하기 위해, 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물에 관한 것이다.
당살초 추출물은 바람직하게는 식물의 지상부 (aerial part), 좀 더 바람직하게는, 잎으로부터 얻어지고, 기술분야의 당업자에게 알려진 어떤 추출 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
도 1은 0.125% 또는 0.25% 당살초 잎 추출물로 처리되거나 또는 미처리 대조구 세포 배양 조직에서 ATP 함량을 나타내는 그래프이다.
도 2a는 0.125% 또는 0.25% 당살초 잎 추출물로 처리되거나 또는 미처리 대조구 세포 배양 조직에서 H2O2 없이 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 2b는 0.125% 또는 0.25% 당살초 잎 추출물로 처리되거나 또는 미처리 대조구 세포 배양 조직에서 H2O2와 함께 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 3은 0.125% 또는 0.25% 당살초 잎 추출물로 처리되거나 또는 미처리 대조구 세포 배양 조직에서 리보오스-5-인산 함량을 나타내는 그래프이다.
하나의 특정 구체 예에 따르면, 추출은 다음의 처리에 의해 당살초의 지상부의 분획을 사용하여 수행된다:
- 그라인딩 후 건조;
- 하이드로알코올 상 (hydroalcoholic phase), 예를 들어, 에탄올과 같은 C1 내지 C4의 저급 알코올 및 물의 혼합물에서 고체/액체 추출;
- 거친 여과 (coarse filtration);
- 활성탄 상에서 대한 탈색;
- 1　㎛ 차단 한계치 (cut-off threshold)를 갖는 플레이트 여과;
- 농축.
이의 나중 사용을 용이하게 하기 위해, 상기 추출물은 그 다음 글리세린과 같은, 미용적으로 허용 가능한 기질 상에 용해될 수 있다.
맑은 호박색의 액체 추출물은 얻어진다.
유리하게, 당살초 추출물은 하이드로알코올 추출물이거나 및/또는 글리세린으로 안정화된다.
이의 미용 용도를 위해, 당살초 추출물은, 조성물의 총 중량에 대하여, 건조 물질의 중량으로 0.01 내지 10%, 바람직하게는 0.01 내지 5%의 당살초 추출물을 포함하도록 화장품 조성물에서 조제된다.
이 조성물은 화장품 및 피부과학적 분야에서 일반적으로 사용된 투여 형태 중 어떤 하나로 제공될 수 있고, 및 이것은 특히 선택적으로 겔화 수성 용액, 선택적으로 이-상 (bi-phase) 로션 타입 분산액, 수성 상에서 오일 상 (O/W)을 분산시켜 얻어진 유화액 또는 역 (W/O), 또는 이온 및/또는 비-이온 타입의 비히클 분산액 또는 삼중 유화액 (W/O/W 또는 O/W/O)의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 일반적인 방법을 사용하여 제조된다.
이 조성물은 거의 유체일 수 있고, 백색 또는 착색된 크림, 연고, 밀크, 로션, 유장 (serum), 페이스트 또는 폼의 외관을 갖는다. 이것은 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수 있다. 이것은 또한 고체 형태, 특히 스틱 형태로 제공될 수 있다. 이것은 피부 관리 제품 및/또는 메이크업 제품으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 친수성 또한 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 작용제, 방부제, 항산화제, 용매, 방향제, 벌크제 (bulking agents), 필터, 안료, 냄새 흡수제 및 염료와 같은, 미용 분야에서 일반적인 보조제를 함유할 수 있다. 이들 다른 보조제의 양은 관심의 분야에 전통적으로 사용되는 양으로, 예를 들어, 조성물의 총 중량의 0.01 내지 20 중량%이다. 이들 보조제는, 이의 본성에 따라, 오일 상, 수성 상, 지질 소포 (lipid vesicles) 및/또는 나노입자로 도입될 수 있다. 어떤 경우에서, 이들 보조제는, 이의 비율에 따라, 본 발명에 따른 당살초 추출물의 얻으려는 특성을 방해하지 않도록 선택될 것이다.
본 발명에 따른 조성물의 의도된 사용에 따르면, 당살초 추출물은 항-노화제, 특히 주름-방지, 색소제거, 탄력, 드레이닝 (draining), 조임, 항-라디칼 및/또는 면역보호제 및/또는 세포 대사 (특히 단백질 합성)및/또는 세포 증식을 자극하는 작용제에 관련될 수 있다.
본 출원인은, 당살초 추출물, 및 이를 함유하는 본 발명에 따른 화장품 조성물이, 특히 세포 에너지를 공급하여, 피부 세포의 대사 경로를 활성화하는데 사용될 수 있음을 입증하였다. 용어 피부 세포는 각질세포 (keratinocytes), 섬유아세포 및 멜라닌세포 (melanocyte)를 의미하고; 바람직하게는, 이것은 각질세포 및 섬유아세포로 이루어진다.
그 결과, 당살초 추출물의 용도는 피부 세포를 조색하고 (toning) 및/또는 피부 세포 대사를 자극하는 작용제이고; 본 발명에 따른 이러한 추출물 및/또는 화장품 조성물은 따라서 피부 세포를 조색하고 및/또는 피부 세포 대사를 자극하기 위한 작용제로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 당살초 추출물 및/또는 화장품 조성물은 피부 세포의 최적 기능을 가능하게 하고, 이의 항상성, 재생 및 회복을 보장하기 위해 또한 사용될 수 있다.
이로써, 본 발명에 따른 당살초 추출물 및/또는 조성물은 얼굴 피부의 색상 및/또는 광채를 향상시켜, 피부, 특히 스트레스를 받고 지친 피부에 활력을 주거나, 피부를 조색하거나, 재활성화하거나 또는 해독시키는데 유리하게 사용되며; 이들은 또한 윤기 없고 및/또는 회색 얼굴과 같은 안면의 피곤한 기색을 방지하고 및/또는 회복하는데 사용되고; 이들은 또한, 추위, 바람, 공해와 같이, 계절-관련 요소와 같은, 공격적인 환경 요인으로부터 피부 세포 및 피부를 보호하는데 사용된다.
본 발명에 따른 당살초 추출물 및/또는 조성물은 또한 얼굴 피부의 색상 및/또는 광채를 향상시키는데 유용하고; 이로써, 윤기 없고 및/또는 광택이 없는 피부의 외모를 방지한다.
본 발명에 따른 당살초 추출물 및/또는 조성물은 눈의 윤곽을 조색하고, 지친 눈에 활력을 주며, 눈 밑에 처진 살 및 그늘을 감소시키고, 및 긴장이 풀리고 휴식을 취한 표정을 일반적으로 회복시키는데 더욱 유용하다.
본 발명에 따른 당살초 추출물 및/또는 조성물은 활력을 불어넣고 또는 피곤을 방지하는 처치에 사용될 수 있다.
상기에서 적용은 바람직하게는 얼굴 피부, 즉, 얼굴, 목, 데콜테 (decollete) 및/또는 눈 윤곽에 대한 피부와 관련되지만, 또한 신체의 피부에 대한 미관상 처치에 대해서도 적합하다.
본 발명은 또한 피부 세포에 에너지를 공급하는 대사 경로를 활성화하기 위해; 피부에 활력을 주거나, 피부를 조색하거나, 재활성화하거나 또는 해독시키고, 및 눈의 윤곽을 조색하고, 지친 눈에 활력을 주며, 눈 밑에 처진 살 및 그늘을 감소시키고, 및 긴장이 풀리고 휴식을 취한 표정을 일반적으로 회복시키기 위해; 전술된 바와 같이 당살초 추출물 또는 당살초 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 피부의 적용을 포함하는 미용 처치 방법에 관한 것이다.
피부에 적용은 따라서 사용된 투여 형태에 따라 수행될 수 있다. 예를 들어, 단순히 피부에 적용 또는 본 발명에 따른 조성물로 피부의 마사지가 수반된 적용으로 이루어질 수 있다.
적용은 처치될 피부의 전체 표면이 처치되도록 조성물의 충분한 양으로 바람직하게 수행된다. 이것은, 예를 들어, 피부 상에 크림과 같은 종래의 적용으로 이루어질 수 있다. 이것은 또한, 예를 들어, 처치 마스크로 작용하기 위한 적용으로 이루어질 수 있다.
이하 실시 예는, 한편으로, 당살초 추출물, 및 다른 한편으로는, 본 발명에 따른 조성물의 생물학적 효과의 평가와 관련된다.
실시 예들은, 첨부된 도면을 참조하여 만들어지며, 여기서, 도 1, 도 2a, 도 2b 및 도 3에서 히토그램은, 각각, 0.125% 또는 0.25% 당살초 잎 추출물로 처리되거나 또는 미처리 대조구 세포 배양 조직에서 ATP 함량, H2O2 없는 시토크롬 C 옥시다아제 활성, H2O2와 함께 시토크롬 C 옥시다아제 활성, 및 리보오스-5-인산 함량을 나타낸다.
이하 실시 예의 설정에서, 시험 제품은 전술된 하이드로알코올 추출 방법을 사용하여 얻어지고, 그 다음 글리세린에서 안정화된 당살초 잎 추출물이다 (70%/30% 글리세린/물 혼합물에서 1.5% 건조 추출물).
실시 예 1 - 배양 조직에서 사람 각질세포 내의 ATP 합성에 대한 본 발명에 따른 추출물의 영향의 연구
물질 및 방법
Lot 조성물:
Lot 1: 미처리 대조구
Lot 2: 배양 배지에서 0.125%로 희석된 당살초 추출물로 처리
Lot 3: 배양 배지에서 0.25%로 희석된 당살초 추출물로 처리
세포 배양:
각질세포 배양조직은 포경수술에서 수집된 사람의 포피 (foreskins)로부터 피부를 사용하여 수립되고, 인슐린, EGF 및 뇌하수체 (pituitary) 추출물로 보충된 KGM2 배지 (각질세포 성장 배지, KGN2, clonetics)에서 증식시켰다. 시험은 3rd 계대 (passage)로 각질 세포에 대해 수행된다. 세포는 1x105 세포의 정도로 다중-웰 디쉬 (multi-well dishes)에 접종된다. 37℃ (5% CO2)에서 24시간 배양 후에, 지수생장기 (exponential growth phase)에서 세포는 0.125% 및 0.25%의 농도의 당살초 추출물로 처리된다. 처리 24시간 후에, 상기 세포는 샘플화되고, ATP 분석은 수행된다.
ATP 분석 (assay):
ATP 분석은 PROMOKINE 분석 키트 (Promocell, France)를 사용하여 수행된다. 비색분석법 (colorimetric assay)은 570nm에서 분광광도계를 사용하여 수행된다.
결과
ATP (nmol/106 cells)
%
평균 표준 편차
음성 대조구 2.55 0.18 /
당살초 0.125% 3.04 0.14 +19
당살초 0.25% 3.11 0.21 +22
얻어진 결과는 0.125% 및 0.25% 농도에서 당살초 추출물이 각각 19% 및 22% 만큼 ATP 합성에서 상당한 증가를 유도한다는 것을 입증한다.
실시 예 2 - 산화 스트레스에 적용되거나 또는 그렇지 않은 배양 조직 내의 사람 각질세포에서, 호흡 사슬의 시토크롬 C 옥시다아제, 복합체 Ⅳ의 활성에 대한 본 발명에 따른 추출물의 효과의 연구
물질 및 방법
Lot 조성물:
Lot 1: 미처리 대조구
Lot 2: 배양 배지에서 0.125%로 희석된 당살초 추출물로 처리
Lot 3: 배양 배지에서 0.25%로 희석된 당살초 추출물로 처리
Lot 4: H2O2로 처리
Lot 5: 배양 배지 + H2O2에서 0.125%로 희석된 당살초 추출물로 처리
Lot 6: 배양 배지 + H2O2에서 0.25%로 희석된 당살초 추출물로 처리
세포 배양
각질세포 배양 조직은 포경수술에서 수집된 사람의 포피로부터 피부를 사용하여 수립되고, 인슐린, EGF 및 뇌하수체 (pituitary) 추출물로 보충된 KGM2 배지 (각질세포 성장 배지, KGN2, clonetics)에서 증식된다. 시험은 3rd 계대로 각질 세포에 대해 수행된다. 세포는 1x106 세포의 정도로 다중-웰 디쉬에 접종된다. 37℃ (5% CO2)에서 24시간 배양 후에, 지수생장기에서 세포는 당살초 추출물로 0.125% 및 0.25%의 농도에서 단독 또는 H2O2의 존재하에서 처리된다.
시토크롬 C 옥시다아제 활성의 평가
처리 24시간 후에, 세포는 샘플화되고, 그 다음 세척되고, 차가운 PBS에서 재현탁된다. 시토크롬 C 옥시다아제 활성의 평가는 그 다음 특정된 프로토콜에 따라 분석 키트 (시토크롬 C 산화제 분석 키트 - 시그마)를 사용하여 수행된다.
결과
ATP (nmol/107 cells)
%
평균 표준 편차
음성 대조구 1.32 0.21 /
당살초 0.125% 1.55 0.07 +17
당살초 0.25% 1.63 0.05 +23
양성 대조구 (H2O2) 0.87 0.05 -34
당살초 0.125% + H2O2 0.98 0.07 +13
당살초 0.25% + H2O2 1.01 0.06 +16
얻어진 결과는 0.125% 및 0.25% 농도의 당살초 추출물이, 음성 대조구와 비교하여, 각각, 17% 및 23% 만큼 배양 조직에서 사람 각질세포의 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 자극하는 것으로 나타난다.
과산화수소 (H2O2) 단독으로 세포의 처리는 시토크롬 C 옥시다아제 활성 (-34%)에서 상당한 감소를 유도한다. H2O2의 존재하에서, 0.125% 및 0.25% 농도의 당살초 추출물은 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 회복시킨다 (+13% 및 +16%).
결론적으로, 당살초 추출물은 배양 조직 내의 사람 각질세포에서 대사 및 에너지 과정의 조절에 대해 상당한 효과를 갖는다.
실시 예 3 - 리보오스-5-인산 분석을 사용하여 배양 조직 내의 사람 각질세포에서 펜토오스 경로에 대한 본 발명에 따른 추출물의 효과의 연구
물질 및 방법
Lot 조성물:
Lot 1: 미처리 대조구
Lot 2: 배양 배지에서 0.125%로 희석된 당살초 추출물로 처리
Lot 3: 배양 배지에서 0.25%로 희석된 당살초 추출물로 처리
세포 배양
사용된 방법은 사람피부 생체검사 (human skin biopsy)로부터 주요 섬유아세포 배양 조직을 얻기 위해 적합한 효소 소화의 방법 (enzymatic digestion)이다. 얻어진 세포는 소 유장, L-글루타민 및 항생제로 보충된 RPMI 1640 배지에서 증식된다. 시험은 3rd 계대로 각질세포에 대해 수행된다. 세포는 1x105 세포 정도로 다중-웰 디쉬에 접종된다. 37℃ (5% CO2)에서 24시간 배양 후에, 지수생장기에서 세포는 0.125% 및 0.25%의 농도의 당살초 추출물로 처리된다.
리보오스-5-포스페이트 분석
처리 24시간 이후에, 세포는 샘플화되고, 세포 침전물은 얼음 욕조에서 30초 동안 초음파처리되며, 10℃에서 11,000g으로 5분 동안 원심분리된다. 상층액은 그 다음 새로운 튜브로 이동된다. 잔여 효소 활성은 샘플에 3　㎛ol/ℓ의 IS를 함유하는 50　㎕의 과염소산 (2.5%)을 첨가시켜 정지시키고, 상기 샘플은 나중에 단백질 제거 (deproteinization)를 위해 적어도 30분 동안 -20℃에서 저장된다. 뒤이어, 15　㎕의 포스페이트 버퍼 (pH 11.5; 1　mol/ℓ)는 상기 용액을 중화시키기 위해 첨가되고, 상기 샘플은 4℃에서 21,000　g으로 5분 동안 원심분리시킨다. 상층액은 유리 바이알로 이동되고, 상기 바이알은 주입까지 -20℃에서 저장된다. 일련의 표준 용액은 제조되고, 0.625; 1.25; 2.5; 3.75 및 6.25　㎛ol/ℓ의 리보오소-5-인산로 각각 이루어진다. 일련의 표준 용액은 샘플에서와 동일한 방식으로 처리된다. 리보오스-5-인산 함량 분석은 LC-MS/MS에 의해 수행된다.
결과
리보오스-5-인산 (nmol/106 cells)
%
평균 표준 편차
음성 대조구 0.256 0.01 /
당살초 0.125% 0.322 0.03 +26
당살초 0.25% 0.34 0.01 +33
얻어진 결과는 0.125% 및 0.25% 농도에서 당살초 추출물이 리보오스-5-인산 합성에서 각각 26% 및 33% 만큼 상당한 증가를 유도한다는 것을 입증한다.
결론적으로, 당살초 추출물은 배양 조직에서 사람 각질세포 및 섬유아세포 내의 대사 및 에너지 과정의 조절에 대한 상당한 효과를 갖는다.
실시 예 4 - 조성물
유장 (SERUM) %
카보머 (CARBOMER) 0.60
셀룰로오스검 0.20
펜틸렌 글리콜 2.00
트로메타인 (TROMETHAMINE) 0.52
글리세린 & 아쿠아 & PEG-8 & 카프릴릴 글리콜 &
폴리아크릴산 나트륨 5.00
아쿠아 & 글리세린 & 글리세릴 아크릴레이트/아크릴산 &
공중합체 (COPOLYMER) 10.00
당살초 3.00
보존제 QS
킬레이트화제 (CHELATING AGENT) QS
방향제 QS
증류수 QS 100
보습 크림 %
세테아릴알코올 & 라우릴황산나트륨 &
세테아릴 황산 나트륨 1.70
하이드로제네이티드 폴리이소부텐 7.00
이소노닐 이소노나노에니트 (ISONONYL ISONONANOATE) 5.00
글리세릴 스테아에이트 (GLYCERYL STEARATE SE) 5.60
C12-15 알킬 벤조에이트 (ALKYL BENZOATE) 3.50
PEG-20 메틸 글루코오스 &
세스퀴스테아레이트 (SESQUISTEARATE) 0.50
글리세린 3.00
카보머 0.25
실리카 0.15
MICA 0.10
TALC 0.50
글리세린 & 아쿠아 & PEG-8 & 카프릴릴 글리콜 &
폴리아크릴산 나트륨 5.00
디메티곤 (DIMETHICONE) & 디메티코놀 (DIMETHICONOL) 0.15
토코페롤 아세테이트 (TOCOPHEROL ACETATE) 0.20
당살초 1.00
보존제 QS
킬레이트화제 QS
방향제 QS
증류수 QS 100
보습 젤 (MOISTURIZING GEL) %
타피오카 녹말 (TAPIOCA STARCH) 1.00
암모늄 & 아크릴로일디메틸타우레이트
(ACRYLOYLDIMETHYLTAURATE)/VP & 공중합체 1.00
글리콜 5.00
에틸헥실글리세린 0.20
아쿠아 & 글리세린 & 글리세릴 아크릴레이트/아크릴산 &
공중합체 5.00
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드
(CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE) 1.50
사이클로메티콘 (CYCLOMETHICONE) 5.00
페닐 트리메티콘 (PHENYL TRIMETHICONE) 1.00
사이클로펜타실록산 (CYCLOPENTASILOXANE) &
PEG/PPG-18/18 디메티콘 (DIMETHICONE) 1.00
토코페롤 아세테이트 0.20
당살초 1.00
테트라소듐 (TETRASODIUM) EDTA 0.05
보존제 QS
방향제 QS
증류수 QS 100

Claims (13)

  1. 피부 세포의 에너지-생산 대사 경로를 활성화시키기 위한 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 당살초 추출물은 잎 추출물인 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서,
    상기 당살초 추출물은 하이드로알코올 추출물인 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  4. 청구항 3에 있어서,
    상기 당살초 추출물은 글리세린으로 안정화된 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  5. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장품 조성물은 조성물의 총 중량에 대하여 건조 물질의 중량으로 0.01 내지 10중량%의 당살초 추출물을 포함하는 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 조성물은, 연화제, 착색제, 필름-형성제, 계면활성제, 방향제, 방부제, 유화제, 오일, 글리콜, UV 필터, 및 비타민과 같은 하나 또는 복수의 제형제 (formulation agents) 또는 첨가제를 더욱 포함하는 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  7. ATP 합성을 증가시키기 위한 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  8. 시토크롬 C 옥시다아제 활성을 자극하기 위한 청구항 1 내지 6중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물.
  9. 리보오스-5-인산 합성을 유도하기 위한 청구항 1 내지 6중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물.
  10. 피부 세포를 조색하고 및/또는 피부 세포 대사를 자극하기 위한 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  11. 최적 피부 세포 기능을 가능하게 하고, 이의 항상성, 재생 및 회복을 보장하기 위한 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  12. 피부, 특히 스트레스를 받고 지친 피부에 활력을 주거나, 피부를 조색하거나, 재활성화하거나 또는 해독시키고; 얼굴 피부의 색상 및/또는 광채를 향상시키며; 윤기 없고 및/또는 광택이 없는 피부의 외모를 방지하고; 윤기 없고 및/또는 회색 얼굴과 같은 안면의 피곤한 기색을 방지하고 및/또는 회복시키며; 추위, 바람, 공해와 같은 공격적인 환경 요인으로부터 피부 세포 및 피부를 보호하기 위한 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
  13. 눈의 윤곽을 조색하고, 지친 눈에 활력을 주며, 눈 밑에 처진 살 및 그늘을 감소시키고, 및 긴장이 풀리고 휴식을 취한 표정을 일반적으로 회복시키기 위한 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 당살초 추출물 또는 이러한 추출물을 포함하는 화장품 조성물의 미용 용도.
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