KR20160092564A - 효모,유산균 2단 발효 용해물을 함유하는 항산화, 주름개선, 보습 효과를 갖는 화장료 조성물 - Google Patents

효모,유산균 2단 발효 용해물을 함유하는 항산화, 주름개선, 보습 효과를 갖는 화장료 조성물 Download PDF

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KR20160092564A KR1020150012782A KR20150012782A KR20160092564A KR 20160092564 A KR20160092564 A KR 20160092564A KR 1020150012782 A KR1020150012782 A KR 1020150012782A KR 20150012782 A KR20150012782 A KR 20150012782A KR 20160092564 A KR20160092564 A KR 20160092564A
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Abstract

본 발명은 2단 발효 용해물의 제조 방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로는 효모를 이용하여 1단 발효를 끝낸 후, 유산균을 이용한 2단 또는 2단 이상 발효하고 마이크로풀루이다이저 등의 세포 파쇄기를 이용하여 균체를 파쇄한 발효 용해물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법에 의하여 제조된 발효 용해물 및 이를 유효성분으로 함유하는 항산화, 피부 주름 개선, 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

효모,유산균 2단 발효 용해물을 함유하는 항산화, 주름개선, 보습 효과를 갖는 화장료 조성물 {A Cosmetic Composition Having An Antioxidant Activity, Anti-wrinkle, And Moisturizing Effects Contaning A Two-stage Fermentation lysate Product Of Yeast And Lactic Acid Bacteria}
본 발명은 2단 또는 2단 이상 발효 용해물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 발효를 통해 생리활성 증진 효과을 가질 뿐 아니라 노화방지와 관련된 항산화 효과, 수분함유량 증진효과를 나타냄으로써 자연노화 또는 광손상에 의해 유도되는 피부 주름 개선 및 보습효능이 우수한 2단 또는 2단 이상 발효 용해물 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 저성물에 관한 것이다.
최근 현대인들의 경제수준이 향상되고 사회생활의 참여도가 높아지면서 피부 미용 건강에 대한 관심이 다양한 연령층에서 높은 수준으로 증가하고 있다. 피부노화를 방지하고 피부 노화 과정을 지연시켜 건강한 피부를 유지하고자 하는 목적에 따라 많은 미용 관련 화장품 및 식품이 개발되고 있고 특히 발효 용해물을 이용한 피부 주름형성 완화와 개선을 위한 연구가 활발히 진행되고 있다.
발효(fermentation)란 미생물이 분비하는 효소에 의해 유기물을 분해하는 과정을 말한다. 또한 미생물이 에너지를 얻는 과정에서 유용한 물질을 내는 것도 발효이다. 한국인은 이러한 발효와 친숙한데 예로부터 김치를 비롯하여 된장, 청국장 등의 전통 발효식품이 대표적이다. 이러한 발효과정은 무산소호흡을 하는 미생물들로 유기물을 완전히 분해 시키고 다른 종류의 유기물을 만들어 내기도 하여 적은 양의 에너지를 생성시킨다. 이러한 발효의 종류는 미생물에 따라 젖산발효, 알콜 발효, 프로피온산 발효, 메탄 발효 등이 있다.
이러한 발효에 관계되는 미생물의 대표적인 유산균은 포도당 또는 유당과 같은 당을 분해하여 젖산이나 초산과 같은 유기산을 생성하며 부산물로 아밀라아제, 셀룰라아제, 리파아제, 프로테아제와 같은 효소를 생성하여 천연물 내의 거대분자의 저분자화를 통하여 피부침투를 용이하게 해준다.
이에 본 발명자들은 주름 개선, 보습효과 및 노화방지 효과를 갖는 발효 산물에 대하여 예의 연구 노력한 결과, 발효 용해물이 세포 독성 없이 주름개선, 보습 및 노화방지 효과를 동시에 가짐을 확인하였고, 특히 발효 미생물에 따라 그 기능이 더욱 강화됨을 발견하고, 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 과제는 노화방지 효과, 피부 주름 개선 및 보습효과를 갖는 2단 발효 용해물을 기능성 원료로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
이를 위해 본 발명은 효모와 유산균에 의해 2단 또는 2단 이상 발효 용해물을 포함하는 노화방지, 보습효과 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 2단 또는 2단 이상 발효 용해물에 관한 것으로, 기존의 1단 발효 보다 2단 또는 2단 이상 발효를 통한 발효 효과가 뛰어나고 노화 방지와 관련된 항산화 효과, 주름개선 효과, 보습효과 증가를 나타낸다. 따라서 피부 콜라겐 합성 촉진, 콜라게네이즈 활성 저해, 피부주름, 피부 노화 개선 및 예방, 피부 보습 향상력이 우수하면서도 부작용이 적은 화장료 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 효과를 갖는다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 보다 명확히 표현하기 위한 목적으로 기재될 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예1> Saccharomyces- Lactobacillus 2단 발효 용해물의 제조
Saccharomyces cerevisiae 균을 YM 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
Lactobacillus paracasei 균을 MRS 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
YM 액체 배지에 미리 배양된 Saccharomyces cerevisiae 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 1단 발효를 한다.
상기 1단 발효물에 미리 배양된 Lactobacillus paracasei 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 2단 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100℃에서 20분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 마이크로플루이다이저로 발효물을 3회 이상 처리하여 발효 용해물을 제조하였다.
<실시예2> Galactomyces - Lactobacillus 2단 발효 용해물의 제조
Galactomyces 균을 YM 고체 배지에서 20℃ 내지 40℃온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 20℃ 내지 40℃온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
Lactobacillus paracasei 균을 MRS 고체 배지에서 20℃ 내지 40℃온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 20℃ 내지 40℃온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
YM 액체 배지에 미리 배양된 Galactomyces 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 20℃ 내지 40℃온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 1단 발효를 한다.
상기 1단 발효물에 미리 배양된 Lactobacillus paracasei 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 20℃ 내지 40℃온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 2단 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100℃에서 20분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 마이크로플루이다이저로 발효물을 3회 이상 처리하여 발효 용해물을 제조하였다.
<실시예3> Saccharomyces - Lactobacillus - Lactobacillus 3단 발효 용해물의 제조
Saccharomyces cerevisiae 균을 YM 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
Lactobacillus paracasei 균을 MRS 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
Lactobacillus bifidus 균을 MRS 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
YM 액체 배지에 미리 배양된 Saccharomyces cerevisiae 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 1단 발효를 한다.
상기 1단 발효물에 미리 배양된 Lactobacillus paracasei 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 2단 발효를 한다.
상기 2단 발효물에 미리 배양된 Lactobacillus bifidus 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 3단 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100℃에서 20분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 마이크로플루이다이저로 발효물을 3회 이상 처리하여 발효 용해물을 제조하였다.
<실시예4> Galactomyces - Lactobacillus - Lactobacillus 3단 발효 용해물의 제조
Galactomyces 균을 YM 고체 배지에서 20℃ 내지 40℃온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 20℃ 내지 40℃온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
Lactobacillus paracasei 균을 MRS 고체 배지에서 20℃ 내지 40℃온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 20℃ 내지 40℃온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
Lactobacillus bifidus 균을 MRS 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 MRS 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
YM 액체 배지에 미리 배양된 Galactomyces 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 20℃ 내지 40℃온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 1단 발효를 한다.
상기 1단 발효물에 미리 배양된 Lactobacillus paracasei 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 20℃ 내지 40℃온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 2단 발효를 한다.
상기 2단 발효물에 미리 배양된 Lactobacillus bifidus 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 3단 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100℃에서 20분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 마이크로플루이다이저로 발효물을 3회 이상 처리하여 발효 용해물을 제조하였다.
<비교예1> Saccharomyces 1단 발효 용해물의 제조
Saccharomyces cerevisiae 균을 YM 고체 배지에서 25℃ 내지 50℃ 온도 에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 25℃ 내지 50℃ 온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
YM 액체 배지에 미리 배양된 Saccharomyces cerevisiae 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 25℃ 내지 50℃온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 1단 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100℃에서 20분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 마이크로플루이다이저로 발효물을 3회 이상 처리하여 발효 용해물을 제조하였다.
<비교예2> Galactomyces 1단 발효 용해물의 제조
Galactomyces 균을 YM 고체 배지에서 20℃ 내지 40℃온도에서 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니를 따서 멸균된 YM 액체 배지에 접종한 후 20℃ 내지 40℃온도 배양기에서 24시간 진탕배양시켜 종균으로 사용한다.
YM 액체 배지에 미리 배양된 Galactomyces 균을 107~108 CFU/ml 농도가 되도록 첨가한 후 20℃ 내지 40℃온도에서 18시간 내지 120시간 배양하여 1단 발효를 시켜 발효물을 제조하였다.
발효를 종료하기 위해 100℃에서 20분간 열을 가하여 균의 기능상실을 유도하였다. 마이크로플루이다이저로 발효물을 3회 이상 처리하여 발효 용해물을 제조하였다.
<실험예1> 항산화 활성 측정
2단 발효 용해물의 항산화 활성을 측정하기 위하여, DPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 라디칼 소거능을 사용하였다.
0.4 mM DPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 용액을 에칠 알콜에 녹여 여과한 후 즉시 사용하였다. 제조된 DPPH 용액과 시료 용액을 1:1로 혼합하여 격렬하게 섞은 후, 상온 암소에 10 분간 방치하였다. Microplate reader (BioTek, USA)를 이용하여 515 nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 수학식 1을 통해 DPPH 라디칼 제거율(%)을 산출하였다. 이때 라디칼을 제거하는 양성 대조군(positive control)으로 0.1 mg/ml의 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.
표 1 에 나타난 바와 같이 비교예 1의 Saccharomyces 1단 발효 용해물과 비교예 2의 Galactomyces 1단 발효 용해물은 비슷한 수준으로 항산화 활성을 보인다. 또한, 실시예 1, 실시예 2의 2단 발효 용해물을 비교해 볼 때, 비교예 1과 비교예 2에 비해 항산화 활성이 증가한 것을 확인할 수 있었다. 2단 발효 용해물은 1단 발효 용해물보다 항산화능이 높음을 알 수 있었다.
[수학식 1]
DPPH 라디칼 제거율(scavenging, %) = (A - B) / A x 100
상기 식에서, A는 공시험액에서 얻은 흡광도이고, B는 검액에서 얻은 흡광도임
2단 발효 용해물의 항산화 활성
농도(%) 항산화력 (%)
As 1mg/ml 비교예1 비교예2 실시예1 실시예2 실시예3 실시예4
1 90.6 5.7 17.6 26.5 28.6 27.1 26.4
10 26.4 27.8 59.8 60.2 61.3 60.5
<실험예 2> 피부주름 개선 효과
<2-1> 콜라겐 생합성 평가
시료에 대한 Fibroblast 세포 내에서 새로 생성되는 collagen 양을 측정하기 위해 procollagen assay를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 젠타마이신 (50ug/mL)과 10% Fetal bovine serum(FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM Welgene, Korea)에 37℃, 5 % CO2 incubator에서 배양하였다. 2x105농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS로 세척한 후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, DMEM배지에 시료를 농도 별로 처리하여 48-72시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 200 uM을 positive control로, UV(+)군을 Negative control로, 배지만 처리한 그룹을 control로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 시료 처리 후 48-72시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였고, 수거한 배지는 Procollagen Type-I C-Peptide(PIP) EIA kit(Takara Bio Inc. MK101)를 이용하여 새로 생성된 콜라겐 양을 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100ul를 각 well에 첨가하고, sample 이나 standard를 20ul씩 넣은 뒤 잘 섞어서 37℃에서 3시간 방치하였다. 반응이 끝나면 내용물을 제거한 뒤 PBS 400ul로 4번 세척하였다. 제거 후 기질용액 100ul를 첨가하여 실온에서 15분간 반응시킨 뒤 stop solution 100ul 첨가하여 부드럽게 섞어주었다, microplate reader(BioTek, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정한 후 표준 농도곡선을 작성하여 콜라겐 양을 산정하였다(표 2).
표 2 에 나타난 바와 같이 2단 발효 용해물의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 2단 발효 용해물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 1단 발효 용해물을 함께 비교하였다. 실시예 1, 실시예 2의 2단 발효 용해물의 경우 비교예 1, 비교예 2의 1단발효 용해물 보다 매우 강한 콜라겐 합성능을 보임으로써 자외선에 의한 항노화 및 주름 개선의 효과를 확인할 수 있었다
2단 발효 용해물의 자외선에 의한 자극에 의한 콜라겐 생합성
농도(%) 콜라겐 합성 (%)
UV
(-)		 UV
(+)		 As 200uM 비교예1 비교예2 실시예1 실시예2 실시예3 실시예4
1 100 46 66 47 47 69 70 71 70
10 56 53 86 85 84 81
<2-2> MMP-1 저해 평가
Collagen을 분해하는 효소는 그 종류가 다양하며 가장 많이 알려져 있는 것이 collagen type I을 분해하는 MMP-1(Matrix metalloproteinase I, collagenase)으로 이를 측정하기 위해 MMP-1 assay를 실시하였다. 시료에 대한 Fibroblast 세포 내에서 새로 생성되는 collagen 양을 측정하기 위해 procollagen assay를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 젠타마이신 (50ug/mL)과 10% Fetal bovine serum(FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM Welgene, Korea)에, 37℃ , 5 % CO2 incubator에서 배양하였다. 2x105농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS로 세척한 후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, DMEM배지에 시료를 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 200uM을 positive control로, UV(+)군을 Negative control로, 배지만 처리한 그룹을 control로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 시료 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 MMP-1 측정 키트(RPN 2610, Amersham Bioscience, UK)를 이용하여 ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. Anti-MMP1 antibody로 코팅된 96 well plate에 buffer를 well 하나에 첨가하여 blank로 삼고, 배지 중에 유리된 샘플과 표준액 100ul를 각각의 well에 넣는다, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 3회 반복해서 세척 한 후 물기를 완전히 제거한다. 100ul peroxide conjugate를 첨가하고, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 30분간 shaking 하면서 반응시킨다. 100ul 1M H2SO4로 반응을 중지시킨 후 microplate reader(BioTek, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하여 비교 하였다(표 3).
표 3 에 나타난 바와 같이 2단 발효 용해물의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 2단 발효 용해물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 1단 발효 용해물을 함께 비교하였다. 실시예 1, 실시예 2의 2단 발효 용해물의 경우 비교예 1, 비교예 2의 1단발효 용해물 보다 매우 강하게 MMP-1 활성이 저해되었고, 이는 콜라겐 생합성 결과(표 2)와 일치하는 양상을 보인다.
2단 발효 용해물의 자외선에 의한 자극에 의한 MMP-1 활성 저해도
농도(%) MMP-1 (% of control)
UV
(+)		 As 200uM 비교예1 비교예2 실시예1 실시예2 실시예3 실시예4
1 100 70 90 91 63 66 68 66
10 78 80 49 50 49 52
<실시예 5> 2단 발효 용해물을 함유하는 화장료 조성물의 제조
2단 발효 용해물을 포함하는 화장료는 실시예 1~2 의 2단 발효 용해물을 각각 포함하는 화장료(제형예 1,2)를 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 2단 발효 용해물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 보습제로서 글리세린 및 솔비톨을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 용해물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)을 하기 표 4에 나타내었다.
원료명 제형예1 제형예2 비교제형예1 비교제형예2 비교제형예3
2단발효용해물
(실시예1)		 5.0
2단발효용해물
(실시예2)		 5.0
글리세린 5.0 5.0
1,3 부틸렌글리콜 5.0
솔비톨 5.0
EDTA-2Na 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
세토스테아릴알코올 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
글리세릴스테아레이트 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
마이크로크리스탈린 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7
스쿠알란 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
유동파라핀 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
트리옥타노인 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
폴리솔베이트 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
솔비탄스테아레이트 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
토코페릴아세테이트 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
사이클로메치콘 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
BHT 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
향, 방부제 적량 적량 적량 적량 적량
정제수 to100 to100 to100 to100 to100
<실험예 3> 2단 발효 용해물의 보습 효과
상기 제형예 1, 2의 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 150 명을 무작위로 25 명씩 6개 그룹 (A, B, C, D, E, F)으로 나눈 후, A, B, C 그룹에는 제형예 1, 2의 화장료 조성물을, D, E, F 그룹에는 각각 2단 발효 용해물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 보습제로서 글리세린 및 솔비톨을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 및 용해물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 5에 나타내었다.
2단발효 용해물의 피부 보습효과
구분 사용전 사용 2주 후 사용 4주 후
제형예1 22.0 37.9 49.7
제형예2 21.6 38.7 50.1
비교제형예1 23.4 35.6 41.8
비교제형예2 23.9 34.6 39.5
비교제형예3 23.1 24.1 24.5
상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예1,2)와 비교하여도 본 발명의 2단 발효 용해물 함유한 화장료(제형예 1, 2)의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.
<실시예6> 유연화장수(스킨로션)
하기의 표 6과 같이 상기 2단 발효 추출을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
원료명 중량%
2단 발효 용해물 (실시예1) 10
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카복시비닐폴리머 0.1
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트80 0.4
에탄올 10
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<실시예7> 밀크로션(유액)
하기의 표 7과 같이 상기 2단 발효 추출을 함유하는 밀크로션을 수상과 유상은 각각 75℃에 가열 후 5분간 유화시켜 냉각 탈포하여 제조하였다.
원료명 중량%
2단 발효 용해물 (실시예2) 10
스쿠알란 5.0
밀납 4.0
폴리솔베이트60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<실시예8> 영양크림
하기의 표 8과 같이 상기 2단 발효 추출을 함유하는 영양크림은 수상과 유상은 각각 75℃에 가열 후 5분간 유화시켜 냉각 탈포하여 제조하였다.
원료명 중량%
2단 발효 용해물 (실시예1) 10
밀납 10.0
폴리솔베이트60 1.5
피이지 60 경화피마자유 2.0
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
유동파라핀 10.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<실시예9> 2단 발효 추출물을 함유하는 에센스 제형의 화장료 조성물의 제조
2단 발효 추출물을 포함하는 에센스 제형의 화장료는 실시예 1~2 의 2단 발효 추출물을 각각 포함하는 화장료(제형예 3, 4)를 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 2단 발효 추출물을 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 4)을 하기 표 9에 나타내었다.
구분 중량%
원료명 제형예3 제형예4 비교제형예4
2단 발효 용해물
(실시예1)		 70 - -
2단 발효 용해물
(실시예2)		 - 70 -
히아루론산 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 5.0 5.0 5.0
글리세린 5.0 5.0 5.0
위치하젤 추출물 0.5 0.5 0.5
레시틴 0.2 0.2 0.2
알란토인 0.1 0.1 0.1
변성알콜 5.0 5.0 5.0
피이지60 하이드로제네이티드 캐스터 오일 0.5 0.5 0.5
내추럴베테인 1.5 1.5 1.5
잔탄검 0.1 0.1 0.1
방부제, 색소, 향료 적량 적량 적량
정제수 to 100 to 100 to 100
<실험예 4> 2단 발효 용해물의 주름개선 효과, 사용감 및 만족도
상기 제형예 3, 4의 화장료 조성물에 대한 피부 주름개선효과, 사용감 및 만족도를 평가하기 위하여, 상기 제형예 3, 4와 비교제형예 4에서 제조된 에센스를 이용하여 시험을 실시하였다. 시험은 피부의 주름개선효과 항목에 대하여는 제형예 3, 4의 에센스를 기준으로 비교제형예 4의 에센스가 나타내는 주름개선효과를 상대적으로 평가하게 하였고, 사용감 및 만족도를 상대적으로 평가하게 하였다.
100 명을 대상으로 하여 제조된 에센스를 1일 2회 4주간 사용케 한 후의 주름개선효과, 사용감 및 만족도 등을 설문 조사하였다. 평가는 매우 우수, 우수, 보통, 나쁨의 기준에 의거하여 수행하였으며, 그 결과를 하기 표 10, 표 11에 나타내었다.
2단발효 용해물의 주름개선효과
매우 우수 우수 보통 나쁨
제형예3 59 25 11 5
제형예4 64 21 12 3
비교제형예4 3 12 45 40
상기 표 10에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제형예 3, 4의 화장료 조성물에 대한 상대적인 피부의 주름개선효과는 우수 이상이 제형예3은 86, 제형예4는 85명으로 비교제형예4에 비해 피부 개선 정도가 매우 우수함을 알 수 있었다.
2단발효 용해물의 사용감 및 만족도
사용감 만족도(%)
우수 보통 나쁨
제형예3 78 17 5 90
제형예4 79 15 6 87
비교제형예4 9 30 61 23
상기 표 11에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제형예 3, 4의 화장료 조성물에 대한 상대적인 사용감은 우수가 제형예3은 78명, 제형예4는 79명이고, 만족도는 87% 이상으로 비교제형예4에 비해 사용감 및 만족도가 매우 우수함을 알 수 있었다.

Claims (5)

  1. 2단 또는 2단 이상 발효 용해물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물
  2. 1항에 있어서, 상기 2단 또는 2단 이상 발효 용해물은 효모를 이용하여 1단발효를 끝낸 후, 유산균을 이용하여 2단 또는 2단 이상 발효 하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
  3. 1항 내지 2항에 있어서, 상기 효모는 Galactomyces, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces ellipsoids, Saccharomyces boulardii 중 1종인 것으로 먼저 하고, 그 다음에 유산균은 Bifidobacterium longum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus confusus, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus brevis, Leuconostoc citreum, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc sp, Pediococcus acidilactici, Pediococcus pentosaseus 중 1종인 것으로 한다.
  4. 1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2단 발효 용해물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에대하여 0.001~99%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
  5. 제 4항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨류, 로션류, 에센스류, 크림류, 팩류, 파운데이션규 및 메이크업베이스류 중 선택된 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 항산화, 주름개선, 보습 효과를 갖는 화장료 조성물
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