KR20160039292A - 근긴장성 이영양증 단백질 키나아제 (dmpk)의 조절을 위한 화합물 및 방법 - Google Patents
근긴장성 이영양증 단백질 키나아제 (dmpk)의 조절을 위한 화합물 및 방법 Download PDFInfo
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Abstract
동물에서 DMPK mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키기 위한 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에서 제공된다. 또한, 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키기 위한 방법, 화합물, 및 조성물이 또한 본원에 제공된다. 그와 같은 방법, 화합물, 및 조성물은 동물에서 유형 1 근긴장성 이영양증, 또는 이의 증상을 치료, 예방, 지연, 또는 개선하는데 유용하다.
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동물에서 DMPK mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키기 위한 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에서 제공된다. 또한, 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키기 위한 DMPK 억제제를 포함하는 방법, 화합물, 및 조성물이 또한 본원에 제공된다. 그와 같은 방법, 화합물, 및 조성물은 동물에서 유형 1 근긴장성 이영양증 (DM1)을 치료, 예방, 또는 개선하는데 유용하다.
근긴장성 이영양증 유형 1 (DM1)은 7500명 중 1명의 추정 빈도로 성인들에게 발생하는 근육성 이영양증의 가장 흔한 유형이다 (Harper PS., Myotonic Dystrophy. London: W.B. Saunders Company; 2001). DM1은 DMPK1에서 비-암호화 CTG 반복서열의 확장으로 야기된 상염색체 우세 장애이다. DMPK1은 세린/트레오닌 키나아제를 암호화하는 유전자이다 (Brook JD, et al., Cell., 1992, 68(4):799-808). 이러한 키나아제의 생리적 기능 및 기질은 완전히 규명되지 않았다. 확장된 CTG 반복서열은 DMPK1의 3' 비번역 영역 (UTR)에 위치한다. 이러한 돌연번이는 확장된 CUG 반복서열(CUGexp)를 함유하는 RNA 발현이 세포 기능장애를 야기하는 과정, RNA 우세를 초래한다 (Osborne RJ and Thornton CA., Human Molecular Genetics., 2006, 15(2): R162-R169).
DMPK 유전자는 일반적으로 3' 비번역 영역에서 5-37 CTG 반복서열을 갖는다. 근긴장성 이영양증 유형 I에서, 이러한 숫자는 뚜렷하게 확장되고, 예를 들어, 50 내지 3,500 초과 범위 내이다 (Harper, Myotonic Dystrophy (Saunders, London, ed.3, 2001); Annu. Rev. Neurosci. 29: 259, 2006; EMBO J. 19: 4439, 2000; Curr Opin Neurol. 20: 572, 2007).
CUGexp 관은 머슬블라인드-유사(muscleblind-like) (MBNL) 단백질, 스플라이싱 인자를 포함하는 RNA 연결 단백질과 상호작용하고, 돌연변이 전사체를 핵 병소에 보유하도록 한다. 이러한 RNA의 독성은 RNA 연결 단백질의 박리 및 신호 경로의 활성으로부터 기인한다. 동물 모델 연구는 CUGexp RNA가 감소한다면 DM1의 표현형이 역전될 수 있다는 것을 보여준다 (Wheeler TM, et al., Science., 2009, 325(5938):336-339; Mulders SA, et al., Proc Natl Acad Sci U S A., 2009, 106(33):13915-13920).
DM1에서, 골격근은 가장 심각하게 영향을 받는 조직이나, 상기 질환은 또한 심장 및 평활근, 수정체, 및 뇌에도 중요한 영향을 미친다. 두개, 사지말단, 및 횡경막 근육이 우선적으로 영향받는다. 수동적 기술은 일찍이 제 기능을 발휘하지 못하였으며, 이는 수십년간 심각한 장애를 야기하였다. 평균 사망 연령은 55세이며, 이는 보통 호흡부전으로 유래한다 (de Die-Smulders CE, et al., Brain., 1998, 121(Pt 8):1557-1563).
안티센스 기술은 특정 유전자 산물의 발현 조절을 위한 효과적인 수단으로 부상하고 있으며, 이로써 DMPK1 조절을 위한 수많은 치료, 진단 및 연구 적용에 특히 유용하도록 입증될 수 있다. CAG-반복서열로 표적화된, CUGexp-MBNL1 착물 형성을 차단시키고, CUGexp 전사체의 핵 병소를 분산시키고, CUGexp 전사체의 핵원형질 이송 및 번역을 개선하고, MBNL 단백질을 핵질로 방출하고, MBNL-의존 엑손의 대안적 스플라이싱을 정규화하고, 그리고 CUGexp-발현 형질전환 마우스에서 근긴장증을 제거하기 위한, 완전히 변형된 올리고뉴클레오타이드의 근육내 주사가 마우스에서 나타난다 (Wheeler TM, et al., Science., 2009, 325(5938):336-339; WO2008/036406).
현재 DM1의 전개를 변형시킬 수 있는 치료는 없다. 따라서 질환의 부담은 뚜렷하게 크다. 따라서, 본원에서는 DM1 치료를 위한 화합물, 조성물, 및 방법을 제공하기 위한 목적이 존재한다.
요약
본 발명에서는 DMPK의 발현을 억제하고, DMPK 연관된 질환 또는 이의 증상을 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 방법, 화합물, 및 조성물이 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 화합물 또는 조성물은 돌연변이체 DMPK 또는 CUGexp DMPK를 억제한다.
특정 구현예는 동물에서 DMPK 발현을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 상기 동물에게 본원에 추가로 기재된 바와 같은, DMPK에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구현예는 동물에서 야생형 DMPK과 비교하여 CUGexp DMPK를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 이는 상기 동물에게 본원에 추가로 기재된 바와 같은, CUGexp DMPK에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 경우에, CUGexp DMPK 전사체는 핵에서의 이의 더 긴 체류 시간 때문에 핵 리보뉴클라아제 (예컨대 RNase H)를 통하여 안티센스 녹다운(antisense knockdown)에 특히 민감한 것으로 알려져 있으며, 이러한 민감성은 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 조직 흡수에 대한 생체분포 장벽에도 불구하고 관련 조직, 예컨대 근육에서 CUGexp DMPK 전사체의 효과적인 안티센스 억제를 허용하는 것으로 알려져 있다. 예를들어 Wheeler TM, et al., Science. , 2009, 325(5938):336-339 및 WO2008/036406에 기술된 CAG-반복서열 ASO와 같은 핵 리보뉴클라아제를 통하여 절단을 야기하지 않는 안티센스 기전은 동일한 치료 이점을 제공하지 않는다.
특정 구현예는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 본원에 추가로 개시된 DMPK에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료학적 유효량을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 동정하는 단계를 포함한다.
특정 구현예는 근육 경직, 근긴장증, 말초 약화 무력증, 안면 및 턱 근육 약화, 연하곤란, 눈꺼풀 수하 (안검하수), 목 근육 약화, 팔 및 다리 근육 약화, 계속된 근육 통증, 수면과잉, 근육 소모, 연하곤란증, 호흡 부족, 불규칙한 심장박동, 심근 손상, 무감각, 인슐린 저항, 및 백내장을 포함하는 DM1의 발병과 연관된 증상 및 결과를 치료, 예방, 지연, 또는 개선하는 방법을 제공한다. 특정 구현예는 발달 지연, 습득 장애, 언어 및 스피치 장애, 및 성격 발달 장애를 포함한 아동에서의 DM1 발병과 연관된 증상 및 결과를 치료, 예방, 지연, 또는 개선하는 방법을 제공한다.
안티센스특정 구현예는 병원성 전사체의 절단을 유도함으로써 RNA 우세를 중화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 1과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자은행 수탁 번호 NT_011109.15에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 2와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 뉴클레오타이드 16666001 내지 16681000로부터 절단된 유전자은행 수탁 번호 NT_039413.7에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 3과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_032418.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 4와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 AI007148.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 5와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 AI304033.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 6과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BC024150.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 7과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BC056615.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 8과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BC075715.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 9와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BU519245.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 10과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 CB247909.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 11과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 CX208906.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 12와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 CX732022.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 13과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 S60315.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 14와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 S60316.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 15와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_001081562.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 16과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_001100.3에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 17과 같이 본원에 포함).
본 개시사항은 하기 비제한적 수의 구현예를 제공한다.
구현예 1.
10 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는, 화합물.
구현예 2.
구현예 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택된 이환식 당을 포함한다.
구현예 3.
구현예 1 내지 2 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 DMPK 핵산의 엑손 9인, 화합물.
구현예 4.
구현예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 상보 영역은 DMPK 전사체의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
구현예 5.
구현예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 상보 영역은 DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
구현예 6.
구현예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 상보 영역은 DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
구현예 7.
구현예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 상보 영역은 DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
구현예 8.
구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 DMPK 핵산은 DMPK 예비 mRNA인, 화합물.
구현예 9.
구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 DMPK 핵산은 DMPK mRNA인, 화합물.
구현예 10.
구현예 1 내지 9에 있어서, 상기 DMPK 핵산은 서열 번호: 1 및 서열 번호: 2 중 선택된 핵염기 서열을 포함하는, 화합물.
구현예 11.
구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 12.
구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 13.
구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 14.
구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2 의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 15.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343 내지 핵염기 1368인, 화합물.
구현예 16.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1317 내지 핵염기 1366인, 화합물.
구현예 17.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2748 내지 핵염기 2791인, 화합물.
구현예 18.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 730 내지 핵염기 748인, 화합물.
구현예 19.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195 내지 핵염기 10294인, 화합물.
구현예 20.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195 내지 핵염기 10294인, 화합물.
구현예 21.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10201 내지 핵염기 10216인, 화합물.
구현예 22.
구현예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10202 내지 핵염기 10218인, 화합물.
구현예 23.
구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸쳐 표적 영역과 적어도 80% 상보적인 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 24.
구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸쳐 표적 영역과 적어도 90% 상보적인 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 25.
구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸쳐 표적 영역과 적어도 100% 상보적인 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 26.
구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서 서열 번호: 23-874에서 인용된 서열의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 27.
구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23-32에서 인용된 서열의 적어도 10 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 28.
구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23-32에서 인용된 서열의 적어도 12 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 29.
구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23-32에서 인용된 서열의 적어도 14 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 30.
구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23-32에서 인용된 서열의 적어도 16 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 31.
구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 32.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 25에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 33.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 26에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 34.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 27에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 35.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 28에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 36.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 29에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 37.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 30에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 38.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 31에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 39.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 32에 인용된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 40.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32에 인용된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 41.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32에 인용된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 42.
구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 33-874에 인용된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
구현예 43.
구현예 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1-19와 적어도 90% 상보적인, 화합물.
구현예 44.
구현예 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1-19와 적어도 100% 상보적인, 화합물.
구현예 45.
구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 46.
구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 47.
구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 48.
구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 49.
구현예 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 50.
구현예 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 단일 가닥 뉴클레오사이드인, 화합물.
구현예 51.
구현예 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
구현예 52.
구현예 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 적어도 2개의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
구현예 53.
구현예 52에 있어서, 상기 각각의 변형된 당은 동일한 변형을 갖는, 화합물.
구현예 54.
구현예 52에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당은 상이한 변형을 갖는, 화합물.
구현예 55.
구현예 51 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 이환식 당인, 화합물.
구현예 56.
구현예 55에서, 상기 이환식 당은 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택되는, 화합물.
구현예 57.
구현예 56에 있어서, 상기 이환식 당은 cEt를 포함하는, 화합물.
구현예 58.
구현예 56에 있어서, 상기 이환식 당은 LNA를 포함하는, 화합물.
구현예 59.
구현예 56에 있어서, 상기 이환식 당은 α-L-LNA를 포함하는, 화합물.
구현예 60.
구현예 56에 있어서, 상기 이환식 당은 ENA를 포함하는, 화합물.
구현예 61.
구현예 56에 있어서, 상기 이환식 당은 2'-티오 LNA를 포함하는, 화합물.
구현예 62.
구현예 1 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당은 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함하는, 화합물.
구현예 63.
구현예 62에서, 2'-치환된 뉴클레오사이드는 다음 중으로부터 선택되는, 화합물: 2'-OCH3, 2'-F, 및 2'-O-메톡시에틸.
구현예 64.
구현예 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸을 포함하는, 화합물.
구현예 65.
구현예 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 핵염기를 포함하는, 화합물.
구현예 66.
구현예 65 있어서, 상기 변형된 핵염기는 5-메틸시토신인, 화합물.
구현예 67.
구현예 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 각 시토신은 5-메틸시토신인, 화합물.
구현예 68.
선행 구현예 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는:
a.
연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
구현예 69.
구현예 68에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 70.
구현예 68 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 71.
구현예 68 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 72.
구현예 68 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 73.
구현예 68 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 74.
구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 2개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 75.
구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 76.
구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 77.
구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 78.
구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 79.
구현예 68 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 2개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 80.
구현예 68 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 81.
구현예 68 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 82.
구현예 68 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 83.
구현예 68 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 84.
구현예 68 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 상기 갭 분절은 6개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 85.
구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 갭 분절은 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 86.
구현예 68 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 상기 갭 분절은 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 87.
구현예 68 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 상기 갭 분절은 9개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 88.
구현예 68 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 상기 갭 분절은 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
구현예 89.
구현예 1 내지 31, 34, 37 내지 45, 또는 53 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하는, 화합물.
구현예 90.
구현예 1 내지 31, 34, 37 내지 45, 또는 53 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 AABB 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 BBAA 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5'-윙 분절 및 상기 3'-윙 분절 사이에 위치하는, 화합물.
구현예 91.
구현예 1 내지 30, 35, 36, 46, 또는 50 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 AAABB 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 BBAAA 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5'-윙 분절 및 상기 3'-윙 분절 사이에 위치하는, 화합물.
구현예 92.
구현예 1 내지 31, 34, 37 내지 45, 또는 53 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절
c.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 그리고 각 K는 cEt 당을 나타내는, 화합물.
구현예 93.
구현예 1 내지 30, 35, 36, 46, 또는 50 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 그리고 각 K는 cEt 당을 나타내는, 화합물.
구현예 94.
구현예 1 내지 30, 32, 33, 또는 49 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하는, 화합물.
구현예 95.
구현예 1 내지 31, 34, 37 내지 45, 또는 53 내지 88중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 cEt 당을 포함하는, 화합물.
구현예 96.
구현예 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1에 인용된 핵염기 1343 및 핵염기 1368 내의 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하고, 여기서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는:
a.
연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
구현예 97.
구현예 96에 있어서, 5' 윙 분절 내의 상기 각각의 변형된 당은 동일한 변형을 갖는, 화합물.
구현예 98.
구현예 96에 있어서, 5' 윙 분절 내의 적어도 두개의 변형된 당은 상이한 변형을 갖는, 화합물.
구현예 99.
구현예 96 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 3' 윙 분절 내의 상기 각각의 변형된 당은 동일한 변형을 갖는, 화합물.
구현예 100.
구현예 96 내지 98 중 어느 하나에 있어서, '3 윙 분절 내의 적어도 두개의 변형된 당은 상이한 변형을 갖는, 화합물.
구현예 101.
구현예 96에서, 상기 변형된 적어도 하나의 변형된 당은 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택된 이환식 당인, 화합물.
구현예 102.
구현예 90 또는 91 중 어느 하나에 있어서, B는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택된 이환식 당을 나타내는, 화합물.
구현예 103.
구현예 102에 있어서, 상기 이환식 당은 BNA를 포함하는, 화합물.
구현예 104.
구현예 102에 있어서, 상기 이환식 당은 cEt를 포함하는, 화합물.
구현예 105.
구현예 102에 있어서, 상기 이환식 당은 LNA를 포함하는, 화합물.
구현예 106.
구현예 102에 있어서, 상기 이환식 당은 α-L-LNA를 포함하는, 화합물.
구현예 107.
구현예 102에 있어서, 상기 이환식 당은 ENA를 포함하는, 화합물.
구현예 108.
구현예 102에 있어서, 상기 이환식 당은 2'-티오 LNA를 포함하는, 화합물.
구현예 109.
구현예 90 또는 91 중 어느 하나에서, A는 다음 중으로부터 선택되는 2'-치환된 뉴클레오사이드를 나타내는, 화합물: 2'-OCH3, 2'-F, 및 2'-O-메톡시에틸.
구현예 110.
구현예 109에 있어서, 상기 2'-치환된 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸을 포함하는, 화합물.
구현예 111.
선행 구현예 1 내지 111 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
구현예 112.
구현예 1 내지 111 중 어느 하나에서, 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결인 화합물.
구현예 113.
ISIS 486178로 이루어진 화합물.
구현예 114.
ISIS 512497로 이루어진 화합물.
구현예 115.
ISIS 598768로 이루어진 화합물.
구현예 116.
ISIS 594300로 이루어진 화합물.
구현예 117.
ISIS 594292로 이루어진 화합물.
구현예 118.
ISIS 569473로 이루어진 화합물.
구현예 119.
ISIS 598769로 이루어진 화합물.
구현예 120.
ISIS 570808로 이루어진 화합물.
구현예 121.
ISIS 598777로 이루어진 화합물.
구현예 122.
서열 번호: 23에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 123.
서열 번호: 29에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 124.
서열 번호: 31에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 125.
서열 번호: 26에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K 는 cEt 당을 나타내고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 126.
서열 번호: 30에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K 는 cEt 당을 나타내고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 127.
서열 번호: 32에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K 는 cEt 당을 나타내고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 128.
서열 번호: 27에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K 는 cEt 당을 나타내고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 129.
서열 번호: 28에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c.
5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K 는 cEt 당을 나타내고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 130.
서열 번호: 25에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 상기 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 그리고 하기:
a.
10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b.
5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c.
5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d.
여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e.
각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고,
f.
각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고; 그리고
g.
각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
구현예 131.
구현예 1 내지 130 중 어느 하나에 있어서, 공액체를 포함하는, 화합물.
구현예 132.
구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물.
구현예 133.
동물에서의 DM1 치료 방법으로서, 구현예 1 내지 130 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료 방법.
구현예 134.
구현예 133에 있어서, 상기 화합물은 DMPK mRNA 수준을 감소시키는, 방법.
구현예 135.
구현예 133에 있어서, 상기 화합물은 DMPK 단백질 발현을 감소시키는, 방법.
구현예 136.
구현예 133에 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK을 감소시키는, 방법.
구현예 137.
구현예 133에 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK을 우선적으로 감소시키는, 방법.
구현예 138.
구현예 133에 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK mRNA를 감소시키는, 방법.
구현예 139.
구현예 133 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK mRNA를 우선적으로 감소시키는, 방법.
구현예 140.
구현예 138 또는 139에 있어서, CUGexp의 우선적 감소는 근육 내의 것인, 방법.
구현예 141.
동물에서 근긴장증을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 142.
동물에서 MBLN 의존성 스플라이스 병증을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 143.
구현예 138에 있어서, Serca1, m-Titin, Clcn1, 및 Zasp 중 임의의 스플라이싱이 정정되는, 방법.
구현예 144.
구현예 133 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 전신성 투여인 방법.
구현예 145.
구현예 133 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 비경구 투여인 방법.
구현예 146.
구현예 144에 있어서, 상기 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 뇌실내 투여 및 척추강내 투여 중 임의의 것인, 방법.
구현예 147.
구현예 133 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 근육내 투여가 아닌, 방법.
구현예 148.
구현예 133 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
구현예 149.
동물에서 Serca1 스플라이스 병증을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하여 Serca1 엑손 22 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 150.
동물에서 m- Titin 스플라이스 병증을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하여 m- Titin 엑손 5 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 151.
동물에서 Clcn1 스플라이스 병증을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하여 Clcn1 엑손 7a 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 152.
동물에서 Zasp 스플라이스 병증을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하여 Zasp 엑손 11 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 153.
세포에서 DMPK mRNA를 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 세포에 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 154.
세포에서 DMPK 단백질을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 세포에 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 155.
세포에서 CUGexp mRNA를 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 세포에 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 156.
구현예 149 내지 151에 있어서, 상기 세포는 동물 내의 것인, 방법.
구현예 157.
구현예 156에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
구현예 158.
하기를 포함하는, CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, 방법:
a.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 대상체를 선택하는 단계; 및
b.
구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
여기서 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물은, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, 방법.
구현예 159.
하기를 포함하는, CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, 방법:
a.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 대상체를 선택하는 단계; 및
b.
구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물을 상기 대상체에게 전신 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 상기 화학적으로-변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, 방법.
구현예 160.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 스플라이스 병증을 감소시키는 방법으로서,
구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 조성물은, 상기 DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 스플라이스 병증을 감소시키는, 방법.
구현예 161.
동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 화합물은 상기 동물에서 DMPK 발현을 감소시켜 이로써 상기 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는, 방법.
구현예 162.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하는 방법으로서,
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 동정하는 단계, 및
구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하고,
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 상기 동물이 치료되는, 방법.
구현예 163.
동물에서 DMPK 발현을 감소시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 DMPK의 발현은 감소되는, 방법.
구현예 164.
동물에서 DM1 치료를 위하여 사용되는, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 약제학적 조성물.
구현예 165.
동물에서 근긴장증 치료를 위하여 사용되는, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 약제학적 조성물.
구현예 166.
동물에서 MBLN 의존성 스플라이스 병증 치료를 위하여 사용되는, 구현예 1 내지 131 중 어느 하나의 화합물, 또는 구현예 132의 약제학적 조성물.
상세한 설명
전술된 일반적인 설명 및 하기 상세한 설명 모두는 단지 예시적이고 설명적인 것이며, 청구될 때 본 발명을 제한하지 않음이 이해되어야 한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 단수의 사용은 달리 구체적으로 언급되지 않으면 복수를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, "또는"의 사용은 다른 식으로 명시되지 않는 한, "및/또는"을 의미한다. 더욱이, 용어 "포함하는" 및 "포함한다" 및 "포함하였다"와 같은 다른 형태의 사용은 비제한적이다. 또한, "요소" 또는 "성분"은 다른 식으로 구체적으로 명시되지 않는 한, 하나의 단위를 포함하는 요소 및 성분들 및 하나를 초과하는 하부단위를 포함하는 요소 및 성분들 둘 다를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 섹션 제목들은 단지 조직적 목적을 위한 것이며, 기술된 요지를 제한하는 것으로 해석되지는 않는다. 특허, 특허 출원, 기사, 서적 및 논문을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌, 본 출원에 인용된, 모든 문서 또는 문서들의 부분은, 임의의 목적을 위하여 이들의 전문이 참고로 명백하게 편입된다.
정의
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다른 식으로 지적되지 않는 한, 하기 용어들은 하기의 의미를 갖는다:
"2'-O-메톡시에틸" (또한 2'-MOE 및 2'-O(CH2)2-OCH3)은 푸로실 환의 2' 위치의 O-메톡시-에틸 변형을 나타낸다. 2'-O-메톡시에틸 변형된 당은 변형된 당이다.
"2'-O-메톡시에틸 뉴클레오타이드"는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오타이드를 의미한다.
"5-메틸시토신"은 5' 위치에 부착된 메틸기로 변형된 시토신을 의미한다. 5-메틸시토신은 변형된 핵염기이다.
"약"은 값의 7% 이내인 것을 의미한다. 예를 들어, "화합물은 DMPK 억제의 적어도 약 70%만큼 영향을 미칠 수 있다"라고 언급된 경우에, 이것은 DMPK 수준이 63% 및 77% 범위 내로 억제될 수 있음을 시사한다.
"활성 약제학적 작용제"는 동물에게 투여하였을 때 치료학적 이점을 제공하는 약제학적 조성물의 물질 또는 물질들을 의미한다. 예를 들어, 특정 구현예에서는 DMPK에 대해 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 활성 약제학적 작용제이다.
"활성 표적 영역" 또는 "표적 영역"은 하나 이상의 활성 안티센스 화합물이 표적화된 영역을 의미한다. "활성 안티센스 화합물"은 표적 핵산 수준 또는 단백질 수준을 감소시키는 안티센스 화합물을 의미한다.
"수반하여 투여된다"는 둘 다의 약물학적 효과가 환자에게서 동시에 나타나도록 하는 특정 방식으로의 두 가지 제제의 공동-투여를 나타낸다. 수반되는 투여는 두 가지 제제를 단일 약제학적 조성물로, 단일 투약형으로, 또는 동일한 투여 경로에 의해서 투여할 것을 필요로 하지 않는다. 두 가지 제제의 효과는 그들 자체가 동시에 나타날 필요는 없다. 효과는 단지 기간의 중복이 필요할 뿐이며, 동일한 시간에 걸칠 필요는 없다.
"투여하는"은 제제를 동물에게 제공하는 것을 의미하며, 의료 전문가에 의한 투여 및 자가-투여를 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.
"제제(agent)"는 동물에게 투여하였을 때 치료학적 이점을 제공할 수 있는 활성 물질을 의미한다. "제1 제제"는 본 발명의 치료학적 화합물을 의미한다. 예를 들어, 제1 제제는 DMPK를 표적으로 한 안티센스 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. "제2 제제"는 본 발명의 제2 치료학적 화합물 (예를 들어, DMPK을 표적으로 하는 제2 안티센스 올리고뉴클레오타이드) 및/또는 비- DMPK 치료학적 화합물을 의미한다.
"개선"은 연관된 질환, 장애 또는 병태의 적어도 하나의 지표, 징후 또는 증상을 약화시키는 것을 나타낸다. 지표의 중증도는 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지되어 있는 주관적 또는 객관적 척도에 의해서 측정될 수 있다.
"동물"은 마우스, 랫트, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 및 원숭이 및 침팬지를 비제한적으로 포함하는 비-인간 영장류를 비제한적으로 포함하는 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다.
"안티센스 활성"은 안티센스 화합물의 그의 표적 핵산에 대한 혼성화에 기인할 수 있는 임의의 검출 가능하거나 측정 가능한 활성을 의미한다. 특정 구현예에서, 안티센스 활성은 표적 핵산 또는 이러한 표적 핵산에 의해서 암호화된 단백질의 양 또는 발현의 감소이다.
"안티센스 화합물"은 수소 결합을 통해서 표적 핵산에 대한 혼성화를 겪을 수 있는 올리고머 화합물을 의미한다. 안티센스 화합물의 예시는 단일 가닥 및 이중 가닥 화합물, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, ssRNA, 및 위성(satellite) 반복서열을 포함한다.
"안티센스 억제"는 안티센스 화합물의 부재 하에서의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준에 비해, 표적 핵산에 대해 상보적인 안티센스 화합물의 존재 하에서의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준의 감소를 의미한다.
"안티센스 올리고뉴클레오타이드"는 표적 핵산의 상응하는 영역 또는 분절에 대한 혼성화를 허용하는 핵염기 서열을 갖는 단일-가닥 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"이환식 당"은 두 개의 원자의 가교화 (bridging)에 의해서 변형된 푸로실 환을 의미한다. 이환식 당은 변형된 당이다.
"이환식 핵산" 또는 "BNA"는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드를 나타내며, 여기에서 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드의 푸라노즈 부분은 푸라노즈 환 상의 두 개의 탄소 원자를 연결하는 가교를 포함하여 이환식 환계를 형성한다.
"캡 (cap) 구조" 또는 "말단 캡 모이어티"는 안티센스 화합물의 어느 하나의 말단에 포함된 화학적 변형을 의미한다.
"화학적으로 구분되는 영역"은 특정 점에서 동일한 안티센스 화합물의 또 다른 영역과 화학적으로 상이한 안티센스 화합물의 영역을 나타낸다. 예를 들어, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오타이드를 갖는 영역은 2'-O-메톡시에틸 변형이 없는 뉴클레오타이드를 갖는 영역과 화학적으로 구분된다.
"키메라 안티센스 화합물"은 적어도 두 개의 화학적으로 구분되는 영역을 갖는 안티센스 화합물을 의미한다.
"공동-투여"는 개체에게 두 개 이상의 제제를 투여하는 것을 의미한다. 두 개 이상의 제제는 단일 약제학적 조성물 내에 존재할 수 있거나, 별개의 약제학적 조성물 내에 존재할 수 있다. 두 개 이상의 제제 각각은 동일하거나 상이한 투여 경로를 통해서 투여될 수 있다. 공동-투여는 병행 또는 순차적 투여를 포괄한다.
"상보성"은 제1 핵산과 제2 핵산의 핵염기 사이의 짝짓기 능력을 의미한다.
"인접 핵염기"는 서로에 대해 바로 인접한 핵염기를 의미한다.
"CUGexp DMPK"는 확장된 CUG 반복서열 (CUGexp)을 함유하는 돌연변이체 DMPK RNA를 의미한다. 야생형 DMPK 유전자는 일반적으로 3' 비번역 영역에서 5-37 CTG 반복서열을 갖는다. CUGexp DMPK에서 (예컨대 근긴장성 이영양증 유형 I 환자에서, 이러한 숫자는 뚜렷하게 확장되고, 예를 들어 50 내지 3,500 초과 범위 내이다 (Harper, Myotonic Dystrophy (Saunders, London, ed.3, 2001); Annu. Rev. Neurosci. 29: 259, 2006; EMBO J. 19: 4439, 2000; Curr Opin Neurol. 20: 572, 2007).
"희석제"는 약물학적 활성을 결여하고 있지만, 약제학적으로 필요하거나 바람직한 조성물 내의 성분을 의미한다. 예를 들어, 주사된 조성물 내 희석제는 액체, 예를 들어, 식염수일 수 있다.
"DMPK"는 근긴장성 이영양증 단백질 키나아제의 임의의 핵산 또는 단백질을 의미한다. DMPK는 CUGexp DMPK 핵산을 포함하는 돌연변이체 DMPK일 수 있다.
"DMPK 발현"은 DMPK을 암호화한 유전자로부터 전사된 mRNA의 수준 또는 mRNA로부터 번역된 단백질의 수준을 의미한다. DMPK 발현은 노던 또는 웨스턴 블럿과 같은 본 기술분야에서 공지된 방법에 의해서 측정될 수 있다.
"DMPK 핵산"은 DMPK를 암호화하는 임의의 핵산을 의미한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, DMPK 핵산은 DMPK를 암호화한 DNA 서열, DMPK를 암호화한 DNA (인트론 및 엑손을 포함하는 게놈 DNA를 포함)로부터 전사된 RNA 서열, 및 DMPK를 암호화한 mRNA 또는 예비-mRNA 서열을 포함한다. "DMPK mRNA"는 DMPK 단백질을 암호화한 mRNA를 의미한다.
"용량"은 단일 투여에서, 또는 명시된 기간 동안에 제공된 약제학적 제제의 명시된 양을 의미한다. 특정 구현예에서, 용량은 1, 2, 또는 그 이상의 볼러스 (boluses), 정제, 또는 주사제로 투여될 수 있다. 예를 들어, 피하 투여를 원하는 특정 구현예에서, 원하는 용량은 단일 주사에 의해서 쉽게 수용되지 않는 용적을 필요로 하며, 따라서 2 이상의 주사제를 사용하여 원하는 용량을 달성할 수 있다. 특정 구현예에서, 약제학적 제제는 장시간에 걸쳐서, 또는 연속적으로 주입함으로써 투여된다. 용량은 시간, 일, 주, 또는 개월 당 약제학적 재제의 양으로 언급될 수 있다.
"유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 제제를 필요로 하는 개체에게서 원하는 생리적 결과를 유발하는데 충분한 활성 약제학적 작용제의 양을 의미한다. 유효량은 치료될 개체의 건강 및 신체 조건, 치료될 개체의 분류군, 조성물의 제형, 개체의 의학적 상태의 평가, 및 그 밖의 다른 관련된 인자에 따라 개체들 사이에서 달라질 수 있다.
"완전히 상보적" 또는 "100% 상보적"은 제1 핵산의 핵염기 서열의 각각의 핵염기가 제2 핵산의 제2 핵염기 서열 내에 상보적인 핵염기를 갖는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 제1 핵산은 안티센스 화합물이고, 표적 핵산은 제2 핵산이다.
"갭머 (gapmer)"는 RNase H 분해를 지지하는 다수의 뉴클레오사이드를 갖는 내부 영역이 하나 또는 그 이상의 뉴클레오사이드를 갖는 외부 영역들 사이에 배치된 키메라 안티센스 화합물을 의미하며, 이때 상기 내부 영역을 포함하는 뉴클레오사이드는 상기 외부 영역을 포함하는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드들과 화학적으로 구분된다. 내부 영역은 "갭 분절"로 불릴 수 있으며, 외부 영역은 "윙 (wing) 분절"로 불릴 수 있다.
"갭-확장된 (gap-widened)"은 1 내지 6 개의 뉴클레오사이드를 갖는 5' 및 3' 윙 분절들 사이에, 및 이들에 바로 인접하여 배치된 12 개 또는 그 이상의 인접 2'-데옥시리보뉴클레오사이드의 갭 분절을 갖는 키메릭 안티센스 화합물을 의미한다.
"혼성화"는 상보적 핵산 분자의 어닐링 (annealing)을 의미한다. 특정 구현예에서, 상보적 핵산 분자는 안티센스 화합물 및 표적 핵산을 포함한다.
"유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 동정하는 것"은 유형 1 근긴장성 이영양증, 장애, 또는 병태를 갖는 것으로 진단된 적이 있거나, 유형 1 근긴장성 이영양증, 장애, 또는 병태를 발병하는 소인이 있는 것으로 동정하는 것을 의미한다. 예를 들어, 가족력이 있는 개체는 유형 1 근긴장성 이영양증, 장애, 또는 병태의 소인을 갖는 것일 수 있다. 그러한 동정은 개체의 병력 및 표준 임상 시험 또는 평가, 예컨대 유전자 시험을 평가하는 단계를 포함하는 임의의 방법에 의하여 수반될 수 있다.
"바로 인접한"은 바로 인접한 요소들 사이에 개입성 요소가 없는 것을 의미한다.
"개체" 는 치료 또는 치료법을 위해서 선택된 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
"뉴클레오사이드간 연결"은 뉴클레오사이드들 사이의 화학적 결합을 나타낸다.
"연결된 뉴클레오사이드"는 뉴클레오사이드간 연결에 의하여 함께 결합 또는 연결된 인접한 뉴클레오사이드를 의미한다.
"미스매치 (mismatch)" 또는 "비-상보적 핵염기"는 제1 핵산의 핵염기가 제2 또는 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 짝짓기 할 수 없는 경우를 나타낸다.
"변형된 뉴클레오사이드간 연결"은 천연적으로 발생하는 뉴클레오사이드간 연결 (즉, 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 결합)으로부터의 치환 또는 임의의 변화를 나타낸다.
"변형된 핵염기"는 아데닌, 시토신, 구아닌, 티미딘, 또는 우라실이 아닌 임의의 핵염기를 나타낸다. "비변형된 핵염기"는 퓨린 염기인 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기인 티민 (T), 시토신 (C), 및 우라실 (U)을 의미한다.
"변형된 뉴클레오타이드"는 독립적으로, 변형된 당 모이어티, 변형된 뉴클레오사이드간 연결, 또는 변형된 핵염기를 갖는 뉴클레오타이드를 의미한다. "변형된 뉴클레오사이드"는 독립적으로, 변형된 당 모이어티 또는 변형된 핵염기를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
"변형된 올리고뉴클레오타이드"는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드 및/또는 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"변형된 당"은 천연 당 모이어티으로부터의 치환 또는 변화를 지칭한다. 변형된 당은 치환된 당 모이어티 및 당 모이어티 대용물을 포함한다.
"모티프"는 안티센스 화합물 내의 화학적으로 구분되는 영역들의 패턴을 의미한다.
"근긴장증"은 수의 수축 또는 전기 자극 후 근육의 비정상적으로 느린 이완을 의미한다.
"핵 리보뉴클라아제"는 핵에서 발견되는 리보뉴클라아제를 의미한다. 핵 리보뉴클라아제는 비제한적으로 RNase H1 및 RNase H2를 포함하는RNase H, 이중가닥 RNase 드로샤(drosha) 및 다른 이중가닥 Rnase를 포함한다.
"천연적으로 발생하는 뉴클레오사이드간 연결"은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 연결을 의미한다.
"천연 당 모이어티"는 DNA (2'-H) 또는 RNA (2'-OH)에서 발견되는 당을 의미한다.
"핵산"은 모노머 뉴클레오타이드로 구성된 분자를 지칭한다. 핵산에는 리보핵산 (RNA), 데옥시리보핵산 (DNA), 단일-가닥 핵산, 이중-가닥 핵산, 소형 개입성 리보핵산 (siRNA), 및 마이크로RNA (miRNA)가 포함된다. 핵산은 또한 단일 분자 내에 이들 요소의 조합을 포함할 수도 있다.
"핵염기"는 또 다른 핵산의 염기와 짝짓기 할 수 있는 헤테로환 모이어티를 의미한다.
"핵염기 서열"은 임의의 당, 연결 및/또는 핵염기 변형에 독립적인 인접 핵염기의 순서를 의미한다.
"뉴클레오사이드"는 당에 연결된 핵염기를 의미한다. 특정 구현예에서, 뉴클레오사이드는 인산기와 연결된다.
"뉴클레오사이드 모방체"는 당 또는 당 및 염기, 및 반드시는 아니지만 예를 들어, 모폴리노, 사이클로헥세닐, 사이클로헥실, 테트라하이드로피라닐, 바이사이클로 또는 트리사이클로 당 모방체, 예를 들어, 비-푸라노즈 당 유니트를 갖는 뉴클레오사이드 모방체와 같은 올리고머 화합물의 하나 또는 그 이상의 위치에서의 연결을 대체시키기 위해서 사용된 이들 구조를 포함한다.
"뉴클레오타이드"는 뉴클레오사이드의 당 부분에 공유적으로 연결된 인산기를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
뉴클레오타이드 모방체는 뉴클레오사이드 및 하나 이상의 위치에서의 연결을, 예를 들어, 펩타이드 핵산 또는 모폴리노 (-N(H)-C(=O)-O- 또는 다른 비-포스포디에스테르 연결에 의해서 연결된 모폴리노)와 같은 올리고머 화합물로 대체하기 위하여 사용된 이들 구조를 포함한다.
"올리고머 화합물" 또는 "올리고머"는 적어도 하나의 핵산 분자의 영역에 혼성화할 수 있는, 연결된 모노머 하부단위의 중합체를 의미한다.
"올리고뉴클레오타이드"는 연결된 뉴클레오사이드의 중합체를 의미하고, 각각의 뉴클레오사이드 및 뉴클레오사이드간 연결은 서로 독립적으로 변형되거나 비변형될 수 있다.
"비경구 투여"는 주사 또는 주입에 의한 투여를 의미한다. 비경구 투여에는 피하 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여, 또는 두개내 투여, 예를 들어, 척추강내 또는 뇌실내 투여가 포함된다. 투여는 연속적이거나, 만성적이거나, 단기간이거나 간헐적일 수 있다.
"펩타이드"는 아미드 결합에 의해 적어도 두 개의 아미노산을 연결시킴으로써 형성된 분자를 의미한다. 펩타이드는 폴리펩타이드 및 단백질을 나타낸다.
"약제학적 조성물"은 개체에게 투여하는데 적합한 물질의 혼합물을 의미한다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 하나 이상의 활성 작용제 및 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 염"은 안티센스 화합물의 생리적으로 및 약제학적으로 허용가능한 염, 즉, 모 올리고뉴클레오타이드의 원하는 생물학적 활성을 유지하며, 원치 않는 독물학적 효과를 그에 부여하지 않는 염을 의미한다.
"포스포로티오에이트 연결"은 포스포디에스테르 결합이 비-가교화 산소 원자들 중의 하나를 황 원자로 대체시킴으로써 변형된 뉴클레오사이드들 사이의 연결을 의미한다. 포스포로티오에이트 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
"부분"은 핵산의 인접 (즉, 연결된) 핵염기의 규정된 수를 의미한다. 특정 구현예에서, 부분은 표적 핵산의 인접 핵염기의 규정된 수이다. 특정 구현예에서, 부분은 안티센스 화합물의 인접 핵염기의 규정된 수이다.
"CUG exp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키는 것"은 정상 DMPK 대립유전자로부터의 RNA 전사체와 비교한 CUGexp DMPK 대립유전자로부터의 RNA 전사체의 우선적 감소를 나타낸다.
"예방하다"는 질환, 장애 또는 상태의 시작 또는 발생을 몇 분으로부터 무한대까지의 기간 동안 지연시키거나 미연에 방지하는 것을 나타낸다. 예방하는 것은 또한 질환, 장애 또는 상태가 발생할 위험을 감소시키는 것을 의미한다.
"프로드럭"은 내인성 효소 또는 다른 화합물질 또는 조건의 작용에 의해 신체 또는 그의 세포 내에서 활성 형태로 전환되는 불활성 형태로 제조된 치료제를 의미한다.
"부작용"은 원하는 효과 이외에 치료에 기인하는 생리적 반응을 의미한다. 특정 구현예에서, 부작용은 주사 부위 반응, 간 기능 시험 이상, 신장 기능 이상, 간독성, 신장 독성, 중추신경계 이상, 근병증, 및 권태감을 포함한다. 예를 들어, 혈청 내의 증가된 아미노트랜스페라제 수준은 간독성 또는 간 기능 이상을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 증가된 빌리루빈은 간독성 또는 간 기능 이상을 나타낼 수 있다.
"단일-가닥 올리고뉴클레오타이드"는 상보적 가닥에 혼성화되지 않은 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"특이적으로 혼성화할 수 있는"은 특이적 연결이 바람직한 조건 하에서, 즉 생체내 검정 및 치료학적 치료의 경우에 생리적 조건 하에서, 비-표적 핵산에 대해서는 최소의 효과를 나타내거나 효과를 나타내지 않으면서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 표적 핵산 사이에서 원하는 효과를 유도하기에 충분한 정도의 상보성을 갖는 안티센스 화합물을 지칭한다.
"스플라이스 병증"은 특정 조직 내 변화된 스플라이스 산물의 발현을 초래하는 하나 이상의 RNA의 대안적 스플라이싱에 있어서의 변화를 의미한다.
"피하 투여"는 피부의 바로 아래에 투여하는 것을 의미한다.
"치환된 당 모이어티"는 RNA 또는 DNA의 천연 당 이외의 푸라노실을 의미한다.
"당" 또는 "당 모이어티"는 천연 당 모이어티 또는 변형된 당을 의미한다.
"당 대용물"은 조금 더 넓은 용어 "뉴클레오사이드 모방체"와 중복되나, 오직 당 단위 (푸라노스 환)의 대체를 지시하도록 의도된다. "당 대용물"은 뉴클레오사이드의 자연 발생 당 모이어티를 대체할 수 있고, 이로써 수득한 뉴클레오사이드 하부단위는 함께 연결될 수 있고/있거나 다른 뉴클레오사이드에 연결되어 상보적 올리고머 화합물을 혼성화할 수 있는 올리고머 화합물을 형성할 수 있다. 그와 같은 구조는 푸라노실과 상이한 원자를 포함하는 고리 (예를 들면, 4, 6, 또는 7-원 고리); 비-산소 원자 (예를 들면, 탄소, 황, 또는 질소)에 의한 푸라노실의 산소의 대체; 또는 원자의 수의 변화 및 산소의 대체 둘 모두를 포함한다. 그러한 구조는 치환된 당 모이어티 (예컨대, 임의로 추가의 치환체를 포함하는 6-원 탄소고리 이환식 당 대용물)에 대해 기재된 것들에 상응하는 치환을 또한 포함할 수 있다. 당 대용물은 또한 더 많은 복합 당 대체물질 (예를 들면, 펩타이드 핵산의 비-고리계)를 포함한다. 당 대용물은 비제한적으로 모폴리노, 사이클로헥세닐 및 사이클로헥시톨을 포함한다.
"표적화" 또는 "표적화된"은 표적 핵산에 특이적으로 혼성화하여 원하는 효과를 유도할 것인, 안티센스 화합물의 설계 및 선택의 과정을 의미한다.
"표적 핵산", "표적 RNA", 및 "표적 RNA 전사체"는 모두 안티센스 화합물에 의해서 표적화될 수 있는 핵산을 나타낸다. 특정 구현예에서, 표적 핵산은 DMPK 핵산의 영역을 포함한다.
"표적 분절"은 안티센스 화합물이 표적화되는 표적 핵산의 뉴클레오타이드의 서열을 의미한다. "5' 표적 부위"는 표적 분절의 5'-모스트(most) 뉴클레오타이드를 나타낸다. "3' 표적 부위"는 표적 분절의 3'-모스트 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"치료학적 유효량"은 개체에게 치료학적 이점을 제공하는 제제의 양을 의미한다.
"치료하다"는 질환, 장애 또는 상태의 변경 또는 개선을 달성하기 위해서 동물에게 약제학적 조성물을 투여하는 것을 나타낸다.
"유형 1 근긴장성 이영양증" 또는 "DM1"은 DMPK에서 비-암호화 CTG 반복서열의 확장으로 야기된 상염색체 우세 장애를 의미한다. 이러한 돌연번이는 확장된 CUG 반복서열 (CUGexp)를 함유하는 RNA 발현이 세포 기능장애를 야기하는 과정, RNA 우세를 초래한다. CUGexp 관은 RNA 연결 단백질과 상호작용하고, 돌연변이 전사체를 핵 병소에 유지하도록 한다. 이러한 RNA의 독성은 RNA 연결 단백질의 박리 및 신호 경로의 활성으로부터 기인한다.
"비변형 뉴클레오타이드"는 천연적으로 발생하는 핵염기, 당 모이어티, 및 뉴클레오사이드간 연결으로 구성된 뉴클레오타이드를 의미한다. 특정 구현예에서, 비변형 뉴클레오타이드는 RNA 뉴클레오타이드 (즉, β-D-리보뉴클레오사이드) 또는 DNA 뉴클레오타이드 (즉, β-D-데옥시리보뉴클레오사이드)이다.
특정
구현예
특정 구현예는 DMPK 발현을 억제하는 방법, 화합물, 및 조성물을 제공한다.
특정 구현예는 동물에서 DMPK 발현을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 상기 동물에게 본원에 추가로 기재된 바와 같은, DMPK에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 이는 상기 동물에게 DMPK에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시킨다.
안티센스특정 구현예는 병원성 전사체의 절단을 유도함으로써 RNA 우세를 중화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 방법을 제공한다.
특정 구현예는 Serca1 스플라이스 병증을 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 엑손 22 포함을 초래한다. 특정 구현예에서, 상기 정정된 스플라이싱은 전경골근, 비복근, 및 대퇴사두근에서 발생한다.
특정 구현예는 m- Titin 스플라이스 병증을 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 엑손 5 포함을 초래한다. 특정 구현예에서, 상기 정정된 스플라이싱은 전경골근, 비복근, 및 대퇴사두근에서 발생한다.
특정 구현예는 Clcn1 스플라이스 병증을 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 엑손 7a 포함을 초래한다. 특정 구현예에서, 상기 정정된 스플라이싱은 전경골근, 비복근, 및 대퇴사두근에서 발생한다.
특정 구현예는 Zasp 스플라이스 병증을 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 엑손 11 포함을 초래한다. 특정 구현예에서, 상기 정정된 스플라이싱은 전경골근, 비복근, 및 대퇴사두근에서 발생한다.
특정 구현예는 하기를 포함하는, 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하는 방법을 제공한다: a) 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 상기 동물을 동정하는 단계, 및 b) 상기 동물에게 치료적으로 유효량의 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계. 특정 구현예에서, 동물에게 투여된 치료적으로 유효량의 화합물은 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시킨다.
특정 구현예는 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법을 제공하며, 이는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 것으로 의심되는 대상체에서, 상기 CUGexp DMPK RNA의 비-반복 영역에 상보적인 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 단계를 포함한다. 상기 화학적으로-변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성한다.
특정 구현예는 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법을 제공하며, 이는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 것으로 의심되는 대상체를 선택하는 단계 및 상기 대상체에게 상기 CUGexp DMPK RNA의 비-반복 영역에 상보적인 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 단계를 포함한다. 상기 화학적으로-변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제 또는 핵 리보뉴클라아제를 활성화하여 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성한다.
특정 구현예는 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법을 제공하며, 이는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 돌연변이체를 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 것으로 의심되는 대상체를 선택하는 단계 및 상기 대상체에게 상기 CUGexp DMPK RNA의 비-반복 영역에 상보적인 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 전신 투여하는 단계를 포함한다. 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 돌연변이체 또는 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 상기 CUGexp DMPK RNA 또는 돌연변이체의 우선적 감소를 달성한다.
특정 구현예는 근긴장증 감소를 필요로 하는 대상체에서 근긴장증을 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 대상체에게 DMPK RNA의 비-반복 영역에 상보적인 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제 또는 핵 리보뉴클라아제를 활성화하여 근긴장증을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 상기 대상체는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나, 변이체 DMPK RNA를 갖거나, 또는 CUGexp DMPK RNA를 갖거나, 또는 이들을 갖는 것으로 의심된다. 특정 구현예에서, DMPK RNA는 핵을 보유한다.
특정 구현예는 스플라이스 병증 감소를 필요로 하는 대상체에서 스플라이스 병증을 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 대상체에게 DMPK RNA의 비-반복 영역에 상보적인 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제 또는 핵 리보뉴클라아제를 활성화하여 스플라이스 병증을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 상기 대상체는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나, 핵 보유 CUGexp DMPK RNA를 갖거나, 또는 이들을 갖는 것으로 의심된다. 특정 구현예에서, DMPK RNA는 핵을 보유한다. 특정 구현예에서, 스플라이스 병증은 MBNL 의존 스플라이스병증이다.
특정 구현예에서, 상기 방법의 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 키메라이다. 특정 구현예에서, 상기 방법의 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 갭머이다.
본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, 상기 투여는 피하이다. 특정 구현예에서, 상기 투여는 정맥내이다.
특정 구현예에서, 상기 방법의 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 DMPK RNA의 비반복 영역 내의 비-암호화 서열를 표적화한다. 특정 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 돌연변이체 DMPK RNA의 암호화 영역, 인트론, 5'UTR, 또는 3'UTR을 표적화한다.
본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, 상기 핵 리보뉴클라아제는 RNase H1이다.
본원에 제공된 방법의 특정 구현예에서, 상기 DMPK RNA는 근육 조직에서 감소된다. 특정 구현예에서, 상기 돌연변이체 DMPK RNA CUGexp DMPK RNA는 우선적으로 감소된다.
특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 1과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자은행 수탁 번호 NT_011109.15에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 2와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 뉴클레오타이드 16666001 내지 16681000로부터 절단된 유전자은행 수탁 번호 NT_039413.7에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 3과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_032418.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 4와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 AI007148.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 5와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 AI304033.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 6과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BC024150.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 7과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BC056615.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 8과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BC075715.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 9와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 BU519245.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 10과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 CB247909.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 11과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 CX208906.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 12와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 CX732022.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 13과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 S60315.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 14와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 S60316.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 15와 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_001081562.1에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 16과 같이 본원에 포함). 특정 구현예에서, DMPK는 유전자은행 수탁 번호 NM_001100.3에서 제시된 서열을 갖는다 (서열 번호: 17과 같이 본원에 포함).
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 인용된 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 인용된 핵염기 서열의 적어도 9개, 적어도 10개, 또는 적어도 11개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 인용된 핵염기 서열의 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 인용된 핵염기 서열의 적어도 13개, 또는 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 인용된 핵염기 서열의 적어도 15개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 인용된 핵염기 서열의 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 24, 25, 27, 또는 28에 인용된 핵염기 서열의 적어도 17개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 24 또는 25에 인용된 핵염기 서열의 적어도 18개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 24 또는 25에 인용된 핵염기 서열의 적어도 19개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1에 표적화된 하기 영역 중 임의의 것에 표적화된다: 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 및 2683-2703. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1에 표적화된 하기 영역 중 임의의 것에 표적화된다: 2773-2788, 1343-1358, 및 1344-1359.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 또는 2683-2703에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2773-2788, 1343-1358, 또는 1344-1359에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 또는 2683-2703에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2773-2788, 1343-1358, 또는 1344-1359에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 또는 2683-2703에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2773-2788, 1343-1358, 또는 1344-1359에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 또는 2683-2703에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2773-2788, 1343-1358, 또는 1344-1359에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 또는 2683-2703에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2773-2788, 1343-1358, 또는 1344-1359에 표적화된다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 2에 표적화된 하기 영역 중 임의의 것에 표적화된다: 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 및 6596-6615. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 2에 표적화된 하기 영역 중 임의의 것에 표적화된다: 13836-13831, 8603-8618, 및 8604-8619.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 또는 6596-6615에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 13836-13831, 8603-8618, 또는 8604-8619에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 또는 6596-6615에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 13836-13831, 8603-8618, 또는 8604-8619에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 또는 6596-6615에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 13836-13831, 8603-8618, 또는 8604-8619에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 또는 6596-6615에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 13836-13831, 8603-8618, 또는 8604-8619에 표적화된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 또는 6596-6615에 표적화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 13836-13831, 8603-8618, 또는 8604-8619에 표적화된다.
특정 구현예에서, 상기 동물은 인간이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 상기 화합물 또는 조성물은 제1 제제로 지정되고, 본 발명의 방법은 제2 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 제 1 제제 및 제 2 제제는 공동 투여된다. 특정 구현예에서, 제 1 제제 및 제 2 제제는 공동 투여되거나 수반하여 투여된다.
특정 구현예에서, 투여는 비경구 투여를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 화합물은 단일가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드로 이루어진다. 특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1-19에 적어도 95% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음). 특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1-19 중 임의의 것에 적어도 100% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음). 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 화합물은 단일가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드로 이루어진다. 특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 적어도 95% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음). 특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 적어도 100% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음).
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 적어도 90% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음). 특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 적어도 85% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음).
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 2에 적어도 90% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음). 특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 2에 적어도 85% 상보적이다 (변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같음).
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다. 특정 구현예에서, 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 이환식 당이다. 특정 구현예에서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸 기 또는 4'- (CH2)n-O-2' 가교를 포함하고, 여기서 n은 1 또는 2이다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각각의 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이며, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다.
특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 동물에게 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 배치되고, 각각의 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드 내의 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5' 윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절; c) 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3' 윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 그리고 각 K는 cEt 당을 나타낸다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5' 윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절; c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3' 윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 그리고 각 K는 cEt 당을 나타낸다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; c) 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 cEt 당을 포함한다.
특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 동물에게 하기를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다: a) 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5' 윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절; c) 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3' 윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 그리고 각 K는 cEt 당을 나타낸다.
특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 동물에게 하기를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다: a) 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5' 윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절; c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3' 윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 그리고 각 K는 cEt 당을 나타낸다.
특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 동물에게 하기를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 그리고 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함한다.
특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 동물에게 하기를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; c) 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절; d) 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙의 뉴클레오사이드는 cEt 당을 포함한다.
특정 구현예는 본원에 개시된 치료적 방법 중 임의의 것에 사용되는 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 임의의 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 유형 1 근긴장성 이영양증을 치료, 개선, 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 DMPK의 발현을 억제하기 위한, 그리고 DMPK 관련 질환 또는 이의 증상을을 치료, 개선, 예방, 또는 지연을 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 동물에서 DMPK 발현을 감소시키기 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키기 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 근육 경직, 근긴장증, 말초 약화 무력증, 안면 및 턱 근육 약화, 연하곤란, 눈꺼풀 수하 (안검하수), 목 근육 약화, 팔 및 다리 근육 약화, 계속된 근육 통증, 수면과잉, 근육 소모, 연하곤란증, 호흡 부족, 불규칙한 심장박동, 심근 손상, 무감각, 인슐린 저항, 및 백내장을 포함하는 DM1의 발병과 연관된 증상 및 결과를 치료, 예방, 지연, 또는 개선하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다. 특정 구현예는 병원성 전사체의 절단을 유도함으로써 RNA 우세를 중화하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 용도를 제공한다.
특정 구현예는 본원에 기재된 바와 같은 유형 1 근긴장성 이영양증을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 키트를 제공하고, 상기 키트는 하기를 포함한다: a) 본원에 기재된 바와 같은 화합물; 및 임의로 b) 본원에 기재된 바와 같은 부가적 제제 또는 요법. 상기 키트는 유형 1 근긴장성 이영양증을 치료, 예방, 또는 개선하기 위하여 상기 키트를 사용하기 위한 설명서 또는 라벨을 추가로 포함할 수 있다.
특정 구현예는 본원에 개시된 치료적 방법 중 임의의 것에 사용되는본원에 기재된 바와 같은 임의의 화합물 또는 조성물을 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예는 DMPK 발현을 억제하기 위한, 그리고 DMPK 관련 질환 및 이의 증상을 치료, 개선, 또는 예방하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물을 제공한다. 특정 구현예는 동물에서 DMPK 발현 감소에 사용되기 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물을 제공한다. 특정 구현예는 동물에서 CUGexp DMPK를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증(spliceopathy)을 감소시키기 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물을 제공한다. 특정 구현예는 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물을 제공한다. 특정 구현예는 근육 경직, 근긴장증, 말초 약화 무력증, 안면 및 턱 근육 약화, 연하곤란, 눈꺼풀 수하 (안검하수), 목 근육 약화, 팔 및 다리 근육 약화, 계속된 근육 통증, 수면과잉, 근육 소모, 연하곤란증, 호흡 부족, 불규칙한 심장박동, 심근 손상, 무감각, 인슐린 저항, 및 백내장을 포함하는 DM1의 발병과 연관된 증상 및 결과를 치료, 예방, 지연, 또는 개선하는데 사용되는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물을 제공한다. 특정 구현예는 병원성 전사체의 절단을 유도함으로써 RNA 우세를 중화하는데 사용되는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물을 제공한다. 특정 구현예는 12 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874의 핵염기 서열 중 임의의 것의 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 제공한다.
본원에 기술된 방법에서 사용될 수 있는 다른 화합물이 또한 제공된다.
예를 들어, 특정 구현예는 10 내지 80, 12 내지 50, 12 내지 30, 15 내지 30, 18 내지 24, 19 내지 22, 또는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874의 핵염기 서열 중 임의의 것의 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구현예는 10 내지 80, 12 내지 50, 12 내지 30, 15 내지 30, 18 내지 24, 19 내지 22, 또는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874의 핵염기 서열 중 임의의 것의 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구현예는 10 내지 80, 12 내지 50, 12 내지 30, 15 내지 30, 또는 15 내지 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 서열 번호: 1의 핵염기 서열 1343-1368, 1317-1366, 2748-2791, 2155-2208, 2748-2791, 730-748, 528-547, 531-567, 636-697, 1311-1331, 1314-1339, 1446-1475, 1635-1670, 1610-1638, 1457-1486, 2773-1788, 931-948, 934-949, 937-952, 942-957, 937-957, 943-958, 937-953, 1346-1363, 1346-1361, 1347-1363, 2162-2179, 2492-2508, 2696-2717, 또는 2683-2703 중 임의의 것의 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 또는 그 이상의 인접 핵염기의 부분을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구현예는 10 내지 80, 12 내지 50, 12 내지 30, 15 내지 30, 18 내지 24, 19 내지 22, 또는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 서열 번호: 2의 핵염기 서열 10195-10294, 13553-13572, 13748-13767, 13455-13475, 13628-13657, 13735-13760, 13746-13905, 13836-13851, 13553-13568, 13563-13578, 13624-13639, 13686-13701, 13760-13775, 13763-13779, 13765-13780, 2580-2595, 6446-6461, 11099-11115, 11082-11099, 1974-1993, 4435-4456, 6035-6052, 6360-6385, 6445-6468, 6807-6824, 6789-6806, 또는 6596-6615 중 임의의 것의 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 또는 그 이상의 인접 핵염기의 부분을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구현예에서, 상기 화합물은 단일가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드이다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 상보적이다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
특정 구현예에서, 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 이환식 당이다.
특정 구현예에서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 cEt이다.
특정 구현예에서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸을 포함한다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 핵염기를 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 각각의 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다.
안티센스
화합물
올리고머 화합물은, 비제한적으로, 올리고뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오사이드, 올리고뉴클레오타이드 유사체, 올리고뉴클레오타이드 모방체, 안티센스 화합물, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 siRNA를 포함한다. 올리고머 화합물은 표적 핵산에 대한 "안티센스"일 수 있고, 이것은 수소 결합을 통해 표적 핵산에 대한 혼성화를 경험할 수 있다는 것을 의미한다.
특정 구현예에서, 안티센스 화합물은, 5'에서 3' 방향으로 쓰여질 때, 그것이 표적화된 표적 핵산의 표적 분절의 역보체를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 그와 같은 특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 5'에서 3' 방향으로 쓰여질 때, 그것이 표적화된 표적 핵산의 표적 분절의 역보체를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 그 길이가 10 내지 30 개의 뉴클레오타이드이다. 환언하면, 일부 구현예에서, 안티센스 화합물은 10 내지 30개 연결된 핵염기이다. 다른 구현예에서, 안티센스 화합물은 하기로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다: 8 내지 80, 10 내지 80, 12 내지 30, 12 내지 50, 15 내지 30, 15 내지 18, 15 내지 17, 16 내지 16, 18 내지 24, 19 내지 22, 또는 20개의 연결된 핵염기. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 그 길이가 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80개 연결된 하부단위 또는 상기 값 중 임의의 2개에 의하여 정의된 범위로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 이러한 길이의 임의의 것의 안티센스 화합물은 본원에 기술된 예시적인 안티센스 화합물 중 임의의 것의 핵염기 서열 중 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 인접 핵염기를 함유한다 (예를 들어, 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874 중 임의의 것에서 제시된 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접 핵염기..
특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 단축된 또는 끝이 잘린 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 단축된 또는 끝이 잘린 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5' 말단 (5' 절단), 또는 대안적으로 3' 말단 (3' 절단)로부터 결실된 단일 뉴클레오사이드를 가질 수 있다. 단축된 또는 끝이 잘린 올리고뉴클레오타이드는 5' 말단으로부터 결실된 2 개의 뉴클레오사이드를 가질 수 있고, 또는 대안적으로 3' 말단으로부터 결실된 2개의 하부단위를 가질 수 있다. 대안적으로, 결실된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 5' 말단으로부터 결실된 하나의 뉴클레오사이드 및 3' 말단로부터 결실된 하나의 뉴클레오사이드을 갖는 안티센스 화합물에서 변형된 올리고뉴클레오타이드를 통해 분산될 수 있다.
단일 부가적 뉴클레오사이드가 늘어난 올리고뉴클레오타이드에서 존재할 때, 부가적 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 5' 또는 3' 말단에서 위치할 수 있다. 2 개 이상의 부가적 뉴클레오사이드가 존재할 때, 부가된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단 (5' 부가), 또는 대안적으로 3' 말단 (3' 부가)에 부가된 2개의 뉴클레오사이드를 갖는 올리고뉴클레오타이드에서 서로 인접할 수 있다. 대안적으로, 부가된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 5' 말단에 부가된 하나의 뉴클레오사이드 및 3' 말단에 부가된 하나의 하부단위를 갖는 올리고뉴클레오타이드에서 안티센스 화합물을 통해 분산될 수 있다.
안티센스 화합물, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 길이를 증가 또는 감소시키고/시키거나 활성을 제거하지 않으면서 미스매치 염기를 도입할 수 있다. 예를 들어, 다음을 참고: in Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), 일련의 길이가 13-25개의 핵염기인 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 난모세포 주사 모델에서 표적 RNA의 절단을 유도하는 그들의 능력에 대해 시험되었다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 말단 근처의 8 또는 11 미스매치 염기를 가지며 그 길이가 25개 핵염기인 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 미스매치를 함유하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오타이드보다 더 적을지라도 표적 mRNA의 직접적인 특이적 절단이 가능했다. 마찬가지로, 표적 특이적 절단은 1 또는 3 미스매치를 갖는 것을 포함하는 13개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 달성되었다.
Gautschi et al (J.Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001)는 bcl-2 및 bcl-xL 둘 다의 시험관내 및 생체내 발현을 감소시키기 위해 bcl-2 mRNA에 대해100% 상보성을 가지며 bcl-xL mRNA에 대한 3 개의 미스매치를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 능력을 실증했다. 더욱이, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 생체내 강력한 항-종양 활성을 실증했다.
Maher 및 Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988) 는 토끼 망상적혈구 검정에서 인간 DHFR의 번역을 저지하는 그것의 능력에 대한, 각각의 탠덤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 2개 또는 3개 서열로 구성된, 일련의 탠덤 14 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및, 28 및 42 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 시험했다. 각각의 3 개의 14 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드 단독은 28 또는 42 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드보다 더 보통의 수준일지라로 번역을 억제할 수 있었다.
표적 핵산, 표적 영역 및
뉴클레오타이드
서열
DMPK를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 비제한적으로 유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1 (서열 번호: 1과 같이 본원에 포함), 뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자 은행 수탁 번호 NT_011109.15 (본원에서 서열 번호: 2와 같이 포함), 뉴클레오타이드 16666001 내지 16681000로부터 절단된 유전자 은행 수탁 번호 NT_039413.7 (본원에서 서열 번호: 3과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 NM_032418.1 (본원에서 서열 번호: 4와 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 AI007148.1 (본원에서 서열 번호: 5와 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 AI304033.1 (본원에서 서열 번호: 6과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 BC024150.1 (본원에서 서열 번호: 7과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 BC056615.1 (본원에서 서열 번호: 8과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 BC075715.1 (본원에서 서열 번호: 9와 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 BU519245.1 (본원에서 서열 번호: 10과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 CB247909.1 (본원에서 서열 번호: 11과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 CX208906.1 (본원에서 서열 번호: 12와 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 CX732022.1 (본원에서 서열 번호: 13과 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 S60315.1 (본원에서 서열 번호: 14와 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 S60316.1 (본원에서 서열 번호: 15와 같이 포함), 유전자 은행 수탁 번호 NM_001081562.1 (본원에서 서열 번호: 16과 같이 포함), 및 유전자 은행 수탁 번호 NM_001100.3 (본원에서 서열 번호: 17과 같이 포함)에서 제시된 서열을 갖는다. 본원에 함유된 실시예에서 각각의 서열 번호로 제시된 서열은 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 연결, 또는 핵염기에 대한 임의의 변형에 독립적인 것으로 이해된다. 그것으로서, 서열번호에 의해 규정된 안티센스 화합물은 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 연결, 또는 핵염기에 대한 하나 이상의 변형을 독립적으로 포함할 수 있다. ISIS 번호 (Isis No)에 의해 기재된 안티센스 화합물은 핵염기 서열 및 모티프의 조합을 나타낸다.
특정 구현예에서, 표적 영역은 표적 핵산의 구조적으로 규정된 영역이다. 예를 들면, 표적 영역은 3' UTR, 5' UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 접합, 코딩 영역, 번역 개시 영역, 번역 종료 영역, 또는 다른 규정된 핵산 영역을 포함할 수 있다. DMPK의 구조적으로 규정된 영역은 서열 데이타베이스 예컨대 NCBI로부터의 승인 번호에 의해 수득될 수 있고 그와 같은 정보는 본원에 참고로 포함되어 있다. 특정 구현예에서, 표적 영역은 표적 영역내의 하나의 표적 분절의 5' 표적 부위로부터 표적 영역내의 또 다른 표적 분절의 3' 표적 부위로의 서열을 포괄할 수 있다.
표적화는 안티센스 화합물이 혼성화하는 적어도 하나의 표적 분절의 결정을 포함하고, 이로써 원하는 효과가 발생한다. 특정 구현예에서, 원하는 효과는 mRNA 표적 핵산 수준의 감소이다. 특정 구현예에서, 원하는 효과는 표적 핵산 또는 표적 핵산과 연관된 표현형 변화에 의해 암호화된 단백질의 수준의 감소이다.
표적 영역은 하나 이상의 표적 분절을 함유할 수 있다. 표적 영역 내의 다중 표적 분절은 중복일 수 있다. 대안적으로, 이들은 비-중복일 수 있다. 특정 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 약 300개 이하의 뉴클레오타이드에 의해 분리된다. 특정 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 표적 핵산 상의 약 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 또는 10 또는 그 이하의 뉴클레오타이드이고, 이전의 값의 임의의 2개에 의해 규정된 범위인 수많은 뉴클레오타이드에 의해 분리된다. 특정 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 표적 핵산 상의 약 5개 이하의 뉴클레오타이드에 의해 분리된다. 특정 구현예에서, 표적 분절은 인접한다. 본원에서 열거된 5' 표적 부위 또는 3' 표적 부위의 임의의 것인 개시 핵산을 갖는 범위에 의해 규정된 표적 영역이 고려된다.
적당한 표적 분절은 5' UTR, 암호화 영역, 3' UTR, 인트론, 엑손, 또는 엑손/인트론 접합 내에서 발견될 수 있다. 시작 코돈 또는 정지 코돈을 함유하는 표적 분절은 또한 적당한 표적 분절이다. 적당한 표적 분절은 특정의 구조적으로 규정된 영역 예컨대 시작 코돈 또는 정지 코돈을 명시적으로 제외할 수 있다.
적당한 표적 분절의 결정은 게놈 도처의 다른 서열에 대한 표적 핵산의 서열의 비교를 포함할 수 있다. 예를 들면, BLAST 알고리즘은 상이한 핵산 중에서 유사성의 영역을 확인하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 비교는 선택된 표적 핵산 이외의 서열 (즉, 비-표적 또는 오프-타겟(off-target) 서열)과 비특이적 방식으로 혼성화할 수 있는 안티센스 화합물의 서열의 선택을 방지할 수 있다.
활성 표적 영역 내의 안티센스 화합물의 활성의 변화 (예를 들면, 표적 핵산 수준의 퍼센트 감소에 의해 규정된 바와 같이) 가 있을 수 있다. 특정 구현예에서, DMPK mRNA 수준의 감소는 DMPK 발현의 억제를 가리킨다. DMPK 단백질의 수준 감소는 또한 표적 mRNA 발현의 억제를 가리킨다. 더욱이, 표현형 변화, 예컨대 근긴장증 감소 또는 스플라이스병증 감소는 DMPK mRNA 및/또는 단백질 발현의 억제를 가리킬 수 있다.
혼성화
일부 구현예에서, 혼성화는 본원에 개시된 안티센스 화합물 및 DMPK 핵산 사이에서 발생한다. 혼성화의 가장 일반적인 기전은 핵산 분자의 상보적 핵염기 사이의 수소 결합 (예를 들면, 왓슨-크릭(Watson-Crick), 후그스텐(Hoogsteen) 또는 역전된 후그스텐(Hoogsteen) 수소 결합)을 수반한다.
혼성화는 가변 조건 하에서 발생할 수 있다. 엄격한 조건은 서열-의존적이고 혼성화될 핵산 분자의 성질 및 조성에 의해 결정된다.
서열이 표적 핵산과 특이적으로 혼성화할 수 있는 지를 측정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다 (Sambrooke and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물은 DMPK 핵산과 특이적으로 혼성화할 수 있다.
상보성
안티센스 화합물 및 표적 핵산은, 충분한 수의 안티센스 화합물의 핵염기가 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 수소연결하여 이로써 원하는 효과가 발생할 수 있을 때 (예를 들면, 표적 핵산, 예컨대 DMPK 핵산의 안티센스 억제), 서로 상보적이다.
더욱이, 안티센스 화합물은 DMPK 핵산의 하나 이상의 분절 상에서 혼성화될 수 있고 이로써 개재 또는 인접한 분절은 혼성화 사건 (예를 들면, 루프 구조, 미스매치 또는 헤어핀 구조)에 관여하지 않는다.
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물, 또는 명시된 이의 부분은 DMPK 핵산, 표적 영역, 표적 분절, 또는 명시된 이의 부분에 대해 적어도, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 상보적이다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 DMPK 핵산, 표적 영역, 표적 분절, 또는 명시된 이의 부분에 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 상보적이며, 본원에 기술된 예시적인 안티센스 화합물 중 임의의 것의 핵염기 서열 중 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 인접 핵염기를 함유한다 (예를 들어, 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874 중 임의의 것에서 제시된 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접 핵염기) 표적 핵산을 갖는 안티센스 화합물의 퍼센트 상보성은 보통의 방법을 사용하여 측정될 수 있으며, 상기 안티센스 화합물의 전체에 걸쳐 측정된다.
예를 들면, 20개 안티센스 화합물의 핵염기 중 18개는 표적 영역에 대해 상보적이고 따라서 특이적으로 혼성화하는, 안티센스 화합물은 90 퍼센트 상보성을 나타낼 것이다. 이러한 예시에서, 잔류 비-상보적 핵염기는 무리를 이루거나 상보적 핵염기와 함께 사이에 배치될 수 있고, 서로 또는 상보적 핵염기에 인접할 필요가 없다. 그것으로서, 표적 핵산에 완전한 상보성을 갖는 2 개의 영역에 의해 플랭킹된 4 개의 비-상보적 핵염기를 갖는 길이가 18개의 핵염기인 안티센스 화합물은 표적 핵산에 77.8% 전체 상보성을 가질 것이며, 따라서 본 발명의 범위 내에 있을 것이다. 표적 핵산의 영역을 갖는 안티센스 화합물의 퍼센트 상보성은 당해기술에서 공지된 BLAST 프로그램 (기본적 국소 정렬 연구 도구) 및 PowerBLAST 프로그램을 사용하여 보통 측정될 수 있다 (Altschul 등, J. Mol. Biol., Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). 퍼센트 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 Smith 및 Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489)의 알고리즘을 사용하는 디폴트 세팅을 사용하여, 예를 들면, 갭(Gap) 프로그램 (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.)에 의해 측정될 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물, 또는 이의 명시된 부분은 표적 핵산, 또는 명시된 이의 부분에 대해 완전 상보적 (즉, 100% 상보적)이다. 예를 들면, 안티센스 화합물은 DMPK 핵산, 또는 이의 표적 영역, 또는 표적 분절 또는 표적 서열에 대해 완전히 상보적일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "완전히 상보적"은, 안티센스 화합물의 각각의 핵염기가 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 정확한 염기 짝짓기를 할수 있다는 것을 의미한다. 예를 들면, 20 핵염기 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물에 대해 완전히 상보적인 표적 핵산의 상응하는 20 핵염기 부분이 있는 한, 400개 핵염기 길이인 표적 서열에 대해 완전히 상보적이다. 완전 상보성은 제 1 및/또는 제 2 핵산의 명시된 부분을 참조하여 또한 사용될 수 있다. 예를 들면, 30 핵염기 안티센스 화합물의 20 핵염기 부분은 400개 핵염기 길이인 표적 서열에 대해 "완전히 상보적"일 수 있다. 30 핵염기 올리고뉴클레오타이드의 20 핵염기 부분은, 표적 서열이 상응하는 20 핵염기 부분을 갖고, 이때 각각의 핵염기가 안티센스 화합물의 20 핵염기 부분에 대해 상보적이라면, 표적 서열에 대해 완전히 상보적이다. 동시에, 전체 30 핵염기 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물의 잔류 10 핵염기가 표적 서열에 대해 또한 상보적인지에 따라 표적 서열에 대해 또한 완전히 상보적일 수 있다.
비-상보적 핵염기의 위치는 안티센스 화합물의 5' 말단 또는 3' 말단에 있을 수 있다. 대안적으로, 비-상보적 핵염기 또는 핵염기들은 안티센스 화합물의 내부 위치에 있을 수 있다. 두개 이상의 비-상보적 핵염기가 존재할 때, 이들은 인접하거나(즉, 연결되거나), 또는 비-인접할 수 있다. 일 구현예에서, 비-상보적 핵염기는 갭머 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 윙 분절에 위치한다.
특정 구현예에서, 길이가 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개이거나, 또는 최대로 상기 길이인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 예컨대 DMPK 핵산, 또는 명시된 이의 부분에 대해 4 이하, 3 이하, 2 이하, 또는 1 이하의 비-상보적 핵염기(들)을 포함한다.
특정 구현예에서, 길이가 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개이거나, 또는 최대로 상기 길이인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 예컨대 DMPK 핵산, 또는 명시된 이의 부분에 대해 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 2 이하, 또는 1 이하의 비-상보적 핵염기(들)을 포함한다.
본원에서 제공된 안티센스 화합물은 또한 표적 핵산의 부분에 대해 상보적인 것을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "부분"은 표적 핵산의 영역 또는 분절 내의 규정된 수의 인접한 (즉, 연결된) 핵염기를 의미한다. "부분"은 또한 규정된 수의 안티센스 화합물의 인접한 핵염기를 의미할 수 있다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 8 핵염기 부분에 대해 상보적이다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 10 핵염기 부분에 대해 상보적이다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 15 핵염기 부분에 대해 상보적이다. 표적 분절의 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18, 적어도 19, 적어도 20, 또는 그 이상의 표적 영역의 핵염기 부분에 대해, 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위에 대해 상보적인 안티센스 화합물이 또한 고려된다.
동일성
본원에서 제공된 안티센스 화합물은 특정한 뉴클레오타이드 서열, 서열번호, 또는 특정 Isis 번호로 나타내는 화합물, 또는 이의 부분에 대한 규정된 퍼센트 동일성을 또한 가질 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 안티센스 화합물은, 동일한 핵염기 짝짓기 능력을 갖는다면, 본원에 개시된 서열과 동일하다. 예를 들면, 우라실 및 티미딘 둘 다 아데닌과 쌍을 이루므로, 개시된 DNA 서열에서 티미딘 대신에 우라실을 함유하는 RNA가 DNA 서열과 동일한 것으로 간주된다. 본원에 기재된 안티센스 화합물 뿐만 아니라 본원에서 제공된 안티센스 화합물에 대해 비-동일한 염기를 갖는 화합물의 단축된 및 늘어난 버전이 또한 고려된다. 비-동일한 염기는 안티센스 화합물에 도처에서 분산되거나 서로 인접할 수 있다. 안티센스 화합물의 퍼센트 동일성은 비교되는 서열에 대해 동일한 염기 짝짓기를 갖는 염기의 수에 따라 산출된다.
특정 구현예에서, 안티센스 화합물, 또는 이의 부분은, 본원에 개시된 안티센스 화합물 또는 서열번호, 또는 이의 부분의 하나 이상과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일하다.
변형
뉴클레오사이드는 염기-당 조합이다. 뉴클레오사이드의 핵염기 (또한 염기로서 공지됨) 부분은 보통 헤테로환 염기 모이어티이다. 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드의 당 부분에 공유 연결된 인산기를 추가로 포함하는 뉴클레오사이드이다. 펜토푸라노실 당을 포함하는 뉴클레오사이드에 대해, 인산기는 당의 2', 3' 또는 5' 히드록실 모이어티에 연결될 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 서로에 대한 인접한 뉴클레오사이드의 공유연결을 통해 형성되어, 선형 폴리머 올리고뉴클레오타이드를 형성한다. 올리고뉴클레오타이드 구조 내에, 인산기는 통상적으로 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 연결을 형성하는 것으로 간주된다.
안티센스 화합물에 대한 변형은 뉴클레오사이드간 연결, 당 모이어티, 또는 핵염기에 대한 치환 또는 변화를 포괄한다. 변형된 안티센스 화합물은 바람직한 특성 예컨대, 예를 들면, 증대된 세포 흡수, 핵산 표적에 대한 증대된 친화도, 뉴클레아제의 존재에서의 증가된 안정성, 또는 증가된 억제 활성 때문에 원산 형태와 비교하여 종종 바람직하다.
화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 그것의 표적 핵산에 대해, 단축된 또는 절단된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 결합 친화도를 증가시키기 위해 또한 이용될 수 있다. 결과적으로, 비교할만한 결과는 그와 같은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 갖는 더 짧은 안티센스 화합물로 종종 수득될 수 있다.
변형된
뉴클레오사이드간
연결
RNA 및 DNA의 "천연적으로 발생하는 뉴클레오사이드간 연결"은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 연결을 의미한다. 하나 이상의 변형된, 즉 비-천연 발생, 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 안티센스 화합물은 바람직한 특성 예컨대, 예를 들면, 증대된 세포 흡수, 표적 핵산에 대한 증대된 친화도, 및 뉴클라아제의 존재에서 증가된 안정성 때문에 천연 발생 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 안티센스 화합물과 비교하여 종종 선택된다.
변형된 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 올리고뉴클레오타이드는 인 원자를 보유하는 뉴클레오사이드간 연결 뿐만 아니라 인 원자를 갖지 않는 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 대표적인 인을 함유하는 뉴클레오사이드간 연결은, 비제한적으로, 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트, 및 포스포로티오에이트를 포함한다. 인-함유 및 비-인-함유 연결의 제조 방법은 공지되어 있다.
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물의 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
변형된 당
모이어티
안티센스 화합물은 임의로 하나 이상의 뉴클레오사이드를 함유할 수 있으며, 여기서 당 그룹은 변형되었던 것이다. 그와 같은 당 변형된 뉴클레오사이드는 안티센스 화합물에 대한 증대된 뉴클레아제 안정성, 증가된 결합 친화도, 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 부여할 수 있다. 특정 구현예에서, 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 리보푸라노스 환 모이어티를 포함한다. 화학적으로 변형된 리보푸라노스 고리의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 치환체 그룹의 부가 (5' 및 2' 치환체 그룹, 이환식 핵산 (BNA)를 형성하기 위한 비-제미널(geminal) 고리 원자의 가교, 리보실 환 산소 원자의 S, N(R), 또는 C(R1)(R2)로의 교체 포함) (R, R1 및 R2 각각은 독립적으로 H, C1-C12 알킬 또는 보호기로부터 선택된다) 및 이들의 조합. 화학적으로 변형된 당의 예시는 하기를 포함한다: 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오사이드 (참고, PCT 국제 출원 WO 2008/101157, 다른 개시된 5', 2'-비스 치환된 뉴클레오사이드에 대해 8/21/08에 공개됨), 또는 2'-위치에서 추가 치환에 의해 S에 의한 리보실 환 산소 원자의 교체 (참고, 공개된 미국 특허 출원 US2005/0130923, 2005년 6월 16일에 공개됨), 또는 대안적으로, BNA의 5'-치환 (참고, PCT 국제 출원 WO 2007/134181, 11/22/07에 공개됨, LNA는, 예를 들면, 5'-메틸 또는 5'-비닐 그룹으로 치환됨).
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오사이드의 예는 5'-비닐, 5'-메틸 (R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환체 그룹을 포함하는 뉴클레오사이드를 비제한적으로 포함한다. 2' 위치에서의 치환체는 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), 및 O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), 여기서 각각의 Rl, Rm 및 Rn은 독립적으로, H 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다.
이환식 핵산 (BNA)의 예는 4' 및 2' 리보실 환 원자 사이의 가교를 포함하는 뉴클레오사이드를 비제한적으로 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물은 하나 이상의 BNA 뉴클레오사이드를 포함하고, 상기 가교는 하기 화학식 중 하나를 포함한다: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)--O-2' 및 4'-C-H(CH2OCH3)--O-2' (및 그의 유사체 참고: 미국 특허 7,399,845, 2008년 7월 15일 발행됨); 4'-C(CH3)(CH3)--O-2' (및 그의 유사체 참고: PCT/US2008/068922, WO/2009/006478로서 2009년 1월 8일 발표); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (및 그의 유사체 참고: PCT/US2008/064591, WO/2008/150729로서 2008년 12월 11일 발표); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (참고: 공개 미국 특허 출원 US2004-0171570, 2004년 9월 2일 발표 ); 4'-CH2-N(R)-O-2', 여기서 R은 H, C1-C12 알킬, 또는 보호기이다 (참고: 미국 특허 7,427,672, 2008년 9월 23일 발표); 4'-CH2-C-(H)(CH3)-2' (참고: Chattopadhyaya et al., J. Org . Chem ., 2009, 74, 118-134); 및 4'-CH2-C-(=CH2)-2' (및 그의 유사체 참고: PCT/US2008/066154, WO 2008/154401로서 2008년 12월 8일 발표).
이환식 뉴클레오사이드와 관련된 추가적인 보고는 다음 출판 문헌에서 발견될 수 있다 (예를 들어 Srivastava et al., J. Am. Chem . Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372; Elayadi et al., Curr . Opinion Invens . Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem . Biol ., 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr . Opinion Mol . Ther., 2001, 3, 239-243; Wahlestedt et al., Proc . Natl . Acad . Sci . U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Singh et al., Chem. Commun ., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumar et al., Bioorg . Med . Chem . Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org . Chem., 1998, 63, 10035-10039; 미국 특허 번호: 7,399,845; 7,053,207; 7,034,133; 6,794,499; 6,770,748; 6,670,461; 6,525,191; 6,268,490; 미국 특허 공보 번호: US2008-0039618; US2007-0287831; US2004-0171570; 미국 특허 출원 일련 번호: 12/129,154; 61/099,844; 61/097,787; 61/086,231; 61/056,564; 61/026,998; 61/026,995; 60/989,574; 국제 출원 WO 2007/134181; WO 2005/021570; WO 2004/106356; WO 94/14226; 및 PCT 국제 출원 번호: PCT/US2008/068922; PCT/US-2008/066154; 및 PCT/US2008/064591). 각각의 상기 이환식 뉴클레오사이드는 예를 들면 α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 포함하는 하나 이상의 입체화학적 당 배치를 갖도록 제조될 수 있다 (참고 PCT 국제 출원 PCT/DK98/00393, WO 99/14226로서 1999년 3월 25일 공개).
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기로부터 독립적으로 선택된 1 또는 1 내지 4개 연결된 기를 포함하는 가교를 비제한적으로 포함하는 펜토푸라노실 당 모이어티의 4' 및 2' 탄소 원자 사이의 가교를 포함한다: -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, 및 -N(Ra)-; 여기서: x는 0, 1, 또는 2이고; n은 1, 2, 3, 또는 4이고; 각각의 Ra 및 Rb는, 독립적으로, H, 보호기, 히드록실, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로환 라디칼, 치환된 헤테로환 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7 지환족 라디칼, 치환된 C5-C7 지환족 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 설포닐 (S(=O)2-J1), 또는 설폭실 (S(=O)-J1)이고; 그리고
각각의 J1 및 J2는, 독립적으로, H, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐,C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로환 라디칼, 치환된 헤테로환 라디칼, C1-C12 아미노알킬, 치환된 C1-C12 아미노알킬, 또는 보호기이다.
특정 구현예에서, 이환식 당 모이어티의 가교는, -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- 또는 -C(RaRb)-O-N(R)-이다. 특정 구현예에서, 가교는 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' 및 4'-CH2-N(R)-O-2'-이고, 여기서 각각의 R은, 독립적으로, H, 보호 그룹, 또는 C1-C12 알킬이다.
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 이성질체 배치에 의해 추가로 규정된다. 예를 들어, 4'-(CH2)-O-2' 가교를 포함하는 뉴클레오사이드는, α-L 배위 또는 β-D 배위일 수 있다. 이전에, α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA'는 안티센스 활성을 보여준 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 통합되었다 (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
이환식 뉴클레오사이드는 4' 내지 2'의 가교를 가지는 것을 포함하고 여기서 이러한 가교는, 제한 없이, α-L-4'-(CH2)-O-2', β-D-4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2', 4'-CH2-N(R)-O-2', 4'-CH(CH3)-O-2', 4'-CH2-S-2', 4'-CH2-N(R)-2', 4'-CH2-CH(CH3)-2', 및 4'-(CH2)3-2'을 포함하고, 여기서 R은 H, 보호기 또는 C1-C12 알킬이다.
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
-Qa-Qb-Qc-는 -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- 또는 -N(Rc)-O-CH2이고;
Rc 는 C1-C12 알킬 또는 아미노 보호기이고; 그리고
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호기, 공액체 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 지지 매질에 대한 공유 부착(covalent attachment)이다.
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호기, 공액체 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 지지 매질에 대한 공유 부착(covalent attachment)이고;
Za는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1-C6 알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐, 아실, 치환된 아실, 치환된 아미드, 티올, 또는 치환된 티올이다.
일 구현예에서, 각각의 치환된 그룹은, 독립적으로, 할로겐, 옥소, 하이드록실, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, 및 NJeC(=X)NJcJd로부터 독립적으로 선택된 치환체 그룹으로 모노 또는 폴리 치환되고, 여기서 각각의 Jc, Jd 및 Je는, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬이고 X는 O 또는 NJc이다.
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호기, 공액체 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 지지 매질에 대한 공유 부착(covalent attachment)이고;
Zb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1-C6 알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐, 아실, 또는 치환된 아실 (C(=O)-)이다.
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호기, 공액체 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 지지 매질에 대한 공유 부착(covalent attachment)이고;
Zd는 C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
각각의 qa, qb, qc 및 qd는 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐, C1-C6 알콕실, 치환된 C1-C6 알콕실, acyl, 치환된 acyl, C1-C6 아미노알킬 또는 치환된 C1-C6 아미노알킬이다;
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호기, 공액체 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 지지 매질에 대한 공유 부착(covalent attachment)이고;
qi, qj, qk 및 ql 각각은, 독립적으로, 수소, 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕실, 치환된 C1-C12 알콕실, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)-NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)-NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이고;
또는 qe 및 qf는 함께 =C(qg)(qh)이고;
qg 및 qh 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C12 알킬이다.
4'-CH2-O-2' 가교를 가지는 아데닌, 시토신, 구아닌, 5-메틸-시토신, 티민 및 우라실 이환식 뉴클레오사이드의 합성 및 제조와 함께, 이들의 올리고머화, 및 핵산 인식 특성이 설명되어 있었다 (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). 이환식 뉴클레오사이드의 합성이 WO 98/39352 및 WO 99/14226에 또한 설명되어 있었다.
4' 2' 가교 기, 예컨대, 4'-CH2-O-2' 및 4'-CH2-S-2'을 가지는 다양한 이환식 뉴클레오사이드의 유사체가 또한 제조되었다(Kumar et al., Bioorg . Med . Chem . Lett ., 1998, 8, 2219-2222). 핵산 중합효소에 대한 기질로서 사용하기 위한 이환식 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고데옥시리보뉴클레오타이드 이중구조의 제조가 또한 설명되어 있었다(Wengel et al., WO 99/14226). 더욱이, 신규한 회전배열적으로 제한된(conformationally restricted) 고친화도 올리고뉴클레오타이드 유사체인 2'-아미노-BNA의 합성이 당업계에 설명되어 있었다(Singh et al., J. Org . Chem ., 1998, 63, 10035-10039). 또한, 2'-아미노- 및 2'-메틸아미노-BNA'가 제조되었고 상보적 RNA 및 DNA 가닥을 갖는 그것의 듀플렉스의 열 안정성은 이전에 보고되었다.
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호기, 공액체 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 지지 매질에 대한 공유 부착(covalent attachment)이고;
qi, qj, qk 및 ql 각각은, 독립적으로, 수소, 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕실, 치환된 C1-C12 알콕실, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)-NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)-NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이고; 그리고
qi 및 qj 또는 ql 및 qk는 함께 =C(qg)(qh)이고, 여기서 qg 및 qh은 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-C12 알킬 또는 치환된 C1-C12 알킬이다.
4'-(CH2)3-2' 가교를 갖는 하나의 탄소환 이환식 뉴클레오사이드 및 알케닐 유사체 가교 4'-CH=CH-CH2-2'가 기재되었다 (참고, 예를 들면, Frier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 and Albaek et al., J. Org . Chem., 2006, 71, 7731-7740). 탄소환 이환식 뉴클레오사이드의 -합성 및 제조는 그것의 올리고머화 및 생화학적 연구와 함께 또한 기재되었다 (참고, 예를 들면, Srivastava et al., J. Am. Chem . Soc . 2007, 129(26), 8362-8379).
특정 구현예에서, 이환식 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, (A) α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (B) β-D-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (C) 에틸렌옥시 (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) 아미노옥시 (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) 옥시아미노 (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, 및 (F) 메틸(메틸렌옥시) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA, (G) 메틸렌-티오 (4'-CH2-S-2') BNA (또한 제한된 에틸 또는 cEt로 지칭됨), (H) 메틸렌-아미노 (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) 메틸 카보사이클릭 (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA, 및 (J) 프로필렌 카보사이클릭 (4'-(CH2)3-2') BNA, 및 (K) 비닐 BNA를, 이하에서 묘사된 바와 같이 포함한다.
여기서 Bx는 염기 모이어티이고 R은, 독립적으로, H, 보호기 또는 C1-C6 알킬 또는 C1-C6 알콕시이다.
특정 구현예에서, 뉴클레오사이드는 리보실 환의 당 대용물로의 교체에 의하여 변형된다. 그러한 변형은 비제한적으로, 하기 화학식 중 하나를 갖는 모폴리노 환, 시클로헥실 환, 시클로헥실 환, 또는 테트라히드로푸라닐 환과 같은 대용 환계 (때로 DNA 유사체로 불림)로의 리보실 환의 대체를 포함한다.
특정 구현예에서, 당 대용물은 하기 화학식으로부터 선택된다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
T3 및 T4 각각은, 독립적으로, 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결시키는 뉴클레오사이드간 연결기이거나 T3 및 T4 중 하나는 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물 또는 올리고뉴클레오타이드에 연결시키는 뉴클레오사이드간 연결기이고, 그리고 T3 및 T4 중 다른 것은 H, 히드록실 보호기, 연결된 공액체 그룹, 또는 5' 또는 3'-말단기이고;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 각각은 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고; 그리고
R1 및 R2 중 한쪽은 수소이고 다른 쪽은 할로겐, 치환된 또는 비치환된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN으로부터 선택되되, 여기서 X는 O, S 또는 NJ1이고 각각의 J1, J2 및 J3은, 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이다.
특정 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7는 각각 H이다. 특정 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 H이외의 것이다. 특정 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 메틸이다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 중 하나가 F인 THP 뉴클레오사이드가 제공된다. 특정 구현예에서, R1은 플루오로이고 R2는 H이며; R1은 메톡시이고 R2는 H이며, 그리고 R1은 메톡시에톡시이고 R2는 H이다.
당 대용물은 당업계에서 헥시톨 핵산(HNA), 알트리톨 핵산(ANA) 및 만니톨 핵산(MNA)으로 지칭되는 것을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다(참고 Leumann, C. J., Bioorg . & Med . Chem ., 2002, 10, 841-854).
특정 구현예에서, 당 대용물은 5개 초과의 원자를 갖고 1개 초과의 헤테로원자를 갖는 환을 포함한다. 예를 들어, 모폴리노 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드 및 올리고머 화합물에서의 그들의 용도가 보고되었다 (예를 들어 참고: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; 및 미국 특허 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; 및 5,034,506).
본원에서 사용된 바와 같이, "모폴리노"는 하기 구조를 갖는 당 대용물을 의미한다:
특정 구현예에서, 모폴리노는, 상기 모폴리노 구조로부터의 다양한 치환기 그룹을 부가하거나 변경시킴으로써 변형될 수 있다. 그와 같은 당 대용물은 본원에서 "변형된 모폴리노"라 칭한다.
특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 천연 유래 뉴클레오사이드에서 펜토퓨라노실 잔기 대신에 6-원 사이클로헥센일을 가지는 뉴클레오사이드인 하나 이상의 변형 사이클로헥센일 뉴클레오사이드를 포함한다. 변형된 사이클로헥시닐 뉴클레오사이드는 당업계에서 다음에 기술된 것들을 비제한적으로 포함한다(예를 들어 일반적으로 보유된, 다음 참고: 공개된 PCT 출원 WO 2010/036696 (2010년 4월 10일 발표), Robeyns et al., J. Am. Chem . Soc ., 2008, 130(6), 1979-1984; et al., Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(30), 9340-9348; Gu et al.,, Nucleosides , Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al., Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu et al., Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al., Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang et al., J. Org. Chem ., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure et al., Nucleic Acids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang et al., J. Org . Chem ., 2001, 66, 8478-82; Wang et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang et al., J. Am. Chem ., 2000, 122, 8595-8602; 공개 PCT 출원, WO 06/047842; 및 공개 PCT 출원 WO 01/049687; 각각의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 편입되어 있다). 특정 구현예에서, 변형된 사이클로헥센일 뉴클레오사이드는 하기 화학식을 갖는다:
여기서:
Bx는 헤테로환 염기 모이어티이고;
T3 및 T4 각각은, 독립적으로, 사이클로헥센일 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결시키는 뉴클레오사이드간 연결기이거나 T3 및 T4 중 하나는 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결시키는 뉴클레오사이드간 연결기이고, 그리고 T3 및 T4 중 다른 것은 H, 히드록실 보호기, 연결된 공액체 그룹, 또는 5' 또는 3'-말단기이고;
q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7, q8 및 q9 는 각각, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 다른 당 치환체 그룹이다.
많은 다른 이환식 및 삼환식 당 대용물 고리계는 또한 당해기술에 공지되어 있고 안티센스 화합물에 통합시키기 위한 뉴클레오사이드를 변형하기 위해 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, 검토 논문: Leumann, Christian J., Bioorg . & Med . Chem., 2002, 10, 841-854). 그와 같은 고리계는 활성을 향상시키기 위해 다양한 부가적 치환을 경험할 수 있다.
변형된 당류의 제조 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다. 이러한 변형 당의 제조를 교시하는 일부 대표적인 미국 특허는, 제한 없이, 미국 특허 제4,981,957호; 제5,118,800호; 제5,319,080호; 제5,359,044호; 제5,393,878호; 제5,446,137호; 제5,466,786호; 제5,514,785호; 제5,519,134호; 제5,567,811호; 제5,576,427호; 제5,591,722호; 제5,597,909호; 제5,610,300호; 제5,627,053호; 제5,639,873호; 제5,646,265호; 제5,670,633호; 제5,700,920호; 제5,792,847호 및 제6,600,032호 및 2005년 6월 2일에 출원되고 2005년 12월 22일에 WO 2005/121371로서 공개된 국제 출원 PCT/US2005/019219를 포함하고, 이들 중 특정한 것은 본 출원과 공동으로 소유되며, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입된다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오타이드에서, 핵염기 모이어티 (천연, 변형된, 또는 이들의 조합)은 적절한 핵산 표적과의 혼성화를 위해 유지된다.
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 변형된 당 모이어티를 갖는 하나 이상의 뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 2'-MOE이다. 특정 구현예에서, 2'-MOE 변형된 뉴클레오타이드는 갭머 모티프에서 배열된다.
변형된 핵염기
핵염기 (또는 염기) 변형 또는 치환은, 자연 발생 또는 합성 비변형된 핵염기와 구조적으로 구별할 수 있고 기능적으로 교환가능하다.
천연 및 변형된 핵염기 모두는 수소 결합에 참여할 수 있다., 그와 같은 핵염기 변형은 안티센스 화합물에 대한 증대된 뉴클레아제 안정성, 증가된 결합 친화도, 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 부여할 수 있다. 변형된 핵염기는 합성 및 천연 핵염기 예컨대, 예를 들면, 5-메틸시토신 (5-me-C)를 포함한다. 5-메틸시토신 치환를 포함하는 임의의 핵염기 치환은, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 특히 유용하다. 예를 들면, 5-메틸시토신 치환은 0.6-1.2°C 까지 핵산 이중 안정성을 증가시키는 것으로 보였다 (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
부가적 비변형된 핵염기는 하기를 포함한다: 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 (-C≡C-CH3) 우라실 및 시토신 및 피리미딘 염기의 다른 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌.
퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로환으로 대체된 헤테로환 염기 모이어티, 예를 들어 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈이 또한 포함된다. 안티센스 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 특히 유용한 핵염기는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린을 포함하고, 이것은 2 아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함한다.
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 하나 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 갭-확장된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 각각의 시토신은 5-메틸시토신이다.
안티센스 화합물 모티프
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 안티센스 화합물 특성 예컨대 증대된 억제 활성, 증가된 표적 핵산에 대한 결합 친화도, 또는 생체내 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 내성을 부여하기 위해 패턴, 또는 모티프에서 배열된 화학적으로 변형된 하부단위를 갖는다.
키메라 안티센스 화합물은 전형적으로 뉴클레아제 분해에 대한 증가된 내성, 증가된 세포 흡수, 표적 핵산의 증가된 결합 친화도, 및/또는 증가된 억제 활성을 부여하기위해 변형된 적어도 하나의 영역을 함유한다. 키메라 안티센스 화합물의 제 2 영역은 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포 엔도뉴클레아제 RNase H의 기질로서 임의로 쓰일 수 있다.
갭머 모티프를 갖는 안티센스 화합물은 키메라 안티센스 화합물로 간주된다. 갭머에서 RNaseH 절단을 지지하는 복수의 뉴클레오타이드를 갖는 내부 영역은 내부 영역의 뉴클레오사이드로부터 화학적으로 뚜렷한 복수의 뉴클레오타이드를 갖는 외부 영역 사이에 배치된다. 갭머 모티프를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경우에, 갭 분절은 일반적으로 엔도뉴클레아제 절단의 기질로서 쓰이지만, 윙 분절은 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 영역은 각각의 뚜렷한 영역을 포함하는 당 모이어티의 유형에 의해 분화된다. 갭머의 영역을 분화시키기 위해 사용된 당 모이어티의 유형은 일부 구현예에서 하기를 포함할 수 있다: β-D-리보뉴클레오사이드, β-D-데옥시리보뉴클레오사이드, 2'-변형된 뉴클레오사이드 (그와 같은 2'-변형된 뉴클레오사이드는 기타 중에서 2'-MOE 및 2'-O-CH3를 포함할 수 있다), 및 이환식 당 변형된 뉴클레오사이드 (그와 같은 이환식 당 변형된 뉴클레오사이드는 4'-(CH2)n-O-2' 가교를 포함할 수 있으며, 여기서 n은 1이거나, n은 2이다). 윙-갭-윙 모티프는 "X-Y-Z"로서 빈번히 기재되고, 여기서 "X"는 5'-윙 영역의 길이를 나타내고, "Y"는 갭 영역의 길이를 나타내고, "Z"는 3'-윙 영역의 길이를 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같이, "X-Y-Z"로서 기재된 갭머는, 갭이 각각의 5'-윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하여 위치하는 정도의 배치를 갖는다. 따라서, 개재 뉴클레오타이드는 5'-윙 분절 및 갭 분절, 또는 갭 분절 및 3'-윙 분절 사이에 존재하지 않는다. 본원에 기재된 안티센스 화합물의 임의의 것은 갭머 모티프를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, "X" 및 "Z"는 동일하고, 다른 구현예에서 y는 상이하다. 바람직한 구현예에서, "Y"는 8 내지 15개의 뉴클레오타이드이다. X, Y, 또는 Z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 또는 그 초과의 뉴클레오타이드 중 임의의 것일 수 있다. 따라서, 갭머는 예를 들어, 비제한적으로 5-10-5, 4-8-4, 4-12-3, 4-12-4, 3-14-3, 2-13-5, 2-16-2, 1-18-1, 3-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 2-8-2, 6-8-6, 5-8-5, 5-7-5, 1-8-1, 또는 2-6-2를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 "윙머(wingmer)" 모티프를 갖고, 이는 윙-갭 또는 갭-윙 배치, 즉 갭머 배치에 대해 상기 기술된 바와 같은 X-Y 또는 Y-Z 배치를 갖는다. 따라서, 윙머는 예를 들어, 비제한적으로 5-10, 8-4, 4-12, 12-4, 3-14, 16-2, 18-1, 10-3, 2-10, 1-10, 8-2, 2-13, 또는 5-13를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 5-10-5 갭머 모티프를 보유한다. 특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 5-7-5 갭머 모티프를 보유한다. 특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 3-10-3 갭머 모티프를 보유한다. 특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 4-8-4 갭머 모티프를 보유한다.
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 갭-확장된 모티프를 갖는다.
특정 구현예에서, 이러한 갭머 또는 윙머 모티프의 임의의 것의 안티센스 화합물은 본원에 기술된 예시적인 안티센스 화합물 중 임의의 것의 핵염기 서열 중 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 인접 핵염기를 함유한다 (예를 들어, 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874 중 임의의 것에서 제시된 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접 핵염기.
특정 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 그러한 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 당을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적인 변형 (당 변형, 핵염기 변형, 및/또는 연결 변형)은 패턴 또는 모티프를 정의한다. 특정 구현예에서, 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 연결 및 핵염기의 화학적 변형의 패턴은 선택은 서로 독립적이다. 따라서, 올리고뉴클레오타이드는 이의 당 변형 모티프, 뉴클레오사이드간 연결 모티프, 및/또는 핵염기 변형 모티프에 의하여 기술될 수 있다 (본원에 사용된 바와 같이, 핵염기 변형 모티프는 핵염기 서열에 독립적인 핵염기에 대한 화학적 변형을 기술한다).
특정 당 모티프
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 규정된 패턴 또는 당 변형 모티프 중 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 영역을 따라 배열된 1 이상의 유형의 변형된 당 모이어티 및/또는 자연 발생 당 모이어티를 포함한다. 그와 같은 모티프는 본원에서 논의된 당 변형 및/또는 다른 공지된 당 변형 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
올리고뉴클레오타이드는 2 개의 외부 영역 또는 "윙" 및 중심 또는 내부 영역 또는 "갭"을 포함하는 갭머 당 모티프를 갖는 영역을 포함하거나 그것으로 구성된다. 갭머 당 모티프의 3 개의 영역 (5'-윙, 갭, 및 3'-윙)은 뉴클레오사이드의 인접 서열을 형성하고, 여기서 각각의 윙의 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 적어도 일부는 갭의 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 적어도 일부와 상이하다. 특이적으로, 갭에 아주 가까운 각각의 윙의 뉴클레오사이드 (5'-윙의 3'-대부분 뉴클레오사이드 및 3'-윙의 5'-대부분 뉴클레오사이드)의 적어도 당 모이어티는 인접하는 갭 뉴클레오사이드의 당 모이어티와 상이하고, 따라서 윙과 갭 사이의 경계를 규정한다. 특정 구현예에서, 갭 내의 당 모이어티는 서로 동일하다. 특정 구현예에서, 갭은 1 이상의 다른 갭의 뉴클레오사이드의 당 모이어티와 상이한 당 모이어티를 갖는 1 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 2 개의 윙의 당 변형 모티프는 서로 동일하다 (대칭적 갭머). 특정 구현예에서, 5'-윙의 당 변형 모티프는 3'-윙의 당 변형 모티프와 상이하다 (비대칭 당 갭머).
특정 5'-윙
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 1 내지 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2 내지 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3 내지 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 4 또는 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 1 내지 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 1 내지 3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 1 또는 2 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2 내지 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2 또는 3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3 또는 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 1 개의 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 1개의 이환식 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 2개의 이환식 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 3개의 이환식 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 4개의 이환식 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 구속된 에틸 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 LNA 뉴클레오사이드이다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-치환된 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3개의 LNA 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 3개의 LNA 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 AABB 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드 및 2'-OMe 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 AABB 모티프를 갖고, 각 B는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 AABB 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 B는 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 나타낸다.
특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 AAABB 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드 및 2'-OMe 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 AABB 모티프를 갖고, 각 B는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 AABB 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 B는 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 나타낸다.
특정 3'-윙
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 1 내지 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2 내지 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3 내지 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 4 또는 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 1 내지 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 1 내지 3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 1 또는 2 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2 내지 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2 또는 3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3 또는 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 1 개의 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 4 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 구속된 에틸 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 LNA 뉴클레오사이드이다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 1개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 3개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 4개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-치환된 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 이환식 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 적어도 하나의 LNA 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 5'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3개의 LNA 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 이환식 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 구속된 에틸 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 3개의 LNA 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 및 2개의 비-이환식 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 2개의 LNA 뉴클레오사이드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함한다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 BBBAA 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드 및 2'-OMe 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 BBAA 모티프를 갖고, 각 B는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 BBAA 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 B는 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 나타낸다.
특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 BBAA 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드 및 2'-OMe 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 BBAA 모티프를 갖고, 각 B는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 뉴클레오사이드 중 선택된다. 특정 구현예에서, 갭머의 3'-윙은 BBAA 모티프를 갖고, 각 A는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 B는 구속된 에틸 뉴클레오사이드를 나타낸다.
약제학적 조성물을
제형화하기
위한 조성물 및 방법
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 약제학적 조성물 또는 제형의 제조를 위한 약제학적으로 허용가능한 활성 또는 불활성 물질과 혼합될 수 있다. 조성물 및 약제학적 조성물의 제형 방법은 수많은 기준에 의존하고, 이 기준은, 비제한적으로, 투여 경로, 질환 정도, 또는 투여될 복용량을 포함한다.
DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 안티센스 화합물을 적당한 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 조합하여 약제학적 조성물에서 이용될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 희석제는 포스페이트-완충 식염수 (PBS)를 포함한다. PBS는 비경구로 전달될 조성물에서 사용하기에 적당한 희석제이다. 따라서, 일 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 희석제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 기재된 방법에서 이용된다. 특정 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 희석제는 PBS이다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 임의의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 그와 같은 에스테르의 염, 또는 인간을 포함하는 동물에게 투여시, (직접적으로 또는 간접적으로) 생물학적 활성 대사물 또는 그의 잔류물을 제공할 수 있는 임의의 다른 올리고뉴클레오타이드을 포함한다. 따라서, 예를 들면, 본 개시내용은 또한 안티센스 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 그와 같은 전구약물의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 다른 생물동등성에 관한 것이다. 적당한 약제학적으로 허용가능한 염은, 비제한적으로, 나트륨 및 칼륨 염을 포함한다.
프로드러그는 활성 안티센스 화합물을 형성하도록 내인성 뉴클레아제에 의해 절단된 안티센스 화합물의 하나 또는 둘 모두의 말단에서 부가적 뉴클레오사이드의 통합을 포함한다.
공액된 안티센스 화합물
안티센스 화합물은 수득한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 모이어티 또는 공액체에 공유연결될 수 있다. 전형적인 공액체 그룹은 콜레스테롤 모이어티 및 지질 모이어티를 포함한다. 부가적 공액체 그룹은 탄수화물, 인지질, 바이오틴, 펜아진, 폴레이트, 펜안트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레신, 로다민, 쿠마린, 및 염료를 포함한다.
안티센스 화합물은 특성 예컨대, 예를 들면, 뉴클레아제 안정성을 향상시키기 위해 안티센스 화합물의 하나 또는 둘 모두 말단에 일반적으로 부착된 하나 이상의 안정화 그룹을 갖도록 또한 변형될 수 있다. 안정화 그룹에 캡 구조가 포함된다. 이들 말단 변형은 엑소뉴클레아제 분해로부터 말단 핵산을 갖는 안티센스 화합물을 보호하고, 세포 내에서 전달 및/또는 국재화를 도울 수 있다. 캡은 5'-말단 (5'-캡), 또는 3'-말단 (3'-캡)에서 존재할 수 있고, 또는 말단 둘에서 존재할 수 있다. 캡 구조는 당해기술에서 잘 공지되어 있고, 예를 들면, 반전된 데옥시 무염기성 캡을 포함한다. 뉴클레아제 안정성을 부여하기 위해 캡 안티센스 화합물의 하나 또는 둘 모두의 말단을 캡핑하기 위해 사용될 수 있는 추가의 3' 및 5'-안정화 그룹은 WO 03/004602 (2003년 1월 16일 공개)에서 개시된 것을 포함한다.
세포 배양물 및 안티센스 화합물 치료
DMPK 핵산의 수준, 활성 또는 발현에 대한 안티센스 화합물의 효과는 다양한 세포 유형에서 시험관내에서 시험될 수 있다. 그와 같은 분석을 위해 사용된 세포 유형은 상업적 판매인 (예를 들면 American Type Culture Collection, Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD)으로부터 이용가능하고 세포는 상업적으로 이용가능한 시약을 사용하여 판매인의 지침에 따라 배양된다 (예를 들면 Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). 예시적인 세포 유형은, 비제한적으로, HepG2 세포 Hep3B 세포, 일차 간세포, A549 세포, GM04281 섬유아세포 및 LLC-MK2 세포를 포함한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 시험관내 시험
다른 안티센스 화합물에 의한 치료를 위해 적절하게 변형될 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 세포의 치료 방법이 본원에 기재되어 있다.
일반적으로, 세포는, 세포가 배양물에서 대략 60-80% 밀집도에 도달할 때 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 처리된다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포에 도입하기 위해 통상적으로 사용된 하나의 시약은 양이온성 지질 전달감염 시약 LIPOFECTIN® (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 원하는 최종 농도 및 2 내지 12 ug/mL / 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드 범위인 LIPOFECTIN® 농도를 달성하기 위해 OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 LIPOFECTIN®와 혼합된다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포에 도입하기 위해 사용된 또 하나의 시약은 LIPOFECTAMINE 2000® (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 원하는 농도 및 2 내지 12 ug/mL / 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드 범위인 LIPOFECTAMINE® 농도를 달성하기 위해 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 배지 (Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 LIPOFECTAMINE 2000®와 혼합된다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포에 도입하기 위해 사용된 또 하나의 시약은 Cytofectin® (Invitrogen, Carlsbad, CA)를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 원하는 농도 및 2 내지 12 ug/mL / 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드 범위인 Cytofectin® 농도를 달성하기 위해 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 배치 (Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 Cytofectin®와 혼합된다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포에 도입하기 위해 사용된 또 하나의 기술은 전기천공을 포함한다.
세포는 일상적인 방법에 의해 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 처리된다. 세포는 전형적으로 안티센스 올리고뉴클레오타이드 처리 16-24 시간 후에 수확되고, 그 시간에 표적 핵산의 RNA 또는 단백질 수준은 당해분야에서 공지되고 본원에 기재된 방법으로 측정된다. 일반적으로, 처리가 다중 복제물에서 수행될 때, 데이타는 복제물 처리의 평균으로서 제공된다.
사용된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 농도는 세포주에서 세포주로 변한다. 특정한 세포주에 대한 최적의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 농도를 측정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 LIPOFECTAMINE2000®, 리포펙틴 또는 사이토펙틴으로 전달감염될 때 1 nM 내지 300 nM 범위의 농도에서 전형적으로 사용된다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 전기천공을 사용하여 전달감염될 때 625 내지 20,000 nM 범위의 고농도에서 사용된다.
RNA 단리
RNA 분석은 총 세포 RNA 또는 폴리(A)+ mRNA에 대해 수행될 수 있다. RNA 단리의 방법은 당해기술에 공지되어 있다. RNA는 제조자의 추천된 프로토콜에 따라 당해기술에서 공지된 방법, 예를 들면, TRIZOL® 시약 (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 사용하여 제조된다.
표적 수준 또는 발현의 억제 분석
DMPK 핵산의 수준 또는 발현의 억제는 당해기술에서 공지된 다양한 방식으로 검정될 수 있다. 예를 들면, 표적 핵산 수준은, 예를 들면, 노던 블랏 분석, 경쟁적 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR), 또는 정량적 실시간 PCR에 의해 정량화될 수 있다. RNA 분석은 총 세포 RNA 또는 폴리(A)+ mRNA에 대해 수행될 수 있다. RNA 단리의 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 노던 블랏 분석은 당해기술에서 또한 일상적이다. 정량적 실시간 PCR은 상업적으로 이용가능한 ABI PRISM® 7600, 7700, 또는 7900 서열 검출 시스템 (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA로부터 이용가능)을 사용하여 편리하게 달성될 수 있고 제조자의 지침에 따라 사용된다.
표적 RNA 수준의 정량적 실시간 PCR 분석
표적 RNA 수준의 정량화는 제조자의 지침에 따라 ABI PRISM® 7600, 7700, 또는 7900 서열 검출 시스템 (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용하여 정량적 실시간 PCR에 의해 달성될 수 있다. 정량적 실시간 PCR의 방법은 당해기술에 공지되어 있다.
실시간 PCR 전에, 단리된 RNA에 대해 역전사효소 (RT) 반응이 수행되고, 이 반응은 상보적 DNA (cDNA)을 생산하고 그 다음 실시간 PCR 증폭에 대한 기질로서 사용된다. RT 및 실시간 PCR 반응은 동일 샘플 웰에서 순차적으로 수행된다. RT 및 실시간 PCR 시약은 Invitrogen (Carlsbad, CA)로부터 수득된다. RT, 실시간-PCR 반응은 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 수행된다.
실시간 PCR에 의해 수득된 유전자 (또는 RNA) 표적 양은, 발현이 일정한 유전자, 예컨대 사이클로필린 A의 발현 수준을 사용하거나, RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA)을 사용하여 총 RNA를 정량화하여 정규화된다. 사이클로필린 A 발현은 실시간 PCR에 의해, 표적과 동시에, 다중화, 또는 별도로 시행하여 정량화된다. 총 RNA는 RIBOGREEN® RNA 정량화 시약 (Invitrogen, Inc. Eugene, OR)를 사용하여 정량화된다. RIBOGREEN®에 의한 RNA 정량화의 방법은 하기에서 교시된다: Jones, L.J., 등, (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). CYTOFLUOR® 4000 기기 (PE Applied Biosystems)는 RIBOGREEN® 형광을 측정하기위해 사용된다.
프로브 및 프라이머는 DMPK 핵산에 대한 혼성화를 위해 설계된다. 실시간 PCR 프로브 및 프라이머를 설계하는 방법은 당해기술에 공지되어 있고 소프트웨어 예컨대 PRIMER EXPRESS® 소프트웨어 (Applied Biosystems, Foster City, CA)의 사용을 포함할 수 있다.
단백질 수준 분석
DMPK 핵산의 안티센스 억제는 DMPK 단백질 수준을 측정하여 평가될 수 있다. DMPK의 단백질 수준은 당해기술에 공지된 다양한 방식, 예컨대 면역침전, 웨스턴 블랏 분석 (면역블로팅), 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA), 정량적 단백질 검정, 단백질 활성 검정 (예를 들면, 카스파제 활성 검정), 면역조직화학, 면역세포화학 또는 형광-활성화된 세포 분류 (FACS)으로 평가 또는 정량화될 수 있다. 표적에 대해 지향된 항체는 다양한 공급원, 예컨대 항체의 MSRS 카탈로그 (Aerie Corporation, Birmingham, MI)으로부터 확인 및 수득될 수 있고, 또는 당해기술에 잘 공지된 종래의 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 생성 방법을 통해 제조될 수 있다.
안티센스 화합물의 체내 시험
안티센스 화합물, 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, DMPK의 발현을 억제하고 표현형 변화를 생성하기 위해 그것의 능력을 평가하기 위해 동물에서 시험된다. 시험은 정상동물, 또는 실험 질환 모델, 예를 들어 근긴장성 이영양증 (DM1)의 HSALR 마우스 모델에서 수행될 수 있다.
HSALR 마우스 모델은 DM1에 대해 확립된 모델이다 (Mankodi, A. et al. Science. 289: 1769, 2000). 마우스는 유전자의 3' UTR에 삽입된 220 CTG 반복서열을 갖는 인간 골격 액틴 (hACTA1) 이식유전자를 가진다. hACTA1-CUGexp 전사체는 골격 근육 내 핵 병소 내에 축적되고, 인간 DM1에서의 것과 유사한 근긴장증을 초래한다 (Mankodi, A. et al. Mol. Cell 10: 35, 2002; Lin, X. et al. Hum. Mol. Genet. 15: 2087, 2006). 따라서, hACTA1 이식유전자의 안티센스 억제에 의한, HSALR 마우스 내의 DM1 증상의 개선이 DMPK 전사체의 안티센스 억제에 의한 인간 환자에서의 유사한 증상의 완화를 예견할 것으로 기대된다.
마우스 내에서의 CUGexp RNA 발현은 근육 전사체의 광범위한 리모델링을 야기하고, 이의 대부분은 MBNL1의 감소에 의하여 복제된다. 따라서, HSALR 마우스 내의 전사체의 정상화가 DMPK 전사체의 안티센스 억제에 의한 DM1 환자에서의 인간 전사체의 정상화를 예견할 것으로 기대된다.
동물에의 투여에 대해, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 약제학적으로 허용가능한 희석제, 예컨대 포스페이트-완충 식염수에서 제형된다. 투여는 비경구 투여 경로를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 치료 기간 다음에, RNA는 조직으로부터 단리되고 DMPK 핵산 발현의 변화가 측정된다. DMPK 단백질 수준의 변화가 또한 측정된다.
스플라이싱
근긴장성 이영양증 (DM1)은 DMPK 유전자의 3' 비번역 영역 내의 CTG 반복서열 확장에 의하여 야기된다 (Brook, J.D. et al. Cell. 68: 799, 1992). 이러한 돌연번이는 확장된 CUG 반복서열(CUGexp)를 함유하는 RNA 발현이 세포 기능장애를 야기하는 과정, RNA 우세를 초래한다 (Osborne RJ and Thornton CA., Human Molecular Genetics., 2006, 15(2): R162-R169). 그러한 CUGexp는 골격 근육 내 핵 병소 내에 보유된다 (Davis, B.M. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:7388, 1997). 핵 병소 내의 CUGexp의 축적은 폴리(CUG)-연결 단백질, 예컨대 머슬블라인드(Muscleblind)-유사 1 (MBLN1)의 박리를 야기한다 (Miller, J.W. et al. EMBO J. 19: 4439, 2000). MBLN1은 스플라이싱 인자이며, Serca1, CIC-1, Titin 및 Zasp과 같은 유전자 스플라이싱을 조절한다. 그러므로, CUGexp에 의한 MBLN1의 박리는, MBLN1이 정상적으로 제어하는 유전자 엑손의 오조절된 대안적 스플라이싱을 야기한다. Hum. Mol. Genet. 15: 2087, 2006). 그러한 오조절, 예컨대 예를 들어 DM1 환자에서의, 그리고 HSALR 마우스 모델에서의 동물 내 대안적 스플라이싱의 정정은 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 치료를 포함하는 치료의 효능에 대한 유용한 지표이다.
특정
안티센스
기전
근긴장성 이영양증(DM1)은 DMPK 유전자의 3' 비번역 영역 내의 CTG 반복서열 확장에 의하여 야기된다. 특정 구현예에서, DMPK 유전자의 3' 비번역 영역 내의 확장은, 골격 근육의 핵 병소에 보유된, 확장된 CUG 반복서열 (CUGexp)을 함유하는 RNA 및 확장된 CUG 반복서열을 함유하는 RNA의 전사를 초래한다. 특정 경우에서, 핵으로부터 세포질로의 mRNA 유출을 책임지는 세포성 기작은 핵으로부터의 확장된 CUG 반복서열을 함유하는 RNA를 유출하지 않거나, 또는 덜 효율적으로 상기와 같이 한다. 특정 구현예에서, 세포는 핵으로부터 DMPK mRNA CUGexp DMPK mRNA를 유출하지 않거나, 그러한 유출이 감소된다. 따라서, 특정 구현예에서, DMPK CUGexp mRNA는 핵에 축적된다. 특정 구현예에서, DMPK CUGexp mRNA의 사본이, 정상적으로 유출된 야생형 DMPK mRNA의 사본에서보다 세포 핵에 더 많이 존재한다. 그러한 구현예에서, 핵 내 표적을 감소시키는 안티센스 화합물은, 핵 내 그것들의 상대적인 풍부함으로 인하여, 상기 안티센스 화합물이 달리 변이체 및 야생형을 구별하지 않다고 하더라도, 야생형 DMPK mRNA와 비교하여 변이체 DMPK CUGexp mRNA를 우선적으로 감소시킬 것이다. RNase H 의존 안티센스 화합물은 핵 내에서 활성이며, 그러한 화합물은 특히 그러한 용도에 매우 적합하다.
특정 경우에서, 야생형 DMPK 예비-mRNA 및 돌연변이 CUGexp DMPK 예비-mRNA는 유사한 속도로 mRNA로 처리되는 것으로 예상된다. 따라서, 야생형 DMPK 예비-mRNA 및 돌연변이 CUGexp DMPK 예비-mRNA의 대략적으로 동일한 양이 세포 핵 내에 존재하는 것으로 예상된다. 그러나, 처리 후, 야생형 DMPK 예비-mRNA은 핵으로부터 상대적으로 빨리 유출되고, 돌연변이 CUGexp DMPK 예비-mRNA는 느리게 유출되거나 유출되지 않는다. 그러한 특정 구현예에서, 변이체 CUGexp DMPK mRNA는 핵 내에 야생형 DMPK mRNA보다 많은 양으로 축적된다. 그러한 특정 구현예에서, mRNA에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 변이체 CUGexp DMPK mRNA의 더 많은 사본이 세포 핵내 존재하므로, 야생형 DMPK mRNA와 비교하여 변이체 CUGexp DMPK mRNA의 발현을 우선적으로 감소시킬 것이다. 특정 구현예에서, 예비-mRNA 및 비-mRNA (예를 들어, 인트론을 표적화)에 표적화된 안티센스 화합물은, 2개 예비-mRNA의 핵 풍부함이 유사할 것이므로, 야생형과 비교하여 변이체 DMPK를 우선적으로 감소시키는 것으로 예상된다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 안티센스 화합물은 DMPK 예비-mRNA의 인트론에 표적화되지 않는다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 안티센스 화합물은 DMPK 예비-mRNA에 존재하는 엑손 또는 엑손-엑손 접합에 표적화된다. 특정 구현예에서, mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 본원에 기술된 하나 이상의 특징을 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 (i) 세포 핵 내의 활성을 갖고, (2) 야생형 DMPK mRNA와 비교하여 변이체 DMPK CUGexp mRNA를 우선적으로 감소시킬 것이므로, 바람직하다.
특정
바이오마커
마우스 모델에서의 DM1 중증도는, 핵 또는 핵 병소 내 CUGexp 전사체 누적 수준에 의해, 적어도 부분적으로, 측정된다. DM1 중증도에 대한 유용한 생리적 마커는 불수의 활동 전위 (근긴장증)의 고빈도 운용의 발달 내에 있다.
특정 징후
특정 구현예에서, 개체를 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 이 방법은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 개체는 유형 1 근긴장성 이영양증 (DM1)을 갖는다.
따라서, 유형 1 근긴장성 이영양증과 연관된 증상을, 유형 1 근긴장성 이영양증과 연관된 증상의 개선을 필요로 하는 대상체에서 개선시키는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 유형 1 근긴장성 이영양증과 관련된 증상의 개시 비율을 감소시키는 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, 유형 1 근긴장성 이영양증과 관련된 증상의 중증도를 감소시키는 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, DM1와 연관된 증상은 근육 경직, 근긴장증, 말초 약화 무력증, 안면 및 턱 근육 약화, 연하곤란, 눈꺼풀 수하 (안검하수), 목 근육 약화, 팔 및 다리 근육 약화, 계속된 근육 통증, 수면과잉, 근육 소모, 연하곤란증, 호흡 부족, 불규칙한 심장박동, 심근 손상, 무감각, 인슐린 저항, 및 백내장을 포함한다. 상기 증상은 아동에서의 발달 지연, 습득 장애, 언어 및 스피치 장애, 및 성격 발달 장애를 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 방법은 DMPK 핵산에 표적화된 화합물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구현예에서, DMPK 핵산에 표적화된 안티센스 화합물의 투여로 적어도 약 15%만큼, 적어도 약 20%만큼, 적어도 약 25%만큼, 적어도 약 30%만큼, 적어도 약 35%만큼, 적어도 약 40%만큼, 적어도 약 45%만큼, 적어도 약 50%만큼, 적어도 약 55%만큼, 적어도 약 60%만큼, 적어도 약 65%만큼, 적어도 약 70%만큼, 적어도 약 75%만큼, 적어도 약 80%만큼, 적어도 약 85%만큼, 적어도 약 90%만큼, 적어도 약 95%만큼 또는 적어도 약 99%만큼 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위 까지 DMPK 발현의 감소를 초래한다.
특정 구현예에서, DMPK에 대해 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 유형 1 근긴장성 이영양증을 앓고 있거나 그것에 민감한 환자를 치료하기 위한 약제의 제조를 위해 사용된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33- 874에서 인용된 서열의 본원에 기재된 바와 같은 인접 핵염기 부분을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
투여
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 및 조성물은 비경구로 투여된다.
특정 구현예에서, 비경구 투여는 주입에 의한 것이다. 투여는 만성적이거나, 연속적이거나, 단기간이거나 간헐적일 수 있다. 특정 구현예에서, 주입된 약제학적 제제는 펌프로 전달된다. 특정 구현예에서, 비경구 투여는 주사에 의한 것이다 (예컨대 볼러스 주사). 이러한 주사는 주사기로 투여될 수 있다.
비경구 투여에는 피하 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여, 또는 두개내 투여, 예를 들어, 척추강내 또는 뇌실내 투여가 포함된다. 투여는 연속적이거나, 만성적이거나, 단기간이거나 간헐적일 수 있다.
특정 구현예서, 비경구 투여는 피하, 정맥내, 뇌내, 뇌실내, 척추강내, 또는 다른 투여이며, 이는 올리고뉴클레오타이드의 전신성 효과 (전신성 효과로 특징화되는 전신성 투여, 즉 1 초과의 조직 내의 효과) 또는 CNS 또는 CSF로의 전달을 초래한다.
DM1의 HSALR 마우스 모델 내에서의 알파 1 액틴 억제 및 근긴장증 감소에 의하여 측정된 활성 기간은 대퇴사두근, 비복근, 및 전경골근을 포함하는 근육 조직 내에서 연장된다 (하기 실시예 참고). 4주 동안의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 피하 주사는, 투여 종료 이후 적어도 11주 (77일) 째에 HSALR 마우스에서의 대퇴사두근, 비복근, 및 전경골근 내의 알파 1 액틴의 적어도 70% 만큼의 억제를 초래한다. 4주 동안의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 피하 주사는, 투여 종료 이후 적어도 11주 (77일) 째에 HSALR 마우스에서의 대퇴사두근, 비복근, 및 전경골근 내의 근긴장증 제거를 초래한다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 바와 같이, 조성물의 화합물의 전달은 적어도 77일 동안 표적 mRNA 및/또는 표적 단백질의 적어도 70%의 하향 조절을 초래한다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 바와 같이, 조성물의 화합물의 전달은 적어도 30일, 적어도 35일, 적어도 40일, 적어도 45일, 적어도 50일, 적어도 55일, 적어도 60일, 적어도 65일, 적어도 70일, 적어도 75일, 적어도 76일, 적어도 77일, 적어도 78일, 적어도 79일, 적어도 80일, 적어도 85일, 적어도 90일, 적어도 95일, 적어도 100일, 적어도 105일, 적어도 110일, 적어도 115일, 적어도 120일, 적어도 1년 동안 표적 mRNA 및/또는 표적 단백질의 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%의 하향 조절을 초래한다.
특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 77일간 매일 1회씩 주사 또는 주입에 의하여 전달된다. 특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 1개월마다, 2개월마다, 3개월마다, 6개월마다, 1년에 2회, 또는 1년에 1회 주사 또는 주입에 의하여 전달된다.
임의의 병용 요법
특정 구현예에서, 본원의 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 제1 제제는 하나 이상의 제2 제제와 함께 공동-투여된다. 특정 구현예에서, 그와 같은 제2 제제는 본원에 기재된 제1 제제로서 동일한 유형 1 근긴장성 이영양증을 치료하기 위해 설계된다. 특정 구현예에서, 그와 같은 제2 제제는 본원에 기재된 제1 제제로서 상이한 질환, 장애, 또는 상태를 치료하기 위해 설계된다. 특정 구현예에서, 그와 같은 제2 제제는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 약제학적 조성물의 원하지 않는 부작용을 치료하기 위해 설계된다. 특정 구현예에서, 제2 제제는 제1 제제의 원하지 않는 효과를 치료하기 위해 제1 제제와 공동-투여된다. 특정 구현예에서, 제2 제제는 조합 효과를 얻기 위해 제1 제제와 공동-투여된다. 특정 구현예에서, 제2 제제는 상승작용 효과를 얻기 위해 제1 제제와 공동-투여된다.
특정 구현예에서, 제 1 제제 및 하나 이상의 제 2 제제는 동시에 투여된다. 특정 구현예에서, 제 1 제제 및 하나 이상의 제 2 제제는 상이한 시간에 투여된다. 특정 구현예에서, 제 1 제제 및 하나 이상의 제 2 제제는 단일 약제학적 제형으로 함께 제조된다. 특정 구현예에서, 제 1 제제 및 하나 이상의 제 2 제제는 별도로 제조된다.
특정 비교 화합물
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 적절한 비교 화합물과 비교하여 하나 이상의 개선된 시험관내 및/또는 체내 특성으로부터의 이점을 갖는다.
특정 구현예에서, ISIS 445569, a 5-10-5 MOE 갭머 (CGGAGCGGTTGTGAACTGGC의 서열 (5'로부터 3'으로)을 갖고 (서열 번호: 24로서 본원에서 포함) 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이고, 각 시토신은 5-메틸시토신이고, 그리고 뉴클레오사이드 1-5 및 16-20은 2'-O-메톡시에틸 모이어티를 포함하며, 이는 WO 2012/012443에 사전에 기술되며, 참고로서 본원에 편입됨)는 비교 화합물이다.
ISIS 445569는, ISIS 445569가 다수의 프라이머 프로브 세트를 사용하여 측정된 시험관내 인간 DMPK의 뚜렷한 감소를 통계적으로 나타내므로, 대표적인 비교 화합물이다 (참고 예컨대 WO 2012/012443의 실시예 1 및 실시예 2). 또한, ISIS 445569가 인간 골격 근육 세포 및 DM1 섬유아세포에서의 시험관내 인간 DMPK의 뚜렷한 용량-의존적 억제를 통계적으로 나타낸다 (참고 예컨대 WO 2012/012443의 실시예 4 및 실시예 5, 및 WO 2012/012467의 실시예 28). ISIS 445569는 또한 형질전환 마우스에서 인간 DMPK 전사체 발현을 감소시킨다 (WO 2012/012443의 실시예 23 및 24 및 WO 2012/012467의 실시예 29 및 30). ISIS 445569는 WO 2012/012443 및 WO 2012/012467에서 바람직한 인간 DMPK 안티센스 화합물이었다.
특정 화합물
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569과 비교하여 개선된 활성 및/또는 개선된 내성으로부터의 이점을 갖는다. 예를 들어, 특정 구현예에서, ISIS 598769, ISIS 598768, 및/또는 ISIS 486178는 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569과 비교하여 더 높은 활성 및/또는 내성을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569보다 더 강력하다. 예를 들어, 본원에 기술된 실시예 10에 제공된 바와 같이, 6 포인트 용량 반응 곡선에서 (61.7 nM, 185.2 nM, 555.6 nM, 1666.7 nM, 5000.0 nM, 및 15000.0 nM), 전기천공을 사용하여 형질감염될 때 HepG2 세포 내 배양된, ISIS 598769는 1.9 μM의 IC50을 달성하였고, ISIS 598768는 1.2 μM의 IC50를 달성하였고, 그리고 ISIS 486178는 0.7 μM의 IC50를 달성하였으며, 반면 ISIS 445569는 2.3 μM의 IC50를 달성하였다. 따라서, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178는 비교 화합물, ISIS 445569보다 더욱 강력하다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 다수의 상이한 근육 조직에 걸처 DMPK의 용량-의존적 억제를 달성할 때 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569보다 더 큰 활성을 갖는다. 또 다른 실시예에서, 본원에 기술된 실시예 16에 제공된 바와 같이, ISIS 598768 및 ISIS 598769은 DMSXL 형질전환 마우스에 피하로 4주간 일주일에 2회씩 25 mg/kg/주, 50 mg/kg/주, 또는 100 mg/kg/주로 투여될 때, 몇몇의 상이한 근육 조직에 걸쳐 비교 화합물 ISIS 445569보다 더 큰 용량-의존적 억제를 달성하였다. 일부 근육 조직에서, 예를 들어, 전경골근에서, ISIS 598768 및 ISIS 598769 둘 다는 200 mg/kg/주에서 달성된 ISIS 445569보다 25, 50 및 100 mg/kg/주에서 더 큰 DMPK 억제를 달성하였다. 대퇴사두근 및 비복근에서, ISIS 598768 및 ISIS 598769 둘 다는 100 또는 200 mg/kg/주에서 달성된 ISIS 445569보다 50 mg/kg/주에서 동일하거나 DMPK의 더 큰 DMPK 억제를 달성하였다. 따라서, ISIS 598768 및 ISIS 598769은 다수의 상이한 근육 조직에 걸쳐 DMPK의 용량-의존적 억제를 달성할 때, ISIS 445569보다 더 큰 활성을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은, CD-1 마우스에 투여될 때, 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569보다 더 높은 내성을 갖는다. 또 다른 실시예에서, 본원에 기술된 실시예 17에 제공된 바와 같이, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178은 CD-1 마우스에 투여될 때, ISIS 445569보다 더 양호한 내성 마커를 나타낸다. ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178를 피하로 6주간 50 mg/kg/주로 일주일에 2회 투여하였다. ISIS 445569를 피하로 6주간 100 mg/kg/주로 일주일에 2회 투여하였다. 치료 후, ALT, AST, 및 BUN 수준은 ISIS 445569 치료된 마우스에서 보다 ISIS 486178 및 ISIS 598768 치료된 마우스에서 더 낮았다. 치료 후, ALT 및 AST 수준은 ISIS 445569 치료된 마우스에서 보다 ISIS 598769 치료된 마우스에서 더 낮았다. 따라서, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178은 CD-1 마우스에서, 비교 화합물 ISIS 445569보다 더 높은 내성을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은, 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 래트에 투여될 때, 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569보다 더 높은 내성을 갖는다. 또 다른 실시예에서, 본원에 기술된 실시예 18에 제공된 바와 같이, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178은 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 마우스에 투여될 때, ISIS 445569보다 더 양호한 내성 마커를 나타낸다. ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178를 피하로 6주간 50 mg/kg/주로 일주일에 2회 투여하였다. ISIS 445569를 피하로 6주간 100 mg/kg/주로 일주일에 2회 투여하였다. 치료 후, ALT 및 AST 수준은 ISIS 445569 치료된 마우스에서 보다 ISIS 486178, ISIS 598769, 및 ISIS 598768 치료된 마우스에서 더 낮았다. 따라서, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178은 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 래트에서, 비교 화합물 ISIS 445569보다 더 높은 내성을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569보다 시노몰구스 원숭이에서 더 양호한 내성 마커을 나타낸다. 또 다른 실시예에서, 본원에 기술된 실시예 19에 제공된 바와 같이, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178은 시노몰구스 원숭이에 투여될 때, 더 양호한 내성 마커를 나타낸다 (알라닌 아미노전이효소 (ALT), 아스파르테이트 아미노전이효소 (AST), 젖산 탈수소효소 (LDH), 및 크레아틴 키나아제 (CK) 측정 포함). 특정 구현예들에서, ALT 및 AST 수준은 간독성(hepatotoxicity)의 지표로서 사용된다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 상승된 ALT 및 AST 수준은 간 세포에의 손상을 나타낸다. 특정 구현예에서, 상승된 CK 수준은 근육 조직 내 세포에의 손상과 연관된다. 특정 구현예에서, 상승된 LDH 수준은 세포 조직 손상과 연관된다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은, 시노몰구스 원숭이에 투여될 때, 적절한 비교 화합물, 예컨대 ISIS 445569보다 더 높은 내성을 갖는다. 실시예 19에서 제공된 바와 같이, 시노몰구스 원숭이 그룹에 ISIS 598769, ISIS 598768, ISIS 486178, 및 ISIS 445569를 40 mg/kg/주로 치료하였다. ISIS 445569로의 치료는 치료 도입 93일째에 상승된 ALT 및 AST 수준을 초래하였다. ISIS 598768, 및 ISIS 486178로의 치료는 치료 도입 58 및 93일째에, ISIS 445569과 비교하여, 더 낮은 ALT 및 AST 수준을 초래하였다. ISIS 598769로의 치료는 ISIS 445569과 비교하여, 더 낮은 ALT (치료 93일째에) 및 AST (치료 도입 58 및 93일째에) 수준을 초래하였다. 더욱이, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178를 투여받은 원숭이의 ALT 및 AST 수준은 염수를 투여받은 ALT 및 AST 수준과 일치하였다. ISIS 445569로의 치료는 치료 도입 93일째에, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178을 투여받은 동물에서 측정된 LDH 수준과 비교하여, 상승된 LDH 수준을 초래하였다. ISIS 445569로의 치료는 치료 도입 93일째에, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178을 투여받은 동물에서 측정된 CK 수준과 비교하여, 상승된 CK 수준을 초래하였다. 그러므로, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178는 비교 화합물, ISIS 445569보다 더 높은 내성을 갖는다.
상기 검토된 데이터는 ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178이 비교 화합물, ISIS 445569와 비교하여 ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178이 활성인, 더 넓은 잘-용인되는 투여량 범위를 갖는다는 것을 나타낸다. 또한, 본원의 실시예에서 제시되고 상기 검토된 데이터 전체는 ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178 각각이 비교 화합물, ISIS 445569와 비교하여 다수의 안정성 및 활성 이점을 갖는다는 것을 나타낸다. 즉, ISIS 598769, ISIS 598768, 및 ISIS 486178은 ISIS 445569에 비하여 인간에서 더 안전하고 더 활성인 약물일 것이다.
특정 구현예에서, ISIS 445569는 WO 2012/012443 및/또는 WO 2012/012467에서 개시된 다른 화합물보다, CUGexp DMPK mRNA를 감소시키고/시키거나 유형 1 근긴장성 이영양증과 연관된 병태 또는 증상을 치료하기 위하여 인간에서 더 안전하고 더 활성인 약물일 것이다.
특정 구현예에서, ISIS 512497는 ISIS 445569보다 영장류 및 CD-1 마우스에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다. 특정 구현예에서, ISIS 512497는 ISIS 445569와 동일한 용량으로, 그리고 그보다 적게 투여시, 다수의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다.
특정 구현예에서, ISIS 486178은 ISIS 445569과 비교하여, 마우스, 래트, 및 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다. 특정 구현예에서, ISIS 486178는 ISIS 445569와 동일한 용량으로, 그리고 그보다 적게 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다.
특정 구현예에서, ISIS 570808는 ISIS 445569와 동일한 용량으로, 그리고 그보다 적게 투여시, 적어도 5개의 상이한 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다.
특정 구현예에서, ISIS 594292는 ISIS 445569와 동일한 용량으로 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다. 특정 구현예에서, ISIS 486178는 ISIS 445569보다 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다.
특정 구현예에서, ISIS 569473는 ISIS 445569와 동일한 용량으로 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다. 특정 구현예에서, ISIS 569473는 ISIS 445569보다 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다.
특정 구현예에서, ISIS 594300는 ISIS 445569와 동일한 용량으로 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다. 특정 구현예에서, ISIS 594300는 ISIS 445569보다 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다.
특정 구현예에서, ISIS 598777는 ISIS 445569와 동일한 용량으로 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다. 특정 구현예에서, ISIS 598777는 ISIS 445569보다 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다.
특정 구현예에서, ISIS 598768는 ISIS 445569와 동일한 용량으로 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다. 특정 구현예에서, ISIS 598768는 ISIS 445569보다 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다.
특정 구현예에서, ISIS 598769는 ISIS 445569와 동일한 용량으로 투여시, 1 이상의 근육 조직에서 인간 DMPK 핵산의 더 큰 녹다운(knockdown)을 달성한다. 특정 구현예에서, ISIS 598769는 ISIS 445569보다 영장류에서 더 나은 안정성 프로파일을 갖는다.
참조에 의한 비제한 개시내용 및 편입
본 명세서에 기술된 임의의 화합물, 조성물 및 방법은 특정 구현예에 따라 구체성을 갖고 기술되어 있지만, 하기 실시예는 단지 본 명세서에 기술된 화합물들을 설명하는데 도움이 되며, 이들을 제한하고자 의도되는 것은 아니다. 본원에서 인용된 각각의 참조, 유전자은행 승인 번호, 등은 그 전체가 참고로 본원에 포함되어 있다.
이러한 제출을 수반하는 서열목록은 요구되는 바와 같은 "RNA" 또는 "DNA"로서 각각의 서열을 확인하지만, 실제로는, 이들 서열은 화학적 변형의 임의의 조합으로 변형될 수 있다. 당해분야의 숙련가는, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 기재하기 위한 "RNA" 또는 "DNA"와 같은 명칭이, 임의의 예에서, 임의적이라는 것을 쉽게 인식할 것이다. 예를 들면, 2'-OH 당 모이어티 및 티민 염기를 포함하는 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 당 (DNA의 천연 2'-H에 대한 2'-OH)을 갖는 DNA로서 또는 변형된 염기 (RNA의 천연 우라실에 대한 티민 (메틸화된 우라실))을 갖는 RNA로서 기재될 수 있다.
따라서, 서열목록에 있는 것들 것 비제한적으로 포함하는 본원에서 제공된 핵산 서열은, 변형된 핵염기를 갖는 그와 같은 핵산을 비제한적으로 포함하는, 천연 또는 변형된 RNA 및/또는 DNA의 임의의 조합을 함유하는 핵산을 포함하는 것으로 의도된다. 추가 실시예에 의해 그리고 비제한적으로, 핵염기 서열 "ATCGATCG" 을 갖는 올리고뉴클레오타이드는, 변형 또는 비변형되든지, 그와 같은 화합물을 비제한적으로 포함하는 그와 같은 핵염기 서열을 갖는 임의의 올리고뉴클레오타이드을 포함하고, 상기 화합물은 RNA 염기, 예컨대 서열 "AUCGAUCG"를 갖는 것들 및 일부 DNA 염기 및 일부 RNA 염기 예컨대 "AUCGATCG"를 갖는 것들 및 다른 변형된 염기, 예컨대 "ATmeCGAUCG"를 갖는 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서meC는 5-위치에서 메틸 그룹을 포함하는 시토신 염기를 나타낸다.
실시예
비제한적 개시사항 및 참조에 의한 포함
본 명세서에 기술된 임의의 화합물, 조성물 및 방법은 특정 구현예에 따라 구체성을 갖고 기술되어 있지만, 하기 실시예는 단지 본 명세서에 기술된 화합물들을 설명하는데 도움이 되며, 이들을 제한하고자 의도되는 것은 아니다. 본 출원에서 열거된 각각의 참조문헌은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다.
실시예
1: 인간
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (
hDMPK
)를
표적화하는
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)는 hDMPK를 표적화하도록 설계되었다. 새롭게 설계된 ASO는 본 분야에 잘 알려지고 하기 표 1 및 2에 기술된 바와 같은 표준 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하여 제조되었다. 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 아래첨자 "k"는 6'-(S)-CH3 이환식 뉴클레오사이드 (cEt); 아래첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 변형된 뉴클레오사이드를 나타내고; 그리고 아래첨자 "d"는 β-D-2'-데옥시리보뉴클레오사이드를 나타낸다. "mC"는 5-메틸시토신 뉴클레오사이드를 나타낸다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 (유전자은행 수탁번호 NM_001081560.1) 및/또는 서열 번호: 2 (뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자은행 수탁번호 NT_011109.15의 상보체)에 표적화된다. "개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 갭머가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 갭머가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다.
표 1
hDMPK를 표적화하고 서열 번호: 2에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
표 2
hDMPK를 표적화하고 서열 번호: 1에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
실시예
2: 인간 골격 근육 세포 (
hSKMc
)에서의 인간
DMPK의
안티센스
억제
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 DMPK RNA에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 hSKMc 세포를 전기천공을 사용하여 10,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. DMPK RNA 전사체 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조군 세포에 대비한 DMPK의 발현율로서 표현된다.
표 3, 4, 5, 및 6에서의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 5-10-5 갭머이고, 여기서 갭 분절은 10 개의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함하고, 각 윙은 5 개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 각각의 갭머 전체적인 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 (P=S) 연결이다. 각각의 갭머에서의 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. "표적 개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "표적 정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. 하기 표 3, 4, 또는 5에 열거된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 (유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1)를 표적화한다. 하기 표 6에 열거된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 2 (뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자은행 수탁번호 NT_011109.15의 상보체)를 표적화한다.
표 2, 3, 4, 및 5에서의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 몇몇은 상기 명시된 조건 하에서 DMPK mRNA 수준의 뚜렷한 억제를 나타냈다.
표 3
서열 번호: 1을 표적화하는 5-10-5 갭머에 의한 hSKMc에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 4
서열 번호: 1을 표적화하는 5-10-5 갭머에 의한 hSKMc에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 5
서열 번호: 1을 표적화하는 5-10-5 갭머에 의한 hSKMc에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 6
서열 번호: 2를 표적화하는 5-10-5 갭머에 의한 hSKMc에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
실시예
3: 인간
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (
hDMPK
)를
표적화하는
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)는 hDMPK를 표적화하도록 설계되었다. 새롭게 설계된 ASO는 본 분야에 잘 알려지고 하기 표 7에 기술된 바와 같은 표준 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하여 제조되었다. 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 아래첨자 "k"는 6'-(S)-CH3 이환식 뉴클레오사이드 (cEt); 아래첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 변형된 뉴클레오사이드를 나타내고; 그리고 아래첨자 "d"는 β-D-2'-데옥시리보뉴클레오사이드를 나타낸다. "mC"는 5-메틸시토신 뉴클레오사이드를 나타낸다.
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 DMPK RNA에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 사용하여 4,500 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. DMPK RNA 전사체 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조군 세포에 대비한 DMPK의 발현율로서 표현된다.
"표적 개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "표적 정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. 하기 표 7에 열거된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 (유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1)를 표적화한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 몇몇은 상기 명시된 조건 하에서 DMPK mRNA 수준의 뚜렷한 억제를 나타냈다.
표 7
서열 번호: 1을 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
실시예
4: 인간
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (
hDMPK
)를
표적화하는
안티센스
올리고뉴클레오타이드의
설계
용량 반응
HepG2
일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)는 hDMPK를 표적화하도록 설계되었다. 새롭게 설계된 ASO는 본 분야에 잘 알려지고 하기 표 8에 기술된 바와 같은 표준 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하여 제조되었다. 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 아래첨자 "k"는 6'-(S)-CH3 이환식 뉴클레오사이드 (cEt); 아래첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 변형된 뉴클레오사이드를 나타내고; 그리고 아래첨자 "d"는 β-D-2'-데옥시리보뉴클레오사이드를 나타낸다. "mC"는 5-메틸시토신 뉴클레오사이드를 나타낸다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 (유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1)에 표적화된다. "개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 갭머가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 갭머가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다.
표 8
hDMPK를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
실시예
5: 용량
반응
HepG2
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 인간 DMPK RNA 전사체에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 사용하여 625 nM, 1250 nM, 2500 nM, 5000 nM, 및 10000.0 nM의 농도로 각 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3164 (정방향 서열 AGCCTGAGCCGGGAGATG, 본 발명에서는 서열 번호: 20으로 지정됨; 역방향 서열 GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT, 본 발명에서는 서열 번호: 21로 지정됨; 프로브 서열 AGGCCATCCGCACGGACAACCX, 본 발명에서는 서열 번호: 22로 지정됨)를 사용하여 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. 인간 DMPK RNA 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조 (UTC) 세포와 비교한, 인간 DMPK의 발현율로서 하기 표에서 제시된다. 상기 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열은 상기 명시된 바와 같이 상기 명시된 조건 하에서 인간 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제를 나타냈다.
표 9
서열 번호: 1을 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
실시예
6: 인간
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (
hDMPK
)를
표적화하는
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)는 hDMPK를 표적화하도록 설계되었다. 새롭게 설계된 ASO는 본 분야에 잘 알려지고 하기 표 10에 기술된 바와 같은 표준 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하여 제조되었다. 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 아래첨자 "k"는 6'-(S)-CH3 이환식 뉴클레오사이드 (cEt); 아래첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 변형된 뉴클레오사이드를 나타내고; 그리고 아래첨자 "d"는 β-D-2'-데옥시리보뉴클레오사이드를 나타낸다. "mC"는 5-메틸시토신 뉴클레오사이드를 나타낸다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 2 (뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자은행 수탁번호 NT_011109.15의 상보체)에 표적화된다. "개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 갭머가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 갭머가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다.
표 10
hDMPK를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계
실시예
7:
HepG2
세포에서의 인간
DMPK
RNA
전사체에
표적화된
ASO에
대한 용량 반응
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 인간 DMPK RNA 전사체에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 사용하여 625 nM, 1250 nM, 2500 nM, 5000 nM, 및 10000.0 nM의 농도로 각 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3164 (정방향 서열 AGCCTGAGCCGGGAGATG, 서열 번호: 20와 같이 본원에서 지정됨; 역방향 서열 GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT, 본 발명에서는 서열 번호: 21로 지정됨; 프로브 서열 AGGCCATCCGCACGGACAACCX, 본 발명에서는 서열 번호: 22로 지정됨)를 사용하여 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. 인간 DMPK RNA 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조 (UTC) 세포와 비교한, 인간 DMPK의 발현율로서 하기 표에서 제시된다. 상기 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열은 상기 명시된 바와 같이 상기 명시된 조건 하에서 인간 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제를 나타냈다.
표 11
서열 번호: 1을 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
실시예
8: 인간
DMPK
RNA
전사체를
표적화하도록
설계된
ASO
일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)는 hDMPK를 표적화하도록 설계되었다. 새롭게 설계된 ASO는 본 분야에 잘 알려지고 하기 표 12에 기술된 바와 같은 표준 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하여 제조되었다. 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 아래첨자 "k"는 6'-(S)-CH3 이환식 뉴클레오사이드 (cEt); 아래첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 변형된 뉴클레오사이드를 나타내고; 그리고 아래첨자 "d"는 β-D-2'-데옥시리보뉴클레오사이드를 나타낸다. "mC"는 5-메틸시토신 뉴클레오사이드를 나타낸다.
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 DMPK RNA에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 hSKMC 세포를 전기천공을 사용하여 800 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. DMPK RNA 전사체 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조군 세포에 대비한 DMPK의 발현율로서 표현된다.
"표적 개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "표적 정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. 하기 표 12에 열거된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 (유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1)를 표적화한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 몇몇은 상기 명시된 조건 하에서 DMPK mRNA 수준의 뚜렷한 억제를 나타냈다.
표 12
서열 번호: 1을 표적화하는, ASO를 사용한 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
실시예
9: 인간
DMPK
RNA
전사체를
표적화하도록
설계된
ASO
일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)는 hDMPK를 표적화하도록 설계되었다. 새롭게 설계된 ASO는 본 분야에 잘 알려지고 하기 표 13 내지 18에 기술된 바와 같은 표준 올리고뉴클레오타이드 합성을 사용하여 제조되었다. 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 아래첨자 "k"는 6'-(S)-CH3 이환식 뉴클레오사이드 (cEt); 아래첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 변형된 뉴클레오사이드를 나타내고; 그리고 아래첨자 "d"는 β-D-2'-데옥시리보뉴클레오사이드를 나타낸다. "mC"는 5-메틸시토신 뉴클레오사이드를 나타낸다.
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 DMPK RNA에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 사용하여 4,500 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. DMPK RNA 전사체 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조 세포와 비교하여, DMPK의 발현율로서 제시되고, "표적발현율%"은 비처리 대조 세포와 비교하여 DMPK의 발현율을 나타낸다.
하기 표 13에 열거된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 (유전자은행 수탁 번호 NM_001081560.1)를 표적화한다. 하기 표 14 내지 18에 열거된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 2 (뉴클레오타이드 18540696 내지 18555106로부터 절단된 유전자은행 수탁번호 NT_011109.15의 상보체)에 표적화된다. "표적 개시 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 5'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다. "표적 정지 부위"는 인간 유전자 서열 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 표적으로 하는 3'-모스트(most) 뉴클레오사이드를 나타낸다.
표 13
서열 번호: 1을 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 14
서열 번호: 2를 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 15
서열 번호: 2를 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 16
서열 번호: 2를 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 17
서열 번호: 2를 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
표 18
서열 번호: 2를 표적화하는 HepG2 세포에서의 인간 DMPK RNA 전사체의 억제
실시예
10:
HepG2
세포에서의 인간
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (DMPK)를
표적화하는
안티센스
올리고뉴클레오타이드로의
용량 반응 연구
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 인간 DMPK RNA 전사체에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 사용하여 61.7 nM, 185.2 nM, 555.6 nM, 1666.7 nM, 5000.0 nM, 및 15000.0 nM의 농도로 각 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3164 (정방향 서열 AGCCTGAGCCGGGAGATG, 서열 번호: 20와 같이 본원에서 지정됨; 역방향 서열 GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT, 본 발명에서는 서열 번호: 21로 지정됨; 프로브 서열 AGGCCATCCGCACGGACAACCX, 본 발명에서는 서열 번호: 22로 지정됨)를 사용하여 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. 인간 DMPK RNA 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조 (UTC) 세포와 비교한, 인간 DMPK의 발현율로서 제시된다. 예를 들어, 만약 UTC가 100이고, ISIS 번호 445569의 5000 nM의 용량이 35의 인간 DMPK 발현율%을 산출한다면, 5000 nM 용량의 ISIS는 인간 DMPK 발현을 UTC와 비교하여 65%만큼 감소시켰다. 각각의 올리고뉴클레오타이드의 절반 최대 억제 농도 (IC50)는 하기 표에 또한 제시되었으며, 사용된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 각각의 농도에서 달성된 인간 DMPK mRNA 발현의 억제율에 대비하여 플로팅하고, 대조군과 비교하여 인간 DMPK mRNA 발현의 50% 억제가 달성된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 표시함으로써 계산되었다. 결과는 표 19에 제시된다.
상기 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열은 상기 명시된 바와 같이 상기 명시된 조건 하에서 인간 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제를 나타냈다.
표 19
HepG2 세포에서의 hDMPK를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 대한 용량 반응 연구
실시예
11:
슈타이너트
(
Steinert
) DM1
근아세포에서의
인간
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (
hDMPK
)를
표적화하는
안티센스
올리고뉴클레오타이드로의
용량 반응 연구
인간 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 인간 DMPK RNA 전사체에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 슈타이너트(Steinert) DM1 근아세포를 전기천공을 사용하여 61.7 nM, 185.2 nM, 555.6 nM, 1666.7 nM, 5000.0 nM, 및 15000.0 nM의 농도로 각 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 상기 기술된 바와 같은 프라이머 프로브 세트 RTS3164를 사용하여 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. 인간 DMPK RNA 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조 (UTC) 세포와 비교한, 인간 DMPK의 발현율(%)로서 제시된다. 각각의 올리고뉴클레오타이드의 절반 최대 억제 농도 (IC50)는 하기 표에 또한 제시되었으며, 사용된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 각각의 농도에서 달성된 인간 DMPK mRNA 발현의 억제율에 대비하여 플로팅하고, 대조군과 비교하여 인간 DMPK mRNA 발현의 50% 억제가 달성된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 표시함으로써 계산되었다. 결과는 표 20에 제시된다.
상기 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열은 상기 명시된 바와 같이 상기 명시된 조건 하에서 인간 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제를 나타냈다.
표 20
슈타이너트(Steinert) DM1 세포에서의 hDMPK를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 용량 반응 연구
실시예
12:
시노몰구스
원숭이 1차 간세포에서의
붉은털 원숭이
근긴장성
이영양증
단백질 키나아제 (
DMPK
)를
표적화하는
안티센스
올리고뉴클레오타이드로의
용량 반응 연구
붉은털 원숭이 DMPK 핵산을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 시험관내에서 붉은털 원숭이 DMPK RNA 전사체에 대한 그들의 효과에 대해서 시험하였다. 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 시노몰구스 원숭이 1차 간세포를 전기천공을 사용하여 61.7 nM, 185.2 nM, 555.6 nM, 1666.7 nM, 5000.0 nM, 및 15000.0 nM의 농도로 각 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 대략 24 시간의 처리 기간 후에, RNA를 세포로부터 단리시키고, DMPK 전사체 수준을 상기 기술된 바와 같은 프라이머 프로브 세트 RTS3164를 사용하여 정량적 실시간 PCR에 의해서 측정하였다. 시노몰구스 원숭이 DMPK RNA 수준은 리보그린(RIBOGREEN)®에 의해서 측정되는 바와 같은 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 비처리 대조 (UTC) 세포와 비교한, 시노몰구스 원숭이 DMPK의 발현율(%)로서 제시된다. 각각의 올리고뉴클레오타이드의 절반 최대 억제 농도 (IC50)는 하기 표에 또한 제시되었으며, 사용된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 각각의 농도에서 달성된 시노몰구스 원숭이 DMPK mRNA 발현의 억제율에 대비하여 플로팅하고, 대조군과 비교하여 시노몰구스 원숭이 DMPK mRNA 발현의 50% 억제가 달성된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 표시함으로써 계산되었다.
상기 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열은 상기 명시된 바와 같이 상기 명시된 조건 하에서 시노몰구스 원숭이 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제를 나타냈다.
표 21
시노몰구스 원숭이 1차 간세포에서의 붉은털 원숭이DMPK를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 용량 반응 연구
실시예
13:
DMSXL
이식유전자 마우스에서
hDMPK의
체내
안티센스
억제
유형 1 근긴장성 이영양증 (DM1)의 치료를 위한 안티센스 억제의 효과를 시험하기 위하여, 적절한 마우스 모델이 요구된다. 1000개 초과의 CTG 반복서열의 큰 확장을 갖는 hDMPK 유전자를 갖는 형질전환 마우스 모델, DMSXL가 생성하였다 (Huguet et al., PLOS Genetics, 2012, 8(11), e1003034- e1003043). 이러한 DMSXL 마우스는 변이체 hDMPK 대립유전자를 발현하고, DM1 환자들에서 나타나는 것과 유사한 근육 약화 표현형을 보여준다.
표 1로부터의 ISIS 486178를 hDMPK 전사체의 체내 안티센스 억제를 위하여 선택하고 시험하였다. ISIS 445569는 비교를 위하여 연구에 포함되었다.
처리
DMSXL 마우스를 12-시간 명/암 주기에 유지시키고, 퓨리나 마우스 사료(chow)를 자유로이 제공하였다. 동물은 실험의 개시 전 연구 시설에서 적어도 7 일 동안 순응되었다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)를 PBS에서 제조하고, 0.2 마이크론 필터를 통하여 여과하여 멸균하였다. ASO는 주사를 위해 0.9% PBS에서 용해되었다.
DMSXL 마우스에 ISIS 445569를 50 mg/kg로, 또는 ISIS 486178를 25 mg/kg로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 대조군을 PBS로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 각 처리 그룹은 4 마리 동물로 구성되었다.
hDMPK
mRNA
수준의 억제
최종 투여 후 24시간째에, 마우스를 희생시키고 혈청을 수집하였다. mRNA를 hDMPK의 실시간 PCR 분석를 위하여 단리시키고, 18s RNA로 정규화하였다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3164을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 결과는 PBS 대조군 그룹에 대한 각 처리 그룹에 대해 hDMPK mRNA 수준의 평균 퍼센트로서 표현된다.
인간 프라이머 프로브 세트 RTS3164 (정방향 서열 AGCCTGAGCCGGGAGATG, 서열 번호: 20으로 지정됨; 역방향 서열 GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT, 본 발명에서는 서열 번호: 21로 지정됨; 프로브 서열 AGGCCATCCGCACGGACAACCX, 본 발명에서는 서열 번호: 22로 지정됨). 결과는 표 22에 제시되며, 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 치료는 hDMPK 전사체 발현을 감소시켰다. 상기 결과는 ISIS 445569 및 486178로의 치료는 DMSXL 마우스에서의 hDMPK mRNA 수준의 감소를 초래하였다.
표 22
DMSXL 마우스에서의 hDMPK 억제에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 효과
실시예
14:
hDMPK를
표적화하는
,
DMSXL
마우스에서의 근육 힘에 대한
ASO
치료 효과
잡기 검사(
Griptest
)
마우스를 다음 문헌에서 기술된 바와 같이 상업적 잡기 힘 검력제를 사용하여 야생형 (WT) 및 DMSXL 앞다리에서 잡기 힘 성능을 측정하였다 ((Huguet et al., PLOS Genetics, 2012, 8(11), e1003034- e1003043).
DMSXL 마우스에 ISIS 445569를 50 mg/kg로, 또는 ISIS 486178를 25 mg/kg로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 대조군 DMSXL 그룹을 PBS로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 각 처리 그룹은 4 마리 동물로 구성되었다. 각 처리 그룹에 대한 앞다리 힘 및 WT를 잡기(grip) 시험을 사용하여 0, 30, 및 60일째 측정하였다. 잡기(grip) 힘 성능은 60일째 및 0일째 사이의 힘 차이를 측정함으로써 결정되었다. 결과는 각 처리 그룹에 대한 평균 앞다리힘으로서 제시된다.
표 23에서 예시된 바와 같이, hDMPK를 표적화하는 ASO로의 처리는 비처리 대조군과 비교하여 DMSXL 마우스에서의 근육 힘을 개선하였다. ISIS 486178, cEt 변형을 갖는 ASO는 MOE 변형 (+0.38)을 갖는 ISIS 445569와 비교하여, 앞다리 힘 (+3.4)에서의 상당한 개선을 나타내었다.
표 23
hDMPK를 표적화하는, DMSXL 마우스에서의 근육 힘에 대한 ASO 치료 효과
실시예
15:
hDMPK를
표적화하는
,
DMSXL
마우스에서의 근육 섬유 분포에 대한 ASO 치료 효과
ISIS 445569 및 486178의 존재 및 부재 하에서 hDMPK를 표적화하는 DMSXL 마우스에서의 근육 섬유 분포를 또한 측정하였다. 둘 다의 ASO가 상기 표 1에 기술되었다.
DMSXL 마우스에 ISIS 445569를 50 mg/kg로, 또는 ISIS 486178를 25 mg/kg로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 대조군 DMSXL 그룹을 PBS로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 각 처리 그룹은 4 마리 동물로 구성되었다. 근육 섬유 분포를 측정하였고, 결과는 하기 표 44에 제시된다.
예시된 바와 같이, hDMPK를 표적화하는 ASO로의 처리는 비처리 대조군과 비교하여 DMSXL 마우스의 전경골근 (TA)에서의 DM1 연관 유형 2c 근육 섬유의 분포를 감소시켰다. 결과는 골격근 내의 섬유 분포의 정상 패턴이 ASO 처리로 회복될 수 있다는 것을 나타냈다. ISIS 445569는 비처리 대조군에 디하여 근육 섬유 분포에서 개선을 나타냈으나; ISIS 486178, cEt 변형을 갖는 ASO는 야생형 마우스 내에서 발견된 근육 섬유 분포와 더욱 일치하는 근육 섬유 분포를 나타내었다.
표 24
hDMPK를 표적화하는, DMSXL 마우스에서의 근육 섬유 분포에 대한 ASO 치료 효과
실시예
16:
DMSXL
이식유전자 마우스에서
hDMPK의
용량-의존적
안티센스
억제
상기 표 1로부터의 새롭게 설계된 ASO를 hDMPK 전사체의 체내 안티센스 억제에 대한 용량-의존적 연구에서 추가적으로 평가하였다. ISIS445569를 비교를 위하여 연구에 포함하였다.
처리
DMSXL 마우스를 12-시간 명/암 주기에 유지시키고, 퓨리나 마우스 사료(chow)를 자유로이 제공하였다. 동물은 실험의 개시 전 연구 시설에서 적어도 7 일 동안 순응되었다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO)를 PBS에서 제조하고, 0.2 마이크론 필터를 통하여 여과하여 멸균하였다. ASO는 주사를 위해 0.9% PBS에서 용해되었다.
DMSXL 마우스에 hDMPK를 표적화하는, 표 1로부터의 PBS 또는 ASO를 피하주사하였다. ASO를 하기 표 25에서 나타낸 용량으로 4주간 일주일에 2번 투여하였다. 대조군을 PBS로 4주간 1주일에 2번 피하주사하였다. 각 처리 그룹은 4 마리 동물로 구성되었다.
hDMPK
mRNA
수준의 억제
최종 투여 후 48시간째에, 마우스를 희생시키고, 전경골근, 대퇴사두근 (좌측), 비복근, 심장 및 횡격막으로부터의 조직을 단리하였다. mRNA를 hDMPK의 실시간 PCR 분석를 위하여 단리시키고, RIBOGREEN®으로 정규화하였다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3164을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 결과는 아래 표 25에 요약하고, 다양한 용량-의존적 연구로부터 독립적으로 생성하였다. 결과는 PBS 대조군 그룹에 대한 각 처리 그룹에 대해 hDMPK mRNA 수준의 평균 퍼센트로서 표현된다.
제시된 바와 같이, 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 처리는 용량-의존 방식에서 hDMPK 전사체 발현 수준을 감소시켰다.
표 25
DMSXL 마우스에서 hDMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제
실시예
17: CD-1 마우스 내의 6주
체내
내성 연구
상기 표 1로부터의 새롭게 설계된 ASO를 혈장 화학성질, 신체/장기 중량 및 조직학에 대한 6주 연구에서 추가적으로 평가하였다. CD-1 마우스 그룹에 ISIS 445569 또는 ISIS 512497를 100 mg/kg/주로 투여하였다. CD-1 마우스 추가 그룹에 ISIS 486178, ISIS 570808, ISIS 594292, ISIS 598768, ISIS 598769, ISIS 569473, ISIS 594300, 및 ISIS 598777를 50 mg/kg/주로 투여하였다. 마우스의 각 그룹에 최종 투여를 한 후, 6주 및 2일째에 마우스를 희생시키고 조직을 분석을 위하여 수집하였다. 마우스의 각 그룹에 대해, 알라닌 트랜스아미나아제 수준, 아스파르테이트 아미노트랜스아미나아제 수준, 혈중 요소 질소 (BUN) 수준, 알부민 수준, 총 빌리루빈 및 크레아틴 수준을 측정하였다. 또한, 장기 중량을 또한 측정하였고, 이의 결과는 하기 표에 제시된다.
표 26
CD-1 마우스에서의 혈장 화학성질
표 27
CD-1 마우스에서의 신체 및 기관 중량
*염수 대조군과 비교한 배수 변화
실시예
18: 스프라그
-
도울리
(Sprague-
Dawley
)
래트
내의 6주
체내
내성 연구
상기 표 1로부터의 새롭게 설계된 ASO를 혈장 화학성질, 신체/장기 중량 및 조직학에 대한 6주 연구에서 추가적으로 평가하였다. 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 래트 그룹에 ISIS 445569 또는 ISIS 512497를 100 mg/kg/주로 투여하였다. 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 래트 추가 그룹에 ISIS 486178, ISIS 570808, ISIS 594292, ISIS 598768, ISIS 598769, ISIS 569473, ISIS 594300, 및 ISIS 598777를 50 mg/kg/주로 투여하였다. 마우스의 각 그룹에 최종 투여를 한 후, 6주 및 2일째에 마우스를 희생시키고 조직을 분석을 위하여 수집하였다. 마우스의 각 그룹에 대해, 알라닌 트랜스아미나아제 수준, 아스파르테이트 아미노트랜스아미나아제 수준, 혈중 요소 질소 (BUN) 수준, 알부민 수준, 총 빌리루빈 및 크레아틴 수준을 측정하였다. 또한, 장기 중량을 또한 측정하였고, 이의 결과는 하기 표에 제시된다.
표 28
스프라그-도울리 래트의 혈장 화학성질 및 소변 분석
표 29
스프라그-도울리 래트의 혈장 화학성질 및 소변 분석
*염수 대조군과 비교한 배수 변화
실시예
19:
시노몰구스
원숭이 내의 13주
체내
내성 연구
시노몰구스 원숭이 4개 그룹에 ISIS 445569, ISIS 512497, ISIS 486178, ISIS 570808, ISIS 594292, ISIS 598768, ISIS 598769, ISIS 569473, ISIS 594300, 및 ISIS 598777를 40 mg/kg/주로 피하 주사를 통하여 투여하였다. 제1 투여 후 13주째에, 동물을 희생시키고 조직 분석을 수행하였다. mRNA를 붉은털 원숭이 DMPK의 실시간 PCR 분석를 위하여 단리시키고, RIBOGREEN®으로 정규화하였다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3164 (상기 기술됨)을 사용하여 mRNA 수준을 측정하고 결과는 하기 표 30에 나타낸다. 또한, 추가적인 mRNA를 붉은털 원숭이 DMPK의 실시간 PCR 분석를 위하여 단리시키고, 프라이머 프로브 세트 RTS4447을 사용하여 RIBOGREEN®으로 정규화하였고, 결과는 하기 표 31에 나타난다. RTS4447 (정방향 서열 AGCCTGAGCCGGGAGATG, 본 발명에서는 서열 번호: 20으로 지정됨; 역방향 서열 GCGTAGTTGACTGGCAAAGTT, 본 발명에서는 서열 번호: 21로 지정됨; 프로브 서열 AGGCCATCCGCATGGCCAACC, 본 발명에서는 서열 번호: 22로 지정됨).
표 30
프라이머 프로브 세트 RTS3164을 사용한 시노몰구스 원숭이에서 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제
표 31
프라이머 프로브 세트 RTS4447을 사용한 시노몰구스 원숭이에서 DMPK mRNA 수준의 용량-의존적 억제
실시예
20: 시노몰구스
원숭이 내의 13주
체내
내성 연구
시노몰구스 원숭이 그룹에 ISIS 445569, ISIS 512497, ISIS 486178, ISIS 570808, ISIS 594292, ISIS 598768, ISIS 598769, ISIS 569473, ISIS 594300, 및 ISIS 598777를 40 mg/kg/주로 피하 주사를 통하여 1, 3, 5, 및 7일째에 투여하였다. 투여 후 7일째에, 각 원숭이는에 ISIS 445569, ISIS 512497, ISIS 486178, ISIS 570808, ISIS 594292, ISIS 598768, ISIS 598769, ISIS 569473, ISIS 594300, 및 ISIS 598777를 40 mg/kg/주로 피하 주사를 통하여 투여하였다.
각 원숭이에 28일째 및 91일째에 피하 투여한 후 48시간째에, 혈액 및 소변 샘플을 분석을 위하여 채득하였다. 상기 원숭이 중 일부는 56일째 투여받은 후 48시간째에 혈액 및 소변을 채득하였다. 알라닌 아미노전이효소 (ALT), 아스파르테이트 아미노전이효소 (AST), 젖산 탈수소효소 (LDH), 및 크레아틴 키나아제 (CK)를 처리 그룹 내 각 동물에 대해 측정하였고, 평균 값은 하기 표에 제시된다. 음의 값을 갖는 샘플의 일수는 치료 시작 이전의 시점을 나타낸다. 예를 들어, -7의 처리 값 일수는 제1 투여 7일 전의 샘플을 나타낸다. 제1 투여 후 13주째에, 동물을 희생시키고 조직 분석을 수행하였다.
표 32
시노몰구스 원숭이에서의 혈장 화학성질 및 소변 분석
SEQUENCE LISTING
<110> Isis Pharmaceuticals, Inc.
<120> COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATION OF DYSTROPHIA
MYOTONICA-PROTEIN KINASE (DMPK) EXPRESSION
<130> BIOL0171WO
<150> 61/864,439
<151> 2013-08-09
<150> 61/889,337
<151> 2013-10-10
<160> 874
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2877
<212> DNA
<213> homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (206)..(2080)
<400> 1
aggggggctg gaccaagggg tggggagaag gggaggaggc ctcggccggc cgcagagaga 60
agtggccaga gaggcccagg ggacagccag ggacaggcag acatgcagcc agggctccag 120
ggcctggaca ggggctgcca ggccctgtga caggaggacc ccgagccccc ggcccgggga 180
ggggccatgg tgctgcctgt ccaac atg tca gcc gag gtg cgg ctg agg cgg 232
Met Ser Ala Glu Val Arg Leu Arg Arg
1 5
ctc cag cag ctg gtg ttg gac ccg ggc ttc ctg ggg ctg gag ccc ctg 280
Leu Gln Gln Leu Val Leu Asp Pro Gly Phe Leu Gly Leu Glu Pro Leu
10 15 20 25
ctc gac ctt ctc ctg ggc gtc cac cag gag ctg ggc gcc tcc gaa ctg 328
Leu Asp Leu Leu Leu Gly Val His Gln Glu Leu Gly Ala Ser Glu Leu
30 35 40
gcc cag gac aag tac gtg gcc gac ttc ttg cag tgg gcg gag ccc atc 376
Ala Gln Asp Lys Tyr Val Ala Asp Phe Leu Gln Trp Ala Glu Pro Ile
45 50 55
gtg gtg agg ctt aag gag gtc cga ctg cag agg gac gac ttc gag att 424
Val Val Arg Leu Lys Glu Val Arg Leu Gln Arg Asp Asp Phe Glu Ile
60 65 70
ctg aag gtg atc gga cgc ggg gcg ttc agc gag gta gcg gta gtg aag 472
Leu Lys Val Ile Gly Arg Gly Ala Phe Ser Glu Val Ala Val Val Lys
75 80 85
atg aag cag acg ggc cag gtg tat gcc atg aag atc atg aac aag tgg 520
Met Lys Gln Thr Gly Gln Val Tyr Ala Met Lys Ile Met Asn Lys Trp
90 95 100 105
gac atg ctg aag agg ggc gag gtg tcg tgc ttc cgt gag gag agg gac 568
Asp Met Leu Lys Arg Gly Glu Val Ser Cys Phe Arg Glu Glu Arg Asp
110 115 120
gtg ttg gtg aat ggg gac cgg cgg tgg atc acg cag ctg cac ttc gcc 616
Val Leu Val Asn Gly Asp Arg Arg Trp Ile Thr Gln Leu His Phe Ala
125 130 135
ttc cag gat gag aac tac ctg tac ctg gtc atg gag tat tac gtg ggc 664
Phe Gln Asp Glu Asn Tyr Leu Tyr Leu Val Met Glu Tyr Tyr Val Gly
140 145 150
ggg gac ctg ctg aca ctg ctg agc aag ttt ggg gag cgg att ccg gcc 712
Gly Asp Leu Leu Thr Leu Leu Ser Lys Phe Gly Glu Arg Ile Pro Ala
155 160 165
gag atg gcg cgc ttc tac ctg gcg gag att gtc atg gcc ata gac tcg 760
Glu Met Ala Arg Phe Tyr Leu Ala Glu Ile Val Met Ala Ile Asp Ser
170 175 180 185
gtg cac cgg ctt ggc tac gtg cac agg gac atc aaa ccc gac aac atc 808
Val His Arg Leu Gly Tyr Val His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Ile
190 195 200
ctg ctg gac cgc tgt ggc cac atc cgc ctg gcc gac ttc ggc tct tgc 856
Leu Leu Asp Arg Cys Gly His Ile Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ser Cys
205 210 215
ctc aag ctg cgg gca gat gga acg gtg cgg tcg ctg gtg gct gtg ggc 904
Leu Lys Leu Arg Ala Asp Gly Thr Val Arg Ser Leu Val Ala Val Gly
220 225 230
acc cca gac tac ctg tcc ccc gag atc ctg cag gct gtg ggc ggt ggg 952
Thr Pro Asp Tyr Leu Ser Pro Glu Ile Leu Gln Ala Val Gly Gly Gly
235 240 245
cct ggg aca ggc agc tac ggg ccc gag tgt gac tgg tgg gcg ctg ggt 1000
Pro Gly Thr Gly Ser Tyr Gly Pro Glu Cys Asp Trp Trp Ala Leu Gly
250 255 260 265
gta ttc gcc tat gaa atg ttc tat ggg cag acg ccc ttc tac gcg gat 1048
Val Phe Ala Tyr Glu Met Phe Tyr Gly Gln Thr Pro Phe Tyr Ala Asp
270 275 280
tcc acg gcg gag acc tat ggc aag atc gtc cac tac aag gag cac ctc 1096
Ser Thr Ala Glu Thr Tyr Gly Lys Ile Val His Tyr Lys Glu His Leu
285 290 295
tct ctg ccg ctg gtg gac gaa ggg gtc cct gag gag gct cga gac ttc 1144
Ser Leu Pro Leu Val Asp Glu Gly Val Pro Glu Glu Ala Arg Asp Phe
300 305 310
att cag cgg ttg ctg tgt ccc ccg gag aca cgg ctg ggc cgg ggt gga 1192
Ile Gln Arg Leu Leu Cys Pro Pro Glu Thr Arg Leu Gly Arg Gly Gly
315 320 325
gca ggc gac ttc cgg aca cat ccc ttc ttc ttt ggc ctc gac tgg gat 1240
Ala Gly Asp Phe Arg Thr His Pro Phe Phe Phe Gly Leu Asp Trp Asp
330 335 340 345
ggt ctc cgg gac agc gtg ccc ccc ttt aca ccg gat ttc gaa ggt gcc 1288
Gly Leu Arg Asp Ser Val Pro Pro Phe Thr Pro Asp Phe Glu Gly Ala
350 355 360
acc gac aca tgc aac ttc gac ttg gtg gag gac ggg ctc act gcc atg 1336
Thr Asp Thr Cys Asn Phe Asp Leu Val Glu Asp Gly Leu Thr Ala Met
365 370 375
gag aca ctg tcg gac att cgg gaa ggt gcg ccg cta ggg gtc cac ctg 1384
Glu Thr Leu Ser Asp Ile Arg Glu Gly Ala Pro Leu Gly Val His Leu
380 385 390
cct ttt gtg ggc tac tcc tac tcc tgc atg gcc ctc agg gac agt gag 1432
Pro Phe Val Gly Tyr Ser Tyr Ser Cys Met Ala Leu Arg Asp Ser Glu
395 400 405
gtc cca ggc ccc aca ccc atg gaa ctg gag gcc gag cag ctg ctt gag 1480
Val Pro Gly Pro Thr Pro Met Glu Leu Glu Ala Glu Gln Leu Leu Glu
410 415 420 425
cca cac gtg caa gcg ccc agc ctg gag ccc tcg gtg tcc cca cag gat 1528
Pro His Val Gln Ala Pro Ser Leu Glu Pro Ser Val Ser Pro Gln Asp
430 435 440
gaa aca gct gaa gtg gca gtt cca gcg gct gtc cct gcg gca gag gct 1576
Glu Thr Ala Glu Val Ala Val Pro Ala Ala Val Pro Ala Ala Glu Ala
445 450 455
gag gcc gag gtg acg ctg cgg gag ctc cag gaa gcc ctg gag gag gag 1624
Glu Ala Glu Val Thr Leu Arg Glu Leu Gln Glu Ala Leu Glu Glu Glu
460 465 470
gtg ctc acc cgg cag agc ctg agc cgg gag atg gag gcc atc cgc acg 1672
Val Leu Thr Arg Gln Ser Leu Ser Arg Glu Met Glu Ala Ile Arg Thr
475 480 485
gac aac cag aac ttc gcc agt caa cta cgc gag gca gag gct cgg aac 1720
Asp Asn Gln Asn Phe Ala Ser Gln Leu Arg Glu Ala Glu Ala Arg Asn
490 495 500 505
cgg gac cta gag gca cac gtc cgg cag ttg cag gag cgg atg gag ttg 1768
Arg Asp Leu Glu Ala His Val Arg Gln Leu Gln Glu Arg Met Glu Leu
510 515 520
ctg cag gca gag gga gcc aca gct gtc acg ggg gtc ccc agt ccc cgg 1816
Leu Gln Ala Glu Gly Ala Thr Ala Val Thr Gly Val Pro Ser Pro Arg
525 530 535
gcc acg gat cca cct tcc cat cta gat ggc ccc ccg gcc gtg gct gtg 1864
Ala Thr Asp Pro Pro Ser His Leu Asp Gly Pro Pro Ala Val Ala Val
540 545 550
ggc cag tgc ccg ctg gtg ggg cca ggc ccc atg cac cgc cgc cac ctg 1912
Gly Gln Cys Pro Leu Val Gly Pro Gly Pro Met His Arg Arg His Leu
555 560 565
ctg ctc cct gcc agg gtc cct agg cct ggc cta tcg gag gcg ctt tcc 1960
Leu Leu Pro Ala Arg Val Pro Arg Pro Gly Leu Ser Glu Ala Leu Ser
570 575 580 585
ctg ctc ctg ttc gcc gtt gtt ctg tct cgt gcc gcc gcc ctg ggc tgc 2008
Leu Leu Leu Phe Ala Val Val Leu Ser Arg Ala Ala Ala Leu Gly Cys
590 595 600
att ggg ttg gtg gcc cac gcc ggc caa ctc acc gca gtc tgg cgc cgc 2056
Ile Gly Leu Val Ala His Ala Gly Gln Leu Thr Ala Val Trp Arg Arg
605 610 615
cca gga gcc gcc cgc gct ccc tga accctagaac tgtcttcgac tccggggccc 2110
Pro Gly Ala Ala Arg Ala Pro
620
cgttggaaga ctgagtgccc ggggcacggc acagaagccg cgcccaccgc ctgccagttc 2170
acaaccgctc cgagcgtggg tctccgccca gctccagtcc tgtgatccgg gcccgccccc 2230
tagcggccgg ggagggaggg gccgggtccg cggccggcga acggggctcg aagggtcctt 2290
gtagccggga atgctgctgc tgctgctgct gctgctgctg ctgctgctgc tgctgctgct 2350
gctgctgctg ctggggggat cacagaccat ttctttcttt cggccaggct gaggccctga 2410
cgtggatggg caaactgcag gcctgggaag gcagcaagcc gggccgtccg tgttccatcc 2470
tccacgcacc cccacctatc gttggttcgc aaagtgcaaa gctttcttgt gcatgacgcc 2530
ctgctctggg gagcgtctgg cgcgatctct gcctgcttac tcgggaaatt tgcttttgcc 2590
aaacccgctt tttcggggat cccgcgcccc cctcctcact tgcgctgctc tcggagcccc 2650
agccggctcc gcccgcttcg gcggtttgga tatttattga cctcgtcctc cgactcgctg 2710
acaggctaca ggacccccaa caaccccaat ccacgttttg gatgcactga gaccccgaca 2770
ttcctcggta tttattgtct gtccccacct aggaccccca cccccgaccc tcgcgaataa 2830
aaggccctcc atctgcccaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 2877
<210> 2
<211> 14411
<212> DNA
<213> homo sapiens
<400> 2
ctcccagccc agcgcctccc accccttttc atagcaggaa aagccggagc ccagggaggg 60
aacggacctg cgagtcacac aactggtgac ccacaccagc ggctggagca ggaccctctt 120
ggggagaaga gcatcctgcc cgcagccagg gcccctcatc aaagtcctcg gtgtttttta 180
aattatcaga actgcccagg accacgtttc ccaggccctg cccagctggg actcctcggt 240
ccttgcctcc tagtttctca ggcctggccc tctcaaggcc caggcacccc aggccggttg 300
gaggccccga cttccactct ggagaaccgt ccaccctgga aagaagagct cagattcctc 360
ttggctctcg gagccgcagg gagtgtgtct tcccgcgcca ccctccaccc cccgaaatgt 420
ttctgtttct aatcccagcc tgggcaggaa tgtggctccc cggccagggg ccaaggagct 480
attttggggt ctcgtttgcc cagggagggc ttggctccac cactttcctc ccccagcctt 540
tgggcagcag gtcacccctg ttcaggctct gagggtgccc cctcctggtc ctgtcctcac 600
caccccttcc ccacctcctg ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaagct ggtataaagc 660
agagagcctg agggctaaat ttaactgtcc gagtcggaat ccatctctga gtcacccaag 720
aagctgccct ggcctcccgt ccccttccca ggcctcaacc cctttctccc acccagcccc 780
aacccccagc cctcaccccc tagcccccag ttctggagct tgtcgggagc aagggggtgg 840
ttgctactgg gtcactcagc ctcaattggc cctgtttcag caatgggcag gttcttcttg 900
aaattcatca cacctgtggc ttcctctgtg ctctaccttt ttattggggt gacagtgtga 960
cagctgagat tctccatgca ttccccctac tctagcactg aagggttctg aagggccctg 1020
gaaggaggga gcttgggggg ctggcttgtg aggggttaag gctgggaggc gggagggggg 1080
ctggaccaag gggtggggag aaggggagga ggcctcggcc ggccgcagag agaagtggcc 1140
agagaggccc aggggacagc cagggacagg cagacatgca gccagggctc cagggcctgg 1200
acaggggctg ccaggccctg tgacaggagg accccgagcc cccggcccgg ggaggggcca 1260
tggtgctgcc tgtccaacat gtcagccgag gtgcggctga ggcggctcca gcagctggtg 1320
ttggacccgg gcttcctggg gctggagccc ctgctcgacc ttctcctggg cgtccaccag 1380
gagctgggcg cctccgaact ggcccaggac aagtacgtgg ccgacttctt gcagtggggt 1440
gagtgcctac cctcggggct cctgcagatg gggtgggggt ggggcaggag acaggtctgg 1500
gcacagaggc ctggctgttg ggggggcagg atggcaggat gggcatgggg agatcctccc 1560
atcctggggc tcagagtgtg gacctgggcc ctggggcaac atttctctgt cctatgccac 1620
cactctggag gggcagagta aggtcagcag aggctagggt ggctgtgact cagagccatg 1680
gcttaggagt cacagcaggc taggctgcca acagcctccc atggcctctc tgcaccccgc 1740
ctcagggtca gggtcagggt catgctggga gctccctctc ctaggaccct ccccccaaaa 1800
gtgggctcta tggccctctc ccctggtttc ctgtggcctg gggcaagcca ggagggccag 1860
catggggcag ctgccagggg cgcagccgac aggcaggtgt tcggcgccag cctctccagc 1920
tgccccaaca ggtgcccagg cactgggagg gcggtgactc acgcgggccc tgtgggagaa 1980
ccagctttgc agacaggcgc caccagtgcc ccctcctctg cgatccagga gggacaactt 2040
tgggttcttc tgggtgtgtc tccttctttt gtaggttctg cacccacccc cacccccagc 2100
cccaaagtct cggttcctat gagccgtgtg ggtcagccac cattcccgcc accccgggtc 2160
cctgcgtcct ttagttctcc tggcccaggg cctccaacct tccagctgtc ccacaaaacc 2220
ccttcttgca agggctttcc agggcctggg gccagggctg gaaggaggat gcttccgctt 2280
ctgccagctg ccttgtctgc ccacctcctc cccaagccca ggactcgggc tcactggtca 2340
ctggtttctt tcattcccag caccctgccc ctctggccct catatgtctg gccctcagtg 2400
actggtgttt ggtttttggc ctgtgtgtaa caaactgtgt gtgacacttg tttcctgttt 2460
ctccgccttc ccctgcttcc tcttgtgtcc atctctttct gacccaggcc tggttccttt 2520
ccctcctcct cccatttcac agatgggaag gtggaggcca agaagggcca ggccattcag 2580
cctctggaaa aaccttctcc caacctccca cagcccctaa tgactctcct ggcctccctt 2640
tagtagagga tgaagttggg ttggcagggt aaactgagac cgggtggggt aggggtctgg 2700
cgctcccggg aggagcactc cttttgtggc ccgagctgca tctcgcggcc cctcccctgc 2760
caggcctggg gcgggggagg gggccagggt tcctgctgcc ttaaaagggc tcaatgtctt 2820
ggctctctcc tccctccccc gtcctcagcc ctggctggtt cgtccctgct ggcccactct 2880
cccggaaccc cccggaaccc ctctctttcc tccagaaccc actgtctcct ctccttccct 2940
cccctcccat acccatccct ctctccatcc tgcctccact tcttccaccc ccgggagtcc 3000
aggcctccct gtccccacag tccctgagcc acaagcctcc accccagctg gtcccccacc 3060
caggctgccc agtttaacat tcctagtcat aggaccttga cttctgagag gcctgattgt 3120
catctgtaaa taaggggtag gactaaagca ctcctcctgg aggactgaga gatgggctgg 3180
accggagcac ttgagtctgg gatatgtgac catgctacct ttgtctccct gtcctgttcc 3240
ttcccccagc cccaaatcca gggttttcca aagtgtggtt caagaaccac ctgcatctga 3300
atctagaggt actggataca accccacgtc tgggccgtta cccaggacat tctacatgag 3360
aacgtggggg tggggccctg gctgcacctg aactgtcacc tggagtcagg gtggaaggtg 3420
gaagaactgg gtcttatttc cttctcccct tgttctttag ggtctgtcct tctgcagact 3480
ccgttacccc accctaacca tcctgcacac ccttggagcc ctctgggcca atgccctgtc 3540
ccgcaaaggg cttctcaggc atctcacctc tatgggaggg catttttggc ccccagaacc 3600
ttacacggtg tttatgtggg gaagcccctg ggaagcagac agtcctaggg tgaagctgag 3660
aggcagagag aaggggagac agacagaggg tggggctttc ccccttgtct ccagtgccct 3720
ttctggtgac cctcggttct tttcccccac caccccccca gcggagccca tcgtggtgag 3780
gcttaaggag gtccgactgc agagggacga cttcgagatt ctgaaggtga tcggacgcgg 3840
ggcgttcagc gaggtaagcc gaaccgggcg ggagcctgac ttgactcgtg gtgggcgggg 3900
cataggggtt ggggcggggc cttagaaatt gatgaatgac cgagccttag aacctagggc 3960
tgggctggag gcggggcttg ggaccaatgg gcgtggtgtg gcaggtgggg cggggccacg 4020
gctgggtgca gaagcgggtg gagttgggtc tgggcgagcc cttttgtttt cccgccgtct 4080
ccactctgtc tcactatctc gacctcaggt agcggtagtg aagatgaagc agacgggcca 4140
ggtgtatgcc atgaagatca tgaacaagtg ggacatgctg aagaggggcg aggtgagggg 4200
ctgggcggac gtggggggct ttgaggatcc gcgccccgtc tccggctgca gctcctccgg 4260
gtgccctgca ggtgtcgtgc ttccgtgagg agagggacgt gttggtgaat ggggaccggc 4320
ggtggatcac gcagctgcac ttcgccttcc aggatgagaa ctacctggtg agctccgggc 4380
cggggtgact aggaagaggg acaagagccc gtgctgtcac tggacgagga ggtggggaga 4440
ggaagctcta ggattggggg tgctgcccgg aaacgtctgt gggaaagtct gtgtgcggta 4500
agagggtgtg tcaggtggat gaggggcctt ccctatctga gacggggatg gtgtccttca 4560
ctgcccgttt ctggggtgat ctgggggact cttataaaga tgtctctgtt gcggggggtc 4620
tcttacctgg aatgggatag gtcttcagga attctaacgg ggccactgcc tagggaagga 4680
gtgtctggga cctattctct gggtgttggg tggcctctgg gttctctttc ccagaacatc 4740
tcagggggag tgaatctgcc cagtgacatc ccaggaaagt ttttttgttt gtgttttttt 4800
ttgaggggcg ggggcggggg ccgcaggtgg tctctgattt ggcccggcag atctctatgg 4860
ttatctctgg gctggggctg caggtctctg cccaaggatg gggtgtctct gggaggggtt 4920
gtcccagcca tccgtgatgg atcagggcct caggggacta ccaaccaccc atgacgaacc 4980
ccttctcagt acctggtcat ggagtattac gtgggcgggg acctgctgac actgctgagc 5040
aagtttgggg agcggattcc ggccgagatg gcgcgcttct acctggcgga gattgtcatg 5100
gccatagact cggtgcaccg gcttggctac gtgcacaggt gggtgcagca tggccgaggg 5160
gatagcaagc ttgttccctg gccgggttct tggaaggtca gagcccagag aggccagggc 5220
ctggagaggg accttcttgg ttggggccca ccggggggtg cctgggagta ggggtcagaa 5280
ctgtagaagc cctacagggg cggaacccga ggaagtgggg tcccaggtgg cactgcccgg 5340
aggggcggag cctggtggga ccacagaagg gaggttcatt tatcccaccc ttctcttttc 5400
ctccgtgcag ggacatcaaa cccgacaaca tcctgctgga ccgctgtggc cacatccgcc 5460
tggccgactt cggctcttgc ctcaagctgc gggcagatgg aacggtgagc cagtgccctg 5520
gccacagagc aactggggct gctgatgagg gatggaaggc acagagtgtg ggagcgggac 5580
tggatttgga ggggaaaaga ggtggtgtga cccaggctta agtgtgcatc tgtgtggcgg 5640
agtattagac caggcagagg gaggggctaa gcatttgggg agtggttgga aggagggccc 5700
agagctggtg ggcccagagg ggtgggccca agcctcgctc tgctcctttt ggtccaggtg 5760
cggtcgctgg tggctgtggg caccccagac tacctgtccc ccgagatcct gcaggctgtg 5820
ggcggtgggc ctgggacagg cagctacggg cccgagtgtg actggtgggc gctgggtgta 5880
ttcgcctatg aaatgttcta tgggcagacg cccttctacg cggattccac ggcggagacc 5940
tatggcaaga tcgtccacta caaggtgagc acggccgcag ggagacctgg cctctcccgg 6000
taggcgctcc caggctatcg cctcctctcc ctctgagcag gagcacctct ctctgccgct 6060
ggtggacgaa ggggtccctg aggaggctcg agacttcatt cagcggttgc tgtgtccccc 6120
ggagacacgg ctgggccggg gtggagcagg cgacttccgg acacatccct tcttctttgg 6180
cctcgactgg gatggtctcc gggacagcgt gccccccttt acaccggatt tcgaaggtgc 6240
caccgacaca tgcaacttcg acttggtgga ggacgggctc actgccatgg tgagcggggg 6300
cggggtaggt acctgtggcc cctgctcggc tgcgggaacc tccccatgct ccctccataa 6360
agttggagta aggacagtgc ctaccttctg gggtcctgaa tcactcattc cccagagcac 6420
ctgctctgtg cccatctact actgaggacc cagcagtgac ctagacttac agtccagtgg 6480
gggaacacag agcagtcttc agacagtaag gccccagagt gatcagggct gagacaatgg 6540
agtgcagggg gtgggggact cctgactcag caaggaaggt cctggagggc tttctggagt 6600
ggggagctat ctgagctgag acttggaggg atgagaagca ggagaggact cctcctccct 6660
taggccgtct ctcttcaccg tgtaacaagc tgtcatggca tgcttgctcg gctctgggtg 6720
cccttttgct gaacaatact ggggatccag cacggaccag atgagctctg gtccctgccc 6780
tcatccagtt gcagtctaga gaattagaga attatggaga gtgtggcagg tgccctgaag 6840
ggaagcaaca ggatacaaga aaaaatgatg gggccaggca cggtggctca cgcctgtaac 6900
cccagcaatt tggcaggccg aagtgggtgg attgcttgag cccaggagtt cgagaccagc 6960
ctgggcaatg tggtgagacc cccgtctcta caaaaatgtt ttaaaaattg gttgggcgtg 7020
gtggcgcatg cctgtatact cagctactag ggtggccgac gtgggcttga gcccaggagg 7080
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ctctgtctca aaaataagat aaactgaaat taaaaaatag gctgggctgg ccgggcgtgg 7200
tggctcacgc ctgtaatctc agcactttgg gaggccgagg cgggtggatc acgaggtcag 7260
gagatcgaga ccatcttggc taacacggtg aaaccccatc tctcctaaaa atacaaaaaa 7320
ttagccaggc gtggtggcgg gcgcctgtag tcccagctac tcaggaggct gaggcaggag 7380
aatggcgtga acccgggagg cagagtttgc agtgagccga gatcgtgcca ctgcactcca 7440
gcctgggcga cagagcgaga ctctgtctca gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaatagg 7500
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gccggtgggt catgagatca ggagttttga gactaggctg gccaacacgg tgaaaccccg 7620
tctctactaa aaatacaaga aaattagctg ggtgtggtct cgggtgcctg taattccagt 7680
tactggggaa gctgaggcag gagaattgct tgaacctggg aggcagagtt tgcagtgagc 7740
caagatcatg ccactacact ccagtctggg tgacagagtg agactctgtc tcaaaaaaaa 7800
aaaaaaaaaa aagggttggg caaggtggtt cacgcctgta atcccagaac tttgggaggc 7860
tgaggcaggc agatcactgg aagtcaggag ttcaagacca gcctggccaa catggtgaaa 7920
ccctgtgtct actaaaaata caaaatttag ccaggcttgg tggcgtatgc ctgtaatgcc 7980
agctactcag gaggctgagg caggagaatc gcttgattga acctgggagg cagagtttgc 8040
agtgggctgg ggttgtgcca ctgcactcta ggctgggaga cagcaagact ccatctaaaa 8100
aaaaaaaaca gaactgggct gggcacagtg gcttatattt gtaatcccag cactttggga 8160
ggctgaggtt ggaggactgc ttgagcccag agtttgggac tacaacagct gaggtaggcg 8220
gatcacttga ggtcagaaga tggagaccag cctggccagc gtggcgaaac cccgtctcta 8280
ccaaaaatat aaaaaattag ccaggcgtgg tagagggcgc ctgtaatctc agctactcag 8340
gacgctgagg caggagaatc gcctgaacct gggaggcgga ggttgcagtg agctgagatt 8400
gcaccactgc actccagcct gggtaacaga gcgagactcc gtatcaaaga aaaagaaaaa 8460
agaaaaaatg ctggaggggc cactttagat aagccctgag ttggggctgg tttgggggga 8520
acatgtaagc caagatcaaa aagcagtgag gggcccgccc tgacgactgc tgctcacatc 8580
tgtgtgtctt gcgcaggaga cactgtcgga cattcgggaa ggtgcgccgc taggggtcca 8640
cctgcctttt gtgggctact cctactcctg catggccctc aggtaagcac tgccctggac 8700
ggcctccagg ggccacgagg ctgcttgagc ttcctgggtc ctgctccttg gcagccaatg 8760
gagttgcagg atcagtcttg gaaccttact gttttgggcc caaagactcc taagaggcca 8820
gagttggagg accttaaatt ttcagatcta tgtacttcaa aatgttagat tgaattttaa 8880
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agtacacaga gccacaggac ttcagaactt ggaaaatatg aagtttagac ttttacaatc 9000
agttgtaaaa gaatgcaaat tctttgaatc agccatataa caataaggcc atttaaaagt 9060
attaatttag gcgggccgcg gtggctcacg cctgtaatcc tagcactttg ggaggccaag 9120
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ctctactaaa aatacaaaaa aattagccgg gcatggtggc gggcgcttgc ggtcccagct 9240
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ggaggatgag gtgggtggat cacctgaggt caggagttcg agaccagcct gaccaacgtg 9480
gagaaacctc atctctacta aaaaacaaaa ttagccaggc gtggtggcat atacctgtaa 9540
tcccagctac tcaggaggct gaggcaggag aatcagaacc caggaggggg aggttgtggt 9600
gagctgagat cgtgccattg cattccagcc tgggcaacaa gagtgaaact tcatctcaaa 9660
aaaaaaaaaa aaaaagtact aatttacagg ctgggcatgg tggctcacgc ttggaatccc 9720
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agcaacataa tgagaccctg tctctacaaa aaattgaaaa aatcgtgcca ggcatggtgg 9840
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gtttgaggct tcagtgagcc atgatagatt ccagcctagg caacaaagtg agacctggtc 9960
tcaacaaaag tattaattac acaaataatg cattgcttat cacaagtaaa ttagaaaata 10020
cagataagga aaaggaagtt gatatctcgt gagctcacca gatggcagtg gtccctggct 10080
cacacgtgta ctgacacatg tttaaatagt ggagaacagg tgtttttttg gtttgttttt 10140
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gctgctgctg ctgctgctgc tgctgctgct gctgctgctg ctgctggggg gatcacagac 13440
catttctttc tttcggccag gctgaggccc tgacgtggat gggcaaactg caggcctggg 13500
aaggcagcaa gccgggccgt ccgtgttcca tcctccacgc acccccacct atcgttggtt 13560
cgcaaagtgc aaagctttct tgtgcatgac gccctgctct ggggagcgtc tggcgcgatc 13620
tctgcctgct tactcgggaa atttgctttt gccaaacccg ctttttcggg gatcccgcgc 13680
ccccctcctc acttgcgctg ctctcggagc cccagccggc tccgcccgct tcggcggttt 13740
ggatatttat tgacctcgtc ctccgactcg ctgacaggct acaggacccc caacaacccc 13800
aatccacgtt ttggatgcac tgagaccccg acattcctcg gtatttattg tctgtcccca 13860
cctaggaccc ccacccccga ccctcgcgaa taaaaggccc tccatctgcc caaagctctg 13920
gactccacag tgtccgcggt ttgcgttgtg ggccggaggc tccgcagcgg gccaatccgg 13980
aggcgtgtgg aggcggccga aggtctggga ggagctagcg ggatgcgaag cggccgaatc 14040
agggttgggg gaggaaaagc cacggggcgg ggctttggcg tccggccaat aggagggcga 14100
gcgggccacc cggaggcacc gcccccgccc agctgtggcc cagctgtgcc accgagcgtc 14160
gagaagaggg ggctgggctg gcagcgcgcg cggccatcct ccttccactg cgcctgcgca 14220
cgccacgcgc atccgctcct gggacgcaag ctcgagaaaa gttgctgcaa actttctagc 14280
ccgttccccg cccctcctcc cggccagacc cgccccccct gcggagccgg gaattccgag 14340
gggcggagcg caggccgaga tggggaatgt gggggcctgc agaggaccct ggagacggag 14400
gcgtgcagaa g 14411
<210> 3
<211> 15000
<212> DNA
<213> mus musculus
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acacacagtt ctgcctgtgg gacctcacag aagatgtgct ctcccctcat ccgtctctgg 120
cccgtacccg cacccttccg ggcacacctg gtgccacccc accagcttct ggtagttctc 180
gggccggaga gacaggtgca ggccccctgc cccgctccct gtctcgttcc aacagtctcc 240
cacacccagc tggtggtggc aaggctggtg ggcctagtgc atcgatggag cctggcatac 300
cattcagcat tggccgcttt gccacactga ccctgcagga gcggcgggac cggggagctg 360
agaaggaaca caaacgctac catagcctgg gaaacatcag ccgcggtggc agtgggggca 420
atagcagcaa tgacaagctc agtggtcctg ccccccgaag ccgattggac ccagctaagg 480
tgctgggcac ggcactgtgc cctcggatcc atgaggtgcc actgctggag cctctcgtgt 540
gcaagaagat tgctcaggaa cgcctgaccg tgctactgtt cctggaggat tgtatcatca 600
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ctgctggccc atatggctca tccttagtac ttcacactca aggcagaacc tgtgtttata 840
ggaaatctga agtgtagatg gtgaaacttt attcaggtct agggatgtga ttgagctggg 900
ggcccacttc tggcctgcct cttagacact gtttctgagc cagctgctga aggcctggat 960
gggaattagc cagggtccag gcctgcactt cctcttgctg ctgtgtggtc ctggtcattg 1020
ggtctcacag atgggctgtg cagtggctgt gctcttagtt ggtgaggtgc aggcctgtca 1080
cctggtcagg cttgagcatg tggtctcagt gtctaggacc ctactctgcc ctcagtcctt 1140
cagtcccttg ctttggaagg ctagagtcca gaagccttag aacgtcaggc agttgcagag 1200
ccactgccag gctagtaggg ctgcgggagt tgactgagtt ctcacagaca cccctctgtc 1260
tccctagttc acagacgagg agaccgaggc ccaggcaggg caagcaagtt ggcccaggtc 1320
acccagcaag tcagttgtag aggtaggaca acccctgaag ctgcaagtgg accccagttt 1380
cttttctctc cactgtcgtc ccctgtatgc ccaggacacc tggggccaca ttactgtgga 1440
agtgctactc tgggtcagtg gagacggccg agctgtttgt tcctagctag gacagcagct 1500
ttaggcctgg ggggcagatc ccagctgggg cagcagctcc aaggcctttg ggtggctcct 1560
tctccgggtt ctggcagaag cccaggtgct gtctaatcca cctttctcct cttgttctcc 1620
ccagggcatc tcctcccaac caggcagctc ccccagtggc actgtggtgt gaaatgtgga 1680
tgtcccatgt tcccggcctc ctagccataa ccctccccgc tgacctcaag aatcactgta 1740
ttaacaagac taatcatgat ggaaggactg ctccaagccc cacgctgcac acatactggg 1800
ggtcccctag gttggcccag ccatggggat gtagtgtcct gtgtggcctt ggccctgtcc 1860
tccacccact gccaagtaca atgacctgtt ctctgaaaca tcagtgttaa ccatatccct 1920
gtcccagcat gtgactgttc actcctggga gagacttagc ccacagtacc cctgggtgag 1980
agggcagggc aggggccatc cccactcctg cccaaactcc accccttgct atggtctgtg 2040
attttgaaag tgttaaatta tggaagccct gagggccctc cttgttcccc tggacctctt 2100
atttatacta aagtccttgt ttgcacagtg tttctgttcc ctggggcagg gtagggtggg 2160
ggttgcagta cttggcctcc aagctgtgct ctgaccaaag gaagcccaat cttagctgtt 2220
tccccatccc tagccccgag cagagagccc tctgaaagat gagtctcgac ccccaaagtc 2280
aagaggctga gatggccttc ctactaggtc cttggagatg tttgaaactt gttttaaaca 2340
ccaggactat ccaagcatgc tctccttggg gagaggagga tgctggaatt gactgcactc 2400
cctgcctcct ctgaacatgc ctttgcagtc tgctgcccct ggcccattta tgactggcca 2460
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ctaacttgtc gcctggcttg ctgtccaggc agctccgccc tcaaccccta aaatgtttct 2580
gtctctaatc ctagcccagg caggaatgtg gctgccccgg cctgtggcca aggagctatt 2640
ttggggttct cttttgctta aggagggcct ggatccacca cttgcctccc ccaggctggg 2700
gccagcaggt cacccctggc cctggcggct gagcaaactc tctcctgatc ttccttctac 2760
ctcctgccaa aaaatggggg ggcgggtaat acagcaggca caggggctaa atttaactgt 2820
cccaaagtcg gaatccattg ctgagtcacg aagaagctgc ccctggcctt tgcccccccc 2880
actaccccct caccccctgt tgcccaggca tcagcccttt cccccaaccc ctcccagctc 2940
tgagtctata gactggctct cctgggcact gacacctccc acctgtaact ccctgtgctc 3000
tctttatggg tgggtagagt caatgggggg gggcaaccct ggagtattac tctgtcccct 3060
gacattgggc tctgaagagt tttgaggggc cctggaagaa gggagttggg gtgttggctc 3120
aggaggggtt aaaaactggg aggcgggagg ggggctgggc caaggggtgg agaaaagagg 3180
aggaggcctt aagcatagaa ctggccagag agacccaagg gatagtcagg gacgggcaga 3240
catgcagcta gggttctggg gcctggacag gggcagccag gccctgtgac gggaagaccc 3300
cgagctccgg cccggggagg ggccatggtg ttgcctgccc aacatgtcag ccgaagtgcg 3360
gctgaggcag ctccagcagc tggtgctgga cccaggcttc ctgggactgg agcccctgct 3420
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tttttgtaag ggagccaagc agagctcatg acctgacccc aagctcccct ggtgaggcac 3660
cagggtcagt gaggccacct atgactcagc cagtgcaggc tggggtgggc atagcctcct 3720
gctatctcag cacccacact aggacctggc agctttctct tttaggaccc ttggctcctc 3780
aaactggctt catagccctc cccagtttcc cagagtgtgg ggagggacag cgtggggcag 3840
ctgccagggt gtggcccata ggcaggtgtt tggcgtctgc ctccccagct gccctgacag 3900
gtgtccagga gctatgaggg cactgtgact cacagaggcc ctgggggaga accagcccgg 3960
cagacaggcg ccaccgagca ccctttctgt tccccaaatt aagaggaagg aacaacttca 4020
gcttctgagt gtgcccatcc ctagcactct gatcccgccc agcctttgtg ggccagattg 4080
gtcatccctc ctggcttctc atctgctttt gtggttctag ctcaagacct ctaattcctc 4140
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tccctgccac ctcttgctgt catctcggtt ccgtatttag gtagcggtgg tgaagatgaa 5700
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tctctcctac ctcacaggtg tcgtgcttcc gggaagaaag ggatgtatta gtgaaagggg 5880
accggcgctg gatcacacag ctgcactttg ccttccagga tgagaactac ctggtaagct 5940
ccgggttcag gtgactagga aagagtgaca gttacatcgc cccaagtcaa gaaggctgga 6000
gaagggagaa gctgctgtag atcggggggg tgggggtggg ggggacacac acaggggatg 6060
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gatcctccct tgaaaaataa aaaagggggt gttgaccttc ctgggtccca aattattatc 7860
ctagagcact gctatgtatc cactcaggta tgaggacaca caggtgacca gtcccaaaga 7920
cagtgagtga ggcctcactc ttggcagtac taaaattgat tgtagggggc tgggctcttg 7980
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cagaagaaag ctgcccttca ctcatccatt cagcatgcac tatctaccag ctctccctcg 11760
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ttggcttcgg acagcctcac tcctgggggt tgctgcaact ccttccccgt gtacacgtct 12960
gcactctaac aacggagcca cagctgcact cccccctccc ccaaagcagt gtgggtattt 13020
attgatcttg ttatctgact cactgacaga ctccgggacc cacgttttag atgcattgag 13080
actcgacatt cctcggtatt tattgtctgt ccccacctac gacctccact cccgaccctt 13140
gcgaataaaa tacttctggt ctgccctaaa tcccgcgcaa tatctctgtt gtggaaagga 13200
aaccgccccg caggccaatg gagagtccaa tagagacaac caatggcttg agtgggagct 13260
agaggggagg caaagcgcac gaatcaggtt gaagggtggg gcttaggcat ccagccagta 13320
ggagagaagc aacaagccac cagagacacc accgcccccc accctccccc ccagctgtga 13380
cccagctgtg ccactcaagt ttggaaaaaa gtagggggtt gggccagcag cgggcacacc 13440
atcttcccac tgcgcctgcg caagccacgc gcatccgctt tttggaccga cactccagaa 13500
aagttgctgc aaactttcta gcgcgattcc ccgcccctcc tcccagctag atccaccgcc 13560
tacccgcggg gccgggaatt ccgaggggcg gagcacggcg cggagatggg aagggagggg 13620
gcccttcaag ggacccggga gatgggagcg gcttcgcgcc cttaaccctc cggacggccc 13680
attaccttct ccgttgctct gatagggaaa ctgaggccct gagtcagagg cacacaaggg 13740
gggaaggcca aaagcgcggc cagagacgga gggaaaacaa agaatcctga cagcccggga 13800
ggggggcgga cacacaggga caaggacaga cccgagtgca gagctgggtc tagtctttgg 13860
gagggggcca gaagactgca aggggaccgg gggggggggc ggcgaggagg actgggcgga 13920
ggagggggct ggggaagccc gcgggaggcg gcaaaggagg gaggaacttt ccaaagttgc 13980
caaacatggc tacctcgcct gcggagccga gcgcggggcc cgcggctcgg ggggaggcgg 14040
cggcggcgac cgaggagcag gaggaggaag cgcgccagct tctgcagact ctgcaggcag 14100
ccgaggggga ggcggcggcg gccggggcgg gagatgcggc ggcggcggcg gactctgggt 14160
ccccgagtgg cccggggtct ccccgggaga ccgtgaccga ggtgcccact ggccttcgct 14220
tctcgcccga acaggtggca tgcgtgtgcg aggcgctgct gcaggcgggc cacgccggcc 14280
gcttgagccg cttcctgggc gcgctgcccc cggccgagcg cctacgtggc agcgatccgg 14340
tgctgcgcgc gcgggcccta gtggccttcc agcggggtga atacgccgag ctctaccaac 14400
ttctcgagag ccgccctttc cccgccgccc accacgcctt cctgcaggac ctctacctgc 14460
gcgcgcgcta ccacgaggcc gagcgggccc gtggccgtgc gctgggcgct gtggacaaat 14520
accggctgcg caagaagttc cctctgccca agaccatctg ggatggcgag gagaccgtct 14580
attgcttcaa ggagcgctcg cgagcggcgc tcaaggcctg ctaccgcggc aaccgctatc 14640
ccacgcctga cgagaagcgc cgcctggcca cgctcaccgg cctctcgctt acacaggtca 14700
gcaactggtt caagaaccgg cgacagcgcg accgcactgg gaccggcggt ggagcgcctt 14760
gcaaaaggtg aggggggaac cgaccctcct tcctcggtgg ccgctggagt ctgcgcaagt 14820
gacccttcac atccctcttc ggtggcgtcg gcgagtgcat aggctgagcg tggagagacc 14880
aggcacaccc tgggttctct gggcatcact gcctcagggg cagaggttgt tccagctact 14940
tctaagctgg gaacgcagtg ccaggaatgg gggggggggc gggggcggga cgggcagtga 15000
<210> 4
<211> 1896
<212> DNA
<213> mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1896)
<400> 4
atg tca gcc gaa gtg cgg ctg agg cag ctc cag cag ctg gtg ctg gac 48
Met Ser Ala Glu Val Arg Leu Arg Gln Leu Gln Gln Leu Val Leu Asp
1 5 10 15
cca ggc ttc ctg gga ctg gag ccc ctg ctc gac ctt ctc ctg ggc gtc 96
Pro Gly Phe Leu Gly Leu Glu Pro Leu Leu Asp Leu Leu Leu Gly Val
20 25 30
cac cag gag ctg ggt gcc tct cac cta gcc cag gac aag tat gtg gcc 144
His Gln Glu Leu Gly Ala Ser His Leu Ala Gln Asp Lys Tyr Val Ala
35 40 45
gac ttc ttg cag tgg gtg gag ccc att gca gca agg ctt aag gag gtc 192
Asp Phe Leu Gln Trp Val Glu Pro Ile Ala Ala Arg Leu Lys Glu Val
50 55 60
cga ctg cag agg gat gat ttt gag att ttg aag gtg atc ggg cgt ggg 240
Arg Leu Gln Arg Asp Asp Phe Glu Ile Leu Lys Val Ile Gly Arg Gly
65 70 75 80
gcg ttc agc gag gta gcg gtg gtg aag atg aaa cag acg ggc caa gtg 288
Ala Phe Ser Glu Val Ala Val Val Lys Met Lys Gln Thr Gly Gln Val
85 90 95
tat gcc atg aag att atg aat aag tgg gac atg ctg aag aga ggc gag 336
Tyr Ala Met Lys Ile Met Asn Lys Trp Asp Met Leu Lys Arg Gly Glu
100 105 110
gtg tcg tgc ttc cgg gaa gaa agg gat gta tta gtg aaa ggg gac cgg 384
Val Ser Cys Phe Arg Glu Glu Arg Asp Val Leu Val Lys Gly Asp Arg
115 120 125
cgc tgg atc aca cag ctg cac ttt gcc ttc cag gat gag aac tac ctg 432
Arg Trp Ile Thr Gln Leu His Phe Ala Phe Gln Asp Glu Asn Tyr Leu
130 135 140
tac ctg gtc atg gaa tac tac gtg ggc ggg gac ctg cta acg ctg ctg 480
Tyr Leu Val Met Glu Tyr Tyr Val Gly Gly Asp Leu Leu Thr Leu Leu
145 150 155 160
agc aag ttt ggg gag cgg atc ccc gcc gag atg gct cgc ttc tac ctg 528
Ser Lys Phe Gly Glu Arg Ile Pro Ala Glu Met Ala Arg Phe Tyr Leu
165 170 175
gcc gag att gtc atg gcc ata gac tcc gtg cac cgg ctg ggc tac gtg 576
Ala Glu Ile Val Met Ala Ile Asp Ser Val His Arg Leu Gly Tyr Val
180 185 190
cac agg gac atc aaa cca gat aac att ctg ctg gac cga tgt ggg cac 624
His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Ile Leu Leu Asp Arg Cys Gly His
195 200 205
att cgc ctg gca gac ttc ggc tcc tgc ctc aaa ctg cag cct gat gga 672
Ile Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ser Cys Leu Lys Leu Gln Pro Asp Gly
210 215 220
atg gtg agg tcg ctg gtg gct gtg ggc acc ccg gac tac ctg tct cct 720
Met Val Arg Ser Leu Val Ala Val Gly Thr Pro Asp Tyr Leu Ser Pro
225 230 235 240
gag att ctg cag gcc gtt ggt gga ggg cct ggg gca ggc agc tac ggg 768
Glu Ile Leu Gln Ala Val Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Tyr Gly
245 250 255
cca gag tgt gac tgg tgg gca ctg ggc gtg ttc gcc tat gag atg ttc 816
Pro Glu Cys Asp Trp Trp Ala Leu Gly Val Phe Ala Tyr Glu Met Phe
260 265 270
tat ggg cag acc ccc ttc tac gcg gac tcc aca gcc gag aca tat gcc 864
Tyr Gly Gln Thr Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Thr Ala Glu Thr Tyr Ala
275 280 285
aag att gtg cac tac agg gaa cac ttg tcg ctg ccg ctg gca gac aca 912
Lys Ile Val His Tyr Arg Glu His Leu Ser Leu Pro Leu Ala Asp Thr
290 295 300
gtt gtc ccc gag gaa gct cag gac ctc att cgt ggg ctg ctg tgt cct 960
Val Val Pro Glu Glu Ala Gln Asp Leu Ile Arg Gly Leu Leu Cys Pro
305 310 315 320
gct gag ata agg cta ggt cga ggt ggg gca ggt gat ttc cag aaa cat 1008
Ala Glu Ile Arg Leu Gly Arg Gly Gly Ala Gly Asp Phe Gln Lys His
325 330 335
cct ttc ttc ttt ggc ctt gat tgg gag ggt ctc cga gac agt gta ccc 1056
Pro Phe Phe Phe Gly Leu Asp Trp Glu Gly Leu Arg Asp Ser Val Pro
340 345 350
ccc ttt aca cca gac ttc gag ggt gcc acg gac aca tgc aat ttc gat 1104
Pro Phe Thr Pro Asp Phe Glu Gly Ala Thr Asp Thr Cys Asn Phe Asp
355 360 365
gtg gtg gag gac cgg ctc act gcc atg gtg agc ggg ggc ggg gag acg 1152
Val Val Glu Asp Arg Leu Thr Ala Met Val Ser Gly Gly Gly Glu Thr
370 375 380
ctg tca gac atg cag gaa gac atg ccc ctt ggg gtg cgc ctg ccc ttc 1200
Leu Ser Asp Met Gln Glu Asp Met Pro Leu Gly Val Arg Leu Pro Phe
385 390 395 400
gtg ggc tac tcc tac tgc tgc atg gcc ttc aga gac aat cag gtc ccg 1248
Val Gly Tyr Ser Tyr Cys Cys Met Ala Phe Arg Asp Asn Gln Val Pro
405 410 415
gac ccc acc cct atg gaa cta gag gcc ctg cag ttg cct gtg tca gac 1296
Asp Pro Thr Pro Met Glu Leu Glu Ala Leu Gln Leu Pro Val Ser Asp
420 425 430
ttg caa ggg ctt gac ttg cag ccc cca gtg tcc cca ccg gat caa gtg 1344
Leu Gln Gly Leu Asp Leu Gln Pro Pro Val Ser Pro Pro Asp Gln Val
435 440 445
gct gaa gag gcc gac cta gtg gct gtc cct gcc cct gtg gct gag gca 1392
Ala Glu Glu Ala Asp Leu Val Ala Val Pro Ala Pro Val Ala Glu Ala
450 455 460
gag acc acg gta acg ctg cag cag ctc cag gaa gcc ctg gaa gaa gag 1440
Glu Thr Thr Val Thr Leu Gln Gln Leu Gln Glu Ala Leu Glu Glu Glu
465 470 475 480
gtt ctc acc cgg cag agc ctg agc cgc gag ctg gag gcc atc cgg acc 1488
Val Leu Thr Arg Gln Ser Leu Ser Arg Glu Leu Glu Ala Ile Arg Thr
485 490 495
gcc aac cag aac ttc tcc agc caa cta cag gag gcc gag gtc cga aac 1536
Ala Asn Gln Asn Phe Ser Ser Gln Leu Gln Glu Ala Glu Val Arg Asn
500 505 510
cga gac ctg gag gcg cat gtt cgg cag cta cag gaa cgg atg gag atg 1584
Arg Asp Leu Glu Ala His Val Arg Gln Leu Gln Glu Arg Met Glu Met
515 520 525
ctg cag gcc cca gga gcc gca gcc atc acg ggg gtc ccc agt ccc cgg 1632
Leu Gln Ala Pro Gly Ala Ala Ala Ile Thr Gly Val Pro Ser Pro Arg
530 535 540
gcc acg gat cca cct tcc cat cta gat ggc ccc ccg gcc gtg gct gtg 1680
Ala Thr Asp Pro Pro Ser His Leu Asp Gly Pro Pro Ala Val Ala Val
545 550 555 560
ggc cag tgc ccg ctg gtg ggg cca ggc ccc atg cac cgc cgt cac ctg 1728
Gly Gln Cys Pro Leu Val Gly Pro Gly Pro Met His Arg Arg His Leu
565 570 575
ctg ctc cct gcc agg atc cct agg cct ggc cta tcc gag gcg cgt tgc 1776
Leu Leu Pro Ala Arg Ile Pro Arg Pro Gly Leu Ser Glu Ala Arg Cys
580 585 590
ctg ctc ctg ttc gcc gct gct ctg gct gct gcc gcc aca ctg ggc tgc 1824
Leu Leu Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ala Ala Ala Ala Thr Leu Gly Cys
595 600 605
act ggg ttg gtg gcc tat acc ggc ggt ctc acc cca gtc tgg tgt ttc 1872
Thr Gly Leu Val Ala Tyr Thr Gly Gly Leu Thr Pro Val Trp Cys Phe
610 615 620
ccg gga gcc acc ttc gcc ccc tga 1896
Pro Gly Ala Thr Phe Ala Pro
625 630
<210> 5
<211> 771
<212> DNA
<213> mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (89)..(89)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (238)..(238)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (506)..(506)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 5
cctgcccctg tggctgaggc agagaccacg gtaacgctgc agcagctcca ggaagccctg 60
gaagaagagg ttctcacccg gcagagctng agccgcgagc tggaggccat ccggaccgcc 120
aaccagaact tctccagcca actacaggag gccgaggtcc gaaaccgaga cctggaggcg 180
catgttcggc agctacagga acggatggag atgctgcagg ccccaggagc cgccggantc 240
cctcacctgc ttccagccaa gggggcactg ggtggagatg gggggcatgt tgggtgtgtg 300
aaccctcggg gcaggggagg agtccaggct ggggcaccgc gccgcgccac tgcctttctc 360
ctccatcctc cacactccat acacctctct cttctccttc cagccatcac gggggtccca 420
gtccccgggc cacggatcca ccttcccatc tagatggccc cccggcggtg gctgtgggcc 480
agtgcccgct ggtggggcca ggacantgtc accgccgtca cctgctgctc cctgccagga 540
ttcctaggcc tggctatccg aggcgcgttg ctgctcctgt tcgccgctgc tctggctgct 600
gcgccacact gggctgcact gggttggttg gctataccgg cggtcttcac ccagtctggt 660
gtttcccgtg agcacccttc gcccctgaaa cctaagactt caagccatct ttcatttagg 720
ccttctagga aggtcgagcg acaggggagc gacccaaagc gtctctgtgc c 771
<210> 6
<211> 434
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 6
gagagaccca aggggtagtc agggacgggc agacatgcag ctagggttct ggggcctgga 60
caggggcagc caggccctgt gacgggaaga ccccgagctc cggcccgggg aggggccatg 120
gtgttgcctg cccaacatgt cagccgaagt gcggctgagg cagctccagc agctggtgct 180
ggacccaggc ttcctgggac tggagcccct gctcgacctt ctcctgggcg tccaccagga 240
gctgggtgcc tctcacctag cccaggacaa gtatgtggcc gacttcttgc agtgggtgga 300
gcccattgca gcaaggctta aggaggtccg actgcagagg gatgattttg agattttgaa 360
ggtgatcggg cgtggggcgt tcagcgaggt agcggtggtg aagatgaaac acacggagtc 420
tttggcttcg gaca 434
<210> 7
<211> 2688
<212> DNA
<213> mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (134)..(1747)
<400> 7
ccacgcgtcc gcccacgcgt ccggggcaga catgcagcta gggttctggg gcctggacag 60
gggcagccag gccctgtgac gggaagaccc cgagctccgg cccggggagg ggccatggtg 120
ttgcctgccc aac atg tca gcc gaa gtg cgg ctg agg cag ctc cag cag 169
Met Ser Ala Glu Val Arg Leu Arg Gln Leu Gln Gln
1 5 10
ctg gtg ctg gac cca ggc ttc ctg gga ctg gag ccc ctg ctc gac ctt 217
Leu Val Leu Asp Pro Gly Phe Leu Gly Leu Glu Pro Leu Leu Asp Leu
15 20 25
ctc ctg ggc gtc cac cag gag ctg ggt gcc tct cac cta gcc cag gac 265
Leu Leu Gly Val His Gln Glu Leu Gly Ala Ser His Leu Ala Gln Asp
30 35 40
aag tat gtg gcc gac ttc ttg cag tgg gtg gag ccc att gca gca agg 313
Lys Tyr Val Ala Asp Phe Leu Gln Trp Val Glu Pro Ile Ala Ala Arg
45 50 55 60
ctt aag gag gtc cga ctg cag agg gat gat ttt gag att ttg aag gtg 361
Leu Lys Glu Val Arg Leu Gln Arg Asp Asp Phe Glu Ile Leu Lys Val
65 70 75
atc ggg cgt ggg gcg ttc agc gag gta gcg gtg gtg aag atg aaa cag 409
Ile Gly Arg Gly Ala Phe Ser Glu Val Ala Val Val Lys Met Lys Gln
80 85 90
acg ggc caa gtg tat gcc atg aag att atg aat aag tgg gac atg ctg 457
Thr Gly Gln Val Tyr Ala Met Lys Ile Met Asn Lys Trp Asp Met Leu
95 100 105
aag aga ggc gag gtg tcg tgc ttc cgg gaa gaa agg gat gta tta gtg 505
Lys Arg Gly Glu Val Ser Cys Phe Arg Glu Glu Arg Asp Val Leu Val
110 115 120
aaa ggg gac cgg cgc tgg atc aca cag ctg cac ttt gcc ttc cag gat 553
Lys Gly Asp Arg Arg Trp Ile Thr Gln Leu His Phe Ala Phe Gln Asp
125 130 135 140
gag aac tac ctg tac ctg gtc atg gaa tac tac gtg ggc ggg gac ctg 601
Glu Asn Tyr Leu Tyr Leu Val Met Glu Tyr Tyr Val Gly Gly Asp Leu
145 150 155
cta acg ctg ctg agc aag ttt ggg gag cgg atc ccc gcc gag atg gct 649
Leu Thr Leu Leu Ser Lys Phe Gly Glu Arg Ile Pro Ala Glu Met Ala
160 165 170
cgc ttc tac ctg gcc gag att gtc atg gcc ata gac tcc gtg cac cgg 697
Arg Phe Tyr Leu Ala Glu Ile Val Met Ala Ile Asp Ser Val His Arg
175 180 185
ctg ggc tac gtg cac agg gac atc aaa cca gat aac att ctg ctg gac 745
Leu Gly Tyr Val His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Ile Leu Leu Asp
190 195 200
cga tgt ggg cac att cgc ctg gca gac ttc ggc tcc tgc ctc aaa ctg 793
Arg Cys Gly His Ile Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ser Cys Leu Lys Leu
205 210 215 220
cag cct gat gga atg gtg agg tcg ctg gtg gct gtg ggc acc ccg gac 841
Gln Pro Asp Gly Met Val Arg Ser Leu Val Ala Val Gly Thr Pro Asp
225 230 235
tac ctg tct cct gag att ctg cag gcc gtt ggt gga ggg cct ggg gca 889
Tyr Leu Ser Pro Glu Ile Leu Gln Ala Val Gly Gly Gly Pro Gly Ala
240 245 250
ggc agc tac ggg cca gag tgt gac tgg tgg gca ctg ggc gtg ttc acc 937
Gly Ser Tyr Gly Pro Glu Cys Asp Trp Trp Ala Leu Gly Val Phe Thr
255 260 265
tat gag atg ttc tat ggg cag acc ccc ttc tac gcg gac tcc aca gcc 985
Tyr Glu Met Phe Tyr Gly Gln Thr Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Thr Ala
270 275 280
gag aca tat gcc aag att gtg cac tac agg gaa cac ttg tcg ctg ccg 1033
Glu Thr Tyr Ala Lys Ile Val His Tyr Arg Glu His Leu Ser Leu Pro
285 290 295 300
ctg gca gac aca gtt gtc ccc gag gaa gct cag gac ctc att cgt ggg 1081
Leu Ala Asp Thr Val Val Pro Glu Glu Ala Gln Asp Leu Ile Arg Gly
305 310 315
ctg ctg tgt cct gct gag ata agg cta ggt cga ggt ggg gca ggt gat 1129
Leu Leu Cys Pro Ala Glu Ile Arg Leu Gly Arg Gly Gly Ala Gly Asp
320 325 330
ttc cag aaa cat cct ttc ttc ttt ggc ctt gat tgg gag ggt ctc cga 1177
Phe Gln Lys His Pro Phe Phe Phe Gly Leu Asp Trp Glu Gly Leu Arg
335 340 345
gac agt gta ccc ccc ttt aca cca gac ttc gag ggt gcc acg gac aca 1225
Asp Ser Val Pro Pro Phe Thr Pro Asp Phe Glu Gly Ala Thr Asp Thr
350 355 360
tgc aat ttc gat gtg gtg gag gac cgg ctc act gcc atg gtg agc ggg 1273
Cys Asn Phe Asp Val Val Glu Asp Arg Leu Thr Ala Met Val Ser Gly
365 370 375 380
ggc ggg gag acg ctg tca gac atg cag gaa gac atg ccc ctt ggg gtg 1321
Gly Gly Glu Thr Leu Ser Asp Met Gln Glu Asp Met Pro Leu Gly Val
385 390 395
cgc ctg ccc ttc gtg ggc tac tcc tac tgc tgc atg gcc ttc aga gac 1369
Arg Leu Pro Phe Val Gly Tyr Ser Tyr Cys Cys Met Ala Phe Arg Asp
400 405 410
aat cag gtc ccg gac ccc acc cct atg gaa cta gag gcc ctg cag ttg 1417
Asn Gln Val Pro Asp Pro Thr Pro Met Glu Leu Glu Ala Leu Gln Leu
415 420 425
cct gtg tca gac ttg caa ggg ctt gac ttg cag ccc cca gtg tcc cca 1465
Pro Val Ser Asp Leu Gln Gly Leu Asp Leu Gln Pro Pro Val Ser Pro
430 435 440
ccg gat caa gtg gct gaa gag gct gac cta gtg gct gtc cct gcc cct 1513
Pro Asp Gln Val Ala Glu Glu Ala Asp Leu Val Ala Val Pro Ala Pro
445 450 455 460
gtg gct gag gca gag acc acg gta acg ctg cag cag ctc cag gaa gcc 1561
Val Ala Glu Ala Glu Thr Thr Val Thr Leu Gln Gln Leu Gln Glu Ala
465 470 475
ctg gaa gaa gag gtt ctc acc cgg cag agc ctg agc cgc gag ctg gag 1609
Leu Glu Glu Glu Val Leu Thr Arg Gln Ser Leu Ser Arg Glu Leu Glu
480 485 490
gcc atc cgg acc gcc aac cag aac ttc tcc agc caa cta cag gag gcc 1657
Ala Ile Arg Thr Ala Asn Gln Asn Phe Ser Ser Gln Leu Gln Glu Ala
495 500 505
gag gtc cga aac cga gac ctg gag gcg cat gtt cgg cag cta cag gaa 1705
Glu Val Arg Asn Arg Asp Leu Glu Ala His Val Arg Gln Leu Gln Glu
510 515 520
cgg atg gag atg ctg cag gcc cca gga gcc gca gat ccc tag 1747
Arg Met Glu Met Leu Gln Ala Pro Gly Ala Ala Asp Pro
525 530 535
gcctggccta tccgaggcgc gttgcctgct cctgttcgcc gctgctctgg ctgctgccgc 1807
cacactgggc tgcactgggt tggtggccta taccggcggt ctcaccccag tctggtgttt 1867
cccgggagcc accttcgccc cctgaaccct aagactccaa gccatctttc atttaggcct 1927
cctaggaagg tcgagcgacc agggagcgac ccaaagcgtc tctgtgccca tcgccccccc 1987
cccccccccc accgctccgc tccacacttc tgtgagcctg ggtccccacc cagctccgct 2047
cctgtgatcc aggcctgcca cctggcggcc ggggagggag gaacagggct cgtgcccagc 2107
acccctggtt cctgcagagc tggtagccac cgctgctgca gcagctgggc attcgccgac 2167
cttgctttac tcagccccga cgtggatggg caaactgctc agctcatccg atttcacttt 2227
ttcactctcc cagccatcag ttacaagcca taagcatgag ccccctattt ccagggacat 2287
cccattccca tagtgatgga tcagcaagac ctctgccagc acacacggag tctttggctt 2347
cggacagcct cactcctggg ggttgctgca actccttccc cgtgtacacg tctgcactct 2407
aacaacggag ccacagctgc actcccccct cccccaaagc agtgtgggta tttattgatc 2467
ttgttatctg actcactgac agactccggg acccacgttt tagatgcatt gagactcgac 2527
attcctcggt atttattgtc tgtccccacc tacgacctcc actcccgacc cttgcgaata 2587
aaatacttct ggtctgccct aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2647
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 2688
<210> 8
<211> 2862
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 8
gggatagtca gggacgggca gacatgcagc tagggttctg gggcctggac aggggcagcc 60
aggccctgtg acgggaagac cccgagctcc ggcccgggga ggggccatgg tgttgcctgc 120
ccaacatgtc agccgaagtg cggctgaggc agctccagca gctggtgctg gacccaggct 180
tcctgggact ggagcccctg ctcgaccttc tcctgggcgt ccaccaggag ctgggtgcct 240
ctcacctagc ccaggacaag tatgtggccg acttcttgca gtgggtggag cccattgcag 300
caaggcttaa ggaggtccga ctgcagaggg atgattttga gattttgaag gtgatcgggc 360
gtggggcgtt cagcgaggta gcggtggtga agatgaaaca gacgggccaa gtgtatgcca 420
tgaagattac gaataagtgg gacatgctga agagaggcga ggtgtcgtgc ttccgggaag 480
aaagggatgt attagtgaaa ggggaccggc gctggatcac acagctgcac tttgccttcc 540
aggatgagaa ctacctgtac ctggtcatgg aatactacgt gggcggggac ctgctaacgc 600
tgctgagcaa gtttggggag cggatccccg ccgagatggc tcgcttctac ctggccgaga 660
ttgtcatggc catagactcc gtgcaccggc tgggctacgt gcacagggac atcaaaccag 720
ataacattct gctggaccga tgtgggcaca ttcgcctggc agacttcggc tcctgcctca 780
aactgcagcc tgatggaatg gtgaggtcgc tggtggctgt gggcaccccg gactacctgt 840
ctcctgagat tctgcaggcc gttggtggag ggcctggggc aggcagctac gggccagagt 900
gtgactggtg ggcactgggc gtgttcacct atgagatgtt ctatgggcag acccccttct 960
acgcggactc cacagccgag acatatgcca agattgtgca ctacagggaa cacttgtcgc 1020
tgccgctggc agacacagtt gtccccgagg aagctcagga cctcattcgt gggctgctgt 1080
gtcctgctga gataaggcta ggtcgaggtg gggcaggtga tttccagaaa catcctttct 1140
tctttggcct tgattgggag ggtctccgag acagtgtacc cccctttaca ccagacttcg 1200
agggtgccac ggacacatgc aatttcgatg tggtggagga ccggctcact gccatggaga 1260
cgctgtcaga catgcaggaa gacatgcccc ttggggtgcg cctgcccttc gtgggctact 1320
cctactgctg catggccttc agagacaatc aggtcccgga ccccacccct atggaactag 1380
aggccctgca gttgcctgtg tcagacttgc aagggcttga cttgcagccc ccagtgtccc 1440
caccggatca agtggctgaa gaggctgacc tagtggctgt ccctgcccct gtggctgagg 1500
cagagaccac ggtaacgctg cagcagctcc aggaagccct ggaagaagag gttctcaccc 1560
ggcagagcct gagccgcgag ctggaggcca tccggaccgc caaccagaac ttctccagcc 1620
aactacagga ggccgaggtc cgaaaccgag acctggaggc gcatgttcgg cagctacagg 1680
aacggatgga gatgctgcag gccccaggag ccgcagccat cacgggggtc cccagtcccc 1740
gggccacgga tccaccttcc catgcttctc gccaaatcct ccccaaggga actccctaga 1800
ctcccgttct ggcctcgact agattcccgc actgcctctc gccctgctgc tgggctccga 1860
tcgggtcacc tgtcccttct ctctccagct agatggcccc ccggccgtgg ctgtgggcca 1920
gtgcccgctg gtggggccag gccccatgca ccgccgtcac ctgctgctcc ctgccaggat 1980
ccctaggcct ggcctatccg aggcgcgttg cctgctcctg ttcgccgctg ctctggctgc 2040
tgccgccaca ctgggctgca ctgggttggt ggcctatacc ggcggtctca ccccagtctg 2100
gtgtttcccg ggagccacct tcgccccctg aaccctaaga ctccaagcca tctttcattt 2160
aggcctccta ggaaggtcga gcgaccaggg agcgacccaa agcgtctctg tgcccatcgc 2220
cccccccccc ccccccaccg ctccgctcca cacttctgtg agcctgggtc cccacccagc 2280
tccgctcctg tgatccaggc ctgccacctg gcggccgggg agggaggaac agggctcgtg 2340
cccagcaccc ctggttcctg cagagctggt agccaccgct gctgcagcag ctgggcattc 2400
gccgaccttg ctttactcag ccccgacgtg gatgggcaaa ctgctcagct catccgattt 2460
cactttttca ctctcccagc catcagttac aagccataag catgagcccc ctatttccag 2520
ggacatccca ttcccatagt gatggatcag caagacctct gccagcacac acggagtctt 2580
tggcttcgga cagcctcact cctgggggtt gctgcaactc cttccccgtg tacacgtctg 2640
cactctaaca acggagccac agctgcactc ccccctcccc caaagcagtg tgggtattta 2700
ttgatcttgt tatctgactc actgacagac tccgggaccc acgttttaga tgcattgaga 2760
ctcgacattc ctcggtattt attgtctgtc cccacctacg acctccactc ccgacccttg 2820
cgaataaaat acttctggtc tgccctaaaa aaaaaaaaaa aa 2862
<210> 9
<211> 2611
<212> DNA
<213> mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (55)..(1872)
<400> 9
cgggaagacc ccgagctccg gcccggggag gggccatggt gttgcctgcc caac atg 57
Met
1
tca gcc gaa gtg cgg ctg agg cag ctc cag cag ctg gtg ctg gac cca 105
Ser Ala Glu Val Arg Leu Arg Gln Leu Gln Gln Leu Val Leu Asp Pro
5 10 15
ggc ttc ctg gga ctg gag ccc ctg ctc gac ctt ctc ctg ggc gtc cac 153
Gly Phe Leu Gly Leu Glu Pro Leu Leu Asp Leu Leu Leu Gly Val His
20 25 30
cag gag ctg ggt gcc tct cac cta gcc cag gac aag tat gtg gcc gac 201
Gln Glu Leu Gly Ala Ser His Leu Ala Gln Asp Lys Tyr Val Ala Asp
35 40 45
ttc ttg cag tgg gtg gag ccc att gca gca agg ctt aag gag gtc cga 249
Phe Leu Gln Trp Val Glu Pro Ile Ala Ala Arg Leu Lys Glu Val Arg
50 55 60 65
ctg cag agg gat gat ttt gag att ttg aag gtg atc ggg cgt ggg gcg 297
Leu Gln Arg Asp Asp Phe Glu Ile Leu Lys Val Ile Gly Arg Gly Ala
70 75 80
ttc agc gag gta gcg gtg gtg aag atg aaa cag acg ggc caa gtg tat 345
Phe Ser Glu Val Ala Val Val Lys Met Lys Gln Thr Gly Gln Val Tyr
85 90 95
gcc atg aag att atg aat aag tgg gac atg ctg aag aga ggc gag gtg 393
Ala Met Lys Ile Met Asn Lys Trp Asp Met Leu Lys Arg Gly Glu Val
100 105 110
tcg tgc ttc cgg gaa gaa agg gat gta tta gtg aaa ggg gac cgg cgc 441
Ser Cys Phe Arg Glu Glu Arg Asp Val Leu Val Lys Gly Asp Arg Arg
115 120 125
tgg atc aca cag ctg cac ttt gcc ttc cag gat gag aac tac ctg tac 489
Trp Ile Thr Gln Leu His Phe Ala Phe Gln Asp Glu Asn Tyr Leu Tyr
130 135 140 145
ctg gtc atg gaa tac tac gtg ggc ggg gac ctg cta acg ctg ctg agc 537
Leu Val Met Glu Tyr Tyr Val Gly Gly Asp Leu Leu Thr Leu Leu Ser
150 155 160
aag ttt ggg gag cgg atc ccc gcc gag atg gct cgc ttc tac ctg gcc 585
Lys Phe Gly Glu Arg Ile Pro Ala Glu Met Ala Arg Phe Tyr Leu Ala
165 170 175
gag att gtc atg gcc ata gac tcc gtg cac cgg ctg ggc tac gtg cac 633
Glu Ile Val Met Ala Ile Asp Ser Val His Arg Leu Gly Tyr Val His
180 185 190
agg gac atc aaa cca gat aac att ctg ctg gac cga tgt ggg cac att 681
Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Ile Leu Leu Asp Arg Cys Gly His Ile
195 200 205
cgc ctg gca gac ttc ggc tcc tgc ctc aaa ctg cag cct gat gga atg 729
Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ser Cys Leu Lys Leu Gln Pro Asp Gly Met
210 215 220 225
gtg agg tcg ctg gtg gct gtg ggc acc ccg gac tac ctg tct cct gag 777
Val Arg Ser Leu Val Ala Val Gly Thr Pro Asp Tyr Leu Ser Pro Glu
230 235 240
att ctg cag gcc gtt ggt gga ggg cct ggg gca ggc agc tac ggg cca 825
Ile Leu Gln Ala Val Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Tyr Gly Pro
245 250 255
gag tgt gac tgg tgg gca ctg ggc gtg ttc acc tat gag atg ttc tat 873
Glu Cys Asp Trp Trp Ala Leu Gly Val Phe Thr Tyr Glu Met Phe Tyr
260 265 270
ggg cag acc ccc ttc tac gcg gac tcc aca gcc gag aca tat gcc aag 921
Gly Gln Thr Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Thr Ala Glu Thr Tyr Ala Lys
275 280 285
att gtg cac tac agg gaa cac ttg tcg ctg ccg ctg gca gac aca gtt 969
Ile Val His Tyr Arg Glu His Leu Ser Leu Pro Leu Ala Asp Thr Val
290 295 300 305
gtc ccc gag gaa gct cag gac ctc att cgt ggg ctg ctg tgt cct gct 1017
Val Pro Glu Glu Ala Gln Asp Leu Ile Arg Gly Leu Leu Cys Pro Ala
310 315 320
gag ata agg cta ggt cga ggt ggg gca gac ttc gag ggt gcc acg gac 1065
Glu Ile Arg Leu Gly Arg Gly Gly Ala Asp Phe Glu Gly Ala Thr Asp
325 330 335
aca tgc aat ttc gat gtg gtg gag gac cgg ctc act gcc atg gtg agc 1113
Thr Cys Asn Phe Asp Val Val Glu Asp Arg Leu Thr Ala Met Val Ser
340 345 350
ggg ggc ggg gag acg ctg tca gac atg cag gaa gac atg ccc ctt ggg 1161
Gly Gly Gly Glu Thr Leu Ser Asp Met Gln Glu Asp Met Pro Leu Gly
355 360 365
gtg cgc ctg ccc ttc gtg ggc tac tcc tac tgc tgc atg gcc ttc aga 1209
Val Arg Leu Pro Phe Val Gly Tyr Ser Tyr Cys Cys Met Ala Phe Arg
370 375 380 385
gac aat cag gtc ccg gac ccc acc cct atg gaa cta gag gcc ctg cag 1257
Asp Asn Gln Val Pro Asp Pro Thr Pro Met Glu Leu Glu Ala Leu Gln
390 395 400
ttg cct gtg tca gac ttg caa ggg ctt gac ttg cag ccc cca gtg tcc 1305
Leu Pro Val Ser Asp Leu Gln Gly Leu Asp Leu Gln Pro Pro Val Ser
405 410 415
cca ccg gat caa gtg gct gaa gag gct gac cta gtg gct gtc cct gcc 1353
Pro Pro Asp Gln Val Ala Glu Glu Ala Asp Leu Val Ala Val Pro Ala
420 425 430
cct gtg gct gag gca gag acc acg gta acg ctg cag cag ctc cag gaa 1401
Pro Val Ala Glu Ala Glu Thr Thr Val Thr Leu Gln Gln Leu Gln Glu
435 440 445
gcc ctg gaa gaa gag gtt ctc acc cgg cag agc ctg agc cgc gag ctg 1449
Ala Leu Glu Glu Glu Val Leu Thr Arg Gln Ser Leu Ser Arg Glu Leu
450 455 460 465
gag gcc atc cgg acc gcc aac cag aac ttc tcc agc caa cta cag gag 1497
Glu Ala Ile Arg Thr Ala Asn Gln Asn Phe Ser Ser Gln Leu Gln Glu
470 475 480
gcc gag gtc cga aac cga gac ctg gag gcg cat gtt cgg cag cta cag 1545
Ala Glu Val Arg Asn Arg Asp Leu Glu Ala His Val Arg Gln Leu Gln
485 490 495
gaa cgg atg gag atg ctg cag gcc cca gga gcc gca gcc atc acg ggg 1593
Glu Arg Met Glu Met Leu Gln Ala Pro Gly Ala Ala Ala Ile Thr Gly
500 505 510
gtc ccc agt ccc cgg gcc acg gat cca cct tcc cat cta gat ggc ccc 1641
Val Pro Ser Pro Arg Ala Thr Asp Pro Pro Ser His Leu Asp Gly Pro
515 520 525
ccg gcc gtg gct gtg ggc cag tgc ccg ctg gtg ggg cca ggc ccc atg 1689
Pro Ala Val Ala Val Gly Gln Cys Pro Leu Val Gly Pro Gly Pro Met
530 535 540 545
cac cgc cgt cac ctg ctg ctc cct gcc agg atc cct agg cct ggc cta 1737
His Arg Arg His Leu Leu Leu Pro Ala Arg Ile Pro Arg Pro Gly Leu
550 555 560
tcc gag gcg cgt tgc ctg ctc ctg ttc gcc gct gct ctg gct gct gcc 1785
Ser Glu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ala Ala Ala
565 570 575
gcc aca ctg ggc tgc act ggg ttg gtg gcc tat acc ggc ggt ctc acc 1833
Ala Thr Leu Gly Cys Thr Gly Leu Val Ala Tyr Thr Gly Gly Leu Thr
580 585 590
cca gtc tgg tgt ttc ccg gga gcc acc ttc gcc ccc tga accctaagac 1882
Pro Val Trp Cys Phe Pro Gly Ala Thr Phe Ala Pro
595 600 605
tccaagccat ctttcattta ggcctcctag gaaggtcgag cgaccaggga gcgacccaaa 1942
gcgtctctgt gcccatcgcc cccccccccc cccccaccgc tccgctccac acttctgtga 2002
gcctgggtcc ccacccagct ccgctcctgt gatccaggcc tgccacctgg cggccgggga 2062
gggaggaaca gggctcgtgc ccagcacccc tggttcctgc agagctggta gccaccgctg 2122
ctgcagcagc tgggcattcg ccgaccttgc tttactcagc cccgacgtgg atgggcaaac 2182
tgctcagctc atccgatttc actttttcac tctcccagcc atcagttaca agccataagc 2242
atgagccccc tatttccagg gacatcccat tcccatagtg atggatcagc aagacctctg 2302
ccagcacaca cggagtcttt ggcttcggac agcctcactc ctgggggttg ctgcaactcc 2362
ttccccgtgt acacgtctgc actctaacaa cggagccaca gctgcactcc cccctccccc 2422
aaagcagtgt gggtatttat tgatcttgtt atctgactca ctgacagact ccgggaccca 2482
cgttttagat gcattgagac tcgacattcc tcggtattta ttgtctgtcc ccacctacga 2542
cctccactcc cgacccttgc gaataaaata cttctggtct gccctaaaaa aaaaaaaaaa 2602
aaaaaaaaa 2611
<210> 10
<211> 988
<212> DNA
<213> mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (531)..(531)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (942)..(942)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 10
gctggaccgg tccggaattc tccggatcgc cagcctttgt gggccatatt cgtcatccct 60
cctggcttct catctgcttt tgtggtccta gctcaagacc tctaattcct ctgctgactt 120
aaatgccctt ccccagaggt cttctcaggc ctagtggaca agcttggagc cttatctgct 180
cctgcccaac attgagccaa agctccagct taccccagct tccttacaat ggaccccatt 240
gcagcaaggc ttaaggaggt ccgactgcag agggatgatt ttgagatttt gaaggtgatc 300
gggcgtgggg cgttcagcga ggtagcggtg gtgaagatga aacagacggg ccaagtgtat 360
gccatgaaga ttatgaataa gtgggacatg ctgaagagag gcgaggtgtc gtgcttccgg 420
gaagaaaggg atgtattagt gaaaggggac cggcgctgga tcacacagct gcactttgcc 480
ttccaggatg agaactacct gtacctggtc atggaatact acgtgggcgg ngacctgcta 540
acgctgctga gcaagttttg gggagcggat ccccgccgag atggctcgct tctacctggc 600
cgagattgtc atggccatag actccgtgca ccggctgggc tacgtgcaca gggacatcaa 660
accagataac attctgctgg accgatgtgg gcacattcgc ctggcagact tcggctcctg 720
gcctcaactg cagcctgatg gaatggtgga gtcccctggt ggctgtgggc acccccggac 780
tacctgtctc ctgaaattct gcagggcctt ggtgggaggc cctggggaag gcaactacgg 840
gccaaaagtt ggaagggggg ggcctggggg gggttcccct atgaaaagtt ctatggggag 900
gacccccttt aagcggaatc ccaggccgaa aaatatgccc angattgggc cctaacaggg 960
aaaacttttc ccctgcccct gggacaat 988
<210> 11
<211> 649
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 11
ggcgtgttcg cctatgagat gttctatggg cagaccccct tctacgcgga ctccacagcc 60
gagacatatg ccaagattgt gcactacagg gaacacttgt cgctgccgct ggcagacaca 120
gttgtccccg aggaagctca ggacctcatt cgtgggctgc tgtgtcctgc tgagataagg 180
ctaggtcgag gtggggcagg tgatttccag aaacatcctt tcttctttgg ccttgattgg 240
gagggtctcc gagacagtgt accccccttt acaccagact tcgagggtgc cacggacaca 300
tgcaatttcg atgtggtgga ggaccggctc actgccatgg agacgctgtc agacatgcag 360
gaagacatgc cccttggggt gcgcctgccc ttcgtgggct actcctactg ctgcatggcc 420
ttcagagaca atcaggtccc ggaccccacc cctatggaac tagaggccct gcagttgcct 480
gtgtcagact tgcaagggct tgacttgcag cccccagtgt ccccaccgga tcaagtggtc 540
ccaactctga tccccaccga caggctgaag aggctgacct agtggctgtc cctgcccctg 600
tggctgaggc agagccacgg taacgctgca gcagctccag gaagccctg 649
<210> 12
<211> 527
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 12
atttcgatgt ggtggaggac cggctcactg ccatggtgag cgggggcggg gagacgctgt 60
cagacatgca ggaagacatg ccccttgggg tgcgcctgcc cttcgtgggc tactcctact 120
gctgcatggc cttcagagac aatcaggtcc cggaccccac ccctatggaa ctagaggccc 180
tgcagttgcc tgtgtcagac ttgcaagggc ttgacttgca gcccccagtg tccccaccgg 240
atcaagtggc tgaagaggct gacctagtgg ctgtccctgc ccctgtggct gaggcagaga 300
ccacggtaac gctgcagcag ctccaggaag ccctggaaga agaggttctc acccggcaga 360
gcctgagccg cgagctggag gccatccgga ccgccaacca gaacttctcc aggaggccga 420
ggtccgaaac cgagacctgg aggcgcatgt tcggcagcta caggaacgga tggagatgct 480
gcaggcccca ggaaccgcag ccatcacggg ggtccccagt cccccgg 527
<210> 13
<211> 567
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 13
atggtgaggt cgctggtggc tgtgggcacc ccggactacc tgtctcctga gattctgcag 60
gccgttggtg gagggcctgg ggcaggcagc tacgggccag agtgtgactg gtgggcactg 120
ggcgtgttcg cctatgagat gttctatggg cagaccccct tctacgcgga ctccacagcc 180
gagacatatg ccaagattgt gcactacagg gaacacttgt cgctgccgct ggcagacaca 240
gttgtccccg aggaagctca ggacctcatt cgtgggctgc tgtgtcctgc tgagataagg 300
ctaggtcgag gtggggcagg tgatttccag aaacatcctt tcttctttgg ccttgattgg 360
gagggtctcc gagacagtgt accccccttt acaccagact tcgagggtgc cacggacaca 420
tgcaatttcg atgtggtgga ggaccggctc actgccatgg tgagcggggg cggggtatga 480
ggacacacag gtgaccagtc cccaagacag tgagtgaggc ttcactcttg gcagtactaa 540
aattgaatgt agggggctgg gctcttg 567
<210> 14
<211> 2474
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 14
ccgggaagaa agggatgtat tagtgaaagg ggaccggcgc tggatcacac agctgcactt 60
tgccttccag gatgagaact acctgtacct ggtcatggaa tactacgtgg gcggggacct 120
gctaacgctg ctgagcaagt ttggggagcg gatccccgcc gagatggctc gcttctacct 180
ggccgagatt gtcatggcca tagactccgt gcaccggctg ggctacgtgc acagggacat 240
caaaccagat aacattctgc tggaccgatg tgggcacatt cgcctggcag acttcggctc 300
ctgcctcaaa ctgcagcctg atggaatggt gaggtcgctg gtggctgtgg gcaccccgga 360
ctacctgtct cctgagattc tgcaggccgt tggtggaggg cctggggcag gcagctacgg 420
gccagagtgt gactggtggg cactgggcgt gttcgcctat gagatgttct atgggcagac 480
ccccttctac gcggactcca cagccgagac atatgccaag attgtgcact acagggaaca 540
cttgtcgctg ccgctggcag acacagttgt ccccgaggaa gctcaggacc tcattcgtgg 600
gctgctgtgt cctgctgaga taaggctagg tcgagacttc gagggtgcca cggacacatg 660
caatttcgat gtggtggagg accggctcac tgccatggtg agcgggggcg gggagacgct 720
gtcagacatg caggaagaca tgccccttgg ggtgcgcctg cccttcgtgg gctactccta 780
ctgctgcatg gccttcagag acaatcaggt cccggacccc acccctatgg aactagaggc 840
cctgcagttg cctgtgtcag acttgcaagg gcttgacttg cagcccccag tgtccccacc 900
ggatcaagtg gctgaagagg ccgacctagt ggctgtccct gcccctgtgg ctgaggcaga 960
gaccacggta acgctgcagc agctccagga agccctggaa gaagaggttc tcacccggca 1020
gagcctgagc cgcgagctgg aggccatccg gaccgccaac cagaacttct ccagccaact 1080
acaggaggcc gaggtccgaa accgagacct ggaggcgcat gttcggcagc tacaggaacg 1140
gatggagatg ctgcaggccc caggagccgc aggcgagtcc ctcacctgct tccagccaag 1200
ggggcactgg gtggagatgg ggggcatgtt gggtgtgtga accctcgggg caggggagga 1260
gtccaggctg gggcaccgca gccgcgccac tgcctttctc ctccatcctc cacactccat 1320
acacctctct cttctccttc cagccatcac gggggtcccc agtccccggg ccacggatcc 1380
accttcccat gcttctcgcc aaatcctccc caagggaact ccctagactc ccgttctggc 1440
ctcgactaga ttcccgcact gcctctcgcc ctgctgctgg gctccgatcg ggtcacctgt 1500
cccttctctc tccagctaga tggccccccg gccgtggctg tgggccagtg cccgctggtg 1560
gggccaggcc ccatgcaccg ccgtcacctg ctgctccctg ccaggatccc taggcctggc 1620
ctatccgagg cgcgttgcct gctcctgttc gccgctgctc tggctgctgc cgccacactg 1680
ggctgcactg ggttggtggc ctataccggc ggtctcaccc cagtctggtg tttcccggga 1740
gccaccttcg ccccctgaac cctaagactc caagccatct ttcatttagg cctcctagga 1800
agatcgagcg accagggagc gacccaaagc gtctctgtgc ccatcgcccc cccccccccc 1860
cccaccgctc cgctccacac ttctgtgagc ctgggtcccc acccagctcc gctcctgtga 1920
tccaggcctg ccacctggcg gccggggagg gaggaacagg gctcgtgccc agcacccctg 1980
gttcctgcag agctggtagc caccgctgct gcagcagctg ggcattcgcc gaccttgctt 2040
tactcagccc tgacgtggat gggctaactg ctcagctcat ccgatttcac tttttcactc 2100
tcccagccat cagttacaag ccataagcat gagcccccta tttccaggga catcccattc 2160
ccatagtgat ggatcagcaa gacctctgcc agcacacacg gagtctttgg cttcggacag 2220
cctcactcct gggggttgct gcaactcctt ccccgtgtac acgtctgcac tctaacaacg 2280
gagccacagc tgcactcccc cctcccccaa agcagtgtgg gtatttattg atcttgttat 2340
ctgactcact gacagactcc gggacccacg ttttagatgc attgagactc gacattcctc 2400
ggtatttatt gtctgtcccc acctacgacc tccactcccg acccttgcga ataaaatact 2460
tctggtctgc ccta 2474
<210> 15
<211> 2135
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 15
ccgggaagaa agggatgtat tagtgaaagg ggaccggcgc tggatcacac agctgcactt 60
tgccttccag gatgagaact acctgtacct ggtcatggaa tactacgtgg gcggggacct 120
gctaacgctg ctgagcaagt ttggggagcg gatccccgcc gagatggctc gcttctacct 180
ggccgagatt gtcatggcca tagactccgt gcaccggctg ggctacgtgc acagggacat 240
caaaccagat aacattctgc tggaccgatg tgggcacatt cgcctggcag acttcggctc 300
ctgcctcaaa ctgcagcctg atggaatggt gaggtcgctg gtggctgtgg gcaccccgga 360
ctacctgtct cctgagattc tgcaggccgt tggtggaggg cctggggcag gcagctacgg 420
gccagagtgt gactggtggg cactgggcgt gttcgcctat gagatgttct atgggcagac 480
ccccttctac gcggactcca cagccgagac atatgccaag attgtgcact acagggaaca 540
cttgtcgctg ccgctggcag acacagttgt ccccgaggaa gctcaggacc tcattcgtgg 600
gctgctgtgt cctgctgaga taaggctagg tcgaggtggg gcaggtgatt tccagaaaca 660
tcctttcttc tttggccttg attgggaggg tctccgagac agtgtacccc cctttacacc 720
agacttcgag ggtgccacgg acacatgcaa tttcgatgtg gtggaggacc ggctcactgc 780
catggagacg ctgtcagaca tgcaggaaga catgcccctt ggggtgcgcc tgcccttcgt 840
gggctactcc tactgctgca tggccttcag agctgaagag gccgacctag tggctgtccc 900
tgcccctgtg gctgaggcag agaccacggt aacgctgcag cagctccagg aagccctgga 960
agaagaggtt ctcacccggc agagcctgag ccgcgagctg gaggccatcc ggaccgccaa 1020
ccagaacttc tccagccaac tacaggaggc cgaggtccga aaccgagacc tggaggcgca 1080
tgttcggcag ctacaggaac ggatggagat gctgcaggcc ccaggagccg cagccatcac 1140
gggggtcccc agtccccggg ccacggatcc accttcccat atggcccccc ggccgtggct 1200
gtgggccagt gcccgctggt ggggccaggc cccatgcacc gccgtcacct gctgctccct 1260
gccaggatcc ctaggcctgg cctatccgag gcgcgttgcc tgctcctgtt cgccgctgct 1320
ctggctgctg ccgccacact gggctgcact gggttggtgg cctataccgg cggtctcacc 1380
ccagtctggt gtttcccggg agccaccttc gccccctgaa ccctaagact ccaagccatc 1440
tttcatttag gcctcctagg aagatcgagc gaccagggag cgacccaaag cgtctctgtg 1500
cccatcgccc cccccccccc ccccaccgct ccgctccaca cttctgtgag cctgggtccc 1560
cacccagctc cgctcctgtg atccaggcct gccacctggc ggccggggag ggaggaacag 1620
ggctcgtgcc cagcacccct ggttcctgca gagctggtag ccaccgctgc tgcagcagct 1680
gggcattcgc cgaccttgct ttactcagcc ctgacgtgga tgggctaact gctcagctca 1740
tccgatttca ctttttcact ctcccagcca tcagttacaa gccataagca tgagccccct 1800
atttccaggg acatcccatt cccatagtga tggatcagca agacctctgc cagcacacac 1860
ggagtctttg gcttcggaca gcctcactcc tgggggttgc tgcaactcct tccccgtgta 1920
cacgtctgca ctctaacaac ggagccacag ctgcactccc ccctccccca aagcagtgtg 1980
ggtatttatt gatcttgtta tctgactcac tgacagactc cgggacccac gttttagatg 2040
cattgagact cgacattcct cggtatttat tgtctgtccc cacctacgac ctccactccc 2100
gacccttgcg aataaaatac ttctggtctg cccta 2135
<210> 16
<211> 2873
<212> DNA
<213> homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (206)..(2083)
<400> 16
aggggggctg gaccaagggg tggggagaag gggaggaggc ctcggccggc cgcagagaga 60
agtggccaga gaggcccagg ggacagccag ggacaggcag acatgcagcc agggctccag 120
ggcctggaca ggggctgcca ggccctgtga caggaggacc ccgagccccc ggcccgggga 180
ggggccatgg tgctgcctgt ccaac atg tca gcc gag gtg cgg ctg agg cgg 232
Met Ser Ala Glu Val Arg Leu Arg Arg
1 5
ctc cag cag ctg gtg ttg gac ccg ggc ttc ctg ggg ctg gag ccc ctg 280
Leu Gln Gln Leu Val Leu Asp Pro Gly Phe Leu Gly Leu Glu Pro Leu
10 15 20 25
ctc gac ctt ctc ctg ggc gtc cac cag gag ctg ggc gcc tcc gaa ctg 328
Leu Asp Leu Leu Leu Gly Val His Gln Glu Leu Gly Ala Ser Glu Leu
30 35 40
gcc cag gac aag tac gtg gcc gac ttc ttg cag tgg gcg gag ccc atc 376
Ala Gln Asp Lys Tyr Val Ala Asp Phe Leu Gln Trp Ala Glu Pro Ile
45 50 55
gtg gtg agg ctt aag gag gtc cga ctg cag agg gac gac ttc gag att 424
Val Val Arg Leu Lys Glu Val Arg Leu Gln Arg Asp Asp Phe Glu Ile
60 65 70
ctg aag gtg atc gga cgc ggg gcg ttc agc gag gta gcg gta gtg aag 472
Leu Lys Val Ile Gly Arg Gly Ala Phe Ser Glu Val Ala Val Val Lys
75 80 85
atg aag cag acg ggc cag gtg tat gcc atg aag atc atg aac aag tgg 520
Met Lys Gln Thr Gly Gln Val Tyr Ala Met Lys Ile Met Asn Lys Trp
90 95 100 105
gac atg ctg aag agg ggc gag gtg tcg tgc ttc cgt gag gag agg gac 568
Asp Met Leu Lys Arg Gly Glu Val Ser Cys Phe Arg Glu Glu Arg Asp
110 115 120
gtg ttg gtg aat ggg gac cgg cgg tgg atc acg cag ctg cac ttc gcc 616
Val Leu Val Asn Gly Asp Arg Arg Trp Ile Thr Gln Leu His Phe Ala
125 130 135
ttc cag gat gag aac tac ctg tac ctg gtc atg gag tat tac gtg ggc 664
Phe Gln Asp Glu Asn Tyr Leu Tyr Leu Val Met Glu Tyr Tyr Val Gly
140 145 150
ggg gac ctg ctg aca ctg ctg agc aag ttt ggg gag cgg att ccg gcc 712
Gly Asp Leu Leu Thr Leu Leu Ser Lys Phe Gly Glu Arg Ile Pro Ala
155 160 165
gag atg gcg cgc ttc tac ctg gcg gag att gtc atg gcc ata gac tcg 760
Glu Met Ala Arg Phe Tyr Leu Ala Glu Ile Val Met Ala Ile Asp Ser
170 175 180 185
gtg cac cgg ctt ggc tac gtg cac agg gac atc aaa ccc gac aac atc 808
Val His Arg Leu Gly Tyr Val His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Ile
190 195 200
ctg ctg gac cgc tgt ggc cac atc cgc ctg gcc gac ttc ggc tct tgc 856
Leu Leu Asp Arg Cys Gly His Ile Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ser Cys
205 210 215
ctc aag ctg cgg gca gat gga acg gtg cgg tcg ctg gtg gct gtg ggc 904
Leu Lys Leu Arg Ala Asp Gly Thr Val Arg Ser Leu Val Ala Val Gly
220 225 230
acc cca gac tac ctg tcc ccc gag atc ctg cag gct gtg ggc ggt ggg 952
Thr Pro Asp Tyr Leu Ser Pro Glu Ile Leu Gln Ala Val Gly Gly Gly
235 240 245
cct ggg aca ggc agc tac ggg ccc gag tgt gac tgg tgg gcg ctg ggt 1000
Pro Gly Thr Gly Ser Tyr Gly Pro Glu Cys Asp Trp Trp Ala Leu Gly
250 255 260 265
gta ttc gcc tat gaa atg ttc tat ggg cag acg ccc ttc tac gcg gat 1048
Val Phe Ala Tyr Glu Met Phe Tyr Gly Gln Thr Pro Phe Tyr Ala Asp
270 275 280
tcc acg gcg gag acc tat ggc aag atc gtc cac tac aag gag cac ctc 1096
Ser Thr Ala Glu Thr Tyr Gly Lys Ile Val His Tyr Lys Glu His Leu
285 290 295
tct ctg ccg ctg gtg gac gaa ggg gtc cct gag gag gct cga gac ttc 1144
Ser Leu Pro Leu Val Asp Glu Gly Val Pro Glu Glu Ala Arg Asp Phe
300 305 310
att cag cgg ttg ctg tgt ccc ccg gag aca cgg ctg ggc cgg ggt gga 1192
Ile Gln Arg Leu Leu Cys Pro Pro Glu Thr Arg Leu Gly Arg Gly Gly
315 320 325
gca ggc gac ttc cgg aca cat ccc ttc ttc ttt ggc ctc gac tgg gat 1240
Ala Gly Asp Phe Arg Thr His Pro Phe Phe Phe Gly Leu Asp Trp Asp
330 335 340 345
ggt ctc cgg gac agc gtg ccc ccc ttt aca ccg gat ttc gaa ggt gcc 1288
Gly Leu Arg Asp Ser Val Pro Pro Phe Thr Pro Asp Phe Glu Gly Ala
350 355 360
acc gac aca tgc aac ttc gac ttg gtg gag gac ggg ctc act gcc atg 1336
Thr Asp Thr Cys Asn Phe Asp Leu Val Glu Asp Gly Leu Thr Ala Met
365 370 375
gag aca ctg tcg gac att cgg gaa ggt gcg ccg cta ggg gtc cac ctg 1384
Glu Thr Leu Ser Asp Ile Arg Glu Gly Ala Pro Leu Gly Val His Leu
380 385 390
cct ttt gtg ggc tac tcc tac tcc tgc atg gcc ctc agg gac agt gag 1432
Pro Phe Val Gly Tyr Ser Tyr Ser Cys Met Ala Leu Arg Asp Ser Glu
395 400 405
gtc cca ggc ccc aca ccc atg gaa ctg gag gcc gag cag ctg ctt gag 1480
Val Pro Gly Pro Thr Pro Met Glu Leu Glu Ala Glu Gln Leu Leu Glu
410 415 420 425
cca cac gtg caa gcg ccc agc ctg gag ccc tcg gtg tcc cca cag gat 1528
Pro His Val Gln Ala Pro Ser Leu Glu Pro Ser Val Ser Pro Gln Asp
430 435 440
gaa aca gct gaa gtg gca gtt cca gcg gct gtc cct gcg gca gag gct 1576
Glu Thr Ala Glu Val Ala Val Pro Ala Ala Val Pro Ala Ala Glu Ala
445 450 455
gag gcc gag gtg acg ctg cgg gag ctc cag gaa gcc ctg gag gag gag 1624
Glu Ala Glu Val Thr Leu Arg Glu Leu Gln Glu Ala Leu Glu Glu Glu
460 465 470
gtg ctc acc cgg cag agc ctg agc cgg gag atg gag gcc atc cgc acg 1672
Val Leu Thr Arg Gln Ser Leu Ser Arg Glu Met Glu Ala Ile Arg Thr
475 480 485
gac aac cag aac ttc gcc agt caa cta cgc gag gca gag gct cgg aac 1720
Asp Asn Gln Asn Phe Ala Ser Gln Leu Arg Glu Ala Glu Ala Arg Asn
490 495 500 505
cgg gac cta gag gca cac gtc cgg cag ttg cag gag cgg atg gag ttg 1768
Arg Asp Leu Glu Ala His Val Arg Gln Leu Gln Glu Arg Met Glu Leu
510 515 520
ctg cag gca gag gga gcc aca gct gtc acg ggg gtc ccc agt ccc cgg 1816
Leu Gln Ala Glu Gly Ala Thr Ala Val Thr Gly Val Pro Ser Pro Arg
525 530 535
gcc acg gat cca cct tcc cat atg gcc ccc cgg ccg tgg ctg tgg gcc 1864
Ala Thr Asp Pro Pro Ser His Met Ala Pro Arg Pro Trp Leu Trp Ala
540 545 550
agt gcc cgc tgg tgg ggc cag gcc cca tgc acc gcc gcc acc tgc tgc 1912
Ser Ala Arg Trp Trp Gly Gln Ala Pro Cys Thr Ala Ala Thr Cys Cys
555 560 565
tcc ctg cca ggg tcc cta ggc ctg gcc tat cgg agg cgc ttt ccc tgc 1960
Ser Leu Pro Gly Ser Leu Gly Leu Ala Tyr Arg Arg Arg Phe Pro Cys
570 575 580 585
tcc tgt tcg ccg ttg ttc tgt ctc gtg ccg ccg ccc tgg gct gca ttg 2008
Ser Cys Ser Pro Leu Phe Cys Leu Val Pro Pro Pro Trp Ala Ala Leu
590 595 600
ggt tgg tgg ccc acg ccg gcc aac tca ccg cag tct ggc gcc gcc cag 2056
Gly Trp Trp Pro Thr Pro Ala Asn Ser Pro Gln Ser Gly Ala Ala Gln
605 610 615
gag ccg ccc gcg ctc cct gaa ccc tag aactgtcttc gactccgggg 2103
Glu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro
620 625
ccccgttgga agactgagtg cccggggcac ggcacagaag ccgcgcccac cgcctgccag 2163
ttcacaaccg ctccgagcgt gggtctccgc ccagctccag tcctgtgatc cgggcccgcc 2223
ccctagcggc cggggaggga ggggccgggt ccgcggccgg cgaacggggc tcgaagggtc 2283
cttgtagccg ggaatgctgc tgctgctgct gctgctgctg ctgctgctgc tgctgctgct 2343
gctgctgctg ctgctggggg gatcacagac catttctttc tttcggccag gctgaggccc 2403
tgacgtggat gggcaaactg caggcctggg aaggcagcaa gccgggccgt ccgtgttcca 2463
tcctccacgc acccccacct atcgttggtt cgcaaagtgc aaagctttct tgtgcatgac 2523
gccctgctct ggggagcgtc tggcgcgatc tctgcctgct tactcgggaa atttgctttt 2583
gccaaacccg ctttttcggg gatcccgcgc ccccctcctc acttgcgctg ctctcggagc 2643
cccagccggc tccgcccgct tcggcggttt ggatatttat tgacctcgtc ctccgactcg 2703
ctgacaggct acaggacccc caacaacccc aatccacgtt ttggatgcac tgagaccccg 2763
acattcctcg gtatttattg tctgtcccca cctaggaccc ccacccccga ccctcgcgaa 2823
taaaaggccc tccatctgcc caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2873
<210> 17
<211> 1509
<212> DNA
<213> homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (106)..(1239)
<400> 17
ccaccgcagc ggacagcgcc aagtgaagcc tcgcttcccc tccgcggcga ccagggcccg 60
agccgagagt agcagttgta gctacccgcc cagaaactag acaca atg tgc gac gaa 117
Met Cys Asp Glu
1
gac gag acc acc gcc ctc gtg tgc gac aat ggc tcc ggc ctg gtg aaa 165
Asp Glu Thr Thr Ala Leu Val Cys Asp Asn Gly Ser Gly Leu Val Lys
5 10 15 20
gcc ggc ttc gcc ggg gat gac gcc cct agg gcc gtg ttc ccg tcc atc 213
Ala Gly Phe Ala Gly Asp Asp Ala Pro Arg Ala Val Phe Pro Ser Ile
25 30 35
gtg ggc cgc ccc cga cac cag ggc gtc atg gtc ggt atg ggt cag aaa 261
Val Gly Arg Pro Arg His Gln Gly Val Met Val Gly Met Gly Gln Lys
40 45 50
gat tcc tac gtg ggc gac gag gct cag agc aag aga ggt atc ctg acc 309
Asp Ser Tyr Val Gly Asp Glu Ala Gln Ser Lys Arg Gly Ile Leu Thr
55 60 65
ctg aag tac cct atc gag cac ggc atc atc acc aac tgg gat gac atg 357
Leu Lys Tyr Pro Ile Glu His Gly Ile Ile Thr Asn Trp Asp Asp Met
70 75 80
gag aag atc tgg cac cac acc ttc tac aac gag ctt cgc gtg gct ccc 405
Glu Lys Ile Trp His His Thr Phe Tyr Asn Glu Leu Arg Val Ala Pro
85 90 95 100
gag gag cac ccc acc ctg ctc acc gag gcc ccc ctc aat ccc aag gcc 453
Glu Glu His Pro Thr Leu Leu Thr Glu Ala Pro Leu Asn Pro Lys Ala
105 110 115
aac cgc gag aag atg acc cag atc atg ttt gag acc ttc aac gtg ccc 501
Asn Arg Glu Lys Met Thr Gln Ile Met Phe Glu Thr Phe Asn Val Pro
120 125 130
gcc atg tac gtg gcc atc cag gcc gtg ctg tcc ctc tac gcc tcc ggc 549
Ala Met Tyr Val Ala Ile Gln Ala Val Leu Ser Leu Tyr Ala Ser Gly
135 140 145
agg acc acc ggc atc gtg ctg gac tcc ggc gac ggc gtc acc cac aac 597
Arg Thr Thr Gly Ile Val Leu Asp Ser Gly Asp Gly Val Thr His Asn
150 155 160
gtg ccc att tat gag ggc tac gcg ctg ccg cac gcc atc atg cgc ctg 645
Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro His Ala Ile Met Arg Leu
165 170 175 180
gac ctg gcg ggc cgc gat ctc acc gac tac ctg atg aag atc ctc act 693
Asp Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr Leu Met Lys Ile Leu Thr
185 190 195
gag cgt ggc tac tcc ttc gtg acc aca gct gag cgc gag atc gtg cgc 741
Glu Arg Gly Tyr Ser Phe Val Thr Thr Ala Glu Arg Glu Ile Val Arg
200 205 210
gac atc aag gag aag ctg tgc tac gtg gcc ctg gac ttc gag aac gag 789
Asp Ile Lys Glu Lys Leu Cys Tyr Val Ala Leu Asp Phe Glu Asn Glu
215 220 225
atg gcg acg gcc gcc tcc tcc tcc tcc ctg gaa aag agc tac gag ctg 837
Met Ala Thr Ala Ala Ser Ser Ser Ser Leu Glu Lys Ser Tyr Glu Leu
230 235 240
cca gac ggg cag gtc atc acc atc ggc aac gag cgc ttc cgc tgc ccg 885
Pro Asp Gly Gln Val Ile Thr Ile Gly Asn Glu Arg Phe Arg Cys Pro
245 250 255 260
gag acg ctc ttc cag ccc tcc ttc atc ggt atg gag tcg gcg ggc att 933
Glu Thr Leu Phe Gln Pro Ser Phe Ile Gly Met Glu Ser Ala Gly Ile
265 270 275
cac gag acc acc tac aac agc atc atg aag tgt gac atc gac atc agg 981
His Glu Thr Thr Tyr Asn Ser Ile Met Lys Cys Asp Ile Asp Ile Arg
280 285 290
aag gac ctg tat gcc aac aac gtc atg tcg ggg ggc acc acg atg tac 1029
Lys Asp Leu Tyr Ala Asn Asn Val Met Ser Gly Gly Thr Thr Met Tyr
295 300 305
cct ggg atc gct gac cgc atg cag aaa gag atc acc gcg ctg gca ccc 1077
Pro Gly Ile Ala Asp Arg Met Gln Lys Glu Ile Thr Ala Leu Ala Pro
310 315 320
agc acc atg aag atc aag atc atc gcc ccg ccg gag cgc aaa tac tcg 1125
Ser Thr Met Lys Ile Lys Ile Ile Ala Pro Pro Glu Arg Lys Tyr Ser
325 330 335 340
gtg tgg atc ggc ggc tcc atc ctg gcc tcg ctg tcc acc ttc cag cag 1173
Val Trp Ile Gly Gly Ser Ile Leu Ala Ser Leu Ser Thr Phe Gln Gln
345 350 355
atg tgg atc acc aag cag gag tac gac gag gcc ggc cct tcc atc gtc 1221
Met Trp Ile Thr Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Ala Gly Pro Ser Ile Val
360 365 370
cac cgc aaa tgc ttc tag acacactcca cctccagcac gcgacttctc 1269
His Arg Lys Cys Phe
375
aggacgacga atcttctcaa tgggggggcg gctgagctcc agccaccccg cagtcacttt 1329
ctttgtaaca acttccgttg ctgccatcgt aaactgacac agtgtttata acgtgtacat 1389
acattaactt attacctcat tttgttattt ttcgaaacaa agccctgtgg aagaaaatgg 1449
aaaacttgaa gaagcattaa agtcattctg ttaagctgcg taaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1509
<210> 18
<400> 18
000
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Primer
<400> 20
agcctgagcc gggagatg 18
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Primer
<400> 21
gcgtagttga ctggcgaagt t 21
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Probe
<400> 22
aggccatccg cacggacaac c 21
<210> 23
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 23
acaataaata ccgagg 16
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 24
cggagcggtt gtgaactggc 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 25
gcgcaccttc ccgaatgtcc 20
<210> 26
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 26
cccgaatgtc cgacag 16
<210> 27
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 27
cggagcggtt gtgaact 17
<210> 28
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 28
acaataaata ccgagga 17
<210> 29
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 29
gacaatctcc gccagg 16
<210> 30
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 30
tcccgaatgt ccgaca 16
<210> 31
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 31
tgtaatgttg tccagt 16
<210> 32
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 32
gtgtaatgtt gtccag 16
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 33
ttgcactttg cgaaccaacg 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 34
cgacacctcg cccctcttca 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 35
acgacacctc gcccctcttc 20
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 36
cacgacacct cgcccctctt 20
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 37
gcacgacacc tcgcccctct 20
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 38
agcacgacac ctcgcccctc 20
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 39
aagcacgaca cctcgcccct 20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 40
gaagcacgac acctcgcccc 20
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 41
ggaagcacga cacctcgccc 20
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 42
cggaagcacg acacctcgcc 20
<210> 43
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 43
acggaagcac gacacctcgc 20
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 44
cacggaagca cgacacctcg 20
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 45
tcacggaagc acgacacctc 20
<210> 46
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 46
ctcacggaag cacgacacct 20
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 47
cctcacggaa gcacgacacc 20
<210> 48
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 48
tcctcacgga agcacgacac 20
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 49
ctcctcacgg aagcacgaca 20
<210> 50
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 50
tctcctcacg gaagcacgac 20
<210> 51
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 51
ctctcctcac ggaagcacga 20
<210> 52
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 52
cctctcctca cggaagcacg 20
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 53
ccctctcctc acggaagcac 20
<210> 54
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 54
tccctctcct cacggaagca 20
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 55
gtccctctcc tcacggaagc 20
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 56
cgtccctctc ctcacggaag 20
<210> 57
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 57
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<210> 58
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 58
cggtccccat tcaccaacac 20
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 59
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<210> 60
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 60
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<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 61
cgccggtccc cattcaccaa 20
<210> 62
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 62
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 63
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 65
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 66
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 67
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 68
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 69
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 70
gtgatccacc gccggtcccc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 71
cgtgatccac cgccggtccc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 72
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 73
gttctcatcc tggaaggcga 20
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 74
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<210> 75
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 75
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<210> 76
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 76
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 77
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 78
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<210> 79
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 79
tacaggtagt tctcatcctg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 80
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 81
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<210> 82
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 82
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 83
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 89
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 90
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 92
tactccatga ccaggtacag 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 93
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<210> 94
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 94
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 95
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 97
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 98
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 99
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 100
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<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 101
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<210> 102
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 102
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<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 103
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<210> 104
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 104
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<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 105
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<210> 106
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 106
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<210> 107
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 107
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<210> 108
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 108
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<210> 109
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 109
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<210> 110
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 110
cccaaacttg ctcagcagtg 20
<210> 111
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 111
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<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 112
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<210> 113
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 113
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<210> 114
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 114
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<210> 115
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 115
ggcagtgagc ccgtcctcca 20
<210> 116
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 116
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<210> 117
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 117
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<210> 118
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 118
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<210> 119
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 119
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<210> 120
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 120
ctccatggca gtgagcccgt 20
<210> 121
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 121
tctccatggc agtgagcccg 20
<210> 122
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 122
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<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 123
ccttcccgaa tgtccgacag 20
<210> 124
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 124
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<210> 125
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 125
caccttcccg aatgtccgac 20
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 126
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 127
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 128
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 129
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<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 130
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<210> 131
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 131
ccacaaaagg caggtggacc 20
<210> 132
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 132
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<210> 133
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 133
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<210> 134
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 134
agcccacaaa aggcaggtgg 20
<210> 135
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 135
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<210> 136
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 136
gtagcccaca aaaggcaggt 20
<210> 137
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 137
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<210> 138
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 138
gagtagccca caaaaggcag 20
<210> 139
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 139
ggagtagccc acaaaaggca 20
<210> 140
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 140
aggagtagcc cacaaaaggc 20
<210> 141
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 141
taggagtagc ccacaaaagg 20
<210> 142
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 142
gtaggagtag cccacaaaag 20
<210> 143
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 143
agtaggagta gcccacaaaa 20
<210> 144
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 144
gagtaggagt agcccacaaa 20
<210> 145
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 145
ggagtaggag tagcccacaa 20
<210> 146
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 146
aggagtagga gtagcccaca 20
<210> 147
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 147
caggagtagg agtagcccac 20
<210> 148
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 148
gcaggagtag gagtagccca 20
<210> 149
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 149
tgcaggagta ggagtagccc 20
<210> 150
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 150
atgcaggagt aggagtagcc 20
<210> 151
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 151
catgcaggag taggagtagc 20
<210> 152
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 152
ccatgcagga gtaggagtag 20
<210> 153
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 153
gccatgcagg agtaggagta 20
<210> 154
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 154
ggccatgcag gagtaggagt 20
<210> 155
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 155
gggccatgca ggagtaggag 20
<210> 156
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 156
agggccatgc aggagtagga 20
<210> 157
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 158
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 159
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 160
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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cggctcaggc tctgccgggt 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ggcctccatc tcccggctca 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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tggcctccat ctcccggctc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<212> DNA
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ggatggcctc catctcccgg 20
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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cccaccgccc acagcc 16
<210> 364
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 364
gcccaccgcc cacagc 16
<210> 365
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 365
ccaggcccac cgccca 16
<210> 366
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 366
cccaggccca ccgccc 16
<210> 367
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 367
tcccaggccc accgcc 16
<210> 368
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 368
tgcctgtccc aggccc 16
<210> 369
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 369
ctgcctgtcc caggcc 16
<210> 370
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 370
gctgcctgtc ccaggc 16
<210> 371
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 371
ggtggcacct tcgaaa 16
<210> 372
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 372
cggtggcacc ttcgaa 16
<210> 373
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 373
tcggtggcac cttcga 16
<210> 374
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 374
agtgagcccg tcctcc 16
<210> 375
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 375
cagtgagccc gtcctc 16
<210> 376
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 376
gcagtgagcc cgtcct 16
<210> 377
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 377
tcccgaatgt ccgaca 16
<210> 378
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 378
ttcccgaatg tccgac 16
<210> 379
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 379
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<210> 380
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 380
ccttcccgaa tgtccg 16
<210> 381
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 381
accttcccga atgtcc 16
<210> 382
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 382
caccttcccg aatgtc 16
<210> 383
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 383
gcaccttccc gaatgt 16
<210> 384
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 384
cgcaccttcc cgaatg 16
<210> 385
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 385
atccgctcct gcaact 16
<210> 386
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 386
catccgctcc tgcaac 16
<210> 387
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 387
ccatccgctc ctgcaa 16
<210> 388
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 388
gctccctctg cctgca 16
<210> 389
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 389
aggtggatcc gtggcc 16
<210> 390
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 390
gggaaggtgg atccgt 16
<210> 391
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 391
acaggagcag ggaaag 16
<210> 392
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 392
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<210> 393
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 393
ggctcctggg cggcgc 16
<210> 394
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 394
ggcggctcct gggcgg 16
<210> 395
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 395
cgcgggcggc tcctgg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 396
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 397
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 398
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 399
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<210> 400
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 400
acagttctag ggttca 16
<210> 401
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 401
gacagttcta gggttc 16
<210> 402
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 402
agacagttct agggtt 16
<210> 403
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 403
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<210> 404
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 404
gaagacagtt ctaggg 16
<210> 405
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 405
cgaagacagt tctagg 16
<210> 406
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 406
tcgaagacag ttctag 16
<210> 407
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 407
gtcgaagaca gttcta 16
<210> 408
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 408
agtcgaagac agttct 16
<210> 409
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 409
gagtcgaaga cagttc 16
<210> 410
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 410
ggagtcgaag acagtt 16
<210> 411
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 411
cggagtcgaa gacagt 16
<210> 412
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 412
ccggagtcga agacag 16
<210> 413
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 413
cccggagtcg aagaca 16
<210> 414
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 414
ccccggagtc gaagac 16
<210> 415
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 415
gccccggagt cgaaga 16
<210> 416
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 416
ggccccggag tcgaag 16
<210> 417
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 417
gggccccgga gtcgaa 16
<210> 418
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 418
cggttgtgaa ctggca 16
<210> 419
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 419
agcggttgtg aactgg 16
<210> 420
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 420
gcactttgcg aaccaa 16
<210> 421
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 421
tgcactttgc gaacca 16
<210> 422
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 422
actttgcgaa ccaacg 16
<210> 423
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 423
aaagctttgc actttg 16
<210> 424
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 424
tcccgagtaa gcaggc 16
<210> 425
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 425
gcagcgcaag tgagga 16
<210> 426
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 426
gtcagcgagt cggagg 16
<210> 427
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 427
cctgtcagcg agtcgg 16
<210> 428
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 428
gcctgtcagc gagtcg 16
<210> 429
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 429
agcctgtcag cgagtc 16
<210> 430
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 430
gggtctcagt gcatcc 16
<210> 431
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 431
aggtttttcc agaggc 16
<210> 432
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 432
aaggtttttc cagagg 16
<210> 433
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 433
ggtcactgct gggtcc 16
<210> 434
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 434
gtggtttctg tctgct 16
<210> 435
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 435
cgtggtttct gtctgc 16
<210> 436
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 436
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<210> 437
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 437
tgtgaactgg caggcg 16
<210> 438
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 438
ggttgtgaac tggcag 16
<210> 439
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 439
gagcggttgt gaactg 16
<210> 440
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 440
actggagctg ggcgga 16
<210> 441
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 441
aggactggag ctgggc 16
<210> 442
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 442
tcacaggact ggagct 16
<210> 443
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 443
atcacaggac tggagc 16
<210> 444
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 444
ggatcacagg actgga 16
<210> 445
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 445
cagcctggcc gaaaga 16
<210> 446
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 446
ctcagcctgg ccgaaa 16
<210> 447
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 447
gtcagggcct cagcct 16
<210> 448
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 448
cgtcagggcc tcagcc 16
<210> 449
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 449
tttgcacttt gcgaac 16
<210> 450
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 450
gaaagctttg cacttt 16
<210> 451
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 451
aatttcccga gtaagc 16
<210> 452
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 452
gcaaatttcc cgagta 16
<210> 453
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 453
agcaaatttc ccgagt 16
<210> 454
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 454
aagcaaattt cccgag 16
<210> 455
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 455
aaagcaaatt tcccga 16
<210> 456
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 456
aaaagcaaat ttcccg 16
<210> 457
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 457
gcaaaagcaa atttcc 16
<210> 458
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 458
ggcaaaagca aatttc 16
<210> 459
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 459
ttggcaaaag caaatt 16
<210> 460
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 460
gtttggcaaa agcaaa 16
<210> 461
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 461
ggtttggcaa aagcaa 16
<210> 462
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 462
gggtttggca aaagca 16
<210> 463
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 463
gcgggtttgg caaaag 16
<210> 464
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 464
agcgggtttg gcaaaa 16
<210> 465
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 465
aagcgggttt ggcaaa 16
<210> 466
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 466
ctccgagagc agcgca 16
<210> 467
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 467
gctccgagag cagcgc 16
<210> 468
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 468
ggctccgaga gcagcg 16
<210> 469
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 469
taaatatcca aaccgc 16
<210> 470
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 470
gtcaataaat atccaa 16
<210> 471
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 471
aggtcaataa atatcc 16
<210> 472
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 472
cgaggtcaat aaatat 16
<210> 473
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 473
acgaggtcaa taaata 16
<210> 474
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 474
gacgaggtca ataaat 16
<210> 475
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 475
ggacgaggtc aataaa 16
<210> 476
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 476
aggacgaggt caataa 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 477
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 478
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 479
cggaggacga ggtcaa 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 480
tcggaggacg aggtca 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 481
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 482
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 483
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 484
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 485
agcgagtcgg aggacg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 486
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 487
tcagcgagtc ggagga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 488
tgtcagcgag tcggag 16
<210> 489
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 489
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 490
cagtgcatcc aaaacg 16
<210> 491
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 491
tcagtgcatc caaaac 16
<210> 492
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 492
ctcagtgcat ccaaaa 16
<210> 493
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 493
tctcagtgca tccaaa 16
<210> 494
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 494
gtctcagtgc atccaa 16
<210> 495
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 495
caataaatac cgagga 16
<210> 496
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 496
agacaataaa taccga 16
<210> 497
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 497
cagacaataa ataccg 16
<210> 498
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 498
cacggaagca cgacac 16
<210> 499
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 499
tcacggaagc acgaca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 500
ctcacggaag cacgac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 501
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 502
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 503
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 504
ccccattcac caacac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 505
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 506
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 508
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 509
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 510
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 511
cgccggtccc cattca 16
<210> 512
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 512
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 513
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 514
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 515
ccaccgccgg tcccca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 516
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 517
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 518
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<210> 519
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 519
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<210> 520
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 520
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<210> 521
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 521
cgtgatccac cgccgg 16
<210> 522
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 522
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<210> 523
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 523
tcatcctgga aggcga 16
<210> 524
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 524
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<210> 525
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 525
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<210> 526
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 526
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<210> 527
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 527
caggtacagg tagttc 16
<210> 528
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 528
ccaggtacag gtagtt 16
<210> 529
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 529
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 530
ctccatgacc aggtac 16
<210> 531
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 531
actccatgac caggta 16
<210> 532
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 532
tactccatga ccaggt 16
<210> 533
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 533
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<210> 534
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 534
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<210> 535
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 535
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<210> 536
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 536
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 537
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<210> 538
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 538
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<210> 539
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 539
acttgctcag cagtgt 16
<210> 540
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 540
aacttgctca gcagtg 16
<210> 541
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 541
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<210> 542
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 542
cgctccccaa acttgc 16
<210> 543
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 543
ccgctcccca aacttg 16
<210> 544
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 544
tccgctcccc aaactt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 545
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<210> 546
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 546
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<210> 547
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 547
gaatccgctc cccaaa 16
<210> 548
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 548
ggaatccgct ccccaa 16
<210> 549
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 549
cggaatccgc tcccca 16
<210> 550
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 550
ccggaatccg ctcccc 16
<210> 551
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 551
gccggaatcc gctccc 16
<210> 552
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 552
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<210> 553
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 553
tagaagcgcg ccatct 16
<210> 554
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 554
gtagaagcgc gccatc 16
<210> 555
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 555
ggtagaagcg cgccat 16
<210> 556
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 556
aggtagaagc gcgcca 16
<210> 557
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 557
caggtagaag cgcgcc 16
<210> 558
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 558
ccaggtagaa gcgcgc 16
<210> 559
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 559
gccaggtaga agcgcg 16
<210> 560
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 560
cgccaggtag aagcgc 16
<210> 561
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 561
ccgccaggta gaagcg 16
<210> 562
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 562
tccgccaggt agaagc 16
<210> 563
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 563
tgacaatctc cgccag 16
<210> 564
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 564
atgacaatct ccgcca 16
<210> 565
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 565
catgacaatc tccgcc 16
<210> 566
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 566
ccatgacaat ctccgc 16
<210> 567
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 567
gccatgacaa tctccg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 568
ggccatgaca atctcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 569
ccaactgttc tcttag 16
<210> 570
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 570
aaccaactgt tctctt 16
<210> 571
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 571
ccagtaataa aagctg 16
<210> 572
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 572
gtccagtaat aaaagc 16
<210> 573
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 573
gttgtccagt aataaa 16
<210> 574
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 574
atgttgtcca gtaata 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 575
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 576
ttcaatcctg acccac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 577
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 580
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 582
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 590
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 594
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 595
cagatgtggt cctaag 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 596
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 597
cacctccaca gatgtg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 598
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 600
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 602
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 603
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 604
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 605
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ccctcctctg cttagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 617
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 618
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 619
cctcctgatt tgagga 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 620
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 622
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 623
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 624
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 625
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 626
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 627
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 629
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 630
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 632
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 633
ctgacggacc ccctcc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 635
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 637
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 638
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 639
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 640
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 642
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 643
ttctgttcag gaagtc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 644
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 645
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<210> 646
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 646
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 647
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 648
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 649
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 650
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 656
cacctggacc aaaagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 657
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 658
gaccgcacct ggacca 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 659
accttgtagt ggacga 16
<210> 660
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 660
tcaccttgta gtggac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ggagaggagg cgatag 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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agggagagga ggcgat 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 664
ctcctgctca gaggga 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 665
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 666
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 667
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 668
agagaggtgc tcctgc 16
<210> 669
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 669
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 670
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 673
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 674
gggaggttcc cgcagc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 675
gtccttactc caactt 16
<210> 676
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 676
ctgtccttac tccaac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 677
cactgtcctt actcca 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 678
ggcactgtcc ttactc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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taggcactgt ccttac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 680
ggtaggcact gtcctt 16
<210> 681
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 681
gtcactgctg ggtcct 16
<210> 682
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 682
aggtcactgc tgggtc 16
<210> 683
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 683
ctaggtcact gctggg 16
<210> 684
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 684
gtctaggtca ctgctg 16
<210> 685
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 685
aagtctaggt cactgc 16
<210> 686
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 686
gcactccatt gtctca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 687
ctgcactcca ttgtct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 688
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 689
ccccctgcac tccatt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 690
cttgctgagt caggag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 691
tccttgctga gtcagg 16
<210> 692
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 692
cttccttgct gagtca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 693
accttccttg ctgagt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 694
ggaccttcct tgctga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 695
caggaccttc cttgct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 696
agccctccag gacctt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 697
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 698
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 699
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 700
ctcagatagc tcccca 16
<210> 701
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 701
agctcagata gctccc 16
<210> 702
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 702
tcagctcaga tagctc 16
<210> 703
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 703
tctcagctca gatagc 16
<210> 704
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 704
gagtcctctc ctgctt 16
<210> 705
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 705
ggaggagtcc tctcct 16
<210> 706
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 706
gaggaggagt cctctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 707
caaaagggca cccaga 16
<210> 708
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 708
agcaaaaggg caccca 16
<210> 709
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 709
ggatccccag tattgt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 710
ctggatcccc agtatt 16
<210> 711
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 711
tgctggatcc ccagta 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 712
attctctaga ctgcaa 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 713
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 714
tctaattctc tagact 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 715
tctctaattc tctaga 16
<210> 716
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 716
ctccataatt ctctaa 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 717
actctccata attctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 718
acactctcca taattc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 719
ccacactctc cataat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 720
tgccacactc tccata 16
<210> 721
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 721
cccatgccca tcctgc 16
<210> 722
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 722
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<210> 723
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 723
ggcataggac agagaa 16
<210> 724
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 724
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<210> 725
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 725
tggtggcata ggacag 16
<210> 726
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 726
cttactctgc ccctcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 727
accttactct gcccct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 728
tgaccttact ctgccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 729
gctgacctta ctctgc 16
<210> 730
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 730
ctgctgacct tactct 16
<210> 731
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 731
ctctgctgac cttact 16
<210> 732
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 732
gcctctgctg acctta 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 733
ccatggctct gagtca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 734
agccatggct ctgagt 16
<210> 735
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 735
taagccatgg ctctga 16
<210> 736
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 736
tagcctgctg tgactc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 737
atgggaggct gttggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 738
ccatgggagg ctgttg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 739
ggccatggga ggctgt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 740
gtgcagagag gccatg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 741
gagctcccag catgac 16
<210> 742
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 742
agggagctcc cagcat 16
<210> 743
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 743
gccatagagc ccactt 16
<210> 744
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 744
gggccataga gcccac 16
<210> 745
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 745
atgctggccc tcctgg 16
<210> 746
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 746
agctgcccca tgctgg 16
<210> 747
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 747
cgcccctggc agctgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 748
tgcgcccctg gcagct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 749
gctgcgcccc tggcag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 750
cggctgcgcc cctggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 751
gtcggctgcg cccctg 16
<210> 752
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 752
ctgtcggctg cgcccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 753
gcctgtcggc tgcgcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 754
ctgcctgtcg gctgcg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 755
acctgcctgt cggctg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 756
acacctgcct gtcggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 757
gaacacctgc ctgtcg 16
<210> 758
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 758
ccgaacacct gcctgt 16
<210> 759
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 759
cgccgaacac ctgcct 16
<210> 760
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 760
cctgggcacc tgttgg 16
<210> 761
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 761
gtgcctgggc acctgt 16
<210> 762
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 762
cgccctccca gtgcct 16
<210> 763
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 763
accgccctcc cagtgc 16
<210> 764
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 764
tcaccgccct cccagt 16
<210> 765
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 765
agtcaccgcc ctccca 16
<210> 766
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 766
tgagtcaccg ccctcc 16
<210> 767
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 767
cgtgagtcac cgccct 16
<210> 768
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 768
caaagctggt tctccc 16
<210> 769
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 769
tgcaaagctg gttctc 16
<210> 770
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 770
tctgcaaagc tggttc 16
<210> 771
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 771
tgtctgcaaa gctggt 16
<210> 772
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 772
cctgtctgca aagctg 16
<210> 773
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 773
cgcctgtctg caaagc 16
<210> 774
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 774
ttgtccctcc tggatc 16
<210> 775
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 775
agttgtccct cctgga 16
<210> 776
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 776
aaagttgtcc ctcctg 16
<210> 777
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 777
ccaaagttgt ccctcc 16
<210> 778
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 778
acccaaagtt gtccct 16
<210> 779
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 779
gaacccaaag ttgtcc 16
<210> 780
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 780
gaagaaccca aagttg 16
<210> 781
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 781
ccagaagaac ccaaag 16
<210> 782
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 782
cacccagaag aaccca 16
<210> 783
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 783
gcagaaccta caaaag 16
<210> 784
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 784
gtgcagaacc tacaaa 16
<210> 785
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 785
gggtgcagaa cctaca 16
<210> 786
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 786
gtgggtgcag aaccta 16
<210> 787
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 787
ccacacggct catagg 16
<210> 788
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 788
acccacacgg ctcata 16
<210> 789
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 789
tgacccacac ggctca 16
<210> 790
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 790
gctgacccac acggct 16
<210> 791
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 791
tggctgaccc acacgg 16
<210> 792
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 792
ggtggctgac ccacac 16
<210> 793
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 793
atggtggctg acccac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 794
gaatggtggc tgaccc 16
<210> 795
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 795
ctaaaggacg caggga 16
<210> 796
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 796
aactaaagga cgcagg 16
<210> 797
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 797
gagaactaaa ggacgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 798
attggtccca agcccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 799
ccattggtcc caagcc 16
<210> 800
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 800
gcccattggt cccaag 16
<210> 801
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 801
acgcccattg gtccca 16
<210> 802
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 802
ccacgcccat tggtcc 16
<210> 803
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 803
caccacgccc attggt 16
<210> 804
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 804
agacccaact ccaccc 16
<210> 805
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 805
tcacctcgcc cctctt 16
<210> 806
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 806
cctcacctcg cccctc 16
<210> 807
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 807
agcccctcac ctcgcc 16
<210> 808
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 808
ctcaaagccc cccacg 16
<210> 809
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 809
atcctcaaag cccccc 16
<210> 810
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 810
ggatcctcaa agcccc 16
<210> 811
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 811
gcggatcctc aaagcc 16
<210> 812
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 812
gcgcggatcc tcaaag 16
<210> 813
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 813
gggcgcggat cctcaa 16
<210> 814
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 814
gagctgcagc cggaga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 815
aggagctgca gccgga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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cggaggagct gcagcc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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acccggagga gctgca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 818
gcacccggag gagctg 16
<210> 819
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 819
gggcacccgg aggagc 16
<210> 820
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 820
cagggcaccc ggagga 16
<210> 821
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 821
tgcagggcac ccggag 16
<210> 822
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 822
cctgcagggc acccgg 16
<210> 823
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 823
cgacacctgc agggca 16
<210> 824
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 824
cacgacacct gcaggg 16
<210> 825
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 825
agcacgacac ctgcag 16
<210> 826
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 826
gaagcacgac acctgc 16
<210> 827
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 827
ccaggtagtt ctcatc 16
<210> 828
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 828
caccaggtag ttctca 16
<210> 829
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 829
ctcaccaggt agttct 16
<210> 830
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 830
agctcaccag gtagtt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 831
ggagctcacc aggtag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 832
ccggagctca ccaggt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 833
gcccggagct caccag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 834
tagagcttcc tctccc 16
<210> 835
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 835
cctagagctt cctctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 836
atcctagagc ttcctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 837
caatcctaga gcttcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 838
cccaatccta gagctt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 839
cccccaatcc tagagc 16
<210> 840
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 840
cacccccaat cctaga 16
<210> 841
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 841
agcaccccca atccta 16
<210> 842
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 842
gcagcacccc caatcc 16
<210> 843
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 843
gggcagcacc cccaat 16
<210> 844
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 844
tgacacaccc tcttac 16
<210> 845
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 845
cctgacacac cctctt 16
<210> 846
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 846
cacctgacac accctc 16
<210> 847
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 847
tccacctgac acaccc 16
<210> 848
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 848
catccacctg acacac 16
<210> 849
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 849
ctcatccacc tgacac 16
<210> 850
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 850
ccctcatcca cctgac 16
<210> 851
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 851
gcccctcatc cacctg 16
<210> 852
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 852
aggcccctca tccacc 16
<210> 853
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 853
gaaggcccct catcca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 854
aggtaagaga cccccc 16
<210> 855
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 855
ccaggtaaga gacccc 16
<210> 856
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 856
ttccaggtaa gagacc 16
<210> 857
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 857
ccattccagg taagag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 858
tcccattcca ggtaag 16
<210> 859
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 859
tatcccattc caggta 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 860
cctatcccat tccagg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 861
gacctatccc attcca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 862
aagacctatc ccattc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 863
tgaagaccta tcccat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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tggccccgtt agaatt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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agtggccccg ttagaa 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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gcagtggccc cgttag 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 867
aggcagtggc cccgtt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 868
ctaggcagtg gccccg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 869
ccctaggcag tggccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 870
aggtcccaga cactcc 16
<210> 871
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 871
ataggtccca gacact 16
<210> 872
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 872
gaataggtcc cagaca 16
<210> 873
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 873
gagaataggt cccaga 16
<210> 874
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 874
cagagaatag gtccca 16
Claims (167)
10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는, 화합물.
청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 1개의 뉴클레오사이드는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택된 이환식 당을 포함하는, 화합물.
청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 표적 영역은 DMPK 핵산의 엑손 9인, 화합물.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보적 영역은 DMPK 전사체의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보적 영역은 DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보적 영역은 DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상보적 영역은 DMPK 핵산의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DMPK 핵산은 DMPK 예비 mRNA인, 화합물.
청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DMPK 핵산은 DMPK mRNA인, 화합물.
청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DMPK 핵산은 서열 번호: 1 및 서열 번호: 2 중 선택된 핵염기 서열을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 2의 동등한 길이의 표적 영역에 상보적인 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1343 내지 핵염기 1368인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 1317 내지 핵염기 1366인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 2748 내지 핵염기 2791인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 1의 핵염기 730 내지 핵염기 748인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 8603 내지 핵염기 8619인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 13836 내지 핵염기 13851인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10201 내지 핵염기 10216인, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 2의 핵염기 10202 내지 핵염기 10218인, 화합물.
청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸쳐 상기 표적 영역과 적어도 80% 상보적인 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸쳐 상기 표적 영역과 적어도 90% 상보적인 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸쳐 상기 표적 영역과 적어도 100% 상보적인 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 23 내지 874 중 임의의 것에 나열된 서열의 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23 내지 32에 나열된 서열의 적어도 10개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23 내지 32에 나열된 서열의 적어도 12개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23 내지 32에 나열된 서열의 적어도 14개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23 내지 32에 나열된 서열의 적어도 16개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 25에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 26에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 27에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 28에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 29에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 30에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 31에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 32에 나열된 서열로 이루어진 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32에 나열된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 23, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32에 나열된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 33 내지 874 중 임의의 것에 나열된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 화합물.
청구항 1 내지 42 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1 내지 19 중 임의의 것과 적어도 90% 상보적인, 화합물.
청구항 1 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1 내지 19 중 임의의 것과 100% 상보적인, 화합물.
청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 1 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 단일 가닥 뉴클레오사이드인, 화합물.
청구항 1 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 2개의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
청구항 52에 있어서, 각각의 변형된 당은 동일한 변형을 갖는, 화합물.
청구항 52에 있어서, 적어도 1개의 변형된 당은 상이한 변형을 갖는, 화합물.
청구항 51 내지 54 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 변형된 당은 이환식 당인, 화합물.
청구항 55에 있어서, 상기 이환식 당은 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택되는, 화합물.
청구항 56에 있어서, 상기 이환식 당은 cEt를 포함하는, 화합물.
청구항 56에 있어서, 상기 이환식 당은 LNA를 포함하는, 화합물.
청구항 56에 있어서, 상기 이환식 당은 α-L-LNA를 포함하는, 화합물.
청구항 56에 있어서, 상기 이환식 당은 ENA를 포함하는, 화합물.
청구항 56에 있어서, 상기 이환식 당은 2'-티오 LNA를 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 61 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 변형된 당은 2'-치환된 뉴클레오사이드를 포함하는, 화합물.
청구항 62에 있어서, 상기 2'-치환된 뉴클레오사이드는 2'-OCH3, 2'-F, 및 2'-O-메톡시에틸 중 선택되는, 화합물.
청구항 1 내지 63 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 64 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 뉴클레오사이드는 변형된 핵염기를 포함하는, 화합물.
청구항 65에 있어서, 상기 변형된 핵염기는 5-메틸시토신인 화합물.
청구항 1 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 시토신은 5-메틸시토신인, 화합물.
청구항 1 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는
a. 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
a. 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
청구항 68에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 2개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 5'-윙 분절은 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 2개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3'-윙 분절은 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 갭 분절은 6개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 갭 분절은 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 갭 분절은 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 갭 분절은 9개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 68 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 갭 분절은 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진, 화합물.
청구항 1 내지 31, 33, 37 내지 45, 또는 51 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하는, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 31, 33, 37 내지 45, 또는 51 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 AABB 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 BBAA 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5'-윙 분절과 3'-윙 분절 사이에 위치하는, 화합물.
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 AABB 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 BBAA 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5'-윙 분절과 3'-윙 분절 사이에 위치하는, 화합물.
청구항 1 내지 30, 34, 35, 46, 또는 50 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 AAABB 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 BBAAA 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5'-윙 분절과 3'-윙 분절 사이에 위치하는, 화합물.
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 AAABB 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 BBAAA 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5'-윙 분절과 3'-윙 분절 사이에 위치하는, 화합물.
청구항 1 내지 31, 33, 37 내지 45, 또는 51 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내는, 화합물.
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내는, 화합물.
청구항 1 내지 30, 34, 35, 46, 또는 50 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내는, 화합물.
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내는, 화합물.
청구항 1 내지 30, 32, 33, 또는 49 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하는, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 31, 33, 34, 37 내지 45, 또는 53 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 cEt 당을 포함하는, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 cEt 당을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 번호: 1의 핵염기 1343 및 핵염기 1368 내의 표적 영역에 상보적인 적어도 8개의 인접 핵염기를 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는
a. 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
a. 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는, 화합물.
청구항 96에 있어서, 5' 윙 분절 내의 각각의 변형된 당은 동일한 변형을 갖는, 화합물.
청구항 96에 있어서, 5' 윙 분절 내의 적어도 2개의 변형된 당은 상이한 변형을 갖는, 화합물.
청구항 96 내지 98 중 어느 한 항에 있어서, 3' 윙 분절 내의 각각의 변형된 당은 동일한 변형을 갖는, 화합물.
청구항 96 내지 98 중 어느 한 항에 있어서, 3' 윙 분절 내의 적어도 2개의 변형된 당은 상이한 변형을 갖는, 화합물.
청구항 96에서, 적어도 1개의 변형된 당은 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택된 이환식 당인, 화합물.
청구항 90 또는 91에 있어서, 각 B는 cEt, LNA, α-L-LNA, ENA 및 2'-티오 LNA 중 선택된 이환식 당을 나타내는, 화합물.
청구항 102에 있어서, 상기 이환식 당은 BNA를 포함하는, 화합물.
청구항 102에 있어서, 상기 이환식 당은 cEt를 포함하는, 화합물.
청구항 102에 있어서, 상기 이환식 당은 LNA를 포함하는, 화합물.
청구항 102에 있어서, 상기 이환식 당은 α-L-LNA를 포함하는, 화합물.
청구항 102에 있어서, 상기 이환식 당은 ENA를 포함하는, 화합물.
청구항 102에 있어서, 상기 이환식 당은 2'-티오 LNA를 포함하는, 화합물.
청구항 90 또는 91에 있어서, 각 A는 2'-OCH3, 2'-F, 및 2'-O-메톡시에틸 중 선택되는 2'-치환된 뉴클레오사이드를 나타내는, 화합물.
청구항 109에 있어서, 상기 2'-치환된 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸을 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 111 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 화합물.
청구항 1 내지 111 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결인 화합물.
ISIS 486178로 이루어진 화합물.
ISIS 512497로 이루어진 화합물.
ISIS 598768로 이루어진 화합물.
ISIS 594300으로 이루어진 화합물.
ISIS 594292로 이루어진 화합물.
ISIS 569473으로 이루어진 화합물.
ISIS 598769로 이루어진 화합물.
ISIS 570808로 이루어진 화합물.
ISIS 598777로 이루어진 화합물.
서열 번호: 23에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 29에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 31에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 3개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 이환식 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 26에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 30에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 32에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 4개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 27에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 28에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 7개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 E-E-E-K-K 5'-윙 모티프를 갖는 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 K-K-E-E-E 3'-윙 모티프를 갖는 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 E는 2'-O-메톡시에틸 당을 나타내고, 각 K는 cEt 당을 나타내고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
서열 번호: 25에 개시된 핵염기 서열을 갖고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고,
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
a. 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
b. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
c. 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고,
d. 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고,
e. 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고,
f. 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고;
g. 각각의 시토신 잔기는 5-메틸 시토신인, 화합물.
청구항 1 내지 130 중 어느 한 항에 있어서, 공액체를 포함하는, 화합물.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 DM1의 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 DM1을 치료하는 방법.
청구항 133에 있어서, 상기 화합물은 DMPK mRNA 수준을 감소시키는, 방법.
청구항 133에 있어서, 상기 화합물은 DMPK 단백질 발현을 감소시키는, 방법.
청구항 133에 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK를 감소시키는, 방법.
청구항 133에 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK를 우선적으로 감소시키는, 방법.
청구항 133에 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK mRNA를 감소시키는, 방법.
청구항 133 있어서, 상기 화합물은 CUGexp DMPK mRNA를 우선적으로 감소시키는, 방법.
청구항 138 또는 139에 있어서, CUGexp의 우선적 감소는 근육 조직 내의 것인, 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 근긴장증의 감소를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 근긴장증을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 MBLN 의존성 스플라이스병증(spliceopathy)의 감소를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 MBLN 의존성 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
청구항 142에 있어서, Serca1, m-Titin, Clcn1, 및 Zasp 중 임의의 것의 스플라이싱이 정정되는, 방법.
청구항 133 내지 143 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 전신성 투여인, 방법.
청구항 133 내지 143 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 비경구 투여인, 방법.
청구항 144에 있어서, 상기 전신성 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 뇌실내 투여 및 척추강내 투여 중 임의의 것인, 방법.
청구항 133 내지 143 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 근육내 투여가 아닌, 방법.
청구항 133 내지 143 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동물은 인간인, 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 Serca1 스플라이스병증의 감소를 필요로 하는 동물에게 투여하여 Serca1 엑손 22 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 동물에서 Serca1 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 m-Titin 스플라이스병증의 감소를 필요로 하는 동물에게 투여하여 m- Titin 엑손 5 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 동물에서 m- Titin 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 Clcn1 스플라이스병증의 감소를 필요로 하는 동물에게 투여하여 Clcn1 엑손 7a 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 동물에서 Clcn1 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 Zasp 스플라이스병증의 감소를 필요로 하는 동물에게 투여하여 Zasp 엑손 11 포함을 야기하는 단계를 포함하는, 동물에서 Zasp 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 DMPK mRNA를 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 DMPK 단백질을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 CUGexp mRNA를 감소시키는 방법.
청구항 153 내지 155 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 동물 내의 것인, 방법.
청구항 156에 있어서, 상기 동물은 인간인, 방법.
a.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 대상체를 선택하는 단계; 및
b. 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물은, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법.
b. 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물은, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법.
a.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 CUGexp DMPK RNA를 갖는 대상체를 선택하는 단계; 및
b. 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 상기 대상체에게 전신성으로 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 상기 화학적으로-변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법.
b. 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 상기 대상체에게 전신성으로 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 상기 화학적으로-변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 상기 CUGexp DMPK RNA에 결합될 때, 상기 CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는, CUGexp DMPK RNA의 우선적 감소를 달성하는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물을 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖거나 핵 보유 CUGexp DMPK RNA를 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물은, 상기 돌연변이체 DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 스플라이스병증을 감소시키는, 상기 대상체에서 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
여기서 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 조성물은, 상기 돌연변이체 DMPK RNA에 결합될 때, 리보뉴클라아제를 활성화하여 스플라이스병증을 감소시키는, 상기 대상체에서 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물을 동물에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 상기 화합물은 동물에서 DMPK 발현을 감소시켜 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증을 감소시키는, 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
여기서 상기 화합물은 동물에서 DMPK 발현을 감소시켜 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증을 감소시키는, 동물에서 CUGexp DMPK RNA를 우선적으로 감소시키거나, 근긴장증을 감소시키거나, 또는 스플라이스병증을 감소시키는 방법.
유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 동정하는 단계, 및
치료 유효량의 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 상기 동물이 치료되는, 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하는 방법.
치료 유효량의 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하고,
여기서 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 상기 동물이 치료되는, 유형 1 근긴장성 이영양증을 갖는 동물을 치료하는 방법.
청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물을 동물에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 DMPK의 발현이 감소되는, DMPK 발현을 감소시키는 방법.
동물에서의 DM1 치료에 사용되는, 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물.
동물에서의 근긴장증 감소에 사용되는, 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물.
동물에서의 MBLN 의존성 스플라이스병증 감소에 사용되는, 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물.
유형 1 근긴장성 이영양증 또는 이의 증상을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 132의 약제학적 조성물의 용도.
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