CN105452464A - 用于调节肌强直性营养不良蛋白激酶(dmpk)表达的化合物和方法 - Google Patents

用于调节肌强直性营养不良蛋白激酶(dmpk)表达的化合物和方法 Download PDF

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Abstract

本文提供用于降低动物中的DMPK？mRNA和蛋白质的表达的方法、化合物和组合物。本文也提供用于在动物中优先降低CUGexp？DMPK？RNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法、化合物和组合物。这种方法、化合物和组合物可用于治疗、预防、延迟或改善1型肌强直性营养不良或其症状。

Description

用于调节肌强直性营养不良蛋白激酶(DMPK)表达的化合物和方法
序列表
本申请正连同呈电子格式的序列表一起申请。序列表是提供为2014年8月1日建立的大小为约276Kb的标题为BIOL0171WOSEQ_ST25.txt的档案。电子格式的序列表中的信息以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本文提供用于降低动物中的DMPKmRNA和蛋白质的表达的方法、化合物和组合物。此外，本文提供用于在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻拼接病变的包含DMPK抑制剂的方法、化合物和组合物。这种方法、化合物和组合物可用于例如治疗、预防或改善动物的1型肌强直性营养不良(DM1)。
背景
1型肌强直性营养不良(DM1)为成人肌肉营养不良的最常见形式，其中估计频率为7,500分之1(HarperPS.,MyotonicDystrophy.London:W.B.Saunders公司；2001)。DM1为一种由DMPK1中的非编码CTG重复序列的扩增引起的常染色体显性病症。DMPK1为一种编码胞质液丝氨酸/苏氨酸激酶的基因(BrookJD等人,Cell.,1992,68(4):799-808)。这种激酶的生理功能和受质尚未充分确定。扩增的CTG重复序列位于DMPK1的3’未转译区域(UTR)中。此突变导致RNA显性(RNAdominance)，即含有扩增的CUG重复序列(CUGexp)的RNA的表达会诱导细胞功能障碍的过程(OsborneRJ和ThorntonCA.,HumanMolecularGenetics.,2006,15(2):R162-R169)。
DMPK基因通常在3’未转译区域中具有5-37个CTG重复序列。在I型肌强直性营养不良中，此数目显著扩大并且例如在50至大于3,500的范围内(Harper,MyotonicDystrophy(Saunders,London,第3版,2001)；Annu.Rev.Neurosci.29:259,2006；EMBOJ.19:4439,2000；CurrOpinNeurol.20:572,2007)。
CUGexp束与包括作为剪接因子的盲肌样(MBNL)蛋白的RNA结合蛋白相互作用，并且导致突变转录物保留在核灶中。此RNA的毒性归因于RNA结合蛋白的螯合和信号传导路径的活化。研究已显示如果CUGexpRNA的毒性降低，则可逆转DM1的表型(WheelerTM等人,Science.,2009,325(5938):336-339；MuldersSA等人,ProcNatlAcadSciUSA.,2009,106(33):13915-13920)。
在DM1中，骨骼肌为受影响最严重的组织，但所述疾病还对心肌和平滑肌、眼晶状体以及脑具有重要影响。颅、四肢远端和横隔膜肌肉优先受影响。手灵巧性在早期受损害，这会导致数十年的重度失能。死亡时的中值年龄为55岁，通常死于呼吸衰竭(deDie-SmuldersCE等人,Brain.,1998,121(Pt8):1557-1563)。
反义技术正作为一种用于调节某些基因产物的表达的有效手段而出现并且因此可证明独特地可用于许多治疗、诊断和研究应用中以调节DMPK1。肌肉内注射靶向CAG重复序列的经充分修饰的寡核苷酸在小鼠中显示阻断CUGexp-MBNL1复合物的形成，分散CUGexp转录物的核灶，增强CUGexp转录物的核质转运和转译，释放MBNL蛋白至核质，使MBNL依赖性外显子的替代性剪接正常化，以及消除CUGexp表达性转基因小鼠的肌强直(WheelerTM等人,Science.,2009,325(5938):336-339；WO2008/036406)。
目前不存在可改变DM1的病程的治疗剂。因此，疾病负担为重大的。因此，本文的目标在于提供用于治疗DM1的化合物、组合物和方法。
概述
本文提供用于抑制DMPK的表达以及治疗、预防、延迟或改善DMPK相关疾病和/或其症状的方法、化合物和组合物。在某些实施例中，本文公开的化合物和组合物抑制突变DMPK或CUGexpDMPK。
某些实施例提供一种降低动物中的DMPK表达的方法，其包括向动物施用包含如本文进一步所述的靶向DMPK的经修饰的寡核苷酸的化合物。
某些实施例提供一种在动物中相对于野生型DMPK优先降低CUGexpDMPK、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含如本文进一步所述的靶向CUGexpDMPK的经修饰的寡核苷酸的化合物。在某些情况下，据信CUGexpDMPK转录物由于在核中的滞留时间较长而对经由核核糖核酸酶(诸如核糖核酸酶H)达成的反义敲低特别敏感，并且此敏感性被认为允许有效反义抑制诸如肌肉的相关组织中的CUGexpDMPK转录物，尽管存在组织摄取反义寡核苷酸的生物分布障壁。不经由核核糖核酸酶引发裂解的反义机制，诸如在例如WheelerTM等人,Science.,2009,325(5938):336-339和WO2008/036406中所述的CAG重复序列ASO不提供相同治疗优势。
某些实施例提供一种治疗患有1型肌强直性营养不良的动物的方法。在某些实施例中，方法包括向动物施用治疗有效量的包含如本文进一步所述的靶向DMPK的经修饰的寡核苷酸的化合物。在某些实施例中，方法包括鉴别患有1型肌强直性营养不良的动物。
某些实施例提供一种治疗、预防、延迟或改善与DM1的进展相关的症状和结果的方法，这些症状和结果包括肌肉僵硬、肌强直、失能性远程无力、面部和颚肌肉无力、吞咽困难、眼睑下垂(下垂症)、颈部肌肉无力、手臂和腿肌肉无力、持续性肌肉疼痛、嗜睡、肌肉损耗、咽物困难、呼吸功能不全、心跳不齐、心肌破坏、冷漠、胰岛素抗性和白内障。某些实施例提供一种治疗、预防、延迟或改善儿童的与DM1的进展相关的症状和结果的方法，这些症状和结果包括发育延迟、学习问题、语言和言语问题、以及人格发展问题。
某些实施例提供一种施用反义寡核苷酸以通过引导病原性转录物的裂解来抵抗RNA显性的方法。
在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_001081560.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:1并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有自核苷酸18540696至18555106截短的如GenBank登录号NT_011109.15中阐述的序列(作为SEQIDNO:2并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有自核苷酸16666001至16681000截短的如GenBank登录号NT_039413.7中阐述的序列(作为SEQIDNO:3并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_032418.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:4并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号AI007148.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:5并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号AI304033.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:6并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BC024150.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:7并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BC056615.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:8并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BC075715.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:9并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BU519245.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:10并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号CB247909.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:11并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号CX208906.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:12并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号CX732022.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:13并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号S60315.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:14并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号S60316.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:15并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_001081562.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:16并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_001100.3中阐述的序列(作为SEQIDNO:17并入本文中)。
本公开内容提供以下非限制性编号的实施例：
实施方案1.一种包含由10-30个连接的核苷组成且具有核苷碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，核苷碱基序列包含含有至少8个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域。
实施方案2.如实施方案1所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸中至少一个核苷包含选自以下的双环糖：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
实施方案3.如实施方案1至2中任一项所述的化合物，其中靶区域为DMPK核酸的外显子9。
实施方案4.如实施方案1至3中任一项所述的化合物，其中互补区域包含至少10个互补于DMPK转录物的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
实施方案5.如实施方案1至3中任一项所述的化合物，其中互补区域包含至少12个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
实施方案6.如实施方案1至3中任一项所述的化合物，其中互补区域包含至少14个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
实施方案7.如实施方案1至3中任一项所述的化合物，其中互补区域包含至少16个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
实施方案8.如实施方案1至7中任一项所述的化合物，其中DMPK核酸为DMPK前mRNA。
实施方案9.如实施方案1至7中任一项所述的化合物，其中DMPK核酸为DMPKmRNA。
实施方案10.如实施方案1至9中任一项所述的化合物，其中DMPK核酸具有选自以下的核苷碱基序列：SEQIDNO:1和SEQIDNO:2。
实施方案11.如实施方案1至10中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
实施方案12.如实施方案1至10所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
实施方案13.如实施方案1至10所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
实施方案14.如实施方案1至10所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
实施方案15.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基1343至核苷碱基1368。
实施方案16.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基1317至核苷碱基1366。
实施方案17.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基2748至核苷碱基2791。
实施方案18.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基730至核苷碱基748。
实施方案19.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基10195至核苷碱基10294。
实施方案20.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基10195至核苷碱基10294。
实施方案21.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基10201至核苷碱基10216。
实施方案22.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基10202至核苷碱基10218。
实施方案23.如实施方案1至22中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有在寡核苷酸的整个长度上至少80％互补于靶区域的核苷碱基序列。
实施方案24.如实施方案1至22中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有在寡核苷酸的整个长度上至少90％互补于靶区域的核苷碱基序列。
实施方案25.如实施方案1至22中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有在寡核苷酸的整个长度上至少100％互补于靶区域的核苷碱基序列。
实施方案26.如实施方案1至25中任一项所述的化合物，其具有包含在SEQIDNO:23-874的任一个中叙述的序列的至少8个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
实施方案27.如实施方案1至25中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少10个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
实施方案28.如实施方案1至25中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少12个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
实施方案29.如实施方案1至25中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少14个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
实施方案30.如实施方案1至25中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少16个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
实施方案31.如实施方案1至30中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:23中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案32.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:25中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案33.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:26中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案34.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:27中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案35.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:28中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案36.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:29中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案37.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:30中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案38.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:31中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案39.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:32中叙述的序列组成的核苷碱基序列。
实施方案40.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31或32中叙述的序列的核苷碱基序列。
实施方案41.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31或32中叙述的序列的核苷碱基序列。
实施方案42.如实施方案1至14中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:33-874中叙述的序列的核苷碱基序列。
实施方案43.如实施方案1至42中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列至少90％互补于SEQIDNO:1-19。
实施方案44.如实施方案1至34中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列100％互补于SEQIDNO:1-19。
实施方案45.如实施方案1至30中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
实施方案46.如实施方案1至30中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成。
实施方案47.如实施方案1至30中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由18个连接的核苷组成。
实施方案48.如实施方案1至30中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由19个连接的核苷组成。
实施方案49.如实施方案1至30中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
实施方案50.如实施方案1至49中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸为单股寡核苷酸。
实施方案51.如实施方案1至50中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的糖。
实施方案52.如实施方案1至51中任一项所述的化合物，其中至少两个核苷包含经修饰的糖。
实施方案53.如实施方案52所述的化合物，其中每个经修饰的糖具有相同修饰。
实施方案54.如实施方案52所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖具有不同修饰。
实施方案55.如实施方案51至54中任一项所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖为双环糖。
实施方案56.如实施方案55所述的化合物，其中双环糖选自以下：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
实施方案57.如实施方案56所述的化合物，其中双环糖包含cEt。
实施方案58.如实施方案56所述的化合物，其中双环糖包含LNA。
实施方案59.如实施方案56所述的化合物，其中双环糖包含α-L-LNA。
实施方案60.如实施方案56所述的化合物，其中双环糖包含ENA。
实施方案61.如实施方案56所述的化合物，其中双环糖包含2’-硫代LNA。
实施方案62.如实施方案1至61中任一项所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖包含2’-取代的核苷。
实施方案63.如实施方案62所述的化合物，其中2’-取代的核苷选自以下：2’-OCH3、2’-F和2’-O-甲氧基乙基。
实施方案64.如实施方案1至63中任一项所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
实施方案65.如实施方案1至64中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的核苷碱基。
实施方案66.如实施方案65所述的化合物，其中经修饰的核苷碱基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案67.如实施方案1至67中任一项所述的化合物，其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。
实施方案68.如实施方案1至67中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸包含：
a.由连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由连接的核苷组成的5’翼段；
c.由连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷包含经修饰的糖。
实施方案69.如实施方案68所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
实施方案70.如实施方案68所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成。
实施方案71.如实施方案68所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由18个连接的核苷组成。
实施方案72.如实施方案68所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由19个连接的核苷组成。
实施方案73.如实施方案68所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
实施方案74.如实施方案68至73中任一项所述的化合物，其中5’翼段由两个连接的核苷组成。
实施方案75.如实施方案68至73中任一项所述的化合物，其中5’翼段由三个连接的核苷组成。
实施方案76.如实施方案68至73中任一项所述的化合物，其中5’翼段由四个连接的核苷组成。
实施方案77.如实施方案68至73中任一项所述的化合物，其中5’翼段由五个连接的核苷组成。
实施方案78.如实施方案68至73中任一项所述的化合物，其中5’翼段由六个连接的核苷组成。
实施方案79.如实施方案68至78中任一项所述的化合物，其中3’翼段由两个连接的核苷组成。
实施方案80.如实施方案68至78中任一项所述的化合物，其中3’翼段由三个连接的核苷组成。
实施方案81.如实施方案68至78中任一项所述的化合物，其中3’翼段由四个连接的核苷组成。
实施方案82.如实施方案68至78中任一项所述的化合物，其中3’翼段由五个连接的核苷组成。
实施方案83.如实施方案68至78中任一项所述的化合物，其中3’翼段由六个连接的核苷组成。
实施方案84.如实施方案68至83中任一项所述的化合物，其中间隔段由六个连接的脱氧核苷组成。
实施方案85.如实施方案68至83中任一项所述的化合物，其中间隔段由七个连接的脱氧核苷组成。
实施方案86.如实施方案68至83中任一项所述的化合物，其中间隔段由八个连接的脱氧核苷组成。
实施方案87.如实施方案68至83中任一项所述的化合物，其中间隔段由九个连接的脱氧核苷组成。
实施方案88.如实施方案68至83中任一项所述的化合物，其中间隔段由十个连接的脱氧核苷组成。
实施方案89.如实施方案1至31、34、37至45或53至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个翼段的每个核苷包含双环糖。
实施方案90.如实施方案1至31、34、37至45或53至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有AABB5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有BBAA3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间。
实施方案91.如实施方案1至30、35、36、46或50至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有AAABB5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有BBAAA3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间。
实施方案92.如实施方案1至31、34、37至45或53至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
实施方案93.如实施方案1至30、35、36、46或50至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
实施方案94.如实施方案1至30、32、33或49至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，且其中每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖。
实施方案95.如实施方案1至31、34、37至45或53至88中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个翼段的每个核苷包含cEt糖。
实施方案96.如实施方案1至67中任一项所述的化合物，其中经修饰的寡核苷酸包含至少8个互补于SEQIDNO.:1的核苷碱基1343和核苷碱基1368内的靶区域的连续核苷碱基，并且其中经修饰的寡核苷酸包含：
a.由连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由连接的核苷组成的5’翼段；
c.由连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷包含经修饰的糖。
实施方案97.如实施方案96所述的化合物，其中5’翼段中的每个经修饰的糖具有相同修饰。
实施方案98.如实施方案96所述的化合物，其中5’翼段中的至少两个经修饰的糖具有不同修饰。
实施方案99.如实施方案96至98中任一项所述的化合物，其中3’翼段中的每个经修饰的糖具有相同修饰。
实施方案100.如实施方案96至98中任一项所述的化合物，其中3’翼段中的至少两个经修饰的糖具有不同修饰。
实施方案101.如实施方案96所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖为选自以下的双环糖：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
实施方案102.如实施方案90至91所述的化合物，其中每个B表示选自以下的双环糖：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
实施方案103.如实施方案102所述的化合物，其中双环糖包含BNA。
实施方案104.如实施方案102所述的化合物，其中双环糖包含cEt。
实施方案105.如实施方案102所述的化合物，其中双环糖包含LNA。
实施方案106.如实施方案102所述的化合物，其中双环糖包含α-L-LNA。
实施方案107.如实施方案102所述的化合物，其中双环糖包含ENA。
实施方案108.如实施方案102所述的化合物，其中双环糖包含2’-硫代LNA。
实施方案109.如实施方案90或91所述的化合物，其中每个A表示选自以下的2’-取代的核苷：2’-OCH3、2’-F和2’-O-甲氧基乙基。
实施方案110.如实施方案109所述的化合物，其中2’-取代的核苷包含2’-O-甲氧基乙基。
实施方案111.如实施方案1至111中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷间键为经修饰的核苷间键。
实施方案112.如实施方案1至111中任一项所述的化合物，其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键。
实施方案113.一种化合物，其由ISIS486178组成。
实施方案114.一种化合物，其由ISIS512497组成。
实施方案115.一种化合物，其由ISIS598768组成。
实施方案116.一种化合物，其由ISIS594300组成。
实施方案117.一种化合物，其由ISIS594292组成。
实施方案118.一种化合物，其由ISIS569473组成。
实施方案119.一种化合物，其由ISIS598769组成。
实施方案120.一种化合物，其由ISIS570808组成。
实施方案121.一种化合物，其由ISIS598777组成。
实施方案122.一种具有如SEQIDNO:23中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含双环糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案123.一种具有如SEQIDNO:29中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含双环糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案124.一种具有如SEQIDNO:31中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含双环糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案125.一种具有如SEQIDNO:26中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案126.一种具有如SEQIDNO:30中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案127.一种具有如SEQIDNO:32中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案128.一种具有如SEQIDNO:27中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案129.一种具有如SEQIDNO:28中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案130.一种具有如SEQIDNO:25中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
实施方案131.如实施方案1至130中任一项所述的化合物，其包含共轭物。
实施方案132.一种组合物，其包含如实施方案1至131中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案133.一种治疗动物中DM1的方法，其包括向有需要的动物施用如实施方案1至130中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物。
实施方案134.如实施方案133所述的方法，其中化合物降低DMPKmRNA含量。
实施方案135.如实施方案133所述的方法，其中化合物降低DMPK蛋白表达。
实施方案136.如实施方案133所述的方法，其中化合物降低CUGexpDMPK。
实施方案137.如实施方案133所述的方法，其中化合物优先降低CUGexpDMPK。
实施方案138.如实施方案133所述的方法，其中化合物降低CUGexpDMPKmRNA。
实施方案139.如实施方案133所述的方法，其中化合物优先降低CUGexpDMPKmRNA。
实施方案140.如实施方案138或139所述的方法，其中CUGexp的优先降低是在肌肉组织中。
实施方案141.一种减轻动物中肌强直的方法，其包括向有需要的动物施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物。
实施方案142.一种减轻动物中MBLN依赖性剪接病变的方法，其包括向有需要的动物施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物。
实施方案143.如实施方案138所述的方法，其中Serca1、m-Titin、Clcn1和Zasp中任一个的剪接得以矫正。
实施方案144.如实施方案133至143中任一项所述的方法，其中施用为全身性施用。
实施方案145.如实施方案133至143中任一项所述的方法，其中施用为非经肠施用。
实施方案146.如实施方案144所述的方法，其中全身性施用为皮下施用、静脉内施用、脑室内施用和鞘内施用中任一种。
实施方案147.如实施方案133至143中任一项所述的方法，其中施用不是肌肉内施用。
实施方案148.如实施方案133至143中任一项所述的方法，其中动物为人类。
实施方案149.一种减轻有需要的动物的Serca1的剪接病变的方法，其是通过施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物，并且从而导致包括Serca1外显子22来达成。
实施方案150.一种减轻有需要的动物中m-Titin的剪接病变的方法，其是通过施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物，并且从而导致包括m-Titin外显子5来达成。
实施方案151.一种减轻有需要的动物中Clcn1的剪接病变的方法，其是通过施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物，并且从而导致包括Clcn1外显子7a来达成。
实施方案152.一种减轻有需要的动物中Zasp的剪接病变的方法，其是通过施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物，并且从而导致包括Zasp外显子11来达成。
实施方案153.一种降低细胞中DMPKmRNA的方法，其包括使细胞与如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物接触。
实施方案154.一种降低细胞中DMPK蛋白的方法，其包括使细胞与如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物接触。
实施方案155.一种降低细胞中CUGexpmRNA的方法，其包括使细胞与如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物接触。
实施方案156.如实施方案149至151中任一项的方法，其中细胞是在动物中。
实施方案157.如实施方案156所述的方法，其中动物为人类。
实施方案158.一种达成CUGexpDMPKRNA的优先降低的方法，其包括：
a.选择患有1型肌强直性营养不良或具有CUGexpDMPKRNA的受试者；以及
b.向受试者施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物；
其中如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物在结合所述CUGexpDMPKRNA时活化核糖核酸酶，从而达成所述CUGexpDMPKRNA的优先降低。
实施方案159.一种达成CUGexpDMPKRNA的优先降低的方法，其包括：
a.选择患有1型肌强直性营养不良或具有CUGexpDMPKRNA的受试者；以及
b.向所述受试者全身性施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物；
其中所述化学修饰的反义寡核苷酸在结合所述CUGexpDMPKRNA时达成所述CUGexpDMPKRNA的优先降低。
实施方案160.一种减轻怀疑患有1型肌强直性营养不良或具有核保留的CUGexpDMPKRNA的受试者的剪接病变的方法，其包括：
向所述受试者施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物，
其中如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的组合物在结合所述突变DMPKRNA时活化核糖核酸酶，从而减轻剪接病变。
实施方案161.一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的药物组合物，其中化合物降低动物中DMPK表达，从而在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变。
实施方案162.一种用于治疗患有1型肌强直性营养不良的动物的方法，其包括
鉴别所述患有1型肌强直性营养不良的动物，
向所述动物施用治疗有效量的如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的药物组合物，
其中所述患有1型肌强直性营养不良的动物得以治疗。
实施方案163.一种降低DMPK表达的方法，其包括向动物施用如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的药物组合物，其中DMPK的表达得以降低。
实施方案164.如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的药物组合物，其是用于治疗动物的DM1。
实施方案165.如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的药物组合物，其是用于减轻动物的肌强直。
实施方案166.如实施方案1至131中任一项所述的化合物或如实施方案132所述的药物组合物，其是用于减轻动物的MBLN依赖性剪接病变。
详述
应了解上文一般性描述和下文详细描述仅具有示范性和说明性并且不限制如所主张的本发明。除非另外明确陈述，否则在本文中，单数的使用包括复数。在本文中，除非另外陈述，否则使用“或”意谓“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式(诸如“包括(includes)”和“包括(included)”)的使用不具有限制性。此外，除非另外明确陈述，否则诸如“要素”或“组分”的术语涵盖包含一个单元的要素和组分与包含一个以上次单元的要素和组分两者。
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定义
除非提供明确定义，否则关联本文所述的分析化学、合成有机化学以及医学和医药化学使用的命名法和本文所述的分析化学、合成有机化学以及医学和医药化学的程序和技术为本领域中熟知且通常使用的那些。标准技术可用于化学合成和化学分析。当允许时，贯穿本文公开内容中提及的所有专利、申请、公开申请和其他公开案、可经由数据库(诸如美国国家生物技术信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)(NCBI))获得的GENBANK登录号和相关序列信息以及其他数据关于本文论述的文献的部分以引用的方式并入本文中以及以全文引用的方式并入本文中。
除非另外指示，否则以下术语具有以下含义：
“2’-O-甲氧基乙基”(也为2’-MOE及2’-O(CH2)2-OCH3)是指对呋喃糖基环的2’位的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基修饰的糖为经修饰的糖。
“2’-O-甲氧基乙基核苷酸”意指包含2’-O-甲氧基乙基修饰的糖部分的核苷酸。
“5-甲基胞嘧啶”意指用连接于5位的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶为经修饰的核苷碱基。
“约”意指在某一值的±7％内。例如，如果陈述“化合物实现对DMPK的至少约70％抑制”，则暗示在63％和77％的范围内的DMPK含量受抑制。
“活性药物剂”意指药物组合物中的一种或多种在向动物施用时提供治疗益处的物质。例如，在某些实施方案中，靶向DMPK的反义寡核苷酸为活性药物剂。
“活性靶区域”或“靶区域”意指一种或多种活性反义化合物所靶向的区域。“活性反义化合物”意指降低目标核酸含量或蛋白质含量的反义化合物。
“伴随性施用”是指两种药剂以其两者的药理学作用在患者中同时显现的任何方式共同施用。伴随性施用不需要两种药剂于单一药物组合物中、以相同剂型或通过相同施用途径施用。两种药剂的作用本身无需同时显现。作用仅需重叠一段时间而无需共同延长。
“施用”意指向动物提供药剂，并且包括但不限于由医学专业人员施用和自行施用。
“药剂”意指在向动物施用时可提供治疗益处的活性物质。“第一药剂”意指本发明的治疗性化合物。例如，第一药剂可为靶向DMPK的反义寡核苷酸。“第二药剂”意指本发明的第二治疗性化合物(例如靶向DMPK的第二反义寡核苷酸)和/或非DMPK治疗性化合物。
“改善”是指减轻相关疾病、病症或病状的至少一种指标、征象或症状。指标的严重性可通过本领域的技术人员已知的主观或客观量度来确定。
“动物”是指人类或非人类动物，包括但不限于小鼠、大鼠、家兔、狗、猫、猪，和非人类灵长类动物，包括但不限于猴和黑猩猩。
“反义活性”意指可归于反义化合物与其目标核酸杂交的任何可检测或可测量活性。在某些实施方案中，反义活性为目标核酸或由这种目标核酸编码的蛋白质的量或表达减少。
“反义化合物”意指能够与目标核酸通过氢键键合进行杂交的寡聚化合物。反义化合物的实例包括单股和双股化合物，诸如反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、snoRNA、miRNA和卫星重复序列。
“反义抑制”意指在与目标核酸互补的反义化合物存在下目标核酸含量或目标蛋白质含量相较于在不存在反义化合物下的目标核酸含量或目标蛋白质含量有所减少。
“反义寡核苷酸”意指具有允许与目标核酸的相应区域或区段杂交的核苷碱基序列的单股寡核苷酸。
“双环糖”意指由两个非孪位碳环原子桥连修饰的呋喃糖基环。双环糖为经修饰的糖。
“双环核酸”或“BNA”是指其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括连接呋喃糖环上两个碳原子的桥，从而形成双环系统的核苷或核苷酸。
“帽结构”或“末端帽部分”意指已并入于反义化合物的任一末端处的化学修饰。
“化学相异区”是指反义化合物中以某种方式在化学上不同于同一反义化合物的另一区的区域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的区域在化学上与具有无2’-O-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区域不同。
“嵌合反义化合物”意指具有至少2个化学相异区的反义化合物。
“共同施用”意指向个体施用两种或两种以上药剂。两种或两种以上药剂可在单个药物组合物中，或可在单独的药物组合物中。两种或两种以上药剂中的每一种可通过相同或不同施用途径施用。共同施用涵盖同时或依序施用。
“互补性”意指第一核酸与第二核酸的核苷碱基之间配对的能力。
“连续核苷碱基”意指彼此紧邻的核苷碱基。
“CUGexpDMPK”意指含有扩增的CUG重复序列(CUGexp)的突变DMPKRNA。野生型DMPK基因在3’未转译区域中具有5-37个CTG重复序列。在“CUGexpDMPK”中(诸如在I型肌强直性营养不良患者中)，此数目显著扩大且例如在50至大于3,500的范围内(Harper,MyotonicDystrophy(Saunders,London,第3版,2001)；Annu.Rev.Neurosci.29:259,2006；EMBOJ.19:4439,2000；CurrOpinNeurol.20:572,2007)。
“稀释剂”意指组合物中缺乏药理学活性，但为医药学上必需或所需的成分。例如，注射组合物中的稀释剂可为液体，例如生理盐水溶液。
“DMPK”意指肌强直性营养不良蛋白激酶的任何核酸或蛋白质。DMPK可为包括CUGexpDMPK核酸的突变DMPK。
“DMPK表达量”意指从编码DMPK的基因转录的mRNA的含量或从mRNA转译的蛋白质的含量。DMPK表达量可通过本领域已知的方法，诸如北方或西方墨点术来测定。
“DMPK核酸”意指编码DMPK的任何核酸。例如，在某些实施方案中，DMPK核酸包括编码DMPK的DNA序列、从编码DMPK的DNA(包括包含内含子和外显子的基因组DNA)转录的RNA序列、和编码DMPK的mRNA或前mRNA序列。“DMPKmRNA”意指编码DMPK蛋白的mRNA。
“剂量”意指单次施用中或指定时段内提供的药物剂的指定量。在某些实施方案中，可以一次、两次或两次以上快速浓注(bolus)、锭剂或注射施用剂量。例如，在某些实施方案中，在需要皮下施用时，所需剂量需要不易由单次注射提供的体积，因此，可使用两次或两次以上注射来达成所需剂量。在某些实施方案中，药物剂通过在延长的时段内或连续输注来施用。剂量可规定为每小时、每天、每周或每个月的药物剂量。
“有效量”或“治疗有效量”意指活性药物剂足以在需要药剂的个体中实现所要生理结果的量。在个体中，有效量可视以下因素而变化：所治疗个体的健康和身体状况、所治疗个体的分类学群组、组合物的制剂、个体的医学病状的评估和其他相关因素。
“完全互补”或“100％互补”意指第一核酸的核苷碱基序列的每个核苷碱基在第二核酸的第二核苷碱基序列中均具有互补核苷碱基。在某些实施方案中，第一核酸为反义化合物并且目标核酸为第二核酸。
“间隔体(gapmer)”意指具有多个有利于核糖核酸酶H裂解的核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域之间的嵌合反义化合物，其中构成内部区域的核苷在化学上与构成外部区域的核苷不同。内部区域可称为“间隔段”并且外部区域可称为“翼段”。
“间隔加宽”意指嵌合反义化合物具有位于具有1至6个核苷的5'与3'翼段之间且紧密邻近于5'和3'翼段的具有12个或超过12个连续2'-脱氧核糖核苷的间隔段。
“杂交”意指互补核酸分子粘接。在某些实施方案中，互补核酸分子包括反义化合物和目标核酸。
“鉴别患有1型肌强直性营养不良的动物”意指鉴别已诊断有1型肌强直性营养不良、病症或病状的动物或鉴别倾向于发展1型肌强直性营养不良、病症或病状的动物。例如，具有家族史的个体可易患1型肌强直性营养不良、病症或病状。此鉴别可通过任何方法，包括评估个体的医学史和标准临床测试或评估来达成。
“紧密邻近”意指紧邻组件之间不存在介入组件。
“个体”意指选用于治疗或疗法的人类或非人类动物。
“核苷间键”是指核苷之间的化学键。
“连接的核苷”意指由核苷间键键合或连接在一起的相邻核苷。
“错配”或“非互补核苷碱基”是指第一核酸的核苷碱基不能与第二或目标核酸的+相应核苷碱基配对的状况。
“经修饰的核苷间键”是指与天然存在的核苷间键(即磷酸二酯核苷间键)相比存在取代或任何变化。
“经修饰的核苷碱基”是指任何除腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸苷或尿嘧啶以外的核苷碱基。“未修饰核苷碱基”意指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
“经修饰的核苷酸”意指独立地具有经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键或经修饰的核苷碱基的核苷酸。“经修饰的核苷”意指独立地具有经修饰的糖部分或经修饰的核苷碱基的核苷。
“经修饰的寡核苷酸”意指包含至少一个经修饰的核苷和/或经修饰的核苷间键的寡核苷酸。
“经修饰的糖”是指自天然糖部分的取代或变化。经修饰的糖包括取代的糖部分和替代糖部分。
“基元”意指反义化合物中化学相异区的样式。
“肌强直”意指在自愿收缩或电刺激之后，肌肉的松弛异常缓慢。
“核核糖核酸酶”意指见于核中的核糖核酸酶。核核糖核酸酶包括但不限于核糖核酸酶H(包括核糖核酸酶H1和核糖核酸酶H2)、双股核糖核酸酶drosha和其他双股核糖核酸酶。
“天然存在的核苷间键”意指3’至5’磷酸二酯键。
“天然糖部分”意指见于DNA(2’-H)或RNA(2’-OH)中的糖。
“核酸”是指由单体核苷酸构成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单股核酸、双股核酸、小干扰核糖核酸(siRNA)和微小RNA(miRNA)。核酸也可包含这些要素在单一分子中的组合。
“核苷碱基”意指能够与另一核酸的碱基配对的杂环部分。
“核苷碱基序列”意指连续核苷碱基的次序，而与任何糖、键或核苷碱基修饰无关。
“核苷”意指连接到糖的核苷碱基。在某些实施方案中，核苷连接到磷酸基团。
“核苷模拟物”包括用于在寡聚化合物的一个或多个位置上置换糖或糖和碱基且未必替换键的那些结构，诸如具有吗啉代、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、双环或三环糖模拟物，例如非呋喃糖糖单元的核苷仿真物。
“核苷酸”意指具有共价连接至核苷的糖部分的磷酸酯基的核苷。
“核苷酸模拟物”包括用于置换在寡聚化合物的一个或多个位置处的核苷和键的那些结构，诸如肽核酸或吗啉代(由-N(H)-C(＝O)-O-或其他非磷酸二酯键连接的吗啉代)。
“寡聚化合物”或“寡聚物”意指具有连接的单体次单元且能够与核酸分子的至少一个区域杂交的聚合物。
“寡核苷酸”意指连接的核苷的聚合物，其中每个核苷和每个核苷间键可独立于彼此经修饰的或未修饰。
“非经肠施用”意指经由注射或输注施用。非经肠施用包括皮下施用、静脉内施用、肌肉内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如鞘内或脑室内施用。施用可为连续的或长期的或短暂的或间断的。
“肽”意指由至少两个氨基酸由酰胺键连接而形成的分子。肽是指多肽和蛋白质。
“药物组合物”意指适于向个体施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含一种或多种活性剂和无菌水溶液。
“药学上可接受的盐”意指反义化合物的生理学上和药学上可接受的盐，即保持母体寡核苷酸的所需生物活性且不赋予其不合需要的毒理学作用的盐。
“硫代磷酸酯键”意指核苷之间的键，其中磷酸二酯键是通过一个非桥连的氧原子经硫原子置换而修饰。硫代磷酸酯键为经修饰的核苷间键。
“部分”意指核酸中确定数目的连续(即连接)核苷碱基。在某些实施方案中，部分为目标核酸中确定数目的连续核苷碱基。在某些实施方案中，部分为反义化合物中确定数目的连续核苷碱基。
“优先降低CUGexpDMPKRNA”是指相对于来自正常DMPK对偶基因的RNA转录物，优先降低来自CUGexpDMPK对偶基因的RNA转录物。
“预防”是指延迟或预先阻止疾病、病症或病状发作或产生达数分钟至无限期的时段。预防也意指降低发展疾病、病症或病状的风险。
“前药”意指以非活性形式制备且在身体或其细胞内在内源酶或其他化学物质或条件作用下转化成活性形式的治疗剂。
“副作用”意指除所需作用以外的可归因于治疗的生理反应。在某些实施方案中，副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝中毒、肾中毒、中枢神经系统异常、肌肉疾病和不适。例如，血清中的转氨酶含量增加可指示肝毒性或肝功能异常。例如，胆红素增加可指示肝毒性或肝功能异常。
“单股寡核苷酸”意指未与互补股杂交的寡核苷酸。
“可特异性杂交”是指反义化合物在反义寡核苷酸与目标核酸之间具有足够的互补度以在需要特异性结合的条件下，即在活体内分析和治疗性处理的状况下于生理条件下诱导所需作用，而对非目标核酸展现极小的影响或无影响。
“剪接病变”意指一种或多种RNA的替代性剪接导致在特定组织中表达改变剪接产物的变化。
“皮下施用”意指仅在皮肤以下施用。
“取代的糖部分”意指除RNA或DNA的天然糖以外的呋喃糖基。
“糖”或“糖部分”意指天然糖部分或经修饰的糖。
“糖替代物”与略微更广泛的术语“核苷模拟物”相一致，但意欲指示仅置换糖单位(呋喃糖环)。糖替代物能够置换核苷的天然存在的糖部分，以使所得核苷次单元能够连接在一起和/或连接到其他核苷以形成能够与互补寡聚化合物杂交的寡聚化合物。这种结构包括包含不同于呋喃糖基的原子数的环(例如4、6或7元环)；用非氧原子(例如碳、硫或氮)置换呋喃糖基的氧；或原子数的变化与氧的置换两者。这种结构也可包含对应于对于取代的糖部分所述的那些取代的取代(例如任选地包含另外的取代基的6元碳环双环糖替代物)。糖替代物也包括更复杂的糖置换(例如肽核酸的非环系统)。糖替代物不加限制地包括吗啉代、环己烯基和环已六醇。
“靶向(Targeting)”或“靶向(targeted)”意指设计和选择将与目标核酸特异性杂交且诱导所需作用的反义化合物的方法。
“目标核酸”、“目标RNA”和“目标RNA转录物”都指能够由反义化合物靶向的核酸。在某些实施方案中，目标核酸包含DMPK核酸的区域。
“目标段”意指目标核酸中由反义化合物所靶向的核苷酸序列。“5'目标位点”是指目标段的5'最末端核苷酸。“3'目标位点”是指目标段的3'最末端核苷酸。
“治疗有效量”意指药剂向个体提供治疗益处的量。
“治疗”是指施用组合物以实现疾病、病症或病状的改善或改进。
“1型肌强直性营养不良”或“DM1”意指由DMPK中的非编码CTG重复序列的扩增引起的常染色体显性病症。此突变导致RNA显性，即含有扩增的CUG重复序列(CUGexp)的RNA的表达诱导细胞功能障碍的过程。CUGexp束与RNA结合蛋白相互作用并且导致突变转录物保留在核灶中。此RNA的毒性归因于RNA结合蛋白的螯合和信号传导路径的活化。
“未修饰核苷酸”意指由天然存在的核苷碱基、糖部分和核苷间键构成的核苷酸。在某些实施方案中，未修饰核苷酸为RNA核苷酸(即β-D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即β-D-脱氧核糖核苷)。
某些实施方案
某些实施方案提供用于抑制DMPK表达的方法、化合物和组合物。
某些实施方案提供一种降低动物中的DMPK表达的方法，其包括向动物施用包含靶向DMPK的经修饰的寡核苷酸的化合物。
某些实施方案提供一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含靶向DMPK的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中经修饰的寡核苷酸在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变。
某些实施例提供一种施用反义寡核苷酸以通过引导病原性转录物的裂解来抵抗RNA显性的方法。
某些实施方案提供一种减轻Serca1的剪接病变的方法。在某些实施方案中，本文提供的方法导致包括外显子22。在某些实施方案中，矫正性剪接发生在胫骨前肌、腓肠肌和四头肌中。
某些实施方案提供一种减轻m-Titin的剪接病变的方法。在某些实施方案中，本文提供的方法导致包括外显子5。在某些实施方案中，矫正性剪接发生在胫骨前肌、腓肠肌和四头肌中。
某些实施方案提供一种减轻Clcn1的剪接病变的方法。在某些实施方案中，本文提供的方法导致包括外显子7a。在某些实施方案中，矫正性剪接发生在胫骨前肌、腓肠肌和四头肌中。
某些实施方案提供一种减轻Zasp的剪接病变的方法。在某些实施方案中，本文提供的方法导致包括外显子11。在某些实施方案中，矫正性剪接发生在胫骨前肌、腓肠肌和四头肌中。
某些实施方案提供一种用于治疗患有1型肌强直性营养不良的动物的方法，其包括：a)鉴别患有1型肌强直性营养不良的所述动物，和b)向所述动物施用治疗有效量的包含靶向DMPK的经修饰的寡核苷酸的化合物。在某些实施方案中，向动物施用的治疗有效量的化合物在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变。
某些实施方案提供一种达成优先降低CUGexpDMPKRNA的方法，其包括向怀疑患有1型肌强直性营养不良或具有CUGexpDMPKRNA的受试者施用互补于所述CUGexpDMPKRNA的非重复区域的经修饰的反义寡核苷酸。经修饰的反义寡核苷酸在结合所述CUGexpDMPKRNA时达成优先降低CUGexpDMPKRNA。
某些实施方案提供一种达成优先降低CUGexpDMPKRNA的方法，其包括选择患有1型肌强直性营养不良或具有CUGexpDMPKRNA的受试者以及向所述受试者施用互补于所述CUGexpDMPKRNA的非重复区域的经修饰的反义寡核苷酸。经修饰的反义寡核苷酸在结合CUGexpDMPKRNA时活化核糖核酸酶或核核糖核酸酶，从而达成优先降低核中的CUGexpDMPKRNA。
某些实施方案提供一种达成优先降低CUGexpDMPKRNA的方法，其包括选择患有1型肌强直性营养不良或具有突变或CUGexpDMPKRNA的受试者以及向所述受试者全身性施用互补于所述CUGexpDMPKRNA的非重复区域的经修饰的反义寡核苷酸。经修饰的反义寡核苷酸在结合突变或CUGexpDMPKRNA时达成优先降低突变或CUGexpDMPKRNA。
某些实施方案提供一种减轻有需要的受试者的肌强直的方法。方法包括向受试者施用互补于DMPKRNA的非重复区域的经修饰的反义寡核苷酸，其中经修饰的反义寡核苷酸在结合DMPKRNA时活化核糖核酸酶或核核糖核酸酶，从而减轻肌强直。在某些实施方案中，受试者患有或怀疑患有1型肌强直性营养不良或具有突变DMPKRNA或CUGexpDMPKRNA。在某些实施方案中，DMPKRNA被核保留。
某些实施方案提供一种减轻有需要的受试者的剪接病变的方法。方法包括向受试者施用互补于DMPKRNA的非重复区域的经修饰的反义寡核苷酸，其中经修饰的反义寡核苷酸在结合DMPKRNA时活化核糖核酸酶或核核糖核酸酶，从而减轻剪接病变。在某些实施方案中，受试者患有或怀疑患有1型肌强直性营养不良或具有核保留的CUGexpDMPKRNA。在某些实施方案中，DMPKRNA被核保留。在某些实施方案中，剪接病变为MBNL依赖性剪接病变。
在某些实施方案中，方法的经修饰的反义寡核苷酸为嵌合物。在某些实施方案中，方法的经修饰的反义寡核苷酸为间隔体。
在本文提供的方法的某些实施方案中，施用为皮下施用。在某些实施方案中，施用为静脉内施用。
在某些实施方案中，方法的经修饰的反义寡核苷酸靶向DMPKRNA的非重复区域内的非编码序列。在某些实施方案中，寡核苷酸靶向突变DMPKRNA的编码区域、内含子、5’UTR或3’UTR。
在本文提供的方法的某些实施方案中，核核糖核酸酶为核糖核酸酶H1。
在方法的某些实施方案中，肌肉组织中的DMPKRNA得以降低。在某些实施方案中，突变DMPKRNACUGexpDMPKRNA得以优先降低。
在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_001081560.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:1并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有自核苷酸18540696至18555106截短的如GenBank登录号NT_011109.15中阐述的序列(作为SEQIDNO:2并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有自核苷酸16666001至16681000截短的如GenBank登录号NT_039413.7中阐述的序列(作为SEQIDNO:3并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_032418.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:4并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号AI007148.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:5并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号AI304033.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:6并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BC024150.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:7并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BC056615.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:8并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BC075715.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:9并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号BU519245.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:10并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号CB247909.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:11并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号CX208906.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:12并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号CX732022.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:13并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号S60315.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:14并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号S60316.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:15并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_001081562.1中阐述的序列(作为SEQIDNO:16并入本文中)。在某些实施例中，DMPK具有如GenBank登录号NM_001100.3中阐述的序列(作为SEQIDNO:17并入本文中)。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基的核苷碱基序列。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少9、至少10或至少11个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少12个连续核苷碱基的核苷碱基序列。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少13或至少14个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少15个连续核苷碱基的核苷碱基序列。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少16个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:24、25、27或28的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少17个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:24或25的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少18个连续核苷碱基的核苷碱基序列。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:24或25的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少19个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
在某些实施方案中，使本文提供的经修饰的寡核苷酸靶向SEQIDNO:1的任一以下区域：1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717以及2683-2703。在某些实施方案中，使本文提供的经修饰的寡核苷酸靶向SEQIDNO:1的任一以下区域：2773-2788、1343-1358和1344-1359。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少8个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少8个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717或2683-2703。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少8个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基2773-2788、1343-1358或1344-1359。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717或2683-2703。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基2773-2788、1343-1358或1344-1359。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717或2683-2703。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基2773-2788、1343-1358或1344-1359。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717或2683-2703。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基2773-2788、1343-1358或1344-1359。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717或2683-2703。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:1的核苷碱基2773-2788、1343-1358或1344-1359。
在某些实施方案中，使本文提供的经修饰的寡核苷酸靶向SEQIDNO:2的任一以下区域：10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806和6596-6615。在某些实施方案中，使本文提供的经修饰的寡核苷酸靶向SEQIDNO:2的任一以下区域：13836-13831、8603-8618和8604-8619。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少8个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少8个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806或6596-6615。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少8个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基13836-13831、8603-8618或8604-8619。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806或6596-6615。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基13836-13831、8603-8618或8604-8619。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806或6596-6615。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基13836-13831、8603-8618或8604-8619。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806或6596-6615。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基13836-13831、8603-8618或8604-8619。
在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806或6596-6615。在某些实施方案中，本文提供的经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列，其中使靶区域靶向SEQIDNO:2的核苷碱基13836-13831、8603-8618或8604-8619。
在某些实施方案中，动物为人类
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物经指定为第一药剂并且本发明的方法进一步包括施用第二药剂。在某些实施方案中，第一药剂与第二药剂共同施用。在某些实施方案中，第一药剂与第二药剂依序或伴随性共同施用。
在某些实施方案中，施用包含非经肠施用。
在某些实施方案中，化合物为单股经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列至少95％互补于SEQIDNO:1-19中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列100％互补于SEQIDNO:1-19中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。在某些实施方案中，化合物为单股经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列至少95％互补于SEQIDNO:1中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列100％互补于SEQIDNO:1中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列至少90％互补于SEQIDNO:1中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列85％互补于SEQIDNO:1中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列至少90％互补于SEQIDNO:2中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列85％互补于SEQIDNO:2中任一个，如在所述经修饰的寡核苷酸的全部上所测量。
在某些实施方案中，所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷间键为经修饰的核苷间键。在某些实施方案中，每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键。
在某些实施方案中，所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含经修饰的糖。在某些实施方案中，至少一个经修饰的糖为双环糖。在某些实施方案中，至少一个经修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基或4’-(CH2)n-O-2’桥，其中n为1或2。
在某些实施方案中，所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含经修饰的核苷碱基。在某些实施方案中，经修饰的核苷碱基为5-甲基胞嘧啶。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含：a)由连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由连接的核苷组成的5’翼段；和c)由连接的核苷组成的3’翼段。间隔段位于5’翼段与3’翼段之间并且每个翼段的每个核苷包含经修饰的糖。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含：a)由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由五个连接的核苷组成的5’翼段；和c)由五个连接的核苷组成的3’翼段。间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，所述经修饰的寡核苷酸的每个核苷间键为硫代磷酸酯键，并且所述经修饰的寡核苷酸中的每个胞嘧啶为5’-甲基胞嘧啶。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由19个连接的核苷组成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由18个连接的核苷组成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
某些实施方案提供一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段、由五个连接的核苷组成的5’翼段和由五个连接的核苷组成的3’翼段。间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，所述经修饰的寡核苷酸的每个核苷间键为硫代磷酸酯键，所述经修饰的寡核苷酸中的每个胞嘧啶为5’-甲基胞嘧啶。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含：a)由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；c)由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含：a)由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；c)由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含：a)由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由五个连接的核苷组成的5’翼段；c)由五个连接的核苷组成的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，且其中每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含：a)由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由三个连接的核苷组成的5’翼段；c)由三个连接的核苷组成的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个翼段的每个核苷包含cEt糖。
某些实施方案提供一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有：a)由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；c)由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
某些实施方案提供一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有：a)由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；c)由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
某些实施方案提供一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有：a)由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由五个连接的核苷组成的5’翼段；c)由五个连接的核苷组成的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，且其中每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖。
某些实施方案提供一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向动物施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有：a)由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；b)由三个连接的核苷组成的5’翼段；c)由三个连接的核苷组成的3’翼段；和d)其中间隔段位于5’翼段与3’翼段之间，并且其中每个翼段的每个核苷包含cEt糖。
某些实施方案提供如本文所述的任何化合物制造用于本文所述的任何治疗方法中的药剂的用途。例如，某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于治疗、改善或预防1型肌强直性营养不良的药剂的用途。某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于抑制DMPK的表达和治疗、预防、延迟或改善DMPK相关疾病和/或其症状的药剂的用途。某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于降低动物中的DMPK表达的药剂的用途。某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于在动物中优先降低CUGexpDMPK、减轻肌强直或减轻剪接病变的药剂的用途。某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于治疗患有1型肌强直性营养不良的动物的药剂的用途。某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于治疗、预防、延迟或改善与DM1的进展相关的症状和结果的药剂的用途，所述症状和结果包括肌肉僵硬、肌强直、失能性远程无力、面部和颚肌肉无力、吞咽困难、眼睑下垂(下垂症)、颈部肌肉无力、手臂和腿肌肉无力、持续性肌肉疼痛、嗜睡、肌肉损耗、咽物困难、呼吸功能不全、心跳不齐、心肌破坏、冷漠、胰岛素抗性和白内障。某些实施方案提供如本文所述的化合物制造用于通过引导病原性转录物的裂解来抵抗RNA显性的药剂的用途。
某些实施方案提供一种用于治疗、预防或改善如本文所述的1型肌强直性营养不良的套组，其中套组包含：a)如本文所述的化合物；和任选地b)如本文所述的另一药剂或疗法。套组可进一步包括用于使用套组治疗、预防或改善1型肌强直性营养不良的说明书或标签。
某些实施方案提供用于本文所述的任何治疗方法中的如本文所述的任何化合物或组合物。例如，某些实施方案提供一种用于抑制DMPK的表达和治疗、预防、延迟或改善DMPK相关疾病和/或其症状的如本文所述的化合物或组合物。某些实施方案提供一种用于降低动物中的DMPK表达的如本文所述的化合物或组合物。某些实施方案提供一种用于在动物中优先降低CUGexpDMPK、减轻肌强直或减轻剪接病变的如本文所述的化合物或组合物。某些实施方案提供一种用于治疗患有1型肌强直性营养不良的动物的如本文所述的化合物或组合物。某些实施方案提供一种用于治疗、预防、延迟或改善与DM1的进展相关的症状和结果的如本文所述的化合物或组合物，所述症状和结果包括肌肉僵硬、肌强直、失能性远程无力、面部和颚肌肉无力、吞咽困难、眼睑下垂(下垂症)、颈部肌肉无力、手臂和腿肌肉无力、持续性肌肉疼痛、嗜睡、肌肉损耗、咽物困难、呼吸功能不全、心跳不齐、心肌破坏、冷漠、胰岛素抗性和白内障。某些实施方案提供一种用于通过引导病原性转录物的裂解来抵抗RNA显性的如本文所述的化合物或组合物。某些实施方案提供包含由12至30个连接的核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有包含核苷碱基序列SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874中任一个的至少12个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
也提供可用于本文所述的方法中的其他化合物。
例如，某些实施方案提供包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20个连接的核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有包含核苷碱基序列SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
某些实施方案提供包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20个连接的核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有包含核苷碱基序列SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
某些实施方案提供包含由10至80、12至50、12至30、15至30或15至17个连接的核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有包含至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个或更多个连续核苷碱基的一部分的核苷碱基序列，所述部分互补于SEQIDNO:1的核苷碱基1343-1368、1317-1366、2748-2791、2155-2208、2748-2791、730-748、528-547、531-567、636-697、1311-1331、1314-1339、1446-1475、1635-1670、1610-1638、1457-1486、2773-1788、931-948、934-949、937-952、942-957、937-957、943-958、937-953、1346-1363、1346-1361、1347-1363、2162-2179、2492-2508、2696-2717或2683-2703的相等长度部分。
某些实施方案提供包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20个连接的核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有包含至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个或更多个连续核苷碱基的一部分的核苷碱基序列，所述部分互补于SEQIDNO:2的核苷碱基10195-10294、13553-13572、13748-13767、13455-13475、13628-13657、13735-13760、13746-13905、13836-13851、13553-13568、13563-13578、13624-13639、13686-13701、13760-13775、13763-13779、13765-13780、2580-2595、6446-6461、11099-11115、11082-11099、1974-1993、4435-4456、6035-6052、6360-6385、6445-6468、6807-6824、6789-6806或6596-6615的相等长度部分。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸为单股寡核苷酸。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷碱基序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％互补于SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874中任一个。
在某些实施方案中，至少一个核苷间键为经修饰的核苷间键。
在某些实施方案中，每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键。
在某些实施方案中，至少一个核苷包含经修饰的糖。
在某些实施方案中，至少一个经修饰的糖为双环糖。
在某些实施方案中，至少一个经修饰的糖为cEt。
在某些实施方案中，至少一个经修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
在某些实施方案中，至少一个核苷包含经修饰的核苷碱基。
在某些实施方案中，经修饰的核苷碱基为5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，每个胞嘧啶残基包含5-甲基胞嘧啶。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成。
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
反义化合物
寡聚化合物包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物相对于目标核酸可为“反义”，意指能够通过氢键合与目标核酸杂交。
在某些实施方案中，反义化合物具有在按5'至3'方向书写时包含其所靶向的目标核酸的目标段的反向互补序列的核苷碱基序列。在某些这种实施方案中，反义寡核苷酸具有在按5'至3'方向书写时包含其所靶向的目标核酸的目标段的反向互补序列的核苷碱基序列。
在某些实施方案中，如本文所述的靶向DMPK的反义化合物的长度为10至30个核苷酸。换句话说，在一些实施方案中，反义化合物为10至30个连接的核苷碱基。在其他实施方案中，反义化合物包含由8至80、10至80、12至30、12至50、15至30、15至18、15至17、16至16、18至24、19至22或20个连接的核苷碱基组成的经修饰的寡核苷酸。在某些这种实施方案中，反义化合物包含由长度为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80或由任何两个以上值限定的范围的连接的核苷碱基组成的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，任何这些长度的反义化合物都含有本文所述的任何示范性反义化合物的核苷碱基序列的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个连续核苷碱基(例如SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基)。
在某些实施方案中，反义化合物包含缩短或截短的经修饰的寡核苷酸。缩短或截短的经修饰的寡核苷酸可从5’末端(5’截短)或者从3’末端(3’截短)缺失单一核苷。缩短或截短的寡核苷酸可从5’末端缺失两个核苷，或者可从3’末端缺失两个次单元。或者，缺失的核苷可分散在整个经修饰的寡核苷酸中，例如在从5’末端缺失一个核苷和从3’末端缺失一个核苷的反义化合物中。
当单一额外核苷存在于延长的寡核苷酸中时，额外核苷可位于寡核苷酸的5’末端或3’末端上。当存在两个或两个以上额外核苷时，所添加的核苷可彼此邻近，例如在寡核苷酸的5’末端上添加有两个核苷(5'添加)或3’末端上添加有两个核苷(3'添加)的反义化合物中。或者，所添加的核苷可分散在整个反义化合物中，例如在5’末端上添加有一个核苷且3’末端上添加有一个核苷的寡核苷酸中。
有可能增加或减少反义化合物(诸如反义寡核苷酸)的长度和/或引入错配碱基而不消除活性。例如，在Woolf等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:7305-7309,1992)中，测试长度为13至25个核苷碱基的一系列反义寡核苷酸在卵母细胞注射模型中诱导目标RNA裂解的能力。长度为25个核苷碱基且在接近反义寡核苷酸的末端处具有8或11个错配碱基的反义寡核苷酸能够导引目标mRNA特异性裂解，但程度低于不含错配的反义寡核苷酸。同样，标靶特异性裂解可使用具有13个核苷碱基的反义寡核苷酸(包括具有1或3个错配的那些)达成。
Gautschi等人(J.Natl.CancerInst.93:463-471,2001年3月)表明与bcl-2mRNA具有100％互补性且与bcl-xLmRNA具有3个错配的寡核苷酸在活体外和活体内减少bcl-2和bcl-xL两者表达的能力。此外，此寡核苷酸展现有效的活体内抗肿瘤活性。
Maher和Dolnick(Nuc.Acid.Res.16:3341-3358,1988)分别测试一系列具有14个核苷碱基的串联反义寡核苷酸以及包含串联反义寡核苷酸中的两个或三个的序列的具有28个和42个核苷碱基的反义寡核苷酸在家兔网状红血球分析中阻止人类DHFR转译的能力。3个具有14个核苷碱基的反义寡核苷酸中每一个单独能够抑制转译，但程度相较于具有28个或42个核苷碱基的反义寡核苷酸而言较适中。
目标核酸、靶区域和核苷酸序列
编码DMPK的核苷酸序列不加限制地包括如以下中阐述的以下序列：GenBank登录号NM_001081560.1(作为SEQIDNO:1并入本文中)、从核苷酸18540696至18555106截短的GenBank登录号NT_011109.15(作为SEQIDNO:2并入本文中)、从核苷酸16666001至16681000截短的GenBank登录号NT_039413.7(作为SEQIDNO:3并入本文中)、GenBank登录号NM_032418.1(作为SEQIDNO:4并入本文中)、GenBank登录号AI007148.1(作为SEQIDNO:5并入本文中)、GenBank登录号AI304033.1(作为SEQIDNO:6并入本文中)、GenBank登录号BC024150.1(作为SEQIDNO:7并入本文中)、GenBank登录号BC056615.1(作为SEQIDNO:8并入本文中)、GenBank登录号BC075715.1(作为SEQIDNO:9并入本文中)、GenBank登录号BU519245.1(作为SEQIDNO:10并入本文中)、GenBank登录号CB247909.1(作为SEQIDNO:11并入本文中)、GenBank登录号CX208906.1(作为SEQIDNO:12并入本文中)、GenBank登录号CX732022.1(作为SEQIDNO:13并入本文中)、GenBank登录号S60315.1(作为SEQIDNO:14并入本文中)、GenBank登录号S60316.1(作为SEQIDNO:15并入本文中)、GenBank登录号NM_001081562.1(作为SEQIDNO:16并入本文中)、和GenBank登录号NM_001100.3(作为SEQIDNO:17并入本文中)。应了解，本文含有的实例中的每个SEQIDNO中阐述的序列与糖部分、核苷间键或核苷碱基的任何修饰无关。因而，由SEQIDNO定义的反义化合物可独立地包含糖部分、核苷间键或核苷碱基的一处或多处修饰。由Isis编号(IsisNo)所述的反义化合物指示核苷碱基序列与基元的组合。
在某些实施方案中，靶区域为目标核酸的结构明确的区。例如，靶区域可涵盖3'UTR、5'UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接合点、编码区、转译起始区、转译终止区或其他明确的核酸区。DMPK的结构明确的区可由来自序列数据库(诸如NCBI)的寄存编号获得，并且信息以引用方式并入本文中。在某些实施方案中，靶区域可涵盖自靶区域内的一个目标段的5'目标位点至靶区域内的另一目标段的3'目标位点的序列。
靶向包括确定至少一个与反义化合物杂交，从而出现所需作用的目标段。在某些实施方案中，所需作用为mRNA目标核酸含量降低。在某些实施方案中，所需作用为由目标核酸编码的蛋白质含量降低或与目标核酸有关的表型改变。
靶区域可含有一个或多个目标段。靶区域内的多个目标段可重叠。或者，它们可不相重叠。在某些实施方案中，靶区域内的目标段相隔至多约300个核苷酸。在某些实施方案中，靶区域内的目标段相隔目标核酸上一定数目的核苷酸，数目为、为约、为至多、为至多约250个、200个、150个、100个、90个、80个、70个、60个、50个、40个、30个、20个或10个核苷酸，或为由前述任何两个值限定的范围。在某些实施方案中，靶区域内的目标段相隔目标核酸上的至多或至多约5个核苷酸。在某些实施方案中，目标段为连续的。涵盖由具有为本文所列的5'目标位点或3'目标位点中的任一个的起始核酸的范围所界定的靶区域。
合适的目标段可存在于5'UTR、编码区、3'UTR、内含子、外显子或外显子/内含子接合点内。含有起始密码子或终止密码子的目标段也为合适的目标段。合适的目标段可尤其排除某一结构明确的区，诸如起始密码子或终止密码子。
确定合适的目标段可包括将目标核酸的序列与整个基因组中的其他序列比较。例如，可使用BLAST算法来鉴别不同核酸当中具相似性的区域。此比较可防止选择可能以非特异性方式与除所选目标核酸以外的序列(即非目标或脱靶序列)杂交的反义化合物序列。
反义化合物在活性靶区域内的活性(例如如由目标核酸含量降低百分比所定义)可能不同。在某些实施方案中，DMPKmRNA含量降低可指示对DMPK蛋白表达的抑制作用。DMPK蛋白含量降低也可指示对目标mRNA表达的抑制作用。此外，诸如减轻肌强直或减轻剪接病变的表型变化可指示对DMPKmRNA和/或蛋白表达的抑制作用。
杂交
在一些实施方案中，本文公开的反义化合物与DMPK核酸之间进行杂交。杂交的最常见机制涉及核酸分子的互补核苷碱基之间的氢键键合(例如沃森-克里克、霍氏或反霍氏氢键键合)。
杂交可在不同条件下进行。严格条件具有序列依赖性并且由待杂交的核酸分子的性质和组成决定。
确定序列是否可与目标核酸特异性杂交的方法在本领域中是熟知的(Sambrooke和Russell,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版,2001)。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物可与DMPK核酸特异性杂交。
互补性
当反义化合物中足够数目的核苷碱基可与目标核酸中的相应核苷碱基进行氢键键合，从而出现所需作用(例如对目标核酸(诸如DMPK核酸)的反义抑制作用)时，反义化合物与目标核酸彼此互补。
反义化合物可在DMPK核酸的一个或多个区段上杂交，因此介入或相邻区段不涉及杂交事件(例如环结构、错配或发夹结构)。
在某些实施方案中，本文提供的反义化合物或其指定部分(或至少)70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％互补于DMPK核酸、其靶区域、目标段或指定部分。在某些实施方案中，反义化合物至少70％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％互补于DMPK核酸、其靶区域、目标段或指定部分，并且含有本文所述的任何示范性反义化合物的核苷碱基序列的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个连续核苷碱基(例如SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基)。反义化合物与目标核酸的互补性百分比可使用常规方法加以确定并且在反义化合物全部上加以测量。
例如，反义化合物中反义化合物的20个核苷碱基中有18个核苷碱基与靶区域互补并且因此特异性杂交将表示90％互补性。在此实例中，其余非互补核苷碱基可与互补核苷碱基丛集或交替并且不需要彼此相邻或与互补核苷碱基相邻。因而，长度为18个核苷碱基并具有4(四)个非互补核苷碱基且非互补核苷碱基由与目标核酸完全互补的两个区侧接的反义化合物与目标核酸应具有77.8％总体互补性并且因此属于本发明范围内。反义化合物与目标核酸的区的互补性百分比可常规地使用本领域中已知的BLAST程序(基本局部比对搜寻工具(basiclocalalignmentsearchtools))和PowerBLAST程序来测定(Altschul等人,J.Mol.Biol.,1990,215,403410；Zhang和Madden,GenomeRes.,1997,7,649656)。同源性、序列一致性或互补性百分比可通过例如使用Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.,1981,2,482489的算法的Gap程序(威斯康星序列分析套件(WisconsinSequenceAnalysisPackage)，用于Unix的版本8，GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,MadisonWis.)使用预设设置来测定。
在某些实施方案中，本文提供的反义化合物或其指定部分与目标核酸或其指定部分完全互补(即100％互补)。例如，反义化合物可与DMPK核酸或其靶区域或目标段或目标序列完全互补。如本文所用的“完全互补”意指反义化合物的每个核苷碱基都能够与目标核酸的相应核苷碱基进行准确碱基配对。例如，具有20个核苷碱基的反义化合物与长度为400个核苷碱基的目标序列完全互补，只要目标核酸中有具有20个核苷碱基的相应部分与反义化合物完全互补即可。完全互补也可对于第一和/或第二核酸的指定部分来使用。例如，具有30个核苷碱基的反义化合物中具有20个核苷碱基的部分可与长度为400个核苷碱基的目标序列“完全互补”。具有30个核苷碱基的寡核苷酸中具有20个核苷碱基的部分在目标序列具有含20个核苷碱基并且每个核苷碱基与反义化合物中具有20个核苷碱基的部分互补的相应部分的情况下与目标序列完全互补。同时，整个具有30个核苷碱基的反义化合物与目标序列可完全互补，取决于反义化合物的其余10个核苷碱基是否也与目标序列互补。
非互补核苷碱基的位置可处于反义化合物的5’末端或3’末端处。或者，一个非互补核苷碱基或多个非互补核苷碱基可处于反义化合物的内部位置上。当存在两个或两个以上非互补核苷碱基时，它们可为连续(即连接)或不连续的。在一个实施方案中，非互补核苷碱基位于间隔体反义寡核苷酸的翼段中。
在某些实施方案中，长度为或为至多10个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个核苷碱基的反义化合物相对于目标核酸(诸如DMPK核酸)或其指定部分包含至多4个、至多3个、至多2个或至多1个非互补核苷碱基。
在某些实施方案中，长度为或为至多10个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个核苷碱基的反义化合物相对于目标核酸(诸如DMPK核酸)或其指定部分包含至多6个、至多5个、至多4个、至多3个、至多2个或至多1个非互补核苷碱基。
本文提供的反义化合物也包括与目标核酸的一部分互补的反义化合物。如本文所用的“部分”是指目标核酸的区或区段内确定数目的连续(即连接)核苷碱基。“部分”也可指反义化合物中确定数目的连续核苷碱基。在某些实施方案中，反义化合物与目标段中具有至少8个核苷碱基的部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与目标段中具有至少10个核苷碱基的部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与目标段中具有至少15个核苷碱基的部分互补。也涵盖与目标段中具有至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20个或20个以上(或由任何两个这些值限定的范围)核苷碱基的部分互补的反义化合物。
一致性
本文提供的反义化合物也可与特定核苷酸序列SEQIDNO或由特定Isis编号表示的化合物或其部分具有确定的一致性百分比。如本文所用，如果反义化合物具有相同核苷碱基配对能力，则它与本文公开的序列一致。例如，在所公开的DNA序列中含有尿嘧啶而非胸苷的RNA将视作与DNA序列一致，因为尿嘧啶和胸苷均与腺嘌呤配对。也涵盖本文所述的反义化合物的缩短和延长型式以及相对于本文提供的反义化合物具有不一致碱基的化合物。不一致碱基可彼此相邻或散布于整个反义化合物中。反义化合物的一致性百分比根据相对于与其比较的序列具有一致碱基配对的碱基的数目来计算。
在某些实施方案中，反义化合物或其部分与本文公开的一种或多种示范性反义化合物或SEQIDNO或其部分具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％一致性。
修饰
核苷为碱基-糖组合。核苷的核苷碱基(也称为碱基)部分通常为杂环碱基部分。核苷酸是进一步包括共价连接至核苷的糖部分的磷酸酯基的核苷。对于包括戊呋喃糖基糖的那些核苷，磷酸酯基可连接至糖的2'、3'或5'羟基部分。寡核苷酸通过相邻核苷彼此共价键形成线性聚合寡核苷酸而形成。在寡核苷酸结构内，磷酸酯基通常视作形成寡核苷酸的核苷间键。
反义化合物的修饰涵盖核苷间键、糖部分或核苷碱基的取代或改变。经修饰的反义化合物通常因具有诸如像以下的所需特性而优于原生形式：细胞吸收增强、对核酸标靶的亲和力增强、在核酸酶存在下稳定性增强或抑制活性增强。
经化学修饰的核苷也可用于增强缩短或截短型反义寡核苷酸对其目标核酸的结合亲和力。因此，通常可以具有这种经化学修饰的核苷的较短反义化合物获得类似结果。
经修饰的核苷间键
RNA和DNA的天然存在的核苷间键为3'至5'磷酸二酯键。相较于具有天然存在的核苷间键的反义化合物，具有一个或多个经修饰的(即非天然存在)的核苷间键的反义化合物常会因具有所需特性(诸如像细胞吸收增强、对目标核酸的亲和力增强和在核酸酶存在下稳定性增强)而被优先选择。
具有经修饰的核苷间键的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷间键以及不具磷原子的核苷间键。代表性含磷核苷间键包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯。制备含磷键和不含磷键的方法为熟知的。
在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物包含一个或多个经修饰的核苷间键。在某些实施方案中，经修饰的核苷间键为硫代磷酸酯键。在某些实施方案中，反义化合物的每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键。
经修饰的糖部分
本发明的反义化合物可任选地含有糖基已经修饰的一个或多个核苷。这种糖经修饰的核苷可赋予反义化合物以增强的核酸酶稳定性、增强的结合亲和力或一些其他有利生物特性。在某些实施方案中，核苷包含经化学修饰的呋喃核糖环部分。化学修饰的呋喃核糖环的实例不加限制地包括添加取代基(包括5'和2'取代基)；非偕位环原子桥连形成双环核酸(BNA)；核糖基环氧原子经S、N(R)或C(R1)(R2)(R、R1和R2各自独立地为H、C1-C12烷基或保护基)置换)；及其组合。经化学修饰的糖的实例包括2'-F-5'-甲基取代的核苷(关于其他所公开的5',2'位上经双取代的核苷，参见08年8月21日公开的PCT国际申请WO2008/101157)；或核糖基环氧原子经S置换且2'位上经进一步取代(参见2005年6月16日公开的公开美国专利申请US2005-0130923)；或可选地BNA的5'位上的取代(参见07年11月22日公开的PCT国际申请WO2007/134181，其中LNA经例如5'-甲基或5'-乙烯基取代)。
具有经修饰的糖部分的核苷的实例不加限制地包括包含5'-乙烯基、5'-甲基(R型或S型)、4'-S、2'-F、2'-OCH3、2’-OCH2CH3、2’-OCH2CH2F和2'-O(CH2)2OCH3取代基的核苷。2'位上的取代基也可选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫基、O-烷基、O-C1-C10烷基、OCF3、OCH2F、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)、O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)和O-CH2-C(＝O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn)，其中每个Rl、Rm和Rn独立地为H或取代或未取代的C1-C10烷基。
双环核酸(BNA)的实例不加限制地包括在4'与2'核糖基环原子之间包含桥的核苷。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物包括一个或多个BNA核苷，其中桥包含下式中的一个：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'和4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(及其类似物，参见2008年7月15日颁布的美国专利7,399,845)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(及其类似物，参见2009年1月8日公开的公开为WO/2009/006478的PCT/US2008/068922)；4'-CH2-N(OCH3)-2'(及其类似物，参见2008年12月11日公开为WO/2008/150729的PCT/US2008/064591)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(参见2004年9月2日公开的公开美国专利申请US2004-0171570)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R为H、C1-C12烷基或保护基(参见2008年9月23日颁布的美国专利7,427,672)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(参见Chattopadhyaya等人,J.Org.Chem.,2009,74,118-134)；以及4'-CH2-C(＝CH2)-2'(及其类似物,参见2008年12月8日公开为WO2008/154401的PCT/US2008/066154)。
其他双环核苷已在公开文献中加以报导(参见例如：Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.,2007,129(26)8362-8379；Frieden等人，NucleicAcidsResearch,2003,21,6365-6372；Elayadi等人，Curr.OpinionInvens.Drugs,2001,2,558-561；Braasch等人，Chem.Biol.,2001,8,1-7；Orum等人，Curr.OpinionMol.Ther.,2001,3,239-243；Wahlestedt等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2000,97,5633-5638；Singh等人，Chem.Commun.,1998,4,455-456；Koshkin等人，Tetrahedron,1998,54,3607-3630；Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222；Singh等人，J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039；美国专利号：7,399,845；7,053,207；7,034,133；6,794,499；6,770,748；6,670,461；6,525,191；6,268,490；美国专利公开号：US2008-0039618；US2007-0287831；US2004-0171570；美国专利申请序列号：12/129,154；61/099,844；61/097,787；61/086,231；61/056,564；61/026,998；61/026,995；60/989,574；国际申请WO2007/134181；WO2005/021570；WO2004/106356；WO94/14226；和PCT国际申请号PCT/US2008/068922；PCT/US2008/066154；以及PCT/US2008/064591)。前述各双环核苷可经制备而具有一种或多种立体化学糖组态，包括例如α-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖(参见1999年3月25日公开为WO99/14226的PCT国际申请PCT/DK98/00393)。
在某些实施方案中，双环核苷在戊呋喃糖基糖部分的4'碳原子与2'碳原子之间包含桥，不加限制地包括包含1或1至4个独立地选自以下的连接的基团的桥：-[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)＝C(Rb)-、-C(Ra)＝N-、-C(＝NRa)-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(＝O)x-和-N(Ra)-；其中：x为0、1或2；n为1、2、3或4；每个Ra和Rb独立地为H、保护基、羟基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、C5-C7脂环基、取代的C5-C7脂环基、卤素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、CN、磺酰基(S(＝O)2-J1)或亚磺酰基(S(＝O)-J1)；并且
每个J1和J2独立地为H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、杂环基、取代的杂环基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保护基。
在某些实施方案中，双环糖部分的桥基为-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或-C(RaRb)-O-N(R)-。在某些实施方案中，桥基为4'-CH2-2'、4'-(CH2)2-2'、4'-(CH2)3-2'、4'-CH2-O-2'、4'-(CH2)2-O-2'、4'-CH2-O-N(R)-2'和4'-CH2-N(R)-O-2'-，其中每个R独立地为H、保护基或C1-C12烷基。
在某些实施方案中，双环核苷进一步由异构组态定义。例如，包含4'-(CH2)-O-2'桥基的核苷可呈α-L组态或β-D组态。α-L-亚甲氧基(4'-CH2-O-2')BNA先前已并入展示反义活性的反义寡核苷酸中(Frieden等人,NucleicAcidsResearch,2003,21,6365-6372)。
在某些实施方案中，双环核苷包括具有4'至2'桥的那些核苷，其中所述桥不加限制地包括α-L-4'-(CH2)-O-2'、β-D-4'-CH2-O-2'、4'-(CH2)2-O-2'、4'-CH2-O-N(R)-2'、4'-CH2-N(R)-O-2'、4'-CH(CH3)-O-2'、4'-CH2-S-2'、4'-CH2-N(R)-2'、4'-CH2-CH(CH3)-2'和4'-(CH2)3-2'，其中R为H、保护基或C1-C12烷基。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
-Qa-Qb-Qc-为-CH2-N(Rc)-CH2-、-C(＝O)-N(Rc)-CH2-、-CH2-O-N(Rc)-、-CH2-N(Rc)-O-或-N(Rc)-O-CH2；
Rc为C1-C12烷基或氨基保护基；并且
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、结合基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接基。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、结合基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接基；
Za为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、硫醇或取代的硫基。
在一个实施方案中，每个取代的基团独立地经独立地选自以下的取代基单取代或多取代：卤素、氧代基、羟基、OJc、NJcJd、SJc、N3、OC(＝X)Jc和NJeC(＝X)NJcJd，其中每个Jc、Jd和Je独立地为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基并且X为O或NJc。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、结合基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接基；
Zb为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基或取代的酰基(C(＝O)-)。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、结合基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接基；
Rd为C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
每个qa、qb、qc和qd独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、酰基、取代的酰基、C1-C6氨基烷基或取代的C1-C6氨基烷基。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、结合基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接基；
qa、qb、qe和qf各自独立地为氢、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；
或qe连同qf一起为＝C(qg)(qh)；
qg和qh各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基。
具有4'-CH2-O-2'桥的腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶双环核苷的合成和制备以及其寡聚和核酸识别特性已有所描述(Koshkin等人,Tetrahedron,1998,54,3607-3630)。双环核苷的合成也已描述于WO98/39352和WO99/14226中。
具有诸如4'-CH2-O-2'和4'-CH2-S-2'的4'至2'桥连基团的各种双环核苷的类似物也已经制备(Kumar等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222)。用作核酸聚合酶的受质的包含双环核苷的寡脱氧核糖核苷酸双链体的制备也已有所描述(Wengel等人,WO99/14226)。此外，2'-氨基-BNA(一种新颖的构形受限的高亲和力寡核苷酸类似物)的合成在本领域中已有所描述(Singh等人,J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039)。另外，2'-氨基-BNA和2'-甲基氨基-BNA已经制备并且其与互补RNA和DNA股的双链体的热稳定性先前已有所报导。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、结合基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接基；
每个qi、qj、qk和ql独立地为H、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；并且
qi连同qj或ql连同qk一起为＝C(qg)(qh)，其中qg和qh各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基。
一种具有4'-(CH2)3-2'桥和烯基类似物桥4'-CH＝CH-CH2-2'的碳环双环核苷已有所描述(Frier等人,NucleicAcidsResearch,1997,25(22),4429-4443和Albaek等人,J.Org.Chem.,2006,71,7731-7740)。碳环双环核苷的合成和制备以及其寡聚和生物化学研究也已有所描述(Srivastava等人,J.Am.Chem.Soc.2007,129(26),8362-8379)。
在某些实施方案中，双环核苷包括但不限于(A)α-L-亚甲氧基(4’-CH2-O-2’)BNA，(B)β-D-亚甲氧基(4’-CH2-O-2’)BNA，(C)乙烯氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA，(D)氨氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA，(E)氧氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA，(F)甲基(亚甲氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA(也称为约束乙基或cEt)，(G)亚甲基-硫基(4’-CH2-S-2’)BNA，(H)亚甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA，(I)甲基碳环(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA，(J)亚丙基碳环(4’-(CH2)3-2’)BNA和(K)乙烯基BNA，如下文所描绘。
其中Bx为碱基部分并且R独立地为H、保护基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在某些实施方案中，核苷是通过用糖替代物置换核糖基环加以修饰。此修饰不加限制地包括用替代环系统(有时称为DNA类似物)置换核糖基环，替代环系统诸如吗啉代环、环己烯基环、环己基环或四氢吡喃基环，诸如具有下式中的一种：
在某些实施方案中，选择具有下式的糖替代物：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
T3和T4各自独立地为将四氢吡喃核苷类似物连接至寡聚化合物的核苷间键基团，或T3和T4中的一个为将四氢吡喃核苷类似物连接至寡聚化合物或寡核苷酸的核苷间键基团，并且T3和T4中的另一个为H、羟基保护基、连接的结合基团或5'或3’末端基；
q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；并且
R1和R2中的一个为氢且另一者选自卤素、取代或未取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1、N3、OC(＝X)J1、OC(＝X)NJ1J2、NJ3C(＝X)NJ1J2和CN，其中X为O、S或NJ1，并且每个J1、J2和J3独立地为H或C1-C6烷基。
在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自为H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个不为H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个为甲基。在某些实施方案中，提供THP核苷，其中R1和R2中的一个为F。在某些实施方案中，R1为氟且R2为H；R1为甲氧基且R2为H，以及R1为甲氧基乙氧基且R2为H。
这种糖替代物包括但不限于在本领域中称为己糖醇核酸(HNA)、阿卓糖醇核酸(ANA)和甘露糖醇核酸(MNA)的糖替代物(参见Leumann,C.J.,Bioorg.&Med.Chem.,2002,10,841-854)。
在某些实施方案中，糖替代物包含具有5个以上原子和一个以上杂原子的环。例如，包含吗啉代糖部分的核苷及其在寡聚化合物中的使用已经报导(参见例如：Braasch等人,Biochemistry,2002,41,4503-4510；和美国专利5,698,685；5,166,315；5,185,444；和5,034,506)。
如此处所用，术语“吗啉代”意指具有以下结构的糖替代物：
在某些实施方案中，吗啉代可例如通过添加或改变来自以上吗啉代结构的各种取代基来加以修饰。这种糖替代物在本文中称为“经修饰的吗啉代”。
在某些实施方案中，反义化合物包含一个或多个经修饰的环己烯基核苷，其为具有6元环己烯基而非天然存在的核苷中的戊呋喃糖基残基的核苷。经修饰的环己烯基核苷包括但不限于本领域中描述的那些(参见例如2010年4月10日公开的共同拥有的公开PCT申请WO2010/036696；Robeyns等人，J.Am.Chem.Soc.,2008,130(6),1979-1984；Horváth等人，TetrahedronLetters,2007,48,3621-3623；Nauwelaerts等人，J.Am.Chem.Soc.,2007,129(30),9340-9348；Gu等人，Nucleosides,Nucleotides&NucleicAcids,2005,24(5-7),993-998；Nauwelaerts等人，NucleicAcidsResearch,2005,33(8),2452-2463；Robeyns等人，ActaCrystallographica,SectionF:StructuralBiologyandCrystallizationCommunications,2005,F61(6),585-586；Gu等人，Tetrahedron,2004,60(9),2111-2123；Gu等人，Oligonucleotides,2003,13(6),479-489；Wang等人，J.Org.Chem.,2003,68,4499-4505；Verbeure等人，NucleicAcidsResearch,2001,29(24),4941-4947；Wang等人，J.Org.Chem.,2001,66,8478-82；Wang等人，Nucleosides,Nucleotides&NucleicAcids,2001,20(4-7),785-788；Wang等人，J.Am.Chem.,2000,122,8595-8602；公开PCT申请WO06/047842；和公开PCT申请WO01/049687；各个的文本以全文引用的方式并入本文中)。某些经修饰的环己烯基核苷具有式：
其中：
Bx为杂环碱基部分；
T3和T4各自独立地为将环己烯基核苷类似物连接至反义化合物的核苷间键基团，或T3和T4中的一个为将四氢吡喃核苷类似物连接至反义化合物的核苷间键基团且T3和T4中的一个为H、羟基保护基、连接的结合基团或5'或3'末端基；并且q1、q2、q3、q4、q5、q6、q7、q8和q9各自独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C2-C6炔基或其他糖取代基。
许多其他双环和三环糖替代物环系统在本领域中也为已知的，其可用于修饰并入反义化合物中的核苷(参见例如评述文章：Leumann,ChristianJ.,Bioorg.&Med.Chem.,2002,10,841-854)。可对这种环系统进行各种其他取代以增强活性。
制备经修饰的糖的方法为本领域的技术人员所熟知。教导这种经修饰的糖的制备的一些代表性美国专利不加限制地包括U.S.:4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,670,633；5,700,920；5,792,847和6,600,032以及2005年6月2日申请且在2005年12月22日公开为WO2005/121371的国际申请PCT/US2005/019219，并且其中每个以全文引用的方式并入本文中。
在具有经修饰的糖部分的核苷酸中，核苷碱基部分(天然、经修饰的或其组合)维持可与适当核酸标靶杂交。
在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物包含一个或多个具有经修饰的糖部分的核苷酸。在某些实施方案中，经修饰的糖部分为2'-MOE。在某些实施方案中，2'-MOE修饰的核苷酸排列于间隔体基元中。
经修饰的核苷碱基
核苷碱基(或碱基)修饰或取代在结构上可与天然存在或合成的未经修饰的核苷碱基区分，但在功能上可与天然存在或合成的未经修饰的核苷碱基互换。天然核苷碱基与经修饰的核苷碱基两者均能够参与氢键合。这种核苷碱基修饰可对反义化合物赋予核酸酶稳定性、结合亲和力或一些其他有益生物学性质。经修饰的核苷碱基包括合成和天然核苷碱基，诸如像5-甲基胞嘧啶(5-me-C)。包括5-甲基胞嘧啶取代的某些核苷碱基取代特别适用于增加反义化合物对目标核酸的结合亲和力。例如，5-甲基胞嘧啶取代已显示使核酸双链体稳定性增加0.6-1.2℃(Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.和Lebleu,B.,编,AntisenseResearchandApplications,CRCPress,BocaRaton,1993,第276-278页)。
其他未经修饰的核苷碱基包括5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其他烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其他烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧碇和2-硫代胞嘧啶、5-卤基尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤基、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤基(特别是5-溴、5-三氟甲基)和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-去氮杂鸟嘌呤和7-去氮杂腺嘌呤和3-去氮杂鸟嘌呤以及3-去氮杂腺嘌呤。
杂环碱基部分也可包括其中嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环，例如7-去氮杂-腺嘌呤、7-去氮杂鸟苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮置换的杂环碱基部分。特别适用于增加反义化合物的结合亲和力的核苷碱基包括5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6以及O-6取代的嘌呤(包括2氨基丙基腺嘌呤)、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。
在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物包含一个或多个经修饰的核苷碱基。在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的间隔加宽的反义寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核苷碱基。在某些实施方案中，经修饰的核苷碱基为5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。
某些反义化合物基元
在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物具有排列成一定型态或基元的经化学修饰的次单元，以赋予反义化合物以诸如抑制活性增强、对目标核酸的结合亲和力增强或对由活体内核酸酶引起的降解具抗性的特性。
嵌合反义化合物通常含有至少一个经修饰的以赋予增强的核酸酶降解抗性、增加的细胞吸收、增强的对目标核酸的结合亲和力和/或增强的抑制活性的区。嵌合反义化合物的第二区可任选地用作细胞核酸内切酶核糖核酸酶H的受质，酶裂解RNA:DNA双链体的RNA股。
具有间隔体基元的反义化合物被认为是嵌合反义化合物。在间隔体中，具有多个有利于核糖核酸酶H裂解的核苷酸的内部区域位于具有多个在化学上与内部区域的核苷不同的核苷酸的外部区域之间。在具有间隔体基元的反义寡核苷酸的状况下，间隔段一般用作核酸内切酶裂解的受质，而翼段包含经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的区由构成各相异区的糖部分的类型来区分。用于区分间隔体的区的糖部分的类型在一些实施方案中可包括β-D-核糖核苷、β-D-脱氧核糖核苷、2'位上经修饰的核苷(这种2'位上经修饰的核苷可尤其包括2'-MOE和2'-O-CH3等)，以及双环糖修饰的核苷(这种双环糖修饰的核苷可包括具有4’-(CH2)n-O-2’桥的那些，其中n＝1或n＝2)。翼区-间隔区-翼区基元常描述为“X-Y-Z”，其中“X”表示5'翼区的长度，“Y”表示间隔区的长度，以及“Z”表示3'翼区的长度。如本文所用，描述为“X-Y-Z”的间隔体具有一定组态以使间隔段经放置而与5'翼段和3'翼段中的每一个紧邻。因此，在5'翼段与间隔段之间，或间隔段与3'翼段之间不存在介入的核苷酸。本文所述的任何反义化合物可具有间隔体基元。在一些实施方案中，X与Z相同；在其他实施方案中，它们不同。在较佳实施方案中，Y为8个与15个之间的核苷酸。X、Y或Z可为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30个或更多个核苷酸的任一个。因此，间隔体包括但不限于例如5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6、5-8-5、5-7-5、1-8-1或2-6-2。
在某些实施方案中，反义化合物具有“翼体”基元，具有翼区-间隔区或间隔区-翼区组态，即如上对于间隔体组态所述的X-Y或Y-Z组态。因此，翼体组态包括但不限于例如5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13或5-13。
在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物具有5-10-5间隔体基元。在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物具有5-7-5间隔体基元。在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物具有3-10-3间隔体基元。在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物具有4-8-4间隔体基元。
在某些实施方案中，靶向DMPK核酸的反义化合物具有间隔加宽的基元。
在某些实施方案中，具有任何这些间隔体或翼体基元的反义化合物都有本文所述的任何示范性反义化合物的核苷碱基序列的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个连续核苷碱基(例如SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874的任一个中叙述的核苷碱基序列的至少8个连续核苷碱基)。
在某些实施方案中，本发明提供包含寡核苷酸的寡聚化合物。在某些实施方案中，这种寡核苷酸包含一个或多个化学修饰。在某些实施方案中，经化学修饰寡核苷酸包含一个或多个经修饰的糖。在某些实施方案中，经化学修饰寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核苷碱基。在某些实施方案中，经化学修饰寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核苷间键。在某些实施方案中，化学修饰(糖修饰、核苷碱基修饰和/或键修饰)限定样式或基元。在某些实施方案中，糖部分、核苷间键和核苷碱基的化学修饰的样式彼此各自独立。因此，寡核苷酸可通过其糖修饰基元、核苷间键基元和/或核苷碱基修饰基元(如本文所用，核苷碱基修饰基元描述独立于核苷碱基的序列对核苷碱基进行的化学修饰)加以描述。
某些糖基元
在某些实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种类型的以确定样式或糖修饰基元形式沿寡核苷酸或其区域排列的经修饰的糖部分和/或天然存在的糖部分。这种基元可包括本文论述的任何糖修饰和/或其他已知糖修饰。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含以下区域或由以下区域组成：具有包含两个外部区域或“翼区”和内部区域或“间隔区”的间隔体糖修饰基元的区域。间隔体基元的三个区域(5’翼区、间隔区和3’翼区)形成连续核苷序列，其中每个翼区的核苷的至少一些糖部分不同于间隔区的核苷的至少一些糖部分。具体地说，至少每个翼区的最靠近间隔区的核苷(5’翼区的3’最近核苷和3’翼区的5’最近核苷)的糖部分不同于相邻间隔区核苷的糖部分，由此界定翼区与间隔区之间的边界。在某些实施方案中，间隔区内的糖部分彼此相同。在某些实施方案中，间隔区包括一个或多个具有不同于间隔区的一个或多个其他核苷的糖部分的糖部分的核苷。在某些实施方案中，两个翼区的糖修饰基元彼此相同(对称间隔体)。在某些实施方案中，5’翼区的糖修饰基元不同于3’翼区的糖修饰基元(不对称间隔体)。
某些5’翼区
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由1至5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由2至5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由3至5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由4或5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由1至4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由1至3个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由1或2个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由2至4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由2或3个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由3或4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由1个核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由2个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由3个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区由5个连接的核苷组成。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少两个双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少三个双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少四个双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为LNA核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区的每个核苷为2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含三个约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和三个2’-MOE核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含三个LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和三个2’-MOE核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含三个约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和三个2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含三个LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个LNA核苷和三个2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区具有AABB基元，其中每个A选自以下：2’-MOE核苷和2’OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区具有AABB基元，其中每个B选自以下：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区具有AABB基元，其中每个A表示2’-MOE核苷并且每个B表示约束乙基核苷。
在某些实施方案中，间隔体的5’翼区具有AAABB基元，其中每个A选自以下：2’-MOE核苷和2’OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区具有AABB基元，其中每个B选自以下：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区具有AABB基元，其中每个A表示2’-MOE核苷并且每个B表示约束乙基核苷。
某些3’翼区
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由1至5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由2至5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由3至5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由4或5个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由1至4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由1至3个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由1或2个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由2至4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由2或3个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由3或4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由1个核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由2个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由3个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由4个连接的核苷组成。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区由5个连接的核苷组成。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为双环核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为LNA核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少三个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少四个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区的每个核苷为2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个双环核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含三个约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的5’翼区包含两个约束乙基核苷和三个2’-MOE核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含三个LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和三个2’-MOE核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含三个约束乙基核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个双环核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个约束乙基核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个约束乙基核苷和三个2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含三个LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA和两个非双环经修饰的核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和两个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区包含两个LNA核苷和三个2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区具有BBAA基元，其中每个A选自以下：2’-MOE核苷和2’OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区具有BBAA基元，其中每个B选自以下：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区具有BBAA基元，其中每个A表示2’-MOE核苷并且每个B表示约束乙基核苷。
在某些实施方案中，间隔体的3’翼区具有BBAAA基元，其中每个A选自以下：2’-MOE核苷和2’OMe核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区具有BBAA基元，其中每个B选自以下：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA核苷。在某些实施方案中，间隔体的3’翼区具有BBAA基元，其中每个A表示2’-MOE核苷并且每个B表示约束乙基核苷。
组合物和配制药物组合物的方法
反义寡核苷酸可与药学上可接受的活性或惰性物质混合以制备药物组合物或制剂。组合物和配制药物组合物的方法取决于许多准则，包括但不限于施用途径、疾病程度或所施用的剂量。
靶向DMPK核酸的反义化合物可通过将反义化合物与合适的药学上可接受的稀释剂或载体组合而用于药物组合物中。药学上可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)。PBS为适用于非经肠递送的组合物中的稀释剂。因此，在一个实施方案中，在本文所述的方法中使用包含靶向DMPK核酸的反义化合物和药学上可接受的稀释剂的药物组合物。在某些实施方案中，药学上可接受的稀释剂为PBS。在某些实施方案中，反义化合物为反义寡核苷酸。
包含反义化合物的药物组合物涵盖在施用到动物(包括人类)时能够提供(直接或间接)其生物活性代谢物或残余物的任何药学上可接受的盐、酯或这种酯的盐，或任何其他寡核苷酸。因此，例如，也公开反义化合物的药学上可接受的盐、前药、这种前药的药学上可接受的盐，以及其他生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
前药可包括在反义化合物的一端或两端上并入可由体内内源性核酸酶裂解而形成活性反义化合物的额外核苷。
结合的反义化合物
反义化合物可共价连接至一个或多个增强所得反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞吸收的部分或共轭物。典型结合基团包括胆固醇部分和脂质部分。其他结合基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸盐、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素和染料。
反义化合物也可经修饰而具有一个或多个稳定化基团，一个或多个稳定化基团一般连接至反义化合物的一端或两端以增强诸如像核酸酶稳定性的特性。在稳定化基团中包括帽结构。这些末端修饰保护具有末端核酸的反义化合物免遭核酸外切酶降解，并且可有助于递送和/或定位于细胞内。帽可存在于5’末端(5'帽)或3’末端(3'帽)上，或可存在于两端上。帽结构在本领域中为熟知的并且包括例如反转脱氧无碱基帽。其他可用于对反义化合物的一端或两端进行封端以赋予核酸酶稳定性的3'和5'稳定化基团包括2003年1月16日公开的WO03/004602中所公开的那些。
细胞培养和反义化合物处理
可在多种细胞类型中活体外测试反义化合物对DMPK核酸的含量、活性或表达的作用。用于这种分析的细胞类型可获自商业供货商(例如AmericanTypeCultureCollection,Manassus,VA；Zen-Bio公司，ResearchTrianglePark,NC；Clonetics公司，Walkersville,MD)并且根据供货商的说明书使用市售可得的试剂(例如InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)培养细胞。说明性细胞类型包括但不限于HepG2细胞、Hep3B细胞、初生肝细胞、A549细胞、GM04281纤维母细胞和LLC-MK2细胞。
活体外测试反义寡核苷酸
本文描述用反义寡核苷酸处理细胞的方法，所述方法可经适当修改以用于用其他反义化合物进行的处理。
一般而言，当细胞在培养中达到约60％至80％汇合度时，用反义寡核苷酸处理细胞。
一种常用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括阳离子型脂质转染试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA)。可将反义寡核苷酸与在1(Invitrogen,Carlsbad,CA)中混合以达成反义寡核苷酸的所需最终浓度和通常在每100nM反义寡核苷酸2至12ug/mL范围内的浓度。
另一个用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括LIPOFECTAMINE(Invitrogen,Carlsbad,CA)。可将反义寡核苷酸与LIPOFECTAMINE在1血清减少型培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中混合以达成反义寡核苷酸的所需浓度和通常在每100nM反义寡核苷酸2至12ug/mL范围内的浓度。
另一用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括(Invitrogen,Carlsbad,CA)。可将反义寡核苷酸与在1血清减少型培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中混合以达成反义寡核苷酸的所需浓度和通常在每100nM反义寡核苷酸2至12ug/mL范围内的浓度。
另一个用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的技术包括电穿孔。
通过常规方法用反义寡核苷酸处理细胞。通常在反义寡核苷酸处理后16至24小时收集细胞，此时通过本领域中已知的和本文所述的方法测量目标核酸的RNA或蛋白含量。一般而言，当在多次重复实验中进行处理时，数据呈现为重复处理的平均值。
所用的反义寡核苷酸浓度在细胞系之间有所不同。确定最佳用于特定细胞系的反义寡核苷酸浓度的方法在本领域中为熟知的。当用Lipofectin或Cytofectin转染时，通常使用浓度在1nM至300nM范围内的反义寡核苷酸。当使用电穿孔进行转染时，使用625nM至20,000nM范围内的较高浓度的反义寡核苷酸。
RNA分离
可对总细胞RNA或聚(腺苷酸)+mRNA进行RNA分析。RNA分离的方法在本领域中为熟知的。RNA是使用本领域中熟知的方法，例如使用试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA)，根据制造商推荐的方案来制备。
分析对标靶含量或表达的抑制作用
对DMPK核酸的含量或表达的抑制作用可以本领域中已知的多种方式来分析。例如，目标核酸含量可通过例如北方墨点分析、竞争聚合酶链反应(PCR)或定量实时PCR来定量。可对总细胞RNA或聚(腺苷酸)+mRNA进行RNA分析。RNA分离的方法在本领域中为熟知的。北方墨点分析在本领域中也为常规的。定量实时PCR可方便地使用市售可得的ABI7600、7700或7900序列检测系统(可获自PE-AppliedBiosystems,FosterCity,CA并且根据制造商说明书来使用)完成。
对目标RNA含量的定量实时PCR分析
可通过定量实时PCR，使用ABI7600、7700或7900序列检测系统(PE-AppliedBiosystems,FosterCity,CA)根据制造商说明书来对目标RNA含量进行定量。定量实时PCR的方法在本领域中为熟知的。
在实时PCR之前，使分离的RNA进行逆转录酶(RT)反应，产生互补DNA(cDNA)，其然后用作实时PCR扩增的受质。在同一样品孔中依序进行RT和实时PCR反应。RT和实时PCR试剂获自Invitrogen(Carlsbad,CA)。RT，实时PCR反应通过为本领域的技术人员熟知的方法进行。
通过实时PCR获得的基因(或RNA)标靶量是使用表达恒定的基因(诸如亲环素A(cyclophilinA))的表达含量或通过使用(Invitrogen公司，Carlsbad,CA)定量总RNA来校正。亲环素A表达是通过实时PCR，通过与标靶同时操作、复合操作或分开操作来定量。总RNA使用RNA定量试剂(Invitrogen公司，Eugene,OR)来定量。通过定量RNA的方法在Jones,L.J.等人(AnalyticalBiochemistry,1998,265,368-374)中有所教导。使用4000仪器(PEAppliedBiosystems)测量荧光。
探针和引物经设计以与DMPK核酸杂交。设计实时PCR探针和引物的方法在本领域中为熟知的，并且可包括使用软件，诸如PRIMER软件(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)。
分析蛋白含量
对DMPK核酸的反义抑制作用可通过测量DMPK蛋白含量来评估。DMPK的蛋白含量可以本领域中熟知的多种方式来评估或定量，诸如免测沉淀法、西方墨点分析(免疫墨点法)、酶联免疫吸附分析(ELISA)、定量蛋白质分析、蛋白质活性分析(例如卡斯蛋白酶活性分析)、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光活化细胞分选法(FACS)。针对标靶的抗体可经鉴别并且获自多种来源，诸如MSRS抗体目录(Aerie公司，Birmingham,MI)，或可经由本领域中熟知的常规单株或多株抗体产生方法来制备。
活体内测试反义化合物
在动物中测试例如反义寡核苷酸的反义化合物以评估其抑制DMPK表达和产生表型变化的能力。测试可在正常动物中或在实验疾病模型，例如肌强直性营养不良(DM1)的HSALR小鼠模型中进行。
HSALR小鼠模型为建立的DM1模型(Mankodi,A.等人Science.289:1769,2000)。小鼠携带220个CTG重复序列插入基因的3’UTR中的人类骨骼肌动蛋白(hACTA1)转基因。hACTA1-CUGexp转录物累积在骨骼肌中的核灶中并且导致与人类DM1中的肌强直类似的肌强直(Mankodi,A.等人Mol.Cell10:35,2002；Lin,X.等人Hum.Mol.Genet.15:2087,2006)。因此，预期通过反义抑制hACTA1转基因来改善HSALR小鼠的DM1症状将预示人类患个的类似症状会通过反义抑制DMPK转录物而得以改善。
CUGexpRNA在小鼠中的表达导致肌肉转录组的广泛重塑，其中许多重塑通过切除MBNL1而得以重现。因此，预期使HSALR小鼠中的转录组正常化将预示DM1患者中的人类转录组会通过反义抑制DMPK转录物而得以正常化。
对于向动物施用，在药学上可接受的稀释剂，诸磷酸盐缓冲生理盐水中配制反义寡核苷酸。施用包括非经肠施用途径。在用反义寡核苷酸治疗一段时期之后，从组织分离RNA并且测量DMPK核酸表达的变化。也测量DMPK蛋白含量的变化。
剪接
肌强直性营养不良(DM1)由DMPK基因的3’未转译区域中的CTG重复序列扩增所引起(Brook,J.D.等人Cell.68:799,1992)。此突变导致RNA显性(RNAdominance)，即含有扩增的CUG重复序列(CUGexp)的RNA的表达会诱导细胞功能障碍的过程(OsborneRJ和ThorntonCA.,HumanMolecularGenetics.,2006,15(2):R162-R169)。这种CUGexp保留在骨骼肌的核灶中(Davis,B.M.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94:7388,1997)。CUGexp在核灶中的累积导致诸如盲肌样1(MBLN1)蛋白的聚(CUG)结合蛋白的螯合(Miller,J.W.等人EMBOJ.19:4439,2000)。MBLN1为剪接因子并且调控诸如Serca1、CIC-1、Titin和Zasp的基因的剪接。因此，由CUGexp螯合MBLN1会触发对基因的外显子的错误调控的替代性剪接，剪接通常由MBLN1控制(Lin,X.等人Hum.Mol.Genet.15:2087,2006)。显示此调控异常的动物中，诸如像在DM1患者和HSALR小鼠模型中的替代性剪接的矫正为治疗(包括用反义寡核苷酸的治疗)的功效的适用指示。
某些反义机制
肌强直性营养不良(DM1)由DMPK基因的3’未转译区域中的CTG重复序列扩增所引起。在某些实施方案中，在DMPK基因的3’未转译区域中的扩增导致转录含有扩增的CUG重复序列的RNA，并且含有扩增的CUG重复序列(CUGexp)的RNA保留在骨骼肌的核灶中。在某些情况下，负责将mRNA从核输出至细胞质中的细胞机构不将含有扩增的CUG重复序列的RNA从核输出或以较低效率进行此举。在某些实施方案中，细胞不将DMPKCUGexpmRNA从核输出或降低这种输出。因此，在某些实施方案中，DMPKCUGexpmRNA累积在核中。在某些实施方案中，细胞的核中存在的DMPKCUGexpmRNA的复本多于正常输出的野生型DMPKmRNA的复本。在这种实施方案中，由于突变DMPKCUGexpmRNA在核中相对丰富，所以相对于野生型DMPKmRNA，降低核中的目标物的反义化合物将优先降低突变DMPKCUGexpmRNA，即使反义化合物不另外区分突变与野生型。因为核糖核酸酶H依赖性反义化合物在核中具有活性，所以这种化合物特别适于这种用途。
在某些情况下，预期野生型DMPK前mRNA和突变CUGexpDMPK前mRNA会在类似速率下被加工成mRNA。因此，预期在细胞的核中存在近似相同量的野生型DMPK前mRNA和突变CUGexpDMPK前mRNA。然而，在加工之后，野生型DMPKmRNA相对快速地自核输出，并且突变CUGexpDMPKmRNA缓慢输出或完全不输出。在某些这种实施方案中，突变CUGexpDMPKmRNA累积在核中的量大于野生型DMPKmRNA。在某些这种实施方案中，相较于野生型DMPKmRNA，靶向mRNA的反义寡核苷酸将优先降低突变CUGexpDMPKmRNA的表达，因为在细胞的核中存在突变CUGexpDMPKmRNA的更多复本。在某些实施方案中，预期相对于野生型，靶向前mRNA而非mRNA(例如靶向内含子)的反义化合物不优先降低突变DMPK，因为两种前mRNA的核丰度可能类似。在某些实施方案中，本文所述的反义化合物不靶向DMPK前mRNA的内含子。在某些实施方案中，使本文所述的反义化合物靶向DMPKmRNA中存在的外显子或外显子-外显子接合点。在某些实施方案中，因此，使用反义寡核苷酸靶向mRNA是较佳的，因为具有一种或多种本文所述的特征的反义寡核苷酸(i)在细胞的核中具有活性并且(2)相较于野生型DMPKmRNA，将优先降低突变CUGexpDMPKmRNA。
某些生物标记
至少部分地根据CUGexp转录物在核或核灶中的累积程度来确定小鼠模型中的DM1严重性。DM1严重性的可用的生理标记为发展高频次的非自愿动作电位(肌强直)。
某些适应症
在某些实施方案中，本文提供治疗个体的方法，其包括施用一种或多种如本文所述的药物组合物。在某些实施方案中，个体患有1型肌强直性营养不良(DM1)。
因此，本文提供用于改善与有需要的受试者的1型肌强直性营养不良相关的症状的方法。在某些实施方案中，提供一种用于降低与1型肌强直性营养不良相关的症状的发作率的方法。在某些实施方案中，提供一种用于降低与1型肌强直性营养不良相关的症状的严重性的方法。在某些实施方案中，与DM1相关的症状包括肌肉僵硬、肌强直、失能性远程无力、面部和颚肌肉无力、吞咽困难、眼睑下垂(下垂症)、颈部肌肉无力、手臂和腿肌肉无力、持续性肌肉疼痛、嗜睡、肌肉损耗、咽物困难、呼吸功能不全、心跳不齐、心肌破坏、冷漠、胰岛素抗性和白内障。在儿童中，症状也可为发育延迟、学习问题、语言和言语问题、以及人格发展问题。
在某些实施方案中，方法包含向有需要的个体施用治疗有效量的靶向DMPK核酸的化合物。
在某些实施方案中，施用靶向DMPK核酸的反义化合物导致DMPK表达降低至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％或由任何两个这些值限定的范围。
在某些实施方案中，包含靶向DMPK的反义化合物的药物组合物用于制备用于治疗罹患或易患1型肌强直性营养不良的患者的药剂。
在某些实施方案中，本文所述的方法包括施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，经修饰的寡核苷酸具有SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33-874中叙述的序列的如本文所述的连续核苷碱基部分。
施用
在某些实施方案中，如本文所述的化合物和组合物非经肠施用。
在某些实施方案中，非经肠施用通过输注达成。输注可为长期的或连续的或短暂的或间断的。在某些实施方案中，输注的药物剂用泵递送。在某些实施方案中，非经肠施用通过注射(例如快速浓注)达成。注射液可用注射器递送。
非经肠施用包括皮下施用、静脉内施用、肌肉内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如鞘内或脑室内施用。施用可为连续的或长期的或短暂的或间断的。
在某些实施方案中，施用为产生寡核苷酸的全身性效应(全身性施用的特征在于全身性效应，即在一个以上组织中具有效应)或导致向CNS或CSF递送的皮下、静脉内、脑内、脑室内、鞘内施用或另一种施用。
在包括四头肌、腓肠肌和胫骨前肌的肌肉组织中，如通过在DM1的HSALR小鼠模型中对α1肌动蛋白的抑制和肌强直的减轻所测量的作用的持续时间得以延长(参见以下实例)。皮下注射反义寡核苷酸4周导致HSALR小鼠中的四头肌、腓肠肌和胫骨前肌中的α1肌动蛋白受抑制至少70％持续终止给药之后至少11周(77天)。皮下注射反义寡核苷酸4周导致HSALR小鼠中的四头肌、腓肠肌和胫骨前肌中的肌强直消除持续终止给药之后至少11周(77天)。
在某些实施方案中，递送如本文所述的组合物的化合物导致目标mRNA和/或目标蛋白质下调至少70％持续至少77天。在某些实施方案中，递送如本文所述的化合物或组合物导致目标mRNA和/或目标蛋白质下调50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％持续至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少65天、至少70天、至少75天、至少76天、至少77天、至少78天、至少79天、至少80天、至少85天、至少90天、至少95天、至少100天、至少105天、至少110天、至少115天、至少120天、至少1年。
在某些实施方案中，反义寡核苷酸是通过每77天注射或输注一次来递送。在某些实施方案中，反义寡核苷酸是通过每个月、每两个月、每三个月、每6个月一次、一年两次或一年一次进行注射或输注来递送。
某些组合疗法
在某些实施方案中，包含本发明的经修饰的寡核苷酸的第一药剂是与一种或多种第二药剂共同施用。在某些实施方案中，这种第二药剂经设计以与本文所述的第一药剂治疗相同1型肌强直性营养不良。在某些实施方案中，这种第二药剂经设计以与本文所述的第一药剂治疗不同疾病、病症或病状。在某些实施方案中，这种第二药剂经设计以处理一种或多种如本文所述的药物组合物的非所要副作用。在某些实施方案中，第二药剂是与第一药剂共同施用以处理第一药剂的非所要的作用。在某些实施方案中，第二药剂是与第一药剂共同施用以产生组合效应。在某些实施方案中，第二药剂是与第一药剂共同施用以产生协同效应。
在某些实施方案中，第一药剂与一种或多种第二药剂同时施用。在某些实施方案中，第一药剂与一种或多种第二药剂在不同时间施用。在某些实施方案中，第一药剂与一种或多种第二药剂以单一医药制剂形式一起制备。在某些实施方案中，第一药剂与一种或多种第二药剂是分别制备的。
某些比较化合物
在某些实施方案中，本文公开的化合物受益于一种或多种相对于适当比较化合物改良的体外和/或体内性质。
在某些实施方案中，5-10-5MOE间隔体ISIS445569为比较化合物，其具有序列(从5’至3’)CGGAGCGGTTGTGAACTGGC(作为SEQIDNO:24并入本文中)，其中每个核苷间键为硫代磷酸酯键，每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶，并且核苷1-5和16-20中每一个包含先前描述于WO2012/012443中的2’-O-甲氧基乙基部分，专利以引用的方式并入本文中。
ISIS445569为适当代表性比较化合物，因为ISIS445569显示活体外人类DMPK统计显著降低，如使用多组引物探针所测量(参见例如WO2012/012443的实例1和实例2)。另外，ISIS445569显示活体外统计显著剂量依赖性抑制人类骨骼肌细胞与DM1纤维母细胞两者中的人类DMPK(参见例如WO2012/012443的实例4和实例5以及WO2012/012467的实例28)。ISIS445569也降低转基因小鼠中的人类DMPK转录物表达(WO2012/012443的实例23和24以及WO2012/012467的实例29和30)。ISIS445569为WO2012/012443和WO2012/012467中的较佳人类DMPK反义化合物。
某些化合物
在某些实施方案中，本文公开的化合物受益于相对于适当比较化合物(诸如ISIS445569)改良的活性和/或改良的可耐受性。例如，在某些实施方案中，ISIS598769、ISIS598768和/或ISIS486178具有比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更大的活性和/或可耐受性。
在某些实施方案中，本文公开的化合物比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更强力。例如，如实例10(本文所述)中所提供，当使用电穿孔转染时，在培养的HepG2细胞中，根据6点剂量反应曲线(61.7nM、185.2nM、555.6nM、1666.7nM、5000.0nM和15000.0nM)，ISIS598769达成IC501.9μM，ISIS598768达成IC501.2μM，并且ISIS486178达成IC500.7μM，而ISIS445569达成IC502.3μM。因此，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178比比较化合物ISIS445569更强力。
在某些实施方案中，在跨越多个不同肌肉组织达成剂量依赖性抑制DMPK方面，本文公开的化合物具有比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更大的活性。在另一实例中，如实例16(本文所述)中所提供，当一周两次持续4周以25mg/kg/周、50mg/kg/周或100mg/kg/周向DMSXL转基因小鼠皮下施用时，ISIS598768和ISIS598769跨越若干不同肌肉组织达成比比较化合物ISIS445569更大的剂量依赖性抑制。在一些肌肉组织中，例如在胫骨前肌中，ISIS598768与ISIS598769两者在25、50和100mg/kg/周下均达成比ISIS445569在200mg/kg/周下达成的抑制更大的对DMPK的抑制。在四头肌和腓肠肌中，ISIS598768与ISIS598769两者在50mg/kg/周下均达成与ISIS445569在100或200mg/kg/周下达成的抑制相等或比其更大的对DMPK的抑制。因此，在跨越多个不同肌肉组织达成剂量依赖性抑制DMPK方面，ISIS598768和ISIS598769具有比ISIS445569更大的活性。
在某些实施方案中，当向CD-1小鼠施用时，本文公开的化合物比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更可耐受。在另一实例中，如实例17(本文所述)中所提供，当向CD-1小鼠施用时，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178展现比ISIS445569更有利的可耐受性标记。ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178是在50mg/kg/周下一周两次持续6周皮下施用。ISIS445569是在100mg/kg/周下一周两次持续6周皮下施用。在治疗之后，ISIS486178和ISIS598768治疗的小鼠中的ALT、AST和BUN含量低于ISIS445569治疗的小鼠中的含量。在治疗之后，ISIS598769治疗的小鼠中的ALT和AST含量低于ISIS445569治疗的小鼠中的含量。因此，在CD-1小鼠中，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178比比较化合物ISIS445569更可耐受。
在某些实施方案中，当向Sprague-Dawley大鼠施用时，本文公开的化合物比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更可耐受。在另一实例中，如实例18(本文所述)中所提供，当向Sprague-Dawley大鼠施用时，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178展现比ISIS445569更有利的可耐受性标记。ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178是在50mg/kg/周下一周两次持续6周皮下施用。ISIS445569是在100mg/kg/周下一周两次持续6周皮下施用。在治疗之后，ISIS486178、ISIS598769和ISIS598768治疗的小鼠中的ALT和AST含量低于ISIS445569治疗的小鼠中的含量。因此，在Sprague-Dawley大鼠中，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178比比较化合物ISIS445569更可耐受。
在某些实施方案中，在食蟹猕猴中，本文公开的化合物展现比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更有利的可耐受性标记。在另一实例中，如实例19(本文所述)中所提供，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178在食蟹猕猴中展现更有利可耐受性标记，包括丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸去氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)评估结果。在某些实施方案中，ALT和AST含量用作肝细胞毒性的指标。例如，在某些实施方案中，ALT和AST含量升高指示对肝细胞的创伤。在某些实施方案中，CK含量升高与对肌肉组织中的细胞的损害相关。在某些实施方案中，LDH含量升高与细胞组织损害相关。
在某些实施方案中，当向食蟹猕猴施用时，本文公开的化合物比适当比较化合物(诸如ISIS445569)更可耐受。如实例19中所提供，各组食蟹猕猴用40mg/kg/周的ISIS598769、ISIS598768、ISIS486178和ISIS445569治疗。在治疗的93天，用ISIS445569治疗导致ALT和AST含量升高。相较于ISIS445569，在治疗的58和93天，用ISIS598768和ISIS486178治疗导致ALT和AST含量更低。相较于ISIS445569，在治疗的58和93天，用ISIS598769治疗导致AST含量更低，并且在治疗的93天，ALT含量更低。此外，接受各剂量的ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178的猴的ALT和AST含量与给与生理盐水的猴的ALT和AST含量一致。在治疗的93天，相较于在给与ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178的动物中测量的LDH含量，用ISIS445569治疗导致LDH含量升高。另外，在治疗的93天，相较于在给与ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178的动物中测量的CK含量，用ISIS445569治疗导致CK含量升高。因此，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178比比较化合物ISIS445569更可耐受。
如以上论述的数据所证明，相较于比较化合物ISIS445569，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178具有的ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178具有活性所处的良好耐受剂量的范围更宽。另外，本文实例中呈现和以上论述的数据总体证明ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178中的每一个具有超过比较化合物ISIS445569的许多的安全性和活性优势。换句话说，在人类中，ISIS598769、ISIS598768和ISIS486178中每一个可能为比ISIS445569更安全且更具活性的药物。
在某些实施方案中，在人类中，ISIS445569可能为比WO2012/012443和/或WO2012/012467中公开的其他化合物更安全且更具活性用于降低CUGexpDMPKmRNA和\或治疗与患有1型肌强直性营养不良相关的病状或症状的药物。
在某些实施方案中，ISIS512497在灵长类动物和CD-1小鼠中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。在某些实施方案中，当在相同剂量下和在较低剂量下施用时，ISIS512497达成比ISIS445569更大的对多个肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。
在某些实施方案中，ISIS486178在小鼠、大鼠和灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。在某些实施方案中，当在相同剂量下和在较低剂量下施用时，ISIS486178达成比ISIS445569更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。
在某些实施方案中，当在相同剂量下和在较低剂量下施用时，ISIS570808达成比ISIS445569大得多的对至少五种不同肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。
在某些实施方案中，当在与ISIS445569相同的剂量下施用时，ISIS594292达成更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。在某些实施方案中，ISIS486178在灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。
在某些实施方案中，当在与ISIS445569相同的剂量下施用时，ISIS569473达成更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。在某些实施方案中，ISIS569473在灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。
在某些实施方案中，当在与ISIS445569相同的剂量下施用时，ISIS594300达成更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。在某些实施方案中，ISIS594300在灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。
在某些实施方案中，当在与ISIS445569相同的剂量下施用时，ISIS598777达成更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。在某些实施方案中，ISIS598777在灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。
在某些实施方案中，当在与ISIS445569相同的剂量下施用时，ISIS598768达成更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。在某些实施方案中，ISIS598768在灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。
在某些实施方案中，当在与ISIS445569相同的剂量下施用时，ISIS598769达成更大的对一种或多种肌肉组织中的人类DMPK核酸的敲低。在某些实施方案中，ISIS598769在灵长类动物中具有比ISIS445569更佳的安全性概况。
非限制性公开和以引用的方式并入
尽管本文所述的某些化合物、组合物和方法已根据某些实施方案特地描述，但以下实例仅用于说明本文所述的化合物且不意欲限制本文所述的化合物。本申请中叙述的参考文献、GenBank登录号和其类似物中的每一个以全文引用的方式并入本文中。
尽管随附于此申请的序列表根据需要将每个序列鉴别为“RNA”或“DNA”，但实际上，那些序列可用任何化学修饰组合修饰。本领域的技术人员将易于了解这种“RNA”或“DNA”的用以描经修饰的寡核苷酸的名称在某些情况下为随意的。例如，包含含有2’-OH糖部分和胸腺嘧啶碱基的核苷的寡核苷酸可描述为具有经修饰的糖(2’-OH针对DNA的天然2’-H)的DNA或具有经修饰的碱基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)针对RNA的天然尿嘧啶)的RNA。
因此，本文提供的核酸序列(包括但不限于序列表中的核酸序列)意欲涵盖含有天然或经修饰的RNA和/或DNA的任何组合的核酸，包括但不限于这种具有经修饰的核苷碱基的核酸。进一步举例且不加限制而言，具有核苷碱基序列“ATCGATCG”的寡聚化合物涵盖具有这种核苷碱基序列(无论经修饰的或未经修饰的)的任何寡聚化合物，包括但不限于包含RNA碱基的这种化合物，诸如具有序列“AUCGAUCG”的那些和具有一些DNA碱基和一些RNA碱基者(诸如“AUCGATCG”)的那些和具有其他经修饰的或天然存在的碱基的寡聚化合物，诸如“ATmeCGAUCG”，其中meC指示在5位处包含甲基的胞嘧啶碱基。
实例
非限制性公开和以引用的方式并入
尽管本文所述的某些化合物、组合物和方法已根据某些实施方案特地描述，但以下实例仅用于说明本文所述的化合物且不意欲限制本文所述的化合物。本申请中叙述的参考文献中的每一个以全文引用的方式并入本文中。
实例1：设计靶向人类肌强直性营养不良蛋白激酶(hDMPK)的反义寡核苷酸
一系列反义寡核苷酸(ASO)经设计以靶向hDMPK。新设计的ASO是使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成法制备并且描述于下表1和2中。下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；下标“e”指示2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷；并且下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷。“mC”指示5-甲基胞嘧啶核苷。
使反义寡核苷酸靶向SEQIDNO:1(GENBANK登录号NM_001081560.1)和/或SEQIDNO:2(从核苷酸18540696至18555106截短的GENBANK登录号NT_011109.15的互补序列)。“起始位点”指示人类基因序列中由间隔体所靶向的5’最近核苷。“终止位点”指示人类基因序列中由间隔体所靶向的3’最近核苷。
表1
靶向hDMPK和靶向SEQIDNO2的反义寡核苷酸的设计
表2
靶向hDMPK和靶向SEQIDNO1的反义寡核苷酸的设计
实例2：对人类骨骼肌细胞(hSKMc)中的人类DMPK的反义抑制
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用10,000nM反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下培养的hSKMc细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA且通过定量实时PCR测量DMPK转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照细胞的DMPK表达百分比。
表3、4、5和6中的反义寡核苷酸为5-10-5间隔体，其中间隔段包含十个2’-脱氧核苷并且每个翼段包含五个2’-MOE核苷。在整个每个间隔体中的核苷间键都是硫代磷酸酯(P＝S)键。在整个每个间隔体中的所有胞嘧啶残基都是5-甲基胞嘧啶。‘目标起始位点’指示人类基因组基因序列中由反义寡核苷酸所靶向的5’最近核苷。‘目标终止位点’指示人类基因组序列中由反义寡核苷酸所靶向的3’最近核苷。表3、4或5中所列的所有反义寡核苷酸都靶向SEQIDNO:1(GENBANK登录号NM_001081560.1)。表6中所列的所有反义寡核苷酸都靶向SEQIDNO:2(从核苷酸18540696至18555106截短的GENBANK登录号NT_011109.15的互补序列)。
表2、3、4和5中的若干反义寡核苷酸显示在以上指定条件下显著抑制DMPKmRNA含量。
表3
由靶向SEQIDNO:1的5-10-5间隔体对hSKMc中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表4
由靶向SEQIDNO:1的5-10-5间隔体对hSKMc中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表5
由靶向SEQIDNO:1的5-10-5间隔体对hSKMc中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表6
由靶向SEQIDNO:2的5-10-5间隔体对hSKMc中的人类DMPKRNA转录物的抑制
实例3：设计靶向人类肌强直性营养不良蛋白激酶(hDMPK)的反义寡核苷酸
一系列反义寡核苷酸(ASO)经设计以靶向hDMPK。新设计的ASO是使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成法制备并且描述于下表7中。下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；下标“e”指示2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷；并且下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷。“mC”指示5-甲基胞嘧啶核苷。
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用4,500nM反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下培养的HepG2细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA且通过定量实时PCR测量DMPK转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照细胞的DMPK表达百分比。
‘目标起始位点’指示人类基因组基因序列中由反义寡核苷酸所靶向的5’最近核苷。‘目标终止位点’指示人类基因组序列中由反义寡核苷酸所靶向的3’最近核苷。表7中所列的所有反义寡核苷酸都靶向SEQIDNO:1(GENBANK登录号NM_001081560.1)。
若干反义寡核苷酸显示在以上指定条件下显著抑制DMPKmRNA含量。
表7
在靶向SEQIDNO:1下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
实例4：设计靶向人类肌强直性营养不良蛋白激酶(hDMPK)的反义寡核苷酸
剂量反应HepG2
一系列反义寡核苷酸(ASO)经设计以靶向hDMPK。新设计的ASO是使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成法制备并且描述于下表8中。下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；下标“e”指示2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷；并且下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷。“mC”指示5-甲基胞嘧啶核苷。
使反义寡核苷酸靶向SEQIDNO:1(GENBANK登录号NM_001081560.1)。“起始位点”指示人类基因序列中由间隔体所靶向的5’最近核苷。“终止位点”指示人类基因序列中由间隔体所靶向的3’最近核苷。
表8
靶向hDMPK的反义寡核苷酸的设计
实例5：剂量反应HepG2
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对人类DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用625nM、1250nM、2500nM、5000nM和10000.0nM浓度的每个反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下的培养的HepG2细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA并且通过使用引物探针组RTS3164(正向序列AGCCTGAGCCGGGAGATG，在本文中指定为SEQIDNO:20；逆向序列GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT，在本文中指定为SEQIDNO:21；探针序列AGGCCATCCGCACGGACAACCX，在本文中指定为SEQIDNO:22)进行定量实时PCR来测量DMPKRNA转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整人类DMPKRNA转录物含量。结果在下表中呈现为相对于未处理对照(UTC)细胞的人类DMPK表达百分比。测试的反义寡核苷酸序列显示在以上指定条件下剂量依赖性抑制人类DMPKmRNA含量。
表9
在靶向SEQIDNO:1下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
实例6：设计靶向人类肌强直性营养不良蛋白激酶(hDMPK)的反义寡核苷酸
一系列反义寡核苷酸(ASO)经设计以靶向hDMPK。新设计的ASO是使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成法制备并且描述于下表10中。下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；下标“e”指示2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷；并且下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷。“mC”指示5-甲基胞嘧啶核苷。
使反义寡核苷酸靶向SEQIDNO:2(从核苷酸18540696至18555106截短的GENBANK登录号NT_011109.15的互补序列)。“起始位点”指示人类基因序列中由间隔体所靶向的5’最近核苷。“终止位点”指示人类基因序列中由间隔体所靶向的3’最近核苷。
表10
靶向hDMPK的反义寡核苷酸的设计
实例7：靶向HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的ASO的剂量反应
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对人类DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用625nM、1250nM、2500nM、5000nM和10000.0nM浓度的每个反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下的培养的HepG2细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA并且通过使用引物探针组RTS3164(正向序列AGCCTGAGCCGGGAGATG，在本文中指定为SEQIDNO:20；逆向序列GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT，在本文中指定为SEQIDNO:21；探针序列AGGCCATCCGCACGGACAACCX，在本文中指定为SEQIDNO:22)进行定量实时PCR来测量DMPKRNA转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整人类DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照(UTC)细胞的人类DMPK表达百分比并且显示于下表中。测试的反义寡核苷酸序列显示在以上指定条件下剂量依赖性抑制人类DMPKmRNA含量。
表11
在靶向SEQIDNO:1下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
实例8：经设计以靶向人类DMPKRNA转录物的ASO
一系列反义寡核苷酸(ASO)经设计以靶向hDMPK。新设计的ASO是使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成法制备并且描述于下表12中。下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；下标“e”指示2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷；并且下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷。“mC”指示5-甲基胞嘧啶核苷。
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用800nM反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下培养的hSKMC细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA且通过定量实时PCR测量DMPK转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照细胞的DMPK表达百分比。
‘目标起始位点’指示人类基因组基因序列中由反义寡核苷酸所靶向的5’最近核苷。‘目标终止位点’指示人类基因组序列中由反义寡核苷酸所靶向的3’最近核苷。表12中所列的所有反义寡核苷酸都靶向SEQIDNO:1(GENBANK登录号NM_001081560.1)。
若干反义寡核苷酸显示在以上指定条件下显著抑制DMPKmRNA含量。
表12
使用靶向SEQIDNO:1的ASO对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
实例9：经设计以靶向人类DMPKRNA转录物的ASO
一系列反义寡核苷酸(ASO)经设计以靶向hDMPK。新设计的ASO是使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成法制备并且描述于下表13至18中。下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；下标“e”指示2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷；并且下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷。“mC”指示5-甲基胞嘧啶核苷。
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用4,500nM反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下培养的HepG2细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA且通过定量实时PCR测量DMPK转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照细胞的DMPK表达百分比，其中“目标表达％”表示相对于未处理对照细胞的DMPK表达百分比
表13中所列的所有反义寡核苷酸都靶向SEQIDNO:1(GENBANK登录号NM_001081560.1)。表14至18中所列的所有反义寡核苷酸都靶向SEQIDNO:2(从核苷酸18540696至18555106截短的GENBANK登录号NT_011109.15的互补序列)。‘目标起始位点’指示人类基因组基因序列中由反义寡核苷酸所靶向的5’最近核苷。‘目标终止位点’指示人类基因组序列中由反义寡核苷酸所靶向的3’最近核苷。
表13
在靶向SEQIDNO:1下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表14
在靶向SEQIDNO:2下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表15
在靶向SEQIDNO:2下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表16
在靶向SEQIDNO:2下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表17
在靶向SEQIDNO:2下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
表18
在靶向SEQIDNO:2下对HepG2细胞中的人类DMPKRNA转录物的抑制
实例10：用靶向HepG2细胞中的人类肌强直性营养不良蛋白激酶(DMPK)的反义寡核苷酸进行的剂量反应研究
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对人类DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用61.7nM、185.2nM、555.6nM、1666.7nM、5000.0nM和15000.0nM浓度的每个反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下的培养的HepG2细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA并且通过使用引物探针组RTS3164(正向序列AGCCTGAGCCGGGAGATG，在本文中指定为SEQIDNO:20；逆向序列GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT，在本文中指定为SEQIDNO:21；探针序列AGGCCATCCGCACGGACAACCX，在本文中指定为SEQIDNO:22)进行定量实时PCR来测量DMPKRNA转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整人类DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照(UTC)细胞的人类DMPK表达百分比。例如，如果UTC为100并且5000nM剂量的ISIS编号445569产生人类DMPK表达％35，则相对于UTC，5000nM剂量的ISIS使人类DMPK表达降低65％。每个寡核苷酸的半数最大抑制性浓度(IC50)呈现于下表中并且是通过相对于在每个浓度下达成的人类DMPKmRNA表达抑制百分比绘制所用寡核苷酸的浓度，并且指示相较于对照，达成对人类DMPKmRNA表达的50％抑制所处的寡核苷酸浓度来计算。结果呈现于表19中。
测试的反义寡核苷酸序列显示在以上指定条件下剂量依赖性抑制人类DMPKmRNA含量。
表19
用靶向HepG2细胞中的hDMPK的反义寡核苷酸进行的剂量反应研究
实例11：用靶向斯泰奈特(Steinert)DM1肌母细胞中的人类肌强直性营养不良蛋白激酶(hDMPK)的反义寡核苷酸进行的剂量反应研究
测试靶向人类DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对人类DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用61.7nM、185.2nM、555.6nM、1666.7nM、5000.0nM和15000.0nM浓度的每个反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下的培养的斯泰奈特(Steinert)DM1肌母细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA且通过使用上述引物探针组RTS3164进行定量实时PCR来测量DMPKRNA转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整人类DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照(UTC)细胞的人类DMPK表达百分比(％)。每个寡核苷酸的半数最大抑制性浓度(IC50)呈现于下表中并且是通过相对于在每个浓度下达成的人类DMPKmRNA表达抑制百分比绘制所用寡核苷酸的浓度，并且指示相较于对照，达成对人类DMPKmRNA表达的50％抑制所处的寡核苷酸浓度来计算。结果呈现于表20中。
测试的反义寡核苷酸序列显示在以上指定条件下剂量依赖性抑制人类DMPKmRNA含量。
表20
用靶向斯泰奈特DM1细胞中的hDMPK的反义寡核苷酸进行的剂量反应研究
实例12：用靶向食蟹猕猴初生肝细胞中的恒河猴肌强直性营养不良蛋白激酶(DMPK)的反义寡核苷酸进行的剂量反应研究
测试靶向恒河猴DMPK核酸的反义寡核苷酸在活体外对恒河猴DMPKRNA转录物的影响。使用电穿孔，用61.7nM、185.2nM、555.6nM、1666.7nM、5000.0nM和15000.0nM浓度的每个反义寡核苷酸转染在每孔20,000个细胞的密度下的培养的食蟹猕猴初生肝细胞。在约24小时之后，从细胞分离RNA且通过使用上述引物探针组RTS3164进行定量实时PCR来测量DMPKRNA转录物含量。根据如通过测量的总RNA含量调整恒河猴DMPKRNA转录物含量。结果呈现为相对于未处理对照(UTC)细胞的恒河猴DMPK表达百分比(％)。每个寡核苷酸的半数最大抑制性浓度(IC50)呈现于下表中并且是通过相对于在每个浓度下达成的恒河猴DMPKmRNA表达抑制百分比绘制所用寡核苷酸的浓度，并且指示相较于对照，达成对恒河猴DMPKmRNA表达的50％抑制所处的寡核苷酸浓度来计算。
测试的反义寡核苷酸序列显示在以上指定条件下剂量依赖性抑制恒河猴DMPKmRNA含量。
表21
用靶向食蟹猕猴初生肝细胞中的恒河猴DMPK的反义寡核苷酸进行的剂量反应研究
实例13：活体内反义抑制DMSXL转基因小鼠中的hDMPK
为测试反义抑制治疗1型肌强直性营养不良(DM1)的效应，需要适当小鼠模型。产生携带具有超过1000个CTG重复序列的大型扩增部分的hDMPK基因的转基因小鼠模型DMSXL(Huguet等人,PLOSGenetics,2012,8(11),e1003034-e1003043)。这些DMSXL小鼠表达突变hDMPK对偶基因并且显示与在DM1患者中所见的肌肉无力表型类似的肌肉无力表型。
选择来自表1的ISIS486178并且测试其对hDMPK转录物的活体内反义抑制。ISIS445569包括在研究中以用于比较。
治疗
DMSXL小鼠是根据12小时光照/黑暗循环加以维持并且随意喂食正常Purina小鼠食物。在启始实验之前，在研究设施中驯化动物至少7天。在PBS中制备反义寡核苷酸(ASO)并且通过经0.2微米过滤器过滤来灭菌。将ASO溶解于0.9％PBS中以供注射。
DMSXL小鼠每周两次持续4周接受皮下注射ISIS445569(在50mg/kg下)或ISIS486178(在25mg/kg下)。对照组每周两次持续4周接受皮下注射PBS。每个治疗组由4个动物组成。
抑制hDMPKmRNA含量
在末次剂量后24小时，处死小鼠并且收集组织。分离mRNA以对hDMPK进行实时PCR分析并且相对于18sRNA加以校正。使用人类引物探针组RTS3164测量mRNA含量。结果表示为每个治疗组相对于PBS对照的hDMPKmRNA含量平均百分比。
人类引物探针组RTS3164(正向序列AGCCTGAGCCGGGAGATG，在本文中指定为SEQIDNO:20；逆向序列GCGTAGTTGACTGGCGAAGTT，在本文中指定为SEQIDNO:21；探针序列AGGCCATCCGCACGGACAACCX，在本文中指定为SEQIDNO:22)。
如下表22中所呈现，用反义寡核苷酸治疗使hDMPK转录物表达降低。结果指示用ISIS445569和486178治疗导致DMSXL小鼠中的hDMPKmRNA含量降低。
表22
反义寡核苷酸对DMSXL小鼠中的hDMPK的抑制效应
实例14：在靶向hDMPK下ASO治疗对DMSXL小鼠的肌肉强度的影响
抓握测试
使用如文献中所述的商品化抓握强度测力计评估小鼠的野生型(WT)和DMSXL前肢的抓握强度表达(Huguet等人,PLOSGenetics,2012,8(11),e1003034-e1003043)。
DMSXL小鼠每周两次持续4周接受皮下注射ISIS486178(在25mg/kg下)或ISIS445569(在50mg/kg下)。对照DMSXL组每周两次持续4周接受皮下注射PBS。每个治疗组由4个动物组成。在第0、30和60天使用抓握测试测量每个治疗组和WT的前肢力量。通过测量第60天与第0天之间的力量差异来确定抓握强度表达。结果呈现为每个组的平均前肢力量。
如下表23中所说明，相较于未治疗对照，用靶向hDMPK的ASO治疗使DMSXL小鼠的肌肉强度得以改良。相较于具有MOE修饰的ISIS445569(+0.38)，ISIS486178(具有cEt修饰的ASO)显示使前肢强度实质性改良(+3.4)。
表23
在靶向hDMPK下ASO治疗对DMSXL小鼠的肌肉强度的影响
实例15：在靶向hDMPK下ASO治疗对DMSXL小鼠的肌肉纤维分布的影响
也评估在靶向hDMPK下在存在和不存在ISIS445569和486178下，DMSXL小鼠中的肌肉纤维分布。两种ASO均先前描述于上表1中。
DMSXL小鼠每周两次持续4周接受皮下注射ISIS486178(在25mg/kg下)或ISIS445569(在50mg/kg下)。对照DMSXL组每周两次持续4周接受皮下注射PBS。每个治疗组由4个动物组成。评估肌肉纤维分布并且结果呈现于下表44中。
如所说明，相较于未治疗对照，用靶向hDMPK的ASO治疗使DMSXL小鼠的胫骨前肌(TA)中的DM1相关2c型肌肉纤维的分布降低。结果证明可用ASO治疗恢复骨骼肌中的正常纤维分布样式。相较于未治疗对照，ISIS445569显示使肌肉纤维分布改良；然而，ISIS486178(具有cEt修饰的ASO)显示肌肉纤维分布与野生型小鼠中所见的肌肉纤维分布更一致。
表24
在靶向hDMPK下ASO治疗对DMSXL小鼠的肌肉纤维分布的影响
实例16：对DMSXL转基因小鼠中的hDMPK的剂量依赖性反义抑制
在剂量-反应研究中进一步评估来自上表1的新设计的ASO在活体内对hDMPK转录物的反义抑制。ISIS445569包括在研究中以用于比较。
治疗
DMSXL小鼠是根据12小时光照/黑暗循环加以维持并且随意喂食正常Purina小鼠食物。在启始实验之前，在研究设施中驯化动物至少7天。在PBS中制备反义寡核苷酸(ASO)并且通过经0.2微米过滤器过滤来灭菌。将ASO溶解于0.9％PBS中以供注射。
DMSXL小鼠接受皮下注射PBS或来自上表1的靶向hDMPK的ASO。在下表25中的指示剂量下每周两次持续4周用ASO给药。对照组每周两次持续4周接受皮下注射PBS。每个治疗组由4个动物组成。
抑制hDMPKmRNA含量
在末次剂量后48小时，处死小鼠并且分离来自胫骨前肌、四头肌(左)、腓肠肌、心脏和横隔膜的组织。分离mRNA以对hDMPK进行实时PCR分析并且相对于加以校正。使用人类引物探针组RTS3164测量mRNA含量。概述于下下表25中的结果是从各种剂量-反应研究独立产生的。结果呈现为每个治疗组相对于PBS对照的hDMPKmRNA表达量平均百分比。
如所呈现，用反义寡核苷酸治疗以剂量依赖性方式降低hDMPK转录物表达。
表25
对DMSXL小鼠中的hDMPKmRNA含量的剂量依赖性抑制
TA＝胫骨前肌；Quad＝四头肌；Gastroc＝腓肠肌
实例17：在CD-1小鼠中进行的六周活体内可耐受性研究
在6周研究中进一步评估来自上表1的新设计的ASO以评估血浆化学、身体/器官重量和组织学。向各组CD-1小鼠施用100mg/kg/周的ISIS445569或ISIS512497。向另外各组CD-1小鼠施用50mg/kg/周的ISIS486178、ISIS570808、ISIS594292、ISIS598768、ISIS598769、ISIS569473、ISIS594300和ISIS598777。在每个组小鼠接受末次剂量后六周和两天之后，处死小鼠并且收集组织以进行分析。对于每组小鼠，测量用以测量丙氨酸转氨酶含量、天冬氨酸转氨酶含量、血液尿素氮(BUN)含量、白蛋白含量、总胆红素和肌酸含量的分析。另外，也测量器官重量，其结果呈现于下表中。
表26
CD-1小鼠中的血浆化学
表27
CD-1小鼠的身体和器官重量
ISIS编号 *肾％BW *肝％BW *脾％BW
PBS 1.00 1.00 1.00
486178 1.05 1.05 1.03
445569 1.07 1.09 1.23
570808 0.94 1.27 1.43
594292 1.03 1.03 1.16
598768 1.14 1.08 0.97
598769 0.97 1.05 1.04
512497 0.99 1.17 1.38
569473 1.02 1.01 1.09
594300 1.14 1.07 1.02
598777 1.05 1.20 1.01
*超过生理盐水对照组的倍数变化
实例18：在Sprague-Dawley大鼠中进行的六周活体内可耐受性研究
在6周研究中进一步评估来自上表1的新设计的ASO以评估血浆化学、身体/器官重量和组织学。向各组Sprague-Dawley大鼠施用100mpk/周的ISIS445569或ISIS512497。向另外各组Sprague-Dawley大鼠施用50mpk/周的ISIS486178,ISIS570808,ISIS594292,ISIS598768,ISIS598769,ISIS569473,ISIS594300和ISIS598777。在每个组小鼠接受末次剂量后六周和两天之后，处死小鼠并且收集组织以进行分析。对于每组小鼠，测量用以测量丙氨酸转氨酶含量、天冬氨酸转氨酶含量、血液尿素氮(BUN)含量、白蛋白含量、总胆红素、肌酸含量和尿肌酸含量的分析。另外，也测量器官重量，其结果呈现于下表中。
表28
在Sprague-Dawley大鼠中进行的血浆化学和尿分析
表29
在Sprague-Dawley大鼠中进行的血浆化学和尿分析
ISIS编号 肾(倍数)* 肝(倍数)* 脾(倍数)*
生理盐水 1 1 1
569473 1.46 1.20 0.82
512497 1.03 1.22 1.94
598768 0.92 0.92 1.49
598769 0.93 1.04 0.98
570808 1.18 0.98 2.43
598777 1.07 0.93 2.31
445569 1 1.13 3.25
594300 1.03 1.04 1.94
486178 0.87 0.89 1.45
594292 1.08 1.01 2.04
*超过生理盐水对照组的倍数变化
实例19：在食蟹猕猴中进行的十三(13)周活体内研究
通过皮下注射向各组4只雄性食蟹猕猴施用40mg/kg/周的ISIS445569、ISIS512497、ISIS486178、ISIS570808、ISIS594292、ISIS598768、ISIS598769、ISIS569473、ISIS594300和ISIS598777。在首次剂量后十三周，处死动物并且进行组织分析。分离mRNA以对恒河猴DMPK进行实时PCR分析并且相对于加以校正。使用引物探针组RTS3164(上述)测量mRNA含量并且结果显示于下表30中。另外，再分离mRNA以使用引物探针组RTS4447对恒河猴DMPK进行实时PCR分析并且相对于加以校正，并且结果显示于下表31中。RTS4447(正向序列AGCCTGAGCCGGGAGATG，在本文中指定为SEQIDNO:20；逆向序列GCGTAGTTGACTGGCAAAGTT，在本文中指定为SEQIDNO:21；探针序列AGGCCATCCGCATGGCCAACC，在本文中指定为SEQIDNO:22)。
表30
在使用引物探针组RTS3164下的对食蟹猕猴中的DMPKmRNA含量的剂量依赖性抑制
表31
在使用引物探针组RTS4447下的对食蟹猕猴中的DMPKmRNA含量的剂量依赖性抑制
实例20：在食蟹猕猴中进行的十三(13)周活体内可耐受性研究
在第1、3、5和7天，通过皮下注射向各组雄性食蟹猕猴施用40mg/kg的ISIS445569、ISIS512497、ISIS486178、ISIS570808、ISIS594292、ISIS598768、ISIS598769、ISIS569473、ISIS594300和ISIS598777。在第7天施用之后，通过皮下注射向每个猴施用40mg/kg/周的ISIS445569、ISIS512497、ISIS486178、ISIS570808、ISIS594292、ISIS598768、ISIS598769、ISIS569473、ISIS594300和ISIS598777。
在第28和91天，在每个猴接受皮下剂量后48小时，获取血液和尿样品以进行分析。一些猴在第56天给予的剂量后48小时被获取血液和尿。测量治疗组中每个动物的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸去氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)并且平均值呈现于下表中。具有负号的样品天数值表示在治疗开始之前的时间点。例如，治疗天数值-7表示在首次剂量前7天获取的样品。在首次剂量后十三周，处死动物并且进行组织分析。
表32
在食蟹猕猴中进行的血浆化学和尿分析

Claims (167)

1.一种包含由10-30个连接的核苷组成且具有核苷碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，核苷碱基序列包含含有至少8个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域。
2.如权利要求1所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸中至少一个核苷包含选自以下的双环糖：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
3.如权利要求1至2中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为DMPK核酸的外显子9。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述互补区域包含至少10个互补于DMPK转录物的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
5.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述互补区域包含至少12个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
6.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述互补区域包含至少14个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
7.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述互补区域包含至少16个互补于DMPK核酸的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基。
8.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中所述DMPK核酸为DMPK前mRNA。
9.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中所述DMPK核酸为DMPKmRNA。
10.如权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中所述DMPK核酸具有选自以下的核苷碱基序列：SEQIDNO:1和SEQIDNO:2。
11.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少10个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
12.如权利要求1至10所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少12个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
13.如权利要求1至10所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少14个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
14.如权利要求1至10所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含含有至少16个互补于SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的具有相等长度的靶区域的连续核苷碱基的互补区域的核苷碱基序列。
15.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基1343至核苷碱基1368。
16.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基1317至核苷碱基1366。
17.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基2748至核苷碱基2791。
18.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:1的核苷碱基730至核苷碱基748。
19.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基8603至核苷碱基8619。
20.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基13836至核苷碱基13851。
21.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基10201至核苷碱基10216。
22.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述靶区域为自SEQIDNO.:2的核苷碱基10202至核苷碱基10218。
23.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有在所述寡核苷酸的整个长度上至少80％互补于所述靶区域的核苷碱基序列。
24.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有在所述寡核苷酸的整个长度上至少90％互补于所述靶区域的核苷碱基序列。
25.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有在所述寡核苷酸的整个长度上至少100％互补于所述靶区域的核苷碱基序列。
26.如权利要求1至25中任一项所述的化合物，其具有包含在SEQIDNO:23-874的任一个中叙述的序列的至少8个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
27.如权利要求1至25中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少10个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
28.如权利要求1至25中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少12个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
29.如权利要求1至25中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少14个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
30.如权利要求1至25中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23-32中叙述的序列的至少16个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
31.如权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:23中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
32.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:25中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
33.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:26中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
34.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:27中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
35.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:28中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
36.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:29中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
37.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:30中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
38.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:31中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
39.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有由SEQIDNO:32中叙述的所述序列组成的核苷碱基序列。
40.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、24、25、26、27、28、29、30、31或32中叙述的所述序列的核苷碱基序列。
41.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:23、25、26、27、28、29、30、31或32中叙述的所述序列的核苷碱基序列。
42.如权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:33-874中任一个叙述的所述序列的核苷碱基序列。
43.如权利要求1至42中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核苷碱基序列至少90％互补于SEQIDNO:1-19中的任一个。
44.如权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核苷碱基序列100％互补于SEQIDNO:1-19中的任一个。
45.如权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
46.如权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成。
47.如权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由18个连接的核苷组成。
48.如权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由19个连接的核苷组成。
49.如权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
50.如权利要求1至49中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸为单股寡核苷酸。
51.如权利要求1至50中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的糖。
52.如权利要求1至51中任一项所述的化合物，其中至少两个核苷包含经修饰的糖。
53.如权利要求52所述的化合物，其中每个所述经修饰的糖具有相同修饰。
54.如权利要求52所述的化合物，其中至少一个所述经修饰的糖具有不同修饰。
55.如权利要求51至54中任一项所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖为双环糖。
56.如权利要求55所述的化合物，其中所述双环糖选自以下：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
57.如权利要求56所述的化合物，其中所述双环糖包含cEt。
58.如权利要求56所述的化合物，其中所述双环糖包含LNA。
59.如权利要求56所述的化合物，其中所述双环糖包含α-L-LNA。
60.如权利要求56所述的化合物，其中所述双环糖包含ENA。
61.如权利要求56所述的化合物，其中所述双环糖包含2’-硫代LNA。
62.如权利要求1至61中任一项所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖包含2’-取代的核苷。
63.如权利要求62所述的化合物，其中所述2’-取代的核苷选自以下：2’-OCH3、2’-F和2’-O-甲氧基乙基。
64.如实施方案1至63中任一项所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
65.如权利要求1至64中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的核苷碱基。
66.如权利要求65所述的化合物，其中所述经修饰的核苷碱基为5-甲基胞嘧啶。
67.如权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。
68.如权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含：
a.由连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由连接的核苷组成的5’翼段；
c.由连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷包含经修饰的糖。
69.如权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成。
70.如权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成。
71.如权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由18个连接的核苷组成。
72.如权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由19个连接的核苷组成。
73.如权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
74.如权利要求68至73中任一项所述的化合物，其中所述5’翼段由两个连接的核苷组成。
75.如权利要求68至73中任一项所述的化合物，其中所述5’翼段由三个连接的核苷组成。
76.如权利要求68至73中任一项所述的化合物，其中所述5’翼段由四个连接的核苷组成。
77.如权利要求68至73中任一项所述的化合物，其中所述5’翼段由五个连接的核苷组成。
78.如权利要求68至73中任一项所述的化合物，其中所述5’翼段由六个连接的核苷组成。
79.如权利要求68至78中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段由两个连接的核苷组成。
80.如权利要求68至78中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段由三个连接的核苷组成。
81.如权利要求68至78中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段由四个连接的核苷组成。
82.如权利要求68至78中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段由五个连接的核苷组成。
83.如权利要求68至78中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段由六个连接的核苷组成。
84.如权利要求68至83中任一项所述的化合物，其中所述间隔段由六个连接的脱氧核苷组成。
85.如权利要求68至83中任一项所述的化合物，其中所述间隔段由七个连接的脱氧核苷组成。
86.如权利要求68至83中任一项所述的化合物，其中所述间隔段由八个连接的脱氧核苷组成。
87.如权利要求68至83中任一项所述的化合物，其中所述间隔段由九个连接的脱氧核苷组成。
88.如权利要求68至83中任一项所述的化合物，其中所述间隔段由十个连接的脱氧核苷组成。
89.如权利要求1至31、33、37至45或51至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷包含双环糖。
90.如权利要求1至31、33、37至45或51至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有AABB5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有BBAA3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间。
91.如权利要求1至30、34、35、46或50至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有AAABB5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有BBAAA3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间。
92.如权利要求1至31、33、37至45或51至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
93.如权利要求1至30、34、35、46或50至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，并且其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖。
94.如权利要求1至30、32、33或49至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间，并且其中每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖。
95.如权利要求1至31、33、34、37至45或53至88中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷包含cEt糖。
96.如权利要求1至67中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少8个互补于SEQIDNO.:1的核苷碱基1343和核苷碱基1368内的靶区域的连续核苷碱基，并且其中所述经修饰的寡核苷酸包含：
a.由连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由连接的核苷组成的5’翼段；
c.由连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间并且其中每个翼段的每个核苷包含经修饰的糖。
97.如权利要求96所述的化合物，其中所述5’翼段中的每个经修饰的糖具有相同修饰。
98.如权利要求96所述的化合物，其中所述5’翼段中的至少两个经修饰的糖具有不同修饰。
99.如权利要求96至98中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段中的每个经修饰的糖具有相同修饰。
100.如权利要求96至98中任一项所述的化合物，其中所述3’翼段中的至少两个经修饰的糖具有不同修饰。
101.如权利要求96所述的化合物，其中至少一个经修饰的糖为选自以下的双环糖：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
102.如权利要求90至91所述的化合物，其中每个B表示选自以下的双环糖：cEt、LNA、α-L-LNA、ENA和2’-硫代LNA。
103.如权利要求102所述的化合物，其中所述双环糖包含BNA。
104.如权利要求102所述的化合物，其中所述双环糖包含cEt。
105.如权利要求102所述的化合物，其中所述双环糖包含LNA。
106.如权利要求102所述的化合物，其中所述双环糖包含α-L-LNA。
107.如权利要求102所述的化合物，其中所述双环糖包含ENA。
108.如权利要求102所述的化合物，其中所述双环糖包含2’-硫代LNA。
109.如权利要求90或91所述的化合物，其中每个A表示选自以下的2’-取代的核苷：2’-OCH3、2’-F和2’-O-甲氧基乙基。
110.如权利要求109所述的化合物，其中所述2’-取代的核苷包含2’-O-甲氧基乙基。
111.如权利要求1至111中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷间键为经修饰的核苷间键。
112.如权利要求1至111中任一项所述的化合物，其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键。
113.一种化合物，其由ISIS486178组成。
114.一种化合物，其由ISIS512497组成。
115.一种化合物，其由ISIS598768组成。
116.一种化合物，其由ISIS594300组成。
117.一种化合物，其由ISIS594292组成。
118.一种化合物，其由ISIS569473组成。
119.一种化合物，其由ISIS598769组成。
120.一种化合物，其由ISIS570808组成。
121.一种化合物，其由ISIS598777组成。
122.一种具有如SEQIDNO:23中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含双环糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
123.一种具有如SEQIDNO:29中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含双环糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
124.一种具有如SEQIDNO:31中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由三个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由三个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含双环糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
125.一种具有如SEQIDNO:26中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
126.一种具有如SEQIDNO:30中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
127.一种具有如SEQIDNO:32中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16个连接的核苷组成并且包含：
a.由八个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由四个连接的核苷组成且具有E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由四个连接的核苷组成且具有K-K-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
128.一种具有如SEQIDNO:27中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
129.一种具有如SEQIDNO:28中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由17个连接的核苷组成并且包含：
a.由七个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成且具有E-E-E-K-K5’翼基元的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成且具有K-K-E-E-E3’翼基元的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个E表示2’-O-甲氧基乙基糖并且每个K表示cEt糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
130.一种具有如SEQIDNO:25中阐述的核苷碱基序列的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成并且包含：
a.由十个连接的脱氧核苷组成的间隔段；
b.由五个连接的核苷组成的5’翼段；
c.由五个连接的核苷组成的3’翼段；
d.其中所述间隔段位于所述5’翼段与所述3’翼段之间；
e.其中每个翼段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；
f.其中每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；并且
g.其中每个胞嘧啶残基为5-甲基胞嘧啶。
131.如权利要求1至130中任一项所述的化合物，其包含共轭物。
132.一种组合物，其包含如权利要求1至131中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
133.一种治疗动物中DM1的方法，其包括向有需要的动物施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物。
134.如权利要求133所述的方法，其中所述化合物降低DMPKmRNA含量。
135.如权利要求133所述的方法，其中所述化合物降低DMPK蛋白表达。
136.如权利要求133所述的方法，其中所述化合物降低CUGexpDMPK。
137.如权利要求133所述的方法，其中所述化合物优先降低CUGexpDMPK。
138.如权利要求133所述的方法，其中所述化合物降低CUGexpDMPKmRNA。
139.如权利要求133所述的方法，其中所述化合物优先降低CUGexpDMPKmRNA。
140.如权利要求138或139所述的方法，其中所述CUGexp的优先降低是在肌肉组织中。
141.一种减轻动物的MBLN依赖性剪接病变的方法，其包括向有需要的动物施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物。
142.一种减轻动物中MBLN依赖性剪接病变的方法，其包括向有需要的动物施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物。
143.如权利要求142所述的方法，其中Serca1、m-Titin、Clcn1和Zasp中任一个的剪接得以矫正。
144.如权利要求133至143中任一项所述的方法，其中所述施用为全身性施用。
145.如权利要求133至143中任一项所述的方法，其中所述施用为非经肠施用。
146.如权利要求144所述的方法，其中所述全身性施用为皮下施用、静脉内施用、脑室内施用和鞘内施用中任一种。
147.如权利要求133至143中任一项所述的方法，其中所述施用不是肌肉内施用。
148.如权利要求133至143中任一项所述的方法，其中所述动物为人类。
149.一种减轻有需要的动物的Serca1的剪接病变的方法，其是通过施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物，并且从而导致包括Serca1外显子22来达成。
150.一种减轻有需要的动物中m-Titin的剪接病变的方法，其是通过施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物，并且从而导致包括m-Titin外显子5来达成。
151.一种减轻有需要的动物中Clcn1的剪接病变的方法，其是通过施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物，并且从而导致包括Clcn1外显子7a来达成。
152.一种减轻有需要的动物中Zasp的剪接病变的方法，其是通过施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物，并且从而导致包括Zasp外显子11来达成。
153.一种降低细胞中DMPKmRNA的方法，其包括使细胞与如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物接触。
154.一种降低细胞中DMPK蛋白的方法，其包括使细胞与如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物接触。
155.一种降低细胞中CUGexpmRNA的方法，其包括使细胞与如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物接触。
156.如权利要求153至155中任一项所述的方法，其中所述细胞是在动物中。
157.如权利要求156所述的方法，其中所述动物是人类。
158.一种达成CUGexpDMPKRNA的优先降低的方法，其包括：
a.选择患有1型肌强直性营养不良或具有CUGexpDMPKRNA的受试者；以及
b.向所述受试者施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物；
其中如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物在结合所述CUGexpDMPKRNA时活化核糖核酸酶，从而达成所述CUGexpDMPKRNA的优先降低。
159.一种达成CUGexpDMPKRNA的优先降低的方法，其包括：
a.选择患有1型肌强直性营养不良或具有CUGexpDMPKRNA的受试者；以及
b.向所述受试者全身性施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物；
其中所述化学修饰的反义寡核苷酸在结合所述CUGexpDMPKRNA时达成所述CUGexpDMPKRNA的优先降低。
160.一种减轻怀疑患有1型肌强直性营养不良或具有核保留的CUGexpDMPKRNA的受试者的剪接病变的方法，其包括：
向所述受试者施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物，
其中如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的组合物在结合所述突变DMPKRNA时活化核糖核酸酶，从而减轻剪接病变。
161.一种在动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变的方法，其包括向所述动物施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的药物组合物，其中所述化合物降低所述动物中DMPK表达，从而在所述动物中优先降低CUGexpDMPKRNA、减轻肌强直或减轻剪接病变。
162.一种用于治疗患有1型肌强直性营养不良的动物的方法，其包括
鉴别所述患有1型肌强直性营养不良的动物，
向所述动物施用治疗有效量的如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的药物组合物，
其中所述患有1型肌强直性营养不良的动物得以治疗。
163.一种降低DMPK表达的方法，其包括向动物施用如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的药物组合物，其中DMPK的表达得以降低。
164.如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的药物组合物，其是用于治疗动物的DM1。
165.如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的药物组合物，其是用于减轻动物的肌强直。
166.如权利要求1至131中任一项所述的化合物或如权利要求132所述的药物组合物，其是用于减轻动物的MBLN依赖性剪接病变。
167.如权利要求1至131中任一项的化合物或如权利要求132所述的药物组合物的用途，其是用于制备用于治疗1型肌强直性营养不良或其症状的药剂。
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