KR20160036640A - Rna―암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 방법 - Google Patents

Rna―암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 방법

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KR20160036640A
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Abstract

본 발명은 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임(open reading frame)을 포함하고, 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 변형된 RNA에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 제트 인젝션(jet injection)에 의해 개체에 투여되는 이러한 변형된 RNA의 의학적 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 제트 인젝션에 의한 투여용 상기 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물 및 부품 키트(kit of parts)에 관한 것이며, 바람직하게 유전자 치료 및/또는 유전적 백신 접종(genetic vaccination) 분야에서 사용하기 위한 것이다. 또한, 본 발명은 제트 인젝션에 의해 변형된 RNA를 투여하는 단계를 포함하는 (포유동물의) 피부(dermis) 또는 근육에 RNA-암호화된 펩타이드 또는 단백질의 (국소(localized)) 발현을 강화하는 방법에 관한 것이다. 그리고 마지막으로, 본 발명은 제트 인젝션에 의해 변형된 RNA를 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법에 관한 것이다.

Description

RNA―암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 방법{Method for increasing expression of RNA-encoded proteins}
본 발명은 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임(open reading frame)을 포함하고, 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 변형된 RNA에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 제트 인젝션(jet injection)에 의해 개체에 투여되는 이러한 변형된 RNA의 의학적 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 제트 인젝션에 의한 투여용 상기 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물 및 부품 키트(kit of parts)에 관한 것이며, 바람직하게 유전자 치료 및/또는 유전적 백신 접종(genetic vaccination) 분야에서 사용하기 위한 것이다. 또한, 본 발명은 제트 인젝션에 의해 변형된 RNA를 투여하는 단계를 포함하는 (포유동물의) 피부(dermis) 또는 근육에 RNA-암호화된 펩타이드 또는 단백질의 (국소(localized)) 발현을 강화하는 방법에 관한 것이다. 그리고 마지막으로, 본 발명은 제트 인젝션에 의해 변형된 RNA를 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법에 관한 것이다.
유전자 치료(gene therapy) 및 유전적 백신 접종(genetic vaccination)은 근대 의학의 가장 유망하고 빠르게 개발되는 방법에 속한다. 그들은 매우 다양한 질환(disease)의 치료를 위한 특이적이고 각각의 옵션(option)을 제공할 수 있다. 특히, 선천성 유전적 질환(inherited genetic disease) 뿐만 아니라 자가 면역 질환(autoimmune disease), 감염성 질환(infectious disease), 암성(cancerous) 또는 종양-연관 질환 뿐만 아니라 염증성 질환(inflammatory disease)은 이러한 치료 접근법의 대상이 될 수 있다. 또한, 이들 접근법에 의해 이와 같은 질환의 (조기) 발병을 예방하는 것이 예상된다.
유전자 치료의 주요 개념의 합리적인 근거는 특정 질환의 병리학적 상태와 관련된 손상된(impaired) 유전자 발현의 적절한 조절이다. 병리학적으로 변화된 유전자 발현은 필수적인 유전자 산물의 부족 또는 과생산을 초래할 수 있으며, 예를 들어, 호르몬과 같은 신호전달 인자, 하우스키핑(housekeeping) 인자, 대사 효소(metabolic enzyme), 구조 단백질 등이 있다. 변화된 유전자 발현은 전사 및/또는 번역의 오조절(mis-regulation) 때문일 뿐만 아니라, 특정 단백질을 암호화하는 ORF 내의 돌연변이 때문일 수 있다. 병리학적 돌연변이는 예를 들어, 염색체 이상(chromosomal aberration), 또는 점 돌연변이 또는 구조-이동 돌연변이와 같은 보다 특이적 돌연변이에 의해 발생할 수 있으며, 이들 모두 잠재적으로 제한된 기능 및 유전자 산물의 기능의 총 손실이 발생할 수 있다. 그러나, 전사 및/또는 번역의 오조절은 또한 발생할 수 있고, 돌연변이가 단백질을 암호화하는 유전자에 영향을 준다면, 이는 세포의 전사 또는 번역 기계(machinery)에 포함된다. 이러한 돌연변이는 유전자의 병리학적 상향- 또는 하향-조절로 이어질 수 있고, 이는 - 이러한 - 기능적이다. 이러한 조절하는 기능을 발휘하는 유전자 산물을 암호화하는 유전자는 예를 들어, 전사 인자, 신호 수용체, 전령 단백질 등일 수 있다. 그러나, 이러한 조절 단백질을 암호화하는 유전자의 기능 손실은, 특정 상황하에서, 손상된 유전자 산물의 추가적인 다운스트림(downstream)으로 행동하는 다른 인자의 인공적인 도입에 의해 반전된다. 이러한 유전자 결함(defect)은 또한 영향을 받는 유전자 자체의 치환을 통한 유전자 치료에 의해 보상될 수 있다.
상기 두 방법에서 알 수 있는 바와 같이, 유전자 치료 및 유전적 백신 접종은 환자에 핵산 분자의 투여 및 이후의 암호화된 유전적 정보의 전사 및/또는 번역에 본질적으로 기초한다.
유전자 치료 또는 유전적 백신 접종의 맥락에서, RNA 뿐만 아니라 DNA는 투여를 위한 핵산 분자로서 사용될 수 있다. DNA는 상대적으로 안정하고 다루기 쉬운 것으로 알려져 있다. 그러나, DNA의 사용은 손상된 유전자의 기능의 손실이 잠재적으로 발생하는 환자의 유전체 내로 투여된 DNA-절편의 원하지 않은 삽입의 위험을 갖는다. 추가의 위험으로, 항-DNA 항체의 원하지 않은 생성이 나타나는 것이다. 또 다른 문제점은, DNA 투여 및 이의 이후의 전사/번역에 의해 달성될 수 있는 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 한정된 발현 수준이다. 다른 인자들 중에서, DNA 전사를 조절하는 특정 전사 인자의 존재는 투여된 DNA의 발현 수준에 주요한 영향을 갖는다. 이러한 인자의 부재에서, DNA 전사는 만족스러운 양의 RNA를 산출할 수 없다. 결과적으로, 수득된 번역된 펩타이드 또는 단백질의 수준은 한정된다.
유전자 치료 또는 유전적 백신 접종을 위해 DNA 대신 RNA를 이용함으로써, 원하지 않는 유전체 통합(genomic integration) 및 항-DNA 항체의 생성의 위험은 최소화되거나 완전히 회피할 수 있다. 그러나, RNA는 다소 불안정한 분자 종류로 간주된다. 한편으로는, 세포 외 공간에서, RNA는 거의 유비쿼터스 RNAses에 의해 분해될 수 있다. 다른 한편으로는, 세포질 내 생체 내(in vivo) mRNA 반감기는, mRNA 분자 내 시스-작용 요소에, 적어도 부분적으로 따라 효소 mRNA 붕괴의 속도에 의해 한정된다. 그렇게 함으로써, mRNA의 조절된 분해(degradation)는 진핵생물 유전자 발현의 우수한 조절에 기여한다(Friedel et al., Conserved principles of mammalian transcriptional regulation revealed by RNA half-life, Nucleic Acid Research, 2009, 1-12). 따라서, 각각의 자연적으로 발생하는 mRNA는, mRNA가 유래된 유전자에 따라 이의 개별적인 반감기를 갖는다.
몇 년 동안, 일반적으로 mRNA는 유전자 치료 목적을 위해 효과적으로 사용되기에는 너무 불안정하다고 받아들여졌다. 그러나 지난 10년간, 여러 연구 그룹은 이 시험대와 직면하였고 형질전환 효율 및 단백질 발현의 지속과 관련된 놀라운 결과를 가진 mRNA-매개 형질전환의 가능성을 증명하였을 뿐만 아니라, pDNA의 사용을 통해 주요한 장점을 증명할 수 있었다. 이들 장점 중 하나는 mRNA가 발현될 이의 암호화된 단백질을 위한 핵 장벽(nuclear barrier)을 통과할 필요가 없는 상황이다(Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469에 검토됨).
유전자 치료 및 유전적 백신 접종을 위해, 변형되고 따라서 안정화된 RNA는 보통 신속하게 붕괴되는 비변형된 RNA보다 보통 더욱 적합하다. 한편으로는, RNA-서열에 의해 암호화된 생산물은 생체 내(in vivo)에 축적하는 것이 바람직하다. 다른 한편으로는, RNA는 적절한 투여 형태로 제조될 때, 그리고 투여될 때, 이의 저장 과정에서, 이의 구조적 및 기능적 무결성(integrity)을 유지한다. 따라서, 그들이 조기 분해 또는 붕괴되는 것을 예방하기 위해서, 유전자 치료 또는 유전적 백신 접종에 안정한 RNA 분자를 제공하기 위해 상당한 노력이 이루어졌다.
세포 내로 도입 이후, (비-안정화) mRNA의 반감기는 제한된다. 결과적으로, 이러한 mRNA에 의해 암호화된 단백질의 생산은 최대 며칠 동안 유지된다. 명백하게, 이 사실은 (비-안정화) mRNA-기반 유전자 치료의 적용을 제한한다. 이는 반복적인 투여를 요구하기 때문에, 예를 들어, 유전 질환을 정정하는데 사용될 수 없다(Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469에서 검토됨).
상기 언급된 바와 같이, mRNA는, 특히 분해 효소에 노출된 세포질에 도달하면 일반적으로 DNA와 비교하여 상당히 불안정한 것으로 간주된다. 이의 불안정성의 주요 이유는 당 모이어티의 두 번째 탄소 원자상의 하이드록실기이며, 이는, 입체 장애(sterical hindrance) 때문에 mRNA가 안정한 이중 β-나선 구조를 취하는 것을 예방하고 이는 분자를 더욱 가수 분해하는 경향으로 만든다. 세포 내 mRNA 전달의 최초 보고는 회의적이었고, 이는 mRNA가 매우 불안정하고 형질전환 프로토콜을 견딜 수 없다는 믿음이 주요 원인이었다.
상기 언급된 바와 같이, RNA의 장점 중 하나는 이의 발현이 세포의 세포질로 RNA를 전달하기 위해 발생하는 것이 충분하다(핵막을 통과해야만 하는 DNA와 대조적으로). 그러나, 나출(naked) 핵산 분자는 이의 큰 크기 및 음이온으로 대전된 포스페이트기에 기인하는 친수성 본질 때문에 효과적으로 세포에 들어가지 않는다. 추가적으로, 그들은 뉴클레아제-매개 분해에 매우 민감하다. 따라서, 유전자 치료를 위한 도전은 세포로 RNA 전달에 효과적이고 안전한 수단을 개발하는 것이다.
일반적으로, 바이러스 및 비-바이러스 전달 방법은 설명되어 있다(예를 들어, Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469 참조). 안전 및 공정 경제(process economy)와 관련하여, 비-바이러스 방법이 보통 바람직하다. 이들 방법 중 일부는 세포막 장벽 기능의 물리적 차단에 기초하는 반면에, 다른 것들은 전달된 유전자의 분해없이 표적 세포로 유전자 도입을 용이하게 하기 위해서 양이온성 담체 분자를 이용한다.
나출 mRNA의 흡수 메카니즘에 대한 첫 번째 통찰력은 주사에 의한 피내 투여를 연구하는 마우스 연구에 의해 얻어진다. 이러한 맥락에서, 피부의 세포 내로의 국소 입구는 포화 가능하도록 전환될 수 있다고 보여주며, 확정된 단백질 수준은 mRNA의 피내 주사에 의해서만 도달할 수 있다는 의미이다. 더욱 정교한 작업은 실험관 내(in vitro) 흡수의 포화성(saturability)을 확인하였고 또한 온도 및 투여량 의존인 것을 증명하였다(Schlake et al.; RNA Biology 9:11, 1-12; November 2012에서 검토됨).
지금까지, 피내 주사(intradermal injection)는 mRNA-기반 어플리케이션(application)을 위해 가장 빈번하게 사용되며, 이후 유출(draining) 림프절로 수송되는 랑게르한스 세포(Langerhans' cell) 및 피부 DC에 의해 mRNA의 흡수를 허용하는 것이 추정된다(Van Lint et al.; Human Vaccines & Immunotherapeutics 9:2, 248-257; February 2013에서 검토됨). RNA를 전달하기 위해서 사용되는 다른 투여 경로는, 근육내 주사(intramuscular injection), 절내 주사(intranodal injection)(림프절내 주사) 및 종양내 주사(intratumoral injection)를 포함한다.
백신으로서 RNA를 사용하는 실험으로부터 분명할 뿐만 아니라, 생체 내(in vivo) 이종(heterologous) mRNA의 도입에 의해 매개된 단백질 발현은 일반적으로 가능하고, 검출 가능한 면역 반응을 높이기 위해 충분하다. 그러나, 효과적인 면역 반응을 높이고, 더욱 더, mRNA-매개 단백질 공급에 의한 치료 효과를 달성하는 것은 단백질 발현에 필요한 수준의 관점에서 더욱 요구될 수 있다.
개체의 세포 내로 RNA를 효과적으로 전달하는 것은 따라서 여전히 이종 RNA에 의해 세포 내로 도입된 단백질의 효과적인 발현에 장애물(bottleneck)로 나타난다. RNA-기반 약제(medicament)의 치료 효과는, 특히 유전자 치료의 분야에서 치료 RNA 분자에 암호화된 유전자 생산물의 효과적인 발현에 대체로 달려있다.
따라서, 본 발명의 목적은 세포 또는 조직 내로 도입되는 RNA 분자에 포함되는 유전적 정보의 발현을 증가시키는 것이다. 특히, 본 발명의 목적은 유전자 치료 또는 유전적 백신 접종 및 개체에 투여되는 RNA 분자에서 암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 것이다.
본 발명의 근본적인 목적은 청구 대상에 의해 해결된다.
본 발명의 요약
본 발명은 의학적 용도를 위한, 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임(ORF) 및 암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 RNA("변형된 RNA")를 제공하며, 여기서 변형된 RNA는 개체에 제트 인젝션에 의해 투여된다. 특히, 본 발명은 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 변형된 RNA를 제공하며, 이의 발현은 제트 인젝션에 의해 추가로 증가된다. 또한, 제트 인젝션에 의한 투여용 상기 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물 및 부품 키트(kit of parts)를 제공하며, 바람직하게 유전자 치료 및/또는 유전적 백신 접종 분야에서 사용하기 위한 것이다. 또한, 본 발명은 적어도 하나의 변형으로서, RNA에 암호화된 단백질의 발현을 증가시키는 변형을 포함하는 각각의 RNA를 제트 인젝션에 의해 단백질 발현을 증가시키는 방법을 제공한다.
요약하자면, 본 발명의 목적은 변형된 RNA의 제공에 의해 해결되며, 여기서 표적 조직 또는 표적 세포에서 암호화된 단백질의 발현은 제트 인젝션에 의해 추가적으로 증가된다.
명확성 및 가독성을 위해 다음의 정의가 제공된다. 이들 정의에 대해 언급된 임의의 기술적 특징은 본 발명의 각각 및 모든 양태에서 이해될 수 있다. 이들 양태의 맥락에서 추가의 정의 및 설명이 특히 제공될 수 있다. 본 발명의 맥락에서 핵산 서열이 보고된 곳에서, 이들 서열은 일반적으로 특정 RNA 또는 DNA 서열 뿐만 아니라 이의 상응하는 DNA 또는 RNA 대응물(counterpart) 각각 모두를 포함한다. 예를 들어, DNA 서열이 제공된 곳에서, 통상의 기술자는 상응하는 RNA 서열은 우라실 잔기에 의한 티민 교환에 의해 수득되고 반대로도 같은 것을 알고있다.
유전자 치료: 유전자 치료는 일반적으로 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 핵산에 의한 환자의 신체 또는 환자의 신체의 분리된 요소(element), 예를 들어 분리된 조직/세포의 치료를 의미한다. 이는 일반적으로 a) 핵산, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 RNA 분자를 - 어떤 투여 경로에 의해 - 직접 환자에게 또는 생체 내(in vivo)/생체 외(ex vivo) 또는 시험관 내(in vitro) 환자의 세포의 형질전환을 초래하는 시험관 내에서(in vitro) 환자의 분리된 세포/조직에 투여; b) 도입된 핵산 분자의 전사 및/또는 번역; 그리고 선택적으로 c) 핵산이 직접 환자에게 투여되지 않았다면, 환자에게 분리된, 형질전환된 세포의 재투여의 단계 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
유전적 백신 접종: 유전적 백신 접종은 일반적으로 항원 또는 면역원 또는 이들의 절편을 암호화하는 핵산 분자의 투여에 의한 백신 접종으로 이해될 수 있다. 핵산 분자는 개체의 신체 또는 개체의 분리된 세포에 투여될 수 있다. 신체의 특정 세포의 형질전환에 따라, 또는 분리된 세포의 형질전환에 따라, 항원 또는 면역원은 그들 세포에 의해 발현될 수 있고 이후에 적응, 즉 항원-특이적 면역 반응을 유발하는 면역 시스템에 제시될 수 있다. 따라서, 유전적 백신 접종은 일반적으로 a) 핵산, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 RNA 분자를 개체에, 바람직하게는 환자에게, 또는 생체 내(in vivo)/생체 외(ex vivo) 또는 시험관 내(in vitro) 환자의 세포의 형질전환을 보통 초래하는 개체, 바람직하게는 환자의 분리된 세포에 투여; b) 도입된 핵산 분자의 전사 및/또는 번역; 및 선택적으로 c) 핵산이 직접 환자에게 투여되지 않았다면, 개체, 바람직하게는 환자에게 분리된, 형질전환된 세포의 재투여의 단계 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
면역 시스템: 면역 시스템은 유기체를 감염으로부터 보호할 수 있다. 만약 병원체가 유기체의 물리적 장벽을 뚫고 유기체로의 침입에 성공하면, 선천적 면역 시스템은 즉시, 단 비-특이적인 반응을 제공한다. 만약 병원체가 이러한 선천적 반응을 회피(evade)하면, 척추동물은 보호의 두번째 층, 적응 면역 시스템을 갖는다. 여기에 면역 시스템은 병원체의 이의 인식을 증가시키기 위해 감염 동안 이의 반응을 맞춘다. 이러한 증진된 반응은 면역학적 기억의 형태로, 이후 병원체가 소멸된 이후에 남고, 이 병원체와 맞닥뜨릴 때마다 빠르고 강력한 공격을 시작하는 적응 면역 시스템을 허용한다. 이에 따라, 면역 시스템은 선천적 및 적응 면역 시스템을 포함한다. 이들 두 부분의 각각은 소위 체액성 및 세포성 성분을 함유한다.
적응 면역 시스템: 적응 면역 시스템은 본질적으로 병원체 성장을 제거 또는 억제(prevent)하기 위해 전념한다. 이는 일반적으로 특이적 병원체(면역을 발생시키는)를 인식 및 기억하고 병원체를 맞닥뜨릴 때마다 강한 공격을 시작하는 능력을 갖는 척추동물 면역 시스템을 제공함으로써 적응 면역 반응을 조절한다. 시스템은 체세포초돌연변이(somatic hypermutation)(가속된 체세포 돌연변이의 과정), 및 V(D)J 재조합(항원 수용체 유전자 부분(segments)의 비가역적 유전적 재조합)으로 인해 적응력이 매우 높다. 이러한 메커니즘은 이후 각 개별적인 림프구에 독특하게 발현된 이후, 다른 항원 수용체의 방대한 수를 발생시키는 유전자의 소수를 허용한다. 유전자 재배열은 각 세포의 DNA에 비가역적 변화를 일으키기 때문에, 수명이 긴 특이적 면역에 대해 핵심(key)인 기억 B 세포 및 기억 T 세포를 포함하는, 그 세포의 자손(progeny)(후손(offspring)) 모두는 이후 동일한 수용체 특이성을 암호화하는 유전자를 상속할 것이다.
선천적 면역 시스템: 일반적으로, 비-특이적(또는 불특이적) 면역 시스템으로도 알려진 선천적 면역 시스템은 비특이적 방식에 다른 유기체에 의한 감염으로부터 숙주를 방어하는 세포 및 메커니즘을 포함한다. 이는 선천적 면역 시스템의 세포는 일반적인 방법으로 병원체를 인식 및 반응하지만, 적응 면역 시스템과는 다르게 숙주에 오래 지속되거나 방어적 면역을 부여하지 않는 것을 의미한다. 선천적 면역 시스템은 예를 들어, 톨-유사 수용체(TLRs) 또는 리포폴리다당류(lipopolysaccharides), TNF-알파, CD40 리간드, 또는 사이토카인, 모노카인(monokines), 림포카인(lymphokines), 인터루킨(interleukins) 또는 케모카인(chemokines), IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IFN-알파, IFN-베타, IFN-감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타, TNF-알파, 성장 인자, 및 hGH, 인간 톨-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10의 리간드, 쥣과(murine) 톨-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 또는 TLR13의 리간드, NOD-유사 수용체의 리간드, RIG-I 유사 수용체의 리간드, 면역 자극성 핵산, 면역 자극성 RNA(isRNA), CpG-DNA, 항생제, 또는 항바이러스제와 같은 다른 보조(auxiliary) 물질에 의해 활성화될 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 이러한 물질을 포함할 수 있다. 일반적으로, 선천적 면역 시스템의 반응은 사이토카인으로 불리는 특수한 화학 조절자를 포함하는, 화학적 인자의 생산을 통해, 감염의 부위에 면역 세포를 모으는 것(recruiting); 보체 연쇄(cascade)의 활성화; 특수한 백혈구 세포에 의해 기관, 조직, 혈액 및 림프 내에 존재하는 외래 물질의 선별 및 제거; 적응 면역 시스템의 활성화; 및/또는 감염성 제제에 물리적 및 화학적 장벽으로서 활동하는 것을 포함한다.
면역 반응: 면역 반응은 일반적으로 특정한 항원에 대한 적응 면역 시스템의 특이적 반응(소위, 특이적 또는 적응 면역 반응) 또는 선천적 면역 시스템의 비특이적 반응(소위, 비특이적 또는 선천적 면역 반응), 또는 이들의 조합일 수 있다.
적응 면역 반응: 적응 면역 반응은 일반적으로 면역 시스템의 항원-특이적 반응으로 이해된다. 항원 특이성은 특이적 병원체 또는 병원체-감염된 세포에 맞춰진 반응의 발생을 허용한다. 이들 맞춰진 반응을 시작하는 능력은 "기억 세포"에 의해 체내에 유지된다. 병원체가 인체를 한번 이상 감염해야 하고, 이들 특이적 기억 세포는 이를 빠르게 제거하는데 사용된다. 이러한 맥락에서, 적응 면역 반응의 첫 번째 단계는 항원 제시 세포에 의한 항원 특이적 면역 반응을 유도할 수 있는 순수한 항원 특이적 T 세포 또는 상이한 면역 세포의 활성화이다. 이는 순수한 T 세포가 지속적으로 지나는 림프 조직 및 기관 내에서 발생한다. 항원 제시 세포로 제공될 수 있는 세 가지 세포 유형은 수상돌기세포, 대식세포, 및 B 세포이다. 이들 세포 각각은 면역 반응을 유도하는데 뚜렷한 기능을 갖는다. 수상돌기세포는 그들이 성숙 수상돌기세포로 분화하는 곳에서 식균작용(phagocytosis) 및 미세포음작용(micropinocytosis)에 의해 항원을 흡수할 수 있고, 예를 들어 국소 림프 조직에 외래 항원을 이동시킴과 함께 접촉에 의해 자극될 수 있다. 대식세포는 박테리아와 같은 입자 항원을 섭취하고 MHC 분자를 발현하는 감염성 제제 또는 다른 적절한 자극에 의해 유도된다. 그들의 수용체를 통해 용해성 단백질 항원을 결합 및 내재화(internalize)하는 B 세포의 특수한 능력은 T 세포를 유도하는데 또한 중요할 수 있다. MHC 분자는 일반적으로 T 세포에 항원을 제시하는 역할을 한다. MHC 분자에 항원의 제시는 무장(armed) 이펙터 T 세포 내로 그들의 증식 및 분화를 유도하는 T 세포의 활성화를 일으킨다. 이펙터 T 세포의 가장 중요한 기능은 함께 세포-매개 면역을 일으키는 CD8+ 세포독성 T 세포에 의해 감염된 세포의 사멸 및 Th1 세포에 의한 대식세포의 활성화, 및 그에 따라 체액성 면역 반응을 일으키는, 상이한 종류의 항체를 생산하는 Th2 및 Th1 모두에 의한 B 세포의 활성화이다. T 세포는 항원을 직접적으로 인식 및 결합하지 못하는 그들의 T 세포 수용체에 의해 항원을 인식하지만, 그러나 대신 다른 세포의 표면에 MHC 분자에 결합하는, 예를 들어 병원체 유래 단백질 항원, 예를 들어 소위 에피토프(epitope)의 짧은 펩타이드 절편을 인식한다.
세포 면역/세포 면역 반응: 세포 면역은 일반적으로 대식세포, 자연 살상 세포(natural killer cells, NK), 항원 특이적 세포독성 T-림프구의 활성화, 및 항원에 반응하는 다양한 사이토카인의 방출과 관련된다. 보다 일반적인 방식으로, 세포 면역은 항체뿐만 아니라 면역 시스템의 세포의 활성화에 기반하지 않는다. 일반적으로, 세포 면역 반응은 예를 들어, 그들의 표면에 외래 항원의 에피토프(epitopes)를 보이는 세포, 예를 들어, 수상돌기세포 또는 다른 세포와 같은 특이적 면역 세포 내에서 세포 사멸을 유도할 수 있는 항원 특이적 세포독성 T-림프구의 활성화로 특징될 수 있다. 이러한 세포는 바이러스 감염되거나 세포 내 박테리아에 감염되거나, 종양 항원을 보이는 암세포일 수 있다. 또한, 특징은 병원체를 파괴할 수 있는 대식세포 및 자연 살상 세포의 활성화 및 적응 면역 반응 및 선천적 면역 반응에 포함된 다른 세포의 기능에 영향을 주는 다양한 사이토카인을 방출하는 세포의 자극일 수 있다.
면역원: 본 발명의 맥락에서, 면역원은 일반적으로 면역 반응을 자극할 수 있는 화합물로 이해될 수 있다. 바람직하게, 면역원은 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질이다. 특히 바람직한 양태에서, 본 발명의 면역원이란 의미는 제공된 핵산 분자, 바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 핵산 분자의 번역의 산물이다. 일반적으로, 면역원은 적어도 적응 면역 반응을 이끌어낸다.
항원: 본 발명의 맥락에서, "항원"은 일반적으로 면역 시스템에 의해 인지될 수 있고, 바람직하게는 적응 면역 시스템에 의해, 예를 들어 적응 면역 반응의 일부로써 항체 및/또는 항원 특이적 T 세포의 형성을 통해, 항원 특이적 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 말한다. 일반적으로, 항원은 T 세포에 MHC에 의해 제시될 수 있는 펩타이드 또는 단백질일 수 있거나 포함할 수 있다.
에피토프 ( Epitope ): 에피토프(또한 "항원 결정요인"으로 불리우는)는 T 세포 에피토프 및 B 세포 에피토프로 구별할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, T 세포 에피토프 또는 단백질의 일부는 바람직하게는 약 6 내지 약 20개 또는 그 이상의 아미노산의 길이를 가지는 절편을 포함할 수 있으며, 예를 들어 MHC 클래스 I 분자에 의해 가공되고 제시된 절편, 바람직하게는 약 8 내지 약 10개 아미노산, 예를 들어 8, 9, 또는 10개, (또는 11개, 또는 12개 아미노산도)의 길이를 갖는, 또는 MHC 클래스 II 분자에 의해 가공되고 제시된 절편, 바람직하게는 약 13개 또는 그 이상의 아미노산, 예를 들어 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상의 아미노산의 길이를 가질 수 있고, 여기서, 이들 절편은 아미노산 서열의 임의의 일부로부터 선택될 수 있다. 이들 절편은 일반적으로 펩타이드 절편 및 MHC 분자로 이루어진 복합체의 형태로 T 세포에 의해 인식되고, 즉 절편은 일반적으로 그들의 천연 형태로 인식되지 않는다. B 세포 에피토프는 일반적으로 항체에 의해 인식될 수 있는, 즉 그들의 천연 형태에서, 바람직하게는 5 내지 15개 아미노산을 가지며, 보다 바람직하게는 5 내지 12개 아미노산을 가지며, 더욱 더 바람직하게는 6 내지 9개 아미노산을 갖는, 본원에 정의된 바와 같은 (천연) 단백질 또는 펩타이드의 외부 표면에 위치하는 절편이다.
이러한 단백질 또는 펩타이드의 에피토프는 또한 본원에 언급된 이러한 단백질 또는 펩타이드의 다양한 변이체로 부터 선택될 수 있다. 이러한 맥락에서, 항원 결정기(antigenic determinants)는 본원에 정의된 바와 같은 단백질 또는 펩타이드의 부분으로 구성된 배좌 또는 불연속적인 에피토프일 수 있고, 그러나 단일 폴리펩타이드 사슬로 구성된 3차원 구조 또는 연속적 또는 선형 에피토프와 합칠 수 있다.
어쥬번트 / 어쥬번트성분 (Adjuvant/adjuvant component): 넓은 의미의 어쥬번트 또는 어쥬번트 성분은 일반적으로 변형할 수 있는 약리학적 및/또는 면역학적 제제이며, 예를 들어, 약물 또는 백신과 같은 다른 제제의 효과를 향상시킨다. 이는 넓은 의미로 해석되어야 하고 물질의 넓은 스펙트럼을 나타낸다. 일반적으로, 이들 물질은 항원의 면역원성(immunogenicity)을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 어쥬번트 선천적 면역 시스템에 의해 인식될 수 있고, 예를 들어, 선천적 면역 시스템을 유발할 수 있다. "어쥬번트"는 일반적으로 적응 면역 반응을 유발하지 않는다. 그 범위에서, "어쥬번트"는 항원으로서 자격을 갖추고 있지 않다. 그들의 행동 방식은 적응 면역 반응의 결과로 항원에 의해 유발된 효과와 구별된다.
단백질: 일반적으로 단백질은 하나 이상의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함한다. 일반적으로 단백질은 생물학적 기능을 발휘하는 단백질을 위해 요구될 수 있는 3차원 형태로 접힌다.
펩타이드 : 일반적으로 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 연결된 아미노산 단량체의 폴리머이다. 이는 일반적으로 50 단량체 단위 미만으로 함유한다. 그렇지만, 용어 펩타이드는 50 단량체 단위를 초과하여 갖는 분자를 위한 권리를 포기하는 것은 아니다. 긴 펩타이드는 폴리펩타이드라고도 불리우며, 일반적으로 50 내지 600 단량체 단위를 갖는다.
단백질의 절편 또는 부분: 본 발명의 맥락에서, 단백질의 절편 또는 부분은 일반적으로 단백질의 아미노산 서열의 연속적인 부분에 상응하는 펩타이드로 이해될 수 있으며, 바람직하게는 약 6 내지 약 20개 또는 그 이상의 아미노산의 길이를 가지고, 예를 들어, MHC 클래스 I 분자에 의하여 가공되고 제시되는 부분, 바람직하게는 약 8 내지 약 10개 아미노산의 길이를 가지는, 예를 들어, 8, 9, 또는 10개, (또는 11, 또는 12개 아미노산도), 또는 MHC 클래스 II 분자에 의하여 가공 및 제시되는 절편, 바람직하게는 약 13개 또는 그 이상의 아미노산, 예를 들어, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상의 아미노산의 길이를 가지며, 여기서 이들 절편은 아미노산 서열의 임의의 부분으로부터 선택될 수 있다. 이들 절편은 일반적으로 펩타이드 절편 및 MHC 분자로 이루어지는 복합체의 형태로 T 세포에 의하여 인지될 수 있고, 즉 절편은 일반적으로 그들의 천연 형태로 인지되지 않는다. 본원에 정의된 바와 같은 단백질의 절편 또는 부분은 또한 이들 단백질의 에피토프 또는 기능부(functional site)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 맥락에서, 단백질의 절편 또는 부분은 항원, 특히 면역원, 예를 들어 항원 결정기(또한 '에피토프'로 불리우는)이거나 항원 특성(antigenic characteristics)을 갖고, 적응 면역 반응을 유도한다. 따라서, 단백질 또는 펩타이드의 절편은 적어도 하나의 이들 단백질 또는 펩타이드의 에피토프를 포함할 수 있다. 게다가 또한, 단백질의 도메인(domain)은, 세포 외 도메인, 세포 내 도메인 또는 막관통 도메인(transmembrane domain) 및 단백질의 짧거나 절단된 버전(versions)과 같이 단백질의 절편을 포함하는 것으로 이해될 수 있다.
약학적 유효량(Pharmaceutically effective amount): 본 발명의 맥락에서, 약학적 유효량은 일반적으로 발현된 펩타이드 또는 단백질의 병리학적 수준을 대체하는, 또는 결여 유전자 산물(lacking gene product)을 치환하는, 예를 들어, 병리학적 상황의 경우에 면역 반응과 같은 약학적 효과를 유도하기 위하여 충분한 양으로 이해된다.
서열 상동성 : 둘 이상의 서열은 만약 그들이 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 동일한 길이 및 순서를 나타낸다면 동일하다(상동성이 있다). 상동성의 백분율은 일반적으로 두 서열이 동일한 정도(extent)를 설명하며, 즉, 이는 일반적으로 그들의 서열 위치가 참조 서열(reference sequence)의 뉴클레오타이드와 상응하는 뉴클레오타이드의 백분율을 설명한다. 동일의 정도를 결정하기 위하여, 비교되는 서열은 동일한 길이, 즉, 비교될 서열의 가장 긴 서열의 길이를 나타내는 것으로 간주된다. 이는 8개 뉴클레오타이드로 이루어진 첫 번째 서열은 첫 번째 서열을 포함하는 10개 뉴클레오타이드로 이루어진 두 번째 서열과 80% 동일한 것을 의미한다. 다시 말하면, 본 발명의 맥락에서, 서열의 동일은 바람직하게는 동일한 길이를 가지는 둘 이상의 서열에서 동일한 위치를 가지는 서열의 뉴클레오타이드의 백분율과 관련된다. 갭(gap)은 보통 정렬에서 이들의 실제 위치와 관계없이, 비-동일 위치로 간주된다.
서열의 절편: 서열의 절편은, 일반적으로 예를 들어, 핵산 분자 또는 아미노산 서열의 총 길이 서열의 짧은 부분이다. 따라서, 절편은, 일반적으로, 총 길이 서열 내 상응하는 스트레치(stretch)와 동일한 서열로 이루어진다. 본 발명의 맥락에서, 서열의 바람직한 절편은 전체(즉, 총 길이) 분자의 적어도 30%, 더욱 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70%, 및 가장 바람직하게는 적어도 80%를 나타내는, 절편이 유래된 분자 내 독립체(entities)의 연속적인 스트레치에 상응하는 뉴클레오타이드 또는 아미노산과 같은 독립체의 연속적인 스트레치로 이루어진다.
핵산 분자의 서열: 핵산 분자의 서열은 일반적으로 특정하고 개별적인 순서, 즉 이의 뉴클레오타이드의 연속인 것으로 이해된다. 단백질 또는 펩타이드의 서열은 일반적으로 순서, 즉, 이의 아미노산의 연쇄(succession)인 것으로 이해된다.
안정화된 핵산 분자: 안정화된 핵산 분자는 핵산 분자이며, 바람직하게는, 변형 없는 핵산 분자보다, 예를 들어, 환경적 인자 또는 엑소- 또는 엔도뉴클레아제와 같은 효소 분해(digest)에 의한 붕괴(disintegration) 또는 분해(degradation)에 더 안정한, 그렇게 변형된 DNA 또는 RNA 분자이다. 바람직하게는, 본 발명의 맥락에서, 안정화된 핵산 분자는 원핵 또는 진핵 세포, 바람직하게는 인간 세포와 같은 포유동물 세포와 같은 세포에서 안정화된다. 안정화 효과는 또한 세포의 외부, 예를 들어, 버퍼 용액 등에서, 예를 들어, 안정화된 핵산 분자를 포함하는 약학적 조성물을 제조하는 공정에서 발휘될 수 있다.
이종 서열( Heterologous sequence): 일반적으로 두 서열은, 그들이 동일한 유전자로부터 이끌어낼 수 있는 것이 아니라면, '이종(heterologous)'으로 이해된다. 즉, 이종 서열은 동일한 유기체(organism)로부터 이끌어낼 수 있을 수 있지만, 그들은 동일한 mRNA에서와 같이, 동일한 핵산에서 자연적으로(자연에서) 발생하지 않는다.
핵산 분자: 핵산 분자는 바람직하게는 핵산 성분을 포함하는, 바람직하게는 이루어진 분자이다. 용어, 핵산 분자는 바람직하게는 DNA 또는 RNA를 나타낸다. 이는 바람직하게는 용어 "폴리뉴클레오타이드"와 동의어로 사용된다. 바람직하게, 핵산 분자는 뉴클레오타이드 단량체를 포함하거나 이로 이루어진 폴리머이며, 당/포스페이트-백본의 포스포디에스테르 결합에 의해 서로 공유 결합으로 연결되어 있다.
오픈 리딩 프레임(Open reading frame): 본 발명의 맥락에서, 오픈 리딩 프레임(ORF)은 일반적으로 펩타이드 또는 단백질로 번역될 수 있는 여러 뉴클레오타이드 트리플렛(triplets)의 서열일 수 있다. 오픈 리딩 프레임은 이의 5'-말단 및 보통 다중 3개 뉴클레오타이드 길이를 나타내는 후속 영역(subsequent region)에 바람직하게는 시작 코돈, 즉, 보통 아미노산 메티오닌을 암호화하는 이후의 세 뉴클레오타이드의 조합(ATG 또는 AUG)을 함유한다. ORF는 바람직하게는 정지-코돈(예를 들어, TAA, TAG, TGA)에 의하여 종결된다. 일반적으로, 이는 오직 오픈 리딩 프레임의 정지-코돈이다. 따라서, 본 발명의 맥락에서 오픈 리딩 프레임은 바람직하게는 시작 코돈(예를 들어, ATG 또는 AUG)으로 시작하고 바람직하게는 정지 코돈(예를 들어, TAA, TGA, 또는 TAG 또는 UAA, UAG, UGA, 각각)으로 종결되는 3으로 나뉘어질 수 있는 다수의 뉴클레오타이드로 이루어지는 뉴클레오타이드 서열이다. 오픈 리딩 프레임은 분리될 수 있거나 더 긴 핵산 서열, 예를 들어 벡터 또는 mRNA에 포함될 수 있다. 오픈 리딩 프레임은 또한 "단백질 암호화 영역"으로 불리울 수 있다.
DNA: DNA는 데옥시-리보핵-산에 대한 일반적인 약자이다. 이는 핵산 분자, 즉, 뉴클레오타이드로 이루어진 폴리머이다. 이러한 뉴클레오타이드는 보통 - 그들 스스로에 의해 - 당 모이어티(sugar moiety), 염기 모이어티 및 포스페이트 모이어티로 구성된 데옥시-아데노신-모노포스페이트, 데옥시-티미딘-모노포스페이트, 데옥시-구아노신-모노포스페이트 및 데옥시-사이티딘-모노포스페이트 단량체이며, 특유의 백본 구조에 의해 중합된다. 백본 구조는, 일반적으로, 단량체에 근접한 첫 번째 뉴클레오타이드의 당 모이어티 즉, 데옥시리보오스와 두 번째 포스페이트 모이어티 사이의 포스포디에스테르 결합에 의해 형성된다. 단량체의 특정 순서, 즉, 당/포스페이트-백본에 연결된 염기의 순서는 DNA-서열로 불리운다. DNA는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 이중 가닥 형태(double stranded form)에서, 첫 번째 가닥의 뉴클레오타이드는 일반적으로 두 번째 가닥의 뉴클레오타이드와 예를 들어, A/T-염기쌍 및 G/C-염기쌍으로 혼성화(hybridize)된다.
RNA, mRNA : RNA는 리보핵-산에 대한 일반적인 약자이다. 이는 핵산 분자 즉, 뉴클레오타이드로 이루어진 폴리머이다. 이들 뉴클레오타이드는 보통 소위 백본을 따라 서로 연결된 아데노신-모노포스페이트, 우리딘-모노포스페이트, 구아노신-모노포스페이트 및 사이티딘-모노포스페이드 단량체이다. 백본은 단량체에 근접한 첫 번째 당, 즉 리보오스, 및 두 번째 포스페이트 모이어티 사이에서 포스포디에스테르 결합에 의해 형성된다. 단량체의 특정 연쇄는 RNA-서열이라고 불리운다. 보통 RNA는 DNA-서열의 전사에 의해, 예를 들어, 세포 내부에서 수득 가능할 수 있다. 진행 세포에서, 전사는 일반적으로 핵 또는 미토콘드리아 내부에서 수행된다. 생체 내에서(In vivo), 보통 DNA의 전사는 보통 mRNA로 약칭하는 소위 전령-RNA로 가공되어야 하는 소위 미성숙 RNA(premature RNA)로 된다. 예를 들어, 진핵 유기체에서 미성숙 RNA의 가공은 스플라이싱(splicing), 5'-캡핑(capping), 아데닐산중합반응(polyadenylation), 핵 또는 미토콘드리아로부터 유출(export) 등의 다양한 상이한 전사 후-변형을 포함한다. 이들 가공의 합(sum)은 RNA의 성숙으로도 불리운다. 성숙 전령 RNA는 보통 특정 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열로 번역될 수 있는 뉴클레오타이드 서열을 제공한다. 일반적으로, 성숙 mRNA(mature mRNA)는 5'-캡(cap), 선택적으로 5'UTR, 오픈 리딩 프레임, 선택적으로 3'UTR 및 폴리(A) 서열을 포함한다. 전령 RNA 이외에, 여러 비-암호화 유형의 RNA가 존재하며, 이는 전사 및/또는 번역의 조절과 관련될 수 있다. 용어 "RNA"는 바이러스 RNA(viral RNA), 레트로바이러스 RNA(retroviral RNA) 및 레플리콘 RNA(replicon RNA)과 같은, 다른 암호화하는 RNA 분자를 또한 포함한다.
바이시스트로닉 RNA, 멀티시스트로닉 RNA( Bicistronic RNA, multicistronic RNA): 바이시스트로닉 또는 멀티시스트로닉 RNA는 일반적으로 두 개의(바이시스트로닉) 또는 그 이상의(멀티시스트로닉) 오픈 리딩 프레임(ORF)를 가질 수 있는 RNA, 바람직하게는 mRNA 이다. 이러한 맥락에서 오픈 리딩 프레임은 펩타이드 또는 단백질로 번역될 수 있는 코돈의 서열이다.
G/C 변형된: G/C-변형된 핵산은 일반적으로 바람직하게는 야생형 서열과 비교하여 증가된 수의 구아노신 및/또는 사이토신 뉴클레오타이드를 포함하는 변형된 야생형 서열에 기반한, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 RNA 분자일 수 있다. 이러한 증가된 수는 구아노신 또는 사이토신 뉴클레오타이드를 함유하는 코돈에 의해 아데노신 또는 티미딘 뉴클레오타이드를 함유하는 코돈의 치환에 의해 생성될 수 있다. 풍부한 G/C 함량이 DNA 또는 RNA의 암호화 영역에 발생하면, 이는 유전적 코드의 퇴화(degeneracy)를 사용한다. 따라서, 코돈 치환은 바람직하게는 암호화된 아미노산 잔기를 변경하지 않지만, 오로지 핵산 분자의 G/C 함량을 증가시킨다.
5'-캡(cap): 5'-캡(cap)은 독립체(entity), 일반적으로 변형된 뉴클레오타이드 독립체이며, 일반적으로 성숙한 mRNA의 5'-말단을 '덮는다(caps)'. 5'-캡(cap)은 일반적으로 변형된 뉴클레오타이드, 특히 구아닌 뉴클레오타이드의 유도체에 의해 형성될 수 있다. 바람직하게, 5'-캡(cap)은 5'-5'-트리포스페이트 결합을 통해 5'-말단에 연결된다. 5'-캡(cap)은 메틸화될 수 있고, 예를 들어, m7GpppN 이며, 여기서 N은 5'-캡(cap), 일반적으로 RNA의 5'-말단을 운반하는 핵산의 5' 뉴클레오타이드 말단이다. 자연적으로 발생하는 5'-캡(CAP)은 m7GpppN 이다.
면역자극성 RNA: 본 발명의 맥락에서 면역자극성 RNA(isRNA)는 일반적으로 선천적 면역 반응을 유도할 수 있는 RNA 일 수 있다. 이는 일반적으로 오픈 리딩 프레임을 갖지 않으며, 따라서 펩타이드-항원 또는 면역원을 제공하지 않으나, 예를 들어, 톨-유사-수용체(TLR) 또는 다른 적합한 수용체의 특정한 종류에 결합에 의한 선천적 면역 반응을 유발한다. 그러나 물론, 또한 오픈 리딩 프레임을 가지며 펩타이드/단백질을 암호화하는 mRNA는 선천적 면역 반응을 유도할 수 있으며, 따라서 면역자극성 RNA 일 수 있다.
폴리 (A) 서열: 폴리(A) 꼬리 또는 3'-폴리(A) 꼬리로도 불리우는 폴리(A) 서열은 일반적으로 아데닌 뉴클레오타이드의 서열로 이해될 수 있으며, 예를 들어, 최대 약 400개 아데닌 뉴클레오타이드, 예를 들어, 약 20 내지 약 400개, 바람직하게는 약 50 내지 약 400개, 더욱 바람직하게는 약 50 내지 약 300개, 더욱 더 바람직하게는 약 50 내지 약 250개, 가장 바람직하게는 약 60 내지 약 250개 아데닌 뉴클레오타이드이다. 폴리(A) 서열은 일반적으로 mRNA의 3' 말단에 위치한다. 본 발명의 맥락에서, 폴리(A) 서열은 mRNA 또는 예를 들어, 벡터에서, 예를 들어, RNA, 바람직하게는 mRNA의 생성을 위한 주형 역할을 하는 벡터와 같이 임의의 다른 핵산 분자 내에, 예를 들어 벡터의 전사에 의해, 위치할 수 있다.
아데닐산중합반응( polyadenylation ): 아데닐산중합반응은 일반적으로 RNA 분자, 예를 들어, 미성숙 mRNA와 같은 핵산 분자에 폴리(A) 서열이 첨가되는 것으로 이해된다. 아데닐산중합반응은 소위 아데닐산중합반응 신호에 의해 유도될 수 있다. 바람직하게, 이 신호는 아데닐산중합반응될, RNA 분자와 같은 핵산 분자의 3'-말단의 뉴클레오타이드의 스트레치(stretch) 내에 위치한다. 아데닐산중합반응 신호는 일반적으로 아데닌 및 우라실/티민 뉴클레오타이드로 이루어진 헥사머(hexamer), 바람직하게는 헥사머 서열 AAUAAA 를 포함한다. 다른 서열, 바람직하게 헥사머 서열도 가능하다(conceivable). 아데닐산중합반응은 일반적으로 프리-mRNA(미성숙-mRNA로도 불리우는)의 가공 중에 발생한다. 일반적으로, RNA 성숙(프리-mRNA로부터 성숙 mRNA 까지)은 아데닐산중합반응의 단계를 포함한다.
3'-비번역 영역 ( 3'UTR ): 3'UTR은 일반적으로 mRNA의 단백질 암호화 영역(즉, 오픈 리딩 프레임) 및 폴리(A) 서열 사이에 위치한 mRNA의 일부이다. mRNA의 3'UTR은 아미노산 서열내로 번역되지 않는다. 3'UTR은 일반적으로 유전자 발현 과정 중 각각의 mRNA 내로 전사되는 유전자에 의해 암호화된다. 게놈 서열은 먼저 선택적인 인트론을 포함하는 미성숙 mRNA로 전사된다. 그 이후, 미성숙 mRNA는 성숙 과정을 거쳐 성숙 mRNA로 되도록 추가로 처리된다. 이러한 성숙 과정은 5'캡핑(capping), 추가적인 인트로을 절단하기 위한 미성숙 mRNA 스플라이싱(splicing) 및 미성숙 mRNA 3'-말단의 아데닐산중합반응 및 추가적인 엔도-(endo-) 또는 엑소(exo)뉴클레아제 절단 등과 같은 3'-말단의 변형을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 3'UTR은 단백질 암호화 영역의 정지 코돈의 3'에, 바람직하게는 단백질 암호화 영역의 정지 코돈의 3' 바로 옆에 위치한 성숙 mRNA의 서열에 상응하며, 폴리(A) 서열의 5'-측면, 바람직하게는 폴리(A) 서열의 5' 바로 옆 뉴클레오타이드까지 이어진다. 용어 "~에 상응한다(corresponds to)"는 3'UTR 서열이 3'UTR 서열을 정의하기 위해 사용되는 mRNA 서열과 같은 RNA 서열 또는 이와 같은 RNA 서열에 상응하는 DNA 서열일 수 있다는 의미이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "유전자의 3'UTR", 예컨대 "알파 또는 베타 글로빈의 3'UTR"은 이러한 유전자로부터 유래된 성숙 mRNA의 3'UTR에 상응하는 서열, 즉, 유전자의 전사 및 미성숙 mRNA의 성숙에 의해 수득된 mRNA에 상응하는 서열이다. 용어 "유전자의 3'UTR"은 3'UTR의 DNA 서열 및 RNA 서열을 포함한다.
5'-비번역 영역( 5'UTR ): 5'-UTR은 일반적으로 전령 RNA(mRNA)의 특정 부분(section)으로 이해된다. 이는 mRNA의 오픈 리딩 프레임의 5'에 위치한다. 일반적으로, 5'UTR은 전사 시작부(transcriptional start site)와 함께 시작하고 오픈 리딩 프레임의 시작 코돈의 하나의 뉴클레오타이드 전에 종료된다. 5'-UTR은 조절 요소라고도 불리우는 유전자 발현을 조절하기 위한 요소를 포함할 수 있다. 이와 같은 조절 요소는 예를 들어, 리보솜 결합부 또는 5'-말단 올리고피리미딘관(Oligopyrimidine Tract)일 수 있다. 5'UTR은 예를 들어, 5'-캡(cap)의 첨가에 의해 전사 후 변형될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 5'UTR은 5'캡(cap) 및 시작 코돈 사이에 위치한 성숙 mRNA의 서열에 상응한다. 바람직하게, 5'UTR은 5'캡(cap)의 3'에 위치한 뉴클레오타이드로부터, 바람직하게는 5'캡(cap)의 3' 바로 옆에 위치한 뉴클레오타이드로부터, 단백질 암호화 영역의 시작 코돈의 5'에 위치한 뉴클레오타이드까지, 바람직하게는 단백질 암호화 영역의 시작 코돈의 5' 바로 옆에 위치한 뉴클레오타이드까지 이어지는 서열에 상응한다. 성숙 mRNA의 5'캡(cap)의 3' 바로 옆에 위치한 뉴클레오타이드는 일반적으로 전사 시작부에 상응한다. 용어 "~ 에상응한다(corresponds to)"는 5'UTR 서열이 5'UTR 서열을 정의하기 위해 사용되는 mRNA 서열과 같은 RNA 서열 또는 이와 같은 RNA 서열에 상응하는 DNA 서열일 수 있다는 의미이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "유전자의 5'UTR"은 이러한 유전자로부터 유래된 성숙 mRNA의 5'UTR에 상응하는 서열, 즉, 유전자의 전사 및 미성숙 mRNA의 성숙에 의해 수득된 mRNA에 상응하는 서열이다. 용어 "유전자의 5'UTR"은 5'UTR의 DNA 서열 및 RNA 서열을 포함한다.
5'말단 올리고피리미딘관(Oligopyrimidine Tract)(TOP): 5'말단 올리고피리미딘관(TOP)은 일반적으로 핵산 분자의 5' 말단 영역, 예컨대 특정 mRNA 분자의 5' 말단 영역 또는 특정 유전자의 기능성 독립체 예를 들어, 전사 영역의 5' 말단 영역에 위치한 피리미딘 뉴클레오타이드의 스트레치(stretch)이다. 서열은 보통 전사 시작부에 상응하는 사이티딘과 함께 시작하고, 보통 약 3 내지 30개의 피리미딘 뉴클레오타이드의 스트레치가 이어진다. 예를 들어, TOP는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 피리미딘 스트레치 그리하여 5' TOP는 TOP의 다운스트림에 위치한 제 1 퓨린 뉴클레오타이드의 5'의 하나의 뉴클레오타이드로 종료된다. 5'말단 올리고피리미딘관을 함유하는 전령 RNA는 종종 TOP mRNA로서 언급된다. 따라서, 이와 같은 전령 RNA를 제공하는 유전자는 TOP 유전자로서 언급된다. TOP 서열은 예를 들어, 유전자 및 펩타이드 신장 인자를 암호화하는 mRNA 및 리보솜 단백질에서 발견된다.
TOP 모티프(motif): 본 발명의 맥락에서, TOP 모티프는 상기 정의된 바와 같은 5'TOP에 상응하는 핵산 서열이다. 따라서, 본 발명의 맥락에서, TOP 모티프는 바람직하게 3 내지 30개 뉴클레오타이드 길이를 갖는 피리미딘 뉴클레오타이드 스트레치이다. 바람직하게, TOP-모티프는 적어도 3개 피리미딘 뉴클레오타이드, 바람직하게는 적어도 4개 피리미딘 뉴클레오타이드, 바람직하게는 적어도 5개 피리미딘 뉴클레오타이드, 더욱 바람직하게는 적어도 6개 뉴클레오타이드, 더욱 바람직하게는 적어도 7개 뉴클레오타이드, 가장 바람직하게는 적어도 8개 피리미딘 뉴클레오타이드로 이루어지고, 여기서 피리미딘 뉴클레오타이드의 스트레치는 바람직하게 사이토신 뉴클레오타이드와 함께 이의 5'말단에서 시작한다. TOP 유전자 및 TOP mRNA에서, TOP-모티프는 바람직하게 전사 시작부와 함께 이의 5'말단에서 시작하고 상기 유전자 또는 mRNA에 제 1 퓨린 잔기의 5'의 하나의 뉴클레오타이드로 종료된다. 본 발명의 의미에서 TOP 모티프는 바람직하게 5'UTR을 나타내는 서열의 5'말단에 위치하거나 5'UTR을 암호화하는 서열의 5'말단에 위치한다. 따라서, 바람직하게, 만약 이러한 스트레치가 각각의 서열의 5'말단, 예컨대 본 발명에 따른 변형된 RNA, 본 발명에 따른 변형된 RNA의 5'UTR 요소, 또는 본원에 설명된 바와 같은 TOP 유전자의 5'UTR로부터 유래된 핵산 서열에 위치한다면 3개 이상의 피리미딘 뉴클레오타이드의 스트레치는 본 발명의 의미에서 "TOP 모티프"로 불리운다. 다시 말해서, 5'UTR 또는 5'UTR 요소의 5'-말단에 위치하지 않고, 5'UTR 또는 5'UTR 요소 내 어디든 위치한 3개 이상의 피리미딘 뉴클레오타이드의 스트레치는 바람직하게 "TOP 모티프"로서 언급되지 않는다.
TOP 유전자: TOP 유전자는 일반적으로 5' 말단 올리고피리미딘관의 존재를 특징으로 한다. 더욱이, 대부분의 TOP 유전자는 성장-연관 번역 조절을 특징으로 한다. 그러나, 조직 특이적 번역 조절을 갖는 TOP 유전자도 알려져 있다. 상기 정의된 바와 같이, TOP 유전자의 5'UTR은 TOP 유전자로부터 유래된 성숙 mRNA의 5'UTR의 서열에 상응하며, 바람직하게 5'-캡(CAP)의 3'에 위치한 뉴클레오타이드로부터 시작 코돈의 5'에 위치한 뉴클레오타이드까지 이어진다. TOP 유전자의 5'UTR은 일반적으로 임의의 시작 코돈, 바람직하게는 업스트림(upstream) AUGs(uAUGs) 또는 업스트림 오픈 리딩 프레임(uORFs)을 포함하지 않는다. 거기에서, 업스트림 AUGs 및 업스트림 오픈 리딩 프레임은 일반적으로 번역되어야 할 오픈 리딩 프레임의 시작 코돈(AUG)의 5' 에 나타나는 AUGs 및 오픈 리딩 프레임으로 이해된다. TOP 유전자의 5'UTR은 일반적으로 상대적으로 짧다. TOP 유전자의 5'UTR 길이는 20 뉴클레오타이드 내지 500개 뉴클레오타이드까지 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 200개 뉴클레오타이드 미만이고, 바람직하게는 약 150개 뉴클레오타이드 미만이며, 더욱 바람직하게는 약 100개 뉴클레오타이드 미만이다. 본 발명의 의미에서, TOP 유전자의 5'UTR 예시는 위치 5의 뉴클레오타이드로부터 특허출원 PCT/EP2012/002448WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 14221-1363에 따른 서열 또는 이의 동족체 또는 변이체에 시작 코돈(예를 들어, ATG)의 5' 바로 옆에 위치한 뉴클레오타이드까지 이어지는 핵산 서열이며, 그 개시 내용은 참조에 의해 본원에 원용된다. 이러한 맥락에서, 특히 바람직한 TOP 유전자의 5'UTR의 절편은 5'TOP 모티프가 결여된 TOP 유전자의 5'UTR이다. 용어 'TOP 유전자의 5'UTR'은 바람직하게 자연적으로 발생하는 TOP 유전자의 5'UTR을 나타낸다.
비변형된 참조 RNA(Unmodified reference RNA): 자연에 존재하는 것과 같은 야생형 RNA 서열에 상응하는 RNA. 예를 들어, 비변형된 참조 mRNA는 자연적으로 발생하는 뉴클레오타이드를 포함하는 mRNA 서열에 상응하며, 자연적으로 발생하는 변형, 및/또는 자연적으로 발생하는 비번역 영역을 포함하는 뉴클레오타이드를 포함하고, 예컨대, 자연적으로 발생하는 5'-캡(CAP) 구조 m7GpppN, 만약 자연적으로 발생하는 mRNA 서열에 존재한다면, 선택적으로 자연적으로 발생하는 5'-UTR을 포함하고, 만약 자연적으로 발생하는 mRNA 서열 및 대략 30개 아데노신을 갖는 폴리 A 서열에 존재한다면, 야생형 오픈 리딩 프레임은, 선택적으로 자연적으로 발생하는 3'-UTR을 포함한다.
형질전환( Transfection ): 용어 "형질전환"은 핵산 분자, DNA 또는 RNA(예를 들어, mRNA) 분자의 세포, 바람직하게는 진핵 세포 내로의 도입을 말한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "형질전환"은 세포, 바람직하게는 포유동물 세포(mammalian cell)와 같은 진핵 세포 내로 핵산 분자를 도입하는 통상의 기술자에게 알려진 임의의 방법을 포함한다. 이러한 방법은, 예를 들어, 전기천공법(electroporation), 예를 들어, 양이온성 지질 및/또는 리포좀(liposome)에 기반한 리포펙션(lipofection), 칼슘 포스페이트 침전(calcium phosphate precipitation), 나노입자 기반의 형질전환, 바이러스 기반의 형질전환, 또는 DEAE-덱스트란 또는 폴리에틸렌이민 등과 같은 양이온성 폴리머에 기반한 형질전환을 포함한다. 바람직하게, 도입은 비-바이러스성이다.
담체 / 폴리머 담체 : 본 발명의 맥락에서, 담체는 일반적으로 또 다른 화합물(화물(cargo))의 수송 또는 복합화를 용이하게 하는 화합물일 수 있다. 폴리머 담체는 일반적으로 폴리머를 형성하는 담체이다. 담체는 이의 화물과 공유 또는 비-공유 상호작용에 의하여 연관될 수 있다. 담체는 표적 세포 내로 핵산, 예를 들어, RNA 또는 DNA를 수송할 수 있다. 담체는 - 일부 양태를 위해 - 양이온성 성분일 수 있다.
양이온성 성분: 용어 "양이온성 성분"은 일반적으로 전하를 띤(charged) 분자를 말하며, 이는 일반적으로 1 내지 9, 바람직하게는 9 미만(예를 들어 5 내지 9), 또는 8 미만(예를 들어 5 내지 8), 또는 7 미만(예를 들어, 5 내지 7)의, 가장 바람직하게는 예를 들어 7.3 내지 7.4의 생리학적 pH 값의 양전하를(양이온) 띤다. 따라서, 양이온성 성분은 임의의 양전하를 띤 화합물 또는 폴리머, 바람직하게는 생리학적 조건하에서, 특히 생체 내(in vivo) 생리학적 조건 하에서 양전하를 띤, 양이온성 펩타이드 또는 단백질일 수 있다. '양이온성 펩타이드 또는 단백질'은 적어도 하나의 양전하를 띤 아미노산 또는 하나 이상의 양전하를 띤 아미노산, 예를 들어 Arg, His, Lys 또는 Orn 로부터 선택된 것을 함유할 수 있다. 따라서, '다중양이온성' 화합물 또한 주어진 조건하에서 하나 이상의 양전하를 보이는 범위 내이다.
백신: 백신은 일반적으로 적어도 하나의 항원, 바람직하게는 면역원을 제공하는 예방 또는 치료 물질로 이해된다. 항원 또는 면역원은 백신 접종에 적절한 임의의 물질로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 항원 또는 면역원은 박테리아 또는 바이러스 입자(particles) 등과 같은 병원체로부터, 또는 종양 또는 암 조직으로부터 유래될 수 있다. 항원 또는 면역원은 적응 면역 반응을 제공하기 위하여 신체의 적응 면역 시스템을 자극한다.
비히클 (Vehicle): 비히클은 일반적으로 약학적 활성 화합물(pharmaceutically active compound)과 같은 화합물을 저장, 운반, 및/또는 투여하기 위한 적절한 물질로 이해된다. 예를 들어, 이는 약학적 활성 화합물을 저장, 운반 및/또는 투여하기 위한 적절한 생리학적으로 허용가능한 지질일 수 있다.
본 발명의 상세한 설명
첫 번째 측면에서, 본 발명은 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임(ORF)을 포함하는 변형된 리보핵산(RNA)을 제공하며, 여기서 RNA는 이의 암호화된 단백질 또는 펩타이드의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함한다. 상기 암호화된 단백질 또는 펩타이드의 발현은 제트 인젝션(jet injection)에 의한 변형된 RNA의 투여에 의해 추가로 증가된다. 이러한 맥락에서, RNA의 적어도 하나의 변형에 따른 단백질 생산의 증가는 본원에서 "단백질 발현의 변형-연관 증가"로서 언급된다.
만약 독립적으로 변형된 RNA 또는 비변형된 참조 RNA가 사용된다면, RNA의 제트 인젝션에 따른 단백질 생산의 증가는 본원에서 "단백질 발현의 주사-연관 증가"로서 언급된다.
용어 '단백질 발현의 변형-연관 증가'는 특정 기간 동안 측정된 변형된 RNA로부터 생산된 단백질이 변형이 결여된 비변형된 참조 RNA로부터 생산된 단백질의 총량과 비교하여 증가되는 상황, 또는 특정 시점에 측정된 변형된 RNA로부터 생산된 단백질 수준이 변형이 결여된 비변형된 참조 RNA로부터 생산된 단백질 수준과 비교하여 증가되는 상황을 나타낸다.
용어 '단백질 발현의 주사-연관 질환'은 특정 기간 동안 측정된 제트 인젝션을 통해 투여된 RNA로부터 생산된 단백질의 총량이 통상의 바늘 주사에 의해 투여된 동일한 RNA로부터 생산된 단백질의 총량과 비교하여 증가되는 상황, 또는 특정 시점에 측정된 제트 인젝션을 통해 투여된 RNA로부터 생산된 단백질 수준이 통상의 바늘 주사에 의해 투여된 동일한 RNA로부터 생산된 단백질 수준과 비교하여 증가되는 상황을 나타낸다.
본 발명에 따르면, 변형된 RNA의 적어도 하나의 변형 및 제트 인젝션에 의한 투여는 변형된 RNA에 의해 암호화된 단백질 또는 펩타이드의 발현에 상승적인 효과를 갖는다. 다른 측면에서, 비변형된 RNA를 개체/조직에 투여하기 위해서 통상의 바늘 주사를 이용하여 수득된 발현과 비교하여 변형된 RNA를 개체/조직에 투여하기 위해서 제트 인젝션을 이용하여 수득된 발현 증가는 비변형된 참조 RNA와 비교하여 변형된 RNA를 이용하여 수득된 발현 증가의 합보다 크며, 여기서 둘 모두는 동일한 방식에 의해 투여되며("단백질 발현의 변형-연관 증가") 발현 증가는 제트 인젝션에 의해 투여된 (비변형된) RNA에 대해 제트 인젝션과 다른 수단, 특히 통상의 바늘 주사("단백질 발현의 주사-연관 증가")에 의해 투여된 동일한 (비변형된) RNA와 비교하여 수득된다.
이러한 맥락에서, 본 발명자들은 제트 인젝션에 의해 암호화된 단백질의 단백질 발현이 증가하는 적어도 하나의 변형을 포함하는 변형된 RNA의 투여는 암호화된 단백질의 발현을 기대한 것보다 더욱 증가시킨다는 놀라운 발견을 하였다. 제트 인젝션에 의한 투여는 변형된 RNA 및 비변형된 참조 RNA에 대한 단백질 발현에 동일한 효과를 갖는다고 기대되었다.
본 발명의 맥락에서, "변형-연관 단백질 발현"은 발현의 개시 이후 특정 시점 이후 증가될 수 있거나 발현의 개시 이후 특정 기간 동안 총 단백질 생산은 비변형된 참조 RNA와 비교할 때 증가될 수 있다. 따라서, 발현의 개시 이후(또는 각각 변형된 RNA의 주사 이후) 특정 시점, 예를 들어, 주사 후 6, 12, 24, 48, 또는 72시간에 관찰된 단백질 수준, 또는 예를 들어, 6, 12, 24, 48 또는 72 시간의 기간에 생성된 단백질의 총량은 바람직하게 발현의 개시 이후(또는 주사 이후) 동일한 시점에 관찰된 단백질 수준 또는 비변형된 참조 RNA에 대해 동일한 기간 내 생산된 단백질 총량보다 높다.
바람직하게, RNA 단독의 변형은(즉, 제트 인젝션에 의해 변형된 RNA의 투여 없이, 그러나 예를 들어, 통상의 바늘 주사를 사용하는 것) 암호화된 단백질의 발현을 이끌며, 상응하는 비변형된 참조 RNA에 대하여 관찰된 단백질 생산의 적어도 1.5배, 더욱 바람직하게는 적어도 2배, 더욱 바람직하게는 적어도 5배, 더욱 더 바람직하게는 적어도 10배, 가장 바람직하게는 50배이다.
"주사-연관 단백질 발현"은 발현의 개시 이후(RNA의 주사 이후) 특정 시점에 증가될 수 있거나 발현의 개시 이후 특정 기간 동안 총 단백질 생산은 비변형된 참조 RNA와 비교할 때 증가될 수 있다. 따라서, 발현의 개시 이후(또는 각각 RNA의 주사 이후) 특정 시점, 예를 들어, 주사 후 6, 12, 24, 48, 또는 72시간에 관찰된 단백질 수준, 또는 예를 들어, 6, 12, 24, 48 또는 72시간의 기간에 생성된 단백질의 총량은 바람직하게 발현의 개시 이후(또는 주사 이후) 동일한 시점에 관찰된 단백질 수준 또는 바늘 주사에 의한 예와 같은 통상의 방법에 의해 주사된 동일한 RNA에 대해 동일한 기간 내 생산된 단백질 총량보다 높다.
바람직하게, 제트 인젝션은 비변형된 참조 RNA로부터 단백질 생산을 단지 경미한 정도 예를 들어, 1.5배 또는 2배 증가시킨다.
본 발명에 따르면, 적어도 하나의 변형을 포함하고 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 RNA에 의해 암호화된 단백질의 발현은 제트 인젝션에 의해 (상승적인 방식으로) 더욱 증가된다. 따라서, 단백질 발현은 통상의 바늘 주사에 의해 투여되는 것과 동일한 변형을 갖는 RNA와 같은 참조와 비교하여 더욱 증가된다. 바람직하게, 본 발명에 따른 변형된 RNA의 제트 인젝션에 의해 수득된 단백질 생산은 통상의 수단, 특히 통상의 바늘 주사에 의해 투여된 것과 같은 비변형된 참조 RNA와 비교하여 적어도 5배, 더욱 바람직하게는 10배, 더욱 더 바람직하게는 50배 그리고 더욱 더 바람직하게는 100배 증가된다. 따라서, 본 발명에 따른 변형된 RNA의 제트 인젝션에 의해 수득된 단백질 생산에서 증가는 비변형된 참조 RNA의 제트 인젝션에 의해 수득된 단백질 발현에서 증가와 비교하여 적어도 1.5배, 더욱 바람직하게는 적어도 2배, 더욱 바람직하게는 적어도 3배, 더욱 바람직하게는 적어도 4배, 더욱 더 바람직하게는 적어도 5배, 가장 바람직하게는 적어도 10배이다. 바람직하게, 발현의 개시 후 주어진 시점에서 단백질 생산 또는 주어진 기간, 예를 들어, 발현의 개시 후 또는 RNA의 주사 후 6, 12, 24, 48 또는 72시간의 기간에서 총 단백질 생산에 대한 사실을 유지한다.
본원에 사용된 용어 "제트 인젝션(jet injection)"은 바늘 없는(needle-free) 주사 방법을 나타내며, 여기서 적어도 하나의 변형된 RNA 및, 선택적으로, 적합한 추가적인 첨가제(excipient)를 함유하는 유체는 구멍(orifice)을 통과하고, 따라서, 고압의 초-미세(ultra-fine) 액체 줄기를 생성하며 포유동물 피부, 및 주사 설정에 따라 피하 조직 또는 근육 조직을 침투할 수 있다. 원칙적으로, 액체 줄기는 피부 내에 액체 줄기가 표적 조직 내로 미는(pushed into) 것을 통해 구멍을 형성한다. 바람직하게, 제트 인젝션은 본 발명에 따른 변형된 RNA의 피부 내, 피하 또는 근육 내 주사에 사용된다.
유체가 제트 인젝션에 의해 전달되는 표적 조직 또는 그 보다는 조직층은 유체가 투여되는 특정 피부 형태(및 밑에 있는 조직)로 정의되는 물리적 파라미터 뿐만 아니라 사용되는 액체 줄기의 특이적 특징과 같은 여러 파라미터에 따라 달라진다. 예를 들어, 처리될 콜라겐 섬유의 밀도 및 조직의 전체적인 탄성은 액체 제트에 의해 달성된 침투에 영향을 가질 수 있다. 여러 물리적 파라미터는 제트 인젝션에 의해 수득된 결과에 영향을 갖는다. 기계적 장벽에 의해 분리된(예컨대 천근막) 조직의 구분된 층은 지정된(addressed) 층 아래에 위치한 상기 기계적 장벽을 침투함 없이 피부 또는 밑에 있는(underlying) 조직 내로 깊게 침투 하기에 적합한 액체 줄기에 의해 명확하게 지정될 수 있다. 예를 들어, 피부 내 투여는 천근막(superficial fascia)을 방해하지 않고 진피 내로 침투하는 액체 줄기의 적용에 의해 달성된다. 투여된 유체는 진피(dermis)에 수평으로(horizontally) 분포한다.
액체 제트를 정의하는 여러 파라미터는 주사 효율 및, 특히 각각 특정 조직층을 표적하는 것으로 번역되는 침투 깊이에 영향을 미칠 수 있다. 이와 같은 하나의 파라미터는 액체 줄기가 피부 표면을 치는 압력이다. 다른 요인들 중에서 상기 압력은 제트 출구 속도(즉, 제트가 주사 기구의 노즐을 빠져나가는 속도) 뿐만 아니라, 노즐과 피부 사이의 거리 및 노즐과 피부 사이의 공간을 구성하는 매체(medium)(공기, 액체)에 따라 달라진다. 일반적으로, 제트의 속도(그리고 제트에 의해 발생된 압력)는 제트가 노즐로부터 빠져나가고 상기 공간을 건너감에 따라 감소된다. 또한, 피부 침투는 제트 직경에 따라 달라지며, 이는 주로 사용되는 노즐의 크기에 의해 결정된다. 특히, 조직 침투 및 유체 전달의 측면에서 비슷한 결과는 파라미터의 상이한 조합에 의해 수득될 수 있다.
피부를 침투하기 위해서, RNA를 포함하는 액체 줄기(stream)의 제트 출구 속도는 바람직하게는 적어도 60 m/s, 더욱 바람직하게는 적어도 80 m/s, 더욱 더 바람직하게는 적어도 100 m/s 그리고 가장 바람직하게는 적어도 150 m/s 이다.
제트 인젝션에 사용되는 RNA를 포함하는 액체 줄기는 일반적으로 매우 가늘고 피부 침투가 가능한 것으로 선택된다. 바람직하게, 액체 제트 직경은 원하는 표적 조직에 따라 선택된다. 액체 제트 직경은 바람직하게 노즐 구멍(orifice)에 의해 조절되며 즉, 액체 제트 직경은 노즐 구멍의 직경이 증가함에 따라 증가한다. 바람직하게, 액체 제트 직경은 구멍 직경에 상응하여 액제 제트 직경은 노즐 구멍의 직경과 같거나 약간 크다. 일반적으로, 일정한 제트 출구 속도에서, 조직에서 달성되는 침투 깊이는 더 큰 액체 제트 직경이 높을 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 구멍(orifice)의 직경은 20 μm 내지 600 μm, 바람직하게는 100 μm 내지 300 μm, 더욱 바람직하게는 120 μm 내지 250 μm 이다.
다른 바람직한 양태에서, 구멍(orifice)의 직경은 20 μm 내지 150 μm, 바람직하게는 30 μm 내지 130 μm, 더욱 바람직하게는 40 μm 내지 110 μm, 더욱 더욱 바람직하게는 50 μm 내지 100 μm 이다.
또 다른 양태에서, 구멍(orifice)의 직경은 70 μm 내지 300 μm, 바람직하게는 80 μm 내지 200 μm, 더욱 바람직하게는 90 μm 내지 180 μm, 더욱 더 바람직하게는 100 μm 내지 150 μm 이다.
바람직하게, 주사 시간(즉, 제트(jet)가 표적 피부와의 첫 번째 접촉 및 제트 중단(cessation) 시점 사이의 시간)은 1.0 초 미만, 바람직하게는 0.7초 미만 그리고 더욱 더 바람직하게는 0.3초 미만이다. 가장 바람직하게, 주사 시간은 0.1초 미만이다.
바람직한 양태에서, 제트 인젝션의 과정은 상이한 제트 속도에 의해 특징화되는 적어도 두 가지 단계(phase)을 포함한다. 바람직하게, 제트 인젝션은 제 1 상으로 시작하며, 여기서 제 1 제트 속도는 조직 침투를 보장하기 위해 선택된다. 상기 제 1 제트 속도는 출구 제트 속도 즉, 액체 제트가 장치의 노즐(nozzle)을 떠나는 속도에 따라 많은 정도 달라진다. 또한, 상기 제 1 속도는 원하는 주사 깊이로 맞추어진다. 그 이후, 제 2 제트 속도는 표적 조직 내로 액체를 전달하는데 적절한 제 2 단계를 사용한다. 상기 제 2 제트 속도는 일반적으로 제 1 속도보다 낮고 조직의 흡수 용량을 초과하지 않도록 선택된다.
바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA의 제트 인젝션은 3가지 단계를 포함한다:
초기 침투 단계는 전체 제트 인젝션 과정의 압력 프로필(profile)에 대하여 가장 높은 압력으로 특징화된다(따라서 피크(peak) 압력 단계로도 나타냄). 침투 단계는 바람직하게는 50 ms 미만, 더욱 바람직하게는 10 ms 미만, 더욱 더 바람직하게는 5 ms 미만 지속된다. 가장 바람직하게, 침투 단계는 1 ms 미만 지속된다.
피크 압력 단계 이후에, 압력은 표적 조직 내로 액체 줄기(stream)를 주사하는데 충분한 수준을 유지하는 동안 전달 단계에서 감소된다. 압력 수준은 일정하거나 전달 단계 동안 천천히 감소하는 것이 바람직하다. 바람직하게, 전달 단계는 0.8초 미만, 더욱 바람직하게는 0.5초 미만 지속되며, 더욱 더 바람직하게는 전달 단계는 0.01 내지 0.3초 , 더욱 바람직하게는 0.01 내지 0.1초 지속된다.
본 발명의 이러한 양태에 따른 제트 인젝션 과정의 마지막 단계는 변형된 RNA를 포함하는 액체에서 활동하는 압력을 대기압 수준 주변으로의 감소에 의해 특징화된다(감소(drop-off) 단계). 일반적으로, 압력은 전달 단계 후 급격히 감소한다. 감소 단계는 바람직하게는 0.3초 미만, 더욱 바람직하게는 0.2초 미만, 더욱 더 바람직하게는 50밀리초 미만, 가장 바람직하게는 10밀리초 미만 지속된다.
치료된 개체에 따라서, 표적 조직 및 특이적 적용, 변형된 RNA를 포함하는 액체의 부피는 그에 따라 선택된다. 본 발명의 바람직한 양태에서, 투여되는 액체의 부피는 0.05 μl 내지 1000 μl, 바람직하게는 0.1 μl 내지 500 μl, 더욱 바람직하게는 0.2 μl 내지 200 μl 이다. 가장 바람직하게, 변형된 RNA를 포함하는 액체의 부피는 100 μl이다.
이러한 맥락에서, 만약 변형된 RNA가 제트 인젝션에 의해 피부 내로 주사되는 경우, 변형된 RNA를 포함하는 액체의 부피는 바람직하게는 0.2 내지 200 μl, 그리고 가장 바람직하게는 100 μl이다.
또한, 만약 변형된 RNA가 제트 인젝션에 의해 근육 내로 주사되는 경우, 변형된 RNA를 포함하는 액체의 부피는 바람직하게는 100 내지 2000 μl, 그리고 가장 바람직하게는 500 μl이다.
만약 변형된 RNA를 포함하는 액체가 제트 인젝션에 의해 피하로 주사되는 경우, 변형된 RNA를 포함하는 액체의 부피는 바람직하게는 100 내지 2000 μl, 그리고 가장 바람직하게는 500 μl이다.
본 발명의 의미에서, 본원에 정의된 바와 같은 전달에 적합한 액체 제트를 생성할 수 있는 한은 제트 인젝션을 위해 임의의 장치는 사용될 수 있다. 액체가 가속하는 수단에 대해서는 제한이 없다. 예를 들어, 액체를 내보내기 위해(expell) 스프링을 사용하는 시스템뿐만 아니라 가스(gas) 또는 다른 압축가스(propellant)를 사용하는 시스템이 사용될 수 있다. 또한, 지속적인 액체 제트가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 본원에 설명된 바와 같은 적어도 두 단계에서 적어도 두 개의 구별되는 속도를 갖는다. 대신에, 펄스(pulsed) 마이크로제트(microjet)가 사용될 수 있다. 바람직하게, 제트 인젝션 시스템은 상업적으로 이용가능한 것을 사용하며, 예컨대, 스트라티스(Stratis), 트로피스(Tropis)(모두 파마제트(Pharmajet) 생산), 비타제트(Vitajet), 바이오제터 2000(Biojector 2000) 또는 바이오젝트 제타제트(Bioject Zetajet)(세 개 모두 바이오젝트 메디컬 테크놀로지 주식회사(Bioject Medical Technologies Inc.) 생산), 글라이드(Glide)(글라이드 파마(Glide Pharma) 생산), 메디젝터 비전(MediJector Vision)(안타레스(Antares) 생산), 수마벨 도스프로(Sumavel DosePro)(조게닉스(Zogenix) 생산), SQ 펜(SQ Pen)(베스팍(Bespak) 생산), 및 인젝스(Injex)(에퀴다인(Equidyne) 생산)가 있다. 변형된 RNA는 시스템을 사용하여 주사되며, 바람직하게는 미리 선택된 투여량의 정확하고 재현할 수 있는(reproducible) 전달을 가능하게 한다. 바람직하게, 장치는 피부 내로 주사될 액체 제트를 위해 피부의 적절한 긴장을 보장한다. 바람직한 양태에서, 국제 특허출원 WO 2013/090315에 개시된 바와 같은 장치의 개시는 그 전체가 본원에 포함되어 있다. 바람직하게, 변형된 RNA는 WO 2013/090315의 도 1 내지 17C 중 임의의 것에 나타낸 바와 같은 바늘 없는 주사의 개별적인 구성 중 적어도 하나를 포함하며, 바람직하게는 압축할 수 있는 메인 스프링, 작동 버튼, 피부 긴장 스프링, 플런저 몸체(plunger body), 덮개(seal) 및 망치로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게, 변형된 RNA는 WO 2013/090315의 도 1 내지 10 중 임의의 것에 개시된 바와 같은 장치를 이용하여 주사되며, 여기서 메인 스프링은 압력이 주사 이전에 바늘 없는 주사기 노즐에 적용될 때, 바람직하게 주사 장치의 주사기 말단으로부터 멀리 측면으로 이동이 유발될 수 있다. 특히 바람직한 양태에서, 변형된 RNA는 트로피스(Tropis) 장치(파마제트(Pharmajet))를 이용하여 주사된다.
본 발명에 따르면, 적어도 하나의 변형을 포함하고 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 RNA는 제트 인젝션에 의해 피부 내로, 근육 내로, 또는 피하로 투여된다. 추가의 바람직한 양태에서, 변형된 RNA는 피부 내로 투여되고, 여기서 제트 인젝션은 20 μm 내지 150 μm, 바람직하게는 30 μm 내지 130 μm, 더욱 바람직하게는 40 μm 내지 110 μm, 더욱 더 바람직하게는 50 μm 내지 100 μm의 직경을 갖는 노즐을 이용하여 수행되고, 제트 출구 속도는 바람직하게는 적어도 80 m/s, 더욱 바람직하게는 적어도 100 m/s, 더욱 더 바람직하게는 적어도 150 m/s, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 190 m/s 이다.
바람직한 양태에서, 변형된 RNA는 TROPIS 장치(Pharmajet)를 이용하여 피부 내로 투여된다.
일반적으로, 포유동물의 피부로 액체의 성공적인 전달은 주사 부위에 발진(wheal)(수포(bleb)로도 불리우는)의 형성에 의해 평가될 수 있다. 바람직하게, 발진의 직경은 적어도 5 mm, 더욱 바람직하게는 적어도 7 mm, 더욱 더 바람직하게는 적어도 9, 그리고 더욱 바람직하게는 적어도 10 mm 이다.
본 발명의 의미에 있어서, 용어 "변형된 RNA"는 변형된 핵산 분자의 임의의 유형을 포함하여, 특정 시점에 측정된 상기 변형된 RNA로부터 생산된 단백질 또는 펩타이드의 양이 변형이 결여된 RNA("비변형된 참조 RNA")와 비교하여 증가된다. 이러한 발현에서의 증가는 상기 정의된 바와 같이 "단백질 발현의 변형-연관 증가"로서 본원에서 불리운다.
본 발명에 따르면, 변형된 RNA 분자는 제공되며, 이는 변형이 결여된 각각의 RNA("비변형된 참조 RNA")와 비교하여 암호화된 단백질의 증가된 발현에 의해 특징화된다. 변형된 RNA에 의한 생체 내(in vivo) 단백질 생산을 평가하기 위해서, 암호화된 단백질의 발현은 표적 세포/조직 내로 변형된 RNA의 주사에 따라 결정되며, 비변형된 참조 RNA의 단백질 발현과 비교된다. 단백질 발현을 결정하는 정량적인 방법은 당 업계에 알려져 있다(예를 들어, 웨스턴-블랏(Western-Blot), ELISA, 질량 분석법(mass spectometry)). 이러한 맥락에서, 루시퍼라아제(luciferase) 또는 분비된 알카라인 포스파타아제(secreted alkaline phosphatase)(SEAP)와 같은 보고 단백질(reporter protein)의 발현의 결정이 특히 유용하다. 따라서, 변형된 RNA 또는 비변형된 참조 RNA는 표적 조직 내로 주사되며, 예를 들어, 통상의 바늘 주사 또는 제트 인젝션을 통해서, 바람직하게는 피부 내로, 근육 내로 또는 피하로 주사된다. 발현의 개시 또는 RNA의 주사 몇 시간 또는 며칠(예를 들어, 6, 12, 24, 48 또는 72 시간) 후, 주사 부위 유래 조직을 수집하고 용해한다. 그 뒤에, 용해물은 여러 방법, 예를 들어, 웨스턴-블랏, ELISA, 질량 분석법 또는 형광 또는 발광 측정을 이용하여 발현된 단백질을 검출하고 정량화하는데 사용될 수 있다(그리고 따라서, 단백질 발현의 효율을 결정한다).
따라서, 만약 변형된 RNA 유래 단백질 발현을 특정 시점에(예를 들어, 발현의 개시 후 또는 RNA의 주사 후 6, 12, 24, 48 또는 72) 비변형된 참조 RNA 유래 단백질 발현을 비교하면, 두 RNA 모두 시험 동물 내로 분리되어 주사되고, 특정 시점 이후에 주사 부위 유래 조직을 수집하고, 특정 검출 방법(예를 들어, 웨스턴 블랏, ELISA 등 당 업계에 알려진)으로 조절되는 특정 프로토콜에 따라 단백질 용해물을 제조하고 단백질은 선택된 검출 방법에 의해 검출되고 정량화된다.
만약 특정 기간 동안 단백질 총량을 측정할 경우, 조직은 RNA의 주사 후 여러 시점 후에 수집될 수 있고(예를 들어, 발현의 개시 또는 보통 상이한 시험 동물 유래 RNA의 주사 후 6, 12, 24, 48 및 72시간), 상기 설명된 바와 같이 시점 당 단백질 양이 결정될 수 있다. 누적된 단백질 양을 계산하기 위해서, 단백질의 총량을 결정하는 수학적 방법이 사용될 수 있으며, 예를 들어, 곡선 아래의 면적(AUC)을 하기 수학식에 따라 결정될 수 있다:
Figure pct00001
단백질의 총량에 대한 곡선 아래의 면적을 계산하기 위해서, 각각의 종말점(end point)(a 및 b)으로부터 발현 곡선 방정식의 적분이 계산된다.
본 발명에 따르면, RNA 분자는 암호화된 단백질의 발현을 향상하기 위해서 구조적으로 변형된다("단백질 발현의 변형-연관 증가"). 거기서, 변형은 암호화된 단백질의 발현만큼 임의의 특정 구조에 한정되지 않고 본원에 정의된 바와 같은 비변형된 참조 RNA와 비교하여 증가된다. 여러 RNA 변형체는 당 업계에 알려져 있으며, 본 발명의 맥락에서 주어진 RNA로 적용할 수 있다.
화학적 변형체 (Chemical modifications):
본원에 사용된 용어 "RNA 변형"은 당 변형 또는 염기 변형뿐만 아니라 백본 변형을 포함하는 화학적 변형을 나타낼 수 있다.
이러한 맥락에서, 본 발명에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 분자는 뉴클레오타이드 유사체/변형체, 예를 들어, 백본 변형체, 당 변형체 또는 염기 변형체를 함유할 수 있다. 본 발명과 관련된 백본 변형은 본원에 정의된 바와 같은 핵산 분자에 함유된 뉴클레오타이드의 백본의 포스페이트가 화학적으로 변형된 변형이다. 본 발명과 관련된 당 변형은 본원에 정의된 바와 같은 핵산 분자의 뉴클레오타이드의 당의 화학적 변형이다. 더욱이, 본 발명과 관련된 염기 변형은 핵산 분자의 핵산 분자의 뉴클레오타이드 염기 모이어티의 화학적 변형이다. 이러한 맥락에서, 뉴클레오타이드 유사체 또는 변형체는 바람직하게 전사 및/또는 번역에 적용할 수 있는 뉴클레오타이드 유사체로부터 선택된다.
당 변형체 (Sugar Modifications):
본원에 설명된 바와 같은 변형된 RNA 내로 포함될 수 있는 변형된 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 당 모이어티에서 변형될 수 있다. 예를 들어, 2' 하이드록실기(OH)는 상이한 수의 "옥시" 또는 "데옥시" 치환체와 함께 변형되거나 치환될 수 있다. "옥시" -2'하이드록실기 변형체의 예로는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 알콕시 또는 아릴옥시(-OR, 예를 들어, R = H, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 또는 당); 폴리에틸렌글리콜(PEG), -0(CH2CH2o)nCH2CH2OR; 2' 하이드록실이 예를 들어, 메틸렌 다리(methylene bridge)에 의해 동일한 리보오스 당의 4' 탄소에 연결된 "잠금(locked)" 핵산(LNA); 아미노기(-O-아미노, 여기서 아미노기 예를 들어, NRR은 알킬아미노, 디알킬아미노, 헤테로사이클릴, 아릴아미노, 디아릴 아미노, 헤테로아릴 아미노, 또는 디헤테로아릴 아미노, 에틸렌 디아민, 폴리아미노일 수 있다) 또는 아미노알콕시를 포함한다.
"데옥시" 변형체는 하이드로겐, 아미노(예를 들어, NH2; 알킬아미노, 디알킬아미노, 헤테로사이클릴, 아릴아미노, 디아릴 아미노, 헤테로아릴 아미노, 디헤테로아릴 아미노, 또는 아미노산); 또는 연결자(linker)를 통해 당에 부착될 수 있는, 여기서 상기 연결자는 원자, C, N 및 O 중 하나 이상의 원자를 포함하는 아미노기를 포함한다.
당기(sugar group)는 또한 리보오스 내 상응하는 탄소와 반대의 입체화학적 배열을 가지는 하나 이상의 탄소를 함유할 수 있다. 따라서, 변형된 RNA는 예를 들어, 당으로서 아라비노스를 함유하는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
백본 변형체 (Backbone Modifications):
포스페이트 백본은 또한, 본원에 설명된 바와 같이, 변형된 RNA 내로 포함될 수 있는 변형된 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드로 변형될 수 있다. 백본의 포스페이트기는 상이한 치환체를 갖는 하나 이상의 산소 원자를 치환함으로써 변형될 수 있다. 또한, 변형된 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 본원에 설명된 바와 같은 변형된 포스페이트를 갖는 비변형된 포스페이트 모이어티의 총 치환을 포함할 수 있다. 변형된 포스페이트기의 예로는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 포스포로티오에이트, 포스포로셀레네이트, 보라노 포스페이트, 보라노 포스페이트 에스테르, 하이드로겐 포스포네이트, 포스포로아미데이트, 알킬 또는 아릴 포스포네이트 및 포스포트리에스테르를 포함한다. 포스포로티오에이트는 황(sulfur)으로 치환된 모두 비-연결된 산소를 갖는다. 포스페이트 연결자는 또한 연결된 산소가 질소(가교 포스포로아미데이트), 황(가교 포스포로티오에이트) 및 탄소(가교 메틸렌-포스포네이트)의 치환에 의해 변형될 수 있다.
염기 변형체 (base modifications):
본원에 설명된 바와 같이, 변형된 RNA 내로 포함될 수 있는 변형된 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 핵염기 모이어티(moiety)에서 추가로 변형될 수 있다. RNA에서 발견되는 핵염기의 예로는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 아데닌, 구아닌, 사이토신 및 우라실이 포함된다. 예를 들어, 본원에 설명된 바와 같은 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 주홈면(major groove face)에서 화학적으로 변형될 수 있다. 일부 양태에서, 주홈 화학적 변형체는 아미노기, 티올기, 알킬기, 또는 할로기를 포함할 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 양태에서, 뉴클레오타이드 유사체/변형체는 염기 변형체로부터 선택되며, 이는 바람직하게 2-아미노-6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트, 2-아미노퓨린-리보사이드-5'-트리포스페이트; 2-아미노아데노신-5'-트리포스페이트, 2'-아미노-2'-데옥시사이티딘-트리포스페이트, 2-티오사이티딘-5'-트리포스페이트, 2-티오우리딘-5'-트리포스페이트, 2'-플루오로티미딘-5'-트리포스페이트, 2'-O-메틸 이노신-5'-트리포스페이트 4-티오우리딘-5'-트리포스페이트, 5-아미노알릴사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-아미노알릴우리딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모우리딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모-2'-데옥시사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-브로모-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도-2'-데옥시사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도우리딘-5'-트리포스페이트, 5-요오도-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 5-메틸사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-메틸우리딘-5'-트리포스페이트, 5-프로피닐-2'-데옥시사이티딘-5'-트리포스페이트, 5-프로피닐-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트, 6-아자사이티딘-5'-트리포스페이트, 6-아자우리딘-5'-트리포스페이트, 6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트, 7-데아자아데노신-5'-트리포스페이트, 7-데아자구아노신-5'-트리포스페이트, 8-아자아데노신-5'-트리포스페이트, 8-아지도아데노신-5'-트리포스페이트, 벤지미다졸-리보사이드-5'-트리포스페이트, N1-메틸아데노신-5'-트리포스페이트, N1-메틸구아노신-5'-트리포스페이트, N6-메틸아데노신-5'-트리포스페이트, O6-메틸구아노신-5'-트리포스페이트, 슈도우리딘-5'-트리포스페이트, 또는 퓨로마이신-5'-트리포스페이트, 잔토신-5'-트리포스페이트로부터 선택된다. 5-메틸사이티딘-5'-트리포스페이트, 7-데아자구아노신-5'-트리포스페이트, 5-브로모사이티딘-5'-트리포스페이트, 및 슈도우리딘-5'-트리포스페이트로 이루어진 염기-변형된 뉴클레오타이드의 군으로부터 선택된 염기 변형을 위한 뉴클레오타이드가 특히 바람직하다.
일부 양태에서, 변형된 뉴클레오사이드는 피리딘-4-온 리보뉴클레오사이드, 5-아자-우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 5-하이드록시우리딘, 3-메틸우리딘, 5-카복시메틸-우리딘, 1-카복시메틸-슈도우리딘, 5-프로피닐-우리딘, 1-프로피닐-슈도우리딘, 5-타우리노메틸우리딘, 1-타우리노메틸-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-우리딘, l-타우리노메틸-4-티오-우리딘, 5-메틸-우리딘, 1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-l-메틸-슈도우리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 디하이드로우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-메톡시우리딘, 2-메톡시-4-티오-우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 및 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘을 포함한다.
일부 양태에서, 변형된 뉴클레오사이드는 5-아자-사이티딘, 슈도이소사이티딘, 3-메틸-사이티딘, N4-아세틸사이티딘, 5-포밀사이티딘, N4-메틸사이티딘, 5-하이드록시메틸사이티딘, 1-메틸-슈도이소사이티딘, 피롤로-사이티딘, 피롤로-슈도이소사이티딘, 2-티오-사이티딘, 2-티오-5-메틸-사이티딘, 4-티오-슈도이소사이티딘, 4-티오-1-메틸-슈도이소사이티딘, 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소사이티딘, 1-메틸-1-데아자-슈도이소사이티딘, 제부라린, 5-아자-제부라린, 5-메틸-제부라린, 5-아자-2-티오-제부라린, 2-티오-제부라린, 2-메톡시-사이티딘, 2-메톡시-5-메틸-사이티딘, 4-메톡시-슈도이소사이티딘, 및 4-메톡시-l-메틸-슈도이소사이티딘을 포함한다.
다른 양태에서, 변형된 뉴클레오사이드는 2-아미노퓨린, 2, 6-디아미노퓨린, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노퓨린, 7-데아자-2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린, 1-메틸아데노신, N6-메틸아데노신, N6-이소펜테닐아데노신, N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신, 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신, N6-글리시닐카바모일아데노신, N6-트레오닐카바모일아데노신, 2-메틸티오-N6-트레오닐카바모일아데노신, N6,N6-디메틸아데노신, 7-메틸아데닌, 2-메틸티오-아데닌, 및 2-메톡시-아데닌을 포함한다.
다른 양태에서, 변형된 뉴클레오사이드는 이노신, 1-메틸-이노신, 와이오신(wyosine), 와이부토신(wybutosine), 7-데아자-구아노신, 7-데아자-8-아자-구아노신, 6-티오-구아노신, 6-티오-7-데아자-구아노신, 6-티오-7-데아자-8-아자-구아노신, 7-메틸-구아노신, 6-티오-7-메틸-구아노신, 7-메틸이노신, 6-메톡시-구아노신, 1-메틸구아노신, N2-메틸구아노신, N2,N2-디메틸구아노신, 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, l-메틸-6-티오-구아노신, N2-메틸-6-티오-구아노신, 및 N2,N2-디메틸-6-티오-구아노신을 포함한다.
일부 양태에서, 뉴클레오타이드는 주홈면에서 변형될 수 있고 우라실의 C-5의 하이드로겐을 메틸기 또는 할로기로 교체하는 것을 포함할 수 있다.
특정 양태에서, 변형된 뉴클레오사이드는 5'-0-(l-티오포스페이트)-아데노신, 5'-0-(1-티오포스페이트)-사이티딘, 5'-0-(1-티오포스페이트)-구아노신, 5'-0-(1-티오포스페이트)-우리딘 또는 5'-0-(l-티오포스페이트)-슈도우리딘이다.
추가의 특정 양태에서, 변형된 RNA는 6-아자-사이티딘, 2-티오-사이티딘, α-티오-사이티딘, 슈도-이소-사이티딘, 5-아미노알릴-우리딘, 5-요오도-우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 5,6-디하이드로우리딘, α-티오-우리딘, 4-티오-우리딘, 6-아자-우리딘, 5-하이드록시-우리딘, 데옥시-티미딘, 5-메틸-우리딘, 피롤로-사이티딘, 이노신, α-티오-구아노신, 6-메틸-구아노신, 5-메틸-사이티딘, 8-옥소-구아노신, 7-데아자-구아노신, N1-메틸-아데노신, 2-아미노-6-클로로-퓨린, N6-메틸-2-아미노-퓨린, 슈도-이소-사이티딘, 6-클로로-퓨린, N6-메틸-아데노신, α-티오-아데노신, 8-아지도-아데노신, 7-데아자-아데노신으로부터 선택된 뉴클레오사이드 변형체를 포함할 수 있다.
지질 변형체 (Lipid modification):
추가적인 양태에 따르면, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA는 지질 변형을 함유할 수 있다. 이와 같은 지질-변형된 RNA는 일반적으로 본원에 정의된 바와 같은 RNA를 포함한다. 본원에 정의된 바와 같은 이와 같은 지질-변형된 RNA 분자는 일반적으로 RNA 분자와 공유결합된 적어도 하나의 연결자, 및 각각의 연결자와 공유결합된 적어도 하나의 지질을 추가적으로 포함한다. 대신에, 지질-변형된 RNA 분자는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 RNA 분자 및 RNA 분자와 (연결자 없이) 공유결합된 적어도 하나의 (2 기능성) 지질을 포함한다. 세 번째 대안에 따라서, 지질-변형된 RNA 분자는 본원에 정의된 바와 같은 RNA 분자, RNA 분자와 공유결합된 적어도 하나의 연결자, 및 각각의 연결자와 공유결합된 적어도 하나의 지질, 및 또한 RNA 분자와 (연결자 없이) 공유결합된 적어도 하나의 (2 기능성) 지질을 포함한다. 이러한 맥락에서, 지질 변형은 선형 RNA 서열의 말단 끝에 존재하는 것이 특히 바람직하다.
변형된 RNA의 5'-말단의 변형:
본 발명의 또 다른 바람직한 양태에 따르면, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 분자는 소위 "5' 캡(CAP)" 구조의 첨가에 의해 변형될 수 있다.
5'-캡(cap)은 독립체, 일반적으로 성숙한 mRNA의 5'-말단을 "덮는(caps)" 일반적으로 변형된 뉴클레오타이드 독립체이다. 5'-캡(cap)은 일반적으로 변형된 뉴클레오타이드, 특히 구아닌 뉴클레오타이드의 유도체에 의해 형성될 수 있다. 바람직하게, 5'-캡(cap)은 5'-5'-트리포스페이트 결합을 통해 5'-말단에 연결된다. 5'-캡(cap)은 메틸화될 수 있으며, 예를 들어, m7GpppN, 여기서 N은 5'-캡(cap), 일반적으로 RNA의 5'-말단을 운반하는 핵산의 말단 5' 뉴클레오타이드이다. m7GpppN은 폴리머라아제 II에 의해 전사된 mRNA에서 자연적으로 발생하는 5'-캡(CAP) 구조이고, 따라서, 본 발명에 따른 변형된 RNA에 포함된 변형으로서 간주되지 않는다. 이는 본 발명에 따른 변형된 RNA는 5'-캡(CAP)으로서 m7GpppN을 포함할 수 있는 것을 의미하지만, 추가적으로 변형된 RNA는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가의 변형을 포함한다.
추가적인 5'캡(cap) 구조의 예로는 글리세릴, 역(inverted) 데옥시 무염기 잔기(모이어티), 4',5' 메틸렌 뉴클레오타이드, 1-(베타-D-에리스로퓨라노실)뉴클레오타이드, 4'-티오 뉴클레오타이드, 카보사이클릭 뉴클레오타이드, 1,5-안하이드로헥시톨 뉴클레오타이드, L-뉴클레오타이드, 알파-뉴클레오타이드, 변형된 염기 뉴클레오타이드, 트레오-펜토퓨라노실 뉴클레오타이드, 아사이클릭(acyclic) 3',4'-세코(seco) 뉴클레오타이드, 아사이클릭 3,4-디하이드록시부틸 뉴클레오타이드, 아사이클릭 3,5 디하이드록시펜틸 뉴클레오타이드, 3'-3'-역 뉴클레오타이드 모이어티, 3'-3'-역 무염기 모이어티, 3'-2'-역 뉴클레오타이드 모이어티, 3'-2'-역 무염기 모이어티, 1,4-부탄디올 포스페이트, 3'-포스포라미데이트, 헥실포스페이트, 아미노헥실 포스페이트, 3'-포스페이트, 3'포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 또는 가교(bridging) 또는 비-가교(non-bridging) 메틸포스포네이트 모이어티를 포함한다. 이들 변형된 5'-캡(CAP) 구조는 본 발명에 따른 변형된 RNA에 포함된 적어도 하나의 변형으로 여겨진다.
특히 바람직한 변형된 5'-캡(CAP) 구조는 CAP1(m7G 인접 뉴클레오타이드의 리보오스의 메틸화), CAP2(m7G의 제 2 뉴클레오타이드 다운스트림의 리보오스의 메틸화), CAP3(m7G의 제 3 뉴클레오타이드 다운스트림의 리보오스의 메틸화), CAP4(m7G의 제 4 뉴클레오타이드 다운스트림의 리보오스의 메틸화), ARCA(항-역 캡(CAP) 유사체, 변형된 ARCA (e.g. phosphothioate modified ARCA), 이노신, N1-메틸-구아노신, 2'-플루오로-구아노신, 7-데아자-구아노신, 8-옥소-구아노신, 2-아미노-구아노신, LNA-구아노신, 및 2-아지도-구아노신이다.
오픈 리딩 프레임의 서열 변형:
G/C 함량의 변형:
본 발명의 특히 바람직한 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는, 암호화 영역의 G/C 함량은 변형되고, 이의 특정 야생형 암호화 영역, 즉, 비변형 암호화 영역의 G/C 함량과 비교하였을 때 특히 증가된다. 암호화 역영의 암호화된 아미노산 서열은 특정 야생형 암호화 영역의 암호화된 아미노산 서열과 비교하였을 때 변형되지 않는 것이 바람직하다.
본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역의 G/C-함량의 변형은, 번역될 임의의 mRNA 영역의 서열이 이 mRNA의 효율적인 번역에 중요하다는 사실을 기초로 한다. 따라서, 다양한 뉴클레오타이드의 조성 및 서열은 중요하다. 특히 G(구아노신)/C(사이토신) 함량이 증가된 mRNA 서열은, A(아데노신)/U(우라실) 함량이 증가된 mRNA 서열보다 더욱 안정하다. 본 발명에 따르면, 지속적으로 아미노산 서열로 번역되고 있는 암호화 영역의 코돈은, 이 코돈 중 G/C 뉴클레오타이드의 양이 증가되었다는 점에서 이의 야생형 암호화 영역의 코돈과는 상이하다. 몇몇 코돈은 하나의 동일한 아미노산을 암호화한다는 사실(소위 유전적 암호의 축퇴성(degeneration))에 비추어, 안정성에 가장 유리한 코돈이 결정될 수 있다(소위 대안적 코돈 선호도(alternative codon usage)).
본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역에 의해 암호화될 아미노산에 따라서, 이의 야생형 암호화 영역과 비교할 때 RNA 서열, 예를 들어, 암호화 영역의 변형에 대한 다양한 가능성이 존재한다. 오직 G 또는 C 뉴클레오타이드만을 함유하는 코돈에 의해 암호화된 아미노산의 경우, 코돈의 변형은 필요하지 않다. 따라서, A 또는 U가 존재하지 않기 때문에, Pro(CCC 또는 CCG), Arg(CGC 또는 CGG), Ala(GCC 또는 GCG) 그리고 Gly (GGC 또는 GGG)에 대한 코돈은 변형이 필요하지 않다.
대조적으로, A 및/또는 U 뉴클레오타이드를 함유하는 코돈은, 동일한 아미노산을 암호화하지만 A 및/또는 U를 함유하지 않는 다른 코돈의 치환에 의해 변형될 수 있으며, 이들의 예로는 다음과 같다:
Pro에 대한 코돈은 CCU 또는 CCA에서 CCC 또는 CCG로 변형될 수 있고;
Arg에 대한 코돈은 CGU 또는 CGA 또는 AGA 또는 AGG에서 CGC 또는 CGG로 변형될 수 있으며;
Ala에 대한 코돈은 GCU 또는 GCA에서 GCC 또는 GCG로 변형될 수 있고;
Gly에 대한 코돈은 GGU 또는 GGA에서 GGC 또는 GGG로 변형될 수 있다.
다른 경우에서, 비록 A 또는 U 뉴클레오타이드가 코돈으로부터 제거될 수 없다고 하더라도, 더욱 적은 함량의 A 및/또는 U 뉴클레오타이드를 함유하는 코돈을 사용함으로써 A 및 U 함량이 감소할 수 있다. 이들의 예로는 다음과 같은 경우가 있다:
Phe에 대한 코돈은 UUU에서 UUC로 변형될 수 있고;
Leu에 대한 코돈은 UUA, UUG, CUU 또는 CUA에서 CUC 또는 CUG로 변형될 수 있으며;
Ser에 대한 코돈은 UCU 또는 UCA 또는 AGU에서 UCC, UCG 또는 AGC로 변형될 수 있고;
Tyr에 대한 코돈은 UAU에서 UAC로 변형될 수 있으며;
Cys에 대한 코돈은 UGU에서 UGC로 변형될 수 있고;
His에 대한 코돈은 CAU에서 CAC로 변형될 수 있으며;
Gln에 대한 코돈은 CAA에서 CAG로 변형될 수 있고;
Ile에 대한 코돈은 AUU 또는 AUA에서 AUC로 변형될 수 있으며;
Thr에 대한 코돈은 ACU 또는 ACA에서 ACC 또는 ACG로 변형될 수 있고;
Asn에 대한 코돈은 AAU에서 AAC로 변형될 수 있으며;
Lys에 대한 코돈은 AAA에서 AAG로 변형될 수 있고;
Val에 대한 코돈은 GUU 또는 GUA에서 GUC 또는 GUG로 변형될 수 있으며;
Asp에 대한 코돈은 GAU에서 GAC로 변형될 수 있고;
Glu에 대한 코돈은 GAA에서 GAG로 변형될 수 있으며;
종결 코돈 UAA는 UAG 또는 UGA로 변형될 수 있다.
한편, Met(AUG) 및 Trp(UGG)에 대한 코돈의 경우, 서열 변형 가능성은 없다.
본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역의 G/C 함량을, 특정 야생형 암호화 영역(즉 원래의 서열)의 G/C 함량에 비해 증가시키기 위해서는, 상기 나열된 치환들은 개별적으로 적용될 수 있거나, 가능한 임의의 조합으로 적용될 수 있다. 따라서, 예를 들어 야생형 서열에서 발생하는 Thr에 대한 모든 코돈은 ACC(또는 ACG)로 변형될 수 있다.
바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역의 G/C 함량은, 야생형 암호화 영역의 G/C 함량에 비하여 7% 이상, 더욱 바람직하게 15% 이상, 특히 바람직하게 20% 이상 증가된다. 특정 양태에 따르면, 병원성 항체 또는 절편, 이의 변이체 또는 유도체를 포함하는 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 하나 이상을 암호화하는 암호화 영역에서 치환 가능한 코돈들 중 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 이상, 더욱 바람직하게는 70% 이상, 더욱 더 바람직하게는 80% 이상, 그리고 가장 바람직하게는 90% 이상, 95% 이상 또는 심지어 100%가 치환되며, 이로써 상기 암호화 영역의 G/C 함량이 증가하게 된다.
이러한 맥락에서, 특히 바람직하게, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역의 G/C 함량은, 야생형 암호화 영역의 G/C 함량에 비하여 최대 값(즉, 치환 가능한 코돈의 100%)만큼 증가할 수 있다.
코돈 최적화( Codon optimization):
본 발명에 따르면, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 적어도 하나의 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 암호화 영역의 추가적인 바람직한 변형은 번역 효율이 세포 내 tRNA의 출현의 상이한 빈도에 의해 또한 결정된다는 발견에 기초한다. 따라서, 만약, 소위 "희귀(rare) 코돈"이 야생형 RNA 서열의 암호화 영역에 증가된 정도로 존재하면, 상대적으로 "빈번한(frequent)" tRNA를 암호화 하는 코돈이 존재하는 경우보다 현저히 낮은 정도로 번역된다.
이러한 맥락에서, 변형된 RNA의 암호화 영역은 바람직하게 상응하는 야생형 암호화 영역과 비교하여 변형되는 결과, 적어도 하나의 세포 내에서 상대적으로 희귀한 tRNA를 암호화하는 야생형 서열의 코돈은, 세포 내에서 상대적으로 빈번한 tRNA를 암호화하고 상대적으로 희귀한 tRNA로서 동일한 아미노산을 운반하는 코돈으로 치환된다. 이러한 변형에 의해, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역은 변형되는 결과, 빈번하게 발생하는 tRNA를 이용하기 위한 코돈이 삽입된다. 다시 말해서, 본 발명에 따르면, 이러한 변형에 의해 세포 내에서 상대적으로 희귀한 tRNA를 암호화하는 야생형 암호화 영역의 모든 코돈은 각각의 경우에서 세포 내에서 상대적으로 빈번한 tRNA를 암호화하는 코돈으로 치환될 수 있고, 각각의 경우에서 상대적으로 희귀한 tRNA로서 아미노산을 운반할 수 있다.
어떤 tRNA가 세포 내에서 상대적으로 빈번하게 발생하는지, 그리고 이와는 대조적으로 어떤 tRNA가 상대적으로 희귀하게 발생하는지는 통상의 기술자에게 알려져있다; 참고, 예를 들어, Akashi, Curr. Opin. Genet. Dev. 2001, 11(6): 660-666. 특정 아미노산을 위해 사용하는 가장 빈번하게 발생하는 tRNA, 예를 들어, (인간) 세포 내에서 가장 빈번하게 발생하는 tRNA를 사용하는 Gly 코돈이 특히 바람직하다.
본 발명에 따르면, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 암호화 영역 내에 특히 최대로 증가된 서열 G/C 함량을, RNA 서열의 암호화 영역에 의해 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열이 변형되지 않은 "빈번한" 코돈과 연관짓는 것이 특히 바람직하다. 이러한 바람직한 양태는 본원에 정의된 바와 같은 특히 효율적으로 번역 및 안정화된(변형된) RNA 서열을 제공한다.
변형된 RNA의 3'-말단의 변형:
더욱이, 제트 인젠션에 의해 투여될 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 변형된 RNA에 있어서, 암호화 영역의 3' 영역은 예를 들어, 아데닌 또는 사이토신 잔기의 다중 반복 스트레치의 삽입 또는 첨가에 의해 변형될 수 있다. 본 발명의 바람직한 양태에서, RNA 분자의 3' 말단은 아데닌 뉴클레오타이드의 시리즈(series)("폴리(A) 꼬리")의 첨가에 의해 변형된다.
폴리(A) 꼬리의 길이는 컨스트럭트(construct) 각각의 번역 효율에 주요한 영향을 갖는다. 효율적으로 번역되기 위해, 외생적으로(exogenously) 전달되는 mRNA의 폴리(A) 꼬리는 적어도 20개 A 잔기로 이루어져야 한다. 게다가, mRNA 발현은 폴리(A) 꼬리의 길이와 긍정적 상관관계가 있다고 설명되어 있다(Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469에서 검토됨). 이러한 맥락에서, 홀트캄프 외(Holtkamp et al.)는 120개 뉴클레오타이들로 측정된 폴리(A) 꼬리가 더 짧은 것에 비해 mRNA 안정성 및 번역 효율이 향상되는 것을 보여준다(Holtkamp et al., Blood. 2006 Dec 15;108(13):4009-17. PMID: 16940422). 본 발명의 일 양태에서, 변형된 RNA는 제트 인젝션에 사용되며, 폴리(A) 꼬리를 (선택적으로 다른 변형과 조합하여) 포함하고, 여기서 폴리(A) 꼬리는 적어도 30개, 바람직하게는 50개를 초과하는, 더욱 바람직하게는 100개를 초과하는, 더욱 더 바람직하게는 200개를 초과하는 아데노신 뉴클레오타이드를 포함한다. 가장 바람직하게는, RNA는 64개 아데노신 뉴클레오타이드로 이루어진 폴리(A) 꼬리를 포함한다.
특정 양태에서, 폴리(A) 꼬리가 30개 아데노신보다 길다면, 바람직하게는 50개 아데노신보다 길다면, 더욱 바람직하게는 100개 아데노신보다 길다면, 그리고 더욱 더 바람직하게는 200개 아데노신보다 길다면, 폴리(A) 꼬리는 단지 본 발명에 따른 변형된 RNA에 포함된 적어도 하나의 변형으로서 고려된다.
추가의 특정 양태에서, 폴리(A) 꼬리의 변형은 본 발명에 따른 변형된 RNA의 적어도 하나의 변형으로 간주되지 않는다. 이는 본 발명에 따른 변형된 RNA는 상기 정의된 바와 같은 폴리(A) 꼬리를 포함할 수 있지만, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 추가적인 변형을 포함할 수 있는 것을 의미한다.
바람직한 양태에서, 제트 인젝션에 사용되는, 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 변형된 RNA는 RNA의 암호화 영역의 영역 3'에 폴리(C) 서열을 (선택적으로 다른 변형과 조합하여) 포함한다. 폴리(C) 서열은 일반적으로 다수의 사이토신 뉴클레오타이드, 일반적으로 약 10 내지 약 200개 사이티딘 뉴클레오타이드, 바람직하게는 약 10 내지 약 100개 사이티딘 뉴클레오타이드, 더욱 바람직하게는 약 10 내지 약 70개 사이티딘 뉴클레오타이드 또는 더욱 더 바람직하게는 약 20 내지 약 50개 또는 심지어 약 20 내지 약 30개 사이티딘 뉴클레오타이드의 스트레치(stretch)이다. 폴리(C) 서열은 바람직하게는 핵산에 의해 암호화 영역의 3'에 위치할 수 있다. 본 발명의 특정 바람직한 양태에서, 폴리(C) 서열은 폴리(A) 서열의 3'에 위치한다.
추가의 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 적어도 하나의 변형으로서 이의 3' 말단에 히스톤 스템-루프를 포함하거나 암호화한다. 본 발명의 맥락에서, 히스톤 스템-루프 서열은 바람직하게 하기 화학식 (I) 또는 (II) 중 적어도 하나로부터 선택된다:
화학식 (I):
Figure pct00002
화학식 (II):
Figure pct00003
여기서:
스템1 또는 스템2 경계 요소 N1-6 는 1 내지 6개의 연속적인 서열, 바람직하게는 2 내지 6개의, 더욱 바람직하게는 2 내지 5개의, 더욱 더 바람직하게는 3 내지 5개의, 가장 바람직하게는 4 내지 5개 또는 5개의 N이며, 여기서 각각의 N은 A, U, T, G 및 C 또는 이들의 뉴클레오타이드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되고;
스템1 [N0- 2GN3 -5] 는 요소 스템2와 역 상보적 또는 부분적으로 역 상보적이며, 5 내지 7개 뉴클레오타이드 사이의 연속적인 서열이고;
여기서 N0-2 는 0 내지 2개, 바람직하게는 0 내지 1개, 더욱 바람직하게는 1개 N의 연속적인 서열이며, 여기서 각각의 N은 A, U, T, G 및 C 로부터 선택된 뉴클레오타이드 또는 이들의 뉴클레오타이드 유사체로부터 서로 독립적으로 또 다른 것으로 선택되고;
여기서, N3-5 는 3 내지 5개의 연속적인 서열, 바람직하게는 4 내지 5개, 더욱 바람직하게는 4개의 N, 여기서 각각의 N은 A, U, T, G 및 C 로부터 선택된 뉴클레오타이드 또는 이들의 뉴클레오타이드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되고, 그리고
여기서, G는 구아노신 또는 이의 유사체, 그리고 만약 스템2에서 그것의 상보적인 뉴클레오타이드 사이티딘이 구아노신으로 치환되면, 선택적으로 사이티딘 또는 이의 유사체로 치환될 수 있고;
루프 서열 [N0- 4(U/T)N0 - 4]는 요소 스템1 및 스템2 사이에 위치하며, 3 내지 5개 뉴클레오타이드, 더욱 바람직하게는 4개 뉴클레오타이드의 연속적인 서열이고;
여기서 각각의 N0-4 는 0 내지 4개의, 바람직하게는 1 내지 3개의, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개의 N의 다른 연속적인 서열로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 각각의 N은 A, U, T, G 및 C 로부터 선택된 뉴클레오타이드 또는 이들의 뉴클레오타이드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되고; 그리고
여기서 U/T 는 우리딘, 또는 선택적으로 티미딘을 나타내고;
스템2 [N3- 5CN0 - 2]는 요소 스템1과 역으로 상보적인 또는 부분적으로 역 상보적이며, 그리고 5 내지 7개 뉴클레오타이드의 연속적인 서열이고;
여기서 N3-5 는 3 내지 5개의, 바람직하게는 4 내지 5개의, 더욱 바람직하게는 4개의 N의 연속적인 서열이며, 여기서 각각의 N은 A, U, T, G 및 C 로부터 선택된 뉴클레오타이드 또는 이들의 뉴클레오타이드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되고;
여기서 N0-2 는 0 내지 2개, 바람직하게는 0 내지 1개, 더욱 바람직하게는 1개의 N의 연속적인 서열이며, 여기서 각각의 N 은 A, U, T, G 또는 C로부터 선택된 뉴클레오타이드 또는 이들의 뉴클레오타이드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되고; 그리고
여기서 C는 사이티딘 또는 이의 유사체이며, 그리고 만약 스템1에서 그것의 상보적인 뉴클레오타이드 구아노신이 사이티딘으로 치환되면, 선택적으로 구아노신 또는 이의 유사체로 치환될 수 있고;
여기서,
스템1 및 스템2는 역 상보 서열을 형성하면서 서로 염기 짝짓기를 할 수 있으며, 여기서 염기 짝짓기는 스템1 및 스템2 사이에서 발생할 수 있으며, 예를 들어, 뉴클레오타이드 A 및 U/T 또는 G 및 C 의 왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기 짝짓기에 의해 또는 예를 들어, 워블(wobble) 염기 짝짓기, 역(reverse) 왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기 짝짓기, Hoogsteen 염기 짝짓기, 역 Hoogsteen 염기 짝짓기와 같은 비-왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기 짝짓기에 의해 발생할 수 있거나 또는 부분적으로 역 상보 서열을 형성하면서 서로 염기 짝짓기를 할 수 있으며, 하나의 스템에서 하나 이상의 염기들은 다른 스템의 역 상보 서열에서 상보적인 염기를 갖지 않음에 기초하여, 상기 불완전한 염기 짝짓기는 스템1 및 스템2 사이에서 발생할 수 있다.
추가의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 하기 특정 화학식 (Ia) 또는 (IIa) 중 적어도 하나에 따른 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있거나 암호화할 수 있다:
화학식 (Ia):
Figure pct00004
화학식 (IIa):
Figure pct00005
여기서:
N, C, G, T 및 U는 상기 정의된 바와 같다.
추가의 더욱 특히 바람직한 양태에 따르면, 변형된 RNA는 하기 특정 화학식(Ib) 또는 (IIb) 중 적어도 하나에 따른 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있거나 암호화할 수 있다:
화학식 (Ib):
Figure pct00006
화학식 (IIb):
Figure pct00007
여기서:
N, C, G, T 및 U는 상기 정의된 바와 같다.
더욱 더 바람직한 양태에 따르면, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 대안적으로 이의 스템-루프 구조와 실시예 1에 따라서 생성된 히스톤 스템-루프 서열을 나타내는 선형 서열로서 나타낸 하기 특정 화학식 (Ic) 내지 (Ih) 또는 (IIc) 내지 (IIh) 중 적어도 하나에 따른 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있거나 암호화할 수 있다:
화학식 (Ic):
Figure pct00008
화학식 (IIc):
Figure pct00009
화학식 (Id):
Figure pct00010
화학식 (IId):
Figure pct00011
화학식 (Ie):
Figure pct00012
화학식 (IIe):
Figure pct00013
화학식 (If):
Figure pct00014
화학식 (IIf):
Figure pct00015
화학식 (Ig):
Figure pct00016
화학식 (IIg):
Figure pct00017
화학식 (Ih):
Figure pct00018
화학식 (IIh):
Figure pct00019
여기서, 상기 화학식 (Ic) 내지 (Ih) 또는 (IIc) 내지 (IIh) 각각에 있어서: N, C, G, A, T 및 U는 상기 정의된 바와 같고; 각각의 U는 T에 의해 치환될 수 있으며; 상응하는 스템 내 이의 상보적인 뉴클레오타이드는 평행한 이의 상보적인 뉴클레오타이드에 의해 치환된다면, 스템 요소 1 및 2 중 (고도로) 보존된 G 또는 C는 각각 이의 상보적인 뉴클레오타이드 염기 C 또는 G에 의해 치환될 수 있고; 그리고/또는 G, A, T, U, C, R, Y, M, K, S, W, H, B, V, D, 및 N은 하기 표에 정의된 바와 같은 뉴클레오타이드 염기와 같다:
Figure pct00020
이러한 맥락에서, 본 발명의 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 또는 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh) 중 적어도 하나에 따른 히스톤 스템-루프 서열은 자연적으로 발생하는 히스톤 스템 루프 서열로부터 선택되고, 더욱 특히 바람직하게는 원생동물 또는 후생동물 히스톤 스템-루프 서열로부터 선택되고, 더욱 더 특히 바람직하게는 척추동물, 가장 바람직하게는 포유동물 히스톤 스템-루프 서열, 특히 인간 히스톤 스템-루프 서열로부터 선택되는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 특정 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 또는 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh) 중 적어도 하나에 따른 히스톤 스템-루프 서열은 각각의 뉴클레오타이드 위치에 후생동물 및 원생동물, 원생동물, 후생동물, 척추동물 및 인간의 자연적으로 발생하는 히스톤 스템-루프 서열 중 가장 빈번하게 발생하는 뉴클레오타이드, 또는 가장 빈번하게 또는 두 번째로 가장 빈번하게 발생하는 뉴클레오타이드를 포함하는 히스톤 스템-루프 서열이다. 이러한 맥락에서, 모든 뉴클레오타이드 중 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 또는 가장 바람직하게는 적어도 90%는 자연적으로 발생하는 히스톤 스템-루프 서열 중 가장 빈번하게 발생하는 뉴클레오타이드에 상응하는 것이 특히 바람직하다.
추가의 특정 양태에서, 본 발명의 특정 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 중 적어도 하나에 따른 히스톤 스템-루프 서열은 하기 (스템 경계 요소를 갖지 않는) 히스톤 스템-루프 서열로부터 선택된다:
VGYYYYHHTHRVVRCB (화학식 (Ic)에 따른 서열번호 13)
SGYYYTTYTMARRRCS (화학식 (Ic)에 따른 서열번호 14)
SGYYCTTTTMAGRRCS (화학식 (Ic)에 따른 서열번호 15)
DGNNNBNNTHVNNNCH (화학식 (Ie)에 따른 서열번호 16)
RGNNNYHBTHRDNNCY (화학식 (Ie)에 따른 서열번호 17)
RGNDBYHYTHRDHNCY (화학식 (Ie)에 따른 서열번호 18)
VGYYYTYHTHRVRRCB (화학식 (If)에 따른 서열번호 19)
SGYYCTTYTMAGRRCS (화학식 (If)에 따른 서열번호 20)
SGYYCTTTTMAGRRCS (화학식 (If)에 따른 서열번호 21)
GGYYCTTYTHAGRRCC (화학식 (Ig)에 따른 서열번호 22)
GGCYCTTYTMAGRGCC (화학식 (Ig)에 따른 서열번호 23)
GGCTCTTTTMAGRGCC (화학식 (Ig)에 따른 서열번호 24)
DGHYCTDYTHASRRCC (화학식 (Ih)에 따른 서열번호 25)
GGCYCTTTTHAGRGCC (화학식 (Ih)에 따른 서열번호 26)
GGCYCTTTTMAGRGCC (화학식 (Ih)에 따른 서열번호 27)
더욱이, 이러한 맥락에서, 특정 화학식 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh) 중 하나에 따른 다음 (스템 경계 요소를 갖는) 히스톤 스템-루프 서열이 특히 바람직하다:
H*H*HHVVGYYYYHHTHRVVRCBVHH*N*N* (화학식 (IIc)에 따른 서열번호 28)
M*H*MHMSGYYYTTYTMARRRCSMCH*H*H* (화학식 (IIc)에 따른 서열번호 29)
M*M*MMMSGYYCTTTTMAGRRCSACH*M*H* (화학식 (IIc)에 따른 서열번호 30)
N*N*NNNDGNNNBNNTHVNNNCHNHN*N*N* (화학식 (IIe)에 따른 서열번호 31)
N*N*HHNRGNNNYHBTHRDNNCYDHH*N*N* (화학식 (IIe)에 따른 서열번호 32)
N*H*HHVRGNDBYHYTHRDHNCYRHH*H*H* (화학식 (IIe)에 따른 서열번호 33)
H*H*MHMVGYYYTYHTHRVRRCBVMH*H*N* (화학식 (IIf)에 따른 서열번호 34)
M*M*MMMSGYYCTTYTMAGRRCSMCH*H*H* (화학식 (IIf)에 따른 서열번호 35)
M*M*MMMSGYYCTTTTMAGRRCSACH*M*H* (화학식 (IIf)에 따른 서열번호 36)
H*H*MAMGGYYCTTYTHAGRRCCVHN*N*M* (화학식 (IIg)에 따른 서열번호 37)
H*H*AAMGGCYCTTYTMAGRGCCVCH*H*M* (화학식 (IIg)에 따른 서열번호 38)
M*M*AAMGGCTCTTTTMAGRGCCMCY*M*M* (화학식 (IIg)에 따른 서열번호 39)
N*H*AAHDGHYCTDYTHASRRCCVHB*N*H* (화학식 (IIh)에 따른 서열번호 40)
H*H*AAMGGCYCTTTTHAGRGCCVMY*N*M* (화학식 (IIh)에 따른 서열번호 41)
H*M*AAAGGCYCTTTTMAGRGCCRMY*H*M* (화학식 (IIh)에 따른 서열번호 42)
추가의 바람직한 양태에 따르면, 변형된 RNA는 특정 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 또는 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh) 중 적어도 하나에 따른 히스톤 스템-루프 서열과 서열 상동성을 100% 미만 보존된 뉴클레오타이드이며, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 또는 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95% 보이는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함하거나 암호화한다.
히스톤 스템-루프 서열을 위한 특히 바람직한 실시예는 서열번호 43(CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA)에 따른 서열 또는 서열번호 44(CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA)에 따른 상응하는 RNA 서열이다.
UTR 변형:
바람직하게, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 적어도 하나의 변형된 5' 및/또는 3' UTR 서열(UTR 변형)을 갖는다. 이들 5' 및/또는 3' 비번역 영역(UTR) 내 변형은 세포 기질 내 RNA의 반감기를 증가시키는 효과를 가질 수 있거나 번역 효율을 증가시킬 수 있고 따라서 암호화된 단백질 또는 펩타이드의 발현을 향상시킬 수 있다. 이들 UTR 서열은 바이러스, 박테리아 및 진핵생물에서 발생한 자연적으로 발생하는 서열과 100% 서열 상동성을 가질 수 있으나, 부분적이거나 전체적으로도 합성될 수 있다. 예를 들어, 호모 사피엔스(Homo sapiens) 또는 제노푸스 라에비스(Xenopus laevis) 유래 (알파-) 또는 베타 글로빈 유전자의 비번역 서열(UTR)은 안정화된 RNA를 위해 사용될 수 있는 안정화 서열의 예시로서 언급될 수 있다. 안정화 서열의 또 다른 예는 일반 화학식 (C/U)CCANxCCC(U/A)PyxUC(C/U)CC를 갖고, 이는 (알파-)글로빈, (I)형-콜라겐, 15-리폭시게나아제 또는 타이로신 하이드록실라아제를 암호화하는 매우 안정한 RNA의 3'UTR에 함유되어 있다(Holcik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94: 2410 to 2414 참고). 본 발명의 맥락에서, "muag"로서도 본원에 칭하는, 하기 서열 GCCCGaTGGG CCTCCCAACG GGCCCTCCTC CCCTCCTTGC ACCG(서열번호 45)(밑줄 친 뉴클레오타이드는 야생형 서열과 비교하여 돌연변이를 나타낸다)를 포함하는 (알파-) 글로빈의 돌연변이된 UTR이 특히 바람직하다. 이와 같은 도입된 UTR 서열은 물론, 개별적으로 또는 또 다른 것과 조합하여 그리고 또한 통상의 기술자에게 알려진 다른 서열 변형체와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 바람직하게, 붕괴(decay) 신호는 본 발명에 따른 RNA의 3' 비번역 영역(3' UTRs)으로부터 제거된다. 특이적으로, 아데닐레이트 우리딜레이트 풍부 요소(Adenylate Uridylate Rich Elements)(AREs)는 안정한 mRNA(예를 들어, α- 또는 β-글로빈 mRNA)의 3'UTR로 치환된다(Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469에 검토됨).
이러한 맥락에서, α-글로빈 mRNA의 3'UTR은 α-글로빈 mRNA의 잘 알려진 안정성을 위한 중요한 인자일 수 있다는 것을 나타낸다(Rodgers et al., Regulated α-globin mRNA decay is a cytoplasmic event proceeding through 3'-to-5' exosome-dependent decapping, RNA, 8, pp. 1526-1537, 2002). α-글로빈 mRNA의 3'UTR은 명백하게 특정 리보핵단백질-복합체, α-복합체의 형성에 연관되어 있고, 이의 존재는 시험관 내(in vitro) mRNA 안정성과 상관관계가 있다(Wang et al., An mRNA stability complex functions with poly(A)-binding protein to stabilize mRNA in vitro, Molecular and Cellular biology, Vol 19, No. 7, July 1999, p. 4552-4560).
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA에 함유된 오픈 리딩 프레임을 포함하는 유전자의 자연적으로 발생하는 5'- 및/또는 3'-UTR이 변형된 RNA에서 제거되는 것이 특히 바람직하다. 따라서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 바람직하게 변형된 RNA가 존재하면 오픈 리딩 프레임에 이종(heterologous)인 UTR을 포함한다.
바람직한 양태에서, 상기 설명된 2 이상의 변형체의 조합은 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 제트 인젝션에 의해 투여되는 하나의 변형된 RNA에 존재한다. 특히 바람직한 양태에서, 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 RNA는 (이종) 3' UTR, 폴리(A) 꼬리, 폴리(C) 서열 및 히스톤 스템-루프의 도입에 의해 변형된다. 바람직하게, 거기에서 3' UTR은 서열 GCCCGaTGGG CCTCCCAACG GGCCCTCCTC CCCTCCTTGC ACCG(서열번호 45; muag; 밑줄 친 뉴클레오타이드는 야생형 서열과 비교하여 돌연변이를 보여준다)를 포함하는 (알파-) 글로빈의 돌연변이된 UTR이고, 폴리(A) 꼬리는 64개의 아데닌 뉴클레오타이드로 이루어지며, 폴리(C) 서열은 30개의 사이토신 뉴클레오타이드로 이루어지고 히스톤 스템-루프는 화학식 (I) 또는 (II) 중 하나로부터 선택된 구조를 갖고, 바람직하게는 서열번호 44(CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA)에 따른 RNA 서열이다. 가장 바람직하게, 특정 양태의 RNA는 도 4(서열번호 46; 실시예 1 또한 참조)에 나타낸 바와 같은 서열 변형체를 포함한다.
추가의 양태에 의해, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 바람직하게 적어도 하나의 하기 구조적 요소를 포함한다: 5'- 및/또는 3'- 비번역 영역 요소(UTR 요소), 특히 TOP 유전자의 5'-UTR로부터 또는 이의 절편, 동족체 또는 변이체로부터 유래된 핵산을 포함하거나 이로 이루어진 5'-UTR 요소, 또는 안정한 mRNA를 제공하는 유전자로부터, 또는 이의 동족체, 절편 또는 변이체로부터 유래할 수 있는 5'- 및/또는 3'-UTR 요소; 히스톤-스템-루프 구조, 바람직하게는 이의 3' 비번역 영역 내 히스톤-스템-루프; 5'-캡(CAP) 구조; 폴리-A 꼬리; 또는 폴리(C) 서열.
본 발명의 첫 번째 측면의 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 적어도 하나의 5'- 또는 3'-UTR 요소를 포함한다. 이러한 맥락에서, UTR 요소는 임의의 자연적으로 발생하는 5'- 또는 3'-UTR로부터 유래되거나, 유전자의 5'- 또는 3'-UTR의 절편, 동족체 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 바람직하게, 본 발명에 따라 사용된 5'- 또는 3'-UTR 요소는 본 발명에 따른 변형된 RNA의 암호화 영역에 이종(heterologous)이다. 자연적으로 발생하는 유전자로부터 유래된 5'- 또는 3'-UTR 요소가 바람직하다 하더라도, 본 발명의 맥락에서 합성적으로 조작된(engineered) UTR 요소도 사용될 수 있다.
본 발명의 첫 번째 측면의 특히 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA의 서열은 TOP 유전자의 5'UTR로부터 유래되거나 TOP 유전자의 5'UTR의 절편, 동족체 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 적어도 하나의 5'-비번역 영역 요소(5'UTR 요소)를 포함한다.
5'UTR 요소는 상기 정의된 바와 같은 TOP-모티프 또는 5'TOP를 포함하지 않는 것이 특히 바람직하다.
일부 양태에서, TOP 유전자의 5'UTR로부터 유래된 5'UTR 요소의 핵산 서열은 유전자 또는 mRNA의 시작 코돈(예를 들어, A(U/T)G)의 업스트림 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 자리에 위치한 뉴클레오타이드와 함께 이의 3'-말단에서 종결된다, 이는 유래된다. 따라서, 5'UTR 요소는 단백질 암호화 영역의 임의의 부분을 포함하지 않는다. 따라서, 바람직하게, 오직 본 발명에 따른 변형된 RNA의 단백질 암호화 부분은 암호화 영역에 의해 제공된다.
TOP 유전자의 5'UTR로부터 유래된 핵산 서열은 진핵생물 TOP 유전자로부터 유래되고, 바람직하게는 식물 또는 동물 TOP 유전자, 더욱 바람직하게는 척색동물 TOP 유전자, 더욱 더 바람직하게는 척추동물 TOP 유전자, 가장 바람직하게는 인간 TOP 유전자와 같은 포유동물 TOP 유전자로부터 유래된다.
예를 들어, 5'UTR 요소는 바람직하게는 개시가 본원에 참조로서 포함된 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422로 이루어진 군으로부터, 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422의 동족체로부터, 이의 변이체로부터, 또는 바람직하게는 상응하는 RNA 서열로부터 선택되는 핵산 서열로부터 유래된 핵산을 포함하거나 이로 이루어진 5'-UTR 요소로부터 선택된다. 용어 "특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422의 동족체"는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422에 따른 서열에 이종(homologous)인 호모 사피엔스(homo sapiens)와 다른 종의 서열을 나타낸다.
바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422로부터 선택된 핵산 서열의 뉴클레오타이드 위치 5(즉, 서열에서 위치 5에 위치한 뉴클레오타이드)로부터 (서열의 3' 말단에 위치한) 시작 코돈 바로 옆에 뉴클레오타이드 위치 5', 예를 들어 ATG 서열 바로 옆에 뉴클레오타이드 위치 5'까지 이어진 핵산 서열 또는 이의 변이체, 또는 상응하는 RNA 서열로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특히 바람직하게, 5'UTR 요소는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1-1363, 서열번호 1395, 서열번호 1421 및 서열번호 1422로부터 선택된 핵산 서열의 5'TOP 바로 옆에 뉴클레오타이드 위치 3' 로부터 부터 (서열의 3' 말단에 위치한) 시작 코돈 바로 옆에 뉴클레오타이드 위치 5', 예를 들어, ATG 서열 바로 옆에 뉴클레오타이드 위치 5'까지 이어진 핵산 서열, 이의 변이체, 또는 상응하는 RNA 서열로부터 유래된다.
특히 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 리보솜 단백질을 암호화하는 TOP 유전자의 5'UTR, 또는 리보솜 단백질을 암호화하는 TOP 유전자의 5'UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 예를 들어, 5'UTR 요소는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 67, 170, 193, 244, 259, 554, 650, 675, 700, 721, 913, 1016, 1063, 1120, 1138, 및 1284-1360 중 임의의 것에 따른 핵산 서열, 상응하는 RNA, 본원에 설명된 바와 같은 이의 동족체, 또는 이의 변이체, 바람직하게는 5'TOP 모티브가 결여된 것의 5'UTR로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 상기 설명된 바와 같이, (서열의 3'말단에 위치한) ATG에 위치 5에서 5' 바로 옆에 뉴클레오타이드로 이어진 서열은 상기 서열의 5'UTR에 상응한다.
바람직하게, 5'UTR 요소는 리보솜 라지(Large) 단백질(RPL)을 암호화하는 TOP 유전자의 5'UTR 또는 리보솜 라지(Large) 단백질(RPL)을 암호화하는 TOP 유전자의 5'UTR의 동족체 또는 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 예를 들어, 5'UTR 요소는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 67, 259, 1284-1318, 1344, 1346, 1348-1354, 1357, 1358, 1421 및 1422 중 임의의 것에 따른 핵산 서열, 상응하는 RNA 서열, 본원에 정의된 바와 같은 이의 동족체, 또는 이의 변이체의 5'UTR, 바람직하게는 5'TOP 모티프가 결여된 것으로부터 유래된 핵산서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특히 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 리보솜 단백질 라지(Large) 32 유전자, 바람직하게는 척추동물 리보솜 단백질 라지(Large) 32(L32) 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 리보솜 단백질 라지(Large) 32(L32) 유전자, 가장 바람직하게는 인간 리보솜 단백질 라지(Large) 32(L32) 유전자의 5'UTR, 또는 리보솜 단백질 라지(Large) 32 유전자, 바람직하게는 척추동물 리보솜 단백질 라지(Large) 32(L32) 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 리보솜 단백질 라지(Large) 32(L32) 유전자, 가장 바람직하게는 인간 리보솜 단백질 라지(Large) 32(L32) 유전자의 5'UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 바람직하게 5'UTR 요소는 상기 유전자의 5'TOP를 포함하지 않는다.
따라서, 특히 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 서열번호 55(5' 말단 올리고피리미딘관이 결여된 인간 리보솜 단백질 라지(Large) 32의 5'-UTR: GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATC; 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1368에 상응함)에 따른 핵산 서열 또는 바람직하게는 상응하는 RNA 서열과 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나, 여기서, 적어도 하나의 5'UTR 요소는 서열번호 55에 따른 핵산 서열 또는 바람직하게는 상응하는 RNA 서열과 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열의 절편을 포함하거나 이로 이루어지고, 여기서, 바람직하게, 절편은 상기 설명된 바와 같고, 즉, 총 길이 5'UTR의 적어도 20%를 나타내는 뉴클레오타이드의 연속적인 스트레치이다. 바람직하게, 절편은 적어도 약 20개 뉴클레오타이드 이상, 바람직하게는 적어도 약 30개 뉴클레오타이드 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40개 뉴클레오타이드 이상의 길이를 나타낸다. 바람직하게, 절편은 본원에 설명된 바와 같은 기능적 절편이다.
일부 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는, 포유동물 예를 들어, RPSA, RPS2, RPS3, RPS3A, RPS4, RPS5, RPS6, RPS7, RPS8, RPS9, RPS10, RPS11, RPS12, RPS13, RPS14, RPS15, RPS15A, RPS16, RPS17, RPS18, RPS19, RPS20, RPS21, RPS23, RPS24, RPS25, RPS26, RPS27, RPS27A, RPS28, RPS29, RPS30, RPL3, RPL4, RPL5, RPL6, RPL7, RPL7A, RPL8, RPL9, RPL10, RPL10A, RPL11, RPL12, RPL13, RPL13A, RPL14, RPL15, RPL17, RPL18, RPL18A, RPL19, RPL21, RPL22, RPL23, RPL23A, RPL24, RPL26, RPL27, RPL27A, RPL28, RPL29, RPL30, RPL31, RPL32, RPL34, RPL35, RPL35A, RPL36, RPL36A, RPL37, RPL37A, RPL38, RPL39, RPL40, RPL41, RPLP0, RPLP1, RPLP2, RPLP3, RPLP0, RPLP1, RPLP2, EEF1A1, EEF1B2, EEF1D, EEF1G, EEF2, EIF3E, EIF3F, EIF3H, EIF2S3, EIF3C, EIF3K, EIF3EIP, EIF4A2, PABPC1, HNRNPA1, TPT1, TUBB1, UBA52, NPM1, ATP5G2, GNB2L1, NME2, UQCRB, 또는 이의 동족체(homolog) 또는 변이체로부터 선택되는 인간 TOP 유전자와 같은 척추동물의 5'UTR로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 5'UTR 요소를 포함하며, 여기서 바람직하게 5'UTR은 상기 유전자의 TOP-모티프(motif) 또는 5'TOP를 포함하지 않고, 여기서 선택적으로 5'UTR 요소는 5'말단 올리고피리미딘 트랙트(tract)(TOP)의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 다운스트림에 위치한 뉴클레오타이드를 갖는 이의 5'-말단에서 시작하고, 여기서 추가 선택적으로, TOP 유전자의 5'UTR로부터 유래된 5'UTR 요소는, 이것이 유래된 유전자의 시작 코돈(예를 들어 A(U/T)G)의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 업스트림에 위치한 뉴클레오타이드를 갖는 이의 3'-말단에서 종결한다.
추가의 특히 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), ATP 합성효소, H+ 수송(transporting), 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나아제　4 유전자(HSD17B4), 안드로겐-유도된 1 유전자(AIG1), 시토크롬 c 옥시다아제 서브유닛　VIc 유전자(COX6C), 또는 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라아제(애시드 세라미다아제) 1 유전자 (ASAH1)의 5'UTR로부터 또는 이의 변이체로부터, 바람직하게는 척추동물 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 척추동물 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 척추동물 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), 척추동물 ATP 합성효소, H+ 수송, 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 척추동물 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나아제　4 유전자(HSD17B4), 척추동물 안드로겐-유도된 1 유전자(AIG1), 척추동물 시토크롬 c 옥사다아제 서브유닛 VIc 유전자(COX6C), 또는 척추동물 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라아제(애시드 세라미다아제) 1 유전자(ASAH1)로부터 또는 이의 변이체로부터, 더욱 바람직하게는 포유동물 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), 포유동물 ATP 합성효소, H+ 수송, 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 포유동물 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나아제　4 유전자(HSD17B4), 포유동물 안드로겐 유도된 1 유전자(AIG1), 포유동물 시토크롬 c 옥사다아제 서브유닛 VIc 유전자(COX6C), 또는 포유동물 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라아제(애시드 세라미다아제) 1 유전자(ASAH1)로부터 또는 이의 변이체로부터, 가장 바람직하게는 인간 리보솜 단백질 라지 32 유전자(RPL32), 인간 리보솜 단백질 라지 35 유전자(RPL35), 인간 리보솜 단백질 라지 21 유전자(RPL21), 인간 ATP 합성효소, H+ 수송, 미토콘드리아 F1 복합체, 알파 서브유닛 1, 심근 (ATP5A1) 유전자, 인간 하이드록시스테로이드 (17-베타)　디하이드로게나아제　4 유전자(HSD17B4), 인간 안드로겐 유도된 1 유전자(AIG1), 인간 시토크롬 c 옥사다아제 서브유닛 VIc 유전자(COX6C), 또는 인간 N-아실스핑고신 아미도하이드롤라아제(애시드 세라미다아제) 1 유전자(ASAH1)로부터 또는 이의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 바람직하게 5'UTR 요소는 상기 유전자의 5'TOP를 포함하지 않는다.
특히 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 하이드록시스테로이드 (17-베타) 디하이드로게나아제 4 유전자(HSD17B4)로부터, 바람직하게는 척추동물 하이드록시스테로이드 (17-베타) 디하이드로게나아제 4 유전자(HSD17B4)로부터, 더욱 바람직하게는 포유동물 하이드록시스테로이드 (17-베타) 디하이드로게나아제 4 유전자(HSD17B4)로부터, 가장 바람직하게는 인간 하이드록시스테로이드 (17-베타) 디하이드로게나아제 4 유전자(HSD17B4)로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 서열번호 54에 따른 핵산 서열에 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 바람직하게, 5'UTR은 서열번호 54에 따른 핵산서열에 포함된 것과 같은 5'UTR을 포함하거나 이로 이루어진다.
따라서, 특히 바람직한 양태에서, 5'UTR 요소는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1368, 또는 서열번호 1412-1420에 따른 핵산 서열, 또는 상응하는 RNA 서열에 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 또는 여기서 적어도 하나의 5'UTR 요소는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1368, 또는 서열번호 1412-1420에 따른 핵산 서열에 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열의 절편을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서, 바람직하게, 절편은 상기 설명된 바와 같고, 즉, 5'UTR 전체 길이의 적어도 20% 등을 나타내는 뉴클레오타이드의 연속적인 스트레치이다. 바람직하게, 절편은 적어도 약 20개의 뉴클레오타이드 이상, 바람직하게는 적어도 약 30개의 뉴클레오타이드 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40개의 뉴클레오타이드 이상의 길이를 나타낸다. 바람직하게, 절편은 본원에 정의된 바와 같은 기능성 절편이다. 따라서, 특히 바람직한 양태에서,
5'UTR 요소는 서열번호 56(특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1414에 상응하는, 5' 말단 올리고피리미딘관: GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCG-GAGTAACTGCAAAG이 결여된 ATP5A1의 5'-UTR)에 따른 핵산 서열, 또는 바람직하게는 상응하는 RNA에 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 적어도 하나의 5'UTR 요소는 서열번호 26에 따른 핵산 서열 또는 상응하는 RNA 서열에 적어도 약 40%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 99%의 상동성을 갖는 핵산 서열의 절편을 포함하거나 이로 이루어지고, 여기서, 바람직하게, 절편은 상기 정의된 바와 같으며, 즉, 즉, 5'UTR 전체 길이의 적어도 20% 등을 나타내는 뉴클레오타이드의 연속적인 스트레치이다. 바람직하게, 절편은 적어도 약 20개의 뉴클레오타이드 이상, 바람직하게는 적어도 약 30개의 뉴클레오타이드 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40개의 뉴클레오타이드 이상의 길이를 나타낸다. 바람직하게, 절편은 본원에 정의된 바와 같은 기능성 절편이다.
추가의 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 척색동물 유전자, 바람직하게는 척추동물 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 유전자, 가장 바람직하게는 인간 유전자의 3'UTR로부터 유래되거나, 척색동물 유전자, 바람직하게는 척추동물 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 유전자, 가장 바람직하게는 인간 유전자의 3'UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 적어도 하나의 3'UTR 요소를 추가로 포함한다.
용어 '3'UTR 요소'는 3'UTR로부터 유래되거나 3'UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 핵산 서열을 나타낸다. 본 발명의 의미에서, 3'UTR 요소는 mRNA의 3'UTR을 대표할 수 있다. 따라서, 본 발명의 의미에서, 바람직하게, 3'UTR 요소는 mRNA, 바람직하게는 인공 mRNA의 3'UTR 일 수 있고, 또한 이는 mRNA의 3'UTR을 위한 전자 주형일 수 있다. 따라서, 3'UTR 요소는 바람직하게 mRNA의 3'UTR, 바람직하게는 인공 mRNA, 예컨대 유전적으로 조작된 벡터 컨스트럭트의 전사에 의해 수득된 mRNA의 3'UTR에 상응하는 핵산 서열이다. 바람직하게, 3'UTR 요소는 3'UTR의 기능을 실현하거나 3'UTR의 기능을 실현하는 서열을 암호화한다.
바람직하게, 독창적인 mRNA는 (안정한 mRNA를 제공하는) 반감기가 향상된 mRNA와 관련된 유전자로부터 유래될 수 있는 3'UTR 요소를 포함하며, 예를 들어, 하기 정의 및 설명된 바와 같은 3'UTR 요소이다.
특히 바람직한 양태에서, 3'UTR 요소는 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 타이로신 하이드록실라아제 유전자, 리폭시게나아제 유전자, 및 콜라겐 알파 유전자, 예컨대 콜라겐 알파 1(I) 유전자로 이루어진 군으로부터 선택되는 유전자의 3'UTR로부터 유래되거나, 개시가 본원에 참조로서 포함된 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1369-1390에 따른 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 타이로신 하이드록실라아제 유전자, 리폭시게나아제 유전자, 및 콜라겐 알파 유전자, 예컨대 콜라겐 알파 1(I) 유전자로 이루어진 군으로부터 선택되는 유전자의 3'UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특히 바람직한 양태에서, 3'UTR 요소는 알부민 유전자, 바람직하게는 척추동물 알부민 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 알부민 유전자, 가장 바람직하게는 서열번호 57에 따른 인간 알부민 유전자의 3'UTR로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
인간 알부민 3'UTR 서열번호 57:
CATCACATTT AAAAGCATCT CAGCCTACCA TGAGAATAAG AGAAAGAAAA TGAAGATCAA AAGCTTATTC ATCTGTTTTT CTTTTTCGTT GGTGTAAAGC CAACACCCTG TCTAAAAAAC ATAAATTTCT TTAATCATTT TGCCTCTTTT CTCTGTGCTT CAATTAATAA AAAATGGAAA GAATCT (특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1369에 상응함)
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1369 내지 1390에 다른 핵산으로부터 유래된 상응하는 RNA 또는 이의 절편, 동족체 또는 변이체를 포함하는 3'-UTR 요소를 포함하는 것이 특히 바람직하다.
가장 바람직하게, 3'-UTR 요소는 서열번호 58에 따른 인간 알부민 유전자의 절편으로부터 유래된 핵산 서열을 포함한다:
알부민7 3'UTR
CATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCT (특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1376에 상응하는 서열번호 58).
이러한 맥락에서, 본 발명의 독창적인 mRNA의 3'-UTR 요소는 서열번호 58에 따른 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 것이 XRMGL 바람직하다.
또 다른 특히 바람직한 양태에서, 3'UTR 요소는 α-글로빈 유전자, 바람직하게는 척추동물 α- 또는 β-글로빈 유전자, 더욱 바람직하게는 포유동물 α- 또는 β-글로빈 유전자, 가장 바람직하게는 서열번호 59 내지 61에 따른 인간 α- 또는 β-글로빈 유전자의 3'UTR로부터 유래된 핵산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
호모 사피엔스 헤모글로빈, 알파 1(HBA1)의 3'-UTR
GCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1370에 상응하는 서열번호 59)
호모 사피엔스 헤모글로빈, 알파 2(HBA2)의 3'-UTR
GCTGGAGCCTCGGTAGCCGTTCCTCCTGCCCGCTGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCGGCCCTTCCTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCAG (특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1371에 상응하는 서열번호 60)
호모 사피엔스 헤모글로빈, 베타(HBB)의 3'-UTR
GCTCGCTTTCTTGCTGTCCAATTTCTATTAAAGGTTCCTTTGTTCCCTAAGTCCAACTACTAAACTGGGGGATATTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTGCCTAATAAAAAACATTTATTTTCATTGC(특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1372에 상응하는 서열번호 61)
예를 들어, 3'UTR 요소는 바람직하게는 서열번호 62에 따른 인간 α-글로빈 유전자와 같은 α-글로빈 유전자의 3'UTR의 중심, α-복합-결합 부분을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다:
중심, α-글로빈 유전자의 3'UTR의 α-복합-결합 부분(또한 "muag"로서 본원에 명명됨)
GCCCGATGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCG (특허출원 WO2013/143700의 서열번호 1393에 상응하는 서열번호 62).
이러한 맥락에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA의 3'-UTR 요소는 서열번호 62에 따른 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열 또는 이의 동족체, 절편 또는 변이체를 포함하거나 이로 이루어지는 것이 특히 바람직하다.
용어 '[…] 유전자의 3'UTR로부터 유래된 핵산 서열'은 바람직하게 […] 유전자의 3'UTR 서열 또는 이의 부분에 기초한 핵산 서열을 나타내고, 예컨대 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 타이로신 하이드록실라아제 유전자, 리폭시게나아제 유전자, 또는 콜라겐 알파 유전자, 예컨대 콜라겐 알파 1(I) 유전자, 바람직하게는 알부민 유전자 또는 이의 부분의 3'UTR에 기초한 핵산 서열을 나타낸다. 이 용어는 3'UTR 서열 전체에 상응하는 서열, 즉, 유전자의 전체 3'UTR 서열, 및 유전자의 3'UTR 서열의 절편에 상응하는 서열, 예컨대, 알부민 유전자, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 타이로신 하이드록실라아제 유전자, 리폭시게나아제 유전자, 또는 콜라겐 알파 유전자, 예컨대 콜라겐 알파 1(I) 유전자, 바람직하게는 알부민 유전자에 상응하는 서열을 포함한다.
용어 '[…] 유전자의 3'UTR의 변이체로부터 유래된 핵산 서열'은 바람직하게 유전자의 3'UTR의 변이체에 기초한 핵산 서열을 나타내고, 예컨대 알부민 유전자의, α-글로빈 유전자, β-글로빈 유전자, 타이로신 하이드록실라아제 유전자, 리폭시게나아제 유전자, 또는 콜라겐 알파 유전자, 예컨대 콜라겐 알파 1(I) 유전자, 또는 상기 설명된 바와 같은 이의 부분의 3'UTR 서열의 변이체에 기초한 핵산 서열을 나타낸다. 이러한 용어는 유전자의 3'UTR의 변이체의 전체 서열, 즉, 유전자의 총 길이 변이체 3'UTR 서열에 상응하는 서열, 및 유전자의 3'UTR 서열의 변이체의 절편에 상응하는 서열을 포함한다. 이러한 맥락에서, 절편은 바람직하게 총-길이 변이체 3'UTR의 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90%를 나타내는 총-길이 변이체 3'UTR 내 뉴클레오타이드의 연속적인 스트레치에 상응하는 뉴클레오타이드의 연속적인 스트레치로 이루어진다. 본 발명의 의미에서, 이와 같은 변이체의 절편은 바람직하게 본원에 설명된 바와 같이 변이체의 기능성 절편이다.
바람직하게, 적어도 하나의 5'UTR 요소 및 적어도 하나의 3'UTR 요소는 상기 설명된 바와 같은 본 발명에 따른 변형된 RNA 유래 단백질 생산을 증가시키는데 상승적인 역할을 한다. 더욱 바람직하게, 적어도 하나의 5'UTR 요소 및/또는 적어도 하나의 3'UTR 요소는 단백질 생산을 증가시키기 위해서 변형된 RNA의 제트 인젝션과 함께 상승적인 역할을 한다.
추가의 특정 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 - 적어도 하나의 변형을 첨가하여 - 내부 리보솜 유입점(internal ribosome entry site)(IRES) 서열 또는 IRES-모티프를 추가로 포함할 수 있고, 예를 들어, 만약 변형된 RNA가 2 이상의 펩타이드 또는 단백질을 암호화하면 여러 오픈 리딩 프레임으로 분리될 수 있다. IRES-서열은 만약 mRNA가 바이- 또는 멀티시스트론 RNA라면 특히 도움이 될 수 있다.
본 발명의 맥락에서 사용된 바와 같이, 용어 "RNA"는 한정되지 않고 임의의 리보 핵산을 나타낸다. 따라서, 용어 RNA는 예를 들어, 바이러스 RNA, 레플리콘(replicon) 또는 mRNA로서 암호화 RNA로서 기능하는 리보 핵산에, 또는 임의의 유형의 인공 RNA 컨스트럭트에 동등하게 적용한다.
바람직한 양태에서, 변형된 RNA는 소 간섭 RNA(small interfering RNA)(siRNA) 또는 소 헤어핀 RNA(short hairpin RNA)(shRNA)가 아니다. 바람직하게, 변형된 RNA는 저항성 유전자, 바람직하게는 MDR1/P-gp와 같은 다중 약물 저항성 유전자에 대항하는 siRNA 또는 shRNA가 아니다.
본 발명에 따르면, RNA는 RNA의 암호화 영역에 의해 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함한다. 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 RNA는 본원에 정의된 바와 같은 변형 중 적어도 하나의 유형을 포함한다. 또 다른 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 RNA는 RNA의 암호화 영역에 의해 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 변형 중 적어도 두 별개 유형을 포함한다. 바람직하게, 본 발명에 따른 RNA는 변형 중 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 별개 유형을 포함한다. 대신에, 또는 다른 다른 유형의 변형과 조합하여, 본원에 정의된 바와 같은 특정 변형, 예컨대 3'UTR, 히스톤 스템-루프 또는 폴리 C 서열은 또한 본 발명에 따른 변형된 RNA에 하나 이상의 복제물(copy)로 존재할 수 있다. 이는 바이- 또는 멀티시스트론 RNA에 대해 특히 마찬가지이다. 본 발명에 따른 변형된 RNA는 여러 별개의 변형의 조합을 포함할 수 있으며, 예컨대, 임의의, 예를 들어, 5'UTR, 폴리 C 서열, 폴리 A 서열, 3'UTR 또는 히스톤 스템-루프와 GC-풍부(GC-enrichment)를 조합한 변형, 여기서 각각 별개의 변형은 RNA 당 단일 복제물의 형태 또는 RNA 당 다수의 복제물 형태로 존재할 수 있다.
본 발명에 따른 RNA의 바람직한 양태는 그러므로 다음을 포함할 수 있으며, 예를 들어,
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 3';
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 폴리(A)/(C) 서열 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 폴리(A)/(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 아데닐산중합반응 신호 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 아데닐산중합반응 신호 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 히스톤 스템-루프 - 폴리(A)/(C) 서열 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 히스톤 스템-루프 - 히스톤 스템-루프 - 아데닐산중합반응 신호 - 3'; 또는
5' - 암호화 영역 - 폴리(A)/(C) 서열 - 폴리(A)/(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3'; 등
여기서, 암호화 영역은 바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 GC 풍부 서열을 포함하거나 이로 이루어지고,
여기서, 5'UTR 요소는 바람직하게 암호화 영역의 5' 측면에 존재하고/하거나 3'UTR 요소는 바람직하게 암호화 영역의 3' 말단 및 RNA의 3'말단 사이에 존재한다.
변형된 RNA의 특정 양태는 예를 들어, 하기 나열된 바와 같은 구조적 특징 및 변형의 조합 중 임의의 하나를 포함할 수 있다:
5' - 암호화 영역 - 폴리(A) 서열 - 3';
5' - 암호화 영역 - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 3';
5' - 암호화 영역 - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3';
5' - 암호화 영역 - 3'UTR - 폴리(A) 서열 - 3';
5' - 암호화 영역 - 3'UTR - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 3';
5' - 암호화 영역 - 3'UTR - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3';
5' - 5'UTR - 암호화 영역 - 폴리(A) 서열 - 3';
5' - 5'UTR - 암호화 영역 - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 3';
5' - 5'UTR - 암호화 영역 - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3';
5' - 암호화 영역 - 3'UTR - 폴리(A) 서열 - 3';
5' - 5'UTR - 암호화 영역 - 3'UTR - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 3';
5' - 5'UTR - 암호화 영역 - 3'UTR - 폴리(A) 서열 - 폴리(C) 서열 - 히스톤 스템-루프 - 3';
여기서, 암호화 영역은 바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 GC 풍부 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
암호화된 단백질:
바람직한 양태에서, 변형된 RNA는 치료 단백질 또는 펩타이드를 암화화하는 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 또 다른 양태에서, 병원성 항원, 종양성 항원, 알러지성 항원 또는 자가 면역성 항원과 같은 항원은 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임에 의해 암호화된다. 거기에, 항원을 암호화하는 변형된 RNA의 투여는 상기 항원을 포함하는 질환에 대한 유전적 백신 접종 접근에 사용된다.
다른 양태에서, 항체는 본 발명에 따른 변형된 RNA의 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임에 의해 암호화된다.
바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 보고 유전자(reporter gene) 또는 표지 유전자(marker gene)를 포함하지 않는다. 바람직하게, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 예를 들어, 루시퍼라아제(luciferase); 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein)(GFP) 및 이의 변이체(예컨대, eGFP, RFP 또는 BFP); α-글로빈; 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라아제(HGPRT); β-갈락토시다아제; 갈락토키나아제; 알카라인 포스파타아제; 분비 배아 알카라인 포스파타아제(secreted embryonic alkaline phosphatase)(SEAP)) 또는 저항성 유전자(예컨대, 네오마이신, 퓨로마이신, 하이그로마이신 및 제오신(zeocin))을 암호화하지 않는다. 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 루시퍼라아제를 암호화하지 않는다. 또 다른 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 GFP 또는 이의 변이체를 암호화하지 않는다.
항원:
병원성 항원(Pathogenic antigens):
본 발명에 따른 변형된 RNA는 병원성 항원 또는 이의 절편, 변이체 또는 유도체를 포함하는 단백질 또는 펩타이드를 암호화할 수 있다. 이와 같은 병원성 항원은 개체, 특히 포유동물 개체, 더욱 특히 인간에서 면역적 반응을 일으키는 병원성 유기체, 특히 박테리아, 바이러스 또는 원생동물(다세포(multicellular)) 병원성 유기체로부터 유래된다. 더욱 구체적으로, 바람직하게 병원성 항원은 표면 항원, 예를 들어, 바이러스 또는 박테리아 또는 원생동물 유기체의 표면에 위치한 단백질(또는 단백질의 절편, 예를 들어, 표면 항원의 외부 부분)이다.
병원성 항원은 바람직하게 감염성 질환과 관련된 병원체로부터 유래하며, 이는 바람직하게는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 아나플라스마 속(Anaplasma genus), 아나플라스마 파고시토필리움(Anaplasma phagocytophilum), 브라질구충(Ancylostoma braziliense), 십이지장충(Ancylostoma duodenale), 용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum), 회충(Ascaris lumbricoides), 아스퍼질러스 속(Aspergillus genus), 아스트로비리다에(Astroviridae), 바베시아 속(Babesia genus), 탄저균(Bacillus anthracis), 세레우스 균(Bacillus cereus), 바르토넬라 헨셀라에(Bartonella henselae), BK 바이러스, 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis), 블라스토미세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 백일해균(Bordetella pertussis), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi), 보렐리아 속(Borrelia genus), 보렐리아 종(Borrelia spp), 브루셀라 속(Brucella genus), 말레이사상충(Brugia malayi), 부니아바이러스 패밀리(Bunyaviridae family), 버크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia) 및 다른 버크홀데리아 종(Burkholderia species), 버크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 버크홀데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei), 칼리시비리대 패밀리(Caliciviridae family), 캠필로박터 속(Campylobacter genus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 종(Candida spp), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미도필라 뉴모니아(Chlamydophila pneumonia), 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), CJD 프리온, 간디스토마(Clonorchis sinensis), 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum), 클로스트리디움 디피실리(Clostridium difficile), 클로스트리디움 페르프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 페르프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 종(Clostridium spp), 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani), 코시디오이디스 종(Coccidioides spp), 코로나바이러스(coronaviruses), 코리네박테리아 디프테리아(Corynebacterium diphtheria), 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii), 크리민 콩고 출혈열 바이러스(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토스포리디움 속(Cryptosporidium genus), 사이토메갈로바이러스(Cytomegalovirus)(CMV), 뎅기열 바이러스(Dengue viruses)(DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4), 이핵아메바 프라질리스(Dientamoeba fragilis), 에볼라바이러스(Ebolavirus, EBOV), 에키노코커스 속(Echinococcus genus), 엘리키아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis), 엘리키아 에인지(Ehrlichia ewingii), 엘리키아 속(Ehrlichia genus), 이핵아메바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica), 엔테로코커스 속(Enterococcus genus), 엔테로바이러스 속(Enterovirus genus), 엔테로바이러스(Enteroviruses), 주로 콕사키 A 바이러스(Coxsackie A virus) 및 엔테로바이러스 71 (EV71), 에피데모피톤 종(Epidermophyton spp), 엡스테인바 바이러스(Epstein-Barr Virus, EBV), 대장균(Escherichia coli) O157:H7, O111 및 O104:H4, 파스시올라 헤파티카(Fasciola hepatica) 및 파스시올라 기간티카(Fasciola gigantica), FFI 프리온, 필라리오데아 수퍼패밀리(Filarioidea superfamily), 플라비바이러스(Flaviviruses), 프란시엘라 투라렌시스(Francisella tularensis), 푸소박테리움 속(Fusobacterium genus), 게오트리쿰 칸디툼(Geotrichum candidum), 지알디아편모충(Giardia intestinalis), 악구충속(Gnathostoma spp), GSS 프리온, 구아나리토 바이러스(Guanarito virus), 헤모필루스 듀크레이(Haemophilus ducreyi), 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori), 헤니파바이러스(Henipavirus)(헨드라 바이러스(Hendra virus) 니파 바이러스(Nipah virus)), A형 간염 바이러스(Hepatitis A Virus), B형 간염 바이러스(Hepatitis B Virus), C형 간염 바이러스(Hepatitis C Virus), D형 간염 바이러스(Hepatitis D Virus), E형 간염 바이러스(Hepatitis E Virus), 단순포진 바이러스 1 및 2(Herpes simplex virus 1 and 2)(HSV-1 및 HSV-2), 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum), HIV(인간 면역결핍 바이러스(Human immunodeficiency virus)), 호르테아 워넥키(Hortaea werneckii), 인간 보카바이러스(Human bocavirus, HBoV), 인간 헤르페스바이러스 6(Human herpesvirus 6, HHV-6) 및 인간 헤르페스 바이러스 7(Human herpesvirus 7, HHV-7), 인간 메타뉴모바이러스(Human metapneumovirus, hMPV), 인유두종 바이러스(Human papillomavirus, HPV), 인간 파라인플루엔자 바이러스(Human parainfluenza viruses, HPIV), 일본 뇌염 바이러스(Japanese encephalitis virus), JC 바이러스, 주닌 바이러스(Junin virus), 킨젤라 킨가에(Kingella kingae), 클렙시엘라균(Klebsiella granulomatis), 쿠루 프리온(Kuru prion), 라싸 바이러스(Lassa virus), 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 리슈마니아 속(Leishmania genus), 렙토스피라 속(Leptospira genus), 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes), 림프구성 맥락 수막염 바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV), 마추포 바이러스(Machupo virus), 말라세지아 종(Malassezia spp), 마버그 바이러스(Marburg virus), 홍역 바이러스(Measles virus), 메타고니무스 요카가와이(Metagonimus yokagawai), 마이크로스포리디아 필룸(Microsporidia phylum), 몰루스쿰 콘타기오숨 바이러스(Molluscum contagiosum virus, MCV), 멈프 바이러스(Mumps virus), 마이코박테리움 레프레(Mycobacterium leprae) 및 마이코박테리움 레프로마토시스(Mycobacterium lepromatosis), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 마이코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 마이코플라스마 뉴모니에(Mycoplasma pneumoniae), 네글레리아 파울러리(Naegleria fowleri), 아메리카 구충(Necator americanus), 나이세리아 고노르호애(Neisseria gonorrhoeae), 나이세리아 메닌지티디스(Neisseria meningitides), 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroids), 노카디아 종(Nocardia spp), 온코세르카 볼부러스(Onchocerca volvulus), 오리엔티아 쯔쯔가무시(Orientia tsutsugamushi), 오르쏘믹소바이러스 패밀리(Orthomyxoviridae family)(인플루엔자), 브라질 파라콕시디오이디즈(Paracoccidioides brasiliensis), 파라고니무스 종(Paragonimus spp), 파라고니무스 웨스터마니(Paragonimus westermani), 파보바이러스(Parvovirus) B19, 파스퇴렐라 속(Pasteurella genus), 플라스모디움 속(Plasmodium genus), 뉴모시스티스 지로베시(Pneumocystis jirovecii), 폴리오바이러스(Poliovirus), 광견병 바이러스(Rabies virus), 호흡기 합포체 바이러스(Respiratory syncytial virus, RSV), 리노바이러스(Rhinovirus), 리노바이러스(rhinoviruses), 리케치아 아카리(Rickettsia akari), 리케치아 속(Rickettsia genus), 리케치아 프로와제키(Rickettsia prowazekii), 리케치아 리켓시(Rickettsia rickettsia), 리케치아 티피(Rickettsia typhi), 리프밸리열바이러스(Rift Valley fever virus), 로타바이러스(Rotavirus), 루벨라 바이러스(Rubella virus), 사비아 바이러스(Sabia virus), 살모넬라 속(Salmonella genus), 개선충(Sarcoptes scabiei), SARS 코로나바이러스, 주혈흡충 속(Schistosoma genus), 시겔라 속(Shigella genus), 신 놈브레 바이러스(Sin Nombre virus), 한타바이러스(Hantavirus), 스포로트릭 센키(Sporothrix schenckii), 스타필로코커스 속(Staphylococcus genus), 스타필로코커스 속(Staphylococcus genus), 스트렙토코커스 아갈락티아(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 뉴모니에(Streptococcus pneumoniae), 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 분선충(Strongyloides stercoralis), 태니아 속(Taenia genus), 태니아 솔리움(Taenia solium), 진드기 매개 뇌염 바이러스(Tick-borne encephalitis virus, TBEV), 견회충(Toxocara canis) 또는 고양이 회충(Toxocara cati), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 트레포네마 팔리둠(Treponema pallidum), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 트리코모나스 바기날리스(Trichomonas vaginalis), 트리코피톤 종(Trichophyton spp), 트리쿠리스 트리키우라(Trichuris trichiura), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 우레플라스마 우렐리티쿰(Ureaplasma urealyticum), 수두 대상 포진 바이러스(Varicella zoster virus, VZV), 수두 대상 포진 바이러스(Varicella zoster virus, VZV), 바리올라 메이저(Variola major) 또는 바리올라 마이너(Variola minor), vCJD 프리온, 베네스 웰라형 마뇌염 바이러스(Venezuelan equine encephalitis virus), 비브리오 콜레라(Vibrio cholera), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 서부 마뇌염 바이러스(Western equine encephalitis virus), 반크로프트 사상충(Wuchereria bancrofti), 황열병 바이러스(Yellow fever virus), 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 및 예르시니아 슈도투버쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis)로부터 유래된 항원으로부터 선택된다.
이러한 맥락에서, 특히 바람직한 항원은 인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 단순 포진 바이러스(HSV), 인유두종바이러스(HPV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 플라스모디움(Plasmodium), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 댕기 바이러스(Dengue virus), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 사이토메갈로바이러스(CMV), B형 간염 바이러스, 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 광견병 바이러스 및 황열병 바이러스로부터 선택된 병원체이다.
바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 광견병 바이러스 단백질 또는 펩타이드 또는 이의 항원성 절편을 암호화한다. 바람직하게, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 광견병 바이러스의 당단백질 G(RAV-G), 핵단백질 N(RAV-N), 인단백질 P(RAV-P), 매트릭스 단백질 M(RAV-M) 또는 RNA 폴리머라아제 L(RAV-L), 또는 이의 절편, 변이체 또는 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 항원성 단백질 또는 펩타이드를 암호화한다.
또 다른 바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 호흡기 합포체 바이러스(respiratory syncytial virus)(RSV) 단백질 또는 펩타이드 또는 이의 항원성 절편을 암호화한다. 바람직하게, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 호흡기 합포체 바이러스(RSV)의 융합 단백질 F, 당단백질 G, 짧은 소수성 단백질 SH, 매트릭스 단백질 M, 핵단백질 N, 라지 폴리머라아제 L, M2-1 단백질, M2-2 단백질, 인단백질 P, 비-구조 단백질 NS1 또는 비-구조 단백질 NS2, 또는 이의 절편, 변이체 또는 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 항원성 단백질 또는 펩타이드를 암호화한다.
종양 항원:
추가의 양태에서, 본 발명에 따른 변형된 RNA는 종양 항원, 상기 종양 항원의 절편, 변이체 또는 유도체를 포함하는 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 단백질 또는 펩타이드를 암호화할 수 있다, 바람직하게, 여기서 종양 항원은 멜라노사이트-특이적 항원(melanocyte-specific antigen), 암-고환 항원(cancer-testis antigen) 또는 종양-특이적 항원이며, 바람직하게는 CT-X 항원, 비-X CT-항원, CT-X 항원에 대한 결합 파트너(binding partner) 또는 비-X CT 항원에 대한 결합 파트너 또는 종양-특이적 항원이고, 더욱 바람직하게는 CT-X 항원, 비-X CT-항원에 대한 결합 파트너 또는 종양-특이적 항원 또는 상기 종양 항원의 절편, 변이체 또는 유도체이며; 여기서 각각의 핵산 서열은 상이한 펩타이드 또는 단백질을 암호화하고; 여기서, 5T4, 707-AP, 9D7, AFP, AlbZIP HPG1, 알파-5-베타-1-인테그린, 알파-5-베타-6-인테그린, 알파-액티닌-4/m, 알파-메틸아실-조효소 A 라세마아제, ART-4, ARTC1/m, B7H4, BAGE-1, BCL-2, bcr/abl, 베타-카테닌/m, BING-4, BRCA1/m, BRCA2/m, CA 15-3/CA 27-29, CA 19-9, CA72-4, CA125, 칼레티큘린, CAMEL, CASP-8/m, 카텝신 B, 카텝신 L, CD19, CD20, CD22, CD25, CDE30, CD33, CD4, CD52, CD55, CD56, CD80, CDC27/m, CDK4/m, CDKN2A/m, CEA, CLCA2, CML28, CML66, COA-1/m, 코액토신-유사 단백질, 콜라주(collage) XXIII, COX-2, CT-9/BRD6, Cten, 사이클린 B1, 사이클린 D1, cyp-B, CYPB1, DAM-10, DAM-6, DEK-CAN, EFTUD2/m, EGFR, ELF2/m, EMMPRIN, EpCam, EphA2, EphA3, ErbB3, ETV6-AML1, EZH2, FGF-5, FN, Frau-1, G250, GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE7b, GAGE-8, GDEP, GnT-V, gp100, GPC3, GPNMB/m, HAGE, HAST-2, 헵신, Her2/neu, HERV-K-MEL, HLA-A*0201-R17I, HLA-A11/m, HLA-A2/m, HNE, 호메오박스 NKX3.1, HOM-TES-14/SCP-1, HOM-TES-85, HPV-E6, HPV-E7, HSP70-2M, HST-2, hTERT, iCE, IGF-1R, IL-13Ra2, IL-2R, IL-5, 미성숙 라미닌 수용체(immature laminin receptor), 칼리크레인-2, 칼리크레인-4, Ki67, KIAA0205, KIAA0205/m, KK-LC-1, K-Ras/m, LAGE-A1, LDLR-FUT, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A12, MAGE-B1, MAGE-B2, MAGE-B3, MAGE-B4, MAGE-B5, MAGE-B6, MAGE-B10, MAGE-B16, MAGE-B17, MAGE-C1, MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-D1, MAGE-D2, MAGE-D4, MAGE-E1, MAGE-E2, MAGE-F1, MAGE-H1, MAGEL2, 맘마글로빈 A, MART-1/멜란-A, MART-2, MART-2/m, 매트릭스 단백질(matrix protein) 22, MC1R, M-CSF, ME1/m, 메소텔린(mesothelin), MG50/PXDN, MMP11, MN/CA IX-항원, MRP-3, MUC-1, MUC-2, MUM-1/m, MUM-2/m, MUM-3/m, 미오신 제I군/m, NA88-A, N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라아제-V, 네오-PAP, 네오-PAP/m, NFYC/m, NGEP, NMP22, NPM/ALK, N-Ras/m, NSE, NY-ESO-1, NY-ESO-B, OA1, OFA-iLRP, OGT, OGT/m, OS-9, OS-9/m, 오스테오칼신, 오스테오폰틴, p15, p190 마이너(minor) bcr-abl, p53, p53/m, PAGE-4, PAI-1, PAI-2, PAP, PART-1, PATE, PDEF, Pim-1-키나아제, Pin-1, Pml/PAR알파, POTE, PRAME, PRDX5/m, 프로스테인, 프로티나아제-3, PSA, PSCA, PSGR, PSM, PSMA, PTPRK/m, RAGE-1, RBAF600/m, RHAMM/CD168, RU1, RU2, S-100, SAGE, SART-1, SART-2, SART-3, SCC, SIRT2/m, Sp17, SSX-1, SSX-2/HOM-MEL-40, SSX-4, STAMP-1, STEAP-1, 서바이빈(survivin), 서바이빈-2B, SYT-SSX-1, SYT-SSX-2, TA-90, TAG-72, TARP, TEL-AML1, TGF베타, TGF베타RII, TGM-4, TPI/m, TRAG-3, TRG, TRP-1, TRP-2/6b, TRP/INT2, TRP-p8, 티로시나아제, UPA, VEGFR1, VEGFR-2/FLK-1, WT1 및 림프 혈액 세포(lymphoid blood cell)의 이뮤노글로불린 이디오타입(idiotype) 또는 림프 혈액 세포의 T 세포 수용체 이디오타입, 또는 상기 종양 항원의 절편, 변이체 또는 유도체를 암호화하는 적어도 하나의 핵산 서열; 바람직하게는, 서바이빈 또는 이의 동족체(homologue), MAGE-계 또는 이의 결합 파트너(binding partner) 유래의 항원 또는 상기 종양 항원의 절편, 변이체 또는 유도체이다.
이러한 맥락에서, 종양 항원 NY-ESO-1, 5T4, MAGE-C1, MAGE-C2, 서바이빈(Survivin), Muc-1, PSA, PSMA, PSCA, STEAP 및 PAP는 특히 바람직하다.
이러한 맥락에서, 특히 바람직하게, 본 발명에 따른 제트 인젝션에 의해 투여되는 적어도 하나의 변형된 RNA는 다음 항원의 조합 중 하나를 암호화한다:
● Muc-1, PSA, PSMA, PSCA, 및 STEAP
● Muc-1, PSA, PSMA, PSCA, 및 PAP
● Muc-1, PSA, PSMA, STEAP 및 PAP
● Muc-1, PSA, PSCA, STEAP 및 PAP
● Muc-1, PSMA, PSCA, STEAP 및 PAP
● PSA, PSMA, PSCA, STEAP 및 PAP
● Muc-1, PSA, PSMA, PSCA, STEAP 및 PAP
또 다른 양태에서, 특히 바람직하게, 본 발명에 따른 제트 인젝션에 의해 투여되는 적어도 하나의 변형된 RNA는 다음 항원의 조합 중 하나를 암호화한다:
● NY-ESO-1, 5T4, MAGE-C1, MAGE-C2, 및 서바이빈(Survivin)
● NY-ESO-1, 5T4, MAGE-C1, MAGE-C2, 및 Muc-1
● NY-ESO-1, 5T4, MAGE-C1, , 서바이빈 및 Muc-1
● NY-ESO-1, 5T4, , MAGE-C2, 서바이빈 및 Muc-1
● NY-ESO-1, MAGE-C1, MAGE-C2, 서바이빈 및 Muc-1
● 5T4, MAGE-C1, MAGE-C2, 서바이빈 및 Muc-1
● NY-ESO-1, 5T4, MAGE-C1, MAGE-C2, 서바이빈 및 Muc-1
바람직한 양태에서, 제트 인젝션에 의해 투여되는 변형된 RNA는 치료 단백질 또는 이의 절편, 변이체 또는 유도체를 포함하는 단백질 또는 펩타이드를 암호화한다.
본원에 정의된 바와 같은 치료 단백질은 임의의 유전성(inherited) 또는 후천성(acquired) 질환의 치료에 유익하거나, 개인(individual)의 상태를 향상시키는 펩타이드 또는 단백질이다. 특히, 치료 단백질은 치료제의 생성에 큰 역할을 하며, 다른 기능 중 유전적 오류를 변형 및 수리, 암세포 또는 병원체 감염된 세포를 파괴, 면역계 장애를 치료, 대사 또는 내분비 장애를 치료할 수 있다. 예를 들어, 에리스로포이에틴(EPO), 단백질 호르몬은 신장 합병증의 일반적인 원인인 적혈구 결핍 환자를 치료하는데 이용될 수 있다. 또한, 어쥬번트 단백질, 치료 항체는 치료 단백질 및 예를 들어, 폐경기 여성의 치료에 이용될 수 있는 호르몬 대체 요법(hormone replacement therapy)에 의해서도 포함된다. 더욱 최근 접근에서, 환자의 체세포는 분쟁(disputed) 줄기세포 요법을 대체하는 다능성 줄기세포로 역분화하는데 사용된다. 또한, 체세포의 역분화에 사용되거나 줄기세포의 분화에 사용되는 이들 단백질은 치료 단백질로서 본원에 정의된다. 또한, 치료 단백질은 예를 들어, 상처 치료, 조직 재생, 신생 혈관 생성 등 다른 목적을 위해 사용될 수 있다.
따라서, 치료 단백질은 예를 들어, 감염성 질환, 신생물(neoplasm)(예를 들어, 암 또는 종양 질환), 혈액 및 혈액-형성 기관 질환, 내분비, 영양성 및 대사 질환, 신경계 질환, 순환계 질환, 호흡계 질환, 소화계 질환, 피부 및 피하 조직 질환, 근골격계 및 결합 조직 질환 및 비뇨생식계(genitourinary system) 질환과 같은 다양한 질환(독립적으로 유전성 또는 후천성인 경우)의 치료를 포함하는 다양한 목적에 사용될 수 있다.
이러한 맥락에서, 그 중에서도 대사 또는 내분비 장애의 치료에 사용될 수 있는 특히 바람직한 치료 단백질은 산 스핑고마이엘리나제(Acid sphingomyelinase)(니만-피크병(Niemann-Pick disease)), 아디포타이드(Adipotide)(비만), 아갈시다아제-베타(Agalsidase-beta)(인간 갈락토시다아제 A(human galactosidase A))(파브리병(Fabry disease); 신장 및 심혈관 합병증을 일으킬 수 있는 지질의 축적을 막아줌), 알글루코시다아제(Alglucosidase)(폼피병(Pompe disease)(제II형 글리코겐 축적병)), 알파-갈락토시다아제 A(alpha-galactosidase A)(알파-GAL A, 아갈시다아제 알파(Agalsidase alpha))(파브리병(Fabry disease)), 알파-글루코시다아제(글리코겐 축적병(GSD), 모르버스 폼피(Morbus Pompe)), 알파-L-이듀로니다아제(alpha-L-iduronidase)(뮤코다당증(mucopolysaccharidoses)(MPS), 후를러 증후군(Hurler syndrome), 샤이 증후군(Scheie syndrome)), 알파-N-아세틸글루코사미니다아제(alpha-N-acetylglucosaminidase)(산필립포 증후군(Sanfilippo syndrome)), 암피레귤린(Amphiregulin)(암, 대사 장애), 안지오포이에틴(Angiopoietin)((Ang1, Ang2, Ang3, Ang4, ANGPTL2, ANGPTL3, ANGPTL4, ANGPTL5, ANGPTL6, ANGPTL7)(신생 혈관 생성, 혈관의 안정화), 베타셀룰린(Betacellulin)(대사 장애), 베타-글루쿠로니다아제(슬라이 증후군(Sly syndrome)), 골 형태 형성 단백질 BMP(BMP1, BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP10, BMP15)(재생 효과, 골-연관 상태, 만성 신장병(CKD)), CLN6 단백질(CLN6 질환 - 비정형 후기 영아형(Atypical Late Infantile), 후발성 변이형(Late Onset variant), 초기 청소년형(Early Juvenile), 신경 세로이드 리포푸신증(Neuronal Ceroid Lipofuscinoses)(NCL)), 상피 성장 인자(Epidermal growth factor)(EGF)(상처 치유, 세포 성장, 증식 및 분화 조절), 에피겐(Epigen)(대사 장애), 에피레귤린(Epiregulin)(대사 장애), 섬유 아세포 성장 인자(Fibroblast Growth Factor)(FGF, FGF-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, FGF-10, FGF-11, FGF-12, FGF-13, FGF-14, FGF-16, FGF-17, FGF-17, FGF-18, FGF-19, FGF-20, FGF-21, FGF-22, FGF-23)(상처 치유, 신생 혈관 생성, 내분비 질환, 조직 재생), 갈설파아제(Galsulphase)(제VI형 뮤코다당증(Mucopolysaccharidosis)), 그렐린(Ghrelin)(과민성 대장 증후군(irritable bowel syndrome)(IBS), 비만, 프래더-윌리 증후군(Prader-Willi syndrome), 제II형 진성 당뇨병(diabetes mellitus)), 글루코세레브로시다아제(Glucocerebrosidase)(고셔병(Gaucher's disease)), GM-CSF(재생 효과, 백혈구 세포 생산, 암), 헤파린 결합 EGF 유사 성장 인자(HB-EGF)(상처 치유, 심장 비대 및 심장 발달 및 기능), 간세포 성장 인자 HGF(재생 효과, 상처 치유), 헵시딘(Hepcidin)(철 대사 질환, 베타-지중해 빈혈), 인간 알부민(알부민 생산 감소(저단백혈증), 알부민 소실 증가(신증후군), 저혈량증, 고빌리루빈혈증), 이듀르설파아제(Idursulphase)(이듀로네이트-2-설파타아제(Iduronate-2-sulphatase))(제II형 뮤코다당증(헌터 증후군(Hunter syndrome))), 인테그린 αVβ3, αVβ5 및 αVβ1(결합 매트릭스 거대 분자 및 프로티나아제, 신생 혈관 생성), 이듀로네이트 설파타아제(Iuduronate sulfatase)(헌터 증후군(Hunter syndrome)), 라로니다아제(Laronidase)(제I형 뮤코다당증의 후를러-샤이(Hurler-Scheie)형 및 후를러(Hurler)형), N-아세틸갈락토사민-4-설파타아제(rhASB; 갈설파아제, 아릴설파타아제(Arylsulfatase) A(ARSA), 아릴설파타아제 B(ARSB))(아릴설파타아제 B 결핍증, 마로토-라미 증후군(Maroteaux-Lamy syndrome), 제VI형 뮤코다당증), N-아세틸글루코사민-6-설파타아제(산필립포 증후군(Sanfilippo syndrome)), 신경 성장 인자(NGF, 뇌 유래 신경 영양 인자(BDNF), 뉴로트로핀-3(Neurotrophin-3)(NT-3) 및 뉴로트로핀 4/5(Neurotrophin 4/5)(NT-4/5)(재생 효과, 심혈관 질환, 관상 동맥 경화, 비만, 제2형 당뇨병, 대사 증후군, 급성 관상 동맥 증후군, 치매, 우울증, 정신 분열증(schizophrenia), 자폐증(autism), 레트 증후군(Rett syndrome), 신경성 식욕 부진증(anorexia nervosa), 폭식증(bulimia nervosa), 상처 치유, 피부 궤양, 각막 궤양, 알츠하이머 질환), 뉴레귤린(Neuregulin)(NRG1, NRG2, NRG3, NRG4)(대사 장애, 정신 분열증), 뉴로필린(Neuropilin)(NRP-1, NRP-2)(신생 혈관 생성, 축삭 돌기 유도, 세포 생존, 이동), 오베스타틴(Obestatin)(과민성 대장 증후군(IBS), 비만, 프래더-윌리 증후군(Prader-Willi syndrome), 제II형 진성 당뇨병), 혈소판 유래 성장 인자(Platelet Derived Growth factor)(PDGF(PDFF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D)(재생 효과, 상처 치유, 신생 혈관 생성 장애, 동맥 경화증, 섬유증, 암), TGF 베타 수용체(엔도글린(endoglin), TGF-베타 1 수용체, TGF-베타 2 수용체, TGF-베타 3 수용체)(신장 섬유증(renal fibrosis), 신장병, 당뇨병, 궁극적 말기 신장 질환(ESRD), 신생 혈관 생성), 트롬보포이에틴(Thrombopoietin)(THPO)(거핵구(Megakaryocyte) 성장 및 발달 인자(MGDF))(혈소판 장애, 수혈용 혈소판, 골수 억제성 화학 요법 후 혈소판 수의 회복), 종양 증식 인자(Transforming Growth factor)(TGF(TGF-α, TGF-베타(TGF베타1, TGF베타2 및 TGF베타3)))(재생 효과, 상처 치유, 면역성, 암, 심장병, 당뇨병, 마르판 증후군(Marfan syndrome), 로이-디에츠 증후군(Loeys-Dietz syndrome)), VEGF(VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 및 PIGF)(재생 효과, 신생 혈관 생성, 상처 치유, 암, 투과성(permeability)), 네시리타이드(Nesiritide)(급성 대상 부전 울혈성 심부전(Acute decompensated congestive heart failure)), 트립신(압박성 궤양(Decubitus ulcer), 정맥류성 궤양(varicose ulcer), 건조 가피의 죽은 조직 제거(debridement of eschar), 열개형 상처(dehiscent wound), 일광 화상(sunburn), 태변성 장폐색증(meconium ileus)), 부신 피질 자극 호르몬( adrenocorticotrophic hormone)(ACTH)(애디슨병(Addison's disease), 소세포 암종, 부신 백질 이영양증(Adrenoleukodystrophy), 선천성 부신 과형성증(Congenital adrenal hyperplasia), 쿠싱 증후군(Cushing's syndrome), 넬슨 증후군(Nelson's syndrome), 유아성 경련(Infantile spasms)), 심방 나트륨 이뇨 펩티드(Atrial-natriuretic peptide)(ANP)(내분비 장애), 콜레시스토키닌(Cholecystokinin)(다수형), 가스트린(Gastrin)(저가스트린혈증(hypogastrinemia)), 렙틴(Leptin)(당뇨병, 고중성조직구증(hypertriglyceridemia), 비만), 옥시토신(Oxytocin)(수유 및 난산시 분만 촉진), 소마토스타틴(Somatostatin)(칼시노이드 증후군(carcinoid syndrome), 급성 정맥류 출혈(acute variceal bleeding) 및 말단 비대증(acromegaly), 간 및 신장의 다낭포성 질환(polycystic diseases), 신경 내분비 종양에 의해 유발되는 증후군들 및 말단 비대증의 증상적 치료), 바소프레신(Vasopressin)(항이뇨 호르몬(antidiuretic hormone))(요붕증(diabetes insipidus)), 칼시토닌(Calcitonin)(폐경기 이후 골다공증, 고칼슘혈증, 파제트병(Paget's disease), 골 전이, 환상 지통(Phantom limb pain), 척추관 협착증(Spinal Stenosis)), 엑세나타이드(Exenatide)(메트포민(metformin) 및 설포닐우레아(sulphonylurea)를 사용한 치료에 내성을 나타내는 제2형 당뇨병), 성장 호르몬(GH), 소마토트로핀(somatotropin)(GH 결핍증 또는 만성 신기능 부전, 프래더-윌리 증후군(Prader-Willi syndrome), 터너 증후군(Turner syndrome), 항바이러스 AIDS 치료로 인한 체력 저하 및 악액질로 인한 성장 부전), 인슐린(진성 당뇨병, 당뇨병성 케토산증, 고칼륨혈증), 인슐린 유사 성장 인자 1 IGF-1(GH 유전자 결손 또는 중증 원발성 IGF1 결핍증(evere primary IGF1 deficiency), 신경 퇴행성 질환, 심혈관 질환, 심장 부전 아동의 성장 부전), 메카서민 린파베이트(Mecasermin rinfabate), IGF-1 유사체(GH 유전자 결손 또는 중증 원발성 IGF1 결핍증, 신경 퇴행성 질환, 심혈관 질환, 심장 부전 아동의 성장 부전), 메카서민(Mecasermin), IGF-1 유사체(GH 유전자 결손 또는 중증 원발성 IGF1 결핍증, 신경 퇴행성 질환, 심혈관 질환, 심장 부전 아동의 성장 부전), 페그비소만트(Pegvisomant)(말단 비대증(Acromegaly)), 프람린타이드(Pramlintide)(진성 당뇨병, 인슐린과 병용), 테리파라타이드(Teriparatide)(인간 부갑상선 호르몬 잔기 1~34)(중증 골다공증(Severe osteoporosis)), 베카플레르민(Becaplermin)(당뇨병성 궤양의 죽은 조직 제거 부속물(Debridement adjunct for diabetic ulcers)), 디보테르민-알파(Dibotermin-alpha)(골 형태 형성 단백질 2)(척추 융합 수술, 골 손상 회복), 히스트렐린 아세테이트(Histrelin acetate)(성선 자극 호르몬 방출 호르몬; GnRH)(성 조숙증), 옥트레오타이드(Octreotide)(말단 비대증, VIP-분비성 선종 및 전이성 유암종 종양의 증상적 완화), 및 팔리퍼민(Palifermin)(각질 세포 성장 인자(keratinocyte growth factor); KGF)(화학 요법 수행중인 환자에 있어서 중증 구강 점막염 및 상처 치유)으로부터 선택된다.
(괄호 안에는 치료에 있어서 해당 치료 단백질의 적용 대상인 구체적 질환이 기술되어 있음) 이들 및 다른 단백질은 기능성 단백질의 이의 부족한 내부 생산량을 충분한 양으로 교체하여 개체를 치료하기 위한 것이므로 치료 단백질로 이해된다. 따라서, 이와 같은 치료 단백질은 일반적으로 포유동물, 특히 인간 단백질이다.
혈액 장애, 순환계 질환, 호흡계 질환, 암 또는 종양 질환, 감염성 질환 또는 면역 결핍증의 치료를 위해서는 다음과 같은 치료 단백질이 사용될 수 있다: 알테플라아제(Alteplase)(조직 플라스미노겐 활성 인자(tissue plasminogen activator); tPA)(폐색전증(Pulmonary embolism), 심근 경색(myocardial infarction), 급성 허혈성 뇌졸중(acute ischaemic stroke), 중심 정맥 접근 장치의 폐색), 아니스트레플라아제(Anistreplase)(혈전 용해술(Thrombolysis)), 항트롬빈 III(AT-III)(유전성 AT-III 결핍증, 혈전증(Thromboembolism)), 비발리루딘(Bivalirudin)(관상 동맥 혈관 성형술에 있어서 혈전 생성 위험 감소 및 헤파린 유도성 저혈소판증 완화), 다베포에틴-알파(Darbepoetin-alpha)(만성 신기능 부전 및 만성 신부전 환자(투석 수행/비수행)에 있어서 빈혈의 치료), 드로트레코긴-알파(Drotrecogin-alpha)(활성화된 단백질 C)(사망 위험이 큰 중증 패혈증), 에리스로포이에틴(Erythropoietin), 에포에틴-알파(Epoetin-alpha), 에리스로포에틴(erythropoetin), 에르스로포이에틴(erthropoyetin)(만성 질환으로 인한 빈혈, 척추 형성 부전증, 신부전 또는 화학 요법으로 인한 빈혈, 수술 전 준비 과정), 인자 IX(B형 혈우병), 인자 VIIa(A형 또는 B형 혈우병 환자에 있어서 출혈에 사용되는 것으로서, 인자 VII 또는 인자 IX에 대한 억제 인자임), 인자 VIII(A형 혈우병), 레피루딘(Lepirudin)(헤파린 유도성 저혈소판증), 단백질 C 농축물(정맥 혈전증, 전격성 자반병(Venous thrombosis, Purpura fulminans)), 레테플라아제(Reteplase)(tPA의 결손 돌연변이 단백질(mutein))(급성 심근 경색의 관리, 좌심실 기능의 개선), 스트렙토키나아제(Streptokinase)(급 전개성 관벽 심근 경색, 폐색전증, 심부 정맥 혈전증, 동맥 혈전증 또는 색전증, 동정맥 케뉼라(arteriovenous cannula)의 폐색), 테넥테플라아제(Tenecteplase)(급성 심근 경색), 유로키나제(Urokinase)(폐색전증(Pulmonary embolism)), 안지오스타틴(Angiostatin)(암), 항-CD22 면역 독소(immunotoxin)(재발된 CD33+ 급성 골수성 백혈병), 데니루킨 디프티톡스(Denileukin diftitox)(표피 T-세포 림프종(CTCL)), 이뮤노시아닌(Immunocyanin)(방광 및 전립선암), MPS(메탈로판스티뮬린(Metallopanstimulin))(암), 아플리버셉트(Aflibercept)(비소세포 폐암(NSCLC), 전이성 대장암(mCRC), 호르몬 불응 전이성 전립선암, 습성 황반 변성(wet macular degeneration)), 엔도스타틴(Endostatin)(암, 염증성 질환, 예를 들어 류마티스 관절염 및 크론병(Crohn's disease), 당뇨병성 망막병증(diabetic retinopathy), 건선 및 자궁 내막증(endometriosis)), 콜라게나아제(Collagenase)(만성 진피 궤양 및 중증 화상 부위의 죽은 조직 제거, 듀프이트렌 구축(Dupuytren's contracture), 페이로니병(Peyronie's disease)), 인간 데옥시-리보뉴클레아제 I, 도르나아제(dornase)(낭포성 섬유증; 선택된 FVC 환자에 있어서 기도 감염을 예상보다 40% 이상 감소시킴), 히알루로니다아제(Hyaluronidase)(주사된 약물, 특히 안과 수술에 있어서 마취제 및 특정 조영제의 흡수 및 분산을 촉진시키기 위해 보조제로서 사용됨), 파파인(Papain)(괴사 조직의 죽은 조직 제거, 또는 급성 및 만성 병변, 예컨대, 압박성 궤양, 정맥류 및 당뇨병성 궤양, 화상, 수술 후 상처, 모소 낭포 상처(pilonidal cyst wounds), 옹(carbuncles) 및 기타 상처에 있어서 박피 조직의 유동화), L-아스파라기나아제(L-Asparaginase)(증식에 외부 아스파라긴을 필요로 하는 급성 림프구성 백혈병), 페그-아스파라기나아제(Peg-asparaginase)(증식에 외부 아스파라긴을 필요로 하는 급성 림프구성 백혈병), 라스부리카아제(Rasburicase)(백혈병, 림프종 및 고형 종양 소아과 환자로서, 종양 용해 증후군을 유발시킬 수 있는 항암 치료법을 수행중인 환자), 인간 융모성 성선 자극 호르몬(Human chorionic gonadotropin)(HCG)(의학적 도움을 받은 임신), 인간 여포 자극 호르몬(FSH)(의학적 도움을 받은 임신), 루트로핀-알파(Lutropin-alpha)(황체 형성 호르몬 결핍으로 인한 불임증), 프로락틴(Prolactin)(저프로락틴혈증, 혈청 프로락틴 결핍증, 여성의 난소 기능 부전, 불안증, 남성의 혈관인성 발기 부전, 조루증, 정자 감소증, 정자 무력증, 정난의 기능 저하, 남성 호르몬 감소증), 알파-1-프로티나아제 억제제(alpha-1-Proteinase inhibitor)(선천성 항트립신 결핍증), 락타아제(Lactase)(락토오스 소화능 불량으로 인한 가스, 복부 팽만, 위경련 및 설사), 췌장 효소(리파아제, 아밀라아제, 프로테아제)(낭포성 섬유증, 만성 췌장염, 췌장 부전증, 빌로스(Billroth) II 위장관 우회로 수술 후유증, 췌관 폐색, 지방변, 소화 불량, 가스, 복부 팽만), 아데노신 탈아민화 효소(Adenosine deaminase)(소 페가데마아제(pegademase bovine), PEG-ADA)(아데노신 탈아민화 효소 결핍으로 인한 중증 복합 면역 결핍 질환), 아바타셉트(Abatacept)(류마티스 관절염(특히 TNFa 억제에 대해 무반응일 때)), 알레파셉트(Alefacept)(판상형 건선), 아나킨라(Anakinra)(류마티스 관절염), 에타너셉트(Etanercept)(류마티스 관절염, 다관절 경과 소아 루마티스 관절염(polyarticular-course juvenile rheumatoid arthritis), 건선성 관절염, 강직성 척추염, 판상형 건선, 강직성 척추염), 인터루킨-1(Interleukin-1)(IL-1) 수용체 길항제(receptor antagonist), 아나킨라(Anakinra)(류마티스 관절염과 연관된 염증 및 연골 분해), 티뮬린(Thymulin)(신경 퇴행성 질환, 류머티즘, 신경성 식욕 부진증), TNF-알파 길항제(자가 면역 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 크론병(Crohn's disease), 건선, 회농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 난치성 천식(refractory asthma)), 엔푸버타이드(Enfuvirtide)(HIV-1 감염) 및 티모신(Thymosin) α1(B형 및 C형 간염).
(괄호 안에는 치료법에 있어서 해당 치료 단백질의 적용 대상인 구체적 질환이 기술되어 있음)
더욱이, 어쥬번트(adjuvant) 또는 면역 자극 단백질도 치료 단백질이란 용어에 포함된다. 이러한 맥락에서, 어쥬번트 또는 면역 자극 단백질은 개체 내 면역 반응을 유도, 변경 또는 개선하여 특정 질환을 치료하거나 개체의 상태를 완화하는데 사용될 수 있다.
이러한 맥락에서, 어쥬번트 단백질은 예를 들어, TLR에 대한 외부 TLR 리간드의 결합 반응으로서 (포유동물에서) 선천적 면역 반응을 유도할 수 있는 임의의 인간 단백질 또는 펩티드를 일반적으로 포함하는 포유동물, 특히 인간 어쥬번트 단백질로부터 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게, 인간 어쥬번트 단백질은 TLR, NLR 및 RLH를 포함하는 패턴 인지 수용체, 예컨대 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11; NOD1, NOD2, NOD3, NOD4, NOD5, NALP1, NALP2, NALP3, NALP4, NALP5, NALP6, NALP6, NALP7, NALP7, NALP8, NALP9, NALP10, NALP11, NALP12, NALP13, NALP14,l IPAF, NAIP, CIITA, RIG-I, MDA5 및 LGP2를 포함하는 신호 전달 네트워크를 구성하는 리간드와 구성 성분, TLR 신호 전달의 신호 전달 물질, 예를 들어 어댑터 단백질(adaptor protein), 예를 들어 Trif 및 Cardif; 소형-GTPase 신호 전달에 관여하는 구성 성분(RhoA, Ras, Rac1, Cdc42, Rab 등), PIP 신호 전달에 관여하는 구성 성분(PI3K, Src-키나제 등), MyD88-의존성 신호 전달에 관여하는 구성 성분(MyD88, IRAK1, IRAK2, IRAK4, TIRAP, TRAF6 등), MyD88-독립성 신호 전달에 관여하는 구성 성분(TICAM1, TICAM2, TRAF6, TBK1, IRF3, TAK1, IRAK1 등); 활성화된 키나아제, 예를 들어 Akt, MEKK1, MKK1, MKK3, MKK4, MKK6, MKK7, ERK1, ERK2, GSK3, PKC 키나아제, PKD 키나아제, GSK3 키나아제, JNK, p38MAPK, TAK1, IKK 및 TAK1; 활성화된 전사 인자, 예를 들어 NF-κB, c-Fos, c-Jun, c-Myc, CREB, AP-1, Elk-1, ATF2, IRF-3, IRF-7와 같은 단백질들로 이루어진 군으로부터 선택된다.
포유동물, 특히 인간 어쥬번트 단백질은 또한 열 충격 단백질, 예컨대 HSP10, HSP60, HSP65, HSP70, HSP75 및 HSP90, gp96, 피브리노겐, 피브로넥틴의 TypIII 반복 여분 도메인 A; 또는 보체계의 구성 성분, 예를 들어 C1q, MBL, C1r, C1s, C2b, Bb, D, MASP-1, MASP-2, C4b, C3b, C5a, C3a, C4a, C5b, C6, C7, C8, C9, CR1, CR2, CR3, CR4, C1qR, C1INH, C4bp, MCP, DAF, H, I, P 및 CD59, 또는, 예를 들어 베타-디펜신(Beta-Defensin), 세포 표면 단백질을 비롯한 유도성 표적 유전자; 또는 인간 어쥬번트 단백질, 예를 들어 trif, flt-3 리간드, Gp96 또는 피브로넥틴 등, 또는 이와 같은 인간 어쥬번트 단백질 중 임의의 것의 임의의 종 동족체로 이루어진 군으로부터 선택될 수도 있다.
포유동물, 특히 인간 어쥬번트 단백질은 또한 선천적 면역 반응을 유도 또는 강화하는, IL-1 알파, IL1 베타, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-21, IL-23, TNF알파, IFN알파, IFN베타, IFN감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF를 포함하는 사이토카인; IL-8, IP-10, MCP-1, MIP-1알파, RANTES, 에오탁신(Eotaxin), CCL21을 포함하는 케모카인; IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 및 TNF-알파를 포함하는 대식세포로부터 방출되는 사이토카인; 뿐만 아니라 IL-1R1 및 IL-1 알파를 포함할 수 있다.
혈액 장애, 순환계 질환, 호흡계 질환, 암 또는 종양 질환, 감염성 질환 또는 면역 결핍증 치료를 위한 치료 단백질 또는 어쥬번트 단백질은 일반적으로 치료되어야 할 동물에 따라서 포유동물 기원, 바람직하게는 인간 기원의 단백질이다. 인간 개체는, 예를 들어, 인간 기원의 치료 단백질에 의해 치료되는 것이 바람직하다.
병원성 어쥬번트 단백질은, 일반적으로 (포유동물에서) 선천적 면역 반응을 유도할 수 있는 병원성 어쥬번트 단백질을 포함하며, 더욱 바람직하게는 박테리아, 원생동물, 바이러스 또는 곰팡이 등으로부터 유래된 병원성 어쥬번트 단백질, 예를 들어, 박테리아 (어쥬번트) 단백질, 원생동물 (어쥬번트) 단백질(예를 들어, 톡소플라즈마 곤디(Toxoplasma gondii)의 프로필린 유사 단백질), 바이러스 (어쥬번트) 단백질, 또는 곰팡이 (어쥬번트) 단백질 등으로부터 선택되는 병원성 어쥬번트 단백질을 포함한다.
특히, 박테리아 (어쥬번트) 단백질은 Hsp60, Hsp70, Hsp90, Hsp100을 포함하는 박테리아 열 충격 단백질 또는 샤페론; 그람-음성 박테리아 유래 OmpA(외막 단백질); OmpF를 포함하는 박테리아 포린; 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis) 유래 백일해 독소(pertussis toxin)(PT), 보르데텔라 페르투시스 유래 백일해 아데닐레이트 사이클라아제 독소 CyaA 및 CyaC, 백일해 독소 유래 PT-9K/129G 돌연변이체, 보르데텔라 페르투시스 유래 백일해 아데닐레이트 사이클라아제 독소 CyaA 및 CyaC, 파상풍 독소(tetanus toxin), 콜레라 독소(CT), 콜레라 독소 B-서브유닛, 콜레라 독소 유래 CTK63 돌연변이체, CT 유래 CTE112K, 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli) 열 불안정 장내독소(LT), 열 불안정 장내독소 유래 B 서브유닛(LTB), 열 불안정 장내독소 유래 B 서브유닛(LTB), LTK63, LTR72를 포함하는 독성이 약화된 에스케리치아 콜라이 열 불안정 장내독소 돌연변이체; 페놀-용해성 모듈린(modulin); 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 유래 호중구 활성화 단백질(HP-NAP); 계면활성 단백질 D; 외표면 단백질 A, 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi) 유래 지단백, 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) 유래 Ag38(38kDa 항원); 박테리아 섬모 유래 단백질; 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae)의 장내독소 CT, 그람 음성 박테리아의 선모(pili)로부터 유래하는 필린(Pilin), 그리고 계면활성 단백질 A 등; 또는 상기 박테리아 (어쥬번트) 단백질 중 임의의 것의 임의의 종 동족체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
박테리아 (어쥬번트) 단백질은 또한 박테리아 플라젤린(flagellin)을 포함할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 박테리아 플라젤린은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 아그로박테리움(Agrobacterium), 아퀴펙스(Aquifex), 아조스피릴리움(Azospirillum), 바실러스(Bacillus), 바르토넬라(Bartonella), 보르데텔라(Bordetella), 보렐리아(Borrelia), 버크홀데리아(Burkholderia), 캠필로박터(Campylobacter), 카울로박터(Caulobacter), 클로스트리듐(Clostridium), 에스케리치아(Escherichia), 헬리코박터(Helicobacter), 라크노스피라세아에(Lachnospiraceae), 레지오넬라(Legionella), 리스테리아(Listeria), 프로테우스(Proteus), 슈도모나스(Pseudomonas), 리조비움(Rhizobium), 로도박터(Rhodobacter), 로즈부리아(Roseburia), 살모넬라(Salmonella), 세르퓰리나(Serpulina), 세라티아(Serratia), 쉬겔라(Shigella), 트레포네마(Treponema), 비브리오(Vibrio), 월리넬라(Wolinella), 여시니아(Yersinia)를 포함하는 유기체 유래 플라젤린으로부터 선택될 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 아그로박테리움 튜미파시엔스(Agrobacterium tumefaciens), 아퀴펙스 피로필러스(Aquifex pyrophilus), 아조스피릴리움 브라실렌스(Azospirillum brasilense), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis), 바르토넬라 바실리포르미스(Bartonella bacilliformis), 보르데텔라 브론치셉티카(Bordetella bronchiseptica), 보렐리아 버그도르페리(Borrelia burgdorferi), 버크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia), 캠필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 카울로박터 크레센투스(Caulobacter crescentus), 클로스트리듐 보툴리늄(Clostridium botulinum) 변종 베넷(Bennett) 클론 1, 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori), 라크노스피라세아에 박테리움(Lachnospiraceae bacterium), 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 슈도모나스 아에로귀노사(Pseudomonas aeroguinosa), 슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae), 리조비움 멜리로티(Rhizobium meliloti), 로도박터 스파에로이데스(Rhodobacter sphaeroides), 로즈부리아 세시콜라(Roseburia cecicola), 로즈부리스 호미니스(Roseburis hominis), 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium), 살모넬라 본고리(Salmonella bongori), 살모넬라 타이피(Salmonella typhi), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 세르퓰리나 하이오디센테리아에(Serpulina hyodysenteriae), 세라티아 마르세센스(Serratia marcescens), 쉬겔라 보이디이(Shigella boydii), 트레포네마 파게데니스(Treponema phagedenis), 비브리오 알기놀리티쿠스(Vibrio alginolyticus), 비브리오 콜레라에(Vibrio cholerae), 비브리오 파라해몰리티쿠스(Vibrio parahaemolyticus), 월리넬라 숙시노제네스(Wolinella succinogenes) 및 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)를 포함하는 종 유래 플라젤린으로부터 선택될 수 있다.
원생동물 (어쥬번트) 단백질은 병원성 어쥬번트 단백질의 추가예이다. 이러한 맥락에서, 원생동물 (어쥬번트) 단백질은 어쥬번트 특성을 나타내는 임의의 원생동물 단백질로부터 선택될 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi) 유래 Tc52, 트리파노소마 곤디(Trypanosoma gondii) 유래 PFTG, 원생동물 열 충격 단백질, 리슈마니아(Leishmania) 종 유래 LeIF, 톡소플라즈마 곤디 유래 프로필링(profiling) 유사 단백질로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
바이러스 (어쥬번트) 단백질은 병원성 어쥬번트 단백질의 또 다른 예이다. 이러한 맥락에서, 바이러스 (어쥬번트) 단백질은 어쥬번트 특성을 나타내는 임의의 바이러스 단백질로부터 선택될 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 호흡기 합포체 바이러스(Respiratory Syncytial Virus) 융합 당단백질(F-단백질), MMT 바이러스 유래 외피 단백질(envelope protein), 마우스 백혈병 바이러스 단백질, 야생형 홍역 바이러스의 헤마글루티닌(Hemagglutinin) 단백질 등으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
곰팡이 (어쥬번트) 단백질도 병원성 어쥬번트 단백질의 추가의 예이다. 본 발명의 맥락에서, 곰팡이 (어쥬번트) 단백질은 어쥬번트 특성을 나타내는 임의의 곰팡이 단백질로부터 선택될 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 곰팡이 면역 조절 단백질(fungal immunomodulatory protein)(FIP; LZ-8) 등으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
마지막으로, 어쥬번트 단백질은 추가로 키홀-림펫 헤모시아닌(keyhole-limpet hemocyanin)(KLH), OspA 등으로 이루어진 군으로부터 선택될 수도 있다.
추가의 양태에서, 치료 단백질은 호르몬 대체 치료법, 특히 폐경기 여성의 치료에 사용될 수 있다. 이들 치료 단백질은 오에스테로겐(oestrogens), 프로게스테론 또는 프로게스틴(progestins), 및 종종 테스토스테론으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
더욱이, 치료 단백질은 체세포를 다능성(pluripotent) 또는 전능성(omnipotent) 줄기세포로 역분화하는데 사용될 수 있다. 이러한 목적을 위하여, 여러 인자 특히, Oct-3/4, Sox 유전자 군(Sox1, Sox2, Sox3 및 Sox15), Klf 군(Klf1, Klf2, Klf4 및 Klf5), Myc 군(c-myc, L-myc 및 N-myc), Nanog 및 LIN28이 설명되어 있다.
상술한 바와 같이, 치료 항체도 치료 단백질로서 본원에 정의되어 있다. 이들 치료 항체는 그 중에서도 암 또는 종양 질환의 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 131I-토시투모맙(131I-tositumomab)(여포성 림프종, B 세포 림프종, 백혈병), 3F8(신경 아세포종), 8H9, 아바고보맙(Abagovomab)(난소암), 아데카투무맙(Adecatumumab)(전립선암 및 유방암), 아푸투주맙(Afutuzumab)(림프종), 알라시주맙 피골(Alacizumab pegol), 알렘투주맙(Alemtuzumab)(B-세포 만성 림프구성 백혈병, T-세포 림프종), 아마툭시맙(Amatuximab), AME-133v(여포성 림프종, 암), AMG 102(발전적 신세포 암종), 아나투모맙 마페나톡스(Anatumomab mafenatox)(비소세포 폐암), 아폴리주맙(Apolizumab)(고형 종양, 백혈병, 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma), 림프종), 바비툭시맙(Bavituximab)(암, 바이러스 감염), 벡투모맙(Bectumomab)(비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma)), 벨리무맙(Belimumab)(비호지킨 림프종), 베바시주맙(Bevacizumab)(결장암, 유방암, 뇌 및 중추 신경계 종양, 폐암, 간세포 암종, 신장암, 유방암, 췌장암, 방광암, 육종, 흑색종, 식도암; 위암, 전이성 신세포 암종; 신장암, 교모세포종, 간암, 증식성 당뇨병성 망막병증, 황반 변성), 비바투주맙 메르탄신(Bivatuzumab mertansine)(편평 세포 암종), 블리나투모맙(Blinatumomab), 브렌툭시맙 베도틴(Brentuximab vedotin)(혈액암), 칸투주맙(Cantuzumab)(결장암, 위암, 췌장암, NSCLC), 칸투주맙 메르탄신(Cantuzumab mertansine)(대장암), 칸투주맙 라브탄신(Cantuzumab ravtansine)(암), 카프로맙 펜데타이드(Capromab pendetide)(전립선암), 칼루맙(Carlumab), 카투막소맙(Catumaxomab)(난소암, 난관 신생물, 복막 신생물), 세툭시맙(Cetuximab)(전이성 대장암, 그리고 두부 및 경부 암), 시타투주맙 보가톡스(Citatuzumab bogatox)(난소암 및 기타 고형 종양), 식수투무맙(Cixutumumab)(고형 종양), 클리바투주맙 테트락세탄(Clivatuzumab tetraxetan)(췌장암), CNTO 328(B-세포 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 캐슬맨병(Castleman's Disease), 난소암), CNTO 95(흑색종), 코나투무맙(Conatumumab), 다세투주맙(Dacetuzumab)(혈액암), 달로투주맙(Dalotuzumab), 데노수맙(Denosumab)(골수종, 골 거대 세포 종양, 유방암, 전립선암, 골다공증), 데투모맙(Detumomab)(림프종), 드로지투맙(Drozitumab), 에크로멕시맙(Ecromeximab)(악성 흑색종), 에드레콜로맙(Edrecolomab)(대장암), 엘로투주맙(Elotuzumab)(다발성 골수종), 엘실리모맙(Elsilimomab), 에나바투주맙(Enavatuzumab), 엔시툭시맙(Ensituximab), 에프라투주맙(Epratuzumab)(자가 면역 질환, 전신 홍반성 낭창, 비호지킨 림프종, 백혈병), 에르투막소맙(Ertumaxomab)(유방암), 에르투막소맙(Ertumaxomab)(유방암), 에타라시주맙(Etaracizumab)(흑색종, 전립선암, 난소암), 팔레투주맙(Farletuzumab)(난소암), FBTA05(만성 림프구성 백혈병), 피클라투주맙(Ficlatuzumab)(암), 피기투무맙(Figitumumab)(부신피질암, 비소세포 폐암), 플란보투맙(Flanvotumab)(흑색종), 갈릭시맙(Galiximab)(B-세포 림프종), 갈릭시맙(Galiximab)(비호지킨 림프종), 가니투맙(Ganitumab), GC1008(발전적 신세포 암종; 악성 흑색종, 폐 섬유증), 겜투주맙(Gemtuzumab)(백혈병), 겜투주맙 오조가미신(Gemtuzumab ozogamicin)(급성 골수성 백혈병), 기렌툭시맙(Girentuximab)(투명 세포 신세포 암종), 글렘바투무맙 베도틴(Glembatumumab vedotin)(흑색종, 유방암), GS6624(특발성 폐 섬유증 및 고형 종양), HuC242-DM4(결장암, 위암, 췌장암), HuHMFG1(유방암), HuN901-DM1(골수종), 이브리투모맙(Ibritumomab)(재발성 또는 난치성 저등급 여포 또는 변형 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)), 이크루쿠맙(Icrucumab), ID09C3(비호지킨 림프종), 인다툭시맙 라브탄신(Indatuximab ravtansine), 이노투주맙 오조가미신(Inotuzumab ozogamicin), 인테투무맙(Intetumumab)(고형 종양(전립선암, 흑색종)), 이필리무맙(Ipilimumab)(육종, 흑색종, 폐암, 난소암 백혈병, 림프종, 뇌 및 중추 신경계 종양, 고환암, 전립선암, 췌장암, 유방암), 이라투무맙(Iratumumab)(호지킨 림프종), 라베투주맙(Labetuzumab)(대장암), 렉사투무맙(Lexatumumab), 린투주맙(Lintuzumab), 로보투주맙 메르탄신(Lorvotuzumab mertansine), 루카투무맙(Lucatumumab)(다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종), 루밀릭시맙(Lumiliximab)(만성 림프구성 백혈병), 마파투무맙(Mapatumumab)(결장암, 골수종), 마투주맙(Matuzumab)(폐암, 자궁 경부암, 식도암), MDX-060(호지킨 림프종, 림프종), MEDI 522(고형 종양, 백혈병, 림프종, 소장암, 흑색종), 미투모맙(Mitumomab)(소세포 폐암), 모가물리주맙(Mogamulizumab), MORab-003(난소암, 난관암, 복막암), MORab-009(췌장암, 중피종, 난소암, 비소세포 폐암, 난관암, 복강암), 목세투모맙 파수도톡스(Moxetumomab pasudotox), MT103(비호지킨 림프종), 나콜로맙 타페나톡스(Nacolomab tafenatox)(대장암), 납투모맙 에스타페나톡스(Naptumomab estafenatox)(비소세포 폐암, 신세포 암종), 나르나투맙(Narnatumab), 네시투무맙(Necitumumab)(비소세포 폐암), 니모투주맙(Nimotuzumab)(편평 세포 암종, 두부 및 경부 암, 식도암, 신경 교종), 니모투주맙(Nimotuzumab)(편평 세포 암종, 신경 교종, 고형 종양, 폐암), 올라라투맙(Olaratumab), 오나르투주맙(Onartuzumab)(암), 오포르투주맙 모나톡스(Oportuzumab monatox), 오레고보맙(Oregovomab)(난소암), 오레고보맙(Oregovomab)(난소암, 난관암, 복강암), PAM4(췌장암), 파니투무맙(Panitumumab)(결장암, 폐암, 유방암; 방광암; 난소암), 파트리투맙(Patritumab), 펨투모맙(Pemtumomab), 페르투주맙(Pertuzumab)(유방암, 난소암, 폐암, 전립선암), 프리투무맙(Pritumumab)(뇌암), 라코투모맙(Racotumomab), 라드레투맙(Radretumab), 라무시루맙(Ramucirumab)(고형 종양), 릴로투무맙(Rilotumumab)(고형 종양), 리툭시맙(Rituximab)(두드러기, 류마티스 관절염, 궤양성 결장염, 만성 국소 뇌염, 비호지킨 림프종, 림프종, 만성 림프구성 백혈병), 로바투무맙(Robatumumab), 사말리주맙(Samalizumab), SGN-30(비호지킨 림프종, 림프종), SGN-40(비호지킨 림프종, 골수종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병), 시브로투주맙(Sibrotuzumab), 실툭시맙(Siltuximab), 타발루맙(Tabalumab)(B 세포암), 타카투주맙 테트락세탄(Tacatuzumab tetraxetan), 타플리투모맙 팝톡스(Taplitumomab paptox), 테나투모맙(Tenatumomab), 테프로투무맙(Teprotumumab)(혈액암(Hematologic tumors)), TGN1412(만성 림프구성 백혈병, 류마티스 관절염), 티실리무맙(Ticilimumab)(= 트레멜리무맙(tremelimumab)), 티가투주맙(Tigatuzumab), TNX-650(호지킨 림프종), 토시투모맙(Tositumomab)(여포성 림프종, B 세포 림프종, 백혈병, 골수종), 트라스투주맙(Trastuzumab)(유방암, 자궁 내막암, 고형 종양), TRBS07(흑색종), 트레멜리무맙(Tremelimumab), TRU-016(만성 림프구성 백혈병), TRU-016(비호지킨 림프종), 투코투주맙 셀모루킨(Tucotuzumab celmoleukin), 유블리툭시맙(Ublituximab), 유렐루맙(Urelumab), 벨투주맙(Veltuzumab)(비호지킨 림프종), 벨투주맙(Veltuzumab)(IMMU-106)(비호지킨 림프종), 볼로식시맙(Volociximab)(신세포 암종, 췌장암, 흑색종), 보투무맙(Votumumab)(대장암), WX-G250(신세포 암종), 잘루투무맙(Zalutumumab)(두부 및 경부 암, 편평 세포 암) 그리고 자놀리무맙(Zanolimumab)(T 세포 림프종);
그 중에서도 면역 장애의 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 에팔리주맙(Efalizumab)(건선), 에프라투주맙(Epratuzumab)(자가 면역 질환, 전신 홍반성 낭창, 비호지킨 림프종, 백혈병), 에트롤리주맙(Etrolizumab)(염증성 장질환), 폰톨리주맙(Fontolizumab)(크론병), 익세키주맙(Ixekizumab)(자가 면역 질환), 메폴리주맙(Mepolizumab)(고호산구 증후군, 천식, 호산구성 위장염, 척-스트라우스 증후군(Churg-Strauss Syndrome), 호산구성 식도염), 밀라투주맙(Milatuzumab)(다발성 골수종 및 기타 혈액암), 풀링된(pooled) 면역 글로불린(원발성 면역 결핍증), 프릴릭시맙(Priliximab)(크론병, 다발성 경화증), 리툭시맙(Rituximab)(두드러기, 류마티스 관절염, 궤양성 결장염, 만성 국소 뇌염, 비호지킨 림프종, 림프종, 만성 림프구성 백혈병), 론탈리주맙(Rontalizumab)(전신 홍반성 낭창), 루플리주맙(Ruplizumab)(류마티스 질환), 사릴루맙(Sarilumab)(류마티스 관절염, 강직성 척추염), 베돌리주맙(Vedolizumab)(크론병, 궤양성 결장염), 비실리주맙(Visilizumab)(크론병, 궤양성 결장염), 레슬리주맙(Reslizumab)(기도, 피부 및 위장관 염증), 아달리무맙(Adalimumab)(류마티스 관절염, 크론병, 강직성 척추염, 건선성 관절염), 아셀리주맙(Aselizumab)(중증 외상 환자), 아티누맙(Atinumab)(신경계 치료용), 아틀리주맙(Atlizumab)(류마티스 관절염, 전신 소아 특발성 관절염), 버틸리무맙(Bertilimumab)(중증 알레르기 장애), 베실레소맙(Besilesomab)(염증성 병변 및 전이), BMS-945429, ALD518(암 및 류마티스 관절염), 브리아키누맙(Briakinumab)(건선, 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 다발성 경화증), 브로달루맙(Brodalumab)(염증성 질환), 카나키누맙(Canakinumab)(류마티스 관절염), 카나키누맙(Canakinumab)(크리오피린 관련 주기적 증후군(CAPS), 류마티스 관절염, 만성 폐색성 폐질환), 서톨리주맙 피골(Certolizumab pegol)(크론병), 얼리주맙(Erlizumab)(심장 마비, 뇌졸중, 외상성 충격), 페자키누맙(Fezakinumab)(류마티스 관절염, 건선), 골리무맙(Golimumab)(류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염), 고밀릭시맙(Gomiliximab)(알레르기성 천식), 인플릭시맙(Infliximab)(류마티스 관절염, 크론병, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 판상형 건선, 베크테로병(Morbus Bechterew), 궤양성 결장염), 마브릴리무맙(Mavrilimumab)(류마티스 관절염), 나탈리주맙(Natalizumab)(다발성 경화증), 오크렐리주맙(Ocrelizumab)(다발성 경화증, 류마티스 관절염, 홍반성 낭창, 혈액암), 오듈리모맙(Odulimomab)(장기 이식 거부 및 면역 질환의 예방), 오파투무맙(Ofatumumab)(만성 림프구성 백혈병, 여포성 비호지킨 림프종, B 세포 림프종, 류마티스 관절염, 재발성 감퇴 다발성 경화증, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병), 오조랄리주맙(Ozoralizumab)(염증), 펙셀리주맙(Pexelizumab)(심장 수술 부작용의 감소), 로벨리주맙(Rovelizumab)(출혈 충격), SBI-087(류마티스 관절염), SBI-087(전신 홍반성 낭창), 세큐키누맙(Secukinumab)(포도막염, 류마티스 관절염 건선), 시루쿠맙(Sirukumab)(류마티스 관절염), 탈리주맙(Talizumab)(알레르기 반응), 토실리주맙(Tocilizumab)(류마티스 관절염, 전신 소아 특발성 관절염, 캐슬맨병), 토랄리주맙(Toralizumab)(류마티스 관절염, 낭창성 신염), TRU-015(류마티스 관정염), TRU-016(자가 면역 질환 및 염증), 유스테키누맙(Ustekinumab)(다발성 경화증, 건선, 건선성 관절염), 유스테키누맙(Ustekinumab)(IL-12/IL-23 차단제)(판상형 건선, 건선성 관절염, 다발성 경화증, 유육종증; IL-23 차단제의 경우도 같음), 베팔리모맙(Vepalimomab)(염증), 졸리모맙 아리톡스(Zolimomab aritox)(전신 홍반성 낭창, 이식편 대 숙주 질환), 시팔리무맙(Sifalimumab)(SLE, 피부 근염, 다발성 근염), 루밀릭시맙(Lumiliximab)(알레르기) 및 로(Rho)(D) 면역 글로불린(레서스병(Rhesus disease)); 또는 감염성 질환의 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 아펠리모맙(Afelimomab)(패혈증), CR6261(감염성 질환/인플루엔자 A), 에도바코맙(Edobacomab)(그람 음성 박테리아에 의해 유발된 패혈증), 에펀구맙(Efungumab)(침습성 칸디다 감염), 엑스비비루맙(Exbivirumab)(B형 간염), 펠비주맙(Felvizumab)(호흡기 융합 세포 바이러스 감염), 포라비루맙(Foravirumab)(광견병(예방)), 이발리주맙(Ibalizumab)(HIV 감염), 리비비루맙(Libivirumab)(B형 간염), 모타비주맙(Motavizumab)(호흡기 융합 세포 바이러스(예방)), 네바쿠맙(Nebacumab)(패혈증), 투비루맙(Tuvirumab)(만성 B형 간염), 얼톡사주맙(Urtoxazumab)(이.콜라이에 의해 유발된 설사), 바비툭시맙(Bavituximab)(다양한 바이러스 감염), 파기박시맙(Pagibaximab)(패혈증(예를 들어 스타필로코커스(Staphylococcus)에 의한 패혈증)), 팔리비주맙(Palivizumab)(고 위험 소아 환자에 있어서 호흡기 융합 세포 바이러스 감염의 예방), 파노바쿠맙(Panobacumab)(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 감염), PRO 140(HIV 감염), 라피비루맙(Rafivirumab)(광견병(예방)), 락시바쿠맙(Raxibacumab)(탄저병(예방 및 치료)), 레가비루맙(Regavirumab)(거대 세포 바이러스 감염(cytomegalovirus infection)), 세비루맙(Sevirumab)(거대 세포 바이러스 감염(cytomegalovirus infection)), 수비주맙(Suvizumab)(바이러스 감염) 및 테피바주맙(Tefibazumab)(스타필로코커스 아우레우스 감염);
그 중에서도 혈액 장애의 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 앱식시맙(Abciximab)(경피 관상 중재술(percutaneous coronary intervention)), 아토롤리무맙(Atorolimumab)(신생아 용혈성 질환(hemolytic disease of the newborn)), 에쿨리주맙(Eculizumab)(발작성 야간 혈색소뇨증(Paroxysmal nocturnal haemoglobinuria)), 메폴리주맙(Mepolizumab)(고호산구 증후군(Hypereosinophilie-Syndrom), 천식, 호산구성 위장염(Eosinophilic Gastroenteritis), 척-스트라우스 증후군(Churg-Strauss Syndrome), 호산구성 식도염(Eosinophilic Esophagitis)) 및 밀라투주맙(Milatuzumab)(다발성 골수종 및 기타 혈액암);
그 중에서도 면역 조절에 사용되는 항체, 예를 들어, 항흉선세포 글로불린(Antithymocyte globulin)(급성 신장 이식 거부 현상(Acute kidney transplant rejection), 무력성 빈혈(aplastic anaemia)), 바실릭시맙(Basiliximab)(사이클로스포린 및 코르티코스테로이드를 포함하는 면역 억제제 처치를 받은 신장 이식 환자에서 일어나는 동종 이식편 거부 현상의 예방), 세델리주맙(Cedelizumab)(장기 이식 거부 현상의 예방, 자가 면역 질환의 치료), 다클리주맙(Daclizumab)(신장 이식을 받은 환자에서 일어나는 급성 동종 이식편 거부 현상 및 다발성 경화증의 예방), 가빌리모맙(Gavilimomab)(이식편 대 숙주 질환), 이놀리모맙(Inolimomab)(이식편 대 숙주 질환), 뮤로모납-CD3(Muromonab-CD3)(장기 이식 거부 현상의 예방), 뮤로모납-CD3(Muromonab-CD3)(급성 신장 동종 이식편 거부 현상 또는 스테로이드 내성 심장 또는 간 동종 이식편 거부 현상), 오듈리모맙(Odulimomab)(장기 이식 거부 현상, 즉 면역 질환의 예방) 및 시플리주맙(Siplizumab)(건선, 이식편 대 숙주 질환(예방));
당뇨병 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 게보키주맙(Gevokizumab)(당뇨병), 오텔릭시주맙(Otelixizumab)(제1형 진성 당뇨병) 및 테플리주맙(Teplizumab)(제1형 진성 당뇨병);
알츠하이머 질환 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 바피뉴주맙(Bapineuzumab), 크레네주맙(Crenezumab), 간테네루맙(Gantenerumab), 포네주맙(Ponezumab), R1450 및 솔라네주맙(Solanezumab);
천식 치료에 사용되는 항체, 예를 들어, 벤랄리주맙(Benralizumab), 에노키주맙(Enokizumab), 켈릭시맙(Keliximab), 레브리키주맙(Lebrikizumab), 오말리주맙(Omalizumab), 옥셀루맙(Oxelumab), 파스콜리주맙(Pascolizumab) 및 트랄로키누맙(Tralokinumab); 그리고
다양한 장애(disorder)를 치료하는데 사용되는 항체, 예를 들어, 블로소주맙(Blosozumab)(골다공증), 카로Rx(CaroRx)(충치), 프레솔리무맙(Fresolimumab)(특발성 폐 섬유증, 국소성 분절 사구체경화증, 암), 풀라누맙(Fulranumab)(통증), 로모소주맙(Romosozumab)(골다공증), 스타물루맙(Stamulumab)(근이영양증), 타네주맙(Tanezumab)(통증) 및 라니비주맙(Ranibizumab)(혈관 신생성 노인성 황반 변성증)으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 변형된 RNA의 암호화 영역은 모노-, 디-, 또는 심지어 멀티시스트론 RNA, 즉, 1, 2 또는 그 이상의 단백질 또는 펩타이드의 암호화 서열을 운반하는 RNA로서 발생할 수 있다. 이와 같은 디-, 또는 심지어 멀티시스트론 RNA 내 암호화 서열은 예를 들어, 본원에 설명된 바와 같은 적어도 하나의 내부 리보솜 도입 위치(IRES) 또는 여러 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드의 절단을 유도하는 신호 펩타이드에 의해 분리될 수 있다.
약학적 조성물:
또한, 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 또한 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 또는 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 분자 다수를 포함하는 조성물의 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현 증가용 약학적 조성물의 제조용으로서의 용도, 특히 예를 들어, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 질환 치료용 유전자 치료용 또는 유전적 백신 접종용, 예를 들어, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 또는 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 분자 다수를 포함하는 조성물을, 세포(예를 들어, 발현 숙주 세포 또는 체세포), 조직 또는 유기체에, 바람직하게는 나출된(naked) 형태 또는 복합된 형태 또는 본원에 설명된 약학적 조성물로서 제트 인젝션으로 적용 또는 투여하는 약학적 조성물 제조용으로서의 용도에 관한 것이다.
따라서, 특히 바람직한 측면에서, 본 발명은 제트 인젝션으로 투여하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물, 또는 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 다수(plurality)를 포함하는 조성물 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 비히클도 포함한다.
제 1 성분으로서, 약학적 조성물은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 변형된 핵산을 포함한다.
제 2 성분으로서, 약학적 조성물은 적어도 하나의 추가적인 약학적 활성 성분(pharmaceutically active component)을 선택적으로 포함할 수 있다. 이와 관련된 약학적 활성 성분은 본원에 언급된 바와 같은 특정 징후 또는 질환을 치유, 완화 또는 예방하는 치료 효과를 갖는 화합물이다. 이와 같은 화합물은, 이에 한정된 것을 암시하지는 않지만, 바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 펩타이드 또는 단백질, 바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 핵산, (치료적 활성) 저 분자량 유기 또는 무기 화합물(분자량 5000 미만, 바람직하게는 1000 미만), 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 당, 항원 또는 항체, 이미 선행 기술에 알려져 있는 치료제, 항원 세포, 항원 세포 절편, 세포 분획; 세포벽 성분(예를 들어, 다당류), 변형된, 약화된 또는 불활성화된(예를 들어, 화학적 또는 조사(irradiation)에 의해) 병원체(바이러스, 박테리아 등), 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 어쥬번트 등을 포함한다.
또한, 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 비히클을 포함할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 독창적인 약학적 조성물의 액체 또는 비-액체 기초(basis)를 포함한다. 담체는 일반적으로 발열원 없는 물, 등장성 식염수 또는 버퍼(수성) 용액, 예를 들어, 포스페이트, 시트레이드 등 버퍼 용액이다. 인젝션 버퍼(injection buffer)는 특정 참조 배지를 참조하여 고장성, 등장성 또는 저장성일 수 있으며, 즉, 버퍼는 특정 참조 배지를 참조하여 더 높은, 동일한 또는 더 낮은 염(salt) 함량을 가질 수 있고, 여기서, 바람직하게 이와 같은 상기 언급된 염의 농도는 삼투압 또는 다른 농도 효과 때문에 세포의 피해를 이끌어 내지 않는 농도가 사용될 수 있다. 참조 배지(Reference media)는 예를 들어, 혈액, 림프, 세포질액(cytosolic liquid)과 같은 "생체 내(in vivo)" 방법에 존재하는 액체, 또는 다른 체액, 또는 예를 들어, 통상의 버퍼 또는 액체와 같은 "시험관 내(in vitro)" 방법에 참조 배지로서 사용될 수 있는 액체이다. 이와 같은 통상의 버퍼 또는 액체는 통상의 기술자에게 알려져 있다. Ringer-Lactate 용액은 액체 기초로서 특히 바람직하다.
그러나, 하나 이상의 양립할 수 있는 고체 또는 액체 필러(filler) 또는 희석제(diluent) 또는 캡슐화된 화합물(encapsulating compound)은 치료될 환자에 투여하기 위해 적합한 약학적 조성물로서도 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "양립할 수 있는(compatible)"은 이들 약학적 조성물의 구성 성분(constituent)이 일반적인 사용 조건하에서 약학적 조성물의 약학적 효과를 실질적으로 감소시키는 상호작용이 발생하지 않는 방식으로 변형된 RNA를 혼합할 수 있는 것을 의미한다.
복합화( Complexation ):
또한, 약학적 조성물은 변형된 RNA를 위한 담체를 포함할 수 있다. 이와 같은 담체는 생리학적으로 허용가능한 액체에서 용해, 약학적으로 활성 변형된 RNA 분자의 수송 및 세포 흡수를 중재하기 위해 적합할 수 있다. 따라서, 이와 같은 담체는 본 발명에 따른 변형된 RNA의 저장 및 운반에 적합할 수 있는 성분일 수 있다. 이와 같은 성분은 예를 들어, 형질전환 또는 복합화 제제 역할을 할 수 있는 양이온성 또는 다중양이온성 담체 또는 화합물일 수 있다.
이러한 맥락에서, 특히 바람직한 형질전환 또는 복합화 제제는 양이온성 또는 다중양이온성 화합물, 예를 들어, 프로타민, 뉴클레올린(nucleoline), 스퍼민 또는 스퍼미딘, 또는 다른 양이온성 펩타이드 또는 단백질, 예컨대, 폴리-L-리신(PLL), 폴리-아르기닌, 염기성 폴리펩타이드, 세포 투과성 펩타이드(CPPs), 예를 들어, HIV-결합 펩타이드, HIV-1 Tat(HIV), Tat-유래 펩타이드, 페네트라틴, VP22 유래 또는 유사 펩타이드, HSV VP22(단순 포진(Herpes simplex)), MAP, KALA 또는 단백질 형질도입 도메인(PTDs), PpT620, 프롤린-풍부 펩타이드, 아르기닌-풍부 펩타이드, 리신-풍부 펩타이드, MPG-펩타이드(들), Pep-1, L-올리고머, 칼시토닌 펩타이드(들), 안테나페디아-유래 펩타이드(Antennapedia-derived peptide)(특히, 드로소필라 안테나페디아(Drosophila antennapedia) 유래, pAntp, pIsl, FGF, 락토페린, 트랜스포탄, 버포린-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, hCT-유래 펩타이드, SAP, 또는 히스톤이다.
또한, 이와 같은 양이온성 또는 다중양이온성 화합물 또는 담체는 양이온성 또는 다중양이온성 펩타이드 또는 단백질일 수 있으며, 바람직하게는 적어도 하나의 -SH 모이어티를 포함하거나 포함하기 위해 추가적으로 변형될 수 있다. 바람직하게, 양이온성 또는 다중양이온성 담체는 하기 총 화학식 (III)을 갖는 양이온성 펩타이드로부터 선택된다:
{(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x}; 화학식 (III)
여기서 l + m + n + o + x = 3 - 100, 그리고 서로 독립적으로 l, m, n 또는 o 는 Arg(아르기닌), Lys(리신), His(히스티딘) 및 Orn(오르니틴)의 총량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 적어도 10%를 나타내는 경우, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 - 30, 31 - 40, 41 - 50, 51 - 60, 61 - 70, 71 - 80, 81 - 90 및 91 - 100으로부터 선택된 서로 다른 임의의 숫자이고, Xaa 는 Arg(아르기닌), Lys(리신), His(히스티딘) 또는 Orn(오르니틴)을 제외하고 천연(= 자연적으로 발생하는) 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 임의의 아미노산일 수 있고; x 는 Xaa 의 총량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 90%를 초과하지 않는 경우, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 - 30, 31 - 40, 41 - 50, 51 - 60, 61 - 70, 71 - 80, 81 - 90로부터 선택된 임의의 숫자이다. Arg, Lys, His, Orn 및 Xaa 중 임의의 아미노산은 펩타이드의 임의의 자리에 위치할 수 있다. 이러한 맥락에서, 7 내지 30 아미노산 범위의 양이온성 펩타이드 또는 단백질이 특히 바람직하다.
또한, 적어도 하나의 -SH 모이어티를 포함하거나 포함하도록 추가적으로 변형된, 상기 화학식 {(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x}(화학식(III))에 따라 정의될 때, 양이온성 또는 다중양이온성 펩타이드 또는 단백질은, 이에 한정되지 않고, 하위화학식(Ia)로 부터 선택된다:
{(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa')x (Cys)y} 하위화학식 (IIIa)
여기서, (Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o; 및 x 는 본원에 정의된 바와 같으며, Arg(아르기닌), Lys(리신), His(히스티딘) 및 Orn(오르니틴)의 총량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 적어도 10%를 나타내는 경우, Xaa'는 Arg, Lys, His, Orn 또는 Cys 를 제외한 천연(= 자연적으로 발생하는) 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 임의의 아미노산이며, y 는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 - 30, 31 - 40, 41 - 50, 51 - 60, 61 - 70, 71 - 80 및 81 - 90 으로부터 선택된 임의의 숫자이다. 또한, 양이온성 또는 다중양이온성 펩타이드는 하위화학식(IIIb)로부터 선택될 수 있다:
Cys1 {(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x} Cys2 하위화학식 (IIIb)
여기서, 실험식 {(Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x} (화학식 (IV))는 본원에 정의된 바와 같고, (반실험식(semiempirical)) 화학식 (IV)에 따른 아미노산 서열의 코어를 형성하고, Cys1 및 Cys2 는 (Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x 의 근위(proximal) 또는 말단의 시스테인이다.
형질전환 또는 복합화 제제로 사용될 수 있는 추가의 바람직한 양이온성 또는 다중양이온성 화합물은 양이온성 다당류, 예를 들어, 키토산, 폴리브렌(polybrene), 양이온성 폴리머, 예를 들어, 폴리에틸렌이민(PEI), 양이온성 지질, 예를 들어, DOTMA: [1-(2,3-시오레일옥시)프로필)]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, DMRIE, 디-C14-아미딘, DOTIM, SAINT, DC-Chol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE: 디올레일 포스파티딜에탄올-아민, DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS: 디옥타데실아미도글리실스페르민, DIMRI: 디미리스토-옥시프로필 디메틸 하이드록시에틸 암모늄 브로마이드, DOTAP: 디올레일옥시-3-(트리메틸암모니오)프로판, DC-6-14: O,O-디테트라데카노일-N-(α-트리메틸암모니오아세틸)디에탄올아민 클로라이드, CLIP1: rac-[(2,3-디옥타데실옥시프로필)(2-하이드록시에틸)]-디메틸암모늄 클로라이드, CLIP6: rac-[2(2,3-디헥사데실옥시프로필-옥시메틸옥시)에틸]트리메틸암모늄, CLIP9: rac-[2(2,3-디헥사데실옥시프로필-옥시숙시닐옥시)에틸]-트리메틸암모늄, 올리고펙타민, 또는 양이온성 또는 다중양이온성 폴리머, 예를 들어, β-아미노산-폴리머 또는 역(reversed) 폴리아미드 등과 같은 변형된 폴리아미노산, PVP(폴리(N-에틸-4-비닐피리디늄 브로마이드)) 등과 같은 변형된 폴리에틸렌, pDMAEMA(폴리(디메틸아미노에틸메틸아크릴레이트)) 등과 같은 변형된 아크릴레이트, pAMAM(폴리(아미도아민)) 등과 같은 변형된 아미도아민, 디아민 말단(end) 변형된 1,4 부탄디올 디아크릴레이트-코-5-아미노-1-펜탄올 폴리머 등과 같은 변형된 폴리베타아미노에스테르(PBAE), 폴리프로필아민 덴드리머 또는 pAMAM 기반의 덴드리머 등과 같은 덴드리머, PEI: 폴리(에틸렌이민), 폴리(프로필렌이민) 등과 같은 폴리이민(들), 폴리알릴아민, 사이클로덱스트린 기반의 폴리머, 덱스트란 기반의 폴리머, 키토산 등과 같은 당 백본 기반의 폴리머, PMOXA-PDMS 코폴리머 등과 같은 실란 백본 기반의 폴리머, 하나 이상의 양이온성 블록(예를 들어, 상기 언급된 양이온성 폴리머로부터 선택된 것)의 조합 및 하나 이상의 친수성 또는 소수성 블록(예를 들어, 폴리에틸렌글리콜) 등으로 이루어진 블록폴리머를 포함할 수 있다.
이러한 맥락에서, 변형된 RNA는 양이온성 또는 다중양이온성 화합물, 바람직하게는 양이온성 단백질 또는 펩타이드와 함께 적어도 부분적으로 복합되는 것이 특히 바람직하다. 부분적으로는 단지 변형된 RNA 분자의 일부가 양이온성 또는 다중양이온성 화합물과 복합되고 변형된 RNA 분자의 나머지가 비복합된 형태("자유(free)")를 의미한다. 바람직하게는, 자유 변형된 RNA에 대한 복합된 변형된 RNA의 비율은 약 5:1 (w/w) 내지 약 1:10 (w/w)의 범위, 더욱 바람직하게는 약 4:1 (w/w) 내지 약 1:8 (w/w)의 범위, 더욱 더 바람직하게는 약 3:1 (w/w) 내지 약 1:5 (w/w) 또는 1:3 (w/w)의 범위로부터 선택되고, 가장 바람직하게는 자유 핵산에 대한 복합된 핵산의 비율은 약 1:1 (w/w)의 비율로부터 선택된다.
특정 양태에 따르면, 약학적 조성물은 어쥬번트(adjuvant)를 포함할 수 있다. 이러한 맥락에서, 어쥬번트는 선천성 면역계의 면역 반응 즉, 비-특이적 면역 반응을 개시 또는 증가시키는데 적합한 임의의 화합물로서 이해될 수 있다. 다시 말하면, 투여시, 독창적인 약학적 조성물은 바람직하게, 선택적으로 거기에 함유된 어쥬번트에 따른 선천성 면역 반응을 유도한다. 바람직하게, 이와 같은 어쥬번트는 통상의 기술자에게 알려진 어쥬번트로부터 선택될 수 있고 본 경우에 적합할 수 있으며, 즉, 포유동물에서 선천성 면역 반응의 유도를 지지하는 것, 예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 어쥬번트 단백질 또는 하기 정의된 바와 같은 어쥬번트이다.
저장 및 전달을 위해 적합한 어쥬번트로서 특히 바람직한 것은 비히클, 형질전환 또는 복합화 제제로서 변형된 RNA를 위한 상기 정의된 바와 같은 양이온성 또는 다중양이온성 화합물이다.
독창적인 약학적 조성물에 포함될 수 있는 추가적인 첨가제는 유화제, 예컨대, 예를 들어, 트윈®; 습윤제, 예컨대, 예를 들어, 소듐 라우릴 설페이트; 착색제; 향미 부여제, 약학적 담체; 정제-형성제; 안정화제; 항산화제; 방부제가 있다.
약학적 조성물은 또한 톨-유사(Toll-like) 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10에 대한 결합 친화성(binding affinity)(리간드로서) 때문에, 또는 쥣과(murine) 톨-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 또는 TLR13에 대한 결합 친화성(리간드로서) 때문에 면역자극성으로 알려진 임의의 추가적인 화합물을 추가적으로 함유할 수 있다.
약학적 조성물은 바람직하게 제트 인젝션에 의해 피하로, 근육 내로, 피부 내로 투여될 수 있다. 약학적 조성물의 살균 주사가능한 형태는 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제(suspending agent)를 사용하여 당 업계에 알려진 기술에 따라 제형화될 수 있다.
약학적 조성물은 일반적으로 약학적 조성물의 성분, 특히 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 "안전하고 유효한 양"을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, "안전하고 유효한 양"은 본원에 정의된 바와 같은 질환 또는 장애의 긍정적인 변형을 현저하게 유도하는데 충분한 그런 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의 양을 의미한다. 동시에, 그러나, "안전하고 유효한 양"은 심각한 부작용을 회피하기에 충분히 적고 장점 및 위험 사이의 합리적인(sensible) 관계를 허용하기에 충분히 적다. 이러한 한정의 결정은 일반적으로 합리적인 의학적 판단의 범위 내에 있다.
또한, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA의, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 분자의 다수를 포함하는 조성물의, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물의, 또는 동일한 것을 포함하는 키트의 여러 적용 및 용도를 제공한다.
일 특정 측면에 따르면, 본 발명은 특히 유전자 치료 또는 유전적 백신 접종에서 약제로서, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 질환의 치료를 위하여 본원에 정의된 바와 같은 독창적인 변형된 RNA 또는 본원에 정의된 바와 같은 독창적인 RNA 분자의 다수를 포함하는 독창적인 조성물의 1차 의학 용도에 관한 것이다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 독창적인 변형된 RNA, 또는 본원에 정의된 바와 같은 독창적인 RNA 분자의 다수를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 질환의 치료를 위한 독창적인 조성물의 2차 의학 용도에 관한 것이며, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 독창적인 변형된 RNA, 본원에 정의된 바와 같은 독창적인 변형된 RNA 분자의 다수를 포함하는 독창적인 조성물, 동일한 것을 포함하는 약학적 조성물, 또는 동일한 것을 포함하는 키트의 본원에 정의된 바와 같은 질환의 예방, 치료 및/또는 완화용 약제의 제조를 위한 용도에 관한 것이다. 바람직하게, 약학적 조성물은 이러한 목적을 위해 이를 필요로 하는 환자에 사용되거나 투여된다.
바람직하게, 본원에 언급된 바와 같은 질환은 바람직하게 감염성 질환, 신생물(neoplasm)(예를 들어, 암 또는 종양 질환), 혈액 및 혈액-형성 기관 질환, 내분비, 영양성 및 대사 질환, 신경계 질환, 순환계 질환, 호흡계 질환, 소화계 질환, 피부 및 피하 조직 질환, 근골격계 및 결합 조직 질환 및 비뇨생식계(genitourinary system) 질환으로부터 선택된다.
질환:
감염성 질환(Infectious diseases):
바람직하게, 본원에 언급된 감염성 질환은 바람직하게 바이러스(viral), 박테리아(bacterial), 원생동물(protozoological) 및 프리온(prion) 감염성 질환으로부터 선택된다. 이와 같은 감염성 질환은 일반적으로 아시네토박터 감염증(Acinetobacter infections), 아프리카 수면병(African sleeping sickness (African trypanosomiasis)), AIDS(후천성 면역결핍증후군), 아메바증(Amoebiasis), 아나플라즈마증(Anaplasmosis), 탄저병(Anthrax), 충수염(Appendicitis), 용혈성 아카노박테리아균 감염증(Arcanobacterium haemolyticum infections), 아르헨티나 출혈열(Argentine hemorrhagic fever), 회충증(Ascariasis), 아스퍼질루스증(Aspergillosis), 아스트로바이러스 감염증(Astrovirus infections), 무좀(Athlete's foot), 바베시아증(Babesiosis), 바실러스 세레우스 감염증(Bacillus cereus infections), 세균성 뇌수막염(Bacterial meningitis), 세균성 폐렴(Bacterial pneumonia), 세균성 질증 (Bacterial vaginosis(BV)), 박테로이드 감염증(Bacteroides infections), 바란티디움증(Balantidiasis), 바일리사스카리스 감염증(Baylisascaris infections), 빌하르츠 주혈흡충증(Bilharziosis), BK 바이러스 감염증, 흑색사모증(Black piedra), 블라스토시스티스 호미니스 감염증(Blastocystis hominis infections), 블라스토마이코시스(Blastomycosis), 볼리비아 출혈열(Bolivian hemorrhagic fever), 보렐리아 감염증(Borrelia infectionss(Borreliosis)), 보툴리누스 중독(및 유아 보툴리누스 중독)(Botulism (and Infant botulism)), 소 촌충(Bovine tapeworm), 브라질 출혈열(Brazilian hemorrhagic fever), 브루셀라증(Brucellosis), 버크홀데리아 감염증(Burkholderia infections), 브룰리 궤양(Buruli ulcer), 칼리시바이러스 감염증(Calicivirus infections(노로바이러스 및 사포바이러스)), 캠필로박테리아증(Campylobacteriosis), 칸디다증(Candidiasis(Candidosis)), 개 촌충 감염증( Canine tapeworm infections), 고양이찰과상감염증(Cat-scratch disease), 샤가스 병(Chagas Disease(American trypanosomiasis)), 연성하감(Chancroid), 수두(Chickenpox), 클라미디아 감염증(Chlamydia infections), 클라미디아 트라코마 감염증(Chlamydia trachomatis infections), 클라미도필라 폐렴 감염증(Chlamydophila pneumoniae infections), 콜레라(Cholera), 크로모블라스트진균증(Chromoblastomycosis), 기후 선종(Climatic bubo), 간흡충(Clonorchiasis), 클로스트리디움 디피실리(Clostridium difficile) 감염증, 콕시디오이드진균증(Coccidioidomycosis), 감기(Cold), 콜로라도진드기열(Colorado tick fever (CTF)), 감기(Common cold(급성 바이러스성 비인두염(Acute viral rhinopharyngitis; Acute coryza))), 생식기 사마귀(Condyloma acuminata), 결막염(Conjunctivitis), 크로이츠 펠트 - 야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease(CJD)), 크림 - 콩고 출혈열(Crimean-Congo hemorrhagic fever(CCHF)), 크립토증(Cryptococcosis), 크립토스포리디움(Cryptosporidiosis), 피부의 유충 이행증(Cutaneous larva migrans(CLM)), 피부의 리슈만편모충(Cutaneous Leishmaniosis), 원포자충증(Cyclosporiasis), 낭미충증(Cysticercosis), 거대세포바이러스 감염증(Cytomegalovirus infections), 뎅기열(Dengue fever), 피부사상균증(Dermatophytosis), 이핵아메바증(Dientamoebiasis), 디프테리아(Diphtheria), 열두조충(Diphyllobothriasis), 도나바노시스(Donavanosis), 드라쿤쿨루스증(Dracunculiasis), 초여름 뇌수막염(Early summer meningoencephalitis(FSME)), 에볼라 출혈열(Ebola hemorrhagic fever), 포충증(Echinococcosis), 엘리히증(Ehrlichiosis), 요충증(Enterobiasis(Pinworm infections)), 장구균 감염증(Enterococcus infections), 엔테로바이러스 감염증(Enterovirus infections), 유행성 발진티푸스(Epidemic typhus), 후두개염(Epiglottitis), 엡스타인 - 바 바이러스 전염성 단핵구증(Epstein-Barr Virus Infectious Mononucleosis), 에리더마 감염증(Erythema infectiosum (Fifth disease)), 돌발진(Exanthem subitum), 비대흡충증(Fasciolopsiasis), 간질증(Fasciolosis), 치명적 가족 성 불면증 (Fatal familial insomnia(FFI)), 제5병(Fifth disease), 사상충증(Filariasis), 물고기 중독(Fish 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사면발이증(Pediculosis pubis (Pubic lice, Crab lice)), 골반염(Pelvic inflammatory disease(PID)), 백일해(Pertussis (Whooping cough)), 파이퍼 선열병(Pfeiffer's glandular fever), 흑사병(Plague), 폐렴균 감염증(Pneumococcal infections), 주폐포자충 폐렴(Pneumocystis pneumonia(PCP)), 폐렴(Pneumonia), 소아마비(Polio (childhood lameness)), 급성 회백수염(Poliomyelitis), 돼지 촌충(Porcine tapeworm), 프리보텔라 감염증(Prevotella infections), 원발성 아메바성 수막뇌염(Primary amoebic meningoencephalitis(PAM)), 진행성다소성백질뇌염(Progressive multifocal leukoencephalopathy), 가성-크룹병(Pseudo-croup), 앵무병(Psittacosis), Q 열(Q fever), 야토병(Rabbit fever), 광견병(Rabies), 서교열(Rat-bite fever), 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 호흡기 세포 융합 바이러스 감염증(Respiratory syncytial virus infections(RSV)), 비육아종(Rhinosporidiosis), 리노바이러스 감염증(Rhinovirus infections), 리케치아 감염증(Rickettsial infections), 리케치아 두창(Rickettsialpox), 리프트 밸리 열(Rift Valley fever(RVF)), 로키산 홍반열(Rocky mountain spotted fever(RMSF)), 로타바이러스 감염증(Rotavirus infections), 풍진(Rubella), 살모넬라 파라티푸스(Salmonella paratyphus), 살모넬라 티푸스(Salmonella typhus), 살모넬라증(Salmonellosis), SARS(중증 급성 호흡기 증후군), 옴(Scabies), 성홍열(Scarlet fever), 주혈흡충증(Schistosomiasis(Bilharziosis)), 쯔쯔가무시병(Scrub typhus), 패혈증(Sepsis), 세균성 이질(Shigellosis(Bacillary dysentery)), 대상포진(Shingles), 천연두(Smallpox(Variola)), 연성하감(Soft chancre), 스포로트리쿰증(Sporotrichosis), 포도상구균 식중독(Staphylococcal food poisoning), 포도상구균 감염증(Staphylococcal infections), 선충(Strongyloidiasis), 매독(Syphilis), 조충증(Taeniasis), 파상풍(Tetanus), 3일열(Three-day fever), 진드기 매개 뇌염 바이러스(Tick-borne encephalitis), 백선성모창(Tinea barbae(Barber's itch)), 두부백선(Tinea capitis(두피의 백선)), 체부 백선(Tinea corporis(몸의 백선)), 샅백선(Tinea cruris(완선)), 수부백선(Tinea manuum(손의 백선)), 흑색백선증(Tinea nigra), 무좀(Tinea pedis (Athlete's foot)), 조갑백선(Tinea unguium(Onychomycosis)), 어우러기(Tinea versicolor(Pityriasis versicolor)), 톡소카라증(Toxocariasis(안구유충이행증(Ocular Larva Migrans(OLM)) 및 장기유충이행증(Visceral Larva Migrans (VLM)), 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis), 선모충증(Trichinellosis), 트리코모나스감염증(Trichomoniasis), 편충증(Trichuriasis(Whipworm infections)), 트리퍼(Tripper), 트리파노소마증(Trypanosomiasis(sleeping sickness)), 쯔쯔가무시 병(Tsutsugamushi disease), 결핵(Tuberculosis), 야토병(Tularemia), 발진티푸스(Typhus), 발진티푸스 발열(Typhus fever), 우레아플라즈마 우레알리티쿰 감염증(Ureaplasma urealyticum infections), 질염(Vaginitis(Colpitis)), 변종 크로이츠펠트 야콥병(Variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD, nvCJD)), 베네주엘라 이콰인 뇌염(Venezuelan equine encephalitis), 베네주엘라 출혈열(Venezuelan hemorrhagic fever), 바이러스성 뉴모니아(Viral pneumonia), 내장의 리슈마니아증(Visceral Leishmaniosis), 무사마귀(Warts), 웨스턴 나일 열병(West Nile Fever), 웨스턴 말 뇌염증(Western equine encephalitis), 백색사모증(White piedra (Tinea blanca)), 백일해(Whooping cough), 효모 곰팡이 스팟(Yeast fungus spots), 황열병(Yellow fever), 여시니아 슈도투베르쿨로시스 감염증(Yersinia pseudotuberculosis infections), 여시니아증(Yersiniosis), 및 접합균증(Zygomycosis)으로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
암 질환:
바람직하게, 본원에 언급된 질환은 암 또는 종양 질환으로부터 선택되며, 바람직하게는 예를 들어, 급성 림프구성 백혈병(Acute lymphoblastic leukemia), 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia), 부신피질 암종(Adrenocortical carcinoma), AIDS-연관 암, AIDS-연관 림프종, 항문암, 맹장암, 성상세포종(Astrocytoma), 기저 세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 골육종/악성 섬유성 조직구종, 뇌간 신경교종(Brainstem glioma), 뇌종양, 소뇌 성상세포종, 뇌 성상세포종/악성 신경교종, 상의세포종(ependymoma), 수모세포종(medulloblastoma), 천막상 원시 신경외배엽 종양(supratentorial primitive neuroectodermal tumors), 시각 경로 및 시상 하부 신경교종, 유방암, 기관지 선종/유암종, 버킷 림프종(Burkitt lymphoma), 소아 유암 종양(childhood Carcinoid tumor), 위장관 유암 종양, 미지의 원발성 암종, 원발성 중추 신경계 림프종, 소아 소뇌 성상세포종, 소아 뇌 성상세포종/악성 신경교종, 자궁 경부암, 소아암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 골수증식성 장애(Chronic myeloproliferative disorder), 결장암, 피부 T 세포 림프종, 결합조직성 소원형세포종양(Desmoplastic small round cell tumor), 자궁내막암, 상의세포종, 식도암, 종양의 유잉군에 속하는 유잉 육종(Ewing's sarcoma in the Ewing family of tumors), 소아 두개골 외 생식 세포 종양, 생식선 외 생식 세포 종양, 간 외 담관암, 안 내 흑색종(Intraocular melanoma), 망막 모세포종, 담낭암, 위장(위) 암, 위장관 유암 종양, 위장관 기질 종양(GIST), 두개골 외, 생식선 외 또는 난소 생식 세포 종양, 융모상피성 종양, 뇌간의 신경교종, 소아 뇌 성상세포종, 소아 시각 경로 및 시상 하부 신경교종, 위 암종, 모양 세포 백혈병, 두부 및 경부 암, 심장암, 간세포(간) 암, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma), 하인두암(Hypopharyngeal cancer), 소아 시상하부 및 시각 경로 신경교종, 안 내 흑색종(Intraocular Melanoma), 섬 세포 암종(내분비 췌장(Endocrine Pancreas)), 카포시 육종(Kaposi sarcoma), 신장암(신세포 암), 후두암, 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 모양 세포 백혈병, 구순(lips) 및 구강(mouth) 암, 지방 육종, 간암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 림프종, AIDS-연관 림프종, 버킷 림프종(Burkitt Lymphoma), 피부 T-세포 림프종, 호지킨 림프종(Hodgkin Lymphoma), 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin Lymphomas), 원발성 중추 신경계 림프종, 발덴스트롬 고분자 글로불린혈증(Waldenstrom Macroglobulinemia), 골의 악성 섬유성 조직구종/골육종, 소아 수모세포종, 흑색종, 안 내(눈) 흑색종(Intraocular (Eye) Melanoma), 메르켈 세포 암종(Merkel Cell Carcinoma), 성인 악성 중피세포종, 소아 중피세포종, 전이성 편평 경부 암(원발성 잠재 구강암 동반), 소아 다발성 내분비 신생물 형성 증후군, 다발성 골수종/형질 세포 신생물, 균상식육종, 골수이형성증후군, 골수이형성/골수증식성 질환, 만성 골수성 백혈병, 성인 급성 골수성 백혈병, 소아 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종(골수 암), 만성 골수증식성 질환, 비강 및 코곁굴 암, 비인두암, 신경아세포종, 구강암(oral cancer), 구인두암, 골육종/뼈의 악성 섬유성 조직구종, 난소암, 난소 상피암(표면 상피-기질 종양), 난소 생식 세포 종양, 난소 저 악성 잠재 종양(ovarian low malignant potential tumor), 췌장암, 섬세포 췌장암, 코곁굴 및 비강 암, 부갑상선 암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 송과체 성상세포종, 송과체 배아세포종, 소아 송과체아세포종 및 천막상 원시 신경외배엽종양, 뇌하수체 선종, 형질 세포 신생물/다발성 골수종, 흉막-폐 모세포종, 원발성 중추 신경계 림프종, 전립선암, 직장암, 신세포 암종(신장 암), 신우 및 요관 암, 망막모세포종, 소아 횡문근육종, 침샘암, 종양 유잉군 육종(Sarcoma of the Ewing family of tumors), 카포시 육종(Kaposi Sarcoma), 연조직 육종, 자궁육종, 시자리 증후군(Sezary syndrome), 피부암(비흑색종), 피부암(흑색종), 메르켈 세포 피부 암종(Merkel cell Skin carcinoma), 소장암, 편평 세포 암종, 전이성 편평 경부 암(원발 잠재성), 소아 천막상 원시 신경외배엽성 종양, 고환암, 인후암, 소아 흉선종, 흉선종(Thymoma) 및 흉선암(Thymic carcinoma), 갑상선암, 소아 갑상선암, 신우 및 요관의 이행세포 암, 융모상피성 종양, 요도암, 자궁내막암, 자궁 육종, 질암, 소아 시각 경로 및 시상하부 신경교종, 외음부암, 발덴스트롬 고분자 글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia) 및 소아 빌름 종양(childhood Wilms tumor)(신장암)을 포함한다.
알러지 :
바람직하게, 본원에 언급된 질환은 알러지로부터 선택되며, 바람직하게는 예를 들어, 화분 알러지(잔디 화분, 나무 화분(예를 들어, 개암나무, 자작나무, 오리나무, 물푸레나무의 화분), 꽃 화분, 허브(herb) 화분(예를 들어, 쑥(mugwort)의 화분)에 대한 알러지), 집먼지 진드기(dust mite) 알러지, 곰팡이 알러지(예를 들어, 아크레모늄(Acremonium), 아스퍼질러스(Aspergillus), 클라도스포리움(Cladosporium), 푸사리움(Fusarium), 뮤코(Mucor), 페니실리움(Penicillium), 리조푸스(Rhizopus), 스타키보트리스(Stachybotrys), 트리코데마(Trichoderma), 또는 알터나리아(Alternaria)에 대한 알러지), 애완동물 알러지(동물에 대한; 예를 들어, 고양이, 개, 말에 대한 알러지), 식품 알러지(예를 들어, 생선(예를 들어, 배스(bass), 대구(cod), 가자미(flounder)), 해산물(예를 들어, 게, 랍스터(lobster), 새우), 달걀, 밀, 견과류(예를 들어, 땅콩, 아몬드, 캐슈(cashew), 호두), 콩, 우유 등에 대한 알러지) 또는 곤충 자상 알러지(곤충 독(venom), 예를 들어, 말벌(wasp), 벌(bee), 호넷(hornet), 개미, 모기 또는 진드기)를 포함한다.
특히 바람직한 양태에서, 적어도 하나의 변형 및 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 RNA는 전립선암의 치료에 사용된다.
자가 면역 질환:
또 다른 특정 양태에 따르면, 본원에 정의된 바와 같은 질환은 다음에 정의된 바와 같은 자가 면역 질환을 포함한다. 바람직하게, 자가 면역 질환은 애디슨병(Addison disease) (자가 면역 부신염(autoimmune adrenalitis), 애디슨 질병(Morbus Addison)), 원형 탈모증(alopecia areata), 애디슨 빈혈증(Addison's anemia)(비에르머 질병(Morbus Biermer)), 자가 면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia)(AIHA), 한냉(cold) 유형의 자가 면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia)(AIHA)(한냉혈구응집소 질환(cold hemagglutinine disease), 한냉 자가 면역 용혈성 빈혈(AIHA) (한랭응집소 질병(cold agglutinin disease)), (CHAD)), 웜(warm) 유형의 자가면역 용혈성 빈혈(AIHA)(웜 AIHA, 웜 자가 면역 용혈성 빈혈(warm autoimmune haemolytic anemia) (AIHA)), 자가 면역 용혈성 도나스-란트스타이너 빈혈(autoimmune hemolytic Donath-Landsteiner anemia)(발작성한랭혈색소뇨증(paroxysmal cold hemoglobinuria)), 항인지질항체증후군(antiphospholipid syndrome)(APS), 아테롬성 동맥 경화증(atherosclerosis), 자가 면역 관절염(autoimmune arthritis), 측두근 동맥염(arteriitis temporalis), 타카야수 동맥염(Takayasu arteriitis) (타카야수 질환(Takayasu's disease), 대동맥궁 질환(aortic arch disease)), 측두 동맥염(temporal arteriitis)/거세포동맥염(giant cell arteriitis), 자가 면역 만성 위염(autoimmune chronic gastritis), 자가 면역 불임(autoimmune infertility), 자가 면역 내이 질환(autoimmune inner ear disease)(AIED), 바제도병(Basedow's disease)(바제도 질병(Morbus Basedow)), 베크테레브병(Bechterew's disease)(베크테레브 질병(Morbus Bechterew), 강직성 척추염(ankylosing spondylitis, spondylitis ankylosans)), 베체트 증후군(Behcet's syndrome)(베체트 질병(Morbus Behcet)), 자가 면역 염증성 장 질환을 포함하는 장 질환(bowel disease)(궤양성 대장염(colitis ulcerosa)(크론병(Morbus Crohn, Crohn's disease))을 포함), 심근증(cardiomyopathy), 특히 자가 면역 심근증, 특발성 팽창 심근증(idiopathic dilated cardiomyopathy)(DCM), 스프루 피부염(celiac sprue dermatitis)(글루텐 매개 장질환(gluten mediated enteropathia)), 만성 피로 면역 장애 증후군(chronic fatigue immune dysfunction syndrome)(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증(chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy)(CIDP), 만성 다발성 관절염(chronic polyarthritis), 처그-스트라우스 증후군(Churg-Strauss syndrome), 반흔성유천포창(cicatricial pemphigoid), 코간 증후군(Cogan syndrome), CREST 증후군 (피부석회화(Calcinosis cutis), 레이노드 현상(Raynaud phenomenon), 식도의 운동 장애(motility disorders of the esophagus), 스크레로닥틸리아(sklerodaktylia) 및 모세혈관확장(teleangiectasia)을 갖는 증후군), 크론병(Crohn's disease)(크론 질병(Morbus Crohn), 궤양성 대장염(colitis ulcerosa)), 피부 자가 면역 질환 동안, 포진성 피부염(dermatitis herpetiformis), 피부근염(dermatomyositis), 당뇨(Diabetes), 제1형 당뇨병(Diabetes mellitus Type 1)(제1형 당뇨, 인슐린 의존성 당뇨병), 제2형 당뇨병(Diabetes mellitus Type 2)(제2형 당뇨), 필수 혼합된 한성글로불린혈증(essential mixed cryoglobulinemia), 필수 혼합된 한성글로불린혈증, 섬유근육통(fibromyalgia), 섬유근염(fibromyositis), 굿파스튜어 증후군(Goodpasture syndrome)(항-GBM 매개 사구체 신염(glomerulonephritis)), 이식 편대 숙주 질환(graft versus host disease), 길랭-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome)(GBM, 다발성신경근염(Polyradikuloneuritis)), 혈액 자가 면역 질환(haematologic autoimmune diseases), 하시모토 갑상선염(Hashimoto thyroiditis), 혈우병(hemophilia), 후천적 혈우병(acquired hemophilia), 간염(hepatitis), 자가 면역 간염(autoimmune hepatitis), 특히 만성 간염의 자가 면역 형태, 특발성 폐섬유증(idiopathic pulmonary fibrosis)(IPF), 특발 혈소판감소 자색반증(idiopathic thrombocytopenic purpura), 면역-혈소판감소성자반병(Immuno-thrombocytopenic purpura)(워호프 질병(Morbus Werlhof); ITP), IgA 신장해(nephropathy), 불임(infertility), 자가 면역 불임, 소아 류머티스 관절염(juvenile rheumatoid arthritis)(스틸 질병(Morbus Still), 스틸 증후군(Still syndrome)), 램버트-이튼 증후군(Lambert-Eaton syndrome), 편평태선(lichen planus), 경화성태선(lichen sclerosus), 홍반성 낭창(lupus erythematosus), 전신 홍반성 낭창(systemic lupus erythematosus)(SLE), 홍반성 낭창(lupus erythematosus)(원반(discoid) 형태), 라임 관절염(Lyme arthritis)(라임 질환(Lyme disease), 보렐리아 관절염(borrelia arthritis)), 메니에르병(Meniere's disease)(메니에르 질병(Morbus Meniere)); 혼합 결합 조직병(mixed connective tissue disease)(MCTD), 다발성 경화증(multiple sclerosis)(MS, 뇌척수염 전파(encephalomyelitis disseminate), 샤르코 병(Charcot's disease)), 중증 근무력증(Myasthenia gravis)(근무력증(myasthenia), MG), 근염(myosits), 다발성근염(polymyositis), 신경 자가 면역 질환(neural autoimmune diseases), 신경엽(neurodermitis), 심상성천포창(pemphigus vulgaris), 수포성류천포창(bullous pemphigoid), 흉터 형성 유천포창(scar forming pemphigoid); 결절성다발성동맥염(polyarteriitis nodosa)(결절성동맥주위염(periarteiitis nodosa)), 다연골염(polychondritis)(전연골염(panchondritis)), 다분비선성(polyglandular) (자가 면역) 증후군(PGA 증후군, 슈밋 증후군(Schmidt's syndrome)), 류마티스성 다발근육통(Polymyalgia rheumatica), 일차 감마글로불린 결여증(primary agammaglobulinemia), 원발담즙성간경변(primary biliary cirrhosis) PBC, 일차 자가 면역 담관염(primary autoimmune cholangitis)), 진행성 전신성 경화증(progressive systemic sclerosis) (PSS), 건선(Psoriasis), 심상성 건선(Psoriasis vulgaris), 레이노 현상(Raynaud's phenomena), 라이터 증후군(Reiter's syndrome)(라이터 질병(Morbus Reiter), 요도 결합 활액 증후군(urethral conjunctive synovial syndrome)), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)(RA, 만성 다발성 관절염(chronic polyarthritis), 관절의 류마티스성 질환, 류마티스성 열), 유육종증(sarcoidosis)(보엑 질병(Morbus Boeck), 베스니어-보엑-샤우만 질환(Besnier-Boeck-Schaumann disease)), 강직인간 증후군(stiff-man syndrome), 피부경화증(Sclerodermia), 경피증(Scleroderma), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 교감성 안염(sympathetic ophtalmia); 일시적 글루텐 불내성(Transient gluten intolerance), 장기 이식 거부(transplanted organ rejection), 포도막염(uveitis), 자가 면역 포도막염(autoimmune uveiitis), 맥관염(Vasculitis), 백반(Vitiligo), (백반(leucoderma), 백반(piebold skin)), 및 베게너병(Wegner's disease)(베게너 질병(Morbus Wegner), 베게너 육아종증(Wegner's granulomatosis))으로부터 선택된다.
이러한 맥락에서, 다음으로부터 선택된 유전 질환(inherited disease)이 특히 바람직하다: 1p36 결손 증후군; 18p 결손 증후군; 21-하이드록실라아제 결핍증; 45,X(터너 증후군); 47,XX,+21(다운 증후군); 47,XXX(삼중 X 증후군); 47,XXY(클라인펠터 증후군); 47,XY,+21(다운 증후군); 47,XYY 증후군; 5-ALA 탈수 효소-결핍 포르피린증(ALA 탈수 효소 결핍증); 5p 결손 증후군(묘성 증후군) 5p-증후군(묘성 증후군); A-T(모세혈관확장성 운동실조증); AAT(알파-1 항트립신 결핍증); 정관 형성 부전증(선천성 양측 정관 형성 부전증); 맥관 부전증(Absent vasa)(선천성 양측 정관 형성 부전증); 아세룰로플라스미네미아(aceruloplasminemia); ACG2(제II형 연골 무형성증); ACH(연골 발육 부전증); 제II형 연골 무형성증; 연골 발육 부전증; 산 베타-글루코시다제 결핍증(제1형 고셔병(Gaucher disease type 1)); 첨두 합지증(Acrocephalosyndactyly)(애퍼트(Apert))(애퍼트 증후군(Apert syndrome)); 첨두 합지증, 제V형(파이퍼 증후군(Pfeiffer syndrome)); 첨두 합지증(애퍼트 증후군); 급성 뇌 고셔병(Acute cerebral Gaucher's disease)(제2형 고셔병(Gaucher disease type 2)); 급성 간헐성 포르피린증; ACY2 결핍증(카나반병(Canavan disease)); AD(알츠하이머 질환); 아델라이드형 두개골 유합증(Adelaide-type craniosynostosis)(뮌케 증후군(Muenke syndrome)); 대장 선종성 폴립증(Adenomatous Polyposis Coli)(가족 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis)); 결장 선종성 폴립증(Adenomatous Polyposis of the Colon)(가족 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis)); ADP(ALA 탈수 효소 결핍증); 아데닐로숙시네이트 라이아제 결핍증(adenylosuccinate lyase deficiency); 부신 장애(Adrenal gland disorders)(21-하이드록실라제 결핍증); 부신 성기 증후군(Adrenogenital syndrome)(21-하이드록실라제 결핍증); 부신 백질 이영양증(Adrenoleukodystrophy); AIP(급성 간헐성 포르피린증(acute intermittent porphyria)); AIS(안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome)); AKU(알캅톤뇨증(alkaptonuria)); ALA 탈수 효소 포르피린증(ALA 탈수 효소 결핍증); ALA-D 포르피린증(ALA 탈수 효소 결핍증); ALA 탈수 효소 결핍증; 알캅톤 뇨증(Alcaptonuria)(알캅톤뇨증(alkaptonuria)); 알렉산더병(Alexander disease); 알캅톤뇨증(alkaptonuria); 알캅톤뇨 조직 갈변증(Alkaptonuric ochronosis)(알캅톤뇨증); 알파-1 항트립신 결핍증; 알파-1 단백 분해 효소 억제제(alpha-1 proteinase inhibitor)(알파-1 항트립신 결핍증); 알파-1 관련 폐기종(alpha-1 related emphysema)(알파-1 항트립신 결핍증); 알파-갈락토시다아제 A 결핍증(Alpha-galactosidase A deficiency)(파브리병(Fabry disease)); ALS(근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis)); 알스트롬 증후군(Alstrom syndrome); ALX(알렉산더병); 알츠하이머 질환; 법랑질 형성 부전증(Amelogenesis Imperfecta); 아미노 레불린산 탈수 효소 결핍증(Amino levulinic acid dehydratase deficiency)(ALA 탈수 효소 결핍증); 아미노아실라아제 2 결핍증(Aminoacylase 2 deficiency)(카나반병(Canavan disease)); 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis); 앤더슨-파브리병(Anderson-Fabry disease)(파브리병(Fabry disease)); 안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome); 빈혈(Anemia); 유전성 철적아구성 빈혈(Anemia, hereditary sideroblastic)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); 성별 연관 혈색소 감소 철적아구성 빈혈(Anemia, sex-linked hypochromic sideroblastic)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia); 비장 가족성 빈혈(Anemia, splenic, familial)(고셔병(Gaucher disease)); 앵겔만 증후군(Angelman syndrome); 미만성 구간혈관각화종(Angiokeratoma Corporis Diffusum)(파브리병(Fabry's disease)); 확산성 혈관 각화종(Angiokeratoma diffuse)(파브리병(Fabry's disease)); 망막 혈관종(Angiomatosis retinae)(폰 히펠-린다우병(von Hippel-Lindau disease)); ANH1(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); APC 내성(resistance), 라이덴형(Leiden type)(인자 V 라이덴 혈전성향증(factor V Leiden thrombophilia)); 애퍼트 증후군(Apert syndrome); AR 결핍증(안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome)); AR-CMT2 ee(제2형 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Mare-Tooth disease)); 거미 손가락증(Arachnodactyly)(마르판 증후군(Marfan syndrome)); ARNSHL(비증후군 난청#상염색체 열성(Nonsyndromic deafness#autosomal recessive)); 유전성 진행형 관절안질환(Arthro-ophthalmopathy, hereditary progressive)(스티클러 증후군#COL2A1(Stickler syndrome#COL2A1)); 선천성 다발성 관절 이완증(Arthrochalasis multiplex congenita)(엘러스-단로스 증후군#관절 이완형(Ehlers-Danlos syndrome#arthrochalasia type)); AS(앵겔만 증후군(Angelman syndrome)); Asp 결핍증(카나반병(Canavan disease)); Aspa 결핍증(카나반병(Canavan disease)); 아스파르토아실라아제 결핍증(Aspartoacylase deficiency)(카나반병(Canavan disease)); 모세혈관확장성 운동실조(ataxia-telangiectasia); 자폐증-치매-운동 실조-목적성 손 사용 상실 증후군(Autism-Dementia-Ataxia-Loss of Purposeful Hand Use syndrome)(레트 증후군(Rett syndrome)); 상 염색체 우성 소아 ALS(autosomal dominant juvenile ALS)(제4형 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis, type 4)); 상 염색체 우성 오피츠 G/BBB 증후군(Autosomal dominant opitz G/BBB syndrome)(22q11.2 결손 증후군); 제3형 소아 ALS의 상 염색체 열성형(autosomal recessive form of juvenile ALS type 3)(근위축성 측색 경화증#제2형(Amyotrophic lateral sclerosis#type 2)); 상 염색체 열성 비 증후군성 청각 상실(Autosomal recessive nonsyndromic hearing loss)(비 증후군성 난청#상 염색체 열성(Nonsyndromic deafness#autosomal recessive)); 상 염색체 열성 감각 신경 청각 장애 및 갑상선종(Autosomal Recessive Sensorineural Hearing Impairment and Goiter)(펜드리드 증후군(Pendred syndrome)); AxD(알렉산더병(Alexander disease)); 아이에르자 증후군(Ayerza syndrome)(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); 헥소사미니다제 GM2 강글리오시드 축적증의 B 변이형(B variant of the Hexosaminidase GM2 gangliosidosis)(샌드호프병(Sandhoff disease)); BANF(신경섬유종증 2(neurofibromatosis 2)); 비아레-스티븐슨 뇌회상 두피 증후군(Beare-Stevenson cutis gyrata syndrome); 양성 발작성 복막염(Benign paroxysmal peritonitis)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 벤자민 증후군(Benjamin syndrome); 베타 지중해 빈혈(beta thalassemia); BH4 결핍증(테트라하이드로비오프테린 결핍증(tetrahydrobiopterin deficiency)); 양측성 청각 신경섬유종증(Bilateral Acoustic Neurofibromatosis)(신경섬유종증 2(neurofibromatosis 2)); 바이오티니다아제 결핍증(biotinidase deficiency); 방광암(bladder cancer); 출혈성 장애(Bleeding disorders)(인자 V 라이덴 혈전성향증(factor V Leiden thrombophilia)); 블로크-슐쯔베르거 증후군(Bloch-Sulzberger syndrome)(색소 실조증(incontinentia pigmenti)); 블룸 증후군(Bloom syndrome); 골 질환(Bone diseases); 골수 질환(Bone marrow diseases)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); 보네비-율리히 증후군(Bonnevie-Ullrich syndrome)(터너 증후군(Turner syndrome)); 부르네빌병(Bourneville disease)(결절성 경화증(tuberous sclerosis)); 부르네빌 모반증(Bourneville phakomatosis)(결절성 경화증(tuberous sclerosis)); 뇌 질환(Brain diseases)(프리온 질환(prion disease)); 유방암; 버트-호그-두베 증후군(Birt-Hogg-Dube syndrome); 취약성 골절(Brittle bone disease)(골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta)); 넓은 엄지-할룩스 증후군(Broad Thumb-Hallux syndrome)(루빈스타인-타이비 증후군(Rubinstein-Taybi syndrome)); 청동색 당뇨병(Bronze Diabetes)(혈색소증(hemochromatosis)); 청동 간경변(Bronzed cirrhosis)(혈색소증(hemochromatosis)); X 염색체-연관 연수 척추성 근육 위축증(Bulbospinal muscular atrophy, X-linked(케네디병(Kennedy disease)); 버거-그러츠 증후군(Burger-Grutz syndrome)(가족성 지단백 지질 분해 효소 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); CADASIL; CGD 만성 육아종성 장애(CGD Chronic Granulomatous Disorder); 캠프토멜릭 이형성(Camptomelic dysplasia); 카나반병(Canavan disease); 암; 암 가계 증후군(Cancer Family syndrome)(유전성 비용종증 대장암(hereditary nonpolyposis colorectal cancer)); 유방의 암(유방암); 방광의 암(방광암); 말기 발생 카복실라아제 결핍증(Carboxylase Deficiency, Multiple, Late-Onset)(바이오티니다아제 결핍증(biotinidase deficiency)); 심근증(Cardiomyopathy)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 묘성 증후군(Cat cry syndrome)(묘성 증후군(Cri du chat)); CAVD(선천성 양측 정관 형성 부전증(congenital bilateral absence of vas deferens)); 카일로 심안면 증후군(Caylor cardiofacial syndrome)(22q11.2 결손 증후군); CBAVD(선천성 양측 정관 형성 부전증(congenital bilateral absence of vas deferens)); 셀리악병(Celiac Disease); CEP(선천성 적혈구조성 포르피린증(congenital erythropoietic porphyria)); 세라마이드 트리헥소시다제 결핍증(Ceramide trihexosidase deficiency)(파브리병(Fabry disease)); 가족성 소뇌망막 혈관종(Cerebelloretinal Angiomatosis, familial)(폰 히펠-린다우병(von Hippel-Lindau disease)); 피질하 경색 및 백질뇌증 동반 대뇌 동맥병증(Cerebral arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy)(CADASIL); 대뇌 경화증(Cerebral sclerosis)(결절성 경화증(tuberous sclerosis)); 대뇌 위축성 고암모니아혈증(Cerebroatrophic Hyperammonemia)(레트 증후군(Rett syndrome)); 세레브로사이 지질 축적 증후군(Cerebroside Lipidosis syndrome)(고셔병(Gaucher disease)); CF(낭포성 섬유증(cystic fibrosis)); CH(선천성 갑상성 기능 저하증(congenital hypothyroidism)); 샤르코 증후군(Charcot disease)(근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis)); 샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease); 사지 단지증(Chondrodystrophia)(연골 발육 부전증(achondroplasia)); 사지 단지 증후군(Chondrodystrophy syndrome)(연골 발육 부전증(achondroplasia)); 감각 신경 난청 동반 사지 단지증(Chondrodystrophy with sensorineural deafness)(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); 연골 형성 부전증(Chondrogenesis imperfecta)(제II형 연골 무형성증(achondrogenesis, type II)); 무도 무정위 운동 자가-돌연변이 고요산혈증 증후군(Choreoathetosis self-mutilation hyperuricemia syndrome)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 전형적 갈락토오스혈증(Classic Galactosemia)(갈락토오스혈증(galactosemia)); 전형적 엘러스-단로스 증후군(Classical Ehlers-Danlos syndrome)(엘러스-단로스 증후군#전형적 유형(Ehlers-Danlos syndrome#classical type)); 전형적 페닐케톤뇨증(Classical Phenylketonuria)(페닐케톤뇨증)(phenylketonuria); 구순구개열(Cleft lip and palate)(스티클러 증후군(Stickler syndrome)); 치명적 난장이증 동반 클로버 잎 모양 두개골(Cloverleaf skull with thanatophoric dwarfism)(치명적 이형성증#제2형(Thanatophoric dysplasia#type 2)); CLS(코핀-로우리 증후군(Coffin-Lowry syndrome)); CMT(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease)); 코케인 증후군(Cockayne syndrome); 코핀-로우리 증후군(Coffin-Lowry syndrome); 제II형 및 제XI형 콜라겐병증(collagenopathy, types II and XI); 가족성 비용종증 결장암(Colon Cancer, familial Nonpolyposis)(유전성 비용종증 대장암(hereditary nonpolyposis colorectal cancer)); 가족성 결장암(Colon cancer, familial)(가족 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis)); 대장암; 완전 HPRT 결핍증(Complete HPRT deficiency)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 완전 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 결핍증(Complete hypoxanthine-guanine phosphoribosy transferase deficiency)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 압박 신경 장애(Compression neuropathy)(압박 마비에 대한 책임 동반 유전성 신경 장애(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies)); 선천성 부신 과형성증(Congenital adrenal hyperplasia)(21-하이드록실라제 결핍증(21-hydroxylase deficiency)); 선천성 양측 정관 형성 부전증(congenital bilateral absence of vas deferens)(선천성 정관 형성 부전증(Congenital absence of the vas deferens)); 선천성 적혈구조성 포르피린증(Congenital erythropoietic porphyria); 선천성 심장 질환(Congenital heart disease); 선천성 수초 형성 부전증(Congenital hypomyelination)(샤르코-마리-투스병#제1형/샤르코-마리-투스병#제4형(Charcot-Marie-Tooth disease#Type 1/Charcot-Marie-Tooth disease#Type 4)); 선천성 갑상선 기능 저하증(Congenital hypothyroidism); 선천성 메트헤모글로빈혈증(Congenital methemoglobinemia)(메트헤모글로빈혈증#선천성 메트헤모글로빈혈증(Methemoglobinemia#Congenital methaemoglobinaemia)); 선천성 골경화증(Congenital osteosclerosis)(연골 발육 부전증(achondroplasia)); 선천성 철적아구성 빈혈(Congenital sideroblastic anaemia)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); 결합 조직병(Connective tissue disease); 뿔줄기 기형 안면 증후군(Conotruncal anomaly face syndrome)(22q11.2 결손 증후군); 쿨리 빈혈(Cooley's Anemia)(베타 지중해 빈혈(beta thalassemia)); 구리 축적병(Copper storage disease)(윌슨병(Wilson disease)); 구리 운반병(Copper transport disease)(멩케 증후군(Menkes disease)); 유전성 코프로포르피린증(Coproporphyria, hereditary)(유전성 코프로포르피린증(hereditary coproporphyria)); 코프로포르피리노겐 옥시다아제 결핍증(Coproporphyrinogen oxidase deficiency)(유전성 코프로포르피린증(hereditary coproporphyria)); 카우덴 증후군(Cowden syndrome); CPO 결핍증(유전성 코프로포르피린증(hereditary coproporphyria)); CPRO 결핍증(유전성 코프로포르피린증(hereditary coproporphyria)); CPX 결핍증(유전성 코프로포르피린증(hereditary coproporphyria)); 두개 안면 관절 기형(Craniofacial dysarthrosis)(크루존 증후군(Crouzon syndrome)); 두개 안면 골 형성 부전증(Craniofacial Dysostosis)(크루존 증후군(Crouzon syndrome)); 크레틴병(Cretinism)(선천성 갑상선 기능 저하증(congenital hypothyroidism)); 크로이펠츠-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease)(프리온 질환(prion disease)); 묘성 증후군(Cri du chat)(크론병(Crohn's disease), 섬유협착성(fibrostenosing)); 크루존 증후군(Crouzon syndrome); 흑색 가시세포증 동반 크루존 증후군(Crouzon syndrome with acanthosis nigricans)(크루존 피부골격 증후군(Crouzonodermoskeletal syndrome); 크루존 피부골격 증후군(Crouzonodermoskeletal syndrome); CS(코케인 증후군(Cockayne syndrome))(카우덴 증후군(Cowden syndrome)); 쿠루슈만-배튼-스타이너트 증후군(Curschmann-Batten-Steinert syndrome)(근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy)); 비아레-스티븐슨의 뇌회상 두피 증후군(cutis gyrata syndrome of Beare-Stevenson)(비아레-스티븐슨 뇌회상 두피 증후군(Beare-Stevenson cutis gyrata syndrome)); 장애 돌연 변이 염색체(Disorder Mutation Chromosome); D-글리서레이트 탈수소효소결핍증(D-glycerate dehydrogenase deficiency)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 얼룩 골간단 증후군(Dappled metaphysis syndrome)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); DAT-치매 알츠하이머형(DAT - Dementia Alzheimer's type)(알츠하이머 질환(Alzheimer disease)); 유전적 고칼슘뇨증(Genetic hypercalciuria)(덴트병(Dent's disease)); DBMD(듀센-베커형 근이영양증(muscular dystrophy, Duchenne and Becker types)); 갑상선종 동반 난청(Deafness with goiter)(펜드리드 증후군(Pendred syndrome)); 난청-망막 색소 변성 증후군(Deafness-retinitis pigmentosa syndrome)(어셔 증후군(Usher syndrome)); 페닐알라닌 하이드록실라아제 결핍성 질환(Phenylalanine Hydroxylase)(페닐케톤뇨증(phenylketonuria)); 퇴행성 신경병(Degenerative nerve diseases); 드 그루쉬 증후군 1(de Grouchy syndrome 1)(드 그루쉬 증후군(De Grouchy Syndrome)); 데제린-소타스 증후군(Dejerine-Sottas syndrome)(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease)); 델타-아미노레불리네이트 탈수 효소 결핍증 포르피린증(Delta-aminolevulinate dehydratase deficiency porphyria)(ALA 탈수 효소 결핍증(ALA dehydratase deficiency)); 치매(Dementia)(CADASIL); 탈수초성 백질 이영양증(demyelinogenic leukodystrophy)(알렉산더병(Alexander disease)); 엘러스-단로스 증후군의 피부 파열형(Dermatosparactic type of Ehlers-Danlos syndrome)(엘러스-단로스 증후군#피부 파열증형(Ehlers-Danlos syndrome#dermatosparaxis type)); 피부 파열증(Dermatosparaxis)(엘러스-단로스 증후군#피부 파열증형(Ehlers-Danlos syndrome#dermatosparaxis type)); 발달 장애(developmental disabilities); dHMN(근위축성 측색 경화증#제4형(Amyotrophic lateral sclerosis#type 4)); DHMN-V(제V형 말단 척추 근육 위축증(distal spinal muscular atrophy, type V)); DHTR 결핍증(안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome)); 확산성 글로보이드체 경화증(Diffuse Globoid Body Sclerosis)(크라베병(Krabbe disease)); 디조지 증후군(DiGeorge syndrome); 디하이드로테스토스테론 수용체 결핍증(Dihydrotestosterone receptor deficiency)(안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome)); 제V형 말단 척추 근육 위축증(distal spinal muscular atrophy, type V); DM1(근 긴장성 이영양증#제1형(Myotonic dystrophy#type1)); DM2(근 긴장성 이영양증#제2형(Myotonic dystrophy#type2)); 다운 증후군; DSMAV(제V형 말단 척추 근육 위축증(distal spinal muscular atrophy, type V)); DSN(샤르코-마리-투스병#제4형(Charcot-Marie-Tooth disease#type 4)); DSS(제4형 샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease, type 4)); 듀센/베커 근이영양증(Duchenne/Becker muscular dystrophy)(근이영양증, 듀센-베커형(muscular dystrophy, Duchenne and Becker types)); 연골 형성 부전 난장이증(Dwarf, achondroplastic)(연골 발육 부전증(achondroplasia)); 치명적 난장이증(Dwarf, thanatophoric)(치명적 이형성증(thanatophoric dysplasia)); 난장이증(Dwarfism); 난장이증-망막 감퇴-난청 증후군(Dwarfism-retinal atrophy-deafness syndrome)(코케인 증후군(Cockayne syndrome)); 수초 이형성 유발성 백질 이영양증(dysmyelinogenic leukodystrophy)(알렉산더병(Alexander disease)); 근 긴장 이영양증(Dystrophia myotonica)(근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy)); 색소성 망막 이영양증-골 형성 부전증 증후군(dystrophia retinae pigmentosa-dysostosis syndrome)(어셔 증후군(Usher syndrome)); 조기 발생 가족성 알츠하이머병(Early-Onset familial alzheimer disease)(EOFAD)(알츠하이머 질환(Alzheimer disease)); EDS(엘러스-단로스 증후군(Ehlers-Danlos syndrome)); 엘러스-단로스 증후군(Ehlers-Danlos syndrome); 에크만-롭슈타인병(Ekman-Lobstein disease)(골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta)); 교액성 신경 장애(Entrapment neuropathy)(압박 마비에 대한 책임 동반 유전성 신경 장애(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies)); 결절 경화증(Epiloia)(결절성 경화증(tuberous sclerosis)); EPP(적혈구조성 프로토포르피린증(erythropoietic protoporphyria)); 적아세포성 빈혈(Erythroblastic anemia)(베타 지중해 빈혈(beta thalassemia)); 적혈구-간성 프로토포르피린증(Erythrohepatic protoporphyria)(적혈구조성 프로토포르피린증(erythropoietic protoporphyria)); 에리스로이드 5-아미노레불리네이트 합성 효소 결핍증(Erythroid 5-aminolevulinate synthetase deficiency)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); 적혈구조성 포르피린증(Erythropoietic porphyria)(선천성 적혈구조성 포르피린증(congenital erythropoietic porphyria)); 적혈구조성 프로토포르피린증(Erythropoietic protoporphyria); 적혈구조성 유로포르피린증(Erythropoietic uroporphyria)(선천성 적혈구조성 포르피린증(congenital erythropoietic porphyria)); 안암(Eye cancer)(망막모세포종 FA - 프리드리히운동 실조(retinoblastoma FA - Friedreich ataxia)); 파브리병(Fabry disease); 얼굴 부상 및 장애(Facial injuries and disorders); 인자 V 라이덴 혈전성향증(Factor V Leiden thrombophilia); FALS(근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis)); 가족성 청 신경종(familial acoustic neuroma)(제II형 신경섬유종증(neurofibromatosis type II)); 가족 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis); 가족성 알츠하이머 질환(familial Alzheimer disease)(FAD)(알츠하이머 질환(Alzheimer disease)); 가족성 근위축성 측색 경화증(familial amyotrophic lateral sclerosis)(근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis)); 가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia); 가족성 지방 유도성 고중성조직구증(familial fat-induced hypertriglyceridemia)(가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); 가족성 혈색소증(familial hemochromatosis)(혈색소증(hemochromatosis)); 가족성 LPL 결핍증(familial LPL deficiency)(가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); 가족성 비용종증 결장암(familial nonpolyposis colon cancer)(유전성 비용종증 대장암(hereditary nonpolyposis colorectal cancer)); 가족성 발작성 다발 장막염(familial paroxysmal polyserositis)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 가족성 PCT(familial PCT)(만발성 피부 포르피린증(porphyria cutanea tarda)); 가족성 압박 감수성 신경병증(familial pressure sensitive neuropathy)(압박 마비에 대한 책임 동반 유전성 신경병증(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies)); 가족성 원발성 폐고혈압(familial primary pulmonary hypertension)(FPPH)(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); 가족성 터너 증후군(Familial Turner syndrome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 가족성 맥관성 백질 뇌증(familial vascular leukoencephalopathy)(CADASIL); FAP(가족 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis)); FD(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); 여성 유사 터너 증후군(Female pseudo-Turner syndrome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 페로케라타아제 결핍증(Ferrochelatase deficiency)(적혈구조성 프로토포르피린증(erythropoietic protoporphyria)); 페로포르틴병(ferroportin disease)(혈색소증#제4형(Haemochromatosis#type 4)); 열(Fever)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); FG 증후군; FGFR3-연관 기관상봉합기조유합증(FGFR3-associated coronal synostosis)(뮈엔케 증후군(Muenke syndrome)); 성상교세포의 유섬유소변성(Fibrinoid degeneration of astrocytes)(알렉산더병(Alexander disease)); 췌장의 섬유낭포성유선증(Fibrocystic disease of the pancreas)(낭포성 섬유증(cystic fibrosis)); FMF(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 폴링병(Folling disease)(페닐케톤뇨증(phenylketonuria)); fra(X) 증후군(취약 X 증후군(fragile X syndrome)); 취약 X 증후군(fragile X syndrome); 골형성부전증(Fragilitas ossium)(골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta)); FRAXA 증후군(취약 X 증후군(fragile X syndrome)); FRDA(프리드리히 운동 실조(Friedreich's ataxia)); 프리드리히 운동 실조(Friedreich ataxia)(프리드리히 운동 실조(Friedreich's ataxia)); 프리드리히 운동 실조(Friedreich's ataxia); FXS(취약 X 증후군(fragile X syndrome)); G6PD 결핍증; 갈락토키나아제 결핍성 질환(Galactokinase deficiency disease)(갈락토오스혈증(galactosemia)); 갈락토오스-1-인산염 우리딜 트랜스퍼라아제 결핍성 질환(Galactose-1-phosphate uridyl-transferase deficiency disease)(갈락토오스혈증(galactosemia)); 갈락토오스혈증(galactosemia); 갈락토실세라미다아제 결핍성 질환(Galactosylceramidase deficiency disease)(크라베병(Krabbe disease)); 갈락토실세라마이드 지방증(Galactosylceramide lipidosis)(크라베병(Krabbe disease)); 갈락토실세레브로시다아제 결핍증(galactosylcerebrosidase deficiency)(크라베병(Krabbe disease)); 갈락토실스핑고신 지방증(galactosylsphingosine lipidosis)(크라베병(Krabbe disease)); GALC 결핍증(크라베병(Krabbe disease)); GALT 결핍증(갈락토오스혈증(galactosemia)); 고셔병(Gaucher disease); 고셔병 유사 질환(Gaucher-like disease)(유사 고셔병(pseudo-Gaucher disease)); GBA 결핍증(제1형 고셔병(Gaucher disease type 1)); GD(고셔병(Gaucher's disease)); 유전성 뇌 장애(Genetic brain disorders); 유전성 폐기종(genetic emphysema)(알파-1 항트립신 결핍증(alpha-1 antitrypsin deficiency)); 유전성 혈색소증(genetic hemochromatosis)(혈색소증(hemochromatosis)); 신생아 거대 세포 간염(Giant cell hepatitis, neonatal)(신생아 혈색소증(Neonatal hemochromatosis)); GLA 결핍증(파브리병(Fabry disease)); 망막 교모세포종(Glioblastoma, retinal)(망막모세포종(retinoblastoma)); 망막 신경교종(Glioma, retinal)(망막모세포종(retinoblastoma)); 글로보이드 세포 백질 이영양증(globoid cell leukodystrophy)(GCL, GLD)(크라베병(Krabbe disease)); 글로보이드 세포 백질 뇌증(globoid cell leukoencephalopathy)(크라베병(Krabbe disease)); 글루코세레브로시다아제 결핍증(Glucocerebrosidase deficiency)(고셔병(Gaucher disease)); 글루코세레브로사이드 축적증(Glucocerebrosidosis)(고셔병(Gaucher disease)); 글루코실 세레브로사이드 지방증(Glucosyl cerebroside lipidosis)(고셔병(Gaucher disease)); 글루코실세라미다아제 결핍증(Glucosylceramidase deficiency)(고셔병(Gaucher disease)); 글루코실세라마이드 베타-글루코시다아제 결핍증(Glucosylceramide beta-glucosidase deficiency)(고셔병(Gaucher disease)); 글루코실세라마이드 지방증(Glucosylceramide lipidosis)(고셔병(Gaucher disease)); 글리세린 산뇨증(Glyceric aciduria)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 글리신 뇌병증(Glycine encephalopathy)(비케톤성 고글리신혈증(Nonketotic hyperglycinemia)); 글리콜 산뇨증(Glycolic aciduria)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 제1형 GM2 강글리오시드축적증(GM2 gangliosidosis)(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); 갑상선종-난청 증후군(Goiter-deafness syndrome)(펜리드 증후군(Pendred syndrome)); 그레페-어셔 증후군(Graefe-Usher syndrome)(어셔 증후군(Usher syndrome)); 그론블라드-스트랜드버그 증후군(Gronblad-Strandberg syndrome)(탄력섬유성위황색종(pseudoxanthoma elasticum)); 괸터 포르피린증(Guenther porphyria)(선천성 적혈구조성 포르피린증(congenital erythropoietic porphyria)); 군터병(Gunther disease)(선천성 적혈구조성 포르피린증(congenital erythropoietic porphyria)); 혈색소증(Haemochromatosis0(혈색소증(hemochromatosis)); 홀그렌 증후군(Hallgren syndrome)(어셔 증후군(Usher syndrome)); 할리퀸 어린선(Harlequin Ichthyosis); Hb S 질환(겸상적혈구빈혈(sickle cell anemia)); HCH(연골저형성증(hypochondroplasia)); HCP(유전성 코프로포르피린증(hereditary coproporphyria)); 두부 및 뇌 기형(Head and brain malformations); 청각 장애 및 난청(Hearing disorders and deafness); 아동의 청력 장애(Hearing problems in children); HEF2A(혈색소증#제2형(hemochromatosis#type 2)); HEF2B(혈색소증#제2형(hemochromatosis#type 2)); 헤마토포르피린증(Hematoporphyria)(포르피린증(porphyria)); 헴 합성 효소 결핍증(Heme synthetase deficiency)(적혈구조성 프로토포르피린증(erythropoietic protoporphyria)); 혈색소증(Hemochromatoses)(혈색소증(hemochromatosis)); 혈색소증(hemochromatosis); 헤모글로빈 M 질환(hemoglobin M disease)(메트헤모글로빈혈증#베타-글로빈형(methemoglobinemia#beta-globin type)); 헤모글로빈 S 질환(Hemoglobin S disease)(겸상적혈구빈혈(sickle cell anemia)); 혈우병(hemophilia); HEP(간적혈구조성 포르피린증(hepatoerythropoietic porphyria)); 간 AGT 결핍증(hepatic AGT deficiency)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 간적혈구조성 포르피린증(hepatoerythropoietic porphyria); 간렌즈핵변성증 증후군(Hepatolenticular degeneration syndrome)(윌슨병(Wilson disease)); 유전성 관절안질환(Hereditary arthro-ophthalmopathy)(스티클러 증후군(Stickler syndrome)); 유전성 코프로포르피린증(Hereditary coproporphyria); 유전성 디스토피아 지방증(Hereditary dystopic lipidosis)(파브리병(Fabry disease)); 유전성 혈색소증(Hereditary hemochromatosis)(HHC)(혈색소증(hemochromatosis)); 유전성 봉입체 근육병(Hereditary Inclusion Body Myopathy)(골격근 신생(skeletal muscle regeneration)); 유전성 철-부하성 빈혈(Hereditary iron-loading anemia)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); 유전성 이동 및 감각 신경병증(Hereditary motor and sensory neuropathy)(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease)); 유전성 이동신경병증(Hereditary motor neuronopathy)(척추근위축증(spinal muscular atrophy)); 제V형 유전성 이동신경병증(Hereditary motor neuronopathy, type V)(제V형 말단 척추 근육 위축증(distal spinal muscular atrophy, type V)); 유전성 다발성 외골증(Hereditary Multiple Exostoses); 유전성 비폴립증 대장암(Hereditary nonpolyposis colorectal cancer); 유전성 주기열 증후군(Hereditary periodic fever syndrome)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 유전성 대장 폴립증(Hereditary Polyposis Coli)(가족 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis)); 유전성 폐 폐기종(Hereditary pulmonary emphysema)(알파-1 항트립신 결핍증(alpha-1 antitrypsin deficiency)); 활성화된 단백질 C에 대한 유전성 내성(Hereditary resistance to activated protein C)(인자 V 라이덴 혈전성향증(factor V Leiden thrombophilia)); 제III형 유전성 감각 및 자율 신경병증(Hereditary sensory and autonomic neuropathy type III)(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); 유전성 경련성 하지대마비(Hereditary spastic paraplegia)(영아 발병 증가성 유전적 경련성 마비(infantile-onset ascending hereditary spastic paralysis)); 유전성 척추 운동 실조(Hereditary spinal ataxia)(프리드리히 운동 실조(Friedreich ataxia)); 유전성 척추 경화증(Hereditary spinal sclerosis)(프리드리히 운동 실조(Friedreich ataxia)); 헤릭 빈혈(Herrick's anemia)(겸상적혈구빈혈(sickle cell anemia)); 이형접합성 OSMED(Heterozygous OSMED)(바이센바허-쯔바이뮐러 증후군(Weissenbacher-Zweymuller syndrome)); 이형접합성 귀척추거대골단이형성증(Heterozygous otospondylomegaepiphyseal dysplasia)(바이센바허-쯔바이뮐러 증후군(Weissenbacher-Zweymuller syndrome)); HexA 결핍증(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); 헥소사미니다아제 A 결핍증(Hexosaminidase A deficiency)(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); 헥소사미니다아제 알파-서브유닛 결핍증(Hexosaminidase alpha-subunit deficiency)(변이형 B)(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); HFE-연관 혈색소증(HFE-associated hemochromatosis)(혈색소증(hemochromatosis)); HGPS(조로증(Progeria)); 히펠-린다우병(Hippel-Lindau disease)(폰 히펠-린다우병(von Hippel-Lindau disease)); HLAH(혈색소증(hemochromatosis)); HMN V(제V형 말단 척추 근육 위축증(distal spinal muscular atrophy, type V)); HMSN(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease)); HNPCC(유전성 비폴립증 대장암(hereditary nonpolyposis colorectal cancer)); HNPP(압박 마비에 대한 책임 동반 유전성 신경병증(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies)); 호모시스틴뇨증(homocystinuria); 호모겐티신산 옥시다아제 결핍증(Homogentisic acid oxidase deficiency)(알캅톤뇨증(alkaptonuria)); 호모겐티신산뇨증(Homogentisic acidura)(알캅톤뇨증(alkaptonuria)); 동형접합성 만발성 피부 포르피린증(Homozygous porphyria cutanea tarda)(간적혈구조성 포르피린증(hepatoerythropoietic porphyria)); HP1(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); HP2(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); HPA(고페닐알라닌혈증(hyperphenylalaninemia)); HPRT - 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제 결핍증(HPRT - Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase deficiency)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 제III형 HSAN(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); HSAN3(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); HSN-III(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); 인간 피부파열증(Human dermatosparaxis)(엘러스-단로스 증후군#피부파열증형(Ehlers-Danlos syndrome#dermatosparaxis type)); 헌팅톤병(Huntington's disease); 허치슨-길포드조로증후군(Hutchinson-Gilford progeria syndrome)(조로증(progeria)); 21-하이드록실라아제 결핍증(21-하이드록실라아제 결핍증)으로 인한 비전형적 안드로겐과다증(Hyperandrogenism, nonclassic type, due to 21-hydroxylase deficiency (21-hydroxylase deficiency)); 가족성 고카일로마이크론혈증(Hyperchylomicronemia, familial)(가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); 케토산증 및 백혈구감소증 동반 고글리신혈증(hyperglycinemia with ketoacidosis and leukopenia)(프로피온산혈증(propionic acidemia)); 제I형 고지단백혈증(Hyperlipoproteinemia type I)(가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); 원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary); 고 페닐알라닌 혈증(hyperphenylalaninaemia)(고페닐알라닌혈증(hyperphenylalaninemia)); 고페닐알라닌혈증(hyperphenylalaninemia); 연골이형성증(Hypochondrodysplasia)(연골저형성증(hypochondroplasia)); 연골 저형성증(hypochondrogenesis); 연골저형성증(hypochondroplasia); 혈색소 감소 빈혈(Hypochromic anemia)(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); 선천성 구리부족혈증(Hypocupremia, congenital); 멩케 증후군(Menkes syndrome)); 하이포잔틴 포스포리보실트랜스퍼라아제(HPRT) 결핍증(hypoxanthine phosphoribosyltransferse (HPRT) deficiency)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); IAHSP(영아 발병 증가 유전적 경련성 마비(infantile-onset ascending hereditary spastic paralysis)); 특발성 혈색소증(idiopathic hemochromatosis)(제3형 혈색소증(hemochromatosis, type 3)); 특발성 신생아 혈색소증(Idiopathic neonatal hemochromatosis)(신생아 혈색소증(hemochromatosis, neonatal)); 특발성 폐고혈압(Idiopathic neonatal hemochromatosis)(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); 면역계 장애(X 염색체-연관 중증 복합 면역결핍증(X-linked severe combined immunodeficiency)); 색소 실조증(Incontinentia Pigmenti); 영아 뇌 고셔병(Infantile cerebral Gaucher's disease)(제2형 고셔병(Gaucher disease type 2)); 영아 고셔병(Infantile Gaucher disease)(제2형 고셔병(Gaucher disease type 2)); 영아 발병 증가 유전성 경련 마비(infantile-onset ascending hereditary spastic paralysis); 불임(Infertility); 유전성 폐기종(inherited emphysema)(알파-1 항트립신 결핍증(alpha-1 antitrypsin deficiency)); 유전성 인간 전염 해면형 뇌질환(Inherited human transmissible spongiform encephalopathies)(프리온 질환(prion disease)); 압박 마비에 대한 유전 성향(inherited tendency to pressure palsies)(압박 마비에 대한 책임 동반 유전성 신경병증(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies)); 인슬리-아슬리 증후군(Insley-Astley syndrome)(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); 간헐적 급성 포르피린 증후군(Intermittent acute porphyria syndrome)(급성 간헐성 포르피린증(acute intermittent porphyria)); 장 용종증-피부 색소침착 증후군(Intestinal polyposis-cutaneous pigmentation syndrome)(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); IP(색소 실조증(incontinentia pigmenti)); 철 축적 질환(Iron storage disorder)(혈색소증(hemochromatosis)); 동완 15(Isodicentric 15)(idic15); 고립형 난청(Isolated deafness)(비증후군성 난청(nonsyndromic deafness)); 잭슨-바이스 증후군(Jackson-Weiss syndrome); JH(혈색소증#제2형(Haemochromatosis#type 2)); 주버트 증후군(Joubert syndrome); JPLS(소아 원발성 측색 경화증(Juvenile Primary Lateral Sclerosis)); 소아 근위축성 측색 경화증(juvenile amyotrophic lateral sclerosis)(근위축성 측색 경화증#제2형(Amyotrophic lateral sclerosis#type 2)); 소아 통풍(gout), 무도무정위운동(choreoathetosis), 정신지체 증후군(mental retardation syndrome)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 소아 과뇨산혈증후군(juvenile hyperuricemia syndrome)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); JWS(잭슨-바이스 증후군(Jackson-Weiss syndrome)); KD(X 염색체-연관 척추-연수 근육 위축증(X-linked spinal-bulbar muscle atrophy)); 케네디병(Kennedy disease)(X 염색체-연관 척추-연수 근육 위축증(X-linked spinal-bulbar muscle atrophy)); 케네디 척추 및 연수 근육 위축증(Kennedy spinal and bulbar muscular atrophy)(X 염색체-연관 척추-연수 근육 위축증(X-linked spinal-bulbar muscle atrophy)); 케라신 조직구증(Kerasin histiocytosis)(고셔병(Gaucher disease)); 케라신 유지증(Kerasin lipoidosis)(고셔병(Gaucher disease)); 케라신 축적증(Kerasin thesaurismosis)(고셔병(Gaucher disease)); 케톤형 글리신혈증(ketotic glycinemia)(프로피온산혈증(propionic acidemia)); 케톤형 고글리신혈증(ketotic hyperglycinemia)(프로피온산혈증(propionic acidemia)); 신장 질환(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 클라인펠터 증후군(Klinefelter syndrome); 클라인펠터 증후군(Klinefelter's syndrome); 니스트 이형성증(Kniest dysplasia); 크라베병(Krabbe disease); 열공성 치매(Lacunar dementia)(CADASIL); 랑거-살디노 연골 무형성증(Langer-Saldino achondrogenesis)(제II형 연골 무형성증(achondrogenesis, type II)); 랑거-살디노 이형성증(Langer-Saldino dysplasia)(제II형 연골 무형성증(achondrogenesis, type II)); 후발성 알츠하이머 질환(Late-onset Alzheimer disease)(알츠하이머 질환#제2형(Alzheimer disease#type 2)); 후발 가족성 알츠하이머 질환(Late-onset familial Alzheimer disease)(AD2)(알츠하이머 질환#제2형(Alzheimer disease#type 2)); 후발성 크라베병(late-onset Krabbe disease)(LOKD)(크라베병(Krabbe disease)); 학습 장애(Learning Disorders)(학습 부진(Learning disability)); 구주위 흑자증(Lentiginosis, perioral)(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); 레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome); 백질 이영양증(Leukodystrophies); 로젠탈 섬유 생성 백질 이영양증(leukodystrophy with Rosenthal fibers)(알렉산더병(Alexander disease)); 해면형 백질 이영양증(Leukodystrophy, spongiform)(카나반병(Canavan disease)); LFS(리-프라우메니 증후군(Li-Fraumeni syndrome)); 리-프라우메니증후군(Li-Fraumeni syndrome); 리파아제 D 결핍증(가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); LIPD 결핍증(가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial)); 세레브로사이드 지방증(Lipidosis, cerebroside)(고셔병(Gaucher disease)); 영아 강글리오시드 지방증(Lipidosis, ganglioside, infantile)(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); 리포이드조직구증(Lipoid histiocytosis)(케라신형(kerasin type))(고셔병(Gaucher disease)); 가족성 지단백 리파아제 결핍증(lipoprotein lipase deficiency, familial); 간 질환(갈락토오스혈증(galactosemia)); 루게릭병(Lou Gehrig disease)(근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis)); 루이-바 증후군(Louis-Bar syndrome)(모세혈관확장성 운동실조(ataxia-telangiectasia)); 린치 증후군(Lynch syndrome)(유전성 비폴립증 대장암(hereditary nonpolyposis colorectal cancer)); 리실-하이드록실라아제 결핍증(Lysyl-hydroxylase deficiency)(엘러스-단로스 증후군#척추만곡증형(Ehlers-Danlos syndrome#kyphoscoliosis type)); 마카도-조셉병(Machado-Joseph disease)(척수소뇌 운동 실조#제3형(Spinocerebellar ataxia#type 3)); 남성 유방암(Male breast cancer)(유방암); 남성 생식기 장애(Male genital disorders); 남성 터너 증후군(Male Turner syndrome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 유방 악성 신생물(Malignant neoplasm of breast)(유방암); 유방 악성 종양(malignant tumor of breast)(유방암); 방광 악성 종양(Malignant tumor of urinary bladder)(방광암); 유선암(Mammary cancer)(유방암); 마르판 증후군 15(Marfan syndrome 15); 마커 X 증후군(Marker X syndrome)(취약 X 증후군(fragile X syndrome)); 마틴-벨 증후군(Martin-Bell syndrome)(취약 X 증후군(fragile X syndrome)); 맥쿤-알브라이트 증후군(McCune-Albright syndrome); 맥러드 증후군(McLeod syndrome); MEDNIK; 지중해 빈혈(Mediterranean Anemia)(베타 지중해 빈혈(beta thalassemia)); 가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial); 거대골단 난장이증(Mega-epiphyseal dwarfism)(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); 멩케아 증후군(Menkea syndrome)(멩케 증후군(Menkes syndrome)); 멩케 증후군(Menkes syndrome); 골연골이상 동반 정신 지체(Mental retardation with osteocartilaginous abnormalities)(코핀-로우리 증후군(Coffin-Lowry syndrome)); 대사 장애; 제II형 영양위축성 난장이증(Metatropic dwarfism, type II)(니스트 이형성증(Kniest dysplasia)); 제II형 영양위축성 이형성증(Metatropic dysplasia type II)(니스트 이형성증(Kniest dysplasia)); 메트헤모글로빈혈증#베타-글로빈형(Methemoglobinemia#beta-globin type); 메틸말론산혈증(methylmalonic acidemia); MFS(마르판 증후군(Marfan syndrome)); MHAM(카우덴 증후군(Cowden syndrome)); MK(멩케 증후군(Menkes syndrome)); 마이크로 증후군(Micro syndrome); 소두증(Microcephaly); MMA(메틸말론산혈증(methylmalonic acidemia)); MNK(멩케 증후군(Menkes syndrome)); 1염색체성 1p36 증후군(Monosomy 1p36 syndrome)(1p36 결손 증후군); 1염색체성 X(monosomy X)(터너 증후군(Turner syndrome)); 운동 신경 질환(Motor neuron disease), 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis)(근위축성 측색 경화증)(amyotrophic lateral sclerosis); 운동 장애(Movement disorders); 모왓-윌슨 증후군(Mowat-Wilson syndrome); 점액다당류증(Mucopolysaccharidosis)(MPS I); 점액성 점착증(Mucoviscidosis)(낭포성 섬유증(cystic fibrosis)); 뮌케 증후군(Muenke syndrome); 다발경색치매(Multi-Infarct dementia)(CADASIL); 후발성 다발 카복실라아제 결핍증(Multiple carboxylase deficiency, late-onset)(바이오티니다아제 결핍증(biotinidase deficiency)); 다발성 과오종 증후군(Multiple hamartoma syndrome)(카우덴 증후군(Cowden syndrome)); 다발성 신경섬유종증(Multiple neurofibromatosis)(신경섬유종증(neurofibromatosis)); 근이영양증(Muscular dystrophy); 듀센-베커형 근이영양증(Muscular dystrophy, Duchenne and Becker type); 근 긴장 이영양증(Myotonia atrophica)(근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy)); 근긴장 이영양증(Myotonia dystrophica)(근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy)); 근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy); 선천성 점액수종(Myxedema, congenital)(선천성 갑상선 기능 저하증(congenital hypothyroidism)); 낸스-인슬리 증후군(Nance-Insley syndrome)(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); 낸스-스위니 연골이형성증(Nance-Sweeney chondrodysplasia)(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); NB1A1(판토테네이트 키나아제-연관 신경퇴화(pantothenate kinase-associated neurodegeneration)); 네일-딩월 증후군(Neill-Dingwall syndrome)(코케인 증후군(Cockayne syndrome)); 망막신경아세포종(Neuroblastoma, retinal)(망막모세포종(retinoblastoma)); 제1형 뇌내 철 축적 동반 신경퇴화(Neurodegeneration with brain iron accumulation type 1)(판토테네이트 키나아제-연관 신경퇴화); 제I형 신경섬유종증(Neurofibromatosis type I); 제II형 신경섬유종증(Neurofibromatosis type II); 신경 질환(Neurologic diseases); 신경근 장애(Neuromuscular disorders); 제V형 원위 유전성 운동신경병증(neuronopathy, distal hereditary motor, type V)(말단 척추 근육 위축증#제V형(Distal spinal muscular atrophy#type V)); 피라미드 특징 동반 원위 유전성 운동신경병증(neuronopathy, distal hereditary motor, with pyramidal features)(근위축성 측색 경화증#제4형(Amyotrophic lateral sclerosis#type 4)); NF(신경섬유종증(neurofibromatosis)); 니만-픽(Niemann-Pick)(니만-픽병(Niemann-Pick disease)); 노악 증후군(Noack syndrome)(파이퍼 증후군(Pfeiffer syndrome)); 비케톤성 고글리신혈증(Nonketotic hyperglycinemia)(글리신 뇌병증(Glycine encephalopathy)); 비-신경계침윤 고셔병(Non-neuronopathic Gaucher disease)(제1형 고셔병(Gaucher disease type 1)); 비페닐케톤뇨 고페닐알라닌혈증(Non-phenylketonuric hyperphenylalaninemia)(테트라하이드로바이오프테린 결핍증(tetrahydrobiopterin deficiency)); 비증후군성 난청(nonsyndromic deafness); 누난 증후군(Noonan syndrome); 노보트니 고셔병(Norrbottnian Gaucher disease)(제3형 고셔병(Gaucher disease type 3)); 조직갈변증(Ochronosis)(알캅톤뇨증(alkaptonuria)); 퇴자병성 관절염(Ochronotic arthritis)(알캅톤뇨증(alkaptonuria)); OI(골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta)); OSMED(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); 골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta); 골취약증(Osteopsathyrosis)(골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta)); 선천성 골경화증(Osteosclerosis congenita)(연골 발육 부전증(achondroplasia)); 귀척추거대골단 이형성증(Oto-spondylo-megaepiphyseal dysplasia)(귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia)); 귀척추거대골단이형성증(otospondylomegaepiphyseal dysplasia); 수산증(Oxalosis)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 원발성 옥살산뇨(Oxaluria, primary)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 판토테네이트 키나아제-연관 신경퇴화(pantothenate kinase-associated neurodegeneration); 파타우 증후군(Patau Syndrome)(3염색체성 13(Trisomy 13)); PBGD 결핍증(급성 간헐성포르피린증(acute intermittent porphyria)); PCC 결핍증(프로피온산혈증(propionic acidemia)); PCT(포르피린증 만발성 피부(porphyria cutanea tarda)); PDM(근 긴장성 이영양증#제2형(Myotonic dystrophy#type 2)); 펜리드 증후군(Pendred syndrome); 주기적 질환(Periodic disease)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 주기적 복막염(Periodic peritonitis)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 구주위 흑자증 증후군(Periorificial lentiginosis syndrome)(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); 말초 신경 장애(Peripheral nerve disorders)(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); 말초 신경섬유종증(Peripheral neurofibromatosis)(신경섬유종증 1(neurofibromatosis 1)); 비골근위축증(Peroneal muscular atrophy)(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease)); 퍼옥시좀 알라닌:글리옥실레이트 아미노트랜스퍼라아제 결핍증(peroxisomal alanine:glyoxylate aminotransferase deficiency)(원발성 고수산뇨증(hyperoxaluria, primary)); 푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome); 파이퍼 증후군(Pfeiffer syndrome); 페닐알라닌 하이드록실라아제 결핍성 질환(Phenylalanine hydroxylase deficiency disease)(페닐케톤뇨증(phenylketonuria)); 페닐케톤뇨증(phenylketonuria); 갈색세포종(Pheochromocytoma)(폰 히펠-린다우병(von Hippel-Lindau disease)); 태아연골이형성증 동반 피에르 로빈 증후군(Pierre Robin syndrome with fetal chondrodysplasia)(바이센바허-쯔바이뮐러 증후군(Weissenbacher-Zweymuller syndrome)); 색소침착경변(Pigmentary cirrhosis)(혈색소증(hemochromatosis)); PJS(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); PKAN(판토테네이트 키나제-연관 신경퇴화(pantothenate kinase-associated neurodegeneration)); PKU(페닐케톤뇨증(phenylketonuria)); 플럼보 포르피린증(Plumboporphyria)(ALA 결핍증 포르피린증(ALA deficiency porphyria)); PMA(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-tooth disease)); 다골성 섬유성골 이형성증(polyostotic fibrous dysplasia)(맥쿤-알브라이트 증후군(McCune-Albright syndrome)); 대장 용종증(polyposis coli)(가족성 성선 종성 용종증(familial adenomatous polyposis)); 과오종 장 용종증(polyposis, hamartomatous intestinal)(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); 장 용종증 II(polyposis, intestinal, II)(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); 폴립-및-스팟 증후군(polyps-and-spots syndrome)(polyps-and-spots syndrome)(푸에츠-제거스 증후군(Peutz-Jeghers syndrome)); 포르포빌리노겐 합성 효소 결핍증(Porphobilinogen synthase deficiency)(ALA 결핍 포르피린증(ALA deficiency porphyria)); 포르피린증(porphyria); 포르피린 장애(porphyrin disorder)(포르피린증(porphyria)); PPH(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); PPOX 결핍증(반문상 포르피린증(variegate porphyria)); 프레이더-랩하트-윌리 증후군(Prader-Labhart-Willi syndrome)(프레이더-윌리 증후군(Prader-Willi syndrome)); 프레이더-윌리 증후군(Prader-Willi syndrome); 초로기 및 노인성 치매(presenile and senile dementia)(알츠하이머 질환(Alzheimer disease)); 원발성 혈색소증(primary hemochromatosis)(혈색소증(hemochromatosis)); 원발성 과뇨산혈증 증후군(primary hyperuricemia syndrome)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension); 원발 노인성 퇴행 치매(primary senile degenerative dementia)(알츠하이머 질환(Alzheimer disease)); 프리온 질환(prion disease); 돌연변이 프로콜라겐형 EDS VII(procollagen type EDS VII, mutant)(엘러스-단로스 증후군#관절이완증형(Ehlers-Danlos syndrome#arthrochalasia type)); 조로증(progeria)(허친슨 길포드 조로증후군(Hutchinson Gilford Progeria Syndrome)); 조로증 유사 증후군(Progeria-like syndrome)(코케인 증후군(Cockayne syndrome)); 조로성 왜소증(progeroid nanism)(코케인 증후군(Cockayne syndrome)); 유전적 만성 진행성 무도병(progressive chorea, chronic hereditary)(헌팅톤(Huntington))(헌팅톤병(Huntington's disease)); 진행성 근위축증(progressive muscular atrophy)(척추 근위축증(spinal muscular atrophy)); 정상 공막 진행성 변형 골 형성 부전증(progressively deforming osteogenesis imperfecta with normal sclerae)(골 형성 부전증#제III형(Osteogenesis imperfecta#type III)); PROMM(근 긴장성 이영양증#제2형(Myotonic dystrophy#type 2)); 프로피온산혈증(propionic academia); 프로피오닐-CoA 카복실라아제 결핍증(propionyl-CoA carboxylase deficiency)(프로피온산혈증(propionic acidemia)); 단백질 C 결핍증; 단백질 S 결핍증; 프로토포르피린증(protoporphyria)(적혈구조성 프로토포르피린증(erythropoietic protoporphyria)); 프로토포르피리노겐 옥시다아제 결핍증(protoporphyrinogen oxidase deficiency)(반문상 포르피린증(variegate porphyria)); 근위 근 긴장성 이영양증(proximal myotonic dystrophy)(근 긴장성 이영양증#제2형(Myotonic dystrophy#type 2)); 근위 근 긴장성 근육병(proximal myotonic myopathy)(근 긴장성 이영양증#제2형(Myotonic dystrophy#type 2)); 유사 고셔병(pseudo-Gaucher disease); 유사 율리히-터너 증후군(pseudo-Ullrich-Turner syndrome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 탄력섬유성위황색종(pseudoxanthoma elasticum); 사이코신 지방증(psychosine lipidosis)(크라베병(Krabbe disease)); 폐동맥 고혈압(pulmonary arterial hypertension)(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); 폐고혈압(pulmonary hypertension)(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); PWS(프레이더-윌리 증후군(Prader-Willi syndrome)); PXE - 탄력섬유성위황색종(PXE - pseudoxanthoma elasticum)(탄력섬유성위황색종(pseudoxanthoma elasticum)); Rb(망막모세포종(retinoblastoma)); 신경 레클링하우젠병(Recklinghausen disease, nerve)(신경섬유종증 1(neurofibromatosis 1)); 재발성 다발 장막염(Recurrent polyserositis)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); 망막 장애(Retinal disorders); 망막색소변성증-난청 증후군(Retinal disorders; Retinitis pigmentosa-deafness syndrome)(어셔 증후군(Usher syndrome)); 망막모세포종(Retinoblastoma); 레트 증후군(Rett syndrome); 제3형 RFALS(근위축성 측색 경화증#제2형(Amyotrophic lateral sclerosis#type 2)); 리커 증후군(Ricker syndrome)(근 긴장성 이영양증#제2형(Myotonic dystrophy#type 2)); 릴리-데이 증후군(Riley-Day syndrome)(가족성 자율 신경 실조증(familial dysautonomia)); 로우시-레비 증후군(Roussy-Levy syndrome)(샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth disease)); RSTS(루빈스타인-테이비 증후군(Rubinstein-Taybi syndrome)); RTS(레트 증후군(Rett syndrome))(루빈스타인-테이비 증후군(Rubinstein-Taybi syndrome)); RTT(레트 증후군(Rett syndrome)); 루빈스타인-테이비 증후군(Rubinstein-Taybi syndrome); 색-바라바스 증후군(Sack-Barabas syndrome)(맥관형 엘러스-단로스 증후군(Ehlers-Danlos syndrome, vascular type)); SADDAN; 리 앤 프라우마니 육종 집단 증후군(sarcoma family syndrome of Li and Fraumeni)(리-프라우메니증후군(Li-Fraumeni syndrome)); 유방 육종, 백혈병 및 부신(SBLA) 증후군(sarcoma, breast, leukemia, and adrenal gland (SBLA) syndrome)(리-프라우메니증후군(Li-Fraumeni syndrome)); SBLA 증후군(리-프라우메니증후군(Li-Fraumeni syndrome)); SBMA(X 염색체-연관 척추-연수 근육 위축증(X-linked spinal-bulbar muscle atrophy)); SCD(겸상적혈구빈혈(sickle cell anemia)); 양측성 청각 슈반종(Schwannoma, acoustic, bilateral)(신경섬유종증 2(neurofibromatosis 2)); SCIDX1(X 염색체-연관 중증 복합 면역결핍증(X-linked severe combined immunodeficiency)); 결절 경화증(sclerosis tuberosa)(결절성 경화증(tuberous sclerosis)); SDAT(알츠하이머 질환(Alzheimer disease)); 선천성 SED(SED congenita)(선천성 척추골단 이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita)); SED 스트루드위크(SED Strudwick)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); SEDc(선천성 척추골단 이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita)); 스트루드위크형 SEMD(SEMD, Strudwick type)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 노인성 치매(senile dementia)(알츠하이머 질환#제2형(Alzheimer disease#type 2)); 발달 지연 및 흑색 가시세포증 동반 중증 연골 발육 부전증(severe achondroplasia with developmental delay and acanthosis nigricans)(SADDAN); 스프린젠 증후군(Shprintzen syndrome)(22q11.2 결손 증후군); 겸상 적혈구 빈혈(sickle cell anemia); 골격-피부-뇌 증후군(skeleton-skin-brain syndrome)(SADDAN); 피부 색소침착 장애(Skin pigmentation disorders); SMA(척추 근위축증(spinal muscular atrophy)); 스트루드위크형 SMED(SMED, Strudwick type)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 제I형 SMED(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 스미스 렘리 오피츠 증후군(Smith Lemli Opitz Syndrome); 유전성 남아프리카 포르피린증(South-African genetic porphyria)(반문상 포르피린증(variegate porphyria)); 영아 발병 증가 경련성 마비(spastic paralysis, infantile onset ascending)(영아 발병 증가 유전적 경련성 마비(infantile-onset ascending hereditary spastic paralysis)); 언어 및 소통 장애(Speech and communication disorders); 테이-삭스 스핑고지방증(sphingolipidosis, Tay-Sachs)(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); 척추-연수 근육위축증(spinal-bulbar muscular atrophy); 척추 근위축증(spinal muscular atrophy); 제V형 원위 척추 근위축증(spinal muscular atrophy, distal type V)(말단 척추 근육 위축증#제V형(Distal spinal muscular atrophy#type V)); 주로 팔에 발병하는 원위 척추 근위축증(spinal muscular atrophy, distal, with upper limb predominance)(원위 척추 근위축증#제V형(Distal spinal muscular atrophy#type V)); 척수소뇌 운동 실조(spinocerebellar ataxia); 스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type); 선천성 척추골단 이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenital); 척추골단 이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia)(제II형 및 제XI형 콜라겐요법(collagenopathy, types II and XI)); 선천성 스트루드위크형 척추사지끝골간단 이형성증(spondylometaepiphyseal dysplasia congenita, Strudwick type)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 척추사지골간단 이형성증(spondylometaphyseal dysplasia)(SMD)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 스트루드위크형 척추사지골간단 이형성증(spondylometaphyseal dysplasia, Strudwick type)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 중추 신경계의 해면상 변성(spongy degeneration of central nervous system)(카나반병(Canavan disease)); 뇌의 해면상 변성(spongy degeneration of the brain)(카나반병(Canavan disease)); 영아 백질 해면상 변성(spongy degeneration of white matter in infancy)(카나반병(Canavan disease)); 산발성 원발 폐고혈압(sporadic primary pulmonary hypertension)(원발성 폐고혈압(primary pulmonary hypertension)); SSB 증후군(SADDAN); 붉은 머리 증후군(steely hair syndrome)(멩케 증후군(Menkes syndrome)); 슈타이너트병(Steinert disease)(근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy)); 슈타이너트 근 긴장성 이영양 증후군(Steinert myotonic dystrophy syndrome)(근 긴장성 이영양증(myotonic dystrophy)); 스티클러 증후군(Stickler syndrome); 뇌졸중(stroke)(CADASIL); 스트루드위크 증후군(Strudwick syndrome)(스트루드위크형 척추골단골간단 이형성증(spondyloepimetaphyseal dysplasia, Strudwick type)); 아급성 신경계침윤 고셔병(subacute neuronopathic Gaucher disease)(제3형 고셔병(Gaucher disease type 3)); 스웨덴 유전성 포르피린증(Swedish genetic porphyria)(급성 간헐성포르피린증(acute intermittent porphyria)); 스웨덴 포르피린증(Swedish porphyria)(급성 간헐성포르피린증(acute intermittent porphyria)); 스위스 치즈 연골 이형성증(Swiss cheese cartilage dysplasia)(니스트 이형성증(Kniest dysplasia)); 테이-삭스병(Tay-Sachs disease); TD - 치명적 난장이증(thanatophoric dwarfism)(치명적 이형성증(thanatophoric dysplasia)); 곧은 대퇴골 및 클로버잎 모양 두개골을 보이는 TD(TD with straight femurs and cloverleaf skull)(치명적 이형성증#제2형(thanatophoric dysplasia#Type 2)); 소뇌-안구피부 모세 혈관 확장증(Telangiectasia, cerebello-oculocutaneous)(모세혈관확장성 운동실조(ataxia-telangiectasia)); 정소성 여성화 증후군(Testicular feminization syndrome)(안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome)); 테트라하이드로비오프테린 결핍증(tetrahydrobiopterin deficiency); TFM - 정소성 여성화 증후군(testicular feminization syndrome)(안드로겐 무감성 증후군(androgen insensitivity syndrome)); 지중해 빈혈 매개물(thalassemia intermedia)(베타 지중해 빈혈(beta thalassemia)); 종증성 지중해 빈혈(Thalassemia Major)(베타 지중해 빈혈(beta thalassemia)); 치명적 이형성증(thanatophoric dysplasia); 진성 당뇨병 및 감각신경 난청 동반 티아민 반응 거대적아구성 빈혈(thiamine-responsive megaloblastic anemia with diabetes mellitus and sensorineural deafness); 활성화된 단백질 C에 대한 보조 인자 결핍으로 인한 라이덴형 혈전성향증(Thrombophilia due to deficiency of cofactor for activated protein C, Leiden type)(인자 V 라이덴 혈전성향증(factor V Leiden thrombophilia)); 갑상선 질환(Thyroid disease); 순대양 신경병증(Tomaculous neuropathy)(압박 마비에 대한 책임 동반 유전성신경병증(hereditary neuropathy with liability to pressure palsies)); 총 HPRT 결핍증(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 총 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라아제 결핍증(Total hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase deficiency)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); 투렛 증후군(Tourette's Syndrome); 전염성 치매(Transmissible dementias)(프리온 질환(prion disease)); 전염성 해면형 뇌질환(Transmissible spongiform encephalopathies)(프리온 질환(prion disease)); 트리처 콜린스 증후군(Treacher Collins syndrome); 트리아스 취약성 골(Trias fragilitis ossium)(골 형성 부전증#제I형(osteogenesis imperfecta#Type I)); 3중 X 증후군(triple X syndrome); 3중 X 증후군(Triplo X syndrome)(3중 X 증후군); 3염색체 21(Trisomy 21)(다운 증후군(Down syndrome)); 3염색체 X(Trisomy X)(3중 X 증후군(triple X syndrome)); 트로이시에-하놋-쇼파르 증후군(Troisier-Hanot-Chauffard syndrome)(혈색소증(hemochromatosis)); TS(터너 증후군(Turner syndrome)); TSD(테이-삭스병(Tay-Sachs disease)); TSEs(프리온 질환(prion disease)); 결절 경화증(tuberose sclerosis)(결절성 경화증(tuberous sclerosis)); 결절성 경화증(tuberous sclerosis); 터너 증후군(Turner syndrome); X 염색체를 가지는, 여성의 터너 증후군(Turner syndrome in female with X chromosome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 정상 핵형의 터너 발현증(Turner's phenotype, karyotype normal)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 터너 증후군(Turner's syndrome)(터너 증후군(Turner syndrome)); 터너 유사 증후군(Turner-like syndrome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 제2형 고셔병(Type 2 Gaucher disease)(고셔병 제2형(Gaucher disease type 2)); 제3형 고셔병(Type 3 Gaucher disease)(고셔병 제3형(Gaucher disease type 3)); UDP-갈락토오스-4-에피머라아제 결핍성 질환(UDP-galactose-4-epimerase deficiency disease)(갈락토오스혈증(galactosemia)); UDP 글루코스 4-에피머라아제 결핍성 질환(UDP glucose 4-epimerase deficiency disease)(갈락토오스혈증(galactosemia)); UDP 글루코오스 헥소오스-1-인산염 우리딜트랜스퍼라아제 결핍증(UDP glucose hexose-1-phosphate uridylyltransferase deficiency)(갈락토오스혈증(galactosemia)); 율리히-누난 증후군(Ullrich-Noonan syndrome)(누난 증후군(Noonan syndrome)); 율리히-터너 증후군(Ullrich-Turner syndrome)(터너 증후군(Turner syndrome)); 미분화 난청(Undifferentiated deafness)(비증후군성 난청(nonsyndromic deafness)); UPS 결핍증(급성 간헐성포르피린증(acute intermittent porphyria)); 방광암(Urinary bladder cancer)(방광암(bladder cancer)); UROD 결핍증(포르피린증 만발성 피부(porphyria cutanea tarda)); 유로포르피리노겐 탈탄산효소 결핍증(Uroporphyrinogen decarboxylase deficiency)(포르피린증 만발성 피부(porphyria cutanea tarda)); 유로포르피리노겐 합성 효소 결핍증(Uroporphyrinogen synthase deficiency)(급성 간헐성포르피린증(acute intermittent porphyria)); UROS 결핍증(선천성 적혈구조성 포르피린증(congenital erythropoietic porphyria)); 어셔 증후군(Usher syndrome); UTP 헥소오스-1-인산염 우리딜릴트랜스퍼라아제 결핍증(UTP hexose-1-phosphate uridylyltransferase deficiency)(갈락토오스혈증); 반 보가에르트-베르트란트 증후군(Van Bogaert-Bertrand syndrome)(카나반병(Canavan disease)); 판 더 회브 증후군(Van der Hoeve syndrome)(골 형성 부전증#제I형(osteogenesis imperfecta#Type I)); 반문상 포르피린증(variegate porphyria); 안모구개 증후군(Velocardiofacial syndrome)(22q11.2 결손 증후군); VHL 증후군(폰 히펠-린다우병(von Hippel-Lindau disease)); 시력 손상 및 실명(Vision impairment and blindness)(알스트롬 증후군(Alstrom syndrome)); 폰 보가에르트-베르트란트병(Von Bogaert-Bertrand disease)(카나반병(Canavan disease)); 폰 히펠-린다우병(von Hippel-Lindau disease); 폰 레클렌하우젠-애플바움병(Von Recklenhausen-Applebaum disease)(혈색소증(hemochromatosis)); 폰 레클렌하우젠병(von Recklinghausen disease)(신경섬유종증 1(neurofibromatosis 1)); VP(반문상 포르피린증(variegate porphyria)); 브롤릭병(Vrolik disease)(골 형성 부전증(osteogenesis imperfecta)); 바르덴부르크 증후군(Waardenburg syndrome); 바르부르크 쇼 플레델리우스 증후군(Warburg Sjo Fledelius syndrome)(마이크로 증후군(Micro syndrome)); WD(윌슨병(Wilson disease)); 바이센바허-쯔바이뮐러 증후군(Weissenbacher-Zweymuller syndrome); 윌슨병(Wilson disease); 윌슨병(Wilson's disease)(윌슨병(Wilson disease)); 볼프-허시혼 증후군(Wolf-Hirschhorn syndrome); 볼프 주기적 질환(Wolff Periodic disease)(가족성 지중해열(Mediterranean fever, familial)); WZS(바이센바허-쯔바이뮐러 증후군(Weissenbacher-Zweymuller syndrome)); 색소성 건피증(Xeroderma Pigmentosum); X 염색체-연관 정신 지체 및 거대고환증(X-linked mental retardation and macroorchidism)(취약 X 증후군(fragile X syndrome)); X 염색체-연관 원발성 과뇨산혈증(X-linked primary hyperuricemia)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); X 염색체-연관 중증 복합 면역결핍증(X-linked severe combined immunodeficiency); X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia); X 염색체-연관 척추-연수 근육 위축증(X-linked spinal-bulbar muscle atrophy)(케네디병(Kennedy disease)); X 염색체-연관 요산뇨증 효소 결함(X-linked uric aciduria enzyme defect)(레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome)); X-SCID(X 염색체-연관 중증 복합 면역결핍증(X-linked severe combined immunodeficiency)); XLSA(X 염색체-연관 철적아구성 빈혈(X-linked sideroblastic anemia)); XSCID(X 염색체-연관 중증 복합 결핍증(X-linked severe combined immunodeficiency)); XXX 증후군(3중 X 증후군(triple X syndrome)); XXXX 증후군(48, XXXX); XXXXX 증후군(49, XXXXX); XXY 증후군(클라인펠터 증후군(Klinefelter syndrome)); XXY 3염색체(XXY trisomy)(클라인펠터 증후군(Klinefelter syndrome)); XYY 핵형(XYY karyotype)(47, XYY 증후군); XYY 증후군(47, XYY 증후군); 및 YY 증후군(47, XYY 증후군).
추가의 바람직한 측면에서, 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA 또는 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA를 다수 개 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 사용될 수 있고, 특히 본원에 정의된 바와 같은 목적으로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 질환들을 치료하는 유전자 치료 또는 유전적 백신 접종에 사용될 수 있다.
약학적 조성물은 또한 유전자 치료 또는 유전적 백신 접종, 특히 바람직하게 본원에 정의된 바와 같은 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다.
추가의 측면에 따르면, 본 발명은 또한 키트, 특히 부품 키트(kits of parts)를 제공한다.
이와 같은 키트, 특히 부품 키트는 일반적으로 성분 단독 또는 본원에 정의된 바와 같은 추가적인 성분, 적어도 하나의 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA, 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물 또는 백신과 조합하여 포함한다. 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 변형된 RNA는 선택적으로 본원에 정의된 바와 같은 추가적인 성분과 조합되며, 이에 의해 본 발명에 따른 적어도 하나의 변형된 RNA는 하나 이상의 다른 성분을 포함하는 키트의 적어도 하나의 다른 부품과 분리되어(키트의 제 1 부품) 제공된다. 약학적 조성물은 예를 들어, 키트의 하나 또는 상이한 부품에 존재할 수 있다. 예시로서, 예를 들어, 적어도 하나의 키트의 부품은 적어도 하나의 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA, 및 적어도 하나의 추가적인 키트의 부품 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 다른 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 적어도 하나의 키트의 다른 부품은 적어도 하나의 약학적 조성물 또는 이의 부품을 포함할 수 있고, 예를 들어, 적어도 하나의 키트의 부품은 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA, 적어도 하나의 추가적인 키트의 부품 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 다른 성분, 적어도 하나의 추가적인 키트의 부품 적어도 하나의 약학적 조성물의 성분 또는 약학적 조성물 전체, 그리고 적어도 하나의 추가적인 키트의 부품 예를 들어, 적어도 하나의 약학적 담체 또는 비히클 등을 포함할 수 있다. 키트 또는 부품 키트가 변형된 RNA 분자의 다수를 포함하는 경우에, 키트의 일 성분은 키트에 포함된 오직 하나, 여러 또는 모든 변형된 RNA 분자를 포함할 수 있다. 다른 양태에서, 모든/각각의 변형된 RNA는 키트의 상이한/분리된 성분에 포함될 수 있고 각각의 성분은 키트의 부품을 형성한다. 또한, 하나 이상의 다른(제 2, 제 3 등) 성분(하나 이상의 다른 부품 키트로 제공되는)은 제 1 성분과 동일하거나 부분적으로 동일하거나 상이할 수 있는 하나 이상의 변형된 RNA를 함유할 수 있는 반면에, 하나 이상의 변형된 RNA는 키트의 부품으로서 제 1 성분에 포함될 수 있다. 또한, 키트 또는 부품 키트(kit of parts)는 변형된 RNA, 약학적 조성물 또는 임의의 이의 성분 또는 예를 들어, 키트가 부품키트로서 제조되는 경우에는 부품(parts)의 투여 및 투여량에 대한 정보와 함께 기술적 설명서(technical instruction)를 함유할 수 있다.
바람직하게, 본 발명에 따른 키트는 바람직하게는 동결 건조된 형태의 변형된 RNA 및 변형된 RNA의 재편성(reconstitution)을 위한 적합한 벡터를 포함한다. 바람직한 양태에서, 변형된 RNA는 용기(container), 바람직하게는 변형된 RNA가 재가용화되는 용기에 제공된다. 바람직하게, 용기는 예를 들어, 바늘 없는 주사 장치의 일회용 주사기를 채우기 위해 바늘 없는 주사 장치에 연결될 수 있다. 또한, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA를 제트 인젝션(jet injection)으로 투여하는 단계를 포함하는, (포유동물의) 피부 또는 근육에서 RNA-암호화된 펩타이드 또는 단백질의 (국소적인) 발현을 향상시키기 위한 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 변형된 RNA를, 이를 필요로 하는 개체, 특히 인간 환자에 제트 인젝션으로 투여하는 단계를 포함하는 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 장애를 치료 또는 예방하는 방법은 바람직하게 상술한 바와 같은 백신 접종 방법 및/또는 유전자 치료 방법이다.
다음에 나타낸 도면은 단지 예시적인 것이며, 또 다른 방법으로 본 발명을 설명한다. 이들 도면은 본 발명을 한정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
도 1은 기니피그에서 루시퍼라아제(Luciferase) 발현이다.
기니피그는 제트 인젝션 또는 통상의 피내 바늘 주사에 의해 20 μg의 포티누스 피랄리스(Photinus pyralis) 루시퍼라아제를 암호화하는 변형된 mRNA(PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL)가 주사되었다. 주사 24시간 후, 피부 샘플(sample)을 제조하고 루시퍼라아제 발현을 측정하였다.
도 2는 기니피그에서 루시퍼라아제 발현이다.
기니피그는 제트 인젝션 또는 통상의 피내 바늘 주사에 의해 상이한 투여량(10, 40 및 80 μg)의 포티누스 피랄리스(Photinus pyralis) 루시퍼라아제를 암호화하는 변형된 mRNA(PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL)가 주사되었다. 주사 24시간 후, 피부 샘플(sample)을 제조하고 루시퍼라아제 발현을 측정하였다.
도 3은 비변형된 및 변형된 mRNA의 비교이다.
기니피그는 제트 인젝션 또는 통상의 피내 바늘 주사에 의해 상이한 투여량(5 및 80 μg)의 포티누스 피랄리스(Photinus pyralis) 루시퍼라아제를 암호화하는 비변형된 mRNA(PpLuc(wt)- A30) 및 변형된 mRNA(PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL)가 주사되었다. 주사 24시간 후, 피부 샘플(sample)을 제조하고 루시퍼라아제 발현을 측정하였다.
도 4는 mRNA 서열 R1265이다: PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (서열번호 46)
도 5는 mRNA 서열 R2652이다: PpLuc(wt) - A30 (서열번호 47)
도 6은 mRNA 서열 R3454이다: PpLuc(wt) - A64 (서열번호 48)
도 7은 mRNA 서열 R2462이다: PpLuc(GC) - A64 - C30 - 히스톤SL (서열번호 49)
도 8은 mRNA 서열 R1256이다: PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 (서열번호 50)
도 9는 mRNA 서열 R2393이다: PpLuc(nat) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (서열번호 51)
도 10은 mRNA 서열 R2403이다: RAV-G(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (서열번호 52)
도 11은 mRNA 서열 R3513이다: EPO(wt) - A30 (서열번호 53)
도 12는 mRNA 서열 R3135이다: HSD17B4 - EPO(GC) - 알부민7 - A64 - C30 - 히스톤SL (서열번호 54)
도 13은 에리스로포이에틴(EPO)을 암호화하는 비변형된 및 변형된 mRNA의 비교이다.
기니피그는 제트 인젝션 또는 통상의 피내 바늘 주사에 의해 에리스로포이에틴(EPO)을 암호화하는 비변형된 mRNA(R3513: EPO(wt)-A30) 또는 변형된 mRNA(HSD17B4 - EPO(GC) - 알부민7 - A64 - C30 - 히스톤SL)가 주사되었다. 각각의 동물은 3 부위에 주사 부위 당 80 μg의 RNA를 주사되었다. 주사 24시간 후, 혈액을 시험하고 EPO 발현을 실시예 5에 설명된 바와 같이 측정하였다.
도 14는 RSV-F mRNA 백신에 포함된 바와 같은 RSV 롱 균주(long strain)의 RSV-F 단백질(RSV-F)을 암호화하는 G/C 최적 mRNA 서열 R2510(서열번호 64)이다.
도 15는 RSV mRNA 백신의 통상의 주사기-바늘 주사 및 제트 인젝션의 비교이다(항체 역가).
암컷 기니피그는(n=8/그룹) 통상의 바늘 주사로 1 x 100 μl(i.d.), 바늘 주사로 4 x 25 μl(i.d.), 또는 제트 인젝션으로 1 x 100 μl(i.d.) 중 하나로 RSV-F mRNA 백신(80 μg의 R2510)이 피부 내로(i.d.) 주사되었다. 대조군(n=2)은 20 μg의 비활성화된 RSV 롱(long)(2 x 50 μl)을 근육 내로(i.m.) 바늘-주사되었다. 모든 동물은 14 및 28일째에 부스트 주사(boost injection)를 받았다. 혈액 샘플을 항-RSV F 항체 역가를 결정하기 위해 -3일째(첫 번째 백신 접종 3일 전) 및 7, 21 및 42일째에 수집하였다. 상기 실험은 실시예 4에 설명된 바와 같이 수행되었다.
도 15A는 ELISA에 의해 결정된 IgG1 종말 역가(endpoint titers)이다.
도 15B는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은 IgG2a 종말 역가(endpoint titers)이다.
알 수 있는 바와 같이, RSV-F mRNA 백신은, 백신이 제트 인젝션(1 x 100 μl)에 의해 투여될 때, 21일째에(14일째 첫 번째 부스트 백신 접종(boost vaccination) 1주일 후) IgG1 하위군(A) 및 IgG2a 하위군(B)의 항-F 단백질 항체를 이미 유도하였다. 비교할 만한 항체 역가는 백신이 통상의 바늘 주사(4 x 25 μl)에 의해 투여될 때, 단지 42일째에(28일째 두 번째 부스트 백신 접종 2주일 후) 도달하였다.
도 16은 RSV mRNA 백신의 통상의 주사기-바늘 주사 및 제트 인젝션의 비교이다(바이러스 중화 역가).
상기 실험은 실시예 4에 설명된 바와 같이 수행되었다. 바이러스 중화 역가(VNTs)는 -3, 21 및 42일째에 플라크 감소 시험(plaque reduction assay)에 의해 결정되었다. 중간 VNTs는 시간에 걸쳐 나타내었다. VNTs는 바이러스 조절의 60% 감소 종말점에서 상호 중화 항체 역가로서 나타내었다. 알 수 있는 바와 같이, 현저한 RSV 중화 역가는 백신이 제트 인젝션(1 x 100 μl)에 의해 투여될 때 오직 42일째에 측정되었다.
하기에 나타낸 실시예는 단지 예시적인 것이며, 또 다른 방식으로 본 발명을 설명한다. 이러한 실시예는 본 발명을 한정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
1. 생체 내( in vivo )에서 루시퍼라아제의 발현
DNA-주형(template)의 제조
시험관 내(in vitro) 전사를 위한 벡터를 T7 프로모터 다음에 포티누스 피랄리스(Photinus pyralis) 루시퍼라아제를 암호화하는 GC-풍부 서열(PpLuc(GC)), 돌연변이된 알파 글로빈의 3'-UTR(muag), A64 폴리(A) 서열, 폴리(C) 서열(C30) 및 히스톤 스템-루프 서열(히스톤-SL)을 포함하여 제작하였다:
서열번호 46 (도 4): PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (R1265)
비교를 위하여, 벡터를 T7 프로모터 다음에 포티누스 피랄리스(Photinus pyralis) 루시퍼라아제를 암호화하는 야생형 서열(PpLuc(wt)) 및 A30 폴리(A) 서열을 포함하여 제작하였다:
서열번호 47 (도 5): PpLuc(wt) - A30 (R2652)
사용된 변형의 효과를 결정하기 위하여, 다음의 벡터를 제작하였다:
서열번호 48 (도 6): PpLuc(wt) - A64 (R3454)
서열번호 49 (도 7): PpLuc(GC) - A64 - C30 - 히스톤SL (R2462)
서열번호 50 (도 8): PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 (R1256)
서열번호 51 (도 9): PpLuc(nat) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (R2393)
추가의 실험을 위하여, 광견병 바이러스의 G 단백질( RAV -G)을 암호화하는 다음의 벡터를 제조하였다:
루시퍼라아제를 암호화하는 벡터 PpLuc(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (R1265)와 유사하게, RAV-G(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (R2403)은 T7 프로모터 다음에 광견병 바이러스의 G 단백질을 암호화하는 GC-풍부 서열, 돌연변이된 알파 글로빈의 3'-UTR(muag), A64 폴리(A) 서열, 폴리(C) 서열(C30) 및 히스톤 스템-루프 서열(히스톤-SL)을 포함한다:
서열번호 52 (도 10): RAV-G(GC) - muag - A64 - C30 - 히스톤SL (R2403)
추가의 실험을 위하여, 쥣과의( murine ) EPO를 암호화하는 벡터를 제작하였다:
시험관 내(in vitro) 전사를 위한 벡터를 T7 프로모터 다음에 HSD17B4의 5'-TOP-UTR 서열, EPO를 암호화하는 GC-풍부 서열(EPO(GC)), 알부민의 3'-UTR 서열(알부민7), A64 폴리(A) 서열, 폴리(C) 서열(C30) 및 히스톤 스템-루프 서열(히스톤-SL)을 포함하여 제조하였다:
서열번호 54 (도 12): HSD17B4 - EPO(GC) - 알부민7 - A64 - C30 - 히스톤SL (R3135)
비교를 위하여, 벡터를 T7 프로모터 다음에 EPO를 암호화하는 야생형 서열(EPO(wt)) 및 A30 폴리(A) 서열을 포함하여 제조하였다:
서열번호 53 (도 11): EPO(wt) - A30 (R3513)
시험관 내( in vitro ) 전사
실시예 1에 따른 DNA-주형을 선형화(linearized)하고 T7-폴리머라아제를 이용하여 시험관 내(in vitro)에서 전사하였다. 그 다음, DNA-주형을 DNase로 분해하였다. 5'-캡(CAP) 구조(mCap)를 포함하는 mRNA 전사체(transcript)를 과량의 N7-메틸-구아노신-5'-트리포스페이트-5'-구아노신을 전사 반응에 첨가하여 수득하였다. 이렇게 하여 얻어진 mRNA를 정제하고 물에 재부유시켰다.
생체 내( in vivo ) 루시퍼라아제의 발현
생체 내 루시퍼라아제의 결정을 위하여, 기니피그를 제트 인젝션(jet injection)으로 지시된 양의 노출(naked) mRNA를 피부 내로(intradermally) 주사하였다.
24시간 후에, 상기 동물을 희생시키고 샘플(귀, 등 또는 근육 유래 피부)을 수집하고, -78℃에서 냉동하고 조직 용해기(tissue lyser)(퀴아젠, 힐덴, 독일)에서 최고 속도로 3분 동안 용해하였다. 그 후에, 600 μl의 용해 버퍼(25 mM Tris, pH 7.5 (HCl), 2 mM EDTA, 10% 글리세롤, 1% 트리톤 X-100, 2 mM DTT, 1 mM PMSF)를 첨가하고 생성된 용액을 조직 용해기에서 최고 속도로 6분 더 하였다. 4℃에서 13,500 rpm으로 원심분리한 10 분 후에, 상층액을 루시페린 버퍼(25 mM 글라이실글라이신, 15 mM MgSO4, 5 mM ATP, 62,5 μM 루시페린)로 혼합하고 루미노미터(luminometer)(Lumat LB 9507 (베르톨드 테크놀로지스, 바트 빌트바트, 독일))를 이용하여 발광(luminiscence)을 검출하였다.
결과:
첫 번째 결과로서, 변형된 mRNA에 의하여 암호화된 루시퍼라아제의 발현은 통상의 피부 내 바늘 주사(도 1 참조)와 비교하여 제트 인젝션(jet injection)에 의하여 기니피그에서 강력하게 향상되었다는 것을 발견하였다.
게다가, 놀랍게도 발현의 포화 수준은 바늘-주사기에 의하여 통상적으로 주사되는 mRNA와 비교하여 제트 인젝션(jet injection)에 의하여 향상될 수 있다는 것을 발견하였다 (도 2 참조).
예상 외로, 변형된 mRNA(PpLuc(GC)) 유래 루시퍼라아제의 발현은 제트 인젝션(jet injection)에 의해 비변형 참조 mRNA 유래 루시퍼라아제의 발현에 비하여 현저하게 더 향상되었다는 것을 더 나아가 보여줄 수 있다(PpLuc(wt); 도 3 참조).
표 1: 단백질 발현에 있어서 측정된 증가량의 요약
　 루시퍼라아제 발현 제트 인젝션 (jet injection)의 효과 변형의 효과 제트 인젝션 (jet injection) 및 변형의 효과
PpLuc ( GC ) 5 μg - conv . 275476 　 123 　
PpLuc ( GC ) 5 μg - Jet 2267492 　 　 1013
PpLuc (wt) 5 μg - conv . 2238 　 　
PpLuc (wt) 5 μg - Jet 4469 2 　 　
PpLuc ( GC ) 80 μg - conv. 1926120 　 117 　
PpLuc ( GC ) 80 μg - Jet 17932040 　 　 1089
PpLuc (wt) 80 μg - conv. 16471 　 　
PpLuc (wt) 80 μg - Jet 27086 1.6 　 　
대조군(mock) 1107 　 　 　
따라서, RNA의 변형 및 제트 인젝션(jet injection)에 의한 상기 변형된 RNA의 투여는 RNA에 의하여 암호화된 단백질의 발현의 향상에 상승적으로 작용한다(표 1 참조).
추가의 실험에서, 추가적인 발현의 향상을 발견하였으며, 이는 비변형 참조 RNA를 이용하는 것과 비교하여(표 2 참조; R2652), 본 발명에 따른 변형된 RNA를 이용하여 제트 인젝션(jet injection)에 의해 달성되며(하기 표 2 참조; 예를 들어, R1265, R2462, R1256, R2393), 별개의 변형된 RNA를 이용하여 달성되고, 각각은 하나 이상의 여러 가지 별개의 변형을 포함한다. 표 2는 바늘을 사용하는 통상의 피내 주사에 의한 각각의 RNA의 투여에 의해 달성되는 단백질 발현을 정상화하는 주어진 RNA(예를 들어, R1265)의 투여에 의해 달성되는 단백질 발현에서 배수 증가를 보여준다. 예를 들어, 변형된 RNA R1265의 발현은 비변형된 참조 RNA의 발현이 단지 지수(factor) 2.00 만큼 증가되는 것에 반해서, 제트 인젝션에 의해 지수 8.23 만큼 증가된다. 이 실시예에서, 본원에 설명된 바와 같은 RNA의 변형에 의하여 달성된 발현 향상은 비변형된 참조 RNA에 대하여 4배이다.
표 2: 상이한 변형된 RNA를 이용한 제트 인젝션(jet injection)의 효과
　 제트 인젝션(jet injection)의 효과
PpLuc(nat)-A30 R2652 2,00
PpLuc(GC)-muag-A64-C30-히스톤SL R1265 8,23
PpLuc(GC)-A64-C30-히스톤SL R2462 6,25
PpLuc(GC)-muag-A64-C30 R1256 3,02
PpLuc(nat)-muag-A64-C30-히스톤SL R2393 2,86
2. 인간에서 RAV -G mRNA 백신에 의한 체액성 면역 반응의 유도
면역화(Immunization)
진행중인 임상 시험(I 상)에서 수득된 예비 결과는 본 발명에 따른 백신의 효능 뿐만 아니라 안전성을 증명한다. 임상 연구에서, 인간 지원자들은 RAV-G mRNA 백신 R2403으로 0, 7 및 28일째에 트로피스(Tropis) 기구를 이용하여 제트 인젝션을 통해 피부 내로 주사되었다. mRNA는 본원의 실시예 1에 설명된 바와 같이 제조되고, 즉, 프로타민과 2:1의 비율(w/w)로 복합화된 mRNA를 자유 mRNA와 동일한 양과 함께 혼합하였다. 3개 백신 접종일에 각각, 80 μg의 mRNA를 투여하였다.
본 발명에 따른 백신의 안전한 프로필(profile)을 평가하기 위해서, 개체는 투여 후에 모니터 되었다(활력 징후(vital signs), 백신 접종 부위 내성 평가, 두 번째 및 세 번째 주사 후 혈액 분석). 진행중인 임상 연구에서 수득된 예비 결과는 본 발명에 따른 mRNA로의 면역화는 인간에서 매우 내성적이다.
면역화의 효능은 여섯 개체 유래 혈청에서 바이러스 중화 역가(VNT)의 결정에 의해 분석되었다. 이를 위해, 혈액 샘플을 기준으로서 0일째 및 42일째에 수집하였다. 혈청은 하기 설명된 바와 같이 형광 항체 바이러스 중화(FAVN) 시험에서 바이러스 중화 항체를 위해 분석되었다.
바이러스 중화 시험
바이러스 중화 항체 반응(특이적 B-세포 면역 반응)의 검출은 바이러스 중화 시험에 의해 수행되었다. 상기 시험의 결과는 바이러스 중화 역가(VNT)로서 나타낸다. WHO 표준에 따르면, 항체 역가는 각각의 VNT가 적어도 0.5 IU/ml 이면, 방어적인(protective) 것으로 여겨진다. 상기 설명된 바와 같은 혈청은 세포 배양을 이용하여 OIE(World Organisation for Animal Health)에 의해 추천되고 Cliquet F., Aubert M. & Sagne L. (1998); J. Immunol. Methods, 212, 79-87에 처음 설명된 광견병 바이러스의 공격 바이러스 균주(challenge virus strain)(CVS) 적응된 세포 배양을 이용하는 형광 항체 바이러스 중화(FAVN) 시험에 사용하였다. 곧, 열 불활성화 혈청은 50 μl의 부피에서 CVS의 100 TCID50(조직 배양 감염량 50%)를 중화하기 위한 그들의 잠재력을 위해 4배체(quadruplicate)로서 연속 2배 희석액에 4배체로서 시험하였다. 따라서, 혈청 희석액은 37℃에서(5% CO2의 습한 인큐베이터 내) 1시간 동안 바이러스와 배양하고, 그 후에 트립신 처리된 BHK-21 세포를 첨가하였다(4x105 세포수/ml; 웰 당 50 μl). 감염된 세포 배양은 5% CO2 및 37℃에 습한 인큐베이터 내에 48시간 동안 배양하였다. 세포의 감염은 FITC 항-광견병 접합체를 이용하여 실온에서 80% 아세톤을 이용하는 세포의 고정 후에 분석되었다. 플레이트는 PBS를 이용하여 두번 세척하고 과량의 PBS를 제거하였다. 세포 배양은 광견병 바이러스의 존재에 대해 양성 또는 음성으로 기록된다. 혈청 처리된 웰 내의 음성 기록된 세포는 광견병 바이러스의 중화를 나타낸다. 각각의 FAVN 시험은 WHO 또는 OIE 표준 혈청(양성 참조 혈청)을 포함하고 이는 시험의 표준화를 위한 참조로서 역할을 한다. 시험 혈청의 중화 활성은 WHO에 의해 제공되는 및 국제 단위/ml(IU/ml)로서 나타낸 표준 혈청을 참조하여 계산된다. 결과는 표 3에 요약하였다.
결과:
표 3: 인간 개체의 면역화 후 바이러스 중화 역가
개체 번호 바이러스 중화 역가 ( VNT ; IU /ml)
1 4.0
2 0.7
3 0.2
4 0.7
5 1.4
6 0.5
여섯 개체(개체 번호 1, 2, 4, 5 및 6) 중 다섯에서, 적어도 0.5 IU/ml의 바이러스 중화 역가가 42일째에 검출되었다. WHO 표준에 따르면, 방어 항체 반응(protective antibody response)은 따라서 이들 개체에서 달성되고, 본 발명에 따른 mRNA로 면역화의 효능을 증명한다.
결론:
진행중인 임상 시험의 예비 결과에 따르면, 인간 개체의 면역화를 위한 본 발명에 따른 mRNA의 사용은 좋은 안전한 프로필(profile)을 갖는다. 접근법의 효능은 조사된 여섯 개체 중 다섯에서 42일째에 달성된 방어 항체 반응(VNT ≥ 0.5 IU/ml)과 함께 이들 예비 연구에 의해 증명되었다
3. 생체 내( in vivo ) EPO의 발현
생체 내(in vivo) 에리스로포이에틴 발현을 결정하기 위해서, 기니피그를 통상의 바늘 주사로 또는 제트 인젝션으로(그룹 당 3마리 동물이며, 각각은 주사 부위 당 80 μg의 RNA를 3번 주사 받았다) 나출 mRNA를 피부 내로 주사하였다. 24시간 후, 혈액을 복재 정맥(saphenous vein)으로부터 채취하였다. 혈청 내 에리스로포이에틴 수준은 ELISA에 의해 결정되었다(마우스 에리스로포이에틴 Quantikine ELISA 키트, R&D Systems)
결과: 변형된 mRNA (HSD17B4-EPO(GC)-알부민7-A64-C30-히스톤SL(R3135))에 의해 암호화된 EPO의 발현은 통상의 피부 내 바늘 주사와 비교하여 제트 인젝션에 의해 기니피그에서 매우 강화되었다(도 13 참조).
뜻밖에, 변형된 mRNA(HSD17B4-EPO(GC)-알부민7-A64-C30-히스톤SL(R3135)) 유래 EPO의 발현은 비변형된 참조 mRNA(EPO(wt)-A30(R3513)) 유래 EPO의 발현보다 제트 인젝션에 의해 현저하게 더욱 향상되었다(도 13 참조)
4. 기니피그에서 체액성 면역 반응의 유도를 위한 RSV -F mRNA 백신의 통상의 주사 및 제트 인젝션의 비교
DNA 및 mRNA 컨스트럭트(construct)의 제조:
본 실시예를 위해, RSV 롱(long) 균주의 RSV-F 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 제조하고 이후의 시험관 내(in vitro) 전사 반응을 위해 사용하였다.
RSV 균주 ATCC VR-26 롱(long)의 융합 단백질 F(서열번호 63에 따른 아미노산 서열):
MELPILKANA ITTILAAVTF CFASSQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE LSNIKENKCN GTDAKVKLIN QELDKYKNAV TELQLLMQST TAANNRARRE LPRFMNYTLN NTKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GIAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCRISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHHVNAGK STTNIMITTI IIVIIVILLS LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSN
첫 번째 제조에 따라, 상기 언급된 mRNA를 암호화하는 DNA 서열을 제조하였다. RNA 서열 R2510(서열번호 64)를 암호화하는 DNA 컨스트럭트를 서열번호 55에 따른 리보솜 단백질 32L로부터 유래된 5'-TOP-UTR을 도입하여 제조하였고, 안정화를 위한 GC-최적 서열을 도입하여 야생형 암호화 서열을 변형하고, 뒤이어 알부민-3'-UTR(서열번호 58에 따른 알부민7), 64개 아데노신의 스트레치(폴리(A)-서열), 30개 사이토신의 스트레치(폴리(C)-서열), 및 서열번호 44에 따른 히스톤 스템 루프로부터 유래된 서열을 안정화하였다. 도 14에서 상응하는 mRNA의 서열(R2510; 서열번호 64)을 보여준다.
시험관 내( In vitro ) 전사:
문단(paragraph) 1에 따라 제조된 각각의 DNA 플라스미드는 캡(CAP) 유사체(m7GpppG) 존재 하에 T7 폴리머라아제를 이용하여 시험관 내(In vitro) 전사하였다. 그 후, mRNA를 PureMessenger®(큐어백(CureVac), 튀빙겐, 독일; WO2008/077592A1)를 이용하여 정제하였다.
시약(Reagents):
복합화 시약(Complexation Reagent): 프로타민
백신의 제조:
mRNA에 프로타민을 (1:2)(w/w) 비율로 첨가하여 mRNA는 프로타민과 복합되었다(어쥬번트 성분). 10분 동안 배양 후에, 항원-제공 RNA로서 동일한 양의 자유 mRNA를 첨가하였다.
RSV-F 롱(long) 백신(R2510): 프로타민과 2:1(w/w) 비율로 복합된 서열번호 63에 따른 RSV F 단백질 롱(long)(R2510)을 암호화하는 mRNA로 이루어진 어쥬번트 성분과 서열번호 63에 따른 RSV F 단백질 롱(long)(R2510)을 암호화하는 항원-제공 자유 mRNA를 포함한다(비율 1:1, 복합된 RNA:자유 RNA).
면역화
0일째에, 암컷 기니피그들(n=8/그룹)은 표 4에 나타낸 바와 같이 통상의 바늘 주사로(i.d.) 1 x 100 μl, 바늘 주사로(i.d.) 4 x 25 μl, 또는 제트 인젝션으로(i.d.) 상기 설명된 바와 같이 RSV-F mRNA 백신을 (80 μg의 R2510/마우스/백신 접종일) 피부 내로(i.d.) 주사되었다. 대조군(n=2)은 20 μg의 불활성화된 RSV 롱(long)을 근육 내로(i.m.) 바늘-주사되었다(2 x 50 μl). 불활성화된 "호흡기 합포체 바이러스 항원"(불활성화된 RSV 롱(long))을 INSTITUT VIRION/SERION GmbH-SERION IMMUNDIAGNOSTICA GmbH로부터 구입하였다. 불활성화된 바이러스를 살균한 PBS에 희석하여, 0.2 μg/μL의 최종 농도를 달성하였다. 모든 동물은 14 및 28일째에 부스트 주사를 받았다. 혈액 샘플을 항-RSV F 항체 역가를 결정하기 위해 -3일째(첫 번째 백신 접종 3일 전) 및 7, 21 및 42일째에 수집하였다.
표 4: 동물 그룹
그룹 균주
성별 		마우스 번호 부피(Volume)
경로 		백신
투여량 		백신 접종일 출혈일(Bleeding day)
1 기니피그,
암컷		 8 1x 100μl,
i.d., 통상적 주사		 R2510
80 μg		 0, 14, 28 -3, 7, 21, 42
2 기니피그,
암컷		 8 4x 25μl,
i.d., 통상적 주사		 R2510
80 μg		 0, 14, 28 -3, 7, 21, 42
3 기니피그,
암컷		 8 1x 100μl,
i.d.,
제트 인젝션		 R2510
80 μg		 0, 14, 28 -3, 7, 21, 42
4 기니피그,
암컷		 2 2x 50μl,
i.m., 통상적 주사		 불활성화된 RSV 롱(long)
20 μg		 0, 14, 28 -3, 7, 21, 42
ELISA에 의한 항- RSV F 단백질 항체의 결정
ELISA 플레이트를 불활성화된 RSV-롱(LONG)(비리온/세리온(Virion/Serion), 최종 농도 5 μg/mL)(Sino Biological Inc.)으로 코팅하였다. 코팅된 플레이트를 표시된 희석액(5x 희석 단계에서 1:50 내지 1:3906250)을 이용하여 기니피그 혈청을 배양하고 F 단백질에 대한 특이적 항체의 결합은 2,2'-아지노비스[3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산]-디암모늄염(ABTS) 기질 및 스트렙타비딘-HRP(홀스 래디쉬(horse radish) 퍼옥시다아제)와 조합하여 비오티닐화된(biotinylated) 동종(isotype) 특이적 항-기니피그 IgG1 및 IgG2a를 사용하여 검출하였다.
RSV 중화 항체 역가 ( VNTs )
혈청은 바이러스 중화 역가(VNTs)를 결정하여 분석하였다. 간단하게, 혈청 샘플을 이글 최소 필수 배지(Eagle's Minimum Essential Medium)(EMEM)에 1:10으로 희석하고, 열로 불활성화하고 추가로 1:4로 연속적으로 희석하였다. 희석된 혈청 샘플을 실온에서 1시간 동안 RSV(25-50 PFU)와 배양하고 24웰 플레이트에 융합성(confluent) HEp-2 세포 단일층에 2중 접종하였다. 5% CO2 인큐베이터(incubator)에 37℃에서 1시간 배양한 후, 웰(well)들은 0.75% 메틸셀룰로오스 배지로 덮어씌웠다. 배양 4일 후, 덮어씌운 것을 제거하고 세포를 1시간 동안 0.1% 크리스탈 바이올렛 염색으로 고정하고 헹군 후에 공기 건조하였다. 상응하는 상호 중화 항체 역가는 바이러스 대조군의 60% 감소 종말점에서 결정되었다.
결과
도 15에 나타낸 바와 같이, RSV-F mRNA 백신은, 백신이 제트 인젝션(1 x 100 μl)에 의해 투여될 때 21일째에(14일째 첫 번째 부스트 백신 접종 1주일 후) IgG1 하위군(A) 및 IgG2a 하위군(B)의 항-F 단백질 항체를 유도하였다. 비교할 만한 항체 역가는 백신이 통상의 바늘 주사(4 x 25 μl)에 의해 투여될 때, 단지 42일째에(28일째 두 번째 부스트 백신 접종 2주일 후) 도달하였다. 따라서, 제트 인젝션에 의해 투여되는 RSV-F mRNA 백신은 통상의 바늘 주사에 의한 투여와 비교하여 더 빠른 속도(kinetic)를 갖는 RSV-F 단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도한다.
도 16에 나타낸 바와 같이, 현저한 RSV 중화 역가는 백신이 제트 인젝션에 의해 투여된 때(100 μl), 오직 42일째에서 측정되었다. 따라서, 제트 인젝션 백신 접종은 통상적인 바늘 주사보다 더 빠른 면역 반응의 발생을 이끈다.
<110> CureVac GmbH <120> Method for increasing expression of RNA-encoded proteins <130> IMP152645DE <150> PCT/EP2013/002512 <151> 2013-08-21 <160> 64 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (3)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 1 ngnnnnnnun nnnncn 16 <210> 2 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(24) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not. <400> 2 nnnnnngnnn nnnunnnnnc nnnnnn 26 <210> 3 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Id) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (3)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 3 ncnnnnnnun nnnngn 16 <210> 4 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IId) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 4 nnnnnncnnn nnnunnnnng nnnnnn 26 <210> 5 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 5 dgnnnnnnun nnnnch 16 <210> 6 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (22)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 6 nnnnndgnnn nnnunnnnnc hnnnnn 26 <210> 7 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 7 ngnbyynnun vndncn 16 <210> 8 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 8 nnnnnngnby ynnunvndnc nnnnnn 26 <210> 9 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 9 nghyyydnuh abrdcn 16 <210> 10 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (4)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26) <223> may be present or not <400> 10 nnhnnnghyy ydnuhabrdc nnnnnh 26 <210> 11 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 11 dghycudyuh asrrcc 16 <210> 12 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26) <223> may be present or not <400> 12 nhaahdghyc udyuhasrrc cvhbnh 26 <210> 13 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <400> 13 vgyyyyhhth rvvrcb 16 <210> 14 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <400> 14 sgyyyttytm arrrcs 16 <210> 15 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <400> 15 sgyycttttm agrrcs 16 <210> 16 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 16 dgnnnbnnth vnnnch 16 <210> 17 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (13)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 17 rgnnnyhbth rdnncy 16 <210> 18 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 18 rgndbyhyth rdhncy 16 <210> 19 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <400> 19 vgyyytyhth rvrrcb 16 <210> 20 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <400> 20 sgyycttytm agrrcs 16 <210> 21 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <400> 21 sgyycttttm agrrcs 16 <210> 22 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <400> 22 ggyycttyth agrrcc 16 <210> 23 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <400> 23 ggcycttytm agrgcc 16 <210> 24 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <400> 24 ggctcttttm agrgcc 16 <210> 25 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 25 dghyctdyth asrrcc 16 <210> 26 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 26 ggcyctttth agrgcc 16 <210> 27 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 27 ggcycttttm agrgcc 16 <210> 28 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 28 hhhhvvgyyy yhhthrvvrc bvhhnn 26 <210> 29 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 29 mhmhmsgyyy ttytmarrrc smchhh 26 <210> 30 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 30 mmmmmsgyyc ttttmagrrc sachmh 26 <210> 31 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(10) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (17)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (22) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 31 nnnnndgnnn bnnthvnnnc hnhnnn 26 <210> 32 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(10) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (18)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 32 nnhhnrgnnn yhbthrdnnc ydhhnn 26 <210> 33 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> may be present or not <400> 33 nhhhvrgndb yhythrdhnc yrhhhh 26 <210> 34 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 34 hhmhmvgyyy tyhthrvrrc bvmhhn 26 <210> 35 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 35 mmmmmsgyyc ttytmagrrc smchhh 26 <210> 36 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 36 mmmmmsgyyc ttttmagrrc sachmh 26 <210> 37 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26) <223> may be present or not <400> 37 hhmamggyyc ttythagrrc cvhnnm 26 <210> 38 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 38 hhaamggcyc ttytmagrgc cvchhm 26 <210> 39 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> may be present or not <400> 39 mmaamggctc ttttmagrgc cmcymm 26 <210> 40 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26) <223> may be present or not <400> 40 nhaahdghyc tdythasrrc cvhbnh 26 <210> 41 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26) <223> may be present or not <400> 41 hhaamggcyc tttthagrgc cvmynm 26 <210> 42 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> may be present or not <400> 42 hmaaaggcyc ttttmagrgc crmyhm 26 <210> 43 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Specific histone stem-loop sequence <400> 43 caaaggctct tttcagagcc acca 24 <210> 44 <211> 24 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Specific histone stem-loop sequence <400> 44 caaaggcucu uuucagagcc acca 24 <210> 45 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated UTR of (alphe-) globin <400> 45 gcccgatggg cctcccaacg ggccctcctc ccctccttgc accg 44 <210> 46 <211> 1870 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mRNA sequence ppluc(gc) - muag - a64 - c30 - histoneSL <400> 46 gggagaaagc uugaggaugg aggacgccaa gaacaucaag aagggcccgg cgcccuucua 60 cccgcuggag gacgggaccg ccggcgagca gcuccacaag gccaugaagc gguacgcccu 120 ggugccgggc acgaucgccu ucaccgacgc ccacaucgag gucgacauca ccuacgcgga 180 guacuucgag augagcgugc gccuggccga ggccaugaag cgguacggcc ugaacaccaa 240 ccaccggauc guggugugcu cggagaacag ccugcaguuc uucaugccgg ugcugggcgc 300 ccucuucauc ggcguggccg ucgccccggc gaacgacauc 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ugcgggggcc 1200 gaugaucaug agcggcuacg ugaacaaccc ggaggccacc aacgcccuca ucgacaagga 1260 cggcuggcug cacagcggcg acaucgccua cugggacgag gacgagcacu ucuucaucgu 1320 cgaccggcug aagucgcuga ucaaguacaa gggcuaccag guggcgccgg ccgagcugga 1380 gagcauccug cuccagcacc ccaacaucuu cgacgccggc guggccgggc ugccggacga 1440 cgacgccggc gagcugccgg ccgcgguggu ggugcuggag cacggcaaga ccaugacgga 1500 gaaggagauc gucgacuacg uggccagcca ggugaccacc gccaagaagc ugcggggcgg 1560 cgugguguuc guggacgagg ucccgaaggg ccugaccggg aagcucgacg cccggaagau 1620 ccgcgagauc cugaucaagg ccaagaaggg cggcaagauc gccguguaag acuaguuaua 1680 agacugacua gcccgauggg ccucccaacg ggcccuccuc cccuccuugc accgagauua 1740 auaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800 aaaaaaugca uccccccccc cccccccccc cccccccccc ccaaaggcuc uuuucagagc 1860 caccagaauu 1870 <210> 47 <211> 1712 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PpLuc(wt) - A30 <400> 47 gggagaaagc uuaccaugga agacgccaaa aacauaaaga aaggcccggc gccauucuau 60 ccuuuagagg auggaaccgc 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R3454: PpLuc(wt) - A64 <400> 48 gggagaaagc uuaccaugga agacgccaaa aacauaaaga aaggcccggc gccauucuau 60 ccuuuagagg auggaaccgc uggagagcaa cugcauaagg cuaugaagag auacgcccug 120 guuccuggaa caauugcuuu uacagaugca cauaucgagg ugaacaucac guacgcggaa 180 uacuucgaaa uguccguucg guuggcagaa gcuaugaaac gauaugggcu gaauacaaau 240 cacagaaucg ucguaugcag ugaaaacucu cuucaauucu uuaugccggu guugggcgcg 300 uuauuuaucg gaguugcagu ugcgcccgcg aacgacauuu auaaugaacg ugaauugcuc 360 aacaguauga acauuucgca gccuaccgua guguuuguuu ccaaaaaggg guugcaaaaa 420 auuuugaacg ugcaaaaaaa auuaccaaua auccagaaaa uuauuaucau ggauucuaaa 480 acggauuacc agggauuuca gucgauguac acguucguca caucucaucu accucccggu 540 uuuaaugaau acgauuuugu accagagucc uuugaucgug acaaaacaau ugcacugaua 600 augaauagcu cuggaucuac uggguuaccu aagggugugg cccuuccgca uagaacugcc 660 ugcgucagau ucucgcaugc cagagauccu auuuuuggca aucaaaucau uccggauacu 720 gcgauuuuaa guguuguucc auuccaucac gguuuuggaa uguuuacuac acucggauau 780 uugauaugug gauuucgagu cgucuuaaug uauagauuug aagaagagcu 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cgaccggcug aagucgcuga ucaaguacaa gggcuaccag guggcgccgg ccgagcugga 1380 gagcauccug cuccagcacc ccaacaucuu cgacgccggc guggccgggc ugccggacga 1440 cgacgccggc gagcugccgg ccgcgguggu ggugcuggag cacggcaaga ccaugacgga 1500 gaaggagauc gucgacuacg uggccagcca ggugaccacc gccaagaagc ugcggggcgg 1560 cgugguguuc guggacgagg ucccgaaggg ccugaccggg aagcucgacg cccggaagau 1620 ccgcgagauc cugaucaagg ccaagaaggg cggcaagauc gccguguaag acuaguuaua 1680 agacugacua gcccgauggg ccucccaacg ggcccuccuc cccuccuugc accgagauua 1740 auaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800 aaaaaaugca uccccccccc cccccccccc cccccccccc cucuag 1846 <210> 51 <211> 1870 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> R2393: PpLuc(nat)-muag-A64-C30-HistoneSL <400> 51 gggagaaagc uuaccaugga agacgccaaa aacauaaaga aaggcccggc gccauucuau 60 ccuuuagagg auggaaccgc uggagagcaa cugcauaagg cuaugaagag auacgcccug 120 guuccuggaa caauugcuuu uacagaugca cauaucgagg ugaacaucac guacgcggaa 180 uacuucgaaa uguccguucg guuggcagaa gcuaugaaac gauaugggcu gaauacaaau 240 cacagaaucg ucguaugcag ugaaaacucu cuucaauucu uuaugccggu guugggcgcg 300 uuauuuaucg gaguugcagu ugcgcccgcg aacgacauuu auaaugaacg ugaauugcuc 360 aacaguauga acauuucgca gccuaccgua guguuuguuu ccaaaaaggg guugcaaaaa 420 auuuugaacg ugcaaaaaaa auuaccaaua auccagaaaa uuauuaucau ggauucuaaa 480 acggauuacc agggauuuca gucgauguac acguucguca caucucaucu accucccggu 540 uuuaaugaau acgauuuugu accagagucc uuugaucgug acaaaacaau ugcacugaua 600 augaauagcu cuggaucuac uggguuaccu aagggugugg cccuuccgca uagaacugcc 660 ugcgucagau ucucgcaugc cagagauccu auuuuuggca aucaaaucau uccggauacu 720 gcgauuuuaa guguuguucc auuccaucac gguuuuggaa uguuuacuac acucggauau 780 uugauaugug gauuucgagu cgucuuaaug uauagauuug aagaagagcu guuuuuacga 840 ucccuucagg auuacaaaau ucaaagugcg uugcuaguac caacccuauu uucauucuuc 900 gccaaaagca cucugauuga caaauacgau uuaucuaauu uacacgaaau ugcuucuggg 960 ggcgcaccuc uuucgaaaga agucggggaa gcgguugcaa aacgcuucca ucuuccaggg 1020 auacgacaag gauaugggcu cacugagacu acaucagcua uucugauuac acccgagggg 1080 gaugauaaac cgggcgcggu cgguaaaguu guuccauuuu uugaagcgaa gguuguggau 1140 cuggauaccg ggaaaacgcu gggcguuaau cagagaggcg aauuaugugu cagaggaccu 1200 augauuaugu ccgguuaugu aaacaauccg gaagcgacca acgccuugau ugacaaggau 1260 ggauggcuac auucuggaga cauagcuuac ugggacgaag acgaacacuu cuucauaguu 1320 gaccgcuuga agucuuuaau uaaauacaaa ggauaucagg uggcccccgc ugaauuggaa 1380 ucgauauugu uacaacaccc caacaucuuc gacgcgggcg uggcaggucu ucccgacgau 1440 gacgccggug aacuucccgc cgccguuguu guuuuggagc acggaaagac gaugacggaa 1500 aaagagaucg uggauuacgu cgccagucaa guaacaaccg cgaaaaaguu gcgcggagga 1560 guuguguuug uggacgaagu accgaaaggu cuuaccggaa aacucgacgc aagaaaaauc 1620 agagagaucc ucauaaaggc caagaagggc ggaaagucca aauugugagg acuaguuaua 1680 agacugacua gcccgauggg ccucccaacg ggcccuccuc cccuccuugc accgagauua 1740 auaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800 aaaaaaugca uccccccccc cccccccccc cccccccccc ccaaaggcuc uuuucagagc 1860 caccagaauu 1870 <210> 52 <211> 1792 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> R2403: RAV-G(GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 52 gggagaaagc uuaccauggu gccccaggcc cugcucuucg ucccgcugcu gguguucccc 60 cucugcuucg gcaaguuccc caucuacacc auccccgaca agcuggggcc guggagcccc 120 aucgacaucc accaccuguc cugccccaac aaccucgugg ucgaggacga gggcugcacc 180 aaccugagcg gguucuccua cauggagcug aaggugggcu acaucagcgc caucaagaug 240 aacggguuca cgugcaccgg cguggucacc gaggcggaga ccuacacgaa cuucgugggc 300 uacgugacca ccaccuucaa gcggaagcac uuccgcccca cgccggacgc cugccgggcc 360 gccuacaacu ggaagauggc cggggacccc cgcuacgagg agucccucca caaccccuac 420 cccgacuacc acuggcugcg gaccgucaag accaccaagg agagccuggu gaucaucucc 480 ccgagcgugg cggaccucga ccccuacgac cgcucccugc acagccgggu cuuccccggc 540 gggaacugcu ccggcguggc cgugagcucc acguacugca gcaccaacca cgacuacacc 600 aucuggaugc ccgagaaccc gcgccugggg auguccugcg acaucuucac caacagccgg 660 ggcaagcgcg ccuccaaggg cagcgagacg ugcggguucg ucgacgagcg gggccucuac 720 aagucccuga agggggccug caagcugaag cucugcggcg ugcugggccu gcgccucaug 780 gacgggaccu ggguggcgau gcagaccagc aacgagacca aguggugccc ccccggccag 840 cuggucaacc ugcacgacuu ccggagcgac gagaucgagc accucguggu ggaggagcug 900 gucaagaagc gcgaggagug ccuggacgcc cucgagucca ucaugacgac caagagcgug 960 uccuuccggc gccugagcca ccugcggaag cucgugcccg gguucggcaa ggccuacacc 1020 aucuucaaca agacccugau ggaggccgac gcccacuaca aguccguccg cacguggaac 1080 gagaucaucc cgagcaaggg gugccugcgg gugggcggcc gcugccaccc ccacgucaac 1140 gggguguucu ucaacggcau cauccucggg cccgacggca acgugcugau ccccgagaug 1200 caguccagcc ugcuccagca gcacauggag cugcuggucu ccagcgugau cccgcucaug 1260 cacccccugg cggaccccuc caccguguuc aagaacgggg acgaggccga ggacuucguc 1320 gaggugcacc ugcccgacgu gcacgagcgg aucagcggcg ucgaccucgg ccugccgaac 1380 ugggggaagu acgugcugcu cuccgccggc gcccugaccg cccugaugcu gaucaucuuc 1440 cucaugaccu gcuggcgccg ggugaaccgg agcgagccca cgcagcacaa ccugcgcggg 1500 accggccggg aggucuccgu gaccccgcag agcgggaaga ucaucuccag cugggagucc 1560 uacaagagcg gcggcgagac cgggcuguga ggacuaguua uaagacugac uagcccgaug 1620 ggccucccaa cgggcccucc uccccuccuu gcaccgagau uaauaaaaaa aaaaaaaaaa 1680 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaug cauccccccc 1740 cccccccccc cccccccccc ccccaaaggc ucuuuucaga gccaccagaa uu 1792 <210> 53 <211> 638 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> R3513: EPO (wt)-A30 <400> 53 gggagaaagc uuaccauggg ggugcccgaa cgucccaccc ugcugcuuuu acucuccuug 60 cuacugauuc cucugggccu cccaguccuc ugugcucccc cacgccucau cugcgacagu 120 cgaguucugg agagguacau cuuagaggcc aaggaggcag aaaaugucac gauggguugu 180 gcagaagguc ccagacugag ugaaaauauu acagucccag auaccaaagu caacuucuau 240 gcuuggaaaa gaauggaggu ggaagaacag gccauagaag uuuggcaagg ccugucccug 300 cucucagaag ccauccugca ggcccaggcc cugcuagcca auuccuccca gccaccagag 360 acccuucagc uucauauaga caaagccauc aguggucuac guagccucac uucacugcuu 420 cggguacugg gagcucagaa ggaauugaug ucgccuccag auaccacccc accugcucca 480 cuccgaacac ucacagugga uacuuucugc aagcucuucc gggucuacgc caacuuccuc 540 cgggggaaac ugaagcugua cacgggagag gucugcagga gaggggacag gugaccacua 600 guagaucuaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 638 <210> 54 <211> 981 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> R3135: HSD17B4-EPO (GC)-albumin7-A64-C30-histoneSL <400> 54 gggucccgca gucggcgucc agcggcucug cuuguucgug ugugugucgu ugcaggccuu 60 auucaagcuu accaugggcg ugcccgagcg gccgacccug cuccugcugc ucagccugcu 120 gcucaucccc cuggggcugc ccguccucug cgcccccccg cgccugaucu gcgacucccg 180 ggugcuggag cgcuacaucc ucgaggccaa ggaggcggag aacgugacca ugggcugcgc 240 cgaggggccc cggcugagcg agaacaucac gguccccgac accaagguga acuucuacgc 300 cuggaagcgc auggaggugg aggagcaggc caucgagguc uggcagggcc ugucccuccu 360 gagcgaggcc auccugcagg cgcaggcccu ccuggccaac uccagccagc ccccggagac 420 acugcagcuc cacaucgaca aggccaucuc cgggcugcgg agccugaccu cccuccugcg 480 cgugcugggc gcgcagaagg agcucaugag cccgcccgac acgacccccc cggccccgcu 540 gcggacccug accguggaca cguucugcaa gcucuuccgc gucuacgcca acuuccugcg 600 gggcaagcug aagcucuaca ccggggaggu gugccgccgg ggcgaccgcu gaccacuagu 660 gcaucacauu uaaaagcauc ucagccuacc augagaauaa gagaaagaaa augaagauca 720 auagcuuauu caucucuuuu ucuuuuucgu ugguguaaag ccaacacccu gucuaaaaaa 780 cauaaauuuc uuuaaucauu uugccucuuu ucucugugcu ucaauuaaua aaaaauggaa 840 agaaccuaga ucuaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900 aaaaaaaaaa aaaaaaaugc aucccccccc cccccccccc cccccccccc cccaaaggcu 960 cuuuucagag ccaccagaau u 981 <210> 55 <211> 42 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 55 ggcgctgcct acggaggtgg cagccatctc cttctcggca tc 42 <210> 56 <211> 75 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 56 gcggctcggc cattttgtcc cagtcagtcc ggaggctgcg gctgcagaag taccgcctgc 60 ggagtaactg caaag 75 <210> 57 <211> 186 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 57 catcacattt aaaagcatct cagcctacca tgagaataag agaaagaaaa tgaagatcaa 60 aagcttattc atctgttttt ctttttcgtt ggtgtaaagc caacaccctg tctaaaaaac 120 ataaatttct ttaatcattt tgcctctttt ctctgtgctt caattaataa aaaatggaaa 180 gaatct 186 <210> 58 <211> 186 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 58 catcacattt aaaagcatct cagcctacca tgagaataag agaaagaaaa tgaagatcaa 60 tagcttattc atctcttttt ctttttcgtt ggtgtaaagc caacaccctg tctaaaaaac 120 ataaatttct ttaatcattt tgcctctttt ctctgtgctt caattaataa aaaatggaaa 180 gaacct 186 <210> 59 <211> 110 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 59 gctggagcct cggtggccat gcttcttgcc ccttgggcct ccccccagcc cctcctcccc 60 ttcctgcacc cgtacccccg tggtctttga ataaagtctg agtgggcggc 110 <210> 60 <211> 108 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 60 gctggagcct cggtagccgt tcctcctgcc cgctgggcct cccaacgggc cctcctcccc 60 tccttgcacc ggcccttcct ggtctttgaa taaagtctga gtgggcag 108 <210> 61 <211> 132 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 61 gctcgctttc ttgctgtcca atttctatta aaggttcctt tgttccctaa gtccaactac 60 taaactgggg gatattatga agggccttga gcatctggat tctgcctaat aaaaaacatt 120 tattttcatt gc 132 <210> 62 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Center, alpha-complex-binding portion of the 3'UTR of an alpha-globin gene <400> 62 gcccgatggg cctcccaacg ggccctcctc ccctccttgc accg 44 <210> 63 <211> 574 <212> PRT <213> respiratory syncytial virus <400> 63 Met Glu Leu Pro Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Ala 1 5 10 15 Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Ser Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe 20 25 30 Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45 Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile 50 55 60 Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Asn 65 70 75 80 Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu 85 90 95 Met Gln Ser Thr Thr Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110 Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Thr Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125 Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140 Gly Ser Ala Ile Ala Ser Gly Ile Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160 Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175 Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190 Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn 195 200 205 Lys Gln Ser Cys Arg Ile Ser Asn Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln 210 215 220 Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240 Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255 Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys 260 265 270 Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile 275 280 285 Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro 290 295 300 Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320 Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg 325 330 335 Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350 Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys Val Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365 Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380 Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400 Asp Val Ser Ser Ser Val Ile Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys 405 410 415 Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile 420 425 430 Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445 Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly 450 455 460 Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480 Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn 485 490 495 Glu Lys Ile Asn Gln Ser Leu Ala Phe Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510 Leu His His Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr 515 520 525 Thr Ile Ile Ile Val Ile Ile Val Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val 530 535 540 Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560 Lys Asp Gln Leu Ser Gly Ile Asn Asn Ile Ala Phe Ser Asn 565 570 <210> 64 <211> 2107 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RSV-F long (GC) R2510 <400> 64 ggggcgcugc cuacggaggu ggcagccauc uccuucucgg caucaagcuu accauggagc 60 ugcccauccu caaggccaac gccaucacca ccauccuggc ggccgugacg uucugcuucg 120 ccagcuccca gaacaucacc gaggaguucu accagagcac cugcuccgcc gucagcaagg 180 gcuaccuguc cgcccuccgg accggguggu acacgagcgu gaucaccauc gagcugucca 240 acaucaagga gaacaagugc aacggcaccg acgcgaaggu gaagcugauc aaccaggagc 300 ucgacaagua caagaacgcc gucaccgagc ugcagcugcu caugcagagc acgaccgccg 360 ccaacaaccg cgcgcggcgc gagcugccgc gguucaugaa cuacacccug aacaacacca 420 agaagacgaa cgugacccuc uccaagaagc gcaagcggcg cuuccugggg uuccugcucg 480 gcguggggag cgccaucgcc uccggcaucg ccgucagcaa ggugcugcac cuggagggcg 540 aggugaacaa gaucaagucc gcccuccuga gcaccaacaa ggcggucgug ucccugagca 600 acgggguguc cguccucacc agcaaggugc uggaccugaa gaacuacauc gacaagcagc 660 uccugcccau cgugaacaag caguccugcc ggaucagcaa caucgagacg gucaucgagu 720 uccagcagaa gaacaaccgc cugcucgaga ucacccggga guucagcgug aacgccggcg 780 ugaccacccc cgucuccacg uacaugcuga ccaacagcga gcugcucucc cugaucaacg 840 acaugcccau caccaacgac cagaagaagc ugaugagcaa caacgugcag aucgugcgcc 900 agcaguccua cagcaucaug uccaucauca aggaggaggu ccucgccuac guggugcagc 960 ugccgcugua cggggucauc gacacccccu gcuggaagcu ccacacgagc ccccugugca 1020 ccaccaacac caaggagggc uccaacaucu gccugacgcg gaccgaccgc gggugguacu 1080 gcgacaacgc cggcagcgug uccuucuucc cccaggccga gaccugcaag guccagagca 1140 accggguguu cugcgacacc augaacuccc ucacgcugcc gagcgaggug aaccugugca 1200 acgucgacau cuucaacccc aaguacgacu gcaagaucau gaccuccaag accgacguga 1260 gcuccagcgu gaucaccucc cucggcgcga ucgucagcug cuacgggaag acgaagugca 1320 ccgccagcaa caagaaccgc ggcaucauca agaccuucuc caacgggugc gacuacguga 1380 gcaacaaggg cguggacacc gucuccgugg gcaacacccu guacuacgug aacaagcagg 1440 aggggaagag ccuguacguc aagggcgagc ccaucaucaa cuucuacgac ccccucgugu 1500 ucccguccga cgaguucgac gccagcaucu cccaggugaa cgagaagauc aaccagagcc 1560 uggccuucau ccggaagucc gacgagcugc ugcaccacgu caacgccggg aagagcacga 1620 ccaacaucau gaucaccacc aucaucaucg ugaucaucgu gauccuccug ucccugaucg 1680 cggucggccu ccugcuguac ugcaaggccc gcagcacgcc cgugacccuc uccaaggacc 1740 agcugagcgg gaucaacaac aucgccuucu ccaacugagg acuagugcau cacauuuaaa 1800 agcaucucag ccuaccauga gaauaagaga aagaaaauga agaucaauag cuuauucauc 1860 ucuuuuucuu uuucguuggu guaaagccaa cacccugucu aaaaaacaua aauuucuuua 1920 aucauuuugc cucuuuucuc ugugcuucaa uuaauaaaaa auggaaagaa ccuagaucua 1980 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040 aaaugcaucc cccccccccc cccccccccc ccccccccca aaggcucuuu ucagagccac 2100 cagaauu 2107

Claims (28)

  1. 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임(open reading frame)을 포함하고, 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하는 변형된 RNA이며, 여기서 변형된 RNA는 제트 인젝션(jet injection)에 의해 투여되는, 의학적 치료용 변형된 RNA.
  2. 제1항에 있어서,
    RNA는 피부 내로(intradermally) 투여되는, 변형된 RNA.
  3. 제1항에 있어서,
    RNA는 근육 내로(intramuscularly) 투여되는, 변형된 RNA.
  4. 제1항에 있어서,
    RNA는 피하로(subcutaneously) 투여되는, 변형된 RNA.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    변형된 RNA는 비변형된 참조(reference) RNA와 비교할 때, 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 증가된 발현에 의하여 특징화되는, 변형된 RNA.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    변형된 RNA에 의하여 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현은, 동일한 변형된 RNA가 제트 인젝션(jet injection)과 상이한 방법에 의해 투여되는 참조(reference)와 비교할 때 적어도 5배 증가되는, 변형된 RNA.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    변형된 RNA는 적어도 하나의 항원, 치료용 단백질 또는 항체를 암호화하는, 변형된 RNA.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 변형은 G/C 함량, 코돈 최적화(optimization), UTR 변형, 30개 초과의 아데노신 뉴클레오타이드를 갖는 폴리(A) 꼬리, 폴리(C) 서열, m7GpppN을 제외한 5'-캡(CAP) 구조, 히스톤-스템-루프 서열 및 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드의 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형인, 변형된 RNA.
  9. 제8항에 있어서,
    적어도 하나의 변형은 화학적으로 변형된 ARCA-캡(CAP)인, 변형된 RNA.
  10. 제9항에 있어서,
    ARCA-캡(CAP)은 포스포로티오에이트로 변형된, 변형된 RNA.
  11. 제8항에 있어서,
    적어도 하나의 변형은 UTR 변형이고, 상기 UTR은 안정한 RNA 유래의 UTR을 도입함으로써 변형되는, 변형된 RNA.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 안정한 RNA는 알파 글로빈 UTR 및 베타 글로빈 UTR로부터 선택되는, 변형된 RNA.
  13. 제8항에 있어서,
    적어도 하나의 변형은 UTR 변형이고, 상기 UTR은 TOP 유전자 유래의 5'-UTR을 도입함으로써 변형되는, 변형된 RNA.
  14. 제8항에 있어서,
    화학적으로 변형된 뉴클레오타이드는 슈도우리딘-5'-트리포스페이트 및 5-메틸사이티딘-5'-트리포스페이트로부터 선택되는, 변형된 RNA.
  15. 제8항에 있어서,
    변형된 RNA는 G/C 함량, 적어도 하나의 UTR 변형, 30개 초과의 아데노신 뉴클레오타이드를 갖는 폴리(A) 꼬리, 및 히스톤 스템-루프 서열의 변형들을 포함하는, 변형된 RNA.
  16. 제15항에 있어서,
    히스톤 스템-루프 서열은 서열번호 44에 따른 핵산 서열인, 변형된 RNA.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서,
    변형된 RNA는 m7GpppN 5'-캡(CAP)을 추가적으로 포함하는, 변형된 RNA.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리(A) 꼬리는 50개 초과의 아데노신 뉴클레오타이드를 포함하는, 변형된 RNA.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리(A) 꼬리는 64개의 아데노신 뉴클레오타이드로 이루어진, 변형된 RNA.
  20. 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하고, 적어도 하나의 치료용 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는 변형된 RNA를 포함하는 약학적 조성물이며, 여기서 상기 약학적 조성물은 제트 인젝션(jet injection)에 의해 투여되고, 상기 약학적 조성물은 적어도 하나의 적합한 약학적 첨가제(excipient)를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  21. 전립선암(prostate cancer)의 치료용인, 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 변형된 RNA 또는 제20항에 따른 약학적 조성물.
  22. 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하고, 상기 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는, 변형된 RNA를 제트 인젝션(jet injection)으로 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물의 피부 또는 근육에서 RNA-암호화된 펩타이드 또는 단백질의 국소적인 발현을 향상시키기 위한 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    RNA-암호화된 단백질은 항원, 치료용 단백질 또는 항체인 방법.
  24. 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하고, 적어도 하나의 치료용 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는, 변형된 RNA를, 이를 필요로 하는 개체에 제트 인젝션(jet injection)으로 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  25. 제24항에 있어서,
    변형된 RNA는 피부 내로(intradermally), 근육 내로(intramuscularly) 또는 피하로(subcutaneously) 주사되는 방법.
  26. 전립선암의 치료용 약제의 제조를 위한 변형된 RNA의 용도.
  27. 암호화된 펩타이드 또는 단백질의 발현을 증가시키는 적어도 하나의 변형을 포함하고, 적어도 하나의 오픈 리딩 프레임을 포함하는, 변형된 RNA를 포함하는 의학적 치료용 부품 키트(kit of parts)이며, 여기서 상기 변형된 RNA는 제1항 내지 제24항에 따른, 특히 제1항 내지 제19항에 따른 제트 인젝션(jet injection), 또는 제20항 또는 제25항에 따른 약학적 조성물로 투여되는 부품 키트.
  28. 제27항에 있어서,
    사용 설명서(instructions for use), 어쥬번트(adjuvant), 약학적 조성물의 투여를 위한 수단, 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 변형된 RNA 또는 약학적 조성물의 용해 또는 희석을 위한 약학적으로 허용가능한 용액을 추가로 포함하는 키트.
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