JP6774878B2 - Rnaの細胞内送達のための、キャップされた及びキャップされていないrna分子およびブロックコポリマー - Google Patents
Rnaの細胞内送達のための、キャップされた及びキャップされていないrna分子およびブロックコポリマー Download PDFInfo
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Description
(i) 全脾臓CD8+細胞のうちのCD8+IFNγ+セルのパーセンテージの低いか中程度の変化、および/または
(ii)
トランスフェクションされたRNA分子によってコードされた組換えタンパク質に向けられた抗体の低いか中程度の産生。
(i) 前記β−gal、EPOおよび/またはルシフェラーゼをコードするmRNAと組み合わせて所定のブロックコポリマーを、マウスに、好ましくは筋肉内注射で投与すること、
(ii) 前記マウスにおける前記β−gal、EPOおよび/またはルシフェラーゼの発現レベルを測定すること、
(iii) 工程(ii)で測定された発現レベルを対照値と比較するか、あるいは前記発現レベルと投与量との比を対照値と比較すること。
(i) 少量で使われる場合でさえの発現の高い効率、
(ii) 発現の最大効率、
(iii) 低い免疫原性。
RNA分子
[5´UTR]x−[対象の遺伝子]−[3´UTR]y−[PolyA]z
ここで[5´UTR]及び[3´UTR]は翻訳されない領域(UTR)であり、
ここで[5´UTR]はコザック配列を有し、
ここで[対象の遺伝子]は対象のタンパク質をコ−ドする任意の遺伝子であり、
ここで[PolyA]はポリ(A)末端部であり、そして
ここで、x、y、およびzは同一であるか異なっており、0又は1に等しい。
[5´UTR]−[対象の遺伝子]−[3´UTR]−[PolyA]
ここで[5´UTR]及び[3´UTR]は翻訳されない領域であり、
ここで[5´UTR]はコザック配列を有し、
ここで[対象の遺伝子]は対象のタンパク質をコ−ドする任意の核酸であり、及び
ここで[PolyA]はポリ(A)末端部である。
(i) キャップされかつ修飾されていないRNA分子
(ii) キャップされかつ修飾されたRNA分子
(iii) キャップされていずかつ修飾されていないRNA分子
(iv) キャップされていずかつ修飾されたRNA分子
最も一般的な実施形態に従い、「キャップされたRNA分子」は、その5´末端がグアノシンまたは修飾されたグアノシン、好ましくは5´−5´三ホスフェート結合に結合された7−メチルグアノシン(m7G)に連結されたRNA分子または類似体を指す。この定義は5´キャップ、特に天然に生じるおよび/または生理学的なキャップの最も広く認められた定義に相応している。
本発明の範囲内で、少なくとも一つの修飾されたヌクレオチド、ヌクレオシド、または塩基、例えば修飾されたプリンまたは修飾されたピリミジンを含有するRNA分子を、「修飾されたRNA分子」は指す。修飾されたヌクレオシドまたは塩基は、A、U、C、またはG(それぞれ、ヌクレオシドに関してはアデノシン、ウリジン、シチジン、またはグアノシン、及び糖部分を専ら指す場合にはアデニン、ウラシル、シトシン、またはグアニン)ではない、いかなるヌクレオシドまたは塩基であることもできる。
- L-6309 β-gal mRNA unmodified ARCA cap (Batch#T1-APG01A)
- L-6109 β-gal mRNA fully substituted with Pseudo-U and 5-Methyl-C, ARCA cap (Batch#T1-AOL03A)
- L-6309 β-gal mRNA unmodified, NO Cap(Batch#I9-B01A)
- L-6109 β-gal mRNA fully substituted with Pseudo-U and 5-Methyl-C, No Cap (Batch#I9-B02A)
- L-6007 Fluc mRNA unmodified ARCA cap (I99-A01A), 及び
- L-6007 EPO mRNA unmodified ARCA cap (I9-A01A).
四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーは、当技術分野、例えばWO2010026537A1および/またはWO2013128423A1において、前に報告されていた。
− アルキレンジアミノ部分、特にC1〜C6またはさらにC2〜C6アルキレンジアミノ部分であり、及び、好ましくはエチレンジアミノ部分であり、又は
−アルキレンまたは5〜8炭素のシクロアルキレンまたはフェニレンであり、特に5または6炭素のシクロアルキレン、又は
−式(Y)の基であり:
*−[B]i−[A]j−Re又は
*−[A]i−[B]j−Re、
を表し、
ここで
Aは親水性ブロックであり、好ましくはポリエチレンオキシド単位を有し又それらから成り、
Bは上記に定義された疎水性ブロックであり、
Reは、水素原子、グリコシル残基、メチルまたはメトキシ基、C2−C6アルキルまたはアルコキシ基、酸、ジカルボン酸残基(例えばエタン二酸残基またはプロパン二酸残基またはブタン二酸残基)、アミン残基、アミノグリコシド残基、またはアミド残基を意味し、
iは約3〜約125の値を有し、それは60以下を包含し、
jは3〜約85の値を有し、それは50以下を包含し、及び
Yは上記に定義された通りであり、
R*は、1〜6の炭素のアルキレン、5〜8の炭素のシクロアルキレン、またはフェニレン、特にアルキレンジアミン部分、及び好ましくはエチレンジアミン部分である。
- Reは、水素原子、グリコシル残基、メチル、酸、アミン、アミノグリコシド、またはアミドを意味し、
- iは約3〜約125、特に約10〜約100、及び特に約10〜約60の値を有し、及び
- jは3〜約85、特に約10〜約50、特に約10〜約20、およびより特には13以上の値を有し、
- R1およびR2に関して、(a)両方とも水素であるか、または(b)一方が水素であり他方はメチルであり、
- R3およびR4に関して、(a)両方とも水素であるか、または(b)一方が水素であり他方はメチルであり、及び
- R3およびR4の両方とも水素である場合、R5およびR6の一方が水素であり他方はメチルであり、またはR3およびR4の1つがメチルである場合、R5およびR6の両方とも水素である。
- iは約3〜約125、特に約10〜約100、及び特に約10〜約60の値を有し、及び
- jは3〜約85、特に約10〜約50、特に約10〜約20、およびより特には13以上の値を有する。
−R*は、2〜6の炭素のアルキレン、5〜8の炭素のシクロアルキレン、またはフェニレンであり、
−iは約3〜約125の値を有し、及び
−jは3〜約85の値を有し、
−ここで、R1、R2一対ごとに、一方は水素であり、他方はメチル基であり、
−ここで、各末端ブロックは任意的に更にグリコシル化および/または官能化される。
- R*は、2〜6の炭素のアルキレン、5〜8の炭素のシクロアルキレン、またはフェニレンであり、及び好ましくは2、4、または6の炭素のアルキレンであり、
- iは約3〜約125、特に約10〜約100、及び特に約10〜約60の値を有し、及び
- jは約3〜約85、特に約10〜約50、特に約10〜約20の値を有し、
- 及びここで、R1、R2一対ごとに、一方は水素であり、他方はメチル基である。
- R*は、2〜6の炭素のアルキレン、5〜8の炭素のシクロアルキレン、またはフェニレンであり、及び好ましくは2、4、または6の炭素のアルキレンであり、
- iは約3〜約125、特に約10〜約100、及びより特には約10〜約60、及び好ましくは約10〜約30の値を有し、
- jは約3〜約85、特に約10〜約50、より特には約10〜約30、及び好ましくは約20〜25の値を有し、
- 及びここで、R1、R2一対ごとに、一方は水素であり、他方はメチル基である。
- iは約3〜約125、特に約10〜約100、及び特に約10〜約60の値を有し、及び
- jは約3〜約85、特に約10〜約50、特に約10〜約20、あるいは約30〜約50の値を有し、
- 及びここで、R1、R2一対ごとに、一方は水素であり、他方はメチル基である。
上記に定義された四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマー自体、およびそれらの薬学的に許容される塩、およびそれらの混合物に、本発明は関する。
(i) 上記に定義された少なくとも一つの四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマー、およびそれらの混合物、および
(ii) 少なくとも一つのRNA分子、特に少なくとも一つのキャップされた又はキャップされていないmRNA。
[図1]C57Bl6マウス骨格筋中のβ−ガラクトシダーゼ発現及びβ−ガラクトシダーゼに対する免疫反応へのmRNAキャッピングおよび/またはヌクレオチド修飾の影響。(A)裸の又は20.10−4%の704により調製された20μgのキャップされていずかつ完全に修飾された又は修飾されていないmRNAの筋肉内注射の1日後のβ−ガラクトシダーゼ活性。(B)裸の又は20.10−4%の704により調製された20μgのキャップされた完全に修飾された又は修飾されていないmRNAの筋肉内注射の1日後のβ−ガラクトシダーゼ活性。(C)裸の又は20.10−4%の704により調製された、20μgのキャップされた又はキャップされていずかつ修飾されたおよび/または修飾されていないmRNAの0及び21日目の筋肉内1回注射から成るワクチン接種の42日後の体液反応。各カラムは、少なくとも8匹の個々のマウスのELISAにより測定された平均抗体価を表す。(D)特定のCD8+IFNγ+β−ガラクトシダーゼ細胞のパーセンテージ。ICAFectin(商標)441およびβ−ガラクトシダーゼをコードするプラスミドDNA又は対照としてα-フェトプロテインをコードするプラスミドDNAによってトランスフェクションされたネズミ樹状細胞株(Jaws)で一晩刺激されて42日目に、脾細胞は準備された。洗浄後、細胞は抗CD8抗体および抗IFNγで染色された。各カラムは、少なくとも6匹の個々のマウスの総脾臓CD8++/−SEMにおけるCD8+IFNγ細胞のパーセンテージを表す。
材料と方法
核酸分子
β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、エリスロポエチン(EPO)をコードしている、キャップされた又はされていない、それぞれのU又はCがそれぞれシュード−Uおよび5−メチル−Cで完全に置換されているかされてないmRNAは、Trilink(サン ジエゴ、米国)から購入された。サイトメガロウイルス(CMV)IE1プロモータ/エンハンサの制御下のネズミEPOcDNAを有しているプラスミドは、プラスミドpTetO−mEPO(Richard et al., Human Gene Therapy 2005)からPCRによりmEPOcDNAをリカバーすることにより構築され、pcDNA−3ベクター(Invitrogen, Cergy Pontoise, France)へ導入された。ヒトサイトメガロウイルス即初期遺伝子プロモータにより制御されるβ−ガラクトシダーゼをコードするpCMV−bGalプラスミド(Clontech, St Germain en Laye, France)が、抗原として使われた。プラスミドは、EndoFreeプラスミド精製カラム(Qiagen、Chatsworth、CA、米国)によって、形質転換された組換え型大腸菌から精製された。
すべての動物実験は、フランス国立保健医学研究所のガイドラインに従って実施された。8週齢の雌のスイスおよびC57bl/6マウスは、Janvier(Le Genest Saint Isle、France)から得られた。少なくとも6〜8匹のマウスが、各実験群において、注射された。筋肉内投与のために、マウスは麻酔された。一個所の毛が剃られた前脛骨筋内に、極小シリンジ(U100、Becton Dickinson、Rungis、France)を使用して50マイクロリットルの合成製剤は注射された。ブロックコポリマーの原液は、水中の2%(w/v)濃度で調製され、4°Cで保管された。バッファ中の所望の濃度のプラスミドDNA溶液と、水中の所望の濃度のブロックコポリマーを等容量で混合することによって、ブロックコポリマーを有するDNAおよびmRNAの製剤は調製された。
ペニシリン、ストレプトマイシン、Lグルタミン及び10%のウシ胎仔血清を補充されたダルベッコ改変イーグル培地中で、Hela、C2C12、JAW IIは生育された。トランスフェクションの1日前に、細胞がトランスフェクション時にコンフルエントの70−80%(1ウェルあたり0.5 〜 2×105細胞)に到達するように、細胞は1mLの完全な細胞生育培地中に置かれた。トランスフェクションの1日後に、細胞は収集され、そしてプロテアーゼインヒビターカクテル(Roche Diagnostics)を補充されたReporter Lysis Buffer(Promega)がそれぞれのウェルに加えられた。10,000rpm、4分間の遠心分離の後、ルシフェラーゼアッセイシステム(Promega)を使用して、Victor2(PerkinElmer)で上澄の一部から、ルシフェラーゼ活性は決定された。上澄10μlにルシフェラーゼアッセイの基質100μlの添加した後、発光を測定することによって、ルシフェラーゼ活性は決定された。
ヘマトクリット値は、ミクロキャピラリ遠心分離で測定された。筋肉内注射後の複数の時点で、眼窩後空洞からマウス血液は集められ、そして遠心分離(1000gで3分)によって、血清が得られた。血漿試料のために、血液はヘパリナイズされたチューブ中に眼窩後洞から集められ、1000gで3分間遠心分離された。製造業者(R&D Systems)により提供された説明書に従って、マウス血清のEPOレベルは、酵素結合免疫吸着法(ELISA)で測定された。
液性免疫応答は、ELISAで測定された。簡潔に言うと、96ウェルプレート(NuncMaxisorp)は、 pH 9.5である50mMのNaHCO3中の組換えネズミEPOで、4°Cで一晩コートされ、その後、希釈された血清を三分配する前に、PBS、0.05%Tween−20、1%ウシ血清アルブミン(BSA)で室温で1時間ブロックされた。プレートは37°Cで90分間インキュベートされ、その後PBS、0.05%Tween−20、1%BSA中で1/5000に希釈されたペルオキシダーゼ結合ヤギマウス抗IgG(Jackson Immunoresearch、Newmarket、英国)を用いて、EPO特異的IgGは検出された。プレートは工程の間にPBS、0.05%のTween−20で3回洗われ、そしてペルオキシダーゼ活性はpH5のクエン酸塩緩衝液中の1mg/mLのOPDによって、明らかにされた。反応は1MのH2SO4の添加によって止められ、そして吸収が492ナノメートルで測定された。血清は1/100、1/1000、および1/10000でテストされ、そして各ELISAプレートに存在する商業的に入手可能な抗ネズミEPOの固定された複数の既知量から成る標準曲線に対して、抗ネズミEPO抗体量は算出された。
PhotonIMAGER Optimaシステム(http://www.biospacelab.com)を使用する、動物のライブ画像化によって、ルシフェラーゼタンパク質発現は評価された。簡潔に言うと、2mgのin vivoルシフェラーゼ基質(ビートルルシフェリン基質、Promega)がマウスの腹膜内に注射され、そして10分後に、マウスは麻酔され、そしてベースラインが安定するまで発光信号は測定されるであろう。発光信号の安定化後、発光の測定は、30秒間実行された。
製造業者のプロトコールに従ってBetaGlo Assayシステム(Promega、Charbonnieres、France)を使用して、筋肉抽出物中において、β−gal発現は定量化された。
液性免疫応答は、ELISAで測定された。簡潔に言うと、96ウェルプレート(NuncMaxisorp)は、 pH 9.5である50mMのNaHCO3中の組換えbGalで、4°Cで一晩コートされ、その後、希釈された血清を三分配する前に、PBS、0.05%のTween−20、および1%のウシ血清アルブミン(BSA)で1時間ブロックされた。プレートは37°Cで90分間インキュベートされ、その後PBS、0.05%Tween−20、1%BSA中で1/5000に希釈されたペルオキシダーゼ結合ヤギマウス抗IgG(Jackson Immunoresearch、Newmarket、英国)を用いて、bGal特異的IgGは検出された。プレートは工程の間にPBS、0.05%のTween−20で3回洗われ、そしてペルオキシダーゼ活性はpH5のクエン酸塩緩衝液中の1mg/mLのOPDによって、明らかにされた。反応は1MのH2SO4の添加によって止められ、そして吸収が492ナノメートルで測定された。血清は1/100、1/1000および1/10000でテストされ、そして各ELISA中に存在するコントロール血清の二倍希釈液に対して、力価は算出された。
I -704−Meの調製
704(1.07g、0.19mmol、1当量)は真空下で30分間乾燥され、そして乾燥THF(25mL)中に溶解された。0°CでNaH(95%、56mg、2.33mmol、12当量)が加えられ、そして混合物は室温で30分間撹拌された。ヨードメタン(0.14mL、2.33mmol、12当量)がその後加えられ、そして混合物は一晩室温で攪拌された。濃縮後、残渣はフラッシュクロマトグラフィ(DCM/MeOH)により精製されて、704−Meが与えられた(0.93g、88%)。
DCM(120mL)中の704(4.7g、0.85mmol、1当量)の溶液に、p−トルエンスルホニルクロライド(1.95g、10.25mmol、12当量)が加えられた。粉末状のKOH(0.77g、13.67mmol、16の式)はその後30分にわたって少しづつ加えられ、そして混合物は2日間室温で撹拌された。DCM(100mL)が加えられ、そして混合物は水、塩水により洗浄され、MgSO4で乾燥され、濃縮された。残渣はフラッシュクロマトグラフィ(DCM/MeOH)により精製されて、704−Tosが与えられた(4.37g、84%)。
減圧/N2が3サイクル適用され、続いて減圧/H2が3サイクル適用された。混合物は室温で2日間撹拌され、その後セライトのパッドを通して濾過され、MeOHで洗浄され、そして濃縮された。残渣はフラッシュクロマトグラフィ(DCM/MeOH)により精製されて、704−NH2が与えられた(2.81g、88%)。
DCM(20mL)中の704−NH2(0.2g、0.036mmol、1当量)の溶液に、Et3N(0.06mL、0.36mmol、10当量)および無水コハク酸(0.036g、0.36mmol、10当量)が順次加えられた。混合物は、室温で一晩撹拌され、その後1MHCl、水で洗浄され、MgSO4で乾燥され、濃縮された。残渣はフラッシュクロマトグラフィ(DCM/MeOH)により精製されて、704−NOxが与えられた(0.185g、87%)。
DMF(15ml)中の704−NOx(0.185g、0.031mmol、1当量)の溶液に、Paromo(Teoc)−NH2(0.224g、0.188mmol、6当量)、HBTU(0.083g、0.220mmol、7当量)、およびDMAP(0.053g、0.440mmol、14当量)が順次加えられた。混合物は50°Cで48時間撹拌され、その後濃縮され、フラッシュクロマトグラフィ(DCM/MeOH)により精製されて、704−Paromo(Teoc)が与えられた(0.149g、48%)。
ピリジン(15mL)中の704(2g、0.36mmol、1当量)の溶液に、無水コハク酸(0.36g、3.63mmol、10当量)が加えられた。混合物は、55°Cで一晩撹拌され、そして濃縮された。残渣はDCM(100mL)に溶解され、1M HCl、 水、塩水により洗浄され、MgSO4で乾燥され、そして濃縮された。残渣はフラッシュクロマトグラフィ(DCM/MeOH)により精製されて、704−OOxが与えられた(1.78g、84%)。
目的:この実験は、C57BI6骨格筋におけるタンパク質発現に対するmRNAキャッピング及びヌクレオチド修飾の影響の比較研究、及び更に注射後の免疫応答の重要性の評価を提示する。
目的:アミノグリコシド脂質誘導体が3つの異なる細胞株においてmRNAトランスフェクションにとってそれほど満足でないという証拠を、この実験は提示する(図2参照)。
目的:この実験は、ビヒクルとしてブロックコポリマー704を使用したネズミEPOをコードするmRNAの注射の、20日にわたる追跡を提示する(図3参照)。
目的:この実験は、ビヒクルとしてブロックコポリマー704又は904を使用して、ネズミEPOをコードするmRNAの注射の、180日にわたる追跡を提示する(図3参照)。RNAトランスフェクションのためのビヒクルとしてのブロックコポリマー704および904の効率を示す比較研究が、更に提示される(図4参照)。
目的:レポーター遺伝子としてルシフェラーゼを使用して、本発明のブロックコポリマーを用いたRNAトランスフェクションに関して、Tyrode媒体およびその等価媒体が優れた特性を与えられるという良い証拠を、この比較研究は提示する(図5参照)。
目的:ブロックコポリマーが低濃度であっても、本発明のブロックコポリマーはRNA分子のトランスフェクションに対して非常に効率的であるという証拠を、この比較研究は提示する(図6参照)。
目的:この比較研究は、以下の一般式のブロックコポリマーの効率の証拠を提示する:
目的:この比較研究は、以下の一般式のブロックコポリマーの効率の証拠を提示する:
目的:この比較研究は、以下の一般式のブロックコポリマーの効率の証拠を提示する:
目的:この比較研究は、以下の一般式のブロックコポリマーの効率の証拠を提示する:
目的:マウスの筋肉内注射後の、マウス中のEPOおよびヘマトクリットの経時変化の証拠を、この研究は提示する(図11参照)。
目的:真核宿主中でのキャップされていずかつ修飾されたメッセンジャーRNAの発現を促進することに対して、本発明のブロックコポリマーが特別には効率的であるという証拠を、この研究は、提示する(図12参照)。
Claims (16)
- 遺伝子治療のための細胞内送達のための、且つ少なくとも一つのキャップされた又はキャップされていないmRNAのためのビヒクルであって、以下の式(Ia)または(Ib)
*−[B] i −[A] j −Re又は
*−[A] i −[B] j −Re
を表し、
ここで
Aは、ポリエチレンオキシド単位を有する親水性ブロックであり、
Bは、ポリプロピレンオキシド単位、ポリカプロラクトン単位、およびポリ乳酸単位から選択される単位を有する疎水性ブロックであり、
Reは、水素原子、グリコシル残基、メチルまたはメトキシ基、C 2 −C 6 アルキルまたはアルコキシ基、酸、ジカルボン酸残基、アミン残基、アミノグリコシド残基、またはアミド残基を意味し、
iは約3〜約125の値を有し、
jは3〜約85の値を有し、
Yは、以下の式であり:
R * は、2〜6の炭素のアルキレン、5〜8の炭素のシクロアルキレン、またはフェニレンである、
で表される少なくとも一つの四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーを含む上記ビヒクル。 - 前記mRNAがキャップされていないmRNAである、請求項1に記載のビヒクル。
- 前記mRNAがキャップされていずかつ修飾された、又はキャップされていずかつ修飾されていないmRNAである、請求項1又は2に記載のビヒクル。
- 前記mRNAがメッセンジャー5'pppRNA;5'ppRNA;5'pRNA;または 5'OHRNAである、請求項1〜3のいずれか一つに記載のビヒクル。
- 前記四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーが、少なくとも一つの末端の親水性又は疎水性ブロックを有する、請求項1〜4のいずれか一つに記載のビヒクル。
- 前記四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーが、約0.5〜約1.5の親水性ブロック/疎水性ブロックの比で親水性ブロックと疎水性ブロックを有する、請求項1〜5のいずれか一つに記載のビヒクル。
- 前記四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーが、少なくとも一つのグリコシル部分と結合されている少なくとも一つの末端の親水性または疎水性ブロックを有する、請求項1〜8のいずれか一つに記載のビヒクル。
- ビヒクルとしての、請求項1〜9のいずれか一つに記載の四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーと少なくとも一つのキャップされていないmRNAとの組み合わせ物。
- 少なくとも一つのキャップされていないmRNAと組み合わせられた、ビヒクルとしての、請求項1〜9のいずれか一つに記載の四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーを含有する医薬組成物。
- 前記四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーおよびmRNAが、Tyrode媒体またはその等価媒体で製剤化された、請求項11に記載された医薬組成物。
- 真核宿主中でのタンパク質の発現を増加、改善、及び/または維持する為の方法であって、少なくとも一つのキャップされた又はキャップされていないmRNAのためのビヒクルとして、請求項1〜9のいずれか一つに記載の少なくとも一つの四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーを前記宿主にトランスフェクションする工程を有し、前記真核宿主がイン・ビトロ又はエクス・ビボの試料であり、又は前記真核宿主がヒト以外の哺乳類である、上記方法。
- 真核宿主中でのタンパク質の発現を増加、改善、及び/または維持する為の、且つ少なくとも一つのキャップされた又はキャップされていないmRNAのためのビヒクルであって、請求項1〜9のいずれか一つに記載の少なくとも一つの四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマーを含む上記ビヒクル。
- 細胞内送達のための又は遺伝子治療のためのキットであって、
(i)請求項1〜9のいずれか一つに記載の少なくとも一つの四官能性非イオン性両親媒性ブロックコポリマー、及び
(ii)少なくとも一つのキャップされていないmRNA分子
を含む、上記キット。
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