KR20160036630A - 항-prlr 항체 및 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 명세는 프로락틴 수용체(PRLR)에 결합하는 항체 및 그의 사용 방법을 제공한다. 몇몇 실시태양에 따라, 본 명세의 항체는 인간 PRLR에 높은 친화성으로 결합한다. 몇몇 실시태양에서, 본 명세는 PRLR에 결합하고 프로락틴-매개된 세포 신호전달을 차단하는 항체를 포함한다. 다른 실시태양에서, 본 명세는 PRLR에 결합하지만 프로락틴-매개된 세포 신호전달은 차단하지 않는 항체를 포함한다. 본 명세의 항체는 완전 인간 항체일 수 있다. 본 명세는 세포독성제, 방사성핵종, 또는 세포 성장 또는 증식에 유해한 다른 부분에 접합된 항-PRLR 항체를 포함한다. 본 명세의 항체는 다양한 암뿐만 아니라 다른 PRLR-관련된 질환의 치료에 유용하다. 본 명세는 또한 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체를 포함하며, 여기에서 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 세포독성제에 접합된다.

Description

항-PRLR 항체 및 그의 용도{ANTI-PRLR ANTIBODIES AND USES THEREOF}
본 발명은 프로락틴 수용체(PRLR)에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편뿐만 아니라 상기와 같은 항체를 포함하는 항체-약물 접합체, 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
프로락틴은 프로락틴 수용체(PRLR)와 상호작용함으로써 그의 활성을 발휘하는 폴리펩티드 성장 호르몬이다. PRLR은 1 부류 사이토카인 수용체 상과에 속하는 단일 막관통 수용체이다. 프로락틴의 PRLR에의 결합은 수용체 이량체화 및 세포내 신호전달을 유도한다. PRLR을 통한 신호전달은 다양한 과정들, 예를 들어 유선 발달, 수유, 생식 및 면역조절과 관련된다. 더욱이, 높은 수준의 PRLR 발현이 유방, 전립선 및 다른 종양 유형들에서 탐지되었다.
PRLR 신호전달의 봉쇄가 유방 및 전립선암의 치료 수단으로서 제안되었다(예를 들어 문헌[Damiano and Wasserman, Apr. 2013, Clin. Cancer Res. 19(7):1644-1650]을 참조하시오). 항-PRLR 항체는 예를 들어 미국특허 제 7,867,493 호 및 미국특허 제 7,422,899 호에 언급되어 있다. 그럼에도 불구하고, 당해 분야에서는 PRLR 발현 및/또는 신호전달과 관련된 암 및 다른 질환들의 치료를 위한 신규의 PRLR 길항물질, 예를 들어 항-PRLR 항체를 필요로 한다.
발명의 간단한 요약
본 발명은 인간 프로락틴 수용체(PRLR)에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 본 발명의 항체는 특히, PRLR을 발현하는 종양 세포의 표적화에 유용하다. 본 발명의 항-PRLR 항체 및 그의 항원-결합 부분을 변형되지 않은 형태로 단독으로 사용하거나, 또는 항체-약물 접합체 또는 이중특이성 항체의 부분으로서 포함시킬 수 있다.
본 발명의 항체는 완전-길이(예를 들어 IgG1 또는 IgG4 항체)이거나 또는 단지 항원-결합 부분(예를 들어 Fab, F(ab')2 또는 scFv 단편)만을 포함할 수 있으며 기능성에 영향을 미치도록, 예를 들어 잔여 효과기 기능을 제거하기 위해서 변형시킬 수도 있다(문헌[Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164:1925-1933]).
본 발명의 예시적인 항-PRLR 항체를 본 발명의 표 1 및 2에 나열한다. 표 1은 상기 예시적인 항-PRLR 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR), 경쇄 가변 영역(LCVR), 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열 식별자들을 제시한다. 표 2는 상기 예시적인 항-PRLR 항체의 HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 핵산 서열 식별자들을 제시한다.
본 발명은 표 1에 나열된 HCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCVR을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열과 짝을 이룬 표 1에 나열된 HCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 포함하는 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 쌍(HCVR/LCVR)을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 몇몇 실시태양에 따라서, 본 발명은 표 1에 나열된 예시적인 항-PRLR 항체 중 임의의 항체내에 함유된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍은 18/26; 66/74; 274/282; 290/298; 및 370/378로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 중쇄 CDR1(HCDR1) 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCDR1을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 중쇄 CDR2(HCDR2) 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCDR2를 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 중쇄 CDR3(HCDR3) 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 경쇄 CDR1(LCDR1) 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCDR1을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 경쇄 CDR2(LCDR2) 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCDR2를 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 경쇄 CDR3(LCDR3) 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCDR3 아미노산 서열들 중 임의의 서열과 짝을 이룬 표 1에 나열된 HCDR3 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 포함하는 HCDR3 및 LCDR3 아미노산 서열 쌍(HCDR3/LCDR3)을 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 몇몇 실시태양에 따라서, 본 발명은 표 1에 나열된 예시적인 항-PRLR 항체 중 임의의 항체내에 함유된 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍은 24/32; 72/80; 280/288; 296/304; 및 376/384로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 예시적인 항-PRLR 항체 중 임의의 항체내에 함유된 6개 CDR(즉 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)의 세트를 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 20-22-24-28-30-32; 68-70-72-76-78-80; 276-278-280-284-286-288; 292-294-296-300-302-304; 및 372-374-376-380-382-384로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
관련된 실시태양에서, 본 발명은 표 1에 나열된 예시적인 항-PRLR 항체 중 임의의 항체에 의해 한정되는 바와 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍내에 함유된 6개 CDR(즉 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)의 세트를 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 18/26; 66/74; 274/282; 290/298; 및 370/378로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍내에 함유된 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트를 포함하는, PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열내에서 CDR을 식별하기 위한 방법 및 기법은 당해 분야에 충분히 공지되어 있으며 이들을 사용하여 본 발명에 개시된 명시된 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열내에서 CDR을 식별할 수 있다. CDR의 경계를 식별하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 규약은 예를 들어 카밧 정의, 코티아 정의, 및 AbM 정의를 포함한다. 일반적으로, 상기 카밧 정의는 서열 가변성에 기반하고, 상기 코티아 정의는 구조상 고리 영역의 위치에 기반하며, 상기 AbM 정의는 상기 카밧과 코티아 접근법간의 절충이다. 예를 들어 문헌[Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]; 문헌[Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997)]; 및 문헌[Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989)]을 참조하시오. 공개 데이터베이스를 또한 항체내에서 CDR 서열을 식별하는데 이용할 수 있다.
본 발명은 또한 항-PRLR 항체 또는 그의 부분들을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 표 1에 나열된 HCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 HCVR 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 LCVR 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 HCDR1 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 HCDR1 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 HCDR2 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 HCDR2 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 HCDR3 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 HCDR3 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCDR1 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 LCDR1 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCDR2 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 LCDR2 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 표 1에 나열된 LCDR3 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 LCDR3 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 HCVR을 암호화하는 핵산 분자를 제공하며, 여기에서 상기 HCVR은 3개 CDR(즉 HCDR1-HCDR2-HCDR3)의 세트를 포함하고, 상기 HCDR1-HCDR2-HCDR3 아미노산 서열 세트는 표 1에 나열된 예시적인 항-PRLR 항체 중 임의의 항체에 의해 정의된 바와 같다.
본 발명은 또한 LCVR을 암호화하는 핵산 분자를 제공하며, 여기에서 상기 LCVR은 3개 CDR(즉 LCDR1-LCDR2-LCDR3)의 세트를 포함하고, 상기 LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 표 1에 나열된 예시적인 항-PRLR 항체 중 임의의 항체에 의해 정의된 바와 같다.
본 발명은 또한 HCVR 및 LCVR을 모두 암호화하는 핵산 분자를 제공하며, 상기 HCVR은 표 1에 나열된 HCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCVR은 표 1에 나열된 LCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 표 2에 나열된 HCVR 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 및 표 2에 나열된 LCVR 핵산 서열들 중 임의의 서열, 및 상기 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 일치성을 갖는 상기 서열의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 몇몇 실시태양에서, 상기 핵산 분자는 HCVR 및 LCVR을 암호화하며, 여기에서 상기 HCVR 및 LCVR은 모두 표 1에 나열된 동일한 항-PRLR 항체로부터 유래한다.
본 발명은 또한 항-PRLR 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 발현할 수 있는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 상기 언급한 핵산 분자, 즉 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 서열들 중 임의의 서열을 암호화하는 핵산 분자 중 임의의 분자를 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함한다. 또한, 상기와 같은 벡터가 도입된 숙주 세포뿐만 아니라, 상기 숙주 세포를 상기 항체 또는 항체 단편의 생산을 허용하는 조건하에서 배양하고 그렇게 생산된 항체 및 항체 단편을 회수함으로써 상기 항체 또는 그의 부분들을 생성시키는 방법은 본 발명의 범위내에 포함된다.
본 발명은 변형된 글리코실화 패턴을 갖는 항-PRLR 항체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 바람직하지 않은 글리코실화 부위를 제거하는 변형, 또는 올리고사카라이드 쇄상에 존재하는 퓨코스 부분이 없는 항체는, 예를 들어 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 기능을 증가시키기에 유용할 수 있다(문헌[Shield et al.(2002) JBC 277:26733]을 참조하시오). 다른 용도에서, 보체 의존성 세포독성(CDC)을 변형시키기 위해서 갈락토실화의 변형이 수행될 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 PRLR에 특이적으로 결합하는 재조합 인간 항체 또는 그의 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 관련된 태양에서, 본 발명은 항-PRLR 항체 및 제2 치료제의 조합인 조성물을 특징으로 한다. 하나의 실시태양에서, 상기 제2 치료제는 항-PRLR 항체와 유리하게 병용되는 임의의 작용제이다. 본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 항-PRLR 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)를 제공한다. 본 발명의 항-PRLR 항체를 수반하는 예시적인 복합 요법, 공-제형, 및 ADC를 본 발명의 어딘가에 개시한다.
더욱 또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 항-PRLR 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 사용하여 종양 세포를 살해하거나 또는 종양 세포 성장을 억제 또는 약화시키기 위한 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 치료 방법은 치료가 필요한 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 투여함을 포함한다. 치료되는 질환은 PRLR을 표적화함으로써 및/또는 PRLR을 통한 프로락틴-매개된 세포 신호전달을 억제함으로써 개선되거나, 좋아지거나, 억제되거나 예방되는 임의의 질병 또는 상태이다.
다른 실시태양들은 이어지는 상세한 설명의 재고찰로부터 자명해질 것이다.
본 발명을 개시하기 전에, 본 발명은, 개시되는 특정한 방법 및 실험 조건들이 다양할 수 있기 때문에, 상기와 같은 방법 및 조건들로 제한되지 않음을 알아야 한다. 또한 본 발명에 사용되는 용어는, 본 발명의 범위는 첨부된 특허청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 단지 특정한 실시태양을 개시하기 위한 것이며 제한을 의도하지 않음을 알아야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용되는 모든 과학기술 용어들은 본 발명의 속하는 분야의 통상적인 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "약"이란 용어는 특별히 인용되는 수치와 관련하여 사용되는 경우, 상기 값이 상기 인용되는 값으로부터 단지 1%까지 변할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 본 발명에 사용되는 바와 같이, "약 100"이란 표현은 99 내지 101 및 이들 사이의 모든 값(예를 들어 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.
본 발명에 개시된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있지만, 이제 바람직한 방법 및 물질을 개시한다.
정의
본 발명에 사용되는 바와 같은 프로락틴 수용체, "PRLR" 등의 표현은 서열번호 404에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 인간 프로락틴 수용체를 지칭한다. "PRLR"이란 표현은 단량체성 및 다량체성 PRLR 분자를 포함한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "단량체성 인간 PRLR"이란 표현은 임의의 다량체화 도메인을 함유하거나 갖지 않고 통상적인 조건하에서 또 다른 PRLR 분자에의 직접적인 물리적 연결없이 단일 PRLR 분자로서 존재하는 PRLR 단백질 또는 그의 부분을 의미한다. 예시적인 단량체성 PRLR 분자는 서열번호 401의 아미노산 서열을 포함하는, "hPRLR.mmh"로서 본 발명에서 지칭되는 분자이다(예를 들어 본 발명의 실시예 3을 참조하시오). 본 발명에 사용되는 바와 같이, "이량체성 인간 PRLR"이란 표현은 링커, 공유 결합, 비-공유 결합, 또는 항체 Fc 도메인과 같은 다량체화 도메인을 통해서 서로 연결되는 2개의 PRLR 분자를 포함하는 구조물을 의미한다. 예시적인 이량체성 PRLR 분자는 서열번호 402의 아미노산 서열을 포함하는, "hPRLR.mFc"로서 본 발명에서 지칭되는 분자이다(예를 들어 본 발명의 실시예 3을 참조하시오).
본 발명에서 단백질, 폴리펩티드 및 단백질 단편에 대한 언급들은 모두 비-인간 종으로부터의 것으로서 명백히 명시되지 않는 한 각 단백질, 폴리펩티드 또는 단백질 단편의 인간 버전을 지칭한다. 따라서, "PRLR"이란 표현은 비-인간 종으로부터의 것, 예를 들어 "마우스 PRLR", "원숭이 PRLR" 등으로서 명시되지 않는 한 인간 PRLR을 의미한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "세포 표면-발현된 PRLR"이란 표현은 PRLR 단백질의 적어도 일부가 세포막의 세포 바깥쪽에 노출되고 항체의 항원-결합 부분에 접근 가능하도록 시험관내 또는 생체내에서 세포의 표면상에서 발현되는 하나 이상의 PRLR 단백질(들) 또는 그의 세포외 도메인을 의미한다. "세포 표면-발현된 PRLR"은 PRLR 단백질을 통상적으로 발현하는 세포의 표면상에서 발현되는 PRLR 단백질을 포함하거나 또는 상기 단백질로 이루어질 수 있다. 한편으로, "세포 표면-발현된 PRLR"은, 통상적으로는 세포의 표면상에서 인간 PRLR을 발현하지 않지만 상기 표면상에서 PRLR을 발현하도록 인공적으로 조작된 상기 표면상에서 발현되는 PRLR 단백질을 포함하거나 또는 상기 단백질로 이루어질 수 있다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "항-PRLR 항체"란 표현은 단일 특이성을 갖는 1가 항체뿐만 아니라, PRLR에 결합하는 제1 가지 및 제2 (표적)항원에 결합하는 제2 가지를 포함하는 이중특이성 항체 모두를 포함하며, 여기에서 상기 항-PRLR 가지는 본 발명에서 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR/LCVR 또는 CDR 서열들 중 임의의 서열을 포함한다. "항-PRLR 항체"란 표현은 또한 약물 또는 독소(즉 세포독성제)에 접합된 항-PRLR 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)를 포함한다. "항-PRLR 항체"란 표현은 또한 방사성핵종에 접합된 항-PRLR 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하는 항체-방사성핵종 접합체(ARC)를 포함한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "항체"란 용어는 특정한 항원(예를 들어 PRLR)에 특이적으로 결합하거나 또는 반응하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 임의의 항원-결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. "항체"란 용어는 디설파이드 결합에 의해 상호-연결되는 4개의 폴리펩타이드 쇄, 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 면역글로불린 분자뿐만 아니라 이들의 다량체(예를 들어 IgM)를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 발명에서 HCVR 또는 VH라 약기함) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 발명에서 LCVR 또는 VL이라 약기함) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인(CL1)을 포함한다. 상기 VH 및 VL 영역을, 상보성 결정 영역(CDR)이라 칭하는 고가변성 영역들로 추가로 세분할 수 있으며, 이들 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 칭하는, 보다 보존된 영역들과 함께 산재되어 있다. 각각의 VH 및 VL은 하기의 순서로 아미노-말단에서부터 카복시-말단으로 배열되는 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 실시태양에서, 상기 항-PRLR 항체(또는 그의 항원-결합 부분)의 FR은 인간 생식세포 서열과 동일하거나 또는 천연으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 공통 서열은 2개 이상의 CDR의 병행 분석에 근거하여 한정될 수 있다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "항체"란 용어는 완전 항체 분자의 항원-결합 단편을 또한 포함한다. 본 발명에 사용되는 바와 같은, 항체의 "항원-결합 부분", 항체의 "항원-결합 단편" 등의 용어는 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 천연의, 효소에 의해 수득될 수 있는 합성 또는 유전 공학 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 예를 들어 임의의 적합한 표준 기법, 예를 들어 단백질 분해 절단 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함한 재조합 유전 공학 기법을 사용하여 완전 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 상기와 같은 DNA는 공지되어 있고/있거나 예를 들어 상업적인 출처, DNA 라이브러리(예를 들어 파지-항체 라이브러리 포함)로부터 쉽게 입수될 수 있거나, 또는 합성될 수 있다. 상기 DNA를 서열분석하고, 예를 들어 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 배열로 배열하거나 또는 코돈을 도입시키거나, 시스테인 잔기를 생성시키거나, 아미노산을 변형시키거나, 부가하거나 또는 결실시키는 등을 위해서 화학적으로 또는 분자 생물학 기법을 사용하여 조작할 수 있다.
항원-결합 단편의 비제한적인 예는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 고가변성 영역을 모방하는 아미노산 잔기들로 이루어지는 최소 인식 단위(예를 들어 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들어 CDR3 펩티드), 또는 한정된 FR3-CDR3-FR4 펩티드를 포함한다. 다른 조작된 분자들, 예를 들어 도메인-특이성 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메릭 항체, CDR-이식된 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들어 1가 나노바디, 2가 나노바디 등), 작은 모듈 면역약제(SMIP) 및 샤크 가변성 IgNAR 도메인이 또한 본 발명에 사용된 바와 같은 "항원-결합 부분"이란 표현 내에 포함된다.
항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 상기 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성을 가질 수 있으며 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나 또는 상기 서열과 프레임 안에 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 결합된 VH 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, 상기 VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치가 정해질 수 있다. 예를 들어, 상기 가변 영역은 이량체성이며 VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 함유할 수 있다. 한편으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
몇몇 실시태양에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유적으로 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인, 예시적인 배열은 (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (V) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL을 포함한다. 상기 나열된 예시적인 배열 중 임의의 배열을 포함한 가변 및 불변 도메인의 임의의 배열에서, 상기 가변 및 불변 도메인을 서로 직접 연결시키거나 또는 전체 또는 부분적인 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결시킬 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩티드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인들 사이에 가요성 또는 반-가요성 결합을 생성시키는 적어도 2개(예를 들어 5, 10, 15, 20, 40, 60개 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 더욱이, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로 및/또는 하나 이상의 단량체성 VH 또는 VL 도메인(예를 들어 디설파이드 결합(들)에 의해)과 비-공유 결합으로 상기 나열된 가변 및 불변 도메인 배열 중 임의의 배열의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 다른 다량체)를 포함할 수 있다.
완전 항체 분자에 관하여, 항원-결합 단편은 단일특이성 또는 다중특이성(예를 들어 이중특이성)일 수 있다. 항체의 다중특이성 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기에서 각 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 발명에 개시된 예시적인 이중특이성 항체 포맷을 포함한 임의의 다중특이성 항체 포맷을 당해 분야에서 입수할 수 있는 통상적인 기법을 사용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 단편과 관련하여 사용하기 위해 적합화시킬 수 있다.
본 발명의 항체는 보체-의존성 세포독성(CDC) 또는 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 통해 기능할 수 있다. "보체-의존성 세포독성"(CDC)은 보체의 존재하에서 본 발명의 항체에 의한 항원-발현 세포의 용해를 지칭한다. "항체-의존성 세포-매개된 세포독성"(ADCC)은 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적인 세포독성 세포(예를 들어 천연 살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포상의 결합된 항체를 인식하고 이에 의해 상기 표적 세포의 용해를 유도하는 세포-매개된 반응을 지칭한다. CDC 및 ADCC를, 당해 분야에 충분히 공지되고 입수할 수 있는 분석들을 사용하여 측정할 수 있다(예를 들어 미국특허 제 5,500,362 호 및 미국특허 제 5,821,337 호, 및 문헌[Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656]을 참조하시오). 항체의 불변 영역은, 항체가 보체를 고정시키고 세포-의존성 세포독성을 매개하는 능력에 있어서 중요하다. 따라서, 항체의 아이소타입을 상기 항체가 세포독성을 매개하는데 바람직할 수 있는지의 여부를 근거로 선택할 수 있다.
본 발명의 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 항-PRLR 항체는 인간 항체이다. 본 발명에 사용되는 바와 같은 "인간 항체"란 용어는 인간 생식세포 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함함을 의미한다. 본 발명의 인간 항체는 예를 들어 CDR 및 특히 CDR3에서 인간 생식세포 면역글로불린 서열(예를 들어 시험관내에서 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이에 의해서 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해서 도입된 돌연변이)에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수도 있다. 그러나, 본 발명에 사용되는 바와 같은 "인간 항체"란 용어는 또 다른 포유동물 종, 예를 들어 마우스의 생식세포로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열상에 이식된 항체들을 포함함을 의미하지 않는다.
본 발명의 항체는 일부 실시태양에서 재조합 인간 항체일 수 있다. 본 발명에 사용되는 바와 같은 "재조합 인간 항체"란 용어는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 모든 인간 항체, 예를 들어 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체(하기에 추가로 개시됨), 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 개시됨), 인간 면역글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉인 동물(예를 들어 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들어 문헌[Taylor et al.(1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295]을 참조하시오) 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열에의 연접(splicing)을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체를 포함함을 의미한다. 상기와 같은 재조합 인간 항체는 인간 생식세포 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 몇몇 실시태양에서, 상기와 같은 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이(또는 인간 Ig 서열에 트랜스제닉인 동물을 사용하는 경우, 생체내 체세포 돌연변이)되기 쉬우며 따라서 상기 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되었지만, 생체내에서 상기 인간 항체 생식세포 레퍼토리 내에 천연으로 존재하지 않을 수도 있는 서열이다.
인간 항체는 힌지 이종성과 관련된 2가지 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150 내지 160 kDa의 안정한 4쇄 구조물을 포함하며 여기에서 이량체들이 쇄간 중쇄 디설파이드 결합에 의해 함께 유지된다. 두 번째 형태에서, 상기 이량체는 쇄간 디설파이드 결합을 통해 연결되지 않으며 공유 결합된 경쇄 및 중쇄(절반-항체)로 구성된, 약 75 내지 80 kDa의 분자가 형성된다. 이들 형태는 친화성 정제후에 조차도 분리시키기가 대단히 어려웠다.
다양한 완전한 IgG 아이소타입에서 상기 두 번째 형태의 출현 빈도는, 비제한적으로 항체의 힌지 영역 아이소타입과 관련된 구조적 차이에 기인한다. 인간 IgG4 힌지의 힌지 영역 중 단일 아미노산 치환은 상기 두 번째 형태(문헌[Angal et al.(1993) Molecular Immunology 30:105])의 출현을 인간 IgG1 힌지를 사용하여 전형적으로 관찰되는 수준으로 현저하게 감소시킬 수 있다. 본 발명은, 예를 들어 생성시 목적하는 항체 형태의 수율을 개선시키기 위해서 바람직할 수 있는, 힌지, CH2 또는 CH3 영역에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체들을 포함한다.
본 발명의 항체는 단리된 항체일 수 있다. 본 발명에 사용되는 바와 같은 "단리된 항체"는 그의 천연 환경의 적어도 하나의 성분으로부터 식별 및 분리된 및/또는 회수된 항체를 의미한다. 예를 들어, 유기체의 적어도 하나의 성분으로부터, 또는 항체가 천연으로 존재하거나 자연적으로 생성되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 상기 항체가 본 발명의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합 세포내의 원위치 항체를 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계가 가해진 항체이다. 몇몇 실시태양에 따라, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수도 있다.
본 발명에 개시된 항-PRLR 항체는 상기 항체가 유래된 상응하는 생식세포 서열에 비해, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 중에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 상기와 같은 돌연변이는 본 발명에 개시된 아미노산 서열을 예를 들어 공개된 항체 서열 데이터베이스로부터 입수할 수 있는 생식세포 서열과 비교함으로써 쉽게 확인될 수 있다. 본 발명은 본 발명에 개시된 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 유래되는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기에서 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역내의 하나 이상의 아미노산을 상기 항체가 유래된 생식세포 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 또 다른 인간 생식세포 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 상응하는 생식세포 잔기(들)의 보존적인 아미노산 치환으로 돌연변이시킨다(상기와 같은 서열 변화를 본 발명에서 집합적으로 "생식세포 돌연변이"라 칭한다). 당해 분야의 통상적인 숙련가는 본 발명에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 출발하여 하나 이상의 개별적인 생식세포 돌연변이 또는 이들의 조합을 포함하는 다수의 항체 및 항원-결합 단편을 쉽게 생성시킬 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 상기 VH 및/또는 VL 도메인내 프레임워크 및/또는 CDR 잔기를 모두 상기 항체가 유래된 원래의 생식세포 서열에서 발견되는 잔기로 다시 돌연변이시킨다. 다른 실시태양에서, 단지 몇몇 잔기들만을, 예를 들어 FR1의 처음 8개 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기들만을, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3내에서 발견되는 돌연변이된 잔기들만을 상기 원래의 생식세포 서열로 다시 돌연변이시킨다. 다른 실시태양에서, 상기 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상을 상이한 생식세포 서열(즉 항체가 원래 유도된 생식세포 서열과 상이한 생식세포 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이시킨다. 더욱 또한, 본 발명의 항체는 상기 프레임워크 및/또는 CDR 영역내에 2개 이상의 생식세포 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있으며, 여기에서 몇몇 개별적인 잔기를 특정한 생식세포 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이시키는 반면, 원래의 생식세포 서열과 상이한 몇몇 다른 잔기들은 유지시키거나 또는 상이한 생식세포 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이시킨다. 하나 이상의 생식세포 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편이 수득되었으면, 이를 하나 이상의 목적하는 특성, 예를 들어 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 개선되거나 증대된 길항성 또는 작용성 생물학적 특성(상기 사례가 있을 수 있는 경우), 감소된 면역원성 등에 대해 쉽게 시험할 수 있다. 상기 일반적인 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편은 본 발명내에 포함된다.
본 발명은 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는, 본 발명에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 임의의 서열의 변체를 포함하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본 발명의 표 1에 제시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 임의의 서열에 비해, 예를 들어 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 갖는 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-PRLR 항체를 포함한다.
"에피토프"란 용어는 파라토프로서 공지된 항체 분자의 가변 영역 중의 특이적인 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원 결정인자를 지칭한다. 단일 항원은 하나 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체들이 하나의 항원상의 상이한 영역들에 결합할 수 있으며 상이한 생물학적 효과들을 가질 수 있다. 에피토프는 입체형태적이거나 선형일 수 있다. 입체형태적 에피토프는 선형 폴리펩티드 쇄의 상이한 분절로부터 공간적으로 나란히 놓인 아미노산들에 의해 생성된다. 선형 에피토프는 폴리펩티드 쇄 중의 인접한 아미노산 잔기들에 의해 생성되는 것이다. 몇몇 상황에서, 에피토프는 상기 항원상의 사카라이드, 포스포릴기 또는 설포닐기 부분을 포함할 수 있다.
"실질적인 일치성" 또는 "실질적으로 일치하는"이란 용어는 핵산 또는 그의 단편을 지칭하는 경우, 또 다른 핵산(또는 그의 상보성 가닥)과 적합한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실로 최적으로 정렬될 때, 하기에 개시되는 바와 같은 임의의 충분히-공지된 서열 일치성 연산, 예를 들어 FASTA, BLAST 또는 Gap에 의해 측정시, 상기 뉴클레오티드 염기의 적어도 약 95%, 및 보다 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99%로 뉴클레오티드 서열 일치성이 존재함을 가리킨다. 기준 핵산 분자에 대해 실질적인 일치성을 갖는 핵산 분자는 몇몇 예에서 상기 기준 핵산 분자에 의해 암호화되는 폴리펩티드와 동일하거나 또는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 암호화한다.
폴리펩티드에 적용시, "실질적인 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"이란 용어는 2개의 펩티드 서열이, 최적으로 정렬될 때, 예를 들어 디폴트 중단 가충치를 사용하여 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 적어도 95% 서열 일치성, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 98% 또는 99% 서열 일치성을 공유함을 의미한다. 바람직하게, 일치하지 않는 잔기 위치들은 보존적 아미노산 치환에 의해 상이하다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예를 들어 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄(R 기)를 갖는 또 다른 아미노산 잔기에 의해 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 2개 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 상이한 경우, 상기 서열 일치성 퍼센트 또는 유사성 정도를 상향 조절하여 상기 치환의 보존적 특징을 보정할 수 있다. 상기 조절을 수행하기 위한 수단들은 당해 분야의 숙련가들에게 충분히 공지되어 있다. 예를 들어 문헌[Pearson(1994) Methods Mol. Biol. 24:307-331]을 참조하시오. 유사한 화학적 특성을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 그룹의 예는 (1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; (2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 쓰레오닌; (3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라진 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파테이트 및 글루타메이트; 및 (7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 그룹은 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파테이트, 및 아스파라진-글루타민이다. 한편으로, 보존적 치환은 문헌[Gonnet et al.(1992) Science 256:1443-1445]에 개시된 PAM250 로그-우도 행렬에서 양수 값을 갖는 임의의 변화이다. "보통으로 보존적인" 치환은 상기 PAM250 로그-우도 행렬에서 비음수 값을 갖는 임의의 변화이다.
폴리펩티드에 대한 서열 유사성(이를 또한 서열 일치성이라고도 칭한다)을 전형적으로는 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정한다. 단백질 분석 소프트웨어는 보존적 아미노산 치환을 포함하여, 다양한 치환, 결실 및 다른 변형들로 지정된 유사성의 크기를 사용하여 유사한 서열들을 합치시킨다. 예를 들어, GCG 소프트웨어는 밀접하게 관련된 폴리펩티드들, 예를 들어 상이한 종의 유기체들로부터의 동종 폴리펩티드들간 또는 야생형 단백질과 그의 뮤테인간의 서열 상동성 또는 서열 일치성을 측정하기 위해 디폴트 매개변수와 함께 사용할 수 있는 Gap 및 Bestfit과 같은 프로그램들을 함유한다. 예를 들어 GCG 버전 6.1 폴리펩티드 서열을 또한, GCG 버전 6.1의 프로그램인, 디폴트 또는 권장 매개변수를 사용하는 FASTA를 사용하여 비교할 수 있다. FASTA(예를 들어 FASTA2 및 FAST3)는 조회 서열과 검색 서열간의 최상의 중복 영역의 정렬 및 서열 일치성 퍼센트를 제공한다(상기 문헌[Pearson(2000)]). 본 발명의 서열을 상이한 유기체로부터의 다수의 서열들을 함유하는 데이터베이스와 비교할 때 바람직한 또 다른 연산은 디폴트 매개변수를 사용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다. 예를 들어 문헌[Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410] 및 문헌[Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402]을 참조하시오.
pH-의존성 결합
본 발명은 pH-의존성 결합 특징을 갖는 항-PRLR 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항-PRLR 항체는 중성 pH에 비해 산성 pH에서 PRLR에 감소된 결합을 나타낼 수 있다. 한편으로, 본 발명의 항-PRLR 항체는 중성 pH에 비해 산성 pH에서 PRLR에 증대된 결합을 나타낼 수도 있다. "산성 pH"란 표현은 약 6.2 미만, 예를 들어 약 6.0, 5.95, 5.9, 5.85, 5.8, 5.75, 5.7, 5.65, 5.6, 5.55, 5.5, 5.45, 5.4, 5.35, 5.3, 5.25, 5.2, 5.15, 5.1, 5.05, 5.0 이하의 pH 값들을 포함한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "중성 pH"란 표현은 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 의미한다. "중성 pH"란 표현은 약 7.0, 7.05, 7.1, 7.15, 7.2, 7.25, 7.3, 7.35, 및 7.4의 pH 값을 포함한다.
몇몇 예에서 "중성 pH에 비해 산성 pH에서 PRLR에 감소된 결합"을 중성 pH에서 PRLR에의 항체 결합의 KD 값에 대한 산성 pH에서 PRLR에의 항체 결합의 KD 값의 비(또는 이와 역)에 의해 나타낸다. 예를 들어 항체 또는 그의 항원-결합 단편은, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 약 3.0 이상의 산성/중성 KD 비를 나타내는 경우 본 발명의 목적을 위해서 "중성 pH에 비해 산성 pH에서 PRLR에 감소된 결합"을 나타내는 것으로서 간주될 수 있다. 몇몇 예시적인 실시태양에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편에 대한 산성/중성 KD 비는 약 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 11.0, 11.5, 12.0, 12.5, 13.0, 13.5, 14.0, 14.5, 15.0, 20.0, 25.0, 30.0, 40.0, 50.0, 60.0, 70.0, 100.0 이상일 수 있다.
pH-의존성 결합 특징을 갖는 항체를, 예를 들어 중성 pH에 비해 산성 pH에서 특정 항원에의 감소된(또는 증대된) 결합에 대해 항체의 집단을 선별함으로써 수득할 수 있다. 추가로, 아미노산 수준에서 항원-결합 도메인의 변형은 pH-의존성 특징을 갖는 항체를 제공할 수 있다. 예를 들어, 항원-결합 도메인(예를 들어 CDR 내의)의 하나 이상의 아미노산을 히스티딘 잔기로 치환시킴으로써, 중성 pH에 비해 산성 pH에서 감소된 항원-결합을 갖는 항체를 수득할 수 있다.
Fc 변체를 포함하는 항- PRLR 항체
본 발명의 몇몇 실시태양에 따라, 예를 들어 중성 pH에 비해 산성 pH에서 FcRn 수용체에의 항체 결합을 증대시키거나 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-PRLR 항체를 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 상기 Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역에 돌연변이를 포함하는 항-PRLR 항체를 포함하며, 여기에서 상기 돌연변이(들)는 산성 환경에서(예를 들어 pH 범위가 약 5.5 내지 약 6.0인 엔도솜에서) FcRn에 대한 상기 Fc 도메인의 친화성을 증가시킨다. 상기와 같은 돌연변이는 동물에게 투여될 때 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다. 상기와 같은 Fc 변형의 비제한적인 예는 예를 들어 250번 위치에서의 변형(예를 들어 E 또는 Q); 250 및 428(예를 들어 L 또는 F); 252(예를 들어 L/Y/F/W 또는 T), 254(예를 들어 S 또는 T), 및 256(예를 들어 S/R/Q/E/D 또는 T); 또는 428 및/또는 433번 위치에서의 변형(예를 들어 H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434 (예를 들어 H/F 또는 Y); 또는 250 및/또는 428번 위치에서의 변형; 또는 307 또는 308(예를 들어 308F, V308F) 및 434번 위치에서의 변형을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 변형은 428L(예를 들어 M428L) 및 434S(예를 들어 N434S) 변형; 428L, 259I(예를 들어 V259I), 및 308F(예를 들어 V308F) 변형; 433K(예를 들어 H433K) 및 434(예를 들어 434Y) 변형; 252, 254, 및 256(예를 들어 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예를 들어 T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예를 들어 308F 또는 308P)을 포함한다.
예를 들어, 본 발명은 250Q 및 248L(예를 들어 T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예를 들어 M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예를 들어 M428L 및 N434S); 및 433K 및 434F(예를 들어 H433K 및 N434F)로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 돌연변이들 중 하나 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 상기 Fc 도메인 돌연변이, 및 본 발명에 개시된 항체 가변 도메인내의 다른 돌연변이들의 모든 가능한 조합은 본 발명의 범위 내에서 고려된다.
항체의 생물학적 특징
본 발명은 높은 친화성을 갖는 단량체성 인간 PRLR에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 25 ℃ 또는 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 4.0 nM 미만의 KD로 단량체성 인간 PRLR(예를 들어 hPRLR.mmh)에 결합하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM, 또는 약 300 pM 미만의 KD로 단량체성 인간 PRLR에 결합하는 항-PRLR 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 25 ℃ 또는 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 5분 초과의 해리 반감기(t½)로 단량체성 인간 PRLR(예를 들어 hPRLR.mmh)에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 5분 초과, 약 6분 초과, 약 8분 초과, 약 10분 초과, 약 12분 초과, 약 14분 초과, 약 16분 초과, 약 18분 초과, 약 20분 초과, 약 30분 초과, 약 40분 초과, 또는 그 이상의 t½로 단량체성 인간 PRLR에 결합하는 항-PRLR 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 높은 친화성으로 이량체성 인간 PRLR(예를 들어 hPRLR.mFc)에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 25 ℃ 또는 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 250 pM 미만의 KD로 이량체성 인간 PRLR에 결합하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 250 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 180 pM 미만, 약 160 pM 미만, 약 140 pM 미만, 약 120 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 또는 약 60 pM 미만의 KD로 이량체성 인간 PRLR에 결합하는 항-PRLR 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 25 ℃ 또는 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 55분 초과의 해리 반감기(t½)로 이량체성 인간 PRLR(예를 들어 hPRLR.mFc)에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해, 예를 들어 본 발명의 실시예 3에 개시된 바와 같은 분석 포맷 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 55분 초과, 약 60분 초과, 약 65분 초과, 약 70분 초과, 약 75분 초과, 약 80분 초과, 약 85분 초과, 약 90분 초과, 약 95분 초과, 약 100분 초과, 약 120분 초과, 약 140분 초과, 약 160분 초과, 또는 그 이상의 t½로 이량체성 인간 PRLR에 결합하는 항-PRLR 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 PRLR에 결합하고 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 프로락틴 신호전달 차단 분석, 예를 들어 본 발명의 실시예 5에 정의된 바와 같은 분석 포맷, 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 1.3 nM 미만의 IC50으로, 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라, 프로락틴 신호전달 차단 분석, 예를 들어 본 발명의 실시예 5에 정의된 바와 같은 분석 포맷, 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정시, 약 1.3 nM 미만, 약 1.2 nM 미만, 약 1.0 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 20 pM 미만의 IC50으로, 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하는 항-PRLR 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 PRLR에 결합하지만 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하지 않는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 프로락틴 신호전달 차단 분석, 예를 들어 본 발명의 실시예 5에서 정의된 바와 같은 분석 또는 실질적으로 유사한 분석에서 시험시, 상기 항체가 단지 무시할 정도의 차단 활성을 나타내거나 차단 활성을 나타내지 않는 경우, 프로락틴-매개된 신호전달을 "차단하지 않는다". 몇몇 실시태양에 따라, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 프로락틴 신호전달 차단 분석, 예를 들어 본 발명의 실시예 5에서 정의된 바와 같은 분석 또는 실질적으로 유사한 분석에서 시험시, 상기 항체가 약 10 nM 초과, 또는 약 100 nM 초과의 IC50 값을 나타내는 경우 프로락틴-매개된 신호전달을 "차단하지 않는다".
본 발명의 항체는 상기 언급한 생물학적 특징들 중 하나 이상, 또는 이들의 임의의 조합을 가질 수 있다. 본 발명의 항체의 생물학적 특징들의 상기 목록은 총망라된 것을 의미하지 않는다. 본 발명의 항체의 다른 생물학적 특징들은 본 발명의 실행 실시예를 포함하여 본 개시의 재검토로부터 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 자명할 것이다.
항체-약물 접합체( ADC )
본 발명은 치료학적 부분, 예를 들어 세포독성제, 화학요법 약물, 또는 방사성 동위원소에 접합된 항-PRLR 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)를 제공한다.
세포독성제는 세포의 성장, 생육력 또는 번식에 유해한 임의의 작용제를 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따라 항-PRLR 항체에 접합될 수 있는 적합한 세포독성제 및 화학요법제의 예는 예를 들어 1-(2-클로로에틸)-1,2-디메탄설포닐 하이드라지드, 1,8-디하이드록시-비사이클로[7.3.1]트리데카-4,9-디엔-2,6-디인-13-온, 1-데하이드로테스토스테론, 5-플루오로우라실, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 9-아미노 캄토테신, 액티노마이신 D, 아마니틴, 아미노프테린, 안구이딘, 안트라사이클린, 안트라마이신(AMC), 아우리스타틴, 블레오마이신, 부설판, 부티르산, 칼리키아미신, 캄토테신, 카르미노마이신, 카르머스틴, 세마도틴, 시스플라틴, 콜히친, 콤브레타스타틴, 사이클로포스파미드, 시타라빈, 사이토칼라신 B, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데카바진, 디아세톡시펜틸독소루비신, 디브로모만니톨, 디하이드록시 안트라신 디온, 디소라졸, 돌라스타틴(예를 들어 돌라스타틴 10), 독소루비신, 듀오카르마이신, 에키노마이신, 엘류쎄로빈, 에메틴, 에포틸론, 에스페라미신, 에스트라머스틴, 에티디움 브로마이드, 에토포시드, 플루오로우라실, 젤다나마이신, 그라미시딘 D, 글루코코르티코이드, 이리노테칸, 키네신 스핀들 단백질(KSP) 억제제, 렙토마이신, 류로신, 리도카인, 로머스틴(CCNU), 메이탄시노이드, 메클로르에타민, 멜팔란, 머캅토퓨린, 메토프테린, 메토트렉세이트, 미쓰라마이신, 미토마이신, 미톡산트론, N8-아세틸 스페르미딘, 포도필로톡신, 프로카인, 프로프라놀롤, 프테리딘, 퓨로마이신, 피롤로벤조디아제핀(PBD), 리족신, 스트렙토조토신, 탈리소마이신, 탁솔, 테노포시드, 테트라카인, 티오에파 클로람부실, 토메이마이신, 토포테칸, 투불리신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 및 상기 중 임의의 것의 유도체를 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라, 항-PRLR 항체에 접합되는 세포독성제는 메이탄시노이드, 예를 들어 DM1 또는 DM4, 토메이마이신 유도체, 또는 돌라스타틴 유도체이다. 몇몇 실시태양에 따라, 항-PRLR 항체에 접합되는 세포독성제는 아우리스타틴, 예를 들어 MMAE, MMAF, 또는 그의 유도체이다. 당해 분야에 공지된 다른 세포독성제, 예를 들어 단백질 독소, 예를 들어 리신, 클로스트리디움 디피실레 독소, 슈도모나스 외독소, 리신, 디프테리아 독소, 보툴리눔 독소, 브리오딘, 사포린, 미국자리공 독소(즉 피토라카톡신 및 피토락시제닌), 및 문헌[Sapra et al., Pharmacol. & Therapeutics, 2013, 138:452-469]에 제시된 바와 같은 것들이 본 발명의 범위내에서 고려된다.
본 발명은 또한 하나 이상의 방사성핵종에 접합된 항-PRLR 항체를 포함하는 항체-방사성핵종 접합체(ARC)를 포함한다. 본 발명의 상기 태양과 관련하여 사용될 수 있는 예시적인 방사성핵종은 비제한적으로 예를 들어 225Ac, 212Bi, 213Bi, 131I, 186Re, 227Th, 222Rn, 223Ra, 224Ra, 및 90Y를 포함한다.
본 발명의 몇몇 실시태양에서, 링커 분자를 통해 세포독성제(상기 개시된 세포독성제들 중 임의의 것)에 접합된 항-PRLR을 포함하는 ADC를 제공한다. 당해 분야에 공지된 임의의 링커 분자 또는 링커 기술을 사용하여 본 발명의 ADC를 생성시키거나 구성할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 상기 링커는 절단성 링커이다. 다른 실시태양에 따라, 상기 링커는 비-절단성 링커이다. 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 예시적인 링커는 예를 들어 MC(6-말레이미도카프로일), MP(말레이미도프로파노일), val-cit(발린-시트룰린), val-ala(발린-알라닌), 프로테아제-절단성 링커 중의 디펩티드 부위, ala-phe(알라닌-페닐알라닌), 프로테아제-절단성 링커 중의 디펩티드 부위, PAB(p-아미노벤질옥시카보닐), SPP(N-숙신이미딜 4-(2-피리딜티오)펜타노에이트), SMCC(N-숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1 카복실레이트), SIAB(N-숙신이미딜 (4-요오도-아세틸)아미노벤조에이트), 및 이들의 변체 및 조합을 포함하거나 또는 이들로 이루어지는 링커들을 포함한다. 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 링커의 추가적인 예는 예를 들어 미국특허 제 7,754,681 호 및 문헌[Ducry, Bioconjugate Chem., 2010, 27:5-13] 및 상기 문헌 중에 인용된 참고문헌들에 개시되어 있다.
본 발명은 링커가 항-PRLR 항체 또는 항원-결합 분자를 상기 항체 또는 항원-결합 분자내 특정 아미노산에서의 부착을 통해 약물 또는 세포독소에 연결하는 ADC를 포함한다. 본 발명의 상기 태양과 관련하여 사용될 수 있는 예시적인 아미노산 부착은 예를 들어 리신(예를 들어 미국특허 제 5,208,020 호; US 2010/0129314; 문헌[Hollander et al. , Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361]; WO 2005/089808; 미국특허 제 5,714,586 호; US 2013/0101546; 및 US 2012/0585592를 참조하시오), 시스테인(예를 들어 US 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546; 및 미국특허 제 7,750,116 호를 참조하시오), 셀레노시스테인(예를 들어 WO 2008/122039; 및 문헌[Hofer ef al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 705:12451-12456]을 참조하시오), 포르밀 글리신(예를 들어 문헌[Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322]; [Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51], 및 [Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067]을 참조하시오), 비-천연 아미노산(예를 들어 WO 2013/068874, 및 WO 2012/166559를 참조하시오), 및 산성 아미노산(예를 들어 WO 2012/05982를 참조하시오)을 포함한다. 링커를 또한 탄수화물(예를 들어 US 2008/0305497, WO 2014/065661, 및 문헌[Ryan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 73: 127-130]을 참조하시오) 및 디설파이드 링커(예를 들어 WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611, 및 문헌[Shaunak et al., Nat. Chem. Biol., 2006, 2:312-313]을 참조하시오)에의 부착을 통해 항원-결합 단백질에 접합시킬 수 있다.
몇몇 실시태양에 따라, 본 발명은, 본 발명에 개시된 바와 같은 항-PRLR 항체가 2014년 3월 14일자로 출원된 국제 특허 출원 PCT/US14/29757에 제시된 바와 같은 링커-약물 조성물(예를 들어 화합물 "7", 또한 본 발명에서 "M0026"이라 칭한다)에 접합된 ADC를 제공한다.
펩티드, 폴리펩티드 또는 다른 거대분자에 화학적 부분을 접합시키는 것에 대해 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 본 발명과 관련하여 사용하여 본 발명에 개시된 바와 같은 항-PRLR ADC를 제조할 수 있다. 링커를 통한 항체-약물 접합의 예시적인 방법은 본 발명의 실시예 6에 제시되어 있다. 상기 예시적인 방법에 대한 변형들은 당해 분야의 통상적인 숙련가들에 의해 이해될 것이며 본 발명의 범위내에서 고려된다.
낮은 수준의 PRLR을 발현하는 세포에의 ADC의 표적화
놀랍게도 본 발명자들은 세포독성제에 접합된 항-PRLR 항체를 포함하는 ADC가 비교적 낮은 수준의 세포 표면 PRLR을 발현하는 세포를 특이적으로 표적화하고 살해할 수 있음을 발견하였다. 예를 들어, 본 발명의 실시예 7에서, DM1에 접합된 항-PRLR 항체 H1H6953N을 포함하는 ADC가 1.3 nM의 IC50으로 T47D 세포(배경보다 단지 12X로 PRLR을 발현한다)의 성장을 억제할 수 있었고 78% 살해를 나타내었음을 입증한다. 대조적으로, 다른 종양-관련된 항원, 예를 들어 ErbB2에 대한 ADC는 전형적으로 필적하는 살해 효능을 위해서 세포상의 표적 항원의 훨씬 더 높은 발현 수준을 요한다. 예를 들어 나노몰 이하의 IC50 범위의 세포 살해가 항-ErbB2-DM1 ADC에 의해서 단지 배경보다 약 200X 내지 약 400X를 초과로 높은 수준으로 ErbB2를 발현하는 세포에 대해서 획득되었다(예를 들어 본 발명의 표 14 내지 17을 참조하시오). 비교적 낮은 수준의 종양-관련된 항원, 예를 들어 PRLR을 발현하는 종양 세포를 살해하는 능력은, 본 발명의 항-PRLR ADC가 다른 종양 항원, 예를 들어 ErbB2를 표적화하는 ADC에 대해서 요구되는 경우보다 더 낮은 용량 및/또는 더 적은 투여 빈도의 현저한 치료 이점을 제공할 수 있음을 의미한다.
따라서, 본 발명은 세포독성제에 접합된 인간 PRLR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)를 제공하며, 여기에서 상기 ADC는 낮은 수준의 PRLR을 발현하는 세포(예를 들어 종양 세포)를 유효하게 살해한다. 관련된 실시태양에서, 본 발명은 낮은 수준의 PRLR을 발현하는 세포를 유효하게 살해하는 방법을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 상기 세포를 세포독성제에 접합된 항-PRLR 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)와 접촉시킴을 포함한다. "세포와 접촉시킴"은 예를 들어 항-PRLR ADC를 필요한 환자에게 투여함으로써 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있으며, 여기에서 상기 투여는 상기 ADC가 PRLR을 발현하는 세포와 접촉되게 한다.
본 발명의 범위내에서 구상되는 몇몇 상황에 따라, "낮은 수준의 PRLR"은 배경보다 약 30배 미만으로 높은 발현 수준을 의미한다. 몇몇 실시태양에 따라, 배경보다 약 30배, 25배, 20배, 18배, 16배, 14배, 12배, 10배, 8배 미만 또는 그 이하로 높은 발현 수준으로 PRLR을 발현하는 세포를 유효하게 살해하는 항-PRLR ADC를 제공한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "배경"이란 용어는 세포를 아이소타입 대조용 항체(즉 PRLR에 특이적이지 않은)로 처리할 때 생성되는 (비-특이적인) 신호를 의미한다.
몇몇 다른 상황에서, "낮은 수준의 PRLR"을 세포당 PRLR 분자의 수에 의해 나타낼 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 사용되는 바와 같이, "낮은 수준"의 PRLR을 발현하는 세포는 세포당 약 100만 카피 미만의 PRLR을 발현한다. 특정한 실시태양에서, "낮은 수준"의 PRLR은 세포당 약 900,000 카피 미만, 약 800,000 카피 미만, 약 700,000 카피 미만, 약 600,000 카피 미만, 약 500,000 카피 미만, 약 400,000 카피 미만, 약 300,000 카피 미만, 약 200,000 카피 미만, 약 100,000 카피 미만, 약 90,000 카피 미만, 약 80,000 카피 미만, 약 70,000 카피 미만, 약 60,000 카피 미만, 약 50,000 카피 미만, 약 40,000 카피 미만, 약 30,000 카피 미만, 약 20,000 카피 미만, 또는 약 10,000 카피 미만의 PRLR을 의미한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "유효 살해"는 ADC가 종양 세포 살해 분석, 예를 들어 본 발명의 실시예 7에서 정의된 분석 또는 실질적으로 유사한 분석에서 약 20 nM 미만, 또는 약 1 nM 미만(예를 들어 약 0.9 nM 미만, 약 0.8 nM 미만, 약 0.7 nM 미만, 약 0.6 nM 미만, 약 0.5 nM 미만, 약 0.4 nM 미만, 또는 약 0.3 nM 미만)의 IC50을 나타냄을 의미한다. 본 발명의 상기 태양에 따라, 상기 ADC의 항-PRLR 항체 성분은 본 발명의 표 1에 제시된 바와 같은 CDR 또는 HCVR/LCVR 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 포함하는 항-PRLR 항체를 포함하는 임의의 항-PRLR 항체일 수 있다. 추가로, 상기 ADC의 세포독성제 성분은 임의의 세포독성제, 예를 들어 DM1, 또는 본 발명에서 언급된 임의의 다른 세포독성제일 수 있다.
본 발명의 ADC는 PRLR+ 종양-함유 동물에서 종양 성장을 억제하고/하거나 종양 크기를 감소시킬 수 있다. 예를 들어 본 발명에서 실시예 8에 나타낸 바와 같이, 항-PRLR-DM1 ADC는 PRLR+ 유방암 이종이식편을 갖는 마우스에서 종양을 검출할 수 없는 수준으로 감소시키는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명은 항-PRLR 항체 및 상기와 같은 항체를 포함하는 ADC를 포함하며, 여기에서 상기 항체 또는 ADC는 PRLR+ 종양-함유 동물에 투여시(예를 들어 1주일에 약 1회의 빈도, 및 약 1 내지 15 ㎎/㎏의 용량으로), 투여후 제52일까지 또는 더 일찍 종양 성장을 억제하고/하거나 종양 크기를 감소시킨다(예를 들어 100% 이상의 종양 성장 억제).
I 부류 사이토카인 수용체 표적화
PRLR은 I 부류 사이토카인 수용체 과에 속한다. 상기에 설명되고 본 발명의 실행 실시예에서 입증된 바와 같이, 뜻밖에도 항-PRLR 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)가 낮은 수준의 PRLR을 발현하는 세포를 유효하게 표적화하고 살해할 수 있음을 발견하였다(본 발명의 실시예 7을 참조하시오). 더욱 또한, 다른 I 부류 사이토카인 수용체(IL-4R 및 IL-6R)에 대한 ADC가 또한 비교적 낮은 수준의 표적 항원을 발현하는 세포주를 효능있게 살해할 수 있는 것으로 나타났다(본 발명의 실시예 9를 참조하시오). 이러한 특성은, 유효한 세포 살해가 높은 표적 발현을 요하는 다른 세포 표면-발현된 단백질, 예를 들어 ErbB2에 대한 ADC와 대조적이다. 더욱이, 놀랍게도 항-PRLR 항체가 종양 세포(예를 들어 T47D 종양 세포)상에서 항-Her2 항체보다 실질적으로 더 빨리 내면화되며 상기 특성은 세포 표면 Her2에 비해 세포 표면 PRLR의 보다 빠른 내면화 및 분해와 상관됨을 또한 발견하였다.
본 발명에 제시된 결과들에 비추어, 본 발명자들은 낮은 수준의 세포 표면 항원을 발현하는 세포를 표적화하고 살해하는 능력이 일반적으로 I 부류 사이토카인 수용체 및 특히 빠르게 내면화되는 I 부류 사이토카인 수용체에 대해 ADC에 의해 공유되는 공통의 특성일 수 있음을 착안하였다. 따라서, 본 발명은 I 부류 사이토카인 수용체를 표적화하는(예를 들어 I 부류 사이토카인 수용체를 빠르게 내면화하는) 방법, 및 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포, 예를 들어 낮은 수준의 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포를 살해하는 방법을 포함한다.
본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포를 상기 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC와 접촉시킴을 포함한다. 몇몇 실시태양에 따라, 상기 표적화되는 세포는 낮은 수준(본 발명의 어딘가에 정의된 바와 같은 발현 수준)의 I 부류 사이토카인 수용체 및/또는 빠르게 내면화되고 분해되는(예를 들어 Her2와 같은 기준 세포 표면 분자보다 더 빨리 내면화되는) I 부류 사이토카인 수용체를 발현한다. 또한 세포독성제에 접합된, I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC가 본 발명 내에 포함된다. 본 발명의 어딘가에 개시된 세포독성제, 링커 및/또는 ADC-관련된 기술 중 임의의 것을 본 발명의 상기 태양과 관련하여 사용할 수 있다.
본 발명에 사용되는 바와 같이 "I 부류 사이토카인 수용체"(또한 때때로 "I형 사이토카인 수용체"라 칭함)는 4개의 알파-나선 가닥을 갖는 사이토카인을 인식하고 이에 반응하는 세포 표면상에서 발현되는 막관통 수용체를 의미한다. 하기에 설명하는 바와 같이, I 부류 사이토카인 수용체는 이종이량체성 또는 동종이량체성일 수 있다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "I 부류 사이토카인 수용체"란 용어는 이종이량체성 및 동종이량체성 수용체 모두를 포함한다.
이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체는 사이토카인-특이성 쇄 및 "공통 쇄"로 이루어진다. 따라서, 상기와 같은 이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체를 신호전달을 위해 상기 수용체에 의해 사용되는 공통 쇄의 유형을 근거로 분류할 수 있다. 이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체의 예시적인 범주는 (i) 공통 감마쇄-함유 이종이량체성 수용체, 예를 들어 IL-2R, IL-4R, IL-7R, IL-9R, IL-13R 및 IL-15R; (ii) 공통 베타쇄-함유 이종이량체성 수용체, 예를 들어 GM-CSF 수용체, IL-3R 및 IL-5R; 및 (iii) gp130-함유 이종이량체성 수용체, 예를 들어 IL-6R, IL-11R, CNTF 수용체, 백혈병 억제 인자(LIF) 수용체, 온코스타틴 M(OSM) 수용체, 및 IL-12 수용체를 포함한다.
동종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체는 성장 호르몬(GH) 수용체, 에리쓰로포이에틴(EPO) 수용체, G-CSF 수용체, 렙틴 수용체, 및 PRLR을 포함한다.
본 발명의 상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 ADC는 이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 본 발명의 상기 태양의 다른 실시태양에 따라, 상기 ADC는 동종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 발명은 낮은 수준의 이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포를 살해하는 방법을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 낮은 수준의 이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포를 상기 이종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC와 접촉시킴을 포함한다.
한편으로, 본 발명은 낮은 수준의 동종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포를 살해하는 방법을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 낮은 수준의 동종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포를 상기 동종이량체성 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC와 접촉시킴을 포함한다.
에피토프 지도화 및 관련 기술
본 발명의 항체가 결합하는 에피토프는 PRLR 단백질의 3개 이상(예를 들어 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상) 아미노산의 단일의 연속적인 서열로 이루어질 수 있다. 한편으로, 상기 에피토프는 PRLR의 다수의 비-연속적인 아미노산(또는 아미노산 서열)으로 이루어질 수도 있다. 일부 실시태양에서, 상기 에피토프는 PRLR의 프로락틴-결합 도메인상에 또는 상기 도메인 부근에 위치한다. 다른 실시태양에서, 상기 에피토프는 PRLR의 프로락틴-결합 도메인의 밖에, 예를 들어 항체가 상기와 같은 에피토프에 결합시 PRLR에의 프로락틴 결합을 방해하지 않는 상기 PRLR의 표면상의 위치에 위치한다.
당해 분야의 통상적인 숙련가에게 공지된 다양한 기법들을 사용하여 항체가 폴리펩티드 또는 단백질내의 "하나 이상의 아미노산과 상호작용"하는지의 여부를 측정할 수 있다. 예시적인 기법은 예를 들어 통상적인 교차-차단 분석, 예를 들어 문헌[Antibodies, Harlow and Lane, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY]에 개시된 것, 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩티드 블럿 분석(문헌[Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463]), 및 펩티드 절단 분석을 포함한다. 또한, 항원의 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 화학적 변형과 같은 방법들을 사용할 수 있다(문헌[Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496]). 항체와 상호작용하는 폴리펩티드내 아미노산을 식별하기 위해 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량분석법에 의해 탐지되는 수소/중수소 교환이다. 일반적으로, 상기 수소/중수소 교환 방법은 관심 단백질을 중수소-표지한 다음 항체를 상기 중수소-표지된 단백질에 결합시킴을 포함한다. 이어서, 상기 단백질/항체 복합체를 물로 이동시켜, 상기 항체에 의해 보호된 잔기(중수소-표지된 채로 남아있다)를 제외한 모든 잔기에서 수소-중수소 교환이 일어나게 한다. 상기 항체의 해리 후에, 표적 단백질에 프로테아제 절단 및 질량 분석법을 수행하고, 이에 의해 상기 항체와 상호작용하는 특이적인 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기들을 밝혀낸다. 예를 들어 문헌[Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259]; [Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A]을 참조하시오.
본 발명은 또한 본 발명에 개시된 특정한 예시적인 항체들(예를 들어 본 발명의 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 포함하는 항체) 중 임의의 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 마찬가지로, 본 발명은 또한 본 발명에 개시된 특정한 예시적인 항체들(예를 들어 본 발명의 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 포함하는 항체) 중 임의의 항체와 PRLR에의 결합에 대해 경쟁하는 항-PRLR 항체를 포함한다.
당해 분야에 공지되고 본 발명에 예시된 통상적인 방법을 사용함으로써 항체가 기준 항-PRLR 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지, 또는 상기 항체와 결합에 대해서 경쟁하는지를 쉽게 측정할 수 있다. 예를 들어, 시험 항체가 본 발명의 기준 항-PRLR 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 측정하기 위해서, 상기 기준 항체를 PRLR 단백질에 결합되게 한다. 이어서, 상기 PRLR 분자에 결합하는 시험 항체의 능력을 평가한다. 상기 시험 항체가 상기 기준 항-PRLR 항체의 포화 결합에 이어서 PRLR에 결합할 수 있는 경우, 상기 시험 항체는 상기 기준 항-PRLR 항체와 상이한 에피토프에 결합한다는 결론을 내릴 수 있다. 다른 한편으로, 상기 시험 항체가 상기 기준 항-PRLR 항체의 포화 결합에 이어서 PRLR에 결합할 수 없는 경우, 상기 시험 항체는 본 발명의 기준 항-PRLR 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 이어서 추가의 통상적인 실험(예를 들어 펩티드 돌연변이 및 결합 분석)을 수행하여 상기 관찰된 시험 항체의 결합 결여가 실제로는 상기 기준 항체와 동일한 에피토프에의 결합에 기인한 것인지, 또는 입체 차단(또는 또 다른 현상)이 관찰된 결합의 결여에 원인인 것인지를 확인할 수 있다. 상기 종류의 실험을 ELISA, RIA, 비아코어(Biacore), 유식 세포측정 또는 당해 분야에서 이용 가능한 임의의 다른 정량적인 또는 정성적인 항체-결합 분석을 사용하여 수행할 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시태양에 따라, 2개의 항체는, 하나의 항체의 예를 들어 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100-배 과잉이 다른 항체의 결합을, 경쟁 결합 분석(예를 들어 문헌[Junghans et al., Cancer Res. 1990:50:1495-1502]을 참조하시오)에서 측정된 바와 같이 적어도 50%, 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%까지 억제하는 경우, 동일한(또는 중복) 에피토프에 결합한다. 한편으로, 2개의 항체는, 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원 중의 필수적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 간주된다. 2개의 항체는, 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 아미노산 돌연변이의 단지 하나의 부분집합만이 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 "중복 에피토프"를 갖는 것으로 간주된다.
항체가 기준 항-PRLR 항체와 결합에 대해 경쟁(또는 결합에 대해 교차-경쟁)하는지를 측정하기 위해서, 상술한 결합 방법을 2가지 방향으로 수행한다: 첫 번째 방향에서, 상기 기준 항체를 포화 조건하에서 PRLR 단백질에 결합되게 한 다음 상기 PRLR에 대한 시험 항체의 결합을 평가한다. 두 번째 방향에서, 상기 시험 항체를 포화 조건하에서 PRLR 분자에 결합되게 한 다음 상기 PRLR 분자에 대한 기준 항체의 결합을 평가한다. 상기 두 방향 모두에서, 오직 첫 번째(포화) 항체만이 상기 PRLR 분자에 결합할 수 있는 경우, 상기 시험 항체 및 기준 항체는 PRLR에의 결합에 대해서 경쟁한다는 결론이 내려진다. 당해 분야의 통상적인 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 기준 항체와 결합에 대해서 경쟁하는 항체는 상기 기준 항체와 동일한 에피토프에 반드시 결합할 수 있는 것은 아니고, 중복되는 또는 인접한 에피토프와 결합함으로써 상기 기준 항체의 결합을 입체적으로 차단할 수도 있다.
인간 항체의 제조
본 발명의 항-PRLR 항체는 완전한 인간 항체일 수 있다. 완전한 인간 단클론 항체를 포함하여, 단클론 항체를 생성시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 임의의 상기와 같은 공지된 방법을 본 발명과 관련하여 사용하여 인간 PRLR에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조할 수 있다.
예를 들어 벨로시뮨(VELOCIMMUNE)(상표) 기술, 또는 완전한 인간 단클론 항체를 생성시키기 위한 임의의 다른 유사한 공지된 방법을 사용하여 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는, PRLR에 대한 고 친화성 키메릭 항체를 초기에 단리한다. 하기의 실험 섹션에서와 같이, 상기 항체를 친화성, 리간드 차단 활성, 선택성, 에피토프 등을 포함한 바람직한 특징들에 대해 특징화하고 선택한다. 필요한 경우, 마우스 불변 영역을 목적하는 인간 불변 영역, 예를 들어 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4로 치환시켜 완전한 인간 항-PRLR 항체를 생성시킨다. 상기 선택되는 불변 영역은 특정한 용도에 따라 변할 수 있지만, 고 친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특징은 가변 영역 중에 존재한다. 몇몇 예에서, 완전한 인간 항-PRLR 항체를 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리한다.
생물학적 등가물
본 발명의 항-PRLR 항체 및 항체 단편은, 상기 개시된 항체의 아미노산 서열들로부터 다양하지만 인간 PRLR에 결합하는 능력은 유지하는 아미노산 서열을 갖는 단백질들을 포함한다. 상기와 같은 변형 항체 및 항체 단편은 모 서열과 비교할 때 아미노산의 하나 이상의 부가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 상기 개시된 항체와 필수적으로 동등한 생물 활성을 나타낸다. 마찬가지로, 본 발명의 항-PRLR 항체-암호화 DNA 서열은 상기 개시된 서열과 비교할 때 뉴클레오티드의 하나 이상의 부가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 본 발명의 항-PRLR 항체 또는 항체 단편과 필수적으로 생물학적으로 동등한 항-PRLR 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열들을 포함한다. 상기와 같은 변형 아미노산 및 DNA 서열의 예는 상기에 논의되어 있다.
2개의 항원-결합 단백질 또는 항체들은, 예를 들어 이들의 흡수율 및 흡수 정도가 유사한 실험 조건하에서 동일한 몰 용량으로 단일 또는 수회 투여될 때 현저한 차이를 나타내지 않는 약학적 등가물 또는 약학적 대체물인 경우 생물학적 등가물로 간주된다. 일부 항체들은, 그들의 흡수 정도는 동등하지만 흡수율은 동등하지 않은 경우 등가물 또는 약학적 대체물로 간주될 것이며, 상기 흡수율에서 상기와 같은 차이는 의도적이며 표지에 반영되고, 예를 들어 만성적인 사용시 유효한 신체 약물 농도의 달성에 필수적이지 않으며 연구된 특정 약물 제품에 의학적으로 무의미한 것으로 간주되기 때문에 여전히 생물학적 등가물로 간주될 수 있다.
하나의 실시태양에서, 2개의 항원-결합 단백질들은 이들의 안전성, 순도 및 효능에 있어서 임상적으로 의미있는 차이가 존재하지 않는 경우 생물학적 등가물이다.
하나의 실시태양에서, 2개의 항원-결합 단백질은 환자가 교환 없이 계속되는 치료법에 비해 임상적으로 의미 있는 면역원성의 변화 또는 감소된 유효성을 포함한 부작용의 위험성의 예상된 증가 없이, 기준 제품과 생물학적 제품을 1회 이상 교환 수 있는 경우 생물학적 등가물이다.
하나의 실시태양에서, 2개의 항원-결합 단백질들은 이들이 모두 사용 조건 또는 조건들에 대한 통상적인 작용 기전 또는 기전들에 의해, 상기와 같은 기전들이 공지된 정도로 작용하는 경우 생물학적 등가물이다.
생물학적 등가는 생체내 및 시험관내 방법에 의해 입증될 수 있다. 생물학적 등가 측정은 예를 들어 (a) 항체 또는 그의 대사산물의 농도를 시간의 함수로서 혈액, 혈장, 혈청 또는 다른 생물학적 유체 중에서 측정하는, 인간 또는 다른 포유동물에서의 생체내 시험; (b) 인간 생체내 생물학적 이용효능 데이터와 상호 관련되었고 상기 데이터를 타당하게 예견하는 시험관내 시험; (c) 항체(또는 그의 표적)의 적합한 급성 약물학적 효과를 시간의 함수로서 측정하는, 인간 또는 다른 포유동물에서의 생체내 시험; 및 (d) 항체의 안전성, 효능, 또는 생물학적 이용효능 또는 생물학적 등가를 확립시키는 충분히-조절되는 임상 시험을 포함한다.
본 발명의 항-PRLR 항체의 생물학적 등가 변체를 예를 들어 잔기 또는 서열의 다양한 치환 또는 생물 활성에 필요하지 않은 말단 또는 내부 잔기 또는 서열의 결실에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 생물 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기를 결실시키거나 또는 다른 아미노산으로 치환시켜 재생시 불필요하거나 부정확한 분자내 디설파이드 가교의 형성을 방지할 수 있다. 다른 상황에서, 생물학적 등가 항체는 상기 항체의 글리코실화 특징을 변형시키는 아미노산 변화, 예를 들어 글리코실화를 제거하거나 없애는 돌연변이를 포함하는 항-PRLR 항체 변체를 포함할 수도 있다.
종 선택성 및 종 교차-반응성
본 발명은 몇몇 실시태양에 따라, 인간 PRLR에 결합하지만 다른 종으로부터의 PRLR에는 결합하지 않는 항-PRLR 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 인간 PRLR 및 하나 이상의 비-인간 종으로부터의 PRLR에 결합하는 항-PRLR 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항-PRLR 항체는 인간 PRLR에 결합할 수 있으며, 가능한 경우, 마우스, 래트, 기니 피그, 햄스터, 모래쥐, 돼지, 고양이, 개, 토끼, 염소, 양, 소, 말, 낙타, 키노몰구스 원숭이, 마모셋, 붉은털 원숭이 및 침팬지 PRLR 중 하나 이상에 결합하거나 또는 결합하지 않을 수도 있다. 본 발명의 몇몇 예시적인 실시태양에 따라, 인간 PRLR 및 키노몰구스 원숭이(예를 들어 마카카 파시쿨라리스) PRLR에 특이적으로 결합하는 항-PRLR 항체를 제공한다. 본 발명의 다른 항-PRLR 항체는 인간 PRLR에 결합하지만, 키노몰구스 원숭이 PRLR에는 결합하지 않거나 또는 단지 약하게 결합한다.
다중특이성 항체
본 발명의 항체는 단일특이성 또는 다중특이성(예를 들어 이중특이성)일 수 있다. 다중특이성 항체는 하나의 표적 폴리펩티드의 상이한 에피토프에 특이적이거나 또는 하나 초과의 표적 폴리펩티드에 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수 있다. 예를 들어 문헌[Tutt et al., 1991 , J. Immunol. 147:60-69]; [Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244]을 참조하시오. 본 발명의 항-PRLR 항체를 또 다른 기능성 분자, 예를 들어 또 다른 펩티드 또는 단백질에 연결하거나 또는 공-발현시킬 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그의 단편을 하나 이상의 다른 분자 존재, 예를 들어 또 다른 항체 또는 항체 단편에 기능적으로 연결하여(예를 들어 화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유 결합 또는 달리) 제2의 결합 특이성을 갖는 이중-특이성 또는 다중특이성 항체를 생성시킬 수 있다.
본 발명은, 면역글로불린의 하나의 가지가 인간 PRLR에 결합하고, 상기 면역글로불린의 다른 가지는 제2 항원에 특이적인 이중특이성 항체를 포함한다. 상기 PRLR-결합 가지는 본 발명의 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR/LCVR 및 CDR 아미노산 서열들 중 임의의 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 상기 PRLR-결합 가지는 인간 PRLR에 결합하고 PRLR에의 프로락틴 결합을 차단한다. 다른 실시태양에서, 상기 PRLR-결합 가지는 인간 PRLR에 결합하지만 PRLR에의 프로락틴 결합은 차단하지 않는다.
본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 예시적인 이중특이성 항체 포맷은 제1 면역글로불린(Ig) CH3 도메인 및 제2 Ig CH3 도메인의 사용을 수반하며, 여기에서 상기 제1 및 제2 Ig CH3 도메인은 적어도 하나의 아미노산에 의해 서로 상이하고, 적어도 하나의 아미노산 차이는 상기 아미노산 차이가 없는 이중특이성 항체에 비해 상기 이중특이성 항체의 단백질 A에의 결합을 감소시킨다. 하나의 실시태양에서, 상기 제1 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고 상기 제2 Ig CH3 도메인은, 단백질 A 결합을 감소시키거나 제거하는 돌연변이, 예를 들어 H95R 변형(IMGT 엑손 넘버링에 의해; EU 넘버링에 의해서는 H435R)을 함유한다. 상기 제2 CH3는 Y96F 변형(IMGT에 의해; EU에 의해 Y436F)을 추가로 포함할 수 있다. 상기 제2 CH3내에서 발견될 수 있는 추가의 변형은 IgG1 항체의 경우 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I(IMGT에 의해; EU에 의해 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I); IgG2 항체의 경우 N44S, K52N, 및 V82I(IMGT; EU에 의해 N384S, K392N, 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I(IMGT에 의해; EU에 의해 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, 및 V422I)를 포함한다. 상술한 이중특이성 항체 포맷에 대한 변화는 본 발명의 범위 내에서 고려된다.
본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 다른 예시적인 이중특이성 포맷은 비제한적으로, 예를 들어 scFv-기반 또는 디아바디 이중특이성 포맷, IgG-scFv 융합, 이중 가변 도메인(DVD)-Ig, 콰드로마(Quadroma), 구멍에 손잡이, 공통 경쇄(예를 들어 구멍에 손잡이를 갖는 공통 경쇄 등), 크로스(Cross)Mab, 크로스Fab, (SEED)바디, 류신 지퍼, 듀오바디(Duobody), IgG1/IgG2, 이중 작용 Fab(DAF)-IgG, 및 Mab2 이중특이성 포맷을 포함한다(상기 포맷들의 재고찰을 위해 예를 들어 문헌[Klein et al. 2012, mAbs 4:6, 1-11] 및 상기 중에 인용된 참고문헌을 참조하시오). 이중특이성 항체를 또한 펩티드/핵산 접합을 사용하여 제조할 수 있으며, 예를 들어 여기에서 직교하는 화학 반응성을 갖는 비천연 아미노산을 사용하여 부위-특이적 항체-올리고뉴클레오티드 접합체를 생성시키며 이어서 상기 접합체는 한정된 조성, 원자가 및 기하학을 갖는 다량체성 복합체로 자가-조립한다(예를 들어 문헌[Kazane et al., J. Am. Chem. Soc. [Epub: Dec. 4, 2012]을 참조하시오).
치료학적 제형 및 투여
본 발명은 본 발명의 항-PRLR 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학 조성물을 적합한 담체, 부형제, 및 개선된 전달, 운반, 내성 등을 제공하는 다른 작용제들과 함께 제형화한다. 다수의 적합한 제형들을 모든 약사들에게 공지된 처방집(Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA)에서 찾을 수 있다. 상기 제형은 예를 들어 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질(양이온성 또는 음이온성) 함유 소낭(예를 들어 리포펙틴(LIPOFECTIN)(상표), 라이프 테크놀로지스(Life Technologies), 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중 유적형 및 유중 수적형 유화액, 유화액 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고형 젤, 및 카보왁스를 함유하는 반-고형 혼합물을 포함한다. 또한 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참조하시오.
환자에게 투여되는 항체의 용량은 상기 환자의 연령 및 크기, 표적 질병, 상태, 투여 경로 등에 따라 변할 수 있다. 바람직한 용량은 전형적으로 체중 또는 체 표면적에 따라 계산된다. 성인 환자에서, 통상적으로 약 0.01 내지 약 20 ㎎/㎏ 체중, 보다 바람직하게는 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3 ㎎/㎏ 체중의 단일 용량으로 본 발명의 항체를 정맥내 투여하는 것이 유리할 수 있다. 상기 상태의 중증도에 따라, 상기 치료의 빈도 및 지속기간을 조절할 수 있다. 항-PRLR 항체의 유효 투여량 및 투여 스케줄을 실험적으로 결정할 수 있다; 예를 들어 환자의 진행을 주기적인 평가 및 상응하게 조절되는 용량에 의해 모니터할 수 있다. 더욱이, 투여량의 종간 비례축소를 당해 분야에 충분히 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다(예를 들어 문헌[Mordenti et al., 1991, Parmaceut. Res. 8:1351]).
다양한 전달 시스템들, 예를 들어 리포솜, 미세입자, 미세캡슐 중의 캡슐화, 돌연변이 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 세포이물흡수(endocytosis0가 공지되어 있으며(예를 들어 문헌[Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432]을 참조하시오) 이들을 본 발명의 약학 조성물의 투여에 사용할 수 있다. 도입 방법은 비제한적으로, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비내, 경막외, 및 경구 경로를 포함한다. 상기 조성물을 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어 주입 또는 일시주사에 의해, 상피 또는 점막피부층(예를 들어 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여할 수 있으며 다른 생물 활성제들과 함께 투여할 수도 있다. 투여는 전신적이거나 국소적일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물을 표준 바늘 및 주사기로 피하 또는 정맥내 전달할 수 있다. 또한, 피하 전달에 관하여, 펜 전달 장치를 본 발명의 약학 조성물의 전달에 용이하게 적용할 수 있다. 상기와 같은 펜 전달 장치는 재사용 가능하거나 또는 일회용일 수 있다. 재새용 가능한 펜 전달 장치는 일반적으로 약학 조성물을 함유하는 교체 가능한 카트리지를 사용한다. 일단 상기 카트리지 내 약학 조성물이 전부 투여되었고 상기 카트리지가 비었으면, 상기 빈 카트리지를 쉽게 버리고 상기 약학 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 교체할 수 있다. 이어서 상기 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에는 교체 가능한 카트리지가 없다. 오히려, 상기 일회용 펜 전달 장치는 상기 장치내 저장소에 유지되는 상기 약학 조성물로 사전충전된다. 일단 상기 저장소에 약학 조성물이 비면, 전체 장치를 버린다.
다수의 재사용 가능한 펜 및 자동주사 전달 장치들이 본 발명의 약학 조성물의 피하 전달에 적용된다. 예로서 몇 가지 언급하자면 비제한적으로 오토펜(AUTOPEN)(상표)(오웬 멈포드 인코포레이티드(Owen Mumford, Inc.), 영국 우드스톡 소재), 디세트로닉(DISETRONIC)(상표) 펜(디세트로닉 메디칼 시스템스(Disetronic Medical Systems), 스위스 베르크도르프 소재), 휴말로그 믹스(HUMALOG MIX) 75/25(상표) 펜, 휴말로그(상표) 펜, 휴말린(HUMALIN) 70/30(상표) 펜(일라이 릴리 앤드 캄파니(Eli Lilly and Co.), 미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재), 노보펜(NOVOPEN)(상표) I, II 및 III(노보 노르디스크(Novo Nordisk), 덴마크 코펜하겐 소재), 노보펜 주니어(NOVOPEN JUNIOR)(상표)(노보 노르디스크, 덴마크 코펜하겐 소재), BD(상표) 펜(벡톤 디킨슨(Becton Dickinson), 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스 소재), 옵티펜(상표), 옵티펜 프로(상표), 옵티펜 스타렛(OPTIPEN STARLET)(상표) 및 옵티클릭(OPTICLIK)(상표)(사노피-아벤티스(sanofi-aventis), 독일 프랑크푸르트 소재)가 있다. 본 발명의 약학 조성물의 피하 전달에 적용되는 일회용 펜 전달 장치의 예는 몇 가지 언급하자면 비제한적으로, 솔로스타(SOLOSTAR)(상표) 펜(사노피-아벤티스), 플렉스펜(FLEXPEN)(상표)(노보 노르디스크), 및 크윅펜(KWIKPEN)(상표)(일라이 릴리), 슈어클릭(SURECLICK)(상표) 자동주사기(암젠(Amgen), 미국 캘리포니아주 싸우전드 오크스 소재), 펜렛(PENLET)(상표)(한셀마이어(Haselmeier), 독일 스투트가르트 소재), 에피펜(EPIPEN)(Dey, L.P.), 및 휴미라(HUMIRA)(상표) 펜(애보트 랩스(Abbott Labs) 미국 일리노이주 애보트 파크 소재)가 있다.
몇몇 상황에서, 상기 약학 조성물을 조절된 방출 시스템 중에서 전달할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 펌프를 사용할 수 있다(상기 문헌[Langer]; 문헌[Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201]). 또 다른 실시태양에서, 중합체성 물질을 사용할 수 있다: 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida]을 참조하시오. 더욱 또 다른 실시태양에서, 조절된 방출 시스템을 상기 조성물의 표적에 가깝게 놓을 수 있으며, 따라서 전신 용량의 단지 일부만이 요구된다(예를 들어 문헌[Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138]을 참조하시오). 다른 조절된 방출 시스템들은 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533]에 논의되어 있다.
상기 주사성 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입 등을 위한 투여형들을 포함할 수 있다. 상기 주사성 제제는 공개적으로 공지된 방법들에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 주사성 제제를, 예를 들어 상술한 항체 또는 그의 염을 주사에 통상적으로 사용되는 멸균 수성 매질 또는 유성 매질에 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조할 수 있다. 주사용 수성 매질로서, 예를 들어 생리식염수, 글루코스 및 다른 보조제를 함유하는 등장성 용액 등이 있으며, 이들을 적합한 용해제, 예를 들어 알콜(예를 들어 에탄올), 폴리알콜(예를 들어 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예를 들어 폴리솔베이트 80, HCO-50(수소화된 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50 몰) 부가물)] 등과 함께 사용할 수 있다. 유성 매질로서, 예를 들어 참깨유, 대두유 등이 사용되며, 이들을 용해제, 예를 들어 벤질 벤조에이트, 벤질 알콜 등과 함께 사용할 수 있다. 상기와 같이 제조된 주사를 바람직하게는 적합한 앰풀 중에 충전시킨다.
유리하게, 상술한 경구 또는 비경구용 약학 조성물을 1회 용량의 활성 성분을 맞추기에 적합한 단위 용량의 투여형으로 제조한다. 상기와 같은 단위 용량의 투여형은 예를 들어 정제, 환제, 캡슐, 주사(앰풀), 좌약 등을 포함한다. 상기 함유된 항체의 양은 일반적으로 단위 용량의 투여형(특히 주사의 형태로)당 약 5 내지 약 500 ㎎이며; 상기 항체는 다른 투여형들의 경우 약 5 내지 약 100 ㎎ 및 약 10 내지 약 250 ㎎으로 함유되는 것이 바람직하다.
항체의 치료학적 용도
본 발명은 필요한 환자에게 항-PRLR 항체 또는 항-PRLR 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(예를 들어 본 발명의 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR/LCVR 및 CDR 서열들 중 임의의 서열을 포함하는 항-PRLR 항체 또는 ADC)를 포함하는 치료학적 조성물을 투여함을 포함한다. 상기 치료학적 조성물은 본 발명에 개시된 항-PRLR 항체, 그의 항원-결합 단편 및 ADC 중 임의의 것, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 및 ADC는 특히 PRLR 발현 또는 활성과 관련되거나 또는 상기에 의해 매개되거나, 또는 PRLR과 프로락틴간의 상호작용을 차단하거나 또는 PRLR 활성 및/또는 신호전달을 달리 억제하고/하거나 수용체 내면화를 촉진하고/하거나 세포 표면 수용체 수를 감소시키고/시키거나 치료될 수 있는 임의의 질병 또는 질환의 치료, 예방 및/또는 개선에 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 항체 및 ADC는 PRLR을 발현하고/하거나 프로락틴-매개된 신호전달에 반응하는 종양, 예를 들어 유방 종양의 치료에 유용하다. 본 발명의 항체 및 항원-결합 단편을 또한 뇌 및 뇌척수막, 구강인두, 폐 및 기관지, 위장관, 남성 및 여성 생식관, 근육, 뼈, 피부 및 부속기, 결합 조직, 비장, 면역계, 혈액 형성 세포 및 골수, 간 및 요로, 및 특수 감각 기관, 예를 들어 눈에서 발생하는 원발성 및/또는 전이성 종양의 치료에 사용할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 항체 및 ADC를 하기의 암들 중 하나 이상의 치료에 사용한다: 신세포 암종, 췌장 암종, 두경부암, 전립선암, 악성 신경교종, 골육종, 결장직장암, 위암(예를 들어 MET 증폭을 갖는 위암), 악성 중피종, 다발성 골수종, 난소암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 활막 육종, 갑상선암, 유방암 또는 흑색종.
본 발명의 항-PRLR 항체는 또한 자궁내막증, 자궁선근증, 비-호르몬성 여성 생식력 피임, 양성 유방 질병 및 유방통, 수유 억제, 양성 전립선 과형성증, 유섬유증, 고- 및 정상프로락틴혈증성 탈모로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 질병 또는 질환의 치료 또는 예방에, 및 유방 상피세포 증식을 억제하기 위한 호르몬요법의 부분으로서 유용하다.
본 발명에 개시된 치료 방법과 관련하여, 상기 항-PRLR 항체를 단독요법으로서(즉 유일한 치료제로서) 또는 하나 이상의 추가적인 치료제(상기의 예는 본 발명의 어딘가에 개시되어 있다)와 함께 투여할 수 있다.
본 발명은 종양 조직과 같은 환자의 하나 이상의 조직 중의 높은 수준의 PRLR 발현을 분석함으로써 본 발명의 항체 또는 ADC로 치료될 수 있는 환자를 식별하는 방법을 포함한다. 관련된 실시태양에서, 본 발명은 높은 수준의 PRLR 발현을 특징으로 하는 암의 치료 방법을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 종양이 있는 환자에게 본 발명의 항-PRLR 항체 또는 그의 ADC(예를 들어 본 발명의 어딘가에 개시된 항-PRLR ADC 중 임의의 것)를 투여함을 포함하는 치료 방법을 포함하며, 여기에서 상기 종양은 높은 수준의 PRLR을 발현하는 것으로서 식별되었다. 몇몇 실시태양에서, 상기 종양은 생검 샘플의 면역조직화학 또는 다른 영상화 기법, 예를 들어 면역-PET 영상화 등에 의해 높은 수준의 PRLR을 발현하는 것으로서 식별된다.
복합 요법 및 제형
본 발명은 본 발명에 개시된 항-PRLR 항체 중 임의의 항체를 하나 이상의 추가적인 치료 활성 성분과 함께 포함하는 조성물 및 치료학적 제형, 및 필요한 환자에게 상기와 같은 제형을 투여함을 포함하는 치료 방법을 포함한다.
본 발명의 항-PRLR 항체를 EGFR 길항물질(예를 들어, 항-EGFR 항체[예를 들어 세툭시맵 또는 파니투뮤맵] 또는 EGFR의 소분자 억제제[예를 들어, 제피티니브 또는 에를로티니브]), 또 다른 EGFR 과 구성원의 길항물질, 예를 들어 Her2/ErbB2, ErbB3 또는 ErbB4(예를 들어, 항-ErbB2[예를 들어, 트라스트주맵 또는 T-DM1{캐드실라(KADCYLA)(등록상표)}], 항-ErbB3 또는 항-ErbB4 항체 또는 ErbB2, ErbB3 또는 ErbB4 활성의 소분자 억제제), EGFRvIII의 길항물질(예를 들어, EGFRvIII에 특이적으로 결합하는 항체), cMET 길항물질(예를 들어, 항-cMET 항체), IGF1R 길항물질(예를 들어, 항-IGF1R 항체), B-raf 억제제(예를 들어, 베뮤라페니브, 소라페니브, GDC-0879, PLX-4720), PDGFR-α 억제제(예를 들어, 항-PDGFR-α 항체), PDGFR-β 억제제(예를 들어, 항-PDGFR-β 항체 또는 소분자 키나제 억제제, 예를 들어 이마티니브 메실레이트 또는 수니티니브 말레이트), PDGF 리간드 억제제(예를 들어, 항-PDGF-A, -B, -C, 또는 -D 항체, 앱타머, siRNA 등), VEGF 길항물질(예를 들어, VEGF-Trap, 예를 들어 아플리베르셉트(예를 들어, 미국특허 제 7,087,411 호를 참조하시오)(또한 본 발명에서 "VEGF-억제 융합 단백질"이라 지칭된다), 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맵), VEGF 수용체의 소분자 키나제 억제제(예를 들어, 수니티니브, 소라페니브 또는 파조파니브)), DLL4 길항물질(예를 들어, US 2009/0142354에 개시된 항-DLL4 항체, 예를 들어 REGN421), Ang2 길항물질(예를 들어, US 2011/0027286에 개시된 항-Ang2 항체, 예를 들어 H1H685P), FOLH1 길항물질(예를 들어, 항-FOLH1 항체), STEAP1 또는 STEAP2 길항물질(예를 들어, 항-STEAP1 항체 또는 항-STEAP2 항체), TMPRSS2 길항물질(예를 들어, 항-TMPRSS2 항체), MSLN 길항물질(예를 들어, 항-MSLN 항체), CA9 길항물질(예를 들어, 항-CA9 항체), 유로플라킨 길항물질(예를 들어, 항-유로플라킨[예를 들어, 항-UPK3A] 항체), MUC16 길항물질(예를 들어, 항-MUC16 항체), Tn 항원 길항물질(예를 들어, 항-Tn 항체), CLEC12A 길항물질(예를 들어, 항-CLEC12A 항체), TNFRSF17 길항물질(예를 들어, 항-TNFRSF17 항체), LGR5 길항물질(예를 들어, 항-LGR5 항체), 1가 CD20 길항물질(예를 들어, 1가 항-CD20 항체, 예를 들어 리툭시맵) 등으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 추가적인 치료 활성 성분(들)과 함께 제형화하고/하거나 투여할 수 있다. 본 발명의 항체와 함께 이롭게 투여될 수 있는 다른 작용제는 예를 들어 타목시펜, 아로마타제 억제제, 및 사이토카인 억제제, 예를 들어 소분자 사이토카인 억제제 및 사이토카인, 예를 들어 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, 또는 이들 각각의 수용체에 결합하는 항체를 포함한다.
본 발명은 본 발명에 개시된 항-PRLR 항체 중 임의의 항체를 하나 이상의 화학요법제와 함께 포함하는 조성물 및 치료학적 제형을 포함한다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예를 들어 티오테파 및 사이클로포스파미드(사이톡산(Cytoxan)(상표)); 알킬 설포네이트, 예를 들어 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예를 들어 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 유레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예를 들어 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포아미드, 트리에틸렌티오포스파오라미드 및 트리메틸올로멜라민; 질소 머스터드, 예를 들어 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라머스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 펜에스테린, 프레드니머스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스터드; 니트로스우레아, 예를 들어 카머스틴, 클로로조토신, 포테머스틴, 로머스틴, 니머스틴, 라니머스틴; 항생제, 예를 들어 아클라시노마이신, 액티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼키아미신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아자-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 대사길항물질, 예를 들어 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 폴산 유사체, 예를 들어 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예를 들어 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들어 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카르모퓨어, 시타라빈, 디데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록슈리딘; 안드로젠, 예를 들어 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-아드레날, 예를 들어 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충물, 예를 들어 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; PSK(상표); 라족산; 시조피란; 스피로제르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노머스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁산, 예를 들어 패클리탁셀(탁솔(상표), 브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재) 및 도세탁셀(탁소테레(상표); 아벤티스 안토니(Aventis Antony), 프랑스 소재); 클로람부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예를 들어 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 국소이성화효소 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노산; 에스페라미신; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한 상기 정의내에, 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항-호르몬제, 예를 들어 항-에스트로젠, 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제제 4(5)-이미다졸, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY 117018, 오나프리스톤 및 토레미펜(파레스톤(Fareston)); 및 항-안드로젠, 예를 들어 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체가 포함된다.
본 발명의 항-PRLR 항체를 또한 항바이러스제, 항생제, 진통제, 코르티코스테로이드, 스테로이드, 산소, 산화방지제, COX 억제제, 심장보호제, 금속 킬레이터, IFN-감마, 및/또는 NSAID와 함께 투여하고/하거나 제형화할 수 있다.
추가의 치료 활성 성분(들), 예를 들어 상기 나열된 작용제들 중 임의의 작용제 또는 그의 유도체를 본 발명의 항-PRLR 항체의 투여 직전에, 투여와 동시에, 또는 투여 직후에 투여할 수 있다; (본 개시의 목적을 위해서, 상기와 같은 투여 섭생은 추가의 치료 활성 성분"과 함께" 항-PRLR 항체를 투여하는 것으로 간주된다). 본 발명은 본 발명의 항-PRLR 항체가 본 발명의 어딘가에 개시된 바와 같은 추가적인 치료 활성 성분(들) 중 하나 이상과 함께 제형화되는 약학 조성물을 포함한다.
투여 섭생
본 발명의 몇몇 실시태양에 따라, 수회 용량의 항-PRLR 항체(또는 항-PRLR 항체 및 본 발명에서 언급된 추가의 치료 활성제들 중 임의의 활성제의 조합을 포함하는 약학 조성물)를 환자에게 한정된 시간 과정에 걸쳐 투여할 수 있다. 본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 환자에게 수회 용량의 본 발명의 항-PRLR 항체를 연속적으로 투여함을 포함한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "연속적으로 투여함"은 항-PRLR 항체의 각 용량을 상기 환자에게 상이한 시점에서, 예를 들어 소정의 간격(예를 들어 수시간, 수일, 수주 또는 수개월)으로 분리된 상이한 날들에 투여함을 의미한다. 본 발명은 상기 환자에게 단일 초기 용량의 항-PRLR 항체에 이어서 하나 이상의 2차 용량의 상기 항-PRLR 항체, 및 임의로 이어서 하나 이상의 3차 용량의 상기 항-PRLR 항체를 연속적으로 투여함을 포함하는 방법을 포함한다.
"초기 용량", "2차 용량", 및 "3차 용량"이란 용어는 본 발명의 항-PRLR 항체의 투여의 시간상 순서를 지칭한다. 따라서, 상기 "초기 용량"은 치료 섭생의 초기에 투여되는 용량(또한 "기준선 용량"이라 칭한다)이고; 상기 "2차 용량"은 상기 초기 용량 후에 투여되는 용량이고; 상기 "3차 용량"은 상기 2차 용량 후에 투여되는 용량이다. 상기 초기, 2차 및 3차 용량들은 모두 동일한 양의 항-PRLR 항체를 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도에 관하여 서로 상이할 수 있다. 그러나, 몇몇 실시태양에서, 상기 초기, 2차 및/또는 3차 용량 중에 함유된 항-PRLR 항체의 양은 치료 과정 동안 서로 변한다(예를 들어 적합한 대로 상향 또는 하향 조절된다). 몇몇 실시태양에서, 2회 이상(2, 3, 4, 또는 5회)의 용량을 "로딩 용량"으로서 상기 치료 섭생의 초기에 투여한 다음 덜 빈번한 기준으로 투여되는 후속 용량(예를 들어 "유지 용량")을 투여한다.
본 발명의 몇몇 예시적인 실시태양에서, 각각의 2차 및/또는 3차 용량을 바로 앞선 용량 후 1 내지 26(예를 들어 1, 1 ½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½ 또는 그 이상의)주째에 투여한다. 본 발명에 사용되는 바와 같은 "바로 앞선 용량"이란 어구는 수회 투여의 시퀀스에서, 중간에 낀 용량 없이 순서상 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여되는 항-PRLR 항체의 용량을 의미한다.
본 발명의 상기 태양에 따른 방법은 환자에게 임의의 수의 2차 및/또는 3차 용량의 항-PRLR 항체를 투여함을 포함할 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시태양에서, 단지 단일의 2차 용량을 상기 환자에게 투여한다. 다른 실시태양에서, 2회 이상(예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상)의 2차 용량을 상기 환자에게 투여한다. 마찬가지로, 몇몇 실시태양에서 단지 단일의 3차 용량을 상기 환자에게 투여한다. 다른 실시태양에서, 2회 이상(예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상)의 3차 용량을 상기 환자에게 투여한다. 상기 투여 섭생을 특정 환자의 일생 동안 무한하게, 또는 상기와 같은 치료가 더이상 치료학적으로 필요하거나 유리하지 않을 때까지 수행할 수 있다.
수회의 2차 용량을 수반하는 실시태양에서, 각각의 2차 용량을 다른 2차 용량들과 동일한 빈도로 투여할 수 있다. 예를 들어, 각각의 2차 용량을 상기 환자에게 바로 앞선 용량 후 1 내지 2주 또는 1 내지 2개월째에 투여할 수 있다. 유사하게, 수회의 3차 용량을 수반하는 실시태양에서, 각각의 3차 용량을 다른 3차 용량들과 동일한 빈도로 투여할 수 있다. 예를 들어, 각각의 3차 용량을 상기 환자에게 바로 앞선 용량 후 2 내지 12주째에 투여할 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시태양에서, 상기 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 섭생의 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 상기 투여의 빈도를 또한 임상 검사에 따른 개인 환자의 필요에 따라 치료 과정 동안 의사가 조절할 수 있다.
본 발명은 2 내지 6회의 로딩 용량을 환자에게 제1 빈도(예를 들어 1주일에 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월에 1회, 2개월 마다 1회 등)로 투여한 다음 덜 빈번하게 상기 환자에게 2회 이상의 유지 용량을 투여하는 투여 섭생을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 상기 태양에 따라, 상기 로딩 용량을 1개월에 1회의 빈도로 투여하는 경우, 상기 유지 용량을 상기 환자에게 6주마다 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회 등으로 투여할 수 있다.
항체의 진단학적 용도
본 발명의 항-PRLR 항체를 또한, 예를 들어 진단을 목적으로 샘플 중 PRLR 또는 PRLR-발현 세포를 검출하고/하거나 측정하기 위해 사용할 수 있다. 예를 들어 항-PRLR 항체 또는 그의 단편을 PRLR의 이상 발현(예를 들어 과발현, 저발현, 발현의 결여 등)을 특징으로 하는 상태 또는 질병을 진단하기 위해 사용할 수 있다. PRLR에 대한 예시적인 진단 분석은 예를 들어 환자로부터 수득된 샘플을 본 발명의 항-PRLR 항체와 접촉시킴을 포함할 수 있으며, 여기에서 상기 항-PRLR 항체를 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지한다. 한편으로, 표지되지 않은 항-PRLR 항체를, 자체가 검출 가능하게 표지된 2차 항체와 함께 진단 용도에 사용할 수 있다. 상기 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자는 방사성 동위원소, 예를 들어 3H, 14C, 32P, 35S 또는 125I; 형광 또는 화학발광 부분, 예를 들어 플루오레세인 또는 로다민; 또는 효소, 예를 들어 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 양고추냉이 퍼옥시다제, 또는 루시페라제일 수 있다. 샘플에서 PRLR을 검출하거나 측정하기 위해 사용될 수 있는 특정한 예시적인 분석은 효소-연결된 면역흡수 분석(ELISA), 방사성면역분석(RIA), 면역-PET(예를 들어 89Zr, 64Cu 등), 및 형광-활성화된 세포 분류(FACS)를 포함한다.
본 발명에 따른 PRLR 진단 분석에 사용될 수 있는 샘플은 정상적인 또는 병적인 조건하에서 검출 가능한 양의 PRLR 단백질 또는 그의 단편을 함유하는 환자로부터 수득할 수 있는 임의의 조직 또는 체액을 포함한다. 일반적으로, 건강한 환자(예를 들어 이상 PRLR 수준 또는 활성과 관련된 질병 또는 상태에 걸리지 않은 환자)로부터 수득된 특정 샘플 중 PRLR의 수준을, PRLR의 기준선 또는 표준 수준을 초기에 확립하기 위해 측정할 것이다. 이어서 상기 PRLR의 기준선 수준을 PRLR 관련된 질병 또는 상태가 있는 것으로 의심되는 개인으로부터 수득된 샘플에서 측정된 PRLR의 수준과 비교할 수 있다.
실시예
하기의 실시예들은 당해 분야의 통상적인 숙련가들에게 본 발명의 방법 및 조성물의 제조 및 사용 방법의 완전한 기술 및 개시를 제시하는 것이며 발명자들이 그들의 발명으로서 간주하는 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다. 사용되는 숫자(예를 들어 양, 온도 등)에 관한 정확성을 보장하고자 노력하였으나 일부 실험 오차 및 편차는 설명되어야 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨이고, 압력은 대기압 또는 그 부근이다.
실시예 1. 항- PRLR 항체의 생성
항-PRLR 항체를, 인간 PRLR의 용해성 이량체성 엑토도메인을 포함하는 면역원으로 벨로시뮨(등록상표) 마우스(즉 인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 조작된 마우스)를 면역시켜 획득하였다. 상기 항체 면역 반응을 PRLR-특이성 면역분석에 의해 모니터하였다. 목적하는 면역 반응이 성취되었을 때 비장세포를 수확하고 마우스 골수종 세포와 융합시켜 상기 세포의 생육력을 보존하고 하이브리도마 세포주를 형성시켰다. 상기 하이브리도마 세포주를 PRLR-특이성 항체를 생산하는 세포주를 식별하기 위해 선별하고 선택하였다. 상기 기법을 사용하여 다수의 항-PRLR 키메릭 항체(즉 인간 가변 도메인 및 마우스 불변 도메인을 갖는 항체)를 수득하였다. 또한, 다수의 완전한 인간 항-PRLR 항체를 US 2007/0280945A1에 개시된 바와 같이, 골수종 세포와의 융합 없이 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리하였다.
본 실시예의 방법에 따라 생성된 상기 예시적인 항-PRLR 항체의 몇몇 생물학적 특성들을 하기에 제시된 실시예들에 상세히 개시한다.
실시예 2. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 및 핵산 서열
표 1은 본 발명의 선택된 항-PRLR 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR의 아미노산 서열 식별자들을 제시한다. 상응하는 핵산 서열 식별자들을 표 2에 제시한다.
Figure pct00001
Figure pct00002
항체들을 전형적으로는 본 발명에서 하기의 명명법에 따라 지칭한다: 표 1 및 2에 나타낸 바와 같이, Fc 접두사(예를 들어 "H1H", "H1M", "H2M" 등)에 이어서, 숫자 식별자(예를 들어 "6762", "6953", "6958" 등), 이어서 "P" 또는 "N" 접미사. 따라서, 상기 명명법에 따라, 항체를 본 발명에서 예를 들어 "H1H6762P", "H1M6953N", "H2M6958N" 등으로 지칭할 수 있다. 본 발명에서 사용된 항체 표시상의 H1H, H1M 및 H2M 접두사는 상기 항체의 특정한 Fc 영역 아이소타입을 가리킨다. 예를 들어 "H1H" 항체는 인간 IgG1 Fc를 가지며, "H1M" 항체는 마우스 IgG1 Fc를, "H2M" 항체는 마우스 IgG2 Fc를 갖는다(모든 가변 영역들은 상기 항체 표시에서 처음 "H"에 의해 나타낼 때 완전히 인간이다). 당해 분야의 통상적인 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 특정한 Fc 아이소타입을 갖는 항체를 상이한 Fc 아이소타입을 갖는 항체로 전환시킬 수 있지만(예를 들어 마우스 IgG1 Fc를 갖는 항체를 인간 IgG4를 갖는 항체 등으로 전환시킬 수 있다), 어쨌든 가변 영역(CDR 포함)(표 1 및 2에 나타낸 숫자 식별자에 의해 나타낸다)은 동일하게 남아있을 것이며, 결합 특성은 상기 Fc 도메인의 특성과 관계 없이 동일하거나 또는 실질적으로 유사한 것으로 예상된다.
하기의 실시예들에 사용되는 대조용 구조물
대조용 구조물을 비교를 목적으로 하기의 실험들에 포함시켰다: 대조용 I: WO2008/02295A2에 제시된 바와 같은, "he.06.642-2"의 상응하는 도메인의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 인간 항-PRLR 항체; 및 대조용 II: 문헌[Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285-4289]에 제시된 바와 같은 "4D5v8"의 상응하는 도메인의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 인간 항-ErbB2 항체.
실시예 3. 인간 단클론 항- PRLR 항체의 표면 플라스몬 공명 유래된 결합 친화성 및 동역학적 상수
인간 단클론 항-PRLR 항체의 결합 친화성 및 동역학적 상수를 25 ℃ 및 37 ℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정하였다. 인간 IgG1 Fc(즉 "H1H" 표시)로서 나타낸 항체를 항-인간 Fc 센서 표면상에 포획하고(mAb-포획 포맷), 용해성 단량체성(hPRLR.mmh; 서열번호 401, 또는 마카카 파시쿨라리스(mf) PRLR.mmh; 서열번호 403) 또는 이량체성(hPRLR.mFc; 서열번호 402) PRLR 단백질을 상기 센서 표면상에 주입하였다. 측정을 T200 비아코어 장치 상에서 수행하였다. 동역학적 결합(ka) 및 해리(kd) 속도 상수를 스크루버(Scrubber) 2.0 곡선 정합 소프트웨어를 사용하여 처리하고 데이터를 1:1 결합 모델에 정합시켜 측정하였다. 결합 해리 평형 상수(KD) 및 해리 반감기(t½)를 KD(M) = kd/ka 및 t½(분) = (In2/(60*kd)로서 상기 동역학적 속도 상수로부터 계산하였다. 결과를 표 3 및 4에 요약한다.
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
표 3 및 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 다수의 항체는 인간 및 원숭이 PRLR 단백질에 대해 나노몰 이하의 친화성을 나타내었으며 비교용 항-PRLR 항체(대조용 I)보다 더 높은 친화성을 나타내었다. 예를 들어, 37 ℃에서 본 발명의 항-PRLR 항체 중 다수는 단량체성 인간 PRLR에 4 nM 미만의 KD 값 및 5분 초과의 T½ 시간으로; 및 이량체성 인간 PRLR에 250 pM 미만의 KD 값 및 60분 초과의 T½ 시간으로 결합하였다. 이러한 결합 특징은 동일한 실험 조건하에서 대조용 I 항체에 대해 관찰된 것보다 실질적으로 더 양호하다.
실시예 4A. 항- PRLR 항체는 내인성의 과발현된 PRLR 세포주에 결합한다
이어서 PRLR 발현 세포주에 선택적으로 결합하는 항-PRLR 항체의 능력을 측정하였다. HA 태그를 갖는 인간, 마카카 파시쿨라리스 원숭이, 및 마우스 PRLR 구조물을 리포펙타민 2000-매개된 형질감염 방법을 통해 HEK293 세포에 안정하게 도입시켰다. 형질감염체(HEK293/hPRLR, HEK293/mfPRLR 및 HEK293/mPRLR)를 완전 생육 배지 플러스 G418에서 적어도 2주 동안 선택하였다.
293/hPRLR 세포상의 PRLR의 세포 표면 발현을 FACS 분석을 통해 평가하였다. 간단히, 1 x 105 세포를 10 ㎍/㎖의 대조용 항체 I, 또는 아이소타입 대조용과 함께 항체 희석 완충제 중에서 얼음상에서 30분 동안 배양하였다. 항체 희석 완충제로 2회 세척 후에, 세포를 10 ㎍/㎖의 PE 접합된 항-인간 2차 항체와 함께 얼음상에서 30분 동안 배양하였다. 2회의 추가 세척에 이어서, 샘플을 하이퍼시트(Hypercyt)(등록상표) 세포계상에서 실행시키고 포어시트(ForeCyt)(상표)(인텔리시트(IntelliCyt), 미국 뉴멕시코주 앨버커키 소재)에서 분석하였다. 평균 형광 강도(MFI)를 아이소타입 대조용 수준(배경)보다 높은 변화 배수로서 표현하였다. FACS 결합은 대조용 I이 배경(아이소타입 대조용) 수준보다 30배 및 모 세포에 대한 결합의 2배 미만으로 높은 MFI로 293/hPRLR 발현 세포에 선택적으로 결합함을 입증하였다.
PRLR의 세포 표면 카피수를 또한 T47D, MCF7 및 MCF7/hPRLR-과발현 세포주상에서 정량적으로 측정하였다. 간단히, 1 x 105 세포를 항체 희석제 중에서 얼음상에서 30분 동안 100 nM의 항-PRLR 항체 H1H6953N-알렉사(Alexa)647과 배양하였다. 항체 희석 완충제로 2회 세척 후에, 샘플을 하이퍼시트(등록상표) 세포계(인텔리시트, 미국 뉴멕시코주 앨버커키 소재)상에서 실행시키고 평균 형광 강도(MFI)를 포어시트(상표)(인텔리시트, 미국 뉴멕시코주 앨버커키 소재)에서 측정하였다. 이어서 각 세포주에 대한 MFI를 제조사의 설명서에 따라 콴텀 알렉사 플루오르(Quantum Alexa Fluor) 647 MESF 키트(뱅스 레보라토리즈 인코포레이티드(Bangs Laboratories, Inc), 미국 인디애나주 피셔스 소재)를 통해 등가의 용해성 형광(MESF)의 알렉사647 분자로 전환시켰다. H1H6953N-A647 단백질당 형광단의 평균수(F/P 비)를 제조사의 설명서에 따라 심플리 셀룰라 안티-휴먼(Simply Cellular anti-Human) IgG 키트(뱅스 레보라토리즈 인코포레이티드, 미국 인디애나주 피셔스 소재)를 통해 측정하였다. 상기 MESF 값을 상기 F/P 비로 나누어 각 세포주상의 PRLR 세포 표면 카피수 또는 H1H6953N 항원 결합 능력을 측정하였다. 상기 방법을 사용하여, 다양한 세포주상의 PRLR의 대략적인 세포 표면 카피수는 하기와 같이 측정되었다: T47D = 27,000; MCF7 = 3,000; 및 MCF7/hPRLR = 190,000.
이어서, 본 발명의 항-PRLR 항체를 FACS를 통해 상기 조작된 과발현 PRLR HEK293 세포뿐만 아니라 비-발현 HEK293 세포 및 고유의 PRLR 발현 세포주(T47D)에 대한 선택적인 결합에 대해 시험하였다. 결과를 표 5에 나타낸다.
Figure pct00008
표 5에 나타낸 바와 같이, 항-인간 PRLR 항체의 대부분은 모 세포에는 무시할만한 결합을 가지면서, HEK293/PRLR 세포에는 배경보다 >25배 수준으로 특이적으로 결합하였다. 인간 PRLR에 결합된 항체는 유사하게 HEK293/mfPRLR 세포상의 원숭이(마카카 파시쿨라리스) PRLR에 결합하는 것으로 나타났다. HEK293/hPRLR 세포에 강한 결합제인 것으로서 식별된 항체들은 유사하게 고유의 PRLR 발현 T47D 세포에 확고한 결합제인 것으로 나타났다. 설치류 PRLR에 대한 교차-반응성은 관찰되지 않았다.
요약하면, 본 발명의 항체는 조작된 세포주상의 인간 및 원숭이 PRLR뿐만 아니라 내인성으로 발현된 PRLR에 대해 강한 결합을 나타내었다.
실시예 4B. 항- PRLR 항체는 시험관내에서 PRLR -발현 세포에 의해 내면화된다
본 실시예에서, PRLR-발현 세포(T47D)에 의한 항-PRLR 항체의 내면화를 평가하였다. 간단히, 20,000 T47D 세포를 콜라겐 코팅된 96 웰 플레이트에 시딩하였다. 다음 날, 세포를 얼음상에서 30분 동안 항-인간 PRLR 항체(10 ㎍/㎖)와 함께 배양한 다음, 2회 PBS 세척하였다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-hFc Fab 2차 항체와 얼음상에서 30분 동안 배양한 다음 2회 추가로 PBS 세척하였다. 항체를 내면화 완충제(PBS + 2% FBS) 중에서 37 ℃에서 1시간 동안 내면화되게 하거나, 또는 4 ℃에서 그대로 두었다. 세포를 4% 포름알데히드 중에 고정시키고, 핵을 DRAQ5(셀 시그널링(Cell signaling))로 염색하고, 이미지엑스프레스 마이크로(ImageXpress micro) XL(몰레큘라 디바이시즈(Molecular Devices))상에서 상들을 획득하였다. 37 ℃에서 전세포 알렉사488 강도(결합) 및 37 ℃에서 세포내 소낭내 알렉사488 강도(내면화)를 콜럼버스 상 분석 소프트웨어(퍼킨엘머(PerkinElmer))를 통해 측정하였다. 상기 강도들을 가장강한 내면화 항체, H1H6975N의 백분율로서 나타내며, 표 6에 요약한다.
Figure pct00009
H1H6959N2를 제외하고, 모든 시험된 항체들은 T47D에 결합하였으며 모든 결합된 mAb의 거의 100%가 1시간내에 내면화되었다. 대부분의 항체에 대한 총 내면화된 항체 강도는 상기 항-인간 PRLR 대조용 항체(대조용 I)보다 더 컸다.
실시예 5. 항- PRLR 항체는 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 PRL - 매개된 수용체 활성화를 억제한다
프로락틴(PRL)-매개된 수용체 활성화를 차단하는 항-PRLR 항체의 능력을 루시페라제-기반 리포터 분석에서 검사하였다. 내분비 호르몬 PRL은 그의 동족 수용체 PRLR의 세포외 도메인에 결합하며, 이는 빠른 동종이량체화를 촉발하고 다수의 하류 신호전달 캐스케이드를 활성화한다.
본 실시예에서, 조작된 세포주를 사용하여 상기 PRLR 수용체의 리간드 활성화를 차단하는 항-PRLR 항체의 능력을 측정하였다. 간단히, 인간 PRLR 발현 카세트 및 STAT5-의존성 루시페라제 리포터의 안정한 통합을 갖는 HEK293/hPRLR/STAT5-Luc 세포주를 연속 라운드의 리포펙타민(등록상표) 2000-매개된 형질감염(라이프테크놀로지스(LifeTechnologies), 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재)을 통해 생성시켰다. 세포를 500 ㎍/㎖ G418(hPRLR) 및 100 ㎍/㎖ 하이그로마이신 B(STAT5-Luc)의 존재하에서 적어도 2주 동안 선택하였다. 상기 STAT5-Luc 분석은 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 생육된 PDL-코팅된 96 웰 플레이트상의 완전 생육 배지에 시딩된 2 x 105 HEK293/hPRLR/STAT5-Luc 세포를 사용하였다. 항체 억제 곡선을 생성시키기 위해서, 세포를 신호 기록 전에 5 nM의 일정한 PRL의 존재하에서 연속 희석된 항-인간 PRLR 항체(100 nM 내지 24 pM)와 함께 배양하였다(37 ℃에서 6시간). PRL 용량 반응 곡선을, 세포에 연속 희석된 PRL(100 nM 내지 24 pM)을 가하고 항체의 부재하에서 6시간(37 ℃) 배양 후에 신호를 기록함으로써 생성시켰다. 리간드의 부재하에서 PRLR을 활성화시키는 상기 항체의 능력을 또한 평가하였다.
루시페라제 활성을 ONE-Glo(상표) 시약(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 매디슨 소재)으로 측정하였다. 상대적인 광 단위(RLU)를 빅터(Victor) 광도계(퍼킨 엘머, 미국 코넥티컷주 쉘톤 소재)상에서 측정하였다. EC50/IC50 값을 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)을 사용하여 8-포인트 반응 곡선에 대한 4-매개변수 로지스틱 방정식으로부터 측정하였다. 차단 퍼센트 및 활성화 퍼센트를 최고의 항체 용량에 대해서 기록한다. 결과를 표 7에 나타낸다.
Figure pct00010
표 7에 요약된 바와 같이, 본 발명 항체의 대부분은 22 pM 내지 8 nM 범위의 IC50 값으로 STAT5 리포터의 활성화를 억제하였다. 모든 억제 항체는 활성화를 기준선 수준(100 퍼센트 차단)으로 차단하였다. 추가로, 상기 분석에서 시험된 항체들은 PRL 리간드의 부재하에서 STAT5를 활성화하지 않았다.
요약하면, 본 실시예의 데이터는 본 발명의 항-PRLR 항체의 대부분이 PRL-매개된 수용체 활성화를 차단함을 나타낸다. 추가로, 상기 항체의 대부분은 수용체 활성화를 상기 항-PRLR 대조용 I 항체보다 더 효능 있게 억제한다. 예를 들어, 본 발명의 다수의 항-PRLR 항체는 프로락틴-매개된 신호전달을 약 1.3 nM 미만의 IC50 값으로 차단하였다. 다른 한편으로, 본 발명의 몇몇 항-PRLR 항체는, PRLR에 결합할 수 있음에도 불구하고, 프로락틴 차단 활성을 나타내지 않았다. 상기와 같은 비-차단성 항-PRLR 항체는, 정상적인 프로락틴-매개된 신호전달을 방해하지 않으면서 PRLR 표적화가 요구되는 다양한 치료학적 상황들에 사용될 수 있다.
실시예 6. 항- PRLR 항체 약물 접합체의 제조 및 특징화
선택된 항-PRLR 항체를 미국특허 제 5,208,020 호 및 미국특허 출원 공보 제 2010/0129314 호에 제시된 것들과 유사한 방법들을 사용하여 SMCC 링커를 통해 메이탄시노이드 DM1에 접합시켰다. 상기 접합체를 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하고 멸균 여과하였다. 모든 출발 물질 및 용매들을, 달리 나타내지 않는 한 상업적으로 구입하였으며 정제 없이 사용하였다.
단백질 및 링커/페이로드 농도를 UV 분광 분석 및 MALDI-TOF 질량분석법에 의해 측정하였다. 크기-배제 HPLC는 사용된 모든 접합체가 >95% 단량체성임을 확립시켰으며, RP-HPLC는 <0.5% 비접합 링커 페이로드가 존재함을 확립시켰다. 수율을 단백질 기준으로 표 8 및 9에 기록한다. 모든 접합된 항체들을 문헌[Hamblett et al, 2004, Clinical Cancer Research 10(20):7063-7070]에 따라 링커 페이로드 로딩 값에 대해 UV에 의해서, 및 고유 대 접합의 질량 차이에 의해서 분석하였다.
Figure pct00011
Figure pct00012
본 실시예는 SMCC 링커를 통한 본 발명의 항-PRLR 항체와 DM1의 접합을 예시한다. 상기 페이로드:항체 몰비는 본 실시예의 접합된 항체에 대해서 약 2.3 내지 약 3.8인 것으로 계산되었다. 본 발명의 항체에 대한 수율 퍼센트는 대략 50% 내지 70%의 범위였다.
실시예 7. 항- PRLR 항체-약물 접합체는 낮은 내지 보통의 PRLR 발현 수준뿐만 아니라 높은 PRLR 발현 수준으로 세포를 유효하게 살해한다
유사한 항-ErbB2 ADC에 대한 본 발명의 항-PRLR ADC의 상대적인 세포-살해 효능을 측정하기 위해서, 세포-살해 분석을 PRLR, ErbB2 또는 상기 두 수용체 모두의 조합을 발현하는 다수의 세포상에서 실행하였다.
HEK293, PC3, MCF7 및 NCI-N87을 포함한 PRLR-과발현 세포를, 세포 생육력을 감소시키는 항-PRLR 접합된 항체의 능력을 평가하기 위해 생성시켰다. 비교를 목적으로, 과발현된 ErbB2를 갖는 PC3 및 T47D 세포뿐만 아니라 hPRLR 및 hErbB2를 모두 과발현하는 MCF7 세포주를 또한 생성시켰다. 간단히, 리포펙타민(등록상표) 2000-매개된 형질감염 방법을 사용하여 인간 PRLR(HEK293/hPRLR) 또는 인간 ErbB2(HEK293/hErbB2)를 발현하는 HEK293 세포를 생성시켰다. 플러스(Plus) 시약과 함께 리포펙타민 LTX를 사용하여 인간 PRLR(PC3/hPRLR) 또는 인간 ErbB2(PC3/hErbB2)를 발현하는 PC3 세포를 생성시켰다. 렌티바이러스-매개된 형질도입을 사용하여 인간 PRLR을 발현하는 MCF7 세포(MCF7/hPRLR), 인간 PRLR을 발현하는 NCI-N87 세포(NCI-N87/hPRLR), 인간 ErbB2를 과발현하는 T47D 세포(T47D/hErbB2), 및 인간 PRLR 및 인간 ErbB2를 모두 발현하는 MCF7 세포(MCF7/hPRLR/hErbB2)를 생성시켰다. 모든 세포주들은 완전 생육 배지 + 적합한 선택 시약 중에서 적어도 2주 동안 선택되었다. 안정한 발현 집단들을 항-PRLR 항체 대조용 I를 사용하여 FACS를 통해 PRLR 발현을 위해 농축시켰다.
PRLR 및 ErbB2의 세포 표면 발현을 각각 대조용 I 항-PRLR 항체 또는 대조용 II 항-HER2 항체를 사용하여 FACS를 통해 분석하였다. 추가로, 보다 공격적인 생체내 종양 성장에 대해 선택된 상기 T47D 세포주의 변체인 T47D#11 세포주상에서의 내인성 PRLR 세포 표면 발현을 또한 측정하였다. 대략 1 x 106 세포를 10 ㎍/㎖의 항-PRLR 대조용 항체(대조용 I), 항-ErbB2 대조용 항체(대조용 II), 또는 아이소타입 대조용과 항체 희석 완충제 중에서 얼음상에서 30분 동안 배양하였다. 항체 희석 완충제로 2회 세척한 다음, 세포를 10 ㎍/㎖의 PE 접합된 항-인간 2차 항체와 얼음상에서 30분 동안 배양하였다. 2회 추가적인 세척에 이어서, 샘플들을 애큐리(Accuri) C6(BD) 세포계상에서 실행시키고 플로우조(FlowJo) 소프트웨어(트리 스타 인코포레이티드(Tree Star, Inc.), 미국 오리건주 애쉬랜드 소재)로 분석하였다. 상대적인 발현 수준 결과를 표 10에 나타낸다.
Figure pct00013
일반적으로, 내인성 PRLR 표면 발현은 배경보다 6배 내지 55배의 범위였으며, 이때 대부분의 조작된 세포는 배경보다 12배 내지 18배의 PRLR 발현을 나타내었다. 내인성 PRLR 발현은 MCF7 세포에서 배경보다 3배였으나, 모 HEK293, PC3 및 NCI-N87 세포주에서는 검출되지 않았다. 내인성 PRLR 발현은 T47D 세포주에서 배경보다 12배였고 T47D#11 변형 세포주에서는 배경보다 10배였다. ErbB2 발현은 모든 PRLR-발현 세포주에서 검출되었으며, 배경보다 18배 내지 1400배로 높은 범위였다.
이어서, 세포 생육력을 감소시키는 항-PRLR-DM1 항체-약물 접합체(즉 비-절단성 링커[SMCC]를 통해 DM1에 접합된 항-PRLR 항체)의 능력을 시험관내 세포 기반 분석을 사용하여 측정하였다. 세포를 완전 생육 배지에서 웰당 1500 내지 10000 세포로 PDL-코팅된 96 웰 플레이트에 시딩하고 밤새 생육시켰다. 세포 생육력 곡선에 대해서, ADC 또는 유리 DM1(메틸 디설파이드 유도체 DM1-SMe로서)을 상기 세포에 500 nM 내지 5 pM 범위의 최종 농도로 가하고 3일 동안 배양하였다. 상기 293, PC3 및 T47D 세포를 최종 1 내지 3시간 동안 CCK8(도진도(Dojindo), 미국 메릴랜드주 록빌 소재)과 배양하고 450 ㎚에서의 흡광도(OD450)를 플렉스스테이션3(Flexstation3)(몰레큘라 디바이시즈(Molecular Devices), 미국 캘리포니아주 서니베일 소재)상에서 측정하였다. MCF7 세포를 4% 포름알데히드로 고정시키면서 훽스트 33342 핵 염료로 처리하였다. 이미지엑스프레스 마이크로 XL(몰레큘라 디바이시즈, 미국 캘리포니아주 서니베일 소재)상에서 상들을 획득하고 핵 수를 콜럼버스 이미지 분석 소프트웨어(퍼킨 엘머, 미국 코넥티컷주 쉘톤 소재)를 통해 측정하였다. 배경 OD450 값(PC3, 293 및 T47D) 또는 디지토닌(40 nM) 처리된 세포로부터의 핵 수(MCF7)를 모든 웰에서 공제하고 생육력을 처리되지 않은 대조용의 백분율로서 나타내었다. IC50 값을 10-포인트 반응 곡선(그래프패드 프리즘)에 대한 4-매개변수 로지스틱 방정식으로부터 측정하였다. IC50 값 및 세포 살해 퍼센트를 표 11 및 12에 나타낸다.
Figure pct00014
Figure pct00015
표 11 및 12에 요약된 바와 같이, 다수의 항-PRLR-DM1 항체-약물 접합체는 100 pM 정도로 낮은 IC50 값으로, 다수의 세포 배경에서 세포 생육력을 효능 있게 감소시켰다. 예시적인 항-PRLR 접합된 항체, H1H6958N2-DM1은 HEK293, PC3 및 MCF7-PRLR 발현 세포의 세포 생육력을 100 pM 내지 460 pM 범위의 nM 이하 IC50으로 감소시켰고, 내인성 발현 T47D 세포를 1.3 nM의 IC50으로 살해하였다. 유사하게 접합된 항-PRLR 대조용 I 항체(대조용 I-DM1)는 모든 세포주에 걸쳐 H1H6958N2-DM1보다 효능이 수배 미만이었다. 비-결합 아이소타입 대조용 및 비접합 항체는 세포 생육력에 영향을 미치지 않았다.
추가로, T47D 세포에서 PRLR-SMCC-DM1 세포 살해에 대한 PRLR 리간드, PRL의 영향을 평가하였다. T47D 세포를 PRL(15 nM) 및 비-차단 항 PRLR 항체(H1H6782P) 또는 수용체 차단 항체(H1H6958N2)와 배양하였다. 결과를 표 13에 요약한다.
Figure pct00016
표 13에 나타낸 바와 같이, PRL의 존재는 상기 시험된 mAb의 세포 살해 효능에서 관찰된 2 내지 3배의 감소와 함께 PRLR ADC-매개된 세포 살해에 단지 보통의 영향만을 미쳤다.
상기 공-발현된 ErbB2 세포 표면 표적에 유사하게 접합된 항체와 비교된 항-PRLR 접합된 항체의 효능을 또한 평가하였다. PRLR 및 ErbB2는 모두 대부분의 유방암에서 발현되며, DM1에 접합된 항-ErbB2 항체는 ErbB2(+) 유방암 표적화에서 임상 효능을 나타내었다(문헌[Hurvitz et al; 2013]). DM1(대조용 II-DM1)에 접합된 ErbB2 대조용 항체(대조용 II)를 상기 생성된 세포주에서 시험관내 생육력 분석에서 시험하였다. 상기 항-ErbB2 접합된 항체와 비교된 접합된 항-PRLR 항체의 세포 살해 효능을 표 14 내지 17에 요약한다.
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
항-PRLR-DM1 항체는 심지어 비교적 낮은 수준의 PRLR 발현으로 세포를 유효하게 살해하였다. 예를 들어, H1H6953N-DM1(항-PRLR-DM1)은 T47D 세포(PRLR을 배경보다 단지 12X로 높게 발현한다)의 성장을 1.3 nM의 IC50으로 억제하였으며 78% 살해를 나타내었다. 상기 동일한 항체는 또한 293/hPRLR 세포(PRLR을 배경보다 18X로 높게 발현한다)의 성장을 0.43 nM의 IC50으로 억제하였으며 93% 살해를 나타내었다. 상기 항-ErbB2-DM1 항체("대조용 II")에 의한 동등한 살해는, 상기 표적 항원을 배경보다 약 200X 내지 약 400배 초과로 높은 수준으로 발현하는 세포에서만 관찰되었다(예를 들어 ErbB2를 배경보다 238X로 높게 발현하는 PC3/hErbB2 및 ErbB2를 배경보다 437X로 높게 발현하는 T47D/hErbB2). 따라서, 이들 데이터는 항-PRLR 항체-약물 접합체가 비교적 낮은 수준의 PRLR 발현을 갖는 종양 세포를 유효하게 표적화하고 살해할 수 있는 반면, 항-ErbB2 항체 약물 접합체는 오직 매우 높은 ErbB2 발현 수준을 갖는 종양에 대해서만 유효함을 암시한다.
최종적으로, 비-절단성 링커 SMCC를 통해 DM1에 접합된 항-PRLR 항체의 효능을 절단성 링커: mc-vc-PAB(콘코르티스(Concortis)로부터 입수할 수 있다, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 통해 MMAE에 접합된 항-PRLR 항체의 세포 살해 효능과 비교하였다. 본 실험에 사용된 세포는 PC3, PC3/hPRLR, MCF7/ATCC 및 MCF7/PRLR이었다. 결과를 표 18에 나타낸다.
Figure pct00021
표 18에 나타낸 바와 같이, PC3/hPRLR 및 MCF7/hPRLR 세포주에서 거의 동등한 세포 살해가 상기 비-절단성 DM1 ADC(H1H6953-SMCC-DM1, H1H6958N2-SMCC-DM1, 및 H1H6765-SMCC-DM1) 및 상기 절단성 MMAE ADC(H1H6953-mc-vc-PAB-MMAE, H1H6958N2-mc-VC-PAB-MMAE, 및 H1H6765-mc-VC-PAB-MMAE) 모두에 대해 관찰되었다.
항-PRLR 항체에 접합된 항체 독소(DM4, MeNHC3-May, 및 MMD)를 또한 T47D 및 MCF7/hPRLR 세포주에서 시험하였으며, 결과를 표 19(293 및 T47D 세포 살해) 및 20(MCF7/ATCC 및 MCF7/PRLR 세포 살해)에 요약한다. (ND = 검출 안 됨).
Figure pct00022
Figure pct00023
시험된 항 PRLR ADC는 모두, 사용된 독소 및 링커에 관계없이, 시험된 세포들을 특이적으로 살해하였다. T47D 세포 생육력 IC50의 범위는 0.6 nM 내지 3.4 nM이었고, MCF7/hPRLR 세포 생육력 IC50의 범위는 0.2 nM 내지 0.8 nM이었다.
실시예 8. 항- PRLR 항체-약물 접합체는 생체내에서 종양 성장을 유효하게 억제한다
상기 항-PRLR-DM1 항체-약물 접합체의 생체내 효능을 측정하기 위해서, PRLR+ 유방암 이종이식편을 갖는 면역타협된 마우스에서 연구를 수행하였다.
간단히, 20 x 106 MCF7/PRLR 세포(앞서 개시한 바와 같은 완전길이 hPRLR로 형질감염된 ATCC HTB-22)를 암컷 NCr 누드 마우스의 좌측 유방 지방체에 피하 이식하였다. 다른 연구에서, 10 x 106 PC3/PRLR 세포(앞서 개시한 바와 같은 완전길이 hPRLR로 형질감염된 ATCC CRL-1435)를 수컷 SCID 마우스의 좌측 옆구리에 피하 이식하였다. 추가로, 10 x 106 모 T47D(ATCC HTB-133) 또는 7.5 x 1010 T47D#11 세포(하기에 개시하는 바와 같이 생체내에서 연속 계대배양된 ATCC HTB-133)를 암컷 CB17 SCID 마우스의 좌측 옆구리에 피하 이식하였다. 모든 마우스는 타코닉(Taconic, 미국 뉴욕주 허드슨 소재)으로부터 얻었다. 각 세포 덩어리에 90-일 에스트로젠 방출 펠릿(1.7 ㎎/펠릿; 이노베이티브 리써치 아메리카(Innovative Research America), 미국 플로리다주 사라소타 소재)을 보충하였다. 일단 종양이 250 ㎣의 평균 부피에 도달하였으면, 마우스를 7개의 그룹으로 무작위 분할하고 본 발명의 항-PRLR 항체-약물 접합체 또는 대조용 시약을 투여하였다. 대조용 시약은 PBS 비히클, 유리 메틸-디설파이드 DM1(DM1-SMe) 및 아이소타입 대조용 1-DM1을 포함하였다.
수회-용량 연구에서, 마우스에게 1주일에 1회, 총 3주 동안 투여하고 종양 부피 및 체중을 상기 연구 전체를 통해 매주 2회 모니터하였다. 시험 ADC를 상기 수회-용량 연구에서 5 및/또는 15 ㎎/㎏으로 투여하였다. 단일-용량 연구에서, 마우스에게 단일 용량의 시험 ADC를 제공하고, 종양 부피 및 체중을 상기 연구 전체를 통해 매주 2회 모니터하였다. 시험 ADC를 상기 단일-용량 연구에서 1, 2.5, 5 및 15 ㎎/㎏으로 투여하였다. 비히클 처리된 그룹에 대한 평균 종양 크기뿐만 아니라 종양 성장 억제를 각 그룹에 대해 계산하였다. 종양을 상기 비히클 그룹의 평균 크기가 1000 ㎣에 도달할 때까지 1주일에 2회 캘리퍼스로 측정하였다. 종양 크기를 식 (길이 x 너비2)/2를 사용하여 계산하였다. 종양 성장 억제를 식 (1 - ((T최종 - T초기)/(C최종 - C초기))) x 100(여기에서 T(처리된 그룹) 및 C(대조용 그룹)는 상기 비히클 그룹이 1000 ㎣에 도달한 날의 평균 종양 질량을 나타낸다)에 따라 계산하였다. 동물들을 제52일까지 관찰하였다. 결과를 표 21 내지 25(수회-용량) 및 표 26(단일 용량)에 요약한다. (NT = 나타낸 특정 실험에서 시험 안 됨).
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
논의
본 실시예에서, DM1에 접합된 5개의 예시적인 항-PRLR 항체를 초기에 수회-용량 연구에서 MCF7/PRLR 및 PC3/PRLR 종양 부피를 감소시키는 능력에 대해 평가하였다. 상기 첫 번째 수회-용량 시험(표 21)에서, H1H6958N2-DM1, H1H6953N-DM1 및 H1H6975N-DM1 항체들은 5 및 15 ㎎/㎏ 용량 모두에서 MCF7/PRLR 종양 성장을 효능 있게 억제하였다. 최고의 용량에서, 3개의 DM1 접합된 항체는 모두 종양을 검출할 수 없는 수준으로 감소시켰으며, 이때 종양 부피의 감소 퍼센트는 약 133 내지 135%였다. 이러한 발견은 H1H6958N2-DM1을 DM1:H1H6782P 및 H1H6765P에 접합된 2개의 추가의 예시적인 항-PRLR 항체와 나란히 시험했을 때 2차 수회-용량 시험(표 22)에서 반복되었다. 상기 두 번째 시험에서, 종양 성장은 또한 15 ㎎/㎏의 최고 용량에서 검출할 수 없는 수준으로 감소하였으며, 이때 종양 부피의 감소 퍼센트는 136 내지 137%였다. 비접합 항-PRLR 항체에 의한 처리는 상기 비히클 그룹에 비해 보통의 종양 부피 감소(17 내지 79%)를 생성시켰지만, 종양 크기의 가장 큰 억제는 항체-약물 접합체로 처리된 코호트에서 관찰되었다.
이어서, 상기 동일한 예시적인 항-PRLR-DM1 항체들의 항-종양 효능을, PRLR 양성 PC3/PRLR 이종이식편을 갖는 마우스에서 수회-용량 연구에서 평가하였다(표 23 및 24). 마우스를, 21일 동안 종양 성장시킨 후에 처리하였다. H1H6958N2-DM1, H1H6953N-DM1 및 H1H6975N-DM1은 모두, 특히 15 ㎎/㎏의 최고 용량에서 종양 성장의 억제를 나타내었다(표 23). 항-종양 효과는, H1H6958N2-DM1을 15일의 종양 성장 후 H1H6765P-DM1 및 H1H6782P-DM1과 나란히 시험하였을 때 두 번째 시험에서 유사하게 관찰되었다. 투여된 최고 용량에서, 시험들 전체에서 종양 억제 범위는 38 내지 98%였다(표 24). 비교시, DM1에 접합된 아이소타입-대조용은 단지 16%의 종양 억제만을 생성시켰으며, 이때 최종 종양 부피는 비히클 대조용과 그다지 다르지 않았다.
5 및 15 ㎎/㎏으로 반복 투여된 상기 항-PRLR ADC의 추가적인 평가를, PRLR을 내인성으로 발현하는 T47D#11 이종이식편을 갖는 마우스에서 수행하였다. 다른 종양 모델들에서와 같이, 투여는 종양 크기가 평균 200 ㎣에 달했을 때 개시되었다. 상기 종양 모델에서 획득된 결과들은 선행 결과들과 일관되었으며 DM1에 접합된 상기 항-PRLR 항체의 항-종양 활성을 명백히 입증하였다. 예를 들어, H1H6958N2-DM1, H1H6765P-DM1 및 H1H6782P-DM1 ADC는 5 및 15 ㎎/㎏ 용량 모두에서 종양 성장을 효능 있게 억제하였다. 5 ㎎/㎏에서 항-PRLR-DM1 접합된 항체는 89 내지 100% 종양 억제를 나타낸 반면 15 ㎎/㎏에서 DM1-접합된 항체는 106 내지 112% 종양 성장 억제를 생성시켰다. 중요하게, 비접합 항-PRLR 항체는 상기 내인성 종양 모델에서 어떠한 항-종양 효능도 갖지 않는 것으로 관찰되었으며, 이는 항-종양 효능의 생성에서 상기 DM1 접합체의 역할을 암시한다. 다시, 항-PRLR ADC의 효능은 대조용 ADC가 종양 성장에 어떠한 영향도 미치지 못했으므로, 매우 특이적이었다.
최종 실시예에서, 항-PRLR DM1-접합된 항체 H1H6958N2를 단일-용량 연구에서 MCF7/PRLR 이종이식된 마우스에서 평가하였다(표 26). 수회-용량 연구에서와 같이, 단일 용량 투여전에 확립된 종양을 대략 200 ㎣까지 성장시켰다. 여기에서, H1H6958N2-DM1을 1, 2.5, 5 및 15 ㎎/㎏으로 제공하였다. 표 26에 요약된 바와 같이, 용량 의존적인 항-종양 효과가 본 연구에 사용된 넓은 범위 전체에서 관찰되었다. 항-종양 효과는 모든 용량에서 관찰되었으며, 1 ㎎/㎏이 비히클 대조용 종양에 비해 종양 부피의 현저한 감소를 야기하였다. 더욱이, 15 ㎎/㎏의 아이소타입 대조용 I-DM1은 약간의 항-종양 효과(∼38% 종양 성장 억제)를 가졌지만, 2.5 ㎎/㎏ 및 그 이상의 항-PRLR-DM1의 용량은 종양 부피를 현저하게 감소시켰다(시험된 1 ㎎/㎏ 이상의 모든 용량에서 >100% 종양 성장 억제). 5 및 15 ㎎/㎏의 단일 용량은 동일한 수준의 반복 투여에 따라 관찰된 경우에 필적하는 항-종양 효능을 나타내었으며, 이는 상기 항-PRLR ADC의 효능을 예시한다.
요약하면, 본 실시예는 본 발명의 접합된 항-PRLR 항체가 종양 성장의 효능 있는 억제제이며 시험된 다양한 종양 모델에서 종양 크기를 검출할 수 없는 수준으로 감소시킬 수 있음을 예시한다.
실시예 9. I 부류 사이토카인 수용체에 대한 항체-약물 접합체는 낮은 수준의 표적 항원을 발현하는 세포주를 유효하게 살해한다
본 발명 어딘가에서 논의된 바와 같이, PRLR에 대한 항체-약물 접합체는 PRLR-발현 세포주, 심지어 비교적 낮은 수준의 표적 항원을 발현하는 것들을 유효하게 살해한다. 앞서 나타낸 바와 같이, PRLR은 IL-4R 및 IL-6R을 포함하는 I 부류 사이토카인 수용체 과에 속한다. PRLR과 유사하게, IL-4R 및 IL-6R은 단일-통과 막관통 수용체이며; IL-4R은 IL-4 및 IL-3 신호전달을 매개하는 반면, IL-6R은 gp130 수용체와의 공-복합체를 통해 IL-6 신호전달을 매개한다. I 부류 사이토카인 수용체를 겨누는 ADC를 사용하여, 낮은 수준의 표적 항원을 발현하는 세포를 포함한 세포를 유효하게 살해할 수 있다는 일반적인 개념의 추가적인 지지에서, IL-4R 및 IL-6R을 겨누는 ADC의 세포-살해 능력을 평가하였다.
IL-4R 또는 IL-6R을 내인성으로 또는 재조합적으로 발현하는 세포상의 세포 표면 항원 수준을 먼저 FACS를 사용하여 확립시켰다. 간단히, 대략 100만 KG-1(IL-4R+), HEK293/IL-4R 및 라모스(IL-6R+) 세포를 예시적인 항-IL-4R(H4H083P2, 미국특허 제 7,608,693 호를 참조하시오) 및 항-IL-6R(VV6A9-5, 미국특허 제 7,582,298 호를 참조하시오) 항체와 얼음상에서 30분 동안 배양하였다. 세척 후에, PE-접합된 항-인간 2차 항체(10 ㎍/㎖)를 30분 동안 가한 다음 2차 세척 단계, 및 플로우조 소프트웨어(트리 스타 인코포레이티드, 미국 오리건주 애쉬랜드 소재)를 사용하여 애큐리 C6 세포계상에서 후속 분석을 수행하였다. 상대적인 IL-4R 및 IL-6R 세포 표면 발현 수준을 아이소타입 대조용 수준에 대한 평균 형광 강도(MFI)로서 계산하였다. 발현 수준을 표 27에 요약한다.
Figure pct00030
표 27에 나타낸 바와 같이, HEK293 및 라모스 세포는 IL-4R을 배경보다 각각 2배 및 4배의 수준으로 내인성으로 발현한 반면, 조작된 HEK293/IL-4R 세포주는 IL-4R을 배경보다 50배 수준으로 발현하였다. IL-4R 발현은 KG-1 세포상에서 배경보다 검출될 수 없었다. IL-6R 발현은 KG-1 세포에서 배경 수준에 대해 7배로 검출되었으며 HEK293 또는 라모스 세포주상에서는 검출되지 않았다.
이어서, 예시적인 항-IL-4R(H4H083P2) 및 항-IL-6R(VV6A9-5) 항체를 세포독성 약물 DM1에 접합시키고 세포독성 분석에서 그의 효능을 평가하였다. 간단히, HEK293/IL-4R, 라모스 또는 KG-1 세포주뿐만 아니라, HEK293 모 세포를 PDL-코팅된 96-웰 플레이트에 1500 내지 10,000 세포/웰로 시딩하였다. ADC 또는 유리 DM1(메틸 디설파이드 유도체 DM1-SMe로서)을 상기 세포에 300 nM 내지 15 pM 범위의 최종 농도로 가하고 3일 동안 배양하였다. 세포를 최종 1 내지 3시간 동안 CCK8(도진도, 미국 메릴랜드주 록빌 소재)과 배양하고 450 ㎚에서의 흡광도(OD450)를 플렉스스테이션3(몰레큘라 디바이시즈, 미국 캘리포니아주 서니베일 소재)상에서 측정하였다. 디지토닌(40 nM) 처리된 세포로부터의 배경 OD450 값을 모든 웰에서 공제하고 생육력을 처리되지 않은 대조용의 백분율로서 나타내었다. IC50 값을 10-포인트 반응 곡선(그래프패드 프리즘)에 대한 4-매개변수 로지스틱 방정식으로부터 측정하였다. 결과를 표 28에 나타낸다.
Figure pct00031
표 28에 나타낸 바와 같이, 항-IL-4R-DM1 항체-약물 접합체는 라모스 세포 생육력을, 배경 수준에 대해 단지 4배의 IL-4R 발현에도 불구하고, 18 nM의 IC50 값으로 감소시켰다. IL-4R-DM1 ADC는 높은 IL-4R-발현 HEK293/IL-4R 생육력을 0.22 nM의 IC50으로 감소시켰다. 항-IL-6R-DM1 항체-약물 접합체는, 동등하게 접합된 아이소타입 대조용 ADC에 의한 100 nM의 IC50 값에 비해 38 nM의 IC50 값으로 KG-1 세포(배경보다 7배의 수준으로 IL-6을 발현한다)의 생육력에 대해 보통이지만 재현가능한 영향을 미쳤다.
요약하면, 본 실시예는 항-IL-4R 및 항-IL-6R 항체 약물 접합체가 보통의 수용체 수준을 발현하는 세포주에 대해서조차 효능 있고 재현 가능한 세포독성을 나타내었음을 입증한다. 상기 결과는 낮은 수준의 PRLR을 발현하는 세포에 대해서조차 효능 있는 세포 살해를 획득한 항-PRLR ADC에 대해 관찰된 경우(예를 들어 본 발명의 실시예 7을 참조하시오)와 유사하다. 따라서, 본 실시예는 항-I 부류 사이토카인 수용체 ADC가 일반적으로, 심지어 낮은 수준으로 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포주 및 종양에 대해 유효한 치료제일 수 있다는 진보적인 개념에 대한 추가적인 지지를 제공한다.
본 발명은 본 발명에 개시된 특정한 실시태양들에 의해 범위가 제한되지 않는다. 실제로, 본 발명의 다양한 변형들은 본 발명에 개시된 것들 외에 상기 설명 및 첨부된 도면으로부터 당해 분야의 숙련가들에게 자명해질 것이다. 상기와 같은 변형을 첨부된 특허청구범위의 범위 내에 포함시키고자 한다.
SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> ANTI-PRLR ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> IPA160120-US <140> PCT/US2014/051831 <141> 2014-08-20 <150> 61/868,185 <151> 2013-08-21 <150> 62/012,440 <151> 2014-06-16 <150> 62/026,088 <151> 2014-07-18 <160> 404 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt cactatggca tggtctgggt ccgccagcct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcactt atatcatttg atggaactac taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctatat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt atttctgtgt tggggctatt 300 gcagcagctg ccttcgatct ctggggccgt ggcaccctgg tcactgtctc ctca 354 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 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Gln 180 185 190 Gln Thr Glu Phe Lys Ile Leu Ser Leu His Pro Gly Gln Lys Tyr Leu 195 200 205 Val Gln Val Arg Cys Lys Pro Asp His Gly Tyr Trp Ser Ala Trp Ser 210 215 220 Pro Ala Thr Phe Ile Gln Ile Pro Ser Asp Phe Thr Met Asn Asp Glu 225 230 235 240 Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile 260 265 270 Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val 290 295 300 Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln 325 330 335 Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 340 345 350 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val 355 360 365 Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr 370 375 380 Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu 385 390 395 400 Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr 405 410 415 Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr 420 425 430 Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr 435 440 445 Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys 450 455 460 Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 465 470 <210> 403 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> monkey (mf) PRLR ecto-mmH <400> 403 Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Pro Leu Ala Leu 1 5 10 15 Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Asp Ala Gln Leu Pro 20 25 30 Pro Gly Lys Pro Glu Ile Phe Lys Cys Arg Ser Pro Asn Lys Glu Thr 35 40 45 Phe Thr Cys Trp Trp Arg Pro Gly Thr Asp Gly Gly Leu Pro Thr Asn 50 55 60 Tyr Ser Leu Thr Tyr His Arg Glu Gly Glu Thr Leu Met His Glu Cys 65 70 75 80 Pro Asp Tyr Ile Thr Gly Gly Pro Asn Ser Cys His Phe Gly Lys Gln 85 90 95 Tyr Thr Ser Met Trp Arg Thr Tyr Val Met Met Val Asn Ala Thr Asn 100 105 110 Gln Met Gly Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu Tyr Val Asp Val Thr Tyr 115 120 125 Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Leu Glu Leu Thr Val Glu Val Lys Gln 130 135 140 Pro Glu Asp Arg Lys Pro Tyr Leu Trp Met Lys Trp Ser Pro Pro Thr 145 150 155 160 Leu Ile Asp Leu Lys Thr Gly Trp Phe Thr Leu Leu Tyr Glu Ile Arg 165 170 175 Leu Lys Pro Glu Lys Ala Ala Glu Trp Glu Thr His Phe Ala Gly Gln 180 185 190 Gln Thr Glu Phe Lys Ile Leu Ser Leu His Pro Gly Gln Lys Tyr Leu 195 200 205 Val Gln Val Arg Cys Lys Pro Asp His Gly Tyr Trp Ser Ala Trp Ser 210 215 220 Pro Ala Thr Phe Ile Gln Ile Pro Ser Asp Phe Ile Met Asn Asp Glu 225 230 235 240 Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile 245 250 255 Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His His 260 265 <210> 404 <211> 622 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> full length human PRLR <400> 404 Met Lys Glu Asn Val Ala Ser Ala Thr Val Phe Thr Leu Leu Leu Phe 1 5 10 15 Leu Asn Thr Cys Leu Leu Asn Gly Gln Leu Pro Pro Gly Lys Pro Glu 20 25 30 Ile Phe Lys Cys Arg Ser Pro Asn Lys Glu Thr Phe Thr Cys Trp Trp 35 40 45 Arg Pro Gly Thr Asp Gly Gly Leu Pro Thr Asn Tyr Ser Leu Thr Tyr 50 55 60 His Arg Glu Gly Glu Thr Leu Met His Glu Cys Pro Asp Tyr Ile Thr 65 70 75 80 Gly Gly Pro Asn Ser Cys His Phe Gly Lys Gln Tyr Thr Ser Met Trp 85 90 95 Arg Thr Tyr Ile Met Met Val Asn Ala Thr Asn Gln Met Gly Ser Ser 100 105 110 Phe Ser Asp Glu Leu Tyr Val Asp Val Thr Tyr Ile Val Gln Pro Asp 115 120 125 Pro Pro Leu Glu Leu Ala Val Glu Val Lys Gln Pro Glu Asp Arg Lys 130 135 140 Pro Tyr Leu Trp Ile Lys Trp Ser Pro Pro Thr Leu Ile Asp Leu Lys 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Thr Leu Leu Tyr Glu Ile Arg Leu Lys Pro Glu Lys 165 170 175 Ala Ala Glu Trp Glu Ile His Phe Ala Gly Gln Gln Thr Glu Phe Lys 180 185 190 Ile Leu Ser Leu His Pro Gly Gln Lys Tyr Leu Val Gln Val Arg Cys 195 200 205 Lys Pro Asp His Gly Tyr Trp Ser Ala Trp Ser Pro Ala Thr Phe Ile 210 215 220 Gln Ile Pro Ser Asp Phe Thr Met Asn Asp Thr Thr Val Trp Ile Ser 225 230 235 240 Val Ala Val Leu Ser Ala Val Ile Cys Leu Ile Ile Val Trp Ala Val 245 250 255 Ala Leu Lys Gly Tyr Ser Met Val Thr Cys Ile Phe Pro Pro Val Pro 260 265 270 Gly Pro Lys Ile Lys Gly Phe Asp Ala His Leu Leu Glu Lys Gly Lys 275 280 285 Ser Glu Glu Leu Leu Ser Ala Leu Gly Cys Gln Asp Phe Pro Pro Thr 290 295 300 Ser Asp Tyr Glu Asp Leu Leu Val Glu Tyr Leu Glu Val Asp Asp Ser 305 310 315 320 Glu Asp Gln His Leu Met Ser Val His Ser Lys Glu His Pro Ser Gln 325 330 335 Gly Met Lys Pro Thr Tyr Leu Asp Pro Asp Thr Asp Ser Gly Arg Gly 340 345 350 Ser Cys Asp Ser Pro Ser Leu Leu Ser Glu Lys Cys Glu Glu Pro Gln 355 360 365 Ala Asn Pro Ser Thr Phe Tyr Asp Pro Glu Val Ile Glu Lys Pro Glu 370 375 380 Asn Pro Glu Thr Thr His Thr Trp Asp Pro Gln Cys Ile Ser Met Glu 385 390 395 400 Gly Lys Ile Pro Tyr Phe His Ala Gly Gly Ser Lys Cys Ser Thr Trp 405 410 415 Pro Leu Pro Gln Pro Ser Gln His Asn Pro Arg Ser Ser Tyr His Asn 420 425 430 Ile Thr Asp Val Cys Glu Leu Ala Val Gly Pro Ala Gly Ala Pro Ala 435 440 445 Thr Leu Leu Asn Glu Ala Gly Lys Asp Ala 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Claims (41)

  1. 프로락틴 수용체(PRLR)에 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로,
    (i) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 약 4.0 nM 미만의 KD로 37 ℃에서 단량체성 인간 PRLR에 결합하고;
    (ii) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 약 5분 초과의 t½로 37 ℃에서 단량체성 인간 PRLR에 결합하고;
    (iii) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 약 250 pM 미만의 KD로 37 ℃에서 이량체성 인간 PRLR에 결합하고;
    (iv) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 약 55분 초과의 t½로 37 ℃에서 이량체성 인간 PRLR에 결합하고;
    (v) 약 1.3 nM 미만의 IC50으로 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단함
    으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 특성들을 나타내는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  2. 세포 표면-발현된 프로락틴 수용체(PRLR)에는 결합하지만 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하지 않는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  3. 세포 표면-발현된 프로락틴 수용체(PRLR)에 결합하고 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  4. 제3항에 있어서,
    약 1.3 nM 미만의 IC50으로 인간 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  5. 프로락틴 수용체(PRLR)에 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로, (a) 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  6. 제5항에 있어서,
    표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  7. 세포독성제에 접합된 인간 프로락틴 수용체(PRLR)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)로서, PRLR을 발현하는 세포의 성장을 억제하는 ADC.
  8. 세포독성제에 접합된 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC).
  9. 제8항에 있어서,
    세포독성제가 메이탄시노이드인 ADC.
  10. 제9항에 있어서,
    메이탄시노이드가 DM1, DM4 또는 그의 유도체인 ADC.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    메이탄시노이드가 절단성 링커를 통해 항체에 연결된 ADC.
  12. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    메이탄시노이드가 비-절단성 링커를 통해 항체에 연결된 ADC.
  13. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    세포독성제가 아우리스타틴인 ADC.
  14. 제7항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    5 nM 미만의 IC50으로, 배경보다 30배 미만으로 높은 발현 수준으로 PRLR을 발현하는 세포를 살해하는 ADC.
  15. 제14항에 있어서,
    5 nM 미만의 IC50으로, 배경보다 20배 미만으로 높은 발현 수준으로 PRLR을 발현하는 세포를 살해하는 ADC.
  16. 제14항에 있어서,
    5 nM 미만의 IC50으로, 배경보다 12배 초과 내지 30배 미만으로 높은 발현 수준으로 PRLR을 발현하는 세포를 살해하는 ADC.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 항원-결합 단편이 서열번호 18/26; 66/74; 274/282; 290/298; 및 370/378로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 기준 항체와 PRLR에의 결합에 대해 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 ADC.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 그의 항원-결합 단편이 서열번호 18/26; 66/74; 274/282; 290/298; 및 370/378로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 기준 항체와 동일한 PRLR상의 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 ADC.
  19. 낮은 수준의 PRLR을 발현하는 세포의 살해 방법으로, 상기 세포를 세포독성제에 접합된 항-PRLR 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)와 접촉시킴을 포함하는 방법.
  20. 제19항에 있어서,
    세포가 종양 세포인 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    종양 세포가 세포당 100만 카피 미만의 PRLR을 발현하는 방법.
  22. 제21항에 있어서,
    종양 세포가 세포당 10,000 내지 500,000 카피의 PRLR을 발현하는 방법.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포독성제가 메이탄시노이드인 방법.
  24. 제23항에 있어서,
    메이탄시노이드가 DM1 또는 DM4인 방법.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서,
    메이탄시노이드가 절단성 링커를 통해 항체에 연결되는 방법.
  26. 제23항 또는 제24항에 있어서,
    메이탄시노이드가 비-절단성 링커를 통해 항체에 연결되는 방법.
  27. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포독성제가 아우리스타틴인 방법.
  28. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-PRLR 항체가 세포 표면-발현된 PRLR에는 결합하지만 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하지 않는 방법.
  29. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-PRLR 항체가 세포 표면-발현된 프로락틴 수용체(PRLR)에 결합하고 PRLR을 발현하는 세포에서 프로락틴-매개된 신호전달을 차단하는 방법.
  30. 제19항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포가 배경보다 약 60배 미만으로 높은 발현 수준으로 PRLR을 발현하는 방법.
  31. 제30항에 있어서,
    세포가 배경보다 약 20배 미만으로 높은 발현 수준으로 PRLR을 발현하는 방법.
  32. 제19항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-PRLR 항체가 (a) 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함하는 방법.
  33. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제7항 내지 제16항 중 어느 한 항의 ADC, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
  34. 종양 성장을 억제하거나 약화시키는 방법으로, 제33항의 약학 조성물을 종양을 앓고 있는 환자에게 투여함을 포함하는 방법.
  35. 제34항에 있어서,
    종양이 신장 종양, 췌장 종양, 두경부 종양, 유방 종양, 전립선 종양, 결장 종양, 위 종양, 및 난소 종양, 폐 종양, 및 피부 종양으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 방법.
  36. 환자에서 종양 성장을 억제하거나 약화시키는 방법으로, 상기 환자에게 제33항의 약학 조성물, 및 제2 치료제를 투여함을 포함하고, 상기 제2 치료제가 HER2, ErbB3, ErbB4, cMet, IGF1R, Ang2, PDGFR-α 또는 PDGFR-β에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 방법.
  37. 환자에서 종양 성장을 억제하거나 약화시키는 방법으로, 상기 환자에게 제33항의 약학 조성물, 및 제2 치료제를 투여함을 포함하고, 상기 제2 치료제가 VEGF 길항물질인 방법.
  38. 환자에서 종양 성장을 억제하거나 약화시키는 방법으로, 상기 환자에게 제33항의 약학 조성물, 및 제2 치료제를 투여함을 포함하고, 상기 제2 치료제가 화학요법제인 방법.
  39. I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC).
  40. 낮은 수준의 I 부류 사이토카인 수용체를 발현하는 세포의 살해 방법으로, 상기 세포를 세포독성제에 접합된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)와 접촉시킴을 포함하고, 상기 항체 또는 항원-결합 단편이 상기 I 부류 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합하는 방법.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서,
    I 부류 사이토카인 수용체가 IL-2R, IL-4R, IL-7R, IL-9R, IL-13R, IL-15R, IL-3R, IL-5R, IL-6R, IL-11R, CNTF 수용체, LIF 수용체, OSM 수용체, IL-12R, EPO 수용체, G-CSF 수용체, 렙틴 수용체 및 PRLR로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 ADC 또는 방법.
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