EA034950B1 - Производные майтанзиноида, их конъюгаты и способы использования - Google Patents
Производные майтанзиноида, их конъюгаты и способы использования Download PDFInfo
- Publication number
- EA034950B1 EA034950B1 EA201700464A EA201700464A EA034950B1 EA 034950 B1 EA034950 B1 EA 034950B1 EA 201700464 A EA201700464 A EA 201700464A EA 201700464 A EA201700464 A EA 201700464A EA 034950 B1 EA034950 B1 EA 034950B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- compound
- antibody
- implementations
- formula
- integer
- Prior art date
Links
- 0 CCC(C)(*)C(CCCCC(N[C@@](C(C)C)C(NC1(C(CCNC(N)=O)C1)C(Nc1cc(O)ccc1C(N(C[C@@]1(C[C@](C[C@]([C@@](C=CC=C(C)Cc(cc2OC)cc(N(C)C(C3)=O)c2Cl)OC)(N2)O)OC2=O)O[C@@]1(C)[C@]3O1)[C@@](C)C1=O)=O)=O)=O)=O)=O Chemical compound CCC(C)(*)C(CCCCC(N[C@@](C(C)C)C(NC1(C(CCNC(N)=O)C1)C(Nc1cc(O)ccc1C(N(C[C@@]1(C[C@](C[C@]([C@@](C=CC=C(C)Cc(cc2OC)cc(N(C)C(C3)=O)c2Cl)OC)(N2)O)OC2=O)O[C@@]1(C)[C@]3O1)[C@@](C)C1=O)=O)=O)=O)=O)=O 0.000 description 3
- BYRGDWLRLNGTCP-HWQNMXLQSA-N CC(C)[C@@H](C(N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(Nc(ccc(C(N(C)[C@@H](C)C(O[C@@H](CC(N(C)c(cc(C/C(/C)=C/C=C/[C@H]([C@@](C1)(N2)O)OC)cc3OC)c3Cl)=O)[C@]3(C)O[C@H]3C[C@H]1OC2=O)=O)=O)c1)c1N1CCOCC1)=O)=O)NC(NCCCCN(C(C=C1)=O)C1=O)=S Chemical compound CC(C)[C@@H](C(N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(Nc(ccc(C(N(C)[C@@H](C)C(O[C@@H](CC(N(C)c(cc(C/C(/C)=C/C=C/[C@H]([C@@](C1)(N2)O)OC)cc3OC)c3Cl)=O)[C@]3(C)O[C@H]3C[C@H]1OC2=O)=O)=O)c1)c1N1CCOCC1)=O)=O)NC(NCCCCN(C(C=C1)=O)C1=O)=S BYRGDWLRLNGTCP-HWQNMXLQSA-N 0.000 description 1
- PTMNMZKKROUAPP-HHGNYWQVSA-N CC(C)[C@@H](C(N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(Nc1ccccc1C(N(C)[C@@H](C)C(O[C@@H](CC(N(C)c(cc(C/C(/C)=C/C=C/[C@H]([C@@](C1)(N2)O)OC)cc3OC)c3Cl)=O)[C@]3(C)O[C@H]3C[C@H]1OC2=O)=O)=O)=O)=O)NC(NCCOCCOCCC(ON(C(CC1)=O)C1=O)=O)=S Chemical compound CC(C)[C@@H](C(N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(Nc1ccccc1C(N(C)[C@@H](C)C(O[C@@H](CC(N(C)c(cc(C/C(/C)=C/C=C/[C@H]([C@@](C1)(N2)O)OC)cc3OC)c3Cl)=O)[C@]3(C)O[C@H]3C[C@H]1OC2=O)=O)=O)=O)=O)NC(NCCOCCOCCC(ON(C(CC1)=O)C1=O)=O)=S PTMNMZKKROUAPP-HHGNYWQVSA-N 0.000 description 1
- ORAIJESRWGDJHB-XLDUQJBBSA-N CC(C)[C@@H](C(N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(Nc1ccccc1C(N(C)[C@@H](C)C(O[C@@H](CC(N(C)c(cc(C/C(/C)=C/C=C/[C@H]([C@@](C[C@H](C)C1)(NC(O)=O)O)OC)cc2OC)c2Cl)=O)[C@@H](C)[C@H]1O)=O)=O)=O)=O)NC(NCCCCN(C(C=C1)=O)C1=O)=S Chemical compound CC(C)[C@@H](C(N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(Nc1ccccc1C(N(C)[C@@H](C)C(O[C@@H](CC(N(C)c(cc(C/C(/C)=C/C=C/[C@H]([C@@](C[C@H](C)C1)(NC(O)=O)O)OC)cc2OC)c2Cl)=O)[C@@H](C)[C@H]1O)=O)=O)=O)=O)NC(NCCCCN(C(C=C1)=O)C1=O)=S ORAIJESRWGDJHB-XLDUQJBBSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D498/18—Bridged systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D498/08—Bridged systems
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
В изобретении представлены майтанзиноидные производные, их конъюгаты и способы лечения или профилактики пролиферативных заболеваний с их помощью.
Description
Область изобретения
Заявляемое изобретение относится к производным майтанзиноидам, их конъюгатам и способам лечения пролиферативных заболеваний с их применением.
Уровень техники
Пролиферативные заболевания, например рак, характеризуются неуправляемым ростом идиобластов. К используемым способам лечения относятся хирургический, лучевая терапия, химиотерапия, гормональная терапия и/или иммунотерапия. В некоторых из этих способов лечения, особенно в химиотерапии, используются антипролиферативные лекарственные средства, ограничивающие распространение идиобластов. Однако эти лекарственные средства, как правило, не отличаются избирательностью в уничтожении клеток, уничтожая как здоровые клетки, так и идиобласты. Для решения этой проблемы было исследовано множество подходов, нацеленных на доставку лекарственного средства, включая применение конъюгатов зондов направленной доставки лекарственных средств в область опухоли (таких как антитела или факторы роста) с токсинами для избирательного нацеливания на идиобласты. Антительные конъюгаты лекарственных средств (ADC) представляют собой соединения, состоящие из антитела, связанного с цитотоксическим средством посредством химического линкера. Такие соединения регулируют связующее свойство антитела для его цели, чтобы доставить цитотоксическое средство к идиобласту. Таким образом, существует необходимость в антипролиферативных соединениях и их конъюгатах.
Краткое описание
Заявляются соединения с формулой (I)
(I) или их фармацевтически приемлемые соли, где А представляет собой арилен или гетероарилен;
L представляет собой линкер;
ВА представляет собой связующий агент и k является целым числом от 1 до 30.
Заявляются стереоизомеры соединения с формулой (I).
Заявляются также соединения с формулой (II)
о сн3 (П) или их фармацевтически приемлемая соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
Также заявляются стереоизомеры соединений с формулой (II). Заявляются также соединения с формулой РР5
- 1 034950
О СН3
РР5 или их соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
Также заявляются стереоизомеры соединений с формулой РР5. Заявляются также соединения с формулой РТ1
РТ1
РТ1 или их соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен,
L представляет собой линкер.
Также заявляются стереоизомеры соединений с формулой РТ1. Кроме того, заявляются способы лечения пролиферативных заболеваний, заключающиеся в приеме заявляемых соединений.
Помимо того, заявляются способы лечения пролиферативных заболевании, заключающиеся в применении заявляемых конъюгатов.
Также заявляются способы приготовления соединений с формулой (I), заключающиеся в реагировании дегликозилированного антитела или агликозилированного антитела с соединением с формулой (РТ1) в присутствии трансглютаминазы.
Краткое описание иллюстраций
На фиг. 1 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-И-метилЩаланин-4-аминобензамидо-цитруллин-валин-капролил-6-малеимидила.
На фиг. 2 изображен график зависимости % жизнеспособности соединений, тестированных в примере 41.
На фиг. 3 изображен график зависимости % жизнеспособности соединений, тестированных в примере 41.
На фиг. 4 изображен график зависимости % жизнеспособности соединений, тестированных в примере 41.
На фиг. 5 изображен график зависимости % жизнеспособности соединений, тестированных в примере 41.
На фиг. 6 изображена синтетическая последовательность аланин(4-амин-2-фтор)бензамид-Cit-Val-Cap-Mal.
На фиг. 7 изображена синтетическая последовательность аланин(4-амин-2-трифторметил)бензамид-Cit-Val-Cap-Mal.
На фиг. 8 изображена синтетическая последовательность аланин(4-амин-2-метокси)бензамид-Cit-Val-Сар-Mal.
На фиг. 9 изображена синтетическая аланин-4-аминобензамида.
На фиг. 10 изображена синтетическая аланин(2-фтор-4-амин)бензамида.
На фиг. 11 изображена синтетическая аланин(2-трифторметил-4-амин)бензамида.
На фиг. 12 изображена синтетическая аланин(2-метокси-4-амин)бензамида.
На фиг. 13 изображена синтетическая последовательность последовательность последовательность последовательность последовательность клетки клетки клетки клетки от от от от
Logw [M]
Logw [M]
Logw [M]
Logw [M] приготовления приготовления приготовления приготовления приготовления приготовления приготовления приготовления определенных определенных определенных определенных майтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩмайтансин-Х-метилЩ- 2 034950 аланин-Ы-(3-трифторметил-4-амин)бензамида.
На фиг. 14 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Ьаланин-Ы-(2-хлор-4-амин-5-фтор)бензамида.
На фиг. 15 изображена основная синтетическая схема приготовления соединений с формулой (II), где заместитель R определен ниже в настоящем изобретении.
На фиг. 16 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Ь-аланинЫ-(2,5-дифтор-4-амин)бензамида.
На фиг. 17 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Ьаланин(3 -фтор-4-амино)бензамида.
На фиг. 18 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(3 -хлор-4-амин)бензамида.
На фиг. 19 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(5-амино-8-карбоксиквинолин)карбоксамида.
На фиг. 20 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(3 -бром-4-амин)бензамида.
На фиг. 21 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(3-метокси-4-амин)бензамида.
На фиг. 22 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(2-метил-4-амин)бензамида.
На фиг. 23 изображена основная синтетическая схема приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(3-метил-4-амин)бензамида.
На фиг. 24 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(8-амин-5-карбоксиквинолин)карбоксамида.
На фиг. 25 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(3-метокси-4-амин)бензамид-Сй-Уа1-Сар-Ма1.
На фиг. 26 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин(2-фтор-4-амин)бензамид-Сй-Уа1-Сар-6-амина.
На фиг. 27 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин-N-(2-метокси-5 -амин)бензамида.
На фиг. 28 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин-N-(3 -амин-4-метокси)бензамида.
На фиг. 29 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин-N-(3 -амин-5 -фтор)бензамида.
На фиг. 30 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-Ы-метил-Lаланин-N-(2-фтор-5 -амин)бензамида.
На фиг. 31 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(3 -амин)бензамида.
На фиг. 32 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(3 -амин-4-фтор)бензамида.
На фиг. 33 изображена синтетическая последовательность приготовления ма^анин-М-метал-Еаланин-N -аминобензамид-адипин-NHS.
На фиг. 34 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-4-аминобензамид-Сар-Ма1.
На фиг. 35 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(3 -метилсульфонил-4 -амин)бензамида.
На фиг. 36 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(3 -гидрокси-4-амин)бензамида.
На фиг. 37 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(2-амин)бензамида.
На фиг. 38 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(4-метокси-2-амин)бензамида.
На фиг. 39 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-N-(3-морфолин-4-амин)бензамида.
На фиг. 40 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-И-(3-ацетамид-4-амин)бензамида.
На фиг. 41 изображена синтетическая последовательность приготовления майтансин-N-метил-Lаланин-И^-аминобензамид-Сй-УаЕсар-дибромметилакрил.
На фиг. 42 изображен деконволюционный массовый спектр (MS) конъюгата антительного лекарственного средства, конъюгат PRLR-Q-63 из примера 43.
На фиг. 43 изображен деконволюционный спектр MS конъюгата изотипического контроляЮ-63 из примера 43.
На фиг. 44 изображен график зависимости % жизнеспособности клетки от Log10 [М] определенных
- 3 034950 соединений, тестированных в примере 45.
На фиг. 45 изображен график зависимости % жизнеспособности клетки от Logic [М] определенных соединений, тестированных в примере 45.
На фиг. 46 изображен график зависимости % жизнеспособности клетки от Log10 [М] определенных соединений, тестированных в примере 45.
На фиг. 47 изображен график зависимости % жизнеспособности клетки от Log10 [М] определенных соединений, тестированных в примере 45.
Описание изобретения
А. Определения.
В настоящем изобретении термин алкил относится к молекулярному фрагменту моновалентного и насыщенного углеводородного радикала. Алкил является дополнительно замещенным и может быть линейным, разветвленным или циклическим, как, например, циклоалкил. Алкил включает, без ограничения перечисленным далее, вещества с 1-20 атомами углерода, например С1-20алкил; 1-12 атомами углерода, например С1-12алкил; 1-8 атомами углерода, например С1-8алкил; 1-6 атомами углерода, например С1-6алкил; и 1-3 атомами углерода, например С1-3алкил. К примерам молекулярных фрагментов алкила относятся, без ограничения перечисленным далее, метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, s-бутил, tбутил, i-бутил, молекулярные фрагменты пентила, молекулярные фрагменты гексила, циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
В настоящем изобретении термин галоалкил относится к алкилу, определенному выше, где алкил включает в себя как минимум один заместитель, выбранный из галогена, например, F, Cl, Br или I.
В настоящем изобретении термин алкенил относится к молекулярному фрагменту моновалентного углеводородного радикала, содержащего как минимум два атома углерода и одну или более неароматическую углерод-углеродную связь. Алкенил является дополнительно замещенным и может иметь линейную, разветвленную или циклическую структуру. Алкенил включает, не ограничиваясь перечисленным далее, вещества, содержащие 2-20 атомов углерода, например С2-20алкенил; 2-12 атомов углерода, например С2-12алкенил; 2-8 атомов углерода, например С2-8алкенил; 2-6 атомов углерода, например С2-6алкенил; и 2-4 атомов углерода, например С2-4алкенил. К примерам молекулярных фрагментов алкенила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, винил, пропенил, бутенил и циклогексенил.
В настоящем изобретении термин алкинил относится к молекулярному фрагменту моновалентного углеводородного радикала, содержащего как минимум два атома углерода и одну или более тройную углерод-углеродную связь. Алкинил является дополнительно замещенным и может иметь линейную, разветвленную или циклическую структуру. Алкинил включает, не ограничиваясь перечисленным далее, вещества, содержащие 2-20 атомов углерода, например С2-20алкинил; 2-12 атомов углерода, например С2-12алкинил; 2-8 атомов углерода, например С2-8алкинил; 2-6 атомов углерода, например С2-6алкинил; и 2-4 атомов углерода, например С2-4алкинил. К примерам молекулярных фрагментов алкинила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, этинил, пропинил и бутинил.
В настоящем изобретении термин алкокси относится к молекулярному фрагменту моновалентного и насыщенного углеводородного радикала, где углеводород включает единичную связь с атомом кислорода и где радикал локализован на атоме кислорода, например CH3CH2-O, для этокси. Алкокси заместители связаны с соединением, где они замещают через этот атом кислорода алкокси заместителя. Алкокси является дополнительно замещенным и может быть линейным, разветвленным или циклическим, как, например, циклоалкокси. Алкокси включает, не ограничиваясь перечисленным далее, вещества, содержащие 1-20 атомов углерода, например С1-20алкокси; 1-12 атомов углерода, например С1-12алкокси; 18 атомов углерода, например С1-8алкокси; 1-6 атомов углерода, например С1-6алкокси; и 1-3 атомов углерода, например С1-3алкокси. К примерам молекулярных фрагментов алкокси относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, метокси, этокси, n-пропокси, i-пропокси, n-бутокси, s-бутокси, t-бутокси, iбутокси, молекулярный фрагмент пентокси, молекулярный фрагмент гексокси, циклопропокси, циклобутокси, циклопентокси и циклогексокси.
В настоящем изобретении термин галоалкокси относится к алкокси, определенному выше, где алкокси включает в себя как минимум один заместитель, выбранный из галогена, например, F, Cl, Br или I.
В настоящем изобретении термин арил относится к молекулярному фрагменту радикала ароматического соединения, где кольцо состоит исключительно из атомов углерода. Арил является дополнительно замещенным и может иметь моноцикличную или полицикличную структуру, например, может быть бицикличным или трицикличным. К примерам молекулярных фрагментов арила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, вещества, содержащие от 6 до 20 кольцевых атомов углерода, например С6-20арил; от 6 до 15 кольцевых атомов углерода, например С6-15арил, и от 6 до 10 кольцевых атомов углерода, например С6-10арил. К примерам молекулярных фрагментов арила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, фенил, нафтил, фторэнил, азуленил, антрил, фенантрил и пиренил.
В настоящем изобретении термин арилен относится к молекулярному фрагменту радикала ароматического соединения, где кольцо состоит исключительно из атомов углерода. Арилен является дополнительно замещенным и может иметь моноцикличную или полицикличную структуру, например, может быть бицикличным или трицикличным. К примерам молекулярных фрагментов арила относятся, не ог
- 4 034950 раничиваясь перечисленным далее, вещества, содержащие от 6 до 20 кольцевых атомов углерода, например С6-20арилен; от 6 до 15 кольцевых атомов углерода, например С6-15арилен, и от 6 до 10 кольцевых атомов углерода, например С6-10арилен.
В настоящем изобретении термин алкарил относится к арилу, замещенному по крайней мере одним алкилом. Алкарил является дополнительно замещенным.
В настоящем изобретении термин гетероалкил относится к алкилу, в котором один или более атомов углерода замещены гетероатомами.
В настоящем изобретении термин гетероалкенил относится к алкенилу, в котором один или более атомов углерода замещены гетероатомами.
В настоящем изобретении термин гетероалкинил относится к алкенилу, в котором один или более атомов углерода замещены гетероатомами. К подходящим гетероатомам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, атомы азота, кислорода и серы. Гетероалкил является дополнительно замещенным. К примерам молекулярных фрагментов гетероалкила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, аминоалкил, сульфонилалкил, сульфинилалкил. К примерам молекулярных фрагментов гетероалкила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, метиламин, метилсульфонил и метилсульфинил.
В настоящем изобретении термин гетероарил относится к моновалентному молекулярному фрагменту, представляющему собой радикал ароматического соединения, где кольцевые атомы содержат атомы углерода и как минимум один атом кислорода, серы, азота или фосфора. К примерам молекулярных фрагментов гетероарила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, имеющие от 5 до 20 кольцевых атомов; от 5 до 15 кольцевых атомов; и от 5 до 10 кольцевых атомов. Гетероарил является дополнительно замещенным.
В настоящем изобретении термин гетероарилен относится к арилену, в котором один или более кольцевых атомов ароматического кольца заменены атомами кислорода, серы, азота или фосфора. Гетероарилен является дополнительно замещенным.
В настоящем изобретении термин гетероциклоалкил относится к циклоалкилу, в котором один или более атомов углерода замещены гетероатомами. К подходящим гетероатомам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, атомы азота, кислорода и серы. Гетероциклоалкил является дополнительно замещенным. К примерам молекулярных фрагментов гетероциклоалкила относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, морфолинил, шшеридинил, тетрагидропиранил, пирролидинил, имидазолидинил, оксазолидинил, тиазолидинил, диоксоланил, дитиоланил, оксанил или тианил.
В настоящем изобретении термин дополнительно замещенный, употребляемый в отношении молекулярного фрагмента моновалентного радикала, например, дополнительно замещенный алкил, означает, что такой молекулярный фрагмент дополнительно связан с одним или более заместителей. К примерам таких заместителей относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, гало, циано, нитро, галоалкил, азидо, эпокси, дополнительно замещенный гетероарил, дополнительно замещенный гетероциклоал кил,
Aora
Asra Anrarb о
-11—r a о о —|-И—ora -|-U—nrarb о
-U—ra
N N
-|-U—NRaRb -|-NRc-^1— NrArB _^_s(0)_rA
5, Δ N j-S(O)2-R -νγν s
Η
ААЛ ’ где Ra, Rb, и Rc представляют собой, независимо в каждом случае, атом водорода, алкил, алкенил, алкинил, арил, алкарил, аралкил, гетероарил, или гетероциклоалкил, или Ra и Rb, вместе с атомами с которыми они связаны, формируют насыщенное или ненасыщенное карбоциклическое кольцо, где кольцо является дополнительно замещенным и где один или более кольцевых атомов дополнительно замещены гетероатомом. В некоторых реализациях Ra, Rb и Rc не являются атомами водорода. В некоторых примерах Ra представляет собой метил. В некоторых примерах Ra представляет собой метиламин, метилсульфонил и метилсульфинил. В некоторых примерах Ra представляет собой метиламин. В определенных реализациях, когда моновалентный радикал дополнительно замещен гетероарилом, дополнительно замещен гетероциклоалкилом, или дополнительно замещен насыщенным или ненасыщенным карбоциклическим кольцом, заместители в дополнительно замещенном гетероариле, дополнительно замещенном гетероциклоалкиле, или дополнительно замещенном насыщенном или ненасыщенном карбоциклическом кольце, если они замещены, не замещаются заместителями, которые дополнительно замещены добавочными заместителями. В некоторых реализациях, когда описываемая здесь группа дополнительно замещена, связанный с группой заместитель не замещен в отсутствие иных указаний.
В настоящем изобретении термин связующий агент относится к молекуле, способной образовывать связь с учетом особенностей конкретного связующего партнера.
В настоящем изобретении термин линкер относится к дивалентному молекулярному фрагменту, ковалентно связывающему связующий агент с заявляемыми производными майтанзиноида.
В настоящем изобретении фраза условия синтеза амида относится к условиям реакции, благоприятным для образования амида, т.е. реакции карбоновой кислоты, активированной карбоновой кислоты или ацил галида с амином. В некоторых примерах условия синтеза амида относятся к условиям реакции,
- 5 034950 благоприятным для возникновения амидной связи между карбоновой кислотой и амином. В некоторых из этих примеров карбоновая кислота сначала преобразуется в активированную карбоновую кислоту до реакции активированной карбоновой кислоты и амина с образованием амида. К благоприятным условиям относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, применение реагентов для осуществления реакции между карбоновой кислотой и амином, включая, но не ограничиваясь перечисленным далее, дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропиларбодиимид (DIC), (бензотриазол-1-илокси)-трис-(диметиламино)фосфоний гексафторфосфат (ВОР), (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинфосфоний гексафторфосфат (РуВОР), (7-азабензотриазол-1-илокси)трипирролидинфосфоний гексафторфосфат (РуАОР), бромтрипирролидинфосфоний гексафторфосфат (PyBrOP), О-(бензотриазол-1-ил)-Ы,М,М',М'тетраметилуроний гексафторфосфат (HBTU), О-(бензотриазол-1-ил)- N.N.N'.N'-тетраметилуроний тетрафторборат (TBTU), 1-[бис-(диметиламино)метилен]-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-6]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат (HATU), 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидроквинолин (EEDQ), 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимид (EDC), 2-хлор-1,3-диметилимидазолидоний гексафторфосфат (CIP), 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазин (CDMT) и карбонилдиимидазол (CDI). В некоторых примерах карбоновая кислота сначала преобразуется в активированный карбоновый эфир до реакции с амином с образованием амидной связи. В определенных реализациях карбоновая кислота реагирует с реагентом. Реагент активирует карбоновую кислоту посредством ее депротонизации с последующим формированием комплекса продуктов с депротонированной карбоновой кислотой как результата нуклеофильной атаки депротонированной карбоновой кислоты на протонированный реагент. Для определенных карбоновых кислот этот активированный эфир может оказаться более подверженным нуклеофильной атаке амином, чем карбоновая кислота до преобразования. За счет этого возникает амидная связь. Таким образом, карбоновая кислота характеризуется как активированная. К показательным реагентам относятся DCC и DIC.
В настоящем изобретении фраза терапевтически эффективное количество относится к количеству (соединения), достаточному для терапевтического эффекта у пациента, проходящего лечение, или для регулирования заболевания или расстройства, или к задержке или минимизации одного или более симптомов, связанных с заболеванием или расстройством.
На изображениях определенных групп, молекулярных фрагментов, заместителей и атомов встречается волнистая линия, пересекающая связь для обозначения атома, через который связаны группы, молекулярные фрагменты, заместители и атомы. Например, фенильная группа, замещенная пропильной группой, изображенная как
СН3 имеет следующую структуру:
С\ /СНз ^СНз.
В настоящем изобретении иллюстрации, изображающие заместители, связанные с циклической группой (например, ароматическим, гетероароматическим, сплавленным кольцом, и насыщенным или ненасыщенным циклоалкилом или гетероциклоалкилом) посредством связи между кольцевыми атомами, означают, в отсутствие иных указаний, возможность замещения циклической группы заместителем на любой позиции кольца в циклической группе или на любом кольце в сплавленной кольцевой группе, соответствии с заявляемыми способами, или в соответствии со способами, известными в области заявляемого изобретения. Например, группа (R’)q
где индекс q представляет собой целое число в диапазоне от 0 до 4 и в которой позиции заместителя R1 описаны в общих чертах, включает следующие группы, где позиции заместителя R1 описаны конкрет но:
- 6 034950
В дополнение к сказанному, и в качестве примера, группа ’ в которой позиции заместителя, отличающегося от R1, связаны с циклической группой посредством связи между кольцевыми атомами, описаны в общих чертах, включает следующие группы, где позиции этих заместителей, отличающихся от R1, описаны конкретно:
циклической группой посредством связи между кольцевыми атомами, описаны в общих чертах, включает следующие группы, где позиции этих заместителей, отличающихся от R1, описаны конкретно:
В каждой из этих структур, где позиции заместителей, отличающихся от R1, описаны конкретно, заместитель R1 может быть связан с любой позицией в кольцевой группе или на любом кольце сплавленной кольцевой группы, не занятой одним из этих заместителей, отличающихся от R1. В следующих неог раничительных иллюстрациях демонстрируется возможность замещения циклической группы указанным заместителем на любой позиции кольца или на любом кольце сплавленной кольцевой группы:
- 7 034950
В. Конъюгаты.
Заявляются соединения с формулой (I)
(I) или их фармацевтически приемлемые соли, где А представляет собой арилен или гетероарилен;
L представляет собой линкер;
ВА представляет собой связующий агент и k является целым числом от 1 до 30.
1. Молекулярные фрагменты А.
В некоторых реализациях А представляет собой арилен. В некоторых реализациях А представляет собой гетероарилен. В некоторых реализациях арилен или гетероарилен замещен одной или более электроноакцепторной группой и/или одной или более электронодонорной группой.
В некоторых реализациях А представляет собой дивалентный радикал бензола, пиридина, нафталина или квинолона, которые дополнительно замещены. В некоторых реализациях А представляет собой дивалентный радикал бензола, дополнительно замещенный звеном, выбранным из группы, содержащей амин, амид, алкил, гало, галоалкил, алкокси и галоалкокси.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, алкаО
-I-ora 4-so2Ra -l-U—Ra рил, аралкил, гало, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, галоалкокси, арил, алкарил, аралкил, гетероарил, гетероалкил, о
4-ora 1so2ra -^rA гетероциклоалкил, циано, нитро, > ’ > ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало, галоалкил, гидроксил, алкил,
- 8 034950 алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, о
-^-ora -^-so2ra -pLrA нитро, ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях R1 представляет собой С1-6алкил или С1-6алкокси.
В некоторых из этих реализаций R1 представляет собой метил, этил, метокси или этокси.
В некоторых из этих реализаций R1 представляет собой метокси.
В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо алкил или гало.
В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо С1-6алкил, С1-6галоалкил или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой фтор, хлор, бром, йод или трифторметил. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0.
T.1 !so2ra
В некоторых реализациях R представляет собой „ »1 /S0;rA
В некоторых реализациях R представляет собой » где Ra представляет собой метил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой гидроксил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой N-метилформамид.
В некоторых реализациях R1 представляет собой морфолинил.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкил, алкокси или гало.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой С1-6алкил, С1-6алкокси, С1-6галоалкил, С1-6галоалкокси или гало.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой гало.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой фтор, хлор, бром, йод или трифторме тил.
В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0 или 1.
В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0.
В некоторых реализациях А представляет собой (R1),
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой (R')n
В некоторых реализациях А представляет собой
где n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях А представляет собой (R1)n
где n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях А представляет собой
- 9 034950
где n принимает значения 0 или 1 и
R1 представляет собой алкокси, гало или галоалкил. В некоторых реализациях А представляет собой (R1)n
где n принимает значения 0 или 1 и
R1 представляет собой алкокси, гало или галоалкил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой алкокси.
В некоторых реализациях А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1 и
R1 представляет собой С1-балкокси, гало или C1.6галоалкил.
В некоторых реализациях А представляет собой (R1)n
где n принимает значения 0 или 1 и
R1 представляет собой С1-балкокси, гало или C1.6галоалкил.
В некоторых примерах R1 представляет собой C1.6алкокси.
В некоторых реализациях А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1;
R1 представляет собой С1-балкокси, гало или С1-бгалоалкил; и
L представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8 и ? представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1;
R1 представляет собой С1-балкокси, гало или С1-бгалоалкил; и
L представляет собой
O^NH2
П3С Сп3 где b является целым числом от 2 до 8 и
- 10 034950 представляет собой связь со связующим агентом.
В некоторых реализациях А представляет собой
где n принимает значения 0, 1, 2, 3 или 4.
В некоторых реализациях А представляет собой (R’)n
где n принимает значения 0, 1, 2, 3 или 4.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой С1-6алкил, гало или C1.6галоалкил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой С1-6алкил, гало или С1-6галоалкил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой С1_6алкил, С1-6алкокси, гало, С1_6галоалкил или С1-6галоалкокси и n принимает значения 0, 1, 2, 3 или 4.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой С1-6алкил, С1-6алкокси, гало, С1-6галоалкил или С1-6галоалкокси и n принимает значения 0, 1, 2, 3 или 4.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой С1-6алкил, С1-6алкокси, гало или С1-6галоалкил.
В определенных реализациях из этого числа R1 представляет собой метокси или метил.
В некоторых конкретных реализациях R1 представляет собой метокси.
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой гало или трифторметил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
- 11 034950
х где X представляет собой атом водорода, гало или трифторметил. В некоторых реализациях А представляет собой
где X представляет собой атом водорода, гало или трифторметил.
представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкил, галоалкокси или гидроксил;
_>1 представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях R1 представляет собой нил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси.
В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор.
В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридиВ некоторых реализациях А представляет собой
R1 где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкил, галоалкокси или гидроксил; _<1_ представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси.
В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор.
В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
В некоторых реализациях R1 представляет собой сульфонил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой N-метилформамид.
В некоторых реализациях R1 представляет собой гидроксил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой морфолинил.
В некоторых реализациях А представляет собой
R1
R1 где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкил или галоалкокси;
представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
- 12 034950
В некоторых реализациях R1 представляет собой алкил или алкокси.
В некоторых конкретных реализациях R1 представляет собой пропиламин, дифтор-метокси, фенил, 2-фторфенил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси.
В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор.
В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
В некоторых реализациях А представляет собой
CI
представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом. В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
F
представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
где X представляет собой F, Cl, Br, CN, метокси, диметиламин или циклопропан;
представляет собой связь с атомом азота и * представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
где X представляет собой F, Cl, Br, CN, метокси, представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой диметиламин, 1-метил-этил-тио или циклопропил;
- 13 034950
где каждый R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, ал кокси, гало, галоалкил или галоалкокси;
представляет собой связь с атомом азота и < представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях R1 представляет собой водород, фтор, трифторметил или метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор, хлор, бром, или йод.
В некоторых реализациях А представляет собой
CI где представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
R1
R1 , где каждый R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкил или галоалкокси;
представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом. В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом. В некоторых реализациях А представляет собой
,1_ представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
- 14 034950
Οχ
СН3 представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и < представляет собой связь с карбонилом. В некоторых реализациях А представляет собой
представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
где 5 представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
- 15 034950
где * представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой где представляет собой связь с атомом азота и представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
где представляет собой связь с атомом азота и
представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
где n принимает значения 0, 1,2 или 3.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1 представляет собой О^алкил, Оц^лкокси, гало, Оцдалоалкил, C1.6галоалкокси, C1.6гетеро алкил и n принимает значения 0, 1, 2, 3 или 4.
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
где X независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил.
В некоторых реализациях X представляет собой фтор, хлор, бром, йод, диметиламин, метиламин, метокси, этокси или трифторметил.
В некоторых реализациях А представляет собой
- 16 034950
где X независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероалкил.
В некоторых реализациях X представляет собой фтор, хлор, бром, йод, диметиламин, метиламин, метокси, этокси, трифторметил или метокси;
представляет собой связь с атомом азота и « представляет собой связь с карбонилом.
2. Линкеры.
Линкерная часть заявляемых конъюгатов представляет собой молекулярный фрагмент дивалентного фрагмента, ковалентно связывающего связующий агент с заявляемыми производными майтанзиноида. Подходящими линкерами являются такие, которые освобождают майтанзиноидную часть в присутствии энзима, или в конкретном диапазоне, или при конкретном значении рН.
В некоторых реализациях линкер содержит энзим-расщепляемый молекулярный фрагмент. К показательным энзим-расщепляемым молекулярным фрагментам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, пептидные связи, эфирные связи, гидразоны и дисульфидные связи. В некоторых реализациях линкер содержит катепсин-расщепляемый линкер.
В некоторых реализациях, линкер содержит нерасщепляемый молекулярный фрагмент. В некоторых реализациях нерасщепляемый линкер представляет собой
О
Лекарственный препарат или его остаток.
В некоторых реализациях нерасщепляемый линкер представляет собой
или его остаток.
К подходящим линкерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, химически связанные с двумя цистеиновыми остатками одиночного связующего агента, например антитела. Подобные линкеры могут служить для дублирования дисульфидных связей антитела, разрываемых в результате процесса конъюгации.
В некоторых реализациях линкер содержит одну или две аминокислоты. К подходящим аминокислотам относятся природные, искусственные, стандартные, нестандартные, протеиногенные и L- или D-αаминокислоты. В некоторых реализациях линкер содержит аланин, валин, лейцин, изолейцин, метионин, триптофан, фенилаланин, пролин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глютамин, аспарагиновую кислоту, глютаминовую кислоту, лизин, аргинин, гистидин, или цитруллин, или их производные. В некоторых реализациях линкер содержит валин и цитруллин.
В некоторых реализациях линкер представляет собой
А ihSP-AA1-AA2-^где SP представляет собой спейсер;
одну или несколько связей к связующему агенту;
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
Спейсер представляет собой дивалентный молекулярный фрагмент, крепящий молекулярный фрагмент АА1-АА2 к связующему агенту (ВА). К подходящим спейсерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, содержащие алкилен или полиэтиленгликоль. Концы спейсеров, т.е. часть спейсера, непосредственно прикрепленная к связующему агенту или АА1, могут быть получены непосредственно из реактивных молекулярных фрагментов, используемых для соединения оголенного антитела или АА1
- 17 034950 со спейсером в процессе химического синтеза конъюгата. В некоторых примерах к подходящим спейсерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, первичный аминоконцевой алкилен или первичный аминоконцевой полиэтиленгликоль. Первичный аминоконцевой конец спейсера может непосредст венно крепиться к дегликозилированному антителу или к гликозилированному антителу в присутствии трансглютаминазы.
В некоторых реализациях спейсер содержит алкилен. В некоторых реализациях спейсер содержит С5-7алкилен. В некоторых реализациях соединение представляет собой:
где * представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях спейсер содержит первичный первичный аминоконцевой алкилен. В некоторых реализациях спейсер содержит ХН2-С5-7алкилен. В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где ? представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
где
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
представляет собой связь со связующим агентом.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где « представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где Rn представляет собой атом водорода или алкил; Rm представляет собой алкил;
,BA-S две связи, представленные , представляют собой связи к цистеинам связующего агента; b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где 5 представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
- 18 034950 где § представляет собой связь со связующим агентом и g является целым числом от 2 до 20.
В некоторых реализациях g принимает значения 2-8. В некоторых реализациях g принимает значе ния 2, 4, 6 или 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой о
о о где n является целым числом от 4 до 10.
В некоторых реализациях n принимает значения 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой о
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где n является целым числом от 4 до 10.
В некоторых реализациях n принимает значения 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
о
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
О
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
- 19 034950
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
.А где ? представляет собой связь со связующим агентом;
X представляет собой N или О;
Rn и RM, каждый независимо, представляют собой водород или алкил и b является целым числом от 1 до 8.
В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизинфенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, аспарагинтреонин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцинаспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагинглицин, глютаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глютаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин или аспарагин-аланин.
В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин или цитруллин-валин. В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин. В некоторых реализациях линкер представляет собой
где SP представляет собой спейсер;
одну или несколько связей к связующему агенту;
RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку.
В настоящем изобретении термин аминокислотная боковая цепочка относится к неводородному заместителю, прикрепленному к α-углероду α-аминокислоты, включая природные и искусственные аминокислоты. К примерам аминокислотных боковых цепочек относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, α-углерод заместитель аланина, валин, лейцин, изолейцин, метионин, триптофан, фенилаланин, пролин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глютамин, аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота, лизин, аргинин, гистидин и цитруллин. В некоторых реализациях линкер представляет собой
где SP представляет собой спейсер и
представляет собой одну или несколько связей к связующему агенту.
В некоторых реализациях линкер представляет собой
где
представляет собой связь со связующим агентом и
- 20 034950 b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях линкер представляет собой
где г представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях ВА представляет собой антитело и линкер представляет собой
где две связи, представленные , представляют собой связи к цистеинам антитела и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях ВА представляет собой антитело и линкер представляет собой
,βΑ-S где две связи, представленные , представляют собой связи к цистеинам антитела и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях ВА представляет собой антитело и линкер представляет собой
где Rn представляет собой атом водорода или алкил;
Rm представляет собой алкил;
, ВА S две связи, представленные , представляют собой связи к цистеинам антитела и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях линкер представляет собой
где * представляет собой связь со связующим агентом и
- 21 034950 b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях линкер представляет собой
где * представляет собой связь со связующим агентом и g является целым числом от 2 до 20.
В некоторых реализациях g является целым числом от 2 до 8. В некоторых реализациях g принимает значения 2, 4, представляет собой или 8. В некоторых реализациях линкер
В некоторых реализациях линкер представляет собой
В некоторых реализациях линкер представляет собой
В некоторых реализациях линкер представляет собой
В некоторых реализациях линкер представляет собой
Н3С^СН3
В некоторых реализациях линкер представляет собой
- 22 034950
В некоторых реализациях линкер представляет собой
В некоторых реализациях линкер представляет собой
3. Связующие агенты.
К подходящим связующим агентам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, антитела, лимфокины, гормоны, факторы роста, вирусные рецепторы, интерлейкины или другие клеточносвязующие или пептидно-связующие молекулы или вещества.
В некоторых реализациях связующим агентом является антитело. В некоторых реализациях антитело представляет собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, фрагмент антитела (Fab, Fab' и F(ab)2, мини-антитело, диатело, триотело и подобные), или биспецифичное антитело. Описываемые антитела может быть гуманизированы способами, заявленными в патенте США № 6596541 и в патентной публикации США № 2012/0096572, каждый из этих источников включен во всей полноте в настоящем изобретении в виде ссылки.
Если связующим агентом является антитело, оно прикреплено к антигенсвязующему партнеру, представляющему собой полипептид, и может быть трансмембранной молекулой (то есть рецептором) или фактором роста, который может быть гликозилирован или фосфорилирован. К показательным анти телам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, молекулы, такие как ренин; гормон роста, включая гормон роста человека и гормон роста крупного рогатого скота; рилизинг-фактор гормона роста; паратиреоидный гормон; тиреостимулирующий гормон; липопротеины; альфа1-антитрипсин; инсулиновая А-цепочка; инсулиновая В-цепочка; проинсулин; фолликулостимулирующий гормон; кальцитонин; лютеинезирущий гормон; глюкагон; коагулирующие факторы, такие как фактор vmc, фактор ЕХ, тканевая тромбокиназа (TF) и фактор фон Виллебранда; антикоагулирующие факторы, такие как протеин С; атриальный натрийуретический фактор; легочный сурфактант; активатор плазминогена, такой, как урокиназа или моча человека плазминогенный активатор тканевого типа (t-PA); бомбезин; тромбин; гемопоэтический фактор роста; фактор некроза опухолей-альфа и -бета; энкефалиназа; RANTES (регулятор активации экспрессии и секреции нормальных Т-клеток); человеческий макрофагальный белок воспаления (М1Р-1-альфа); сывороточный альбумин, такой, как человеческий сывороточный альбумин; мюллерова ингибирующая субстанция; релаксин А-цепочка; релаксин В-цепочка; прорелаксин; мьппиный гонадотропин-связанный пептид; микробиологический протеин, такой, как беталактамаза; DNase; 19E; цитотоксичный Т-лимфоцит-связанный протеин (CTLA), такой, как CTLA-4; ингибин; активин; васкулярный эндотелиальный фактор роста (VEGF); рецепторы для гормонов или факторов роста; протеин А или D; ревматоидные факторы; нейротрофический фактор, такой, как нейротрофический фактор костной ткани (BDNF), нейротрофин-3, -4, -5 или -6 (NT-3, NT4, NT-5 или NT-6), или фактор роста нервов, такой, как NGF-β; тромбоцитарный фактор роста (PDGF); фактор роста фибробластов, такой, как aFGF и bFGF; рецептор 2 фактора роста фибробластов (FGFR2), эпидермальный фактор роста (EGF); трансформирующий фактор роста (TGF), такой как TGF-альфа и TGF-бета, включая TGF-βΡ TGF-e2, TGF-e3, TGF-e4 или TGF-e5; инсулиноподобный фактор роста-I и -II (IGF-1 и IGF-II); des(I-3)-IGF-1 (головной мозг IGF-1), связующие протеины инсулиноподобного фактора роста, ЕрСАМ, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUC1, MUC16, STEAP, CEA, TENB2, EphA рецепторы, EphB рецепторы, рецептор фолиевой кислоты, FOLRI, мезотелин, крипто, альфа-убетаб, интегрины, VEGF, VEGFR, EGFR, трансфер
- 23 034950 риновый рецептор, IRTA1, IRTA2, IRTA3, IRTA4, IRTA5; CD протеины, такие как CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD137, CD138, CD152, или антитело, связанное с опухолевыми специфическими антигенами или рецепторами клеточной поверхности, описанными в патентной публикации США № 2008/0171040 или в патентной публикации США № 2008/0305044, включенными во всей полноте в список источников настоящей заявки; эритропоэтин; остеоиндуктивные факторы; иммунотоксины; костный морфогенетический протеин (BMP); интерферон, такой, как интерферон-альфа, -бета и -гамма; колониестимулирующие факторы (CSF), например, М-CSF, GM-CSF и G-CSF; интерлейкины (IL-), например, от IL-1 до IL-10; супероксиддисмутаза; Т-клеточные рецепторы; поверхностные мембранные протеины; стимулятор гемолиза; вирусные антигены, такие, например, как часть ВИЧ капсулы; транспортные протеины; хомингрецепторы; адрессины; регуляторные протеины; интегрины, такие как CD11a, CD11b, CD1L·, CD18, ICAM, VLA-4 и VCAM; опухолевый специфический антиген, такой как AFP, ALK, B7H4, BAGE протеины, β-катенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9 (карбоангидраза DC), каспаза-8, CD20, CD40, CD123, CDK4, СЕА, CLEC12A, c-kit, cMET, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, эндоглин, Epcam, EphA2, ErbB2/Her2, ErbB3/Her3, ErbB4/Her4, ETV6-AML, Fra-1, FOLR1, GAGE протеины (например, GAGE-1, 2), GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/EBNA1, HLA/k-ras, HLA/MAGEA3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE протеины (например, MAGE-1, -2, -3, -4, -6 и -12), MART-1, мезотелин, ML-IAP, Mucl, Muc16 (CA-125), MUM1, NA17, NGEP, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NYESO1, OX40, p15, p53, PAP, РАХ3, РАХ5, PCTA-1, PDGFR-a, PDGFR-p, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSCA, PSGR, PSMA (FOLH1), RAGE протеины, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, STn, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназа, и уроплакин-3, и фрагменты любых из перечисленных выше полипептидов.
К показательным антителам относятся также, не ограничиваясь перечисленным далее, ВСМА, SLAMF7, В7Н4, GPNMB, UPK3A и LGR5. В некоторых реализациях к антителам относится рецептор пролактина (PRLR) или простатический специфический мембраны антиген (PSMA).
К связующим агентам относится также, не ограничиваясь перечисленным далее, повторяющиеся протеины анкирина, интерфероны, лимфокины, такие как IL-2 или IL-3, гормоны, наподобие инсулина и глюкокортикоидов, факторы роста, такие как EGF, трансферрин и фибронектин типа III.
В некоторых реализациях связующие агенты взаимодействуют или связываются опухолевыми антигенами, включая специфичные антигены опухоли или общие антигены, сверхвыраженные или модифицированные на опухоли конкретного типа. К примерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, альфа-актинин-4 с раком легких, ARTC1 с меланомой, BCR-ABL рекомбинационный белок с хроническим миелобластным лейкозом, B-RAF, CLPP или Cdc27 с меланомой, CASP-8 с плоскоклеточной карциномой, и hsp70-2 с гипернефроидной опухолью почки, а также следующие специфичные антигены опухоли, например: BAGE-1, GAGE, GnTV, KK-LC-1, MAGE-A2, NA88-A, TRP2-INT2.
В некоторых реализациях связующим агентом является антитело. В некоторых реализациях связующим агентом является моноклональное антитело. В некоторых реализациях связующим агентом является поликлональное антитело. В некоторых реализациях антитело представляет собой анти-PSMA, анти-MUC16, или анти-EGFRvIII, или анти-STEAP-2 антитело.
Линкеры могут быть прикреплены к связующему агенту, например, антительной или антигенсвязующей молекуле, за счет крепления посредством конкретной аминокислоты в антителе или в антиген-связующей молекуле. К показательным аминокислотным креплениям, пригодным для использования в связи с заявляемым изобретением, относятся, например, лизин (см., например, патент США 5208020; патент США 2010/0129314; Голландер (Hollander) и соавторы, Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; WO 2005/089808; патент США 5714586; патент США 2013/0101546; и патент США 2012/0585592), цистеин (см., например, патент США 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546 и патент США 7750116), селеноцистеин (см., например, WO 2008/122039; и Гофер (Hofer) и соавторы, Proc. Natl. Acad. Sci (труды Национальной академии наук), США, 2008, 705:12451-12456), формил глицин (см., например, Каррико (Carrico) и соавторы, Nat. Chem. Biol, 2007, 3:321-322; Эгрвол (Agarwal) и соавторы, Proc. Natl. Acad. Sci. (труды Национальной академии наук), США, 2013, 110:46-51, и Рабука (Rabuka) и соавторы, Nat. Protocols, 2012, 70:10521067), искусственные аминокислоты (см., например, WO 2013/068874, и WO 2012/166559), и кислые аминокислоты (см., например, WO 2012/05982). Линкеры могут быть конъюгированы глютамином посредством химэнзимной конъюгации на основе трансглютаминазы (см., например, Деннлер (Dennler) и соавторы, Bioconjugate Chem. 2014, 25, -578 Линкеры также могут быть конъюгированы в антигенсвязанный протеин посредством прикрепления к карбогидратам (см., например, патент США 2008/0305497, WO 2014/065661, и Райан (Ryan) и соавторы, Иммунология продуктов питания и сельского хозяйства, 2001, /5:127-130) и дисульфидные линкеры (см., например, WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611, WO 2014/197854, и Шаунак (Shaunak) и соавторы, Nat. Chem. Biol, 2006, 2:312-313).
- 24 034950
В некоторых реализациях представляет собой антитело, и антитело связывается с линкером посредством лизинового остатка. В некоторых реализациях антитело связывается с линкером посредством цистеинового остатка.
4. Показательные реализации.
В некоторых реализациях
А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, алкаО
-^-ora ^-so2ra ra рил, аралкил, гало, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
А
4-SP-AA1-AA2-^где SP представляет собой спейсер;
-Г5 представляет собой одну или более связей со связующим агентом;
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых реализациях А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой С1-6алкил, С1-6галоалкил или гало; n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
А -^-SP-AA1-AA24где SP представляет собой спейсер;
-fпредставляет собой одну или более связей к связующему агенту;
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых реализациях
А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроо ^-ora -1-so2ra RA ксил, циано, нитро, > » ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
- 25 034950
А
4-SP-AA1-AA2-^где SP представляет собой спейсер;
* представляет собой одну или более связей к связующему агенту; АА1 представляет собой аминокислоту; и АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых реализациях
А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой Оц^лкил, Оц^алоалкил или гало; n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой где SP представляет собой:
А .
4-SP-AA1-AA2-|-
где * представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8; и
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроО
-i-ORA 4so2Ra 4^~rA ксил, циано, нитро, > » » или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
А 4*SP-AA1-AA2-^где SP представляет собой:
° о J? N-(CH2)b JLh ^N-(CH2)b-N-M0 или О
-fгде < представляет собой связь со связующим агентом;
b является целым числом от 2 до 8;
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых реализациях
- 26 034950
А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой С^алкил, С1_6галоалкил или гало; n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
где SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или более связей к связующему агенту; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку. В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроо
-1-ora -1-so2Ra ксил, циано, нитро, ’ » ’ или азидо, где RA представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
где SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или более связей к связующему агенту; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку. В некоторых реализациях А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой ^^алкил, ^^галоалкил или гало; n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
- 27 034950
где SP представляет собой спейсер и < представляет собой одну или более связей к связующему агенту. В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, о
4-ora -1-so2Ra -I-u-ra нитро, ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
где SP представляет собой спейсер и представляет собой одну или более связей к связующему агенту. В некоторых реализациях
А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой О1-6алкил, О1-6галоалкил или гало; n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой где SP представляет собой:
- 28 034950 где ? представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроО -^-ORa 4sO2Ra 4-1Lra ксил, циано, нитро, ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и L представляет собой
где SP представляет собой:
где * представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях
А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой Ор^лкил, C1-6галоалкил или гало; и n, m, р и q принимают значения 0, 1 или 2; и
L представляет собой
где ' представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях А представляет собой
- 29 034950 где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано,
Lora 4so2ra _|1Lra нитро, ’ ’ 5 , или азидо, где Ra представляет собой алкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
и где
представляет собой связь со связующим агентом b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой C1.6галоалкил или гало; n принимает значения 0, 1 или 2; и
L представляет собой
где SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или более связей к связующему агенту; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и Raa2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку. В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроО -I-ora -ho2RA ксил, циано, нитро, > ’ ’ или азидо, где RA представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
L представляет собой
где SP представляет собой спейсер;
г представляет собой одну или более связей к связующему агенту; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и
- 30 034950
RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку.
В некоторых реализациях А представляет собой где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало;
n принимает значения 0, 1 или 2; и
L представляет собой
где * представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроО
-ЬокА 4-so2ra Ra ксил, циано, нитро, » ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
L представляет собой
где 2 представляет собой связь со связующим агентом; где n является целым числом от 0 до 4 и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях А представляет собой (R1)n
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало; n принимает значения 0, 1 или 2; и
L представляет собой
- 31 034950
где < представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, гидроО
4-ora 4so2ra -^-ll-ra ксил, циано, нитро, > » > или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
где n является целым числом от 0 до 4;
L представляет собой
представляет собой связь со связующим агентом.
В некоторых реализациях
А представляет собой
L представляет собой
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкокси, галоалкил;
представляет собой связь с атомом азота и ' представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил. В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор. В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
- 32 034950
В некоторых реализациях А представляет собой
R1 где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, арил, гетероалкил, гало, галоалкил, галоалкокси;
представляет собой связь с атомом азота и * представляет собой связь с карбонилом.
В некоторых реализациях R1 представляет собой 1-метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил. В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор. В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
В некоторых реализациях А представляет собой
L представляет собой
В некоторых реализациях
ВА представляет собой антитело, А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало;
n принимает значения 0, 1 или 2; и
L представляет собой
где * представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях
А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано,
О
-^-ora 4sO2Ra -^-11—ra нитро, ’ ’ ’ или азидо;
q является целым числом от 0 до 5; и L представляет собой
- 33 034950
где SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или более связей к связующему агенту; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку. В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, ч s °
-|-ORa i-SO2RA -1-U-ra нитро, ’ ’ ’ или азидо;
где q является целым числом от 0 до 5;
L представляет собой
где SP представляет собой спейсер;
представляет собой одну или более связей к связующему агенту; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку.
В некоторых реализациях
А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано,
О
-^-ORa -^-SO2Ra -i-tt-RA нитро, ’ > ( > или азидо;
где q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
где 5 представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях
А представляет собой:
- 34 034950
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, О
-^-0RA 4sO2Ra -I-U-Ra нитро, ’ ’ ’ или азидо;
q является целым числом от 0 до 5; и
L представляет собой
где 5 представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях
А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, галоалкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано,
О
-^-ORa 4sO2Ra нитро, ’ ’ ’ или азидо;
где q является целым числом от 0 до 5;
L представляет собой
где 5 представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях
А представляет собой:
L представляет собой
В некоторых реализациях соединение с формулой (I) представляет собой:
- 35 034950
где А представляет собой арилен или гетероарилен, L1 и L2 представляют собой линкеры, ВА представляет собой связующий агент, k является целым числом от 0 до 30, t является целым числом от 0 до 8.
В некоторых из этих реализаций L1 представляет собой линкер, прикрепленный к ВА посредством лизинового остатка. В некоторых из этих реализаций коэффициент k означает количество линкеров, L1, прикрепленных к ВА посредством лизиновых остатков на ВА. В некоторых из этих реализаций L2 представляет собой линкер, прикрепленный к ВА посредством цистеинового остатка. В некоторых из этих реализаций коэффициент t означает количество линкеров L2, прикрепленных к ВА посредством цистеиновых остатков на ВА. В некоторых из этих реализаций линкер L2 представляет собой монодентатный линкер, t является целым числом от 0 до 8.
В некоторых из этих реализаций, когда линкер L2, представляет собой бидентагный линкер, t является целым числом от 0 до 4. В некоторых из этих примеров сумма k + t представляет собой число в диапазоне 1-8.
В некоторых реализациях соединение с формулой (I) представляет собой:
где А представляет собой арилен или гетероарилен, L1 и L2 представляют собой линкеры, ВА представляет собой связующий агент. В некоторых из этих реализаций L1 представляет собой линкер, прикрепленный к ВА посредством лизинового остатка. В некоторых из этих реализаций L2 представляет собой линкер, прикрепленный к ВА посредством цистеинового остатка.
В некоторых реализациях соединение с формулой (I) представляет собой:
где А представляет собой арилен или гетероарилен, L1 и L2 представляют собой линкеры, ВА представляет собой связующий агент.
В некоторых из этих реализаций L1 представляет собой линкер, прикрепленный к ВА посредством лизинового остатка. В некоторых из этих реализаций L2 представляет собой линкер, прикрепленный к ВА посредством цистеинового остатка.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, галоалкокси, арил, алкарил, аралкил, гетероарил, гетероалкил, О
Л-ora -^-SO2Ra ~^rA гетероциклоалкил, циано, нитро, ’ » ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
- 36 034950 n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях линкер представляет собой
А
4*SP-AA1-AA24где SP представляет собой спейсер;
* представляет собой одну или более связей к связующему агенту;
АА1 представляет собой аминокислоту; и
АА2 представляет собой аминокислоту.
Спейсер представляет собой дивалентный молекулярный фрагмент, крепящий молекулярный фрагмент АА1-АА2 к связующему агенту (ВА). К подходящим спейсерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, содержащие алкилен или полиэтиленгликоль. Концы спейсеров, т.е. часть спейсера, непосредственно прикрепленная к связующему агенту или АА1, могут быть получены непосредственно из реактивных молекулярных фрагментов, используемых для соединения антитела или АА1 со спейсером в процессе химического синтеза конъюгата.
В некоторых реализациях спейсер содержит алкилен. В некоторых реализациях спейсер содержит С5-7алкилен.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где < представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где * представляет собой связь со связующим агентом. В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где Rn представляет собой атом водорода или алкил; Rm представляет собой алкил;
, BA-S две связи, представленные , представляют собой связи к цистеинам связующего агента и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой а ° θ
4—^(СНЖ-Цгде * представляет собой связь со связующим агентом и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где < представляет собой связь со связующим агентом и
- 37 034950 g является целым числом от 2 до 20.
В некоторых реализациях g принимает значения 2-8. В некоторых реализациях g принимает значения 2, 4, 6 или 8.
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
О
О
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
Г где <
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
представляет собой связь со связующим агентом;
X представляет собой N или О;
Rn и RM, каждый независимо, представляют собой водород или алкил и b является целым числом от 1 до 8.
В некоторых реализациях АА1-АА2 представляют собой валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизинфенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, аспарагинтреонин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцинаспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагинглицин, глютаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глютаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин или аспарагин-аланин.
- 38 034950
В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин или цитруллин-валин. В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин. В некоторых реализациях соединение с формулой (I) представляет собой:
или
где X представляет собой N или О;
Rn и RM независимо представляют собой водород или арил;
b является целым числом от 1 до 8;
А представляет собой арил или гетероарил и t является целым числом в диапазоне 1-8.
В некоторых реализациях соединение с формулой (I) представляет собой:
- 39 034950
- 40 034950
- 41 034950
- 42 034950
- 43 034950
- 44 034950
- 45 034950
- 46 034950
- 47 034950
- 48 034950
- 49 034950
- 50 034950
- 51 034950
- 52 034950
- 53 034950
- 54 034950
- 55 034950
- 56 034950
- 57 034950
- 58 034950
- 59 034950
- 60 034950
- 61 034950
- 62 034950
- 63 034950
- 64 034950
- 65 034950
- 66 034950
- 67 034950
- 68 034950
- 69 034950
- 70 034950
- 71 034950
- 72 034950
- 73 034950
- 74 034950
- 75 034950
- 76 034950
где Ab представляет собой антитело;
—-— представляет собой связь к цистеину антитела;
—-— представляет собой связь к лизину антитела;
k является целым числом от 1 до 30 и t является целым числом от 1 до 8.
В некоторых примерах k является целым числом от 1 до 8.
В некоторых примерах t является целым числом от 1 до 4.
„ S
В некоторых примерах, когда представляет собой связь к цистеину антитела, до 8 заявляемых конъюгатов могут крепиться к антителу.
В некоторых примерах, когда —-— представляет собой связь к лизину антитела, до 30 заявляемых
- 77 034950 конъюгатов могут крепиться к антителу.
В некоторых реализациях соединение с формулой (I) представляет собой:
В некоторых реализациях k является целым числом от 1 до 30. В некоторых реализациях k является целым числом от 1 до 8. В некоторых реализациях k является целым числом от 1 до 6. В некоторых реализациях k является целым числом от 1 до 4. В некоторых реализациях k является целым числом от 1 до 3. В некоторых реализациях пропорция лекарственного средства к антителу (DAR) конъюгата находится в диапазоне от 1,0 до 3,0.
- 78 034950
C. Производные майтанзиноида. Заявляются соединения с формулой (II)
или их фармацевтически приемлемая соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
В некоторых реализациях эти соединения представляют собой полезную часть описываемых конъюгатов и высвобождаются, например, ферментативным протеолизом с последующей интернализацией конъюгата в клетку. Заявляемые способы включают способы лечения пролиферативного заболевания, например, рака, заключающиеся в приеме пациентов терапевтически эффективного количества конъюгата, например, конъюгата антительного лекарственного препарата, высвобождающего соединение с формулой (II) с последующей интернализацией упомянутого конъюгата в клетку упомянутого пациента.
В некоторых реализациях эти соединения представляют собой метаболический продукт описываемых конъюгатов, например, продукт ферментативного протеолиза. В некоторых реализациях эти соединения представляют собой катаболический продукт описываемых конъюгатов. В некоторых реализациях эти соединения представляют собой клеточный продукт описываемых конъюгатов.
В некоторых реализациях А представляет собой дивалентный радикал бензола, пиридина, нафталина или квинолона, которые дополнительно замещены.
В некоторых реализациях А представляет собой арилен.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, алкаО _^J1_rA ’ или
-^-ora -^-so2ra рил, аралкил, гало, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, ’ ’ азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение (IIA)
где R1 и n определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение (IIB):
с формулой с формулой
- 79 034950
(lib) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIB2)
(IIB2) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIB3)
(ПВЗ) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIC)
(ПС) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IID)
(IID) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой
- 80 034950 (IIE)
(HE) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIF)
(IIF) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIG)
(IIG) где R1 и q определены выше.
В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо алкил или гало. В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо С1-6алкил, С1-6галоалкил или гало. В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо С1-6галоалкил или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой фтор, хлор, бром, йод или трифторметил. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил или галоалкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой С1-6алкил, С1-6алкокси, С1-6галоалкил, С1-6галоалкокси или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой С1-6алкил или С1-6алкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой метокси, этокси, пропокси. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0. В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIA)
(ПА) где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало или трифторметил; и n принимает значения 0, 1 или 2.
- 81 034950
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIB)
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало или трифторметил; и q принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой:
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение, выбранное из:
- 82 034950
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой
В некоторых реализациях эти соединения представляют собой полезную часть описываемых конъюгатов и высвобождаются, например, ферментативным протеолизом с последующей интернализацией конъюгата в клетку. Заявляемые способы включают способы лечения пролиферативного заболевания, например рака, заключающиеся в приеме пациентов терапевтически эффективного количества конъюгата, например конъюгата антительного лекарственного препарата, высвобождающего соединение с формулой (II) с последующей интернализацией упомянутого конъюгата в клетку упомянутого пациента.
В некоторых реализациях эти соединения представляют собой метаболический продукт описываемых конъюгатов, например продукт ферментативного протеолиза.
В некоторых реализациях А представляет собой дивалентный радикал бензола, пиридина, нафтали на или квинолона, которые дополнительно замещены.
В некоторых реализациях А представляет собой арилен.
В некоторых реализациях А представляет собой
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалкокси, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, О
-^-ORa -^-so2ra 4jlra ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIA)
- 83 034950
(ПА) где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой метокси, гало или трифторметил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIB)
(ПВ) где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой метокси, гало или трифторметил и q принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIB2)
(IIB2) где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой метокси, гало или трифторметил и q принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIB3)
(R1)q (ПВЗ) где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой метокси, гало или трифторметил и q принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкил или гало. В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо С1-6алкил, С1-6галоалкил или гало. В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо С1-6галоалкил или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой фтор, хлор, бром, йод или трифторметил. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил или галоалкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой С1-6алкил, С1-6алкокси, С1-6галоалкил, С1-6галоалкокси или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представ
- 84 034950 ляет собой С1-6алкил или С1-6алкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой метокси, этокси, пропокси. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0. В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой:
.. . осн, CHН21
Н21
Н21
Н21
НОН.РСНз СИ
ОСН3 , или '3
F О СН3
CI о сн3
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение с формулой (IIH)
где R1 и n определены выше.
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение, выбранное из:
- 85 034950
В некоторых реализациях соединение с формулой (II) представляет собой соединение, выбранное из:
D. Приготовление соединений.
Соединения с формулой (I) могут быть синтезированы сочетанием соединений с формулой Р1 и связующего агента, например, антитела в стандартных условиях конъюгации (см., например, Доронина (Doronina) и соавторы, Nature Biotechnology 2003, 21, 7, 778, этот источник включен в список литературы настоящего изобретения). Когда связующим агентом является антитело, оно может сочетаться с соединением формулы Р1 посредством одного или более цистеиновых или лизиновых остатков антитела. Соединения формулы Р1 могут сочетаться с цистеиновыми остатками, например, обработкой антитела восстановителем, например дитиотеритолом, для разрыва дисульфидных связей антитела, очисткой восстановленного антитела, например, гелевой фильтрацией, и последующим реагированием антитела с соединением формулы Р1, содержащим реактивные молекулярные фрагменты, например, малеимидную группу. К подходящим растворителям относятся, не ограничиваясь водой, DMA, DMF и DMSO. Соединения
- 86 034950 формулы Р1, содержащие реактивный молекулярный фрагмент, например, активированный эфир или кислотную галидную группу, могут сочетаться с лизиновыми остатками. К подходящим растворителям относятся, не ограничиваясь водой, DMA, DMF и DMSO. Соединения формулы (I) можно очистить с помощью известных протеиновых технологий, включая, например, эксклюзионную хроматографию, диализ и ультрафильтрацию/диафильтрацию.
Р1 I где RL представляет собой реактивный линкер, А представляет собой арилен или гетероарилен, L представляет собой линкер и ВА представляет собой связующий агент.
В некоторых реализациях соединение формулы Р1 включает А, где А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1 и R1 представляет собой алкокси, гало или галоалкил. В некоторых реализациях соединение формулы Р1 включает А, где А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1 и R1 представляет собой С1-балкокси, гало или С1-бгалоалкил. В некоторых реализациях соединение формулы Р1 включает А, где А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1; R1 представляет собой С1-балкокси, гало, или С1-бгалоалкил и RL представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8 и 5 представляет собой связь к связующему агенту.
Реактивный линкер представляет собой молекулярный фрагмент, часть структуры которого способна вступать в реакцию со связующим агентом (например, реагировать с антителом на его цистеиновых или лизиновых остатках) с образованием соединения формулы (I). Вслед за конъюгацией к связующему агенту реактивный линкер становится линкерными молекулярными фрагментами (L) соединения формулы (I). К показательным реактивным линкерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, содержащие галоацетил-, изотиоцианат-, или малеимид-части, способные вступать в реакцию со связующим агентом. В состав реактивных частей входят молекулярные фрагменты следующей структуры:
где X представляет собой -О- или -NH- и LG представляет собой замещаемую группу, например Br. В некоторых реализациях соединение представляет собой spr-aa1-aa24~ где SPR представляет собой реактивный спейсер;
АА1 представляет собой аминокислоту и АА2 представляет собой аминокислоту.
- 87 034950
Реактивный спейсер представляет собой молекулярный фрагмент, содержащий описанную выше часть реактивного линкера, способную реагировать со связующим агентом и соединить эту часть с АА1. К подходящим спейсерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, содержащие алкилен или полиэтиленгликоль, соединяющие АА1 с частью, способной реагировать со связующим агентом (например, галоацетил, изотиоцианат или малеимид).
В некоторых реализациях реактивный спейсер содержит неразрываемый молекулярный фрагмент, выбранный из
представляет одну или более связей с майтанзиноидной производной; и где n является целым числом от 4 до 10.
В некоторых примерах n принимает значения 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В некоторых реализациях реактивный спейсер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный спейсер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный спейсер представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
В некоторых реализациях спейсер представляет собой
где g является целым числом от 1 до 24.
В некоторых реализациях реактивный спейсер представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8 и g является целым числом от 2 до 20. В некоторых реализациях реактивный спейсер представляет собой
- 88 034950
В некоторых реализациях АЛ'-ЛА2 представляет собой валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизинфенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, аспарагинтреонин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин глицин, глютаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глютаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин или аспарагин-аланин. В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин или цитруллин-валин. В некоторых реализациях АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин. В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
где SPR представляет собой реактивный спейсер;
RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
где SP представляет собой реактивный спейсер.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой ck,nh2
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
CX_NH2
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
- 89 034950
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
O^,NH2
где b является целым числом от 2 до 8, RN представляет собой атом водорода или алкил и RM представляет собой алкил.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8.
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8; RN представляет собой атом водорода или алкил и RM представляет собой алкил.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
- 90 034950
где g является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
- 91 034950
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях реактивный линкер представляет собой
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой
- 92 034950
Р1А
где А представляет собой:
где R1 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоалр 4-ora -!-so2ra кокси, галоалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, » > или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил; n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5;
SPR представляет собой реактивный спейсер;
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1А представляет собой соединение, содержащее А, где А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1 и R1 представляет собой алкокси, гало или галоалкил.
В некоторых примерах R1 представляет собой метилсульфонил, N-метилформамид, гидроксил или морфолинил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1А представляет собой соединение, содержащее А, где А представляет собой
где n принимает значения 0 или 1 и R1 представляет собой О1-6алкокси, гало или О1-6галоалкил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1А представляет собой соединение, содержащее А, где А представляет собой /рЦ
где q является целым числом от 0 до 5 и R1 представляет собой О1-6алкокси, гало или О1-6галоалкил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1А представляет собой соединение, содержащее А, где А представляет собой
где q является целым числом от 0 до 5 и R1 представляет собой О1-6алкокси, гало, или О1-6галоалкил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1А представляет собой соединение, содержащее А, где А представляет собой
- 93 034950 (R1)n
где n принимает значения 0 или 1 и R1 представляет собой алкокси, гало или галоалкил.
В некоторых примерах R1 представляет собой метилсульфонил, N-метилформамид, гидроксил или морфолинил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой Р1В
Р1В где А представляет собой:
где R1 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гало, галоал. . о i*ORA i-SO2RA -I-U-rA кокси, галоалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4; m является целым числом от 0 до 3; р является целым числом от 0 до 6; q является целым числом от 0 до 5 и SPR представляет собой реактивный спейсер.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой Р1С
Р1С где SPR представляет собой реактивный спейсер;
АА1 представляет собой аминокислоту;
АА2 представляет собой аминокислоту;
R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил, или n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1D
- 94 034950
P1D где SPR представляет собой реактивный спейсер;
АА1 представляет собой аминокислоту;
АА2 представляет собой аминокислоту;
R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях n равняется 0. В некоторых реализациях n равняется 1. В некоторых реализациях n равняется 2. В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1D, где R1 представляет собой алкокси, гало, или галоалкил. В некоторых реализациях R1 представляет собой О1-6алкокси, гало или О1-6галоалкил. В некоторых реализациях n равняется 0. В некоторых реализациях n равняется 1. В некоторых реализациях n равняется 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1D, где R1 представляет собой О1-6алкокси, гало или О1-6галоалкил; или SPR-AA1-AA2 представляет собой
где b является целым числом от 2 до 8 и « представляет собой связь к связующему агенту.
В некоторых реализациях n равняется 0. В некоторых реализациях n равняется 1. В некоторых реализациях n равняется 2. В некоторых реализациях b равняется 2. В некоторых реализациях b равняется 3. В некоторых реализациях b равняется 4. В некоторых реализациях b равняется 5. В некоторых реализациях b равняется 6. В некоторых реализациях b равняется 7. В некоторых реализациях b равняется 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой Р1Е
О 4—' О СН3
Р1Е где SPR представляет собой реактивный спейсер;
RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку;
RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку;
R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1F
- 95 034950
P1F где SPR представляет собой реактивный спейсер;
R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1G
P1G где SPR представляет собой реактивный спейсер и
R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой Р1Н
Р1Н где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или триф торметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой
Р1Т
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой
- 96 034950
P1J
P1J где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой ₽1K
Р1К где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1L
P1L где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой Р1М
Р1М где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1N
- 97 034950
PIN где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой РЮ
РЮ где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой Р1Р
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1Q
где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1R
- 98 034950
P1R где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1S
P1S где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1T
PIT где Rn представляет собой атом водорода или алкил, RM представляет собой алкил, R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1U
РШ где Rn представляет собой атом водорода или алкил, RM представляет собой алкил, R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1V
- 99 034950
P1V где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1W
P1W где R1 представляет собой атом водорода, алкил, алкокси, гало, галоалкокси, галоалкил или трифторметил, g является целым числом от 2 до 20 и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой
Р1Х
Р1Х где R1 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил или галоалкокси; b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях R1 представляет собой метил, этил, метокси или этокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой 1-метилэтилтиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор. В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1Y
P1Y где R1 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил, галоал кокси.
В некоторых реализациях R1 представляет собой метил, этил, метокси или этокси. В некоторых из
- 100 034950 этих реализаций R1 представляет собой метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой 1метилэтил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор. В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с формулой P1Z
Rc
P1Z, где Rc выбирается из алкила или галоалкила и где структура алкила или галоалкила линейная, разветвленная или циклическая.
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с одной из следующих структур:
- 101 034950
- 102 034950
- 103 034950
- 104 034950
- 105 034950
- 106 034950
- 107 034950
- 108 034950
- 109 034950
- 110 034950
- 111 034950
- 112 034950
- 113 034950
- 114 034950
- 115 034950
- 116 034950
- 117 034950
- 118 034950
- 119 034950
- 120 034950
- 121 034950
- 122 034950
- 123
- 124 034950
- 125 034950
- 126 034950
- 127 034950
- 128 034950
- 129 034950
- 130 034950
- 131 034950
NH °Ч „<СНз HN СНз
HN
Br
- 132 034950
- 133 034950
- 134 034950
- 135 034950
- 136 034950
NH
О
Br
- 137 034950
- 138 034950
- 139 034950
- 140 034950
- 141 034950
- 142 034950
143 034950
- 144 034950
- 145 034950
- 146 034950
- 147 034950
- 148 034950
- 149 034950
- 150 034950
- 151 034950
- 152 034950
- 153 034950
- 154 034950
- 155 034950
- 156 034950
NH
Br .
В некоторых реализациях соединение с формулой Р1 представляет собой соединение с одной из следующих структур:
- 157 034950
Соединения с формулой Р1 могут быть синтезированы реагированием соединений формулы Р2 и соединений формулы Р3 в условиях синтеза амида. К благоприятным условиям синтеза амида относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, контактирование соединения формулы Р2 с основанием в присутствии активирующего агента карбоксильной кислоты. К подходящим активирующим агентам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, EDC, HATU, HBTU, DCC, ВОР и EEDQ. К подходящим основаниям относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, DIEA, DBU, трибутиламин и 2,6лутидин.
Соединения формулы Р2 можно синтезировать непосредственно из майтансинола и аланина известными способами (см., например, патент США № 4308269, включенный в список источников настоящей заявки).
Соединения формулы (I) могут быть синтезированы объединением соединений формулы РР3
- 158 034950
О СН3
РРЗ и соединений формулы РР4 в условиях синтеза амида
РР4.
где ВА представляет собой связующий агент; и
SP представляет собой спейсер;
Raa1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку,
RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку;
А представляет собой арилен или гетероарилен и k является целым числом от 1 до 10.
Соединения формулы РР3 могут быть синтезированы контактированием соединений формулы РР5 с подходящим восстановителем
О СН3
РР5, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
В некоторых реализациях к подходящим восстановителям относится металл, металлическая фольга, порошковый металл, металлическая амальгама, или металлические наполнители. В определенных реализациях металл выбирается из цинка, железа, алюминия, палладия или никеля Ренея.
Например, в некоторых реализациях используются следующие условия восстановителя. Например, с учетом количества соединения РР5, в некоторых заявляемых способах используется около двадцати (20) эквивалентных частей цинковой пыли и сорок (40) эквивалентных частей уксусной кислоты. В некоторых примерах восстановительная реакция производилась при комнатной температуре на протяжении приблизительно от 1 до 20 ч. В некоторых из этих примеров упомянутая выше уксусная кислота заменена другой подходящей слабой кислотой или протонным донором. К примерам подходящих слабых кислот или протонных доноров относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, муравьиная кислота, pTsOH и NH4Cl. В некоторых из этих примеров восстанавливающий металл заменен подходящим восстановителем, выбранным из железа, алюминия, палладия или никеля Ренея. В некоторых из этих примеров к подходящим растворителям относятся включающие 10-50% воды (по объему) в органическом растворителе, допускающем смешивание. К примерам органических растворителей, допускающих смешивание, относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, THF, диоксан и диэтиловый эфир. В некоторых примерах описываемые далее восстановительные реакции производятся при температурах от 0 до 50°С. В некоторых примерах описываемые далее восстановительные реакции производятся на протяжении от 1 до 40 ч.
К подходящим кислотам относится, без ограничения упомянутой, уксусная кислота.
В некоторых реализациях А представляет собой
- 159 034950
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, алкаО -^-ora 4sO2Ra rA рил, аралкил, гало, гетероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, циано, нитро, ’ » ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой соединение с формулой РР5А
РР5А, где R1 и n определены выше.
В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкил, алкокси, гетероалкил, гало, галоалкил или галоалкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой О1-6алкил, О1-6алкокси, О1-6галоалкил, О1-6галоалкокси или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой О1-6алкил или О1-6алкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой алкокси. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой метокси, этокси, пропокси. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0.
В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой соединение с формулой РР5А
РР5А, где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало или трифторметил и n принимает значения 0, 1 или 2.
В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой соединение с формулой РР5А2
РР5А2, где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало или трифторметил;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой соединение с формулой
- 160 034950
РР5А3
(R1)q
PP5A3, где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало или трифторметил;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях R1 представляет собой 1-метилетил-тиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил. В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор. В некоторых реализациях R1 представляет собой водород. В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой соединение с формулой РР5А4:
no2 о сн3
РР5А4, где R1 и n определены выше.
Соединения с формулой РР5 могут быть синтезированы реагированием соединений формулы Р2 и соединений формулы РР6 в условиях синтеза амида.
сн3
Р2,
O2N ОН '4
РР6.
К подходящим соединениям с формулой РР6 относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, 3нитробензойная кислота, 3-хлор-5-нитробензойная кислота, 3-фтор-5-нитробензойная кислота, 3-нитро-
1- нафталенкарбоновая кислота, 2-фтор-5-нитробензойная кислота, 3-(диметиламин)-5-нитробензойная кислота, 3-этокси-5-нитробензойная кислота, 2-метокси-5-нитробензойная кислота, 4-метокси-3нитробензойная кислота, 2,6-дифтор-3-нитробензойная кислота, 2-хлор-6-фтор-3-нитробензойная кислота, 6-хлор-2-фтор-3-нитробензойная кислота, 2-хлор-4-фтор-5-нитробензойная кислота, 4-хлор-2-фтор-5нитробензойная кислота, 2-этокси-5-нитробензойная кислота, 2-(метиламин)-3-нитробензойная кислота, 6-нитро-8-квинолинкарбоновая кислота, 4-(диметиламин)-3-нитробензойной кислоты гидрохлорид (1:1),
2- метил-нитробензойная кислота, 3-метил-4-нитробензойная кислота, 4-нитро-1-нафталенкарбоновая кислота, 4-нитро-1-нафталенкарбоновая кислота, 2,6-диметил-4-нитробензойная кислота, 3-фтор-4нитробензойная кислота, 3-хлор-4-нитробензойная кислота, 3-бром-4-нитробензойная кислота, 3-циано4-нитробензойная кислота, 3-циклопропил-4-нитробензойная кислота, 3-метокси-4-нитробензойная кислота. 2-метокси-4-нитробензойная кислота, 5-хлор-2-метил-4-нитробензойная кислота, 8-нитро-5изоквинолинкарбоновая кислота, 5-нитро-8-квинолинкарбоновая кислота, 8-нитро-5квинолинкарбоновая кислота, 2,5-дифтор-4-нитробензойная кислота, 2-(диметиламин)-4-нитробензойная кислота, 2-хлор-5-фтор-4-нитробензойная кислота, 3-(диметиламин)-4-нитробензойная кислота, 2-[(1метилэтил)тио]-4-нитробензойная кислота, 4-нитро-3-(трифторметил)бензойная кислота, 4-нитро-2
- 161 034950 (трифторметил)бензойная кислота, 3,5-диметокси-4-нитробензойная кислота, 4-нитро-2(пропиламин)бензойная кислота, 3-(дифторметокси)-4-нитробензойная кислота, 2-(2-фтор-фенил)-4нитробензойная кислота, 4-нитро-2-(4-пиридинил)бензойная кислота, 4-нитро-3-(4-пиридинил)бензойная кислота или 4-нитро-2-(1-пирролидинил)бензойная кислота.
К подходящим соединениям с формулой РР6 относятся соединения с одной из следующих формул:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой С1-6алкил, С1-6алкокси, гало, С1-6галоалкил или С1-6галоалкокси, где n принимает значения 0, 1, 2, 3 или 4. В определенных реализациях из этого числа R1 представляет собой метокси или метил. В некоторых особых реализациях R1 представляет собой метокси, фтор, или трифторметил. В определенных реализациях n принимает значения 1 или 2. В некоторых из этих реализаций n равняется 1. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор, хлор, бром или йод.
В некоторых реализациях R1 представляет собой 1-метилэтилтиол, фенил, 2-фторфенил, пиридинил, 4-пиридинил, пирролидинил или 1-пирролидинил. В некоторых реализациях R1 представляет собой трифторметил. В некоторых реализациях R1 представляет собой метокси. В некоторых реализациях R1 представляет собой фтор. В некоторых реализациях R1 представляет собой водород.
В некоторых реализациях настоящей заявки представлены соединения с формулой РР5
о сн3
РР5, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой соединение, выбранное из:
В некоторых реализациях соединение с формулой РР5 представляет собой
- 162 034950
Соединения с формулой III
могут быть синтезированы контактированием соединений формулы РР1
и связующего агента в условиях конъюгации, где ВА представляет собой связующий агент и SP представляет собой спейсер; SPR представляет собой реактивный спейсер; RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку; RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку; А представляет собой арилен или гетероарилен и k является целым числом от 1 до 30.
Соединения с формулой РР1 могут быть приготовлены контактированием соединения формулы РР2 и соединения формулы Р2:
где SPR представляет собой реактивный линкер;
RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку;
- 163 034950
RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и
А представляет собой арилен или гетероарилен.
Соединения с формулой РР1 могут быть приготовлены контактированием соединения формулы РР3 с соединения формулы РР7:
R о о где SP представляет собой реактивный линкер;
RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку;
RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и
А представляет собой арилен или гетероарилен.
Соединения с формулой РР2 могут быть приготовлены контактированием соединения формулы РР8 с бифункциональным спейсером
РР8 РР2
Соединения с формулой РР7 могут быть приготовлены контактированием соединения формулы РР9 с бифункциональным спейсером
Бифункциональные спейсеры представляют собой соединения, реагирующие с соединением формулы РР3 для присоединения молекулярного фрагмента SPR, присутствующего в соединениях формулы РР2. К показательным бифункциональным спейсерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее:
Соединения с формулой РР8 могут быть приготовлены контактированием соединения формулы РР10 с и соединения формулы РР11 с последующим исключением защитной группы:
где PG представляет собой аминную защитную группу и Y представляет собой молекулярный фрагмент, покрывающий карбонил, к которому он электрофильно прикреплен.
Соединения с формулой РР10 могут быть приготовлены сочетанием их соответствующих аминокислот посредством стандартных способов сочетания аминокислот, включая, например, активную этерификацию с помощью HATU, BOP/HOBt, или EDC/N-гидроксисукцинимида в присутствии DIEA, DBU или трибутиламина.
Бифункциональные спейсеры представляют собой соединения, реагирующие с соединением формулы РР9 для присоединения молекулярного фрагмента SPR, присутствующего в соединениях формулы РР7. К показательным бифункциональным спейсерам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее:
- 164 034950
Br
Br
ОН
Н3С СНз
О о
СНз он . и
Соединения конъюгата антительного лекарственного препарата формулы (I) могут быть также при готовлены реагированием подходящего антитела, например, дегликозилированного антитела или негликозилированного антитела и соединения формулы (РТ1) в присутствии трансглютаминазы
РТ1 где А представляет собой арилен или гетероарилен и L представляет собой линкер.
В некоторых реализациях А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало, галоалкил, галоалкокси, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, галоалкокси, арил, алкарил, аралкил, гетероарил, гетероалкил, О
4-ora 1s°2rA гетероциклоалкил, циано, нитро, 5 ’ ’ ’ или азидо, где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях А представляет собой:
где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой гало, галоалкил, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, арил, алкарил, аралкил, гетероарил, гетероалкил, гетероциклоалкил, циано, о
-^-ORa 4sO2Ra -^ra нитро, ’ ’ ’ или азидо,
- 165 034950 где Ra представляет собой алкил или гетероалкил;
n является целым числом от 0 до 4;
m является целым числом от 0 до 3;
р является целым числом от 0 до 6;
q является целым числом от 0 до 5.
В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо алкил или гало.
В некоторых реализациях R1 представляет собой независимо С1-6алкил, С1-6галоалкил или гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой гало. В некоторых реализациях R1 независимо представляет собой фтор, хлор, бром, йод или трифторметил. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0, 1 или 2. В некоторых реализациях n, m, р или q равняются 0 или 1. В некоторых реализациях n, m, p или q равняются 0.
В некоторых реализациях R1 представляет собой
-^-SO2Ra
В некоторых реализациях R1 представляет собой
4so2ra где Ra представляет собой метил.
В некоторых реализациях R1 представляет собой гидроксил. В некоторых реализациях R1 представляет собой N-метилформамид. В некоторых реализациях R1 представляет собой морфолинил. В некоторых реализациях линкер содержит одну или более аминокислоты. К подходящим аминокислотам относятся природные, искусственные, стандартные, нестандартные, протеиногенные, непротеиногенные и L-, или D-a-аминокислоты. В некоторых реализациях линкер содержит аланин, валин, лейцин, изолейцин, метионин, триптофан, фенилаланин, пролин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глютамин, аспарагиновую кислоту, глютаминовую кислоту, лизин, аргинин, гистидин, или цитруллин, или их производную. В некоторых реализациях линкер содержит валин и цитруллин.
В некоторых реализациях линкер представляет собой [- аа1-аа24 где один представляет собой одну или более связей с полезной частью;
другой представляет собой одну или более связей с -NH2 соединения РТ1;
АА1 представляет собой аминокислоту и
АА2 представляет собой аминокислоту.
Линкер может дополнительно содержать дивалентный молекулярный фрагмент, соединяющий молекулярный фрагмент АА1-АА2 с -NH2 из РТ1. К подходящим дивалентным молекулярным фрагментам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, содержащие алкилен или полиэтиленгликоль. Дивалентный молекулярный фрагмент может содержать одну или две реактивные группы для облегчения связи с остатком соединения, или один или более остатков таких реактивных групп.
РТ1 содержит первичный аминоконцевой алкилен или первичный аминоконцевой полиэтиленгликоль. Первичный аминоконцевой молекулярный фрагмент может быть непосредственно связан с дегликозилированным антителом или негликозилированным антителом в присутствии трансглютаминазы.
В некоторых реализациях соединение содержит первичный аминоконцевой алкилен. В некоторых реализациях соединение содержит КЛ2-С5-7алкилен. В некоторых реализациях соединение представляет собой:
0 Η п
NH2-(CH2),,-114- или nh2-(CH2vn-Ц· где представляет собой связь с полезной частью и b является целым числом от 2 до 8.
В некоторых реализациях соединение представляет собой:
где § представляет собой связь с полезной частью.
В некоторых реализациях соединение РТ1 представляет собой
- 166 034950
В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается контактированием связующего агента с РТ1 в присутствии трансглютаминазы в условиях, благоприятных для реакции трансглютаминации. В некоторых реализациях реакция трансглютаминации происходит при рН между примерно 7 и 8 в течение примерно 4 ч. В некоторых примерах рН принимает значения 7,2; 7,3; 7,4; 7,5; 7,6; 7,8 или 8. В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается посредством реакции трансглютаминации, где концентрация соединения формулы (РТ1) равняется как минимум 30 молярным эквивалентам (мол.экв.) относительно дегликозилированного антитела или негликозилированного антитела. В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается посредством реакции трансглютаминации, где концентрация соединения формулы (РТ1) находится в диапазоне от 30 до 150 мол.экв. относительно дегликозилированного антитела или негликозилированного антитела. В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается посредством реакции трансглютаминации, где концентрация соединения формулы (РТ1) находится в диапазоне от 1 до 30 U на 1 мг дегликозилированного антитела или негликозилированного антитела.
В некоторых реализациях дегликозилирование антитела производится пептидом N-глюкозидазы F (PNGaseF) до реакции трансглютаминации. В некоторых реализациях антитело негликозилировано.
Негликозилированное антитело может быть приготовлено мутагенными способами для удаления одной или более аминокислотных последовательностей, что необходимо для гликозилирования антитела. В некоторых реализациях антитело содержит тяжелую цепь с мутацией, замещающей другую аминокислоту на N180. В определенных реализациях негликозилированное антитело содержит один или более N180Q тяжелоцепочечных пептидов.
В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается посредством реакции трансглютаминации, происходящей в одном или более растворителе (растворителях), отобранных из группы, содержащей воду, забуференную воду, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор и органику.
В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается посредством реакции трансглютаминации, происходящей в воде, забуференной фосфатом, HEPES, или MOPS.
В некоторых реализациях соединение формулы (I) приготавливается посредством реакции трансглютаминации, включающей в себя реагирование глютаминил-модифицированного антитела с соединением реактивного спейсера для получения антительного спейсерного конъюгата; и затем реагирование антительного спейсерного конъюгата с соединением реактивной полезной части для образования конъюгата антительной спейсерной полезной части.
В некоторых реализациях заявляемого изобретения глютамин-модифицированное антитело приготавливается изложенным ниже способом.
В некоторых реализациях заявляемого изобретения лекарственный препарат содержащий глютамин-модифицированное антитело, приготавливается изложенным ниже способом.
В некоторых реализациях заявляемого изобретения способ лечения состояния объекта, нуждающегося в таком лечении, заключается в приеме объектом фармацевтически приемлемого количества заявляемого антитела или конъюгата антительного лекарственного препарата.
В некоторых реализациях заявляемого изобретения антитело или конъюгат антительного лекарственного препарата, описываемого в настоящем изобретении, используется для лечения.
В некоторых реализациях заявляемого изобретения антитело или конъюгат антительного лекарственного препарата, описываемого в настоящем изобретении, используется для лечения рака.
Е. Способы применения и фармацевтические композиции.
Заявляются способы лечения или профилактики заболеваний, состояний, или расстройств, например, пролиферативных заболеваний, таких, как рак, заключающиеся в приеме терапевтически эффективного количества одного или более заявляемых соединений, например, одного или более соединений с формулой (I) или (II). К заболеваниям, расстройствам и/или состояниям относятся, не ограничиваясь перечисленным далее, связанные с антигенами, перечисленными в настоящем изобретении. В некоторых реализациях антиген представляет собой PSMA, MUC16 или EGFRvIII.
Заявляемые соединения могут использоваться для лечения первичных и/или метастатических опухолей головного мозга и оболочек головного мозга, ротовой части глотки, легочного и бронхиального дерева, желудочно-кишечного тракта, мужских и женских половых путей, мускулатуры, костей, кожи и лимфоидных придатков, соединительной ткани, селезенки, иммунной системы, кроветворных клеток и костного мозга, печени и мочеиспускательных путей, а также специализированных органов чувств, таких, как глаза. В определенных реализациях заявляемые соединения используются для лечения одного
- 167 034950 или более злокачественных онкологических заболеваний: почечно-клеточная карцинома, карцинома поджелудочной железы, рак головы и шеи, рак предстательной железы, злокачественные глиомы, остеосаркома, колоректальный рак, рак желудочно-кишечного тракта (например, рак желудочно-кишечного тракта с МЕТ амплификацией), злокачественная мезотелиома, плазмоклеточная миелома, карцинома яичника, многоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, синовиальная саркома, злокачественная опухоль щитовидной железы, рак молочной железы или меланома. В некоторых реализациях рак представляет собой рак молочной железы. Прием заявляемых соединений может осуществляться отдельно или совместно с одним или более лекарственным средством. Прием одного или более дополнительных лекарственных средств может осуществляться непосредственно перед, попеременно с или вскоре после приема заявляемых соединений. В заявляемое изобретение включаются также лекарственные средства, содержащие любое из заявляемых соединений в сочетании с одним или более дополнительным лекарственным средством, и способы лечения, заключающиеся в приеме таких сочетаний пациентом, нуждающимся в лечении.
К подходящим лекарственным средствам относятся, не ограничиваясь перечисленным далее: антагонист EGFR (например, анти-EGFR антитело [например, цетуксимаб или панитумумаб], или маломолекулярный ингибитор EGFR (например, гефитиниб или эрлотиниб]), антагонист другого члена семейства EGFR, такой как Her2/ErbB2, ErbB3 или ErbB4 (например, анти-ErbB2 [например, трастузумаб или TDM1 {KADCYLA®}], анти-ErbB3 или анти-ErbB4 антитело или маломолекулярный ингибитор активности ErbB2, ErbB3 или ErbB4), антагонист EGFRvIII (например, антитело, специально связывающее EGFRvIII), антагонист сМЕТ (например, анти-сМЕТ антитело), антагонист IGF1R (например, анти-IGF1R антитело), В-раф ингибитор (например, вемурафениб, сорафениб, GDC-0879, PLX-4720), PDGFR-α ингибитор (например, анти-PDGFR-a антитело), PDGFR-β ингибитор (например, анти-PDGFR-e антитело маломолекулярный киназный ингибитор, такой как, например, иматиниб мезилат или сунитиниб малат), ингибитор лиганда PDGF (например, анти-PDGF-A, -В, -С или -D антитело, аптамер, siRNA и т.д.), VEGF антагонист (например, VEGF-ловушка, такой как афлиберцепт, см., например, патент США 7087411 (также упоминаемый в настоящем изобретении как VEGF-ингибирующий сплавленный протеин), анти-VEGF антитело (например, бевацизумаб), маломолекулярный киназный ингибитор рецептора VEGF (например, сунитиниб, сорафениб или пазопаниб)), DLL4 антагонист (например, анти-DLL4 антитело, заявленное в патенте США 2009/0142354, такое, как REGN421), Ang2 антагонист (например, антиAng2 антитело, заявленное в патенте США 2011/0027286, такое как Н1Н685Р), FOLH1 антагонист (например, анти-FOLH1 антитело), STEAP1 или STEAP2 антагонист (например, анти-STEAPl антитело или анти-STEAP2 антитело), TMPRSS2 антагонист (например, анти-TMPRSS2 антитело), MSLN антагонист (например, анти-MSLN антитело), СА9 антагонист (например, анти-СА9 антитело), антагонист уроплакина (например, антиуроплакин [например, анти-UPK3A] антитело), MUC16 антагонист (например, анtu-MUC16 антитело), антагонист Тп антигена (например, анти-Тп антитело), CLEC12A антагонист (например, анти-CLEC12A антитело), TNFRSF17 антагонист (например, анти-TNFRSF17 антитело), LGR5 антагонист (например, анти-LGR5 антитело), моновалентный CD20 антагонист (например, моновалентное анти-ОО20 антитело, такое, как ритуксимаб) и т.д. К другим лекарственным средствам, которые могут благоприятно приниматься с заявляемыми соединениями, относятся, например, тамоксифен, ингибиторы ароматического ряда, и цитоксинные ингибиторы, включая маломолекулярные цитокинные ингибиторы и антитела, связанные с цитокинами, такие как IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18 или их соответствующие рецепторы.
К пригодным лекарственным средствам относятся, не ограничиваясь химиотерапевтическими средствами, включая алкинированные средства, такие как тиотепа и циклофосфамид (Cytoxan™); алкил сульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленэмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфаорамид и триметилоломеламин; нитроиприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафтазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, мехлорэтамин оксид гидрохлорид, мелфалан, новэмбихин, фенестрин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномизины, актиномицин, атрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, калихемицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Е-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; анти-метаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиосталон, мепитиостан, тестолактон; антиадреналы, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; подкрепитель фолиевой кислоты, такой, как
- 168 034950 фролиниевая кислота; ацеглатон; адофосфамид гликозид; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрауцил; бисантрен; эдатрексат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиниум ацетат; этоглюцид; галлия нитрат; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; митоквазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK™; разоксан; сизофран; спирогерманий; тенуазойная кислота; триазиквон; 2,2',2трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Apa-Cu); циклофосфамид; тиотепа; таксаны, например, паклитаксел (Таксол™, Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси) и доцетаксел (Таксотер™; Aventis Antony, Франция); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новатрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор изотопомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноевая кислота; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любых из перечисленных выше веществ. Также под это определение подпадают антигормональные вещества, регулирующие или подавляющие гормональное действие на опухоли, такие как анти-эстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, ингибирующие ароматазу 4(5)имидазолы, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон, и торемифен (фарестон); и анти-андрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любых из перечисленных выше веществ.
Прием заявляемых соединений может также осуществляться и/или приготовляться в готовой смеси в сочетании с антивирусными препаратами, антибиотиками, анальгетиками, кортикостероидами, стероидами, кислородом, антиоксидантами, СОХ ингибиторами, кардиопротекторами, мателлохелаторами, IFN-гамма и/или NSAID.
В некоторых реализациях заявляемых способов несколько доз заявляемого соединения (или лекарственного средства, содержащего сочетание заявляемого соединения и любого упомянутого дополнительного лекарственного средства) могут приниматься пациентом в течение заданного промежутка времени. Способы, соответствующие этому аспекту заявляемого изобретения, заключаются в последовательном приеме пациентом нескольких доз заявляемого соединения.
В настоящем изобретении фраза последовательный прием означает, что каждая доза соединения подлежит приему пациентом в различные моменты времени, например, по разным дням, разделенным предварительно заданным интервалом (например, часы, дни, недели или месяцы).
В настоящем изобретении излагаются способы, заключающиеся в последовательном приеме пациентом единичной начальной дозы заявляемого соединения, с последующим приемом одной или более вторичных доз соединения, и с дополнительным последующим приемом одной или более третичных доз соединения.
Термины начальная доза, вторичные дозы и третичные дозы относятся к ограниченной по времени последовательности приема заявляемого соединения. Так, начальная доза представляет собой дозу, принимаемую в начале схемы лечения (называется также базовой дозой); вторичные дозы представляют собой дозы, принимаемые после начальной дозы; и третичные дозы представляют собой дозы, принимаемые после вторичных доз. Начальные, вторичные и третичные дозы могут содержать одинаковое количество заявляемого соединения, однако в основном они могут отличаться друг от друга частотой приема. В определенных реализациях количество соединения в начальной, вторичной и/или третичной дозах различается (например, регулируется в сторону увеличения или уменьшения по ситуации) на протяжении курса лечения. В определенных реализациях две или более дозы (например, 2, 3, 4 или 5) принимаются в начале схемы лечения как загрузочные дозы, а последующие дозы принимаются реже (то есть как поддерживающие дозы).
В определенных показательных реализациях заявляемого изобретения каждая вторичная и/или третичная доза принимается в течение от 1 до 26 (например, 1, 1 1/2, 2, 2 1/2, 3, 3 1/2, 4, 4 1/2, 5, 5 1/2, 6, 6 1/2, 7, 7 1/2, 8, 8 1/2, 9, 9 1/2, 10, 10 1/2, 11, 11 1/2, 12, 12 1/2, 13, 13 1/2, 14, 14 1/2, 15, 15 1/2, 16, 16 1/2, 17, 17 1/2, 18, 18 1/2, 19, 19 1/2, 20, 20 1/2, 21, 21 1/2, 22, 22 1/2, 23, 23 1/2, 24, 24 1/2, 25, 25 1/2, 26, 26 1/2 или более) недель после непосредственно предшествующей дозы. Фраза непосредственно предшествующая доза означает в настоящем изобретении, в последовательности нескольких приемов, дозу соединения, принятую пациентом до приема следующей по очереди дозы без смешивания доз.
Способы, соответствующие этому аспекту заявляемого изобретения, могут заключаться в приеме пациентом нескольких вторичных или третичных доз соединения. Например, в некоторых реализациях пациент принимает только одну вторичную дозу. В другой реализации пациент принимает две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных доз. Аналогично, в определенных реализациях пациент принимает только одну третичную дозу. В других реализациях пациент принимает две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз. Схема лечения конкретного пациента может реализоваться неограниченно по времени или до исчезновения необходимости или эффективности такого лечения.
- 169 034950
В реализациях с несколькими вторичными дозами частота приема каждой вторичной дозы может совпадать с частотой приема других вторичных доз. Например, пациент может принимать каждую вторичную дозу спустя от 1 до 2 недель или от 1 до 2 месяцев после непосредственно предшествующей дозы. Аналогично, в реализациях с несколькими третичными дозами частота приема каждой третичной дозы может совпадать с частотой приема других третичных доз. Например, пациент может принимать каждую третичную дозу спустя от 2 до 12 недель после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых реализациях заявляемого изобретения частота приема пациентом вторичных и/или третичных доз может изменяться в процессе реализации схемы лечения. Частота приема может также регулироваться врачом в процессе реализации схемы лечения в зависимости от потребностей конкретного пациента по результатам клинического наблюдения.
В настоящем изобретении излагаются схемы приема, согласно которым от 2 до 6 загрузочных доз принимаются пациентом с первым значением частоты (например, раз в неделю, раз в каждые две недели, раз в каждые три недели, раз в месяц, раз в каждые два месяца и т.д.), затем пациент гораздо реже принимает две или более поддерживающие дозы. Например, в соответствии с этим аспектом заявляемого изобретения, если загрузочные дозы принимаются пациентом раз в месяц, то поддерживающие дозы могут приниматься пациентом раз в каждые шесть недель, раз в каждые два месяца, раз в каждые три месяца, и т д.
В заявляемое изобретение включены лекарственные средства, состоящие из заявляемых соединений и/или конъюгатов, например, соединения с формулой (I) и (II), например, лекарственные средства, содержащие заявляемое соединение, его соль, стереоизомер, полиморф, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или инертный наполнитель. К примерам подходящих носителей, разбавителей и инертных наполнителей относятся, не ограничиваясь перечисленным далее: буферы для поддержания надлежащего значения рН состава (например, лимоннокислые буферы, сукцинатные буферы, ацетатные буферы, фосфатные буферы, лактатные буферы, оксалатные буферы и подобные), протеины носителя (например, альбумин человеческой сыворотки), физиологический раствор, полиолы (например, трегалоза, сахароза, ксилитол, сорбитол и подобные), сурфактанты (поверхностно-активные вещества, ПАВ) (например, полисорбат 20, полисорбат 80, полиоксолат и подобные), противомикробные препараты и антиоксиданты.
F. Примеры.
Протонный спектр ЯМР был получен с помощью измерительного прибора Varian Inova 300 МГц или Bruker 500 МГц, в то время как масс-спектры были получены посредством измерительных приборов Agilent серий 1100 или 1200 LC/MSD с помощью электрораспылительного источника ионизации и квадрупольного анализатора или ионной ловушки. Полезные части определенных линкеров в ферментных анализах анализировались масс-спектрометром Waters Xevo TQ-S. Все исходные материалы и растворители был приобретены на рынке и использовались без очистки, в отсутствие иных указаний.
Пример 1.
Соединение 10 было синтезировано из соединения 1 описанным ниже образом и представлено на фиг. 1.
Майтансин-N-метил-L-аланин-4-аминобензоамидо-Cit-Val-Cap-Mal (10).
Этап А.
В колбу с круглым дном был отвешен Boc-L-валин (1,03 г; 4,74 ммоль), N-гидроксисукцинимид (1,22 г; 10,6 ммоль) и EDC (1,60 г; 8,35 ммоль). Реагенты были растворены в сухом DCM (30 мл), колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута аргоном, и реагирующие вещества перемешивались при комнатной температуре. Спустя 3 дня остатков Вос-валина не было обнаружено путем TLC (после контрастирования нингидрином), и реагирующая смесь была промыта насыщенным гидратогенным раствором NaHCO3. водосодержащий слой экстрактирован DCM, комбинированные органические слои промыты минеральным раствором, высушены над Na2SO4, и профильтрованы. Затем фильтрат был испарен и высушен in vacuo с получением Boc-L-валин-сукцината в виде белого твердого вещества (1,52 г; 100%).
1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 4,98 (br d, 1H); 4,58 (dd, 1H); 2,82 (m, 4H); 2,27 (m, 1H); 1,44 (s, 9H); 1,03 (dd, 6H).
Вос-Е-валин-Е-цитруллин (3).
Boc-L-валин-сукцинат (1), полученный на предыдущем этапе (1,50 г; 4,77 ммоль), был растворен в ацетонитриле (MeCN, 15 мл), обработан раствором L-цитруллина (2; 1,07 г; 6,11 ммоль) в воде (9 мл) и насыщенном гидратогенным раствором NaHCO3 (6 мл), колба была закрыта вентилируемой мембраной, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре. Спустя 18 ч реакция еще не завершилась, и был дополнительно добавлен насыщенный гидратогенный NaHCO3 (3 мл) для доведения рН приблизительно до 7, и реагирующая смесь перемешивалась дополнительно в течение 36 ч. Реагирующая смесь была частично сконцентрирована in vacuo для удаления MeCN и однократно промыта этилацетатом (EtOAc) для удаления неполярных загрязнений. Затем водосодержащий слой был подкислен до рН 3 с помощью 10% (по объему) HCl, насыщен NaCl и экстрактирован 4 раза посредством 9:1 EtOAc/изопропанол. Комбинированные органические экстракты были промыты минеральным раство
- 170 034950 ром, высушены над Na2SO4 и профильтрованы. Затем фильтрат был испарен и высушен in vacuo с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (1,56 г; 87%). MS (ESI, pos.): вычислено для C16H30N4O6, 374.2; обнаружено 375.2 (М+Н), 397.2 (M+Na).
Вос-Е-валин-Е-цитруллин-р-аминобензойная кислота t-бутиловый эфир (5).
Этап В.
Вещество, полученное на предыдущем этапе (3; 152 мг; 0,406 ммоль), трет-бутил-4-аминобензоат (4; 150 мг; 0,776 ммоль) и 1-[бис-(диметиламин)метилен]-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-Ь]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат (HATU, 488 мг; 1,28 ммоль) были отвешены в колбу с круглым дном и растворены в безводном Ν,Ν-диметилформамиде (DMF, 3 мл). Ν,Ν-диизопропилэтиламин (DIEA; 0,25 мл; 1,44 ммоль) был добавлен к реагирующей смеси, колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута аргоном, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре. Спустя 18 ч реагирующая смесь была очищена непосредственно на 100 г С18 RediSep Gold колонне с помощью системы ISCO (градиентное элюирование: 20-80% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 20 мин). Фракции, содержащие продукт, были скомпонованы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с образованием неочищенного белого твердого вещества (115 мг). Это вещество было растворено в DCM и повторно очищено на 12 г силикагельной RediSep колонне посредством ISCO (градиентное элюирование: 0-10% метанол в DCM дольше 12 мин), и менее подвижные фракции продукта выпарены и высушены in vacuo с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде бледно-желтого твердого вещества (65 мг; 29%). MS (ESI, pos.): вычислено для C27H43N5O7, 549,3; обнаружено 450,3 (М-Вос+Н); 572,3 (M+Na); 1099,5 (2М+Н); 1121,5 (2M+Na).
Е-валин-Е-цитруллин-р-аминобензойная кислота (6).
Этап С.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено по способу Мета и соавторов. (Jet. Lett. 1992, 33, 5441-5444). Вещество, полученное на предыдущем этапе (5; 61 мг; 0,111 ммоль) было растворено в сухом DCM (3 мл) в колбе с круглым дном, и обработано трифторуксусной кислотой (TFA, 110 мкл; 1,44 ммоль) и триэтилсиланом [TES (Et3SiH), 50 мкл; 0,313 ммоль]. Колба была герметизирована мембраной, продута аргоном, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре в течение 18 ч. Реакция не была завершена посредством ECMS, были добавлены дополнительно TFA (90 мкл) и TES (25 мкл) с перемешиванием в течение еще 6 ч. Реакция все же не была завершена, поэтому колба была запечатана и хранилась при температуре -20°С в течение 3 дней. После нагревания до окружающей температуры и перемешивании в течение еще 24 ч реагирующая смесь была сконцентрирована in vacuo до получения масла, дважды протитрована диэтиловым эфиром, и высушена в среде глубокого вакуума с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде грязно-белого твердого вещества (55 мг; 98%). MS (ESI, pos.): вычислено для C18H27N5O5; 393,2; обнаружено 394,0 (М+Н); 787,2 (2М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) показано в смеси амидных ротамеров: δ 10,52 (s; 0,5H); 10,46 (s; 0,5H); 8,83 (d; 0,5H); 8,71 (d; 0,5H); 8,06 (br s; 3Н); 7,89 (m; 2Н); 7,72 (m; 2Н); 6,03 (m; 1Н); 4,55 (m; 1Н); 3,05 (m; 1Н); 2,97 (m; 1Н); 2,10 (m; 1H); 1,73 (m; 1Н); 1,63 (m; 1Н); 1,5-1,3 (m; 2Н); 0,95 (m; 6Н).
6-(Малеимидо-капролил)-Е-валин-Е-цитруллин-р-аминобензойная кислота (8).
Этап D.
Вещество, полученное на предыдущем этапе (6; 55 мг; 0,108 ммоль) было растворено в воде (3 мл), обработано гидратогенным раствором NaHCO3, затем раствором 6-малеимидил-капроновой кислоты сукцинатным эфиром (56 мг; 0,182 ммоль) в MeCN (3 мл). Колба была запечатана в среде аргона, и реагирующая смесь перемешивалась при окружающей температуре в течение 22 ч. Реакция была завершена посредством ECMS, так что реагирующая смесь была частично сконцентрирована in vacuo и очищена непосредственно на 30 г С18 Aq RediSep Gold колонне посредством ISCO (градиентное элюирование: 2080% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 12 мин). Фракции основного продукта были скомбинированы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с образованием неочищенного бледно-желтого твердого вещества (92 мг). Это вещество было определено посредством ECMS как неочищенное, так что оно было растворено в смеси MeCN/вода и подвергнуто повторной очистке на 100 г С18 Aq Gold колонне посредством ISCO (градиентное элюирование: 0-50% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 20 мин). Наиболее чистые фракции продукта были скомбинированы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (34 мг; 53%). MS (ESI, pos.): вычислено для C28H38N6O8; 586,3; обнаружено 587,3 (М+Н); 609,3 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) показано в смеси амидных ротамеров: δ 10,26 (s; 0,6Н); 10,11 (s; 0,4Н); 8,43 (d; 0,4H); 8,13 (d; 0,6Н); 7,93-7,70 (m; 4Н); 6,99 (m; 2Н); 5,97 (m; 1H); 5,41 (m; 2Н); 4,38 (m; 1Н); 4,21-4,12 (m; 1Н); 3,36 (m; 2Н); 3,02 (m; 1Н); 2,95 (m; 1H); 2,17 (m; 1Н); 2,12 (m; 1H); 1,95 (m; 1H); 1,78-1,58 (m; 2Н); 1,48 (m; 6Н); 1,36 (m; 1Н); 1,18 (m; 2Н); 0,85 (m; 6Н).
Майтансин-Ы-метил-Е-аланин-4-аминбензамид-цитруллин-валин-капролил-6-малеимидил (10).
- 171 034950
Этап Е.
Вещество, полученное на предыдущем этапе (8; 33 мг; 0,056 ммоль), HATU (33 мг; 0,087 ммоль), и майтансин-Ы-метил-Е-аланин (9, приготовлено в виде золотистого твердого вещества ил майтансинола способами, заявленными в патентной заявке США 2007/0037972 А1, 25 мг; 0,038 ммоль), были отвешены в колбу с круглым дном и растворены в безводном DMF (2 мл), и обработаны DIEA (20 мкл; 0,115 ммоль). Колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута аргоном, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре в течение 20 ч. Реагирующая смесь была разведена водой (1 мл) и очищена непосредственно на 50 г С18 Aq RediSep Gold колонне посредством ISCO (градиентное элюирование: 20-80% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 12 мин). Фракции продукта были скомбинированы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (8 мг; 17%). MS (ESI, pos.): вычислено для C60H80N9O16Cl; 1217,5; обнаружено 1218,6 (М+Н); 1200,7 (М-Н2О+Н); 1240,7 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 9,25 (s; 1H); 7,68-7,61 (m; 2H); 7,33 (d; 2H); 6,91 (s; 1H); 6,84 (s; 1H); 6,75 (d; 1H); 6,67 (s; 2H); 6,45 (dd; 1H); 6,27 (br s; 1H); 6,21 (d; 1H); 5,74 (dd; 1H); 5,44 (m; 1H); 4,98 (m; 1H); 4,88 (d; 1H); 4,77 (t; 1H); 4,53 (br s; 1H); 4,33-4,25 (m; 2); 4,00 (s; 3H); 3,65 (d; 1H); 3,48 (m; 4H); 3,56 (s; 3H); 3,20 (m; 1H); 3,11 (d; 1H); 3,05 (m; 3H); 2,88 (s; 3Н); 2,69 (t; 1Н); 2,26-2,19 (m; 3H); 2,10 (m; 2H); 1,94 (m; 1H); 1,70-1,55 (m; 6H); 1,66 (s; 3H); 1,46 (d; 3H); 1,33-1,26 (m; 7H); 0,96 (m; 6H); 0,85 (s; 3H).
Пример 2.
Соединение 15 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 6. Майтансин-N-метил-Е-аланин(4-амино-2-фтор)бензамидо-Cit-Val-Cap-Mal (15). Вос-Е-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-фтор)бензойная кислота t-бутил эфир (12).
Этап А.
Согласно процедуре Випфа и Геймгартнера (Wipf & Heimgartner) (Helv. Chim. Acta, 1998, 71, 140154), Вос-Е-валин-Е-цитруллин (3; 155 мг; 0,414 ммоль) и дициклогексилкарбодиимид (DCC, 95 мг; 0,460 ммоль) были растворены в сухом дихлорметане (DCM, 3 мл), смесь была охлаждена до 0°С, и перемешивалась в течение 5 мин. (+)-камфор-10-сульфоновая кислота (CSA, 15 мг; 0,065 ммоль) и третбутил-4-амино-2-фторбензоат (99 мг; 0,469 ммоль) были затем добавлены в сухом состоянии, и окружающая смесь нагревалась естественным путем до окружающей температуры при перемешивании в течение 3 дней. ECMS показал наличие большого нового пика с m/z 566 (ESI, neg.). Реагирующая смесь была разведена DCM и промыта 10% (по объему) HCl, водой и насыщенным NaHCO3. Каждый водосодержащий слой был подвергнут однократной экстракции посредством DCM, и комбинированные органические слои были промыты минеральным раствором, высушены над Na2SO4 и профильтрованы. Затем фильтрат был выпарен и высушен in vacuo с образованием бледно-золотистого твердого вещества, которое было очищено на 24 г RediSep Gold колонне посредством ISCO (градиентное элюирование: этил ацетат-5:5:1 EtOAc/DCM/метанол более 12 мин). Наиболее чистые фракции продукта были скомбинированы, сконцентрированы in vacuo, и высушены в среде глубокого вакуума с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (95 мг; 40%). MS (ESI, pos.): вычислено для C27H42N5O7F; 567,3; обнаружено 568,3 (М+Н); 590,4 (M+Na).
Е-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-фтор)бензойная кислота трифторацетатная соль (13).
Этап В.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (12; 94 мг; 0,166) с использованием этапа С, пример 1, для получения грязно-белого твердого вещества (112 мг). MS (ESI, pos.): вычислено для C18H26N5O5F; 411,2; обнаружено 412,2 (М+Н); 395,2 (М-Н2О+Н).
6-(Малеимидо)капроамидил-Е-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-фтор)бензойная кислота (14).
Этап С.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (13; 106 мг; 0,166 ммоль), с использованием этапа D, пример 1, для получения белого твердого вещества (92 мг), чистого всего лишь на 70% по оценке ECMS, однако использованного без дальнейшей очистки. MS (ESI, pos.): вычислено для C28H37N6O8F; 604.3; обнаружено 605,2 (М+Н); 627,2 (M+Na).
Майтансин-N-метил-Е-аланин(4-амино-2-фтор)бензамидо-Cit-Val-Cap-Mal (15).
Этап D.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (14, 50 мг; 0,077 ммоль) и майтансин-М-метил-Е-аланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль), с использованием этапа Е, пример 1, для получения белого твердого вещества (18 мг) чистого всего лишь на 55% по оценке ECMS. После двукратной очистки посредством HPEC на колонне Phenomenex Gemini C18 5u, 30x150 мм (2080%, затем 40-60%, MeCN в воде; 0,1% НОАс обе фазы, дольше 20 мин, 30 мл/мин) было получено соединение, указанное в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (3 мг; 3%). MS (ESI, pos.): вычислено для C60H79N9O16ClF; 1235,5; обнаружено 1236,5 (М+Н); 1258,5 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 9,40 (s; 1H); 7,64 (d; 1H; J=12 Гц); 7,42 (s; 1H); 7,14 (t; 1H; J=8 Гц); 6,90 (s; 1H); 6,86 (s; 1H); 6,77 (m; 1H); 6,68 (s; 2H); 6,46 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,25 (br s; 1H); 6,19 (br m;
- 172 034950
1H); 5,75 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,48 (br m; 1H); 4,88 (d; 1H; J=12 Гц); 4,76 (m; 1H); 4,29 (t; 1H; J=11 Гц); 4,23 (t; 1H; J=7 Гц); 4,01 (s; 2H); 3,99 (m; 1H); 3,70 (m; 1H); 3,53-3,47 (m; 4H); 3,36 (s; 3H); 3,20 (m; 1H); 3,13 (d; 1H; J=12 Гц); 3,03 (m; 3H); 2,81 (s; 2H); 2,67 (dd; 1H; J=15 Гц; 12 Гц); 2,25 (t; 1H; J=7 Гц); 2,21 (m; 2H); 2,10 (m; 1H); 1,70-1,64 (m; 2H); 1,67 (s; 3H); 1,46-1,41 (m; 6H); 1,33-1,25 (m; 10H); 0,99-0,95 (m; 6H); 0,89-0,80 (m; 1H); 0,85 (s; 3H).
Пример 3.
Соединение 20 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 7. Майтансин-N-метил-L-аланин(4-амино-2-трифторметил)бензоамидо-Cit-Val-Cap-Mal (20). Вос-Г-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-трифторметил)бензойная кислота t-бутил эфир (17). Этап А.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из Вос-Е-валин-Е-цитруллин (3; 175 мг; 0,467 ммоль) и трет-бутил-4-амино-2-трифторметилбензоата (150 мг; 0,574 ммоль), по способу Випфа и Геймгартнера (Helv. Chim. Ada, 1998, 71, 140-154) для получения белого твердого вещества (77 мг; 27%). MS (ESI, neg.): вычислено для C28H42N5O7F3; 617,3; обнаружено 616,4 (М-Н).
1-Валин-1-цитруллин-(4-амино-2-трифторметил)бензойная кислота трифторацетатная соль (18).
Этап В.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (17; 67 мг; 0,108), с использованием этапа С, пример 1, для получения грязно-белого твердого вещества (77 мг). MS (ESI, pos.): вычислено для C19H26N5O5F3; 461,2; обнаружено 462,3 (М+Н); 445,2 (М-Н2О+Н).
6-(Малеимидо)капроамидил-Е-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-трифторметил)бензойная кислота (19).
Этап С.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (18;
мг; 0,108 ммоль), с использованием этапа D, пример 1, для получения белого твердого вещества (47 мг; 66%). MS (ESI, pos.): вычислено для C29H37N6O8F3; 654,3; обнаружено 655,3 (М+Н).
Майгансин-№метил-Е-аланин(4-амино-2-трифторметил)бензоамидо-Сй-Уа1-Сар-Ма1 (20).
Этап D.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (19; 34 мг; 0,052 ммоль) и майтансин-Ы-метил-Е-аланин (9; 34 мг; 0,052 ммоль), с использованием этапа Е, пример 1, для получения белого твердого вещества (11 мг; 16%) после второй очистки ISCO (100 г С18 Aq Gold колонна, 30-70% MeCN в воде; 0,05% НОАс оба, дольше 15 мин, 50 мл/мин). MS (ESI, pos.): вычислено для C61H79N9O16C1F3; 1285,5; обнаружено 1287,4 (М+Н); 1268,4 (М-Н2О+Н), 1308,4 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDC16): δ 10,4 (s; 1H); 8,16 (d; 1Н; J=7 Гц); 8,13 (s; 1H); 7,80 (d; 1H; J=8 Гц); 7,25 (s; 1H); 7,12 (m; 1H); 6,99 (s; 2H); 6,93 (s; 1H); 6,84 (s; 1H); 6,63-6,55 (m; 2H); 6,01 (s; 1H); 5,95 (m; 1H); 5,58 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,38 (m; 3H); 4,64 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,30 (m; 1H); 4,17-4,08 (m; 2H); 3,96 (s; 2H); 3,93 (m; 1H); 3,53 (d; 1H; J=9 Гц); 3,40 (br m; 1H); 3,36 (m; 1H); 3,27 (s; 3H); 3,25 (m; 1H); 3,04 (s; 3H); 3,03-2,92 (m; 2H); 2,84-2,70 (m; 2H); 2,53 (m; 2H); 2,20-2,09 (m; 3H); 1,94 (m; 1H); 1,70 (m; 1H); 1,64 (s; 3H); 1,60-1,53 (m; 3H); 1,51-1,44 (m; 6H); 1,40 (m; 1H); 1,37-1,32 (m; 3H); 1,30-1,24 (m; 2H); 1,201,12 (m; 5H); 0,89 (m; 1H); 0,86 (s; 3H); 0,84-0,80 (m; 6H).
Пример 4.
Соединение 25 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 8.
Майтансин-N-мети-Е-аланин(4-амипо-2-метокси)бензоамидо-Cit-Va1-Cap-Ma1 (25). Вос-Е-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-метокси)бензойная кислота t-бутил эфир (22).
Этап А.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из: Вос-Е-валин-Е-цитруллин (3; 143 мг; 0,382 ммоль) и трет-бутил-4-амино-2-метоксибензоат (109 мг; 0,488 ммоль), по способу Випфа и Геймгартнера (He1v. Chim. Ada, 1998, 71, 140-154) для получения белого твердого вещества (92 мг; 42%). MS (ESI, neg.): вычислено для C28H45N5O8; 579,3; обнаружено 580,3 (М-Н); 602,3 (M+Na).
Е-валин-Е-цитруллин-(4-амино-2-метокси)бензойная кислота трифторацетат соль (23).
Этап В.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (22; 90 мг; 0,155), с использованием этапа С, пример 1, для получения бледного твердого вещества (99 мг), дважды титрованного DCM, растворенного в MeCN и THF, профильтрованного, и раствор выпарен in vacuo с получением указанного в заголовке соединения в виде грязно-белого твердого вещества (79 мг; 95%). MS (ESI, pos.): вычислено для C19H29N5O6; 423,2; обнаружено 424,2 (М+Н); 407,2 (М-Н2О+Н);
446,2 (M+Na).
6-(Малеимидо)капроамидил-Е-валин-1-цитруллин-(4-амино-2-метокси)бензойная кислота (24).
Этап С.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (23;
мг; 0,141 ммоль), с использованием этапа D, пример 1, для получения белого твердого вещества (50 мг; 57%). MS (ESI, pos.): вычислено для C29H40N6O9; 616,3; обнаружено 617,2 (М+Н).
- 173 034950
Майтансин-М-метил-Ь-аланин(4-амино-2-метокси)бензоамидо-Сй-Уа1-Сар-Ма1 (25).
Этап D.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (24; 49 мг; 0,079 ммоль) и майтансин-М-метил-Е-аланин (9; 34 мг; 0,052 ммоль), с использованием этапа Е, пример 1, для получения белого твердого вещества (34 мг; 34%). MS (ESI, pos.): вычислено для C61H82N9O17C1; 1247,6; обнаружено 1248,5 (М+Н); 1230,5 (М-Н2О+Н); 1270,5 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDC16): δ 9,26 (br s; 1H); 7,49 (br m; 1H); 6,99 (m; 1H); 6,95 (s; 1H); 6,87 (s; 1H); 6,85 (m; 1H); 6,69 (s; 2H); 6,45 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,29 (br s; 1H); 5,73 (dd; 1H; J=16 Гц; 10 Гц); 4,84 (d; 1H; J=12 Гц); 4,70 (br m; 1H); 4,30 (t; 1H; J=12 Гц); 4,01 (s; 3H); 3,74 (br m; 4H); 3,55-3,47 (m; 5H); 3,35 (s; 3Н); 3,14 (m; 2H); 3,02 (m; 4H); 2,83 (br s; 3H); 2,71 (s; 3H); 2,65 (m; 1H); 2,60 (t; 1H; J=8 Гц); 2,24-2,18 (m; 3H); 2,09 (m; 1H); 1,77 (пентет; 1H; J=8 Гц); 1,70-1,61 (m; 6H); 1,67 (s; 3H); 1,51-1,40 (m; 6H); 1,30-1,26 (m; 5H); 0,94 (m; 6H); 0,85 (s; 3H).
Пример 5.
Соединение 27 было синтезировано из соединения 26 описанным ниже образом и представлено на фиг. 9.
Майтансин-Ы-метип-Е-аланин-4-аминобензамид (27).
Этап А. Майтансин-Ы-метил-1-аланин(4-нитро)бензамид.
В сухую колбу с плоским дном были отвешены: майтансин-Ы-метил-Е-аланин (9; 96 мг; 0,15 ммоль), 4-нитробензойная кислота (26) (42 мг; 0,25 ммоль), и HATU (0,12 г; 0,31 ммоль). Реагенты были растворены в безводном DMF (3,0 мл), обработаны DIEA (0,10 мл; 0,57 ммоль), и колба продута аргоном и герметизирована каучуковой мембраной. Реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре в течение 3 дней, после чего анализ LCMS показал полное преобразование майтан-NMA так, что он был растворен в нескольких мл воды и очищен непосредственно на 100 г С18 Aq Gold колонне (градиентное элюирование: 20-80% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 15 мин). Наиболее чистые фракции продукта были скомбинированы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде желтого твердого вещества (64 мг; 54%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H47N4O12C1; 798,3; обнаружено 798,4 (М+Н).
Этап В. Майтан-NMA-(4-амино)бензамид (27).
Вещество предыдущего этапа (63 мг; 0,079 ммоль) и цинковая пыль (<10 мкм, 98+% чистоты, 108 мг; 1,65 ммоль) были растворены/взвешены в смеси THF (4 мл) и воды (1 мл). К смеси была добавлен уксусная кислота (0,80 мл; 3,14 ммоль), колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута аргоном, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре в течение 1 ч. LCMS необработанной смеси показал полное преобразование, и реагирующая смесь была профильтрована через целит, промыта MeCN и фильтрат сконцентрирован in vacuo. Необработанное вещество было очищено непосредственно на 50 г С18 Aq Go1d колонне (градиентное элюирование: 20-80% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 12 мин). Наиболее чистые фракции продукта были скомбинированы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с получением 46 мг белого твердого вещества, чистого лишь на 88% по результатам анализа LCMS. Это вещество было растворено в смеси 1:1 MeCN/вода (3 мл) и повторно очищено посредством HPLC с помощью колонны Phenomenex Gemini C18 5u, 30x150 мм в двух инъекциях (40-80% и 30-70% MeCN в воде; 0,05% НОАс обе фазы, дольше 20 мин, 30 мл/мин), и наиболее читая фракция была сконцентрирована, заморожена и лиофилизирована приведенным выше образом с получением соединения, указанного в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (31 мг; 48%). MS (ESI, pos.): вычислено для C41H53N4O12C1; 768,3; обнаружено 751,2 (М-Н2О+Н); 769,2 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDC13): δ 7,24 (d; 2Н; J=9 Гц); 6,93 (s; 1H); 6,82 (s; 1H); 6,76 (d; 1H; J=12 Гц); 6,57 (d; 2H; J=9 Гц); 6,45 (dd; 1H; J=16 Гц; 12 Гц); 6,23 (s; 1H); 5,74 (dd; 1H; J=16 Гц; 9 Гц); 5,43 (br m; 1H); 4,87 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,32 (m; 1H); 3,99 (s; 3H); 3,85 (s; 2H); 3,65 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=9 Гц); 3,47 (br s; 1H); 3,36 (s; 3H); 3,10 (d; 1H; J=13 Гц); 3,07 (s; 3H); 3,04 (d; 1H; J=9 Гц); 2,93 (s; 3H); 2,67 (m; 1H); 2,20 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,67 (m; 1H); 1,66 (s; 3H); 1,51-1,47 (m; 2H); 1,44 (d; 3H; J=7 Гц); 1,31 (d; 3H; J=7 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,84 (s; 3H).
Пример 6.
Соединение 29 было синтезировано из соединения 28 описанным ниже образом и представлено на фиг. 10.
Майтансин-М-метил-Е-аланин(2-фтор-4-амино)бензамид (29).
Этап А. Майтансин-М-метил-1-аланин(2-фтор-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-И-метил-Еаланин (9; 40 мг; 0,056 ммоль) и 2-фтор-4-нитробензойная кислота (28) (26 мг; 0,140 ммоль), с использованием этапа А примера 5, для получения светло-желтого твердого вещества (16 мг; 35%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H46N4O12C1F; 816,3; обнаружено 817,2 (М+Н); 839,2 (M+Na).
- 174 034950
Этап В. Майтан-ММЛ-(2-фтор-4-амино)бензамид (29).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (15 мг; 0,018 ммоль), с использованием этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (8 мг; 50%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H48N4O10ClF; 786,3; обнаружено 769,2 (М-Н2О+Н); 787,2 (М+Н);
809,3 (M+Na).
Щ-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,05-6,99 (га; 2Н); 6,92 (s; 1H); 6,85 (s; 1H); 6,81 (d; 1H; J=11 Гц); 6,47 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,36-6,29 (m; 2H); 6,22 (s; 1H); 5,73 (dd; 1H; J=16 Гц; 9 Гц); 5,48 (m; 1H); 4,87 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,30 (m; 1H); 4,00 (s; 3H); 3,93 (s; 2H); 3,73 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=9 Гц); 3,41 (br m; 1H); 3,36 (s; 3H); 3,13 (d; 1H; J=12 Гц); 3,04 (s; 3H); 3,02 (m; 1H); 2,83 (s; 3H); 2,66 (dd; 1H; J=15 Гц; 13 Гц); 2,19 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,67 (s; 3H); 1,63 (m; 1H); 1,51-1,45 (m; 2H); 1,43 (d; 3H; J=7 Гц); 1,30 (d; 3H; J=7 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,84 (s; 3H).
Пример 7.
Соединение 31 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 11.
Майтансин-№метил-Е-аланин(2-трифторметил-4-амино)бензамид (31).
Этап А. Майтансин-№метил-Е-аланин(2-трифторметил-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-№метил-Еаланин (9; 68 мг; 0,105 ммоль) и 2-трифторметил-4-нитробензойная кислота (30) (37 мг; 0,157 ммоль), с использованием этапа А примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (82 мг; 90%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H46N4O12ClF3; 866,3; обнаружено 867,1 (М+Н); 889,1 (M+Na).
Этап В. Майтан-NMЛ-(2-трифторметил-4-амино)бензамид (31).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (79 мг; 0,091 ммоль), с использованием этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (29 мг; 35%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H48N4O10ClF3; 836,3; обнаружено 818,8 (М-Н2О+Н); 836,8 (М+Н); 858,0 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,00-6,91 (m; 3Н); 6,85 (d; 1H; J=3 Гц); 6,75 (br d; 1H; J=18 Гц); 6,63 (d; 1Н; J=11 Гц); 6,45 (dd; 1H; J=26 Гц; 19 Гц); 6,23 (s; 1H); 5,73 (dd; 1H; J=26 Гц; 15 Гц); 4,88 (dd; 1H; J=20 Гц; 5 Гц); 4,31 (m; 1H); 4,01 (s; 3H); 3,96 (m; 1H); 3,66 (d; 1H; J=22 Гц); 3,52 (d; 1H; J=15 Гц); 3,37 (s; 3H); 3,14 (s; 3H); 3,11 (m; 1H); 3,03 (d; 1H; J=16 Гц); 2,72 (m; 1H); 2,66 (s; 3H); 2,23 (dd; 1H; J=24 Гц; 5 Гц); 1,66 (s; 3Н); 1,51-1,45 (m; 2H); 1,43 (d; 3Н; J=12 Гц); 1,31 (d; 3Н; J=11 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,87 (s; 3H).
Пример 8.
Соединение 33 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 12.
Майтансин-Н-метил-Е-аланин(2-метокси-4-амино)бензамид (33).
Этап А. Майтансин-Н-метил-1-аланин(2-метокси-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 68 мг; 0,105 ммоль) и 2-метокси-4-нитробензойная кислота (32) (32 мг; 0,162 ммоль), с использованием этапа А примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (78 мг; 90%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H49N4O13Cl; 828,3; обнаружено 811,1 (М-Н2О+Н); 829,2 (М+Н); 851,2 (M+Na).
Этап В. Майтан-NMЛ-(2-метокси-4-амино)бензамид (33).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (75 мг; 0.090 ммоль), с использованием этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (62 мг; 79%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O11Cl; 798,3; обнаружено 781,2 (М-Н2О+Н); 799,2 (М+Н);
821.2 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,03 (d; 1H; J=14 Гц); 6,99 (s; 1H); 6,94 (d; 1H; J=12 Гц); 6,86 (s; 1H); 6,81 (d; 1H; J=8 Гц); 6,46 (dd; 1H; J=16 Гц; 11 Гц); 6,24 (s; 1H); 6,17 (s; 1H); 6,11 (d; 1H; J=8 Гц); 5,73 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,54 (m; 1H); 4,81 (m; 1H); 4,31 (t; 1H; J=11 Гц); 4,00 (s; 3H); 3,81 (d; 1H; J=13 Гц); 3,79 (m; 1H); 3,52 (d; 1H; J=9 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,12 (d; 1H; J=13 Гц); 3,04 (m; 1H); 3,02 (s; 3H); 2,72 (s; 3H); 2,64 (t; 1H; J=12 Гц); 2,18 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,66 (s; 3H); 1,63 (m; 2H); 1,51-1,45 (m; 2H); 1,41 (d; 3H; J=7 Гц); 1,30 (d; 3H; J=7 Гц); 1,26 (m; 1H); 0,84 (s; 3H).
Пример 9.
Соединение 35 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 13.
Майтансин-N-метил-Е-аланин-N-(3-трифторметил-4-амино)бензамид (35).
Этап А. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-трифторметил-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-N-метил-Еаланин (9; 46 мг; 0,071 ммоль) и 3-трифторметил-4-нитробензойная кислота (34) (25 мг; 0,106 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения светло-желтого твердого вещества (37 мг; 61%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H46N4O12ClF3; 866,3; обнаружено 849,2 (М-Н2О+Н); 867,2 (М+Н);
889.2 (M+Na).
Этап В. Майтансин-N-метил-Е-аланин-N-(3-трифторметил-4-амино)бензамид (35).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (36 мг; 0,042 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества
- 175 034950 (17 мг; 46%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H48N4O10CIF3; 836,3; обнаружено 819,2 (М-Н2О+Н); 837,2 (М+Н); 859,2 (M+Na).
Ή-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,54 (s; 1H); 7,37 (d; 1H; J=8 Гц); 6,91 (br s; 1H); 6,83 (s; 1H); 6,70 (d; 1H; J=11 Гц); 6,66 (d; 1H; J=8 Гц); 6,45 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,28 (s; 1H); 5,73 (dd; 1H; J=16 Гц; 9 Гц); 5,44 (m; 1H); 4,88 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,40 (s; 2H); 4,30 (t; 1H; J=11 Гц); 3,99 (s; 3H); 3,63 (d; 1H; J=13 Гц); 3,52 (d; 1H; J=9 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,12 (d; 1H; J=13 Гц); 3,03 (m; 4H); 2,92 (s; 3H); 2,69 (m; 1H); 2,21 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,65 (m; 4H); 1,52-1,44 (m; 4H); 1,31 (d; 3H; J=6 Гц); 1,26 (m; 2H); 0,85 (s; 3H).
Пример 10.
Соединение 37 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 14.
Майтансин-N -метил-Е-аланин-N-(2-хлор-4-амино-5 -фтор)бензамид (37).
Этап А. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(2-хлор-4-нитро-5-фтор)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 46 мг; 0,071 ммоль) и 3-трифторметил-4-нитробензойная кислота (36; 26 мг; 0,118 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения белого твердого вещества (33 мг; 55%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H45N4O12Cl2F; 850,2; обнаружено 833,1 (М-Н2О+Н); 851,1 (М+Н); 873,1 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Н-метил-Е-аланин-Н-(2-хлор-4-амино-5-фтор)бензамид (37).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (36 мг; 0,042 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (17 мг; 46%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H47N4O10Cl2F; 820,3; обнаружено 803,2 (М-Н2О+Н); 821,2 (М+Н); 843,2 (M+Na).
Ή-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 6,88 (d; 2Н; J=13 Гц); 6,83 (d; 1H; J=11 Гц); 6,77 (d; 1H; J=8 Гц); 6,72 (d; 1H; J=10 Гц); 6,46 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,25 (s; 1H); 5,71 (dd; 1H; J=16 Гц; 10 Гц); 5,52 (m; 1H); 4,85 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,30 (t; 1H; J=11 Гц); 4,01 (s; 3H); 3,92 (s; 2H); 3,73 (d; 1H; J=13 Гц); 3,52 (d; 1H; J=9 Гц); 3,37 (s; 3H); 3,15 (d; 1H; J=13 Гц); 3,10 (s; 3H); 3,03 (d; 1H; J=10 Гц); 2,75 (s; 3H); 2,68 (dd; 1H; J=14 Гц; 12 Гц); 2,22 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,67 (s; 3H); 1,61 (m; 1H); 1,50-1,43 (m; 5H); 1,31 (d; 3H; J=6 Гц); 1,27-1,24 (m; 1H); 0,86 (s; 3H).
Пример 11.
Соединение 39 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 16.
Майтансин-N -метил-Е-аланин-N-(2,5 -дифтор-4 -амино)бензамид (39).
Этап А. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(2,5-дифтор-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 48 мг; 0,074 ммоль) и 2,5-дифтор-4-нитробензойная кислота (38; 27 мг; 0,133 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, получения желтого твердого вещества (37 мг; 60%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H45N4O12ClF2; 834,3; обнаружено 817,2 (М-Н2О+Н); 835,2 (М+Н); 857,2 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(2,5-дифтор-4-амино)бензамид (39).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (36 мг; 0,043 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (22 мг; 59%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H47N4O10ClF2; 804,3; обнаружено 787,3 (М-Н2О+Н); 805,3 (М+Н); 827,3 (M+Na).
Ή-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 6,89-6,84 (m; 3Н); 6,77 (d; 1Н; J=11 Гц); 6,49-6,41 (m; 2H); 6,24 (s; 1H); 5,72 (dd; 1H; J=16 Гц; 9 Гц); 5,47 (q; 1H; J=7 Гц); 4,87 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,30 (td; 1H; J=12 Гц; 2 Гц); 4,00 (m; 5H); 3,71 (d; 1H; J=13 Гц); 3,52 (d; 1H; J=9 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,33 (br s; 1H); 3,13 (d; 1H; J=13 Гц); 3,06 (s; 3H); 3,02 (d; 1H; J=10 Гц); 2,83 (d; 3H; J=2 Гц); 2,66 (dd; 1H; J=15 Гц; 12 Гц); 2,18 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,67 (s; 3Н); 1,63 (d; 1H; J=14 Гц); 1,51-1,45 (m; 1H); 1,43 (d; 3H; J=7 Гц); 1,31 (d; 3H; J=6 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,84 (s, 3H).
Пример 12.
Соединение 41 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 17.
Майтансин-N -метил-Е-аланин(3 -фтор-4-амино)бензамид (41).
Этап А. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(3-фтор-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 47 мг; 0,072 ммоль) и 3-фтор-4-нитробензойная кислота (40) (24 мг; 0,130 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (40 мг; 68%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H46N4O12ClF; 816,3; обнаружено 799,2 (M-H2O+H); 817,2 (М+Н); 839,2 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(3-фтор-4-амино)бензамид (41).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (39 мг; 0,048 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (24 мг; 60%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H48N4O10ClF; 786,3; обнаружено 769,2 (М-Н2О+Н); 787,2 (М+Н); 809,2 (M+Na).
Ή-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,11-7,04 (m; 2Н); 6,89 (s; 1Н); 6,83 (d; 1H; J=2 Гц); 6,72 (d; 1H; J=11 Гц); 6,68 (t; 1H; J=8 Гц); 6,45 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,25 (s; 1H); 5,72 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,43 (m;
- 176 034950
1H); 4,86 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,31 (t; 1H; J=11 Гц); 3,99 (s; 3H); 3,92 (m; 2H); 3,62 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=9 Гц); 3,40 (bs s; 1H); 3,36 (s; 3H); 3,12 (m; 1H); 3,08 (s; 3H); 3,04 (d; 1H; J=10 Гц); 2,92 (s; 3H); 2,68 (t; 1H; J=13 Гц); 2,20 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,66 (s; 3H); 1,63 (m; 1H); 1,49-1,46 (m; 1H); 1,44 (d; 3H; J=7 Гц); 1,31 (d; 3H; J=7 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,84 (s; 3H).
Пример 13.
Соединение 43 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 18.
Майтансин-Ы-метил-Г-аланин(3-хлор-4-амино)бензамид (43).
Этап А. Майтансин-Ы-метил-Г-аланин(3-хлор-4-амино)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Ы-метил-Галанин (9; 45 мг; 0,069 ммоль) и 3-хлор-4-нитробензойная кислота (42) (26 мг; 0,129 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (36 мг; 62%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H46N4O12Cl2; 832,2; обнаружено 815,2 (М-Н2О+Н); 833,2 (М+Н); 855,2 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(3-хлор-4-амино)бензамид (43).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (35 мг; 0,042 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (24 мг; 67%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H48N4O10Cl2; 802,3; обнаружено 785,2 (М-Н2О+Н); 803,2 (М+Н); 825,1 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,35 (s; 1H); 7,17 (d; 1H; J=8 Гц); 6,90 (s; 1H); 6,83 (d; 1Н; J=2 Гц); 6,68 (m; 2H); 6,44 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,30 (s; 1H); 5,73 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,42 (m; 1H); 4,87 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,32-4,27 (m; 3Н); 3,99 (s; 3H); 3,60 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=10 Гц); 3,44 (bs s; 1Н); 3,36 (s; 3Н); 3,10 (m; 4H); 3,03 (d; 1H; J=10 Гц); 2,92 (s; 3H); 2,69 (m; 1H); 2,21 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,65 (s; 3Н); 1,63 (m; 1H); 1,52-1,45 (m; 1H); 1,43 (d; 3H; J=7 Гц); 1,31 (d; 3H; J=7 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,83 (s; 3H).
Пример 14.
Соединение 45 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 19. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(5-амино-8-карбоксиквинолин)карбоксамид (45).
Этап А. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(5-нитро-8-карбоксиквинолин)карбоксамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Ы-метил-Еаланин (9; 45 мг; 0,069 ммоль) и 5-нитро-8-карбоксиквинолин (44) (24 мг; 0,110 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (26 мг; 44%). MS (ESI, pos.): вычислено для C42H48N5O12Cl; 849,3; обнаружено 832,2 (М-Н2О+Н); 850,2 (М+Н); 872,2 (M+Na).
Этап В. Майтансин-М-метил-Е-аланин(5-амино-8-карбоксиквинолин)карбоксамид (45).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (25 мг; 0,029 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (8 мг; 31%). MS (ESI, pos.): вычислено для C42H50N5O10Cl; 819,3; обнаружено 802,3 (М-Н2О+Н);
820,3 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,80 (br s; 1H); 8,54 (d; 1H; J=10 Гц); 7,39 (br s; 1H); 7,28 (s; 1H); 7,05-7,00 (br m; 2H); 6,90 (s; 1H); 6,84 (m; 1H); 6,62 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,52 (br m; 1H); 6,22 (s; 2H); 5,98 (s; 1H); 5,62 (br m; 2H); 4,56 (br m; 1H); 4,11 (m; 1H); 3,98 (s; 3H); 3,64 (d; 1H; J=13 Гц); 3,53 (d; 1H; J=9 Гц); 3,27 (s; 3H); 2,92-2,88 (m; 3H); 2,81 (d; 1H; J=10 Гц); 2,42 (br s; 2H); 2,07-2,04 (m; 1H); 1,75 (m; 2H); 1,66 (s; 3H); 1,55-1,45 (m; 3H); 1,42 (d; 3H; J=1 Гц); 1,32 (d; 1H; J=14 Гц); 1,24 (s; 1H); 1,14 (d; 3H; J=7 Гц); 0,84 (s; 3H).
Пример 15.
Соединение 47 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 20.
Майтансин-М-метил-Е-аланин(3-бромо-4-амино)бензамид (47).
Этап А. Майтансин-М-метил-Е-аланин(3-бромо-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-М-метил-Еаланин (9; 49 мг; 0,075 ммоль) и 3-бромо-4-нитробензойная кислота (46) (30 мг; 0,122 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (38 мг; 58%). MS (ESI, pos.): рассчитано для C39H46N4O12BrCl; 876,2/878,2; обнаружено 861,1 (М-Н2О+Н); 879,1 (М+Н), 901,1 (M+Na) для наиболее распространенных изотопов.
Этап В. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-бромо-4-амино)бензамид (47).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (37 мг; 0,042 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (28 мг; 74%). MS (ESI, pos.): рассчитано для C39H48N4O10BrCl; 846,2/848,2; обнаружено 831,1 (M-H2O+H); 849,1 (М+Н), 871,2 (M+Na) для наиболее распространенных изотопов.
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,51 (s; 1H); 7,20 (d; 1H; J=8 Гц); 6,90 (s; 1H); 6,83 (s; 1H); 6,68 (m; 2H); 6,44 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,33 (s; 1H); 5,74 (dd; 1H; J=15 Гц; 10 Гц); 5,42 (m; 1H); 4,88 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,31 (m; 3H); 3,99 (s; 3H); 3,60 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=9 Гц); 3,46 (br s; 1H); 3,36 (s; 3H); 3,10 (s; 3H); 3,09 (m; 1H); 3,03 (d; 1H; J=10 Гц); 2,70 (t; 1H; J=13 Гц); 2,21 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,65 (s; 3H); 1,51-1,45 (m; 2H); 1,43 (d; 3H; J=7 Гц); 1,30 (d; 3H; J=6 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,85 (s; 3H).
- 177 034950
Пример 16.
Соединение 49 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 21.
Майтансин-Н-метил-С-аланин(3-метокси-4-амино)бензамид (49).
Этап А. Майтансин-Н-метил-С-аланин(3-метокси-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Ы-метил-Саланин (9; 49 мг; 0,075 ммоль) и 3-метокси-4-нитробензойная кислота (48) (23 мг; 0,117 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (34 мг; 55%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H49N4O13Cl; 828,3; обнаружено 811,2 (M-H2O+H); 829,3 (М+Н); 851,3 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(3-метокси-4-амино)бензамид (49).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (33 мг; 0,40 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (25 мг; 74%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O11Cl; 798,3; обнаружено 781,2 (М-Н2О+Н); 799,2 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 6,94 (s; 1H); 6,92 (s; 1H); 6,85 (d; 1H; J=8 Гц); 6,81 (s; 1H); 6,74 (br d; 1H; J=10 Гц); 6,54 (d; 1H; J=10 Гц); 6,44 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,33 (s; 1H); 5,76 (m; 1H); 5,43 (br s; 1H); 4,87 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,31 (t; 1H; J=11 Гц); 3,98 (s; 3H); 3,70 (s; 3H); 3,64 (br d; 1H; J=13 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,11-3,02 (m; 5H); 2,94 (s; 3H); 2,68 (m; 1H); 2,20 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,67 (m; 1H); 1,65 (s; 3H);
1.49 (dd; 1H; J=9 Гц; 7 Гц); 1,44 (d; 3H; J=7 Гц); 1,30 (d; 3H; J=7 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,85 (s; 3H).
Пример 17.
Соединение 51 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 22.
Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(2-метил-4-амино)бензамид (51).
Этап А. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(2-метил-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Ы-метил-Еаланин (9; 49 мг; 0,075 ммоль) и 2-метил-4-нитробензойная кислота (50) (24 мг; 0,132 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (32 мг; 52%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H49N4O12Cl; 812,3; обнаружено 795,3 (M-H2O+H); 813,3 (М+Н); 835,3 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(2-метил-4-амино)бензамид (51).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (30 мг; 0,037 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (17 мг; 55%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O10Cl; 782,3; обнаружено 765,2 (М-Н2О+Н); 783,2 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 6,93 (s; 1H); 6,85 (s; 1H); 6,81 (d; 1H; J=8 Гц); 6,77 (d; 1H; J=11 Гц);
6.49 (s; 1H); 6,45 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,34 (d; 1H; J=7 Гц); 6,28 (s; 1H); 5,74 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,38 (m; 1H); 4,90 (m; 1H); 4,32 (t; 1H; J=11 Гц); 4,00 (s; 3H); 3,69 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=9 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,15 (m; 1H); 3,12 (s; 3H); 3,01 (d; 1H; J=10 Гц); 2,73 (s; 3H); 2,69 (m; 1H); 2,22 (m; 1H); 2,18 (s; 3H); 1,68 (m; 1H); 1,66 (s; 3H); 1,51 (m; 1H); 1,47 (d; 3H; J=7 Гц); 1,30 (d; 3H; J=6 Гц); 1,28 (m; 1H); 0,87 (s; 3H).
Пример 18.
Соединение 53 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 23.
Майтансин-N -метил-Е-аланин(3 -метил-4-амино)бензамид (53).
Этап А. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(3-метил-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 49 мг; 0,075 ммоль) и 3-метил-4-нитробензойная кислота (52) (26 мг; 0,143 ммолъ), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (34 мг; 56%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H49N4O12Cl; 812,3; обнаружено 795,2 (М-Н2О+Н); 813,2 (М+Н).
Этап В. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-метил-4-амино)бензамид (53).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (33 мг; 0,041 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (24 мг; 71%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O10Cl; 782,3; обнаружено 765,2 (М-Н2О+Н); 783,2 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,15 (s; 1H); 7,09 (d; 1Н; J=8 Гц); 6,94 (s; 1H); 6,82 (s; 1H); 6,72 (br d; 1H; J=10 Гц); 6,54 (d; 1H; J=8 Гц); 6,44 (dd; 1H; J=15 Гц; 12 Гц); 6,33 (s; 1H); 5,75 (dd; 1H; J=14 Гц; 9 Гц); 5,42 (m; 1H); 4,87 (dd; 1H; J=12 Гц; 10 Гц); 4,31 (t; 1H; J=11 Гц); 3,98 (s; 3H); 3,63 (br d; 1H; J=13 Гц); 3,50 (d; 1H; J=9 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,10 (m; 1H); 3,07 (s; 3H); 3,03 (d; 1H; J=10 Гц); 2,91 (s; 3H); 2,68 (t; 1H; J=13 Гц); 2,19 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 2,06 (s; 3H); 1,66 (m; 1H); 1,65 (s; 3H); 1,48 (dd; 1H; J=11 Гц; 7 Гц); 1,43 (d; 3H; J=7 Гц); 1,29 (d; 3H; J=7 Гц); 1,27 (m; 1H); 0,84 (s; 3H).
Пример 19.
Соединение 55 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 24.
Майтансин-N-метип-Е-аланин(8-амино-5-карбоксиквинолин)карбоксамид (55).
- 178 034950
Этап А. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(8-нитро-5-карбоксиквинолин)карбоксамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Л-метил-Еаланин (9; 47 мг; 0,072 ммоль) и 8-нитро-5-карбоксиквинолин (54) (35 мг; 0,160 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (30 мг; 49%). MS (ESI, pos.): вычислено для C42H48N5O12Cl; 849,3; обнаружено 832,6 (М-Н2О+Н); 850,7 (М+Н).
Этап В. Майтансин-Ы-метил-Е-аланин(8-амино-5-карбоксиквинолин)карбоксамид (55).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (29 мг; 0,034 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (18 мг; 60%). MS (ESI, pos.): вычислено для C42H50N5O10Cl; 819,3; обнаружено 802,0 (МН2О+Н); 820,0 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 8,77 (dd; 1H; J=4 Гц; 2 Гц); 8,18 (d; 1H; J=8 Гц); 7,40 (dd; 1H; J=9 Гц; 4 Гц); 7,23 (m; 1H); 6,99 (s; 1H); 6,87 (s; 1H); 6,73 (d; 1H; J=8 Гц); 6,68 (d; 1H; J=11 Гц); 6,47 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,26 (s; 1H); 5,77 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,32 (br m; 1H); 5,21 (br s; 2H); 4,99 (d; 1H; J=9 Гц); 4,34 (t; 1H; J=11 Гц); 4,01 (s; 3H); 3,78 (br m; 1H); 3,67 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=10 Гц); 3,37 (s; 3H); 3,16 (d; 1H; J=13 Гц); 3,12 (s; 3H); 3,00 (d; 1H; J=10 Гц); 2,79 (s; 3H); 2,73 (m; 1H); 2,24 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,76 (d; 1H; J=14 Гц); 1,68 (s; 3H); 1,61 (d; 3H; J=7 Гц); 1,33 (m; 1H); 1,30 (d; 3H; J=7 Гц); 1,25 (s; 1H); 0,90 (s; 3H).
Пример 20.
Соединение 60 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 25.
Майтансин-N-метил-L-аланин(3-метокси-4-амино)бензамидо-Cit-Val-Сар-Mal(60).
Этап А.
Вос-Е-валин-Е-цитруллин-(3-метокси-4-амино)бензойная кислота t-бутил эфир (57).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: Вос-Е-валин-Е-цитруллин (3; 100 мг; 0,267 ммоль) и 4-амино-3-метоксибензойная кислота трет-бутил эфир (56; 61 мг; 0,273 ммоль), с использованием способа этапа А примера 2, для получения белого твердого вещества (74 мг; 48%). MS (ESI, pos.): вычислено для C28H45N5O8; 579,3; обнаружено 580,4 (М+Н); 602,6 (M+Na).
Этап В. Е-валин-Е-цитруллин-(3-метокси-4-амино)бензойная кислота (58).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (57; 72 мг; 0,124 ммоль), с использованием способа С примера 1, для получения грязно-белого твердого вещества (68 мг; 100%). MS (ESI, pos.): вычислено для C19H29N5O6; 423,2; обнаружено 424,4 (М+Н); 847,4 (2М+Н).
Этап С. 6-(Малеимидил-капролил)-Е-валин-Е-цитруллин-(3-метокси-4-амино)бензойная кислота (59).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (58; 67 мг; 0,124 ммоль), с использованием способа D примера 1, для получения белого твердого вещества (45 мг; 59%). MS (ESI, pos.): вычислено для C29H40N6O9; 616,3; обнаружено 617,5 (М+Н); 639,6 (M+Na).
Этап D. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-метокси-4-амино)бензамидо-Cit-Val-Сар-Mal (60).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (59; 44 мг; 0,071 ммоль) и майтансин-Л-метил-Е-аланин (9; 49 мг; 0,075 ммоль), с использованием способа Е примера 1, для получения белого твердого вещества (14 мг; 16%). MS (ESI, pos.): вычислено для C61H82N9O17Cl; 1247,6; обнаружено 1231,1 (М-Н2О+Н); 1249,1 (М+Н); 1271,1 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 8,48 (s; 1Н); 8,24 (d; 1H; J=8 Гц); 7,11 (d; 1H; J=8 Гц); 6,96-6,93 (m; 3H); 6,83 (s; 1H); 6,72-6,68 (m; 3H); 6,45 (dd; 1H; J=16 Гц; 11 Гц); 6,25 (s; 1H); 6,18 (d; 1H; J=9 Гц); 5,77 (dd; 1H; J=15 Гц; 10 Гц); 5,44 (m; 1H); 5,03 (br s; 1H); 4,90 (d; 1H; J=10 Гц); 4,62 (m; 1H); 4,54 (br s; 2H); 4,33-4,28 (m; 2H); 3,99 (s; 3H); 3,75 (s; 3H); 3,61 (d; 1H; J=13 Гц); 3,52-3,48 (m; 3Н); 3,36 (s; 3Н); 3,24 (m; 2H); 3,11 (d; 1H; J=13 Гц); 3,07 (s; 3H); 3,03 (d; 1H; J=10 Гц); 2,90 (s; 3H); 2,70 (m; 1H); 2,26-2,20 (m; 3H); 2,12 (m; 1H); 2,00 (m; 1H); 1,78 (m; 1H); 1,63-1,57 (m; 6H); 1,46 (d; 2H; J=7 Гц); 1,33-1,25 (m; 6H); 0,95 (m; 6H); 0,86 (s; 3H).
Пример 21.
Соединение 63 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 26.
Майтансин-N-метил-Е-манин-(2-фтор-4-амино)бензамидо-Cit-Val-Сар-6-амин (63).
Этап А. Вос-6-аминогексановая кислота сукцинат эфир.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: Вос-6-аминогексановая кислота (64; 502 мг; 2,17 ммоль), с использованием способа этапа А примера 1, для получения белого твердого вещества (712 мг; 99%). MS (ESI, pos.): вычислено для C15H24N2O6; 328,2; определено 351,2 (M+Na).
Этап В. Вос-(6-амино-капролил)-Е-валин-Е-цитруллин (62).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (710 мг; 2,16 ммоль) и Е-валин-Е-цитруллин TFA соль (970 мг; 2,51 ммоль), с использованием способа D примера 1, для получения бледно-золотистого твердого вещества (720 мг; 69%). MS (ESI, pos.): вычислено для C22H41N5O7; 487,3; определено 488,3 (М+Н), (М+Н).
- 179 034950
Этап С. Майтансин-М-метил-Е-аланин(2-фтор-4-амино)бензамидо-С11-Уа1-Сар-6-Вос-амин.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (62; 25 мг; 0,051 ммоль) и майтансин-М-метил-В-аланин(2-фтор-4-амино)бензамид (29; 35 мг; 0,041 ммоль), с использованием способа этапа А примера 2, для получения белого твердого вещества (17 мг; 33%). MS (ESI, pos.): вычислено для C61H87N9O16ClF; 1255,6; обнаружено 1238,5 (М-Н2О+Н); 1256,6 (М+Н); 1278,6 (M+Na).
Этап D. Майтансин-N-метил-L-алании-(2-фтор-4-амино)бензамидо-Cit-Va1-Cap-6-амин (63).
Вещество предыдущего этапа (16 мг; 0,013 ммоль) было растворено в ацетонитриле (MeCN, 3 мл) и воде (1 мл), обработано трифторуксусной кислотой (TFA, 1,0 мл, 13,0 ммоль), колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута аргоном, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре. Спустя 24 ч реагирующая смесь была частично сконцентрирована in vacuo при окружающей температуре, разведена водой (примерно 1 мл), и дважды очищена на С18 Aq RediSep Gold колонне с помощью системы ISCO (20-80% MeCN в воде; 0,1% TFA обе фазы). Наиболее чистые фракции по оценке LCMS скомбинированы, частично сконцентрированы in vacuo при окружающей температуре, заморожены при температуре -78°С, и лиофилизированы для получения соединения, указанного в заголовке этапа, в виде белого твердого вещества (9 мг; 56%). MS (ESI, pos.): вычислено для C56H79N9O14ClF; 1155,5; обнаружено 1156,6 (М+Н); 1178,6 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CD3OD): δ 8,72 (d; 1H; J=12 Гц); 8,39 (d; 1H; J=13 Гц); 8,14 (d; 1H; J=10 Гц); 7,84 (dd; 1H; J=21 Гц; 3 Гц); 7,75 (dd; 1H; J=21 Гц; 3 Гц); 7,60 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 7,33 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 7,25 (m; 1H); 7,21 (s; 1H); 6,97 (s; 1H); 6,75 (m; 1H); 6,72 (s; 1H); 6,67 (m; 1H); 5,78-5,60 (m; 3H); 4,77 (m; 1H); 4,45 (m; 2H); 4,26 (m; 1H); 4,20 (d; 1H; J=13 Гц); 4,05-4,00 (m; 2H); 4,03 (s; 3H); 3,69 (dd; 1H; J=21 Гц; 5 Гц); 3,64 (d; 1H; J=16 Гц); 3,41 (s; 3H); 3,30-3,26 (m; 2H); 3,23-3,09 (m; 2H); 3,05 (m; 3H); 2,97 (dd; 1H; J=16 Гц; 5 Гц); 2,92 (d; 1H; J=13 Гц); 2,86 (m; 3H); 2,82 (d; 1H; J=13 Гц); 2,75 (m; 1H); 2,36-2,29 (m; 2H); 2,25-2,20 (m; 1H); 2,08-2,02 (m; 2H); 1,76 (s; 3H); 1,73-1,50 (m; 10H); 1,45 (m; 2H); 1,36-1,32 (m; 2H); 1,28 (d; 3H; J=11 Гц); 1,05 (d; 3H; J=11 Гц); 1,03-0,98 (m; 4H); 0,93 (s; 3H).
Пример 22.
Соединение 65 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 27.
Майтансин-Н-метилЩ-аланин-М-(2-метокси-5-амино)бензамид (65).
Этап А. Майтансин-М-метилЩ-аланин(2-метокси-5-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил^аланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль) и 2-метокси-5-нитробензойная кислота (64) (25 мг; 0,127 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения белого твердого вещества (51 мг; 80%). MS (ESI, pos.); вычислено для C40H49C1N4O13; 829,3; обнаружено 812,0 (М-Н2О+Н); 830,0 (М+Н); 852,0 (M+Na).
Этап В. Майтансин-N-метил-L-аланин-N-(2-метокси-5-амино)бензамид (65).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (50 мг; 0,060 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (19 мг; 40%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51C1N4O11; 798,3; обнаружено 781,3 (M-H2O); 799,3 (М+Н); 822,3 (M+Na).
Пример 23.
Соединение 67 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 28.
Майтансин-N-метил-L-аланин-N-(3-амино-4-метокси)бензамид (67).
Этап А. Майтансин-N-метил-L-аланин(3-нитро-4-метокси)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-N-метил-Lаланин (9, 50 мг; 0,077 ммоль) и 3-нитро-4-метоксибензойная кислота (66) (25 мг; 0,127 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения белого твердого вещества (46 мг; 72%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H49C1N4O13; 829,3; обнаружено 812,0 (М-Н2О+Н); 830,0 (М+Н); 852,0 (M+Na).
Этап В. Майтансин-N-метил-L-аланин-N-(3-амино-4-метокси)бензамид (67).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (45 мг; 0,054 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (23 мг; 53%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51C1N4O11; 798,3; обнаружено 781,3 (М-Н2О); 799,3 (М+Н); 822,3 (M+Na).
Пример 24.
Соединение 69 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 29.
Майтансин-N -метил^-аланин-Н-(3 -амино-5 -фтор)бензамид (69).
Этап А. Майтансин-N-метил-L-аланин(3-нитро-5-фтор)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-N-метил-Lаланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль) и 3-нитро-5-фторбензойная кислота (68) (24 мг; 0,127 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (37 мг; 59%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H46C1FN4O12; 816,3; обнаружено 817,2 (М+Н).
Этап В. Майтансин-Н-метилЩ-аланин-Н-(3-амино-5-фтор)бензамид (69).
- 180 034950
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (37 мг; 0,045 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (9,1 мг; 24%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H48ClFN4O10; 786,3; обнаружено 769,3 (М-Н2О); 787,3 (М+Н).
Пример 25.
Соединение 71 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 30.
Майтансин-П-метил-Е-аланин-П-(2-фтор-5-амино)бензамид (71).
Этап А. Майтансин-П-метил-Е-аланин(2-фтор-5-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Л-метил-Еаланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль) и 2-фтор-5-нитробензойная кислота (70) (24 мг; 0,127 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (37 мг; 59%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H46ClFN4O12; 816,3; обнаружено 799,3 (М-Н2О); 817,2 (М+Н).
Этап В. Майтансин-Л-метил-Е-аланин-П-(2-фтор-5-амино)бензамид (71).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (37 мг; 0,045 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (2,2 мг; 6%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H48ClFN4O10; 786,3; обнаружено 769,3 (М-Н2О); 787,3 (М+Н).
Пример 26.
Соединение 73 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 31.
Майтансин-N -метил-Е-аланин-N-(3 -амино)бензамид (73).
Этап А. Майтансин-П-метил-Е-аланин(3-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Л-метил-Еаланин (9, 50 мг; 0,077 ммоль) и 3-нитробензойная кислота (72) (21 мг; 0,127 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения белого твердого вещества (34 мг; 56%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H47ClN4O12; 798,3; обнаружено 781,2 (М-Н2О); 799,3 (М+Н).
Этап В. Майтансин-Л-метил-Е-аланин-П-(3-амино)бензамид (73).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (34 мг; 0,043 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (9,3 мг; 27%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H49ClN4O10; 768,3; обнаружено 751,2 (М-Н2О); 769,2 (М+Н).
Пример 27.
Соединение 75 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 32.
Майтансин-Л-метил-Е-аланин-П-(3-амино-4-фтор)бензамид (75).
Этап А. Майтансин-П-метил-Е-аланин(3-нитро-4-фтор)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-П-метил-Еаланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль) и 3-нитро-4-фторбензойная кислота (74) (24 мг; 0,127 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения белого твердого вещества (34 мг; 54%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H46C1fN4O12; 816,3; обнаружено 799,3 (М-Н2О); 817,2 (М+Н).
Этап В. Майтансин-Л-метил-Е-аланин-П-(3-амино-4-фтор)бензамид (75).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (34 мг; 0,042 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (12 мг; 37%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H48ClFN4O10; 786,3; обнаружено 769,3 (М-Н2О); 787,3 (М+Н).
Пример 28.
Соединение 77 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 33.
Майтансин-N-метил-Е-аланин-N-4-аминобензамид-адипин-NHS (77).
Этап А. Майтансин-П-метил-Е-аланин-П-(4-амино)бензамид-адипиновая кислота (76).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: 27 (20 мг; 0,026 ммоль) и адипинового ангидрида (17 мг; 0,133 ммоль) были отвешены в колбу с круглым дном и растворены в пиридине (1,5 мл). Колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута азотом, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре. Спустя 4 ч реагирующая смесь была очищена непосредственно на 30 г С18 RediSep Gold Aq колонне посредством системы ISCO (градиентное элюирование: 20-90% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 20 мин). Фракции, содержащие продукт, были скомпонованы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы в течение суток с образованием грязно-белого твердого вещества (16 мг; 67%). MS (ESI, pos.): вычислено для C45H57ClN4C13; 896,4; обнаружено 879,4 (М-Н2О); 897,4 (М+Н).
Этап В. Майтансин-N-метил-Е-аланин-N-(4-амино)бензамид-адипин-NHS (77).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (76; 16 мг; 0,017 ммоль), с использованием способа этапа А примера 1, для получения белого твердого вещества (10 мг; 58%). MS (ESI, pos.): вычислено для C49H60c1n5O15; 993,5; обнаружено 976,0 (М-Н2О); 994,0 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,92 (s; 1H); 7,57 (d; 2H; J=8 Гц); 7,36 (d; 2Н; J=8 Гц); 6,93 (s; 1Н); 6,86
- 181 034950 (s; 1H); 6,75 (d; 1H; J=12 Гц); 6,47 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,29 (s; 1H); 5,74 (dd; 1H; J=16 Гц; 9 Гц); 5,47 (m; 1H); 4,90 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,32 (t; 1H; J=11 Гц); 4,02 (s; 4H); 3,63 (d; 1H; J=13 Гц); 3,62 (br s; 1H); 3,53 (d; 1H; J=9 Гц); 3,38 (s; 3H); 3,13 (d; 1H; J=13 Гц); 2 (s; 3H); 2,80 (d; 2H; J=10 Гц); 2,73 (s; 3H); 2,60 (m; 1H); 2,27 (t; 2H; J=10 Гц); 2,11 (br s; 1H); 2,07 (s; 2H); 1,62 (s; 3H); 1,58-1,52 (m; 2H); 1,51-1,46 (m; 2H); 1,34-1,29 (m; 3H); 1,25-1,20 (m; 2H); 1,13 (d; 3H; J=7 Гц); 0,82 (s; 3H).
Пример 29.
Соединение 78 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 34. Майтансин-N-метил-L-аланин-4-аминобензамид-Сар-Mal (78).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: 27 (15 мг; 0,019 ммоль) и 6-малеимидогексановая кислота (6 мг; 0,029 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения грязно-белого твердого вещества (9,8 мг; 52%). MS (ESI, pos.): вычислено для C49H60ClN5O13; 962,5; обнаружено 944,8 (M-H2O); 962,8 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 10,01 (s; 1H); 7,56 (d; 2H; J=9 Гц); 7,29 (d; 2H; J=9 Гц); 7,21 (s; 1H); 6,99 (s; 2H); 6,91 (s; 1H); 6,83 (s; 1H); 6,62-6,56 (m; 2Н); 5,97 (s; 1H); 5,61 (dd; 1Н; J=15 Гц; 10 Гц); 5,44 (m; 1Н); 4,59 (d; 1H; J=12 Гц); 4,10 (t; 1H; J=12 Гц); 3,94 (s; 3Н); 3,51 (d; 1Н; J=9 Гц); 3,40-3,36 (m; 2Н); 3,26 (s; 3H); 3,23-3,21 (m; 2Н); 2,94 (s; 3Н); 2,80 (d; 1H; J=10 Гц); 2,73 (s; 3Н); 2,64-2,57 (m; 1Н); 2,27 (t; 2Н; J=10 Гц); 2,11-2,09 (m; 1Н); 2,07 (s; 2Н); 1,62 (s; 3Н); 1,57-1,52 (m; 2Н); 1,51-1,46 (m; 2Н); 1,34-1,29 (m; 3Н); 1,25-1,19 (m; 2Н); 1,13 (d; 3Н; J=7 Гц); 0,82 (s; 3Н).
Пример 30.
Соединение 80 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 35.
Майтансин-N -метил-1 -аланин-N-(3 -метилсульфонил-4-амино)бензамид (80).
Этап А. Майтансин-М-метил-Е-аланин(3 -метилсульфонил-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 40 мг; 0,062 ммоль) и 3-метилсульфонил 4-нитробензойная кислота (79) (25 мг; 0,102 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (37 мг; 69%). MS (ESI, pos.): вычислено для C50H49N4O14ClS; 876,3; обнаружено 857,6 (М-Н2О+Н); 875,6 (М+Н); 897,6 (M+Na).
Этап В. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-метилсульфонил-4-амино)бензамид (80).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (36 мг; 0,041 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (28 мг; 76%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O12ClS; 846,3; обнаружено 829,1 (М-Н2О+Н); 847,1 (М+Н); 869,1 (M+Na).
Ή-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,85 (s; 1H); 7,44 (d; 1H; J=9 Гц); 6,90 (s; 1H); 6,84 (s; 1H); 6,71 (d; 1H; J=9 Гц); 6,66 (d; 1H; J=11 Гц); 6,45 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,23 (s; 1H); 5,72 (dd; 1H; J=15 Гц; 10 Гц); 5,32-5,25 (m; 2H); 4,89 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,31 (t; 1H; J=11 Гц); 3,99 (s; 3H); 3,65 (d; 1H; J=13 Гц); 3,51 (d; 1H; J=9 Гц); 3,36 (s; 3H); 3,14 (d; 1H; J=13 Гц); 3,05 (s; 3H); 3,01 (m; 1H); 2,99 (s; 3H); 2,95 (s; 3H); 2,68 (t; 1H; J=14 Гц); 2,20 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,70 (m; 1H); 1,67 (s; 3H); 1,55 (s; 3H); 1,52 (m; 1H); 1,47 (d; 1H; J=7 Гц); 1,31 (d; 1H; J=7 Гц); 1,28 (m; 1H); 0,85 (s; 3H).
Пример 31.
Соединение 82 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 36.
Майтансин-N -метил-Е-аланин-N-(3 -гидрокси-4-амино)бензамид (82).
Этап А. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-гидрокси-4-питро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-N-метил-Еаланин (9; 47 мг; 0,072 ммоль) и 3-гидрокси-4-нитробензойная кислота (81) (20 мг; 0,109 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (29 мг; 49%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H47N4O13Cl; 814,3; обнаружено 796,8 (М-Н2О+Н); 814,8 (М+Н); 836,8 (M+Na).
Этап В. Майтансин-N-метил-Е-аланин(3-гидрокси-4-амино)бензамид (82).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (28 мг; 0,034 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения бледно-желтого твердого вещества (20 мг; 69%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O12ClS; 784,3; обнаружено 767,7 (МН2О+Н); 785,7 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 9,19 (s; 1H); 7,17 (s; 1H); 6,88 (s; 1H); 6,79 (br s; 2H); 6,63-6,56 (m; 3Н); 6,47 (m; 1H); 5,93 (s; 1Н); 4,93 (s; 2Н); 4,57 (d; 1H; J=11 Гц); 4,09 (t; 1H; J=12 Гц); 3,93 (s; 3Н); 3,50 (d; 1H; J=9 Гц); 3,26 (s; 3Н); 3,18 (br m; 1H); 2,99 (s; 3H); 2,79 (d; 1H; J=10 Гц); 2,76 (s; 3Н); 2,06 (dd; 1H; J=14 Гц; 2 Гц); 1,60 (s; 3Н); 1,48-1,46 (m; 2Н); 1,33-1,27 (m; 4Н); 1,13 (d; 3Н; J=6 Гц); 0,80 (s; 3Н).
Пример 32.
Соединение 84 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 37.
Майтансин-N -метил-Е-аланин-N-(2-амино)бензамид (84).
Этап А. Майтансин-N-метил-Е-аланин(2-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-N-метил-Е
- 182 034950 аланин (9; 30 мг; 0,046 ммоль) и 2-нитробензойная кислота (83) (15 мг; 0,092 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (26 мг; 71%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H47N4O12Cl; 798,3; обнаружено 799,3 (М+Н); 821,3 (M+Na).
Этап В. Майтансин-№метил-Е-аланин(2-амино)бензамид (84).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (24 мг; 0,038 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (13 мг; 54%). MS (ESI, pos.): вычислено для C39H49N4O10Cl; 768,3; обнаружено 769,0 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,16 (m; 1H); 7,08 (d; 1H; J=6 Гц); 6,92 (s; 1H); 6,84 (d; Ш; J=2 Гц); 6,71 (d; 1H; J=8 Гц); 6,63 (t; 1H; J=7 Гц); 6,57 (m; 1H); 6,47 (dd; 1H; J=15 Гц; 11 Гц); 6,27 (s; 1H); 5,76 (m; 1H); 5,20 (br s; 1H); 4,99 (m; 1H); 4,39-4,32 (m; 3H); 4,01 (s; 3H); 3,74 (br s; 1H); 3,59 (d; 1H; J=13 Гц); 3,52 (d; 1H; J=9 Гц); 3,39 (s; 3H); 3,20 (s; 3H); 3,15 (d; 1H; J=12 Гц); 2,99 (d; 1H; J=12 Гц); 2,94 (s; 3H); 2,73 (t; 1H; J=14 Гц); 2,26 (m; 1H); 1,75 (d; 1H; J=12 Гц); 1,69 (s; 3H); 1,55 (d; 3H; J=7 Гц); 1,50 (m; 1H); 1,35-1,30 (m; 4H); 0,90 (s; 3H).
Пример 33.
Соединение 86 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 38.
Майтансин-Н-метил-Е-аланин-Н-(4-метокси-2-амино)бензамид (86).
Этап А. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(4-метокси-2-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Ы-метил-Еаланин (9; 30 мг; 0,046 ммоль) и 4-метокси-2-нитробензойная кислота (85) (18 мг; 0,092 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (18 мг; 47%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H49N4O13Cl; 828,3; обнаружено 829,4 (М+Н); 851,3 (M+Na).
Этап В. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(4-метокси-2-амино)бензамид (86).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (18 мг; 0,022 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (15 мг; 84%). MS (ESI, pos.): вычислено для C40H51N4O11Cl; 798,3; обнаружено 799,1 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 6,94 (s; 1H); 6,85 (d; 1H; J=2 Гц); 6,79 (dd; 1H; J=9 Гц; 3 Гц); 6,67 (d; 1H; J=9 Гц); 6,65 (m; 1H); 6,60 (d; 1H; J=11 Гц); 6,48 (dd; 1H; J=15 Гц; 12 Гц); 6,27 (s; 1H); 5,76 (m; 1H); 5,22 (br s; 1H); 4,98 (m; 1H); 4,36 (t; 1H; J=11 Гц); 4,01 (s; 3H); 3,93 (br s; 1H); 3,72 (br s; 1H); 3,65 (m; 1H); 3,61 (s; 3H); 3,52 (d; 1H; J=9 Гц); 3,39 (s; 3H); 3,18 (s; 3H); 3,16 (m; 1H); 2,99 (d; 1H; J=10 Гц); 2,94 (s; 3H);
2.72 (t; 1H; J=13 Гц); 2,26 (dd; 1H; J=15 Гц; 3 Гц); 1,74 (d; 1H; J=14 Гц); 1,70 (s; 3H); 1,55 (d; 3H; J=7 Гц); 1,52-1,48 (m; 1H); 1,35-1,30 (m; 4H); 0,90 (s; 3H).
Пример 34.
Соединение 88 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 39.
Майтансин-Н-метил-Е-аланин-Н-(3-морфолино-4-амино)бензамид (88).
Этап А. Майтансин-Н-метил-Е-аланин(3-морфолино-4-нитро)бензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-Н-метил-Еаланин (9; 30 мг; 0,046 ммоль) и 3-морфолино-4-нитробензойная кислота (87) (23 мг; 0,092 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения желтого твердого вещества (28 мг; 70%). MS (ESI, pos.): вычислено для C43H54N5O13Cl; 883,3; обнаружено 884,5 (М+Н); 906,3 (M+Na).
Этап В. Майтансин-М-метил-Е-аланин(3-морфолино-4-амино)бензамид (88).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (28 мг; 0,032 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения грязно-белого твердого вещества (12 мг; 52%). MS (ESI, pos.): вычислено для C43H56N5O11Cl; 853,4; обнаружено 853,9 (М+Н); 875,9 (M+Na).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7,12 (s; 1Н); 7,02 (d; 1H; J=8 Гц); 6,98 (s; 1H); 6,86 (d; 1H; J=2 Гц); 6,81 (d; 1H; J=11 Гц); 6,61 (d; 1H; J=8 Гц); 6,48 (dd; 1H; J=16 Гц; 12 Гц); 6,29 (s; 1H); 5,77 (dd; 1H; J=15 Гц; 9 Гц); 5,48 (m; 1H); 4,89 (dd; 1H; J=12 Гц; 3 Гц); 4,34 (t; 1H; J=12 Гц); 4,19 (br m; 1H); 4,01 (s; 3H); 3,80-3,75 (m; 5H); 3,53 (m; 2H); 3,39 (s; 3H); 3,15 (d; 1H; J=13 Гц); 3,07 (d; 1H; J=10 Гц); 3,03 (s; 3H); 2,96 (s; 3H);
2.73 (m; 5H); 2,22 (dd; 1H; J=14 Гц; 3 Гц); 1,71 (m; 1H); 1,69 (s; 3H); 1,54-1,49 (m; 1H); 1,47 (d; 3H; J=8 Гц); 1,33 (d; 3H; J=7 Гц); 1,30 (m; 1H); 0,88 (s; 3H).
Пример 35.
Соединение 90 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 40.
Майтансин-N -метил-Е-аланин-N-(3 -ацетамидо-4 -амино)бензамид (90).
Этап А. Майтансин-М-метил-Е-аланинр-ацетамидо^-нитро^ензамид.
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ: майтансин-N-метил-Еаланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль) и 3-ацетамидо-4-нитробензойная кислота (89) (29 мг; 0,129 ммоль), с использованием способа этапа А примера 5, для получения ворсистого желтого твердого вещества (36 мг; 54%). MS (ESI, pos.): вычислено для C41H50N5O13Cl; 855,3; обнаружено 839,1 (М-Н2О); 857,1 (М+Н); 879,1 (M+Na).
Этап В. Майтансин-П-метил-Е-аланинр-ацетамидо^-амино^ензамид (90).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (35
- 183 034950 мг; 0,042 ммоль), с использованием способа этапа В примера 5, для получения белого твердого вещества (19 мг; 57%). MS (ESI, pos.): вычислено для C4iH52N5OnCl; 825,3; обнаружено 808,4 (М-Н2О); 6,4 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDCl6): δ 9,05 (s; 1H); 7,30 (s; 1H); 7,17 (s; 1H); 6,98 (d; 1H; J=9 Гц); 6,91 (s; 1H); 6,79 (s; 1H); 6,58 (m; 3H); 5,97 (s; 1H); 5,64 (br s; 1H); 5,34 (m; 3H); 4,60 (d; 1H; J=12 Гц); 4,10 (t; 1H; J=12 Гц); 3,93 (s; 3H); 3,50 (d; 1H; J=9 Гц); 3,33 (s; 3H); 3,29 (m; 1H); 3,26 (s; 3H); 3,16 (d; 1H; J=12 Гц); 2,97 (s; 3H); 2,79 (m; 4H); 2,07 (d; 1H; J=13 Гц); 1,95 (s; 2H); 1,59 (s; 3H); 1,51-1,42 (m; 2H); 1,29 (m; 3H); 1,13 (d; 3H; J=6 Гц); 0,81 (s; 3H).
Пример 36.
Соединение 100 было синтезировано описанным ниже образом и представлено на фиг. 41. Майтансин-N -метил-Е-аланин-N -аминобензамид-Cit-Val-сар-дибромометилакрил (100).
Этап А. 3-Бромо-2-бромометилпропионил хлорид (92).
В 10-мл колбу с круглым дном, оснащенную магнитной мешалкой и штуцером подачи азота, были помещены следующие вещества: 3-бромо-2-бромометилпропионовая кислота (91; 1,0 г; 4,1 ммоль) и тионил хлорид (3,0 мл). Раствор нагревался до возгонки в течение 3 ч и был сконцентрирован до 0,90 г (выход 84%) в виде коричневого масла.
1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 3,85-3,75 (m, 4Н); 3,60 (пентет, 1Н, J=9 Гц).
Этап В. 6-Аминогексановой кислоты трет-бутиловый эфир (94).
В 50-мл колбу с круглым дном, оснащенную магнитной мешалкой и штуцером подачи азота, были помещены следующие вещества: 6-аминогексановая кислота (93; 2,0 г; 15 ммоль) и тионил хлорид (5,0 мл; 69 ммоль; 4,5 экв.). Раствор перемешивался при температуре равной или ниже 30°С в течение 2 ч и был сконцентрирован in vacuo до высыхания. К этому коричневому полутвердому остатку была добавлена суспензия бикарбоната натрия (2,6 г; 30 ммоль; 2,0 экв.) в t-BuOH (5,0 мл; 87 ммоль; 5,7 экв.) и полученная суспензия перемешивалась при окружающей температуре еще 2 ч. Бутано был удален in vacuo при 40°С. Толстый слой шлама белого цвета был разведен этилацетатом и промыт 4 порциями 1 N NaOH, 3 порциями H2O, 1 порцией минерального раствора. Органические слои были высушены над Na2SO4, профильтрованы и сконцентрированы для получения 2,2 г (выход 77%) в виде бесцветного масла MS (ESI, pos.): вычислено для C10H21NO2; 187,3; обнаружено 188,4 (М+Н).
1H-NMR (300 МГц, CDCl3): δ 2,68-2,64 (m; 2H); 2,21-2,16 (m; 2H); 1,62-1,52 (m; 2Н); 1,48-1,38 (m; 9Н); 1,36-1,20 (m; 2Н); 1,09 (m; 2Н).
Этап С. 6-(3-Бромо-2-бромометилпропиониламино)гексановой кислоты трет-бутиловый эфир (95).
В 50-мл колбу с круглым дном, оснащенную магнитной мешалкой и штуцером подачи азота, были помещены следующие вещества: 6-аминогексановой кислоты трет-бутиловый эфир (94; 0,50 г; 2,7 ммоль) и диметиламинпиридин (0,03 г; 0,27 ммоль; 0,10 экв.) в DCM (5,0 мл). Этот раствор был охлажден до 0°С в ледяной ванне. 3-бромо-2-бромометилпропионил хлорид (92; 0,90 г; 3,4 ммоль; 1,2 экв.) был растворен в DCM (5 мл) и медленно добавлен к реагирующей смеси при 0°С. Перемешивание с медленным нагреванием до окружающей температуры производилось в течение суток. Реагирующая смесь была разведена этил ацетатом, органическая смесь была промыта Н2О, 5% NaHCO3 и минеральным раствором. Органические вещества были высушены над Na2SO4, профильтрованы, сконцентрированы и очищены элюированием на силикагельной колонне с помощью 0-100% этилацетата в гексанах с образованием 0,49 г (выход 42%) прозрачного желтого масла.
1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 5,92 (br s; 1H); 3,64-3,58 (m; 2H); 3,54-3,48 (m; 2H); 3,36-3,29 (m; 2H); 2,89-2,83 (m; 1H); 2,24-2,20 (m; 2H); 1,65-1,51 (m; 4H); 1,44-1,35 (m; 11H).
Этап D. 6-(3-Бромо-2-бромометилпропиониламино)гексановая кислота (96).
В 50-мл колбу с круглым дном, оснащенную магнитной мешалкой и штуцером подачи азота, были помещены следующие вещества: 6-(3-бромо-2-бромометилпропиониламино)гексановой кислоты третбутиловый эфир (95; 0,26 г; 0,62 ммоль) и трифторуксусная кислота (0,70 мл; 9,3 ммоль; 15 экв.) в DCM (10 мл). Раствор перемешивался при окружающей температуре в течение суток, был сконцентрирован для высушивания, растворен в ацетонитриле и H2O (по 1,0 мл каждого), заморожен и лиофилизирован для получения 0,22 г (100%) в виде твердого вещества. MS (ESI, pos.): вычислено для C10H17Br2NO3; 359,0 обнаружено 358,0; 360,0; 362,0 (М+Н); 380,0; 382,0; 384,0 (M+Na); 356,0; 358,0; 360,0 (М-Н).
1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 11,97 (s; 1H); 8,20-8,16 (m; 1H); 3,58-3,56 (d; 4H); 3,11-3,04 (m; 2H); 3,02-2,97 (m; 1H); 2,21-2,16 (m; 2H); 1,54-1,37 (m; 4H); 1,33-1,29 (m; 2H).
Этап Е. Boc-Val-Cit-4-аминобензойная кислота (97).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из веществ примера 1, этап D (6; 100 мг; 0,254 ммоль) и ди-трет-бутил дикарбоната (61 мг; 0,279 ммоль), которые были отвешены в колбу с круглым дном и обработаны 1 М NaOH (2 мл) в THF (3 мл) и H2O (1,5 мл). Колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута азотом, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре в течение суток, сконцентрированы in vacuo и нейтрализованы до рН 7 добавлением по каплям 1 М HCl (2 мл). Водосодержащая фаза реагирующих веществ была обработана этил ацетатом, органический слой высушен над Na2SO4, профильтрован и сконцентрирован для получения грязно-белого вещества (93 мг; 74%). MS (ESI, pos.): вычислено для C23H35N5O7; 493,5; обнаружено 394,2 (М+1-Вос);
- 184 034950
494,2 (М+Н); 516,2 (M+Na).
Этап F. Майтансин-№метил-Е-аланин-№4-аминобензамид-С11-Уа1-Вос (98).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа BocVal-Cit-4-аминобензойная кислота (97; 76 мг; 0,154 ммоль) и майтансин-№метил-В-аланин (9; 50 мг; 0,077 ммоль) с использованием способа этапа А Примера 5, для получения белого твердого вещества (22 мг; 26%). MS (ESI, pos.): вычислено для C55H77C1N8G15; 1124,5; обнаружено 1107,2 (М-Н2О); 1125,3 (М+Н); 1147,2 (M+Na).
Этап G. Майтансин-Н-метил-Е-алаиин-Н-4-аминобензамид-Сй^а1 (99).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (98; 20 мг; 0,018 ммоль), отвешенного в колбу с круглым дном, растворенного в ACN (3 мл) и H2G (1 мл) и обработанного TFA (1 мл). Колба была герметизирована каучуковой мембраной, продута азотом, и реагирующие вещества перемешивались при окружающей температуре. Спустя 48 ч реагирующая смесь была очищена непосредственно на 30 г С18 RediSep Gold Aq колонне посредством системы ISCG (градиентное элюирование: 10-65% MeCN в воде; 0,05% уксусной кислоты в обеих частях, более 20 мин). Фракции, содержащие продукт, были скомпонованы, частично сконцентрированы in vacuo, заморожены в сухом льду, и лиофилизированы с образованием грязно-белого твердого вещества (8 мг; 46%). MS (ESI, pos.): вычислено для C50H69C1N8G13; 1024,5; обнаружено 1007,2 (М-Н2О); 1026,2 (М+Н).
Этап H. Майтансин-N-метил-L-аланин-N-4-аминобензамид-Cit-Va1-каприл-бис-(BrMe)акриламид (100).
Соединение, указанное в заголовке этапа, было приготовлено из вещества предыдущего этапа (99; 8 мг; 0,008 ммоль) и 6-(3-бромо-2-бромометил-пропиламино)гексановая кислота (96), с использованием способа этапа А примера 5, для получения белого твердого вещества (8 мг; 75%). MS (ESI, pos.): вычислено для C60H84Br2C1N9G15; 1363,4; обнаружено 1363,1 (М+Н).
1Н-ЯМР (500 МГц, CDC13): δ 9,32 (s; 1Н); 8,72 (m; 1H); 8,37 (m; 1H); 7,65 (m; 2H); 7,45 (m; 1H); 7,34 (m; 1H); 7,32 (m; 2H); 7,22-7,18 (m; 2H); 6,89-6,84 (m; 2H); 6,70-6,60 (m; 2H); 6,44 (m; 1H); 6,32 (br s; 1H); 6,12 (s; 1H); 5,76-5,71 (m; 1H); 5,65 (s; 1H); 5,37-5,29 (m; 3H); 4,86-4,70 (m; 3H); 4,52 (br s; 1H); 4,31-4,25 (m; 1H); 4,12 (m; 1H); 3,99 (s; 3H); 3,65-3,58 (m; 1H); 3,51 (m; 1H); 3,34-3,21 (m; 8H); 3,13-3,02 (m; 5H); 2,88 (s; 3H); 2,68 (m; 1H); 2,28-2,17 (m; 3H); 2,11-1,83 (m; 2H); 1,80-1,70 (m; 2H); 1,66 (s; 3H); 1,57-1,49 (m; 4H); 1,47-1,43 (m; 3H); 1,30-1,26 (m; 7H); 1,00-0,91 (m; 6H); 0,85 (s; 3H).
Пример 37.
Приготовление и характеристика конъюгата.
Пять антител были конъюгированы в заявляемые соединения с линкер-полезной частью посредством изложенной ниже процедуры. В этих экспериментах использовались четыре следующих целевых антитела: (1) антитело PSMA с тяжелыми и легкими цепочечными переменными доменами клона ABPG1-XG1-006, представленное в WG 2007002222 A2, (2) анти-MUC16 антитело с переменными участками, полученное из клона 3А5 по описанию в источнике WG2007001851, и (3) два антитела PRLR тяжелыми и легкими цепочечными переменными доменами клона Н1Н6765Р и H1H6958N2, представленные в WG2015026907A1. Все моноклональные антитела были выражены в клетках СНО и очищены протеином А. Также использовалось не связывающее изотопное регулирование, полученное из антигена, не имеющего отношения к онкологии.
Пример 38.
Способ конъюгации соединения 10.
Способ конъюгации малеимидов.
Антитело (1-10 мг/мл) в 50ммоль HEPES, 150 мМ NaC1; pH 7,5 было обработано 1 ммоль дитиотреитола при 37°С в течение 30 мин. После гельной фильтрации (G-25; рН 4,5 ацетат натрия), к восстановленному антителу были добавлены производная малеимидо линкерной полезной части 10, 15, 20, 25, 60 и 78 (1,2 экв./SH группа) в DMSG (10 мг/мл) и смесь доведена до рН 7,0 с помощью 1 М HEPES (рН 7,4). Спустя 1 ч реагирующая смесь была резко охлаждена избытком N-этил малеимида. Конъюгаты были очищены эксклюзионной хроматографией и стерильно профильтрованы. Пропорции концентраций протеина и полезной части к антителу определялись посредством УФ спектрального анализа. Посредством эксклюзионной HPLC было установлено, что >95% всех использованных конъюгатов были мономерными, и посредством RP-HPLC было установлено наличие <0,5% неконъюгированной полезной части. Значения нагруженности линкерной полезной части всех конъюгированных антител были проанализированы УФ-способом по методике Гамблетта (Hamb1ett) и соавторов, источник: Cancer Res 2004 10 7063. В табл. 1 приводятся значения выхода и пропорций полезной части к антителу.
Пример 39.
Способ конъюгации для активных эфиров.
Антитела (1-10 мг/мл) в 50 ммоль HEPES, 150 ммоль NaC1; рН 8,0 и 15% (по объему) DMA подвергались конъюгации с 6-кратным избытком соединения 77 в течение 1-2 ч при окружающей температуре. Конъюгаты были очищены эксклюзионной хроматографией и стерильно профильтрованы. Концентрации протеина и линкерной полезной части были определены УФ спектральным анализом. Посредством экс
- 185 034950 клюзионной HPLC было установлено, что >95% всех использованных конъюгатов были мономерными, и посредством RP-HPLC было установлено наличие <0,5% неконъюгированной полезной части. В табл. 1 представлены значения выхода на основе протеина. Значения нагруженности линкерной полезной части всех конъюгированных антител были проанализированы УФ-способом по методике Гамблетта и соавторов, источник: Cancer Res 2004 10 7063. В табл. 1 приводятся значения выхода и пропорций полезной части к антителу.
Таблица 1
| Соединение | 8252 нм (см1 М1) | ε280 нм (см1 М1) |
| ю | 45990 · . | |
| 15 | 68900 | 26500 ’ * |
| 20 | 65000 | - · ? .< УЗЗЭДрУ+то < ·:.·.; |
| 25 | 64550 | 25550 ’ |
| 60 | 32000 | -8600/, V· «· то. |
| 63 | 53500 | 22300 |
| 77 | 44500 | . 17166. . .. . ·= . |
| 78 | 47600 | 15600 |
| Антитело | 8252 нм (см'1 М'1) | ε280 нм (см*1 М‘5 |
| PSMA | 77652 | ' 224320:-.- ’ <· |
| MUC16 | 85888 | 247360 |
| PRLR | 80673 | 220420 · то ·· |
| PRLR-Q | 82000 | 195400 |
| Изотипический | 75113 | .218360 , ·'· |
| контрольный образец | ||
| Изотипический | 68741 | 203757 |
| контрольный образец- | ||
| Q | ||
| -' | * . - . . Г * | |
| Конъюгат антитела | Полезная часть: | - г- * > С ' ,4. ζ ’ ''ν’’ Выход % |
| PSMA-10 | Антитело (UV) 2,4 | У у ДО г, '.'S /Г-.' -'-то |
| MUC16-10 | 1,5 | 50 |
| Изотипический | 2,4 | . ' . 75. . ацС. |
| контрольный образец- | - У | |
| 10 | ||
| PSMA-25 | 2,5 | 65 |
| MUC1&25 | 2,0 | |
| Изотипический | 2,5 | ’ 65 |
| контрольный образец- 25 | ||
| PSMA-60 | 3,9 | . 60 . - |
| MUC16-60 | 1,5 | то-то ·. yC-Av 40 |
| PRLR-60 | 3,8 . - | ТОД .А ' |
| Изотипический | 3,1 | 70 ' |
| контрольный образец- 60 | ||
| PRLR-Q-63 | 2,9 (3,3 ESI-MS) | - 60 ... |
| Изотипический | 3,2 (3,1 ESI-MS) | 60 ‘ ’ |
контрольный образец- 186 034950
| Q-63 | ||
| PSMA-77 | 4,0 | ‘ 55 |
| MUC16-77 | 2,8 | 40 |
| PRLR-77 | 4,3 | 70 |
| Изотипический контрольный образец77 | 3,9 | 65 |
| PSMA-78 | Не применяется | Не лрименяется - |
| MUC16-78 | 2,0 | 40 |
| PRLR-78 | 2,8 | ’ ’ г/ , Э '*·' |
| Изотипический | 4,0 | 70 |
контрольный образец78
Пример 40.
In vitro бесклеточное ферментативное исследование линкерной полезной части.
Инкубация катепсина В.
Процедура бесклеточного ферментативного исследования in vitro применялась Дубовчиком (Dubowchik) и соавторами. Источник: Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855 Линкерная полезная часть 10 была окончательно отрегулирована на 100 мг/мл в буфере ацетата натрия 25 мМ, 1 мМ EDTA при рН 5,0 и предварительно инкубирована при 37°С. Катепсин В (сигма № С8571) был активирован при комнатной температуре на 15 мин с 1 экв. 30 ммоль DTT, 15 ммоль EDTA до 2 экв. потенциала катепсина В. Раствор активированного катепсина В был добавлен к раствору субстрата в молярной пропорции 1:20 (к контрольному образцу вместо активированного катепсина В была добавлена очищенная H2O). Образцы подверглись инкубации при 37°С в течение суток, и полученные образцы исследовались с помощью LC-MS посредством Q1 Scan.
Исследование LC-MS.
Образцы обрабатывались на центрифуге в течение нескольких минут при ускорении 12000 g. Снятый супернатант был проанализирован жидкостной хроматографией-масс-спектрометрией (Thermo Quantiva) комбинированной инфузией с расходом 0,3 мл/мин в мобильной фазы В:А в пропорции 30:70 (мобильная фаза A: 0,1% FA в H2O; мобильная фаза В: 0.1% FA в ацетонитриле) при расходе 20 мкл/мин из супернатанта. MS1 был настроен на соответствующий диапазон для обнаружения молекулярного иона либо линкерной полезной части, либо полезной части. Супернатант содержал прогнозируемую полезную часть, р-амино-бензамид майтанзиноид (27), массой 791,27 M+Na (расчетная моноизотопная масса для C39H49ClN4O10, 768.31) и контрольные образцы без катепсина В 10 с массой 1240.50 M+Na (расчетная моноизотопная масса для C60H80ClN9O16, 1217.54). В контрольных образцах не был обнаружен прогнозируемый молекулярный ион полезной части.
Результаты этого примера отчасти важны, поскольку катепсиновый В протеолиз 10 должен происходить только после интернализации ADC в клетке, где имеется энзим. Побочные эффекты следует уменьшить, поскольку антитело выдает цитотоксическую полезную часть непосредственно на целевые клетки.
Пример 41.
Цитотоксическое исследование in vitro.
В этом примере была исследована in vitro способность различных конъюгатов антительного лекарственного препарата или связанных с ними полезных частей уничтожать антиген-выражающие опухолевые клетки.
Клетки Ovcar3 (Muc16+) или С4-2 (PSMA+) были посеяны на 96-луночных плашках с плотностью 3000 (С42) клеток на лунку в полной питательной среде, рост продолжался в течение суток. Для построения графиков жизнеспособности клетки к клеткам добавлялись последовательно разведенные конъюгаты или полезные части с окончательной концентрацией в диапазоне от 300 нМ до5 рМ с последующей инкубацией в течение 3 дней. Для измерения жизнеспособности клетки были инкубированы CCK8 (Dojindo) в последние 1-3 ч и поглощение на длине волны 450 нм (OD450) было определено по измерительному прибору Victor (Perkin Elmer). Фоновые уровни OD450, определенные по обработанным дигитонином (40 нМ) клеткам, были вычтены из всех лунок, и жизнеспособность выражена в процентах необработанных контрольных образцов. Значения IC50 были определены из логического выражения с четырьмя параметрами по 10-точечному графику реагирования (GraphPad Prism). Все графики конъюгатов и значения IC50 были откорректированы с учетом эквивалентов полезных частей.
В клетках С4-2 (график рака простаты), исходно выраженный PSMA на 271, изгибается над связью изотипического контрольного образца; майтанзиноидные конъюгаты PSMA-10 и PSMA-25 имеют значения IC50, равные соответственно 0,11 и 0,59 нМ (фиг. 2-5). Полезные части 27 и 33 по отдельности имеют
- 187 034950 значения IC50, равные соответственно 0,20 и 0,55 нМ. Оголенное антитело PSMA и изотопический контрольный образец были лишены какой-либо антипролиферативной активности в исследуемых концентрациях.
Клетки Ovcar-3 (график карциномы яичника), исходно выраженный MUC16 на 320, изгибается над связью изотипического контрольного образца; майтанзиноидные конъюгаты MUC16-10 и MUC16-25 имеют значения IC50, равные соответственно 0,74 и 0,63 пМ (фиг. 2-5). Полезные части 27 и 33 по отдельности имеют значения IC50, равные соответственно 0,06 и 0,11 нМ. Оголенное антитело MUC16 и изотопический контрольный образец были лишены какой-либо антипролиферативной активности в исследуемых концентрациях.
В табл. 2 приводится антипролиферативная способность полезных частей только в клетках Ovcar3 (Muc16+) или С4-2 (PSMA+). Все соединения взаимодействуют на суб-наномерном уровне с соединениями 35 и 37 на или вблизи однопозиционного пикомоляра IC50S.
Таблица 2
| С4-2 | .Opaf3V\V ' a | |||
| Соединения | IC50 (пМ) | % уничтожения | IC50 (пМ) | % уничтожения |
| 29 | 0,27 | 83 | 0,13 | · -'Ж |
| 33 | 0,45 | 86 | 0,20 | 93 |
| 31 | 0,10 | 82 , | J .Ас ’ | |
| 27 | 0,20 | 84 | 0,09 | 92 |
| 35 | 0,004 | 84 | <0,01 | эза |
| 37 | 0,01 | 86 | <0,01 | 94 |
Пример 42.
Представление антитела.
Тип исследования/эксперимента. Клонирование, выражение и очистка антител, модифицированных для содержания сайт-специфичных конъюгационных мотивов.
В этом примере демонстрируется формирование антител с аминокислотными последовательностями, позволяющими сайт-специфичную конъюгацию посредством трансглютаминазных реакций.
Для формирования антител был произведен мутагенез на плазмидном кодировании доменов CH1, CH2 и СН3 человеческого IgG1 (аминокислоты с 1 по 330 каталога UniprotKB № Р01857) для генерирования мутации с N по Q на позиции 180 с помощью комплекта мутагенеза QuikChange Lightning Multi Site-Directed (Agilent, № 210516). Были выбраны два тяжелых фрагмента (VH) изменяемого региона антитела, один - кодирующий VH античеловеческого PRLR антитела, H1H6958N2 (заявка на международный патент WO 2015026907 А1), другой - кодирующий VH антитело изотопического контроля, распознающий экзогенный антиген. Были разработаны праймеры (idtdna.com) для усиления регионов VH этих двух антител с использованием полимеразы Кара HiFi DNA (Кара Biosciences; № KK2102). В процессе усиления PCR плазмид-содержащая человеческая IgG1 N180Q мутация подверглась переработке посредством энзима LguI (Fermentas, № FD1934) при 37°С в течение 30 мин. После завершения усиления переработанный человеческий плазмид IgG1 и оба продукта PCR были выпущены на 1% агарозный гель, содержащий безопасное контрастное вещество SYBR (Life Technologies, № S33102). Полосы подходящего размера были найдены и вырезаны из геля чистым бритвенным лезвием. Все вырезанные продукты были очищены с использованием комплекта Gel Extraction (Qiagen, № 28704). Затем была произведена инфузионная реакция клонирования (Clontech, № 638911) в пропорции 3:1 переработанного человеческого IgG1 вектора относительно продукта VH PCR, после чего было произведено инкубирование в течение 15 мин при 50°С. После инкубирования каждая реакция была преобразована в компетентные клетки типа Mix and Go (Zymo, № T3007), инкубирована на льду в течение 5 мин, и компетентные клетки помещены на плашки LB + карбенициллин (Teknova, VWR, № 101320-126), которые подверглись инкубированию в течение суток при 37°С.
На следующий день отдельные колонии были высеяны с платки в питательную среду LB, содержащую 100 мкг/мл карбенициллина и выращены в течение суток с потряхиванием в настольном инкубаторе при 37°С. Затем ячейки были гранулированы на центрифуге и мини-препарированы на роботе Hamilton Starlet с использованием комплекта мини-препарирования плазмида PureLink HiPure (Thermo Fisher,
- 188 034950 № K210003). Очищенная ДНК была секвенирована, и результаты проанализированы с помощью прикладной программы Sequencher (GeneCodes). Из каждой реакции лигирования был огобран клон для повторного преобразования в в компетентные клетки типа Mix and Go, инкубирован на льду в течение 5 мин, и компетентные клетки помещены на плашки LB, содержащие карбенициллин, которые подверглись инкубированию в течение суток при 37 °С.
На следующий день с каждой плашки была отобрана единственная колония, пророщенная в течение от 3 до 4 ч в питательной среде LB, содержащей 100 мкг/мл карбенициллина. Затем образец был разведен в питательно среде LB, содержащей 100 мкг/мл карбенициллина и перемещен в вибрационный инкубатор с температурой 37°С на сутки. После чего максимально препарированный экстракт ДНК был приведен в действие на обоих плазмидах, и были секвенсированы открытые рамки считывания полной ДНК. После подтверждения секвенсирования, ДНК с тяжелой цепочкой вместе с ранее клонированной ДНК с присоединенной легкой цепочкой были устойчиво трансфектированы в линию клетки СНО для приготовления каждого антитела.
H1H6958N2 (заявка на международный патент WO 2015026907 А1), содержащее мутацию N180Q Fc, называется PRLR-Q, и антитело изотопического контроля, распознающее экзогенный антиген, также содержащее мутацию N180Q Fc, называется изотопический контроль-Q.
Пример 43.
Конъюгация бактериальной трансглютаминазы.
PRLR-Q (MW 145438 Da) и антитела изотопического контроля-Q (MW 144602 Da) были конъюгированы на 1-10 мг/мл в PBS рН 7.4. Линкерная полезная нагрузка 63 была добавлена в 10 в 25-кратном молярном избытке относительно антитела и энзимная реакция была начата добавкой 1-5 единиц бактериальной трансглютаминазы (Zedira, T1001 ) на 1 мг антитела; затем последовало инкубирование с встряхиванием при 37°С в течение 4-16 ч. Конъюгаты были очищены эксклюзионной хроматографией и стерильно профильтрованы. Концентрации протеина и линкерной полезной части были определены УФ спектральным анализом. Посредством эксклюзионной HPLC было установлено, что >95% всех использованных конъюгатов были мономерными. В табл. 1 представлены значения выхода на основе протеина. Значения нагруженности линкерной полезной части всех конъюгированных антител были проанализированы УФ-способом по методике Гамблетта и соавторов, источник: Cancer Res 2004 10 7063. Помимо этого, нагруженность линкерной полезной части конъюгатов была проанализирована посредством ESI-MS с помощью масс-спектрометрии Waters Synapt G2-Si QTOF совместно с Acquity UPLC. Хроматографическое разделение было произведено на колонне С4 (Waters protein ВЕН С4, 50x1 мм, 1,7 мкм) при 25минутном градиенте (пропорция минута:проценты мобильной фазы В; 0:20%; 1:20%; 18:40%; 18,1:90; 20:95%; 20,8:95%; 20,9:20%; 25:20%). Мобильная фаза А представляла собой 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, и мобильная фаза В представляла собой 0,1% раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле. Расход был задан равным 100 мкл/мин. Детектор сканирования TOF был настроен от m/z 7005000 на 25 мин с перечисленными далее параметрами (капиллярное напряжение 3,2 кВ; конус пробы 150; смещение источника на 80; температуры источника 120°С; температура десольвации 500°С; энергия столкновения ловушки 30; энергия передачи энергии столкновения - ВЫКЛ; регулирование газа ВЫКЛ; разрешающий квадруполь: LM разрешающая способность на 4,7). Комбинированные спектры были подвергнуты деконволюции функцией MaxEnt в прикладной программе MassLynx. Полученные ионы при взвешивании в соответствии с интенсивностью соответствовали нагрузкам, приведенным в табл. 3. Фактический спектр по масс-спектрометру показан на фиг. 42 и 43.
Таблица 3
Сводные взвешенные по интенсивности средние нагрузки линкерной полезной части в PRLR-Q и конъюгатов изотипического контрольного образца-Q для соединения 63
Пример 44.
Константы равновесной диссоциации (значения KD) для человеческого PRLR, связывающиеся с очищенными анти-PRLR антителами, каждое из которых является немодифицированным H1H6958N2, PRLR-Q и PRLR-Q-63, определялись биосенсорами поверхностного плазмонного резонанса с помощью измерительного прибора Biacore 3000. Поверхность датчика Biacore сначала была дериватизирована
- 189 034950 амином вместе с моноклональным мышиным античеловеческим Fc антителом (GE, # BR-1008-39) для захвата анти-PRLR моноклональных антител. Исследования всех связей производились в 0,01 М HEPES рН 7,4; 0,15 М NaCl; 3 мМ EDTA и 0,05% (по объему) Surfactant Tween-20 (HBS-ET подвижный буфер) при 25°С и при 37°С. Различные концентрации человеческого PRLR внеклеточного домена, выраженного посредством С-концевой мик-мик-гестагистидиновой метки (hPRLR-MMH; SEQ ID NO: 401 по описанию заявки на патент WO 2015026907 А1), в HBS-ET подвижном буфере (в диапазоне от 40 до 3,33 нМ) впрыскивались поверх анти-PRLR антительной захваченной поверхности в течение 4 мин при расходе 50 мкл/мин и их диссоциация в подвижном буфере HBS-ET контролировалась в течение 8 мин. Константа кинетической скорости ассоциации (ka) и константа скорости диссоциации (kd) определялась совмещением сенсограмм реального времени с 1:1 моделью связи с помощью прикладной программы совмещения графиков Scrubber 2.0с. Константы равновесной диссоциации связи (KD) и диссоциативные периоды полужизни (t1/2) вычислялись по константам кинетической скорости следующим образом:
ЛЪ(М) = £, и Р/,(мин) = ^
Кинетические параметры связи для hPRLR-MMH, связанного с различными анти-PRLR антителами при 25°С приводятся в табл. 4. При 25°С, hPRLR-MMH связь с исходным антителом H1H6958N2 с значением KD, равным 1,09 нМ. Человеческая связь PRLR-MMH с PRLR-Q со значением KD, равным 850 рМ, и с PRLR-Q-63 со значением KD, равным 1,50 нМ.
Таблица 4 Параметры кинетической энергии связи анти-PRLR антител, связанных с hPRLR-MMH при 25°С
| Антитело | гпАЬ Уровень захвата (RU) | 100пМ hPRLRMMH связь (RU) | ka (1/Ms) | kd (1/с) | KD (М) | 1½ (мин) |
| H1H6958N2 | 141,3±0,8 | 38 | 4Д7Е+05 | 4.54Ё-04 | ||
| PRLR-Q | 148,5±0,6 | 46 | 4,48Е+05 | 3,79Е-04 | 8,50Е-10 | 30 |
| PRLR-Q-63 | 153,7±0,7 | 45 | 3,80Е+05 | 5,69Е-04 • v* kJ - | <4Д0Е-:О9. |
Пример 45.
В данном примере приводится цитотоксическое исследование заявляемых конъюгатов. Для оценки способности анти-PRLR антител, конъюгированных с 63, 60, 77 и 78, уничтожать PRLR выраженную линию клеток, было проведено in vitro цитотоксическое исследование с использованием T47D линии протоковой карциномы (АТСС, № НТВ-133), ранее определенное для выражения >27000 копий человеческого PRLR на своей клеточной поверхности.
В целях исследования клетки T47D были высеяны на 96-луночных плашках с плотностью 2000 клеток на лунку в среде, содержащей DMEM, дополненной 10% FBS, NEAA, и пенициллин/стрептомицином (полная питательная среда). Рост клеток продолжался в течение суток при 37°С в 5% СО2. Для построения графиков жизнеспособности клетки на следующий день к клеткам были добавлены конъюгаты антительного лекарственного препарата, неконъюгированные антитела или свободные полезные части в окончательных последовательных разведениях в диапазоне от 100 до 0,01 нМ в полной питательной среде, затем в течение 5 дополнительных дней производилось инкубирование. Активность люциферазы была обнаружена после добавления реагента CellTiter-Glo™ (Promega, G7571) в каждую лунку, в которой присутствовали реагенты для разрушения оставшихся жизнеспособных клеток для освобождения их ATP, ATPase ингибиторов с целью предотвращения разрушения ATP, a также люциферин и люцифераза для катализа люминесцентной реакции. Жизнеспособные клетки перед добавкой CellTiter-Glo будут единственным источником АТР, поскольку мертвые клетки в культуре не будут синтезировать АТР, и любой из их освобожденного АТР будет разрушен эндогенными ATPase. Относительные единицы люминесценции (RLU) измерялись посредством люминометра Victor (PerkinElmer), и результаты определялись из логического выражения с четырьмя параметрами по 10-точечному графику реагирования (GraphPad Prism). Все измеренные значения и расчетные значения IC50 корректировались с учетом эквивалентов полезной части. Все значения IC50 выражены в концентрациях нМ, и процент уничтожения приводится для наивысшей тестированной концентрации. Результаты показаны На фиг. 45-48.
Как показано на фиг. 44, анти-PRLR антитело, сайт-специфично конъюгированное с 63 (PRLR-Q63), продемонстрировало цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 1,1 нМ, и максимальным процентом уничтожения 55%. Свободная часть 29 продемонстрировала цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,07нМ, и максимальным процентом уничтожения 67%. Антитело изотипического контрольного образца, конъюгированное с 63 (изотипический контрольный образец, -Q-63) не продемонстрировало какого-либо уничтожения клеток T47D, и неконъюгированное анти-PRLR антитело (PRLR-Q) не продемонстрировало какого-либо уничтожения клеток T47D.
Как показано на фиг. 45, анти-PRLR антитело, конъюгированное с 60 (PRLR-60), продемонстрировало цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,6 нМ, и максимальным процентом уничтожения 60%. Свободная часть 49 продемонстрировала цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,03 пМ, и
- 190 034950 максимальным процентом уничтожения 69%. Антитело изотипического контрольного образца, конъюгированное с 60 (изотипический контрольный образец-60) не продемонстрировало какого-либо уничтожения клеток T47D, и неконъюгированное анти-PRLR антитело (PRLR) не продемонстрировало какоголибо уничтожения клеток T47D.
Как показано на фиг. 46, анти-PRLR антитело, конъюгированное с 77 (PRLR-77), продемонстрировало цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,4 нМ, и максимальным процентом уничтожения 69%. Свободная полезная часть 27 продемонстрировала цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,1 нМ, и максимальным процентом уничтожения 67%. Антитело изотипического контрольного образца, конъюгированное с 77 (изотипический контрольный образец-77) не продемонстрировало какого-либо уничтожения клеток T47D, и неконъюгированное анти-PRLR антитело (PRLR) не продемонстрировало какого-либо уничтожения клеток T47D.
Как показано на фиг. 47, анти-PRLR антитело, конъюгированное с 78 (PRLR-78), продемонстрировало цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,9 нМ, и максимальным процентом уничтожения 61%. Свободная часть 27 продемонстрировала цитотоксичность клеток T47D с IC50, равным 0,1 нМ, и максимальным процентом уничтожения 67%. Антитело изотипического контрольного образца, конъюгированное с 78 (изотипический контрольный образец-78) не продемонстрировало какого-либо уничтожения клеток T47D, и неконъюгированное анти-PRLR антитело (PRLR) не продемонстрировало какоголибо уничтожения клеток T47D.
В табл. 5 представлена антипролиферативная способность полезных частей только в Ovcar3 (Muc16+), C4-2 (PSMA+) и T47D (PRLR+) клетках.
Таблица 5
| С4-2 | ОусагЗ | T47D | ||||
| Соединение № | IC50 (пМ) | % уничтожения | IC50 (пМ) | уничтожения ' | ||
| 29 | 0,27 | 83 | 0,13 | 93 | 0,07 | 67 |
| 33 | 0,45 | 86 | 0,20 | 93 | ; | у. |
| 31 | 0,10 | 82 | 0,04 | 93 | ||
| 27 | 0,20 | 84 | 0,09 | 92 | v У | |
| 35 | 0,004 | 84 | <0,01 | 93 | ||
| 37 | 0,01 | 86 | <0,01 | 94 | ύδϋϊί. | |
| 39 | 0,02 | 70 | ||||
| 41 | г * | |||||
| 43 | 0,01 | 71^ | ||||
| 45 | X? | : -А | ||||
| 47 | 0,01 | 72 | ||||
| 49 | о,об с | •«δ | ||||
| 51 | 0,49 | 72 | ||||
| 53 | у | * WW | ||||
| 55 | 0,18 | 75 | ||||
| 65 | А. | |||||
| 67 | 0,19 | 71 | ||||
| 69 | АЗЖЖ | |||||
| 71 | 0,73 | 68 | ||||
| 73 | ||||||
| 75 | ||||||
| 86 | 0,73 | 90 | 4 | ..,3 | эАМ | |
| 84 | 0,07 | 88 | ||||
| 90 | 100 | 86 | f ч * dr X | ·<* s | ||
| 80 | 1,3 | 91 | ||||
| 88 | 0,05 | 89 | - s | % А У- | ГУ AWB | |
| 82 | 19,95 | 93 |
Приведенные выше реализации и примеры предназначены исключительно для иллюстрации и не имеют ограничительного характера. Специалист сможет выявить или убедиться в достоверности множества эквивалентов конкретных соединений, материалов и процедур посредством обычных экспериментов. Все подобные эквиваленты считаются подпадающими под область заявляемого изобретения и охватываются приведенными ниже пунктами формулы изобретения.
Claims (61)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение с формулой (I)(I) или фармацевтически приемлемая соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен;L представляет собой линкер;ВА представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и k является целым числом от 1 до 30.
- 2. Соединение по п.1, где А представляет собойгде R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкил, ге04ORa -^-SO2Ra иды Р' R тероарил, гетероциклоалкил, гидроксил, ’ ’ где Ra представляет собой алкил;n является целым числом от 0 до 4;q является целым числом от 0 до 5.
- 3. Способ по п. 1 или 2, где А представляет собой
- 4. Соединение по любому из пп.1-3, где А представляет собойгде n принимает значения 0, 1 или 2.
- 5. Соединение по любому из пп.1-4, где n равняется 0.
- 6. Соединение по любому из пп.1-4, где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкокси или гало.
- 7. Соединение по любому из пп.1-6, где L представляет собойА4-SP-AA1-AA24 где SP представляет собой спейсер;представляет собой одну или более связей к антителу или его антигенсвязывающему фраг менту;АА1 представляет собой аминокислотный остаток иАА2 представляет собой аминокислотный остаток.
- 8. Соединение по п.7, где АА1-АА2 представляет собой валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизинфенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, аспарагинтреонин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцинаспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин глицин, глютаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глютаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин или аспарагин-аланиновые остатки.
- 9. Соединение по любому из пп.1-6, где L представляет собой- 192 034950где SP представляет собой спейсер;представляет собой одну или более связей к антителу или его антигенсвязывающему фрагмен ту;RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку.
- 10. Соединение по п.1, гдеА представляет собойгде R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкил, ге0-^_ORa -^-SO2Ra ujtu pl тероарил, гетероциклоалкил, » ’ где RA представляет собой алкил;n является целым числом от 0 до 4;q является целым числом от 0 до 5; и L представляет собойгде SP представляет собой спейсер;представляет собой одну или более связей к антителу или его антигенсвязывающему фраг менту;RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку и RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку.
- 11. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:- 193 034950- 194 034950- 195 034950- 196 034950- 197 034950- 198 034950- 199 034950- 200 034950- 201 034950- 202 034950- 203 034950- 204 034950- 205 034950- 206 034950- 207 034950- 208 034950- 209 034950- 210 034950- 211 034950- 212- 213 034950- 214 034950- 215 034950- 216 034950- 217 034950- 218 034950- 219 034950- 220 034950- 221 034950- 222 034950- 223 034950- 224 034950- 225 034950- 226 034950ΝΗ- 227 034950- 228 034950- 229 034950- 230 034950- 231 034950- 232 034950где Ab представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;—-— представляет собой связь к остатку цистеина антитела или его антигенсвязывающего фрагмента;—-— представляет собой связь к остатку лизина антитела или его антигенсвязывающего фрагмен та;k является целым числом от 1 до 30 и t является целым числом от 1 до 8.
- 12. Соединение по п.11, где соединение представляет собой
- 13. Соединение по любому из пп.1-8, 11 или 12, где t равняется 1.
- 14. Соединение по любому из пп.1-8 или 11-13, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой анти-MUC16 антитело, анти-PRLR антитело или анти-PSMA антитело.
- 15. Соединение с формулой (II)- 233 034950или его фармацевтически приемлемая соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
- 16. Соединение по п.15, где А представляет собой:(R1)n ^/=N (R1)qА Оу где R1, независимо при каждом появлении, представляет собой алкил, алкокси, гало, галоалкил, гео-1-ora Aso2ra ипи -i-4-RA тероарил, гетероциклоалкил, 5 > или » где Ra представляет собой алкил; n является целым числом от 0 до 4; q является целым числом от 0 до 5.
- 17. Соединение по п.16, где соединение представляет собой соединение с формулой (IIA)
- 18. Соединение по п.15, где соединение представляет собой:- 234 034950- 235 034950- 236 034950
- 19. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:- 237 034950- 238 034950
- 20. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-13 или 14-19 и фармацевтически приемлемый инертный наполнитель, для лечения пролиферативного расстройства.
- 21. Способ лечения пролиферативного расстройства, заключающийся в приеме пациентом с таким расстройством терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-13 или 14-19.
- 22. Соединение с формулой Р1δ сн3Р1 где А представляет собой арилен или гетероарилен иRL представляет собой реактивный линкер.
- 23. Соединение по п.22, где соединение представляет собой:- 239 034950Н3с- 240 034950- 241 034950- 242 034950- 243 034950- 244 034950- 245 034950- 246 034950- 247 034950- 248 034950- 249 034950- 250 034950- 251 034950- 252 034950- 253 034950254 034950- 255- 256 034950- 257 034950- 258 034950- 259 034950- 260 034950- 261 034950- 262 034950Н3С сн3н3с- 263 034950- 264 034950- 265 034950NHBr Br- 266 034950- 267 034950- 268 034950- 269 034950- 270 034950NHHNBr- 271 034950- 272 034950- 273 034950- 274 034950- 275 034950- 276 034950- 277 034950- 278 034950- 279 034950- 280 034950- 281 034950- 282 034950BrBrBrBrBrBrBrBr- 283 034950- 284 034950- 285 034950- 286 034950- 287 034950- 288 034950- 289 034950- 290 034950- 291 034950- 292 034950- 293 034950- 294 034950
- 24. Способ получения соединения с формулой (I)- 295 034950(I) заключающийся в контактировании соединения с формулой Р1и антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в условиях конъюгации, где А представляет собой арилен или гетероарилен;L представляет собой линкер;ВА представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;k является целым числом от 1 до 10 иRL представляет собой реактивный линкер.
- 25. Способ по п.24, где соединение с формулой Р1 приготавливается контактированием соединения с формулой Р2сн3Р2 и соединения с формулой Р3 rl-n-ay0H н S РЗ в условиях синтеза амида, где RL представляет собой реактивный линкер иА представляет собой арилен или гетероарилен.РР5 или его соль, где А представляет собой арилен или гетероарилен.
- 27. Способ по п.24, где соединение с формулой Р1 приготавливается контактированием соединения с формулой РР3- 296 034950О СН3РРЗ и соединения с формулой РР7РР7 в условиях синтеза амида, где SPR представляет собой реактивный линкер;RAA1 представляет собой аминокислотную боковую цепочку;RAA2 представляет собой аминокислотную боковую цепочку иА представляет собой арилен или гетероарилен.
- 28. Способ по п.27, где соединение с формулой РР3 получено через контактирование соединения с формулой РР5 с восстанавливающим агентомО СН3РР5РР5.
- 29. Способ по п.28, где восстанавливающий агент представляет собой цинковую пыль.
- 30. Способ получения соединения с формулой РР3О СН3РРЗ включающий:(а) контактирование соединения с формулой Р2СН3Р2- 297 034950 и соединения с формулой РР6ОНРР6 в условиях синтеза амида для образования соединения с формулой РР5О СН3РР5 где А представляет собой арилен или гетероарилен; и (b) восстановление соединения с формулой РР5 контактированием соединения с формулой РР5 и восстанавливающего агента для образования соединения с формулой РР3.
- 31. Способ по п.30, где восстанавливающий агент представляет собой цинк.
- 32. Способ по п.31, где цинк представлен в форме цинковой пыли.
- 33. Способ получения соединения конъюгата антительного лекарственного препарата с формулой (I), включающий:(а) реагирование дегликозилированного антитела или негликозилированного антитела с соединением с формулой (РТ1) в присутствии трансглютаминазыРТ1 где А представляет собой арилен или гетероарилен иL представляет собой линкер.
- 34. Способ по п.33, где этап (а) осуществляется при значении рН примерно от 7,0 до примерно 8,0 в течение как минимум 4 ч.
- 35. Способ по п.33, где соединение с формулой (РТ1) этапа (а) присутствует в концентрации как минимум 5 мол.экв. по сравнению с дегликозилированным антителом или агликозилированным антите лом.
- 36. Способ по п.33, где трансглютаминаза этапа (а) присутствует в количестве от 1 до 30 U на 1 мг дегликозилированного антитела или негликозилированного антитела.
- 37. Способ по п.33, где антитело дегликозилировано пептидом N-гликозидазы F (PNGaseF) до этапа (а).
- 38. Способ по п.33, где антитело негликозилировано.
- 39. Соединение по п.15, где соединение выбирается из:- 298 034950- 299 034950- 300 034950- 301 034950- 302 034950- 303 034950
- 40. Соединение по п.22, где соединение выбирается из:- 304 034950- 305 034950Н3С сн3
- 41. Соединение по п.1, где соединение выбирается из:- 306 034950- 307 034950- 308 034950- 309 034950- 310 034950- 311 034950
- 42. Способ лечения пролиферативного расстройства, включающий введение пациенту с таким расстройством терапевтически эффективного количества композиции по п.20.
- 43. Соединение по формуле (I) по п.1, где ВА представляет собой анти-PSMA, анти-MUC16, антиEGFRvIII или анти-STEAP-2 антитело.
- 44. Соединение по пп.1, 20, 21 или 23, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывают антиген опухоли.
- 45. Фармацевтическая композиция по п.20, где пролиферативным расстройством является раковое заболевание.
- 46. Фармацевтическая композиция по п.45, где раковым заболеванием является раковое заболевание, экспрессирующее PSMA, PRLR или MUC16.
- 47. Фармацевтическая композиция по п.45, где раковым заболеванием является рак яичников, рак предстательной железы или рак молочной железы.
- 48. Способ по п.21, где пролиферативным расстройством является раковое заболевание.
- 49. Способ по п.48, где раковым заболеванием является раковое заболевание, экспрессирующее PSMA, PRLR или MUC16.
- 50. Способ по п.48, где раковым заболеванием является рак яичников, рак предстательной железы или рак молочной железы.
- 51. Способ по п.42, где пролиферативным расстройством является раковое заболевание.
- 52. Способ по п.51, где раковым заболеванием является раковое заболевание, экспрессирующее PSMA, PRLR или MUC16.
- 53. Способ по п.51, где раковым заболеванием является рак яичников, рак предстательной железы или рак молочной железы.
- 54. Соединение по любому из пп.1, 2, 8, 10-13, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбираются из группы, включающей анти-EGFR антитело, анти-ErbB2 антитело, анти-ErbB3 антитело, анти-ErbB4 антитело, антитело, которое, в частности, связывает EGFRvIII, анти-сМЕТ антитело, антиIGF1R антитело, анти-PDGFR-a антитело, анти-PDGFR-e антитело, анти-PDGF-A, анти-PDGF-В, анти- 312 034950PDGF-C, анти-PDGF-D антитело, анти-VEGF антитело, анти-0ЕЕ4 антитело, анти-Апд2 антитело, антиFOLH1 антитело, анти-STEAPl антитело, анти-БТЕАР2 антитело, анти-ТМРК8Б2 антитело, анти-MSLN антитело, анти-СА9 антитело, антиуроплакин или анти-UPKSA антитело, анти-MUC16 антитело, анти-Tn антитело, анти-CLEC12A антитело, анти-'Ш1;1^1;17 антитело, анти-LGRS антитело, моновалентное анtu-CD20 антитело, анти-PRLR антитело, анти-PSMA антитело, и антитела, которые связывают с цитокинами, включающими IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, или их соответствующими рецепторами.
- 55. Конъюгат антительного лекарственного препарата, выбранный из:- 313 034950t представляет собой целое число от 1 до 8.
- 56. Соединение по п.22, где соединение по формуле Р1 выбирается из группы, состоящей из:- 314 034950- 315 034950О сн3О СН3
- 57. Соединение по п.15, где соединение по формуле (II) выбирается из группы, состоящей из:- 316 034950- 317 034950- 318 034950- 319 034950- 320 034950ОМе О СН3О СН3- 321 034950- 322 034950NH2 О СН3
- 58. Соединение по п.26, где соединение выбирается из группы, состоящей из:- 323 034950CF3 О CH3- 324 034950- 325- 326 034950- 327 034950- 328 034950no2 о ch3- 329 034950
- 59. Конъюгат антительного лекарственного препарата, содержащий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, конъюгированный с полезной нагрузкой через линкер, где полезная нагрузка выбирается из группы, состоящей из:О СН3- 330 034950F О CH3CF3 О СН3ОМе О СН3О СН3- 331 034950- 332 034950- 333 034950- 334 034950- 335 034950
- 60. Конъюгат антитела по п.58, где полезная нагрузка выбирается из группы, состоящей из:- 336 034950- 337 034950
- 61. Конъюгат антитела по п.60, где полезная нагрузка представляет собой
- 62. Конъюгат антитела по п.60, где полезная нагрузка представляет собой
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562139044P | 2015-03-27 | 2015-03-27 | |
| US201562252239P | 2015-11-06 | 2015-11-06 | |
| PCT/US2016/024343 WO2016160615A1 (en) | 2015-03-27 | 2016-03-25 | Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201700464A1 EA201700464A1 (ru) | 2018-11-30 |
| EA034950B1 true EA034950B1 (ru) | 2020-04-09 |
Family
ID=55650789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201700464A EA034950B1 (ru) | 2015-03-27 | 2016-03-25 | Производные майтанзиноида, их конъюгаты и способы использования |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20160375147A1 (ru) |
| EP (1) | EP3273998B1 (ru) |
| JP (2) | JP6948950B2 (ru) |
| KR (1) | KR20170131587A (ru) |
| CN (2) | CN115645543A (ru) |
| AU (1) | AU2016243527B2 (ru) |
| BR (1) | BR112017020149A8 (ru) |
| CA (1) | CA2978340A1 (ru) |
| CL (1) | CL2017002422A1 (ru) |
| CO (1) | CO2017010890A2 (ru) |
| EA (1) | EA034950B1 (ru) |
| IL (1) | IL254267B (ru) |
| MX (2) | MX2017012380A (ru) |
| PH (1) | PH12017501780A1 (ru) |
| SG (1) | SG11201707148PA (ru) |
| WO (1) | WO2016160615A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201706040B (ru) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2015011348A (es) | 2013-03-15 | 2016-01-15 | Regeneron Pharma | Moleculas biologicamente activas, conjugados de las mismas, y usos terapeuticos. |
| CN105530942B (zh) | 2013-08-26 | 2019-10-11 | 瑞泽恩制药公司 | 一种包含大环内酯类非对映体的药物组合物、其制备方法和用途 |
| EP3273998B1 (en) * | 2015-03-27 | 2019-09-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use |
| EP3319994B1 (en) | 2015-07-06 | 2024-02-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof |
| CN114478801A (zh) | 2016-01-25 | 2022-05-13 | 里珍纳龙药品有限公司 | 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法 |
| WO2017190079A1 (en) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of making multispecific antigen-binding molecules |
| MD3515487T2 (ro) | 2016-09-23 | 2023-11-30 | Regeneron Pharma | Anticorpi bispecifici anti-MUC16-CD3 și conjugate anticorp anti-MUC16-medicament |
| CA3037732A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-steap2 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind steap2 and cd3, and uses thereof |
| TWI782930B (zh) | 2016-11-16 | 2022-11-11 | 美商再生元醫藥公司 | 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法 |
| MX2019006131A (es) | 2016-11-29 | 2019-08-21 | Regeneron Pharma | Metodos para tratar cancer de mama positivo para prlr. |
| CN110944718A (zh) | 2017-05-18 | 2020-03-31 | 里珍纳龙药品有限公司 | 环糊精蛋白质药物偶联物 |
| WO2019094395A2 (en) | 2017-11-07 | 2019-05-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Hydrophilic linkers for antibody drug conjugates |
| IL305268A (en) * | 2017-11-30 | 2023-10-01 | Centurion Biopharma Corp | Maytansinoid-based drug delivery systems |
| EP3788075A1 (en) * | 2018-04-30 | 2021-03-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind her2 and/or aplp2, conjugates, and uses thereof |
| JP7477462B2 (ja) | 2018-05-17 | 2024-05-01 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 抗ｃｄ６３抗体、コンジュゲート、及び、それらの使用 |
| WO2020057543A1 (zh) * | 2018-09-21 | 2020-03-26 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 基于芳硝基的连接子、含连接子的抗体偶联药物及连接子的用途 |
| WO2020172475A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating ocular cancer using anti-met antibodies and bispecific antigen binding molecules that bind met |
| CN114340684A (zh) | 2019-09-16 | 2022-04-12 | 瑞泽恩制药公司 | 用于免疫pet成像的放射性标记的met结合蛋白 |
| US11814428B2 (en) | 2019-09-19 | 2023-11-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof |
| WO2021097220A1 (en) | 2019-11-15 | 2021-05-20 | Seagen Inc. | Methods of treating her2 positive breast cancer with tucatinib in combination with an anti-her2 antibody-drug conjugate |
| CN113292574B (zh) * | 2020-02-21 | 2022-05-03 | 四川大学 | 一类手性多环的托品烷化合物及其制备方法和用途 |
| CA3166619A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | Julian Andreev | Bispecific antigen binding molecules that bind her2, and methods of use thereof |
| WO2021211984A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Diels-alder conjugation methods |
| CA3190569A1 (en) | 2020-10-22 | 2022-04-28 | Christopher Daly | Anti-fgfr2 antibodies and methods of use thereof |
| WO2022103724A1 (en) | 2020-11-10 | 2022-05-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Selenium antibody conjugates |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014080251A1 (en) * | 2012-11-24 | 2014-05-30 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules |
| WO2014145090A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses |
Family Cites Families (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5566585A (en) * | 1978-11-14 | 1980-05-20 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
| JPS55164686A (en) | 1979-06-11 | 1980-12-22 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
| US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| US5714586A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US7087411B2 (en) | 1999-06-08 | 2006-08-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Fusion protein capable of binding VEGF |
| US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
| US20070258987A1 (en) | 2000-11-28 | 2007-11-08 | Seattle Genetics, Inc. | Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof |
| TW200539855A (en) | 2004-03-15 | 2005-12-16 | Wyeth Corp | Calicheamicin conjugates |
| BRPI0510883B8 (pt) | 2004-06-01 | 2021-05-25 | Genentech Inc | composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação |
| JP2008521828A (ja) | 2004-11-29 | 2008-06-26 | シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド | 操作された抗体およびイムノコンジュゲート |
| PL1912677T3 (pl) | 2005-06-20 | 2014-03-31 | Psma Dev Company L L C | Koniugaty przeciwciało PSMA-lek |
| AU2006262603B2 (en) | 2005-06-20 | 2011-01-06 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| CA2617953C (en) | 2005-08-09 | 2013-12-17 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Method of acylating maytansinol with chiral amino acids |
| AU2006330562B2 (en) | 2005-12-22 | 2013-05-02 | Baxter Healthcare S.A. | Improved monocyte activation test better able to detect non-endotoxin pyrogenic contaminants in medical products |
| US7750116B1 (en) | 2006-02-18 | 2010-07-06 | Seattle Genetics, Inc. | Antibody drug conjugate metabolites |
| RU2448979C2 (ru) | 2006-12-14 | 2012-04-27 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека |
| WO2008122039A2 (en) | 2007-04-02 | 2008-10-09 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules |
| EP2167963B1 (en) | 2007-05-23 | 2019-04-17 | Ventana Medical Systems, Inc. | Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization |
| BRPI0911442A2 (pt) | 2008-04-30 | 2019-03-12 | Immunogen, Inc. | conjugados potentes e ligantes hidrofílicos |
| AU2009275358C1 (en) | 2008-07-21 | 2015-09-24 | Polytherics Limited | Novel reagents and method for conjugating biological molecules |
| JO3182B1 (ar) | 2009-07-29 | 2018-03-08 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2 |
| DK2889624T3 (en) | 2009-08-10 | 2018-12-10 | Ucl Business Plc | Reversible covalent bonding of functional molecules |
| US20130028917A1 (en) | 2010-04-15 | 2013-01-31 | Spirogen Developments Sàrl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| WO2012005982A2 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Reporter for rna polymerase ii termination |
| NZ707327A (en) | 2010-08-02 | 2017-01-27 | Regeneron Pharma | Mice that make binding proteins comprising vl domains |
| EP2714685B1 (en) | 2011-05-27 | 2016-10-19 | Ambrx, Inc. | Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives |
| US8815226B2 (en) | 2011-06-10 | 2014-08-26 | Mersana Therapeutics, Inc. | Protein-polymer-drug conjugates |
| WO2012177837A2 (en) * | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Immunogen, Inc. | Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof |
| KR101891859B1 (ko) | 2011-10-14 | 2018-08-24 | 메디뮨 리미티드 | 피롤로벤조디아제핀 |
| WO2013053872A1 (en) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | Spirogen Sàrl | Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines |
| CN103997893B (zh) | 2011-10-14 | 2019-04-12 | 西雅图基因公司 | 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物 |
| WO2013055990A1 (en) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | Seattle Genetics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates |
| WO2013068874A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | Pfizer Inc. | Antibody-drug conjugates |
| IN2014CN04961A (ru) | 2011-12-05 | 2015-09-18 | Igenica Biotherapeutics Inc | |
| CN110201186A (zh) | 2012-10-23 | 2019-09-06 | 西纳福克斯股份有限公司 | 经修饰的抗体、抗体-缀合物及其制备方法 |
| WO2014197854A1 (en) | 2013-06-06 | 2014-12-11 | Igenica Biotherapeutics, Inc. | Novel linkers for antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use |
| TWI641620B (zh) | 2013-08-21 | 2018-11-21 | 再生元醫藥公司 | 抗－ｐｒｌｒ抗體及其用途 |
| CN105530942B (zh) * | 2013-08-26 | 2019-10-11 | 瑞泽恩制药公司 | 一种包含大环内酯类非对映体的药物组合物、其制备方法和用途 |
| EP3273998B1 (en) * | 2015-03-27 | 2019-09-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use |
-
2016
- 2016-03-25 EP EP16714199.3A patent/EP3273998B1/en active Active
- 2016-03-25 WO PCT/US2016/024343 patent/WO2016160615A1/en active Application Filing
- 2016-03-25 JP JP2017550548A patent/JP6948950B2/ja active Active
- 2016-03-25 US US15/081,759 patent/US20160375147A1/en not_active Abandoned
- 2016-03-25 SG SG11201707148PA patent/SG11201707148PA/en unknown
- 2016-03-25 AU AU2016243527A patent/AU2016243527B2/en active Active
- 2016-03-25 EA EA201700464A patent/EA034950B1/ru unknown
- 2016-03-25 CN CN202210829028.0A patent/CN115645543A/zh active Pending
- 2016-03-25 KR KR1020177030678A patent/KR20170131587A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-03-25 CA CA2978340A patent/CA2978340A1/en active Granted
- 2016-03-25 MX MX2017012380A patent/MX2017012380A/es unknown
- 2016-03-25 BR BR112017020149A patent/BR112017020149A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-03-25 CN CN201680030443.2A patent/CN107995912A/zh active Pending
-
2017
- 2017-09-01 IL IL254267A patent/IL254267B/en active IP Right Grant
- 2017-09-05 ZA ZA2017/06040A patent/ZA201706040B/en unknown
- 2017-09-26 CL CL2017002422A patent/CL2017002422A1/es unknown
- 2017-09-27 PH PH12017501780A patent/PH12017501780A1/en unknown
- 2017-09-27 MX MX2021008101A patent/MX2021008101A/es unknown
- 2017-10-26 CO CONC2017/0010890A patent/CO2017010890A2/es unknown
-
2019
- 2019-12-12 US US16/712,941 patent/US20200385402A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-03-17 JP JP2021044152A patent/JP2021113191A/ja not_active Withdrawn
- 2021-11-16 US US17/528,144 patent/US20220259225A1/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014080251A1 (en) * | 2012-11-24 | 2014-05-30 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules |
| WO2014145090A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KAWAI A; ET AL: "CHEMICAL MODIFICATION OF ANSAMITOCINS 3. SYNTHESIS AND BIOLOGICAL EFFECTS OF 3 ACYL ESTERS OF MAYTANSINOL", CHEMICAL AND PHARMACEUTICAL BULLETIN, PHARMACEUTICAL SOCIETY OF JAPAN, JP, vol. 32, no. 9, 1 January 1984 (1984-01-01), JP, pages 3441 - 3451, XP008094318, ISSN: 0009-2363 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2016160615A1 (en) | 2016-10-06 |
| BR112017020149A2 (pt) | 2018-09-11 |
| EP3273998B1 (en) | 2019-09-04 |
| CA2978340A1 (en) | 2016-10-06 |
| SG11201707148PA (en) | 2017-10-30 |
| JP2018516851A (ja) | 2018-06-28 |
| PH12017501780A1 (en) | 2018-04-30 |
| KR20170131587A (ko) | 2017-11-29 |
| JP6948950B2 (ja) | 2021-10-13 |
| CO2017010890A2 (es) | 2020-04-13 |
| CL2017002422A1 (es) | 2018-03-16 |
| US20220259225A1 (en) | 2022-08-18 |
| CN107995912A (zh) | 2018-05-04 |
| JP2021113191A (ja) | 2021-08-05 |
| IL254267A (en) | 2018-06-28 |
| AU2016243527B2 (en) | 2021-04-29 |
| EP3273998A1 (en) | 2018-01-31 |
| ZA201706040B (en) | 2020-05-27 |
| IL254267B (en) | 2021-03-25 |
| BR112017020149A8 (pt) | 2023-05-02 |
| CN115645543A (zh) | 2023-01-31 |
| US20200385402A1 (en) | 2020-12-10 |
| MX2017012380A (es) | 2018-04-11 |
| EA201700464A1 (ru) | 2018-11-30 |
| US20160375147A1 (en) | 2016-12-29 |
| MX2021008101A (es) | 2021-08-05 |
| AU2016243527A1 (en) | 2017-09-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA034950B1 (ru) | Производные майтанзиноида, их конъюгаты и способы использования | |
| US11446389B2 (en) | Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use | |
| CN108093640B (zh) | 位点特异性抗体-药物缀合物 | |
| KR20210006362A (ko) | 캄토테신 펩타이드 접합체들 | |
| AU2018200308A1 (en) | Antibody-drug conjugate | |
| JP2023116497A (ja) | シクロデキストリンタンパク質薬物コンジュゲート | |
| KR20220156533A (ko) | IL-7Rα 결합 화합물 | |
| JP2016502504A (ja) | ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体 | |
| JP2015534579A (ja) | ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体 | |
| TW202015739A (zh) | 剪接調節抗體-藥物結合物及其使用方法 | |
| CN115990269A (zh) | 依沙替康衍生物及其连接子-负载物和缀合物 | |
| JP2020532523A (ja) | 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）及びその使用 | |
| CA2978340C (en) | Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use |