KR20160013110A

KR20160013110A - B-세포 cll/림프종 11a(bcl11a)의 올리고뉴클레오티드 조절제 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20160013110A
Application number: KR1020157036075A
Authority: KR
Inventors: 메이 헤티오른; 닐스 피스커 닐센
Original assignee: 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스
Priority date: 2013-05-24
Filing date: 2014-05-26
Publication date: 2016-02-03
Also published as: BR112015029327A2; CA2907694A1; EP3004352B1; EP3004352A1; WO2014188001A1; RU2015155332A; HK1213595A1; JP2016520310A; MX363846B; DK3004352T3; US20160130582A1; CN105247052A; MX2015015564A

Abstract

본 발명은 특히, B 세포 림프종/백혈병 11A(BCL11A)의 올리고뉴클레오티드 조절제(예를 들면, 억제제) 및 상기 조절제에 기초한 BCL11A-관련된 질병, 장애 또는 질환을 치료하기 위한 개선된 방법 및 조성물을 제공한다.

Description

B-세포 CLL/림프종 11A(BCL11A)의 올리고뉴클레오티드 조절제 및 이의 용도{OLIGONUCLEOTIDE MODULATORS OF B-CELL CLL/LYMPHOMA 11A(BCL11A) AND USES THEREOF}

이상 혈색소증은 헤모글로빈 단백질의 기능 장애와 관련된 질병이다. 전형적으로, 이러한 질병은 글로빈 유전자(예를 들면, α, β, 등; 도 1)의 유전적 돌연변이로부터 기원하는 헤모글로빈 단백질의 결핍 또는 기능저하를 수반한다. 이상 혈색소증은 대부분의 경우에 상염색체 공우성 특성인 단일-유전자 유전된 장애를 특징으로 하는 적혈구 관련된 장애의 광범위한 스펙트럼의 하나의 군이다. 전 세계 인구의 약 7%가 보균자인 것으로 추정된다. 유전적인 이상 혈색소증은 다음 3가지 형태 중 하나로 나타난다: 지중해 빈혈(α, β, δ), 겸상적혈구 빈혈(SCD) 및 유전성 태아 헤모글로빈 지속증(HbF). 겸상적혈구 빈혈 및 β-지중해 빈혈은 가장 흔한 형태의 이상 혈색소증이고 전 세계 이환율 및 사망률의 주요 원인이다. SCD는, 이름이 암시하는 바와 같이, 돌연변이로부터 발생하는 글로빈 단백질의 구조 변화를 수반하고 헤모글로빈 단백질의 기능 저하를 야기하는 반면, 지중해 빈혈은 정상 글로빈 단백질의 생산 부족을 초래하는 글로빈 유전자에서의 돌연변이와 관련된다. 이는 조절 단백질의 돌연변이를 통해 발생할 수 있다. 빈혈증은, 일부 심각한 경우에, 헤모글로빈 기능 장애의 통상적인 결과이다.

이상 혈색소증에 대한 다양한 치료는 오랜 시간에 걸쳐서 연구되어 왔다. 주요 초점은 전형적으로 태아성 헤모글로빈(HbF) 수준의 증가에 의한 헤모글로빈 기능을 회복하는 것이다. 그러나, 많은 효과적인 치료가 성공적으로 개발되지 않았다. 최근에, HbF를 조절하는 기작의 이해가 많은 연구 분야에서 수행되고 있다. B 세포 림프종/백혈병 11A(BCL11A)가 골수의 성인 적혈구 전구 세포에서 발현되고 γ-글로빈 생성을 억제하도록 작용하는 것이 보고되었다(문헌[Sankaran et al. 2008 Science vol 322 page 1839-1842]).

WO 2010/030963은 4개의 표적 서열에 대하여 siRNA 샘플의 풀을 사용하여 BCL11A의 조절을 기재하고 있다. 각각의 표적 서열이 BCL11A을 하향 조절할 수 있는지 여부에 대한 증거는 없다. WO 2012/079046은 BCL11A 유전자를 표적하는 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 조성물을 기재하고 있다.

본 발명은 특히, BCL11A의 안티센스 올리고뉴클레오티드 조절제(예를 들면, 억제제) 및 상기 조절제에 기초한 BCL11A-관련된 질병, 장애 또는 질환을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 이상 혈색소증, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈 및 β-지중해 빈혈을 치료하는데 특히 유용한 것으로 고려된다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 1의 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 선택된 영역 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체(isoform) 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 80% 이상(예를 들면, 약 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상) 동일한 서열을 갖는 인간 BCL11A의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 개프머(gapmer)이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 19개 미만 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 18개 미만 뉴클레오티드이다.

일 양상에서, 본 발명은 18개 미만(예를 들면, 17, 16, 15, 14, 13, 또는 12개 미만)의 뉴클레오티드의 길이 및 서열번호 1의 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 선택된 영역 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 80% 이상(예를 들면, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 서열을 갖는 인간 BCL11A의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 1의 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 선택된 영역 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 약 80% 이상(예를 들면, 약 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상) 동일한 서열을 갖는 인간 BCL11A의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 화학식 X_a-Y_b-X_a'으로 나타낼 수 있고, 이때, X는 뉴클레오티드 유사체이고; Y는 DNA의 연속 서열이고; a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고; a'은 1, 2, 3, 4 또는 5이고; b는 5 내지 15의 정수이다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 유사체는 잠금 핵산(LNA)이다.

일부 실시양태에서, a 및 a'은 상이하다. 일부 실시양태에서, a 및 a'은 동일하다. 일부 실시양태에서, a 및/또는 a'은 1이다. 일부 실시양태에서, a 및/또는 a'은 2이다. 일부 실시양태에서, a 및/또는 a'은 3이다. 일부 실시양태에서, a 및/또는 a'은 4이다. 일부 실시양태에서, a 및/또는 a'은 5이다.

일부 실시양태에서, b는 5 및 15가 포함된 5 내지 15의 정수이다. 일부 실시양태에서, b는 5 및 10이 포함된 5 내지 10의 정수이다. 일부 실시양태에서, b는 7 및 11이 포함된 7 내지 11의 정수이다. 일부 실시양태에서, b는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.

일부 실시양태에서, BCL11A의 동종체는 XL, L, M, S 및 XS 또는 상동체 또는 이의 이종체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 마우스 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상 또는 그 이상의 뉴클레오시드 유사체를 포함하거나 함유한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 3 내지 8개 뉴클레오티드 유사체, 예를 들면, 6 또는 7개 뉴클레오티드 유사체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 상기 뉴클레오티드 유사체는 잠금 핵산(LNA)이고; 예를 들면 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상 또는 8개 뉴클레오티드 유사체는 LNA일 수 있다. 일부 실시양태에서, 모든 뉴클레오티드 유사체는 LNA일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상 또는 그 이상 LNA 단위를 포함하거나 함유한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상 LNA 단위는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 위치한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 5' 및/또는 3' 말단에서 1개 이상, 2개 이상 또는 3개 이상 LNA 단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 내부적으로 1개 이상, 2개 이상 또는 3개 이상 LNA 단위를 포함한다.

일부 실시양태에서, LNA 단위는 β-D-옥시-LNA 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 추가 화학적 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 2'O-메틸 변형 및/또는 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 하나 이상의 추가 화학적 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 LNA 5-메틸사이토신 뉴클레오티드인 하나 이상 LNA 단위를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 10 내지 17개, 10 내지 16개, 10 내지 15개, 10 내지 14개, 10 내지 13개, 10 내지 12개, 11 내지 17개, 11 내지 16개, 11 내지 15개, 11 내지 14개, 11 내지 13개, 12 내지 17개, 12 내지 16개, 12 내지 15개, 또는 12 내지 14개 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 12 내지 16개 뉴클레오티드이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 선택된 영역 또는 인간 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 동일한 서열을 갖는다.

본 발명의 다른 양상은 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 1 내지 283(엑손 1), 뉴클레오티드 284 내지 613(엑손 2), 또는 뉴클레오티드 614 내지 715(엑손 3)로부터 선택된 영역 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 80% 이상 동일한 서열을 포함하는 인간 BCL11A의 발현을 감소시킬 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 XL의 뉴클레오티드 410 내지 450 내에 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 XL의 뉴클레오티드 415 내지 436 내에 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 XL의 뉴클레오티드 420 내지 450 내에 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 5'-ATTGCATTGTTTCCG-3'(서열번호 63), 5'-GTTTGTGCTCGAT-3'(서열번호 64), 5'-CATTGCATTGTTTCCG-3'(서열번호 65), 5'-CGTTTGTGCTCGAT-3'(서열번호 66), 5'-CGTTTGTGCTCGATAA-3'(서열번호 67), 5'-CCGTTTGTGCTCGA-3'(서열번호 68), 5'-CGTTTGTGCTCGA-3'(서열번호 69), 5'-TTTGTGCTCGATAA-3'(서열번호 70), 5'-TTGTGCTCCATAA-3'(서열번호 71), 5'-TTTCCGTTTGTGCTCG(서열번호 72), 5'-ATTGCATTGTTTCCGT-3'(서열번호 73) 및 5'-CGTTTGTGCTCGATA-3'(서열번호 74)으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 모티프를 포함하거나 함유한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 하기 표 2로부터 선택된 서열을 갖는다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 11, 서열번호 15, 서열번호 32, 서열번호 21, 서열번호 34, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 57, 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 61 및 서열번호 62로부터 선택된 서열을 갖는다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 5'-^mC_s ^o A_s ^o T_s ^o t_s g_s c_s a_s t_s t_s g_s t_s t_s t_s ^mC_s ^o ^mC_s ^o G^o -3'(서열번호 11), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_sg_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s T _s ^o A _s ^o A ^o -3'(서열번호 15), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s A _s ^o T _s ^o A ^o -3'(서열번호 32), 5'-T _s ^o T _s ^o G _s ^o t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s t_s A _s ^o A _s ^o A ^o -3'(서열번호 14) 및 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s c_s G _s ^o A _s ^o T ^o -3'(서열번호 35)으로부터 선택되고, 이때 대문자는 잠금 핵산(LNA) 단위를 나타내고, 아랫첨자 s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고, 소문자는 데옥시리보뉴클레오티드(DNA) 단위를 나타내고, ^mC는 5' 메틸-사이토신 LNA 단위를 나타내고, ^mc는 5' 메틸-사이토신 DNA 단위를 나타낸다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 5'-^mC_s ^o A_s ^o T_s ^o t_sg_s c_s a_s t_s t_s g_s t_s t_s t_s ^mC_s ^o ^mC_s ^o G^o-3'(서열번호 11)이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 표 2로부터 선택된 올리고뉴클레오티드 서열과 80% 이상(예를 들면, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상) 동일한 서열을 갖는 인간 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드는 5'-^mC_s ^o A_s ^o T_s ^o t_s g_s c_s a_s t_s t_s g_s t_s t_s t_s ^mC_s ^o ^mC_s ^o G^o-3'(서열번호 11), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s T _s ^o A _s ^o A ^o -3'(서열번호 15), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s A _s ^o T _s ^o A ^o -3'(서열번호 32), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s A _s ^o T _s ^o A ^o -3'(서열번호 32), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s c_s G _s ^o A _s ^o T ^o -3'(서열번호 35), 5'-T _s ^o T _s ^o G _s ^o t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s t_s A _s ^o A _s ^o A ^o -3'(서열번호 14) 및 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_sc_s t_s c_s G _s ^o A _s ^o T ^o -3'(서열번호 35)으로부터 선택된 올리고뉴클레오티드 서열과 80% 이상(예를 들면, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상) 동일한 서열을 갖고, 이때 대문자는 잠금 핵산(LNA) 단위를 나타내고, 아랫첨자 s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고, 소문자는 데옥시리보뉴클레오티드(DNA) 단위를 나타내고, ^mC는 5' 메틸-사이토신 LNA 단위를 나타내고, ^mc는 5' 메틸-사이토신 DNA 단위를 나타낸다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

특히, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 BCL11A를 억제하는 방법을 제공한다.

특히, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, BCL11A를 억제하는 방법에 사용하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 빈혈성 질병, 장애 또는 질환, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈 또는 β-지중해 빈혈의 치료용 약제의 제조에 있어서 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물의 용도를 제공한다. 특히 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, BCL11A를 억제하기 위한 약제의 제조에 있어서.

일부 실시양태에서, 본 발명은 예컨대, 빈혈성 질병, 장애 또는 질환, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈 또는 β-지중해 빈혈의 치료용 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 빈혈성 질병, 장애 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 언급된 질병 또는 장애, 예컨대, 이상 혈색소증, 예컨대, 빈혈성 질병, 장애 또는 질환, 예컨대, 지중해 빈혈(a, β, δ), 겸상적혈구 빈혈 및 유전성 태아 헤모글로빈 지속증(HbF)의 치료에 사용하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 빈혈성 질병, 장애 또는 질환을 치료하는 방법에 사용하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 치료 방법은 질병 또는 장애의 치료를 위해, 예컨대, 빈혈성 질병, 장애 또는 질환의 치료를 위해 대상체에게 제 2 약제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법에 의해 치료되는 빈혈성 질병, 장애 또는 질환은 겸상적혈구 빈혈이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법에 의해 치료되는 빈혈성 질병, 장애 또는 질환은 β-지중해 빈혈이다.

일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물의 투여는 하나 이상의 표적 조직에서 BCL11A의 감소된 발현을 야기한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물의 투여는 하나 이상의 표적 조직에서 증가된 γ-글로빈 발현을 야기한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물의 투여는 하나 이상의 표적 조직에서 증가된 태아성 헤모글로빈 생성을 야기한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 표적 조직은 골수, 간, 신장, 비장, 형질 세포, 흉선, 편도 상피, 적혈구 전구 세포, 다능성 줄기 세포, 수지상 세포 및/또는 말초혈 B-세포로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물은 피하로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물을 포함하는 용기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물은 단일 투여 형태로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물은 다중 투여 형태(예를 들면, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상)로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물은 동결건조된 형태로 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물은 액체 형태로 제공된다.

일부 실시양태에서, 용기는 앰플, 바이알, 카트리지, 리저버(reservoir), 리오-젝트(lyo-ject) 및 미리 충전된 주사기로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 용기는 미리 충전된 주사기이고 임의적으로 구어진 실리콘 코팅을 갖는 붕규산염 유리 주사기, 분사된 실리콘을 갖는 붕규산염 유리 주사기 및 실리콘이 없는 플라스틱 수지 주사기로부터 선택된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은 동등하게 사용된다. 약/대략을 사용하거나 사용하지 않고 본원에 사용된 임의의 수치는 관련 분야의 숙련자에 의해 이해된 임의의 정상적인 변동을 포괄하는 것을 의미한다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 하기 상세한 설명에서 명백하다. 그러나, 상세한 설명은 본 발명의 실시양태를 나타내면서 제한하지 않고 단지 예시의 방식으로서 주어짐이 이해되어야 한다. 본 발명의 범주 내에서의 다양한 변화 및 변형은 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백하게 될 것이다.

도면은 본 발명을 제한하지 않고 오직 예시하기 위한 목적이다.
도 1은 정상 개체(좌측) 및 β-글로빈 쇄 기능 장애를 갖는 개체(우측)에서 상이한 글로빈 쇄에 대한 총 헤모글로빈(y-축) 대 임신 주령 및 출생 후 주령(x-축)의 퍼센트의 예시한다. 문헌[Cecil Medicine 23rd ed., Lee W. Goldman, Dennis A. Ausiello. W.B. Saunders Elsevier 2008]의 챕터 167의 도 167-2로부터 채택되고 변형된다.
도 2는 인간 BCL11A(S, L 및 XL)의 3가지 주요 동종체의 크기를 변경하지 않은 개략도를 도시한다. 엑손을 5'으로부터 3'으로 각각의 동종체에서 발견되는 만큼 표지하였다.
도 3은 25 μM의 농도에서 BCL11A를 표적하는 401 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 REH 세포에서의 BCL11A-XL mRNA 발현의 억제를 예시한다.
도 4a 및 4b는 0.0064 내지 20 μM의 올리고뉴클레오티드 농도에서 BCL11A를 표적하는 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 REH 세포에서의 BCL11A-XL mRNA 발현의 억제를 예시한다.
도 5는 0.25 내지 60 μM의 올리고뉴클레오티드 농도에서 BCL11A를 표적하는 올리고 4(도 5a) 및 5(도 5b)로부터 설계된 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 REH 세포에서의 BCL11A-XL mRNA 발현의 억제를 예시한다.
도 6은 0.25 내지 60 μM의 농도에서 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 REH 세포에서의 BCL11A mRNA 발현의 주요 동종체(S, L, 및 XL)의 억제를 예시한다. BCL11A XL, L 및 S 동종체의 mRNA의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 농도에 대하여 각각 좌측, 중간 및 우측 컬럼에 도시된다.
도 7은 0.08 내지 20 μM의 농도에서 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 마우스 MPC-11 세포에서의 마우스 BCL11A mRNA 발현의 억제를 예시한다. 마우스 BCL11A의 모든 동종체(BCL11A-All) 및 동종체 L(BCL11A-L)의 측정은 각각의 처리군 내의 각각의 농도에 대하여 각각 좌측 및 우측 컬럼에 예시된다.
도 8은 BCL11A를 표적하는 15 mg/kg의 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여한 암컷 NMRI 마우스의 군의 골수(위) 및 비장(아래)에서 BCL11A mRNA 발현의 억제를 예시한다. 골수에 대한 측정은 각각의 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리군에 대하여 모든 동종체(좌측 컬럼) 및 동종체 L(우측 컬럼)을 포함한다.
도 9는 BCL11A를 표적하는 25 또는 15 mg/kg의 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하고 4주 후 야생형 C57BL/6 마우스의 골수에서 BCL11A mRNA의 억제를 예시한다.
도 10은 BCL11A를 표적하는 25 또는 15 mg/kg의 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하고 8주 후 야생형 C57BL/6 마우스의 골수에서 BCL11A mRNA의 억제를 예시한다.
도 11은 BCL11A를 표적하는 15 mg/kg의 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하고 8주 후 인간 β-YAC 형질전환 마우스의 골수에서 BCL11A mRNA의 억제를 예시한다.
도 12는 BCL11A를 표적하는 15 mg/kg의 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하고 8주 후 인간 β-YAC 형질전환 마우스의 Ter119⁺ 및 CD19⁺ 골수 세포군에서 BCL11A mRNA의 억제를 예시한다.
도 13은 다양한 처리 일에 정맥절개된 처리군 및 정맥절개되지 않은 처리군에서 비-인간 영장류 동물의 말초혈의 총 헤모글로빈(g/L)을 예시한다. 비히클 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군을 나타낸다.
도 14는 다양한 처리 일에 정맥절개된 처리군 및 비-정맥절개된 처리군에서 비-인간 영장류 동물의 망상 적혈구의 %를 예시한다. 비히클 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군을 나타낸다.
도 15는 연구 7주에 20 mg/kg의 비히클 대조군(식염수) 또는 후보자 올리고뉴클레오티드 4가 투여된 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 상완골 골수에서 GAPDH로 기준화된 BCL11A의 발현을 예시한다. 동종체 XL(좌측 컬럼) 및 모든 동종체(우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리 동물에 대하여 보여준다.
도 16은 연구 7주에 20 mg/kg의 비히클 대조군(식염수) 또는 후보자 올리고뉴클레오티드 4가 투여된 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 상완골 골수에서 GAPDH로 기준화된 γ- 및 β-글로빈 BCL11A의 발현을 예시한다. 인간 γ-글로빈(γ A+G ,컬럼 1), 히말라야 원숭이 γ-글로빈(HBG2, 컬럼 2), 히말라야 원숭이 β-글로빈(HBB, 컬럼 3; HBB_mH, 컬럼 4)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다.
도 17은 연구 17주에 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군에 대하여 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 골(위) 및 대퇴골(아래) 골수에서 GAPDH로 기준화된 BCL11A mRNA의 발현을 예시한다. 동종체 XL(좌측 컬럼) 및 모든 동종체(우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다.
도 18은 연구 17주에 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군에 대하여 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 상완골(위) 및 대퇴골(아래) 골수에서 GAPDH로 기준화된 γ-글로빈 mRNA의 발현을 예시한다. 인간 γ-글로빈(γ A+G, 좌측 컬럼) 및 히말라야 원숭이 γ-글로빈(HBG2, 우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다.
도 19는 17주에 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군의 상완골 골수에서 GAPDH로 기준화된 γ- 및 β-글로빈 mRNA의 발현을 예시한다. 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 좌측으로부터 우측 컬럼은 각각 인간 γ-글로빈(γ A+G), 히말라야 원숭이 γ-글로빈(HBG2), 히말라야 원숭이 β-글로빈(RhHBB), 및 히말라야 원숭이 β-글로빈(RhHBB_mH)의 측정이다.
도 20은 17주에 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군의 상완골 골수에서 GAPDH로 기준화된 γ- 및 β-글로빈 mRNA의 발현을 예시한다. 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 좌측으로부터 우측 컬럼은 각각 인간 γ-글로빈(γ A+G), 히말라야 원숭이 γ-글로빈(HBG2), 히말라야 원숭이 β-글로빈(RhHBB), 및 히말라야 원숭이 β-글로빈(RhHBB_mH)의 측정이다.
도 21은 17주에 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군에서 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 상완골 골수에서 GAPDH로 기준화된 BCL11A(위) 및 γ-글로빈(아래) mRNA의 평균 발현을 예시한다. BCL11A의 동종체 XL(좌측 컬럼) 및 모든 동종체(우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다. 인간 γ-글로빈(γ A+G, 좌측 컬럼) 및 히말라야 원숭이 γ-글로빈(HBG2, 우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다.
도 22는 17주에 대조군(식염수) 및 후보자 올리고뉴클레오티드 4(10 및 20 mg/kg) 처리군에서 정맥절개된 비-인간 영장류 동물의 대퇴골 골수에서 GAPDH로 기준화된 BCL11A(위) 및 γ-글로빈(아래) mRNA의 평균 발현을 예시한다. BCL11A의 동종체 XL(좌측 컬럼) 및 모든 동종체(우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다. 인간 γ-글로빈(γ A+G, 좌측 컬럼) 및 히말라야 원숭이 γ-글로빈(HBG2, 우측 컬럼)의 측정은 각각의 처리군 내에서 각각의 동물에 대하여 보여준다.
도 23은 전체 규모(도 23a) 및 확대 규모(도 23b)에서 정맥절개된 비-인간 영장류 동물에 대한 골수에서 F-세포의 분획(‰)을 예시한다.
도 24는 전체 규모(도 24a) 및 확대 규모(도 24b)에서 정맥절개된 비-인간 영장류 동물에 대한 말초혈에서 F-세포의 분획(‰)을 예시한다.
도 25는 첫번째 투여 후 다양한 주에서 대조군(도 25a), 10 mg/kg(도 25b), 및 20 mg/kg(도 25c) 처리군에 대하여 비-인간 영장류 동물의 말초혈에서 γ-글로빈 단백질의 측정을 예시한다.
도 26은 대조군 처리된 군에서 γ-글로빈 피크(피크 1 또는 피크 2)의 각각의 시점에서 대조군의 %로서 비-인간 영장류 동물의 말초혈에서 γ-글로빈 단백질의 측정을 예시한다.
도 27은 10 mg/kg 투여 군에서 γ-글로빈 피크(피크 1 또는 피크 2)의 각각의 시점에서 대조군의 %로서 비-인간 영장류 동물의 말초혈에서 γ-글로빈 단백질의 측정을 예시한다.
도 28은 20 mg/kg 투여 군에서 γ-글로빈 피크(피크 1 또는 피크 2)의 각각의 시점에서 대조군의 %로서 비-인간 영장류 동물의 말초혈에서 γ-글로빈 단백질의 측정을 예시한다.
도 29는 야생형 마우스에서 시간에 따라 안티센스 올리고뉴클레오티드 4의 혈장 농도의 측정을 예시한다.
도 30은 야생형 마우스로부터 시간에 따라 다양한 조직에서 안티센스 올리고뉴클레오티드 4의 농도의 측정을 예시한다.
도 31은 야생형 마우스로부터 시간에 따라 다양한 조직에서 안티센스 올리고뉴클레오티드 4의 조직 농도의 측정을 예시한다.
도 32는 단일 투여 약동학적 연구에 기초하여 골수에서 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 예상된 농도의 모델을 예시한다.

정의

본 발명을 더욱 용이하게 이해하기 위해, 특정한 용어는 먼저 하기에 정의된다. 하기 용어 및 다른 용어에 대한 추가 정의는 명세서 전체에 걸쳐 제시된다.

대략 또는 약: 본원에 사용된 용어 "대략" 또는 "약"은, 관심있는 하나 이상의 값에 적용되는 바와 같이, 명시된 기준 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 명시되지 않는 한 또는 내용상 명백한 경우를 제외하고(이러한 수가 가능한 값의 100%를 초과하지 않을 수 있는 경우를 제외하고) 명시된 기준 값의 (보다 더 크거나 보다 더 작은) 방향으로 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 이하로 포함되는 값의 범위를 지칭한다.

생물학적 활성: 본원에 사용된 바와 같이, "생물학적 활성"이란 어구는 시험관내 또는 생체내의 생물학적 시스템에서(예를 들면, 유기체에서) 활성을 갖는 임의의 제제의 특징을 지칭한다. 예를 들면, 유기체에 생물학적 효과를 갖는 제제는, 유기체에 투여되는 경우, 생물학적 활성이 있는 것으로 간주된다. 특정한 실시양태에서, 단백질 또는 폴리펩티드가 생물학적 활성인 경우, 단백질 또는 폴리펩티드의 하나 이상의 생물학적 활성을 공유하는 상기 단백질 또는 폴리펩티드의 부분을 전형적으로 "생물학적 활성" 부분으로서 지칭한다.

개선하다, 증가시키다, 감소시키다 또는 억제하다: 본원에 사용된 용어 "개선하다", "증가시키다", "감소시키다", "억제하다" 또는 문법적 등가물은, 기준 측정, 예컨대, 본원에 기재된 처리의 개시 전에 동일한 개체의 측정, 또는 본원에 기재된 처리 없이 대조군 개체(또는 다중 대조군 개체)의 측정에 대한 값을 나타낸다. "대조군 개체"는 (치료된 개체 및 대조군 개체의 질병 단계가 비교가능하도록) 치료를 받는 개체와 동일한 형태의 질병을 앓고 있고 대략 동일한 연령인 개체이다.

개체, 대상체 또는 환자: 본원에 사용된 용어 "대상체", "개체" 또는 "환자"는 인간 또는 비-인간 포유류 대상체를 지칭한다. 치료받은 개체(또한 "환자" 또는 "대상체"로서 지칭됨)는 질병을 앓고 있는 개체(태아, 유아, 소아, 청소년 또는 성인 인간)이다.

잠금 핵산(LNA): 본원에 사용된 용어 "LNA" 또는 "잠금 핵산"은 이환형 뉴클레오티드 유사체, 바람직하게는 리보스 고리의 2'과 4' 위치 사이에 가교를 갖는 이환형 뉴클레오티드 유사체(2' 내지 4' 이환형 뉴클레오티드 유사체)를 지칭한다. LNA는 문헌에서 때때로 BNA(가교된 핵산 또는 이환형 핵산)로서 지칭된다. 이는 LNA 단량체를 지칭할 수 있거나, "LNA 올리고뉴클레오티드"의 문맥에서 사용되는 경우 하나 이상의 상기 이환형 뉴클레오티드 유사체를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다.

뉴클레오티드: 본원에 사용된 용어 "뉴클레오티드"는, 당 모이어티, 염기 모이어티 및 공유 결합된 포스페이트 기를 포함하는 글리코시드를 지칭하고 2개의 천연 뉴클레오티드, 예컨대, DNA 또는 RNA, 바람직하게는 DNA, 및 변형된 당 및/또는 염기 모이어티를 포함하는 비-천연 뉴클레오티드를 포괄하고, 이는 또한 본원에서 "뉴클레오티드 유사체"로서 지칭된다. 일부 실시양태에서, 비-천연 뉴클레오티드는 변형된 당 모이어티, 예컨대, 이환형 뉴클레오티드 또는 2' 변형된 뉴클레오티드, 예컨대, 2' 치환된 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 비-천연 뉴클레오티드는 잠금 핵산(LNA)을 포함한다.

실질적인 상동성: "실질적인 상동성"이란 어구는 아미노산 또는 핵산 서열 사이의 비교를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 2개의 서열은 대응하는 위치에서 상응하는 잔기를 함유하는 경우, 일반적으로 "실질적으로 상응하는" 것으로 간주된다. 상응하는 잔기는 동일한 잔기일 수 있다. 다르게는, 상응하는 잔기는 적당하게 유사한 구조 및/또는 기능적 특성을 갖는 상이한 잔기일 수 있다. 예를 들면, 당업자에 의해 널리 공지된 바와 같이, 특정한 아미노산은 전형적으로 "소수성" 또는 "친수성" 아미노산으로서, 및/또는 "극성" 또는 "비-극성" 측쇄를 갖는 아미노산으로서 분류된다. 하나의 아미노산의 동일한 유형의 또 다른 아미노산으로의 치환은 종종 "상응하는" 치환으로 간주될 수 있다.

이 분야에 널리 공지된 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열은 상업적인 컴퓨터 프로그램에서 이용가능한 것, 예컨대, 뉴클레오티드 서열용 BLASTN 및 BLASTP, 갭 BLAST, 및 아미노산 서열용 PSI-BLAST를 포함하는 다양한 임의의 알고리즘을 사용하여 비교될 수 있다. 상기 프로그램의 예는 문헌[Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990]; [Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new Generation of protein database search programs", Nucleic acids Res. 25:3389-3402, 1997]; [Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998]; 및 [Misener, et al.,(eds.), Bioinformatics Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999]에 기재되어 있다. 상응하는 서열의 확인 이외에, 상기 언급된 프로그램은 전형적으로 상동성 정도의 지표를 제공한다. 일부 실시양태에서, 2개의 서열은, 이의 대응하는 잔기의 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 그 이상이 잔기의 관련 서열에 대하여 상응하는 경우, 실질적으로 상응하고 있는 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 완전 서열이다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17개 이상 또는 그 이상의 잔기이다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 완전 서열을 따라 인접한 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 완전 서열을 따라 불연속 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50개 이상 또는 그 이상의 잔기이다.

실질적인 동일성: "실질적인 동일성"이란 어구는 아미노산 또는 핵산 서열 사이의 비교를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 2개의 서열은 대응하는 위치에서 동일한 잔기를 함유하는 경우, 일반적으로 "실질적으로 동일한" 것으로 간주된다. 이 분야에 널리 공지된 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열은 상업적인 컴퓨터 프로그램에서 이용가능한 것, 예컨대, 뉴클레오티드 서열용 BLASTN 및 BLASTP, 갭 BLAST, 및 아미노산 서열용 PSI-BLAST 뿐만 아니라 전체 정렬용 EMBOSS needel 또는 일부 정렬용 EMBOSS Water를 포함하는 다양한 임의의 알고리즘을 사용하여 비교될 수 있다. 상기 프로그램의 예는 문헌[Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990]; [Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul et al., Nuclein acids Res. 25:3389-3402, 1997]; [Baxevanis et al., Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998]; 및 [Misener, et al.,(eds.), Bioinformatics Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999]에 기재되어 있다. 동일한 서열의 확인 이외에, 상기 언급된 프로그램은 전형적으로 동일성 정도의 지표를 제공한다. 일부 실시양태에서, 2개의 서열은 대응하는 잔기의 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 그 이상이 잔기의 관련 서열에 대하여 동일한 경우, 실질적으로 동일한 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 올리고뉴클레오티드의 완전 서열이다. 일부 실시양태에서, 관련 서열은 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50개 이상 또는 그 이상의 잔기이다.

표적 조직: 본원에 사용된 용어 "표적 조직"은 특히 간, 비장 및 골수에서 단백질 하위단위 또는 헤모글로빈을 구성하는 글로빈 쇄로부터 목적한 활성보다 적거나 결핍에 영향을 받는 임의의 조직을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 표적 조직은 글로빈 쇄, 예를 들면, α, β 또는 γ의 발현에 있어서 기형인 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 조직은 질병-관련된 병리학, 증상 또는 특징을 나타내는 조직을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 표적 조직은 간 표적 조직, 비장 표적 조직 및/또는 골수 표적 조직일 수 있다. 표적 조직의 예는 하기에 상세하게 기재되어 있다.

치료 효과량: 본원에 사용된 용어 "치료 효과량"은 임의의 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비로 치료된 대상체에서 치료 효과를 부여하는 치료제의 양을 지칭한다. 치료 효과는 객관적(즉, 일부 시험 또는 마커에 의해 측정가능함)일 수 있거나 주관적(즉, 대상체는 효과의 징후를 주거나 효과를 느낌)일 수 있다. 특히, "치료 효과량"은 목적한 질병 또는 질환을 치료하거나 개선하거나 예방하거나, 예컨대, 질병과 관련된 증상을 개선하고/하거나, 질병의 개시를 예방하거나 지연시키고/시키거나, 또한 질병의 증상의 심각도 또는 빈도를 완화함으로써 검출가능한 치료적 또는 예방적 효과를 나타내기에 효과적인 치료제 또는 조성물의 양을 지칭한다. 치료 효과량은 다중 단위 투여량을 포함할 수 있는 투여 양생법으로 통상적으로 투여된다. 임의의 특정한 치료제에 대하여, 치료 효과량(및/또는 효과적인 투여 양생법 이내에 적합한 단위 투여량)은 다른 약학 제제와 조합시 예를 들면, 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 또한, 임의의 특정한 환자에 대한 특정한 치료 효과량(및/또는 단위 투여량)는 치료될 장애 및 장애의 심각도; 이용된 특정한 약학 제제의 활성; 이용된 특정한 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이; 투여 시간, 투여 경로, 및/또는 이용된 특정한 제제의 배설률 또는 대사율; 치료 기간; 및 의학 분야에 널리 공지된 바와 같은 유사한 인자를 포함하는 다양한 인자에 따를 수 있다.

치료: 본원에 사용된 용어 "치료"(또한 "치료하다" 또는 "치료하는")는 특정한 질병, 장애 및/또는 질환(예를 들면, 헤모글로빈 기능 장애 또는 결핍, 겸상적혈구 빈혈, 지중해 빈혈)의 하나 이상의 증상 또는 특징을 부분적으로 또는 완전히 완화하고, 개선하고, 경감하고, 억제하고/하거나, 이의 개시를 지연시키고/시키거나, 이의 심각도를 감소시키고/시키거나, 이의 발생 정도를 감소시키는 치료제(예를 들면, 올리고뉴클레오티드)의 임의의 투여를 지칭한다. 상기 치료의 대상체는 관련 질병, 장애 및/또는 질환의 징후를 나타내지 않는 대상체, 및/또는 질병, 장애 및/또는 질환의 오직 초기 징후를 나타내는 대상체일 수 있다. 다르게는 또는 추가적으로, 상기 치료의 대상체는 관련 질병, 장애 및/또는 질환의 하나 이상의 확립된 징후를 나타내는 대상체일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 관련 질병의 예시적인 징후는 징후를 나타내는 환자에 따라 보통 내지 심각한 범위일 수 있는 빈혈증을 포함한다.

상세한 설명

본 발명은 특히, B-세포 CLL/림프종 11A(BCL11A) 활성을 조절하고 BCL11A와 관련된 질병, 장애 또는 질환을 치료하기 위한 개선된 조성물 및 방법을 제공한다. 이는 글로빈 유전자, 예를 들면, γ-글로빈의 증가된 발현을 야기하는 BCL11A 활성을 감소시키거나 억제하는 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명은 이상 혈색소증, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈 및 β-지중해 빈혈을 치료하는데 특히 유용하다. 특히, 본 발명은 BCL11A의 발현을 하향-조절하거나 감소시켜 BCL11A 활성을 감소시키거나 억제하는 BCL11A의 안티센스 올리고뉴클레오티드 조절제에 기초한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 인간 BCL11A 유전자의 영역 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체(예를 들면, XL, L, M, S 또는 XS)를 표적하는 인간 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드는 인간 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 연속 서열의 역 상보에 기초한 서열을 갖는다.

본 발명의 다양한 양상은 하기 섹션에서 상세하게 기재되어 있다. 하기 섹션은 본 발명을 제한하는 것을 의미하지 않는다. 각각의 섹션은 본 발명의 임의의 양상에 적용될 수 있다. 이 적용에서, "또는"의 사용은 달리 명시되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다.

BCL11A 및 관련된 질병 및 질환

인간 BCL11A 유전자는 마우스 BCL11A 단백질과 유사성을 갖는 C₂H₂ 징크 핑거 단백질을 암호화한다. BCL11A는 B 세포에서 작용하는 림프성 전사 인자이고, 최근까지 적혈구 생성시 역할은 알려지지 않았다. BCL11A는 현재 글로빈 유전자 조절에서 역할을 하는 것으로 이해되고 있고 발현은 글로빈 유전자의 발달 상의 발현과 연관되는 것으로 보인다. BCL11A는 골수의 성인 적혈구 전구 세포에서 발현되고 γ-글로빈 유전자와 역전 관계로 작용하는바, BCL11A는 γ-글로빈 생성의 억제제로서 작용한다.

BCL11A는 여러 동종체로 제시된다. 도 2는 BCL11A의 3가지 주요 동종체를 제시하고, 이는 2개의 잠재적인 3' 말단 엑손의 사용에 있어서 상이하다. BCL11A는 태아-대-성인 헤모글로빈 스위치를 조절하도록 작용하는 복합체를 형성하기 위해 다른 단백질과 관련된 것으로 알려져 있다. BCL11A는 헤모글로빈 기능 장애와 관련된 질병에 연루되어 있다. 특히, BCL11A의 억제는 γ-글로빈 발현을 상향조절하고, 결과적으로 글로빈 유전자 기능 장애를 보상할 수 있는 태아성 헤모글로빈의 생성은 이상 혈색소증, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈, β-지중해 빈혈, 등에 직면한다.

BCL11A 의 조절제

하기 실시예에서 논의된 바와 같이, 본 발명자들은 BCL11A의 하나 이상의 동종체를 표적하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 조절제를 성공적으로 확인하였다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 조절제는 도 2에 도시된 3가지 주요 동종체에 대한 통상의 영역을 표적한다. 구체적으로 본 발명자들은 BCL11A를 매우 효율적으로 하향조절하는 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 엑손 2 내의 특정한 영역을 확인하였다. 마우스 BCL11A 유전자에서 대응하는 영역(예를 들면, XL, L 또는 S)은 뉴클레오티드 517 내지 557의 범위이다. 도 3은 엑손 1, 2, 3 및 4를 가로질러 명백히 보여주고, 이 영역은 BCL11A의 발현을 감소시킬 수 있는 단일 가닥 올리고뉴클레오티드의 설계에 관한 핫스팟이다. 상기 핫스팟에 대한 지식은 우수한 효능을 갖는 올리고뉴클레오티드를 설계하는 성공 가능성을 증가시키고 치료받은 대상체에 의해 널리 용인된다.

안티센스 올리고뉴클레오티드의 설계

특히, 본 발명은 인간 BCL11A를 암호화하는 핵산 분자의 조절에 유용한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 특히, 본 발명에 적합한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 BCL11A 발현 또는 활성을 하향-조절하거나 감소시키거나, 줄이거나 억제할 수 있는 임의의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

전형적으로, 인간 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드는 인간 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체(예를 들면, XL, L 또는 S)의 서열에 기초하여 설계될 수 있다. 예를 들면, 인간 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드는 인간 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 연속 서열의 역 상보 서열과 실질적으로 동일한 서열을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 인간 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 연속 서열의 역 상보 서열과 약 50% 이상(예를 들면, 약 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상) 동일한 서열을 갖는다. 인간 BCL11A 유전자 및 마우스 BCL11A 유전자는 높은 서열 동일성을 공유하므로, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 또한 마우스 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 서열에 기초하여 설계될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 마우스 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 연속 서열의 역 상보 서열과 약 50% 이상(예를 들면, 약 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상) 동일한 서열을 갖는다.

다르게는, 인간 BCL11A 유전자의 발현을 하향-조절하거나 감소시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드는 BCL11A mRNA의 하나 이상의 동종체의 표적 영역을 혼성화(hybridization)하거나 이에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 BCL11A 유전자의 발현을 감소시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드는 엑손(예를 들면, 엑손 1, 엑손 2, 엑손 3, 엑손 4, 또는 엑손 5)에서 발견되는 BCL11A mRNA의 표적 영역을 혼성화하거나 이에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 BCL11A 유전자의 발현을 감소시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드는 인간 또는 마우스 BCL11A의 표적 영역을 혼성화하거나 이에 결합할 수 있다.

BCL11A mRNA의 표적 영역에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 혼성화는 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있음이 이해될 것이다. 혼성화는 당해 분야에 널리 공지된 바와 같이 낮은, 중간의, 및/또는 엄격한 혼성화 조건하에 수행될 수 있다. 일반적으로, 엄격한 혼성화 조건은 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자가 상보적인 핵산 서열을 갖는 분자를 확인하기 위해 사용되는 표준 혼성화 조건을 지칭한다. 엄격한 혼성화 조건은 전형적으로 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 또는 그 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 핵산 분자 사이의 결합을 허용한다. 표준 조건은 예를 들면, 문헌[Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labs Press]에 개시되어 있고, 이의 내용은 전체가 참조로서 본원에 혼입된다. 적합한 혼성화를 계산하기 위한 화학식 및 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% 또는 이하의 뉴클레오티드 미스매치를 허용하는 혼성화를 달성하기 위한 세척 조건은 당해 분야, 예를 들면, 문헌[Meinkoth et al., 1984, Anal. Biochem. 138, 267-284]에서 이용가능하고, 이의 내용은 전체가 참조로서 본원에 혼입된다. 올리고뉴클레오티드(14 내지 20 bp)와 고정화된 DNA 사이의 하이브리드는 감소된 안정성을 나타내고 이는 혼성화에 대한 최적 조건을 정의하는 경우 고려되어야 함이 이해될 것이다.

혼성화 조건의 엄중함은 완충액의 이온 강도, 뉴클레오티드의 염기 조성물, 이중(n) 나선에서 가장 짧은 쇄의 길이, 및 나선 불안정화제, 예컨대, 포름아미드의 농도에 의해 영향을 받을 수 있다. 예를 들면, 혼성화의 엄중함은 염 및/또는 포름아미드 농도를 조절하고/하거나 온도를 변화시킴으로써 변경될 수 있다. 엄중함은 혼성화 단계 동안, 또는 혼성화 세척 후에 조절될 수 있다. 서던(Southern) 또는 노던(Northern) 블롯에서 여과시 100개 초과의 상보적인 잔기를 갖는 상보적인 핵산의 혼성화에 대한 엄격한 혼성화 조건의 예는 42℃에서 헤파린(1 mg)을 갖는 50% 포르아미드이고, 혼성화를 밤새 수행한다. 엄격한 세척 조건의 예는 65℃에서 15 분 동안 0.2X SS 세척이다. 일부 실시양태에서, 높은 엄격한 세척은 낮은 엄격한 세척으로 진행되어 배경 프로브 신호를 제거한다. 예를 들면, 100개 초과의 뉴클레오티드의 이중 나선에 대한 중간 엄격한 세척의 예는 45℃에서 15 분 동안 100X SSC이다. 예를 들면, 100개 초과의 뉴클레오티드의 이중 나선에 대한 낮은 엄격한 세척의 예는 40℃에서 15 분 동안 4X SSC이다. 일반적으로, 특정한 혼성화 어세이에서 관련되지 않은 프로브에 대하여 관찰된 것보다 2X(또는 이상)의 신호 대 잡음비는 특정한 혼성화의 검출을 나타낸다.

BCL11A mRNA 동종체의 서열

상기한 바와 같이, 도 2는 3가지 주요 인간 BCL11A mRNA 동종체, 즉, 동종체 XL, L 및 S를 제시한다. 유사하게, 3가지 주요 마우스 BCL11A mRNA 동종체, 즉, 동종체 XL, L 및 S이다. 마우스 및 인간 모두에 대하여, 다른 BCL11A mRNA 동종체가 확인되었다. 예를 들면, 인간에서 대안적인 스플라이스 변이체에 기초한 여러 동종체는 앙상블 유전자 빌드 어셈블리(Ensembl Genebuild assemblies)(유럽 생물정보학 연구소 및 웰컴 트러스트 생어 연구소(European Bioinformatics Institute and Wellcome Trust Sanger Institute))에 기재되어 있고, 이는 하기 전사체 확인 번호로 확인되었다: ENST00000358510, ENST00000538214, ENST00000537768, ENST00000477659, ENST00000489516, ENST00000409351, ENST00000479026, ENST00000492272, ENST00000489183. BCL11A의 예시적인 인간 및 마우스 동종체의 서열은 엑손의 표시와 함께 서열 목록에 제시된다:

서열번호 1 = 인간 BCL11A-XL NCBI 수탁 번호 NM_022893

서열번호 2 = 인간 BCL11A-L NCBI 수탁 번호 NM_018014

서열번호 3 = 인간 BCL11A-S NCBI 수탁 번호 NM_138559

서열번호 4 = 마우스 BCL11A-XL NCBI 수탁 번호 NM_001242934

서열번호 5 = 마우스 BCL11A-L NCBI 수탁 번호 NM_016707

서열번호 6 = 마우스 BCL11A-SL NCBI 수탁 번호 NM_001159289

서열번호 7 = 마우스 BCL11A-XS NCBI 수탁 번호 NM_001159290

일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 7에 보여진 바와 같이 인간 또는 마우스 BCL11A의 하나 이상의 동종체 내의 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 7에 보여진 바와 같이 인간 또는 마우스 BCL11A 동종체의 엑손 내의 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 인간 BCL11A, 마우스 BCL11A, 또는 이들의 조합의 동종체의 엑손 내의 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 인간 BCL11A의 뉴클레오티드 1 내지 283, 284 내지 613, 또는 614 내지 715 내의 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 바람직하게는, 서열번호 1의 뉴클레오티드 1 내지 283, 284 내지 613, 또는 614 내지 715. 일부 실시양태에서, 인간 BCL11A의 뉴클레오티드 250 내지 500, 259 내지 438, 284 내지 613, 415 내지 445, 415 내지 436, 716 내지 5946, 716 내지 2458, 2459 내지 3958, 또는 뉴클레오티드 859 내지 2358 내의 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 다양한 실시양태에서, 인간 BCL11A는 서열번호 1 내지 3에 보여진 바와 같이 동종체 XL, L 및 S로부터 선택된다. 다양한 실시양태에서, 마우스 BCL11A는 서열번호 4 내지 7에 보여진 바와 같이 동종체 XL, L 및 S로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 인간 또는 마우스 BCL11A 유전자, 또는 인간 또는 마우스 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 연속 서열의 역 상보 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상 동일한 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 인간 또는 마우스 BCL11A 유전자, 또는 인간 또는 마우스 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 연속 서열의 역 상보 서열과 동일한 서열을 갖는다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 1 내지 283(엑손 1), 뉴클레오티드 284 내지 613(엑손 2), 및 뉴클레오티드 614 내지 715(엑손 3)로부터 선택된 영역 내에 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 XL(서열번호 1)의 뉴클레오티드 내에 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 XL(서열번호 1)의 뉴클레오티드 200 내지 620, 410 내지 450, 415 내지 436, 415 내지 446, 420 내지 450 내에, 또는 뉴클레오티드 716 내지 5946(엑손 4) 내에 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 L(서열번호 2)의 뉴클레오티드 내에 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 L의 뉴클레오티드 716 내지 2458(엑손 4) 또는 뉴클레오티드 2459 내지 3958(엑손 5) 내에 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 S(서열번호 3)의 뉴클레오티드 내에 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 연속 서열은 인간 BCL11A mRNA 동종체 S의 뉴클레오티드 716 내지 858(엑손 4) 또는 뉴클레오티드 859 내지 2358(엑손 5) 내에 있다.

일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 7에 보여진 바와 같이 인간 또는 마우스 BCL11A의 대응하는 영역에 실질적으로 동일한 표적 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 예를 들면, 서열번호 1 내지 7에 보여진 바와 같이 인간 또는 마우스 BCL11A의 대응하는 영역(예를 들면, 엑손 1, 2, 3, 4, 또는 5)의 표적 영역에 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 그 이상 동일한 서열을 갖는 표적 영역에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 예시적인 영역은 명세서 전반에 걸쳐 기재된다.

올리고뉴클레오티드

본 발명에 있어서 용어 "올리고뉴클레오티드"는 2개 이상의 뉴클레오티드의 공유 결합에 의해 형성된 분자를 지칭한다. 용어는 올리고머라는 용어와 상호교환적으로 사용된다. 본원에서, 단일 뉴클레오티드(단위)는 또한 단량체 또는 단위로서 지칭될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용어 "뉴클레오시드", "뉴클레오티드", "단위" 및 "단량체"는 상호교환적으로 사용된다. 뉴클레오티드 또는 단량체의 서열을 지칭하는 경우, 지칭되는 것은 염기, 예컨대, A, T, G, C 또는 U의 서열임이 인식될 것이다.

본 발명의 올리고뉴클레오티드는 인간 BCL11A 유전자 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 선택된 영역 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 80% 이상 동일한 서열을 포함하는 인간 BCL11A의 발현을 감소시킬 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 하기 표 1에 제시된 군으로부터 선택된 서열 모티프를 포함하거나 이로 이루어진다. 서열 모티프는 동일한 서열을 본질적으로 포함하거나 이로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 등급화하는 유전자에 대한 기초로서 사용될 수 있지만 예를 들면 뉴클레오티드 유사체의 수, 길이 또는 뉴클레오티드간 연결에서 달라지는 본질적인 뉴클레오티드이다.

특정한 올리고뉴클레오티드를 설계하기 위해 사용될 수 있는 서열 모티프

서열(5'-3')
ATTGCATTGTTTCCG	서열번호 63
GTTTGTGCTCGAT	서열번호 64
CATTGCATTGTTTCCG	서열번호 65
CGTTTGTGCTCGAT	서열번호 66
CGTTTGTGCTCGATAA	서열번호 67
CCGTTTGTGCTCGA	서열번호 68
CGTTTGTGCTCGA	서열번호 69
TTTGTGCTCGATAA	서열번호 70
TTGTGCTCCATAA	서열번호 71
TTTCCGTTTGTGCTCG	서열번호 72
ATTGCATTGTTTCCGT	서열번호 73
CGTTTGTGCTCGATA	서열번호 74

일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드 서열 모티프는 TCCGTTTGTGCTCGATAAA(서열번호 75), TTTGTGCTCGATAAAAATA(서열번호 76), 또는 ATTGTTTCCGTTTGTGCTC(서열번호 77)가 아니다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 개프머를 포함하거나 개프머이다.

일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드의 길이는 19개 미만, 바람직하게는 18개 미만, 더욱 바람직하게는 17개 미만 뉴클레오티드이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 뉴클레오티드 유사체를 강화하는 친화력을 포함한다.

일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 유사체는 당 변형된 뉴클레오티드, 예컨대, 2'-O-알킬-RNA 단위, 2'-OMe-RNA 단위, 2'-O-알킬-DNA, 2'-아미노-DNA 단위, 2'-플루오로-DNA 단위, LNA 단위, 아라비노 핵산(ANA) 단위, 2'-플루오로-ANA 단위, HNA 단위, INA 단위 및 2'MOE 단위로 이루어진 군으로부터 독립적으로 또는 의존적으로 선택된 당 변형된 뉴클레오티드이다.

일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 유사체는 잠금 핵산(LNA) 단위를 포함하거나 이로 이루어진다.

바람직한 실시양태에서, 올리고머는 단일 가닥 분자이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 동일한 올리고뉴클레오티드 내의 등가 영역(즉, 이중가닥 또는 헤어핀)에 상보적인, 예를 들면, 3, 4 또는 5개 이상의 인접한 뉴클레오티드에서의 짧은 영역을 포함하지 않는다. 올리고뉴클레오티드는, 일부 실시양태에서, (본질적으로) 이중 가닥이 아닐 수 있다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 본질적으로 이중 가닥이 아니고, 예컨대, siRNA가 아니다.

예시적인 안티센스 올리고뉴클레오티드

본 발명의 예시적인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 하기 표 2에 나열하였다.

다양한 실시양태에서, 본 발명에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드는 상기 표 2로부터 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열에 나타낸 12개 이상(예를 들면, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개)의 인접한 뉴클레오티드와 50% 이상(예를 들면, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상) 동일한 서열을 갖는 그러한 올리고뉴클레오티드를 포함한다

다양한 실시양태에서, 본 발명에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드는 상기 표 2로부터 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열과 서열 50% 이상(예를 들면, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상) 동일한 서열을 갖는 그러한 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

길이

본 발명에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드는 임의의 적합한 길이일 수 있음이 이해될 것이다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 총 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 인접한 뉴클레오티드의 인접한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 총 10 내지 18, 10 내지 17, 10 내지 16, 10 내지 15, 10 내지 14, 10 내지 13, 10 내지 12, 11 내지 17, 11 내지 16, 11 내지 15, 11 내지 14, 11 내지 13, 12 내지 17, 12 내지 16, 12 내지 15, 또는 12 내지 14개 뉴클레오티드의 인접한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 10 내지 16 또는 12 내지 16개 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 22개 이하, 예컨대, 20개 이하, 예컨대, 19개 이하, 예컨대, 15, 16, 17 또는 18개 뉴클레오티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 20개 이하 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이는 18개 미만 뉴클레오티드이다. 이론에 얽매이지 않고, 범위가 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 인접한 뉴클레오티드 서열 길이에 대하여 제시된 경우, 상기 범위는 범위에 제공된 길이의 상한치, 예를 들면 10 및 30을 포함하는 10 내지 30을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

본원에서 확인된 뉴클레오티드 서열에 대한 "퍼센트(%) 핵산 서열 동일성"은 기준 서열에서, 필요한 경우, 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위한 뉴클레오티드와 동일한 후보자 서열의 뉴클레오티드의 퍼센트로서 정의된다. 퍼센트 서열 동일성은 2개의 서열 사이에 동일하게 정렬된 핵산의 수를 계수하고, 올리고머 중 단량체의 총 수로 나누고, 100을 곱하여 계산될 수 있다. 상기 비교에서, 갭이 존재하는 경우, 상기 갭은 단지, 갭 내의 핵산의 수가 정렬된 서열 사이에, 예를 들면, 본 발명의 올리고뉴클레오티드와 표적 영역 사이에 상이한 영역보다 오히려 미스매치인 것이 바람직하다. 퍼센트 핵산 서열 동일성을 측정하는 목적을 위한 정렬은 당해 분야 내의 다양한 방식, 예를 들면, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대, BLAST, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어뿐만 아니라 전체 정렬용 EMBOSS needel 또는 부분 정렬용 EMBOSS Water를 사용하여 수행될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대하여 최대 정렬을 달성하기 위해 요구되는 임의의 알고리즘을 포함하는 정렬을 측정하기 위한 적합한 파라미터를 결정할 수 있다. 바람직하게는, WU-BLAST-2 소프트웨어를 사용하여 아미노산 서열 동일성을 측정한다(문헌[Altschul et al., Methods in Enzymology, 266, 460-480(1996)]; http://blast.wustl/edu/blast/README.html). WU-BLAST-2는 여러 연구 파라미터를 사용하고, 이들 중 대부분은 디폴트 값으로 설정된다. 조정가능한 파라미터를 하기 값으로 설정한다: 중첩 스팬 = 1, 중첩 분획 = 0.125, 세계 기준(T) = 11. HSP 등급(S) 및 HSP S2 파라미터는 동적 값이고, 특정한 서열의 조성물에 따라 프로그램 그 자체에 의해 수립되지만, 최소 값은 조정될 수 있고 상기 나타낸 바와 같이 설정된다.

뉴클레오시드 및 뉴클레오시드 유사체

일부 실시양태에서, 용어 "뉴클레오시드 유사체" 및 "뉴클레오티드 유사체"는 상호교환적으로 사용된다.

본원에 사용된 용어 "뉴클레오티드"는 당 모이어티, 염기 모이어티 및 공유적으로 연결된 기(연결기), 예컨대, 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결기를 포함하는 글리코시드를 지칭하고, 2개의 천연 뉴클레오티드, 예컨대, DNA 또는 RNA, 및 변형된 당 및/또는 염기 모이어티를 포함하는 비-천연 뉴클레오티드(이는 또한 본원에서 "뉴클레오티드 유사체"로서 지칭됨)를 포괄한다. 본원에서, 단일 뉴클레오티드(단위)는 또한 단량체 또는 핵산 단위로서 지칭될 수 있다.

생화학 분야에서, 용어 "뉴클레오시드"는 당 모이어티 및 염기 모이어티를 포함하는 글리코시드를 지칭하기 위해 통상적으로 사용되고, 따라서 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 사이의 뉴클레오티드간 연결에 의해 공유적으로 연결되는 뉴클레오티드 단위를 지칭하는 경우 사용될 수 있다. 생명공학 분야에서, 용어 "뉴클레오티드"는 종종 핵산 단량체 또는 단위를 지칭하기 위해 사용되고, 올리고뉴클레오티드의 맥락에서와 같이 염기를 지칭할 수 있고, 예컨대, "뉴클레오티드 서열은 전형적으로 핵 염기 서열을 지칭한다(즉, 당 백본 및 뉴클레오시드간 결합의 존재를 내포한다). 유사하게, 특히 올리고뉴클레오티드의 경우에, 하나 이상의 뉴클레오시드간 연결기가 변형되는 경우, 용어 "뉴클레오티드"는 "뉴클레오시드"를 지칭하고, 예를 들면, 뉴클레오시드 사이의 연결의 존재 또는 특징을 구체화하는 경우 용어 "뉴클레오티드"가 사용될 수 있다.

당업자는, 올리고뉴클레오티드의 5' 말단 뉴클레오티드는 5' 말단 기를 포함할 수 있거나 포함할 수 없을지라도 5' 뉴클레오티드간 연결기를 포함하지 않음을 인지할 수 있다.

비-천연 뉴클레오티드는 변형된 당 모이어티, 예컨대, 이환형 뉴클레오티드 또는 2' 변형된 뉴클레오티드, 예컨대, 2' 치환된 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드를 포함한다.

"뉴클레오티드 유사체"는 당 및/또는 염기 모이어티의 변형으로 인한 천연 뉴클레오티드, 예컨대, DNA 또는 RNA 뉴클레오티드의 변이체이다. 유사체는 원칙적으로 올리고뉴클레오티드의 맥락에서 천연 뉴클레오티드에 단지 "침묵" 또는 "등가"일 수 있는 바, 올리고뉴클레오티드는 표적 유전자 발현을 억제하기 위해 작용하는 중에 기능적인 효과가 없다. 그럼에도 불구하고 상기 "등가" 유사체는 예를 들면, 용이하거나 비용 효과적으로 제조되거나, 저장 또는 제조 조건에 더욱 안정하거나, 태그 또는 라벨을 나타내는 경우 유용할 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 유사체는 올리고뉴클레오티드가 예를 들면 표적에 대하여 증가된 결합 친화력 및/또는 세포 내 뉴클레아제에 대한 증가된 내성 및/또는 세포로의 수송의 증가된 용이성을 생성함으로써 발현을 억제하기 위해 작용하는 중에 기능적인 효과를 가질 것이다. 뉴클레오시드 유사체의 특정한 예는 예를 들면, 문헌[Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443] 및 문헌[Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213], 및 하기 도식 1 및 "잠금 핵산(LNA)" 섹션에 기재되어 있다.

[도식 1]

따라서, 올리고뉴클레오티드는 천연 뉴클레오티드, 바람직하게는 2'-데옥시뉴클레오티드(여기에서 일반적으로 "DNA"로서 지칭됨), 뿐만 아니라 가능하게는 리보뉴클레오티드(여기에서 일반적으로 "RNA"로서 지칭됨), 또는 상기 천연 뉴클레오티드 및 하나 이상의 비-천연 뉴클레오티드, 즉, 뉴클레오티드 유사체의 조합의 단순 서열을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 상기 뉴클레오티드 유사체는 표적 서열에 대한 올리고머의 친화력을 적합하게 강화할 수 있다. 적합하고 바람직한 뉴클레오티드 유사체의 예는 WO 2007/031091에 의해 제공되거나 본원에서 언급된다.

올리고머 중 친화력-강화 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, LNA 또는 2'-치환된 당의 혼입은 특이적으로 결합하는 올리고머의 크기를 감소시킬 수 있고, 또한 비특이적 또는 비정상적 결합이 발생하기 전에 올리고뉴클레오티드의 크기를 상한치로 감소시킬 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 1개 이상의 뉴클레오시드 유사체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 2개 이상의 뉴클레오티드 유사체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 3 내지 8개 뉴클레오티드 유사체, 예를 들면, 6 또는 7개 뉴클레오티드 유사체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 뉴클레오티드 유사체 중 하나 이상은 잠금 핵산(LNA)이고; 예를 들면 뉴클레오티드 유사체 중 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상 또는 8개는 LNA일 수 있다. 일부 실시양태에서, 모든 뉴클레오티드 유사체는 LNA일 수 있다.

오직 뉴클레오티드로 이루어진 바람직한 뉴클레오티드 서열 모티프 또는 뉴클레오티드 서열을 지칭하는 경우, 서열에 의해 한정되는 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 상기 서열에 존재하는 하나 이상의 뉴클레오티드, 예컨대, LNA 단위 또는 다른 뉴클레오티드 유사체(이는 올리고머/표적 이중의 이중 안정성/T_m을 높인다)(즉, 친화력 강화 뉴클레오티드 유사체) 대신에 대응하는 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있음이 본 개시내용을 읽는 당업자에 의해 인식될 것이다.

일부 실시양태에서, 올리고머의 뉴클레오티드 서열과 표적 서열 사이의 임의의 미스매치는 바람직하게는 친화력 강화 뉴클레오티드 유사체의 외부 영역, 예컨대, "개프머 설계" 섹션에서 언급된 바와 같은 영역 B 또는 Y, 및/또는 "개프머 설계" 섹션에서 언급된 바와 같은 영역 D, 및/또는 올리고뉴클레오티드에서 비-변형된, 예컨대, DNA 뉴클레오티드의 위치에서, 및/또는 인접한 뉴클레오티드 서열에 대한 5' 또는 3' 영역에서 발견되었다.

뉴클레오티드의 상기 변형의 예는 당 모이어티를 변형시켜 2'-치환기 기를 제공하거나 결합 친화력을 강화하는 이환형 구조를 생성하는 것을 포함하고 또한 증가된 뉴클레아제 내성을 제공할 수 있다.

바람직한 뉴클레오티드 유사체는 LNA, 예컨대, 옥시-LNA(예컨대, β-D-옥시-LNA, 및 α-L-옥시-LNA), 및/또는 아미노-LNA(예컨대, β-D-아미노-LNA 및 α-L-아미노-LNA) 및/또는 티오-LNA(예컨대, β-D-티오-LNA 및 α-L-티오-LNA) 및/또는 ENA(예컨대, β-D-ENA 및 α-L-ENA)이다. β-D-옥시-LNA가 가장 바람직하다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 내에(예컨대, "개프머 설계" 섹션에서 언급된 영역 A 및 C에) 존재하는 뉴클레오티드 유사체는 예를 들면, 2'-O-알킬-RNA 단위, 2'-OMe-RNA 단위, 2'-O-알킬-DNA, 2'-아미노-DNA 단위, 2'-플루오로-DNA 단위, LNA 단위, 아라비노 핵산(ANA) 단위, 2'-플루오로-ANA 단위, HNA 단위, INA(개입 핵산; 참조로서 본원에 언급된 문헌[Christensen, 2002. Nucl. Acids. Res. 2002 30: 4918-4925] 참조) 단위 및 2'MOE 단위로부터 독립적으로 선택된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이의 인접한 뉴클레오티드 서열에 존재하는 상기 유형의 뉴클레오티드 유사체 중 1개만이 존재한다.

일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 유사체는 2'-O-메톡시에틸-RNA(2'MOE), 2'-플루오로-DNA 단량체 또는 LNA 뉴클레오티드 유사체이고, 상기와 같이 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 상기 3가지 유형의 유사체로부터 독립적으로 선택된 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있거나, 상기 3가지 유형으로부터 선택된 유사체 유형 중 1개 유형만을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 뉴클레오티드 유사체 중 하나 이상은 2'-MOE-RNA, 예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 2'-MOE-RNA 뉴클레오티드 단위이다. 일부 실시양태에서, 상기 뉴클레오티드 유사체 중 하나 이상은 2'-플루오로 DNA, 예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 2'-플루오로-DNA 뉴클레오티드 단위이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 잠금 핵산(LNA) 단위, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개 LNA 단위, 예컨대, 3 내지 7개 또는 4 내지 8개 LNA 단위, 또는 3, 4, 5, 6 또는 7개 LNA 단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 모든 뉴클레오티드 유사체는 LNA이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 β-D-옥시-LNA, 및 하나 이상의 하기 LNA 단위 둘다 또는 이의 조합을 포함할 수 있다: β-D 또는 α-L 정렬 중 티오-LNA, 아미노-LNA, 옥시-LNA, 5'-메틸-LNA 및/또는 ENA. 일부 실시양태에서, 모든 LNA 사이토신 단위는 5'-메틸-사이토신이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 뉴클레오티드 유사체(바람직하게는 LNA) 및 DNA 단위를 둘다 포함할 수 있다. 바람직하게는 뉴클레오티드 유사체(바람직하게는 LNA) 및 DNA 단위를 모두 합한 수는 10 내지 25, 예컨대, 10 내지 24, 바람직하게는 10 내지 20, 예컨대, 10 내지 18, 더욱더 바람직하게는 12 내지 16이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열, 예컨대, 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체(바람직하게는 LNA) 및 잔여 뉴클레오티드 단위로 이루어진 인접한 뉴클레오티드 서열은 DNA 단위이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 오직 LNA 뉴클레오티드 유사체 및 임의적으로 뉴클레오티드간 연결, 예컨대, 포스포로티오에이트로 변형된 천연 뉴클레오티드(예컨대, RNA 또는 DNA, 가장 바람직하게는 DNA 뉴클레오티드)를 포함한다.

용어 "핵염기"는 뉴클레오티드의 염기 모이어티를 지칭하고, 천연 및 비-천연 변이체를 둘다 포괄한다. 따라서, "핵염기"는 공지된 퓨린 및 피리미딘 헤테로환형 뿐만 아니라 이의 헤테로환식 유사체 및 호변이성질체를 포괄한다.

핵염기의 예는 비제한적으로 아데닌, 구아닌, 사이토신, 티미딘, 우라실, 잔틴, 하이포잔틴, 5-메틸사이토신, 이소사이토신, 슈도이소사이토신, 5-브로모우라실, 5-프로핀일우라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 다이아미노퓨린, 및 2-클로로-6-아미노퓨린을 포함한다.

일부 실시양태에서, 올리고머에 존재하는 핵염기 중 하나 이상은 5-메틸사이토신, 이소사이토신, 슈도이소사이토신, 5-브로모우라실, 5-프로핀일우라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 다이아미노퓨린, 및 2-클로로-6-아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형된 핵염기이다.

잠금 핵산( LNA )

용어 "LNA"는 "잠금 핵산"으로서 공지된 이환형 뉴클레오시드 유사체를 지칭한다. 이는 LNA 단량체로 지칭될 수 있거나, "LNA 올리고뉴클레오티드"의 맥락에서 사용되는 경우, LNA는 하나 이상의 상기 이환형 뉴클레오티드 유사체를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. LNA 뉴클레오티드는 리보스 당 고리(예를 들면 하기 기재된 바와 같이 2가 라디칼 R⁴ ^*-R² ^*로서 보여진 바와 같음)의 C2'과 C4' 사이의 연결기(예컨대, 가교)의 존재를 특징으로 한다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드에 사용된 LNA는 바람직하게는 하기 화학식 I의 구조 및 이의 염기 염 및 산 부가 염을 갖는다:

[화학식 I]

상기 식에서,

모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있고;

X는 -O-, -S-, -N(R^N ^*)-, -C(R⁶R⁶ ^*)-, 예컨대, 일부 실시양태에서, -O-로부터 선택되고;

B는 수소, 임의적으로 치환된 C₁ _-4-알콕시, 임의적으로 치환된 C₁ _-4-알킬, 임의적으로 치환된 C₁ _-4-아실옥시, 핵염기, 예컨대 천연 핵염기 및 핵염기 유사체, DNA 삽입체, 광화학적으로 활성인 기, 열화학적으로 활성인 기, 킬레이팅 기, 리포터 기, 및 리간드로부터 선택되고, 바람직하게는, B는 핵염기 또는 핵염기 유사체이고;

P는 인접한 단량체에 대한 뉴클레오티드간 연결, 또는 5'-말단 기, 치환기 R⁵ 또는 동일하게 적용가능한 치환기 R⁵ ^*를 임의적으로 포함하는 상기 뉴클레오티드간 연결 또는 5'-말단 기를 나타내고;

P*는 인접한 단량체에 대한 뉴클레오티드간 연결, 또는 3'-말단 기를 나타내고;

R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 -C(R^aR^b)-, -C(R^a)=C(R^b)-, -C(R^a)=N-, -O-, -Si(R^a)₂-, -S-, -SO₂-, -N(R^a)-, 및 >C=Z로부터 선택된 1 내지 4개의 기/원자로 이루어진 2가 연결기를 나타내고, 이때 Z는 -O-, -S-, 및 -N(R^a)-로부터 선택되고, R^a 및 R^b는 각각 독립적으로 수소, 임의적으로 치환된 C₁ _-12-알킬, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알켄일, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알킨일, 하이드록시, 임의적으로 치환된 C₁ _-12-알콕시, C₂ _-12-알콕시알킬, C_2-12-알켄일옥시, 카복시, C_1-12-알콕시카본일, C_1-12-알킬카본일, 포름일, 아릴, 아릴옥시-카본일, 아릴옥시, 아릴카본일, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카본일, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카본일, 아미노, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C₁ _-6-알킬)-아미노-카본일, 아미노-C₁ _-6-알킬-아미노카본일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, C_1-6-알킬-카본일아미노, 카브아미도, C₁ _-6-알칸오일옥시, 설포노, C₁ _-6-알킬설폰일옥시, 니트로, 아지도, 설판일, C₁ _-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입체, 광화학적으로 활성인 기, 열화학적으로 활성인 기, 킬레이팅 기, 리포터 기, 및 리간드로부터 선택되고, 상기 아릴 및 헤테로아릴은 임의적으로 치환될 수 있고, 2개의 같은 자리 치환기 R^a 및 R^b는 함께 임의적으로 치환된 메틸렌(=CH₂)을 나타낼 수 있고, 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있고;

존재하는 치환기 R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*, R⁶ 및 R⁶ ^*는 각각 독립적으로 수소, 임의적으로 치환된 C₁ _-12-알킬, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알켄일, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알킨일, 하이드록시, C_1-12-알콕시, C_2-12-알콕시알킬, C_2-12-알켄일옥시, 카복시, C_1-12-알콕시카본일, C_1-12-알킬카본일, 포름일, 아릴, 아릴옥시-카본일, 아릴옥시, 아릴카본일, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카본일, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카본일, 아미노, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)-아미노-카본일, 아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, C_1-6-알킬-카본일아미노, 카브아미도, C_1-6-알칸오일옥시, 설포노, C₁ _-6-알킬설폰일옥시, 니트로, 아지도, 설판일, C₁ _-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입체, 광화학적으로 활성인 기, 열화학적으로 활성인 기, 킬레이팅 기, 리포터 기, 및 리간드로부터 선택되고, 상기 아릴 및 헤테로아릴은 임의적으로 치환될 수 있고, 2개의 같은 자리 치환기는 함께 옥소, 티옥소, 이미노, 또는 임의적으로 치환된 메틸렌을 나타낼 수 있고;

R^N은 수소 및 C₁ _-4-알킬로부터 선택되고, 2개의 인접한(다른 자리) 치환기는 이중 결합을 야기하는 추가 결합을 나타낼 수 있고;

R^N ^*는, 존재하고 2가 라디칼에 수반되지 않는 경우, 수소 및 C₁ _-4-알킬로부터 선택된다.

모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 C(R^aR^b)-C(R^aR^b)-, C(R^aR^b)-O-, C(R^aR^b)-NR^a-, C(R^aR^b)-S-, 및 C(R^aR^b)-C(R^aR^b)-O-로 이루어진 군으로부터 선택된 군으로 이루어진 2가 라디칼을 나타내고, 이때 R^a 및 R^b는 각각 임의적으로 독립적으로 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, R^a 및 R^b는 임의적으로 수소 및 C₁ _- ₆알킬, 예컨대, 메틸, 예컨대, 수소로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 R- 또는 S-정렬에서 2가 라디칼 -O-CH(CH₂OCH₃)-(2'O-메톡시에틸 이환형 핵산, 문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem])을 나타낸다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 R- 또는 S-정렬에서 2가 라디칼 -O-CH(CH₂CH₃)-(2'O-에틸 이환형 핵산, 문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem])을 나타낸다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 R- 또는 S-정렬에서 2가 라디칼 -O-CH(CH₃)-을 나타낸다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 2가 라디칼 -O-CH₂-O-CH₂-(문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem])를 나타낸다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 2가 라디칼 -O-NR-CH₃-(문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem])을 나타낸다.

일부 실시양태에서, LNA 단위는 하기 기로부터 선택된 구조를 갖는다:

일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C_1-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C₁ _-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다.

일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소이다.

일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³은 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C_2-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C₁ _-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다.

일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³은 수소이다.

일부 실시양태에서, R⁵ 및 R⁵ ^*는 각각 독립적으로 H, -CH₃, -CH₂-CH₃,- CH₂-O-CH₃, 및 -CH=CH₂로 이루어진 군으로부터 선택된다. 적합한 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 수소이고, 다른 기(각각 R⁵ 또는 R⁵ ^*)는 C₁ _-5알킬, C₂ _-6알켄일, C_2-6알킨일, 치환된 C₁ _-6알킬, 치환된 C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알킨일 또는 치환된 아실(-C(=O)-)로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 각각의 치환된 기는 할로겐, C_1-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일, 치환된 C₂ _-6알킨일, OJ₁, SJ₁, NJ₁J₂, N₃, COOJ₁, CN, O-C(=O)NJ₁J₂, N(H)C(=NH)NJ₁J₂ 및 N(H)C(=X)N(H)J₂로부터 독립적으로 선택된 치환기로 일치환되거나 다치환되고, 이때 X는 O 또는 S이고; J₁ 및 J₂는 각각 독립적으로 H, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일, 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6아미노알킬, 치환된 C₁ _-6아미노알킬 또는 보호기이다. 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 치환된 C₁ _-6알킬이다. 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 치환된 메틸렌이고, 이때 바람직한 치환기는 F, NJ₁J₂, N₃, CN, OJ₁, SJ₁, O-C(=O)NJ₁J₂, N(H)C(=NH)NJ, J₂ 및 N(H)C(O)N(H)J₂로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, J₁ 및 J₂는 각각 독립적으로 H 또는 C₁ _-6알킬이다. 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 메틸, 에틸 또는 메톡시메틸이다. 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 메틸이다. 추가 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 에틸렌일이다. 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 치환된 아실이다. 일부 실시양태에서, R⁵ 또는 R⁵ ^* 중 하나는 C(=O)NJ₁J₂이다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다. 상기 5' 변형된 이환형 뉴클레오티드는 WO 2007/134181에 개시되어 있고, 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다.

일부 실시양태에서, B는 핵염기, 예컨대 핵염기 유사체 및 천연 핵염기, 예컨대, 퓨린 또는 피리미딘, 또는 치환된 퓨린 또는 치환된 피리미딘, 예컨대, 본원에서 언급된 핵염기, 예컨대, 아데닌, 사이토신, 티민, 아데닌, 우라실, 및/또는 변형된 또는 치환된 핵염기, 예컨대, 5-티아졸로-우라실, 2-티오-우라실, 5-프로핀일-우라실, 2'티오-티민, 5-메틸 사이토신, 5-티오졸로-사이토신, 5-프로핀일-사이토신, 및 2,6-다이아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 핵염기이다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 -C(R^aR^b)-O-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-O-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-C(R^eR^f)-O-, -C(R^aR^b)-O-C(R^cR^d)-, -C(R^aR^b)-O-C(R^cR^d)-O-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-C(R^eR^f)-, -C(R^a)=C(R^b)-C(R^cR^d)-, -C(R^aR^b)-N(R^c)-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)- N(R^e)-, -C(R^aR^b)-N(R^c)-O-, -C(R^aR^b)-S- 및 -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-S-로부터 선택된 2가 라디칼을 나타내고, 이때 R^a, R^b, R^c, R^d, R^e 및 R^f는 각각 독립적으로 수소, 임의적으로 치환된 C₁ _-12-알킬, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알켄일, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알킨일, 하이드록시, C₁ _-12-알콕시, C₂ _-12-알콕시알킬, C₂ _-12-알켄일옥시, 카복시, C₁ _-12-알콕시카본일, C₁ _-12-알킬카본일, 포름일, 아릴, 아릴옥시-카본일, 아릴옥시, 아릴카본일, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카본일, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카본일, 아미노, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)-아미노-카본일, 아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, C_1-6-알킬-카본일아미노, 카브아미도, C_1-6-알칸오일옥시, 설포노, C_1-6-알킬설폰일옥시, 니트로, 아지도, 설판일, C_1-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입체, 광화학적으로 활성인 기, 열화학적으로 활성인 기, 킬레이팅 기, 리포터 기, 및 리간드로부터 선택되고, 상기 아릴 및 헤테로아릴은 임의적으로 치환될 수 있고, 2개의 같은 자리 치환기 R^a 및 R^b는 함께 임의적으로 치환된 메틸렌(=CH₂)을 나타낼 수 있다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 -CH₂-O-, -CH₂-S-, -CH₂-NH-, -CH₂-N(CH₃)-, -CH₂-CH₂-O-, -CH₂-CH(CH₃)-, -CH₂-CH₂-S-, -CH₂-CH₂-NH-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-O-, -CH₂-CH₂-CH(CH₃)-, -CH=CH-CH₂-, -CH₂-O-CH₂-O-, -CH₂-NH-O-, -CH₂-N(CH₃)-O-, -CH₂-O-CH₂-, -CH(CH₃)-O-, -CH(CH₂-O-CH₃)-O- 및/또는 -CH₂-CH₂-, 및 -CH=CH-로부터 선택된 2가 라디칼(2가 기)을 나타낸다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 2가 라디칼 C(R^aR^b)-N(R^c)-O-를 나타내고, 이때 R^a 및 R^b는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C_2-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C₁ _-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬, 예컨대, 수소로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; R^c는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C₁ _-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬, 예컨대, 수소로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 2가 라디칼 C(R^aR^b)-O-C(R^cR^d)-O-를 나타내고, 이때 R^a, R^b, R^c 및 R^d는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _- ₆알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C₁ _-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬, 예컨대, 수소로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 2가 라디칼 -CH(Z)-O-를 형성하고, 이때 Z는 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일, 치환된 C₁ _-6알킬, 치환된 C₂ _-6알켄일, 치환된 C_2-6알킨일, 아실, 치환된 아실, 치환된 아미드, 티올 또는 치환된 티오로 이루어진 군으로부터 선택되고; 상기 치환된 기는 각각 독립적으로 할로겐, 옥소, 하이드록실, OJ₁, NJ₁J₂, SJ₁, N₃, OC(=X)J₁, OC(=X)NJ₁J₂, NJ³C(=X)NJ₁J₂ 및 CN으로부터 독립적으로 선택된 임의적으로 보호된 치환기로 일치환되거나 다치환되고, J₁, J₂ 및 J₃은 각각 독립적으로 H 또는 C₁ _-6알킬이고, X는 O, S 또는 NJ₁이다. 일부 실시양태에서, Z는 C₁ _-6알킬 또는 치환된 C₁ _-6알킬이다. 일부 실시양태에서, Z는 메틸이다. 일부 실시양태에서, Z는 치환된 C₁ _-6알킬이다. 일부 실시양태에서, 상기 치환기는 C_1-6알콕시이다. 일부 실시양태에서, Z는 CH₃OCH₂-이다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다. 상기 이환형 뉴클레오티드는 US 7,399,845에 개시되어 있고, 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소이다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³ ^*은 수소이고, R⁵ 및 R⁵ ^* 중 하나 또는 둘다는 상기 언급되고 WO 2007/134181에서와 같이 수소가 아닐 수 있다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 가교에서 치환된 아미노 기를 포함하는, 예컨대, 2가 라디칼 -CH₂-N( R^c)-로 이루어지거나 이를 포함하는 2가 라디칼을 나타내고, 이때 R^c는 C₁ _-12알킬옥시이다. 일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 2가 라디칼 -Cq₃q₄-NOR-을 나타내고, q₃ 및 q₄는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C_1-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 상기 치환된 기는 각각 독립적으로 할로겐, OJ₁, SJ₁, NJ₁J₂, COOJ₁, CN, O-C(=O)NJ₁J₂, N(H)C(=NH)N J₁J₂ 및 N(H)C(=X=N(H)J₂로부터 독립적으로 선택된 치환기로 일치환되거나 다치환되고, X는 O 또는 S이고; J₁ 및 J₂는 각각 독립적으로 H, C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일, C_1-6아미노알킬 또는 보호기이다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다. 상기 이환형 뉴클레오티드는 WO 2008/150729에 개시되어 있고, 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C₁ _-6알콕실, 치환된 C₁ _-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C_1-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소이다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³은 수소이고 R⁵ 및 R⁵ ^* 중 하나 또는 둘다는 상기 언급되고 WO 2007/134181에서와 같이 수소가 아닐 수 있다. 일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R² ^*는 함께 2가 라디칼(2가 기) C(R^aR^b)-O-를 나타내고, 이때 R^a 및 R^b는 각각 독립적으로 할로겐, C₁-C₁₂ 알킬, 치환된 C₁-C₁₂ 알킬, C₂-C₁₂ 알켄일, 치환된 C₂-C₁₂ 알켄일, C₂-C₁₂ 알킨일, 치환된 C₂-C₁₂ 알킨일, C₁-C₁₂ 알콕시, 치환된 C₁-C₁₂ 알콕시, OJ₁ SJ₁, SOJ₁, SO₂J₁, NJ₁J₂, N₃, CN, C(=O)OJ₁, C(=O)NJ₁J₂, C(=O)J₁, O-C(=O)NJ₁J₂, N(H)C(=NH)NJ₁J₂, N(H)C(=O)NJ₁J₂ 또는 N(H)C(=S)NJ₁J₂이거나; R^a 및 R^b는 함께 =C(q₃)(q₄)이고; q₃ 및 q₄는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C₁-C₁₂알킬 또는 치환된 C₁-C₁₂ 알킬이고; 치환된 기는 각각 독립적으로 할로겐, C₁-C₆ 알킬, 치환된 C₁-C₆ 알킬, C₂- C₆ 알켄일, 치환된 C₂-C₆ 알켄일, C₂-C₆ 알킨일, 치환된 C₂-C₆ 알킨일, OJ₁, SJ₁, NJ₁J₂, N₃, CN, C(=O)OJ₁, C(=O)NJ₁J₂, C(=O)J₁, O-C(=O)NJ₁J₂, N(H)C(=O)NJ₁J₂ 및 N(H)C(=S)NJ₁J₂로부터 독립적으로 선택된 치환기로 일치환되거나 다치환되고; J₁ 및 J₂는 각각 독립적으로 H, C1-C₆ 알킬, 치환된 C1-C₆ 알킬, C₂-C₆ 알켄일, 치환된 C₂-C₆ 알켄일, C₂-C₆ 알킨일, 치환된 C₂-C₆ 알킨일, C1-C₆ 아미노알킬, 치환된 C1-C₆ 아미노알킬 또는 보호기이다. 상기 화합물은 WO 2009/006478A에 개시되어 있고, 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다.

일부 실시양태에서, R⁴ ^* 및 R²는 2가 라디칼-Q-를 형성하고, 이때 Q는 C(q₁)(q₂)C(q₃)(q₄), C(q₁)=C(q₃), C[=C(q₁)(q₂)]-C(q₃)(q₄) 또는 C(q₁)(q₂)-C[=C(q₃)(q₄)]이고; q₁, q₂, q₃, q₄는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C₁ _-12알킬, 치환된 C_1-12알킬, C₂ _-12알켄일, 치환된 C₁ _-12알콕시, OJ₁, SJ₁, SOJ₁, SO₂J₁, NJ₁J₂, N₃, CN, C(=O)OJ₁, C(=O)-NJ₁J₂, C(=O) J₁, -C(=O)NJ₁J₂, N(H)C(=NH)NJ₁J₂, N(H)C(=O)NJ₁J₂ 또는 N(H)C(=S)NJ₁J₂이고; J₁ 및 J₂는 각각 독립적으로 H, C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, C₂ _-6 알킨일, C₁ _-6 아미노알킬 또는 보호기이고; 임의적으로 Q가 C(q₁)(q₂)(q₃)(q₄)이고 q₃ 또는 q₄ 중 하나가 CH₃이면, 하나 이상의 q₃ 또는 q₄ 중 다른 하나 또는 q₁ 및 q₂ 중 하나는 수소가 아니다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소이다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다. 상기 이환형 뉴클레오티드 WO 2008/154401에 개시되어 있고, 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소, 할로겐, C₁ _-6알킬, 치환된 C₁ _-6알킬, C₂ _-6알켄일, 치환된 C₂ _-6알켄일, C₂ _-6알킨일 또는 치환된 C₂ _-6알킨일, C_1-6알콕실, 치환된 C_1-6알콕실, 아실, 치환된 아실, C₁ _-6아미노알킬 또는 치환된 C₁ _-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, R^1*, R², R³, R⁵, R⁵ ^*는 수소이다. 일부 실시양태에서, R¹ ^*, R², R³은 수소이고 R⁵ 및 R^5* 중 하나 또는 둘다는 상기 언급되고 WO 2007/134181 또는 WO 2009/067647에서와 같이 수소가 아닐 수 있다(α-L-이환형 핵산 유사체).

추가 이환형 뉴클레오시드 유사체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드에서 이의 용도는 WO 2011/115818, WO 2011/085102, WO 2011/017521, WO 09/100320, WO 2010/036698, WO 2009/124295 및 WO 2009/006478에 개시되어 있다. 상기 뉴클레오시드 유사체는 일부 양상에서 본 발명의 화합물에 유용할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드에 사용된 LNA는 바람직하게는 하기 화학식 II의 구조를 갖는다:

[화학식 II]

상기 식에서,

Y는 -O-, -CH₂O-, -S-, -NH-, N(R^e) 및/또는 -CH₂-로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Z 및 Z^*는 뉴클레오티드간 연결, R^H, 말단 기 또는 보호기 중에서 독립적으로 선택되고;

B는 천연 또는 비-천연 뉴클레오티드 염기 모이어티(핵염기)를 구성하고, R^H는 수소 및 C₁ _-4-알킬로부터 선택되고;

R^a, R^b R^c, R^d 및 R^e는 임의적으로 수소, 임의적으로 치환된 C₁ _-12-알킬, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알켄일, 임의적으로 치환된 C₂ _-12-알킨일, 하이드록시, C₁ _-12-알콕시, C₂ _-12-알콕시알킬, C₂ _-12-알켄일옥시, 카복시, C_1-12-알콕시카본일, C_1-12-알킬카본일, 포름일, 아릴, 아릴옥시-카본일, 아릴옥시, 아릴카본일, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카본일, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카본일, 아미노, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)-아미노-카본일, 아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, 모노- 및 다이(C_1-6-알킬)아미노-C_1-6-알킬-아미노카본일, C_1-6-알킬-카본일아미노, 카브아미도, C_1-6-알칸오일옥시, 설포노, C_1-6-알킬설폰일옥시, 니트로, 아지도, 설판일, C_1-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입체, 광화학적으로 활성인 기, 열화학적으로 활성인 기, 킬레이팅 기, 리포터 기, 및 리간드로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 아릴 및 헤테로아릴은 임의적으로 치환될 수 있고, 2개의 같은 자리 치환기 R^a 및 R^b는 함께 임의적으로 치환된 메틸렌(=CH₂)을 나타낼 수 있고, R^H는 수소 및 C₁ _-4-알킬로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, R^a, R^b R^c, R^d 및 R^e는 임의적으로 수소 및 C₁ _-6알킬, 예컨대, 메틸로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 모든 키랄 중심에 대하여, 비대칭 기는 R 또는 S 배향에서 발견될 수 있다, 예를 들면, 2개의 예시적인 입체화학 이성질체는 하기와 같이 예시될 수 있는 β-D 및 α-L 동종체를 포함한다:

특정한 예시적인 LNA 단위를 하기에 제시하였다:

용어 "티오-LNA"는 잠금 뉴클레오티드를 포함하고, 상기 화학식에서 Y는 S 및 -CH₂-S-로부터 선택된다. 티오-LNA는 β-D- 및 α-L-정렬 둘다에서 존재할 수 있다.

용어 "아미노-LNA"는 잠금 뉴클레오티드를 포함하고, 상기 화학식에서 Y는 -N(H)-, N(R)-, CH₂-N(H)- 및 -CH₂-N(R)-로부터 선택되고, 이때 R은 수소 및 C₁ _-4-알킬로부터 선택된다. 아미노-LNA는 β-D- 및 α-L-정렬 둘다에서 존재할 수 있다.

용어 "옥시-LNA"는 잠금 뉴클레오티드를 포함하고, 상기 화학식에서 Y는 -O-를 나타낸다. 옥시-LNA는 β-D- 및 α-L-정렬 둘다에서 존재할 수 있다.

용어 "ENA"는 잠금 뉴클레오티드를 포함하고, 상기 화학식에서 Y는 -CH₂-O-(여기서, -CH₂-O-의 산소 원자는 염기 B에 관해서 2'-위치에 부착된다)이다. R^e는 수소 또는 메틸이다.

일부 예시적인 실시양태에서, LNA는 β-D-옥시-LNA, α-L-옥시-LNA, β-D-아미노-LNA 및 β-D-티오-LNA, 특히 β-D-옥시-LNA로부터 선택된다.

개프머 설계

본 발명의 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 개프머이다. 개프머 올리고뉴클레오티드는 RNAse, 예컨대, RNAse H를 유도할 수 있는 뉴클레오티드의 인접한 구간, 예컨대, 본원에서 영역 B 또는 영역 Y_b로서 언급된 6 또는 7개 이상의 DNA 뉴클레오티드의 영역을 포함하는 올리고뉴클레오티드이다. RNAse H를 유도하는 영역의 길이는 5 내지 15 사이의 정수_b로 제시될 수 있다. 영역 B 또는 Y는 친화력 강화 뉴클레오티드 유사체의 영역에 의해, 예컨대, RNAse를 유도할 수 있는 뉴클레오티드의 인접한 구간으로 1 내지 6개 뉴클레오티드 유사체 5' 및 3'에 의해 5' 및 3'은 둘다 측면에 존재한다. 이러한 영역은 각각 영역 A 또는 X 및 C 또는 X_a _'으로서 지칭된다. 뉴클레오티드 유사체의 수를 _a 또는 _a'으로 제시할 수 있고, 1 내지 6개, 바람직하게는 1, 2, 3, 4 또는 5개이다.

EP 1 222 309는 RNAse H를 유도하기 위한 능력을 측정하는데 사용될 수 있는 RNAse H 활성을 측정하기 위한 시험관내 방법을 제공한다. 올리고머가 RNase H를 유도할 수 있는 것으로 간주되는 경우, 상보적인 RNA 표적과 함께 제공될 때, EP 1 222 309의 실시예 91 내지 95에 제공된 방법론을 사용하여, 동일한 염기 서열을 갖지만 올리고뉴클레오티드 중 모든 단량체 사이에 포스포로에트에이트 연결기를 갖고 2' 치환이 없는 오직 DNA 단량체를 함유하는 오직 DNA 올리고뉴클레오티드를 사용하여 측정된 초기 속도의 1% 이상, 예컨대, 5% 이상, 예컨대, 10% 이상, 또는 20% 초과의 초기 속도를 갖는다(pmol/l/분으로 측정됨).

일부 실시양태에서, 올리고머가 본질적으로 RNAse H를 유도할 수 없는 것으로 간주되는 경우, 상보적인 RNA 표적, 및 RNAse H와 함께 제공될 때, RNAse H 초기 속도는, EP 1 222 309의 실시예 91 내지 95에 제공된 방법론을 사용하여 올리고뉴클레오티드 중 모든 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 연결기를 갖고 2' 치환이 없는 오직 등가 DNA 올리고뉴클레오티드를 사용하여 측정된 초기 속도의 1% 미만, 예컨대 5% 미만, 예컨대 10% 미만 또는 20% 미만이다(pmol/l/분으로 측정됨).

다른 실시양태에서, 올리고머가 RNAse H를 유도할 수 있는 것으로 간주되는 경우, 상보적인 RNA 표적, 및 RNAse H와 함께 제공될 때, RNAse H 초기 속도는, EP 1 222 309(참조로서 본원에 혼입됨)의 실시예 91 내지 95에 의해 제공된 방법론을 사용하여 올리고뉴클레오티드 중 모든 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 연결기를 갖고 2' 치환이 없는 오직 등가 DNA 올리고뉴클레오티드를 사용하여 측정된 초기 속도의 20% 이상, 예컨대 40% 이상, 예컨대 60% 이상, 예컨대 80% 이상이다(pmol/l/분으로 측정됨).

일부 실시양태에서, RNAse를 유도할 수 있는 단량체는 DNA 단량체, α-L-LNA 단량체, C4' 알킬화된 DNA 단량체(참조로서 본원에 혼입된 WO 2009/090182 및 문헌[Vester et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18(2008) 2296-2300] 참조), 및 UNA(결합되지 않은 핵산) 뉴클레오티드(참조로서 본원에 혼입된 문헌[Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039] 참조)로 이루어진 군으로부터 선택된다. UNA는 풀림 핵산이고, 전형적으로, 리보스의 C₂-C₃ C-C 결합이 제거되는 경우, 풀림 "당" 잔기를 형성한다.

일부 실시양태에서, 개프머는 화학식의 (폴리)뉴클레오티드 서열(5'→3'), A-B-C 또는 X_a-Y_b-X_a', 또는 임의적으로 A-B-C-D, D-A-B-C, X_a-Y_b-X_a'-D 또는 D-X_a-Y_b-X_a'을 포함하고, 여기서, 영역 A 또는 X_a(5' 영역)는 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, 하나 이상의 잠금 핵산(LNA) 단위, 예컨대, 1 내지 6개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, LNA 단위로 이루어지거나 이를 포함하고; 영역 B 또는 Y는 (상보적인 RNA 분자, 예컨대, mRNA 표적을 사용하여 이중으로 형성되는 경우) RNAse를 유도할 수 있는 5개 이상의 연속 뉴클레오티드, 예컨대, DNA 뉴클레오티드로 이루어지거나 이를 포함하고; 영역 C 또는 X_a'(3' 영역)은 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, 하나 이상 LNA 단위, 예컨대, 1 내지 6개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, LNA 단위로 이루어지거나 이를 포함하고; 영역 D는 존재하는 경우, 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드 단위, 예컨대, DNA 뉴클레오티드로 이루어지거나 이를 포함한다.

일부 실시양태에서, 영역 A 또는 X_a는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, LNA 단위, 예컨대, 2 내지 5개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, 2 내지 5개 LNA 단위, 예컨대, 3 또는 4개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, 3 또는 4개 LNA 단위를 포함하거나 이로 이루어지고/지거나 영역 C 또는 X_a'은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, LNA 단위, 예컨대, 2 내지 5개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, 2 내지 5개 LNA 단위, 예컨대, 3 또는 4개 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, 3 또는 4개 LNA 단위를 포함하거나 이로 이루어진다.

일부 실시양태에서, B 또는 Y는 RNAse를 유도할 수 있는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 연속 뉴클레오티드, 또는 RNAse를 유도할 수 있는 5 내지 15개, 6 내지 10개, 또는 7 내지 9개, 예컨대 8개의 연속 뉴클레오티드를 함유하거나 이로 이루어지거나 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 영역 B 또는 Y는 하나 이상의 DNA 뉴클레오티드 단위, 예컨대, 1 내지 12개의 DNA 단위, 바람직하게는 4 내지 12개의 DNA 단위, 더욱 바람직하게는 6 내지 10개의 DNA 단위, 예컨대, 7 내지 10개의 DNA 단위, 가장 바람직하게는 8, 9 또는 10개의 DNA 단위로 이루어지거나 이를 포함한다.

일부 실시양태에서, 영역 A 또는 X_a는 예컨대, "뉴클레오시드 및 뉴클레오시드 유사체" 섹션에 기재된 3 또는 4개 뉴클레오티드 유사체를 포함하거나 이로 이루어지고, 바람직하게는 유사체는 LNA이다. 영역 B는 7, 8, 9 또는 10개의 DNA 단위를 포함하거나 이로 이루어지고, 영역 C 또는 X_a'은 예컨대, "뉴클레오시드 및 뉴클레오시드 유사체" 섹션에 기재된 3 또는 4개 뉴클레오티드 유사체를 포함하거나 이로 이루어지고, 바람직하게는 유사체는 LNA이다. 상기 설계는 예를 들면, (A-B-C 또는 X_a-Y_b-X_a') 2-11-3, 2-10-2, 2-8-4, 2-9-3, 2-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, 4-7-3을 포함하고, 1 또는 2개 뉴클레오티드 단위, 예컨대, DNA 단위를 가질 수 있는 영역 D를 추가로 포함할 수 있다. 개프머 설계의 예는 WO 2004/046160에서 보여지고 참조로서 본원에 혼입된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 개프머 안티센스 올리고뉴클레오티드는 미국 가출원 제 60/977,409 호에 기재된 바와 같인 짧은 개프머일 수 있고 참조로서 본원에 혼입된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 총 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개 뉴클레오티드 단위의 인접한 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 이때 인접한 뉴클레오티드 서열은 화학식(5'→3'), A-B-C 또는 X_a-Y_b-X_a', 또는 임의적으로 A-B-C-D, D-A-B-C, X_a-Y_b-X_a'-D 또는 D-X_a-Y_b-X_a'의 서열이고; 여기서, A 또는 X_a'은 1, 2, 3 또는 4개 뉴클레오티드 유사체 단위, 예컨대, LNA 단위로 이루어지고; B 또는 Y는 상보적인 RNA 분자(예컨대, mRNA 표적)로 이중으로 형성되는 경우 RNAse를 유도할 수 있는 7, 8, 9, 10 또는 11개의 인접한 뉴클레오티드 단위로 이루어지고; C 또는 X_a'은 1, 2, 3 또는 4개 뉴클레오티드 유사체 단위, 예컨대, LNA 단위로 이루어진다. 존재하는 경우, D는 단일 DNA 단위로 이루어진다.

일부 실시양태에서, A 또는 X_a는 1개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, A 또는 X_a는 2개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, A 또는 X_a는 3개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, A 또는 X_a는 4개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, C 또는 X_a'은 1개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, C 또는 X_a'은 2개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, C 또는 X_a'은 3개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, C 또는 X_a'은 4개 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 7개 뉴클레오티드 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 8개 뉴클레오티드 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 9개 뉴클레오티드 단위로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 영역 B는 10개의 뉴클레오시드 단량체로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 영역 B 또는 Y는 1 내지 10개의 DNA 단량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, B는 10개 뉴클레오티드 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 11개 뉴클레오티드 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 1 및 11을 포함하는 1 내지 11개의 DNA 단위, 예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11개의 DNA 단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 DNA 단위로 이루어진다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 α-L 정렬에 있는 하나 이상 LNA 단위, 예컨대, α-L-정렬 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개 LNA 단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, B 또는 Y는 하나 이상의 α-L-옥시 LNA 단위를 포함하거나 α-L-정렬 중 모든 LNA 단위는 α-L-옥시 LNA 단위이다. 일부 실시양태에서, A-B-C 또는 X_a-Y_b-X_a'에 존재하는 뉴클레오티드의 수는 하기(뉴클레오티드 유사체 단위-영역 B 또는 Y-뉴클레오티드 유사체 단위)로 이루어진 군으로부터 선택된다: 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4; 또는 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4; 또는 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1; 또는 1-11-1, 1-11-2, 2-11-1, 2-11-2, 2-11-3, 3-11-2, 4-11-1, 1-11-4. 일부 실시양태에서, A-B-C에서 뉴클레오티드의 수는 3-8-3, 3-10-3, 3-9-3, 2-8-3, 2-11-3, 3-9-4, 4-9-3, 4-8-4, 3-8-5, 5-8-3, 2-10-3, 3-10-2, 4-9-2, 2-9-4, 4-8-3, 3-8-4, 2-10-2, 2-9-3, 3-9-2, 4-8-2, 2-8-4 및 4-7-4로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 영역 A 및 C 또는 X_a 및 X_a'은 각각 3개의 LNA 단량체로 이루어지고, 영역 B 또는 Y 8, 9 또는 10개의 뉴클레오시드 단량체, 바람직하게는 DNA 단량체로 이루어진다. 일부 실시양태에서, A 및 C는 둘다 2, 3 또는 4개 LNA 단위 각각으로 이루어지고, B는 8, 9, 10 또는 11개 뉴클레오티드 단위, 바람직하게는 DNA 단위로 이루어진다.

다양한 실시양태에서, 다른 개프머 설계는 영역 A 및/또는 C 또는 X_a 및/또는 X_a'이 3, 4, 5 또는 6개의 뉴클레오시드 유사체, 예컨대, 2'-O-메톡시에틸-리보스 당(2'-MOE)을 함유하는 단량체 또는 2'-플루오로-데옥시리보스 당을 함유하는 단량체로 이루어지고, 영역 B가 8, 9, 10, 11 또는 12개의 뉴클레오시드, 예컨대, DNA 단량체로 이루어지는 것을 포함하고, 영역 A-B-C는 3-9-3, 3-10-3, 5-10-5 또는 4-12-4 단량체를 갖는다. 추가 개프머 설계는 참조로서 본원에 혼입된 WO 2007/146511에 개시되어 있다.

뉴클레오티드간 연결

본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 단량체는 연결기를 통해 함께 커플링된다. 적합하게, 각각의 단량체는 연결기를 통해 3' 인접한 단량체에 연결된다.

본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 말단에서 5' 단량체는, 5' 말단 기를 포함할 수 있거나 포함할 수 없을지라도 5' 연결기를 포함하지 않음이 본 개시 내용을 읽는 당업자에 의해 이해될 것이다.

용어 "연결기" 또는 "뉴클레오티드간 연결"은 2개 뉴클레오티드가 함께 공유적으로 커플링될 수 있는 기를 의미하는 것으로 의도된다. 특정하고 바람직한 예는 포스페이트 기 및 포스포로티오에이트 기를 포함한다. 본원의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이의 인접한 뉴클레오티드 서열은 연결기를 통해 함께 커플링된다. 적합하게, 각각의 뉴클레오티드는 연결기를 통해 3' 인접한 뉴클레오티드에 연결된다. 예시적인 뉴클레오티드간 연결은 참조로서 본원에 혼입된 WO 2007/031091에 기재된 것을 포함한다.

일부 실시양태에서, 뉴클레오티드간 연결은 이의 정상 포스포다이에스터로부터 뉴클레아제 공격에 더욱 내성인 것, 예컨대, 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트로 변형될 수 있고, RNase H에 의해 분열가능한 상기 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트는 또한 표적 유전자의 발현을 감소시키는 안티센스 억제의 경로를 허용한다.

본원에 제공된 바와 같은 적합한 황(S) 함유 뉴클레오티드간 연결이 바람직할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결은 또한 특히 개프머의 갭 영역(B 또는 Y)에 대하여 바람직하다. 포스포로티오에이트 연결은 또한 측면 영역에 대하여(적절한 경우, A/X_a 및 C/X_a', 및 A/X_a 또는 C/X_a'을 D에 연결하기 위해, 및 영역 D 내에서) 사용될 수 있다.

그러나, 영역 A 또는 X_a, B 또는 Y 및 C 또는 X_a'은, 특히, 예를 들면 뉴클레오티드 유사체의 사용이 뉴클레아제내 분해로부터 영역 A 또는 X_a 및 C 또는 X_a 내에 뉴클레오티드간 연결을 보호할 때, 예컨대, 영역 A 또는 X_a 및 C 또는 X_a'이 LNA 뉴클레오티드를 포함할 때 포스포로티오에이트 이외에 뉴클레오티드간 연결, 예컨대, 포스포다이에스터 결합을 포함할 수 있다.

본 발명의 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드간 연결은 표적된 RNA의 RNase H 절단을 허용하기 위한 포스포다이에스터, 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트일 수 있다. 포스포로티오에이트는 개선된 뉴클레아제 내성 및 다른 이유, 예컨대, 제조의 용이성에 대하여 바람직하다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체는 포스포로티오에이트 기에 의해 서로 연결된다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 연결을 포함한다.

포스포다이에스터 연결, 예컨대, 1 또는 2개의 연결의 다른 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드, 특히 뉴클레오티드 유사체 단위 사이에 또는 인접한(전형적으로 영역 A 또는 X_a 및/또는 C 또는 X_a'에서) 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드로의 포함은 WO 2008/053314(참조로서 본원에 혼입됨)에 기재된 바와 같이 올리고뉴클레오티드의 생체이용률 및/또는 생물-분배를 변형시킬 수 있음이 인지된다.

일부 실시양태에서, 예컨대, 상기 언급된 실시양태에서, 적합하고 구체적으로 나타내지 않은 경우, 모든 잔여 연결기는 포스포다이에스터 또는 포스포로티오에이트, 또는 이의 혼합물이다.

일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드의 모든 뉴클레오티드간 연결기는 포스포로티오에이트이다. 특정한 개프머 올리고뉴클레오티드 서열, 예컨대, 본원에 제공된 것을 참조하는 경우, 이는 다양한 실시양태에서, 연결이 포스포로티오에이트 연결일 때, 대안적인 연결, 예컨대, 본원에 개시된 것이 사용될 수 있고, 예를 들면 포스페이트(포스포다이에스터) 연결, 특히 뉴클레오티드 유사체, 예컨대, LNA, 단위 사이의 연결을 위해 사용될 수 있음이 이해될 것이다. 마찬가지로, 특정한 개프머 올리고뉴클레오티드 서열, 예컨대, 본원에 제공된 것에 참조하는 경우, C 뉴클레오티드 잔기 5' 메틸 변형된 사이토신으로서 인용될 때, 다양한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드에 존재하는 하나 이상의 C 뉴클레오티드는 비변형된 C 잔기일 수 있다.

약학 조성물

본 발명은 본 발명에 따른 치료 활성제(예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드)와 함께 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 추가로 제공한다. 상기 약학 조성물은 임의적으로 하나 이상의 추가 치료 활성 물질을 포함할 수 있다.

본원에 제공된 약학 조성물의 설명이 원칙적으로 인간에 대하여 윤리적 투여에 적합한 약학 조성물에 관한 것일지라도, 상기 조성물이 일반적으로 모든 종류의 동물에게 투여하기에 적합함이 당업자에 의해 이해될 것이다. 다양한 동물에게 투여하기에 적합한 조성물을 제공하기 위해 인간에게 투여하기에 적합한 약학 조성물의 변형은 잘 이해되고 있고, 숙련된 수의학 약리학자는 임의의 경우 단지 원래 실험을 사용하여 상기 변형을 설계하고/하거나 수행할 수 있다.

본원에 기재된 약학 조성물의 제형은 공지되거나 이후 약리학 분야에서 개발된 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 일반적으로, 상기 제조 방법은 활성 성분을 희석제 또는 또 다른 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 함께 제공하는 단계, 및 이어서 필요한 경우 및/또는 바람직하게는, 목적한 단일-투여 단위 또는 다중-투여 단위로 제품을 성형하고/하거나 포장하는 단계를 포함한다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 단일 단위 투여량으로서 및/또는 다수의 단일 단위 투여량으로서 대량으로 제조되고/되거나 포장되고/되거나 판매될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "단위 투여량"은 소정된 양의 활성 성분을 포함하는 약학 조성물의 별개의 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상체에게 투여될 수 있는 활성 성분의 투여량 및/또는 상기 투여량, 예컨대 상기 투여량의 편리한 분획, 예를 들면 상기 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일하다.

활성 성분의 양과 관련하여, 약학적으로 허용되는 부형제, 및/또는 본 발명에 따른 약학 조성물 중 임의의 추가 성분은 치료된 대상체의 동일함, 크기 및/또는 상태에 따라, 추가로 조성물이 투여되는 경로에 따라 달라질 것이다. 예로써, 조성물은 0.1% 내지 100%(w/w) 활성 성분을 포함할 수 있다.

약학 제형은 약학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함할 수 있고, 본원에 사용된 바와 같이, 목적한 특정한 투여 형태에 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 배지, 희석제, 또는 다른 액체 비히클, 분산 또는 현탁 보조제, 계면활성제, 등장제, 증점제 또는 유화제, 보존제, 고체 결합체, 윤활제 등을 포함한다. 문헌[Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21^st Edition, A. R. Gennaro(Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; 참조로서 본원에 혼입됨)]은 약학 조성물을 제형화하는데 사용된 다양한 부형제 및 이의 제조를 위한 공지된 기법을 개시한다. 임의의 통상적인 부형제 배지가 예컨대, 임의의 목적하지 않은 생물학적 효과를 생성하거나 그렇지 않으면 유해한 방식으로 약학 조성물의 임의의 다른 성분과 상호작용함으로써 기질 또는 이의 유도체와 맞지 않는 것을 제외하고, 이의 사용은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 간주된다.

일부 실시양태에서, 약학적으로 허용되는 부형제는 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100% 순수하다. 일부 실시양태에서, 부형제는 인간에서 사용하기 위해 및 수의학 용도로 승인된다. 일부 실시양태에서, 부형제는 미국 식품 의약 관리국에 의해 승인된다. 일부 실시양태에서, 부형제는 제약 등급이 있다. 일부 실시양태에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전의 기준을 충족한다.

약학 조성물의 제조에 사용된 약학적으로 허용되는 부형제는 비제한적으로, 불활성 희석제, 분산제 및/또는 과립화제, 표면 활성제 및/또는 유화제, 붕해제, 결합제, 보존제, 완충제, 윤활제, 및/또는 오일을 포함한다. 상기 부형제는 임의적으로 약학 제형에 포함될 수 있다. 부형제, 예컨대, 코코아 버터 및 좌제 왁스, 착색제, 코팅제, 감미료, 향미료, 및/또는 방향제는 제조자의 판단에 따라 조성물에 존재할 수 있다.

제형 및/또는 약학 제제의 제조에 있어서 일반적인 고려 사항은 예를 들면, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21^st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005](참조로서 본원에 혼입됨)에서 발견될 수 있다.

일부 실시양태에서, 리포솜은 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 전달하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 리포솜은 지질 이중층으로 이루어진 인공적으로 제조된 비히클이다. 리포솜은 생물학적 막을 분열시켜(예컨대, 초음파 처리에 의해) 제조될 수 있다. 리포솜은 천연 인지질을 포함할 수 있거나, 계면활성제 특성을 갖는 혼합된 지질 쇄(예를 들면, 달걀 포스파티딜에탄올아민)을 포함할 수 있다. 리포솜 설계는 목적한 표적 조직을 표적하기 위한 표면 리간드를 이용할 수 있다.

투여

본 발명은 본원에 기재된 치료 활성제(예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드)를 효과량으로 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 방법을 제공한다.

본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 비제한적으로, 정맥내, 피하, 근육내, 비경구, 경피, 또는 경점막(예를 들면, 구강 도는 비강)을 포함하는 다양한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 정맥내 투여를 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 피하 투여를 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드에 대한 투여 양생법은 초기 투여 양생법 이후 반복될 수 있고, 실제로 투여 양생법은 질병의 진행을 치료하거나 예방하기 위해 필요한 만큼 반복될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 매일, 주에 2회, 주에 1회, 2주마다, 1개월마다, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 6개월마다 1회, 또는 가변적인 기간으로 투여될 수 있다.

적용

본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 예를 들면, 진단용, 치료용 및 예방용 연구 시약으로서 이용될 수 있다.

연구시, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 세포 및 실험 동물에서 BCL11A 단백질의 합성을 특이적으로 억제하는데(전형적으로 mRNA을 분해하거나 억제하고 이로 인해 단백질 형성을 막음으로써) 사용되고 이로 인해 표적의 기능적인 분석 또는 치료적 개입을 위한 표적으로서 이의 유용성의 평가를 촉진할 수 있다.

진단시, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 노던 블롯팅, 동일반응계 혼성화 또는 유사한 기법에 의해 세포 및 조직에서 BCL11A 발현을 검출하고 정량화하는데 사용될 수 있다.

치료용으로서, BCL11A의 발현을 조절함으로써 치료될 수 있는 질병 또는 장애를 갖는 것으로 의심되는 동물 또는 인간은 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하여 치료된다. 본 발명의 하나 이상의 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 치료적 또는 예방적 효과량으로 투여함으로써 BCL11A의 발현과 관련된 질병 또는 질환을 갖는 것으로 의심되거나 상기 질병 또는 질환에 걸리는 포유동물, 예컨대 인간을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.

본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드, 공액결합 또는 약학 조성물은 전형적으로 효과량으로 투여된다.

본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 본원에 언급된 장애를 치료하기 위한 약제의 제조, 또는 본원에 언급된 장애의 치료 방법에 적합하다.

본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오티드 및/또는 공액결합 및/또는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 본원에 언급된 바와 같은 장애를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명은 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 본 발명의 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 빈혈성 질병, 장애 또는 질환의 치료 방법을 제공한다.

일 실시양태에서, 빈혈성 질병, 장애 또는 질환은 겸상적혈구 빈혈이다.

또 다른 실시양태에서, 빈혈성 질병, 장애 또는 질환은 β-지중해 빈혈이다.

치료 방법에 적용되는 경우, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 본 발명의 약학 조성물의 투여는 하나 이상의 표적 조직에서 BCL11A의 감소된 발현을 야기한다. 바람직하게는, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 본 발명의 약학 조성물의 투여는 하나 이상의 표적 조직에서 증가된 γ-글로빈 발현을 야기한다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 본 발명의 약학 조성물의 투여는 하나 이상의 표적 조직에서 증가된 태아성 헤모글로빈 생성을 야기할 수 있다. 바람직하게는, 표적 조직은 골수, 간, 신장, 비장 및/또는 형질 세포, 말초혈 B-세포, 수지상 세포, 적혈구 전구 세포, 다능성 줄기 세포, 흉선, 편도 상피로부터 선택된다.

치료 용도

본원에 기재된 BCL11A의 안티센스 올리고 뉴클레오티드 조절제는 다양한 BCL11A 관련된 질병, 장애 및 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

겸상적혈구 빈혈(SCD)

겸상적혈구 빈혈 또는 겸상적혈구 빈혈증은 비정상적인 딱딱한 낫 모양의 적혈구를 특징으로 하는 유전적 유전 장애이고, 세포의 유연성을 감소시킨다. 이는 β-글로빈 쇄 유전자에서 돌연변이를 유발하고 초우성을 갖는 상염색체 열성 방식으로 나타난다. SCD는 여러 심각한 합병증, 예컨대, 감소된 기대 수명과 관련되고, 죽음을 야기할 수 있는 병리학적 질환의 원인이다. 그러나, 돌연변이의 유전적 다형성으로 인해, 모든 유전된 헤모글로빈 변이체가 해롭지는 않다.

SCD는 열대지방 및 아열대 사하라 사막 이남 지역의 인구에서 매우 통상적으로 보고되었다. 이러한 지역은 또한 말라리아가 통상적으로 관찰되는 지역이다. 흥미롭게도, SCD의 담체(즉, 돌연변이의 1개 복제를 갖는)는 감염에 더욱 내성인 것으로 밝혀졌고 감염된 경우 덜 심각한 증상을 보인다.

본원에 기재된 BCL11A의 안티센스 올리고뉴클레오티드 조절제는 SCD를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 질병과 관련된 하나 이상의 증상의 개선, 질병의 하나 이상의 증상의 개시의 예방 또는 지연, 및/또는 질병의 하나 이상의 증상의 심각도 또는 빈도의 줄임을 지칭한다.

일부 실시양태에서, 치료는 비제한적으로, 빈혈증; 눈의 황달; 창백함, 추위 및/또는 피부의 황달; 숨가쁨; 근육 약화; 장내 변화(예를 들면, 대변 색의 변화); 피로; 현기증; 실신; 혈관에 대한 변화(예를 들면, 저혈압); 심장에 영향을 미치는 변화(예를 들면, 심계 항진, 빠른 심박수, 흉통, 협심증, 심근 경색), 및 장기 확대(예를 들면, 비장)를 포함하는 SCD 환자에서 하나 이상의 증상의 심각도 및/또는 발생률을 부분적으로 또는 완전히 경감하고, 개선하고, 완화하고, 억제하고, 개시를 지연시키고, 감소시키는 것을 지칭한다.

일부 실시양태에서, 치료는 치료를 필요로 하는 대상체에서 감소된 빈혈증 증상을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 빈혈증 증상의 양은 전처리 또는 미처리 대조군(예를 들면, 유사한 질병 또는 발달 단계를 갖지만 치료받지 않은 대조군 대상체에 의한 빈혈증 증상의 양)에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 또는 그 이상 감소될 수 있다.

일부 실시양태에서, 치료는 증가된 γ-글로빈 발현(예를 들면, 총 발현, 퍼센트 발현은 주마다, 개월마다, 2개월마다, 6개월마다 등 증가한다)을 지칭한다. 다양한 실시양태에서, 증가된 γ-글로빈 발현은 SCD 환자에서 β-글로빈의 결핍 또는 감소된 발현을 보상한다.

지중해 빈혈(a, β 및 δ)

지중해 빈혈, 예컨대 SCD는 혈액에 영향을 미치는 유전된 유전 장애이다. 지중해 빈혈은 상염색체 열성 상태를 나타내고 적혈구의 약화 및 파괴를 야기한다. 지중해 빈혈은 산소를 운반하는 책임이 있는 적혈구 내에서 단백질인 헤모글로빈을 만드는 방법에 영향을 끼치는 유전자의 돌연변이 또는 결실에 의해 야기된다. 지중해 빈혈을 앓고 있는 개체는 적은 헤모글로빈 생성을 특징으로 하고 정상보다 적은 순환 적혈구를 갖고, 이는 경미하거나 심각한 빈혈증을 야기한다. 지중해 빈혈은 지중해 지역에서 기원한다.

지중해 빈혈은 폐렴, 철분 과다, 골 기형 및 심혈관 질환을 포함하는 유의한 합병증을 야기할 수 있다. 그러나, SCD와 같은 이 질병은 질병의 전달체인 말라리아에 대한 보호 정도를 부여하는 것이 관찰되었다.

헤모글로빈은 4개의 단백질 쇄, 2개의 α-글로빈 쇄 및 2개의 β-글로빈 쇄로 이루어지고, 이들은 헤테로이량체에 배열된다. 인간에서, β-글로빈 쇄는 11번 염색체에서 단일 유전자에 의해 암호화되고, α-글로빈 쇄는 연결되는 16번 염색체에서 2개의 유전자에 의해 암호화된다. 이는 정상 개체가 2개의 β 쇄 좌위 및 4개의 α 쇄 좌위를 함유하는 유전적 환경을 제공한다. 지중해 빈혈 환자에서, α 또는 β 쇄에서의 돌연변이는 적혈구의 적은 생성 및/또는 비정상적인 생성을 증가시킨다. 결과적으로, 지중해 빈혈은 돌연변이를 갖는 쇄에 따라 분류된다. α 및 β 지중해 빈혈은 아프리카, 아시아, 그리스 및 이탈리아 인종 집단에서 통상적이다.

α 지중해 빈혈(α 쇄에서의 돌연변이)은 HBA1 및 HBA2 유전자와 관련되고, α-글로빈 생성의 감소를 야기한다. 이는 성인에서 β-글로빈 생성을 증가시키고 유아에서 γ-글로빈 생성을 증가시키는 상황을 만든다. β-글로빈 생성의 증가는 불안정한 테트라머의 형성을 야기하고 산소를 분리하는 손상된 능력을 갖는다.

β 지중해 빈혈(β 쇄에서의 돌연변이)은 HBB 유전자와 관련되고, 생성된 질병의 심각도는 돌연변이에 의존한다. 일부 돌연변이는 질병의 대부분의 심각한 형태인 β 쇄 형태를 막고, 다른 돌연변이는 비록 감소된 수준일지라도 β 쇄의 일부 형성을 허용한다. β 쇄 돌연변이의 결과로서, α 쇄는 과잉 생성되고, 이는 α 지중해 빈혈의 경우에서와 같이 테트라머를 형성하지 않는다. 다르게는, 과잉 α 쇄는 적혈구의 막에 결합하고 막 손상을 야기하고 α 쇄가 응집되는 경우 독성일 수 있다.

비록 적은 빈도일지라도, γ 지중해 빈혈이 발생할 수 있다. 유사하게, γ 지중해 빈혈은 γ-글로빈 쇄 유전자에서의 돌연변이로부터 야기되고 이러한 쇄의 비정상적인 생성을 초래한다. 성인 헤모글로빈의 약 3%는 α 및 γ 쇄로 만들어졌음이 보고되었다.

본원에 기재된 BCL11A의 안티센스 올리고뉴클레오티드 조절제는 지중해 빈혈, 예를 들면, α, β 및/또는 δ 지중해 빈혈을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 질병과 관련된 하나 이상의 증상의 개선, 질병의 하나 이상의 증상의 개시의 예방 또는 지연, 및/또는 질병의 하나 이상의 증상의 심각도 또는 빈도의 줄임을 지칭한다.

일부 실시양태에서, 치료는 비제한적으로, 폐렴, 철분 과다, 골 기형 및 심혈관 질환을 포함하는 지중해 빈혈 환자에서 하나 이상의 증상의 심각도 및/또는 발생률을 부분적으로 또는 완전히 경감하거나, 개선하거나, 완화하거나, 억제하거나, 개시를 지연시키거나 감소시키는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 치료는 비제한적으로, 빈혈증; 눈의 황달; 창백함, 추위 및/또는 피부의 황달; 숨가쁨; 근육 약화; 장내 변화(예를 들면, 대변 색의 변화); 피로; 현기증; 실신; 혈관에 대한 변화(예를 들면, 저혈압); 심장에 영향을 미치는 변화(예를 들면, 심계 항진, 빠른 심박수, 흉통, 협심증, 심근 경색), 및 장기 확대(예를 들면, 비장)를 포함하는 지중해 빈혈 환자에서 하나 이상의 증상의 심각도 및/또는 발생률을 부분적으로 또는 완전히 경감하거나, 개선하거나, 완화하거나, 억제하거나, 개시를 지연시키거나, 감소시키는 것을 지칭한다.

일부 실시양태에서, 치료는 치료를 필요로 하는 대상체에서 빈혈증 증상의 감소를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 빈혈증 증상의 양은 전처리 또는 미처리 대조군(예를 들면, 유사한 질병 또는 발달 단계를 갖지만 치료받지 않은 대조군 대상체에 의한 빈혈증 증상의 양)에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 또는 그 이상 감소될 수 있다.

일부 실시양태에서, 치료는 증가된 γ-글로빈 발현(예를 들면, 총 발현, 퍼센트 발현은 1주마다, 1개월마다, 2개월마다, 6개월마다 등 증가한다)을 지칭한다. 다양한 실시양태에서, 증가된 γ-글로빈 발현은 지중해 빈혈 환자에서 α-, β- 또는 δ-글로빈의 결핍 또는 감소된 발현을 보상한다.

본 발명은 하기 실시예를 참조하여 더욱 완전히 이해될 것이다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 모든 문헌 인용은 참조로서 본원에 혼입된다.

실시예

실시예 1. BCL11A 를 표적하는 올리고뉴클레오티드의 설계 및 합성

이 실시예는 BCL11A 발현 및 활성을 효과적으로 하향-조절할 수 있는 LNA 올리고뉴클레오티드의 예시적인 설계 방법 및 합성을 예시한다. 이 실시예에서, 1차 표적 영역은 XL, L 및 S 동종체 중에서 중첩 영역이다(도 2).

총 401개의 LNA 올리고뉴클레오티드를 설계하고 다양한 특이성의 올리고뉴클레오티드를 야기하는 인간 BCL11A의 3가지 주요 동종체(즉, XL, L 또는 S; 표 3)의 서열, 길이(예를 들면, 12 내지 16머) 및 LNA 설계를 기초하여 7개의 라이브러리를 합성하였다.

BCL11A	동종체	수탁 번호
인간	XL	NM_022893	서열번호 1
	L	NM_018014	서열번호 2
	S	NM_138559	서열번호 3
마우스	XL	NM_001242934	서열번호 4
	L	NM_016707	서열번호 5
	S	NM_001159289	서열번호 6

LNA 단위를 설계하는 예시적인 방법은 문헌[Wahlestedt, C. et al. 2000, PNAS 91(10):5633-5638]에 기재되어 있고, 이는 참조로서 본원에 혼입된다. 예시적인 LNA 올리고뉴클레오티드는 표 4에 제시된다.

^mC는 5-메틸사이토신-1-일 염기를 갖는 뉴클레오티드 단량체를 나타내고; 아랫첨자 s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고; 대분자/볼드체 염기는 잠금 핵산을 나타내고; 윗첨자 o는 옥시-LNA를 나타낸다.

실시예 2. BCL11A -특이적 올리고뉴클레오티드의 시험관내 스크리닝 및 IC ₅₀ 측정

BCL11A 핵산 발현에 있어서 올리고뉴클레오티드의 효과는 표적 핵산이 측정가능한 값으로 존재하는 제공된 다양한 임의의 세포 유형 중에서 시험될 수 있다. BCL11A는 내생적으로 또는 핵산의 일시적인 또는 안정한 형질감염에 의해 발현될 수 있다. BCL11A 핵산의 발현 수준은 예를 들면, 노던 블롯 분석, 정량적 PCR, 리보뉴클레아제 보호 어세이를 사용하여 통상적으로 측정될 수 있다. 이 실시예에서, 실시예 1에 따라 합성된 올리고뉴클레오티드를 BCL11A를 선택적으로 표적하는 인간 REH 세포에서 시험하고 BCL11A mRNA 발현을 측정하였다. 표적이 선택된 세포 유형에서 발현되도록 제공된 다른 세포 유형을 통상적으로 사용하였다. 세포를 하기 기재된 바와 같이 적합한 배지에서 배양하고 95 내지 98%의 습도 및 5% CO₂에서 37℃에서 유지하였다. 저산소 또는 무산소 하에 배양되는 경우, O₂ 수준은 각각 1 내지 2% 또는 0 내지 0.5%에서 유지된다. 세포를 통상적으로 1주마다 2 내지 3회 계대 배양하였다.

간단히, BCL11A mRNA의 발현에서의 효과를 측정하기 위해 401개의 올리고뉴클레오티드를 인간 REH 세포를 사용하여 3일 포유류 세포 배양 실험에 이용하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 짐노시스(gymnosis) 전달 기법을 사용하여 임의의 추가 시약 또는 흡수 강화제 없이 5 및 25 μM로 세포에 첨가하였다(문헌[Stein, C.A. et al., 2010, Nucleic acids Research 38(1):e3]). BCL11A mRNA를 정량적 실시간 RT-PCR(RT-qPCR)로 측정하였다. 실시예 1에 따라 제조된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 BCL11A의 억제에 대한 예시적인 결과를 도 3에 제시하였다.

도 3에 보여진 바와 같이, 실시예 1에 따라 제조된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 BCL11A 동종체 XL을 가로지르는 여러 상이한 위치, 특히 XL, L 및 S 동종체 중에서 중첩하는 위치에서 표적하여 BCL11A mRNA의 발현을 억제할 수 있다(도 2 참조).

또 다른 실험에서, 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대하여 다양한 농도(0.0064 내지 20 μM의 범위)에서 BCL11A mRNA의 발현시 효과 및 IC₅₀ 값을 상기한 바와 같이 인간 REH 세포를 사용하여 측정하였다. 예시적인 결과를 표 5(IC₅₀) 및 도 4(BCL11A mRNA)에 제시하였다. 올리고 #56: BCL11A mRNA를 표적하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오티드.

올리고 #	IC₅₀(μM)
4	1.5
7	1.5
8	0.3
9	0.3
10	0.8
11	0.8
19	1.0
20	6.0
21	0.8
22	0.6
23	0.5
24	0.7
25	0.3
26	0.6
27	0.9
28	0.5
29	0.4
30	0.7
31	0.4
32	0.3
33	0.5
34	1.2
35	1.6
36	0.8

유사한 실험에서, 올리고 4 및 5로부터 설계된 상이한 올리고뉴클레오티드에 대하여 다양한 농도(0.25 내지 60 μM의 범위)에서 BCL11A mRNA의 발현에 대한 효과 및 IC₅₀ 값을 상기한 바와 같이 인간 REH 세포를 사용하여 측정하였다. 예시적인 결과를 표 6(IC₅₀) 및 도 5(BCL11A mRNA)에 제시하였다. 올리고 #56: BCL11A mRNA를 표적하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오티드; 모의 대조문(Mock): 안티센스 올리고뉴클레오티드를 세포에 첨가하지 않음.

올리고 #	IC₅₀(μM)
4	3.9
12	6.2
13	5.1
14	2.0
15	7.1
16	12.6
17	5.1
18	74.8
5	3.2
6	3.4

또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드에 대하여 다양한 농도(0.25 내지 60 μM)에서 BCL11A mRNA의 상이한 동종체의 발현에 대한 효과 및 IC₅₀ 값을 상기한 바와 같이 인간 REH 세포를 사용하여 측정하였다. 예시적인 결과를 표 7(IC₅₀) 및 도 6(동종체 BCL11A mRNA)에 제시하였다. 올리고 #56: BCL11A mRNA를 표적하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오티드; 모의 대조문: 안티센스 올리고뉴클레오티드를 세포에 첨가하지 않음.

올리고 #	IC₅₀(μM)
올리고 #	XL	L	S
3-03	2.3	2.4	2.0
4-03	1.9	1.4	1.3
1	1.6	0.9	1.2

또 다른 유사한 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드에 대하여 다양한 농도(0.08 내지 20 μM)에서 BCL11A mRNA의 발현에 대한 효과 및 IC₅₀ 값을 인간 REH 세포에 대하여 상기한 유사한 실험 조건을 사용하여 마우스 MPC-11 세포에서 측정하였다. 예시적인 결과를 표 8(IC₅₀) 및 도 7(BCL11A mRNA)에 제시하였다. 올리고 #56: BCL11A mRNA를 표적하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오티드; 모의 대조문: 안티센스 올리고뉴클레오티드를 세포에 첨가하지 않음.

올리고 #	IC₅₀(μM) BCL11A-All
4	0.8
14	1.0
8	0.2
25	0.3
27	0.8
5	0.7
6	1.4

또 다른 실험에서, 올리고 8, 25 및 27로부터 설계된 상이한 올리고뉴클레오티드에 대한 IC₅₀ 값을 상기한 인간 REH 세포를 사용하여 측정하였다. 전형적으로, 0.0064 내지 20 μM 범위의 6-점 5x 희석을 사용하여 IC₅₀ 값을 측정하였다. 예시적인 결과를 표 9에 제시하였다.

올리고 #	설계	IC₅₀(μM)
8	3-10-3	1.0
37	2-11-3	2.0
38	3-9-4	1.3
39	4-9-3	0.6
40	4-8-4	1.1
41	3-8-5	0.9
42	5-8-3	1.8

25	3-9-3	0.7
43	2-10-3	0.9
44	3-10-2	0.3
45	4-9-2	0.3
46	2-9-4	0.4
47	4-8-3	0.3
48	3-8-4	0.6

27	3-8-3	0.5
49	3-8-3^mc	0.4
50	2-10-2	0.8
51	2-9-3	0.4
52	3-9-2	0.5
53	4-8-2	0.4
54	2-8-4	1.8
55	4-7-4	11.4

이와 함께, 이러한 데이타는 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대, 실시예 1에 기재된 것이 0.25 μM 내지 60 μM 범위의 전형적인 IC₅₀을 값는 BCL11A를 효과적으로 억제할 수 있음을 보여준다. 또한, 본 발명에 의해 제공된 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 0.10 μM 내지 1.5 μM 범위의 전형적인 IC₅₀을 갖는 마우스 BCL11A를 효과적으로 억제할 수 있다.

실시예 3. 올리고뉴클레오티드의 생체내 내성

NMRI 마우스를 사용하여 이의 생체내 내약성에 대하여 이전 실시예에 기재된 올리고뉴클레오티드를 시험하였다.

간단히, 암컷 NMRI 마우스(n = 군당 5마리)에 정맥내 투여를 통해 식염수(대조군) 또는 선택된 LNA 올리고뉴클레오티드(15 mg/kg)를 0, 3, 7, 10 및 14일에 투여하였다. 마우스를 최종 투여 후 48시간에 희생시켰다. 하기 파라미터를 각각의 군에서 각각의 동물에 대하여 기록하였다: 체중(0일, 5, 6 또는 7일, 및 10, 13, 14 또는 16일), 희생시 장기(간, 신장 및 비장) 중량, 혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라아제(ALT) 활성, 및 전골수 및 비장에서 BCL11A mRNA 발현. 예시적인 결과를 도 8에 제시하였다.

도 8에 제시된 바와 같이, 마우스에서 BCL11A mRNA 발현을 억제하기 위해 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 능력을 채취한 골수 및 비장에서 확인하였다. 예를 들면, 올리고 8 및 25는 골수에서 BCL11A mRNA의 약 40% 감소를 나타내고, 올리고 8 및 20은 비장에서 BCL11A mRNA의 대략 동일한 감소를 나타낸다. 일반적으로, 골수에서 BCL11A mRNA 발현의 억제는 평균적으로 약 10 내지 50%의 범위인 반면, 비장에서 BCL11A mRNA 발현의 억제는 평균적으로 약 10 내지 40%의 범위이다. 전형적으로, 처리된 동물의 체중 및 장기 중량은 영향을 받지 않았다.

이와 함께, 이러한 데이타는 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 실시예 1에 기재된 것이 잘 견디고 비제한적으로 골수, 비장을 포함하는 다양한 생체내 표적 조직에서 BCL11A mRNA 발현을 효과적으로 억제할 수 있음을 보여준다.

유사한 실험에서, NMRI 마우스를 사용하여 이의 생체내 내약성에 대하여 상기한 바와 같이 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 시험하였다. 전형적으로, BCL11A를 표적하는 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 투여된 마우스의 체중 및 장기 중량은 전형적으로 영향을 받지 않았다. 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 투여된 마우스에 대한 혈청 ALT 수준은 식염수 군과 비교하여 유사한 결과를 나타내었다.

유사한 실험에서, 위스타(Wistar) 래트를 사용하여 생체내 내약성에 대하여 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 시험하였다. 간단히, 수컷 위스타 래트(n = 군당 5마리)에 피하 투여를 통해 식염수(대조군) 또는 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드(25 mg/kg)를 1주에 1회(0, 7, 14, 21 및 28일) 투여하였다. 래트를 30일에 희생시켰다. 하기 파라미터를 각각의 군에서 각각의 동물에 대하여 기록하였다: 연구 동안 체중, 희생시 장기(간, 신장 및 비장) 중량, 간 및 신장 조직병리학, 및 임상 혈청 화학(알라닌 아미노트랜스퍼라아제, 아스파라테이트 아미노트랜스퍼라아제, 알칼리 포스파타아제, 비리루빈, 우레아 및 크레아티닌).

BCL11A를 표적하는 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 투여된 위스타 래트의 장기(예를 들면, 간, 신장 및 비장) 중량은 전형적으로 영향을 받지 않았다. 또한, 다양한 임상 혈청 화학 마커(예를 들면, ALT, AST, ALP, 비리루빈, 우레아, 크레아틴)의 측정은 대조군과 비교하여 유사한 결과를 입증하였다.

이와 함께, 이러한 데이타는 본 발명에 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 실시예 1에 기재된 것이 일반적으로 안전하고 잘 견딤을 입증하였다.

실시예 4. 야생형 및 β- YAC 형질전환 마우스의 생체내 효능

인간 β-글로빈 유전자(β-YAC)에 대한 야생형 및 형질전환 마우스를 사용하여 이전 실시예에 따라 제조된 여러 LNA 올리고뉴클레오티드의 생체내 효능을 측정하였다.

간단히, 야생형 및 β-YAC 형질전환 마우스에 피하 경로를 통해 다음 2개의 일정 중 하나에 따라 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하였다(25 또는 15 mg/kg): (1) 0, 3, 6, 13, 20 및 27일에 투여, 29일에 해부(희생); 및 (2) 0, 3, 6, 13, 20, 27, 34, 41, 48, 및 55일에 투여, 57일에 해부(희생). 상기 2개의 투여 일정에 대하여, 0일 및 해부일(각각 29일 또는 57일) 전에 채혈을 수행하였다. 이 연구에 사용된 종점은 표적 조직(예를 들면, 골수)에서 BCL11A 녹다운뿐만 아니라 올리고뉴클레오티드의 혈액 화학 및 생물분배를 포함하였다.

실시예 3에 제시된 결과와 일치하게, 야생형 및 형질전환 마우스 둘다에 대하여 다양한 안티센스 올리고뉴클레오티드로 58일 이하에서 처리시 체중에서 부작용은 없었다. 처리군 중에서 AST 수준에서 유의미한 차이는 관찰되지 않았다.

야생형 마우스의 골수에서 BCL11A mRNA 발현의 녹다운에 대한 예시적인 결과를 도 9(투여 후 4주) 및 도 10(투여 후 8주)에 제시하였다. β-YAC 형질전환 마우스에서 BCL11A mRNA 발현의 녹다운에 대한 예시적인 결과를 도 11에 제시하였다. 투여 후 8주의 β-YAC 형질전환 마우스의 Ter119⁺ 및 CD19⁺ 골수 세포에서 BCL11A mRNA 발현의 녹다운에 대한 예시적인 결과를 도 12에 제시하였다.

상기 결과에 보여준 바와 같이, BCL11A mRNA 발현의 녹다운은 8주에서 더 크지만, 후보자 올리고 8은 시험된 올리고뉴클레오티드 중에서 BCL11A에서 더 큰 감소를 입증하였다. 15 또는 25 mg/kg으로 투여된 경우 후보자 올리고 4에 대하여 BCL11A 발현의 녹다운의 차이는 관찰되지 않았다. 또한, 8주 동안 투여되는 경우 야생형 또는 형질전환 마우스에 대하여 선택된 올리고뉴클레오티드에 대한 BCL11A 발현의 녹다운의 차이는 관찰되지 않았다.

이와 함께, 이 실시예는 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 비제한적으로 골수, 비장을 포함하는 다양한 생체내 표적 조직에서 BCL11A 발현을 효과적으로 억제할 수 있음을 입증한다.

실시예 5. 비-인간 영장류의 약리학 연구

BCL11A의 하나 이상의 동종체를 특이적으로 표적하는 예시적인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하는 약리학 연구를 수행하여 생체내 안전성 및 효능을 추가로 확인하였다.

간단히, 연구는, 암컷 시아노몰구스 원숭이(2 내지 4년령 및 2.5 내지 4 kg의 체중)에게 선택된 BCL11A-특이적 LNA 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 대조군(식염수)을 피하 주사를 통해 20 mg/kg의 투여량으로 6주마다 투여하거나 10 mg/kg 및 20 mg/kg의 투여량으로 12주마다 투여하는 동안의 6 내지 16주의 기간을 포괄하였다. 상기한 바와 같이 연구 기간에 따라 대략 7주 또는 17주에 마지막 투여한 후 대략 1일에 동물을 희생시켰다. 연구가 진행되는 동안에, 연구의 예비실험 단계 동안뿐만 아니라 적혈구 생성을 자극하는 투여 기간 전체에 걸쳐 반복된 혈액 샘플링으로 인해, 치료 군의 절반은 적당히 빈혈 상태가 되었다. 실험 설계를 표 10에 제시하였다.

군	투여 수준 (mg/kg)	동물의 수		정맥 절개술
군	투여 수준 (mg/kg)	잠정 희생(7주)	최종 희생(17주)	정맥 절개술
대조군	0	4	4	-
저용량	10	-	4	-
고용량	20	4	4	-
대조군	0	4	4	+
저용량	10	-	4	+
고용량	20	4	4	+
매주 피하 투여(6 또는 16 투여) 마지막 투여 후 7일에 희생(7주 또는 17주)

약력학적 바이오마커: 말초혈(2주 마다) 및 골수(해부시, 연구 설계에 따라 7주 및 17주)를 샘플링하고 ELISA 어세이에 의해 BCL11A 및 γ-글로빈 mRNA 발현, 뿐만 아니라 태아성 헤모글로빈(HbF) 및 γ-글로빈 단백질 수준을 측정하기 위해 사용하였다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 골수에서 HbF 수준을 또한 분석하였다. 클라이하우어(Kleihauer) 방법을 사용하여 F-세포를 측정하였다. 7주에 샘플링된 골수를 살아있는 골수 흡인에 의해 상완골로부터 샘플링하였다. 17주에 샘플링된 골수를 다양한 방법론을 사용하여 상완골 및 대퇴골로부터 샘플링하였다. 17주에 상완골로부터 샘플링을 살아있는 골수 흡인을 통해 수행하였다. 17주에 대퇴골로부터 샘플링을 완충액을 사용하여 골수의 플러싱을 통해 수행한 후 원심분리하고 생성된 펠렛을 분석하였다. 17주에 대퇴골로부터 샘플링을 또한 전체 냉동된 대퇴골로부터 수행하였다.

혈액학 분석은 적혈구의 카운트를 포함하고, 2주마다 샘플로부터 측정된 망상 적혈구 및 전체 헤모글로빈을 측정하였다.

말초혈을 오직 연구 설계 16주 후 주당 군에서 LNA 안티센스 올리고뉴클레오티드의 첫번째 및 12주 투여(오직 17주 군) 후 2, 4, 8, 24 및 48 시간에 약동학적 분석을 위해 샘플링하였다.

해부시(7주 및 17주), 분석 및 무게 측정을 위해 간, 신장 및 골수를 샘플링하였다. 임상 화학 분석을 또한 해부시 수행하였다.

말초혈로부터 총 헤모글로빈 측정의 예를 도 13에 도시하였다. 말초혈에서 망상 적혈구%의 예를 도 14에 도시하였다. 7주에 RT-qPCR에 의해 상완골 골수에서 BCL11A mRNA의 측정의 예를 도 15에 도시하였다. 7주에 RT-qPCR에 의해 상완골 골수에서 γ-글로빈 및 β-글로빈 mRNA의 측정의 예를 도 16에 도시하였다. 17주에 RT-qPCR에 의해 상완골(위) 및 대퇴골(아래) 골수에서 BCL11A mRNA의 측정의 예를 도 17에 도시하였다. 17주에 RT-qPCR에 의해 상완골(위) 및 대퇴골(아래) 골수에서 γ-글로빈 mRNA의 측정의 예를 도 18에 도시하였다. 17주에 RT-qPCR에 의해 상완골 골수에서 γ-글로빈 및 β-글로빈 mRNA의 측정의 예를 도 19에 도시하였다. 17주에 RT-qPCR에 의해 대퇴골 골수에서 γ-글로빈 및 β-글로빈 mRNA의 측정의 예를 도 20에 도시하였다. 17주에 RT-qPCR에 의해 상완골 골수에서 BCL11A(위) 및 γ-글로빈(아래) mRNA의 측정의 예를 도 21에 도시하였다. 17주에 RT-qPCR에 의해 대퇴골 골수에서 BCL11A(위) 및 γ-글로빈(아래) mRNA의 측정의 예를 도 22에 도시하였다.

전체 규모(도 23a) 및 확대 규모(도 23b)에서 선택된 정맥 절개된 동물에 대한 골수에서의 F-세포의 분획(‰) 측정의 예를 도 23a 및 23b에 도시하였다. 전체 규모 및 확대 규모에서 선택된 정맥 절개된 동물에 대한 말초혈에서의 F-세포의 분획(‰) 측정의 예를 도 24에 도시하였다.

대조군(도 25a), 10 mg/kg(도 25b), 및 20 mg/kg(도 25c) 투여 군의 말초혈에서의 γ-글로빈 측정의 예를 도 25에 도시하였다. 대조군, 10 mg/kg 및 20 mg/kg 투여 군에 대하여 γ-글로빈 피크(피크 1 또는 피크 2)의 각각의 시점에서 대조군의 %로서 말초혈에서 γ-글로빈 측정의 예를 각각 도 26, 27 및 28에 도시하였다.

상기 결과에서 보여진 바와 같이, 상완골 뼈에 비해 대퇴골로부터의 골수 샘플에서 약 2배 더 높은 BCL11A의 발현을 관찰하였다. γ-글로빈 발현에 대하여, 대퇴골에 비해 상완골로부터의 골수 샘플에서 2배 내지 3배 더 높은 발현을 관찰하였다. 하기 기재된 바와 같이 특정한 동물에서 가장 큰 차이를 관찰하였다.

골수에서 F-세포의 측정에 대하여, 동물 I은 대조군 동물 중 약 0.2‰에 비해 17주에서 약 10‰ F-세포를 입증하였다. 말초혈에서 F-세포의 측정에 대하여, 동물 I은 대조군 동물 중 약 0.3‰에 비해 17주에서 약 8‰를 입증하였다. 또한, 이 동물에서 F-세포는 말초혈로부터 수득된 샘플로부터 약 15주에 측정 시 증가하기 시작하였다.

말초혈에서 γ-글로빈의 측정에 대하여, 10 mg/kg 투여 군에서 17주에 추가 증가를 갖는 동물 I에 대하여 15주에 증가가 관찰되었다. 유사한 방식으로, 동물 Q가 20 mg/kg 투여 군에서 17주에 증가함을 입증하였다.

비-정맥 절개술 군에서, 대조군 군에 비해 BCL11A mRNA 발현의 감소는 관찰되지 않았다. 마찬가지로, 어떠한 동물에서도 F-세포 또는 HbF(γ-글로빈)에서의 증가는 관찰되지 않았다.

요약하면, 이 실시예에 기재된 실험 결과는 대조군 동물에 비해 골수(상완골 및 대퇴골)에서 BCL11A mRNA의 85% 초과의 녹다운에 의해 및 대조군 동물에 비해 골수(상완골 및 대퇴골)에서 동물 Q의 BCL11A mRNA의 약 60% 녹다운에 의해 동물 I에서 효과적인 표적 유도 개입을 입증한다. 또한, 대조군 동물에 비해 동물 I의 골수에서 γ-글로빈 mRNA 발현의 80배 초과 유도 및 대조군에 비해 동물 I의 말초혈에서 γ-글로빈 단백질의 7배 증가가 기록되었다. 동물 Q는 대조군 동물에 비해 말초혈에서 γ-글로빈 단백질의 약 3배 증가를 입증하였다. 동물 I은 또한 대조군 동물에 비해 골수 및 말초혈에서 F-세포의 증가를 입증하였다.

이와 함께, 이 실시예는 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 생체내 다양한 표적 조직에서 BCL11A 발현을 효과적으로 억제할 수 있고 비히클 대조군에 비해 적어도 2배 이상 말초혈에서 γ-글로빈 단백질을 증가시킬 수 있음을 입증하였다.

실시예 6. 생체내 약동학

이 실험은 이전 실시예에 따라 제조된 선택된 LNA 올리고뉴클레오티드의 생체내 약동학을 측정한다.

간단히, 야생형 마우스에게 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 피하 경로를 통해 단일 투여량(20 mg/kg)을 제공하였다. 혈장, 간, 신장 및 골수의 샘플링을 28일까지 여러 시점에서 수행하였다. 각각의 샘플링된 조직에 대한 약동학 프로필을 측정하였다. 예시적인 결과를 도 29 내지 31에 제시하였다.

실험 결과는 골수를 포함하는 모든 샘플링된 조직에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 빠른 분포 및 관찰가능한 분포를 입증하였다. C_최대는 피하 투여 후 10분에 약 21 μg/mL이었다. 간, 신장 및 혈장 t₁ _/2β는 약 10일이었다. 골수에서, t_1/2β는 약 3일이었다.

이 약동학 연구로부터, 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 골수 노출의 예측 모델을 결정하였다(도 32).

이와 함께, 이 실시예는 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 투여시(예를 들면, 피하) 다중 조직에 의해 효과적이고 안전하게 흡수됨을 입증하였다. 또한, 본 발명에 의해 제공된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 어떠한 부작용도 없이 골수를 포함하는 다중 표적 조직에 분포된다.

따라서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 기재된 여러 양상을 가지고, 다양한 변화, 변형 및 개선이 당업자에게 용이하게 발생함이 이해되어야 한다. 상기 변화, 변형 및 개선은 본 개시내용의 일부인 것으로 의도되고, 본 발명의 취지 및 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 따라서, 상기한 설명 및 도면은 단지 예시이고 본 발명은 하기 청구범위에 의해 상세하게 기재된다.

청구항 요소를 변형하기 위해 청구항에서 서수적 용어, 예컨대, "첫번째", "두번째", "세번째" 등을 사용은 방법을 수행함에 있어 다른 요소 또는 시간적 순서에 대해 그 자체로 하나의 청구항 요소의 우선 순위, 선행 또는 순서를 함축하지 않지만, 단지 하나의 특정 명칭을 갖는 요소를 동일한 명칭을 갖는 다른 요소로부터(그러나 서수 용어의 사용을 위해) 구분하는 라벨로서 사용된다.

명세서 및 청구범위에서 사용된 단수형은, 달리 명백하게 나타내지 않는 한, 복수형을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 군의 하나 이상의 일원 사이에 "또는"을 포함하는 청구항 또는 명세서는, 달리 지시되지 않거나 내용상 명백하지 않은 한, 하나, 하나 이상, 또는 모든 군 일원이 존재하거나 이용되거나 그렇지 않으면 주어진 생성물 또는 과정에 관련되어 있다는 것을 의미한다. 발명은 정확히 군의 하나의 일원이 존재하거나 이용되거나 그렇지 않으면 주어진 생성물 또는 과정에 관련되어 있는 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 하나 이상 또는 전체 군 일원이 존재하거나 이용되거나 그렇지 않으면 주어진 생성물 또는 과정에 관련되어 있는 실시양태를 포함한다. 또한, 본 발명은, 달리 언급하지 않거나 모순이나 불일치가 발생할 수 있음이 당업자에게 명백하지않는 한, 열거된 하나 이상의 청구항으로부터 하나 이상의 제한, 요소, 조항, 기술적 용어가 동일한 항(또는 연관된 다른 청구항)에 기초한 또 다른 종속 청구항에 도입되는 모든 변화, 조합 및 순열을 포괄한다고 이해되어야 한다. 요소가 목록으로서 제시되는 경우(예를 들면 마쿠쉬(Markush) 군 또는 유사한 형식), 요소 각각의 하위군이 또한 개시되고 임의의 요소가 군으로부터 제거될 수 있음이 이해되어야 한다. 일반적으로, 본 발명 또는 본 발명의 양상이 특정한 요소, 특징 등을 포함하는 것으로서 지칭되는 경우, 본 발명의 특정한 실시양태 또는 본 발명의 양상은 상기 요소, 특징 등으로 이루어지거나 이로 본질적으로 이루어진다. 단순함을 목적하기 위해, 이러한 실시양태는 모든 경우에 본원에서 그렇게 많은 단어로 제시되지 않았다. 특정한 예외가 명세서에 재인용되는지와 상관없이 본 발명의 임의의 실시양태 또는 양상이 청구항으로부터 명백하게 제외될 수 있음이 또한 이해되어야 한다. 본 발명의 배경을 기재하고 이의 실시에 관한 추가 상세한 설명을 제공하기 위해 본원에 언급된 문헌, 웹사이트 및 다른 참조물은 참조로서 본원에 혼입된다.

<110> Roche Innovation Center Copenhagen A/S <120> Oligonucleotide modulators of B-cell CLL/lymphoma 11A (BCL11A) and uses thereof <130> 1151 WO <140> PCT/EP2014/060813 <141> 2014-05-26 <150> US 61/827,484 <151> 2013-05-24 <160> 77 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5946 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> exon <222> (1)..(283) <223> exon1 <220> <221> exon <222> (284)..(613) <223> exon2 <220> <221> exon <222> (614)..(715) <223> exon3 <220> <221> exon <222> (716)..(5946) <223> exon4 <400> 1 ttt ttt ttt ttt ttt tgc tta aaa aaa agc cat gac ggc tct ccc aca 48 Phe Phe Phe Phe Phe Cys Leu Lys Lys Ser His Asp Gly Ser Pro Thr 1 5 10 15 att cat ctt ccc tgc gcc atc ttt gta tta ttt cta att tat ttt gga 96 Ile His Leu Pro Cys Ala Ile Phe Val Leu Phe Leu Ile Tyr Phe Gly 20 25 30 tgt caa aag gca ctg atg aag ata ttt tct ctg gag tct cct tct ttc 144 Cys Gln Lys Ala Leu Met Lys Ile Phe Ser Leu Glu Ser Pro Ser Phe 35 40 45 taa ccc ggc tct ccc gat gtg aac cga gcc gtc gtc cgc ccg ccg ccg 192 Pro Gly Ser Pro Asp Val Asn Arg Ala Val Val Arg Pro Pro Pro 50 55 60 ccg ccg ccg ccg ccg ccg ccc gcc ccg cag ccc acc atg tct cgc cgc 240 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Pro Gln Pro Thr Met Ser Arg Arg 65 70 75 aag caa ggc aaa ccc cag cac tta agc aaa cgg gaa ttc tcg c cc gag 288 Lys Gln Gly Lys Pro Gln His Leu Ser Lys Arg Glu Phe Ser Pro Glu 80 85 90 95 cct ctt gaa gcc att ctt aca gat gat gaa cca gac cac ggc ccg ttg 336 Pro Leu Glu Ala Ile Leu Thr Asp Asp Glu Pro Asp His Gly Pro Leu 100 105 110 gga gct cca gaa ggg gat cat gac ctc ctc acc tgt ggg cag tgc cag 384 Gly Ala Pro Glu Gly Asp His Asp Leu Leu Thr Cys Gly Gln Cys Gln 115 120 125 atg aac ttc cca ttg ggg gac att ctt att ttt atc gag cac aaa cgg 432 Met Asn Phe Pro Leu Gly Asp Ile Leu Ile Phe Ile Glu His Lys Arg 130 135 140 aaa caa tgc aat ggc agc ctc tgc tta gaa aaa gct gtg gat aag cca 480 Lys Gln Cys Asn Gly Ser Leu Cys Leu Glu Lys Ala Val Asp Lys Pro 145 150 155 cct tcc cct tca cca atc gag atg aaa aaa gca tcc aat ccc gtg gag 528 Pro 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600 605 gtc gtg ggc gtg ggc gac gag agc cgc gcc ctg ccc gac gtc atg cag 1872 Val Val Gly Val Gly Asp Glu Ser Arg Ala Leu Pro Asp Val Met Gln 610 615 620 ggc atg gtg ctc agc tcc atg cag cac ttc agc gag gcc ttc cac cag 1920 Gly Met Val Leu Ser Ser Met Gln His Phe Ser Glu Ala Phe His Gln 625 630 635 gtc ctg ggc gag aag cat aag cgc ggc cac ctg gcc gag gcc gag ggc 1968 Val Leu Gly Glu Lys His Lys Arg Gly His Leu Ala Glu Ala Glu Gly 640 645 650 655 cac agg gac act tgc gac gaa gac tcg gtg gcc ggc gag tcg gac cgc 2016 His Arg Asp Thr Cys Asp Glu Asp Ser Val Ala Gly Glu Ser Asp Arg 660 665 670 ata gac gat ggc act gtt aat ggc cgc ggc tgc tcc ccg ggc gag tcg 2064 Ile Asp Asp Gly Thr Val Asn Gly Arg Gly Cys Ser Pro Gly Glu Ser 675 680 685 gcc tcg ggg ggc ctg tcc aaa aag ctg ctg ctg ggc agc ccc agc tcg 2112 Ala Ser Gly Gly Leu Ser Lys Lys Leu Leu Leu Gly Ser Pro Ser Ser 690 695 700 ctg agc ccc ttc tct aag cgc atc aag ctc gag aag gag ttc gac ctg 2160 Leu Ser Pro Phe Ser Lys Arg Ile Lys Leu Glu Lys Glu Phe Asp Leu 705 710 715 ccc ccg gcc gcg atg ccc aac acg gag aac gtg tac tcg cag tgg ctc 2208 Pro Pro Ala Ala Met Pro Asn Thr Glu Asn Val Tyr Ser Gln Trp Leu 720 725 730 735 gcc ggc tac gcg gcc tcc agg cag ctc aaa gat ccc ttc ctt agc ttc 2256 Ala Gly Tyr Ala Ala Ser Arg Gln Leu Lys Asp Pro Phe Leu Ser Phe 740 745 750 gga gac tcc aga caa tcg cct ttt gcc tcc tcg tcg gag cac tcc tcg 2304 Gly Asp Ser Arg Gln Ser Pro Phe Ala Ser Ser Ser Glu His Ser Ser 755 760 765 gag aac ggg agt ttg cgc ttc tcc aca ccg ccc ggg gag ctg gac gga 2352 Glu Asn Gly Ser Leu Arg Phe Ser Thr Pro Pro Gly Glu Leu Asp Gly 770 775 780 ggg atc tcg ggg cgc agc ggc acg gga agt gga ggg agc acg ccc cat 2400 Gly Ile Ser Gly Arg Ser Gly Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Pro His 785 790 795 att agt ggt ccg ggc ccg ggc agg ccc agc tca aaa gag ggc aga cgc 2448 Ile Ser Gly Pro Gly Pro Gly Arg Pro Ser Ser Lys Glu Gly Arg Arg 800 805 810 815 agc gac act tgt gag tac tgt ggg aaa gtc ttc aag aac tgt agc aat 2496 Ser Asp Thr Cys Glu Tyr Cys Gly Lys Val Phe Lys Asn Cys Ser Asn 820 825 830 ctc act gtc cac agg aga agc cac acg ggc gaa agg cct tat aaa tgc 2544 Leu Thr Val His Arg Arg Ser His Thr Gly Glu Arg Pro Tyr Lys Cys 835 840 845 gag ctg tgc aac tat gcc tgt gcc cag agt agc aag ctc acc agg cac 2592 Glu Leu Cys Asn Tyr Ala Cys Ala Gln Ser Ser Lys Leu Thr Arg His 850 855 860 atg aaa acg cat ggc cag gtg ggg aag gac gtt tac aaa tgt gaa att 2640 Met Lys Thr His Gly Gln Val Gly Lys Asp Val Tyr Lys Cys Glu Ile 865 870 875 tgt aag atg cct ttt agc gtg tac agt acc ctg gag aaa cac atg aaa 2688 Cys Lys Met Pro Phe Ser Val Tyr Ser Thr Leu Glu Lys His Met Lys 880 885 890 895 aaa tgg cac agt gat cga gtg ttg aat aat gat ata aaa act gaa tag 2736 Lys Trp His Ser Asp Arg Val Leu Asn Asn Asp Ile Lys Thr Glu 900 905 910 agg tat att aat acc cct ccc tca ctc cca cct gac acc ccc ttt ttc 2784 Arg Tyr Ile Asn Thr Pro Pro Ser Leu Pro Pro Asp Thr Pro Phe Phe 915 920 925 acc act ccc ctt ccc cat cgc cct cca gcc cca ctc cct gta gga ttt 2832 Thr Thr Pro Leu Pro His Arg Pro Pro Ala Pro Leu Pro Val Gly Phe 930 935 940 ttt tct agt ccc atg tga ttt aaa caa aca aac aaa caa aca gaa gta 2880 Phe Ser Ser Pro Met Phe Lys Gln Thr Asn Lys Gln Thr Glu Val 945 950 955 acg aag cta aga ata tga gag tgc ttg tca cca gca cac ctg ttt ttt 2928 Thr Lys Leu Arg Ile Glu Cys Leu Ser Pro Ala His Leu Phe Phe 960 965 970 ttc ttt ttc ttt ttc ttt ttt ctt ttt cct ttt ttt ttt ttt tcc ttt 2976 Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe Leu Phe Pro Phe Phe Phe Phe Ser Phe 975 980 985 atg ttc tca ccg ttt gaa tgc atg atc tgt atg ggg caa tac tat tgc 3024 Met Phe Ser Pro Phe Glu Cys Met Ile Cys Met Gly Gln Tyr Tyr Cys 990 995 1000 att tta cgc aaa ctt tga gcc ttt ctc ttg tgc aat aat tta cat 3069 Ile Leu Arg Lys Leu Ala Phe Leu Leu Cys Asn Asn Leu His 1005 1010 1015 gtt gtg tat gtt ttt ttt taa act tag aca gca tgt atg gta tgt 3114 Val Val Tyr Val Phe Phe Thr Thr Ala Cys Met Val Cys 1020 1025 1030 tat ggc tat ttt aaa ttg tcc cta att cgt tgc tga gca aac atg 3159 Tyr Gly Tyr Phe Lys Leu Ser Leu Ile Arg Cys Ala Asn Met 1035 1040 1045 ttg ctg ttt cca gtt ccg ttc tga gag aaa aag aga gag aga gag 3204 Leu Leu Phe Pro Val Pro Phe Glu Lys Lys Arg Glu Arg Glu 1050 1055 aaa aag acc atg ctg cat aca ttc tgt aat aca tat cat gta cag 3249 Lys Lys Thr Met Leu His Thr Phe Cys Asn Thr Tyr His Val Gln 1060 1065 1070 ttt tat ttt ata acg tga gga gga aaa aca gtc ttt gga tta acc 3294 Phe Tyr Phe Ile Thr Gly Gly Lys Thr Val Phe Gly Leu Thr 1075 1080 1085 ctc tat aga cag aat aga tag cac tga aaa aaa atc tct atg agc 3339 Leu Tyr Arg Gln Asn Arg His Lys Lys Ile Ser Met Ser 1090 1095 1100 taa atg tct gtc tct aaa ggg tta aat gta tca att gga aag gaa 3384 Met Ser Val Ser Lys Gly Leu Asn Val Ser Ile Gly Lys Glu 1105 1110 1115 gaa aaa agg cct tga att gac aaa tta aca gaa aaa cag aac aag 3429 Glu Lys Arg Pro Ile Asp Lys Leu Thr Glu Lys Gln Asn Lys 1120 1125 ttt att cta tca ttt ggt ttt aaa ata tga gtg cct tgg atc tat 3474 Phe Ile Leu Ser Phe Gly Phe Lys Ile Val Pro Trp Ile Tyr 1130 1135 1140 taa aac cac atc gat ggt tct ttc tac ttg tta taa act tgt agc 3519 Asn His Ile Asp Gly Ser Phe Tyr Leu Leu Thr Cys Ser 1145 1150 1155 tta att cag cat tgg gtg agg taa taa acc tta gga act agc ata taa 3567 Leu Ile Gln His Trp Val Arg Thr Leu Gly Thr Ser Ile 1160 1165 ttc tat att gta ttt ctc aca aca atg gct acc taa aaa gat gac 3612 Phe Tyr Ile Val Phe Leu Thr Thr Met Ala Thr Lys Asp Asp 1170 1175 1180 cca tta tgt cct agt taa tca tca ttt ttc ctt tag ttt aat ttt 3657 Pro Leu Cys Pro Ser Ser Ser Phe Phe Leu Phe Asn Phe 1185 1190 1195 ata aac aaa act gat tat acc agt ata aaa gct act ttg ctc ctg 3702 Ile Asn Lys Thr Asp Tyr Thr Ser Ile Lys Ala Thr Leu Leu Leu 1200 1205 1210 gtg aga gct taa aag aaa tgg gct gtt ttg ccc aaa gtt tta ttt 3747 Val Arg Ala Lys Lys Trp Ala Val Leu Pro Lys Val Leu Phe 1215 1220 1225 ttt tta aac aat gat taa att gaa tgt gta atg tgc aaa agc cct 3792 Phe Leu Asn Asn Asp Ile Glu Cys Val Met Cys Lys Ser Pro 1230 1235 gga acg caa tta aat aca cta gta agg agt tca ttt tat gaa gat 3837 Gly Thr Gln Leu Asn Thr Leu Val Arg Ser Ser Phe Tyr Glu Asp 1240 1245 1250 att tgc ttt aat aat gtc ttt tta aaa ata ctg gca cca aaa gaa 3882 Ile Cys Phe Asn Asn Val Phe Leu Lys Ile Leu Ala Pro Lys Glu 1255 1260 1265 ata gat cca gat cta ctt ggt tgt caa gtg gac aat caa atg ata 3927 Ile Asp Pro Asp Leu Leu Gly Cys Gln Val Asp Asn Gln Met Ile 1270 1275 1280 aac ttt aag acc ttg tat acc ata ttg aaa gga aga ggc tga caa 3972 Asn Phe Lys Thr Leu Tyr Thr Ile Leu Lys Gly Arg Gly Gln 1285 1290 1295 taa ggt ttg aca gag ggg aac aga aga aaa taa tat gat tta tta 4017 Gly Leu Thr Glu Gly Asn Arg Arg Lys Tyr Asp Leu Leu 1300 1305 1310 gca caa cgt ggt act att tgc cat tta aaa cta gaa cag gta tat 4062 Ala Gln Arg Gly Thr Ile Cys His Leu Lys Leu Glu Gln Val Tyr 1315 1320 1325 aag cta ata ttg ata caa tga tga tta act atg aat tct taa gac ttg 4110 Lys Leu Ile Leu Ile Gln Leu Thr Met Asn Ser Asp Leu 1330 1335 cat tta aat gtg aca ttc tta aaa aaa gaa gag aaa gaa ttt taa 4155 His Leu Asn Val Thr Phe Leu Lys Lys Glu Glu Lys Glu Phe 1340 1345 1350 gag tag cag tat ata tgt ctg tgc tcc cta aaa gtt gta ctt cat 4200 Glu Gln Tyr Ile Cys Leu Cys Ser Leu Lys Val Val Leu His 1355 1360 1365 ttc ttt tcc ata cac tgt gtg cta ttt gtg tta aca tgg aag agg 4245 Phe Phe Ser Ile His Cys Val Leu Phe Val Leu Thr Trp Lys Arg 1370 1375 1380 att cat tgt ttt tat ttt tat ttt ttt aat ttt ttc ttt ttt att 4290 Ile His Cys Phe Tyr Phe Tyr Phe Phe Asn Phe Phe Phe Phe Ile 1385 1390 1395 aag cta gca tct gcc cca gtt ggt gtt caa ata gca ctt gac tct 4335 Lys Leu Ala Ser Ala Pro Val Gly Val Gln Ile Ala Leu Asp Ser 1400 1405 1410 gcc tgt gat atc tgt atc ttt tct cta atc aga gat aca gag gtt 4380 Ala Cys Asp Ile Cys Ile Phe Ser Leu Ile Arg Asp Thr Glu Val 1415 1420 1425 gag tat aaa ata aac ctg ctc aga tag gac aat taa gtg cac tgt 4425 Glu Tyr Lys Ile Asn Leu Leu Arg Asp Asn Val His Cys 1430 1435 1440 aca att ttc cca gtt tac agg tct ata ctt aag gga aaa gtt gca 4470 Thr Ile Phe Pro Val Tyr Arg Ser Ile Leu Lys Gly Lys Val Ala 1445 1450 1455 aga atg ctg aaa aaa aat tga aca caa tct cat tga gga gca ttt ttt 4518 Arg Met Leu Lys Lys Asn Thr Gln Ser His Gly Ala Phe Phe 1460 1465 aaa aac taa aaa aaa aaa aac ttt gcc agc cat tta ctt gac tat 4563 Lys Asn Lys Lys Lys Asn Phe Ala Ser His Leu Leu Asp Tyr 1470 1475 1480 tga gct tac tta ctt gga cgc aac att gca agc gct gtg aat gga 4608 Ala Tyr Leu Leu Gly Arg Asn Ile Ala Ser Ala Val Asn Gly 1485 1490 1495 aac aga ata cac tta aca tag aaa tga atg att gct ttc gct tct 4653 Asn Arg Ile His Leu Thr Lys Met Ile Ala Phe Ala Ser 1500 1505 1510 aca gtg caa gga ttt ttt tgt aca aaa ctt ttt taa ata taa atg tta 4701 Thr Val Gln Gly Phe Phe Cys Thr Lys Leu Phe Ile Met Leu 1515 1520 aga aaa att ttt ttt aaa aaa cac ttc att atg ttt agg ggg gaa 4746 Arg Lys Ile Phe Phe Lys Lys His Phe Ile Met Phe Arg Gly Glu 1525 1530 1535 ctg cat ttt agg gtt cca ttg tct tgg tgg tgt tac aag act tgt 4791 Leu His Phe Arg Val Pro Leu Ser Trp Trp Cys Tyr Lys Thr Cys 1540 1545 1550 tat cca ttt aaa aat ggt agt gga aat tct atg cct tgg ata cac 4836 Tyr Pro Phe Lys Asn Gly Ser Gly Asn Ser Met Pro Trp Ile His 1555 1560 1565 acc gct ctt cag gtt gta aaa aaa aaa aac ata cat tgg gga aag 4881 Thr Ala Leu Gln Val Val Lys Lys Lys Asn Ile His Trp Gly Lys 1570 1575 1580 gtt taa gat tat ata gta ctt aaa tat agg aaa atg cac act cat 4926 Val Asp Tyr Ile Val Leu Lys Tyr Arg Lys Met His Thr His 1585 1590 1595 gtt gat tcc tat gct aaa ata cat tta tgg tct ttt ttc tgt att 4971 Val Asp Ser Tyr Ala Lys Ile His Leu Trp Ser Phe Phe Cys Ile 1600 1605 1610 tct aga atg gta ttt gaa tta aat gtt cat cta gtg tta ggc act 5016 Ser Arg Met Val Phe Glu Leu Asn Val His Leu Val Leu Gly Thr 1615 1620 1625 ata gta ttt ata ttg aag ctt gta ttt tta act gtt gct tgt tct 5061 Ile Val Phe Ile Leu Lys Leu Val Phe Leu Thr Val Ala Cys Ser 1630 1635 1640 ctt aaa agg tat caa tgt acc ttt ttt ggt agt gga aaa aaa aaa 5106 Leu Lys Arg Tyr Gln Cys Thr Phe Phe Gly Ser Gly Lys Lys Lys 1645 1650 1655 gac agg ctg cca cag tat att ttt tta att tgg cag gat aat ata 5151 Asp Arg Leu Pro Gln Tyr Ile Phe Leu Ile Trp Gln Asp Asn Ile 1660 1665 1670 gtg caa att att tgt atg ctt caa aaa aaa aaa aaa gag aga aac 5196 Val Gln Ile Ile Cys Met Leu Gln Lys Lys Lys Lys Glu Arg Asn 1675 1680 1685 aaa aaa gtg tga cat tac aga tga gaa gcc ata taa tgg cgg ttt 5241 Lys Lys Val His Tyr Arg Glu Ala Ile Trp Arg Phe 1690 1695 1700 ggg gga gcc tgc tag aat gtc aca tgg atg gct gtc ata ggg gtt 5286 Gly Gly Ala Cys Asn Val Thr Trp Met Ala Val Ile Gly Val 1705 1710 gta cat atc ctt ttt tgt tcc ttt ttc ctg ctg cca tac tgt atg 5331 Val His Ile Leu Phe Cys Ser Phe Phe Leu Leu Pro Tyr Cys Met 1715 1720 1725 cag tac tgc aag cta ata acg ttg gtt tgt tat gta gtg tgc ttt 5376 Gln Tyr Cys Lys Leu Ile Thr Leu Val Cys Tyr Val Val Cys Phe 1730 1735 1740 ttg tcc ctt tcc ttc tat cac cct aca ttc cag cat ctt acc ttc 5421 Leu Ser Leu Ser Phe Tyr His Pro Thr Phe Gln His Leu Thr Phe 1745 1750 1755 ata tgc agt aaa aga aag aaa gaa aaa aaa agg aaa aaa aaa aaa 5466 Ile Cys Ser Lys Arg Lys Lys Glu Lys Lys Arg Lys Lys Lys Lys 1760 1765 1770 aaa cca atg ttt tgc agt ttt ttt cat tgc caa aaa cta aat ggt 5511 Lys Pro Met Phe Cys Ser Phe Phe His Cys Gln Lys Leu Asn Gly 1775 1780 1785 gct tta tat tta gat tgg aaa gaa ttt cat atg caa agc ata tta 5556 Ala Leu Tyr Leu Asp Trp Lys Glu Phe His Met Gln Ser Ile Leu 1790 1795 1800 aag aga aag ccc gct tta gtc aat act ttt ttg taa atg gca atg 5601 Lys Arg Lys Pro Ala Leu Val Asn Thr Phe Leu Met Ala Met 1805 1810 1815 cag aat att ttg tta ttg gcc ttt tct att cct gta atg aaa gct 5646 Gln Asn Ile Leu Leu Leu Ala Phe Ser Ile Pro Val Met Lys Ala 1820 1825 1830 gtt tgt cgt aac ttg aaa ttt tat ctt tta cta tgg gag tca cta 5691 Val Cys Arg Asn Leu Lys Phe Tyr Leu Leu Leu Trp Glu Ser Leu 1835 1840 1845 ttt att att gct tat gtg ccc tgt tca aaa cag agg cac tta att 5736 Phe Ile Ile Ala Tyr Val Pro Cys Ser Lys Gln Arg His Leu Ile 1850 1855 1860 tga tct ttt att ttt ctt tgt ttt tat ttt ttt ttt tat tta gat 5781 Ser Phe Ile Phe Leu Cys Phe Tyr Phe Phe Phe Tyr Leu Asp 1865 1870 1875 gac caa agg tca tta caa cct ggc ttt tta ttg tat ttg ttt ctg 5826 Asp Gln Arg Ser Leu Gln Pro Gly Phe Leu Leu Tyr Leu Phe Leu 1880 1885 1890 gtc ttt gtt aag ttc tat tgg aaa aac cac tgt ctg tgt ttt ttt 5871 Val Phe Val Lys Phe Tyr Trp Lys Asn His Cys Leu Cys Phe Phe 1895 1900 1905 ggc agt tgt ctg cat taa cct gtt cat aca ccc att ttg tcc ctt 5916 Gly Ser Cys Leu His Pro Val His Thr Pro Ile Leu Ser Leu 1910 1915 1920 tat tga aaa aat aaa aaa aat taa agt aca 5946 Tyr Lys Asn Lys Lys Asn Ser Thr 1925 <210> 2 <211> 3958 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> exon <222> (1)..(283) <223> exon1 <220> <221> exon <222> (284)..(613) <223> exon2 <220> <221> exon <222> (614)..(715) <223> exon3 <220> <221> exon <222> (716)..(2458) <223> exon4 <220> <221> exon <222> (2459)..(3958) <223> exon5 <400> 2 ttt ttt ttt ttt ttt tgc tta aaa aaa agc cat gac ggc tct ccc aca 48 Phe Phe Phe Phe Phe Cys Leu Lys Lys Ser His Asp Gly Ser Pro Thr 1 5 10 15 att cat ctt ccc tgc gcc atc ttt gta tta ttt cta att tat ttt gga 96 Ile His Leu Pro Cys Ala Ile Phe Val Leu Phe Leu Ile Tyr Phe Gly 20 25 30 tgt caa aag gca ctg atg aag ata ttt tct ctg gag tct cct tct ttc 144 Cys Gln Lys Ala Leu Met Lys Ile Phe Ser Leu Glu Ser Pro Ser Phe 35 40 45 taa ccc ggc tct ccc gat gtg aac cga gcc gtc gtc cgc ccg ccg ccg 192 Pro Gly Ser Pro Asp Val Asn Arg Ala Val Val Arg Pro Pro Pro 50 55 60 ccg ccg ccg ccg ccg ccg ccc gcc ccg cag ccc acc atg tct cgc cgc 240 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Pro Gln Pro Thr Met Ser Arg Arg 65 70 75 aag caa ggc aaa ccc cag cac tta agc aaa cgg gaa ttc tcg c cc gag 288 Lys Gln Gly Lys Pro Gln His Leu Ser Lys Arg Glu Phe Ser Pro Glu 80 85 90 95 cct ctt gaa gcc att ctt aca gat gat gaa cca gac cac ggc ccg ttg 336 Pro Leu Glu Ala Ile Leu Thr Asp Asp Glu Pro Asp His Gly Pro Leu 100 105 110 gga gct cca gaa ggg gat cat gac ctc ctc acc tgt ggg cag tgc cag 384 Gly Ala Pro Glu Gly Asp His Asp Leu Leu Thr Cys Gly Gln Cys Gln 115 120 125 atg aac ttc cca ttg ggg gac att ctt att ttt atc gag cac aaa cgg 432 Met Asn Phe Pro Leu Gly Asp Ile Leu Ile Phe Ile Glu His Lys Arg 130 135 140 aaa caa tgc aat ggc agc ctc tgc tta gaa aaa gct gtg gat aag cca 480 Lys Gln Cys Asn Gly Ser Leu Cys Leu Glu Lys Ala Val Asp Lys Pro 145 150 155 cct tcc cct tca cca atc gag atg aaa aaa gca tcc aat ccc gtg gag 528 Pro Ser Pro Ser Pro Ile Glu Met Lys Lys Ala Ser Asn Pro Val Glu 160 165 170 175 gtt ggc atc cag gtc acg cca gag gat gac gat tgt tta tca acg tca 576 Val Gly Ile Gln Val Thr Pro Glu Asp Asp Asp Cys Leu Ser Thr Ser 180 185 190 tct aga gga att tgc ccc aaa cag gaa cac ata gca g at aaa ctt ctg 624 Ser Arg Gly Ile Cys Pro Lys Gln Glu His Ile Ala Asp Lys Leu Leu 195 200 205 cac tgg agg ggc ctc tcc tcc cct cgt tct gca cat gga gct cta atc 672 His Trp Arg Gly Leu Ser Ser Pro Arg Ser Ala His Gly Ala Leu Ile 210 215 220 ccc acg cct ggg atg agt gca gaa tat gcc ccg cag ggt att t gt aaa 720 Pro Thr Pro Gly Met Ser Ala Glu Tyr Ala Pro Gln Gly Ile Cys Lys 225 230 235 gat gag ccc agc agc tac aca tgt aca act tgc aaa cag cca ttc acc 768 Asp Glu Pro Ser Ser Tyr Thr Cys Thr Thr Cys Lys Gln Pro Phe Thr 240 245 250 255 agt gca tgg ttt ctc ttg caa cac gca cag aac act cat gga tta aga 816 Ser Ala Trp Phe Leu Leu Gln His Ala Gln Asn Thr His Gly Leu Arg 260 265 270 atc tac tta gaa agc gaa cac gga agt ccc ctg acc ccg cgg gtt ggt 864 Ile Tyr Leu Glu Ser Glu His Gly Ser Pro Leu Thr Pro Arg Val Gly 275 280 285 atc cct tca gga cta ggt gca gaa tgt cct tcc cag cca cct ctc cat 912 Ile Pro Ser Gly Leu Gly Ala Glu Cys Pro Ser Gln Pro Pro Leu His 290 295 300 ggg att cat att gca gac aat aac ccc ttt aac ctg cta aga ata cca 960 Gly Ile His Ile Ala Asp Asn Asn Pro Phe Asn Leu Leu Arg Ile Pro 305 310 315 gga tca gta tcg aga gag gct tcc ggc ctg gca gaa ggg cgc ttt cca 1008 Gly Ser Val Ser Arg Glu Ala Ser Gly Leu Ala Glu Gly Arg Phe Pro 320 325 330 335 ccc act ccc ccc ctg ttt agt cca cca ccg aga cat cac ttg gac ccc 1056 Pro Thr Pro Pro Leu Phe Ser Pro Pro Pro Arg His His Leu Asp Pro 340 345 350 cac cgc ata gag cgc ctg ggg gcg gaa gag atg gcc ctg gcc acc cat 1104 His Arg Ile Glu Arg Leu Gly Ala Glu Glu Met Ala Leu Ala Thr His 355 360 365 cac ccg agt gcc ttt gac agg gtg ctg cgg ttg aat cca atg gct atg 1152 His Pro Ser Ala Phe Asp Arg Val Leu Arg Leu Asn Pro Met Ala Met 370 375 380 gag cct ccc gcc atg gat ttc tct agg aga ctt aga gag ctg gca ggg 1200 Glu Pro Pro Ala Met Asp Phe Ser Arg Arg Leu Arg Glu Leu Ala Gly 385 390 395 aac acg tct agc cca ccg ctg tcc cca ggc cgg ccc agc cct atg caa 1248 Asn Thr Ser Ser Pro Pro Leu Ser Pro Gly Arg Pro Ser Pro Met Gln 400 405 410 415 agg tta ctg caa cca ttc cag cca ggt agc aag ccg ccc ttc ctg gcg 1296 Arg Leu Leu Gln Pro Phe Gln Pro Gly Ser Lys Pro Pro Phe Leu Ala 420 425 430 acg ccc ccc ctc cct cct ctg caa tcc gcc cct cct ccc tcc cag ccc 1344 Thr Pro Pro Leu Pro Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro Pro Ser Gln Pro 435 440 445 ccg gtc aag tcc aag tca tgc gag ttc tgc ggc aag acg ttc aaa ttt 1392 Pro Val Lys Ser Lys Ser Cys Glu Phe Cys Gly Lys Thr Phe Lys Phe 450 455 460 cag agc aac ctg gtg gtg cac cgg cgc agc cac acg ggc gag aag ccc 1440 Gln Ser Asn Leu Val Val His Arg Arg Ser His Thr Gly Glu Lys Pro 465 470 475 tac aag tgc aac ctg tgc gac cac gcg tgc acc cag gcc agc aag ctg 1488 Tyr Lys Cys Asn Leu Cys Asp His Ala Cys Thr Gln Ala Ser Lys Leu 480 485 490 495 aag cgc cac atg aag acg cac atg cac aaa tcg tcc ccc atg acg gtc 1536 Lys Arg His Met Lys Thr His Met His Lys Ser Ser Pro Met Thr Val 500 505 510 aag tcc gac gac ggt ctc tcc acc gcc agc tcc ccg gaa ccc ggc acc 1584 Lys Ser Asp Asp Gly Leu Ser Thr Ala Ser Ser Pro Glu Pro Gly Thr 515 520 525 agc gac ttg gtg ggc agc gcc agc agc gcg ctc aag tcc gtg gtg gcc 1632 Ser Asp Leu Val Gly Ser Ala Ser Ser Ala Leu Lys Ser Val Val Ala 530 535 540 aag ttc aag agc gag aac gac ccc aac ctg atc ccg gag aac ggg gac 1680 Lys Phe Lys Ser Glu Asn Asp Pro Asn Leu Ile Pro Glu Asn Gly Asp 545 550 555 gag gag gaa gag gag gac gac gag gaa gag gaa gaa gag gag gaa gag 1728 Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu 560 565 570 575 gag gag gag gag ctg acg gag agc gag agg gtg gac tac ggc ttc ggg 1776 Glu Glu Glu Glu Leu Thr Glu Ser Glu Arg Val Asp Tyr Gly Phe Gly 580 585 590 ctg agc ctg gag gcg gcg cgc cac cac gag aac agc tcg cgg ggc gcg 1824 Leu Ser Leu Glu Ala Ala Arg His His Glu Asn Ser Ser Arg Gly Ala 595 600 605 gtc gtg ggc gtg ggc gac gag agc cgc gcc ctg ccc gac gtc atg cag 1872 Val Val Gly Val Gly Asp Glu Ser Arg Ala Leu Pro Asp Val Met Gln 610 615 620 ggc atg gtg ctc agc tcc atg cag cac ttc agc gag gcc ttc cac cag 1920 Gly Met Val Leu Ser Ser Met Gln His Phe Ser Glu Ala Phe His Gln 625 630 635 gtc ctg ggc gag aag cat aag cgc ggc cac ctg gcc gag gcc gag ggc 1968 Val Leu Gly Glu Lys His Lys Arg Gly His Leu Ala Glu Ala Glu Gly 640 645 650 655 cac agg gac act tgc gac gaa gac tcg gtg gcc ggc gag tcg gac cgc 2016 His Arg Asp Thr Cys Asp Glu Asp Ser Val Ala Gly Glu Ser Asp Arg 660 665 670 ata gac gat ggc act gtt aat ggc cgc ggc tgc tcc ccg ggc gag tcg 2064 Ile Asp Asp Gly Thr Val Asn Gly Arg Gly Cys Ser Pro Gly Glu Ser 675 680 685 gcc tcg ggg ggc ctg tcc aaa aag ctg ctg ctg ggc agc ccc agc tcg 2112 Ala Ser Gly Gly Leu Ser Lys Lys Leu Leu Leu Gly Ser Pro Ser Ser 690 695 700 ctg agc ccc ttc tct aag cgc atc aag ctc gag aag gag ttc gac ctg 2160 Leu Ser Pro Phe Ser Lys Arg Ile Lys Leu Glu Lys Glu Phe Asp Leu 705 710 715 ccc ccg gcc gcg atg ccc aac acg gag aac gtg tac tcg cag tgg ctc 2208 Pro Pro Ala Ala Met Pro Asn Thr Glu Asn Val Tyr Ser Gln Trp Leu 720 725 730 735 gcc ggc tac gcg gcc tcc agg cag ctc aaa gat ccc ttc ctt agc ttc 2256 Ala Gly Tyr Ala Ala Ser Arg Gln Leu Lys Asp Pro Phe Leu Ser Phe 740 745 750 gga gac tcc aga caa tcg cct ttt gcc tcc tcg tcg gag cac tcc tcg 2304 Gly Asp Ser Arg Gln Ser Pro Phe Ala Ser Ser Ser Glu His Ser Ser 755 760 765 gag aac ggg agt ttg cgc ttc tcc aca ccg ccc ggg gag ctg gac gga 2352 Glu Asn Gly Ser Leu Arg Phe Ser Thr Pro Pro Gly Glu Leu Asp Gly 770 775 780 ggg atc tcg ggg cgc agc ggc acg gga agt gga ggg agc acg ccc cat 2400 Gly Ile Ser Gly Arg Ser Gly Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Pro His 785 790 795 att agt ggt ccg ggc ccg ggc agg ccc agc tca aaa gag ggc aga cgc 2448 Ile Ser Gly Pro Gly Pro Gly Arg Pro Ser Ser Lys Glu Gly Arg Arg 800 805 810 815 agc gac act t gt tct tca cac acc ccc att cgg cgt agt acc cag aga 2496 Ser Asp Thr Cys Ser Ser His Thr Pro Ile Arg Arg Ser Thr Gln Arg 820 825 830 gct caa gat gtg tgg cag ttt tcg gat gga agc tcg aga gcc ctt aag 2544 Ala Gln Asp Val Trp Gln Phe Ser Asp Gly Ser Ser Arg Ala Leu Lys 835 840 845 ttc tga gaa aat ttg aag ccc cca ggg gtg ggg tgg acg cgt gcc gcc 2592 Phe Glu Asn Leu Lys Pro Pro Gly Val Gly Trp Thr Arg Ala Ala 850 855 860 cag tcg acg tca gcg tgg tct gtc atc ctg cta gtt tgt gat gtt ttc 2640 Gln Ser Thr Ser Ala Trp Ser Val Ile Leu Leu Val Cys Asp Val Phe 865 870 875 tga cag tag cct cca aga agc cgt tgt gcg aag aca gag tcc tgc aga 2688 Gln Pro Pro Arg Ser Arg Cys Ala Lys Thr Glu Ser Cys Arg 880 885 890 gtc ctt cca gcc tag gcc tgc agc gcc att tta ttt ata ttt ttt aat 2736 Val Leu Pro Ala Ala Cys Ser Ala Ile Leu Phe Ile Phe Phe Asn 895 900 905 aaa aag taa aaa caa aaa aac aga ccc aca ttg gaa cag tga atc agt 2784 Lys Lys Lys Gln Lys Asn Arg Pro Thr Leu Glu Gln Ile Ser 910 915 920 ccc ata gag agg gcc cgt gga cca tcg ctg tca tga gtg atg ccc tgg 2832 Pro Ile Glu Arg Ala Arg Gly Pro Ser Leu Ser Val Met Pro Trp 925 930 935 ccc ttc tga aac cag cca acc taa tta cct gta ttg tgg aaa tgc gca 2880 Pro Phe Asn Gln Pro Thr Leu Pro Val Leu Trp Lys Cys Ala 940 945 950 tga gtc ccc aac ccc ttg ttt cta tac att cta tgt tgt ctt tta aaa 2928 Val Pro Asn Pro Leu Phe Leu Tyr Ile Leu Cys Cys Leu Leu Lys 955 960 965 agt gtg ctt aac att gac aca ata aat gtt gga gct tta ggt ggt gtt 2976 Ser Val Leu Asn Ile Asp Thr Ile Asn Val Gly Ala Leu Gly Gly Val 970 975 980 tgc ttg ttc ttt aat ttt taa tgc tta taa gac aat gag gct gct tat 3024 Cys Leu Phe Phe Asn Phe Cys Leu Asp Asn Glu Ala Ala Tyr 985 990 995 gat ttt gta ctt ctg tac ctg ttt cct aca gac acc cat cgg gtg 3069 Asp Phe Val Leu Leu Tyr Leu Phe Pro Thr Asp Thr His Arg Val 1000 1005 1010 ggt agg agg aac aga ttt gag aaa tgg gca gga gat gta gga ggg 3114 Gly Arg Arg Asn Arg Phe Glu Lys Trp Ala Gly Asp Val Gly Gly 1015 1020 1025 gaa cta ggt tac cgc tta tca gat ggc ata aat ttt caa gga gaa 3159 Glu Leu Gly Tyr Arg Leu Ser Asp Gly Ile Asn Phe Gln Gly Glu 1030 1035 1040 tca aaa tgc aaa act tgg gaa taa atc ata gca ata tca taa tta atg 3207 Ser Lys Cys Lys Thr Trp Glu Ile Ile Ala Ile Ser Leu Met 1045 1050 tag tag taa tat tgc tgt tta tta atg ctg aag tgt ggt ttt cct 3252 Tyr Cys Cys Leu Leu Met Leu Lys Cys Gly Phe Pro 1055 1060 1065 aac tgt ctg act tat aat ttg cat acc att aaa taa tgc ata ata 3297 Asn Cys Leu Thr Tyr Asn Leu His Thr Ile Lys Cys Ile Ile 1070 1075 1080 tgg cac gcc gaa tcc tgt ttt tca aat ata tgc ttt tgg tgg cta 3342 Trp His Ala Glu Ser Cys Phe Ser Asn Ile Cys Phe Trp Trp Leu 1085 1090 1095 cca tgc agg att tga att tgt ctt tta att tag ctt agg aaa gaa cat 3390 Pro Cys Arg Ile Ile Cys Leu Leu Ile Leu Arg Lys Glu His 1100 1105 cac tgg gcg agc ggt aaa tcc taa aga agg tga taa atg tca gta 3435 His Trp Ala Ser Gly Lys Ser Arg Arg Met Ser Val 1110 1115 1120 gtt tct tat taa ata ttc taa ttt tag gtt ccc aaa cct tca gga aat 3483 Val Ser Tyr Ile Phe Phe Val Pro Lys Pro Ser Gly Asn 1125 1130 ata tct taa tgc aga caa aca aac ata aaa ctt ctt tag tac tta 3528 Ile Ser Cys Arg Gln Thr Asn Ile Lys Leu Leu Tyr Leu 1135 1140 1145 cat cag gaa att tgg ggc aga ttt tag agg ggg gaa att ata gga 3573 His Gln Glu Ile Trp Gly Arg Phe Arg Gly Glu Ile Ile Gly 1150 1155 1160 gga aag aag ttc aca tca gaa cag aca atc aca gca atg ctc tat 3618 Gly Lys Lys Phe Thr Ser Glu Gln Thr Ile Thr Ala Met Leu Tyr 1165 1170 1175 tcc tta gaa att agt gcc aca aat aag tta cat cta caa aca ggt 3663 Ser Leu Glu Ile Ser Ala Thr Asn Lys Leu His Leu Gln Thr Gly 1180 1185 1190 ggt aaa aat tct ttc tgg ccc agt taa ttt gca cag aac ttt tct 3708 Gly Lys Asn Ser Phe Trp Pro Ser Phe Ala Gln Asn Phe Ser 1195 1200 1205 cag ttt ggt att ttt tac tgc ttg gag atc cag aag aga att aga 3753 Gln Phe Gly Ile Phe Tyr Cys Leu Glu Ile Gln Lys Arg Ile Arg 1210 1215 1220 aac aac ata gca aat taa aat agg ttt gtc aat aat aga gct cag 3798 Asn Asn Ile Ala Asn Asn Arg Phe Val Asn Asn Arg Ala Gln 1225 1230 aca cct gtg tgc tgt aga ttc aca tac agg ccg tga acc taa gtg 3843 Thr Pro Val Cys Cys Arg Phe Thr Tyr Arg Pro Thr Val 1235 1240 1245 ggg aaa atc cta cct atc cac ctt ctg gct aga tta cct agc tta 3888 Gly Lys Ile Leu Pro Ile His Leu Leu Ala Arg Leu Pro Ser Leu 1250 1255 1260 gtg aaa aga tag cca aat aat tgg cat gtg aat tat ttc ctg ctt 3933 Val Lys Arg Pro Asn Asn Trp His Val Asn Tyr Phe Leu Leu 1265 1270 1275 att cat aat aaa taa tga ctg tct a 3958 Ile His Asn Lys Leu Ser 1280 <210> 3 <211> 2358 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> exon <222> (1)..(283) <223> exon1 <220> <221> exon <222> (284)..(613) <223> exon2 <220> <221> exon <222> (614)..(714) <223> exon3 <220> <221> exon <222> (715)..(858) <223> exon4 <220> <221> exon <222> (859)..(2358) <223> exon5 <400> 3 ttt ttt ttt ttt ttt tgc tta aaa aaa agc cat gac ggc tct ccc aca 48 Phe Phe Phe Phe Phe Cys Leu Lys Lys Ser His Asp Gly Ser Pro Thr 1 5 10 15 att cat ctt ccc tgc gcc atc ttt gta tta ttt cta att tat ttt gga 96 Ile His Leu Pro Cys Ala Ile Phe Val Leu Phe Leu Ile Tyr Phe Gly 20 25 30 tgt caa aag gca ctg atg aag ata ttt tct ctg gag tct cct tct ttc 144 Cys Gln Lys Ala Leu Met Lys Ile Phe Ser Leu Glu Ser Pro Ser Phe 35 40 45 taa ccc ggc tct ccc gat gtg aac cga gcc gtc gtc cgc ccg ccg ccg 192 Pro Gly Ser Pro Asp Val Asn Arg Ala Val Val Arg Pro Pro Pro 50 55 60 ccg ccg ccg ccg ccg ccg ccc gcc ccg cag ccc acc atg tct cgc cgc 240 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Pro Gln Pro Thr Met Ser Arg Arg 65 70 75 aag caa ggc aaa ccc cag cac tta agc aaa cgg gaa ttc tcg c cc gag 288 Lys Gln Gly Lys Pro Gln His Leu Ser Lys Arg Glu Phe Ser Pro Glu 80 85 90 95 cct ctt gaa gcc att ctt aca gat gat gaa cca gac cac ggc ccg ttg 336 Pro Leu Glu Ala Ile Leu Thr Asp Asp Glu Pro Asp His Gly Pro Leu 100 105 110 gga gct cca gaa ggg gat cat gac ctc ctc acc tgt ggg cag tgc cag 384 Gly Ala Pro Glu Gly Asp His Asp Leu Leu Thr Cys Gly Gln Cys Gln 115 120 125 atg aac ttc cca ttg ggg gac att ctt att ttt atc gag cac aaa cgg 432 Met Asn Phe Pro Leu Gly Asp Ile Leu Ile Phe Ile Glu His Lys Arg 130 135 140 aaa caa tgc aat ggc agc ctc tgc tta gaa aaa gct gtg gat aag cca 480 Lys Gln Cys Asn Gly Ser Leu Cys Leu Glu Lys Ala Val Asp Lys Pro 145 150 155 cct tcc cct tca cca atc gag atg aaa aaa gca tcc aat ccc gtg gag 528 Pro Ser Pro Ser Pro Ile Glu Met Lys Lys Ala Ser Asn Pro Val Glu 160 165 170 175 gtt ggc atc cag gtc acg cca gag gat gac gat tgt tta tca acg tca 576 Val Gly Ile Gln Val Thr Pro Glu Asp Asp Asp Cys Leu Ser Thr Ser 180 185 190 tct aga gga att tgc ccc aaa cag gaa cac ata gca g at aaa ctt ctg 624 Ser Arg Gly Ile Cys Pro Lys Gln Glu His Ile Ala Asp Lys Leu Leu 195 200 205 cac tgg agg ggc ctc tcc tcc cct cgt tct gca cat gga gct cta atc 672 His Trp Arg Gly Leu Ser Ser Pro Arg Ser Ala His Gly Ala Leu Ile 210 215 220 ccc acg cct ggg atg agt gca gaa tat gcc ccg cag ggt att tgt aaa 720 Pro Thr Pro Gly Met Ser Ala Glu Tyr Ala Pro Gln Gly Ile Cys Lys 225 230 235 gat gag ccc agc agc tac aca tgt aca act tgc aaa cag cca ttc acc 768 Asp Glu Pro Ser Ser Tyr Thr Cys Thr Thr Cys Lys Gln Pro Phe Thr 240 245 250 255 agt gca tgg ttt ctc ttg caa cac gca cag aac act cat gga tta aga 816 Ser Ala Trp Phe Leu Leu Gln His Ala Gln Asn Thr His Gly Leu Arg 260 265 270 atc tac tta gaa agc gaa cac gga agt ccc ctg acc ccg cgg gtt ctt 864 Ile Tyr Leu Glu Ser Glu His Gly Ser Pro Leu Thr Pro Arg Val Leu 275 280 285 cac aca ccc cca ttc ggc gta gta ccc aga gag ctc aag atg tgt ggc 912 His Thr Pro Pro Phe Gly Val Val Pro Arg Glu Leu Lys Met Cys Gly 290 295 300 agt ttt cgg atg gaa gct cga gag ccc tta agt tct gag aaa att tga 960 Ser Phe Arg Met Glu Ala Arg Glu Pro Leu Ser Ser Glu Lys Ile 305 310 315 agc ccc cag ggg tgg ggt gga cgc gtg ccg ccc agt cga cgt cag cgt 1008 Ser Pro Gln Gly Trp Gly Gly Arg Val Pro Pro Ser Arg Arg Gln Arg 320 325 330 ggt ctg tca tcc tgc tag ttt gtg atg ttt tct gac agt agc ctc caa 1056 Gly Leu Ser Ser Cys Phe Val Met Phe Ser Asp Ser Ser Leu Gln 335 340 345 gaa gcc gtt gtg cga aga cag agt cct gca gag tcc ttc cag cct agg 1104 Glu Ala Val Val Arg Arg Gln Ser Pro Ala Glu Ser Phe Gln Pro Arg 350 355 360 365 cct gca gcg cca ttt tat tta tat ttt tta ata aaa agt aaa aac aaa 1152 Pro Ala Ala Pro Phe Tyr Leu Tyr Phe Leu Ile Lys Ser Lys Asn Lys 370 375 380 aaa aca gac cca cat tgg aac agt gaa tca gtc cca tag aga ggg ccc 1200 Lys Thr Asp Pro His Trp Asn Ser Glu Ser Val Pro Arg Gly Pro 385 390 395 gtg gac cat cgc tgt cat gag tga tgc cct ggc cct tct gaa acc agc 1248 Val Asp His Arg Cys His Glu Cys Pro Gly Pro Ser Glu Thr Ser 400 405 410 caa cct aat tac ctg tat tgt gga aat gcg cat gag tcc cca acc cct 1296 Gln Pro Asn Tyr Leu Tyr Cys Gly Asn Ala His Glu Ser Pro Thr Pro 415 420 425 tgt ttc tat aca ttc tat gtt gtc ttt taa aaa gtg tgc tta aca ttg 1344 Cys Phe Tyr Thr Phe Tyr Val Val Phe Lys Val Cys Leu Thr Leu 430 435 440 aca caa taa atg ttg gag ctt tag gtg gtg ttt gct tgt tct tta att 1392 Thr Gln Met Leu Glu Leu Val Val Phe Ala Cys Ser Leu Ile 445 450 455 ttt aat gct tat aag aca atg agg ctg ctt atg att ttg tac ttc tgt 1440 Phe Asn Ala Tyr Lys Thr Met Arg Leu Leu Met Ile Leu Tyr Phe Cys 460 465 470 acc tgt ttc cta cag aca ccc atc ggg tgg gta gga gga aca gat ttg 1488 Thr Cys Phe Leu Gln Thr Pro Ile Gly Trp Val Gly Gly Thr Asp Leu 475 480 485 aga aat ggg cag gag atg tag gag ggg aac tag gtt acc gct tat cag 1536 Arg Asn Gly Gln Glu Met Glu Gly Asn Val Thr Ala Tyr Gln 490 495 500 atg gca taa att ttc aag gag aat caa aat gca aaa ctt ggg aat aaa 1584 Met Ala Ile Phe Lys Glu Asn Gln Asn Ala Lys Leu Gly Asn Lys 505 510 515 tca tag caa tat cat aat taa tgt agt agt aat att gct gtt tat taa 1632 Ser Gln Tyr His Asn Cys Ser Ser Asn Ile Ala Val Tyr 520 525 530 tgc tga agt gtg gtt ttc cta act gtc tga ctt ata att tgc ata cca 1680 Cys Ser Val Val Phe Leu Thr Val Leu Ile Ile Cys Ile Pro 535 540 tta aat aat gca taa tat ggc acg ccg aat cct gtt ttt caa ata tat 1728 Leu Asn Asn Ala Tyr Gly Thr Pro Asn Pro Val Phe Gln Ile Tyr 545 550 555 gct ttt ggt ggc tac cat gca gga ttt gaa ttt gtc ttt taa ttt agc 1776 Ala Phe Gly Gly Tyr His Ala Gly Phe Glu Phe Val Phe Phe Ser 560 565 570 tta gga aag aac atc act ggg cga gcg gta aat cct aaa gaa ggt gat 1824 Leu Gly Lys Asn Ile Thr Gly Arg Ala Val Asn Pro Lys Glu Gly Asp 575 580 585 590 aaa tgt cag tag ttt ctt att aaa tat tct aat ttt agg ttc cca aac 1872 Lys Cys Gln Phe Leu Ile Lys Tyr Ser Asn Phe Arg Phe Pro Asn 595 600 605 ctt cag gaa ata tat ctt aat gca gac aaa caa aca taa aac ttc ttt 1920 Leu Gln Glu Ile Tyr Leu Asn Ala Asp Lys Gln Thr Asn Phe Phe 610 615 620 agt act tac atc agg aaa ttt ggg gca gat ttt aga ggg ggg aaa tta 1968 Ser Thr Tyr Ile Arg Lys Phe Gly Ala Asp Phe Arg Gly Gly Lys Leu 625 630 635 tag gag gaa aga agt tca cat cag aac aga caa tca cag caa tgc tct 2016 Glu Glu Arg Ser Ser His Gln Asn Arg Gln Ser Gln Gln Cys Ser 640 645 650 att cct tag aaa tta gtg cca caa ata agt tac atc tac aaa cag gtg 2064 Ile Pro Lys Leu Val Pro Gln Ile Ser Tyr Ile Tyr Lys Gln Val 655 660 665 gta aaa att ctt tct ggc cca gtt aat ttg cac aga act ttt ctc agt 2112 Val Lys Ile Leu Ser Gly Pro Val Asn Leu His Arg Thr Phe Leu Ser 670 675 680 ttg gta ttt ttt act gct tgg aga tcc aga aga gaa tta gaa aca aca 2160 Leu Val Phe Phe Thr Ala Trp Arg Ser Arg Arg Glu Leu Glu Thr Thr 685 690 695 tag caa att aaa ata ggt ttg tca ata ata gag ctc aga cac ctg tgt 2208 Gln Ile Lys Ile Gly Leu Ser Ile Ile Glu Leu Arg His Leu Cys 700 705 710 gct gta gat tca cat aca ggc cgt gaa cct aag tgg gga aaa tcc tac 2256 Ala Val Asp Ser His Thr Gly Arg Glu Pro Lys Trp Gly Lys Ser Tyr 715 720 725 cta tcc acc ttc tgg cta gat tac cta gct tag tga aaa gat agc caa 2304 Leu Ser Thr Phe Trp Leu Asp Tyr Leu Ala Lys Asp Ser Gln 730 735 740 ata att ggc atg tga att att tcc tgc tta ttc ata ata aat aat gac 2352 Ile Ile Gly Met Ile Ile Ser Cys Leu Phe Ile Ile Asn Asn Asp 745 750 755 tgt cta 2358 Cys Leu 760 <210> 4 <211> 6122 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> exon <222> (1)..(390) <223> exon1 <220> <221> exon <222> (391)..(720) <223> exon2 <220> <221> exon <222> (721)..(822) <223> exon3 <220> <221> exon <222> (823)..(6112) <223> exon4 <400> 4 gac gtt caa gtt cgc agg gac gtc acg tcc gca ctt gaa ctt gca gct 48 Asp Val Gln Val Arg Arg Asp Val Thr Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala 1 5 10 15 cag ggg ggc ttt tgc cat ttt ttt cat ctc tct ctc tcc ctc tat ccc 96 Gln Gly Gly Phe Cys His Phe Phe His Leu Ser Leu Ser Leu Tyr Pro 20 25 30 tct tct ctc ttc ctc tct ctc ttt ttt ttc ctt aaa aaa aaa aaa gcc 144 Ser Ser Leu Phe Leu Ser Leu Phe Phe Phe Leu Lys Lys Lys Lys Ala 35 40 45 atg acg gct ctc cca caa ttc atc ttc cct gcg cca tct ttg tat tat 192 Met Thr Ala Leu Pro Gln Phe Ile Phe Pro Ala Pro Ser Leu Tyr Tyr 50 55 60 ttc taa ttt att ttg gat gtc aaa agg cac tga tga aga tat ttt ctc 240 Phe Phe Ile Leu Asp Val Lys Arg His Arg Tyr Phe Leu 65 70 75 tgg agt ctc ctt ctt tct aac ccg gct ctc ccg atg tga acc gag ccg 288 Trp Ser Leu Leu Leu Ser Asn Pro Ala Leu Pro Met Thr Glu Pro 80 85 90 tcg tcc gca cgc cgc cgc cgc cgc cgc cgc ccg ccc cgc agc cca cca 336 Ser Ser Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Pro Arg Ser Pro Pro 95 100 105 tgt ctc gcc gca agc aag gca aac ccc agc act taa gca aac ggg aat 384 Cys Leu Ala Ala Ser Lys Ala Asn Pro Ser Thr Ala Asn Gly Asn 110 115 120 tct cgc ccg aac ctc ttg aag cca ttc tta cag atg atg aac cag acc 432 Ser Arg Pro Asn Leu Leu Lys Pro Phe Leu Gln Met Met Asn Gln Thr 125 130 135 atg gcc cgt tgg gag ctc cag aag ggg acc acg acc ttc tca cct gtg 480 Met Ala Arg Trp Glu Leu Gln Lys Gly Thr Thr Thr Phe Ser Pro Val 140 145 150 155 ggc agt gcc aga tga att tcc cac tgg ggg aca ttc tta ttt tta tcg 528 Gly Ser Ala Arg Ile Ser His Trp Gly Thr Phe Leu Phe Leu Ser 160 165 170 agc aca aac gga aac aat gca atg gca gcc tct gct tag aaa aag gtg 576 Ser Thr Asn Gly Asn Asn Ala Met Ala Ala Ser Ala Lys Lys Val 175 180 185 tgg ata agc cgc ctt ccc ctt ctc cca tcg aga tga aaa agg cat cca 624 Trp Ile Ser Arg Leu Pro Leu Leu Pro Ser Arg Lys Arg His Pro 190 195 200 atc ctg tgg agg ttg gca tcc agg tca cgc cag agg atg acg att gtt 672 Ile Leu Trp Arg Leu Ala Ser Arg Ser Arg Gln Arg Met Thr Ile Val 205 210 215 tat caa cgt cat cta gag gaa ttt gcc cca aac agg aac aca tag cag 720 Tyr Gln Arg His Leu Glu Glu Phe Ala Pro Asn Arg Asn Thr Gln 220 225 230 ata aac ttc tgc act gga ggg gcc tgt cct ctc ctc ggt ctg cac acg 768 Ile Asn Phe Cys Thr Gly Gly Ala Cys Pro Leu Leu Gly Leu His Thr 235 240 245 gag ctc taa tcc cca cgc ccg gga tga gtg cag aat atg ccc cgc agg 816 Glu Leu Ser Pro Arg Pro Gly Val Gln Asn Met Pro Arg Arg 250 255 260 gta ttt gta aag atg agc cca gca gct aca cat gta caa ctt gca aac 864 Val Phe Val Lys Met Ser Pro Ala Ala Thr His Val Gln Leu Ala Asn 265 270 275 agc cat tca cca gtg cat ggt ttc tct tgc aac acg cac aga aca ctc 912 Ser His Ser Pro Val His Gly Phe Ser Cys Asn Thr His Arg Thr Leu 280 285 290 atg gat taa gaa tct act tag aaa gtg aac acg gaa gtc ccc tga ccc 960 Met Asp Glu Ser Thr Lys Val Asn Thr Glu Val Pro Pro 295 300 305 cgc ggg ttg gta tcc ctt cag gac tag gtg cag aat gtc ctt ccc agc 1008 Arg Gly Leu Val Ser Leu Gln Asp Val Gln Asn Val Leu Pro Ser 310 315 320 cac ctc tcc atg gga ttc ata ttg cag aca ata acc cct tta acc tgc 1056 His Leu Ser Met Gly Phe Ile Leu Gln Thr Ile Thr Pro Leu Thr Cys 325 330 335 taa gaa tac cag gat cag tat cga gag agg ctt ccg gcc tgg cag aag 1104 Glu Tyr Gln Asp Gln Tyr Arg Glu Arg Leu Pro Ala Trp Gln Lys 340 345 350 ggc gct ttc cac cca ctc ccc ccc tgt tta gtc cac cac cga gac atc 1152 Gly Ala Phe His Pro Leu Pro Pro Cys Leu Val His His Arg Asp Ile 355 360 365 act tgg acc ccc acc gca tag agc gcc tgg ggg cgg aag aga tgg ccc 1200 Thr Trp Thr Pro Thr Ala Ser Ala Trp Gly Arg Lys Arg Trp Pro 370 375 380 tgg cca ccc atc acc cga gtg cct ttg aca ggg tgc tgc ggt tga atc 1248 Trp Pro Pro Ile Thr Arg Val Pro Leu Thr Gly Cys Cys Gly Ile 385 390 395 caa tgg cta tgg agc ctc ccg cca tgg att tct cta gga gac tta gag 1296 Gln Trp Leu Trp Ser Leu Pro Pro Trp Ile Ser Leu Gly Asp Leu Glu 400 405 410 agc tgg cag gga aca cgt cta gtc cac cgc tgt ccc cag gcc ggc cca 1344 Ser Trp Gln Gly Thr Arg Leu Val His Arg Cys Pro Gln Ala Gly Pro 415 420 425 430 gtc cta tgc aaa ggt tac tgc aac cat tcc agc cag gta gca agc cac 1392 Val Leu Cys Lys Gly Tyr Cys Asn His Ser Ser Gln Val Ala Ser His 435 440 445 cct tcc tgg cga cgc ccc ccc tcc ctc ctc tgc aat ccg ccc ctc ctc 1440 Pro Ser Trp Arg Arg Pro Pro Ser Leu Leu Cys Asn Pro Pro Leu Leu 450 455 460 cct ccc aac ccc cgg tca agt cca agt cat gcg agt tct gcg gca aga 1488 Pro Pro Asn Pro Arg Ser Ser Pro Ser His Ala Ser Ser Ala Ala Arg 465 470 475 cgt tca aat ttc aga gca act tgg tgg ttc acc gac gca gcc ata ctg 1536 Arg Ser Asn Phe Arg Ala Thr Trp Trp Phe Thr Asp Ala Ala Ile Leu 480 485 490 gtg aga agc cct ata agt gca acc tgt gcg acc acg cgt gca cac agg 1584 Val Arg Ser Pro Ile Ser Ala Thr Cys Ala Thr Thr Arg Ala His Arg 495 500 505 510 cca gca agc tga agc gtc aca tga aga cac aca tgc aca aat cgt ccc 1632 Pro Ala Ser Ser Val Thr Arg His Thr Cys Thr Asn Arg Pro 515 520 cca tga cag tca agt ccg acg atg gcc tct cca cag cca gct ccc cgg 1680 Pro Gln Ser Ser Pro Thr Met Ala Ser Pro Gln Pro Ala Pro Arg 525 530 535 aac ctg gta cca gcg acc tgg tgg gca gcg cca gca gtg cgc tca agt 1728 Asn Leu Val Pro Ala Thr Trp Trp Ala Ala Pro Ala Val Arg Ser Ser 540 545 550 555 cag tgg tgg cca agt tca aga gtg aga acg acc cca act tga tcc cag 1776 Gln Trp Trp Pro Ser Ser Arg Val Arg Thr Thr Pro Thr Ser Gln 560 565 570 aga acg ggg atg agg agg aag agg agg acg acg agg aag aag aag aag 1824 Arg Thr Gly Met Arg Arg Lys Arg Arg Thr Thr Arg Lys Lys Lys Lys 575 580 585 agg agg aag agg agg agg agg agc tga cgg aga gcg aga ggg tgg act 1872 Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Ser Arg Arg Ala Arg Gly Trp Thr 590 595 600 acg gct tcg ggc tga gcc tgg agg ctg cac gcc acc atg aga aca gct 1920 Thr Ala Ser Gly Ala Trp Arg Leu His Ala Thr Met Arg Thr Ala 605 610 615 ctc ggg gcg cag tgg tgg gcg tgg gcg acg agg gcc gcg ccc tgc ccg 1968 Leu Gly Ala Gln Trp Trp Ala Trp Ala Thr Arg Ala Ala Pro Cys Pro 620 625 630 atg tca tgc agg gca tgg tgc tca gct cca tgc agc act tca gcg agg 2016 Met Ser Cys Arg Ala Trp Cys Ser Ala Pro Cys Ser Thr Ser Ala Arg 635 640 645 cct tcc acc agg tcc tgg gcg aaa agc ata agc gta gcc acc tgg ccg 2064 Pro Ser Thr Arg Ser Trp Ala Lys Ser Ile Ser Val Ala Thr Trp Pro 650 655 660 agg ccg agg gcc ata ggg aca ctt gtg atg aag act cgg tgg ccg gtg 2112 Arg Pro Arg Ala Ile Gly Thr Leu Val Met Lys Thr Arg Trp Pro Val 665 670 675 680 agt cag acc gca tag acg atg gca ctg tta atg gtc gtg gct gct ccc 2160 Ser Gln Thr Ala Thr Met Ala Leu Leu Met Val Val Ala Ala Pro 685 690 695 ccg gcg aat cgg ctt cgg ggg gtc tgt cca aaa agc tgc tgc tgg gta 2208 Pro Ala Asn Arg Leu Arg Gly Val Cys Pro Lys Ser Cys Cys Trp Val 700 705 710 gcc cca gct cgc tga gcc cct tct cca agc gca tca agc tgg aga agg 2256 Ala Pro Ala Arg Ala Pro Ser Pro Ser Ala Ser Ser Trp Arg Arg 715 720 725 agt ttg acc tgc ccc cgg ccg cga tgc cta aca cgg aga acg tgt att 2304 Ser Leu Thr Cys Pro Arg Pro Arg Cys Leu Thr Arg Arg Thr Cys Ile 730 735 740 cgc agt ggc tcg ctg gct atg cgg cct cca ggc agc tca aag atc cct 2352 Arg Ser Gly Ser Leu Ala Met Arg Pro Pro Gly Ser Ser Lys Ile Pro 745 750 755 tcc tta ctt tcg gag act cca gac aat cgc ctt ttg cct cct cat cag 2400 Ser Leu Leu Ser Glu Thr Pro Asp Asn Arg Leu Leu Pro Pro His Gln 760 765 770 agc act cct cgg aga acg gga gct tgc gct tct cca cac cgc ccg ggg 2448 Ser Thr Pro Arg Arg Thr Gly Ala Cys Ala Ser Pro His Arg Pro Gly 775 780 785 790 agc tgg acg gag gga tct cag ggc gca gcg gca cag gaa gtg gag gga 2496 Ser Trp Thr Glu Gly Ser Gln Gly Ala Ala Ala Gln Glu Val Glu Gly 795 800 805 gca cgc ccc ata tta gtg gtc cgg gcc cgg gca ggc cca gct caa aag 2544 Ala Arg Pro Ile Leu Val Val Arg Ala Arg Ala Gly Pro Ala Gln Lys 810 815 820 agg gca gac gca gcg aca ctt gtg agt act gtg gga aag tct tca aga 2592 Arg Ala Asp Ala Ala Thr Leu Val Ser Thr Val Gly Lys Ser Ser Arg 825 830 835 act gta gca atc tca ctg tcc aca gga gaa gcc aca cgg gcg aaa ggc 2640 Thr Val Ala Ile Ser Leu Ser Thr Gly Glu Ala Thr Arg Ala Lys Gly 840 845 850 ctt ata aat gcg agc tgt gca act atg cct gtg ccc aga gta gca agc 2688 Leu Ile Asn Ala Ser Cys Ala Thr Met Pro Val Pro Arg Val Ala Ser 855 860 865 870 tca cca ggc aca tga aaa cgc atg gcc agg tgg gga agg acg ttt aca 2736 Ser Pro Gly Thr Lys Arg Met Ala Arg Trp Gly Arg Thr Phe Thr 875 880 885 aat gtg aaa ttt gta aga tgc ctt tta gcg tgt aca gta ccc tgg aga 2784 Asn Val Lys Phe Val Arg Cys Leu Leu Ala Cys Thr Val Pro Trp Arg 890 895 900 aac aca tga aaa aat ggc aca gtg atc gag tgt tga ata atg ata taa 2832 Asn Thr Lys Asn Gly Thr Val Ile Glu Cys Ile Met Ile 905 910 aaa ctg aat aga ggt ata tta ata ccc tcc ctc act ccc act tga tgc 2880 Lys Leu Asn Arg Gly Ile Leu Ile Pro Ser Leu Thr Pro Thr Cys 915 920 925 ccc cct tcc acc cct tcc cca ttg tcc ttc cag ccc tac tcc ctg tag 2928 Pro Pro Ser Thr Pro Ser Pro Leu Ser Phe Gln Pro Tyr Ser Leu 930 935 940 gat ttt tct agt ccc atg tga tca aac aaa caa aca aac aaa caa cag 2976 Asp Phe Ser Ser Pro Met Ser Asn Lys Gln Thr Asn Lys Gln Gln 945 950 955 agg taa tgg aag cta aga ata tga atg agt gct tgt cac cag cac acc 3024 Arg Trp Lys Leu Arg Ile Met Ser Ala Cys His Gln His Thr 960 965 970 tgg ttt ttt gtt ttg ttt ttc ctt ttt ttt ttc ttt ttc ttc ttc ttt 3072 Trp Phe Phe Val Leu Phe Phe Leu Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe 975 980 985 ttt tta aat ttt aaa ttc ttt atg ttc tca ccg ttt gaa tgc atg ttt 3120 Phe Leu Asn Phe Lys Phe Phe Met Phe Ser Pro Phe Glu Cys Met Phe 990 995 1000 1005 ggg gca ata cta ttg cat ttt acg caa act ttg agc ctt tct ctt 3165 Gly Ala Ile Leu Leu His Phe Thr Gln Thr Leu Ser Leu Ser Leu 1010 1015 1020 gtg caa taa ttt aca tgt tgt gta tgt ttt tcc ccc ctt aac tta 3210 Val Gln Phe Thr Cys Cys Val Cys Phe Ser Pro Leu Asn Leu 1025 1030 gac agc atg tat ggt atg tta cgg cta ttt taa att gtc cct aat 3255 Asp Ser Met Tyr Gly Met Leu Arg Leu Phe Ile Val Pro Asn 1035 1040 1045 tca tta tga gca aac atg ttg ttg ctg ttt cca gtt cca ttc tga 3300 Ser Leu Ala Asn Met Leu Leu Leu Phe Pro Val Pro Phe 1050 1055 1060 gag tgt gag gga ggg agg gta gaa aac aac gca tgc tgc ata cat 3345 Glu Cys Glu Gly Gly Arg Val Glu Asn Asn Ala Cys Cys Ile His 1065 1070 1075 aat tct gta ata cag atc atg tgc agc ttt att tta taa cac gag 3390 Asn Ser Val Ile Gln Ile Met Cys Ser Phe Ile Leu His Glu 1080 1085 1090 gag gga aac ggt gtc tgg gtt gac taa ccc tct gca gac aga gca 3435 Glu Gly Asn Gly Val Trp Val Asp Pro Ser Ala Asp Arg Ala 1095 1100 gat agc agt gaa aaa aag gtg cta aat gtc tgt ctc taa agg gtt 3480 Asp Ser Ser Glu Lys Lys Val Leu Asn Val Cys Leu Arg Val 1105 1110 1115 aca tgt att aat tgg aga ggg aaa aaa ggc ctt gaa ttg aca aat 3525 Thr Cys Ile Asn Trp Arg Gly Lys Lys Gly Leu Glu Leu Thr Asn 1120 1125 1130 taa cag aag aac aag ttt att cta tca ttt ggc ttt taa aat gag 3570 Gln Lys Asn Lys Phe Ile Leu Ser Phe Gly Phe Asn Glu 1135 1140 1145 tgc ctt gga tct att caa acc atg ttg atg gtt ttt ttt ctg ctt 3615 Cys Leu Gly Ser Ile Gln Thr Met Leu Met Val Phe Phe Leu Leu 1150 1155 1160 gtt ata aac ttg tag ttt aat cta gca ttg ggt gag gta ata aac 3660 Val Ile Asn Leu Phe Asn Leu Ala Leu Gly Glu Val Ile Asn 1165 1170 1175 ttt agg acc tag cat gta att ctg tgt tgt att tct cac aac aat 3705 Phe Arg Thr His Val Ile Leu Cys Cys Ile Ser His Asn Asn 1180 1185 ggc tac cta aaa ata tga ccc att atg tcc tag tta atc att gat 3750 Gly Tyr Leu Lys Ile Pro Ile Met Ser Leu Ile Ile Asp 1190 1195 1200 ttt tgc ctt taa ctt tgt gaa caa aac tga tta tac cag tat aaa 3795 Phe Cys Leu Leu Cys Glu Gln Asn Leu Tyr Gln Tyr Lys 1205 1210 1215 agc tac ttt gct cct tgt gag agc ata aaa gaa atg ggc tgt ttc 3840 Ser Tyr Phe Ala Pro Cys Glu Ser Ile Lys Glu Met Gly Cys Phe 1220 1225 1230 gcc taa agt ttt att tta ttt tat ttt taa atg gtt atc aaa ttg aat 3888 Ala Ser Phe Ile Leu Phe Tyr Phe Met Val Ile Lys Leu Asn 1235 1240 gtg aaa tgt gca aag gcc ctg gaa tgt gat gaa ata cat tag caa 3933 Val Lys Cys Ala Lys Ala Leu Glu Cys Asp Glu Ile His Gln 1245 1250 1255 gaa gtt cat ctt gtg aca ata ctt gtt taa aat gat gca ttt aat 3978 Glu Val His Leu Val Thr Ile Leu Val Asn Asp Ala Phe Asn 1260 1265 1270 gaa att ctg gcg cca aaa gaa gta gat ccg gct cta gtt ggt tgt 4023 Glu Ile Leu Ala Pro Lys Glu Val Asp Pro Ala Leu Val Gly Cys 1275 1280 1285 tga gtg gac aat aaa atg ata aag ccc ttt aga gga cat ttg aaa 4068 Val Asp Asn Lys Met Ile Lys Pro Phe Arg Gly His Leu Lys 1290 1295 1300 gaa cag gct gat atg atg aga gag aga gag aga gac aga aaa cgg 4113 Glu Gln Ala Asp Met Met Arg Glu Arg Glu Arg Asp Arg Lys Arg 1305 1310 1315 tag tga ttg gtt agc acg atg tag tac tgt ttg cca ttt gaa act aga 4161 Leu Val Ser Thr Met Tyr Cys Leu Pro Phe Glu Thr Arg 1320 1325 aca ggt gta taa ggg gcc agc gat aca atg atg att aac tct gaa 4206 Thr Gly Val Gly Ala Ser Asp Thr Met Met Ile Asn Ser Glu 1330 1335 1340 gct cta aga ctt gca ttt aat gtg aca gtc ttc aaa aag aag agg 4251 Ala Leu Arg Leu Ala Phe Asn Val Thr Val Phe Lys Lys Lys Arg 1345 1350 1355 aag acc ttt aag agc agc agt atc tat gtc tgt gct ccc tgg aag 4296 Lys Thr Phe Lys Ser Ser Ser Ile Tyr Val Cys Ala Pro Trp Lys 1360 1365 1370 ttg tac ttc att tct ttt cca tac act gtg tgc tat ttg tgt taa 4341 Leu Tyr Phe Ile Ser Phe Pro Tyr Thr Val Cys Tyr Leu Cys 1375 1380 1385 cat tga aga gga ttt gtt ttt att ttg ttt tat tct ttc ttt ctt 4386 His Arg Gly Phe Val Phe Ile Leu Phe Tyr Ser Phe Phe Leu 1390 1395 1400 tct ttt ttc ttc ctt ctt tgt ttt aag cta gca tct gcc cca gtt 4431 Ser Phe Phe Phe Leu Leu Cys Phe Lys Leu Ala Ser Ala Pro Val 1405 1410 1415 ggt gtt caa ata gca ctt gac tct gcc tat gat acc tgt atc ttt 4476 Gly Val Gln Ile Ala Leu Asp Ser Ala Tyr Asp Thr Cys Ile Phe 1420 1425 1430 tct cta atc aga gat aca gag gtt gag tat aaa ata aac ctg ctc 4521 Ser Leu Ile Arg Asp Thr Glu Val Glu Tyr Lys Ile Asn Leu Leu 1435 1440 1445 aga tag gac aat taa gtg cac tgt aca gtt ttc cca gtt tac agg 4566 Arg Asp Asn Val His Cys Thr Val Phe Pro Val Tyr Arg 1450 1455 tct tta tta agg gaa acg ttg caa gaa tgc tga aaa caa ttg aac 4611 Ser Leu Leu Arg Glu Thr Leu Gln Glu Cys Lys Gln Leu Asn 1460 1465 1470 aca atc tca atg atg agc att aaa aaa taa taa aaa aaa aca agc 4656 Thr Ile Ser Met Met Ser Ile Lys Lys Lys Lys Thr Ser 1475 1480 1485 aaa cct aaa aaa aac taa gac aga cgt tgc cag cca ttg act tga 4701 Lys Pro Lys Lys Asn Asp Arg Arg Cys Gln Pro Leu Thr 1490 1495 cta ttg agc ttc ctc act tgg atg caa cat tgc aag cgc tgt gga 4746 Leu Leu Ser Phe Leu Thr Trp Met Gln His Cys Lys Arg Cys Gly 1500 1505 1510 tgg aaa caa cac act taa cat aga aac gaa tga ctc ctt tgc ttc 4791 Trp Lys Gln His Thr His Arg Asn Glu Leu Leu Cys Phe 1515 1520 1525 tac agt gca agg att ttt gta caa aac ttt ttt aag tat aaa tgt 4836 Tyr Ser Ala Arg Ile Phe Val Gln Asn Phe Phe Lys Tyr Lys Cys 1530 1535 1540 taa gaa aag aat ttt taa aaa gac act tca tta tgt tta ggg ggg 4881 Glu Lys Asn Phe Lys Asp Thr Ser Leu Cys Leu Gly Gly 1545 1550 1555 aac agc att tta ggg ttc cat tgt ctt ggt ggt gtt aca aga cct 4926 Asn Ser Ile Leu Gly Phe His Cys Leu Gly Gly Val Thr Arg Pro 1560 1565 1570 gtt atc cat tta aaa atg gta gtg gaa att cta tgc ctt gga tca 4971 Val Ile His Leu Lys Met Val Val Glu Ile Leu Cys Leu Gly Ser 1575 1580 1585 cac acc gct ctt cag gtt gta aaa aaa aat gaa aac aaa aca aaa 5016 His Thr Ala Leu Gln Val Val Lys Lys Asn Glu Asn Lys Thr Lys 1590 1595 1600 caa aaa aaa aac ata cat ggg gaa agg ttt aag att ata tag tac 5061 Gln Lys Lys Asn Ile His Gly Glu Arg Phe Lys Ile Ile Tyr 1605 1610 tta aaa ata gga aaa cgc aca ctc atg ttg att cct atg cta aaa 5106 Leu Lys Ile Gly Lys Arg Thr Leu Met Leu Ile Pro Met Leu Lys 1615 1620 1625 cac agt tat ggt ctt ctt tct gta ttt cta gaa tgg tat ttg aat 5151 His Ser Tyr Gly Leu Leu Ser Val Phe Leu Glu Trp Tyr Leu Asn 1630 1635 1640 taa atg ttc atc tag tgt tag gca cta tag tat tta tat tga agc 5196 Met Phe Ile Cys Ala Leu Tyr Leu Tyr Ser 1645 1650 ttg tat ttt taa ctg ttg ctt gtt cac tca aaa ggt atc aat gta 5241 Leu Tyr Phe Leu Leu Leu Val His Ser Lys Gly Ile Asn Val 1655 1660 1665 cct ttt tgt tag tag aaa aaa aaa gac agg ctg cca cag tat att 5286 Pro Phe Cys Lys Lys Lys Asp Arg Leu Pro Gln Tyr Ile 1670 1675 1680 ttt tta att tgg cag gat aat ata gtg caa att att tgt atg ctg 5331 Phe Leu Ile Trp Gln Asp Asn Ile Val Gln Ile Ile Cys Met Leu 1685 1690 1695 aga gag aga gag aga gag aga gag aga gag aga gag gtg tga cat 5376 Arg Glu Arg Glu Arg Glu Arg Glu Arg Glu Arg Glu Val His 1700 1705 1710 tgt aca gag aag cca tat aat ggc ggt ttg ggg agc ctg cta gaa 5421 Cys Thr Glu Lys Pro Tyr Asn Gly Gly Leu Gly Ser Leu Leu Glu 1715 1720 1725 tgt cac atg gat ggc tgt cat agg ggt tgt aca tat cct ttt ccc 5466 Cys His Met Asp Gly Cys His Arg Gly Cys Thr Tyr Pro Phe Pro 1730 1735 1740 cct ttc ctg ctg cca tgc tgt acg cag cac tgc aag cta ata gcg 5511 Pro Phe Leu Leu Pro Cys Cys Thr Gln His Cys Lys Leu Ile Ala 1745 1750 1755 ttg gtt tgt tat gta gtg tgc ttt ggc ccc tcc tcc ccg ctc acc 5556 Leu Val Cys Tyr Val Val Cys Phe Gly Pro Ser Ser Pro Leu Thr 1760 1765 1770 cga cat tcc agc atc tta cct tca tat gca gta aaa gaa aga aag 5601 Arg His Ser Ser Ile Leu Pro Ser Tyr Ala Val Lys Glu Arg Lys 1775 1780 1785 aaa aaa aaa aag gaa aaa aaa aac aac aac aat gtt ttg cag ttt 5646 Lys Lys Lys Lys Glu Lys Lys Asn Asn Asn Asn Val Leu Gln Phe 1790 1795 1800 ttt tca ttg cca aaa act aaa tgg tgc ttt ata ttt aga ttg gag 5691 Phe Ser Leu Pro Lys Thr Lys Trp Cys Phe Ile Phe Arg Leu Glu 1805 1810 1815 aga att tct tat gca aag cat att aaa gag aaa gcc cgc ttt agt 5736 Arg Ile Ser Tyr Ala Lys His Ile Lys Glu Lys Ala Arg Phe Ser 1820 1825 1830 caa tac ttt ttt gta aat ggc aat gca gaa tat ttt gtt att ggc 5781 Gln Tyr Phe Phe Val Asn Gly Asn Ala Glu Tyr Phe Val Ile Gly 1835 1840 1845 ctt ttc tat tcc tgt aat gaa agc tgt ttg tcg taa ctt gaa att 5826 Leu Phe Tyr Ser Cys Asn Glu Ser Cys Leu Ser Leu Glu Ile 1850 1855 tta tct ttt act atg gga gtc act att tat tat tgc tta tat gcc 5871 Leu Ser Phe Thr Met Gly Val Thr Ile Tyr Tyr Cys Leu Tyr Ala 1860 1865 1870 ctg ttc aaa aca gag gca ctt aat ttg atc ttt tat ttt tct ctg 5916 Leu Phe Lys Thr Glu Ala Leu Asn Leu Ile Phe Tyr Phe Ser Leu 1875 1880 1885 ttt tta tta tta ttt ttt tta att tgg atg acc aaa ggt cat tgc 5961 Phe Leu Leu Leu Phe Phe Leu Ile Trp Met Thr Lys Gly His Cys 1890 1895 1900 aac ctg gct ttt tac tgt att tgt ttc tgg tct ttg tta agt tct 6006 Asn Leu Ala Phe Tyr Cys Ile Cys Phe Trp Ser Leu Leu Ser Ser 1905 1910 1915 att gga aaa acc act gtc tgt gtt ttt ttg gca gtt gtc tgc att 6051 Ile Gly Lys Thr Thr Val Cys Val Phe Leu Ala Val Val Cys Ile 1920 1925 1930 aac ctg ttc ata cac cca ttt tgt ccc ttt att gaa aaa aaa taa 6096 Asn Leu Phe Ile His Pro Phe Cys Pro Phe Ile Glu Lys Lys 1935 1940 1945 aaa aat taa agt act a aaaaaaaaaa 6122 Lys Asn Ser Thr 1950 <210> 5 <211> 3425 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> exon <222> (1)..(390) <223> exon1 <220> <221> exon <222> (391)..(720) <223> exon2 <220> <221> exon <222> (721)..(822) <223> exon3 <220> <221> exon <222> (823)..(2565) <223> exon4 <220> <221> exon <222> (2566)..(3425) <223> exon5 <400> 5 gac gtt caa gtt cgc agg gac gtc acg tcc gca ctt gaa ctt gca gct 48 Asp Val Gln Val Arg Arg Asp Val Thr Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala 1 5 10 15 cag ggg ggc ttt tgc cat ttt ttt cat ctc tct ctc tcc ctc tat ccc 96 Gln Gly Gly Phe Cys His Phe Phe His Leu Ser Leu Ser Leu Tyr Pro 20 25 30 tct tct ctc ttc ctc tct ctc ttt ttt ttc ctt aaa aaa aaa aaa gcc 144 Ser Ser Leu Phe Leu Ser Leu Phe Phe Phe Leu Lys Lys Lys Lys Ala 35 40 45 atg acg gct ctc cca caa ttc atc ttc cct gcg cca tct ttg tat tat 192 Met Thr Ala Leu Pro Gln Phe Ile Phe Pro Ala Pro Ser Leu Tyr Tyr 50 55 60 ttc taa ttt att ttg gat gtc aaa agg cac tga tga aga tat ttt ctc 240 Phe Phe Ile Leu Asp Val Lys Arg His Arg Tyr Phe Leu 65 70 75 tgg agt ctc ctt ctt tct aac ccg gct ctc ccg atg tga acc gag ccg 288 Trp Ser Leu Leu Leu Ser Asn Pro Ala Leu Pro Met Thr Glu Pro 80 85 90 tcg tcc gca cgc cgc cgc cgc cgc cgc cgc ccg ccc cgc agc cca cca 336 Ser Ser Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Pro Arg Ser Pro Pro 95 100 105 tgt ctc gcc gca agc aag gca aac ccc agc act taa gca aac ggg aat 384 Cys Leu Ala Ala Ser Lys Ala Asn Pro Ser Thr Ala Asn Gly Asn 110 115 120 tct cgc ccg aac ctc ttg aag cca ttc tta cag atg atg aac cag acc 432 Ser Arg Pro Asn Leu Leu Lys Pro Phe Leu Gln Met Met Asn Gln Thr 125 130 135 atg gcc cgt tgg gag ctc cag aag ggg acc acg acc ttc tca cct gtg 480 Met Ala Arg Trp Glu Leu Gln Lys Gly Thr Thr Thr Phe Ser Pro Val 140 145 150 155 ggc agt gcc aga tga att tcc cac tgg ggg aca ttc tta ttt tta tcg 528 Gly Ser Ala Arg Ile Ser His Trp Gly Thr Phe Leu Phe Leu Ser 160 165 170 agc aca aac gga aac aat gca atg gca gcc tct gct tag aaa aag gtg 576 Ser Thr Asn Gly Asn Asn Ala Met Ala Ala Ser Ala Lys Lys Val 175 180 185 tgg ata agc cgc ctt ccc ctt ctc cca tcg aga tga aaa agg cat cca 624 Trp Ile Ser Arg Leu Pro Leu Leu Pro Ser Arg Lys Arg His Pro 190 195 200 atc ctg tgg agg ttg gca tcc agg tca cgc cag agg atg acg att gtt 672 Ile Leu Trp Arg Leu Ala Ser Arg Ser Arg Gln Arg Met Thr Ile Val 205 210 215 tat caa cgt cat cta gag gaa ttt gcc cca aac agg aac aca tag cag 720 Tyr Gln Arg His Leu Glu Glu Phe Ala Pro Asn Arg Asn Thr Gln 220 225 230 ata aac ttc tgc act gga ggg gcc tgt cct ctc ctc ggt ctg cac acg 768 Ile Asn Phe Cys Thr Gly Gly Ala Cys Pro Leu Leu Gly Leu His Thr 235 240 245 gag ctc taa tcc cca cgc ccg gga tga gtg cag aat atg ccc cgc agg 816 Glu Leu Ser Pro Arg Pro Gly Val Gln Asn Met Pro Arg Arg 250 255 260 gta ttt gta aag atg agc cca gca gct aca cat gta caa ctt gca aac 864 Val Phe Val Lys Met Ser Pro Ala Ala Thr His Val Gln Leu Ala Asn 265 270 275 agc cat tca cca gtg cat ggt ttc tct tgc aac acg cac aga aca ctc 912 Ser His Ser Pro Val His Gly Phe Ser Cys Asn Thr His Arg Thr Leu 280 285 290 atg gat taa gaa tct act tag aaa gtg aac acg gaa gtc ccc tga ccc 960 Met Asp Glu Ser Thr Lys Val Asn Thr Glu Val Pro Pro 295 300 305 cgc ggg ttg gta tcc ctt cag gac tag gtg cag aat gtc ctt ccc agc 1008 Arg Gly Leu Val Ser Leu Gln Asp Val Gln Asn Val Leu Pro Ser 310 315 320 cac ctc tcc atg gga ttc ata ttg cag aca ata acc cct tta acc tgc 1056 His Leu Ser Met Gly Phe Ile Leu Gln Thr Ile Thr Pro Leu Thr Cys 325 330 335 taa gaa tac cag gat cag tat cga gag agg ctt ccg gcc tgg cag aag 1104 Glu Tyr Gln Asp Gln Tyr Arg Glu Arg Leu Pro Ala Trp Gln Lys 340 345 350 ggc gct ttc cac cca ctc ccc ccc tgt tta gtc cac cac cga gac atc 1152 Gly Ala Phe His Pro Leu Pro Pro Cys Leu Val His His Arg Asp Ile 355 360 365 act tgg acc ccc acc gca tag agc gcc tgg ggg cgg aag aga tgg ccc 1200 Thr Trp Thr Pro Thr Ala Ser Ala Trp Gly Arg Lys Arg Trp Pro 370 375 380 tgg cca ccc atc acc cga gtg cct ttg aca ggg tgc tgc ggt tga atc 1248 Trp Pro Pro Ile Thr Arg Val Pro Leu Thr Gly Cys Cys Gly Ile 385 390 395 caa tgg cta tgg agc ctc ccg cca tgg att tct cta gga gac tta gag 1296 Gln Trp Leu Trp Ser Leu Pro Pro Trp Ile Ser Leu Gly Asp Leu Glu 400 405 410 agc tgg cag gga aca cgt cta gtc cac cgc tgt ccc cag gcc ggc cca 1344 Ser Trp Gln Gly Thr Arg Leu Val His Arg Cys Pro Gln Ala Gly Pro 415 420 425 430 gtc cta tgc aaa ggt tac tgc aac cat tcc agc cag gta gca agc cac 1392 Val Leu Cys Lys Gly Tyr Cys Asn His Ser Ser Gln Val Ala Ser His 435 440 445 cct tcc tgg cga cgc ccc ccc tcc ctc ctc tgc aat ccg ccc ctc ctc 1440 Pro Ser Trp Arg Arg Pro Pro Ser Leu Leu Cys Asn Pro Pro Leu Leu 450 455 460 cct ccc aac ccc cgg tca agt cca agt cat gcg agt tct gcg gca aga 1488 Pro Pro Asn Pro Arg Ser Ser Pro Ser His Ala Ser Ser Ala Ala Arg 465 470 475 cgt tca aat ttc aga gca act tgg tgg ttc acc gac gca gcc ata ctg 1536 Arg Ser Asn Phe Arg Ala Thr Trp Trp Phe Thr Asp Ala Ala Ile Leu 480 485 490 gtg aga agc cct ata agt gca acc tgt gcg acc acg cgt gca cac agg 1584 Val Arg Ser Pro Ile Ser Ala Thr Cys Ala Thr Thr Arg Ala His Arg 495 500 505 510 cca gca agc tga agc gtc aca tga aga cac aca tgc aca aat cgt ccc 1632 Pro Ala Ser Ser Val Thr Arg His Thr Cys Thr Asn Arg Pro 515 520 cca tga cag tca agt ccg acg atg gcc tct cca cag cca gct ccc cgg 1680 Pro Gln Ser Ser Pro Thr Met Ala Ser Pro Gln Pro Ala Pro Arg 525 530 535 aac ctg gta cca gcg acc tgg tgg gca gcg cca gca gtg cgc tca agt 1728 Asn Leu Val Pro Ala Thr Trp Trp Ala Ala Pro Ala Val Arg Ser Ser 540 545 550 555 cag tgg tgg cca agt tca aga gtg aga acg acc cca act tga tcc cag 1776 Gln Trp Trp Pro Ser Ser Arg Val Arg Thr Thr Pro Thr Ser Gln 560 565 570 aga acg ggg atg agg agg aag agg agg acg acg agg aag aag aag aag 1824 Arg Thr Gly Met Arg Arg Lys Arg Arg Thr Thr Arg Lys Lys Lys Lys 575 580 585 agg agg aag agg agg agg agg agc tga cgg aga gcg aga ggg tgg act 1872 Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Ser Arg Arg Ala Arg Gly Trp Thr 590 595 600 acg gct tcg ggc tga gcc tgg agg ctg cac gcc acc atg aga aca gct 1920 Thr Ala Ser Gly Ala Trp Arg Leu His Ala Thr Met Arg Thr Ala 605 610 615 ctc ggg gcg cag tgg tgg gcg tgg gcg acg agg gcc gcg ccc tgc ccg 1968 Leu Gly Ala Gln Trp Trp Ala Trp Ala Thr Arg Ala Ala Pro Cys Pro 620 625 630 atg tca tgc agg gca tgg tgc tca gct cca tgc agc act tca gcg agg 2016 Met Ser Cys Arg Ala Trp Cys Ser Ala Pro Cys Ser Thr Ser Ala Arg 635 640 645 cct tcc acc agg tcc tgg gcg aaa agc ata agc gta gcc acc tgg ccg 2064 Pro Ser Thr Arg Ser Trp Ala Lys Ser Ile Ser Val Ala Thr Trp Pro 650 655 660 agg ccg agg gcc ata ggg aca ctt gtg atg aag act cgg tgg ccg gtg 2112 Arg Pro Arg Ala Ile Gly Thr Leu Val Met Lys Thr Arg Trp Pro Val 665 670 675 680 agt cag acc gca tag acg atg gca ctg tta atg gtc gtg gct gct ccc 2160 Ser Gln Thr Ala Thr Met Ala Leu Leu Met Val Val Ala Ala Pro 685 690 695 ccg gcg aat cgg ctt cgg ggg gtc tgt cca aaa agc tgc tgc tgg gta 2208 Pro Ala Asn Arg Leu Arg Gly Val Cys Pro Lys Ser Cys Cys Trp Val 700 705 710 gcc cca gct cgc tga gcc cct tct cca agc gca tca agc tgg aga agg 2256 Ala Pro Ala Arg Ala Pro Ser Pro Ser Ala Ser Ser Trp Arg Arg 715 720 725 agt ttg acc tgc ccc cgg ccg cga tgc cta aca cgg aga acg tgt att 2304 Ser Leu Thr Cys Pro Arg Pro Arg Cys Leu Thr Arg Arg Thr Cys Ile 730 735 740 cgc agt ggc tcg ctg gct atg cgg cct cca ggc agc tca aag atc cct 2352 Arg Ser Gly Ser Leu Ala Met Arg Pro Pro Gly Ser Ser Lys Ile Pro 745 750 755 tcc tta ctt tcg gag act cca gac aat cgc ctt ttg cct cct cat cag 2400 Ser Leu Leu Ser Glu Thr Pro Asp Asn Arg Leu Leu Pro Pro His Gln 760 765 770 agc act cct cgg aga acg gga gct tgc gct tct cca cac cgc ccg ggg 2448 Ser Thr Pro Arg Arg Thr Gly Ala Cys Ala Ser Pro His Arg Pro Gly 775 780 785 790 agc tgg acg gag gga tct cag ggc gca gcg gca cag gaa gtg gag gga 2496 Ser Trp Thr Glu Gly Ser Gln Gly Ala Ala Ala Gln Glu Val Glu Gly 795 800 805 gca cgc ccc ata tta gtg gtc cgg gcc cgg gca ggc cca gct caa aag 2544 Ala Arg Pro Ile Leu Val Val Arg Ala Arg Ala Gly Pro Ala Gln Lys 810 815 820 agg gca gac gca gcg aca ctt gtc ctt cac aca ccc ccg ttc ggc gta 2592 Arg Ala Asp Ala Ala Thr Leu Val Leu His Thr Pro Pro Phe Gly Val 825 830 835 gta ccc cgc gag ctc aag atg tgt ggc agt ttt cgg atg gaa gct caa 2640 Val Pro Arg Glu Leu Lys Met Cys Gly Ser Phe Arg Met Glu Ala Gln 840 845 850 gaa ccc tta agt tct gag aaa ctt tga agc ccc caa ggg cgg ggc gga 2688 Glu Pro Leu Ser Ser Glu Lys Leu Ser Pro Gln Gly Arg Gly Gly 855 860 865 cat gcg ccg ccc agc cga cgt caa cgt gct ccg tta tcc tgc tag att 2736 His Ala Pro Pro Ser Arg Arg Gln Arg Ala Pro Leu Ser Cys Ile 870 875 880 gtg atg ttt tct gac agt agc ctc caa gaa gac aag agt cct gcc gag 2784 Val Met Phe Ser Asp Ser Ser Leu Gln Glu Asp Lys Ser Pro Ala Glu 885 890 895 900 tcc tcc cag cct ggg cct gca gtg cca ttt tat tta tat ttt tta ata 2832 Ser Ser Gln Pro Gly Pro Ala Val Pro Phe Tyr Leu Tyr Phe Leu Ile 905 910 915 aaa cgt aaa aac aaa aaa aac cag acc cac att gga aca gtg aac ccg 2880 Lys Arg Lys Asn Lys Lys Asn Gln Thr His Ile Gly Thr Val Asn Pro 920 925 930 tcc cat cca gag ggc cct agg act gcc gca gtt gga gcg acg tcc aac 2928 Ser His Pro Glu Gly Pro Arg Thr Ala Ala Val Gly Ala Thr Ser Asn 935 940 945 cct ttt gaa acc agc caa cct aat tac ccg tac tgt gga aat gag cat 2976 Pro Phe Glu Thr Ser Gln Pro Asn Tyr Pro Tyr Cys Gly Asn Glu His 950 955 960 gac ccc tga ccc ctt gtt tct ata cat tct atg ttg tct ttt aaa aag 3024 Asp Pro Pro Leu Val Ser Ile His Ser Met Leu Ser Phe Lys Lys 965 970 975 tgt gct taa cat tga cat aat aaa tgt tgg agc ttt agg cgg tgt gtg 3072 Cys Ala His His Asn Lys Cys Trp Ser Phe Arg Arg Cys Val 980 985 990 ctt gtt ttt taa ttt tta atg ctc gta aga caa tgt ggc tgc ttc agg 3120 Leu Val Phe Phe Leu Met Leu Val Arg Gln Cys Gly Cys Phe Arg 995 1000 1005 ctt tat gtc tgt gta ctt ttt ttc ctt cag aag ctc ata ggg tga 3165 Leu Tyr Val Cys Val Leu Phe Phe Leu Gln Lys Leu Ile Gly 1010 1015 1020 gca gaa gga cca gac tca agt gcc agg cag gag acc tag aaa agg 3210 Ala Glu Gly Pro Asp Ser Ser Ala Arg Gln Glu Thr Lys Arg 1025 1030 1035 aag tag gct ttt cag atg gca tac att ttc aaa gaa aat caa aat 3255 Lys Ala Phe Gln Met Ala Tyr Ile Phe Lys Glu Asn Gln Asn 1040 1045 1050 gca aag cta ggg gat aaa tca tag taa tat cat aat taa tgt agt agt 3303 Ala Lys Leu Gly Asp Lys Ser Tyr His Asn Cys Ser Ser 1055 1060 att gct gtt tat taa tgc tga cgt gtg ttt ttc ctc tct gac tta 3348 Ile Ala Val Tyr Cys Arg Val Phe Phe Leu Ser Asp Leu 1065 1070 1075 taa ttt gca tac cat taa ata atg cat aaa tat ggc aca ctg aat 3393 Phe Ala Tyr His Ile Met His Lys Tyr Gly Thr Leu Asn 1080 1085 cct ttt tca aat aca cgc ttt tgg tga cta 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Val Lys Arg His Arg Tyr Phe Leu 65 70 75 tgg agt ctc ctt ctt tct aac ccg gct ctc ccg atg tga acc gag ccg 288 Trp Ser Leu Leu Leu Ser Asn Pro Ala Leu Pro Met Thr Glu Pro 80 85 90 tcg tcc gca cgc cgc cgc cgc cgc cgc cgc ccg ccc cgc agc cca cca 336 Ser Ser Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Pro Arg Ser Pro Pro 95 100 105 tgt ctc gcc gca agc aag gca aac ccc agc act taa gca aac ggg aat 384 Cys Leu Ala Ala Ser Lys Ala Asn Pro Ser Thr Ala Asn Gly Asn 110 115 120 tct cgc ccg aac ctc ttg aag cca ttc tta cag atg atg aac cag acc 432 Ser Arg Pro Asn Leu Leu Lys Pro Phe Leu Gln Met Met Asn Gln Thr 125 130 135 atg gcc cgt tgg gag ctc cag aag ggg acc acg acc ttc tca cct gtg 480 Met Ala Arg Trp Glu Leu Gln Lys Gly Thr Thr Thr Phe Ser Pro Val 140 145 150 155 ggc agt gcc aga tga att tcc cac tgg ggg aca ttc tta ttt tta tcg 528 Gly Ser Ala Arg Ile Ser His Trp Gly Thr Phe Leu Phe Leu Ser 160 165 170 agc aca aac gga aac aat gca atg gca gcc tct gct tag aaa aag gtg 576 Ser Thr Asn Gly Asn Asn Ala Met Ala Ala Ser Ala Lys Lys Val 175 180 185 tgg ata agc cgc ctt ccc ctt ctc cca tcg aga tga aaa agg cat cca 624 Trp Ile Ser Arg Leu Pro Leu Leu Pro Ser Arg Lys Arg His Pro 190 195 200 atc ctg tgg agg ttg gca tcc agg tca cgc cag agg atg acg att gtt 672 Ile Leu Trp Arg Leu Ala Ser Arg Ser Arg Gln Arg Met Thr Ile Val 205 210 215 tat caa cgt cat cta gag gaa ttt gcc cca aac agg aac aca tag cag 720 Tyr Gln Arg His Leu Glu Glu Phe Ala Pro Asn Arg Asn Thr Gln 220 225 230 ata aac ttc tgc act gga ggg gcc tgt cct ctc ctc ggt ctg cac acg 768 Ile Asn Phe Cys Thr Gly Gly Ala Cys Pro Leu Leu Gly Leu His Thr 235 240 245 gag ctc taa tcc cca cgc ccg gga tga gtg cag aat atg ccc cgc agg 816 Glu Leu Ser Pro Arg Pro Gly Val Gln Asn Met Pro Arg Arg 250 255 260 gta ttt gta aag atg agc cca gca gct aca cat gta caa ctt gca aac 864 Val Phe Val Lys Met Ser Pro Ala Ala Thr His Val Gln Leu Ala Asn 265 270 275 agc cat tca cca gtg cat ggt ttc tct tgc aac acg cac aga aca ctc 912 Ser His Ser Pro Val His Gly Phe Ser Cys Asn Thr His Arg Thr Leu 280 285 290 atg gat taa gaa tct act tag aaa gtg aac acg gaa gtc ccc tga ccc 960 Met Asp Glu Ser Thr Lys Val Asn Thr Glu Val Pro Pro 295 300 305 cgc gg g tcc ttc aca cac ccc cgt tcg gcg tag tac ccc gcg agc tca 1008 Arg Gly Ser Phe Thr His Pro Arg Ser Ala Tyr Pro Ala Ser Ser 310 315 320 aga tgt gtg gca gtt ttc gga tgg aag ctc aag aac cct taa gtt ctg 1056 Arg Cys Val Ala Val Phe Gly Trp Lys Leu Lys Asn Pro Val Leu 325 330 335 aga aac ttt gaa gcc ccc aag ggc ggg gcg gac atg cgc cgc cca gcc 1104 Arg Asn Phe Glu Ala Pro Lys Gly Gly Ala Asp Met Arg Arg Pro Ala 340 345 350 gac gtc aac gtg ctc cgt tat cct gct aga ttg tga tgt ttt ctg aca 1152 Asp Val Asn Val Leu Arg Tyr Pro Ala Arg Leu Cys Phe Leu Thr 355 360 365 gta gcc tcc aag aag aca aga gtc ctg ccg agt cct ccc agc ctg ggc 1200 Val Ala Ser Lys Lys Thr Arg Val Leu Pro Ser Pro Pro Ser Leu Gly 370 375 380 ctg cag tgc cat ttt att tat att ttt taa taa aac gta aaa aca aaa 1248 Leu Gln Cys His Phe Ile Tyr Ile Phe Asn Val Lys Thr Lys 385 390 395 aaa acc aga ccc aca ttg gaa cag tga acc cgt ccc atc cag agg gcc 1296 Lys Thr Arg Pro Thr Leu Glu Gln Thr Arg Pro Ile Gln Arg Ala 400 405 410 cta gga ctg ccg cag ttg gag cga cgt cca acc ctt ttg aaa cca gcc 1344 Leu Gly Leu Pro Gln Leu Glu Arg Arg Pro Thr Leu Leu Lys Pro Ala 415 420 425 aac cta att acc cgt act gtg gaa atg agc atg acc cct gac ccc ttg 1392 Asn Leu Ile Thr Arg Thr Val Glu Met Ser Met Thr Pro Asp Pro Leu 430 435 440 ttt cta tac att cta tgt tgt ctt tta aaa agt gtg ctt aac att gac 1440 Phe Leu Tyr Ile Leu Cys Cys Leu Leu Lys Ser Val Leu Asn Ile Asp 445 450 455 460 ata ata aat gtt gga gct tta ggc ggt gtg tgc ttg ttt ttt aat ttt 1488 Ile Ile Asn Val Gly Ala Leu Gly Gly Val Cys Leu Phe Phe Asn Phe 465 470 475 taa tgc tcg taa gac aat gtg gct gct tca ggc ttt atg tct gtg tac 1536 Cys Ser Asp Asn Val Ala Ala Ser Gly Phe Met Ser Val Tyr 480 485 490 ttt ttt tcc ttc aga agc tca tag ggt gag cag aag gac cag act caa 1584 Phe Phe Ser Phe Arg Ser Ser Gly Glu Gln Lys Asp Gln Thr Gln 495 500 505 gtg cca ggc agg aga cct aga aaa gga agt agg ctt ttc aga tgg cat 1632 Val Pro Gly Arg Arg Pro Arg Lys Gly Ser Arg Leu Phe Arg Trp His 510 515 520 aca ttt tca aag aaa atc aaa atg caa agc tag ggg ata aat cat agt 1680 Thr Phe Ser Lys Lys Ile Lys Met Gln Ser Gly Ile Asn His Ser 525 530 535 aat atc ata att aat gta gta gta ttg ctg ttt att aat gct gac gtg 1728 Asn Ile Ile Ile Asn Val Val Val Leu Leu Phe Ile Asn Ala Asp Val 540 545 550 tgt ttt tcc tct ctg act tat aat ttg cat acc att aaa taa tgc ata 1776 Cys Phe Ser Ser Leu Thr Tyr Asn Leu His Thr Ile Lys Cys Ile 555 560 565 aat atg gca cac tga atc ctt ttt caa ata cac gct ttt ggt gac tac c 1825 Asn Met Ala His Ile Leu Phe Gln Ile His Ala Phe Gly Asp Tyr 570 575 580 <210> 7 <211> 1480 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> exon <222> (1)..(45) <223> exon1 <220> <221> exon <222> (46)..(375) <223> exon2 <220> <221> exon <222> (376)..(477) <223> exon3 <220> <221> exon <222> (478)..(620) <223> exon4 <220> <221> exon <222> (621)..(1480) <223> exon5 <400> 7 aga gca gac gcg gcg cgc gac ggt gtg aag tta cag ccc ggc cag ccg 48 Arg Ala Asp Ala Ala Arg Asp Gly Val Lys Leu Gln Pro Gly Gln Pro 1 5 10 15 aac ctc ttg aag cca ttc tta cag atg atg aac cag acc atg gcc cgt 96 Asn Leu Leu Lys Pro Phe Leu Gln Met Met Asn Gln Thr Met Ala Arg 20 25 30 tgg gag ctc cag aag ggg acc acg acc ttc tca cct gtg ggc agt gcc 144 Trp Glu Leu Gln Lys Gly Thr Thr Thr Phe Ser Pro Val Gly Ser Ala 35 40 45 aga tga att tcc cac tgg ggg aca ttc tta ttt tta tcg agc aca aac 192 Arg Ile Ser His Trp Gly Thr Phe Leu Phe Leu Ser Ser Thr Asn 50 55 60 gga aac aat gca atg gca gcc tct gct tag aaa aag gtg tgg ata agc 240 Gly Asn Asn Ala Met Ala Ala Ser Ala Lys Lys Val Trp Ile Ser 65 70 75 cgc ctt ccc ctt ctc cca tcg aga tga aaa agg cat cca atc ctg tgg 288 Arg Leu Pro Leu Leu Pro Ser Arg Lys Arg His Pro Ile Leu Trp 80 85 90 agg ttg gca tcc agg tca cgc cag agg atg acg att gtt tat caa cgt 336 Arg Leu Ala Ser Arg Ser Arg Gln Arg Met Thr Ile Val Tyr Gln Arg 95 100 105 cat cta gag gaa ttt gcc cca aac agg aac aca tag cag ata aac ttc 384 His Leu Glu Glu Phe Ala Pro Asn Arg Asn Thr Gln Ile Asn Phe 110 115 120 tgc act gga ggg gcc tgt cct ctc ctc ggt ctg cac acg gag ctc taa 432 Cys Thr Gly Gly Ala Cys Pro Leu Leu Gly Leu His Thr Glu Leu 125 130 135 tcc cca cgc ccg gga tga gtg cag aat atg ccc cgc agg gta ttt gta 480 Ser Pro Arg Pro Gly Val Gln Asn Met Pro Arg Arg Val Phe Val 140 145 150 aag atg agc cca gca gct aca cat gta caa ctt gca aac agc cat tca 528 Lys Met Ser Pro Ala Ala Thr His Val Gln Leu Ala Asn Ser His Ser 155 160 165 170 cca gtg cat ggt ttc tct tgc aac acg cac aga aca ctc atg gat taa 576 Pro Val His Gly Phe Ser Cys Asn Thr His Arg Thr Leu Met Asp 175 180 185 gaa tct act tag aaa gtg aac acg gaa gtc ccc tga ccc cgc gg g tcc 624 Glu Ser Thr Lys Val Asn Thr Glu Val Pro Pro Arg Gly Ser 190 195 ttc aca cac ccc cgt tcg gcg tag tac ccc gcg agc tca aga tgt gtg 672 Phe Thr His Pro Arg Ser Ala Tyr Pro Ala Ser Ser Arg Cys Val 200 205 210 gca gtt ttc gga tgg aag ctc aag aac cct taa gtt ctg aga aac ttt 720 Ala Val Phe Gly Trp Lys Leu Lys Asn Pro Val Leu Arg Asn Phe 215 220 225 gaa gcc ccc aag ggc ggg gcg gac atg cgc cgc cca gcc gac gtc aac 768 Glu Ala Pro Lys Gly Gly Ala Asp Met Arg Arg Pro Ala Asp Val Asn 230 235 240 245 gtg ctc cgt tat cct gct aga ttg tga tgt ttt ctg aca gta gcc tcc 816 Val Leu Arg Tyr Pro Ala Arg Leu Cys Phe Leu Thr Val Ala Ser 250 255 260 aag aag aca aga gtc ctg ccg agt cct ccc agc ctg ggc ctg cag tgc 864 Lys Lys Thr Arg Val Leu Pro Ser Pro Pro Ser Leu Gly Leu Gln Cys 265 270 275 cat ttt att tat att ttt taa taa aac gta aaa aca aaa aaa acc aga 912 His Phe Ile Tyr Ile Phe Asn Val Lys Thr Lys Lys Thr Arg 280 285 290 ccc aca ttg gaa cag tga acc cgt ccc atc cag agg gcc cta gga ctg 960 Pro Thr Leu Glu Gln Thr Arg Pro Ile Gln Arg Ala Leu Gly Leu 295 300 305 ccg cag ttg gag cga cgt cca acc ctt ttg aaa cca gcc aac cta att 1008 Pro Gln Leu Glu Arg Arg Pro Thr Leu Leu Lys Pro Ala Asn Leu Ile 310 315 320 acc cgt act gtg gaa atg agc atg acc cct gac ccc ttg ttt cta tac 1056 Thr Arg Thr Val Glu Met Ser Met Thr Pro Asp Pro Leu Phe Leu Tyr 325 330 335 att cta tgt tgt ctt tta aaa agt gtg ctt aac att gac ata ata aat 1104 Ile Leu Cys Cys Leu Leu Lys Ser Val Leu Asn Ile Asp Ile Ile Asn 340 345 350 gtt gga gct tta ggc ggt gtg tgc ttg ttt ttt aat ttt taa tgc tcg 1152 Val Gly Ala Leu Gly Gly Val Cys Leu Phe Phe Asn Phe Cys Ser 355 360 365 taa gac aat gtg gct gct tca ggc ttt atg tct gtg tac ttt ttt tcc 1200 Asp Asn Val Ala Ala Ser Gly Phe Met Ser Val Tyr Phe Phe Ser 370 375 380 ttc aga agc tca tag ggt gag cag aag gac cag act caa gtg cca ggc 1248 Phe Arg Ser Ser Gly Glu Gln Lys Asp Gln Thr Gln Val Pro Gly 385 390 395 agg aga cct aga aaa gga agt agg ctt ttc aga tgg cat aca ttt tca 1296 Arg Arg Pro Arg Lys Gly Ser Arg Leu Phe Arg Trp His Thr Phe Ser 400 405 410 aag aaa atc aaa atg caa agc tag ggg ata aat cat agt aat atc ata 1344 Lys Lys Ile Lys Met Gln Ser Gly Ile Asn His Ser Asn Ile Ile 415 420 425 att aat gta gta gta ttg ctg ttt att aat gct gac gtg tgt ttt tcc 1392 Ile Asn Val Val Val Leu Leu Phe Ile Asn Ala Asp Val Cys Phe Ser 430 435 440 445 tct ctg act tat aat ttg cat acc att aaa taa tgc ata aat atg gca 1440 Ser Leu Thr Tyr Asn Leu His Thr Ile Lys Cys Ile Asn Met Ala 450 455 460 cac tga atc ctt ttt caa ata cac gct ttt ggt gac tac c 1480 His Ile Leu Phe Gln Ile His Ala Phe Gly Asp Tyr 465 470 <210> 8 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(14) <223> beta-D-oxy LNA <400> 8 ctatgtgttc ctgt 14 <210> 9 <211> 16 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(16) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (14)..(16) <223> beta-D-oxy 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<223> beta-D-oxy LNA <400> 57 cgtttgtgct cgat 14 <210> 58 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(14) <223> beta-D-oxy LNA <400> 58 cgtttgtgct cgat 14 <210> 59 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (13)..(14) <223> beta-D-oxy LNA <400> 59 cgtttgtgct cgat 14 <210> 60 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (13)..(14) <223> beta-D-oxy LNA <400> 60 cgtttgtgct cgat 14 <210> 61 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (11)..(14) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> 5-methyl cytosine <400> 61 cgtttgtgct cgat 14 <210> 62 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> Phosphorothioate linkages <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5-methyl cytosine <220> <221> misc_feature <222> (11)..(14) <223> beta-D-oxy LNA <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> 5-methyl cytosine <400> 62 cgtttgtgct cgat 14 <210> 63 <211> 15 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 63 attgcattgt ttccg 15 <210> 64 <211> 13 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 64 gtttgtgctc gat 13 <210> 65 <211> 16 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 65 cattgcattg tttccg 16 <210> 66 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 66 cgtttgtgct cgat 14 <210> 67 <211> 16 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 67 cgtttgtgct cgataa 16 <210> 68 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 68 ccgtttgtgc tcga 14 <210> 69 <211> 13 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 69 cgtttgtgct cga 13 <210> 70 <211> 14 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 70 tttgtgctcg ataa 14 <210> 71 <211> 13 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 71 ttgtgctcca taa 13 <210> 72 <211> 16 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 72 tttccgtttg tgctcg 16 <210> 73 <211> 16 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 73 attgcattgt ttccgt 16 <210> 74 <211> 15 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 74 cgtttgtgct cgata 15 <210> 75 <211> 19 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 75 tccgtttgtg ctcgataaa 19 <210> 76 <211> 19 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 76 tttgtgctcg ataaaaata 19 <210> 77 <211> 19 <212> DNA <213> ARTIFICIAL <220> <223> oligonucleotide <400> 77 attgtttccg tttgtgctc 19

Claims

서열번호 1의 인간 BCL11A 유전자의 뉴클레오티드 410 내지 450으로부터 선택된 영역 또는 BCL11A의 메신저 RNA(mRNA) 동종체(isoform) 내의 연속 서열의 역 상보 서열과 80% 이상 동일한 서열을 포함하는, 인간 BCL11A의 발현을 감소시킬 수 있고, 개프머인, 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항에 있어서,
하기 화학식으로 나타낸 안티센스 올리고뉴클레오티드:
X_a-Y_b-X_a'
상기 식에서,
X는 뉴클레오티드 유사체이고;
Y는 DNA의 연속 서열이고;
a는 1, 2, 3, 4 또는 5이고;
a'은 1, 2, 3, 4 또는 5이고;
b는 5 내지 15의 정수이다.
제 2 항에 있어서,
a 및/또는 a'이 2 내지 4인 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,
b가 7 내지 10의 정수인 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이가 19개 미만 뉴클레오티드인 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 5 항에 있어서,
올리고뉴클레오티드의 길이가 10 내지 16개 뉴클레오티드인 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
올리고뉴클레오티드가 2'-O-알킬-RNA 단위, 2'-OMe-RNA 단위, 2'-O-알킬-DNA, 2'-아미노-DNA 단위, 2'-플루오로-DNA 단위, LNA 단위, 아라비노 핵산(ANA) 단위, 2'-플루오로-ANA 단위, HNA 단위, INA 단위 및 2'MOE 단위로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체를 포함하는, 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 7 항에 있어서,
뉴클레오티드 유사체가 β-D-옥시-LNA, α-L-옥시-LNA, β-D-아미노-LNA, α-L-아미노-LNA, β-D-티오-LNA, α-L-티오-LNA, 5'-메틸-LNA, β-D-ENA 및 α-L-ENA로 이루어진 군으로부터 선택된 LNA 단위인 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
올리고뉴클레오티드가 RNAase H를 보충할 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 67, 서열번호 68, 서열번호 69, 서열번호 70, 서열번호 71, 서열번호 72, 서열번호 73 및 서열번호 74로 이루어진 군으로부터 선택된 올리고뉴클레오티드 서열 모티프를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
서열번호 11, 서열번호 15, 서열번호 32, 서열번호 21, 서열번호 34, 서열번호10, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 57, 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 61 및 서열번호 62로부터 선택된 서열을 갖는 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
5'- ^m C _s ^o A _s ^o T _s ^o t_s g_s c_s a_s t_s t_s g_s t_s t_s t _s ^m C _s ^o ^m C _s ^o G ^o-3'(서열번호 11), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_sa_s T _s ^o A _s ^o A ^o -3'(서열번호 15), 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s A _s ^o T _s ^o A ^o -3'(서열번호 32), 5'-T _s ^o T _s ^o G _s ^o t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s t_s A _s ^o A _s ^o A ^o -3'(서열번호 14) 또는 5'- ^m C _s ^o G _s ^o T _s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s c_s G _s ^o A _s ^o T ^o -3'(서열번호 35)이고, 이때 대문자는 잠금 핵산(LNA) 단위를 나타내고, 아랫첨자 s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고, 소문자는 데옥시리보뉴클레오티드(DNA) 단위를 나타내고, ^mC는 5' 메틸-사이토신 LNA 단위를 나타내고, ^mc는 5' 메틸-사이토신 DNA 단위를 나타내는, 안티센스 올리고뉴클레오티드.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
빈혈성 질병, 장애 또는 질환, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈 또는 β-지중해 빈혈의 치료를 위한 약제로서 사용하기 위한, 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 제 14 항에 따른 약학 조성물.
빈혈성 질병, 장애 또는 질환, 예컨대, 겸상적혈구 빈혈 또는 β-지중해 빈혈의 치료용 약제의 제조를 위한, 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 제 14 항에 따른 약학 조성물의 용도.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 제 14 항에 따른 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 BCL11A의 억제 방법.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제 14 항에 따른 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 빈혈성 질병, 장애 또는 질환의 치료 방법.
제 18 항에 있어서,
빈혈성 질병, 장애 또는 질환이 겸상적혈구 빈혈인 방법.
제 18 항에 있어서,
빈혈성 질병, 장애 또는 질환이 β-지중해 빈혈인 방법.