KR20210142699A - Dux4의 발현을 조절하기 위한 화합물, 방법 및 의약조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은, Double homeobox 4(DUX4) 유전자가 이상발현한 개체의, DUX4를 정상화(正常化)시키기 위한 화합물, 방법 및 의약조성물을 제공하는 것을 목적으로 하고, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드로서, 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지는 것을 제공한다.
Description
본 발명은, 동물에서의 DUX4 mRNA 및 단백질의 발현을 저감시키기 위한 화합물, 상기 화합물을 사용하는 방법, 및 상기 화합물을 함유하는 의약조성물에 관한 것이다. 본 발명의 방법은, DUX4 관련 질환, 예를 들면, 안면견갑상완형 근디스트로피(facioscapulohumeral muscular dystrophy: FSHD)를 치료하고, 예방하고, 또는 경감하기 위해 유용하다.
안면견갑상완형 근디스트로피(FSHD)는, 전세계에서 20,000분의 1, 유럽에서는 7,500분의 1의 개산(槪算) 빈도로 발증하는 근디스트로피이며, 근디스트로피 중에서, 듀센느형 근디스트로피, 근강직성 디스트로피에 이어서 3번째로 많은 질환이다. 초발증상은, 안면이나 상지(上肢)·견갑부·상지대(上肢帶)의 근력저하에 의해, 진행과 함께 하지대, 하지에도 장애가 미치고, 약 20%의 증례에서 40세까지 휠체어 생활이 된다(장년기가 되어도 경도한 안면근 이환(罹患)의 경우도 있음). 동통이나 신경성 난청 및 망막증의 합병증인 경우도 많다. 약 9할의 환자는, 20세까지 발증한다. 중증환자(약4%)에서는 유아기부터 근력저하를 나타낸다.
FSHD는 원인 유전자에 의해, FSHD1과 FSHD2의 21개의 형으로 분류된다. FSHD1형은, FSHD환자 전체의 약 95%를 차지한다. FSHD1형환자에서는, 4q35의 D4Z4리피트 영역이 유전적으로 단축되어 있고(1∼10 개의 D4Z4리피트), 이로써 D4Z4리피트 영역에 코딩되어 있는 DUX4의 이상(異常)발현이 일어난다(건상자(健常者)에서는 DUX4은 발현되지 않음). FSHD2형은, FSHD 환자전체의 약 5%로, SMCHD1(DNA메틸화 효소) 변이에 의해 DUX4의 이상발현이 일어난다. DUX4는 전사인자 유사 기능을 가지고, 하류에 코딩되는 근육세포의 아포토시스나 근위축을 야기하는 유전자군을 발현시킨다. DUX4의 이상발현은 4qA와 4qB의 2개의 대립 유전자 중, 4qA로 불리우는 대립 유전자를 보유하는 것에 의하여 4qA에 존재하는 폴리아데닐레이션사이트가 DUX4 mRNA의 안정화에 필요하다(비특허문헌 1, 비특허문헌 2, 비특허문헌 3).
앤티센스 기술은, 일종의 유전자산물의 발현을 조절하기 위한 유효한 수단으로서 밝혀지는 중이며, 따라서, DUX4를 조절하기 위한, 몇 가지의 치료적, 진단적, 및 연구적 적용에 비할 데 없이 유용한 것으로 판명될 가능성이 있다.
DUX4 miRNA을 코딩하는 아데노 수반(隨伴) 바이러스를 사용하여, DUX4 유전자의 발현을 억제하는 방법이 보고되어 있지만(특허문헌 1), 상기 아데노 수반 바이러스를 조제하는 것은 번잡하며, 또한 필요로 하는 전신의 근육에 송달하는 것은 곤란하다.
DUX4 shRNA를 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여, DUX4 유전자의 발현을 억제하는 방법이 보고되어 있지만(비특허문헌 2), 상기 렌티바이러스를 조제하는 것은 번잡하며, 또한 필요로 하는 전신의 근육에 송달하는 것은 곤란하다. 또한, 사두근이나 승모근육 세포에서의 invitro에서의 유전자 억제 작용은 21%, 44%의 잔존 활성이 있어, 충분한 효과라고는 할 수없다.
복수의 DUX4에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 연결한 화합물이 보고되어 있지만(특허문헌 2), 수식 올리고뉴클레오티드가 아니며, 또한 그 저해 효과는 충분하다고는 할 수 없다.
DUX4 mRNA의 스플라이싱 부위에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 화합물이 보고되어 있지만(특허문헌 3), 이들 화합물은 인트론을 포함하는 프리 mRNA 선택적이므로 성숙 mRNA에 대해서는 저해 효과가 약하고, 또한 Lipofection법에 의한 녹다운때문에, 생체에 투여하는 것은 곤란하다.
현재 행해지고 있는 FSHD치료법으로서는, 대증요법으로서의 리허빌리테이션(스트레칭이나 운동), NSAIDs의 투여, 호흡 케어 등이지만, 효과는 불충분하며 환자의 부담은 크다. 따라서, FSHD를 처치하기 위한 화합물, 조성물 및 방법을 제공하는 것이, 본 명세서에서의 목적이다.
Snider et al., PLoS 2010, Vol. 6 (10) p1
Ferreboeuf et al., HumanMolecular Genetics 2013, Vol. 23(1), p171
Sacconi et al., Biochim.Biophys.Acta 2015, p607
본 발명의 과제는, DUX4의 발현을 저해하기 위한, 및 DUX4 관련 질환 및/또는 그 증상을 처치하고, 즉 치료하고, 예방하고, 지연시키는, 또는 개선시키기 위한, 화합물, 방법, 및 의약조성물을 제공하는 것에 있다. 본 명세서에 개시된 화합물 및 의약조성물은, SNP 등의 변이형 DUX4나 DUX4의 스플라이싱 배리언트도 저해한다.
일실시태양은, 동물(인간을 포함함)에 있어서 DUX4의 발현을 저감시키는 방법으로서, 본 명세서에 기재되는, DUX4를 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드를 함유하는 화합물, 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, DUX4를 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드를 함유하는 화합물 또는 의약조성물을 동물에 투여하여, 핵내 리보뉴클레아제(RNase H 등)를 통하는 녹다운하는 방법을 제공한다. 또한, 상기 수식 올리고뉴클레오티드를 함유하는 화합물을 투여하여, DUX4 mRNA의 전사나 DUX4 단백질의 번역을 저해하는 방법을 제공한다. 수식 올리고뉴클레오티드는 근육에 분포되는 것이 바람직하고, 특히 골격근에 분포되는 것이 바람직하다.
일실시태양은, FSHD를 가지는 동물을 처치하는 방법을 제공한다. 일실시태양에서는, 본 발명의 방법은, 또한 본 명세서에 기재되는, DUX4를 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 치료 유효량의 화합물 또는 의약조성물을 동물에 투여하는 것을 포함한다. 일실시태양에서는, 본 발명의 방법은, FSHD1 및/또는 FSHD2를 가지는 동물을 특정하는 것을 포함한다.
일실시태양은, 근위축·근력저하를 처치하고, 즉 치료하고, 예방하고, 지연시키는, 또는 개선시키는 방법을 제공한다. 안면협(顔面頰)부, 어깨, 상완부의 근력저하에 의한, 표정이 없고/눈을 뜬 채 자고 /상지의 거상(擧上) 곤란/익상견갑(翼狀肩甲)을 완화 또는 악화를 지연시키는 것이다. 또한, 요대(腰帶), 하지의 근력저하를 방지하고, 또한 신경성 난청 및 망막증의 합병을 방지하는 것이 바람직하다.
일실시태양에서는, DUX4 mRNA는, GenBank 수탁번호 NM_001293798.2에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 1로서 본 명세서에 포함됨)을 가진다. 서열목록의 서열번호 1의 DUX4 mRNA의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-FL1 또는 DUX4의 성숙 mRNA라고도 한다. 일실시태양에서는, DUX4 mRNA는, GenBank 수탁번호 NM_001306068.2에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 5로서 본 명세서에 포함됨)을 가진다. 서열목록의 서열번호 5의 DUX4 mRNA의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-FL2라고도 한다. 일실시태양에서는, DUX4는, GenBank 수탁번호 NM_001363820.1에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 6로서 본 명세서에 포함됨)을 가진다. 서열목록의 서열번호 6의 DUX4 mRNA의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-s라고도 한다. 일실시태양에서는, DUX4는, 상기 스플라이싱 배리언트의 SNP를 일컫는다.
본 개시는, 하기 항 [1]∼[27]에 기재된 비한정으로 번호매김된 실시태양에 관한 것이지만, 이들로 한정되지 않는다.
항 [1] 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드로서,
적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1480번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지고,
상기 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열이 서열번호 1의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 경우에는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치의 염기의 상보 염기를 3'말단에 가지는 핵산염기서열로 이루어지는,
수식 올리고뉴클레오티드.
항 [2] 상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 1개 이상의 수식 뉴클레오티드가 수식 당을 포함하는, 항 [1]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [3] 상기 수식 당이, 2환식 당, 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및 2'-O-메틸로 수식된 당으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 항 [2]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [4] 상기 2환식 당이, LNA, GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및 ALNA[Trz]로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 항 [3]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [5] 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드로서,
적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가 GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및 ALNA[Trz]로부터 선택되는 수식 당을 포함하는 뉴클레오시드를 적어도 1개 포함하는,
수식 올리고뉴클레오티드.
항 [6]상기 수식 올리고뉴클레오티드가 또한, 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및/또는 2'-O-메틸로 수식된 당을 포함하는, 항 [5]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [7] 상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 적어도 1개의 수식 뉴클레오티드가 수식 핵산염기를 포함하는, 항 [1]∼[6] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [8] 상기 수식 핵산염기가 5-메틸시토신인, 항 [7]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [9] 적어도 1개의 뉴클레오시드간 결합이 수식 뉴클레오시드간 결합인, 항 [1]∼[8] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [10] 상기 수식 뉴클레오시드간 결합이, 포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합인, 항 [9]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [11] 상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
1) 갭 세그먼트와,
2) 5'윙 세그먼트와,
3) 3'윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트가, 상기 5'윙 세그먼트와 상기 3'윙 세그먼트 사이에 위치되고,
상기 5'윙 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 뉴클레오시드 전부가, 적어도 1개의 수식 당을 포함하고,
상기 갭 세그먼트의 뉴클레오시드는, 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드뿐이거나, 또는, 수식 당을 포함하는 1개 또는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 그 이외에는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드인, 항 [1]∼[10] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [12] 상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의
5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 232번 위치∼247번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 233번 위치∼248번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 1309번 위치∼1323번 위치의 핵산염기서열, 또는
5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치의 핵산염기서열
에 상보적인 핵산염기서열로 이루어지는, 항 [1]∼[11] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [13] 상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
gtggcgatgc ccgggt(서열번호 75),
gagattcccg cnggtg(서열번호 78: n은 5-메틸시토신을 나타냄),
ngagattcccgccggt(서열번호 2: n은 5-메틸시토신을 나타냄),
gnagttctccgcggt(서열번호 3: n은 5-메틸시토신을 나타냄), 또는
gnntagacagcgtngg(서열번호 4: n은 5-메틸시토신을 나타냄)
의 염기서열로 이루어지는, 항 [1]∼[12] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
항 [14] 하기 식:
GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl
으로 표시되는 항 [13]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신,
에 따라 표시되고
각 당 부분이 하기 기호:
l=LNA, d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트에 따라 표시된다.
항 [15] 하기 식:
GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm
으로 표시되는 항 [13]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신,
에 따라 표시되고
각 당 부분이 하기 기호:
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트를 따라서 나타내진다.
항 [16] 하기 식:
GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm
에서 나타내지는 항 [13]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신,을 따라서 표시되고
각 당 부분이 하기 기호:
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트
에 따라서 나타내진다.
항 [17] 하기 식:
MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl
에서 나타내지는 항 [13]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드.
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신,
에 따라 표시되고
각 당 부분이 하기 기호:
l=LNA, d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시된다.
항 [18] 하기 식:
에 의해 표시되는, 항 [14]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
항 [19] 하기 식:
에 의해 표시되는, 항 [15]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
항 [20] 하기 식:
에 의해 표시되는, 항 [16]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
항 [21] 하기 식:
에 의해 표시되는, 항 [17]에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
항 [22] 항 [1]∼항 [21] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그 의약적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 의약조성물.
항 [23] DUX4 관련 질환의 치료, 예방, 또는 그 진행의 지연화를 위한, 항 [22]에 기재된 의약조성물.
항 [24] 상기 DUX4 관련 질환이 안면견갑상완형 근디스트로피인, 항 [23]에 기재된 의약조성물.
항 [25] 항 [1]∼항 [21] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을, 그것을 필요로 하는 피험자에 투여하는 것을 특징으로 하는, 피험자에서의 DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화를 위한 방법.
항 [26] DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화를 위한 의약의 제조에서의, 항 [1]∼항 [21] 중 어느 한항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 사용.
항 [27] DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화를 위한, 항 [1]∼항 [21] 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 사용.
본 발명에 의해, DUX4 유전자의 이상발현에 기인하는 안면견갑상완형 근디스트로피 등의 질환의 처치에 유효한 수식 올리고뉴클레오티드를 제공할 수 있다.
도 1은 각종 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 2는 각종 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 3은 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한, 용량의존적인 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 4는 각종 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 5는 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드(화합물번 호3) 투여에 의한, DUX4 Tg마우스에서의 크레아틴키나아제 및 DUX4 mRNA의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 6은 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드(화합물번호 123, 화합물번호 247, 및 화합물번호 113) 투여에 의한, DUX4 Tg 마우스에서의 크레아틴키나아제 및 DUX4 mRNA의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 2는 각종 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 3은 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한, 용량의존적인 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 4는 각종 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 투여에 의한 DUX4 유전자발현의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 5는 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드(화합물번 호3) 투여에 의한, DUX4 Tg마우스에서의 크레아틴키나아제 및 DUX4 mRNA의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 6은 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드(화합물번호 123, 화합물번호 247, 및 화합물번호 113) 투여에 의한, DUX4 Tg 마우스에서의 크레아틴키나아제 및 DUX4 mRNA의 억제 효과를 나타낸 도면이다.
전술한 개요 및 이하의 상세한 설명의 양쪽 모두 예시적이면서 설명적인 것에 지나지 않고, 청구되는 본 발명을 제한하는 것은 아닌 것으로 이해된다. 본 명세서에서는, 별도의 기재가 없는 한, 단수형의 사용은 복수형을 포함한다. 본 명세서에서는, 별도의 기재가 없는 한, 「또는」의 사용은 「및/또는」을 의미한다. 또한, 용어 「포함하는 것(including)」 및 다른 형태, 예를 들면, 「포함한다(includes)」 및 「포함된다(included)」의 사용은, 한정적인 것은 아니다. 또한, 별도의 기재가 없는 한, 「요소」 등의 용어는, 1개의 유닛을 포함하는 요소와 1개를 초과하는 서브유닛을 포함하는 요소를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 섹션의 표제는, 구성 상의 목적을 위한 것뿐이며, 기재되는 주제를 제한하는 것으로서 해석되어서는 않된다. 이들로 한정되지 않지만, 특허, 특허출원, 기사, 서적 및 논문을 포함한, 본 출원에서 인용되는 모든 문서 또는 문서의 일부분은, 본 명세서에서 논하는 문서의 일부분에 관하여, 및 그 전체가, 참조에 의해 본 명세서에 명확히 포함된다.
(정의)
구체적인 정의가 주어지지 않는 한, 본 명세서에 기재된 분석화학, 유기합성화학, 및 의화학 및 약화학에 관련되어 이용되는 명명법, 및 이들의 수순 및 기법은, 당기술분야에서 주지이며, 일반적으로 사용되는 것이다. 표준적인 기법을, 본명세서 중에서 사용하는 화학합성 및 화학분석에 사용할 수 있다. 허용되는 경우, 본명세서의 개시된 전체를 통하여 언급되는, 모든 특허, 출원, 공개 출원 및 다른 간행물, 국립바이오테크놀로지정보센터(NCBI) 등의 데이터베이스를 통하여 입수가능한 GenBank 수탁번호 및 관련되는 서열 정보 및 다른 데이터는, 본 명세서에서 논하는 문서의 일부분에 관하여, 및 그 전체가, 참조에 의해 포함된다.
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별도의 지시가 없는 한, 이하의 용어는 이하의 의미를 가진다.
「핵산」은, 모노머의 뉴클레오티드로 이루어지는 분자를 나타낸다. 핵산의 예로서는, 리보핵산(RNA), 데옥시리보핵산(DNA), 단일가닥 핵산, 이중가닥 핵산, 저분자간섭 리보핵산(siRNA) 및 마이크로 RNA(miRNA)를 예로 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다. 핵산은, 이들 요소의 조합을 단일분자 중에 포함할 수도 있다.
「핵산염기」는, 별도의 핵산의 염기와 쌍형성할 수 있는 복소환부분을 의미한다. 핵산염기에는, 「수식 핵산염기」와 「비수식 핵산염기」가 있다.
「핵산염기서열」은, 임의의 당결합 또는 핵산염기 수식과 관계없는, 연속적인 핵산염기의 순서를 의미한다.
「뉴클레오시드」는, 당에 연결한 핵산염기를 의미한다. 일실시태양에서는, 뉴클레오시드는 인산기에 연결되어 있다.
「뉴클레오티드」는, 뉴클레오시드의 당 부분과 공유결합한 인산기 등을 가지는 뉴클레오시드를 의미한다. 천연에 존재하는 뉴클레오티드는 당 부분이 리보스 또는 데옥시리보스이며, 인산기를 통하여 포스포디에스테르 결합에 의해 공유결합하고 있다.
「올리고머 화합물」 또는 「올리고머」는, 핵산분자 중 적어도 일영역에 하이브리다이즈할 수 있는, 연결 모노머 서브유닛의 폴리머를 의미한다.
「올리고뉴클레오티드」는, 각 뉴클레오시드 및 각 뉴클레오시드간 결합이, 서로 독립적으로, 수식되어 있어도 되고 수식되어 있지 않아도 되는, 연결한 뉴클레오시드의 폴리머를 의미한다.
「비수식 뉴클레오티드」는, 천연에 존재하는 핵산염기, 당 부분 및 뉴클레오시드간 결합으로 이루어지는 뉴클레오티드를 의미한다. 일실시태양에서는, 비수식 뉴클레오티드는 RNA 뉴클레오티드(즉 β-D-리보뉴클레오시드) 또는 DNA 뉴클레오티드(즉 β-D-디옥시리보뉴클레오시드)이지만, 이들로 한정되지 않는다.
「수식 뉴클레오티드」는, 독립적으로, 수식 당 부분, 수식 뉴클레오시드간 결합 또는 수식 핵산염기를 가지는 뉴클레오티드를 의미한다. 「수식 뉴클레오시드」는, 독립적으로, 수식 당 부분 또는 수식 핵산염기를 가지는 뉴클레오시드를 의미한다.
「뉴클레오시드간 결합」은, 뉴클레오시드간의 화학결합을 나타낸다.
「연결한 뉴클레오시드」는, 뉴클레오시드간 결합에 의해 결합 또는 연결하고 있는, 인접 뉴클레오시드를 의미한다.
「천연에 존재하는 뉴클레오시드간 결합」은, 3'-5'포스포디에스테르 결합을 의미한다.
「수식 뉴클레오시드간 결합」은, 천연에 존재하는 뉴클레오시드간 결합(즉, 포스포디에스테르뉴클레오시드간 결합)으로부터의 치환 또는 임의의 변화를 나타낸다. 예를 들면, 포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합이 있지만, 이것으로 한정되지 않는다.
「포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합」은, 비가교 산소 원자의 1개를 유황 원자로 치환하는 것에 의해 포스포디에스테르 결합이 수식되는, 뉴클레오시드간의 결합을 의미한다. 포스포로티오에이트 결합은, 상기 수식 뉴클레오시드간 결합의 일례이다.
「수식 핵산염기」는, 아데닌, 시토신, 구아닌, 티미딘 또는 우라실 이외의 임의의 핵산염기를 나타낸다. 예를 들면, 5-메틸시토신이 있지만, 이것으로 한정되지 않는다. 「비수식 핵산염기」는, 퓨린 염기의 아데닌(A) 및 구아닌(G), 및 피리미딘 염기의 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U)을 의미한다.
「수식 올리고뉴클레오티드」는, 적어도 1개의 상기 수식 뉴클레오시드 및/또는 상기 수식 뉴클레오시드간 결합을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「염」은 산에 포함되어 있는 1개 이상의 분해할 수 있는 수소 이온을, 금속 이온이나 암모늄 이온 등의 양이온으로 치환한 화합물의 총칭이며, 수식 올리고뉴클레오티드의 염으로서는, 포스포로티오에이트 결합의 티오(S)기 또는 수식 핵산염기 내의 관능기(예를 들면, 아미노기) 상에서, 무기물 이온(예를 들면, 나트륨 이온, 마그네슘 이온)과 형성되는 염(예를 들면, 나트륨염, 마그네슘염)을 예로 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
「당」 또는 「당 부분」은, 천연당 부분 또는 수식 당 부분을 의미한다.
「천연당 부분」은, DNA(2'-H) 또는 RNA(2'-OH) 중에 관찰되는 당을 의미한다.
「수식 당」은, 천연당 부분으로부터의 치환 또는 변화를 나타낸다. 수식 당으로서는, 예를 들면, 치환 당 부분 및 대용(代用) 당 부분이 있다.
「치환 당 부분」은, RNA 또는 DNA의 천연당 이외의 퓨라노실을 의미한다.
「2'-O-메톡시에틸」(2'-MOE 및 2'-O(CH2)2-OCH3도 마찬가지임)은, 퓨라노실환의 2'번 위치의 O-메톡시-에틸 수식을 나타낸다. 2'-O-메톡시에틸 수식된 당은 수식 당이다.
「2'-O-메톡시에틸뉴클레오티드」는, 2'-O-메톡시에틸 수식된 당 부분을 포함하는 뉴클레오티드를 의미한다.
「2'-O-메틸」(2'-OMe 및 2'-OCH3도 마찬가지임)은, 퓨라노실환의 2'번 위치의 O-메틸 수식을 나타낸다. 2'-O-메틸수 식된 당은 수식 당이다.
「2'-O-메틸뉴클레오티드」는, 2'-O-메틸 수식된 당 부분을 포함하는 뉴클레오티드를 의미한다.
「대용 당 부분」을 위한 「당대용물」은, 당 유닛(퓨라노스환)만의 치환을 나타내는 것이 의도된다. 당대용물은, 뉴클레오시드의 천연에 존재하는 당 부분을 치환할 수 있고, 그 결과, 얻어진 뉴클레오시드 서브유닛는, 서로 연결되어, 및/또는 다른 뉴클레오시드와 연결되어, 상보적 올리고머 화합물과 하이브리다이즈할 수 있는 올리고머 화합물을 형성할 수 있다. 이러한 구조체는, 퓨라노실과 상이한 수의 원자를 포함하는 환(예를 들면, 4, 6 또는 7 원환); 비산소 원자(예를 들면, 탄소, 유황 혹은 질소)와의 퓨라노실의 산소의 치환; 또는 원자수의 변화와 산소의 치환의 양쪽을 포함한다. 이러한 구조체는, 치환 당 부분에 관하여 기재된 것에 대응하는 치환을 포함할 수도 있다(예를 들면, 더 한층의 치환기를 임의로 포함하는 6원의 탄소환식 2환식 당대용물). 당대용물은, 보다 복잡한 당의 치환도 포함한다(예를 들면, 비환계의 펩티드 핵산). 당대용물로서는, 이들로 한정되지 않지만, 모르폴리노, 시클로헥세닐 및 시클로헥시톨을 예로 들 수 있다.
「2환식 당」은, 동일 환 상에 존재하는 2개의 상이한 탄소 원자의 가교에 의해 수식되는 퓨라노실환을 의미한다. 바람직하게는, 「2환식 당」은, 퓨라노실환의 2'번 위치와 4'번 위치가 가교에 의해 수식된 수식 당을 의미한다. 「2환식 핵산」은, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 퓨라노스 부분이, 「2환식 당」을 포함하는, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 지칭한다.
「LNA」는, 일반적으로 2',4'-로크드핵산(locked nucleic acid)으로 호칭되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 의미하고, 예를 들면, 일반식:
[식 중,
B는, 핵산염기이며;
X 및 Y는, 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이다]
으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 들 수 있다(WO98/39352를 참조).
전형적인 구체예는, 하기 식:
으로 표시되는 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드를 들 수 있다.
「GuNA」는, 하기 식:
[식 중, B는 핵산염기이며, R3, R4, R5, R6는 각각 독립적으로 수소 원자, 또는 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 C1-6 알킬기이며, R7, R8은 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며, 그리고, R9, R10, R11은 각각 독립적으로 수소 원자, 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 C1-6 알킬기, 또는 아미노기의 보호기이다.]
으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.(예를 들면, 국제공개 제2014/046212호, 국제공개 제2017/047816호를 참조).
「ALNA[mU]」는, 하기 일반식(I):
[식 중,
B는, 핵산염기이며;
R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로, 수소 원자, 또는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 C1-6 알킬기이며;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 또는 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이;
m은, 1 또는 2이며;
X는, 하기 식 (II-1):
으로 표시되는 기이며;
식(II-1) 중에 기재된 기호:
는, 2'-아미노기와의 결합점을 나타내고;
R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 메틸기이다.]
으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 무치환의 메틸기인, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.
「ALNA[ipU]」는, 상기한 「ALNA[mU]」에 있어서 정의한 일반식(I)으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이며, 상기 식 중,
X가, 하기 식 (II-1):
으로 표시되는 기이며;
R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 이소프로필기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 무치환의 이소프로필기인, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.
「ALNA[Trz]」는, 상기한 「ALNA[mU]」에 있어서 정의한 일반식(I)으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이며, 상기 식 중,
X가, 하기 식 (II-2):
으로 표시되는 기이며;
A가, 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 트리아졸릴기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, A가, 1 또는 복수의 메틸기를 가져도 되는 트리아졸릴기, 보다 구체적으로는 1,5-디메틸-1,2,4-트리아졸-3-일기인, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.
「ALNA[Oxz]」는, 상기한 「ALNA[mU]」에 있어서 정의한 일반식(I)으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이며, 상기 식 중,
X가, 하기 식 (II-2):
으로 표시되는 기이며;
A가, 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 옥사디아졸릴기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, A가, 1 또는 복수의 메틸기를 가져도되는 옥사디아졸릴기, 보다 구체적으로는, 5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일기인, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.
「ALNA[Ms]」는, 상기한 「ALNA[mU]」에 있어서 정의한 일반식(I)으로 표시되는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이며, 상기 식 중,
X가, 하기 식 (II-3):
으로 표시되는 기이며;
M은, 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 메틸기로 치환된, 술포닐기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, M이 무치환의 메틸기로 치환된 술포닐기인, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.
「5-메틸시토신」은, 5번 위치에 결합한 메틸기로 수식된 시토신을 의미한다. 5-메틸시토신은 수식 핵산염기이다.
「단일가닥 올리고뉴클레오티드」는, 상보쇄과 하이브리다이즈하지 않고 있는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「DUX4」는, Double homeobox4로도 불리우는 전사인자의 핵산 또는 단백질을 의미한다. DUX4에는, 예를 들면, DUX4 유전자로부터 전사되는 각종 스플라이싱 배리언트, 또는 그의 일염기치환체(SNP)를 들 수 있지만, 상기 배리언트 및/또는 SNP라도 된다.
DUX4 mRNA에는 많은 스플라이싱 배리언트가 보고되고 있다. 인간 DUX4-s(서열목록의 서열번호 6)은 엑손 1 내의 비전형적인 스프라이싱 도너 사이트에 의해, 짧은 엑손 1(엑손 1s), 엑손 2, 엑손 3로 이루어지고, 독성이 없는 짧은 DUX4 단백질을 코딩한다. 인간 DUX4-FL은 엑손 1, 엑손 2, 엑손 3로 이루어지고, 전장(全長)의 DUX4 단백질을 코딩한다. DUX4-FL에는, 인트론 1을 포함하지 않는 성숙 mRNA인 DUX4-FL1(서열목록의 서열번호 1)과 인트론 1을 포함하는 DUX4-FL2(서열목록의 서열번호 5)가 있지만, 모두 전장의 DUX4 단백질을 코딩하고, 근육에 발현된 경우, FSHD의 원인이 된다(상기 비특허문헌 2을 참조).
DUX4 mRNA는 정상인 고환에도 발현되고 있지만, DUX4-FL에 더하여, 엑손 1, 엑손 2, 엑손 6, 엑손 7의 스플라이싱 배리언트, 및/또는 엑손 1, 엑손 2, 엑손 4, 엑손 5, 엑손 6, 엑손 7의 스플라이싱 배리언트가 발현된다(상기 비특허문헌 1을 참조).
DUX4 단백질은 전사인자로서 기능하지만, DUX4에 의해 전사가 조절되는 유전자로서는, 예를 들면, MBD3L2, ZSCAN4, TRIM43, DEFB103, ZNF217 등이 있다(상기 비특허문헌 2를 참조).
본 발명의 수식 올리고뉴클레오티드의 표적으로 하는 DUX4 mRNA는, 예를 들면, 인간 DUX4가 바람직하고, DUX4-FL이 보다 바람직하고, 서열목록의 서열번호 1에 기재하는 DUX4-FL1이 더 한층 바람직하다. 또한, 본 발명의 DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 표적부위로서는, 엑손 1, 인트론 1, 엑손 2, 인트론 2, 엑손 3이 바람직하다.
DUX4 유전자는, 전좌(轉座) 등의 염색체 이상에 의해 다른 유전자와 융합하여서 발현되는 것이 알려져 있다. 다른 유전자로서는, 예를 들면, IGH(Yasuda 등, Nature Genetics 48(5), 569(2016)), CIC(Yoshimoto 등, Cancer research 77, 2927(2017)), EWSR1(Sirvent 등, Cancer Genetics and Cytogenetics 195, 12(2009))이 보고되어 있고, 각각 B세포성 급성 임파성 백혈병, 분화 원형세포 육종, 태아성 횡문근육종 등의 원인 유전자로 여겨지고 있다. 본 발명의 수식 올리고뉴클레오티드에는, 이들 융합 유전자를 표적으로 하는 화합물도 포함된다.
「DUX4의 발현」은, DUX4를 코딩하는 유전자로부터 전사된 mRNA의 레벨, 또는 그 mRNA로부터 번역된 단백질의 레벨을 의미한다. DUX4의 발현은, 노던블로팅 또는 웨스턴블로팅, PCR 등의 당기술 분야에서 기지(旣知)의 방법에 의해 결정할 수 있다.
「DUX4핵산」은, DUX4를 코딩하는 임의의 핵산을 의미한다. 예를 들면, 일실시태양에서는, DUX4핵산은, DUX4를 코딩하는 DNA서열, (인트론 및 엑손을 포함하는 게놈 DNA를 포함한) DUX4를 코딩하는 DNA로부터 전사되는 RNA서열, 및 DUX4를 코딩하는 mRNA전구체 또는 스플라이싱된 성숙 mRNA를 포함한다. 또한, 일실시태양에서는 DUX4 유전자와 다른 유전자의 융합에 의해 생기는 유전자의 DNA서열, RNA서열을 포함한다.
「DUX4 mRNA」는, DUX4 단백질을 코딩하는 mRNA를 의미한다.
「연속적인 핵산염기」, 「연속하는 핵산염기」는, 서로 직접 인접하는 핵산염기를 의미한다.
「상보적」는은 제1 핵산과 제2 핵산의 핵산염기간의 쌍형성에 대한 능력을 의미한다.
「완전히 상보적(상보성이라고도 함)」 또는 「100% 상보적(상보성이라고도 함)」은, 제1 핵산의 핵산염기서열의 각 핵산염기 전부가, 제2 핵산의 제2 핵산염기서열 중에 상보적 핵산염기를 가지는 것을 의미한다. 일실시태양에서는, 제1 핵산은 수식 올리고뉴클레오티드이며, 표적 핵산이 제2 핵산이다.
「하이브리다이제이션」은, 상보적 핵산분자의 가열 냉각을 의미한다. 일실시태양에서는, 상보적 핵산분자로서는, 수식 올리고뉴클레오티드 및 표적 핵산을 예로 들 수 있다.
「특이적으로 하이브리다이즈 가능」은, 원하는 효과를 유도하기에 충분한 상보성도를 수식 올리고뉴클레오티드와 표적 핵산의 사이에 가지며, 한편으로는, 특이적 결합이 요망되는 조건 하, 즉 인비보어세이 및 치료적 처치의 경우의 생리적 조건 하에서, 비표적 핵산에 대하여 최소의 효과밖에 나타내지 않는, 또는 완전히 효과를 나타내지 않는 수식 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
「미스매치」 또는 「비상보적 핵산염기」는, 제1 핵산의 핵산염기가, 제2 핵산 또는 표적 핵산의 대응하는 핵산염기와 쌍형성할 수 없는 경우를 나타낸다.
「타겟팅한다」 또는 「표적으로 한다」는, 표적 핵산에 특이적으로 하이브리다이즈하고, 원하는 효과를 유도하는 수식 올리고뉴클레오티드의 설계 및 선택의 과정을 의미한다.
「표적 핵산」, 「표적 RNA」 및 「표적 RNA 전사산물」은 모두, 수식 올리고뉴클레오티드가 표적으로 할 수 있는 핵산을 나타낸다. 일실시태양에서는, 표적 핵산은 DUX4핵산의 영역을 포함한다.
「표적 세그먼트」는, 수식 올리고뉴클레오티드가 표적으로 하는, 표적 핵산의 뉴클레오티드 서열을 의미한다. 「5'표적부위」는, 표적 세그먼트의 가장 5'측의 뉴클레오티드를 나타낸다. 「3'표적부위」는, 표적 세그먼트의 가장 3'측의 뉴클레오티드를 나타낸다.
「활성표적영역」 또는 「표적영역」은, 1종 또는 복수의 활성 수식 올리고뉴클레오티드가 표적으로 하는 영역을 의미한다. 「활성 수식 올리고뉴클레오티드」는, 표적 핵산 레벨 또는 단백질 레벨을 저감시키는 수식 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「안티센스 저해」는, 수식 올리고뉴클레오티드의 비존재 하에서의 표적 핵산 레벨 또는 표적 단백질 레벨과 비교하여, 표적 핵산에 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드의 존재 하에서의 표적 핵산 레벨 또는 표적 단백질 레벨이 저감하는 것을 의미한다.
「siRNA」는, 표적 핵산이 대응하는 영역 또는 세그먼트에 대한 하이브리다이제이션을 가능하게 하는 핵산염기서열을 가지는 이중가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「shRNA」는, 표적 핵산이 대응하는 영역 또는 세그먼트에 대한 하이브리다이제이션을 가능하게 하는 핵산염기서열을 가지는 헤어핀형의 단일가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「snoRNA」는, 핵소체에 존재하는 논코딩 RNA이며, 표적 RNA핵산이 대응하는 영역 또는 세그먼트에 대한 하이브리다이제이션을 가능하게 하는 핵산염기서열을 가지고, 표적 RNA핵산의 메틸화나 슈트 우리딘화의 화학수식을 이끄는, 단일가닥 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「miRNA」는, 다른 유전자의 발현을 조절하는 논코딩 RNA이며, 표적 핵산이 대응하는 영역 또는 세그먼트에 대한 하이브리다이제이션을 가능하게 하는 핵산염기서열을 가지는 단일가닥 또는 이중가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「캡 구조」 또는 「말단 캡 부분」은, 수식 올리고뉴클레오티드의 어느 하나가의 말단에 포함된 화학적 수식을 의미한다.
「화학적으로 이질적인 영역」은, 동일한 수식 올리고뉴클레오티드 내의 다른 영역과 어떤 점에서 화학적으로 상이한 수식 올리고뉴클레오티드 내의 영역을 나타낸다. 예를 들면, 2'-O-메톡시에틸뉴클레오티드를 가지는 영역은, 2'-O-메톡시에틸 수식되어 있지 않은 뉴클레오티드를 가지는 영역과는 화학적으로 상이하다.
「키메라 수식 올리고뉴클레오티드」는, 적어도 2개의 화학적으로 이질적인 영역을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「모티프」는, 수식 올리고뉴클레오티드중의 화학적으로 이질적인 영역의 패턴을 의미한다.
「갭머(gapmer)」는, RNase H에 의한 절단을 지원하는 복수의 뉴클레오시드를 가지는 내부영역이, 1개 또는 복수의 뉴클레오시드를 가지는 외부영역 사이에 위치하고, 내부영역을 구성하는 뉴클레오시드가, 외부영역을 구성하는 뉴클레오시드(복수 가능)와 화학적으로 상이한, 수식 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 내부영역은, 「갭 세그먼트」라고 할 수 있고, 외부영역은 「윙 세그먼트」라고 할 수 있다. 갭 세그먼트보다 5'에 존재하는 윙 세그먼트를 「5'윙 세그먼트」라고 할 수 있고, 갭 세그먼트보다 3'에 존재하는 윙 세그먼트를 「3'윙 세그먼트」라고 할 수 있다.
「직접 인접하는」은, 직접 인접하는 요소 사이에 개재성의 요소가 없는 것을 의미한다.
「핵내 리보뉴클레아제」는, 핵내에서 관찰되는 리보뉴클레아제를 의미한다. 핵내 리보뉴클레아제로서는, 이들로 한정되지 않지만, RNase H1 및 RNase H2를 포함시킨 RNase H, 이중가닥 RNase 드로샤(drosha), 및 다른 이중가닥 RNase를 예로 들 수 있다.
일실시태양에서는, 갭머는, 각각 뉴클레오시드의 수가 1개∼8개인 5' 및 3'윙 세그먼트, 및 양쪽 윙 세그먼트 사이에 위치하고, 또한 이들에 직접 인접하는, 뉴클레오시드의 수가 6개 이상인 갭 세그먼트이며, 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드만을 포함하거나, 또는, 수식 당을 포함하는 1개 또는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 그 이외에는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드인 갭 세그먼트을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
「약제」는, 동물에 투여된 경우에, 치료적 이익을 줄 수 있는 활성물질을 의미한다. 「제1 약제」는, 본 발명의 치료용 화합물을 의미한다. 예를 들면, 제1 약제는, DUX4를 타겟팅하는 수식 올리고뉴클레오티드라도 된다. 「제2 약제」는, 본 발명의 제2 치료용 화합물(예를 들면, DUX4를 타겟팅하는 제2 수식 올리고뉴클레오티드) 및/또는 DUX4를 타겟팅하지 않는 치료용 화합물을 의미한다.
「의약적으로 허용 가능한 염」은, 수식 올리고뉴클레오티드의 생리학적 및 의약적으로 허용 가능한 염, 즉 수식 올리고뉴클레오티드의 원하는 생물활성을 유지하고, 바람직하지 않은 독성효과를 거기에 주지 않는 염을 의미한다.
「희석제」는, 약리학적 활성이 결여되지만, 의약적으로 필요한 또는 바람직한, 조성물 중의 성분을 의미한다. 예를 들면, 주사되는 조성물 중의 희석제는, 액체, 예를 들면, 생리식염수라도 된다.
「DUX4 관련 질환」은, DUX4 mRNA 혹은 DUX4 단백질, 또는 DUX4 유전자의 전좌에 의한 융합 유전자의 mRNA 혹은 단백질의 이상발현에 기인하는 질환을 일컫는다. 안면견갑상완형 근디스트로피, B세포성 급성 임파성 백혈병, 분화 원형세포 육종, 태아성 횡문근육종 등을 예로 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
「안면견갑상완형 근디스트로피」 또는 「FSHD」는, 안면·견갑·상완근의 근력저하로부터 발증하는 근디스트로피를 의미한다. 인간에는, 주로 제4번 염색체의 텔로미어(염색체의 말단) 근방에 있는 게놈 반복 서열(D4Z4)의 단축(短縮)을 수반하고, 그 결과 게놈 구조에 변화를 가져오며, 원래 근(전구) 세포에서는 발현되지 않고 있는 DUX4 유전자가 이소성(異所性)으로 발현되어 세포사를 야기하는 것으로 여겨지고 있다(FSHD1). 또한, 일부 FSHD환자에서, 유전자발현을 억제하는 게놈 구조 제어인자의 하나의 SMCHD1에 유전자변이가 발견되고 있다(FSHD2).
FSHD는, 진행성 근쇠약 및 근섬유 소실과 관련된 근디스트로피의 일종이다. 주로 하반신을 침범하는 듀센느형 근디스트로피 및 베커형 근디스트로피와는 달리, FSHD는, 상반신, 주로 안면근, 견갑근, 및 상완근에 있어서 발증한다. 그러나, 골반, 허리, 하지에 있어서 발증하는 경우도 있다. FSHD의 증상은, 10세∼26세가 되고나서 나타나는 경우가 많지만, 그보다 훨씬 나중에 발증하는 것도 드물지 않다. 경우에 따라서는, 완전히 발증하지 않는 경우도 있다. 증상은 가벼우며, 악화 속도도 매우 늦은 것이 통례이다. 안면근 쇠약이 일반적이며, 안검하수, 휘파람불가능, 얼굴의 표정변화의 감소, 우울 또는 분노의 얼굴표정, 말할 때 발음 곤란, 견갑근 쇠약(견갑골의 두드러짐(익상견갑) 및 처진 어깨 등의 변형의 원인이됨), 하지쇠약, 청력손실, 및 심장병의 우려 등이 있을 수 있다.
「활성 의약제」는, 동물에 투여된 경우에 치료적 이익을 제공하는, 의약조성물 중의 물질(복수 가능)을 의미한다. 예를 들면, 일실시태양에서는, DUX4를 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는 활성 의약제이다.
「동시에 투여된다」는, 양쪽 약제에 기인하는 약리학적 효과가 동시에 환자에 발현되는 임의의 양식에서의, 2개의 약제의 공투여를 지칭한다. 동시투여는, 양쪽 약제가, 단일 의약조성물 중에서, 동일 제형 중에서, 또는 동일 투여 경로에 의해 투여되는 것을 필요로 하지 않는다. 양쪽 약제에 기인하는 약리학적 효과는, 동시에 발현될 필요는 없다. 상기 약리학적 효과는, 어느 일정기간 내에 중복할 필요가 있을 뿐이며, 동일한 퍼짐을 가질 필요는 없다.
「투여하는 것」은, 약제를 동물에 투여하는 것을 의미하고, 이들로 한정되지 않으며, 의료전문가에 의한 투여 및 자가 투여를 예로 들 수 있다.
「개선」은, 관련되는 질환, 장애 또는 상태 중 적어도 1개의 지표, 징후 또는 증상을 저감하는 것을 나타낸다. 지표의 중증도는, 당업자에게 기지의 주관적 또는 객관적 척도에 의해 결정할 수 있다.
「동물」은, 인간, 또는 이들로 한정되지 않지만, 마우스, 래트(rat), 토끼, 개, 고양이, 돼지를 포함시킨 비인간 동물, 및 이들로 한정되지 않지만, 원숭이 및 침팬지를 포함시킨 비인간 영장류를 지칭한다.
「공투여」는, 개체로의 2개 이상의 약제의 투여를 의미한다. 2개 이상의 약제는, 단일 의약조성물 중에 존재해도 되고, 별개의 의약조성물 중에 존재해도 된다. 2개 이상의 약제의 각각은, 동일 또는 상이한 투여 경로를 통하여 투여할 수 있다. 공투여는, 병행적 또는 축차적 투여를 포함한다.
「용량」은, 단회투여로, 또는 특정 기간에 제공되는, 의약제의 특정량을 의미한다. 일실시태양에서는, 용량은, 1, 2 또는 그 이상의 볼러스(bolus), 정제, 또는 주사로 투여할 수 있다. 예를 들면, 피하투여가 요망되는 일실시태양에서는, 원하는 용량은, 단회의 주사에 용이하게 수용되지 않는 용량을 필요로 하므로, 원하는 용량을 달성하기 위해서는 2 이상의 주사를 사용할 수 있다. 일실시태양에서는, 의약제는, 주입에 의해, 장기간에 걸쳐 또는 지속적으로 투여된다. 용량은, 시간, 일, 주 뜨는 월당의 의약제의 양으로서 기재될 수 있다.
「유효량」 또는 「치료 유효량」은, 약제를 필요로 하고 있는 개체에 있어서 원하는 생리적 전귀(轉歸)를 실현하기에 충분한, 활성 의약제의 양을 의미한다. 유효량은, 처치되는 개체의 건강 및 신체 상태, 처치되는 개체의 분류군, 조성물의 제제, 개체의 의학적 상태의 평가 및 다른 관련된 인자에 따라, 개체 사이에 변동될 수 있다.
「안면견갑상완형 근디스트로피(FSHD)를 가지는 동물을 특정한다」는, FSHD의 장애 혹은 상태로 진단된 동물을 특정하는 것, 또는 FSHD의 장애 또는 상태로 되기 쉬운 동물을 특정하는 것을 의미한다. 예를 들면, 가족력이 있는 개체는, FSHD의 장애 또는 상태로 되기 쉬울 가능성이 있다.
이러한 특정은, 개체의 병력 및 표준적인 임상적인 검사 또는 평가를 조사하는 것을 포함한, 임의의 방법에 의해 달성할 수 있다. 그리고, FSHD는 발증 기전에 따라, FSHD1과 FSHD2가 알려져 있지만, 양자를 포함한다.
「개체」는, 처치 또는 요법에 대하여 선택된 인간 또는 비인간 동물을 의미한다.
「근강직증」은,임의 수축 또는 전기자극후의 매우 늦은 근육이완을 의미한다.
「비경구투여」는, 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다. 비경구투여로서는, 피하투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여 또는 두개골내 투여, 예를 들면, 수공(髓腔)내 또는 뇌실내 투여를 들 수 있다. 투여는, 지속적 또는 장기적이라도 되고, 단기적 또는 단속적(斷續的)이라도 된다.
「의약조성물」은, 개체로의 투여에 적합한 물질의 혼합물을 의미한다. 예를 들면, 의약조성물은 1종 또는 복수의 활성 약제 및 멸균수용액을 포함할 수 있다.
「예방한다」는, 몇분부터 무기한의 기간에 걸쳐, 질환, 장애 혹은 바람직하지 않은 건강 상태, 또는 상기 질환, 장애 혹은 바람직하지 않은 건강 상태와 관련된 1개 이상의 증상의 발증 또는 발생을 지연시키거나 또는 미연에 방지하는 것을 의미한다. 예방한다는 것은, 질환, 장애 또는 바람직하지 않은 건강 상태를 발생할 위험성을 저감시키는 것도 의미한다.
「치료한다」는, 질환, 장애 혹은 바람직하지 않은 건강 상태, 또는 상기 질환, 장애 혹은 바람직하지 않은 건강 상태와 관련된 1개 이상의 증상을 경감하거나, 혹은 배제하거나, 또는, 상기 질환, 장애, 혹은 바람직하지 않은 건강 상태 자체의 1개 혹은 그 이상의 원인을 부분적으로 해소하거나 또는 근절하는 것을 의미한다.
「처치한다」는, 상기 예방 또는 치료을 포함하는 것을 의도한다. 예를 들면, 상기 질환, 장애 또는 바람직하지 않은 건강 상태의 변화 또는 향상을 초래하기 위하여, 본 발명의 의약조성물을 투여하는 것도 포함한다.
「프로드러그」는, 내재성 효소 혹은 다른 화학물질 또는 조건의 작용에 의해, 몸 또는 그 세포 내에서 활성형으로 변환되는 불활성형으로 조제되는 치료제를 의미한다.
「부작용」은, 원하는 효과 이외의, 처치에 기인할 수 있는 생리응답을 의미한다. 일실시태양에서는, 부작용으로서는, 주사부위반응, 간기능검사의 이상, 신장기능이상, 간독성, 신장독성, 중추신경계 이상, 미오퍼시(myopathy) 및 권태를 예로 들 수 있다. 예를 들면, 혈액 중의 알라닌아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파라긴산 아미노트랜스퍼라제(AST) 또는 γ-글루타밀트랜스펩티다제(γ-GTP) 레벨의 상승은, 간독성 또는 간기능이상을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 빌리루빈(bilirubin)의 상승은, 간독성 또는 간기능이상을 나타낼 수 있다. 또한, 요단백의 상승, 혈액 중의 크레아티닌, 요소질소(UN)의 상승은, 신장독성 또는 신장기능이상을 나타낼 수 있다.
「피하투여」는, 피부의 바로 아래의 투여를 의미한다.
「치료 유효량」은, 개체에 치료적 이익을 주는 약제량을 의미한다.
(구체적 실시태양)
실시태양
하기 일구체적 실시태양은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, DUX4의 발현을 저해하기 위한 화합물, 상기 화합물을 사용하는 방법, 및 상기 화합물을 함유하는 의약조성물을 제공한다.
일실시태양은, DUX4를 타겟팅하는 수식 올리고뉴클레오티드를 함유하는 화합물을 동물에 투여하는 것을 포함하는, 동물에 있어서 DUX4의 발현을 저감시키는 방법을 제공한다.
일실시태양은, DUX4 유전자의 전사를 저해, 혹은 DUX4 mRNA의 번역을 저해, 또는 DUX4 mRNA의 절단을 유도하는 것에 의해, 병원성이 있는 DUX4전사인자의 축적을 방지하기 위하여, 수식 올리고뉴클레오티드를 투여하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, 안면견갑상완형 근디스트로피를 가지는 동물의 처치 방법으로서, 이하의 공정을 포함하는 방법을 제공한다: a) 안면견갑상완형 근디스트로피를 가지는 상기 동물을 특정하는 것, 및 b) 치료 유효량의, DUX4를 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드를 함유하는 화합물을, 상기 동물에 투여하는 것.
일실시태양은, 그것을 필요로 하는 대상에 있어서 근강직증을 경감시키는 방법을 제공한다. 이 방법은, DUX4 mRNA에 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드를 대상에 투여하는 것을 포함하고, 수식 올리고뉴클레오티드는, DUX4 mRNA에 결합한 경우에, 리보뉴클레아제 또는 핵내 리보뉴클레아제를 활성화하고, 이에 따라, 근강직증을 경감시킨다. 일실시태양에서는, 대상은, 안면견갑상완형 근디스트로피를 가지거나, 가지는 것으로 의심되며, 또는 DUX4 mRNA를 고발현하거나, 인간의 제4번 염색체에 있는, D4Z4리피트의 수가 감소하고 있거나, 혹은 SMCHD1(DNA메틸화 효소) 변이를 가지거나, 가지고 있는 것으로 의심된다.
일실시태양에서는, 본 발명의 방법에 사용하는 수식 올리고뉴클레오티드는 키메라이다. 일실시태양에서는, 본 발명에서 사용하는 방법의 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이다.
본 명세서에 기재하는 본 발명의 방법의 일실시태양에서는, 투여는 피하투여이다. 일실시태양에서는, 투여는 정맥내 또는 근육내의 투여이다.
일실시태양에서는, 본 발명의 방법에 사용하는 수식 올리고뉴클레오티드는, DUX4 mRNA의 DUX4 단백질 코딩 영역, 인트론, 5'UTR 또는 3'UTR을 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 발명의 방법에 사용하는 수식 올리고뉴클레오티드는, DUX4 mRNA의 엑손 1, 엑손 2, 엑손 3, 인트론 1, 인트론 2를 표적으로 한다.
본 명세서에 기재하는 본 발명의 방법의 일실시태양에서는, DUX4 mRNA는 핵내 리보뉴클레아제의 RNase H1에 의해 절단된다.
본 발명의 방법의 일실시태양에서는, DUX4 mRNA는 근조직에서 저감된다. 일실시태양에서는, 스플라이싱 배리언트인 DUX4-FL1(서열목록의 서열번호 1), DUX4-FL2(서열목록의 서열번호 5)이 우선적으로 저감된다.
일실시태양에서는, DUX4 mRNA는, GenBank 수탁번호 NM_001293798.2에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 1로서 본 명세서에 포함됨)을 가진다. 서열목록의 서열번호 1의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-FL1 또는 DUX4의 성숙 mRNA라고도 한다. 일실시태양에서는, DUX4 mRNA는, GenBank 수탁번호 NM_001306068.2에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 5로서 본 명세서에 포함됨)을 가진다. 서열목록의 서열번호 5의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-FL2라고도 한다. 일실시태양에서는, DUX4는, GenBank 수탁번호 NM_001363820.1에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 6로서 본 명세서에 포함됨)을 가진다. 서열목록의 서열번호 6의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-s라고도 한다. 일실시태양에서는, DUX4 mRNA는, 상기 스플라이싱 배리언트의 SNP를 가지는 것이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 동시에 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열인 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 또한 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 9개, 10개, 11개 또는 12개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열인 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로 되어도 되고, 상기 핵산염기서열에 더하여, 5'말단측 및/또는 3'말단측에 부가서열을 가져도 된다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개 또는 22개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 232번 위치∼248번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개 또는 17개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1306번 위치∼1325번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개 또는 24개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14 잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14 잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 232번 위치∼248번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다.
또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1306번 위치∼1325번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기로 이루어지는 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 또한 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치, 233번 위치∼248번 위치, 1309번 위치∼1323번 위치 또는 1480번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열인 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 동시에 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치, 233번 위치∼248번 위치, 1309번 위치∼1323번 위치 또는 1480번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 9개, 10개, 11개, 12개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열인 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 또는 16개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 233번 위치∼248번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 또는 16개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1309번 위치∼1323번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 또는 16개의 연속하는 핵산염기서열이며, 서열번호 1의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치의 염기의 상보 염기를 3'말단에 가지는 핵산염기서열로 이루어지는, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 233번 위치∼248번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1309번 위치∼1323번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열이며, 서열번호 1의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치의 염기의 상보 염기를 3'말단에 가지는 핵산염기서열로 이루어지고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기로 이루어지는 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 이하의 영역 중 어느 하나를 표적으로 한다 : 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 이하의 영역 중 어느 하나를 표적으로 한다 : 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 및 1480번 위치∼1495번 위치.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323, 1480∼1495 번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2∼4, 7∼64, 69∼97, 102∼112 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열을 포함하는 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2∼4, 75, 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열을 포함하는 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2∼4, 7∼64, 69∼97, 102∼112 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 서열목록의 서열번호 2∼4, 75, 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 75, 또는 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 75, 또는 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 75, 또는 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 75, 또는 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 75, 또는 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열로 이루어지는 핵산염기를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 75, 또는 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열로 이루어지는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 동물은 인간이다.
일실시태양에서는, 투여는 비경구투여를 포함한다.
일실시태양에서는, 화합물은 단일가닥의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 상기 수식 올리고뉴클레오티드의 전체에 걸쳐 측정한 경우에, 서열목록의 서열번호 1의 상기 어느 하나의 영역의 동일 길이 부분에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적이다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 상기 수식 올리고뉴클레오티드의 전체에 걸쳐 측정한 경우에, 서열목록의 서열번호 1의 상기 어느 하나의 영역의 동일 길이 부분에 대하여 100% 상보적이다.
일실시태양에서는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 적어도 1개의 뉴클레오시드간 결합은, 수식 뉴클레오시드간 결합이다. 일실시태양에서는, 각 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합이다.
일실시태양에서는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 적어도 1개의 뉴클레오시드는 수식 당을 포함한다. 일실시태양에서는, 적어도 1개의 수식 당은 2환식 당이다. 일실시태양에서는, 적어도 1개의 수식 당은, 2'-O-메톡시에틸, 2'-O-메틸 및/또는 4'-(CH2)n-O-2' 가교(식 중, n은 1 또는 2이다)를 포함한다.
일실시태양에서는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드의 당 부분은 적어도 1개의 2환식 당인 수식 당을 포함한다. 일실시태양에서는, 적어도 1개의 수식 당은LNA, GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및/또는 ALNA[Trz]이다.
일실시태양에서는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 적어도 1개의 뉴클레오시드는, 수식 핵산염기를 포함한다. 일실시태양에서는, 수식 핵산염기는 5-메틸시토신이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 이하를 포함한다: a) 연결한 디옥시뉴클레오시드로 이루어지는 갭 세그먼트; b) 연결한 뉴클레오시드로 이루어지는 5'윙 세그먼트; 및 c) 연결한 뉴클레오시드로 이루어지는 3'윙 세그먼트. 갭 세그먼트는 5'윙 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 사이에 위치하고, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메틸수식 당, 2'-O-메톡시에틸 수식 당 또는 2환식 당 등의 수식 당을 포함한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 이하를 포함한다: a) 1개 또는 2개의 2'-O-메틸수식 당이나 2'-O-메톡시에틸 수식 당 등의 수식 당을 포함하는 뉴클레오시드를 포함하고, 그 이외에는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드인 갭 세그먼트; b) 연결한 뉴클레오시드를 포함하는 5'윙 세그먼트; 및 c) 연결한 뉴클레오시드를 포함하는 3'윙 세그먼트. 갭 세그먼트는 5'윙 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 사이에 위치하고, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메틸수식 당, 2'-O-메톡시에틸 당 또는 2환식 당 등의 수식 당을 포함한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 이하를 포함한다: a) 뉴클레오시드의 개수가 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16 개인 갭 세그먼트이며, 상기 뉴클레오시드는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드뿐이거나, 또는 2'-O-메틸수식 당이나 2'-O-메톡시에틸 수식 당 등의 수식 당을 포함하는 뉴클레오시드를 1개 또는 2개 포함하고, 그 이외에는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드인, 갭 세그먼트; b) 뉴클레오시드의 개수가 2, 3, 4, 5, 6 또는 7 개인 5'윙 세그먼트; 및 c) 뉴클레오시드의 개수가 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 개인 3'윙 세그먼트. 여기서, 갭 세그먼트는 5'윙 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 사이에 위치하고, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메틸수식 당, 2'-O-메톡시에틸 당 또는 2환식 당을 포함하고, 상기 수식 올리고뉴클레오티드의 각 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 결합을 포함하고, 상기 수식 올리고뉴클레오티드 중의 시토신의 일부 또는 전부는 5'-메틸시토신이라도 된다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 갭머를 구성하는 뉴클레오시드의 개수는 12개, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 뉴클레오시드의 당 부분에 있어서, 2'-O-메틸, 2'-O-메톡시에틸 및/또는 4'-(CH2)n-O-2' 가교(식 중, n은 1 또는 2이다)를 포함한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 뉴클레오시드의 당 부분에 있어서, LNA, GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및/또는 ALNA[Trz]를 포함한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 이것은, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 또한 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열인 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이며, 동시에 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 9개, 10개, 11개 또는 12개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열인 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개 또는 22개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 232번 위치∼248번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개 또는 17개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1306번 위치∼1325번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 적어도 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개 또는 24개의 연속하는 핵산염기서열을 포함하는 핵산염기서열이며, 30잔기 이내의 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드의 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드의 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 233번 위치∼248번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드의 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1309번 위치∼1323번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드의 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다. 이 경우에, 5'윙 세그먼트 및/또는 3'윙 세그먼트에 포함되는 올리고뉴클레오티드는 적어도 1개의 GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz] 및 ALNA[Trz]로부터 선택되는 수식 당을 포함하는 뉴클레오시드를 적어도 1개 포함하고, 또한 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및/또는 2'-O-메틸로 수식된 당을 포함해도 된다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드의 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열이며, 서열번호 1의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치의 염기의 상보 염기를 3'말단에 가지는 핵산염기서열로 이루어지고, 동일 길이 부분에 있어서 서열목록의 서열번호 1에 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기로 이루어지는 상기 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 하기 영역 중 어느 하나를 표적으로 한다 : 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 하기 영역 중 어느 하나를 표적으로 한다: 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 및 1480∼1495 번 위치.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 10개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 12개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499위를 표적으로 한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 표적영역에 대하여 상보적인 적어도 14개의 연속적인 핵산염기를 함유하는 상보적 영역을 포함하는 핵산염기서열을 가지고, 표적영역은, 서열목록의 서열번호 1의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323 또는 1480∼1495 번 위치를 표적으로 한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 126∼141, 126∼143, 127∼142, 127∼143, 127∼144, 127∼146, 128∼143, 128∼144, 128∼147, 232∼245, 232∼247, 233∼246, 233∼247, 233∼248, 234∼247, 234∼248, 1304∼1323, 1306∼1321, 1306∼1324, 1307∼1323, 1307∼1324, 1307∼1325, 1307∼1326, 1308∼1323, 1308∼1324, 1308∼1322, 1308∼1325, 1309∼1323, 1309∼1324, 1309∼1325, 1309∼1322, 1310∼1323, 1310∼1324, 1472∼1485, 1472∼1486, 1472∼1487, 1472∼1488, 1473∼1487, 1473∼1488, 1473∼1489, 1474∼1488, 1474∼1489, 1475∼1490, 1476∼1490, 1476∼1491, 1476∼1495, 1477∼1495, 1478∼1496, 1479∼1495, 1479∼1496, 1479∼1498, 1480∼1494, 1480∼1495, 1480∼1496, 1480∼1497 또는 1480∼1499 번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기의 5'말단으로부터 128∼143, 232∼247, 233∼248, 1309∼1323, 1480∼1495 번 위치의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 2∼4, 7∼64, 69∼97, 102∼112 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 서열목록의 서열번호 2∼4, 75, 78 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 화합물번호 1∼112, 114∼132, 137∼246 중 어느 하나에 기재되는 수식 올리고뉴클레오티드이다. 또한, 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 화합물번호 1∼3, 123, 157, 204, 221, 231 중 어느 하나에 기재되는 수식 올리고뉴클레오티드이다.
본 명세서 중, 뉴클레오티드를 나타낸 「Gls」 등의 기호에 있어서, 좌측위치에 나타내는 약호는 핵산염기부분을 의미하고, 중앙 위치에 나타낸 약호는 당 부분을 의미하고,그리고, 우측위치에 나타내는 약호는 뉴클레오시드간 결합의 양식을 의미한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 하기 식:
GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드이며,
식 중
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신,
에 따라 표시되고;
각 당 부분이 하기 기호:
l=LNA, d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고;
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며,
하기 식:
GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드이며,
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고;
각 당 부분이 하기 기호:
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고;
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 하기 식:
GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드이며,
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고;
각 당 부분이 하기 기호:
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고;
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 갭머이며, 하기 식:
MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드이며,
식 중,
각 핵산염기가 하기 기호:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고;
각 당 부분이 하기 기호:
l=LNA, d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고;
각 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호:
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드이다.
일실시태양은, DUX4 관련 질환의 동물에 있어서, DUX4 mRNA 및/또는 DUX4 단백질의 레벨(예를 들면, 근육내 레벨)을 저감시키는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, FSHD의 동물에 있어서, DUX4 mRNA 및/또는 DUX4 단백질의 레벨(예를 들면, 근육내 레벨)을 저감시키는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또한, 일실시태양은, FSHD의 동물에 있어서, 근장애를 저감시키는 및/또는 운동 기능을 개선하는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, FSHD의 처치, 즉 치료, 예방, 개선, 경감하는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, FSHD의 각종 증상(예를 들면, 안면근쇠약, 안검하수, 휘파람불가능, 얼굴의 표정변화의 감소, 우울 또는 분노의 얼굴표정, 말할 때 발음 곤란, 견갑근쇠약(익상견갑, 처진 어깨 등의 변형), 하지쇠약, 청력손실, 및 심장병)의 예방, 개선, 경감하는 방법, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, B세포성급성 임파성 백혈병 등의 동물에 있어서, DUX4 유전자가 IGH 유전자와 융합함으로써 생기는 mRNA 및/또는 단백질의 레벨(예를 들면, 혈중의 B세포내 레벨)을 저감시키는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또한, 일실시태양은, B세포성 급성 임파성 백혈병 등의 처치, 즉 치료, 예방, 개선, 경감하는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, 분화 원형세포육종등의 동물에 있어서, DUX4 유전자가 CIC유전자와 융합함으로써 생기는 mRNA 및/또는 단백질의 레벨(예를 들면, 육종내 레벨)을 저감시키는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또한, 일실시태양은, 분화 원형세포육종 등의 처치, 즉 치료, 예방, 개선, 경감하는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, 태아성 횡문근육종등의 동물에 있어서, DUX4 유전자가 EWSR1유전자와 융합함으로써 생기는mRNA 및/또는 단백질의 레벨(예를 들면, 육종내 레벨)을 저감시키는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드를 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또한, 일실시태양은, 태아성 횡문근육종 등의 처치, 즉 치료, 예방, 개선, 경감하는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일실시태양은, 부작용이 적은 DUX4 관련 질환의 치료, 예방, 개선, 경감하는 방법으로서, DUX4에 대한 수식 올리고뉴클레오티드를 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일실시태양에서는, 부작용으로서는, 주사부위반응, 간기능검사의 이상, 신장기능이상, 간독성(병리조직학적 이상소견: 간세포의 변성괴사, 간세포비대 등), 신장독성(병리조직학적 이상소견 등), 중추신경계 이상, 미오퍼시 및 권태를 예로 들 수 있다. 예를 들면, 혈액 중의 ALT, AST, γ-GTP, GLDH, ALP(알칼리포스파타제) 또는 TBA(total bile acids) 레벨의 상승은, 간독성 또는 간기능이상을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 빌리루빈의 상승은, 간독성 또는 간기능이상을 나타낼 수 있다. 또한, 요단백의 상승, 혈액 중의 크레아티닌, 혹은 UN의 상승은, 신장독성 또는 신장기능이상을 나타낼 수 있다.
일실시태양은, 본 명세서에 기재된 치료 방법 중 어느 하나에 의해 사용하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재되는 임의의 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 예를 들면, 일실시태양은 FSHD를 처치하고, 즉 치료하고, 예방하고, 지연시키고 또는 개선시키기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, DUX4의 발현을 저해하고, 및 DUX4 관련 질환 및/또는 그 증상을 처치하고, 즉 치료하고, 예방하고, 지연시키고 또는 개선시키기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, 동물에 있어서 DUX4의 발현을 저감하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, 동물에 있어서, 우선적으로 DUX4-FL mRNA의 레벨(예를 들면, 근육내 레벨)을 저감시키고, 근강직증을 경감시키기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, FSHD를 가지는 동물을 처치하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, 근경직, 근강직증, 안면근쇠약, 안검하수, 휘파람불가능, 얼굴의 표정변화의 감소, 우울 또는 분노의 얼굴표정, 말할 때 발음 곤란, 견갑근쇠약(익상견갑, 처진 어깨 등의 변형), 하지쇠약, 청력손실, 및 심장병을 포함시킨, FSHD의 발생과 관계가 있는 1개 이상의 증상 및 전귀를 처치하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, DUX4 유전자의 전사, DUX4 mRNA의 번역, DUX4 mRNA의 절단을 유도함으로써 DUX4 단백질의 발현을 방해하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다.
일실시태양은, 본 명세서에 기재된 바와 같이 FSHD를 처치하고, 즉 치료하고, 예방하거나 또는 개선시키는 키트로서, a) 본 명세서에 기재된 화합물, 및 임의로 b) 본 명세서에 기재의 새로운 약제 또는 요법을 포함하는, 키트를 제공한다. 키트는, FSHD를 처치하고, 즉 치료하고, 예방하고, 또는 개선시킬 목적으로 키트를 사용하기 위한 설명서 또는 라벨을 더욱 포함할 수 있다.
일실시태양은, 본 명세서에 기재된 치료 방법 중 어느 하나에 의해 사용하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재되는 임의의 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 예를 들면, 일실시태양은 FSHD를 처치하고, 즉 치료하고, 개선시키고, 또는 예방하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, DUX4의 발현을 저해하고 그리고 DUX4 관련 질환 및/또는 그 증상을 처치하고, 즉 치료하고, 예방하고, 지연시키고 또는 개선시키기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, 동물에 있어서 DUX4의 발현을 저감하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, 동물에 있어서, 우선적으로 DUX4-FL mRNA의 레벨(예를 들면, 근육내 레벨)을 저감시키고, 근강직증을 경감시키기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, FSHD를 가지는 동물을 처치하기 위한 의약의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물의 사용을 제공한다. 일실시태양은, 근경직, 근강직증, 안면근쇠약, 안검하수, 휘파람불가능, 얼굴의 표정변화의 감소, 우울 또는 분노의 얼굴표정, 말할 때 발음 곤란, 견갑근쇠약(익상견갑, 처진 어깨 등의 변형), 하지쇠약, 청력손실, 및 심장병을 포함시킨, FSHD의 발생과 관계가 있는 1개 이상의 증상 및 전귀를 처치하기 위한, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 상기 화합물을 함유하는 의약조성물을 제공한다. 일실시태양은, 서열목록의 서열번호 2∼4, 7∼64, 69∼97 또는 102∼112의 핵산염기서열로 이루어지는 핵산염기서열을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드, 또는 화합물번호 1∼112, 114∼132 또는 137∼246의 화합물을 제공한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 5'로부터 3'의 방향으로 기재되는 경우, 그것이 표적으로 하는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역상보쇄를 포함하는 핵산염기서열을 가진다. 일종의 이러한 실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 5'로부터 3'의 방향으로 기재되는 경우, 그것이 표적으로 하는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역상보쇄를 포함하는 핵산염기서열을 가진다.
일실시태양에서는, DUX4를 표적으로 하는 본 명세서에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼30 뉴클레오티드의 길이이다. 바꾸어 말하면, 몇 개의 실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는 12∼30 잔기의 연결한 핵산염기이다. 다른 실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12∼29 잔기, 12∼28 잔기, 12∼27 잔기, 12∼26 잔기, 12∼25 잔기, 12∼24 잔기, 12∼23 잔기, 12∼22 잔기, 12∼21 잔기, 12∼20 잔기, 12∼19 잔기, 12∼18 잔기, 12∼17 잔기, 12∼16 잔기, 12∼15 잔기, 12∼14잔기, 13∼29 잔기, 13∼28 잔기, 13∼27 잔기, 13∼26 잔기, 13∼25 잔기, 13∼24 잔기, 13∼23 잔기, 13∼22 잔기, 13∼21 잔기, 13∼20 잔기, 13∼19 잔기, 13∼18 잔기, 13∼17 잔기, 13∼16 잔기, 13∼15 잔기, 13∼14잔기, 14∼29 잔기, 14∼28 잔기, 14∼27 잔기, 14∼26 잔기, 14∼25 잔기, 14∼24 잔기, 14∼23 잔기, 14∼22 잔기, 14∼21 잔기, 14∼20 잔기, 14∼19 잔기, 14∼18 잔기, 14∼17 잔기, 14∼16 잔기, 14∼15 잔기의 연결한 핵산염기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일종의 그러한 실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 잔기의 연결한 핵산염기의 길이, 또는 상기한 값의 임의의 2개에 의해 정해진 범위로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일실시태양에서는, 이들 길이의 어느 하나의 수식 올리고뉴클레오티드는, 본 명세서에 기재된 예시적 수식 올리고뉴클레오티드의 어느 하나의 핵산염기서열 중 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18 또는 적어도 19 잔기의 연속적인 핵산염기(예를 들면, 서열목록의 서열번호 2∼4, 7∼64, 69∼97 또는 102∼112) 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 8개의 연속적인 핵산염기를 포함한다.
활성을 없애지 않고, 안티센스 올리고뉴클레오티드 등의 안티센스 화합물의 길이를 증가시키고 혹은 줄이는 것 및/또는 미스매치 염기를 도입할 수 있다. 예를 들면, Woolfet al.(Proc.Natl.Acad.Sci.USA89: 7305-7309, 1992)에 의하면, 13∼25 핵산염기길이의 일련의 안티센스 올리고뉴클레오티드를, 난모세포 인젝션 모델에 있어서, 이들이 표적 RNA의 절단을 유도하는 능력에 대하여 시험하고, 안티센스 올리고뉴클레오티드의 말단부근에 8 또는 11 개의 미스매치 염기를 가지는 25핵산염기길이의 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 미스매치를 포함하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오티드보다 정도가 적다고는 해도, 표적mRNA의 특이적인 절단을 유도할 수 있는 것으로 보고되어 있다. 마찬가지로, 표적특이적인 절단은, 1개 또는 3개의 미스매치를 가지는 것을 포함시키고, 13핵산염기의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 달성된 것으로 보고되어 있다.
Gautschi et al.(J.Natl.Cancer Inst. 93: 463-471, March 2001)에 의하면, bcl-2 mRNA에 대하여 100%의 상보성을 가지고, bcl-xL mRNA에 대하여 3개의 미스매치를 가지는 올리고뉴클레오티드가, 인비트로 및 인비보에 있어서 bcl-2와 bcl-xL의 양쪽의 발현을 저감시키는 능력을 나타낸 것으로 보고되어 있다. 또한, 이 올리고뉴클레오티드는, 인비보에서, 강력한 항종양활성을 나타내는 것으로 보고되어 있다.
표적 핵산, 표적영역 및 뉴클레오티드 서열
DUX4를 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서는, 한정되지 않지만, 이하의 서열을 예로 들 수 있다.
·GenBank 수탁번호 NM_001293798.2에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 1로서 본 명세서에 포함됨). 서열목록의 서열번호 1의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-FL1 또는 DUX4의 성숙 mRNA라고도 한다.
·GenBank 수탁번호 NM_001306068.2에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 5로서 본 명세서에 포함됨). 서열목록의 서열번호 5의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-FL2라고도 한다.
·GenBank 수탁번호 NM_001363820.1에 기재된 서열(서열목록의 서열번호 6로서 본 명세서에 포함됨). 서열목록의 서열번호 6의 스플라이싱 배리언트는, DUX4-s 모두 말한다.
·상기 각 스플라이싱 배리언트의 SNP.
본 명세서에 포함되는 실시예의 서열목록의 각 서열번호에 기재된 서열은, 당 부분, 뉴클레오시드간 결합 또는 핵산염기에 대한 어떠한 수식과도 무관계이다. 따라서, 서열목록의 서열번호로 정해진 수식 올리고뉴클레오티드는, 독립적으로, 당 부분, 뉴클레오시드간 결합 또는 핵산염기에 대한 1개 또는 복수의 수식을 포함할 수 있다. 화합물번호로 기재된 수식 올리고뉴클레오티드는, 핵산염기서열과 모티프의 조합을 나타낸다.
일실시태양에서는, 표적영역은 표적 핵산의 구조적으로 정해진 영역이다. 예를 들면, 표적영역은, 3'UTR, 5'UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 접합부, 코딩 영역, 번역 개시 영역, 번역 종결 영역 또는 다른 정해진 핵산영역 중 1개 이상을 포함할 수 있다. DUX4에 관한 구조적으로 정해진 영역은, NCBI 등의 서열 데이터베이스로부터 수탁번호에 의해 얻을 수 있고, 그러한 정보는, 참조에 의해 본 명세서에 포함된다. 일실시태양에서는, 표적영역은, 표적영역 내의 어떤 표적 세그먼트의 5'표적부위로부터 표적영역 내의 다른 표적 세그먼트의 3'표적부위까지의 서열을 포함할 수 있다.
타겟팅은, 수식 올리고뉴클레오티드가 하이브리다이즈하고, 그 결과 원하는 효과가 생기는, 적어도 1개의 표적 세그먼트의 결정을 포함한다. 일실시태양에서는, 원하는 효과는, mRNA표적 핵산 레벨의 저감이다. 일실시태양에서는, 원하는 효과는, 표적 핵산에 코딩되는 단백질의 레벨의 저감, 또는 표적 핵산과 관계가 있는 표현형의 변화이다.
표적영역은, 1개 또는 복수의 표적 세그먼트를 포함할 수 있다. 표적영역 내의 복수의 표적 세그먼트는, 중복하고 있어도 된다. 혹은, 이들은, 중복하고 있지 않아도 된다. 일실시태양에서는, 표적영역 내의 표적 세그먼트는, 약 300개 이하의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 일실시태양에서는, 표적영역내의 표적 세그먼트는, 표적 핵산의 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10 뉴클레오티드인, 또는, 약 이들의수의 뉴클레오티드인, 또는, 이들 개수 이하의 뉴클레오티드인, 또는 전술한 값의 임의의 2개에 의해 정해진 범위인, 다수의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 일실시태양에서는, 표적영역 내의 표적 세그먼트는, 표적 핵산의 5 이하 또는 약 5 이하의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 일실시태양에서는, 표적 세그먼트는 연속적이다. 본 명세서에 열거되는 5'표적부위 또는 3'표적부위 중 어느 하나인 출발 핵산을 가지는 범위에 의해 정해지는 표적영역이 의도된다.
적절한 표적 세그먼트는, 5'UTR, 코딩 영역, 3'UTR, 인트론, 엑손 또는 엑손/인트론 접합부 내에 발견할 수 있다. 개시 코돈 또는 종지 코돈을 포함하는 표적 세그먼트도 적절한 표적 세그먼트이다. 적절한 표적 세그먼트는, 개시 코돈 또는 종지 코돈 등의 일종의 구조적으로 정해진 영역을 특이적으로 배제할 수 있다.
적절한 표적 세그먼트의 결정은, 게놈 전체적에 걸쳐서, 다른 서열과의 표적 핵산의 서열의 비교를 포함할 수 있다. 예를 들면, BLAST알고리즘을 사용하여, 다른 핵산 사이의 유사 영역을 특정할 수 있다. 이 비교는, 선택된 표적 핵산 이외의 서열(즉, 비표적서열 또는 오프타겟 서열)에 비특이적 양식으로 하이브리다이즈할 수 있는 수식 올리고뉴클레오티드 서열의 선택을 방지할 수 있다.
활성표적영역 내의 수식 올리고뉴클레오티드의(예를 들면, 표적 핵산 레벨의 저감 퍼센트로 정해지는) 활성의 변동이 있을 수 있다. 일실시태양에서는, DUX4 mRNA의 레벨의 저감은, DUX4 단백질발현의 저해의 지표가 된다. DUX4 단백질의 레벨의 저감도, 표적 mRNA 발현의 저해의 지표가 된다. 또한, 표현형의 변화, 예를 들면, 근강직증을 경감시키고, 또한 근장애를 저감시키는 것은, DUX4 mRNA 및/또는 단백질의 발현의 저해의 지표가 될 수 있다.
하이브리다이제이션
몇 개의 실시태양에서는, 하이브리다이제이션은, 본 명세서에 개시된 수식 올리고뉴클레오티드와 DUX4핵산의 사이에 생긴다. 하이브리다이제이션의 가장 일반적인 메커니즘은, 핵산분자의 상보적 핵산염기간의 수소결합(예를 들면, 왓슨-클릭, 후그스틴 또는 역후그스틴형 수소결합)을 수반한다. 하이브리다이제이션의 강도는 융해 온도 Tm으로 나타낼 수 있다. Tm은, 하이브리다이제이션한 이중가닥 핵산의 50%가 단일가닥 핵산으로 분해하는 온도이며, 용액의 염 조건, 핵산의 길이나 염기서열 등에 따라 상이하지만, Tm값이 높을수록 하이브리다이제이션은 강하다.
하이브리다이제이션은 다양한 조건 하에서 일어난다. 스트린젠트 조건은 서열 의존적이며, 하이브리다이즈하게 되는 핵산분자의 성질 및 조성에 의해 결정된다.
서열이 표적 핵산에 특이적으로 하이브리다이즈 가능한 지의 여부를 결정하는 방법은, 당기술 분야에서 주지이다(Sambrooke and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는 DUX4핵산과 특이적으로 하이브리다이즈 가능하다.
상보성
원하는 효과가 생기도록(예를 들면, DUX4핵산 등의 표적 핵산의 안티센스 저해), 수식 올리고뉴클레오티드의 충분한 개수의 핵산염기가 표적 핵산의 대응하는 핵산염기와 수소결합할 수 있는 경우, 수식 올리고뉴클레오티드 및 표적 핵산은 서로 상보적이다.
수식 올리고뉴클레오티드는, 개재(介在) 또는 인접하는 세그먼트가 하이브리다이제이션 현상에 관여하지 않도록(예를 들면, 루프 구조, 미스매치 또는 헤어핀 구조), DUX4핵산의 1개 또는 복수의 세그먼트에 걸쳐 하이브리다이즈할 수 있다.
일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그 특정한 부분은, DUX4핵산, 표적영역, 표적 세그먼트 또는 이들의 특정한 부분에 대하여, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 혹은 100% 상보적이다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, DUX4핵산, 표적영역, 표적 세그먼트 또는 이들의 특정한 부분에 대하여, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 상보적이며, 본 명세서에 기재된 예시적 수식 올리고뉴클레오티드의 어느 하나의 핵산염기서열 중 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18 또는 적어도 19 개의 연속적인 핵산염기(예를 들면, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 7∼64, 69∼97 또는 102∼112 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 8개의 연속적인 핵산염기)를 포함한다. 표적 핵산과의 수식 올리고뉴클레오티드의 상보성 퍼센트는, 관례적 방법을 사용하여 결정할 수 있고, 수식 올리고뉴클레오티드 전체에 걸쳐 측정된다.
예를 들면, 수식 올리고뉴클레오티드의 20개의 핵산염기 중 18개가, 표적영역에 대하여 상보적이며, 따라서 특이적으로 하이브리다이즈하는 것으로 여겨지는 수식 올리고뉴클레오티드는, 90%의 상보성에 상당한다. 이 예에서는, 나머지 비상보적 핵산염기는, 클러스터화되어 있어도 되고, 상보적 핵산염기가 협지되어 있어도 되며, 서로 또는 상보적 핵산염기와 연속적일 필요는 없다. 표적 핵산영역과의 수식 올리고뉴클레오티드의 상보성 퍼센트는, 당기술 분야에서 기지의 BLAST프로그램(basiclocal alignmentsearch tools) 및 PowerBLAST프로그램(Altschulet al., J.Mol.Biol., 1990, 215, 403410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649656)을 사용하여, 관례적으로 결정할 수 있다. 상동성 퍼센트, 서열 동일성 또는 상보성은, 예를 들면, 갭 프로그램(WisconsinSequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.)에 의해, Smith and Waterman(Adv.Appl.Math., 1981, 2, 482489)의 알고리즘을 사용하는 디폴트 설정을 사용하여 결정할 수 있다.
비상보적 핵산염기의 부위는, 수식 올리고뉴클레오티드의 5'말단이라도 되고, 3'말단이라도 된다. 혹은, 비상보적 핵산염기(복수 가능)는, 수식 올리고뉴클레오티드의 내부의 위치라도 된다. 2개 이상의 비상보적 핵산염기가 존재하는 경우에는, 이들은, 연속적 (즉 연결된)이라도되는하고, 비연속적이며도 된다.
일 실시예에서는, 비상보적 핵산염기는, 갭머수식 올리고뉴클레오티드의 윙 세그먼트중에 위치한다.
일실시태양에서는, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30핵산염기길이인, 또는 이 핵산염기길이까지의 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적 핵산, 예를 들면, DUX4핵산 또는 그의 특정한 부분에 대한, 3개 이하, 2개 이하 또는 1개 이하의 비상보적 핵산염기(복수 가능)를 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적 핵산의 일부분에 대하여 상보적인 것도 포함한다. 본 명세서에서 사용하는 경우, 「부분」은, 표적 핵산의 영역 또는 세그먼트 내의 정해진 개수의 연속적(즉 연결된) 핵산염기를 지칭한다. 「부분」은, 수식 올리고뉴클레오티드의 정해진 개수의 연속적인 핵산염기를 지칭할 수도 있다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적 세그먼트 중 적어도 8핵산염기부분에 상보적이다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적 세그먼트 중 적어도 10핵산염기부분에 상보적이다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 표적 세그먼트 중 적어도 15핵산염기부분에 상보적이다. 표적 세그먼트 중 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18, 적어도 19, 적어도 20 또는 그 이상의 핵산염기부분, 또는 이들 값의 임의의 2개에 의해 정해진 범위에 상보적인 수식 올리고뉴클레오티드도 의도된다.
동일성
본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드는, 특정한 뉴클레오티드 서열, 서열목록의 서열번호 혹은 특정한 화합물번호에 의해 표시되는 화합물 또는 이들의 부분에 대하여, 정해진 동일성 퍼센트를 가질 수도 있다. 본 명세서에서 사용하는 경우, 수식 올리고뉴클레오티드는, 그것이 동일한 핵산염기 쌍합능력을 가지는 경우, 본 명세서에 개시된 서열과 동일하다. 예를 들면, 개시된 DNA서열의 티미딘 대신 우라실을 포함하는 RNA는, 우라실과 티미딘의 양쪽 모두 아데닌과 쌍이 되므로, 그 DNA서열과 동일한 것으로 여겨진다. 본 명세서에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 단축 및 연장 버전 및 본 명세서에서 제공되는 수식 올리고뉴클레오티드에 대하여 동일하지 않은 염기를 가지는 화합물도 의도된다. 동일하지 않은 염기는 서로 인접하고 있어도 되고, 수식 올리고뉴클레오티드 전체에 걸쳐 분산하고 있어도 된다. 수식 올리고뉴클레오티드의 동일성 퍼센트는, 비교되는 서열에 대하여 동일한 염기쌍합을 가지는 염기의 개수에 따라 계산된다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그 부분은, 본 명세서에 개시되는 예시적 수식 올리고뉴클레오티드 혹은 서열목록의 서열번호 또는 이들의 부분의 1개 또는 복수와, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일하다.
수식
뉴클레오시드는 염기-당의 조합물이다. 뉴클레오시드의 핵산염기(염기로서도 알려짐) 부분은, 통상은, 복소환 염기부분이다. 뉴클레오티드는, 뉴클레오시드의 당 부분에 공유결합한 인산기를 더 포함하는 뉴클레오시드이다. 펜토퓨라노실당을 포함하는 뉴클레오시드에 대해서는, 인산기는, 당의 2', 3' 또는 5'하이드록실 부분에 연결할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는, 인접 뉴클레오시드가 서로 공유결합하는 것을 통하여 형성되어, 직쇄형의 폴리머 올리고뉴클레오티드를 형성한다. 올리고뉴클레오티드 구조 내에서, 인산기는, 일반적으로, 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드간 결합을 형성하는 것으로 알려져 있다.
수식 올리고뉴클레오티드에서의 수식은, 뉴클레오시드간 결합, 당 부분 또는 핵산염기에 대한 치환 또는 변화를 포함한다. 수식 수식 올리고뉴클레오티드는, 예를 들면, 세포 흡수의 증강, 핵산표적에 대한 친화성의 증강, 뉴클레아제의 존재 하에서의 안정성의 증대 또는 저해 활성의 증대 등의 바람직한 특성이 이유로, 천연형보다 바람직한 경우가 많다.
수식 뉴클레오시드간 결합
RNA 및 DNA의 천연에 존재하는 뉴클레오시드간 결합은, 3'-5'포스포디에스테르결합이다. 1개 또는 복수의 수식된, 즉 천연에 존재하지 않는, 뉴클레오시드간 결합을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드는, 예를 들면, 세포 흡수의 증강, 표적 핵산에 대한 친화성의 증강 및 뉴클레아제의 존재 하에서의 안정성의 증대 등의 바람직한 특성이 이유로, 천연에 존재하는 뉴클레오시드간 결합을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드보다 선택되는 경우가 많다.
수식 뉴클레오시드간 결합을 가지는 올리고뉴클레오티드는, 인 원자를 유지하는 뉴클레오시드간 결합 및 인 원자를 가지지 않는 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 대표적인 인 함유 뉴클레오시드간 결합으로서는, 이들로 한정되지 않지만, 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트 및 포스포로티오에이트 중 1개 이상을 예로 들 수 있다. 인함유 및 비인함유 결합의 조제 방법은 주지이다.
일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는, 1개 또는 복수의 수식 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 일실시태양에서는, 수식 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드의 각 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합이다.
수식 당 부분
본 발명 수식 올리고뉴클레오티드는, 그것을 구성하는 적어도 1개의 뉴클레오시드가 수식 당을 포함하는 것이 바람직하게 사용된다. 본 발명에 있어서 수식 당은, 당 부분이 수식된 것을 일컬으며, 상기 수식 당을 1개 이상 포함하는 수식 올리고뉴클레오티드는, 뉴클레아제 안정성의 증강, 결합 친화성의 증대 등의 유리한 특징을 가진다. 수식 당 중 적어도 하나는, 2환식 당 또는 치환 당 부분을 가지는 것이 바람직하다.
수식 당을 가지는 뉴클레오시드의 예로서는, 이들로 한정되지 않지만, 5'-비닐, 5'-메틸(R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환기를 포함하는 뉴클레오시드를 들 수 있다. 2'번 위치의 치환기는, 알릴, 아미노, 아지드, 티오, O-알릴, O-C1∼C10 알킬, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) 및 O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn)(식 중, 각 Rl, Rm 및 Rn은 독립적으로, H 또는 치환 혹은 무치환의 C1∼C10 알킬임)로부터 선택할 수도 있다.
2환식 당을 가지는 뉴클레오시드의 예로서는, 이들로 한정되지 않지만, 4'와 2'의 리보실환 원자 사이의 가교를 포함하는 뉴클레오시드를 들 수 있다. 일실시태양에서는, 본 명세서에서 제공되는 올리고뉴클레오티드는, 가교가 하기 식 중 1개을 포함하는, 1개 또는 복수의 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드를 포함한다: 4'-(CH2)-O-2'(LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2'(ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(및 이들의 유사물. 미국특허 7,399,845호를 참조); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(및 이들의 유사물. WO2009/006478호를 참조); 4'-CH2-N (OCH3)-2'(및 이들의 유사물. WO2008/150729호를 참조); 4'-CH2-O-N (CH3)-2'(및 이들의 유사물. US2004-0171570호를 참조); 4'-CH2-N(R)-O-2'(식 중, R은, H, C1∼C12 알킬 또는 보호기)(미국특허 7,427,672호를 참조); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(및 이들의 유사물. Chattopadhyayaet al., J.Org.Chem., 2009, 74, 118-134를 참조); 및 4'-CH2-C(=CH2)-2'(및 이들의 유사물. WO2008/154401호를 참조).
또한 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드가, 발표문헌에 보고되어 있다(예를 들면: Srivastavaet al., J.Am.Chem.Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Friedenet al., NucleicAcids Research, 2003, 21, 6365-6372; Elayadiet al., Curr.OpinionInvens.Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem.Biol., 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr.Opinion Mol.Ther., 2001, 3, 239-243;Wahlestedt etal., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 2000, 97, 5633-5638; Singhet al., Chem.Commun., 1998, 4, 455-456;Koshkinet al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumaret al., Bioorg.Med.Chem.Lett ., 1998, 8, 2219-2222;Singhet al.,; 미국특허 US7,399,845호; 6,770,748호; 6,525,191호; 6,268,490호; 미국 US2008-0039618호; US2007-0287831호; US2004-0171570호; US2009-0012281호; WO2010/036698; WO2009/067647호; WO2009/067647호; WO2007/134181호; WO2005/021570호; WO2004/106356호; WO94/14226호; WO2009/006478호; WO2008/154401호; 및 WO2008/150729호를 참조). 전술한 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드의 각각은, 예를 들면 α-L-리보퓨라노스 및 β-D-리보퓨라노스를 포함하는 1개 또는 복수의 입체화학적 당 배치를 가지고, 조제할 수 있다.
2환식 당을 가지는 뉴클레오시드의 GuNA는 구아니딘 가교를 가지는 인공 뉴클레오시드로서 보고되어 있다(WO2014/046212호, WO2017/047816호를 참조). 2환식 뉴클레오시드의 ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Trz] 및 ALNA[Oxz]는 가교형 인공핵산아미노 LNA(ALNA)로서 보고되어 있다(일본특허출원 2018-212424호를 참조).
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는, 펜토퓨라노실당 부분의 4'와 2'의 탄소 원자 사이에 가교를 포함하고, 이들로 한정되지는 않지만, -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -N(Ra)-, -O-, -Si(Ra)2- 및 -S(=O)x-로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 1개∼4개의 연결 기를 포함하는 가교가 포함되고, 식 중, X는 0, 1 또는 2이며; n은 1, 2, 3 또는 4이며; 각 Ra 및 Rb는, 독립적으로, H, 보호기, 하이드록실, C1∼C12 알킬, 치환 C1∼C12 알킬, C2∼C12 알케닐, 치환 C2∼C12 알케닐, C2∼C12 알키닐, 치환 C2∼C12 알키닐, 방향환기, 치환 방향환기, 복소환기, 치환 복소환기, C5∼C7 지환기, 치환 C5∼C7 지환기, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실(C(=O)-H), 치환 아실, CN, 술포닐(S=O)2-J1) 또는 술폭실(S=O)-J1)이며,
각 J1 및 J2는, 독립적으로, H, C1∼C12 알킬, 치환 C1∼C12 알킬, C2∼C12 알케닐, 치환 C2∼C12 알케닐, C2∼C12 알키닐, 치환 C2∼C12 알키닐, 방향환기, 치환 방향환기, 아실(C(=O)-H), 치환 아실, 복소환기, 치환 복소환기, C1∼C12 아미노알킬, 치환 C1∼C12 아미노알킬 또는 보호기다.
일실시태양에서는, 2환식 당 부분의 가교는, -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- 또는 -C(RaRb)-O-N(R)-이다. 일실시태양에서는, 가교는, 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2'(이 경우의 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드를 LNA라고도 함), 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' 및 4'-CH2-N(R)-O-2'-이며, 식 중, 각 R은 독립적으로, H, 보호기 또는 C1∼C12 알킬이다.
일실시태양에서는, 2환식 당 부분의 가교는, 4'-CH2-O-2'-(LNA) 또는 -CH2-N(R)-이며,식 중, 각R은 독립적으로 -SO2-CH3(ALNA[Ms]), -CO-NH-CH3(ALNA[mU]), 1,5-디메틸-1,2,4-트리아졸-3-일(ALNA[Trz]), -CO-NH-CH(CH3)2(ALNA[ipU]), 5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일(ALNA[Oxz])이다(일본특허출원 2018-212424호).
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는, 이성체 입체 배치에 의해 더욱 정의된다. 예를 들면, 4'-(CH2)-O-2' 가교를 포함하는 뉴클레오시드는, α-L-입체 배치로 존재해도 되고, β-D-입체 배치로 존재해도 된다.
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는, 4'-2' 가교를 가지는 것을 포함하고, 그러한 가교로서는, 이들로 한정되지 않지만, α-L-4'-(CH2)-O-2', β-D-4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2', 4'-CH2-N(R)-O-2', 4'-CH(CH3)-O-2', 4'-CH2-S-2', 4'-CH2-CH(CH3)-2' 및 4'-(CH2)3-2'(식 중, R은, H, 보호기, C1∼C12 알킬, 또는 C1∼C12 알킬로 치환되어도 되는 우레아 혹은 구아니딘)을 예로 들 수 있다.
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는 하기 식을 가진다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며;
Ta 및 Tb는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며;
Za는, C1∼C6 알킬, C2∼C6 알케닐, C2∼C6 알키닐, 치환 C1∼C6 알킬, 치환 C2∼C6 알케닐, 치환 C2∼C6 알키닐, 아실, 치환 아실, 치환 아미드, 티올 또는 치환 티올이다.
일실시태양에서는, 치환기의 각각은 독립적으로, 할로겐, 옥소, 하이드록실, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc 및 NJeC(=X)NJcJd(식 중, 각 Jc, Jd 및 Je는 독립적으로, H, C1∼C6 알킬 또는 치환 C1∼C6 알킬이며, X는 O 또는 NJc임)로부터 독립으로 선택되는 치환기이며 1치환 또는 다치환된다.
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는 하기 식을 가진다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며;
Ta 및 Tb는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며;
Zb는, C1∼C6 알킬, C2∼C6 알케닐, C2∼C6 알키닐, 치환 C1∼C6 알킬, 치환 C2∼C6 알케닐, 치환 C2∼C6 알키닐 또는 치환 아실(C(=O)-)이다.
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는 하기 식을 가진다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며;
Ta 및 Tb는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며;
Rd는, C1∼C6 알킬, 치환 C1∼C6 알킬, C2∼C6 알케닐, 치환 C2∼C6 알케닐, C2∼C6 알키닐 또는 치환 C2∼C6 알키닐이며;
각 qa, qb, qc 및 qd는 독립적으로, H, 할로겐, C1∼C6 알킬, 치환 C1∼C6 알킬, C2∼C6 알케닐, 치환 C2∼C6 알케닐, C2∼C6 알키닐 또는 치환 C2∼C6 알키닐, C1∼C6 알콕실, 치환 C1∼C6 알콕실, 아실, 치환 아실, C1∼C6 아미노알킬 또는 치환 C1∼C6 아미노알킬이다.
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는 하기 식을 가진다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며;
Ta 및 Tb는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며;
qa, qb, qe 및 qf는 각각 독립적으로, 수소, 할로겐, C1∼C12 알킬, 치환 C1∼C12 알킬, C2∼C12 알케닐, 치환 C2∼C12 알케닐, C2∼C12 알키닐, 치환 C2∼C12 알키닐, C1∼C12 알콕시, 치환 C1∼C12 알콕시, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)-NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이며;
또는, qe 및 qf는 모두 =C(qg)(qh)이며;
qg 및 qh는 각각 독립적으로, H, 할로겐, C1∼C12 알킬 혹은 치환 C1∼C12 알킬이다.
4'-CH2-O-2' 가교를 가지는, 아데닌, 시토신, 구아닌, 5-메틸-시토신, 티민 및 우라실 2환식 뉴클레오시드(LNA라고도 함)의 합성 및 조제는, 이들의 올리고머화 및 핵산인식 특성과 함께 기재되어 있다(Koshkinet al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드의 합성은, WO98/39352 및 WO99/14226에도 기재되어 있다.
4'-CH2-O-2'(이 경우의 2환식 뉴클레오시드를 LNA라고도 함) 및 4'-CH2-S-2'등의 4'-2' 가교기를 가지는 다양한 2환식 뉴클레오시드의 유사물도, 조제되고 있다(Kumaret al., Bioorg.Med.Chem.Lett., 1998, 8, 2219-2222). 핵산 폴리머라아제의 기질로서 사용하기 위한, 2환식 뉴클레오시드를 포함하는 올리고데옥시리보뉴클레오티드 이중가닥의 조제도 기재되어 있다(Wengel et al., WO99/14226). 또한, 2'-아미노-BNA(이 경우의 2환식 뉴클레오시드를 ALNA라고도 함), 즉 입체구조적으로 제한된 고친화성 올리고뉴클레오티드 유사물의 합성이, 당기술분야에서 기재되어 있다(Singh et al., J.Org.Chem., 1998, 63, 10035-10039). 또한, 2'-아미노- 및 2'-메틸아미노-BNA가 조제되어 있고, 상보적인 RNA쇄 및 DNA쇄의 이중가닥의 열안정성이 이전에 보고되어 있다.
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는 하기 식을 가진다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며;
Ta 및 Tb는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며;
각 qi, qj, qk 및 ql은 독립적으로, H, 할로겐, C1∼C12 알킬, 치환 C1∼C12 알킬, C2∼C12 알케닐, 치환 C2∼C12 알케닐, C2∼C12 알키닐, 치환 C2∼C12 알키닐, C1∼C12 알콕실, 치환 C1∼C12 알콕실, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이며;
qi 및 qj 또는 ql 및 qk는 모두 =C(qg)(qh)이며, 식 중, qg 및 qh는 각각 독립적으로, H, 할로겐, C1∼C12 알킬 또는 치환 C1∼C12 알킬이다.
4'-(CH2)3-2' 가교 및 알케닐 유사물 가교 4'-CH=CH-CH2-2'를 가지는 1개의 탄소환식 2환식 뉴클레오시드가 기재되어 있다(Frier et al., NucleicAcids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 및 Albaeket al., J.Org.Chem., 2006, 71, 7731-7740). 탄소환식 2환식 뉴클레오시드의 합성 및 조제도, 그 올리고머화 및 생화학적인 연구와 함께 기재되어 있다(Srivastava et al., J.Am.Chem.Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
일실시태양에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드로서는, 이들로 한정되지 않으며, 이하에 나타낸 바와 같은,
(A) α-L-메틸렌 옥시(4'-CH2-O-2')BNA,
(B) β-D-메틸렌 옥시(4'-CH2-O-2')BNA,
(C) 에틸렌 옥시(4'-(CH2)2-O-2')BNA,
(D) 아미노옥시(4'-CH2-O-N(R)-2')BNA,
(E) 옥시아미노(4'-CH2-N(R)-O-2')BNA,
(F) 메틸(메틸렌옥시)(4'-CH(CH3)-O-2')BNA(구속(拘束) 에틸 또는 cEt로도 일컬어짐),
(G) 메틸렌-티오(4'-CH2-S-2')BNA,
(H) 메틸렌-아미노(4'-CH2-N(R)-2')BNA,
(I) 메틸탄소환식 (4'-CH2-CH(CH3)-2')BNA,
(J) 프로필렌 탄소환식 (4'-(CH2)3-2')BNA, 및
(K) 비닐BNA를 예로 들 수 있다.
식 중, Bx는 염기부분이며, R은 독립적으로, 보호기, C1∼C6 알킬 또는 C1∼C6 알콕시이다.
일실시태양(LNA)에서는, 2환식 당을 가지는 뉴클레오시드는 하기 일반식:
[식 중,
B는, 핵산염기이며;
X 및 Y는, 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등]으로 표시되는 뉴클레오시드를 예로 들 수 있다(WO98/39352을 참조). 전형적인 구체예는, 하기 식:
으로 표시되는 뉴클레오티드를 들 수 있다.
일실시태양(GuNA)에서는, 2환식을 포함하는 뉴클레오시드는 하기 일반식:
[식 중, B는 핵산염기이며, R3, R4, R5, R6는 각각 독립적으로 수소 원자, 또는 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 C1-6 알킬기이며, R7, R8은 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며, 그리고, R9, R10, R11은 각각 독립적으로 수소 원자, 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 C1-6 알킬기, 또는 아미노기의 보호기임]
으로 표시되는 뉴클레오시드이다(예를 들면, 국제공개 제2014/046212호, 국제공개 제2017/047816호를 참조).
일실시태양(ALNA[mU])에서는, 2환식 당을 포함하는 뉴클레오시드는 하기 일반식(I):
[식 중,
B는, 핵산염기이며;
R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로, 수소 원자, 또는 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 C1-6 알킬기이며;
R5 및 R6는 각각 독립적으로, 수소 원자, 수산기의 보호기, 치환되어도 되는 인산기, 인 부분 또는 지지체로의 공유결합 등이며;
m은, 1 또는 2이며;
X는, 하기 식 (II-1):
으로 표시되는 기이며;
식(II-1) 중에 기재된 기호:
는, 2'-아미노기와의 결합점을 나타내고;
R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 메틸기임]
로 표시되는 뉴클레오시드이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 무치환의 메틸기인, 뉴클레오시드이다.
일실시태양(ALNA[ipU])에서는, 2환식 당을 포함하는 뉴클레오시드는 상기한 ALNA[mU]에 있어서 정의한 일반식(I)을 가지는 뉴클레오시드이며, 상기 식 중,
X가, 하기 식 (II-1):
으로 표시되는 기이며;
R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 1개 이상의 치환기로 치환되어도 되는 이소프로필기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, R7 및 R8의 한쪽이 수소 원자이며, 다른 쪽이 무치환의 이소프로필기인, 뉴클레오시드이다.
일실시태양(ALNA[Trz])에서는, 2환식을 포함하는 뉴클레오시드는 상기 일반식(I)을 가지는 뉴클레오시드이며, 상기 식 중, X가, 하기 식 (II-2):
으로 표시되는 기이며;
A가, 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 트리아졸릴기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). ALNA[Trz]의 전형적인 구체예는, A가, 1 또는 복수의 메틸기를 가져도 되는 트리아졸릴기이며, 보다 구체적으로는, 1,5-디메틸-1,2,4-트리아졸-3-일기인, 뉴클레오시드이다.
일실시태양(ALNA[Oxz])에서는, 상기한 ALNA[mU]에 있어서 정의한 일반식(I)을 가지는 뉴클레오시드이며, 상기 식 중,
X가, 하기 식 (II-2):
으로 표시되는 기이며;
A가, 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 옥사디아졸릴기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). 전형적인 구체예는, A가 1 또는 복수의메틸기를 가져도되는 옥사디아졸릴기이며, 보다 구체적으로는, 5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일기인, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이다.
일실시태양(ALNA[Ms])에서는, 2환식을 포함하는 뉴클레오시드는 상기 일반식(I)을 가지는 뉴클레오시드이며, 상기 식 중, X가, 하기 일반식(II-3):
으로 표시되는 기이며;
M은, 1개 이상의 치환기로 치환되어 있어도 되는 메틸기로 치환된, 술포닐기이다(예를 들면, 일본특허출원 2018-212424를 참조). ALNA[Ms]의 전형적인 구체예는, M이 무치환의 메틸기로 치환된 술포닐기인, 뉴클레오시드이다.
일실시태양에서는, 뉴클레오시드는, 당대용물과의 리보실환의 치환에 의해 수식된다. 그러한 수식으로서는, 이들로 한정되지 않지만, 대용환계(DNA유사물이라고 하는 경우도 있음), 예를 들면, 모르폴리노환, 시클로헥세닐환, 시클로헥실환 또는 테트라하이드로피라닐환, 예를 들면, 하기 식 중 1개를 가지는 것과의 리보실환의 치환을 들 수 있다 :
일실시태양에서는, 하기 식을 가지는 당대용물이 선택된다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며
T3 및 T4는 각각 독립적으로, 테트라하이드로피란뉴클레오시드 유사물을 올리고머 화합물에 연결하는 뉴클레오시드간 연결기, 또는 T3 및 T4의 한쪽은, 테트라하이드로피란뉴클레오시드유사물을 올리고머 화합물 혹은 올리고뉴클레오티드에 연결하는 뉴클레오시드간 연결기이며, T3 및 T4의 다른 쪽은, H, 하이드록실 보호기, 연결 공역기 또는 5'또는 3'-말단기이며;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7은 각각 독립적으로, H, C1∼C6 알킬, 치환 C1∼C6 알킬, C2∼C6 알케닐, 치환 C2∼C6 알케닐, C2∼C6 알키닐 또는 치환 C2∼C6 알키닐이며;
R1 및 R2의 한쪽은 수소이며, 다른 쪽은 할로겐, 치환 또는 무치환의 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN(식 중, X는 O, S 또는 NJ1이며, 각 J1, J2 및 J3는 독립적으로, H 또는 C1∼C6 알킬임)로 선택된다.
일실시태양에서는, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7은 각각 H이다. 일실시태양에서는, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 1개는 H 이외이다. 일실시태양에서는, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 1개는 메틸이다. 일실시태양에서는, R1 및 R2의 한쪽이 F인 THP뉴클레오시드가 제공된다. 일실시태양에서는, R1이 플루오로이며, 또한 R2가 H이며; R1이 메톡시이며, 또한 R2가 H이며, 및 R1이 메톡시에톡시이며, 또한 R2가 H이다.
그러한 당대용물로서는, 이들로 한정되지 않지만, 당기술분야에서, 헥시톨핵산(HNA), 알트리톨핵산(ANA) 및 만니톨핵산(MNA)으로 일컬어지는 것을 예로 들 수 있다(Leumann, C.J., Bioorg. & Med. Chem., 2002, 10, 841-854를 참조).
일실시태양에서는, 당대용물은, 5개를 초과하는 원자 및 1개를 초과하는 헤테로 원자를 가지는 환을 포함한다. 예를 들면, 모르폴리노 당 부분을 포함하는 뉴클레오시드 및 올리고머 화합물에서의 그 사용이 보고되어 있다(예를 들면, Braaschet al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; 및 미국특허 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; 및 5,034,506을 참조).
본 명세서에서 사용하는 경우, 용어 「모르폴리노」는 하기 구조를 가지는 당대용물을 의미한다 :
일실시태양에서는, 예를 들면, 상기한 모르폴리노 구조로부터 다양한 치환기를 부가하거나 또는 변경함으로써, 모르폴리노를 수식할 수 있다. 그러한 당대용물은, 본 명세서에서 「수식 모르폴리노」라고 한다.
일실시태양에서는, 올리고뉴클레오티드는, 천연에 존재하는 뉴클레오시드의 펜토퓨라노실 잔기 대신 6원 시클로헥세닐을 가지는 뉴클레오시드인, 1개 또는 복수의 수식 시클로헥세닐 뉴클레오시드를 포함한다. 수식 시크로헥세닐뉴클레오시드로서는, 이들로 한정되지 않지만, 당기술분야에서 기재된 것을 들 수 있다(예를 들면, 공유에 관한, 2010년 4월 10일에 공개된 WO2010/036696, Robeynset al., J.Am.Chem.Soc., 2008, 130(6), 1979-1984; Horvathet al., TetrahedronLetters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts et al., J.Am.Chem.Soc., 2007, 129(30), 9340-9348;Guet al., Nucleosides, Nucleotides& Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al., Nucleic AcidsResearch, 2005, 33(8), 2452-2463;Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F:StructuralBiology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586;Gu et al., Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al., Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang et al., J.Org.Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure et al., NucleicAcids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang et al., J.Org.Chem., 2001, 66, 8478-82; Wang et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang et al., J.Am.Chem., 2000, 122, 8595-8602;WO06/047842호; 및 WO01/049687호를 참조; 각각의 텍스트는 참조에 의해 그 전체가 본 명세서에 포함된다).
일종의 수식 시클로헥세닐 뉴클레오시드는 하기 식을 가진다:
식 중,
Bx는 복소환염기 부분이며;
T3 및 T4은 각각 독립적으로, 시클로헥세닐뉴클레오시드 유사물을 올리고뉴클레오티드 화합물에 연결하는 뉴클레오시드간 연결기이며, 또는 T3 및 T4의 한쪽은, 테트라하이드로피란뉴클레오시드 유사물을 올리고뉴클레오티드 화합물에 연결하는 뉴클레오시드간 연결기이며, T3 및 T4의 다른 쪽은, H, 하이드록실 보호기, 연결 공역기 혹은 5'- 혹은 3'-말단기이며;
q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7, q8 및 q9은 각각 독립적으로, H, C1∼C6 알킬, 치환 C1∼C6 알킬, C2∼C6 알케닐, 치환 C2∼C6 알케닐, C2∼C6 알키닐, 치환 C2∼C6 알키닐 또는 다른 당치환기이다.
올리고뉴클레오티드에 포함시키기 위한 뉴클레오시드를 수식하는 데 사용할 수 있는, 많은 다른 2환식 및 3환식의 당대용환계가 당기술분야에서 기지이다(예를 들면, 총설: Leumann, ChristianJ., Bioorg.& Med.Chem., 2002, 10, 841-854를 참조). 그러한 환계는, 활성을 증강하기 위하여 다양한 다른 치환을 받을 수 있다.
수식 당의 조제 방법은 당업자에게 주지이다. 그러한 수식 당의 조제를 교시하는 몇 가지 대표적인 U.S. 특허는, 하기로 한정되지 않지만, U.S.: 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,670,633; 5,700,920; 5,792,847 및 6,600,032 및 WO2005/121371호를 에로 들 수 있고, 이들 각각은, 참조에 의해 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
수식 당 부분을 가지는 뉴클레오티드에서는, 핵산염기부분(천연, 수식 또는 이들의 조합)은, 적절한 핵산표적과의 하이브리다이제이션 동안 유지된다.
수식 핵산염기
핵산염기(또는 염기)의 수식 또는 치환은, 천연에 존재하거나 또는 합성의 비수식 핵산염기와 구조적으로 식별 가능하며, 이와 같은 비수식 핵산염기와 더욱 기능적으로 호환성이 있다. 천연 및 수식 핵산염기의 양쪽 모두, 수소결합에 관여할 수 있다. 그러한 핵산염기수식은, 뉴클레아제 안정성, 결합 친화성 또는 몇 가지 다른 유익한 생물학적 특성을 수식 올리고뉴클레오티드에 줄 수 있다. 수식 핵산염기는, 예를 들면, 5-메틸시토신(5-me-C) 등의 합성 및 천연의 핵산염기를 포함한다. 5-메틸시토신 치환을 포함한 일종의 핵산염기 치환은, 표적 핵산에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 결합 친화성을 증대시키는 데 특히 유용하다. 예를 들면, 5-메틸시토신 치환은, 핵산의 이중가닥 안정성을 0.6∼1.2 ℃ 증대시키는 것이 나타나 있다(Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T.and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
또한 수식 핵산염기로서는, 5-하이드록시메틸시토신, 크산틴, 히포크산틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐(-C≡C-CH3)우라실 및 시토신 및 피리미딘 염기의 다른 알키닐 유도체, 6-아조우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실(슈트 우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 예로 들 수 있다.
복소환염기 부분은, 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 복소환, 예를 들면, 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노 피리딘 및 2-피리돈으로 치환되어 있는 것을 포함할 수도 있다. 수식 올리고뉴클레오티드의 결합 친화성을 증대시키는 데 특히 유용한 핵산염기로서는, 5-치환 피리미딘, 6-아자피리미진 및 N-2, N-6 및 O-6치환 퓨린(2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함함)을 예로 들 수 있다.
일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는, 1개 또는 복수의 수식 핵산염기를 포함한다. 일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는, 1개 또는 복수의 수식 핵산염기를 포함한다. 일실시태양에서는, 수식 핵산염기는 5-메틸시토신이다. 일실시태양에서는, 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
일종의 수식올리고뉴클레오티드 모티프
일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는, 수식 올리고뉴클레오티드에, 저해 활성의 증강, 표적 핵산에 대한 결합 친화성의 증대 또는 인비보 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 저항성 등의 특성을 부여하기 위하여, 패턴 또는 모티프에 배치되는 화학수식 서브유닛를 가진다.
키메라 수식 올리고뉴클레오티드는, 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 저항성의 증대, 세포 받아들임의 증대, 표적 핵산에 대한 결합 친화성의 증대 및/또는 저해 활성의 증대를 부여하기 위하여, 전형적으로는 적어도 1개의 수식 영역을 포함한다. 키메라 수식 올리고뉴클레오티드의 제2 영역은, RNA:DNA 이중가닥 의 RNA쇄를 절단하는 세포내 엔드 뉴클레아제 RNase H에 대한 기질로서 임의로 기능할 수 있다.
갭머 모티프를 가지는 수식 올리고뉴클레오티드는, 키메라 수식 올리고뉴클레오티드이다. 갭머에서는, RNase H 절단을 지원하는 복수의 뉴클레오티드를 가지는 내부영역은, 내부영역의 뉴클레오시드와 화학적으로 상이한 복수의 뉴클레오티드를 가지는 외부영역 사이에 위치한다. 갭머 모티프를 가지는 수식 올리고뉴클레오티드의 경우에는, 갭 세그먼트는, 엔드 뉴클레아제에 의한 절단의 기질로서 일반적으로 작용하지만, 윙 세그먼트는 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머 영역은, 각각 다른 영역을 포함하는 당 부분의 타입에 의해 구별된다. 몇 개의 실시태양에서는, 갭머 영역을 구별하는 데 사용되는 당 부분의 타입은, β-D-리보뉴클레오시드, β-D-디옥시리보뉴클레오시드, 2'-수식 뉴클레오시드(이와 같은 2'-수식 뉴클레오시드는, 그 중에서도, 2'-MOE 및 2'-O-CH3를 포함할 수 있음) 및 2환식 당수식 뉴클레오시드(이와 같은 2환식 당수식 뉴클레오시드는, LNA, GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Trz] 및/또는 ALNA[Oxz]를 가지는 것을 포함할 수 있음)를 포함할 수 있다. 윙-갭-윙 모티프는, 「X-Y-Z」로서 흔히 기재되며, 「X」는 5'윙 영역의 길이를 나타내고, 「Y」는 갭 영역의 길이를 나타내고, 「Z」는 3'윙 영역의 길이를 나타낸다. 본 명세서에서 사용하는 경우, 「X-Y-Z」로서 기재되는 갭머는, 갭 세그먼트가 5'윙 세그먼트 및 3'윙 세그먼트의 각각에 직접 인접하도록 위치하는 입체 배치를 가진다. 따라서, 5'윙 세그먼트와 갭 세그먼트의 사이 또는 갭 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 사이에, 개재성 뉴클레오티드는 존재하지 않는다. 본 명세서에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 중 어느 하나는, 갭머 모티프를 가질 수 있다. 몇 개의 실시태양에서는 X와 Z는 동일하며, 다른 실시태양에서는 이들은 상이하다. 바람직한 실시태양에서는, Y는 8∼16 개의 뉴클레오티드이다. X, Y 또는 Z는, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 개 또는 그 이상의 뉴클레오티드 중 어느 하나일 수 있다. 따라서, 갭머로서는, 이들로 한정되지 않지만, 예를 들면, 2-10-3, 2-14-2, 2-15-2, 2-16-2, 3-6-7, 3-7-5, 3-8-3, 3-8-4, 3-8-5, 3-9-2, 3-9-3, 3-9-4, 3-9-5, 3-9-8, 3-10-2, 3-10-3, 3-10-4, 3-11-3, 3-12-3, 3-14-3, 4-7-4, 4-7-5, 4-8-3, 4-8-4, 4-9-3, 4-10-3, 5-6-4, 5-6-5, 5-7-3, 5-7-4, 5-8-3, 5-8-4, 또는 7-6-3을 예로 들 수 있다.
일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는 3-10-3 갭머 모티프를 가진다. 일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는 3-9-3 갭머 모티프를 가진다. 일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는 3-9-4 갭머 모티프를 가진다. 일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드는 3-8-5 갭머 모티프를 가진다.
일실시태양에서는, 이들 갭머의 수식 올리고뉴클레오티드는, 본 명세서에 기재된 예시적 수식 올리고뉴클레오티드의 어느 하나의 핵산염기서열 중 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18, 적어도 19, 적어도 20, 적어도 21, 적어도 22, 적어도 23, 적어도 24, 적어도 25, 적어도 26, 적어도 27, 적어도 28, 적어도 29 또는, 적어도 30 개의 연속적인 핵산염기(예를 들면, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 7∼64, 69∼97 또는 102∼112 중 어느 하나에 기재되는 핵산염기서열 중 적어도 8개의 연속적인 핵산염기)를 포함한다.
일실시태양에서는, 본 발명은 올리고뉴클레오티드를 포함하는 올리고머 화합물을 제공한다. 일실시태양에서는, 그러한 올리고뉴클레오티드는, 1개 또는 복수의 화학수식을 포함한다. 일실시태양에서는, 화학수식 올리고뉴클레오티드는 1개 또는 복수의 수식 당을 포함한다. 일실시태양에서는, 화학수식 올리고뉴클레오티드는 1개 또는 복수의 수식 핵산염기를 포함한다. 일실시태양에서는, 화학수식 올리고뉴클레오티드는 1개 또는 복수의 수식 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 일실시태양에서는, 화학수식(당수식, 핵산염기수식 및/또는 결합 수식)은, 패턴 또는 모티프를 결정한다. 일실시태양에서는, 당 부분, 뉴클레오시드간 결합 및 핵산염기의 화학수식의 패턴은, 각각 서로 무관계이다. 따라서, 올리고뉴클레오티드는, 그 당수식 모티프, 뉴클레오시드간 결합 모티프 및/또는 핵산염기 수식 모티프에 의해 설명 될 수 있다(본 명세서에서 사용하는 경우, 핵산염기 수식 모티프는, 핵산염기의 서열과 무관계이며, 핵산염기에 대한 화학수식을 설명함).
일종의 당 모티프
일실시태양에서는, 올리고뉴클레오티드는, 정해진 패턴 또는 당수식 모티프에 있어서 올리고뉴클레오티드 또는 그 영역을 따라 배치된, 1 또는 복수의 타입의 수식 당 부분 및/또는 천연에 존재하는 당 부분을 포함한다. 그러한 모티프는, 본 명세서에서 논하는 당 수식 및/또는 다른 기지의 당 수식 중 어느 하나를 포함할 수 있다.
일실시태양에서는, 올리고뉴클레오티드는, 갭머 당 수식 모티프를 가지는 영역을 포함하거나, 그 영역으로 이루어지고, 이는, 2개의 외부영역, 즉 「윙 세그먼트」, 및 1개의 내부영역, 즉 「갭 세그먼트」를 포함한다. 갭머 모티프의 3영역(5'윙 세그먼트, 갭 세그먼트 및 3'윙 세그먼트)은, 뉴클레오시드가 연속적인 서열을 형성하고, 여기서는, 각윙 세그먼트의 뉴클레오시드의 당 부분 중 적어도 몇 개는, 갭 세그먼트의 뉴클레오시드의 당 부분 중 적어도 몇 개와 상이하다. 특히, 적어도, 갭 세그먼트에 가장 가까운 각 윙 세그먼트의 뉴클레오시드(5'윙 세그먼트의 가장 3'측의 뉴클레오시드 및 3'윙 세그먼트의 가장 5'측의 뉴클레오시드)의 당 부분은, 인접한 갭 세그먼트의 뉴클레오시드의 당 부분과는 상이하며, 따라서 윙 세그먼트와 갭 세그먼트 사이의 경계부위를 정한다. 일실시태양에서는, 갭 세그먼트내의 당 부분은 서로 동일하다. 일실시태양에서는, 갭 세그먼트는, 갭 세그먼트의 1개 또는 복수의 다른 뉴클레오시드의 당 부분과 상이한 당 부분을 가지는 1개 또는 복수의 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 2개의 윙 세그먼트의 당수식 모티프는 서로 동일하다(대칭적 갭머). 일실시태양에서는, 5'윙 세그먼트의 당수식 모티프는, 3'윙 세그먼트의 당수식 모티프와 상이하다(비대칭적 갭머).
일종의 5'윙 세그먼트
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 1개∼5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개∼5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개∼5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 4개 또는 5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 1개∼4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 1개∼3개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 1개 또는 2개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개∼4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개 또는 3개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개 또는 4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 1개의 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 2개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 3개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 4개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2환식 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 구속 에틸 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드이다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2'-치환 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개, 예를 들면, 3개, 4개, 또는 5개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 비2환식 수식 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-치환 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-MOE 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-OMe 뉴클레오시드이다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-치환 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-디옥시뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-치환 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-디옥시 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 1개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 2개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 3개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 4개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 5개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 LNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 4개의LNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 GuNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 GuNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드와 1개의 GuNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 3개의 구속 에틸 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 2환식 뉴클레오시드 및 2개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 2환식 뉴클레오시드 및 2개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 2개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 1개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 2개의 연결한 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 3개의 연결한 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 4개의 연결한 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 5개의 연결한 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 일루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드로이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 2개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 3개의 LNA 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 2개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3개의 5-메틸시토신을 포함한다.
일종의 3'윙 세그먼트
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 1개∼8개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개∼5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개∼5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 4개 또는 5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 1개∼4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 1개∼3개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 1개 또는 2개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개∼4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개 또는 3개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개 또는 4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 1개의 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 4개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 5개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 6개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 7개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 8개의 연결한 뉴클레오시드로 이루어진다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 2개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 3개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 4개의 2환식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2환식 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 구속 에틸 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드이다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2'-치환 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 비2환식 수식 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-치환 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-MOE 뉴클레오시드이다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-OMe 뉴클레오시드이다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-치환 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 2환식 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-디옥시 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-치환 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 적어도 1개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 적어도 1개의 2'-디옥시 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 1개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 2개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 3개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 4개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 5개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 6개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 7개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2'-MOE 뉴클레오시드, 2'-OMe 뉴클레오시드, LNA 함유 뉴클레오시드, GuNA 함유 뉴클레오시드, ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드 및/또는 ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오시드로부터 선택되는 적어도 8개의 수식 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 LNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 4개의LNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 GuNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 GuNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[mU] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[ipU] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙은, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드와 1개의 GuNA 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Trz] 함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-OMe함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 4개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 5개의 2'-MOE를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 1개의 2'-MOE함유 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 3개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 5개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 1개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드와 3개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드와 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 3개의 구속 에틸 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 2환식 뉴클레오시드 및 2개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 2환식 뉴클레오시드 및 2개의 비2환식 수식 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 2개의 구속 에틸 뉴클레오시드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 1개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 2개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 4개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 5개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 3, 4 또는 5 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 3개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 5개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한, 2개의 LNA 함유 뉴클레오시드 및 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 2개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 3'윙 세그먼트는 연결한 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 1개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는 1개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 2개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는 연결한 2개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양이며 세그먼트는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는 연결한 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 4개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는 연결한 4개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는 연결한 5개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는 연결한 5개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어진다.
일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 연결한 2개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 3개의 2'-OMe 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개 또는 2개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1개 또는 2개의 2'MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1, 2 또는 3 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3'윙 세그먼트는, 연결한, 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms]로 이루어진다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함하고, 또한 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 2개의 5-메틸시토신을 포함하고, 또한 갭머의 3'윙은, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 2개의 5-메틸시토신을 포함하고, 또한 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 2개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3개의 5-메틸시토신을 포함하고, 또한 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 3개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함하고, 또한 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다. 일실시태양에서는, 갭머의 5'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 갭머의 3'윙 세그먼트는, 연결한 1, 2 또는 3 개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드 및 1, 2 또는 3 개의 2'-MOE 뉴클레오시드로 이루어지고, 또한 1개의 5-메틸시토신을 포함한다.
일실시태양에서는, 갭머의 갭 세그먼트는 10개의 연속된 뉴클레오시드를 포함하고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 번째 중 어느 하나의 뉴클레오시드에 있어서 2'-OMe 뉴클레오시드를 포함하고, 나머지의 뉴클레오시드는 디옥시 뉴클레오시드이다.
의약조성물을 제제화하기 위한 조성물 및 방법
의약조성물 또는 제제의 조제를 위하여, 수식 올리고뉴클레오티드를 1개 이상의 의약적으로 허용 가능한 활성 또는 불활성한 물질과 혼합할 수 있다. 의약조성물의 제제화를 위한 조성물 및 방법은, 이들로 한정되지 않지만, 투여 경로, 질환의 정도 또는 투여되는 용량을 포함한 몇 개의 판단 기준에 의해 결정된다.
적절한 의약적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체와 수식 올리고뉴클레오티드를 조합함으로써, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드를 의약조성물 중에서 이용할 수 있다. 의약적으로 허용 가능한 희석제로서는, 인산완충 식염수(PBS)를 예로 들 수 있다. PBS는, 비경구적으로 송달되는 조성물 중에서 사용하기에 적합한 희석제이다. 따라서, 일실시예에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드 및 의약적으로 허용 가능한 희석제를 포함하는 의약조성물이, 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 일실시태양에서는, 의약적으로 허용 가능한 희석제는 PBS이다.
수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약조성물은, 인간을 포함한 동물에 투여할 때, 생물학적으로 활성인 대사물 또는 그 잔존물을 (직접적 또는 간접적으로) 제공할 수 있는, 임의의 의약적으로 허용 가능한 염, 에스테르 혹은 이러한 에스테르의 염 또는 임의의 다른 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 따라서, 예를 들면, 본 개시는, 수식 올리고뉴클레오티드의 의약적으로 허용 가능한 염, 프로드러그, 이러한 프로드러그의 의약적으로 허용 가능한 염 및 다른 생물학적 동등물에도 관한 것이다. 적절한 의약적으로 허용 가능한 염으로서는, 이들로 한정되지 않지만, 나트륨염 및 칼륨염을 예로 들 수 있다.
프로드러그는, 활성인 수식 올리고뉴클레오티드를 형성하기 위하여, 체내에서 내재성 뉴클레아제에 의해 절단되는 수식 올리고뉴클레오티드의 일단 또는 양단에 부가적인 뉴클레오시드를 포함하는 것을 포함할 수 있다.
공역 수식 올리고뉴클레오티드
수식 올리고뉴클레오티드를, 얻어진 수식 올리고뉴클레오티드의 활성, 세포분포 또는 세포 받아들임을 증강하는 1개 또는 복수의 부분 또는 공역물에 공유결합할 수 있다. 전형적인 공역기로서는, 콜레스테롤 부분 및 지질부분을 예로 들 수 있다. 또한 공역기로서는, 탄수화물, 인 지질, 비오틴, 페나진, 엽산, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린 및 색소를 예로 들 수 있다.
예를 들면, 뉴클레아제 안정성 등의 특성을 증강하기 위하여, 수식 올리고뉴클레오티드의 일 말단 또는 양 말단에 일반적으로 결합되어 있는 1개 또는 복수의 안정화 기를 가지도록, 수식 올리고뉴클레오티드를 수식할 수도 있다. 캡 구조는 안정화 기에 포함된다. 이 말단수식은, 말단핵산을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드를 엑소뉴클레아제에 의한 분해로부터 보호하고, 세포 내의 송달 및/또는 국재화(局在化)에 유용할 수 있다. 캡은, 5'말단(5'캡) 또는 3'말단(3'캡)에 존재해도 되고, 양 말단에 존재해도 된다. 캡 구조는 당기술분야에서 주지이며, 예를 들면, 역위 디옥시 탈염기 캡을 들 수 있다. 뉴클레아제 안정성을 부여하기 위해 수식 올리고뉴클레오티드의 일단 또는 양단을 캡하는 데 사용할 수 있는 3' 및 5'안정화 기로서는, WO03/004602에 개시된 것을 예로 들 수 있다.
세포배양 및 수식 올리고뉴클레오티드 처리
DUX4핵산의 레벨, 활성 또는 발현에 대한 수식 올리고뉴클레오티드의 효과는, 다양한 세포형에 있어서 인비트로에서 시험할 수 있다. 이러한 해석에 사용하는 세포형은, 상업적 공급업자(예를 들면, 미국배양세포계통보존기관, Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD)로부터 입수가능하며, 세포는, 시판하고 있는 시약(예를 들면, InvitrogenLife Technologies, Carlsbad, CA)을 사용하여, 공급업자의 설명서를 따라 배양된다. 예시적인 세포형으로서는, 이들로 한정되지 않지만, C2C12세포, HepG2세포, Hep3B세포, 초대 간세포, A549세포, GM04281섬유아세포 및 LLC-MK2세포를 예로 들 수 있다. 이들 세포는, 인간 DUX4 mRNA를 발현하는 벡터를 트랜스펙션하여 사용할 수 있다. 벡터로서는, 루시페라제나 GFP 등의 리포터 유전자와 융합 단백질로서 발현하는 것이 바람직하며, 예를 들면, psiCHECK-2 vector(Promega)를 들 수 있다.
수식 올리고뉴클레오티드의 인비트로 시험
수식 올리고뉴클레오티드로 세포를 처리하는 방법이 본 명세서에 기재되어 있고, 이는, 수식 올리고뉴클레오티드의 종류에 따라 적절하게 개변할 수 있다.
일반적으로, 배양 중에 세포가 약 60∼80 % 콘플루언스에 도달 시에, 세포를 수식 올리고뉴클레오티드로 처리한다.
수식 올리고뉴클레오티드는, 예를 들면, 리포펙션법으로 세포에 도입된다. 수식 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하는 데 일반적으로 사용되는 일시약으로서는, 양이온성 지질 트랜스펙션 시약의 LIPOFECTIN(등록상표)(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 예로 들 수 있다. 수식 올리고뉴클레오티드를, OPTI-MEM(등록상표) 1(Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 LIPOFECTIN(등록상표)과 혼합하여, 수식 올리고뉴클레오티드의 원하는 최종농도 및 전형적으로는 100nM 수식 올리고뉴클레오티드당 2∼12 μg/mL에 달하는 LIPOFECTIN(등록상표) 농도를 얻는다.
수식 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하는 데 사용되는 다른 시약으로서는, LIPOFECTAMINE2000(등록상표)(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 예로 들 수 있다. 수식 올리고뉴클레오티드를, OPTI-MEM(등록상표) 1혈청저감 배지(Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 LIPOFECTAMINE2000(등록상표)과 혼합하여, 수식 올리고뉴클레오티드의 원하는 농도 및 전형적으로는 100nM 수식 올리고뉴클레오티드당 2∼12 μg/mL에 달하는 LIPOFECTAMINE(등록상표) 농도를 얻는다.
수식 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하는 데 사용되는 다른 시약으로서는, Cytofectin(등록상표)(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 예로 들 수 있다. 수식 올리고뉴클레오티드를, OPTI-MEM(등록상표) 1혈청저감 배지(Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 Cytofectin(등록상표)과 혼합하여, 수식 올리고뉴클레오티드의 원하는 농도 및 전형적으로는 100nM수식 올리고뉴클레오티드당 2∼12 μg/mL에 달하는 Cytofectin(등록상표) 농도를 얻는다.
수식 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하는 데 사용되는 다른 기법으로서는, 일렉트로포레이션을 예로 들 수 있다.
수식 올리고뉴클레오티드는 LIPOFECTIN 등을 사용하지 않아도, 세포에 도입된다. 이 경우의 수식 올리고뉴클레오티드의 표적유전자의 발현 억제 방법을 Gymnosis법이라고 한다.
관례적 방법에 의해 세포를 수식 올리고뉴클레오티드로 처리한다. 전형적으로는, 수식 올리고뉴클레오티드 처리하고 나서 16∼48 시간 후에 세포를 수집하고, 그 시점에서, 당기술분야에서 기지의 및 본 명세서에 기재된 방법에 의해, 표적 핵산의 RNA 또는 단백질 레벨을 측정한다. 일반적으로, 복수의 반복으로 처리를 실시하는 경우, 반복 처리의 평균으로서 데이터를 나타낸다.
사용하는 수식 올리고뉴클레오티드의 농도는, 세포계통에 따라 상이하다. 특정 세포계통에 대한 최적 수식 올리고뉴클레오티드 농도를 결정하는 방법은 당기술분야에서 주지이다. LIPOFECTAMINE2000(등록상표), LIPOFECTIN 또는 Cytofectin을 사용하여 트랜스펙트하는 경우에, 전형적으로는 1nM∼300nM에 달하는 농도로 수식 올리고뉴클레오티드를 사용한다. 일렉트로포레이션을 사용하여 트랜스펙트하는 경우에는, 625∼20,000 nM에 달하는 보다 고농도로 수식 올리고뉴클레오티드를 사용한다. 각 농도에서의 유전자발현의 저해율로부터, 50%의 유전자발현을 억제하는 수식 올리고뉴클레오티드의 농도 IC50을 산출할 수 있다.
RNA단리
RNA해석은, 전세포RNA 또는 폴리(A)+mRNA에 대하여 실시할 수 있다. RNA단리의 방법은 당기술분야에서 주지이다. RNA는, 당기술분야에서 주지의 방법을 사용하여, 예를 들면, 제조업자의 권장 프로토콜에 따라 TRIZOL(등록상표)시약(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 사용하여 조제한다.
표적의 레벨 또는 발현의 저해에 관한 해석
DUX4핵산의 레벨 또는 발현의 저해는, 당기술분야에서 기지인 다양한 방법으로 어세이할 수 있다. 예를 들면, 표적 핵산 레벨은, 예를 들면, 노던블로팅해석, 경합적 폴리머라아제 연쇄반응(PCR) 또는 정량적(定量的) 실시간PCR에 의해 정량화할 수 있다. RNA해석은, 전세포RNA 또는 폴리(A)+mRNA에 대하여 실시할 수 있다. RNA단리의 방법은 당기술분야에서 주지이다. 노던블로팅해석도 당기술분야에서 관례적이다. 정량적 실시간PCR은, PE-Applied Biosystems, Foster City, CA로부터 입수 가능하며, 제조자의 설명서에 따라 사용되고, 시판하고 있는 ABI PRISM(등록상표) 7600, 7700 또는 7900 서열검출시스템을 사용하여, 편리하게 달성할 수 있다.
표적 RNA레벨의 정량적 실시간PCR해석
표적 RNA레벨의 정량화는, 제조자의 설명서에 따라 ABI PRISM(등록상표) 7600, 7700 또는 7900 서열검출시스템(PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용하여, 정량적 실시간PCR에 의해 달성할 수 있다. 정량적 실시간PCR의 방법은 당기술분야에서 주지이다.
실시간PCR 전에, 단리한 RNA를 역전사효소(RT)반응에 투입하고, 이로써, 이어서 실시간PCR증폭의 기질로서 사용되는 상보DNA(cDNA)이 생성된다. RT 및 실시간PCR의 반응을 동일한 시료 웰 중에서 축차 실시한다. RT 및 실시간PCR의 시약은, Invitrogen(Carlsbad, CA)로부터 얻어진다. RT, 실시간PCR반응은, 당업자에게 주지의 방법에 의해 행한다.
실시간PCR에 의해 얻어지는 유전자(또는 RNA)표적의 양은, 시클로피린A 등의 발현이 일정한 유전자의 발현 레벨을 사용하여, 또는 RIBOGREEN(등록상표)(Invitrogen, Inc.Carlsbad, CA)을 사용하여 전RNA를 정량화함으로써, 표준화한다. 시클로피린A의 발현은, 실시간PCR에 의해, 표적과 동시에, 다중적으로 또는 따로따로 실시함으로써, 정량화한다. 전RNA는, RIBOGREEN(등록상표)RNA정량화 시약(Invitrogen, Inc.Eugene, OR)을 사용하여 정량화한다. RIBOGREEN(등록상표)에 의한 RNA의 정량화 방법은, Jones, L.J., etal, (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)에 있어서 교시된다. CYTOFLUOR(등록상표) 4000기기(PEApplied Biosystems)를 사용하여, RIBOGREEN(등록상표)형광을 측정한다.
프로브 및 프라이머를 DUX4핵산에 하이브리다이즈하도록 설계한다. 실시간PCR의 프로브 및 프라이머의 설계 방법은 당기술분야에서 주지이며, PRIMER EXPRESS(등록상표) 소프트웨어(Applied Biosystems, FosterCity, CA) 등의 소프트웨어의 사용을 포함할 수 있다.
단백질 레벨의 해석
DUX4 단백질의 레벨을 측정함으로써, DUX4핵산의 안티센스 저해를 평가할 수 있다. DUX4 단백질의 레벨은, 당기술분야에서 주지의 다양한 방법, 예를 들면, 면역침강법, 웨스턴블로팅해석(면역블토팅법), 효소결합면역흡착측정법(ELISA), 정량적단백질 어세이, 단백질활성 어세이(예를 들면, 카스파제활성어세이), 면역조직화학법, 면역세포화학법 또는 형광활성화 셀 소팅(FACS)으로 조사하거나 또는 정량화할 수 있다. 표적에 대한 항체는, 다양한 공급원, 예를 들면, 항체의 MSRS카탈로그(AerieCorporation, Birmingham, MI)로부터 특정하고 또한 얻을 수 있으며, 또는 당기술분야에서 주지의 종래의 모노클로널 또는 폴리클로널 항체 생산방법에 의해 조제할 수 있다.
유전자발현의 해석
DUX4 유전자발현의 레벨을 루시페라제 등의 리포터 유전자를 사용하여 측정할 수도 있다. 예를 들면, psiCHECK-2 vector(Promega)를 사용하면, DUX4 유전자의 발현이, DUX4과의 융합 단백인 Renilla 루시페라제의 발광량으로 측정할 수 있고, 동일 벡터 상에 존재하는 Firefly luciferase의 발광량으로 보정함으로써, 비특이적인 세포사 등의 영향을 제외할 수 있다.
수식 올리고뉴클레오티드의 인비보 시험
수식 올리고뉴클레오티드는, DUX4의 발현을 저해하고 또한 표현형을 변화시키는 그 능력을 평가하기 위해, 동물로 시험한다. 시험은, 정상 동물에서, 또는 실험용 질환 모델, 예를 들면, DUX4의 트랜스제닉마우스모델(Jones, T.et al. PLoS One. 2018; 13(2), Article number e0192657)이나 유전자변형 AAV바이러스를 사용한 DUX4 유전자발현 마우스(Wallace, LM et al. Mol Ther. 2012; 20(7): 1417, Wallace, LM et al. Ann Neurol. 2011; 69(3): 540)로 실시할 수 있다.
동물에 투여하기 위하여, 수식 올리고뉴클레오티드를, 의약적으로 허용 가능한 희석제, 예를 들면, 인산완충 식염수 중에 제제화한다. 투여는 비경구투여경로를 포함한다. 수식 올리고뉴클레오티드에 의한 처치 기간에 이어, RNA를 조직으로부터 단리하고, DUX4핵산발현의 변화를 측정한다. DUX4 단백질의 레벨의 변화도 측정한다.
일종의 안티센스 메카니즘
FSHD는, 근육에서의 DUX4 유전자(특히 DUX4-FL의 스플라이싱 배리언트)의 이상발현에 의해 야기된다. 한편, DUX4은 건상자에 있어서도 예를 들면, 정소 등에서 발현되고 있다. 정소 등에서 발현되고 있는 어떤 DUX4의 스플라이싱 배리언트에는 DUX4-FL에 더하여, 엑손 1, 엑손 2, 엑손 6, 엑손 7의 스플라이싱 배리언트, 엑손 1, 엑손 2, 엑손 4, 엑손 5, 엑손 6, 엑손 7의 스플라이싱 배리언트가 발현된다(상기 비특허문헌 1).
일종의 바이오 마커
적어도 부분적으로는, DUX4 단백질의 축적 레벨에 의해, 예를 들면, MBD3L2, ZSCAN4, TRIM43, DEFB103, ZNF217 등의 유전자발현이 조절된다(상기 비특허문헌 2). 또한, 근장애의 마커로서는 혈중 크레아틴키나아제를 측정할 수 있다.
일종의 적응증
일실시태양에서는, 개체를 처치하는 방법으로서, 본 명세서에 기재된 1개 또는 복수의 의약조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 일실시태양에서는, 개체는 FSHD를 가진다.
따라서, 그것을 필요로 하는 대상에 있어서, FSHD와 관계가 있는 증상을 개선시키는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 일실시태양에서는, FSHD와 관계가 있는 1개 이상의 증상의 발증율을 저감시키는 방법이 제공된다. 일실시태양에서는, FSHD와 관계가 있는 증상의 중증도를 저감시키는 방법이 제공된다. 일실시태양에서는, FSHD와 관계가 있는 증상으로서는, 근경직, 근강직증, 안면근쇠약, 안검하수, 휘파람불가능, 얼굴의 표정변화의 감소, 우울 또는 분노의 얼굴표정, 말할 때 발음 곤란, 견갑근쇠약(익상견갑, 처진 어깨 등의 변형), 하지쇠약, 청력손실, 및 심장병을 예로 들 수 있다.
일실시태양에서는, 본 발명의 방법은, 치료 유효량의, DUX4핵산을 표적으로 하는 화합물을, 그것을 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함한다.
일실시태양에서는, DUX4핵산을 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드의 투여는, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약40%, 적어도 약45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 혹은 적어도 약 99% 또는 이들 값의 임의의 2개에 의해 정해진 범위의 DUX4의 발현의 저감을 초래한다.
일실시태양에서는, DUX4를 표적으로 하는 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약조성물은, FSHD 등의 DUX4 관련 질환을 앓고 있는 또는 거기에 걸리기 쉬운 환자를 처치하기 위한 의약을 조제하는 데 사용된다.
일실시태양에서는, 본 명세서에 기재된 방법은, 서열목록의 서열번호 2, 3, 4, 7∼64, 69∼97 또는 102∼112에 기재되는 서열의, 본 명세서에 기재되는 연속적인 핵산염기부분을 가지는 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
투여
일실시태양에서는, 본 명세서에 기재된 화합물 및 의약조성물은 비경구적으로 투여된다.
일실시태양에서는, 비경구투여는 주입에 의하여 행한다. 주입은, 장기적 또는 지속적이라도 되고, 단기적 또는 단속적이라도 된다. 일실시태양에서는, 주입된 의약제는 펌프로 송달된다. 일실시태양에서는, 비경구투여는 주사(예를 들면, 볼러스 주사)에 의해 행한다. 주사제는 주사기로 송달될 수 있다.
비경구투여로서는, 예를 들면, 피하투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여 또는 두개내 투여, 예를 들면, 수강내 또는 뇌실내 투여를 들 수 있다. 투여는, 지속적 또는 장기적이라도 되고, 단기적 또는 단속적이라도 된다.
일실시태양에서는, 본 명세서에 기재되는 의약조성물의 화합물의 송달은, 표적mRNA 및/또는 표적 단백질의 레벨 중 적어도 70%의 다운 레귤레이션을 초래한다. 일실시태양에서는, 본 명세서에 기재되는 화합물 또는 조성물의 송달은, 적어도 1일, 적어도 3일, 적어도 5일, 적어도7일, 적어도 10일, 적어도 14일, 적어도 20일, 적어도 21일, 적어도 28일, 적어도 30일, 적어도 35일, 적어도 40일, 적어도 45일, 적어도50일, 적어도 55일, 적어도 60일, 적어도 65일, 적어도 70일, 적어도75일, 적어도 76일, 적어도 77일, 적어도 78일, 적어도 79일, 적어도 80일, 적어도 85일, 적어도 90일, 적어도 95일, 적어도 100일, 적어도 105일, 적어도 110일, 적어도 115일, 적어도 120일, 적어도 1년에 걸쳐, 표적mRNA 및/또는 표적 단백질의 레벨의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 다운 레귤레이션을 초래한다.
일실시태양에서는, 수식 올리고뉴클레오티드는, 매일 1회, 3일에 1회, 매주 1회, 격주 1회, 3주일에 1회, 매월 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 6개월에 1회, 1년에 2회 또는 1년에 1회, 주사 또는 주입에 의해 송달된다.
어느 종류의 병용 요법
일실시태양에서는, 본 발명의 수식 올리고뉴클레오티드를 포함하는 제1 약제는, 1종 또는 복수의 제2 약제와 공투여된다. 일실시태양에서는, 이러한 제2 약제는, 본 명세서에 기재된 제1 약제와 동일한 FSHD를 처치하도록 설계된다. 일실시태양에서는, 이러한 제2 약제는, 본 명세서에 기재된 제1 약제와 상이한 질환, 장애 또는 상태를 처치하도록 설계된다. 일실시태양에서는, 이러한 제2 약제는, 본 명세서에 기재된 1개 또는 복수의 의약조성물이 바람직하지 않은 부작용을 처치하도록 설계된다. 일실시태양에서는, 제2 약제는, 제1 약제의 바람직하지 않은 작용을 처치하기 위하여, 제1 약제와 공투여된다. 일실시태양에서는, 제2 약제는, 병용 효과를 초래하기 위하여, 제1 약제와 공투여된다. 일실시태양에서는, 제2 약제는, 상승 효과를 초래하기 위하여, 제1 약제와 공투여된다.
일실시태양에서는, 제1 약제 및 1종 또는 복수의 제2 약제는, 동시에 투여된다. 일실시태양에서는, 제1 약제 및 1종 또는 복수의 제2 약제는, 상이한 시간에 투여된다. 일실시태양에서는, 제1 약제 및 1종 또는 복수의 제2 약제는, 단일 의약제제 중에 함께 조제된다. 일실시태양에서는, 제1 약제 및 1종 또는 복수의 제2 약제는, 따로따로 조제된다.
일종의 화합물
일실시태양에서는, 본 명세서에 개시된 화합물은, 시판되고 있는 DNA·RNA 합성용 아미다이트(LNA도 포함함)를 사용하여 포스포로아미다이트법에 의해 올리고머를 합성할 수 있다. 인공핵산 GuNA는 WO2014/046212호, WO2017/047816호에 기재된 방법에 의해 올리고머를 합성할 수 있다. 인공핵산 ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Trz] 및 ALNA[Oxz]는, 일본특허출원 2018-212424호에 기재된 방법에 의해 올리고머를 합성할 수 있다.
일실시태양에서는, 본 명세서에 개시된 화합물은, 적절한 비교화합물이라고 비교하여 향상시킨 1개 또는 복수의 인비트로 및/또는 인비보 특성의 이익을 누린다.
일실시태양에서는, (5'∼3')ngagattcccgccggt(n은 5-메틸시토신이며, 서열번호 2로서 본 명세서에 포함됨)의 서열을 가지는 화합물번호 1의 화합물, 즉 5'윙, 3'윙이 각 3개의 LNA 함유 뉴클레오시드로 이루어지는 갭머이며, 각 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 화합물이다.
일실시태양에서는, (5'∼3')gnagttctccgcggt(n은 5-메틸시토신이며, 서열목록의 서열번호 3으로서 본 명세서에 포함됨)의 서열을 가지는 화합물번호 2의 화합물, 즉 5'윙, 3'윙이 각 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지는 갭머이며, 각 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 화합물이다.
일실시태양에서는, (5'∼3')gnntagacagcgtngg(n은 5-메틸시토신이며, 서열목록의 서열번호 4로서 본 명세서에 포함됨)의 서열을 가지는 화합물번호 3의 화합물, 즉 5'윙, 3'윙이 각 3개의 LNA 함유 뉴클레오시드로 이루어지는 갭머이며, 각 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 화합물이다.
일실시태양에서는, (5'∼3')gnntagacagcgtngg(n은 5-메틸시토신이며, 서열목록의 서열번호 4로서 본 명세서에 포함됨)의 서열을 가지는 화합물번호 123의 화합물, 즉 5'윙, 3'윙이 각 3개의 ALNA[Ms] 함유 뉴클레오시드로 이루어지는 갭머이며, 각 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 화합물이다.
비한정적 개시 및 참조에 의한 원용
본 명세서에 기재된 어느 종류의 화합물, 조성물 및 방법은, 일실시태양에 따라 특이적으로 기재되어 있지만, 이하의 실시예는, 본 명세서에 기재된 화합물을 예시하는 역할을 하는 것에 지나지 않으며, 이것을 한정하는 것을 의도하지 않는다. 본 출원에 기재된 참고문헌, GENBANK수탁번호 등의 각각은, 참조에 의해 그 전체가 본 명세서에 원용된다.
본 출원에 첨부한 서열목록는, 필요에 따라 「RNA」 또는 「DNA」 중 어느 하나로서 각 서열을 특정하지만, 실제로는, 이들 서열은 화학적 수식의 임의의 조합에 의해 수식될 수 있다. 수식 올리고뉴클레오티드를 설명하기 위한 「RNA」 또는 「DNA」와 같은 지정은, 경우에 따라서는 자의적인 점을, 당업자라면 용이하게 이해할 것이다. 예를 들면, 2'-OH 당 부분 및 티민염기를 함유하는 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드는, 수식 당(DNA의 천연 2'-H에 대하여 2'-OH)을 가지는 DNA로서, 또는 수식 염기(RNA의 천연 우라실에 대하여 티민(메틸화 우라실))를 가지는 RNA로서 설명될 수 있다.
따라서, 이들로 한정되지 않지만, 서열목록에 있는 것을 포함한, 본 명세서에서 제공되는 핵산서열은, 이들로 한정되지 않지만, 수식 핵산염기를 가지는 그러한 핵산을 포함한, 천연 혹은 수식 RNA 및/또는 DNA의 임의의 조합을 포함하는 핵산을 포함하는 것이 의도된다. 한정되는 것은 아니지만, 또 다른 예로서, 핵산염기서열 「ATCGATCG」를 가지는 올리고머 화합물은, 수식되어 있어도, 수식되어 있지 않아도, 그러한 핵산염기서열을 가지는 임의의 올리고머 화합물을 포함하고, 여기에는, 이들로 한정되지 않지만, RNA염기를 포함하는 그러한 화합물, 예를 들면, 서열 「AUCGAUCG」을 가지는 것, 및 「AUCGATCG」 등의 몇 개의 DNA염기 및 몇 개의 RNA염기를 가지는 것, 및 「ATmeCGAUCG」(여기서는, meC는 5번 위치에 메틸기를 포함하는 시토신 염기를 나타냄) 등의 다른 수식된 또는 천연에 존재하는 염기를 가지는 올리고머 화합물이 포함된다.
[실시예]
비한정 개시 및 참조에 의한 원용
본 명세서에 기재된 어느 종류의 화합물, 조성물 및 방법은, 일실시태양에 따라 특이적으로 기재되어 있지만, 이하의 실시예는, 본 명세서에 기재된 화합물을 예시하는 역할을 하는 것에 지나지 않으며, 이것을 한정하는 것을 의도하지 않는다. 본 출원에 기재된 참고문헌 각각은, 참조에 의해 그 전체가 본 명세서에 원용된다.
본 명세서 중에서 사용하는 각 인공핵산의 구조를, 하기 구조식에 각각의 약칭과 함께 나타내었다.
각 인공핵산의 구조와 약칭
실시예 1
In vitro 평가용 수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 합성 및 정제
각종 아미다이트(LNA아미다이트는 Chem Genes 및 Hongene Biotechnology Limited로부터 구입, 2'-OMe아미다이트는 Sigma-Aldrich로부터 구입, GuNA는 WO2014/046212호, WO2017/047816호에 기재된 방법에 의해 합성, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Trz] 및 ALNA[Oxz]는, 일본특허출원 2018-212424호에 기재된 방법에 의해 합성)를 사용하고, 수식 올리고뉴클레오티드 화합물을, DNA/RNA 올리고뉴클레오티드자동합성기 nS-8II(가부시키가이샤 진디자인 제조)에 의해 0.2 또는 1.0 ㎛ol 스케일로 CPG 또는 폴리스티렌 담체를 사용하여 합성했다. 아미다이트는 모두 0.1M의 아세토니트릴 용액으로 조정하고, 비천연형 뉴클레오시드에서의 커플링 시간은 10분간으로 행하고, 그 이외의 공정은 nS-8II의 표준조건에서 행하였다. 활성화제는 Activator42(Sigma-Aldrich), 티오화에는 Sulfurizing ReagentII(Gren Research Corporation)을 사용했다. 합성한 올리고뉴클레오티드는 28% 암모니아 수용액을 가하고 60-65 ℃에서 8시간 반응시킴으로써 담체로부터의 절단과 염기부의 탈보호를 행하였다. 암모니아를 농축 증류제거한 후, 역상HPLC정제를 행하였다.
실시예 2
In vivo 평가용 수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 합성 및 정제
각종 아미다이트를 사용하고, 수식 올리고뉴클레오티드 화합물을, DNA/RNA 올리고뉴클레오티드자동합성기 AKTA oligopilot plus 10(GE헬스케어 재팬 가부시키가이샤 제조)에 의해 20∼50 ㎛ol 스케일로 폴리스티렌 담체를 사용하여 합성했다. DNA아미다이트는 0.1M, 비천연형 아미다이트는 0.05∼0.1 M의 아세토니트릴 용액으로 조정하고, 비천연형 뉴클레오시드에서의 커플링 재활용 시간은 20분간으로 행하고, 유니버설 담체로의 1염기째의 도입 시에는, 커플링, 티오화, 캡핑 공정을 각각 2회 연속으로 실시했다. 그 이외의 공정은 AKTA oligopilot plus10의 표준조건에서 행하였다. 활성화제는 Activator42(Sigma-Aldrich), 티오화에는 Sulfurizing ReagentII(Gren Research Corporation)을 사용했다. 합성한 올리고뉴클레오티드는, 20% 디에틸아민/아세토니트릴 혹은 50% 트리에틸아민/아세토니트릴을 사용하여 고상(固相) 상에서 탈시아노에틸 처리를 행하고, 28% 암모니아 수용액을 가하고 60-65 ℃에서 8∼24 시간 반응시킴으로써 담체로부터의 절단 및 염기부의 탈보호를 행하였다. 암모니아를 농축 증류제거한 후, 음이온교환 컬럼으로 정제를 행하였다. 음이온 교환 후에 포함되는 잉여염을 탈염 컬럼에 의해 제거했다.
실시예 3
수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 순도 확인
합성한 수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 정제 및 순도 확인은, 역상HPLC에 의해 하기 조건으로 행하였다. 어느 화합물도 순도 85% 이상이었다.
역상HPLC(정제)
이동상:
A액: 400mM 헥사플루오로이소프로판올, 15mM 트리에틸아민
B액: 메탄올
그레디언트: A:B = 85:15→0:30(10min)
사용 컬럼:
분취 Waters XBridge@ Oligonucleotide BEH C18 OBDTM Prep Column, 130Å, 2.5㎛, 10mm*50mm
유속(流速):
분취 5mL/min
컬럼 온도: 60℃
검출: UV(260nm)
역상HPLC(순도 확인)
이동상:
A액: 400mM 헥사플루오로이소프로판올, 15mM 트리에틸아민 수용액
B액: 메탄올
그레디언트: A:B = 80:20→0:30(6.5min)
사용 컬럼:
분석 Waters ACQUITY UPLC@ Oligonucleotide BEH C18 Column, 130Åm 1.7㎛, 2.1mm*50mm
유속: 0.2mL/min
컬럼 온도: 60℃
검출: UV(260nm)
음이온 교환 정제
이동상:
A액: 1mM NaOH 20% 아세토니트릴 수용액
B액: 1mM NaOH, 1.5M NaCl/20% 아세토니트릴 수용액
사용 컬럼: TSKgel SuperQ-5PW(13) φ21.1*15mm
유속: 7mL/min
컬럼 온도: 실온
검출: UV(260nm)
탈염 컬럼
이동상:
A액: 20% 아세토니트릴 수용액
B액: 20% 아세토니트릴 수용액
사용 컬럼:
GE HiPrep26/10 Desalting*4개 직렬
유속: 12mL/min
컬럼 온도: 실온
실시예 4
수식 올리고뉴클레오티드 화합물 분자량 측정
합성한 수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 분자량은, Waters ZQ를 사용하여하기 조건으로 행하였다.
이동상:
A액: 400mM 헥사플루오로이소프로판올, 15mM 트리에틸아민 수용액
B액: 메탄올
그레디언트: A:B = 80:20→0:30(6.5min)
사용 컬럼:
Waters ACQUITY UPLC@ Oligonucleotide BEH C18 Column, 130Åm 1.7㎛, 2.1mm*50mm
유속: 0.2mL/min
컬럼 온도: 60℃
검출: UV(260nm)
실시예 5
합성한 수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 분자량
합성한 수식 올리고뉴클레오티드 화합물을 하기 표 1에 나타낸다. 화합물의 표기는, 각 뉴클레오티드가 3문자로 표시된다. 다만 3'말단의 뉴클레오티드는 뉴클레오시드간 결합이 없으므로 2문자로 표시된다.
1) 제1 문자는 대문자로 표시되고, 하기 핵산염기를 나타낸다:
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, U=우라실, M=5-메틸시토신,
2) 제2 문자는 하기 각 당 부분을 나타낸다 :
l=LNA, g=GuNA, m=ALNA[Ms], u=ALNA[mU], p=ALNA[ipU], t=ALNA[Trz], e=2'-MOE, o=2'-OMe, d=2'-데옥시리보스,
3) 제3 문자는 하기 뉴클레오시드간 결합을 나타낸다 :
s=포스포로티오에이트, p=포스포디에스테르.
표적 위치로서, 수식 올리고뉴클레오티드의 DUX4 성숙 mRNA의 5'표적부위(수식 올리고뉴클레오티드의 3'말단에 대응하는 서열목록의 서열번호 1의 위치)를 나타낸다.
[표 1-1]
[표 1-2]
[표 1-3]
[표 1-4]
[표 1-5]
[표 1-6]
실시예 6
In vitro DUX4 녹다운 활성 시험(Lipofection법)
DUX4 수식 올리고뉴클레오티드와 Lipofectamine RNAi Reagent를 혼합한 트랜스펙션 시약 위에, C2C12세포를 1.25×104 cells/cm2로 되도록 파종하고, CO2인큐베이터로 하룻밤 배양했다. 다음날, Lipofectamine 2000 Reagent를 사용하고, DUX4서열을 psiCHECK-2 vector(Promega)의 멀티클로닝사이트에 클로닝한 리포터 플라스미드를 세포에 트랜스펙션하고, CO2인큐베이터로 24시간 정도 배양했다. 그 후, Dual-Glo Luciferase Assay System을 사용하고, 세포 내의 Firefly luciferase와 Renilla luciferase 발광값을 플레이트 리더에 의해 검출하였다. Renilla 루시페라제 활성에 의한 발광값으로부터 트랜스펙션 효율이나 세포수의 영향을 보정하기 위하여, Firefly 루시페라제 활성에 의한 발광값과의 비를 산출했다. 수식 올리고뉴클레오티드를 첨가했을 때의 Renilla/Firefly의 감소율로부터 저해율을 100분률로 산출하고, 50%를 사이에 둔 2점의 농도와 그 때의 저해율로부터 IC50값을 산출하였다(표2). DUX4 성숙 mRNA의 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치에 상보적인 화합물(화합물번호 1∼132)과 비교하여, 화합물번호 133(서열목록의 서열번호 1의 214∼227 번 위치에 상보적), 134(서열목록의 서열번호 1의 1323∼1336 번 위치에 상보적), 135(서열목록의 서열번호 1의 1458∼1471 번 위치에 상보적), 136(서열목록의 서열번호 1의 1495∼1508 번 위치에 상보적)은 저해율이 현저하게 약한 것을 알았다.
실시예 7
In vitro DUX4 녹다운 활성 시험(Gymnosis법)
DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 용액에, C2C12세포를 6×103 cells/cm2로 되도록 파종하고, CO2인큐베이터로 이틀 밤 배양했다. 2일 후, 세포로부터 DUX4 수식 올리고뉴클레오티드 용액 함유 배지를 제거하고, 새로운 배지에서 Wash를 행하였다. 그 후, Lipofectamine 2000 Reagent를 사용하고, DUX4서열을 psiCHECK-2 vector(Promega)의 멀티클로닝사이트에 클로닝한 리포터 플라스미드를 세포에 트랜스펙션하고, CO2인큐베이터로 24시간 정도 배양했다. 그 후, Dual-Glo Luciferase Assay System을 사용하고, 세포 내의 Firefly luciferase와 Renilla luciferase 발광값을 플레이트 리더에 의해 검출하였다. Renilla 루시페라제 활성에 의한 발광값으로부터 트랜스펙션 효율이나 세포수의 영향을 보정하기 위하여, Firefly 루시페라제 활성에 의한 발광값과의 비를 산출했다. 수식 올리고뉴클레오티드를 첨가했을 때의 Renilla/Firefly의 감소율로부터 저해율을 100분률로 산출하고, 50%를 사이에 둔 2점의 농도와 그 때의 저해율로부터 IC50값을 산출했다. 결과를 하기 표 2에 나타낸다. DUX4 성숙 mRNA의 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 영역 내의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 화합물(화합물번호 1∼132)과 비교하여, 화합물번호 133(서열목록의 서열번호 1의 214∼227 번 위치에 상보적), 134(서열목록의 서열번호 1의 1323∼1336 번 위치에 상보적), 135(서열목록의 서열번호 1의 1458∼1471 번 위치에 상보적), 136(서열목록의 서열번호 1의 1495∼1508 번 위치에 상보적)은 저해율이 현저하게 약한 것을 알았다.
[표 2-1]
[표 2-2]
[표 2-3]
[표 2-4]
실시예 8
수식 올리고뉴클레오티드 화합물의 합성과 In vitro DUX4 녹다운 활성 시험(Gymnosis법)
표 3에, 새로이 합성한 수식 올리고뉴클레오티드 화합물과, 상기 화합물에 관한, 실시예 7과 동일하게 행한 In vitro DUX4 녹다운 활성 시험의 결과를 나타낸다.
그리고, 표 3에서의 화합물의 표기는, 각 뉴클레오티드가 3문자로 표시된다. 다만 3'말단의 뉴클레오티드는 뉴클레오시드간 결합이 없으므로 2문자로 표시된다.
1) 제1 문자는 대문자로 표시되고, 하기 핵산염기를 나타낸다 :
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, U=우라실, M=5-메틸시토신,
2) 제2 문자는 하기 각 당 부분을 나타낸다:
l=LNA, m=ALNA[Ms], e=2'-MOE, o=2'-OMe, d=2'-데옥시리보스,
3) 제3 문자는 하기 뉴클레오시드간 결합을 나타낸다 :
s=포스포로티오에이트, p=포스포디에스테르.
표적 위치로서, 수식 올리고뉴클레오티드의 DUX4 성숙 mRNA의 5'표적부위(수식 올리고뉴클레오티드의 3'말단에 대응하는 서열목록의 서열번호 1의 위치)를 나타낸다.
DUX4 성숙 mRNA의 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1472번 위치∼1495번 위치의 영역 내의 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 화합물(화합물번호 137∼247)과 비교하여, 화합물번호 248(서열목록의 서열번호 1의 112∼127 번 위치에 상보적), 249(서열목록의 서열번호 1의 162∼177 번 위치에 상보적), 250(서열목록의 서열번호 1의 264∼279 번 위치에 상보적), 251(서열목록의 서열번호 1의 1273∼1288 번 위치에 상보적)은 저해율이 현저하게 약한 것을 알았다.
[표 3-1]
[표 3-2]
실시예 9
In vivo DUX4 녹다운 활성 시험
서열목록의 서열번호 1의 DUX4 성숙 mRNA를 도입한 아데노 수반 바이러스 벡터 AAV-DUX4(SignaGen Laboratories, Cat.#SL100862)를 제작했다. 8주령의 C57BL/6J마우스(수컷, 일본찰스리버) 전경골근(前脛骨筋)에, 이소플루란(화이자가부시키가이샤) 마취 하에서, AAV-DUX4를 1E+10VG/50μL 근육내 투여했다. 3일 후에, DUX4를 표적으로 한 수식 올리고뉴클레오티드를, 1, 3, 10 및 50 mg/5mL/kg이 되도록 생리식염수로 조제하고, 8주령의 C57BL/6J마우스(수컷, 일본찰스리버)에 미정맥 내 투여했다. 72시간 후에 경추탈구 혹은 이소플루란(화이자가부시키가이샤) 마취 하에서 복부대정맥으로부터 전채혈(全採血)을 행하고, 치사시켰다. 치사 후, 전경골근을 채취하고, RNAlater Soln.(invitrogen)에 침지시킨 후, -80℃에서 동결했다. 조직에 Maxwell RSC simplyRNA Tissue Kit(Promega)의 호모지네이션 버퍼를 가하고, 멀티비즈쇼커(multi-beads shocker)를 사용하여 파쇄하고, 키트에 기재된 프로토콜을 따라 RNA를 정제했다. RNA 400ng를 역전사하고, 얻어진 cDNA를 사용하여 정량PCR을 행하였다. 수식 올리고뉴클레오티드의 녹다운 활성은, DUX4의 18S rRNA에 대한 양비(量比)를, vehicle군에 대한 상대값으로 나타낸다. 1, 3, 10 및 50 mg/5mL/kg의 경우의 결과를 도 1∼4에 나타낸다. 화합물번호 1(DUX4 성숙 mRNA의 233번 위치∼248번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 2(DUX4 성숙 mRNA의 1309번 위치∼1323 번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 3(DUX4 성숙 mRNA의 1480번 위치∼1495 번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 13(DUX4 성숙 mRNA의 234번 위치∼247번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 41(DUX4 성숙 mRNA의 1308번 위치∼1323번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 54(DUX4 성숙 mRNA의 1309번 위치∼1323번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 57(DUX4 성숙 mRNA의 1309번 위치∼1323번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 68(DUX4 성숙 mRNA의 1309번 위치∼1323번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 78(DUX4 성숙 mRNA의 1309번 위치∼1324번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 88(DUX4 성숙 mRNA의 1310번 위치∼1323번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 104(DUX4 성숙 mRNA의 1473번 위치∼1488번 위치에 상보적 서열), 화합물번호 122(DUX4 성숙 mRNA의 1480번 위치∼1495번 위치에 상보적 서열)는 생체에 투여해도, 근육 내에서의 DUX4 유전자의 발현을 억제할 수 있었다.
실시예 10
수식 올리고뉴클레오티드의 안전성
화합물번호 3, 42, 123을, 6주령의 ICR마우스(수컷, 일본찰스리버)에 최대 100mg/kg의 투여량으로 정맥내 투여한 바, 간독성(혈액 중의 ALT, AST의 상승, 및 병리조직학적 이상소견), 신장독성(혈액 중의 UN, 크레아티닌의 상승, 및 병리조직학적 이상소견), 일반증상변화, 사망 등의 소견은 관찰되지 않았다.
실시예 11
In vivo Tg마우스 DUX4 녹다운 활성 시험
9주령의 수컷 FLExDUX4-heteto/HSA-MCM-hetero: TG (DUX4-Tg) 및 FLExDUX4-wild/HSA-MCM-hetero: TG(MCM, control)를 사용했다(수컷, The Jackson Laboratory보다 일본찰스리버 가부시키가이샤에 도입). DUX4를 표적으로 한 수식 올리고뉴클레오티드를, 각 용량의 투여액을 5mL/kg이 되도록 생리식염수로 조제하고, 주 1회, 미정맥 내 투여하였다. 4주 투여 종료 1주 후, 이소플루란 깊은 마취 하에서 복부대정맥보다 전채혈을 하고, 안락사시켰다. EDTA혈장을 분리하고, 크레아틴키나아제(CK) 측정에 제공했다. 하지의 근육을 채취하고, 습(濕)중량을 측정하고, 유전자발현해석에 제공했다.
도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 화합물번호 3 및 화합물번호 123은 DUX4의 mRNA발현을 억제했다. 또한, 근장애 마커인 CK의 혈중 레벨을 저하시켰다. 한편, 화합물번호 113 및 화합물번호 247은 명확한 DUX4 mRNA발현 및 혈중 CK레벨에 대한 작용은 인정되지 않았다.
실시예 12
마우스 연투(連投) 독성시험
6주령의 ICR마우스(수컷, 일본찰스리버)에, DUX4를 표적으로 한 수식 올리고뉴클레오티드를, 100mg/5mL/kg으로 되도록 생리식염수로 조제하고, 4일간 연일 미정맥내 투여했다. 최종투여 72시간 후에 이소플루란마취 하에서 후대정맥으로부터 채혈을 행하고, 임상 생화학검사를 실시했다. 또한 방혈(放血) 치사 후, 부검을 행하고, 간장 및 신장의 병리조직학적 검사를 실시했다. 화합물번호 123에는 투여 후에 사망 및 일반상태, 섭취량 및 체중에는 변화는 인정되지 않고, 간독성(혈청 중의 ALT, AST의 상승, 및 병리조직학적 이상소견), 신장독성(혈청 중의 UN, 크레아티닌의 상승, 및 병리조직학적 이상소견)은 관찰되지 않았다. 한편, 화합물번호 113 및 화합물번호 247에 대해서는 투여 후에 사망 및 일반상태, 섭취량 및 체중에는 변화는 인정되지 않았지만, 모두 명확한 간독성(혈청 중의 ALT, AST, GLDH, ALP, 빌리루빈, 담즙산의 상승, 병리조직학적 이상소견: 간세포의 변성괴사, 간세포비대) 및 신장독성(혈청 중의 크레아티닌의 상승)이 인정되었다. 또한, 상기 시험 조건 하에서의 화합물번호 123의 간장 및 신장 중 농도는, 각각 323 및 251 μg/g이며, 화합물번호 247의 간장 및 신장 중 농도 111 및 185 μg/g, 화합물번호 113의 간장 및 신장 중 농도 39.3 및 235 μg/g과 비교하여 동등 이상의 조직 중 농도임에도 불구하고 간 및 신장 독성은 인정되지 않았다.
[표 4] 마우스 연투시험 혈액 생화학검사
[표 5] 마우스 연투시험 병리소견
참고예
ALNA[Ms] 함유 뉴클레오티드, ALNA[mU] 함유 뉴클레오티드, ALNA[ipU] 함유 뉴클레오티드, ALNA[Trz] 함유 뉴클레오티드, ALNA[Oxz] 함유 뉴클레오티드의 합성법의 스킴(scheme)을 이하에 나타낸다. 그리고, 출발 화합물 1a, 1d, 1g는 국제공개 제2017/047816호에 기재된 방법으로 합성할 수 있다.
ALNA[Ms]-T의 합성
ALNA[Ms]-mC의 합성
ALNA[Ms]-G의 합성
ALNA[Ms]-A의 합성
ALNA[mU]-T의 합성
ALNA[mU]-mC의 합성
ALNA[mU]-G의 합성
ALNA[mU]-A의 합성
ALNA[ipU]-T의 합성
ALNA[ipU]-mC의 합성
ALNA[ipU]-G의 합성
ALNA[ipU]-A의 합성
ALNA[Trz]-T의 합성
ALNA[Trz]-mC의 합성
ALNA[Trz]-G의 합성
ALNA[Trz]-A의 합성
ALNA[Oxz]-T의 합성
ALNA[Oxz]-mC의 합성
[산업 상 이용가능성]
본 발명의 수식 올리고뉴클레오티드는, DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화에 유용한 화합물로서 사용 가능하다.
[서열목록 프리텍스트]
서열목록의 서열번호 1은, DUX4 성숙 mRNA의 염기서열을 나타낸다.
서열목록의 서열번호 2∼4, 및 7∼112은, 수식 올리고뉴클레오티드의 염기서열을 나타낸다.
서열목록의 서열번호 5∼6은, 서열번호 1의 스플라이싱 배리언트로서의 DUX4-FL2 및 DUX4-s의 각각의 염기서열을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING
<110> Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation
<120> Compounds for modulating expression of DUX4, Methods and Pharmaceutical Composition thereof
<130> A19030-19510
<150> JP2019-67914
<151> 2019-03-29
<160> 109
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1574
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
atggccctcc cgacaccctc ggacagcacc ctccccgcgg aagcccgggg acgaggacgg 60
cgacggagac tcgtttggac cccgagccaa agcgaggccc tgcgagcctg ctttgagcgg 120
aacccgtacc cgggcatcgc caccagagaa cggctggccc aggccatcgg cattccggag 180
cccagggtcc agatttggtt tcagaatgag aggtcacgcc agctgaggca gcaccggcgg 240
gaatctcggc cctggcccgg gagacgcggc ccgccagaag gccggcgaaa gcggaccgcc 300
gtcaccggat cccagaccgc cctgctcctc cgagcctttg agaaggatcg ctttccaggc 360
atcgccgccc gggaggagct ggccagagag acgggcctcc cggagtccag gattcagatc 420
tggtttcaga atcgaagggc caggcacccg ggacagggtg gcagggcgcc cgcgcaggca 480
ggcggcctgt gcagcgcggc ccccggcggg ggtcaccctg ctccctcgtg ggtcgccttc 540
gcccacaccg gcgcgtgggg aacggggctt cccgcacccc acgtgccctg cgcgcctggg 600
gctctcccac agggggcttt cgtgagccag gcagcgaggg ccgcccccgc gctgcagccc 660
agccaggccg cgccggcaga ggggatctcc caacctgccc cggcgcgcgg ggatttcgcc 720
tacgccgccc cggctcctcc ggacggggcg ctctcccacc ctcaggctcc tcgctggcct 780
ccgcacccgg gcaaaagccg ggaggaccgg gacccgcagc gcgacggcct gccgggcccc 840
tgcgcggtgg cacagcctgg gcccgctcaa gcggggccgc agggccaagg ggtgcttgcg 900
ccacccacgt cccaggggag tccgtggtgg ggctggggcc ggggtcccca ggtcgccggg 960
gcggcgtggg aaccccaagc cggggcagct ccacctcccc agcccgcgcc cccggacgcc 1020
tccgcctccg cgcggcaggg gcagatgcaa ggcatcccgg cgccctccca ggcgctccag 1080
gagccggcgc cctggtctgc actcccctgc ggcctgctgc tggatgagct cctggcgagc 1140
ccggagtttc tgcagcaggc gcaacctctc ctagaaacgg aggccccggg ggagctggag 1200
gcctcggaag aggccgcctc gctggaagca cccctcagcg aggaagaata ccgggctctg 1260
ctggaggagc tttaggacgc ggggtctagg cccggtgaga gactccacac cgcggagaac 1320
tgccattctt tcctgggcat cccggggatc ccagagccgg cccaggtacc agcagacctg 1380
cgcgcagtgc gcaccccggc tgacgtgcaa gggagctcgc tggcctctct gtgcccttgt 1440
tcttccgtga aattctggct gaatgtctcc ccccaccttc cgacgctgtc taggcaaacc 1500
tggattagag ttacatctcc tggatgatta gttcagagat atattaaaat gccccctccc 1560
tgtggatcct atag 1574
<210> 2
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> m5c
<400> 2
cgagattccc gccggt 16
<210> 3
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 3
gcagttctcc gcggt 15
<210> 4
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 4
gcctagacag cgtcgg 16
<210> 5
<211> 1710
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
atggccctcc cgacaccctc ggacagcacc ctccccgcgg aagcccgggg acgaggacgg 60
cgacggagac tcgtttggac cccgagccaa agcgaggccc tgcgagcctg ctttgagcgg 120
aacccgtacc cgggcatcgc caccagagaa cggctggccc aggccatcgg cattccggag 180
cccagggtcc agatttggtt tcagaatgag aggtcacgcc agctgaggca gcaccggcgg 240
gaatctcggc cctggcccgg gagacgcggc ccgccagaag gccggcgaaa gcggaccgcc 300
gtcaccggat cccagaccgc cctgctcctc cgagcctttg agaaggatcg ctttccaggc 360
atcgccgccc gggaggagct ggccagagag acgggcctcc cggagtccag gattcagatc 420
tggtttcaga atcgaagggc caggcacccg ggacagggtg gcagggcgcc cgcgcaggca 480
ggcggcctgt gcagcgcggc ccccggcggg ggtcaccctg ctccctcgtg ggtcgccttc 540
gcccacaccg gcgcgtgggg aacggggctt cccgcacccc acgtgccctg cgcgcctggg 600
gctctcccac agggggcttt cgtgagccag gcagcgaggg ccgcccccgc gctgcagccc 660
agccaggccg cgccggcaga ggggatctcc caacctgccc cggcgcgcgg ggatttcgcc 720
tacgccgccc cggctcctcc ggacggggcg ctctcccacc ctcaggctcc tcgctggcct 780
ccgcacccgg gcaaaagccg ggaggaccgg gacccgcagc gcgacggcct gccgggcccc 840
tgcgcggtgg cacagcctgg gcccgctcaa gcggggccgc agggccaagg ggtgcttgcg 900
ccacccacgt cccaggggag tccgtggtgg ggctggggcc ggggtcccca ggtcgccggg 960
gcggcgtggg aaccccaagc cggggcagct ccacctcccc agcccgcgcc cccggacgcc 1020
tccgcctccg cgcggcaggg gcagatgcaa ggcatcccgg cgccctccca ggcgctccag 1080
gagccggcgc cctggtctgc actcccctgc ggcctgctgc tggatgagct cctggcgagc 1140
ccggagtttc tgcagcaggc gcaacctctc ctagaaacgg aggccccggg ggagctggag 1200
gcctcggaag aggccgcctc gctggaagca cccctcagcg aggaagaata ccgggctctg 1260
ctggaggagc tttaggacgc ggggttggga cggggtcggg tggttcgggg cagggcggtg 1320
gcctctcttt cgcggggaac acctggctgg ctacggaggg gcgtgtctcc gccccgcccc 1380
ctccaccggg ctgaccggcc tgggattcct gccttctagg tctaggcccg gtgagagact 1440
ccacaccgcg gagaactgcc attctttcct gggcatcccg gggatcccag agccggccca 1500
ggtaccagca gacctgcgcg cagtgcgcac cccggctgac gtgcaaggga gctcgctggc 1560
ctctctgtgc ccttgttctt ccgtgaaatt ctggctgaat gtctcccccc accttccgac 1620
gctgtctagg caaacctgga ttagagttac atctcctgga tgattagttc agagatatat 1680
taaaatgccc cctccctgtg gatcctatag 1710
<210> 6
<211> 768
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: oligonucleotide
<400> 6
atggccctcc cgacaccctc ggacagcacc ctccccgcgg aagcccgggg acgaggacgg 60
cgacggagac tcgtttggac cccgagccaa agcgaggccc tgcgagcctg ctttgagcgg 120
aacccgtacc cgggcatcgc caccagagaa cggctggccc aggccatcgg cattccggag 180
cccagggtcc agatttggtt tcagaatgag aggtcacgcc agctgaggca gcaccggcgg 240
gaatctcggc cctggcccgg gagacgcggc ccgccagaag gccggcgaaa gcggaccgcc 300
gtcaccggat cccagaccgc cctgctcctc cgagcctttg agaaggatcg ctttccaggc 360
atcgccgccc gggaggagct ggccagagag acgggcctcc cggagtccag gattcagatc 420
tggtttcaga atcgaagggc caggcacccg ggacagggtg gcagggcgcc cgcgcaggtc 480
taggcccggt gagagactcc acaccgcgga gaactgccat tctttcctgg gcatcccggg 540
gatcccagag ccggcccagg taccagcaga cctgcgcgca gtgcgcaccc cggctgacgt 600
gcaagggagc tcgctggcct ctctgtgccc ttgttcttcc gtgaaattct ggctgaatgt 660
ctccccccac cttccgacgc tgtctaggca aacctggatt agagttacat ctcctggatg 720
attagttcag agatatatta aaatgccccc tccctgtgga tcctatag 768
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (12)..(12)
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (7)..(9), (11)..(12)
<223> m5c
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<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1), (8)..(10), (12)..(13),
<223> m5c
<400> 13
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<210> 14
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1), (13)..(13)
<223> m5c
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<210> 15
<211> 16
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 15
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<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3)
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<221> modified_base
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 20
gcagttctcc gcggtg 16
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<221> modified_base
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<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
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<210> 25
<211> 14
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<221> modified_base
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<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2), (7)..(7), (9)..(10)
<223> m5c
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<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2), (7)..(7), (9)..(10), (12)..(12)
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<211> 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2), (7)..(7), (9)..(10)
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2), (7)..(7), (9)..(10), (12)..(12)
<223> m5c
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<220>
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<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<400> 37
gcagttctcc gcgg 14
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3)
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<212> DNA
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3), (13)..(13)
<223> m5c
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ggcagttctc cgcgg 15
<210> 41
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3), (8)..(8), (10)..(11), (13)..(13)
<223> m5c
<400> 41
ggcagttctc cgcgg 15
<210> 42
<211> 14
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<210> 45
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> m5c
<400> 45
cagcgtcgga aggtggg 17
<210> 46
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3)
<223> m5c
<400> 46
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<210> 47
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3), (6)..(6)
<223> m5c
<400> 47
agcgtcggaa ggtgg 15
<210> 48
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
<400> 49
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<210> 50
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
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<210> 51
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
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<210> 52
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
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<400> 52
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<212> DNA
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3)
<223> m5c
<400> 53
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<210> 54
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3)
<223> m5c
<400> 54
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<210> 55
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 55
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<210> 56
<211> 15
<212> DNA
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 58
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 59
gcctagacag cgtcgg 16
<210> 60
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3)
<223> m5c
<400> 60
gcctagacag cgtcgg 16
<210> 61
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
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<223> m5c
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (8)..(8), (11)..(11), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 62
gcctagacag cgucgg 16
<210> 63
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (8)..(8), (11)..(11), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 63
gccuagacag cgtcgg 16
<210> 64
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (8)..(8), (11)..(11), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 64
gccuagacag cgucgg 16
<210> 65
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1), (3)..(3)
<223> m5c
<400> 65
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<210> 66
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(2)
<223> m5c
<400> 66
ccaggaaaga atgg 14
<210> 67
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (14)..(14)
<223> m5c
<400> 67
gggagacatt cagc 14
<210> 68
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> m5c
<400> 68
ctaatccagg tttg 14
<210> 69
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3),(16)..(16)
<223> m5c
<400> 69
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<210> 70
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (18)..(18)
<223> m5c
<400> 70
gtggcgatgc ccgggtac 18
<210> 71
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 71
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<210> 72
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 72
gtggcgatgc ccgggta 17
<210> 73
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 73
tggcgatgcc cgggta 16
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1)
<223> m5c
<400> 74
ctggtggcga tgcccgggta 20
<210> 75
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 75
gtggcgatgc ccgggt 16
<210> 76
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 76
ggtggcgatg cccgggt 17
<210> 77
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 77
tctggtggcg atgcccgggt 20
<210> 78
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (12)..(12)
<223> m5c
<400> 78
gagattcccg ccggtg 16
<210> 79
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 79
gcagttctcc gcggtgtgga 20
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<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 80
ggcagttctc cgcggtgtg 19
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 81
atggcagttc tccgcggtgt 20
<210> 82
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 82
tggcagttct ccgcggtgt 19
<210> 83
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 83
tggcagttct ccgcggtg 18
<210> 84
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 84
gcctagacag cgtcggaagg 20
<210> 85
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 85
gcctagacag cgtcggaag 19
<210> 86
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 86
tgcctagaca gcgtcggaa 19
<210> 87
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 87
tttgcctaga cagcgtcgga 20
<210> 88
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 88
tgcctagaca gcgtcgga 18
<210> 89
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3)
<223> m5c
<400> 89
gcctagacag cgtcgga 17
<210> 90
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 90
gtttgcctag acagcgtcgg 20
<210> 91
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 91
ttgcctagac agcgtcgg 18
<210> 92
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3), (15)..(15)
<223> m5c
<400> 92
tgcctagaca gcgtcgg 17
<210> 93
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 93
gcctagacag cgtcgg 16
<210> 94
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2), (12)..(12)
<223> m5c
<400> 94
gcagttctcc gcggtg 16
<210> 95
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 95
ggcagttctc cgcggtgt 18
<210> 96
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (12)..(12)
<223> m5c
<400> 96
gtggcgatgc ccgggt 16
<210> 97
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (12)..(12)
<223> m5c
<400> 97
gcagttctcc gcggtg 16
<210> 98
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 98
acgggttccg ctcaaa 16
<210> 99
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(1), (15)..(16)
<223> m5c
<400> 99
cggaatgccg atggcc 16
<210> 100
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 100
ttctggcggg ccgcgt 16
<210> 101
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (14)..(14)
<223> m5c
<400> 101
tagaccccgc gtccta 16
<210> 102
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 102
gccuagacag cgtcgg 16
<210> 103
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 103
gcctagacag cgucgg 16
<210> 104
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 104
gccuagacag cgtcgg 16
<210> 105
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(3), (14)..(14)
<223> m5c
<400> 105
gccuagacag cgucgg 16
<210> 106
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 106
gtggcgaugc ccgggt 16
<210> 107
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 107
gcagutctcc gcggt 15
<210> 108
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 108
gcagtuctcc gcggt 15
<210> 109
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (2)..(2)
<223> m5c
<400> 109
gcagttcucc gcggt 15
Claims (27)
12∼30 잔기로 이루어지는 수식(修飾) 올리고뉴클레오티드로서,
적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1480번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지고,
상기 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열이 서열번호 1의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 경우에는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치의 염기의 상보 염기를 3'말단에 가지는 핵산염기서열로 이루어지는,
수식 올리고뉴클레오티드.
적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 126번 위치∼147번 위치, 232번 위치∼248번 위치, 1306번 위치∼1325번 위치 또는 1480번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지고,
상기 적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열이 서열번호 1의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하는 경우에는, 상기 수식 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 핵산염기의 5'말단으로부터 1480번 위치의 염기의 상보 염기를 3'말단에 가지는 핵산염기서열로 이루어지는,
수식 올리고뉴클레오티드.
제1항에 있어서,
상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 1개 이상의 수식 뉴클레오티드가 수식 당을 포함하는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 1개 이상의 수식 뉴클레오티드가 수식 당을 포함하는, 수식 올리고뉴클레오티드.
제2항에 있어서,
상기 수식 당이, 2환식 당, 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및 2'-O-메틸로 수식된 당으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 당이, 2환식 당, 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및 2'-O-메틸로 수식된 당으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 수식 올리고뉴클레오티드.
제3항에 있어서,
상기 2환식 당이, LNA, GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및 ALNA[Trz]로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 2환식 당이, LNA, GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및 ALNA[Trz]로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 수식 올리고뉴클레오티드.
12∼30 잔기로 이루어지는 수식 올리고뉴클레오티드로서,
적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가 GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및 ALNA[Trz]로부터 선택되는 수식 당을 포함하는 뉴클레오시드를 적어도 1개 포함하는,
수식 올리고뉴클레오티드.
적어도 8개의 연속하는 핵산염기서열로서, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의 5'말단으로부터 1472번 위치∼1495번 위치에서의 그 동일 길이 부분에 상보적인 핵산염기서열을 포함하고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드의 핵산염기서열은, 서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열에서의 그 동일 길이 부분에 적어도 90% 상보성을 가지고,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가 GuNA, ALNA[Ms], ALNA[mU], ALNA[ipU], ALNA[Oxz], 및 ALNA[Trz]로부터 선택되는 수식 당을 포함하는 뉴클레오시드를 적어도 1개 포함하는,
수식 올리고뉴클레오티드.
제5항에 있어서,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가, 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및/또는 2'-O-메틸로 수식된 당을 더 포함하는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 올리고뉴클레오티드가, 2'-O-메톡시에틸로 수식된 당, 및/또는 2'-O-메틸로 수식된 당을 더 포함하는, 수식 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 적어도 1개의 수식 뉴클레오티드가 수식 핵산염기를 포함하는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 올리고뉴클레오티드 중 적어도 1개의 수식 뉴클레오티드가 수식 핵산염기를 포함하는, 수식 올리고뉴클레오티드.
제7항에 있어서,
상기 수식 핵산염기가 5-메틸시토신인, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 핵산염기가 5-메틸시토신인, 수식 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
적어도 1개의 뉴클레오시드간 결합이 수식 뉴클레오시드간 결합인, 수식 올리고뉴클레오티드.
적어도 1개의 뉴클레오시드간 결합이 수식 뉴클레오시드간 결합인, 수식 올리고뉴클레오티드.
제9항에 있어서,
상기 수식 뉴클레오시드간 결합이, 포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합인, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 뉴클레오시드간 결합이, 포스포로티오에이트뉴클레오시드간 결합인, 수식 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
1) 갭 세그먼트와,
2) 5'윙 세그먼트와,
3) 3'윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트가, 상기 5'윙 세그먼트와, 상기 3'윙 세그먼트 사이에 위치되고,
상기 5'윙 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 뉴클레오시드 전부가, 적어도 1개의 수식 당을 포함하고,
상기 갭 세그먼트의 뉴클레오시드는, 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드뿐이거나, 또는, 수식 당을 포함하는 1개 또는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 그 이외에는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드인,
수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
1) 갭 세그먼트와,
2) 5'윙 세그먼트와,
3) 3'윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트가, 상기 5'윙 세그먼트와, 상기 3'윙 세그먼트 사이에 위치되고,
상기 5'윙 세그먼트와 3'윙 세그먼트의 뉴클레오시드 전부가, 적어도 1개의 수식 당을 포함하고,
상기 갭 세그먼트의 뉴클레오시드는, 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드뿐이거나, 또는, 수식 당을 포함하는 1개 또는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 그 이외에는 수식 당을 포함하지 않는 뉴클레오시드인,
수식 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의
5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 232번 위치∼247번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 233번 위치∼248번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 1309번 위치∼1323번 위치의 핵산염기서열, 또는
5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치의 핵산염기서열
에 상보적인 핵산염기서열로 이루어지는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
서열번호 1의 DUX4의 성숙 mRNA의 핵산염기서열의
5'말단으로부터 128번 위치∼143번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 232번 위치∼247번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 233번 위치∼248번 위치의 핵산염기서열,
5'말단으로부터 1309번 위치∼1323번 위치의 핵산염기서열, 또는
5'말단으로부터 1480번 위치∼1495번 위치의 핵산염기서열
에 상보적인 핵산염기서열로 이루어지는, 수식 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
gtggcgatgc ccgggt(서열번호 75),
gagattcccg cnggtg(서열번호 78: n은 5-메틸시토신을 나타냄),
ngagattcccgccggt(서열번호 2: n은 5-메틸시토신을 나타냄),
gnagttctccgcggt(서열번호 3: n은 5-메틸시토신을 나타냄), 또는
gnntagacagcgtngg(서열번호 4: n은 5-메틸시토신을 나타냄)
의 염기서열로 이루어지는, 수식 올리고뉴클레오티드.
상기 수식 올리고뉴클레오티드가,
gtggcgatgc ccgggt(서열번호 75),
gagattcccg cnggtg(서열번호 78: n은 5-메틸시토신을 나타냄),
ngagattcccgccggt(서열번호 2: n은 5-메틸시토신을 나타냄),
gnagttctccgcggt(서열번호 3: n은 5-메틸시토신을 나타냄), 또는
gnntagacagcgtngg(서열번호 4: n은 5-메틸시토신을 나타냄)
의 염기서열로 이루어지는, 수식 올리고뉴클레오티드.
제13항에 있어서,
하기 식
GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호
l=LNA, d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트에 따라 표시됨.
하기 식
GlsMlsMlsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMlsGlsGl
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호
l=LNA, d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트에 따라 표시됨.
제13항에 있어서,
하기 식
GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트에 따라 표시됨.
하기 식
GmsMmsMmsTdsAdsGdsAdsCdsAdsGdsCdsGdsTdsMmsGmsGm
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트에 따라 표시됨.
제13항에 있어서,
하기 식
GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시됨.
하기 식
GmsMmsAmsGdsTdsTdsCdsTdsCdsCdsGdsCdsGmsGmsTm
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호
m=ALNA[Ms], d=2'-데옥시리보스
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시됨.
제13항에 있어서,
하기 식
MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호:
l=LNA, d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시됨.
하기 식
MlsGlsAlsGdsAdsTdsTdsCdsCdsCdsGdsCdsCdsGlsGlsTl
으로 표시되는 수식 올리고뉴클레오티드:
상기 식 중,
각각의 핵산염기가 하기 기호
A=아데닌, T=티민, G=구아닌, C=시토신, M=5-메틸시토신
에 따라 표시되고,
각각의 당 부분이 하기 기호:
l=LNA, d=2'-데옥시리보스,
에 따라 표시되고,
각각의 뉴클레오시드간 결합이 하기 기호
s=포스포로티오에이트
에 따라 표시됨.
하기 식
에 의해 표시되는, 제14항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
에 의해 표시되는, 제14항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
제15항에 있어서,
하기 식
에 의해 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
하기 식
에 의해 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
제16항에 있어서,
하기 식
에 의해 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
하기 식
에 의해 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
제17항에 있어서,
하기 식
에 의해 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
하기 식
에 의해 표시되는, 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드 또는 그의 의약적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 의약조성물.
제22항에 있어서,
DUX4 관련 질환의 치료, 예방, 또는 그 진행의 지연화를 위한, 의약조성물.
DUX4 관련 질환의 치료, 예방, 또는 그 진행의 지연화를 위한, 의약조성물.
제23항에 있어서,
상기 DUX4 관련 질환이 안면견갑상완형(顔面肩甲上腕型) 근디스트로피(muscular dystrophy)인, 의약조성물.
상기 DUX4 관련 질환이 안면견갑상완형(顔面肩甲上腕型) 근디스트로피(muscular dystrophy)인, 의약조성물.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 유효량을, 그것을 필요로 하는 피험자에 투여하는 것을 특징으로 하는, 피험자에서의 DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화를 위한 방법.
DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화를 위한 의약의 제조에서의, 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 사용.
DUX4 관련 질환의 치료, 예방 또는 그 진행의 지연화를 위한, 제1항 내지 제21항 중 어느 한항에 기재된 수식 올리고뉴클레오티드의 사용.
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