JP2016520310A - Ｂ細胞ｃｌｌ／リンパ腫１１ａ（ｂｃｌ１１ａ）のオリゴヌクレオチドモデュレーター及びその使用 - Google Patents

Abstract

本発明はとりわけ、Ｂ細胞リンパ腫／白血病１１Ａ（ＢＣＬ１１Ａ）のオリゴヌクレオチドモデュレーター（例えば、インヒビター）、及びこのようなモデュレーターに基づいて、ＢＣＬ１１Ａに関連する疾患、障害又は状態を処置するための、改良された方法及び組成物を提供する。

Description

背景
異常ヘモグロビン症は、ヘモグロビンタンパク質の機能障害に関連する疾患である。典型的には、これらの疾患にはグロビン遺伝子（例えば、アルファ、ベータなど、図１）における遺伝子突然変異より生じる、ヘモグロビンタンパク質の欠乏又は機能不全のいずれかが関わる。異常ヘモグロビン症は、ほとんどの場合、常染色体の共優性形質である単一遺伝子で継承される障害によって特徴付けられる、赤血球細胞が関係する障害の広域スペクトルの一群である。世界の人口の約７％がキャリアであると推定されている。遺伝性の異常ヘモグロビン症は、サラセミア（地中海貧血症：アルファ、ベータ、デルタ）、鎌状赤血球症及び遺伝性高胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）血症という、３種の型のうちの１種にて現れる。鎌状赤血球症（ＳＣＤ）及びベータ−サラセミアが、異常ヘモグロビン症の最も一般的な型であり、世界中での罹患及び死亡の主たる原因である。ＳＣＤは、その名前が示すとおり、変異に起因するグロビンタンパク質の構造の変化が関わっており、結果的に機能不全のヘモグロビンタンパク質を生じるが、一方サラセミアは、正常グロビンタンパク質の過小生産をもたらす、グロビン遺伝子における変異に関係している。これは調節タンパク質における変異を通じて起こり得る。場合により、重度の（sever）貧血がヘモグロビン機能障害の共通の結果である。

異常ヘモグロビン症に対し、種々の処置が長期にわたり検討されてきた。典型的には、ヘモグロビン機能を回復することに重点が置かれており、これは例えば、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）のレベルを増加させることによるものである。しかしながら、開発に成功した有効な処置は多くない。最近、ＨｂＦを調節する機構の理解が、多くの研究領域でなされてきている。ＢＣＬ１１Ａは、骨髄内の成体赤血球系前駆体細胞において発現されており、γ−グロビン生成を抑制するよう機能することが報告された（Sankaran et al. 2008 Science vol 322 page 1839-1842）。

国際公開第２０１０／０３０９６３号パンフットは、４つの標的配列に対するｓｉＲＮＡ試料のプールを用いたＢＣＬ１１Ａのモデュレーションを記載している。個々の標的配列がＢＣＬ１１Ａをダウンレギュレートできるかについての示唆はなされていない。

国際公開第２０１２／０７９０４６号パンフレットは、ＢＣＬ１１Ａ遺伝子へ標的とする二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）組成物を記載している。

概要
本発明はとりわけ、ＢＣＬ１１Ａのアンチセンスオリゴヌクレオチドモデュレーター（例えば、インヒビター）並びにこのようなモデュレーターに基づきＢＣＬ１１Ａに関連する疾患、障害又は状態を処置するための方法及び組成物を提供する。本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、鎌状赤血球症及びβ−サラセミアなどの異常ヘモグロビン症を処置するために特に有用であると考えられる。

一つの態様では、本発明は、ヒトＢＣＬ１１Ａの発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、配列番号１のヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームのヌクレオチド４１０〜４５０から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一である配列を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーである、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１９ヌクレオチド未満の長さである。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは１８ヌクレオチド未満の長さである。

一つの態様では、本発明は、ヒトＢＣＬ１１Ａの発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１８ヌクレオチド未満（例えば、１７、１６、１５、１４、１３、又は１２未満）の長さと、配列番号１のヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームのヌクレオチド４１０〜４５０から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一である配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

一つの態様では、本発明は、ヒトＢＣＬ１１Ａの発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、配列番号１のヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームのヌクレオチド４１０〜４５０から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一であり、且つ式Ｘ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’（式中、Ｘはヌクレオチド類似体であり、ＹはＤＮＡの連続配列であり、ａは１、２、３、４又は５であり、ａ’は１、２、３、４又は５であり、ｂは５から１５の整数である）によって表される配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド類似体はロックド核酸（ＬＮＡ）である。

いくつかの実施態様では、ａとａ’とは異なっている。いくつかの実施態様では、ａとａ’とは同じである。いくつかの実施態様では、ａ及び／又はａ’は１である。いくつかの実施態様では、ａ及び／又はａ’は２である。いくつかの実施態様では、ａ及び／又はａ’は３である。いくつかの実施態様では、ａ及び／又はａ’は４である。いくつかの実施態様では、ａ及び／又はａ’は５である。

いくつかの実施態様では、ｂは全体で５から１５の整数である。いくつかの実施態様では、ｂは全体で５から１０の整数。いくつかの実施態様では、ｂは全体で７から１１の整数である。いくつかの実施態様では、ｂは５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４及び１５からなる群より選択される整数である。

いくつかの実施態様では、ＢＣＬ１１ＡのアイソフォームはＸＬ、Ｌ、Ｍ、Ｓ及びＸＳからなる群より選択されるか、又はその相同体若しくは相同分子種（オルソログ）である。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはマウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができる。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８又はそれ以上のヌクレオシド類似体を含むか（comprise）又は含有する（contain）。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、３から８のヌクレオチド類似体、例えば６又は７のヌクレオチド類似体を含む。いくつかの実施態様では、前記ヌクレオチド類似体のうちの少なくとも１つはロックド核酸（ＬＮＡ）であり、例えばヌクレオチド類似体のうちの少なくとも３又は少なくとも４、又は少なくとも５、又は少なくとも６、又は少なくとも７、又は８が、ＬＮＡであり得る。いくつかの実施態様では、ヌクレオチド類似体のすべてがＬＮＡであり得る。

いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも、４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８又はそれ以上のＬＮＡ単位を含むか又は含有する。いくつかの実施態様では、１以上のＬＮＡ単位が、アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’及び／又は’３端に位置する。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの、少なくとも２又は少なくとも３のＬＮＡ単位を５’及び／又は’３端に含む。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１、少なくとも２又は少なくとも３のＬＮＡ単位を内部に含む。

いくつかの実施態様では、ＬＮＡ単位は、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡヌクレオチドである。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１以上の付加的な化学修飾を含む。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２’Ｏ−メチル修飾及び／又はホスホロチオエート結合を含めた１以上の付加的な化学修飾を含む。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ５−メチルシトシンヌクレオチドである少なくとも１つのＬＮＡ単位を含む。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１０〜１７、１０〜１６、１０〜１５、１０〜１４、１０〜１３、１０〜１２、１１〜１７、１１〜１６、１１〜１５、１１〜１４、１１〜１３、１２〜１７、１２〜１６、１２〜１５、又は１２〜１４ヌクレオチドの長さを有する。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは１２〜１６ヌクレオチドの長さを有する。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１のヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はヒトＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームのヌクレオチド４１０〜４５０から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と同一である配列を有する。

本発明の他に採りうる態様は、ヒトＢＣＬ１１Ａの発現を減少させることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子のヌクレオチド１〜２８３（エクソン１）、ヌクレオチド２８４〜６１３（エクソン２）、又はヌクレオチド６１４〜７１５（エクソン３）から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と少なくとも８０％同一である配列を含む。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＸＬのヌクレオチド４１０〜４５０内にある。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＸＬのヌクレオチド４１５〜４３６内にある。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＸＬのヌクレオチド４２０〜４５０内にある。

いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、5'-ATTGCATTGTTTCCG-3'（配列番号６３）、5'-GTTTGTGCTCGAT-3'（配列番号６４）、5'-CATTGCATTGTTTCCG-3'（配列番号６５）、5'-CGTTTGTGCTCGAT-3'（配列番号６６）、5'-CGTTTGTGCTCGATAA-3'（配列番号６７）、5'-CCGTTTGTGCTCGA-3'（配列番号６８）、5'-CGTTTGTGCTCGA-3'（配列番号６９）、5'-TTTGTGCTCGATAA-3'（配列番号７０）、5'-TTGTGCTCCATAA-3'（配列番号７１）及び5'-TTTCCGTTTGTGCTCG（配列番号７２）、5'-ATTGCATTGTTTCCGT-3'（配列番号７３）、5'-CGTTTGTGCTCGATA-3'（配列番号７４）からなる群より選択される配列モチーフを含むか又はそれからなる（consist）。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表２から選択される配列を有する。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１１、配列番号１５、配列番号３２、配列番号２１、配列番号３４、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６０、配列番号６１又は配列番号６２から選択される配列を有する。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5'-^mC_s ^oA_s ^o T_s ^o t_s g_sc_s a_s t_s t_s g_s t_st_s t_s ^mC_s ^{o m}C_s ^oG^o -3'（配列番号１１）、5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^ot_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_sa_sT_s ^oA_s ^oA^o-3'（配列番号１５）又は5'-^mC_s ^oG_s ^o T_s ^o t_s t_sg_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_s A_s ^o T_s ^o A^o-3'（配列番号３２）、5'-T_s ^o T_s ^o G_s ^o t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s t_s A_s ^o A_s ^o A^o -3'（配列番号１４）及び5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^o t_s t_sg_s t_s g_s c_s t_s c_sG_s ^o A_s ^o T^o-3'（配列番号３５）から選択され、配列中、大文字はロックド核酸（ＬＮＡ）単位を示し、添え字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、小文字はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）単位を表し、「^ｍＣ」は５’メチル−シトシンＬＮＡ単位を表し、「^ｍｃ」は５’メチル−シトシンＤＮＡ単位を表す。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5'-^mC_s ^o A_s ^o T_s ^o t_s g_s c_s a_s t_s t_s g_s t_s t_s t_s ^mC_s ^{o m}C_s ^o G^o-3'（配列番号１１）である。

別の態様では、本発明は、表２から選択されるオリゴヌクレオチド配列に少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）同一である配列を有する、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5'-^mC_s ^oA_s ^o T_s ^o t_s g_sc_s a_s t_s t_s g_s t_st_s t_s ^mC_s ^{o m}C_s ^oG^o -3'（配列番号１１）、5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^ot_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_sa_sT_s ^oA_s ^oA^o-3'（配列番号１５）又は5'-^mC_s ^oG_s ^o T_s ^o t_s t_sg_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_s A_s ^o T_s ^o A^o-3'（配列番号３２）5'-^mC_s ^oG_s ^o T_s ^o t_s t_sg_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_s A_s ^o T_s ^o A^o-3'（配列番号３２）、5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^o t_s t_sg_s t_s g_s c_s t_s c_sG_s ^o A_s ^o T^o-3'（配列番号３５）、5'-T_s ^o T_s ^o G_s ^o t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s t_s A_s ^o A_s ^o A^o-3'（配列番号１４）及び5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^o t_s t_sg_s t_s g_s c_s t_s c_sG_s ^o A_s ^o T^o-3'（配列番号３５）から選択されるオリゴヌクレオチド配列に少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）同一である配列を有し、配列中、大文字はロックド核酸（ＬＮＡ）単位を示し、添え字「s」は、ホスホロチオエート結合を表し、小文字はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）単位を表し、「^ｍＣ」は、５’メチル−シトシンＬＮＡ単位を表し、「^ｍｃ」は５’メチル−シトシンＤＮＡ単位を表す。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物が提供される。

とりわけ、本発明は、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与することを含む、被験者においてＢＣＬ１１Ａを阻害する方法を提供する。

とりわけ、本発明は、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与する工程を含むＢＣＬ１１Ａを阻害する方法で使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施態様では、本発明は、鎌状赤血球症又はβ−サラセミアなどの貧血性疾患、障害又は状態の処置のための医薬の製造における、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物の使用を提供する。特に、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を被験者に投与することを含む、ＢＣＬ１１Ａを阻害するための医薬の製造における使用を提供する。

いくつかの実施態様では、本発明は、鎌状赤血球症又はβ−サラセミアなどの貧血性疾患、障害又は状態の処置用など、医薬としての使用のための本発明の医薬組成物にかかるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与することを含む、被験者において貧血性疾患、障害又は状態を処置する方法を提供する。

いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書にいうところのものなどの疾患又は障害、異常ヘモグロビン症など、すなわち、サラセミア（α、β、δ）、鎌状赤血球症、及び胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）の遺伝性の残存などの、貧血性疾患、障害又は状態の処置に使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与することを含む、被験者において貧血性疾患、障害又は状態を処置する方法で使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施態様では、本発明の処置方法はさらに、貧血性疾患、障害又は状態の処置のためなど、疾患又は障害の処置のために、被験者に第２の薬剤を投与することを含む。

いくつかの実施態様では、本発明の方法によって処置される貧血性疾患、障害又は状態は、鎌状赤血球症である。

いくつかの実施態様では、本発明の方法によって処置される貧血性疾患、障害又は状態は、β−サラセミアである。

いくつかの実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与の結果、１以上の標的組織においてＢＣＬ１１Ａの発現低下がもたらされる。いくつかの実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与の結果、１以上の標的組織においてγ−グロビン発現の増加がもたらされる。いくつかの実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与の結果、１以上の標的組織において胎児ヘモグロビン生成の増加がもたらされる。いくつかの実施態様では、１以上の標的組織は、骨髄、肝臓、腎臓、脾臓、血漿細胞、胸腺、扁桃上皮、赤血球系前駆細胞、多能性幹細胞、樹状細胞及び／又は末梢血Ｂ細胞から選択される。いくつかの実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、静脈内に投与される。いくつかの実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、皮下に投与される。

いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を含む容器を提供する。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、単一剤形にて提供される。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、複数（例えば、２、３、４、５以上）剤形にて提供される。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、凍結乾燥された形態にて提供される。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、液状形態にて提供される。

いくつかの実施態様では、容器は、アンプル、バイアル、カートリッジ、リザーバ、Ｌｙｏ−Ｊｅｃｔ（二重チャンバーシリンジ）、及びプレフィルドシリンジから選択される。いくつかの実施態様では、容器は、プレフィルドシリンジであり、焼結シリコーンコーティングのホウケイ酸ガラスシリンジ、シリコーン吹き付けしたホウケイ酸ガラスシリンジ、及びシリコーン不含のプラスチック樹脂シリンジから任意に選択される。

本出願における場合、「約」及び「およそ」の用語は、同等のものとして用いられる。本出願で用いられるいずれの数も、約／およその有無に関わらず、関連分野の当業者により理解される正常な変動の範囲全体に及ぶものとする。

本発明の他の特徴、目的、及び利点は、以下の詳細な説明に明らかである。しかしながら、詳細な説明は本発明の実施態様を示しているが、例示のみを目的とし、本発明を限定するものではないことは理解されるべきである。本発明の範囲内での種々の変更及び修正は、詳細な説明から当業者には明らかであろう。

図面は、例示のみを目的とし、本発明を限定するものではない。

正常個体（左）及びβグロビン鎖機能障害のある個体（右）における異なるグロビン鎖について、在胎及び生後週齢（ｘ軸）に対する総ヘモグロビンのパーセント（ｙ軸）の例を示す図である。図１６７−２、１６７章より改変、修正。Cecil Medicine 23rd ed., Lee W. Goldman, Dennis A. Ausiello, W.B. Saunders Elsevier 2008。 ヒトＢＣＬ１１Ａの３つの主要アイソフォーム（Ｓ、Ｌ、及びＸＬ）を示す概略図である（一定の縮尺ではない）。エクソンは、各アイソフォームで認められるとおり、５’から３’に表示している。 ２５μMの濃度の、ＢＣＬ１１Ａを標的とする４０１アンチセンスオリゴヌクレオチドによる、ヒトＲＥＨ細胞におけるＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。 ０．００６４〜２０μMの範囲のオリゴヌクレオチド濃度で、ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、ヒトＲＥＨ細胞におけるＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。 ０．００６４〜２０μMの範囲のオリゴヌクレオチド濃度で、ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、ヒトＲＥＨ細胞におけるＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。 ０．２５〜６０μMの範囲のオリゴヌクレオチド濃度で、ＢＣＬ１１Ａを標的とするオリゴ４（上）及び５（下）から設計された、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、ヒトＲＥＨ細胞におけるＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。 ０．２５〜６０μMの範囲のオリゴヌクレオチド濃度で、ＢＣＬ１１Ａを標的とするオリゴ４（上）及び５（下）から設計された、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、ヒトＲＥＨ細胞におけるＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。 ０．２５〜６０μMの範囲の濃度の、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、ヒトＲＥＨ細胞におけるＢＣＬ１１Ａ−ＸＬの主要アイソフォーム（Ｓ、Ｌ、及びＸＬ）ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。ＢＣＬ１１Ａ ＸＬ、L及びSアイソフォームのｍＲＮＡの測定値を、各々の処置群での各濃度につき左、中央及び右カラムにそれぞれ示す。 ０．０８〜２０μMの範囲の濃度の、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、マウスＭＰＣ−１１細胞におけるマウスＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。マウスＢＣＬ１１Ａの全アイソフォーム（ＢＣＬ１１Ａ−Ａｌｌ）及びアイソフォームＬ（ＢＣＬ１１Ａ−Ｌ）の測定値を、各々の処置群での各濃度につき左及び右カラムにそれぞれ示す。 ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチド１５mg／kgを服用させた雌性ＮＭＲＩマウスの群の骨髄（上）及び脾臓（下）におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現の例示的な阻害を示す図である。骨髄に対する測定には、各々のアンチセンスオリゴヌクレオチド処置群につき全アイソフォーム（左カラム）及びアイソフォームＬ（右カラム）が含まれる。 ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの２５又は１５mg／kgを投与後４週の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの例示的な阻害を示す図である。 ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチド２５又は１５mg／kgを投与後８週の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの例示的な阻害を示す図である。 ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチド１５mg／kgを投与後８週のヒトβ−ＹＡＣ遺伝子導入マウスの骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの例示的な阻害を示す図である。 ＢＣＬ１１Ａを標的とする選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチド１５mg／kgを投与後８週のヒトβ−ＹＡＣ遺伝子導入マウスのＴｅｒ１１９^＋及びＣＤ１９^＋骨髄細胞集団におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの例示的な阻害を示す図である。 瀉血（ｐｈｌｅｂ．）及び非瀉血処置群のヒト以外の霊長類動物の、種々の処置日での末梢血中の例示的な総ヘモグロビン（ｇ／Ｌ）を示す図である。媒質対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群が示されている。 瀉血（ｐｈｌｅｂ．）及び非瀉血処置群のヒト以外の霊長類動物の、種々の処置日での末梢血中の例示的な網状赤血球のパーセントを示す図である。媒質対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群が示されている。 媒質対照（生理食塩水）又は候補オリゴヌクレオチド４を２０mg／kg服用させた、ヒト以外の瀉血した霊長類動物の上腕骨骨髄における、研究の第７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したＢＣＬ１１Ａの例示的な発現を示す図である。アイソフォームＸＬ（左カラム）及び全アイソフォーム（右カラム）についての測定値を、各々の処置動物に関して示す。 媒質対照（生理食塩水）又は候補オリゴヌクレオチド４を２０mg／kg服用させた、ヒト以外の瀉血した霊長類動物の上腕骨骨髄における、研究の第７週での、ＧＡＰＤＨに正規化した例示的なγ−及びβ−グロビンｍＲＮＡの発現を示す図である。ヒトγ−グロビン（ガンマ Ａ＋Ｇ、第１カラム）、アカゲザルγ−グロビン（ＨＢＧ２、第２カラム）、アカゲザルβ−グロビン（ＨＢＢ、第３カラム；ＨＢＢ＿ｍＨ、第４カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。 対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群に対する、ヒト以外の瀉血した霊長類動物の上腕骨（上）及び大腿骨（下）骨髄における、研究の第１７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの例示的な発現を示す図である。アイソフォームＸＬ（左カラム）及び全アイソフォーム（右カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。 対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群に対する、ヒト以外の瀉血した霊長類動物の上腕骨（上）及び大腿骨（下）骨髄における、研究の第１７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したγ−グロビンｍＲＮＡの例示的な発現を示す図である。ヒトγ−グロビン（ガンマ Ａ＋Ｇ、左カラム）及びアカゲザルγ−グロビン（ＨＢＧ２、右カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。 ヒト以外の瀉血した霊長類動物の対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群の上腕骨骨髄における、第１７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したγ−及びβ−グロビンｍＲＮＡの例示的な発現を示す図である。カラムの左から右で、各々の処置群の各動物に関して、ヒトγ−グロビン（ガンマ Ａ＋Ｇ）、アカゲザルγ−グロビン（ＨＢＧ２）、アカゲザルβ−グロビン（ＲｈＨＢＢ）、及びアカゲザルβ−グロビン（ＲｈＨＢＢ＿ｍＨ）の測定値をそれぞれ示す。 ヒト以外の瀉血した霊長類動物の対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群の大腿骨骨髄における、第１７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したγ−及びβ−グロビンｍＲＮＡの例示的な発現を示す図である。カラムの左から右で、各々の処置群の各動物に関して、ヒトγ−グロビン（ガンマ Ａ＋Ｇ）、アカゲザルγ−グロビン（ＨＢＧ２）、アカゲザルβ−グロビン（ＲｈＨＢＢ）、及びアカゲザルβ−グロビン（ＲｈＨＢＢ＿ｍＨ）の測定値をそれぞれ示す。 対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群の、ヒト以外の瀉血した霊長類動物の上腕骨骨髄における、第１７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したＢＣＬ１１Ａ（上）及びγ−グロビン（下）ｍＲＮＡの例示的な平均発現を示す図である。ＢＣＬ１１ＡのアイソフォームＸＬ（左カラム）及び全アイソフォーム（右カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。ヒトγ−グロビン（ガンマ Ａ＋Ｇ、左カラム）及びアカゲザルγ−グロビン（ＨＢＧ２、右カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。 対照（生理食塩水）及び候補オリゴヌクレオチド４（１０及び２０mg／kg）処置群の、ヒト以外の瀉血した霊長類動物の大腿骨骨髄における、第１７週での、ＧＡＰＤＨに正規化したＢＣＬ１１Ａ（上）及びγ−グロビン（下）ｍＲＮＡの例示的な平均発現を示す図である。ＢＣＬ１１ＡのアイソフォームＸＬ（左カラム）及び全アイソフォーム（右カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。ヒトγ−グロビン（ガンマ Ａ＋Ｇ、左カラム）及びアカゲザルγ−グロビン（ＨＢＧ２、右カラム）の測定値を、各々の処置群の各動物に関して示す。 ヒト以外の瀉血した霊長類動物に関し、骨髄中のＦ細胞の例示的な画分（‰）を、フルスケール（左）及び拡大スケール（右）で示す図である。 ヒト以外の瀉血した霊長類動物に関し、骨髄中のＦ細胞の例示的な画分（‰）を、フルスケール（左）及び拡大スケール（右）で示す図である。 ヒト以外の瀉血した霊長類動物に関し、末梢血中のＦ細胞の例示的な画分（‰）を、フルスケール（左）及び拡大スケール（右）で示す図である。 ヒト以外の瀉血した霊長類動物に関し、末梢血中のＦ細胞の例示的な画分（‰）を、フルスケール（左）及び拡大スケール（右）で示す図である。 第１回服用後の様々な週で、対照（上）、１０mg／kg（中央）、及び２０mg／kg（下）処置群のヒト以外の霊長類動物の末梢血におけるγ−グロビンタンパク質の例示的な測定値を示す図である。 対照処置群のγ−グロビンピーク（「ピーク１」又は「ピーク２」）のそれぞれの時間点での対照に対するパーセントとして、ヒト以外の霊長類動物の末梢血におけるγ−グロビンタンパク質の例示的な測定値を示す図である。 １０mg／kg服用群のγ−グロビンピーク（「ピーク１」又は「ピーク２」）のそれぞれの時間点での対照に対するパーセントとして、ヒト以外の霊長類動物の末梢血におけるγ−グロビンタンパク質の測定例を示す図である。 ２０mg／kg服用群のγ−グロビンピーク（「ピーク１」又は「ピーク２」）のそれぞれの時間点での対照に対するパーセントとして、ヒト以外の霊長類動物の末梢血におけるγ−グロビンタンパク質の例示的な測定値を示す図である。 野生型マウスにおけるアンチセンスオリゴヌクレオチド４の経時的な血漿中濃度の例示的な測定値を示す図である。 野生型マウスからの、アンチセンスオリゴヌクレオチド４の種々の組織中の経時的な濃度の例示的な測定値を示す図である。 野生型マウスからの、アンチセンスオリゴヌクレオチド４の種々の組織中の経時的な組織濃度の例示的な測定値を示す図である。 単回投与での薬物動態の研究に基づく、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの骨髄中の予測濃度の例示的なモデルを示す図である。

定義
本発明がより容易に理解されるように、特定の用語を先ず、以下に定義する。以下の用語のさらなる定義、及び他の用語は、本明細書全体にわたって述べる。

「およそ」又は「約」：本明細書で使用する場合、「およそ」又は「約」の用語は１以上の対象となる数値に適用されると、記載した基準値に類似の数値のことを言う。特定の実施態様では、「およそ」又は「約」の用語は、特に断りない限り、あるいいは文脈から明白でない限り（以下のような数が可能な数値の１００％を超えるであろう場合を除いて）、記載した基準値の（上回る、又は下回る）いずれの方向でも、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下のうちに該当する数値の範囲を言う。

生物活性のある（biologically active）：本明細書で使用する場合、「生物活性のある」という語句は、生物系、インビトロ又はインビボ（例えば、生物体において）で活性を有するあらゆる薬剤の特性を言う。例えば、ある薬剤が生物体に投与された場合にその生物体に対して生物学的効果を有していれば、生物活性のあるものと考えられる。特定実施態様では、タンパク質又はポリペプチドに生物活性がある場合、そのタンパク質又はポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を共有するタンパク質又はポリペプチドの一部は、典型的に「生物活性のある」一部と呼ばれる。

改善、増加（増強）、低下又は阻害する：本明細書で使用する場合、「改善」「増加」「低下」若しくは「阻害」の用語、又は文法的に等価な用語は、本明細書に記載される処置開始前の同一個体における測定値などのベースライン測定値か、又は本明細書に記載される処置がなされていない一の対照個体（又は複数の対照個体）における測定値に対する数値を示す。「対照個体」は、処置を受ける個体と同じ型の疾患に苛まれており処置を受ける個体とほぼ同じ年齢の個体であり、処置される個体と、一または複数の対照個体における疾患のステージは同等であるようにする。

個体、被験者、患者：本明細書で使用する場合、「被験者」「個体」又は「患者」の用語は、ヒト又はヒト以外の哺乳類の被験者を言う。処置を受ける個体（「患者」又は「被験者」とも呼ばれる）は、疾患に罹患している個体（胎児、幼児、小児、青年、又は成人）である。

ロックド核酸（ＬＮＡ）：本明細書で使用する場合、「ＬＮＡ」又は「ロックド核酸」の用語は、二環式ヌクレオチド類似体、好ましくはリボース環の２’位と４’位との間に架橋を有する二環式ヌクレオチド類似体（２’−４’二環式ヌクレオチド類似体）を言う。文献では、ＬＮＡはＢＮＡ（架橋化核酸又は二環式核酸）と呼ばれることがある。ＬＮＡ単量体とも呼ばれ得るものであり、又は「ＬＮＡオリゴヌクレオチド」との関連で用いる場合は、１以上のこのような二環式ヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドを言う。

ヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「ヌクレオチド」の用語は、糖部分、塩基部分及び共有結合されたリン酸塩基を含むグリコシド（配糖体）を言い、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの天然に存在するヌクレオチド（好ましくはＤＮＡ）と、本明細書で「ヌクレオチド類似体」とも呼ばれる修飾された糖及び／又は塩基部分を含む天然に存在しないヌクレオチドとの両方を包含する。いくつかの実施態様では、天然に存在しないヌクレオチドには、二環式ヌクレオチド又は２’置換されたヌクレオチドなどの２’修飾ヌクレオチド等といった、修飾された糖部分を有するヌクレオチドが包含される。いくつかの実施態様では、天然に存在しないヌクレオチドはロックド核酸（ＬＮＡ）を包含する。

実質的な相同性：本明細書で使用される「実質的な相同性」の語句は、アミノ酸又は核酸の配列間の比較を参照するのに用いられる。当業者により理解されるであろうとおり、２つの配列は通常、対応する位置に相同の残基を含有していれば「実質的に相同」であると考えられる。相同の残基は、同一の残基であり得る。あるいは、相同の残基は、適切に類似した構造及び／又は機能的特性を備えた同一でない残基であり得る。例えば、当業者に周知のとおり、特定のアミノ酸は典型的には、「疎水性」若しくは「親水性」アミノ酸として、及び／又は「極性」若しくは「非極性」側鎖を有するものとして分類される。１つのアミノ酸を同じタイプの別のアミノ酸と置換することは、「相同の」置換と考え得ることが多い。

本技術分野で周知のとおり、アミノ酸又は核酸の配列は、ヌクレオチド配列にはＢＬＡＳＴＮ、そしてアミノ酸配列にはＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの、市販のコンピュータープログラムで入手可能なものを含めた様々なアルゴリズムのいずれを用いても比較され得る。例示的な係るプログラムは、Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; and Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999に記載されている。相同配列の同定に加えて、前記のプログラムで、典型的には、相同性の程度の同定がもたらされる。いくつかの実施態様では、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上が残基の関連ストレッチにわたって相同であれば、実質的に相同であると考えられる。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、完全な配列である。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７以上の残基である。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、完全な配列に沿って連続した残基を含んでいる。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、完全な配列に沿って非連続的な残基を含んでいる。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、以上の残基である。

実質的同一性：本明細書で使用される「実質的同一性」の語句は、アミノ酸又は核酸の配列間の比較を参照するのに用いられる。当業者により理解されるであろうとおり、２つの配列は通常、対応する位置に同一である残基を含有していれば「実質的に同一である」であると考えられる。本技術分野で周知のとおり、アミノ酸又は核酸の配列は、ヌクレオチド配列にはＢＬＡＳＴＮ、そしてアミノ酸配列にはＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの、市販のコンピュータープログラムで入手可能なものを含めた様々なアルゴリズムや、グローバルアラインメント用のＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｅｌ又はローカルアラインメント用のＥＭＢＯＳＳ ｗａｔｅｒのいずれを用いても比較され得る。例示的な係るプログラムは、Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; and Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999に記載されている。同一である配列の同定に加えて、前記のプログラムで、典型的には、同一性の程度の同定がもたらされる。いくつかの実施態様では、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上が残基の関連ストレッチにわたって同一であれば、実質的に同一であると考えられる。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、オリゴヌクレオチドの完全な配列である。いくつかの実施態様では、関連ストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、以上の残基である。

標的組織：本明細書で使用する場合、「標的組織」の用語は、とりわけ肝臓、脾臓及び骨髄においてヘモグロビンを構成するグロビン鎖又はタンパク質サブユニットにおける欠陥又は所望の活性低下により影響を受ける何れの組織をも言う。いくつかの実施態様では、標的組織には、例えばアルファ、ベータ又はガンマのグロビン鎖の発現に異常がある組織が含まれる。いくつかの実施態様では、標的組織には、疾患に関係する病理、症候、又は特徴を呈する組織が含まれる。本明細書で使用する場合、標的組織は、肝臓標的組織、脾臓標的組織及び／又は骨髄標的組織であり得る。例示的な標的組織を、以下に詳述する。

治療上有効量：本明細書で使用する場合、「治療上有効量」の用語とは、いずれの医療的処置にも適用可能である妥当な効果／リスク比で、処置される被験者に治療効果を与える治療薬の量を言う。治療効果は、客観的（すなわち、何らかの試験又はマーカーにより測定される）、又は主観的（すなわち、被験者が兆候を発するか、又は効果を感じる）であり得る。特に、「治療上有効量」とは、所望の疾患若しくは状態を処置、緩和、若しくは予防することに対し、又は疾患に関係する症候の改善によって、疾患の発症の防止若しくは遅延によって、及び／又は疾患の症候の重症度若しくは頻度の低減によってなどで、検出可能な治療若しくは予防効果を呈することに対し、有効な治療薬又は組成物の量を言う。治療上有効量は通例、単位用量を複数含み得る投薬計画にて投与される。特定の治療薬のいずれについても、治療上有効量（及び／又は有効な投薬計画での適切な単位用量）は、例えば投与経路に応じて、他の医薬品との組み合わせに応じて、変動し得るものである。また、特定の患者についても、具体的な治療上有効量（及び／又は単位用量）は、処置を受ける障害及び障害の重症度；採用される具体的な医薬品の活性；採用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性、及び食事；採用される具体的な医薬品の投与の時間、投与経路、及び／又は排泄若しくは代謝の速度；処置の継続期間；並びに医学分野にて周知であるような同様の因子を含む様々な因子に依存し得るものである。

処置：本明細書で使用する場合、「処置（treatment）」（「treat」又は「treating」とも記載）の用語とは、特定の疾患、障害、及び／又は状態（例えば、ヘモグロビン機能障害又は欠損、鎌状赤血球症、サラセミア）の１以上の症候又は特徴を、部分的に又は完全に軽減、寛解、緩和、阻害、発症遅延、重症度低下、及び／若しくは発生率を低下させる、治療薬（例えば、オリゴヌクレオチド）の何らかの投与を言う。このような処置は、関連疾患、障害及び／若しくは状態の徴候を呈しない被験者のもの、並びに／又は当該疾患、障害、及び／若しくは状態の初期徴候のみを呈する被験者のものでもあり得る。それらに代えて又はそれらに加えて、このような処置は関連疾患、障害及び／又は状態の確立された１以上の徴候を呈する被験者のものでもあり得る。本明細書に記載される関連疾患の例示的な徴候として、貧血が挙げられ、これは徴候が顕在している患者に応じ、中程度から重度にまでにわたり得る。

詳細な説明
本発明はとりわけ、Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫１１Ａ（ＢＣＬ１１Ａ）活性をモデュレーションするため、そしてＢＣＬ１１Ａに関係する疾患、障害又は状態を処置するための、改善された組成物及び方法を提供する。ＢＣＬ１１Ａ活性を低下させること、又は阻害することで、例えば、ガンマグロビンなどのグロビン遺伝子の発現が増加する結果をもたらすことが企図される。それゆえ、本発明は、鎌状赤血球症及びβ−サラセミアなどの異常ヘモグロビン症を処置するために特に有用である。特に、本発明は、ＢＣＬ１１Ａの発現をダウンレギュレーション又は減少させることによってＢＣＬ１１Ａ活性を低下させるか又は阻害する、ＢＣＬ１１Ａのアンチセンスオリゴヌクレオチドモデュレーターに基づいている。いくつかの実施態様では、ＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるオリゴヌクレオチドヒトは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォーム（例えば、ＸＬ、Ｌ、Ｍ、Ｓ又はＸＳ）の領域を標的とする。いくつかの実施態様では、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの連続配列の逆相補配列に基づく配列を有する。

本発明の種々の態様を、以下の段落に詳説する。段落の使用は、本発明を限定しようとするものではない。各段落は、本発明のいずれの態様にも適用することができる。本願において、「又は（若しくは）」の使用は、特に断りない限り「及び（並びに）／又は（若しくは）」を意味する。

ＢＣＬ１１Ａ並びに関連疾患及び状態
ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子は、マウスＢＣＬ１１Ａタンパク質に類似性を有するＣ_２Ｈ_２ジンクフィンガータンパク質をコード化する。ＢＣＬ１１Ａは、Ｂ細胞において機能するリンパ系転写因子であり、赤血球新生に役割を果たすことはつい最近まで知られていなかった。現在では、ＢＣＬ１１Ａはグロビン遺伝子調節に役割を果たすことが理解されており、その発現はグロビン遺伝子の発生過程での発現に関連しているように思われる。ＢＣＬ１１Ａは、骨髄中の成体赤血球系前駆体細胞で発現し、そして機ガンマグロビン遺伝子と逆相関的に機能する。すなわち、ＢＣＬ１１Ａは、ガンマグロビン生成のリプレッサーとして機能する。

ＢＣＬ１１Ａは、いくつかのアイソフォームにて表される。図２は、ＢＣＬ１１Ａの３つの主要アイソフォームを示すが、これらは２つの潜在的３’末端エクソンの使用において異なっている。ＢＣＬ１１Ａは、他のタンパク質と会合して、胎児から成体のヘモグロビン切替を調節する上で機能する複合体を形成することが知られている。ＢＣＬ１１Ａは、ヘモグロビン機能障害と関係する疾患に関与している。特に、ＢＣＬ１１Ａの阻害はガンマグロビン発現をアップレギュレーションし、その結果、胎児ヘモグロビンが生成して、これが鎌状赤血球症、β−サラセミアなどの異常ヘモグロビン症において見舞われるグロビン遺伝子機能障害を帳消しにすることが可能である。

ＢＣＬ１１Ａのモデュレーター
以下の実施例で議論するとおり、本発明者らは、ＢＣＬ１１Ａの１以上のアイソフォームを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドモデュレーターの同定に成功している。いくつかの実施態様では、本発明のモデュレーターは、図２に示す３つの主要アイソフォームに共通の領域を標的とする。具体的には、本発明者らは、ＢＣＬ１１Ａを非常に効率よくダウンレギュレーションするヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子のヌクレオチド４１０〜４５０由来のエクソン２の内部の特有の領域を同定している。マウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子において対応する領域（例えば、ＸＬ、Ｌ又はＳ）は、ヌクレオチド５１７〜５５７の範囲に分布している。図３は、エクソン１、２、３及び４の全体からして、この領域は、ＢＣＬ１１Ａの発現を減少させることができる一本鎖のオリゴヌクレオチドの設計という点から見ると、ホットスポットであることを明確に示している。このようなホットスポットの知識は、効力が良好で、且つ処置されるべき被験者によって十分に容認されるオリゴヌクレオチドの設計が成功する可能性を増加させる。

アンチセンスオリゴヌクレオチドの設計
とりわけ、本発明は、ヒトＢＣＬ１１Ａをコード化している核酸分子のモデュレーションに有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。特に、本発明に好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＢＣＬ１１Ａ発現又は活性をダウンレギュレーションすること又は減少させることができる、低下させること又は阻害することができる、いずれのオリゴヌクレオチドも含むものである。

典型的には、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォーム（例えば、ＸＬ、Ｌ又はＳ）の配列に基づいて設計され得る。例えば、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの連続配列の逆相補配列と実質的に同一である配列を有し得る。いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの連続配列の逆相補配列と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一である配列を有する。ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子とマウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子とは、高い配列同一性を共有しているので、本発明のオリゴヌクレオチドは、マウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの配列に基づいても設計され得る。いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、マウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの連続配列の逆相補配列と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一である配列を有する。

あるいは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現をダウンレギュレーション又は減少させることができるオリゴヌクレオチドは、ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの１以上のアイソフォームの標的領域にハイブリダイゼーション又は結合することができる。いくつかの実施態様では、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現を減少させることができるオリゴヌクレオチドは、エクソン（例えば、エクソン１、エクソン２、エクソン３、エクソン４、又はエクソン５）内に見出されるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの標的領域にハイブリダイゼーション又は結合することができる。いくつかの実施態様では、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子の発現を減少させることができるオリゴヌクレオチドは、ヒト又はマウスＢＣＬ１１Ａの標的領域にハイブリダイゼーション又は結合することができる。

ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの標的領域へのアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、インビトロ又はインビボで実施され得るということは理解されるであろう。ハイブリダイゼーションは、当該技術分野で周知のとおりに、低度、中度、及び／又はストリンジェントのハイブリダイゼーション条件下で実施され得る。一般に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件とは、その下でオリゴヌクレオチドを含む核酸分子が、相補性核酸配列を有する分子を同定するのに用いられる標準的なハイブリダイゼーション条件を言う。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は典型的には、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上の核酸配列の同一性がある核酸分子間の結合を許容する。標準条件は、例えば、Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labs Pressに開示され、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。ヌクレオチドの５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％以下のミスマッチを許容するハイブリダイゼーションを成し遂げるのに適切なハイブリダイゼーション及び洗浄条件を算出するための式を、当該技術分野で入手することができ、その例として、Meinkoth et al., 1984, Anal. Biochem. 138, 267-284（その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる）が挙げられる。オリゴヌクレオチド（１４〜２０ｂｐ）と固定化されたＤＮＡとの間のハイブリッドでは、安定性の低減が示され、それらのハイブリダイゼーションのための最適条件を規定する際には配慮すべきであるということは理解されるであろう。

ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーは、緩衝液のイオン強度、ヌクレオチドの塩基組成、二重鎖のうち最も短い鎖の長さ（ｎ）、及びホルムアミドなどのヘリックス不安定化剤の濃度により影響される可能性がある。例えば、ハイブリダイゼーションストリンジェンシーは、塩及び／若しくはホルムアミド濃度を調整することによって、並びに／又は温度を変えることによって変更できる。ストリンジェンシーは、ハイブリダイゼーション工程の途中、又はハイブリダイゼーション後の洗浄のいずれかで調整することができる。サザン又はノザンブロットのフィルター上で１００を超える相補性残基を有する相補性核酸のハイブリダイゼーションのためのストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例としては、１mgのヘパリンを含む５０％ホルムアミドにて４２℃でハイブリダイゼーションを一晩実施することが挙げられる。ストリンジェントな洗浄条件の一例は、０．２Ｘ ＳＳＣにて６５℃で１５分間の洗浄である。いくつかの実施態様では、高ストリンジェンシー洗浄の前に、低ストリンジェンシー洗浄を行なってバックグラウンドのプローブシグナルを除去する。例えば、１００ヌクレオチドを超える二重鎖に対する中度のストリンジェンシーの洗浄の例は、１００Ｘ ＳＳＣにて４５℃で１５分間である。例えば、１００ヌクレオチドを超える二重鎖に対する低度のストリンジェンシーの洗浄の例は、４Ｘ ＳＳＣにて４０℃で１５分間である。一般に、特定のハイブリダイゼーションアッセイにおいて、関連のないプローブについて観察されたものよりも２Ｘの（またはそれよりも高い）ノイズに対するシグナルの比は、特異的なハイブリダイゼーションの検出を示唆する。

ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームの配列
先に記載したように、図２は、３つの主要なヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォーム、すなわち、アイソフォームＸＬ、Ｌ及びＳを示す。同様に、３つの主要なマウスＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォーム、すなわち、アイソフォームＸＬ、Ｌ及びＳがある。マウス及びヒトの両方に関し、他のＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームが同定されている。例えば、ヒトにおいて、選択的スプライスバリアントに基づくいくつかのアイソフォームが、Ensembl genebuild assemblies（European Bioinformatics Institute and Wellcome Trust Sanger Institute）に述べられており、それらは以下の転写物（transcript）識別番号により識別されている：ENST00000358510、ENST00000538214、ENST00000537768、ENST00000477659、ENST00000489516、ENST00000409351、ENST00000479026、ENST00000492272、ENST00000489183。ＢＣＬ１１Ａの例示的なヒト及びマウスアイソフォームの配列を、エクソンの表示と共に配列表に示す。

配列番号１＝ヒトＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_022893
配列番号２＝ヒトＢＣＬ１１Ａ−Ｌ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_018014
配列番号３＝ヒトＢＣＬ１１Ａ−Ｓ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_138559
配列番号４＝マウスＢＣＬ１１Ａ−ＸＬ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_001242934
配列番号５＝マウスＢＣＬ１１Ａ−Ｌ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_016707
配列番号６＝マウスＢＣＬ１１Ａ−Ｓ Ｌ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_001159289
配列番号７＝マウスＢＣＬ１１Ａ−ＸＳ ＮＣＢＩアクセッション番号 NM_001159290

いくつかの実施態様では、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１〜７に示されるヒト又はマウスＢＣＬ１１Ａの１以上のアイソフォーム内の領域に結合する。いくつかの実施態様では、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１〜７に示されるヒト又はマウスＢＣＬ１１Ａアイソフォームのエクソン内の領域に結合する。いくつかの実施態様では、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａ、マウスＢＣＬ１１Ａ、又はこれらの組み合わせのアイソフォームのエクソン内の領域に結合する。いくつかの実施態様では、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａのヌクレオチド１〜２８３、２８４〜６１３、又は６１４〜７１５内の領域に結合する。好ましくは、配列番号１のヌクレオチド１〜２８３、２８４〜６１３、又は６１４〜７１５である。いくつかの実施態様では、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａのヌクレオチド２５０〜５００、２５９〜４３８、２８４〜６１３、４１５〜４４５、４１５〜４３６、７１６〜５９４６、７１６〜２４５８、２４５９〜３９５８、又はヌクレオチド８５９〜２３５８内の領域に結合する。種々の実施態様では、ヒトＢＣＬ１１Ａは、配列番号１〜３に示されるアイソフォームＸＬ、Ｌ又はＳから選択される。種々の実施態様では、マウスＢＣＬ１１Ａは、配列番号４〜７に示されるアイソフォームＸＬ、Ｌ又はＳから選択される。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒト若しくはマウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子、又はヒト若しくはマウスＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの連続配列の逆相補配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である配列を有する。いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ヒト若しくはマウスＢＣＬ１１Ａ遺伝子、又はヒト若しくはマウスＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームの連続配列の逆相補配列と同一である配列を有する。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子のヌクレオチド１〜２８３（エクソン１）、ヌクレオチド２８４〜６１３（エクソン２）、又はヌクレオチド６１４〜７１５（エクソン３）から選択される領域内にある。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＸＬ（配列番号１）のヌクレオチド内にある。いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＸＬ（配列番号１）のヌクレオチド２００〜６２０、４１０〜４５０、４１５〜４３６、４１５〜４４６、４２０〜４５０内、又はヌクレオチド７１６〜５９４６（エクソン４）内にある。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＬ（配列番号２）のヌクレオチド内にある。いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＬのヌクレオチド７１６〜２４５８（エクソン４）又はヌクレオチド２４５９〜３９５８（エクソン５）内にある。

いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＳ（配列番号３）のヌクレオチド内にある。いくつかの実施態様では、本発明の連続配列は、ヒトＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡアイソフォームＳのヌクレオチド７１６〜８５８（エクソン４）又はヌクレオチド８５９〜２３５８（エクソン５）内にある。

いくつかの実施態様では、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１〜７に示されるヒト又はマウスＢＣＬ１１Ａの対応する領域に実質的に同一の標的領域に結合する。例えば、提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１〜７に示されるヒト又はマウスＢＣＬ１１Ａの対応する領域（例えば、エクソン１、２、３、４、又は５）のものと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一である配列を有する標的領域に結合し得る。例示的な領域が、明細書全体にわたって記載される。

オリゴヌクレオチド
本発明に関して、「オリゴヌクレオチド」の用語は、２つ以上のヌクレオチドの共有結合によって形成される分子を言う。この用語は、オリゴマーの用語とほとんど同義で使用される。本明細書で、単一ヌクレオチド（単位）は、単量体又は単位とも呼ばれ得る。いくつかの実施態様では、「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」、「単位」及び「単量体」の用語は、ほとんど同義で使用される。ヌクレオチド又は単量体の配列を言う場合、参照されるのはＡ、Ｔ、Ｇ、Ｃ又はＵなどの塩基の配列であることが認識されよう。

本発明のオリゴヌクレオチドは、ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームのヌクレオチド４１０〜４５０から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と少なくとも８０％同一である配列を含む、ヒトＢＣＬ１１Ａの発現を減少させることができる。

いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、表１に示される群より選択される配列モチーフを含むか、又は当該配列モチーフからなる。本質的に配列モチーフは、本質的には同じ配列を含むか又は含有するが、例えばヌクレオチド類似体の数、長さ又はヌクレオチド間結合が違うオリゴヌクレオチドを生成する基礎として使用することができるヌクレオチド配列である。

いくつかの実施態様では、オリゴヌクレオチド配列モチーフは、TCCGTTTGTGCTCGATAAA（配列番号７５）ではなく、又はTTTGTGCTCGATAAAAATA（配列番号７６）ではなく、又はATTGTTTCCGTTTGTGCTC（配列番号７７）ではない。

好ましい実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ギャップマーを含むか、又はギャップマーである。

いくつかの実施態様では、オリゴヌクレオチドは１９ヌクレオチド未満の長さ、好ましくは１８未満、より好ましくは１７ヌクレオチド未満の長さである。

いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、親和性強化ヌクレオチド類似体を含む。

いくつかの実施態様では、ヌクレオチド類似体は、２’−Ｏ−アルキル−ＲＮＡ単位、２’−ＯＭｅ−ＲＮＡ単位、２’−Ｏ−アルキル−ＤＮＡ、２’−アミノ−ＤＮＡ単位、２’−フルオロ−ＤＮＡ単位、ＬＮＡ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位、２’−フルオロ−ＡＮＡ単位、ＨＮＡ単位、ＩＮＡ単位及び２’ＭＯＥ単位からなる群より、独立して又は独立せずに選択される、糖修飾ヌクレオチドなどの、糖修飾ヌクレオチドである。

いくつかの実施態様では、ヌクレオチド類似体は、ロックド核酸（ＬＮＡ）単位を含むか、又はロックド核酸（ＬＮＡ）単位からなる。

好ましい実施態様では、オリゴマーは、一本鎖の分子である。いくつかの実施態様では、オリゴヌクレオチドは、例えば、少なくとも３、４又は５の連続したヌクレオチドの短い領域であって、同じオリゴヌクレオチド内の同等領域に相補的な領域（すなわち、二重鎖又はヘアピン）を含まない。オリゴヌクレオチドは、いくつかの実施態様では、（本質的に）二本鎖であり得ない。いくつかの実施態様でのオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡではないなど、本質的に二本鎖ではない。

例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチド
例示的な本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、表２に列挙する。

種々の実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表２から選択されるアンチセンスオリゴヌクレオチド配列に現れる１２以上（例えば、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８）の連続したヌクレオチドと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）同一である配列を有するものであるオリゴヌクレオチドを含む。

種々の実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表２から選択されるアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）同一である配列を有するものであるオリゴヌクレオチドを含む。

長さ
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、適切ないずれかの長さにもされ得ることが理解されよう。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、合計１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０の連続したヌクレオチドの長さの連続したヌクレオチド配列を含むか又はそれからなり得る。いくつかの実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、合計１０〜１８、１０〜１７、１０〜１６、１０〜１５、１０〜１４、１０〜１３、１０〜１２、１１〜１７、１１〜１６、１１〜１５、１１〜１４、１１〜１３、１２〜１７、１２〜１６、１２〜１５、又は１２〜１４ヌクレオチドの長さの連続したヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１０〜１６又は１２〜１６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０以下のヌクレオチドなど、１９以下のヌクレオチドなど、１５、１６、１７又は１８ヌクレオチドなどといった、２２ヌクレオチド以下からなる。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０ヌクレオチド未満を含む。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８ヌクレオチド未満の長さである。理論に縛られることを望むものではないが、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、又は連続したヌクレオチド配列長に範囲を設ける場合、その範囲の上限と下限の長さを含み、例えば１０から３０（又は１０と３０の間）では、１０及び３０の両方が含まれるということを理解されたい。

本明細書で同定されるヌクレオチド配列に関する「核酸配列同一性パーセント（％）」（ Percent (%) nucleic acid sequence identity）は、参照配列のヌクレオチドと同一である候補配列のヌクレオチドの百分率であり、それらの配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最高の配列同一性パーセントを得た後の百分率として定義される。配列同一性百分率は、整列された核酸の２つの配列の間で同一である数を数え、オリゴマー中の単量体の総数で割り、そして１００を乗じることによって算出され得る。このような比較においてギャップが存在すれば、かかるギャップは、例えば本発明のオリゴヌクレオチドと標的領域との間などの整列された配列間でいくつかの核酸が異なるギャップ内の領域であるよりもむしろ、単なるミスマッチであることが好ましい。核酸配列同一性パーセントを求めることを目的としたアラインメントは、当該分野の技術に含まれる種々の方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアや、グローバルアラインメントにはＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｅｌ、又はローカルアラインメントにはＥＭＢＯＳＳ ｗａｔｅｒなどの、一般に入手できるコンピューターソフトウェアを用いて成し遂げることができる。当業者であれば、比較すべき配列の全長にわたる最高のアラインメントを成し遂げるために必要とされる何らかのアルゴリズムを含め、アラインメント測定のための適切なパラメータを決定することができる。好ましくは、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２ソフトウェアを使用してアミノ酸配列同一性を求める（Altschul et al., Methods in Enzymology, 266, 460-480 (1996);http://blast.wustl/edu/blast/README.html）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、いくつかの検索パラメータを用いるが、そのほとんどがデフォルト値に設定されている。調整可能なパラメータは、以下の数値に設定される：オーバーラップスパン（overlap span）＝１、オーバーラップフラクション（overlap fraction）＝０．１２５、ワールド閾値（world threshold）（Ｔ）＝１１。ＨＳＰスコア（Ｓ）及びＨＳＰ Ｓ２パラメータは動的数値であり、特定の配列の組成に応じて、プログラム自体により確立されるが、最低値は調整され得、上で示したように設定される。

ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体
いくつかの実施態様では、「ヌクレオシド類似体」及び「ヌクレオチド類似体」の用語は、ほとんど同義で使用される。

本明細書で使用する場合、「ヌクレオチド」の用語は、糖部分、塩基部分及び共有結合された基（結合基、リン酸塩又はホスホロチオエートヌクレオチド間結合基など）を含むグリコシドを言い、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの天然に存在するヌクレオチドと、本明細書で「ヌクレオチド類似体」とも呼ばれる修飾された糖及び／又は塩基部分を含む天然に存在しないヌクレオチドとの両方を包含する。本明細書で、単一のヌクレオチド（単位）は、単量体又は核酸単位とも呼ばれることがある。

生化学の分野では、「ヌクレオシド」の用語は通例、糖部分及び塩基部分を含むグリコシドを言うのに用いられ、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの間のヌクレオチド間結合によって共有結合される、ヌクレオチド単位を言う場合に用いられ得る。バイオテクノロジーの分野では、「ヌクレオチド」の用語は、核酸単量体又は単位を呼ぶのに用いられることが多く、それ自体は、オリゴヌクレオチドとの関連で塩基を言うものであり（「ヌクレオチド配列」など）、典型的にはヌクレオ塩基配列（すなわち、糖骨格及びヌクレオシド間結合の存在が暗示される）を言う。同様に、特に１以上のヌクレオシド間結合基が修飾されたオリゴヌクレオチドの場合は、「ヌクレオチド」の用語は、「ヌクレオシド」を言うことがあり、ヌクレオシドの間の結合の存在又は性質を明記する際であっても、例えば「ヌクレオチド」の用語が使用され得る。

当業者が認識するように、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドは、５’ヌクレオチド間結合基を含まないが、５’末端基を含むことも含まないこともある。

天然に存在しないヌクレオチドとしては、二環式ヌクレオチド、又は、２’置換されたヌクレオチドなどの２’修飾ヌクレオチド等、修飾された糖部分を有するヌクレオチドが挙げられる。

「ヌクレオチド類似体」は、糖及び／又は塩基部分における修飾による、ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオチドなどの天然のヌクレオチドの変異体である。類似体は、原則として単に「サイレント」であるか、又は当該オリゴヌクレオチドとの関連で天然のヌクレオチドと「等価」であってよく、すなわち、オリゴヌクレオチドが標的遺伝子発現を阻害すべく作用する上で機能的な効果をおよぼさない。このような「等価」の類似体はそれでも、例えば、製造がより容易であるか若しくは費用効率が高いか、又は貯蔵若しくは製造条件に対してより安定であるか、又は、タグ若しくはラベルを表すものであれば有用であり得る。しかしながら、好ましくは、類似体は、例えば、標的への結合親和性の増強、及び／又は細胞内ヌクレアーゼに対する耐性の増強、及び／又は細胞内への輸送容易性の促進をもたらすことによって、前記オリゴヌクレオチドが発現を阻害すべく作用する上で機能的な効果を有するであろう。ヌクレオシド類似体の具体例は、例えばFreier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 and Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213に、スキーム１に、並びに「ロックド核酸（ＬＮＡ）」の項目に記載されている。

オリゴヌクレオチドはこのように、天然に存在するヌクレオチドの単純な配列、好ましくは、２’−デオキシヌクレオチド（本明細書で通常、「ＤＮＡ」と呼ぶ）、あるいはさらにはリボヌクレオチド（本明細書で通常、「ＲＮＡ」と呼ぶ）、又はこのような天然に存在するヌクレオチドと１以上の天然に存在しないヌクレオチドとの組み合わせ、すなわちヌクレオチド類似体を含み得るか、又はこれからなり得る。このようなヌクレオチド類似体は、標的配列に対するオリゴマーの親和性を適切に増強し得る。適切で好ましいヌクレオチド類似体の例は、国際公開第２００７／０３１０９１号パンフレットに提供され、又は本明細書に参照される。

ＬＮＡ又は２’−置換糖などの、親和性を増強するヌクレオチド類似体のオリゴマーへの取り込みによって、特異的に結合するオリゴマーのサイズを低下させることができ、またその上限を、非特異的な又は異常な結合が起こる前のオリゴヌクレオチドのサイズに低下もさせ得る。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオシド類似体を含む。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも２つのヌクレオチド類似体を含む。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、３〜８のヌクレオチド類似体、例えば６又は７のヌクレオチド類似体を含む。いくつかの実施態様では、前記ヌクレオチド類似体のうちの少なくとも１つはロックド核酸（ＬＮＡ）であり、例えば、ヌクレオチド類似体の少なくとも３つ、又は少なくとも４つ、又は少なくとも５つ、又は少なくとも６つ、又は少なくとも７つ、又は８つが、ＬＮＡであり得る。いくつかの実施態様では、すべてのヌクレオチド類似体がＬＮＡであり得る。

当業者であれば本開示を読んで、好ましいヌクレオチド配列モチーフ又はヌクレオチドのみからなるヌクレオチド配列を参照すると、その配列によって規定される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、前記配列に存在するヌクレオチドの１以上に代えて、ＬＮＡ単位又は他のヌクレオチド類似体などであって、オリゴマー／標的二重鎖の二重鎖安定性／Ｔ_ｍを高めるもの（すなわち親和性強化ヌクレオチド類似体）である、対応するヌクレオチド類似体を含み得ることを認識するであろう。

いくつかの実施態様では、オリゴマーのヌクレオチド配列と標的配列との間の何らかのミスマッチが見出されるのは、親和性強化ヌクレオチド類似体以外の領域内、例えば「ギャップマー設計」の項目で参照されるような領域Ｂ若しくはＹ、及び／又は「ギャップマー設計」の項目で参照されるような領域Ｄ、及び／又はオリゴヌクレオチド内のＤＮＡヌクレオチドなどの修飾されていない部位で、及び／又は連続したヌクレオチド配列に対して５’若しくは３’である領域内などであることが好ましい。

ヌクレオチドのこのような修飾の例として、２’−置換基を与えるか、又は二環式構造を生成して、結合親和性を増強し、且つヌクレアーゼ耐性の増加ももたらし得る、糖部分の修飾が挙げられる。

好ましいヌクレオチド類似体は、オキシ−ＬＮＡ（ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ、及びアルファ−Ｌ−オキシ−ＬＮＡなど）、及び／又はアミノ−ＬＮＡ（ベータ−Ｄ−アミノ−ＬＮＡ及びアルファ−Ｌ−アミノ−ＬＮＡなど）及び／又はチオ−ＬＮＡ（ベータ−Ｄ−チオ−ＬＮＡ及びアルファ−Ｌ−チオ−ＬＮＡなど）及び／又はＥＮＡ（ベータ−Ｄ−ＥＮＡ及びアルファ−Ｌ−ＥＮＡなど）などのＬＮＡである。最も好ましいのは、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡである。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド内（「ギャップマー設計」の項目で述べた領域Ａ及びＣ内など）に存在するヌクレオチド類似体は独立して、例えば、２’−Ｏ−アルキル−ＲＮＡ単位、２’−ＯＭｅ−ＲＮＡ単位、２’−Ｏ−アルキル−ＤＮＡ、２’−アミノ−ＤＮＡ単位、２’−フルオロ−ＤＮＡ単位、ＬＮＡ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位、２’−フルオロ−ＡＮＡ単位、ＨＮＡ単位、ＩＮＡ（インターカレーティング核酸（intercalating nucleic acid）Christensen, 2002. Nucl. Acids. Res. 2002 30: 4918-4925、参照により本明細書に組み入れられる）単位及び２’ＭＯＥ単位から選択される。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに存在するのは前記の型のヌクレオチド類似体のうち１つのみか、又はその連続したヌクレオチド配列である。

いくつかの実施態様では、ヌクレオチド類似体は、２’−Ｏ−メトキシエチル−ＲＮＡ（２’ＭＯＥ）、２’−フルオロ−ＤＮＡ単量体又はＬＮＡヌクレオチド類似体であり、それ自体、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、これらの３つの型の類似体から独立して選択されるヌクレオチド類似体を含み得るか、又はこれら３つの型から選択される１つの型の類似体のみを含み得る。いくつかの実施態様では、前記ヌクレオチド類似体のうちの少なくとも１つは、２’−ＭＯＥ−ＲＮＡであり、例えば２、３、４、５、６、７、８、９又は１０などの２’−ＭＯＥ−ＲＮＡヌクレオチド単位である。いくつかの実施態様では、前記ヌクレオチド類似体のうちの少なくとも１つは、２’−フルオロＤＮＡであり、例えば２、３、４、５、６、７、８、９又は１０などの２’−フルオロ−ＤＮＡヌクレオチド単位である。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）単位を含み、例えば１、２、３、４、５、６、７、若しくは８つなどのＬＮＡ単位を含むか、例えば３〜７若しくは４〜８つなどのＬＮＡ単位を含むか、又は３、４、５、６若しくは７のＬＮＡ単位を含む。いくつかの実施態様では、すべてのヌクレオチド類似体がＬＮＡである。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ、と以下のＬＮＡ単位：チオ−ＬＮＡ、アミノ−ＬＮＡ、オキシ−ＬＮＡ、５’−メチル−ＬＮＡ及び／若しくはＥＮＡ（ベータ−Ｄ又はアルファ−Ｌ配置のいずれか）又はこれらの組み合わせ、の１以上との両方を含み得る。いくつかの実施態様では、すべてのＬＮＡシトシン単位が５’−メチル−シトシンである。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド類似体（好ましくはＬＮＡ）及びＤＮＡ単位の両方を含み得る。好ましくは、ヌクレオチド類似体（好ましくはＬＮＡ）とＤＮＡ単位との組み合わせの合計は、１０〜２５で、例えば１０〜２４などであり、好ましくは１０〜２０で、例えば１０〜１８などであり、さらにより好ましくは１２〜１６である。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列で、前記連続したヌクレオチド配列などは、少なくとも１つのヌクレオチド類似体（好ましくはＬＮＡ）からなり、残余のヌクレオチド単位はＤＮＡ単位である。いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチド類似体及び天然に存在するヌクレオチド（ＲＮＡ又はＤＮＡ、最も好ましくはＤＮＡヌクレオチドなど）のみを含み、ホスホロチオエートなどの修飾されたヌクレオチド間結合を任意に有する。

「ヌクレオ塩基」の用語は、ヌクレオチドの塩基部分を言い、天然に存在するもの、天然に存在しない変異体の両方を包含する。よって、「ヌクレオ塩基」は、既知のプリン及びピリミジン複素環のみならず複素環式類似体及び互変異性体も包含する。

ヌクレオ塩基の例として、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、ヒポキサンチン、５−メチルシトシン、イソシトシン、シュードイソシトシン（pseudoisocytosine）、５−ブロモウラシル、５−プロピニルウラシル、６−アミノプリン、２−アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、及び２−クロロ−６−アミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施態様では、オリゴマーに存在するヌクレオ塩基のうちの少なくとも１つは、５−メチルシトシン、イソシトシン、シュードイソシトシン、５−ブロモウラシル、５−プロピニルウラシル、６−アミノプリン、２−アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、及び２−クロロ−６−アミノプリンからなる群より選択される、修飾されたヌクレオ塩基である。

ロックド核酸（ＬＮＡ）
「ＬＮＡ」の用語は、二環式ヌクレオシド類似体を言い、「ロックド核酸」として知られている。ＬＮＡ単量体とも呼ばれ得るものであり、又は「ＬＮＡオリゴヌクレオチド」との関連で用いる場合、ＬＮＡは１以上のこのような二環式ヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドを言う。ＬＮＡヌクレオチドは、リボース糖環のＣ２’とＣ４’との間のリンカー基（架橋など、例えば、後述するようなビラジカルＲ^４＊−Ｒ^２＊として示すもの）の存在によって特徴付けられる。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドで用いられるＬＮＡは、好ましくは一般式Ｉの構造を有する。

式中、すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得るものであり、
式中、Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ＊）−、−Ｃ（Ｒ^６Ｒ^６＊）−から選択され、いくつかの実施態様では−Ｏ−などであり、
Ｂは、水素、任意に置換されたＣ_１−４−アルコキシ、任意に置換されたＣ_１−４−アルキル、任意に置換されたＣ_１−４−アシルオキシ、天然に存在するものとヌクレオ塩基類似体を含むヌクレオ塩基、ＤＮＡインターカレーター、光化学的に活性な基、熱化学的に活性な基、キレート性基、レポーター基、及びリガンドから選択され、好ましくは、Ｂはヌクレオ塩基又はヌクレオ塩基類似体であり、
Ｐは、隣接した単量体とのヌクレオチド間結合、又は５’末端基を示し、かかるヌクレオチド間結合又は５’末端基は任意に、置換基Ｒ^５を含むか、又は置換基Ｒ^５＊も同様であり、
Ｐ^＊は、隣接した単量体とのヌクレオチド間結合、又は３’末端基を示し、
Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−、−Ｃ（Ｒ^ａ）＝Ｃ（Ｒ^ｂ）−、−Ｃ（Ｒ^ａ）＝Ｎ−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒ^ａ）_２−、−Ｓ−、−ＳＯ_２−、−Ｎ（Ｒ^ａ）−、及び＞Ｃ＝Ｚから選択される１〜４の基／原子からなる二価のリンカー基を示し、Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−Ｎ（Ｒ^ａ）−から選択され、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは各々独立して、水素、任意に置換されたＣ_１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルケニル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルキニル、ヒドロキシ、任意に置換されたＣ_１−１２−アルコキシ、Ｃ_２−１２−アルコキシアルキル、Ｃ_２−１２−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシルカルボニル、Ｃ_１−１２−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ_１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ_１−６−アルカノイルオキシ、スルフォノ、Ｃ_１−６−アルキルスルフォニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ_１−６−アルキルチオ、ハロゲン、ＤＮＡインターカレーター、光化学的に活性な基、熱化学的に活性な基、キレート性基、レポーター基、並びにリガンドから選択され、アリール及びヘテロアリールは任意に置換され得るものであり、２つのジェミナル置換基Ｒ^ａ及びＲ^ｂは共に、任意に置換されたメチレン（＝ＣＨ_２）を示し得るものであり、すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得るものであり、
存在する置換基Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊、Ｒ^６及びＲ^６＊の各々は、独立して水素、任意に置換されたＣ_１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルケニル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルキニル、ヒドロキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシ、Ｃ_２−１２−アルコキシアルキル、Ｃ_２−１２−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシルカルボニル、Ｃ_１−１２−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ_１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ_１−６−アルカノイルオキシ、スルフォノ、Ｃ_１−６−アルキルスルフォニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ_１−６−アルキルチオ、ハロゲン、ＤＮＡインターカレーター、光化学的に活性な基、熱化学的に活性な基、キレート性基、レポーター基、及びリガンドから選択され、アリール及びヘテロアリールは任意に置換され得るものであり、２つのジェミナル置換基は共に、オキソ、チオキソ、イミノ、又は任意に置換されたメチレンを示し得るものであり、；Ｒ^Ｎは、水素及びＣ_１−４−アルキルから選択され、２つの隣接した（非ジェミナル）置換基は、二重結合をもたらすさらなる結合を示し得るものであり、Ｒ^Ｎ＊は、存在してビラジカルに含まれない場合は、水素及びＣ_１−４−アルキルから選択され、ならびに塩基性塩及びその酸付加塩であり、すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−ＮＲ^ａ−、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｓ−、及びＣ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−（式中、各々のＲ^ａ及びＲ^ｂは独立して任意に選択され得る）からなる群より選択される基からなるビラジカルを示す。いくつかの実施態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、独立して水素及びＣ_１−６アルキルからなる群より任意に選択される得るものであり、メチルなど、水素などであり得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ_２ＯＣＨ_３）−を示し（２’Ｏ−メトキシエチル二環式核酸、Seth at al., 2010, J. Org. Chem）、Ｒ−又はＳ−配置のいずれかである。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）−を示し（２’Ｏ−エチル二環式核酸、Seth at al., 2010, J. Org. Chem）、Ｒ−又はＳ−配置のいずれかである。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ_３）−を示し、Ｒ−又はＳ−配置のいずれかである。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−を示す（Seth at al., 2010, J. Org. Chem）。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−Ｏ−ＮＲ−ＣＨ_３−を示す（Seth at al., 2010, J. Org. Chem）。

いくつかの実施態様では、ＬＮＡ単位は、以下の群から選択される構造を有する。

いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択される。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は水素である。

いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択される。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３は水素である。

いくつかの実施態様では、Ｒ^５及びＲ^５＊は各々独立して、Ｈ、−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_３、及び−ＣＨ＝ＣＨ_２からなる群より選択される。好適には、いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかが水素であって、その他の基（Ｒ^５又はＲ^５＊それぞれ）は、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、置換されたＣ_１−６アルキル、置換されたＣ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルキニル又は置換されたアシル（−Ｃ（＝Ｏ）−）からなる群より選択され、各々の置換された基は、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、置換されたＣ_２−６アルキニル、ＯＪ_１、ＳＪ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ_３、ＣＯＯＪ_１、ＣＮ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ、Ｊ_２又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｘ）Ｎ（Ｈ）Ｊ_２から独立して選択される置換基でモノ又はポリ置換されており、ＸはＯ又はＳであり、各々のＪ_１及びＪ_２は独立して、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アミノアルキル、置換されたＣ_１−６アミノアルキル又は保護基である。いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかは、置換されたＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかは、置換されたメチレンであり、好ましい置換基として、Ｆ、ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ_３、ＣＮ、ＯＪ_１、ＳＪ_１、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ、Ｊ_２又はＮ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｊ_２から独立して選択される１以上の基が挙げられる。いくつかの実施態様では、各々のＪ_１及びＪ_２は独立して、Ｈ又はＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかは、メチル、エチル又はメトキシメチルである。いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかはメチルである。さらなる実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかは、エチレニルである。いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかは、置換されたアシルである。いくつかの実施態様では、Ｒ^５又はＲ^５＊のいずれかは、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２である。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。かかる５’修飾された二環式ヌクレオチドは、国際公開第２００７／１３４１８１号パンフレットに開示されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。

いくつかの実施態様では、Ｂはヌクレオ塩基であり、これにはヌクレオ塩基類似体及び天然に存在するヌクレオ塩基が含まれ、プリン若しくはピリミジン、又は置換されたプリン若しくは置換されたピリミジンなどであり、本明細書で言及するヌクレオ塩基など、例えばアデニン、シトシン、チミン、アデニン、ウラシルからなる群より選択されるヌクレオ塩基、並びに／又は５−チアゾロ−ウラシル、２−チオ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２’チオ−チミン、５−メチルシトシン、５−チオゾロ−シトシン、５−プロピニル−シトシン、及び２、６−ジアミノプリンなどの修飾若しくは置換されたヌクレオ塩基が挙げられる。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｃ（Ｒ^ｅＲ^ｆ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｃ（Ｒ^ｅＲ^ｆ）−、−Ｃ（Ｒ^ａ）＝Ｃ（Ｒ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｎ（Ｒ^ｃ）−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｎ（Ｒ^ｅ）−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｎ（Ｒ^ｃ）−Ｏ−、及び−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｓ−から選択されるビラジカルを示し、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃ、Ｒ^ｄ、Ｒ^ｅ、及びＲ^ｆは各々独立して、水素、任意に置換されたＣ_１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルケニル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルキニル、ヒドロキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシ、Ｃ_２−１２−アルコキシアルキル、Ｃ_２−１２−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシルカルボニル、Ｃ_１−１２−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ_１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ_１−６−アルカノイルオキシ、スルフォノ、Ｃ_１−６−アルキルスルフォニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ_１−６−アルキルチオ、ハロゲン、ＤＮＡインターカレーター、光化学的に活性な基、熱化学的に活性な基、キレート性基、レポーター基、及びリガンドから選択され、アリール及びヘテロアリールは任意に置換され得るものであり、２つのジェミナル置換基Ｒ^ａ及びＲ^ｂは共に、任意に置換されたメチレン（＝ＣＨ_２）を示し得るものである。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｓ−、−ＣＨ_２−ＮＨ−、−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｓ−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−ＮＨ−Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−、及び−ＣＨ（ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_３）−Ｏ−、及び／又は、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、並びに−ＣＨ＝ＣＨ−から選択されるビラジカル（二価の基）を示し、すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｎ（Ｒ^ｃ）−Ｏ−を示し、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択され、水素などであり、Ｒ^ｃは、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択され、水素などである。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ^ｃＲ^ｄ）−Ｏ−を示し、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃ、及びＲ^ｄは独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択され、水素などである。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は、ビラジカル、−ＣＨ（Ｚ）−Ｏ−を形成し、Ｚは、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、置換されたＣ_１−６アルキル、置換されたＣ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルキニル、アシル、置換されたアシル、置換されたアミド、チオール又は置換されたチオからなる群より選択され、置換された基の各々は独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、ＳＪ_１、Ｎ_３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ_１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ_１Ｊ_２、ＮＪ^３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ_１Ｊ_２及びＣＮから独立して選択される任意に保護された置換基でモノ又はポリ置換されており、各々のＪ_１、Ｊ_２及びＪ_３は独立して、Ｈ又はＣ_１−６アルキルであり、ＸはＯ、Ｓ又はＮＪ_１である。いくつかの実施態様ではＺは、Ｃ_１−６アルキル又は置換されたＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施態様ではＺは、メチルである。いくつかの実施態様ではＺは、置換されたＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施態様では前記置換基は、Ｃ_１−６アルコキシである。いくつかの実施態様では、Ｚは、ＣＨ_３ＯＣＨ_２−である。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。このような二環式ヌクレオチドは、米国特許第７，３９９、８４５号に開示されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は、水素である。またいくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３＊は、水素であり、Ｒ^５、Ｒ^５＊の片方又は両方は、前記及び国際公開第２００７／１３４１８１号パンフレットで言及されるように水素以外であり得る。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ^ｃ）−からなるか該ビラジカルを含むなど、置換されたアミノ基を架橋中に含むビラジカルを示し、Ｒ^ｃは、Ｃ_１〜１２アルキルオキシである。いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル、−Ｃｑ_３ｑ_４−ＮＯＲ−を示し、ｑ_３及びｑ_４は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル若しくは置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択され、各々の置換された基は独立して、ハロゲン、ＯＪ_１、ＳＪ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、ＣＯＯＪ_１、ＣＮ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ_１Ｊ_２又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｘ＝Ｎ（Ｈ）Ｊ_２から独立して選択される置換基でモノ又はポリ置換されており、ＸはＯ又はＳであり、Ｊ_１及びＪ_２の各々は独立して、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は保護基である。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。このような二環式ヌクレオチドは、国際公開第２００８／１５０７２９号パンフレットに開示され、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択される。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は、水素である。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３は、水素であり、Ｒ^５、Ｒ^５＊の片方又は両方は、前記及び国際公開第２００７／１３４１８１号パンフレットで言及されるように水素以外であり得る。いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は共に、ビラジカル（二価の基）、Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）−Ｏ−を示し、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、各々独立して、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、置換されたＣ_１−Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、置換されたＣ_２−Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、置換されたＣ_２−Ｃ_１２アルキニル、Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシ、置換されたＣ_１−Ｃ_１２アルコキシ、ＯＪ_１ＳＪ_１、ＳＯＪ_１、ＳＯ_２Ｊ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ_３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ_１、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｃ（＝Ｏ）Ｊ_１、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２若しくはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ_１Ｊ_２であり、又はＲ^ａ及びＲ^ｂは共に、＝Ｃ（ｑ３）（ｑ４）であり、ｑ_３及びｑ_４は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル又は置換されたＣ_１−Ｃ_１２アルキルであり、各々の置換された基は独立して、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニル、ＯＪ_１、ＳＪ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ_３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ_１、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｃ（＝Ｏ）Ｊ_１、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ_１Ｊ_２から独立して選択される置換基でモノ又はポリ置換されており、各々のＪ_１及びＪ_２は独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ_６アルキル、置換されたＣ１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ１−Ｃ_６アミノアルキル、置換されたＣ１−Ｃ_６アミノアルキル又は保護基である。このような化合物は、国際公開第２００９／００６４７８Ａ号パンフレットに開示され、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。

いくつかの実施態様では、Ｒ^４＊及びＲ^２＊は、ビラジカル、−Ｑ−を形成し、Ｑは、Ｃ（ｑ_１）（ｑ_２）Ｃ（ｑ_３）（ｑ_４）、Ｃ（ｑ_１）＝Ｃ（ｑ_３）、Ｃ［＝Ｃ（ｑ_１）（ｑ_２）］−Ｃ（ｑ_３）（ｑ_４）又はＣ（ｑ_１）（ｑ_２）−Ｃ［＝Ｃ（ｑ_３）（ｑ_４）］であり、ｑ_１、ｑ_２、ｑ_３、ｑ_４は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１−１２アルキル、置換されたＣ_１−１２アルキル、Ｃ_２−１２アルケニル、置換されたＣ_１−１２アルコキシ、ＯＪ_１、ＳＪ_１、ＳＯＪ_１、ＳＯ_２Ｊ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ_３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ_１、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＪ_１Ｊ_２、Ｃ（＝Ｏ）Ｊ_１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ_１Ｊ_２、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_１Ｊ_２又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ_１Ｊ_２であり、各々のＪ_１及びＪ_２は独立して、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は保護基であり、また任意に、ＱがＣ（ｑ_１）（ｑ_２）（ｑ_３）（ｑ_４）でありｑ_３又はｑ_４のうちの１つがＣＨ_３である場合、その他のｑ_３若しくはｑ_４のうちの少なくとも１つ、又はｑ_１及びｑ_２のうちの１つはＨ以外である。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は水素である。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得る。このような二環式ヌクレオチドは、国際公開第２００８／１５４４０１号パンフレットに開示され、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、置換されたＣ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル又は置換されたＣ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシル、置換されたＣ_１−６アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ_１−６アミノアルキル又は置換されたＣ_１−６アミノアルキルからなる群より選択される。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^５＊は、水素である。いくつかの実施態様では、Ｒ^１＊、Ｒ^２、Ｒ^３は水素であり、Ｒ^５、Ｒ^５＊の片方又は両方は、前記及び国際公開第２００７／１３４１８１号パンフレット又は国際公開第２００９／０６７６４７号パンフレットで言及されるように水素以外であり得る（アルファ−Ｌ−二環式核酸類似体）。

さらに、二環式ヌクレオシド類似体及びアンチセンスオリゴヌクレオチドにおけるそれらの使用は、国際公開第２０１１／１１５８１８号パンフレット、国際公開第２０１１／０８５１０２号パンフレット、国際公開第２０１１／０１７５２１号パンフレット、国際公開第０９１００３２０、国際公開第２０１０／０３６６９８号パンフレット、国際公開第２００９／１２４２９５号パンフレット及び国際公開第２００９／００６４７８号パンフレットに開示される。このようなヌクレオシド類似体は、いくつかの態様では、本発明の化合物において有用であり得る。

いくつかの実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドで使用されるＬＮＡは、好ましくは一般式ＩＩの構造を有する。

式中、Ｙは、−Ｏ−、−ＣＨ_２Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、Ｎ（Ｒ^ｅ）及び／又は−ＣＨ_２−からなる群より選択され、Ｚ及びＺ＊は、ヌクレオチド間結合、Ｒ^Ｈ、末端基又は保護基のうちから独立して選択され、Ｂは、天然の又は非天然のヌクレオチド塩基部分（ヌクレオ塩基）を構成し、Ｒ^Ｈは、水素及びＣ_１−４−アルキルから選択され、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃ、Ｒ^ｄ及びＲ^ｅは独立して、水素、任意に置換されたＣ_１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルケニル、任意に置換されたＣ_２−１２−アルキニル、ヒドロキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシ、Ｃ_２−１２−アルコキシアルキル、Ｃ_２−１２−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ_１−１２−アルコキシルカルボニル、Ｃ_１−１２−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、モノ−及びジ（Ｃ_１−６−アルキル）アミノ−Ｃ_１−６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ_１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ_１−６−アルカノイルオキシ、スルフォノ、Ｃ_１−６−アルキルスルフォニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ_１−６−アルキルチオ、ハロゲン、ＤＮＡインターカレーター、光化学的に活性な基、熱化学的に活性な基、キレート性基、レポーター基、及びリガンドからなる群より任意に選択され、アリール及びヘテロアリールは任意に置換され得るものであり、２つのジェミナル置換基Ｒ^ａ及びＲ^ｂは共に、任意に置換されたメチレン（＝ＣＨ_２）を示し得るものであり、Ｒ^Ｈは、水素及びＣ_１−４−アルキルから選択される。いくつかの実施態様ではＲ^ａ、Ｒ^ｂＲ^ｃ、Ｒ^ｄ及びＲ^ｅは任意に独立して、水素及びメチルなどのＣ_１−６アルキルからなる群より選択される。すべてのキラル中心につき、不斉基はＲ又はＳ配向のいずれかで認められ得るものであり、例えば、２つの例示的な立体化学的異性体としてベータ−Ｄ及びアルファ−Ｌアイソフォームが挙げられ、これらは以下のように例示され得る。

具体的で例示的なＬＮＡ単位を、以下に示す。

「チオ−ＬＮＡ」の用語は、前記一般式のＹが、Ｓ又は−ＣＨ_２−Ｓ−から選択されるロックドヌクレオチドを含む。チオ−ＬＮＡは、ベータ−Ｄ及びアルファ−Ｌ−配置の両方であることができる。

「アミノ−ＬＮＡ」の用語は、前記一般式のＹが、−Ｎ（Ｈ）−、Ｎ（Ｒ）−、ＣＨ_２−Ｎ（Ｈ）−、及び−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−から選択され、Ｒは、水素及びＣ_１−４−アルキルから選択される、ロックドヌクレオチドを含む。アミノ−ＬＮＡは、ベータ−Ｄ及びアルファ−Ｌ−配置の両方であることができる。

「オキシ−ＬＮＡ」の用語は、前記一般式のＹが、−Ｏ−を表すロックドヌクレオチドを含む。オキシ−ＬＮＡは、ベータ−Ｄ及びアルファ−Ｌ−配置の両方であることができる。

「ＥＮＡ」の用語は、前記一般式のＹが、−ＣＨ_２−Ｏ−であり（−ＣＨ_２−Ｏ−の酸素原子は、塩基Ｂに対して２’−位に付く）、Ｒ^ｅが、水素又はメチルであり、ロックドヌクレオチドを含む。

いくつかの例示的な実施態様では、ＬＮＡは、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ、アルファ−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ、ベータ−Ｄ−アミノ−ＬＮＡ及びベータ−Ｄ−チオ−ＬＮＡから選択され、特にベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡである。

ギャップマー設計
本発明のオリゴヌクレオチドは、好ましくはギャップマーである。ギャップマーオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅ ＨなどのＲＮａｓｅをリクルートすることができるヌクレオチドの連続したストレッチを含むオリゴヌクレオチドであり、この連続したストレッチとして、少なくとも６又は７つのＤＮＡヌクレオチドの領域が挙げられ、本明細書では領域Ｂ又は領域Ｙ_ｂと呼ぶ。ＲＮａｓｅ Ｈリクルート領域の長さは、整数_ｂによって示されることができ、５から１５の間である。領域Ｂ又はＹは、親和性強化ヌクレオチド類似体の領域により５’及び３’の両方に隣接されるものであって、ＲＮａｓｅをリクルートすることができるヌクレオチドの連続したストレッチに対して５’及び３’の、１〜６の間のヌクレオチド類似体などである。これらの領域は、それぞれ領域Ａ又はＸ及びＣ又はＸ_ａ’と呼ばれる。ヌクレオチド類似体の数は、_ａ又は_ａ’により示されることができ、１〜６の間、好ましくは１、２、３、４又は５である。

ＥＰ １２２２３０９は、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を定量するためのインビトロの方法であって、ＲＮａｓｅ Ｈをリクルートする能力を定量するのに使用され得る方法を提供する。オリゴマーは、相補性ＲＮＡ標的が与えられた場合、同じ塩基配列を有するがＤＮＡ単量体のみを含み、２’置換がなく、オリゴヌクレオチド中のすべての単量体の間にホスホロチオエート結合基があるというＤＮＡのみのオリゴヌクレオチドを用いて定量した初速度の、少なくとも１％、少なくとも５％など、少なくとも１０％など、又は２０％を上回る初速度（ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定）を有していれば、ＥＰ １２２２３０９の実施例９１〜９５に提供された方法論を用い、ＲＮａｓｅ Ｈをリクルートすることができる、と判断される。

いくつかの実施態様では、オリゴマーは、相補性ＲＮＡ標的及びＲＮａｓｅ Ｈが与えられた場合に、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定したＲＮａｓｅ Ｈ初速度は、２’置換がなく、オリゴヌクレオチド中のすべてのヌクレオチドの間にホスホロチオエート結合基があるという等価ＤＮＡのみのオリゴヌクレオチドを用いて定量した初速度の、１％未満、５％未満など、１０％未満など、又は２０％未満などであれば、ＥＰ １２２２３０９の実施例９１〜９５に提供された方法論を用い、ＲＮａｓｅ Ｈを本質的にリクルートすることができない、と判断される。

他の実施態様では、オリゴマーは、相補性ＲＮＡ標的及びＲＮａｓｅ Ｈが与えられた場合に、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定したＲＮａｓｅ Ｈ初速度は、２’置換がなく、オリゴヌクレオチド中のすべてのヌクレオチドの間にホスホロチオエート結合基があるという等価ＤＮＡのみのオリゴヌクレオチドを用いて定量した初速度の、少なくとも２０％、少なくとも４０％など、少なくとも６０％など、少なくと８０％などであれば、ＥＰ １２２２３０９（参照により本明細書に組み入れられる）の実施例９１〜９５に提供された方法論を用い、ＲＮａｓｅ Ｈをリクルートすることができる、と判断される。

いくつかの実施態様では、ＲＮａｓｅをリクルートすることができる単量体は、ＤＮＡ単量体、アルファ−Ｌ−ＬＮＡ単量体、Ｃ４’アルキル化ＤＮＡ単量体（国際公開第２００９／０９０１８２号パンフレット及びVester et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 2296 - 2300（参照により本明細書に組み入れられる）参照のこと）、及びＵＮＡ（非連鎖（unlinked）核酸）ヌクレオチド（Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039（参照により本明細書に組み入れられる）参照）からなる群より選択される。ＵＮＡは、アンロックド（unlocked）核酸であり、典型的には、リボースのＣ２−Ｃ３のＣ−Ｃ結合が除去されており、ロックされていない（unlocked）「糖」残基を形成している。

いくつかの実施態様では、ギャップマーは、式（５’−３’）、Ａ−Ｂ−Ｃ若しくはＸ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’、又は任意にＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ若しくはＤ−Ａ−Ｂ−Ｃ若しくはＸ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’−Ｄ若しくはＤ−Ｘ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’の（ポリ）ヌクレオチド配列を含み、ここで領域Ａ又はＸ_ａ（５’領域）は、少なくとも１のロックド核酸（ＬＮＡ）単位など、１〜６のヌクレオチド類似体など、ＬＮＡ単位などといった、少なくとも１つのヌクレオチド類似体からなるか又はこれを含み、領域Ｂ又はＹは、ＤＮＡヌクレオチドなどの、ＲＮａｓｅをリクルートすることができる少なくとも５つの連続した（consecutive）ヌクレオチド（ｍＲＮＡ標的などの相補性ＲＮＡ分子との二重鎖が形成される場合）からなるか又はこれを含み、領域Ｃ又はＸ_ａ’（３’領域）は、少なくとも１のＬＮＡ単位など、１〜６のヌクレオチド類似体など、ＬＮＡ単位などといった、少なくとも１つのヌクレオチド類似体からなるか又はこれを含み、領域Ｄは、存在する場合、ＤＮＡヌクレオチドなどの、１、２又は３のヌクレオチド単位からなるか又はこれを含む。

いくつかの実施態様では、領域Ａ又はＸ_ａは、ＬＮＡ単位など、２〜５のヌクレオチド類似体など、２〜５のＬＮＡ単位など、３又は４のヌクレオチド類似体など、３又は４のＬＮＡ単位などといった、１、２、３、４、５又は６のヌクレオチド類似体、を含むか又はこれからなり、且つ／あるいは、領域Ｃ又はＸ_ａ’は、ＬＮＡ単位など、２〜５のヌクレオチド類似体など、２〜５のＬＮＡ単位など、３又は４のヌクレオチド類似体など、３又は４のＬＮＡ単位などといった、１、２、３、４、５又は６のヌクレオチド類似体を含むか又はこれからなる。

いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、ＲＮａｓｅをリクルートすることができる、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２の連続したヌクレオチド、又はＲＮａｓｅをリクルートすることができる、５〜１５、若しくは６〜１０、若しくは７〜９、８などの、連続したヌクレオチドを含むか（includes）又はこれからなるか又はこれを含む（comprise）。いくつかの実施態様では、領域Ｂ又はＹは、１〜１２のＤＮＡ単位などの、少なくとも１つのＤＮＡヌクレオチド単位、好ましくは４〜１２のＤＮＡ単位、より好ましくは７〜１０のＤＮＡ単位などの、６〜１０のＤＮＡ単位、最も好ましくは８、９又は１０のＤＮＡ単位からなるか又はこれを含む。

いくつかの実施態様では、領域Ａ又はＸ_ａは、「ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体」の項目に記載されたものなど、３又は４のヌクレオチド類似体を含むか又はこれからなり、好ましくは当該類似体はＬＮＡである。領域Ｂは、７、８、９又は１０のＤＮＡ単位を含むか又はこれからなり、領域Ｃ又はＸ_ａ’は、「ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体」の項目に記載されたものなど、３又は４のヌクレオチド類似体を含むか又はこれからなり、好ましくは当該類似体はＬＮＡである。このような設計として、例えば、（Ａ−Ｂ−Ｃ又はＸ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’）２−１１−３、２−１０−２、２−８−４、２−９−３、２−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、３−９−３、３−９−４、４−９−３、３−８−３、３−８−４、４−８−３、３−７−３、３−７−４、４−７−３が挙げられ、さらに、ＤＮＡ単位など、１又は２のヌクレオチド単位を有し得る領域Ｄを含み得る。ギャップマー設計の例は、国際公開第２００４／０４６１６０号パンフレットに示されており、参照により本明細書に組み入れられる。いくつかの実施態様では、本発明のギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドは、米国仮特許出願第６０／９７７，４０９号に記載されるようなショートマー（shortmer）ギャップマーであり得、これらは参照により本明細書に組み入れられる。

いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドは、合計１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８のヌクレオチド単位の連続したヌクレオチド配列を含み、この連続したヌクレオチド配列は、式（５’−３’）、Ａ−Ｂ−Ｃ若しくはＸ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’のものであり、又は任意にＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ又はＤ−Ａ−Ｂ−Ｃ若しくはＸ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’−Ｄ若しくはＤ−Ｘ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’のものであって、Ａ又はＸ_ａ’は、ＬＮＡ単位などの、１、２、３又は４のヌクレオチド類似体単位からなり、Ｂ又はＹは、相補性ＲＮＡ分子（ｍＲＮＡ標的など）との二重鎖が形成される場合、ＲＮａｓｅをリクルートすることができる、７、８、９、１０又は１１の連続したヌクレオチド単位からなり、Ｃ又はＸ_ａ’は、ＬＮＡ単位など、１、２、３又は４のヌクレオチド類似体単位からなる。存在する場合、Ｄは単一のＤＮＡ単位からなる。

いくつかの実施態様では、Ａ又はＸ_ａは、１のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ａ又はＸ_ａは、２のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ａ又はＸ_ａは、３のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ａ又はＸ_ａは、４のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｃ又はＸ_ａ’は、１のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｃ又はＸ_ａ’は、２のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｃ又はＸ_ａ’は、３のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｃ又はＸ_ａ’は、４のＬＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、７のヌクレオチド単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、８のヌクレオチド単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、９のヌクレオチド単位からなる。特定の実施態様では、領域Ｂは、１０のヌクレオシド単量体からなる。特定の実施態様では、領域Ｂ又はＹは、１〜１０のＤＮＡ単量体を含む。いくつかの実施態様では、Ｂは、１０のヌクレオチド単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、１１のヌクレオチド単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１１のＤＮＡ単位などを含む１〜１１のＤＮＡ単位を含む。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、ＤＮＡ単位からなる。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、アルファ−Ｌ−配置の、２、３、４、５、６、７、８又は９のＬＮＡ単位などといった、アルファ−Ｌ配置の、少なくとも１つのＬＮＡ単位、を含む。いくつかの実施態様では、Ｂ又はＹは、少なくとも１つのアルファ−Ｌ−オキシＬＮＡ単位を含み、又はアルファ−Ｌ−配置のすべてのＬＮＡ単位が、アルファ−Ｌ−オキシＬＮＡ単位である。いくつかの実施態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ又はＸ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’に存在するヌクレオチドの数は、１−８−１、１−８−２、２−８−１、２−８−２、３−８−３、２−８−３、３−８−２、４−８−１、４−８−２、１−８−４、２−８−４、又は１−９−１、１−９−２、２−９−１、２−９−２、２−９−３、３−９−２、１−９−３、３−９−１、４−９−１、１−９−４、又は１−１０−１、１−１０−２、２−１０−１、２−１０−２、１−１０−３、３−１０−１、又は１−１１−１、１−１１−２、２−１１−１、２−１１−２、２−１１−３、３−１１−２、４−１１−１、１−１１−４（ヌクレオチド類似体単位−領域Ｂ又はＹ−ヌクレオチド類似体単位）からなる群より選択される。いくつかの実施態様では、Ａ−Ｂ−Ｃにおけるヌクレオチドの数は、３−８−３、３−１０−３、３−９−３、２−８−３、２−１１−３、３−９−４、４−９−３、４−８−４、３−８−５、５−８−３、２−１０−３、３−１０−２、４−９−２、２−９−４、４−８−３、３−８−４、２−１０−２、２−９−３、３−９−２、４−８−２、２−８−４及び４−７−４からなる群より選択される。特定の実施態様では、領域Ａ及びＣ又はＸ_ａ及びＸ_ａ’の各々は、３のＬＮＡ単量体からなり、領域Ｂ又はＹは、８又は９又は１０のヌクレオシド単量体、好ましくはＤＮＡ単量体からなる。いくつかの実施態様では、Ａ及びＣの両方は各々、２、３又は４のＬＮＡ単位からなり、Ｂは、８、９、１０又は１１のヌクレオチド単位、好ましくはＤＮＡ単位からなる。

種々の実施態様では、他のギャップマー設計として、領域Ａ及び／又はＣ又はＸ_ａ及び／又はＸ_ａ’が、２’−Ｏ−メトキシエチル−リボース糖（２’−ＭＯＥ）を含む単量体若しくは２’−フルオロ−デオキシリボース糖を含む単量体など、３、４、５又は６のヌクレオシド類似体からなり、領域ＢはＤＮＡ単量体など、８、９、１０、１１又は１２ヌクレオシドからなり、領域Ａ−Ｂ−Ｃは３−９−３、３−１０−３、５−１０−５又は４−１２−４単量体を有するものが挙げられる。さらなるギャップマー設計は、国際公開第２００７／１４６５１１号パンフレットに開示され、参照により本明細書に組み入れられる。

ヌクレオチド間結合
本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの単量体は、結合基を介して互いに連結される。好適には、各単量体は、結合基を介して３’の隣接した単量体に連結される。

本開示を読んで、当業者であれば本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの端部の５’単量体は、５’結合基を含まないが、５’末端基を含んでも含まなくてもよいことを理解するであろう。

「結合基」又は「ヌクレオチド間結合」の用語は、２つのヌクレオチドが互いに共有結合することができる群（group）を意味することとする。具体的且つ好ましい例として、リン酸塩基及びホスホロチオエート基が挙げられる。本アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続したヌクレオチド配列は、結合基を介して互いに連結される。好適には、各ヌクレオチドは、結合基を介して３’の隣接したヌクレオチドに連結される。例示的なヌクレオチド間結合には、国際公開第２００７／０３１０９１号パンフレットに記載のものが含まれ、参照により本明細書に組み入れられる。

いくつかの実施態様では、ヌクレオチド間結合は、その正常ホスホジエステルから、ホスホロチオエート又はボラノホスフェート（これらの２つは、ＲＮａｓｅ Ｈにより切断可能）など、ヌクレアーゼによる攻撃に対する耐性がより強いものに修飾され得るものであり、また、標的遺伝子の発現を低下させるのに、アンチセンス阻害の経路を許容する。

本明細書に提示される、好適な硫黄（Ｓ）含有ヌクレオチド間結合は、好ましいものであり得る。ホスホロチオエートヌクレオチド間結合も好ましく、特にギャップマーのギャップ領域（Ｂ又はＹ）に対して好ましい。ホスホロチオエート結合はまた、隣接領域に対しても使用され得る（適宜、Ａ／Ｘ_ａ及びＣ／Ｘ_ａ’、並びにＡ／Ｘ_ａ又はＣ／Ｘ_ａ’をＤに連結するため、及び領域Ｄ内）。

しかしながら、領域Ａ又はＸ_ａ、Ｂ又はＹ及びＣ又はＸ_ａ’は、特に、例えば、領域Ａ又はＸ_ａ及びＣ又はＸ_ａ’がＬＮＡヌクレオチド含む場合など、ヌクレオチド類似体の使用によって、領域Ａ又はＸ_ａ及びＣ又はＸ_ａ内のヌクレオチド間結合がエンドヌクレアーゼ分解から保護される場合に、ホスホジエステル結合など、ホスホロチオエート以外のヌクレオチド間結合を含み得るものである。

標的とされるＲＮＡをＲＮａｓｅ Ｈで切断させるべく、本発明のオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート又はボラノホスフェートとされ得る。ヌクレアーゼ耐性を向上させ、さらに製造を容易にするなど他の理由により、ホスホロチオエートが好ましい。いくつかの実施態様では、本発明のオリゴヌクレオチドのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド類似体は、ホスホロチオエート基によって互いに連結されている。本発明の好ましい実施態様ではオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む。

ホスホジエステル結合（１又は２つの結合など）を、別のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドに、特にヌクレオチド類似体単位の間又はそれらに隣接して（典型的には領域Ａ又はＸ_ａ及び／若しくはＣ又はＸ_ａ’内）含ませることで、国際公開第２００８／０５３３１４号パンフレット（参照により本明細書に組み入れられる）に記載されるように、オリゴヌクレオチドのバイオアベイラビリティー及び／又は成体分布を改変できることが認められる。

いくつかの実施態様では、前記のような実施態様などで、好適且つ具体的に示されない場合、残余の結合基はすべて、ホスホジエステル又はホスホロチオエートのいずれか、又はそれらが混在している。

いくつかの実施態様では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間結合基は、ホスホロチオエートである。本明細書に提示されるものなど、具体的なギャップマーオリゴヌクレオチド配列を参照すると、種々の実施態様では、前記結合がホスホロチオエート結合である場合、本明細書に開示されるものなど、代替結合が使用され得ること、例えばリン酸塩（ホスホジエステル）結合は、特にＬＮＡ単位などのヌクレオチド類似体間の結合に対して使用され得ることが理解されよう。同様に、本明細書に提示されるものなど、具体的なギャップマーオリゴヌクレオチド配列を参照すると、Ｃヌクレオチド残基が、５’メチル修飾されたシトシンとして注釈される場合、種々の実施態様では、オリゴヌクレオチドに存在するＣヌクレオチドの１以上は、修飾されないＣ残基であり得る。

医薬組成物
本発明は、本発明に係る治療活性物（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）、と一緒に１以上の薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物をさらに提供する。このような医薬組成物は、１以上のさらなる、治療上有効な物質を任意に含み得る。

本明細書に提示される医薬組成物の説明は主に、ヒトへの倫理的な投与に好適な医薬組成物に関するものであるが、当業者であれば、このような組成物があらゆる種類の動物への投与に概して好適であることは理解されよう。組成物を種々の動物への投与に好適なものとするために、ヒトへの投与に好適な医薬組成物を改変することは、十分に理解されており、もし必要ならば、通常の知識を有する獣医薬理学者（veterinary pharmacologist）は、このような改変を単に通常の実験法で設計及び／又は実施することができる。

本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の当該技術分野で既知又は今後開発されるいずれかの方法によって調製され得る。一般に、このような調製方法は、有効成分を希釈剤若しくは別の賦形剤及び／又は１以上の他の副成分と合わせ、次いで、必要及び／又は所望であれば、その産物を所望の単回又は複数用量単位に成形及び／又は包装する工程を含む。

本発明に係る医薬組成物は、調製され、包装され、並びに／又は、ばら（バルク）で、単回単位用量として、及び／若しくは複数の単回単位用量として販売され得る。本明細書で使用する場合、「単位用量」とは所定の量の有効成分含む、個別量の医薬組成物のことである。有効成分の量は概して、被験者に投与されることになる有効成分の服用量、及び／又は例えば、このような服用量の２分の１若しくは３分の１など、かかる服用量の好都合な画分に等しい。

本発明に係る医薬組成物における、有効成分の相対的な量、薬学的に許容し得る 賦形剤、及び／又はいずれかの付加的成分は、処置される被験者のアイデンティティ、大きさ、及び／又は状態に応じて、またさらに、組成物が投与されることになる経路応じて変化するであろう。例として、組成物は、０．１％〜１００％（重量／重量）の有効成分を含み得る。

医薬製剤は付加的に、薬学的に許容し得る賦形剤を含み得るものであり、本明細書で使用する場合賦形剤としては、所望の特定剤形に適合するような、あらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、又は他の液体媒質、分散若しくは懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、濃厚化若しくは乳化剤、防腐剤、固形結合剤、滑沢剤などが挙げられる。Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21^st Edition, A. R. Gennaro (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006（参照により本明細書に組み入れられる））は、医薬組成物の製剤化、及びその調製のための公知の技法において使用される種々の賦形剤を開示する。従来の賦形剤媒体のいずれかが、望ましくない何らかの生物学的効果を生じさせたり、あるいは医薬組成物の１種若しくは複数種の、他のいずれかの成分と有害に相互作用を惹き起こすなどにより、物質又はその誘導体と不適合である場合のみを除いては、その使用は本発明の範囲に含まれることが考えられる。

いくつかの実施態様では、薬学的に許容し得る賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の純度である。いくつかの実施態様では、ヒトにおける使用のため、及び獣医学での使用のために認められる。いくつかの実施態様では、賦形剤は、米国食品医薬品局（United States Food and Drug Administration）により認可されたものである。いくつかの実施態様では、賦形剤は医薬品等級のものである。いくつかの実施態様では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／又は国際薬局方の規格に適合する。

医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容し得る賦形剤としては、不活性な希釈剤、分散及び／若しくは造粒剤、表面活性剤及び／若しくは乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、平滑剤、並びに／又は油が挙げられるが、これらに限定されない。このような賦形剤は、医薬製剤に任意に含まれ得る。カカオバター及び坐剤ロウ（suppository wax）などの賦形剤、着色剤、コーティング剤、甘味料、香料、及び／又は付香剤を、調剤者の判断に従い組成物中に存在させることができる。

医薬品の製剤化及び／又は製造における一般的な考慮事項は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005（参照により本明細書に組み入れられる）に見出され得る。

いくつかの実施態様では、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するためにリポソームが使用され得る。本明細書で使用する場合、リポソームは、脂質二重層で構成される、人工的に調製されたベシクルである。リポソームは、生体膜を破壊（超音波処理によるなど）することによって調製されることができる。リポソームは、天然のリン脂質、又は界面活性剤特性を備えた混合脂質鎖（例えば、卵ホスファチジルエタノールアミン）を含み得る。リポソーム設計は、所望の標的組織への標的化のため、表面リガンドを採用し得る。

投与
本発明は、有効量の、本明細書に記載される治療活性物（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）を、処置を必要とする被験者に投与する方法を提供する。

本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、経皮、又は経粘膜（例えば、経口又は鼻内）を含め、種々の投与経路によって投与され得るが、投与経路はこれらに限定されない。いくつかの実施態様では、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、静脈内投与によって投与され得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、皮下投与によって投与され得る。いくつかの実施態様では、オリゴヌクレオチドに対する投与計画は、最初の投与計画の後反復され得るものであり、実際に投与計画は、疾患を処置又はその進行を防止するために、必要に応じて反復され得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、毎日、週二回、週一回、隔週、毎月、二カ月ごとに１回、三カ月ごとに一回、四カ月ごとに一回、六カ月ごとに一回、又は間隔を変動させて投与され得る。

適用
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、診断、治療及び予防のための研究試薬として利用され得る。

研究で、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞及び実験動物においてＢＣＬ１１Ａタンパク質の合成を特異的に阻害し（典型的には、ｍＲＮＡを分解又は阻害し、これによりタンパク質形成を妨げることにより）、これによって標的の機能的な分析、又は治療的介入に対する標的としてのその有用性の査定を容易にするために使用され得る。

診断において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ノーザンブロッティング、インサイツハイブリダイゼーション又は同様の技術によって、細胞及び組織におけるＢＣＬ１１Ａ発現を検出及び定量するために使用され得る。

治療に対しては、ＢＣＬ１１Ａの発現をモデュレーションすることにより処置することのできる疾患又は障害があると疑われる動物又はヒトが、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することにより処置される。さらに提供されるのは、治療上又は予防上有効量の、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物の１以上を投与することにより、ＢＣＬ１１Ａの発現が関係する疾患又は状態があると疑われるか、又はその傾向にあるヒトを処置することなど、哺乳動物を処置する方法である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、結合物又は医薬組成物が、典型的には有効量投与される。

本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本明細書で言及される障害の処置用の医薬の製造のため、又は本明細書で言及される障害の処置の方法のために好適である。

本明細書で言及される障害を処置するための方法が提供され、この方法は、本明細書に記載されるようなアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び／又は結合物、及び／又は医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む。

本発明は、本発明に係るオリゴヌクレオチド又は本発明の医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与することを含む、貧血性疾患、障害又は状態を処置する方法を提供する。

一つの実施態様では貧血性疾患、障害又は状態は、鎌状赤血球症である。

別の実施態様では、貧血性疾患、障害又は状態は、β−サラセミアである。

処置の方法において適用される場合、本発明のオリゴヌクレオチド又は本発明の医薬組成物の投与は結果的に、１以上の標的組織においてＢＣＬ１１Ａの発現低下をもたらす。好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチド又は本発明の医薬組成物の投与は結果的に、１以上の標的組織においてγ−グロビン発現の増加をもたらす。本発明のオリゴヌクレオチド又は本発明の医薬組成物の投与は結果的に、１以上の標的組織において胎児ヘモグロビン生成の増加をもたらし得る。好ましくは、標的組織は、骨髄、肝臓、腎臓、脾臓及び／又は血漿細胞、末梢血Ｂ細胞、樹状細胞、赤血球系前駆細胞、多能性幹細胞、胸腺、扁桃上皮から選択される。

治療用途
本明細書に記載されるＢＣＬ１１Ａのアンチセンスオリゴヌクレオチドモデュレーターは、種々のＢＣＬ１１Ａ関連疾患、障害及び状態を処置するために使用され得る。

鎌状赤血球症（ＳＣＤ）
鎌状赤血球症、又は鎌状赤血球貧血は、受け継がれる遺伝的障害であり、細胞の柔軟性を低下させる、異常な、硬直した、鎌状の形を有する赤血球細胞により特徴付けられる。これはベータグロビン鎖遺伝子の変異に起因し、超優性を伴い常染色体劣性に顕在化される。ＳＣＤは、平均余命の低下など、様々な重度の合併症に関係し、また死に導く可能性がある病態を惹き起こす。しかしながら、変異の遺伝的多形性のため、すべての受け継がれるヘモグロビン変異が有害なわけではない。

ＳＣＤは、熱帯及び亜熱帯のサハラ砂漠以南の地域の住民で、通常的に報告されている。これらは、通例、マラリアが観察される領域でもある。興味深いことに、ＳＣＤのキャリア（すなわち、変異の１コピーを有している）は、感染への耐性がより強く、感染時に示す重度の症候が少ないことが認められている。

本明細書に記載されるＢＣＬ１１Ａのアンチセンスオリゴヌクレオチドモデュレーターが、ＳＣＤを処置するのに使用され得る。本明細書で使用する場合、「処置する」又は「処置」の用語は、疾患に関係する１以上の症候の寛解、疾患の１以上の症候の発症の防止若しくは遅延、及び／又は疾患の１以上の症候の重症度若しくは頻度の低減を言う。

いくつかの実施態様では、処置は、ＳＣＤ患者の１以上の症候を、部分的に又は完全に軽減、寛解、緩和、阻害、発症を遅延、重症度及び／又は発生率を低下させることを言い、それら症候として、貧血；眼の黄変；皮膚の蒼白、冷え及び／又は黄変；呼吸の短縮；筋力低下；腸内変化（例えば、糞便色の変化）；疲労；眩暈；失神；血管への変化（例えば、低血圧）；心臓に影響する変化（例えば、心悸亢進、頻脈、胸部疼痛、狭心症、心臓発作）、及び臓器肥大（例えば、脾臓）が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施態様では、処置は、処置を必要とする被験者における貧血の症候の低下を言う。特定の実施態様では、貧血の症候の程度は、前処置又は非処置の対照（例えば、同様の罹病又は進行段階であるが処置をしていない対照被験者による貧血の症候の程度）と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、以上低下され得る。

いくつかの実施態様では、処置は、ガンマグロビン発現の増加（例えば、総発現、一週あたり、一カ月、二カ月あたり、六カ月あたりの発現増加パーセントなど）を言う。種々の実施態様では、ガンマグロビン発現の増加は、ＳＣＤ患者におけるベータグロブリンの発現の欠除または低下を補う。

サラセミア（α、β及びδ）
サラセミアは、ＳＣＤと同様、受け継がれる遺伝的障害であり、血液に影響を及ぼす。サラセミアは、常染色体劣性状態として顕在し、赤血球細胞の衰弱及び破壊をもたらす。サラセミアは、酸素の運搬を担う赤血球細胞中のタンパク質であるヘモグロビンがどのように身体で作られるかに影響を及ぼす遺伝子の変異又は欠失によって引き起こされる。サラセミアに罹患している個体は、低ヘモグロビン生成によって特徴付けられ、循環している赤血球細胞が正常よりも少なく、その結果、軽度又は重度の貧血が起こる。サラセミアの起源は、地中海沿岸領域にある。

サラセミアは、肺炎、鉄過剰、骨変形及び心臓血管病を含め、深刻な合併症を起こす可能性がある。しかしながら、本疾患ではＳＣＤと同様、この疾患のキャリアである人々に、マラリアに対するある程度の防御が授けられることが観察されている。

ヘモグロビンは、２つのアルファグロビン鎖及び２つのベータグロビン鎖の、４つのタンパク質鎖で構成されており、これらグロビン鎖はヘテロ二量体として配置されている。ヒトにおいて、ベータグロビン鎖は染色体１１上の単一遺伝子によってコード化されており、アルファグロビン鎖は染色体１６上の２つの遺伝子によってコード化され、それらは連結されている。これにより、正常個体が２つのベータ鎖遺伝子座及び４つのアルファ鎖遺伝子座を含む遺伝的な状態が成り立つ。サラセミアの患者では、アルファ又はベータ鎖のいずれかの変異があり、低い且つ／又は異常な赤血球細胞の生成を誘発する。その結果、どの鎖に変異があるかによってサラセミアは分類される。アルファ及びベータサラセミアは、アフリカ人、アジア人、ギリシャ人及びイタリア人の民族集団で共通である。

アルファサラセミア（thalassemas）（アルファ鎖での変異）は、ＨＢＡ１及びＨＢＡ２遺伝子に関わり、アルファグロビンの生成の低下を引き起こす。これにより、成人ではベータグロビン生成が増加し、幼児ではガンマグロビン生成が増加するという状態が生まれる。ベータグロビン生成の増加は、不安定な四量体の形成をもたらし、酸素と解離する能力が減弱になる。

ベータサラセミア（ベータ鎖での変異）は、ＨＢＢ遺伝子に関わり、結果的な疾患の重症度は、その変異に依存している。いくつかの変異は、ベータ鎖の形成を妨げ、疾患の最重症型となるが、その他ではある程度のベータ鎖が、例え低レベルでも形成される。ベータ鎖変異の結果、アルファ鎖生成が過剰になり、アルファサラセミアの場合のように四量体を形成しない。あるいは、過剰のアルファ鎖は赤血球細胞の膜に結合して、その結果膜に損傷を起こし、またアルファ鎖が凝集すれば毒性になる可能性がある。

低頻度ではあるが、デルタサラセミアが起こる可能性がある。それらは同様に、デルタグロビン鎖遺伝子の変異に起因し、これらの鎖の異常生成を引き起こす。成人のヘモグロビンの約３％が、アルファ及びデルタ鎖から構成されると報告されている。

本明細書に記載されるＢＣＬ１１Ａのアンチセンスオリゴヌクレオチドモデュレーターが、サラセミア、例えば、アルファ、ベータ及び／又はデルタサラセミア（thalassemas）を処置するのに使用され得る。「処置する」又は「処置」の用語は、疾患に関係する１以上の症候の寛解、疾患の１以上の症候の発症の防止若しくは遅延、及び／又は疾患の１以上の症候の重症度若しくは頻度の低減を言う。

いくつかの実施態様では、処置は、サラセミア患者の１以上の症候の、部分的又は完全な軽減、寛解、緩和、阻害、発症を遅延、重症度及び／又は発生率低下を言い、それら症候として、肺炎、鉄過剰、骨変形及び心臓血管病が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様では、処置は、サラセミア患者の１以上の症候の、部分的又は完全な軽減、寛解、緩和、阻害、発症を遅延、重症度及び／又は発生率低下を言い、それら症候として、貧血；眼の黄変；皮膚の蒼白、冷え及び／又は黄変；呼吸の短縮；筋力低下；腸内変化（例えば、糞便色の変化）；疲労；眩暈；失神；血管への変化（例えば、低血圧）；心臓に影響する変化（例えば、心悸亢進、頻脈、胸部疼痛、狭心症、心臓発作）、及び臓器肥大（例えば、脾臓）が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施態様では、処置は、処置を必要とする被験者における貧血の症候の低下を言う。特定の実施態様では、貧血の症候の程度は、前処置又は非処置の対照（例えば、同様の罹病又は進行段階であるが処置をしていない対照被験者による貧血の症候の程度）と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、以上低下され得る。

いくつかの実施態様では、処置は、ガンマグロビン発現の増加（例えば、総発現、一週あたり、一カ月、二カ月あたり、六カ月あたりの発現増加パーセントなど）を言う。種々の実施態様では、ガンマグロビン発現の増加は、サラセミア患者におけるアルファ、ベータ又はデルタグロブリンの発現の欠除または低下を補う。

本発明は、以下の実施例を参照することによってさらに十分に理解されよう。しかしながら、本実施例は、本発明の範囲を限定するものとして理解されるべきではない。すべての引用文献は、参照により組み入れられる。

実施例
実施例１． ＢＣＬ１１Ａを標的とするオリゴヌクレオチドの設計及び合成
本実施例は、ＢＣＬ１１Ａ発現及び活性を有効にダウンレギュレーションすることができるＬＮＡオリゴヌクレオチドの設計及び合成の例示的な方法を示す。本実施例では、主たる標的領域は、ＸＬ、Ｌ及びＳアイソフォーム間の重複領域である（図２）。

ヒトＢＣＬ１１Ａの３つの主要アイソフォーム（すなわち、ＸＬ、Ｌ又はＳ；表３）の配列の基づいて、合計４０１のＬＮＡオリゴヌクレオチドを設計し、７つのライブラリーにて合成して、種々の特異性、長さ（例えば、１２〜１６マー）及びＬＮＡ設計のオリゴヌクレオチドを得た。

ＬＮＡ単位を設計するための例示的な方法は、Wahlestedt, C. et al. 2000, PNAS 91(10):5633-5638に記載されており、これは参照により本明細書に組み入れられる。例示的なＬＮＡオリゴヌクレオチドを、表４に示す。

^ｍＣは、５−メチルシトシン−１−イル塩基を有するヌクレオチド単量体を示し；添え字「ｓ」が、ホスホロチオエート結合を示し；大文字／太字の塩基はロックド核酸を示し；上付き「ｏ」はオキシ−ＬＮＡを示す。

実施例２． ＢＣＬ１１Ａ特有のオリゴヌクレオチドのインビトロスクリーニング及びＩＣ_５０定量
ＢＣＬ１１Ａ核酸発現に対するオリゴヌクレオチドの効果は、標的核酸が測定可能レベルで存在するならば、様々な細胞タイプのいずれでも試験されることが可能である。ＢＣＬ１１Ａは、核酸の一過性又は安定なトランスフェクションによって内在的に発現されることができる。ＢＣＬ１１Ａ核酸の発現レベルは、例えば、ノザンブロット分析、定量的ＰＣＲ、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイを用いて、ルーティンに定量できる。本実施例では、ＢＣＬ１１Ａを選択的に標的指向化した、実施例１のとおりに合成したオリゴヌクレオチドを、ヒトＲＥＨ細胞で試験してＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現を測定した。選択された細胞タイプにて標的が発現されるならば、他の細胞タイプをルーティンに使用することができる。細胞は後記の適切な培地で培養し、３７℃で湿度９５〜９８％、５％ＣＯ_２に保持した。低酸素又は無酸素下に培養する場合、Ｏ_２レベルはそれぞれ、１〜２％又は０〜０．５％に維持した。細胞は毎週２〜３回、ルーティンに継代した。

手短に説明すると、ヒトＲＥＨ細胞を使用し、第３日の哺乳類細胞培養実験において、４０１オリゴヌクレオチドを用いてＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの発現に対する効果を定量した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞に５及び２５μＭで添加し、さらなる試薬又は取り込み賦活薬は用いずにジムノシス（gymnosis）送達技術を用いた（Stein, C.A. et al. 2010, Nucleic Acids Research 38(1)：ｅ３）。定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）により、ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡを測定した。実施例１に従って作成されたアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＢＣＬ１１Ａの阻害の例示的な結果を図３に示す。

図３に示すとおり、実施例１に従って作成されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＢＣＬ１１ＡアイソフォームＸＬ全体のいくつかの異なる位置に標的とすることによってＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの発現を阻害することができ、特に、ＸＬ、Ｌ及びＳアイソフォームで重複している位置で、阻害することができた（図２参照）。

別の実験において、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドに関し、種々の濃度（０．００６４〜２０μMの範囲）で、ＩＣ_５０値及びＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの発現に対する効果を、ヒトＲＥＨ細胞を使用して先に記載したように定量した。例示的な結果を表５（ＩＣ_５０）及び図４（ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ）に示す。オリゴ番号５６：ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡを標的としないアンチセンスオリゴヌクレオチド。

同様の実験において、オリゴ４及び５から設計された異なるオリゴヌクレオチドに関し、種々の濃度（０．２５〜６０μMの範囲）で、ＩＣ_５０値及びＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの発現に対する効果を、ヒトＲＥＨ細胞を使用して先に記載したように定量した。例示的な結果を表６（ＩＣ_５０）及び図５（ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ）に示す。オリゴ番号５６：ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡを標的としないアンチセンスオリゴヌクレオチド；モック：細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドは添加せず。

別の実験において、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドに関し、種々の濃度（０．２５〜６０μMの範囲）で、ＩＣ_５０値及びＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの異なるアイソフォームの発現に対する効果を、ヒトＲＥＨ細胞を使用して先に記載したように定量した。例示的な結果を表７（ＩＣ_５０）及び図６（アイソフォームＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ）に示す。オリゴ番号５６：ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡを標的指向化しないアンチセンスオリゴヌクレオチド；モック：細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドは添加せず。

別の同様の実験において、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドに関し、種々の濃度（０．０８〜２０μMの範囲）で、ＩＣ_５０値及びＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの発現に対する効果を、マウスＭＰＣ−１１細胞を使用し、ヒトＲＥＨ細胞に対して先に記載したと同様の実験条件を用いて定量した。例示的な結果を表８（ＩＣ_５０）及び図７（ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ）に示す。オリゴ番号５６：ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡを標的としないアンチセンスオリゴヌクレオチド；モック：細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドは添加せず。

さらに別の実験で、オリゴ８、２５及び２７から設計された異なるオリゴヌクレオチドに関し、ＩＣ_５０値を、ヒトＲＥＨ細胞を使用して先に記載したように定量した。典型的には、ＩＣ_５０値は、０．００６４〜２０μMの範囲で、５倍希釈の６ポイントを用いて定量した。例示的な結果を表９に示す。

まとめると、これらのデータは、実施例１に記載のもののような、本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、０．２５μM〜６０μMの間の範囲の典型的なＩＣ_５０で、ＢＣＬ１１Ａを有効に阻害できることを示している。加えて、本発明によって提供される、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、０．１０μM〜１．５μMの間の範囲の典型的なＩＣ_５０で、マウスＢＣＬ１１Ａを有効に阻害することができる。

実施例３． オリゴヌクレオチドのインビボ耐容性（tolerance）
前述の実施例に記載のオリゴヌクレオチドを、それらのインビボ耐容度（tolerability）に関して、ＮＭＲＩマウスを用いて試験した。

手短に説明すると、雌性ＮＭＲＩマウス（一群あたり、ｎ＝５）に、生理食塩水（対照）又は選択されたＬＮＡオリゴヌクレオチド（１５mg／kg）のいずれかを、第０、３、７、１０及び１４日に静脈内投与によって服用させた。マウスを、最後の服用後４８時間に屠殺した。各群の各動物に関し、以下のパラメータ：体重（第０日、第５、６又は７日、及び第１０、１３、１４又は１６日）、屠殺時の臓器（肝臓、腎臓及び脾臓）重量、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）活性、並びに骨髄及び脾臓全体におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現を記録した。例示的な結果を図８に示す。

図８に示すように、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドが、マウスにおけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現を阻害する能力を、回収された骨髄及び脾臓において確認した。例えば、オリゴ８及び２５で、骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの約４０％の低減が明示され、またオリゴ８及び２０で、脾臓におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡの同程度の低減が明示された。概して、骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現の阻害は、平均約１０〜５０％の範囲であり、脾臓におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現の阻害は、平均約１０〜４０％の範囲であった。典型的には、処置された動物の身体及び臓器重量は影響を受けなかった。

まとめると、これらのデータは、本発明によって提供される、実施例１に記載のものなどのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、良好に耐容性を呈し、且つ骨髄、脾臓を含む（これらに限定されない）種々の標的組織におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現をインビボで有効に阻害できることを示している。

同様の実験において、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを、それらのインビボ耐容度に関し、ＮＭＲＩマウスを使用して先に記載したように試験した。典型的には、ＢＣＬ１１Ａを標的とする、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドが投与されたマウスの身体及び臓器重量は典型的には影響を受けなかった。選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与されたマウスに対する血清ＡＬＴレベルは、生理食塩水群と比較して同様の結果を明示した。

同様の実験において、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを、インビボ耐容度に関し、ウィスターラットを使用して試験した。手短に説明すると、雄性ウィスターラット（一群あたり、ｎ＝５）に、生理食塩水（対照）又は選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（２５mg／kg）のいずれかを、週一回（第０、７、１４、２１及び２８日）皮下投与によって服用させた。ラットを第３０日に屠殺した。各群の各動物に関し、以下のパラメータ：試験の間の体重、屠殺時の臓器（肝臓、腎臓及び脾臓）重量、肝臓及び腎臓の組織病理学、及び臨床的血清化学物質（アラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、ビリルビン、尿素及びクレアチニン）を記録した。

ＢＣＬ１１Ａを標的とする、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与されたウィスターラットにおける臓器（例えば、肝臓、腎臓及び脾臓）重量は、典型的には影響を受けなかった。加えて、種々の臨床的血清化学マーカー（例えば、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、ビリルビン、尿素、クレアチン）に対する測定値は、対照群と比較して同様の結果を明示した。

まとめると、これらのデータは、実施例１に記載のもののような、本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、概して安全であり、良好な耐容性を呈することを明示する。

実施例４． 野生型及びβ−ＹＡＣ遺伝子導入マウスにおけるインビボの有効性
野生型及び遺伝子導入マウス（ヒトβ−グロビン遺伝子（β−ＹＡＣ）の遺伝子導入）を使用して、前記の実施例に従って作成された、いくつかのＬＮＡオリゴヌクレオチドの、インビボの有効性を定量した。

手短に説明すると、野生型及びβ−ＹＡＣ遺伝子導入マウスに、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを皮下経路で、以下の二種のスケジュール、（１）第０、３、６、１３、２０及び２７日に服用、第２９日に剖検（屠殺）を指定、並びに（２）第０、３、６、１３、２０、２７、３４、４１、４８、及び５５日に服用、第５７日に剖検（屠殺）を指定、に従って服用させた（２５又は１５mg／kg）。両方の服用スケジュールにつき、第０日の前と、剖検死検時（それぞれ、第２９又は５７日）に血液を採取した。本試験で使用したエンドポイントは、標的組織（例えば、骨髄）におけるＢＣＬ１１Ａのノックダウン、さらには血液化学物質及びオリゴヌクレオチドの体内分布を含んでいた。

実施例３で示される結果に合致して、野生型及び遺伝子導入マウスの両方につき、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置では５８日まで、体重に対して悪影響はなかった。処置群間でＡＳＴレベルに、有意差は観察されなかった。

野生型マウスの骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現のノックダウンの例示的な結果を、図９（投与後４週）及び１０（投与後８週）に示す。β−ＹＡＣ遺伝子導入マウスにおけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現のノックダウンに対する例示的な結果を、図１１に示す。β−ＹＡＣ遺伝子導入マウスのＴｅｒ１１９^＋及びＣＤ１９^＋骨髄 細胞における、ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現のノックダウンに対する投与後８週の例示的な結果を、図１２に示す。

前記結果で示されるように、ＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現のノックダウンは８週でより大きかったが、候補オリゴ８では、試験されたオリゴヌクレオチドのうち、ＢＣＬ１１Ａの減少が最大であることが明示された。１５又は２５mg／kgで服用した場合、ＢＣＬ１１Ａ発現のノックダウンの、候補オリゴ４との差は観察されなかった。さらに、選択されたオリゴヌクレオチドにつき、８週間投与された場合に、野生型でも遺伝子導入のマウスでも、ＢＣＬ１１Ａ発現のノックダウンの差は観察されなかった。

まとめると、本実施例は、本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドが、骨髄、脾臓を含む（これらに限定されない）種々の標的組織におけるＢＣＬ１１Ａ発現をインビボで有効に阻害できることを明示している。

実施例５． ヒト以外の霊長類における薬理学試験
ＢＣＬ１１Ａの１以上のアイソフォームを特異的に標的とする、例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて薬理学的な試験を実施し、インビボ安全性及び有効性をさらに確認した。

手短に説明すると、試験は６〜１６週の期間にわたり、この間、皮下注射により雌性カニクイザル（cynomologus monkeys）（年齢２〜４年、及び重量２．５〜４kgの範囲）に、毎週２０mg／kgを６回の服用量で、又は毎週１０mg／kg及び２０mg／kgを１２回の服用量で、選択されたＢＣＬ１１Ａに特有のＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチド又は対照（生理食塩水）を投与した。最後の服用のおよそ７日後、先に記載したような試験の継続期間に応じておよそ第７週又は第１７週に、動物を屠殺した。その試験の前段階の間や服用期間の全体にわたって採血を繰り返して赤血球新生を刺激したために、試験が進行するにつれて処置群の半分は中程度に貧血になってしまった。実験計画を、表１０に示す。

薬力学的バイオマーカー：末梢血（２週ごと）及び骨髄（剖検時、試験計画に応じて第７週及び第１７週）を試料採取して、ＢＣＬ１１Ａ及びγ−グロビンｍＲＮＡ発現、さらに胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）及びγ−グロビンタンパク質レベルをＥＬＩＳＡアッセイにより定量するのに使用した。骨髄中のＨｂＦレベルは、高性能クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を用いた分析も行った。Ｆ細胞は、Ｋｌｅｉｈａｕｅｒ法を用いてを測定した。第７週に採取した骨髄試料は、生体骨髄吸引により上腕骨から試料採取された。第１７週に採取した骨髄試料は、複数の方法論を用い、上腕骨及び大腿骨から試料採取された。上腕骨からの第１７週の試料採取は、生体骨髄吸引により実施された。大腿骨からの第１７週の試料採取は、骨髄を緩衝液で洗い流し、その後遠心分離して得られたペレットを分析した。大腿骨からの第１７週の試料採取は、凍結大腿骨全体からも実施された。

血液学分析は、２週ごとに試料から測定した、赤血球細胞、網状赤血球の計数、及び総ヘモグロビンを含んでいた。

１６週試験計画の後の週群のみで、ＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドの初回及び第１２週服用（１７週群のみ）の後、２、４、８、２４及び４８時間で、末梢血を薬物動態の解析用に試料採取した。

剖検時（７週及び１７週）に、分析及び重量測定のために肝臓、腎臓及び骨髄を試料採取した。臨床化学分析も、剖検時に実施した。

末梢血からの例示的な総ヘモグロビン測定値を、図１３に示す。末梢血中の網状赤血球の例示的な百分率を図１４に示す。第７週の上腕骨骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡのＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な測定値を図１５に示す。第７週の上腕骨骨髄におけるγ−グロビン及びβ−グロビンｍＲＮＡのＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な測定値を図１６に示す。第１７週の上腕骨（上）及び大腿骨（下）骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡのＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な測定値を図１７に示す。第１７週の上腕骨（上）及び大腿骨（下）骨髄におけるγ−グロビンｍＲＮＡのＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な測定値を図１８に示す。第１７週の上腕骨骨髄におけるγ−グロビン及びβ−グロビンｍＲＮＡの、ＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な測定値を図１９に示す。第１７週の大腿骨骨髄におけるγ−グロビン及びβ−グロビンｍＲＮＡの、ＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な測定値を図２０に示す。第１７週の上腕骨骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ（上）及びγ−グロビン（下）ｍＲＮＡの、ＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な平均測定値を図２１に示す。第１７週の大腿骨骨髄におけるＢＣＬ１１Ａ（上）及びγ−グロビン（下）ｍＲＮＡの、ＲＴ−ｑＰＣＲによる例示的な平均測定値を図２２に示す。

選択された瀉血動物に関し、骨髄中のＦ細胞の画分（‰）の例示的な測定値をフルスケール（左）及び拡大スケール（右）で図２３に示す。選択された瀉血動物に関し、末梢血中のＦ細胞の画分（‰）の例示的な測定値をフルスケール（左）及び拡大スケール（右）で図２４に示す。

対照（上）、１０mg／kg（中央）、及び２０mg／kg（下）服用群における、末梢血中のγ−グロビンの例示的な測定値を、図２５に示す。末梢血中のγ−グロビンの例示的な測定値を、γ−グロビンピーク（「ピーク１」又は「ピーク２」）のそれぞれの時間点での対照に対するパーセントとして、対照群、１０mg／kg及び２０mg／kg服用群につき、図２６、２７及び２８にそれぞれ示す。

前記の結果に示されるように、上腕骨と比較して約２倍高いＢＣＬ１１Ａの発現が、大腿骨からの骨髄試料で観察された。γ−グロビン発現に関しては、大腿骨と比較して２〜３倍高い発現が、上腕骨からの骨髄試料で観察された。最大の差が、後述するような特定の具体的な動物で観察された。

骨髄におけるＦ細胞の測定に関しては、動物Ｉが第１７週に、対照動物における約０．２‰と比較して約１０‰のＦ細胞を明示した。末梢血中のＦ細胞の測定に関しては、動物Ｉが第１７週に、対照動物における約０．３‰と比較して約８‰を明示した。さらに、この動物におけるＦ細胞は、末梢血から得られた試料からの測定では約１５週で増加し始めた。

末梢血中のγ−グロビンの測定に関しては、１０mg／kg 服用群において動物Ｉにつき、第１５週で増加が観察され、第１７週にさらに増加が観察された。同様に、動物Ｑは２０mg／kg 服用群で、第１７週に増加を明示した。

非瀉血群では、対照群と比較してＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡ発現の低減は観察されなかった。同様に、Ｆ細胞又はＨｂＦ（γ−グロビン）の増加は、いずれの動物についても観察されなかった。

要約すれば、本実施例に記載の実験結果は、対照動物と比較して動物Ｉでは８５％を上回る、骨髄（上腕骨及び大腿骨）でのＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡのノックダウンで、そして動物Ｑでは対照動物と比較して約６０％の、骨髄（上腕骨及び大腿骨）でのＢＣＬ１１Ａ ｍＲＮＡのノックダウンで、有効なターゲットエンゲージメントを明示する。さらに、対照動物と比較して、動物Ｉの骨髄においてγ−グロビンｍＲＮＡ発現の８０倍を上回る誘導が、そして対照と比較して、動物Ｉの末梢血においてγ−グロビンタンパク質の７倍の増加が、記録された。動物Ｑは、対照動物と比較して、末梢血においてγ−グロビンタンパク質の約３倍の増加を明示した。動物Ｉも、対照動物と比較して、骨髄及び末梢血においてＦ細胞の増加を明示した。

まとめると、本実施例は、本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドが、種々の標的組織におけるＢＣＬ１１Ａ発現をインビボで有効に阻害することができること、及び媒質対照と比較して少なくとも２倍以上、末梢血中のγ−グロビンタンパク質を増加させることを明示する。

実施例６． インビボ薬物動態
本実施例で、前記の実施例に従って作成された、選択されたＬＮＡオリゴヌクレオチドのインビボ薬物動態を定量する。

手短に説明すると、野生型マウスに、単回投与（２０mg／kg）で皮下経路によって、選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを与えた。血漿、肝臓、腎臓及び骨髄の試料採取は、２８日まで、いくつかの時間ポイントで行った。試料採取された各組織に対する薬物動態プロファイルを決定した。例示的な結果を図２９〜３１に示す。

その結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの、試料採取された、骨髄を含む組織すべてへの速やかな分布及び観察可能な分布を明示していた。Ｃ_ｍａｘは、皮下投与後１０分で約２１μg/mLであった。肝臓、腎臓及び血漿ｔ_１／２βは、約１０日であった。骨髄では、ｔ_１／２βは約３日であった。

本薬物動態の試験から、骨髄のアンチセンスオリゴヌクレオチドへの暴露に対する予測モデルが決定された（図３２）。

まとめると、本実施例は、本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドが、投与（例えば、皮下）に伴い有効に且つ安全に、複数の組織によって吸収されることを明示する。さらに、本発明によって提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、何らかの悪影響なしに、骨髄を含む複数の標的組織に分布される。

以上、説明した本発明の少なくともの一つの実施態様のいくつかの態様をもってすれば、種々の変更、修飾、及び改良が当業者に容易に想起されようことは理解されるべきである。このような変更、修飾、及び改良は、本開示の一部であることが意図され、また本発明の本質及び範囲に含まれることが意図される。したがって、上記発明の説明及び図面は、例としてのみ示すものであって、本発明は後出の特許請求の範囲によって詳細に記載される。

特許請求の範囲において、請求要素を修飾する「第一、」「第二、」「第三、」などの順序を示す語の使用は、それ自体で一つの請求要素の別の構成要素に対する優先、先行、若しくは順序、又は方法の行為が実施される時間的な順序を何ら暗示するものでなく、単にラベルとして、特定の名前を有する一つの請求要素を、（かかる、順序を示す語の使用がなければ）同じ名前を有する別の要素と区別するのに使用されるに過ぎない。

冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書及び請求項で使用する場合、反するように明らかに示されていなければ、複数の指示対象を含むことは理解されるべきである。あるグループの１以上の構成素の間に「ｏｒ」を含む請求項又発明の説明は、反するように示されたり、又は文脈から別異であることが明らかでない限り、そのグループの構成素の１つ、複数、又はすべてが、所定の産物又はプロセスに存在、それにおいて使用、あるいはそれに関連するのであれば、その主旨が満たされると考えられる。本発明は、そのグループのまさしく一つの構成素が、特定産物又はプロセスに存在するか、それで用いられるか、あるいはそれに関連するか、である実施態様を含む。本発明はまた、複数の、又は全体のグループの構成素が、所定の産物又はプロセスに存在、それにおいて使用、あるいはそれに関連する実施態様も含む。さらにまた、本発明は、特に断りない限り、又は当業者に矛盾若しくは不整合が想起されるであろうことが明らかと思われない限り、１以上の列挙される請求項から１以上の限定、要素、条項、記述用語などが、同じ基礎の請求項に従属する別の請求項（又は、関連するような他の請求項のいずれか）に導入されてなる、すべての変更、組み合わせ、及び順序を入れ替えたものを包含することを理解されたい。要素がリストとして存在する場合（例えば、マーカッシュグループ又は類似の形式）その要素の各サブグループも開示されており、そしていずれの要素（単数又は複数）も、そのグループから除去できるということを理解されたい。一般に、本発明、又は本発明の態様が、特定の要素、特徴などを含むと称されている場合、本発明の特定の実施態様、又は本発明の態様は、かかる要素、特徴などからなるか、又はそれらから本質的になるということを理解されたい。簡潔にすることを目的として、それらの実施態様は、必ずしもいずれの場合でも明細書に多くの語を用いて具体的に述べるようなことはなされていない。本発明のいずれの実施態様又は態様も、具体的な除外が明細書に述べられているかに関わらず、請求項から明示的に除外されることが可能であることも理解されたい。背景技術を記載するため、及びその実施に関してさらなる詳細を提供するための、本明細書に引用の出版物、ウェブサイト及び他の参照文献は、参照により本明細書に組み入れられる。

Claims (20)

1. ヒトＢＣＬ１１Ａの発現を減少させることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、配列番号１のヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子又はＢＣＬ１１ＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）アイソフォームのヌクレオチド４１０〜４５０から選択される領域内の連続配列の逆相補配列と少なくとも８０％同一である配列を有し、該アンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーである、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
2. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｘ_ａ−Ｙ_ｂ−Ｘ_ａ’（式中、
   Ｘはヌクレオチド類似体であり、
   ＹはＤＮＡの連続配列であり、
   ａは１、２、３、４又は５であり、
   ａ’は１、２、３、４又は５であり、
   ｂは５〜１５の整数である）
   によって表される、請求項１記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
3. ａ及び／又はａ’は、２〜４である、請求項２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
4. ｂは、７〜１０の整数である、請求項２又は３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
5. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１９ヌクレオチド未満の長さである、請求項１〜４のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
6. 前記オリゴヌクレオチドは、１０〜１６ヌクレオチドの長さである、請求項５記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
7. 前記オリゴヌクレオチドは、２’−Ｏ−アルキル−ＲＮＡ単位、２’−ＯＭｅ−ＲＮＡ単位、２’−Ｏ−アルキル−ＤＮＡ、２’−アミノ−ＤＮＡ単位、２’−フルオロ−ＤＮＡ単位、ＬＮＡ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位、２’−フルオロ−ＡＮＡ単位、ＨＮＡ単位、ＩＮＡ単位及び２’ＭＯＥ単位からなる群より選択される少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含む、請求項１〜６のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
8. 前記ヌクレオチド類似体は、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ、アルファ−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ、ベータ−Ｄ−アミノ−ＬＮＡ、アルファ−Ｌ−アミノ−ＬＮＡ、ベータ−Ｄ−チオ−ＬＮＡ、アルファ−Ｌ−チオ−ＬＮＡ、５’−メチル−ＬＮＡ、ベータ−Ｄ−ＥＮＡ及びアルファ−Ｌ−ＥＮＡからなる群より選択されるＬＮＡ単位である、請求項７記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
9. 前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、請求項１〜８のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
10. 前記オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡａｓｅＨをリクルートすることができる、請求項１〜９のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
11. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３及び配列番号７４からなる群より選択されるオリゴヌクレオチド配列モチーフを含む、請求項１〜１０のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
12. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１１、配列番号１５、配列番号３２、配列番号２１、配列番号３４、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６０、配列番号６１又は配列番号から選択される配列を有する、請求項１〜１１のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
13. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、5'-^mC_s ^oA_s ^o T_s ^o t_s g_sc_s a_s t_s t_s g_s t_st_s t_s ^mC_s ^{o m}C_s ^oG^o -3'（配列番号１１）、5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^o t_s t_s g_s t_s g_s c_s t_s ^mc_sg_sa_sT_s ^oA_s ^oA^o-3'（配列番号１５）、5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^ot_s t_s g_s t_s g_s c_st_s ^mc_s g_s A_s ^oT_s ^o A^o-3'（配列番号３２）5'-T_s ^oT_s ^o G_s ^o t_s g_s c_s t_s ^mc_s g_s a_s t_s A_s ^o A_s ^o A^o-3'（配列番号１４）又は5'-^mC_s ^o G_s ^o T_s ^ot_s t_s g_s t_s g_s c_st_s c_s G_s ^o A_s ^oT^o-3'（配列番号３５）（配列中、大文字はロックド核酸（ＬＮＡ）単位を示し、添え字「ｓ」は、ホスホロチオエート結合を表し、小文字はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）単位を表し、「^ｍＣ」は、５’メチル−シトシンＬＮＡ単位を表し、「^ｍｃ」は５’メチル−シトシンＤＮＡ単位を表す）である、請求項１〜１２のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
14. 請求項１〜１３のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物。
15. 鎌状赤血球症又はβ−サラセミアなどの貧血性疾患、障害又は状態の処置用などの医薬として使用するための、請求項１〜１３のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は請求項１４記載の医薬組成物。
16. 鎌状赤血球症又はβ−サラセミアなどの貧血性疾患、障害又は状態の処置用の医薬の製造のための、請求項１〜１３のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は請求項１４記載の医薬組成物の使用。
17. 請求項１〜１３のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は請求項１４記載の医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与することを含む、ＢＣＬ１１Ａを阻害する方法。
18. 請求項１〜１３のいずれか一項記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、又は請求項１４記載の医薬組成物を、処置を必要とする被験者に投与することを含む、貧血性疾患、障害又は状態を処置する方法。
19. 前記貧血性疾患、障害又は状態は、鎌状赤血球症である、請求項１８記載の方法。
20. 前記貧血性疾患、障害又は状態は、β−サラセミアである、請求項１８記載の方法。