KR20150126598A - 항-ｉｌ-33 항체 및 이의 용도 - Google Patents

항-ｉｌ-33 항체 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20150126598A
KR20150126598A KR1020157021200A KR20157021200A KR20150126598A KR 20150126598 A KR20150126598 A KR 20150126598A KR 1020157021200 A KR1020157021200 A KR 1020157021200A KR 20157021200 A KR20157021200 A KR 20157021200A KR 20150126598 A KR20150126598 A KR 20150126598A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
antibody
gly
antigen
thr
Prior art date
Application number
KR1020157021200A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102103159B1 (ko
Inventor
앤드류 제이. 머피
니콜라스 제이. 파파도풀로스
제이미 엠. 오렌고
Original Assignee
리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. filed Critical 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Publication of KR20150126598A publication Critical patent/KR20150126598A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102103159B1 publication Critical patent/KR102103159B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 인터류킨-33(IL-33)에 결합하는 항체, 및 이를 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 IL-33-매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시키는 항체를 포함한다. 본 발명의 항체는 IL-33과 ST2간의 상호작용을 차단하는 기능을 할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 특정 항체는 IL-33/ST2 상호작용을 차단시키는 것 없이 IL-33-매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시킨다. 본 발명의 특정 양태에 따르면, 항체는 고친화성으로 사람 IL-33에 결합하는 완전한 사람 항체이다. 본 발명의 항체는 염증 질환 또는 알레르기 질환과 같이 IL-33 신호 전달 및/또는 IL-33 세포성 발현과 관련된 질환 및 장애의 치료를 위해 유용하다.

Description

항-ＩＬ-33 항체 및 이의 용도{ANTI-IL-33 ANTIBODIES AND USES THEREOF}
본 발명은 사람 IL-33에 특이적인 항체, 및 이의 항원 결합 단편, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
인터류킨-33 (IL-33)은 액세서리 단백질인 IL-1RAcP와 연합하는 톨형/인터류킨-1 수용체 슈퍼-패밀리 구성원인 ST2에 대한 리간드이다(문헌참조: 예를 들어, Kakkar and Lee, Nature Reviews - Drug Discovery 7(10):827-840 (2008), Schmitz 등, Immunity 23:479-490 (2005); Liew 등, Nature Reviews - Immunology 10:103-110 (2010); US 2010/0260770; US 2009/0041718). IL-33에 의한 ST2/IL-1RAcP 활성화시, 신호전달 캐스케이드는 MyD88 (골수 분화 인자 88) 및 TRAF6 (TNF 수용체 연합된 인자 6)과 같은 다운스트림 분자를 통해 유발되어, 무엇 보다 NFκB(핵 인자-κB)의 활성화를 유도한다. IL-33 신호전달은 다양한 질환 및 장애에서 인자로서 연루되어 있다(문헌참조: Liew 등, Nature Reviews - Immunology 10:103-110 (2010)).
발명의 요약
본 발명은 사람 인터류킨-33 ("IL-33")에 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명의 항체는 특히 IL-33 매개된 신호전달을 억제하고 IL-33 활성 및/또는 신호 전달에 의해 유발되거나 이와 관련된 질환 및 장애를 치료하기 위해 유용하다.
본 발명의 항체는 전장(예를 들어, IgG1 또는 IgG4 항체)일 수 있거나 단지 항원-결합부(예를 들어, Fab, F(ab')2 또는 scFv 단편)를 포함할 수 있고 기능성에 영향을 미치도록, 예를 들어, 잔류 이펙터 기능을 제거하도록 변형될 수 있다(문헌참조: Reddy 등, 2000, J. Immunol. 164:1925-1933).
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체는 분리된 완전한 사람 모노클로날 항체이다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IL-33 매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시킨다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IL-33와 ST2의 상호작용을 차단한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 25℃에서 시험관내 수용체/리간드 결합 검정으로 측정시, 약 10nM 미만의 IC50 값으로 IL-33과 ST2의 상호작용을 차단하거나 IL-33과 ST2의 상호작용을 약 50% 초과로 차단한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IL-33과 ST2의 상호작용을 차단하지 않거나 단지 부분적으로 차단한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 37℃에서 표면 플라스몬 공명 분석으로 측정시 약 1nM 미만의 결합 해리 평형 상수(KD)로 사람 IL-33에 결합한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 37℃에서 표면 플라스몬 공명 분석으로 측정시 약 8분 초과의 해리 반감기(t½)로 사람 IL-33에 결합한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 사람 호염구의 IL-33 매개된 탈과립을 억제한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 시험관내 호염구 활성화 시험(BAT)에서 측정시 약 600pM 미만의 IC50으로 사람 호염구의 IL-33 매개된 탈과립을 억제한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 사람 PBMC로부터 IL-33 매개된 IFN-감마 생산을 억제한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 시험관내 PBMC IFN-감마 생산 검정에서 측정시 약 25nM 미만의 IC50으로 사람 PBMC로부터 IL-33 매개된 IFN-감마 생산을 억제한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 시험관내 PBMC IFN-감마 생산 검정에서 측정시 약 3nM 미만의 IC50으로 사람 PBMC로부터 IL-33 매개된 IFN-감마 생산을 억제한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 시험관내 PBMC IFN-감마 생산 검정에서 측정시 약 0.5nM 미만의 IC50으로 사람 PBMC로부터 IL-33 매개된 IFN-감마 생산을 억제한다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 알레르겐 유도된 폐 염증의 동물 모델로 투여되는 경우 폐에서 CD4+ T 세포, 호산구 및 ILC2 세포의 빈도수를 감소시킨다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 알레르겐 유도된 폐 염증의 동물 모델로 투여되는 경우 폐에서 IL-4 및 IL-5의 수준을 감소시킨다.
하나의 실시형태에서, 사람 인터류킨-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 알레르겐 유도된 폐 염증의 동물 모델로 투여되는 경우, 이소형 대조군 항체를 투여받은 알레르겐-챌린지된 동물과 비교하여 IL-4 수준을 4배 이상 감소시키고/시키거나, IL-5 수준을 5배 이상 감소시킨다.
본 발명은 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 및 308로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명은 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 및 316으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함하는 항체 또는 항체의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 및 308/316으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCVR 및 LCVR(HCVR/LCVR) 서열 쌍을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명은 서열번호 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 및 314로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 중쇄 CDR3(HCDR3) 도메인; 및 서열번호 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 및 322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 경쇄 CDR3(LCDR3) 도메인을 포함하는 항체 또는 항체의 항원 결합 단편을 제공한다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 항체의 항원 결합부는 서열번호 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 72/80, 88/96, 104/112, 120/128, 136/144, 152/160, 168/176, 184/192, 200/208, 216/224, 232/240, 248/256, 264/272, 280/288, 296/304 및 314/322로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
본 발명은 또한 서열번호 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 및 310으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 중쇄 CDR1(HCDR1) 도메인; 서열번호 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 및 312로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 중쇄 CDR2(HCDR2) 도메인; 서열번호 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 및 318로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 경쇄 CDR1 (LCDR1) 도메인; 및 서열번호 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 및 320으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖거나 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 경쇄 CDR2(LCDR2) 도메인을 추가로 포함하는 항체 또는 이의 단편을 제공한다.
본 발명의 특정 비제한적인 예시적 항체 및 이의 항원 결합 단편은 서열번호 4-6-8-12-14-16 (예를 들어, H1M9559N); 20-22-24-28-30-32 (예를 들어, H1M9566N); 36-38-40-44-46-48 (예를 들어, H1M9568N); 52-54-56-60-62-64 (예를 들어, H4H9629P); 68-70-72-76-78-80 (예를 들어, H4H9633P); 84-86-88-92-94-96 (예를 들어, H4H9640P); 100-102-104-108-110-112 (예를 들어, H4H9659P); 116-118-120-124-126-128 (예를 들어, H4H9660P); 132-134-136-140-142-144 (예를 들어, H4H9662P); 148-150-152-156-158-160 (예를 들어, H4H9663P); 164-166-168-172-174-176 (예를 들어, H4H9664P); 180-182-184-188-190-192 (예를 들어, H4H9665P); 196-198-200-204-206-208 (예를 들어, H4H9666P); 212-214-216-220-222-224 (예를 들어, H4H9667P); 228-230-232-236-238-240 (예를 들어, H4H9670P); 244-246-248-252-254-256 (예를들어, H4H9671P); 260-262-264-268-270-272 (예를 들어, H4H9672P); 276-278-280-284-286-288 (예를 들어, H4H9675P); 292-294-296-300-302-304 (예를 들어, H4H9676P); 및 310-312-314-318-320-322 (H1M9565N)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 각각 갖는 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 도메인들을 포함한다.
관련 실시형태에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체의 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서, 상기 항체 또는 단편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 및 308/316으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 가변 영역(HCVR/LCVR) 서열내 함유된 중쇄 및 경쇄 CDR 도메인들을 포함한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열내 CDR을 동정하기 위한 방법 및 기술은 당업계에 널리 공지되어 있고 이를 사용하여 본원에 기재된 특정 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열내 CDR을 동정할 수 있다. CDR의 경계선을 동정하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 통례는 예를 들어, 문헌[참조: the Kabat definition, the Chothia definition, and the AbM definition]을 포함한다. 일반적인 용어에서, 캐뱃(Kabat) 정의는 서열 다양성을 기초로 하고, 초티아(Chothia) 정의는 구조 루프 영역의 위치를 기초로하고, AbM 정의는 캐뱃와 초티아 방법을 절충한다. 문헌[예를 들어, Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani 등, J. Mol . Biol . 273:927-948 (1997); 및 Martin 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 86:9268-9272 (1989)]을 참조한다. 공개 데이타베이스는 또한 항체내 CDR 서열을 동정하기 위해 가용하다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항-IL-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 본 발명의 핵산 분자를 운반하는 재조합 발현 벡터, 및 상기 벡터가 도입되는 숙주 세포는 또한 상기 숙주 세포를 항체의 생산을 허용하는 조건하에서 배양하고 생산된 항체를 회수함에 의해 항체를 제조하는 방법과 같이 본원에 의해 포함된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 241, 257, 273, 289, 및 307로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 핵산 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 HCVR을 추가로 포함하는 항체 또는 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217, 233, 249, 265, 281, 297, 및 315로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 핵산 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 LCVR을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 7, 23, 39, 55, 71, 87, 103, 119, 135, 151, 167, 183, 199, 215, 231, 247, 263, 279, 295, 및 313으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 HCDR3 도메인; 및 서열번호 15, 31, 47, 63, 79, 95, 111, 127, 143, 159, 175, 191, 207, 223, 239, 255, 271, 287, 303, 및 321로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 LCDR3 도메인을 포함하는 항체 또는 항체의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 3, 19, 35, 51, 67, 83, 99, 115, 131, 147, 163, 179, 195, 211, 227, 243, 259, 275, 291, 및 309로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 HCDR1 도메인; 서열번호 5, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 117, 133, 149, 165, 181, 197, 213, 229, 245, 261, 277, 293, 및 311로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 HCDR2 도메인; 서열번호 11, 27, 43, 59, 75, 91, 107, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 및 317로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 LCDR1 도메인; 및 서열번호 13, 29, 45, 61, 77, 93, 109, 125, 141, 157, 173, 189, 205, 221, 237, 253, 269, 285, 301, 및 319로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이것과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 서열에 의해 암호화된 LCDR2 도메인을 추가로 포함하는 항체 또는 이의 단편을 제공한다.
특정 실시형태에 따라, 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 1 및 9 (예를 들어, H1M9559N), 17 및 25 (예를 들어, H1M9566N), 33 및 41 (예를 들어, H1M9568N), 49 및 57 (예를 들어, H4H9629P), 65 및 73 (예를 들어, H4H9633P), 81 및 89 (예를 들어, H4H9640P), 97 및 105 (예를 들어, H4H9659P), 113 및 121 (예를 들어, H4H9660P), 129 및 137 (예를 들어, H4H9662P), 145 및 153 (예를 들어, H4H9663P), 161 및 169 (예를 들어, H4H9664P), 177 및 185 (예를 들어, H4H9665P), 193 및 201 (예를 들어, H4H9666P), 209 및 217 (예를 들어, H4H9667P), 225 및 233 (예를 들어, H4H9670P), 241 및 249 (예를 들어, H4H9671P), 257 및 265 (예를 들어, H4H9672P), 273 및 281 (예를 들어, H4H9675P), 289 및 297 (예를 들어, H4H9676P), 또는 307 및 315 (H1M9565N)의 핵산 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 CDR 서열을 포함한다.
본 발명은 변형된 당화 패턴을 갖는 항-IL-33 항체를 포함한다. 일부 응용에서, 요망되지 않을 수 있는 당화 부위를 제거하기 위한 변형이 유용할 수 있거나, 예를 들어, 항체 의존 세포 독성(ADCC) 기능을 증가시키기 위해 올리고사카라이드 쇄 상에 존재하는 푸코스 모이어티가 없는 항체가 유용할 수 있다(문헌참조: Shield 등 (2002) JBC 277:26733). 다른 적용에서, 갈락토실화의 변형은 보체 의존 세포독성(CDC)을 변형시키기 위해 만들어질 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 IL-33에 특이적으로 결합하는 재조합 사람 항체 또는 이의 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 관련 양상에서, 본 발명은 항-IL-33 항체와 제2 치료 제제가 조합된 조성물을 특징으로 한다. 하나의 실시형태에서, 제2 치료 제제는 항-IL-33 항체와 유리하게 조합되는 임의의 제제이다. 항-IL-33 항체와 유리하게 조합될 수 있는 예시적인 제제는 제한없이 IL-33 활성을 억제하는 다른 제제(다른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 펩타이드 억제제, 소분자 길항제 등을 포함하는) 및/또는 직접 IL-33에 결합하지 않음에도 불구하고 IL-33-매개된 신호 전달을 간섭하거나, 차단하거나 약화시키는 제제를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제2 치료 제제는 비스테로이드성 소염제 (NSAID), 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민제, 에피네프린, 충혈 완화제, 흉선 간질 림포포이에틴(TSLP) 길항제, IL-13 길항제, IL-4 길항제, IL-4/IL-13 이원 길항제, IL-5 길항제, IL-6 길항제, IL-12/23 길항제, IL-22 길항제, IL-25 길항제, IL-17 길항제, IL-31 길항제, 경구 PDE4 억제제 및 또 다른 IL-33 길항제 또는 IL-33에 대한 상이한 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시형태에서, 상기 사이토킨 길항제는 소분자 억제제(합성 또는 천연 유래된), 또는 사이토킨 자체, 또는 상기 사이토킨에 대한 수용체, 또는 상기 사이토킨 및 이의 수용체 둘다를 포함하는 복합체와 상호작용하는 단백질(예를 들어, 항체)(예를 들어, IL-4 또는 IL-6에 대한 항체, 또는 IL-4 또는 IL-6에 대한 수용체)일 수 있다. 본 발명의 항-IL-33 항체를 포함하는 추가의 조합 치료요법 및 보조-제형이 본원에 기재된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 항-IL-33 항체 또는 항체의 항원 결합부를 사용하여 IL-33 활성을 억제하기 위한 치료 방법을 제공하고, 여기서, 상기 치료 방법은 본 발명의 항체 또는 항체의 항원 결합 단편을 포함하는 치료 유효량의 약제학적 조성물을 투여함을 포함한다. 치료된 장애는 IL-33 활성 또는 신호 전달의 제거, 억제 또는 감소에 의해 개선되거나, 완화되거나, 억제되거나 예방되는 임의의 질환 또는 병태이다. 본 발명의 상기 항-IL-33 항체 또는 항체 단편은 IL-33과 IL-33 결합 파트너(예를 들어, IL-33 수용체 성분)와의 상호작용을 차단하거나 다르게는 IL-33의 신호 전달 활성을 억제하는 기능을 할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 염증 질환 또는 장애, 또는 상기 염증 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 치료하기 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 IL-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 IL-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하고, 여기서, 상기 염증 질환 또는 장애는 중증도, 지속성 또는 발병 빈도에 있어서 완화 또는 감소되거나 상기 염증 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상은 중증도, 지속성 또는 발병 빈도수에 있어서 완화되거나 감소된다.
하나의 실시형태에서, 상기 염증 질환 또는 병태는 천식, 아토피성 피부염, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 관절염, 알레르기성 비염, 호산구 식도염 및 건선으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 알레르겐에 대한 민감성을 나타내는 환자를 치료하기 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 IL-33에 특이적으로 결합하는 유효량의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 IL-33에 특디적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하고, 여기서, 상기 환자는 알레르겐에 대해 감소된 민감성을 나타내거나 이에 대해 감소된 알레르기 반응을 나타내거나, 항체 또는 상기 항체를 포함하는 조성물의 투여 후 알레르겐에 대한 임의의 민감성 또는 알레르기 반응, 또는 과민성 반응을 경험하지 않는다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 염증 질환 또는 장애, 또는 상기 염증 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 완화시키거나 알레르겐에 대한 알레르기 반응을 감소시키기 위해 유용한 유효량의 제2 치료 제제를 투여함을 제공한다. 상기된 바와 같이, 제2 치료 제제는 비스테로이드성 소염제(NSAID), 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민제, 에피네프린, 충혈 완화제, 흉선 간질 림포포이에틴(TSLP) 길항제, IL-13 길항제, IL-4 길항제, IL-5 길항제, IL-6 길항제, IL-25 길항제, IL-17 길항제, 및 또 다른 IL-33 길항제 또는 IL-33에 대한 상이한 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
관련 양상에서, 본 발명은 환자에서 IL-33 활성과 관련되거나 이에 의해 유발되는 질환 또는 장애를 치료하는데 사용하기 위한 본 발명의 항-IL-33 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 환자에서 IL-33 활성과 관련되거나 이에 의해 유발되는 질환 또는 장애는 염증 질환 또는 장애이고, 여기서, 염증 질환 또는 장애는 천식, 아토피성 피부염, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 관절염, 알레르기성 비염, 호산구 식도염 및 건선으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 환자에서 IL-33 활성과 관련되거나 이에 의해 유발되는 질환 또는 장애의 치료용 약물을 제조하는데 있어서 본 발명의 항-IL-33 항체 또는 항체의 항원 결합부의 용도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 환자에서 IL-33 활성과 관련되거나, 이에 의해 유발되는 질환 또는 장애는 염증 질환 또는 장애이고, 여기서, 상기 염증 질환 또는 장애는 천식, 아토피성 피부염, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 관절염, 알레르기성 비염, 호산구 식도염 및 건선으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다..
다른 실시형태는 이어지는 상세한 설명의 검토로부터 명백해질 것이다.
도 1. 사람 IL-33에 대한 항-IL-33 항체들간의 교차 경쟁
도 2. 재조합 원숭이 IL-33에 대한 항-IL-33 항체들간의 교차 경쟁
상세한 설명
본 발명을 기술하기 전에, 본 발명은 기재된 특정 방법 및 실험적 조건으로 제한되지 않는 것으로 이해되어야 하는데 그 이유는 상기 방법 및 조건이 다양할 수 있기 때문이다. 또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시형태를 기술할 목적인 것이지 제한하고자 하는 것이 아닌 것으로 이해되어야 하는데 이는 본 발명의 범위가 첨부된 특허청구범위에 의해서만 제한되기 때문이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은, 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "약"은, 특정의 인용된 수치적 값과 관련하여 사용되는 경우에, 상기 값은 인용된 값으로부터 1% 이하만큼 다를 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 본원에서 사용되는 바와 같은 표현 "약 100"은 99 및 101, 그리고 이들 사이의 모든 값들(예를 들면, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.
본원에 기술되는 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료를 본 발명의 실행 또는 시험에 사용할 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료는 하기에 기술된다.
정의
본원세 사용되는 표현 "인터류킨-33", "IL-33" 등은 서열번호 307의 아미노산 서열을 갖는 사람 IL-33 단백질을 언급한다. 본원에서 단백질, 폴리펩타이드 및 단백질 단편에 대한 모든 언급은 비-사람 종(예를 들어, "마우스 IL-33," "원숭이 IL-33" 등)인 것으로 명백히 언급되지 않는 경우 각각의 단백질, 폴리펩타이드 또는 단백질 단편의 사람 버젼을 언급한다.
본원에 사용된 바와 같은 "IL-33에 결합하는 항체" 또는 "항-IL-33 항체"는 IL-33 단백질의 가용성 단편에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 가용성 IL-33 분자는 예를 들어, 단량체 및 이량체 IL-33 작제물과 같은 재조합 IL-33 단백질 변이체 뿐만 아니라 천연 IL-33 단백질을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는, 특정 항원(예를 들면, IL-33)에 특이적으로 결합하거나 특정 항원과 상호작용하는 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 임의의 항원-결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. 용어 "항체"는, 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 2개의 중(H)쇄들 및 2개의 경(L)쇄들인 4개의 폴리펩타이드 쇄들을 포함하는 면역글로불린 분자, 및 이의 다량체(예를 들면, IgM)를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 약기함) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은, CH1, CH2 및 CH3인 3개의 도메인들을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로 약기함) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(CL1)을 포함한다. VH 및 VL 영역은, 프레임워크 영역(FR)이라고 칭하는 보다 보존된 영역들 사이에 산재된 상보성 결정 영역(CDR)이라고 칭하는 초가변성 영역들로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은, 아미노-말단으로부터 카복시-말단까지 하기 순서로 배열된 3개의 CDR들 및 4개의 FR들로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 실시형태에서, 항-IL-33 항체(또는 이의 항원-결합부)의 FR은 사람 생식선 서열과 동일할 수 있거나, 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스 서열은, 2개 이상의 CDR들의 사이드-바이-사이드(side-by-side) 분석에 근거하여 정의될 수 있다.
또한, 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 완전 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합부", 및 항체의 "항원-결합 단편" 등은, 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는, 임의의 천연 발생 폴리펩타이드 또는 당단백질, 효소적으로 수득가능한 폴리펩타이드 또는 당단백질, 합성 폴리펩타이드 또는 당단백질, 또는 유전자 조작된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 완전 항체 분자로부터 임의의 적합한 표준 기술, 예를 들면, 단백질분해성 소화 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현에 관여하는 재조합 유전자 조작 기술을 이용하여 유도될 수 있다. 이러한 DNA는, 공지되어 있고/있거나, 예를 들면, 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예를 들면, 파지-항체 라이브러리 포함)로부터 쉽게 입수가능하거나, 합성될 수 있다. DNA는, 서열분석되고 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 이용함으로써 조작되어, 예를 들면, 1개 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 입체배치로 배열하거나, 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성시키거나, 아미노산 등을 변형, 부가, 또는 결실시킬 수 있다.
항원-결합 단편의 비-제한적 예로는: (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변성 영역(예를 들면, CDR3 펩타이드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR))을 모방하는 아미노산 잔기, 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드로 이루어진 최소 인식 단위가 포함된다. 또한, 다른 조작된 분자, 예를 들면, 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-절편이식된 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들면, 1가의 나노바디, 2가의 나노바디 등), 소형 모듈 면역 약제(SMIP: samll modular immunopharmaceutical), 및 상어 가변 IgNAR 도메인도 본원에서 사용되는 표현 "항원-결합 단편" 내에 포함된다.
항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 1개 이상의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성물로 이루어질 수 있고, 일반적으로, 1개 이상의 프레임워크 서열과 인접하거나 1개 이상의 프레임워크 서열과 프레임 내에 존재하는, 1개 이상의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 회합된 VH 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치될 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체성일 수 있고, VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 함유할 수 있다. 대안으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체의 항원-결합 단편은, 1개 이상의 불변 도메인에 공유결합적으로 링크된 1개 이상의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적 예시의 입체배치로는: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL이 포함된다. 상기 열거된 예시의 입체배치들 중 임의의 것을 포함하는, 가변 및 불변 도메인의 임의의 입체배치에 있어서, 가변 및 불변 도메인은, 서로에 대해 직접적으로 링크될 수 있거나, 완전 또는 부분 힌지 또는 링커 영역에 의해 링크될 수 있다. 힌지 영역은, 단일 폴리펩타이드 분자 내에 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이의 가요성(flexible) 또는 반-가요성(semi-flexible) 링크를 초래하는, 2개 이상(예를 들면, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 또한, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은, 상기 열거된 가변 및 불변 도메인 입체배치 중 임의의 것의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 기타 다량체)를, 서로의 및/또는 1개 이상의 단량체성 VH 또는 VL 도메인과의 비-공유결합적 회합으로(예를 들면, 디설파이드 결합(들)에 의해) 포함할 수 있다.
완전 항체 분자에 관해서, 항원-결합 단편은 단일 특이적 또는 다중 특이적(예를 들면, 이특이적)일 수 있다. 항체의 다중 특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 2개 이상의 상이한 가변 도메인들을 포함할 것이고, 여기서, 각각의 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시되는 예시의 이특이적 항체 포맷을 포함하는 임의의 다중 특이적 항체 포맷은, 당해 분야에서 이용가능한 일상적인 기술을 이용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 단편의 맥락에서 사용하기 위해 조정될 수 있다.
본 발명의 항체는, 보체-의존적 세포독성(CDC) 또는 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 통해 기능할 수 있다. "보체-의존적 세포독성"(CDC)은, 보체의 존재시 본 발명의 항체에 의한 항원-발현 세포의 용해를 말한다. "항체-의존적 세포-매개된 세포독성"(ADCC)은, Fc 수용체(FcRs)(예를 들면, 자연 살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포가, 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식함으로써 표적 세포의 용해를 초래하는, 세포-매개된 반응을 말한다. CDC 및 ADCC는, 당해 분야에 익히 공지되어 있고 이용가능한 검정을 이용하여 측정할 수 있다. (예를 들면, 문헌[미국 특허 제5,500,362호 및 제5,821,337호, 및 Clynes 등 (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656]을 참조한다). 항체의 불변 영역은, 보체를 고정하고 세포-의존적 세포독성을 매개하는 항체의 능력에 있어서 중요하다. 따라서, 항체의 이소형은, 세포독성을 매개하는 것이 항체에 바람직한지의 여부에 근거하여 선택될 수 있다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 본 발명의 항-IL-33 항체는 사람 항체이다. 본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는, 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 본 발명의 사람 항체는, 예를 들면, CDR에서 그리고 특정 CDR3에서 사람 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들면, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는, 다른 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 생식선으로부터 유도된 CDR 서열이 사람 프레임워크 서열 상에 절편이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
몇몇의 실시형태에서, 본 발명의 항체는 재조합 사람 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "재조합 사람 항체"는, 재조합 수단에 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리되는 모든 사람 항체, 예를 들면, 숙주 세포에 형질감염된 재조합 발현 벡터를 이용하여 발현되는 항체(하기에 추가로 기술됨), 재조합 조합적 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자전이된 동물(예를 들면, 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들면, 문헌[Taylor 등 (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295]을 참조한다) 또는 다른 DNA 서열에의 사람 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱(splicing)을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리되는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는, 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 실시형태에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내에서 돌연변이 유발(또는, 사람 Ig 서열에 대해 유전자전이된 동물이 이용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이 유발)되고, 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 사람 생식선 VH 및 VL 서열로부터 유도되고 이들과 관련되어 있지만, 생체내 사람 항체 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재할 수 없는 서열이다.
사람 항체는, 힌지 이종 혼합성(heterogeneity)과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 한 형태에서, 면역글로불린 분자는, 이량체들이 쇄간 중쇄 디설파이드 결합에 의해 고정된 대략 150 내지 160kDa의 안정한 4개의 쇄 작제물을 포함한다. 제2 형태에서, 이량체들은 쇄간 디설파이드 결합을 통해 링크되지 않고, 약 75 내지 80kDa의 분자는, 공유결합적으로 커플링된 경쇄 및 중쇄(반-항체(half-antibody))로 이루어진다. 이들 형태는, 친화성 정제 후에도 분리하기가 매우 곤란했다.
각종 온전한 IgG 이소형에서의 제2 형태의 출현 빈도는, 항체의 힌지 영역 이소형과 관련된 구조적 차이에 기인한 것이지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 사람 IgG4 힌지의 힌지 영역에서의 단일 아미노산 치환은, 사람 IgG1 힌지를 이용하여 전형적으로 관찰되는 수준으로 제2 형태의 출현을 유의하게 감소시킬 수 있다(Angal 등 (1993) Molecular Immunology 30:105). 본 발명은, 예를 들면, 생산시 원하는 항체 형태의 수율을 개선시키는데 바람직할 수 있는 힌지, CH2 또는 CH3 영역에 1개 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함한다.
본 발명의 항체는, 단리된 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 "단리된 항체"는, 항체의 자연 환경의 하나 이상의 구성성분으로부터 동정되고 분리되고/되거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 하나 이상의 구성성분으로부터, 또는 항체가 자연적으로 존재하거나 자연적으로 생성되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체가, 본 발명의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 또한, 단리된 항체로는, 재조합 세포 내의 동일 반응계(in situ) 항체가 포함된다. 단리된 항체는, 1개 이상의 정제 또는 단리 단계를 행한 항체이다. 특정 실시형태에 따르면, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 포함하지 않을 수 있다.
본 발명은 중화하고/하거나 차단하는 항-IL-33 항체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "중화하는" 또는 "차단하는" 항체는 IL-33에 결합하여 (i) IL-33 또는 IL-33 단편과 IL-33 수용체 성분(예를 들어, ST2, IL-1RAcP, 등)간의 상호작용을 간섭하고/하거나 (ii) IL-33의 하나 이상의 생물학적 기능을 억제하는 항체를 언급하는 것으로 의도된다. IL-33을 중화하거나 차단하는 항체에 의해 유발되는 억제는 이것이 적당한 검정을 사용하여 검출할 수 있는 한 완전할 필요는 없다. IL-33 억제를 검출하기 위한 예시적 검정은 본원의 실시예에 기재되어 있다.
본원에 기재된 항-IL-33 항체는, 이들 항체들이 유도된 상응하는 생식선 서열과 비교하여, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인들의 프레임워크 및/또는 CDR 영역들에 1개 이상의 아미노산 치환, 삽입, 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는, 예를 들면, 공공의 항체 서열 데이터베이스로부터 이용가능한 생식선 서열에 대해 본원에 개시된 아미노산 서열을 비교함으로써 용이하게 확인될 수 있다. 본 발명은, 본원에 개시된 아미노산 서열들 중 임의의 서열로부터 유도되는, 항체, 및 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서, 1개 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 1개 이상의 아미노산은, 이들 항체들이 유도된 생식선 서열의 상응하는 잔기(들)에 대해, 또는 다른 사람 생식선 서열의 상응하는 잔기(들)에 대해, 또는 상응하는 생식선 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환에 대해 돌연변이된다(이러한 서열 변화는 본원에서 총체적으로 "생식선 돌연변이"로서 나타냄). 당해 분야 숙련가는, 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 출발하여, 하나 이상의 개별 생식선 돌연변이 또는 이들의 조합을 포함하는 다수의 항체들 및 항원-결합 단편을 쉽게 제조할 수 있다. 특정 실시형태에서, VH 및/또는 VL 도메인 내의 프레임워크 및/또는 CDR 잔기들 전부는, 항체가 유도된 본래 생식선 서열에서 발견된 잔기로 역 돌연변이된다. 다른 실시형태에서, 특정 잔기들만이, 예를 들면, FR1의 처음 8개의 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개의 아미노산 내에서 발견된 돌연변이된 잔기들만이, 또는 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기들만이 본래 생식선 서열로 역 돌연변이된다. 다른 실시형태에서, 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상은, 상이한 생식선 서열(즉, 항체가 본래 유도된 생식선 서열과 상이한 생식선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 또한, 본 발명의 항체는, 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내에 2개 이상의 생식선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있고, 예를 들면, 여기서, 특정 개별 잔기들은 특정 생식선 서열의 상응하는 잔기에 대해 돌연변이되고, 한편, 본래 생식선 서열과 상이한 특정의 다른 잔기는 유지되거나, 상이한 생식선 서열의 상응하는 잔기에 대해 돌연변이된다. 일단 수득되면, 하나 이상의 생식선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은, 하나 이상의 바람직한 특성, 예를 들면, 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화도, 개선되거나 향상된 길항제 또는 작용제 생물학적 특성(경우에 따라), 감소된 면역원성 등에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적인 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편은 본 발명 내에 포함된다.
또한, 본 발명은, 하나 이상의 보존적 치환을 갖는, 본원에 개시되어 있는 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 임의의 서열의 변이체를 포함하는, 항-IL-33 항체를 포함한다. 예를 들면, 본 발명은, 본원에 제시되는 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 임의의 서열에 대하여, 예를 들면, 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 갖는, HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는, 항-IL-33 항체를 포함한다.
용어 "에피토프"는, 파라토프로서 공지되어 있는 항체 분자의 가변 영역에서의 특정 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원성 결정인자를 말한다. 단일 항원은 1개 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체들은 항원 상의 상이한 구역에 결합할 수 있고, 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 입체배좌 또는 선형일 수 있다. 입체배좌 에피토프는, 선형 폴리펩타이드 쇄의 상이한 분절로부터 공간적으로 병치된 아미노산에 의해 제조된다. 선형 에피토프는, 폴리펩타이드 쇄 내에서 인접한 아미노산 잔기들에 의해 제조된 에피토프이다. 특정 상황에서, 에피토프는 항원 상의 사카라이드, 포스포릴 그룹, 또는 설포닐 그룹의 모이어티들을 포함할 수 있다.
핵산 또는 이의 단편을 나타내는 경우의 용어 "실질적 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"은, 적절한 뉴클레오타이드 삽입 또는 다른 핵산(또는 이의 상보성 가닥)으로의 결실로 최적으로 정렬되는 경우, 서열 동일성의 임의의 익히 공지되어 있는 알고리듬, 예를 들면, 하기에 논의되는 바와 같은 FASTA, BLAST, 또는 Gap에 의해 측정시, 뉴클레오타이드 염기들의 적어도 약 95%, 보다 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 뉴클레오타이드 서열 동일성이 존재함을 나타낸다. 참조 핵산 분자에 대해 실질적 동일성을 갖는 핵산 분자는, 특정 예에 있어서, 표준 핵산 분자에 의해 암호화된 폴리펩타이드와 동일하거나 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 암호화할 수 있다.
폴리펩타이드에 적용되는 바와 같은 용어 "실질적 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"은, 2개의 펩타이드 서열들이, 예를 들면, 디폴트 갭 중량을 이용한 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 최적으로 정렬되는 경우에 적어도 95%의 서열 동일성, 더욱 더 바람직하게는 적어도 98% 또는 99%의 서열 동일성을 공유함을 의미한다. 바람직하게, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환이 상이하다. "보존적 아미노산 치환"은, 유사한 화학적 특성(예를 들면, 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄(R 그룹)를 갖는 다른 아미노산 잔기에 의해 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 2개 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 상이한 경우에, 서열 동일성 백분율 또는 유사성 정도는 상향 조정하여 치환의 보존적 성질을 교정할 수 있다. 이러한 조정을 이루기 위한 수단은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 예를 들면, 본원에 인용에 의해 포함된 문헌[Pearson (1994) Methods Mol Biol 24: 307-331]을 참조한다. 유사한 화학적 특성을 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 그룹의 예로는 (1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; (2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; (3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파테이트 및 글루타메이트, 및 (7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌이 포함된다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 그룹은: 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파테이트, 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안으로, 보존적 대체는, 문헌[Gonnet 등 (1992) Science 256: 1443-1445]에 개시되어 있는 PAM250 로그-우도(log-likelihood) 매트릭스에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다. "중간 정도 보존적" 대체는, PAM250 로그-우도 매트릭스에서 음이 아닌 값을 갖는 임의의 변화이다.
서열 동일성이라고도 나타내는 폴리펩타이드에 대한 서열 유사성은, 전형적으로, 서열 분석 소프트웨어를 이용하여 측정한다. 단백질 분석 소프트웨어는, 보존적 아미노산 치환을 포함하는 각종 치환, 결실 및 다른 변형에 할당된 유사성의 측정값을 이용하여 유사한 서열을 매칭시킨다. 예를 들면, GCG 소프트웨어는, 밀접하게 관련되어 있는 폴리펩타이드들, 예를 들면, 상이한 종의 유기체 유래의 상동성 폴리펩타이드들 사이의 또는 야생형 단백질과 이의 뮤테인 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 측정하기 위해, 디폴트 파라미터와 함께 사용될 수 있는 프로그램, 예를 들면, Gap 및 Bestfit을 함유한다. 예를 들면, GCG 버젼 6.1을 참조한다. 폴리펩타이드 서열은, 또한, GCG 버젼 6.1로의 프로그램인 디폴트 또는 추천된 파라미터를 이용한 FASTA를 이용하여 비교할 수 있다. FASTA(예를 들면, FASTA2 및 FASTA3)는, 쿼리 서열과 검색 서열 사이의 최고 중첩 영역의 정렬 및 서열 동일성 백분율을 제공한다(Pearson (2000) supra). 상이한 유기체 유래의 다수의 서열을 함유하는 데이터베이스와 본 발명의 서열을 비교하는 경우의 다른 바람직한 알고리듬은, 디폴트 파라미터를 이용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히, BLASTP 또는 TBLASTN이다. 예를 들면, 문헌[Altschul 등 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 및 Altschul 등 (1997) Nucleic Acids Res 25:3389-402]을 참조한다.
본원에 사용된 바와 같은 "염증 질환 또는 장애"는 병리학이 전반적으로 또는 부분적으로 면역계의 세포의 수의 변화, 이동 속도의 변화 또는 이의 활성화 변화를 유도하는 질환, 장애 또는 병리학적 병태를 언급한다. 상기 면역계의 세포는 예를 들어, T 세포, B 세포, 단핵구 또는 대식세포, 항원 제공 세포(APC), 수지상 세포, 미세아교세포, NK 세포, 호중구, 호산구, 비만 세포 또는 면역과 특이적으로 관련된 임의의 다른 세포, 예를 들어, 사이토킨 생산 내피 세포 또는 상피 세포를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 하나의 실시형태에서, 상기 "염증 질환 또는 장애"는 천식(스테로이드 내성 천식, 스테로이드 민감성 천식, 호산성 천식 또는 비-호산성 천식, 알레르기, 과민증, 다발성 경화증, 염증 장 장애(예를 들어, 크론 질환 또는 궤양성 대장염), 만성 폐색성 폐 질환(직접 또는 간접 흡연과 과련되거나 부분적으로 이에 의해 유발되거나 이의 노출로부터 비롯되거나 아닐 수 있는 COPD), 낭창, 아토피성 피부염, 건선, 피부경화증 및 다른 섬유증 질환, 쇼그렌 증후군, 혈관염(베쳇(behcet's) 질환, 거대 세포 동맥염, 헤노흐-손라인 (Henoch-Schonlein) 자반증 및 척스트라우스 증후군) 및 관절염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 면역 장애 또는 병태이다. 또 다른 실시형태에서, 상기 관절염은 류마티스 관절염, 골관절염 및 건선 관절염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 "염증 질환 또는 장애"는 TH1-형 반응 또는 TH2-형 반응을 포함하는 면역 장애 또는 병태이다.
본원에 사용된 바와 같은 문구 "IL-33-매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시키다"는 본원에 기재된 IL-33 항체와 같은 길항제의 부재하에 IL-33이 ST2 및 IL-1RAcP를 통해 신호 전달을 자극하는 정도와 상대적으로 본원에 기재된 IL-33 항체와 같은 길항제의 존재하에 감소되는 ST2 및 IL-1RAcP를 통해 IL-33이 신호 전달을 자극하는 정도를 언급한다. 억제 정도를 조사하기 위해, 샘플은 잠재적 억제제/길항제로 처리하고 억제제/길항제가 없는 대조군 샘플과 비교한다. 대조군 샘플, 즉 길항제로 처리되지 않은 대조군 샘플은 상대적 활성 값을 100%로 할당한다. 억제는 대조군과 비교하여 활성 값이 약 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 또는 20% 미만인 경우 성취된다. 억제에서 종점은 예를 들어, 염증, 또는 세포 탈과립 분비 또는 사이토킨 방출과 같은 활성화의 지시기의 특정의 양 또는 %를 포함할 수 있다. ST2 및 IL-1RAcP를 통한 IL-33 신호 전달의 억제는 실시예 6에 기재된 바와 같이 시험관내 분석에서 IL-33 신호 전달에 대해 분석함에 의해 결정할 수 있다. 추가로, 생체내 분석을 사용하여 분자가 IL-33의 길항제인지를 결정할 수 있다. 예를 들어, 실시예 11 및 12에서 기재된 바와 같은 생체내 분석을 사용하여 사람 IL-33의 발현에 대해 동종접합성인 알레르겐-감작화된 동물에서 폐 염증에 대한, IL-33 항체의 효과를 평가할 수 있다. 알레르겐으로 동물을 감작화시킨 후, 동물의 서브세트를 본 발명의 항-IL-33 항체 또는 음성 이소형 대조군 항체로 처리한다. 이후, 상기 동물을 희생시키고 폐는 세포 침투 평가 및 사이토킨 측정(IL-4 및 IL-5)을 위해 수거한다. 길항제로서 효과적인 IL-33 항체는 폐에서 염증 세포를 감소시키는 경향 및 IL-4 및 IL-5와 같은 사이토킨을 감소시키는 경향을 입증해야만 한다.
항체의 생물학적 특성
본 발명은 사람 IL-33에 결합하여 IL-33 매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시키는 항-IL-33 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 항-IL-33 항체는 예를 들어, 항체가 (1) 세포 기반 생물검정에서 IL-33 매개된 신호 전달의 억제; (2) 사람 호염구의 IL-33 유도된 탈과립의 억제; (3) 사람 PBMC로부터 IL-33 유도된 IFNγ 생산의 억제; (4) 알레르겐, 예를 들어, IL-4 또는 IL-5와 같은 알레르겐에 대한 노출 결과로서 포유동물에서 상승되는 사이토킨 수준의 감소; 및 (5) 알레르겐(예를 들어, 집 먼지 진드기(HDM))에 대한 급성 또는 만성 노출로부터 비롯되는 폐 염증의 억제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 성질을 나타내는 경우 "IL-33 매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시키는" 것으로 간주된다.
세포 기반 생검정에서 IL-33 매개된 신호 전달의 억제는 항-IL-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편이, 예를 들어, 본원의 실시예 6에 정의된 바와 같은 검정 포맷 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여 IL-33 결합에 응답하여 검출가능한 신호를 생성하는 IL-33 수용체 및 리포터 요소를 발현하는 세포에서 생성된 신호를 억제하거나 감소시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명은 사람 ST2를 발현하는 세포에서 IL-33 매개된 신호전달을 차단하는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하고, IC50은 예를 들어, 본원의 실시예 5에 정의된 바와 같은 검정 포맷 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용한 세포 기반 차단 생검정으로 측정시 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 350 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 250 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만이다.
사람 호염구의 IL-33 유도된 탈과립의 억제는 항-IL-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어, 실시예 7의 검정 시스템 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용한 측정시 시험관내 IL-33 유도된 호염구 탈과립을 억제하거나 이의 정도를 감소시킨다는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명은 사람 IL-33의 존재(예를 들어, 약 100pM 최종 농도)하에 사람 호염구의 탈과립을 억제하는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하고, IC50은 예를 들어, 본원의 실시예 7에 정의된 검정 포맷 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용한 시험관내 사람 호염구 탈과립 검정으로 측정시 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 350 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 250 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만이다.
사람 PBMC로부터 IL-33 유도된 IFNγ 생산의 억제는 항-IL-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 예를 들어, 실시예 8의 검정 시스템 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용한 측정시 사람 IL-12의 존재하에 사람 IL-33으로 처리된 PBMC로부터 방출된 IFNγ를 억제하거나 이의 양을 감소시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명은 사람 IL-12의 존재하에 IFNγ의 IL-33 유도된 방출을 억제하는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하고, IC50은 예를 들어, 본원의 실시예 8에 정의된 검정 포맷을 사용한 IL-33 유도된 IFNγ 방출 검정 또는 실질적으로 유사한 검정으로 측정시 약 50 nM 미만, 약 25 nM 미만, 약 20 nM 미만, 약 15 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만 또는 약 300 pM 미만이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 항-IL-33 항체 및 항원 결합 단편은 IL-33의 IL-33 수용체(예를 들어, ST2)로의 결합을 차단한다. 예를 들어, 본 발명은 시험관내 IL-33의 ST2로의 결합을 차단하는 항-IL-33 항체를 포함하고, IC50 값은 예를 들어, 본원의 실시예 4에 정의된 검정 포맷을 사용한 ELISA-기반 면역검정 또는 실질적으로 유사한 검정에 의한 측정시 약 15 nM 미만이다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 시험관내에서 IL-33의 ST2로의 결합을 차단하고, IC50 값은 예를 들어, 본원의 실시예 4에 정의된 검정 포맷을 사용한 ELISA 기반 면역검정 또는 실질적으로 유사한 검정에 의한 측정시 약 10 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 280 pM 미만, 약 260 pM 미만, 약 250 pM 미만, 약 240 pM 미만, 약 230 pM 미만, 약 220 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 180 pM 미만, 약 160 pM 미만, 또는 약 150 pM 미만이다.
그러나, 다른 실시형태에서, 본 발명의 특정 항-IL-33 항체 및 항원 결합 단편은 IL-33 매개된 신호 잔달을 억제하거나 약화시키는 능력을 갖는다 하더라도 IL-33과 ST2의 상호작용을 차단하지 못하거나 단지 부분적으로 차단한다. 상기 항체 및 이의 항원 결합 단편은 본원에서 "간접적 차단제"로서 언급될 수 있다. 이론에 국한되는 것 없이, 본 발명의 간접적 차단제는 IL-33의 ST2 결합 도메인과 중첩하거나 단지 부분적으로 중첩하는 에피토프에서 IL-33과 결합함에 의해 기능하지만 그럼에도 불구하고 IL-33/ST2 상호작용을 직접적으로 차단시키는 것 없이 IL-33 매개된 신호 전달을 방해한다.
본 발명은 고친화성으로 가용성 IL-33 분자에 결합하는 항-IL-33 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 IL-33에 결합하는 (예를 들어, 25℃ 또는 37℃에서) 항체 및 항체의 항원 결합 단편을 포함하고 KD는 예를 들어, 본원의 실시예 3에 정의된 검정 포맷을 사용한 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 약 10nM 미만이다. 특정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 IL-33에 결합하고, KD는 예를 들어, 본원의 실시예 3에 정의된 검정 포맷 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용한 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 약 5 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 800 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 180 pM 미만, 또는 약 160 pM 미만이다.
본 발명은 IL-33과 특이적으로 결합하는 항-IL-33 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하고, IL-33은 해리 반감기(t½)가 예를 들어, 본원의 실시예 3에 정의된 검정 포맷 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정 시 약 10분 초과이다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 IL-33에 결합하고, IL-33은 t½이 본원의 실시예 3에 정의된 검정 포맷 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정 시 약 20분 초과, 약 30분 초과, 약 40분 초과, 약 50분 초과, 약 60분 초과, 약 70분 초과, 약 80분 초과, 약 90분 초과, 약 100분 초과이다.
본 발명의 항체는 상기 언급된 생물학적 특성 중 하나 이상 또는 이의 임의의 조합 특성을 소유할 수 있다. 본 발명의 항체의 다른 생물학적 특성은 본원의 실시예를 포함하는 본원의 기재를 검토함으로써 당업자에게 자명할 것이다.
Fc 변이체를 포함하는 항-IL-33 항체
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 예를 들면, 중성 pH에 비하여 산성 pH에서 FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 향상시키거나 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는, 항-IL-33 항체가 제공된다. 예를 들면, 본 발명은, Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역에 돌연변이를 포함하는 항-IL-33 항체를 포함하고, 여기서, 상기 돌연변이(들)은 산성 환경에서(예를 들면, pH가 약 5.5 내지 약 6.0의 범위인 엔도솜에서) FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화도를 증가시킨다. 이러한 돌연변이는, 동물에게 투여되는 경우 항체의 혈청 반감기의 증가를 초래할 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비-제한적 예로는, 예를 들면, 위치 250(예를 들면, E 또는 Q); 250 및 428(예를 들면, L 또는 F); 252(예를 들면, L/Y/F/W 또는 T), 254(예를 들면, S 또는 T), 및 256(예를 들면, S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 위치 428 및/또는 433(예를 들면, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434(예를 들면, H/F 또는 Y)에서의 변형; 또는 위치 250 및/또는 428에서의 변형; 또는 위치 307 또는 308(예를 들면, 308F, V308F), 및 434에서의 변형이 포함된다. 한 실시형태에서, 상기 변형은, 428L(예를 들면, M428L) 및 434S(예를 들면, N434S) 변형; 428L, 259I(예를 들면, V259I), 및 308F(예를 들면, V308F) 변형; 433K(예를 들면, H433K) 및 434(예를 들면, 434Y) 변형; 252, 254, 및 256(예를 들면, 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예를 들면, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예를 들면, 308F 또는 308P)을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 변형은 265A(예를 들면, D265A) 및/또는 297A(예를 들면, D297A) 변형을 포함한다
예를 들면, 본 발명은, 250Q 및 248L(예를 들면, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예를 들면, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예를 들면, M428L 및 N434S); 및 433K 및 434F(예를 들면, H433K 및 N434F)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 돌연변이의 1개 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는, 항-IL-33 항체를 포함한다. 상기 Fc 도메인 돌연변이의 모든 가능한 조합, 및 본원에 개시되는 항체 가변 도메인 내의 다른 돌연변이들은, 본 발명의 범위 내에서 고려된다.
본 발명은 또한 키메라 중쇄 불변(CH) 영역을 포함하는 항-IL-33 항체를 포함하고, 여기서, 상기 키메라 CH 영역은 하나 이상의 면역글로불린 이소형의 CH 영역으로부터 유래된 절편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 IgG4 분자로부터 유래된 CH3의 일부 또는 전부와 조합된 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 분자로부터 유래된 CH2의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 CH 영역을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에 따르면, 본 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 갖는 키메라 CH 영역을 포함한다. 예를 들어, 키메라 힌지는 "사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 힌지 영역으로부터 유래된 "하부 힌지" 서열(EU 번호매김에 따른 위치 228번 내지 236번의 아미노산 잔기)과 조합된 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 힌지 영역으로부터 유래된 "상부 힌지" 아미노산 서열 (EU 번호매김에 따른 위치 216번 내지 227번의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에 따르면, 상기 키메라 힌지 영역은 사람 IgG1 또는 사람 IgG4 상부 힌지로부터 유래된 아미노산 서열 및 사람 IgG2 하부 힌지로부터 유래된 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 키메라 CH 영역을 포함하는 항체는 특정 실시형태에서 항체의 치료 또는 약리역학적 성질에 역으로 영향을 미치지 않으면서 변형된 Fc 이펙터 기능을 나타낼 수 있다. (문헌참조: 예를 들어, 2013년 2월 1일자 출원된 미국 가출원 번호. 제61/759,578호).
에피토프 맵핑 및 관련 기술
본 발명은 IL-33의 하나 이상의 아미노산과 상호작용하는 항-IL-33 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 IL-33의 ST2-상호작용 도메인내 위치된 하나 이상의 아미노산과 상호작용하는 항-IL-33 항체를 포함한다. 항체가 결합하는 에피토프는 IL-33의 3개 이상(예를 들어, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상)의 아미노산의 단일 연속 서열로 이루어질 수 있다. 대안으로, 상기 에피토프는 IL-33의 다수의 비-연속 아미노산(또는 아미노산 서열)으로 이루어질 수 있다.
당해 분야 숙련가에게 공지되어 있는 각종 기술은, 항체의 항원-결합 도메인이 폴리펩타이드 또는 단백질 내의 "1개 이상의 아미노산과 상호작용하는"지를 측정하는데 사용할 수 있다. 예시적 기술로는, 예를 들면, 일상적인 가교-차단 검정, 예를 들면, 문헌[Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)]에 기술된 바와 같은 것, 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩타이드 블롯 분석(Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463), 및 펩타이드 절단 분석이 포함된다. 또한, 에피토프 절개, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법을 사용할 수 있다(Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496). 항체가 상호작용하는 폴리펩타이드 내의 아미노산을 동정하는데 사용될 수 있는 다른 방법은, 질량 분광법에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적으로, 수소/중수소 교환 방법은, 목적하는 단백질을 중수소-표지하고, 이어서, 중수소-표지된 단백질에 항체를 결합시키는 것을 포함한다. 이어서, 단백질/항체 복합체는 물로 이동시켜, 항체에 의해 보호된 잔기(이는 중수소-표지된 상태를 유지함)를 제외한 모든 잔기에서 수소-중수소 교환이 일어나도록 한다. 항체의 해리 후, 표적 단백질은 프로테아제 절단 및 질량 분광 분석을 수행하여, 항체가 상호작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기를 드러낸다. 예를 들면, 문헌[Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A]을 참조한다.
본 발명은 본원에 기재된 임의의 특정 예시적 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-IL-33 항체(예를 들어, H1M9559N, H1M9566N, H1M9568N, H4H9629P, H4H9633P, H4H9640P, H4H9659P, H4H9660P, H4H9662P, H4H9663P, H4H9664P, H4H9665P, H4H9666P, H4H9667P, H4H9670P, H4H9671P, H4H9672P, H4H9675P, H4H9676P, H1M9565N 등)을 추가로 포함한다. 또한, 본 발명은 또한 본원에 기재된 임의의 특정 예시적 항체와 IL-33에 결합하기 위해 경쟁하는 항-IL-33 항체(예를 들어, H1M9559N, H1M9566N, H1M9568N, H4H9629P, H4H9633P, H4H9640P, H4H9659P, H4H9660P, H4H9662P, H4H9663P, H4H9664P, H4H9665P, H4H9666P, H4H9667P, H4H9670P, H4H9671P, H4H9672P, H4H9675P, H4H9676P, H1M9565N 등)를 포함한다.
당업자는, 당해 분야에 공지되어 있고 본원에 예시된 일상적인 방법을 이용함으로써, 항체가, 본 발명의 참조 항-IL-33 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지, 또는 결합에 대해 상기 참조 항체와 경쟁하는지를 쉽게 결정할 수 있다. 예를 들면, 시험 항체가, 본 발명의 참조 항-IL-33 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 결정하기 위해, 상기 참조 항체는 IL-33 단백질에 결합하도록 한다. 이어서, IL-33 분자에 결합하는 시험 항체의 능력을 평가한다. 시험 항체가, 참조 항-IL-33 항체와의 포화 결합 후 IL-33에 결합할 수 있는 경우, 시험 항체는 참조 항-IL-33 항체와 상이한 에피토프에 결합한다고 결론지을 수 있다. 한편, 시험 항체가, 참조 항-IL-33 항체와의 포화 결합에 이어서 IL-33 분자에 결합할 수 없는 경우, 이때, 시험 항체는, 본 발명의 표준 항-IL-33 항체에 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 이어서 추가의 일상적인 실험(예를 들면, 펩타이드 돌연변이 및 결합 분석)을 수행하여 시험 항체의 관찰된 결합 부재가 사실 참조 서열과 동일한 에피토프에 결합함으로 인한 건지 또는 입체 블록킹(또는 다른 현상)이 관찰된 결합 부재에 관여하는지를 확인할 수 있다. 이러한 종류의 실험은, ELISA, RIA, Biacore, 유동세포 측정법 또는 당해 분야에서 입수가능한 임의의 다른 정량적 또는 정성적 항체-결합 검정을 이용하여 수행할 수 있다. 본 발명의 특정 실시 형태에 따라, 예를 들면, 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100-배 과량의 하나의 항체가, 경쟁적 결합 검정(참조: 예를 들면, Junghans 등, Cancer Res. 1990:50:1495-1502)으로 측정시, 50% 이상, 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%까지 다른 항체의 결합을 저해하는 경우, 2개의 항체는 동일한(또는 오버랩핑) 에피토프에 결합한다. 대안으로, 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원 내의 필수적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소하거나 제거하는 경우, 2개의 항체는 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 생각된다. 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 아미노산 돌연변이의 서브세트만이 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우, 2개의 항체는 "중첩 에피토프"를 갖는 것으로 생각된다.
항체가, 결합에 대해 참조 항-IL-33 항체와 경쟁하는지를 결정하기 위하여, 상기-기술된 결합 방법을 2개의 배향으로 수행한다: 제1 배향에서, 참조 항체를 포화 조건 하에 IL-33 단백질에 결합하도록 하고, 이어서, IL-33 분자에 대한 시험 항체의 결합을 평가하도록 한다. 제2 배향에서, 시험 항체를 포화 조건 하에 IL-33 분자와 결합하도록 하고, 이어서, IL-33 분자에 대한 참조 IL-33 항체의 결합을 평가하도록 한다. 상기 배향 둘 다에서, 제1 (포화) 항체가 IL-33 분자에 결합할 수 있는 경우, 이때, IL-33에 결합하기 위해 시험 항체 및 참조 항체가 경쟁한다고 결론지어진다. 당해 분야의 통상의 숙련가에게 이해될 것인 바와 같이, 결합에 대해 참조 항체와 경쟁하는 항체는, 참조 항체와 동일한 에피토프에 필수적으로 결합하지 않을 수 있지만, 중첩되거나 인접한 에피토프에 결합시킴으로써 참조 항체의 결합을 입체적으로 차단할 수 있다.
사람 항체의 제조
완전한 사람 모노클로날 항체를 포함하는 모노클로날 항체를 제조하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 임의의 상기 공지된 방법은 본 발명에 따라 사용하여 사람 IL-33에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 제조할 수 있다.
예를 들어, VELOCIMMUNE™ 기술, 또는 완전한 사람 모노클로날 항체를 제조하기 위한 임의의 다른 공지된 방법을 사용하여, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 IL-33에 대한 고친화성 키메라 항체를 처음에 단리한다. 하기 실험 섹션에서와 같이, 특징 분석하고 친화성, 선택성, 에피토프 등을 포함하는 요망될 수 있는 특징에 대해 선별한다. 경우에 따라, 마우스 불변 영역은 요망되는 사람 불변 영역으로 대체하여 예를 들어, 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4와 같이 완전한 사람 항-IL-33 항체를 제조한다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 다양할 수 있지만, 고친화성 항원 결합 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 있다. 특정 경우에, 완전한 사람 항-IL-33 항체는 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리한다.
생물학적 등가성
본 발명의 항-IL-33 항체 및 항체 단편은 기재된 항체의 서열로부터 변하지만 사람 IL-33에 결합하는 능력을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 단백질을 포함한다. 이러한 변이체 항체 및 항체 단편은 모 서열과 비교하는 경우, 아미노산의 1개 이상의 부가, 결실, 또는 치환을 포함하지만, 기재된 항체의 생물학적 활성과 필수적으로 등가인 생물학적 활성을 나타낸다. 또한, 본 발명의 항-IL-33 항체 암호화 DNA 서열은 기재된 서열과 비교하는 경우 뉴클레오타이드의 하나 이상의 부가, 결실 또는 치환을 포함하지만 본 발명의 항-IL-33 항체 또는 항체 단편과 필수적으로 생물학적 등가인 항-IL-33 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함한다. 상기 변이체 아미노산 및 DNA 서열의 예는 상기에서 논의된다.
2개의 항원-결합 단백질, 또는 항체는, 예를 들면, 이들이 약제학적으로 등가물인 경우에, 또는 이의 흡수 속도 및 정도가 유사한 실험 조건 하에 단일 용량 또는 다중 용량의 동일한 몰 용량으로 투여되는 경우에 유의한 차이를 나타내지 않는 약제학적 대체물인 경우에 생물학적 등가성인 것으로 간주된다. 몇몇 항체는, 이들이 이들의 흡수의 정도에 있어서 등가이지만 이들의 흡수 속도에 있어서 등가가 아닌 경우 등가물 또는 약제학적 대체물인 것으로 간주될 것이고, 흡수 속도에 있어서의 이러한 차이는 의도적이고 표지화에서 반영되며, 예를 들면, 만성적 사용시 효과적인 체내 약물 농도의 획득에 필수적이지 않으므로 여전히 생물학적 등가성인 것으로 고려될 수 있으며, 연구된 특정 약물 제품에 대해 의학적으로 유의하지 않은 것으로 간주된다.
하나의 실시형태에서, 2개의 항원-결합 단백질은, 이들의 안전성, 순도, 및 효력에 있어서 임상학적으로 의미 있는 차이가 없는 경우에 생물학적 등가성이다.
하나의 실시형태에서, 2개의 항원-결합 단백질은, 환자가, 참조 생성물과 생물학적 생성물 사이의 스위칭(switching) 없이 지속된 치료요법과 비교하여, 면역원성에 있어서의 임상학적으로 유의한 변화, 또는 감소된 효율성을 포함하는 부작용의 위험에 있어서 예측된 증가 없이 참조 생성물과 생물학적 생성물 사이에서 1회 이상 스위칭될 수 있는 경우에 생물학적 등가성이다.
한 실시형태에서, 2개의 항원-결합 단백질은, 이들 둘 다가, 작용 메커니즘이 공지되어 있는 정도로 사용 조건 또는 사용 조건들에 대한 일반적인 메커니즘 또는 메커니즘들에 의해 작용하는 경우에 생물학적 등가성이다.
생물학적 등가성은 생체내 및 시험관내 방법에 의해 입증될 수 있다. 생물학적 등가성 척도는, 예를 들면, (a) 항체 또는 이의 대사물의 농도가 시간의 함수로서 혈액, 혈장, 혈청 또는 다른 생물학적 유체 중에서 측정되는, 사람 또는 기타 포유동물에서의 생체내 시험; (b) 사람 생체내 생체 이용률 데이터와 상호관련되어 있고 사람 생체내 생체 이용률 데이터가 충분하게 예측되는, 시험관내 시험; (c) 항체(또는 이의 표적)의 적절한 급성의 약리학적 효과가 시간의 함수로서 측정되는, 사람 또는 다른 포유동물에서의 생체내 시험; 및 (d) 항체의 안전성, 효능, 또는 생체 이용률 또는 생물학적 등가성을 확립하는 잘-제어된 임상 시험을 포함한다.
본 발명의 항-IL-33 항체의 생물학적 등가성 변이체는, 예를 들면, 생물학적 활성에 필요하지 않은 말단 또는 내부 잔기 또는 서열의 각종 치환 또는 생물학적 활성에 필요하지 않은 말단 또는 내부 잔기 또는 서열의 결실을 제조함으로써 작제될 수 있다. 　예를 들면, 생물학적 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기는 결실되거나 다른 아미노산으로 대체되어 복원(renaturation)시 불필요하거나 부정확한 분자내 디설파이드 가교의 형성을 방지할 수 있다. 다른 관점에서, 생물학적 등가성 항체는, 항체의 당화 특성을 변형시키는 아미노산 변화, 예를 들면, 당화를 제거하거나 삭제하는 돌연변이를 포함하는, 항-IL-33 항체 변이체를 포함할 수 있다.
종 선택성 및 종 교차-반응성
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 사람 IL-33에 결합하지만, 다른 종 유래의 IL-33에는 결합하지 않는 항-IL-33 항체가 제공된다. 본 발명은 또한 사람 IL-33 및 하나 이상의 비-사람 종 기원의 IL-33에 결합하는 항-IL-33 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항-IL-33 항체는 사람 IL-33을 결합할 수 있고 마우스, 래트, 기니아 피그, 햄스터, 게르빌, 돼지, 고양이, 개, 토끼, 염소, 양, 소, 말, 낙타, 사이노몰거스, 마모셋, 레서스 또는 침팬지 IL-33 중 하나 이상에 결합하거나 결합하지 않을 수 있다. 본 발명의 특정 예시적 실시형태에 따라, 사람 IL-33 및 사이노몰구스 원숭이 (예를 들어, Macaca fascicularis) IL-33에 특이적으로 결합하는 항-IL-33 항체가 제공된다.
면역접합체
본 발명은, 세포독소, 화학치료 약물, 면역 억제제 또는 방사성 동위원소와 같은 치료 모이어티("면역 접합체")에 접합된 항-IL-33 모노클로날 항체를 포함한다. 세포독성제는, 세포에 유해한 임의의 제제를 포함한다. 면역 접합체를 형성하기 위한 적합한 세포독성제 및 화학치료제의 예는 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들면, WO 05/103081을 참조한다)
다중특이적 항체
본 발명의 항체는 단일 특이적, 이특이적, 또는 다중 특이적일 수 있다. 다중 특이적 항체는, 1개의 표적 폴리펩타이드의 상이한 에피토프들에 대해 특이적일 수 있거나, 1개 초과의 표적 폴리펩타이드에 대한 항원-결합 도메인을 함유할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Tutt 등, 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer 등, 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244]을 참조한다. 본 발명의 항-IL-33 항체는 다른 기능성 분자, 예를 들면, 다른 펩타이드 또는 단백질에 링크되거나 이들과 동시-발현될 수 있다. 예를 들면, 항체 또는 이의 단편은, 1개 이상의 다른 분자 실체(entity)들, 예를 들면, 다른 항체 또는 항체 분자에 (예를 들면, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유결합적 회합 또는 기타에 의해) 기능적으로 링크되어 제2 결합 특이성을 갖는 이-특이적 또는 다중 특이적 항체를 제조할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 이특이적 항체를 포함하고, 여기서, 면역글로불린의 1개의 아암은 사람 IL-33 또는 이의 단편에 특이적이고 상기 면역글로불린의 다른 아암은 제2 치료 표적에 대해 특이적이거나 치료 모이어티에 접합된다.
본 발명의 문맥에 사용될 수 있는 예시적인 이특이적 항체 포맷은 제1 면역글로불린 (Ig)CH3 도메인 및 제2 Ig CH3 도메인의 사용을 포함하고, 여기서, 제1 및 제2 Ig CH3 도메인은 적어도 하나의 아미노산에서 서로 상이하고 적어도 하나의 아미노산 차이는 아미노산 차이가 없는 이특이적 항체와 비교하여 이특이적 항체의 단백질 A로의 결합을 감소시킨다. 하나의 실시형태에서, 제1 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고 제2 Ig CH3 도메인은 H95R 변형(IMGT 엑손 번호매김에 의해; EU 번호매김에 의해 H435R)와 같이 단백질 A 결합을 감소시키거나 제거하는 돌연변이를 포함한다. 제2 CH3은 Y96F 변형(IMGT에 의해; EU에 의해 Y436F)을 추가로 포함할 수 있다. 제2 CH3 내에서 발견될 수 있는 추가의 변형은 다음을 포함한다: IgG1 항체의 경우에 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I (IMGT에 의해; EU에 의해 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I); IgG2 항체의 경우에 N44S, K52N, 및 V82I (IMGT; EU에 의해 N384S, K392N, 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우에 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I (IMGT에 의해; EU에 의해 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, 및 V422I). 상기된 이특이적 항체 포맷에 대한 변형은 본 발명의 범위내에서 고려된다.
본 발명에 사용될 수 있는 다른 예시적 이특이적 포맷은 제한없이 예를 들어, scFv 기반 또는 디아바디 이특이적 형태, IgG-scFv 융합체, 이원 가변 도메인(DVD)-Ig, 쿠아드로마(Quadroma), 크놉-인투=홀(knobs-into-holes), 통상적인 경쇄(예를 들어, 크놉-인투-홀 등을 갖는 통상의 경쇄), CrossMab, CrossFab, (씨드)바디, 류신 지퍼, 두오바디, IgG1/IgG2, 이원 작용 Fab (DAF)-IgG, 및 Mab2 이특이적 포맷 (문헌참조: 예를 들어, Klein 등 2012, mAbs 4:6, 1-11, 및 이전의 포맷의 검토를 위해 본원에 인용된 문헌들)을 포함한다. 이특이적 항체는 또한 펩타이드/핵산 접합을 사용하여 작제될 수 있고, 예를 들어, 여기서 직교의 화학적 반응성을 갖는 비천연 아미노산을 사용하여 부위 특이적 항체 올리고뉴클레오타이드 접합체를 제조하고 이어서 이는 규정된 조성, 결합가 및 기하학적 구조를 갖는 다량체성 복합체로 자가 어셈블리한다. (문헌참조: 예를 들어, Kazane 등, J. Am. Chem . Soc. [Epub: Dec . 4, 2012]).
pH-의존성 결합
본 발명은 pH-의존적 방식으로 IL-33에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 항-IL-33 항체는 중성 pH와 비교하여 산성 pH에서 IL-33에 대해 감소된 결합을 나타낼 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 항-IL-33 항체는 중성 pH와 비교하여 산성 pH에서 이의 항원에 대해 증진된 결합을 나타낼 수 있다.
특정 예에서, "중성 pH에 비하여 산성 pH에서 IL-33에 대해 감소된 결합"은, 중성 pH에서의 IL-33에의 항체 결합의 KD 값에 대한 산성 pH에서의 IL-33에의 항체 결합의 KD 값의 비(또는 역으로)의 관점에서 나타낸다. 예를 들면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 3.0 이상의 산성/중성 KD 비를 나타내는 경우, 본 발명의 목적을 위한 "중성 pH에 비하여 산성 pH에서 IL-33에 대한 감소된 결합"을 나타내는 것으로 간주될 수 있다. 특정 예시적 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편에 대한 산성/중성 KD 비는 약 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 11.0, 11.5, 12.0, 12.5, 13.0, 13.5, 14.0, 14.5, 15.0, 20.0. 25.0, 30.0, 40.0, 50.0, 60.0, 70.0, 100.0 또는 그 이상일 수 있다.
pH-의존적 결합 특성을 갖는 항체는, 예를 들면, 중성 pH에 비하여 산성 pH에서 특정 항원에 대한 감소된(또는 향상된) 결합을 위해 항체의 집단을 스크리닝함으로써 얻어질 수 있다. 추가로, 아미노산 수준에서의 항원-결합 도메인의 변형은 pH-의존적 특징을 갖는 항체를 수득할 수 있다. 예를 들면, (예를 들면, CDR 내의) 항원-결합 도메인의 1개 이상의 아미노산을 히스티딘 잔기로 치환함으로써, 중성 pH에 비하여 산성 pH에서 감소된 항원-결합을 갖는 항체를 얻을 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 표현 "산성 pH"는 약 6.0 이하, 약 5.5 이하 또는 약 5.0 이하의 pH를 의미한다. 표현 "산성 pH"는, 약 6.0, 5.95, 5,9, 5.85, 5.8, 5.75, 5.7, 5.65, 5.6, 5.55, 5.5, 5.45, 5.4, 5.35, 5.3, 5.25, 5.2, 5.15, 5.1, 5.05, 5.0, 또는 그 미만의 pH 값을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 표현 "중성 pH"는 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 의미한다. 표현 "중성 pH"는 약 7.0, 7.05, 7.1, 7.15, 7.2, 7.25, 7.3, 7.35, 및 7.4의 pH 값을 포함한다.
치료 제형 및 투여
본 발명은 항-IL-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 약제학적 조성물은, 적합한 담체, 부형제, 및 개선된 수송, 전달, 및 내성 등을 제공하는 기타 제제와 함께 제형화된다. 다수의 적절한 제형은 모든 약사에게 공지되어 있는 처방서[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA]에서 발견될 수 있다. 이들 제형으로는, 예를 들면, 산제, 페이스트제, 연고제, 젤리제, 왁스제, 오일제, 지질제, 지질(양이온성 또는 음이온성) 함유 소낭(예를 들면, LIPOFECTIN™, Life Technologies, Carlsbad, CA), DNA 접합체, 무수 흡착 페이스트제, 수-중-유 및 유-중-수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(각종 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 겔, 및 카보왁스 함유 반-고체 혼합물이 포함된다. 또한, 문헌[Powell 등 "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참조한다.
환자에게 투여되는 항체의 용량은, 환자의 연령 및 체격, 표적 질환, 병태, 및 투여 경로 등에 따라 변할 수 있다. 바람직한 용량은 통상적으로 체중 또는 체표면적에 따라 계산된다. 본 발명의 항체가 성인 환자에서의 IL-33 활성과 관련된 병태 또는 질환을 치료하기 위해, 본 발명의 항체를 보통 약 0.01 내지 약 20mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3mg/kg 체중의 단일 용량으로 정맥내 투여하는 것이 이로울 수 있다. 병태의 중증도에 따라, 치료의 빈도 및 지속기간이 조정될 수 있다. 항-IL-33 항체를 투여하기 위한 유효 용량 및 스케쥴은 경험적으로 결정할 수 있고; 예를 들면, 환자 치료경과(patient progress)를 주기적 평가로 모니터링하고, 이에 따라 용량을 조정할 수 있다. 또한, 용량의 종간 스케일링(scaling)은, 당업계에 익히 공지되어 있는 방법[예를 들면, Mordenti 등, 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351]을 사용하여 수행할 수 있다.
각종 전달 시스템, 예를 들면, 리포솜, 미립자, 미세캡슐의 캡슐화, 돌연변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 엔도사이토시스 등이 공지되어 있어, 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다[예를 들면, Wu 등, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 참조]. 도입 방법으로는 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외 및 경구 경로가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 당해 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면, 주입 또는 볼루스(bolus) 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 내층(예를 들면, 경구 점막, 직장 및 장내 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여할 수 있으며, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여할 수 있다. 투여는 전신적이거나 국소적일 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 표준 니들 및 시린지를 사용하여 피하로 또는 정맥내로 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치(pen delivery device)는 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는데 용이하게 적용된다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용가능하거나 1회용일 수 있다. 재사용가능한 펜 전달 장치는, 일반적으로, 약제학적 조성물을 함유하는 교체가능한 카트리지를 이용한다. 일단 카트리지 내의 약제학적 조성물이 모두 투여되어 카트리지가 비워지게 되면, 빈 카트리지를 폐기하고 약제학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 쉽게 대체할 수 있다. 그러면, 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 1회용 펜 전달 장치의 경우, 대체가능한 카트리지가 없다. 오히려, 1회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 수용된 약제학적 조성물로 사전 충전된다. 일단 저장소의 약제학적 조성물이 비워지게 되면, 전체 장치를 폐기한다.
다수의 재사용가능한 펜 및 오토인젝터(autoinjector) 전달 장치는 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용된다. 그 예로는 단지 몇 개만을 명명하여, AUTOPEN™(제조원: 영국 우드스톡 소재의 Owen Mumford, Inc.), DISETRONIC™ 펜(제조원: 스위스 베르크도르프 소재의 Disetronic Medical Systems), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™ 펜(제조원: 미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재의 Eli Lilly and Co.), NOVOPEN™ I, II 및 III(제조원: 덴마크 코펜하겐 소재의 Novo Nordisk), NOVOPEN JUNIOR™(제조원: 덴마크 코펜하겐 소재의 Novo Nordisk), BD™ 펜(제조원: 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스 소재의 Becton Dickinson), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ 및 OPTICLIK™(제조원: 독일 프랑크푸르트 소재의 sanofi-aventis)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용되는 1회용 펜 전달 장치의 예로는 단지 몇 개만을 명명하여, SOLOSTAR™ 펜(제조원: sanofi-aventis), FLEXPEN™(제조원: Novo Nordisk), 및 KWIKPEN™(제조원: Eli Lilly), SURECLICK™ 오토인젝터(미국 캘리포니아주 사우전드 오크스 소재의 Amgen), PENLET™(독일 슈투트가르트 소재의 Haselmeier), EPIPEN(Dey, L.P.) 및 HUMIRA™ 펜(미국 일리노이주 애보트 파크 소재의 Abbott Labs)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 상황에서, 약제학적 조성물은 제어된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 한 실시형태에서는 펌프를 사용할 수 있다[참조: Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201]. 다른 실시형태에서, 중합체성 물질을 사용할 수 있고; 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida]을 참조한다. 또 다른 실시형태에서, 제어된 방출 시스템을 조성물의 표적의 부근에 위치시킴으로써 전신 용량의 분획만을 필요로 할 수 있다[예를 들면, Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 참조]. 다른 제어된 방출 시스템은 문헌[참조: Langer, 1990, Science 249:1527-1533]의 검토에서 논의된다.
주사가능한 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입 등을 위한 용량 형태를 포함할 수 있다. 이들 주사가능한 제제는 공공의 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 주사가능한 제제는, 예를 들면, 주사용으로 통상적으로 사용되는 멸균 수성 매질 또는 유성 매질 중에 상기 기술된 항체 또는 이의 염을 용해시키거나, 현탁시키거나, 유화시킴으로써 제조할 수 있다. 주사용 수성 매질로서, 예를 들면, 생리학적 염수, 글루코스 및 기타 보조제를 함유하는 등장액 등이 있고, 이들은 적절한 가용화제, 예를 들면, 알콜(예를 들면, 에탄올), 다가 알콜(예를 들면, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예를 들면, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소첨가된 피마자 오일의 폴리옥시에틸렌(50mol) 부가물)] 등과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 유성 매질로서, 예를 들면, 참깨 오일, 대두 오일 등이 사용되고, 이들은 가용화제, 예를 들면, 벤질 벤조에이트, 벤질 알콜 등과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 이로써 제조된 주사제는 바람직하게는 적절한 앰플 내에 충전된다.
유리하게는, 상기 기술된 경구 또는 비경구용 약제학적 조성물은 활성 성분의 용량을 조절하기에 적합한 단위 용량의 용량 형태로 제조된다. 단위 용량의 이러한 용량 형태는, 예를 들면, 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰플), 좌제 등을 포함한다. 상술한 항체의 함유량은 일반적으로 단위 용량으로의 용량 형태당 약 5 내지 약 500mg이며; 특히, 주사제 형태의 경우에는 상술한 항체가 약 5 내지 약 100mg 및 다른 용량 형태의 경우에는 약 10 내지 약 250mg으로 함유되는 것이 바람직하다.
항체의 치료 용도
본원 발명자에 의해 수행된 마우스 모델 시스템을 사용한 실험은 IL-33 길항작용에 의해 치료되고, 예방되고/되거나 완화될 수 있는 다양한 질환 및 병태의 동정에 기여하였다. 예를 들어, 마우스 IL-33 DNA의 유체역학적 전달은 마우스에서 폐 점액 축적을 유도하였고 총 혈청 IgE를 증가시킨다. 추가로, mIL-33 DNA 전달은 마이크로어레이 분석에 의한 측정시 ST2 및 다양한 다운스트림 사이토킨을 상향조절하였다. IL-33 녹아웃 마우스를 사용한 본 발명자에 의해 수행된 실험은 또한 IL-33 길항작용의 다양한 잠재적인 치료 이득을 밝혔다. 예를 들어, 거시적 스코어링 및 피부 침투는 IMQ-유도된 건선의 모델에서 야생형 마우스와 IL-33-/- 마우스간에 상응하는 것으로 밝혀졌다. 더욱이, IL-33-/- 마우스는 알레르겐 유도된 염증 모델에서 감소된 호산구 증가증 및 잔여 점액 축적을 나타내었다.
본 발명의 항체는 특히 IL-33 발현, 신호 전달 또는 활성과 관련되거나 이에의해 매개되거나 IL-33과 IL-33 리간드(예를 들어, ST2)간의 상호작용을 차단하거나 다르게는 IL-33 활성 및/또는 신호 전달을 억제함에 의해 치료될 수 있는 임의의 질환 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 완화를 위해 유용하다. 예를 들어, 본 발명은 천식(예를 들어, 알르르기 천식, 비-알레르기 천식, 중증 난치성 천식, 천식 악화, 스테로이드 내성 천식, 스테로이드 민감성 천식, 호산구 증가증성 천식 또는 비-호산구 증가증성 천식 등), 아토피성 피부염, 건선, 다른 염증 장애, 알레르기, 과민증, 심혈관 질환, 중추 신경계 질환, 통증, 관절염(예를 들어, 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염 등), 거대 세포 동맥염, 혈관염(베쳇 질환 및 척스트라우스 증후군), 헤노흐-손라인 자반증, 다발성 경화증, 염증 장 장애(예를 들어, 크론 질환 또는 궤양성 대장염), 낭창 및 쇼그렌 증후군을 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 항체는 또한 하나 이상의 섬유증 질환의 치료, 예방 및/또는 완화를 위해 유용하다. 본 발명의 항-IL-33 항체를 투여함에 의해 치료될 수 있는 예시적 섬유증 질환은 폐 섬유증(예를 들어, 특발성 폐 섬유증, 블레오마이신 유도된 폐 섬유증, 아스베스토스 유도된 폐 섬유증 및 기관지염 오블리테란스 증후군), 만성 천식, 급성 폐 손상 및 급성 호흡 곤란과 관련된 섬유증(예를 들어, 세균 폐렴 유도된 섬유증, 외상 유도된 섬유증, 바이러스 폐렴 유도된 섬유증, 호흡기 유도된 섬유증, 비-폐 패혈증 유도된 섬유증 및 흡인 유도된 섬유증), 규폐증, 방사선 유도된 섬유증, 만성 폐색성 폐 질환(직접 또는 간접 흡연과 관련되거나 부분적으로 유발되거나 상기 흡연 노출과 관련되거나 관련지 않을 수 있는 COPD), 피부경화증, 눈 섬유증, 피부 섬유증(예를 들어, 피부경화증), 간 섬유증(예를 들어, 간경변, 알콜 유도된 간 섬유증, 비알콜성 지방간염(NASH), 담관 손상, 1차 담관 간경화, 감염 또는 바이러스 유도된 간 섬유증, 자가면역 간염, 콩팥(신장) 섬유증, 심장 섬유증, 죽상동맥경화증, 스텐트 재협착증 및 골수섬유증을 포함한다.
본원에 기재된 치료 방법과 관련하여, 항-IL-33 항체는 단일치료제(즉, 단지 치료 제제) 또는 하나 이상의 추가의 치료 제제(이의 예는 본원의 그밖의 다른 곳에 기재되어 있다)와 병용하여 투여될 수 있다.
병용 치료요법 및 제형
본 발명은 하나 이상의 추가의 치료 활성 성분과 조합된 본원에 기재된 임의의 항-IL-33 항체를 포함하는 조성물 및 치료 제형 및 상기 병용제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는 치료 방법을 포함한다.
본 발명의 항-IL-33 항체는 예를 들어, 소분자 사이토킨 억제제 및 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, IL-21, IL-23, IL-25, IL-26과 같은 사이토킨에 결합하는 항체, 또는 이들 각각의 수용체의 길항제를 포함하는, 사이토킨 억제제와 함께 제형화되고/되거나 이와 병용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 항-IL-33 항체는 또한 항바이러스제, 항생제, 진통제, 코르티코스테로이드, 스테로이드, 산소, 항산화제, 금속 킬레이팅제, IFN-감마 및/또는 NSAID와 병용하여 투여되고/되거나 이와 함께 제형화될 수 있다.
추가의 치료 활성 성분(들)은 본 발명의 항-IL-33 항체의 투여 직전, 투여와 함께 또는 투여 직후 투여될 수 있다; (본원의 목적을 위해, 상기 투여 용법은 추가의 치료 활성 성분과 "병용되는" 항-IL-33 항체의 투여로 간주된다). 본 발명은 본 발명의 항-IL-33 항체가 본원의 그밖의 다른 곳에 기재된 바와 같이 추가의 치료 활성 성분(들) 중 하나 이상과 함께 제형화된 약제학적 조성물을 포함한다.
투여 요법
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 항-IL-33 항체(또는 항-IL-33 항체와 본원에 언급된 임의의 추가의 치료 활성제의 조합을 포함하는 약제하적 조성물)의 다중 용량이 정해진 시간 과정 동안 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은, 본 발명의 항-IL-33 항체의 다중 용량을 대상체에게 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 "순차적으로 투여하는"은, 항-IL-33 항체의 각각의 용량을 상이한 시점에, 예를 들면, 특정 간격(예를 들면, 시간, 일, 주 또는 개월)으로 떨어진 다른 날에 대상체에게 투여함을 의미한다. 본 발명은, 환자에게 항-IL-33 항체의 단일 개시 용량을 투여하고, 이어서, 항-IL-33 항체의 1회 이상의 2차 용량을 투여하고, 이어서, 임의로, 항-IL-33 항체의 1회 이상의 3차 용량을 투여하는 것을 순차적으로 포함하는 방법을 포함한다.
용어 "개시 용량", "2차 용량" 및 "3차 용량"은 본 발명의 용어 "개시 용량", "2차 용량" 및 "3차 용량"은 본 발명의 항-IL-33 항체의 투여의 시간적 순차를 말한다. 따라서, "개시 용량"은, 치료 용법을 시작할 때에 투여되는 용량("기저선 용량"으로서도 나타냄)이고; "2차 용량"은, 개시 용량 후에 투여되는 용량이고; "3차 용량"은, 2차 용량 후에 투여되는 용량이다. 개시, 2차, 및 3차 용량은 모두 동일한 양의 항-IL-33 항체를 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도의 관점에서 서로 상이할 것이다. 그러나, 특정 실시형태에서, 개시, 2차 및/또는 3차 용량에 함유된 항-IL-33 항체의 양은 치료의 과정 동안 서로 다를 것이다(예를 들면, 적절하게 상향 또는 하향 조정됨). 특정 실시형태에서, 치료 용법을 시작할 때에 "부하 용량(loading dose)"으로서 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 또는 5회)의 용량이 투여되고, 이어서, 보다 적은 빈도로 투여되는 후속적 용량(예를 들면, "유지 용량(maintenance dose)")이 투여된다.
본 발명의 한 예시적 실시형태에서, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 직전 용량 후 1 내지 26(예를 들면, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½, 또는 그 이상)주째에 투여된다. 본원에서 사용되는 바와 같은 어구 "직전 용량"은, 다중 투여의 순차에서, 개입 용량(intervening dose) 없이 순차에서 바로 다음의 용량 투여 전에 환자에게 투여되는, 항-IL-33 항체의 용량을 의미한다.
본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은, 항-IL-33 항체의 2차 및/또는 3차 용량의 임의의 수를 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 특정 실시형태에서, 단일 2차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 그 이상)의 2차 용량이 환자에게 투여된다. 유사하게, 특정 실시형태에서, 단일 3차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 그 이상)의 3차 용량이 환자에게 투여된다.
다중 2차 용량과 관련된 실시형태에서, 각각의 2차 용량은, 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 2차 용량은 직전 용량 후 1 내지 2주째 또는 1 내지 2개월째에 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, 다중 3차 용량과 관련된 실시형태에서, 각각의 3차 용량은, 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 3차 용량은 직전 용량 후 2 내지 12주째에 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 실시형태에서, 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 용법의 과정에 따라 변할 수 있다. 투여의 빈도는, 또한, 임상 실험에 따른 개별 환자의 요구에 따라 의사에 의한 치료 과정 동안에 조정될 수 있다.
본 발명은 2 내지 6개의 부하 용량을 제1 빈도(예를 들어, 1주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 1개월 1회, 2개월 마다 회 등)로 환자에게 투여되고 이어서 적은 빈도를 기본으로 하여 2개 이상의 유지 용량이 투여되는 투여 용법을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 상기 양상에 따라 부하 용량이 1개월 1회의 빈도로 투여되는 경우, 유지 용량은 1개월 1회의 빈도로 투여되는 경우, 6주마다 1회, 2개월 마다 1회, 3개월 마다 1회 환자에게 투여될 수 있다.
항체의 진단적 용도
또한, 본 발명의 항-IL-33 항체는, 예를 들면, 진단 목적을 위해, 시료 중에서 IL-33, 또는 IL-33 발현 세포를 검출하고/하거나 측정하기 위해 사용될 수도 있다. 예를 들면, 항-IL-33 항체, 또는 이의 단편을 사용하여 IL-33의 비정상적 발현(예를 들면, 과-발현, 미만-발현, 발현의 결여 등)을 특징으로 하는 병태 또는 질환을 진단할 수 있다. IL-33에 대한 예시적인 진단 검정은, 예를 들면, 환자로부터 수득된 샘플을 본 발명의 항-IL-33 항체와 접촉시킴을 포함할 수 있으며, 여기서, 항-IL-33 항체는 검출가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되어 있다. 대안으로, 표지되지 않은 항-IL-33 항체를 자체적으로 검출가능하게 표지된 제2 항체와 병용하여 진단 적용시 사용할 수 있다. 검출가능한 표지 또는 리포터 분자는 방사성 동위원소, 예를 들면, 3H, 14C, 32P, 35S, 또는 125I; 형광성 또는 화학발광성 모이어티, 예를 들면, 플루오레세인 이소티아시아네이트, 또는 로다민; 또는 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 또는 루시페라제와 같은 효소일 수 있다. 샘플 중에서 IL-33을 검출하거나 측정하는데 사용될 수 있는 특정 예시적인 검정은 효소-링크된 면역흡착 검정(ELISA), 방사 면역 검정(RIA), 및 형광성-활성화된 세포 분류(FACS)를 포함한다.
본 발명에 따른 IL-33 진단 검정에서 사용될 수 있는 샘플은 검출가능한 양의 IL-33 단백질 또는 이의 단편을 함유하는 환자로부터 정상적인 또는 병리학적 병태 하에 수득될 수 있는 임의의 조직 또는 유체 샘플을 포함한다. 일반적으로, 건강한 환자(예를 들면, 비정상 IL-33 수준 또는 활성과 관련된 질환 또는 병태에 걸리지 않은 환자)로부터 수득된 특정 샘플 중의 IL-33의 수준을 측정하여 기저선, 또는 표준 수준의 IL-33으로 초기에 확립할 것이다. 이어서, IL-33의 당해 기저선 수준을 IL-33 관련된 질환 또는 병태를 갖는 것으로 의심되는 개체로부터 수득된 샘플 중에서 측정된 IL-33의 수준에 대해 비교할 수 있다.
실시예
하기 실시예는, 당해 분야의 통상의 숙련가에게 본 발명의 방법 및 조성물을 제조하고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 제공하도록 제시되고, 하기 실시예는, 본 발명자들이 본 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하도록 의도되지 않는다. 사용된 수(예를 들면, 양, 온도 등)와 관련하여 정확도를 확보하기 위한 노력이 이루어져 왔지만, 몇몇의 실험 오차 및 편차는 고려되어야만 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 도이고, 압력은 대기압이거나 대기압 부근이다.
실시예 1. 사람 IL-33에 대한 사람 항체의 생성
사람 IL-33을 포함하는 면역원은 면역반응을 자극하기 위한 보조제와 함께 사람 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 VELOCIMMUNE® 마우스로 직접 투여하였다. 상기 항체 면역 반응은 IL-33 특이적 면역검정에 의해 모니터링하였다. 요망되는 면역 반응이 성취된 경우, 비장세포를 수거하고 마우스 골수종 세포와 융합시켜 이들의 생존능을 보존하고 하이브리도마 세포주를 형성하였다. 상기 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선별하여 IL-33 키메라 항체를 생성하는 세포주를 동정하였다. 상기 기술을 사용하여, 여러 항-IL-33 키메라 항체(즉, 사람 가변 도메인 및 마우스 불변 도메인을 갖는 항체)를 수득하였고; 상기 방식으로 생성된 예시적 항체는 다음과 같이 지정하였다: H1M9559N, H1M9566N, H1M9568N 및 H1M9565N. 상기 키메라 항체 기원의 사람 가변 도메인은 후속적으로 사람 불변 도메인상으로 클로닝하여 본원에 기재된 바와 같이 완전한 사람 항-IL-33 항체를 제조하였다.
항-IL-33 항체는 또한 문헌[참조: US 2007/0280945A1]에 기재된 바와 같이 골수종 세포로 융합 시키는 것 없이 항원 양성 B 세포로부터 직접 단리하였다. 상기 방법을 사용하여, 여러 완전한 사람 항-IL-33 항체(즉, 사람 가변 도메인 및 사람 불변 도메인을 갖는 항체)를 수득하였고; 상기 방식으로 생성된 예시적 항체는 다음과 같이 지정하였다: H4H9629P, H4H9633P, H4H6940P, H4H9659P, H4H9660P, H4H9662P, H4H9663P, H4H9664P, H4H9665P, H4H9666P, H4H9667P, H4H9670P, H4H9671P, H4H9672P, H4H9675P, 및 H4H9676P.
상기 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적 항-IL-33 항체의 특정 생물학적 성질은 하기에 제시된 실시예에서 상세히 기재한다.
실시예 2. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열
표 1은 선택된 항-IL-33 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 쌍, 및 CDR 서열, 및 이들의 상응하는 항체 서열번호를 제시한다.
[표 1]
Figure pct00001

항체들은 전형적으로 하기 명명법에 따라 본원에 나타낸다: Fc 접두사(예를 들면, "H1M" 또는 "H4H"), 이어서, 수적 확인 번호(예를 들면, 표 1에 나타낸 바와 같은 "9559", "9566", 또는 "9629"), 이어서, "P" 또는 "N" 접미사. 따라서, 이러한 명명법에 따르면, 항체는, 본원에서, 예를 들면, "H1M9559N", "H1M9566N", "H4H9629P 등으로서 나타낼 수 있다. 본원에서 사용된 항체 명칭에 대한 H1M 및 H4H 접두사는 항체의 특정 Fc 영역 이소형을 나타낸다. 예를 들면, "H1M" 항체는 사람 IgG1 Fc를 갖고, "H4H" 항체는 사람 IgG4 Fc를 갖는다. 당해 분야 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 특정 Fc 이소형을 갖는 항체는, 상이한 Fc 이소형을 갖는 항체로 전환될 수 있지만(예를 들면, 마우스 IgG1 Fc를 갖는 항체는, 사람 IgG4 등을 갖는 항체로 전환될 수 있음), 어떠한 경우에서도 표 1에 나타낸 수적 확인 번호에 의해 나타내어지는 가변 도메인들(CDR들을 포함함)은 동일하게 유지될 것이고, 결합 특성은, Fc 도메인의 특성에 관계 없이 동일하거나 실질적으로 유사한 것으로 예측된다.
실시예 3. 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 사람 IL-33에 결합하는 항체
정제된 항-IL-33 모노클로날 항체에 결합하는 IL-33에 대한 평형 해리 상수(K D 값)은 바이아코어(Biacore) 4000 장치를 사용한 실시간 표면 플라스몬 공명 바이오센서를 사용하여 측정하였다. 상기 바이아코어 센서 표면은 마우스 또는 사람 IgG4 불변 영역과 함께 발현되는 항-IL-33 모노클로날 항체를 포획하기 위해 먼저 아민을 각각 폴리클로날 래빗 항-마우스 항체(GE, # BR-1008-38) 또는 모노클로날 마우스 항-사람 Fc 항체(GE, # BR-1008-39)와 커플링시킴에 의해 유도체화하였다. 모든 바이아코어 결합 연구는 0.01M ADA pH 7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20 (ABS-ET 전개 완충액)중에서 수행하였다. ABS-ET 전개 완충액(100nM 내지 3.7nM의 범위, 3-배 희석) 중에서 제조된 C-말단 헥사히스티딘 태그 (MfIL-33-6His; 서열번호 xx)와 함께 발현되는 상이한 농도의 사람 IL-33 (hIL-33; R&D Systems, # 3625-IL-010/CF) 또는 시노몰구스 원숭이 IL-33을 항-IL-33 모노클로날 항체 포획된 표면상에 30μL/분의 유속으로 주사하였다. hIL-33 또는 MfIL-33-6His의 포획된 모노클로날 항체로의 연합은 4분 동안 모니터링하였고 ABS-ET 전개 완충액 중에서의 이들의 해리는 10분 동안 모니터링하였다. hIL-33 또는 MfIL-33-6His로의 각각의 항-IL-33 항체의 결합에 대한 감소된 pH의 효과는 0.01M ADA pH 6.0, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20 (ABS-ET pH6 완충액) 중에서 인-라인 pH 추적 검정 포맷을 사용하여 연구하였다. 이를 성취하기 위해, 포획된 모노클로날 항체로의 hIL-33 또는 MfIL-33-6His의 연합은 ABS-ET 전개 완충액 중에서 4분 동안 모니터링하였다. ABS-ET 전개 완충액 중에서 hIL-33 또는 MfIL-33-6His의 30초 해리 후, ABS-ET pH6 완충액을 3분 동안 주사하고 낮은 pH 조건하에 분석물 해리를 측정하였다. 모든 결합 역학적 실험은 25℃ 및 37℃ 둘다에서 수행하였다. 역학적 연합(k a) 및 해리(k d) 상수는 Scrubber 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 실시간 센서그램을 1:1 결합 모델에 피팅함에 의해 측정하였다. 결합 해리 평형 상수((K D) 및 해리 반감기(t½)를 역학적 비율 상수로부터 계산하였다:
KD(M) = kd/ka 및 t½ (분) = In(2)/60*kd)
25℃ 및 37℃에서 상이한 항-IL-33 모노클로날 항체에 결합하는 hIL-33 및 MfIL-33-6His에 대한 결합 역학적 파라미터는 표 2 내지 5에 나타낸다. 25℃에서, hIL-33은 표 2에 나타낸 바와 같이 78pM 내지 757pM 범위의 KD 값으로 항-IL-33 항체에 결합한다. 37℃에서, hIL-33은 표 3에 나타낸 바와 같이 411pM 내지 2.03nM 범위의 KD 값으로 항-IL-33 항체에 결합한다. 25℃ 및 37℃ 둘다에서, 하나의 항-IL-33 항체는 약한 결합을 나타냄에 따라 이의 결합 역학적 파라미터는 1:1 결합 모델을 사용해서는 피팅될 수 없었다. 25℃에서, MfIL-33-6His는 표 4에 나타낸 바와 같이 333pM 내지 38nM 범위의 KD 값으로 항-IL-33 항체에 결합한다. 37℃에서, MfIL-33-6His는 표 5에 나타낸 바와 같이 1nM 내지 48.6 nM 범위의 KD 값으로 항-IL-33 항체에 결합한다.
[표 2]
Figure pct00002

[표 3]
Figure pct00003

[표 4]
Figure pct00004

[표 5]
Figure pct00005

실시예 4. 항-IL-33 항체는 사람 ST2 수용체로의 IL-33의 결합을 차단한다
사람 ST2 수용체에 결합하는 사람 IL-33(hIL-33) 또는 시노몰로구스 원숭이 IL-33을 차단하는 항-IL-33 항체의 능력은 경쟁 샌드위치 ELISA를 사용하여 측정하였다. C-말단 사람 IgG1 Fc 태그 (hST2-hFc; 서열번호 306)과 함께 발현되는 사람 ST2 단백질 엑토(ecto) 도메인의 일부는 4℃에서 밤새 96웰 미세적정 플레이트상에서 PBS 완충액 중에서 1㎍/ml의 농도로 피복하였다. 이어서 비특이적 결합 부위는 PBS 중에서 BSA의 0.5%(w/v) 용액을 사용하여 차단하였다. 헥사히스티딘 태그(MfIL-33-6His; 서열번호 305)와 함께 발현되는 30pM 비오티닐화된 hIL-33 단백질 (R&D systems, Cat #3625-IL/CF) (비오틴-hIL-33) 또는 150pM 시노몰로구스 원숭이 IL-33의 일정 농도를 별도로 항체의 연속 희석액에 첨가하여 항체의 최종 농도가 0 내지 100nM의 범위가 되게한다. 상기 항체/IL-33 혼합물은 이들을 hST2-hFc-피복된 미세적정 플레이트로 이동시키기 전에 실온에서 1시간동안 항온처리하였다. 실온에서 1시간동안의 항온처리 후, 상기 웰을 이어서 세척하고 플레이트 결합된 비오틴-hIL-33은 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)(Thermo Scientific, Cat # N200)와 접합된 스트렙타비딘으로 검출하고, 플레이트 결합된 MfIL-33-6His는 HRP 접합된 항-His 모노클로날 항체(Qiagen, #34460)로 검출하였다. 모든 샘플은 TMB 용액 (BD biosciences, # 51-2607KC)으로 전개하여 비색 반응을 생성시키고 이어서 빅터(Victor) X5 플레이트 판독기로 450nm에서 흡광도를 측정하기 전에 1M 황산으로 산성화시킴으로써 켄칭하였다. 데이타 분석은 PrismTM 소프트웨어내 S자형 용량-반응 모델을 사용하여 수행하였다. 플레이트 피복된 hST2-hFc로의 비오틴-hIL-33 또는 MfIL-33-6His 결합을 최대 신호로부터 50%까지 감소시키는데 요구되는 항체의 농도로서 정의되는 상기 계산된 IC50 값을 차단 효능의 지시기로서 사용하였다. % 차단은 단독의 IL-33과의 신호와 배경 (단독의 HRP-접합된 2차 항체 또는 스트렙타비딘으로부터의 신호) 간의 차이에 상대적인 항체의 존재에서 관찰되는 신호의 감소 비율로서 계산하였다. 일정 농도의 단독의 비오틴-hIL-33 또는 MfIL-33-6His에 대해 측정된 흡광도는 0% 차단으로서 정의되고 IL-33이 첨가되지 않은 것에 대해 측정된 흡광도는 100% 차단으로서 정의된다. 각각의 항체에 대해 최고 농도를 함유하는 웰의 흡광도 값은 % 최대 차단을 결정하기 위해 사용하였다.
[표 6]
Figure pct00006

20개 항체에 대한 결합 실험은 표 6에 지적된 바와 같이 2개의 별도의 날에 수행하였다. 항-IL-33 항체 20개 모두는 hST2-hFc로의 비오틴-hIL-33 결합을 차단하였고, IC50 값은 140pM 내지 22nM 범위이고 % 최대 차단은 46% 내지 88% 범위이다. 20개 항-IL-33 항체 중 18개는 hST2-hFc로의 MfIL-33-6His 결합을 차단했고 표 6에 나타낸 바와 같이 IC50 값은 220pM 내지 13nM 범위이고 % 최대 차단은 38% 내지 92% 범위이다. 시험된 항체 중 2개, H4H9629P 및 H4H9633P는 hST2-hFc로의 MfIL-33-6His 결합의 측정가능한 차단을 입증하지 못하였다.
실시예 5. 바이아코어 분석에 의해 보여지는 바와 같은 ST2에 의한 항-IL-33 모노클로날 항체로의 IL-33 결합의 억제
예비 형성된 IL-33과 ST2의 복합체에 결합하는 항-IL-33 항체의 능력은 실시간 표면 플라스몬 공명 바이오센서가 장착된 바이아코어 T-200 장치를 사용하여 시험하였다. 상기 실험은 0.01M HEPES pH 7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20 (HBS-ET)으로 구성된 전개 완충액으로 25℃에서 수행하였다. 상기 바이아코어 센서 표면은 먼저 아민을 항-myc 태그-특이적 모노클로날 항체(클론# 9E10)과 커플링시켜 유도체화하고 상기 유도체화된 센서 상에 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(hST2-MMH; 서열번호 323)과 함께 발현되는 사람 ST2 단백질의 대략 160 반응 유니트(RU)를 포획하였다. 이어서 상기 포획된 hST2-MMH 표면은 3분 동안 100nM의 사람 IL-33 (hIL-33; R&D Systems, # 3625-IL-010/CF)을 주사한 후 항-IL-33 모노클로날 항체의 100nM 용액을 3분 주사하여 포화시켰다. 상기 실시간 결합 반응은 전체 실험 과정 동안에 모니터링하고 항-IL-33 항체를 hIL-33과 포획된 hST2-MMH의 예비형성된 복합체에 주사한 후 3분 시점에 관찰된 결합 반응을 기록하고 표로 작성하여 표 7에 나타낸다. 항-IL-33 모노클로날 항체의 항-myc 태그 포획 표면으로의 어떠한 비특이적 결합도 관찰되지 않았다. 표 7에 나타낸 바와 같이, 시험된 항체 중 17개는 이것이 hST2-MMH와 예비 복합체화한 후 hIL-33으로의 측정가능한 결합을 나타내지 않았고 hIL-33에 결합된 3개의 항체(H1M9565N, H1M9566N, 및 H1M9568N)는 이것이 hST2-MMH와 예비 복합체화한 후 hIL-33에 결합하였다.
[표 7]
Figure pct00007

실시예 6. 항-IL-33 항체에 의한 IL-33-매개된 수용체 신호 전달의 억제
인터류킨-33 (IL-33)은 부속 단백질 IL-1RAcP와 연합하는 톨형/인터류킨-1 수용체 슈퍼-패밀리 구성원인 ST2에 대한 리간드이다(문헌참조: Kakkar and Lee, 2008). IL-33에 의한 ST2/IL-1RAcP의 활성화시, 신호 전달 캐스케이드는 MyD88(골수 분화 인자 88) 및 TRAF6(TNF 수용체 연합된 인자 6)와 같은 다운스트림 분자를 통해 유발되고 무엇보다 NFκB (핵 인자 -κB)의 활성화를 유도한다. 항-IL-33 항체를 시험하기 위한 생물학적으로 관련된 생검정 시스템을 개발하기 위해, 사람 배아 신장 세포(HEK293)는 루시퍼라제 리포터[NFκB 반응 요소 (5x)-루시퍼라제-IRES-GFP] (HEK293/hST2/NFkB-루시퍼라제 세포주)와 함께 사람 ST2(승인 번호 NP_057316의 아미노산 1-556)를 발현하도록 한안정적으로 형질감염시켰다. 상기 HEK293 세포주는 내인성으로 IL-1RAcP를 발현하고 HEK293 세포에서 IL-33에 의한 NFκB 활성화는 이전에 보고되었다(문헌참조: Schmitz 등, Immunity 23:479-490 (2005)). 상기 안정한 세포주를 단리하고 10% FBS, DMEM, NEAA, 페니실린/스트렙토마이신, 및 G418 중에 유지시켰다.
생검정을 위해, HEK293/hST2/NFkB-루시퍼라제 세포는 0.1% w/v FBS 및 OPTIMEM (Invitrogen, #31985-070)를 함유하는 저 혈청 배지 중에 웰당 10,000 세포로 96웰 검정 플레이트상으로 씨딩하고 이어서 밤새 5% CO2 중 37℃에서 항온처리하였다. 다음날, IL-33의 용량 반응을 결정하기 위해, C-말단 헥사히스티딘 태그(MfIL-33-6His; 서열번호 305)와 함께 발현되는 사람 IL-33 (hIL-33; R&D Systems, #3625-IL) 또는 시노몰구스 원숭이 IL-33을 1:3으로 연속으로 희석하고 10nM로부터 개시하여 0.0002 nM 범위 아래까지 세포에 첨가하고 IL-33을 함유하지 않는 대조군 샘플도 첨가하였다. 억제를 측정하기 위해, 항체는 연속으로 희석하고 세포에 첨가하고 이어서 일정 농도의 IL-33(사람 검정용 10pM hIL-33 및 원숭이 검정용 5pM MfIL-33-6His)을 첨가한다. 3배 항체 연속 희석은 세포에 첨가하기 전에 수행하였고 100pM로부터 개시하여 0.002 nM 범위 아래까지 또는 10nM로부터 개시하여 0.0002nM 범위 아래까지이다. 항체 연속 희석에 추가로, 일정 농도의 IL-33을 함유하지만 임의의 항체가 없는 웰이 또한 포함된다. 5% CO2 중 37℃에서 항온처리한지 5.5시간 후, 루시퍼라제 활성은 빅토르 X(Perkin Elmer) 플레이트 판독기를 사용하여 검출하고 상기 결과는 프리즘 5와 함께 비선형 회귀(4-파라미터 로지스틱)을 사용하여 분석하였다. 결과는 표 8에 나타낸다.
[표 8]
Figure pct00008

20개 항-IL33 항체 중 18개는 HEK293/hST2/NFkB-루시퍼라제 세포의 사람 IL-33 자극을 차단하였고 IC50 값은 표 8에 나타낸 바와 같이 7.5pM 내지 29nM 범위이다. 시험된 항체 중 2개인 H1M9566N 및 H1M9568N는 hIL-33을 부분적으로 억제하였고, 각각 최대 억제는 48% 및 66%이고, IC50 값은 950pM 및 250pM이다. 20개 항-IL33 항체 중 18개는 HEK293/hST2/NFkB-루시퍼라제 세포의 MfIL-33-6His 자극을 차단하였고 IC50 값은 표 8에 나타낸 바와 같이 660pM 내지 130nM 범위이다. 시험된 항체 중 2개인 H1M9566N 및 H1M9568N은 MfIL-33-6His를 부분적으로 억제하였고 각각 최대 억제는 61% 및 34%이고, IC50 값은 1.5 nM 및 3.5 nM이다.
실시예 7. 항-IL-33 항체에 의한 사람 호염구의 IL-33-유도된 탈과립의 억제
본 발명의 선택된 항-IL-33 항체의 시험관내 특성을 추가로 평가하기 위해, IL-33 유도된 호염구 탈과립을 차단하는 이들의 능력을 측정하였다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 밀도 농도 구배 원심분리에 의해 2명의 상이한 사람 공여자 기원의 신선한 전혈로부터 정제하였다. K2 EDTA 전혈은 RPMI 1640에서 1:1로 희석하였고, 피콜-파크(Ficoll-Paque)(GE Healthcare, # 17-1440-03)상에 주의깊게 적층시키고 원심분리하여 PBMC를 분리하였다. PBMC를 함유하는 상간 층을 흡인하고 새로운 튜브로 이전시키고 MACS 세정 용액(Militenyi Biotec, #130-091-222) 중 MACS BSA 용액 (Militenyi Biotec, #130-091-376)의 1:20 희석액으로 구성된 MACS 완충액으로 2회 세척하였다. 정제된 PBMC를 이어서 100μL의 MACS 완충액 중 ~3.0x106 세포/mL의 최종 농도로 v-바닥 96-웰 플레이트에 분주하였다. 상기 PBMC 집단내 함유된 호염구를 적응시키기 위해, Ca++ 또는 Mg++ (DPBS)가 없는 50μL의 듈베코 인산 완충 식염수 중 1 ng의 IL-3 (Sigma, # H7166-10UG)을 세포 현탁액에 첨가하고 이어서 10분 동안 37℃에서 항온처리하였다.
본 발명의 2개의 상이한 예시적 항-IL-33 항체 (H4H9675P 및 H4H9659P) 또는 이소형 대조군 항체의 10nM 내지 4.6pM 범위의 연속 희석물(1:3)을 제조하였고 항체가 없는 대조군을 제조하였다. 상기 용액을 PBMC로 첨가하기 전에 고정된 농도의 100pM(최종 농도)의 사람 IL-33(R&D Systems, # 6325-IL/CF) 또는 IL-33이 없는 음성 대조군과 혼합하였다. 모든 조건들은 2회 시험하였다.
사람 IL-33 및 항체를 세포에 첨가한 후, 상기 세포를 20분 동안 37℃에서 항온처리하여 호염구 탈과립을 촉진시켰다. 탈과립은 이어서 젖은 빙상에서 5분 동안 검정 플레이트를 냉각시킴에 의해 종료시켰다. 탈과립을 측정하기 위해 사용되는 호염구 집단의 분석을 가능하게 하기 위해, 항-HLA-DR-FITC (Beckman Coulter, # IM0463U), 항-CD123-APC (BD, # 560087), 및 항-CD203c-PE (Beckman Coulter, # IM3575) 각각 20μL(제조업자의 지침에 따라)를 각각의 샘플에 첨가하고 상기 샘플을 암실에서 20분 동안 4℃에서 유지하였다. 이어서 상기 세포를 원심분리하고 DPBS로 세척함에 이어서 4℃에서 2% 포름알데하이드 (고정 완충액) 중에 재현탁시켰다. 다음 날, 고정된 세포는 BD FACSCanto II 상에서 분석하여 호염구 탈과립의 수준을 측정하였다. 결과는 표 9 및 10에 요약한다.
[표 9]
Figure pct00009

[표 10]
Figure pct00010

표 9에 나타낸 바와 같이, 100 pM에서, 사람 IL-33은 2명의 상이한 공여자에서 호염구 탈과립을 유도하였고 평균 % 탈과립은 공여자 655687에 대해 68.8%이고 공여자 655688에 대해서는 61.6% 였다.
표 10에 나타낸 바와 같이, 하나의 항-IL33 항체인 H4H9675P는 100pM 사람 IL-33 챌린지에 의해 유도된 호염구 탈과립을 차단하였고, 공여자 65587에 대한 IC50 값은 132.9pM이고 공여자 655688에 대한 IC50 값은 97.12pM이었다. 또 다른 항-IL33 항체인 H4H9659P는 100pM 사람 IL-33 챌린지에 의해 유도된 호염구 탈과립을 차단하였고 IC50 값은 공여자 655687에 대해 578.6 pM이었고 IC50 값은 공여자 655688에 대해 446.5 pM 이었다. 대조적으로, 이소형 대조군은 임의의 시험된 공여자로부터의 호염구 탈과립을 차단시키지 않았다.
실시예 8. 항-IL-33 항체에 의한 사람 PBMC 로부터 IL-33 유도된 IFN-감마의 억제
본 발명의 항-IL-33 항체의 특징을 추가로 분석하기 위해, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용한 1차 세포 기반 분석을 사용하였다. 상기 실시예에서 사용된 검정은 문헌[참조: Smithgall 등 in International Immunology, 2008, vol. 20 (8) pp. 1019-1030]에 의해 공개된 결과를 기초로하였다. 상기 검정을 위해, PBMC는 밀도 농도 구배 원심분리에 의해 3명의 상이한 공여자 기원의 신선한 새로운 전혈로부터 정제하였다. 간략하게, K2 EDTA 전혈은 RPMI 1640 중에서 2배 희석하고 피콜-파크 (GE Healthcare, #17-1440-03)상에 주의깊게 적층시키고 20분동 동안 원심분리하였다. PBMC를 함유하는 상간 층을 흡인하고 새로운 튜브로 이전시키고 PBS로 2회 세척하였다. 상기 단리된 PBMC는 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 100 U/mL 페니실린, 및 100㎍/mL의 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640에서 최종 농도 5x105 세포/mL로 환저 96웰 플레이트에 분주하였다. 이어서, 세포는 50 g/mL의 사람 IL-12 (hIL-12; R&D Systems, #219-IL-025/CF) 및 10nM 내지 0.64pM의 연속 희석물의 사람 IL-33 (hIL-33; R&D Systems, #3625-IL-010/CF) 또는 100nM 내지 6,4pM의 항체 연속 희석물과 조합된 260 pM의 hIL-33으로 항온처리하였다. 최종 용적은 웰당 200μL였다. 각각의 조건은 3회 시험하였다. 항체가 존재하는 경우 이들은 hIL-33과의 예비 항원처리 30분 후 세포에 첨가하였다.
상기 세포는 5% CO2와 함께 습한 항온처리기에서 37℃에서 밤새 항온처리하고 배양 상등액 중 IFNγ 수준을 ELISA (R&D Systems, #DY285)로 측정하였다. ELISA를 위해, 96-웰 편저 플레이트를 제조업자의 지침에 따라 포획 항체로 피복시켰다. 세척 및 차단 후, 100μL의 희석되지 않은 배양 상등액을 플레이트에 첨가하고 2시간동안 항온처리하였다. 후속적 세척 및 검출은 제조업자의 지침에 따라 수행하였다.
hIL-12의 존재하에 사람 IL-33은 시험된 3명의 상이한 공여자 기원의 사람 총 PBMC로부터의 IFNγ의 방출을 유도하였고 EC50 값은 표 11에 나타낸 바와 같이 274pM 내지 39pM이다. 11개의 항-IL-33 항체는 공여자 #603486 및 #603487 기원의 PBMC를 사용하여 시험하고, 3개의 항-IL-33 항체는 공여자 #603491 기원의 PBMC로 시험하였다. 공여자 #603486 및 #603487에 대해 시험된 11개의 항-IL-33 항체 모두는 260pM IL-33에 의해 유도된 사람 PBMC로부터 IFNγ의 방출을 차단하였고, IC50 값은 표 12에 나타낸 바와 같이 175 pM 내지 22 nM이다. 공여자 #603491에 대해 시험된 3개의 IL-33 항체 어느것도 260pM hIL-33에 의해 유도된 사람 PBMC로부터 IFNγ의 방출을 차단하지 못하였고 대신 56.1pM과 189nM 사이의 EC50 값으로 IFNγ방출의 증가를 유발하였다.
[표 11]
Figure pct00011

[표 12]
Figure pct00012

[표 13]
Figure pct00013

본 발명은 본원에 기재된 특정 양태에 의한 범위로 제한되지 말아야 한다. 실제로 본원에 기재된 것들 뿐만 아니라 본 발명의 다양한 변형은 이전의 기재 및 첨부된 도면으로부터 당업자에게 자명할 것이다. 상기 변형은 첨부된 특허청구범위내에 있는 것으로 의도된다.
실시예 9. 바이오-층 간섭 측정을 사용한 사람 IL-33 교차-경쟁
상이한 항-IL-33 모노클로날 항체의 패널간의 결합 경쟁은 Octet® HTX 바이오센서 (ForteBio, A Division of Pall Life Sciences) 상에서 실시간 표지 부재 바이오층 간섭 측정 검정을 사용하여 측정하였다. 상기 실험은 1000rpm의 속도로 플레이트를 진탕시키면서 0.01M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 및 0.1mg/ml BSA (HBS-ET 역학 완충액)의 완충액을 사용하여 25℃에서 수행하였다. 2개의 항체가 사람 IL-33에 결합하기 위해 서로 경쟁할 수 있는지를 평가하기 위해, 예비-혼합 검정 포맷을 사용하였고, 여기서 100nM의 사람 IL-33 (R&D Systems; # 3625-IL-010/CF)은 결합 경쟁 검정을 수행하기 전 적어도 2시간 동안 500nM의 상이한 항-IL-33 모노클로날 항체(이후 mAb-2로 언급됨)와 예비 혼합하였다. 항-마우스 Fc 폴리클로날 항체(Pall ForteBio Corp., # 18-5088; 후속적으로 AMC로서 언급됨) 또는 항-사람 Fc 폴리클로날 항체(Pall ForteBio Corp., # 18-5060; 후속적으로 AHC로서 언급됨)로 피복된 Octet 바이오센서를 먼저 각각 마우스 Fc 또는 사람 Fc (이후 mAb-1으로 언급됨)와 함께 발현된 항-IL-33 모노클로날 항체를 포획하기 위해 20μg/mL의 개별 항-IL-33 모노클로날 항체를 함유하는 웰에 3 분 동안 침지시켰다. 상기 포획 단계 후, Octet 바이오센서 상에 차지되지 않은 항-마우스 Fc 폴리클로날 항체 및 항-사람 Fc 폴리클로날 항체는 4분 동안 각각 마우스 Fc 또는 사람 Fc와 함께 비특이적 모노클로날 항체 200㎍/ml을 함유하는 웰에 침지시킴에 의해 포화시켰다. 최종적으로, Octet 바이오센서는 100nM의 사람 IL-33 및 500nM의 mAb-2의 예비 혼합된 샘플을 함유하는 웰에 4분 동안 침지시켰다. 각 주기의 말기에, 사람 IL-33 및 mAb-2의 결합된 예비 복합체와 함께 비공유적으로 포획된 항-IL-33 항체를 10mM HCl에 3회 반복 20초 침지함에 HBS-ET 역학적 완충액으로 침지시킴을 사용하여 바이오센서로부터 제거하였다. 상기 바이오센서는 실험의 매 단계 사이에 HBS-ET 역학 완충액으로 세척하였다. 실시간 결합 반응은 결합 반응 동안에 모니터링하였고 매 단계 종점에서 결합 반응(nm 유니트)을 기록하였다. 분석 동안에, 소정의 mAb-2(여기서, 즉, 매트릭스의 대각선을 따라 mAb-1은 mAb-2이다)의 자가-자가 배경 결합 신호는 모든 mAb-2 결합 반응(교차-경쟁 매트릭스 중 칼럼을 거쳐)에 대해 관찰된 신호로부터 공제하였고 상기 배경 보정된 결과는 도 1에 나타낸다. 사람 IL-33의 예비 복합체 및 상이한 mAb-2 샘플 각각에 결합하는 mAb-1의 반응은 서로에 대해 상이한 항-IL-33 모노클로날 항체의 경쟁/비경쟁 행동을 결정하기 위해 측정하였다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 검은 폰트를 갖는 담회색 박스는 자가 경쟁에 대한 결합 반응을 나타낸다. 결합 순서와는 무관하게 양 방향으로 서로 경쟁하는 항체는 검은 박스 및 백색 폰트로 나타낸다. 검은 폰트를 갖는 담회색으로 표시된 세포는 사람 IL-33에 약하게 결합하는 항-IL-33 모노클로날 항체를 나타내고 관찰된 일방향 교차 경쟁을 유도한다. 실험에 사용되는 이소형 대조군은 백색 폰트를 갖는 암회색 박스로 나타낸다. 검은 폰트를 갖는 백색 박스는 항체간 어떠한 경쟁을 나타내지 않고 이는 각각의 항체가 독특한 결합 에피토프를 가짐을 시사한다.
실시예 10. 바이오-층 간섭측정을 사용한 원숭이 IL-33 교차-경쟁
상이한 항-IL-33 모노클로날 항체 패널간의 결합 경쟁은 Octet® HTX 바이오센서(ForteBio, A Division of Pall Life Sciences) 상에서 실시간 표지 부재 바이오-층 간섭측정 검정을 사용하여 측정하였다. 상기 실험은 1000rpm으로 플레이트를 진탕시키면서 0.01M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 및 0.1mg/ml BSA (HBS-ET 역학 완충액)의 완충액을 사용하여 25℃에서 수행하였다. 2개의 항체가, C-말단 헥사히스티딘 태그(MfIL-33-6His; 서열번호 xx)와 함께 발현된 재조합 원숭이 IL-33에 결합하는 것에 대해 서로 경쟁할 수 있는지를 평가하기 위해, 대략 0.15nm 결합 유니트의 MfIL-33-6His를 먼저 상기 바이오센서를 85초동안 2㎍/ml의 MfIL-33-6His를 함유하는 웰에 침지시킴에 의해 항-펜타-His 항체 피복된 Octet 바이오센서(Fortebio Inc, # 18-5079)상으로 포획하였다. 이어서 상기 항원 포획된 바이오센서는 50㎍/ml의 mAb-1 용액을 함유하는 웰에 5분 동안 침지시킴에 의해 제1 항-IL-33 모노클로날 항체(이후 mAb-1으로서 언급됨)로 포화시켰다. 상기 바이오센서는 이어서 4분 동안 50㎍/ml 용액의 제2 항-IL-33 모노클로날 항체(이후 mAb-2로서 언급됨)를 함유하는 웰에 침지시켰다. 상기 바이오센서는 실험의 매 단계 사이에 HBS-ET 역학 완충액 중에서 세척하였다. 실시간 결합 반응은 실험 동안에 모니터링하였고 각각의 결합 단계에 대한 최대 결합 반응을 기록하였다. mAb-1과 예비 복합체화된 MfIL-33-6His에 결합하는 mAb-2의 반응을 측정하고 서로에 대해 상이한 항-IL-33 모노클로날 항체의 경쟁/비경쟁 행동을 측정하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 검은 폰트를 갖는 담회색 박스(대각선을 따라)는자가 경쟁(여기서, mAb-1=mAb-2)을 나타낸다. 양 방향으로 경쟁하는 항체는 결합 순서와는 무관하게 검은 박스 및 백색 폰트로 나타낸다. 검은 폰트를 갖는 백색 박스는 항체 간에 어떠한 경쟁을 나타내지 않고 이는 각각의 항체가 독특한 결합 에피토프를 가짐을 시사한다. 백색 폰트를 갖는 암회색 박스는 실험에 사용된 이소형 대조군을 나타낸다.
실시예 11. 폐 염증에서 IL-33의 역할을 연구하기 위한 생체내 모델: 급성 HDM-유도된 폐 염증 모델에서 mAb 시험
관련 생체내 모델에서 H4H9675P인 항-IL-33 항체의 효과를 결정하기 위해, 급성 HDM-유도된 폐 염증 연구는 마우스 IL-33 대신 사람 IL-33의 발현을 위해 동종접합성인 마우스(IL-33 HumIn 마우스)에서 수행하였다.
2주동안 주마다 5일 동안 20μL의 1X 인산 완충 식염수(PBS)(n=17) 또는 20μL의 1X PBS(n=3)에서 희석된 50㎍의 집먼지 진드기 추출물(HDM; Greer, #XPB70D3A2.5)을 IL-33 HumIn 마우스에 비강내 투여하였다. HDM 챌린지된 마우스의 서브세트에 제1 HDM 투여 전 3일째에 개시하여 이어서 HDM 챌린지 종료시때까지 주마다 2회 항-IL-33 항체인 H4H9675, (n=6) 또는 이소형 대조군 항체 (n=6) 25mg/kg으로 피하내 주사하였다. 제1 비강내 HDM 후 15일째에, 모든 마우스를 희생시키고 이들의 폐를 수거하였다. 마우스 그룹에 대해 실험 용량 범위 및 치료 프로토콜은 표 14에 나타낸다.
[표 14]
Figure pct00014

사이토킨 분석을 위한 폐 수거:
채혈 후, 각각의 마우스 기원의 두개골 및 우측 폐의 중엽을 제거하고 1X Halt 프로테아제 억제제 칵테일(Pierce, #78430)이 보충된 조직 단백질 추출 시약(1X T-PER 시약; Pierce, #78510) 용액을 함유하는 튜브에 위치시켰다. 모든 추가의 단계는 빙상에서 수행하였다. T-PER 시약의 용량(프로테아제 억제제 칵테일을 함유하는)은 각각의 샘플에 대해 조정하여 1:8(w/v)의 조직 대 T-PER 비율을 일치시켰다. 폐 샘플은 1회용 막자 (Kimble Chase, # 749625-0010)를 사용하여 튜브에서 손으로 파쇄시켰다. 상기 수득한 용해물을 원심분리하여 파쇄물을 펠렛화한다. 가용성 단백질 추출물을 함유하는 상등액을 새로운 튜브로 이전시키고 추가의 분석때까지 4℃에서 저장하였다.
폐 단백질 추출물 중 총 단백질 함량은 브래드포드 검정을 사용하여 측정하였다. 검정을 위해, 10μL의 희석된 추출물 샘플은 2회 96웰 플레이트에 분주하고 200μL의 1X 염료 시약(Biorad, #500-0006)과 혼합하였다. 1X T-Per 시약에서 700㎍/ml에서 개시하여 소 혈청 알부민 (Sigma, #A7979)의 연속 희석물을 표준물로서 사용하여 추출물의 정확한 단백질 농도를 결정하였다. 실온에서 5분 항온처리 후, 595nm에서 흡광도는 장치(Molecular Devices SpectraMax M5 플레이트 판독기) 상에서 측정하였다. 총 단백질 함량을 측정하기 위한 데이타 분석은 GraphPad PrismTM 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
폐 단백질 추출물에서 사이토킨 농도는 제조업자의 지시에 따라 염증 촉진 패널 1(마우스) 멀티플렉스 면역검정 키트 (MesoScale Discovery, # K15048D-2)를 사용하여 측정하였다. 간략하게,　50μL/웰의 구경측정기 및 샘플(Diluent 41 중에 희석된)을, 포획 항체로 예비 피복된 플레이트에 첨가하고 실온에서 2시간동안 700rpm에서 진탕시키면서 항온처리하였다. 이어서 상기 플레이트는 0.05% (w/v) Tween-20을 함유하는 1X PBS로 3회 세척하고 이어서, Diluent 45에 희석된 25μL의 검출 항체 용액을 첨가하였다. 진탕시키면서 실온에서 또 다른 2시간 항온처리 후, 상기 플레이트를 3회 세척하고 150μL의 2X Read 완충액을 각각의 웰에 첨가하였다. 전기화학발광을 MSD Spector® 장치상에서 즉각 판독하였다. 데이타 분석은 GraphPad PrismTM 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
각각의 그룹에서 모든 마우스 기원의 폐 총 단백질 추출물 중 각각의 사이토킨 농도는 브래드포드 분석에 의해 측정된 추출물의 총 단백질 함량으로 표준화하고 각각의 그룹에 대해 표 15에 나타낸 바와 같이 총 폐 단백질의 mg 당 (pg/mg 폐 단백질, ±SD) 사이토킨의 평균 pg으로서 표현하였다.
사이토킨 분석을 위한 폐 수거:
2주 동안 HDM을 투여받은 IL-33 HumIn 마우스의 폐에서 방출된 사이토킨 IL-4 및 IL-5의 수준은 식염수 완충액이 챌린지된 IL-33 HumIn 마우스에서 보다 상당히 높았다. 대조적으로, 치료 없이 또는 이소형 대조군과 함께 HDM을 투여받은 IL-33 HumIn 마우스와 비교하여 급성 HDM 챌린지 과정 동안에 항-IL-33 항체로 처리된 IL-33 HumIn 마우스의 폐에서 IL-4 및 IL-5 수준이 감소되는 경향이 있었다.
[표 15]
Figure pct00015

폐 세포 침투 분석을 위한 폐 수거
채혈 후, 각각의 마우스 기원의 우측 폐의 미측 엽을 제거하고 크기가 대략 2 내지 3mm인 정육면체로 절개함에 이어서 20분 동안 37℃ 욕조에서 항온처리하고 5분 마다 볼텍싱한, 행크( Hank's) 균염 용액 (HBSS) (Gibco, #14025) 중에 희석된 20㎍/mL의 DNAse (Roche, #10104159001) 및 0.7 U/mL Liberase TH (Roche, #05401151001)의 용액을 함유하는 튜브에 위치시켰다. 상기 반응은 10mM의 최종 농도로 에틸렌디아민에테트라아세트산 (Gibco, #15575)을 첨가하여 종료시켰다. 이어서 각각의 폐는 gentleMACS 해리기(dissociator®) (Miltenyi Biotec, #130-095-937)를 사용하여 해리시킴에 이어서 70㎛의 필터를 통해 여과하고 원심분리하였다. 수득한 폐 펠렛은 1ml의 1X 적혈구 세포 용해 완충액 (Sigma, #R7757) 중에 재현탁시켜 적색 세포를 제거하였다. 실온에서 3분 동안 항온처리한 후, 3 mL의 1X DMEM를 적혈 세포 용해 완충액을 탈활성화하기 위해 첨가하였다. 이어서 상기 세포 현탁액을 원심분리하고 수득한 세포 펠셋을 5 mL의 MACS 완충액 (autoMACS 전개 완충액; Miltenyi Biotec, #130-091-221) 중에 재현탁시켰다. 상기 재현탁된 샘플은 70㎛ 필터를 통해 여과하고 웰당 1x106 세포는 96웰 V-바닥 플레이트에 분주하였다. 이어서 세포를 원심분리하고 상기 펠렛은 1X PBS 중에서 세척하였다. 제2 원심분리 후, 세포 펠렛을 1X PBS 중에서 1:1000으로 희석된 100μL의 LIVE/DEAD® 고정된 아쿠아 사멸 세포 염색(Fixable Aqua Dead Cell Stain) (Life Technologies, #L34957) 중에 재현탁시켜 세포 생존능을 결정하고 광으로부터 보호하면서 시론에서 20분 동안 항온처리하였다. 1X PBS 중에서 1회 세척 후, 세포는 10㎍/mL의 정제된 래트 항-마우스 CD16/CD32 Fc Block, (Clone: 2.4G2; BD Biosciences, #553142)를 함유하는MACS 완충액 용액에서 4℃에서 10분 동안 항온처리하였다. 상기 세포를 1회 세척하고 이어서 광으로부터 보호하면서 4℃에서 30분 동안 MACS 완충액 중에 희석된 적당한 항체 혼합물(표 16에 기재된)에서 항온처리하였다. 항체 항온처리 후, 상기 세포는 MACS 완충액 중에서 2회 세척하고 BD 사이토픽스 (BD Biosciences, #554655)에 재현탁시키고 이어서 광으로부터 보호하면서 4℃에서 15분 동안 항온처리하였다. 상기 세포는 이어서 세척하고 MACS 완충액에 재현탁시킴에 이어서 유동세포측정기에 의해 호산구, 고유 림프구성 세포 2형(ILC2) 및 림프구의 분석을 위해 BD FACS 튜브(BD Biosciences, #352235)에 이전하였다.
활성화된 CD4 T 세포는 생존 CD45+, SSCLo, FSCLo, CD3+, CD19-, CD4+, CD8-, 및 CD69+인 세포로서 정의하였다. 활성화된 B 세포는 생존 CD45+, SSCLo, FSCLo, CD3-, CD19+, 및 CD69+인 세포로서 정의하였다. 호산구는 생존 CD45+, GR1-, CD11clo, SiglecFhi으로 정의하였다. ILC2 세포는 생존 CD45+, 계통- (계통: CD19, CD3, CD11b, CD11c, F4/80), CD127+, Sca-1+, ST2+로서 정의하였다. 활성화된 CD4 세포에 대한 데이타는 모 집단 (CD4, ± SD)내 활성화된 세포(CD69+)의 빈도수로서 표현하고 표 17에 나타낸다.
[표 16]
Figure pct00016

폐 세포 침투 분석:
표 17에 나타낸 바와 같이, 2주 동안 HDM을 투여받은 IL-33 HumIn 마우스의 폐에서 활성화된 CD4+ T 세포, 호산구 및 ILC2의 빈도는 1X PBS 대조군이 챌린지된 IL-33 HumIn 마우스에서 보다 상당히 높았다. 대조적으로, 이들 침투의 빈도가 감소하는 경향은 치료 없이 또는 이소형 대조군으로 처리된 HDM이 투여된 IL-33 HumIn 마우스와 비교하여 급성 HDM 챌린지의 과정 동안에 항-IL-33 항체로 처리되는 경우 IL-33 HumIn에서 관찰되었다.
활성화된 B 세포의 빈도가 증가하는 경향은 1X PBS 대조군이 챌린지된 IL33 Humin 마우스와 비교하여 2주 동안 HDM이 챌린지된 IL33 HumIn 마우스의 폐에서 관찰되었다. 항-IL-33 항체 처리 즉시, 치료 없이 또는 이소형 대조군으로 처리된 HDM을 투여받은 IL-33 HumIn 마우스와 비교하여 HDM이 챌린지된 IL33 HumIn 마우스의 폐에서 폐 활성화된 B 세포 빈도의 상당한 감소가 관찰되었다.
[표 17]
Figure pct00017

실시예 12: 폐 염증에서 IL-33의 역할을 연구하기 위한 생체내 모델; 만성 HDM-유도된 섬유증 및 중증 폐 염증 모델에서의 mAb 시험
관련 생체내 모델에서 항-IL-33 항체인 H4H9675P의 효과를 결정하기 위해, 만성 HDM-유도된 섬유증 및 중증 폐 염증 연구를 마우스 IL-33 대신 사람 IL-33의 발현에 대해 동종접합성인 마우스 (IL-33 HumIn 마우스)에서 수행하였다.
IL-33 HumIn 마우스에 12주동안 주마다 5일 동안 20μL의 1X 인산 완충 식염수(PBS) 또는 20μL의 1X PBS 중에 희석된 50㎍ 집먼지 진드기 추출물 (HDM; Greer, #XPB70D3A2.5)을 비강내 투여하였다. IL-33 HumIn 마우스의 제2 대조군 그룹에 4주동안 주마다 5일 동안 20μL의 1X PBS 중에 희석된 50㎍ HDM 추출물을 투여하여 항체 치료 개시 시점에 질환의 중증도를 평가하였다. HDM 챌린지된 마우스의 2개 그룹에는 HDM 챌린지의 4주 후에 개시함에 이어서 HDM 챌린지 종료(항체 치료 8주)시까지 주마다 2회 25 mg/kg의 항-IL-33 항체, H4H9675P, 또는 이소형 대조군 항체를 피하내 주사하였다. 연구의 85일째에, 모든 마우스를 희생시키고 이들의 폐를 수거하였다. 마우스 그룹에 대한 실험 용량 범위 및 치료 프로토콜을 표 18에 나타낸다.
[표 18]
Figure pct00018

사이토킨 분석을 위한 폐 수거:
채혈 후, 각각의 마우스로부터 두개골 및 우측 폐의 중엽을 제거하고 1X Halt 프로테아제 억제제 칵테일(Pierce, #78430)이 보충된 조직 단백질 추출 시약(1X T-PER 시약; Pierce, #78510) 용액을 함유하는 튜브에 위치시켰다. 모든 추가의 단계는 빙상에서 수행하였다. T-PER 시약의 용량(프로테아제 억제제 칵테일을 함유하는)은 각각의 샘플에 대해 조정하여 1:8(w/v)의 조직 대 T-PER 비율을 일치시켰다. 폐 샘플은 1회용 막자 (Kimble Chase, # 749625-0010)를 사용하여 튜브에서 손으로 파쇄시켰다. 상기 수득한 용해물을 원심분리하여 파쇄물을 펠렛화한다. 가용성 단백질 추출물을 함유하는 상등액을 새로운 튜브로 이전시키고 추가의 분석때까지 4℃에서 저장하였다.
폐 단백질 추출물 중 총 단백질 함량은 브래드포드 검정을 사용하여 측정하였다. 검정을 위해, 10μL의 희석된 추출물 샘플은 2회 96웰 플레이트에 분주하고 200μL의 1X 염료 시약(Biorad, #500-0006)과 혼합하였다. 1X T-Per 시약에서 700㎍/ml에서 개시하여 소 혈청 알부민 (BSA; Sigma, #A7979)의 연속 희석물을 표준물로서 사용하여 추출물의 단백질 농도를 결정하였다. 실온에서 5분 항온처리 후, 595nm에서 흡광도는 장치(Molecular Devices SpectraMax M5 플레이트 판독기) 상에서 측정하였다. BSA 표준물을 기준으로 총 폐 추출물 단백질 함량을 측정하기 위한 데이타 분석은 GraphPad PrismTM 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
폐 단백질 추출물에서 사이토킨 농도는 제조업자의 지시에 따라 염증 촉진 패널 1(마우스) 멀티플렉스 면역검정 키트 (MesoScale Discovery, # K15048D-2)를 사용하여 측정하였다. 간략하게,　50μL/웰의 구경측정기 및 샘플(Diluent 41 중에 희석된)을, 포획 항체로 예비 피복된 플레이트에 첨가하고 실온에서 2시간동안 700rpm에서 진탕시키면서 항온처리하였다. 이어서 상기 플레이트는 0.05% (w/v) Tween-20을 함유하는 1X PBS로 3회 세척하고 이어서, Diluent 45에 희석된 25μL의 검출 항체 용액을 첨가하였다. 진탕시키면서 실온에서 또 다른 2시간 항온처리 후, 상기 플레이트를 3회 세척하고 150L의 2X Read 완충액을 각각의 웰에 첨가하였다. 전기화학발광을 MSD Spector® 장치상에서 즉각 판독하였다. 데이타 분석은 GraphPad PrismTM 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
각각의 그룹에서 모든 마우스 기원의 폐 총 단백질 추출물 중 각각의 사이토킨 농도는 브래드포드 분석에 의해 측정된 추출물의 총 단백질 함량으로 표준화하고 각각의 그룹에 대해 표 19에 나타낸 바와 같이 총 폐 단백질의 mg 당 (pg/mg 폐 단백질, ±SD)사이토킨의 평균 pg으로서 표현하였다.
[표 19]
Figure pct00019

폐 사이토킨 분석:
4주 및 12주 동안 HDM을 투여받은 IL-33 HumIn 마우스의 폐에서 방출된 사이토킨 IL-4 및 IL-5의 수준은 1X PBS가 챌린지된 IL-33 HumIn 마우스에서 보다 상당히 높았다. 대조적으로 치료 없이 또는 이소형 대조군 처리와 함께 HDM을 투여받은 IL-33 HumIn 마우스와 비교하여 만성 HDM 챌린지 과정 동안에 항-IL-33 항체로 처리된 IL-33 HumIn 마우스의 폐에서 IL-4 및 IL-5 수준이 감소하는 경향이 있었다.
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. <120> Anti-IL-33 Antibodies and Uses Thereof <130> 1850-WO <150> US 61/778,687 <151> 2013-03-13 <150> US 61/819,018 <151> 2013-05-03 <160> 323 <170> KopatentIN 2.0 <210> 1 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agttatggca tgcattgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagaaa taaatactat 180 acagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatgg acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagagg 300 tatatcagca gctattatgg ggggttcgac ccctggggcc agggagccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 2 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Tyr Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 ggattcacct tcagtagtta tggc 24 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 atatggtatg atggaagaaa taaa 24 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys 1 5 <210> 7 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 gcgagagaga ggtatatcag cagctattat ggggggttcg acccc 45 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Ala Arg Glu Arg Tyr Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 9 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagt agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaac tggatatcaa g 321 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 cagggtatta gtagttgg 18 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 gctgcatcc 9 <210> 14 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Ala Ala Ser 1 <210> 15 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 caacaggcta acagtttccc attcact 27 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 17 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta gtggaagtag cacagactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaggga cacgctgcat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaacgttc 300 tactacttct acggtttgga cgtctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctca 357 <210> 18 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asp Thr Leu His 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Thr Phe Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 ggattcacct tcagcagcta tgcc 24 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 20 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 21 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 21 attagtggta gtggaagtag caca 24 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 22 Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr 1 5 <210> 23 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 23 gcgaaaacgt tctactactt ctacggtttg gacgtc 36 <210> 24 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 24 Ala Lys Thr Phe Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 25 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 25 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctttaagaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagttc ctaaggtcct aatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180 cggttcagtg gcagtggatc tgggacagtt ttcactctca ccatcagcag cctgcagact 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tatagcagtg ccccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 26 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 26 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Arg 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 27 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 27 cagggcatta gcaattat 18 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 28 Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 29 gctgcatcc 9 <210> 30 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 30 Ala Ala Ser 1 <210> 31 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 31 caaaagtata gcagtgcccc attcact 27 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 32 Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Phe Thr 1 5 <210> 33 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 33 caggtgcttc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggccac agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggatc cactttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acaatggtgg cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggaattga gcaggctgag atctgacgac acggccgtat attactgtgc gagagagttg 300 cggtataact ggaagtcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 34 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 34 Gln Val Leu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Leu Arg Tyr Asn Trp Lys Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 35 ggatccactt tcaccggcta ctat 24 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 36 Gly Ser Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr 1 5 <210> 37 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 37 atcaacccta acaatggtgg caca 24 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 38 Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr 1 5 <210> 39 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 39 gcgagagagt tgcggtataa ctggaagtcc 30 <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 40 Ala Arg Glu Leu Arg Tyr Asn Trp Lys Ser 1 5 10 <210> 41 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 41 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagtcacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc aggccctact tagcctggta ccaacagata 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tgacatccca 180 gacaggttca gtggcaatgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag tagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatgata attcccctta tacttttggc 300 caggggacca ggctggagat caaa 324 <210> 42 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 42 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Arg Pro 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 43 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 43 cagagtgttg gcaggcccta c 21 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 44 Gln Ser Val Gly Arg Pro Tyr 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 45 ggtgcatcc 9 <210> 46 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 46 Gly Ala Ser 1 <210> 47 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 47 cagcagtatg ataattcccc ttatact 27 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 Gln Gln Tyr Asp Asn Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 49 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggaatt ggtctcagat ctcaggacta gtggtggtag tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gctcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaagccac 300 tatagcacca gctggttcgg gggctttgac tactggggcc agggaaccct ggtcactgtc 360 tcctca 366 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 50 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ser Asp Leu Arg Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser His Tyr Ser Thr Ser Trp Phe Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 ggattcacct ttagaagctt tgcc 24 <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Ala 1 5 <210> 53 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 ctcaggacta gtggtggtag taca 24 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 Leu Arg Thr Ser Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 55 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 55 gcgaaaagcc actatagcac cagctggttc gggggctttg actac 45 <210> 56 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 Ala Lys Ser His Tyr Ser Thr Ser Trp Phe Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 57 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgctt ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaccaa cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 58 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 59 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 cagggtttta gcagctgg 18 <210> 60 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 60 Gln Gly Phe Ser Ser Trp 1 5 <210> 61 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 gctgcatcc 9 <210> 62 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 Ala Ala Ser 1 <210> 63 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 caacaggcta acagtttccc tctcact 27 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 65 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacgtttagc agctatgtca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta atggtggtag cacaaactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctggaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatcactg 300 ggaactacca cgactttttt ggggtttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 66 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Gly Thr Thr Thr Thr Phe Leu Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 67 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 ggattcacgt ttagcagcta tgtc 24 <210> 68 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 68 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val 1 5 <210> 69 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 69 attagtggta atggtggtag caca 24 <210> 70 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 70 Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 71 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 71 gcgaaatcac tgggaactac cacgactttt ttggggtttg actat 45 <210> 72 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 72 Ala Lys Ser Leu Gly Thr Thr Thr Thr Phe Leu Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 73 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 73 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacatat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 74 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 74 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 75 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 75 cagggtatta gcagctgg 18 <210> 76 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 76 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 77 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 77 gctgcatcc 9 <210> 78 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 78 Ala Ala Ser 1 <210> 79 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 79 caacaggcta acagtttccc tctcact 27 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 80 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 81 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 81 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttattact ggagctggat ccggcagccc 120 ccagggaagg gactggagtt gattgggtat atttattaca gtgggagcac caattataac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatatct gtagacacgt ccaagaacca cttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtatatt actgtgcgag atcccagtat 300 accagtagtt ggtacggttc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 82 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 82 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 83 ggtggctcca tcagtagtta ttac 24 <210> 84 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 84 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr 1 5 <210> 85 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 85 atttattaca gtgggagcac c 21 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 86 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 87 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 87 gcgagatccc agtataccag tagttggtac ggttcttttg atatc 45 <210> 88 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 88 Ala Arg Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Ser Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 89 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 89 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc acctggttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tacaaggtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggccagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 90 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 90 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Pro Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 91 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 91 cagggtatta gcacctgg 18 <210> 92 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 92 Gln Gly Ile Ser Thr Trp 1 5 <210> 93 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 93 gctgcatcc 9 <210> 94 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 94 Ala Ala Ser 1 <210> 95 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 95 caacaggcta acagtttccc gtggacg 27 <210> 96 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 96 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 97 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 97 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cctctggtta cacctttaac agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagctccc acaatggtaa cagtcactat 180 gtacagaagt tccagggcag agtctccatg accacagaca catccacgag tacagcctac 240 atggaactga ggagccttag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagacactcg 300 tataccacca gctggtacgg gggttttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 98 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 98 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser His Asn Gly Asn Ser His Tyr Val Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 99 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 99 ggttacacct ttaacagcta tggt 24 <210> 100 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 100 Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr Gly 1 5 <210> 101 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 101 atcagctccc acaatggtaa cagt 24 <210> 102 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 102 Ile Ser Ser His Asn Gly Asn Ser 1 5 <210> 103 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 103 gcgagacact cgtataccac cagctggtac gggggttttg actat 45 <210> 104 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 104 Ala Arg His Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 105 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 105 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctcagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggtcagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 106 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 106 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 107 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 107 cagggtttta gcagctgg 18 <210> 108 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 108 Gln Gly Phe Ser Ser Trp 1 5 <210> 109 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 109 gctgcatcc 9 <210> 110 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 110 Ala Ala Ser 1 <210> 111 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 111 caacaggcta acagtttccc tctcact 27 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 112 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 113 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttggttcagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggaat caccttgagc agctatggca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtcgcatcc atttttggta gtggtggtgg cccatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatg tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ttgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attattgtgc gaaagatcga 300 tacagtggga gctactacgg aggttttgac tactggggcc ggggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 114 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Phe Gly Ser Gly Gly Gly Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 115 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 115 ggaatcacct tgagcagcta tggc 24 <210> 116 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 116 Gly Ile Thr Leu Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 117 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 117 atttttggta gtggtggtgg ccca 24 <210> 118 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 118 Ile Phe Gly Ser Gly Gly Gly Pro 1 5 <210> 119 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 119 gcgaaagatc gatacagtgg gagctactac ggaggttttg actac 45 <210> 120 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 120 Ala Lys Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 121 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 121 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattacc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctacactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaactgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaacattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcctac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 122 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 122 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu His Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 123 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 123 cagggtatta ccagctgg 18 <210> 124 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 124 Gln Gly Ile Thr Ser Trp 1 5 <210> 125 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 125 gctgcatcc 9 <210> 126 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 126 Ala Ala Ser 1 <210> 127 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 127 caacaggcta acagtttccc tcctact 27 <210> 128 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 128 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 129 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 129 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctaagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgcct tgacctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctctttt attagtggta gtggtggtag gccattctac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa catgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccatat attactgtgc gaagtccctg 300 tataccacca gctggtacgg ggggttcgac tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 130 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 130 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Phe Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 131 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 131 ggattcacct ttagcagtta tgcc 24 <210> 132 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 132 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 133 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 133 attagtggta gtggtggtag gcca 24 <210> 134 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 134 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Pro 1 5 <210> 135 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 135 gcgaagtccc tgtataccac cagctggtac ggggggttcg actcc 45 <210> 136 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 136 Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser 1 5 10 15 <210> 137 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 137 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtgtcgtc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ttgtcaacag tctaacagtt tccctttcac tctcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 138 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 138 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Val Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Leu Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 139 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 139 cagggtgtcg tcagctgg 18 <210> 140 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 140 Gln Gly Val Val Ser Trp 1 5 <210> 141 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 141 gctgcatcc 9 <210> 142 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 142 Ala Ala Ser 1 <210> 143 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 143 caacagtcta acagtttccc tttc 24 <210> 144 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 144 Gln Gln Ser Asn Ser Phe Pro Phe 1 5 <210> 145 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 145 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgaa gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggccactata tgtactggat gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180 gcacagaagt ttcaggacag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagggaga 300 tatggcagta gctggtacgg ggggtttgag tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 146 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 146 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Tyr Gly Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Glu Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 147 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 147 ggatacacct tcaccggcca ctat 24 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 148 Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His Tyr 1 5 <210> 149 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 149 atcaacccta acagtggtgg caca 24 <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 150 Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr 1 5 <210> 151 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 151 gcgagaggga gatatggcag tagctggtac ggggggtttg agtac 45 <210> 152 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 152 Ala Arg Gly Arg Tyr Gly Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Glu Tyr 1 5 10 15 <210> 153 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 153 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattacc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcagccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagacttta caacttacta ttgtcaacag gcttacagtc tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 154 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 154 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ala Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ser Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 155 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 155 cagggtatta ccagctgg 18 <210> 156 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 156 Gln Gly Ile Thr Ser Trp 1 5 <210> 157 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 157 gctgcagcc 9 <210> 158 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 158 Ala Ala Ala 1 <210> 159 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 159 caacaggctt acagtctccc tctcact 27 <210> 160 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 160 Gln Gln Ala Tyr Ser Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 161 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 161 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggct tgcactgggt ccgccagtct 120 ccaggcaagg ggctggaatg ggtggcactt atatcatatg acggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag acctgaggac acggctggat atttctgtgc gaaatcccta 300 tatacaacca gctggtacgg gggctttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 162 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 162 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Gly Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 163 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 163 ggattcacct tcagtagcta tggc 24 <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 164 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 165 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 165 atatcatatg acggaagtaa taaa 24 <210> 166 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 166 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys 1 5 <210> 167 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 167 gcgaaatccc tatatacaac cagctggtac gggggctttg actat 45 <210> 168 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 168 Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 169 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 169 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattaga agctggttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcgtccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcccac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 170 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 170 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 171 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 171 cagggtatta gaagctgg 18 <210> 172 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 172 Gln Gly Ile Arg Ser Trp 1 5 <210> 173 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 173 gctgcgtcc 9 <210> 174 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 174 Ala Ala Ser 1 <210> 175 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 175 caacaggcta acagtttccc tcccact 27 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 176 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 177 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 177 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccttcagc aactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact atcagtggca gtggtgataa cacatactac 180 gcagactccg tgcagggccg gttcaccatc tccagaggcc attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaacctacg 300 tatagcagaa gctggtacgg tgcttttgat ttctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttca 366 <210> 178 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 178 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Gly His Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Thr Tyr Ser Arg Ser Trp Tyr Gly Ala Phe Asp Phe Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 179 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 179 gggttcacct tcagcaacta tgcc 24 <210> 180 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 180 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5 <210> 181 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 181 atcagtggca gtggtgataa caca 24 <210> 182 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 182 Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr 1 5 <210> 183 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 183 gcgaaaccta cgtatagcag aagctggtac ggtgcttttg atttc 45 <210> 184 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 184 Ala Lys Pro Thr Tyr Ser Arg Ser Trp Tyr Gly Ala Phe Asp Phe 1 5 10 15 <210> 185 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 185 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaaccg 120 gggaaagccc ctcaactcct gatctatgct gcatccagat tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttctggg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacaatt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 186 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 186 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Trp Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 187 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 187 cagggtatta gcagctgg 18 <210> 188 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 188 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 189 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 189 gctgcatcc 9 <210> 190 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 190 Ala Ala Ser 1 <210> 191 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 191 caacaggcta acaatttccc attcact 27 <210> 192 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 192 Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 193 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 193 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agttatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gccttgagtg gatgggatgg atccgcgctt acaatggtta cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgaa caccgcctac 240 atggagctga ggaccctgaa ttctgacgat acggccgttt attactgtgc gagagatcga 300 tatagtggga gcttccacgg taactttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 194 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 194 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Arg Ala Tyr Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Thr Leu Asn Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Phe His Gly Asn Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 195 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 195 ggttacacct ttaccagtta tggt 24 <210> 196 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 196 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly 1 5 <210> 197 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 197 atccgcgctt acaatggtta caca 24 <210> 198 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 198 Ile Arg Ala Tyr Asn Gly Tyr Thr 1 5 <210> 199 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 199 gcgagagatc gatatagtgg gagcttccac ggtaactttg actac 45 <210> 200 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 200 Ala Arg Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Phe His Gly Asn Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 201 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 201 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcgt ctgtaggaga cagagtgacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattttc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaggtcct aatctatgct gcatccaatt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt taccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 202 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 202 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Phe Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 203 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 203 cagggtattt tcagctgg 18 <210> 204 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 204 Gln Gly Ile Phe Ser Trp 1 5 <210> 205 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 205 gctgcatcc 9 <210> 206 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 206 Ala Ala Ser 1 <210> 207 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 207 caacaggcta acagtttacc gctcact 27 <210> 208 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 208 Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 209 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 209 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctattcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcaact attaataata atggggatac cacatattat 180 gcagactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 cttcaactgg gcagcctgag acctgaggac atggctgtgt attactgtgc gagacagacg 300 tataccagca gctggtacgg ggggttcgac tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 210 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 210 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ser Thr Ile Asn Asn Asn Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Gly Ser Leu Arg Pro Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 211 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 211 ggattcacct tcagtaccta ttct 24 <210> 212 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 212 Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ser 1 5 <210> 213 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 213 attaataata atggggatac caca 24 <210> 214 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 214 Ile Asn Asn Asn Gly Asp Thr Thr 1 5 <210> 215 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 215 gcgagacaga cgtataccag cagctggtac ggggggttcg actcc 45 <210> 216 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 216 Ala Arg Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser 1 5 10 15 <210> 217 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 217 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggcga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattacc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaccag cctgcagcct 240 gaggattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtc tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 218 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 218 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 219 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 219 cagggtatta ccagctgg 18 <210> 220 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 220 Gln Gly Ile Thr Ser Trp 1 5 <210> 221 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 221 gctgcatcc 9 <210> 222 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 222 Ala Ala Ser 1 <210> 223 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 223 caacaggcta acagtctccc attcact 27 <210> 224 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 224 Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 225 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 225 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacccttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggcag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgtat 240 ctgcaattga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaagacgctg 300 tatactacca gctggtacgg gggcttccag cactggggcc agggcaccct ggtcactgtc 360 tcctca 366 <210> 226 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 226 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Thr Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 227 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 227 ggattcaccc ttagcagcta tgcc 24 <210> 228 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 228 Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 229 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 229 attagtggta gtggtggcag caca 24 <210> 230 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 230 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 231 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 231 gcgaagacgc tgtatactac cagctggtac gggggcttcc agcac 45 <210> 232 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 232 Ala Lys Thr Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His 1 5 10 15 <210> 233 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 233 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggaatcagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagtcc ctaagctcct gatctatgct gcgtcctctt tgcaaagtgg gttcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagtag cctgcagccc 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag actcacagtt tcccgtggac ggtcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 234 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 234 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Phe Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Val Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 235 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 235 cagggaatca gcagttgg 18 <210> 236 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 236 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 237 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 237 gctgcgtcc 9 <210> 238 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 238 Ala Ala Ser 1 <210> 239 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 239 caacagactc acagtttccc gtgg 24 <210> 240 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 240 Gln Gln Thr His Ser Phe Pro Trp 1 5 <210> 241 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 241 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacccttagg agctatttca tgacctgggt ccgccaggtt 120 ccagggaagg ggctggaggg ggtctcagct attagtggca ttagtggtgg cacatactac 180 acagactccg ttaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat atttctgtgc gagaacggtg 300 tatagtagta gttactacgg gggcttccag cactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 242 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 242 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr 20 25 30 Phe Met Thr Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ile Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Val Tyr Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Gln His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 243 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 243 ggattcaccc ttaggagcta tttc 24 <210> 244 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 244 Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr Phe 1 5 <210> 245 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 245 attagtggca ttagtggtgg caca 24 <210> 246 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 246 Ile Ser Gly Ile Ser Gly Gly Thr 1 5 <210> 247 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 247 gcgagaacgg tgtatagtag tagttactac gggggcttcc agcac 45 <210> 248 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 248 Ala Arg Thr Val Tyr Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Gln His 1 5 10 15 <210> 249 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 249 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgtat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgtt gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag actaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 250 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 250 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 251 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 251 cagggtatta gcagttgg 18 <210> 252 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 252 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 253 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 253 gttgcatcc 9 <210> 254 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 254 Val Ala Ser 1 <210> 255 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 255 caacagacta acagtttccc tctcact 27 <210> 256 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 256 Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 257 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 257 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacccttagg agttatgtca tgtactgggt ccgccagggt 120 ccagggaagg ggctggaggg ggtctcaggt attagtggca gtagtggtgg cacatactac 180 acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat atttctgtgc gagatcggtg 300 tatagtacca cctggtacgg gggcttccag cactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 258 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 258 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr 20 25 30 Val Met Tyr Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Val Tyr Ser Thr Thr Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 259 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 259 ggattcaccc ttaggagtta tgtc 24 <210> 260 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 260 Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr Val 1 5 <210> 261 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 261 attagtggca gtagtggtgg caca 24 <210> 262 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 262 Ile Ser Gly Ser Ser Gly Gly Thr 1 5 <210> 263 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 263 gcgagatcgg tgtatagtac cacctggtac gggggcttcc agcac 45 <210> 264 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 264 Ala Arg Ser Val Tyr Ser Thr Thr Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His 1 5 10 15 <210> 265 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 265 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgtat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggttattagc agttggttag cctggtatca gctgaaacca 120 gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcgg cctgcagcct 240 gaagattttg cagtttacta ttgtcaacag actaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 266 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 266 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 267 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 267 caggttatta gcagttgg 18 <210> 268 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 268 Gln Val Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 269 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 269 gctgcatcc 9 <210> 270 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 270 Ala Ala Ser 1 <210> 271 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 271 caacagacta acagtttccc tctcact 27 <210> 272 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 272 Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 273 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 273 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaaac ttggaacagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtacag cctctggatt cacctttagc agatctgcca tgaactgggt ccgccgggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagga attagtggta gtggtggtcg aacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa tacgctatat 240 ctgcaaatga acagcctgag cgccgaggac acggccgcat attactgtgc gaaagattcg 300 tatactacca gttggtacgg aggtatggac gtctggggcc acgggaccac ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 274 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 274 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Glu Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 275 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 275 ggattcacct ttagcagatc tgcc 24 <210> 276 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 276 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser Ala 1 5 <210> 277 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 277 attagtggta gtggtggtcg aaca 24 <210> 278 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 278 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr 1 5 <210> 279 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 279 gcgaaagatt cgtatactac cagttggtac ggaggtatgg acgtc 45 <210> 280 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 280 Ala Lys Asp Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 281 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 281 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattttc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 ggaaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcttccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180 agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaggattttg caatttacta ttgtcaacag gctaacagtg tcccgatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa a 321 <210> 282 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 282 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Phe Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Val Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 283 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 283 cagggtattt tcagctgg 18 <210> 284 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 284 Gln Gly Ile Phe Ser Trp 1 5 <210> 285 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 285 gctgcttcc 9 <210> 286 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 286 Ala Ala Ser 1 <210> 287 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 287 caacaggcta acagtgtccc gatcacc 27 <210> 288 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 288 Gln Gln Ala Asn Ser Val Pro Ile Thr 1 5 <210> 289 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 289 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgttcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcaccgct attagtggca gtggtggtgg cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgttt 240 ctgcaattga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaacaaacg 300 tataccagca gctggtacgg tggctttgat atctggggcc aggggacaat ggtcaccgtc 360 tcttca 366 <210> 290 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 290 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 291 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 291 ggattcacct ttagcagcta tgcc 24 <210> 292 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 292 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 293 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 293 attagtggca gtggtggtgg caca 24 <210> 294 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 294 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr 1 5 <210> 295 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 295 gcgaaacaaa cgtataccag cagctggtac ggtggctttg atatc 45 <210> 296 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 296 Ala Lys Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 297 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 297 gacatccaga tgacccagtc gccatcttcc gtgtccgcgt ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggttttagt tcctggttag cctggtatca gcagatacca 120 gggaaagccc ccaagctcct gatctatgct gcatcaaggt tgcaaagtgg ggtcccatcc 180 aggttccgcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaggattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 298 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 298 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 299 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 299 cagggtttta gttcctgg 18 <210> 300 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 300 Gln Gly Phe Ser Ser Trp 1 5 <210> 301 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 301 gctgcatca 9 <210> 302 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 302 Ala Ala Ser 1 <210> 303 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 303 caacaggcta acagtttccc gctcact 27 <210> 304 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 304 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 305 <211> 167 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 305 Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Ser Leu Ala Ser Leu Ser 1 5 10 15 Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr 20 25 30 Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Asp Lys Val 35 40 45 Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Ser Glu Ser Gly Asp 50 55 60 Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp 65 70 75 80 Phe Trp Leu Gln Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys 85 90 95 Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Arg 100 105 110 Ser Phe Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe 115 120 125 Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Tyr Ser 130 135 140 Glu Asn Leu Gly Ser Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Ile Leu 145 150 155 160 Glu His His His His His His 165 <210> 306 <211> 167 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 306 Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Ser Leu Ala Ser Leu Ser 1 5 10 15 Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr 20 25 30 Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Asp Lys Val 35 40 45 Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Ser Glu Ser Gly Asp 50 55 60 Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp 65 70 75 80 Phe Trp Leu Gln Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys 85 90 95 Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Arg 100 105 110 Ser Phe Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe 115 120 125 Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Tyr Ser 130 135 140 Glu Asn Leu Gly Ser Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Ile Leu 145 150 155 160 Glu His His His His His His 165 <210> 307 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 307 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagag cctcacgctg 60 acctgctccg tctctggatt ctcactcagt aatgttagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagtccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacaccacat ctctgaagac caggctcacc atctccaagg acacctccag aagccaggtg 240 gtccttacca tgaccgacat ggaccctggg gacacagcca catattactg tgcacggata 300 cggaatttgg cctttaatta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 308 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 308 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Val 20 25 30 Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Thr Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asp Met Asp Pro Gly Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Arg Asn Leu Ala Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 309 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 309 ggattctcac tcagtaatgt tagaatgggt 30 <210> 310 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 310 Gly Phe Ser Leu Ser Asn Val Arg Met Gly 1 5 10 <210> 311 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 311 attttttcga atgacgaaaa a 21 <210> 312 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 312 Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys 1 5 <210> 313 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 313 gcacggatac ggaatttggc ctttaattac 30 <210> 314 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 314 Ala Arg Ile Arg Asn Leu Ala Phe Asn Tyr 1 5 10 <210> 315 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 315 gacttcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtgtta cacaggtcca gcaataagaa ctacttagct 120 tggtatcagc agaagccagg acagcctcct aacctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatggtact 300 ctatttactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339 <210> 316 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 316 Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Arg 20 25 30 Ser Ser Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Gly Thr Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile 100 105 110 Lys <210> 317 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 317 cagagtgtgt tacacaggtc cagcaataag aactac 36 <210> 318 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 318 Gln Ser Val Leu His Arg Ser Ser Asn Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 319 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 319 tgggcatct 9 <210> 320 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 320 Trp Ala Ser 1 <210> 321 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 321 cagcaatatt atggtactct atttact 27 <210> 322 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 322 Gln Gln Tyr Tyr Gly Thr Leu Phe Thr 1 5 <210> 323 <211> 338 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic Amino acids 1-310: Human ST2 (K19-S328 of accession number NP_057316.3) Amino acids 311-338: Myc-Myc-hexahistidine tag <400> 323 Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val 1 5 10 15 Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr 20 25 30 Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe 35 40 45 Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala Asp Ser 50 55 60 Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro 85 90 95 Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys 100 105 110 Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu 115 120 125 Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His 130 135 140 Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp 145 150 155 160 Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val 165 170 175 Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe Ser Leu 180 185 190 Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu Val Glu 195 200 205 Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly 210 215 220 Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr Lys Ile 225 230 235 240 Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln Asn Gln 245 250 255 Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg Ile Ala 260 265 270 Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu Ala Leu 275 280 285 Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg Lys Asn 290 295 300 Pro Ile Asp His His Ser Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 305 310 315 320 Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His 325 330 335 His His

Claims (39)

  1. 사람 인터류킨 33(IL-33)에 결합하는 단리된 사람 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 IL-33-매개된 신호 전달을 억제하거나 약화시키는 단리된 사람 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 IL-33과 ST2의 상호작용을 차단하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 25℃에서 시험관내 수용체/리간드 결합 분석에 의한 측정시 약 10nM 미만의 IC50 값으로 IL-33과 ST2의 상호작용을 차단하거나 IL-33과 ST2의 상호작용을 약 50% 초과로 차단하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 IL-33과 ST2의 상호작용을 차단하지 않거나 단지 부분적으로 차단하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 37℃에서 표면 플라스몬 공명 검정에 의한 측정시 약 1nM 미만의 결합 해리 평형 상수(KD)로 사람 IL-33과 결합하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 37℃에서 표면 플라스몬 공명 검정에 의한 측정시 약 8분 초과의 해리 반감기(t½)로 사람 IL-33과 결합하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 사람 호염구의 IL-33-매개된 탈과립을 억제하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 시험관내 호염구 활성화 시험(BAT)에 의한 측정시 약 600pM 미만의 IC50으로 사람 호염구의 IL-33-매개된 탈과립을 억제하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 사람 PBMC로부터 IL-33-매개된 IFN-감마 생산을 억제하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 시험관내 PBMC IFN-감마 생산 검정에 의한 측정시 약 25nM 미만의 IC50으로 사람 PBMC로부터 IL-33-매개된 IFN-감마 생산을 억제하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 시험관내 PBMC IFN-감마 생산 검정에 의한 측정시 약 3nM 미만의 IC50으로 사람 PBMC로부터 IL-33-매개된 IFN-감마 생산을 억제하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 시험관내 PBMC IFN-감마 생산 검정에 의한 측정시 약 0.5nM 미만의 IC50으로 사람 PBMC로부터 IL-33-매개된 IFN-감마 생산을 억제하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 알레르겐-유도된 폐 염증의 동물 모델로 투여되는 경우 폐에서 CD4+ T 세포, 호산구 및 ILC2 세포의 빈도를 감소시키는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 알레르겐-유도된 폐 염증의 동물 모델로 투여되는 경우, IL-4 및 IL-5의 수준을 감소시키는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 알레르겐 유도된 폐 염증의 동물 모델로 투여되는 경우, 이소형 대조군 항체를 투여받은 알레르겐 챌린지된 동물과 비교하여 IL-4 수준을 적어도 4배 감소시키고/시키거나 IL-5 수준을 적어도 5배 감소시키는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 및 308/316으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 표준 항체와 IL-33에 결합하는 것에 대해 경쟁하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 및 308/316으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 표준 항체와 동일한 IL-33 상의 에피토프에 결합하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 사람 인터류킨-33 (IL-33)에 특이적으로 결합하는 단리된 사람 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 (a) 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 및 308로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 및 316로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함하는, 단리된 사람 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 및 308/316으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  20. 청구항 18에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 각각 서열번호 4-6-8-12-14-16; 20-22-24-28-30-32; 36-38-40-44-46-48; 52-54-56-60-62-64; 68-70-72-76-78-80; 84-86-88-92-94-96; 100-102-104-108-110-112; 116-118-120-124-126-128; 132-134-136-140-142-144; 148-150-152-156-158-160; 164-166-168-172-174-176; 180-182-184-188-190-192; 196-198-200-204-206-208; 212-214-216-220-222-224; 228-230-232-236-238-240; 244-246-248-252-254-256; 260-262-264-268-270-272; 276-278-280-284-286-288; 292-294-296-300-302-304; 및 310-312-314-318-320-322로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 도메인을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 사람 인터류킨-33(IL-33)에 특이적으로 결합하는 단리된 사람 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 (a) 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 및 308로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR); 및 (b) 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 및 316으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는, 단리된 사람 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  22. 청구항 21에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 및 308/316로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  23. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 청구항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자.
  24. 청구항 23에 따른 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
  25. 청구항 24의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  26. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 청구항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
  27. 염증 질환 또는 장애, 또는 염증 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법이 청구항 1 내지 22 중 어느 한 청구항에 따른 IL-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 청구항 26의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하고, 상기 염증 질환 또는 장애가 중증도, 지속성 또는 발병 빈도에 있어서 약화 또는 감소되거나, 상기 염증 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상이 중증도, 지속성 또는 발병 빈도에 있어서 약화 또는 감소되는, 방법.
  28. 청구항 27에 있어서, 상기 염증 질환 또는 장애가 천식, 아토피성 피부염, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 관절염, 알레르기성 비염, 호산구 식도염 및 건선으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  29. 청구항 28에 있어서, 상기 염증 또는 장애가 천식인, 방법.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 천식이 호산구성 또는 비-호산구성 천식인, 방법.
  31. 청구항 28 내지 30 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 천식이 스테로이드 내성 또는 스테로이드 민감성 천식인, 방법.
  32. 청구항 28에 있어서, 상기 염증 질환 또는 장애가 아토피성 피부염인, 방법.
  33. 청구항 28에 있어서, 상기 염증 질환 또는 장애가 만성 폐색성 폐 질환(COPD)인, 방법.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 만성 폐색성 폐 질환이 흡연으로부터 비롯되거나 부분적으로 상기 흡연에 의해 유발되는, 방법.
  35. 알레르겐에 대해 민감성을 나타내는 환자를 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 IL-33에 특이적으로 결합하는 청구항 1 내지 22 중 어느 한 청구항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 청구항 26에 따른 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하고, 상기 환자가 상기 항체, 또는 상기 항체를 포함하는 조성물을 투여한 후 알레르겐에 대해 감소된 민감성 또는 감소된 알레르기 반응을 나타내거나, 알레르겐에 대해 임의의 민감성 또는 알레르기 반응, 또는 알레르겐에 대해 과민성 반응을 경험하지 않는, 방법.
  36. 염증 질환 또는 장애를 치료하는데 사용하기 위한 청구항 1 내지 22 중 어느 한 청구항에 따른 항체 또는 청구항 26에 따른 약제학적 조성물로서, 상기 염증 질환 또는 장애가 천식, 알레르기, 과민증, 아토피성 피부염, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 관절염, 알레르기성 비염, 호산구 식도염 및 건선으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 항체 또는 약제학적 조성물.
  37. 염증 질환 또는 장애의 치료를 위한 약물의 제조에 사용하기 위한 청구항 1 내지 22 중 어느 한 청구항에 따른 항체 또는 청구항 26에 따른 약제학적 조성물로서, 상기 염증 질환 또는 장애가 천식, 알레르기, 과민증, 아토피성 피부염, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 관절염, 알레르기성 비염, 호산구 식도염 및 건선으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 항체 또는 약제학적 조성물.
  38. 청구항 27 내지 37 중 어느 한 청구항에 있어서, 염증 질환 또는 장애, 또는 상기 염증 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 약화시키기 위해 또는 알레르겐에 대한 알레르기 반응을 감소시키기 위해 유용한, 유효량의 제2 치료 제제를 투여함을 추가로 포함하는 방법.
  39. 청구항 38에 있어서, 제2 치료 제제가 비스테로이드성 소염제(NSAID), 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민제, 에피네프린, 충혈 완화제, 흉선 간질 림포포이에틴(TSLP) 길항제, IL-13 길항제, IL-4 길항제, IL-4/IL-13 이원 길항제, IL-5 길항제, IL-6 길항제, IL-12/23 길항제, IL-22 길항제, IL-25 길항제, IL-17 길항제, IL-31 길항제, 경구 PDE4 억제제 및 또 다른 IL-33 길항제 또는 IL-33에 대한 상이한 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
KR1020157021200A 2013-03-13 2014-03-12 항-ｉｌ-33 항체 및 이의 용도 KR102103159B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361778687P 2013-03-13 2013-03-13
US61/778,687 2013-03-13
US201361819018P 2013-05-03 2013-05-03
US61/819,018 2013-05-03
PCT/US2014/023930 WO2014164959A2 (en) 2013-03-13 2014-03-12 Anti-il-33 antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150126598A true KR20150126598A (ko) 2015-11-12
KR102103159B1 KR102103159B1 (ko) 2020-05-29

Family

ID=50678269

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157021200A KR102103159B1 (ko) 2013-03-13 2014-03-12 항-ｉｌ-33 항체 및 이의 용도

Country Status (30)

Country Link
US (5) US9453072B2 (ko)
EP (3) EP4403570A3 (ko)
JP (2) JP6479755B2 (ko)
KR (1) KR102103159B1 (ko)
CN (1) CN105051063B (ko)
AU (1) AU2014248839B2 (ko)
CA (1) CA2902172C (ko)
CL (2) CL2015002469A1 (ko)
DK (2) DK2970460T3 (ko)
EA (1) EA031745B1 (ko)
ES (1) ES2804592T3 (ko)
FI (1) FI3683235T3 (ko)
HK (1) HK1220467A1 (ko)
HR (2) HRP20240774T1 (ko)
HU (1) HUE051018T2 (ko)
IL (2) IL240354A0 (ko)
JO (1) JO3532B1 (ko)
LT (2) LT3683235T (ko)
MX (2) MX2015010599A (ko)
MY (1) MY174740A (ko)
PH (1) PH12015501656A1 (ko)
PL (2) PL2970460T3 (ko)
PT (2) PT3683235T (ko)
RS (2) RS60503B1 (ko)
SG (1) SG11201505745WA (ko)
SI (2) SI3683235T1 (ko)
TW (1) TWI633119B (ko)
UY (1) UY35417A (ko)
WO (1) WO2014164959A2 (ko)
ZA (1) ZA201505376B (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022039455A1 (ko) * 2020-08-18 2022-02-24 성균관대학교 산학협력단 Il-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편

Families Citing this family (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX352889B (es) 2011-02-25 2017-12-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo de fc especifico para fcyriib.
US20150050269A1 (en) 2011-09-30 2015-02-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
MX358220B (es) 2011-11-30 2018-08-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Portador que contiene fármaco en la célula para formar el inmunocomplejo.
AR091069A1 (es) 2012-05-18 2014-12-30 Amgen Inc Proteinas de union a antigeno dirigidas contra el receptor st2
CN110624107A (zh) 2012-08-21 2019-12-31 赛诺菲生物技术公司 通过施用il-4r拮抗剂治疗或预防哮喘的方法
AU2013306700B2 (en) 2012-08-24 2019-05-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha FcgammaRIIb-specific Fc region variant
US10766960B2 (en) 2012-12-27 2020-09-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
JO3532B1 (ar) 2013-03-13 2020-07-05 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
CA2904377C (en) 2013-03-15 2021-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il-33 antagonists and uses thereof
AU2014250434B2 (en) 2013-04-02 2019-08-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc region variant
FI3088517T3 (fi) 2013-12-26 2023-11-30 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Ihmisen Anti-IL-33 neutraloiva monoklonaalinen vasta-aine
EP3092253B1 (en) 2014-01-10 2021-03-17 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against interleukin-33 (il-33)
CA2946511C (en) 2014-04-21 2023-08-22 The Childen's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for treating cytokine-related disorders
NO2785538T3 (ko) 2014-05-07 2018-08-04
JP7231326B2 (ja) 2014-11-10 2023-03-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｉｌ－３３媒介性障害のための治療及び診断方法
EA201791029A1 (ru) 2014-11-10 2017-12-29 Дженентек, Инк. Антитела против интерлейкина-33 и их применение
SG11201700841QA (en) 2014-12-19 2017-03-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
KR102605798B1 (ko) 2015-02-05 2023-11-23 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이온 농도 의존적 항원 결합 도메인을 포함하는 항체, Fc 영역 개변체, IL-8에 결합하는 항체, 및 그들의 사용
EP3265107B1 (en) 2015-03-02 2024-10-02 180 Therapeutics LP Method of treating a localized fibrotic disorder using a tnf receptor 2 antagonist
WO2016156440A1 (en) * 2015-03-31 2016-10-06 Medimmune Limited A novel il33 form, mutated forms of il33, antibodies, assays and methods of using the same
KR20240070706A (ko) * 2015-04-06 2024-05-21 메소 스케일 테크놀러지즈, 엘엘시 소모성 진탕 장치를 포함하는, 전기화학발광을 이용하여 검정법을 수행하기 위한 고처리율 시스템
TW202340452A (zh) 2015-08-04 2023-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
AU2016333903B2 (en) * 2015-10-06 2021-07-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biomarkers related to interleukin-33 (IL-33)-mediated diseases and uses thereof
US11359009B2 (en) 2015-12-25 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
CN109475622A (zh) * 2016-01-14 2019-03-15 安奈普泰斯生物有限公司 使用il-33抑制剂抑制过敏反应
EP3445783A2 (en) 2016-04-18 2019-02-27 Celldex Therapeutics, Inc. Agonistic antibodies that bind human cd40 and uses thereof
MA45294A (fr) * 2016-04-22 2019-02-27 Medimmune Llc Plasticité fonctionnelle d'ilc2, immunité et copd
CN109415436A (zh) * 2016-04-27 2019-03-01 辉瑞公司 抗il-33抗体及其组合物、方法及用途
MX2019001448A (es) 2016-08-05 2019-09-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composicion para profilaxis o tratamiento de enfermedades relacionadas con interleucina 8 (il-8).
EP3504328A1 (en) 2016-08-24 2019-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
MA46525A (fr) * 2016-10-13 2019-08-21 Symphogen As Anticorps anti-lag-3 et compositions
JOP20190093A1 (ar) * 2016-10-28 2019-04-25 Lilly Co Eli أجسام مضادة لـ il-33 واستخداماتها
TWI784988B (zh) * 2016-12-01 2022-12-01 美商再生元醫藥公司 治療發炎症狀的方法
JP6995127B2 (ja) 2017-02-10 2022-02-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トリプターゼ抗体、その組成物、及びその使用
CN108456251A (zh) * 2017-02-21 2018-08-28 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd-l1抗体及其应用
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
EP3610041A1 (en) * 2017-04-13 2020-02-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Treatment and inhibition of inflammatory lung diseases in patients having risk alleles in the genes encoding il33 and il1rl1
CA3066918A1 (en) 2017-06-12 2018-12-20 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-il1rap antibodies and antibody drug conjugates
SG11201912548XA (en) 2017-07-06 2020-01-30 Regeneron Pharma Cell culture process for making a glycoprotein
WO2019045075A1 (ja) * 2017-08-31 2019-03-07 田辺三菱製薬株式会社 Ｉｌ－３３アンタゴニストを含む子宮内膜症治療剤
CN111556895B (zh) 2017-11-14 2024-09-13 中外制药株式会社 抗-c1s抗体及使用方法
BR112020010615A2 (pt) 2017-12-22 2020-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. produto farmacêutico proteico, método e sistema para caracterizar impurezas de produto farmacêutico proteico e de fármaco de baixo peso molecular, método para produzir um anticorpo, anticorpo, e, usos do método e do sistema
MX2020008095A (es) 2018-01-31 2020-09-24 Regeneron Pharma Sistemas y métodos para caracterizar variantes de tamaño y carga de impurezas de productos farmacológicos.
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
JP7418337B2 (ja) 2018-02-09 2024-01-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド マスト細胞媒介性炎症性疾患の治療法及び診断法
BR112020013426A2 (pt) 2018-02-28 2020-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. métodos para identificação de um vírus em uma amostra e para detecção de ácidos nucleicos virais em uma amostra de cultura de células
BR112020015291B1 (pt) 2018-03-19 2023-09-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Tampão de amostra de eletroforese aquoso, método para identificar contaminantes ou impurezas em uma amostra de fármaco proteico, e, kit
IL277890B2 (en) 2018-04-11 2024-03-01 Regeneron Pharma Methods for quantification of IL-33
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
SG11202011970TA (en) 2018-08-27 2020-12-30 Regeneron Pharma Use of raman spectroscopy in downstream purification
MX2021002281A (es) 2018-08-30 2021-05-27 Regeneron Pharma Metodos para caracterizar complejos proteicos.
CN113272651B (zh) 2019-01-16 2023-06-16 瑞泽恩制药公司 鉴别蛋白质中的游离巯基的方法
TW202102260A (zh) 2019-03-21 2021-01-16 美商再生元醫藥公司 含有抗ｉｌ－３３抗體之穩定調配物
TW202106334A (zh) * 2019-05-01 2021-02-16 法商賽諾菲生物技術公司 藉由投予ｉｌ－３３拮抗劑治療或預防哮喘之方法
JP7541534B2 (ja) 2019-05-13 2024-08-28 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 改善された競合的リガンド結合アッセイ
US20220323937A1 (en) 2019-09-24 2022-10-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for chromatography use and regeneration
WO2021064452A1 (en) 2019-10-03 2021-04-08 Dasman Diabetes Institute Method for preventing progression to type ii diabetes
IL292442A (en) 2019-11-04 2022-06-01 Medimmune Ltd Anti-il-33 therapeutic agent for the treatment of kidney disorders
WO2021089563A1 (en) 2019-11-04 2021-05-14 Medimmune Limited Methods of using il-33 antagonists
IL293112A (en) 2019-11-25 2022-07-01 Regeneron Pharma Sustained release formulations using non-aqueous emulsions
MX2022007958A (es) * 2019-12-23 2022-10-07 Sanofi Biotechnology Metodos para tratar o prevenir el asma alergica mediante la administracion de un antagonista de il-33 y/o un antagonista de il-4r.
CA3165060C (en) 2020-01-21 2023-06-20 Yiming Zhao Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins
US20230110203A1 (en) 2020-03-13 2023-04-13 Medimmune Limited Therapeutic methods for the treatment of subjects with risk alelles in il33
IL296256A (en) 2020-03-13 2022-11-01 Genentech Inc Antibodies against interleukin-33 and uses thereof
EP4132972A1 (en) 2020-04-06 2023-02-15 MedImmune Limited Treating acute respiratory distress syndrome with il-33 axis binding antagonists
KR20230002612A (ko) * 2020-04-13 2023-01-05 매든 어드바이저스 엘엘씨 Ace2-표적화 조성물 및 covid-19의 치료 방법
KR20230010239A (ko) 2020-05-11 2023-01-18 메디뮨 리미티드 항-il-33 항체의 제형물
MX2022014243A (es) * 2020-05-12 2022-12-02 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd Proteina de union al antigeno st2.
KR20230058094A (ko) 2020-08-31 2023-05-02 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 세포 배양 성능을 개선하고 아스파라긴 서열 변이체를 완화하기 위한 아스파라긴 공급 전략
CN114249825A (zh) 2020-09-25 2022-03-29 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人il-33的抗体、其制备方法和用途
AU2021385363A1 (en) 2020-11-25 2023-06-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous membrane emulsification
MX2023007225A (es) 2020-12-17 2023-06-27 Regeneron Pharma Fabricacion de microgeles encapsuladores de proteina.
EP4281542A1 (en) 2021-01-20 2023-11-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving protein titer in cell culture
AU2022230987A1 (en) 2021-03-03 2023-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for quantifying and modifying protein viscosity
BR112023018665A2 (pt) 2021-03-26 2023-10-03 Regeneron Pharma Métodos e sistemas para desenvolvimento de protocolos de mistura
AU2022286340A1 (en) 2021-06-01 2024-01-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
CN113493513B (zh) * 2021-06-30 2022-07-12 深圳大学 抗人il-33中和性自身抗体及其制备方法和应用
CN113603775B (zh) * 2021-09-03 2022-05-20 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用
WO2023039457A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. A high-throughput and mass-spectrometry-based method for quantitating antibodies and other fc-containing proteins
EP4405390A1 (en) 2021-09-20 2024-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of controlling antibody heterogeneity
CN118076894A (zh) 2021-10-07 2024-05-24 里珍纳龙药品有限公司 pH建模和控制的系统及方法
EP4413359A1 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ph meter calibration and correction
EP4423018A1 (en) 2021-10-26 2024-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for generating laboratory water and distributing laboratory water at different temperatures
EP4430072A1 (en) 2021-11-10 2024-09-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
IL315265A (en) * 2022-03-03 2024-10-01 Pfizer Inc Multiple antibodies and their uses
WO2023177836A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for analyzing polypeptide variants
TW202402790A (zh) 2022-03-25 2024-01-16 英商梅迪繆思有限公司 減少呼吸系統感染之方法
WO2024038185A1 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Medimmune Limited Method of selecting patients for treatment with an il-33 axis antagonist
US20240198253A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for assessing chromatographic column integrity
WO2024158961A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mass spectrometry-based characterization of antibodies co-expressed in vivo
US20240245779A1 (en) 2023-01-25 2024-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modeling liquid protein composition stability
WO2024163708A1 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asymmetrical flow field-flow fractionation with mass spectrometry for biomacromolecule analysis
WO2024178213A2 (en) 2023-02-22 2024-08-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System suitability parameters and column aging

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005079844A2 (en) * 2004-02-17 2005-09-01 Schering Corporation Use for interleukin-33 (il33) and the il-33 receptor complex

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US550362A (en) 1895-11-26 crosby
US1000056A (en) 1910-11-03 1911-08-08 Carlos Van Bergh Threshing-machine.
US1001164A (en) 1911-06-09 1911-08-22 Arthur W Porter Cotton-sweep.
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5576191A (en) 1994-06-17 1996-11-19 Immunex Corporation Cytokine that binds ST2
WO2004056868A2 (en) 2002-12-19 2004-07-08 Endocube Sas Nf-hev compositions and methods of use
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US7666622B2 (en) 2005-10-19 2010-02-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Monomeric self-associating fusion polypeptides and therapeutic uses thereof
WO2007140205A2 (en) 2006-05-24 2007-12-06 Biogen Idec Ma Inc. Methods of treating fibrosis
PL2041177T3 (pl) 2006-06-02 2012-09-28 Regeneron Pharma Przeciwciała o wysokim powinowactwie przeciw ludzkiemu receptorowi IL 6
US7560530B1 (en) 2006-07-20 2009-07-14 Schering Corporation IL-33 receptor
WO2008132709A1 (en) 2007-04-26 2008-11-06 Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin Products for altering il-33 activity and methods therefor
JP2010527936A (ja) 2007-05-18 2010-08-19 メディミューン，エルエルシー 炎症性疾患におけるｉｌ−３３
US20100310575A1 (en) 2007-10-26 2010-12-09 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissensc Inhibitors of Caspase I-Dependent Cytokines in the Treatment of Neurodegenerative Disorders
ES2655079T3 (es) 2009-09-10 2018-02-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Uso de antagonistas de IL-33 para tratar enfermedades fibróticas
US9212227B2 (en) 2012-04-30 2015-12-15 Janssen Biotech, Inc. ST2L antibody antagonists for the treatment of ST2L-mediated inflammatory pulmonary conditions
AR091069A1 (es) 2012-05-18 2014-12-30 Amgen Inc Proteinas de union a antigeno dirigidas contra el receptor st2
JO3532B1 (ar) 2013-03-13 2020-07-05 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها
CA2904377C (en) 2013-03-15 2021-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il-33 antagonists and uses thereof
FI3088517T3 (fi) 2013-12-26 2023-11-30 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Ihmisen Anti-IL-33 neutraloiva monoklonaalinen vasta-aine
EP3092253B1 (en) 2014-01-10 2021-03-17 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against interleukin-33 (il-33)

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005079844A2 (en) * 2004-02-17 2005-09-01 Schering Corporation Use for interleukin-33 (il33) and the il-33 receptor complex

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022039455A1 (ko) * 2020-08-18 2022-02-24 성균관대학교 산학협력단 Il-33에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편

Also Published As

Publication number Publication date
EP3683235A1 (en) 2020-07-22
WO2014164959A3 (en) 2015-02-19
IL240354A0 (en) 2015-09-24
HUE051018T2 (hu) 2021-01-28
US20210363236A1 (en) 2021-11-25
CA2902172A1 (en) 2014-10-09
AU2014248839B2 (en) 2019-01-03
ES2804592T3 (es) 2021-02-08
JO3532B1 (ar) 2020-07-05
EP4403570A3 (en) 2024-10-02
HRP20200846T1 (hr) 2020-08-21
MX2020012416A (es) 2021-02-09
JP6479755B2 (ja) 2019-03-06
HRP20240774T1 (hr) 2024-09-13
KR102103159B1 (ko) 2020-05-29
US20200071396A1 (en) 2020-03-05
EP3683235B1 (en) 2024-05-22
IL261743A (en) 2018-10-31
PT2970460T (pt) 2020-06-02
PL2970460T3 (pl) 2020-10-05
SG11201505745WA (en) 2015-08-28
LT2970460T (lt) 2020-06-10
EA031745B1 (ru) 2019-02-28
CN105051063A (zh) 2015-11-11
US20160362487A1 (en) 2016-12-15
PL3683235T3 (pl) 2024-08-05
CA2902172C (en) 2024-04-02
US10000564B2 (en) 2018-06-19
CN105051063B (zh) 2019-08-16
BR112015020470A2 (pt) 2017-10-10
US12037388B2 (en) 2024-07-16
ZA201505376B (en) 2016-07-27
MY174740A (en) 2020-05-13
US20140271658A1 (en) 2014-09-18
JP6845876B2 (ja) 2021-03-24
US9453072B2 (en) 2016-09-27
US11104729B2 (en) 2021-08-31
IL261743B (en) 2020-11-30
TW201522370A (zh) 2015-06-16
US20180251542A1 (en) 2018-09-06
CL2015002469A1 (es) 2016-06-10
PH12015501656B1 (en) 2015-10-19
SI2970460T1 (sl) 2020-07-31
JP2019088311A (ja) 2019-06-13
SI3683235T1 (sl) 2024-07-31
EP4403570A2 (en) 2024-07-24
WO2014164959A2 (en) 2014-10-09
UY35417A (es) 2014-10-31
RS65586B1 (sr) 2024-06-28
PT3683235T (pt) 2024-06-24
PH12015501656A1 (en) 2015-10-19
DK2970460T3 (da) 2020-06-02
NZ710831A (en) 2021-04-30
EP2970460B1 (en) 2020-04-29
FI3683235T3 (fi) 2024-07-02
MX2015010599A (es) 2015-12-15
EA201591716A1 (ru) 2016-07-29
US10519230B2 (en) 2019-12-31
DK3683235T3 (da) 2024-07-08
AU2014248839A1 (en) 2015-08-20
RS60503B1 (sr) 2020-08-31
HK1220467A1 (zh) 2017-05-05
LT3683235T (lt) 2024-06-25
CL2018000101A1 (es) 2018-07-06
TWI633119B (zh) 2018-08-21
EP2970460A2 (en) 2016-01-20
JP2016513644A (ja) 2016-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102103159B1 (ko) 항-ｉｌ-33 항체 및 이의 용도
KR102645242B1 (ko) 염증 질환의 치료 방법
AU2013243644B2 (en) Anti-HLA-B*27 antibodies and uses thereof
US20240158497A1 (en) Bispecific antigen binding molecules that bind leptin receptor and/or gp130, and methods of use thereof
US11542326B2 (en) Anti-IL-25 antibodies and uses thereof
DK2809681T3 (en) ANTI-ASIC1 antibodies and uses thereof
KR20140014067A (ko) 항-cd48 항체 및 그의 용도
KR20150127618A (ko) Nav1.7에 대한 사람 항체
HUE031725T2 (en) High Human Human Protease Activated Receptor-2 Affinity
KR20190075133A (ko) 렙틴 수용체에 길항하는 항원-결합 단백질
JP2024147596A (ja) レプチン受容体および／またはｇｐ１３０に結合する二重特異性抗原結合分子、ならびにその使用方法
NZ710831B2 (en) Anti-il-33 antibodies and uses thereof
BR112015020470B1 (pt) Anticorpo monoclonal humano isolado anti-il-33 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seus usos, molécula de ácido nucleico isolada, vetor de expressão, e composição farmacêutica

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant