JP2016513644A - 抗ｉｌ−３３抗体及びその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に結合する抗体及びその使用方法を提供する。本発明は、ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる抗体を含む。本発明の抗体は、ＩＬ−３３とＳＴ２の相互作用を遮断するために機能し得る。別の方法では、本発明のある抗体は、ＩＬ−３３／ＳＴ２相互作用を遮断することなくＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる。本発明のある実施形態によれば、抗体は、ヒトＩＬ−３３に高い親和性で結合する完全ヒト抗体である。本発明の抗体は、炎症性疾患、又はアレルギー性疾患のようにＩＬ−３３シグナル伝達及び／又はＩＬ−３３細胞発現に関連する疾患及び障害の治療に有用である。【選択図】なし

Description

本発明は、ヒトＩＬ−３３に対して特異的な、抗体及びその抗原結合性断片、並びにその使用方法に関する。

インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）は、付属タンパク質ＩＬ−１ＲＡｃＰと会合する、ｔｏｌｌ様／インターロイキン−１受容体スーパーファミリー・メンバーであるＳＴ２のリガンドである（総説については、例えば、非特許文献１、非特許文献２；非特許文献３を参照のこと；特許文献１；特許文献２）。ＩＬ−３３によりＳＴ２／ＩＬ−１ＲＡｃＰが活性化されると、ＭｙＤ８８（ミエロイド系分化因子８８）及びＴＲＡＦ６（ＴＮＦ受容体関連因子６）などの下流分子を介してシグナル伝達カスケードが誘発され、特にＮＦκＢの活性化を引き起こす（核因子−κＢ）。ＩＬ−３３シグナル伝達は、さまざまな疾患及び障害に関与する因子として考えられている。（非特許文献３）。

米国特許第２０１０／０２６０７７０号 米国特許第２００９／００４１７１８号

Ｋａｋｋａｒ ａｎｄ Ｌｅｅ、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ − Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ７（１０）：８２７−８４０（２００８） Ｓｃｈｍｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２３：４７９−４９０（２００５） Ｌｉｅｗ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ − Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１０：１０３−１１０（２０１０）

本発明は、ヒトのインターロイキン−３３（「ＩＬ−３３」）に結合する抗体を提供する。本発明の抗体は、特に、ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達の抑制、並びにＩＬ−３３活性及び／又はシグナル伝達が原因であるもしくは関連する疾患及び障害の治療のために有用である。

本発明の抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体）が可能だが、抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）₂又はｓｃＦｖ断片）のみを含んでよく、また、機能性に影響を与える、例えば、残留エフェクター機能を除去するために修飾してよい（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体は完全に単離したヒトのモノクローナル抗体である。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を遮断する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用遮断がＩＣ₅₀値約１０ｎＭ未満、又は２５℃でのインビトロ受容体／リガンド結合アッセイで測定した、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用遮断が約５０％より大きい。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を遮断しない、又は一部のみを遮断する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定した結合平衡解離定数（Ｋ_D）約１ｎＭ未満でヒトＩＬ−３３に結合する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約８分を超える解離半減期（ｔ_1/2）でヒトＩＬ−３３に結合する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ＩＬ−３３を介するヒト好塩基球の脱顆粒を抑制する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ＩＬ−３３を介するヒト好塩基球の脱顆粒を抑制し、インビトロ好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）で測定したＩＣ₅₀が約６００ｐＭ未満である。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を、インビトロでのＰＢＭＣ ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ₅₀約２５ｎＭ未満で抑制する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を、インビトロでのＰＢＭＣ ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ₅₀約３ｎＭ未満で抑制する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、ヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を、インビトロでのＰＢＭＣ ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ₅₀約０.５ｎＭ未満で抑制する。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合に、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、好酸球及びＩＬＣ２細胞の肺における頻度を低下させる。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合、肺におけるＩＬ−４及びＩＬ−５のレベルを低下させる。

ある実施形態では、ヒトのインターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片は、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合、アイソタイプ・コントロール抗体を投与したアレルゲン誘発動物の場合に比して、ＩＬ−４レベルの少なくとも４倍低下及び／又はＩＬ−５レベルの少なくとも５倍低下をもたらす。

本発明は、抗体又はその抗原結合性断片であって、配列番号が２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、及び３０８番からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、抗体又はその抗原結合性断片を提供する。

本発明はまた、抗体又は抗体の抗原結合性断片であって、配列番号が１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、及び３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列を含む、抗体又は抗体の抗原結合性断片を提供する。

本発明はまた、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲとＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）の配列対を含む抗体又はその抗原結合性断片を提供する。

本発明はまた、抗体又は抗体の抗原結合性断片であって、配列番号が８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、及び３１４番からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン；並びに配列番号が１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、及び３２２番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメイン、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列を含む、抗体又は抗体の抗原結合性断片を提供する。

ある実施形態では、抗体又は抗体の抗原結合部分は、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４及び３１４／３２２番からなる群から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。

本発明はまた、抗体又はその断片であって、配列番号が４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、及び３１０番からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、及び３１２番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、及び３１８番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列；並びに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、及び３２０番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメイン、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的な類似配列、をさらに含む抗体又はその断片を提供する。

ある非限定的で例示的な本発明の抗体及び抗原結合性断片は、下記群から選択されるアミノ酸配列をそれぞれ有するＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む：配列番号：４−６−８−１２−１４−１６（例えば、Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ）；２０−２２−２４−２８−３０−３２（例えば、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ）；３６−３８−４０−４４−４６−４８（例えば、Ｈ１Ｍ９５６８Ｎ）；５２−５４−５６−６０−６２−６４（例えば、Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ）；６８−７０−７２−７６−７８−８０（例えば、Ｈ４Ｈ９６３３Ｐ）；８４−８６−８８−９２−９４−９６（例えば、Ｈ４Ｈ９６４０Ｐ）；１００−１０２−１０４−１０８−１１０−１１２（例えば、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ）；１１６−１１８−１２０−１２４−１２６−１２８（例えば、Ｈ４Ｈ９６６０Ｐ）；１３２−１３４−１３６−１４０−１４２−１４４（例えば、Ｈ４Ｈ９６６２Ｐ）；１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０（例えば、Ｈ４Ｈ９６６３Ｐ）；１６４−１６６−１６８−１７２−１７４−１７６（例えば、Ｈ４Ｈ９６６４Ｐ）；１８０−１８２−１８４−１８８−１９０−１９２（例えば、Ｈ４Ｈ９６６５Ｐ）；１９６−１９８−２００−２０４−２０６−２０８（例えば、Ｈ４Ｈ９６６６Ｐ）；２１２−２１４−２１６−２２０−２２２−２２４（例えば、Ｈ４Ｈ９６６７Ｐ）；２２８−２３０−２３２−２３６−２３８−２４０（例えば、Ｈ４Ｈ９６７０Ｐ）；２４４−２４６−２４８−２５２−２５４−２５６（例えば、Ｈ４Ｈ９６７１Ｐ）；２６０−２６２−２６４−２６８−２７０−２７２（例えば、Ｈ４Ｈ９６７２Ｐ）；２７６−２７８−２８０−２８４−２８６−２８８（例えば、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ）；２９２−２９４−２９６−３００−３０２−３０４（例えば、Ｈ４Ｈ９６７６Ｐ）；並びに３１０−３１２−３１４−３１８−３２０−３２２（Ｈ１Ｍ９５６５Ｎ）番。

関連実施形態では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合性断片を含み、かかる抗体又は断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択される重鎖と軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列内に含有される、重鎖及び軽鎖ＣＤＲドメインを含む。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定する方法及び技術は、当技術分野において周知であり、それらを使用して本明細書に開示する特定のＨＣＶＲ及び／又はＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定することができる。ＣＤＲの境界同定に使用可能な例示的な原則としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、及びＡｂＭ定義が挙げられる。一般的な用語で言うと、Ｋａｂａｔ定義は配列変化性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づいており、またＡｂＭ定義はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ両定義の折衷的な試みである。例えば、Ｋａｂａｔ， ”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，” Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．（１９９１）； Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８（１９９７）；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８−９２７２（１９８９）を参照のこと。抗体内のＣＤＲ配列の同定には公的データベースもまた利用可能である。

別の態様では、本発明は、抗ＩＬ−３３抗体又はその抗原結合性断片をコードする核酸分子を提供する。本発明の核酸を保有する組換え発現ベクター、及びかかるベクターが中に導入された宿主細胞もまた本発明に包含されるとともに、抗体の作製及びその作製抗体の回収が可能な条件下で宿主細胞を培養することにより抗体を作製する方法も本発明に包含される。

ある実施形態では、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、及び３０７番からなる群から選択される核酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一な配列によりコードされるＨＣＶＲを含む、抗体又はその断片を提供する。

本発明はまた、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、及び３１５番からなる群から選択される核酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＬＣＶＲを含む、抗体又はその断片を提供する。

本発明はまた、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、及び３１３番からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＨＣＤＲ３ドメイン；並びに、配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、及び３２１番からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含む、抗体又は抗体の抗原結合性断片を提供する。

本発明はまた、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、及び３０９番からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、及び３１１番からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、及び３１７番からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、及び３１９番からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によりコードされるＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む、抗体又はその断片を提供する。

ある実施形態によれば、抗体又はその断片は、配列番号が１及び９番（例えば、Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ）、１７及び２５番（例えば、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ）、３３及び４１番（例えば、Ｈ１Ｍ９５６８Ｎ）、４９及び５７番（例えば、Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ）、６５及び７３番（例えば、Ｈ４Ｈ９６３３Ｐ）、８１及び８９番（例えば、Ｈ４Ｈ９６４０Ｐ）、９７及び１０５番（例えば、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ）、１１３及び１２１番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６０Ｐ）、１２９及び１３７番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６２Ｐ）、１４５及び１５３番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６３Ｐ）、１６１及び１６９番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６４Ｐ）、１７７及び１８５番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６５Ｐ）、１９３及び２０１番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６６Ｐ）、２０９及び２１７番（例えば、Ｈ４Ｈ９６６７Ｐ）、２２５及び２３３番（例えば、Ｈ４Ｈ９６７０Ｐ）、２４１及び２４９番（例えば、Ｈ４Ｈ９６７１Ｐ）、２５７及び２６５番（例えば、Ｈ４Ｈ９６７２Ｐ）、２７３及び２８１番（例えば、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ）、２８９及び２９７番（例えば、Ｈ４Ｈ９６７６Ｐ）、又は３０７及び３１５番（Ｈ１Ｍ９５６５Ｎ）である核酸配列によりコードされる、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ配列を含む。

本発明は、改変されたグリコシル化パターンを有する抗ＩＬ−３３抗体を含む。用途によっては、望ましくないグリコシル化部位を除去するための改変が有用な場合があり、又は抗体のオリゴ糖鎖上にあるフコース部分を欠失させると、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を亢進させる（Ｓｈｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＪＢＣ ２７７：２６７３３を参照のこと）。別の用途では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するためにガラクトシル化の改変を行うことができる。別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する組換えヒト抗体又はその断片を含む医薬組成物、及び薬理学的に許容される担体を提供する。ある関連態様では、本発明は、抗ＩＬ−３３抗体及び第２の治療剤の組み合わせである組成物を特徴とする。ある実施形態では、第２の治療剤は、抗ＩＬ−３３抗体と有利に組み合わせられる任意の薬剤である。抗ＩＬ−３３抗体と有利に組み合わせてよい例示的薬剤には、非限定的に、ＩＬ−３３の活性を抑制する他の薬剤（他の抗体又はその抗原結合性断片、ペプチド阻害剤、低分子拮抗薬などを含む）及び／又は直接ＩＬ−３３に結合しはしないがＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を妨害する、遮断する又は減弱させる薬剤が含まれる。ある実施形態では第２の治療剤は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、気管支拡張剤、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）拮抗薬、ＩＬ−１３拮抗薬、ＩＬ−４拮抗薬、ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重拮抗薬、ＩＬ−５拮抗薬、ＩＬ−６拮抗薬、ＩＬ−１２／２３拮抗薬、ＩＬ−２２拮抗薬、ＩＬ−２５拮抗薬、ＩＬ−１７拮抗薬、ＩＬ−３１拮抗薬、経口ＰＤＥ４阻害剤及び別のＩＬ−３３拮抗薬又はＩＬ−３３に対する異なる抗体からなる群から選択されてよい。

ある実施形態では、サイトカイン拮抗薬は、低分子阻害剤（合成又は天然由来）、又は対象サイトカイン自身、もしくはサイトカインの受容体、もしくはサイトカインとその受容体（複数可）とを含む複合体のいずれかと相互作用するタンパク質（例えば、抗体）（例えば、ＩＬ−４又はＩＬ−６に対する抗体、又はＩＬ−４もしくはＩＬ−６の受容体に対する抗体）であってよい。本発明の抗ＩＬ−３３抗体を使用する治療及び合剤のさらなる組み合わせは、本明細書の他の箇所に開示されている。

さらに別の態様では、本発明は、本発明の抗ＩＬ−３３抗体又は抗体の抗原結合部分を用いてＩＬ−３３活性を抑制する治療的方法を提供し、これにおいて、かかる治療的方法は、本発明の抗体又は抗体の抗原結合性断片を含む、治療的有効量の医薬組成物を投与することを含む。治療される障害は、ＩＬ−３３活性又はシグナル伝達の除去、抑制もしくは低下により、改善、回復、阻害もしくは予防される、任意の疾患又は病態である。本発明の抗ＩＬ−３３抗体又は抗体断片は、ＩＬ−３３とＩＬ−３３が結合する相手（例えば、ＩＬ−３３受容体成分）との相互作用を遮断する、又はＩＬ−３３のシグナル伝達活性を抑制するために機能し得る。

ある実施形態では、本発明は、炎症性の疾患もしくは障害、又はかかる炎症性の疾患又は障害に関連する少なくとも１つの症状を治療する方法であって、ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片又はＩＬ−３３に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、その炎症性の疾患又は障害が回復する、又は発症の重症度、持続時間もしくは頻度を低減する；又はかかる炎症性の疾患又は障害に関連する少なくとも１つの症状が回復する、又は発症の重症度、持続時間もしくは頻度を低減する、治療方法を提供する。

ある実施形態では、炎症性疾患又は病態は、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される。

ある実施形態では、本発明は、アレルゲンに対して感受性を示す患者の治療方法であって、ＩＬ−３３に特異的に結合する有効量の抗体もしくはその抗原結合断片、又はＩＬ−３３に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、これにおいて抗体又は抗体を含む組成物の投与後に、患者がアレルゲンに対する感受性低下もしくはアレルギー反応減退を示す、又はアレルゲンに対するいかなる感受性もしくはアレルギー反応、又はアナフィラキシー反応を経験しない、治療方法を提供する。

ある実施形態では、本発明は、炎症性の疾患もしくは障害、又はその炎症性の疾患もしくは障害の少なくとも１つの症状を緩和する、又はアレルゲンに対するアレルギー応答を減退させるために有用である、有効量の第２の治療剤の投与を提供する。上記のように、第２の治療剤は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、気管支拡張剤、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）拮抗薬、ＩＬ−１３拮抗薬、ＩＬ−４拮抗薬、ＩＬ−５拮抗薬、ＩＬ−６拮抗薬、ＩＬ−２５拮抗薬、ＩＬ−１７拮抗薬、及び別のＩＬ−３３拮抗薬又はＩＬ−３３に対する異なる抗体からなる群から選択されてよい。

ある関連態様では、本発明は、患者のＩＬ−３３活性が関連する又は原因である疾患又は障害の治療に使用するための、本発明の抗ＩＬ−３３抗体、又はその抗原結合性断片、又は抗体もしくはそのａｎ−ｇｅｎ結合断片を含む医薬組成物を提供する。ある実施形態では、患者のＩＬ−３３活性が関連する又は原因である疾患又は障害は、炎症性の疾患又は障害であり、かかる炎症性の疾患又は障害は、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される。

本発明はまた、患者のＩＬ−３３活性が関連する又は原因である疾患又は障害を治療するための薬物の製造において、抗ＩＬ−３３抗体又は本発明の抗体の抗原結合部分を使用することを含む。ある実施形態では、患者のＩＬ−３３活性が関連する又は原因である疾患又は障害は、炎症性の疾患又は障害であり、かかる炎症性の疾患又は障害は、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される。

他の実施形態は、後述の詳細な説明の概説より明らかとなろう。

図１は、ヒトＩＬ−３３に対する抗ＩＬ−３３抗体間の交差競合を示す。 図２は、組換えサルのＩＬ−３３に対する抗ＩＬ−３３抗体間の交差競合を示す。

本発明の記載に入る前に、本発明は、記載される特定の方法及び実験条件に限定されるものではなく、かかる方法及び条件も異なる場合があることは理解されるべきである。また、本明細書で使用する用語は、あくまでも個々の実施形態を説明するためのであり、限定を意図したものではなく、その理由は、本発明の範囲は添付のクレームによってのみ限定されるからである。

特に明記しないかぎり、本明細書で使用するすべての技術的及び科学的用語は、本発明の属する技術分野の当業者が一般的に理解する意味と同じ意味を持つ。本明細書中で使用する場合、「約」という用語は、具体的に記述された数値に関して使用する場合、その値は記述値から１％以下で変動し得ることを意味する。例えば、本明細書中で使用する場合、「約１００」には９９及び１０１及びその間のすべての数値（例えば、９９.１、９９.２、９９.３、９９.４など）が含まれる。

本明細書に記載の類似又は同等な任意の方法及び物質を使用して本発明の実施又は試験が可能であるが、その好ましい方法及び物質をここに記載する。

定義
「インターロイキン−３３」、「ＩＬ−３３」、など、本明細書中で使用する場合、配列番号３０７番のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−３３タンパク質をいう。本明細書でタンパク質、ポリペプチド及びタンパク質断片という場合はいずれも、ヒト種でないことが明確に指示されていない限り（例えば、「マウスＩＬ−３３」、「サルＩＬ−３３」など）、それぞれヒトのタンパク質、ポリペプチド又はタンパク質断片を指すことを意図する。

本明細書中で使用する場合、「ＩＬ−３３に結合する抗体」又は「抗ＩＬ−３３抗体」は、ＩＬ−３３タンパク質の可溶性断片に結合する、抗体及びその抗原結合性断片を含む。可溶性ＩＬ−３３分子は、天然ＩＬ−３３タンパク質並びに組換えＩＬ−３３タンパク質変異体、例えば、単量体の及び二量体のＩＬ−３３構築物などを含む。

「抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、特定の抗原（例えば、ＩＬ−３３）と特異的に結合又は相互作用する、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む任意の抗原結合分子又は分子複合体を意味する。「抗体」という用語は、互いにジスルフィド結合により連結される、ポリペプチド鎖４本、重（Ｈ）鎖２本及び軽（Ｌ）鎖２本、並びにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む、免疫グロブリン分子を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＨＣＶＲ又はＶ_H）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、Ｃ_H１、Ｃ_H２及びＣ_H３の３つのドメインを含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＬＣＶＲ又はＶ_Lと略す）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（Ｃ_L１）を含む。Ｖ_H及びＶ_L領域はさらに、より保存性の高いフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に細分することができる。各Ｖ_H及びＶ_Lは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へ向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４という順序で並んでいる。本発明の異なる実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体（又はその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖細胞系配列と同一でよく、又は天然もしくは人工的に改変されてよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並行分析に基づいて定義してよい。

「抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、全抗体分子の抗原結合性断片も含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合性断片」などという用語は、本明細書中で使用する場合、天然に生じる、酵素的に得ることができる、合成される、又は遺伝子的に操作される、抗原に特異的に結合して複合体を形成するあらゆるポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合性断片は、例えば、タンパク質分解、又は抗体の可変ドメイン（及び必要に応じ、定常ドメイン）をコードするＤＮＡの操作及び発現を含む遺伝子組換え操作技術など、任意の好適な標準的技術を使用した、全抗体分子に由来するものであってよい。このようなＤＮＡは公知であり、及び／又は、例えば、市販されているもの、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）からすぐに入手可能、又は合成可能である。ＤＮＡは、例えば、１つ以上の可変及び／又は定常ドメインの好適な立体配置への配置決定、又はコドンの導入、システイン残基の作製、修飾、アミノ酸の付加もしくは削除などを行うために、化学的に又は分子生物学的技術を使用して配列決定及び操作してよい。

抗原結合性断片の非限定的な実施例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ'）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；並びに（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなど単離した相補性決定領域（ＣＤＲ））又は拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が含まれる。操作による他の分子、例えば、ドメイン特異性抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ融合抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、三重特異性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、四重特異性抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、小型抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、ナノ抗体（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ）（例えば、１価ナノ抗体（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ）、２価ナノ抗体（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ）など）、小モジュール免疫薬（ＳＭＩＰ）、及びサメＩｇＮＡＲ可変ドメインなどもまた、本明細書中で使用する場合、表現「抗原結合性断片」内に包含される。

抗体の抗原結合性断片は、一般に、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意の大きさ又はアミノ酸組成であってよく、一般に、１つ以上のフレームワーク配列に隣接する又はフレームされる、少なくとも１つのＣＤＲを含む。Ｖ_Lドメインと会合するＶ_Hドメインを有する抗原結合性断片では、Ｖ_H及びＶ_Lドメインは、任意の好適な配置決定で互いに位置してよい。例えば、可変領域は、二量体で、Ｖ_H−Ｖ_H、Ｖ_H−Ｖ_L又はＶ_L−Ｖ_Lの二量体を含有してよい。別の方法では、抗体の抗原結合性断片は、Ｖ_H又はＶ_Lの単量体ドメインを含有してよい。

ある実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含有してよい。可変及び定常ドメインの非限定的で例示的な立体配置は、以下を含む本発明の抗体の抗原結合性断片内に見出されてよい：（ｉ）Ｖ_H−Ｃ_H１；（ｉｉ）Ｖ_H−Ｃ_H２；（ｉｉｉ）Ｖ_H−Ｃ_H３；（ｉｖ）Ｖ_H−Ｃ_H１−Ｃ_H２；（ｖ）Ｖ_H−Ｃ_H１−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｖｉ）Ｖ_H−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｖｉｉ）Ｖ_H−Ｃ_L；（ｖｉｉｉ）Ｖ_L−Ｃ_H１；（ｉｘ）Ｖ_L−Ｃ_H２；（ｘ）Ｖ_L−Ｃ_H３；（ｘｉ）Ｖ_L
−Ｃ_H１−Ｃ_H２；（ｘｉｉ）Ｖ_L−Ｃ_H１−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｘｉｉｉ）Ｖ_L−Ｃ_H２−Ｃ_H３；及び（ｘｉｖ）Ｖ_L−Ｃ_L。上記に挙げた例示的な立体配置を含む、可変及び定常ドメインの任意の配置では、可変及び定常ドメインは、互いに直接結合しあっても、又は、完全もしくは部分的ヒンジ領域もしくはリンカー領域により結合しても、どちらでもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０又はそれ以上）のアミノ酸で構成されてよく、隣接する可変領域及び／又は定常ドメイン間に単一ポリペプチド分子で柔軟又は半柔軟な結合をする。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、互いに及び／又は１つ以上の単量体のＶ_HもしくはＶ_Lドメインと非共有的に会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可））、上記の可変及び定常ドメイン立体配置のいずれかのホモ二量体又はヘテロ二量体（又は他の多量体）を含んでよい。

全抗体分子の場合と同様に、抗原結合性断片は、単一特異性又は多重特異性（例えば、二重特異性）であってよい。抗体の多重特異性抗原結合性断片は、一般に、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含んでよく、これにおいて、各可変ドメインは、別々の抗原又は同一抗原の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示する例示的な二重特異性抗体フォーマットを含めて、いかなる多重特異性抗体フォーマットも、当該技術分野で利用可能なルーチンの技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合性断片の文脈においての使用に適用できる。

本発明の抗体は、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）又は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能し得る。「補体依存性細胞障害」（ＣＤＣ）とは、補体存在下で本発明の抗体による抗原発現細胞の溶解をいう。「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｓ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識して、その標的細胞に溶解をもたらす、細胞媒介性反応をいう。ＣＤＣ及びＡＤＣＣは、当該技術分野で周知かつ利用可能な試験法を使用して測定できる。（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および５，８２１，３３７号、およびＣｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． （ＵＳＡ）９５：６５２−６５６を参照のこと。）抗体の定常領域は、補体を固定し細胞依存性細胞障害を媒介する抗体の能力において重要である。したがって、抗体のアイソタイプは、その抗体が細胞障害を媒介するために望ましいか否かに基づいて選択してよい。

本発明のある実施形態では、本発明の抗ＩＬ−３３抗体はヒトの抗体である。「ヒト抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３の、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム又は部位特異的変異誘発、又はインビボ体細胞変異により導入される変異）を含んでよい。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、マウスなど他の哺乳類動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列上に融合させた抗体を含むことは意図していない。

本発明の抗体は、いくつかの実施形態では、組換えヒト抗体である。「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、宿主細胞に移入させた組換え発現ベクターを用いて発現させる抗体（下記で詳述）、組換え、コンビナトリアルヒト抗体・ライブラリー（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｉｂｒａｒｙ）（下記で詳述）から単離される抗体、トランスジェニック動物（例えば、マウス）からヒト免疫グロブリン遺伝子用に単離される抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５を参照のこと）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングする他の任意の手段により調製、発現、作製又は単離される抗体などのように、組換え手段により調製、発現、作製、又は単離されるすべてのヒト抗体を含むことを意図する。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する。しかしながら、ある実施形態では、このような組換えヒト抗体は、インビトロで変異（すなわち、ヒトＩｇ配列用のトランスジェニック動物の配列を使用した場合には、インビボで体細胞変異）を起こしやすいことから、組換え抗体のＶ_H及びＶ_L領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系Ｖ_H及びＶ_L配列に由来し関連する配列でありながら、インビボヒト抗体生殖細胞系レパートリーに天然に存在し得ない配列である。

ヒト抗体は、ヒンジ領域の異質性（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ）に関連して２種の形態をとり得る。ある形態では、免疫グロブリン分子は、およそ１５０〜１６０ｋＤａの安定な４鎖構築体を含み、そこでは各二量体が重鎖間のジスルフィド結合により結び付けられている。別の形態では、二量体は、鎖間のジスルフィド結合では結合しておらず、共有結合した軽鎖及び重鎖からなる約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体）。これらの形態はアフィニティー精製後であっても分離が極めて困難であった。

この第２の形態がそのままの状態のさまざまなＩｇＧアイソタイプに出現する頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的な違いによるが、これに限定されない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域において単一のアミノ酸を置換することにより、第２の形態の出現頻度を（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１０５）ヒトＩｇＧ１ヒンジ使用時に観察されたレベルまで有意に低下させることができる。本発明は、所望の抗体形態の収量改善のために、例えば、製造において望ましい変異を、ヒンジ、Ｃ_H２又はＣ_H３領域内に１つ以上有する抗体を包含する。

本発明の抗体は単離された抗体であってよい。本明細書中で使用する場合、「単離された抗体」とは、その天然環境の少なくとも１つの成分から同定、分離され、及び／又は回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分、又は、中に抗体が天然に存在するもしくは天然で産生される組織もしくは細胞から分離又は除去された抗体は、本発明のための「単離された抗体」である。単離された抗体はまた、組換え細胞内にあるインサイチュ抗体も含む。単離された抗体は、精製又は単離ステップに少なくとも１回供された抗体である。ある実施形態によれば、単離した抗体は、他の細胞物質及び／又は化学薬品を実質的に含まないものでよい。

本発明は、抗ＩＬ−３３抗体を中和及び／又は遮断することを含む。本明細書中で使用する場合、抗体を「中和する」又は「遮断する」とは、ＩＬ−３３に結合することにより、（ｉ）ＩＬ−３３もしくはＩＬ−３３断片とＩＬ−３３受容体成分（例えば、ＳＴ２、ＩＬ−１ＲＡｃＰなど）との相互作用を妨害する；及び／又は（ｉｉ）ＩＬ−３３の少なくとも１つの生物学的機能を抑制する抗体を指すことを意図する。ＩＬ−３３を中和又は遮断する抗体による抑制は、適切な試験法を用いて検出可能であれば完全である必要はない。ＩＬ−３３抑制検出のための例示的な試験法は、本明細書の作業実施例に記載されている。

本明細書に開示する抗ＩＬ−３３抗体は、その抗体が由来する生殖細胞系配列の対応する部分と比較して、重鎖及び軽鎖の可変ドメインのフレームワーク及び／又はＣＤＲ領域における１個以上のアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失を含んでよい。かかる変異は、本明細書に開示するアミノ酸配列を、例えば、公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖細胞系配列と比較することにより容易に確認可能である。本発明は、本明細書に開示する任意のアミノ酸配列に由来する抗体及びその抗原結合性断片を含み、これにおいて、１つ以上のフレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内の１個以上のアミノ酸を、その抗体が由来する生殖細胞系配列の対応する残基（複数可）に、又は他のヒト生殖細胞系配列の対応する残基（複数可）に、又は対応する生殖細胞系の残基（複数可）の保存的アミノ酸置換に変異させる（このような配列変化を、本明細書では集合的に「生殖細胞系変異」という）。当該技術分野の当業者であれば、本明細書に開示する重鎖及び軽鎖可変領域配列から開始して、１つ以上の個別の生殖細胞系変異又はその組み合わせを含む、多数の抗体及び抗原結合性断片を容易に作製することができる。ある実施形態では、Ｖ_H及び／又はＶ_Lドメイン内のすべてのフレームワーク及び／又はＣＤＲ残基を変異させて、その抗体が由来する元の生殖細胞系配列の残基に復帰させる。他の実施形態では、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸に見られる変異残基のみ、又はＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３に見られる変異残基のみ、といったように、特定の残基に限って変異させて元の生殖細胞系配列に復帰させる。他の実施形態では、フレームワークの１つ以上及び／又はＣＤＲ残基（複数可）を、別の生殖細胞系配列（すなわち、抗体がもともと由来する生殖細胞系配列とは異なる生殖細胞系配列）の対応する残基（複数可）に変異させる。さらに、本発明の抗体は、フレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内の２つ以上の生殖細胞系変異の任意の組み合わせを含有してよく、例えば、これにおいて、ある個々の残基を特定の生殖細胞系配列の対応する残基に変異させ、一方、元の生殖細胞系配列とは異なるある他の残基を維持する又は異なる生殖細胞系配列の対応する残基に変異させる。一旦得られた、１つ以上の生殖細胞系変異を含有する抗体及び抗原結合性断片は、１つ以上の所望の性質、例えば、結合特異性の改善、結合親和性の上昇、拮抗的又は作動的生物学的性質の改善又は向上（場合に応じて）、免疫原性低下などについて容易に試験することができる。この一般的な方法で得られた抗体及び抗原結合性断片は、本発明に包含される。

本発明はまた、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列の任意の変異体を含む抗ＩＬ−３３抗体も含む。例えば、本発明は、本明細書に開示の任意のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列に対して、例えば、１０又はそれより少数、８又はそれより少数、６又はそれより少数、４又はそれより少数の保存的アミノ酸置換を含む、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−３３抗体を含む。

用語「エピトープ」は、抗体分子の可変領域内にあるパラトープとして知られる抗原特異的結合部位と相互作用する抗原決定基をいう。一つの抗原が１つ以上のエピトープを有する場合がある。したがって、１つの抗原上で、異なる抗体がそれぞれ異なる場所に結合することができ、生物学的作用が異なる場合がある。エピトープは、立体構造（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ）又は線形のどちらでもよい。立体構造エピトープは、線形ポリペプチド鎖の異なるセグメントのアミノ酸を空間的に並列させて作製する。線形エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接するアミノ酸残基で作製したエピトープである。状況によっては、エピトープは、糖類部分、ホスホリル基、又はスルホニル基を抗原上に含んでよい。

「実質的な同一性」又は「実質的に同一な」という用語は、核酸又はその断片に言及する場合、適切なヌクレオチドの挿入又は欠失により別の核酸（又はその相補鎖）と最適にアラインメントを行った時に、以下に考察するＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ又はＧａｐなど周知の配列同一性アルゴリズムの任意の方法で測定したヌクレオチド配列同一性が、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、及びさらに好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％であることを指す。基準核酸分子に対して実質的な同一性を有する核酸分子は、場合によっては、基準核酸分子によりコードされるポリペプチドと同一の又は実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。

ポリペプチドにおいて「実質的な類似性」又は「実質的に類似の」という用語を使用する場合、２つのペプチド配列が、ＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴプログラムなどでデフォルトの重み付けを使用して最適にアラインメントを行った場合に、少なくとも９５％の配列同一性、よりさらに好ましくは少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基の位置は保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、化学的性質（例えば、電荷又は疎水性）が類似する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換されることである。一般に、保存的アミノ酸置換では、タンパク質の機能的性質は実質的に変化しない。保存的置換により２個以上のアミノ酸配列が互いに異なる場合、配列同一性のパーセント又は類似性の程度は、上方調節を行ってその置換の保存的性質について補正してよい。この調節を行う手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４： ３０７−３３１を参照のこと。化学的性質が類似する側鎖を有するアミノ酸群の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；（２）脂肪族ヒドロキシル基の側鎖：セリン及びスレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、及びヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸、並びに（７）硫黄含有側鎖のシステイン及びメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及びアスパラギン−グルタミンである。別の方法では、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６： １４４３−１４４５に開示されているＰＡＭ２５０ ｌｏｇ尤度マトリックスにおいて正値を有する任意の変化である。「中程度に保存的」置換は、ＰＡＭ２５０ ｌｏｇ尤度マトリックスにおいて非負値を有する任意の変化である。

ポリペプチドの配列類似性は、配列同一性ともいわれ、一般に配列解析ソフトウェアを使用して測定する。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含め、種々の置換、欠失及び他の改変に割り当てられている類似性測定値を使用して類似配列を照合する。例えば、ＧＣＧソフトウェアには、Ｇａｐ及びＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムが含有されており、これらをデフォルトのパラメータで使用して、異なる生物種からの相同ポリペプチドなど密接に関連するポリペプチド間で、又は野生型タンパク質とその変異タンパク質との間で、配列相同性又は配列同一性を決定することができる。例えば、ＧＣＧバージョン６.１を参照のこと。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６.１付属プログラムであるＦＡＳＴＡを使用してデフォルト又は推奨パラメータを用いて比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）により、クエリー及び検索配列間で最良重複領域のアラインメント及び配列同一性のパーセントが得られる（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）、前出）。本発明の配列を異なる生物の多数の配列を含むデータベースと比較する場合に好ましい別のアルゴリズムは、デフォルトのパラメータを用いる、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰ又はＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。

「炎症性の疾患又は障害」とは、本明細書中で使用する場合、病理により、全体的又は部分的に、免疫系細胞の、例えば、数の変化、遊走速度の変化、又は活性化の変化をもたらす疾患、障害又は病理学的状態をいう。免疫系細胞には、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球もしくはマクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、ミクログリア、ＮＫ細胞、好中球、好酸球、肥満細胞などの、免疫学に特異的に関連する細胞、例えば、サイトカイン産生内皮細胞又は上皮細胞が含まれる。本明細書中で「炎症性の疾患又は障害」とは、ある実施形態において、喘息、（ステロイド抵抗性喘息、ステロイド感受性喘息、好酸球性喘息又は非好酸球性喘息、アレルギー、アナフィラキシー、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ、喫煙又は受動喫煙への暴露が関連する又は関連しないもの、原因の一部であるもの、又は原因となって引き起こされたもの）、狼瘡、アトピー性皮膚炎、乾癬、強皮症などの線維化疾患、シェーグレン症候群、血管炎（ベーチェット病、巨細胞動脈炎、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病及びチャーグ−ストラウス病を含む）及び関節炎からなる群から選択される免疫障害又は病態である。別の実施形態では、関節炎は、関節リウマチ、変形性関節症、及び乾癬性関節炎からなる群から選択される。別の実施形態では、「炎症性の疾患又は障害」は、ＴＨ₁型応答又はＴＨ₂型応答を含む免疫障害又は病態である。

「ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる」という語句は、本明細書中で使用する場合、ＩＬ−３３がＳＴ２及びＩＬ−１ＲＡｃＰを介してシグナル伝達を刺激する程度をいい、ＩＬ−３３が本明細書に記載するＩＬ−３３抗体などの拮抗薬の非存在下でＳＴ２及びＩＬ−１ＲＡｃＰを介してシグナル伝達を刺激する程度に比して、本明細書に記載するＩＬ−３３抗体などの拮抗薬の存在下で減退する程度を指す。抑制の程度を調べるには、試料を可能性の高い阻害剤／拮抗薬で処理し、阻害剤／拮抗薬で未処理の対照試料と比較する。対照試料、すなわち、拮抗薬で未処理の試料に相対活性値１００％を割り当てる。対照に対する活性値が約９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、もしくは２０％又はそれ未満であれば、抑制達成とする。抑制エンドポイントには、例えば、サイトカイン放出などのように、炎症、又は細胞の脱顆粒、分泌もしくは活性化の指標について予め設定された量又はパーセンテージを含んでよい。ＳＴ２及びＩＬ−１ＲＡｃＰを介するＩＬ−３３シグナル伝達の抑制は、本明細書実施例６に記載のようなインビトロ試験法でＩＬ−３３シグナル伝達を評価することにより測定可能である。さらに、分子がＩＬ−３３の拮抗であるか否かの判定にはインビボ試験法を使用できる。例えば、ヒトＩＬ−３３の発現についてホモ接合性であるアレルゲン感作動物の肺炎症におけるＩＬ−３３に対する抗体作用を評価するために実施例１１及び１２に記載のようなインビボ試験法を使用してよい。動物をアレルゲンに感作させた後、動物の亜群を本発明の抗ＩＬ−３３抗体又は陰性アイソタイプ・コントロール抗体いずれかで処置する。その後、動物を屠殺し、細胞の浸潤、並びにサイトカイン測定（ＩＬ−４及びＩＬ−５）を評価するため肺を回収する。拮抗薬として有効なＩＬ−３３抗体は、ＩＬ−４及びＩＬ−５などのサイトカインを低下させる傾向とともに肺炎症細胞を低下させる傾向を示さなければならない。

抗体の生物学的特徴
本発明は、ヒトＩＬ−３３に結合し、ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる、抗ＩＬ−３３抗体及びその抗原結合性断片を含む。抗ＩＬ−３３抗体が「ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる」とみなされるのは、例えば、抗体が、（１）細胞ベースのバイオアッセイにおけるＩＬ−３３媒介性シグナル伝達の抑制；（２）ＩＬ−３３誘発性のヒト好塩基球脱顆粒の抑制；（３）ヒトＰＢＭＣによるＩＬ−３３誘発性ＩＦＮγ産生の抑制；（４）哺乳類においてアレルゲン、例えば、ＩＬ−４又はＩＬ−５に暴露されると上昇する、サイトカインレベルの低下；並びに（５）アレルゲン（例えば、チリダニ（ＨＤＭ）への急性又は慢性的暴露で生じた肺炎症の抑制）からなる群から選択される１つ以上の性質を示す場合とする。

細胞ベースのバイオアッセイでのＩＬ−３３媒介性シグナル伝達の抑制とは、例えば、本明細書実施例６に定義するアッセイフォーマット、又は実質的に類似の試験法を用いて、抗ＩＬ−３３抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３受容体と、ＩＬ−３３の結合に応答して検出可能なシグナルを発するレポーターエレメント（ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ）とを発現している細胞の発するシグナルを抑制する又は低下させることを意味する。例えば、本発明は、細胞ベース遮断バイオアッセイで、例えば、本明細書実施例５で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、ヒトＳＴ２を発現している細胞でのＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を、ＩＣ₅₀約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３５０ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２５０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、又は約１０ｐＭ未満で遮断する抗体及びその抗原結合性断片を含む。

ＩＬ−３３誘発性のヒト好塩基球脱顆粒の抑制とは、抗ＩＬ−３３抗体又はその抗原結合性断片が、インビトロで、例えば、実施例７の試験系又は実質的に類似の試験法を使用して測定した場合に、ＩＬ−３３誘発性の好塩基球脱顆粒の程度を抑制又は低下させることを意味する。例えば、本発明は、インビトロヒト好塩基球脱顆粒アッセイで、例えば、本明細書実施例７で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、ヒトＩＬ−３３（例えば、最終濃度約１００ｐＭ）の存在下でＩＣ₅₀約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３５０ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２５０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、又は約１０ｐＭ未満でヒト好塩基球脱顆粒を抑制する抗体及びその抗原結合性断片を含む。

ヒトＰＢＭＣによるＩＬ−３３誘発性ＩＦＮγ産生の抑制とは、抗ＩＬ−３３抗体又はその抗原結合性断片が、例えば、実施例８の試験系又は実質的に類似の試験法を使用して測定した場合に、ヒトＩＬ−１２の存在下でヒトＩＬ−３３で処理したＰＢＭＣからのＩＦＮγ放出量を抑制又は低下させることを意味する。例えば、本発明は、ＩＬ−３３誘発性ＩＦＮγ放出アッセイ、例えば、本明細書実施例８で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、ヒトＩＬ−１２の存在下で、ＩＬ−３３誘発性のＩＦＮγ放出をＩＣ₅₀約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、未満約４００ｐＭ又は約３００ｐＭ未満で抑制する抗体及びその抗原結合性断片を含む。

ある実施形態では、本発明の抗ＩＬ−３３抗体及び抗原結合性断片は、ＩＬ−３３のＩＬ−３３受容体（例えば、ＳＴ２）への結合を遮断する。例えば、本発明は、インビトロでのＩＬ−３３のＳＴ２への結合を、ＥＬＩＳＡ法に基づくイムノアッセイ、例えば、本明細書実施例４で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、ＩＣ₅₀値約１５ｎＭ未満で遮断する抗ＩＬ−３３抗体を含む。ある実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡ法に基づくイムノアッセイ、例えば、本明細書実施例４で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、インビトロでのＩＬ−３３のＳＴ２への結合をＩＣ₅₀値約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２８０ｐＭ未満、約２６０ｐＭ未満、約２５０ｐＭ未満、約２４０ｐＭ未満、約２３０ｐＭ未満、約２２０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、又は約１５０ｐＭ未満で遮断する。

しかしながら、他の実施形態では、本発明のある抗ＩＬ−３３抗体及び抗原結合性断片は、ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる能力を有しているにもかかわらず、遮断しない又は部分的にしかＩＬ−３３とＳＴ２の相互作用を遮断しない。このような抗体及びその抗原結合性断片を、本明細書で「間接的ブロッカー」という場合がある。理論上は結合していないため、本発明の間接的ブロッカーは、ＩＬ−３３のＳＴ２結合ドメインと重複する又は一部のみ重複するエピトープでＩＬ−３３に結合することにより機能するが、それでもなおＩＬ−３３／ＳＴ２相互作用を直接遮断せずにＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を妨害すると考えられる。

本発明は、可溶性ＩＬ−３３分子に高い親和性で結合する抗ＩＬ−３３抗体及びその抗原結合性断片を含む。例えば、本発明は、ＩＬ−３３に、表面プラズモン共鳴により、例えば、本明細書実施例３で定義されるアッセイフォーマットを用いて測定した場合に、Ｋ_D約１０ｎＭ未満で結合する（例えば、２５℃又は３７℃で）抗体及び抗体の抗原結合性断片を含む。ある実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、表面プラズモン共鳴により、例えば、本明細書実施例３で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、ＩＬ−３３にＫ_D約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約８００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、又は約１６０ｐＭ未満で結合する。

本発明はまた、表面プラズモン共鳴により２５℃又は３７℃で、例えば、本明細書実施例３で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、約１０分を超える解離半減期（ｔ_1/2）でＩＬ−３３に特異的に結合する抗ＩＬ−３３抗体及びその抗原結合性断片を含む。ある実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、ＩＬ−３３に、表面プラズモン共鳴により２５℃又は３７℃で、例えば、本明細書実施例３で定義されるアッセイフォーマット又は実質的に類似の試験法を用いて測定した場合に、約２０分を超える、約３０分を超える、約４０分を超える、約５０分を超える、約６０分を超える、約７０分を超える、約８０分を超える、約９０分を超える、約１００分を超えるｔ_1/2で結合する。

本発明の抗体は、前述の生物学的特徴を１つ以上、又はその任意の組み合わせを有してよい。本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書の作業実施例を含めた本願開示の総説より当該技術分野の当業者には明らかとなろう。

Ｆｃ改変体を含む抗ＩＬ−３３抗体
本発明のある実施形態によれば、ＦｃＲｎ受容体への抗体の結合性を、例えば、中性ｐＨに比して酸性ｐＨで高める又は減退させる、１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＩＬ−３３抗体を提供する。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣ_H２又はＣ_H３領域における変異を含む抗ＩＬ−３３抗体を含み、これにおいて、変異（複数可）により酸性環境（例えば、ｐＨ範囲約５.５〜約６.０のエンドソームで）におけるＦｃドメインのＦｃＲｎに対する親和性が高まる。こうした変異により、動物に投与した場合、抗体の血清中半減期が長くなり得る。このようなＦｃ改変の非限定的な実施例には、例えば、２５０位（例えば、Ｅ又はＱ）；２５０及び４２８位（例えば、Ｌ又はＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ又はＴ）、２５４位（例えば、Ｓ又はＴ）、並びに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ又はＴ）での改変；又は４２８位及び／又は４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ又はＫ）及び／又は４３４位（例えば、Ｈ／Ｆ又はＹ）での改変；又は２５０及び／又は４２８位での改変；又は３０７もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、及び４３４位での改変が含まれる。ある実施形態では、改変には、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）及び４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）の改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、及び３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）及び４３４（例えば、４３４Ｙ）の改変；２５２、２５４、及び２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、及び２５６Ｅ）の改変；２５０Ｑ及び４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌ）；並びに３０７及び／又は３０８の改変（例えば、３０８Ｆ又は３０８Ｐ）が含まれる。さらに別の実施形態では、改変には、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）及び／又は２９７Ａ（例えば、Ｄ２９７Ａ）の改変が含まれる。

例えば、本発明は、２５０Ｑ及び２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ及び２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌ及び４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ）；並びに４３３Ｋ及び４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される１つ以上の変異対又は変異群を含むＦｃドメインを含む抗ＩＬ−３３抗体を含む。上述のＦｃドメイン変異、及び本明細書に開示する抗体の可変ドメイン内の他の変異について可能な全組み合わせは、本発明の範囲内であることが意図される。

本発明はまた、キメラ重鎖定常（Ｃ_H）領域を含む抗ＩＬ−３３抗体を含み、これにおいて、かかるキメラＣ_H領域は２つ以上のイムノグロブリン・アイソタイプのＣ_H領域に由来するセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４分子に由来するＣ_H２ドメインの一部又はすべてを含むキメラＣ_H領域を、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４分子に由来するＣ_H３ドメインの一部又はすべてと組み合わせて含んでよい。ある実施形態によれば、本発明の抗体は、キメラのヒンジ領域を有するキメラＣ_H領域を含む。例えば、キメラのヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「アッパーヒンジ（ｕｐｐｅｒ ｈｉｎｇｅ）」のアミノ酸配列（ＥＵナンバリングの２１６〜２２７位のアミノ酸残基）を、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「ロワーヒンジ（ｌｏｗｅｒ ｈｉｎｇｅ）」配列（ＥＵナンバリングの２２８〜２３６位のアミノ酸残基）と組み合わせて含んでよい。ある実施形態によれば、キメラのヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４のアッパーヒンジ（ｕｐｐｅｒ ｈｉｎｇｅ）に由来するアミノ酸残基、及びヒトＩｇＧ２ロワーヒンジ（ｌｏｗｅｒ ｈｉｎｇｅ）に由来するアミノ酸残基を含む。ある実施形態では、本明細書に記載するキメラＣ_H領域を含む抗体は、抗体の治療的又は薬物動態的性質に悪影響を与えることなく改変されたＦｃエフェクター機能を示す。（例えば、２０１３年２月１日提出の米国仮出願第６１／７５９,５７８号を参照のこと）。

エピトープマッピング及び関連技術
本発明は、ＩＬ−３３の１個以上のアミノ酸と相互作用する抗ＩＬ−３３抗体を含む。例えば、本発明は、ＩＬ−３３のＳＴ２相互作用ドメイン内に位置する１個以上のアミノ酸と相互作用する抗ＩＬ−３３抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＩＬ−３３の３つ以上の（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上の）アミノ酸の単一連続配列で構成されてよい。別の方法では、エピトープは、ＩＬ−３３の複数の非連続アミノ酸（又はアミノ酸配列）で構成されてよい。

ポリペプチド又はタンパク質内で抗体が「１個以上のアミノ酸と相互作用する」か否かを判定するために当該技術分野の当業者に知られている種々の技術を使用できる。例示的な技術には、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．， ＮＹ）に記載されているようなルーチンの交叉ブロッキングアッセイ（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｓｓａｙ）、アラニンスキャン変異解析、ペプチドブロット解析（ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｌｏｔｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）（Ｒｅｉｎｅｋｅ， ２００４，
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８：４４３−４６３）、及びペプチド開裂解析が含まれる。さらに、抗原のエピトープ切り出し（ｅｐｉｔｏｐｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ）、エピトープ抽出及び化学的な修飾などの方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ， ２０００， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用できる別の方法は、水素／重水素交換を質量分析法で検出する方法である。一般的な用語で言うと、水素／重水素交換方法では、対象とするタンパク質を重水素で標識した後、その重水素標識タンパク質に抗体を結合させる。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移し、抗体で保護された残基（重水素標識されたまま）を除くすべての残基で水素−重水素交換を起こさせる。抗体解離後、標的タンパク質をプロテアーゼで切断し質量分析を行うことで、重水素標識されている残基がわかれば、それが抗体が相互作用する特定のアミノ酸ということになる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７（２）：２５２−２５９； Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照のこと。

本発明は、本明細書に記載する具体的に例示される抗体（例えば、Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６８Ｎ、Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ、Ｈ４Ｈ９６３３Ｐ、Ｈ４Ｈ９６４０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６２Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６３Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６４Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６５Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６６Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６７Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７１Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７２Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７６Ｐ、Ｈ１Ｍ９５６５Ｎなど）のいずれかと同一のエピトープに結合する抗ＩＬ−３３抗体をさらに含む。同様に、本発明はまた、ＩＬ−３３への結合について、本明細書に記載する具体的に例示される抗体のいずれか（例えば、Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６８Ｎ、Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ、Ｈ４Ｈ９６３３Ｐ、Ｈ４Ｈ９６４０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６２Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６３Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６４Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６５Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６６Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６７Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７１Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７２Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７６Ｐ、Ｈ１Ｍ９５６５Ｎなど）と競合する抗ＩＬ−３３抗体も含む。

ある抗体が、基準となる抗ＩＬ−３３抗体について、それと同一のエピトープに結合、又はそれとの結合について競合するか否かは、当該技術分野で既知であり本明細書で例示されているルーチンの方法により容易に測定できる。例えば、被験抗体が、基準となる本発明の抗ＩＬ−３３抗体と同一のエピトープに結合するかどうかを測定する場合は、基準抗体をＩＬ−３３タンパク質と結合させる。次いで、ＩＬ−３３分子への被験抗体の結合能力を評価する。被験抗体が、基準抗ＩＬ−３３抗体との飽和結合に続いてＩＬ−３３に結合することができれば、被験抗体は基準抗ＩＬ−３３抗体とは異なるエピトープに結合するという結論を出すことができる。一方、被験抗体が、基準抗ＩＬ−３３抗体との飽和結合に続いてＩＬ−３３分子に結合することができなければ、被験抗体は、基準となる本発明の抗ＩＬ−３３抗体が結合したエピトープと同一のエピトープに結合し得るということである。被験抗体で結合が見られないのは、やはり基準抗体と同一のエピトープに結合することによるものなのか、又は結合が観察されなかったことには立体的遮断（ｓｔｅｒｉｃ ｂｌｏｃｋｉｎｇ）（又は別の現象）が関与しているのか、ということを確認するため、さらなるルーチンの実験（例えば、ペプチドの変異及び結合解析）を行うこともできる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリーなど当該技術分野で利用可能な定量的又は定性的な抗体結合試験法で実施することができる。本発明のある実施形態によれば、２つの抗体は、例えば、１、５、１０、２０又は１００倍過剰の１つの抗体が、もう一方の抗体の結合を、競合結合アッセイで測定した場合に（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５−１５０２を参照のこと）少なくとも５０％で、しかし好ましくは７５％、９０％、さらには９９％で抑制する場合に、同一の（又は重複する）エピトープに結合する。別の方法では、１つの抗体の結合を減少させる又は排除する、抗原の本質的にすべてのアミノ酸変異が、もう一方の抗体の結合を減少させる又は排除する場合に、２つの抗体は同一のエピトープに結合するとみなされる。１つの抗体の結合を減少させる又は排除するアミノ酸変異の亜群がもう一方の抗体の結合を減少させる又は排除する場合に限り、２つの抗体は「重複エピトープ」を有するとみなす。

抗体が基準抗ＩＬ−３３抗体と結合について競合する（又は結合で交差競合（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｅｓ）する）ことを検討するため、上記の結合方法を２つの方向から実施する。第１の方向は、基準抗体を飽和条件下でＩＬ−３３タンパク質に結合させた後、被験抗体のＩＬ−３３分子への結合を評価する。第２の方向では、被験抗体を飽和条件下でＩＬ−３３分子に結合させた後、基準抗体のＩＬ−３３分子への結合を評価する。この２つの方向において、第１の（飽和）抗体のみがＩＬ−３３分子に結合することができれば、被験抗体と基準抗体はＩＬ−３３への結合について競合するという結論が導き出される。当該技術分野の当業者には認識されるように、結合について基準抗体と競合する抗体は、必ずしも基準抗体と同一のエピトープに結合するわけではないが、重複する又は隣接するエピトープに結合することにより基準抗体の結合を立体的に遮断し得る。

ヒト抗体の調製
完全ヒトモノクローナル抗体を含めたモノクローナル抗体の作製方法は当該技術分野で知られている。本発明の文脈においてヒトＩＬ−３３に特異的に結合するヒト抗体を作製するために、そのような既知のあらゆる方法を使用できる。

ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術、例えば、又は他の任意の既知の完全ヒトのモノクローナル抗体作製方法を用いて、ヒト可変領域及びマウスの定常領域を有する、ＩＬ−３３に対する高親和性キメラ抗体を初めに単離する。下記実験の項にあるように、抗体の特徴付けを行い、親和性、選択性、エピトープなどを含めた望ましい特徴で選択する。必要に応じ、マウスの定常領域を、所望のヒト定常領域、例えば野生型又は改変ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４と置換し完全ヒト抗ＩＬ−３３抗体を作製する。選択定常領域は個々の用途により異なるが、高親和性抗原結合及び標的特異性といった特徴は可変領域内に存在する。場合によっては、完全ヒト抗ＩＬ−３３抗体を抗原陽性Ｂ細胞から直接単離する。

生物学的同等
本発明の抗ＩＬ−３３抗体及び抗体断片は、記載の抗体のアミノ酸配列とは異なるがヒトＩＬ−３３に結合する能力を保有するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このような改変抗体及び抗体断片は、親配列と比較した場合にアミノ酸の付加、欠失、又は置換を１つ以上含んでいるが、記載の抗体の生物学的活性と本質的に同等な生物学的活性を示す。同様に、抗ＩＬ−３３抗体をコードする本発明のＤＮＡ配列は、開示の配列と比較した場合にヌクレオチドの付加、欠失、又は置換を１つ以上含むが、本質的に本発明の抗ＩＬ−３３抗体又は抗体断片と生物学的に同等である抗ＩＬ−３３抗体又は抗体断片をコードする配列を包含する。このような改変アミノ酸及びＤＮＡ配列の例については上述している。

２つの抗原結合タンパク質、すなわち抗体は、例えば、それらが医薬的同等物又は医薬的代替物であって、類似した実験条件で同一モル用量を単回又は頻回投与した場合に、吸収される速度及び程度が有意な差を示さない場合に、それらは生物学的に同等であるとみなされる。いくつかの抗体は、吸収の程度は同等であるが吸収速度はそうではない場合でも、かかる吸収速度の差が意図したもので標識に反映されること、有効な体内薬物濃度（例えば、慢性使用）達成のために不可欠ではないこと、及び特定の試験済み製剤には医学的に有意とされないこと、という理由で生物学的に同等であるとみなされ得る場合は、これらの抗体は同等物又は医薬的代替物とみなされることになる。

ある実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、安全性、純度、及び力価において臨床上意義のある差がない場合は生物学的に同等である。

ある実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、患者が基準処方物と生物学的処方物とを切り替えずに継続治療を行った場合と比較して、臨床上有意な免疫原性の変化を含む有害事象リスクの上昇又は有効性の低下が予測されることなくそれらを１回以上切り替えることができる場合、生物学的に同等である。

ある実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらがともに１つの使用条件又は複数の使用条件に対して一般的な１つの作用機序又は複数の作用機序で、かかる機序が知られている程度に作用する場合は生物学的に同等である。

生物学的同等性を、インビボ及びインビトロ法で示してよい。生物学的同等性測定には、例えば、（ａ）抗体又はその代謝物の血中、血漿中、血清中、又は他の生物学的流体中の濃度を時間の関数として測定する、ヒト又は他の哺乳類におけるインビボ試験；（ｂ）ヒトインビボでの生物学的利用能データに関してこれまでに相関があるとともに、それを十分に予測できる、インビトロ試験；（ｃ）抗体（又はその標的）の適切な薬理学的急性作用を時間の関数として測定する、ヒト又は他の哺乳類におけるインビボ試験；並びに（ｄ）抗体の安全性、有効性、又は生物学的利用能もしくは生物学的同等性を確立する、よく管理された臨床試験における測定が含まれる。

本発明の抗ＩＬ−３３抗体の生物学的に同等な変異体を、例えば、残基又は配列の置換を各種作製する、又は生物学的活性には必要のない末端又は内部の残基もしくは配列を削除することにより構築してよい。例えば、生物学的活性に不可欠ではないシステイン残基は、再生時に分子間に不必要又は不適切なジスルフィド架橋が形成されないようにするために、削除又は他のアミノ酸との置換が可能である。他の文脈では、生物学的に同等である抗体は、抗体のグリコシル化の特性が改変される、例えば、グリコシル化を排除又は除去する、アミノ酸の変更を含む抗ＩＬ−３３抗体変異体を含んでよい。

種選択性及び種交差反応性
ある実施形態によれば、本発明は、ヒトＩＬ−３３には結合するが他の種のＩＬ−３３には結合しない抗ＩＬ−３３抗体を提供する。本発明はまた、ヒトＩＬ−３３及び１種以上の非ヒト種からのＩＬ−３３に結合する抗ＩＬ−３３抗体を含む。例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、ヒトＩＬ−３３に結合してよく、また、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、霊長類又はチンパンジーの１種以上のＩＬ−３３に、場合に応じて、結合しても結合しなくてもよい。本発明のある例示的な実施形態によれば、ヒトＩＬ−３３及びカニクイザル（例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ種）のＩＬ−３３に特異的に結合する抗ＩＬ−３３抗体を提供する。

免疫複合体
本発明は、細胞毒素、化学療法薬、免疫抑制剤又は放射性同位元素などの治療的部分（「免疫複合体」）に抱合させた抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体を包含する。細胞障害剤には細胞に有害な任意の薬剤が含まれる。免疫複合体を形成するための好適な細胞障害剤及び化学療法薬の例は、従来技術において既知である（例えば、国際公開第０５／１０３０８１号を参照のこと）。

多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異的、又は多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってよく、又は、２つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有してよい。例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．， １９９１， J．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９； Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００４， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照のこと。本発明の抗ＩＬ−３３抗体を、別の機能性分子、例えば、別のペプチド又はタンパク質と結合又は共発現させてよい。例えば、抗体又はその断片を、別の抗体又は抗体断片など１つ以上の他の分子種（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｎｔｉｔｉｅｓ）に機能的に結合させ（例えば、化学的共役、遺伝子融合、非共有性会合又はその他により）、第２の結合特異性を有する二重特異性又は多重特異性抗体を作製することができる。例えば、本発明は、免疫グロブリンの１本の腕はヒトＩＬ−３３又はその断片に対して特異的であり、免疫グロブリンのもう一方の腕は第２の治療標的に対して特異的である又は治療的部分に抱合される、二重特異性抗体を含む。

本発明の文脈において使用可能な例示的な二重特異性抗体フォーマットでは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）のＣ_H３ドメイン及び第２のＩｇのＣ_H３ドメインを使用し、これにおいて、第１及び第２のＩｇのＣ_H３ドメインは少なくとも１個のアミノ酸が互いに異なり、かつ、少なくとも１個のアミノ酸の違いにより、アミノ酸の違いがない二重特異性抗体に比してタンパク質Ａへの二重特異性抗体の結合を減少させる。ある実施形態では、第１のＩｇのＣ_H３ドメインはタンパク質Ａに結合し、第２のＩｇのＣ_H３ドメインには、Ｈ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエキソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）などのタンパク質Ａ結合を減少又は消失させる変異が含まれている。第２のＣ_H３は、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含んでよい。第２のＣ_H３内に見ることができるさらなる改変には、ＩｇＧ１抗体の場合はＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合はＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ）；並びにＩｇＧ４抗体の場合はＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ）が含まれる。上記の二重特異性抗体フォーマットに対する変形は本発明の範囲内であることを意図するものである。

本発明の文脈において使用可能な他の例示的な二重特異性フォーマットには、これらに限定されることなく、例えば、ｓｃＦｖベース又は二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）の二重特異性フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ：ｄｕａｌ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ、一般的軽鎖（例えば、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓを有する一般的な軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ：ｄｕａｌ ａｃｔｉｎｇ Ｆａｂ）ＩｇＧ、及びＭａｂ²二重特異性フォーマットが含まれる（上述のフォーマット総説は、例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２， ｍＡｂｓ ４：６， １−１１及びその記載内の引用を参照のこと）。二重特異性抗体は、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもでき、例えば、これにおいては、オルトゴナルな化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して部位特異性の抗体−オリゴヌクレオチドのコンジュゲートを作製し、これが組成、価数及び幾何が明確な多量体の複合体に自己組織化する。（例えば、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．， J．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ： Ｄｅｃ．４， ２０１２］を参照のこと）。

ｐＨ依存結合
本発明は、ＩＬ−３３にｐＨ依存的に結合する抗体及びその抗原結合性断片を提供する。例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、中性ｐＨに比して酸性ｐＨでＩＬ−３３への低い結合性を示してよい。別の方法では、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、中性ｐＨに比して酸性ｐＨで、その抗原への高い結合性を示してよい。

場合によっては、「中性ｐＨに比して酸性ｐＨでのＩＬ−３３への低い結合性」は、中性ｐＨでＩＬ−３３に結合する抗体のＫ_D値に対する、酸性ｐＨでＩＬ−３３に結合する
抗体のＫ_D値の比（又はその逆）で表される。例えば、抗体又はその抗原結合性断片は、抗体又はその抗原結合性断片が約３.０以上の酸性／中性Ｋ_D比を示す場合は、本発明の目的の「中性ｐＨに比して酸性ｐＨでのＩＬ−３３への低い結合性」を示すと考えてよい。ある例示的な実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合性断片の酸性／中性Ｋ_D比は、約３.０、３.５、４.０、４.５、５.０、５.５、６.０、６.５、７.０、７.５、８.０、８.５、９.０、９.５、１０.０、１０.５、１１.０、１１.５、１２.０、１２.５、１３.０、１３.５、１４.０、１４.５、１５.０、２０.０,２５.０、３０.０、４０.０、５０.０、６０.０、７０.０、１００.０又はそれ以上であり得る。

ｐＨ依存性結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨに比して酸性ｐＨでの特定抗原に対する結合の低下（又は増強）について抗体母集団をスクリーニングすることにより得てよい。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変で、ｐＨ依存的特徴を有する抗体を得ることができる。例えば、抗原結合ドメインの１個以上のアミノ酸（例えば、ＣＤＲ内）をヒスチジン残基と置換することにより、中性ｐＨに比して酸性ｐＨでの抗原結合性の低い抗体が得られる。本明細書中で使用する場合、表現「酸性ｐＨ」とは、ｐＨ約６.０以下、約５.５以下、又は約５.０以下を意味する。表現「酸性ｐＨ」は、ｐＨ値約６.０、５.９５、５.９、５.８５、５.８、５.７５、５.７、５.６５、５.６、５.５５、５.５、５.４５、５.４、５.３５、５.３、５.２５、５.２、５.１５、５.１、５.０５、５.０、又はそれ未満を含む。本明細書中で使用する場合、表現「中性ｐＨ」は、ｐＨ約７.０〜約７.４を意味する。表現「中性ｐＨ」は、ｐＨ値約７.０、７.０５、７.１、７.１５、７.２、７.２５、７.３、７.３５、及び７.４を含む。

治療的処方物及び投与
本発明は、本発明の抗ＩＬ−３３抗体又はその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物を、移行、送達、忍容性などで改善が得られる好適な担体、賦形剤などの薬剤とともに処方する。多数の適切な処方物を、すべての薬剤師に公知のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに見出すことができる。これらの処方物には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、小胞含有脂質（陽イオン又は陰イオン）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カリフォルニア州カールスバッド）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（さまざまな分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックス含有半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ” ＰＤＡ（１９９８）J Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１も参照のこと。

患者に投与する抗体用量は、患者の年齢及びサイズ、標的疾患、病態、投与経路などにより異なってよい。好ましい用量は、一般に、体重又は体表面積にしたがって計算する。本発明の抗体を、成人患者におけるＩＬ−３３活性に関連する病態又は疾患の治療に使用する場合、本発明の抗体を、通常、約０.０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは約０.０２〜約７、約０.０３〜約５、又は約０.０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重での単回投与で静脈内に投与することが有利であり得る。病態の重症度に応じ、治療の頻度及び継続期間を調整することができる。抗ＩＬ−３３抗体投与に有効な用量及びスケジュールは、経験的に決定してよく、例えば、患者の進行度を定期評価でモニタリングし、それにしたがって用量を調整することができる。さらに、用量の種間スケーリングを当該技術分野で周知の方法を用いて実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，
１９９１， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。

種々の送達システムが公知であり、本発明の医薬組成物の投与に使用できる。例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体介在性エンドサイトーシスへの封入がある（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， １９８７， J．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと）。導入方法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経鼻、硬膜外、及び経口経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物を、任意の好都合な経路、例えば注入又はボーラス注射で、上皮又は粘膜皮膚内膜（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜及び腸管粘膜など）を介した吸収により投与してよく、また、他の生物学的に活性な薬剤とともに投与してよい。投与は、全身又は局所で行うことができる。

本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器を用いて皮下又は静脈内に送達可能である。さらに、皮下送達に関しては、ペン送達デバイスには、本発明の医薬組成物の送達適用が用意されている。かかるペン送達デバイスは、再使用可能又は使い捨てであってよい。再使用可能ペン送達デバイスは、一般に、医薬組成物を含有する交換式カートリッジを使用する。一旦カートリッジ内の医薬組成物をすべて投与し、カートリッジが空になると、その空のカートリッジを容易に廃棄し医薬組成物が含有されている新しいカートリッジと交換することができる。その後、そのペン送達デバイスは再度使用することができる。使い捨てペン送達デバイスでは交換式カートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達デバイスはデバイス内のレザバーに医薬組成物が予め充填されて提供される。一旦レザバーの医薬組成物がなくなると、デバイスは丸ごと廃棄される。

多数の再使用可能ペン及び自動注入送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達で適用される。ほんの数例として、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ,Ｉｎｃ、イギリス、ウッドストック）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、スイス、ベルゲドルフ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ.、インディアナ州インディアナポリス）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリン・レイクス）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及びＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、ドイツ、フランクフルト）が含まれるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン送達デバイスの例には、ほんの数例として、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入器（Ａｍｇｅｎ、カリフォルニア州サウザンドオークス）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、ドイツ、シュツットガルト）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ.Ｐ.）、及びＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、イリノイ州アボットパーク）が含まれるが、これらに限定されない。

ある状況では、医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。ある実施形態では、ポンプを使用してよい（Ｌａｎｇｅｒ、前出； Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照のこと）。別の実施形態では、高分子材料を使用できる；Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ （ｅｄｓ．）， １９７４， ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａを参照のこと。さらに別の実施形態では、制御放出システムを、組成物の標的の近傍に配置し、そのため、全身用量の一分割用量だけですむ（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， １９８４， ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，前出、ｖｏｌ． ２、ｐｐ．１１５−１３８を参照のこと）。他の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ， １９９０， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３の総説で考察されている。

注射用調製物には、静脈内、皮下、皮内及び筋肉内注射、点滴などの剤形を含んでよい。これらの注射用調製物は、公知の方法で調製してよい。例えば、注射用調製物を、例えば、上記の抗体又はその塩を、注射用に一般的に使用される無菌水溶性媒体又は油性媒体に溶解、懸濁又は乳化させて調製してよい。注射用水溶性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤を含有する等張液などがあり、これらをアルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加体）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用してよい。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などを使用し、これらを安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の可溶化剤などと組み合わせて使用してよい。このようにして調製した注射剤を好ましくは適切なアンプルに充填する。

有利には、上記の経口又は非経口用の医薬組成物を、活性成分の用量にふさわしい適切な単位用量の剤形に調製する。単位用量のかかる剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが含まれる。前述の抗体含有量は、一般に、単位用量の剤形あたり約５〜約５００ｍｇであり、特に注射形態では、前述の抗体を約５〜約１００ｍｇで含有し、また他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇで含有することが好ましい。

抗体の治療的使用
本願発明者らが実施したマウスモデル系を使用する実験は、ＩＬ−３３拮抗により治療、予防及び／又は改善が可能なさまざまな疾患及び病態の同定に寄与した。例えば、マウスＩＬ−３３ＤＮＡの流体力学的送達により、肺粘液蓄積を誘導しマウスでの血清総ＩｇＥを上昇させた。さらに、ｍＩＬ−３３ＤＮＡ送達により、マイクロアレイ解析で測定したところ、ＳＴ２及び下流のさまざまなサイトカインが上方制御された。本願発明者らがＩＬ−３３ノックアウトマウスを使用して実施した実験でも、ＩＬ−３３拮抗によりさまざまな治療上の利益が得られる可能性が高いことが明らかとなった。例えば、巨視的スコアリング及び皮膚浸潤は、ＩＭＱ誘導性乾癬モデルの野生型マウスとＩＬ−３３^-/-マウスの間で比較できることがわかった。さらに、ＩＬ−３３^-/-マウスは、アレルゲン誘導性肺炎症モデルにおいて好酸球増加症及び残留粘液蓄積の低下を示した。

本発明の抗体は、特に、ＩＬ−３３の発現、シグナル伝達、もしくは活性が関連又は介在する、又はＩＬ−３３とＩＬ−３３リガンド（例えば、ＳＴ２）との相互作用を遮断又はＩＬ−３３活性及び／又はシグナル伝達を抑制することにより治療可能である、任意の疾患もしくは障害の治療、予防及び／又は改善に有用である。例えば、本発明は、喘息（例えば、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、重度の難治性喘息、喘息増悪、ステロイド抵抗性喘息、ステロイド感受性喘息、好酸球性喘息又は非好酸球性喘息など）、アトピー性皮膚炎、乾癬、他の炎症性障害、アレルギー、アナフィラキシー、心血管疾患、中枢神経系疾患、疼痛、関節炎（例えば、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎など）、巨細胞動脈炎、血管炎（ベーチェット病及びチャーグ−ストラウス症候群）、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、狼瘡、及びシェーグレン症候群の治療方法を提供する。

本発明の抗体はまた、１つ以上の線維化疾患の治療、予防及び／又は改善にも有用である。本発明の抗ＩＬ−３３抗体を投与することにより治療可能な例示的な線維化疾患には、肺線維症（例えば、特発性肺線維症、ブレオマイシン誘導性肺線維症、アスベスト誘導性肺線維症、及び閉塞性細気管支炎症候群）、慢性喘息、急性肺損傷及び急性呼吸困難（例えば、細菌性肺炎誘導性線維症、外傷誘導性線維症、ウイルス性肺炎誘導性線維症、人工呼吸器誘導性線維症、非肺敗血症誘導性線維症及び吸引誘導性線維症）に関連する線維症、珪肺症、放射線誘発性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ、喫煙又は受動喫煙への暴露が関連する又は関連しないもの、原因の一部であるもの、又は原因となって引き起こされたもの）、強皮症、眼線維症、皮膚線維症（例えば、強皮症）、肝線維症（例えば、肝硬変、アルコール誘導性肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、胆管損傷、原発性胆汁性肝硬変、感染もしくはウイルス誘導性肝線維症、自己免疫性肝炎、腎（腎性）線維症、心臓線維症、アテローム性動脈硬化、ステント再狭窄、及び骨髄線維症を含む。

本明細書に記載する治療方法の文脈において、抗ＩＬ−３３抗体は、単独療法（すなわち、唯一治療剤として）又は１つ以上の追加治療剤との併用で（これらの例は、本明細書の他の項に記載する）投与してよい。

併用療法及び処方物
本発明は、本明細書に記載する抗ＩＬ−３３抗体を１つ以上のさらなる治療的活性成分と組み合わせることを含む組成物及び治療的処方物、及びかかる組み合わせをそれを必要とする被検者に投与することを含む治療方法を含む。

本発明の抗ＩＬ−３３抗体を、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６などのサイトカインに結合する低分子サイトカイン阻害剤もしくは抗体、又はこれらの受容体それぞれに対する拮抗薬を含むサイトカイン阻害剤と、配合処方及び／又は組み合わせ投与をしてよい。

本発明の抗ＩＬ−３３抗体はまた、抗ウイルス薬、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイド、ステロイド、酸素、抗酸化剤、金属キレート剤、ＩＦＮ−γ、及び／又はＮＳＡＩＤと組み合わせて投与及び／又は配合処方してよい。

さらなる治療的活性成分（複数可）を、本発明の抗ＩＬ−３３抗体投与の直前、同時、又は直後に投与してよい。（本願開示の目的のために、かかる投与レジメンを、さらなる治療的活性成分「と組み合わせた」抗ＩＬ−３３抗体投与とみなす）。本発明は、本発明の抗ＩＬ−３３抗体が、本明細書の他の項に記載するように、１つ以上のさらなる治療的活性成分（複数可）とともに配合処方される医薬組成物を含む。

投与レジメン
本発明のある実施形態によれば、抗ＩＬ−３３抗体（又は抗ＩＬ−３３抗体と本明細書で言及する任意のさらなる治療的活性薬剤との組み合わせを含む医薬組成物）の複数用量をある一定期間被験者に投与してよい。本発明のこの態様による方法は、複数用量の本発明の抗ＩＬ−３３抗体を被験者に順次投与することを含む。本明細書中で使用する場合、「順次投与する」とは、抗ＩＬ−３３抗体の各用量を被検者に異なる時間ポイントで、例えば、予め設定された間隔（例えば、時間、日、週又は月）で区切った異なる日に投与することを意味する。本発明は、患者に単一の初回用量で抗ＩＬ−３３抗体投与後、１つ以上の第２用量で抗ＩＬ−３３抗体を投与し、必要に応じ、さらに１つ以上の第３用量で抗ＩＬ−３３抗体を順次投与することを含む方法を含む。

「初回用量」、「第２用量」、及び「第３用量」という用語は、本発明の抗ＩＬ−３３抗体を時間的順序で投与することをいう。したがって、「初回用量」とは、治療レジメン開始時に投与する用量であり（「ベースライン用量」とも言う）、「第２用量」は、初回用量後に投与する用量、並びに「第３用量」は、第２用量後に投与する用量である。初回、第２、及び第３用量はすべて同量の抗ＩＬ−３３抗体を含有してよいが、一般に投与頻度の点で互いに異なる場合がある。しかしながら、ある実施形態では、初回、第２及び／又は第３用量における抗ＩＬ−３３抗体含有量は、治療期間中、互いに異なる（例えば、適宜、増減を調整）。ある実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、又は５）用量を治療レジメン開始時に「負荷投与」として投与した後、以降の用量を低頻度で（例えば、「維持量」）投与する。

本発明のある例示的な実施形態では、各第２及び／又は第３用量を直近の先行投与から１〜２６（例えば、１、１_1/2、２、２_1/2、３、３_1/2、４、４_1/2、５、５_1/2、６、６_1/2、７、７_1/2、８、８_1/2、９、９_1/2、１０、１０_1/2、１１、１１_1/2、１２、１２_1/2、１３、１３_1/2、１４、１４_1/2、１５、１５_1/2、１６、１６_1/2、１７、１７_1/2、１８、１８_1/2、１９、１９_1/2、２０、２０_1/2、２１、２１_1/2、２２、２２_1/2、２３、２３_1/2、２４、２４_1/2、２５、２５_1/2、２６、２６_1/2、又はそれ以上）週間後に投与する。「直近の先行投与」という語句は、本明細書中で使用する場合、一連の複数投与において、他の用量が介在しない順序で、直後の用量の投与に先立ち患者に投与する抗ＩＬ−３３抗体の用量を意味する。

本発明のこの態様による方法は、任意の数の第２及び／又は第３用量の抗ＩＬ−３３抗体を患者に投与することを含んでよい。例えば、ある実施形態では、第２用量を１回のみ患者に投与する。他の実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の第２用量を患者に投与する。同様に、ある実施形態では、第３用量を１回のみ患者に投与する。他の実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の第３用量を患者に投与する。

複数の第２用量を使用する実施形態では、各第２用量を、他の第２用量と同一頻度で投与してよい。例えば、各第２用量を、直近の先行投与から１〜２週間又は１〜２か月後に患者に投与してよい。同様に、複数の第３用量を使用する実施形態では、各第３用量を、他の第３用量と同一頻度で投与してよい。例えば、各第３用量を直近の先行投与から２〜１２週間後に患者に投与してよい。本発明のある実施形態では、第２及び／又は第３用量を患者に投与する頻度は治療レジメン期間中を通して異なり得る。投与頻度は、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じ、治療期間中に医師が調整してもよい。

本発明は、２〜６の負荷投与を第１頻度（例えば、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１か月に１回、２か月に１回など）で患者に投与し、その後、２以上の維持量を低頻度で患者に投与する投与レジメンを含む。例えば、本発明のこの態様によれば、負荷投与を１か月に１回の頻度で投与した場合は、６週間に１回、２か月に１回、３か月に１回などで維持量を患者に投与してよい。

抗体の診断用使用
本発明の抗ＩＬ−３３抗体を、ＩＬ−３３、又は試料中のＩＬ−３３発現細胞を検出及び／又は測定するため、例えば、診断するために使用することもできる。例えば、抗ＩＬ−３３抗体、又はその断片を、ＩＬ−３３の異常発現を特徴とする病態又は疾患を診断するため（例えば、過剰発現、低発現、発現の欠如など）に使用してよい。ＩＬ−３３の例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を本発明の抗ＩＬ−３３抗体と接触させることを含んでよく、ここでは、抗ＩＬ−３３抗体を検出可能標識又はレポーター分子で標識する。別の方法では、未標識抗ＩＬ−３３抗体を、それ自体が検出可能に標識された第２抗体と組み合わせて診断用途に使用できる。検出可能標識又はレポーター分子は、³Ｈ、¹⁴Ｃ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、又は¹²⁵Ｉなどの放射性同位元素；フルオレセインイソチオシア
ネート、又はローダミンなどの蛍光又は化学発光部分；又はアルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、又はルシフェラーゼなどの酵素であり得る。試料中のＩＬ−３３を検出又は測定するために使用可能な具体的試験法の例には、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を含む。

本発明のＩＬ−３３診断アッセイに使用可能な試料には、検出可能量のＩＬ−３３タンパク質、又はその断片を正常又は病理学的状態で含有する、患者から得ることが可能な任意の組織又は流体の試料が含まれる。一般に、健常な患者（例えば、ＩＬ−３３の異常なレベル又は活性に関連する疾患又は病態に罹患していない患者）から得た特定試料中におけるＩＬ−３３レベルを測定し、最初にＩＬ−３３のベースライン、すなわち標準のレベルを設定する。次いで、このＩＬ−３３のベースライン値を、ＩＬ−３３関連の疾患又は病態を有することが疑われる各患者から得た試料で測定されたＩＬ−３３レベルと比較する。

実施例
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物をいかに使用し作製するかについての開示及び説明を完全に当業者に提供するために提案するものであり、本発明者らが該発明者らの発明であるとみなす範囲を限定することは意図していない。使用する数字に関し、正確さを保証するべく試みがなされた（例えば、量、温度など）が、一部の実験上の誤差及び偏差は考慮されるべきである。特に指定しない限り、部は重量部、分子量は平均分子量、温度はセ氏、及び圧力は大気圧又はその近傍圧である。

実施例１
ヒトＩＬ−３３に対するヒト抗体の作製
ヒトＩＬ−３３を含む免疫原を、免疫応答を刺激するためにアジュバントとともに、ヒト免疫グロブリンの重鎖及びκ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに直接投与した。抗体免疫応答をＩＬ−３３特異的イムノアッセイにより監視した。所望の免疫応答が達成されたら、脾細胞を回収してマウス骨髄腫細胞と融合させ、細胞の活動性を保存するとともにハイブリドーマ細胞株を形成した。ＩＬ−３３特異性抗体を産生する細胞株を同定するために、ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし選択した。この手法を使用し、抗ＩＬ−３３キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びマウスの定常ドメインを有する抗体）を幾つか得た。この方法で作製した例示的抗体を、Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６８Ｎ及びＨ１Ｍ９５６５Ｎという名称にした。キメラ抗体から得たヒト可変ドメインをその後ヒト定常ドメイン上にクローニングし、本明細書に記載する完全ヒト抗ＩＬ−３３抗体を作製した。

また、抗ＩＬ−３３抗体を、米国特許第２００７／０２８０９４５Ａ１号に記載のように、骨髄腫細胞とは融合させずに、抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。この方法を使用して、完全ヒト抗ＩＬ−３３抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びヒト定常ドメイン）を幾つか得た；この方法で作製した例示的抗体を、Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ、Ｈ４Ｈ９６３３Ｐ、Ｈ４Ｈ６９４０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６２Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６３Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６４Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６５Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６６Ｐ、Ｈ４Ｈ９６６７Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７０Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７１Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７２Ｐ、Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ、及びＨ４Ｈ９６７６Ｐという名称にした。

本実施例の方法に従って作製した例示的抗ＩＬ−３３抗体の、ある生物学的性質を、下記実施例に詳述する。

実施例２.
重鎖及び軽鎖の可変領域アミノ酸配列
表１に、重鎖及び軽鎖の可変領域アミノ酸配列対、及びＣＤＲ配列、選択した抗ＩＬ−３３抗体とその対応する抗体識別名称を記載する。

本明細書では、抗体は、一般に以下の命名法にしたがっている：接頭辞Ｆｃ（例えば、“Ｈ１Ｍ”、又は“Ｈ４Ｈ”）の後に、識別数字（例えば、表１に示すように「９５５９」、「９５６６」、又は「９６２９」）があり、接尾辞「Ｐ」、又は「Ｎ」が続く。したがって、この命名法に則ると、本明細書における抗体は、例えば、「Ｈ１Ｍ９５５９Ｎ」、「Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ」、「Ｈ４Ｈ９６２９Ｐ」などと表記される。本明細書で使用する抗体名称に付された接頭辞Ｈ１Ｍ及びＨ４Ｈは、抗体の特定Ｆｃ領域のアイソタイプを指す。例えば、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１Ｆｃを有し、「Ｈ４Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ４Ｆｃを有する。当該技術分野の当業者に認識されるように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換可能である（例えば、マウスＩｇＧ１Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換可能であるなど）が、いずれの場合も、可変ドメイン（ＣＤＲを含む）（表１に識別数字で示されている）は同一のままであり、その結合特性は、Ｆｃドメインの性質にかかわらず同一又は実質的に類似であることが予測される。

実施例３.
表面プラズモン共鳴で測定した抗体のヒトＩＬ−３３への結合性
精製抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体に結合するＩＬ−３３の平衡解離定数（Ｋ_D値）を、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用しリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーで測定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、抗マウスのウサギ・ポリクローナル抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３８）又は抗ヒトＦｃマウス・モノクローナル抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）いずれかとのアミンカップリングにより最初に誘導体化し、それぞれ、マウス又はヒトＩｇＧ４定常領域に発現した抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体を捕捉した。Ｂｉａｃｏｒｅ結合試験はすべて、０.０１Ｍ ＡＤＡ ｐＨ７.４、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０（ＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液）で実施した。ＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液（１００ｎＭ〜３.７ｎＭの範囲で、３倍希釈）に調製した、各種濃度のヒトＩＬ−３３（ｈＩＬ−３３；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）又はＣ末端ヘキサヒスチジンタグとともに発現されるカニクイザルＩＬ−３３（ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ；配列番号ｘｘ番）を、抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体捕捉表面上に流量３０μＬ／分で注入した。ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓと捕捉モノクローナル抗体との会合を４分間監視し、ＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液内での解離について１０分間監視した。ｐＨを低くしたことによる各抗ＩＬ−３３抗体とｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓとの結合への影響を、インラインｐＨ追跡（ｉｎ−ライン ｐＨ ｃｈａｓｅ）試験フォーマットを用い、０.０１Ｍ ＡＤＡ ｐＨ６.０、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０（ＡＢＳ−ＥＴ ｐＨ６緩衝液）で試験した。これを達成するため、ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓのいずれかと捕捉モノクローナル抗体との会合をＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液内で４分間監視した。ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓのいずれかをＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中で３０秒解離させた後、ＡＢＳ−ＥＴ ｐＨ６緩衝液を３分間注入し、低ｐＨ条件下でのアナライトの解離を測定した。結合動態実験を２５℃及び３７℃の両温度で実施した。動態の会合（ｋ_a）及び解離（ｋ_d）定数は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２.０ｃ ｃｕｒｖｅ ｆｉｔｔｉｎｇソフトウェアを使用し、リアルタイム・センサーグラムを１：１結合モデルに当てはめて測定した。結合解離平衡定数（Ｋ_D）及び解離半減期（ｔ_1/2）を以下の動態速度定数としての計算した：
Ｋ_D（Ｍ）＝ｋ_d／ｋ_a及びｔ_1/2（分）＝ｌｎ（２）／（６０^*ｋ_d）

各種抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体に２５℃及び３７℃で結合するｈＩＬ−３３及びＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓの結合動態パラメータを表２から５に示す。表２に示すように、２５℃では、ｈＩＬ−３３はＫ_D値７８ｐＭ〜７５７ｐＭの範囲で抗ＩＬ−３３抗体に結合した。表３に示すように、３７℃では、ｈＩＬ−３３はＫ_D値４１１ｐＭ〜２.０３ｎＭの範囲で抗ＩＬ−３３抗体に結合した。２５℃及び３７℃両温度で、１つの抗ＩＬ−３３抗体は弱い結合性を示したため、その結合動態パラメータを１：１結合モデルを用いて当てはめることはできなかった。表４に示すように、２５℃では、ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓは、Ｋ_D値３３３ｐＭ〜３８ｎＭの範囲で抗ＩＬ−３３抗体に結合した。表５５に示すように、３７℃では、ＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓはＫ_D値１ｎＭ〜４８.６ｎＭの範囲で抗ＩＬ−３３抗体に結合した。

実施例４.
抗ＩＬ−３３抗体はヒトＳＴ２受容体へのＩＬ−３３の結合を遮断する
ヒトＩＬ−３３（ｈＩＬ−３３）又はヒトＳＴ２受容体に結合するカニクイザルＩＬ−３３ に対する抗ＩＬ−３３抗体の遮断能力を、競合サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して測定した。Ｃ末端ヒトＩｇＧ１Ｆｃタグ（ｈＳＴ２−ｈＦｃ；配列番号３０６番）とともに発現した、ヒトＳＴ２タンパク質の細胞外ドメインの一部分を、ＰＢＳ緩衝液中濃度１(ｇ／ｍＬで９６ウェルマイクロタイタープレート上に４℃で一晩コーティングした。続いて、非特異的結合部位をＢＳＡの０.５％（ｗ／ｖ）ＰＢＳ溶液を用いてブロッキングした。一定濃度の３０ｐＭビオチン化ｈＩＬ−３３タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃３６２５−ＩＬ／ＣＦ）（ビオチン−ｈＩＬ−３３）又はヘキサヒスチジンタグとともに発現させた（ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ；配列番号３０５番）１５０ｐＭカニクイザルＩＬ−３３いずれかを、抗体の最終濃度が０〜１００ｎＭの範囲になるよう抗体の系列希釈に別々に添加した。抗体／ＩＬ−３３混合物は、室温にて１時間インキュベートしてから、ｈＳＴ２−ｈＦｃコーティングしたマイクロタイタープレートに移した。室温にて１時間インキュベートした後、ウェルを洗浄し、プレートに結合したビオチン−ｈＩＬ−３３を、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と抱合させたストレプトアビジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ, Ｃａｔ＃Ｎ２００）で検出し、プレートに結合したＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓは、抗Ｈｉｓモノクローナル抗体（Ｑｉａｇｅｎ、＃３４４６０）と抱合させたＨＲＰで検出した。全試料をＴＭＢ溶液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５１−２６０７ＫＣ）と反応させて呈色反応を起こさせ、次いで、１Ｍ硫酸による酸性化で反応を停止させてから、Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ５マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。データ解析を、ｓｉｇｍｏｉｄａｌ ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍｏｄｅｌ ｗｉｔｈｉｎ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実施した。ＩＣ₅₀値は、プレートにコーティングしたｈＳＴ２−ｈＦｃに結合するビオチン−ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓを、最高シグナルから５０％まで低下させるのに必要とされる抗体濃度と定義され、この計算値を遮断力価の指標として用いた。遮断パーセントは、ＩＬ−３３単独のシグナルとバックグラウンド（ＨＲＰで抱合させた第２抗体又はストレプトアビジン単独の時のシグナル）との差に対する、抗体存在下で観察されたシグナル低下の比率として計算した。一定濃度のビオチン−ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ単独について測定した吸光度を、０％遮断と定義し、ＩＬ−３３未添加について測定した吸光度を１００％遮断と定義する。各抗体の最高濃度含有ウェルの吸光度値を、最大遮断パーセントを測定するために使用した。

表６に示すように、２０の抗体の結合実験を２日に分けて実施した。全２０の抗ＩＬ−３３抗体は、ｈＳＴ２−ｈＦｃに結合するビオチン−ｈＩＬ−３３をＩＣ₅₀値１４０ｐＭ〜２２ｎＭの範囲、最大遮断パーセント４６％〜８８％の範囲で遮断した。２０中１８の抗ＩＬ−３３抗体は、表６に示すように、ｈＳＴ２−ｈＦｃに結合するＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓをＩＣ₅₀値２２０ｐＭ〜１３ｎＭの範囲、及び最大遮断パーセント３８％〜９２％の範囲で遮断した。被験抗体Ｈ４Ｈ９６２９ＰとＨ４Ｈ９６３３Ｐの２つは、ｈＳＴ２−ｈＦｃに結合するＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓに対し測定可能な遮断を示さなかった。

実施例５.
Ｂｉａｃｏｒｅ解析により示される、抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体に結合するＩＬ−３３のＳＴ２による抑制
抗ＩＬ−３３抗体の、予め形成したＩＬ−３３とＳＴ２との複合体への結合能力を、リアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーが付属したＢｉａｃｏｒｅ Ｔ−２００ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用して試験した。実験は、０.０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.４、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０（ＨＢＳ−ＥＴ）で構成されるランニング緩衝液を用いて２５℃にて実施した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、抗ｍｙｃタグ特異的モノクローナル抗体とのアミンカップリング法により最初に誘導体化し（クローン＃９Ｅ１０）、この誘導体化されたセンサー上で、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスタジンタグとともに発現させたヒトＳＴ２タンパク質（ｈＳＴ２−ＭＭＨ；配列番号３２３番）をおよそ１６０応答単位（ＲＵ）捕捉した。次いで、捕捉したｈＳＴ２−ＭＭＨ表面を、ヒトＩＬ−３３（ｈＩＬ−３３；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）１００ｎＭを３分間注入することにより飽和状態にし、その後、抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体溶液１００ｎＭを３分間注入した。リアルタイム結合応答を実験中の全期間監視し、抗ＩＬ−３３抗体を予め形成したｈＩＬ−３３と捕捉したｈＳＴ２−ＭＭＨとの複合体に注入してから３分後に観察された結合応答を記録し、表にまとめ表７に示した。抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体の抗ｍｙｃタグ捕捉表面への非特異的結合は観察されなかった。表７に示すように、１７の被験抗体は、予めｈＳＴ２−ＭＭＨと複合体を作製した後、ｈＩＬ−３３への測定可能な結合を示さなかったが、３抗体（Ｈ１Ｍ９５６５Ｎ、Ｈ１Ｍ９５６６Ｎ、及びＨ１Ｍ９５６８Ｎ）は予めｈＳＴ２−ＭＭＨと複合体を作製した後でｈＩＬ−３３に結合した。

実施例６.
抗ＩＬ−３３抗体によるＩＬ−３３媒介性受容体シグナル伝達の抑制
インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）は、付属タンパク質ＩＬ−１ＲＡｃＰと会合する、ｔｏｌｌ様／インターロイキン−１受容体スーパーファミリー・メンバーであるＳＴ２のリガンドである（総説は、Ｋａｋｋａｒ ａｎｄ Ｌｅｅ， ２００８を参照のこと）。ＩＬ−３３によりＳＴ２／ＩＬ−１ＲＡｃＰが活性化されると、ＭｙＤ８８（ミエロイド系分化因子８８）及びＴＲＡＦ６（ＴＮＦ受容体関連因子６）などの下流分子を介してシグナル伝達カスケードが誘発され、特にＮＦκＢ（核因子−κＢ）の活性化を引き起こす。抗ＩＬ−３３抗体を試験する、生物学的に関連するバイオ試験系を作成するため、ヒト胚性腎細胞（ＨＥＫ２９３）を安定に移入させ、ヒトＳＴ２（ＮＰ＿０５７３１６、ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号１−５５６のアミノ酸）をルシフェラーゼ・レポーターとともに発現させた［ＮＦκＢ応答配列（５ｘ）−ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ］（ＨＥＫ２９３／ｈＳＴ２／ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼ細胞株）。ＨＥＫ２９３細胞株はＩＬ−１ＲＡｃＰを内因的に発現し、ＨＥＫ２９３細胞のＩＬ−３３によるＮＦκＢ活性化がこれまでに示されている（Ｓｃｈｍｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２３：４７９−４９０（２００５））。安定な細胞株を単離し、１０％ＦＢＳ、ＤＭＥＭ、ＮＥＡＡ、ペニシリン／ストレプトマイシン、及びＧ４１８に維持した。

バイオアッセイ用に、ＨＥＫ２９３／ｈＳＴ２／ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼ細胞を、０.１％ｗ／ｖ ＦＢＳ及びＯＰＴＩＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃３１９８５−０７０）を含有する低濃度血清媒体にウェルあたり１０,０００細胞で９６ウェルアッセイプレート上に播種し、その後、３７℃、５％ＣＯ₂で一晩インキュベートした。翌日、ＩＬ−３３の用量反応を測定するため、ヒトＩＬ−３３（ｈＩＬ−３３；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３６２５−ＩＬ）又はＣ末端ヘキサヒスチジンタグとともに発現させたカニクイザルＩＬ−３３（ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ；配列番号３０５番）を１：３で系列的に希釈し、開始時１０ｎＭから徐々に０.０００２ｎＭまで減らした範囲の細胞に添加し、この他に、ＩＬ−３３未含有の対照試料を用意した。抑制を測定するため、抗体を系列的に希釈して細胞に添加し、その後、一定濃度のＩＬ−３３を添加した（ヒトのアッセイには１０ｐＭのｈＩＬ−３３、及びサルのアッセイには５ｐＭ ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ）。抗体の３倍系列希釈を実施してから、開始時１００ｎＭから徐々に０.００２ｎＭまで減らした範囲又は開始時１０ｎＭから徐々に０.０００２ｎＭまで減らした範囲の細胞に添加する。抗体の希釈系列に加え、一定濃度のＩＬ−３３は含有するが抗体は一切含有しないウェルも含めた。３７℃で５.５時間５％ＣＯ₂にインキュベーションした後、ルシフェラーゼ活性をＶｉｃｔｏｒ Ｘ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダーを用いて検出し、結果をＰｒｉｓｍ５の非線形回帰（４パラメータ・ロジスティック）で分析した。結果を表８に示す。

抗ＩＬ３３抗体２０中１８例は、表８に示すように、ヒトＩＬ−３３のＨＥＫ２９３／ｈＳＴ２／ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼ細胞刺激をＩＣ₅₀値７.５ｐＭ〜２９ｎＭの範囲で遮断した。被験抗体のうちＨ１Ｍ９５６６ＮとＨ１Ｍ９５６８Ｎの２抗体は、ｈＩＬ−３３を部分的に抑制し、それぞれの最大抑制は４８％と６６％、またＩＣ₅₀値は９５０ｐＭと２５０ｐＭであった。抗ＩＬ３３抗体２０中１８例は、表８に示すように、ＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓのＨＥＫ２９３／ｈＳＴ２／ＮＦｋＢ−ルシフェラーゼ細胞刺激をＩＣ₅₀値６６０ｐＭ〜１３０ｎＭの範囲で遮断した。被験抗体のうちＨ１Ｍ９５６６ＮとＨ１Ｍ９５６８Ｎの２抗体は、ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓを部分的に抑制し、それぞれの最大抑制は６１％と３４％、またＩＣ₅₀値は１.５ｎＭと３.５ｎＭであった。

実施例７.
抗ＩＬ−３３抗体によるＩＬ−３３誘発性ヒト好塩基球脱顆粒の抑制
本発明の選択抗ＩＬ−３３抗体の特徴インビトロでさらに評価するために、ＩＬ−３３誘発性好塩基球脱顆粒を遮断する能力を測定した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を異なるヒトの提供者２人の新鮮全血から密度勾配遠心により精製した。Ｋ２ ＥＤＴＡ全血を、ＲＰＭＩ１６４０に１：１で希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７−１４４０−０３）上に慎重に置き、遠心分離してＰＢＭＣを分離した。ＰＢＭＣを含有する間期層を吸引し、新しい管に移し、ＭＡＣＳ ＢＳＡ溶液（Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−３７６）とＭＡＣＳリンス溶液（Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−２２２）を１：２０で希釈して構成したＭＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。その後、精製したＰＢＭＣを、ＭＡＣＳ緩衝液１００μＬ中約３.０ｘ１０⁶細胞／ｍＬの最終濃度でＶ字底９６ウェルプレートに置いた。好塩基球をＰＢＭＣ母集団に含有させるため、Ｃａ⁺⁺もＭｇ⁺⁺も含まないＤｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）５０μＬにＩＬ−３（Ｓｉｇｍａ、＃Ｈ７１６６−１０ＵＧ）１ｎｇを入れたものを細胞懸濁液に加えた後、３７℃で１０分間インキュベートした。

本発明の２つの異なる例示的抗ＩＬ−３３抗体（Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ及びＨ４Ｈ９６５９Ｐ）又はアイソタイプ・コントロール抗体の系列希釈（１：３）を１０ｎＭ〜４.６ｐＭの範囲で作製し、この他に抗体を含まない対照を用意した。各溶液を、固定濃度１００ｐＭ（最終濃度）のヒトＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃６３２５−ＩＬ／ＣＦ）又はＩＬ−３３未含の陰性対照と混合し、それからＰＢＭＣに添加した。全条件を２連で試験した。

ヒトＩＬ−３３及び抗体を細胞に添加した後、好塩基球脱顆粒を促すために細胞を３７℃で２０分間インキュベートした。その後、アッセイプレートを氷上で５分間冷却して脱顆粒を停止させた。脱顆粒測定に使用した好塩基球母集団の分析を行えるようにするため、抗ＨＬＡ−ＤＲ−ＦＩＴＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、＃ＩＭ０４６３Ｕ）、抗ＣＤ１２３−ＡＰＣ（ＢＤ、＃５６００８７）、及び抗ＣＤ２０３ｃ−ＰＥ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、＃ＩＭ３５７５）それぞれについて２０μＬ（製造者の指示に従い）を、各試料に加え、試料を４℃で２０分間暗所に保持した。次いで、細胞を遠心分離し、ＤＰＢＳで洗浄した後、２％ホルムアルデヒド（固定緩衝液）に４℃で再懸濁した。翌日、固定された細胞をＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩで分析し、好塩基球脱顆粒レベルを測定した。結果を表９及び１０にまとめた。

表９に示すように、１００ｐＭでは、ヒトＩＬ−３３は異なる提供者２人に好塩基球脱顆粒を誘導し、平均脱顆粒パーセントは提供者６５５６８７が６８.８％及び提供者６５５６８８が６１.６％であった。

表１０に示すように、１抗ＩＬ３３抗体Ｈ４Ｈ９６７５Ｐは、１００ｐＭヒトＩＬ−３３惹起により誘導された脱顆粒好塩基球を提供者６５５６８７ではＩＣ₅₀値１３２.９ｐＭで、また提供者６５５６８８ではＩＣ₅₀値９７.１２ｐＭで遮断した。もう一方の抗ＩＬ３３抗体Ｈ４Ｈ９６５９Ｐは、１００ｐＭヒトＩＬ−３３惹起により誘導された脱顆粒好塩基球を提供者６５５６８７ではＩＣ₅₀値５７８.６ｐＭで、また提供者６５５６８８ではＩＣ₅₀値４４６.５ｐＭで遮断した。対照的に、アイソタイプ・コントロールではいずれの被験提供者の好塩基球脱顆粒も遮断しなかった。

実施例８.
抗ＩＬ−３３抗体による、ＩＬ−３３誘発性のヒトＰＢＭＣからのＩＦＮ−γの抑制
本発明の抗ＩＬ−３３抗体の特徴をさらに明らかにするため、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する一次細胞ベースアッセイを用いた。本実施例で使用したアッセイは、Ｓｍｉｔｈｇａｌｌ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００８， ｖｏｌ．２０（８）ｐｐ．１０１９−１０３０により発表されている結果を基にした。このアッセイ用に、異なる提供者３人の新鮮全血から得たＰＢＭＣを密度勾配遠心により精製した。簡単に言うと、Ｋ２ ＥＤＴＡ全血をＲＰＭＩ１６４０で２倍希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７−１４４０−０３）上に慎重に置いて２０分間遠心分離した。ＰＢＭＣを含有する間期層を吸引し、新しい管に移してＰＢＳで２回洗浄した。単離したＰＢＭＣを、１０％ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン２ｍＭ、ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ、及びストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬを添加したＲＰＭＩ１６４０に最終濃度５ｘ１０⁵細胞／ｍＬで丸底９６ウェルプレートに置いた。次いで、細胞を５０ｇ／ｍＬのヒトＩＬ−１２（ｈＩＬ−１２；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃２１９−ＩＬ−０２５／ＣＦ）及び１０ｎＭ〜０.６４ｐＭのヒトＩＬ−３３（ｈＩＬ−３３；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）単独を系列希釈したものとともに、又は２６０ｐＭのｈＩＬ−３３と１００ｎＭ〜６.４ｐＭの各種抗体を系列希釈したものとの組み合わせとともにインキュベートした。最終容積はウェルあたり２００μＬであった。各条件を３連で試験した。抗体を存在させた場合は、それらを予めｈＩＬ−３３とインキュベーションしてから３０分後に細胞に加えた。

細胞を、５％ＣＯ₂の加湿したインキュベーターで３７℃にて一晩インキュベートし、その後、培養上清中のＩＦＮγレベルをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＤＹ２８５）により測定した。ＥＬＩＳＡでは、製造者の指示に従い、９６ウェル平底プレートを捕捉抗体でコーティングした。洗浄とブロッキングの後、未希釈の培養上清１００μＬをプレートに加え、２時間インキュベートした。その後の洗浄及び検出を製造者の指示に従い行った。

ｈＩＬ−１２存在下のヒトＩＬ−３３は、表１１に示すように、異なる被験提供者３人のヒト全ＰＢＭＣからのＩＦＮγ放出を２７４ｐＭ〜３９ｐＭのＥＣ₅₀値で誘導した。抗ＩＬ−３３抗体１１例を、提供者＃６０３４８６及び＃６０３４８７からのＰＢＭＣを使用して試験し、抗ＩＬ−３３抗体３例は、提供者＃６０３４９１からのＰＢＭＣを使用して試験した。提供者＃６０３４８６及び＃６０３４８７で試験した抗ＩＬ−３３抗体全１１例は、表１２に示すように、２６０ｐＭのＩＬ−３３により誘導されたヒトＰＢＭＣからのＩＦＮγ放出を、ＩＣ₅₀値１７５ｐＭ〜２２ｎＭの範囲で遮断した。提供者＃６０３４９１で試験したＩＬ−３３抗体３例いずれも、２６０ｐＭのｈＩＬ−３３により誘導されたヒトＰＢＭＣからのＩＦＮγ放出を遮断するのではなく、ＩＦＮγ放出を５６.１ｐＭ〜１８９ｎＭのＥＣ₅₀値で上昇させた。

本発明は、本明細書に記載の具体的実施例によりその範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載の他のさまざまな変更例が、これまでの記載及び添付図面から当該分野の当業者には明らかとなろう。かかる変更も添付のクレームの範囲内であることが意図される。

実施例９
バイオレイヤー干渉法を使用したヒトＩＬ−３３交差競合
パネルの種々の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体間の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ａ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してリアルタイム、非標識バイオレイヤー干渉法で測定した。実験は、０.０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.４、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、及び０.１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ（ＨＢＳ−ＥＴ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒ）緩衝液を使用し、プレートを速度１０００ｒｐｍで撹拌しながら２５℃にて実施した。２抗体がヒトＩＬ−３３への結合について互いに競合することができたかどうかを評価するため、予備混合アッセイフォーマットを使用し、これにおいては、１００ｎＭのヒトＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；＃３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）と５００ｎＭの異なる抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ−２と呼ぶ）とを、結合競合アッセイに先立ち少なくとも２時間予備混合した。抗マウスＦｃポリクローナル抗体（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ、＃１８−５０８８；以後、ＡＭＣと呼ぶ）又は抗ヒトＦｃポリクローナル抗体（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ、＃１８−５０６０；以後、ＡＨＣと呼ぶ）いずれかでコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサーを、まず、個々の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体２０μｇ／ｍＬを含有するウェルに３分間浸し、それぞれに、マウスＦｃ又はヒトＦｃを発現している抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ−１と呼ぶ）を捕捉した。捕捉ステップに続き、Ｏｃｔｅｔバイオセンサー上の、何も結合していない抗マウスＦｃポリクローナル抗体及び抗ヒトＦｃポリクローナル抗体を、それぞれ、マウスＦｃ又はヒトＦｃとともに非特異的モノクローナル抗体２００μｇ／ｍＬを含有するウェルに４分間浸して飽和させた。最後に、Ｏｃｔｅｔバイオセンサーを、ヒトＩＬ−３３ １００ｎＭとｍＡｂ−２ ５００ｎＭとの予備混合試料を含有するウェルに４分間浸漬した。各サイクルの終了時、非共有結合により捕捉した抗ＩＬ−３３抗体と、結合した、ヒトＩＬ−３３とｍＡｂ−２とで予め作製した複合体とを、ＨＣｌ １０ｍＭとを２０秒ずつ交互に３回浸漬してからＨＢＳ−ＥＴ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒに浸す方法でバイオセンサーから除去した。バイオセンサーを、実験の各ステップごとにＨＢＳ−ＥＴ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。リアルタイム結合応答を結合イベントの間監視し、各ステップ終了時の結合応答（単位：ｎｍ）を記録した。解析中、与えられたｍＡｂ−２（ｍＡｂ−１＝ｍＡｂ−２の場合、すなわち、マトリックスの対角線沿い）の自己−自己のバックグラウンド結合シグナルを、ｍＡｂ−２の全結合イベントで観察されたシグナル（交差競合マトリックスの対応列）から減算し、バックグラウンドを補正した結果を図１に示している。ヒトＩＬ−３３と各種ｍＡｂ−２試料それぞれとで予め作製した複合体へのｍＡｂ−１の結合応答を測定し、各種抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体のそれぞれに対する競合的／非競合的挙動を検討した。

図１に示すように、黒色フォントで記載した明灰色欄は自己−競合の結合応答を表す。双方向に互いに競合する抗体は、結合順序とは無関係に、黒色欄に白色フォントで表されている。黒色フォントと暗灰色で強調表示されている細胞は、ヒトＩＬ−３３への結合が弱い抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体を表し、一方向の交差競合が見られる。実験で使用したアイソタイプ・コントロールは、暗灰色の欄に白色フォントで表されている。白色欄の黒色フォントは抗体間で競合が見られなかったことを表しており、これは抗体それぞれが別個の結合エピトープを有することが示唆される。

実施例１０.
バイオレイヤー干渉法を使用したサルＩＬ−３３交差競合
パネルの種々の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体間の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ａ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してリアルタイム、非標識バイオレイヤー干渉法で測定した。実験は、０.０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.４、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、及び０.１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ（ＨＢＳ−ＥＴ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒ）緩衝液を使用し、プレートを速度１０００ｒｐｍで撹拌しながら２５℃にて実施した。Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグとともに発現させた組換えサルＩＬ−３３（ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ；ＳＥＱ ＩＤ：ｘｘ）への結合について２抗体が互いに競合することができたかどうかを評価するために、２μｇ／ｍＬのＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓを含有するウェルにバイオセンサーを８５秒間浸すことにより、抗ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ抗体でコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、＃１８−５０７９）上に、およそ０.１５ｎｍ結合単位のＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓを最初に捕捉した。その後、抗原捕捉バイオセンサーを、ｍＡｂ−１の５０μｇ／ｍＬ溶液含有ウェルに５分間浸漬させ、第１の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ−１と呼ぶ）で飽和させた。その後、バイオセンサーを、第２の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ−２と呼ぶ）の５０μｇ／ｍＬ溶液含有ウェルに４分間浸した。バイオセンサーを、実験の各ステップごとにＨＢＳ−ＥＴ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。リアルタイム結合応答を実験の間監視し、各結合ステップの最大結合応答を記録した。予めｍＡｂ−１と作製した複合体ＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓへのｍＡｂ−２の結合応答を測定し、各種抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体のそれぞれに対する競合的／非競合的挙動を検討した。

図２に示すように、黒色フォントで記載した明灰色欄（対角線沿い）は自己−競合を表す（ｍＡｂ−１＝ｍＡｂ−２）。双方向に競合する抗体は、結合順序とは無関係に、黒色欄に白色フォントで表されている。白色欄の黒色フォントは抗体間で競合が見られなかったことを表しており、これは抗体それぞれが別個の結合エピトープを有することが示唆される。暗灰色の欄の白色フォントは実験で使用したアイソタイプ・コントロールを表す。

実施例１１.
インビボモデルでのｍＡｂ試験；急性ＨＤＭ誘導性肺炎症モデルによる、肺炎症でＩＬ−３３が果たす役割の検討
関連インビボモデルにおける抗ＩＬ−３３抗体Ｈ４Ｈ９６７５Ｐの影響を検討するため、急性ＨＤＭ誘導性肺炎症試験を、マウスＩＬ−３３の代わりにヒトＩＬ−３３を発現するホモ接合体マウスにおいて実施した（ＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウス）。

ＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスに、チリダニ抽出物（ＨＤＭ；Ｇｒｅｅｒ、＃ＸＰＢ７０Ｄ３Ａ２.５）５０μｇを１Ｘリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）２０μＬ（ｎ＝１７）又は１Ｘ ＰＢＳ ２０μＬ（ｎ＝３）に希釈したものいずれかを週５日で２週間経鼻投与した。ＨＤＭ惹起マウスの亜群には、２５ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−３３抗体、Ｈ４Ｈ９６７５（ｎ＝６）又はアイソタイプ・コントロール抗体（ｎ＝６）いずれかの皮下注射を、ＨＤＭ初回投与の３日前に開始し、その後、ＨＤＭ惹起終了時まで週２回注射した。ＨＤＭ初回経鼻投与の１５日後、すべてのマウスを屠殺し、それぞれ肺を回収した。マウス各群の実験上の用量及び処置プロトコルを表１４に示す。

サイトカイン分析用肺回収物：
放血後、各マウスから右肺の前葉及び中葉を取り出し、１Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８４３０）を添加した、組織タンパク質抽出試薬（１Ｘ Ｔ−ＰＥＲ試薬；Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８５１０）溶液を含有する管に入れた。以後の全ステップを氷上で実施した。Ｔ−ＰＥＲ試薬（プロテアーゼ阻害剤カクテル含有）の容積を、組織対Ｔ−ＰＥＲ比が１：８（ｗ／ｖ）に一致するよう各試料について調整した。肺試料を、使い捨て乳棒（Ｋｉｍｂｌｅ Ｃｈａｓｅ、＃７４９６２５−００１０）を使用して管内で手で均質化した。得られた溶解物を遠心分離し組織片をペレットにした。可溶性タンパク質抽出物を含有する上清を新たな管に移し、さらなる分析時まで４℃で保存した。

肺タンパク抽出物内の総タンパク量を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いて測定した。アッセイ用に、希釈した抽出物試料１０μＬを９６ウェルプレートに２連で置き、２００μＬの１Ｘ Ｄｙｅ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｂｉｏｒａｄ、＃５００−０００６）とともに混合した。ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ、＃Ａ７９７９）を、１Ｘ Ｔ−Ｐｅｒ試薬中７００μｇ／ｍＬで系列希釈を開始したものを標準として使用し、抽出物の正確なタンパク質濃度を測定した。５分間インキュベーションを室温にて行った後、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーで５９５ｎｍでの吸光度を測定した。総タンパク質含有量を測定するためのデータ解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実施した。

肺タンパク抽出物内のサイトカイン濃度を、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ１（マウス）多重免疫測定キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ,＃Ｋ１５０４８Ｄ−２）を使用し製造者の指示に従い測定した。簡単に言うと、５０μＬ／ウェルの較正用標準及び試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１に希釈）を、予め捕捉抗体でコーティングしたプレートにに加え、７００ｒｐｍで撹拌しながら室温にて２時間インキュベートした。その後、プレートを、０.０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０含有１Ｘ ＰＢＳで３回洗浄し、Ｄｉｌｕｅｎｔ４５で希釈した２５μＬのＤｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを加えた。さらに２時間、撹拌下で室温にてインキュベーションした後、プレートを３回洗浄し、１５０μＬの２倍Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒを各ウェルに加えた。電気化学発光をＭＳＤ Ｓｐｅｃｔｏｒ（登録商標）装置で直ちに計測した。データ解析をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実施した。

各群の全マウスの肺総タンパク質抽出物内の各サイトカイン濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイで測定した抽出物総タンパク質含有量に標準化し、表１５に示すように、各群について、総肺タンパク質ｍｇあたりのサイトカインの平均ｐｇ（ｐｇ／ｍｇ肺タンパク、±ＳＤ）として表した。

サイトカイン分析用肺回収物：
ＨＤＭを２週間投与されたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスの肺で放出されたサイトカインＩＬ−４及びＩＬ−５のレベルは、生理食塩水緩衝液で惹起したＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスより有意に高かった。対照的に、急性ＨＤＭ惹起期間中に抗ＩＬ−３３抗体の処置を受けたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスでは、未処理のＨＤＭ又はアイソタイプ・コントロールを投与されたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスに比較して肺内ＩＬ−４及びＩＬ−５レベルを低下させる傾向があった。

肺細胞浸潤分析用の肺回収物
放血後、各マウスから右肺後葉を取り出し、およそ２〜３ｍｍの角切りにした後、２０μｇ／ｍＬのＤＮＡｓｅ（Ｒｏｃｈｅ、＃１０１０４１５９００１）及び０.７Ｕ／ｍＬのリベラーゼＴＨ（Ｒｏｃｈｅ、＃０５４０１１５１００１）をハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１４０２５）に希釈した溶液を含有する管に入れ、それを３７℃水浴で２０分間でインキュベートし、５分おきにボルテックスによる撹拌を行った。エチレンジアミン四酢酸（Ｇｉｂｃｏ、＃１５５７５）を最終濃度１０ｍＭで加えて反応を停止させた。続いて、各肺をｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（登録商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９５−９３７）を使用して分離し、その後、７０μｍフィルターでろ過し、遠心分離した。得られた肺のペレットを１ｍＬの１Ｘ赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ、＃Ｒ７７５７）に再懸濁し赤血球を除去した。３分間室温にてインキュベーションした後、３ｍＬの１Ｘ ＤＭＥＭを加えて赤血球溶解緩衝液を不活化させた。その後、細胞懸濁液を遠心分離し、得られた細胞ペレットを、５ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液（ａｕｔｏＭＡＣＳ Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−２２１）に再懸濁した。再懸濁した試料を７０μｍフィルターでろ過し、ウェルあたり１ｘ１０⁶細胞を９６ウェルＶ字底プレートに置いた。その後、細胞を遠心分離し、ペレット１Ｘ ＰＢＳで洗浄した。第２遠心分離の後、細胞生存率を測定するため、細胞ペレットを、１Ｘ ＰＢＳで１：１０００に希釈したＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ｌ３４９５７）１００μＬに再懸濁し、遮光して室温で２０分間インキュベートした。１Ｘ ＰＢＳ洗浄を１回行った後、１０μｇ／ｍＬの精製ラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（クローン：２.４Ｇ２；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５３１４２）を含有するＭＡＣＳ緩衝液溶液で細胞を４℃で１０分間インキュベートした。細胞を１回洗浄してから、ＭＡＣＳ緩衝液に希釈した適切な抗体混合物（表１６に記載の）内で遮光しながら４℃で３０分間インキュベートした。抗体をインキュベーションした後、細胞をＭＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５４６５５）に再懸濁してから、遮光して４℃で１５分間インキュベートした。細胞をその後洗浄してＭＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳ管（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃３５２２３５）に移して、好酸球、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）及びリンパ球についてフローサイトメトリーで分析した。

活性化ＣＤ４Ｔ細胞を、生きている、ＣＤ４５⁺、ＳＳＣ^Lo、ＦＳＣ^Lo、ＣＤ３⁺、ＣＤ１９^-、ＣＤ４⁺、ＣＤ８^-、及びＣＤ６９⁺細胞と定義した。活性化Ｂ細胞を、生きている、ＣＤ４５⁺、ＳＳＣ^Lo、ＦＳＣ^Lo、ＣＤ３^-、ＣＤ１９⁺、及びＣＤ６９⁺細胞と定義した。好酸球を、生きている、ＣＤ４５⁺、ＧＲ１^-、ＣＤ１１ｃ^lo、ＳｉｇｌｅｃＦ^hiと定義した。ＩＬＣ２細胞を、生きている、ＣＤ４５⁺、系列−（系列：ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０）、ＣＤ１２７＋、Ｓｃａ^-１⁺、ＳＴ２⁺と定義した。親母集団（ＣＤ４、±ＳＤ）内の活性化細胞（ＣＤ６９⁺）の頻度として表した、活性化ＣＤ４細胞のデータを表１７に示す。

肺細胞浸潤分析：
表１７に示すように、ＨＤＭを２週間投与されたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスの肺における活性化ＣＤ４⁺Ｔ細胞、好酸球、及びＩＬＣ２の頻度は、１Ｘ ＰＢＳ対照で惹起したＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスより有意に高かった。対照的に、急性ＨＤＭ惹起の期間中、抗ＩＬ−３３抗体で処置したＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスでは、未処理のＨＤＭ又はアイソタイプ・コントロールを投与されたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスに比較してこれらの浸潤頻度が低下する傾向が観察された。

ＨＤＭで２週間惹起したＩＬ３３ ＨｕｍＩｎマウスの肺では、１Ｘ ＰＢＳ対照で惹起したＩＬ３３ Ｈｕｍｉｎマウスと比較して活性化Ｂ細胞の頻度が上昇する傾向が観察された。抗ＩＬ−３３抗体で処置すると、未処理ＨＤＭ又はアイソタイプ・コントロールを投与したＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスに比較して、ＨＤＭ惹起したＩＬ３３ ＨｕｍＩｎマウスの肺では、肺の活性化Ｂ細胞頻度の有意な低下が観察された。

実施例１２：インビボモデルにおけるｍＡｂ試験；慢性ＨＤＭ誘導性線維症及び重度の肺炎症モデルによる、肺炎症でＩＬ−３３が果たす役割の検討
抗ＩＬ−３３抗体Ｈ４Ｈ９６７５Ｐのへの影響を関連インビボモデルで測定するため、慢性ＨＤＭ誘導性線維症及び重度の肺炎症試験を、マウスＩＬ−３３の代わりにヒトＩＬ−３３を発現するホモ接合体マウスにおいて実施した（ＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウス）。

ＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスに、１Ｘリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）２０μＬで希釈した５０μｇチリダニ抽出物（ＨＤＭ；Ｇｒｅｅｒ、＃ＸＰＢ７０Ｄ３Ａ２.５）又は１Ｘ ＰＢＳ ２０μＬいずれかを週５日、１２週間経鼻投与した。ＩＬ３３ ＨｕｍＩｎマウスの第２の対照群には、抗体処置開始時の疾患重症度を評価するために、ＨＤＭ抽出物５０μｇを１Ｘ ＰＢＳ ２０μＬに希釈して週５日、４週間投与した。ＨＤＭ惹起マウス２群に、ＨＤＭ惹起開始から４週間後に、抗ＩＬ−３３抗体Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ、又はアイソタイプ・コントロール抗体のいずれかを２５ｍｇ／ｋｇ皮下注射し、その後は、ＨＤＭ惹起終了時まで１週間に２回（８週間の抗体処置）投与する。試験第８５日目、すべてのマウスを屠殺し、それぞれの肺を回収した。マウス各群の実験上の用量及び処置プロトコルを表１８に示す。

サイトカイン分析用肺回収物：
放血後、各マウスから右肺の前葉及び中葉を取り出し、１Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８４３０）を添加した、組織タンパク質抽出試薬（１Ｘ Ｔ−ＰＥＲ試薬；Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８５１０）溶液を含有する管に入れた。以後の全ステップを氷上で実施した。Ｔ−ＰＥＲ試薬（プロテアーゼ阻害剤カクテル含有）の容積を、組織対Ｔ−ＰＥＲ比が１：８（ｗ／ｖ）に一致するよう各試料について調整した。肺試料を、使い捨て乳棒（Ｋｉｍｂｌｅ Ｃｈａｓｅ、＃７４９６２５−００１０）を使用して管内で手で均質化した。得られた溶解物を遠心分離し組織片をペレットにした。可溶性タンパク質抽出物を含有する上清を新たな管に移し、さらなる分析時まで４℃で保存した。

肺タンパク抽出物内の総タンパク量を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いて測定した。アッセイ用に、希釈した抽出物試料１０μＬを９６ウェルプレートに２連で置き、２００μＬの１Ｘ Ｄｙｅ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｂｉｏｒａｄ、＃５００−０００６）とともに混合した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ、＃Ａ７９７９）を、１Ｘ Ｔ−Ｐｅｒ試薬中７００μｇ／ｍＬで系列希釈を開始したものを標準として使用し、抽出物のタンパク質濃度を測定した。５分間インキュベーションを室温にて行った後、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５マイクロプレートリーダーで５９５ｎｍでの吸光度を測定した。ＢＳＡ標準に基づいた総肺抽出物タンパク質含有量を測定するためのデータ解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実施した

肺タンパク抽出物内のサイトカイン濃度を、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ１（マウス）多重免疫測定キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ,＃Ｋ１５０４８Ｄ−２）を使用して製造者の指示に従い測定した。簡単に言うと、５０μＬ／ウェルの較正用標準及び試料（Ｄｉｌｕｅｎｔ４１に希釈）を、予め捕捉抗体でコーティングしたプレートにに加え、７００ｒｐｍで撹拌しながら室温にて２時間インキュベートした。その後、プレートを、０.０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０含有１Ｘ ＰＢＳで３回洗浄し、Ｄｉｌｕｅｎｔ４５で希釈した２５μＬのＤｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを加えた。さらに２時間、撹拌下で室温にてインキュベーションした後、プレートを３回洗浄し、１５０μＬの２倍Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒを各ウェルに加えた。電気化学発光をＭＳＤ Ｓｐｅｃｔｏｒ（商標）装置で直ちに計測した。データ解析をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して実施した。

各群の全マウスの肺総タンパク質抽出物内の各サイトカイン濃度基を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイで測定した抽出物総タンパク質含有量に標準化し、表１９に示すように、各群について、総肺タンパク質ｍｇあたりのサイトカインの平均ｐｇ（ｐｇ／ｍｇ肺タンパク、±ＳＤ）として表した。

肺サイトカイン分析：
ＨＤＭを４及び１２週間投与されたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスの肺で放出されたサイトカインＩＬ−４及びＩＬ−５のレベルは、１Ｘ ＰＢＳで惹起したＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスより有意に高かった。対照的に、慢性ＨＤＭ惹起期間中に抗ＩＬ−３３抗体の処置を受けたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスでは、未処理のＨＤＭ又はアイソタイプ・コントロールを投与されたＩＬ−３３ ＨｕｍＩｎマウスに比較して肺内ＩＬ−４及びＩＬ−５レベルを低下させる傾向があった。

Claims (39)

1. ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる、ヒトインターロイキン３３（ＩＬ−３３）に結合する単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
2. 前記抗体又はその抗原結合性断片がＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を遮断する、請求項１に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
3. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用をＩＣ₅₀値約１０ｎＭ未満で遮断する、又は２５℃でのインビトロ受容体／リガンド結合アッセイで測定したＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を約５０％を超えて遮断する、請求項２に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
4. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を遮断しない、又は一部のみ遮断する、請求項１に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
5. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に結合平衡解離定数（Ｋ_D）約１ｎＭ未満でヒトＩＬ−３３に結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
6. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約８分を超える解離半減期（ｔ_1/2）でヒトＩＬ−３３に結合する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
7. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３媒介性のヒト好塩基球脱顆粒を抑制する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
8. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、インビトロ好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）で測定した場合にＩＣ₅₀約６００ｐＭ未満でＩＬ−３３媒介性のヒト好塩基球脱顆粒を抑制する、請求項７に記載の抗体又は抗原結合性断片。
9. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
10. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、インビトロでのＰＢＭＣ ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ₅₀約２５ｎＭ未満でヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制する、請求項９に記載の抗体又は抗原結合性断片。
11. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、インビトロでのＰＢＭＣ ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ₅₀約３ｎＭ未満でヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制する、請求項１０に記載の抗体又は抗原結合性断片。
12. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、インビトロでのＰＢＭＣ ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ₅₀約０.５ｎＭ未満でヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制する、請求項１１に記載の抗体又は抗原結合性断片。
13. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合に肺におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞、好酸球及びＩＬＣ２細胞の頻度を低下させる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
14. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合に肺におけるＩＬ−４及びＩＬ−５のレベルを低下させる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
15. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合、アイソタイプ・コントロール抗体を投与したアレルゲン誘発動物の場合に比して、ＩＬ−４レベルの少なくとも４倍低下及び／又はＩＬ−５レベルの少なくとも５倍低下をもたらす、請求項１４に記載の抗体又は抗原結合性断片。
16. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの配列対を含む基準抗体と、ＩＬ−３３への結合について競合する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
17. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの配列対を含む基準抗体と同一のＩＬ−３３上のエピトープに結合する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
18. ヒトのインターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に特異的に結合する単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片であって、前記抗体又は抗原結合性断片が（ａ）配列番号：２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、及び３０８番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｂ）配列番号：１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、及び３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲ、を含む、単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
19. 前記抗体又は抗原結合性断片が、配列番号：２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列対のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
20. 前記抗体又は抗原結合性断片が、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含み、それぞれの配列番号が４−６−８−１２−１４−１６；２０−２２−２４−２８−３０−３２；３６−３８−４０−４４−４６−４８；５２−５４−５６−６０−６２−６４；６８−７０−７２−７６−７８−８０；８４−８６−８８−９２−９４−９６；１００−１０２−１０４−１０８−１１０−１１２；１１６−１１８−１２０−１２４−１２６−１２８；１３２−１３４−１３６−１４０−１４２−１４４；１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０；１６４−１６６−１６８−１７２−１７４−１７６；１８０−１８２−１８４−１８８−１９０−１９２；１９６−１９８−２００−２０４−２０６−２０８；２１２−２１４−２１６−２２０−２２２−２２４；２２８−２３０−２３２−２３６−２３８−２４０；２４４−２４６−２４８−２５２−２５４−２５６；２６０−２６２−２６４−２６８−２７０−２７２；２７６−２７８−２８０−２８４−２８６−２８８；２９２−２９４−２９６−３００−３０２−３０４；並びに３１０−３１２−３１４−３１８−３２０−３２２番からなる群から選択される、請求項１８に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
21. ヒトのインターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に特異的に結合する単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片であって、前記抗体又は抗原結合性断片が（ａ）配列番号：２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、及び３０８番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；並びに（ｂ）配列番号：１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、及び３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、を含む、単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
22. 前記抗体又は抗原結合性断片が、配列番号：２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項２１に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
23. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする、単離された核酸分子。
24. 請求項２３に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
25. 請求項２４に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
26. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片を含む、医薬組成物、及び薬理学的に許容される担体又は溶剤。
27. 炎症性の疾患もしくは障害、又はかかる炎症性の疾患又は障害に関連する少なくとも１つの症状を治療する方法であって、該方法は、請求項１から２２のいずれか一項に記載の、ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合性断片、又は請求項２６に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、これにおいて、前記炎症性の疾患又は障害が回復する、又は発症の重症度、持続時間もしくは頻度を低減する、又は前記炎症性の疾患又は障害に関連する少なくとも１つの症状が回復する、又は発症の重症度、持続時間もしくは頻度を低減する、治療方法。
28. 前記炎症性の疾患又は障害が、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
29. 前記炎症性の疾患又は障害が喘息である、請求項２８に記載の方法。
30. 前記喘息が好酸球性又は非好酸球性喘息である、請求項２９に記載の方法。
31. 前記喘息がステロイド抵抗性又はステロイド感受性喘息である、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記炎症性の疾患又は障害がアトピー性皮膚炎である、請求項２８に記載の方法。
33. 前記炎症性の疾患又は障害が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項２８に記載の方法。
34. 前記慢性閉塞性肺疾患が喫煙の結果である、又は原因の一部である、請求項３３に記載の方法。
35. アレルゲンに対する感受性を示す患者を治療する方法であって、該方法は、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の、ＩＬ−３３に特異的に結合する有効量の抗体又はその抗原結合断片、又は請求項２６に記載の医薬組成物をそれを必要とする患者にを投与することを含み、これにおいて、前記抗体又は抗体を含む組成物の投与後に、患者がアレルゲンに対する感受性低下もしくはアレルギー反応減退を示す、又はアレルゲンに対するいかなる感受性もしくはアレルギー反応、又はアナフィラキシー反応を経験しない、治療方法。
36. 前記炎症性の疾患又は障害が、喘息、アレルギー、アナフィラキシー、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される、炎症性の疾患又は障害の治療で使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２６に記載の医薬組成物。
37. 前記炎症性の疾患又は障害が、喘息、アレルギー、アナフィラキシー、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される、炎症性の疾患又は障害の治療用薬物製造における、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２６に記載の医薬組成物。
38. 前記炎症性の疾患もしくは障害、又は前記炎症性の疾患もしくは障害の少なくとも１つの症状を緩和する、又はアレルゲンに対するアレルギー応答を減退させるために有用である、有効量の第２の治療剤を投与することをさらに含む、請求項２７〜３７のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記第２の治療剤が、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、副腎皮質ホルモン、気管支拡張剤、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）拮抗薬、ＩＬ−１３拮抗薬、ＩＬ−４拮抗薬、ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重拮抗薬、ＩＬ−５拮抗薬、ＩＬ−６拮抗薬、ＩＬ−１２／２３拮抗薬、ＩＬ−２２拮抗薬、ＩＬ−２５拮抗薬、ＩＬ−１７拮抗薬、ＩＬ−３１拮抗薬、経口ＰＤＥ４阻害剤及び別のＩＬ−３３拮抗薬又はＩＬ−３３に対する異なる抗体からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。