KR20150126035A - 변형된 개 렙틴 폴리펩티드 - Google Patents

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마이클 블레드소
피터 코너 캐닝
마이클 데구즈만
닉 크누드센
라니나 발렌타
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일라이 릴리 앤드 캄파니
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Abstract

폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티가 폴리펩티드의 파라-아세틸-페닐알라닌 (pAF) 잔기에 공유적으로 부착되어 있는 PEG 변형된 개 렙틴 폴리펩티드를 비롯한, 변형된 개 렙틴 폴리펩티드 및 그의 제제 및 용도, 및 반려 동물 비만 및 다른 렙틴 관련 장애를 치료하는데 유용한 관련 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

변형된 개 렙틴 폴리펩티드 {MODIFIED CANINE LEPTIN POLYPEPTIDES}
관련 출원에 대한 참조
본원은 2013년 3월 13일 출원된 미국 가출원 번호 61/779,337을 우선권 주장한다.
서열 목록
본원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출되었고 그의 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2014년 3월 7일 작성된 상기 ASCII 카피의 명칭은 204257-0016-WO-00(509186)_SL.txt이고 크기는 2,597 바이트이다.
기술분야
본 발명은 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 변형된 개 렙틴 폴리펩티드, 및 반려 동물 비만 및 다른 렙틴 관련 장애를 치료하는데 유용한 관련 조성물 및 방법에 관한 것이다.
렙틴은 시상하부에서 에너지 균형 및 음식물 섭취를 조절하는 작용을 하는 신경호르몬이다. 인간에 대한 렙틴 및 그의 수용체와 관련된 문제에 대해서는 많은 것들이 기록되어 왔지만 (US2012/0149,636), 반려 동물 또한 렙틴 관련 장애를 앓고 있다. 비만과 같은 렙틴 장애를 경험한 반려 동물, 예컨대 개가 특히 주목된다. 인간에서는 요법으로서 외인성 렙틴을 투여하는 것이 공지되어 있지만, 이는 여러 문제들로 인해 제한받고 있으며, 그 중 가장 중요한 것은 장기간 지속 효과를 제공하지 못한다는 점이다. 따라서, 더욱 우수한 대안을 찾고자 하는 노력이 계속해서 진행되고 있으며, 이러한 노력으로는 인간용 뿐만 아니라 반려 동물용으로서 더욱 안전하고, 더욱 장기간 동안 지속되며, 더욱 큰 효능을 가지는 화합물을 찾는 것을 포함한다.
본 발명은 서열 1의 폴리펩티드 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티를 포함하며, 여기서 PEG 모이어티는 서열 1의 폴리펩티드의 파라-아세틸-페닐알라닌 (pAF) 잔기에 공유적으로 부착되어 있는 것인 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 비만 치료를 필요로 하는 동물에게 유효량의 본 발명에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 반려 동물에서 비만을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 비만 예방을 필요로 하는 동물에게 유효량의 본 발명에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 반려 동물에서 비만을 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 요법에서 사용하기 위한 본 발명에 따른 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 비만을 치료하는데 사용하기 위한 본 발명에 따른 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 비만을 예방하는데 사용하기 위한 본 발명에 따른 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 화합물 및 하나 이상의 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 폴리펩티드의 아미노산 서열은
Figure pct00001
(여기서 Xaa는 파라-아세틸-페닐알라닌 (pAF)임) (서열 1)이다.
서열 1의 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 분자의 예는
Figure pct00002
이다.
프로세싱의 결과로서, 제1 메티오닌이 절단될 수 있으므로, 성숙 폴리펩티드 중에는 존재하지 않고, 제1 메티오닌이 절단된 서열 1과 제1 메티오닌이 절단되지 않은 서열 1의 혼합물이 생성된다. 바람직하게, 최종 혼합물은 제1 메티오닌이 절단된 십 (10) 퍼센트 미만 또는 오 (5) 퍼센트 미만의 서열 1을 함유한다. 가장 바람직하게, 최종 혼합물은 제1 메티오닌이 절단된 2% 이하의 서열 1을 함유한다.
비자연적으로 발생된 아미노산은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 한 특정의 비자연적으로 발생된 아미노산은 파라-아세틸-페닐알라닌 (pAF)으로서 알려져 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 US2012/0149,636에 기재된 바와 같이 본 폴리펩티드를 코딩하는 유전자 중 앰버 정지 코돈에 대한 반응으로 pAF를 도입하기 위해 변형된 tRNA 및 tRNA 신테타제를 사용하여 생체내에서 생성될 수 있다. 서열 1의 폴리펩티드의 발현을 지시하는 발현 플라스미드 또는 벡터를 변형된 이. 콜라이(E. coli) K-12 W3110 균주 내로 형질감염시킨다. 이. 콜라이 K-12 숙주 균주는, pAF가 도입되는 위치인 서열 1의 112번 위치의 Xaa에 앰버 정지 코돈 (TAG)을 함유하는 DNA 서열을 함유하는 플라스미드를 포함하도록 변형된 W3110 유도체이다. 플라스미드는 또한 메타노코쿠스 잔나쉬이(Methanococcus jannaschii) DSM 2661로부터 유래된 변형된 티로실 tRNA 및 아미노아실-tRNA 신테타제 (aa-RS) 쌍 (MjTyrCUA tRNA 및 Tyr-RS)에 대한 유전자를 함유한다. 상기 쌍은 앰버 정지 코돈에 대한 반응으로 pAF를 도입하기 위해 변형되고 유전적으로 선택된 것이다.
본 발명에서 사용되는 PEG 모이어티의 평균 분자량은 1 kDa 내지 100 kDa, 또는 1 kDa 내지 50 kDa, 또는 20 kDa 내지 50 kDa이다. 바람직한 PEG 모이어티의 분자량은 약 20 kDa이다. 또 다른 바람직한 PEG 모이어티의 분자량은 약 30 kDa이다. 추가의 또 다른 바람직한 PEG 모이어티의 분자량은 약 40 kDa이다. PEG는 선형 및 분지형 중합체 둘 다를 포괄하는 것으로 사용된다. 대부분의 PEG는 상업적으로 이용가능하다. 바람직하게, PEG는 30 kDa PEG (α-메틸-ω-아미노옥시에틸카르바밀, 폴리옥시에틸렌)이다.
동물이란 반려 동물, 예컨대 개 및 고양이를 지칭한다.
본 발명의 화합물은 렙틴에 의해 조절되는 장애를 앓는 반려 동물을 치료하는데 유용하다. 상기 장애로는 비만, 및 비만 유도성 또는 비만 관련 장애를 포함한다. 비만은 제지방 조직에 비하여 과량의 지방 조직이 존재하는 병증이다. 비만, 및 비만 유도성 또는 비만 관련 장애 치료란, 본 발명의 화합물을 투여하여 비만인 반려 동물의 음식물 섭취를 감소시키고, 지방 조직의 양을 우선적으로 감소시키고, 체중을 감소시키는 것을 의미한다. 치료 결과는 본 발명의 화합물 투여 이전의 해당 동물의 체중과 비교하여 비만인 반려 동물의 체중 감소일 수 있다. 치료를 통해 적합하게는, 총 음식물 섭취 감소를 비롯한, 동물이 섭취하는 음식물 또는 칼로리 감소, 및 치료를 필요로 하는 동물에서 체중 감소가 이루어질 수 있다. 비만 및 비만 관련 장애 예방이란, 본 발명의 폴리펩티드를 투여하여 비만 위험이 있는 동물의 음식물 섭취를 감소시키거나, 체중을 감소시키거나, 또는 체중을 유지시키는 것을 의미한다. 예방의 또 다른 결과는 다이어트, 운동, 또는 약물요법의 결과로서 이전에 감량된 체중이 회복되지 못하도록 막는 것일 수 있다. 예방의 또 다른 결과는 비만 위험이 있는 동물에서 비만 발병 이전에 처치가 실행될 경우에는 비만이 발생하지 못하도록 막는 것일 수 있다.
본 발명의 화합물은 개 렙틴에 의해 조절되는 장애를 앓는 동물을 위한 요법에서, 및 상기 동물을 치료하기 위해, 하나 이상의 다른 활성 성분과 함께 조합될 수 있거나, 또는 그를 사용할 수 있다.
본 발명의 화합물은 동물에게 투여하는데 적합한 조성물로 도입될 수 있다. 상기 조성물은 선택된 투여 모드에 적절하게 디자인되고, 허용되는 희석제, 담체, 및/또는 부형제, 예컨대 분산제, 완충제, 계면활성제, 보존제, 가용화제, 등장화제, 안정화제 등이 적절하게 사용된다. 상기 조성물은 일반적으로 의사에게 공지되어 있는 바와 같은 제제화 기법에 관한 개론을 제공하는, 예컨대 문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995]에 개시된 종래 기법에 따라 디자인될 수 있다. 조성물에 적합한 담체로는 본 발명의 화합물과 조합되었을 때, 화합물의 활성을 유지하고, 동물의 면역계와 비반응성인 임의의 물질을 포함한다. 본 발명의 조성물은 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 표준 투여 기법을 사용하여 본원에 기재된 질환 또는 장애의 위험이 있거나, 또는 질환 또는 장애를 보이는 동물에게 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 유효량의 본 발명의 화합물을 함유한다. 유효량이란 (투여 수단을 위해 및 투여 기간 동안 및 투여량에서) 치료학적 결과를 달성하는 양이다. 화합물의 유효량은 인자, 예컨대 질환 상태, 동물의 연령, 성별 및 체중, 및 화합물이 동물에서 원하는 반응을 유도할 수 있는 능력에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 화합물의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료학상 유익한 효과가 더 큰 양이다. 유효량은 수의사 및 임상의에 의해 결정되는 바와 같이, 동물이 원하는 체중을 달성할 때까지 주당 동물의 초기 체중의 대략 2%일 수 있다. 유효량/유효 용량은 피하 주사에 의해 투여되는, 주당 동물 체중 1 kg당 약 0.1 내지 약 10 mg일 수 있다. 유효량/유효 용량은 SC 주사에 의해 투여되는 주당 1회 1 mg/kg일 수 있다.
실시예 1
본질적으로 US2012/0149,636에 기재된 바와 같이 서열 1의 폴리펩티드를 수득하였다. 서열 1의 폴리펩티드를 20 mM 트리스(Tris) (pH 4.0); 2 M 우레아; 및 50 mM 메티오닌 중 4 mg/mL로 제제화하였다. 상기 제제화된 폴리펩티드에 30K PEG (α-메틸-ω-아미노옥시에틸카르바밀, 폴리옥시에틸렌, 선브라이트(Sunbright) ME-300CA, NOF (일본))를 10:1=PEG:폴리펩티드인 몰비로 첨가하였다. 폴리펩티드 및 PEG를 온화하게 혼합하고, 28℃에서 48-72시간 동안 계속해서 접합시켰다. 이어서, PEG화된 폴리펩티드를 통상의 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하고, 4% 트레할로스를 포함하는 PBS (포스페이트 완충 염수) 7.4 중에서 1 mg/ML로 제제화하였다. 본 과정을 거쳐 제1 메티오닌이 절단된 1-2%의 서열 1을 함유하는 혼합물을 수득하였다.
시험관내 생물학적 데이터
STAT3 반응 요소의 제어하의 루시페라제 수용체 유전자 및 세포 표면 상에서 발현되는 OB-Rb (렙틴 수용체) 둘 다로 HEK 293 세포를 안정적으로 형질감염시켰다. 렙틴은 렙틴 수용체에 결합하여 STAT3 동종이량체 및 STAT3/STAT1 이종이량체를 활성화시키고, 이는 STAT3 서열 반응 요소와 상호작용하고, 그와 결합한다. 이러한 상호작용은 루시페라제 유전자의 발현을 구동시키고, 세포를 자극하여 발광을 생성한다. 발광량은 화합물의 활성에 비례한다. 생물학적 활성은 4-PL S자 곡선의 EC50에 기초한다.
제1일
세포를 96-웰 플레이트에 20,000개의 세포/웰로 시딩하고, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24-30시간 동안 놓았다.
제2일
야생형 (WT) 개 렙틴 및 실시예 1의 PEG화된 폴리펩티드의 출발 농도는 1,200 ng/mL였다. 그로부터 400 uL 부피를 각 샘플로부터 취하고, 희석 블록 열에 걸쳐 4x 일련의 희석액을 제조하였다. 먼저, 300 uL/웰의 검정 배지를 Col 2-11에 첨가하였다. 이어서, 100 uL를 Col 1에서 Col 2로 옮기고, 주의깊게 및 천천히 (기포가 생기지 않게) 8-10회에 걸쳐 혼합한 후, 계속해서 100 uL를 Col 2에서 Col 3으로 옮기고, Col 11에 도달할 때까지 반복하였다. Col 12는 비자극 대조군 웰로서 그대로 남겨 두었다. 이어서, 야생형 (WT) 개 렙틴 및 실시예 1의 PEG화된 폴리펩티드의 일련의 희석액으로 세포를 자극시켰다. 세포를 인큐베이터에서 꺼내고, 각 웰로부터 배지를 주의깊게 흡인시켰다. 이어서, 100 ㎕/웰의 일련으로 희석된 WT 및 PEG화된 폴리펩티드를 깊은 웰 희석 블록으로부터 96-웰 검정 플레이트 중의 세포로 옮겨 놓았다. 이어서, 이용가능한 그 다음 열에 걸쳐 수평으로 시험되는 WT 및 PEG화된 폴리펩티드를 위해 중복 샘플을 만들었다. 플레이트를 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 16-18시간 동안 인큐베이션시켰다. 최종 농도 (ng/mL)와 함께 플레이트 포맷이 하기에 제시되어 있다.
Figure pct00003
제3일
제3일, 기질을 준비하고, 세포에 첨가한 후, 이어서 루미노미터에 의해 측정하였다. 플레이트를 판독하기 전 대략 1-2시간 전에, 검정 플레이당 한 바이알의 스테디-글로(Steady-Glo) 동결건조된 루시페라제 검정 기질 및 한 바이알의 스테디-글로 루시페라제 검정 완충제를 포함하는 한 세트의 스테디-글로 (프로메가(Promega)) 시약을 실온에서 해동시켰다. 총 함량의 루시페라제 검정 완충제 (~10.5 mL)를 동결건조된 루시페라제 기질로 피펫팅하였다. 100 ㎕/웰의 재구성된 루시페라제 기질을 검정 플레이트 각 웰에 첨가하고, 검정 플레이트를 알루미늄 호일로 덮고, 450 내지 600 rpm으로 설정된 플레이트 진탕기 상에서 실온에서 45-60분 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 250 msec으로 설정된 적분 시간으로 테칸(Tecan) GENiosPRO 플레이트 판독기 상에서 플레이트를 판독하였다. 이어서, 데이터를 엑셀(Excel)로 입력하고, 시그마플롯 어플리케이션(SigmaPlot Application)에서 EC50 측정을 수행하고, WT 렙틴에 대해 상대적인 활성 손실 배수 및 상대적인 효능(%) 측정 또한 수행하였다. 야생형 개 렙틴에 대해 상대적인 활성 손실 배수는 [샘플의 EC50]을 [야생형 렙틴의 EC50]으로 나눔으로써 측정하였고; 참조 표준에 대한 렙틴 단백질의 상대적인 효능(%)은 참조 표준의 EC50을 렙틴 단백질의 EC50 값으로 나누고, 그 값에 100을 곱함으로써 계산하였다. 예를 들어, 상대적인 효능(%)은 [참조 표준의 EC50]을 [샘플의 EC50]으로 나누고, 그 값에 100을 곱함으로써 계산하였다. 하기 표에는 상기 방법을 사용하여 분석된 WT 및 실시예 1의 PEG화된 폴리펩티드가 제시되어 있다.
<표 1>
Figure pct00004
본 결과는 실시예 1의 PEG화된 폴리펩티드가 시험관내에서 활성을 띤다는 것을 나타낸다.
생체내 생물학적 데이터
본 연구의 목적은 비만인 수컷 및 암컷 개에서 실시예 1의 PEG화된 폴리펩티드가 체중, 체조성, 및 섭식 행동에 미치는 영향을 평가하고자 하는 것이다. 실시예 1의 PEG화된 폴리펩티드를 포스페이트 완충 염수 (pH 7.4 및 4% (w/v) 트레할로스 포함) 중에서 5.1 mg/ml로 제제화하였다.
모두가 한살 (1세)이 넘는 열 여덟 (18)마리의 개를 사용하였으며: 아홉 (9)마리는 무손상인 수컷이고, 아홉 (9)마리는 무손상인 암컷 비글이었다. 개는 비만으로, 체중이 대략 12 내지 18 kg (26.4 내지 39.6 lbs) 나갔다. 순응기 중 처음 4주 동안 (또는 원하는 출발 체중을 달성할 때까지), 유지 및 건강을 위한 영양 요구량을 충족시키거나, 또는 그를 초과하는 실험실용 고지방 (대략 45%) 건사료를 개에게 공급하였다. 체중 증가를 촉진시키기 위해 순응기 중 상기 일부 기간 동안에는 모든 개에게 임의로 공급하였다. 순응기 중 마지막 2주 동안 및 남은 연구 기간 동안, 내인성 렙틴 수준을 감소시키고, 렙틴 감수성을 회복시키기 위해 모든 개에게 상업용 표준 지방 (대략 12%) 개 건사료를 공급하였다. 처리군 1 및 2의 개는 남은 연구 전기간 동안에 걸쳐 계속해서 사료를 임의로 제공받았다. 처리군 3의 동물에게는 다이어트를 위해 라벨 제품 사용 설명서에 따라 1일 2회 공급하였다. 동물은 각 케이지에 포함되어 있는 볼 또는 자동 급수 시스템을 통해 임의로 식수를 이용할 수 있었다. 연구 기간 동안 어떤 다른 공동 약물처치도 수행하지 않았다.
본 연구는 각 성별 내에서 무작위화된 블록 디자인으로서 수행하였다. 개를 무작위로 우리로 배정하였다. 동물을 각 성별 내에서 기준선 (제-14일) 체중까지 차단시켰다. 수컷 3마리를 포함하는 블록 3개 및 암컷 3마리를 포함하는 블록 3개가 존재하였다. 블록 1의 수컷은 최저 체중을 가지는 3마리의 수컷으로 이루어졌고, 블록 1의 암컷은 최저 체중을 가지는 3마리의 암컷으로 이루어지도록 하였다. 각 성별 내의 두번째 블록은 그 다음으로 최저 체중을 가지는 3마리의 수컷 및 3마리의 암컷으로 이루어졌다. 각 성별 내의 마지막 블록은 최고 체중을 가지는 3마리의 수컷 및 3마리의 암컷을 포함하였다.
하기 표는 사용된 처리, 투여 요법, 및 동물 마리수를 보여주는 것이다.
<표 2>
Figure pct00005
동물을 9마리의 동물로 이루어진 2개의 성별군으로 나누었다. 각 성별군 내에서 동물을 제-14일 체중에 기초하여 최저부터 최고 체중으로 순위화하였다. 각 성별군에서 동물을 기준선 체중 증가에 기초하여 3마리의 동물로 이루어진 블록으로 나누었다. 스폰서로부터 제공받은 난수표를 사용하여 동물을 무작위로 우리 위치로 배정하였다.
제0일, 제7일, 제14일, 제21일, 제28일에 대조군 및 처리군에 피하 주사를 통해 투여하였다. 개를 채혈 시술에 순응시키고, 기준선 내인성 렙틴 수준을 확립하기 위해 동물을 저지방 사료로 바꾸기 전에 제-14일 연구 등록 이전에 혈청 샘플 (대략 2-3 ml)을 수득하였다. 하기 표는 제-14일 및 -제1일 순환 렙틴 수준을 제공한다.
<표 3>
Figure pct00006
3개의 처리군 모두의 동물은 제-1일, 제21일 및 제42일 (연구 최종일)째에 제지방 조직 대 지방 조직의 비율 측정을 위해 DEXA (이중 에너지 x선 흡수계측법) 스캔을 받았다.
제-7일부터 제42일까지 매회 대략적으로 같은 시간에 처리군 1 및 2에 등록한 동물의 1일 사료 섭취량을 기록하였다.
1일당 식사 횟수 및 1회 식사당 평균 섭식 소요 시간을 비롯한 섭식 행동을 관찰하기 위해 제7일을 출발로 하여 연구 종료 시점까지 계속해서 하루에 24시간씩 모든 처리군의 동물을 비디오테이프에 녹화하였다.
1차 종점은 연구 진행 과정 동안 주간 개별 동물 체중의 변화인 것으로 하고, 이를 요약하고, 처리군과 비교하는 것으로 하였다. 2차 종점은 하기의 것으로 하였다:
1) 체조성: 제지방 조직 및 지방 조직의 비율을 포함하는 개별 동물 DEXA 스캔 결과를 연구 진행 과정 동안 요약하는 것으로 하였고;
2) 사료 섭취량/섭식 행동: 처리군 1 및 2의 개별 동물에 대한 평균 1일 사료 섭취량을 각 동물에 대해 요약하는 것으로 하였다.
처리 개시 이전 및 처리 개시 이후의, 각 동물이 섭취하는 식사 횟수 및 사료 공급 시간을 측정하기 위해 개별 동물의 섭식 행동을 기록한 비디오테이프를 관찰하는 것으로 하였다.
체중에 미치는 영향에 대한 결과는 하기 표에 제시되어 있다.
<표 4>
Figure pct00007
본 결과는 대조군과 비교하여 실시예 1의 화합물로 처리된 군이 더 많이 체중을 감량하였다는 것을 나타낸다.
체조성에 미치는 영향은 하기 표에 제시되어 있다.
<표 5>
Figure pct00008
본 결과는 대조군과 비교하여 실시예 1의 화합물로 처리된 군에서는 지방 조직 비율의 차별적인 감소와 관련된 체충실지수는 감소하였고, 조직 비율에 대한 유의적인 영향은 없었다는 것을 나타낸다.
사료 섭취량 및 행동에 미치는 영향은 하기 표에 제시되어 있다.
<표 6>
Figure pct00009
본 결과는 대조군과 비교하여 실시예의 화합물로 처리된 군이 더 소량의 사료를 섭취하였고, 1일 식사 섭취 횟수와 대조적으로 사료 섭취 감소는 사료 공급 시간 단축과 관련이 있었다는 것을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> ELI LILLY AND COMPANY AMBRX, INC. <120> MODIFIED CANINE LEPTIN POLYPEPTIDES <130> 204257-0016-WO-00 (509186) <140> <141> <150> 61/779,337 <151> 2013-03-13 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <220> <221> MOD_RES <222> (112)..(112) <223> Para-acetyl-phenylalanine (pAF) <400> 1 Met Val Pro Ile Arg Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15 Thr Ile Val Ala Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser 20 25 30 Ser Lys Gln Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu Gln Pro 35 40 45 Val Leu Ser Leu Ser Arg Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln 50 55 60 Ile Leu Asn Ser Leu His Ser Arg Asn Val Val Gln Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80 Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ser Ser Lys Ser 85 90 95 Cys Pro Leu Pro Arg Ala Arg Gly Leu Glu Thr Phe Glu Ser Leu Xaa 100 105 110 Gly Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Asn 115 120 125 Arg Leu Gln Ala Ala Leu Gln Asp Met Leu Arg Arg Leu Asp Leu Ser 130 135 140 Pro Gly Cys 145 <210> 2 <211> 441 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 2 atggttccaa ttcgaaaggt tcaagatgat acgaagacac tgatcaagac tatcgtggcg 60 cgcatcaacg atatttcgca tacccagtca gtctcgtcga aacaacgtgt ggctggctta 120 gattttattc cagggctgca accggtactg tctctgagcc gtatggacca aactctggcc 180 atctaccagc aaatccttaa ctctctgcat tctcgcaatg tggtgcaaat ctcgaacgat 240 cttgagaact tgcgtgacct gttacatctg ttagcctcaa gcaaatcatg cccgctgccg 300 cgtgcacgtg gccttgaaac gtttgaaagt ttgtagggtg tcttggaagc gagtctttat 360 tccaccgaag tcgtcgccct gaaccgcctg caggccgcac ttcaagacat gcttcgccgt 420 ctggatctca gtccgggttg c 441

Claims (9)

  1. 서열 1의 폴리펩티드 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티를 포함하며, 여기서 PEG 모이어티는 서열 1의 폴리펩티드의 파라-아세틸-페닐알라닌 (pAF) 잔기에 공유적으로 부착되어 있는 것인 화합물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 PEG 모이어티의 분자량이 약 30 kDa인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 PEG 모이어티가 α-메틸-ω-아미노옥시에틸카르바밀 또는 폴리옥시에틸렌인 화합물.
  4. 비만 치료를 필요로 하는 동물에게 유효량의 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 반려 동물에서 비만을 치료하는 방법.
  5. 비만 예방을 필요로 하는 동물에게 유효량의 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 반려 동물에서 비만을 예방하는 방법.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에서 사용하기 위한 화합물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 동물에서 비만을 치료하는데 사용하기 위한 화합물.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 동물에서 비만을 예방하는데 사용하기 위한 화합물.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물 및 하나 이상의 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물.
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