KR20140146074A - 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 trf2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물 및 그 용도 - Google Patents

Abstract

펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물 및 그 용도를 제공한다. 화장료 조성물은 생리학적으로 수용가능한 매체 내에서, 원재료들의 총 무게(weight)의 적어도 80% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 최대 20% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻은 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 것을 특징으로 한다. 따라서, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포들 내에서 텔로미어들과 관련된 단백질들(TRFs) 및 특히 TRF2 단백질의 양을 증가시킬 수 있다. 또한, 노화된 세포 표현형을 갖는 세포들 내에 비멘틴 세포골격 단밸질의 증가 및 응집을 제한할 수 있다. 또한, 그것은 메틸글리옥살로 처리하는 피부 생체검사에 대한 손상의 출현을 제한할 수 있다. 또한, 텔로머라제의 양 및/또는 활성도를 조절하지 않고 텔로미어들의 저하를 제한할 수 있다. 또한, 피부 세포들의 DNA에 대한 손실 및 노화와 관련된 피부 증상들을 방지 및/또는 치료할 수 있다.

Description

펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물 및 그 용도{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING A SYNERGISTIC TRF2 PROTEIN ACTIVATION SYSTEM CONSISTING OF A COMBINATION OF A PEPTIDIC SOYBEAN AND YEAST EXTRACT AND THE USES THEREOF}

본 발명은 화장품 분야에 관련된다. 본 발명은 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물에 관련되고, 보다 특히 노화와 관련된 피부 세포들의 DAN 손상 및 노화와 관련된 피부 증상들을 방지 및/또는 치료하기 위한 목적의 화장료 조성물에 관련된다.

노화는 인간을 구성하는 모든 세포들에 "보통" 영향을 주는 생물학적 과정이다. 이는 피부 세포들, 털(hair), 장기, 기타 등등이든, 인간 신체에 대한 종합적인 노화에 대한 신체적 용어들로 전달된다.

노화는 텔로미어 단축(복제노화) 또는 예컨대 산화스트레스(oxidative stress)와 같은 생리학적인 스트레스 신호들에 대한 극심한 또는 만성 노출에 의해 특히 야기된다고 과학적으로 입증되고 있다. 세포 노화 및 인간 노화를 제한하기 위하여 탐구된 방법들 중 하나는 텔로미어 단축을 방지하는 것 및/또는 DNA 상에 산화 스트레스의 활동을 제한하는 것으로 구성된다.

텔로미어들은 TTAGGG 시퀀스의 반복들 및 특이적 단백질들로 형성된다. 이러한 텔로미어들은 염색체의 말단에 위치하고, 그것의 안정성을 제공한다. 텔로미어들과 결합되는 단백질들 중에, TRF1 및 TRF2 단백질들 (텔로미어-결합 인자용 TRF)은 이중-사슬 텔로머릭 DNA에 직접적으로 결합하거나, 단일-사슬 3' 말단에 결합하는 POT1 단백질에 결합하는 것으로 발견된다. 세포 분열 중에, TTAGGG 유닛들은 복제 동안의 과정에서 손실된다. 이러한 텔로미어들의 손실은 역전사 효소, 기존 텔로미어들의 말단 상에 텔로머릭 반복인 데노보 합성(de novo synthesis)을 수행하여, 따라서 최적의 길이를 보상하는 텔로머라제에 의해 부분적으로 보상된다.

이때 발생되는 문제는 이러한 텔로머라제의 활성도가 체세포(somatic cells) 내에서는 매우 약해서, 각 염색체 복제에서 텔로머릭 단축을 일으킨다는 점이다.

피부 노화 및 그것의 증상들을 제한하기 위해 현재 사용되는 전략들 중 하나는 피부 세포들의 텔로머라제 활성도를 증가시키는 것으로 구성된다. 그러나, 이는 상기 세포들의 불멸화의 위험을 수반하고, 이는 불멸화 세포들이 암 세포들과 연결될 수 있어 바람직하지 않다.

본 출원인은 텔로미어들과 관련된 단백질들, 보다 구체적으로 TRF2 단백질의 양을 조절함으로써, 세포 노화를 지연시키도록 하는 또 다른 경로를 연구해 왔다. 이런 방식으로, 본 출원인은 피부 세포들 내에 텔로미어들과 관련된 단백질들의 양을 증가시키기에 적합한 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 개발하였다.

나아가, 화합물들을 조절하는 TRF 단백질 또는 텔로미어 안정제들은 특허출원 US20020076719, WO9836066, 또는 WO2004092395에서 개시된 바와 같이 이미 제안되어 왔다.

뿐만 아니라, 대두 또는 효모 추출물들의 미용적 용도(cosmetic use)는 상기 피부 상에 노화방지 작용을 갖는 것으로 서술되어 있고(특허 출원 FR2915378, FR2915384, FR2915381, FR2887775, FR2887772, FR2826576) 수용성 대두, 맥아(malt) 및 효모 추출물을 포함하는 화장료 조성물이 피부 탄력도를 증가시키기 위한 것으로 또한 서술되어 있다 (KR2003045437).

그러나, 상기 인용된 문헌들 중 어느 것도 본 발명에서 개시된 바와 같이, 정의된 농도의 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템 또는 피부 세포들의 DNA 손상 및 노화와 관련된 피부 증상들을 방지 및/또는 치료하기 위한 그러한 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물의 용도를 개시하거나 암시하지 않는다.

본 발명은 첫째로, 생리학적으로 수용가능한 매체 내에서, 원재료의 총 무게의 적어도 80% 무게인 대두 및 원료 총 무게의 최대 20% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻은 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물과 관련된다.

본 발명은 두번째로, 텔로머라제의 양 및/또는 활성도를 조절하지 않고 텔로미어들의 저하를 제한하기 위해 세포들 내에 TRF2의 양을 증가시킴으로써 노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한, 본 발명에 따른 조성물의 미용적 용도와 관련된다.

마지막으로, 본 발명은 세번째로, 얼굴 또는 몸의 피부의 적어도 일 부분 상에 본 발명에 따른 조성물을 국소 적용하는 것을 포함하는 노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하는 미용 치료 방법들에 관련된다.

상기 과제를 이루기 위하여 본 발명의 일 측면은 화장료 조성물을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 생리학적으로 수용가능한 매체 내에서, 원재료들의 총 무게(weight)의 적어도 80% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 최대 20% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻은 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 원재료들의 총 무게의 90% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 10% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 대두(Glycine Max L.) 및 사카로마이세스 속(Saccaromyces genus)의 효모들의 바이오매스를 가수분해함으로써 얻는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 대두 및 효모들을 가수분해함으로써 부수적으로 얻는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 오직 분자량이 5 kDa 미만인 펩티드성 화합물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 0.5 및 5.5 g/L 사이의 펩티드성 화합물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 크림, 수중유(oil-in-water) 에멀젼, 또는 유중수(water-in-oil) 또는 다중 에멀젼, 용액, 서스펜션, 마이크로에멀젼, 수용성 또는 무수 젤, 세럼, 또는 소포성 분산제, 패치, 스프레이, 고약(unguent), 연고(ointment), 로션, 콜로이드, 밀크, 스틱 또는 분말로부터 선택된 국소 적용에 적합한 형태로 존재하는 것을 특징으로 한다.

상기 과제를 이루기 위하여 본 발명의 다른 측면은 상술한 조성물의 미용적 용도를 제공한다. 상기 상술한 조성물의 미용적 용도는 텔로머라제의 양 및/또는 활성도의 조절 없이 피부 세포들 내에 TRF2의 양을 증가시킴으로써 노화와 관련된 상기 피부 세포들의 DNA에 대한 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 것이다.

또한, 상기 피부 세포들의 DAN 상의 이중-사슬 절단을 방지 및/또는 복원하기 위한 것이다.

또한, 노화의 피부 증상을 방지 및/또는 치료하기 위한 것이다.

또한, UV 조사에 의해 유도된 광-노화의 피부 증상들을 방지 및/또는 치료하기 위한 것이다.

또한, 주름, 깊은 주름, 라인들, 크랙들, 피부 및 피하 조직의 늘어짐, 피부 탄력 및 이완의 손실, 단단함 및 톤의 손실, 및 피부 위축을 방지 및/또는 치료하기 위한 것이다.

상기 과제를 이루기 위하여 본 발명의 또 다른 측면은 노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 미용적 치료 방법을 제공한다. 상기 미용적 치료 방법은 얼굴 또는 신체의 피부의 적어도 일 부분 상에 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 국소 적용하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 노화 방지의 주간 케어로서 아침에 및/또는 복원용 야간 케어로서, 취침시간에 적용될 수 있다.

상기 과제를 이루기 위하여 본 발명의 또 다른 측면은 노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 미용적 치료 방법을 제공한다. 상기 미용적 치료 방법은 얼굴 또는 신체의 피부의 적어도 일 부분 상에 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 국소 적용하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 프리-선 케어(pre-sun care)로서, 햇빛 노출 전 및/또는, 애프터-선 케어(after-sun care)로서, 햇빛 노출 후에 적용될 수 있다.

본 발명에 따라 사용된 TRF2 단백질 활성화 시스템은 특히 후술하는 장점들을 제공한다:

- 그것은 피부 세포들 내에서 텔로미어들과 관련된 단백질들(TRFs) 및 특히 TRF2 단백질의 양을 증가시킨다;

- 그것은 노화된 세포 표현형(aged cell phenotype)을 갖는 세포들 내에 비멘틴 세포골격 단밸질(vimentin cytoskeleton protein)의 증가 및 응집을 제한한다;

- 그것은 메틸글리옥살(methylglyoxal)로 처리하는 피부 생체검사(biopsies)에 대한 손상의 출현을 제한한다;

- 그것은 텔로머라제의 양 및/또는 활성도를 조절하지 않고 텔로미어들의 저하를 제한한다; 및

- 그것은 피부 세포들의 DNA에 대한 손실 및 노화와 관련된 피부 증상들을 방지 및/또는 치료한다.

본 발명 및 그로부터 유래된 장점들은 이하 상세한 설명 및 비제한적인 실시예들을 읽으면서 보다 분명하게 이해될 것이다.

도 1은 실험예 1에 따른 펩티드성 추출물로 처리되고 UVB 조사된 섬유아세포의 중간말단 모멘트를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 이와 같이 생리학적으로 수용가능한 매체 내에서, 다양하게 선택된 원재료들, 즉 대두 및 효모들을 가수분해함으로써 얻는 펩티드성 추출물의 혼합물로 구성되는 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 화장료 조성물에 관련된다.

본 발명에 따른 펩티드성 대두 추출물은 우선적으로 대두(Glycine Max L.)의 가수분해로부터 얻고, 나아가, 본 발명에 따른 펩티드성 효모 추출물은 우선적으로 사카로마이세스 속(Saccaromyces genus), 특히 종인 사카로마이세스 세레비시아(species Saccharomyces cerevisiae)의 효모의 바이오매스(biomass)의 가수분해로부터 얻는다.

바람직하게, 이러한 대두들은 사전 발효의 대상이 되지 않고, 이러한 효모들은 냉동-건조된다.

본 발명에 따른 TRF2 단백질 활성화 시스템을 얻기 위하여, 펩티드성 대두 및 효모 가수분해물들은 따로따로 얻어지고, 그 다음에 혼합되어 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물을 형성한다.

바람직하게, 대두 및 효모의 가수분해는 예를 들어, 실시예 1에서의 방법에 따라, 부수적으로 일어난다.

상기 사용된 방법에 상관없이, 본 발명에 따른 TRF2 단백질 활성화 시스템의 특성들은 이러한 펩티드성 대두 및 효모 추출물을 원재료들의 총 무게의 적어도 80% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 최대 20%인 효모를 가수분해함으로써 얻는 한에 있어서는 보존된다.

한 예로서, 이러한 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템은 원재료들의 총 무게의 85 내지 92%인 대두 및 원재료들의 총 무게의 8 내지 15%인 효모들을 가수분해함으로써 얻는 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 구성된다. 바람직하게(Preferentially), 이러한 본 발명에 따른 TRF2 단백질 활성화 시스템은 원재료의 총 무게의 90% 무게인 대두 및 원재료의 총 무게의 10% 무게인 효모를 가수분해함으로써 형성된다.

본 발명에 따른 TRF2 단백질 활성화 시스템을 형성하는 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 이의 물리화학적 특징들과 이의 펩티드성 화합물들로서 정성 및 정량적으로 분석된다; 펩타이드(peptides), 아미노산(amino acids) 및 단백질 단편(protein fragments)은 당해 분야의 기술자에게 잘 알려진, 종래 기술들에 따라 분석된다.

본 발명에 따른 선호되는 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 필수적으로 낮은 분자량의 펩티드성 화합물들, 즉 유리하게 오직 낮은 분자량의 펩타이드를 함유하는 펩티드성 화합물들을 포함한다. 바람직하게, 그것은 5 kDa 미만의 분자량을 갖는 펩티드성 화합물들을 필수적으로 포함한다. 즉 유리하게 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 오직 분자량이 5 kDa 미만인 펩티드성 화합물들을 포함한다.

또한, 본 발명의 일 유리한 실시예에 따르면, 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 건조 추출물의 무게에 대한 16 및 18 g/L 사이의 펩티드성 화합물들을 포함하고, 바람직하게 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 건조 추출물의 무게에 대한 0.5 및 5.5 g/L 사이의 펩티드성 화합물들을 함유하기 위해 희석된다.

TRF2 단백질 활성화 시스템 및 생리학적으로 수용가능한 매체를 포함하는 본 발명에 따른 화장료 조성물은 얼굴 또는 몸의 피부의 적어도 일 부분 상에 국소 적용하기에 적합한 형태로 존재한다.

본 발명에 따른 생리학적으로 수용가능한 매체는 특히, 예컨대 유독성(toxicity), 불화합성(incompatibility), 불안정성(instability), 또는 알레르기반응(allergic response)의 위험 없이, 사람 피부 또는 피부 부속기(skin appendages)와 접촉하여 사용되는데 적합한 매체를 의미한다.

본 발명의 일 유리한 실시예에 따르면, TRF2 단백질 활성화 시스템을 형성하는 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 물(water), 글리세롤(glycerol), 에탄올(ethanol), 프로필렌글리콜(propylene glycol), 부틸렌글리콜(butylene glycol), 디프로필렌글리콜(dipropylene glycol), 디글리콜 에톡실레이트 또는 프로폭실레이트(diglycol ethoxylates or propoxylates), 고리형 폴리올(cyclic polyol), 바셀린(petroleum jelly), 식물성 오일(vegetable oil) 또는 이러한 용매들의 혼합과 같이, 당해분야의 기술자에 의해 종래 사용되는 하나 또는 복수의 생리학적으로 수용가능한 용매들 내에서 미리 용해도를 높인다.

본 발명의 더 유리한 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 리포솜(liposomes)과 같은 화장료 전달자(carrier) 내에서 용해도를 높이거나, 또는 유기 고분자 파우더, 활석(talcs) 및 벤토나이트(bentonites)와 같은 광물 기재들 상에 흡착된다, 그리고 보다 일반적으로 어느 생리학적으로 적합한 전달자에서 용해도를 높이거나, 묶인다.

바람직하게, 국소적으로 적용하도록 의도된 본 발명에 따른 조성물은 크림(cream), 수중유(oil-in-water emulsion), 또는 유중수(water-in-oil) 또는 다중(multiple) 에멀젼(emulsion), 용액(solution), 서스펜션(suspension), 마이크로에멀젼(microemulsion), 수용성(aqueous) 또는 무수(anhydrous) 젤(gel), 세럼(serum), 또는 소포성 분산제(vesicular dispersion), 패치(patch), 스프레이(spray), 고약(unguent), 연고(ointment), 로션(lotion), 콜로이드(colloid), 밀크(milk), 스틱(stick) 또는 분말(powder)의 형태로 존재한다.

본 발명의 일 유리한 실시예에 따르면, 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 최종 조성물의 총 무게와 비교하여 0.0001% 및 20% 사이의 농도로, 바람직하게 약 0.05% 및 5% 사이의 농도로, 보다 바람직하게 약 1% 및 3% 사이의 농도로 본 발명에 따른 화장료 조성물 내에 존재한다.

보다 바람직하게, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 적어도 하나의 추가 활성제를 더 함유한다. 이러한 포함물들은 그러나 후술하는 성분 류들(ingredient classes)에 제한되지는 않는다: 추가 펩티드성 활성제들(further peptidic active agents), 식물추출물(plant extracts), 힐링(healing), 노화방지(anti-ageing), 주름개선(anti-wrinkle), 진정(soothing), 항라디칼(anti-radical), 자외선방지제(anti-UV agents), 진피 고분자 합성(dermal macromolecule synthesis) 또는 에너지 대사에 활기를 주는 물질, 보습(moisturizing), 항박테리아(antibacterial), 항균(antifungal), 항염증(anti-inflammatory), 마취제(anesthetic agents), 피부의 분화(differentiation), 색소형성(pigmentation) 또는 탈색(depigmentation)을 조절하는 물질들(agents), 손톱 또는 모발 성장에 활기를 주는 물질들(agents) 등. 바람직하게, 예를 들어, 항라디칼 또는 항산화제, 또는 진피 고분자 합성에 활기를 주는 물질, 또는 에너지 대사에 활기를 주는 물질과 같이 주름방지 분야에서 활성도를 갖는 물질이 사용될 것이다. 보다 바람직하게, 상기 활성제(active agent)는 비타민(vitamins), 피토스테롤(phytosterols), 플라보노이드(flavonoids), DHEA 및/또는 그것의 전구체들 중 어느 것 또는 그것의 화학적 또는 생물학적인 유도체들 중 어느 것, 단백질분해효소 억제제(metalloproteinase inhibitor), 또는 레티노이드(retinoid)로부터 선택된다.

나아가, 예컨대, 용액(solvents), 희석액(diluents), 착색제(colorants), 태양필터(sun filters), 셀프태닝제(self-tanning agents), 안료(pigments), 충전제(fillers), 방부제(preservatives), 냄새흡수제(odor absorbers), 증점제(thickeners), 유화제(emulsifiers), 보습제(humectants), 피부연화제(emollients), 향료(fragrances), 항산화제(antioxidants), 필름형성제(film-forming agents), 킬레이트제(chelating agents), 봉쇄제(sequestering agents), 컨디셔너(conditioners)와 같은 첨가제들이 본 발명에 따른 조성물에 추가될 수 있다.

어떤 경우에도, 당해 분야의 기술자는 이러한 첨가제들 및 그것의 비율들이 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효소 추출물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 조성물의 추구하는 유리한 특징들을 방해하지 않도록 선택되는 것을 보장할 것이다. 이들 첨가제들은 예컨대, 조성물의 총 무게의 0.01% 및 20% 사이일 수 있다. 만일, 본 발명에 따른 조성물이 에멀젼인 경우, 오일상(oil phase)이 조성물의 총 무게와의 관계에서 5% 내지 80% 무게로 대표할 수 있고 바람직하게 5% 내지 50% 무게로 대표할 수 있다. 이러한 조성물에서 사용된 유화제들 및 공통유화제들은 논의가 되고 있는 분야에서 종래 사용된 것들로부터 선택될 것이다. 예를 들어, 그들은 그 조성물의 총 무게와 비교하여 0.3% 내지 30%의 범위에 이르는 비율로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물, 및 보다 특히 원재료들의 총 무게의 적어도 80% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 최대 20% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻는 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성되는 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템은 피부 세포들 내에서, (유전자 발현(gene expression)의 직접 또는 간접적인 조절에 의해) 그것의 단백질 합성을 증가시키는 것에 의하거나, 전령RNA 전사 안정화와 같은 추가적인 생물학정 과정들에 의해, 텔로미어들과 결합된 TRF 단백질들(TRF2 및/또는 POT1), 바람직하게 TRF2의 양을 증가시킨다.

원재료들의 총 무게의 적어도 80% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 최대 20% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻어지는 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 인해 상승적 활동을 가지는 TRF2 단백질 활성화 시스템은, 원재료들의 총 무게의 무게로서 동일한 총 양인 100% 무게인 펩티드성 대두 추출물과 비교하여, 배양에서 피부각질세포(keratinocytes) 및 섬유아세포(fibroblasts) 내의 TRF2 형(expression)의 증가에 대하여 약 20%까지 활성화 시스템의 효율을 증가시키는 것을 가능하게 한다.

이렇게 하여, 본 발명의 또 다른 목적은 세포 불멸화의 위험이 없을 것과 같이 중요한, 텔로머라제의 양 및/또는 활성도를 조절하지 않고 텔로미어 저하(telomeres degradation)를 제한하기 위해 세포들 내에 TRF2의 양을 증가시킴으로써 노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 본 발명에 따른 조성물의 미용적 용도와 관련된다.

인간의 DNA 세포 손상은 매일 복원되나, 완전히는 아니다. 따라서, 복원되지 않은 손상은 수년간 축척된다. 따라서, 이러한 손상을 방지 및 복원하는 것이 필수적이다.

피부 세포들의 DNA 손상을 방지한다는 것은 DNA 손상의 출현을 제한하기 위해 피부 세포들 상에 본 발명에 따른 TRF2 단백질 활성화 시스템의 보호적인 역할을 의미한다.

피부 세포들의 DNA 손상을 복원한다는 것은 피부 세포들의 이전 손상에 대해 본 발명에 따른 TRF2 단백질 활성화 시스템의 복원적 역할을 의미한다.

본 발명에 따른 피부 세포들은 표피(epidermis) 및 진피(dermis), 그리고 특히 피부각질세포 및 섬유아세포의 세포들을 의미한다.

본 발명에 따른 피부 세포들의 DNA 손상은 예들 들어, 사이클로부탄의 피리미딘 다이머들(pyrimidine dimers)의 형성, DNA 상의 이중-사슬 절단(double-strand breaks) 또는 환경에 의해 발생되기 쉬운 외부 공격(external attacks)에 뒤따르는 DNA의 다른 손상과 같이, DNA 베이스들 사이에서의 광화학 반응들에 의해 야기되는 손상을 의미한다.

예를 들면, 이는 오염(pollution), 산화 스트레스로 야기된 공격, UV 조사, 특히 예컨대 태양에 대한 과다노출과 관련된 UVB, 또는 계면활성제, 방부제 또는 향료와 같은 자극성 물질과 같은 공격들을 포함한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 바람직하게 손상 이후의 피부 세포들의 DNA 상의 이중-사슬 절단의 발생을 방지 및/또는 복원하기 위하여 사용된다. 확실히, 피부 세포들의 손상 이후에, 특히 UV 조사 또는 산화스트레스에 의한 손상 이후에, 상기 피부 세포들의 DNA는 이중-사술 절단에 의해 전달되는 손상의 대상이 되기 쉽다. 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물에 의해 형성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템은 이러한 타입의 손상에 대하여 그것의 DNA 보호 활동으로 설명된다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 또한 노화의 피부 증상들 및 UV 조사에 의해 유도된 광-노화(photo-ageing)의 피부 증상들을 방지 및/또는 치료하기 위해 사용된다.

본 발명에 따른 광-노화는 태양에 장기적이고 누적된 노출에 의해 야기되는 조기 피부 노화를 의미한다.

본 발명에 따른 노화 및 광-노화의 피부 증상들은 노화에 의해 야기되는 피부 상의 어떠한 가시적인 징후들을 포함하는데, 다만, 이에 한정되지는 않는다. 이는 특히 주름(wrinkles), 깊은 주름(deep wrinkles), 라인들(lines), 크랙들(cracks), 피부 및 피하 조직의 늘어짐(slackening of the cutaneous and subcutaneous tissue), 피부 탄력 및 이완의 손실(loss of skin elasticity and atony), 단단함 및 톤의 손실(loss of firmness and tone), 및 피부 위축(dermal atrophy)을 나타낸다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 바람직하게 주름, 깊은 주름, 라인들, 크랙들, 피부 및 피하 조직의 늘어짐, 피부 탄력 및 이완의 손실, 단단함 및 톤의 손실, 및 피부 위축을 방지 및/또는 치료하기 위한 목적이다.

마지막으로, 본 발명의 마지막 목적은 얼굴 또는 신체의 피부의 적어도 일 부분 상에 본 발명에 따른 조성물의 국소 적용하는 것을 포함하는 노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 미용적 치료방법에 관련되고, 상기 조성물은 노화 방지의 주간 케어로서 아침에 및/또는 복원용 야간 케어로서, 취침시간에 적용된다. 주간 케어로 적용할 때, 상기 조성물은 특히 피부 세포들의 DNA 손상의 출현을 제한함으로써, 일명 UV 조사, 특히 UVB인 환경 공격(environmental attacks)에 대응하여 상기 피부를 보호한다. 야간 케어로서, 상기 조성물은 보다 특히 주간 동안의 피부의 어떤 손상에 대한 회복적인 역할을 갖는다.

본 발명에 따른 미용 치료 방법의 또 다른 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 프리-선 케어(pre-sun care)로서, 햇빛 노출 전 및/또는 애프터-선 케어(after-sun care)로서, 햇빛 노출 후에 적용되고, 따라서 특히 피부 세포들의 DNA 손상을 방지하는 뛰어난 프리-선 케어를 구성한다, 그리고/또는 태양 노출 후에, 특히 피부의 DNA에 대한 어떤 손상을 복원하기 위한 애프터-선 케어로 구성한다.

다음 실험예들은 본 발명에 따른 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템의 효과를 서술하고 입증하나 본 발명을 한정하는 것으로 이해되어서는 안된다.

실험예 1: 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물을 얻는 방법:

본 발명에 따른 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 얻기 위하여, 미리 갈은 대두들(ground soybeans)의 원재료들의 총 무게의 90% 무게에 효모 바이오매스의 원재료들의 총 무게의 10% 무게를 혼합한다. 상기 원재료 혼합물은 1:60의 무게 비율로, 즉 60 kg의 물 안에 1 kg의 원재료 물질로, 물 안에 용해하여 배치한다. 상기 용액의 pH는 7 및 7.5 사이의 값으로 조절한다. 상기 pH를 조절한 후에, 2%의 브로멜린(bromelain) 및 2%의 POLYCLAR® 10(불용성 폴리비닐피롤리돈 - PVPP)을 상기 반응 혼합물에 첨가한다. 상기 반응 혼합물은 그 다음에 55 ℃에서 2시간 동안 가열되고, 80 ℃에서 2시간 동안 비활성화된다. 여과 단계는 20 내지 25 g/L의 건조물(dry matter), 19 내지 22 g/L의 단백질들 및 2 내지 3 g/L의 설탕으로 구성된 여과액을 회수하기 위해 사용된다.

이러한 여과액의 단백질적 성질(protein nature)은 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(polyacrylamide gel electrophoresis)에 의해 입증되었다. 이러한 분석에서, NuPAGE® Bis-Tris Pre-cast (Invitrogen) gels이 사용되었다. 중간생성물(intermediate) 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 NuPAGE® LDS 샘플 조제용물질 버퍼 내에 변성 환원 조건 하에서 10분 동안 70 ℃에서 가열된다. NuPAGE® 산화방지제 용액은 전기영동 동안에 환원된 단백질들이 재산화되는 것을 방지하기 위해 내부 용기(inner vessel) 내에 첨가된다. 펩티드성 화합물들의 이송은 분자량 마커로서 씨블루 플러스2 표준(SeeBlue Plus2 standard)을 가지는 NuPAGE® MES 이송 버퍼에 의해 수행된다. 펩티드성 화합물들의 착색은 Coomassie Blue® R　250을 사용하여 수행된다. 얻게된 펩티드성 프로파일은 6　kDa 미만의 분자량의 분포를 보여준다.

상기 얻게된 중간 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 그 다음에 선명하고 깨끗한 용액을 얻기 위해 기공(porosity)을 (0.2 ㎛까지) 감소시키는 Seitz-Orion 필터 프레스를 사용하여 연속적인 여과에 의해 정제된다. 이 단계에서, 상기 대두 및 효모 추출물은 20-22　g/kg의 건조 무게, 18-20　g/L의 펩티드성 화합물 함량 및 1-2　g/L의 설탕 함량에 의해 특징지어진다.

그 다음에, 이러한 용액은 접선유동여과(tangential flow filtration)를 사용하여 5 kDa 보다 큰 분자량을 가지는 펩티드성 화합물을 제거함으로써 정제된다. 이를 위해, 상기 대두 및 효모 용액은 10 kDa Biomax Pellicon® 2개의 카세트(cassettes)를 갖춘 Pellicon® 홀더를 경유하여 압력 하에서 주입(pumped)된다. 이러한 첫번째 여과액은 추가 5 kDa Biomax Pellicon® 2 cassette를 경유하여 다음 여과를 위해 회수된다.

정제 마지막에, 선명하고 깨끗한 라이트 옐로우 펩티드성 대두 및 효모 플랜트 추출물을 얻는다. 그것은 18-20　g/kg의 건조 무게, 16-18　g/L의 펩티드성 화합물 함량 및 0.3 및 0.5　g/L 사이의 설탕 함량에 의해 특징지어진다.

멸균 여과 단계는 그 다음에 30%의 글리세롤 내에 2.35　g/L의 펩티드성 화합물들에 희석하는 것으로, 본 발명에 따른 최종적인 펩티드성 대두 및 효모 추출물을 얻기 위해 수행된다.

실험예 2: 복제노화(replicative senescence)에 의해 노화된 섬유아세포 상에 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 영향 연구

인간 섬유아세포들은 1% 또는 3%의 농도로 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물을 일일 적용하여, 특정 매체 내에 배양 내에 배치되고, 장기 배양(17 관 이상) 내에서 유지된다. 비멘틴 면역형광법 검출 실험이 6번 및 17번 배양 관들(culture passages)에 있는 상기 세포들 상에서 수행되었다. 상기 세포들은 그 다음에 PBS로 세척되고, 10분 동안 3.7% 포름알데히드로 고정하고, 10분 동안 0.2% Triton X-100(Fisher Chemical)을 사용하여 투과되고(permeabilized), 15분동안 1% BSA(Euromedex)로 배양된다. 항-비멘틴 항체(Tebu Santa Cruz)는 그 뒤에 첨가되고 주위 온도(ambient temperature)에서 2시간 동안 1:200 희석에서 배양된다. PBS로 세척한 후에, Alexa Fluor® 488 marker와 결합하는, 덩키 항-마우스 면역글로불린G(Donkey anti-mouse IgG) 항체가 1:1000 희석으로 첨가되고 주위 온도에서 한 시간 동안 배양하여 남게 된다. 최종적으로, 상기 부분들(sections)은 플로로마운트 G(Fluoromount　G) (Electron Microscopy Science)로 고정되고 현미경(Nikon Eclipse 80i, 배율 40x)을 사용하여 검사하였다.

결과들/결론들:

실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 처리된 노화된 섬유아세포들은 처리되지 않은 노화된 섬유아세포들보다 적은 비멘틴을 나타내는 것으로 관찰되었다. 그러나, 비멘틴 내의 증가 및 비멘틴의 응집(aggregation)은 상기 노화 현상에 수반하는 세포골격 변형(cytoskeleton modification)과 관련된다. 그것은 따라서 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로의 치료가 섬유아세포 노화에 의한 비멘틴 내의 증가 및 비멘틴의 응집을 제한하는 것을 가능하게 하는 것으로 결론내릴 수 있다.

실험예 3: 메틸글리옥살을 사용한 생체 외에서 만들어진 노화 생체 검사 모델에서 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 효과의 연구

인간 피부 생체검사는 메틸글리옥살(MGO)을 사용한 처리 수단에 의해, 생체 외(in vitro)에서 인위적으로 노화를 만들게 된다. 이를 위해, 6 mm 펀치의 인간 피부 생체검사는 특정 배양 매체 내의 공기-액체 계면에서 배양된다. 그것들은 그 다음에 상기 생체검사의 표면 상에 및 상기 배양 매체 내에 놓인 5 mM 또는 10 mM의 MGO(Sigma)로 처리된다. 상기 생체검사는 그 뒤에 하기 어느 하나로 처리된다:

- 조건 1: 20 ㎕의 1X PBS, 또는

- 조건 2: 1%로 실험예 1에 따른 20 ㎕의 펩티드성 대두 및 효모 추출물, 또는

- 조건 3: 3%로 실험예 1에 따른 20 ㎕의 펩티드성 대두 및 효모 추출물.

생체검사는 파라핀 내에 고정되고 포함된다, 그리고 그 다음에 마이크로톰(microtome)을 사용하여 4 ㎛의 부분들(sections)로 자른다. 헤마톡실린-에오진(H&E) 면역표지는 미리 자른 부분들 상에 수행되고 이들의 모폴로지 및 구조는 현미경(40x 렌즈의, Nikon Eclipse E600 microscope를 사용하여)을 가지고 관찰함으로써 연구된다.

결과들/결론들:

통제집단(control) 조건 1 하에, 즉 본 발명에 따른 펩티드성 추출물을 첨가하지 않은 조건 하에, MGO가 피부 생체검사, 보다 특히 이들의 구조 상에 대한 커다란 손상을 야기하는 것이 관찰되었다. 더 많은 손상이 10 mM의 양의 MGO에서 관찰되기 때문에 상기 야기된 손상은 투여량-의존적(dose-dependent)이다.

상기 생체검사들이 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 처리될 때, 상기 생체검사들의 구조들에 대한 손상이 상기 통제집단 조건들 하에서보다 훨씬 덜 크다는 것이 관찰되었다. 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 보호 효과는 1% 투여일때보다 3% 투여일때 심지어 적은 손상이 관찰되었기 때문에 투여량-의존적인 것이 관찰되었다.

따라서 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 상기 구조들이 커다란 손상 및 조기 노화를 생기게 하는 스트레스의 대상이 될 때 상기 세포 구조들 상을 보호하는 효과를 갖는 것으로 결론지을 수 있다.

실험예 4: 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 처리된 인간 섬유아세포 내의 siRNA에 의한 TRF2 단백질의 표현형의 연구

본 발명에 따른 펩티드성 추출물의 효능을 정량화하기 위하여, 인간 섬유아세포 인구 내의 TRF2 과발현 상에, TRF2에 대한 유전자 코딩(gene coding)은 siRNA(silencer RNA)을 사용하여 소멸되었다.

프로토콜:

섬유아세포 세포들은 60% confluence될 때까지 6-웰 플레이트 내에 배양에서 배치된다. 상기 배양 매체는 아래 서술된 조건들 하인 1%로 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 첨가로 새로워진다. 그 다음에, 10 nM 의 최종 함량 및 TRF2 siRNA를 함유하는 혼합물 및 형질감염제(transfection agent)를 함유하는 100　?의 미리 제조된 혼합물이 웰마다, 한 방울씩 조심스럽게 첨가된다. 상기 세포 배양 플레이트는 37 ℃에서 72 시간 동안 CO₂ 내에서 5%로 배양된다. 상기 배지(culture medium)는 2일마다 새로워졌다. 4개의 조건들이 설정되었다:

- 조건 1: siRNA 및 활성제 없는 통제집단(control)

- 조건 2: 활성제 없이, siRNA로 형질감염된 세포들

- 조건 3: 형질감염되지 않았으나 활성제에 처리된 세포들

- 조건 4: siRNA로 형질감염되고 활성제로 처리된 세포들

상기 TRF2 표현형 정량은 항-TRF2 항체를 사용하여 수행되고 종래의 프로토콜에 따른 종래의 면역복제(immunotransfer) 기술(Western Blot)을 사용하여 관찰된다. siRNA로 형질감염된 섬유아세포들 내에서 펩티드에 의해 제공된 보상을 분석하기 위하여, 상기 비교는 상기 유전자가 siRNA에 의해 소멸되지 않은 처리되지 않은 섬유아세포와 비교하여 수행될 것이다.

결과들/결론들:

조건들 1 및 3 사이에, 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 첨가는 상기 통제집단(control)과 비교하여 17%의 TRF2 단백질 표현형의 증가가 일어남이 관찰되었다. 조건들 1 및 2 사이에, TRF2 단백질 상의 siRNA의 효과가 효과적으로 관찰되었다: 게다가, 이러한 표현형은 26% 아래이다. 그러나, siRNA로 형질감염된 세포들에 상기 활성제를 추가하는 것은 TRF2 표현형을 회복시키고, siRNA의 존재에 의한 감소는 상기 통제집단(coltrol) 조건과 비교하여 오직 18%이다.

결론적으로, 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 상기 처리된 섬유아세포 내에서 TRF2 단백질 표현형에 대한 감소(특정 siRNA에 의해 유도된 감소)를 보상하는 것을 가능하게 한다.

실험예 5: 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 처리된 인간 각질세포(keratinocytes) 내에 SiRNA를 사용한 TRF2 단백질의 표현형의 연구

본 발명에 따른 펩티드성 추출물의 효능을 정량화하기 위하여, 각질세포 인구 내에서 TRF2 표현형 레벨의 조절에서, TRF2에 대한 유전자 코딩은 siRNA를 사용하여 소멸되었다.

프로토콜:

배양 내에서 인간 각질세포는 Lipofectamine™ RNAiMAX 형질감염 기술(Invitrogen, Ref: 13778-075)을 사용한 25 nM의 최종 농도로 특정 TRF2 siRNA(custom siRNA, Qiagen)로 임의로 처리되고, 48시간동안, 1%의 최종 농도로 상기 성분(ingredient)에 임의로 처리된다.

4개의 조건들이 설정되었다:

- 조건 1: siRNA 및 활성제 없는 통제집단(control)

- 조건 2: 활성제 없이, siRNA로 형질감염된 세포들

- 조건 3: 형질감염되지 않았으나 활성제에 처리된 세포들

- 조건 4: siRNA로 형질감염되고 활성제로 처리된 세포들

상기 세포들은 그 다음에 세척되고, 주위 온도에서 10분 동안 3.7% 포름알데히드로 고정한다. 상기 세포핵들(nuclei)의 투과화(Permeabilization)는 주위 온도에서 10분 동안 0.2% 트리톤 X-100을 가진 인큐베이션(incubation)을 사용하여 수행되었다. 비특정된 지역들은 30분 동안 적용된 1% BSA를 가지고 차단하였다. 상기 세포들은 TRF2(Abcam, ref: ab13579)에 대한 특정 단일클론 마우스 항체의 존재 하에서 배양되었고, 그 다음에 형광색소(fluorochrome) (Invitrogen, ref: A21202)가 결합된 제2 항-마우스 항체의 존재 하에서 배양되었다. 상기 세포들은 그 다음에 형광 현미경(Epifluorescence microscope)(Nikon Eclipse E600 microscope)을 가지고 검사하였다.

조건에 따른 세개의 이미지들이 이미지-프로 분석기 6.3 소프트웨어(MediaCybernetics, Inc.)를 사용하여 분석 및 정량화되었다. 통계적 분석들이 그 다음에 스튜던트 테스트(Student's t test)를 사용하여 이러한 데이터 상에 행해졌다.

결과들/결론들:

조건들 1 및 3 사이에, 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 첨가가 상기 통제집단(control)과 비교하여 34%의 TRF2 단백질 표현형의 증가가 일어남이 관찰되었다. 조건들 1 및 2 사이에, TRF2 단백질 표현형 상의 TRF2 siRNA의 효과가 효과적으로 관찰되었다: 게다가, 이러한 표현형이 32.5% 아래이다. 그러나, siRNA로 형질감염된 세포들에 상기 활성제를 추가하는 것은 TRF2 표현형을 회복시키고, 상기 형질감염된 처리되지 않은 세포들과 비교하여 75.5%의 증가가 관찰되었다.

결론적으로, 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 상기 처리된 각질세포 내에서 TRF2 단백질 표현형에 대한 감소(특정 siRNA에 의해 유도된 감소)를 보상하는 것을 가능하게 한다.

실험예 6: 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 처리되고 노화의 인공 유도(artificial induction)에 의해 노화된 인간 섬유아세포 내에 TRF2 단백질의 표현형의 연구

본 발명에 따른 펩티드성 추출물의 효능을 정량화하기 위하여, TRF2 표현형 레벨을 조절하여, 섬유아세포 인구의 노화의 인공 유도가 48시간 동안 FOXO3a 유전자에 대한 특정 siRNA를 상기 세포들에 처리함으로써 수행되었다.

프로토콜:

배양 내에 인간 섬유아세포는 Lipofectamine™ RNAiMAX 형질감염 기술(Invitrogen, Ref: 13778-075)을 사용하여 25 nM의 최종 농도로 특정 FOXO3a siRNA (HSS177176, Invitrogen)에 임의적으로 처리되었고 48시간 동안 1%의 최종 농도로 상기 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물에 임의적으로 처리되었다.

4개의 조건들이 설정되었다:

- 조건 1: siRNA 및 활성제 없는 통제집단(control)

- 조건 2: 활성제 없이, siRNA로 형질감염된 세포들

- 조건 3: 형질감염되지 않았으나 활성제에 처리된 세포들

- 조건 4: siRNA로 형질감염되고 활성제로 처리된 세포들

상기 세포들은 그 다음에 세척되고, 주위 온도에서 10분 동안 3.7% 포름알데히드로 고정되었다. 상기 세포핵들의 투과화는 주위 온도에서 10분 동안 0.2% 트리톤 X-100을 가진 인큐베이션(incubation)을 사용하여 수행되었다. 비특정된 지역들은 30분 동안 적용된 1% BSA를 가지고 차단하였다. 상기 세포들은 TRF2(Abcam, ref: ab13579)에 대한 특정 단일클론 마우스 항체의 존재 하에서 배양되었고, 그 다음에 형광색소(fluorochrome) (Invitrogen, ref: A21202)가 결합된 제2 항-마우스 항체의 존재 하에서 배양되었다. 상기 세포들은 그 다음에 형광 현미경(Epifluorescence microscope)(Nikon Eclipse E600 microscope)을 가지고 검사하였다.

조건에 따른 세개의 이미지들이 이미지-프로 분석기 6.3 소프트웨어(MediaCybernetics, Inc.)를 사용하여 분석 및 정량화되었다. 통계적 분석들이 그 다음에 스튜던트 테스트(Student's t test)를 사용하여 이러한 데이터 상에 행해졌다.

결과들/결론들:

조건들 1 및 3 사이에, 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 첨가가 상기 통제집단(control)과 비교하여 22%의 TRF2 단백질 표현형의 증가가 일어남이 관찰되었다. 조건들 1 및 2 사이에, TRF2 단백질 표현형 상의 FOXO3a-specific siRNA의 효과가 효과적으로 관찰되었다: 게다가, 이러한 표현형은 18.9% 아래이다. 그러나, siRNA로 형질감염된 세포들에 상기 활성제를 추가하는 것은 TRF2 표현형을 회복시키고(조건 4), 상기 형질감염된 처리되지 않은 세포들과 비교하여 26%의 증가가 관찰되었다(조건 2).

결론적으로, 본 발명에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 FOXO3a-specific siRNA에 의해 인공적으로 유도된 TRF2 단백질 표현형에 대한 감소를 보상하는 것을 가능하게 한다.

실험예 7: 실험예 1에 따른 펩티드성 대두 및 효모 추출물로 처리된 인간 섬유아세포의 DNA의 보호의 연구

유전자 손상 정량분석법(comet assay)이 세포 레벨(cellular level) 상에 DNA에 야기된 손상을 정량화하는데 적합한 테스트이다.

프로토콜:

인간 섬유아세포를 배양 내에 두고, 관 3(passage 3) 및 관 16(passage 16) 사이에, 1% 농도로, 실험예 1에 따른 펩티드성 추출물로 하루에 한번 처리했다. 그들을 그 다음에 50　mJ/cm²의 비율로 UVB 방사선이 조사되고, 그 다음에 30분 동안 상기 섬유아세포 매체 내에 배양 내로 되돌려 놓았다.

통제집단 배양(control culture)은 실험예 1에 따른 펩티드성 추출물에 처리되지 않고 준비되었다.

상기 세포들은 그 다음에 똑같이 농축하고 나열하기 위해, 트립신으로 처리함으로써 그것의 기재로부터 떨어뜨렸다.

정의된 수의 세포들(25,000 세포들)은 그 다음에 0.75% 로우 멜팅 아가로스 겔(Low Melting agarose gel) 내에 포함되고, 그 다음에 1% 아가로스로 미리 코팅된 글래스 슬라이드 상에 놓인다. 상기 슬라이드들은 그 다음에 4℃에서 1시간30분 동안 세포용해 용액(lysis solution) 내에 침지되고, 그 다음에 4℃에서 20분 동안 알카리성 용액(alkaline solution) 내에 침지된다. 상기 세포들은 따라서 세포 용해되고 DNA 변성된다. 상기 슬라이드들은 전기장(20 V - 250 mA)을 인가하기 전에 전기영동 용액 내에 담근다. 이러한 방법으로 변성된 DNA는 4℃에서 아가로스 겔 내에서 이동을 겪게 된다. 형광 DNA 염료(fluorescent DNA dye) (2　㎍/ml의 프로피디움 요오드화물(propidium iodide)) 를 적용하는 것은 DNA를 현미경으로 관찰하는 것을 가능하게 한다. 손상된 DNA, 즉 다양한 크기의 다중 조각들로 조각된 DNA는 확산된 방식(diffuse manner)으로 이동하고, "혜성(comets)"의 형태로 나타난다.

정량화 소프트웨어는 DNA 손상이 증가할수록 증가하는, 중간 말단 모멘트(mean Tail Moment)를 결정하기 위해 사용된다.

결과들:

상기 섬유아세포들이 실험예 1에 따른 펩티드성 추출물로 처리되고 UVB 조사의 대상이 될 때, 상기 말단 모멘트는 13.9이고 반면에 상기 조사되고 처리되지 않은 조건하에서는 49이다. 상기 계산된 말단 모멘트는 따라서 상기 조사된 통제집단 조건과 비교하면 (통계적으로 가장 커다란 감소인) 71.6%까지 감소하고, 즉 UVB 조사의 대상인 상기 세포들의 DNA는 도 1에 도시된 바와 같이, 상기 통제집단 조건 하에서보다 상당히 덜 손상을 받는다.

결론들:

1%로 실험예 1에 따른 펩티드성 추출물은 UVB 조사의 대상이 되는 일반 인간 섬유아세포들의 DNA를 매우 상당히 보호하였다.

실험예 8: 선 크림 조성물

상표명 (Trade names)	성분 (INCI names)	질량퍼센트(% by mass)
상 A(PHASE A)
	물(초순수)	q.s.
	글리세린(Glycerin)	3.00
Versene NA2	디소듐 이디티에이(Disodium EDTA)	0.10
	트리에탄올아민(Triethanolamine)	0.50
UltraThix®P100	아크릴산/VP 크로스폴리머(Acrylic acid/VP Crosspolymer)	0.70
상 B(PHASE B)
	다이메티콘(Dimethicone) (100cs)	0.50
Glucamate SSE20	PEG-20 메틸글루코즈 세스퀴스테아레이트(PEG-20 Methyl Glucose Sesquistearate)	2.50
Glucamate SS	메틸글루코즈 세스퀴스테아레이트(Methyl Glucose Sesquistearate)	0.50
Lanette® 16	세틸 알코올(Cetyl Alcohol)	1.50
Ceraphyl® SLK	이소데실 네오펜타노에이트(Isodecyl Neopentanoate)	3.00
Ceraphyl® 230	디이소프로필 아디페이트(Diisopropyl Adipate)	2.00
Escalol® 517	아보벤존(Avobenzone)	3.00
Escalol® 587	옥티살레이트(Octisalate)	5.00
Escalol® 597	옥토크릴렌(Octocrylene)	2.00
Escalol® S	비스에틸헥실록시페놀 메톡시페닐 트리아진(Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine)	3.00
상 C(PHASE C)
	사이클로펜타실록산(Cyclopentasiloxane)	5.00
Si-Tec™ RE-100	사이클로펜타실록산(Cyclopentasiloxane), 디메치콘/비닐트리메틸실록시실리케이드 크로스폴리머(Dimethicone/Vinyltrimethylsiloxysilicate Crosspolymer)	1.00
상 D(PHASE D)
	에탄올(Ethanol)	5.00
Optiphen™ ND	페녹시에탄올(Phenoxyethanol), 벤조산(Benzoic acid), 디하이드로아세트산(Dehydroacetic acid)	1.20
상 E(PHASE E)
	실험예 1에 따른 펩티드성 대두 / 효모 추출물	1.00
	향료(Fragrance)	q.s.
	착색제(Colorant)	q.s.

Claims (14)

1. 생리학적으로 수용가능한 매체 내에서, 원재료들의 총 무게(weight)의 적어도 80% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 최대 20% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻은 펩티드성 대두 및 효모 추출물의 혼합물로 구성된 상승적 TRF2 단백질 활성화 시스템을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 원재료들의 총 무게의 90% 무게인 대두 및 원재료들의 총 무게의 10% 무게인 효모를 가수분해함으로써 얻는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 대두(Glycine Max L.) 및 사카로마이세스 속(Saccaromyces genus)의 효모들의 바이오매스를 가수분해함으로써 얻는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 대두 및 효모들을 가수분해함으로써 부수적으로 얻는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 오직 분자량이 5 kDa 미만인 펩티드성 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 펩티드성 대두 및 효모 추출물은 0.5 및 5.5 g/L 사이의 펩티드성 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   크림, 수중유(oil-in-water) 에멀젼, 또는 유중수(water-in-oil) 또는 다중 에멀젼, 용액, 서스펜션, 마이크로에멀젼, 수용성 또는 무수 젤, 세럼, 또는 소포성 분산제, 패치, 스프레이, 고약(unguent), 연고(ointment), 로션, 콜로이드, 밀크, 스틱 또는 분말로부터 선택된 국소 적용에 적합한 형태로 존재하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
8. 텔로머라제의 양 및/또는 활성도의 조절 없이 피부 세포들 내에 TRF2의 양을 증가시킴으로써 노화와 관련된 상기 피부 세포들의 DNA에 대한 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 미용적 용도.
9. 제8항에 있어서,
   상기 피부 세포들의 DAN 상의 이중-사슬 절단을 방지 및/또는 복원하기 위한 미용적 용도.
10. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    노화의 피부 증상을 방지 및/또는 치료하기 위한 미용적 용도.
11. 제10항에 있어서,
    UV 조사에 의해 유도된 광-노화의 피부 증상들을 방지 및/또는 치료하기 위한 미용적 용도.
12. 제10항 또는 제11항에 있어서,
    주름, 깊은 주름, 라인들, 크랙들, 피부 및 피하 조직의 늘어짐, 피부 탄력 및 이완의 손실, 단단함 및 톤의 손실, 및 피부 위축을 방지 및/또는 치료하기 위한 미용적 용도.
13. 얼굴 또는 신체의 피부의 적어도 일 부분 상에 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 국소 적용하는 것을 포함하고,
    상기 조성물은 노화 방지의 주간 케어로서 아침에 및/또는 복원용 야간 케어로서, 취침시간에 적용되는,
    노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 미용적 치료 방법.
14. 얼굴 또는 신체의 피부의 적어도 일 부분 상에 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 국소 적용하는 것을 포함하고,
    상기 조성물은 프리-선 케어(pre-sun care)로서, 햇빛 노출 전 및/또는, 애프터-선 케어(after-sun care)로서, 햇빛 노출 후에 적용되는,
    노화와 관련된 피부 세포들의 DNA 손상을 방지 및/또는 복원하기 위한 미용적 치료 방법.

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