KR20140114192A - 무세포 진피 조직을 함유한 포장재 - Google Patents

Abstract

본 발명은 무세포 진피 조직을 함유한 포장재에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 이식시에 생착율이 우수한 기저막이 제거된 무세포 진피 조직 포장재 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직을 함유한 포장재는, 생체 이식체를 포장시에 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 사용함으로써 기존 사용되는 진피막에 비해 살아있는 세포가 조직으로 잘 들어가 생착율이 우수한 효과를 가지고 있다.

Description

무세포 진피 조직을 함유한 포장재 {A packing material containing acellular dermis}

본 발명은 무세포 진피 조직을 함유한 포장재에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 이식시에 생착율이 우수한 기저막이 제거된 무세포 진피 조직 포장재 및 그 제조방법에 관한 것이다.

손상된 연골의 치료 또는 성형외과 분야에서 연골의 이식은 널리 이용되어 왔다. 특히 코성형이 날로 활성화됨에 따라 융비술이 증가하고 있다. 여기에는 수십 년 동안 자가 연골을 비롯한 여러 종류의 이식물들이 사용되어 왔다. 고어텍스(Gore-tex)나 실리콘 같은 이물성형 이식편들은 다루기가 쉽고 수술 시간이 절약되며 공여부의 이환율을 없애는 장점이 있다. 이종의 물질을 이용한 관련분야의 선행문헌으로는 특허문헌 1 (인공연골대치물) 및 특허문헌 2 (관절연골 재생용 지지체 및 이의 제조 방법)이 공개되어 있다. 그러나, 장기간의 추적관찰에서 이물감, 감염, 통증, 이식물의 탈출 및 가동성 등의 부작용이 보고되어 왔다.

따라서, 근래에는 위와 같은 이물성형 이식편들을 이용하기 보다는, 자가 또는 동종 유래 연골 이식이 외부 감염 등으로부터의 감염율을 낮추는 장점으로 인해 많이 이용되고 있다. 또한 이러한 연골을 이용하는 종래 기술로써 특허문헌 3 (포유류의 연골조직에서 유래한 생체 이식체)가 있으며, 최근에는 이러한 연골을 미세하게 파쇄한 미세 연골을 골막 또는 무세포 진피막으로 포장(wrapping)하여 주입하기도 하였다. 하지만, 생착률 등에 있어서는 여전히 우수하지 못한 결과를 나타내고 있다.

특허문헌 1: 한국공개특허 10-2011-0012807 특허문헌 2: 한국공개특허 10-2011-0097662 특허문헌 3: 한국공개특허 10-2012-0116332

따라서, 본 발명의 목적은 무세포 진피 조직을 함유한 포장재 및 그 제조방법을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직을 함유한 포장재를 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 포장재는 생체 이식재를 포장하는 것이고, 이러한 생체 이식재는 연골 또는 피부 조직, 또는 그 혼합물인 것이다.

더 상세하게는, 상기 생체 이식재는 미세 연골 또는 피부의 진피조직, 구체적으로, 미세 연골 및 기저막층이 제거된 진피조직의 파쇄물의 혼합물이며, 상기 무세포 진피 조직 파쇄물과 미세 연골은 동일한 비율로 혼합된 것이다.

본 발명은 또한, (a) 무세포 진피 조직으로부터 기저막층을 제거하는 단계; 및 (b) 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 처리하는 단계; 를 포함하는 포장재의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 기저막층을 제거하는 단계는 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 것일 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 포장재로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니를 제공한다.

본 발명에 따른 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직을 함유한 포장재는, 생체 이식재를 포장시에 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 사용함으로써 기존 사용되는 진피막에 비해 살아있는 세포가 조직으로 잘 들어가 생착율이 우수한 효과를 가지고 있으며, 부드러워 생체 이식재를 포장하기 편리한 장점이 있다.

도 1은 기저막층이 제거된 무세포 동종 진피를 나타낸 사진이다.
도 2는 본 발명에 따라 제작된 포장재를 이용하여 생체 이식재를 싸는 과정을 나타낸 모식도이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직을 함유한 포장재에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 포장재는 생체 이식재를 포장하는 것이고, 이러한 생체 이식재로는 연골 또는 피부 조직, 단독, 또는 그 혼합물, 더 상세하게는, 상기 생체 이식재는 미세 연골 또는 피부의 진피조직, 구체적으로, 미세 연골 및 기저막층이 제거된 진피조직의 파쇄물의 혼합물이며, 상기 무세포 진피 조직 파쇄물과 미세 연골은 동일한 비율로 혼합된 것이다.

본 발명에 있어서, 미세 연골은, 생체 조직의 일부인 연골을 분리하여, 골막 제거 등의 일단의 전처리 과정을 거쳐 확보된 연골을, 수술용 칼 (scalpel) 등을 이용하여 각 변이 1mm 이하의 육면체 구조로 가공한 연골을 말한다.

본 발명에 있어서, 무세포 진피 조직은, 분리된 진피를 화학적 처리과정을 통해 면역거부반응 일으킬 수 있는 세포들을 제거한 진피층을 말하며 콜라겐과 엘라스틴이 주성분을 이루고 있다. 또한, 생체 이식재의 일부로써, 무세포 동종진피를 파쇄하여 500 μm 정도의 미세구조로 만든 것을 본 발명에서의 “무세포 진피 조직 파쇄물”이다. 예컨대, 본 발명에 있어서, 상기 무세포 진피 조직 파쇄물과 미세 연골은 혼합된 형태로써, 비율은 1~2: 1이나, 동일한 비율로 혼합될 수도 있다.

본 발명은 또한, 상기 생체 이식재 제조에 있어서, (a) 연골을 잘게 잘라 미세 연골을 제작하는 단계; 및 (b) 무세포 진피 조직을 파쇄하고, 파쇄물을 상기 (a)단계의 미세 연골과 혼합하는 단계를 포함한다.

여기서, 상기 미세 연골은 각 변이 1mm 이하의 육면체 구조로 제작된 연골이며, 이러한 미세 연골을 얻기 위해서는 수술용 칼, 포셉, 의료용 집게 등을 이용할 수 있다.

상기 (b)단계에서는 이러한 무세포 진피 조직을 파쇄하고, 이렇게 얻어진 파쇄물을 상기 (a)단계의 미세 연골과 혼합하는 단계이다. 이때, 생리 식염수를 이용하여, 미세 연골과, 무세포 진피 조직 파쇄물을 혼합할 수 있으며, 생리식염수와 미세연골의 혼합비는 1:1~3:1이다.

위와 같은 혼합 과정은 주사기에 상기 미세 연골과 진피 조직 파쇄물을 생리식염수와 함께 넣어 피스톤 운동을 통하여 혼합할 수 있으며, 이것 이외에도 혼합 가능한 용기나 장치는 제한없이 적용가능하다.

본 발명에 있어서, 미세 연골을 제작하는 과정은 다음과 같다:

생체 조직의 일부인 연골을 기증된 시신 등으로부터 분리하여, 골막 제거 등의 일단의 전처리 과정을 거쳐 확보된 연골을, 수술용 칼 (scalpel) 등을 이용하여 각 변이 1mm 이하의 육면체 구조로 가공하여 미세연골을 제작한다.

본 발명에 있어서, 생체 이식재로 사용되는 미세 연골을 제작하는 과정은 다음과 같다:

생체 조직의 일부인 연골을 기증된 시신 등으로부터 분리하여, 골막 제거 등의 일단의 전처리 과정을 거쳐 확보된 연골을, 수술용 칼 (scalpel) 등을 이용하여 각 변이 1mm 이하의 육면체 구조로 가공하여 미세연골을 제작한다. 구체적으로, 늑연골(costal cartilage)를 미세연골로 가공하는 과정으로써, 늑연골 조직의 포장을 개봉하여 해동된 조직을 가공 및 처리에 적절한 크기로 자른다. 멸균증류수가 담긴 멸균용기에 늑연골을 넣고 롤포셉을 이용하여 흔들어 씻어낸다. 이러한 세척을 3회 실시한다. 연부조직 및 연골막을 주의해서 제거한다. 불필요한 부분을 잘라낸다. 조직의 손질 및 규격화 작업을 하는 동안 조직이 건조해지지 않도록 멸균증류수로 조직표면을 적셔준다. 멸균증류수를 사용하여 3 회 세척한다. 크기가 1 mm 이하가 되도록 수술용 칼을 이용하여 자른다. 자른 미세연골을 생리식염수에 담아 건조가 되지 않도록 하며 밀봉한다. 포장이 완료된 미세 늑연골 완제품을 방사선 멸균처리한다. 이 때, 멸균에 필요한 감마-선량은 15 ~ 25 kGy를 사용한다.

본 발명에 있어서, 상기 무세포 진피 조직은 동종 진피 조직일 수 있으며, 이러한 무세포 진피 조직을 준비하는 과정은 다음과 같다:

기증된 시신의 조직을 신체에서 분리하여 운반할 때, 저산소증에 의한 조직손상, 자가 분해 효소에 의한 분해, 단백질 분해 효소에 의한 세포외 간질의 손상 등의 위험이 있다. 또한, 운반용액의 삼투압에 따라 물리적인 손상을 입을 수도 있다. 그 뿐 아니라 세균이나 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염 위험이 항상 존재한다. 따라서 조직의 운반에 이용되는 용액에는 저산소증에 의한 분해, 자가분해효소에 의한 분해, 단백질, 분해효소에 의한 분해를 막을 수 있는 물질을 첨가하여야

하고, 미생물의 오염을 막을 수 있는 항생제와 항균제를 첨가하여야 한다. 삼투압에 의한 조직의 손상을 막기 위해 적절한 완충용액이 포함되어야 한다. 조직운반용액의 삼투압은 혈장의 삼투압인 260 ~ 320 mOsm/kg 정도의 삼투압을 가져야 한다. 동물세포 배양 등에 많이 이용되는 상업적인 배지의 경우 삼투압이 260 ~ 320mOsm/kg 정도로 혈장의 삼투압과 비슷한 수준을 갖는다. 따라서, 상업적인 배지를 기본 용액으로 이용하고 거기에 여러 가지 역할을 하는 성분을 첨가하여 이용한다.

세균이나 곰팡이의 오염을 막기 위해 페니실린, 스트렙토마이신, 가나마이신, 네오마이신, 바시트라신, 젠타마이신, 반코마이신 등과 같은 항생제를 단독 또는 조합으로 첨가하여, 암포테리신-비, 니스타틴, 폴리믹신 등과 같은 항균제를 단독 또는 조합으로 첨가한다. 또 여러 가지 분해효소에 의한 조직의 손상을 막기 위해 효소억제제를 첨가하여야 한다.

효소억제제로는 엔-에틸말레이미드(NEM), 불화 페닐메틸술포닐(PMSF), 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA) 등과 같은 킬레이트화물질, 루펩틴, 아포프로티닌 등과 같은 단백질 분해효소 억제제 등을 이용한다.

또한, 물리적인 손상을 최소화할 수 있는 방법에 따라 조직을 운반하여야 한다.

대부분의 효소반응은 온도에 따라 많은 영향을 받으며 인간의 체온인 37℃ 주변에서 가장 활성이 강하게 된다, 따라서 조직을 4℃ 정도의 저온상태로 운반한다.

일반적으로 아이스박스에 얼음을 채워 운반하는 방법을 이용한다. 운반 용액이 얼 정도로 낮은 온도로 조직을 운반하면 얼음 결정이 조직을 손상시킬 수 있으므로 피해야 한다.

무세포 진피 조직을 얻는 과정은 크게 2단계로 나눌 수 있으며, 제 1 단계는 상기와 같이 준비된 조직으로부터 표피층을 제거하는 단계로서, 표피층과 진피층을 분리한다.

일반적으로 진피층과 표피층을 분리하는데 여러 가지 단백질 분해 효소를 사용하게 된다. 효소를 사용하는 경우 사용농도가 낮거나 처리 시간이 너무 짧으면 분리가 잘 이루어지지 않고, 농도가 높거나 처리시간이 너무 길면 세포나 조직에 손상을 일으키게 된다. 따라서 적절한 농도와 시간에 따라 처리하여야 한다. 진피층과 표피층을 분리하는데 이용되는 효소로는 중성 단백질 분해효소인 디스파아제, 터몰리신, 트립신 등이 있다. 1.0 units/㎖ 농도의 디스파아제로 37℃에서 60∼120분간 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 또는 200㎍/㎖ 농도의 터몰리신을 37℃에서 30분간 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 터몰리신을 이용하면 디스파아제를 이용하는 경우보다 기저막의 손상 위험이 낮아진다. 또 다른 방법으로는 용액의 이온 강도를 변화시켜 조직의 두 층을 분리하기도 하는데 이 방법도 역시 이온 강도와 처리시간, 처리온도 등의 조건에 따라 효율이 달라진다. 1몰 이상의 염화나트륨 용액으로 37℃에서 14∼32시간 동안 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 1몰 이상의 염화나트룸 용액에서는 세균이나 곰팡이 등이 증식할 수 없기 때문에 미생물의 오염 위험을 낮출 수 있다. 또는 20mM의 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 용액으로 37℃에서 14∼32시간 동안 처리하여도 역시 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. EDTA를 이용하면 EDTA가 단백질분해효소 억제제의 역할을 하기 때문에 단백질분해효소에 의한 조직의 손상을 줄일 수 있다. 따라서, 1몰의 염화나트륨 용액에 1∼5mM의 EDTA를 첨가하여 처리하면 미생물의 오염이나 효소에 의한 조직 손상을 최소화하며 진피층과 표피층을 분리할 수 있다.

제 2 단계는 상기와 같이 표피층을 제거한 다음, 진피층의 세포를 제거한다.

면역반응은 주로 세포막에 존재하는 막 단백질에 의해 야기된다. 따라서 세포를 제거하면 면역반응을 최소화 할 수 있다. 세포와 세포외간질과의 물리, 화학적 성질의 차이를 이용하여 조직의 손상 없이 세포만 선별적으로 제거하는 방법을 이용한다. 세포막의 주 성분은 인지질로 여러 가지 계면활성제를 이용하면 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다.

이를 위하여 소듐도데실 설페이트(SDS)와 같은 이온성 계면활성제, 또는 트리톤 엑스-100, 트윈20, 트윈 40, 트윈60, 트윈80, 노니데트 피-10(NP-10), 노니데트 피-40(NP-40) 등과 같은 비이온성 계면활성제 등이 이용된다.

진피층을 실온에서 0.2∼1% 농도의 SDS 용액으로 실온에서 30∼120분간 처리하면 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다. 또는 0.1∼2.0% 농도의 트윈 20 용액으로 실온에서 30∼180분간 처리하거나, 0.2∼2% 농도의 트리톤 엑스-100 또는 노니데트피-40 용액으로 22-37℃에서 30∼180분간 처리하면 역시 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다.

상기 화학적인 방법 외에 물리적인 방법으로도 세포를 제거할 수 있는데, 진피층에 5∼60분간 10∼100 ㎑의 초음파를 처리하면 세포를 제거할 수 있다. 또는 계면활성제와 초음파를 조합하여 사용하여도 역시 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다. 또한, 용매(TNBP)와 계면활성제를 사용하여 세포 제거와 바이러스 제거를 동시에 할 수 있다.

본 발명은 무세포 진피 조직으로부터 기저막층을 제거하는 단계; 및 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 처리하는 단계; 를 포함하는 포장재의 제조방법에 관한것이다.

본 발명에 있어서, 상기 기저막층을 제거하는 단계는 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 것일 수 있다.

더욱 상세하게, 상기 기저막층을 제거하는 단계를 다음의 과정을 포함할 수 있다.

기저막층을 진피조직으로부터 분리하는 방법은 물리적 방법과 인체에 무해한 화학물질을 이용한 화학적 방법 등이 있다. 물리적인 방법으로는 표피층이 제거된 진피층 윗면을 육절기를 사용하여 0.01 내지 0.5 mm(바람직하게는 0.05 내지 0.2mm) 두께로 얇게 잘라주는 방법이 있다. 이 경우 육절기 칼날은 열발생을 최소화하여 진피조직의 변성을 막을 수 있도록 탄소강 소재를 사용할 수 있다. 화학적 처리 방법은 미세침이 부착된 롤러를 이용하여 기저막층 상단 표면에 작은 구멍을 낸 후 기저막층을 진피층으로 분리하기 위해 0.3% 과산화수소수 용액을 1시간내지 3시간 가량 처리하면 기저막층의 멤브레인 단백질의 구조를 느슨하게 만들어 주어 진피조직의 파괴 없이 기저막을 제거할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 기저막이 제거된 진피조직에, 작은 슬릿을 넣는 단계를 추가로 수행할 수 있다.

추가적으로, 위와 같은 기저막층이 제거된 진피 조직은 동결 건조하여 보관될 수 있다.

구체적으로는, 기저막층을 제거한 후, 동결용액 처리 및 동결 건조하여 보존한다.

동결용액은 용액의 이온강도나 삼투압을 유지하는 완충용액, 얼릴 때 진피층 조직의 물리, 화학적인 손상을 막는 동결보호제, 건조할 때 진피층 조직의 구조 변화를 방지하는 건조보호제 등으로 구성된다. 동결보호제는 유리전이온도를 높여 얼어 있는 조직의 안정성을 높인다. 유리전이온도가 높아지면 조직 중에 육각형얼음 보다 덜 안정한 유리질의 얼음이나 정방형의 얼음의 비중을 높여 건조 속도를 더 높일 수 있다. 또 유리질의 얼음과 정방형의 얼음은 얼음의 크기가 작아 조직을 덜

손상시킨다. 따라서 동결용액에는 반드시 동결보호제가 포함되어야 한다. 현재 많이 사용되는 동결보호제로는 디메틸설폭시드(DMSO), 덱스트란, 설탕, 프로필렌글리콜, 글리세롤, 마니톨, 솔비톨, 과당, 트레할로스, 라피노스, 2.3-부탄디올, 수산화에틸전분(HES), 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 프롤린, 헤타스타치,혈청알부민 등이 있다. 이러한 성분들과 여러 가지 염기성분을 조합하여 동결용액을 제조하여 이용한다. 그 중 덱스트란, 글리세롤, 헤타스타치, 마니톨, 수산화에틸전분 등은 혈청대체물로도 이용되고 있으며, 또 폴리에틸렌글리콜의 경우 단백성주사제의 안정제로도 이용되고 있어 안정성이 어느 정도 검증되어 있다. 이처럼 이미 인체에 해가 거의 없다고 알려진 물질들을 주성분으로 동결용액을 제조한다. 이렇게 제조한 동결용액에 진피층을 담그고 적절한 방법을 이용하여 동결용액이 잘침투할 수 있도록 한다. 동결용액이 침투된 진피층을 -70 ℃ 이하(바람직하게는 -40 ℃ 내지 -70 ℃)의 초저온 냉동고에 보관한다. 12시간 내지 48시간 동결 실시후동결건조기에 이동하여 동결건조시간을 24시간 내지 50시간 동안 시행하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 상기와 같은 과정을 통해 제작된 포장재는 도 2에 나타난 바와 같이, 무세포 동종 진피를 충분히 수화하고 생체 이식체를 진피 위에 올려 놓은 후 (a)에 접는 형식으로 포장하고 (b) 안에 있는 이식체가 밖으로 새어 나오지 않도록 봉합하는 과정 (c)을 포함한다.

또한, 본 발명에서 제작된 진피 조직으로 이루어진 포장재에, 일면을 절개하여 포장용 주머니로 제작하는 것 또한 가능하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 본 발명에 따른 포장재의 제조

피부조직(조직은행으로부터 비영리 목적의 환자의 치료를 위해 기증받은 시신으로부터 채취)을 중성 단백질 분해효소인 디스파아제 1.0 units/㎖ 농도로 처리하고, 교반배양기에서 37 ℃의 온도로 60분 내지 120분 동안 교반 후 멸균 증류수로 3회 세척하여 진피층과 표피층을 분리하여 표피층을 제거하였다.

표피층을 제거한 조직을 1% 농도의 트리톤 엑스-100 용액으로 30 ℃에서 100분간 처리하여 진피층의 세포를 제거하였다.

표피층이 제거된 진피층 윗면을 열발생을 최소화하여 진피조직의 변성을 막을 수 있도록 탄소강 소재의 칼날의 육절기를 사용하여 0.05 내지 0.2 mm 두께로 얇게 잘라 기저막층을 제거하였다.

동결용액으로 10%의 덱스트란 용액을 사용하고, 이 동결용액에 상기 기저막층이 제거된 진피조직을 -4 ℃에서 12시간 동안 담궈 동결용액이 잘 침투되도록 한 후, -70 ℃ 이하의 초저온 냉동고에 12시간 보관하고 동결건조기에 48시간 동결건조 하였다. 기저막을 제거한 동결건조 상태의 동종 진피는 포장재로 사용하기 전까지 장기 보관을 위해 알루미늄 백에 밀봉하고 15 ~ 25 kGy 정도의 E-beam을 주사하여 멸균처리한다.

비교예 1: 기저막층이 제거되지 않은 무세포 진피조직

상기 1에서 기재한 것 중 기저막층 제거단계를 제외하고는 동일한 과정으로 제작하였다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

1. 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직을 함유한 포장재.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 포장재는 생체 이식재를 포장하는 것을 특징으로 하는 포장재.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 생체 이식재는 연골 또는 피부 조직, 또는 그 혼합물인 것을 특징으로 하는 포장재.
   
4. (a)무세포 진피 조직으로부터 기저막층을 제거하는 단계; 및 (b) 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 처리하는 단계; 를 포함하는 제1항에 따른 포장재의 제조방법.
   
5. 제4항에 있어서, 상기 기저막층을 제거하는 단계는 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 것을 특징으로 하는 방법.
   
6. 제4항에 있어서, 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 슬릿을 넣는 단계를 더 포함하는 방법.

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