PL236127B1

PL236127B1 - Sposób otrzymywania opatrunku ze skóry świńskiej oraz zastosowanie medyczne opatrunku ze skóry świńskiej

Info

Publication number: PL236127B1
Application number: PL426783A
Authority: PL
Inventors: Sebastian RADEJ; Sebastian Radej
Original assignee: Xenogp Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia
Priority date: 2018-08-24
Filing date: 2018-08-24
Publication date: 2020-12-14
Also published as: PL426783A1; WO2020039397A1

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania opatrunku ze skóry świńskiej oraz zastosowane medyczne opatrunku ze skóry świńskiej do leczenia uszkodzeń skóry.

Znane są opatrunki ze skóry świńskiej, jednak ich trwałość jest krótka, a co za tym idzie skutki leczenia gorsze i niezadawalające.

Opis zgłoszenia nr KLR20110057391 (A) ujawnia przygotowanie oraz wykorzystanie skóry świń jako materiału opatrunkowego. Niniejszy wynalazek obejmuje kilka etapów m.in. pobierania skóry od świni; zanurzania zebranej skóry w glicerolu o niskim stężeniu i mieszanie, pielęgnowanie skóry w glicerolu o wysokim stężeniu; etap przemywania skóry w sterylnym fizjologicznym roztworem soli; mieszania i konserwacji skóry w 0,1 molowym roztworze NaOH, zobojętniania skóry w 0,1 molowym HCl i przemywania skóry roztworem soli fizjologicznej; wycinania umytej skóry w odpowiedniej wielkości opatrunki, umieszczenie jej w 20-30% glicerolu oraz sterylizacje promieniowaniami gamma.

Opis zgłoszenia nr CN102921034 (A) dotyczy kompozytowego opatrunku z macierzy właściwej nabłonka świń i sposobu przygotowania kompozytowego opatrunku. Sposób wytwarzania obejmuje następujące etapy: (1) przemywanie: mycie kawałka skóry w roztworze soli buforowej z kwasem fosforowym; (2) oddzielanie naskórka i skóry właściwej: moczenie i trawienie kawałka skóry w roztworze Dispase II, oddzielanie naskórka i skóry właściwej, a następnie przemywanie roztworem soli buforowej z kwasem fosforowym; (3) usuwanie komórek skóry, a mianowicie moczenie kawałka skóry w roztworze Triton X-100 w celu dalszego usuwania składników komórek skóry, a następnie przemywanie roztworem soli buforowej z kwasem fosforowym; (4) przeprowadzanie mycia ultradźwiękowego, a następ nie moczenie w roztworze soli buforowej z kwasem fosforowym do tymczasowego przechowywania i (5) moczenie kawałka skóry kolagenu typu I w celu napełniania i zamykania, lub namaczanie kawałka skóry kolagenu typu I w celu liofilizacji, uszczelnianie i pakowanie w celu uzyskania gotowych produktów.

Z kolei opis zgłoszenia CN106581758 (A) dotyczy preparatyki opatrunku na ranę skórną i ujawnia przeciwbakteryjny bezkomórkowy opatrunek skórny z możliwością wywoływania unaczynienia i jego sposobu wytwarzania. Przeciwbakteryjny bezkomórkowy opatrunek na bazie skóry obejmuje matrycę bezkomórkowej skóry świni, polidopaminę, kompozycję czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF) i peptyd przeciwbakteryjny I.I.37.

Wynalazek przedmiotowy rozwiązuje zagadnienie otrzymywania opatrunku ze skóry świńskiej umożliwiający skuteczne i szybkie gojenie się uszkodzeń skóry spowodowanych zwłaszcza urazami mechanicznymi, poparzeniem.

Istotą wynalazku jest sposób otrzymywania opatrunku ze skóry świńskiej. Pierwszy etap polega na oddzieleniu z pobranego materiału naskórka o grubości warstwy od 0,5 mm do 2,0 mm korzystnie 1 mm. Następnie materiał poddaje się oczyszczaniu w każdym płynie fizjologicznym, korzystnie o właściwościach izotonicznych w stosunku do tkanek zwierząt stałocieplnych i człowieka o osmolalności w przedziale od 295 mOsm/L do 320 mOsm/L, korzystnie w soli fizjologicznej, przy jednoczesnym wałkowaniu w celu zachowania kształtu materiału oraz utrzymaniu stałej wilgotności materiału w pełnej objętości, następnie materiał myje się w łaźni ultradźwiękowej. Kolejnym etapem jest konserwacja w roztworze złożonym z DMSO i gliceryny w temperaturze od 1 °C do 20°C w czasie od 1 min. do 10 min., przy czym materiał konserwuje się pod próżniowym zamknięciem w roztworze zawierającym DMSO i glicerynę w ilościach v/v 1-15% DMSO oraz gliceryna 85-99% użytym w ilości 2-10 ml na 1 cm² próbki. Następnie materiał poddaje się stopniowemu obniżeniu temperatury: początkowo schładzany jest przez 10-30 min w temp. od 1°C do -20°C, następnie poddaje się go mrożeniu najpierw w temp. od -10°C do -25°C przez 4-8 godzin, po czym w temp. od -50°C do -85°C korzystnie -75°C przez 30-60 godzin. Tak przygotowany materiał poddaje się inkubacji w parach ciekłego azotu przez 30-60 godzin, a następnie pozostawia się w ciekłym azocie przez 30-60 godzin. Następnie materiał rozmraża się w temperaturze pokojowej przez 1-8 godzin, płucze w zbuforowanych płynach myjących z jednoczesnym wałkowaniem oraz myje w łaźni ultradźwiękowej. Tak przygotowany materiał poddaje się liofilizacji, po czym zamyka się w szczelnym pojemniku w atmosferze gazu obojętnego i poddaje sterylizacji radiacyjnej.

Korzystnie konserwacje materiału w roztworze DMSO oraz gliceryny przeprowadza się w temperaturze 2-10°C.

Korzystnie gdy DMSO stosuje się w ilości 2-10%.

PL236 127 Β1

Sposób według wynalazku pozwala otrzymać materiał opatrunkowy ze skóry świńskiej umożliwiający skuteczne i szybkie gojenie się uszkodzeń skóry spowodowanych zwłaszcza urazami mechanicznymi, poparzeniem. Wynalazek charakteryzuje się zastosowaniem jako środka konserwującego mieszaniny DMSO oraz gliceryny, dzięki czemu otrzymuje się materiał o lepszej i dłuższej aktywności biologicznej. Dodatkowo mieszanina konserwująca zapobiega krystalizowaniu się wody i uszkadzaniu (rozsadzaniu) materiału (komórek) podczas wielostopniowego obniżania temperatury. Mato decydujący wpływ na funkcjonalność plastra. Jednocześnie zamrażanie w płynie ogranicza możliwość wystąpienia ostrych reakcji odpornościowych ze strony organizmu stosującego go pacjenta. Opatrunek wpływa na poprawę „wyglądu” blizny. Stosowanie opatrunku pozwala uniknąć używania szwów lub plastrów do stabilizowania opatrunku w miejscu uszkodzenia. Ponadto wykazuje znaczące właściwości redukcji bólu. Dzięki ochronie przed wysuszeniem miejsca uszkodzonego oraz ograniczeniu utraty płynów elektrolitów, białka, wpływa na przyspieszenie procesu gojenia. Wykazuje ponadto właściwości redukcji zakażeń bakteryjnych;

Badanie 1:

Ocena proliferacji fibroblastów HDFa (Primary Dermal Fibroblast; Normal, Humań, Adult HDFa, ATCC® PCS201012) w obecności plastrów XenoGP, produktów dostępnych na rynku w porównaniu do kontroli.

Wykres 1. Ocena proliferacji fibroblastów HDFa (Primary Dermal Fibroblast; Normal, Humań, Adult HDFa, ATCC® PCS201012) w obecności plastrów XenoGP (opatrunku według wynalazku ze skóry świńskiej), produktów dostępnych na rynku w porówaniu do kontroli. Wartości liczbowe ilości komórek (oś pionowa) wartość χ 10⁶, wartości liczbowe (oś pozioma) odpowiadające dobom inkubacji.

W badaniu wykazano istotnie statystycznie wyższą liczbę komórek w hodowli w obecności produktu XenoGP w porównaniu do produktów silikonowych (Silikon), opatrunku sporządzonego ze skóry świńskiej (UKR) oraz kontroli.

Badanie 2:

Ocena proliferacji fibroblastów hTRET (Fibroblast immortalized with hTERT, BJ5ta, ATCC®.

PL236 127B1

Wykres 2. Ocena proliferacji fibroblastów hTRET (Fibroblast immortalized with hTERT, BJ5ta, ATCC® CRL4001) w obecności plastrów XenoGP, produktów dostępnych na rynku w porówaniu do kontroli. Wartości liczbowe ilości komórek (oś pionowa) wartość χ 10⁶, wartości liczbowe (oś pozioma) odpowiadające dobom inkubacji.

Przykład 1

Pobrano materiał skóry świni, ogolono przy użyciu ostrza wraz ze ściągnięciem wierzchniej warstwy naskórka o grubości 0,5 mm. Materiał oczyszczono przy użyciu soli fizjologicznej o wartości 320 mOsm/L. Pobrany materiał umieszczono na płaskiej powierzchni w soli fizjologicznej i wałkowano za pomocą wałka w celu uzyskania jednorodnej płaskiej powierzchni materiału oraz w celu umycia umieszczono w łaźni ultradźwiękowej w soli fizjologicznej. Tak przygotowany materiał umieszczono w szczelnym pojemniku pod próżniowym zamknięciem w roztworze zawierającym 2 ml DMSO oraz 98 ml gliceryny przez 10 minut w temperaturze 20°C. W następnej kolejności materiał schłodzono w lodówce przez 10 minut w temperaturze 4°C, po czym poddano stopniowemu mrożeniu, najpierw w temperaturze -25°C przez 4 godziny w zamrażarce, następnie w temperaturze -85°C przez 30 godzin w zamrażarce głębokiego mrożenia. Następnie poddano inkubacji w parach ciekłego azotu przez 60 godzin oraz w ciekłym azocie 60 godzin, po czym materiał rozmrożono w temperaturze pokojowej w soli fizjologicznej przez 6 godzin przy jednoczesnym wałkowaniu oraz w celu umycia umieszczono w łaźni ultradźwiękowej w soli fizjologicznej. Następnie materiał pocięto na plastry wielkości 10x10 cm, poddano liofilizacji, zamknięto w szczelnym pojemniku za pomocą zgrzewarki próżniowej w atmosferze gazu obojętnego i poddano sterylizacji radiacyjnej w dawce 10 Gy. Otrzymane plastry miały grubość 2 mm.

P rzykład 2

Pobrano materiał skóry świni, ogolono przy użyciu ostrza wraz ze ściągnięciem wierzchniej warstwy naskórka o grubości 2,0 mm. Materiał oczyszczono przy użyciu płynu fizjologicznego wieloelektrolitowego izotonicznego Fresenius Kabi o wartości 295 mOsm/L. Pobrany materiał umieszczono na płaskiej powierzchni w roztworze płynu izotonicznego Fresenius Kabi i wałkowano za pomocą wałka w celu

PL 236 127 B1 uzyskania jednorodnej płaskiej powierzchni materiału oraz w celu umycia umieszczono w łaźni ultradźwiękowej w roztworze płynu izotonicznego Fresenius Kabi. Tak przygotowany materiał umieszczono w szczelnym pojemniku pod próżniowym zaniknięciem w roztworze zawierającym 15 ml DMSO oraz 85 ml gliceryny przez 1 minutę w temperaturze 1°C. W następnej kolejności materiał schłodzono w lodówce przez 30 minut w temperaturze 4°C, po czym poddano stopniowemu mrożeniu, najpierw w temperaturze -20°C przez 8 godziny w zamrażarce, następnie w temperaturze -50°C przez 60 godzin w zamrażarce głębokiego mrożenia. Następnie, poddano inkubacji w parach ciekłego azotu przez 60 godzin oraz w ciekłym azocie 60 godzin, po czym materiał rozmrożono w temperaturze pokojowej płynie fizjologicznym Fresenius Kabi przez 3 godziny przy jednoczesnym wałkowaniu oraz w celu umycia umieszczono w łaźni ultradźwiękowej płynie Fresenius Kabi. Następnie materiał pocięto na plastry wielkości 10x10 cz., poddano je liofilizacji, zamknięto w szczelnym pojemniku za pomocą zgrzewarki próżniowej w atmosferze gazu, obojętnego i poddano sterylizacji radiacyjnej w dawce 30 Gy. Otrzymane plastry miały grubość 3 mm.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Sposób otrzymywania opatrunku ze skóry świńskiej obejmujący pobranie oraz przygotowanie materiału poprzez oczyszczenie materiału w zbuforowanych płynach myjących, konserwację w roztworze konserwującym, umieszczenie w szczelnym opakowaniu, płukanie i mycie, chłodzenie, liofilizację, sterylizację, znamienny tym, że z pobranego materiału usuwa się wierzchnią warstwę naskórka po czym materiał poddaje się oczyszczaniu w zbuforowanych płynach myjących oraz wałkowaniu materiału, następnie materiał myje się w łaźni ultradźwiękowej, konserwuje pod próżniowym zamknięciem w roztworze zawierającym DMSO i glicerynę w ilościach v/v 1-15% DMSO oraz gliceryna 85-99% użytym w ilości 2-10 ml na 1 cm² próbki przez czas od 1 minuty do 10 minut w temperaturze 1°C-20°C, po czym materiał schładza się przez 10-30 min w temperaturze od 1°C do -20°C, a następnie poddaje etapowemu mrożeniu najpierw w temperaturze od -10°C do -25°C, korzystnie -20°C przez 4-8 godzin, następnie w temperaturze od -50°C do -85°C korzystnie -75°C przez 30-60 godzin, po czym całość inkubuje się kolejno 30-60 godzin w parach ciekłego azotu oraz 30-60 godzin w ciekłym azocie, następnie materiał rozmraża się w temperaturze pokojowej przez czas 1-8 godzin w zbuforowanych płynach myjących i płucze przy jednoczesnym wałkowaniu, po czym materiał myje się w łaźni ultradźwiękowej, liofilizuje, zamyka w szczelnym opakowaniu w atmosferze gazu obojętnego a następnie sterylizuje.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że grubość warstwy pobranego naskórka wynosi od 0,5 mm do 2,0 mm korzystnie 1 mm.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako zbuforowane płyny myjące stosuje się każdy płyn fizjologiczny o właściwościach izotonicznych w stosunku do tkanek zwierząt stałocieplnych i człowieka o osmolalności w przedziale od 295 mOsm/L do 320 mOsm/L, korzystnie sól fizjologiczna.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że konserwacje materiału w roztworze DMSO oraz gliceryny przeprowadza się w temperaturze 2-10°C.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że DMSO stosuje się w ilości 2-10%.
6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że materiał poddaje się sterylizacji radiacyjnej.