KR101362402B1 - 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 기존 무세포 진피조직 이식체에서 기저막층을 제거하여 이식 후 섬유아세포의 유입을 증대시키고 신혈관 생성작용을 촉진시킴으로써 피부로의 생착률을 높여 이식이 안정적으로 되게 하여 이식 후의 회복일을 단축시킬 수 있다.

Description

기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체{ACELLULAR DERMAL MATRIX REMOVED BASEMENT MEMBRANE}

본 발명은 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

인체의 피부조직은 크게 세 부분으로 나뉘어지는데, 피부의 가장 바깥쪽을 이루는 표피층과 그 아래층의 진피층, 그리고 피하조직으로 이루어진다. 이 중 표피층은 표피층과 진피층이 단단하게 결합할 수 있도록 하는 기저막(basement membrane)으로부터 여러 층으로 분화된 상피세포와 그 밖에 멜라닌세포, 면역세포로 이루어지며, 표피층 아래의 진피층은 주로 섬유아세포와 이 세포가 분비한 여러 세포외간물질(extracellular matrix)로 이루어진다.

피부조직 또는 내부 장기조직은 화상, 외상, 궤양 등으로 인해 조직의 일부가 손상될 수 있는데, 이 경우 손상된 조직의 치유를 목적으로 하거나 또는 재건성형을 목적으로 본인 피부조직 또는 내부 장기조직으로부터 이식하는 방법을 사용한다. 이러한 경우에는 이식받는 자가 자신의 피부조직 혹은 장기조직을 추가적으로 적출하는 수술적 부담이 있어 이식받는 사람의 건강상태가 양호하지 않은 경우에는 위험 할 수가 있다. 그 외에 이종조직(Xenograft)이나 합성물질(Synthetic biomaterial)을 사용하여 이식하는 방법이 있는데, 이 경우에는 면역거부 반응이 발생하여 장기간 이식 시 염증반응을 초래하여 재수술하는 결과를 초래할 수도 있다. 상기 문제점을 해결하기 위해 공여자로부터 적출된 피부조직으로부터 이식용 무세포 진피층을 제조[특허문헌 1, 특허문헌 2]하여 시술하는 방법은 상기의 어려움을 해결하는 방법으로 사용된다.

무세포 진피조직의 경우 기저막층은 진피층의 상단부에 위치하며 표피층과 진피층이 단단하게 결합하는 역할을 하고 표피층 제거 후에도 진피층에 부착되어 남아있게 된다. 기저막층의 경우 조직이 치밀하여 이식 후 기존의 이식 부위의 섬유아세포 등의 유입속도가 다른 면에 비해 현저히 줄어 생착이 더딘 문제점이 발생한다.

국내 특허 공개 제2001-0092985호, 국내 특허 등록 제791502호

이에, 본 발명자들은 이식 후에 기존의 이식 부위의 섬유아세포 등의 유입속도가 다른 면에 비해 현저히 줄어 생착률이 더디게 하는 기저막층을 제거하여 섬유아세포의 유입이 하단, 옆면부의 기저막층이 없는 부위의 섬유아세포의 유입과 동일한 속도로 유지시킬 수 있었다.

따라서, 본 발명은 무세포 진피조직 이식체의 기저막층을 제거하여 이식 후 섬유아세포의 유입을 증대시키고 신혈관 생성작용을 촉진시켜 피부로의 생착률을 높여 이식이 안정적으로 되고 이식 후의 회복일을 최소화 할 수 있다.

상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은

무세포 진피조직 이식체에 있어서,

기적막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체를 제공한다.

또한, 상기 과제를 해결하기 위한 다른 수단으로서, 본 발명은

무세포 진피조직 이식체의 제조방법에 있어서,

기저막층을 제거하는 단계를 포함하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 무세포 진피조직 이식체의 기저막층을 제거하여 이식 후 섬유아세포의 유입을 증대시키고 신혈관 생성작용을 촉진시켜 피부로의 생착률을 높여 이식이 안정적으로 되고 이식 후의 회복일을 단축시킬 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 무세포 진피조직 이식체와 기존 무세포 진피조직 이식체[Alloderm, LifeCell Corporation, Branchburg, NJ]를 비교한 것이다.
도 2는 기저막층이 제거된 무세포진피조직의 이식 후 사진이다[굵은 검정 실선: 기저막층과 기저막층에 의해 진피조직 이식체에 침투하지 못하고 축적된 섬유아세포, 검정 점선: 이식된 무세포 진피조직, 검정 화살표: 생착된 섬유아세포].
도 3은 기저막층이 제거되지 않은 무세포진피조직의 이식 후 사진이다[굵은 검정 실선: 기저막층, 검정 점선: 이식된 무세포 진피조직, 검정 화살표: 생착된 섬유아세포].
도 4는 이식된 무세포 진피 조직의 혈관 생성을 확인한 사진이다[좌측; 기저막층이 제거된 무세포진피조직, 우측; 기저막층이 제거되지 않은 무세포진피조직, 검정화살표: 혈관 형성].
도 5는 이식된 무세포 진피 조직의 피부 생착율을 확인한 사진이다[좌측; 기저막층이 제거된 무세포진피조직, 우측; 기저막층이 제거되지 않은 무세포진피조직].

본 발명은 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체에 관한 것이다.

상기 무세포 진피조직 이식체는 뼈, 인대, 건 또는 피부일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

첨부도면 도 1에 나타낸 바와 같이, 기존의 무세포 진피조직 이식체[Alloderm, LifeCell Corporation, Branchburg, NJ]의 경우에는 진피층 상단부에 기저막층이 위치하고 있어 이식 후 기존 이식 부위의 섬유아세포 등의 유입이 방해가 되어 피부로의 생착률이 진피층의 옆면부, 하단부의 기저막층이 없는 부위 보다 현저히 줄어들었다. 이러한 기존 이식체의 문제를 해결하기 위하여 본 발명의 이식체는 기저막층을 제거함으로써 기존 이식 부위의 섬유아세포 등의 유입이 기존 진피조직 이식체에 비하여 월등히 증대되고 신혈관 생성 작용을 촉진시켜 피부로의 생착률을 향상시킬 수 있다.

또한, 본 발명은

무세포 진피조직 이식체의 제조방법에 있어서,

기저막층을 제거하는 단계를 포함하는 기적막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법을 포함한다.

구체적으로, 표피층을 제거하는 단계;

진피층의 세포를 제거하는 단계;

기저막층을 제거하는 단계; 및

동결 보존 단계

를 포함할 수 있다.

상기 무세포 진피조직 이식체는 뼈, 인대, 건 또는 피부일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

우선, 이식체에 사용되는 조직을 준비하는 단계를 추가할 수 있다.

기증된 시신의 조직을 신체에서 분리하여 운반할 때, 저산소증에 의한 조직 손상, 자가 분해 효소에 의한 분해, 단백질 분해 효소에 의한 세포외 간질의 손상 등의 위험이 있다. 또한, 운반용액의 삼투압에 따라 물리적인 손상을 입을 수도 있다. 그 뿐 아니라 세균이나 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염 위험이 항상 존재한다. 따라서 조직의 운반에 이용되는 용액에는 저산소증에 의한 분해, 자가분해효소에 의한 분해, 단백질, 분해효소에 의한 분해를 막을 수 있는 물질을 첨가하여야 하고, 미생물의 오염을 막을 수 있는 항생제와 항균제를 첨가하여야 한다. 삼투압에 의한 조직의 손상을 막기 위해 적절한 완충용액이 포함되어야 한다. 조직운반용액의 삼투압은 혈장의 삼투압인 260 ~ 320 mOsm/kg 정도의 삼투압을 가져야 한다. 동물세포 배양 등에 많이 이용되는 상업적인 배지의 경우 삼투압이 260 ~ 320 mOsm/kg 정도로 혈장의 삼투압과 비슷한 수준을 갖는다. 따라서, 상업적인 배지를 기본 용액으로 이용하고 거기에 여러 가지 역할을 하는 성분을 첨가하여 이용한다.

세균이나 곰팡이의 오염을 막기 위해 페니실린, 스트렙토마이신, 가나마이신, 네오마이신, 바시트라신, 젠타마이신, 반코마이신 등과 같은 항생제를 단독 또는 조합으로 첨가하여, 암포테리신-비, 니스타틴, 폴리믹신 등과 같은 항균제를 단독 또는 조합으로 첨가한다. 또 여러 가지 분해효소에 의한 조직의 손상을 막기 위해 효소억제제를 첨가하여야 한다.

효소억제제로는 엔-에틸말레이미드(NEM), 불화 페닐메틸술포닐(PMSF), 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA) 등과 같은 킬레이트화물질, 루펩틴, 아포프로티닌 등과 같은 단백질 분해효소 억제제 등을 이용한다.

또한, 물리적인 손상을 최소화할 수 있는 방법에 따라 조직을 운반하여야 한다.

대부분의 효소반응은 온도에 따라 많은 영향을 받으며 인간의 체온인 37℃ 주변에서 가장 활성이 강하게 된다, 따라서 조직을 4℃ 정도의 저온상태로 운반한다.

일반적으로 아이스박스에 얼음을 채워 운반하는 방법을 이용한다. 운반 용액이 얼 정도로 낮은 온도로 조직을 운반하면 얼음 결정이 조직을 손상시킬 수 있으므로 피해야 한다.

제 1 단계는 상기와 같이 준비된 조직으로부터 표피층을 제거하는 단계로서, 진피층과 표피층을 분리한다.

일반적으로 진피층과 표피층을 분리하는데 여러 가지 단백질 분해 효소를 사용하게 된다. 효소를 사용하는 경우 사용농도가 낮거나 처리 시간이 너무 짧으면 분리가 잘 이루어지지 않고, 농도가 높거나 처리시간이 너무 길면 세포나 조직에 손상을 일으키게 된다. 따라서 적절한 농도와 시간에 따라 처리하여야 한다. 진피층과 표피층을 분리하는데 이용되는 효소로는 중성 단백질 분해효소인 디스파아제, 터몰리신, 트립신 등이 있다. 1.0 units/㎖ 농도의 디스파아제로 37 ℃에서 60∼120분간 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 또는 200㎍/㎖ 농도의 터몰리신을 37 ℃에서 30분간 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 터몰리신을 이용하면 디스파아제를 이용하는 경우보다 기저막의 손상위험이 낮아진다. 또 다른 방법으로는 용액의 이온 강도를 변화시켜 조직의 두 층을 분리하기도 하는데 이 방법도 역시 이온 강도와 처리시간, 처리온도 등의 조건에 따라 효율이 달라진다. 1몰 이상의 염화나트륨 용액으로 37℃에서 14∼32시간 동안 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 1몰 이상의 염화나트룸 용액에서는 세균이나 곰팡이 등이 증식할 수 없기 때문에 미생물의 오염 위험을 낮출 수 있다. 또는 20mM의 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 용액으로 37℃에서 14∼32시간 동안 처리하여도 역시 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. EDTA를 이용하면 EDTA가 단백질분해효소 억제제의 역할을 하기 때문에 단백질분해효소에 의한 조직의 손상을 줄일 수 있다. 따라서, 1몰의 염화나트륨 용액에 1∼5mM의 EDTA를 첨가하여 처리하면 미생물의 오염이나 효소에 의한 조직 손상을 최소화하며 진피층과 표피층을 분리할 수 있다.

제 2 단계는 상기와 같이 표피층을 제거한 다음, 진피층의 세포를 제거한다.

면역반응은 주로 세포막에 존재하는 막 단백질에 의해 야기된다. 따라서 세포를 제거하면 면역반응을 최소화할 수 있다. 세포와 세포외간질과의 물리, 화학적 성질의 차이를 이용하여 조직의 손상 없이 세포만 선별적으로 제거하는 방법을 이용한다. 세포막의 주 성분은 인지질로 여러 가지 계면활성제를 이용하면 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다.

이를 위하여 소듐도데실 설페이트(SDS)와 같은 이온성 계면활성제, 또는 트리톤 엑스-100, 트윈20, 트윈 40, 트윈60, 트윈80, 노니데트 피-10(NP-10), 노니데트 피-40(NP-40) 등과 같은 비이온성 계면활성제 등이 이용된다.

진피층을 실온에서 0.2∼1% 농도의 SDS 용액으로 실온에서 30∼120분간 처리하면 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다. 또는 0.1∼2.0% 농도의 트윈 20 용액으로 실온에서 30∼180분간 처리하거나, 0.2∼2% 농도의 트리톤 엑스-100 또는 노니데트피-40 용액으로 22-37℃에서 30∼180분간 처리하면 역시 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다.

상기 화학적인 방법 외에 물리적인 방법으로도 세포를 제거할 수 있는데, 진피층에 5∼60분간 10∼100 ㎑의 초음파를 처리하면 세포를 제거할 수 있다.

또는 계면활성제와 초음파를 조합하여 사용하여도 역시 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다.

또한, 용매(TNBP)와 계면활성제를 사용하여 세포 제거와 바이러스 제거를 동시에 할 수 있다.

제 3 단계는 진피층에서 세포를 제거한 다음, 기저막층을 제거한다.

기저막층을 진피조직으로부터 분리하는 방법은 물리적 방법과 인체에 무해한 화학물질을 이용한 화학적 방법 등이 있다. 물리적인 방법으로는 표피층이 제거된 진피층 윗면을 육절기를 사용하여 0.01 내지 0.5 mm(바람직하게는 0.05 내지 0.2 mm) 두께로 얇게 잘라주는 방법이 있다. 이 경우 육절기 칼날은 열발생을 최소화하여 진피조직의 변성을 막을 수 있도록 탄소강 소재를 사용할 수 있다. 화학적 처리방법은 미세침이 부착된 롤러를 이용하여 기저막층 상단 표면에 작은 구멍을 낸 후 기저막층을 진피층으로 분리하기 위해 0.3% 과산화수소수 용액을 1시간내지 3시간 가량 처리하면 기저막층의 멤브레인 단백질의 구조를 느슨하게 만들어 주어 진피조직의 파괴 없이 기저막을 제거할 수 있다.

마지막으로, 기저막층을 제거한 후, 동결용액 처리 및 동결 건조하여 보존한다.

동결용액은 용액의 이온강도나 삼투압을 유지하는 완충용액, 얼릴 때 진피층 조직의 물리, 화학적인 손상을 막는 동결보호제, 건조할 때 진피층 조직의 구조 변화를 방지하는 건조보호제 등으로 구성된다. 동결보호제는 유리전이온도를 높여 얼어 있는 조직의 안정성을 높인다. 유리전이온도가 높아지면 조직 중에 육각형얼음 보다 덜 안정한 유리질의 얼음이나 정방형의 얼음의 비중을 높여 건조 속도를 더 높일 수 있다. 또 유리질의 얼음과 정방형의 얼음은 얼음의 크기가 작아 조직을 덜 손상시킨다. 따라서 동결용액에는 반드시 동결보호제가 포함되어야 한다. 현재 많이 사용되는 동결보호제로는 디메틸설폭시드(DMSO), 덱스트란, 설탕, 프로필렌글리콜, 글리세롤, 마니톨, 솔비톨, 과당, 트레할로스, 라피노스, 2.3-부탄디올, 수산화에틸전분(HES), 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 프롤린, 헤타스타치, 혈청알부민 등이 있다. 이러한 성분들과 여러 가지 염기성분을 조합하여 동결용액을 제조하여 이용한다. 그 중 덱스트란, 글리세롤, 헤타스타치, 마니톨, 수산화에틸전분 등은 혈청대체물로도 이용되고 있으며, 또 폴리에틸렌글리콜의 경우 단백성 주사제의 안정제로도 이용되고 있어 안정성이 어느 정도 검증되어 있다. 이처럼 이미 인체에 해가 거의 없다고 알려진 물질들을 주성분으로 동결용액을 제조한다. 이렇게 제조한 동결용액에 진피층을 담그고 적절한 방법을 이용하여 동결용액이 잘 침투할 수 있도록 한다. 동결용액이 침투된 진피층을 -70 ℃ 이하(바람직하게는 - 40 ℃ 내지 -70 ℃)의 초저온 냉동고에 보관한다. 12시간 내지 48시간 동결 실시후 동결건조기에 이동하여 동결건조시간을 24시간 내지 50시간 동안 시행하는 것이 바람직하다.

이렇게 제조된 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체를 피부손상 치료제로 사용한다.

즉, 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피 이식체는 화상, 교통사고, 궤양 등에 의한 피부 복원제, 전층 피부 재건제, 비중격 재건제, 뇌척수 경막결손창의 재건제, 함몰교정제, 반흔교정제, 반안면 위축 교정제 등 피부과, 성형외과, 부인과, 외과, 신경외과, 비뇨기과, 이비인후과 영역에서 사용할 수 있다.

이하, 본 발명에 따르는 실시예 및 본 발명에 따르지 않는 비교예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 하기 제시된 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체 제조

피부조직(조직은행으로부터 비영리 목적의 환자의 치료를 위해 기증받은 시신으로부터 채취)을 중성 단백질 분해효소인 디스파아제 1.0 units/㎖ 농도로 처리하고, 교반배양기에서 37 ℃의 온도로 60분 내지 120분 동안 교반 후 멸균 증류수로 3회 세척하여 진피층과 표피층을 분리하여 표피층을 제거하였다.

표피층을 제거한 조직을 1% 농도의 트리톤 엑스-100 용액으로 30 ℃에서 100분간 처리하여 진피층의 세포를 제거하였다.

표피층이 제거된 진피층 윗면을 열발생을 최소화하여 진피조직의 변성을 막을 수 있도록 탄소강 소재의 칼날의 육절기를 사용하여 0.05 내지 0.2 mm 두께로 얇게 잘라 기저막층을 제거하였다.

동결용액으로 10%의 덱스트란 용액을 사용하고, 이 동결용액에 상기 기저막층이 제거된 진피조직을 -4 ℃에서 12시간 동안 담궈 동결용액이 잘 침투되도록 한 후, -70 ℃ 이하의 초저온 냉동고에 12시간 보관하고 동결건조기에 48시간 동결건조 하였다.

비교예 1: 기저막층이 제거되지 않은 무세포 진피조직 이식체 제조

상기 실시예 1에서 기저막층을 제거하는 단계를 생략한 것을 제외하고 상기 실시에 1과 동일하게 실시하여 무세포 진피조직 이식체를 제조하였다.

실험예 1: 섬유아세포 유입 확인

180g 의 실험용 동물 백서(Sprague Dawley rat)를 럼푼을 이용하여 마취를 유도하였다. 마취 후 등에 Clipper를 이용하여 삭모한 후 1X1cm 의 조직을 양측면에 이식하였다. 이때, 기저막층이 제거되지 않은 무세포 진피 조직(비교예 1)은 우측에, 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직(실시에 1)은 좌측에 이식하였다. 이식 방법은 블레이드(blade)를 사용하여 5 mm 정도 절개(incision)하여 피하에 삽입 후 봉합하였다. 봉합 후 베타딘을 처리하여 마취가 깨어나면 사육장으로 옮겼다.

이식 4주 후 조직 검사를 위해 피부조직과 함께 이식된 무세포 진피조직을 채취하였다. 그 방법은 실험동물을 식염수 100 ml에 이어 포스페이트 버퍼로 준비한 10% 포르말린 용액(fixative) 500 ml로 심장을 통해 관류하였다. 처음 고정액 200 ml은 5분간, 그리고 나머지 300 ml은 25분간에 걸쳐 관류하고, 조직을 추출 후 고정액으로 3시간 동안 고정시키고 30% 수크로오스가 함유된 PBS(phosphate buffered saline)에 넣어 4 ℃에서 하루 동안 보관하였다. 다음날 채취한 피부조직을 급속 냉동한 후 채취 조직을 30 um의 크기로 잘랐다. 섬유아세포의 유입 및 신혈관 생성확인, 피부 생착율 확인을 위해 Hematoxylin & Eosin 염색을 실시하여 관찰 하였다.

도 2와 도 3에서 보듯이, 섬유아세포를 확인할 수 있는 표지자인 Hematoxylin이 기저막층이 제거되지 않은 경우(비교예 1)에 기저막층 부위에 섬유아 세포가 아래쪽으로 유입되지 않고 기저막층 윗쪽에 모여있음을 확인(도 2의 검정 화살표)할 수 있다. 이에 반해 기저막 층을 제거한 경우(실시예 1) 윗쪽에 섬유아 세포가 모여 있지 않고, 이식체에 섬유아세포가 고르게 생착되었음(도 3의 검정 화살표)을 확인하였다.

실험예 2: 신혈관 생성 확인

상기 실험예 1과 동일한 방법으로 실시하여 이식된 무세포 진피 조직을 Hematoxylin & Eosin 염색을 실시하여 이식체의 신혈관 생성을 확인하였다.

도 4에서 보듯이, 기저막층이 제거되지 않은 무세포진피조직에 비해 기저막층이 제거된 무세포진피조직이 혈관 형성이 증가되었음을 확인(검정화살표)할 수 있다.

실험예 3: 피부 생착률 확인

상기 실험예 1과 동일한 방법으로 실시하여 이식된 무세포 진피 조직을 Hematoxylin & Eosin 염색을 실시하여 이식체의 피부 생착률을 확인하였다.

도 5에서 보듯이, 기저막층이 제거되지 않은 무세포진피조직의 경우 기저막층에 의해 기저막층 위쪽에 섬유아세포가 침투되지 못하고 이식체 윗쪽 바깥에 침착이 된 것을 확인할 수 있다. 이에 비해 기저막층이 제거된 무세포진피조직의 경우 섬유아 세포가 이식체 내로 침투되어 자라고 있는 것을 확인할 수가 있다. 이로 인해 더 많은 수의 섬유아 세포가 기저막층이 제거된 무세포진피조직 이식체에 있음을 확인할 수 있다.

Claims (14)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 계면활성제를 0.2%~1%의 농도로 22~37 ℃에서 30분 내지 100분간 처리하여 진피층의 세포를 제거하는 단계; 및
   탄소강 소재 칼날의 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법.
   
7. 제 6 항에 있어서,
   상기 무세포 진피조직 이식체는 뼈, 인대, 건 또는 피부인 것을 특징으로 하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법.
   
8. 삭제
9. 제 6 항에 있어서,
   상기 무세포 진피조직 이식체의 제조방법은
   표피층을 제거하는 단계;
   계면활성제를 0.2%~1%의 농도로 22~37 ℃에서 30분 내지 100분간 처리하여 진피층의 세포를 제거하는 단계;
   탄소강 소재의 칼날의 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 단계; 및
   동결 보존 단계
   를 포함하는 것을 특징으로 하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법.
   
10. 제 9 항에 있어서,
    상기 표피층은 단백질 분해 효소를 이용하여 진피층과 분리시켜 제거하는 것을 특징으로 하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법.
    
11. 제 6 항에 있어서,
    상기 진피층의 세포는 추가로 초음파 처리하여 제거하는 것을 특징으로 하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법.
    
12. 제 9 항에 있어서,
    상기 동결 보존은 동결보존제가 포함된 동결 용액에 진피층을 담궈 -70 ℃ 이하에서 보관하는 것을 특징으로 하는 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체의 제조방법.
    
13. 제 6 항의 방법으로 제조된 무세포 진피조직 이식체.
    
14. 제 13 항에 따른 무세포 진피조직 이식체를 포함하는 피부손상 치료제.

Images