KR20130138968A - 고온에서 추출된 녹각추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품 - Google Patents
고온에서 추출된 녹각추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각추출물은 기존의 추출방법에 의한 녹각추출물보다 성장호르몬(GH), 인슐린유사성장인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)을 다량 함유하고 있으며 2형 콜라겐도 함유하고 있어, 면역증진, 성장호르몬 증가, 조혈기능 개선, 골밀도 개선 및 류마티스 관절염 억제 효과가 뛰어나 이는 녹용과 동등하거나 더 우수하여, 우수한 품질을 갖는 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
Description
본 발명은 약리효과가 충분히 개선된 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
녹용은 동물자원을 활용한 인체의 건강 증진을 위한 기능성 식품으로 개발이 가능한 식품이며 한의학(韓醫學)에서는 대표적인 보양·강장 소재로서 한국인과 중국인들이 가장 애용하고 있는 약제이다. 아시아지역이 주소비국이고 더 나아가 한국이 세계 최대 소비시장(80%, 2007년 기준)으로 통계가 집계되고 있다. 녹용의 효능에 관한 과학적인 연구는 매우 광범위하고 철저하게 진행되어 있어서 이에 근거하여 아시아 이외의 외국인들도 녹용을 건강증진의 목적으로 먹고 있는 사람들이 늘고 있다. 녹각은 녹용의 채취시기가 늦어져서 골화(骨化, Ossification 또는 Calcification)가 현저하게 진행된 것을 말한다.
국내에서 녹용 및 녹각은 절편의 형태로 포장되어 그 자체로 활용되거나, 일부 제약회사에서는 일반적으로 100℃ 온도에서 추출하여 “녹각교” 또는 파우치에 미량 함유되어 판매되고 있으며, 대부분의 한방병원에서는 건강 보양제로 100℃에서 다른 약제와 함께 가열 추출한 액상제품으로 판매되고 있다. 이들 절편들 중에서 녹용은 100℃의 물에 잘 추출되지만 녹각은 거의 추출되지 않으므로(추출율 10%이하) 녹각은 녹용에 비하여 효능·효과의 기능은 크게 차이가 없지만 효능의 강도는 매우 약한 것으로 한의학계와 일반 국민은 인식하고 있다.
따라서 일반인들은 값이 싼 녹각보다 값이 비싼 녹용을 효능의 강도 면에서의 차이점 때문에 선호한다. 그뿐만이 아니라 녹용에 대해서는 많은 과학적 연구가 다양하게 되어 있는 반면 녹각에 대한 연구논문은 찾아보기 힘들다.
녹용과 녹각의 유효성분들 중에서 매우 중요하고 함량이 많이 들어 있는 성분들 중의 하나는 콜라겐 성분인데 현재 시중에서 유통되는 열수 추출물 제품인 “녹각교” 중에 함유된 콜라겐의 함량을 분석해 보면 제품에 표시된 녹각의 사용량으로부터 산출한 콜라겐 함량에 비하여 매우 미달하는 제품이 유통되고 있다.
한국공개특허 제 2009-0022200호에는 녹각교 농축분말의 제조방법에 관한 특허가 개시되어 있다.
본 발명은 녹용과 동등하거나 더 우수한 약리 효과를 갖는 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
1. 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 면역계 질환, 성장 질환, 빈혈, 골다공증 및 류마티스 관절염으로 이루어진 군에서 선택된 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
2. 위 1에 있어서, 상기 녹각 추출물은 2형 콜라겐, 성장 호르몬(GH), 인슐린 유사 성장 인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)으로 이루어진 군에서 선택된 유효 성분을 포함하는 약학 조성물.
3. 위 1에 있어서, 상기 추출은 녹각의 2 내지 8배 중량의 용매의 존재 하에서 2 내지 5회 반복 수행되는 것인 약학 조성물.
4. 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 면역증진, 성장호르몬 증가, 조혈기능 개선, 골밀도 개선 및 류마티스 관절염 억제로 이루어진 군에서 선택된 효능을 갖는 건강기능식품.
5. 위 4에 있어서, 상기 녹각 추출물은 2형 콜라겐, 성장 호르몬(GH), 인슐린 유사 성장 인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)으로 이루어진 군에서 선택된 유효 성분을 포함하는 건강기능식품.
6. 위 4에 있어서, 상기 추출은 녹각의 2 내지 8배 중량의 용매의 존재 하에서 2 내지 5회 반복 수행되는 것인 건강기능식품.
7. 위 4 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 유제품, 제과물, 조미료, 음료 및 드링크제, 스낵, 캔디류, 아이스크림 및 냉동용 디저트, 아침 곡물류, 영양바, 스낵 바 초콜렛 제품, 가공 식품, 곡물 제품 및 파스타, 스프, 소스 및 드레싱, 과자 제품, 오일 및 지방 제품, 유제품 음료 (dairy drink) 및 우유 음료, 두유 및 콩 유제품 (soy dairy-like product), 냉동식품, 조리 음식 및 대체 음식, 육류 제품, 치즈, 요구르트, 빵 및 롤빵, 효모 제품, 케이크, 쿠키 및 크래커로 이루어진 군에서 선택된 것인 건강기능식품.
본 발명의 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각추출물은 기존의 추출방법에 의한 녹각추출물보다 성장호르몬(GH), 인슐린유사성장인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)을 다량 함유하고 있으며 2형 콜라겐도 함유하고 있어, 면역증진, 성장호르몬 증가, 조혈기능 개선, 골밀도 개선 및 류마티스 관절염 억제 효과가 뛰어나 이는 녹용과 동등하거나 더 우수하여, 우수한 품질을 갖는 약학조성물 및 건강기능식품을 제공한다.
도 1은 온도 조건에 따른 녹각추출물의 수율을 나타낸 것이다.
도 2는 녹용 및 녹각 콜라겐의 전기영동 사진이다.
도 3은 녹용 및 녹각 콜라겐의 SDS-PAGE 결과이다.
도 4는 녹용 및 녹각 추출물이 비장 세포의 증식에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 5는 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 골밀도 변화를 나타낸 것이다.
도 6은 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 성장호르몬 변화를 나타낸 것이다.
도 7은 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 IGF-1 변화를 나타낸 것이다.
도 8은 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 EPO 변화를 나타낸 것이다.
도 2는 녹용 및 녹각 콜라겐의 전기영동 사진이다.
도 3은 녹용 및 녹각 콜라겐의 SDS-PAGE 결과이다.
도 4는 녹용 및 녹각 추출물이 비장 세포의 증식에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 5는 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 골밀도 변화를 나타낸 것이다.
도 6은 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 성장호르몬 변화를 나타낸 것이다.
도 7은 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 IGF-1 변화를 나타낸 것이다.
도 8은 녹각 및 녹용 추출물을 투여한 동물의 EPO 변화를 나타낸 것이다.
본 발명은 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각추출물은 기존의 추출방법에 의한 녹각추출물보다 성장호르몬(GH), 인슐린유사성장인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)을 다량 함유하고 있으며 2형 콜라겐도 함유하고 있어, 면역증진, 성장호르몬 증가, 조혈기능 개선, 골밀도 개선 및 류마티스 관절염 억제 효과가 뛰어나 이는 녹용과 동등하거나 더 우수하여, 우수한 품질을 갖는 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 녹각추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.
본 발명의 녹각추출물에 있어서, 국산, 일본, 러시아, 중국, 미국, 캐나다 등 녹각의 산지는 어느 곳이든 무방하다.
녹각을 폭 0.1~2cm내외로 잘게 분쇄한다. 분쇄방법은 한정되지 않고 당업계에 알려진 어떠한 방법도 사용가능하다.
분쇄된 녹각에 용매를 가하여 130℃이상의 온도로 1~3시간동안 추출한다. 추출용매의 양은 추출물이 충분히 얻어질 수 있을 때까지 적절하게 결정될 수 있으나 녹각중량대비 2~8배의 용량의 용매로 추출할 수 있고, 제조공정상 효율을 고려하여 더 바람직하게는 3~7배의 용량의 용매로 추출할 수 있다.
여과하여 추출물을 얻고 추출단계를 1~4회 더 반복한다.
이후 상기 여과된 추출물을 분획하고 감압 농축하여 건조시켜 본 발명의 녹각추출물을 얻는다.
기존에는 녹용이 노화되면 녹각이 되는데 이때 녹용속의 유효성분인 2형 콜라겐이 1형 콜라겐으로 변화하는 것으로 알려져 있어 2형 콜라겐 함유여부가 녹용과 녹각의 가장 큰 차이점으로 알려져 있었다. 그러나 상기의 추출방법으로 추출한 녹각추출물의 경우 2형 콜라겐, 성장 호르몬(GH), 인슐린 유사 성장 인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)으로 이루어진 군에서 선택된 유효 성분을 포함하고 있어 녹용과 동등하거나 오히려 더 우수한 약리활성을 갖는다.
본 발명의 바람직한 구현 예에 따르면, 본 발명의 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물은 비장 세포활성 증진효과가 있어 이를 포함하는 면역계질환의 예방 또는 치료용 약학조성물일 수 있다.
상기 면역계질환은 생체의 면역체계 이상으로 유발되는 다양한 염증성 질환, 알러지성 질환 및 암 등을 포함하며, 예를 들면, 감기, 천식, 폐렴, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 아토피성 피부염, 알러지, 알츠하이머병, 자가면역성 갑상선 질환, 염증성 장질환, 재생불량성 빈혈, 홍반성 루푸스 및 건선 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 면역계질환의 예방 또는 치료용 약학조성물은 자닥신(티모신 알파-1), EP-HBS(HBV Therapeutic Vaccine), HBV Core Antigen Vaccine, LPS, Con. A와 같은 면역자극제 또는 인트론 A(인터페론 알파-2b), 페가시스(페그인터페론 alfa-2a)과 같은 면역조절제와 함께 투약될 수 있다.
본 발명의 다른 일 구현예로서, 본 발명의 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물은 성장호르몬(GH) 및 인슐린유사성장인자(IGF-1)을 함유하고 있어 이를 포함하는 성장 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물일 수 있다.
본 발명의 성장 질환 예방 또는 치료용 의약조성물은 성장호르몬을 증가시키므로, 소인증, 왜소증, 소아의 발육부진 및 성장저하와 같은 성장 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 일 구현예로서, 본 발명의 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물은 에리스로포이에틴(EPO)를 함유하고 있어 이를 포함하는 빈혈의 예방 또는 치료용 약학조성물일 수 있다.
에리트로포이에틴(EPO)은 적혈구계 선조 세포를 적혈구로 성숙시키는 데 필요한 당단백질 호르몬이다. 이는 신장에서 생성되고 순환시에 적혈구 수준을 조절하는 데 필수적이다.
빈혈은 헤모글로빈 수의 감소, 혈액 내 헤모글로빈의 양적 감소, 헤모글로빈 분자의 산소결합 능력의 저하로 인한 조직세포로의 산소 공급이 감소한 생리적 반응으로, 본 발명에 의하여 치료할 수 있는 증상에는 신장 기능의 쇠퇴 또는 손실(만성 신부전)과 관련된 빈혈, 화학요법 또는 항- 바이러스 약제(예, AZT)와 같은, 골수억제 요법과 관련된 빈혈, 비-골수 암의 진행과 관련된 빈혈, 바이러스 감염(예, HIV)과 관련된 빈혈 및 만성 질병의 빈혈을 포함하나 이에 한정되지는 않는다.
본 발명의 빈혈의 예방 또는 치료용 약학조성물은 조혈 세포를 증식시키고 분화 및 동원을 자극할 수 있다. 본 발명은 조혈 세포의 증식 또는 분화를 자극하거나 또는 조혈 세포를 동원하는 것이 바람직한 경우라면 언제나 유용하다. 조혈 세포의 동원은 골수 내의 초기 기원 세포의 풍부 및 이들 세포가 동원제(예컨대, G-CSF, GM-CSF 등)에 반응하여 주변으로 점증을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 유용한 제제는 조혈 세포 결핍을 저해하거나 또는 이러한 결핍을 갖고 있는 개체의 조혈 및 성숙 혈액 세포 수를 회복시키기 위하여 사용될 수 있다. 이러한 제제는 또한 개체의 면역 시스템을 보충 또는 생성하기 위해 사용되는 경우, 골수 또는 말초 혈액 이식편과 같은 조혈 세포 이식편과 관련되어 사용될 수도 있다. 또한, 이 제제는 면역 보조제로서 사용될 수 있다. 이 제제는 또한 치료 및 연구 용도를 위한 세포의 배양과 관련되어 시험관내에서 유용하다.
본 발명의 다른 일 구현예로서, 본 발명의 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물은 골밀도 개선효과가 있어 이를 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 의약조성물일 수 있다.
골다공증은 골 조직의 석회가 감소되어 뼈의 치밀질이 엷어지고 그로 인해 골수강이 넓어지는 상태를 말하는 것으로, 원발성 골다공증(예컨대, 나이가 듦에 따른 원발성 골다공증, 폐경에 따른 원발성 골다공증, 난소 적출술에 따른 원발성 골다공증 등), 2차성 골다공증(예컨대, 글루코코르티코이드 유발성 골다공증, 갑상선 기능 항진성 골다공증, 고정 유발성 골다공증, 헤파린 유발성 골다공증, 면역 억제 유발성 골다공증, 신부전에 따른 골다공증, 염증성 골다공증, 쿠싱증후군에 따른 골다공증, 류머티스성 골다공증 등)으로 나눌 수 있다.
본 발명의 녹각추출물은 골다공증의 예방 및 치료를 위하여 단독으로 사용하거나 기존에 사용된 골다공증에 대한 예방 또는 치료 활성을 가지는 물질을 포함할 수 있으며, 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 일 구현예로서, 본 발명은 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 류머티스 관절염의 예방 또는 치료용 의약조성물일 수 있다.
류머티스 관절염이란 활막조직을 침범하는 원인을 알 수 없는 만성이고 진행성인 자격면역 질환으로 비가역적 관절손상, 만성통증, 강직과 기능적 손상을 일으키는 만성 염증성 전신 질환이다.
류마티스 관절염 동물모델에서 2형 콜라겐을 경구투여하면 페이에르판(peyer's patch) 내에서 CD11c+, CD11b+ 수지상 세포의 비율이 증가하고 CD4+, CD25+ 조절T세포의 유도가 증가하게 되므로 경구관용(oral tolerance)을 유도하여 면역억제효과를 나타낸다. 또한 CD11c+, CD11b+ 수지상 세포는 입양전이(adoptive transfer)에 의해 류머티스 관절염의 심각성 경감시킨다(ARTHRITIS & RHEUMATISM Vol. 54, No. 3, March 2006, pp.887-898 참조).
본 발명의 면역계 질환, 성장 질환, 빈혈, 골다공증 또는 류머티스 관절염의 예방 또는 치료용 의약조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여된다. 본 발명에서 사용된 용어, “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 화합물을 포함하는 조성물의 투여방법은 경구투여 또는 정맥투여가 바람직하다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 성별, 연령, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여 방법, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.
의학적으로 허용 가능한 임의의 투여 방식을 사용하여 실시될 수 있다. 이러한 투여 방식으로는 경구, 직장, 국소, 비강, 피내 또는 비경구 경로가 있다. 용어 "비경구"는 피하, 정맥내, 근육내 또는 주입을 포함한다. 정맥내 또는 근육내 경로는 장기간의 요법 및 예방법에는 특히 적합하지 않다. 그러나 이들은 응급 상황에서는 바람직할 수 있다. 경구 투여가 개체의 편리 및 투여 일정을 위하여 바람직하다.
본 발명의 면역계 질환, 성장질환, 빈혈, 골다공증 또는 류머티스 관절염의 예방 또는 치료용 의약조성물은 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다. 투여를 위해서 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화 할 수 있다. 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제 및 유제 등이 될 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가로스, 벤토나이트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 약학 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 환약, 캡슐, 과립 또는 정제 등으로 제제화 할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제로는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 및 유화액이 있다. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일(예: 올리브유) 및 주사가능한 유기 에스테르(예: 에틸 올리에이트)이다. 수성 담체로는 식염수 및 완충 매질을 포함하여 물, 알콜/수용액, 유화액 또는 현탁액이 있다. 비경구 부형제로는 염화나트륨 용액, 링거(Ringer) 덱스트로즈, 덱스트로즈 및 염화 나트륨, 락테이트화 링거 또는 고정 오일이 있다. 정맥내 부형제로는 유체 및 영양 보충액, 전해질 보충액(예: 링거 덱스트로즈를 기본으로 하는 것) 등이 있다. 방부제 및 다른 첨가제, 예를 들어 항균제, 산화방지제, 킬레이트제 및 불활성 기체 등도 또한 존재할 수도 있다. 더 적은 투여량은 정맥내 투여와 같은 다른 투여 형태에 의해 이루어질 것이다. 개체의 반응이 적용된 초기 투여량에서 불충분한 경우에는, 개체의 내성이 허용하는 정도까지 더 많은 투여량(또는 상이한, 더 국한된 전달 경로에 의해 효과적으로 더 많은 투여량)이 사용될 수 있다. 1일 다수회 투여가 고려된다.
본 발명의 면역계 질환, 성장 질환, 빈혈, 골다공증 또는 류머티스 관절염의 예방 또는 치료용 의약조성물은 일상적으로 염, 완충제, 방부제, 상용성 담체 및 임의로 다른 치료제를 함유할 수 있다. 염은 약에 사용될 때 약학적으로 허용 가능해야 하지만, 약학적으로 허용 불가능한 염은 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제조하는데 편리하게 사용될 수 있고, 본 발명의 범주에서 제외되지 않는다. 이러한 약리학적으로 및 약학적으로 허용 가능한 염으로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, 시트르산, 포름산, 말론산, 숙신산 등으로부터 제조된 것이 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 또한, 약학적으로 허용 가능한 염은 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토 염으로서 제조될 수 있다.
본 발명의 다른 일 구현예로서, 본 발명은 130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 건강기능식품일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 면역 증진, 성장호르몬 증가, 조혈기능 개선, 골밀도 개선 및 류마티스 관절염 억제로 이루어진 군에서 선택된 효능을 갖는다.
본 발명의 건강기능식품은 유제품, 제과물, 조미료, 음료 및 드링크제, 스낵, 캔디류, 아이스크림 및 냉동용 디저트, 아침 곡물류, 영양바, 스낵 바 초콜렛 제품, 가공 식품, 곡물 제품 및 파스타, 스프, 소스 및 드레싱, 과자 제품, 오일 및 지방제품, 유제품 음료 (dairy drink) 및 우유 음료, 두유 및 콩 유제품 (soy dairy-like product), 냉동식품, 조리 음식 및 대체음식, 육류 제품, 치즈, 요구르트, 빵 및 롤빵, 효모 제품, 케이크 및 쿠키 및 크래커로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실시예 1. 녹각 추출물의 제조
녹각을 폭 1cm내외로 잘게 만든 후 그 중 100g을 취하여 고압솥에 넣고 물 500ml를 가하여 136℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이를 거즈로 걸러서 수층을 튀한 다음에 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 투명한 수층을 얻고 원심 침전물과 거즈에 있는 여과 잔사를 합하여 증류수 200ml를 가한 다음, 같은 조건으로 가열 및 여과하는 과정을 2회 더 반복하였다. 추출하여 원심분리한 상등액을 모두 합한 다음에 분액여두에 넣고 같은 용량의 부탄올을 가하여 진탕하여 분획하는 과정을 2회 반복하고 수층을 취하여 감압농축하여 그 용량을 약 20%가 되도록 줄였다. 이후 셀로판 반투막 주머니에 넣고 증류수에 대하여 4~6시간 동안 4℃에서 투석하여 겔화된 내용물을 얻고 동결건조하여 26.2g의 추출물을 얻었다.
실시예 2. 녹용 및 녹각추출물의 2형 콜라겐의 함유 여부 분석
녹용 및 녹각에서 동일하게 2형 콜라겐이 들어 있음을 확인하기 위하여 단백질을 변성하지 않는 냉침 추출법을 이용하였다. 녹각 및 녹용 10g을 취하여 50% 아세트산 100ml에 넣고 4℃에서 24시간 동안 냉침하여 변성되지 않은 단백질을 얻은 후 투석을 통하여 저분자 물질을 제거하고 동결건조를 통하여 분말 상태의 녹용 및 녹각 추출물을 얻었다. 이와 같은 방법으로 제조하여 변성되지 않은 녹용 및 녹각 추출물을 사용하여 2형 콜라겐의 분석을 하였다.
녹용 및 녹각에서 변성되지 않은 단백질을 추출(A-2)하여 12% 아크릴아마이드 겔을 제작한 후 전기영동(80V, 30mA, 2hr)하였다. Size maker(1kb) 및 표준 2형 콜라겐 및 1형 콜라겐을 같이 로딩하여 녹용 및 녹각 단백질 추출물에서 콜라겐을 분석하였다 표준 1형 콜라겐 및 2형 콜라겐은 chondrex(USA) 사에서 구입하였다.
분석 결과 녹각 및 녹용 추출물에서 2형 콜라겐(55KDa)과 1형 콜라겐(130KDa)의 밴드 두 가지 모두 관찰되었다. 녹각 추출물에서는 1형 콜라겐의 밴드가 진하게 관찰되었으며 녹용추출물에서는 2형 콜라겐의 밴드가 진하게 관찰되었다(도 2 참조). SDS-PAGE를 UN-SCAN-IT를 이용하여 밴드의 면적을 구하였다(도 3 참조).
도 2에서 1은 녹각추출물(Ossified antler extract), 2는 녹용추출물(Antler extract), 3은 2형 콜라겐, 4는 1형 콜라겐 및 M은 Size maker이다.
실험예 1. 녹용 및 녹각 추출물의 면역활성 증진 여부 확인
비장 세포활성 측정은 체내에서 간과 함께 세포 분열이 가장 활발한 기관으로서 면역증가 효과 또는 세포 재생 능력 평가에서 주로 사용되는 장기이다. 본 실험에서는 SD rat의 비장을 1차 세포배양을 통해 각 군별 비장 세포를 배양 하고 항원 콘카나발린 A를 처리하여 그에 따른 세포 증식능을 평가 하였다. 실험동물은 6주령 SD rat을 이용하였으며 녹용 및 녹각 추출물을 3주간 경구투여 한 후 개복하여 동물의 비장을 분리하였다. 분리한 비장은 다음과 같은 단계를 거쳐 MTT assay를 하였다.
각 그룹별 SD rat은 10마리였고, 온도 25±1℃, 습도 50±5%에서 사육하였다. 비장세포는 온도 25±0.1℃, CO2 농도 5±0.2%에서 배양하였다.
그 결과 3주간 녹용 및 녹각 추출물을 경구 투여한 SD rat의 비장을 취하여 1차 세포배양을 통하여 비장세포의 증식을 확인한 결과 녹용 추출물과 녹각 추출물을 경구 투여한 동물의 시료에서 면역세포가 증식되는 것을 확인할 수 있었다(도 4 참조). 동물의 중량(kg)당 150mg의 녹용 추출물을 경구 투여한 동물의 경우 control 그룹보다 비장세포가 120% 더 활성화 되었으며, 녹각 추출물을 동물의 중량(kg)당 100~200mg을 경구 투여한 동물에서 비장세포가 대조군 대비 약 115~160%정도 증가하였다. 각 시료는 dose-dependency가 보였다. 특히 녹각 추출물 150mg 이상을 경구 투여한 동물은 녹용 추출물 150mg을 경구 투여한 동물의 비장세포 활성보다 높은 결과를 보여주었다.
도 4에서 AT는 Antler extract(녹용추출물), OA는 Ossified antler extract(녹각추출물) 투여군이고, 100,150,200은 투여량이다(mg/kg).
실험예 2. 녹용 및 녹각 추출물이 골밀도에 주는 영향 확인
6주령 SD rat 암컷을 이용하여 충남동물자원센터에 의뢰하여 난소를 적출하였으며 1주일간 안정기를 보낸 후 16주간 녹용 및 녹각 추출물을 투여하였다. 사용한 SD rat은 총 70마리였으며 각 그룹당 7마리씩 총 10개의 그룹으로 분류하였다. 온도는 25±1℃, 습도는 50±5%에서 사육하였다.
난소적출을 하지 않은 normal 그룹, 난소적출은 하지 않았으나 복부를 개복하였다가 닫은 sham 그룹, 난소 적출 후 단백질원으로 카세인을 경구 투여한 control 그룹, 동물의 중량(kg) 당 150mg의 녹용 추출물을 투여한 그룹 등을 positive 및 negative control로 분류하고, 동물의 중량(kg) 당 50, 100, 150, 200, 300mg의 녹각추출물을 농도별로 투여한 5개의 그룹으로 분류하여 총 10개의 그룹으로 분류하여 실험을 진행하였다. 각 그룹의 동물은 기본적으로 자유식이를 하였으며 각각의 시료에 대하여 경구 투여하였다. 골밀도 측정은 오창에 소재한 한국기초과학지원연구원의 micro CT(Inveon™, Siemens Preclinical Solution, USA) 기기를 이용하여 측정하였으며 측정조건은 엑스레이 전압 80kV, 전류 500uA, 노출시간 250ms 및 filed of view(FOV) 56.97 * 71.21의 조건으로 촬영하였으며, 얻어진 이미지는 Shepp-Logan 필터 방식으로 영상을 재구성하였다. 영상 분석은 Inveon Research Workplace(Siemens Preclinical Solution, USA) 프로그램을 이용하였으며, 대퇴골체 부분에 관심영역을 지정하여 평균값을 구하여 BMD를 산출하였다. 측정 부위는 대퇴부 경부 부분에서 대퇴골 슬개면까지 측정하여 평균값을 구하였다.
그 결과 일반 SD rat과 개복 후 닫은 sham 그룹은 사육 8주까지 골밀도가 증가하다가 16주까지 더 이상 증가하지 않고 유지되는 것을 관찰하였다. 난소적출 후 카세인을 투여한 동물의 그룹에서는 8주 이후 골밀도가 저하 되는 것을 관찰할 수 있었으며, 동물의 중량(kg) 당 150mg의 녹각 추출물과 녹용 추출물은 8주 이후로도 골밀도가 유지되는 것을 관찰 할 수 있었다. 특히 녹각 추출물 150mg을 투여한 그룹은 16주에서 일반 SD와 비슷한 수치까지 증가하여 골밀도 개선효과를 확인 할 수 있었다(도 5 참조).
도 5에서 CA는 카세인 150mg/kg 투여군, AT는 녹용추출물 150mg/kg 투여군 및 OA는 녹각추출물 150mg/kg 투여군이다.
실험예 3. 녹용 및 녹각추출물을 투여한 동물의 혈중 GH(growth hormone) 및 IGF(insulin like growth factor) 변화 측정
6주령 SD rat 암컷을 사용하여 난소 적출한 후 1주간 안정기를 지난 후에 16주간 1일 1회 시료를 투여하여 골밀도의 경시 변화를 측정하고 최종 16주 후 개복하여 심장에서 혈액을 채취하여 1시간동안 상온에 방치 후 원심분리 (6000rpm , 15분)를 하여 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 GH, IGF-1(R&D) assay kit을 이용하여 효소면역측정법으로 측정하였다.
각 그룹별 SD rat은 7마리였고, 온도는 25±1℃, 습도는 50±5%에서 사육하였다.
그 결과 골밀도 개선에 영향을 준 결과와 비슷한 패턴을 보였다. Normal 및 sham 그룹의 혈청 중 GH은 30ng/ml 수준이었으며 난소를 적출하여 카세인을 투여한 그룹은 20ng/ml로 normal 및 sham 그룹에 비하여 혈청 중 GH의 수치가 낮게 측정되었다. 녹각 추출물 150mg을 투여한 군의 혈청 GH은 대체적으로 normal 보다 높게 측정되었다(도 6 참조). 같은 혈청을 이용하여 IGF-1을 측정한 결과에서도 GH의 결과와 비슷하게 측정되었다(도 7 참조). 이는 동일한 양의 녹용추출물을 투여한 군에서의 결과보다 약 10% 더 우수한 결과이다.
도 6 및 7에서 OP는 난소적출(Oophorectomy), Ca는 카세인, AT는 녹용추출물, OA는 녹각추출물, 50, 100, 150, 200 및 300은 투여량(mg/kg)이다.
실험예 4. 녹용 및 녹각추출물을 투여한 동물의 혈중 EPO(erythropoietin) 변화 측정
6주령 SD rat 암컷을 이용하여 난소 적출한 후 1주간 안정기를 지난 후에 3주간 녹용 및 녹각 추출물을 투여하였다. 사용한 동물은 총 35마리였으며 각 그룹당 7마리씩 총 5개의 그룹으로 분류하였다. 온도는 24±1℃, 습도는 50%±5에서 사육하였다.
식수를 투여한 control 그룹, 동물의 중량(kg) 당 150mg의 녹용 추출물을 투여한 그룹 등을 positive 및 negative control로 분류하고, 동물의 중량(kg) 당 100, 150, 200mg의 녹각추출물을 농도별로 투여한 3개의 그룹으로 분류하여 총 5개의 그룹으로 분류하여 실험을 진행하였다. 각 그룹의 동물에게 시료를 3주간 경구투여한 후 심장에서 혈액을 채취하여 1시간동안 상온에 방치 후 6000rpm에서 15분간 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청은 EPO assay kit(MSD사)을 이용하여 효소면역측정법으로 측정하였다.
그 결과 대조군의 혈중 EPO가 25ng/ml 수준인데 반해 녹용 150mg/kg을 투여한 동물의 그룹에서는 EPO의 혈중 농도가 대조군 대비 60%가 증가한 40ng/ml 수준이었으며, 녹각 100~200mg/kg을 투여한 동물의 혈중 EPO의 농도는 대조군 대비 50% 증가한 37±3ng/ml 수준이었다. 녹각 추출물을 투여한 동물의 혈중 EPO 농도는 녹용 추출물을 투여한 동물의 혈중 EPO 농도보다 높지는 않았으나 대조군 동물보다 향상 된 수치를 보여주었다(도 8 참조).
도 8에서 AT150은 녹용추출물 150mg/kg투여군, OA는 각각 녹각추출물 100,150 및 200mg/kg을 투여군이다.
Claims (7)
130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 면역계 질환, 성장 질환, 빈혈, 골다공증 및 류마티스 관절염으로 이루어진 군에서 선택된 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 녹각 추출물은 2형 콜라겐, 성장 호르몬(GH), 인슐린 유사 성장 인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)으로 이루어진 군에서 선택된 유효 성분을 포함하는 약학 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 추출은 녹각의 2 내지 8배 중량의 용매의 존재 하에서 2 내지 5회 반복 수행되는 것인 약학 조성물.
130℃ 이상의 고온에서 추출된 녹각 추출물을 포함하는 면역증진, 성장호르몬 증가, 조혈기능 개선, 골밀도 개선 및 류마티스 관절염 억제로 이루어진 군에서 선택된 효능을 갖는 건강기능식품.
청구항 4에 있어서, 상기 녹각 추출물은 2형 콜라겐, 성장 호르몬(GH), 인슐린 유사 성장 인자(IGF-1) 및 에리스로포이에틴(EPO)으로 이루어진 군에서 선택된 유효 성분을 포함하는 건강기능식품.
청구항 4에 있어서, 상기 추출은 녹각의 2 내지 8배 중량의 용매의 존재 하에서 2 내지 5회 반복 수행되는 것인 건강기능식품.
청구항 4 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 유제품, 제과물, 조미료, 음료 및 드링크제, 스낵, 캔디류, 아이스크림 및 냉동용 디저트, 아침 곡물류, 영양바, 스낵 바 초콜렛 제품, 가공 식품, 곡물 제품 및 파스타, 스프, 소스 및 드레싱, 과자 제품, 오일 및 지방 제품, 유제품 음료 (dairy drink) 및 우유 음료, 두유 및 콩 유제품 (soy dairy-like product), 냉동식품, 조리 음식 및 대체 음식, 육류 제품, 치즈, 요구르트, 빵 및 롤빵, 효모 제품, 케이크, 쿠키 및 크래커로 이루어진 군에서 선택된 것인 건강기능식품.
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