KR20130033440A

KR20130033440A - 클로스트리디움에 대하여 항박테리아 활성을 갖는 화합물

Info

Publication number: KR20130033440A
Application number: KR1020137002738A
Authority: KR
Inventors: 제롬 에밀 조지스 귈레몬트; 피에르 진-마리 버나드 라보이손; 네이서 라우니스
Original assignee: 엘랑코 애니멀 헬쓰 아일랜드 리미티드
Priority date: 2010-08-04
Filing date: 2011-08-04
Publication date: 2013-04-03
Also published as: PL2601193T3; EP2601193B1; US8618100B2; EA201270817A1; JP5886285B2; CL2013000331A1; BR112013003675A8; CA2805358A1; ZA201300432B; SG187175A1; EP2601193A1; KR101499368B1; CO6680629A2; TW201211048A; BR112013003675A2; CY1116238T1; SI2601193T1; TWI498330B; WO2012017030A1; US20130109694A1

Abstract

본 발명은 클로스트리디움(Clostridium) 박테리아, 특히 클로스트리디움 페르프린겐스(Clostridium perfringens)에 대하여 항박테리아 활성을 갖는 화학식 I의 신규한 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 이들 화합물의 화학적 제조 방법에 관한 것이다.
<화학식 I>

Description

클로스트리디움에 대하여 항박테리아 활성을 갖는 화합물{COMPOUNDS WITH ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST CLOSTRIDIUM}

본 발명은 클로스트리디움(Clostridium) 박테리아, 특히 클로스트리디움 페르프린겐스(Clostridium perfringens)에 대하여 항박테리아 활성을 갖는 화학식 I의 신규한 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 이들 화합물의 화학적 제조 방법에 관한 것이다.

클로스트리디움은 100개 초과의 종을 포함하는 혐기성 조건하에 성장하는 포자 형성 그람 양성 박테리아의 속이다. 인간 및 다른 온혈 동물에서 질환에 관여하는 4개의 주요 종이 있다: 보툴리눔 식중독(botulism)을 유발하는 식품 또는 상처에서 독소를 생성하는 유기체인 씨. 보툴리눔(C. botulinum); 위막성 대장염, 중독성 거대결장증 및 항생제로 인한 설사를 유발할 수 있는 씨. 디피실레(C. difficile); 파상풍의 원인 미생물인 씨. 테타니(C. tetani); 및 씨. 페르프린겐스(C. perfringens).

씨. 페르프린겐스는 환경에 어디에서나 흔히 있는 것이고 토양, 먼지, 식품 가공에 사용된 향신료와 같은 원료 성분, 및 인간 및 동물의 장에서 발견된다. 이는 15종이 넘는 상이한 독소를 생성하고 씨. 페르프린겐스로 인한 감염은 씨. 페르프린겐스 A형 식중독, 장독소혈증, 괴사성 장염, 및 가스 괴저를 유발할 수 있다. 가금업에서, 씨. 페르프린겐스 감염은 육용계(broiler) 무리에서 상당히 부정적인 경제적 영향을 미치면서 소화관 건강의 문제를 유발할 수 있다. 식품 산업에서 항생제의 사용은 고도로 규제되기 때문에 대체적 항박테리아 화합물에 대한 필요성이 존재한다.

WO-2008/039640은 화합물 5-[3-((R)(+)-6,8-디브로모-크로만-4-일아미노)-프로필아미노]-4H-티에노[3,2-b]피리딘-7-온 (이는 REP3123으로도 공지됨), 및 클로스트리디움 디피실레에 대한 그의 항박테리아 활성을 개시하고 있다.

REP3123 화합물의 항박테리아 활성의 시험관내 시험은 상기 화합물이 클로스트리디움 속의 박테리아에 대하여 활성이지만 REP3123은 또한 소화관에 존재하는 매우 다양한 박테리아에 대하여 항박테리아 활성을 갖는다는 것을 입증한다. 그람 양성 박테리아에 대하여 이러한 광범위(broad-spectrum) 항박테리아 활성은 장내 미생물에 부정적인 영향을 미친다. 이런 이유로 그람 양성 박테리아에 대하여 좁은 범위의(narrow-spectrum) 활성을 갖고 부수적으로 장내 미생물에 부정적인 영향이 없는 클로스트리디움 속의 박테리아에 대하여 활성을 갖는 항박테리아 화합물에 대한 필요성이 존재한다.

본 발명은, 그의 임의의 입체화학적 이성질체 형태 및 호변이성질체를 비롯한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 산 부가염, 또는 그의 용매화물에 관한 것이다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, C₁ _- ₆알킬, 폴리할로C₁ _- ₆알킬, C₁ _- ₆알킬옥시, 또는 폴리할로C₁ _- ₆알킬옥시로부터 선택되고;

R³은 히드록시, 아미노, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노이고;

R⁴는 수소 또는 C₁ _- ₄알킬이고;

X는 질소 또는 CR⁵이고, 여기서 R⁵는 수소, 할로 또는 C₁ _- ₄알킬이되;

단, R³이 히드록시인 경우, X는 CH를 나타내고, R⁴는 수소를 나타낸다.

단서 조항은 클로스트리디움 속의 박테리아에 대하여 항박테리아 활성이 거의 없거나 전혀 없는 화합물을 제외하고자 하는 것이다.

전술한 정의에서 사용된 바와 같이:

- 할로는 플루오로, 클로로, 브로모 및 아이오도에 대한 통칭이고;

- C₁ _- ₄알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 포화 탄화수소 라디칼, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 1-메틸에틸, 2-메틸프로필 등을 정의하고;

- C₁ _- ₆알킬은 C₁ _- ₄알킬 및 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는 그의 고급 동족체, 예를 들어 2-메틸부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함하는 것을 의미하고;

- 폴리할로C₁ _- ₆알킬은 폴리할로치환된 C₁ _- ₆알킬, 특히 2 내지 6개의 할로겐 원자로 치환된 (상기 정의된 바와 같은) C₁ _- ₄알킬, 예컨대 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸 등으로서 정의된다.

앞서 사용된 바와 같은 용어 "입체화학적 이성질체 형태"는 화학식 I의 화합물이 가질 수 있는 모든 가능한 이성질체 형태를 정의하는 것이다. 달리 언급되거나 명시되지 않는 한, 화합물의 화학 명칭은 모든 가능한 입체화학적 이성질체 형태의 혼합물을 나타내며, 상기 혼합물은 기본 분자 구조의 모든 부분입체이성질체 및 거울상이성질체를 함유한다. 더 특히, 입체 중심은 R- 또는 S-배치를 가질 수 있고; 2가 시클릭 (부분적) 포화 라디칼에 대한 치환기는 시스- 또는 트랜스-배치 둘 중 어느 하나를 가질 수 있다. 화학식 I의 화합물의 입체화학적 이성질체 형태는 분명히 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.

화학식 I의 화합물 및 그의 제조에 사용된 중간체의 절대 입체화학 배치는 예를 들어 X-선 회절과 같은 주지된 방법을 사용하여 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

일부의 화학식 I의 화합물은 또한 그의 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다. 이러한 형태는 비록 상기 화학식에서 명시적으로 지시되어 있지 않지만 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 예를 들어 R³이 히드록시를 나타내는 화학식 I의 화합물에 있어서, 상응하는 케토-형태가 주로 차지하는(populated) 호변이성질체일 수 있다.

더욱이, 일부의 화학식 I의 화합물 및 그의 제조에 사용된 일부의 중간체는 다형성을 나타낼 수 있다. 본 발명은 상기 서술된 병태의 치료에 유용한 특성을 갖는 임의의 다형체 형태를 포함하는 것으로 이해되어야 한다 .

상기 언급된 바와 같은 제약상 허용되는 산 부가염은 화학식 I의 화합물이 형성할 수 있는, 치료 활성의 무독성 산 부가염 형태를 포함하는 것을 의미한다. 이들 제약상 허용되는 산 부가염은 편리하게는, 염기 형태를 이러한 적절한 산으로 처리하여 수득될 수 있다. 적절한 산은, 예를 들어 무기산, 예컨대 할로겐화수소산, 예를 들어 염산 또는 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 산; 또는 유기산, 예를 들어 아세트산, 프로판산, 히드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산 (즉 에탄디오산, 말론산, 숙신산 (즉 부탄디오산), 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 파모산 등의 산을 포함한다.

역으로 상기 염 형태는 적절한 염기로 처리하여 유리 염기 형태로 전환시킬 수 있다.

화학식 I의 화합물은 비용매화 및 용매화 형태 둘 다로 존재할 수 있다. 용어 '용매화물'은 본원에서 사용되어 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 용매 분자, 예를 들어 물 또는 에탄올을 포함하는 분자 회합을 기술하는 것이다. 용어 '수화물'은 상기 용매가 물인 경우 사용된다.

화학식 I의 화합물은 하기 예시된 바와 같은 적어도 1개의 비대칭 탄소 원자를 가지며 여기서 비대칭 탄소 원자는 ^*에 의해 식별된다.

<화학식 I>

한 실시양태에서 본 발명은 크로마닐 모이어티의 4-위치에서 (R)-배치를 갖는 화학식 I의 화합물로서 정의되는 화학식 (R)-I의 화합물에 관한 것이다.

<화학식 (R)-I>

화학식 I의 흥미로운 화합물은 하기 제한 중 하나 이상이 적용되는 화학식 I의 그러한 화합물이다:

a) R¹ 및 R²는 각각 할로이거나;

b) R¹ 및 R²는 각각 브로모이고 크로마닐 모이어티의 6- 및 8-위치에 위치하거나;

c) R³은 히드록시이거나;

d) R³은 아미노이거나;

e) R³은 메틸아미노이거나;

f) R⁴는 수소이거나;

g) R⁴는 메틸이거나;

h) X는 질소이거나;

i) X는 CR⁵이고, 여기서 R⁵는 수소를 나타내거나;

j) X는 CR⁵이고, 여기서 R⁵는 할로, 특히 클로로를 나타낸다.

화합물의 제1 군은 R¹ 및 R²가 각각 브로모이고 크로마닐 모이어티의 6- 및 8-위치에 위치하고, R³이 히드록시를 나타내는 것인 화학식 (R)-I의 그러한 화합물이다.

화합물의 제2 군은 X가 질소를 나타내고, R¹ 및 R²가 각각 브로모이고 크로마닐 모이어티의 6- 및 8-위치에 위치하고, R³이 히드록시를 나타내는 것인 화학식 (R)-I의 그러한 화합물이다.

화합물의 제3 군은 R¹ 및 R²가 각각 브로모이고 크로마닐 모이어티의 6- 및 8-위치에 위치하고, R³이 아미노를 나타내는 것인 화학식 (R)-I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물은 당업계에 공지된 환원적 N-알킬화 절차에 따라, 화학식 II의 중간체를 화학식 III의 중간체와 환원적으로 N-알킬화함으로써 제조할 수 있다.

상기 환원적 N-알킬화는, 예를 들어 디클로로메탄, THF, 톨루엔 또는 그의 혼합물 등의 반응-불활성 용매 중에서, 및 예를 들어 보로히드라이드, 예를 들어 수소화붕소나트륨, 시아노수소화붕소나트륨 또는 트리아세톡시 보로히드라이드 등의 환원제의 존재하에 수행할 수 있다. 또한, 환원제로서 수소를, 예를 들어 차콜-상-팔라듐 또는 차콜-상-백금 등의 적합한 촉매와 조합하여 사용하는 것이 편리할 수 있다. 수소를 환원제로서 사용하는 경우, 예를 들어 알루미늄 tert-부톡시드와 같은 탈수제를 반응 혼합물에 가하는 것이 유리할 수 있다. 반응물 및 반응 생성물에서의 특정 관능기의 원하지 않는 추가의 수소화를 방지하기 위하여, 또한, 적절한 촉매-독, 예를 들어, 티오펜 또는 퀴놀린-황을 반응 혼합물에 가하는 것이 유리할 수 있다. 반응 속도를 증진시키기 위하여, 온도를 실온 내지 반응 혼합물의 환류 온도로 범위로 상승시킬 수 있고 임의로 수소 기체 압력을 상승시킬 수 있다.

R³이 아미노 또는 모노-(C₁ _- ₄알킬)-아미노를 나타내는 것인 화학식 I의 화합물을 상기 기재된 N-알킬화 방법을 사용하여 제조하는 경우, 상기 아민 관능기를 보호하는 것이 적절할 수 있다. 아민 관능기에 관한 보호기는 당업계에 공지되어 있고 N-알킬화 절차 후 제거된다.

또한, R³이 히드록시를 나타내는 것인 화학식 I의 화합물은 상기 기재된 N-알킬화 절차를 사용하여 제조할 수 있고 그에 따라 히드록시 관능기가 당업계에 공지된 보호기에 의해 보호된다.

R³이 히드록시를 나타내는 것인 화학식 I의 화합물로서 정의되는 화학식 I-a의 화합물은 염기성 조건하에 화학식 IV의 중간체를 가수분해함으로써 제조할 수 있다. 화학식 IV의 중간체는 상기 기재된 바와 같은 일반적인 N-알킬화 절차에 따라 제조할 수 있다.

출발 물질 및 일부의 중간체는 공지된 화합물이고 상업적으로 입수가능하거나 당업계에 일반적으로 공지된 통상적인 반응 절차에 따라 제조할 수 있다.

상기 기재된 방법으로 제조된 바와 같은 화학식 I의 화합물은 당업계에 공지된 분리 절차에 따라 서로 분리될 수 있는 거울상이성질체의 라세미 혼합물의 형태로 합성될 수 있다. 라세미 형태로 수득되는 화학식 I의 그러한 화합물은, 적합한 키랄 산과의 반응에 의해 상응하는 부분입체이성질체 염 형태로 전환될 수 있다. 상기 부분입체이성질체 염 형태는 후속적으로, 예를 들어, 선택적 또는 분별 결정에 의해 분리되고 거울상이성질체는 알칼리에 의해 그로부터 유리된다. 화학식 I의 화합물의 거울상이성질체 형태를 분리하는 대안적 방식에는 키랄 고정상을 사용하는 액체 크로마토그래피가 포함된다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 물질의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는 특이 입체이성질체를 목적으로 하는 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성될 것이다. 이들 방법은 유리하게는 거울상이성질체적으로 순수한 출발 물질을 사용할 것이다.

그의 임의의 입체화학적 이성질체 형태 및 호변이성질체를 비롯한, 화학식 I의 화합물, 및 그의 제약상 허용되는 염은 약리학적 실시예에서 입증된 바와 같이, 특히 클로스트리디움 속의 박테리아, 더 특히 클로스트리디움 페르프린겐스에 대하여 항박테리아 활성을 갖는다.

따라서 본 발명은 또한, 박테리아 감염, 특히 클로스트리디움 기반 감염, 더 특히 클로스트리디움 페르프린겐스 기반 감염의 치료에 특히 사용하기 위한 의약으로서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물에 관한 것이다. 후속적으로 본 화합물은 박테리아 감염, 특히 클로스트리디움 기반 감염, 더 특히 클로스트리디움 페르프린겐스 기반 감염의 치료용 의약을 제조하는데 사용할 수 있다.

추가로, 본 발명은 박테리아 감염, 특히 클로스트리디움 기반 감염, 더 특히 클로스트리디움 페르프린겐스 기반 감염의 치료가 필요한 온혈 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 온혈 대상체에서 상기 감염의 치료 방법을 제공한다.

클로스트리디움 페르프린겐스 기반 감염은 예를 들어 씨. 페르프린겐스 A형 식중독, 장독소혈증, 괴사성 장염, 및 가스 괴저이다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "치료하는" 및 "치료"는 이러한 용어가 적용되는 질환, 장애 또는 병태, 또는 이러한 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 역전, 완화, 진행 억제, 또는 예방하는 것을 포함하는, 치유적, 고식적 및 예방적 치료를 지칭하는 것이다.

본 문서에 걸쳐 사용된 바와 같은 온혈 동물에는 인간 및 인간이 아닌 동물, 예컨대, 농장 동물 (예를 들어 양, 소, 돼지, 염소 또는 말), 가축 (예를 들어 개, 고양이, 또는 기니피크(cavia)), 뿐만 아니라 감금된 야생 동물 및 조류 (예를 들어 가금류)가 포함된다.

추가로 본 발명은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 및 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본원에서 사용된 바와 같은 용어 "치료 유효량의 화학식 I의 화합물"은 치료될 병태의 증상의 완화를 포함하는, 의사 또는 수의사에 의해 추구되는, 온혈 동물에서 생물학적 또는 의약 반응을 도출하는 화학식 I의 화합물의 양을 의미한다. 치료 유효량은 통상의 최적화 기법을 사용하여 결정할 수 있고 치료될 특정의 병태, 온혈 동물의 상태, 투여 경로, 제제, 및 의사의 판단 및 당업자에게 명백한 다른 인자에 따라 달라진다. 치료 유효량은 반복 투여에 의해 달성될 수 있다.

인간을 포함하는 온혈 동물에 사용함에 있어서, 화학식 I의 화합물은 단독으로 투여될 수 있으나, 일반적으로, 의도된 투여 경로 및 표준 제약 실무와 관련하여 선택되는 제약상 또는 수의학상 허용되는 희석제 또는 담체와 혼합하여 투여될 것이다. 예를 들어, 이들은 설하를 포함하여 경구로, 전분 또는 락토스와 같은 부형제를 함유하는 정제의 형태로, 또는 단독으로 아니면 부형제와 혼합되어 캡슐 또는 오뷸(ovule)로, 또는 향미제 또는 착색제를 함유하는 엘릭시르, 용액 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있다. 화학식 I의 화합물은 캡슐, 정제 또는 볼루스(bolus) 내로 혼입될 수 있어 경구 투여후 특정의 시간 동안 상기 캡슐, 정제 또는 볼루스의 지연 용해를 통해 결장 또는 십이지장에 이르게 하는 것을 목적으로 할 수 있을 것이다. 화학식 I의 화합물은 비경구적으로, 예를 들어, 정맥내, 근육내 또는 피하로 주사될 수 있다. 비경구 투여용으로, 이들은 다른 물질, 예를 들어, 용액을 혈액과 등장성으로 만들기에 충분한 염 또는 글루코스를 함유할 수 있는 멸균 수용액 또는 현탁액의 형태로 가장 잘 사용된다. 화학식 I의 화합물은 멸균 크림, 겔, 퍼어-온(pour-on) 또는 스팟-온(spot-on) 제제, 현탁액, 로션, 연고, 살포 분말, 스프레이, 약물-혼입 드레싱의 형태로 또는 피부 패치를 통해 국소적으로 투여될 수 있다. 예를 들어 화학식 I의 화합물은 폴리에틸렌 글리콜 또는 액체 파라핀의 수성 또는 유성 에멀젼으로 이루어진 크림 내로 혼입될 수 있거나, 이들은 백랍 연질 파라핀 기제로 이루어진 연고 내로, 또는 셀룰로스 또는 폴리아크릴레이트 유도체 또는 다른 점도 개질제를 갖는 히드로겔로서, 또는 부탄/프로판, HFA 또는 CFC 추진제를 갖는 건조 분말 또는 액체 스프레이 또는 에어로졸로서, 또는 약물-혼입 드레싱으로서 튤(tulle) 드레싱으로서, 백색 연질 파라핀 또는 폴리에틸렌 글리콜 함침 거즈 드레싱과 함께 또는 히드로겔, 히드로콜로이드, 알기네이트 또는 필름 드레싱과 함께, 혼입될 수 있다. 화학식 I의 화합물은 또한 점안액으로서 적절한 완충제, 점도 개질제 (예를 들어 셀룰로스 유도체), 보존제 (예를 들어 벤즈알코늄 클로라이드 (BZK)) 및 장성을 조정하는 작용제 (예를 들어 염화나트륨)와 함께 안내 투여될 수 있을 것이다. 이러한 제제화 기법은 당업계에 주지되어 있다. 모든 이러한 제제는 또한 적절한 안정화제 및 보존제를 함유할 수 있다.

수의학 용도로, 화합물은 통상의 수의학 실무에 따라 적합하게 허용되는 제제로서 투여될 수 있고 수의사는 특정의 동물에게 가장 적합할 투여 계획 및 투여 경로를 결정할 것이다.

국소 적용을 위해 침지(dip), 스프레이, 분말, 분제(dust), 퍼어-온, 스팟-온, 유화성 농축물, 분사용 유체(jetting fluid), 샴푸, 칼라(collar), 태그 또는 하니스(harness)를 사용할 수 있다. 이러한 제제는 표준 수의학 및 제약 실무에 따라 통상적인 방법으로 제조된다. 따라서 캡슐, 볼루스 또는 정제는 활성 성분을 적합한 미분 희석제 또는 담체와 혼합함으로써 제조할 수 있고, 붕해제 및/또는 결합제, 예컨대 전분, 락토스, 활석, 또는 스테아르산마그네슘을 추가로 함유할 수 있다. 수침 제제(drench formulation)는 활성 성분을 수용액에 분산제 또는 습윤제와 함께 분산시킴으로써 제조할 수 있고 주사용 제제는 멸균 용액 또는 에멀젼의 형태로 제조할 수 있다. 퍼어-온 또는 스팟-온 제제는 활성 성분을 허용되는 액체 담체 비히클, 예컨대 부틸 디골, 액체 파라핀 또는 비휘발성 에스테르에, 이소프로판올과 같은 휘발성 성분을 가하거나 가하지 않고, 용해시킴으로써 제조할 수 있다.

대안으로, 퍼어-온, 스팟-온 또는 스프레이 제제는 캡슐화에 의해 제조하여동물의 표면 상에 활성제의 잔류물이 남게 할 수 있다. 이들 제제는 치료될 숙주 동물의 종, 감염의 중증도 및 유형, 및 숙주의 체중에 따라 활성 화합물의 중량에 관해 달라질 것이다. 화학식 I의 화합물을 포함하는 제제는 특히 공지된 방법에 의해 예방용으로 연속적으로 투여될 수 있다.

대안으로서 조합물을 동물 사료와 함께 투여할 수 있고 이러한 목적을 위해 농축 사료 첨가제 또는 프리믹스(premix)를 정상 동물 사료와 혼합하여 제조할 수 있다.

인간에게 사용하기 위해 화학식 I의 화합물은 통상 의약 실무에 따라 제약상 허용되는 제제로서 투여된다.

박테리아 감염, 특히 클로스트리디움 감염의 치료에서 당업자는, 이하에 제시된 시험 결과로부터 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 용이하게 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로 치료 유효 용량은 치료될 온혈 동물에 대해 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg 체중, 더 바람직하게는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 체중일 것으로 고려된다. 치료 유효 용량을 2개 이상의 분할-용량의 형태로 하루에 걸쳐 적절한 간격으로 투여하는 것이 적절할 수 있다.

정확한 투여량 및 투여의 빈도는 당업자에게 주지된 바와 같이, 사용된 화학식 I의 특정의 화합물, 치료될 특정의 병태, 치료될 병태의 중증도, 특정의 온혈 동물의 연령, 체중 및 전반적인 신체 상태뿐만 아니라 온혈 동물이 섭취하고 있을 수 있는 다른 약물에 따라 달라진다. 더욱이, 상기 일일 유효량은 치료된 동물의 반응에 따라 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사 또는 수의사의 평가에 따라 저하되거나 증가될 수 있다. 따라서 상기에서 언급된 일일 유효량 범위는 단지 지침이다.

실험 부분

"DMF"는 N,N-디메틸포름아미드로서 정의되고, "CH₂Cl₂"는 디클로로메탄으로서 정의되고, "MeOH"는 메탄올로서 정의되고, "EtOH"는 에탄올로서 정의되고, "TEA"는 트리에틸아민으로서 정의되고, "DPPA"는 포스포르아지드산 디파닐 에스테르로서 정의되고, "DBU"는 2,3,4,6,7,8,9,10-옥타히드로-피리미도[1,2-a]아제핀으로서 정의되고, "NaBH(OAc)₃"은 트리아세톡시수소화붕소나트륨으로서 정의되고, "MgSO₄"는 황산마그네슘으로서 정의되고, "POCl₃"는 삼염화인산으로서 정의되고, "Na₂SO₃"는 아황산나트륨으로서 정의되고, "CH₃NH₂"는 메탄아민으로서 정의되고, "NaHCO₃"는 중탄산나트륨으로서 정의되고, "CHCl₃"는 트리클로로메탄으로서 정의되고, "Na₂SO₄"는 황산나트륨으로서 정의되고, "NH₄OH"는 수산화암모늄으로서 정의되고, "H₂SO₄"는 황산으로서 정의되고, "NCS"는 1-클로로-2,5-피롤리딘디온으로서 정의되고, "NaOH"는 수산화나트륨으로서 정의되고 "THF"는 테트라히드로푸란으로서 정의된다.

다수의 화합물에 있어서, 융점(mp.)은 상하이 프리시전 및 사이언티픽 인스트루먼트 컴퍼니 리미티드(Shanghai Precision and Scientific Instrument Co. Ltd.)로부터 구매한 WRS-2A 융점 측정기를 사용하여 결정하였다. 융점은 0.2 내지 5.0℃/분의 선형 승온 속도(linear heating up rate)로 측정하였다. 보고된 값은 용융 범위이다. 최대 온도는 300℃이었다.

¹ H NMR

다수의 화합물에 있어서, ¹H NMR 스펙트럼은 용매로서 클로로포름-d(중수소화 클로로포름, CDCl₃) 또는 DMSO-d ₆ (중수소화 DMSO, 디메틸-d6 술폭시드)를 사용하여,각각 300 MHz 및 400 MHz에서 작동하는, 표준 펄스 시퀀스를 이용하는 브루커(Bruker) DPX-300, 또는 브루커 DPX-400 분광계에서 기록하였다. 화학 이동 (δ)은 내부 표준으로서 사용된 테트라메틸실란(TMS)에 대해 백만분율(ppm)로 보고되었다.

A. 중간체의 합성

실시예 A.1

a)

중간체 (1)의 제조

포름산 (81 g)을 0℃에서 TEA (1040 mmol)에 적가하였다. 10분 동안 교반 후, 6,8-디브로모-2,3-디히드로-4H-1-벤조피란-4-온 (261 mmol)을 반응 혼합물, 이어서 중간체 (14) (0.5 mmol) 및 DMF (300 ml)를 25℃에서 가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 40℃에서 24시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 반응이 종료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃에서 물 (1000 ml)을 가하여 켄칭하였다. 생성된 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (1000 ml로 3회)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (500 ml)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 tert-부틸 메틸 에테르로 세척하여 78 g의 중간체 (1)를 수득하였다.

b)

중간체 (2)의 제조

THF (2000 ml) 중 중간체 (1) (253 mmol)의 교반 용액에 25℃에서 DPPA (334 mmol)를 가하였다. 25℃에서 15분 동안 교반 후, DBU (691 mmol)를 0℃에서 가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1)는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (1000 ml)로 처리하고 에틸 아세테이트 (1000 ml로 3회)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (1000 ml)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1), 60.3 g의 중간체 (2)를 수득하였다.

c)

중간체 (3)의 제조

트리페닐포스핀 (362 mmol)을 25℃에서 H₂O (80 ml) 및 THF (800 ml) 중 중간체 (2) (181 mmol)의 혼합물에 가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 반응이 종료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하고 잔류물을 에틸 아세테이트 (1000 ml)와 H₂O (1000 ml)에 분배하였다. 분리된 후, 수성 상을 에틸 아세테이트 (500 ml)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (1000 ml)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 농축하여 150 g의 중간체 (3)을 수득하였다.

d)

중간체 (4)의 제조

NH₄OH (180 ml)를 0℃에서 EtOH (1500 ml) 중 중간체 (3) (181 mmol)의 용액에 가하였다. 생성된 반응 혼합물을 3시간 동안 환류하에 가열하였다. 박층 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH =10/1)는 반응이 종료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 증발시켜 EtOH를 제거하고 6N HCl를 가하여 잔류물을 pH = 2로 산성화하였다. 생성된 혼합물을 여과하고 생성된 고체를 에틸 아세테이트 (500 ml)로 세척하여 40 g의 중간체 (4)를 수득하였다.

실시예 A.2

a)

중간체 (5)의 제조

2N 수성 NaOH (565 mmol) 중 N-[(1H-피라졸-3-일아미노)티옥소메틸]-카르밤산 에틸 에스테르 (514 mmol)의 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 2N H₂SO₄로 산성화하였다. 침전물을 여과하고, 물 (1000 ml) 및 tert-부틸 메틸에테르 (500 ml)로 세척하였다. 생성된 고체를 진공하에 건조시켜 생성물을 78 g의 중간체 (5)를 산출하는 백색 고체로서 수득하였다.

b)

중간체 (6)의 제조

EtOH (1600 ml) 중 중간체 (5) (464 mmol, 1 당량)의 교반 현탁액에 0℃에서 2N NaOH 수용액 (480 ml, 2 당량), 이어서 아이오도메탄 (511 mmol, 1.1 당량)을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH = 10/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 침전물을 여과한 다음 물 (800 ml)에 현탁한 후 2N H₂SO₄에 의해 산성화하였다. 현탁액을 0℃에서 5분 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고 냉수 (900 ml)로 세척하였다. 생성된 고체를 진공하에 건조시켜 75 g의 중간체 (6)을 백색 고체로서 산출하였다.

c)

중간체 (7)의 제조

POCl₃ (1500 ml) 중 중간체 (6) (374 mmol), N,N-디메틸-4-피리딘아민 (1.31 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 환류로 가열하였다. 실온으로 냉각 후, 과잉의 POCl₃을 진공하에 제거하고 생성된 잔류물을 2시간 동안 건조시켰다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하여, 240 g의 중간체 (7)을 산출하였다.

d)

중간체 (8)의 제조

중간체 (7) (374 mmol)을 건조 CH₂Cl₂ (2000 ml)에 용해시킨 다음, N-메틸-벤젠아민 (285 ml) 및 TEA (355 ml)를 0℃에서 적가하였다. 10분 동안 교반 후, 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH = 10/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈었다. 반응 혼합물을 물 (600 ml) 및 염수 (300 ml)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 조 생성물을 수득하고, 이를 EtOH에 의해 추가로 세척하여 82 g의 중간체 (8)을 수득하였다.

e)

중간체 (9)의 제조

CH₂Cl₂ (2000 ml) 중 중간체 (8) (303 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 3-클로로퍼옥시벤조산 (1059 mmol)을 조금씩 가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 이어서 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트= 5/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 Na₂SO₃ 수용액 (600 ml로 4회)으로 세척한 다음 포화 NaHCO₃ 수용액을 pH = 7이 될 때까지 가하였다. 수성 층을 CH₂Cl₂ (500 ml)에 의해 추출하였다. 합해진 유기 상을 염수 (800 ml)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 tert-부틸 메틸에테르 (500 ml로 3회)로 세척하여 87 g의 중간체 (9)를 수득하였다.

f)

중간체 (10)의 제조

CHCl₃ (2000 ml) 중 중간체 (9) (287 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 3,3-디에톡시-1-프로판아민 (474 mmol)을 조금씩 가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 이어서 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트= 5/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 Na₂SO₃ 수용액 (600 ml로 4회)으로 세척한 다음 포화 NaHCO₃ 수용액을 pH = 7이 될 때까지 가하였다. 수성 층을 CH₂Cl₂ (500 ml)에 의해 추출하였다. 합해진 유기 상을 염수 (800 ml)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 tert-부틸 메틸에테르 (500 ml로 3회)로 세척하여 87 g의 중간체 (10) (mp. 100.8 내지 103.8℃)을 수득하였다.

g)

중간체 (11)의 제조

12N HCl (7.5 ml)을 20℃ 미만에서 THF (450 ml) 중 중간체 (10) (81 mmol)의 용액에 가하였다. 5분 동안 교반 후, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH = 20/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 에틸 아세테이트 (500 ml)를 가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고 진공하에 건조시켜 32 g의 중간체 (11)를 수득하였다.

실시예 A.3

중간체 (14)의 제조

2-프로판올 (21 ml) 중 N-[(1S,2S)-2-아미노-1,2-디페닐에틸]-4-메틸-벤젠술폰아미드 (2.13 mmol), 디클로로(p-시멘)루테늄(II) 이량체 (2.13 mmol) 및 TEA (0.6 ml)의 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 20℃로 냉각 후, 유기 용액을 진공하에 농축하였다. 생성된 고체를 물 (10 ml)로 세척하고 감압하에 건조시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 메탄올로부터 추가로 재결정화하여 0.37 g의 생성물을 밝은 오렌지색 고체 중간체 (14)로서 수득하였다.

B. 최종 화합물의 제조

실시예 B.1

a)

중간체 (12)의 제조

TEA (210.6 mmol)를 중간체 (11) (81 mmol) 및 중간체 (4) (81 mmol)의 용액에 가하였다. 1시간 동안 교반 후, NaBH(OAc)₃ (113 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH = 10/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (1000 ml)로 희석하고 포화 NaHCO₃ 수용액 (500 ml로 2회)에 의해 추가로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 중간체 (12)의 55 g의 조 생성물을 무색 오일로서 수득하고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

b)

화합물 (1)의 제조

EtOH (100 ml) 중 중간체 (12) (6 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 5N NaOH (12 ml)를 적가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 환류로 가열하였다. 박층 크로마토그래피 (CH₂Cl₂/MeOH = 10/1)는 반응이 완료되었음을 나타냈다. EtOH를 감압하에 제거하고 잔류물을 포화 수성 시트르산을 사용하여 pH = 7로 중화하였다. 혼합물을 물 (50 ml) 및 에틸 아세테이트 (100 ml)의 용액에 가하였다. 침전물을 여과하고, 아세토니트릴 (50 ml로 3회)로 세척하고 진공하에 건조시켜 1.8 g의 화합물 (1)을 수득하였다.

중간체 (11)을 (R)-6,8-디클로로-크로만-4-일아민과 반응시킴으로써 화합물 (5)를 동일한 절차를 사용하여 제조하였다.

화합물 (1)의 제조를 위한 대안적 방법을 하기에 도시하였다.

실시예 B.2

화합물 (2)의 제조

디옥산 (30 ml) 중 4M HCl을 20℃에서 MeOH (10 ml) 중 화합물 (1) (3.6 mmol)의 용액에 가하였다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 진공하에 건조시켜, 1.62 g의 화합물 (2) (mp.: 234.6 내지 235.6℃)를 산출하였다. 선광도: [α]₅₈₉ ²⁰=+10.67, 8.77 mg/ml, 메탄올.

실시예 B.3

a)

중간체 (13)의 제조

DMF (300 ml) 중 중간체 (12) (10.2 mmol)의 용액을 80℃에서 5분 동안 교반하였다. NCS (20.4 mmol)를 질소 분위기하에 혼합물에 가하고 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 그 다음 DMF를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 tert-부틸 메틸 에테르 (50 ml로 3회)로 세척하고 여과하였다. 고체를 감압하에 건조시켜, 2.8 g의 중간체 (13)을 산출하였다.

b)

화합물 (3)의 제조

THF (5 ml) 중 중간체 (13) (0.97 mmol) 및 2M CH₃NH₂를 20℃에서 무수 EtOH (5 ml)에 가하였다. 혼합물을 마이크로웨이브 하에 150℃에서 4시간 동안 교반하였다. EtOH를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 정제용 고성능 액체 크로마토그래피 (칼럼: YMC, 250 x 20 mm, 이동상: 20 내지 50% CH₃CN (0.075% v/v CF₃COOH), 유량: 25 ml/분, 종료 시간: 15분)로 정제하였다. 목적 분획을 수집하고 증발시켰다. 수용액을 pH = 7로 중화하고 농축하였다. 고체를 여과하고 물 (30 ml로 3회)로 세척하여, 0.065 g의 화합물 (3) (mp.: 108.8 내지 118.6℃)을 산출하였다.

실시예 B.4

화합물 (4)의 제조

MeOH (10 ml) 중 중간체 (13) (0.97 mmol)과 2M NH₃의 혼합물을 마이크로웨이브 하에 125℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 정제용 고성능 액체 크로마토그래피 (칼럼: YMC, 250 x 20 mm, 이동상: 30 내지 60% CH₃CN (0.075% v/v CF₃COOH), 유량: 25 ml/분, 종료 시간: 15분)로 정제하였다. 목적 분획을 수집하고 증발시켰다. 수용액을 pH = 7로 중화하고 농축하였다. 생성된 고체를 여과하고 물 (30 ml로 3회)로 추가로 세척하였다. 생성물을 고진공하에 건조시켜, 0.09 g의 화합물 (4) (mp.: 78.7 내지 94.1℃)을 산출하였다.

표 1은 상기 실시예 중 하나에 따라 제조된 화합물을 열거한 것이다.

C. 분석 파트

C.1. LC - MS 일반 절차 A

일반 절차 A

HPLC 측정을 펌프, 다이오드-어레이 검출기(DAD) (사용된 파장 220 nm), 칼럼 히터 및 하기 각각의 방법에 명시된 바와 같은 칼럼을 포함하는 애질런트(Agilent) 1100 모듈을 사용하여 수행하였다. 칼럼으로부터의 유량을 애질런트 MSD 시리즈 G1946C와 G1956A로 분할하였다. MS 검출기를 API-ES (대기압 전기분무 이온화)를 사용하여 설정하였다. 질량 스펙트럼은 100 내지 1000회 스캔하여 획득하였다. 모세관 니들 전압(capillary needle voltage)은 양이온화 모드로는 2500 V이고 음이온화 모드로는 3000 V이었다. 단편화 전압은 50 V이었다. 건조 가스 온도를 10 l/분의 유량으로 350℃에서 유지하였다.

방법 1

일반 절차 A에 더하여: 역상 HPLC를 0.8 ml/분의 유량으로 YMC-팩(Pack) ODS-AQ, 50x2.0 mm 5㎛ 칼럼 상에서 수행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 0.1% TFA를 함유한 물; 이동상 B: 0.05% TFA를 함유한 아세토니트릴)을 사용하였다. 먼저, 100% A를 1분 동안 유지하였다. 그 다음 구배를 4분 후 40% A 및 60% B에 적용하고 2.5분 동안 유지하였다. 2 μl의 전형적인 주입 용적을 사용하였다. 오븐 온도는 50℃이었다. (MS 극성: 양성)

방법 2

일반 절차 A에 더하여: 역상 HPLC를 0.8 ml/분의 유량으로 YMC-팩 ODS-AQ, 50x2.0 mm 5㎛ 칼럼 상에서 수행하였다. 2개의 이동상 (이동상 A: 0.1% TFA를 함유한 물; 이동상 B: 0.05% TFA를 함유한 아세토니트릴)을 사용하였다. 먼저, 90% A 및 10% B를 0.8분 동안 유지하였다. 그 다음 구배를 3.7분 후 20% A 및 80% B에 적용하고 3분 동안 유지하였다. 2 μl의 전형적인 주입 용적을 사용하였다. 오븐 온도는 50℃이었다. (MS 극성: 양성)

D. 약리학적 실시예

D.1.1 씨. 페르프린겐스 에 대한 시험 화합물의 시험관내 방법.

편평-바닥, 멸균 96-웰 플라스틱 마이크로타이터 플레이트를 100 μl의 브레인 하트 인퓨전(Brain heart infusion) 브로스(broth) 배지로 채웠다. 후속적으로, 화합물의 스톡 용액 (100 x 최종 시험 농도)을 2 μl 용적으로 일련의 웰에 가하여 그들이 박테리아 성장에 미치는 영향을 평가하였다. 접종물을 함유한 및 함유하지 않은 미처리 대조군 샘플을 각각의 마이크로타이터 플레이트에 포함시켰다. 브레인 하트 인퓨전 브로스 배지 중 100 μl의 용적으로 웰당 대략 50000 CFU의 클로스트리디움 페르프린겐스 (균주 56)를 웰에 가하였다. 배양물을 혐기성 배양조(anaerobic jar)에서 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 광학 밀도(OD)를 540 nm의 파장에서 컴퓨터-제어 분광광도계 (인비전(Envision))에서 판독하였다. 화합물에 의해 달성된 성장 억제 백분율을 표준 방법에 따라 계산하고, 박테리아 성장에 관해 90% 억제 농도를 규정하는 IC₉₀ (㎍/ml)으로서 표기하였다.

D.1.2. 균주 씨. 디피실레 에 대하여 항박테리아 활성에 대한 시험 화합물의 시험관 내 방법.

편평-바닥, 멸균 96-웰 플라스틱 마이크로타이터 플레이트를 100 μl의 리인포스드 클로스트리디알(Reinforced Clostridial) 브로스 배지로 채웠다. 후속적으로, 화합물의 스톡 용액 (100 x 최종 시험 농도)을 2 μl 용적으로 일련의 웰에 가하여 그들이 박테리아 성장에 미치는 영향을 평가하였다. 접종물을 함유한 및 함유하지 않은 미처리 대조군 샘플을 각각의 마이크로타이터 플레이트에 포함시켰다. 리인포스드 클로스트리디알 브로스 배지 중 100 μl의 용적으로 웰당 대략 50000 CFU의 클로스트리디움 디피실레 (ATCC9689)을 웰에 가하였다. 배양물을 혐기성 배양조에서 48시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. OD를 570 nm의 파장에서 컴퓨터-제어 분광광도계 (써모맥스(Thermomax))에서 판독하였다. 화합물에 의해 달성된 성장 억제 백분율을 표준 방법에 따라 계산하고, 박테리아 성장에 관해 90% 억제 농도를 규정하는 IC₉₀ (㎍/ml)으로서 표기하였다.

D.1.1 및 D.1.2에 관한 결과:

REP3123은 씨. 페르프린겐스 및 씨. 디피실레 둘 다에 대하여 양호한 활성을 나타냈으며, 각각 IC₉₀은 0.25 및 0.5 내지 1 ㎍/ml를 나타냈다.

본 발명의 화합물 (2)는 씨. 페르프린겐스 및 씨. 디피실레 둘 다에 대해 양호한 활성을 나타냈으며, 각각 IC₉₀은 0.5 및 2 ㎍/ml를 나타냈다.

D.1.3. 몇몇 박테리아에 대한 시험 화합물의 시험관내 방법.

편평-바닥, 멸균 96-웰 플라스틱 마이크로타이터 플레이트를 100 μl의 브로스 배지로 채웠다. 후속적으로, 화합물의 스톡 용액 (100 x 최종 시험 농도)을 2 μl 용적으로 일련의 웰에 가하여 그들이 박테리아 성장에 미치는 영향을 평가하였다. 접종물을 함유한 및 함유하지 않은 미처리 대조군 샘플을 각각의 마이크로타이터 플레이트에 포함시켰다. 100 μl 브로스 배지의 용적으로 웰당 대략 50000 CFU의 박테리아를 웰에 가하였다. 플레이트를 37℃에서 인큐베이션하였다. 최소 억제 농도를 가시적 성장 없는 최고 농도로서 결정하고 박테리아 성장에 관해 90% 억제 농도를 규정하는 IC₉₀ (㎍/ml)으로서 표기하였다.

배지 및 인큐베이션 조건:

스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 메티실린(Methicillin)-내성 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피데르미디스(Staphylococcus epidermidis), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 클렙시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes): 뮬러 힌톤(Mueller Hinton) 배지; 호기성 조건에서 20 내지 24시간 동안 인큐베이션.

엔테로코쿠스 파에칼리스(Enterococcus faecalis), 스트렙토코쿠스 뉴모니 아(Streptococcus pneumonia): 토드 헤위트(Todd Hewitt) 배지; 5% CO₂에서 20 내지 24시간 동안 인큐베이션.

미코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis): 뮬러 힌톤 배지; 호기성 조건에서 48시간 동안 인큐베이션.

아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumanii): 영양 브로스; 호기성 조건에서 20 내지 24시간 동안 인큐베이션.

모락셀라 카타르할리스(Moraxella catarrhalis): 브레인 하트 인퓨전 배지; 호기성 조건에서 20 내지 24시간 동안 인큐베이션.

D.1.3에 관한 결과:

REP3123 및 본 발명의 화합물 (2)는 둘 다 그람 음성 박테리아에 대해 어떠한 활성도 나타내지 않았다. REP3123의 IC₉₀은 이. 콜라이(E. coli), 케이. 뉴모니아에(K. pneumoniae), 엠. 카타르할리스(M. catarrhalis), 피. 아에루기노사(P. aeruginosa) 및 에이. 바우마니(A. baumanii) 각각에 대하여 >32, >64, 16, >78 및 >64 ㎍/ml이었다. 본 발명의 화합물 (2)의 IC₉₀은 이. 콜라이, 케이. 뉴모니아에, 엠. 카타르할리스, 피. 아에루기노사 및 에이. 바우마니 각각에 대하여 >31, >64, 16, >75 및 >64 ㎍/ml이었다.

REP3123은 시험된 모든 그람 양성 박테리아에 대해 양호한 활성을 나타냈다. REP3123의 IC₉₀은 에스. 아우레우스(S. aureus), 메티실린-내성 에스. 아우레우스, 에스. 에피데르미디스(S. epidermidis), 이. 파에칼리스(E. faecalis), 에스. 뉴모니아(S. pneumonia), 비. 서브틸리스(B. subtilis) 및 엘. 모노시토게네스(L. monocytogenes) 각각에 대하여 <0.25, <0.25, <0.25, <0.25, 1, 0.12 및 0.12 ㎍/ml이었다.

본 발명의 화합물 (2)는 이. 파에칼리스 및 엘. 모노시토게네스를 제외하고는 시험된 모든 그람 양성 박테리아에 대해 활성이 아니었다. 그러나, 본 발명의 화합물 (2)의 활성은 REP3123의 것보다 이들 2종의 미생물에 대하여 훨씬 많이 낮았다. 본 발명의 화합물 (2)의 IC₉₀은 에스. 아우레우스, 메티실린-내성 에스. 아우레우스, 에스. 에피데르미디스, 이. 파에칼리스, 에스. 뉴모니아, 비. 서브틸리스 및 엘. 모노시토게네스 각각에 대하여 8-15, 7-13, 15, 1.5, >31, 4 및 2 ㎍/ml이었다.

REP3123 및 본 발명의 화합물 (2) 둘 다 미코박테리움 스메그마티스에 대하여 어떠한 활성도 나타내지 않았다. 엠. 스메그마티스(M. smegmatis)에 대하여 REP3123 및 본 발명의 화합물 (2)의 IC₉₀은 각각 6 내지 8 및 >31 ㎍/ml이었다.

REP3123과 본 발명의 화합물 (2)의 비교는 그람 양성 박테리아에 대하여 화합물 (2)의 좁은 범위의 활성에 비해 REP3123의 광범위 활성을 명백히 입증하는 것이다.

Claims

그의 임의의 입체화학적 이성질체 형태 및 호변이성질체를 비롯한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 산 부가염, 또는 그의 용매화물.
<화학식 I>

상기 식에서,
R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, C₁ _- ₆알킬, 폴리할로C₁ _- ₆알킬, C₁ _- ₆알킬옥시, 또는 폴리할로C₁ _- ₆알킬옥시로부터 선택되고;
R³은 히드록시, 아미노, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노이고;
R⁴는 수소 또는 C₁ _- ₄알킬이고;
X는 질소 또는 CR⁵이고, 여기서 R⁵는 수소, 할로 또는 C₁ _- ₄알킬이되;
단, R³이 히드록시인 경우, X는 CH를 나타내고, R⁴는 수소를 나타낸다.
제1항에 있어서, 크로마닐 모이어티의 4-위치에서 (R)-배치를 갖는 화합물.
제2항에 있어서, R¹ 및 R²가 각각 할로인 화합물.
제3항에 있어서, R¹ 및 R²가 각각 브로모이고 크로마닐 모이어티의 6- 및 8-위치에 위치하고, R³이 히드록시를 나타내는 것인 화합물.
제4항에 있어서, X가 질소를 나타내는 것인 화합물.
제3항에 있어서, R¹ 및 R²가 각각 브로모이고 크로마닐 모이어티의 6- 및 8-위치에 위치하고, R³이 아미노를 나타내는 것인 화합물.
제약상 허용되는 담체 및 치료 활성량의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 제약 조성물.
치료 활성량의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 제약상 허용되는 담체와 긴밀히 혼합하는, 제7항에 따른 제약 조성물의 제조 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 박테리아 감염의 치료에 사용하기 위한 화합물.
제10항에 있어서, 클로스트리디움(Clostridium) 기반 감염의 치료에 사용하기 위한 화합물.
a) 화학식 II의 중간체 화합물을 화학식 III의 중간체로 N-알킬화하거나

(여기서, 치환기 R¹, R², R³, R⁴ 및 X는 제1항에 정의된 바와 같음),
b) 화학식 I의 화합물을 당업계에 공지된 변환 반응에 따라 서로 전환시키거나; 또는 원하는 경우, 화학식 I의 화합물을 제약상 허용되는 산 부가염으로 전환시키거나, 또는 역으로, 화학식 I의 화합물의 산 부가염을 알칼리를 사용하여 유리 염기 형태로 전환시키고; 원하는 경우, 그의 입체화학적 이성질체 형태를 제조하는,
화학식 I의 화합물의 제조 방법.