KR20110110201A - 씨앗 코팅에 파스테리아 포자를 갖는 선충을 방제하는 물질 및 방법 - Google Patents

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토마스 이. 휴레트
존 피. 워터스
찰스 에스. 바모어
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파세트리아 바이오사이언스, 인크.
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Abstract

본원 발명은 파스테리아 포자의 유효량이 씨앗에 결합하고, 상기 씨앗을 선충이 있는 장소로 전달함으로써, 식물 병원성 및/또는 토양에 사는 선충을 방제하는 신규하고 이로운 물질 및 방법을 제공한다.

Description

씨앗 코팅에 파스테리아 포자를 갖는 선충을 방제하는 물질 및 방법{MATERIALS AND METHODS FOR CONTROLLING NEMATODES WITH PASTEURIA SPORES IN SEED COATINGS}
본 출원은 2008년 12월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 제61/139,304호의 이익을 주장하며, 여기에 모든 도표, 표 또는 도면을 전체로써 참조로 포함된다.
식물에 기생하는 선충에 기인하는 작물손실은 ＄1000 억을 초과하는 것으로 추정된다. 이러한 손상을 방지하는 것은 상당한 도전에 해당한다. 임박한 훈증약 브롬화 메틸의 손실 때문에, 새로운 선충 방제용 합성 화합물을 개발하고 등록하기에는 시간이 불충분하다. 따라서, 다른 옵션이 필요하다.
식물 병원성 선충은 두꺼운, 불침투성 큐티클, 또는 외피로 덮혀 있고, 극소량의 감각 신경 세포를 가지기 때문에 식물 병원성 선충을 방제하기가 특히 어렵다. 많은 해충 방제 화합물이 신경독으로서 작용하지만, 식물 병원성 선충에 의해 노출된 적은 수의 신경 세포는 살선충 화합물의 유효 표적 면적을 감소시키고, 극도로 높은 신경독 속성을 갖는 살선충 화합물의 개발을 야기한다.
또한, 식물 병원성 선충이 토양 또는 식물 뿌리에서 발견되기 때문에, 상기 식물 병원성 선충을 방제제(control agent)에 노출시키는 것은 달성되기 어렵고, 지하수면을 이러한 유독성 화합물로부터의 오염의 위험에 처하게 한다. 신경독에 기반한 살선충제의 사용은 토양과 지표수 모두를 오염시키는 것으로 보여졌다. 그 결과, 많은 이러한 화합물은 공중 위생의 이유로 시장으로부터 퇴출되었다.
재배 이전에 토양의 훈증 소독은 선충을 방제하는 대중적인 방법이다. 가장 대중적인 훈증약 중 하나인 브롬화 메틸은, 오존을 파괴하는 성질 때문에, 사용으로부터 제거하기 위해 계획되었다. 나아가, 토양 훈증 소독의 실시는 토양에 있는 유기체를 무분별하게 죽이고, 유익한 미생물뿐만 아니라 질병을 유발하는 유기체를 제거하는 위험을 무릅쓴다. 따라서, 환경에 무해한 영향을 끼치는 효과적인 살선충제가 절실히 필요하다.
파스테리아는 Metchnikoff(Annales de l'Institut Pasteur 2:165-170)에 의해 1888년에 물벼룩의 기생생물로서 처음 개시되었다. 그 뒤에, Cobb은 선충 Dorylaimus bulbiferous에 감염된 파스테리아를 개시했다(2nd ed. Hawaiian Sugar Planters Assoc., Expt. Sta. Div. Path. Physiol. Bull. 5:163-195, 1906).
박테리아의 생활 주기는 내생포자가 토양에 있는 선충의 큐티클에 결합하는 단계를 포함한다. 이후에, 파스테리아 페네트랜스는 상기 선충 몸체에서 급증하고, 새로운 내생포자의 개발의 절정에 달하는 균사 구조 및 엽상체를 포함하는 형태학상의 몇 단계를 거친다. 상기 선충 몸체가 용해될 때, 내생포자는 방출된다.
선충 몸체 내에서 박테리아의 성장은 상기 선충에 의한 알의 생산을 감소시키거나 제거하여, 선충의 번식 속도를 극도로 제한한다. 주요작물에 대한 경제적 손실은 보통 선충의 제 1 세대 자손에 의하고, 파스테리아로 식물 뿌리 부분에 있는 자손 선충의 농도를 낮춤으로써 방지된다.
선충을 방제하기 위한 파스테리아의 사용이 이전에 제한되었음에도 불구하고, 차선의 전달 옵션을 포함하는 다수의 인자는 이러한 선충방제 계획의 사용을 제한해왔다. 파스테리아 유형을 사용하여 선충을 방제하는 종래의 방법은 박테리아를 식물 및 토양에 자유로운 형태(예, Stirling G. R. 1984. "Biological control of Meloidogyne javanica with Bacillus penetrans", Phytopathology, 74:55-60) 또는 고형 및 액형 제제(예, 미국특허 제5,248,500호)로 가하는 것을 포함한다. 반면에, 식물 병원성 선충에서 박테리아의 높은 선택 유효성에도 불구하고, 살선충 효과를 내기 위해서 선충과 접촉하는 것이 필요하다. 토양에 직접 적용되면, 많은 양의 박테리아가 필요하고 토양과 잘 혼합되어야 하며, 이는 박테리아의 사용 비용을 실질적으로 증가시킨다.
파스테리아 박테리아를 사용하는 다양한 생물방제(biocontrol) 방법이 알려졌지만, 효과적으로 선충을 방제하기 위해서, 이러한 박테리아를 사용하는 향상된 처리방법의 필요가 여전히 존재한다. 그러므로, 본원 발명은 식물을 공격하는 식물 병원성 선충을 방제하는 신규한 방법을 제공한다.
본 발명의 목적은 씨앗 코팅에 파스테리아 포자를 갖는 선충을 방제하는 물질을 제공하고, 선충을 방제하는 방법을 제공함에 있다.
본 발명은, 씨앗에 결합되는 파스테리아 포자의 유효량을 포함하는 조성물을 토양에 전달함으로써 식물 병원성 선충 및/또는 다른 토양에 사는 선충을 방제하는 신규하고 이로운 물질 및 방법을 제공한다.
본 발명의 씨앗을 심자마자, 상기 파스테리아 포자는 씨앗을 둘러싸는 토양으로 이동된다. 본 발명의 방법이 실행되면, 상기 포자는 어떤 식물을 감염시키고, 생장시키며, 포자를 재형성시키고, 비옥도를 감소시키며, 및/또는 씨앗 부근의 식물 병원성 선충 및/또는 다른 토양에 사는 선충을 죽이도록 결합하며, 궁극적으로는 씨앗으로부터 성장하는 임의의 식물에 결합한다.
본 발명의 방법은 선충감염에 의해 유발되는 피해를 방제하거나 감소시키기 위하여 사용될 수 있고, 바람직한 실시예에서는 씨앗 모상체, 식물 성장 및 식물 건강을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 일 양태는 식물 씨앗에 결합된 파스테리아 포자의 유효량을 선충감염 장소에 전달함으로써 선충방제하는 방법을 제공한다.
상기 본 발명의 파스테리아 포자는 비정제화된 또는 정제화된 액형 또는 고형 조성물, 입자의 슬러리 또는 에멀젼으로써 씨앗에 도포 될 수 있다. 일 실시예에서, 파스테리아 포자는 액형 조성물로 제형화된다. 또 다른 실시예에서, 파스테리아 포자는 고형 조성물로 제형화된다. 적합한 고형 담체는 고형 폴리머릭 매트릭스, 입자형, 과립형 및 파우더형을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일 실시예에서, 상기 고형 담체는 과립으로 구성된다.
바람직한 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은, 상기 파스테리아 조성물이 씨앗에 코팅, 분무 되거나 또는 그렇지 않으면 씨앗이 상기 파스테리아 조성물과 결합, 접촉 또는 혼합됨으로써 씨앗과 결합된다. 일 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 씨앗 표면적의 적어도 일부분에 파스테리아 조성물을 코팅함으로써 도포된다.
일 실시예에서, 상기 식물의 씨앗은 우선 상기 파스테리아 포자 및/또는 포자를 함유하는 조성물에 접착할 수 있는 접착제로 처리된다. 상기 접착제는 예를 들어, 아교(glue) 및/또는 하나 이상의 중합체 또는 공중합체(copolymer)일 수 있다. 접착제의 예로는 아교(예를 들어, ELMERSTM 아교); 폴리비닐아세테이트; 실리콘 물질; 및 실리카겔 및 클레이와 같은 천연 무기물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태는 표면의 적어도 일부분이 파스테리아 조성물로 코팅된 씨앗을 제공하며, 이 때 상기 파스테리아 조성물은 선충방제용 파스테리아 포자를 유효량 포함한다.
도 1은 선충방제용 파스테리아로 코팅된 씨앗에서 생장한 식물의 건강을 보여준다.
도 2는 토양에서 파스테리아 포자와 선충의 결합을 보여준다.
도 3은 선충방제용 파스테리아로 코팅된 씨앗에서 생장한 식물의 높이를 보여준다.
본 발명은, 파스테리아 포자로 코팅된 식물 씨앗을 사용함으로써 식물 병원성 선충 및/또는 다른 토양에 사는 선충을 효과적으로 방제하는 물질 및 방법을 제공한다.
효과로는, 파스테리아는 오염시키고, 생장시키고, 포자를 재형성시키며, 및/또는 식물 병원성 선충 및 다른 토양에 사는 선충을 죽이도록 결합할 수 있는 특별하고 유용한 성질을 가지는 내생포자를 제공한다.
본 발명의 일 양태는 식물 씨앗을 코팅함으로써 파스테리아 조성물의 유효량을 선충 감염 장소에 전달함으로써 선충방제하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 씨앗을 코팅함으로써 전달된 파스테리아는 식물을 감염시키는 선충의 능력을 감소시킬 수 있다. 그 결과, 바람직한 실시예에서는, 본 처리 방법은 선충감염에 의해 유발되는 피해를 방제하거나 감소시킬 수 있고, 따라서, 씨앗 모상체, 식물 성장 및/또는 식물 건강을 향상시킨다.
본 발명의 파스테리아 포자는 숙주세포 내에서 생체내조건에서 생산될 수 있거나(예, Verdeho, S., 및 R. Mankau, 1986, Journal of Nematology, 18:635), 숙주세포 조직이 없이 생체외조건에서 생산될 수 있다(예, 미국특허 제5,094,954호). 특정 실시예에서, 본 발명의 파스테리아 포자는 예를 들어, 미국특허 제7,067,299호 및 제6,919,197호에서 설명하는 발효 기술을 사용하여 생산된다.
다양한 파스테리아 종(pasteuria spp.)은 선충방제를 위한 사용에 적합하다. 일 실시예에서, 상기 활성 성분은 뿌리혹선충을 방제하기 위한 파스테리아 페네트랜스 포자의 유효량을 포함한다. 다른 실시예에서, 상기 활성 성분은 파스테리아 라모스, 파스테리아 토네이(Pasteuria thornei), 파스테리아 유시지(pasteuria usage), 파스테리아 니시자웨(pasteuria nishizawae), 이들의 조합으로부터 선택되는 파스테리아 포자의 유효량을 포함할 뿐만 아니라 앞으로 발견될 새로운 살선충의 종을 포함한다.
파스테리아 포자의 살선충 유효량은 식물 종, 씨앗의 표면적, 담체의 유형, 다른 활성 성분의 존재 또는 부존재, 제형화 방법, 전달 경로, 파스테리아 종, 목표 선충 종, 및 선충 감염 또는 식물에 대한 손상의 심각성을 포함하지만 이에 제한되지 않는 인자에 따라서 변한다.
본 명세서에서 사용된 "살선충 유효량"은 선충을 죽이거나, 방제하거나 감염시킬 수 있는; 선충의 성장 또는 생식을 억제시킬 수 있는; 선충 집단을 감소시킬 수 있는; 및/또는 선충에 의해 유발되는 식물에 대한 손상을 감소시킬 수 있는 파스테리아 포자의 양을 나타낸다. 일반적으로, 포자의 유효량은 약 1 x 105 내지 1 x 1012(또는 그 이상) spores/seeds의 범위를 갖는다. 바람직하게는, 상기 포자의 농도는 약 1 x 106 내지 1 x 109 spores/seeds이다.
본 명세서에서 사용된 "활성 성분"은 선충 또는 다른 해충을 죽이거나 감염시키며; 및/또는 선충 또는 다른 해충의 성장 또는 생식을 억제시키며; 선충 또는 해충 집단을 감소시키며, 및/또는 선충 또는 다른 해충에 의해 유발되는 식물에 대한 손상을 감소시키는데에 유용한 물질을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 "농업적으로 유익한 성분"은 농업환경에서 유용하거나 생산적인 예를 들어, 질병, 해충(예를 들어 곤충, 기생충, 바이러스, 균류, 박테리아를 포함) 및/또는 잡초를 방제하는데 유용하며; 식물 성장, 식물 건강, 씨앗 모상체, 식물의 생식 및/또는 열매의 성장을 촉진하기에 유용한 물질을 나타낸다. 농업적으로 유익한 성분은 살충제, 제초제, 살진균제, 비료 및 생물농약을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용된 "비활성 또는 비활성 성분"은 사용에 도움을 주거나 농약 제제 또는 조성물의 효율을 향상시키는 물질을 나타낸다. 비활성 또는 비활성 성분은 담체, 접착제, 분산제, 계면활성제, 액형 희석제, 바인더, 필러제, 용매, 습윤제, 스티커, 유화제, 영양소, 계면활성제, 침투제, 발포제, 가용화제, 확전제 및 완충제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은, 상기 파스테리아 조성물이 씨앗에 코팅, 분사, 결합, 접촉하거나 혼합됨으로써 씨앗에 적용된다. 일 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 상기 씨앗 표면적의 적어도 일부분이 상기 파스테리아 조성물로 코팅됨으로써 씨앗에 결합된다.
특정 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 a) 파스테리아 담체 혼합물을 수득하기 위하여 고형 담체를 파스테리아 조성물로 함침시키며; 그리고 b) 상기 씨앗을 파스테리아 담체 혼합물과 접촉시킴으로써 씨앗에 적용시킨다.
본 발명의 또 다른 양태는 본원의 파스테리아 조성물로 처리된 씨앗을 제공한다. 일 실시예는 표면적 중 적어도 일부분이 상기 파스테리아 조성물로 코팅된 씨앗을 제공한다. 특정 실시예에서, 씨앗을 처리하는 상기 파스테리아는 약 106 내지 109 spores/seed의 포자 농도를 가진다. 또한, 상기 씨앗은 더 많은 씨앗당 포자의 수, 예를 들어, 1 x 1010, 1 x 1011 또는 1 x 1012 spores/seed를 가질 수 있다.
파스테리아 조성물의 제제
본 발명의 파스테리아는 비제형화된 포자 또는 제형화된 액형 또는 고형 담체, 입자의 슬러리 또는 에멀젼으로 씨앗에 전달될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 파스테리아 포자는 액형 조성물로 제형화된다. 내생포자는 원하는 pH를 유지하도록 완충된 배지(medium)속에 부유시킨다. 바람직하게는, 상기 pH는 약 6.0 미만이며, 더 바람직하게는 상기 pH는 약 5.5 미만이며, 가장 바람직하게는 상기 pH는 약 3.0 내지 5.0 사이이다. 사용될 수 있는 완충 시스템은 포타슘 하이드로젠 프탈레이트, 아세트산, 숙신산 및 시트르산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 배양 배지를 산성화하는데 사용될 수 있는 물질은 염산, 황산, 아세트산 및 다른 유기산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
또 다른 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 하나 이상의 아미노산, 염, 탄수화물, 비타민 및 다른 보충 영양소(supporting nutrient)를 선택적으로 포함할 수 있다. 특정 실시예에서, 상기 파스테리아 현탁액은 하나 이상의 다음의 구성성분: 글루코오스, NaCl, 효모 추출물, NH4H2PO4, (NH4)2SO4, 글리세롤, 발린, L-루신, L-글루타민, L-알라닌, L-발린, L-티로신, L-트립토판, 락트산, 프로피온산, 숙신산, 말산, 시트르산, KH 타르트르산염, 비타민 용액, 미네랄 용액, 자일로오스, 릭소오스 및 레시틴을 포함할 수 있다. 또 다른 특정 실시예에서, 상기 현탁액은 하나 이상의 다음의 구성성분: 락트산, 프로피온산, 숙신산, 말산, 시트르산, 타르타르산 및 효모 추출물을 포함할 수 있다.
일 실시예에서, 파스테리아 포자는 고형 조성물로 제형화된다. 상기 고형 현탁액은 파스테리아 포자 또는 액형 파스테리아 현탁액을 고형 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 일 실시예에서, 상기 고형 조성물은 상기 고형 담체를 상기 포자 현탁액으로 함침하고, 이어서 상기 고형 조성물을 건조함으로써 수득된다.
적합한 고형 담체는 고형 폴리머릭 매트릭스, 입자, 과립 및 분말을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일 실시예에서, 상기 고형 담체는 과립으로 구성된다. 일 실시예에서, 본원 조성물은 에멀젼; 수성 배지(예, 물)에서 입자의 슬러리; 수화제; 수화과립(건조한 액상수화제); 또는 건조한 과립으로서 제형화 된다. 특정 실시예에서, 상기 고형 담체는 AXIS®로부터의 diatomaceous earth granules 및/또는 PROFILE®로부터의 greensgrade clay granules이다.
본원 파스테리아 조성물은 예를 들어, 액형 현탁액, 고형 조성물 또는 수성 슬러리로 제형화 될 수 있다. 상기 활성 성분의 농도는 약 0.5 내지 99 중량%(w/w), 약 5 내지 80 %, 약 10 내지 75 %, 약 15 내지 70 %, 약 20 내지 65 %, 약 25 내지 60 %, 약 30 내지 55 %, 약 35 내지 50 %일 수 있다.
또 다른 실시예에서, 본원 조성물은 파스테리아 과립 혼합물로 제형화 될 수 있다. 상기 파스테리아 포자의 양은 약 1 x 106 내지 7 x 108 spores/g granules, 약 5 x 106 내지 5 x 108 spores/g granules, 약 1 x 107 내지 1 x 108 spores/g granules, 또는 약 3 x 107 내지 5 x 107 spores/g granules 일 수 있다.
특정 실시예에서, 상기 과립 조성물은 2 x 107 spores/ml의 파스테리아 포자 현탁액 약 3 내지 5 ml를 약 2 g의 과립과 혼합함으로써 수득된다. 구체적인 실시예에서, 상기 과립 조성물은 약 5 ml의 상기 포자 현탁액을 약 2 g AXIS® 과립과 혼합함으로써 수득된다. 또 다른 구체적인 실시예에서, 상기 과립 조성물은 약 3 ml의 상기 포자 현탁액을 약 2 g의 PROFILE® 과립과 혼합함으로써 수득된다.
상기 고형 조성물의 입자는 파스테리아 포자가 식물 씨앗에 결합하기에 적합한 임의의 크기일 수 있다.
추가적인 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 예를 들어, 접착제, 분산제, 계면활성제, 액형 희석제, 바인더, 필러제, 용매, 습윤제, 스티커, 유화제, 영양소 및 완충제를 포함하는 하나 이상의 종래의 비활성 또는 비활성 성분을 더 포함한다.
종래의 비활성 또는 비활성 성분은 종래의 점착제; 메틸셀룰로오스와 같은 분산제(METHOCELTM A15LV 또는 METHOCELTM A15C, 예를 들어, 씨앗 처리에 사용하기 위한 결합된 분산제/점착제의 역할을 함); 폴리비닐알콜(예, ELVANOLTM 51-05); 레시틴(예, YELKINOLTM P), 폴리머릭 분산제(예, 폴리비닐피롤리돈/비닐 아세테이트 PVPIVA S-630); 증점제(예, Van Gel B와 같은 클레이 증점제, 점도를 향상시키고 입자 현탁액의 침전을 감소시킴); 에멀젼 안정화제; 계면 활성제; 부동액 화합물(예, 요소), 염료, 색료 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 유용한 부가적인 비활성 성분은 문헌[McCutcheon's, vol. 1, "Emulsifiers and Detergents", MC Publishing Company, Glen Rock, N.J., U.S.A., 1996]에서 찾을 수 있다. 본 발명에 유용한 부가적인 비활성 성분은 문헌[McCutcheon's, vol. 2, "Functional Materials", MC Publishing Company, Glen Rock, N.J., U.S.A., 1996]에서 찾을 수 있다.
일 실시예에서, 접착제는 상기 포자가 씨앗에 결합이 용이하도록 사용된다. 상기 접착제는 상기 포자 또는 상기 파스테리아를 함유하는 조성물을 씨앗의 표면에 결합시켜서, 원하지 않는 포자의 떨어짐을 막거나 최소한 감소시킨다. 바람직하게는, 상기 접착제는 무독성, 생분해성이고 접착성이 있다. 적절한 접착제는 아교; 폴리비닐 아세트산염; 폴리비닐 아세트산염 공중합체; 폴리비닐 알콜; 폴리비닐 알콜 공중합체; 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸 셀룰로오스 및 히드록시메틸 프로필 셀룰로오스와 같은 셀룰로오스; 덱스트린; 알긴산염; 당; 당밀; 폴리비닐 피롤리돈; 폴리사카라이드; 단백질; 지방; 오일; 검 아라빅; 젤라틴; 시럽; 및 녹말을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 부가적인 적합한 접착제는 예를 들어, 미국특허 제7,213,367호에 개시되어 있다. 특정 실시예에서, 상기 접착제는 폴리비닐 아세테이트이다.
또 다른 실시예에서, 본원 조성물은 상기 활성 성분을 고형 담체에 혼합시키거나 결합시킬 수 있는 하나 이상의 중합체를 더 포함한다. 적합한 중합체는 천연 또는 합성물이고, 바람직하게는 씨앗에 식물 독소 효과가 거의 없도록 코팅된 것일 수 있다. 상기 중합체는 예를 들어, 폴리비닐 아세트산염; 폴리비닐 아세트산염 공중합체; 에틸렌 비닐 아세트산염(EVA) 공중합체; 폴리비닐 알콜; 폴리비닐 알콜 공중합체; 에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 및 카복시메틸셀룰로오스를 포함하는 셀룰로오스; 폴리비닐피롤리돈; 녹말, 변형된 녹말, 덱스트린, 말토덱스트린, 알긴산염 및 키토산을 포함하는 폴리사카라이드; 지방; 오일; 젤라틴 및 제인(zeins)을 포함하는 단백질; 검 아라빅; 셸락(shellacs); 비닐리덴 클로라이드 및 비닐리덴 클로라이드 공중합체; 칼슘 리그노설폰산염; 아크릴 공중합체; 폴리비닐아크릴산염; 폴리에틸렌 산화물; 아크릴아미드중합체 및 공중합체; 폴리히드록시에틸 아크릴산염, 메틸아크릴아미드 단량체; 및 폴리클로로프렌(polychloroprene)으로부터 선택될 수 있다.
또 다른 실시예에서, 본원 조성물은 응력 조건 중에 씨앗을 보호하기 위한 필러제를 더 포함할 수 있다. 이에 더하여, 본원 조성물은 액체 또는 반액체 조성물의 유동성, 상기 혼합 또는 상기 폴리머릭 조성물의 적응성, 및/또는 상기 씨앗에 대한 조성물의 접착성을 향상시키기 위해 가소제를 더 포함할 수 있다. 이에 더하여, 상기 제제에 탄산칼슘, 고령토 또는 벤토나이트 클레이, 펄라이트, diatomaceous earth 또는 예를 들어, 미국특허 제5,876,739호에 개시된 임의의 흡수 물질과 같은 건조제를 첨가하는 것이 요구될 수 있다. 현재 공개된 내용의 이익을 가지는 숙련된 장인은 제제에 사용하기 위해 원하는 성분을 용이하게 선택할 수 있다.
또 추가적인 실시예에서, 본원 파스테리아 조성물은 제 2 농업적으로 유익한 성분을 포함한다. 상기 제 2 농업적으로 유익한 성분은 예를 들어, 살충제 및 캡탄, 티아람, 메탈락실, 플루디옥소닐(fludioxonil), 옥사딕실(oxadixyl) 및 각각의 상기 물질의 이성질체와 같은 살진균제 등; 카밤산염, 티오카밤산염, 아세트아미드, 트리아진, 디니트로아닐린, 글리세롤 에테르, 피리다지논, 우라실, 페녹시, 요소 및 벤조산과 같은 화합물을 포함하는 제초제; 벤조옥사진, 벤즈히드릴 유도체, N,N-디알릴 디클로로아세트아미드, 다양한 디할로아실, 옥사졸리디닐 및 티아졸리디닐 화합물, 에탄온, 나프탈산 무수물, 및 옥심 유도체와 같은 제초제의 독성 완화제로부터 선택될 수 있다.
상기 제 2 농업적으로 유익한 성분은 씨앗의 발아 및/또는 식물의 성장 및/또는 식물의 건강을 촉진하는 비료 및/또는 성분을 더 포함할 수 있다. 이에 더하여, 근류 박테리아류, 바실러스속, 슈도모나스균속(Pseudomonas), 세라티아속(Serratia), 트리코데나(Trichodenna), 글로무스(Glomus), 글리오클라듐(Gliocladium) 및 균근균(mycorrhizal fungi)로부터의 다른 자연발생적 또는 재조합형 박테리아 및 균류와 같은 다양한 생물 농약을 포함할 수 있다. 이러한 화학 또는 생물학적 물질은 선충 및/또는 다른 해충을 방제하는데 이로울 수 있다.
상기 설명에 비추어 보면, 당해 기술자는 비활성 또는 비활성 성분, 살충제또는 비료와 같은 다양한 성분을 본원 조성물 및/또는 처리 방법에 포함할 수 있다. 이에 더하여, 당해 기술자는 파스테리아 포자의 생존, 성장, 및/또는 번식에 상당한 해를 끼치는 성분, 선충을 감염시키고, 생장시키고/생장시키거나 죽이기 위해 결합하는 파스테리아 능력을 감소시키는 성분, 및/또는 씨앗의 발아, 식물의 성장, 열매의 성장 및/또는 식물의 번식을 방해하는 성분을 일반적으로 포함하지 않을 것이다.
식물 종
상기 본 발명의 물질 및 방법은 껍질콩(green beans), 잔디, 토마토, 목화, 곡식, 콩, 채소, 밀, 보리, 쌀 및 캐놀라를 포함하지만 이에 제한되지 않는 식물 종에 대한 손상을 감소시키기 위하여 사용될 수 있다.
선충 종
상기 본 발명의 물질 및 방법은 선충을 죽이거나 방제하거나/방제하고 감염시키는데에; 선충의 성장 또는 번식을 억제하는데에; 선충 집단을 감소시키는데에; 및/또는 식물 병원성 선충, 식물에 기생하는 선충 및 땅콩뿌리혹선충(Meloidogyne arenaria), 프라틸렌커스 브라츄러스(Pratylenchus brachyurus), 콩팥모양선충(Rotylenchulus reniformis), 및 벨로놀라이머스 롱기카우다투스(Belonolaimus longicaudatus), 콩시스트선충(Heterodera glycines) 및 창 선충(Hoplolaimus galeatus)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 토양에 사는 선충에 의해 유발되는 식물에 대한 손상을 감소시키거나 억제하는데에 유용하다.
결합 및 전달 방법
본 발명은 상기 파스테리아 조성물을 식물 씨앗에 결합시키는 방법 및 씨앗을 선충 감염 장소에 전달하는 방법을 또한 제공한다.
상기 결합 방법은 파스테리아 포자의 생존, 성장 및/또는 번식에 상당한 해를 끼치지 않으며, 선충을 감염시키며, 생장시키며, 및/또는 죽이기 위해 결합하는 파스테리아 능력을 감소시키지 않는 것이 바람직하다. 바람직하게, 상기 결합 및 전달 방법은 씨앗 발아, 식물 관 형성, 식물의 길이, 식물의 번식 및/또는 열매의 성장에 영향을 미치는 것 같은 약간의 식물약해를 초래한다.
어떤 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 파스테리아 조성물을 씨앗에 코팅, 분무, 접촉 또는 혼합시킴으로써 결합된다. 일 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 씨앗 표면적의 적어도 일부분을 상기 파스테리아 조성물로 코팅함으로써 결합된다.
본원의 조성물은 임의의 다양한 기술, 가령 예를 들어, 유동층 기술(fluidized bed technique), 롤러분쇄법(roller mill methods) 및 분류층 기술(spouted bed technique)을 사용하여 씨앗에 결합 될 수 있다. 이에 더하여, 본원의 조성물은 로토정지 씨앗 처리기(rotostatic seed treater) 또는 드럼제피기(drum coater)를 사용하여 씨앗에 결합 될 수 있다. 상기 씨앗은 코팅 전에 미리 크기가 정해질 수 있다. 코팅 이후에, 상기 씨앗은 일반적으로 건조되고, 이후에 크기를 맞추기 위해 공지된 기술인 사이징 기기(sizing machine)로 전달된다.
일 실시예에서, 본원의 파스테리아 조성물은 우선 살충제, 제초제, 살진균제, 비료 및/또는 다양한 생물농약과 같은 다양한 농업적으로 유익한 성분과 혼합되고; 이후에, 상기 혼합물은 씨앗에 전달된다. 또 다른 실시예에서, 본원의 파스테리아 조성물은 다양한 농업적으로 유익한 성분이 순차적으로 씨앗에 전달된다. 또 다른 실시예에서, 본원의 파스테리아 조성물은 다양한 농업적으로 유익한 성분이 동시적으로 전달되지만, 상기 씨앗의 다른 면적에 전달된다.
본 명세서에서 사용된 것처럼, 씨앗 코팅은 상기 씨앗에 물질을 첨가하는 임의의 과정을 포함하는데, 이 때 상기 임의의 과정은 필름 코팅(film coating), 물질의 단일 층 또는 다수 층을 상기 씨앗의 표면적 전체 또는 일부에 부착, 물질의 연속층을 씨앗의 표면적 전체 또는 일부에 도포, 씨앗의 표면적 전체 또는 일부를 덮도록 동시에 또는 순차적으로 상기 씨앗에 물질을 도포하는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시예에서, 본원의 제제는 다양한 방법을 사용하여 씨앗 표면을 코팅될 수 있는데, 이 때 상기 다양한 방법은 필름 코팅, 용기(예, 병 또는 백)에서 씨앗과 본원의 제제를 혼합하는 방법, 기계적 도포, 텀블링, 분무, 및 침지를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다양한 활성 또는 비활성 물질은 코팅을 위해 사용될 수 있으며, 이러한 예로는 SEPIRET(Seppic, Inc., Fairfield, N.J.)와 같은 수성 필름 코팅 물질 및 오파코트(Opacoat)(Berwind Pharm. Services, Westpoint, Pa.)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 종래의 필름 코팅 물질이 있다.
코팅된 씨앗을 생산하는 다양한 방법은 예를 들어, 미국특허 제5,918,413호, 제5,891,246호, 제5,554,445호, 제5,389,399호, 제5,107,787호, 제5,080,925호, 제4,759,945호, 제4,465,017호, 제5,939,356호, 제5,882,713호, 제5,876,739호, 제5,849,320호, 제5,834,447호, 제5,791,084호, 제5,661,103호, 제5,622,003호, 제5,580,544호, 제5,328,942호, 제5,300,127호, 제4,735,015호, 제4,634,587호, 제4,383,391호, 제4,372,080호, 제4,339,456호, 제4,272,417호, 및 제4,245,432호에서 개시된 방법을 더 포함한다.
또 다른 특정 실시예에서, 상기 파스테리아 조성물은 고형 매트릭스 프라이밍(priming)에 의해 씨앗으로 전달된다. 간략하게 설명하면, 고형 매트릭스에 균일하게 분포된 파스테리아 포자는, 씨앗의 모든 면이 파스테리아 포자로 덮여질 때까지 충분한 시간 동안 씨앗과 접촉하여 놓여진다. 상기 처리된 씨앗은 차후에 보관하거나 사용하기 위하여 상기 고형 매트릭스로부터 분리될 수 있거나; 그렇지 않으면, 상기 처리된 씨앗은 상기 고형 매트릭스와 함께 저장되거나 심겨질 수 있다.
고형 매트릭스로서 사용하기에 적합한 물질은 폴리아크릴아미드, 녹말, 클레이, 실리카, 알루미나, 토양, 모래, 폴리요소, 폴리아크릴산염, 또는 방제 방식으로 본원의 조성물을 씨앗 위에 흡수하고 방출하기에 적합한 임의의 물질을 포함한다. 바람직하게, 상기 고형 매트릭스는 방제 방식으로 본원의 조성물을 방출하기에 적합하다. 상기 요구되는 방출 속도는 식물 종, 파스테리아 종, 선충 종 및 다른 인자에 따라 변화할 수 있다. 바람직하게, 본원의 조성물은 느린 속도로, 예를 들어 매트릭스를 통과하여 배지 또는 토양의 주변으로 확산 또는 이동함으로써, 처리된 씨앗으로부터 방출될 수 있다.
파스테리아 조성물로 코팅된 씨앗은, 파스테리아 코팅을 보호하기 위하여 추가적인 박막 필름으로 오버 코팅(over-coating)되어 추가적으로 뒤덮힐 수 있다. 오버 코팅하는 예증된 기술은 상기 유동층 기술 및 상기 드럼 필름 코팅 기술(drum film coating technique)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
추가적인 실시예에서, 상기 전달 방법은 추가적인 열처리 단계를 포함한다. 상기 열처리 단계는 파스테리아 조성물의 살선충 효과를 향상시킨다. 일 실시예에서, 상기 파스테리아 포자 현탁액은 과립과 같은 고형 담체와 혼합되기 전에 가열된다. 또 다른 실시예에서, 상기 파스테리아 과립 혼합물은 가열된다.
이에 더하여, 본원의 방법은 파스테리아 처리 이전에 또는 동시에, 씨앗에 접착제를 도포하는 단계를 포함할 수 있다. 일 실시예에서, 먼저, 상기 씨앗은 접착제 층으로 코팅되고, 그 다음으로 파스테리아 조성물로 처리된다. 적합한 접착제로는 폴리비닐 아세트산염, 폴리비닐 아세트산염 공중합체, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 알콜 공중합체, 메틸 셀룰로오스, 히드록시메틸 셀룰로오스, 히드록시메틸 프로필 셀룰로오스 덱스트린, 알긴산염, 당밀, 폴릴비닐 피롤리돈, 폴리사카라이드, 단백질, 지방, 오일, 폴리사카라이드, 검 아라빅, 젤라틴, 시럽, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시예에서, 본원의 방법은 a) 파스테리아 포자 현탁액을 입자성 담체와 혼합하고, 포자/과립 입자가 형성될 때까지 충분한 시간 동안 상기 혼합물을 건조하는 단계; b) 접착제로 씨앗을 코팅하는 단계; 및 c) 상기 씨앗이 상기 파스테리아 포자의 살선충 유효량으로 코팅될 때까지 상기 포자/과립 입자를 씨앗에 접촉시키는 단계를 포함한다.
또 추가적인 실시예에서, 본원의 파스테리아 조성물로 처리된 씨앗은 건조하는 단계와 같은 추가적인 단계를 거칠 수 있다. 유리하게는, 파스테리아 포자는 건조에 의해 손상 받지 않아야 한다. 따라서, 본원의 파스테리아 조성물로 처리된 씨앗은 실온에서 오랜 기간 동안 저장될 수 있다. 또한, 상기 처리된 씨앗의 긴 저장수명은 식재 스케쥴의 변화를 가능하게 한다. 유리하게는, 씨앗을 수송, 파종하거나 토양에 놓을 때, 상기 파스테리아 포자의 생존률은 박테리아의 발육형의 생존률보다 더 크다.
상기 씨앗 처리가 임의의 생리학적 상태에서 씨앗에 적용될 수 있음에도 불구하고, 상기 씨앗은 충분히 견고한 상태이어서 상기 치료 과정은 씨앗에 거의 손상을 주지 않을 것이다. 일반적으로, 상기 식물은 들판에서 수학 되었으며; 상기 씨앗은 상기 식물로부터 제거되었고; 임의의 비-종자식물 물질로부터 분리된다. 상기 씨앗은, 상기 처리가 상기 씨앗에 손상을 유발하지 않는 정도로 생물학적으로 안정한 것이 바람직하다. 예를 들어, 일 실시예에서, 상기 처리는 수확되고, 세척되고 수분 함량이 약 15 중량%로 건조된 종자에 적용될 수 있다.
대안적인 실시예로, 상기 씨앗은 건조된 이후에 물 및/또는 다른 물질을 붓고, 그 다음에 파스테리아 조성물로 처리하기 전 또는 도중에 재건조된다. 상기 처리는 수확 내지 파종의 과정 중 아무 때나 씨앗에 적용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된, 상기 용어 "파종되지 않은 씨앗"은 수확 내지 파종의 과정 중 어느 기간에서의 씨앗을 포함한다.
다음은 본 발명을 실시하기 위한 절차를 보여주는 실시예이다. 이러한 실시예는 제한하는 것으로서 이해되지 않을 것이다. 모든 퍼센트는 중량%이고, 모든 용매 혼합 비율은 알려진 것이 아닌 한 부피%이다.
파스테리아 씨앗 코팅의 제조
본 실시예는 파스테리아 페네트랜스 포자로 씨앗을 코팅하는 방법을 보여준다. 파스테리아 포자는 10 mmol/L의 인산염 완충액 속에 떠 있고, 약 2 x 107 spores/ml로 조절됐다. 파스테리아-과립형 혼합물은 페트리 접시에서 5 ml의 포자 현탁액을 2 g AXIS® diatomaceous earth granule과 혼합함으로써 수득되거나; 대안적으로, 페트리 접시에서 3 ml의 포자 현탁액을 2 g PROFILE® green clay granules와 혼합함으로써 수득된다.
상기 혼합물은 램프 밑에서 건조된다. 이후에, 껍질콩 씨앗은 폴리비닐아세트산염으로 처리되고, 평평한 접시에서 5 분간 건조된다. 상기 씨앗은 상기 파스테리아-과립형 혼합물로 완전히 코팅된다.
상기 파스테리아로 코팅된 씨앗은 즉시 사용 또는 장시간 저장에 적합하다.
선충방제에 대해 파스테리아로 코팅한 씨앗의 효험
선충에 관한 파스테리아로 코팅된 씨앗의 효과를 평가하기 위해 온실포트 시험이 수행되었다.
Axis의 잔디 보충제 및 Profile의 잔디 보충제 각각 2.2 g을 페트리 접시에 분리하여 놓았다. 1.8 x 107 spores/ml의 파스테리아 페네트랜스 포자를 상기 물질이 포화될 때까지 각각의 접시에 피펫으로 첨가하였다. 상기 Axis의 보충제는 5 ml에서 포화되었고, 상기 Profile 보충제는 4 ml에서 포화되었다. 건조시키기 위하여 상기 접시를 할로겐 램프 아래에 설치하였다. 껍질콩 씨앗(Ferry-Morse Blue Lake 274)의 중량을 측정했고, 413.3 mg의 평균 중량을 갖도록 결정했다. 비커 안으로 Elmer's Clear School Glue를 부으고, 핀셋을 사용하여 각각의 씨앗을 아교 속에 담금으로써, 씨앗을 폴리비닐 아세트산 스티커로 코팅했다. 씨앗을 5 분간 페트리 접시에서 건조하고 난 후에, 포자로 처리된 Axis 및 Profile의 과립에서 완전히 코팅될 때까지 굴렸다. 대조군 씨앗을 상술한 방법으로 처리되지 않은 Axis 및 Profile의 과립으로 코팅했다.
상기 코팅된 씨앗을 21 일간 들판에서 수집된 뿌리혹선충에 노출시켰다. 대조군에서는, 비처리된 껍질콩 씨앗을 동일한 조건에서 선충에 노출시켰다.
스티로폼 컵을 1 kg의 토양으로 채웠다. 토양 표면으로부터 2 인치 깊이의 토양 안으로 선충의 현탁액을 피펫으로 첨가함으로써, 각각의 포트에 1500 내지 2000개의 뿌리혹유형(root-knot juvenile)(Meloidogyne arenaria)을 접종했다. 상기 접종에 의해 생성된 구멍을 채우고난 이후에, 상기 껍질콩 씨앗을 포트 당 한 개씩 표면으로부터 0.5 인치 깊이에 심었다. 5 개의 시험군(포자를 포함함) 및 5 개의 대조군 씨앗을 심었다. 포트에 50 ml의 수돗물을 매일 주었고, 선충이 나타내는 온도 측정값이 하루에 500 도를 달성할 때까지 온실에서 유지했다.
이후에, 선충 수를 세기 위하여 토양의 샘플을 채취했고, 식물 및 뿌리 시스템을 토양으로부터 제거했다. 식물 건강 및 초세를 1 내지 10 등급으로 평가했고, 이 때 1은 가장 건강하지 않은 것이고, 10은 가장 건강한 것이다. 하나 이상의 파스테리와 결합한 토양 샘플 내의 유형선충의 수를 기록하고 퍼센트를 계산함으로써, 결합 비율을 평가했다. 뿌리 시스템으로부터 알 무리를 수집하고 현미경으로 알의 수를 셈으로써, 선충 알의 수를 세었다.
도 1 내지 3에 도시된 결과는 파스테리아로 코팅된 씨앗이 상기 대조군 처리와 비교할 때 씨앗 모상체, 초장(plant height) 및 식물 성장을 촉진한다는 것을 보여준다.
본 명세서에서 말했거나 인용된 특허, 특허 출원, 가출원 및 공개공보를 포함하는 모든 참조문헌은 상세한 설명의 명백한 설명에 부합하는 정도로 모든 도면 및 표를 포함하여 전부 참조로써 포함된다.
본 발명을 설명하는 측면에서 사용된 상기 용어 "하나" 및 이와 유사한 지시어는 본 명세서에서 따로 표시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포괄하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 값의 범위의 나열은 본 명세서에서 표시가 없는 한 범위에 포함된 각각의 독립된 값을 개별적으로 나타내는 속기 방법으로 단지 생각되고, 각각의 독립된 값은 본 명세서에서 개별적으로 인용된 것처럼 상세한 설명에 포함된다.
본 명세서에서 제공된 모든 예의 사용 또는 예시적인 표현(예, "예를 들어")은 단지 발명을 더 분명하게 하기 위한 의도이지, 따로 표시되지 않는 한 본 발명의 범위를 제한하기 위함이 아니다. 상세한 설명에서 없는 표현은 명쾌하게 명시할 정도가 아닌 한 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 요소를 표시하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에서 본 발명의 임의의 양태 또는 실시예에서 요소 또는 요소들과 관련하여 사용되는 용어, 예를 들어 "포함하는", "가지는", 또는 "함유하는"는, 명시되거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 특정 요소 또는 요소들로 "구성되는", "필수적 구성요소로 포함하는", 또는 "실질적으로 포함하는"하는 본 발명의 유사한 양태 또는 실시예에 대한 증거를 제공하는 것으로 생각된다(예, 본 명세서에 기술된 특정 요소를 포함하는 조성물은, 명시되거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 그 요소로 구성되는 조성물을 기술하는 것으로 또한 이해될 것임).
본 명세서에 기술된 예 및 실시예는 오직 설명하기 위한 목적이고, 다양한 변형 또는 상기의 약간의 변경은 당해 기술자에게 제안될 것이고, 본 출원서의 사상 및 범위 내에 포함될 것으로 이해될 것이다.

Claims (12)

  1. 파스테리아 포자의 유효량을 포함하는 파스테리아 조성물을 씨앗에 결합시키는 단계; 및 상기 씨앗을 심는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 씨앗에 도포되는 경우에, 상기 파스테리아 조성물은 씨앗당 약 106 내지 약 109 포자의 농도가 존재하는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 파스테리아 조성물은 액형 또는 고형 담체를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 고형 담체는 건조분말, 수화분말, 수화과립, 건조과립, 입자, 중합체 매트릭스 및 슬러리로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 고형 담체는 과립을 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  6. 제 4 항에 있어서,
    상기 고형 담체는 폴리아크릴아미드, 녹말, 클레이, 실리카, 알루미나, 토양, 모래, 폴리우레아, 폴리아크릴레이트 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 중합체 매트릭스인 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 접착제는 씨앗에 도포되고, 상기 접착제는 폴리비닐 아세트산염, 폴리비닐 아세트산염 공중합체, 폴리비닐알콜, 폴리비닐알콜 공중합체, 메틸 셀룰로오스, 히드록시메틸 셀룰로오스, 히드록시메틸 프로필 셀룰로오스 덱스트린, 알긴산염, 당밀, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리사카라이드, 단백질, 지방, 오일, 폴리사카라이드, 검 아라빅, 젤라틴, 시럽 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 파스테리아 포자는 파스테리아 페네트랜스, 파스테리아 라모스, 파스테리아 토네이(Pasteuria thornei), 파스테리아 니시자웨(pasteuria nishizawae) 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  9. 제 1 항에 있어서,
    상기 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충은 땅콩뿌리혹선충(Meloidogyne arenaria), 프라틸렌커스 브라츄러스(Pratylenchus brachyurus), 콩팥모양선충(Rotylenchulus reniformis), 벨로놀라이머스 롱기카우다투스(Belonolaimus longicaudatus) 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  10. 제 1 항에 있어서,
    상기 씨앗은 껍질콩(green beans), 토마토, 목화, 곡식, 콩, 밀, 보리, 쌀, 캐놀라 및 이들의 조합의 씨앗으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  11. 제 1 항에 있어서,
    상기 씨앗은 살충제, 제초제, 살진균제, 비료 및 생물농약으로 구성되는 군으로부터 선택되는 제 2 농업적으로 유익한 성분을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 병원성 선충 및/또는 토양에서 사는 선충을 방제하는 방법.
  12. 표면적의 적어도 일부분이 선충방제를 위한 파스테리아 포자의 유효량을 포함하는 파스테리아 조성물로 코팅된 씨앗.
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