BRPI0922998B1

BRPI0922998B1 - Método para o controle de nematódeos fitopatogênicos e/ou presentes no solo e sementes

Info

Publication number: BRPI0922998B1
Application number: BRPI0922998-1A
Authority: BR
Inventors: E. Hewlett Thomas; P. Waters John; R. Barmore Charles
Original assignee: Syngenta Crop Protection Ag
Priority date: 2008-12-19
Filing date: 2009-12-18
Publication date: 2018-01-16
Also published as: UA108065C2; CA2950287A1; JP5654481B2; EP2373148A4; US20140290134A1; AU2009335725B8; EA201690811A1; US20140057784A1; AU2009335725A8; AU2009335725A1; CA2745672C; EA033303B1; CN102316715B; BRPI0922998A2; CA2950287C; EA201991236A1; KR101708422B1; EP2373148B1; US9072307B2; EP2373148A2

Description

(54) Título: MÉTODO PARA O CONTROLE DE NEMATÓDEOS FITOPATOGÊNICOS E/OU PRESENTES NO SOLO E SEMENTES (51) lnt.CI.: A01C 1/06; A01C 1/08; A01N 3/00; A01N 25/02 (30) Prioridade Unionista: 19/12/2008 US 61/139,304 (73) Titular(es): SYNGENTA CROP PROTECTION AG (72) Inventor(es): THOMAS E. HEWLETT; JOHN P. WATERS; CHARLES R. BARMORE

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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODO PARA O CONTROLE DE NEMATÓDEOS FITOPATOGÊNICOS E/OU PRESENTES NO SOLO E SEMENTES.

Referência Cruzada a um Pedido Relacionado 5 O presente pedido reivindica o benefício do Pedido Provisional dos Estados Unidos N° de Série 61/139.304, depositado em 19 de dezembro de 2008, o qual é por meio deste incorporado por referência em sua totalidade, incluindo todas as figuras, tabelas ou desenhos.

Antecedentes da Invenção

As perdas de safra devido aos nematódeos parasitas das plantas estão estimadas exceder $100 bilhões. A prevenção desta lesão representa um significante desafio. Com a iminente perda do fumigante brometo de metila, existe tempo insuficiente para desenvolver e registrar novos compostos sintéticos para o controle de nematódeo. Por esse motivo, outras op15 ções são necessárias.

Os nematódeos fitopatogênicos são particularmente difíceis de controlar porque são revestidos com uma cutícula impermeável, espessa, ou revestimento externo, e têm muito poucos neurônios sensórios. Uma vez que muitos compostos de controle de peste operam como neurotoxinas, o baixo número de neurônios expostos por nematódeos fitopatogênicos diminui a eficaz área-alvo para os compostos nematicidas e tem resultado no desenvolvimento de compostos nematicidas como propriedades neurotóxicas extremamente elevadas.

Além disso, porque os nematódeos fitopatogênicos são encon25 trados no solo ou nas raízes de plantas, expondo os nematódeos fitopatogênicos aos agentes de controle é difícil de obter e coloca o lençol freático em risco de contaminação a partir destes compostos tóxicos. O uso de nematicidas com base nas neurotoxinas tem sido demonstrado contaminar igualmente água de superfície e freática. Por conseguinte, muitos destes com30 postos estão sendo removidos do mercado por razões de saúde pública.

A fumigação do solo antes do plantio é um método popular para o controle dos nematódeos. Um dos fumigantes mais populares, o brometo

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2/20 de metila, é destinado para a remoção do uso por causa de suas propriedades de destruição do ozônio. Além disso, esta prática de fumigação do solo mata os organismos no solo indiscriminadamente e corre o risco de eliminar os micróbios benéficos assim como os organismos causadores de doenças.

Por esse motivo, um nematicida eficaz com os efeitos ambientais benignos é urgentemente necessária.

A Pasteuria foi primeiro descrita em 1888 por Metchnikoff (Annales de 1’lnstitut Pasteur 2:165-170) como um parasita de pulgas de água. Subsequentemente, Cobb descreveu uma infecção por Pasteuria do nema10 tódeo Dorylaimus bulbiferous (2^a edição, Hawaiian Sugar Planters Assoe., Expt. Sta. Div. Path. Physiol. Bull. 5:163-195, 1906).

O ciclo de vida das bactérias envolve uma fase em que os endoesporos se ligam à cutícula dos nematódeos no solo. P. penetrans em seguida se prolifera dentro do corpo do nematódeo e passa através de diver15 sas fases morfológicas, incluindo estruturas em micélio e tálio, culminando no desenvolvimento de novos endoesporos. Os endoesporos são liberados quando lisam o corpo do nematódeo.

O crescimento das bactérias dentro do corpo do nematódeo reduz ou elimina a produção de ovos pelo nematódeo, gravemente restringin20 do a taxa de reprodução do nematódeo. A perda econômica para a safra hospedeira normalmente é infligida pela primeira geração da progênie de nematódeos e é prevenida pela Pasteuria através da redução da concentração da progênie de nematódeos na área da raiz da planta.

Embora o uso de Pasteuria para controlar os nematódeos tenha sido previamente proposto, um número de fatores, incluindo opções de liberação subideal tendo limitado o uso desta estratégia de controle de nematódeo. Os métodos convencionais para o controle dos nematódeos usando linhagens de Pasteuria incluem a aplicação das bactérias à planta e ao solo na forma livre (por exemplo, Stirling G. R. 1984. Biological contrai of Meloi30 dogyne javanica with Bacillus penetrans, Phytopathology, 74:55-60) ou na formulação líquida e sólida (por exemplo, Patente dos Estados Unidos N°. 5.248.500). De qualquer modo, apesar da eficácia altamente seletiva das

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3/20 bactérias nos nematódeos fitopatogênicos, necessitam estar em contato com os nematódeos a fim de produzir o efeito nematicida. Quando aplicado diretamente ao solo, uma grande quantidade das bactérias é necessária e tem de estar bem misturada com o solo, que substancialmente aumenta o custo do uso das bactérias.

Ao mesmo tempo que vários métodos de biocontrole usando bactérias de Pasteuria são conhecidos, neste ponto ainda permanece uma necessidade de uma metodologia melhorada para o uso destas bactérias para eficazmente controlar os nematódeos. Por esse motivo, a invenção ob10 jeto fornece novos métodos de controle de nematódeos fitopatogênicos que atacam as plantas.

Breve Sumário da Invenção

A invenção objeto fornece métodos e materiais vantajosos e novos para o controle dos nematódeos fitopatogênicos e/ou outros nematódeos presentes no solo por meio da liberação para o solo de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de esporos de Pasteuria que são atacados por uma semente.

No plantio das sementes da invenção objeto, os esporos de Pasteuria são transferidos para o solo circundando a semente. Tem sido consta20 tado que, quando o método da invenção objeto é praticado, os esporos em seguida atacam para, infectar, cultivar em, reesporular em, reduzir a fecundidade de, e/ou matar os nematódeos fitopatogênicos e/ou outros nematódeos presentes no solo na vizinhança da semente e, ultimamente, qualquer planta que se desenvolva a partir da semente.

O método da invenção objeto pode ser usado para controlar ou reduzir o mal causado pela infecção por nematódeo, e, nas modalidades preferidas, pode a florescimento da semente, crescimento de plantas e saúde de plantas.

Um aspecto da presente invenção fornece um método para o controle de nematódeo por meio da liberação para o local de uma infecção por nematódeo uma quantidade eficaz dos esporos de Pasteuria ligados às sementes das plantas.

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Os esporos da Pasteuría da presente invenção podem ser aplicados às sementes como esporos não formulados ou como uma composição sólida ou líquida formulada, suspensão das partículas, ou emulsão. Em uma modalidade, os esporos da Pasteuría são formulados em uma composi5 ção líquida. Em outra modalidade, os esporos da Pasteuría são formulados em uma composição sólida. Os veículos sólidos adequados incluem, mas não estão limitados a matrizes poliméricas sólidas, partículas, grânulos e pós. Em uma modalidade, o veículo sólido é composto de grânulos.

Nas modalidades preferidas, a composição da Pasteuría é asso10 ciada com as sementes por meio do revestimento, vaporização, ou de outra forma ligada para, contatar, ou misturar as sementes com uma composição da Pasteuría. Em uma modalidade, a composição da Pasteuría é aplicada por meio do revestimento de pelo menos parte da área de superfície da semente com a composição da Pasteuría.

Em uma modalidade, a semente da planta é primeiro tratada com um aderente que pode aderir aos esporos da Pasteuría e/ou uma composição contendo os esporos. O aderente pode ser, por exemplo, uma cola e/ou um ou mais polímeros ou copolímeros. Os exemplos de aderentes incluem, mas não estão limitados a, colas (tal como, cola ELMERS®); acetatos de polivinila; materiais de silicone; e materiais inorgânicos naturais, tal como, sílica-gel e argila.

Outro aspecto da invenção objeto fornece uma semente tendo pelo menos parte de sua superfície revestida por uma composição da Pasteuría, em que a composição da Pasteuría compreende uma quantidade efi25 caz de esporos da Pasteuría para o controle de nematódeo.

Breve Descrição dos Desenhos

A figura 1 mostra a saúde do crescimento das plantas a partir das sementes revestidas com a Pasteuría para o controle de nematódeo.

A figura 2 mostra a ligação dos esporos da Pasteuría aos nema30 tódeos no solo.

A figura 3 mostra a altura das plantas desenvolvidas a partir das sementes revestidas com Pasteuría para o controle de nematódeo.

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Descrição Detalhada

A presente invenção fornece materiais e métodos para o eficiente controle dos nematódeos fitopatogênicos e/ou outros nematódeos presentes no solo por utilizar as sementes das plantas revestidas com esporos da Pasteuria.

Vantajosamente, a Pasteuria produz os endoesporos que têm a propriedade única e útil de ser capaz de atacar a, infectar, cultivar em, reesporular em, reduzir a fecundidade de, e/ou matar os nematódeos fitopatogênicos e outros nematódeos presentes no solo.

Um aspecto da presente invenção fornece os métodos para o controle de nematódeo por meio da liberação, para o local de uma infecção por nematódeo, uma quantidade eficaz de uma composição da Pasteuria como um revestimento da semente da planta.

A Pasteuria liberada como revestimentos das sementes de acordo com a invenção objeto pode reduzir a capacidade dos nematódeos infectar as plantas. Como resultado, nas modalidades preferidas, o método de tratamento objeto é capaz de controlar ou reduzir o mal causado por meio da infecção por nematódeo, desse modo realçando o florescimento da semente, o crescimento de plantas e/ou a saúde de plantas.

Os esporos da Pasteuria da presente invenção podem ser produzidos in vivo nos hospedeiros vivos (por exemplo, Verdeho, S., and R. Mankau, 1986, Journal of Nematology, 18:635), ou in vitro sem a presença de tecidos hospedeiros vivos (por exemplo, Patente dos Estados Unidos N°. 5.094.954). Em uma modalidade específica, os esporos da Pasteuria da presente invenção são produzidos usando as técnicas de fermentação descritas nas, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos N^os 7.067.299 e 6.919.197.

Várias espécies de Pasteuria (Pasteuria spp.) são adequadas para o uso para o controle de nematódeo. Em uma modalidade, o ingrediente ativo compreende uma quantidade eficaz de esporos da Pasteuria penetrans para o controle de nematódeos de protuberância de raiz. Em outras modalidades, o ingrediente ativo compreende uma quantidade eficaz de esporos da Pasteuria selecionados a partir de Pasteuria ramose, Pasteuria

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6/20 thornea, Pasteuria usage, Pasteuria nishizawae, qualquer combinação dos mesmos, assim como a nova nematicidade das espécies que serão identificadas.

A quantidade nematicidamente eficaz de esporos da Pasteuria pode variar, dependendo dos fatores incluídos, mas não limitados a, as espécies das plantas, a área de superfície da semente, o tipo de veículo, presença ou ausência de outros ingredientes ativos, do método da formulação, da via de liberação, das espécies da Pasteuria, das espécies do nematódeoalvo, e da seriedade da infecção por nematódeo ou lesão à (s) planta (s).

A quantidade nematicidamente eficaz como usado aqui referese a uma quantidade de esporos da Pasteuria capaz de matar, controlar, ou infectar os nematódeos; retardar o crescimento ou reprodução dos nematódeos; reduzir uma população de nematódeo; e/ou reduzir a lesão às plantas causada por meio dos nematódeos. Em geral, a quantidade eficaz de esporos varia de cerca de 1χ10⁵ a 1χ10¹² (ou mais) esporos/sementes. De preferência, a concentração de esporo é de cerca de 1χ10⁶ a cerca de 1x10⁹esporos/semente.

Um ingrediente ativo como usado aqui refere-se a uma substância que é útil para matar, controlar, ou infectar nematódeos ou outras pestes; e/ou retardar o crescimento ou a reprodução dos nematódeos ou outras pestes; reduzir as populações de nematódeo ou de peste, e/ou reduzir a lesão as plantas causada por meio dos nematódeos ou outra peste (s).

Um ingrediente agricolamente benéfico como usado aqui refere-se a uma substância que é útil ou produtivo nos ambientes agrícolas, por exemplo, útil para o controle de uma doença, uma peste (incluindo, por exemplo, um inseto, um parasita, um vírus, um fungo, uma bactéria) e/ou uma erva daninha; útil para a promoção da quantidade e qualidade do crescimento de plantas, saúde de plantas, florescimento da semente, reprodução das plantas e/ou crescimento dos frutos. Os ingredientes agricolamente benéficos incluem, mas não estão limitados a pesticidas, herbicidas, fungicidas, fertilizantes, e agentes de biocontrole.

Um ingrediente inativo ou inerte como usado aqui refere-se a

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7/20 uma substância que auxilia na operação ou melhora a eficácia de uma composição ou formulação agrícola. Os ingredientes inativos ou inertes incluem, mas não estão limitados a um veículo, um aderente, um dispersante, um tensoativo, um diluente líquido, um aglutinante, um agente de enchimento, um solvente, um agente de umectação, um espessante, um emulsificante, um nutriente, um tensoativo, um penetrante, um agente espumante, um solubilizante, um extensor, e um agente de tamponamento.

Em certas modalidades, a composição da Pasteuría é aplicada às sementes por meio de revestimento, vaporização, ligação a, contatar, ou misturar as sementes com a composição da Pasteuría. Em uma modalidade, a composição da Pasteuría é ligada à semente por meio do revestimento pelo menos parte da área de superfície da semente com a composição da Pasteuría.

Em uma modalidade específica, a composição da Pasteuría é aplicada à semente por a) impregnar um veículo sólido com a composição da Pasteuría para se obter uma mistura de veículo da Pasteuría; e b) contatar a semente com a mistura de veículo da Pasteuría.

Outro aspecto da invenção fornece as sementes tratadas com a composição da Pasteuría objeto. Uma modalidade fornece as sementes tendo pelo menos parte da área de superfície revestida com a composição da Pasteuría. Em uma modalidade específica, as sementes da Pasteuría tratadas têm uma concentração de esporo de cerca de 10⁶ a cerca de 10⁹ esporos por semente. As sementes podem, da mesma forma, ter mais esporos por semente, tais como, por exemplo 1χ10¹⁰, 1x10¹¹ ou 1x10¹² esporos por semente.

Formulação da composição da Pasteuría

A Pasteuría da presente invenção pode ser liberada para as sementes como esporos não formulados ou como uma composição sólida ou líquida formulada, suspensão das partículas, ou emulsão.

Em uma modalidade, os esporos da Pasteuría são formulados em uma composição líquida. Os endoesporos são suspensos em um meio tamponado para manter o pH desejado. De preferência, o pH é de menos do

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8/20 que cerca de 6,0, mais de preferência o pH é de menos do que cerca de 5,5 e, mais de preferência, o pH está entre cerca de 3,0 e cerca de 5,0. Os sistemas de tamponamento que podem ser usados incluem, mas não estão limitados a, hidrogeno ftalato de potássio, ácido acético, ácido succínico e ácido cítrico. Os agentes que podem ser usados para acidificar o meio de cultivo incluem, mas não estão limitados a, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido acético, e outros ácidos orgânicos.

Em outra modalidade, a composição da Pasteuria pode opcionalmente compreender um ou mais aminoácidos, sais, carboidratos, vitaminas, e outros nutrientes de suporte. Em uma modalidade específica, a suspensão da Pasteuria pode compreender um ou mais dos componentes que seguem: glicose, NaCI, extrato de levedura, NH4H2PO4, (NH4)2SO4, glicerol, valina, L-leucina, L-glutamina, L-alanina, L-valina, L-tirosina, L-triptofano, ácido láctico, ácido propiônico, ácido succínico, ácido málico, ácido cítrico, tartarato de KH, solução de vitamina, solução mineral, xilose, lixose, e lecitina. Em outra modalidade específica, a suspensão pode compreender um ou mais dos componentes que seguem: ácido láctico, ácido propiônico, ácido succínico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e extrato de levedura.

Em uma modalidade, os esporos da Pasteuria são formulados em uma composição sólida. A suspensão sólida pode ser preparada por misturar os esporos da Pasteuria ou uma suspensão líquida da Pasteuria com um veículo sólido. Em uma modalidade, a composição sólida é obtida por meio da impregnação do veículo sólido com a suspensão de esporo, e subsequentemente secagem da composição sólida.

Os veículos sólidos adequados incluem, mas não estão limitados a, matrizes poliméricas sólidas, partículas, grânulos e pós. Em uma modalidade, o veículo sólido é composto de grânulos. Em uma modalidade, a composição objeto é formulada como uma emulsão; suspensão das partículas em um meio aquoso (por exemplo, água); pós umectáveis; grânulos umectáveis (secagem fluível); ou grânulos secos. Em uma modalidade específica, o veículo sólido é grânulos de terra diatomácea da AXIS® e/ou grânulos de argila greensgradeda PROFILE®.

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A composição da Pasteuria objeto pode ser formulada como, por exemplo, uma suspensão líquida, uma composição sólida, ou suspensão aquosa. A concentração do ingrediente ativo pode variar de cerca de 0,5% a cerca de 99% em peso (peso/peso), de cerca de 5% a cerca de 80%, de cerca 10% a cerca de 75%, de cerca de 15% a cerca de 70%, de cerca de 20% a cerca de 65%, de cerca de 25% a cerca de 60%, de cerca de 30% a cerca de 55%, de cerca de 35% a cerca de 50%.

Em outra modalidade, a composição objeto é formulada como uma mistura de grânulo da Pasteuria. A quantidade de esporos da Pasteuria para os grânulos pode variar de cerca de 1*10⁶ a cerca de 7*10® esporos /g de grânulos, de cerca de 5*10⁶ a cerca de 5χ10⁸ esporos/g dos grânulos, de cerca de 1χ10⁷ a cerca de 1χ10⁸ esporos/g de grânulos, ou de cerca de 3x10⁷ a cerca de 5x10⁷ esporos/g dos grânulos.

Em uma modalidade específica, o grânulo composição é obtido por meio da mistura de cerca de 3 a 5ml de uma suspensão de esporo da Pasteuria de 2χ10⁷ esporos/ml com cerca de 2 g dos grânulos. Em uma outra modalidade específica, a composição do grânulo é obtida por meio da mistura de cerca de 5 ml da suspensão do esporo com cerca de 2g de grânulos AXIS®. Em ainda outra modalidade específica, a composição do grânulo é obtida por meio da mistura de cerca de 3ml da suspensão do esporo com cerca de 2g de grânulos PROFILE®.

As partículas da composição sólida podem ser de qualquer tamanho capaz de ligar os esporos da Pasteuria a uma semente da planta.

Em uma outra modalidade, a composição da Pasteuria também compreende um ou mais ingredientes inertes ou inativos convencionais, incluindo, por exemplo, aderentes, dispersantes, tensoativos, diluentes líquidos, aglutinantes, agentes de enchimentos, solventes, agentes umectantes, espessantes, emulsificantes, nutrientes e agentes de tamponamentos.

Os ingredientes inertes ou inativos convencionais incluem, mas não estão limitados a: agentes de aderência convencionais; agentes dispersantes, tais como, metilcelulose (METHOCEL® A15LV ou METHOCEL®

A15C, por exemplo, serve como agentes de aderência/dispersante combina13/11/2017, pág. 14/29

10/20 dos para o uso nos tratamentos das sementes); álcool polivinílico (por exemplo, ELVANOL® 51-05); lecitina (por exemplo, YELKINOL® P), dispersantes poliméricos (por exemplo, polivinilpirrolidona/acetato de viniia PVPIVA S-630); espessantes (por exemplo, espessantes de argila, tais como, Van Gel B para melhorar a viscosidade e reduzir a aplicação de suspensões da partícula); estabilizantes de emulsão; tensoativos; compostos anticongelantes (por exemplo, ureia), tinturas, colorantes, e similares. Os ingredientes inertes adicionais úteis na presente invenção podem ser encontrados em McCutcheoris, volume 1, Emulsifiers and Detergents, MC Publishing Company, Glen Rock, N.J., U.S.A., 1996. Os ingredientes inertes adicionais úteis na presente invenção podem ser encontrados em McCutcheoris, volume 2, Functional Materials, MC Publishing Company, Glen Rock, N.J., U.S.A., 1996.

Em uma modalidade, um aderente é usado para facilitar a ligação dos esporos às sementes. O aderente se liga aos esporos ou a composição contendo a Pasteuria à superfície de uma semente, dessa forma, prevenindo ou pelo menos reduzindo as gotas indesejáveis de esporo. De preferência, o aderente é não tóxico, biodegradável, e adesivo. Os aderentes adequados incluem, mas não estão limitados a colas; acetatos de polivinila; copolímeros de acetato de polivinila; alcoóis polivinílicos; copolímeros de álcool polivinílico; celuloses, tais como, metil celuloses, hidroximetil celuloses, e hidroximetil propil celuloses; dextrinas; alginatos; açúcares; melaço; polivinilpirrolidonas; polissacarídeos; proteínas; gorduras; óleos; gomas arábicas; gelatinas; xaropes; e amidos. Os aderentes adicionais adequados são descritos na, por exemplo, Patente dos Estados Unidos N°. 7.213.367. Em uma modalidade específica, o aderente é acetato de polivinila.

Em outra modalidade, a composição objeto também compreende um ou mais polímeros capazes de misturar ou ligar o ingrediente ativo a um veículo sólido. Os polímeros adequados podem ser naturais ou sintéticos, e de preferência não têm ou têm pouco efeito fitotóxico na semente a ser revestida. O polímero pode ser selecionado a partir de, por exemplo, acetatos de polivinila; copolímeros de acetato de polivinila; copolímeros de

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11/20 etileno acetato de vinila (EVA); alcoóis polivinílicos; copolímeros álcool polivinílicos; celuloses, incluindo etilceluloses, metilceluloses, hidroximetilceluloses, hidroxipropilceluloses e carboximetilcelulose; polivinilpirrolidonas; polissacarídeos, incluindo amido, amido modificado, dextrinas, maltodextrinas, alginato e quitosanas; gorduras; óleos; proteínas, incluindo gelatina e zeínas; gomas arábicas; gomas laca; cloreto de vinilideno e copolímeros de cloreto de vinilideno; lignossulfonatos de cálcio; copolímeros acrílicos; polivinilacrilatos; óxido de polietileno; polímeros e copolímeros de dacrilamida; acrilato de poli-hidroxietila, monômeros de metilacrilamida; e policloropreno.

Em outra modalidade, a composição objeto pode, além disso, compreender um agente de enchimento para proteger as sementes durante condições de estresses. Além disso, a composição objeto pode, além disso, compreender um plastificante para melhorar a fluidez da composição líquida ou semilíquida, a flexibilidade da mistura ou da composição polimérica, e/ou a adesividade da composição à semente. Além disso, pode ser desejável adicionar à formulação um agente de secagem, tal como, carbonato de cálcio, caulim ou argila bentonita, perlita, terra diatomácea ou qualquer outro material absorvente como descrito, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos N°. 5.876.739. O técnico versado, tendo o benefício da descrição atual, pode facilmente selecionar os componentes desejáveis para usar na formulação.

Ainda em uma outra modalidade, a composição da Pasteuria objeto compreende um segundo ingrediente agricolamente benéfico. O segundo ingrediente agricolamente benéfico pode ser, por exemplo, selecionado a partir de pesticidas e fungicidas, tais como, captana, tiram, metalaxila, fludioxonila, oxadixila, e isômeros de cada um daqueles materiais, e similares; herbicidas, incluindo os compostos, tais como, carbamatos, tiocarbamatos, acetamidas, triazinas, dinitroanilinas, glicerol éteres, piridazinonas, uracils, fenóxis, ureias, e ácidos benzoicos; protetores herbicidas, tais como, ben30 zoxazina, derivados de benzidrila, Ν,Ν-dialil dicloroacetamida, vários compostos de dialoacila, oxazolidinila e tiazolidinila, etanona, compostos de anidrido naftálico, e derivados de oxima.

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O segundo ingrediente agricolamente benéfico pode, além disso, compreender os fertilizantes e/ou ingredientes que promovem a germinação da semente, e/ou o crescimento de plantas e/ou saúde. Além disso, ele pode compreender vários agentes de biocontrole, tais como, outros de ocorrência natural ou bactérias recombinantes e fungos a partir do gênero Rhizobium, Bacillus, Pseudomonas, Serratia, Trichodenna, Glomus, Gliocladium e fungos mycorrhizal. Estes agentes químicos ou biológicos podem ser benéficos para controlar o nematódeo e/ou outras pestes.

A luz dos ensinamentos acima, alguém versado na técnica deve incluir vários ingredientes, tais como, os ingredientes inativos ou inertes, pesticidas, ou fertilizantes na composição objeto e/ou método de tratamento. Além disso, alguém versado na técnica deve tipicamente não incluir aqueles ingredientes que devem significantemente prejudicar a sobrevivência, crescimento, e/ou reprodução dos esporos da Pasteuria, reduzir a capacidade dos esporos da Pasteuria de atacar a, infectar, cultivar em, e/ou matar os nematódeos, e/ou inibir a germinação das sementes, crescimento de plantas, crescimento dos frutos e/ou reprodução das plantas.

Espécies das plantas

Os materiais e os métodos da invenção objeto podem ser usados para a redução da lesão às espécies das plantas, incluindo, mas não limitados a, feijões verdes, gramados, tomates, algodão, milho, feijões de soja, legumes, trigo, cevada, arroz e canola.

Espécies de nematódeos

Os materiais e os métodos da invenção objeto são úteis para matar, controlar, e/ou infectar os nematódeos; retardar o crescimento ou a reprodução de nematódeos; reduzir a população de nematódeo; e/ou reduzir ou retardar lesão às plantas causadas por meio dos nematódeos fitopatogênicos, parasitas dos nematódeos da planta, e outros nematódeos presentes no solo, incluindo, mas não limitados a Meloidogyne arenaria, Pratylenchus brachyurus, Rotylenchulus reniformis, e Belonolaimus longicaudatus, Heterodera glycines e Hoplolaimus galeatus.

Métodos de Ligação e de Liberação

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A presente invenção da mesma forma fornece os métodos para a ligação da composição da Pasteuria às sementes das plantas e liberação das sementes para um local da infecção por nematódeo.

É preferível que o método de ligação não significantemente prejudique a sobrevivência, crescimento, e/ou reprodução dos esporos da Pasteuria, reduzir a capacidade dos esporos da Pasteuria de atacar a, infectar, cultivar em, e/ou matar nematódeos. De preferência, a ligação e a liberação dos métodos devem produzir pouca fitotoxicidade, tal como, afetar a germinação da semente, vascularização da planta, altura da planta, reprodução das plantas e/ou crescimento dos frutos.

Em certas modalidades, a composição da Pasteuria é ligada por meio do revestimento, vaporização, contato, ou mistura da semente com a composição da Pasteuria. Em uma modalidade, a composição Pasteuria é ligada por meio do revestimento de pelo menos parte da área de superfície da semente com a composição da Pasteuria.

A composição objeto pode ser ligada às sementes usando qualquer uma de uma variedade das técnicas, tais como, por exemplo, técnicas de leito fluidificado, os métodos de moinho rolante, e técnicas de leito fluidificado. Além disso, a composição objeto pode ser ligada às sementes usando uma máquina, tal como, um tratador rotostático de semente ou um revestidor de tambor. As sementes podem ser pré-feitas sob medida antes do revestimento. Após o revestimento, as sementes são tipicamente secas e em seguida transferidas para uma máquina de ajuste para ajustar, como é conhecido na técnica.

Em uma modalidade, a composição da Pasteuria objeto é primeiro misturada com vários ingredientes agricolamente benéficos, tais como, pesticidas, herbicidas, fungicidas, fertilizantes e/ou vários agentes de biocontrole; e a mistura é em seguida liberada às sementes. Em outra modalidade, a composição da Pasteuria objeto é liberada sequencialmente com vários ingredientes agricolamente benéficos às sementes. Em outra modalidade, a composição da Pasteuria objeto é liberada simultaneamente com vários ingredientes agricolamente benéficos, mas para diferentes áreas da

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14/20 superfície da semente.

Como usado aqui, o revestimento da semente inclui qualquer processo que adiciona materiais à semente, incluindo, mas não limitado a, revestimento da película, depósito de uma única camada ou camadas de materiais para toda ou parte da área de superfície de uma semente, aplicação de camadas contínuas de materiais para toda ou parte da área de superfície de uma semente, aplicação dos materiais à semente simultaneamente ou sequencialmente para cobrir a totalidade ou parte da área de superfície de uma semente.

Em modalidades específicas, a formulação objeto pode ser revestida nas sementes usando uma variedade de métodos, incluindo, mas não limitados a, revestimento da película, misturando as sementes com a formulação objeto em um recipiente (por exemplo, uma garrafa ou saco), aplicação mecânica, turbilhonamento, vaporização, e imersão. Uma varieda15 de de materiais ativos ou inertes pode ser usada para o revestimento, tal como, por exemplo, materiais convencionais de revestimento da película, incluindo, mas não limitados aos materiais de revestimento da película com base em água, tal como, SEPIRET (Seppic, Inc., Fairfield, N.J.) e Opacoat (Berwind Pharm. Services, Westpoint, Pa.).

Vários métodos para a produção das sementes revestidas, além disso, incluem aqueles descritos nas, por exemplo, Patentes dos Estados

Unidos N^Os	5.918.413;	5.891.246;	5.554.445;	5.389.399;	5.107.787;
5.080.925;	4.759.945;	4.465.017;	5.939.356;	5.882.713;	5.876.739;
5.849.320;	5.834.447;	5.791.084;	5.661.103;	5.622.003;	5.580.544;
25 5.328.942;	5.300.127;	4.735.015;	4.634.587;	4.383.391;	4.372.080;

4.339.456; 4.272.417; e 4.245.432.

Em outra modalidade específica, a composição da Pasteuria é liberada às sementes por meio do princípio da matriz sólida. Para brevemente ilustrar, os esporos da Pasteuria uniformemente distribuídos em uma ma30 triz sólida são colocados em contato com as sementes durante uma quantidade suficiente de tempo até toda a área de superfície das sementes ser revestida com os esporos da Pasteuria. As sementes tratadas podem ser

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15/20 separadas da matriz sólida para, também, armazenar ou usar; ou, alternativamente, as sementes tratadas podem ser armazenadas ou plantadas juntamente com a matriz sólida.

Os materiais adequados para uso como uma matriz sólida incluem, poliacrilamida, amido, argila, sílica, alumina, terra, areia, poliureia, poliacrilato, ou qualquer material capaz de absorver e liberar a composição objeto nas sementes de um modo controlado. De preferência, a matriz sólida é capaz de liberar a composição objeto de um modo controlado. A taxa de liberação desejada pode variar dependendo das espécies das plantas, das espécies da Pasteuria, das espécies do nematódeo e de outros fatores. De preferência, a composição objeto pode ser liberada a partir das sementes tratadas em ritmo lento, tal como, por meio da difusão ou movendo-se através da matriz para o meio circundando ou ao solo.

As sementes revestidas com a composição da Pasteuria podem ser, também, envolvidas com uma fina película adicional de sobre revestimento para proteger o revestimento da Pasteuria. As técnicas exemplificadas para o sobre revestimento incluem, mas não estão limitados a, técnica de leito fluidificado e a técnica de revestimento da película do tambor.

Em uma outra modalidade, os métodos de liberação incluem uma etapa adicional de tratamento térmico. A etapa de tratamento térmico deve realçar o efeito nematicida da composição da Pasteuria. Em uma modalidade, a suspensão do esporo da Pasteuria é aquecida antes da mistura com um veículo sólido, tal como grânulos. Em outra modalidade, a mistura de grânulos da Pasteuria é aquecida.

Além disso, o método objeto pode compreender uma etapa de aplicação de um aderente às sementes antes de ou simultaneamente com o tratamento da Pasteuria. Em uma modalidade, as sementes são primeiro revestidas com uma camada de aderente, e em seguida tratadas com a composição da Pasteuria. Os aderentes adequados incluem, mas não estão limitados a, acetato de polivinila, copolímeros de acetato de polivinila, álcool polivinílico, copolímero de álcool polivinílico, metil celulose, hidroximetil celulose, hidroximetil propil celulose dextrina, alginato, molasse, polivinilpirrolido13/11/2017, pág. 20/29

16/20 na, polissacarídeos, proteína, gordura, óleo, polissacarídeo, goma arábica, gelatina, xaropes, e qualquer uma das combinações dos mesmos.

Em uma modalidade específica, o método objeto compreende a) misturar uma suspensão do esporo da Pasteuría com um veículo particulado, e secar a mistura durante um tempo suficiente até que as partículas do esporo/grânulo sejam formadas; b) revestiras sementes com um aderente; e c) contatar as sementes com as partículas do esporo/grânulo até que a semente seja revestida com uma quantidade nematicidamente eficaz dos esporos da Pasteuría.

Ainda em uma outra modalidade, as sementes tratadas com a composição da Pasteuría objeto podem suportar as etapas adicionais de processamento, tal como secagem. Vantajosamente, os esporos da Pasteuría não devem ser danificados pela secagem. Dessa forma, as sementes tratadas com a composição objeto podem ser armazenadas durante um período prolongado de tempo em temperatura ambiente. A longa vida de prateleira das sementes tratadas, da mesma forma, permite variações nos horários de plantio. Vantajosamente, a taxa de sobrevivência dos esporos da Pasteuría é muito mais elevada do que a taxa de sobrevivência da forma vegetativa das bactérias durante o transporte, semeadura, ou uma vez colocada no solo com as sementes.

Embora os tratamentos das sementes possam ser aplicados a uma semente em qualquer estado fisiológico, é preferido que a semente esteja em uma estado suficientemente durável a fim de que o processo de tratamento deva produzir pouca ou nenhuma lesão à semente. Tipicamente, a planta tem sido colhida do campo; a semente removida da planta; e separada de qualquer material da planta de não semente. A semente é de preferência biologicamente estável à extensão que o tratamento não cause lesão à semente. Em uma modalidade, por exemplo, o tratamento pode ser aplicado à semente de milho que tem sido colhida, limpa e seca para teor de humidade abaixo de cerca de 15% em peso.

Em uma modalidade alternativa, a semente pode ser uma que tenha sido seca e em seguida preparada com água e/ou outros materiais e

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17/20 em seguida seca novamente antes ou durante o tratamento com a composição da Pasteuria. O tratamento pode ser aplicado às sementes a qualquer momento desde a colheita até a semeadura. Como usado aqui, o termo semente não semeada inclui qualquer semente em qualquer período de colheita até a semeadura.

A seguir estão exemplos, que ilustram os procedimentos para a prática da invenção. Estes exemplos não devem ser interpretados como limitação. Todas as porcentagens estão em peso e todas as proporções da mistura de solvente estão em volume, salvo de outra forma observado.

Exemplo 1 - Preparação do Revestimento de Semente da PASTEURIA

Este exemplo ilustra os métodos para as sementes revestidas com esporos da Pasteuria penetrans. Os esporos da Pasteuria são suspensos em 10 mmols /L de tampão de fosfato e ajustados para cerca de 2 x 10⁷esporos/ml. Uma mistura granular de Pasteuria é obtida por meio da misturação de 5 ml da suspensão de esporo com 2 g de grânulos de terra diatomácea AXIS® em uma placa de Petri; ou alternativamente, por meio da mistura de 3 ml da suspensão de esporo com 2 g de grânulos de argila greensgrade PROFILE® em uma placa de Petri.

A mistura é seca sob uma lâmpada. E em seguida, as sementes de vagem são tratadas com acetato de polivinila e deixadas secar durante 5 minutos em uma placa lisa. As sementes são completamente revestidas com a mistura granular da Pasteuria.

As sementes revestidas da Pasteuria são adequadas para uso imediato ou longo prazo de armazenamento.

Exemplo 2 - Eficácia de Revestimento de Pasteuria das sementes para o controle de nematódeos

Para avaliar o efeito das sementes revestidas de Pasteuria nos nematódeos, um pós-teste de estufa é executado.

2,2 g de cada um de suplemento para gramado Axis e suplemento para gramado Profile foram colocados em placas de Petri separadas.

Os esporos da Pasteuria penetrans em uma concentração de 1,8 x 10⁷ sp/ml foram pipetados em cada placa até que os materiais foram saturados. O su13/11/2017, pág. 22/29

18/20 plemento Axis foi saturado em 5 mL e o Profile foi saturado em 4 mL. As placas foram estabelecidas sob uma lâmpada de halogênio para secar. As sementes de vagem (Ferry-Morse Blue Lake 274) foram pesadas e determinadas para ter um peso médio de 413,3 mg. As sementes foram revestidas com um espessante de acetato de polivinila por derramamento de Elmer’s Clear School Glue em um béquer e manualmente mergulhando as sementes especiais com pinças na cola. As sementes foram secas durante 5 minutos em uma placa de Petri, e em seguida enroladas nos grânulos Profile e Axis com o esporo tratado até completamente revestimento. As sementes de controle foram revestidas como acima com grânulos Axis e Profile não tratados.

As sementes revestidas são expostas, como segue, aos campos de coleta dos nematódeos de protuberância de raiz durante 21 dias. No controle, as sementes de vagem não tratadas são expostas aos nematódeos sob as mesmas condições.

Os copos de isopor foram preenchidos com 1 kg de terra. Cada pote foi inoculado com 1500-2000 protuberâncias de raiz imaturas (Meloidogyne arenaria) por meio da pipetagem de uma suspensão dos nematódeos no solo em uma profundidade de 5 χ 10^-2 m (2 polegadas) abaixo da superfície do solo. O buraco resultante foi preenchido, e em seguida as sementes de vagem foram plantadas, uma por pote, em, uma profundidade de 1,2 χ 10² m (0,5 polegada) abaixo da superfície. 5 sementes de controle e 5 de teste (com esporos) foram plantadas. Os potes foram regados com 50 ml de água de torneira por dia, e mantidos na estufa até que as leituras da temperatura indicassem que os nematódeos atingiram 500 graus-dias.

O solo foi em seguida testado para a contagem do nematódeo, e as plantas e os sistemas de raízes removidos do solo. O vigor e a saúde das plantas foram avaliados em uma escala de 1 a 10, 1 sendo o menos saudável e 10 o mais saudável. A ligação da porcentagem foi avaliada por registrar o número de nematódeos imaturos em uma amostra de solo com 1 ou mais esporos da Pasteuria ligados e cálculo da porcentagem. Os ovos do nematódeo foram contados por meio da recolha das massas de ovo a partir dos sistemas de raízes e contagem dos ovos microscopicamente.

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19/20

Os resultados, mostrados nas figuras 1 até 3, demonstram que o revestimento de Pasteuria das sementes promovem o florescimento da semente, altura da planta, e crescimento de plantas comparados ao tratamento de controle.

Todas as referências, incluindo patentes, pedidos de patentes, pedidos provisórios, e publicações referidos a ou citados aqui são incorporados por referência em sua totalidade, incluindo todas as figuras e tabelas, para a extensão não são inconsistentes com as técnicas explícitas deste relatório descritivo.

Os termos um e uma e o e referências similares como usados no contexto da descrição da invenção são para serem interpretados para cobrir igualmente ambos a singular e o plural, salvo de outra forma indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto.

A recitação das faixas de valores aqui é meramente entendida para servir como um método de taquigrafia referindo-se individualmente a cada valor separado caindo na faixa, salvo de outra forma indicado aqui, e cada valor separado é incorporado no relatório descritivo como se fosse individualmente recitado aqui.

O uso de quaisquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, tal como) fornecida aqui, é entendido meramente para melhor iluminar a invenção e não representa uma limitação no escopo da invenção salvo de outra forma indicado. Nenhuma linguagem no relatório descritivo deve ser interpretada como indicação de qualquer elemento ser essencial para a prática da invenção salvo quanto é explicitamente declarado.

A descrição aqui de qualquer aspecto ou modalidade da invenção usando os termos, tal como, compreendendo, tendo, incluindo ou contendo com referência a um elemento ou elementos é entendida para fornecer suporte para o aspecto similar ou modalidade da invenção que consiste em, consiste essencialmente em, ou substancialmente compreende que o elemento ou elementos particulares, salvo de outra forma estabelecido ou claramente contradito pelo contexto (por exemplo, uma compo13/11/2017, pág. 24/29

20/20 sição descrita aqui como compreendendo um elemento particular deve der entendida como da mesma forma descrevendo uma composição consistindo naquele elemento, salvo de outra forma estabelecido ou claramente contradito pelo contexto).

Deve ser entendido que os exemplos e as modalidades descritas aqui são para os propósitos ilustrativos somente e que várias modificações ou alterações a luz dos mesmos serão sugeridas por pessoas versadas na técnica e são para serem incluídas no espírito e limite deste pedido de patente.

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para o controle de nematódeos fitopatogênicos e/ou presentes no solo, caracterizado pelo fato de incorporar uma composição de Pasteuría compreendendo de 10⁶ a 10⁹ esporos de Pasteuría a uma semente; e plantar a semente.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição de Pasteuría também compreende um veículo líquido ou sólido.
3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o veículo sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em pós secos, pós umectáveis, grânulos umectáveis, grânulos secos, partículas, matrizes poliméricas, e pastas.
4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o veículo sólido compreende grânulos.
5. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o veículo sólido é uma matriz polimérica selecionada a partir do grupo consistindo em poliacrilamida, amido, argila, sílica, alumina, terra, areia, poliureia, poliacrilato, e qualquer uma das combinações dos mesmos.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um aderente foi aplicado à semente, e em que o aderente é selecionado a partir do grupo consistindo em acetato de polivinila, copolímeros de acetato de polivinila, álcool polivinílico, copolímero de álcool polivinílico, metil celulose, hidroximetil celulose, hidroximetil propil celulose dextrina, alginato, melaço, polivinilpirrolidona, polissacarídeos, proteína, gordura, óleo, polissacarídeo, goma arábica, gelatina, xaropes, e qualquer combinação dos mesmos.
7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os esporos de Pasteuría são selecionados a partir do grupo consistindo em Pasteuría penetrans, Pasteuría ramose, Pasteuría thornei, Pasteuría nishizawae, e qualquer combinação dos mesmos.
8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os nematódeos fitopatogênicos e/ou presentes no solo são sele13/11/2017, pág. 26/29

2/2 cionados a partir do grupo consistindo em Meloidogyne arenaría, Pratylenchus brachyurus, Rotylenchulus reniformis, Belonolaimus longicaudatus, e qualquer combinação dos mesmos.
9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo

5 fato de que a semente é selecionada a partir do grupo consistindo em sementes para vagem, tomates, algodão, milho, soja, trigo, cevada, arroz, canola, e qualquer combinação dos mesmos.
10. Semente, como definida na reinvindicação 1, caracterizada pelo fato de que possui pelo menos parte da área de superfície revestida

10 com uma composição de Pasteuria, em que a composição de Pasteuria compreende de 10⁶ a 10⁹ esporos de Pasteuria para o controle de nematódeo.

Petição 870170087632, de 13/11/2017, pág. 27/29

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Revestimento da Semente Do Feijão Verde c

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Controle

Eixo

Perfil