KR20110061630A

KR20110061630A - 질병 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20110061630A
Application number: KR1020117009215A
Authority: KR
Inventors: 프랑크 오스터로스; 실케 아이그너; 크리스토프 우헤렉; 안드레아 와르텐버그-디맨드; 아나톨리 루드네브; 마이클 솔단; 크리스토프 브루에쉐어; 벤야민 다엘켄; 찬탈 주베르; 그레거 슐츠; 니클라스 첼로스
Original assignee: 바이오테스트 아게
Priority date: 2008-09-29
Filing date: 2009-08-31
Publication date: 2011-06-09
Also published as: HK1154797A1; RU2531548C2; AU2009296078A1; IL211904A; DK2341937T3; CA2738598C; IL211904A0; CA2738598A1; JP6154847B2; RU2011117293A; BRPI0919489A2; MX2011003335A; CN102215867B; AU2009296078B2; JP2012504110A; ES2528419T3; PT2341937E; JP2015172060A; US20110229465A1; WO2010034590A1

Abstract

본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 약학 조성물 및 키트와, 이를 이용하여 치료 방법 및 의학적 용도를 제공한다.

Description

질병 치료용 조성물{COMPOSITION FOR TREATING DISEASE}

본 발명은 류마티스 질환의 치료에 관한 것이다. 본 발명은 인간화된 단일클론 항체와 같이 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 약물 메토트렉세이트를 포함하는 고효능의 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물 및 키트는 특히 류마티스 관절염 치료에 효과적이다. 본 발명은 상기 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 약학 조성물 또는 키트 뿐만 아니라 상기 조성물 및 키트의 용도 및 이를 이용한 치료 방법에 관한 것이다.

류마티스 질환은 결합 조직, 특히 관절과 이의 부속 구조물에서 발병하는 질환 군으로, 염증, 퇴행 또는 대사 교란이 특징이다. 류마티스 질환의 예로는 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 청소년 류마니스 관절염 및 강직성 척추염이 있다.

류마티스 관절염은 관절과 주변 조직에 만성적인 염증을 유발하는 자가면역 질환이며, 또한 다른 조직과 신체 장기에도 침범할 수 있다. 이 질환은, 정상적으로는 자가 조직에 대해 허용성을 나타내는 T 세포가 숙주 세포에 의해 생성되는 분자인 '자기' 분자를 인지하여 반응할 때 발병한다. 항원 제시 세포(APC)에 의해 이루어지는 자가 항원의 제시한 '자가 반응성' T 세포의 활성화는, 이의 클론 증식과, 이들이 염증과 조직 파괴를 유도하게 되는 특정 조직으로의 이동을 유도한다.

현재 이용가능한 류마티스 관절염의 치료제는, 비스테로이드성 항염증제(NSAID)로 분류되는 통증과 염증을 통제하기 위한 제1선의 약물, 예컨대 아스피린, 이부프로펜, 나프로센 등으로 매우 다양하다. 제2차 관절염 치료제로는, 체내 코르티손 호르몬의 합성 버전으로, 항류마티스제(SAARD) 또는 질병-완화성 항류마티스제(DMARD)로서 작용하는, 코르티코스테로이드(예, 프레드니손 및 덱사메타손), 예컨대 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 메토트렉세이트, 페니실린아민, 사이클로포스파미드, 골드 염, 아조티포프린, 레플루노미드 등을 포함한다.

최근에 RA로 진단받은 많은 환자들은 메토트렉세이트(MTX)와 같은 DMARD로 치료를 시작한다. MTX(4-아미노-N10-메틸프테로일 글루탐산)는 엽산의 유사체로서, 피부, 혈액, 위장 조직에서 발견되는 세포 및 면역 시스템에 관여하는 세포 등의, 활발하게 생장하는 세포에게 중요한 형태의 엽산의 생산을 방해하는 것으로 알려져 있다. MTX가 어떠한 방식으로 RA의 중증도를 낮추는지는 완전하게 파악되지 않았지만, 항-염증 작용에서 역할을 담당하며, 퓨린 합성, 아데노신 분비 촉진, 전염증성 사이토카인의 생산 저해 및 염증의 조절을 포함하여, 작용할 것으로 제안되고 있는 매우 다양한 약학적인 기전에서 역할을 하는 것으로 생각된다(Swierkot et al., 2006). 또한, MTX는 예컨대 디하이드로폴레이트 리덕타제(DHFR)라고 하는 효소의 활성을 저해하는 것으로 알려져 있으며, 또한 다른 몇가지 효소들을 간섭하는 것으로 알려져 있다.

RA 치료용 약물의 다른 그룹은 생물-반응 변형제(BRM)라고 하는 일컫어지는데, 단일클론 항체를 포함한다. 이의 예로는, 종양 괴사 인자-알파(TNF-alpha)에 대한 길항제, 예컨대 아달리무맵(adalimumab), 인플릭시맵(infliximab) 및 에타너셉트(etanercept)가 있으며, 이들은 TNF-알파 수용체와의 결합을 통해 작용하거나, 또는 TNF-알파 단백질 자체에 직접 결합하여 작용한다. 몇가지 TNF-알파 저해제들이 류마티스 관절염 치료용으로 FDA로부터 승인받았으며, 이러한 것으로는 아달리무맵(Humira^®), 인플릭시맵(Remicade^®) 및 에타너셉트(Enbrel^®)가 있다. TNF-알파는 류마티스 관절염에서 중요한 매개체이며, RA 환자의 활막내 활성화된 대식세포에 의해 주로 생산된다. TNF-알파는, 전염증성 사이토카인으로 작용하며, RA 환자의 활막 조직내에 다량 존재한다. 이것은 혈액으로부터 염증이 발병된 조직으로 백혈구를 유인하는 사이토카인의 생산과 분비를 유발한다(Tracey et al., 2008).

TNF-알파는 활막의 염증 매개 뿐만 아니라, 관절 파괴 및 연골 분해에 관여한다. 또한, 이것은 CD4+CD25+ 조절 T-세포의 억제 활성을 저해할 수 있다(Andersson et al., 2008).

일부 사례들에서는, 전술한 약물을 조합하여 RA 환자를 치료한다. 특히, DMARD가 1차 치료제로 흔히 사용된다. 그러나, 질병이 통제되지 않는 환자의 경우에는, 보다 최근에 승인받은 치료제, 예컨대 생물 제제, 예를 들어 TNF-알파 길항제와 조합하여 사용하는 것이 바람직할 수 있다. MTX를 몇가지 단일클론 항체들(에타너셉트, 인플릭시맵, 아달리무맵 및 아나키리나)과 조합하면, MTX 치료를 단독으로 수행한 경우에 비하여 보다 나은 치료 효과를 도출할 수 있는 것으로 보고되었다(Swierkot et al., 2006). 그러나, MTX는 매우 다양한 약리학적 작용을 발휘하므로, 이의 임상 효과는 복수의 타겟에 의한 것일 수 있다(Wessels et al., 2008). 따라서, MTX가 어떤 방식으로 단일 제제로서 유효한, 치료학적 활성, 즉 유효성에 작용하는지를 쉽게 예측할 수 없다.

현재 이용가능한 약물들에도 불구하고, 상기한 치료제에 모든 환자들이 잘 반응하는 것은 아니며, 다수의 부작용이 있다. 예를 들면, TNF-알파 치료제는 면역 시스템을 하향 조절하여, 치료받고 있는 환자는 감염과 질병에 더욱 취약해지게 된다. 따라서, 대안적인 치료제의 개발이 여전히 필요한 실정이다.

일반적으로, CD4⁺ T 세포는 자가면역성을 개시하고 유지하는데 중요한 역할을 한다. 이에, 류마티스 관절염과 같은 질병 치료에, CD4⁺ T 세포 표면 분자에 대한 mAb, 특히 항-CD4 mAb의 사용이 제안되고 있다.

추가적으로 조사 중에 있는 일 예로는, 여러가지 자가면역 질환에서 테스트하고 있는, 항-CD4 B-F5 항체(뮤라인 IgG1 항-인간 CD4)가 있다. 류마티스 관절염 환자들을 대상으로 하는, 매일 B-F5를 투여하는 위약 대조 실험의 관찰 결과에서는, 유의한 개선이 나타나지 않았다(Wendling et al. J Rheumato1; 25(8):1457-61, 1998). 그러나, WO 2004/083247에서, 모체 마우스 B-F5에 대해 유사한 CD4 결합 특성을 지닌 인간화된 B-F5 (이하, hB-F5 또는 BT061이라 함) 항체가 개발되었다. 비스테로이드성 항염증 약물인 디클로페낙도 투여받고 있는 환자를 대상으로 하는, 마우스 B-F5 항체의 인간화된 버전의 유효성 예비 평가에서, 10일간 치료제로 사용하였을 때 환자에게서 양성적인 임상 효과가 나타나, 유효한 면역억제가 시사되었다.

또한, 2005년 6월에 개최된 EULAR 컨퍼런스에서 발표된 초록 및 포스터를 통해, Wijdenes 등의 연구도 개시되었다. 이들은, 류마티스 관절염을 앓고 있는 11명의 환자에게 2일 간격으로 5 mg의 hB-F5를 5번 정맥내 주입하고, 이와 함께 150 mg의 디클로페낙을 병행 처리하는, 치료에 대해 언급하였다(Wijdenes et al., Abstract and poster, EULAR conference, June 2005).

WO 2004/083247에는, 항체가 CD4+ T 세포의 특정 서브세트, 즉 CD4+CD25+ 조절 T 세포 (Tregs)를 활성화시킬 수 있다고 언급되어 있다. 이들 세포는 말초 CD4+ T 세포의 5-10%를 구성하고 있으며, 일단 자극을 받으면 CD4+ T-세포 및 CD8+ T-세포의 반응을 억제할 뿐만 아니라 B 세포의 활성화 및 클론 증식을 저해할 수 있게 된다. 따라서, 이들 세포는 면역 시스템에서 통제의 심각 수준(important level)을 나타낸다. 특히, CD4⁺CD25⁺Treg 세포는 말초에서 면역 항상성을 유지하고, 자가면역성 반응과 병원성 면역 반응을 조절하는데 관여한다.

CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화시키는 메카니즘을 통한 류마티스 관절염의 치료는 중요한 연구 방향을 제시해주는데, 류마티스 관절염을 앓고 있는 환자를 대상으로 한 임상 II상 연구에서의 hB-F5의 사용이 국제 특허 출원번호 PCT/EP2009/052809, PCT/EP2009/052811 및 PCT/EP2009/052810에 논의되어 있다.

그러나, 어떠한 새로운 치료제가 현재의 치료제와 성공적으로 조합되어 유익한 치료 효과를 제공할 수 있을지는 쉽게 예측하기 어렵다. 전술한 바와 같이, 이는 특히 MTX를 이용한 경우이다.

몇가지 실험들에서, MTX가 조절성 T 세포에 대해 부정적인 효과를 나타내어, 이의 치료학적 기전으로 인해 CD4+CD25+ 조절 T 세포 활성화에 의존하는 제제와의 병용 요법에 MTX의 사용을 금할 것으로 보이는 결과들이, 보고되었다. Wascher et al., (1994) 및 Herman et al., (2005)는, MTX가 이용가능한 T 림프구의 수를 줄일 수 있음을 시사하는 결과를 보고하였다. Wascher 등은, MTX를 고투여량으로 정맥내 투여하면 12주째에 총 말초 혈액 림프구가 현저하게 감소되고(P < 0.01), B 림프구(P < 0.005)와 T 림프구(P < 0.05)에 대한 바람직한 감소 효과와 더불어 림프구 서브세트의 명백한 재분배를 유도한다고 보고하였다. Herman et al., (2005)는, RA 환자의 저투여량 요법을 반영하는 농도(7.5 mg)에서 MTX가 T 림프구에 대한 시험관내 세포자살 유도 효과가 있다고 보고하였다.

또한, Porter et al., (2006)에 의해 수행된 시험관내 실험에서는, 조절성 T 세포의 생활성에 대한 MTX의 영향이 보고되었다. 시험관내 50 nM(분석한 최고 농도) 농도에서, Treg 세포의 억제 활성이 94%에서 88%로 크게 줄어들었다(p<0.05). 이러한 결과는, MTX의 존재가 Treg 억제를 저해할 수 있음을 시사한다.

또한, Yamaguchi et al., (2007)은, 천연 Treg 세포가 계속적으로 폴레이트 수용체 4(FR4)를 다량 발현한다고 하였다. MTX는 폴레이트 유도체로, MTX가 Treg 세포에 유입될 수도 있음을 의미한다. 이러한 유입이 이들 세포 집단의 내부 대사를 방해하는 결과를 초래할 수도 있다.

더욱이, 수많은 항체의 치료 활성은 Fc 수용체를 발현하는 세포 상에 존재하는 Fc 수용체에 의해 영향을 받는 것으로 알려져 있다. 일부 항체들은 심지어 활성을 발휘하려면 Fc 수용체를 발현하는 세포 상의 Fc 수용체에 결합되어야 한다. 그러나, MTX 요법은 생체내 단핵구 상의 Fc 감마 R1의 발현을 감소시키는 것으로 알려져 있다(Wijngaarden et al., 2004, 2005). 단핵구 상에서의 Fc 수용체의 발현을 감소시키는 MTX의 작용은, 또한 MTX와 치료학적 항-TNF-알파 항체인 인플릭시맵으로 치료받은 환자들에서도 확인되었다(Wijngaarden et al., 2008). 그 결과, MTX는 Fc 수용체에 결합하는 항체의 활성에 부정적인 영향을 미치는 것으로 일반적으로 간주되고 있다. 즉, MTX는 Treg를 활성화하는 항체의 능력에 부정적인 영향을 미칠 것으로 예상된다.

전술한 바와 같이, MTX는 hB-F5와 같이 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 활성화를 통해 작용하는 제제의 치료 효능에 부정적인 영향을 나타낼 것으로 예상된다. 이와 같이, 조합 치료 방법의 성과는 예측할 수 없다고 할 수 있다.

전술한 종래 기술과 관련하여, 본 발명의 목적은 류마티스 관절염을 치료하기 위한 개선된 다른 약학 조성물을 개발하는 것이다.

이에, 본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제와 메토트렉세이트를 분리된 상태로 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제와 메토트렉세이트의 조합이 치료 효능을 가지고 있으며, 놀랍게도 항체와 관련된 부작용의 수를 줄이는데 유익하다는 것을 예상치 못하게도 발견하게 되었다. 이러한 조합은 또한 놀랍게도 높은 수준의 치료 효능에 도달하는 속도 측면에서도 유익하다.

이에, 본 발명은, (a) CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계 및 (b) 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단계 (a)와 (b)는 동시에, 개별적으로, 또는 순차적으로 임의 순서로 수행할 수 있는, 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 메토트렉세이트 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 구현예로, 본 발명은 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하는, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화하는 제제를 이용한 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은, (a) CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계 및 (b) 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단계 (a)와 (b)는 동시에, 개별적으로, 또는 순차적으로 임의 순서로 수행할 수 있는, 질병-완화성 항류마티스제(DMARD)를 이용한 치료에 무반응인 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은, 의약제로 동시, 개별 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합된 조제물로서 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 제공한다. 일 측면에서, 본 발명은 류마티스 질환의 치료에 동시, 개별 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합된 조제물로서 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 발명은 메토트렉세이트 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는데 사용하기 위한 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 제공한다. 또다른 측면에서, 본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 이용한 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는데 이용하기 위한 메토트렉세이트를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 측면에서, 본 발명은 질병-완화성 항류마티스제 (DMARD)에 무반응인 환자에게서 류마티스 질환을 치료하는데 동시, 개별 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합된 조제물로서 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 제공한다.

본 발명은 하기 도면을 참조하여 단지 예시를 들어 설명된다.

도 1은 실시예 1에서 2명의 공여자(실험1 및 실험2)로부터 취한 CD4+CD25+ 조절 T 세포로 수행된 시험관내 증식 분석 결과를 나타낸다.
도 2A 및 2B는 실시예 2에 기술된 임상 실험의 코스에서 ACR20 스코어 이상을 달성한 환자의 %를 Keystone et al., (2004) 및 (2009)에 의해 공개된 3상 실험에서 보고된 가장 유효한 용량 그룹의 환자와 비교하여 나타낸 그래프이다. 도 2B의 그래프는 위약-보정한 것이다.
도 3A 및 3B는 실시예 2에 기술된 임상 실험의 코스에서 ACR50 스코어 이상을 달성한 환자의 %를 Keystone et al., (2004) 및 (2009)에 의해 공개된 3상 실험에서 보고된 가장 유효한 용량 그룹의 환자와 비교하여 나타낸 그래프이다. 도 3B의 그래프는 위약-보정한 것이다.
도 4A 및 4B는 실시예 2에 기술된 임상 실험의 코스에서 ACR70 스코어 이상을 달성한 환자의 %를 Keystone et al., (2004) 및 (2009)에 의해 공개된 3상 실험에서 보고된 가장 유효한 용량 그룹의 환자와 비교하여 나타낸 그래프이다. 도 4B의 그래프는 위약-보정한 것이다.
도 5는 인간화된 B-F5의 V_H 영역을 코딩하는 플라스미드의 단편에 대한 뉴클레오티드 서열(서열번호 3)을 나타낸다. V 영역을 코딩하는 서열은 밑줄 표시되어 있으며, 해당 폴리펩타이드 서열(서열번호 15)은 뉴클레오티드 서열 밑에 나타낸다.
도 6은 인간화된 B-F5의 V_k 영역을 코딩하는 플라스미드의 단편에 대한 뉴클레오티드 서열(서열번호 4)을 나타낸다. V 영역을 코딩하는 서열은 밑줄 표시되어 있으며, 해당 폴리펩타이드 서열(서열번호 2)은 뉴클레오티드 서열 밑에 나타낸다.
도 7은 B-F5의 인간화된 형태(즉, BT061) 설계에서, 뮤라인 B-F5 V_K (서열번호 6), FK-001 (서열번호 7, 8 9 및 10), L4L (서열번호 16), 및 L4M (서열번호 2)의 폴리펩타이드 서열을 정렬한 것이다.
도 8은 B-F5의 인간화된 형태 설계에서, 뮤라인 B-F5 V_H (서열번호 5), M26 (서열번호 11, 12, 13 및 14), H37L (서열번호 1), 및 H37V (서열번호 15)의 폴리펩타이드 서열을 정렬한 것이다.

전술한 바와 같이, 본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 개별적으로 포함하는 키트를 제공한다.

CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트는 단일 제형이거나 또는 분리된 개별 제형일 수 있다. 이들 제형들은 상기 제제 및/또는 메토트렉세이트로 구성될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 제형들은 제제 및/또는 메토트렉세이트를 포함할 수 있으며, 담체 또는 부형제와 같은 제약학적으로 허용가능한 성분을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일 측면에서, 상기 제제 및/또는 메토트렉세이트는 비경구 투여용으로, 바람직하게는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여용으로 적합할 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 제제 및/또는 메토트렉세이트는 피하 투여에 적합하다.

본 발명의 이러한 측면에 대한 일 구현예에서, 상기 제제 및/또는 메토트렉세이트는 정맥내 투여용으로 적합하며, 용량 부피 0.5 내지 500 ml로 제공되거나, 또는 용량 부피 0.5 - 500 ml로의 희석을 위한 형태로 제공된다. 다른 구현예에서, 상기 조성물은 피하 또는 근육내 투여용으로 적합하며, 용량 부피 0.1 내지 3 ml로 제공된다. 다른 예로, 상기 제제 및/또는 메토트렉세이트는 용량 부피 0.5 내지 1.5 ml 또는 15 내지 25 ml로 제공하는 것이 적합하다.

다른 측면에서, 메토트렉세이트는 경구 투여용으로 조정되며, 정제 형태일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에서, 상기 조성물 또는 키트는 1회 투여량으로 사용하기 적합하거나, 복수회의 투여량의 일부로서 사용하기 적합할 수 있으며, 특히 투여량은 매주, 2주에 1회, 4주에 1회, 6주에 1회 또는 8주에 1회로 투여된다.

이러한 측면에 대한 일 구현예에서, 본 발명의 키트는 상기 제제와 메토트렉세이트를 개별 투여량으로 복수개 포함한다. 다른 구현예에서, 약학 조성물이 투여량 단위로 개별 포장된 형태로 복수개 포함하는 투여량 팩이 제공된다.

일 특정 구현예에서, 상기 제제는, 선택적으로 메토트렉세이트와 함께, 피하 투여에 적합하며, 비-의료 종사자가 쉽게 투여할 수 있도록 희석이 필요하지 않은 투약 형태로 준비된 형태로 제공된다.

본 발명에 사용하기 적합한 상기 제제는, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 것이다. 상기 제제는 폴리펩타이드, 단백질 또는 항체일 수 있다. 상기 제제가 항체인 경우, 이는 단일클론 항체일 수 있다. 바람직하게는, 상기 항체는 단일클론 항-CD4 항체이다. 또한, 항체는 바람직하게는 IgG1 항체일 수 있으며, 비변형된 IgG1 항체일 수 있다.

본 발명에 사용하기 가장 적합한 항체는 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는, 인간화된 항-CD4 항체, 또는 이의 단편 또는 유도체이다. CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 항체의 예들은 Becker et al., (European Journal of Immunology (2007), Vol. 37: pages 1217-1223)에 논의되어 있으며, WO 2004/083247에 기술되어 있다.

일반적으로, 본 발명에 사용되는 항체는 CD4에 결합할 수 있는 하나 이상의 가변성 도메인을 포함한다. 상기 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE 등의 임의의 인간 불변부(Fc) 클래스, 및 IgGl, IgG2, IgG3 및 IgG4 등의 이소타입으로부터 유래되는 불변 도메인들로부터 선택할 수 있다. 바람직한 불변부는 IgG, 특히 IgG1의 불변 도메인으로부터 선택된다.

또한, 본 발명은 항체의 임의의 단편을 포함한다. 단편은 바람직하게는 항원 결합부, 또는 항체의 V 영역을 포함하며, 특히 Fab, Fab', F(ab)'₂, Fv 및 scFv 단편이다.

본 발명의 특히 바람직한 측면에서, 항체는 마우스 단일클론 항-CD4 항체인 B-F5로부터 유래된, 인간화된 항-CD4 항체, 또는 이의 단편 또는 유도체이다. 항체는 마우스 단일클론 항체 B-F5의 상보성 결정부(CDR)를 포함하는 서열을 포함하며, 선택적으로 항체의 특이성 및/또는 친화성에 실질적으로 영향을 주지 않는 서열내 변이가 추가된, 인간화된 항-CD4 항체일 수 있다.

항체의 예들은 WO 2004/083247에서 제공되며, 이 문헌에는 마우스 B-F5 항체의 여러가지 인간화된 버전의 제조 방법이 기술되어 있다. 특히, WO 2004/083247에는 하기 폴리펩타이드 서열로 정의되는 V 도메인을 가진 인간화된 항체 BT061 (hB-F5)의 제조 방법이 설명되어 있다:

H 체인 V 도메인: EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCRMYWLRQA PGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSAS YYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (서열번호 1)

L 체인 V 도메인: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQ KPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFG QGTKVEIK (서열번호 2).

상기 항체의 유도체들은 또한 본 발명에 사용하기 적합하다. 유도체들은 서열번호 1 또는 2와 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 가지는 폴리펩타이드 서열로 정의되는 V 도메인을 가지는 것을 포함한다.

특히 바람직한 항체는 마우스의 B-F5 mAb의 상보성 결정부(CDR)를 포함하며, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화하는 hB-F5의 능력을 보유한 것이다. V_H 및 V_K 도메인내 CDR의 위치는 도 7과 8에 나타내었다. 이들 항체들은 선택적으로 결합 특이성 및/또는 결합 친화성에 실질적으로 영향을 주지 않는 CDR 서열 상의 변이를 가질 수 있다.

일반적으로, 본 발명에 사용되는 항체는 인간 불변부(Fc)를 더 포함한다. 이러한 불변부는 전술한 불변 도메인들 중에서 선택할 수 있다.

또한, 본 발명은 이것의 V 영역을 포함하는, hB-F5 항체의 모든 단편 또는 이의 유도체를 포함한다. 이는 특히 Fab, Fab', F(ab)'₂, Fv 및 scFv 단편을 포함한다.

hB-F5 항체를 제조하기 위해, BT061 항체의 H 체인과 L 체인의 V 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를, 인간 H 또는 L 체인의 불변부를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 융합할 수 있다. 이러한 방식으로 수득되는 완전한 H 및 L 체인을 발현시키기 위해, 단백질의 분비를 허용하는 신호 펩타이드를 코딩하는 서열도 부가할 수 있다.

전술한 폴리뉴클레오티드는 발현 벡터에서 선택된 숙주 세포에서의 전사 및 번역을 조절할 수 있는 적절한 조절 서열과 연결된다. 이러한 재조합 DNA 구조체는 공지된 재조합 DNA 및 유전자 조작 기법에 의해 수득하고 숙주 세포에 도입할 수 있다.

사용가능한 숙주 세포는 원핵세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 적합한 진핵 세포들 중에서도, 예로, 식물 세포, 사카로마이세스와 같은 효모 세포, 드로소필라 또는 스포도테라와 같은 곤충 세포 및 HeLa, CHO, 3T3, C127, BHK, COS 등의 포유류 세포를 언급할 수 있을 것이다.

본 발명에 사용되는 BT061 (hB-F5) 항체는 이의 발현에 적합한 조건 하에 상기 항체를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하고, 숙주 세포 배양물로부터 상기 항체를 회수함으로써, 수득할 수 있다.

본 발명의 다른 측면은 상기 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 키트 또는 약학 조성물의 제조 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

전술한 바와 같이, 본 발명은 류마티스 질환을 앓고 있거나 또는 걸리기 쉬운 개체에 대한 의학적 용도 및 치료 방법을 추가로 제공한다. 특히, 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법은, (a) CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계 및 (b) 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하며, 단계 (a) 및 단계 (b)는 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로, 임의 순서로 이루어질 수 있다. 이러한 측면에 대한 일 구현예에서, 단계 (a) 및 단계 (b)는 동일한 날에 수행된다. 이러한 측면에 대한 다른 구현에에서, 단계 (a)와 단계 (b)는 동일한 주내에 이루어진다.

다른 측면에서, 본 발명은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 메토트렉세이트 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법, 및 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하는, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 이용한 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

류마티스 질환은, 결합 조직, 특히 관절 및 관련 구조물에서 발병하는 질환, 특히 염증, 퇴행 또는 대사 교란이 특징적인 질환으로 정의된다. 본 발명의 바람직한 측면에서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 청소년 류마니스 관절염 및 강직성 척추염이다.

류마티스 관절염의 치료가 바람직하다. 류마티스 관절염과 관련하여, 치료제의 임상 효능은 ACR 스코어 평가로 평가할 수 있다.

ACR 스코어 평가는 미국 류마티스 학회(ACR)에 의해 개시된 치료받은 환자에게서 나타나는 류마티스 관절염을 평가하는 방법으로, 코어 세트 파라미터를 측정함으로써 이루어진다(Felson et al., Arthritis & Rheumatism, 1995, 38(6), 727-735). 이러한 시스템에서는, ACR20은 압통(tender) 관절 카운트 및 종창 관절 카운트의 20% 이상 개선 및 나머지 ACR 코어 세트 측정 5개 중 3개에서 20% 이상의 개선으로 정의된다: 환자 및 의사 평가(physician global assessment), 통증, 장애 및 급성 반응 물질, 예컨대 c-반응성 단백질(CRP) 또는 적혈구 침강율(ESR). 마찬가지로, ACR50 및 ACR70 스코어는 각각 50% 이상의 개선 및 70% 이상의 개선을 의미한다.

본 발명의 다른 측면에서, 치료제는 질환-완화성 항류마티스제(DMARD)를 이용한 치료에 무반응인 환자에게 투여할 수 있다. 무반응자는 DMARD를 이용한 치료에 불충분한 반응을 보이는 환자이다. 특히, 환자에게서 임상적으로 활성인 류마티스 관절염이 지속되는 경우, 예컨대 약물이 환자에게서 ACR20을 달성하지 못하거나 또는 관절의 구조적 손상 진행을 저해하지 못하거나, 또는 치료하는 동안에 약물에 대한 초기 반응이 없는 경우, 환자는 불충분한 반응을 나타내는 것이다.

DMARD의 예로는, 예컨대 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 메토트렉세이트, 페니실린아민, 사이클로포스파미드, 골드 염, 아조티포프린, 레플루노미드 등이 있다.

전술한 바와 같이, 제제 및 메토트렉세이트는 임의의 적합한 방식으로 환자에게 투여할 수 있다. 특히, 이것은 비경구, 예컨대 정맥내, 근육내 또는 피하 주입으로 투여할 수 있다. 제제의 투여를 위해, 정맥내 또는 피하 투여가 특히 바람직하다. 또한, 메토트렉세이트는 경구 투여할 수 있다.

제제 및/또는 메토트렉세이트가 투여되는 부피는 투여 방법에 따라 달라질 것이다. 투여가 정맥내 주입에 의해 투여되는 것인 경우, 투약 부피는 0.1 또는 0.5 ml에서 최대 500 ml, 바람직하게는 15 내지 25 ml, 전형적으로는 약 20 ml일 수 있다. 투여량이 피하 또는 근육내 주사에 의해 투여되는 경우, 투약 부피는 0.1 내지 3 ml, 바람직하게는 0.5 내지 1.5 ml, 전형적으로는 약 1 ml일 수 있다.

투여 횟수는 특별히 제한되지 않지만, 치료 효능을 간섭하지 않도록 한다. 치료는 1회 투약 또는 다중 투약을 포함할 수 있다. 다중 투약은 적어도 다음과 같은 기준으로 투여되는 것이 바람직하다: 매주, 2주마다, 4주마다, 6주마다, 12주마다, 24주마다, 1개월, 6개월 또는 매년. 따라서, 투약은 1주일 이상, 또는 2주일 이상, 1달 이상, 3달 이상, 6달 이상, 1년 이상의 간격으로 떨어져 있을 수 있다(이는, 투여량이 매주, 2주 마다, 또는 매달, 6개월마다 또는 매년 복용됨을 의미함). 투여량은 적어도 2주 내지 3주 간격으로 투여되는 것이 특히 바람직하다.

치료 기간은 특별히 제한되지 않으며, 자가면역 질환의 치료에서 일반적인 바와 같이, 치료는 무한정으로 진행되거나, 또는 환자에서 증상이 관리가능한 수준으로 감소될 때까지 이루어진다. 통상적으로 치료는 적어도 1달 동안 개체에게서 이루어진다.

치료학적 유효량, 즉 류마티스 질환을 완화, 예방 또는 치료하는데 유효한 양으로 상기 제제 및 메토트렉세이트가 투여되는 것으로 이해될 것이다.

특히, 질환이 류마티스 관절염이 경우, 상기 제제 및 메토트렉세이트는 바람직하게는 ACR50 반응, 더 바람직하게는 ACR70 반응을 제공하는데 유효한 양으로 투여된다.

본 발명의 일 측면에서, 상기 제제는 개체에게 0.2 내지 10 mg의 투여량으로 투여되며, 더 바람직하게는 0.2 내지 6.25 mg, 가장 바람직하게는 0.2 내지 3 mg의 투여량으로 투여된다. 이러한 투여량은 특히 투여량이 정맥내로 투여되는 경우에 바람직하다.

본 발명자들은, 상기 제제가 인간화된 항체 BT061인 경우, 3명의 건강한 지원자에게 정맥내 주입한 지 3시간 후에 이들의 혈장내 순환성 항체의 유효한 Cmax 수치가 하기 표 1에 나타낸 바와 같이 예상한 결과 보다 훨씬 낮다는 것을 놀랍게도 확인하였다. 이는 보다 신속한 타겟 매개의 소거를 의미하는 것으로 생각된다.

용량( mg )	혈장 수준 (㎍/ ml )
용량( mg )	이론적 cmax	유효 cmax (주입 완료 후)	주입 완료 3시간 후 농도
2.5	0.71	0.06 - 0.14	0
5	1.43	0.32 - 0.44	0.09 - 0.16
10	2.86	0.8 - 2.0	0.46 - 1.4
20	5.71	2.3 - 4.1	1.7 - 3.3
40	11.43	5.9 - 6.5	4.4 - 6.1
60	17.14	8.9 - 15.1	7.7 - 11.08

표 1 - 정맥내 투여 후 BT061의 혈장 예상 수준 및 혈장 유효 수준. 투약 그룹 당 3명의 상이한 지원자로부터 측정한 혈장 수준 범위를 나타낸다.

즉, 본 발명의 바람직한 구현예에서, 제제 0.2 - 10 mg을 정맥내로 투여하며, 투여한 지 3시간 후에 환자의 혈장내 제제의 최고 농도는 2.5 ㎍/ml 미만이다. 바람직하게는, 제제 0.2 - 5 mg을 정맥내로 투여하며, 투여한 지 3시간 후에 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.3 ㎍/ml 미만이다. 더 바람직하게는, 제제 0.5 - 3 mg을 정맥내로 투여하며, 투여한 지 3시간 후의 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.1 ㎍/ml 미만이다. 이들 수치는 임의 투여 후 및/또는 제제의 1차 및/또는 2차 투여 후에 수득된다.

또한, 투여량은 개체의 체표면적(BSA)을 기초로 계산할 수 있다. 체표면적(BSA)은 임의의 공지된 방법에 따라 계산할 수 있다. BSA 계산 방법의 예는 다음과 같다: Mosteller 공식 (BSA (m²) = ([키(cm) x 체중(kg)]/ 3600 )^½ (Mosteller RD., N Engl J Med 1987 Oct 22;317(17):1098); DuBois 및 DuBois 공식, BSA (m²) = 0.20247 x 키(m)⁰ ^.725 x 체중(kg)⁰ ^.425 (DuBois D; DuBois EF., Arch Int Med 1916 17:863-71); Haycock 공식, BSA (m²) = 0.024265 x 키(cm)⁰ ^.3964 x 체중(kg)⁰ ^.5378 (Haycock G.B., et al.,　 The Journal of Pediatrics 1978　 93:1:62-66); Gehan 및 George 공식, BSA (m²) = 0.0235 x 키(cm)⁰ ^.42246 x 체중(kg)⁰ ^.51456 (Gehan EA, and George SL, Cancer Chemother Rep 1970 54:225-35); 및 Boyd 공식: BSA (m²) = 0.0003207 x 키(cm)⁰ ^.3x 체중(g)^{(0.7285 - ( 0.0188 x} ^LOG ^(g)).

즉, 제제는 환자의 체표면적 m² 당 0.1 - 5 mg, 바람직하게는 0.1 - 2.5 mg, 가장 바람직하게는 0.25 - 1.5 mg의 투여량으로 개체에게 투여할 수 있다. 다른 구현예에서, 투여량은 본 발명의 다른 측면에서, 2 - 150 ㎍/kg, 바람직하게는 2 - 75 ㎍/kg, 및 가장 바람직하게는 5 - 45 ㎍/kg의 투여량으로 제제가 개체에게 투여되도록, 개체의 체중을 기준으로 투여량을 계산할 수 있다. 상기와 같이, 투여량은 제제가 정맥내로 투여되었을 때 사용하는 것이 특히 바람직하다.

전술한 바와 같이, 본 발명의 일 측면에서, 제제 및/또는 메토트렉세이트는 피하 투여된다. 일반적으로, 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이, 피하 투여량은 등가의 치료 효과를 달성하기 위해서는 정맥내 투여량 보다 더 많아야 한다. 본 발명자들은, 항체 BT061을 이용한 류마티스 관절염 환자의 단일치료 시험에서, 2 mg을 정맥내로 투여한 후에 달성되는 치료 효과가 50 mg을 피하 투여한 후에 달성되는 효과와 거의 비슷하다는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 하기 표 2에 나타낸다.

7주	ACR20 (%)	ACR50 (%)	ACR70 (%)
2 mg 정맥내	50	25	12.5
50 mg 피하	50	25	12.5

표 2 - BT061의 투여량(정맥내 2 mg 또는 피하 50 mg)을 매주 1회 총 6주간 처리한 후, 7주 째에 ACR 개선을 보이는 류마티스 관절염 환자의 비율. 결과는 위약 복용군 2명과 BT061 복용군 6명으로 구성된 8명으로부터 취한 맹검 데이타를 나타낸다.

따라서, 본 발명의 다른 바람직한 측면에서, 제제는 20 mg - 80 mg, 더 바람직하게는 30 mg - 70 mg의 투여량으로 피하 또는 근육내로 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 제제는 8 - 50 mg/m² 또는 0.2 - 1.5 mg/kg의 투여량으로 투여할 수 있다. 본 발명의 측면에서, 투여는 많아야 2주마다 약 1회인 것이 특히 바람직하다. 본 단락에 기술된 본 발명의 측면은 본 출원에 기술된 본 발명의 다른 측면과 바람직한 특성들과 조합할 수 있음을 유념하여야 한다.

본 발명에서, 약학 조성물 또는 키트는 메토트렉세이트(MTX)를 더 포함한다. RA의 MTX 치료는 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 본 발명에서 MTX는 이전에 공지된 투여량으로 투여되는 것으로 생각된다. 특히, 본 발명에서, MTX는 통상 5 - 30 mg, 바람직하게는 7.5 mg - 30 mg, 가장 바람직하게는 10 - 25 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 경우에서, 투여량은 환자의 MTX 사전 치료 또는 이 약물에 대한 허용성에 따라 달라질 것이다.

다른 측면에서, 본 발명의 방법은 류마티스 질환을 치료하는데 적합한 부가적인 치료제를 투여하는 단계를 더 포함한다. 부가적인 치료제는 하기 물질들 중 한가지 이상을 포함한다: 비스테로이드성 항염증 약물, 항염증성 스테로이드, 골드 화합물, 항-말라리아 약물, 엽산, 사이클로스포린, 레플루노미드, 아자티오프린, 설파살라진, d-페니실아민, 사이클로포스파미드, 마이코페노에이트, 미노사이클린 및 클로람부실. 이들 부가적인 치료제는 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 MTX와 개별적으로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명자들은 놀랍게도 본 발명의 약학 조성물 및 키트가 류마티스 질환을 치료할 수 있다는 것을 확인하였다. 특히, 하기 실시예 2에 나타낸 바와 같이, 류마티스 관절염의 치료는 질병에 현저한 개선을 나타낸다. 즉, 상기 질환이 류마티스 관절염인 본 발명의 또다른 측면에서, 치료는, 미국 류마티스 학회의 스코어 평가 체계에 따라, 환자의 질환을 적어도 ACR20, 바람직하게는 적어도 AR50, 더 바람직하게는 적어도 ACR70 이상으로 개선시킨다. 즉, 치료는 미국 류마티스 학회(ACR)의 스코어 평가에 따라, 환자의 질병 파라미터들의 20% 이상, 바람직하게는 50% 이상, 가장 바람직하게는 70% 이상의 개선을 제공한다.

가장 바람직하게는, 치료는 치료 개시 후 6 내지 8주 사이에 환자에게 ACR70 이상의 반응을 제공한다.

실시예 2 및 관련 도면으로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 치료는 다수의 환자들에서 류마티스 관절염을 개선시키는 능력을 가진다. 따라서, 본 발명의 치료 방법은 환자의 20% 이상에서 적어도 ACR20의 질병 증상 개선을 제공함으로써 류마티스 관절염을 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 치료 방법은 환자의 10% 이상에서 적어도, ACR50, 더 바람직하게는 ACR70의 질병 증상 개선을 제공함으로써, 류마티스 관절염을 치료할 수 있다.

이제 본 발명은 하기 실시예를 참조하여 더욱 설명될 것이다.

실시예 1. 새롭게 분리한 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 이용한 항체 BT061의 시험관내 증식 분석

방법

인간 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 분리

50 ml EDTA 혈액 생검을 건강한 대조군 공여체로부터 수득하였다. 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC), 조절 T 세포(Treg) 및 T 반응자 세포(Tresp)로서 T 헬퍼 세포를 말초 혈액 샘플로부터 기존의 방법에 따라 분리하였다(Haas et al., 2007).

시험관내 증식 분석

신선하게 분리한 Treg를 1 ㎍/ml 플레이트에 결합된 항체(BT061), 1 ㎍/ml 가용성 BT061 또는 배지에서 48시간 예비 인큐베이션하였다.

2명의 공여자(실험1 및 실험2)로부터 수득한 신선하게 분리한 Treg(2.5x10⁴, 공여체 A)를 1 ㎍/ml 가용성 BT061 또는 플레이트 결합된 BT061과 48시간 예비 인큐베이션하였다. 동종 자극을 위해, 인큐베이션한 Treg 2.5x10⁴를, 반응자 세포로서 제2 공여자(공여자 B)로부터 수득한 1x10⁵T 세포에, 2x10⁵개의 T　세포가 제거되고 방사선 조사된(30 Gray) PBMC(공여자 A)의 존재 하에 이동시켰다. 4일간 자극한 후, 1 μCi[3H] 티미딘/웰을 첨가하고, 다시 16시간 후에 증식을 측정하였다.

결과

Tresp 증식의 Treg 매개 저해율을 Treg의 부재 시의 PBMC와 인큐베이션한 Tresp의 증식 억제율로서 도 1에 나타낸다. 2명의 공여자(실험1 및 실험2)로부터 수득한 Treg에 대한 결과를 나타낸다. 빗금 친 막대는 가용성 항체와 예비 인큐베이션한 Treg 세포로부터 수득한 결과이고, 칠한 막대는 플레이트 결합된 항체와 예비 인큐베이션한 Treg 세포에서 수득한 결과이다. 대조군으로서, 배지 처리한 Treg의 억제 활성도 (빈 막대) 나타낸다. 막대 위 숫자는 Tresp의 증식 저해율이다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 플레이트 결합형 항체나 가용성 항체와 예비 인큐베이션된 Treg는, 배지만으로 인큐베이션한 Treg와는 대조적으로, 동종 자극된 Tresp의 평균 증식 반응을 감소시킬 수 있었다. 또한, 플레이트 결합형 항체와 접촉시킨 경우에 수득되는 억제는 가용성 항체에서 수득되는 억제 보다 더 강하였다.

생리학적 조건 하에, IgG1 항체로서 생체내 BT061은 Fc 수용체를 발현하는 세포 상의 Fc 수용체에 결합할 것으로 예상된다. 이러한 상호작용은, 균일하게 배치된(CD4에 결합된) BT061이 타겟 세포와 Fc 수용체를 발현하는 세포의 국소 상호작용 부위로 몰리게 할 것이며, 그래서 BT061의 가교, 즉 CD4의 가교를 유도할 것이다. 2가지 메카니즘이 몇가지 타겟 분자(CD4)를 세포 표면 가까이로 동원하기 때문에, BT061과 Fc 수용체를 발현하는 세포의 상호작용은 플레이트 결합형 항체에서 관찰되는 바와 같이 동일한 신호를 Treg 타겟 세포에 부여할 것으로 예상된다.

실시예 2 - 류마티스 관절염 환자에 대한 임상 실험

본 발명의 약학 조성물 및 키트의 효과적인 RA 치료력을 RA를 앓고 있는 환자들에서 확인하였다.

BT061을 MTX와 조합하여 조사하는 조합 시험은 중도 내지 중증도의 RA 환자에서 수득한 무작위, 위약 대조의 이중 맹검의 2상 실험으로 이루어졌다. 모든 환자들은 본 실험을 시작하기 적어도 3달 전에 MTX를 안정적인 용량으로 복용하였으며, 이러한 투약은 경구 또는 근육내 투여되는 실험 코스 동안에 주 당 15 내지 20 mg의 범위로 모든 환자에게 지속적으로 투약하였다.

환자들을 3개의 군으로 나누었다. 그룹 I의 환자(환자 14명)에게는 BT016 정맥내 투여량 0.5 mg과 MTX 투여량 15-20 mg을 제공하였다. 그룹 II의 환자(환자 42명)에게는 BT061 정맥내 투여량 2.0 mg과 MTX 투여량 15-20 mg을 제공하였다. 그룹 III의 환자(환자 14명)에게는 MTX 투여량 15-20 mg을 제공하였다. 환자들에게는 8주간 매주 1회 투약하였다.

정맥내 투여시, 제제는 의약적으로 허용가능한 절차에 따라 전완 정맥에 주입한다.

치료 유효성은 투약 기간 동안 매주, 투약을 종료한 후 몇 주간 매주, ACR 파라미터(미국 류마티스 학회 ACR 홈페이지)를 평가하고, 특히 압통 관절과 종창 관절의 수와 C-반응성 단백질(CRP) 및 적혈구 침강율(ESR) 수준을 조사함으로써, 평가하였다. 이들 파라미터는 또한 실험 전에도 평가하여, 0일의 "베이스라인" 수치로 제공하였다.

실험 결과는, 2 mg BT061 + MTX를 투여받은 투약 그룹 II의 환자로부터 수득한 데이타를 항-TNF 알파 항체들인 Keystone et al., (2004 - trial DE019)의 Humira (adalimumab) 및 Keystone et al., (2009 - Go-Forward trial)의 Simponi (golimumab)이 참여한 2가지의 공개된 III상 실험에서 수득한 가장 유효한 투여량 그룹과 비교하여, 도 2-4에 나타낸다. 모든 실험들에서 가장 유효한 투여량 그룹을 나타낸다.

비교 목적으로 포함시킨 종래 결과는 약학 조성물의 투여량이 최적화된 III상 실험임을 유념하여야 한다.

특히, 도 2는 2 mg 투여량 그룹에서 ACR20 스코어를 달성한 환자의 퍼센트이고, 도 3 및 4는 2 mg 투여량 그룹에서 CDR50 및 CDR70을 달성한 환자의 퍼센트를 각각 나타낸다.

도에서 알 수 있는 바와 같이, 치료적 항-TNF-알파 항체를 이용한 임상 실험들에서, ACR 스코어 개선에 의해 측정되는 피크 치료 활성이 나타나는데에는 통상 수개월이 걸린다. 일반적으로, ACR20 반응을 보이는 환자의 퍼센트는 3주 후에 최대였으며 안정 수준에 도달하였다. ACR50의 경우, 안정 수준은 4주 후에 도달하였으며, ACR70은 6개월 후에 안정 수준에 도달하였다.

그러나, 본 발명의 조합 요법의 결과는 여러가지 차이를 나타낸다. 특히, 위약-보정한 결과를 나타내는 도면에서, 치료 효과의 개시가 지연되고, ACR20 스코어에 도달하는 환자의 퍼센트가 8주까지 5% 보다 높게 증가하지 않는다는 것을 알 수 있다. 그러나, ACR50에 도달하는 환자의 퍼센트가 9주째에 TNF-알파 항체인 Humira 및 Simponi를 이용한 III상 실험에서 달성된 결과와 비슷하게 치료 효과가 빠르게 증가하였다. 7주에서 9주 사이에 ACR20, ACR50 및 ACR70에 도달하는 환자의 퍼센트가 빠르게 증가하여, 9주까지 ACR20, ACR50 및 ACR70에 도달하는 환자의 퍼센트는 각각 약 25%, 18% 및 17%이었다. 이러한 ACR70인 환자의 퍼센트는 Humira 및 Simponi를 이용한 실험에서 치료 개시 후 24 내지 26주까지 달성하지 못하였음을 유념하여야 한다.

또한, 본 발명자들은, BT06과 MTX의 조합 요법에서 볼 수 있었던 다수 부작용들이 BT061 단독으로 수행한 실험에서 볼 수 있었던 부작용 보다 적어, 따라서 MTX가 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화하는 치료 항체의 부작용을 낮출 수 있는 능력을 가지고 있다는 것을 인지하였다.

이러한 결과들은, 본 발명의 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제와 MTX의 조합이 류마티스 질환 치료에 유효하며 놀라운 효과가 있다는 것을 입증한다.

SEQUENCE LISTING <110> Biotest AG <120> Pharmaceutical Composition for Treating Disease <130> 322248.WO/JND/CJS <160> 16 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> V domain of H chain of humanized antibody hB-F5H37L <400> 1 Glu Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Cys 20 25 30 Arg Met Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Val Lys Ser Glu Asn Tyr Gly Ala Asn Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ser Ala Ser Tyr Tyr Arg Tyr Asp Val Gly Ala Trp Phe Ala 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> V domain of K chain of humanized antibody hB-F5L4M <400> 2 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 3 <211> 550 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Part of plasmid encoding V domain of H chain of humanized antibody hB-F5 <400> 3 gaggagctcc agacaatgtc tgtctccttc ctcatcttcc tgcccgtgct gggcctccca 60 tggggtcagt gtcagggaga tgccgtattc acagcagcat tcacagactg aggggtgttt 120 cactttgctg tttccttttg tctccaggtg tcctgtcaga ggaacagctt gtggagtctg 180 ggggaggctt ggtgaaaccc ggaggttctc tgaggctctc ctgtgcagcc tcgggtttca 240 gtttcagtga ctgccggatg tactgggttc gccaggctcc agggaagggg ctggagtgga 300 ttggtgtgat ttcagtcaaa tctgagaatt atggagcaaa ttatgcagag tctgtgaggg 360 gcagattcac tatttcaaga gatgattcaa aaaacacggt ctatctgcag atgaacagct 420 tgaagaccga agacactgcc gtttattatt gtagtgcctc ctattatagg tacgacgtgg 480 gggcctggtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctcttca ggtaagaatg 540 gccaagcttg 550 <210> 4 <211> 498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Part of plasmid encoding V domain of K chain of humanized antibody hB-F5 <400> 4 ggaggatcca attatctgct gacttataat actactagaa agcaaattta aatgacatat 60 ttcaattata tctgagacag cgtgtataag tttatgtata atcattgtcc attcctgact 120 acaggtgcct acggggacat cgtgatgacc cagtctccag actccctggc tgtgtctctg 180 ggcgagaggg ccaccatcaa ctgcagggcc agcaaaagtg tcagtacatc tggctacagt 240 tatatatatt ggtaccagca gaaaccagga cagcctccta agctgctcat ttaccttgca 300 tccatcctag aatctggggt ccctgaccga ttcagtggca gcgggtctgg gacagatttc 360 actctcacca tcagcagcct gcaggctgaa gatgtggcag tttattactg tcagcacagt 420 agggaacttc cgtggacgtt cggccaaggg accaaggtgg aaatcaaacg tgagtagaat 480 ttaaatttta agcttctt 498 <210> 5 <211> 124 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Gln Glu Tyr Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Asn 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Cys 20 25 30 Arg Met Tyr Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Val Lys Ser Glu Asn Tyr Gly Ala Asn Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Ser Arg Leu Arg Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ser Ala Ser Tyr Tyr Arg Tyr Asp Val Gly Ala Trp Phe Ala 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 6 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Val Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Gly 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 7 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 20 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 9 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 11 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 12 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 13 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr 20 25 30 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 15 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> V domain of the H chain of humanized antibody hB-F5H37V <400> 15 Glu Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Cys 20 25 30 Arg Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Val Lys Ser Glu Asn Tyr Gly Ala Asn Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ser Ala Ser Tyr Tyr Arg Tyr Asp Val Gly Ala Trp Phe Ala 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> V domain of K chain of humanized antibody hB-F5L4L <400> 16 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110

Claims

CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 약학 조성물.
CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트를 각각 분리하여 포함하는 키트.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 제제는 비경구 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제3항에 있어서, 상기 제제는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제1항 내지 제4항 중 어느 한항에 있어서, 상기 메토트렉세이트는 경구, 근육내, 정맥내 또는 피하 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제1항 내지 제5항 중 어느 한항에 있어서, 상기 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제는 항체 또는 항체의 단편이나 유도체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제6항에 있어서, 상기 항체는 인간화된 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 제제는 항-CD4 항체 또는 이의 단편 또는 유도체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제8항에 있어서, 상기 제제는 마우스 단일클론 항체 B-F5의 상보성 결정부(CDR)를 포함하는 서열을 포함하되, 선택적으로 항체의 특이성 및/또는 친화성에 실질적으로 영향을 주지 않는 서열 상의 변이를 포함하는, 인간화된 항-CD4 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제8항에 있어서, 상기 제제는 하기 폴리펩타이드 서열에 의해 정의되는 V 도메인, 또는 서열번호 1 및 서열번호 2와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 V 도메인을 가지는 인간화된 항-CD4 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트:
- H 체인 V 도메인:
EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (서열번호 1)
- L 체인 V 도메인:
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (서열번호 2).
제1항 내지 제10항 중 어느 한항에 있어서, 상기 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제는 0.2 mg 내지 10 mg의 투여량으로 개체에게 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제11항에 있어서, 상기 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제는 0.2 mg 내지 5 mg의 투여량으로 개체에게 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제12항에 있어서, 상기 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제는 0.5 mg 내지 3 mg의 투여량으로 개체에게 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물 또는 키트.
제1항 내지 제13항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조성물 또는 제제는 정맥내 투여용이며, 투약 부피 0.5 - 500 ml 또는 투약 부피 0.5 - 500 ml로의 희석을 위한 형태로 제공되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조성물 또는 제제는 투약 부피 0.5 - 1.5 ml로 제공하는 것이 적합하거나, 투약 부피 0.5 - 1.5 ml로 제공되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조성물 또는 제제는 투약 부피 15 - 25 ml로 제공하는 것이 적합하거나, 투약 부피 15 - 25 ml로 제공되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조성물은 피하 또는 근육내 투여에 적합하며, 투약 부피 0.1 - 3 ml로 제공되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항 내지 제17항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조성물은 1회 투여량으로 사용하기 적합한 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항 내지 제17항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조성물 또는 제제는 다중 투여량의 일부로서 사용하기 적합한 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제20항에 있어서, 상기 다중 투여량의 각각의 투여량은 매주 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
(a) CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계 및 (b) 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단계 (a)와 (b)는 동시에, 개별적으로, 또는 순차적으로 임의 순서로 수행할 수 있는, 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법.
CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 메토트렉세이트 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법.
메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하는, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 이용한 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법.
제21항 내지 제23항 중 어느 한항에 있어서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 청소년 류마티스 관절염 및 강직성 척추염으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제24항에 있어서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 방법.
(a) CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 투여하는 단계 및 (b) 메토트렉세이트를 투여하는 단계를 포함하며, 상기 단계 (a)와 (b)는 동시에, 개별적으로, 또는 순차적으로 임의 순서로 수행할 수 있는, 질병-완화성 항류마티스제(DMARD)를 이용한 치료에 무반응인 환자에서 류마티스 질환을 치료하는 방법.
제26항에 있어서, 상기 DMARD는 메토트렉세이트인 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제27항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 비경구 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제28항에 있어서, 상기 제제는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제29항 중 어느 한항에 있어서, 상기 메토트렉세이트는 경구, 근육내, 정맥내 또는 피하 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제30항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 환자에게 0.2 내지 10 mg의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제31항에 있어서, 상기 제제는 환자에게 0.2 내지 5 mg의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제32항에 있어서, 상기 제제는 환자에게 0.5 내지 3 mg의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제31항에 있어서, 상기 제제는 정맥내 투여되며, 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 2.5 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제32항에 있어서, 상기 제제는 정맥내 투여되며, 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.3 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제33항에 있어서, 상기 제제는 정맥내 투여되며, 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.1 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제31항에 있어서, 상기 제제는 매주 1회 정맥내 투여되며, 2차 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 2.5 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제32항에 있어서, 상기 제제는 매주 1회 정맥내 투여되며, 2차 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.3 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제33항에 있어서, 상기 제제는 매주 1회 정맥내 투여되며, 2차 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.1 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제31항에 있어서, 상기 제제는 매주 1회 정맥내 투여되며, 임의의 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 2.5 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제32항에 있어서, 상기 제제는 매주 1회 정맥내 투여되며, 임의의 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.3 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제33항에 있어서, 상기 제제는 매주 1회 정맥내 투여되며, 임의의 투여를 종료하고 3시간 후 환자의 혈장내 제제의 최대 농도는 0.1 ㎍/ml 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제30항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 2 내지 150 ㎍/kg의 양으로 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제43항에 있어서, 상기 제제는 2 내지 75 ㎍/kg의 양으로 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제44항에 있어서, 상기 제제는 5 내지 45 ㎍/kg의 양으로 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제30항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 환자의 체표면적 m² 당 0.1 내지 5 mg의 양으로 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제46항에 있어서, 상기 제제는 환자의 체표면적 m² 당 0.1 내지 2.5 mg의 양으로 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제47항에 있어서, 상기 제제는 환자의 체표면적 m² 당 0.25 내지 1.5 mg의 양으로 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제48항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제의 1회 투여량이 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제48항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제의 다중 투여량이 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제50항에 있어서, 상기 제제 및/또는 상기 메토트렉세이트는 많게는 매주 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서, 상기 제제 및/또는 상기 메토트렉세이트는 2주에 1회, 3주에 1회 또는 4주에 1회 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제52항 중 어느 한항에 있어서, 비스테로이드성 항염증 약물, 항염증성 스테로이드, 골드 화합물, 항-말라리아 약물, 엽산, 사이클로스포린, 레플루노미드, 아자티오프린, 설파살라진, d-페니실아민, 사이클로포스파미드, 마이코페노에이트, 미노사이클린 및 클로람부실 중에서 선택되는, 질병 치료에 적합한 부가적인 치료제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제53항 중 어느 한항에 있어서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염이고, 상기 치료는 미국 류마티스 학회(ACR)의 스코어 평가 체계에 따라 환자 질병에 ACR50 이상으로의 개선을 제공하는 것을 특징으로 하는 방법.
제54항에 있어서, 상기 치료는 미국 류마티스 학회(ACR)의 스코어 평가 체계에 따라 환자의 질병에 ACR70 이상으로의 개선을 제공하는 것을 특징으로 하는 방법.
제55항에 있어서, 상기 치료는 치료 개시 후 6-8주 사이에 환자에서 ACR70 이상의 반응을 제공하는 것을 특징으로 하는 방법.
의약제로 동시, 개별 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합된 조제물로서, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트.
제57항에 있어서, 류마티스 질환의 치료에 사용되는 것을 특징으로 하는 제제 및 메토트렉세이트.
환자에서 류마티스 질환을 치료하는데 동시, 개별 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합된 조제물의 제조에 있어서의, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트의 용도.
메토트렉세이트 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는데 사용하기 위한 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제.
CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제를 이용한 치료를 받고 있는 환자에서 류마티스 질환을 치료하는데 이용하기 위한 메토트렉세이트를 포함하는 조성물.
제58항 내지 제61항 중 어느 한항에 있어서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 청소년 류마티스 관절염 및 강직성 척추염으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
제62항에 있어서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 용도.
제57항에 있어서, 질병 완화성 항류마티스제(DMARD)를 이용한 치료에 무반응인 환자에서 류마티스 질환을 치료하는데 사용하는, 동시, 개별 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합된 조제물로서, CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화할 수 있는 제제 및 메토트렉세이트.
제64항에 있어서, DMARD는 메토트렉세이트인 것을 특징으로 하는 제제 및 메토트렉세이트.
제57항 내지 제65항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 비경구 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
제66항에 있어서, 상기 제제는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제67항 중 어느 한항에 있어서, 상기 메토트렉세이트는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제68항 중 어느 한항에 있어서, 상기 메토트렉세이트는 환자에게 0.2 내지 10 mg의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 용도.
제69항에 있어서, 상기 제제는 정맥내 투여에 적합하며, 투여한 지 3시간 후 환자의 혈장내 최대 농도 2.5 ㎍/ml 미만을 확립할 수 있는 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제68항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 환자에게 2 내지 150 ㎍/kg의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제68항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 환자에게 환자의 체표면적 m² 당 0.1 내지 5 mg의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제72항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 1회 투여량으로 투여하기 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제72항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 다중 투여량의 일부로서 투여하기 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
제74항에 있어서, 상기 제제는 많게는 매주 1회 투여하기 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
제57항 내지 제72항 중 어느 한항에 있어서, 상기 조합된 조제물은 비스테로이드성 항염증 약물, 항염증성 스테로이드, 골드 화합물, 항-말라리아 약물, 엽산, 사이클로스포린, 레플루노미드, 아자티오프린, 설파살라진, d-페니실아민, 사이클로포스파미드, 마이코페노에이트, 미노사이클린 및 클로람부실 중에서 선택되는, 질병 치료에 적합한 부가적인 치료제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
제58항 내지 제76항 중 어느 한항에 있어서, 상기 류마티스 질환은 류마티스 관절염이고, 상기 조합된 조제물은 미국 류마티스 학회(ACR)의 스코어 평가 체계에 따라 환자 질병의 ACR50 이상으로의 개선을 제공하는 것을 특징으로 하는 용도.
제21항 내지 제77항 중 어느 한항에 있어서, 상기 제제는 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 활성화하는 제제는 항체 또는 이의 단편이나 유도체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
제78항에 있어서, 상기 항체는 인간화된 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
제78항 또는 제79항에 있어서, 상기 제제는 항-CD4 항체 또는 이의 단편이나 유도체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
제80항에 있어서, 상기 제제는 마우스 단일클론 항체 B-F5의 상보성 결정부(CDR)을 포함하는 서열을 포함하되, 선택적으로 항체의 특이성 및/또는 친화성에 실질적으로 영향을 주지 않는 서열 상의 변이를 포함하는, 인간화된 항-CD4 항체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
제80항에 있어서, 상기 제제는 하기 폴리펩타이드 서열에 의해 정의되는 V 도메인, 또는 서열번호 1 및 서열번호 2와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 V 도메인을 가지는 인간화된 항-CD4 항체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도:
- H 체인 V 도메인:
EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (서열번호 1)
- L 체인 V 도메인:
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (서열번호 2).
제1항 내지 제20항 중 어느 한항에 따른 제제 및 메토트렉세이트를 포함하는 약학 조성물 또는 키트의 제조 방법.