MX2011003335A - Composicion para tratar enfermedad. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas y equipos que comprenden un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato, y métodos de tratamiento y usos médicos que utilizan los mismos.

Description

COMPOSICIÓN PARA TRATAR ENFERMEDAD La presente invención se refiere al tratamiento de enfermedades reumáticas. La invención involucra una composición farmacéutica altamente efectiva, que comprende un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+, tales como un anticuerpo monoclonal humanizado, y el fármaco metotrexato. La composición y equipos de la invención son particularmente efectivos en el tratamiento de artritis reumatoide. La invención prevé composiciones farmacéuticas o quipos que comprenden el agente y metotrexato, asi como usos y métodos de tratamiento que emplean las composiciones y equipos.

Enfermedades reumáticas son un grupo de enfermedades que afectan el tejido conectivo, en especial las articulaciones y estructuras relacionadas, y se caracterizan por inflamación, degeneración o alteración metabólica. Ejemplos de enfermedades reumáticas son artritis- reumatoide, artritis psoriásica, artritis reumatoide juvenil y espondilitis anquilosante.

La artritis reumatoide es una enfermedad auto- inmune que provoca inflamación · crónica de las articulaciones y tejidos circundantes-, y también puede afectar otros tejidos y órganos del cuerpo. La enfermedad ocurre cuando células T, que normalmente son tolerantes respecto a tejido autólogo, reconocen y reaccionan con moléculas "propias", esto es moléculas producidas por las células del huésped u hospedero. La activación de células T "auto-reactivas" por presentación de auto-antigenos procesados por células que presentan antigeno (APC = Antigen Presenting Cells) lleva a su expansión clonal y migración a los tejidos específicos, en donde inducen inflamación y destrucción de tejido.

Hay un gran intervalo de · tratamientos para artritis reumatoide que están actualmente disponibles., incluyendo drogas o fármacos de primer linea para controlar el dolor e inflamación clasificados como fármacos antiinflamatorios no-esteroidales = AINEs (NSAIDs = Non- Steroidal Anti-Inflammatory Drugs), por ejemplo, aspirina, ibuprofeno, naproxeno, etc. El tratamiento secundario de artritis incluye corticoesteroides (por ejemplo prednisona y dexametosona) , que son versiones sintéticas de la hormona cortisona del cuerpo, fármacos antirreunaáticos de acción lenta (SAARDs = Slow Acting Antirheumatic Drugs) o fármacos anti-reumáticos que modifican la enfermedad (D ARDs = Disease-Modifying Anti-Rheumatic Drugs), por ejemplo hidroxicloroquina, sulfasalazina,: metotrexato, penicilinamina , ciclofosfamida, sales de oro, azotipoprina, leflunomida, etc.

Muchos pacientes con RA recientemente diagnosticada empiezan con DMARD, tal como metotrexato ( ??) . MTX (ácido 4-amino-NlO-metilpteroil glutámico) es un análogo de ácido fólico, que se conoce obstruye la producción de una forma de ácido fólico importante para células de crecimiento activo tales como aquellas encontradas en la piel, sangre, tejidos gastrointestinales y aquellas involucradas en el sistema inmune. No es completamente claro como MTX disminuye la severidad de RA, sin embargo, se considera que juega un papel en la acción anti-inflamatoria y se han propuesto una variedad de mecanismos farmacológicos para su acción, incluyendo inhibición de síntesis de purina, promoción de liberación de adenosina, inhibición de producción de citocinas pro- inflamatorias, y modulación de inflamación (Swierkot et al., 2006) . MTX también se conoce que inhibe, por ejemplo, la actividad de una enzima denominada dihidrofolato reductasa (DHFR) , y también interfiere con otras varias enzimas.

Otro grupo de fármacos o drogas para el tratamiento de RA se denominan modificadores de respuesta biológica (BRMs = Biological-Response Modifiers) , que incluyen anticuerpos monoclonales . Ejemplos de estos son antagonistas a factor alfa de necrosis de tumor (TNF-alfa) , tales como adalimumab, infliximab, y etanercept, que trabajan a través de enlace al receptor TNF-alfa o directamente enlace a la propia proteína TNF-alfa. Varios inhibidores TNF-alfa se han aprobado por la FDA para tratamiento de artritis reumatoide, incluyendo adalimumab (Humira®) , Infliximab (Remicade®) y Etanercept (Enbrel®) . TNF-alfa representa un mediador clave en artritis reumatoide, y primordialmente se produce por macrófagos activados dentro del sinovio de pacientes de RA. Actuando como una citocina pro-inflamatoria, TNF alfa está abundantemente presente en el tejido sinovial de pacientes de RA. Induce la producción y liberación de guimiocinas que atraen leucocitos de la sangre en el tejido inflamado (Tracey et al., 2008). Además la mediación de inflamación sinovial, TNF alfa está involucrado en destrucción de articulaciones y degradación de cartílago. Adicionalmente , es capaz de inhibir la actividad supresiva de células T reguladores de CD4+CD25+ (Andersson et al., 2008).

En algunos casos, los pacientes de RA se tratan con una combinación de los fármacos discutidos anteriormente. En particular, DMARDs frecuentemente se emplean como un primer tratamiento. Sin embargo, puede ser conveniente en pacientes en donde no se logra el control de la enfermedad, el utilizarlos en combinación con tratamientos que han sido aprobados más recientemente, tales como agentes biológicos, por ejemplo antagonistas TNF-alfa. Se ha reportado gue una combinación de MTX con algunos anticuerpos monoclonales (etanercept, infliximab, adalimumab y anakirina) lleva a una mejor eficacia terapéutica en comparación con terapia MTX sola (Swierkot et al., 2006). Sin embargo, MTX ejerce una variedad de acciones farmacológicas y sus efectos clínicos pueden ser atribuidos a múltiples objetivos (Wessels et al., 2008). De acuerdo con esto, no puede pronosticarse fácilmente cómo MTX afectará la actividad terapéutica y por lo tanto la eficacia de un fármaco o droga que es efectivo como un solo agente .

A pesar del intervalo de fármacos actualmente disponibles, no todos los pacientes responden bien a los tratamientos anteriores y hay una cantidad de efectos secundarios adversos. Por ejemplo, el tratamiento de TNF-alfa regula por disminución al sistema inmune haciendo a los pacientes tratados, más susceptibles a infecciones y enfermedad. De acuerdo con esto, todavía hay necesidad que se desarrollen terapias alternas.

• En general se está de acuerdo en que las células T CD4+ juegan una parte principal en inicio y mantenimiento de auto-inmunidad. De acuerdo con esto, se ha propuesto el utilizar mAbs contra moléculas de superficie de célula T CD4+ y ' en particular anti-CD4 mAbs, como agentes inmunosupresivos en el tratamiento de enfermedades tales como artritis reumatoide.

Un ejemplo bajo adicional investigación es el anticuerpo anti-CD4 B-F5 (CD4 anti-humano IgGl murino) , que se ha probado en diferentes enfermedades auto-inmunes. En pacientes de artritis reumatoide, los resultados observados en una prueba controlada por placebo con una dosis diaria de B-F5, no indican una mejora significante (Wendling et al. J Rheumatol; 25 (8) : 1457-61, 1998). Sin embargo, en WO 2004/083247, se desarrolló un anticuerpo B-F5 humanizado (a continuación referido como hB-F5 o BT061) que tiene propiedades de enlace CD4 similares al B-F5 de ratón precursor. Una evaluación preliminar del efecto de la versión humanizada del anticuerpo B-F5 de ratón en pacientes que también reciben la droga anti-inflamatoria no esteroidal Diclofenac, proporciona una indicación de la imunosupresión efectiva, reflejada por un efecto clínico positivo en los pacientes cuando se utiliza en un tratamiento de 10 días.

El estudio también se describió por Wijdenes et al., en un extracto y un cartel presentado en la conferencia FULAR, junio 2005. Describe el tratamiento de 11 pacientes que sufren de artritis reumatoide con 5 infusiones intravenosas de 5 mg de hB-F5 cada día salteado con tratamiento concomitante con 150 mg de Diclofenac (Wijdenes et al., Abstract and poster, EULAR conference, June 2005) .

En WO 2004/083247 se anotó que el anticuerpo fue capaz de activar un sub-conjunto particular de célula T CD4+, es decir células T regulatorias CD4+CD25+ (Tregs) . Estas células constituyen 5-10% de las células T CD4+ periféricas, y una vez estimuladas, son competentes para suprimir la respuesta de células T CD4+ y células T CD8+ asi como inhibir la activación de célula B y expansión clonal. De esta manera, estas células representan un nivel importante de control en el sistema inmune. En particular, células CD4+CD25+Treg están involucradas en mantener homeostasis inmune de la periferia y regular auto-inmunidad e inmuno-respuestas patogénicas.

El tratamiento de artritis reumatoide mediante un mecanismo que activa las células T regulatorias CD4+CD25+ representa una avenida de investigación importante y el uso de agente hB-F5 en pruebas clínicas fase II en pacientes que sufren de artritis reumatoide, se discute en las Solicitudes de Patentes Internacionales números PCT/EP2009/052809, PCT/EP2009/052811 y PCT/EP2009/052810.

Sin embargo, no puede pronosticarse fácilmente si cualquier tratamiento nuevo pueda ser combinado exitosamente con los actuales tratamientos para dar un efecto ; terapéutico benéfico. Como se mencionó anteriormente, esto es el caso particular con MTX.

Varios estudios han reportado hallazgos que sugieren que MTX tiene un efecto negativo en células T regulatorias y por lo tanto es probable que eviten que se utilice MTX en terapia de combinación con un agente que se basa en la activación de células T regulatorias CD4+CD25+ por su mecanismo terapéutico. ascher et al., (1994) y Hermán et al., (2005) reportan hallazgos que sugieren que MTX puede reducir el número de linfocitos T disponibles. Wascher et al., reporta que la administración de MTX en alta dosis suministrado intravenosamente a 12 semanas reduce en forma significante (P < 0.01) los linfocitos en sangre periférica total y lleva a una redistribución pronunciada de sub-conjuntos de linfocitos con un efecto reductivo preferido en linfocitos B (P < 0.005) y linfocitos T (P < 0.05). Hermán et al., 2005 reportó un efecto que induce apoptosis de MTX :en linfocitos T in vitro, a concentraciones que reflejan una terapia de baja dosis en pacientes de RA (7.5 mg) .

Además, un estudio in vitro realizado por Porter et al., 2006 reportó una influencia de MTX en la viabilidad de células T regulatorias. A concentraciones in vitro de 50 nM (más alta concentración analizada), la actividad supresora de células Treg se redujo significativamente de 94% a 88% (p<0.05). Esto sugiere que la presencia de MTX puede inhibir la supresión de Treg.

Aún más, Yamaguchi et al., 2007 reportó que células Treg naturales expresan en forma constitutiva altas cantidades de receptor folato 4 (FR4). Ya que MTX es un análogo de folato, se sugiere que MTX también puede ser absorbido por las células Tregs. Esta absorción probablemente resultará en interferencia con el metabolismo dentro de esta población celular.

¦ Aún más, se conoce que la actividad terapéutica de muchos anticuerpos se influencia por receptores Fe en células que expresan receptor Fe. Algunos anticuerpos incluso requieren ligar a receptores Fe en células que expresan receptor Fe para ser activas. Sin embargo, la terapia MTX se conoce que resulta en una disminución de expresión de Fe gamma Rl en monocitos (Wijngaarden et al., 2004, 2005) in vivo. La influencia reductiva de MTX en expresión de receptor Fe en monocitos también se ha demostrado en pacientes que se trataron con MTX y el anticuerpo anti-TNF-alfa terapéutico Infliximab (Wijngaarden et al., 2008). Como resultado, en general se considera que MTX influencia en forma negativa la actividad de anticuerpos de enlace receptor Fe. De acuerdo con esto, se espera que MTX influencie en forma negativa la capacidad de un anticuerpo para activar Tregs.

Dado lo anterior, se espera: que MTX tendrá un impacto negativo en la capacidad terapéutica de un agente que trabaja mediante la activación de células T regulatorias CD4+CD25+, tal como hB-F5.. Como tal, puede verse que el resultado de los enfoques de tratamiento en combinación no puede pronosticarse.

Considerando la técnica previa anteriormente descrita, el objetivo de la presente invención es desarrollar adicionales y mejoradas composiciones farmacéuticas para el tratamiento de artritis reumatoide.

• De acuerdo con esto, la : presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato. La presente invención además proporciona un equipo que comprende por separado un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato.

Los presentes inventores han encontrado en forma inesperada que una combinación de un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ con metotrexato tiene un efecto terapéutico, y es sorprendentemente ventajoso en relación al número reducido de efectos secundarios relacionados a anticuerpo. La combinación también es sorprendentemente ventajosa en relación a la velocidad en la cual se alcanza un efecto terapéutico de alto nivel.

De acuerdo con esto, la presente invención también proporciona un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente, que comprende una etapa de (a) de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y una etapa (b) de administrar metotrexato, en donde la etapa (a) y la etapa (b) pueden realizarse en forma simultánea, separada o secuencial y en cualquier orden.

Además, la presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente que se somete al tratamiento de metotrexato que comprende una etapa de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+. En forma alterna, la presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente que se somete al tratamiento con un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+, que comprende una etapa de administrar metotrexato.

• Aún más, la presente invención proporciona un método para tratar artritis reumatoide en un paciente quien no responde a tratamiento con un fármaco anti- reumáticó que modifica enfermedad (DMARD), que comprende una etapa (a) de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y ; una etapa (b) de administrar metotrexato, en donde la etapa (a) y la etapa (b) pueden realizarse en forma simultánea, separada o secuencial y en cualquier orden.

Además, la presente invención proporciona un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencia! en medicina. En un aspecto, la presente invención proporciona un agente capaz de activar las células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de una enfermedad reumática. En un aspecto alterno, la presente invención proporciona un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ para utilizar en el tratamiento de una enfermedad reumática en un paciente, en donde el paciente- se somete a tratamiento con metotrexato. En un aspecto alterno adicional, la presente invención proporciona una composición que comprende metotrexato para uso en el tratamiento de una enfermedad reumática en un paciente, en donde el paciente se somete a tratamiento con un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+.

En un aspecto aún adicional, la presente invención proporciona un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato como una preparación combinadá para uso simultáneo, separado' o secuencial en el tratamiento de una enfermedad reumática- en un paciente que no responde a tratamiento con un fármaco anti-reumático que modifica enfermedad (DMARD) .

La invención se ilustrará a manera de ejemplo solamente, con referencia a las siguientes Figuras, en donde : La Figura 1 muestra los resultados de un ensayo de proliferación in vitro realizado con células T regulatorias CD4+CD25+ que se toma de dos donadores (Exp. 1 y Exp. 2) en el Ejemplo 1.

Las Figuras 2A y 2B muestran gráficas del % de pacientes que logran al menos una calificación ACR 20 sobre el curso de la prueba clínica descrita en el Ejemplo 2 en comparación con pacientes en los grupos de dosis más efectivos reportados en pruebas fase III publicado por Keystone^et al., (2004) y (2009). La gráfica en la Figura 2B es corregida por placebo.

Las Figuras 3A y 3B muestran gráficas del % de pacientes que logran al menos una calificación de ACR 50 sobre el curso de la prueba clínica descrita en el Ejemplo 2 en comparación con pacientes en el grupo de dosis más efectivas reportado en pruebas fase · III publicado por Keystone et al., (2004) y (2009). La gráfica en la Figura 3B es corregida por placebo.

Las Figuras 4A y 4B muestran gráficas del % de pacientes que logran al menos una calificación de ACR 70 sobre el curso de la prueba clínica descrita en el Ejemplo 2 en comparación con pacientes en el grupo de dosis más efectivas reportado en pruebas fase III publicado por Keystone et al., (2004) y (2009). La gráfica en la Figura 4B es corregida por placebo.

La Figura 5 muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID No: 3) de un fragmento del plásmido que codifica la región VH de B-F5 humanizado. La secuencia que codifica la región V está subrayada y la secuencia de polipéptidos correspondiente (SEQ ID No: 15) indica abajo de la secuencia de nucleótidos; ' La Figura 6 muestra la secuencia de nucleótido (SEQ ID No: 4) de un fragmento del plásmido que codifica las regiones VK de B-F5 humanizado. · La secuencia que codifica la región V está subrayada y la secuencia de polipéptidos correspondiente (SEQ ID No: 2) se indica abajo de la secuencia de nucleótidos; La Figura 7 muestra el alineamiento de las secuencias polipéptido de B-F5 VK murino (SEQ ID No: 6) , FK-001 (SEQ ID Nos: 7, 8 9 y 10) , L4L- (SEQ ID No: 16), y L4M (SEQ ID No: 2) en el diseño de la forma humanizada de B-F5 (i.e. BT061) .

La Figura 8 muestra el alineamiento de las secuencias de polipéptidos de B-F5 VH murino (SEQ ID No: 5), M26 (SEQ ID Nos: 11, 12, 13 y 14), :H37L (SEQ ID No: 1) y H37V (SEQ ID No: 15) en el diseño de la forma humanizada de B-F5.

Como se describió anteriormente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato. La presente invención además proporciona un equipo que comprende por separado un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato .

¦ El agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato puede estar en una sola formulación o en formulaciones separadas. Las formulaciones pueden consistir del agente y/o metotrexato. En forma alterna, las formulaciones pueden comprender el agente y/o el metotrexato y además comprender componentes farmacéuticos aceptables, tales como portadores o excipientes.

En un aspecto de la invención, el agente y/o metotrexato se adaptan para administración parenteral, de preferencia administración intramuscular, intravenosa o subcutánea. Se prefiere más que el agente y/o metotrexato sean adecuados para administración subcutánea.

• En una modalidad de este aspecto de la invención, el agente y/o metotrexato se adaptan :para administración intravenosa y se proporcionan en un volumen de dosis de 0.5 a 500 mi o en una forma de dilución al volumen de dosis de 0.5 a 500 mi. En una modalidad alterna, la composición es adecuada para administración subcutánea o intramuscular y se proporciona en un volumen de dosis de 0.1 a 3 mi . En forma alterna, el agente y/o metotrexato son adecuados para proporcionar un volumen de dosis de 0.5 a 1.5 mi o 15 a 25 mi.

En un aspecto alterno, el metotrexato se adapta para administración oral y puede estar en la forma de tabletas .

En aspectos adicionales de la invención, la composición o equipo pueden ser adecuados para utilizar como una' sola dosis o adecuado para uso como parte de una pluralidad de dosis, en particular, en donde la dosis se va a administrar en forma semanal, una vez cada dos semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada seis semanas o una vez cada ocho semanas.

En una modalidad de este aspecto, el equipo de la invención comprende una pluralidad de dosis separadas del agente y el metotrexato. En una modalidad adicional, un empaque de dosis se proporciona que comprende una pluralidad de dosis empacadas por separado de la composición farmacéutica. : En una modalidad especifica, el agente, opcionalmente con el metotrexato, es adecuado para administración subcutánea y se proporciona en una forma lista para administración que no requiere dilución de manera tal que pueda administrarse fácilmente por personal no médico.

Los agentes que son adecuados para utilizar en la presente invención son aquellos que son capaces de activar células T regulatorias CD4+CD25+. El agente puede ser un polipéptido, una proteina o un anticuerpo. Cuando el agente es un anticuerpo, puede ser un anticuerpo monoclonal . De preferencia, el anticuerpo es un anticuerpo anti-CD4 monoclonal. El anticuerpo también de preferencia puede ser un anticuerpo IgGl y puede ser un anticuerpo IgGl no modificado. : : Los anticuerpos que son más adecuados para utilizar en la presente invención son anticuerpos anti-CD4 humanizados, o sus fragmentos o derivados, que son capaces de activar células T regulatorias CD4+CD25+. Ejemplos de anticuerpos que son capaces de activar células T regulatorias CD4+CD25+, se discuten por Becker et al., (European Journal of Immunology (2007), Vol . 37: págs . 1217-1223) y se describen en WO 2004/083247.

En general, el anticuerpo empleado en la presente invención comprende uno o más dominios variables que son capaces de ligar a CD . El anticuerpo puede comprender una región constante humana (Fe) . Esta región constante puede seleccionarse entre dominios constantes de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA y IgE, y cualquier isotipo, incluyendo IgGl, IgG2, IgG3 y IgG4. Regiones constantes preferidas se eligen entre dominios constantes de IgG, en particular IgGl.

La presente invención también incluye cualquier fragmento del anticuerpo. Fragmentos de preferencia comprenden las regiones V o de enlace antigeno del anticuerpo y en particular son los fragmentos Fab, Fab', F (ab) '2, Fv y scFv.

En un aspecto particularmente preferido de la presente invención, el anticuerpo es un anticuerpo anti-CD4 humanizado o fragmento o derivado del mismo, derivado del anticuerpo anti-CD4 monoclonal de ratón B-F5. El anticuerpo puede ser un anticuerpo anti-CD4 humanizado que comprende una secuencia que comprende las regiones que determinan complementariedad (CDRs) del anticuerpo monoclonal de ratón B-F5, opcionalmente con variaciones en la secuencia que no afectan substancialmente la especificidad de anticuerpo y/o su afinidad.

Ejemplos de anticuerpos se proporcionan en WO 2004/083247, en donde se describe la producción de varias versiones humanizadas del anticuerpo B-F5 de ratón. En particular, WO 2004/083247 describe la producción de un anticuerpo humanizado BT061 (hB-F5) que tiene dominios V definidos por las siguientes secuencias polipéptido: dominio V cadena H: EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCR YWLRQA PGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCS S YYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1) - dominio V cadena L: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIY YQQ KPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELP T FG QGTKVEIK (SEQ ID NO: 2) .

Derivados de este anticuerpo también son adecuados para utilizar en la presente invención. Derivados incluyen aquellos con dominios V definidos por las secuencias polipéptido que tienen al menos 80%, de preferencia al menos 90%, más preferiblemente al menos 95% identidad de secuencia con SEQ ID NO: l o SEQ ID NO: 2.

Anticuerpos particularmente. preferidos son aquellos que comprenden las regiones de determinación de complementariedad (CDRs) del B-F5 mAb de ratón, y retienen la capacidad de hB-F5 para activar células T regulatorias CD4+ CD25+. La ubicación de las GDRs dentro de los dominios VH y VK se muestran en las Figuras 7 y 8. Estos anticuerpos opcionalmente tienen variaciones en la secuencia de CDRs que no afectan substancialmente la especificidad y/o afinidad de enlace.

En general, el anticuerpo. empleado en la invención además comprende una región constante humana (Fe) . Esta región constante puede seleccionarse de entre los dominios constantes indicados anteriormente.

La presente invención también incluye cualquier fragmento del anticuerpo hB-F5 o su derivado que comprende sus regiones V. Esto comprende en particular los fragmentos Fab, Fab', F(ab) ' 2, Fv y scFv.

A fin de preparar el anticuerpo hB-F5, un polinucleótido que codifica el dominio V de la cadena H o de la cadena L de un anticuerpo BT061 puede fusionarse con un polinucleótido que codifica la región constante de una cadena H o L humana. Con el propósito de expresar las cadenas H y L completas obtenidas de esta manera, una secuencia que codifica un péptido de señal que permite la secreción de la proteina, también puede agregarse.

El polinucleótido como se describe anteriormente se enlaza dentro de un vector de expresión con secuencias de control apropiadas que permiten la regulación de su transcripción y traducción en una célula hospedera selecta. Estas construcciones de ADN recombinantes pueden obtenerse e introducirse en células hospederas por las técnicas bien conocidas de ADN recombinante e ingeniería genética.

Células hospederas útiles pueden ser células procarióticas o eucarióticas . Entre células eucarióticas convenientes, se mencionará a manera de . ejemplo, células de plantas, células de levadura tales como Saccharomyces, células de insectos tales como Drosophila o Spodoptera , y células de mamífero tales como HeLa, CHO, 3T3, C127, BHK, COS, etc.

El anticuerpo BT061 (hB-F5) utilizado en la invención puede obtenerse al cultivar una célula hospedera que contiene un vector de expresión que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el anticuerpo, bajo condiciones adecuadas para su expresión, y recuperar el anticuerpo del cultivo de célula huésped.

Un aspecto adicional de la invención es un método que comprende preparar un equipo o una composición farmacéutica que comprende el agente y el metotrexato.

Como se indicó anteriormente, la presente invención además proporciona usos médicos y métodos para tratamiento de pacientes que sufren de, o son susceptibles a enfermedades reumáticas. En particular, en un aspecto, se proporciona un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente, que comprende una etapa (a) de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y una etapa (b) de administrar metotrexato, en donde la etapa (a) y la etapa (b) pueden realizarse en forma simultánea, separada o secuencial y en cualquier orden. En una modalidad de este aspecto, la etapa (a) y la etapa (b) se realizan el mismo día. En una modalidad alterna de este aspecto, la etapa (a) y la etapa (b) se realizan dentro de la misma semana.

En aspectos alternos, la presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente que se somete a tratamiento de metotrexato que comprende una etapa de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente que se somete a tratamiento con un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ que comprende una etapa de administrar metotrexato.

Las enfermedades reumáticas' se definen como enfermedades que afectan el tejido conectivo, en especial las articulaciones y estructuras relacionadas, en particular caracterizadas por inflamación, degeneración o alteración metabólica. En un aspecto preferido de la invención, la enfermedad reumática es artritis reumatoide, artritis psoriásica, artritis reumatoide juvenil o espondilitis anquilosante.

El tratamiento de artritis reumatoide se prefiere. Con artritis reumatoide la eficacia clínica del tratamiento puede estimarse utilizando la calificación ACR.

La calificación ACR es un método para estimar la artritis reumatoide exhibida por un paciente tratado, que se establece por el Colegio Americano de Reumatologia (ACR = American College of Rheumatology) y funciona a través de la medida de un conjunto núcleo de parámetros (Felson et al., Arthritis & Rheumatism, 1995, 38(6), 727-735). Este sistema define un valor de ACR 20 como una mejora de al menos 20% en recuentos de articulaciones sensibles e hinchadas y al menos una mejora del 20% en 3 de 5 medidas del conjunto de calificaciones ACR restantes: evaluaciones globables del paciente y del médico, incapacidad y un reactivo de fase aguda, tal como una proteina C-reactiva (CRP) o Velocidad de Sedimentación de Eritrocitos (ESR = Erythrocyte Sedimentation Rate) . Similarmente , las calificaciones ACR 50 y ACR 70 definen al menos 50% y al menos 70% de mejora, respectivamente.

En un aspecto adicional de. la invención, el tratamiento puede administrarse a un paciente que no responde a tratamiento con un fármaco o droga antireumática que modifica enfermedad (DMARD) . Una persona que no responde es un paciente que muestra una respuesta inadecuada a tratamiento con una DMARD. En particular, un paciente muestra una respuesta inadecua si tiene artritis reumatoide clínicamente activa continua, por ejemplo si el fármaco no logra ACR20 en el paciente o no logra una inhibición de avance de daño estructural en las articulaciones o si se pierde una respuesta inicial al fármaco con el tiempo durante el tratamiento.

Ejemplos de DMARDs son hidroxicloroquina , sulfasalazina, metotrexato, penicilinamina, ciclofosfamida , sales de oro, azotipoprina, leflunomida, etc.

Como se indicó anteriormente, el agente y el metotrexato pueden administrarse al paciente en cualquier forma conveniente. En particular, pueden administrarse en forma parenteral, por ejemplo por inyección intravenosa, intramuscular o subcutánea. Para administración del agente, administración intravenosa o subcutánea se prefieren en particular. Además, el metotrexato puede administrarse en forma oral.

El volumen en el que el agente y/o metotrexato se dosifican variarán dependiendo del método de administración. Cuando la dosis se va a administrar por infusión intravenosa, el volumen de dosis puede ser de 0.1 ó 0.5 mi hasta 500 mi, de preferencia entre 15 y 25 mi, y típicamente aproximadamente 20 mi. Cuando la dosis se va a administrar por inyección subcutánea o intramuscular, el volumen de dosis puede estar entre' 0.1 a 3 mi, de preferencia entre 0.5 y 1.5 mi, y típicamente aproximadamente 1 mi.

La frecuencia de administración no se limita en especial, siempre que no interfiera con la efectividad del tratamiento. El tratamiento puede comprender una sola dosis o una pluralidad de dosis. Se prefiere que la pluralidad de dosis se administren en al menos las siguientes bases: semanal, cada dos semanas, cada 4 semanas, cada 6 semanas, cada 12 semanas, cada 24 semanas, cada mes calendario, cada 6 meses calendario o anualmente.

De esta manera, la dosis puede estar separada por al menos una semana, o al menos dos semanas, al menos un mes o al menos 3 meses o por al menos 6 meses o al menos un año (lo que significa que las dosis se toman cada semana, cada dos semanas, o cada mes o cada 6 meses o cada año) . En particular se prefiere que las dosis se administren al menos cada dos a tres semanas.

• La duración del tratamiento no se limita en especial, y como es típico en el tratamiento de enfermedades autoinmunes, el tratamiento procede en forma indefinida, o hasta que los síntomas se reducen a un nivel manejable para el paciente. En general, el tratamiento se administra al sujeto por al menos 1 mes.

¦ Se entenderá que el agente y el metotrexato se van a administrar en cantidades terapéuticas efectivas, es decir en cantidades que son efectivas para mejorar, evitar o tratar la enfermedad reumática.

En particular cuando la enfermedad es artritis reumatoide, el agente y el metotrexato de preferencia se administran en una cantidad que :es efectiva para proporcionar una respuesta ACR50 , más preferiblemente una respuesta ACR70.

En un aspecto de la invención, el agente se va a administrar a un sujeto en una dosis desde 0.2 a 10 mg, y más preferible en una dosis de 0.2 a 6.25 mg, y más preferible en una dosis de 0.2 a 3 mg . Estas dosis se prefieren particularmente cuando la dosis se administra en forma intravenosa.

Cuando el agente es anticuerpo humanizado BT061, los inventores han encontrado de manera sorprendente que los valores Cmax efectivos del anticuerpo que circula en el plasma de voluntarios sanos, 3 horas después del fin de la infusión- intravenosa, son mucho menores que los esperados, como se muestra en la Tabla 1, a continuación. Esto se considera que refleja una más rápida eliminación mediada de objetivo.

Tabla 1 - los niveles en plasma esperados efectivos de BT061 después de administración intravenosa El intervalo de niveles de plasma medido en 3 voluntarios diferentes por grupo de dosis, se indica.

De acuerdo con esto, en una modalidad preferida de la invención 0.2 a 10 mg del agente se administra en forma intravenosa y la concentración máxima del agente en el plasma del paciente 3 horas después de la administración, es menor a 2.5 g/ml. De preferencia, 0.2 a 5 mg del agente se administra en forma intravenosa y la concentración máxima del agente en el plasma del paciente a 3 horas después de la administración es menor a 0.3 µ?/p??. Aún más preferible, 0.5 a 3 mg del agente se administra en forma intravenosa y la concentración máxima del agente en el plasma del paciente 3 horas después de administración, es menor a ?.?µ?/p??. Éstos valores se obtienen después de cualquier administración y/o después de la primer y/o segunda administraciones del agente.

La dosis también puede calcularse en base al área superficial del cuerpo (BSA= Body Surface Área) del sujeto. El área superficial del cuerpo (BSA) puede calcularse de acuerdo con cualquier método conocido. : Ejemplos de métodos de cálculo BSA son: la fórmula de Mosteller (BSA (m2 ) = ([Altura(cm) x Peso(kg)]/ 3600 )½ (Mosteller RD . , N Engl J Med 1987 Oct 22 ; 317 ( 1 ) : 1098 ) ; la fórmula de DuBois y DuBois de BSA (m2 ) = 0.20247 x Altura (m) °'725 x Peso ( kg) °'425 (DuBois D; DuBois EF. , ñrch Int Med 1916 17:863-71); la fórmula Haycock de BSA (m2 ) = 0.024265 x Altura (cm) °·396<? x Peso (kg) °-5378 (Haycock G.B., et al., The Journal of Pediatrics 1978 93:1:62-66); la fórmula Gehan y George de BSA (m2) . = 0.0235 x Altura (cm) °·42246 x Peso (kg) °·5145d (Gehan EA, and George SL, Cáncer Chemother Rep 1970 54:225-35); y la fórmula Boyd: BSA (m2) = 0.0003207 x Altura (cm) °·3 x Peso (gramos) (0·7285 ~ ( °·0188 x LOG(gramos) ).

De acuerdo con esto, el agente puede administrarse a un sujeto en una dosis desde 0.1 a 5 mg/m2 de área superficial de cuerpo del paciente, de preferencia de 0.1 a 2.5 mg/m2 y más preferiblemente de 0.25 a 1.5 mg/m2. En forma alterna, la dosis puede . calcularse con base en el peso corporal del sujeto, de manera tal que en un aspecto 'adicional de la invención, el agente se va a administrar a un sujeto en una dosis desde 2 a 150 µg/kg, de preferencia de 2 a 75 µ?/kg, más preferible de 5 a 45 g/kg. Como con anterioridad, es particularmente preferido que estas dosis se utilicen cuando el agente se administre en forma intravenosa .

Como se indicó anteriormente, .en un aspecto de la invención, el agente y/o metotrexato se administran en forma subcutánea. En general, como se conoce en la técnica, dosis subcutáneas requieren ser más grandes que las dosis intravenosas para lograr el efecto terapéutico equivalente. Los presentes inventores han demostrado en pruebas de monoterapia que pacientes con artritis reumatoide con el anticuerpo BT061 que el efecto terapéutico logrado después de administración intravenosa de 2 mg es aproximadamente equivalente a la que se logra después de una administración subcutánea de 50 mg. Estos resultados se representan a continuación en la Tabla 2.

Tabla 2 - porcentaje de pacientes con artritis reumatoide que muestran mejoras en ACR en la semana 7 después de ser tratados con dosis una vez a la semana de BT061 (2 mg intravenosos o 50 mg subcutáneos) para un periodo de tratamiento total de seis semanas. Los resultados representan datos ciegos de :8 individuos, 2 que reciben placebo y 6 que reciben BT061.

De acuerdo con esto, en un aspecto preferido adicional de la invención, el agente se administra al paciente en forma subcutánea o intramuscular en una dosis de 20 mg a 80 mg, y más preferible de 30 mg a 70 mg. En forma alterna, el agente puede ser administrado en una dosis de 8 a 50 mg/m2 o de 0.2 a 1.5 mg/kg. En este aspecto de la invención, se prefiere particularmente que la administración sea cuando más aproximadamente una vez cada dos semanas. Se nota que los aspectos de la invención descritos en este párrafo pueden combinarse con otros aspectos y características preferidas de la invención establecidas en esta solicitud.

De acuerdo con la presente invención, la composición farmacéutica o equipo · además comprenden metotrexato (MTX) . El tratamiento con MTX de RA es bien conocido' en la técnica y se prevé que en la presente invención MTX se va a administrar en las dosis previamente descritas. En particular, en la invención MTX usualmente se administra en una dosis entre 5 a 30 mg, de preferencia entre 7.5 mg y 30 mg y más preferible entre 10 a 25 mg. En algunos casos, la dosis dependerá del pre-tratamiento del paciente con MTX o tolerancia a esta droga.

En otro aspecto, el método de la invención incluye una etapa adicional de administrar un agente terapéutico adicional adecuado para tratar la enfermedad reumática. Agentes terapéuticos adicionales comprenden uno o más de los siguientes agentes: un fármaco o droga anti inflamatoria no esteroidal, un esteroide antiinflamatorio, un compuesto de oro, un fármaco anti-malaria, ácido fólico, ciclosporina, leflunomida, azatioprina, sulfasalazina, d- penicilamina, ciclofosfamida, micofenoato, minociclina y clorambucil. Estos agentes terapéuticos adicionales pueden administrarse por separado, en forma simultánea o secuencial con el agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y MTX.

Como se mencionó anteriormente, los presentes inventores han mostrado de manera sorprendente que la composición farmacéutica y el equipo de la presente invención son capaces de tratar enfermedades reumáticas. En particular, como se muestra a continuación en el Ejemplo 2, el tratamiento de artritis reumatoide resulta en una mejora significante en la enfermedad. De acuerdo con esto, en un aspecto aún adicional de la invención, en donde la enfermedad es artritis reumatoide, el tratamiento proporciona una mejora de la enfermedad en el paciente de al menos" ACR20, de preferencia al menos ACR 50, y más preferiblemente al menos ACR 70, de acuerdo con el sistema de calificación del Colegio Americano de Reumatologia . En otras palabras, el tratamiento proporciona una mejora del paciente de al menos 20%, de preferencia al menos 50% y más preferiblemente al menos 70% de los parámetros de la enfermedad de acuerdo con la calificación del Colegio Americano de Reumatologia (ACR) .

' Más preferible, el tratamiento proporciona cuando menos una respuesta de ACR 70 en el paciente entre 6 a 8 semanas después del inicio del tratamiento.

Como también puede verse del Ejemplo 2 y las Figuras relacionadas, el tratamiento de la presente invención tiene la capacidad por mejorar artritis reumatoide en una cantidad de pacientes. De acuerdo con esto, el método de tratamiento de la presente invención es capaz dé tratar artritis reumatoide al proporcionar al menos una mejora de la condición de enfermedad de ACR 20 a cuando menos 20% de los pacientes. Además, el método de tratamiento de la presente invención es capaz de tratar artritis1 reumatoide al proporcionar al menos una mejora de la condición de la enfermedad de ACR 50, más preferiblemente ACR 70 a cuando menos 10% de los pacientes.

La invención ahora se describirá adicionalmente con los siguientes ejemplos.

EJEMPLO 1 Ensayo de proliferación in vitro con el anticuerpo BT061 utilizando células T regulatorias CD4+CD25+ recientemente aisladas.

Método Aislamiento de células T regulatorias CD4+CD25+ humanas 50 mi de especímenes de sangre de EDTA se obtuvieron de donadores de control sanos. Células mononucleares de sangre periférica (PB Cs) , células T regulatorias (Tregs) y células auxiliares T como células de respuesta T (Tresps) , se aislaron de muestras de sangre periférica como se describió previamente (Haas et al., 2007) .

Ensayos de proliferación in vitro Tregs recientemente aisladas fueron pre-incubadas por 48 horas con 1 yg/ml de anticuerpo ligado a placa (BT061), 1 ug/ml de BT061 soluble o Medio.

Tregs recientemente aisladas (2.5xl04, donador A) obtenidas de 2 donadores (Exp. 1 y Exp. 2) se pre-incubaron por 48 horas, ya sea con 1 pg/ml de BT061 soluble o ligado a placa. Para lograr estimulo alogenéico, las 2.5xl04 Tregs pre-incubadas después se transfirieron a lxlO5 células T como células de respuesta (Tresps) de · un segundo donador (donador B) en la presencia de 2xl05 células T PBMCs (donador A) agotadas e irradiadas (30 Gray) . Después de 4 dias de estimulo 1 µ?? [3H] de timidina por pozo se agregaron y la proliferación se midió después de 16 horas adicionales .

Resultados ; El porcentaje de inhibición mediada por Treg de proliferación de Tresp se muestra en la Figura 1 como el por ciento de supresión de proliferación de Tresps incubadas con PBMC en la ausencia de Tregs. Se muestran resultados para las Tregs que se obtienen de dos donadores (Exp. 1 y Exp. 2). Las barras rayadas representan los resultados que se obtienen con células Treg pre-incubadas con anticuerpo soluble, mientras que las barras rellenas representan los resultados que se obtienen con células Treg pre-incubadas con anticuerpo ligado a placa. Como un control, se muestra la actividad supresora de Tregs tratadas con medio (barras abiertas) . Números sobre las barras representan el por ciento de inhibición de proliferación de Tresp.

Como muestra la Figura 1, Tregs pre-incubadas con anticuerpo soluble o ligado a placa fueron capaces de reducir respuestas proliferativas promedio de Tresps estimuladas alogenéicas en contraste con Tregs incubadas con medio solo. Además, la supresión obtenida con anticuerpo ligado a placa fue más fuerte en comparación con supresión que se obtiene con anticuerpo soluble.

Bajo condiciones fisiológicas in vivo BT061 como anticuerpo IgGl se espera que ligue a receptores Fe en células que expresan receptor Fe. Esta interacción llevará a reclutamiento de BT061 distribuidas homogéneamente (ligadas a CD4) en el sitio de interacción local de células objetivo y células que expresan receptor Fe, llevando a un entrelazamiento de BT061 y de esta manera CD . Se espera que la interacción de BT061 con células que expresan receptor Fe confiere una señal similar a células de blanco Treg como se observa con el anticuerpo ligado a placa ya que ambos mecanismos reclutan varias moléculas objetivo (CD4) en proximidad inmediata en la superficie celular.

EJEMPLO 2 - Prueba clínica en pacientes con artritis reumatoide La capacidad de composiciones farmacéuticas y equipos de la presente invención para proporcionar tratamiento eficaz de RA, se demostró en pacientes que sufren de RA.

La prueba en combinación en donde BT061 se estudia en combinación con MTX comprende un estudio fase II doble ciego controlado por placebo aleatorio, conducido en pacientes con RA moderada a severa. Todos los pacientes han tomado dosis estables de MTX por al menos 3 meses antes del inicio de la prueba, estas dosis se continuaron en todos los pacientes al intervalo de 15 a 20 mg por semana durante el curso de la prueba administrada en forma oral o intramuscular.

Los pacientes fueron divididos en tres grupos. Los pacientes en el grupo I (14 pacientes) recibieron una dosis intravenosa de 0.5 mg de BT061 y una dosis de MTX en el intervalo de 15 a 20 mg. Los pacientes en el grupo II (42 pacientes) recibieron una dosis intravenosa de 2.0 mg de BT061 y una dosis de MTX en el intervalo de 15 a 20 mg. Los pacientes en el grupo III (14 pacientes) recibieron una dosis de MTX en el intervalo de 15 a 20 mg. Los pacientes fueron dosificados una vez a la semana sobre un periodo de ocho semanas.

Para administración intravenosa, el agente se va a someter a infusión en la vena del antebrazo de acuerdo con procedimientos médicamente aceptados.

La eficacia del tratamiento se evalúa semanalmente durante el periodo de dosificación, y por una cantidad de semanas después de que se completara la dosis, por evaluación de los parámetros ACR (American Society of Rheumatology página principal ACR) y en particular estudiando el número de articulaciones sensibles e hinchadas y siguiendo los niveles de proteina C reactiva (CRP) y la velocidad de sedimentación de eritrocitos (ESR) . Estos parámetros también se estimaron antes de la prueba para proporcionar un valor de "línea base o de referencia" en el día 0.

Los resultados de la prueba . se muestran en las Figuras 2 a 4, en donde datos obtenidos de pacientes en el grupo de dosis II, que reciben dosis de 2 mg de BT061 + MTX, se comparan con los grupos de dosis más efectivos que se obtienen en dos pruebas fase III publicadas que involucran los anticuerpos anti-TNF alfa, Humira (adalimumab) por Keystone et al., (2004 - trial DE019) y Simponi (golimumab) por Keystone et al., (2009 - Go-Forward trial) . Los grupos de dosis más efectivos se muestran para todos los estudios. Habrá de notarse que resultados de la técnica previa incluidos para propósitos comparativos son pruebas fase III en donde la dosis de las composiciones farmacéuticas se han optimizado.

• En particular, la Figura 2 muestra el por ciento de pacientes del grupo de dosis de 2 mg que logran una calificación ACR20, mientras que las Figuras 3 y 4 muestran los porcentajes de pacientes del grupo de dosis de 2 mg que logran una calificación ACR50 y una ACR 70, respectivamente.

Como puede verse en las Figuras, en las pruebas clínicas con los anticuerpos anti-TNF-alfa terapéuticos, actividad terapéutica pico como se mide por mejora de las calificaciones ACR usualmente requiere varios meses. En general, el por ciento de pacientes que muestran una respuesta a ACR20 es máximo y alcanza una meseta después de 3 meses. Para ACR50, la meseta se alcanza después de 4 meses y ' para ACR70, la meseta se alcanza después de 6 meses .

Sin embargo, los resultados de la terapia combinada de la presente invención muestran una cantidad de diferencias. En particular, en las Figuras que muestran los resultados corregidos por placebo puede verse que el inicio del efecto terapéutico se retrasa; el por ciento de pacientes que logran una calificación ACR (20) no aumenta sobre 5% hasta la semana 8. Sin embargo, después del inicio el efecto terapéutico aumenta rápidamente tal que en la semana 9 el por ciento de pacientes que logran ACR50 es comparable con el logrado en las pruebas III con los anticuerpos TNF-alfa, Humira y Simponi. El porcentaje de pacientes que alcanzan ACR 20, ACR 50 y ACR70 aumenta rápidamente entre las semanas 7 a 9 de .manera tal que a la semana 9, el por ciento de pacientes de ACR20, ACR50 y ACR70 es aproximadamente 25%, 18% y 17%, respectivamente. Se nota' que este porcentaje de pacientes ACR70 no se alcanza en las pruebas con Humira y Simponi hasta 24 a 26 semanas después del inicio del tratamiento.

Además, los presentes inventores han notado que la cantidad de efectos secundarios adversos vistos con la terapia de combinación de BT061 y MTX es menor que los que se ven en las pruebas realizadas utilizando BT061 solo, y por lo tanto MTX tiene la capacidad en . reducir los efectos secundarios de anticuerpos terapéuticos que activan células T regulatorias de CD4+CD25+. Éstos resultados demuestran la eficacia y ventaja sorprendentes de la combinación de un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y MTX de la presente' invención en el tratamiento de enfermedad reumática .

Claims (83)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato.

2. Un equipo que comprende separadamente un agente capaz de activar células T requlatorias CD4+CD25+ y metotrexato .

3. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 1 o reivindicación 2, caracterizados porque el agente es adecuado para administración parenteral.

• 4. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 3, caracterizados porque el agente es adecuado para administración intramuscular, intravenosa o subcutánea.

5. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con cualquier reivindicación precedente en donde el metotrexato es adecuado para administración oral, intramuscular, intravenosa o subcutánea.

6. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con cualquier reivindicación precedente en donde el agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ es un anticuerpo o su fragmento o derivado.

7. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 6, caracterizados porque el anticuerpo es un anticuerpo raonoclonal humanizado.

8. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 6 o reivindicación 7, caracterizados porque el agente es un anticuerpo anti-CD4 o fragmento o derivado del mismo.

9. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 8, caracterizados porque el agente es un anticuerpo anti-CD4 humanizado que comprende una secuencia que comprende las regiones de determinación de complementariedad (CDRs) del anticuerpo monoclonal de ratón B-F5, opcionalmente con variaciones en la secuencia que no afectan sustancialmente la especificidad y/o unidades de su anticuerpo.

10. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 8, caracterizados porque el agenté es un anticuerpo anti-CD4 humanizado que tiene dominios V definidos por las siguientes secuencias de polipéptido : - cadena H dominio V: EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCR YWLRQAPGKGLE IGVISVKSENYG ANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAY GQGT LVTVSS (SEQ ID NO: 1) - cadena L dominio V: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIY YQQKPGQPPKLLIYLASILE SGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 2) . o dominios V que comprenden secuencias polipéptido que tienen al menos 80% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

11. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde el agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ se va a administrar a un sujeto en una dosis desde 0.2 mg a 10 mg.

12. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 11, caracterizados porque el agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ se va a administrar a un sujeto en una dosis desde 0.2 mg a 5 mg .

13. Una composición farmacéutica o equipo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizados porque el agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ se va a administrar a un sujeto en una dosis desde 0.5 mg a 3 mg.

14. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquier reivindicación precedente, caracterizada porque la composición o agente es para administración intravenosa y se proporciona en un volumen de dosis de 0.5 a 500 mi o en una forma para división al volumen de dosis de 0.5 a 500 mi.

15. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque la composición o agente es adecuada para proporcionar o se proporciona en un volumen de dosis de 0.5 a- 1.5 mi.

¦ 16. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque la composición o agente es adecuada para proporcionar o se proporciona en un volumen de dosis de 15 a 25 mi.

: 17. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque la composición es adecuada para administración subcutánea o intramuscular y se proporciona en un volumen de dosis de 0.1 a 3 mi.

18. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquier reivindicación precedente, caracterizada porque la composición o agente es adecuada para utilizar como una sola dosis.

19. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizada porque la composición o agente es adecuada para utilizar como parte de una pluralidad de dosis.

20. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque cada dosis de la pluralidad de dosis se va a administrar semanalmente.

21. Un método para, tratar una enfermedad reumática en un paciente, que comprende una etapa (a) de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y una etapa (b) de administrar metotrexato, en donde la etapa (a) y la etapa (b) pueden conducirse en forma simultánea, separada o secuencial y en cualquier orden.

22. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente que se somete a tratamiento con metotrexato que comprende una etapa de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+.

23. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente que se somete a tratamiento con un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ que comprende una etapa de administrar metotrexato.

24. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, caracterizado porque la enfermedad reumática se elige de artritis reumatoide, artritis' soriásica, artritis reumatoide juvenil y espondilitis anquilosante.

25. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad reumática es artritis reumatoide.

26. Un método para tratar artritis reumatoide en un paciente que no responde a tratamiento con una droga anti reumática que modifica la enfermedad (DMARD = Disease-Modifying Anti-Rheumatic Drug) , que comprende una etapa (a) de administrar un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y una etapa (b) de administrar metotrexáto, en donde la etapa (a) y la etapa (b) pueden realizarse en forma simultánea, separada o secuencial y en cualquier orden.

27. Un método para tratar artritis reumatoide en un paciente de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el DMARD es metotrexáto.

28. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, caracterizado porque el agente se administra parenteralmente.

29. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el agente se administra en forma intramuscular, intravenosa o subcutánea .

' 30. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 29, caracterizado porque el metotrexato se administra en forma oral, intramuscular, intravenosa o subcutánea.

31. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 30, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 0.2 a 10 mg .

32. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 0.2 a 5 mg.

33. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 0.5 a 3 mg.

34. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de la administración, es menor a 2.5 pg/ml.

35. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado . porque el agente se administra en forma intravenosa y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de la administración, es menor a 0.3 µg/ml.

36. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de la administración, es menor a 0.1 g/ml.

37. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa y una- vez cada semana y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de la segunda administración, es menor a 2.5 pg/ml.

38. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado . porque el agente se administra en forma intravenosa y una vez cada semana y en donde la- concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de la segunda administración, es menor a 0.3 pg/ml.

39. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa una vez cada semana y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de la segunda administración, es menor a 0.1 µg/ml.

40. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa una vez cada semana y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de cualquier administración, es menor a 2.5 pg/ml .

41. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa una vez cada semana y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del fin de cualquier administración, es menor a 0.3 µg/ml .

42. Un método para tratamiento de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el agente se administra en forma intravenosa una vez cada semana y en donde la concentración máxima del agente en el plasma del paciente, 3 horas después del :fin de cualquier administración, es menor a 0.1 g/ml.

43. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 30, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 2 a 150 pg/kg.

44. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 2 a 75 g/kg.

45. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 5 a 45 µg kg.

46. Un método para tratar una enfermedad . reumática en un paciente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 30, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 0.1 a 5 mg/m2 del área superficial corporal del paciente.

47. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 0.1 a 2.5 mg/m2 del área superficial corporal del paciente.

• 48. Un método para tratar una enfermedad reumática en un paciente de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque el agente se administra al paciente en una cantidad desde 0.25 a 1.5 mg/m2 del área superficial corporal del paciente.

49. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 48, caracterizado porque se administra al paciente una sola dosis del agente.

50. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 48, caracterizado porque se administran al paciente una pluralidad de dosis del agente.

51. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque el agente y/o el metotrexato se administran cuando más cada semana.

52. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con la reivindicación 51 caracterizado porque el agente y/o el metotrexato se administran cada dos semanas, cada tres semanas o cada cuatro semanas.

53. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 52, caracterizado porque comprende la etapa adicional de administrar un agente terapéutico adicional adecuado para tratar la enfermedad, seleccionados de una droga anti inflamatoria no esferoidal, un esferoide anti inflamatorio, un compuesto de oro, una droga anti malaria, ácido fólico, ciclosporina, leflunomida, azatioprina, sulfasalazina , d-penicilamina, ciclofosfamida , micofenoato, minociclina y clorambucil.

' 54. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 53, caracterizado porque la enfermedad reumática es artritis reumatoide y en donde el tratamiento proporciona una mejora de la enfermedad en el paciente de cuando menos ACR50, de acuerdo con el sistema de calificación del American College of Rheumatology (ACR) .

55. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque el tratamiento proporciona una mejora de la enfermedad en el paciente de cuando menos ACR70, de acuerdo con el sistema de calificación del American College of Rheumatology (ACR) .

¦ 56. Un método para tratar una enfermedad reumática de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque el tratamiento proporciona al menos una respuesta de ACR 70 en el paciente entre 6 a 8 semanas después del inicio de tratamiento.

57. Un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en medicina i

58. Un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial de conformidad con la reivindicación 57 en el tratamiento de una enfermedad reumática.

59. Uso de un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato para la fabricación de una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de una enfermedad reumática en un paciente.

60. Un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ para el tratamiento de una enfermedad reumática en un paciente, en donde el paciente se somete a tratamiento con metotrexato.

61. Una composición que comprende metotrexato para utilizar en el tratamiento de una enfermedad reumática en un paciente, en donde el paciente se somete a tratamiento con un agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+.

62. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 58 a 61, caracterizado porque la enfermedad reumática se elige de artritis reumatoide, artritis soriásica, artritis reumatoide juvenil y espondilitis anquilosante.

63. Uso de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque la enfermedad reumática es artritis reumatoide.

¦ 64. Un agente capaz de .activar células T regulatorias CD4+CD25+ y metotrexato como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial de conformidad con la reivindicación 57, en el tratamiento de una enfermedad reumática en un paciente que no responde a tratamiento con una droga anti reumática que modifica enfermedad (DMARD) .

65. Un agente para uso de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque la DMARD es metotrexato .

66. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 65, caracterizado porque el agente es adecuado para administración parenteral.

67. Uso de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque el agente es adecuado para administración intramuscular, intravenosa o subcutánea.

' 68. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67, caracterizado porque el metotrexato es adecuado para administración oral, intramuscular, intravenosa o subcutánea.

69. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 68, caracterizado porque el agente se va a administrar al paciente en una cantidad desde 0.2 a 10 mg .

70. Uso de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado porque el agente es adecuado para administración intravenosa y es capaz de establecer una concentración máxima en el plasma del paciente menor a 2.5 µ?/ml, 3 horas después de administración.

71. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 68, caracterizado porque el agente se va a administrar al paciente en una cantidad desde 2 a 150 g/kg.

72. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 68, caracterizado porque el agente se va a administrar al paciente en una cantidad desde 0.1 a 5 mg/m2 del área superficial corporal del paciente.

73. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 72, caracterizado porque el agente es adecuado para administración como una sola dosis.

74. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 72, caracterizado por el agente es adecuado para administración como parte de una pluralidad de dosis.

75. Uso de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado por el agente es adecuado para administración cuando más una vez cada semana.

76. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57 a 72, caracterizado porque la preparación combinada además comprende un agente terapéutico adicional adecuado para tratar la enfermedad, seleccionados de una droga anti inflamatoria no esferoidal, un esferoide anti inflamatorio, un compuesto de oro, una droga anti malaria, ácido fólico, ciclosporina, leflunomida, azatioprina, sulfasalazina, d-penicilamina, ciclofosfamida, micofenoato, minociclina y clorambucil.

77. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 58 a 76, caracterizado porque la enfermedad reumática es artritis reumatoide y en donde la preparación combinada es capaz de proporcionar una mejora de la enfermedad en el paciente de al menos ACR50, de acuerdo con el sistema de calificación de American College of Rheumatology (ACR) .

78. Un método o uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 77, caracterizados porque el agente capaz de activar células T regulatorias CD4+CD25+ es un anticuerpo o su fragmento o derivado.

79.. Un método o uso de conformidad con la reivindicación 78, caracterizados porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humanizado.

80. Un método o uso de conformidad con la reivindicación 78 o reivindicación 79, caracterizados porque el agente es un anticuerpo anti-CD4 o fragmento o derivado del mismo.

81. Un método o uso de conformidad con la reivindicación 80, caracterizados porque el agente es un anticuerpo anti-CD4 humanizado que comprende una secuencia que comprende las regiones de . determinación de complementariedad (CDRs) del anticuerpo monoclonal de ratón B-F5, opcionalmente con variaciones en la secuencia que no afectan esencialmente la especificidad y/o afinidad del anticuerpo .

82. Un método o uso de conformidad con la reivindicación 80, caracterizados porque el agente es un anticuerpo anti-CD4 humanizado que tiene dominios V definidos por las siguientes secuencias ' polipéptido: -cadena H dominio V: EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCR YWLRQAPGKGLEWIGVISVKSENYG ANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAY GQGT LVTVSS (SEQ ID NO: 1) - cadena L dominio V: DIV TQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASILE SGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 2) . o dominios V que comprenden secuencias polipéptido que tienen al menos 80% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

83. Un método que comprende preparar una composición farmacéutica o equipo que comprenden el agente y el metotrexato de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20.