KR20110046335A

KR20110046335A - 만가닥버섯 자실체의 제조방법

Info

Publication number: KR20110046335A
Application number: KR1020100104794A
Authority: KR
Inventors: 유지 하시모토; 카츠히코 쿠사카베
Original assignee: 다카라 바이오 가부시키가이샤
Priority date: 2009-10-27
Filing date: 2010-10-26
Publication date: 2011-05-04

Abstract

대규모 상업 제조에 있어서 저렴하고, 또한 효율이 좋은 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법이 제공된다. 증점제를 함유하는 액체 배지에서, 기포를 사용한 배지의 교반에 의해 액체 심부 배양을 실시한 액체 종균을 사용하는 것을 특징으로 하는 만가닥버섯 자실체의 제조방법이 제공된다. 또한 병 재배에 있어서 균좌를 높게 한 균상 재배용 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는 만가닥버섯 자실체의 제조방법이 제공된다. 본 발명에 의해, 종균 제조 시간을 대폭 단축하는 것이 가능하게 되었고, 또한 고체 종균을 사용한 자실체 제조시의 제조 불균일의 리스크를 회피할 수 있다는 점에서, 대규모 상업재배에서 효율적으로 만가닥버섯 자실체의 제조를 실시하는 것이 가능하게 되었다.

Description

만가닥버섯 자실체의 제조방법{METHOD FOR MANUFACTURING OF FRUITING BODY OF HYPSIZIGUS MARMOREUS}

본 발명은 액체 종균을 사용한 만가닥(만년)버섯 자실체의 제조방법에 관한 것이다.

최근, 버섯의 인공적인 재배 기술이 개발되어, 여러 종류의 버섯의 자실체(땅찌만가닥버섯, 잿빛만가닥버섯, 만가닥버섯, 큰느타리버섯, 표고버섯, 팽이버섯 등)가 제공되고 있다.

통상, 버섯의 인공 재배는 자른 나무나 고형 배지에 버섯의 종균을 접종하고, 배양, 생육 등의 공정을 거쳐서, 자실체를 수확하는 것에 의해 이루어진다. 버섯의 종균에는 톱밥 등의 배지를 사용한 고체 종균과 액체 배지를 사용한 액체 종균이 존재한다. 최근, 버섯의 인공적인 재배는 대형 설비의 공장 시스템에서 실시되는 등 기계화가 추진되고 있다. 그렇지만, 상업적으로 대량이면서 안정적으로 버섯 자실체를 제조하기 위해서는, 사용하는 종균을 대량으로 배양할 필요가 있다. 종래, 버섯의 종균에는 보존성이 좋고, 용이하게 수송이 가능하다는 등의 이유로 고체 종균이 사용되고 있었다. 그렇지만, 고체 종균의 로트 차이에 기인하는 버섯 자실체 제조시의 제조 불균일 리스크나 고체 종균을 접종하였을 때의 넘치게 된 종균에 의한 병이나 컨테이너의 오염에 기인하는 심각한 설비의 해균ㆍ해충오염 등을 회피하기 쉬울 것, 종균의 제조 시간의 대폭적인 단축이 가능하며, 또한 스케일업이 용이할 것 등으로부터, 액체 종균이 유리하다고 확인되고, 사용이 증가하고 있다. 액체 종균을 대량으로 배양하기 위한 방법으로서, 균사체에서 유용 성분을 얻기 위한 대량 배양 방법인 액체 심부(深部) 배양법이 검토되고, 배양 조건 등을 엄밀하게 컨트롤하기 위해서 기계적인 교반, 통풍, 온도관리를 실시하는 자 발효기(jar fermenter)에 의한 통풍 교반형 발효조를 사용한 액체 심부 배양법이 통용되고 있다(예를 들면, 비특허문헌 1). 그러나, 상업적 규모로 버섯 자실체를 재배하기 위해서는 대용량의 자 발효기를 포함하는 고가이며, 대규모인 배양설비의 설치가 필수적이다.

한편, 만가닥(만년)버섯의 인공적인 재배는 고체 종균을 사용해서 실시하는 것이 일반적이고, 상업적 규모로 수행되고 있다. 최근, 액체 종균을 사용한 만가닥버섯의 재배 방법도 시도되고 있다(예를 들면, 특허문헌 1, 비특허문헌 2). 그렇지만, 만가닥버섯은 액체 배양을 실시하면 균사 생육이 불안정해져서, 가지런하지 않은 균사괴(균사 덩어리) 상태가 된다. 이 때문에, 그대로 재배용 배지에 접종하면, 균 스프레딩 불량이 발생하여, 만가닥버섯 자실체의 발생 유도 수단인 균 긁기도 불충분하게 된다. 그 결과, 만가닥버섯 자실체의 발생 불량이 일어날 가능성이 높다. 또, 가지런하지 않은 균사괴 상태를 피하기 위해서, 배양 중 기계적인 교반 등에 의한 균일화도 시도되고 있다. 그렇지만, 배양 중에 균사를 기계적으로 절단해 버리기 때문에, 결과적으로 만가닥버섯 자실체의 발생불량이나 형상의 불안정화가 발생하여, 상업적 규모의 제조는 아직 어려워 그다지 실시되고 있지 않다.

일본 공개특허공보 제2003-158921호

발효협회지, 제24권, 제7호, 293-304쪽, 1966년 특산정보, 제24권, 제1호, 44-47쪽, 2002년.

상기 현 상황을 감안하여, 본 발명의 목적은 대규모 상업 제조에 있어서, 저렴하며, 또한 효율이 좋은 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법을 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은 대규모 상업 제조를 실시하기 위한 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법을 예의 검토한 결과, 놀랍게도, 교반에 기포를 사용하는 액체 심부 배양(무동력 교반: 에어버블링)이, 의외로 만가닥버섯 자실체를 제조하기 위한 액체 종균 제조에 유용하다는 것을 발견하였다. 또, 당해 배양에 있어서, 배지 중에 저농도의 증점제를 함유시키는 것에 의해, 만가닥버섯의 자실체 형성능을 가진 상태에서 만가닥버섯 균사체를 균일하면서도 효율적으로 안정적으로 대량 배양하는 것이 가능하다는 것을 발견하였다. 또, 지금까지 고체 종균에서 사용되어 온 균상 재배용 배지의 균좌(菌座, fungus seat)를 더 높게 하고, 균좌 표면의 중앙부 이외의 장소에 작은 구멍을 뚫음으로써, 안정된 균 스프레딩이 가능하게 되고, 균긁기에 의한 발생 유도를 효율적으로 수행할 수 있어, 고체 종균을 사용하였을 경우보다, 종균 제조시간을 포함하여, 단기간에 상품가치가 높은 균일한 우량의 만가닥버섯 자실체를 제조하는 것이 가능함을 발견하고, 본 발명을 완성시켰다.

본 발명을 개략적으로 설명하면, 하기에 관한 것이다.

[1] 증점제를 함유한 액체 배지에서, 기포를 사용한 배지의 교반으로 액체 심부 배양을 실시한 액체 종균을 사용하는 것을 특징으로 하는 만가닥버섯 자실체의 제조방법.

[2] 상기 [1]에서, 실질적으로 기포를 사용한 교반에 의해서만 배지의 교반을 실시하는 방법.

[3] 상기 [1]에서, 증점제가 해초 추출물, 과실 다당류, 종자 다당류, 수액 다당류, 발효 다당류, 저장성 다당류, 동물성 단백질 및 셀룰로오스 유도체로부터 선택되는 방법.

[4] 상기 [1]에서, 배지 중의 증점제의 농도가 0.001 내지 0.1 중량%인 방법.

[5] 상기 [1]에서, 병 재배인 제조방법.

[6] 상기 [5]에서, 균좌를 높게 한 균상 재배용 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는 제조방법.

　[7] 상기 [6]에서, 병 중앙부의 주변에 2 내지 6개의 접종 구멍을 가지는 균상 재배용 배지를 사용하는 제조방법.

본 발명에 의해, 액체 종균을 사용한 저렴한 만가닥버섯 자실체의 대규모 상업적 제조방법이 제공된다.

도 1은 본 발명의 제조방법에 사용하는 재배 병중의 균상 재배용 배지의 균좌 위치를 나타내는 도면이다.

본 발명에 바람직한 만가닥버섯 균주로서는, Lyophyllum ulmarium으로 표시되고 있는 균주, Hypsizygus marmoreus로 표시되고 있는 균주 등이 있고, 예를 들면, Lyophyllum ulmarium M-8171(FERM BP-1415), Lyophyllum ulmarium K-0259(FER MP-12981), Lyophyllum ulmarium Lu1 -172주(FERM BP-8354), Lu1 -173주(FERM BP-8355), Lu1-174주(FERM BP-8356), Lu1 -181주(FERM BP-8357) 및 자실체의 제조에 적합한 이들의 변이주 등이 예시된다.

본 발명에 바람직한 만가닥버섯 균주는 인공적인 재배가 가능한 균주로서, 본 발명에 적용할 수 있는 균주라면, 상기 균주로만 하등 제한되지 않는다. 이들 균주로서는 시판되고 있는 균주, 야생 자실체로부터의 조직 분리주, 또는, 선발, 교배, 세포융합, 유전자 재조합 등 당업자들에게 자명한 방법에 의해 종자를 육종시킨 주 등을 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용할 수 있는 「만가닥버섯 균사체」란 상기 만가닥버섯의 균사체로서, 액체 배지에서 배양이 가능하고, 또한, 만가닥버섯 자실체를 제조하기 위한 액체 종균으로서 사용할 수 있다면, 특별한 한정은 없다.

본원 명세서에 있어서 「기포를 사용하는 액체 심부 배양」이란, 배양조 내에 발생시킨 기포에 의해 배양액의 움직임(흐름)을 발생시켜서 배지의 교반을 실시하는 배양방법을 가리킨다. 실질적으로 기포를 사용한 교반에 의해서만 배지의 교반을 실시하는 배양방법이 바람직하며, 균사의 절단이 일어나지 않는 정도라면, 교반기, 프로펠러 형상의 팬과 같은 장치에 의한 기계적인 교반을 포함할 수도 있다. 특히 바람직하게는, 기계적인 교반을 동반하지 않고, 기포를 사용한 교반에 의해서만 배지의 교반을 실시하는 배양방법이다. 상기 배양방법에 사용되는 배양조에는 교반이나 진탕을 위한 기계적인 동력을 사용하는 장치를 필요로 하지 않고, 기포를 발생시키는 장치를 구비할 수 있으면 된다. 본 발명에 있어서는, 예를 들면 일본 응용버섯 학회지, 제8권, 제1호, 1-11쪽(2000)에 기재된 기포 탑형 배양장치 등을 사용할 수 있고, 저면 및/또는 측면으로부터 무균적으로 기포를 발생시킬 수 있는 것과 같은 장치를 구비한 배양조를 사용할 수 있다. 또, 기포를 발생시킬 수 있는 관 등을 직접 배양조에 넣고 수행할 수도 있다. 배양조에서 기포의 환기량으로서는 0.2∼0.8vvm(volume per volume per minute: 단위 체적당 가스 환기량)이 바람직하고, 바람직하게는 0.2∼0.6vvm, 혹은 10∼50ℓ/min(1분간에 10∼50ℓ의 무균에어를 25∼83ℓ의 액체 배지 중으로 통기하는 양을 나타낸다)일 수 있고, 바람직하게는 20∼40ℓ/min이다.

기포를 사용해서 배지를 교반하는 것에 의해, 액체 배양에서 안정적인 균사생육이 가능하게 되고, 가지런하지 않은 균사괴 상태를 피할 수 있다. 또, 실질적으로 기포에 의한 교반에 의해서만 배지를 교반하는 것에 의해, 배양 중에 균사를 기계적으로 절단하는 것에 의해서 발생하는, 만가닥버섯 자실체의 발생불량이나 형상의 불안정화를 피할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 배양조는 소망하는 양의 배양액을 유지할 수 있는 용량을 가지며, 또한 외부로부터의 미생물의 혼입을 방지할 수 있는 용기라면 좋다. 바람직하게는, 유지된 배지를 가열 가압 살균할 수 있는 구조의 배양조가 사용되지만, 배양액을 유지하는 배양조 자체를 오토클레이브 등으로 살균 가능하다면, 가압 살균을 위한 기능은 필요없다. 또, 무균으로 한 공기를 용기 내로 도입하는 기능을 가지거나, 이를 위한 장치를 부가할 수 있는 것이 바람직하다. 통상의 자 발효기를 사용할 수도 있지만, 그 경우, 배양 시에 기계적인 교반기능을 사용할 필요는 없다. 본 발명에서 사용되는 배양조의 크기는 제조하는 액체 종균의 양에 따라서 적당하게 조정할 수 있다. 본 발명의 액체 종균의 제조에 있어서, 연속 또는 단회 배양의 어느 쪽을 수행할 수 있지만, 바람직하게는 단회 배양, 즉 만가닥버섯 자실체의 제조를 실시하는 단위 마다 사용하는 액체 종균을 매회 배양하는 것이 바람직하다.

본원 명세서에 있어서 사용하는 액체 배지는 버섯의 액체 배양에 통상 사용되는 것, 예를 들면 탄소원, 질소원, 무기염 등의 영양원을 함유하는 액체 배지를 사용할 수 있다. 예를 들면 포도당, 말토오스, 당밀, 덱스트린, 글리세린, 전분 등의 탄수화물 등의 탄소원, 및 펩톤, 고기 엑스, 면실가루, 대두가루, 효모엑스, 카세인, 콘 스팁 리커, NZ-아민, 황산암모늄, 질산암모늄, 염화암모늄 등의 질소원, 또 인산이칼륨, 인산나트륨, 식염, 탄산칼슘, 황산마그네슘, 염화망간 등의 무기염을 함유하고, 만가닥버섯 균사체가 배양 가능한 액체 배지일 수 있다. 예를 들면, PGY 액체 배지(글루코스 2.0%, 폴리펩톤 0.2%, 효모엑스 0.2%, KH₂PO₄ 0.05% 및 MgSO₄ㆍ7H₂O 0.05%)나, SGMY 액체 배지(글루코스 0.5%, 효모엑스 0.2%, KH₂PO₄ 0.05%, K₂HPO₄ 0.03% 및 MgSO₄ㆍ7H₂O 0.05%, SH(미생물 배양용 영양원, Bacterio-N, 마루하니치로사 제품), 말토오스 0.2%)를 바람직하게 사용할 수 있다.

본 발명에 의한 액체 종균의 배양은 특히 본 발명을 한정하는 것은 아니지만, 전술한 액체 배지에 저농도의 증점제를 첨가하고, 만가닥버섯의 균사체를 접종하는 것에 의해 실시된다. 배양 온도나 배양 시간은 접종하는 만가닥버섯의 균사체가 증식 가능한 온도 및 시간으로 하는 것은 당연하다. 또, 대량 배양을 실시하는 경우, 우선, 처음에 플라스크 등을 사용한 교반 또는 진탕에 의한 소(작은) 스케일로의 전 배양 후, 예를 들면, 2 내지 20㎖의 액체 배지에 만가닥버섯의 균사체를 접종하고, 교반 또는 진탕에 의한 전 배양을 실시하고, 당해 전 배양물을 사용해서 본 배양(대량 배양)을 실시한다. 이 경우 본 배양 시에 본 발명의 방법을 사용하는 것에 의해, 효율적으로 저렴하면서 대량으로 액체 종균을 제조할 수 있다.

본원 명세서에 있어서 「증점제」란, 액체에 점성을 가지게 하는 물질이라면, 특별하게 한정은 없으며, 전분이나 겔화제 등의 증점 다당류, 예를 들면 해초 추출물, 과실 다당류, 종자 다당류, 수액 다당류, 발효 다당류, 저장성 다당류, 동물성 단백질, 셀룰로오스 유도체 등을 들 수 있고, 더 상세하게는, 한천, 카라기닌, 알긴산, 프로필렌글리콜, 펙틴, 구아검, 로커스트빈검, 타마린드, 씰리엄, 대두 다당류, 타라검, 카시아검, 아라비아검, 카라야검, 트랜건드검, 크산탄검, 젤란검, 커드란, 풀루란, 글루코만난, 가라크트만난, 젤라틴, 카세인, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스(CMC) 등으로부터 선택되는 것을 들 수 있다. 특히, 안전성의 관점에서 식용 첨가물로서 사용되고 있는 증점제가 바람직하다. 이들 증점제는 공지의 방법으로 제조될 수 있거나, 시판품을 사용할 수도 있다. 본 발명에서는 이들 증점제의 1종류 또는 수 종류를 배지에 혼합해서 사용할 수도 있다.

본원 명세서에 있어서 「저농도」란 배지가 겔상(고화된 상태)이나 졸상(젤리상 혹은 젤리 형태에 가까운 상태)이 되지 않는 증점제의 농도를 나타낸다. 바람직하게는 증점제를 제외한 배지에 대해서, 0.001 내지 0.1 중량%, 바람직하게는 0.005 내지 0.08 중량%, 더 바람직하게는 0.01 내지 0.05 중량%이다.

본원 명세서에 있어서 「균좌」란, 재배용 배지 상부의 표면의 균접종 부위를 말한다. 예를 들면, 병 재배용 배지에서는 병 개구부가 노출된 배지 표면을 균좌라고 한다. 본 발명에 있어서는, 고체 종균을 사용할 경우의 균상 재배용 배지(균상 재배용 고형 배지, 균상 재배용 배양기라고도 한다) 보다도 균좌를 높게 하는 것이 바람직하고, 예를 들면 병 재배인 경우, 도 1에 나타낸 바와 같이 고체 종균을 사용하는 경우, 통상의 병 재배에 사용되고 있는 시판의 850㎖ 병 또는 1100㎖의 병입구(병 연(淵))에서 15mm 아래를 균좌로 하는 것이 권장되고 있다. 본 발명에 있어서는, 균좌의 위치는 병 어깨에서 위, 또한 병 입구보다 아래라면, 특별하게 한정되지 않지만, 고체 종균을 사용할 경우의 균상 재배용 배지의 균좌보다 높게 하는 것이 바람직하고, 바람직하게는 병 입구에서 2 내지 10mm, 더 바람직하게는 5 내지 9mm 아래를 균좌로 하는 것이 바람직하다.

본 발명에 의한 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법은 특별하게 본 발명을 한정하는 것은 아니지만, 일례로서, 예를 들면, 하기의 공정에 의해 실시할 수 있다. SGMY 액체 배지(조성: 글루코스 0.5%, 효모엑스 0.2%, KH₂P0₄ 0.05%, K₂HP0₄ 0.03% 및 MgSO₄ㆍ7H₂0 0.05%, SH(미생물 배양용 영양원, Bacterio-N, 마루하니치로사 제품), 말토오스 0.2%) 200㎖에 만가닥버섯의 균사체를 접종하고, 25℃에서 14일간 진탕배양하여, 전 배양물을 제조한다. 다음에 별도 제조한 SGMY 액체 배지 160ℓ에 저농도의 증점 다당류, 예를 들면, 젤란검 〔켈코겔(산에이원 에프ㆍ에프ㆍ아이사 제품)〕을 증점제를 제외한 배지에 대해서 0.001∼0.04 중량%가 되도록 첨가하여, 본 배양용 액체 배지를 제조한다. 이 액체 배지를 배양조에 충전하고, 118℃ 에서 35∼90분간 고압 증기 살균을 실시한다. 방냉 개시 직후에 무균 에어에 의한 통풍을 실시하여, 배양조 내를 정압으로 한다. 당해 배지를 냉각 후, 상기의 전 배양물의 전량을 접종하고, 배양 온도 25℃, 환기량 0.25vvm, 내압 0.05MPa, 무동력교반(에어버블링)의 배양조건으로, 6∼7일간 배양을 실시하여 액체 종균을 제조한다.

상기한 바와 같이 제조한 액체 종균은 적당한 용기, 예를 들면 폴리프로필렌제의 원형 병 등에 무균적으로 옮기고, 균상 배지로 섭취하기 까지, 3 내지 -1℃의 범위로 제어된 환경에서 보관할 수 있다.

다음에, 상기의 액체 종균을 사용하여, 예를 들면 균상 재배 방법인, 병 재배, 봉지재배, 상자재배 등에 의해 만가닥버섯 자실체를 제조하는 것이 가능하다. 일례로서, 병 재배에 의한 본 발명의 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법에 대해서 기술하면, 그 방법은 균상 배지 제조, 입병, 살균, 종균의 접종, 균상 배양, 균 긁기(만두(饅頭) 긁기), 싹 틔움, 생육, 수확 등의 각 공정으로 이루어진다. 예를 들면 일본 공개특허공보 H05-268942호에 기재된 균상 재배를 실시할 때의 종균으로서, 본 발명의 방법으로 배양한 액체 종균을 사용할 수 있다. 단, 본 발명의 제조방법에 사용하는 균상 재배용 배지는 고체 종균을 사용할 경우의 균상 재배용 배지나 통상 사용되고 있는 균상 재배용 배지보다도 균좌를 높게 하는 것이 바람직하고, 바람직하게는 균좌가 병 입구에서 2∼10m 아래가 되도록 하는 것이 좋다. 또 병 중앙부의 구멍(구멍 또는 접종구멍이라고 한다)은 특별히 필요하지 않지만, 병 연(淵) 부근, 즉 병 중앙부의 주변에 구경 3∼10mm 정도, 바람직하게는 5mm정도, 깊이 100∼200mm 정도, 바람직하게는 110∼150mm 정도의 작은 구멍(구멍 또는 접종구멍이라고도 한다)을 1병당 2∼6개, 바람직하게는 4개 뚫은 균상 재배용 배지를 사용할 수 있다.

본 발명의 액체 종균을 균상 재배용 배지에 접종할 때, 850㎖의 광구 배양 병 1병당, 예를 들면, 그 약 10∼20㎖을 무균적으로 이식할 수 있다. 상기 액체 종균을 접종하는 방법으로서는, 특수한 기계를 사용해서 스프레이상으로 균좌 및 접종구멍에 모조리 접종할 필요는 없고, 액체 종균을 그대로 균좌 상에 필요량을 무균적으로 첨가하는 것만으로 좋다. 액체 종균을 첨가하는 균좌 상의 위치는 균좌의 중앙부 부근이 바람직하다.

본 발명에 의해, 대규모 만가닥버섯 자실체의 상업적 제조용 고체 종균과 비교하여, 매우 짧은 시간내에 만가닥버섯 자실체의 상업적 제조용의 액체 종균을 제조할 수 있다. 예를 들면 상기 고체 종균을 제조하는 경우, 전 배양후의 액체 균사 혹은 고체 균사를 고형 배지에 접종한다. 그 후에 약 30∼60일간, 고형 배지에 균사를 만연시킨다. 수득된 균사가 만연한 고형 배지를 고체 종균으로 하여 만가닥버섯 자실체의 상업적 제조에 사용한다. 이에 비해서 본 발명의 액체 종균의 경우에는, 전 배양 후의 액체 균사를 본 발명의 액체 배지에 접종한다. 그 후에 약 3∼7일간, 바람직하게는 6∼7일간 배양을 실시하는 것에 의해 액체 종균을 얻을 수 있으며, 만가닥버섯 자실체의 상업적 제조에 사용할 수 있다.

또, 본 발명의 액체 종균을 대규모의 만가닥버섯 자실체의 상업적 제조에 사용함으로써, 고체 종균의 로트 차이에 기인하는 만가닥버섯 자실체 제조 시의 제조 불균일을 회피할 수 있으며, 또 우량한 만가닥버섯 자실체를 안정적으로 제조하는 것이 가능하다.

이상, 병 재배 방법에 대해서 예를 들어서 설명하였지만, 본 발명의 방법에서 배양한 액체 종균을 사용한 만가닥버섯의 제조방법이 상기 병 재배에 의한 균상 재배에서의 사용에 한정되지는 않는다.

실시예

이하에, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이하의 실시예 범위만으로 한정되지 않는다.

실시예 1

SGMY 액체 배지(조성: 글루코스 0.5%, 효모엑스 0.2%, KH₂P0₄ 0.05%, K₂HP0₄ 0.03% 및 MgS0₄·7H₂0 0.05%, SH(미생물 배양용 영양원, Bacterio-N, 마루하니치로사 제품), 말토오스 0.2%) 200㎖에 Lyophyllum ulmarium Lu1 -181주(FERM BP-8357)의 균사체를 접종하고, 25℃에서 14일간 진탕 배양(90∼110rpm)을 실시하여, 전 배양물을 제조하였다.

다음에, 별도 제조한 SGMY 액체 배지 160ℓ에 증점 다당류인 젤란검 〔켈코겔(산에이원 에프ㆍ에프ㆍ아이사 제품)〕을 증점제를 제외한 배지에 대해서 0.04% 중량%가 되도록 첨가하고, 본 배양용의 액체 배지를 제조하였다. 배양조는 교반 능력이 없는 비제1종 압력용기를 사용한 본 배양용의 액체 배지를 넣은 배양조를, 118℃에서 35분간 고압증기 살균을 실시하고, 방냉 개시 직후에 무균 에어에 의한 통풍을 실시하여, 배양조 내를 정압으로 하였다. 당해 배지를 냉각 후, 상기의 전 배양물의 전량을 접종하고, 배양 온도 25℃, 환기량 0.25vvm, 내압 0.05MPa, 무동력 교반(에어 버블링)의 배양 조건으로, 6∼7일간 배양을 실시하여, 액체 종균을 제조하였다.

또, 비교대상으로서, 통상의 방법, 즉 다음과 같이 해서 Lyophyllum ulmarium Lu1 -181주(FERM BP-8357)의 고체 종균을 제조하였다. 우선, 폴리프로필렌제의 광구 배양 병(850㎖, 신에츠노자이사 제품)에 톱밥(삼나무재) 62g, 콘코브(corncob) 30g, 쌀겨 60g, 콩기울(bean skin) 20g, 밀기울 20g, 다카라크린(다카라바이오사 제품) 2.5g, 수분 함량 63∼65%로 설정하고, 잘 혼합해서 습윤상태로 한 것을 압축하였다. 압을 가해서 채워 넣었다. 채워 넣어진 것의 표면 중앙에 직경 lcm 정도, 깊이 130mm의 접종 구멍부를 뚫고, 마개로 막았다. 그 후에 118℃에서 60분간 고압 증기 살균을 실시하고, 20℃까지 방냉하였다. 이렇게 해서 수득된 고형 배지에 대해서, 상기의 전 배양물을 약 10㎖ 접종하였다. 그 후에 암소에서 온도 25℃, 습도 55%의 조건하에서 약 60일간 균사체를 배양하고, 고형 배지 전체에 균사를 만연시켜, 고체 종균을 제조하였다.

다음에, 본 발명의 액체 종균의 자실체 형성능의 확인을 위해서, 아래와 같이 만가닥버섯 자실체의 재배를 실시하였다.

폴리프로필렌제의 광구 배양 병(850㎖, 신에츠노자이사 제품)에, 톱밥(삼나무재) 62g, 콘코브(corncob) 30g, 쌀겨 60g, 콩기울(bean skin) 20g, 밀기울 20g, 다카라크린(다카라바이오사 제품) 2.5g, 수분함량 63∼65%로 설정하고, 잘 혼합해서 습윤상태로 한 것을 압을 가해서 채워 넣었다. 고체 종균용의 균상 재배용 배지로서는, 채워 넣은 것의 표면의 중앙에 직경 1cm 정도, 깊이 130mm의 접종 구멍부를 열고, 마개로 막았다. 액체 종균용 균상 재배용 배지로서는, 고체 종균용의 균상 재배용 배지의 균좌(병 입구에서 약 15mm)보다 약 10mm정도 더욱 상부(병 입구에서 5mm)에서 압을 가해서 채워 넣고, 병 중앙부에서 사방의 병 연(淵) 부근의 4곳에 구경 5mm정도, 깊이 130mm 정도의 접종 구멍부를 뚫고, 마개로 막았다. 그 후에 118℃에서 60분간 고압 증기 살균을 실시하고, 20℃까지 방냉한 것을 각각, 고체 종균용의 균상 재배용 배지(고체 종균용 고형 배지), 액체 종균용의 균상 재배용 배지(액체 종균용 고형 배지)로 하였다. 마찬가지로, 고형 배지를 각 8개씩 제작하였다.

액체 종균용 고형 배지에는 상기에서 제조한 액체 종균을 약 10∼20㎖ 씩 접종, 고체 종균용 고형 배지에는 상기에서 제조한 고체 종균을 약 10g 씩 접종하고, 암소에서 온도 25℃, 습도 55%의 조건하에서 약 60일간 균사체를 배양하고, 고형 배지 전체에 균사를 만연시켰다. 그 후에 캡을 빼내고, 균상면 상부의 균 긁기(만두 긁기)를 실시하고, 다음에 수돗물을 병 입구까지 넣은 후, 약 2시간 그대로 두고, 추가로 반전탈수를 위해서 약 2시간 도치하고, 그 후에 싹 틔움ㆍ생육공정에 제공하였다.

싹 틔움ㆍ생육공정은 실내 1장소 연속 조사에 의해 조도 20럭스, 온도 16℃, 가습은 휴미아이 100(사기노미야제작소 제품)의 표시값으로서 110%로 제어하고, 탄산가스 농도는 1000∼1500ppm의 범위로 제어한 싹틔움ㆍ생육실에서 실시하였다. 또, 결로수를 피하기 위해서, 병 상부에 골함석 피복ㆍ직상광은 없었다. 싹 틔움ㆍ생육공정 개시 9일 후, 골함석 피복을 제거하고, 11일 후에 직상광 조사를 개시하였다. 약 19일 후, 수득된 성숙 자실체를 수확하고, 액체 종균과 고체 종균을 사용하였을 경우에 의한 생육일수와 자실체의 평균 수량(g/병)의 비교를 실시하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.

	생육일수(일)	수량(g)
고체 종균	18.9	181.3
액체 종균	18.9	170.9

표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법은 고체 종균을 사용하였을 경우와 동등한 수량을 수득할 수 있음이 명백하다.

본 발명에 의해, 저렴하고, 효율이 좋은 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조방법이 제공된다. 또, 액체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체의 제조에 유용한 균상 재배용 배지도 제공된다. 당해 제조방법을 사용하는 것에 의해, 통상, 고체 종균의 경우, 30 내지 60일이 필요한 종균 제조 시간을 대폭 단축하는 것이 가능하게 되었고, 또 고체 종균을 사용한 만가닥버섯 자실체 제조 시의 제조 불균일의 리스크를 회피할 수 있다는 점에서, 만가닥버섯 자실체의 대규모 상업재배에 있어서 유용하다.

Claims

증점제를 함유하는 액체 배지에서, 기포를 사용한 배지의 교반으로 액체 심부(深部) 배양을 실시한 액체 종균을 사용하는 것을 특징으로 하는 만가닥버섯 자실체의 제조방법.
제 1 항에 있어서, 실질적으로 기포를 사용한 교반에 의해서만 배지의 교반을 실시하는 방법.
제 1 항에 있어서, 증점제가 해초 추출물, 과실 다당류, 종자 다당류, 수액 다당류, 발효 다당류, 저장성 다당류, 동물성 단백질 및 셀룰로오스 유도체로부터 선택되는 방법.
제 1 항에 있어서, 배지 중의 증점제의 농도가 0.001 내지 0.1 중량%인 방법.
제 1 항에 있어서, 병 재배인 제조방법.
제 5 항에 있어서, 균좌(fungus seat)를 높게 한 균상 재배용 배지를 사용하는 것을 특징으로 제조방법.
제 6 항에 있어서, 병 중앙부의 주변에 2 내지 6개의 접종 구멍을 가지는 균상 재배용 배지를 사용하는 제조방법.